(57)【要約】本発明は、ＪＡＫキナーゼの阻害剤である、式（Ｉ）：2021501151.tif 000053の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。本発明はまた、このような化合物を含有する薬学的組成物、結晶形態、このような化合物を使用して炎症性皮膚疾患および他の疾患を処置する方法、ならびにこのような化合物を調製するために有用なプロセスおよび中間体を提供する。本発明はまた、炎症性の疾患または障害の処置において使用するための、本明細書中に開示される化合物（Ｉ）を提供する。
2021501151.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化２６】
2021501151.tif 000044
の化合物またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項２】
式（Ｉ）：
【化２７】
2021501151.tif 000045
の化合物。
【請求項３】
式（Ｉ）：
【化２８】
2021501151.tif 000046
の化合物の結晶形態であって、該結晶形態は、１１．４±０．２、１６．２±０．２、１６．６±０．２、１７．７±０．２、および２１．９±０．２の２θ値に回折ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンにより特徴付けられる、結晶形態。
【請求項４】
前記粉末Ｘ線回折パターンは、８．９±０．２、９．５±０．２、および１０．２±０．２の２θ値にさらなる回折ピークを有することによりさらに特徴付けられる、請求項３に記載の結晶形態。
【請求項５】
前記粉末Ｘ線回折パターンは、１４．４±０．２、１９．０±０．２、１９．２±０．２、１９．８±０．２、２０．１±０．２、２０．４±０．２、２０．６±０．２、２０．８±０．２、２１．３±０．２、２５．９±０．２、３０．１±０．２、３０．５±０．２、３０．９±０．２、３２．６±０．２、および３３．８±０．２から選択される２θ値に２つまたはそれより多くのさらなる回折ピークを有することによりさらに特徴付けられる、請求項４に記載の結晶形態。
【請求項６】
前記結晶形態は、ピーク位置が図５に示されるパターンのピーク位置に実質的に一致する粉末Ｘ線回折パターンにより特徴付けられる、請求項３に記載の結晶形態。
【請求項７】
前記結晶形態は、２３８．１℃±２℃にピークを有する吸熱の熱流の極大値を示す、１分間あたり１０℃の加熱速度で記録される示差走査熱量測定トレースにより特徴付けられる、請求項３に記載の結晶形態。
【請求項８】
前記結晶形態は、図６に示される示差走査熱量測定トレースに実質的に一致する示差走査熱量測定トレースにより特徴付けられる、請求項３に記載の結晶形態。
【請求項９】
請求項１または２のいずれか１項に記載の化合物、および薬学的に受容可能なキャリアを含有する薬学的組成物。
【請求項１０】
請求項３〜８のいずれか１項に記載の結晶形態、および薬学的に受容可能なキャリアを含有する薬学的組成物。
【請求項１１】
１つまたはそれより多くのさらなる治療剤をさらに含有する、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記薬学的組成物は、軟膏またはクリームである、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
化合物（Ｉ）、またはその薬学的に受容可能な塩は、０．１〜１０重量％で存在する、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
化合物（Ｉ）、またはその薬学的に受容可能な塩は、０．２５〜５重量％で存在する、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
化合物（Ｉ）、またはその薬学的に受容可能な塩は、０．０５〜０．５重量％で存在する、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
哺乳動物における炎症性または自己免疫性の皮膚疾患の処置において使用するための、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１７】
哺乳動物における炎症性皮膚疾患の処置において使用するための、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
アトピー性皮膚炎の処置において使用するための、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
前記アトピー性皮膚炎は、中等症〜重症のアトピー性皮膚炎である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
前記アトピー性皮膚炎は、軽症〜中等症のアトピー性皮膚炎である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２１】
円形脱毛症の処置において使用するための、請求項１６に記載の化合物。
【請求項２２】
白斑、結節性痒疹、扁平苔癬、接触皮膚炎、対宿主性移植片病の皮膚症状、類天疱瘡、円板状狼瘡、硬化性苔癬、毛孔性扁平苔癬、乾癬、および禿髪性毛包炎からなる群より選択される炎症性または自己免疫性の皮膚疾患の処置において使用するための、請求項１６に記載の化合物。
【請求項２３】
哺乳動物における炎症性または自己免疫性の皮膚疾患の処置のための医薬の製造における、請求項１または２に記載の化合物の使用。
【請求項２４】
哺乳動物における炎症性皮膚疾患の処置のための医薬の製造における、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記炎症性皮膚疾患はアトピー性皮膚炎である、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記アトピー性皮膚炎は、中等症〜重症のアトピー性皮膚炎である、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
前記アトピー性皮膚炎は、軽症〜中等症のアトピー性皮膚炎である、請求項２５に記載の使用。
【請求項２８】
哺乳動物における自己免疫性皮膚疾患の処置のための医薬の製造における、請求項２３に記載の使用。
【請求項２９】
前記自己免疫性皮膚疾患は円形脱毛症である、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
前記炎症性または自己免疫性の皮膚疾患は、白斑、結節性痒疹、扁平苔癬、接触皮膚炎、対宿主性移植片病の皮膚症状、類天疱瘡、円板状狼瘡、硬化性苔癬、毛孔性扁平苔癬、乾癬、および禿髪性毛包炎からなる群より選択される、請求項２３に記載の使用。
【請求項３１】
哺乳動物における炎症性または自己免疫性の皮膚疾患を処置する方法であって、該方法は、請求項１または２に記載の化合物を該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３２】
前記化合物は、前記哺乳動物の皮膚に、該化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含有する薬学的組成物中で投与される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記炎症性または自己免疫性の皮膚疾患は、炎症性皮膚疾患である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記炎症性皮膚疾患はアトピー性皮膚炎である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記アトピー性皮膚炎は、中等症〜重症のアトピー性皮膚炎である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記アトピー性皮膚炎は、軽症〜中等症のアトピー性皮膚炎である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記炎症性または自己免疫性の皮膚疾患は、自己免疫性皮膚疾患である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３８】
前記自己免疫性皮膚疾患は円形脱毛症である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記炎症性または自己免疫性の皮膚疾患は、白斑、結節性痒疹、扁平苔癬、接触皮膚炎、対宿主性移植片病の皮膚症状、類天疱瘡、円板状狼瘡、硬化性苔癬、毛孔性扁平苔癬、乾癬、および禿髪性毛包炎からなる群より選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項４０】
式（Ｉ）：
【化２９】
2021501151.tif 000047
の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を調製するためのプロセスであって、
（ａ）式（ＩＩ）：
【化３０】
2021501151.tif 000048
の化合物［式中、ＲはＣ１〜１２アルキル基である］を還元剤と反応させる工程、および
（ｂ）必要に応じて、薬学的に受容可能な塩を形成する工程
を包含して、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を提供する、プロセス。
【請求項４１】
前記還元剤は、ＬｉＡｌＨ４、ＮａＢＨ４、およびＬｉＢＨ４からなる群より選択される、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４２】
Ｒはエチルである、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４３】
前記式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ）
【化３１】
2021501151.tif 000049
の化合物［式中、Ｘはハロゲンである］を式１−９
【化３２】
2021501151.tif 000050
の化合物とカップリングさせることにより得られる、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４４】
式（ＩＩ）：
【化３３】
2021501151.tif 000051
の化合物またはその薬学的に受容可能な塩であって、
式（ＩＩ）において、ＲはＣ１〜１２アルキル基である、化合物またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項４５】
Ｒはエチルである、請求項４４に記載の化合物。
【請求項４６】
式（ＩＩＩ）：
【化３４】
2021501151.tif 000052
の化合物またはその薬学的に受容可能な塩であって、
式（ＩＩＩ）において、ＲはＣ１〜１２アルキル基であり、そしてＸはハロゲンである、化合物またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項４７】
Ｒはエチルであり、そしてＸはクロロである、請求項４６に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
発明の分野
本発明は、ＪＡＫキナーゼ阻害剤として有用な、ピリミジン化合物に関する。本発明はまた、このような化合物を含有する薬学的組成物、このような化合物の結晶形態、このような化合物を使用して炎症性疾患および自己免疫性疾患を処置する方法、ならびにこのような化合物を調製するために有用なプロセスおよび中間体に関する。
【背景技術】
【０００２】
技術水準
ＪＡＫ酵素のファミリーを阻害すると、多くの重要な炎症促進性サイトカインのシグナル伝達が阻害され得る。したがって、ＪＡＫ阻害剤は、アトピー性皮膚炎および他の炎症性皮膚疾患、アレルギー性鼻炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および他の肺炎症性疾患、潰瘍性大腸炎および他の胃腸の炎症、ならびに眼の炎症性疾患の処置において有用である可能性がある。
【０００３】
アトピー性皮膚炎（ＡＤ）は、一般的な慢性炎症性皮膚疾患であり、合衆国単独で、推定１４００万人の人々に影響を与えている。ＡＤは、先進国において、小児の１０〜２０％、および成人の１〜３％に影響を与えていると推定されており（Ｂａｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＫ−ＳＴＡＴ，２０１３，２，ｅ２４１３７）、その流行は増大している。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に依存する炎症誘発サイトカイン、特に、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＦＮγ、およびＴＳＬＰの上昇は、ＡＤと関連付けられている（Ｂａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，２００４，１１３，６５１−６５７）。さらに、ＩＬ−３１（ＪＡＫ対合によりシグナル伝達する別のサイトカイン）のアップレギュレーションは、ＡＤの慢性状態に関連するそう痒症において役割を有することが示されている（Ｓｏｎｋｏｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００６，１１７，４１１−４１７）。
【０００４】
免疫系に対するＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路の調節作用に起因して、ＪＡＫ阻害剤への全身曝露は、有害な全身性の免疫抑制作用を及ぼし得る。ゆえに、著しい全身作用を起こさずに作用部位において効果を生じる新しいＪＡＫ阻害剤を提供することが望ましい。特に、アトピー性皮膚炎などの炎症性皮膚疾患の処置の場合、局所的に投与することができ、かつ皮膚において治療的に妥当な曝露を達成でき、迅速に排除されて全身曝露を最小にする、新しいＪＡＫ阻害剤を提供することが望ましい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｂａｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＫ−ＳＴＡＴ，２０１３，２，ｅ２４１３７
【非特許文献２】Ｂａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，２００４，１１３，６５１−６５７
【非特許文献３】Ｓｏｎｋｏｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００６，１１７，４１１−４１７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明の要旨
１つの局面において、本発明は、ＪＡＫキナーゼ阻害剤としての活性を有する化合物を提供する。
【０００７】
従って、本発明は式（Ｉ）：
【化１】
2021501151.tif 000003
の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。
【０００８】
本発明はまた、化合物（Ｉ）の結晶形態を提供する。
【０００９】
本発明はまた、化合物（Ｉ）および薬学的に受容可能なキャリアを含有する薬学的組成物を提供する。
【００１０】
本発明はまた、哺乳動物における、皮膚の炎症性および自己免疫性の疾患、特にアトピー性皮膚炎および円形脱毛症を処置する方法を提供し、この方法は、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩をこの哺乳動物に投与する工程を包含する。
【００１１】
本発明はまた、化合物（Ｉ）の調製のために有用な、本明細書中に記載される合成プロセスおよび中間体を提供する。
【００１２】
本発明はまた、炎症性の疾患または障害の処置において使用するための、本明細書中に開示される化合物（Ｉ）を提供する。
【００１３】
本発明の様々な局面が、添付の図面を参照することにより例証される。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、化合物（Ｉ）の結晶形態Ｉ（本明細書中以後形態Ｉ）の粉末ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを示す。
【００１５】
【図２】図２は、結晶形態Ｉの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）のサーモグラムを示す。
【００１６】
【図３】図３は、結晶形態Ｉの熱重量分析（ＴＧＡ）のプロットを示す。
【００１７】
【図４】図４は、結晶形態Ｉの動的水分吸着（ｄｙｎａｍｉｃ  ｍｏｉｓｔｕｒｅ  ｓｏｒｐｔｉｏｎ）の等温線を示す。
【００１８】
【図５】図５は、化合物（Ｉ）  の結晶形態ＩＩ溶媒和物（本明細書中以後形態ＩＩ）の粉末ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを示す。
【００１９】
【図６】図６は、結晶形態ＩＩの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【００２０】
【図７】図７は、結晶形態ＩＩの熱重量分析（ＴＧＡ）プロットを示す。
【００２１】
【図８】図８は、結晶形態ＩＩの動的水分吸着等温線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
発明の詳細な説明
他の局面の中でも、本発明は、式（Ｉ）のＪＡＫキナーゼ阻害剤、それらの薬学的に受容可能な塩およびそれらを調製するための中間体を提供する。
【００２３】
化学構造は、本明細書中で、ＣｈｅｍＤｒａｗソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）に実装されているようなＩＵＰＡＣの慣例に従って命名される。例えば、化合物（Ｉ）：
【化２】
2021501151.tif 000004
は、（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（エチルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−５−フルオロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）メタノールと名付けられる。
【００２４】
（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）との記載は、９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン基に対するピリミジニルアミノ基のエキソ配向を説明する。
【００２５】
さらに、化合物（Ｉ）および本明細書中に開示される他の化合物のピラゾリル部分は、互変異性形態で存在する。特定の構造は、ある特定の形態として示されているかまたは命名されているが、本発明は、それらの互変異性体も含むことが理解される。
【００２６】
本開示の化合物は、１つまたはそれより多くのキラル中心を含むので、そのような化合物（およびそれらの中間体）は、ラセミ混合物；純粋な立体異性体（すなわち、エナンチオマーまたはジアステレオマー）；立体異性体富化混合物などとして存在し得る。キラル中心に明確な立体化学なしに本明細書中に示されているまたは命名されているキラル化合物は、別段示されない限り、未確定の立体中心において存在し得る任意のまたはすべての立体異性体バリエーションを含むことを意図されている。特定の立体異性体の描写または呼称は、別段示されない限り、少量の他の立体異性体も存在し得ることの理解とともに、示されている立体中心が、指定の立体化学を有することを意味しているが、但し、描写されたまたは命名された化合物の有用性は、別の立体異性体の存在によって排除されない。
【００２７】
化合物（Ｉ）は、遊離形態で、または様々な塩の形態（例えば、モノプロトン化塩の形態、ジプロトン化塩の形態、トリプロトン化塩の形態またはそれらの混合物）で存在し得る。別段示されない限り、そのような形態のすべてが、本発明の範囲内に含まれる。
【００２８】
原子が、同じ原子番号を有するが自然界で優勢である原子質量とは異なる原子質量を有する原子で置き換えられているかまたは富化されている、本開示の化合物（式（Ｉ）の化合物を含む）の同位体で標識されたバージョンも含む。式（Ｉ）の化合物に組み込まれ得る同位体の例としては、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３５Ｓ、および１８Ｆが挙げられるが、これらに限定されない。トリチウムまたは炭素−１４に富化した式（Ｉ）の化合物が特に興味深く、それらの化合物は、例えば、組織分布研究において使用され得る。また、特に代謝部位においてジュウテリウムに富化した式（Ｉ）の化合物も特に興味深く、それらの化合物は、より高い代謝的安定性を有すると予想される。さらに、陽電子放出同位体（例えば、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎ）に富化した式（Ｉ）の化合物も特に興味深く、それらの化合物は、例えば、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）研究において使用され得る。
定義
【００２９】
様々な局面および実施形態を含む本発明を説明する際、以下の用語は、別段示されない限り、以下の意味を有する。
【００３０】
用語「アルキル」は、直鎖もしくは分枝鎖またはそれらの組み合わせであり得る一価の飽和炭化水素基を意味する。別段定義されない限り、そのようなアルキル基は、代表的には、１〜１０個の炭素原子を含む。代表的なアルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ−プロピル（ｎ−Ｐｒ）または（ｎＰｒ）、イソプロピル（ｉ−Ｐｒ）または（ｉＰｒ）、ｎ−ブチル（ｎ−Ｂｕ）または（ｎＢｕ）、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）または（ｔＢｕ）、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、２，２−ジメチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、２−エチルブチル、２，２−ジメチルペンチル、２−プロピルペンチルなどが挙げられる。
【００３１】
具体的な数の炭素原子が、特定の用語に対して意図されているとき、炭素原子の数は、その用語の前に示される。例えば、用語「Ｃ１〜３アルキル」は、１〜３個の炭素原子を有するアルキル基を意味し、ここで、それらの炭素原子は、直鎖または分枝鎖の配置を含む化学的に許容され得る任意の配置で存在する。
【００３２】
用語「アルコキシ」は、一価の基−Ｏ−アルキルを意味し、ここで、アルキルは、上記のように定義される。代表的なアルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシなどが挙げられる。
【００３３】
用語「シクロアルキル」は、単環式または多環式であり得る一価の飽和炭素環式基を意味する。別段定義されない限り、そのようなシクロアルキル基は、代表的には、３〜１０個の炭素原子を含む。代表的なシクロアルキル基の例としては、シクロプロピル（ｃＰｒ）、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、アダマンチルなどが挙げられる。
【００３４】
用語「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。
【００３５】
用語「ヘテロシクリル」、「複素環」、「複素環式」または「複素環式環」は、合計３〜１０個の環原子を有する一価の飽和または部分不飽和の環式の非芳香族基を意味し、ここで、その環は、２〜９個の炭素環原子、ならびに窒素、酸素および硫黄から選択される１〜４個の環ヘテロ原子を含む。複素環式基は、単環式または多環式（すなわち、縮合または架橋）であり得る。代表的な複素環式基の例としては、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、イミダゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリル、インドリン−３−イル、２−イミダゾリニル、テトラヒドロピラニル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−２−イル、キヌクリジニル、７−アザノルボルナニル、ノルトロパニルなどが挙げられ、ここで、結合点は、任意の利用可能な炭素または窒素環原子に存在する。状況によって複素環式基の結合点が明らかである場合、そのような基は、代わりに、無価種、すなわち、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾール、テトラヒドロピランなどと称され得る。
【００３６】
用語「治療有効量」は、処置を必要とする患者に投与されたとき、処置をもたらすのに十分な量を意味する。
【００３７】
用語「処置」は、本明細書中で使用されるとき、哺乳動物（特にヒト）などの患者における疾患、障害または病状（例えば、胃腸炎症性疾患）の処置を意味し、それには、以下のうちの１つまたはそれより多くのものが含まれる：
【００３８】
（ａ）疾患、障害または病状の発生を予防すること、すなわち、疾患もしくは病状の再発を予防すること、またはその疾患もしくは病状になりやすい患者の予防的処置；
（ｂ）疾患、障害または病状を回復させること、すなわち、患者の疾患、障害もしくは病状を排除するかまたはそれらを後退させること（他の治療剤の効果を相殺することを含む）；
（ｃ）疾患、障害または病状を抑制すること、すなわち、患者の疾患、障害または病状の発症を遅延させるかまたは停止させること；または
（ｄ）患者の疾患、障害または病状の症候を軽減すること。
【００３９】
用語「薬学的に受容可能な塩」は、患者または哺乳動物（例えば、ヒト）への投与が許容され得る塩（例えば、所与の投与レジメンについて許容され得る哺乳動物の安全性を有する塩）を意味する。代表的な薬学的に受容可能な塩としては、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、エジシル酸（ｅｄｉｓｙｌｉｃ）、フマル酸、ゲンチシン酸、グルコン酸、グルクロン酸（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ）、グルタミン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２，６−ジスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オロチン酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびキシナホ酸（ｘｉｎａｆｏｉｃ  ａｃｉｄ）などの塩が挙げられる。
【００４０】
用語「その塩」は、酸の水素がカチオン（例えば、金属カチオンまたは有機カチオンなど）によって置き換えられたときに形成される化合物を意味する。例えば、カチオンは、プロトン化型の式（Ｉ）の化合物、すなわち、１つまたはそれより多くのアミノ基が酸によってプロトン化されている形態であり得る。代表的には、塩は、薬学的に受容可能な塩であるが、これは、患者への投与が意図されていない中間体化合物の塩には求められない。
【００４１】
用語「アミノ保護基」は、アミノ窒素において望まれない反応を妨げるのに適した保護基を意味する。代表的なアミノ保護基としては、ホルミル；アシル基、例えば、アルカノイル基（例えば、アセチルおよびトリ−フルオロアセチル）；アルコキシカルボニル基（例えば、ｔｅｒｔブトキシカルボニル（Ｂｏｃ））；アリールメトキシカルボニル基（例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ））；アリールメチル基（例えば、ベンジル（Ｂｎ）、トリチル（Ｔｒ）および１，１−ジ−（４’−メトキシフェニル）メチル）；シリル基（例えば、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳまたはＴＢＤＭＳ）、［２−（トリメチルシリル）−エトキシ］メチル（ＳＥＭ））；などが挙げられるが、これらに限定されない。数多くの保護基ならびにそれらの導入および除去は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載されている。
一般的な合成手順
【００４２】
