(57)【要約】癌を治療する方法であって、特異的に間葉系間質細胞（ＭＳＣ）のシアリル化を阻害又は低減して、ＭＳＣ免疫抑制を阻害し、癌におけるＴ細胞増殖を回復させることを含む方法が、提供される。この方法は、シアリルトランスフェラーゼインヒビター（例えば、３Ｆａｘ-ペルアセチルＮｅｕ５Ａｃ）又はシアリダーゼを投与することを含んでもよい。シアル酸を除去するために投与前に操作されたＭＳＣの投与及びＭＳＣ−シアル酸とＳｉｇｌｅｃ  ７といったレクチンとの間の相互作用、及び／又はＭＳＣ−レクチンとシアル酸との間の相互作用をブロックする小分子又はブロッキング抗体の使用もまた、記載される。
2021501189.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の治療に用いるためのシアリル化のインヒビターであって、前記インヒビターは、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）の特異的なシアリル化を低減又は阻害するように標的化されている、上記インヒビター。
【請求項２】
前記インヒビターは、シアリルトランスフェラーゼインヒビターである、請求項１に記載の使用のためのインヒビター。
【請求項３】
前記シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、ＭＳＣに関連する又は特異的であるシアリルトランスフェラーゼを特異的に阻害する、請求項２に記載の使用のためのインヒビター。
【請求項４】
前記インヒビターは、骨髄微小環境への特異的な送達のために標的化されている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のためのインヒビター。
【請求項５】
前記インヒビターは、ＭＳＣへの特異的な送達のために標的化されている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のためのインヒビター。
【請求項６】
前記インヒビターは、前記骨髄微小環境又はＭＳＣに特異的な抗原を標的とするモノクローナル抗体と共役している、請求項４又は５に記載の使用のためのインヒビター。
【請求項７】
前記インヒビターは、（ｉ）シアル酸アナログ、（ｉｉ）ＣＭＰ−シアル酸アナログ、（ｉｉｉ）シチジンアナログ、（ｉｖ）オリゴ糖誘導体、（ｖ）芳香族化合物、（ｖｉ）フラボノイドｓ及び（ｖｉｉ）リトコール酸アナログからなる群から選択されるシアリルトランスフェラーゼインヒビターである、請求項４〜６のいずれか一項に記載の使用のためのインヒビター。
【請求項８】
前記シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、シアル酸アナログである、請求項７に記載の使用のためのインヒビター。
【請求項９】
前記シアル酸アナログは、３Ｆａｘ−ペルアセチルＮｅｕ５Ａｃである、請求項８に記載の使用のためのインヒビター。
【請求項１０】
前記インヒビターは、シアリダーゼであり、前記シアリダーゼは、骨髄微小環境又は間葉系間質細胞（ＭＳＣ）への特異的な送達のために標的化されている、請求項１に記載の使用のためのインヒビター。
【請求項１１】
前記シアリダーゼは、骨髄微小環境への特異的な送達のために標的化されている、請求項１０に記載の使用のためのインヒビター。
【請求項１２】
前記シアリダーゼは、ＭＳＣへの特異的な送達のために標的化されている、請求項１０に記載の使用のためのインヒビター。
【請求項１３】
前記シアリダーゼは、前記骨髄微小環境又はＭＳＣに特異的な抗原を標的とするモノクローナル抗体と共役している、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の使用のためのインヒビター。
【請求項１４】
対象における癌の治療に用いるための間葉系間質細胞（ＭＳＣ）であって、前記ＭＳＣは、前記対象への投与の前にシアル酸を除去するように操作されている、上記ＭＳＣ。
【請求項１５】
シアル酸を除去する前記ＭＳＣの操作は、α２，６連結シアル酸を除去することを含む、請求項１４に記載の使用のためのＭＳＣ。
【請求項１６】
前記癌の治療に用いるための、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）−シアル酸とレクチンとの間の相互作用、及び／又は、ＭＳＣ−レクチンとシアル酸との間の相互作用をブロックする小分子又はブロッキング抗体。
【請求項１７】
前記小分子又はブロッキング抗体は、ＭＳＣ−シアル酸とＳｉｇｌｅｃ  ７との間の相互作用、及び／又は、ＭＳＣ  Ｓｉｇｌｅｃ  ７とシアル酸との間の相互作用をブロックする、請求項１６に記載の使用のための小分子又はブロッキング抗体。
【請求項１８】
前記小分子は、シアル酸模倣体を含む、請求項１６又は１７に記載の使用のための小分子
【請求項１９】
それを必要とする対象における癌を治療する方法であって、前記方法は、前記対象の間葉系間質細胞（ＭＳＣ）の特異的なシアリル化を阻害又は低減することを含む、上記方法。
【請求項２０】
ＭＳＣの特異的なシアリル化を阻害又は低減することは、シアリルトランスフェラーゼインヒビターを前記対象に投与することを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、ＭＳＣに関連する又は特異的であるシアリルトランスフェラーゼを特異的に阻害する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記インヒビターは、骨髄微小環境への特異的な送達のために標的化されている、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記インヒビターは、ＭＳＣへの特異的な送達のために標的化されている、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記インヒビターは、前記骨髄微小環境又はＭＳＣに特異的な抗原を標的とするモノクローナル抗体．と共役している、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記インヒビターは、（ｉ）シアル酸アナログ、（ｉｉ）ＣＭＰ−シアル酸アナログ、（ｉｉｉ）シチジンアナログ、（ｉｖ）オリゴ糖誘導体、（ｖ）芳香族化合物、（ｖｉ）フラボノイドｓ及び（ｖｉｉ）リトコール酸アナログからなる群から選択されるシアリルトランスフェラーゼインヒビターである、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記インヒビターは、シアル酸アナログである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、３Ｆａｘ−ペルアセチルＮｅｕ５Ａｃである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ＭＳＣの特異的なシアリル化を阻害又は低減することは、シアリダーゼを前記対象に投与することを含み、前記シアリダーゼは、骨髄微小環境又はＭＳＣへの特異的な送達のために標的化されている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２９】
