(57)【要約】  本願は、抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬、その調製方法および使用を提供し、前記医薬は式Ｉまたは式ＩＩで表される構造を有し、本願に係る医薬、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、互変異性体、立体化学異性体、または医薬組成物は、いずれも炎症性腸疾患に対して良好な作用効果を有し、炎症性腸疾患の治療薬を調製するために使用でき、重要な臨床的意義および広い応用の見通しを有している。
2021501171.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬であって、式Ｉまたは式ＩＩで表される構造を有する、医薬。
【化１】
2021501171.tif 000017
【化２】
2021501171.tif 000018
（ただし、Ｒ１およびＲ２は、いずれも独立して水素、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、イソプロピル基、アリル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ベンジル基、アセチル基、スルホン酸基、リン酸基、安息香酸基、ベンズアミド基、ベンゾイルシクロプロピルアミノ基、ベンゼンスルホン酸基、ピリジンカルボキサミド基、ピコリノイルシクロプロピルアミノ基、ピリミジンカルボキサミド基、またはピリミジニルホルミルシクロプロピルアミノ基から選ばれるいずれか１種であり、
Ｒ３は水素、アセチル基、スルホン酸基、またはリン酸基から選ばれるいずれか１種であり、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が同時に水素ではなく、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が同時にアセチル基ではなく、Ｒ１およびＲ２が同時にベンジル基ではないことと、式ＩＩにおいて、Ｒ１およびＲ２が同時に水素またはベンジル基ではないこととを満たす。）
【請求項２】
以下のような化合物Ａ〜Ｊ構造のうちのいずれか１種を有する、請求項１に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬。
【化３】
2021501171.tif 000019
【請求項３】
式Ｉで表される構造を有する、抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の調製方法であって、
以下の反応式のように、式ＩＩＩで表される化合物ミリカノールが、塩基性試薬の存在下で求核試薬と置換反応を経て式Ｉで表される化合物を得ることを含む、調製方法。
【化４】
2021501171.tif 000020
（ただし、Ｒ１およびＲ２は、いずれも独立して水素、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、イソプロピル基、アリル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ベンジル基、アセチル基、スルホン酸基、リン酸基、安息香酸基、ベンズアミド基、ベンゾイルシクロプロピルアミノ基、ベンゼンスルホン酸基、ピリジンカルボキサミド基、ピコリノイルシクロプロピルアミノ基、ピリミジンカルボキサミド基、またはピリミジニルホルミルシクロプロピルアミノ基から選ばれるいずれか１種であり、
Ｒ３は水素、アセチル基、スルホン酸基、またはリン酸基から選ばれるいずれか１種であり、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が同時に水素ではなく、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が同時にアセチル基ではなく、Ｒ１およびＲ２が同時にベンジル基ではないことを満たす。）
【請求項４】
前記式ＩＩＩで表される化合物ミリカノールと求核試薬とのモル比は１：（１〜６）であり、
好ましくは、前記置換反応の溶媒は、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ピリジン、またはトリエチルアミンのうちのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含み、
好ましくは、前記置換反応の温度は０〜８０℃であり、
好ましくは、前記置換反応の時間は１〜３０ｈであり、
好ましくは、前記塩基性試薬は、ピリジン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、またはカリウム−ｔ−ブトキシドのうちのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含み、ピリジンまたはトリエチルアミンであることが好ましい、請求項３に記載の調製方法。
【請求項５】
式ＩＩで表される構造を有する、抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の調製方法であって、
以下の反応式のように、式ＩＶで表される化合物が、酸化剤の存在下で酸化反応により式ＩＩで表される化合物を得ることを含む、調製方法。
【化５】
2021501171.tif 000021
（ただし、Ｒ１およびＲ２は、いずれも独立して水素、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、イソプロピル基、アリル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ベンジル基、アセチル基、スルホン酸基、リン酸基、安息香酸基、ベンズアミド基、ベンゾイルシクロプロピルアミノ基、ベンゼンスルホン酸基、ピリジンカルボキサミド基、ピコリノイルシクロプロピルアミノ基、ピリミジンカルボキサミド基、またはピリミジニルホルミルシクロプロピルアミノ基から選ばれるいずれか１種であり、
Ｒ１およびＲ２が同時に水素またはベンジル基ではないことを満たす。）
【請求項６】
前記式ＩＶで表される化合物と酸化剤とのモル比は１：（０．５〜５）であり、
好ましくは、前記酸化剤は、クロロクロム酸ピリジニウム塩、三酸化クロム、オゾン、  過酸化水素水、または三酸化硫黄のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含み、
好ましくは、前記酸化反応の溶媒は、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、トルエン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ｎ−ヘプタン、またはジメチルスルホキシドのうちのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含み、
好ましくは、前記酸化反応の温度は０〜５０℃であり、
好ましくは、前記酸化反応の時間は１〜１０ｈである、請求項５に記載の調製方法。
【請求項７】
請求項１または２に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の医薬的に許容される塩。
【請求項８】
前記医薬的に許容される塩は、式Ｉで表される化合物の金属塩または式ＩＩで表される化合物の金属塩であり、
好ましくは、前記金属塩は、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、またはカルシウム塩のうちのいずれか１種を含み、ナトリウム塩またはカリウム塩であることが好ましい、請求項７に記載の医薬的に許容される塩。
【請求項９】
請求項１または２に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の溶媒和物。
【請求項１０】
前記溶媒和物は、式Ｉで表される化合物の水和物、式Ｉで表される化合物のアルコール和物、式ＩＩで表される化合物の水和物、または式ＩＩで表される化合物のアルコール和物である、請求項９に記載の溶媒和物。
【請求項１１】