化合物（Ｉ）およびそれらの中間体は、商業的に入手可能なまたは日常的に調製される出発物質および試薬を使用して、以下の一般的な方法および手順に従って調製され得る。以下のスキームにおいて使用される置換基および変数（例えば、ＲおよびＸ）は、別段示されない限り、本明細書中の他の箇所に定義される意味と同じ意味を有する。さらに、酸性または塩基性の原子または官能基を有する化合物は、別段示されない限り、塩として使用され得るかまたは生成され得る（場合によっては、特定の反応において塩を使用するためには、その反応を行う前に、日常的な手順を使用して、その塩から非塩形態、例えば、遊離塩基に変換することが必要である）。
【００４３】
本発明の特定の実施形態が、以下の手順に示され得るかまたは記載され得るが、当業者は、本発明の他の実施形態または局面も、そのような手順を用いて、または当業者に公知の他の方法、試薬および出発物質を用いて、調製され得ることを認識する。特に、化合物（Ｉ）は、反応体が異なる順序で混和されることにより最終生成物を生成する途中で異なる中間体が提供される種々のプロセス経路によって調製され得ることが認識される。
【００４４】
化合物（Ｉ）を調製する一般方法が、スキーム１および２に図示されている。
【００４５】
スキーム１
【化３】
2021501151.tif 000005
出発物質２−１を、エステル（Ｖ）に、酸の存在下でのアルコールとの反応により転換し得、ここでＲはアルキル基である。いくつかの実施形態において、ＲはＣ１〜１２アルキル基である。いくつかの実施形態において、このアルコールはエタノールである。化合物（Ｖ）をジ−ハロ化合物（ＩＶ）に転換し得る。いくつかの実施形態において、（ＩＶ）はジ−クロロアナログである。いくつかの実施形態において、その試薬はＰＯＣｌ３である。化合物（ＩＶ）は、（ＩＩＩ）に、塩基の存在下での２−４との反応により転換され得る。化合物（ＩＩ）は、（ＩＩＩ）を１−９と塩基の存在下で反応させることにより形成され得る。最後に、（ＩＩ）は、（Ｉ）に、還元剤の存在下で還元され得る。いくつかの実施形態において、この還元剤は、水素化リチウム源または水素化ナトリウム源である。いくつかの実施形態において、この還元剤は、ＬｉＡｌＨ４、ＮａＢＨ４、またはＬｉＢＨ４である。いくつかの実施形態において、Ｒはエチルである。必要に応じて、（Ｉ）の薬学的に受容可能な塩が形成され得る。
【００４６】
この一般方法に関して、いくつかの実施形態において、ＲはＣ１〜１２アルキルである。いくつかの実施形態において、ＲはＣ１〜６アルキルである。いくつかの実施形態において、ＲはＣ１〜３アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒはエチルである。いくつかの実施形態において、Ｘは、Ｆ、ＣｌまたはＢｒである。いくつかの実施形態において、ＸはＣｌである。いくつかの実施形態において、Ｒはエチルであり、そしてＸはＣｌである。
【００４７】
スキーム２
【化４】
2021501151.tif 000006
あるいは、化合物（ＩＩＩ）は、化合物（ＶＩ）（ここでＰＧはアミノ保護基である）と塩基（例えば、ＤＩＰＥＡ）の存在下で反応して、化合物（ＶＩＩ）を与え得る。化合物（ＶＩＩ）は、還元剤で、対応するアルコール（ＶＩＩＩ）に還元され得る。いくつかの実施形態において、この還元剤は、水素化リチウム源または水素化ナトリウム源である。いくつかの実施形態において、この還元剤は、ＬｉＡｌＨ４、ＮａＢＨ４、またはＬｉＢＨ４である。化合物（ＶＩＩＩ）は脱保護されて、化合物（ＩＸ）を与え得る。ＰＧがＢｏｃである場合、この脱保護は、ＴＦＡまたはＨＣｌなどの強酸の存在下で行われ得る。最後に、化合物（ＩＸ）は、エタンスルホニルクロリドなどのエタンスルホニル源と反応し得る。
【００４８】
この一般方法に関して、いくつかの実施形態において、ＰＧはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）である。いくつかの実施形態において、ＲはＣ１〜１２アルキルである。いくつかの実施形態において、ＲはＣ１〜６アルキルである。いくつかの実施形態において、ＲはＣ１〜３アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒはエチルである。いくつかの実施形態において、Ｘは、Ｆ、ＣｌまたはＢｒである。いくつかの実施形態において、ＸはＣｌである。いくつかの実施形態において、Ｒはエチルであり、そしてＸはＣｌである。
【００４９】
結晶形態Ｉ
別の局面において、本開示は、化合物（Ｉ）
【化５】
2021501151.tif 000007
の結晶形態（形態Ｉ）を提供する。
【００５０】
１つの局面において、この結晶形態は、１１．１９±０．２０、１１．７３±０．２０、１８．８０±０．２０、および１９．２９±０．２０の２θ値に回折ピークを含む粉末Ｘ線回折により特徴付けられる。別の局面において、この結晶形態は、６．７５±０．２０の２θ値にさらなる回折ピークを有することによりさらに特徴付けられる。別の局面において、この結晶形態は、５．９１±０．２０、６．２８±０．２０、８．０８±０．２０、１６．６８±０．２０、１７．６２±０．２０、２０．５３±０．２０、および２２．１６±０．２０から選択される２θ値に２つまたはそれより多くのさらなる回折ピークを有することによりさらに特徴付けられる。
【００５１】
粉末Ｘ線回折の分野で周知であるように、ＰＸＲＤパターンのピーク位置は、相対的ピーク高さよりも、比較的、実験の詳細（例えば、サンプル調製および装置のジオメトリの詳細）に感受性でない。したがって、１つの局面において、結晶形態Ｉは、ピーク位置が、図１に示されるパターンのピーク位置と実質的に一致する粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする。
【００５２】
別の局面では、結晶形態Ｉは、高温に曝露されたときの挙動によって特徴付けられる。図２に示されているように、１０℃／分の加熱速度で記録された示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースは、融解転移として特定される、吸熱熱流のピークを示し、これは２５０．９℃±２℃の温度で吸熱の熱流の極大値を示す。別の局面において、形態Ｉは、図２に示されるものに実質的に一致する示差走査熱量測定トレースにより特徴付けられる。
【００５３】
図３の熱重量分析（ＴＧＡ）トレースは、Ｎ２パージ下で、２２℃〜１２５℃で約０．７０％の重量損失を示す。この化合物は、約２５０℃の開始温度で分解する。
【００５４】
調製２に記載されるように、形態Ｉは、化合物（Ｉ）をエタノールに溶解させて加熱することにより調製され得る。次いで、得られた溶液が約２５℃まで冷却される。形態Ｉは、濾過により単離され得る。
【００５５】
別の局面において、本発明は、結晶形態Ｉを調製する方法を提供し、この方法は：（ａ）化合物（Ｉ）をエタノールなどの希釈剤に溶解させ、そして必要に応じて熱を加えて、反応混合物を形成する工程；（ｂ）この溶液を、必要に応じて撹拌しながら、約２５℃まで冷却する工程；および（ｃ）結晶形態Ｉをこの反応混合物から、例えば濾過により単離する工程を包含する。
【００５６】
結晶形態ＩＩ
別の局面において、本発明は、化合物（Ｉ）：
【化６】
2021501151.tif 000008
の、遊離塩基の無水結晶形態である、結晶形態（形態ＩＩ）を提供する。
【００５７】
１つの局面において、この結晶形態は、１１．４±０．２、１６．２±０．２、１６．６±０．２、１７．７±０．２、および２１．９±０．２の２θ値に回折ピークを含む粉末Ｘ線回折により特徴付けられる。
【００５８】
別の局面において、この結晶形態は、８．９±０．２、９．５±０．２、および１０．２±０．２の２θ値にさらなる回折ピークを有することによりさらに特徴付けられる。
【００５９】
別の局面において、この結晶形態は、１４．４±０．２、１９．０±０．２、１９．２±０．２、１９．８±０．２、２０．１±０．２、２０．４±０．２、２０．６±０．２、２０．８±０．２、２１．３±０．２、２５．９±０．２、３０．１±０．２、３０．５±０．２、３０．９±０．２、３２．６±０．２、および３３．８±０．２から選択される２θ値に２つまたはそれより多くのさらなる回折ピークを有することによりさらに特徴付けられる。
【００６０】
粉末Ｘ線回折の分野で周知であるように、ＰＸＲＤパターンのピーク位置は、相対的ピーク高さよりも、比較的、実験の詳細（例えば、サンプル調製および装置のジオメトリの詳細）に感受性でない。したがって、１つの局面において、結晶形態ＩＩは、ピーク位置が、図５に示されるパターンのピーク位置と実質的に一致する粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする。
【００６１】
別の局面では、結晶形態ＩＩは、高温に曝露されたときの挙動によって特徴付けられる。図６に示されているように、１０℃／分の加熱速度で記録された示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースは、融解転移として特定される、吸熱熱流のピークを示し、これは２３８．１℃±２℃の温度で吸熱の熱流の極大値を示す。別の局面において、形態ＩＩは、図６に示されるものに実質的に一致する示差走査熱量測定トレースにより特徴付けられる。
【００６２】
図７の熱重量分析（ＴＧＡ）トレースは、２２２℃より後の分解に関連する重量損失を示す。
【００６３】
形態ＩＩについての代表的なＤＭＳトレースを図８に示す。５〜９０％ＲＨでの総水分取り込みは、約０．０２％であった。形態ＩＩは非潮解性である。
【００６４】
調製２０に記載されるように、形態ＩＩは、化合物２−６を、５℃に冷却したＥｔＯＨとＴＨＦとの混合物中に懸濁させることにより調製され得る。この懸濁物に、ＬｉＢＨ４が添加され得る。この添加の後に、その温度を１０℃まで上昇させ得、そしてこの反応混合物を２時間撹拌し得る。この反応を、水に溶解させた塩化アンモニウムの混合物でクエンチし得る。４５℃まで加熱した後に、水をゆっくりと添加して、結晶を生成させ得る。得られたスラリーを４５℃で数時間保持し得、次いで１５℃で撹拌し得、そして濾過し得る。結晶形態の形態ＩＩをＥｔＯＨおよび水ですすぎ得、そして乾燥させて、中間体等級の形態ＩＩを得ることができる。
【００６５】
この中間体等級物を、ＤＭＳＯに加熱しながら溶解し得、その後、その内部温度を約８６℃で維持しながらｎ−ＰｒＯＨをゆっくりと添加し得る。この混合物を約９２℃で約４時間撹拌する。次いで、得られた混合物を約２０℃までゆっくりと冷却し、そして約２０℃で数時間撹拌する。次いで、形態ＩＩを濾過により単離し得る。結晶形態ＩＩをｎＰｒＯＨおよびエタノールで洗浄し得、その後、濾過し得る。
【００６６】
別の局面において、本開示は、中間体等級の結晶形態ＩＩを精製する方法を提供し、この方法は、（ａ）中間体等級の形態ＩＩをＤＭＳＯなどの希釈剤に溶解させ、そしてこの混合物に熱を加える工程；（ｂ）ｎ−ＰｒＯＨをゆっくりと添加する工程；（ｃ）この混合物を約９０℃で加熱する工程；（ｄ）この溶液を約２０℃まで冷却する工程；および（ｅ）結晶形態ＩＩをこの反応混合物から、例えば濾過により単離する工程を包含する。
薬学的組成物
【００６７】
化合物（Ｉ）およびそれらの薬学的に受容可能な塩は、通常、薬学的組成物または製剤の形態で使用される。化合物（Ｉ）は、形態Ｉまたは形態ＩＩなどの結晶形態で存在し得る。そのような薬学的組成物は、任意の許容され得る投与経路によって患者に投与されてよく、その投与経路としては、経口、局所（経皮を含む）、直腸、経鼻、吸入、および非経口的な投与形式が挙げられるがこれらに限定されない。
【００６８】
したがって、上記組成物の局面の１つにおいて、本発明は、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤および化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を含む薬学的組成物に関する。別の組成物の局面において、本発明は、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤、および化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩の結晶形態（例えば、形態Ｉまたは形態ＩＩ）を含有する薬学的組成物に関する。必要に応じて、そのような薬学的組成物は、所望であれば、他の治療剤および／または製剤化剤を含んでもよい。組成物およびその使用を論じる際、「本発明の化合物」は、本明細書中で「活性な作用物質」と称されることがある。
【００６９】
本開示の薬学的組成物は、通常、治療有効量の化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を含む。しかしながら、薬学的組成物は、治療有効量より多い、すなわち、大量の組成物または治療有効量より少ない、すなわち、治療有効量を達成するための複数回投与のためにデザインされた個別の単位用量を含むことがあることを当業者は認識する。
【００７０】
代表的には、そのような薬学的組成物は、約０．１〜約９５重量％の活性な作用物質を含み；約５〜約７０重量％の活性な作用物質が含まれる。
【００７１】
任意の従来のキャリアまたは賦形剤を、本発明の薬学的組成物において使用してもよい。特定のキャリアもしくは賦形剤、またはキャリアもしくは賦形剤の組み合わせの選択は、特定の患者を処置するために用いられる投与様式、または病状もしくは疾患状態のタイプに依存する。この点において、特定の投与様式のために好適な薬学的組成物の調製法は、十分に薬学分野の当業者の技術の範囲内である。さらに、本発明の薬学的組成物において使用されるキャリアまたは賦形剤は、商業的に入手可能である。さらなる例証として、従来の製剤化の手法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００）；およびＨ．Ｃ．Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９）に記載されている。
【００７２】
薬学的に受容可能なキャリアとして機能し得る材料の代表例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：糖（例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース）；デンプン（例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン）；セルロース（例えば、微結晶性セルロース）およびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース）；トラガント末；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤（例えば、カカオバターおよび坐剤蝋）；油（例えば、落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油）；グリコール（例えば、プロピレングリコール）；ポリオール（例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール）；エステル（例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル）；寒天；緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム）；アルギン酸；発熱物質非含有水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；および薬学的組成物において使用される他の無毒性の適合性物質。
【００７３】
薬学的組成物は、代表的には、活性な作用物質を薬学的に受容可能なキャリアおよび１つまたはそれより多くの必要に応じた成分と十分かつ完全に混合または混和することによって調製される。次いで、得られた均一に混和された混合物は、従来の手順および器具を用いて、錠剤、カプセル剤、丸剤などに成形または充填され得る。
【００７４】
本開示の薬学的組成物は、単位剤形に包装され得る。用語「単位剤形」とは、患者への投与に適した物理的に別々の単位のことを指し、すなわち、各単位は、単独でまたは１つもしくはそれを超えるさらなる単位と組み合わさって所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性な作用物質を含む。例えば、そのような単位剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤など、または非経口投与に適した単位パッケージであり得る。
【００７５】
１つの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、経口投与に適している。経口投与に好適な薬学的組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、舐剤、カシェ剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤の形態であり得るか；または水性もしくは非水性液体における溶液または懸濁液として存在し得るか；または水中油型もしくは油中水型の液体エマルジョンとして存在し得るか；またはエリキシル剤もしくはシロップ剤などとして存在し得；それらの各々は、所定の量の本開示の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を活性成分として含んでいる。
【００７６】
固形剤形（すなわち、カプセル剤、錠剤、丸剤など）での経口投与が意図されているとき、本開示の薬学的組成物は、通常、活性な作用物質またはその薬学的に受容可能な塩、および１つまたはそれより多くの薬学的に受容可能なキャリアを含む。必要に応じて、そのような固形剤形は、充填剤または増量剤（例えば、デンプン、微結晶性セルロース、ラクトース、リン酸二カルシウム、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸）；結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシア）；保湿剤（例えば、グリセロール）；崩壊剤（例えば、クロスカルメロース（ｃｒｏｓｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ）ナトリウム、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケートおよび／または炭酸ナトリウム）；溶解遅延剤（例えば、パラフィン）；吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）；湿潤剤（例えば、セチルアルコールおよび／またはモノステアリン酸グリセロール）；吸収剤（例えば、カオリンおよび／またはベントナイト粘土）；滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよび／またはそれらの混合物）；着色剤；および緩衝剤を含み得る。
【００７７】
離型剤、湿潤剤、コーティング剤、甘味料、香味料および香料、保存剤ならびに酸化防止剤も、本開示の薬学的組成物に存在し得る。薬学的に受容可能な酸化防止剤の例としては、水溶性の酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど）；油溶性の酸化防止剤（例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなど）；および金属キレート剤（例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸、ソルビトール、酒石酸、リン酸など）が挙げられる。錠剤、カプセル剤、丸剤などのためのコーティング剤としては、腸溶コーティングのために使用されるもの（例えば、セルロースアセテートフタレート、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸、メタクリル酸エステル共重合体、セルロースアセテートトリメリテート、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートなど）が挙げられる。
【００７８】
本開示の薬学的組成物はまた、例えば、様々な比率でヒドロキシプロピルメチルセルロース；または他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／もしくはミクロスフェアを用いて、活性な作用物質の持続放出または制御放出を提供するように製剤化され得る。さらに、本開示の薬学的組成物は、必要に応じて不透明化剤を含んでもよく、消化管のある特定の部分において、必要に応じて遅延様式で、活性成分だけを放出するようにまたは活性成分を優先的に放出するように製剤化され得る。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質および蝋が挙げられる。活性な作用物質は、適切な場合、上に記載された賦形剤の１つまたはそれ超とともに、マイクロカプセル化された形態でも存在し得る。
【００７９】
経口投与に好適な液体剤形としては、例証として、薬学的に受容可能なエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。液体剤形は、代表的には、活性な作用物質および不活性な希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、オレイン酸、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含む。あるいは、ある特定の液体製剤は、例えば噴霧乾燥によって、粉末に変換され得、その粉末は、従来の手順によって固形剤形を調製するために使用される。
【００８０】
懸濁剤は、活性成分またはその薬学的に受容可能な塩に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガント、ならびにそれらの混合物を含み得る。
【００８１】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、非経口的に（例えば、静脈内、皮下、筋肉内または腹腔内注射によって）も投与され得る。非経口投与の場合、活性な作用物質またはその薬学的に受容可能な塩は、代表的には、非経口投与に好適なビヒクルと混合され、そのビヒクルの例としては、滅菌水溶液、食塩水、低分子量アルコール、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、ゼラチン、脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルなどが挙げられる。非経口製剤は、１つまたはそれより多くの酸化防止剤、可溶化剤、安定剤、保存剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤または分散剤も含み得る。これらの製剤は、滅菌された注射可能な媒質、滅菌剤の使用、濾過、照射または加熱によって、滅菌され得る。
【００８２】
あるいは、本開示の薬学的組成物は、吸入による投与のために製剤化される。吸入による投与に好適な薬学的組成物は、代表的には、エアロゾルまたは粉末の形態であり得る。そのような組成物は、一般に、周知の送達デバイス（例えば、定量吸入器、乾燥粉末吸入器、噴霧器または同様の送達デバイス）を用いて投与される。
【００８３】
加圧容器を用いて吸入によって投与されるとき、本開示の薬学的組成物は、代表的には、活性成分またはその薬学的に受容可能な塩、および好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適なガス）を含み得る。さらに、薬学的組成物は、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、および粉末吸入器での使用に適した粉末を含むカプセルまたはカートリッジ（例えばゼラチンでできたもの）の形態であり得る。好適な粉末基剤の例としては、ラクトースまたはデンプンが挙げられる。
【００８４】
局所製剤
皮膚の状態を処置するために、本発明の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩は、好ましくは、皮膚への局所投与のために製剤化される。局所組成物は、流体または半固体のビヒクルを含み、これらとしては、ポリマー、増粘剤、緩衝剤、中和剤、キレート剤、防腐剤、界面活性剤または乳化剤、酸化防止剤、蝋または油、軟化薬、日焼け止め剤、および溶媒または混合溶媒系が挙げられ得るが、これらに限定されない。本発明において有用な局所組成物は、広範な種々の製品の型に作製され得る。これらとしては、ローション、クリーム、ゲル、スティック、スプレー、軟膏、ペースト、フォーム、ムース、およびクレンザーが挙げられるが、これらに限定されない。これらの製品の型は、数種類のキャリア系を含み得、これらとしては、粒子、ナノ粒子、およびリポソームが挙げられるが、これらに限定されない。所望であれば、崩壊剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（アルギン酸ナトリウムなど））が添加され得る。製剤化および投与のための技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  Ｅｄ．（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，１９９５）に見出され得る。この製剤は、身体内の所望の標的部位への送達を最大にするように選択され得る。
【００８５】
皮膚に塗布される予定の調製物であるローションは代表的に、微細に分割された固体、蝋状物質、または液体が分散している、液体または半液体の調製物である。ローションは代表的に、より良好な分散物を生成するための懸濁化剤、ならびに活性な作用物質を皮膚または毛に接触させて配置および保持するために有用な化合物（例えば、メチルセルロース、またはナトリウムカルボキシメチル−セルロースなど）を含有する。
【００８６】
本開示による送達のために、活性な作用物質またはその薬学的に受容可能な塩を含有するクリームは、水中油型または油中水型のいずれかの、粘性の液体または半固体のエマルジョンである。クリーム基剤は、水洗可能であり、そして油相、乳化剤および水相を含む。この油相は一般に、ペトロラタムまたは脂肪アルコール（例えば、セチルアルコールもしくはステアリルアルコール）からなり、この水相は通常、必須ではないが、体積が油相より大きく、そして一般に、湿潤剤を含有する。クリーム製剤中の乳化剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙに説明されるように、一般に、非イオン性、陰イオン性、陽イオン性または両性の界面活性剤である。クリーム製剤の構成要素としては、油性基剤（例えば、ペトロラタム（ｐｅｔｒｏｌａｔｒｕｍ）、鉱油、植物油および動物油ならびにトリグリセリド）；クリーム基剤（例えば、ラノリンアルコール、ステアリン酸およびセトステアリルアルコール）；ゲル基剤（例えば、ポリビニルアルコール）；溶媒（例えば、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール）；乳化剤（例えば、ポリソルベート、ステアレート（例えば、ステアリン酸グリセリル、ヒドロキシステアリン酸オクチル（ｏｃｔｙｌｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅａｒａｔｅ）、ステアリン酸ポリオキシル、ＰＥＧステアリルエーテル、パルミチン酸イソプロピルおよびモノステアリン酸ソルビタン））；安定剤（例えば、多糖および亜硫酸ナトリウム）；軟化薬（すなわち、保湿剤（例えば、中鎖トリグリセリド、ミリスチン酸イソプロピルおよびジメチコーン））；硬化剤（例えば、セチルアルコールおよびステアリルアルコール）；抗菌剤（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェノキシエタノール、ソルビン酸、ジアゾリジニル尿素およびブチル化ヒドロキシアニソール）；浸透促進剤（例えば、Ｎ−メチルピロリドン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールモノラウレートなど）；およびキレート剤（例えば、エデト酸二ナトリウム）が挙げられ得る。
【００８７】
ゲル製剤もまた、本発明に関連して使用され得る。局所薬物製剤の分野の当業者により理解されるように、ゲルは半固体である。単相ゲルは、キャリア液体（これは代表的に水性であるが、溶媒または溶媒ブレンドであってもよい）の全体に実質的に均一に分布した有機巨大分子を含有する。
【００８８】
