(57)【要約】  遅消化性デキストリンの製造方法が開示され、生物学的に変性されたデンプンの分野に属する。前記方法は、Ｒｏ−ＧＢＥ及びＧｔ−ＧＢＥを用いて変性対象デンプンを協同的に変性することを含む。異なる微生物由来の２種類のデンプン枝作り酵素を用いてコーンスターチを協同的に処理し、すなわち、まず、Ｒｏ−ＧＢＥを添加して前処理し、次にＧｔ−ＧＢＥを添加することにより、Ｒｏ−ＧＢＥで変性対象デンプンを触媒してＧｔ−ＧＢＥの更なる利用により有利なセグメント構造を形成し、Ｇｔ−ＧＢＥの作用により細長いタイプのデンプン分子をずんぐりしたタイプのより緊密な分岐構造に変換し、変性物の遅消化性をより顕著にする。さらに、Ｒｏ−ＧＢＥの添加量、変性時間及び変性対象デンプンの状態を変化させることにより、両者間の相乗作用を促進し、アミロペクチンの分岐度を高め、遅消化及び難消化性デンプンの含有量をさらに高める。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｒｈｏｄｏｔｈｅｒｍｕｓ  ｏｂａｍｅｎｓｉ由来のデンプン枝作り酵素Ｒｏ−ＧＢＥとＧｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｇｌｕｃｏｓｉｄａｎｓ由来のデンプン枝作り酵素Ｇｔ−ＧＢＥとを用いて変性対象デンプンを協同的に変性することを含む、ことを特徴とする遅消化性デキストリンの製造方法。
【請求項２】
まず、Ｒｏ−ＧＢＥを添加して変性対象デンプンを前処理し、次に、Ｇｔ−ＧＢＥを添加して変性対象デンプンを協同的に変性することを含む、ことを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
まず、Ｒｏ−ＧＢＥを添加して変性対象デンプンを前処理するときに、Ｒｏ−ＧＢＥの添加量が２５〜４０Ｕ／ｇ乾燥デンプンである、ことを特徴とする請求項２に記載の製造方法。
【請求項４】
次にＧｔ−ＧＢＥを添加して変性対象デンプンを協同的に変性するときに、Ｇｔ−ＧＢＥの添加量が２０〜３０Ｕ／ｇ乾燥デンプンである、ことを特徴とする請求項２又は３に記載の製造方法。
【請求項５】
前記変性対象デンプンの状態が糊化状態であり、糊化状態で、Ｒｏ−ＧＢＥにより前記変性対象デンプンを変性する条件は、６０〜６５℃で２〜１０ｈの恒温反応であり、糊化して酵素を不活性化させた後、Ｇｔ−ＧＢＥを添加して５０℃で８〜１２ｈの反応を継続する、ことを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の製造方法。
【請求項６】
前記変性対象デンプンの状態が粒子状態であり、粒子状態で、Ｒｏ−ＧＢＥにより前記変性対象デンプンを変性する条件は、６０〜６５℃で２〜１２ｈの恒温反応であり、糊化して酵素を不活性化させた後、Ｇｔ−ＧＢＥを添加して５０℃で８〜１２ｈの反応を継続する、ことを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の製造方法。
【請求項７】
前記変性対象デンプンのデンプン液の濃度が２０〜３０％である、ことを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の製造方法。
【請求項８】
前記変性対象デンプンのデンプン液のｐＨが６．５〜７．５である、ことを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の製造方法で製造された遅消化性デキストリン。
【請求項１０】
インスリン非依存性糖尿病及び心血管疾患の予防及び遅延のための食品又は医薬品の製造における請求項９に記載の遅消化性デキストリンの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、遅消化性デキストリンの製造方法に関し、生物学的に変性されたデンプンの分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