請求項１または２に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の互変異性体もしくは立体化学異性体。
【請求項１２】
請求項１または２に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬のプロドラッグ。
【請求項１３】
請求項１または２に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
前記医薬組成物は補助材料を更に含み、
好ましくは、前記補助材料は、賦形剤、希釈剤、担体、調味剤、粘着剤、または充填剤のうちのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含み、
好ましくは、前記抗炎症性腸疾患の医薬組成物の剤形は、経口投与製剤、外用製剤、または非経口投与製剤のうちのいずれか１種を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１または２に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬、請求項７または８に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の医薬的に許容される塩、請求項９または１０に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の溶媒和物、請求項１１に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の互変異性体もしくは立体化学異性体、請求項１２に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有するプロドラッグ、あるいは請求項１３または１４に記載の医薬組成物の、炎症性腸疾患を治療する医薬の調製における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は医薬分野に属し、抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬、その調製方法および使用に関し、特に、ミリカノール（Ｍｙｒｉｃａｎｏｌ）誘導体、その調製方法および使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性腸疾患（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ、ＩＢＤ）は、病因が未だ明らかでない１グループの慢性非特異的炎症性腸疾患であり、潰瘍性大腸炎（Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  Ｃｏｌｉｔｉｓ、ＵＣ）およびクローン病（Ｃｒｏｈｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ、ＣＤ）を含み、発症メカニズムは不明であるが、既に発見された関連病原性因子は、遺伝、感染、環境汚染、食事、腸マイクロ生態等を含む。炎症性腸疾患は、北米およびヨーロッパの一般的な疾患であり、潰瘍性大腸炎は、ヨーロッパと米国における羅患率が２４０／１０万であり、発症率が１０／１０万〜２０／１０万であり、クローン病は、羅患率が２００／１０万であり、発症率が５／１０万〜１０／１０万である。この３０年間、日本のＩＢＤの発症率も徐々に高まる傾向となっている。中国では、一般的な群衆の疫学的資料がないが、この十数年間、本疾患の診察人数の段階的な増加傾向が非常に明らかである。多くの病院の症例の統計をまとめて推定すると、潰瘍性大腸炎は羅患率が１１．６／１０万で、発症率が約３／１０万であり、クローン病は羅患率が１．４／１０万で、発症率が約０．４／１０万であり、実際の症例がより多くなる可能性がある。
【０００３】
アミノサリチル酸、糖質コルチコイド、免疫抑製剤、バイオ製剤等を基礎とする従来のＩＢＤの治療プランは現在依然として主流であり、病因が複雑で、治療効果が良くないため、治療を受けた多くの患者は緩和できず、８０％と高いクローン病患者および３０％のＵＣ患者は、最終的に手術を受ける必要があり、この分野では巨大の医学的ニーズは満足されていない。近年、糞便微生物移植（Ｆｅｃａｌ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、ＦＭＴ）の臨床試験および応用が進められているが、患者の受け入れ度が低く、更に探索する必要がある。そのため、腸部に入って著しい治療作用を発揮し、潰瘍面積を効果的に減少し、患者の症状を緩和することができるとともに、薬剤耐性を発生せず、安全で確実な炎症性腸疾患（ＩＢＤ）治療薬の見出しは、依然として臨床的に早急に解決すべき問題となっている。
【０００４】
ヤマモモ科（Ｍｙｒｉｃａｅ）ヤマモモ属（Ｍｙｒｉｃａ）植物は、中国での栽培面積が広く、歴史が長い。漢方薬の論述によると、ヤマモモ樹皮が苦く、性質が温かく、うっ血を取り除いて止血して鎮痛する効果を有し、民間では、打撲傷、骨折、下痢、胃および十二指腸潰瘍、歯痛等を治療するために用いられる。ミリカノール（Ｍｙｒｉｃａｎｏｌ）は、ヤマモモ樹皮から抽出した典型的な大環状ビフェニル型の環状ジアリールヘプタン系化合物であり、構造は式ＩＩＩに示すように、独特した化学構造を有するため、近年、該系の化合物は注目されており、現在報道されたミリカノールの薬理的活性に関連する研究は、主にその抗ウイルス、抗腫瘍、抗酸化、ラジカルの消去、免疫調節および抗アレルギー等の面に関し、その潜在的な用途が広いことが分かった。
【０００５】
ＣＮ１０２５５２２４３Ａは、ミリカノールおよび／またはミリセチンの抗腫瘍医薬の調製における使用を開示し、前記抗腫瘍医薬は、肝癌を予防および／または治療するため医薬、肺癌を予防および／または治療するための医薬、白血病を予防および／または治療するための医薬、胃癌を予防および／または治療するための医薬、または他の腫瘍を予防および／または治療するための医薬を含み、この出願はミリカノールの抗腫瘍における使用だけを開示し、腫瘍を治療する医薬としての作用に限られている。
【０００６】
ＣＮ１０５１９８７１４Ａは、ミリカノール誘導体、その調製方法および抗腫瘍における使用を開示し、該ミリカノール誘導体の構造は以下のとおりである。
【化１】
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【０００７】
ただし、Ｒは置換ベンジル基である。該ミリカノール誘導体は、ミリカノールを原料とし、塩基性条件で、置換ベンジル基と常温で置換反応して得られ、該ミリカノール誘導体の抗腫瘍医薬の調製における使用は、ミリカノールの５位のヒドロキシ基に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｍｅ、またはＯＭｅにより置換されたパラ位のベンジル系プロドラッグを導入することにより、インビボでゆっくりと加水分解し、親薬剤を放出して治療効果および作用時間を延長することができるとともに、バイオアベイラビリティを改善し、抗腫瘍活性も更に強化され、この方法で調製されたミリカノール誘導体も抗腫瘍方面の使用だけに限られている。
【０００８】
ＵＳ８９４０９４５Ｂ２は、Ｔａｕタンパク質を減少する方法、材料および神経変性疾患の治療方法を開示し、ミリカノール化合物を提供し、実施例において、ミリカノール誘導体はトウゴマ属植物から分離されて得られたものであり、神経変性疾患の治療に使用される。この出願で開示されるミリカノールおよび誘導体も、神経変性疾患における使用だけに限られている。
【０００９】
現在、ミリカノールおよびその誘導体の、炎症性腸疾患に関連する方面における使用に関する研究報告はまだない。ミリカノールをより良好にこの特定の適応症に使用するために、一定の構造活性相関に基づいてミリカノールを修飾し、修飾されたミリカノール誘導体はその活性および／または創薬可能性を増加することを目的とし、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療および予防の投薬要求を更に満たすことができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本願の目的は、抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬、その調製方法および使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