半固体調製物である軟膏は、代表的に、ペトロラタムまたは他の石油誘導体をベースとする。当業者により理解されるように、使用されるべき具体的な軟膏基剤は、所定の製剤のために選択された活性な作用物質のために最適な送達を提供し、そして好ましくは、他の望ましい特性（例えば、軟化性など）もまた提供する、軟膏基剤である。他のキャリアまたはビヒクルと同様に、軟膏基剤は、不活性であり、安定であり、非刺激性であり、そして非感作性であるべきである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  Ｅｄ．（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，１９９５）の１３９９〜１４０４頁で説明されるように、軟膏基剤は、４つのクラス、すなわち、油性基剤；乳化性基剤；エマルジョン基剤；および水溶性基剤に分けられ得る。油性軟膏基剤としては、例えば、植物油、動物から得られる脂肪、および石油から得られる半固体炭化水素が挙げられる。乳化性軟膏基剤（吸収性軟膏基剤としても公知）は、水をほとんどまたは全く含まず、そして例えば、硫酸ヒドロキシステアリン、無水ラノリンおよび親水性ペトロラタムが挙げられる。エマルジョン軟膏基剤は、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルジョンまたは水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョンのいずれかであり、そして例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ラノリンおよびステアリン酸が挙げられる。水溶性軟膏基剤は、種々の分子量のポリエチレングリコールから調製され得、ここでまた、さらなる情報に関して、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（前出）が参照されるべきであり得る。軟膏製剤において使用するために適切な油性物質としては、ペトロラタム（ペトロレアムゼリー）、蜜蝋、カカオバター、シアバターおよびセチルアルコールが挙げられる。軟膏は、所望であれば、浸入増強剤を必要に応じてさらに含有し得る。
【００８９】
本発明の有用な製剤としてはまた、スプレーが挙げられる。スプレーは一般に、活性な作用物質を、水性および／またはアルコール性溶液中で提供し、これは、送達のために、皮膚または毛に噴霧され得る。このようなスプレーとしては、活性な作用物質の溶液の濃縮を、送達後に投与の部位で提供するように製剤化されたスプレーが挙げられる。例えば、スプレー溶液は、薬物または活性な作用物質が溶解し得るアルコールまたは他の同様の揮発性液体から主としてなり得る。皮膚または毛に送達されると、このキャリアが蒸発して、濃縮された活性な作用物質を投与部位に残す。
【００９０】
局所薬学的組成物はまた、適切な固体またはゲル相のキャリアを含有し得る。このようなキャリアの例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９１】
局所薬学的組成物はまた、適切な乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ）を含有し得る。乳化剤とは、水中油または油中水の混合および懸濁を増強または容易にする薬剤をいう。本明細書中で使用される乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）は、単一の乳化剤からなり得るか、あるいは非イオン性、陰イオン性、陽イオン性もしくは両性の界面活性剤、または２つもしくはそれより多くのこのような界面活性剤のブレンドであり得、本明細書中で使用するために好ましいものは、非イオン性または陰イオン性の乳化剤である。このような表面活性物質は、”ＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ’ｓ  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ  ａｎｄ  Ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒｓ，”Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８０年ＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，ＭＣ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ出版，１７５  Ｒｏｃｋ  Ｒｏａｄ，Ｇｌｅｎ  Ｒｏｃｋ，ＮＪ．０７４５２，ＵＳＡ．に記載されている。
【００９２】
セテアリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、乳化蝋、モノステアリン酸グリセリルなどの、高分子量アルコールが使用され得る。他の例は、エチレングリコールジステアレート、トリステアリン酸ソルビタン、プロピレングリコールモノステアレート、モノオレイン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン（ＳＰＡＮ（登録商標）  ６０）、ジエチレングリコールモノラウレート、モノパルミチン酸ソルビタン、スクロースジオレエート、スクロースステアレート（ＣＲＯＤＥＳＴＡ  Ｆ−１６０）、ポリオキシエチレンラウリルエーテル（ＢＲＩＪ  ３０）、ポリオキシエチレン（２）ステアリルエーテル（ＢＲＩＪ  ７２）、ポリオキシエチレン（２１）ステアリルエーテル（ＢＲＩＪ  ７２１）、ポリオキシエチレンモノステアレート（Ｍｙｒｊ  ４５）、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）  ６０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）  ８０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）  ２０）およびオレイン酸ナトリウムである。コレステロールおよびコレステロール誘導体もまた、外用エマルジョンにおいて使用され得る。
【００９３】
適切な非イオン性乳化剤の例は、Ｐａｕｌ  Ｌ．Ｌｉｎｄｎｅｒにより、”Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎ”，編者Ｋｅｎｎｅｔｈ  Ｌｉｓｓａｎｔ，Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．出版，１９７４に記載されている。使用され得る非イオン性乳化剤の例としては、ＢＲＩＪ製品（例えば、ＢＲＩＪ  ２（ポリオキシエチレン（２）ステアリルエーテル）、ＢＲＩＪ  Ｓ２０（ポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル）、ＢＲＩＪ  ７２（４．９のＨＬＢを有するポリオキシエチレン（２）ステアリルエーテル）、ＢＲＩＪ  ７２１（１５．５のＨＬＢを有するポリオキシエチレン（２１）ステアリルエーテル）、Ｂｒｉｊ  ３０（９．７のＨＬＢを有するポリオキシエチレンラウリルエーテル））、Ｐｏｌａｗａｘ（８．０のＨＬＢを有する乳化蝋）、Ｓｐａｎ（登録商標）  ６０（４．７のＨＬＢを有するモノステアリン酸ソルビタン）、Ｃｒｏｄｅｓｔａ  Ｆ−１６０（１４．５のＨＬＢを有するスクロースステアレート”）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９４】
局所薬学的組成物はまた、適切な軟化薬を含有し得る。軟化薬とは、乾燥の予防または軽減のため、および皮膚または毛の保護のために使用される物質である。有用な軟化薬としては、セチルアルコール、ミリスチン酸イソプロピル、およびステアリルアルコールなどが挙げられるが、これらに限定されない。広範な種々の適切な軟化薬が公知であり、そして本明細書中で使用され得る。例えば、Ｓａｇａｒｉｎ，Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１，ｐｐ．３２−４３（１９７２）、およびＤｅｃｋｎｅｒらに対する米国特許第４，９１９，９３４号（１９９０年４月２４日発行）（これらの両方は、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【００９５】
局所薬学的組成物はまた、適切な酸化防止剤（酸化を抑制することが既知である物質）を含有し得る。本発明に従って使用するのに適した酸化防止剤としては、ブチル化ヒドロキシトルエン、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸パルミテート（ａｓｃｏｒｂｉｃ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、ブチル化ヒドロキシアニソール、２，４，５−トリヒドロキシブチロフェノン、４−ヒドロキシメチル−２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール、エリソルビン酸、グアヤクガム、没食子酸プロピル、チオジプロピオン酸、チオジプロピオン酸ジラウリル、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロキノンおよびトコフェロール（ビタミンＥなど）などが挙げられるが、これらに限定されず、これらの化合物の薬学的に受容可能な塩およびエステルを含む。好ましくは、この酸化防止剤は、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチル化ヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、アスコルビン酸、その薬学的に受容可能な塩またはエステル、あるいはこれらの混合物である。最も好ましくは、この酸化防止剤はブチル化ヒドロキシトルエンである。
【００９６】
局所薬学的組成物はまた、適切な防腐剤を含有し得る。防腐剤とは、抗微生物剤として働くために、薬学的製剤に添加される化合物である。非経口製剤において有効かつ受容可能であることが当該分野において公知である防腐剤のうちでもとりわけ、ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウム、クロロヘキシジン、フェノール、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロロブタノール、ｏ−クレゾール、ｐ−クレゾール、クロロクレゾール、硝酸フェニル水銀、チメロサール、安息香酸、およびこれらの種々の混合物である。例えば、Ｗａｌｌｈａｕｓｓｅｒ，Ｋ．−Ｈ．，Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ，２４：９−２８（１９７４）（Ｓ．Ｋｒａｇｅｒ，Ｂａｓｅｌ）を参照のこと。
【００９７】
局所薬学的組成物はまた、脂質二重層を通過しない金属陽イオンと錯体を形成するための、適切なキレート剤を含有し得る。適切なキレート剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール−ビス（β−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）および８−アミノ−２−［（２−アミノ−５−メチルフェノキシ）メチル］−６−メトキシキノリン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸，四カリウム塩（ＱＵＩＮ−２）が挙げられる。好ましくは、これらのキレート剤は、ＥＤＴＡおよびクエン酸である。
【００９８】
局所薬学的組成物はまた、製剤のｐＨを薬学的に受容可能な範囲内に調整するために使用される、適切な中和剤を含有し得る。中和剤の例としては、トロラミン、トロメタミン、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、および酢酸が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９９】
局所薬学的組成物はまた、適切な粘度上昇剤を含有し得る。これらの成分は、ポリマー含有溶液の粘度を、この薬剤とこのポリマーとの相互作用により増大させることが可能な、拡散性化合物である。Ｃａｒｂｏｐｏｌ  Ｕｌｔｒｅｚ  １０が、粘度上昇剤として使用され得る。
【０１００】
局所投与に適したローションなどの液体形態は、適切な水性または非水性のビヒクルを、緩衝剤、懸濁化剤および分散剤、増粘剤、ならびに浸入増強剤などと一緒に含有し得る。クリームまたはペーストなどの固体形態は、例えば、以下の成分：基材としての水、油、アルコールまたはグリースなどのいずれかを、界面活性剤、ポリエチレングリコールなどのポリマー、増粘剤、および固体などと一緒に含有し得る。液体または固体の製剤は、リポソーム、ミクロソーム、およびミクロスポンジなどの、増強された送達技術を含み得る。さらに、化合物は、徐放系（例えば、治療剤を含む固体疎水性ポリマーの半透マトリックス）を使用して、送達され得る。種々の徐放材料が樹立されており、そして当業者に周知である。
【０１０１】
局所適用のために製剤化される場合、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、０．１〜５０重量％で存在し得る。いくつかの実施形態において、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、０．１〜２５重量％で存在する。いくつかの実施形態において、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、０．１〜１０重量％で存在する。いくつかの実施形態において、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、０．２５〜５重量％で存在する。いくつかの実施形態において、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、０．２５〜２重量％で存在する。いくつかの実施形態において、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、０．２５〜１重量％で存在する。いくつかの実施形態において、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、０．０５〜０．５重量％で存在する。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、重量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、約２％、約２．１％、約２．２％、約２．３％、約２．４％、約２．５％、約２．６％、約２．７％、約２．８％、約２．９％、約３％、約３．２５％、約３．５％、約３．７５％、約４％、約４．５％、約５％、約５．５％、約６％、約６．５％、約７％、約７．５％、約８％、約８．５％、約９％、約９．５％または約１０％で存在する。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を含有する薬学的組成物は、１つまたはそれより多くのさらなる治療剤をさらに含有する。いくつかの実施形態において、この１つまたはそれより多くのさらなる治療剤は、自己免疫性皮膚疾患を処置するために有用である。いくつかの実施形態において、この１つまたはそれより多くのさらなる治療剤は、炎症性皮膚疾患を処置するために有用である。いくつかの実施形態において、この１つまたはそれより多くのさらなる治療剤は、アトピー性皮膚炎を処置するために有用である。いくつかの実施形態において、この１つまたはそれより多くのさらなる治療剤は、円形脱毛症を処置するために有用である。薬学的組成物中で化合物（Ｉ）と組み合わせられ得る特定のクラスの化合物または特定の化合物は、後の段落に例示されている。
【０１０４】
以下の非限定的な例は、本発明の代表的な薬学的組成物を例証する。
【０１０５】
錠剤経口固形剤形
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、例えば、錠剤１つあたり５ｍｇ、２０ｍｇまたは４０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドンおよびクロスカルメロースナトリウムと４：５：１：１の比で乾式混合され、錠剤に圧縮される。
【０１０６】
カプセル経口固形剤形
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、例えば、カプセル１つあたり５ｍｇ、２０ｍｇまたは４０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドンおよびクロスカルメロースナトリウムと４：５：１：１の比で湿式造粒によって混和され、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースのカプセルに充填される。
【０１０７】
液体製剤
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩（０．１％）、水（９８．９％）およびアスコルビン酸（１．０％）を含む液体製剤が、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を水とアスコルビン酸との混合物に加えることによって形成される。
【０１０８】
腸溶コーティングされた経口剤形
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を、ポリビニルピロリドンを含む水溶液に溶解し、１：５ｗ／ｗという活性な作用物質：ビーズの比で微結晶性＋セルロース上または糖のビーズ上にスプレーコーティングし、次いで、アクリル共重合体、例えば、商品名Ｅｕｄｒａｇｉｔ−Ｌ（登録商標）およびＥｕｄｒａｇｉｔ−Ｓ（登録商標）として入手可能なアクリル共重合体の組み合わせまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートを含む腸溶コーティングのおよそ５％重量増加を適用する。腸溶コーティングされたビーズを、例えば、カプセル１つあたり３０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースのカプセルの中に充填する。
【０１０９】
腸溶コーティングされた経口剤形
Ｅｕｄｒａｇｉｔ−Ｌ（登録商標）とＥｕｄｒａｇｉｔ−Ｓ（登録商標）との組み合わせまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートを含む腸溶コーティングを、上に記載された錠剤経口剤形またはカプセル経口剤形に適用する。
【０１１０】
局所投与用の軟膏製剤
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、ペトロラタム、Ｃ８〜Ｃ１０トリグリセリド、ヒドロキシステアリン酸オクチルおよびＮ−メチルピロリドンと、ある比で混和される。
【０１１１】
局所投与用の軟膏製剤
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、ペトロラタム、Ｃ８〜Ｃ１０トリグリセリド、ヒドロキシステアリン酸オクチル、ベンジルアルコールおよびＮ−メチルピロリドンと、ある比で混和される。
【０１１２】
局所投与用の軟膏製剤
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、白色ワセリン、プロピレングリコール、モノ−およびジ−グリセリド、パラフィン、ブチル化ヒドロキシトルエンおよびエデト酸カルシウム二ナトリウムと、ある比で混和される。
【０１１３】
局所投与用の軟膏製剤
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、鉱油、パラフィン、炭酸プロピレン、白色ワセリンおよび白蝋と混和される。
【０１１４】
局所投与用のクリーム製剤
鉱油が、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、プロピレングリコール、パルミチン酸イソプロピル、ポリソルベート６０、セチルアルコール、モノステアリン酸ソルビタン、ステアリン酸ポリオキシル４０、ソルビン酸、メチルパラベンおよびプロピルパラベンと混和されて、油相が形成され、それが、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、剪断混合（ｓｈｅａｒ  ｂｌｅｎｄｉｎｇ）によって精製水と混和される。
【０１１５】
局所投与用のクリーム製剤
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、ベンジルアルコール、セチルアルコール、無水クエン酸、モノグリセリドおよびジグリセリド、オレイルアルコール、プロピレングリコール、硫酸セトステアリルナトリウム、水酸化ナトリウム、ステアリルアルコール、トリグリセリドならびに水を含むクリーム製剤は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む。
【０１１６】
局所投与用のクリーム製剤
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、セトステアリルアルコール、ミリスチン酸イソプロピル、プロピレングリコール、セトマクロゴール１０００、ジメチコーン３６０、クエン酸、クエン酸ナトリウムおよび精製水を、保存剤としてイミド尿素、メチルパラベンおよびプロピルパラベンとともに含むクリーム製剤は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む。
【０１１７】
局所投与用のクリーム製剤
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、ステアリン酸、セトステアリルアルコール、パルミチン酸イソプロピル、オクチルヒドロキシステアレート、ＢＲＩＪ  Ｓ２（ＰＥＧ  ２ステアリルエーテル）、ＢＲＩＪ  Ｓ２０（ＰＥＧ  ２０ステアリルエーテル）、Ｎ−メチルピロリジン、ＰＥＧおよび水を含むクリーム製剤は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む。
【０１１８】
局所投与用のクリーム製剤
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、ステアリン酸、セトステアリルアルコール、パルミチン酸イソプロピル、オクチルヒドロキシステアレート、ＢＲＩＪ  Ｓ２（ＰＥＧ  ２ステアリルエーテル）、ＢＲＩＪ  Ｓ２０（ＰＥＧ  ２０ステアリルエーテル）、Ｎ−メチルピロリジン、ＰＥＧ４００および水を含むクリーム製剤は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む。
【０１１９】
有用性
化合物（Ｉ）は、ＪＡＫファミリーの酵素、すなわち、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２の強力な阻害剤であることが示されている。ＪＡＫ酵素のファミリーの阻害は、多くの主要な炎症誘発サイトカインのシグナル伝達を阻害し得る。したがって、化合物（Ｉ）は、胃腸炎症性疾患、炎症性およびそう痒性の皮膚疾患、炎症性眼疾患、ならびに炎症性呼吸疾患などの炎症性疾患の処置において有用であると予測される。
【０１２０】
炎症性皮膚疾患
アトピー性皮膚炎は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に依存する炎症誘発サイトカイン、特に、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、およびＩＦＮγの上昇に関連付けられている。化合物（Ｉ）は、４つ全てのＪＡＫ酵素の強力な阻害を示すので、アトピー性皮膚炎および他の炎症性皮膚疾患に特徴的な炎症誘発サイトカインを強力に阻害すると予測される。化合物（Ｉ）はまた、アッセイ４において、ＴＳＬＰにより誘導されるＴＡＲＣの阻害について、７．８のｐＩＣ５０値を示すことが、本明細書中で示された
【０１２１】
化合物（Ｉ）は、アッセイ２に記載される細胞アッセイにおいて、ＩＬ−１３により誘導されるＳＴＡＴ６のリン酸化の阻害について、８．５のｐＩＣ５０値を示した。化合物（Ｉ）はまた、アッセイ１３において、正常ヒト表皮ケラチノサイトにおけるＩＬ−１３により誘導されるＳＴＡＴ６のリン酸化の阻害について、８．３のｐＩＣ５０値を示した。さらに、アッセイ６の、化合物（Ｉ）のモデルのクリーム製剤および軟膏製剤は、ミニブタにおいて、検出可能な血漿曝露なしで、表皮および真皮の層での有意な化合物曝露を実証した。切除したばかりのヒト皮膚を使用するエキソビボ薬物動力学アッセイにおいて、化合物（Ｉ）は、ＣＸＣＬ１０およびＣＣＬ２遺伝子発現を阻害することが示された。化合物（Ｉ）は、ヒト皮膚アッセイにおいて、良好な透過性を示すことが示された。化合物（Ｉ）はまた、アッセイ９において、インビボモデルでのＩＬ−３１により誘導されるｐＳＴＡＴ３の産生を８０％阻害した。最後に、化合物（Ｉ）は、アッセイ１０において、マウスでのＴＰＡにより誘導される刺激性接触皮膚炎モデルで、用量依存性効果を示した。
【０１２２】
化合物（Ｉ）はまた、アッセイ１１に記載される細胞アッセイにおける、ＩＬ−２により誘導されるＳＴＡＴ５のリン酸化についての８．４のｐＩＣ５０値、アッセイ１２で、ヒトＣＤ３＋  Ｔ細胞におけるＩＬ−１２により誘導されるＳＴＡＴ４のリン酸化についての７．２のｐＩＣ５０値、アッセイ１４で、正常ヒト表皮ケラチノサイトにおけるＩＬ−２２により誘導されるＳＴＡＴ３のリン酸化についての８．４のｐＩＣ５０値を示すことが示された。最後に、インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）により抑制されるフィラグリン発現についての化合物（Ｉ）の回収が、１μＭ未満の濃度で観察された。ＩＬ−１２、ＩＬ−２２、およびＩＬ−２３は、乾癬に関与するサイトカインである（Ｂａｌｉｗａｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２０１５，７３（２），３４２−３５０  ２０１５）。これらのサイトカインは、ＪＡＫ２およびＴｙｋ２酵素を介してシグナル伝達する（Ｉｓｈｉｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１１，１８７，１８１−１８９）。これらのサイトカインを標的とする抗体治療は、乾癬において臨床的有用性を実証している（Ｓｃｈａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｓｅａｓｅ−ａ−Ｍｏｎｔｈ，２０１８，１−４０）。これらのサイトカインを遮断し得る局所的ＪＡＫ阻害剤は、これらの疾患において効力があると予測される。これらのサイトカインは、Ｔｙｋ２およびＪＡＫ２を介してシグナル伝達するので、化合物（Ｉ）は、これらの疾患において活性を有すると予測される。
【０１２３】
ＪＡＫ阻害剤の、有意な全身レベルの非存在下での持続した皮膚レベルは、全身に働く有害な影響なしに、皮膚での強力な局所的な抗炎症活性および抗そう痒活性をもたらすと予測される。このような化合物は、多数の皮膚の炎症状態またはそう痒状態において有益であると予測される。これらの状態としては、アトピー性皮膚炎、白斑、皮膚Ｔ細胞リンパ腫およびサブタイプ（セザリー症候群、菌状息肉腫、パジェット様細網症、肉芽腫性皮膚弛緩症（ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｕｓ  ｓｌａｃｋ  ｓｋｉｎ）、リンパ腫様丘疹症、慢性苔癬状ひこう疹、急性痘瘡状苔癬状ひこう疹、ＣＤ３０＋皮膚Ｔ細胞リンパ腫、二次性皮膚ＣＤ３０＋大細胞型リンパ腫、非菌状息肉腫  ＣＤ３０−皮膚大細胞型Ｔ細胞リンパ腫、多形性Ｔ細胞リンパ腫、レナートリンパ腫、皮下Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、分芽性ＮＫ細胞リンパ腫）、結節性痒疹、扁平苔癬、接触皮膚炎、異汗性湿疹、湿疹、貨幣状皮膚炎、脂漏性皮膚炎、うっ血性皮膚炎、原発性限局性皮膚アミロイドーシス、水疱性類天疱瘡、対宿主性移植片病の皮膚症状、類天疱瘡、円板状狼瘡（ｄｉｓｃｏｉｄ  ｌｕｐｕｓ）、環状肉芽腫、限局性神経皮膚炎、そう痒症、外陰部／陰嚢／肛門周囲のそう痒症、硬化性苔癬、疱疹後神経痛の痒み、毛孔性扁平苔癬、乾癬、ならびに禿髪性毛包炎（ｆｏｌｉｃｕｌｉｔｉｓ  ｄｅｃａｌｖａｎｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。特に、アトピー性皮膚炎（Ｂａｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＫ−ＳＴＡＴ，２０１３，２，ｅ２４１３７）、円形脱毛症（Ｘｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２０１４，２０，１０４３−１０４９）（単在性円形脱毛症、多在性円形脱毛症、蛇行状脱毛症、全身性円形脱毛症、全頭型円形脱毛症、および髭円形脱毛症などのサブタイプが挙げられる）、白斑（Ｃｒａｉｇｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ，ＪＡＭＡ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１５，１５１，１１１０−１１１２）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（Ｎｅｔｃｈｉｐｏｒｏｕｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ．２０１４；１３，３３３１−３３３５）、結節性痒疹（Ｓｏｎｋｏｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６，１１７，４１１−４１７）、扁平苔癬（Ｗｅｌｚ−Ｋｕｂｉａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２０１５，ＩＤ：８５４７４７）、原発性限局性皮膚アミロイドーシス（Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００９，１６１，１２１７−１２２４）、水疱性類天疱瘡（Ｆｅｌｉｃｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９９，１２，５５−６１）、ならびに対宿主性移植片病の皮膚症状（Ｏｋｉｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１４，１３４，９９２−１０００）は、ＪＡＫの活性化を介してシグナル伝達する特定のサイトカインの上昇により特徴付けられる。したがって、化合物（Ｉ）は、これらのサイトカインにより駆動される、関連する皮膚の炎症またはそう痒症を軽減することが可能であり得る。特に、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、アトピー性皮膚炎および他の炎症性皮膚疾患の処置のために有用であると予測される。
