(57)【要約】  一実施形態では、本発明は、アロエ・バルバデンシス（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（漢防已：Ｃ４）、オウバク（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（地楡：Ｅ５）、プーアル茶（普▲ある▼：ＰＥ）及びザクロ（石榴：ＰＧ）並びにそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの薬草の水抽出物又はエタノール抽出物を含む組成物を対象とする。その組成物は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）の活動過多を原因の一部とする又はその活動過多により悪化される病態若しくは病状を、アンドロゲン受容体タンパク質を阻害することによって治療、阻害、予防、発生率の低減、改善又は解消する方法において、患者に有効量で投与される。これらの組成物は、必要とする対象における脱毛若しくは発毛を阻害する又は安定させるためにも使用されることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アロエ・バルバデンシス（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（漢防已：Ｃ４）、オウバク（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（地楡：Ｅ５）、プーアル茶（普▲ある▼：ＰＥ）及びザクロ（石榴：ＰＧ）並びにそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの薬草及び／又は少なくとも１つの抽出物を含む組成物。
【請求項２】
前記抽出物は、少なくとも１つの前記薬草を有効量の沸騰水及び／又は水性エタノールに曝すことによって調製される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記水性エタノールは、体積で少なくとも約５０％の水を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記水性エタノールは、体積で少なくとも約５０％のエタノールを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記抽出物は半液状である、請求項１から４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記抽出物は固形である、請求項１から４のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
食品補助剤において使用されるか、アジュバントとして使用されるか、又は治療薬として使用される、請求項１から６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
請求項１から７のいずれかに記載の抽出物を、薬学的に許容可能な担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わせて含む組成物。
【請求項９】
少なくとも２つの薬草の抽出物を含む、請求項１から８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
少なくとも３つの薬草の抽出物を含む、請求項１から９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
少なくとも４つの薬草の抽出物を含む、請求項１から１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
少なくとも５つの薬草の抽出物を含む、請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
少なくとも６つの薬草の抽出物を含む、請求項１から１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
少なくとも７つの薬草の抽出物を含む、請求項１から１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
少なくとも８つの薬草の抽出物を含む、請求項１から１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
少なくとも９つの薬草の抽出物を含む、請求項１から１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
少なくとも１０の薬草の抽出物を含む、請求項１から１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
少なくとも１１の薬草の抽出物を含む、請求項１から１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
アロエエモジン、エモジン、クリソファノール、レイン、センノシド−Ａ、センノシド−Ｃ、センノシド−Ｄ、没食子酸、エピガロカテキン、ガロカテキン、ケルセチン、ケンフェロール、没食子酸エピガロカテキン、プーアル茶（ＰＥ１）のポリフェノール画分、及びそれらの混合物からなる群から選択される有効量の少なくとも１つの化合物を、薬学的に許容可能な担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わせて含む組成物。
【請求項２０】
前記化合物は、アロエエモジン、没食子酸、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、ガロカテキン（ＧＣ）、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、ケルセチン、ケンフェロール、プーアル茶のポリフェノール画分、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
請求項１から１８のいずれかに記載された少なくとも１つの薬草又は薬草抽出物と請求項１９に記載された少なくとも１つの化合物との有効量を、薬学的に許容可能な担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わせて含む組成物。
【請求項２２】
請求項１から１８のいずれかに記載された少なくとも１つの薬草又は薬草抽出物と請求項２０に記載された少なくとも１つの化合物との有効量を、薬学的に許容可能な担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わせて含む組成物。
【請求項２３】
少なくとも１種の抗アンドロゲン化合物を更に含む、請求項１から２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
少なくとも１種のＧｎＲＨモジュレータを更に含む、請求項１から２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
フルタミド、ビカルタミド、ニルタミド、酢酸シプロテロン、ケトコナゾール、アミノグルテチミド、アバレリックス、ロイプロリド、ゴセレリン、トリプトレリン、ブセレリン、酢酸アビラテロン、ソラフェニブ及びそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの化学物質を更に含む、請求項１から２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
前立腺肥大用薬剤、エウレキシン、フルタミド、ゴセレリン、ロイプロリド、ルプロン、ニランドロン、ニルタミド、ゾラデックス及びそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの化学物質を更に含む、請求項１から２２、２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
経口剤形である、請求項１から２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
局所投与剤形である、請求項１から２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
アンドロゲン受容体（ＡＲ）の活動過多を原因の一部とする又は前記活動過多により悪化される病態若しくは病状を、前記活動過多を阻害することによって治療、阻害、予防、発生率の低減、改善及び／又は解消する方法であって、有効量の請求項１から２８のいずれかに記載の組成物を患者に投与することを含む、方法。
【請求項３０】
前記病態若しくは病状は、前立腺肥大症、肝細胞癌、脱毛及び／又は発毛、高レベルのＤＨＴによって引き起こされる男性／女性型脱毛症（アンドロゲン性脱毛症）、座瘡、脂漏症、多毛症、化膿性汗腺炎、性的倒錯、少年での思春期早発症、並びに女性の多嚢胞性卵巣症候群からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記病態若しくは病状は前立腺癌である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記病態若しくは病状は薬剤耐性前立腺癌である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記前立腺癌は、アンドロゲン受容体スプライス変異体（ＡＲ−Ｖ）に関連する薬剤耐性癌である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記前立腺癌は、ビカルタミド及び／又はエンザルタミド耐性前立腺癌である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記前立腺癌は去勢抵抗性前立腺癌である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記病態若しくは病状は、脱毛及び／又は発毛である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３７】
前記病態若しくは病状は、高レベルのＤＨＴによって引き起こされる男性／女性型脱毛症（アンドロゲン性脱毛症）である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３８】
前記病態若しくは病状は、座瘡又は脂漏症である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３９】
前記病態若しくは病状は、多毛症、化膿性汗腺炎、性的倒錯、少年での思春期早発症、又は女性の多嚢胞性卵巣症候群である、請求項２９に記載の方法。
【請求項４０】
前記病態若しくは病状は肝細胞癌である、請求項２９に記載の方法。
【請求項４１】
必要とする対象における脱毛若しくは発毛を阻害する又は安定させる方法であって、有効量の請求項１から２６のいずれかに記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項４２】
必要とする対象における過度な発毛を阻害する方法であって、有効量の請求項１から２６のいずれかに記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
本出願は、本出願と同一名称である２０１７年１０月１９日出願の米国仮特許出願第６２／５７４，４４０号の優先権の利益を主張するものであり、参照によりその仮特許出願の全内容が本出願に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、アンドロゲン受容体を阻害することが分かり、アンドロゲン受容体の活動過多によってもたらされる病態及び病状の治療に有用である、特定の薬草及びその抽出物に関する。これらの薬草及び／又はその薬草から得られる抽出物をベースとした医薬組成物は、本発明の更なる態様を示す。本明細書中の他の箇所で開示されているようなアンドロゲン受容体の活動過多の結果である多様な病態を治療する方法は、本発明の更なる態様を示す。
【背景技術】
【０００３】
前立腺は、男性生殖系の腺である。ほとんどの前立腺癌はゆっくりと成長するが、より急速に成長することもある。癌細胞は前立腺から身体の他の部分、特に骨及びリンパ節へと広がる場合がある。前立腺癌は、初めは症状を示さないことがある。成長の後期に発生する症状としては、排尿困難、血尿、又は骨盤、背中若しくは排尿時の痛みなどである。他の後期症状としては、赤血球レベルの低下による疲労などである。
【０００４】
単一の遺伝子が前立腺癌の原因であるとは考えられておらず、多くの異なる遺伝子が関与している。女性における卵巣癌及び乳癌の重大な危険因子であるＢＲＣＡ１及びＢＲＣＡ２の突然変異はまた、前立腺癌にも関与している。他の関連遺伝子としては、遺伝性前立腺癌遺伝子１（ＨＰＣ１）、アンドロゲン受容体、及びビタミンＤ受容体などである。ＴＭＰＲＳＳ２−ＥＴＳ遺伝子ファミリー融合、具体的にはＴＭＰＲＳＳ２−ＥＲＧ又はＴＭＰＲＳＳ２−ＥＴＶ１／４が、癌細胞の成長を促進させる。
【０００５】
前立腺は、適切に機能するために、アンドロゲンとして知られる男性ホルモンを必要とする。アンドロゲンは、精巣で作られるテストステロン、副腎で作られるデヒドロエピアンドロステロン、及び前立腺内でテストステロンから変換されるジヒドロテストステロンを含む。アンドロゲンは、顔面の体毛や筋肉量の増大などの第二次性徴に関与している。ＮＲ３Ｃ４（核受容体サブファミリー３、グループＣ、メンバー４）としても知られるアンドロゲン受容体（ＡＲ）は核受容体の一種であり、細胞質内の男性ホルモン、テストステロン又はジヒドロテストステロンのいずれかと結合して核内へ移行することによって活性化される。アンドロゲン受容体の主な機能は、遺伝子発現を調節するＤＮＡ結合転写因子としての機能であるが、アンドロゲン受容体は他の機能も有する。アンドロゲン受容体は前立腺癌細胞の生存を助け、その阻害は多くの抗癌研究の標的である。これまでのところ、ヒトのアンドロゲン受容体の阻害に有効な組成物は見つかっていない。