この発明目的を達成するために、本願は以下の技術案を採用する。
【００１２】
第１の態様では、本願は、式Ｉまたは式ＩＩで表される構造を有する、抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬を提供する。
【化２】
2021501171.tif 000004
【化３】
2021501171.tif 000005
（ただし、Ｒ１およびＲ２は、いずれも独立して水素、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、イソプロピル基、アリル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ベンジル基、アセチル基、スルホン酸基、リン酸基、安息香酸基、ベンズアミド基、ベンゾイルシクロプロピルアミノ基、ベンゼンスルホン酸基、ピリジンカルボキサミド基、ピコリノイルシクロプロピルアミノ基、ピリミジンカルボキサミド基、またはピリミジニルホルミルシクロプロピルアミノ基から選ばれるいずれか１種であり、
Ｒ３は水素、アセチル基、スルホン酸基、またはリン酸基から選ばれるいずれか１種であり、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が同時に水素ではなく、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が同時にアセチル基ではなく、Ｒ１およびＲ２が同時にベンジル基ではないことと、式ＩＩにおいて、Ｒ１およびＲ２が同時に水素またはベンジル基ではないこととを満たす。）
【００１３】
本願に係る抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬は、ＩＢＤに関連するＣＯＸ２のタンパク質発現を抑制することができ、炎症因子ＰＧＥ２を強く抑制する能力を有し、炎症性腸疾患の潰瘍面積を効果的に減少して症状を緩和することができるとともに、明らかな毒性の副反応がなく、安全性が高くて確実である。
【００１４】
従来方法に開示されたミリカノールおよびその誘導体の抗腫瘍方面における使用と比べ、本願に係る抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬は、全く新しい用途を開発し、ミリカノール誘導体の適用範囲を大きく拡張する。
【００１５】
上記ＣＯＸ２は誘導型酵素であり、複数種のサイトカインおよび炎症伝達物質により誘導され得て、炎症と密接に関連し、現在、正常な生理状態でＣＯＸ２はほとんど発現せず、いくつかの病理状態（例えば、胃潰瘍、炎症性腸疾患、結腸癌等）でＣＯＸ２の発現量が明らかに上昇し、ＰＧＥ２はＣＯＸ２下流の１つの重要な炎症指標因子であることが既に報告されている。
【００１６】
好ましくは、以下のような化合物Ａ〜Ｊ構造のうちのいずれか１種を有する。
【化４】
2021501171.tif 000006
【００１７】
好ましくは、前記抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の構造は、
【化５】
2021501171.tif 000007
【化６】
2021501171.tif 000008
または
【化７】
2021501171.tif 000009
のうちのいずれか１種である。
【００１８】
本願において、上記３種の構造のミリカノールの誘導体が好ましく、より高いＣＯＸ２のタンパク質発現抑制率を有し、より高い炎症因子ＰＧＥ２の抑制率を有し、抑制率が１００％に達することができ、他のミリカノール誘導体と比べてその抗炎症効果がより優れている。
【００１９】
第２の態様では、本願は、式Ｉで表される構造を有する、抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の調製方法であって、
以下の反応式のように、式ＩＩＩで表される化合物ミリカノールが、塩基性試薬の存在下で求核試薬と置換反応を経て式Ｉで表される化合物を得ることを含む調製方法を提供する。
【化８】
2021501171.tif 000010
（ただし、Ｒ１およびＲ２は、いずれも独立して水素、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、イソプロピル基、アリル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ベンジル基、アセチル基、スルホン酸基、リン酸基、安息香酸基、ベンズアミド基、ベンゾイルシクロプロピルアミノ基、ベンゼンスルホン酸基、ピリジンカルボキサミド基、ピコリノイルシクロプロピルアミノ基、ピリミジンカルボキサミド基、またはピリミジニルホルミルシクロプロピルアミノ基から選ばれるいずれか１種であり、
Ｒ３は水素、アセチル基、スルホン酸基、またはリン酸基から選ばれるいずれか１種であり、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が同時に水素ではなく、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が同時にアセチル基ではなく、Ｒ１およびＲ２が同時にベンジル基ではないことを満たす。）
【００２０】
本願において、求核試薬は、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３と同じ基を有するハロゲン化物または酸無水物等であり、反応後に式Ｉの構造を得ることができ、当業者は式Ｉの構造に基づいて求核試薬を選択することができる。
【００２１】
好ましくは、前記塩基性試薬は、ピリジン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、またはカリウム−ｔ−ブトキシドのうちのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含み、ピリジンまたはトリエチルアミンであることが好ましい。
【００２２】
本願において、塩基性試薬は上記挙げられた試薬に限定されず、塩基性環境を提供できて反応の順方向進行に寄与する塩基性試薬であれば良い。
【００２３】
好ましくは、前記式ＩＩＩで表される化合物ミリカノールと求核試薬とのモル比は１：（１〜６）であり、例えば、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、または１：６であってもよい。
【００２４】
本願において、式ＩＩＩで表される化合物ミリカノールと求核試薬とのモル比は置換反応の過程を決める。異なる求核試薬は立体障害や電子的効果が異なるため、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３の置換反応に優先順位が存在し、一般的には、優先順位がＲ１＞Ｒ２＞Ｒ３であるが、置換基に対応する置換試薬がハロゲン化アシル（ａｃｙｌ  ｈａｌｉｄｅ）である場合、優先順位がＲ３＞Ｒ１＞Ｒ２である。本願は、反応中にミリカノールと求核試薬との投入比を制御することにより、一置換または多置換の反応生成物を得ることができる。
【００２５】
例示的には、反応順序がＲ１＞Ｒ２＞Ｒ３である場合、ミリカノールは無水酢酸と反応し、反応のモル比を約１：２に制御して投入すると、このとき、Ｒ１とＲ２位置だけの置換が発生し、この場合、
【化９】
2021501171.tif 000011
を得ることができる。ミリカノールは臭化アリルと反応する場合、反応のモル比を１：１に制御して投入すると、Ｒ１位置だけの置換が発生し、得られた化合物は
【化１０】
2021501171.tif 000012
である。反応順序がＲ３＞Ｒ１＞Ｒ２である場合、ミリカノールはクロロスルホン酸と反応し、両者の反応のモル比を約１：１に制御して投入すると、Ｒ３位置だけの置換が発生し、得られた化合物は、
【化１１】
2021501171.tif 000013
である。
【００２６】