【０１２４】
表１３に示されるように、化合物（Ｉ）は、ヒトミクロソームにおいて高いクリアランスを有することが示された。したがって、これは迅速に排出されるという利点を有し、これは、全身曝露を最小にし、そして有害な影響の危険性を低下させる。
【０１２５】
表１３に示されるように、化合物（Ｉ）はまた、高い透過性を有し、これは、皮膚へのより良好な浸透に結び付けられるようであるので、皮膚の適応症のために有益である。
【０１２６】
したがって、いくつかの実施形態において、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）における炎症性または自己免疫性の皮膚疾患を処置する方法を提供し、この方法は、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、および薬学的に受容可能なキャリアを含有する薬学的組成物を、この哺乳動物の皮膚に塗布する工程を包含する。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）における炎症性または自己免疫性の皮膚疾患を処置する方法を提供し、この方法は、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩をこの哺乳動物に投与する工程を包含する。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、この炎症性皮膚疾患はアトピー性皮膚炎である。いくつかの実施形態において、このアトピー性皮膚炎は、軽症〜中等症である。いくつかの実施形態において、このアトピー性皮膚炎は、中等症〜重症である。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、この自己免疫性皮膚疾患は円形脱毛症である。
【０１３０】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩はまた、炎症性皮膚疾患を処置するために有用な１つまたはそれより多くの化合物と組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態において、この１つまたはそれより多くの化合物は、ステロイド、コルチコステロイド、抗生物質、ヒスタミンＨ１受容体アンタゴニスト、カルシニューリン阻害剤、ＩＬ−１３アンタゴニスト、ＰＤＥ  ４阻害剤、Ｇタンパク質共役型受容体−４４アンタゴニスト、ＩＬ−４アンタゴニスト、５−ＨＴ  １ａ受容体アンタゴニスト、５−ＨＴ  ２ｂ受容体アンタゴニスト、α２アドレナリン受容体アゴニスト、カンナビノイドＣＢ１受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ３ケモカイン、アンタゴニスト、コラゲナーゼ阻害剤、細胞質ホスホリパーゼＡ２阻害剤、エオタキシンリガンド阻害剤、ＧＡＴＡ  ３転写因子阻害剤、ヒスタミンＨ４受容体アンタゴニスト、ＩＬ−１０アンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−２アンタゴニスト、ＩＬ−２３アンタゴニスト、ＩＬ−４受容体モジュレーターＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−６アンタゴニスト、ＩＬ−８アンタゴニスト、ＩＬ−９アンタゴニスト、ＩＬ−５アンタゴニスト、免疫グロブリンＥアンタゴニスト、免疫グロブリンＥモジュレーター、インターフェロンγ受容体アンタゴニスト、インターフェロンγリガンド、インターロイキン３３リガンド阻害剤、インターロイキン−３１受容体アンタゴニスト、ロイコトリエンアンタゴニスト、肝臓Ｘ受容体アゴニスト、肝臓Ｘ受容体βアゴニスト、核性因子κＢ阻害剤、ＯＸ−４０受容体アンタゴニスト、ＰＧＤ２アンタゴニスト、ホスホリパーゼＡ２阻害剤、ＳＨ２ドメインイノシトールホスファターゼ１刺激因子、胸腺間質リンパタンパク質（ｔｈｙｍｉｃ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ）リガンド阻害剤、ＴＬＲモジュレーター、ＴＮＦαリガンドモジュレーター、ＴＬＲ９遺伝子刺激因子、細胞傷害性Ｔリンパ球タンパク質−４刺激因子、オピオイド受容体κアゴニスト、ガレクチン−３阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ−１阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ−２阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ−３阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ−６阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、グルココルチコイドアゴニスト、Ｓｙｋチロシンキナーゼ阻害剤、ＴｒｋＡ受容体アンタゴニスト、インテグリンα−４／β−１アンタゴニスト、インターロイキン１様受容体アンタゴニスト、インターロイキン−１変換酵素阻害剤、インターロイキン−３１受容体アンタゴニスト、ＫＣＮＡ電位開口型カリウムチャネル−３阻害剤、ＰＤＥ４Ｂ遺伝子阻害剤、カリクレイン２阻害剤、スフィンゴシン−１−ホスフェート受容体−１アゴニスト、網膜色素上皮タンパク質刺激因子、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ２８阻害剤、ＴＧＦβアンタゴニストまたはバニロイドＶＲ１（ｖａｎｉｌｌｏｉｄ  ＶＲ１）アンタゴニストである。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、ベタメタゾン、フシジン酸（ｆｕｃｉｄｉｃ  ａｃｉｄ）、ＧＲ−ＭＤ−０２、デュピルマブ、ロシプトル酢酸塩、ＡＳ−１０１、シクロスポリン、ＩＭＤ−０３５４、セクキヌマブ、アクチミューン（Ａｃｔｉｍｍｕｎｅ）、レブリキズマブ（ｌｅｂｒｉｋｉｚｕｍａｂ）、ＣＭＰ−００１、メポリズマブ、ペグカントラチニブ（ｐｅｇｃａｎｔｒａｔｉｎｉｂ）、テゼペルマブ（ｔｅｚｅｐｅｌｕｍａｂ）、ＭＭ−３６、クリサボロール（ｃｒｉｓａｂｏｒｏｌｅ）、ＡＬＸ−１０１、ベルチリムマブ（ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ）、ＦＢ−８２５、ＡＸ−１６０２、ＢＮＺ−１、アバタセプト、タクロリムス、ＡＮＢ−０２０、ＪＴＥ−０５２、ＺＰＬ−３８９、ウステキヌマブ、ＧＢＲ−８３０、ＧＳＫ−３７７２８４７、ＡＳＮ−００２、レメチノスタット（ｒｅｍｅｔｉｎｏｓｔａｔ）、アプレミラスト、チマピプラント（ｔｉｍａｐｉｐｒａｎｔ）、ＭＯＲ−１０６、アシバトレプ（ａｓｉｖａｔｒｅｐ）、ネモリズマブ（ｎｅｍｏｌｉｚｕｍａｂ）、フェビピプラント、ドキシサイクリン、ＭＤＰＫ−６７ｂ、デスロラタジン（ｄｅｓｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）、トラロキヌマブ、フェキソフェナジン、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、ベポタスチン、ナルフラフィン、ＶＴＰ−３８５４３、Ｑ−３０１、リゲリズマブ（ｌｉｇｅｌｉｚｕｍａｂ）、ＲＶＴ−２０１、ＤＭＴ−２１０、ＫＰＩ−１５０、ＡＫＰ−１１、Ｅ−６００５、ＡＭＧ−０１０１、ＡＶＸ−００１、ＰＧ−１０２、ＺＰＬ−５２１、ＭＥＤＩ−９３１４、ＡＭ−１０３０、ＷＯＬ−０７１００７、ＭＴ−０８１４、吉草酸ベタメタゾン、ＳＢ−０１１、エピナスチン、タクロリムス、トラニラスト、またはビロメド（ｖｉｒｏｍｅｄ）、あるいはこれらの任意の組み合わせと組み合わせて投与される。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、ステロイド、抗生物質および保湿剤と組み合わせて投与される（Ｌａｋｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，２０１７，３４，３，３２２−３２５）。いくつかの実施形態において、この１つまたはそれより多くの化合物は、グラム陽性抗生物質、例えば、ムピロシンまたはフシジン酸（ｆｕｓｉｄｉｃ  ａｃｉｄ）である。
【０１３３】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩はまた、炎症性皮膚疾患を処置するために、グラム陽性抗生物質、例えば、ムピロシンおよびフシジン酸と組み合わせて使用される。したがって、１つの局面において、本発明は、哺乳動物における炎症性皮膚疾患を処置する方法を提供し、この方法は、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、およびグラム陽性抗生物質を、この哺乳動物の皮膚に塗布する工程を包含する。別の局面において、本発明は、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、グラム陽性抗生物質、および薬学的に受容可能なキャリアを含有する薬学的組成物を提供する。
【０１３４】
したがって、別の局面において、本発明は、皮膚の炎症性障害の処置において使用するための治療用組み合わせ物を提供し、この組み合わせ物は、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、および皮膚の炎症性障害を処置するために有用な１つまたはそれより多くの他の治療剤を含有する。第二の薬剤（単数または複数）は、含有される場合、治療有効量で、すなわち、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩と一緒に共投与される場合に治療上有益な効果を生じる任意の量で、存在する。
【０１３５】
したがって、化合物（Ｉ）またはその薬学的な塩、および皮膚の炎症性障害を処置するために有用な１つまたはそれより多くの他の治療剤を含有する薬学的組成物もまた提供される。
【０１３６】
さらに、方法の局面において、本発明は、皮膚の炎症性障害を処置する方法を提供し、この方法は、この哺乳動物に、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、および皮膚の炎症性障害を処置するために有用な１つまたはそれより多くの他の治療剤を提供する工程を包含する。
【０１３７】
胃腸炎症性疾患
ＪＡＫファミリーの酵素の阻害に起因して、化合物（Ｉ）は、種々の胃腸炎症性適応症に有用であると予想され、それらの適応症としては、潰瘍性大腸炎（直腸Ｓ状結腸炎、汎大腸炎、潰瘍性直腸炎および左側大腸炎）、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、ベーチェット病、セリアック病、免疫チェックポイント阻害剤によって誘発される大腸炎、回腸炎、好酸球性食道炎、移植片対宿主病関連大腸炎および感染性大腸炎が挙げられるが、これらに限定されない。潰瘍性大腸炎（Ｒｅｉｍｕｎｄら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９６，１６，１４４−１５０）、クローン病（Ｗｏｙｗｏｄｔら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９９，１１，２６７−２７６）、コラーゲン蓄積大腸炎（Ｋｕｍａｗａｔら、Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１３，５５，３５５−３６４）、リンパ球性大腸炎（Ｋｕｍａｗａｔら、２０１３）、好酸球性食道炎（Ｗｅｉｎｂｒａｎｄ−Ｇｏｉｃｈｂｅｒｇら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ，２０１３，５６，２４９−２６０）、移植片対宿主病関連大腸炎（Ｃｏｇｈｉｌｌら、Ｂｌｏｏｄ，２００１，１１７，３２６８−３２７６）、感染性大腸炎（Ｓｔａｌｌｍａｃｈら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｄｉｓ，２００４，１９，３０８−３１５）、ベーチェット病（Ｚｈｏｕら、Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｒｅｖ，２０１２，１１，６９９−７０４）、セリアック病（ｄｅ  Ｎｉｔｔｏら、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００９，１５，４６０９−４６１４）、免疫チェックポイント阻害剤によって誘発される大腸炎（例えば、ＣＴＬＡ−４阻害剤によって誘発される大腸炎；（Ｙａｎｏら、Ｊ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  Ｍｅｄ，２０１４，１２，１９１）、ＰＤ−１阻害剤またはＰＤ−Ｌ１阻害剤により誘導される大腸炎）、および回腸炎（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｄｉｇ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ，２００８，４０，２５３−２５９）は、ある特定の炎症促進性サイトカインのレベルの上昇を特徴とする。多くの炎症促進性サイトカインが、ＪＡＫの活性化を介してシグナル伝達するので、本願に記載される化合物は、炎症を軽減することおよび症候の軽減を提供することができ得る。
【０１３８】
したがって、いくつかの実施形態において、本開示は、哺乳動物（例えば、ヒト）における胃腸炎症性疾患を処置する方法を提供し、この方法は、この哺乳動物に、薬学的に受容可能なキャリアおよび化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を含有する薬学的組成物を提供する工程を包含する。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、本開示は、哺乳動物（例えば、ヒト）における胃腸炎症性疾患を処置する方法を提供し、この方法は、この哺乳動物に、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を提供する工程を包含する。
【０１４０】
本発明は、哺乳動物における潰瘍性大腸炎を処置する方法をさらに提供し、この方法は、この哺乳動物に、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、あるいは薬学的に受容可能なキャリアおよび本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含有する薬学的組成物を投与する工程を包含する。
【０１４１】
本発明の化合物は、潰瘍性大腸炎を処置するために使用されるとき、通常、１日１回または１日あたり複数回で経口的に投与され得るが、他の投与形態を使用してもよい。１回に投与される活性な作用物質の量または１日あたりに投与される総量は、通常、処置される症状、選択される投与経路、投与される実際の化合物およびその相対的な活性、個別の患者の年齢、体重および反応、患者の症候の重症度などを含む関連する状況に照らして、医師によって決定される。
【０１４２】
潰瘍性大腸炎および他の胃腸炎症性障害の処置に好適な用量は、平均的な７０ｋｇのヒトの場合、約５〜約３００ｍｇ／日および約２０〜約７０ｍｇ／日という活性な作用物質を含む、約１〜約４００ｍｇ／日という活性な作用物質の範囲であると予想される。
【０１４３】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩はまた、胃腸炎症性障害の処置をもたらすために、同じ機序または異なる機序によって作用する１つまたはそれより多くの作用物質と併用して使用され得る。併用療法に有用な作用物質のクラスとしては、アミノサリチレート、ステロイド、全身免疫抑制剤、抗ＴＮＦα抗体、抗ＶＬＡ−４抗体、抗インテグリンα４β７抗体、抗菌薬および止痢薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４４】
化合物（Ｉ）と併用して使用され得るアミノサリチレートとしては、メサラミン、オルサラジン（ｏｓａｌａｚｉｎｅ）およびスルファサラジンが挙げられるが、これらに限定されない。ステロイドの例としては、プレドニゾン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、ブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、ベクロメタゾンおよびフルチカゾンが挙げられるが、これらに限定されない。炎症性障害の処置に有用な全身免疫抑制剤としては、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、６−メルカプトプリンおよびタクロリムスが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、インフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ（ｇｏｌｉｍｕｍａｂ）およびセルトリズマブを含むがこれらに限定されない抗ＴＮＦα抗体も、併用療法において使用され得る。他の機序によって作用する有用な化合物としては、抗ＶＬＡ−４抗体（例えば、ナタリズマブ）、抗インテグリンα４β７抗体（例えば、ベドリズマブ）、抗菌薬（例えば、リファキシミン）および止痢薬（例えば、ロペラミド）が挙げられる。（Ｍｏｚａｆｆａｒｉら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１４，１４，５８３−６００；Ｄａｎｅｓｅ，Ｇｕｔ，２０１２，６１，９１８−９３２；Ｌａｍら、Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１４，６，９６３−９７１．）
【０１４５】
ゆえに、別の局面では、本発明は、胃腸炎症性障害の処置において使用するための治療的組み合わせを提供し、その組み合わせは、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、および胃腸炎症性障害の処置に有用な１つまたはそれより多くの他の治療剤を含む。例えば、本発明は、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、ならびにアミノサリチレート、ステロイド、全身免疫抑制剤、抗ＴＮＦα抗体、抗ＶＬＡ−４抗体、抗インテグリンα４β７抗体、抗菌薬および止痢薬から選択される１つまたはそれより多くの作用物質を含む組み合わせを提供する。第二の作用物質（単数または複数）は、含められるとき、治療有効量で、すなわち、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩と共投与されたときに治療的に有益な効果をもたらす任意の量で存在する。
【０１４６】
ゆえに、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、および胃腸炎症性障害の処置に有用な１つまたはそれより多くの他の治療剤を含む薬学的組成物も提供される。
【０１４７】
さらに、方法の局面において、本発明は、胃腸炎症性障害を処置する方法であって、その方法が、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、および胃腸炎症性障害の処置に有用な１つまたはそれより多くの他の治療剤を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【０１４８】
呼吸器疾患
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を通じてシグナル伝達するサイトカイン、特に、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＩＬ−３１、ＩＬ−２７、胸腺間質リンホポエチン（ＴＳＬＰ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）、および顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、喘息性炎症および他の炎症性呼吸器疾患に関与している。上記のように、化合物（Ｉ）は、ＪＡＫの強力な阻害剤であることが示されており、細胞アッセイにおいてＩＬ−１３炎症促進性サイトカインの強力な阻害が実証されている。
【０１４９】
喘息の前臨床モデルにおいて、ＪＡＫ阻害剤の抗炎症活性が確実に実証されている（Ｍａｌａｖｉｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１０，１０，８２９，−８３６；Ｍａｔｓｕｎａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ，２０１１，４０４，２６１−２６７；Ｋｕｄｌａｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００８，５８２，１５４−１６１）。したがって、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、喘息などの炎症性呼吸器障害の処置に有用であり得る。肺の炎症および線維症は、喘息に加えて他の呼吸器疾患（慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症が含まれる）、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、気腫、および閉塞性細気管支炎など）に特徴的である。したがって、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症が含まれる）、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、気腫、閉塞性細気管支炎、慢性移植肺機能不全（ＣＬＡＤ）、肺移植拒絶、およびサルコイドーシスの処置に有用であり得る。
【０１５０】
したがって、１つの局面において、本開示は、哺乳動物（例えば、ヒト）の呼吸器疾患を処置する方法であって、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【０１５１】
１つの局面において、呼吸器疾患は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症が含まれる）、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、気腫、閉塞性細気管支炎、アレルギー性鼻炎、またはサルコイドーシスである。別の局面において、呼吸器疾患は、喘息または慢性閉塞性肺疾患である。
【０１５２】
１つのさらなる局面において、呼吸器疾患は、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋腫、気管支拡張、または浸潤性肺疾患である。さらに別の局面において、呼吸器疾患は、薬剤誘起性肺臓炎、真菌誘起性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフラー症候群、閉塞性細気管支炎性器質化肺炎、または免疫チェックポイント阻害剤誘起性肺臓炎である。
【０１５３】
本発明は、さらに、呼吸器疾患を処置する方法であって、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【０１５４】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩はまた、呼吸器疾患に有用な１または複数の化合物と併用して使用され得る。
眼疾患
【０１５５】
多数の眼疾患が、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に依存する炎症促進性サイトカインの上昇に関連している。
【０１５６】
したがって、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、いくつかの眼疾患（ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、眼乾燥症、加齢性黄斑変性、およびアトピー性角結膜炎が挙げられるが、これらに限定されない）の処置に有用であり得る。
【０１５７】
特に、ブドウ膜炎（Ｈｏｒａｉ  ａｎｄ  Ｃａｓｐｉ，Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ，２０１１，３１，７３３−７４４）、糖尿病性網膜症（Ａｂｃｏｕｗｅｒ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１３，Ｓｕｐｐｌ  １，１−１２）、糖尿病性黄斑浮腫（Ｓｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｔｈａｍｏｌｏｇｙ，２０１１，１５２，６８６−６９４）、眼乾燥症（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，２０１２，１３０，９０−１００）、網膜静脈閉塞  （Ｓｈｃｈｕｋｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２０１５，６３（１２），９０５−９１１）、および加齢性黄斑変性（Ｋｎｉｃｋｅｌｂｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｃｌｉｎ，２０１５，５５（３），６３−７８）は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達する一定の炎症促進性サイトカインの上昇を特徴とする。したがって、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、関連する眼炎症を軽減し、疾患の進行を逆行させるか、症状を緩和することができ得る。
【０１５８】
したがって、１つの局面において、本発明は、哺乳動物の眼疾患を処置する方法であって、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、あるいは化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩および薬学的キャリアを含む薬学的組成物を、哺乳動物の眼に投与する工程を含む、方法を提供する。１つの局面において、眼疾患は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、眼乾燥症、加齢性黄斑変性、またはアトピー性角結膜炎である。１つの局面において、本方法は、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を硝子体内注射によって投与する工程を含む。
【０１５９】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩はまた、眼疾患に有用な１または複数の化合物と併用して使用され得る。
