(57)【要約】本発明はイタドリとシナニッケイとを有効成分として含む抗血栓用組成物に関するものであり、本発明の組成物は、好ましくはイタドリとシナニッケイとを１：２〜２：１の重量比で混合して抽出した抽出物を含む。本発明の組成物は、血小板凝集阻害効果、血栓生成阻害効果、血栓形成遅延効果などで確認された抗血栓効果が非常に優れるので、漢方薬ベースの効果の優れた血栓予防及び治療剤、抗血栓用健康食品などに使われることができる。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
イタドリとシナニッケイとを有効成分として含む、抗血栓用組成物。
【請求項２】
前記イタドリとシナニッケイとは１：２〜２：１の重量比で混合して抽出した抽出物であることを特徴とする、請求項１に記載の抗血栓用組成物。
【請求項３】
前記イタドリとシナニッケイとは１：１の重量比で混合して抽出した抽出物であることを特徴とする、請求項２に記載の抗血栓用組成物。
【請求項４】
前記抽出物は、イタドリとシナニッケイとの混合物の重量を基準にして、１５０〜２５０倍（体積）の抽出溶媒を加え、５０〜７０℃で２２〜２６時間浸漬させた後、抽出液を得、得られた抽出液を濾過、減圧濃縮及び乾燥させて得たものであることを特徴とする、請求項２に記載の抗血栓用組成物。
【請求項５】
前記溶媒は、７０％エタノールであることを特徴とする、請求項４に記載の抗血栓用組成物。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物を有効成分として含む、血栓予防及び治療剤。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物を含む、抗血栓用健康食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はイタドリとシナニッケイとを有効成分として含む抗血栓用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
最近、国民所得が向上して消費の質が向上するにつれて血管内障害による死亡率が急増している趨勢である。特に、動脈硬化、血栓症などの血管性危険因子の増加による心悩血管疾患の罹患率が全世界的にずっと増加している。
【０００３】
生体内で血液は凝固と溶解作用がいつも平衡を成しているので、正常状態では出血や血栓などによって血液の流れが妨げられない。しかし、血管壁が損傷されれば、このような平衡状態が崩れる（Lee HS. How safe is the readministration of streptokinase, Drug Safety 13, 76-80. 1995）。
【０００４】
動脈硬化は、遺伝的変異、過酸化物、高血圧、糖尿、血漿ホモシステイン濃度の増加、微生物感染などによって血管の内皮細胞が損傷されて発生する疾病である。機能不全を引き起こした血管内皮細胞は細胞付着物質を発現し細胞透過性を増加させることで、兔疫細胞、血小板、脂肪質などが組職内に侵透することができるようにする。組職内に侵透した兔疫細胞によって炎症媒介因子、成長因子などが分泌されるなど、一連の炎症反応によって動脈硬化性病変が発生する（(Ross R. Atherosclerosis-an inflammatory disease. New Engl J Med. 340(2):115-126, 1999）。また、血管内膜が損傷されれば、血小板が血管組職の損傷部位に粘着し、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）、アラキドン酸（ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ＡＤＰ、トロンボキサンＡ２（ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ  Ａ２．ＴＸＡ２）のような凝集誘導体による血小板活性化につながり、その後、癒着接着（ａｄｈｅｓｉｏｎ）・分泌（ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ）・凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）反応を引き起こして血液凝固系を活性化させ、結局血栓が形成される（Yang SA. et al., Effect of methanolic extract from Salvia miltiorrhiza Bunge on in vitro antithrombotic and antioxidative activities. Korean J. Food Sci. Technol. 39, 83-87. 2007）。