好ましくは、前記置換反応の溶媒は、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ピリジン、またはトリエチルアミンのうちのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含む。
【００２７】
好ましくは、前記置換反応の温度は０〜８０℃であり、例えば、０℃、５℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃、５０℃、５５℃、６０℃、６５℃、７０℃、７５℃、または８０℃等であってもよい。
【００２８】
好ましくは、前記置換反応の時間は１〜３０ｈであり、例えば、１ｈ、５ｈ、１０ｈ、１５ｈ、２０ｈ、２５ｈ、または３０ｈ等であってもよい。
【００２９】
また、本願は、式Ｉで表される構造を有する、抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の調製方法であって、
以下の反応式のように、式ＩＶで表される化合物が、酸化剤の存在下で酸化反応により式ＩＩで表される化合物を得ることを含む調製方法を更に提供する。
【化１２】
2021501171.tif 000014
（ただし、Ｒ１およびＲ２は、いずれも独立して水素、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、イソプロピル基、アリル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ベンジル基、アセチル基、スルホン酸基、リン酸基、安息香酸基、ベンズアミド基、ベンゾイルシクロプロピルアミノ基、ベンゼンスルホン酸基、ピリジンカルボキサミド基、ピコリノイルシクロプロピルアミノ基、ピリミジンカルボキサミド基、またはピリミジニルホルミルシクロプロピルアミノ基から選ばれるいずれか１種であり、
Ｒ１およびＲ２が同時に水素またはベンジル基ではないことを満たす。）
【００３０】
好ましくは、前記式ＩＶで表される化合物と酸化剤とのモル比は１：（０．５〜５）であり、例えば、１：０．５、１：１、１：１．５、１：２、１：２．５、１：３、１：３．５、１：４、１：４．５、または１：５等であってもよい。
【００３１】
好ましくは、前記酸化剤は、クロロクロム酸ピリジニウム塩、三酸化クロム、オゾン、過酸化水素水、または三酸化硫黄のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含む。
【００３２】
好ましくは、前記酸化反応の溶媒は、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、トルエン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ｎ−ヘプタン、またはジメチルスルホキシドのうちのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含む。
【００３３】
好ましくは、前記酸化反応の温度は０〜５０℃であり、例えば、０℃、５℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃、または５０℃であってもよい。
【００３４】
好ましくは、前記酸化反応の時間は１〜１０ｈであり、例えば、１ｈ、２ｈ、３ｈ、４ｈ、５ｈ、６ｈ、７ｈ、８ｈ、９ｈ、または１０ｈであってもよい。
【００３５】
第３の態様では、本願は、第１の態様に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の医薬的に許容される塩を提供する。
【００３６】
好ましくは、前記医薬的に許容される塩は、式Ｉで表される化合物の金属塩または式ＩＩで表される化合物の金属塩である。
【００３７】
好ましくは、前記金属塩は、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、またはカルシウム塩のうちのいずれか１種を含み、ナトリウム塩またはカリウム塩であることが好ましい。
【００３８】
第４の態様では、本願は、第１の態様に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の溶媒和物を提供する。
【００３９】
好ましくは、前記溶媒和物は、式Ｉで表される化合物の水和物、式Ｉで表される化合物のアルコール和物、式ＩＩで表される化合物の水和物、または式ＩＩで表される化合物のアルコール和物である。
【００４０】
第５の態様では、本願は、第１の態様の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の互変異性体もしくは立体化学異性体を提供する。
【００４１】
本願において、互変異性体とは、化学構造における二重結合のシス−トランス異性を指し、立体化学異性体とは、Ｒ３基における各キラル中心の異性を指す。
【００４２】
第６の態様では、本願は、第１の態様に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬のプロドラッグを提供する。
【００４３】
本願において、抗炎症性腸疾患の作用を有するプロドラッグは、インビトロで活性がないかまたは活性が小さく、インビボ代謝変化を経た後に活性を有するミリカノール誘導体を放出することにより、その作用を発揮する。
【００４４】
第７の態様では、本願は、第１の態様に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬を含む医薬組成物を提供する。
【００４５】
好ましくは、前記医薬組成物は補助材料を更に含む。
【００４６】
好ましくは、前記補助材料は、賦形剤、希釈剤、担体、調味剤、粘着剤、または充填剤のうちのいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを含む。
【００４７】
好ましくは、前記抗炎症医薬組成物の剤形は、経口投与製剤、外用製剤、または非経口投与製剤のうちのいずれか１種を含む。
【００４８】
例えば、本願において、前記医薬組成物は、固体、半固体、液体、または気体製剤として調製することができ、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉剤、粒剤、ペースト剤、乳剤、懸濁剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル化剤、微小球およびエアロゾル等である。本願における化合物、またはその医薬的に許容される塩、またはその医薬組成物を投与する典型的な経路は、経口、直腸、局所、吸入、非経口、舌下、膣内、鼻内、眼内、腹膜内、筋肉内、皮下、静脈内投与を含んでもよいが、これらに限定されない。
【００４９】
第８の態様では、本願は、第１の態様に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬、第３の態様に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の医薬的に許容される塩、第４の態様に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の溶媒和物、第５の態様に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬の互変異性体もしくは立体化学異性体、第６の態様に記載の抗炎症性腸疾患の作用を有するプロドラッグ、あるいは第７の態様に記載の医薬組成物の、炎症性腸疾患を治療する医薬の調製における使用を提供する。
【発明の効果】
【００５０】
従来技術と比べ、本願は以下の有益な効果を有する。
【００５１】
本願に係る抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、互変異性体もしくは立体化学異性体、または医薬組成物は、炎症性腸疾患に良好な作用を果たすことができ、いずれも炎症性腸疾患の予防治療薬剤として開発することができる。本願に係る抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬は、良好な創薬可能性を有し、炎症性腸疾患の潰瘍面積を効果的に減少して症状を緩和することができるとともに、安全で確実であり、炎症性腸疾患のような症状を緩和し改善する必要がある疾患に対して更に臨床的意義を有し、広い応用の見通しを有している。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】本願の実施例１の化合物Ａの核磁気共鳴スペクトルである。