デンプンは緑色植物の果実、種子、塊茎、塊根の主要成分であり、地球で最も豊富な貯蔵性多糖類である。人間や大多数の動物の主要なエネルギー源として、食品、医薬品、化学工業などの工業分野によく使われている。デンプンが人体内で消化されてブドウ糖を放出する時間の長さによって、デンプンは易消化性デンプン（Ｒａｐｉｄｌｙ  Ｄｉｇｅｓｔｉｂｌｅ  Ｓｔａｒｃｈ、ＲＤＳ）、遅消化性デンプン（Ｓｌｏｗｌｙ  Ｄｉｇｅｓｔｉｂｌｅ  Ｓｔａｒｃｈ、ＳＤＳ）、及び難消化性デンプン（Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｓｔａｒｃｈ、ＲＳ）に分けられ、ＲＤＳとは、小腸内で迅速に消化吸収されるデンプンを指し、消化時間が２０ｍｉｎ以内であり、ＳＤＳとは、小腸で完全に消化吸収されるが、速度が遅いデンプンを指し、消化時間が２０〜１２０ｍｉｎ以内であり、ＲＳとは１２０ｍｉｎでも小腸に消化吸収されないデンプンを指し、大腸で微生物発酵により利用されるしかない食物繊維と類似している。
【０００３】
住民の食事の中で、デンプンの「質」と「量」は血糖の調節に直接影響するが、人々の生活水準が向上するにつれて、近年、糖尿病などの慢性疾患の発病率は年々増加しており、食用後に満腹感を維持し、エネルギーを持続的に放出し、血糖の急激な変動を回避し、またインシュリン非依存型糖尿病や心血管疾患に対して補助治療作用を有する遅消化及び難消化性デンプン変性物の研究製造が必要とされる。
【０００４】
現在、物理、化学或いは生物方法を利用してデンプンの分子構造を変えることで、デンプンの天然特性を改善し、一部のＲＤＳをＳＤＳに転化させ、健康な飲食の需要を満たすようにすることができる。その中で、生物酵素法は主にデンプン自体の構造を変えることによってデンプンの消化性能を改善する目的を達成する。先行研究では、単一酵素でデンプンを変性処理する場合が多いが、変性デンプン中の遅消化性デンプンの含有量は低く、現在文献で報告されているいくつかの二重酵素処理方法の中でも、主な方法には、グルコシルトランスフェラーゼとβ−アミラーゼによる協同的変性（相乗的変性）、マルトースα−アミラーゼとグルコシルトランスフェラーゼによる協同的変性、デンプン枝作り酵素とアミロスクラーゼによる協同的変性などがあるが、その変性物の収率は低く、できるだけ変性物の収率を高めるために、その製造プロセスにおいて通常エタノール洗浄工程を採用し、その結果、変性物の損失量が大きくなり、変性時間が長くなるなどの問題を招く。
【発明の概要】
【０００５】
遅消化性デキストリン生成物の収率が低く、変性時間が長いという従来の問題点を解決するために、本発明は、遅消化性デキストリンの製造方法を提供する。
【０００６】
Ｒｈｏｄｏｔｈｅｒｍｕｓ  ｏｂａｍｅｎｓｉ由来のＲｏ−ＧＢＥはグリコシド加水分解酵素ファミリー５７に属し、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｇｌｕｃｏｓｉｄａｎｓ由来のＧｔ−ＧＢＥはグリコシド加水分解酵素ファミリー１３に属し、いずれも３種類のグリコシル基転移反応（鎖間転移、鎖内転移、環化反応）を触媒でき、グリコーゲンとアミロペクチンを合成する重要な酵素である。デンプン分子中のα−１，４グリコシド結合を切断し、その後、グリコシル基転移作用により、切断されたセグメントをα−１，６グリコシド結合で受容体鎖に連結して新たな分岐を形成し、このように、分岐度を増加させ、デンプンの消化速度を低下させることができる。これら２つの酵素の触媒機構はいずれも遅消化性デキストリンの生成に有利である。
【０００７】
本発明の第１の目的は、Ｒｈｏｄｏｔｈｅｒｍｕｓ  ｏｂａｍｅｎｓｉ由来のデンプン枝作り酵素Ｒｏ−ＧＢＥとＧｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｇｌｕｃｏｓｉｄａｎｓ由来のデンプン枝作り酵素Ｇｔ−ＧＢＥとを用いて、変性対象デンプンを協同的に変性することを含む、遅消化性デキストリンの製造方法を提供することにある。
【０００８】
任意選択に、前記遅消化性デキストリンの製造方法は、まず、Ｒｏ−ＧＢＥを添加して変性対象デンプンを前処理し、次に、Ｇｔ−ＧＢＥを添加して変性対象デンプンを協同的に変性するステップを含む。