【０００５】
血栓症は血管に血栓が積もり、このような血管内血栓が血液の流れを妨げて細胞成長及び細胞機能の障害を誘発するものであり、脳梗塞、心筋梗塞などの多くの形態の成人病を引き起こす主要原因である。血栓が静脈で生成されれば、血液循環障害が引き起こされて浮腫や炎症が発生し、動脈で発生すれば、虚血や梗塞を引き起こして動脈硬化、心筋梗塞症、脳卒中及び肺動脈塞栓症などの心血管系疾患をもたらす。
【０００６】
今まで知られた抗血小板剤としては、テオフィリン（ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ）、モルシドミン（ｍｏｌｓｉｄｏｍｉｎ）、ベラパミル（ｖｅｒａｐａｍｉｌ）、ニフェジピン（ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ）、アスピリン（ａｓｐｉｒｉｎ）、イミダゾール（ｉｍｉｄａｚｏｌｅ）、インドメタシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ）などがある。これらの薬物はｃＡＭＰとｃＧＭＰの生成を促進してＣａ２＋の動員を抑制するか、トロンボキサンＡ２の生成を阻害すると知られている。しかし、これらの薬物は、出血性副作用、胃膓障害、不妊、過敏反応などの副作用のため、その使用が制限されている実情である。
【０００７】
したがって、血栓生成を効果的に阻害することができながらも人体に対する副作用を最小化した優れた抗血栓剤が要求されている。
【０００８】
抗血栓効果を有する代表的な漢方薬材組成物としては、強心丸（Ｃａｒｄｉｏｔｏｎｉｃ  Ｐｉｌｌｓ）が知られている。強心丸は冠状動脈硬化症の予防及び治療剤であり、血管拡張、鎮静、陣痛作用を有し、昔から使われて来た丹参、消炎作用がある田七人参、及び中樞神経興奮と抗菌作用を有する竜脳から構成されている。
【０００９】
一方、ニワヤナギ科に属する多年生草本植物であるイタドリ（Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc. = Reynoutria japonica Hou.）はイタドリ及び同属近縁植物の根又は根茎を言うものであり、韓国語で、コザン、サンザン、バンザン、サントンスン、バンザンクン、オブダップ、サンカン、バンクン、ウンファンヨン、トジユとも呼ばれる。イタドリは、韓国、日本、台湾、中国などに分布し、我が国では全国の山野の谷で育つ。イタドリは高さが１ｍ以上であり、根茎は地下で横に伸び、黄褐色の木質であり、節が明らかである。幹は真っ直ぐに育ち、円桂形に中が空いている。表面には毛がなく、赤色又は紫色の斑点が多くある。このような根、根茎と葉の部位が昔から薬剤として使われて来た。イタドリの薬理作用としては、緩和、利尿、通経、鎮咳鎭静剤として知られており、抗菌作用及び抗ウイルス作用の薬理作用がある。
【００１０】
クスノキ科に属する常緑喬木であるシナニッケイ（Cinnamomum cassia Blume）は肉桂又はその他の同属近縁植物の幹皮であり、主皮と１次皮層を除去したものである。長い板状又は円筒状であり、長さは１０〜２０ｃｍであり、厚さは均一でない。外側面と内側面はいずれも赤褐色であり、よく折れ曲がる。折れ曲がった面は赤褐色であり、油が豊かである。独特な芳香があり、味は辛くて甘い。シナニッケイの薬理作用は強心剤として血液循環を促進して心臓衰弱に良く、興奮、健胃整腸、温中保養、温通経脈、陽痿、体温調節、虚弱体質改善、駆風に良いと知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】韓国特許公開第１０−２０１７−００８６１２０号公報
【特許文献２】韓国特許公開第１０−２０１６−００５８２１２号公報
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Yang YY et al., Screening of antioxidative, anti-platelet aggregation and anti-thrombotic effects of Clove extracts. Korean J Oriental Physiology & Pathology. 25(3):471-481, 2011