【図２】本願の実施例７の化合物Ｇの核磁気共鳴スペクトルである。
【図３】本願の実施例８の化合物Ｈの核磁気共鳴スペクトルである。
【図４】図４Ａは本願の実施例１０における化合物ＡのマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の増殖活性に対する影響の図であり、図４Ｂは本願の実施例１０における化合物ＢのマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の増殖活性に対する影響の図であり、図４Ｃは本願の実施例１０における化合物ＣのマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の増殖活性に対する影響の図であり、図４Ｄは本願の実施例１０における化合物ＤのマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の増殖活性に対する影響の図であり、図４Ｅは本願の実施例１０における化合物ＥのマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の増殖活性に対する影響の図であり、図４Ｆは本願の実施例１０における化合物ＦのマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の増殖活性に対する影響の図であり、図４Ｇは本願の実施例１０における化合物ＧのマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の増殖活性に対する影響の図であり、図４Ｈは本願の実施例１０における化合物ＨのマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の増殖活性に対する影響の図である。
【図５】本願の実施例１０における化合物Ａ〜Ｈの、マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７が分泌したＩＬ−６のタンパク質レベルに対する影響の図（ｎ＝３）である。
【図６】本願の実施例１０における化合物Ａ〜Ｈの、マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７が分泌したＴＮＦ−αのタンパク質レベルの活性に対する影響の図（ｎ＝３）である。
【図７】本願の実施例１０における化合物Ａ、Ｂ、ＧおよびＨの、マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７が分泌したＰＧＥ２のタンパク質レベルに対する影響の図（ｎ＝３）である。
【図８】本願の実施例１０における化合物Ａ、Ｂ、ＧおよびＨの、マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７が発現したＣＯＸ２タンパク質に対する影響の図である。
【図９】本願の実施例１０における化合物Ｈの、マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７が発現したＰＧＥ２のタンパク質レベルに対する活性比較図（ｎ＝３）である。
【図１０】本願の実施例１１における化合物Ｈの、５％のＤＳＳにより誘導された急性ＩＢＤモデルの体重変化率に対する影響の図（ｎ＝１０）である（ブランクグループ  ｖｓ  ５％のＤＳＳ  ＊＊＊ｐ＜０．００１、５％のＤＳＳ  ｖｓ  ５％のＤＳＳ＋５ｍｇ／ｋｇ  ＃＃ｐ＜０．０１）。
【図１１】本願の実施例１１における化合物Ｈの、５％のＤＳＳにより誘導された急性ＩＢＤモデルの血清内のＩＬ−６のタンパク質レベルに対する影響の図（ｎ＝１０）である。
【図１２】本願の実施例１１における化合物Ｈの、５％のＤＳＳにより誘導された急性ＩＢＤモデルのＤＡＩ採点に対する影響の図（ｎ＝１０）である。
【図１３】本願の実施例１１における化合物Ｈの、５％のＤＳＳにより誘導された急性ＩＢＤモデルの結腸直腸の病理に対する影響の図である。
【図１４】本願の実施例１１における化合物Ｈの、５％のＤＳＳにより誘導された急性ＩＢＤモデルの結腸直腸のＭＰＯに対する影響の図である。
【図１５】本願の実施例１２における化合物Ｈで治療するラットの結腸直腸の湿重量変化の模式図である。
【図１６】本願の実施例１２における化合物Ｈで治療するラットの結腸直腸の潰瘍面積の模式図である。
【図１７】本願の実施例１２における化合物Ｈで治療するラットの結腸直腸の病理ＨＥの炎症採点の模式図である（ｐ＜０．０５  ｖｓ  ブランク    ＃ｐ＜０．０５  ｖｓ  ２．５％のＴＮＢＳ＋溶媒）。
【図１８】本願の実施例１２における化合物Ｈで治療するラットの結腸直腸の病理ＨＥの概ねの損傷の採点の模式図である（＊ｐ＜０．０５  ｖｓ  ブランク    ＃＃ｐ＜０．０１  ｖｓ  ２．５％のＴＮＢＳ＋溶媒）。
【図１９】本願の実施例１２における化合物Ｈで治療するラットの結腸直腸の病理ＨＥの潰瘍損傷の採点の模式図である（＊ｐ＜０．０５  ｖｓ  ブランク    ＃ｐ＜０．０５  ｖｓ  ２．５％のＴＮＢＳ＋溶媒）。
【図２０】本願の実施例１２における化合物Ｈで治療するラットの結腸直腸の解剖損傷の模式図である。
【図２１】本願の実施例１２における化合物Ｈで治療するラットの結腸直腸のＨＥの病理模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
以下、具体的な実施形態を参照しながら本願の技術案について更に説明する。当業者であれば、前記実施例は本願を理解するためのものに過ぎず、本願を具体的に限定するものではないことを理解すべきである。
【００５４】
実施例１
本実施例は以下の方法により、５，１７−ジアセトキシミリカノールを調製した。
【００５５】
窒素保護の下で、ミリカノール（０．４９ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（３０ｍｌ）およびピリジン（０．３２ｇ、４．１０ｍｍｏｌ）を順に１００ｍｌのナスフラスコに入れ、無水酢酸（０．３１ｇ、２．２０ｍｍｏｌ）を別に取り、ジクロロメタン（２０ｍｌ）で希釈し、定圧滴下漏斗に置き、ナスフラスコにゆっくりと滴下して反応を行い、約３０ｍｉｎかけて滴下を終了した。系を６０℃の油浴に移して３ｈ還流反応させ、反応液をＬＣ−ＭＳにより検出した。反応液を、調製用液体クロマトグラフィー分離（移動相：石油エーテル−酢酸エチル：０〜３５％）で勾配溶出し、レシーバー液を合わせ、溶媒をスピンドライして５，１７−ジアセトキシミリカノール（白色固体Ａ、０．３５ｇ、ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４４３．１（Ｍ＋１）＋、純度９９．３６％）を取得し、収率が５８％であった。その核磁気共鳴スペクトルは図１に示すとおりである。
【００５６】
実施例
本実施例は以下の方法により、５−ｎ−プロポキシミリカノールを調製した。
【００５７】
窒素保護の下で、ミリセチン（０．３６ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）、１−クロロプロパン（０．１７ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．４２ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）を順に１００ｍｌのナスフラスコに入れた。系を１００℃の油浴内で３ｈ反応させ、反応液をＬＣ−ＭＳにより検出した。反応液を調製用液体クロマトグラフィー分離（移動相：石油エーテル−酢酸エチル：０〜３５％）で勾配溶出し、レシーバー液を合わせ、溶媒をスピンドライして５−ｎ−プロポキシミリカノール（白色固体Ｂ、０．２８ｇ、ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３９５．６（Ｍ−Ｈ）−、９９．３８％）を取得し、収率が７０％であった。
【００５８】
実施例３
本実施例は以下の方法により、５−ベンジルオキシミリカノールを調製した。
【００５９】