【０００９】
任意選択に、まず、Ｒｏ−ＧＢＥを添加して変性対象デンプンを前処理するときに、Ｒｏ−ＧＢＥの添加量が２５〜４０Ｕ／ｇ乾燥デンプンである。
【００１０】
任意選択に、次にＧｔ−ＧＢＥを添加して変性対象デンプンを協同的に（相乗的に）変性するときに、Ｇｔ−ＧＢＥの添加量が２０〜３０Ｕ／ｇ乾燥デンプンである。
【００１１】
任意選択に、前記変性対象デンプンの状態が糊化状態であり、糊化状態で、Ｒｏ−ＧＢＥにより前記変性対象デンプンを変性する条件は、６０〜６５℃で２〜１０ｈの恒温反応であり、糊化して酵素を不活性化させた後、Ｇｔ−ＧＢＥを添加して５０℃で８〜１２ｈの反応を継続する。任意選択に、糊化状態で、Ｒｏ−ＧＢＥにより糊化コーンスターチを変性する条件は、６０〜６５℃で１０ｈの恒温反応であり、糊化して酵素を不活性化させた後、Ｇｔ−ＧＢＥを添加して５０℃で１２ｈの反応を継続する。
【００１２】
任意選択に、前記変性対象デンプンの状態が粒子状態であり、粒子状態で、Ｒｏ−ＧＢＥにより前記変性対象デンプンを変性する条件は、６０〜６５℃で２〜１２ｈの恒温反応であり、糊化して酵素を不活性化させた後、Ｇｔ−ＧＢＥを添加して５０℃で８〜１２ｈの反応を継続する。
【００１３】
任意選択に、粒子状態で、Ｒｏ−ＧＢＥにより粒子状コーンスターチを変性する条件は、６０〜６５℃で１２ｈの恒温反応であり、糊化して酵素を不活性化させた後、Ｇｔ−ＧＢＥを添加して５０℃で１２ｈの反応を継続する。
【００１４】
任意選択に、前記変性対象デンプンのデンプン液の濃度が２０〜３０％である。
【００１５】
任意選択に、前記変性対象デンプンのデンプン液のｐＨが６．５〜７．５である。
【００１６】
本発明の第２の目的は、上記のいずれかの方法で製造された遅消化性デキストリンを提供することにある。
【００１７】
本発明の第３の目的は、一般的な人のインスリン非依存性糖尿病の予防及び糖尿病患者のインスリン非依存性糖尿病の遅延のための食品又は医薬品の製造における遅消化性デキストリンの使用を提供することにある。
【００１８】
本発明の有益な効果は次の通りである。
異なる由来の２種類のデンプン枝作り酵素を用いてコーンスターチを協同的に処理し、すなわち、まず、Ｒｏ−ＧＢＥを添加して前処理し、次にＧｔ−ＧＢＥを添加することにより、Ｒｏ−ＧＢＥで変性対象デンプンを触媒してＧｔ−ＧＢＥの更なる利用により有利なセグメント構造を形成し、Ｇｔ−ＧＢＥの作用により細長いタイプのデンプン分子をずんぐりしたタイプのより緊密な分岐構造に変換し、変性物の遅消化性をより顕著にする。さらに、Ｒｏ−ＧＢＥの添加量、変性時間及び変性対象デンプンの状態を変化させることにより、両者間の相乗作用を促進し、アミロペクチンの分岐度を高め、遅消化・難消化性デンプンの含有量をさらに高め、消化速度を低下させ、生物変性による遅消化性デキストリンの製造に新しいコンセプトを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明の目的、技術案、及び利点をより明確にするために、以下、図面を参照しながら本発明の実施形態をさらに詳細に説明する。
【００２０】
以下の実施例では、変性対象デンプンがコーンスターチであることを例に説明し、その変性過程においてエタノール洗浄ステップを必要としない。
【００２１】
以下では、まず、本出願の二重酵素協同変性法において二重酵素をそれぞれ単独で変性させる場合を説明する。
【００２２】
実施例１：Ｇｔ−ＧＢＥの単独変性による変性物中の易消化性デンプンの含有量への影響
コーンスターチを水に溶解して１０％デンプン液を得て、沸騰水で糊化した後にＧｔ−ＧＢＥ  ２５Ｕ／ｇ乾燥デンプンを加え、５０℃の恒温条件下で２、４、６、８、１０ｈ処理し、沸騰水浴で反応を停止し、凍結乾燥して変性試料を得た。Ｅｎｇｌｙｓｔ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ模擬消化法を参照して変性デンプンの消化性能を測定したものを表１に示す。対照群は、未変性処理コーンスターチペーストの消化性能を示す。