【非特許文献２】Lee HS. How safe is the readministration of streptokinase, Drug Safety 13, 76-80. 1995
【非特許文献３】Ross R. Atherosclerosis-an inflammatory disease. New Engl J Med. 340(2):115-126, 1999
【非特許文献４】Yang SA. et al., Effect of methanolic extract from Salvia miltiorrhiza Bunge on in vitro antithrombotic and antioxidative activities. Korean J. Food Sci. Technol. 39, 83-87. 2007
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は生薬材であるイタドリとシナニッケイとを使用して血栓阻害能に優れた抗血栓用組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
前記目的を達成するために、本発明は、
イタドリとシナニッケイとを有効成分として含む抗血栓用組成物を提供する。
【００１５】
前記組成物で、イタドリとシナニッケイとは１：２〜２：１の重量比で混合して抽出した抽出物であることが好ましい。より好ましくは、前記イタドリとシナニッケイは１：１の重量比で混合して抽出した抽出物である。
【００１６】
前記組成物で、前記抽出物は、
イタドリ及びシナニッケイの混合物の重量を基準にして、１５０〜２５０倍（体積）の抽出溶媒を加え、５０〜７０℃で２２〜２６時間浸漬させた後、抽出液を得、得られた抽出液を濾過、減圧濃縮及び乾燥させて得たものであることが好ましい。
【００１７】
前記組成物で、前記溶媒は７０％エタノールであることが好ましい。
【００１８】
また、本発明は、前記組成物を有効成分として含む血栓予防及び治療剤を提供する。
【００１９】
また、本発明は、前記組成物を含む抗血栓用健康食品を提供する。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によるイタドリとシナニッケイを含む抗血栓用組成物は、血小板凝集阻害効果、血栓生成阻害効果、血栓形成遅延効果などとして確認された抗血栓効果が現在抗血栓用漢方薬材組成物として商用化している強心丸に比べてもかなり優秀である。本発明の抗血栓用組成物は、血栓によって発生し得る心血管系疾患である動脈硬化、脳梗塞、心筋梗塞、脳卒中、肺動脈塞栓症などの予防及び治療効果を有するので、漢方薬ベースの効果の優れた血栓予防及び治療剤、抗血栓用健康食品などに使われることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】本発明のイタドリ及びシナニッケイの混合抽出物の抽出成分を確認したＧＣ−ＭＳ分析結果を示した図である。
【図２】コラーゲンによって誘導される血小板凝集において本発明の組成物の阻害効能を確認した結果を示す図である。
【図３】血栓誘発動物モデルにおいて本発明の組成物の血栓形成遅延効果を確認した結果を示す図である。
【図４】血栓誘発動物モデルにおいて本発明の組成物の血栓形成遅延効果を確認した結果を示す図である。
【図５】血栓誘発動物モデルにおいて血管の組職学的変化を確認した結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明の抗血栓用組成物は有効成分としてイタドリとシナニッケイとを含み、好ましくはイタドリとシナニッケイとを１：２〜２：１の重量比で混合して抽出した抽出物を含む。特に好ましくは、イタドリとシナニッケイとを１：１の重量比で混合して抽出した抽出物を含む。
【００２３】
抽出の際、溶媒としては水又はエタノールを使うことが好ましい。抽出溶媒としては７０％エタノールを使うことが特に好ましい。７０％エタノールを抽出溶媒として使えば、水を抽出溶媒として使用した場合に比べてより多い成分が抽出される（図１参照）。
【００２４】
また、イタドリとシナニッケイとを混合して抽出した抽出物はイタドリ及びシナニッケイのそれぞれを抽出した抽出物が有する成分を全部含むとともに追加的に他の成分も抽出されて含まれる（図１参照）。
