(57)【要約】  本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合し、ＡｐｏＣ３機能に拮抗する抗体を提供する。これらの抗体を含む医薬組成物、これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらの抗体を使用して対象を治療する方法も、提供される。
2021501579.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域と、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域と、を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＴＹＳＭＲ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＨＴＸ１Ｘ２ＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（式中、Ｘ１が、Ｇ、Ｅ、またはＤであり、Ｘ２が、ＧまたはＡである）（配列番号８７）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、ＡＧＹＳＤ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＸＧＫＴＹＦＹ（式中、Ｘが、ＤまたはＧである）（配列番号８８）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＱＶＳＮＲＡＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＡＸＧＴＹＹＰＨＴ（式中、Ｘが、ＱまたはＨである）（配列番号８のアミノ酸配列を含み、
前記抗体の前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号３、９、１０；３、１１、１０；３、９、１２；または３、１１、１２ではない、単離された抗体。
【請求項２】
ＣＤＲＨ２が、ＳＩＨＴＧＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３６）、ＳＩＨＴＥＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３７）、ＳＩＨＴＤＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３８）、またはＳＩＨＴＥＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
ＣＤＲＬ１が、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＤＧＫＴＹＦＹ（配列番号６）またはＫＴＳＱＧＬＶＨＳＧＧＫＴＹＦＹ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体。
【請求項４】
ＣＤＲＬ３が、ＡＨＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１４）またはＡＱＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５】
前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３、３６、１０、６、７、および１４；３、３７、１０、４０、７、および１４；３、３８、１０、４０、７、および１４；３、３８、１０、６、７、および１４；３、３９、１０、６、７、および１４；または３、３７、１０、４０、７、および１３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６】
ＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号４２〜５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体。
【請求項７】
ＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号５４〜６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体。
【請求項８】
ＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域が、それぞれ、配列番号４２および５４、４３および５５、４４および５６、４５および５７、４６および５８、４６および５４、４７および５８、４７および５４、４８および５８、４８および５４、４９および５９、４９および６０、５０および５９、５０および６０、５１および６１、５２および６２、５３および６２、４３および６３、４４および６４、または４５および６５に示されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体。
【請求項９】
前記抗体が、ヒト化抗体である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、ヒト定常領域をさらに含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１１】
前記定常領域が、野生型ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域のバリアントであり、前記バリアントヒト免疫グロブリン重鎖定常領域が、ｐＨ６でヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する前記野生型ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域の親和性と比較して、ｐＨ６でヒトＦｃＲｎに対する増加した前記親和性を有する、請求項１０に記載の単離された抗体。
【請求項１２】
前記定常領域が、ヒトＩｇＧの重鎖定常領域である、請求項１０または１１に記載の単離された抗体。
【請求項１３】
前記定常領域が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域である、請求項１２に記載の単離された抗体。
【請求項１４】
前記定常領域が、それぞれ、ＥＵ位置４３３、４３４、および４３６でアミノ酸Ｋ、Ｆ、およびＹを含む、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１５】
前記定常領域が、それぞれ、ＥＵ位置２５２、２５４、および２５６でアミノ酸Ｙ、Ｔ、およびＥを含む、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１６】
前記定常領域が、それぞれ、ＥＵ位置４２８および４３４でアミノ酸ＬおよびＳを含む、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１７】
前記定常領域が、配列番号２２〜２４、７６〜７８、および８１〜８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１８】
配列番号６６〜７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１９】
配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２０】
重鎖および軽鎖を含み、前記重鎖および前記軽鎖が、それぞれ、配列番号６６および７４、６７および７４、６８および７４、６９および７４、７０および７４、７１および７４、７２および７４、または７３および７４に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２１】
前記ＡｐｏＣ３が、ヒトＡｐｏＣ３である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
【請求項２３】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体の前記重鎖可変領域および／または前記軽鎖可変領域をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項２４】
請求項２３に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項２５】
請求項２３に記載のポリヌクレオチドまたは請求項２４に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２６】
請求項２５に記載の宿主細胞を、前記抗体の発現を可能にする条件下で培養することを含む、ＡｐｏＣ３に結合する抗体を産生するための方法。
【請求項２７】
対象におけるＡｐｏＣ３の活性を阻害するための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体または医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２８】
対象の血中トリグリセリドレベルを低下させるための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体または医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２９】
対象における食後脂肪血症を阻害するための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体または医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３０】
対象における高トリグリセリド血症を治療するための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体または医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３１】
対象におけるカイロミクロン血症を治療するための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体または医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３２】
高トリグリセリド血症を伴う対象における心血管疾患のリスクを軽減するための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体または医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３３】
前記心血管疾患が、心筋梗塞である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記心血管疾患が、狭心症である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記心血管疾患が、脳卒中である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記心血管疾患が、アテローム性動脈硬化症である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記抗体が、前記対象の血液中のカイロミクロンまたはカイロミクロンレムナントのレベルを低下させる、請求項２７〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記対象が、追加の脂質低下剤を受けている、請求項２７〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記追加の脂質低下剤が、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤が、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、またはシンバスタチンである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記追加の脂質低下剤が、ＰＣＳＫ９阻害剤である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＰＣＳＫ９阻害剤が、アリロクマブ、エボロクマブ、またはボコシズマブである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記追加の脂質低下剤が、エゼチミブである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４４】
前記追加の脂質低下剤が、エゼチミブおよびＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の組み合わせである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４５】
前記追加の脂質低下剤が、エゼチミブ、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、およびＰＣＳＫ９阻害剤の組み合わせである、請求項３８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年１０月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／５７９，４４９号の利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する抗体およびその使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
血中トリグリセリドレベルの上昇（高トリグリセリド血症）は、アテローム性動脈硬化症の原因因子であり、心血管系死亡、狭心症、心筋梗塞、および脳卒中などの心血管系イベントのリスクを高める。
【０００４】
ＡｐｏＣ３は、非常に高濃度（１０μＭを超える）で血中を循環するタンパク質であり、ほとんどがトリグリセリドリッチリポタンパク質（ＴＲＬ）、ＴＲＬレムナント、および高密度リポタンパク質に結合する。ＡｐｏＣ３は、血中トリグリセリドレベルの重要な調節因子であると思われる。例えば、ヒトにおけるＡｐｏＣ３レベルは、血中トリグリセリドレベルと正の相関があることが示されており、ＡｐｏＣ３レベルの上昇は、高トリグリセリド血症に関連する。さらに、ＡｐｏＣ３は、リポタンパク質リパーゼ（ＴＲＬのトリグリセリドを加水分解する酵素）の活性を阻害し、ＴＲＬレムナントの肝臓への取り込みも阻害し、これらの両方が、血中トリグリセリドレベルの上昇を引き起こす。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】WO2014/131008
【特許文献２】WO2018/193427
【特許文献３】WO2018/007999
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
いくつかの治療法は、フィブラート、ナイアシン、およびオメガ−３脂肪酸などの高トリグリセリド血症の治療に承認されている。しかしながら、これらの治療法は、血漿トリグリセリドを低下させるのに多少有効的であるのみである。したがって、血漿トリグリセリドを低下させるために改善された治療法が当該技術分野で必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合し、ＡｐｏＣ３機能を阻害する抗体を提供する。これらの抗体を含む医薬組成物、これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらの抗体を使用して対象を治療する方法も、提供される。
【０００８】
特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、肝細胞によるＴＲＬの取り込みを阻害するＡｐｏＣ３の能力を弱めることができ、対象に投与されると、ＡｐｏＣ３およびＡｐｏＢの血清レベルを急速かつ持続的に低下させることができる。したがって、開示された抗ＡｐｏＣ３抗体は、高トリグリセリド血症および関連疾患（例えば、心血管疾患および膵炎）の治療および予防に有用である。
したがって、一態様では、本開示は、ｐＨ７．４で第１の解離定数（ＫＤ）で、ｐＨ５．５で第２のＫＤでＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体を提供し、第２のＫＤと第１のＫＤの比率は、少なくとも約５、１０、２０、または５０である。特定の実施形態では、第１のＫＤは、１０、５、２、１、０．５、０．２、または０．１ｎＭ未満である。特定の実施形態では、ＡｐｏＣ３を発現するマウスにおける抗体の半減期は、少なくとも約３、７、１４、２１、または２８日間である。
【０００９】
特定の実施形態では、抗体は、ＡｐｏＣ３が超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の肝細胞の取り込みを阻害する能力を弱める。特定の実施形態では、抗体は、対象の血液からのＡｐｏＣ３のクリアランス速度を増加させることができる。特定の実施形態では、抗体は、対象の血液からのＡｐｏＢのクリアランス速度を増加させることができる。特定の実施形態では、抗体は、対象の血液中のＡｐｏＣ３のレベルを低下させることができる。特定の実施形態では、抗体は、対象の血液中のＡｐｏＣ３のレベルを少なくとも２週間、少なくとも４０％低下させることができる。特定の実施形態では、抗体は、対象の血液中のＡｐｏＢのレベルを低下させることができる。特定の実施形態では、抗体は、対象の血液中のＡｐｏＢのレベルを少なくとも２週間、少なくとも２０％低下させることができる。特定の実施形態では、抗体は、対象における食後脂肪血症を阻害することができる。特定の実施形態では、抗体は、脂質結合ＡｐｏＣ３に結合することができる。
【００１０】
特定の実施形態では、抗体は、配列番号２に示されるアミノ酸配列内のエピトープに結合する。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の２、５、６、８、または１０位に少なくとも１つのアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の５位および６位にアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の２、５、６、および８位にアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の１０位にアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の６、８、および１０位にアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の６位および８位にアミノ酸を含む。
【００１１】
特定の実施形態では、抗体（例えば、ヒト化抗体）は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域と、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域と、を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＴＹＳＭＲ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＨＴＸ１Ｘ２ＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（式中、Ｘ１が、Ｇ、Ｅ、またはＤであり、Ｘ２が、ＧまたはＡである）（配列番号８７）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、ＡＧＹＳＤ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＸＧＫＴＹＦＹ（式中、Ｘが、ＤまたはＧである）（配列番号８８）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＱＶＳＮＲＡＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＡＸＧＴＹＹＰＨＴ（式中、Ｘが、ＱまたはＨである）（配列番号８）のアミノ酸配列を含み、任意に、抗体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号３、９、１０；３、１１、１０；３、９、１２；または３、１１、１２ではない。
【００１２】
特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、ＳＩＨＴＧＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３６）、ＳＩＨＴＥＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３７）、ＳＩＨＴＤＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３８）、またはＳＩＨＴＥＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＬ１は、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＤＧＫＴＹＦＹ（配列番号６）またはＫＴＳＱＧＬＶＨＳＧＧＫＴＹＦＹ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＬ３は、ＡＨＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１４）またはＡＱＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む。
【００１３】
特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号３、３６、１０、６、７、および１４；３、３７、１０、４０、７、および１４；３、３８、１０、４０、７、および１４；３、３８、１０、６、７、および１４；３、３９、１０、６、７、および１４；または３、３７、１０、４０、７、および１３に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号４２〜５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号５４〜６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、それぞれ、配列番号４２および５４、４３および５５、４４および５６、４５および５７、４６および５８、４６および５４、４７および５８、４７および５４、４８および５８、４８および５４、４９および５９、４９および６０、５０および５９、５０および６０、５１および６１、５２および６２、５３および６２、４３および６３、４４および６４、または４５および６５に示されるアミノ酸配列を含む。
【００１４】
特定の実施形態では、抗体は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域と、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域と、を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＴＹＳＭＲ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＸ１ＴＤＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（式中、Ｘ１が、ＳまたはＨである）（配列番号４）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、Ｘ２ＧＹＳＤ（式中、Ｘ２が、ＡまたはＨである）（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＤＧＫＴＹＦＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＱＶＳＮＲＡＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＡＸ３ＧＴＹＹＰＨＴ（式中、Ｘ３が、ＱまたはＨである）（配列番号８）のアミノ酸配列を含み、
式中、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３のうちの少なくとも１つが、Ｈである。
【００１５】
特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、配列番号３、１１、１０、６、７、および１３；３、９、１２、６、７、および１３；３、９、１０、６、７、および１４；３、１１、１０、６、７、および１４；３、９、１２、６、７、および１４；３、１１、１２、６、７、および１３；または３、１１、１２、６、７、および１３に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１６〜１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、それぞれ、配列番号１６および１９、１７および１９、１８および１９、１５および２０、１６および２０、１７および２０、または１８および２０に示されるアミノ酸配列を含む。
【００１６】
別の態様では、本開示は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域と、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域と、を含む、ＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）を提供し、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＴＹＳＭＲ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＨＴＸ１Ｘ２ＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（式中、Ｘ１が、Ｇ、Ｅ、またはＤであり、Ｘ２が、ＧまたはＡである）（配列番号８７）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、ＡＧＹＳＤ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＸＧＫＴＹＦＹ（式中、Ｘが、ＤまたはＧである）（配列番号８８）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＱＶＳＮＲＡＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＡＸＧＴＹＹＰＨＴ（式中、Ｘが、ＱまたはＨである）（配列番号８）のアミノ酸配列を含む。
【００１７】
特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、ＳＩＨＴＧＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３６）、ＳＩＨＴＥＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３７）、ＳＩＨＴＤＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３８）、またはＳＩＨＴＥＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＬ１は、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＤＧＫＴＹＦＹ（配列番号６）またはＫＴＳＱＧＬＶＨＳＧＧＫＴＹＦＹ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＬ３は、ＡＨＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１４）またはＡＱＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号３、３６、１０、６、７、および１４；３、３７、１０、４０、７、および１４；３、３８、１０、４０、７、および１４；３、３８、１０、６、７、および１４；３、３９、１０、６、７、および１４；または３、３７、１０、４０、７、および１３に示されるアミノ酸配列を含む。
【００１８】
別の態様では、本開示は、ＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）を提供し、抗体は、配列番号４２〜５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【００１９】
別の態様では、本開示は、ＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）を提供し、抗体は、配列番号５４〜６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００２０】
別の態様では、本開示は、ＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）を提供し、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、それぞれ、配列番号４２および５４、４３および５５、４４および５６、４５および５７、４６および５８、４６および５４、４７および５８、４７および５４、４８および５８、４８および５４、４９および５９、４９および６０、５０および５９、５０および６０、５１および６１、５２および６２、５３および６２、４３および６３、４４および６４、または４５および６５に示されるアミノ酸配列を含む。
【００２１】
別の態様では、本開示は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域と、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域と、を含む、ＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体を提供し、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＴＹＳＭＲ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＸ１ＴＤＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（式中、Ｘ１が、ＳまたはＨである）（配列番号４）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、Ｘ２ＧＹＳＤ（式中、Ｘ２が、ＡまたはＨである）（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＤＧＫＴＹＦＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＱＶＳＮＲＡＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＡＸ３ＧＴＹＹＰＨＴ（式中、Ｘ３が、ＱまたはＨである）（配列番号８）のアミノ酸配列を含み、