前記シアリダーゼは、骨髄微小環境への特異的な送達のために標的化されている、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記シアリダーゼは、ＭＳＣへの特異的な送達のために標的化されている、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記シアリダーゼは、前記骨髄微小環境又はＭＳＣに特異的な抗原を標的とするモノクローナル抗体と共役している、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
ＭＳＣの特異的なシアリル化を阻害又は低減することは、ＭＳＣを前記対象に投与することを含み、前記ＭＳＣは、前記対象への投与の前にシアル酸を除去するように操作されている、請求項１９に記載の方法。
【請求項３３】
シアル酸を除去する前記ＭＳＣの操作は、α２，６連結シアル酸を除去することを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
それを必要とする対象における癌を治療する方法であって、前記方法は、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）−シアル酸とレクチンとの間の相互作用、及び／又は、ＭＳＣ−レクチンとシアル酸との間の相互作用をブロックする小分子又はブロッキング抗体を投与することを含む、上記方法。
【請求項３５】
前記小分子又はブロッキング抗体は、ＭＳＣ−シアル酸とＳｉｇｌｅｃ  ７との間の相互作用、及び／又は、ＭＳＣ  Ｓｉｇｌｅｃ  ７とシアル酸との間の相互作用をブロックする、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記小分子は、シアル酸模倣体を含む、請求項３４又は３５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌を治療する方法に関する。特に、本発明は、Ｔ細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を回復させることを含めた、癌における腫瘍微小環境の免疫抑制コンポーネントを逆転させることに関する。本明細書中に記載される免疫賦活化アプローチは、多くの癌に対する広範な適用性を有する。
【背景技術】
【０００２】
シアリル化は、シアル酸グループが、末端単糖として、オリゴ糖及び炭水化物といった分子の上へと導入されるプロセスである。シアル酸は、真核細胞の細胞表面糖タンパク質及び糖脂質上の幅広く発現した末端炭水化物である、ノイラミン酸（ａ９−炭素背骨単糖）のＮ又はＯ置換誘導体に対する一般用語である。そこには、２つの共通の哺乳動物シアル酸：Ｎ−アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）及びＮ−グリコリルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ｇｃ）が存在し、それらは、Ｎ−アセチルグルコサミンからの４つの連続した反応により合成される。真核細胞の表面上でのそれらのありふれた存在によって、シアル酸は、転移、腫瘍進行、炎症及びウイルス感染を含めた、いくつかの病態生理学的プロセスにおいて鍵となる役割を担う。シアル酸の量は、シアリダーゼ及びシアリルトランスフェラーゼのレベルによって司られる。
【０００３】
シアリルトランスフェラーゼは、シアル酸を形成途中のオリゴ糖へと転移させる酵素である。各シアリルトランスフェラーゼは特定の糖基質に特異的である。シアリルトランスフェラーゼは、シアル酸をシアル化糖脂質（ガングリオシド）の末端部分に、又は糖タンパク質のＮ−又はＯ−連結糖鎖に付加する。シアリルトランスフェラーゼが作用するアクセプター構造及びシアリルトランスフェラーゼが形成する糖連結のタイプに基づいて区別することができる約２０の異なるシアリルトランスフェラーゼが存在する。これらのシアリルトランスフェラーゼ遺伝子のそれぞれは、組織−、細胞タイプ−、及びステージ−特異的な様式で異なって発現し、細胞のシアリル化パターンを制御する。それらは、基質特異性、組織分布及び種々の生化学的パラメーターにおいて異なる。例えば、シアリルトランスフェラーゼの１つのグループは、ガラクトースにα−２，３連結を持つシアル酸を付加し、一方、他のシアリルトランスフェラーゼは、ガラクトース又はＮ−アセチルガラクトサミンにα−２，６連結を持つシアル酸を付加する。
【０００４】
シアリダーゼは、細胞表面又は血清シアロ糖共役体からシアル酸残基の除去を引き起こすシアル酸異化作用の最も重要な酵素の１つである。通常、高等動物では、分解されやすい糖共役体は、エンドサイトーシスによって捕捉される。後期エンドソームとリソソームの融合後、リソソームシアリダーゼは、シアル酸残基を除去する。これらのシアリダーゼの活性は、Ｏ−アセチル基の除去に基づいている。遊離シアル酸分子は、リソソームの膜を介してサイトゾルに輸送される。そこで、それらはリサイクルされ、再び活性化されて、ゴルジ装置内で別の形成途中の糖共役体分子を形成することができる。シアリダーゼ、例えばＮＥＵ−１は、細胞膜のレベルでも作用する（Ｌｕｋｏｎｇ  ＫＥ，  Ｓｅｙｒａｎｔｅｐｅ  Ｖ，  Ｌａｎｄｒｙ  Ｋ，  Ｔｒｕｄｅｌ  Ｓ，  Ａｈｍａｄ  Ａ，  Ｇａｈｌ  ＷＡ，  Ｌｅｆｒａｎｃｏｉｓ  Ｓ，  Ｍｏｒａｌｅｓ  ＣＲ，  Ｐｓｈｅｚｈｅｔｓｋｙ  ＡＶ．  Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  ｓｉａｌｉｄａｓｅ  ｉｓ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｓｉｇｎａｌ  ｉｎ  ｉｔｓ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｔａｉｌ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００１  Ｄｅｃ  ７；２７６（４９）：４６１７２−８１．  Ｅｐｕｂ  ２００１  Ｓｅｐ  ２４．  ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：  １１５７１２８２）。