【０００６】
前立腺癌、脱毛症、肝細胞癌、及び尋常性座瘡は、アンドロゲン受容体シグナル伝達に関連する無数の疾患の一部の例である。これらの疾患は、人間の健康に重大な影響をもたらす。例えば、米国癌協会は２００９年に、前立腺癌による死者は２７，３６０人となり、１９２，２８０件の新たな患者が診断されると推定している。実際に、６人に１人の男性が一生の間に前立腺癌に罹患し、３５人に１人がこの疾患によって死亡する。アンドロゲン受容体阻害剤は、アンドロゲン関連疾患の主要な治療選択肢である。現在の阻害剤は、アンドロゲン受容体に対するリガンドの結合を阻害するが、これらの治療は、獲得耐性及び重篤な副作用をもたらし得る。現在の治療選択肢のそのような限界により、別の抗アンドロゲン療法が緊急に必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、人間による使用の長い歴史を有する特定の薬草がアンドロゲン受容体を阻害できる可能性があることを認める。それらの薬草を、単独で若しくは他のものと組み合わせて、又はアンドロゲン受容体の阻害のための活性化学物質の単離のための手がかりとして使用することができる。それらの薬草は、癌、特に前立腺肥大症又は前立腺癌の予防、及びアンドロゲン受容体の活動過多を原因とする他の疾患の予防に有用である可能性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
この可能性に取り組むために、本発明者らは、一次ルシフェラーゼレポータアッセイ及び他の酵素反応を用いて、２５のシグナル伝達経路に亘り、２５０を超える調剤で薬草の水抽出物の効果を研究した。１１種の薬草がアンドロゲン受容体阻害性を示した。
【０００９】
従って本発明は、アロエ・バルバデンシス（Aloe barbadensis）（アロエベラ（Aloe vbera））（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（Rheum palmatum L.）（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、オウバク（Phellodendron chinense Schneid.）（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（Apocynum venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）、プーアル茶（Camellia sinensis var.assamica（Mast.）Kitamura／Chang）（普▲ある▼：ＰＥ）、ザクロ（Punica granatum.）（石榴：ＰＧ）からなる１１種の薬草の群から得られる抽出物、並びにそれらの混合物（上述の薬草及び／又はその抽出物のうちの２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、及び１１種の混合物を含む）に関する。これらの薬草はアンドロゲン受容体の阻害剤であり、従って医薬組成物又は栄養補助剤において、アンドロゲン受容体活動過多に起因する多くの病態若しくは病状のいずれの治療、阻害、予防、発生率の低減、改善及び／又は解消にも有効である。これらの病態及び／若しくは病状としては、例えば、前立腺肥大症；去勢抵抗性前立腺癌、薬剤耐性前立腺癌（ＡＲ−Ｖ（アンドロゲン受容体スプライス変異体）に関連する薬剤耐性癌を含む）、ビカルタミド及び／又はエンザルタミド耐性前立腺癌を特に含む前立腺癌；肝細胞癌；脱毛並びに／又は特に頭皮及び発毛が望ましい身体の他の部分での発毛；高レベルのＤＨＴによって引き起こされる男性／女性型脱毛症（アンドロゲン性脱毛症）；座瘡；脂漏症；多毛症（過剰な体毛）；化膿性汗腺炎；性的倒錯；少年での思春期早発症；並びに女性の多嚢胞性卵巣症候群が特に挙げられる。
【００１０】
本発明による１つ以上の上記薬草及び／又は抽出物、好ましくは水性（水、若しくは水と少なくとも１つのＣ１−Ｃ３アルコールとの混合物）又はＣ１−Ｃ３アルコール（好ましくはメタノール若しくはエタノール、より好ましくはエタノール）抽出物などの溶媒抽出物を、例えば前立腺肥大症、前立腺癌、及びアンドロゲン受容体の活動過多によって引き起こされる他の疾患を含む、多くの病態若しくは病状の治療、阻害、予防、発生率の低減、改善及び／又は解消のために、単独で、又は薬学的に許容可能な担体、添加剤、若しくは賦形剤と組み合わせて使用することができる。特定の実施形態では、その組成物は、脱毛の軽減、並びに／又は特に頭皮及び発毛が望ましい身体の他の部分での発毛をもたらすことができる。特定の実施形態では、その組成物は、去勢抵抗性前立腺癌、薬剤耐性前立腺癌（ＡＲ−Ｖ（アンドロゲン受容体スプライス変異体）に関連する薬剤耐性癌を含む）及び／又はアンドロゲン受容体の過剰発現を治療するために使用されることができる。ある実施形態では、その組成物は、ビカルタミド及び／又はエンザルタミド耐性前立腺癌、並びに肝細胞癌を治療するために使用されることができる。更なる実施形態では、その組成物は、前立腺肥大症、高レベルのＤＨＴによって引き起こされる男性／女性型脱毛症（アンドロゲン性脱毛症）、座瘡、脂漏症、多毛症（過剰な体毛）、化膿性汗腺炎、性的倒錯、少年での思春期早発症、及び女性の多嚢胞性卵巣症候群を治療するために使用されることができる。
【００１１】
本発明はまた、アロエエモジン、エモジン、クリソファノール、レイン、センノシド−Ａ、センノシド−Ｃ、センノシド−Ｄ、没食子酸、エピガロカテキン、ガロカテキン、ケルセチン、ケンフェロール、没食子酸エピガロカテキン、プーアル茶（Camellia assamica）（ＰＥ１）のポリフェノール画分、及びそれらの混合物、好ましくはアロエエモジン、没食子酸、エピガロカテキン、ガロカテキン、没食子酸エピガロカテキン、ケルセチン、ケンフェロール、及びプーアル茶（Camellia assamica）（ＰＥ１）のポリフェノール画分、及びそれらの混合物からなる群の化合物を、例えば前立腺肥大症、前立腺癌、及びアンドロゲン受容体の活動過多／過活動によって引き起こされる他の疾患を含む、多くの病態若しくは病状の治療、阻害、予防、発生率の低減、改善及び／又は解消のために、単独で、又は薬学的に許容可能な担体、添加剤、若しくは賦形剤と組み合わせて使用することができるという発見に関する。特定の実施形態では、上記化合物又は複数のその化合物の混合物を、脱毛の軽減並びに／又は特に頭皮及び発毛が望ましい身体の他の部分での発毛に使用することができる。特定の実施形態では、上記化合物又は複数のその化合物の混合物は、去勢抵抗性前立腺癌、薬剤耐性前立腺癌（ＡＲ−Ｖ（アンドロゲン受容体スプライス変異体）に関連する薬剤耐性癌を含む）及び／又はアンドロゲン受容体の過剰発現の治療、阻害、発生率若しくは可能性の低減、改善及び／又は解消のために使用されることができる。ある実施形態では、上記化合物又は複数のその化合物の混合物は、エンザルタミド耐性前立腺癌及び／又は肝細胞癌を治療するために使用されることができる。更なる実施形態では、上記化合物又は複数のその化合物の混合物は、前立腺肥大症、高レベルのＤＨＴによって引き起こされる男性／女性型脱毛症（アンドロゲン性脱毛症）、座瘡、脂漏症、多毛症（過剰な体毛）、化膿性汗腺炎、性的倒錯、少年での思春期早発症、及び女性の多嚢胞性卵巣症候群を治療するために使用されることができる。当然のことながら、これらの化合物が示す生物学的効果のために、これらの化合物のうちの１つ以上を含有する薬草を、これらの化合物の代わりに使用してもよい。
【００１２】
上述の薬草及び／又はその抽出物は、単独で、又はアロエエモジン、没食子酸、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、ガロカテキン（ＧＣ）、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、ケルセチン、及びケンフェロールからなる群から選択される少なくとも１つの追加の化合物と更に組み合わせて使用されてもよい。これらの化学物質のそれぞれ又はこれらの化合物を含有する薬草のそれぞれが、本明細書で開示されている病態若しくは病状のうちの１つ以上の治療のために、単独で又は互いに組み合わせて使用されてもよい。
【００１３】
上記で列挙されたこれらの薬草及び／又は化合物は、ビカルタミド及びエンザルタミドに対する耐性を有する２２ＲＶ１の成長を阻害することができるため、これらの薬草及び／又は化合物を、ビカルタミド及び／又はエンザルタミド耐性前立腺癌を標的とするために発展させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１Ａ〜Ｉは、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）が存在する条件下での、２２ＲＶ１のＡＲ−ルシフェラーゼレポータ細胞のアンドロゲン受容体介在性の転写活性に対する、選択された薬草の水抽出物の影響を示すグラフである。選択された薬草抽出物は、次の９種であった。アロエ・バルバデンシス（Aloe barbadensis）（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（Rheum palmatum L.）（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、オウバク（Phellodendron chinense Schneid.）（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）。
【図２】ＤＨＴが存在する条件下での、２２ＲＶ１のＡＲ−ルシフェラーゼレポータ細胞のアンドロゲン受容体介在性の転写活性に対する、ＰＥ茶（プーアル茶）水の異なる複数のバッチの影響を示す。
【図３】図３Ａ〜Ｄは、ＤＨＴ有無の条件下での、２２ＲＶ１のアンドロゲン受容体標的遺伝子であるカリクレイン／ＫＬＫ（Ａ、Ｃ）及び前立腺特異抗原／ＰＳＡ（Ｂ、Ｄ）のｍＲＮＡ発現に対する、以下の薬草の水抽出物の影響を示すグラフである。ｑＲＴ−ＰＣＲを用いて相対ｍＲＮＡ発現を明らかにし、ここではβアクチンを内部対照として使用した。アロエベラ（Aloe vbera）（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（Rheum palmatum L.）（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、オウバク（Phellodendron chinense Schneid.）（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）、プーアル茶（Camellia assamica（Mast）Chang）（普▲ある▼茶：ＰＥ）。図３Ｅ及び３Ｆでは、プーアル茶の即時溶解粉末（ＰＥ−Ｐ）を用いて調製した水抽出物と、プーアル茶の生の茶材を用いて調製した水抽出物とを、２２ＲＶ１細胞のＫＬＫ及びＰＳＡのｍＲＮＡ発現に対する影響に関して比較した。
【図４】図４Ａは、ＤＨＴ有無の条件下での、２２ＲＶ１のアンドロゲン受容体タンパク質発現に対する以下の薬草の水抽出物の影響を示す。ウサギモノクローナル抗体を用いて、２４時間の処置後のアンドロゲン受容体タンパク質発現を検出した。βアクチンをローディングコントロールとして用いた。アロエベラ（Aloe vbera）（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（Rheum palmatum L.）（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、オウバク（Phellodendron chinense Schneid.）（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）、プーアル茶（Camellia assamica（Mast）Chang）（普▲ある▼茶：ＰＥ）。図４Ｂでは、プーアル茶の即時溶解粉末（ＰＥ−Ｐ）を用いて調製した水抽出物と、プーアル茶の生の茶材を用いて調製した水抽出物とを、２２ＲＶ１細胞のＡＲタンパク質発現に対する影響に関して比較した。
【図５】図５Ａ及びＢは、ＤＨＴが存在しない条件下（Ａ、Ｃ）及び存在する条件下（Ｂ、Ｃ）での、２２ＲＶ１のアンドロゲン受容体のｍＲＮＡ発現に対する以下の薬草の水抽出物の影響を示す。ｑＲＴ−ＰＣＲを用いて、ＡＲのｍＲＮＡ発現を定量化した。βアクチンを正規化のために用いた。アロエベラ（Aloe vbera）（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（Rheum palmatum L.）（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、オウバク（Phellodendron chinense Schneid.）（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）、プーアル茶（Camellia assamica（Mast）Chang）（普▲ある▼茶：ＰＥ）。図５Ｃでは、プーアル茶の即時溶解粉末（ＰＥ−Ｐ）を用いて調製した水抽出物と、プーアル茶の生の茶材を用いて調製した水抽出物とを、２２ＲＶ１細胞のＡＲのｍＲＮＡ発現に対する影響に関して比較した。