式中、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３のうちの少なくとも１つが、Ｈである。
【００２２】
特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、配列番号３、１１、１０、６、７、および１３；３、９、１２、６、７、および１３；３、９、１０、６、７、および１４；３、１１、１０、６、７、および１４；３、９、１２、６、７、および１４；３、１１、１２、６、７、および１３；または３、１１、１２、６、７、および１３に示されるアミノ酸配列を含む。
【００２３】
別の態様では、本開示は、ＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６〜１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【００２４】
別の態様では、本開示は、ＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００２５】
別の態様では、本開示は、ＡｐｏＣ３に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、それぞれ、配列番号１６および１９、１７および１９、１８および１９、１５および２０、１６および２０、１７および２０、または１８および２０に示されるアミノ酸配列を含む。
【００２６】
前述の態様のいずれか１つの特定の実施形態では、抗体は、ヒトまたはヒト化定常領域をさらに含む。特定の実施形態では、定常領域は、野生型ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域のバリアントであり、バリアントヒト免疫グロブリン重鎖定常領域は、ｐＨ６でヒトＦｃＲｎに対する野生型ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域の親和性と比較して、ｐＨ６でヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する増加した親和性を有する。特定の実施形態では、定常領域は、ヒトＩｇＧの重鎖定常領域である。特定の実施形態では、定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域である。
【００２７】
特定の実施形態では、定常領域は、それぞれ、ＥＵ位置４３３、４３４、および４３６でアミノ酸Ｋ、Ｆ、およびＹを含む。特定の実施形態では、定常領域は、それぞれ、ＥＵ位置２５２、２５４、および２５６でアミノ酸Ｙ、Ｔ、およびＥを含む。特定の実施形態では、定常領域は、それぞれ、ＥＵ位置４２８および４３４でアミノ酸ＬおよびＳを含む。特定の実施形態では、定常領域は、配列番号２２〜２４、７６〜７８、および８１〜８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００２８】
特定の実施形態では、単離された抗体は、配列番号６６〜７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、単離された抗体は、配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、単離された抗体は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖および軽鎖は、それぞれ、配列番号６６および７４、６７および７４、６８および７４、６９および７４、７０および７４、７１および７４、７２および７４、または７３および７４に示されるアミノ酸配列を含む。
【００２９】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示される抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物を提供する。
【００３０】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示される抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを提供する。別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。別の態様では、本開示は、本明細書に開示される発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。
【００３１】
別の態様では、本開示は、ＡｐｏＣ３に結合する抗体を産生するための方法を提供し、本方法は、本明細書に開示される宿主細胞を、抗体の発現を可能にする条件下で培養することを含む。
【００３２】
別の態様では、本開示は、対象におけるＡｐｏＣ３の活性を阻害するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗体または医薬組成物を投与することを含む。別の態様では、本開示は、対象の血液中のトリグリセリドレベルを低下させるための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗体または医薬組成物を投与することを含む。別の態様では、本開示は、対象における食後脂肪血症を阻害するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗体または医薬組成物を投与することを含む。別の態様では、本開示は、対象における高トリグリセリド血症を治療するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗体または医薬組成物を投与することを含む。別の態様では、本開示は、対象におけるカイロミクロン血症を治療する方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗体または医薬組成物を投与することを含む。
【００３３】
別の態様では、本開示は、高トリグリセリド血症に罹患している対象における心血管疾患のリスクを軽減するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗体または医薬組成物を投与することを含む。特定の実施形態では、心血管疾患は、心筋梗塞である。特定の実施形態では、心血管疾患は、狭心症である。特定の実施形態では、心血管疾患は、脳卒中である。特定の実施形態では、心血管疾患は、アテローム性動脈硬化症である。
【００３４】
治療方法に関する前述の態様の特定の実施形態では、抗体は、対象の血液中のカイロミクロンまたはカイロミクロンレムナントのレベルを低下させる。特定の実施形態では、対象は、追加の脂質低下剤を受けている。特定の実施形態では、追加の脂質低下剤は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤である。特定の実施形態では、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンまたはシンバスタチンである。特定の実施形態では、追加の脂質低下剤は、ＰＣＳＫ９阻害剤である。特定の実施形態では、ＰＣＳＫ９阻害剤は、アリロクマブ、エボロクマブ、またはボコシズマブである。特定の実施形態では、追加の脂質低下剤は、エゼチミブである。特定の実施形態では、追加の脂質低下剤は、エゼチミブおよびＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の組み合わせである。特定の実施形態では、追加の脂質低下剤は、エゼチミブ、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、およびＰＣＳＫ９阻害剤の組み合わせである。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１Ａ】５Ｅ５ＷＴ（図１Ａ）、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８（図１Ｂ）、および５Ｅ５ＶＨＷＴ＿ＶＬ８（「ＶＬ８」）、５Ｅ５ＶＨ１２＿ＶＬＷＴ（「ＶＨ１２」）、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬＷＴ（「ＶＨ５」）、および５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８（「ＶＨ５＿ＶＬ８」）（図１Ｃ）抗体は、ＡｐｏＣ３がＨｅｐＧ２細胞による超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の取り込みを阻害する能力を弱めたことを示す一連のグラフである。ＨｅｐＧ２細胞を、ＤｉＩ  ＶＬＤＬでインキュベートし、示されるように、単独でまたは抗ＡｐｏＣ３抗体の存在下のいずれかでＡｐｏＣ３を精製した。ＨｅｐＧ２細胞によって摂取されたＤｉＩ  ＶＬＤＬは、ＤｉＩ色素の蛍光分光法によって測定された。ＤｉＩ  ＶＬＤＬのみ（「ＶＬＤＬ」）でインキュベートしたＨｅｐＧ２細胞は、陽性対照として機能し、ＤｉＩ  ＶＬＤＬでインキュベートし、ＡｐｏＣ３を精製したＨｅｐＧ２細胞は、抗ＡｐｏＣ３抗体（「ＡｐｏＣ３」）の非存在下で陰性対照として機能した。
【図１Ｂ】５Ｅ５ＷＴ（図１Ａ）、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８（図１Ｂ）、および５Ｅ５ＶＨＷＴ＿ＶＬ８（「ＶＬ８」）、５Ｅ５ＶＨ１２＿ＶＬＷＴ（「ＶＨ１２」）、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬＷＴ（「ＶＨ５」）、および５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８（「ＶＨ５＿ＶＬ８」）（図１Ｃ）抗体は、ＡｐｏＣ３がＨｅｐＧ２細胞による超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の取り込みを阻害する能力を弱めたことを示す一連のグラフである。ＨｅｐＧ２細胞を、ＤｉＩ  ＶＬＤＬでインキュベートし、示されるように、単独でまたは抗ＡｐｏＣ３抗体の存在下のいずれかでＡｐｏＣ３を精製した。ＨｅｐＧ２細胞によって摂取されたＤｉＩ  ＶＬＤＬは、ＤｉＩ色素の蛍光分光法によって測定された。ＤｉＩ  ＶＬＤＬのみ（「ＶＬＤＬ」）でインキュベートしたＨｅｐＧ２細胞は、陽性対照として機能し、ＤｉＩ  ＶＬＤＬでインキュベートし、ＡｐｏＣ３を精製したＨｅｐＧ２細胞は、抗ＡｐｏＣ３抗体（「ＡｐｏＣ３」）の非存在下で陰性対照として機能した。
【図１Ｃ】５Ｅ５ＷＴ（図１Ａ）、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８（図１Ｂ）、および５Ｅ５ＶＨＷＴ＿ＶＬ８（「ＶＬ８」）、５Ｅ５ＶＨ１２＿ＶＬＷＴ（「ＶＨ１２」）、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬＷＴ（「ＶＨ５」）、および５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８（「ＶＨ５＿ＶＬ８」）（図１Ｃ）抗体は、ＡｐｏＣ３がＨｅｐＧ２細胞による超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の取り込みを阻害する能力を弱めたことを示す一連のグラフである。ＨｅｐＧ２細胞を、ＤｉＩ  ＶＬＤＬでインキュベートし、示されるように、単独でまたは抗ＡｐｏＣ３抗体の存在下のいずれかでＡｐｏＣ３を精製した。ＨｅｐＧ２細胞によって摂取されたＤｉＩ  ＶＬＤＬは、ＤｉＩ色素の蛍光分光法によって測定された。ＤｉＩ  ＶＬＤＬのみ（「ＶＬＤＬ」）でインキュベートしたＨｅｐＧ２細胞は、陽性対照として機能し、ＤｉＩ  ＶＬＤＬでインキュベートし、ＡｐｏＣ３を精製したＨｅｐＧ２細胞は、抗ＡｐｏＣ３抗体（「ＡｐｏＣ３」）の非存在下で陰性対照として機能した。
【図２Ａ】ＡＡＶ８−ヒトＡｐｏＣ３マウスモデルにおける２つの抗ＡｐｏＣ３抗体、５Ｅ５および５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８、ならびに抗鶏卵リソソームヒトＩｇＧ１抗体（ＨｙＨＥＬ５）の注射後の様々な時点における血清レベルを示すグラフである。
【図２Ｂ】ＡＡＶ８−ヒトＡｐｏＣ３マウスモデルにおけるヒトＡｐｏＣ３を循環するレベルに対する５Ｅ５および５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８の効果を示すグラフである。
【図２Ｃ】ＡＡＶ８−ヒトＡｐｏＣ３マウスモデルにおけるＡｐｏＢを循環するレベルに対する５Ｅ５および５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８の効果を示すグラフである。
【図３Ａ】ヒトＡｐｏＣ３がバイオセンサーチップ上に固定されているときの、ヒトＡｐｏＣ３に対する２０個のヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体（ｍＡｂ１〜ｍＡｂ２０）の結合反応速度を示す一連の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサーグラムである。点線および実線のセンサーグラムは、それぞれ、ｐＨ７．４および５．５をアッセイするのに対応する。参考のために、２５ｎＭの濃度での５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８に対応するセンサーグラムは、全てのグラフに含まれる（ｐＨ７．４の破線およびｐＨ５．５の長破線）。
【図３Ｂ】ヒトＡｐｏＣ３がバイオセンサーチップ上に固定されているときの、ヒトＡｐｏＣ３に対する２０個のヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体（ｍＡｂ１〜ｍＡｂ２０）の結合反応速度を示す一連の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサーグラムである。点線および実線のセンサーグラムは、それぞれ、ｐＨ７．４および５．５をアッセイするのに対応する。参考のために、２５ｎＭの濃度での５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８に対応するセンサーグラムは、全てのグラフに含まれる（ｐＨ７．４の破線およびｐＨ５．５の長破線）。
【図３Ｃ】ヒトＡｐｏＣ３がバイオセンサーチップ上に固定されているときの、ヒトＡｐｏＣ３に対する２０個のヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体（ｍＡｂ１〜ｍＡｂ２０）の結合反応速度を示す一連の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサーグラムである。点線および実線のセンサーグラムは、それぞれ、ｐＨ７．４および５．５をアッセイするのに対応する。参考のために、２５ｎＭの濃度での５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８に対応するセンサーグラムは、全てのグラフに含まれる（ｐＨ７．４の破線およびｐＨ５．５の長破線）。
【図３Ｄ】ヒトＡｐｏＣ３がバイオセンサーチップ上に固定されているときの、ヒトＡｐｏＣ３に対する２０個のヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体（ｍＡｂ１〜ｍＡｂ２０）の結合反応速度を示す一連の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサーグラムである。点線および実線のセンサーグラムは、それぞれ、ｐＨ７．４および５．５をアッセイするのに対応する。参考のために、２５ｎＭの濃度での５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８に対応するセンサーグラムは、全てのグラフに含まれる（ｐＨ７．４の破線およびｐＨ５．５の長破線）。
【図３Ｅ】ヒトＡｐｏＣ３がバイオセンサーチップ上に固定されているときの、ヒトＡｐｏＣ３に対する２０個のヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体（ｍＡｂ１〜ｍＡｂ２０）の結合反応速度を示す一連の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサーグラムである。点線および実線のセンサーグラムは、それぞれ、ｐＨ７．４および５．５をアッセイするのに対応する。参考のために、２５ｎＭの濃度での５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８に対応するセンサーグラムは、全てのグラフに含まれる（ｐＨ７．４の破線およびｐＨ５．５の長破線）。
【図４Ａ】ＡｐｏＣ３抗体がバイオセンサーチップ上に固定されているときの、ヒトＡｐｏＣ３に対する２０個のヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体（ｍＡｂ１〜ｍＡｂ２０）の結合反応速度を示す一連のＳＰＲセンサーグラムである。点線および実線のセンサーグラムは、それぞれ、ｐＨ７．４および５．５をアッセイするのに対応する。参考のために、６００ｎＭの標的ｎｈｕＡｐｏＣ３濃度での５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８に対応するセンサーグラムは、全てのグラフに含まれる（ｐＨ７．４の破線およびｐＨ５．５の長破線）。
【図４Ｂ】ＡｐｏＣ３抗体がバイオセンサーチップ上に固定されているときの、ヒトＡｐｏＣ３に対する２０個のヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体（ｍＡｂ１〜ｍＡｂ２０）の結合反応速度を示す一連のＳＰＲセンサーグラムである。点線および実線のセンサーグラムは、それぞれ、ｐＨ７．４および５．５をアッセイするのに対応する。参考のために、６００ｎＭの標的ｎｈｕＡｐｏＣ３濃度での５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８に対応するセンサーグラムは、全てのグラフに含まれる（ｐＨ７．４の破線およびｐＨ５．５の長破線）。
【図４Ｃ】ＡｐｏＣ３抗体がバイオセンサーチップ上に固定されているときの、ヒトＡｐｏＣ３に対する２０個のヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体（ｍＡｂ１〜ｍＡｂ２０）の結合反応速度を示す一連のＳＰＲセンサーグラムである。点線および実線のセンサーグラムは、それぞれ、ｐＨ７．４および５．５をアッセイするのに対応する。参考のために、６００ｎＭの標的ｎｈｕＡｐｏＣ３濃度での５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８に対応するセンサーグラムは、全てのグラフに含まれる（ｐＨ７．４の破線およびｐＨ５．５の長破線）。
【図４Ｄ】ＡｐｏＣ３抗体がバイオセンサーチップ上に固定されているときの、ヒトＡｐｏＣ３に対する２０個のヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体（ｍＡｂ１〜ｍＡｂ２０）の結合反応速度を示す一連のＳＰＲセンサーグラムである。点線および実線のセンサーグラムは、それぞれ、ｐＨ７．４および５．５をアッセイするのに対応する。参考のために、６００ｎＭの標的ｎｈｕＡｐｏＣ３濃度での５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８に対応するセンサーグラムは、全てのグラフに含まれる（ｐＨ７．４の破線およびｐＨ５．５の長破線）。
【図４Ｅ】ＡｐｏＣ３抗体がバイオセンサーチップ上に固定されているときの、ヒトＡｐｏＣ３に対する２０個のヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体（ｍＡｂ１〜ｍＡｂ２０）の結合反応速度を示す一連のＳＰＲセンサーグラムである。点線および実線のセンサーグラムは、それぞれ、ｐＨ７．４および５．５をアッセイするのに対応する。参考のために、６００ｎＭの標的ｎｈｕＡｐｏＣ３濃度での５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８に対応するセンサーグラムは、全てのグラフに含まれる（ｐＨ７．４の破線およびｐＨ５．５の長破線）。
【図５Ａ】４℃で１時間インキュベートした対応する抗体の活性と比較して、指示された温度で１時間抗体をインキュベートした後の選択したヒト化抗体および５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８の活性の割合を示すグラフである。活性は、図５Ａでは会合速度として測定され、図５Ｂおよび５ＣではＲＵ最大値（Ｒ０）として測定された。
【図５Ｂ】４℃で１時間インキュベートした対応する抗体の活性と比較して、指示された温度で１時間抗体をインキュベートした後の選択したヒト化抗体および５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８の活性の割合を示すグラフである。活性は、図５Ａでは会合速度として測定され、図５Ｂおよび５ＣではＲＵ最大値（Ｒ０）として測定された。
【図５Ｃ】４℃で１時間インキュベートした対応する抗体の活性と比較して、指示された温度で１時間抗体をインキュベートした後の選択したヒト化抗体および５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８の活性の割合を示すグラフである。活性は、図５Ａでは会合速度として測定され、図５Ｂおよび５ＣではＲＵ最大値（Ｒ０）として測定された。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合し、ＡｐｏＣ３機能を阻害する抗体を提供する。これらの抗体を含む医薬組成物、これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらの抗体を使用して対象を治療する方法も、提供される。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、肝細胞によるＴＲＬの取り込みを阻害するＡｐｏＣ３の能力を弱めることができ、対象に投与されると、ＡｐｏＣ３およびＡｐｏＢの血清レベルを急速かつ持続的に低下させることができる。したがって、開示された抗ＡｐｏＣ３抗体は、高トリグリセリド血症および関連疾患（例えば、心血管疾患および膵炎）の治療および予防に有用である。
【００３７】
１．定義
本明細書で使用される場合、「ＡｐｏＣ３」という用語は、アポリポタンパク質Ｃ３タンパク質を指す。特定の実施形態では、ＡｐｏＣ３は、ヒトＡｐｏＣ３である。例示的なヒトＡｐｏＣ３アミノ酸配列は、ＲｅｆＳｅｑ受入番号ＮＰ＿００００３１．１に示されている。ＮＰ＿００００３１．１の成熟アミノ酸配列は、次のとおりである。
ＳＥＡＥＤＡＳＬＬＳＦＭＱＧＹＭＫＨＡＴＫＴＡＫＤＡＬＳＳＶＱＥＳＱＶＡＱＱＡＲＧＷＶＴＤＧＦＳＳＬＫＤＹＷＳＴＶＫＤＫＦＳＥＦＷＤＬＤＰＥＶＲＰＴＳＡＶＡＡ（配列番号１）。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「抗体」および「複数の抗体」という用語には、全長抗体、全長抗体の抗原結合断片、および抗体のＣＤＲ、ＶＨ領域またはＶＬ領域を含む分子が含まれる。抗体の例には、モノクローナル抗体、組換え産生抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖および２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖−抗体重鎖対、イントラボディ、ヘテロコンジュゲート抗体、単一ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ラクダ抗体（例えば、ラマ抗体）、ラクダ化抗体、アフィボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）、および上記のいずれかの抗原結合断片が含まれる。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。抗体は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、もしくはＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａもしくはＩｇＧ２ｂ）であり得る。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、ＩｇＧ抗体、またはそのクラス（例えば、ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４）またはそのサブクラスである。特定の一実施形態では、抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「単離された抗体」という用語は、同定され、その天然環境の少なくとも１つの構成要素から分離および／または回収された抗体を指す。「単離された抗体」という用語には、組換え宿主細胞内での原位置の抗体が含まれる。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非隣接の抗原結合部位を意味する。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９−６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（１９９１）によって、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）によって、ならびにＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６）によって記載されており、これらは全て、参照によりそれらの全体が組み込まれており、互いに比較した場合、定義は、アミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。特定の実施形態では、「ＣＤＲ」という用語は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９−６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（１９９１）によって定義される、ＣＤＲである。ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、重鎖ＣＤＲを示し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、軽鎖ＣＤＲを示す。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「フレームワーク（ＦＲ）アミノ酸残基」という用語は、免疫グロブリン鎖のフレームワーク領域中のアミノ酸を指す。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ領域」という用語には、可変領域の一部であるが、ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲのＫａｂａｔ定義を使用する）の一部ではないアミノ酸残基が含まれる。
【００４２】
本明細書で使用される場合、「可変領域」および「可変ドメイン」という用語は、交換可能に使用され、当該技術分野において一般的である。可変領域とは、典型的には、抗体の一部分、一般に、軽鎖または重鎖の一部分、典型的には、成熟重鎖におけるアミノ末端の約１１０〜１２０アミノ酸または１１０〜１２５アミノ酸および成熟軽鎖における約９０〜１１５アミノ酸を指し、これらは、配列が抗体間で大きく異なり、かつそれらの特定の抗原に対する特定の抗体の結合および特異性において使用される。配列における変動性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれるそのような領域に集中しているが、可変ドメインにおけるより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれている。いかなる特定の機構または理論にも拘束されることは望まないが、軽鎖および重鎖のＣＤＲは、抗体の抗原との相互作用および特異性に主に関与している。特定の実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、齧歯類またはマウスのＣＤＲおよびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、齧歯類またはマウスのＣＤＲおよび霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
【００４３】
「ＶＬ」および「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すように、交換可能に使用される。
【００４４】
「ＶＨ」および「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すように、交換可能に使用される。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「定常領域」および「定常ドメイン」という用語は、交換可能であり、当該技術分野において一般的である。定常領域は、抗体部分、例えば、抗原への抗体の結合に直接関与していないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示し得る、軽鎖または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比べて、より多くの保存されたアミノ酸配列を有する。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「重鎖」という用語は、抗体に言及して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、任意の異なる種類、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびミューμ）を指し得、それらから抗体のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭクラス（ＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）がそれぞれ生じる。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「軽鎖」という用語は、抗体に言及して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、任意の異なる種類、例えば、カッパ（κ）またはラムダ（λ）を指し得る。軽鎖アミノ酸配列は、当該技術分野で周知である。特定の実施形態では、軽鎖は、ヒト軽鎖である。