【０００５】
腫瘍形成及び転移は、腫瘍細胞の細胞表面糖タンパク質及び糖脂質上のオリゴ糖の変化した構造及び発現と頻繁に関連する。腫瘍細胞上のシアリル化糖共役体の発現は、発生、分化、疾患及び発癌性トランスフォーメーションの間に変化することが示されてきた。癌細胞における異常なシアリル化は、侵襲性及び転移潜在性を含めた悪性特性に関連する際立った特徴である。腫瘍細胞のシアリル化を標的とする方法は、癌を治療するための手段として研究されている。例えば、欧州特許公開第２９０６９５２Ａ号は、多発性ミエローマを治療するためにミエローマ細胞を標的とするためのシアリルトランスフェラーゼインヒビターの使用を開示している。
【０００６】
間葉系間質細胞（ＭＳＣ）は、骨髄に見られ、骨芽細胞、軟骨細胞、筋細胞及び脂肪細胞を含めた種々の細胞タイプに分化することができる多能性（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ）間質細胞である。ＭＳＣは、免疫系の潜在的サプレッサーであり、腫瘍微小環境内での免疫抑制が抗癌治療の失敗の主な理由であることが現在認識されている。免疫チェックポイント阻害薬物は、腫瘍微小環境内の免疫抑制を克服する手段として研究されており、いくつかのモノクローナル抗体がチェックポイントインヒビターとして開発中である。しかしながら、これらは遺伝子工学によって生産する必要があるため、生産するのに高費用である。さらに、それらは、単一の行動様式を有している。したがって、腫瘍微小環境の免疫抑制表現型を克服するための新しい手段は、多くの癌に適用可能な有利な抗癌応答を得るために優位となったであろう。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者らは、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）のシアリル化とそれらの免疫抑制特性との間の連関を同定した。特に、ＭＳＣのシアリル化の阻害が、細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を回復させ、而して、癌における腫瘍微小環境の重要な免疫抑制コンポーネントを克服することが、本発明者らにより示されている。このことは、癌を持つ患者における免疫抑制を逆転させる高い対費用効果のアプローチを提供し、及び、本明細書中に記載される免疫賦活化アプローチは、免疫抑制が癌敷設における共通の機構であるので、多くの癌に対する広範な適用性を有する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
よって、本発明の第一の態様によれば、癌の治療に用いるためのシアリル化のインヒビターであって、前記インヒビターは、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）の特異的なシアリル化を阻害する又は低減するように標的化されている、インヒビターが提供される。
【０００９】
典型的には、ＭＳＣのシアリル化の阻害又は低減は、Ｔ細胞ｓ及び／又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞をアップレギュレートする。
【００１０】
典型的には、細胞表面ＭＳＣのシアリル化は、低減又は阻害されていてもよい。
【００１１】
典型的には、インヒビターは、シアリルトランスフェラーゼインヒビターである。シアリルトランスフェラーゼインヒビターの使用は、薬物耐性に関連する問題を回避し、転移を阻害することについての支援となり得る。
【００１２】
シアリルトランスフェラーゼは、異なる組織及び細胞タイプに特異的であってもよく、基質特異性において異なっていてもよい。特定の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼインヒビターを標的にして、ＭＳＣの特異的なシアリル化を阻害することは、ＭＳＣに関連する又は特異的であるシアリルトランスフェラーゼを特異的に阻害するシアリルトランスフェラーゼインヒビターを使用することを含む。ＭＳＣ中の関連するシアリルトランスフェラーゼのみを標的とするであろう選択的シアリルトランスフェラーゼインヒビターの使用は、汎シアリルトランスフェラーゼインヒビターで発生し得たオフターゲット効果のいかなるリスクを回避するであろうために、有利であったであろう。シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、全身投与経路を使用して投与してもよい。
【００１３】
特定の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、シアル酸のα２，３糖連結を持つ糖上への付加を触媒するシアリルトランスフェラーゼを阻害する。特定の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、シアル酸のα２，６糖連結を持つ糖上への付加を触媒するシアリルトランスフェラーゼを阻害する。特定の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、シアル酸のα２，８糖連結を持つ糖上への付加を触媒するシアリルトランスフェラーゼを阻害する。
【００１４】