【図６】ＡＲタンパク質と（アンドロゲン結合部位を有する）ＤＮＡとの間の相互作用に対する、以下の薬草の水抽出物の影響を示す。（アンドロゲン結合部位を有する）ビオチン標識ＤＮＡである５’−ｇｔａａｔｔｇｃＡＧＡＡＣＡｇｃａＡＧＴＧＣＴａｇｃｔｃｔｃ−３’及び核溶解物を（２５ｎＭのＤＨＴで一晩予備刺激した２２ＲＶ１細胞から抽出した）アンドロゲン受容体タンパク質と混合することにより、アンドロゲン受容体−ＤＮＡ相互作用プルダウンアッセイを実施した。ストレプトアビジンダイナビーズを用いて、磁気的状況下でＤＮＡ−ＡＲ複合体を捕集した。ウェスタンブロッティングを用いて、プルダウンされたＡＲタンパク質の量を検出した。ＤＮＡとアンドロゲン受容体の間の結合の阻害は、ＡＲタンパク質のプルダウンの量を減少させる。アロエベラ（Aloe vbera）（蘆薈：Ｆ３）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）、プーアル茶（Camellia assamica（Mast）Chang）（普▲ある▼茶：ＰＥ）。図６Ａの表１は、ＡＲシグナル伝達経路に対する次の薬草の考えられる標的を示す。アロエベラ（Aloe vbera）（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（Rheum palmatum L.）（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、オウバク（Phellodendron chinense Schneid.）（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）。図６Ｂの表２は、ＤＨＴを伴った２２ＲＶ１細胞及びＤｕ１４５細胞に対する次の薬草の水抽出物の細胞毒性を示す。アロエベラ（Aloe vbera）（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（Rheum palmatum L.）（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、オウバク（Phellodendron chinense Schneid.）（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）、プーアル茶（Camellia assamica（Mast）Chang）（普▲ある▼茶：ＰＥ）、ザクロ（Punica granatum）水抽出物（石榴：ＰＧ）。
【図７】図７Ａ〜Ｌは、生体内でのＤＵ１４５及び２２ＲＶ１の異種移植片の成長に対する、以下の薬草の水抽出物の影響を示すグラフである。異種移植片の成長に対する有意な阻害を示す曲線を＊で表示した（Ｐ＜０．０５）。アロエ・バルバデンシス（Aloe barbadensis）（蘆薈：Ｆ３）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）。
【図８】図８Ａ〜Ｈは、ヌードマウスにおけるＬＮＣａＰ異種移植片（Ａ〜Ｃ）及びＤｕ１４５（Ｄ〜Ｆ）の成長に対する、Ｓ６、Ｆ５、ＰＥ１水抽出物、及びエンザルタミドの影響を示す。１４日目のｔ検定における異種移植片の成長に対する有意な阻害を＊で表示した（Ｐ＜０．０５）。（Ｇ、Ｈ）は、ＬＮＣａＰ腫瘍のＫＬＫ２及びＰＳＡのｍＲＮＡに対する異なる複数の処置の影響であり、有意な阻害を＊で表示した（Ｐ＜０．０５）。
【図９】分取ＨＰＬＣから得られたＦ３の画分の阻害活性を示す。Ａ：全ての画分について５００μｇ／ｍｌ（Ｆ３の水での粗抽出物と同じ用量）を使用したルシフェラーゼレポータアッセイを用いて分取ＨＰＬＣから得られたＦ３の画分の阻害活性。Ｂ：異なる用量の画分３１及び３２を、ルシフェラーゼレポータアッセイを用いてＡＲ阻害活性について試験した。
【図１０】分取ＨＰＬＣを用いてのＦ３の分画からの画分３１及び３２についてのＬＣ−ＭＳを示す。挿入図は、ルシフェラーゼレポータアッセイを用いてのＦ３の水での粗抽出物と、同量のアロエエモジンとの比較を示す。
【図１１】ルシフェラーゼレポータアッセイを用いてのＡＲの活性に対するアロエエモジン誘導体の影響を示す。
【図１２】固相抽出Ｃ１８カラムからのＳ６水抽出物の水溶出物及び１０％エタノール溶出物（Ｅ１０％）についてのＬＣ−ＭＳを示す。挿入図は、ルシフェラーゼレポータアッセイを用いて、水溶出物及び１０％エタノール溶出物（Ｅ１０％）が、他の溶出物よりもＡＲに対して相対的に強い阻害効果を有していたことを示す。
【図１３】図１３Ａ〜Ｆは、ＡＲ活性に対する没食子酸の影響を示す。（Ａ）は、ルシフェラーゼレポータアッセイを用いて、Ｓ６の水での粗抽出物と、同量の没食子酸とを比較した。（Ｂ、Ｃ、Ｄ）は、ＤＨＴ有無の条件下での、２２ＲＶ１細胞のＫＬＫ２、ＰＳＡ、及びＡＲのｍＲＮＡ発現に対する没食子酸の影響を示す。（Ｅ、Ｆ）は、ヌードマウスの２２ＲＶ１腫瘍及びＤｕ１４５腫瘍に対する没食子酸の抗腫瘍効果を示す。
【図１４】（Ａ）は、ルシフェラーゼレポータアッセイを用いて、ＡＲ活性に対するＦ１（ラフマ）及び中国産の羅布麻（ＬＢＭ）茶の影響を示す。（Ｂ、Ｃ）は、ｑＰＣＲアッセイを用いて、ＫＬＫ２及びＰＳＡのｍＲＮＡ発現に対するＦ１（ラフマ）及び中国産の羅布麻（ＬＢＭ）茶の影響を示す。
【図１５】図１５Ａ〜Ｃは、固相抽出カラムを用いてのＦ１の画分の抗ＡＲ活性と、活性化学物質のリストを示す。（Ａ）固相抽出Ｃ１８カラムを用いてのＦ１水抽出物の画分の抗ＡＲ活性を示す。Ｆ１の水抽出物をＣ１８カラムに通した後、異なる濃度のエタノールで溶出させた。ルシフェラーゼレポータアッセイを用いて、Ｆ１の画分（Ｆ１の水での粗抽出物に等しい量の１ｍｇ／ｍｌ）をその抗ＡＲ活性について試験した。（Ｂ）Ｆ１の異なる画分で検出可能な化学物質の抗ＡＲ活性を示す。（Ｃ）ルシフェラーゼレポータアッセイを用いてのＡＲ活性に対するＦ１の異なる精製化合物の用量応答を示す。
【図１６】（Ａ）は、２２ＲＶ１ルシフェラーゼレポータ細胞アッセイを用いて、Gaoligongshan co.ltdから入手したポリフェノール（ＰＰ）（ＰＥからの抽出物）が抗アンドロゲン受容体を示したことを示す。（Ｂ、Ｃ）は、ＰＥ１又はＰＰ（ポリフェノール画分）の異なる複数の画分の抗ＡＲ活性を示す。
【図１７】Ｆ１及びＰＰ（ポリフェノール）の３０％エタノール溶出物のＬＣ−ＭＳプロファイルを示す。
【図１８】ルシフェラーゼレポータアッセイを用いて明らかにされた、ＡＲ活性に対するエピカテキン、カテキン、ガロカテキン（ＧＣ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、及び没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）の影響を示す。
【図１９】低分子量スキャン設定を用いたＰＥ中の没食子酸を明らかにするためのＬＣ−ＭＳプロファイルを示す。
【図２０】画分９が分取ＨＰＬＣ画分で最も強い抗アンドロゲン受容体活性を示したことを示す。
【図２１】分取ＨＰＬＣ画分での画分９が、没食子酸を含有することを示す。挿入図は、２２ＲＶ１細胞中のアンドロゲン受容体でのＤＨＴ置換の没食子酸活性を示す。
【図２２】ＤＨＴの有無での２２ＲＶ１細胞及びＤｕ１４５細胞に関する、特定の薬草抽出物（Ｆ１、ＬＢＭ茶、及びＬＢＭ混合茶の試料）の細胞毒性を示す。
【図２３】２２ＲＶ１ルシフェラーゼレポータ細胞アッセイにおける異なる複数の茶の抗アンドロゲン活性を示す。ＰＥ−ＰはYunnan taslydee pure biological tea group co.ltd.社製であり、ＰＥ−１、ＰＥ−２、ＰＥ−ＢはGaoligongshan co.ltd.から入手した。各試料は抗アンドロゲン受容体活性を示したが、示した効力にはわずかな差異があった。
【図２４】ＨＰＬＣを用いて単離したＰＥ１抽出物の成分の相対ルシフェラーゼ活性を示す。
【図２５】等級１のＰＥ茶についての分取ＨＰＬＣからのＬＣ−ＭＳを示し、また画分１３が５−ガロイルキナ酸に対応し、その画分中の活性成分であったことを示す。
【図２６】等級１のＰＥ茶についての分取ＨＰＬＣからのＬＣ−ＭＳを示し、また画分２１が１−ガロイルβグルコースに対応し、その画分中の活性成分であったことを示す。
【図２７】等級１のＰＥ茶についての分取ＨＰＬＣからのＬＣ−ＭＳを示し、また画分３２が没食子酸エピカテキン（ＥＣＧ）に対応し、その画分中の活性成分であったことを示す。
【図２８】等級１のＰＥ茶についての分取ＨＰＬＣからのＬＣ−ＭＳを示し、また画分３３が没食子酸エピカテキン（ＥＣＧ）に対応し、その画分中の活性成分であったことを示す。
【図２９】等級１のＰＥ茶についての分取ＨＰＬＣからのＬＣ−ＭＳを示し、また画分４２が没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）に対応し、その画分中の活性成分であったことを示す。
【図３０】多くの細胞株（一番上の行）における、本発明の様々な薬草（左の列）の細胞毒性を示す。
【図３１】図３１Ａ〜Ｅは、２２ＲＶ１細胞のアンドロゲン受容体活性に対する、ピューニカ・グラネイタム（Punica granatum）（ＰＧ、又は一般的な名称でザクロ）水抽出物の影響を示す。（Ａ）ＰＧ水抽出物は、ルシフェラーゼレポータアッセイにおいて、２２ＲＶ１細胞のＡＲ介在性の転写に対する阻害効果を示した。（Ｂ及びＣ）ＰＧ水抽出物は、ｑＲＴ−ＰＣＲアッセイにおいて、ＤＨＴ有無の条件下で２２ＲＶ１のＰＳＡ及びＫＬＫ２のｍＲＮＡ発現を阻害した。（Ｄ）ＰＧ水抽出物は、ウェスタンブロットアッセイにおいて、２２ＲＶ１細胞のＡＲ及びＡＲ−Ｖタンパク質を阻害した。（Ｅ）ＰＧ水抽出物は、ｑＲＴ−ＰＣＲアッセイにおいて、２２ＲＶ１のＡＲのｍＲＮＡを下方制御した。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下の定義が本発明を説明するために使用される。ある用語が具体的に定義されていない場合には、使用される定義は、その用語が使用されている文脈において当業者がその用語を定義するために使用するであろうものである。
【００１６】
用語「患者」又は「対象」は、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ又は他の同様の家畜動物などの家畜動物を含む動物、特に本発明の医学的処置、ケア、又は治療を受ける、それを必要とする人間の患者を記載するために使用される。
【００１７】
用語「有効」は、所望の効果に合った量で意図した効果をもたらすために使用される成分、抽出物、材料、又は溶媒の量を記載するために使用され、所望の効果又は生じる効果に応じて変わり得る。
【００１８】
用語「抽出物」は、アロエ・バルバデンシス（Aloe barbadensis）（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（Rheum palmatum L.）（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、オウバク（Phellodendron chinense Schneid.）（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、及びワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）、Camellia sinensis var.assamica（Mast.）Kitamura（普▲ある▼：ＰＥ）、ザクロ（Punica granatum.）（石榴：ＰＧ）、及びそれらの混合物からなる群から選択される１つ以上の薬草の水性又はＣ１−Ｃ３アルコール（好ましくメタノール若しくはエタノール）抽出物（２、３、４、５、６、７、８又は９種の薬草からの抽出物の混合物を含む）を記載するために使用される。
【００１９】
本発明の抽出物は、上述の薬草のうちの１つ以上を、有効量の溶媒、好ましくは水性又はＣ１−Ｃ３アルコール（好ましくはエタノール）溶媒に曝すことによって調製され、その溶媒は好ましくは、上記薬草の医薬成分をその溶媒中に抽出するのに効果的な期間に亘って（数分から数時間、数日以上の期間に亘って）加熱（沸騰を含む）される。溶媒の抽出物は、当該技術分野で容易に利用可能な標準的な方法を用いて調製されることができ、その方法は、本明細書の他の箇所に記載されているような好ましい調製方法を含んでもよい。
【００２０】
用語「水性」は、いずれかの量の水を含む溶媒を記載するために使用される。好ましくは、抽出物は、水又は水／アルコール、好ましくは水／エタノールを用いて提供される。抽出物の提供に使用される水性溶媒は、好ましくはこの混合物中に体積で少なくとも約５０％の水を含み、多くの場合に水及び別のアルコール（特にエタノール、イソプロパノール又はメタノールなど）を含む。好ましい態様では、溶媒は加熱される（好ましくは沸騰される）。水、又は水／エタノール混合物を使用することが好ましい。なお、本発明による抽出物を提供するために他の溶媒（「抽出溶媒」）を用いてもよいが、水性アルコール、特に水性エタノール（好ましくは少なくとも約５％から最大約９５％以上の水を含む）の使用が好ましい。水、エタノール、イソプロパノール、メタノール、プロパノール、及びブタノール、並びにそれらの混合物が、本発明による抽出物を提供するための溶媒として通常は使用される。
【００２１】
用語「メタノール」、「メタノール溶媒」、「エタノール」、又は「エタノール溶媒」は、メタノール又はエタノールを体積で５０％より多く含む溶媒を記載するために使用される。上述のように、用語「メタノール」又は「エタノール」は、本明細書の他の箇所で定義されている用語「水性」と重複する場合がある。
【００２２】
用語「固体抽出物」は、組成物が多量の溶媒を含有するのを避けるために、乾燥、脱水、凍結乾燥、又は他の固体化をされた、本明細書の他の箇所で開示されている１つ以上の薬草の抽出物を記載するために使用される。
【００２３】
用語「アンドロゲン受容体」は、テストステロン、デヒドロエピアンドロステロン、及びジヒドロテストステロンなどのアンドロゲンとして知られる男性ホルモンに結合する、通常は細胞内に生じるタンパク質複合体を記載又は示すために使用される。より具体的には、ＮＲ３Ｃ４（核受容体サブファミリー３、グループＣ、メンバー４）としても知られるアンドロゲン受容体（ＡＲ）は核受容体の一種であり、細胞質内の男性ホルモン、テストステロン又はジヒドロテストステロンのいずれかと結合して核内へ移行することによって活性化される。
【００２４】
アンドロゲン受容体（ＡＲ）の活動過多は、前立腺組織内での発癌、並びに肝細胞癌及び尋常性座瘡を含む他の多くの疾患の重大な因子である。