【００４８】
本明細書で使用する場合、「ＥＵ位置」という用語は、Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８−８５（１９６９）、およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ，ｉｎ“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１に記載されるように、抗体の定常領域のＥＵ番号付け慣習によるアミノ酸位置を指し、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「に特異的に結合する」という用語は、約１×１０−６Ｍ未満、１×１０−７Ｍ、１×１０−８Ｍ、１×１０−９Ｍ、１×１０−１０Ｍ、１×１０−１１Ｍ、１×１０−１２Ｍ、もしくはそれ以下の解離定数（ＫＤ）で抗原に結合するか、または非特異的抗原に対するその親和性よりも少なくとも２倍大きい親和性で抗原に結合する抗体の能力を指す。
【００５０】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」とは、抗体が特異的に結合することができる抗原の局所化領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの隣接アミノ酸（線形もしくは隣接エピトープ）であり得るか、またはエピトープは、例えば、ポリペプチド（複数可）の２つ以上の非隣接領域（立体構造、非線形、非連続、もしくは非隣接エピトープ）から形成され得る。特定の実施形態では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）を伴う水素／重水素交換、ペプチド走査アッセイ、または変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。
【００５１】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、および「治療」という用語は、本明細書に開示される治療または予防手段を指す。「治療」の方法は、疾患もしくは障害、または再発性疾患もしくは障害のうちの１つ以上の症状を予防するか、治癒するか、遅延させるか、その重度を低減させるか、それを発症するリスクを軽減するか、または改善させるため、あるいはかかる治療の不在下で予想される対象の生存期間よりも長く延長させるために、疾患もしくは障害を有するか、または疾患もしくは障害にかかりやすい対象への抗ＡｐｏＣ３抗体の投与を用いる。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、対象への療法剤の投与の文脈では、所望の予防または治療効果を達成する療法剤の量を指す。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語には、任意のヒトまたは非ヒト動物が含まれる。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「または」という用語は、および／またはを意味する。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「約」および「およそ」という用語は、数値または数的範囲を修飾するために使用される場合、値または範囲を５％〜１０％上回る、および５％〜１０％下回る偏差が、引用された値または範囲の意図される意味の範囲内であることを示す。
【００５６】
２．抗ＡｐｏＣ３抗体
本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合し、ＡｐｏＣ３機能を阻害する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）を提供する。
【００５７】
特定の実施形態では、単離された抗体は、哺乳動物のＡｐｏＣ３タンパク質に結合する。特定の実施形態では、単離された抗体は、ヒトＡｐｏＣ３に結合する。ある特定の実施形態では、単離された抗体は、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル）ＡｐｏＣ３に結合する。
【００５８】
ある特定の実施形態では、単離された抗体は、酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ５．５〜ｐＨ６）下よりも生理学的ｐＨ（例えば、ｐＨ７．４）で、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）により高い親和性で結合する。かかるｐＨ依存性抗体を生成するための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、１つの例示的な方法において、抗ＡｐｏＣ３抗体の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲにおける１つ以上のアミノ残基は、Ｉｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０１０）２８（１１）：１２０３−１２０７、Ｃｈａｐａｒｒｏ−Ｒｉｇｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  ＢｉｏｌＣｈｅｍ．（２０１２）２８７（１４）：１１０９０−１１０９７、米国特許第９，０９６，６５１号、および米国特許公開第２０１１／０１１１４０６Ａ１号に記載されるように、ヒスチジン残基で置換され、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。しかしながら、かかる方法は当該技術分野で周知であるが、当業者は、任意の所与の抗体について、抗原に対する抗体の親和性を破壊することなく、抗原へのｐＨ依存性結合を達成するためにヒスチジンに変異され得る正確なＣＤＲアミノ酸が、経験的にのみ判定することができることを理解する（例えば、Ｅｄｇｃｏｍｂ  ａｎｄ  Ｍｕｒｐｈｙ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（２００２）４９：１−６を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【００５９】
当業者は、抗原に対する抗体の親和性が、解離定数（ＫＤ）によって示すことができ、ＫＤが小さいほど親和性が高いことを示すことを理解し得る。したがって、特定の実施形態では、抗ＡｐｏＣ３抗体は、ｐＨ７．４で第１のＫＤおよびｐＨ５．５で第２のＫＤでＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に結合し、第２のＫＤと第１のＫＤの比率は、少なくとも１（例えば、少なくとも１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、または１００）である。
【００６０】
特定の実施形態では、第１のＫＤは、１００ｎＭ未満（例えば、５０、２０、１０、５、２、１、０．５、０．２、または０．１ｎＭ未満）である。特定の実施形態では、第２のＫＤは、１ｎＭを超える（例えば、２、５、１０、２０、もしくは５０ｎＭを超える、または０．１、０．２、０．５、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは１００μＭを超える）。特定の実施形態では、第１のＫＤは、１００ｎＭ未満（例えば、５０、２０、１０、５、２、１、０．５、０．２、または０．１ｎＭ未満）、およびＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）を発現する動物（例えば、ヒトまたはマウス）における抗体の半減期は、少なくとも約１日である（例えば、少なくとも約２、３、４、５、６、もしくは７日間、または約１、２、３、４、６、または８週間を超える）。特定の実施形態では、ＡｐｏＣ３は、ヒトＡｐｏＣ３であり、ＡｐｏＣ３を発現する動物は、ヒトである。特定の実施形態では、ＡｐｏＣ３は、ヒトＡｐｏＣ３であり、ＡｐｏＣ３を発現する動物は、ヒトＡｐｏＣ３を発現するマウスである。
【００６１】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）またはＴＲＬレムナントの肝細胞の取り込みを阻害するＡｐｏＣ３の能力を弱める（インビボまたはインビトロ）。特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）またはＴＲＬレムナントの肝細胞の取り込みを阻害するＡｐｏＣ３の能力を、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％弱める。特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）またはＴＲＬレムナントの肝細胞の取り込みを阻害するＡｐｏＣ３の能力を、少なくとも約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍弱める。
【００６２】
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、食前、食中、または食後に対象に投与された場合、対象における食後脂肪血症を阻害することができる。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、対象における食後脂肪血症を少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％阻害することができる。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、対象における食後脂肪血症を少なくとも約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍阻害することができる。
【００６３】
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、食前、食中、または食後に対象に投与された場合、対象における食後カイロミクロンレベルまたはカイロミクロンレムナントレベルを低下させることができる。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、対象における食後カイロミクロンレベルまたはカイロミクロンレムナントレベルを少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％低下させることができる。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、対象における食後カイロミクロンレベルまたはカイロミクロンレムナントレベルを少なくとも約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍低下させることができる。
【００６４】
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、対象の血液からのＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のクリアランスの速度を増加させることができる。特定の実施形態では、抗ＡｐｏＣ３抗体は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、対象の血液からのＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のクリアランスの速度を少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％増加させることができる。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、対象の血液からのＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のクリアランスの速度を少なくとも約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させることができる。ＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のクリアランスを評価するための方法には、同位体トレーサー技術が含まれるが、これらに限定されず、同位体は、放射性または安定のいずれかであってもよい。
【００６５】
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、対象の血液中のＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のレベルを低下させることができる。特定の実施形態では、抗ＡｐｏＣ３抗体は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、対象の血液中のＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のレベルを少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％低下させることができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、対象の血液中のＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のレベルを少なくとも約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍低下させることができる。特定の実施形態では、対象の血液中のＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のレベルの低下は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、もしくは５０日間、または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、もしくは８週間維持される。
【００６６】
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、脂質結合ＡｐｏＣ３（例えば、トリグリセリド、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）、またはＴＲＬレムナントに結合したＡｐｏＣ３）に結合することができる。特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、脂質またはリポタンパク質へのＡｐｏＣ３の結合を阻害しない。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、ＡｐｏＣ３と脂質またはリポタンパク質との結合について競合しない。特定の実施形態では、脂質は、脂肪酸鎖を含む。特定の実施形態では、脂質は、ホスファチジル基を含む。特定の実施形態では、脂質は、ホスファチジルコリン（例えば、ＤＭＰＣ）、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、またはホスファチジルグリセロールを含む。特定の実施形態では、脂質は、トリグリセリドである。特定の実施形態では、リポタンパク質は、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）またはＴＲＬレムナントである。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体の存在下で脂質およびリポタンパク質（例えば、トリグリセリド、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）またはＴＲＬレムナント）に結合するＡｐｏＣ３の能力は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、抗ＡｐｏＣ３抗体の非存在下での、ＡｐｏＣ３の同じ脂質およびリポタンパク質への結合の能力の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％である。
【００６７】
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）またはＴＲＬレムナントの肝細胞の取り込みを阻害するＡｐｏＣ３の能力を弱める。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体の存在下での肝細胞（例えば、ＨｅｐＧ２細胞）によるＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）またはＴＲＬレムナントの取り込みは、抗ＡｐｏＣ３抗体の非存在下での、肝細胞（例えば、ＨｅｐＧ２細胞）によるＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）またはＴＲＬレムナントの取り込みよりも、少なくとも１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５倍高い。
【００６８】
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）またはＴＲＬレムナントの肝細胞の取り込みを阻害するＡｐｏＣ３の能力を弱め、かつ脂質結合ＡｐｏＣ３（例えば、トリグリセリド、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）、またはＴＲＬレムナントに結合したＡｐｏＣ３）に結合することができる。
【００６９】
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、アミノ酸配列ＦＳＥＦＷＤＬＤＰＥ（配列番号２）内のＡｐｏＣ３のエピトープに結合する。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２内の少なくとも１つのアミノ酸を含み、任意に、配列番号２に隣接する配列番号１からの１つ以上のアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の２、５、６、８、または１０位に少なくとも１つのアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の２、５、６、８、または１０位に少なくとも２つのアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の２、５、６、８、または１０位に少なくとも３つのアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の２、５、６、８、または１０位に少なくとも４つのアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の５位および６位にアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の２、５、および６位のアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の２、５、および８位にアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の２、５、６、および８位にアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の１０位にアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の６位および１０位にアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の８位および１０位にアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の６位および８位にアミノ酸を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２の６、８、および１０位にアミノ酸を含む。特定の実施形態では、抗体は、脂質結合ＡｐｏＣ３（例えば、トリグリセリド、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）、またはＴＲＬレムナントに結合したＡｐｏＣ３）に結合することができる。ある特定の実施形態では、抗体は、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）のリポタンパク質リパーゼ媒介性脂質分解を阻害するＡｐｏＣ３の能力を弱めることはできない。特定の実施形態では、抗体はまた、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）またはＴＲＬレムナントの肝細胞の取り込みを阻害するＡｐｏＣ３の能力を弱める。特定の実施形態では、抗体はまた、食前、食中、または食後に対象に投与された場合、対象における食後脂肪血症を阻害することもできる。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体はまた、食前、食中、または食後に対象に投与された場合、対象における食後カイロミクロンレベルまたはカイロミクロンレムナントレベルを低下させることもできる。
【００７０】
任意の好適なアッセイを使用して、本明細書に開示される抗体の前述の機能活性を測定することができる。例示的なアッセイには、本明細書の実施例に開示される機能アッセイが含まれるが、これらに限定されない。
【００７１】
例示的な抗ＡｐｏＣ３抗体のアミノ酸配列は、本明細書の表１〜１３に示される。
【表１】
2021501579.tif 000003
【表２】
2021501579.tif 000004
【表３】
2021501579.tif 000005
【表４】
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【表５】
2021501579.tif 000007
【表６−１】
2021501579.tif 000008
【表６−２】
2021501579.tif 000009
【表６−３】
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【表７−１】
2021501579.tif 000011
【表７−２】
2021501579.tif 000012
【００７２】
例示的なヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体のアミノ酸配列は、本明細書の表８〜１３に示される。
【表８】
2021501579.tif 000013
【表９】
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【表１０−１】
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【表１０−２】
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【表１１−１】
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【表１１−２】
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【表１２】
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【表１３−１】
2021501579.tif 000020
【表１３−２】
2021501579.tif 000021
【００７３】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、本明細書の表３または１０に示されるＶＨドメインのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含むＶＨドメインを含む。特定の実施形態では、抗体は、表３または１０に示されるＶＨドメインのうちの１つのＣＤＲＨ１を含む。特定の実施形態では、抗体は、表３または１０に示されるＶＨドメインのうちの１つのＣＤＲＨ２を含む。特定の実施形態では、抗体は、表３または１０に示されるＶＨドメインのうちの１つのＣＤＲＨ３を含む。
【００７４】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、本明細書の表４または１１に開示されるＶＬドメインのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含むＶＬドメインを含む。特定の実施形態では、抗体は、表４または１１に示されるＶＬドメインのうちの１つのＣＤＲＬ１を含む。特定の実施形態では、抗体は、表４または１１に示されるＶＬドメインのうちの１つのＣＤＲＬ２を含む。特定の実施形態では、抗体は、表４または１１に示されるＶＬドメインの１つのＣＤＲＬ３を含む。
【００７５】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域と、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域と、を含み、表５または１２に示される抗体の、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含む。
【００７６】
特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９−６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９９１）に従って判定することができる。特定の実施形態では、抗体の軽鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って判定され、抗体の重鎖ＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ（上記）に従って判定される。
【００７７】
特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、免疫グロブリン構造ループの位置を指すＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム従って判定することができる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ＆Ｌｅｓｋ  ＡＭ，（１９８７），Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１−９１７、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２７３：９２７−９４８、Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ，（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２７：７９９−８１７、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５（１）：１７５−８２、および米国特許第７，７０９，２２６号を参照されたい）。典型的には、Ｋａｂａｔ番号付け規則を使用する場合、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＨ１ループは、重鎖アミノ酸２６〜３２、３３、または３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＨ２ループは、重鎖アミノ酸５２〜５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＨ３ループは、重鎖アミノ酸９５〜１０２に存在し、一方Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＬ１ループは、軽鎖アミノ酸２４〜３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＬ２ループは、軽鎖アミノ酸５０〜５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＬ３ループは、軽鎖アミノ酸８９〜９７に存在する。Ｋａｂａｔ番号付け規則を使用して番号付けされた場合のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＨ１ループの末端は、ループの長さによってＨ３２とＨ３４との間で変化する（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームがＨ３５ＡおよびＨ３５Ｂに挿入を配置しているためである；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終結する；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終結する；３５Ａおよび３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終結する）。
【００７８】
特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ  ７：１３２−１３６およびＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２７：２０９−２１２に記載されるように、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従って判定することができる。ＩＭＧＴ番号付けスキームによると、ＣＤＲＨ１は、２６〜３５位にあり、ＣＤＲＨ２は、５１〜５７位にあり、ＣＤＲＨ３は、９３〜１０２位にあり、ＣＤＲＬ１は、２７〜３２位にあり、ＣＤＲＬ２は、５０〜５２位にあり、ＣＤＲＬ３は、８９〜９７位にある。
【００７９】
特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、ＡｂＭ超可変領域を指すＡｂＭ番号付けスキームに従って判定することができ、これは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の折衷案を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ  ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）によって使用される。
【００８０】