特定の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼインヒビターを標的化して、特異的にＭＳＣのシアリル化を阻害することは、特異的に骨髄微小環境への送達を標的化するシアリルトランスフェラーゼインヒビターを使用することを含む。特定の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、特異的にＭＳＣへの送達を標的とする。骨髄又はＭＳＣへの選択的送達は、オフターゲット毒性、特に腎毒性のリスクを低減させる。シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、汎シアリルトランスフェラーゼインヒビター（例えば、３Ｆａｘ−ペルアセチルＮｅｕ５Ａｃ）又は上に記載したようにＭＳＣにおいて関連するシアリルトランスフェラーゼのみを標的化したであろう選択的シアリルトランスフェラーゼインヒビターであってもよい。シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、全身投与経路を使用して投与されてもよい。ＭＳＣが存在する骨髄微小環境への又はＭＳＣ自体への標的化送達は、シアリルトランスフェラーゼインヒビターを、骨髄微小環境又はＭＳＣに特異的な抗原を標的化するモノクローナル抗体に結合させることによって達成してもよい。ＭＳＣ特異的抗原の例としては、ＣＤ１０５、ＣＤ９０及びＣＤ７３が挙げられる。ＭＳＣは、ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４又はＣＤ１１ｂ、ＣＤ７９アルファ又はＣＤ１９及びＨＬＡ−ＤＲの発現を欠く。シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、ナノ粒子として処方されてもよい。ナノ粒子は、モノクローナル抗体でコーティングされてもよい。シアリル化の阻害は、ゴルジにおけるシアリルトランスフェラーゼの作用をブロックするために、ＭＳＣによるシアリルトランスフェラーゼインヒビターの取込み及び内部移行が必要となる。シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、脂質又はタンパク質上の伸長するグリカンへの新規なシアル酸残基の取込みを防止することにより、細胞表面シアリル化を徐々に阻害する。特定の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、３Ｆａｘ−ペルアセチルＮｅｕ５Ａｃである。
【００１５】
特定の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、（ｉ）シアル酸アナログ、（ｉｉ）ＣＭＰ−シアル酸アナログ、（ｉｉｉ）シチジンアナログ、（ｉｖ）オリゴ糖誘導体、（ｖ）芳香族化合物、（ｖｉ）フラボノイド及び（ｖｉｉ）リトコール酸アナログからなる群から選択される。特定の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼインヒビターは、シアル酸アナログ、例えば、３Ｆａｘ−ペルアセチルＮｅｕ５Ａｃである。特定の実施形態では、ｔｈｅシアリルトランスフェラーゼインヒビターは、ＣＭＰ−シアル酸アナログ、例えば、シチジン−５′−イルシアリルエチルホスホネートである。．特定の実施形態では、ｔｈｅシアリルトランスフェラーゼインヒビターは、シチジンアナログ、例えば、５−メチルＣＭＰ又は２′−Ｏ−メチルＣＭＰである。特定の実施形態では、ｔｈｅシアリルトランスフェラーゼインヒビターは、芳香族化合物、例えば、シアリルトランスフェラーゼ阻害属性を持つ天然芳香族化合物である、負帯電スルホン酸アナログである。シアリルトランスフェラーゼインヒビターのさらなる例は、Ｗａｎｇ  Ｌ，  Ｌｉｕ  Ｙ，  Ｗｕ  Ｌ，  Ｓｕｎ  Ｘ−Ｌ．    Ｓｉａｌｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ．    Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １８６４  （２０１６）  １４３−１５３に記載されている。
【００１６】
特定の実施形態では、インヒビターは、シアリダーゼである。よって、本発明の第二の態様によれば、癌の治療に用いるためのシアリダーゼであって、前記シアリダーゼは、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）に特異的に標的化されている、シアリダーゼが提供される。
【００１７】
特定の実施形態では、ＭＳＣに対して特異的にシアリダーゼを標的化することは、特異的に骨髄微小環境への送達のために標的化されるシアリダーゼを使用することを含む。特定の実施形態では、シアリダーゼは、特にＭＳＣへの送達のために標的化される。シアリダーゼは、細胞表面糖タンパク質又は糖脂質の特異的糖連結でシアル酸残基を切断する。ＭＳＣが存在する骨髄微小環境又はＭＳＣ自体への標的化された送達は、シアリダーゼを、例えば上に記載したように、骨髄微小環境又はＭＳＣに特異的な抗原又は細胞表面マーカーを標的化するモノクローナル抗体に結合させることによって達成してもよい。シアリダーゼは、ナノ粒子として処方されてもよい。ナノ粒子は、モノクローナル抗体でコーティングされてもよい。特定の実施形態では、シアリダーゼは、ＮＥＵ−１である。
【００１８】
本発明の第三の態様によれば、対象における癌の治療に用いるための間葉系間質細胞（ＭＳＣ）であって、前記ＭＳＣは、前記対象への投与の前にシアル酸を除去するように操作されている、ＭＳＣが提供される。
【００１９】
ＭＳＣが癌患者に治療目的で注入される場合、ＭＳＣは、注入の前にシアル酸を除去するように操作されてもよい。これは、例えば、低分子干渉ＲＮＡ又はＣｒｉｓｐｒ／Ｃａｓ９技術を使用して達成され得た。好ましくは、ＭＳＣの操作は、ＭＳＣのホーミング特性に影響を及ぼさないであろう−この点で、好ましくは、シアリルＬｅｗｉｓＸ合成に関与するアルファ２，３連結シアル酸は除去されないであろう、例えば、ＳＴ３ＧＡＬ４及びＳＴ３ＧＡＬ６によって生成されるアルファ２，３連結シアル酸。その場合、ＭＳＣを操作することは、ＭＳＣシアリル化には重要となり得るが、シアリルＬｅｗｉｓの生成及び／又はアルファ２，６を除去することには重要となり得ない、ＳＴ３ＧＡＬ１、ＳＴ３ＧＡＬ５といった他のアルファ２，３連結シアル酸を除去することを含んでもよい。
【００２０】
本発明の第四の態様によれば、前記癌の治療に用いるための、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）−シアル酸とレクチンとの間の相互作用、及び／又は、ＭＳＣ−レクチンとシアル酸との間の相互作用をブロックする小分子又はブロッキング抗体が提供される。
【００２１】