【００２５】
用語「前立腺癌」は、男性の生殖器官の腺である前立腺において癌が発症する疾患を述べるのに用いられる。これは、前立腺の細胞が変異し制御不能に増殖を開始する時に発生する。これらの細胞は、前立腺からほとんどの身体の他の部分、特に、他の組織の中でも骨若しくはリンパ節、腎、膀胱及び脳でさえも転移する可能性がある（転移性前立腺癌）。前立腺癌は、痛み、排尿の困難性、性行での問題、勃起障害を引き起こすことがある。他の症状は、疾患の末期の間に潜在的に進行進展することがある。
【００２６】
前立腺癌の検出率は、世界中で大きく異なり、南及び東アジアでは、ヨーロッパ、特にアメリカと比較して発見頻度が低い。前立腺癌は、５０歳過ぎの男性で最も頻繁に発症し、男性で最も高頻度に見られる癌の種類の１つである。しかし、前立腺癌を発症する多くの男性は、症状を有さず、治療を受けることなく、最終的に他の原因で死に至る。これは、前立腺の癌は、多くの場合、進行が遅く、病気になった人の多くは、６０歳を越えているためである。したがって、前立腺癌とは無関係な原因でしばしば死亡する。遺伝及び食事などの多くの因子が、前立腺癌の発症に関係している。前立腺癌の存在は、症状、健康診断、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）又は生検により示される場合がある。ＰＳＡ検査の正確性及びスクリーニングにおけるその有用性については、懸念がある。疑いのある前立腺癌は、前立腺の生検を採取し顕微鏡でこれを検査することにより、通常は確認される。ＣＴスキャン及び骨スキャンなどの更なる検査が、前立腺癌が広がっているかどうかを検討するために行われてもよい。
【００２７】
治癒目的での前立腺癌に対する治療の選択肢は、主として外科手術及び放射線療法である。ホルモン療法、化学療法、光子治療、凍結外科手術、高密度焦点式超音波（ＨＩＦＵ）などの他の治療もまた、臨床シナリオ及び所望の結果に応じて存在する。
【００２８】
男性の年齢及び元の健康状態、転移の程度、顕微鏡での外見、及び初期治療に対する癌の反応性は、疾患の転帰を決定するのに重要である。治癒の意図をもって限局性前立腺癌（前立腺内に含まれる腫瘍）を治療するかどうかの決定は、患者の生存及び生活の質の観点における期待される恩恵と弊害との間での患者の妥協による。
【００２９】
前立腺癌を評価する重要な部分は、病期、又は癌が広がっている程度を明らかにすることである。病期を知ることは、予後を定める助けとなり、治療法を選択する際に有用である。最も一般的な分類は、４期のＴＮＭ（腫瘍／節／転移の略称）分類である。この構成要素は、腫瘍の寸法、関与するリンパ節の数、及び他の転移の存在を含む。
【００３０】
いかなる病期分類によってもなされる最も重要な区別は、癌がまだ前立腺内に留まっているか、又は転移しているかである。ＴＮＭ分類では、臨床のＴ１及びＴ２の癌は前立腺のみで見つかり、一方Ｔ３及びＴ４の癌は他の場所に広がっており、他の組織に転移している。いくつかの検査が、広がりの証拠を探すために使われ得る。これらは、骨盤への広がりを評価するコンピュータ断層撮影、骨への広がりを探索する骨スキャン、並びに前立腺被膜及び精嚢を詳しく評価する直腸コイル磁気共鳴影像法を含む。骨スキャンは、転移する多くの他の癌に見られるのとは反対に、骨の転移の領域における増加した骨密度による骨芽細胞の外見をしばしば明らかにする。コンピュータ断層撮影（ＣＴ）及び磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）は、現在、メタ分析による前立腺癌を患う患者でのリンパ節転移の可能性の評価において、重要な情報を何も追加しない。
【００３１】
前立腺癌は、早期に発見されれば治療が比較的容易である。前立腺の生検の後、病理医は、顕微鏡で試料を検査する。癌が存在すれば、病理医は、腫瘍の悪性度を報告する。悪性度は、腫瘍組織が通常の前立腺組織と異なる度合いを示し、腫瘍の成長の速さの見込みを示唆する。グリソン分類は、前立腺の腫瘍を２〜１０に等級付けするのに使用され、グリソンスコアが１０である場合、最も異常の程度が高いことを示す。病理医は、顕微鏡で観察された最も一般的な形態について１〜５の数を割り当て、次に２番目に最も一般的な形態について同様に行う。これらの２つの数の合計が、グリソンスコアである。ホイットモア−ジェーエット病期は、時に用いられる別の方法である。腫瘍の悪性度は、治療法の提案を決定するのに使用される主な因子の一つであることから、腫瘍の適切な等級付けは重要である。
【００３２】
早期の前立腺癌は通常、無症状である。しばしば、定期健診で分かったＰＳＡの上昇に対する検査で診断される。しかし、時に前立腺癌は、良性の前立腺肥大などの疾患の症状としばしば同様の症状を発症する。これらは、頻尿、夜間での排尿増加、尿の安定な流れを開始し維持することの困難性、血尿、及び痛みを伴う排尿を含む。前立腺癌は、前立腺が尿道前立腺部を取り囲んでいることから、泌尿器の機能障害に関係する。したがって、前立腺内部の変化は、泌尿器の機能に直接影響を与える。輸精管は、尿道前立腺部に精液を届け、前立腺自体からの分泌物が精液成分に含まれることから、前立腺癌はまた、勃起障害又は痛みを伴う射精などの性機能及び性的能力での問題をもたらす可能性がある。
【００３３】
進行した前立腺癌は、身体の他の部位に広がることがあり、これは更なる症状をもたらす可能性がある。最も一般的な症状は、しばしば椎骨（脊椎骨）、骨盤又は肋骨で起こる骨痛である。大腿骨などの他の骨への癌の広がりは、通常、骨の近位部についてである。脊椎における前立腺癌もまた、脊髄を圧迫し、下肢の脱力、尿失禁及び便失禁を起こすことがある。
【００３４】
前立腺癌の具体的な原因は、未だ不明である。前立腺癌を発症する男性の危険性は、その年齢、遺伝子、人種、食事、生活様式、医薬、及び他の要因に関係する。主な危険要因は、年齢である。前立腺癌は、４５歳未満の男性では一般的ではないが、加齢に伴い一般的となる。診断時の平均年齢は７０である。しかし、多くの男性は、前立腺癌であることを全く分からない。
【００３５】
男性の遺伝的背景は、前立腺癌を発症させる危険の一因となる。このことは、特定の人種集団、前立腺癌を患う男性の一卵性双生児、及び特定の遺伝子を有する男性に見られる前立腺癌の発症率増加により示唆される。前立腺癌を患う兄弟又は父親を有する男性は、前立腺癌発症の通常の危険性の２倍の危険性を有する。スカンジナビアにおける双子の研究で示唆されるように、前立腺癌の危険性の４０％は、遺伝的因子により説明され得る。しかし、前立腺癌の原因である単一の遺伝子は見出されておらず、多くの異なる遺伝子が関与している。女性における卵巣癌及び乳癌の重大な危険因子である２つの遺伝子（ＢＲＣＡ１及びＢＲＣＡ２）もまた、前立腺癌に関与している。
【００３６】
特定の食物、ビタミン及びミネラルの食事による量は、前立腺癌の危険の一因となる。前立腺癌の危険を増加させるおそれのある食事での要因は、ビタミンＥ、ミネラルのセレン、緑茶及びビタミンＤの摂取量の低さなどである。大規模な研究が、乳製品、特にパルミチン酸ビタミンＡが添加された低脂肪牛乳及び他の乳製品について行われた。合成ビタミンＡのこの形態は、亜鉛及びタンパク質と反応して非吸収性の複合体を形成することから、前立腺癌に関連している。また、前立腺癌は、特定の乳製品におけるウシ成長ホルモンの含有にも関係している。
【００３７】
また、前立腺癌と、医薬、医療及び医学的状態との間にもいくらかの関係がある。アスピリン、イブプロフェン又はナプロキセンなどの抗炎症剤の日常的な使用は、前立腺癌の危険を減少させるようである。スタチン類として公知のコレステロール降下剤の使用もまた、前立腺癌の危険を減少させるようである。前立腺の感染又は炎症（前立腺炎）は、前立腺癌の可能性を増加させるようであり、またクラミジア、淋病又は梅毒などの性感染症の感染は、危険性を増加させるようである。肥満、及びテストステロンの血中濃度の上昇は、前立腺癌の危険を増大させるようである。
【００３８】
前立腺癌は、通常の精液を分泌する前立腺細胞が癌細胞に変異した場合に始まる、アデノカルシノーマ又は腺癌として分類される。アデノカルシノーマが最も一般的である前立腺の領域は、辺縁部である。病初では、癌細胞の小塊は、他の正常な前立腺に留められており、上皮内癌又は前立腺上皮内腫瘍（ＰＩＮ）として知られる状態である。ＰＩＮが癌の前駆体であるという証明はないが、癌と密接に関連する。時間と共に、これらの癌細胞は増殖し始め、周囲の前立腺組織（間質）に広がり、腫瘍を形成する。最終的には、腫瘍は、精嚢若しくは直腸などのすぐ近くの器官を冒すのに十分大きく成長することがあり、又は腫瘍細胞は、血流やリンパ系を移動する能力を得ることがある。身体の他の部位を冒し得る細胞の塊であることから、前立腺癌は、悪性の腫瘍と考えられる。他の器官へのこの浸潤は、転移と称される。前立腺癌は、骨、リンパ節、直腸及び膀胱に最も一般的に転移する。
【００３９】
前立腺癌において、正常な前立腺の正常な腺は、異常な腺及び細胞の塊に取って代わられる。男性が前立腺の症状を有する場合、又はスクリーニング検査が癌の危険性の増大を示す場合、より浸襲的検査が提供される。前立腺癌の診断を完全に裏付けることができる唯一の検査は、顕微鏡観察のために前立腺の小片を取る生検である。しかし、生検に先立って、前立腺及び尿路についてより多くの情報を収集するために複数の他の手段が用いられる場合がある。膀胱鏡検査法は、尿道の下方から挿入された薄く柔軟性のある撮像管を用いて、膀胱の内部から尿路を見せる。経直腸的超音波断層法は、直腸におけるプローブからの音波を用いて前立腺の像を生成する。
【００４０】
生検の後、組織試料は、次に顕微鏡で検査され、癌細胞が存在するかどうかを明らかにし、そして見られた癌の顕微鏡的特徴（又はグレソンスコア）を評価する。また、組織試料は、転移した悪性細胞の出所を明らかにするために、ＰＳＡ及び他の腫瘍のマーカーの存在に関して染色されてもよい。早期前立腺抗原−２（ＥＰＣＡ−２）及びプロスタソーム分析など、前立腺癌の診断のための多くの他の可能性のある手法が進められている。
【００４１】
本発明による化合物を用いた治療に加えて、前立腺癌のための治療（予防的治療を含む）は、食事性セレン、ビタミンＥ、リコピン、大豆食品、ビタミンＤ、緑茶、オメガ３脂肪酸及び植物エストロゲンで、前立腺癌を減少させる役割を支援する。選択的エストロゲン受容体モジュレータであるトレミフェンは、初期試験において有望である。テストステロンのジヒドロテストステロンへの変換を阻害する（及び細胞成長傾向を低下させる）２つの医薬、フィナステリド及びデュタステリドは、有用であることが示されている。アブラナ科の野菜（カリフラワー及びブロッコリー）に見られる植物化学物質のインドール−３−カルビノール及びジインドリルメタンは、好ましい抗アンドロゲン特性及び免疫調節特性を有する。前立腺癌の危険性は、菜食主義者の食生活で低下される。
【００４２】
前立腺癌の治療は、ホルモン療法のみならず、積極的監視、外科手術（前立腺切除又は睾丸摘出）、小線源療法（前立腺癌小線源療法）を含む放射線療法及び外部ビーム放射を含んでもよい。下記を含む複数のホルモン療法の形態があり、そのそれぞれが本発明の化合物及び／若しくは組成物と組み合わされるか、又は組み合わせて使用されてもよい。
・前立腺癌細胞内においてテストステロン及びＤＨＴの作用を直接阻害するフルタミド、ビカルタミド、ニルタミド、及び酢酸シプロテロンなどの抗アンドロゲン剤。
・ＤＨＥＡなどの副腎アンドロゲンの産生を阻害するケトコナゾール及びアミノグルテチミドなどの薬剤。これらの薬剤は、一般的に他の方法と組み合わせてのみ使用され、精巣において産生される９５％のアンドロゲンを阻害することができる。これらの組み合わされた方法は、完全アンドロゲン除去療法（ＴＡＢ）と呼ばれ、抗アンドロゲン剤を用いても達成され得る。
・作動薬及び拮抗薬を含む、ＧｎＲＨモジュレータ。ＧｎＲＨ拮抗薬は、ＬＨの産生を直接抑制し、一方でＧｎＲＨ作動薬は、初期刺激作用の後に下方制御の過程によってＬＨを抑制する。アバレリックスは、ＧｎＲＨ拮抗薬の例であり、一方でＧｎＲＨ作動薬としては、ロイプロリド、ゴセレリン、トリプトレリン及びブセレリンなどである。
・酢酸アビラテロンの使用は、７０％の患者でＰＳＡレベル及び悪性の末期前立腺癌における腫瘍の寸法を減少させることができる。ソラフェニブもまた、転移性前立腺癌を治療するため使用されることができる。
【００４３】
上記の各治療は、特定の状況においてその使用が制限されるという欠点を有する。ＧｎＲＨ作動薬は、最終的に睾丸摘出と同様の副作用を発症するが、治療の初期においてより悪い症状を発症することがある。ＧｎＲＨ作動薬が最初に使用される時、テストステロンの急上昇が転移性癌による骨痛の増加をもたらす可能性があり、そのため抗アンドロゲン剤又はアバレリックスが、これらの副作用を弱めるようにしばしば追加される。エストロゲンは、心臓血管疾患及び血栓に対する危険を増加させることから、一般的に使用されない。抗アンドロゲン剤は、一般的にインポテンスを発症せず、通常は骨及び筋肉の減少が少ない。ケトコナゾールは、長期使用で肝障害を発症する可能性があり、アミノグルテチミドは、皮膚発疹を発症する可能性がある。
【００４４】
進行した段階の前立腺癌のための緩和ケアは、延命、及び転移性疾患の症状の軽減に重点が置かれる。上述したように、酢酸アビラテロンは、ソラフェニブのように進行した段階の前立腺癌を治療するのに有望である。化学療法は、疾患の進行を遅らせ、かつ症状を先送りするように提供されてもよい。最も一般的に用いられる投薬計画は、化学療法薬のドセタキセルを、プレドニゾンなどの副腎皮質ステロイドと組み合わせる。ゾレドロン酸などのビスホスホネートは、骨折などの骨格合併症、又は耐ホルモン性の転移性前立腺癌を患う患者での放射線療法の必要性を遅らせることが示されている。アルファラジンは、骨の転移を標的にして使用されることができる。第二相の試験は、患者の生存期間を長期化させ、痛みを減少させ、かつ生活の質を向上させることを示す。
【００４５】