特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ＲＭ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２６２：７３２−７４５に従って判定することができる。例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３１，ｐｐ．４２２−４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）におけるＭａｒｔｉｎ  Ａ．「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ」も参照されたい。
【００８１】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、表３に示されるＶＨドメインのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３領域アミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、表４に示されるＶＬドメインのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含み、各ＣＤＲは独立して、本明細書に開示されるように、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、ＭａｃＣａｌｌｕｍ、またはＡｂＭによるＣＤＲの定義に従って定義される。
【００８２】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）を提供し、当該抗体は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域と、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域と、を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＴＹＳＭＲ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＸ１ＴＸ２Ｘ３ＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（式中、Ｘ１が、ＳまたはＨであり、Ｘ２が、Ｇ、Ｅ、またはＤであり、かつＸ３が、ＧまたはＡである）（配列番号９３）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、Ｘ４ＧＹＳＤ（式中、Ｘ４が、ＡまたはＨである）（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＸ５ＧＫＴＹＦＹ（式中、Ｘ５が、ＤまたはＧである）（配列番号８８）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＱＶＳＮＲＡＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＡＸ６ＧＴＹＹＰＨＴ（式中、Ｘ６が、ＱまたはＨである）（配列番号８）のアミノ酸配列を含み、
式中、Ｘ１、Ｘ４、およびＸ６のうちの少なくとも１つが、Ｈである。
【００８３】
特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、ＳＩＨＴＧＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３６）、ＳＩＨＴＥＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３７）、ＳＩＨＴＤＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３８）、ＳＩＨＴＥＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３９）、ＳＩＳＴＤＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号９）、またはＳＩＨＴＤＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む。
【００８４】
特定の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、ＡＧＹＳＤ（配列番号１０）またはＨＧＹＳＤ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む。
【００８５】
特定の実施形態では、ＣＤＲＬ１は、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＤＧＫＴＹＦＹ（配列番号６）またはＫＴＳＱＧＬＶＨＳＧＧＫＴＹＦＹ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含む。
【００８６】
特定の実施形態では、ＣＤＲＬ３は、ＡＨＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１４）またはＡＱＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む。
【００８７】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）を提供し、当該抗体は、それぞれ、配列番号３、３６、および１０；３、３７、および１０；３、３８、および１０；３、３９、および１０；３、９、および１０；３、１１、および１０；３、９、１２；または３、１１、および１２に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。
【００８８】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、それぞれ、配列番号６、７、および１４；４０、７、および１４；４０、７、および１３；または６、７、および１３に示されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００８９】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）であって、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、１５、１６、１７、または１８に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、抗体は、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、１５、１６、１７、または１８に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。
【００９０】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）であって、配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、１９、または２０に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、１９、または２０に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００９１】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）であって、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、１５、１６、１７、または１８に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、１９、または２０に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、抗体は、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、１５、１６、１７、または１８に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、１９、または２０に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む。
【００９２】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）を提供し、当該抗体は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域と、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域と、を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＴＹＳＭＲ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＨＴＸ１Ｘ２ＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（式中、Ｘ１が、Ｇ、Ｅ、またはＤであり、Ｘ２が、ＧまたはＡである）（配列番号８７）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、ＡＧＹＳＤ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＸＧＫＴＹＦＹ（式中、Ｘが、ＤまたはＧである）（配列番号８８）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＱＶＳＮＲＡＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＡＸＧＴＹＹＰＨＴ（式中、Ｘが、ＱまたはＨである）（配列番号８）のアミノ酸配列を含む。
【００９３】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）を提供し、当該抗体は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域と、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域と、を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＴＹＳＭＲ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＨＴＧＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３６）、ＳＩＨＴＥＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３７）、ＳＩＨＴＤＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３８）、またはＳＩＨＴＥＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、ＡＧＹＳＤ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＤＧＫＴＹＦＹ（配列番号６）またはＫＴＳＱＧＬＶＨＳＧＧＫＴＹＦＹ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＱＶＳＮＲＡＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＡＨＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１４）またはＡＱＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む。
【００９４】
特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、ＳＩＨＴＧＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３６）、ＳＩＨＴＥＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３７）、ＳＩＨＴＤＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３８）、またはＳＩＨＴＥＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、ＳＩＨＴＧＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３６）、ＳＩＨＴＥＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３７）、またはＳＩＨＴＤＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、ＳＩＨＴＧＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、ＳＩＨＴＥＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３７）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、ＳＩＨＴＤＡＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、ＳＩＨＴＥＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含む。
【００９５】
特定の実施形態では、ＣＤＲＬ１は、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＤＧＫＴＹＦＹ（配列番号６）またはＫＴＳＱＧＬＶＨＳＧＧＫＴＹＦＹ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＬ１は、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＤＧＫＴＹＦＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＬ１は、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＧＧＫＴＹＦＹ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含む。
【００９６】
特定の実施形態では、ＣＤＲＬ３は、ＡＨＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１４）またはＡＱＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＬ３は、ＡＨＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＬ３は、ＡＱＧＴＹＹＰＨＴ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む。
【００９７】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）を提供し、当該抗体は、それぞれ、配列番号３、３６、および１０；３、３７、および１０；３、３８、および１０；または３、３９、および１０に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。特定の実施形態では、ＶＨドメインは、それぞれ、配列番号３、３６、および１０に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨドメインは、それぞれ、配列番号３、３７、および１０に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨドメインは、それぞれ、配列番号３、３８、および１０に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含む。
【００９８】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、それぞれ、配列番号６、７、および１４；４０、７、および１４；または４０、７、および１３に示されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。特定の実施形態では、ＶＬドメインは、それぞれ、配列番号６、７および１４に示されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬドメインは、それぞれ、配列番号４０、７および１４に示されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含む。
【００９９】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）を提供し、当該抗体は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３領域を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域を含む軽鎖可変領域と、を含み、当該ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域は、それぞれ、配列番号３、３６、１０、６、７、および１４；３、３７、１０、４０、７、および１４；３、３８、１０、４０、７、および１４；３、３９、１０、６、７、および１４；３、３７、１０、４０、７、および１３；または３、３８、１０、４０、７、および１３に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域は、それぞれ、配列番号３、３６、１０、６、７、および１４に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域は、それぞれ、配列番号３、３７、１０、４０、７、および１４に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域は、それぞれ、配列番号３、３８、１０、４０、７、および１４に示されるアミノ酸配列を含む。
【０１００】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）であって、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、８９、または９０に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、抗体は、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、８９、または９０に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号４３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号８９に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、任意に、この重鎖可変領域は、配列番号１５、１６、１７、または１８に示されるアミノ酸配列を含まない。特定の実施形態では、抗体は、配列番号９０に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、任意に、この重鎖可変領域は、配列番号１５、１６、１７、または１８に示されるアミノ酸配列を含まない。
【０１０１】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）であって、配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、９１、または９２に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、９１、または９２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５５に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５６に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５７に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５８に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５９に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号６０に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号６１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号６２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号６３に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号６４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号６５に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号９１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【０１０２】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）であって、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、８９、または９０に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、９１、または９２に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、抗体は、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、８９、または９０に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、９１、または９２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４２および５４、４３および５５、４４および５６、４５および５７、４６および５８、４６および５４、４７および５８、４７および５４、４８および５８、４８および５４、４９および５９、４９および６０、５０および５９、５０および６０、５１および６１、５２および６２、５３および６２、４３および６３、４４および６４、４５および６５、８９および９１、または９０および９２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４２および５４に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４３および５５に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４４および５６に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４５および５７に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４６および５８に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４６および５４に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４７および５８に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４７および５４に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４８および５８に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４８および５４に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４９および５９に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４９および６０に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号５０および５９に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号５０および６０に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号５１および６１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号５２および６２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号５３および６２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４３および６３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４４および６４に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４５および６５に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号８９および９１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、任意に、この重鎖可変領域は、配列番号１５、１６、１７、または１８に示されるアミノ酸配列を含まない。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号９０および９２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、任意に、この重鎖可変領域は、配列番号１５、１６、１７、または１８に示されるアミノ酸配列を含まない。
【０１０３】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域と、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域と、を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＴＹＳＭＲ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＸ１ＴＤＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（式中、Ｘ１が、ＳまたはＨである）（配列番号４）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、Ｘ２ＧＹＳＤ（式中、Ｘ２が、ＡまたはＨである）（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＤＧＫＴＹＦＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＱＶＳＮＲＡＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＡＸ３ＧＴＹＹＰＨＴ（式中、Ｘ３が、ＱまたはＨである）（配列番号８）のアミノ酸配列を含む。
【０１０４】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域と、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域と、を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＴＹＳＭＲ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＸ１ＴＤＧＧＧＴＡＹＲＤＳＶＫＧ（式中、Ｘ１が、ＳまたはＨである）（配列番号４）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、Ｘ２ＧＹＳＤ（式中、Ｘ２が、ＡまたはＨである）（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＫＴＳＱＧＬＶＨＳＤＧＫＴＹＦＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＱＶＳＮＲＡＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＡＸ３ＧＴＹＹＰＨＴ（式中、Ｘ３が、ＱまたはＨである）（配列番号８）のアミノ酸配列を含み、
式中、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３のうちの少なくとも１つが、Ｈである。
【０１０５】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、
（ｂ）配列番号９もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、
（ｃ）配列番号１０もしくは１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および／または
（ｆ）配列番号１３もしくは１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、を含む。
【０１０６】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、
（ｂ）配列番号９もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、
（ｃ）配列番号１０もしくは１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
（ｆ）配列番号１３もしくは１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、を含み、
単離された抗体は、それぞれ、配列番号３、９、１０、６、７、および１３に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３配列を含まない。
【０１０７】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、それぞれ、配列番号３、９、および１０；３、１１、および１０；３、９、および１２；または３、１１、および１２に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。特定の実施形態では、ＶＨドメインは、それぞれ、配列番号３、１１、および１０に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨドメインは、それぞれ、配列番号３、９、および１２に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨドメインは、それぞれ、配列番号３、１１、および１２に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含む。