その結果、Ｇｔ−ＧＢＥ単独の作用下で、対照群と比べて、１０ｈ変性処理時、易消化性デンプンの含有量は２０．８％（
2021524279.tif 000002
）減少し、遅消化性デンプンの含有量は１３４％（
2021524279.tif 000003
）増加し、難消化性デンプンの含有量は２８．５％（
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）増加した。Ｇｔ−ＧＢＥ単独で変性した場合、遅消化性デンプンの割合が著しく増加することがわかり、考えられる原因はＧｔ−ＧＢＥの作用により産生された高分岐構造が生成物の遅消化性能を著しく改善することである。
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【００２３】
実施例２：Ｒｏ−ＧＢＥの単独変性による変性物中の易消化性デンプンの含有量への影響
コーンスターチを水に溶解して２５％デンプン液を得て、沸騰水で糊化した後にＲｏ−ＧＢＥ  ３０Ｕ／ｇ乾燥デンプンを加え、６５℃の恒温条件下で２、４、６、８、１０ｈ処理し、沸騰水浴で反応を停止し、凍結乾燥して変性試料を得た。Ｅｎｇｌｙｓｔ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ模擬消化法を参照して変性デンプンの消化性能を測定したものを表２に示す。対照群は、未変性処理コーンスターチペーストの消化性能を示す。
その結果、Ｒｏ−ＧＢＥ単独の作用下で、対照群と比べて、２ｈ変性処理時、易消化性デンプンの含有量は１２．５％（
2021524279.tif 000006
）減少し、その後、処理時間の増加に伴い、易消化性デンプンの含有量は逆に増加し、さらに１０ｈ処理時、Ｒｏ−ＧＢＥを添加せずに変性した対照群さえ超えており、遅消化性デンプンの含有量は９．７８％（
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）増加し、その後、処理時間の増加に伴い、４ｈ処理時、遅消化性デンプンの含有量は４２．４％（
2021524279.tif 000008
）増加し、引き続き処理時間が増加すると、遅消化性デンプンの含有量はかえって低下して、さらに１０ｈ処理時、遅消化性デンプンの含有量はＲｏ−ＧＢＥを添加せずに変性した対照群よりも低く、難消化性デンプンの含有量は６６．９％（
2021524279.tif 000009
）増加し、その後処理時間の増加に伴い、難消化性デンプンの含有量は多少変動した。
実施例１と比べて、Ｒｏ−ＧＢＥの作用は比較的短時間で変性効果が良好であるが、作用時間が長くなるにつれて、易消化性デンプンの含有量は逆に再び増加した。考えられる原因は、Ｒｏ−ＧＢＥの加水分解作用が強く、変性時間が長い場合に遊離短鎖や小分子糖が多く生成され、生成物の遅消化性能に不利であることである。
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以下では、本出願に採用された二重酵素協同変性方法について説明し、Ｒｏ−ＧＢＥの酵素添加量、Ｒｏ−ＧＢＥの変性時間、Ｒｏ−ＧＢＥ処理粒子デンプンの二重酵素協同変性過程における変性生成物への影響についてそれぞれ詳細に説明する。
本発明のすべての実施例及び比較例における対照群は、未変性処理コーンスターチペーストの消化性能を示したが、易消化性デンプン、遅消化性デンプン、難消化性デンプンの含有量は若干異なり、誤差が許容範囲内であった。
【００２４】
実施例３：Ｒｏ−ＧＢＥ酵素添加量による二重酵素協同変性生成物中の易消化性デンプンの含有量への影響
コーンスターチを水に溶解して２５％デンプン液を得て、沸騰水で糊化した後にＲｏ−ＧＢＥを添加し、６５℃の恒温条件下で２ｈ処理し、沸騰水浴で反応を停止し、Ｇｔ−ＧＢＥ  ２５Ｕ／ｇ乾燥デンプンを添加し、５０℃の恒温条件下で１０ｈ処理し、反応を停止し、凍結乾燥して変性試料を得た。Ｅｎｇｌｙｓｔ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ模擬消化法を参照して変性デンプンの消化性能を測定したものを表３に示す。対照群は未変性処理コーンスターチペーストの消化性能であった。