転移性の疾患による骨痛は、モルヒネ及びオキシコドンなどのオピオイド系鎮痛剤で治療される。骨の転移に対する外部ビーム放射線療法は、痛みの緩和をもたらす場合がある。ストロンチウム８９、リン３２又はサマリウム１５３などの特定の放射性同位元素の注射もまた、骨の転移を標的にして、痛みの緩和に有効な場合がある。
【００４６】
積極的監視及び決定的治療法の代わりとして、代替的な治療法もまた、前立腺癌の処置に使用されてもよい。ＰＳＡは、完全菜食主義の食事（魚は許容）、習慣的な運動及びストレス軽減を利用して、明らかな限局性前立腺癌を患う男性において低下されることが示されている。ザクロ果汁や種々のマメ科植物に見られるイソフラボンであるゲニステインなど、多くの他の単剤は、短期試験において、ＰＳＡを減少させ、ＰＳＡの倍加期間を遅延させ、又は短期間の試験において限局性癌を患う男性における二次的マーカーに対して同様の効果を有することが示されている。
【００４７】
転移性及び進行性の前立腺癌の兆候、二次的状態又は影響は、特に、貧血、骨髄抑制、体重減少、病的骨折、脊髄圧迫、痛み、血尿、尿管及び／又は膀胱出口閉塞、尿閉、慢性腎不全、尿失禁、並びに骨又は軟部組織の転移に関連する症状である。
【００４８】
本発明による化合物及び／又は組成物と組み合わせて使用されてもよい追加の前立腺の薬としては、例えば、前立腺肥大用薬／薬剤、並びにエウレキシン、フルタミド、ゴセレリン、ロイプロリド、ルプロン、ニランドロン、ニルタミド、ゾラデックス及びそれらの混合物などである。上記の前立腺肥大用薬／薬剤としては、例えば、アムベニル、アムボフェン、アムゲナル、アトロセプト、ボロマニル、ブロモジフェンヒドラミン−コデイン、ブロモツス−コデイン、カルデュラ、クロロフェニラミンヒドロコドン、シクロピロックス、クロトリマゾール−ベタメタゾン、ドルセド、デュタセリド、フィナステリド、フロマックス、ゲシル、ヘキサロール、ラミシル、ラナセド、ロプロックス、ロトリゾン、メテナミン、メテン−ベラ−メト  Ｂｌ−フェンサル、ｍｅｔｈ−ｈｙｏｓ−ａｔｒｐ−Ｍ  Ｂｌｕｅ−ＢＡ−ｐｈｓａｌ、ＭＨＰ−Ａ、ミバニル、プロセド／ＤＳ、Ｒｏ−Ｓｅｄ、Ｓ−Ｔ  Ｆｏｒｔｅ、タムスロシン、テルビナフィン、トラク、ツシオネックス、ｔｙ−メテート、ウラミン、ウラチン、ウレトロン、ウリドン、ｕｒｏ−ｖｅｓ、ウルスタット、ウセプト及びそれらの混合物などである。
【００４９】
本発明は、アロエ・バルバデンシス（Aloe barbadensis）（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（Rheum palmatum L.）（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、オウバク（Phellodendron chinense Schneid.）（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ａｎｄ  ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）、Camellia sinensis var.assamica（Mast.）Kitamura（普▲ある▼：ＰＥ）、ザクロ（Punica granatum.）（石榴：ＰＧ）、及びそれらの混合物からなる群から選択される薬草の固体抽出物又は好ましくは少なくとも部分的に水性若しくはＣ１−Ｃ３アルコール（好ましくはエタノール）溶媒をベースにした抽出物を特に含む、薬草組成物及び／又は薬草抽出物組成物に関する。本発明の更なる態様は、液状、半固形又は固形の有効量の薬草抽出物を含み、任意で薬学的に許容可能な担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わせた組成物に関する。これらの組成物は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）活動過多に起因する様々な病態若しくは病状の予防、治療、改善、又は発生率の低減のために使用することができ、この使用は、本明細書の他の箇所に記載された抽出物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む。治療することができる病態若しくは病状としては、例えば、前立腺肥大症；去勢抵抗性前立腺癌、薬剤耐性前立腺癌（ＡＲ−Ｖ（アンドロゲン受容体スプライス変異体）に関連する薬剤耐性癌を含む）、ビカルタミド及び／又はエンザルタミド耐性前立腺癌を特に含む前立腺癌；肝細胞癌；脱毛並びに／又は特に頭皮及び発毛が望ましい身体の他の部分での発毛；高レベルのＤＨＴによって引き起こされる男性／女性型脱毛症（アンドロゲン性脱毛症）；座瘡；脂漏症；多毛症（過剰な体毛）；化膿性汗腺炎；性的倒錯；少年での思春期早発症；並びに女性の多嚢胞性卵巣症候群が特に挙げられる。
【００５０】
本発明の医薬組成物は、有効量の本発明による１つ以上の化合物を、任意で薬学的に許容可能な添加剤、担体、又は賦形剤と組み合わせて含む。
【００５１】
別の態様では、本発明は、体重１ｋｇ当たり約０．０５〜約１００ｍｇ／日、好ましくは約０．１〜５０ｍｇ／日、最も好ましくは１〜２０ｍｇ／日である適切な用量での、薬学的に許容可能な担体、添加剤、又は賦形剤中における本発明での１つ以上の薬草抽出物の使用を対象とする。所望の用量は、単回投与として、又は適当な間隔で投与される分割用量として、例えば１日２回、３回、４回若しくはそれ以上の部分用量として、都合良く提供されることができる。
【００５２】
理想的には、有効成分は、好ましく約０．０５〜約５μＭの範囲内で活性化合物の有効ピーク血漿濃度となるように投与されるべきである。これは例えば、経口投与、又は本明細書の他の箇所に記載された他の投与経路によって成されることができる。該当する場合には、経口投薬量は、ＧＩ管からの化合物のバイオアベイラビリティー、及び投与される化合物の薬物動態に左右される。治療での使用について、本発明の化合物は未加工の化学物質として投与されることができるが、有効成分を、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、又は添加剤と組み合わせて提供される医薬製剤として提供することが好ましい。
【００５３】
医薬製剤は、経口投与、直腸内投与、経鼻投与、局所（口腔内及び舌下を含む）投与、又は非経口（筋肉内、皮下、及び静脈内を含む）投与に適したものを含む。本発明による組成物は、ボーラス、舐剤、又はペーストとして提供されてもよい。経口投与用の錠剤及びカプセルは、結合剤、充填剤、潤滑剤、崩壊剤、又は湿潤剤などの従来の賦形剤を含有してもよい。錠剤は、当該技術分野で公知の方法によりコーティングされてもよい。経口液体製剤は、例えば水性若しくは油性懸濁液、溶液、乳液、シロップ、又はエリキシル剤の形態であってもよく、あるいは使用前に水又は他の適したビヒクルを用いて構成するための乾燥製品として提供されてもよい。そのような液体製剤は、懸濁剤、乳化剤、非水性ビヒクル（食用油を含んでもよい）、又は防腐剤などの従来の添加剤を含有してもよい。必要に応じて、上述の製剤は、当該技術分野で公知の標準的な方法を用いて、組成物中の１つ以上の活性成分の持続放出特性を提供するようにされることができる。
【００５４】
本発明による医薬の態様では、本発明による１つ以上の化合物は、好ましくは薬学的に許容可能な担体と混合して製剤される。通常は、医薬組成物を経口投与することが好ましいが、特定の製剤は非経口投与することが好ましい場合があり、特に静脈内又は筋肉内投与剤形で、及び経皮、口腔内、皮下、坐剤、又は吸入（鼻腔内を含む）を含む他の経路などの他の非経口経路を介して、投与することが好ましい場合がある。経口剤形は、好ましくは錠剤若しくはカプセル（好ましくは硬質若しくは軟質ゼラチン）で、又は溶液及び／若しくは懸濁液として投与される。静脈内及び筋肉内投与製剤は、好ましくは滅菌生理食塩水中において投与される。当然のことながら当業者であれば、本発明の組成物を不安定にすることなく、又はその治療活性を損なうことなく、本明細書の教示の範囲内で製剤を変更して、特定の投与経路用に多くの製剤を提供し得る。
【００５５】
特に、例えば本発明の化合物を水又は他のビヒクルに溶解しやすくする変更は、十分に当業者の通常の能力の範囲内である少しの変更（塩の配合など）によって容易に成され得る。また、患者に最大の効果となるように本発明の化合物の薬物動態に対処するために、特定の化合物又は組成物の投与経路及び投薬計画を変更することも、所定作業をする者の能力の範囲内である。
【００５６】
本発明の化合物を含有する製剤は、好ましくは正確な投薬量の簡単な投与に好適である単位剤形の、例えば錠剤、カプセル、粉末、持続放出製剤、溶液、懸濁液、乳液、坐薬、クリーム、軟膏、ローション、エアロゾルなどの固形、半固形、凍結乾燥粉末、又は液状の剤形とすることができる。
【００５７】
上記組成物は、通常は従来の医薬担体、添加剤、又は賦形剤を含み、また他の薬剤、担体などを更に含んでもよい。好ましくは上記組成物は、本発明の１つ以上の抽出物が約０．０５重量％〜約７５〜８０重量％であり、残部は適した医薬添加剤、担体及び／又は賦形剤からなる。経口投与に関して、そのような賦形剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、ゼラチン、スクロース、炭酸マグネシウムなどを含む。必要に応じて、上記組成物は、湿潤剤、乳化剤、又は緩衝剤などの少量の非毒性補助物質も含有することができる。
【００５８】
液体組成物は、液状、半固形、又は固形（多くの場合、約０．５％〜約２０％）の抽出物と、任意の医薬添加剤とを、例えば生理食塩水、デキストロース水溶液、グリセロール、又はエタノールなどの担体中に溶解又は分散させて溶液又は懸濁液を作ることにより、調製されることができる。経口液体製剤での使用に関して、組成物は溶液、懸濁液、乳液、又はシロップとして調製されて、液状で又は水若しくは通常の生理食塩水での水和に適した乾燥形態で供給されることができる。
【００５９】
上記組成物を経口投与用の固形製剤の形態で使用する場合、その製剤を錠剤、顆粒、粉末、カプセルなどにすることができる。錠剤では、その組成物は、通常は添加剤、例えばショ糖又はセルロース製剤などの賦形剤、スターチペースト又はメチルセルロースなどの結合剤、充填剤、崩壊剤、及び医療製剤の製造に一般的に使用される他の添加剤を用いて製剤される。
【００６０】
非経口投与用の注射用組成物は、通常は滅菌生理食塩水などの適した静脈内投与用溶液中に化合物を含有する。その組成物はまた、脂質若しくはリン脂質中、リポソーム懸濁液中、又は水性乳液中の懸濁液として製剤されてもよい。
【００６１】
本発明の医薬組成物は、経鼻エアロゾル又は吸入によって投与されてもよい。そのような組成物は、医薬製剤の分野で公知の手法により調製され、またベンジルアルコール若しくは他の適した防腐剤、バイオアベイラビリティーを高めるための吸収促進剤、フルオロカーボン、及び／又は他の従来の可溶化剤若しくは分散剤を用いて、生理食塩水中の溶液として調製されてもよい。
【００６２】
そのような剤形の調製方法は公知であるか、又は当業者には明らかであろう。例えば、「Remington’s Pharmaceutical Sciences」（第１７版、Mack Pub. Co、１９８５年）を参照されたい。該当する場合には、当業者は本発明の化合物をウイルス感染症に罹患した患者に投与するにあたり、その化合物の目的とする効果を最大化するために、本発明のプロドラッグ形態の好ましい薬物動態パラメータを利用することが考えられる。
【００６３】
本発明の医薬組成物は、本発明の薬草抽出物で治療される病態若しくは病状のいずれか１つ以上の治療における他の活性成分を含有することもできる。これらの薬草抽出物の各活性化合物の有効量又は有効濃度が、本発明の医薬組成物に含まれることができる。
【００６４】
そのような組み合わせの個々の成分は、別個の医薬製剤若しくは複合医薬製剤で、順次又は同時に投与されることができる。これらは特に、例えばアロエエモジン、エモジン、クリソファノール、レイン、センノシド−Ａ、センノシド−Ｃ、センノシド−Ｄ、没食子酸、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、ガロカテキン（ＧＣ）、ケルセチン、ケンフェロール、没食子酸エピガロカテキン（ＥＰＣＧ）、及びそれらの混合物のうちの１つ以上を含む。
【００６５】
本発明による化合物のうちの１つ以上を、第２の活性治療剤と組み合わせて使用する場合、各化合物の投薬量は、その化合物を単独で使用する場合と同一であっても、又は異なっていてもよい。適切な投薬量は、当業者であれば容易に理解することができるであろう。
【００６６】
本発明による方法の態様では、本発明による１つ以上の医薬組成物を、上述の病態若しくは病状のいずれかの治療又は予防において患者に投与することができる。本明細書の他の箇所に記載されている病態若しくは病状の症状を治療する及びその病態若しくは病状が悪化する可能性を低減又は排除するために、本明細書の他の箇所に記載されている薬草抽出物の有効量を、その病態若しくは病状の症状を示す患者に投与する。
【００６７】
本発明の医薬組成物は、本明細書の他の箇所に記載された、液状、半液状、又は固形の有効量の１つ以上の抽出物を含み、任意で薬学的に許容可能な担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わされ、更に任意でアンドロゲン受容体（ＡＲ）タンパク質に関連する若しくはアンドロゲン受容体（ＡＲ）タンパク質によって変調される病態若しくは病状の治療に有用な少なくとも１つの追加の化学物質と組み合わされる。本発明のこの態様では、複数の化合物が、有利には上述の病態若しくは病状のいずれか１つ以上の予防及び／又は治療のために同時投与されるように処方されてもよい。
【００６８】
そのような組み合わせの個々の成分は、別個の医薬製剤若しくは複合医薬製剤で、順次又は同時に投与されることができる。本発明による化合物のうちの１つ以上を、第２の活性治療剤と組み合わせて使用する場合、各化合物の投薬量は、その化合物を単独で使用する場合と同一であっても、又は異なっていてもよい。適切な投薬量は、当業者であれば容易に理解することができるであろう。