【０１０８】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、それぞれ、配列番号６、７、および１３；または６、７、および１４に示されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。特定の実施形態では、ＶＬドメインは、それぞれ、配列番号６、７、および１４に示されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含む。
【０１０９】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３領域を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域を含む軽鎖可変領域と、を含み、当該ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域は、それぞれ、配列番号３、１１、１０、６、７、および１３；３、９、１２、６、７、および１３；３、９、１０、６、７、および１４；３、１１、１０、６、７、および１４；３、９、１２、６、７、および１４；または３、１１、１２、６、７、および１３；または３、１１、１２、６、７、および１３に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域は、それぞれ、配列番号３、１１、１０、６、７、および１４に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域は、それぞれ、配列番号３、９、１２、６、７、および１４に示されるアミノ酸配列を含む。
【０１１０】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号１５、１６、１７、または１８に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、抗体は、配列番号１５、１６、１７、または１８に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。
【０１１１】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号１９または２０に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、抗体は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【０１１２】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号１５、１６、１７、または１８に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１９または２０に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、抗体は、配列番号１５、１６、１７、または１８に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１９または２０に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１６および１９、１７および１９、１８および１９、１５および２０、１６および２０、１７および２０、または１８および２０に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１６および２０に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１７および２０に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。
【０１１３】
任意のＩｇ定常領域は、本明細書に開示される単離された抗体において使用することができる。特定の実施形態では、Ｉｇ定常領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹ免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の定常領域であり、かつ／または免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）、もしくは任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ）の定常領域である。特定の実施形態では、Ｉｇ定常領域は、ヒトまたはヒト化Ｉｇ定常領域である。
【０１１４】
特定の実施形態では、定常領域は、野生型ヒトＩｇ（例えば、ＩｇＧ）重鎖定常領域のバリアントであり、バリアントヒトＩｇ重鎖定常領域は、同じ条件下でのヒトＦｃＲｎに対して対応する野生型ヒトＩｇ重鎖定常領域の親和性と比較して、ヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ５．５〜ｐＨ６）での増加した（例えば、少なくとも１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、または２０倍増加した）親和性を有する。特定の実施形態では、バリアントヒトＩｇ重鎖定常領域は、同じ条件下でのヒトＦｃＲｎに対して野生型ヒトＩｇ重鎖定常領域の親和性と比較して、ヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する生理学的ｐＨ（例えば、ｐＨ７．４）での同様のまたは減少した（例えば、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、または２倍以下の、同等の、または減少した）親和性を有する。特定の実施形態では、定常領域は、野生型Ｉｇ（例えば、ＩｇＧ）定常ドメインまたはそのＦｃＲｎ結合断片（例えば、Ｆｃまたはヒンジ−Ｆｃドメイン断片）から、１つ、２つ以上のアミノ酸（例えば、１つ以上の置換、挿入、または欠失を有する）を含む。特定の実施形態では、インビボでの野生型定常ドメインまたはそのＦｃＲｎ結合断片を有する対応する抗体の半減期と比較して、インビボでのバリアント定常領域を有する抗体の半減期は増加する。例えば、インビボでの抗体の半減期を増加させる変異の例に関して、国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号、同第ＷＯ９８／２３２８９号、および同第ＷＯ９７／３４６３１号、ならびに米国特許第５，８６９，０４６号、同第６，１２１，０２２号、同第６，２７７，３７５号、同第６，１６５，７４５号、同第８，０８８，３７６号、および同第８，１６３，８８１号を参照されたく、これらの全ては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、１つ以上の異なるアミノ酸は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、第２の定常（ＣＨ２）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）、および／または第３の定常（ＣＨ３）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１〜４４７）である。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体のＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４）の定常領域は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、それぞれ、２５２、２５４、および２５６位のアミノ酸チロシン（Ｙ）、スレオニン（Ｔ）、およびグルタミン酸（Ｅ）を含む。米国特許第７，６５８，９２１号を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。「ＹＴＥ  ＩｇＧ」と称されるこのＩｇＧ型は、同じ抗体の野生型バージョンと比較して、４倍に増加した半減期を表示することが示されている（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ＷＦ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１：２３５１４−２４を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体のＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）の定常領域は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、４３４位のアミノ酸アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、チロシン（Ｙ）���またはフェニルアラニン（Ｆ）を含む。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体のＩｇＧの定常領域（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４）の定常領域は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、それぞれ、４３３、４３４、および４３６位のアミノ酸リジン（Ｋ）、フェニルアラニン（Ｆ）、およびチロシン（Ｙ）を含む。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体のＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４）の定常領域は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、それぞれ、４２８および４３４位のアミノ酸ロイシン（Ｌ）およびセリン（Ｓ）を含む。酸性条件下でＦｃＲｎに対して増加した親和性を有し得る追加のＩｇＧ定常領域は、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５）６７（２００）：１３１−４１に記載され、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、２５１〜２５７、２８５〜２９０、３０８〜３１４、３８５〜３８９、および４２８〜４３６位のアミノ酸残基のうちの１つ、２つ、または３つ以上のアミノ酸置換を含むＩｇＧ定常ドメインを含む。特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、配列番号２１、２２、２３、２４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、または８６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、本明細書に開示される単離された抗体は、配列番号２５または２６に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。
【０１１５】
特定の実施形態では、本開示、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、または７３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体であって、それぞれ、配列番号６６および７４、６７および７４、６８および７４、６９および７４、７０および７４、７１および７４、７２および７４、または７３および７４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖を含む、単離された抗体を提供する。
【０１１６】
特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、または３４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する単離された抗体であって、それぞれ、配列番号２７および３５、２８および３５、２９および３５、３０および３５、３１および３５、３２および３５、３３および３５、または３４および３５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖を含む、単離された抗体を提供する。
【０１１７】
３．使用方法
ＡｐｏＣ３は、肝細胞によるＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）およびＴＲＬレムナントの取り込みおよびクリアランスを阻害し、ＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）のリポタンパク質リパーゼ媒介性脂肪分解を阻害し、それにより対象の血液中のトリグリセリドレベルを増加させるように機能する。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、肝細胞によるＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）およびＴＲＬレムナントの取り込みおよびクリアランスを阻害するＡｐｏＣ３の能力を弱めるか、またはＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）のリポタンパク質リパーゼ媒介性脂肪分解を阻害するＡｐｏＣ３の能力を弱めることができる。したがって、特定の実施形態では、本開示は、対象の血液中のＡｐｏＣ３の活性を阻害するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示の抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物を投与することを含む。特定の実施形態では、ＡｐｏＣ３の活性は、肝細胞によるＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）およびＴＲＬレムナントの取り込みおよびクリアランスの阻害である。特定の実施形態では、ＡｐｏＣ３の活性は、ＴＲＬのリポタンパク質リパーゼ媒介脂肪分解の阻害である。特定の実施形態では、ＡｐｏＣ３の活性は、肝細胞によるＴＲＬ（例えば、ＶＬＤＬ）およびＴＲＬレムナントの取り込みおよびクリアランスの阻害、ならびにＴＲＬのリポタンパク質リパーゼ媒介脂肪分解の阻害である。
【０１１８】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、対象の血液からのＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のクリアランスの速度を増加させるために有用である。したがって、特定の実施形態では、本開示は、対象の血液からのＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のクリアランスの速度を増加させるための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物を投与することを含む。
【０１１９】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、対象の血液中のＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のレベルを低下させるために有用である。したがって、特定の実施形態では、本開示は、対象の血液中のＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のレベルを低下させるための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物を投与することを含む。特定の実施形態では、本方法は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、対象の血液中のＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のレベルを少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％低下させる。特定の実施形態では、本方法は、本明細書に開示される方法によって、または当業者に既知の方法によって評価した場合、対象の血液中のＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のレベルを少なくとも約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍低下させる。特定の実施形態では、対象の血液中のＡｐｏＣ３および／またはＡｐｏＢ（例えば、ＡｐｏＢ４８および／またはＡｐｏＢ１００）のレベルの低下は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、もしくは５０日間、または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、もしくは８週間維持される。
【０１２０】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、対象の血液中のトリグリセリドレベルを低下させるために有用である。したがって、特定の実施形態では、本開示は、対象の血液中のトリグリセリドレベルを低下させるための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物を投与することを含む。
【０１２１】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、高トリグリセリド血症の治療のために有用である。したがって、特定の実施形態では、本開示は、対象における高トリグリセリド血症を治療するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物を投与することを含む。特定の実施形態では、本開示は、対象におけるカイロミクロン血症を治療するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物を投与することを含む。特定の実施形態では、本開示は、対象におけるカイロミクロン血症症候群を治療するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物を投与することを含む。
【０１２２】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、対象における食後脂肪血症の治療および予防のために有用である。したがって、特定の実施形態では、本開示は、対象における食後脂肪血症を阻害するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物を投与することを含む。抗ＡｐｏＣ３抗体は、食前、食中、または食後に対象に投与され得る。
【０１２３】
理論に拘束されることを望むものではないが、出願人らは、ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、食前、食中、または食後に対象に投与された場合、対象における食後カイロミクロンまたはカイロミクロンレムナントレベルを低下せることができると考える。したがって、特定の実施形態では、本開示は、対象における食後カイロミクロンまたはカイロミクロンレムナントレベルを低下させるための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物を投与することを含む。抗ＡｐｏＣ３抗体は、食前、食中、または食後に対象に投与され得る。
【０１２４】
高トリグリセリド血症を有する患者の血中のトリグリセリドレベルの低下は、膵炎の発症のリスクを軽減させ得る。したがって、特定の実施形態では、本開示は、高トリグリセリド血症を有する対象における膵炎のリスクを軽減するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物を投与することを含む。
【０１２５】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、対象における心血管疾患のリスクを軽減するために有用である。したがって、特定の実施形態では、本開示は、高トリグリセリド血症の対象における心血管疾患のリスクを軽減するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物を投与することを含む。高トリグリセリド血症または過剰な食後脂肪血症に関連するかまたはそれらによって引き起こされる任意の心血管疾患を発症するリスクは、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物の投与によって軽減され得る。リスクが軽減され得る心血管疾患には、冠状動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、狭心症、心筋梗塞、および脳卒中が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２６】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物は、単独で、または追加の治療剤と組み合わせてのいずれかで投与され得る。特定の実施形態では、追加の治療剤は、別の脂質低下剤である。任意の１つ以上の脂質低下剤が、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物と組み合わせて使用され得る。好適な脂質低下剤には、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（例えば、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、またはシンバスタチン）、フィブラート、ニコチン酸、胆汁酸封鎖剤（例えば、コレスチラミン、コレスチポール、およびコレセベラム）、食事性コレステロール吸収阻害剤（例えば、エゼチミブ）、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤（例えば、ロミタピド）、フィトステロール、膵リパーゼ阻害剤（例えば、オルリスタット）、コレステリルエステル転送タンパク質阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤（例えば、ＴＡＫ−４７５、ザラゴジン酸、およびＲＰＲ  １０７３９３）、ＡｐｏＡ−１  Ｍｉｌａｎｏ、サクシノブコール（ＡＧＩ−１０６７）、アポタンパク質Ｂ阻害剤（例えば、ミポメルセン）、およびプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ＰＣＳＫ９）阻害剤（例えば、アリロクマブ、エボロクマブ、およびボコシズマブ）が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、追加の脂質低下剤は、エゼチミブおよびＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の組み合わせである。特定の実施形態では、脂質低下剤は、エゼチミブ、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、およびＰＣＳＫ９阻害剤の組み合わせである。
【０１２７】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物は、様々な経路によって対象に送達され得る。これらには、非経口、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、および皮下経路が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体または医薬組成物は、皮下または静脈内に送達される。
【０１２８】
病気の治療または予防に有効であるであろう、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３または医薬組成物の量は、疾患の性質に依存することになり、標準的な臨床技術によって経験的に判定することができる。組成物に使用される正確な用量は、投与経路、およびそれによって引き起こされる感染または疾患の重篤度にも依存し、開業医の判断および各対象の状況に従って決定されるべきである。例えば、有効用量はまた、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態（年齢、体重、および健康状態を含む）、患者がヒトであるか動物であるか、投与された他の薬物、または治療が予防的であるか治療的であるかに応じて異なり得る。本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または医薬組成物は、任意の頻度（例えば、約１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、１カ月ごと、または２カ月ごと）で投与することができる。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物を治療することもできる。治療投薬量およびレジメンは、安全性および有効性を最適化するために、最適に滴定される。
【０１２９】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体はまた、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降法、またはウェスタンブロッティングなどの免疫測定法を含む、当業者に既知である古典的な免疫組織学的方法を使用して生体試料中のＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）タンパク質レベルをアッセイするために使用することもできる。好適なアッセイ標識は、当該技術分野で既知であり、これには、グルコース酸化酵素などの酵素標識、ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ）などの放射性同位体、ルミノールなどの発光標識、フルオレセインおよびローダミンなどの蛍光標識、ならびにビオチンが含まれる。かかる標識は、本明細書に開示される抗体を標識付けするために使用され得る。代替的には、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体を認識する二次抗体が標識付けられ得、これを抗ＡｐｏＣ３抗体と組み合わせて使用してＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）タンパク質レベルを検出することができる。
【０１３０】
ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）タンパク質の発現レベルについてアッセイすることは、直接的（例えば、絶対的タンパク質レベルを判定もしくは予測することによって）、または相対的に（例えば、第２の生体試料中の疾患関連タンパク質レベルと比較することによって）のいずれかで、第１の生体試料中のＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）タンパク質のレベルを定性的または定量的に測定または予測することを含むように意図される。第１の生体試料中のＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）ポリペプチドの発現レベルは、測定または推定および標準的なＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）タンパク質レベルと比較することができ、標準は、疾患を有しない個人から得られた第２の生体試料から取得されるか、または疾患を有しない個人の集団のレベルを平均することによって決定される。当該技術分野で理解されるように、「標準」ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）ポリペプチドレベルが分かると、比較のための標準として繰り返し使用することができる。
【０１３１】
本明細書で使用される場合、「生体試料」という用語は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）を発現する可能性がある対象、細胞株、組織、または他の細胞源から得られた任意の生体試料を指す。組織生検および体液を動物（例えば、ヒト）から得るための方法は、当該技術分野で周知である。生体試料には、末梢血単核球が含まれる。
【０１３２】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、予後診断、診断、監視、およびスクリーニング用途に使用することができ、これには、当業者に周知および標準的であり、かつ本明細書に基づくインビトロおよびインビボ用途が含まれる。免疫系状態または免疫応答のインビトロ評価および査定のための予後診断、診断、監視、およびスクリーニングアッセイおよびキットを利用して、予測、診断、および監視して、上昇したＡｐｏＣ３活性を有することが知られているか、またはそれを有することが疑われるものを含む、患者試料を査定することができる。一実施形態では、抗ＡｐｏＣ３抗体は、生検試料の免疫組織化学的検査に使用され得る。別の実施形態では、抗ＡｐｏＣ３抗体を使用して、ある特定の疾患症状に繋がり得る、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）レベルを検出することができる。本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、検出可能な標識または機能標識を保有し得る。蛍光標識が使用される場合、現在利用可能な顕微鏡法および経口蛍光標識細胞分取分析（ＦＡＣＳ）、または当該技術分野で既知である両方の方法手順の組み合わせを利用して、特異的結合メンバーを同定および定量化することができる。本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、蛍光標識を担持し得る。例示的な蛍光標識としては、例えば、反応性およびコンジュゲートされたプローブ、例えば、アミノクマリン、フルオレセイン、およびテキサスレッド、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ染料、Ｃｙ染料、およびＤｙＬｉｇｈｔ染料が挙げられる。抗ＡｐｏＣ３抗体は、同位体３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１７Ｌｕ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１９８Ａｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、および１８６Ｒｅなどの放射性標識を担持し得る。放射性標識が使用される場合、当該技術分野で既知である現在利用可能な計数手順を利用して、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）への抗ＡｐｏＣ３抗体の特異的結合を同定および定量化することができる。標識が酵素である場合には、検出は、当該技術分野で既知である現在利用されている比色分析、分光光度法、蛍光分光光度法、電流測定法、または気体定量技術のいずれかによって達成され得る。これは、抗体とＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）との複合体の形成を可能にする条件下で、試料または対照試料を抗ＡｐｏＣ３抗体と接触させることによって達成することができる。抗体とＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）との間で形成される任意の複合体が試料および対照において検出され、比較される。本明細書に開示される抗体はまた、免疫親和性精製を介してＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）を精製するために使用され得る。本明細書には、例えば、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）の存在の程度の定量分析のための試験キットの形態で調製され得るアッセイシステムも含まれる。システムまたは試験キットは、標識成分、例えば、標識ＡｐｏＣ３抗体と、１つ以上の追加の免疫化学的試薬と、を含み得る。