他の疾患
【０１６０】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩はまた、他の炎症性疾患、自己免疫疾患、または癌などの他の疾患を処置するのに有用であり得る。
【０１６１】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩はまた、口腔、口の粘膜および再発性アフタ性口内炎を処置するのに有用であり得る。
【０１６２】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩は、関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、移植片拒絶、眼球乾燥、乾癬性関節炎、糖尿病、インスリン依存性糖尿病、運動ニューロン疾患、骨髄異形成症候群、疼痛、筋肉減少、悪液質、敗血症性ショック、全身性エリテマトーデス、白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、強直性脊椎炎、骨髄線維症、Ｂ細胞リンパ腫、肝細胞癌、ホジキン病、乳癌、多発性骨髄腫、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、卵巣明細胞癌、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、真性赤血球増加症、シェーグレン症候群、軟部組織肉腫、肉腫、脾腫、Ｔ細胞リンパ腫、および重症型サラセミアのうちの１または複数の処置に有用であり得る。
【０１６３】
その開示は、哺乳動物においてこれらの疾患を処置する方法を提供し、この方法は、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、あるいは化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩および薬学的に受容可能なキャリアを含有する薬学的組成物を、この哺乳動物に投与する工程を包含する。
【０１６４】
以前の段落において、それらの作用物質は、併用療法において使用されるとき、上に開示されたような単一の薬学的組成物として製剤化されてもよいし、それらの作用物質は、同時にまたは別々の時点において同じまたは異なる投与経路によって投与される別個の組成物として提供されてもよい。それらの作用物質は、別々に投与されるとき、所望の治療効果が提供されるように十分に近い時点において投与される。そのような組成物は、別々に包装されてもよいし、キットとして一緒に包装されてもよい。キットの中の２つまたはそれを超える治療剤は、同じ投与経路によって投与されてもよいし、異なる投与経路によって投与されてもよい。
【実施例】
【０１６５】
以下の合成および生物学の実施例は、本発明を例証するために提供されるのであって、決して本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでない。下記の実施例では、以下の省略形は、別段示されない限り、以下の意味を有する。下記に定義されない省略形は、それらの一般に認められている意味を有する。
ＡＣＮ＝アセトニトリル
Ｂｎ＝ベンジル
Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ｄ＝日数
ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＥｔＯＨ＝エチルアルコール
ｈ＝時間
ＨＡＴＵ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＩＰＡ＝イソプロピルアルコール
ＭｅＯＨ＝メタノール
ｍｉｎ＝分
ＮＭＰ＝Ｎ−メチルピロリドン
ＲＴ＝室温
ＴＥＡ＝トリエチルアミン
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
【０１６６】
試薬および溶媒は、商業的供給業者（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａなど）から購入し、さらに精製せずに使用した。反応混合物の進行は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、分析用高速液体クロマトグラフィー（ａｎａｌ．ＨＰＬＣ）および／または質量分析法によってモニターした。反応混合物は、各反応において具体的に記載されるようにワークアップした；通常、それらは、抽出および他の精製方法（例えば、温度依存性および溶媒依存性の結晶化および沈殿）によって精製した。さらに、反応混合物は、代表的にはＣ１８またはＢＤＳカラムパッキングおよび従来の溶離剤を用いる、カラムクロマトグラフィーまたは分取ＨＰＬＣによって通例のように精製した。代表的な分取ＨＰＬＣ条件は、下記に記載される。
【０１６７】
反応生成物の特徴付けは、質量分析法および１Ｈ−ＮＭＲ分光法によって通例のように行った。ＮＭＲ分析のために、サンプルを重水素化溶媒（例えば、ＣＤ３ＯＤ、ＣＤＣｌ３またはｄ６−ＤＭＳＯ）に溶解し、標準的な観測条件下でＶａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ２０００装置（４００ＭＨｚ）を用いて１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを取得した。化合物の質量分析同定は、自動精製システムに連結された、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）のモデルＡＰＩ  １５０  ＥＸ装置またはＷａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）の３１００装置を用いるエレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＭＳ）によって行った。
【０１６８】
別段示されない限り、以下の条件を分取ＨＰＬＣ精製のために使用した。
カラム：Ｃ１８、５μｍ  ２１．２×１５０ｍｍまたはＣ１８、５μｍ  ２１×２５０ｍｍまたはＣ１４  ５μｍ  ２１×１５０ｍｍ
カラム温度：室温
流速：２０．０ｍＬ／分
移動相：Ａ＝水＋０．０５％ＴＦＡ
Ｂ＝ＡＣＮ＋０．０５％ＴＦＡ、
注入体積：（１００〜１５００μＬ）
検出器の波長：２１４ｎｍ
【０１６９】
粗化合物を約５０ｍｇ／ｍＬで１：１水：酢酸に溶解した。４分間の分析スケールの試験ランを、２．１×５０ｍｍ  Ｃ１８カラムを用いて行った後、１５または２０分間の分取スケールのランを、分析スケールの試験ランの％Ｂ保持に基づくグラジエントを伴う１００μＬの注入を用いて行った。正確なグラジエントは、サンプル依存的であった。近くを流れる（ｃｌｏｓｅ  ｒｕｎｎｉｎｇ）不純物を含むサンプルは、最善の分離のために２１×２５０ｍｍ  Ｃ１８カラムおよび／または２１×１５０ｍｍ  Ｃ１４カラムを用いて調べた。所望の生成物を含む画分を質量分析によって特定した。
分析用ＨＰＬＣ条件
方法Ａ
カラム：ＬＵＮＡ  Ｃ１８（２）、１５０×４．６０ｍｍ、３μｍ
カラム温度：３７℃
流速：１．０ｍＬ／分
注入体積：５μＬ
サンプル調製：１：１ＡＣＮ：水に溶解
移動相：Ａ＝水：ＡＣＮ：ＴＦＡ（９８：２：０．０５）
Ｂ＝水：ＡＣＮ：ＴＦＡ（２：９８：０．０５）
検出器の波長：２５０ｎｍ
グラジエント：全３２分（時間（分）／％Ｂ）：０／２、１０／２０、２４／９０、２９／９０、３０／２、３２／２
方法Ｂ
カラム：ＬＵＮＡ  Ｃ１８（２）、１５０×４．６０ｍｍ、３μｍ
カラム温度：３７℃
流速：１．０ｍＬ／分
注入体積：１０μＬ
サンプル調製：１：１ＡＣＮ：水に溶解
移動相：Ａ＝水：ＡＣＮ：ＴＦＡ（９８：２：０．０５）
Ｂ＝水：ＡＣＮ：ＴＦＡ（１０：９０：０．０５）
検出器の波長：２５４ｎｍ
グラジエント：全３５分（時間（分）／％Ｂ）：０／２、２０／２５、２３／９０、２６／９０、２７／２、３５／２
方法Ｃ
カラム：     Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  １２０  ＳＢ−Ａｑ、１５０ｍｍ×４．６ｍｍ、２．７ミクロンパート＃６８３９７５−９１４
カラム温度：３５℃
流速：１．０ｍＬ／分
注入体積：５μＬ
サンプル調製：       ５０：ＭＰＢ：５０ＭＰＡに溶解
移動相：Ａ＝アセトニトリル：水：トリフルオロ酢酸（１：９９：０．２０）
Ｂ＝アセトニトリル：水：トリフルオロ酢酸（９０：１０：０．２０）
グラジエント：       
【表Ａ】
2021501151.tif 000009
【０１７０】
調製１：  （（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（エチルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化７】
2021501151.tif 000010
工程１：  ５つの反応を並行して実施した。化合物１−１（２．００ｋｇ、１３．７ｍｏｌ、１．００当量）のジオキサン（５．００Ｌ）および水（２０．０Ｌ）中の溶液に、グルタルアルデヒド（２．０６ｋｇ、２０．５ｍｏｌ、１．５当量）およびフェニルメタンアミン（１．５４ｋｇ、１４．４ｍｏｌ、１．０５当量）を１０℃で滴下により添加した。添加後、この反応混合物を２０℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１、生成物のＲｆ＝０．４０）およびＬＣＭＳは、この反応が完了したことを示した。この反応混合物のｐＨ値を濃ＨＣｌ（１２Ｎ）で２０℃で２に調整した。添加後、この反応混合物を６０℃まで加熱し、１時間撹拌した。１０℃まで冷却した後に、酢酸エチル（１０．０Ｌ）をこの混合物に添加した。次いで、この混合物のｐＨ値を、水酸化ナトリウムの水溶液（１２Ｎ）を１０℃で添加することにより１０に調整した。この混合物を１０分間撹拌した。その有機層を分離した。その水層を酢酸エチル（３．００Ｌ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（４．００Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして濾過した。５つの並行した反応の有機層を合わせて濃縮した。その残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝３０：１〜２：１）により精製して、化合物１−２（１０．０ｋｇ、５１．５％の収率、９７％の純度）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C15H19NO  230.15  found  230.0。1H  NMR:  400  MHz  DMSO-d6  δ  7.24-7.41  (m,  5H),  3.88  (s,  2H),  3.20-3.21  (m,  2H),  2.73-2.79  (m,  2H),  2.07  (d,  J  =  16.4  Hz,  2H),  1.75-1.84  (m,  2H),  1.45-1.50  (m,  3H),  1.24-1.36  (m,  1H)。
【０１７１】
工程２：  ３つの反応を並行して実施した。化合物１−２（３．００ｋｇ、１３．１ｍｏｌ、１．０当量）の酢酸エチル（２４．０Ｌ）および水（９．００Ｌ）中の溶液に、ＣＨ３ＣＯＯＫ（２．０５ｋｇ、２０．９ｍｏｌ、１．６当量）およびＮＨ２ＯＨ−ＨＣｌ（１．８２ｋｇ、２６．２ｍｏｌ、２．０当量）を２０℃で添加した。この懸濁物を４５℃まで加熱し、そして１６時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、生成物のＲｆ＝０．３０）およびＬＣＭＳは、この反応が完了したことを示した。この懸濁物のｐＨ値を飽和重炭酸ナトリウム溶液で８に調整し、次いで水（１５．０Ｌ）および酢酸エチル（１０．０Ｌ）で希釈した。その有機層を分離した。その水層を酢酸エチル（１０．０Ｌ×３）で抽出した。この３つの反応物の有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。その粗生成物をｎ−ヘプタン（１２．０Ｌ）で希釈し、そして１２時間撹拌した。その固体を濾過により集めて、化合物１−３（８．００ｋｇ、８３．４％の収率）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C15H20N2O  245.16  found  245.1。1H  NMR:  400  MHz  DMSO-d6  10.16  (s,  1H),  7.22-7.38  (m,  5H),  3.83  (s,  2H),  2.97(br  s,  2H),  2.87  (d,  J  =  16.0  Hz,  1H),  2.60-2.62  (m,  1H),  2.20-2.25  (m,  1H),  2.09-2.13  (m,  1H),  1.72-1.85  (m,  3H),  1.39-1.49  (m,  3H)。
【０１７２】
工程４：  ４５の反応を並行して実施した。化合物１−３（１６０ｇ、６５５ｍｍｏｌ、１．０当量）のｎ−ＰｒＯＨ（３．２０Ｌ）中の溶液に、１１０℃でＮａ（１８１ｇ、７．８６ｍｏｌ、１２当量）を３時間かけて少しずつ添加した。この混合物を１１０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、ＳＭ  Ｒｆ＝０．４０）は、この反応が完了したことを示した。この混合物を７０℃まで冷却し、氷水（４．００Ｌ）に注いだ。その水層を酢酸エチル（１．００Ｌ×２）で抽出した。これらの４５の反応物の合わせた有機層をブライン（２０．０Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。この残渣をｎ−ヘキサン（１２．０Ｌ）で希釈し、１２時間撹拌した。その懸濁物を濾過して濾液を得た。この濾液を濃縮して、化合物１−４（６．００ｋｇ、８８．４％の収率）を黄色油状物として得た。1H  NMR  400  MHz  DMSO-d6:  δ  7.18-7.35  (m,  5H),  3.76  (s,  2H),  3.26-3.35  (m,  1H),  2.76  (s,  2H),  1.86-1.90  (m,  2H),  1.67-1.73  (m,  2H),  1.54-1.59  (m,  5H),  1.41-1.45  (m,  3H)。
【０１７３】
工程５：  ２つの反応を並行して実施した。化合物１−４（２．１０ｋｇ、９．１２ｍｏｌ、１．１当量）のジオキサン（１２．６Ｌ）および水（１．２６Ｌ）中の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１．０１ｋｇ、１０．０ｍｏｌ、１．１当量）および（Ｂｏｃ）２Ｏ（２．１９ｋｇ、１０．０ｍｏｌ、１．１当量）を、その温度を２０℃未満にしながら０℃で滴下により添加した。この混合物を４０℃まで加熱し、そして１０時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、生成物のＲｆ＝０．４０）は、この反応が完了したことを示した。この混合物を１０℃まで冷却し、濾過してフィルターケーキを得た。その濾液を濃縮した。そのフィルターケーキをｎ−ヘキサン（３．００Ｌ）で洗浄して、化合物１−５（４．００ｋｇ、６６．４％の収率）を白色固体として得た。1H  NMR:  400  MHz  DMSO-d6:  δ  7.28-7.33  (m,  4H),  7.19-7.22  (m,  1H),  6.64  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  4.10-4.17  (m,  1H),  3.77  (s,  2H),  2.77  (s,  2H),  1.88-1.90  (m,  2H),  1.72-1.75  (m,  3H),  1.57-1.61  (m,  3H),  1.43-1.48  (m,  2H),  1.38  (s,  9H)。
【０１７４】
工程６：  ４つの反応を並行して実施した。化合物１−５（１．５０ｋｇ、４．５４ｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（１３．５Ｌ）中の懸濁物に、ＮａＨ（２７２ｇ、６．８１ｍｏｌ、６０％の純度、１．５当量）を０℃でＮ２下で滴下により添加した。この懸濁物を自然に２５℃まで昇温させ、そして３０分間撹拌した。これを０℃まで冷却した後に、ＭｅＩ（７７３ｇ、５．４５ｍｏｌ、１．２当量）をこの懸濁物に滴下により添加した。この反応混合物を自然に２５℃まで昇温させ、そして１２時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１、生成物のＲｆ＝０．５０）およびＬＣＭＳは、この反応が完了したことを示した。この混合物を氷水（３０．０Ｌ）に注ぎ、酢酸エチル（９．００Ｌ、３．００Ｌ）で抽出した。これらの４つの反応の合わせた有機層を氷水（２０．０Ｌ）、ブライン（１０．０Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮して、化合物１−６（６．００ｋｇ、粗製）を黄色油状物として得た。この粗生成物を次の工程に使用した。1H  NMR:  400  MHz  DMSO-d6  δ  7.21-7.37  (m,  5H),  4.87  (br  s,  1H),  3.80  (s,  2H),  2.86  (s,  2H),  2.68  (s,  3H),  1.64-1.99  (m,  6H),  1.40-1.49  (m,  13H).  (m/z):  [M+H]+  calcd  for  C21H32N2O2  344.25  found  345.2。
【０１７５】
工程７：  ３９の反応を並行して実施した。化合物１−６（１５０ｇ、４３５ｍｍｏｌ、１．０当量）のＩＰＡ（５００ｍＬ）およびＴＨＦ（５００ｍＬ）中の溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（７０ｇ、４０％の純度）を添加した。この懸濁物を減圧下で脱気してＨ２でパージすることを数回行った。この混合物をＨ２（５０ｐｓｉ）下で２５℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１、ＳＭ  Ｒｆ＝０．５０）およびＬＣＭＳは、この反応が完了したことを示した。これらの３９の反応物を合わせた。この混合物を濾過して濾液を得た。そのフィルターケーキをＩＰＡ／ＴＨＦ（１：１、２５．０Ｌ）で洗浄した。合わせた濾液を濃縮して、化合物１−７（３．８５ｋｇ、粗製）を明黄色油状物として得た。この粗生成物を次の工程に直接使用した。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C14H26N2O2  255.20  found  255.1。1H  NMR:  400  MHz  DMSO-d6  δ  4.88  (br  s,  1H),  3.08  (s,  2H),  2.60  (s,  3H),  1.73-1.76  (m,  5H),  1.51-1.61  (m,  5H),  1.39  (s,  9H)。
【０１７６】
工程８：  ４つの反応を並行して実施した。化合物１−７（７５０ｇ、２．９５ｍｏｌ、１．０当量）の２−メチルテトラヒドロフラン（３．００Ｌ）中の溶液に、ピリジン（４６６ｇ、５．９０ｍｏｌ、２．０当量）およびエタンスルホニルクロリド（３９８ｇ、３．１０ｍｏｌ、１．０５当量）を０℃でＮ２下で滴下により添加した。この混合物を２５℃まで温め、そして３時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、生成物のＲｆ＝０．５０）は、この反応が完了したことを示した。これらの４つの反応物を合わせた。この混合物を氷水（１０．０Ｌ）でクエンチした。その有機層を分離し、０．５ＮのＨＣｌ（３．００Ｌ×２）で洗浄した。合わせた水層を酢酸エチル（３．００Ｌ）で抽出し、その有機層を０．５ＮのＨＣｌ（５００ｍＬ）で再度洗浄した。合わせた有機層をブライン（５．００Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮して、化合物１−８（２．２０ｋｇ、粗製）を黄色油状物として得た。この粗性生物を次の工程で使用した。1H  NMR:  400  MHz  DMSO-d6  δ  4.94  (br  s,  1H),  3.98  (s,  2H),  3.10  (q,  J  =  7.2  Hz,  2H),  2.58  (s,  3H),  1.83-1.91  (m,  5H),  1.56-1.71  (m,  5H),  1.40  (s,  9H),  1.19  (t,  J  =  7.2  Hz,  3H)。
【０１７７】
工程９：  ４つの反応を並行して実施した。化合物１−８（５５０ｇ、１．５９ｍｏｌ、１．０当量）のＥｔＯＡｃ（２．７５Ｌ）中の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、３．０当量）を２５℃で滴下により添加した。この混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、ＳＭ  Ｒｆ＝０．５０）は、この反応が完了したことを示した。これらの４つの反応物を合わせた。この混合物を濾過してフィルターケーキを得、化合物１−９（１．２５ｋｇ、粗製、ＨＣｌ）を黄色固体として得た。1H  NMR:  400  MHz  DMSO-d6  δ  9.04  (s,  1H),  4.02  (s,  2H),  3.88-3.94  (m,  1H),  3.09  (q,  J  =  7.2  Hz,  2H),  2.09-2.14  (m,  2H),  1.61-1.84  (m,  8H),  1.19  (t,  J  =  7.2  Hz,  3H)。
【０１７８】
調製２：  （２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（エチルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−５−フルオロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）メタノール（Ｉ）
【化８】
2021501151.tif 000011
工程１：  飽和ＨＣｌ（１．４０ｋｇ、３８．４ｍｏｌ）を含む、化合物２−１（１．００ｋｇ、５．７４ｍｏｌ、１．０当量）のエタノール（１５．０Ｌ）中の溶液を９０℃で６０時間撹拌した。ＨＰＬＣは、１つの主要なピークが検出されることを示した。この反応混合物を濾過した。そのフィルターケーキを集めて、化合物２−２（１．００ｋｇ、８１．８％の収率、９８．８％の純度）を白色固体として得た。1H  NMR:  400  MHz  DMSO-d6  δ  11.82  (br  s,  1H),  10.82  (br  s,  1H),  4.31  (q,  J  =  7.2  Hz,  2H),  1.27  (t,  J  =  6.8  Hz,  3H)。
【０１７９】
工程２：  ５つの反応を並行して実施した。化合物２−２（５６０ｇ、２．７７ｍｏｌ、１．０当量）のＰＯＣｌ３（１．６８Ｌ）中の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン（２８９ｇ、１．９４ｍｏｌ、０．７当量）を添加した。この混合物を１４０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１、生成物のＲｆ＝０．５０）は、化合物２−２が完全に消費されたことを示した。これらの５つの反応物を合わせた。この反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得た。この残渣を酢酸エチル（２５．０Ｌ）で希釈した。この溶液を砕いた氷（２５．０Ｌ）に注いだ。その水相を酢酸エチル（２５．０Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を飽和炭酸ナトリウム溶液（１０．０Ｌ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして減圧下で濃縮して、残渣を得た。この残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１：０〜５０：１）により精製して、化合物２−３（２．００ｋｇ）を褐色液体として得た。1H  NMR:  400  MHz  CDCl3  δ  4.51  (q,  J  =  7.2  Hz,  2H),  1.44  (t,  J  =  7.2  Hz,  3H)。
【０１８０】
工程３：  ４つの反応を並行して実施した。化合物２−３（４８０ｇ、２．０１ｍｏｌ、１．０当量）、化合物２−４（２２４ｇ、２．３１ｍｏｌ、１．１５当量）、ＤＩＰＥＡ（５１９ｇ、４．０２ｍｏｌ、２．０当量）のエタノール（２．６０Ｌ）中の混合物を、脱気してＮ２でパージすることを３回行い、次いでこの混合物をＮ２雰囲気下で２５℃で４時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１）は、化合物２−３が完全に消費されたことを示した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１、生成物のＲｆ＝０．４０）は、１個の新たなスポットが形成されたことを示した。これらの４つの反応物を合わせた。この反応混合物を濾過し、そしてそのフィルターケーキを集めた。その濾液を減圧下で濃縮して、残渣を得た。この残渣を水（３８．０Ｌ）で磨砕し、そして濾過した。そのフィルターケーキ（３００ｇ）をエタノール（６００ｍＬ）で磨砕し、そして濾過した。これらの２つのフィルターケーキを合わせて、化合物２−５（１．５０ｋｇ、６２．２％の収率）を黄色固体として得た。1H  NMR:  400  MHz  DMSO-d6  δ  12.31  (s,  1H),  10.76  (s,  1H),  6.38  (s,  1H),  4.35  (q,  J  =  7.2  Hz,  2H),  2.27  (s,  3H),  1.30  (t,  J  =  7.2  Hz,  3H)。
【０１８１】
工程４：  ４つの反応を並行して実施した。化合物２−５（２５４ｇ、８４８ｍｍｏｌ、１．０当量）、化合物１−９（３００ｇ、１．０６ｍｏｌ、ＨＣｌ、１．２５当量）およびＤＩＰＥＡ（５４８ｇ、４．２４ｍｏｌ、５．０当量）のＤＭＳＯ（６００ｍＬ）中の溶液を１３０℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：石油エーテル＝２：１、Ｒｆ＝０．３０）およびＬＣＭＳは、約９％の出発物質が残っていることを示した。この混合物を２５℃まで冷却した。これらの４つの反応物を合わせ、氷水（１２．０Ｌ）に注いだ。黄色の沈殿物が形成された。その固体を濾過により集めて、化合物２−６（１．５０ｋｇ、約７６％の純度）を黄色固体として得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C22H32FN7O4S  510.22  found  510.2。
【０１８２】
化合物２−６（４４０ｇ、６５６ｍｍｏｌ、約７６％の純度）のエタノール（１．１０Ｌ）中の懸濁物を、その固体が溶解するまで９５℃まで加熱した。この溶液を２５℃まで冷却し、そして１２時間撹拌した。ＨＰＬＣは、約９６．９％の純度を示した。これらの３つの反応物を合わせた。この懸濁物を濾過してフィルターケーキを得、化合物２−６（約５７０ｇ、９６．９％の純度）を明黄色固体として得た。この生成物を次の工程に直接使用した。1H  NMR:  400  MHz  DMSO-d6  δ  12.12  (s,  1H),  9.73  (s,  1H),  6.35  (s,  1H),  5.59  (br  s,  1H),  4.32  (m,  2H),  4.02  (s  ,  2H),  3.13  (q,  J  =  7.2  Hz,  2H),  2.83  (s,  3H),  2.20  (s,  3H),  1.94  (s,  3H),  1.64-1.73  (m,  5H),  1.76-1.87  (m,  5H),  1.29  (t,  J  =  7.2  Hz,  3H),  1.21  (t,  J  =  7.2  Hz,  3H)。
【０１８３】