【００６９】
本発明の本質
一般的な方法
アロエ・バルバデンシス（Aloe barbadensis）（アロエベラ（Aloe vbera））（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（Rheum palmatum L.）（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、オウバク（Phellodendron chinense Schneid.）（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）、Camellia sinensis var.assamica（Mast.）Kitamura（普▲ある▼：ＰＥ）、及びザクロ（Punica granatum.）（石榴：ＰＧ）を含む１１種の薬草が、アンドロゲン受容体に対する阻害効果を有することが分かり、それらは前立腺肥大症又は前立腺癌及びアンドロゲン受容体の活動過多によって引き起こされる疾患の予防又は治療に使用されることができる。
【００７０】
これら１１種の薬草は、個別に又はいずれかの組み合わせで、ＡＲ陽性及びＡＲ陰性前立腺癌の両方、並びに他の種類の癌の治療に使用することができる。
【００７１】
上記１１種の薬草のうち、アロエ・バルバデンシスのアロエエモジン及びチキンソウの没食子酸は、アンドロゲン受容体活性の阻害において重要な役割を果たすことが分かった。アロエエモジン及び没食子酸を含有する薬草又は薬草調剤（以下の表３）は、前立腺肥大症又は前立腺癌及びアンドロゲン受容体の過活動によって引き起こされる疾患の予防又は治療の可能性を有する。アロエエモジン及び没食子酸に加えて、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、ガロカテキン（ＧＣ）、ケルセチン、ケンフェロール、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、又はプーアル茶（Camellia assamica）のポリフェノール画分もまた、アンドロゲン受容体活性に対する阻害効果を示し、それぞれが単独で又はいずれかの組み合わせで、前立腺肥大症、前立腺癌、又はアンドロゲン受容体の過活動によって引き起こされる他の疾患の可能性の低減、阻害、及び／又は治療に使用されることができる。
【００７２】
【表１】
2021500023.tif 000002
2021500023.tif 000003
Ｆ１のエピガロカテキン、ガロカテキン、ケルセチン、及びケンフェロールは、２２ＲＶ１細胞のＤＨＴ誘発性アンドロゲン受容体活性に対する阻害を示した。これらの化学物質は、前立腺肥大症又は前立腺癌及びアンドロゲン受容体の過活動によって引き起こされる他の疾患の予防又は治療に使用することができる。
【００７３】
結果
本発明者ら自身の研究から得た包括的データベース（ＳＴＡＲ）に基づき、一次ルシフェラーゼレポータアッセイ及び他の酵素反応を用いて、２５のシグナル伝達経路に亘り、２５０を超える調剤により薬草の水抽出物の影響を研究した。本発明者らは、アロエベラ（Aloe vbera）（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（Rheum palmatum L.）（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、オウバク（Phellodendron chinense Schneid.）（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）の９種の薬草を選択したが、これらはルシフェラーゼレポータアッセイにおいて抗アンドロゲン受容体（ＡＲ）活性を示した（図１）。更に、プーアル茶（Camellia assamica（Mast）Chang）（普▲ある▼茶：ＰＥ）及びザクロ（Punica granatum）（石榴：ＰＧ）が、ＤＨＴが存在する条件下において、２２ＲＶ１のＡＲ−ルシフェラーゼレポータ細胞のアンドロゲン受容体介在性の転写活性に対する阻害活性を有することが示された（図２及び図３１）。アンドロゲン受容体標的遺伝子（ＰＳＡ、ＫＬＫ２）のｍＲＮＡ発現に対するこれらの影響を更に確認すると、これらの薬草は全て、ＤＨＴ誘発性ＰＳＡ及びＫＬＫ２のｍＲＮＡ発現を阻害することができた（図３及び図３１）。
【００７４】
異なる薬草は、ＡＲシグナル伝達に対する異なる作用機序を有し得る。Ｆ３及びＦ５は、ＡＲのタンパク質及びｍＲＮＡの両方を下方制御することができた（図４及び５）。Ｂ６、Ｃ４及びＤ８はＡＲのタンパク質しか下方制御できず、ＡＲのｍＲＮＡに対する影響は弱かった（図４及び５）。Ｓ６、Ｉ２、Ｆ１、Ｅ５及びＰＥは、ＡＲのタンパク質及びｍＲＮＡに対する影響を有さず（図４及び５）、ＡＲに直接作用し得る。
【００７５】
ＤＮＡプルダウンアッセイを用いて、薬草の水抽出物がアンドロゲン受容体とＤＮＡとの間の相互作用を阻害することができるかどうかを評価した。（アンドロゲン結合部位を有する）ビオチン標識ＤＮＡである５’−ｇｔａａｔｔｇｃＡＧＡＡＣＡｇｃａＡＧＴＧＣＴａｇｃｔｃｔｃ−３’及び核溶解物を（２５ｎＭのＤＨＴで一晩予備刺激した２２ＲＶ１細胞から抽出した）アンドロゲン受容体タンパク質と混合することにより、アンドロゲン受容体−ＤＮＡ相互作用プルダウンアッセイを実施した。ストレプトアビジンダイナビーズを用いて、磁気的状況下でＤＮＡ−ＡＲ複合体を捕集した。ウェスタンブロッティングを用いて、プルダウンされたＡＲタンパク質の量を検出した。ＤＮＡとアンドロゲン受容体の間の結合の阻害は、ＡＲタンパク質のプルダウンの量を減少させる。図６に示すように、Ｆ３及びＣ４はＤＮＡ−ＡＲタンパク質相互作用を阻害しなかったが、Ｆ１、Ｓ６、Ｅ５、Ｆ５、Ｉ２、ＰＥ１は、ＤＮＡ−ＡＲタンパク質相互作用を異なる効力で阻害することができた。これらの薬草の可能性のある作用機序は、表１に列挙される。
【００７６】
９種の薬草が、以下の２つの前立腺癌細胞に対する細胞毒性を示した。
１．完全長のＡＲ並びにビカルタミド及びエンザルタミド耐性の原因である構成的に活性の短縮型ＡＲを発現する２２ＲＶ１細胞。２２ＲＶ１細胞成長はアンドロゲンに部分的に依存し、その成長は、両方のＡＲアイソフォームを下方制御することによって低減されることができる。
２．ＡＲタンパク質を発現せず、かつその成長がアンドロゲン非依存性であるＤｕ１４５細胞。表２に示すように、Ｆ３、Ｂ６、Ｃ４、Ｓ６、Ｉ２、Ｆ１は、Ｄｕ１４５細胞よりも２２ＲＶ１細胞の成長の阻害に対して強い影響を示す。これらの薬草は、ＡＲタンパク質発現を伴う前立腺癌を標的とするのに利点があり得る。しかしながら、Ｄ８及びＥ５は、２２ＲＶ１よりもＤｕ１４５細胞に対する毒性が高かった。これは、Ｄ８及びＥ５が、Ｄｕ１４５の成長の阻害に関して、ＡＲに依存しない他の標的部位を有し得ることを示唆している。全体として、これらの薬草は全て、ＡＲタンパク質の発現を伴う又は伴わない前立腺癌の治療の可能性を有し得る。
【００７７】
図７に示すように、Ｅ５（１ｇ／ｋｇ  ＢＩＤ）、Ｆ１（１ｇ／ｋｇ  ＢＩＤ）、Ｆ３（１ｇ／ｋｇ  ＢＩＤ）、Ｉ２（１ｇ／ｋｇ  ＢＩＤ）、Ｓ６（１ｇ／ｋｇ  ＢＩＤ）、及び没食子酸（２３ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ、１ｇ／ｋｇ  ＢＩＤのＳ６に対応する用量）の水抽出物を、２２ＲＶ１（ＡＲ＋ｖｅ）及びＤＵ１４５（ＡＲ−ｖｅ）の異種移植片を移植したマウスに経口摂取させた。Ｆ１、Ｆ３、Ｉ２、Ｓ６はＤＵ１４５腫瘍成長に対する有意な阻害を示し、Ｅ５、Ｆ１、Ｆ３、Ｓ６は２２ＲＶ１腫瘍成長に対する有意な阻害を示した（図７）。Ｅ５は、生体内でのＡＲタンパク質発現を伴う前立腺癌を阻害するより高い選択性を有し得る。Ｉ２は、生体内でのＡＲタンパク質発現を伴わない前立腺癌を阻害するより高い選択性を有し得る。
【００７８】
別の動物実験では、本発明者らは、２週間に亘りヌードマウスのＬＮＣａＰ（アンドロゲン依存性）異種移植片腫瘍及びＤｕ１４５異種移植片腫瘍に関して、Ｓ６、Ｆ５、及びＰＥ１（それぞれ３００ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｄ）の抗前立腺腫瘍成長効果を、（ＡＲを標的とする）エンザルタミド（１０ｍｇ／ｋｇ  ｑｄ）と比較した。予想されたように、エンザルタミドはＬＮＣａＰ腫瘍の成長を効果的に阻害したが、Ｄｕ１４５腫瘍に関してはそうではなかった（図８Ａ〜Ｆ）。Ｓ６、Ｆ５、及びＰＥ１は、ＬＮＣａＰの成長に対する有意な阻害（Ｐ＜０．０５）を示したが、Ｓ６、Ｆ５、及びＰＥ１は、Ｄｕ１４５腫瘍の成長を有意には阻害しなかった（図８Ａ〜Ｆ）。ｑＲＴ−ＰＣＲの結果は、Ｓ６、Ｆ５、ＰＥ１がＬＮＣａＰ腫瘍のＡＲ標的遺伝子、ＫＬＫ２又はＰＳＡを下方制御することができることを更に支持するものであった（図８Ｇ、８Ｈ）。結論として、Ｓ６、Ｆ５、ＰＥ１は、ＡＲを標的とすることによるアンドロゲン依存性腫瘍の成長の阻害に関する選択性を有するようである。
【００７９】
本発明に従って、更なる実験を実施した。これらの実験の結果を図２０〜３０に示し、本明細書中で説明する。
【００８０】
図２０に示すように、分取ＨＰＬＣを実施してＳ６水抽出物を分画した。この目的のために、１０μｌのＳ６水抽出物を、アセトニトリルの勾配を増大させながら実施されるＣ１８分取カラムを用いたＨＰＬＣに供した。分取ＨＰＬＣ画分での画分９（星）は、ＡＲルシフェラーゼレポータアッセイにおいて最も強い抗アンドロゲン受容体活性を明示した。画分９を回収し、ＭＷ１６０からＭＷ８００までのネガティブモーのスキャンを用いてＬＣ−ＭＳ分析に供した。画分９（赤色）は、没食子酸を含有していた（ＭＷ１７０）。図２１に示されている小さな挿入図は、純粋な没食子酸が、ルシフェラーゼレポータアッセイにおいて、２２ＲＶ１細胞のＡＲ活性に対して活性である（ＩＣ５０は約２８μｍである）ことを示している。
【００８１】
２２ＲＶ１及びＤｕ１４５細胞に対する細胞毒性に関して、いくつかの茶抽出物を試験した。結果を図２２に示す。特に、Ｆ１（ラフマ）、中国産の「羅布麻」（ＬＢＭ茶）として表示された茶（これは時に中国におけるApocynum venetum又は「Apocynum pictum」である）、並びに葉、花、及び緑茶を含有するＬＢＭ混合茶のそれぞれの細胞毒性を試験した。図示されているように、これらの茶は全て、２２ＲＶ１細胞及びＤｕ１４５細胞（アンドロゲン受容体を発現しない）に対する細胞毒性を示した。Ｆ１は、ＬＢＭ茶又はＬＢＭ混合茶よりも強い細胞毒性を示した。水抽出物による３日間の処置の後、メチレンブルーを用いて全細胞を染色した。
【００８２】
図２３は、ポリフェノール抽出物（ＰＥ）の比較を示す。２２ＲＶ１ルシフェラーゼレポータ細胞アッセイを用いて、Yunnan taslydee pure biological tea group co.ltd.社製のＰＥ粉末又はGaoligongshan Co. Ltd社製のＰＥ−１、ＰＥ−２、ＰＥ−Ｂを、それらの抗アンドロゲン受容体活性について試験した。図２３に結果が示されており、全ての抽出物が活性を示し、ＰＥ−１が最も強い活性を示した。
【００８３】
分取ＨＰＬＣを実施して、更にＰＥ１水抽出物を分画した。１ｍｌのＳ６（１００ｍｇ／ｍｌ）を、アセトニトリルの勾配を増大させながら実施されるＣ１８分取カラムを用いたＨＰＬＣに供した。分取ＨＰＬＣ画分での画分１３、２１、３２（星）は、ＡＲルシフェラーゼレポータアッセイにおいて比較的強い抗アンドロゲン受容体活性を有した。これらの画分を更なる分析に供した。これを図２４に示す。分取ＨＰＬＣからのＰＥ１及びＰＥ１の水での粗抽出物（図２５）の画分１３（赤色）のＨＰＬＣ分析は、５−ガロイルキナ酸が画分１３中に識別可能な量で見られることを示し、これは、この化合物が、その画分が示す活性に関与している可能性が最も高いことを示している。分取ＨＰＬＣからのＰＥ１及びＰＥ１の水での粗抽出物の画分２１（赤色）のＨＰＬＣ分析は、１−ガロイル−β−グルコースが画分２１中に識別可能な量で見られ、これが画分２１の活性に関与している可能性が高いことを示した。図２６を参照されたい。分取ＨＰＬＣからのＰＥ１水抽出物の画分３１（赤色）のＨＰＬＣ分析は、識別可能な量のエピガロカテキン（ＥＧＣ）を、可能性の高い活性成分として示した。これを図２７に示す。分取ＨＰＬＣからのＰＥ１の画分３３（赤色）のＨＰＬＣ分析もまた、識別可能な量のＥＧＣを、可能性の高い活性成分として示した。これを図２８に示す。分取ＨＰＬＣからのＰＥ１抽出物の画分４３（赤色）及び４４（緑色）のＨＰＬＣ分析は、画分４３が識別可能な量のＥＧＣを有し、画分４４が識別可能な量の没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）を有することを示している。結果は、画分４４が識別可能な量でＥＧＣＧを含有することを示した。その画分はまた、ケンフェロール−３−Ｏ−Ｒ−Ｌ−ラムノピラノシル（１ｆ６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、ケルセチン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド、又は没食子酸−３−Ｏ−（６０−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコシドを、多量に含有しているようであった。これを図２９に示す。
【００８４】
本発明による様々な抽出物を様々な癌細胞株、例えば図３０に示すような２２ＲＶ１、ＨｅｐＧ２、ＫＢ、ＫＢ−ＭＤＲ（多剤耐性）、ＫＢ−３００（ＣＰＴ１耐性）に対する細胞毒性について試験した。３回の独立した実験からの平均ＩＣ５０をその図に示す。異なる薬草の水抽出物での３日間の処置後に、メチレンブルーアッセイを用いて細胞成長を明らかにした。
【００８５】
潜在的な活性化学物質