【０１３３】
４．医薬組成物
薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定化剤中で所望の純度を有する本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体を含む医薬組成物が、本明細書に提供される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投薬量および濃度でレシピエントに対して無毒であり、これらには、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。
【０１３４】
特定の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体中で、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体と、任意で、１つ以上の追加の予防または治療剤と、を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体中で、有効量の本明細書に開示される抗体と、任意で、１つ以上の追加の予防または治療剤と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、医薬組成物に含まれる唯一の有効成分である。本明細書に開示される医薬組成物は、ＡｐｏＣ３活性の阻害、および癌または感染症などの病気の治療に有用であり得る。
【０１３５】
非経口調製物に使用される薬学的に許容される担体には、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗菌剤、等張化剤、緩衝液、抗酸化剤、局所麻酔剤、懸濁化剤および分散剤、乳化剤、封鎖剤またはキレート剤、ならびに他の薬学的に許容される物質が含まれる。水性ビヒクルの例としては、塩化ナトリウム注射液、リンガー液、等張性デキストロース注射液、滅菌水注射液、デキストロースおよび乳酸加リンガー液が挙げられる。非水性経口ビヒクルには、植物由来の不揮発性油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、およびピーナッツ油が含まれる。複数用量容器にパッケージ化された経口調製物に、静菌的または静真菌的濃度の抗菌剤が添加されてもよく、これには、フェノールまたはクレゾール、水銀、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、および塩化ベンゼトニウムが含まれる。等張剤には、塩化ナトリウムおよびデキストロースが含まれる。緩衝液には、リン酸およびクエン酸が含まれる。抗酸化剤には、重硫酸ナトリウムが含まれる。局所麻酔剤には、塩酸プロカインが含まれる。懸濁化剤および分散剤には、カルボキシメチルセルオースナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｏｓｅ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンが含まれる。乳化剤には、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）が含まれる。金属イオンの封鎖剤またはキレート剤には、ＥＤＴＡが含まれる。薬学的担体には、水混和性ビヒクルのためのエチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコール、ならびにｐＨ調節のための水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、または乳酸も含まれる。
【０１３６】
医薬組成物は、対象への任意の投与経路用に製剤化され得る。投与経路の具体的な例としては、鼻腔内、経口、肺、経皮、皮内、および非経口が挙げられる。皮下、筋肉内、または静脈内注射のいずれかを特徴とする非経口投与も本明細書において企図される。注射剤は、液体溶液もしくは懸濁液としてのいずれかの従来の形態で、注射前の液体中での溶解もしくは懸濁化に好適な固体形態で、または乳濁液として調製することができる。注射剤、溶液、および乳濁液は、１つ以上の賦形剤も含有する。好適な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、またはエタノールである。さらに、所望の場合、投与される医薬組成物は、少量の非毒性補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定化剤、可溶性増強剤、ならびに例えば、酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、およびシクロデキストリンなどの他のかかる薬剤も含有し得る。
【０１３７】
抗体の非経口投与のための調製物には、注射用の滅菌溶液、使用直前に溶媒と合わせるための凍結乾燥粉末剤などの乾燥した滅菌可溶性生成物（皮下錠剤を含む）、注射用の滅菌懸濁液、使用直前にビヒクルと合わせるための乾燥した滅菌不溶性生成物、および滅菌乳濁液が含まれる。溶液は、水性または非水性のいずれかでもよい。
【０１３８】
静脈内に投与される場合、好適な担体には、生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ならびにグルコース、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコール、およびこれらの混合物などの増粘剤および可溶化剤が含まれる。
【０１３９】
抗体を含む局所混合物は、局所および全身投与について記載されるように調製される。得られた混合物は、溶液、懸濁液、乳濁液などであり得、クリーム、ゲル、軟膏、乳濁液、溶液、エリキシル剤、ローション、懸濁液、チンキ剤、ペースト、泡状物質、エアロゾル、潅注剤、スプレー、坐薬、包帯、皮膚パッチ、または局所投与に好適な任意の他の製剤として製剤化され得る。
【０１４０】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、例えば吸入による局所投与のためにエアロゾルとして製剤化され得る（例えば、炎症性疾患、特に喘息の治療に有用なステロイドの送達のためのエアロゾルを説明する、米国特許第４，０４４，１２６号、同第４，４１４，２０９号、および同第４，３６４，９２３号を参照されたい）。呼吸器への投与のためのこれらの製剤は、単独で、またはラクトースなどの不活性担体と組み合わせた、ネブライザー用のエアロゾルもしくは溶液の形態、または吹送のための微小粉末剤であり得る。かかる場合において、製剤の粒子は、一実施形態では、５０ミクロン未満、一実施形態では、１０ミクロン未満の直径を有することになる。
【０１４１】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体は、局所（ｌｏｃａｌ）または局所（ｔｏｐｉｃａｌ）投与用に、例えば、皮膚、および眼中などの粘膜への局所適用のためにゲル、クリーム、およびローションの形態で、ならびに眼への適用または槽内もしくは脊髄内の適用のために、製剤化され得る。局所投与は、経皮送達について企図され、眼もしくは粘膜への投与、または吸入療法についても企図される。抗体単独の、または他の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた点鼻薬も投与され得る。
【０１４２】
イオン振とうデバイスおよび電気泳動デバイスを含む経皮パッチは、当該技術分野で周知であり、抗体を投与するために使用され得る。例えば、かかるパッチは、米国特許第６，２６７，９８３号、同第６，２６１，５９５号、同第６，２５６，５３３号、同第６，１６７，３０１号、同第６，０２４，９７５号、同第６，０１０，７１５号、同第５，９８５，３１７号、同第５，９８３，１３４号、同第５，９４８，４３３号、および同第５，８６０，９５７号に開示されている。
【０１４３】
特定の実施形態では、本明細書に開示されるものを含む医薬組成物は、凍結乾燥粉末剤であり、溶液、乳濁液、および他の混合物としての投与のために再構成することができる。また、再構成し、固体またはゲルとして製剤化することもできる。凍結乾燥した粉末剤は、本明細書に開示される抗体またはその薬学的に許容される誘導体を好適な溶媒中に溶解することによって調製される。いくつかの実施形態では、凍結乾燥した粉末剤は、滅菌である。溶媒は、安定性を改善させる賦形剤、または粉末剤もしくは粉末剤から調製された再構成された溶液の他の薬理成分を含有し得る。使用され得る賦形剤には、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、または他の好適な薬剤が含まれるが、これらに限定されない。溶媒はまた、一実施形態では、約中性ｐＨの、緩衝液、例えば、クエン酸、リン酸ナトリウムもしくはカリウム、または当業者に既知である他のかかる緩衝液も含有し得る。当業者に既知である標準条件下でのその後の溶液の滅菌濾過に続く凍結乾燥によって、所望の製剤が提供される。一実施形態では、得られた溶液は、凍結乾燥用のバイアルに配分される。各バイアルは、単回投薬量または複数回投薬量の化合物を含有することになる。凍結乾燥した粉末剤は、約４℃〜室温などの適切な条件下で保管され得る。この凍結乾燥した粉末剤を注射用に水で再構成することにより、非経口投与における使用のための製剤が提供される。再構成のために、凍結乾燥した粉末剤は、滅菌水または他の好適な担体に添加される。正確な量は、選択される化合物によって異なる。かかる量は、経験的に判定され得る。
【０１４４】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体および本明細書に提供される他の組成物はまた、特定の組織、受容体、または治療される対象の身体の他の場所を標的化するように製剤化され得る。多くのかかる標的化の方法は、当業者には周知である。全てのかかる標的化の方法は、本組成物における使用のために本明細書において企図される。標的化の方法の非限定的な例については、例えば、米国特許第６，３１６，６５２号、同第６，２７４，５５２号、同第６，２７１，３５９号、同第６，２５３，８７２号、同第６，１３９，８６５号、同第６，１３１，５７０号、同第６，１２０，７５１号、同第６，０７１，４９５号、同第６，０６０，０８２号、同第６，０４８，７３６号、同第６，０３９，９７５号、同第６，００４，５３４号、同第５，９８５，３０７号、同第５，９７２，３６６号、同第５，９００，２５２号、同第５，８４０，６７４号、同第５，７５９，５４２号、および同第５，７０９，８７４号を参照されたい。
【０１４５】
インビボ投与に使用される組成物は、滅菌であり得る。これは、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。
【０１４６】
５．ポリヌクレオチド、ベクター、および抗ＡｐｏＣ３抗体を産生する方法
別の態様では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体（例えば、軽鎖可変領域または重鎖可変領域）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびにベクター、例えば、宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよび哺乳動物細胞）における組換え発現のためのかかるポリヌクレオチドを含むベクターが、本明細書に提供される。
【０１４７】
本明細書で使用される場合、「単離された」ポリヌクレオチドまたは核酸分子は、核酸分子の天然源において（例えば、マウスまたはヒトにおいて）存在する他の核酸分子から分離したものである。さらに、ｃＤＮＡ分子などの「単離された」核酸分子は、他の細胞形質成分、もしくは組換え技術によって産生された場合には培養培地を実質的に含まないか、または化学的に合成された場合には化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まないことがある。例えば、「実質的に含まない」という表現は、約１５％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満（特に、約１０％未満）の他の物質、例えば、細胞物質、培養培地、他の核酸分子、化学的前駆体、または他の化学物質を有するポリヌクレオチドまたは核酸分子の調製物を含む。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体をコードする核酸分子（複数可）は、単離または精製される。
【０１４８】
具体的な態様では、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）ペプチドに特異的に結合し、本明細書に開示されるアミノ酸配列を含む抗体、ならびにＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）ポリペプチドへの結合についてかかる抗体と競合する（例えば、用量依存的な様式で）か、またはかかる抗体のエピトープと同じエピトープに結合する抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが、本明細書に提供される。
【０１４９】
特定の態様では、本明細書に開示される抗体の軽鎖または重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが、本明細書に提供される。ポリヌクレオチドは、本明細書に開示される抗体のＶＨ、ＶＬ、またはＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含み得る（例えば、本明細書の表１〜４を参照されたい）。
【０１５０】
また、例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列での置き換え、およびｍＲＮＡ不安定エレメントの排除によって最適化されている、抗ＡｐｏＣ３抗体をコードするポリヌクレオチドも、本明細書に提供される。コドン変化を導入するか、またはｍＲＮＡにおける阻害領域を排除することによって、組換え発現のための抗ＡｐｏＣ３抗体（例えば、軽鎖、重鎖、ＶＨドメイン、またはＶＬドメイン）をコードする最適化された核酸を生成する方法は、例えば、米国特許第５，９６５，７２６号、同第６，１７４，６６６号、同第６，２９１，６６４号、同第６，４１４，１３２号、および同第６，７９４，４９８号に記載される最適化方法を適宜適応させることによって実施することができる。例えば、ＲＮＡ内の潜在的なスプライス部位と不安定エレメント（例えば、Ａ／ＴまたはＡ／Ｕリッチエレメント）は、核酸配列によってコードされるアミノ酸を改変せずに変異させて、組換え発現のためのＲＮＡの安定性を高めることができる。改変は、例えば、同一のアミノ酸の代替コドンを使用して、遺伝暗号の縮重を利用する。いくつかの実施形態では、１つ以上のコドンを改変して、保存的変異、例えば、元のアミノ酸と類似の化学構造および特性または機能を有する類似のアミノ酸をコードすることが望ましい場合がある。かかる方法は、最適化されていないポリヌクレオチドによってコードされた抗ＡｐｏＣ３抗体の発現と比べて、抗ＡｐｏＣ３の発現を少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍以上増加させることができる。
【０１５１】
特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体（例えば、ＶＬドメインまたはＶＨドメイン）をコードする最適化されたポリヌクレオチド配列は、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体（例えば、ＶＬドメインまたはＶＨドメイン）をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンス（例えば、補体）ポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができる。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体または断片をコードする最適化されたヌクレオチド配列は、高ストリンジェンシー条件下で、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドにハイブリダイズする。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体をコードする最適化されたヌクレオチド配列は、高ストリンジェンシー、中または低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体の最適化されていないヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドにハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション条件に関する情報が記載されており、例えば、米国特許出願公開第２００５／００４８５４９号（例えば、段落７２〜７３）を参照されたく、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５２】
当該技術分野で既知の任意の方法によって、ポリヌクレオチドが得られ得、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が決定され得る。本明細書に開示される抗体、例えば、表１に記載される抗体、およびこれらの抗体の修飾バージョンをコードするヌクレオチド配列は、当該技術分野で周知の方法を使用して、すなわち、特定のアミノ酸をコードすることが知られているヌクレオチドコドンを、抗体をコードする核酸を生成するように集合させて、判定することができる。抗体をコードするかかるポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから集合させることができ（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４），ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７：２４２−６に記載されるように）、これは簡潔には、抗体をコードする配列の一部分を含有する重複オリゴヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリングおよびライゲーション、ならびにその後の、ライゲートされたオリゴヌクレオチドのＰＣＲによる増幅を伴う。
【０１５３】
代替的には、本明細書に開示される抗体をコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野で周知の方法（例えば、ＰＣＲおよび他の分子クローニング法）を使用して、好適な供給源（例えば、ハイブリドーマ）からの核酸から生成することができる。例えば、目的の抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られたゲノムＤＮＡを使用して、既知の配列の３’および５’末端にハイブリダイズすることができる合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅を実施することができる。かかるＰＣＲ増幅法は、抗体の軽鎖または重鎖をコードする配列を含む核酸を得るために使用することができる。かかるＰＣＲ増幅法は、抗体の可変軽鎖領域または可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得るために使用することができる。増幅した核酸は、宿主細胞における発現のため、ならびに例えば、キメラおよびヒト化抗体を生成するためのさらなるクローニングのためにベクター内にクローニングすることができる。
【０１５４】
特定の抗体をコードする核酸を含有するクローンが入手できないが、抗体分子の配列が既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、配列の３’および５’末端にハイブリダイズすることができる合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって、または例えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリからのｃＤＮＡクローンを同定するための特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングによって、好適な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリ、または本明細書に開示される抗体を発現するために選択されたハイブリドーマ細胞などの、抗体を発現する任意の組織または細胞から生成された抗体ｃＤＮＡライブラリ、もしくはそれから単離された核酸、好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ）から化学的に合成されるか、またはそれから得ることができる。次いで、ＰＣＲにより生成された増幅された核酸は、当該技術分野で周知の任意の方法を使用して複製可能なクローニングベクターにクローニングされ得る。
【０１５５】
本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離および配列決定され得る。ハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの供給源として機能し得る。一旦単離されると、ＤＮＡは発現ベクター内に置かれ、これは次いで、別様に免疫グロブリンタンパク質を産生しない、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞）、または骨髄腫細胞などの宿主細胞内にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞中の抗ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）抗体の合成を得る。
【０１５６】
完全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護する隣接配列を含むＰＣＲプライマーは、ｓｃＦｖクローンのＶＨまたはＶＬ配列を増幅させるために使用することができる。当業者に既知のクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅したＶＨドメインを、重鎖定常領域、例えば、ヒトガンマ４定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅したＶＬドメインを、軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。特定の実施形態では、ＶＨまたはＶＬドメインを発現するためのベクターは、ＥＦ−１αプロモーター、分泌シグナル、可変領域のためのクローニング部位、定常領域、およびネオマイシンなどの選択マーカーを含む。ＶＨおよびＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングされてもよい。次いで、当業者に既知である技術を使用して、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターを細胞株に同時にトランスフェクトして、全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する安定または一過性細胞株を生成する。
【０１５７】
ＤＮＡはまた、例えば、マウス配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することによって、または免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てもしくは一部を共有結合させることによって修飾され得る。
【０１５８】
本明細書に開示される抗体をコードするポリヌクレオチドに、高、中、または低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドも、提供される。特定の実施形態では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、高、中、または低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に提供されるＶＨドメインまたはＶＬドメインをコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズする。
【０１５９】
ハイブリダイゼーション条件は、当該技術分野で記載されており、当業者には既知である。例えば、ストリンジェント条件下のハイブリダイゼーションは、約４５℃の６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーション、続いて約５０〜６５℃の０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中での１回以上の洗浄を伴い得る。高ストリンジェント条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃の６×ＳＳＣ中でのフィルター結合核酸へのハイブリダイゼーション、続いて約６８℃の０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中での１回以上の洗浄を伴い得る。他のストリンジェントハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーションは、当業者には既知であり、記載されており、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ，Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．およびＪｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの６．３．１〜６．３．６および２．１０．３頁を参照されたい。
【０１６０】
特定の態様では、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する本明細書に開示される抗体を発現する（例えば、組換えで）細胞（例えば、宿主細胞）、ならびに関連するポリヌクレオチドおよび発現ベクターが、本明細書に提供される。宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞における組換え発現のための抗ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）抗体または断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）が、本明細書に提供される。また、本明細書に開示されるＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）抗体（例えば、ヒトまたはヒト化抗体）を組換え発現するためのかかるベクターを含む宿主細胞も、提供される。特定の態様では、宿主細胞からのかかる抗体を発現させることを含む、本明細書に開示される抗体を産生するための方法が、本明細書に提供される。
【０１６１】
ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する本明細書に開示される抗体（例えば、本明細書に開示される全長抗体、抗体の重鎖もしくは軽鎖、または一本鎖抗体）の組換え発現は、抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を伴う。本明細書に開示される抗体分子、抗体の重鎖または軽鎖（例えば、重鎖または軽鎖可変領域）をコードするポリヌクレオチドが得られると、抗体分子の産生のためのベクターは、当該技術分野で周知の技術を使用する組換えＤＮＡ技術によって産生され得る。したがって、ヌクレオチド配列をコードする抗体または抗体断片（例えば、軽鎖または重鎖）を含有するポリヌクレオチドを発現することによってタンパク質を調製するための方法が、本明細書に開示される。当業者に周知である方法は、配列ならびに適切な転写および翻訳制御シグナルをコードする抗体または抗体断片（例えば、軽鎖または重鎖）を含有する発現ベクターを構築するために使用することができる。これらの方法には、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組換えが含まれる。また、プロモーターに操作可能に連結した、本明細書に開示される抗体分子、抗体の重鎖もしくは軽鎖、抗体の重鎖もしくは軽鎖可変領域、または重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターも、提供される。かかるベクターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、国際公開第ＷＯ８６／０５８０７号および同第ＷＯ８９／０１０３６号、ならびに米国特許第５，１２２，４６４号を参照されたい）を含んでもよく、抗体の可変領域は、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖および軽鎖全体の両方の発現のためのかかるベクターにクローニングされてもよい。
【０１６２】