【００２５】
イタドリ及びシナニッケイの混合物の抽出には通常の抽出方法を使うことができ、好適な抽出方法の例は次のようである。
【００２６】
イタドリ及びシナニッケイの混合物の重量を基準にして、１５０〜２５０倍（体積）の抽出溶媒を加え、５０〜７０℃で２２〜２６時間浸漬させた後、室温で抽出液を収得する。この過程は２〜３回繰り返すことができる。抽出液を濾過した後、減圧濃縮及び乾燥させてイタドリ及びシナニッケイの混合抽出物を得る。
【００２７】
本発明の抗血栓用組成物は、血小板凝集阻害効果、血栓生成阻害効果、血栓形成遅延効果などから確認されたように、抗血栓効果が非常に優秀である。特に、イタドリとシナニッケイとをそれぞれ使用する場合に比べて効果が大きく優れ、現在抗血栓用漢方薬材組成物として商用化している強心丸に比べても血栓形成遅延効果が２倍程度大きく優れる。よって、本発明の抗血栓用組成物は、漢方薬ベースの効果の優れた血栓予防及び治療剤、抗血栓用健康食品などに使われることができる。
【００２８】
本発明の抗血栓用組成物は、イタドリとシナニッケイとの乾燥抽出物を基準にして、血栓予防用に使用する場合には、体重６０ｋｇの大人を基準にして１日１００〜１，０００ｍｇを使うことが好ましく、血栓治療用に使用する場合には、１日５００〜５，０００ｍｇの範囲で使うことが好ましい。
【００２９】
以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明する。これらの実施例は本発明を例示するものであり、本発明の範囲がこれらに限定されるものではない。
【００３０】
発明の実施のための形態
【００３１】
＜実施例１＞
【００３２】
イタドリ及びシナニッケイの混合抽出物の製造
【００３３】
（株）ヒューマンハーブ（http://www.humanherb.co.kr/）から購入したイタドリ１００ｇとシナニッケイ１００ｇとに７０％エタノール２０リットルを加え、６０℃で２４時間浸漬させた後、室温で抽出液を収得した。また、７０％エタノール２０リットルを加えて抽出する過程を２回もう繰り返して抽出液を収集した。
【００３４】
前記各抽出液を濾過した濾過物を減圧回転濃縮機（Ｖａｃｕｕｍ  ｒｏｔａｒｙ  ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ；日本ＮｉｈｏｎＳｅｉｋｏ社、ＶＲ−２０５ｃ）で溶媒を蒸発させて減圧濃縮し、乾燥させることでイタドリ及びシナニッケイの混合抽出物４１．８ｇ（収率：２０．９％）を収得した。
【００３５】
＜実施例２＞
【００３６】
イタドリ及びシナニッケイの混合抽出物の製造
【００３７】
イタドリ６６．７ｇとシナニッケイ１３３．３ｇとを使ったことを除き、実施例１と同様な方法でイタドリとシナニッケイとの１：２混合抽出物を得た。
【００３８】
＜実施例３＞
【００３９】
イタドリ及びシナニッケイの混合抽出物の製造
【００４０】
イタドリ１３３．３ｇとシナニッケイ６６．７ｇとを使ったことを除き、実施例１と同様な方法でイタドリとシナニッケイとの２：１混合抽出物を得た。
【００４１】
＜実験例１＞
【００４２】
血小板凝集阻害能実験
【００４３】
コラーゲンを用いてラット血小板の凝集を誘導し、本発明の組成物においてイタドリ及びシナニッケイの混合比による血小板凝集阻害能を次のように比較した。
【００４４】
実験にはコアテクから分譲されたＳＤラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ  ｒａｔ、ｍａｌｅ、２２０ｇ）を使った。
【００４５】
ＳＤラットは、１週間の適応期を有した後、腹大動脈から血液を採取した。採取された血液５ｍLに甲状腺緩衝液（ｔｈｙｒｏｉｄ  ｂｕｆｆｅｒ；１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、１２ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、５．５ｍＭグルコース、１Ｍ  ＭｇＣｌ２、１Ｍ  ＫＣｌ及び１Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４、ｐＨ７．４）２ｍLを添加し、１，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。
【００４６】