工程５：  ５つの反応を並行して実施した。化合物２−６（１３０ｇ、２５５ｍｍｏｌ、１．０当量）のテトラヒドロフラン（３．２５Ｌ）およびエタノール（３．２５Ｌ）中の溶液に、ＮａＢＨ４（７７．２ｇ、２．０４ｍｏｌ、８．０当量）およびＣａＣｌ２（１１３ｇ、１．０２ｍｏｌ、４．０当量）を０℃で滴下により添加した。この混合物を１０℃まで温め、そして２時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：石油エーテル＝３：１、生成物のＲｆ＝０．２０）は、この反応が完了したことを示した。これらの５つの反応物を合わせた。この混合物を飽和炭酸ナトリウム溶液（６．００Ｌ）によりクエンチし、酢酸エチル（１５．０Ｌ）で希釈し、そして０．５時間撹拌した。その懸濁物を濾過して濾液を得た。その有機層を分離し、そして水層を酢酸エチル（５．００Ｌ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５．００Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮して、（Ｉ）（５００ｇ、粗製）を明黄色固体として得た。
【０１８４】
精製：  ５つの反応を並行して実施した。Ｉ（１００ｇ、２１０ｍｍｏｌ）のエタノール（３．００Ｌ）中の懸濁物を、その固体が溶解するまで９５℃まで加熱した。この溶液を２５℃まで冷却し、そして１２時間撹拌すると、多量の沈殿物が形成された。ＨＰＬＣは、１００％の純度を示した。これらの５つの反応物を合わせた。その固体を濾過により集めて、合計３３０ｇの化合物Ｉ（９９．３％の純度）を明黄色固体として得た（結晶形態Ｉ）。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C20H30FN7O3S  468.21  found  468.3。1H  NMR:  400  MHz  DMSO-d6  δ  12.02  (s,  1H),  9.29  (s,  1H),  6.34  (s,  1H),  5.61  (br  s,  1H),  5.02  (t,  J  =  6.8  Hz,  1H),  4.33  (d,  J  =  4.0  Hz,  2H),  4.02  (s,  2H),  3.12  (q,  J  =  7.2  Hz,  2H),  2.84  (s,  3H),  2.19  (s,  3H),  1.82-2.01  (m,  3H),  1.63-1.74  (m,  5H),  1.21  (t,  J  =  7.2  Hz,  3H)。
【０１８５】
調製３：  ５−フルオロ−２，６−ジヒドロキシピリミジン−４−カルボン酸エチル
【化９】
2021501151.tif 000012
５−フルオロ−２，６−ジヒドロキシピリミジン−４−カルボン酸（２０．４ｇ、１２０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２００ｍＬ）中の溶液をＤＢＵ（１８．７ｇ、１２３ｍｍｏｌ）で処理し、そして２５℃で０．５時間撹拌した。次いで、ＥｔＩ（１９．２ｇ、１２３ｍｍｏｌ）を添加し、そして得られた溶液を６０℃まで３時間加熱した。Ｈ２Ｏ（１０００ｍＬ）をこの混合物に添加し、そして生じた沈殿物を濾過により集め、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）で洗浄し、そして乾燥させて、５−フルオロ−２，６−ジヒドロキシピリミジン−４−カルボン酸エチル（１９ｇ、８０％の収率）を得た。
【０１８６】
調製４：  ２，６−ジクロロ−５−フルオロピリミジン−４−カルボン酸エチル
【化１０】
2021501151.tif 000013
５−フルオロ−２，６−ジヒドロキシピリミジン−４−カルボン酸エチル（５ｇ、２４．８ｍｍｏｌ）、ＰｈＮＥｔ２（２．５８ｇ、１７．３ｍｍｏｌ）、ＰＯＣｌ３（１３０ｇ、８５５．９ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃まで４時間加熱した。次いで、この反応混合物を室温まで冷却し、そして氷水（５００ｍＬ）に注ぎ、その水層をＥｔＯＡｃ（１０００ｍＬ）で抽出し、そしてその有機層をｓａｔ．ＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、そして減圧下で濃縮した。その残渣をカラムクロマトグラフィー（８０ｇのカラム；ヘキサン中０〜５０％のＥｔＯＡｃ）により精製して、２，６−ジクロロ−５−フルオロピリミジン−４−カルボン酸エチルを黄色油状物として得た（３．８ｇ、６５％）。
【０１８７】
調製５：  ２−クロロ−５−フルオロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−カルボン酸エチル
【化１１】
2021501151.tif 000014
２，６−ジクロロ−５−フルオロピリミジン−４−カルボン酸エチル（３．８ｇ、１６ｍｍｏｌ）、５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（１．８６ｇ、１９ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（４ｇ、３２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中の混合物を室温で２時間撹拌した。この反応混合物を減圧下で濃縮した。次いで、水（５００ｍＬ）を添加し、そしてこの反応混合物を濾過し、そしてそのフィルターケーキを１００ｍＬのＨ２Ｏで洗浄し、そして減圧中で乾燥させて、２−クロロ−５−フルオロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−カルボン酸エチル（３．８ｇ  ８０％の収率）を得た。
【０１８８】
調製６：  （１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（エトキシカルボニル）−５−フルオロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化１２】
2021501151.tif 000015
２−クロロ−５−フルオロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−カルボン酸エチル（１．７ｇ、５．６８４ｍｍｏｌ）、（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（メチルアミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．１７ｇ、８．５２７ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（１．４７ｇ、１１．３６８ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の混合物を１１０℃まで１８時間加熱した。この反応混合物を水（２００ｍＬ）に注ぎ、そしてこの反応混合物を濾過し、そしてそのフィルターケーキを２００ｍＬのＨ２Ｏで洗浄し、そして減圧中で乾燥させて、粗製の（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（エトキシカルボニル）−５−フルオロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．５ｇ、粗製）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C25H37FN7O4  518.29  found  518.2。
【０１８９】
調製７：  （１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（５−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化１３】
2021501151.tif 000016
（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（エトキシカルボニル）−５−フルオロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．５ｇ、７ｍｍｏｌ）、ＮａＢＨ４（２．１ｇ、５６ｍｍｏｌ）、およびＣａＣｌ２（３．１ｇ、２８ｍｍｏｌ）の、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）とＴＨＦ（５０ｍＬ）との混合物中の混合物を２５℃で一晩撹拌した。この反応混合物をＮａ２ＣＯ３（ａｑ）（８０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（８０ｍＬ）でクエンチし、その水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出し、そして合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、そして減圧下で濃縮した。その残渣をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製して、（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（５−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．４ｇ、４４％）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C23H35FN7O3  476.28  found  476.3。
【０１９０】
調製８：  （２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−５−フルオロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）メタノール
【化１４】
2021501151.tif 000017
（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（５−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．４ｇ、２．９５ｍｍｏｌ）のＨＣｌ／ジオキサン（５０ｍＬ）中の溶液を２５℃で４時間撹拌した。この反応混合物を濾過し、そしてそのフィルターケーキを１００ｍＬのＥｔＯＡｃで洗浄し、そして減圧中で乾燥させて、（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−５−フルオロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）メタノール（１．４ｇ、１００％）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C18H27FN7O  376.23  found  376.2。
【０１９１】
調製９：  （２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（エチルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−５−フルオロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）メタノール
【化１５】
2021501151.tif 000018
（２−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル（メチル）アミノ）−５−フルオロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）メタノール（９５ｍｇ、０．２５３ｍｍｏｌ）をピリジン（４．０ｍｌ）に溶解させ、そしてエタンスルホニルクロリド（０．０２４ｍｌ、０．２５３ｍｍｏｌ）で処理した。この反応混合物を２時間撹拌し、その後、減圧中で濃縮した。この粗製残渣を、３ｍＬの、酢酸／水の１：１の混合物に溶解させ、濾過して沈殿物を除去し、そして水（０．０５％のＴＦＡを含む）中２〜５０％のＡＣＮの勾配を使用する分取ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｄｙｎａｍａｘ  ２５０×２１．４ｍｍ  １０μｍ、１５ｍＬ／分、２〜５０％のＡＣＮ＋０．０５％のＴＦＡ／ＡＣＮ）により精製した。純粋な画分を合わせ、そして凍結乾燥させて、表題化合物ＴＦＡの塩（１２．９２ｍｇ、８．８％の収率、９９．９％の純度）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C20H31FN7O3S  468.22  found  468。
【０１９２】
調製１０：  ２−クロロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−カルボン酸メチル
【化１６】
2021501151.tif 000019
５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（５．６ｇ、５８ｍｍｏｌ）、２，６−ジクロロピリミジン−４−カルボン酸メチル（１２．０ｇ、５８ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（１５．０ｇ、１１６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１２０ｍｌ）中の混合物を２５℃で１２時間撹拌した。Ｈ２Ｏ（５００ｍＬ）を添加し、そして沈殿した固体を濾過により集めて、表題中間体（１５ｇ、９７％）を黄色固体として得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C10H11ClN5O2  268.05  found  268.1。
【０１９３】
調製１１：  （１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（メトキシカルボニル）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化１７】
2021501151.tif 000020
２−クロロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−カルボン酸メチル（１２．０ｇ、４５ｍｍｏｌ）、（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（メチルアミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１３．７ｇ、５４ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（１２．０ｇ、９０ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（１２０ｍｌ）中の混合物を１２０℃で１６時間撹拌した。この反応物をＨ２Ｏ（２０００ｍＬ）に注ぎ、沈殿した固体を濾過により集めて、表題中間体（１５ｇ、６８％）を白色固体として得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C24H36N7O4  486.28  found  486.3。
【０１９４】
調製１２：  （１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−カルバモイル−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化１８】
2021501151.tif 000021
（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（メトキシカルボニル）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３バッチの２ｇ、４．１２ｍｍｏｌ）に、ＮＨ３／ＭｅＯＨ（３アリコートの６０ｍｌ）を１００ｍｌの密封管内で添加し、この反応混合物を２５℃で１２時間撹拌した。この反応混合物を減圧中で濃縮して、表題中間体（３．７ｇ、６４％）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C23H35N8O3  471.28  found  471.3。
【０１９５】
調製１３：  ２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−カルボキサミド
【化１９】
2021501151.tif 000022
（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−カルバモイル−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．７ｇ、７．９ｍｍｏｌ）のジオキサン（１８５ｍＬ）中の混合物に、ＨＣｌ／ジオキサン（３７ｍＬ）を添加した。この反応物を２５℃で３時間撹拌した。ＴＬＣは、出発物質が残っていないことを示した。その溶媒を除去し、そしてその粗生成物を酢酸エチル／ＭｅＯＨ（１００：１）で洗浄して、表題中間体をＨＣｌ塩として得た（４．０ｇ、９５％）。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C18H27N8O  371.23  found  371.1。
【０１９６】
調製１４：  ２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（エチルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−カルボキサミド（Ｃ−１）
【化２０】
2021501151.tif 000023
２−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル（メチル）アミノ）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−カルボキサミド（４０ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０５７ｍｌ、０．３２４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５０ｍｌ）に溶解させ、そして０℃まで冷却した。エタンスルホニルクロリドを添加し、そしてこの反応混合物を室温まで昇温させ、そして７２時間撹拌した。この反応混合物を減圧中で濃縮し、そして粗生成物を分取逆相ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｄｙｎａｍａｘ  ２５０×２１．４ｍｍ  １０μｍ、１５ｍＬ／分、２〜７０％のＡＣＮ＋０．１％のＴＦＡ／ＡＣＮ）により精製して、表題化合物ＴＦＡの塩（４．５ｍｇ、９．０１％）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C20H31N8O3S  463.22  found  463.2。
【０１９７】
調製１５：  ２−クロロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−カルボン酸メチル
【化２１】
2021501151.tif 000024
５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（５．６ｇ、５８ｍｍｏｌ）、２，６−ジクロロピリミジン−４−カルボン酸メチル（１２．０ｇ、５８ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（１５．０ｇ、１１６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１２０ｍｌ）中の混合物を２５℃で１２時間撹拌した。Ｈ２Ｏ（５００ｍＬ）を添加し、そして沈殿した固体を濾過により集めて、表題化合物（１５ｇ、９７％）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C10H11ClN5O2  268.05  found  268.1。
【０１９８】
調製１６：  （１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（メトキシカルボニル）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化２２】
2021501151.tif 000025
２−クロロ−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−カルボン酸メチル（８．３ｇ、３１．０ｍｍｏｌ）、（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（メチルアミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８．２ｇ、３４．１ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（１０．８ｍＬ、６２．０ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（８５ｍｌ）中の混合物を１２０℃で１６時間撹拌した。この混合物を２Ｌの水に注ぎ、激しく撹拌し、次いで濾過して、表題化合物（１１．１ｇ、７６％）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C23H34N7O4  472.27  found  472.3。
【０１９９】
調製１７：  （１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（ヒドロキシメチル）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化２３】
2021501151.tif 000026
ＮａＢＨ４（８ｇ、２１２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中の混合物に、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（メトキシカルボニル）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。次いで、この反応混合物を１時間加熱還流させた。この反応を水（５００ｍＬ）でクエンチし、そしてこの混合物を酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、そして減圧中で濃縮した。その粗製残渣を、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝４：１）により精製して、表題化合物（７ｇ、６８％）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C22H34N7O3  444.27  found  444.3。
【０２００】
調製１８：  （２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）メタノール
【化２４】
2021501151.tif 000027
（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（ヒドロキシメチル）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６．５ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）のＨＣｌ／ジオキサン（１００ｍＬ）中の混合物を室温で１時間撹拌した。この混合物を減圧中で濃縮して、表題中間体のＨＣｌ塩（４．８ｇ、１００％）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C17H26N7O  344.22  found  344.1。
【０２０１】
調製１９：  ３−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（ヒドロキシメチル）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル）プロパンニトリル（Ｃ−２）
【化２５】
2021501151.tif 000028
（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）メタノール（５０ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０７６ｍｌ、０．４３７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１．５０ｍｌ）に溶解させた。アクリロニトリル（０．０１４ｍｌ、０．２１８ｍｍｏｌ）を添加し、そしてこの反応混合物を室温で９０分間撹拌した。次いで、この反応混合物を減圧中で濃縮し、そしてその粗製残渣を分取逆相ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｄｙｎａｍａｘ  ２５０×２１．４ｍｍ  １０μｍ、１５ｍＬ／分、２〜６０％のＡＣＮ＋０．１％のＴＦＡ／ＡＣＮ）により精製して、表題化合物ＴＦＡの塩（１４ｍｇ、１９％）を得た。(m/z):  [M+H]+  calcd  for  C20H29N8O  397.25  found  397.1。
【０２０２】
実施例１：  結晶形態Ｉの粉末Ｘ線回折
図１の粉末Ｘ線回折パターンは、４５ｋＶの出力電圧および４０ｍＡの電流でＣｕ−Ｋα線（λ＝１．５４０５１Å）を使用するＢｒｕｋｅｒ  Ｄ８−Ａｄｖａｎｃｅ  Ｘ線回折計を用いて得た。この装置を、サンプルにおいて強度が最大となるように入射スリット、発散スリットおよび散乱スリットを設定したＢｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏジオメトリで作動した。計測のために、少量の粉末（５〜２５ｍｇ）をサンプルホルダー上に静かに押し込んで、滑らかな表面を形成させ、Ｘ線曝露に供した。サンプルを、２°から３５°（単位：２θ）まで０．０２°の刻み幅および１工程あたり０．３０°秒の走査速度での２θ−２θモードで走査した。データ取得を、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤｉｆｆｒａｃＳｕｉｔｅ計測ソフトウェアによって制御し、Ｊａｄｅソフトウェア（バージョン７．５．１）によって解析した。上記装置は、コランダム標準を用いて±０．０２°２シータ角以内に較正した。結晶形態Ｉについて観測されたＰＸＲＤの２θピーク位置およびｄ間隔を表１に示す。
【表１】
2021501151.tif 000029
【０２０３】
実施例２：  形態Ｉの分析
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を、Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｎａｌｙｓｔコントローラを備えたＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ｑ−１００モジュールを用いて行った。データを収集し、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを用いて解析した。各結晶形態のサンプルを、ふた付きのアルミニウムパンに正確に秤量した。５℃での５分間の等温平衡期間の後、サンプルを１０℃／分の線形加熱勾配で０℃から３００℃に加熱した。本発明の結晶形態Ｉの代表的なＤＳＣサーモグラムを図２に示す。このサーモグラムは、約２４８．５℃の開始、および約２５０．９℃のピークを有する融解吸熱を示す。約４０℃および約１９０℃で観察される、小さい融解前吸熱熱事象が存在した。
【０２０４】
熱重量分析（ＴＧＡ）の計測は、高分解能を備えるＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ｑ−５０モジュールを用いて行った。データを、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｎａｌｙｓｔコントローラを用いて収集し、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを用いて解析した。秤量したサンプルを白金パン上に置き、周囲温度から３００℃まで１０℃の加熱速度で走査した。使用中、天秤および炉チャンバーに窒素流をパージした。本発明の結晶形態Ｉの代表的なＴＧＡトレースを図３に示す。このＴＧＡプロフィールは、２２℃〜１２５℃でＮ２パージ下での約０．７０％の重量損失、および約２５０℃の開始温度の分解を示す。
【０２０５】