発現ベクターは、従来の技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に転送され得、得られた細胞はその後、本明細書に開示される抗体を産生するために従来の技術によって培養され得る。したがって、宿主細胞におけるかかる配列の発現のためのプロモーターに操作可能に連結した、本明細書に開示される抗体、またはその重鎖もしくは軽鎖、またはその断片、または本明細書に開示される一本鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞が、本明細書に提供される。特定の実施形態では、二本鎖抗体の発現の場合、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターは、個々に、以下に詳述されるように、免疫グロブリン分子全体の発現のための宿主細胞中で共発現され得る。特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に開示される抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含有する。特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に開示される抗体またはその断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に開示される抗体またはその断片の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターと、の２つの異なるベクターを含有する。他の実施形態では、第１の宿主細胞は、本明細書に開示される抗体またはその断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、第２の宿主細胞は、本明細書に開示される抗体の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。特定の実施形態では、第１の細胞によって発現された重鎖／重鎖可変領域は、第２の細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と会合して、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体を形成した。特定の実施形態では、そのような第１の宿主細胞およびそのような第２の宿主細胞を含む宿主細胞の集団が、本明細書で提供される。
【０１６３】
特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体の軽鎖／軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体の重鎖／重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターと、を含むベクターの集団が、本明細書に提供される。
【０１６４】
多様な宿主発現ベクター系は、本明細書に開示される抗体分子を発現するために使用することができる（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい）。かかる宿主発現系は、目的のコード配列が産生され、その後精製され得るビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトされた場合に本明細書に開示される抗体分子を原位置で発現することができる細胞も表す。これらには、抗体コード配列を含有する、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの微生物；抗体コード配列を含有する、組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母菌（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  Ｐｉｃｈｉａ）；抗体コード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；抗体コード配列を含有する、組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染したか、もしくは組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉ  ｐｌａｓｍｉｄ）で形質転換された植物細胞系（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻類）；または哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）もしくは哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組換え発現構築物を保有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１もしくはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ  ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７０３０、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、およびＮＩＨ  ３Ｔ３、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、およびＢＭＴ１０細胞）が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体を発現させるための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞である。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体を発現させるための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞株である。特定の実施形態では、哺乳動物発現ベクターは、ｐＯｐｔｉＶＥＣ（登録商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。特定の実施形態では、特に、全組換え抗体分子の発現の場合、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどの細菌細胞または真核細胞（例えば、哺乳動物細胞）が、組換え抗体分子の発現に使用される。例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞は、ヒトサイトメガロウイルスからの主要な中間体である初期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと併せて、抗体のための有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ＭＫ＆Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ  Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ  ４５：１０１−５およびＣｏｃｋｅｔｔ  ＭＩ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８（７）：６６２−７）。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞によって産生される。特定の実施形態では、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する本明細書に開示される抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成型プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターによって制御される。
【０１６５】
細菌系において、発現される抗体分子について意図される用途に応じて、いくつかの発現ベクターが、有利に選択され得る。例えば、大量のかかる抗体が産生される場合、抗体分子の医薬組成物の生成のために、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を指示するベクターが、望ましくあり得る。かかるベクターには、融合タンパク質が産生されるように、抗体コード配列がｌａｃ  Ｚコード領域を有するフレーム中でベクター内に個々にライゲーションされ得る、Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｅｔｈｅｒ  Ｕ＆Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｌｌ  Ｂ（１９８３）ＥＭＢＯ  Ｊ  ２：１７９１−１７９４）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ  Ｓ＆Ｉｎｏｕｙｅ  Ｍ（１９８５）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １３：３１０１−３１０９、Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  Ｇ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ  ＳＭ（１９８９）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２４：５５０３−５５０９）などが含まれるが、これらに限定されない。例えば、ｐＧＥＸベクターは、外来ポリペプチドをグルタチオン５−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として発現するために使用することもできる。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズへの吸着および結合に続く遊離グルタチオンの存在下での溶離により溶解細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計されているため、クローニングされた標的遺伝子産物は、ＧＳＴ部分から放出される。
【０１６６】
昆虫系において、外来遺伝子を発現するためのベクターとして例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）を使用することができる。ウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞で増殖する。抗体コード配列は、ウイルスの非本質的な領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）内へ個々にクローニングされ、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれ得る。
【０１６７】
哺乳動物宿主細胞において、いくつかのウイルスベースの発現系を利用することができる。発現ベクターとしてアデノウイルスが使用される場合、目的の抗体コード配列をアデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーターおよび３つに分かれた（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ）リーダー配列にライゲーションされ得る。次いで、このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボ組換えによりアデノウイルスゲノムに挿入され得る。ウイルスゲノムの非本質的な領域（例えば、領域Ｅ１またはＥ３）への挿入は、感染した宿主において生存可能であり、抗体分子を発現することができる組換えウイルスをもたらすことになる（例えば、Ｌｏｇａｎ  Ｊ＆Ｓｈｅｎｋ  Ｔ（１９８４）ＰＮＡＳ  ８１（１２）：３６５５−９を参照されたい）。また、挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳のために特定の開始シグナルも必要とされ得る。これらのシグナルには、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接する配列が含まれる。さらに、開始コドンは、挿入物全体の翻訳を確実にするために、所望のコード配列のリーディングフレームと一致しなければならない。これらの外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然と合成の両方の様々な起源のものであり得る。発現の有効性は、適切な転写エンハンサー要素、転写ターミネーターなどを含むことによって増強され得る（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６−５４４を参照されたい）。
【０１６８】
加えて、挿入された配列の発現を調節するか、または所望の特定の様式で遺伝子産物を修飾および加工する宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）および加工（例えば、切断）は、タンパク質の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後加工および修飾のための特徴的かつ特定の機構を有する。適切な細胞株または宿主システムを選択して、発現された外来タンパク質の正しい修飾および加工を保証することができる。この目的のために、遺伝子産物の一次転写物の適切な加工、グリコシル化、およびリン酸化のための細胞機構を保有する真核生物宿主細胞を使用することができる。そのような哺乳動物宿主細胞には、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２ＯおよびＴ４７Ｄ、ＮＳ０（内因的にいずれの免疫グロブリン鎖も産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０、およびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞において産生される。
【０１６９】
特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、フコース含有量が低下しているか、またはフコースを含有しない。かかる抗体は、当業者に既知である技術を使用して産生され得る。例えば、抗体は、フコシル化の能力が不足または欠損している細胞において発現され得る。特定の例では、α１，６−フコシル転移酵素の両方のアレルのノックアウトを有する細胞株は、低下したフコース含有量を有する抗体を産生するために使用することができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、低下したフコース含有量を有する抗体を産生するために使用することができるようなシステムの一例である。
【０１７０】
組換えタンパク質の長期的な高収量の産生のために、安定的な発現細胞が生成され得る。例えば、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体を安定的に発現する細胞株は、操作され得る。特定の実施形態では、本明細書に提供される細胞は、本明細書に開示される抗体を形成するために会合する軽鎖／軽鎖可変領域および重鎖／重鎖可変領域を安定的に発現する。
【０１７１】
特定の態様では、ウイルス複製開始点を含有する発現ベクターを使用するのではなく、宿主細胞は、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）および選択可能なマーカーによって制御されたＤＮＡで形質転換され得る。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、改変された細胞を濃縮培地で１〜２日間増殖させ、その後選択培地に切り替える。組換えプラスミドの選択マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞がプラスミドを染色体に安定して組み込み、増殖して、結果的に細胞株にクローニングして増殖させることのできるフォーカスを形成することを可能にする。この方法は、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体を発現する細胞株を操作するために有利に使用することができる。かかる操作された細胞株は、抗体分子と直接または間接的に相互作用する組成物のスクリーニングおよび評価においてとりわけ有用であり得る。
【０１７２】
いくつかの選択システムを使用することができ、これには、それぞれ、ｔｋ細胞、ｈｇｐｒｔ細胞、またはａｐｒｔ細胞中の単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）Ｃｅｌｌ  １１（１）：２２３−３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ  ＥＨ＆Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ  Ｗ（１９６２）ＰＮＡＳ  ４８（１２）：２０２６−２０３４）、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ  Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌｌ  ２２（３）：８１７−２３）遺伝子が含まれるが、これらに限定されない。また、代謝拮抗剤耐性は、以下の遺伝子に対する選択の基礎として使用できる：メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ  ７７（６）：３５６７−７０、Ｏ’Ｈａｒｅ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）ＰＮＡＳ  ７８：１５２７−３１）；ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＲＣ  ＆  Ｂｅｒｇ  Ｐ（１９８１）ＰＮＡＳ  ７８（４）：２０７２−６）；アミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ  ＧＹ＆Ｗｕ  ＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ  Ｐ（１９９３）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ３２：５７３−５９６、Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２、およびＭｏｒｇａｎ  ＲＡ＆Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＷＦ（１９９３）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ６２：１９１−２１７、Ｎａｂｅｌ  ＧＪ＆Ｆｅｌｇｎｅｒ  ＰＬ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １１（５）：２１１−５）；ならびにハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ  ＲＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｇｅｎｅ  ３０（１−３）：１４７−５６）。組換えＤＮＡ技術の技術分野で一般的に知られている方法は、所望の組換えクローンを選択するために日常的に適用でき、そのような方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ  Ｍ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）、およびＣｈａｐｔｅｒｓ  １２  ａｎｄ  １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ  ＮＣ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）、Ｃｏｌｂｅｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １５０：１−１４（これらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１７３】
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増加させることができる（概説について、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ＣＲ＆Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ  ＣＣＧ，Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照されたい）。抗体を発現するベクター系のマーカーが増幅可能であるとき、宿主細胞の培養物中に存在する阻害剤のレベルが増加すると、マーカー遺伝子のコピー数が増加するであろう。増幅された領域が抗体遺伝子に関連するため、抗体の産生も増加することになる（Ｃｒｏｕｓｅ  ＧＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ３：２５７−６６）。
【０１７４】
宿主細胞を、重鎖由来のポリペプチドをコードする第１のベクターおよび軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２のベクターの、本明細書に記載される２つ以上の発現ベクターで同時にトランスフェクトすることができる。２つのベクターは同一の選択可能なマーカーを含有し得、これらは重鎖および軽鎖ポリペプチドの同等の発現を可能にする。宿主細胞を、異なる量の２つ以上の発現ベクターで同時にトランスフェクトすることができる。例えば、宿主細胞は、第１の発現ベクターと第２の発現ベクターの比率の１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、または１：５０のうちのいずれか１つでトランスフェクトすることができる。
【０１７５】
代替的には、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、かつこれらを発現することができる単一のベクターを使用することができる。かかる状況では、過剰な毒性を有しない重鎖を回避するために、重鎖の前に軽鎖が置かれるべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ  ＮＪ（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：５６２−５６５およびＫｏｈｌｅｒ  Ｇ（１９８０）ＰＮＡＳ  ７７：２１９７−２１９９）。重鎖および軽鎖のコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る。発現ベクターは、モノシストロン性またはマルチシストロン性であり得る。マルチシストロン性核酸構築物は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上、または２〜５、５〜１０、もしくは１０〜２０個の範囲の遺伝子／ヌクレオチド配列をコードすることができる。例えば、バイシストロン性核酸構築物は、以下の順序で、プロモーター、第１の遺伝子（例えば、本明細書に開示される抗体の重鎖）、および第２の遺伝子および（例えば、本明細書に開示される抗体の軽鎖）を含み得る。かかる発現ベクターにおいて、両方の遺伝子の転写はプロモーターによって駆動され得る一方、第１の遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳は、キャップ依存性スキャニング機構によるものであり得、第２の遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳は、キャップ依存性機構、例えばＩＲＥＳによるものであり得る。
【０１７６】
一旦本明細書に開示される抗体分子が組換え発現によって産生されると、これは、免疫グロブリン分子の精製のための当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にタンパク質Ａの後の特定の抗原に対する親和性、およびサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、差次的溶解度、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準的技術によって精製され得る。さらに、本明細書に開示される抗体を、本明細書に開示されるか、または他の様式で当該技術分野において既知である異種ポリペプチド配列に融合させて、精製を容易にすることができる。
【０１７７】
特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、単離または精製されている。一般に、単離された抗体は、単離された抗体とは異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まないものである。例えば、特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体の調製物は、細胞物質または化学的前駆体を実質的に含まない。「細胞物質を実質的に含まない」という表現は、抗体が、それがそこから単離または組換え産生された細胞の細胞成分から分離されている抗体の調製物を含む。したがって、細胞物質を実質的に含まない抗体には、約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満（乾燥重量で）の異種タンパク質（本明細書において「混在タンパク質」とも称される）を有する抗体の調製物、または抗体のバリアント、例えば、抗体の異なる翻訳後修飾形態もしくは抗体の他の異なるバージョン（例えば、抗体断片）が含まれる。抗体が組換え産生された場合、これはまた、培養培地も概して実質的に含まず、すなわち、培養培地は、タンパク質調製物の体積の約２０％、１０％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満を占める。抗体が化学的合成によって産生された場合、これは化学的前駆体または他の化学物質を概して実質的に含まず、すなわち、これは、タンパク質の合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質から分離されている。したがって、抗体のかかる調製物は、約３０％、２０％、１０％、または５％未満（乾燥重量で）の化学的前駆体または目的の抗体以外の化合物を有する。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、単離または精製されている。
【０１７８】
ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する抗体は、抗体の合成のための当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、化学的合成によって、または組換え発現技術によって産生され得る。本明細書に開示される方法は、別途示されない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子解析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成および修飾、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに当該技術分野内の関連分野における従来の技術を用いる。これらの技術は、例えば、本明細書に引用された参考文献に記載されており、文献に完全に説明されている。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７  ａｎｄ  ａｎｎｕａｌ  ｕｐｄａｔｅｓ）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７  ａｎｄ  ａｎｎｕａｌ  ｕｐｄａｔｅｓ）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｉｒｒｅｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい。
【０１７９】
特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、例えば、合成、遺伝子操作を介したＤＮＡ配列の作製を伴う任意の手段によって調製、発現、作製、または単離された抗体（例えば、組換え抗体）である。特定の実施形態では、かかる抗体は、インビボで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）の抗体生殖系列レパートリー内に天然で存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列またはアミノ酸配列）を含む。
【０１８０】
一態様では、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する抗体を作製する方法であって、本明細書に開示される細胞または宿主細胞を培養することを含む、方法が本明細書に提供される。特定の態様では、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する抗体を作製する方法であって、本明細書に開示される細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に開示される抗体をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を使用して抗体を発現させること（例えば、組換え発現させること）を含む、方法が本明細書に提供される。特定の実施形態では、細胞は、単離された細胞である。特定の実施形態では、外因性ポリヌクレオチドが、細胞に導入されている。特定の実施形態では、本方法は、細胞または宿主細胞から得られた抗体を精製するステップをさらに含む。
【０１８１】
ポリクローナル抗体を産生するための方法は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの第１１章を参照されたい）。