窒素保護の下で、ミリカノール（０．３６ｇ、１．００ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１０ｍｌ）、ブロモベンジル（０．３８ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．４２ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）を順に１００ｍｌのナスフラスコに入れた。系を８０℃の油浴内で６ｈ反応させ、反応液をＬＣ−ＭＳにより検出した。反応液を調製用液体クロマトグラフィー分離（移動相：石油エーテル−酢酸エチル：０〜３５％）で勾配溶出し、レシーバー液を合わせ、溶媒をスピンドライして５−ベンジルオキシミリカノール（白色固体Ｃ、０．２０ｇ、ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４４７．６（Ｍ−Ｈ）−、９８．０９％）を取得し、収率が６２％であった。
【００６０】
実施例４
本実施例は以下の方法により、５，１７−ジアリルオキシミリカノールを調製した。
【００６１】
窒素保護の下で、ミリカノール（０．３６ｇ、１．００ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１０ｍｌ）、臭化アリル（０．２７ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．４２ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）を順に１００ｍｌのナスフラスコに入れた。系を８０℃の油浴内で６ｈ反応させ、反応液をＬＣ−ＭＳにより検出した。反応液を調製用液体クロマトグラフィー分離（移動相：石油エーテル−酢酸エチル：０〜３５％）で勾配溶出し、レシーバー液を合わせ、溶媒をスピンドライして５，１７−ジアリルオキシミリカノール（白色固体Ｄ、０．３５ｇ、ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４３９．６（Ｍ−Ｈ）−、９９．７０％）を取得し、収率が７９％であった。
【００６２】
実施例５
本実施例は以下の方法により、５−アリルオキシミリカノールを調製した。
【００６３】
窒素保護の下で、ミリカノール（０．３６ｇ、１．００ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１０ｍｌ）、臭化アリル（０．１３ｇ、１．１０ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．４２ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）を順に１００ｍｌのナスフラスコに入れた。系を６０℃の油浴内で６ｈ反応させ、反応液をＬＣ−ＭＳにより検出した。反応液を調製用液体クロマトグラフィー分離（移動相：石油エーテル−酢酸エチル：０〜３５％）で勾配溶出し、レシーバー液を合わせ、溶媒をスピンドライして５−アリルオキシミリカノール（白色固体Ｅ、０．２２ｇ、ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３９９．２（Ｍ＋Ｈ）＋、９６．６４％）を取得し、収率が５５％であった。
【００６４】
実施例６
本実施例は以下の方法により、５，１７−アリルオキシミリセチンを調製した。
【００６５】
５，１７−ジアリルオキシミリカノール（１．２０ｇ、２．７４ｍｍｏｌ）を秤量してジクロロメタン（５０ｍｌ）に溶解し、クロロクロム酸ピリジニウム（２．９５ｇ、１３．６９ｍｍｏｌ）を加え、アルゴンガス保護の下で１ｈ反応させた。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝３：１）は原料が消失したことを示すと、反応を停止し、濃縮してライトブラウン固体を得た。高速調製用クロマトグラフィーを用いてカラムクロマトグラフィー（石油エーテル−酢酸エチル：０〜３５％）を行って勾配溶出し、５，１７−アリルオキシミリセチン（白色固体Ｆ、０．７１ｇ、ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４３６．６（Ｍ＋Ｈ）＋、９４．５３％）を取得し、収率が５９％であった。
【００６６】
実施例７
本実施例は以下の方法により、５−アセトキシミリカノールを調製した。
【００６７】
窒素保護の下で、ミリカノール（０．４９ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（３０ｍｌ）およびピリジン（０．３２ｇ、４．１０ｍｍｏｌ）を順に１００ｍｌのナスフラスコに入れ、無水酢酸（０．１６ｇ、１．１０ｍｍｏｌ）を別に取り、ジクロロメタン（２０ｍｌ）で希釈し、定圧滴下漏斗に置き、ナスフラスコにゆっくりと滴下して反応を行い、約３０ｍｉｎかけて滴下を終了した。系を６０℃の油浴に移して３ｈ還流反応させ、反応液をＬＣ−ＭＳにより検出した。反応液を調製用液体クロマトグラフィー分離（移動相：石油エーテル−酢酸エチル：０〜３５％）で勾配溶出し、レシーバー液を合わせ、溶媒をスピンドライして５−アセトキシミリカノール（白色固体Ｇ、０．３２ｇ、ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４００．７（Ｍ＋Ｈ）＋、９４．６７％）を取得し、収率が８０％であった。その核磁気共鳴スペクトルは図２に示すとおりである。
【００６８】
実施例８
本実施例は以下の方法により、１１−スルホニルオキシミリカノールを調製した。
【００６９】
ミリカノール（０．３６ｇ、１．００ｍｍｏｌ）を秤量してジクロロメタン（２０ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（０．２４ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）を加えた。氷浴で、クロロスルホン酸（０．１８ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（１０ｍｌ）溶液を滴下し、１５ｍｉｎ滴下し、１６ｈ以上反応させた。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝３：１）は原料が消失したことを示した。シリカゲル（１００〜２００メッシュ、３ｇ）を加えて撹拌し、高速調製用クロマトグラフィーを用いてカラムクロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン−ＭｅＯＨ：０−１５％）を行って勾配溶出し、溶媒をスピンドライして１１−スルホニルオキシミリカノール（白色固体Ｈ、０．３８ｇ、ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４３６．７（Ｍ−Ｈ）−、９７．８２％）を取得し、収率が８６％であった。その核磁気共鳴スペクトルは図３に示すとおりである。
【００７０】
実施例９
本実施例は以下の方法により、５，１７−ジアセトキシミリセチンを調製した。
【００７１】
５，１７−ジアセトキシミリカノール（０．３６ｇ、１．００ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍｌ）に溶解し、クロロクロム酸ピリジニウム（１．２９ｇ、６．００ｍｍｏｌ）を加え、アルゴンガス保護の下で１ｈ反応させた。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）は原料が消失したことを示すと、反応を停止し、濃縮してライトブラウン固体を得た。高速調製用クロマトグラフィーを用いてカラムクロマトグラフィー（石油エーテル−酢酸エチル：０〜３５％）を行って勾配溶出し、５，１７−ジアセトキシミリセチン（白色固体Ｊ、０．３２ｇ、ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４６３．２（Ｍ＋２３）＋、９４．５３％）を取得し、収率が９４％であった。
【００７２】
実施例１０
本実施例において、実施例１〜８で調製した化合物Ａ〜Ｈに対してインビトロ抗炎症活性テストを行った。
【００７３】