動的水分吸着（ＤＭＳ）の計測を、ＶＴＩ大気微量天秤ＳＧＡ−１００システム（ＶＴＩ  Ｃｏｒｐ．，Ｈｉａｌｅａｈ，ＦＬ  ３３０１６）を使用して行った。秤量したサンプルを使用し、分析の開始時の湿度は、可能な限り最低の値（０％ＲＨに近い値）であった。このＤＭＳ分析は、１２０分間にわたる最初の乾燥工程（０％ＲＨ）の後、５％ＲＨ〜９０％ＲＨの湿度範囲にわたる５％ＲＨ／工程という走査速度での吸着および脱着の２サイクルからなった。このＤＭＳの実行を、２５℃で等温で実施した。形態Ｉについての代表的なＤＭＳトレースを図４に示す。５〜９０％ＲＨでの総水分取り込みは、１．９６％であった。
【０２０６】
形態Ｉのカールフィッシャー分析は、これが１．６％ｗ／ｗの水を含むことを示した。
【０２０７】
調製２０：  形態ＩＩの調製
２８ｇの化合物２−６を、７０ｍＬのＥｔＯＨと１５４ｍＬのＴＨＦとの混合物に懸濁させ、次いで５℃まで冷却した。この懸濁物に、８２ｍＬのＬｉＢＨ４（ＴＨＦ中２．０Ｍ）を１時間かけて添加した。この添加の後に、その温度は１０℃まで上昇し、そして２時間撹拌し、この時点の後に、出発物質は、ＨＰＬＣ分析により検出されなかった。次いで、この反応を、７７ｍＬの水に溶解させた１６．８ｇの塩化アンモニウムの混合物でクエンチした。４５℃まで加熱した後に、４６７ｍＬの水を３時間かけて入れた。一旦、３７０ｍＬのこの水を添加すると、結晶の形成が観察された。この水の添加が完了したら、このスラリーを４５℃で５時間保持し、次いで１５℃まで３時間かけて加熱した。このスラリーを１５℃で７．５時間保持した後に、その生成物を濾過し、そして１４０ｍＬのＥｔＯＨですすいで流し、その後、１４０ｍＬの水を使用して２回すすいで流した。この固体を４５℃で、窒素を供給しながら一晩減圧下で乾燥させて、２２．６ｇの形態ＩＩ（８７％の収率、９８．６％の純度）を得た。
【０２０８】
６３ｍＬのＤＭＳＯ中の、先の工程から得られた２１ｇの中間体等級の化合物（Ｉ）の形態ＩＩを９０℃まで加熱した。この混合物の温度を８６℃より高く維持しながら、４２０ｍＬのｎ−ＰｒＯＨを４０分間かけて添加した。最後の３回目のｎＰｒＯＨ添加中に、非常に微細な屈折性の結晶が観察された。この混合物を９２℃で４時間撹拌した。この混合物を８時間かけて２０℃まで冷却し、そして２０℃で一晩撹拌した。その生成物を濾過し、そして５２．５ｍＬのｎＰｒＯＨ、次いで５２．５ｍＬのエタノールで２回、洗浄した。その固体を、窒素を供給しながら５５℃で減圧下で乾燥させて、１９．２４ｇの形態ＩＩ（９２％の収率、９９．６％の純度）を得た。
【０２０９】
実施例３：  結晶形態ＩＩの粉末Ｘ線回折
図５の粉末Ｘ線回折パターンを、形態Ｉについてと同じ条件下で得た。観測されたＰＸＲＤの２θピーク位置およびｄ間隔を下記の表に示す。
【表１Ａ】
2021501151.tif 000030
【０２１０】
実施例４：  形態ＩＩの分析
形態ＩＩを、形態Ｉと類似の条件下で試験した。
【０２１１】
本発明の結晶形態ＩＩの代表的なＤＳＣサーモグラムを図６に示す。このサーモグラムは、融解転移として特定される、吸熱の熱流のピークを示し、これは、２３８．１℃±２℃の温度で吸熱の熱流の極大値を示す。
【０２１２】
本発明の結晶形態ＩＩの代表的なＴＧＡトレースを図７に示す。このＴＧＡプロフィールは、２２２℃より後の分解に関連する重量損失を示す。
【０２１３】
このＤＭＳ分析は、１２０分間にわたる最初の乾燥工程（０％ＲＨ）の後、５％ＲＨ〜９０％ＲＨの湿度範囲にわたる５％ＲＨ／工程という走査速度での吸着および脱着の２サイクルからなった。このＤＭＳの実行を、２５℃で等温で実施した。形態ＩＩについての代表的なＤＭＳトレースを図８に示す。５〜９０％ＲＨでの総水分取り込みは、約０．０２％であった。
【０２１４】
実施例５：形態ＩＩの単結晶Ｘ線回折
データを、Ｒｉｇａｋｕ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｕｐｅｒｎｏｖａ  Ｄｕａｌ  Ｓｏｕｒｃｅで、Ｃｕをゼロとして、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｏｂｒａ冷却デバイスを備えるＡｔｌａｓ  ＣＣＤ回折形で収集した。これらのデータを、Ｃｕ  Ｋα放射線を使用して収集した。構造を、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  ＳＨＥＬＸＴＬスイート結晶学ソフトウェアを使用して解析および精密化した。全ての詳細がＣＩＦに見出され得る。他に記載されない限り、炭素に結合している水素原子を幾何学的に配置し、そしてライディング等方性変位パラメータ（ｒｉｄｉｎｇ  ｉｓｏｔｒｏｐｉｃ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｐａｒａｍｅｔｅｒ）を用いる精密化を可能にした。ヘテロ原子に結合している水素原子を異なるフーリエマップ上に配置し、そして等方性置換パラメータを用いて自由に精密化することを可能にした。
【表１Ｂ】
2021501151.tif 000031
【０２１５】
生物学的アッセイ
アッセイ１：  生化学的ＪＡＫおよびＴｙｋ２キナーゼアッセイ
４つのＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ  ＪＡＫ生化学的アッセイのパネル（ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２）を、通常のキナーゼ反応緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５、０．０１％Ｂｒｉｊ−３５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＥＧＴＡ）に含めた。組換えＧＳＴタグ化ＪＡＫ酵素およびＧＦＰタグ化ＳＴＡＴ１ペプチド基質をＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した。
【０２１６】
段階または不連続希釈した化合物を、それらの４つのＪＡＫ酵素の各々および基質とともに、白色３８４ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）において周囲温度で１時間プレインキュベートした。続いて、ＡＴＰを加えて、１％ＤＭＳＯを含む１０μＬの総体積でキナーゼ反応を開始した。ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２についての最終的な酵素濃度は、それぞれ４．２ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭおよび０．２５ｎＭであり；使用された対応するＫｍ  ＡＴＰ濃度は、２５μＭ、３μＭ、１．６μＭおよび１０μＭであり；基質濃度は、４つすべてのアッセイについて２００ｎＭである。キナーゼ反応を周囲温度で１時間進めた後、ＴＲ−ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中のＥＤＴＡ（最終濃度１０ｍＭ）およびＴｂ−抗ｐＳＴＡＴ１（ｐＴｙｒ７０１）抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，最終濃度２ｎＭ）の１０μＬ調製物を加えた。そのプレートを周囲温度で１時間インキュベートした後、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）において読み出した。発光シグナル比（Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｒａｔｉｏ  ｓｉｇｎａｌｓ）（５２０ｎｍ／４９５ｎｍ）を記録し、それを用いて、ＤＭＳＯに基づくパーセント阻害値およびバックグラウンドコントロールを算出した。
【０２１７】
用量反応分析のために、パーセント阻害のデータを化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。結果は、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の対数に負号をつけたもの）として表され、続いてＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式を用いてｐＫｉ（解離定数Ｋｉの対数に負号をつけたもの）に変換した。
【表２】
2021501151.tif 000032
【０２１８】
アッセイ２：  細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞におけるＩＬ−１３により誘導されるＳＴＡＴ６のリン酸化の阻害
ＪＡＫ阻害についての細胞効力アッセイを、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって誘導されたＳＴＡＴ６のリン酸化をＢＥＡＳ−２Ｂヒト肺上皮細胞（ＡＴＣＣ）において計測することによって、行った。抗ＳＴＡＴ６抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアクセプタービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）に結合体化し、抗ｐＳＴＡＴ６（ｐＴｙｒ６４１）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてビオチン化した。
【０２１９】
ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞を、３７℃の５％ＣＯ２加湿恒温器内にて、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２ｍＭ  ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充された５０％ＤＭＥＭ／５０％Ｆ−１２培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で生育した。アッセイの１日目に、細胞を、２５μＬの培地が入った、ポリ−Ｄ−リジンでコーティングされた白色３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に７，５００細胞／ウェルの密度で播種し、恒温器内で一晩接着させた。アッセイの２日目に、培地を除去し、試験化合物の用量反応物を含む１２μＬのアッセイ緩衝液（ハンクス平衡塩類溶液／ＨＢＳＳ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン／ＢＳＡ）と交換した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次いで、最終ＤＭＳＯ濃度が０．１％になるようにさらに培地で１０００倍希釈した。細胞を３７℃で１時間、試験化合物とインキュベートした後、刺激のために、予め加温した１２μｌのＩＬ−１３（アッセイ緩衝液中８０ｎｇ／ｍＬ）を加えた。３７℃で３０分間インキュベートした後、アッセイ緩衝液（化合物およびＩＬ−１３を含む）を除去し、１０μＬの細胞溶解緩衝液（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ＳＤＳ、１％ＮＰ−４０、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１．３ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、ならびにＲｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ製のＣｏｍｐｌｅｔｅ  Ｕｌｔｒａミニプロテアーゼ阻害剤およびＰｈｏｓＳＴＯＰによる補充）。プレートを周囲温度で３０分間振盪した後、検出試薬を加えた。まず、ビオチン−抗ｐＳＴＡＴ６および抗ＳＴＡＴ６結合体化アクセプタービーズの混合物を加え、周囲温度で２時間インキュベートした後、ストレプトアビジン結合体化ドナービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を加えた。最低２時間のインキュベーションの後、アッセイプレートをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーにおいて読み出した。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎルミネセンスシグナルを記録し、それを用いて、ＤＭＳＯに基づくパーセント阻害値およびバックグラウンドコントロールを算出した。
【０２２０】
用量反応分析のために、パーセント阻害データを化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。結果は、ＩＣ５０値の対数に負号をつけたものであるｐＩＣ５０として表され得る。化合物（Ｉ）は、このアッセイにおいて、８．５のｐＩＣ５０値を示した。
【０２２１】
アッセイ３：  細胞傷害性アッセイ
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存能／細胞傷害性アッセイを、通常の生育条件下のＢＥＡＳ−２Ｂヒト肺上皮細胞（ＡＴＣＣ）において行った。
【０２２２】
細胞を、３７℃の５％ＣＯ２加湿恒温器内にて、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２ｍＭ  ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充された５０％ＤＭＥＭ／５０％Ｆ−１２培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で生育した。アッセイの１日目に、細胞を、２５μＬの培地が入った、白色３８４ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に５００細胞／ウェルの密度で播種し、恒温器内で一晩接着させた。アッセイの２日目に、試験化合物の用量反応物を含む５μＬの培地を加え、３７℃で４８時間インキュベートした。その後、３０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ検出液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、オービタルシェーカー上で５分間混合し、さらに１０分間インキュベートした後、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダーにおいて読み出した。ルミネセンスシグナルを記録し、パーセントＤＭＳＯコントロール値を算出した。
【０２２３】
用量反応分析のために、パーセントＤＭＳＯコントロールデータを化合物の濃度に対してプロットして、各データポイントをつなぐ線によって用量反応曲線を作成した。各曲線が１５％阻害閾値を横断する濃度をＣＣ１５と定義する。結果は、ＣＣ１５値の対数に負号をつけたものであるｐＣＣ１５として表した。
【０２２４】
このアッセイにおいてより低いｐＣＣ１５値を示す試験化合物は、細胞傷害性を引き起こす可能性がより低いと予想される。化合物（Ｉ）についてのｐＣＣ１５は５．３６であった。
【０２２５】
アッセイ４：  ヒトＰＢＭＣにおけるインビトロＴＳＬＰ誘導性ＴＡＲＣアッセイ
ＴＳＬＰのその受容体への結合は、ＪＡＫ１およびＪＡＫ２を活性化させて種々の転写因子（ＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５が挙げられる）をリン酸化する、コンホメーション変化を誘導する。皮膚に常在する免疫細胞において、これは、細胞増殖、抗アポトーシス樹状細胞移動、ならびにＴｈ２サイトカインおよびケモカインの産生をもたらす、細胞内事象のカスケードを誘発する。アトピー性皮膚炎の急性段階において、皮膚はＴｈ２リンパ球に侵入される。初代末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において、ＴＳＬＰは、骨髄樹状細胞を活性化させてＴ細胞を誘引および刺激することにより、炎症誘発効果を有する。このプロセスは、胸腺および活性化調節ケモカイン（ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７）により媒介される。ＴＡＲＣは、アトピー性皮膚炎の有望な臨床バイオマーカーであることが示されており、高い血清中レベルは、皮膚の炎症の加速した発病を示す。
【０２２６】
このアッセイにおいて、ＴＳＬＰ刺激がＰＢＭＣからのＴＡＲＣ放出を誘導すること、およびこの応答は、化合物（Ｉ）での処置により、用量依存性の様式で減衰することが示された。３人のドナー由来のＰＢＭＣ（事前に全血から単離され、そしてアリコートとして−８０℃で凍結された）を解凍し、プレートし、そして３７℃で１時間静置した。細胞を、３３．３μＭ〜０．９５ｎＭの範囲の化合物（Ｉ）の３．７Ｘ希釈系列で１時間、前処理した。次いで、細胞を、１０ｎｇ／ｍＬのＴＳＬＰで刺激したか、または基礎コントロールとしての等体積のプレーン培地を与えたかのいずれかを行った。４８時間後、細胞上清を集め、そしてＴＡＲＣを、Ｈｕｍａｎ  ＣＣＬ１７／ＴＡＲＣ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔを使用して測定した。
【０２２７】
用量反応分析のために、パーセント阻害データを化合物の濃度に対してプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。結果は、ＩＣ５０値の対数に負号をつけたものであるｐＩＣ５０として表され得る。化合物（Ｉ）は、このアッセイにおいて、７．８のｐＩＣ５０値を示した。
【０２２８】
アッセイ５：  ラット薬物動態学アッセイ
この研究の目的は、雄性Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットへの１回の経口（ＰＯ、ｎ＝３）または静脈内（ＩＶ、ｎ＝２）投与後の血漿中の化合物（Ｉ）の薬物動態学を評価することであった。
【０２２９】
３匹の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに、単回ＩＶ用量の化合物（Ｉ）（５％のＤＭＳＯ＋２０ｍＭのクエン酸緩衝液（ｐＨ４）中１．０ｍｇ／ｋｇ）を頸静脈カテーテルを介して、または単回ＰＯ用量の５ｍｇ／ｋｇを経口栄養（１％のＨＰＭＣ（０．１％のＴｗｅｅｎ（登録商標）８０を含む）中５．０ｍｇ／ｋｇ）を介して、投与した。用量投与の０．２５時間後、０．５時間後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、および２４時間後に、血液サンプルを頸静脈カテーテルを通してＥＤＴＡ管内に引き出し、そして氷上で冷却して維持し、その後、遠心分離した（１２，０００ｒｐｍ、４分間、４℃）。血漿のアリコートをクラスターチューブに移し、そしてバイオ分析前に、凍結状態（−８０℃）で貯蔵した。
【０２３０】
血漿サンプルをボルテックスし、その後、５０μＬのアリコートのサンプルを、９６ウェルプレートに移し、そして内部標準を含有する２００μＬのアセトニトリルで抽出した。抽出後、サンプルを３７００ＲＰＭ（２８０９×ｇ）で１０分間遠心分離した。その上清を、新しい９６ウェルプレートに移し、次いで水中０．２％のギ酸で希釈した（３倍希釈）。全てのサンプルについて、１０μＬをＷａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ（Ｃ１８  ３０×２．１ｍｍ）カラムに０．８０ｍＬ／分の流速で注入した。移動相Ａは、水中０．２％のギ酸からなり、そして移動相Ｂは、アセトニトリル中０．２％のギ酸からなった。化合物（Ｉ）の血漿レベルを、ＬＣ−ＭＳ−ＭＳ分析により決定した。標準ＰＫパラメータを、Ｐｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ，（Ｃｅｒｔａｒａ  Ｉｎｃ．）を使用して決定した。
【表３】
2021501151.tif 000033
ＮＤは、決定していない。
【０２３１】
アッセイ６：  Ｈａｎｆｏｒｄミニブタ皮膚における皮膚薬物動態学
この研究の目的は、インタクトなＨａｎｆｏｒｄミニブタ皮膚への２４時間の曝露後の、化合物（Ｉ）の上皮、真皮および血漿薬物動態学を決定することであった。化合物（Ｉ）を、表４にそれぞれ製剤Ａおよび製剤Ｂとして記載される、クリームまたは軟膏中に０．５％（ｗ／ｗ）で製剤化した。
【表４】
2021501151.tif 000034
【０２３２】
投与の２４時間前に、１０〜１５ｋｇのＨａｎｆｏｒｄミニブタの背から毛を剃って、少なくとも７００ｃｍ２（体表面の約１０％）の領域を露出させた。時刻ゼロにおいて、化合物（Ｉ）をこれらのミニブタの背に２５μＬ／ｃｍ２の用量で塗布した。その皮膚を粘着性カバーで覆って、ケージまたは寝床への化合物の損失を防止した。２４時間の曝露後、その背中を石鹸水で穏やかに洗浄して、吸収されていない薬物を除去し、そして軽く叩いて乾かした。この洗浄のすぐ後に、これらのミニブタから血液を静脈穿刺により採取した。次いで、外皮（角質層）を、粘着テープを剥がすことにより除去した。表皮を露出させたら、０．５ｃｍのパンチ生検を採取した。表皮および真皮を手早く分離し、秤量し、そして急速冷凍した。類似のサンプルを、ミニブタへの投与後９４時間目および１６８時間目（７日目）に採取した。表皮および真皮のサンプルを１：１０（ｗ／ｖ）の水で、Ｃｏｖａｒｉｓ超音波ホモジナイザーを使用して均質化した。サンプルを３体積のアセトニトリルで抽出し、そしてＬＣ−ＭＳにより標準曲線に対して定量した。薬物動態パラメータ（表５）により証明されるように、有意な化合物曝露が表皮層および真皮層において示されたが、血漿曝露は、定量限界（０．００１μｇ／ｍｌ）未満であり、全身循環への化合物の非常に制限された吸収を示した。
【表５】
2021501151.tif 000035
【０２３３】
アッセイ７：  切除されたばかりのヒト皮膚を使用するエキソビボＪＡＫ薬物動力学（ＰＤ）アッセイ
エキソビボＪＡＫ薬物動力学（ＰＤ）アッセイを、単離されたヒト皮膚組織を使用して実施した。このＰＤアッセイは、新鮮なヒト皮膚（７５０μｍの厚さの真皮節）を使用し、これを約０．５ｃｍ２の表面積の静的Ｆｒａｎｚセル内に載置した。これらのＦｒａｎｚセルの受容チャンバに温（３７℃）角化培地を満たし、そして３７℃のインキュベーターに入れた。その皮膚に、１０μＬ（約１８μＬ／ｃｍ２）の化合物（Ｉ）またはビヒクルを局所投与し、そして一晩（約２４時間）静置した。翌日、試験化合物もビヒクルも再塗布せずに、その培地を、ＴＮＦα、ＩＦＮγおよびＩＬ−１２からなるＴｈ１スキュー刺激カクテルで置き換えた。この皮膚をさらに１６時間静置し、次いで採取し、そしてＲＮＡ抽出およびバイオマーカー（ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ２）のｑＰＣＲのために処理した。ＧＡＰＤＨを内部標準として使用した。化合物（Ｉ）を０．５％強度の軟膏製剤に製剤化した。この軟膏ビヒクルの組成を表６に列挙する。合計３人の皮膚ドナー（四連で試験／サンプル／処置）を使用した。処置の効果を、ビヒクル群と比較した刺激の増加または減少の百分率として計算した。
【表６】
2021501151.tif 000036
【０２３４】
エキソビボヒト皮膚ＰＤアッセイ結果
データを７に要約する。ＣＸＣＬ１０遺伝子発現（これは、インターフェロン−γ−誘導タンパク質１０（ＩＰ−１０）をコードする）は、化合物（Ｉ）によって、ＴＨ１／ビヒクルコントロール群と比較して９０．１％阻害された。ＣＣＬ２遺伝子（これは、単球化学誘引物質１（ＭＣＰ−１）をコードする）に関して、化合物（Ｉ）は、その応答を６１．３％阻害した。さらに、両方の製剤を用いて、高濃度の化合物が、皮膚の上皮層と真皮層との両方で検出された。
【表７】
2021501151.tif 000037
データを平均±標準偏差として表す。ｎ＝１２（３人のドナー、４サンプル／ドナー）。
【０２３５】
アッセイ８：  ヒト皮膚透過性アッセイ
この実験の目的は、局所投与後に試験化合物がヒト皮膚を通る経皮吸収を評価することであった。このモデルは、皮膚が実際の使用条件に一致する温度および湿度に維持されることを可能にする、特別に設計された拡散チャンバ（静的またはフロースルー）内に設置された切除されたヒト皮膚を使用する。製剤を皮膚の表面に塗布した。そして薬物の透過を、この薬物が皮膚サンプルのすぐ下を流れる受容体溶液内に出現する割合を監視することによって、測定する。このインビトロシステムは、局所塗布に関与する潜在的な変数（例えば、投与体積、湿度、温度、薬物安定性、および皮膚の厚さ）の多くを注意深く制御することを可能にする。
【０２３６】
この実験は、最適なシンク条件のために最小の空隙体積を有する注意深く設計された流路を利用するフロースルー拡散セルシステム（ＭｅｄＦｌｕｘ−ＨＴＴＭ）を使用し、そして採取された皮膚の局所クリアランスを提供して、より正確かつ詳細な流れプロフィールを、自動収集および最適化された流体工学により生成することが示された。このシステムは、インビトロ実験中に投与面積を特に最小にするように開発されたので、エキソビボヒト皮膚の制限された表面積内での、さらなる投与再現を可能にする。
【０２３７】
およそ３２℃の皮膚表面温度を維持するために、拡散セルをセル温熱支持具に入れ、そして循環水浴を使用して加熱した。これらのセルをマルチチャネル蠕動ポンプに接続し、そして皮膚のすぐ下の受容流体の連続流のために、およそ１０μＬ／分（６００μＬ／時間）の流速で維持した。２４時間の連続サンプリングの後に、サンプルを試験化合物レベルについて、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによりアッセイした。試験化合物を、試験軟膏製剤の塗布後２０時間から２８時間まで、受容流体内で検出した（ｎ＝５）。使用した軟膏は、アッセイ７に開示されている。受容流体は、０．１％のＢｒｉｊを含有するＰＢＳであった。
【表８】
2021501151.tif 000038
表８に示されるように、化合物（Ｉ）は十分な透過性を示した。
【０２３８】
アッセイ９：  マウスにおけるインビボＩＬ−３１−ｐＳＴＡＴ３  ＪＡＫターゲットエンゲージメントアッセイ
マウスにおける、リン酸化シグナル伝達兼転写活性化因子３（ｐＳＴＡＴ３）の、ＩＬ−３１により誘導される産生のインビボモデルを使用して、マウス皮膚への局所ターゲットエンゲージメントを評価した。
【０２３９】
ＪＡＫ／ＳＴＡＴ（ヤヌスキナーゼ／シグナル伝達兼転写活性化因子）シグナル伝達経路は、免疫細胞間の連絡における主要なエレメントであり、そして主として、サイトカイン受容体により活性化される。サイトカインＩＬ−３１の結合は、ＪＡＫ１／ＪＡＫ２チロシンキナーゼの活性化およびリン酸化をもたらし、これは次に、ＳＴＡＴ３のリン酸化（ｐＳＴＡＴ３）をもたらす。次いで、活性化ＳＴＡＴは、核内に転座し、そしてサイトカイン感受性遺伝子の転写を直接調節する。これらの研究において、Ｂａｌｂ／ｃマウスに、化合物（Ｉ）の軟膏製剤を投与した。軟膏ビヒクル（表９）またはこの軟膏ビヒクル中に製剤化された化合物（Ｉ）を、毛を剃った皮膚（２５μｌ／ｃｍ２）に局所塗布し、その３０分後、ＩＬ−３１（１μｇ／ｍｌ）の皮内注射（５０μｌ／１×１ｃｍ２部位）を、耳の間の後部の皮膚の１ｘ１ｃｍ２の毛を剃った領域に行った。ＩＬ−３１の１時間後、皮膚生検を集めた。これらの組織サンプルを急激に冷凍し、そしてｐＳＴＡＴ３について、ＥＬＩＳＡおよび化合物濃度により分析した。化合物（Ｉ）は、ｐＳＴＡＴ３産生を８０％阻害し、そして化合物（Ｉ）の皮膚組織濃度は６２μＭであった。
【表９】
2021501151.tif 000039
【０２４０】
アッセイ１０：  マウスにおけるインビボＴＰＡ誘導性急性皮膚炎モデル
このアッセイの目的は、化合物（Ｉ）の抗炎症効果を、アトピー性皮膚炎などの皮膚の炎症状態について研究されている急性皮膚炎のモデル（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ，２０１３，３４４，４３６−４４６）において評価することである。
【０２４１】
マウスにおけるホルボールエステルＴＰＡの局所真皮塗布は、初期段階（２〜２４時間）の浮腫および好中球流入ならびに後期段階（２４〜４８時間）の上皮細胞増殖により特徴付けられる、炎症応答を引き起こす（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ａｃｔｉｏｎｓ，１９８８，２５，３４４−３５１）。このモデルにおいて、雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスに、２０μｌ／耳の、ビヒクルまたはＴＰＡ（２．５μｇ）のいずれかを局所投与した。溶液製剤については、ビヒクル（１：７のＤＭＳＯ：アセトン）または試験化合物を、ＴＰＡ投与の３０分前および１５分後に局所塗布した。軟膏製剤については、ビヒクルまたは化合物（Ｉ）（０．５％強度）を、ＴＰＡの３０分前に塗布した。軟膏ビヒクルの組成を表１０に列挙する。炎症の程度を、ＴＰＡ塗布の６時間後の耳の厚さの変化として評価した。
【０２４２】