アロエ・バルバデンシス（Ｆ３）：分取ＨＰＬＣを用いて、Ｆ３の水抽出物を分画した。図９Ａ及び９Ｂに示すように、画分３１及び３２は、ＡＲの作用に対して同様の阻害効果を示した。ＬＣ−ＭＳの結果は、画分３１及び３２が、同様の量のＭＷ２７１のアロエエモジン及びＭＷ６８６．１の化合物（これはエルゴニカ二量体であり得る）を含有することを示した。標準的なアロエエモジンを購入し、ルシフェラーゼレポータアッセイを用いて抗ＡＲ活性を有することを確認した（図１０）。ルシフェラーゼレポータアッセイを用いて、Ｆ３の水での粗抽出物と、同量のアロエエモジンとを比較した（図１０の挿入図）。結果は、アロエエモジンがＡＲ活性の阻害に関してＦ３の重要な成分であることを示した。しかしながら、アロエエモジンは、薬草全体でのＦ３の混合物よりも相対的に弱い。これは、Ｆ３中の他の化学物質もまた、ＡＲに対する活性を有し得ることを示唆している。
【００８６】
アロエエモジンに類似した様々な構造を選択し、ルシフェラーゼレポータアッセイを用いて、ＡＲに対する阻害効果について試験した。結果は、アロエエモジンに加えてエモジン及びセンノシドＡもＡＲに対する活性を有するものの、クリソファノール、センノシドＣ、センノシドＤは、いずれもＡＲに対する活性を有しないことを示した（図１１）。
【００８７】
チキンソウ（Ｓ６）：固相抽出カラムを用いて、Ｓ６の水抽出物を分画した。水及び１０％エタノールの溶出物は、ルシフェラーゼレポータアッセイの使用で、ＡＲに対して比較的強い阻害効果を有した（図１２挿入図）。ＬＣ−ＭＳにより、水溶出物及び１０％エタノール溶出物中に没食子酸が検出された。（Ｓ６との比較で）同じ用量の没食子酸は、アンドロゲン受容体介在性の転写活性の阻害効果を有することが示された（図１３Ａ）。没食子酸は、ＫＬＫ２及びＰＳＡに対する阻害効果を有するものの、ＡＲに対する阻害効果は有しないことが示された（図１３Ｂ、１３Ｃ、１３Ｄ）。これらの結果は、これらがＡＲ活性の阻害に関してＳ６の重要な成分であることを示した。しかしながら、没食子酸は、全草全体でのＳ６の混合物よりも相対的に弱い。これは、Ｓ６中の他の化学物質もまたＡＲに対する活性を有する可能性、又は他の化学物質がＡＲに対する没食子酸の作用を増強する可能性を示唆している。更に、没食子酸は、ヌードマウスにおいて、２２ＲＶ１及びＤｕ１４５腫瘍の成長に対する生体内での抗腫瘍活性を示す（図１３Ｅ及び１３Ｆ）。
【００８８】
ラフマ（羅布麻：Ｆ１）：図１４では、Ｆ１（ラフマ）と、中国産の「羅布麻：ＬＢＭ」で表示された他の茶（これは中国におけるApocynum venetum又は「Apocynum pictum」であり得る）を、ルシフェラーゼレポータアッセイを用いて、抗ＡＲ活性に関して比較した。ＬＢＭ茶は、その葉、花、及び緑茶を含有している場合もある。これらの茶は全て抗アンドロゲン受容体活性を有したが、Ｆ１は他のもの（ＬＢＭ、ＬＢＭ混合茶、及びＬＢＭ混合茶−Ｎｉｌｅ）よりも高い抗アンドロゲン受容体を有した。Ｆ１、ＬＢＭ、及びＬＢＭ混合茶は、ＫＬＫ２及びＰＳＡのｍＲＮＡ発現に対する阻害を示した（図１４Ｂ、１４Ｃ）。
【００８９】
固相抽出Ｃ１８カラムを用いて、Ｆ１の水抽出物を分画した（図１５Ａ）。１０％、２０％、４０％エタノール溶出物は、ルシフェラーゼレポータアッセイを用いて、比較的高い抗ＡＲ活性を有することが分かった。ＬＣ−ＭＳにより、これらの画分中にカテキン／エピカテキン、エピガロカテキン又はガロカテキン、カフェイン酸、クロロゲン酸、イソケルセチン、ヒペロシド、アストラガリン、トリフォリン、アセチル化ヒペロシド又はアセチル化イソケルセチン、ケルセチン、ケンフェロールが検出された（図１５Ｂ）。エピガロカテキン、ガロカテキン、ケルセチン、及びケンフェロールは、ルシフェラーゼレポータアッセイを用いて、ＡＲの阻害に関して異なる効力を有することが示された（図１５Ｃ）。
【００９０】
プーアル茶（普▲ある▼茶：ＰＥ）
Gaoligongshan co.ltd社から入手したポリフェノール（ＰＰ）（ＰＥからの抽出物）は、２２ＲＶ１ルシフェラーゼレポータ細胞アッセイの使用で、抗アンドロゲン受容体を示した（図１６Ａ）。ＰＥ１又はＰＰ水抽出物をＣ１８固相抽出カラムに通した時に、２２ＲＶ１ルシフェラーゼレポータ細胞アッセイの使用で、３０％溶出物（矢印）が最も強力な抗アンドロゲン受容体活性を示した（図１６Ｂ、１６Ｃ）。
【００９１】
ＰＥ１の効力とＰＰの効力は約５：１であるため、１００ｍｇ／ｍｌの１ｍｌのＰＥ１又は２０ｍｇ／ｍｌの１ｍｌのＰＰを、固相抽出のための材料として選択した。ＬＣ−ＭＳは、ＰＥ１又はＰＰの３０％エタノール溶出物について、いくつかの質量ピーク（黒色）は極めて類似した効力を示し、いくつかのピーク（緑色でハイライト）は異なる効力を有することを示した。共通のピークは抗アンドロゲン受容体活性に、より強く関連するはずである（図１７）。しかしながら、本発明者らは、緑色でハイライトされた化合物もまた活性を有するかどうかについては排除していない。
【００９２】
Ｆ１中に存在する５種の純粋な化合物であるエピカテキン、カテキン、ガロカテキン（ＧＣ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、及び没食子酸エピガロカテキンＥＧＣＧを、ルシフェラーゼレポータアッセイを用いて、ＤＨＴ１０ｎＭの存在下で、抗アンドロゲン受容体活性について試験した。ＧＣ、ＥＧＣ、ＥＧＣＧは、抗アンドロゲン受容体活性を有することが分かった。ＥＧＣは、ＡＲに対して最も高い効力を示した（図１８）。低分子量スキャンを行うようにＬＣ−ＭＳスキャンパラメータを設定すると、ＰＥ中に没食子酸を検出することができた（図１９）。ＰＥ茶に関して、ＩＣ５０の１２５μｇ／ｍｌは約４．８ｕＭの没食子酸を含有し、これはＡＲの阻害において部分的な役割を果たし得る。
【００９３】
ピューニカ・グラネイタム（Punica granatum）、即ち一般的な名称でザクロ（石榴：ＰＧ）の抽出物は、２２ＲＶ１細胞のＤＨＴ誘発性アンドロゲン受容体活性に対する阻害効果を有することが分かった（図３１Ａ）。ＰＧはまた、２２ＲＶ１細胞のＤＨＴ誘発性ＫＬＫ２及びＰＳＡのｍＲＮＡ発現も阻害した（図３１Ｂ及びＣ）。ＰＧは、２２ＲＶ１細胞のアンドロゲン受容体タンパク質及びＤＨＴ誘発性アンドロゲン受容体タンパク質の基礎レベルを低下させた（図３１Ｄ）。更にＰＧは、ＡＲのｍＲＮＡ発現に対する阻害を示した（図３１Ｅ）。
【００９４】
ａ．新規性及び主要な利点
１．アロエ・バルバデンシス（Aloe barbadensis）（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（Rheum palmatum L.）（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（Stephania tetrandra）（漢防已：Ｃ４）、オウバク（Phellodendron chinense Schneid.）（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（Euphorbia humifusa）（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（Eclipta prostrata）（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（A. venetum L.）（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（Portulaca oleracea L.）（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis L.）（地楡：Ｅ５）、若しくはCamellia sinensis var.assamica（Mast.）Kitamura（普▲ある▼：ＰＥ）、ザクロ（Punica granatum）（石榴：ＰＧ）を含む１１種の薬草、及び／又はこれらの薬草の抽出物、及び／又はＡＲ受容体活性を抑制することができるそれらの活性成分を、前立腺肥大症又は前立腺癌並びにアンドロゲン受容体の活動過多によって引き起こされる疾患の予防又は治療のために、単独で又は組み合わせて使用することができる。
２．アンドロゲン受容体の活動過多によって引き起こされる疾患又は症状を標的とするために有用であり得るアロエエモジン、没食子酸、エピガロカテキン、ガロカテキン、没食子酸エピガロカテキン、ケルセチン、及びケンフェロールなどの他の化学物質と組み合わされた、上述した薬草又はそれらの薬草を含有する製剤。
３．これらの薬草の一部は、前立腺癌予防に関する科学的証拠を有する高性能の食品補助剤として発展されることができる。例えば、Ｆ１は中国では、血圧を抑制するためのハーブティーとして一般的に使用されている。Ｆ５は、欧州、中東、アジア、及びメキシコを含む多くの場所で、野菜として一般的に使用されている。ＰＥは一般的に使用されている茶である。これらの薬草は、摂取しても安全であると考えられている。
４．アロエエモジン、没食子酸、エピガロカテキン、ガロカテキン、没食子酸エピガロカテキン、ケルセチン及びケンフェロールを含有する薬草又は野菜（表３）は、前立腺肥大症又は前立腺癌及びアンドロゲン受容体の過活動によって引き起こされる疾患の予防又は治療のために発展されることができる。
５．これらの薬草は、ビカルタミド及びエンザルタミドに対する耐性を有する２２ＲＶ１細胞の成長を阻害することができるため、これらの薬草又はその活性成分は、ビカルタミド及びエンザルタミド耐性前立腺癌を標的とするために発展されることができる。
【００９５】
実験手順
本発明者らによるこの研究の目標は、薬草の医薬がアンドロゲン受容体活性に対する効果を有する場合に、どのような効果を有するかを調査し、更に掘り下げて調査してこれらの薬草がアンドロゲン受容体活性に対して有する具体的な効果を特定し、その活性に関与しているこれらの薬草中の活性化合物を同定することであった。これは３つのパートで行われ、そのうちの第１のパートは、ルシフェラーゼレポータ細胞（ＰＳＡプロモータルシフェラーゼレポータでトランスフェクトされた２２ＲＶ１細胞）を用いた、アンドロゲン受容体活性に関する約２５０の薬草の医薬の一次用量応答スクリーニングであった。アンドロゲンレポータの標的遺伝子であるＫＬＫ２及びＰＳＡに関するＲＴ−ｑＰＣＲを用いて、それらの薬草抽出物の作用を確認した。
【００９６】
材料及び方法
ＰＳＡルシフェラーゼレポータ細胞−このスクリーニング検査では、２２ＲＶ１前立腺癌細胞を使用した。２２ＲＶ１細胞株を、ＰＳＡプロモータ−ＰＧＬ４．２ルシフェラーゼレポータで安定的にトランスフェクトした。２５ｎＭのＤＨＴを用いて、２４時間に亘ってアンドロゲン受容体活性を誘導した。
【００９７】
ルシフェラーゼスクリーニング−アンドロゲン受容体活性の誘導に使用される２５ｎＭのＤＨＴを含む又は含まない３７℃のＣＯ２インキュベータ内で、２２ＲＶ１アンドロゲンレポータ細胞を、３０、１００、３００、及び１０００μｇ／ｍｌの薬草抽出物で２４時間に亘って処置した。ルシフェラーゼ溶解緩衝液を用いて細胞を溶解した後、ルシフェリンを含むルシフェラーゼ緩衝液を添加して発光させた。発光マイクロプレートリーダを用いて発光を記録した。
【００９８】
ＮＲＦ２及び下流遺伝子のリアルタイム定量ＰＣＲ（ＲＴ−ｑＰＣＲ）−Ｒｏｃｈｅ  Ｈｉｇｈ  Ｐｕｒｅ  ＲＮＡ単離キットを用いて、薬草の処理済み細胞からＲＮＡを抽出した。次に、ＲＴ−ｑＰＣＲのために、Ｂｉｏ−ｒａｄ  ｉＳｃｒｉｐｔ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｃＤＮＡ合成キットを用いて、ＲＮＡ試料からｃＤＮＡを生成した。ＣＦＸ  ＰＣＲ機（Ｂｉｏ−ｒａｄ）内でヒトＮＲＦ２、ＨＯ１、ＮＱＯ１、及びβアクチンプライマ（以下の表に示されているような）、並びにｉＴａｑ（商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘを用いて、ｑＰＣＲを実施した。精製済みのＰＣＲ産物によって生成される標準曲線を用いて、内部対照のβアクチンに対する閾値サイクルの変化に基づいて、相対ｍＲＮＡ発現を計算した。
【００９９】
【表２】
2021500023.tif 000004
【０１００】
ウェスタンブロッティングプロトコル−２×ＳＤＳ試料緩衝液（６２．５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、２％のＳＤＳ、１０％のグリセロール、５０ｍＭのＤＴＴ、及び０．０５％のブロモフェノールブルー）を用いて全細胞溶解物を調製し、１０秒間超音波処理してＤＮＡをせん断した。０．４％のＮＰ４０を含むＴｒｉｓ緩衝生理食塩水を用いて細胞核を単離した。次に細胞抽出物を１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで電気泳動させ、Ｍｉｎｉｐｒｏｔｅｉｎ  ＩＩ転写装置（Bio-Rad）を用いて、０．２μｍのニトロセルロース膜（Bio-Rad Laboratories、カリフォルニア州ハーキュリーズ）に転写した。その膜をブロックし、５％脱脂乳を含有するＴＢＳ−Ｔ緩衝液（１×ＴＢＳ緩衝液、０．２％のＴｗｅｅｎ２０）中でのプローブにより検出した。モノクローナルウサギ抗ＡＲ（１：５０００）（Abcam社の＃133273）を用いてアンドロゲン受容体を検出し、１：２５００に希釈されたモノクローナルアクチン抗体（Sigma社、ミズーリ州セントルイス）を用いて内部対照としてのβアクチンを検出することにより、タンパク質負荷が等しいことを確認した。次に、西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ及び抗ウサギＩｇＧ（１：５０００、Sigma社）を用いてその膜をインキュベートした。増強化学発光試薬（Perkin-Elmer Life Science Products、マサチューセッツ州ボストン）を用いて免疫反応性バンドを可視化し、ＮＩＨ社製ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて、タンパク質バンドの密度をスキャン及び分析した。