その結果、実施例１に比べて、本実施例では、易消化性デンプンの含有量は最大３１．６％（
2021524279.tif 000011
）減少し、遅消化性デンプンの含有量は最高５２．８％（
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）増加し、難消化性デンプンの含有量は最高５５．６％（
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）増加した。
実施例２と比べて、易消化性デンプンの含有量は最大３８．１％（
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）減少し、遅消化性デンプンの含有量は最大１５２％（
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）増加し、難消化性デンプンの含有量は最大２１．２％
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増加した。
二重酵素による二段階作用は単一酵素による一段階変性と比べて、効果はさらに顕著であり、易消化性デンプンの含有量は明らかに減少し、遅消化と難消化性デンプンの含有量は、程度が異なるが、すべて増加した。３０Ｕ／ｇ乾燥デンプンのＲｏ−ＧＢＥ添加量で形成された中間生成物はＧｔ−ＧＢＥの継続作用により有利であり、高分岐、ショートクラスター状の遅消化性デキストリンを形成すると推定された。
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【００２５】
実施例４：Ｒｏ−ＧＢＥ変性時間による二重酵素協同変性生成物中の易消化性デンプンの含有量への影響
コーンスターチを水に溶解して２５％デンプン液を得て、沸騰水で糊化した後に、Ｒｏ−ＧＢＥ  ３０Ｕ／ｇ乾燥デンプンを添加して、６５℃の恒温条件下で処理し、沸騰水浴で反応を停止し、Ｇｔ−ＧＢＥ  ２５Ｕ／ｇ乾燥デンプンを添加して、５０℃の恒温条件下で１０ｈ処理し、反応を停止し、凍結乾燥して変性試料を得た。Ｅｎｇｌｙｓｔ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ模擬消化法を参照して変性デンプンの消化性能を測定したものを表４に示す。対照群は未変性処理コーンスターチペーストの消化性能であった。
その結果、対照群と比べて、Ｒｏ−ＧＢＥ処理時間２ｈの二重酵素協同変性生成物中の易消化性デンプンの含有量は４６．９％（
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）減少し、遅消化性デンプンの含有量は２２６％（
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）増加し、難消化性デンプンの含有量は８９．９％（
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）増加した。実施例１、２中の最適変性生成物と比べて、易消化性デンプンの含有量はそれぞれ３５．５％（
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）、４１．６％（
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）減少した。異なる由来の２種類の分岐酵素の協同作用の下で、デンプンの微細構造の変化はさらにその遅消化性能の向上に有利であり、易消化性デンプンの含有量は明らかに減少し、遅消化と難消化性デンプンの割合は明らかに増加することを示した。
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【００２６】
実施例５：Ｒｏ−ＧＢＥ処理粒子デンプンによる二重酵素協同変性生成物中の易消化性デンプンの含有量への影響