その結果を表１１および１２に要約する。溶液として投与される場合、化合物（Ｉ）（３〜１０００μｇ／耳）は、ＴＰＡにより誘導される耳の厚さの増大を、用量依存様式で阻害した。試験した最も高い用量は、ＴＰＡ応答を５４．８％阻害した。０．５％の強度の軟膏として製剤化した場合、化合物（Ｉ）は、ＴＰＡ応答を３４．９％阻害した。
【表１０】
2021501151.tif 000040
【０２４３】
【表１１】
2021501151.tif 000041
【０２４４】
【表１２】
2021501151.tif 000042
【０２４５】
アッセイ１１：  Ｔａｌｌ−１  Ｔ細胞におけるＩＬ−２刺激ｐＳＴＡＴ５の阻害
Ｔａｌｌ−１ヒトＴ細胞株（ＤＳＭＺ）におけるインターロイキン−２（ＩＬ−２）刺激ＳＴＡＴ５リン酸化の阻害に対する試験化合物の効力を、ＡｌｐｈａＬｉｓａを使用して測定した。ＩＬ−２はＪＡＫ１／３を介してシグナル伝達するので、このアッセイによりＪＡＫ１／３細胞効力の尺度を提供する。
【０２４６】
リン酸化ＳＴＡＴ５を、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ  Ｕｌｔｒａ  ｐＳＴＡＴ５（Ｔｙｒ６９４／６９９）キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって測定した。
【０２４７】
Ｔａｌｌ−１細胞株由来のヒトＴ細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿恒温器において、１５％熱失活ウシ胎児血清（ＦＢＳ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充されたＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、空のウェルに音響学的に分注した。アッセイ培地（１０％ＦＢＳ（ＡＴＣＣ）が補充された無フェノールレッドＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））を分注し（４μＬ／ウェル）、プレートを９００ｒｐｍで１０分間振盪した。細胞を、アッセイ培地（４μＬ／ウェル）中に４５，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、予め加温したアッセイ培地（４μＬ）中にＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度３００ｎｇ／ｍＬ）を３０分間加えた。サイトカイン刺激の後、細胞を、１×ＰｈｏｓＳｔｏｐおよびＣｏｍｐｌｅｔｅ  ｔａｂｌｅｔ（Ｒｏｃｈｅ）を含む６ｕｌの３×ＡｌｐｈａＬｉｓａ溶解緩衝液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で溶解した。ライセートを、室温（ＲＴ）にて９００ｒｐｍで１０分間振盪した。リン酸化ＳＴＡＴ５を、ｐＳＴＡＴ５  ＡｌｐｈａＬｉｓａキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって計測した。新たに調製したアクセプタービーズ混合物を、緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下でライセート（５μＬ）上に分注した。プレートを９００ｒｐｍで２分間振盪し、短時間遠沈し、ＲＴの暗所で２時間インキュベートした。ドナービーズを、緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下で分注した（５μＬ）。プレートを９００ｒｐｍで２分間振盪し、短時間遠沈し、ＲＴの暗所で一晩インキュベートした。ルミネセンスを、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下で６８９ｎｍでの励起および５７０ｎｍでの発光を使用して測定した。
【０２４８】
試験化合物のＩＬ−２に応答する阻害性効力を測定するために、ヒトＴ細胞株におけるｐＳＴＡＴ５に結合したビーズの平均発光強度を計測した。化合物濃度に対するシグナル強度の阻害曲線の解析から、ＩＣ５０値を決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値（平均値±標準偏差）として表される。化合物（Ｉ）は、このアッセイにおいて８．４のｐＩＣ５０値を示した。
【０２４９】
アッセイ１２：  ヒトＣＤ３＋  Ｔ細胞におけるＩＬ−１２により誘導されるＳＴＡＴ４のリン酸化の阻害
ＪＡＫ阻害についてのこの細胞効力アッセイを、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって誘導されたＳＴＡＴ４のリン酸化をヒトＣＤ３＋  Ｔ細胞において計測することによって、行った。ＣＤ３抗体（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（ＢＤ）Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）をＲ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ（Ｒ−ＰＥ）に結合体化した。ｐＳＴＡＴ４抗体（ｐＴｙｒ６４１、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）をＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７と結合体化させた。
【０２５０】
ヒト末梢血単球細胞を、３７℃で、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で、１０％のＦＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭのＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、プレート結合抗ＣＤ３（５μｇ／ｍＬ、ＵＣＨＴ１、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および可溶性抗ＣＤ２８（１μｇ／ｍＬ、ＣＤ２８．２、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を補充したＲＰＭＩ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で、３日間培養した。次いで、細胞を、１０％のＦＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭのＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および１０ｎｇ／ｍＬのインターロイキン−２（ＩＬ−２，  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を補充したＲＰＭＩ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に、さらに３日間懸濁させた。アッセイの当日に、細胞をアッセイ緩衝液（０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２ｍＭのＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ）で洗浄し、そして１ｍＬのアッセイ緩衝液あたり１．２５×１０６で再懸濁させた。細胞を１ウェルあたり１００μＬあたり２５０，０００個の細胞で、ポリプロピレンの９６ディープウェル丸底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に播種し、そして１時間培養した。その培地を除去し、そして試験化合物の用量応答を含む５０μＬのアッセイ緩衝液で置き換えた。化合物を、ＤＭＳＯ中１０ｍＭのストック溶液として調製した。系列希釈を行って、最終アッセイ試験濃度の１０００倍で、１００％のＤＭＳＯ中で１１濃度の試験化合物を作製した。これらをアッセイ培地中で２５倍、次いで２０倍に希釈して、０．２％のＤＭＳＯ中で、最終アッセイ試験濃度の２Ｘのストックを作製した。細胞を試験化合物と一緒に３７℃で１時間インキュベートし、その後、ＩＬ−１２（２０ｎｇ／ｍＬ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有する５０μＬの予熱したアッセイ緩衝液を添加した。ＩＬ−１２の最終濃度は、１０ｎｇ／ｍＬである。３７℃で３０分間インキュベートした後に、細胞を１００μＬの予熱したｃｙｔｏｆｉｘ緩衝液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で固定し、そして３７℃で１０分間インキュベートした。次いで、細胞を３２２×ｇで５分間遠心分離し、その上清を廃棄し、そして細胞を５００μＬの染色緩衝液（リン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）中１％のＢＳＡ）で洗浄した。次いで、細胞３２２×ｇで５分間遠心分離し、その上清を廃棄し、そして細胞を氷上で５００μＬの予冷したＰｅｒｍ  ＩＩＩ緩衝液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と一緒に３０分間インキュベートして、細胞を透過性にした。次に、細胞を３２２×ｇで５分間遠心分離し、その上清を廃棄し、１ｍＬの染色緩衝液で洗浄し、もう１回遠心分離し、そして最終細胞ペレットを、抗ＣＤ３  Ｒ−ＰＥ（１：１０希釈物）���よび抗ＳＴＡＴ４  ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６４７（１：５０希釈物を含む）１００μＬの染色緩衝液に再度懸濁させて、細胞表面および細胞内マーカーを染色した。細胞を室温で暗所で４５分間インキュベートした。抗体染色後、細胞を３２２×ｇで５分間遠心分離し、その上清を廃棄し、そして細胞を５００μＬの染色緩衝液で洗浄した。細胞をもう１回洗浄し、その後、そのウェルの内容物を、ディープウェルアッセイプレートから、フローサイトメトリー分析のために、ポリプロピレンＵ底９６ウェルプレートに、２００μＬの染色緩衝液中で移した。用量反応分析のために、平均蛍光強度値を化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。化合物（Ｉ）は、このアッセイにおいて、７．２のｐＩＣ５０値を示した。
【０２５１】
アッセイ１３：  正常ヒト表皮ケラチノサイトにおけるＩＬ−１３により刺激されるｐＳＴＡＴ６の阻害
インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）により刺激されるＳＴＡＴ６のリン酸化の阻害についての試験化合物の効力を、正常ヒト表皮ケラチノサイト（ＡＴＣＣ）において、ＡｌｐｈａＬｉｓａを使用して測定した。リン酸化ＳＴＡＴ６を、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ  Ｕｌｔｒａ  ｐＳＴＡＴ６（Ｔｙｒ６４１）キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）により測定した。
【０２５２】
初代表皮ケラチノサイトを、３７℃の５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で、ケラチノサイト成長キット（ＡＴＣＣ）および１Ｘ  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充した真皮細胞基礎培地（ＡＴＣＣ）内で培養した。細胞を、２０，０００細胞／ウェルで、白色ポリ−Ｄ−リジンコーティングした３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内に、５０μｌで播種し、そして３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。アッセイの２日目に、その培地を除去し、そして試験化合物の用量応答を含む１５μＬの培地で置き換えた。化合物をＤＭＳＯに系列希釈し、次いで培地中でさらに１０００倍希釈して、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％にした。細胞を試験化合物と一緒に３７℃で１時間インキュベートし、その後、ＩＬ−１３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度５０ｎｇ／ｍＬ）を、予熱したアッセイ培地（５μＬ）に３０分間添加した。
【０２５３】
サイトカイン刺激の後、細胞を、１ｘ  ＰｈｏｓＳｔｏｐおよびＣｏｍｐｌｅｔｅ  ｔａｂｌｅｔｓ（Ｒｏｃｈｅ）を含有する５ｕｌの５×ＡｌｐｈａＬｉｓａ溶解緩衝液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で溶解した。ライセートを、室温（ＲＴ）にて９００ｒｐｍで１０分間振盪した。リン酸化ＳＴＡＴ６を、ｐＳＴＡＴ６  ＡｌｐｈａＬｉｓａキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって計測した。新たに調製したアクセプタービーズ混合物を、緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下でライセート（１０ｕＬ）上に分注した。プレートを９００ｒｐｍで２分間振盪し、短時間遠沈し、ＲＴの暗所で２時間インキュベートした。ドナービーズを、緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下で分注した（１０μＬ）。プレートを９００ｒｐｍで２分間振盪し、短時間遠沈し、ＲＴの暗所で一晩インキュベートした。ルミネセンスを、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下で６８９ｎｍでの励起および５７０ｎｍでの発光を使用して測定した。
【０２５４】
発光信号を記録し、そしてＤＭＳＯおよびコントロールに基づく阻害値の百分率を計算するために利用した。用量反応分析のために、パーセント阻害データを化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。ｐＩＣ５０の化合物（Ｉ）は、このアッセイにおいて８．３であった。
【０２５５】
アッセイ１４：  正常ヒト表皮ケラチノサイトにおけるＩＬ−２２により刺激されるｐＳＴＡＴ３の阻害
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）により刺激されるＳＴＡＴ３のリン酸化の阻害についての試験化合物の効力を、正常ヒト表皮ケラチノサイト（ＡＴＣＣ）において、ＡｌｐｈａＬｉｓａを使用して測定した。リン酸化ＳＴＡＴ３を、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ  Ｕｌｔｒａ  ｐＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）により測定した。
【０２５６】
初代表皮ケラチノサイトを、３７℃の５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で、ケラチノサイト成長キット（ＡＴＣＣ）および１Ｘ  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充した真皮細胞基礎培地（ＡＴＣＣ）内で培養した。細胞を、２０，０００細胞／ウェルで、白色ポリ−Ｄ−リジンコーティングした３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内に、５０μｌで播種し、そして３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。アッセイの２日目に、その培地を除去し、そして試験化合物の用量応答を含む１５μＬの培地で置き換えた。化合物をＤＭＳＯに系列希釈し、次いで培地中でさらに１０００倍希釈して、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％にした。細胞を試験化合物と一緒に３７℃で１時間インキュベートし、その後、ＩＬ−２２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度５０ｎｇ／ｍＬ）を、予熱したアッセイ培地（５μＬ）に３０分間添加した。
【０２５７】
サイトカイン刺激の後、細胞を、１ｘ  ＰｈｏｓＳｔｏｐおよびＣｏｍｐｌｅｔｅ  ｔａｂｌｅｔｓ（Ｒｏｃｈｅ）を含有する５ｕｌの５×ＡｌｐｈａＬｉｓａ溶解緩衝液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で溶解した。ライセートを、室温（ＲＴ）にて９００ｒｐｍで１０分間振盪した。リン酸化ＳＴＡＴ３を、ｐＳＴＡＴ３  ＡｌｐｈａＬｉｓａキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって計測した。新たに調製したアクセプタービーズ混合物を、緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下でライセート（１０ｕＬ）上に分注した。プレートを９００ｒｐｍで２分間振盪し、短時間遠沈し、ＲＴの暗所で２時間インキュベートした。ドナービーズを、緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下で分注した（１０μＬ）。プレートを９００ｒｐｍで２分間振盪し、短時間遠沈し、ＲＴの暗所で一晩インキュベートした。ルミネセンスを、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下で６８９ｎｍでの励起および５７０ｎｍでの発光を使用して測定した。
【０２５８】
発光信号を記録し、そしてＤＭＳＯおよびコントロールに基づく阻害値の百分率を計算するために利用した。用量反応分析のために、パーセント阻害データを化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。ｐＩＣ５０の化合物（Ｉ）は、このアッセイにおいて８．４であった。
【０２５９】
アッセイ１５：  正常ヒト表皮ケラチノサイトにおける、ＩＬ−２２により抑制されたフィラグリンの回収
ＩＬ−２２は、フィラグリンなどの末端分化遺伝子の発現を阻害することが公知である。インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）により抑制されるフィラグリン発現についての試験化合物の回収レベルを、正常ヒト表皮ケラチノサイト（ＡＴＣＣ）において、リアルタイムＰＣＲを使用して測定した。
【０２６０】
初代表皮ケラチノサイトを、３７℃の５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で、ケラチノサイト成長キット（ＡＴＣＣ）および１Ｘ  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充した真皮細胞基礎培地（ＡＴＣＣ）内で培養した。細胞を、５，０００細胞／ウェルで、ＢｉｏＣｏａｔ  ９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内に、１００μｌで播種し、そして３７℃、５％ＣＯ２で、１００％コンフルエンスになるまで３〜４日間インキュベートした。次いで、その培地を除去し、そして試験化合物の用量応答を含む１５０μＬの培地で置き換えた。化合物をＤＭＳＯに系列希釈し、次いで培地中でさらに１０００倍希釈して、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％にした。アッセイの１日目に、細胞を試験化合物と一緒に３７℃で１時間インキュベートし、その後、ＩＬ−２２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度５０ｎｇ／ｍＬ）を、予熱した培地（５０μＬ）に４日間添加した。試験化合物およびＩＬ−２２を含む培地を３日目に１回交換した、５日目に、細胞を１Ｘ  ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で洗浄し、そして０．５μｌのＤｎａｓｅＩ（ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌｓ−ｔｏ−ＣｔＴＭ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から）を含有する５０μｌの溶解緩衝液ですすいだ。室温（ＲＴ）で５分間インキュベートした後に、このキットからの５μｌの停止溶液を添加し、次いで室温で２分間インキュベートした。このキットからの１１．２５μｌの溶解物、１２．５μｌの２Ｘ  ＲＴ緩衝液および１．２５μｌの２０Ｘ  ＲＴ酵素ミックスを混合した。逆転写反応を、この混合物を３７℃で６０分間、次いで９５℃で５分間インキュベートすることに行い、ｃＤＮＡを生成した。ＰＣＲカクテルを組み立てるために、各反応物は、１０μｌの２Ｘ  ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍａｔｅｒ  Ｍｉｘ、１μｌの２Ｘ  ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｆｉｌａｇｇｒｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１μｌの２Ｘ  ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＵＢＣ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  （Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、４μｌのヌクレアーゼ非含有水および４μｌのｃＤＮＡを含有した。ＰＣＲ反応を、ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓＴＭ  （Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で、５０℃で２分間、９５℃で１０分間、その後、９５℃で１５秒間および６０℃で１分間の４０サイクルのサイクリング条件で行った。各サイクル後に蛍光信号を捕捉した。比較ＣＴ法を使用して、ベースラインコントロールとしてＩＬ−２２および試験化合物を含まない細胞で、遺伝子発現を定量した。
【０２６１】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）により抑制されるフィラグリン発現についての化合物（Ｉ）の回収は、１μＭ未満の濃度で観察された。
【０２６２】
アッセイ１６：  Ｃａｃｏ−２透過アッセイ
Ｃａｃｏ−２透過アッセイを、皮膚透過性の指標として使用した。このアッセイは、（ヒト小腸単層の密着結合を模倣するようにデザインされた）細胞単層を溶液中の試験化合物が透過する速度を測定する。
【０２６３】
ＣａｃｏＲｅａｄｙ  ２４ウェルトランズウェルプレートを、ＡＤＭＥｃｅｌｌ（Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）から入手した。化合物を、１０ｍＭ  ＤＭＳＯ保存溶液から５μＭの濃度で２連（ｎ＝２）にて評価した。試験した化合物の受動的透過性を、頂端−基底外側（Ａ−Ｂ）方向のＰ−ｇｐ輸送タンパク質を阻害するためにベラパミル（２５μＭ）と共にＣａｃｏ−２細胞単層を使用して評価した。３７℃、５％ＣＯ２恒温器内で実験を行った。Ｃａｃｏ−２培養培地は、標準的な濾過ＤＭＥＭ、ＦＣＳ１０％、Ｌ−グルタミン１％、およびＰｅｎＳｔｒｅｐ１％からなった。基底膜アッセイプレートを、７５０μＬの輸送緩衝液をＡ−Ｂウェルに加えることによって調製した。ＣａｃｏＲｅａｄｙ（商標）プレートを、頂端ウェルからＣａｃｏ−２培地を除去して新鮮な輸送培地と置換する（２００μＬにて全部で３回洗浄）ことによって調製した。次いで、ブランク培地（２００μＬ）を、Ａ−Ｂウェルのために希釈化合物と置換した。インキュベーションを開始するために、基底プレートを恒温器から取り出し、その上に頂端部を加えた。時間ゼロ（ｔ０）のために、頂端区分および基底区分からサンプル（４０μＬ）を回収した。１２０分後（ｔ１２０）に頂端区分および基底区分からサンプルを再度回収した。全サンプルを希釈し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる生物分析のために調製した。ｃｍ／秒で示す透過係数（Ｋｐ、Ａ−Ｂ方向の平均＋ベラパミルの見かけ上の透過）を、ｄＱ（ｆｌｕｘ）／（ｄｔ×領域×濃度）として計算した。
【０２６４】
このアッセイにおいて、約５×１０−６ｃｍ／秒未満のＫｐ値を有する化合物を、低い透過性を有するとみなす。約２０×１０−６ｃｍ／秒より高いＫｐ値を有する化合物を、高い透過性を有するとみなす。
【０２６５】
アッセイ１７：  ヒト肝ミクロソームアッセイ
このアッセイの目的は、インビトロヒト肝臓サブフラクションにおける試験化合物の代謝安定性を評価することであった。Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ−ＩＶＴ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ）から得たヒト肝ミクロソームを氷上で解凍し、そして０．１Ｍのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）で希釈して、０．１ｍｇ／ｍＬの最終インキュベーションタンパク質濃度を得た。試験化合物（１０ｍＭ）をＮＡＤＰＨ補因子に希釈して、０．１μＭの試験化合物および１ｍＭのＮＡＤＰＨの最終インキュベーション濃度を得た。インキュベーションを３７℃の温度で実施し、そして試験アリコートを、０分、５分、８分、１５分、３０分および４５分の時点で採取した。各アリコートを、３％のギ酸および１μＭの内部標準を含む水中でクラッシュした。得られたサンプルを、分析のためにＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムに注入した。
【０２６６】
各インキュベーションについて、ｔ０のそれぞれのアリコート中の分析物のピーク面積を１００％に設定し、そしてその後の時点のアリコートからのピーク面積を、ｔ０に対して残っている親化合物の百分率に変換した。残っている親化合物の百分率を自然対数スケールに変換し、そして分を単位とする時間に対してプロットした。線形回帰分析を、親の消失プロフィールの最初の下り勾配について行い、そしてベストフィット直線の式を決定した。得られた直線の傾きをｍｇ／ｍＬタンパク質でのタンパク質濃度に対して、または細胞数／ｍＬに対して標準化し、そしてＣＬｉｎｔを、肝ミクロソームについて下記のように計算した：
ＣＬｉｎｔ（μＬ・ｍｉｎ−１・ｍｇ−１）＝（傾き×１０００）／［タンパク質、ｍｇ／ｍＬ］
【０２６７】
０〜８μｌ／分／ｍｇのＣＬｉｎｔ値は、低いクリアランス（すなわち、ヒトにおける３０％未満の肝臓血流）を表す。９〜４９μｌ／分／ｍｇのＣＬｉｎｔ値は、中程度のクリアランス（すなわち、ヒトにおける３０〜７０％の肝臓血流）を表し、そして５０μｌ／分／ｍｇより高いＣＬｉｎｔ値は、高い肝臓クリアランス（すなわち、ヒトにおける７０％より高い肝臓血流）を表す。
【０２６８】
化合物（Ｉ）および比較化合物の特徴付け
【表１３】
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比較化合物Ｃ−１およびＣ−２は、出願人により、２０１７年の４月、６月および８月になされた提出物において、会議で開示された。
【０２６９】
化合物（Ｉ）は、Ｃ−１およびＣ−２よりかなり高い透過性（Ｃａｃｏｖｅｒａｐ値）およびヒト肝ミクロソームクリアランス（ＨＬＭ  Ｃｌｉｎｔ値）により特徴付けられる。より高いクリアランスは、迅速な全身クリアランスを促進し、そして全身曝露（これは副作用に関連し得る）を防止するために有益である。より高い透過性は、皮膚におけるより良好な浸透を提供するようであるので、皮膚の適応症のために有益である。
【０２７０】
本発明について、その具体的な局面または実施形態を参照して記述してきたが、本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の変更が為され得るまたは同等物で代用され得ることが、当業者には理解されるであろう。加えて、適用される特許法および規制によって許可される程度まで、本明細書において引用されているすべての刊行物、特許および特許出願は、各文書が参照により本明細書に個々に組み込まれたのと同程度まで、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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