ミリカノール誘導体の、細菌性リポ多糖（以下、ＬＰＳと略称する）の刺激により誘導されたマウスのマクロファージ細胞株ＲＡＷ２６４．７が分泌したＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＰＧＥ２等の炎症因子の発現に対する影響：予め調製された細胞懸濁液を取り、１５０００個の細胞／ウェル、１００μｌ／ウェルで９６ウェルプレートに接種し、３７℃で５％のＣＯ２インキュベーターに置いて一晩培養し、細胞を８０％集め、元の培養液を捨て、ウェルごとに配合された異なる濃度の被験薬液を１００μＬ加え、薬を加えて１ｈ培養した後、ＬＰＳ溶液を加え、培養系におけるＬＰＳの最終濃度が１００ｎｇ／ｍＬであった。濃度ごとに平行な３ウェルを設け、それと同時に細胞対照グループ（薬剤無し、溶媒無し）、およびブランク培地対照グループ（細胞無し、溶媒対照孔（Ｚｅｒｏ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ  ｈｏｌｅ））を設け、２４ｈ培養し続けた。細胞培養上清を吸い取り、Ｒ＆Ｄ  ＥＬＩＳＡ検出キット（Ｍ６０００Ｂ、ＭＴＡ００Ｂ、ＶＡＬ６０１）を用い、各グループのＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＰＧＥ２等の炎症因子の発現を検出した。
【００７４】
図４は、各ミリカノール誘導体（すなわち、化合物Ａ〜Ｈ）の、マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の増殖活性に対する影響を示す。図４の結果から見られるように、一部の化合物Ａ（４０μＭ）、Ｂ（３０μＭ）、Ｃ（３０μＭ）、Ｄ（３０μＭ）、Ｅ（３０μＭ）、Ｆ（８０μＭ）、Ｇ（４０μＭ）、Ｈ（８０μＭ）は、マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の増殖活性に対して明らかな影響（ｎ＝３）がなく、後続の抗炎症活性はいずれも該薬剤濃度またはそれ以下の濃度で行った。
【００７５】
細胞実験において、ｎは実験回数であり、毎回３つのウェル（繰り返し数）があり、動物実験において、ｎは各グループの動物の数（サンプル量）である。
【００７６】
図５、図６および図７は、ミリカノール誘導体の、マウスマクロファージＲＡＷ  ２６４．７の抗炎症活性に対する影響（ｎ＝３）を示す。
【００７７】
図５の結果から見られるように、全てのミリカノール誘導体は、ＬＰＳにより誘導されたマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７細胞が分泌したＩＬ−６に対して抑制作用を有することを示し、Ａ、Ｂ、Ｇ、Ｈのような一部の化合物は、ＬＰＳの刺激によるＲＡＷ２６４．７細胞のＩＬ−６分泌を強く抑制する作用を有し、炎症性腸疾患患者の血清または腸管局所的炎症に対して抑制作用を有する可能性があることを意味する。
【００７８】
図６の結果から見られるように、一部のミリカノール誘導体は、ＬＰＳにより誘導されたマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７細胞が分泌したＴＮＦ−αに対して著しい抑制作用を有することを示し、炎症性腸疾患患者の血清または腸管局所的炎症に対して抑制作用を有する可能性があることを意味する。
【００７９】
図７の結果から見られるように、一部のミリカノール誘導体（Ａ、Ｂ、Ｇ、Ｈ）は、ＬＰＳにより誘導されたマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７細胞が分泌したＰＧＥ２に対して著しい抑制作用を有し、炎症性腸疾患患者の血清または腸管局所的炎症に対して抑制作用を有する可能性があることを意味する。
【００８０】
図８の結果から見られるように、ミリカノールおよびその一部の誘導体（Ａ、Ｂ、Ｇ、Ｈ）は、ＩＢＤに関連するＣＯＸ２のタンパク質発現を抑制することができ、誘導体ＧおよびＨの抑制効果はミリカノールよりも優れた。
【００８１】
図９の結果から見られるように、ミリカノールとその誘導体Ａ、Ｂ、ＧおよびＨは、炎症因子ＰＧＥ２を強く抑制する能力を有し、図中から見られるように、誘導体ＨのＰＧＥ２を抑制する活性は、良好な用量依存性があり、且つ２０μＭの用量で誘導体Ｈの抑制効果はミリカノールよりも優れた。
【００８２】
ミリカノールおよび化合物Ｈの、ＬＰＳにより誘導されたマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７が分泌したＰＧＥ２に対する抑制作用は、以下の表１に示すとおりである。
【００８３】
【表１】
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【００８４】
実施例１１
本実施例において、ミリカノール誘導体化合物Ｈの、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）により誘導されたＩＢＤマウスインビボモデルに対するインビボにおける薬力学的活性をテストした。
【００８５】
雌性で６〜８週齢のＳＰＦ級Ｃ５７ＢＬ／６マウスを３〜７日適応性飼育させた後、５％のデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）水溶液を自由摂水の方式でマウスに給餌し（ｄａｙ０）、２日ごとに新鮮なＤＳＳ水溶液を１回交換し、ＤＳＳ水溶液を７日（ｄａｙ７）間自由摂水した後、新鮮な精製水に交換して給餌した。モデル構築してから４日間後に、モデル構築の５日目から投与し始め、尾静脈投与でそれぞれ動物に５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、１．２５ｍｇ／ｋｇの薬剤を投与して治療した。４日間連続的に投与した後、１日観察し、最後一回投与してから２４時間後に実験を終了した。
【００８６】
検出指標：各グループの動物の体重を観察して毎日記録するとともに、各動物の糞便を収集し、便潜血の状況を検出し、明らかな血便を判断できないと、潜血検出キットで潜血状況を確認し、実験記録紙に記録し、且つ撮像して記録した。実験が終了すると、動物血清を収集し、血液内のＩＬ−６の発現を検出した。それと同時に、各動物の糞便性状、潜血状況、体重変化率に対して採点し、得られた点数を加算して該動物のＤＡＩ点数を得た。動物の結腸直腸組織のサンプルを収集し、後続の病理学および組織内のＭＰＯ等の検出を行った。
【００８７】
図１０の結果から見られるように、ミリカノール誘導体Ｈは、５％のＤＳＳにより誘導されたマウス急性ＩＢＤモデルの体重減少傾向に対して緩和の作用を有することを示した。炎症性腸疾患患者の体重軽減を改善する作用を有することを意味する。
【００８８】
図１１の結果から見られるように、ミリカノール誘導体Ｈは著しい抗炎症作用を示し、炎症性腸疾患患者の炎症反応を改善する作用を有することを意味する。
【００８９】
図１２の結果から見られるように、ミリカノール誘導体Ｈは著しいマウスＤＡＩ採点低減作用を示し、炎症性腸疾患患者の疾患状態全体を改善し、病症を改善する作用を有することを意味する。
【００９０】
図１３の結果から見られるように、ミリカノール誘導体Ｈは、５％のＤＳＳのＣ５７ＢＬ／６マウス腸管粘膜に対する損傷を修復する著しい作用を示し、炎症性腸疾患患者の腸管損傷を改善する作用を有することを意味する。
【００９１】
図１４の結果から見られるように、ミリカノール誘導体Ｈは、５％のＤＳＳによるマウスの結腸直腸部位の酸化的損傷を改善する一定の作用を有する。
【００９２】
実施例１２
本実施例において、化合物Ｈの、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）により誘導されたＩＢＤラットインビボモデルに対するインビボにおける薬力学的活性をテストした。
【００９３】
試験方法：雌性で１８０〜２００ｇのＳＰＦ級ＳＤラットを５〜７日間適応性飼育させた後、モデル構築を開始し、モデル構築するとき、まずラットを麻酔し、予めマークされた猫用尿道カテーテルを肛門から貫通して結腸の８センチメートルまで入れ、その後、２５０μＬの２．５％（ｗｔ／ｖｏｌ）のＴＮＢＳ溶液をゆっくりと結腸の内腔に注入してラットを１分間反転させ、１分間後に、カテーテルを腸管から徐々に取り出し、頭を下向きにしてラットを１分間放置し、その後、ラットをケージ内に戻し、ブランクグループのラットに同じ容量の生理食塩水を投与した。モデル構築の２日目、すなわち、Ｄ１に、胃内投与の方式で投与し、６日間連続的に投与した。