血球が除去された上澄み液（多血小板血漿、ＰＲＰ、Ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｒｉｃｈ  ｐｌａｓｍａ）を８００×ｇで１５分間遠心分離し、沈澱した血小板を洗浄緩衝液（ｗａｓｈｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒ；１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．９ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭグルコース、１２ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、０．３４ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ及び０．２５％ＢＳＡ、ｐＨ７．４）で２回洗浄した後、懸濁緩衝液（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ；１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．９ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭグルコース、１２ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、０．３４ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ及び０．２５％ＢＳＡ、ｐＨ７．４）に懸濁させることで最終洗浄血小板を得た。得られた洗浄血小板を３×１０８ｐｌａｔｅｌｅｔ／ｍLとなるように希釈して分析に用いた。
【００４７】
血小板は３７℃で３分間インキュベーションした後、ＣａＣｌ２１ｍＭを入れ、実施例１の試料（イタドリとシナニッケイとの１：１混合抽出物）、実施例２の試料（イタドリとシナニッケイとの１：２混合抽出物）及び実施例３の試料（イタドリとシナニッケイとの２：１混合抽出物）を１００μｇ／ｍL添加し、２分間インキュベーションした。
【００４８】
インキュベーションの後、血小板凝集誘導物質であるコラーゲン２．５μｇ／ｍLを添加し、５分間血小板の凝集程度を測定した。ラット（Ｒａｔ）血小板凝集抑制能は凝集測定器（Ａｇｇｒｅｇｏｍｅｔｅｒ；Ｃｈｒｏｎｏ−Ｌｏｇ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｈａｖｅｒｔｏｗｎ，ＰＡ．ＵＳＡ）を用いた濁度測定法で確認した。その結果を図２に示した。
【００４９】
図２の結果から分かるように、実施例１〜３の試料はいずれも６３％以上の優れた血小板凝集阻害能を示した。特に、イタドリとシナニッケイとの１：１混合抽出物である実施例１の試料（９２．８±５．９％）は１：２混合抽出物である実施例２の試料（６３．３±３．１％）と２：１混合抽出物である実施例３の試料（７２．０±４．４％）に比べても非常に高い血小板凝集阻害能を示した。
【００５０】
＜実験例２＞
【００５１】
頸動脈血栓誘発動物モデルにおいて血流変化に及ぶ影響確認
【００５２】
塩化鉄（Ｆｅｒｒｉｃ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＦｅＣｌ３）で誘導した頸動脈血栓誘発動物モデルにおいてイタドリ抽出物、シナニッケイ抽出物及びイタドリ及びシナニッケイの混合抽出物が血流変化に及ぶ影響を次のように測定した。
【００５３】
実験動物としては、雄ＳＤラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ  ｒａｔ、８週齢、２３０−２５０ｇ、コアテク、韓国）を購入して１週間の順化期間を経て実験に使った。
【００５４】
１．単一抽出物と混合抽出物の比較
【００５５】
試料としては、実施例１のイタドリ及びシナニッケイの混合抽出物を使った。比較のための試料としてイタドリ抽出物及びシナニッケイ抽出物を使った。イタドリ抽出物とシナニッケイ抽出物はイタドリとシナニッケイをそれぞれ２００ｇ使ったことを除き、実施例１と同様な方法で抽出物を得た。
【００５６】
実験動物に各試料を体重１ｋｇ当たり５０ｍｇ、１００ｍｇ及び２００ｍｇをそれぞれ３日間経口投与し、対照群は同量の緩衝液（ｓａｌｉｎｅ）を投与した。試験期間の間に固形飼料と水は自由に取るようにし、飼育環境は、温度２３±０．５℃、相対湿度５０±５％、１２時間の間隔の明暗（ｌｉｇｈｔ−ｄａｒｋ）サイクルで自動維持させた。