【０１０１】
薬草抽出物の標準化された調製
ホリスティック医療の薬物療法に関してよく表明される懸念は、試験用の薬草試薬を調製する際の標準化の欠如である。機能分析での直接定量比較のために複数の調製の間の一貫性を維持するために、標準水性抽出プロトコルを設計した。乾燥粉末薬草（０．５ｇ）を８５℃の超純水（１０ｍｌ、＞１５ＭΩの抵抗）中で３０分間加熱することによって、抽出物を調製した。次に、水性画分を濾過滅菌し、使用まで４℃の暗所で保管した。この標準プロトコルの順守により、薬草抽出物間の正確な定量比較が可能となるばかりでなく、季節的変化を考慮するために同一の茶の異なる収穫物を比較する機会も提供する。更に、後述する最も活性が高い茶を凍結乾燥及び再構成した後に、生物活性スクリーニングで一貫した値が得られた。これは、この茶の中の活性成分が安定していること、及びこの方法が茶を標準化するための信頼できる方法であることを示唆している。
【図１Ａ−Ｆ】
2021500023.tif 000005
【図１Ｇ−Ｉ】
2021500023.tif 000006
【図２】
2021500023.tif 000007
【図３Ａ−Ｄ】
2021500023.tif 000008
【図３Ｅ−Ｆ】
2021500023.tif 000009
【図４】
2021500023.tif 000010
【図５Ａ−Ｂ】
2021500023.tif 000011
【図５Ｃ】
2021500023.tif 000012
【図６】
2021500023.tif 000013
【図６Ａ】
2021500023.tif 000014
【図６Ｂ】
2021500023.tif 000015
【図７】
2021500023.tif 000016
【図８】
2021500023.tif 000017
【図９】
2021500023.tif 000018
【図１０】
2021500023.tif 000019
【図１１（１）】
2021500023.tif 000020
【図１１（２）】
2021500023.tif 000021
【図１２】
2021500023.tif 000022
【図１３Ａ−Ｃ】
2021500023.tif 000023
【図１３Ｄ−Ｆ】
2021500023.tif 000024
【図１４】
2021500023.tif 000025
【図１５Ａ】
2021500023.tif 000026
【図１５Ｂ】
2021500023.tif 000027
【図１５Ｃ】
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【図１６】
2021500023.tif 000029
【図１７】
2021500023.tif 000030
【図１８】
2021500023.tif 000031
【図１９】
2021500023.tif 000032
【図２０】
2021500023.tif 000033
【図２１】
2021500023.tif 000034
【図２２】
2021500023.tif 000035
【図２３】
2021500023.tif 000036
【図２４】
2021500023.tif 000037
【図２５】
2021500023.tif 000038
【図２６】
2021500023.tif 000039
【図２７】
2021500023.tif 000040
【図２８】
2021500023.tif 000041
【図２９】
2021500023.tif 000042
【図３０】
2021500023.tif 000043
【図３１】
2021500023.tif 000044
【手続補正書】
【提出日】令和2年7月10日(2020.7.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アロエ・バルバデンシス（蘆薈：Ｆ３）、ダイオウ（大黄：Ｂ６）、シマハスノハカズラ（漢防已：Ｃ４）、オウバク（黄柏：Ｄ８）、チキンソウ（地錦草：Ｓ６）、タカサブロウ（墨旱蓮：Ｉ２）、ラフマ（羅布麻：Ｆ１）、バシケン（馬歯▲けん▼：Ｆ５）、ワレモコウ（地楡：Ｅ５）、プーアル茶（普▲ある▼：ＰＥ）及びザクロ（石榴：ＰＧ）並びにそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの薬草及び／又は少なくとも１つの抽出物を含む組成物。
【請求項２】
前記抽出物は、少なくとも１つの前記薬草を有効量の沸騰水及び／又は水性エタノールに曝すことによって調製される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記水性エタノールは、体積で少なくとも約５０％の水を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記水性エタノールは、体積で少なくとも約５０％のエタノールを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記抽出物は半液状である、請求項１から４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記抽出物は固形である、請求項１から４のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
食品補助剤において使用されるか、アジュバントとして使用されるか、又は治療薬として使用される、請求項１から６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
請求項１から７のいずれかに記載の抽出物を、薬学的に許容可能な担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わせて含む組成物。
【請求項９】
少なくとも２つの薬草の抽出物を含む、請求項１から８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
少なくとも３つの薬草の抽出物を含む、請求項１から９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
少なくとも４つの薬草の抽出物を含む、請求項１から１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
少なくとも５つの薬草の抽出物を含む、請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
少なくとも６つの薬草の抽出物を含む、請求項１から１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
少なくとも７つの薬草の抽出物を含む、請求項１から１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
少なくとも８つの薬草の抽出物を含む、請求項１から１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
少なくとも９つの薬草の抽出物を含む、請求項１から１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
少なくとも１０の薬草の抽出物を含む、請求項１から１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
少なくとも１１の薬草の抽出物を含む、請求項１から１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
アロエエモジン、エモジン、クリソファノール、レイン、センノシド−Ａ、センノシド−Ｃ、センノシド−Ｄ、没食子酸、エピガロカテキン、ガロカテキン、ケルセチン、ケンフェロール、没食子酸エピガロカテキン、プーアル茶（ＰＥ１）のポリフェノール画分、及びそれらの混合物からなる群から選択される有効量の少なくとも１つの化合物を、薬学的に許容可能な担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わせて含む組成物。
【請求項２０】
前記化合物は、アロエエモジン、没食子酸、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、ガロカテキン（ＧＣ）、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、ケルセチン、ケンフェロール、プーアル茶のポリフェノール画分、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
請求項１から１８のいずれかに記載された少なくとも１つの薬草又は薬草抽出物と請求項１９に記載された少なくとも１つの化合物との有効量を、薬学的に許容可能な担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わせて含む組成物。
【請求項２２】
請求項１から１８のいずれかに記載された少なくとも１つの薬草又は薬草抽出物と請求項２０に記載された少なくとも１つの化合物との有効量を、薬学的に許容可能な担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わせて含む組成物。
【請求項２３】
少なくとも１種の抗アンドロゲン化合物を更に含む、請求項１から２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
少なくとも１種のＧｎＲＨモジュレータを更に含む、請求項１から２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
フルタミド、ビカルタミド、ニルタミド、酢酸シプロテロン、ケトコナゾール、アミノグルテチミド、アバレリックス、ロイプロリド、ゴセレリン、トリプトレリン、ブセレリン、酢酸アビラテロン、ソラフェニブ及びそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの化学物質を更に含む、請求項１から２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
前立腺肥大用薬剤、エウレキシン、フルタミド、ゴセレリン、ロイプロリド、ルプロン、ニランドロン、ニルタミド、ゾラデックス及びそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの化学物質を更に含む、請求項１から２２、２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
経口剤形である、請求項１から２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
局所投与剤形である、請求項１から２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
アンドロゲン受容体（ＡＲ）の活動過多を原因の一部とする又は前記活動過多により悪化される病態若しくは病状を、前記活動過多を阻害することによって治療、阻害、予防、発生率の低減、改善及び／又は解消するための医薬組成物の製造における、有効量の請求項１から２６のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項３０】
前記病態若しくは病状は、前立腺肥大症、肝細胞癌、脱毛及び／又は発毛、高レベルのＤＨＴによって引き起こされる男性／女性型脱毛症（アンドロゲン性脱毛症）、座瘡、脂漏症、多毛症、化膿性汗腺炎、性的倒錯、少年での思春期早発症、並びに女性の多嚢胞性卵巣症候群からなる群から選択される、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
前記病態若しくは病状は前立腺癌である、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
前記病態若しくは病状は薬剤耐性前立腺癌である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記前立腺癌は、アンドロゲン受容体スプライス変異体（ＡＲ−Ｖ）に関連する薬剤耐性癌である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３４】
前記前立腺癌は、ビカルタミド及び／又はエンザルタミド耐性前立腺癌である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３５】
前記前立腺癌は去勢抵抗性前立腺癌である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３６】
前記病態若しくは病状は、脱毛及び／又は発毛である、請求項２９に記載の使用。
【請求項３７】
前記病態若しくは病状は、高レベルのＤＨＴによって引き起こされる男性／女性型脱毛症（アンドロゲン性脱毛症）である、請求項２９に記載の使用。
【請求項３８】
前記病態若しくは病状は、座瘡又は脂漏症である、請求項２９に記載の使用。
【請求項３９】
前記病態若しくは病状は、多毛症、化膿性汗腺炎、性的倒錯、少年での思春期早発症、又は女性の多嚢胞性卵巣症候群である、請求項２９に記載の使用。
【請求項４０】
前記病態若しくは病状は肝細胞癌である、請求項２９に記載の使用。
【請求項４１】
必要とする対象における脱毛若しくは発毛を阻害する又は安定させるための医薬組成物の製造における、有効量の請求項１から２６のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項４２】
必要とする対象における過度な発毛を阻害するための医薬組成物の製造における、有効量の請求項１から２６のいずれかに記載の組成物の使用。
【国際調査報告】
2021500023.tif 000045
2021500023.tif 000046
2021500023.tif 000047