コーンスターチを水に溶解して２５％デンプン液を得て、予熱後、Ｒｏ−ＧＢＥを添加して６５℃の恒温条件下で処理し、沸騰水浴で反応を停止し、Ｇｔ−ＧＢＥ  ２５Ｕ／ｇ乾燥デンプンを添加して５０℃の恒温条件下で１０ｈ処理し、反応を停止し、凍結乾燥して変性試料を得た。Ｅｎｇｌｙｓｔ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ模擬消化法を参照して変性デンプンの消化性能を測定したものを表５に示す。
表５−１から５−４の結果によれば、Ｒｏ−ＧＢＥで粒子デンプンを処理した場合、変性時間は１０ｈであり、酵素添加量が２５Ｕ／ｇから３０Ｕ／ｇ（５−１と５−２参照）に増加するにつれて易消化性デンプンの含有量は１０．７％減少し、３５Ｕ／ｇ、４０Ｕ／ｇに増加し続けた場合、易消化性デンプンの含有量に有意な変化はなかった。
表５−２によれば、Ｒｏ−ＧＢＥ酵素添加量が３０Ｕ／ｇであった場合、変性時間が１０ｈまで延長されることにつれて、易消化性デンプンの含有量は最低値４１．９％まで減少し、遅消化及び難消化性デンプンの含有量はそれぞれ２６．８％、３１．３％まで増加した。
実施例３、実施例４と比べて、二重酵素による二段階変性過程では、Ｒｏ−ＧＢＥ酵素添加量の変化傾向は同じであり、このことから、３０Ｕ／ｇ乾燥デンプンが最適添加量であることが分かり、しかし、糊化デンプンの処理の場合、２ｈ程度が適切であり、時間が長すぎると加水分解作用を強化してかえってその易消化性デンプンの含有量を増加させて、粒子デンプンの場合、１０ｈ程度が適切であり、粒子デンプンの結晶構造による保護のため、デンプンの直鎖と分岐鎖はさらに遅くアミラーゼに攻撃されるので、優れた変性効果を達成するのに長い変性時間がかかった。
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【００２７】
本出願で２種類のデンプン枝作り酵素を用いて変性処理を行って得られる変性生成物では、遅消化性デキストリン生成物の収率が高く、変性時間が短いという利点をさらに証明するために、本出願が２種類のデンプン枝作り酵素（Ｒｏ−ＧＢＥ及びＧｔ−ＧＢＥ）を用いて変性処理を行うことと、ＣＧＴ酵素とＧｔ−ＧＢＥの組み合わせで変性処理を行うこととを比較した。
【００２８】
比較例１：ＣＧＴ酵素とＧｔ−ＧＢＥ協同変性に対するＲｏ−ＧＢＥとＧｔ−ＧＢＥ協同変性の優位性
コーンスターチを水に溶解して２５％デンプン液を得て、沸騰水で糊化した後、４５℃恒温条件下でシクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼ（ＣＧＴ酵素）３Ｕ／ｇ乾燥デンプンを添加して、異なる時間処理し、沸騰水浴で反応を停止し、Ｇｔ−ＧＢＥ  ２５Ｕ／ｇ乾燥デンプンを添加し、５０℃恒温条件下で１０ｈの反応を継続して、反応を停止し、凍結乾燥して変性試料を得て、インビトロ消化性測定を表６−１に示す。
2021524279.tif 000028
表６−１によれば、６ｈのＣＧＴ酵素処理に１０ｈのＧｔ−ＧＢＥを加えて変性処理を継続することで、生成物中の易消化性デンプンの含有量を４８．６％に低下させ、難消化性デンプンの含有量を３６．２％に高めることができ、このとき、遅消化性デンプンの含有量は１５．２％であることが分かった。その結果、Ｇｔ−ＧＢＥ反応時間が一定の場合、ＣＧＴ酵素処理時間が長くなるにつれて、難消化性デンプンの含有量は増加し、易消化性デンプンの含有量は低下するが、遅消化性デンプンの含有量はわずかに低下する傾向を示した。
Ｒｏ−ＧＢＥとＧｔ−ＧＢＥで協同的に変性処理された生成物と比べて（すなわち、本比較例のうち易消化性デンプンの含有量が最も低い１群のデータと、本出願の実施例３の表３における易消化性デンプンの含有量が最も低い１群のデータとを比較する）、その易消化性デンプンの含有量は約１５％（
2021524279.tif 000029
）高く、インビトロ消化速度はやや増加しており、遅消化デンプンの含有量は明らかに減少し（１５．２％は３３．０％より小さく、その遅消化デンプンの含有量の最高値１７．１％も３３．０％より小さい）、難消化性デンプンの含有量は明らかに増加し（３６．２％は２４．８％より大きい）、考えられる原因は、ＣＧＴ酵素の作用により環化反応が主な役割を果たし、形成されたシクロデキストリンの含有量が増加し、シクロデキストリンは高分岐デンプン鎖とＶ−型錯体構造を形成することができるが、沸騰水浴により再糊化すると、Ｖ−型錯体構造が消失し、遅消化性デンプンの含有量が減少し、良好な抗消化能力のみを示すことである。