特定の実施形態では、小分子又はブロッキング抗体は、ＭＳＣ−シアル酸と、ＮＫ細胞といった免疫細胞上のレクチン、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ  ７又はＳｉｇｌｅｃ  ９といったｓｉｇｌｅｃとの間の相互作用をブロックする。小分子又はブロッキング抗体は、シアル酸（例えば、ＮＫ細胞といった免疫細胞上のもの）とＭＳＣ上のレクチン、例えばＳｉｇｌｅｃ  ７又はＳｉｇｌｅｃ  ９といったｓｉｇｌｅｃとの間の相互作用を追加で又は代替的にブロックしてもよい。小分子は、シアル酸模倣物を含んでいてもよい。含む場合があります。ブロッキング抗体は、モノクローナル抗体、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｓｉｇｌｅｃリガンド相互作用をブロックするモノクローナル抗体であってもよい。特定の実施形態において、小分子又は遮断抗体は、シアル酸とＳｉｇｌｅｃ  ７との間の相互作用をブロックしてもよい。特定の実施形態において、小分子又は遮断抗体は、シアル酸とＳｉｇｌｅｃ  ９との間の相互作用をブロックしない。
【００２２】
本発明のさらなる態様によれば、それを必要とする対象における癌を治療する方法であって、前記方法は、前記対象の間葉系間質細胞（ＭＳＣ）の特異的なシアリル化を阻害又は低減することを含む、上記方法が提供される。
【００２３】
その方法は、シアリル化のインヒビター、特に、シアリルトランスフェラーゼインヒビター又はシアリダーゼを前記対象に投与することを含んでいてもよい。インヒビターは、上で記載したようなシアリルトランスフェラーゼインヒビター又はシアリダーゼであってもよい。その方法は、ＭＳＣを前記対象に投与することであって、前記ＭＳＣは、例えば、上で記載したように、前記対象への投与の前にシアル酸を除去するように操作されていること、をさらに含んでいてもよい。
【００２４】
また、それを必要とする対象における癌を治療する方法であって、前記方法は、相互作用間葉系間質細胞（ＭＳＣ）−シアル酸とレクチンとの間の相互作用、及び／又は、ＭＳＣ−レクチンとシアル酸との間の相互作用をブロックする小分子又はブロッキング抗体を投与することを含む、上記方法も提供される。小分子又はブロッキング抗体は、上で記載したような小分子又はブロッキング抗体であってもよい。
【００２５】
癌の治療のための医薬の調製における、上で記載したようなシアリルトランスフェラーゼインヒビター、シアリダーゼ、操作されたＭＳＣ、小分子又は遮断抗体の、癌の治療のための医薬の調製における使用が、さらに提供される。
【００２６】
本発明は、例示としてのみ与えられる、そのいくつかの実施形態の以下の記載から、以下の図面を参照して、より明確に理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、シアル酸が（ａ）炎症促進性（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）環境、（ｂ）多発性ミエローマ及び（ｃ）結腸癌でアップレギュレートされることを示す。ＣＭ＝多発性ミエローマ馴化培地。ＭＷＳ＝ウシ胎児血清を含まない多発性ミエローマ馴化培地。ＴＣＭ＝結腸癌馴化培地。統計：対応のないＴ検定及び、該当する場合一元配置ＡＮＯＶＡ  Ｐ＜０．０５＊  ＜０．００５＊＊  ＜０．０００５＊＊＊。
【図２】図２は、事前処理したＭＳＣがＴ−細胞免疫抑制を上昇させたことを示す。図２（ａ）は、ＣＤ４＋リンパ球を示し、図２（ｂ）は、全ＣＤ４＋増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を示し、図２（ｃ）は、ＣＤ８＋リンパ球を示し、図２（ｄ）は、全ＣＤ８＋増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を示し、図２（ｅ）は、ＮａＮＯ２のレベルを示し、図２（ｆ）は、ＰＧＥ２レベルを示す。
【図３】図３は、グリコシル化の阻害がＭＳＣ免疫変調を障害することを示す。図３（ａ）は、ＣＤ４＋リンパ球を示し、図３（ｂ）は、全ＣＤ４＋増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を示し、図３（ｃ）は、ＣＤ８＋リンパ球を示し、図３（ｄ）は、全ＣＤ８＋増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を示す。．
【図４】図４は、グリコシル化の阻害がＭＳＣ免疫変調を障害するが、これは、ＮＯ（図４（ａ））、ＩＬ−１０図４（ｂ））及びＰＧＥ２図４（ｃ））非依存的であることを示す。
【図５】図５は、ｈＭＳＣがＳｉｇｌｅｃ  ７（図５（ａ））及びＳｉｇｌｅｃ  ９（図５（ｂ））受容体の両方を発現していることを示す。炎症促進性（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）環境では、Ｓｉｇｌｅｃ  ７は、刺激されていないＭＳＣと比較して増加する（ＴＮＦ−α＋ＩＬ−１β）（図５（ａ））。その逆が、Ｓｉｇｌｅｃ  ９について見られる（図５（ｂ））。
【図６】図６は、多発性ミエローマの間葉系間質細胞（ＭＭ  ＭＳＣ）が、健康なＭＳＣ対照と比較してシアリル化プロファイルを増加させたことを示す。ＭＭ  ＭＳＣと健康なＭＳＣの両方のシアル酸プロファイルは、フローサイトメトリーで分析した。
【図７】図７は、ＭＭ  ＭＳＣが活性化Ｔリンパ球を抑制する増大した能力を有することを示す。ＭＭ  ＭＳＣ及び健康なＭＳＣの両方を、Ｔリンパ球共培養に９６時間置いた。図７（ａ）は、％ＣＤ４増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を示し、図７（ｂ）は、ＣＤ４カウントを示し、図７（ｃ）は、％ＣＤ８増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を示し、図７（ｄ）は、ＣＤ８カウントを示す。
【図８】図８は、ＭＭ  ＭＳＣが活性化マクロファージを抑制する増大した能力を有することを示す。ＭＭ  ＭＳＣ及び健康なＭＳＣの両方を、ＩＦＮ−γ及びＬＰＳの存在下でマクロファージ共培養に７２時間置いた。ＭＭ  ＭＳＣは、ＩＦＮ−γ刺激マクロファージの活性化表現型を抑制する増大した能力を有した。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
（発明の詳細な説明）