【００９４】
検出指標：各グループ動物体重を観察して毎日記録し、実験が開始すると各動物糞便を収集し、便潜血状況を検出し、明らかな血便を判断できないと、潜血検出キットで潜血状況を確認し、実験記録紙に記録し、且つ撮像して記録した。実験が終了すると、各動物の糞便性状、潜血状況、体重変化率に対して採点し、得られた点数を加算して最終的な各動物のＤＡＩ点数を得た。動物結腸直腸組織のサンプルを収集し、湿重量を秤量し、後続の病理学的検出を行った。
【００９５】
実験結果により、２．５％のＴＮＢＳでラットを処理した後、ラットの腸湿重量は、ブランクグループと治療グループの両方よりも増加したが、いずれも統計学的差異がなく、一方、Ｈ−１２．５ｍｇ／ｋｇ投与グループは、ラットの浮腫を軽減する傾向がある（図１５に示す）ことが示されている。
【００９６】
実験結果：１２．５ｍｇ／ｋｇ−Ｈの経口投与は、２．５％のＴＮＢＳにより誘導されたＩＢＤモデルの結腸直腸の潰瘍面積を著しく縮小する作用を有し（図１６に示す）、該指標では、治療効果が５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）よりもやや良好であった。
【００９７】
実験結果：１２．５ｍｇ／ｋｇ−Ｈの経口投与は、２．５％のＴＮＢＳにより誘導されたＩＢＤモデルの結腸直腸の炎症レベルを著しく低減する傾向があり、該指標では、治療効果が５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）に相当した（図１７に示す）。
【００９８】
実験結果：１２．５ｍｇ／ｋｇ−Ｈの経口投与は、２．５％のＴＮＢＳにより誘導されたＩＢＤモデルの結腸直腸の概ねの損傷レベルを著しく低減する作用を有し、該指標では、治療効果が５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）に相当した（図１８に示す）。
【００９９】
実験結果：１２．５ｍｇ／ｋｇ−Ｈの経口投与は、２．５％のＴＮＢＳにより誘導されたＩＢＤモデルの結腸直腸の潰瘍損傷採点を著しく低減する作用を有し、該指標では、治療効果が５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）よりもやや良好であった（図１９に示す）。
【０１００】
実験結果：１２．５ｍｇ／ｋｇ−Ｈ、２５ｍｇ／ｋｇ−Ｈの経口投与は、２．５％のＴＮＢＳにより誘導されたＩＢＤモデルの結腸直腸の潰瘍損傷を低減する作用を有した（図２０および図２１に示す）。
【０１０１】
病理的観察結果により、１２．５ｍｇ／ｋｇ−Ｈの経口投与は、２．５％のＴＮＢＳにより誘導されたＩＢＤモデルのラットの結腸直腸の炎症採点を著しく緩和する作用を有し（図１７に示す）、２．５％のＴＮＢＳにより誘導されたＩＢＤモデルのラットの結腸直腸の全体損傷程度を著しく縮小する治療効果を有し（図１８に示す）、２．５％のＴＮＢＳにより誘導されたＩＢＤモデルのラットの損傷の重篤度を著しく緩和する治療効果を有する（図１９、図２０および図２１に示す）ことが示されている。
【０１０２】
以上の実験結果をまとめ、ミリカノール誘導体である化合物Ｈは良好な抗炎症性腸疾患の作用を有することを意味する。
【０１０３】
実施例１３
本実施例において、化合物Ａ、Ｂ、Ｇおよび化合物Ｈの急性毒性をテストし、具体的なステップは以下のとおりである。
【０１０４】
実験方法：３０匹のＳＤラットを採用し、雌雄半分ずつ、グループ分けする時、体重平均数は雌１６０〜２００ｇで、雄１８０〜２２０ｇであり、個体体重は平均体重±２０％範囲内にあるべきであった。試験前に、動物をまず少なくとも５日間馴化させる必要があり、健康（雌である場合妊娠していない）のラットを被験動物として選択した。馴化期間の主な検査内容は、注文時に要求する品質指標と一致するか否か、一般的な状態検査、体重が試験に要求される体重範囲に達するか否かを検査することであった。不合格の異常動物を本試験に取り込まない。ラットに経口単回投与し、低、中、高用量で投与し、ブランク製剤予備実験により、用量調整はそれぞれ１００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇであり、対照グループを別に設け、等体積の溶媒を経口投与した。
【０１０５】
観察方法：（１）一般的な状態の観察：ラットの外観徴候、投与部位（出血の有無、発赤腫脹、うっ血、硬変、化膿、潰瘍）、毛、一般的な挙動活動、精神状態、腺体分泌、皮膚と粘膜の色、呼吸状態、糞便性状、生殖器、死亡等の状況、および他の毒性症状を観察し、毎回投与してから約０〜２時間、４〜６時間に、１回ずつ観察し、毒性症状があれば観察回数を増加してもよい。（２）概ねの解剖学的観察：試験の１４日目に、各グループのすべての生きているラットを解剖して観察し、投与部位および概ねの解剖により、テスト製品に関連する可能性のある異常臓器組織を観察して見出し、撮像して記録した。（３）瀕死動物の取り扱い：ラット状態および観察時間を記録し、体重を測定した。（４）死亡動物の取り扱い：ラットの死亡時間または死亡発見時間を記録し、体重を測定した後、速やかに解剖して概ね観察し、その死因を推定した。化合物Ａ、Ｂ、ＣおよびＨの急性毒性用量および結果は以下の表２に示すとおりである。
【０１０６】
【表２】
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【０１０７】
実験結果：ＳＤラットに上記化合物を単回胃内投与した後、明らかな毒副作用が現れず、明らかな体重減少および食事量減少の傾向が見られなかった。ミリカノール誘導体の単回急性毒性耐量ＭＴＤ＞１０００ｍｇ／ｋｇであることを意味し、ここで、ＨのＭＴＤ＞１５００ｍｇ／ｋｇであった。
【０１０８】
本願の上記実施例をまとめると、本願の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬は、合成原料が天然物に由来し、グリーンで環境に優しく、合成プロセス過程が簡単で、制御しやすく、薬効実験から見ると、該系化合物は、炎症性腸炎（ＩＢＤ）疾患の治療薬として広く使用でき、且つ、明らかな副作用が見られず、広い応用の見通しを有していることが分かった。
【０１０９】
本願は上記実施例により本願の抗炎症性腸疾患の作用を有する医薬、その調製方法および使用を説明したが、本願は上記プロセスステップに限定するものではなく、すなわち、本願が上記プロセスステップに依存しなければ実施できないことを意味するものではないことを、出願人より声明する。当業者であれば、本願に対するいかなる改良、本願に使用される原料に対する等価的な置換および補助成分の追加、具体的な形態の選択等は、全て本願の保護範囲および開示範囲内に含まれることを理解すべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４（Ａ）】
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【図４（Ｂ）】
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【図４（Ｃ）】
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【図４（Ｄ）】
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【図４（Ｅ）】
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【図４（Ｆ）】
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【図４（Ｇ）】
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【図４（Ｈ）】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【国際調査報告】
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