なお、ＣＧＴ酵素とＲｏ−ＧＢＥ酵素は異なる酵素であるため、本出願ではそれぞれの最適な反応条件下での生成物を比較し、実施例３及び実施例４では、Ｒｏ−ＧＢＥ酵素を加えて６５℃の恒温条件下で処理し、本実施例では、ＣＧＴ酵素を加えて４５℃の恒温条件下で処理した。また、ＣＧＴ酵素とＲｏ−ＧＢＥ酵素との酵素添加量も同一ではなく、本出願におけるＲｏ−ＧＢＥとＧｔ−ＧＢＥ協同変性処理の効果がＣＧＴ酵素とＧｔ−ＧＢＥ協同変性処理の効果よりも優れていることをさらに説明するために、以下では、ＣＧＴ酵素をＲｏ−ＧＢＥ酵素の酵素添加量と同一にし、比較を行う比較例２を提供した。
【００２９】
比較例２
コーンスターチを水に溶解して２５％デンプン液を得て、沸騰水で糊化した後に、４５℃の恒温条件下でシクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼ（ＣＧＴ酵素）３０Ｕ／ｇ乾燥デンプンを添加して異なる時間処理し、沸騰水浴で反応を停止し、Ｇｔ−ＧＢＥ  ２５Ｕ／ｇ乾燥デンプンを添加し、５０℃の恒温条件下で１０ｈの反応を継続して反応を停止し、凍結乾燥して変性試料を得て、インビトロ消化性測定を表６−２に示す。
2021524279.tif 000030
表６−２によれば、６ｈの３０Ｕ／ｇ乾燥デンプンのＣＧＴ酵素変性処理に加えて、８ｈのＧｔ−ＧＢＥ変性処理を継続すると、生成物中の易消化性デンプンの含有量を４９．５％に低下させ、難消化性デンプンの含有量を３８．６％に向上させ、このとき、遅消化性デンプンの含有量は１１．９％であった。その結果、Ｇｔ−ＧＢＥ反応時間が一定の場合、ＣＧＴ酵素処理時間が長くなるにつれて、難消化性デンプンの含有量は増加し、易消化性デンプンの含有量は低下するが、遅消化性デンプンの含有量はやや低下する傾向を示し、この変性結果は上記表６−１の３Ｕ／ｇ乾燥デンプンのＣＧＴ酵素変性物の結果と類似しているため、過剰なＣＧＴ酵素添加による改善効果は得られなかった。
以上の比較例１と比較例２のデータをまとめて、上記実施例４と比べて、本出願では、２種類のデンプン枝作り酵素（Ｒｏ−ＧＢＥ及びＧｔ−ＧＢＥ）を用いて協同的変性を行うと、その変性時間が短く、変性物の収率が高く（２ｈ処理すると、易消化性デンプンの含有量を３９．８％程度に低下させ、遅消化性デンプンの含有量を３０．０％程度に増加させ、難消化性デンプンの含有量を３０．２％程度に増加させることができる）、一方、従来のＣＧＴ酵素とＧｔ−ＧＢＥの協同的変性では、易消化性デンプンの含有量を４８．６％程度に低下させるのに６ｈの処理が必要であり、このデータは２ｈ処理する時に速消化デンプンの含有量を３９．８％程度に低下させた本出願の数値より大きい。
遅消化性デンプンについては、従来のＣＧＴ酵素とＧｔ−ＧＢＥ協同的変性を用いて２ｈ処理した時に、遅消化性デンプンの含有量はすでに比較的高値１７．１％前後に増加したが（その後、処理時間の増加に伴い、遅消化性デンプンの含有量は低下する傾向を示す）、このデータは２ｈ処理時に遅消化性デンプンの含有量が３０．０％程度に増加したという本出願のデータよりはるかに小さいことが分かった。
【００３０】
したがって、本出願は２種類のデンプン枝作り酵素を用いて変性処理を行うことで、変性処理時間が短く、変性物の収率が高くなる。
【００３１】
生成物の構造から見ると、２種類のデンプン枝作り酵素変性物は、さらに高い安定性を有し、緩慢に消化されてエネルギーを供給する作用があり、血糖定常状態を維持する点ではより顕著な効果がある。
【００３２】
上記は、本発明の好適な実施例にすぎず、本発明を限定するものではなく、本発明の思想及び原理の範囲内で行われた修正、同等の置換、改良等は、すべて本発明の権利範囲内に含まれるものとする。
【国際調査報告】
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