本発明者らは、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）のシアリル化の阻害がＭＳＣの免疫抑制特性を低下させることを同定した。ＭＳＣの免疫抑制成分は、癌における共通の特徴であり、したがって、本発明は、一般的に癌に対する広範な適用性を有し、新規なチェックポイントインヒビターとして効果的に作用する。
【００２９】
癌におけるシアリル化に焦点を当てた以前の試みは、例えば、腫瘍抗原に対する標識抗体を使用して、特異的に腫瘍細胞のシアリル化を阻害することを目的としていた。オフターゲット毒性が問題と考えられたので、これらの試みは腫瘍細胞のシアリル化に特異的に焦点化された。本発明者らは、特にＭＳＣにおけるシアリル化と癌における免疫抑制との間の連関を同定し、ＭＳＣを特異的に標的とする治療をもたらした。骨髄又はＭＳＣへの選択的送達は、オフターゲット毒性、特に腎毒性のリスクを低減する。
【００３０】
ＭＳＣのシアリル化の阻害は、Ｔ細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を回復することが本発明者らによって示され、したがって、癌における腫瘍微小環境の重要な免疫抑制コンポーネントを克服する。理論に拘束されるつもりではなく、ＭＳＣのシアリル化の低減はまた、マクロファージを極性化してもよく、このことは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に対する有利な効果といった、Ｔ細胞増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）とは独立した有利な効果を有していたことができた。例えば、マクロファージがより少ないＰＤＬ−１を発現する場合、ＰＤ−１を発現することができるＮＫ細胞に対する阻害効果がより少なくなってもよい。
【００３１】
本発明者らはまた、炎症状況におけるＭＳＣ上のＳｉｇｌｅｃ−７の上方制御も示した。Ｓｉｇｌｅｃ−７は、Ｔ細胞の負の制御に重要な役割を担うことが知られている（Ｉｋｅｈａｒａ  Ｙ，  Ｉｋｅｈａｒａ  ＳＫ，  Ｐａｕｌｓｏｎ  ＪＣ．  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｂｙ  Ｓｉｇｌｅｃ−７  （ｐ７０／ＡＩＲＭ）  ａｎｄ  Ｓｉｇｌｅｃ−９．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２００４  Ｏｃｔ  ８；２７９（４１）：４３１１７−２５．  Ｅｐｕｂ  ２００４  Ａｕｇ  ３．  ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：  １５２９２２６２）これは、炎症におけるＭＳＣとＴ細胞との間の重要な連関であり得た。
【００３２】
また、理論に縛られることを望まないで、ＭＳＣ上のｓｉｇｌｅｃリガンドは、ＮＫ細胞上のｓｉｇｌｅｃ（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ  ７）と直接相互作用して、ＮＫ細胞の阻害を引き起こすことができた。Ｓｉｇｌｅｃ−７はまた、ＮＫ細胞の阻害に重要な役割を担うことも知られている。
【００３３】
シアリル化を阻害する方法は、国際特許公開番号ＷＯ２００８／０８７２５６Ａ１に記載されている。この文献は、ヒト幹細胞及びそれに由来する細胞集団に存在する特定のシアリル化構造を記載する。
【００３４】
それを必要とする対象は、癌に罹患している対象又は癌患者であってもよい。
【００３５】
治療（例えば、シアリルトランスフェラーゼインヒビター、シアリダーゼ、修飾ＭＳＣ、小分子又はブロッキング抗体）は、１つ以上の標準的な癌治療と組み合わせされていてもよい。治療は、単独で投与されてもよく、又は適切な医薬的に許容される賦形剤、希釈剤又は担体を一般に含むであろう医薬組成物として投与されてもよい。医薬的に許容される賦形剤、希釈剤又は担体は、意図された投与経路に応じて選択してもよい。適切な医薬的担体の例としては、水、グリセロール及びエタノールが挙げられる。
【００３６】
治療は、治療を必要とする患者へいかなる適した経路を介して投与されてもよい。
治療は、注射又は注入により非経口的に投与されてもよい。非経口投与のための好ましい経路の例は、静脈内、心臓内、動脈内、腹腔内、筋肉内、腔内、皮下、経粘膜、吸入及び経皮を含むが、これらに限定されない。投与の経路は、局所及び経腸、例えば、粘膜（肺を含む）、経口、経鼻及び直腸をさらに含んでもよい。治療はまた、ナノ粒子、ミクロスフェア、リポソーム、他の微粒子送達系又は血液を含む特定の組織に配置された徐放性製剤を介して投与されてもよい。
【００３７】
治療は、典型的には、「治療有効量」で対象に投与され、これは、治療が投与される対象に利益を示すのに十分な量である。投与される実際の投与量、並びに投与の速度及びタイムコースは、治療される状態の性質及び重篤度、並びに治療される対象の年齢、性別及び年齢などの要因、並びに投与の経路に依存するであろうし、これらを適宜参照して決定することができる。さらに適宜な考慮が、治療の特性、例えば、そのインビボ血漿寿命及び製剤中の濃度、並びに送達の経路、部位及び速度に払われるべきである。治療の処方、例えば用量等の決定は、究極的には一般開業医及び他の医師の責任内で及び彼らの裁量であり、典型的には、治療される障害、個々の患者の状態、送達の部位、投与の方法及び開業医に知られている他の要因を考慮する。
【００３８】
投与量計画は、単回投与、又は複数回投与用量を含むことができる。治療はさらに、治療が投与されている癌の治療に使用される他の治療学及び医薬と同時に、連続して、又は別個に投与することができる。
【００３９】
（定義）
他に定義されなければ、本明細書中で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明の分野において技術に精通した者により共通して理解される意味を有する。
【００４０】
本明細書中で使用されるように、用語「癌」は、体の他の部分へ侵入又は拡散する潜在性を持つ異常な細胞増殖（ｇｒｏｗｔｈ）に関する一群の疾患を参照して理解される。癌は、例えば、肺癌、前立腺癌、大腸癌、胃癌、腸癌、乳癌、口腔癌、膵臓癌及び子宮頸癌からなる群から選択されていてもよい。
【００４１】
典型的には、用語「対象」及び「患者」は、本明細書中で互換的に使用される。対象は、典型的には哺乳動物、より典型的にはヒトである。
【００４２】