【００５７】
実験動物の痲酔には、ロンプンとゾレチルとを２：３の比率で混合した痲酔剤を使った。
【００５８】
実験動物の頸動脈血栓誘発は、頸動脈に３０％塩化鉄溶液で濡らした濾過紙（ｆｉｌｔｅｒ  ｐａｐｅｒ）（２×２ｍｍ）を３分間接触させた後、濾過紙を除去し、生理食塩水で拭いた後、探針（Ｐｏｗｅｒｌａｂ／８ｓｐ，ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｐｔｙ Ｌｔｄ．，Ｃａｓｔｌｅ Ｈｉｌｌ，ＮＳＷ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を付けた血流測定器（Ｌａｓｅｒ  Ｄｏｐｐｌｅｒ  Ｆｌｏｗｎｅｔｒｙ（ＬＤＦ；ＢＦＬ２１、Ｔｒａｎｓｏｎｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，ＵＳＡ）を使って血流測定を施行した。
【００５９】
塩化鉄処理の後、血栓生成は、血流測定値が０近くに落ちるときを基準にして測定し、正常群の場合は４０分まで測定した。その結果を図３に示した。
【００６０】
正常群（Ｃ  Ｂａｓａｌ）では、総４０分の観察時間内で血栓が生成されず、塩化鉄処理群は塩化鉄処理１７分後に血流量値が０に至ることが確認された。
【００６１】
イタドリ抽出物を投与した群（ＰＣ）とシナニッケイ抽出物を投与した群（ＣＣ）は塩化鉄処理の後に４０分が経過しても正常群の約４０％に相当する血流量値を示した反面、イタドリ及びシナニッケイの混合抽出物を投与した群（Ｍｉｘ）の場合、正常群の約７０％に相当する血流量値を維持した。
【００６２】
このように、イタドリとシナニッケイとを混合して抽出した抽出物はイタドリ又はシナニッケイの単独抽出物に比べて抗血栓効果に著しく優れたことが分かった。
【００６３】
２．混合抽出物と市販薬剤の比較
【００６４】
イタドリ及びシナニッケイの混合抽出物が血流変化に及ぶ影響を市販薬剤と比較するために、次のように実験した。
【００６５】
市販薬剤としては強心丸（Ｃａｒｄｉｏｔｏｎｉｃ  Ｐｉｌｌｓ；丹参１７．５ｍｇ、田七人参３．４ｍｇ、竜脳０．２ｍｇ）を使った。
【００６６】
実験動物に、イタドリ及びシナニッケイの混合抽出物と強心丸を体重１ｋｇ当たり２００ｍｇで経口投与したことを除き、前記と同様に実験した。その結果を図４に示した。
【００６７】
図４から確認されるように、イタドリ及びシナニッケイの混合抽出物を投与した群（Ｍｉｘ）と強心丸を投与した群ではいずれも明らかな血栓形成遅延効果を示した。特に、イタドリ及びシナニッケイの混合抽出物を投与した群（Ｍｉｘ）は強心丸を投与した群に比べても２倍程度の高い血栓形成遅延効果を示した。このようなイタドリ及びシナニッケイの混合抽出物の血栓形成阻害効果は正常群と類似の水準であることが確認された。
【００６８】
＜実験例３＞
【００６９】
血栓誘発動物モデルにおいて血管の組職学的変化確認
【００７０】
血栓誘発動物モデルにおいて血管の組職学的変化を次のように確認した。
【００７１】
前記実験例２で血栓生成を測定した後、血栓が生成された頸動脈部位を３〜４ｍｍ摘出した。
【００７２】
摘出された頸動脈部位を１０％中性パラホルムアルデヒドで２４時間固定させ、通常の組職処理過程を経てパラフィンに包埋した後、切片（厚さ４μｍ）を作った。作られた切片はヘマトキシリン−エオシン（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ−ｅｏｓｉｎ）染色を実施して光学顕微鏡用組職標本を製作した。
【００７３】
標本を光学顕微鏡で観察し、その結果を図５に示した。
【００７４】
図５から確認されるように、塩化鉄処理群（ＦｅＣｌ３）は血管全体が血栓で満たされていた。一方、イタドリ及びシナニッケイの混合抽出物投与群（ＦｅＣｌ３＋Ｍｉｘ）はイタドリ抽出物を投与した群（ＦｅＣｌ３＋ＰＣ）又はシナニッケイ抽出物（ＦｅＣｌ３＋ＣＣ）を投与した群に比べて血栓形成が減少した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
2021501207.tif 000008
2021501207.tif 000009
2021501207.tif 000010
2021501207.tif 000011