用語「阻害する」及び「阻害している」は、部分的な阻害（即ち、低減）及び完全な阻害の両方を参照するように本明細書中で使用される。
【００４３】
用語「シアリル化のインヒビター」は、本明細書中で、例えば、シアル酸（例えば、シアリルトランスフェラーゼインヒビター）の添加を阻害又は低減すること及び／又はシアル酸の除去（例えば、シアリダーゼ）を促進することにより、シアリル化を阻害又は低減する任意の化合物又は薬物を指すために使用される。
【００４４】
「特異的に間葉系間質細胞（ＭＳＣ）」、「間葉系間質細胞（ＭＳＣ）を特異的に標的化すること」又は「特異的にＭＳＣのシアリル化の阻害を標的化するこ」又は同様な語への言及は、腫瘍細胞を含む他の細胞タイプのシアリル化よりも高い速度でＭＳＣのシアリル化を阻害又は低減する、治療の能力（例えば、シアリダーゼ又はシアリルトランスフェラーゼインヒビター）を指すために本明細書中で使用され、即ち、治療は、他の細胞タイプのシアリル化よりもむしろ主にＭＳＣのシアリル化を低減又は阻害することを目的とする。特定の実施形態では、他の細胞タイプのシアリル化に対する効果もあるが、これは、ＭＳＣのシアリル化に対する効果よりも低く、好ましくは著しくそうである。代替の実施形態では、シアリル化に対する効果は、ＭＳＣのシアリル化に限定される。同様に、「ＭＳＣに関連する又は特異的であるシアリルトランスフェラーゼを特異的に阻害する」又は類似の言及は、ＭＳＣのシアリルトランスフェラーゼを、腫瘍細胞を含めた、他の細胞タイプのシアリルトランスフェラーゼよりも高い速度で阻害する治療（例えば、シアリルトランスフェラーゼインヒビター）の能力を指すために本明細書で使用され、即ち、治療は、他の細胞タイプのシアリル化よりもむしろ主にＭＳＣのシアリル化を低減又は阻害することを目的とする。特定の実施形態では、他の細胞タイプのシアリルトランスフェラーゼに対する効果もあるが、これは、ＭＳＣのシアリルトランスフェラーゼに対する効果よりも低く、好ましくは著しくそうである。代替の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼに対する効果は、ＭＳＣのシアリルトランスフェラーゼに限定される。
【００４５】
本明細書中で使用されるような用語「治療」、並びに「治療する」及び「治療すること」などの関連用語は、癌又はその少なくとも１つの症状の進行、重篤度及び／又は期間の減少を意味する。したがって、用語「治療」は、対象に利益をもたらすことができる任意のレジメンを指す。治療には、治療効果、緩和効果、又は予防効果を含んでいてもよい。
【００４６】
本明細書中で使用されるような用語「骨髄微小環境」は、脂肪細胞、造血幹細胞、前駆細胞（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ）及び前駆体細胞（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｃｅｌｌｓ）を含むがこれらに限定されない骨髄のすべての細胞及び構造成分を含む。
【００４７】
本明細書中で使用されるような用語「腫瘍微小環境」は、腫瘍／癌性細胞が存在する細胞環境を指す。
【００４８】
本発明を参照して本明細書中で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）／含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語及び「有している（ｈａｖｉｎｇ）／含んでいる(ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語は、述べられた特徴、整数、工程又はコンポーネントの存在を特定するために使用されるが、１以上の他の機能、整数、工程、コンポーネント、又はそれらのグループの存在又は追加を排除するものではない。
【００４９】
本明細書中で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」などの用語は、文脈が明らかに他を要求しない限り、単数及び複数の指示対象を含む。
【００５０】
明確にするため別個の実施形態の文脈で説明されている本発明の特定の特徴は単一の実施形態に組み合わせて提供してもよいことは分かるであろう。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈で説明されている本発明の種々の特徴は、別々に又は任意の適切なサブコンビネーションで提供してもよい。
【実施例】
【００５１】
（実施例−シアリル化の阻害はＭＳＣ免疫抑制を障害する）
（材料及び方法）
４匹のおよそ５〜７週のメスＢＡＬＢ／ｃａｔを、安楽死させ、大腿骨及び脛骨を切開して、培地又はＰＢＳ入りの５０ｍｌチューブ中に置いた。鉗子及び鋏を使用して、骨をきれいにして筋肉を除去し、両端を切り取って、ＭＳＣ培地を含むペトリ皿に骨髄を突き出した。１ｍｌシリンジに装着された３０Ｇ針を使用して骨髄を突き出し、骨が白く見えるまで数回繰り返した。骨髄を５０ｍｌチューブに取り付けられた４０μｍのふるいを通過させ、ふるいを培地で２回洗浄した。培地を交換し、細胞カウントを行った。１０μｌの細胞を４０μｌのＰＢＳ及び１０μｌの４％酢酸と混合し、細胞カウントを行った。カウントに基づいて、Ｔ１７５ｃｍフラスコ当たり又はフラスコ当たり１匹の動物で、約３５００〜５０００万の細胞を播種した。単離及び培養後、ＭＳＣはＴＮＦ−α＋ＩＬ−１βでの処理の前後にインビトロで広範囲に特徴付けた。
【００５２】
ヒトＭＳＣ（ｈＭＳＣ）を、３名のヒトのドナーの骨髄から単離した。細胞をＴ１７５フラスコに５ｘ１０４単核細胞／ｃｍ２で播種した。実験に使用する前に、細胞をインビトロで広範囲に特徴付けた。
【００５３】
シアル酸含量を、レクチンカップル化フローサイトメトリーを使用してアッセイした。ビオチンラベル化ＳＮＡ−Ｉ及びＭＡＬ−ＩＩを使用して、α２−６シアル酸及びα２−３シアル酸をそれぞれ検出した。シアリルトランスフェラーゼ阻害を、１００μＭの３Ｆａｘ−ペルアセチルＮｅｕ５Ａｃを使用して実施した。細胞を、阻害を確実にするため２回の連続した継代の間、インヒビターの存在下で培養した。
【００５４】
ＴＮＦ−α＋ＩＬ−１βＭＳＣが、増強した免疫調節能力を提示したかどうかを決定するために、それらを混合リンパ球反応（ＭＬＲ）中で共培養した。ＭＳＣ及びＴＮＦ−α＋ＩＬ−１βＭＳＣは、異なるＭＳＣ：Ｔ細胞比で９６時間共培養した。Ｔ細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、活性化、死滅及び分化は、フローサイトメトリーによって決定した。
【００５５】
ＥＬＩＳＡ及びＧｒｉｅｓｓアッセイの両方を、混合リンパ球反応実験の上清中の免疫調節性分子の量を決定するために使用した。
【００５６】
（結果及び考察）
ＭＳＣは、炎症促進性（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）微小環境に曝露されると、増大したＴ−細胞免疫抑制能力を有する（図１）。この増大した免疫抑制潜在性は、一酸化窒素（ＮＯ）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、トランスフォーミング増殖因子ベータ１（ＴＧＦ−β）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）及び細胞表面プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）といった分泌された分子の増加によるものである。この研究で、本発明者らは、ＭＳＣの免疫抑制属性においてシアル酸がどのような役割を担うのかを調査した。シアル酸がＭＳＣ免疫変調においていかなる役割を果たすかを研究するために、本発明者らは、シアリルトランスフェラーゼインヒビター３Ｆａｘ−ペルアセチルＮｅｕ５Ａｃを使用した。これは、ＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ａｃに変換され、シアリルトランスフェラーゼを阻害する、細胞透過性のシアリル酸アナログである。ＭＳＣを刺激してより免疫抑制性にするために、本発明者らは、ＭＳＣを炎症促進性（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）サイトカインＩＬ−１及びＴＮＦ−αで前処理し、それらを多発性ミエローマ細胞株由来の上清で調整するか、又は結腸癌細胞株由来の上清で調整することにより、炎症誘発性微小環境を模倣した。本発明者らは、これらの条件下でシアル酸が増加することを観察した（図１）。本発明者らはまた、これらの環境で調整されたＭＳＣによるリンパ球抑制の増加も観察した（図２）。本発明者らは、インヒビターありで及びなしで処理されたＭＳＣの免疫変調能力を試験した（図３）。シアリルトランスフェラーゼインヒビターに曝露した後にＴＮＦ−α＋ＩＬ−１βで処理されたＭＳＣは、活性化Ｔ細胞の抑制にあまり効果的でなかった（図３）。次いで、本発明者らは、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）の回復が、ＭＳＣ調節に関与する鍵となるタンパク質の１つの阻害によるものであるかどうかを調べた（図４）。シアリルトランスフェラーゼインヒビターはＴ細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を回復させたが、一酸化窒素（ＮＯ）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、及びＩＬ−１０とは独立性であるようである。
【００５７】
Ｓｉｇｌｅｃは、細胞-細胞相互作用を促進し、グリカン認識を通じて自然免疫系及び適応免疫系の細胞の機能を制御すると考えられているシアル酸結合免疫グロブリン様レクチンのファミリーである。本発明者らは、ヒトＭＳＣ（ｈＭＳＣ）がＳｉｇｌｅｃ  ７及びＳｉｇｌｅｃ  ９の両方を発現することを初めて示した。３名のヒトのドナーは、炎症促進性（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）刺激後にＳｉｇｌｅｃ  ７の増加を示したが、Ｓｉｇｌｅｃ  ９は減少した（図５）。このことは、ＭＳＣによる免疫細胞の免疫変調におけるシアル酸含量の重要性を強調する。
【００５８】
図６は、ミエローマ保有マウスから単離されたＭＳＣが健康な対照と比較して増加したシアル酸プロファイルを示したことを示し、シアル酸が癌治療の潜在的標的であることをさらに裏付ける。図７は、ＭＭ  ＭＳＣが健康なコントロールと比較して活性化Ｔリンパ球を抑制する能力が増大していることを示し、図８は、ＭＭ  ＭＳＣが健康な対照と比較して活性化マクロファージを抑制する能力が増大していることを示す。
【図１（ａ）】
2021501189.tif 000003
【図１（ｂ）】
2021501189.tif 000004
【図１（ｃ）】
2021501189.tif 000005
【図２（ａ）】
2021501189.tif 000006
【図２（ｂ）】
2021501189.tif 000007
【図２（ｃ）】
2021501189.tif 000008
【図２（ｄ）】
2021501189.tif 000009
【図２（ｅ）】
2021501189.tif 000010
【図２（ｆ）】
2021501189.tif 000011
【図３（ａ）】
2021501189.tif 000012
【図３（ｂ）】
2021501189.tif 000013
【図３（ｃ）】
2021501189.tif 000014
【図３（ｄ）】
2021501189.tif 000015
【図４（ａ）】
2021501189.tif 000016
【図４（ｂ）】
2021501189.tif 000017
【図４（ｃ）】
2021501189.tif 000018
【図５（ａ）】
2021501189.tif 000019
【図５（ｂ）】
2021501189.tif 000020
【図６（ａ）】
2021501189.tif 000021
【図６（ｂ）】
2021501189.tif 000022
【図７（ａ）】
2021501189.tif 000023
【図７（ｂ）】
2021501189.tif 000024
【図７（ｃ）】
2021501189.tif 000025
【図７（ｄ）】
2021501189.tif 000026
【図８（ａ）】
2021501189.tif 000027
【図８（ｂ）】
2021501189.tif 000028
【図８（ｃ）】
2021501189.tif 000029
【図８（ｄ）】
2021501189.tif 000030
【国際調査報告】
2021501189.tif 000031
2021501189.tif 000032
2021501189.tif 000033
2021501189.tif 000034
2021501189.tif 000035