【０１８２】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術、またはこれらの組み合わせの使用を含む、当該技術分野で既知の幅広い技術を使用して調製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ例えば、Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ＆Ｌａｎｅ  Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）、１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ＧＪ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３  ６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）に教示されるものを含む、ハイブリドーマ技術を使用して産生され得る。本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術によって産生された抗体に限定されない。例えば、モノクローナル抗体は、本明細書に開示される抗体、例えば、かかる抗体の軽鎖または重鎖を外因的に発現する宿主細胞から組換え産生され得る。
【０１８３】
特定の実施形態では、本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」は、単一の細胞（例えば、組換え抗体を産生するハイブリドーマまたは宿主細胞）によって産生され、抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に提供される実施例における他の抗原結合もしくは競合結合アッセイによって判定されるように、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体であり得る。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、一価抗体または多価（例えば、二価）抗体である。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、単一特異性または多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。本明細書に開示されるモノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  Ｇ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５に記載されるハイブリドーマ法により作製され得るか、または例えば、本明細書に開示される技術を用いてファージライブラリーから単離され得る。クローン細胞株、およびそれにより発現されたモノクローナル抗体の調製のための他の方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，（上記）の第１１章を参照されたい）。
【０１８４】
ハイブリドーマ技術を使用して特定の抗体を産生およびスクリーニングするための方法は、慣例的であり、当該技術分野で周知である。例えば、ハイブリドーマ法において、マウス、またはヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、ハムスター、もしくはマカクザルなどの他の適切な宿主動物に免疫付与して、免疫付与に使用されるタンパク質（例えば、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３））に特異的に結合することになる抗体を産生するか、またはそれを産生することができるリンパ球を誘発する。代替的には、リンパ球は、インビトロで免疫付与され得る。その後、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用してリンパ球を骨髄腫細胞に融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ  ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。さらに、ＲＩＭＭＳ（繰り返し免疫複数部位）技術を使用して、動物に免疫付与することができる（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  ＫＥ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １６：３８１−９、参照によりその全体が組み込まれる）。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、マウス（またはラット、サル、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスター、もしくはイヌなどの他の動物）に、抗原（例えば、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３））で免疫付与することができ、一旦免疫応答が検出される（例えば、抗原に特異的な抗体がマウス血清中で検出される）と、マウス脾臓を採取し、脾細胞を単離した。次いで、周知の技術によって脾細胞を任意の好適な骨髄腫細胞、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ（登録商標））（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能な細胞株ＳＰ２０に融合させて、ハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマを選択し、限界希釈によってクローニングする。特定の実施形態では、免疫付与したマウスのリンパ節を採取し、ＮＳ０骨髄腫細胞と融合させる。
【０１８６】
このように調製されたハイブリドーマ細胞を、好ましくは、未融合の親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する好適な培養培地中で播種および増殖させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含むことになり（ＨＡＴ培地）、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止する。
【０１８７】
特定の実施形態は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定的な高レベルの産生を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に対して感応性である骨髄腫細胞を用いる。これらの骨髄腫細胞株の中には、マウス骨髄腫細胞株、例えば、ＮＳ０細胞株、またはＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）から入手可能なＳＰ−２もしくはＸ６３−Ａｇ８．６５３細胞に由来するものがある。ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株はまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ  Ｄ（１９８４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３３：３００１−５、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０１８８】
ハイブリドーマ細胞を増殖させている培養培地を、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、当該技術分野で既知の方法、例えば、免疫沈降法によって、または放射免疫測定法（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロ結合アッセイによって判定される。
【０１８９】
所望の特異性、親和性、または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞の同定後、クローンは、限界希釈手順によりサブクローニングされ、標準方法によって増殖され得る（Ｇｏｄｉｎｇ  ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（上記））。この目的のために好適な培養培地には、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ  １６４０培地が含まれる。さらに、ハイブリドーマ細胞は、動物において腹水腫瘍としてインビボで増殖され得る。
【０１９０】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、好適には、例えば、タンパク質Ａ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動法、透析、または親和性クロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地、腹水液、または血清から分離される。
【０１９１】
本明細書に開示される抗体には、特異的ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）を認識し、かつ当業者に既知である任意の技術によって生成され得る抗体断片が含まれる。例えば、本明細書に開示されるＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片を産生するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を産生するため）などの酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解的切断によって産生され得る。Ｆａｂ断片は、抗体分子の２つの同一のアームのうちの一方に対応し、かつ重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメインと対になった完全な軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域におけるジスルフィド結合によって結合した抗体分子の２つの抗原結合アームを含有する。
【０１９２】
さらに、本明細書に開示される抗体はまた、当該技術分野で既知の様々なファージディスプレイ法を使用して生成することもできる。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインが、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面上に提示される。特に、ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリ（例えば、患部組織のヒトまたはマウスｃＤＮＡライブラリ）から増幅される。ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡを、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーと共に組換え、ファージミドベクターにクローニングする。ベクターをＥ．ｃｏｌｉにエレクトロポレーションし、Ｅ．ｃｏｌｉにヘルパーファージを感染させる。これらの方法に使用するファージは、典型的には、ｆｄおよびＭ１３を含む繊維状ファージであり、ＶＨおよびＶＬドメインは通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組換え融合されている。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原、例えば、標識抗原、または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原を使用して選択または同定され得る。本明細書に開示される抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８２：４１−５０、Ａｍｅｓ  ＲＳ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７−１８６、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ＣＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２４：９５２−９５８、Ｐｅｒｓｉｃ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ  １８７：９−１８、Ｂｕｒｔｏｎ  ＤＲ  ＆  Ｂａｒｂａｓ  ＣＦ（１９９４）Ａｄｖａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５７：１９１−２８０、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４号、国際公開第ＷＯ９０／０２８０９号、同第ＷＯ９１／１０７３７号、同第ＷＯ９２／０１０４７号、同第ＷＯ９２／１８６１９号、同第ＷＯ９３／１１２３６号、同第ＷＯ９５／１５９８２号、同第ＷＯ９５／２０４０１号、および同第ＷＯ９７／１３８４４号、ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号、および同第５，９６９，１０８号に開示されるものが挙げられる。
【０１９３】
上記の参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージからの抗体コード領域は、単離され、ヒト抗体を含む全抗体、または任意の他の所望の抗原結合断片を生成するために使用され、例えば、以下に記載されるように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母菌、および細菌を含む任意の所望の宿主において発現され得る。ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／２２３２４号、Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １２（６）：８６４−９、Ｓａｗａｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３４：２６−３４、およびＢｅｔｔｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３に開示されものなどの当該技術分野で既知の方法を使用して、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片などの抗体断片を組換え産生する技術も用いられ得る。
【０１９４】
特定の実施形態では、完全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護する隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、鋳型、例えばｓｃＦｖクローンからＶＨまたはＶＬ配列を増幅させることができる。当業者に既知のクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅したＶＨドメインを、ＶＨ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅したＶＬドメインを、ＶＬ定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。ＶＨおよびＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることもできる。次いで、当業者に既知である技術を使用して、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターを、細胞株に同時にトランスフェクトして、全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する安定または一過性細胞株を生成する。
【０１９５】
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域に融合した、マウスまたはラットモノクローナル抗体の可変領域を含有し得る。キメラ抗体を産生するための方法は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＳＬ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−７、Ｏｉ  ＶＴ  ＆  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＳＬ（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４−２２１、Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２、ならびに米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、同第４，８１６，３９７号、および同第６，３３１，４１５号を参照されたい。
【０１９６】
ヒト化抗体は、所定の抗原に結合することができ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域と、非ヒト免疫グロブリン（例えば、マウス免疫グロブリン）のアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲと、を含む。特定の実施形態では、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的には、ヒト免疫グロブリンのもの）の少なくとも一部分も含む。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域を含むことができる。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリン、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択することができる。ヒト化抗体は、ＣＤＲ移植（欧州特許第ＥＰ２３９４００号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号、および米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、および同第５，５８５，０８９号）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）または再表面化（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第ＥＰ５９２１０６号および同第ＥＰ５１９５９６号、Ｐａｄｌａｎ  ＥＡ（１９９１）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ＧＭ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４、およびＲｏｇｕｓｋａ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開第ＷＯ９３／１７１０５号、Ｔａｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９：１１１９−２５、Ｃａｌｄａｓ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３（５）：３５３−６０、Ｍｏｒｅａ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０（３）：２６７−７９、Ｂａｃａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２（１６）：１０６７８−８４、Ｒｏｇｕｓｋａ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  ９（１０）：８９５  ９０４、Ｃｏｕｔｏ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ、Ｃｏｕｔｏ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５５（８）：１７１７−２２、Ｓａｎｄｈｕ  ＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ  １５０（２）：４０９−１０、およびＰｅｄｅｒｓｅｎ  ＪＴ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２３５（３）：９５９−７３を含むが、これらに限定されない、当該技術分野で既知の多様な技術を使用して産生され得る。米国特許出願公開第２００５／００４２６６４Ａ１号（２００５年２月２４日）も参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１９７】
多重特異性（例えば、二重特異性抗体）を作製するための方法は記載されており、例えば、米国特許第７，９５１，９１７号、同第７，１８３，０７６号、同第８，２２７，５７７号、同第５，８３７，２４２号、同第５，９８９，８３０号、同第５，８６９，６２０号、同第６，１３２，９９２号、および同第８，５８６，７１３号を参照されたい。
【０１９８】
単一ドメイン抗体、例えば、軽鎖を欠く抗体は、当該技術分野で周知の方法によって産生され得る。Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｌ＆Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３１：２５−３８、Ｎｕｔｔａｌｌ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １（３）：２５３−２６３、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ，（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ７４（４）：２７７−３０２、米国特許第６，００５，０７９号、および国際公開第ＷＯ９４／０４６７８号、同第ＷＯ９４／２５５９１号、および同第ＷＯ０１／４４３０１号を参照されたい。
【０１９９】
さらに、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合する抗体は、同様に、当業者に周知の技術を使用して、抗原を「模倣する」抗イディオタイプ抗体を生成するために利用することができる。（例えば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ  ＮＳ＆Ｂｏｎａ  ＣＡ（１９８９）ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ７（５）：４３７−４４４およびＮｉｓｓｉｎｏｆｆ  Ａ（１９９１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４７（８）：２４２９−２４３８を参照されたい）。
【０２００】
特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＡｐｏＣ３抗体と同じＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）のエピトープに結合する本明細書に開示される抗体は、ヒト抗体である。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体のいずれか１つのＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）への結合を（例えば、用量依存的様式で）競合的にブロックする本明細書に開示される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当業者に既知である任意の方法を使用して産生され得る。例えば、機能的内因性免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用することができる。特に、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、ランダムに、または相同組換えによって、マウス胚幹細胞内に導入され得る。代替的には、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域、および多様性領域がマウス胚幹細胞内に導入され得る。マウス重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入と別個に、または同時に非機能性となってもよい。特に、ＪＨ領域のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生を防止する。改変された胚性幹細胞を増殖し、胚盤胞に微量注入して、キメラマウスを産生する。その後、キメラマウスを繁殖させて、ヒト抗体を発現するホモ接合性子孫を産生する。トランスジェニックマウスに通常の様式で、選択された抗原、例えば、抗原（例えば、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３））の全てまたは一部分で免疫付与する。抗原に対するモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して、免疫付与したトランスジェニックマウスから得ることができる。トランスジェニックマウスによって保有されるヒト免疫グロブリントランス遺伝子は、Ｂ細胞分化中に再構成し、その後、クラススイッチおよび体細胞変異を受ける。このように、かかる技術を使用して、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ  Ｎ＆Ｈｕｓｚａｒ  Ｄ（１９９５）Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：６５−９３を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術、ならびにかかる抗体を産生するためのプロトコルの詳細な考察については、例えば、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、および同第ＷＯ９６／３３７３５号、ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、および同第５，９３９，５９８号を参照されたい。ヒト抗体を産生することができるマウスの例としては、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．、米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，１８４号）、ＨｕＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）（Ｍｅｄｅｒｅｘ，Ｉｎｃ．／Ｇｅｎ  Ｐｈａｒｍ、米国特許第５，５４５，８０６号および同第５，５６９，８２５号）、Ｔｒａｎｓ  Ｃｈｒｏｍｏ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）（Ｋｉｒｉ��）、ならびにＫＭ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ  Ｋｉｒｉｎ）が挙げられる。
【０２０１】
ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）に特異的に結合するヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを使用する上記のファージディスプレイ法を含む、当該技術分野で既知の多様な方法によって作製され得る。米国特許第４，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号、および同第５，８８５，７９３号、ならびに国際公開第ＷＯ９８／４６６４５号、同第ＷＯ９８／５０４３３号、同第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９８／１６６５４号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、同第ＷＯ９６／３３７３５号、および同第ＷＯ９１／１０７４１号も参照されたい。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、ヒト抗体は、マウス−ヒトハイブリドーマを使用して産生することができる。例えば、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）で形質転換されたヒト末梢血リンパ球をマウス骨髄腫細胞と融合させて、ヒトモノクローナル抗体を分泌するマウス−ヒトハイブリドーマを産生することができ、これらのマウス−ヒトハイブリドーマをスクリーニングして、標的抗原（例えば、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３））に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を分泌するものを判定することができる。かかる方法は既知であり、当該技術分野で記載されている（例えば、Ｓｈｉｎｍｏｔｏ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４６：１９−２３、Ｎａｇａｎａｗａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  １４：２７−３１を参照されたい）。
【０２０３】
６．キット
本明細書に開示される１つ以上の抗体またはその医薬組成物もしくはコンジュゲートを含むキットも提供される。特定の実施形態では、本明細書に提供される１つ以上の抗体などの、本明細書に開示される医薬組成物の１つ以上の成分で充填した１つ以上の容器を含む薬学的パックまたはキットが、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に開示される医薬組成物と、本明細書に開示されるものなどの任意の予防剤または治療剤と、を含有する。このような容器に必要に応じて付随するのは、医薬品または生物学的製剤の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって規定された形式の通知であり得、この通知はヒトの投与のために製造、使用、または販売の代理店による承認を反映している。
【０２０４】
さらに提供されるのは、上述の方法で使用できるキットである。一実施形態では、キットは、本明細書に開示される抗体、好ましくは精製された抗体を１つ以上の容器に含む。特定の実施形態では、本明細書に開示されるキットは、実質的に単離されたＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）抗原を対照として含有する。別の特定の実施形態では、本明細書に開示されるキットは、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）と反応しない対照抗体をさらに含む。別の特定の実施形態では、本明細書に開示されるキットは、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）抗原への抗体の結合を検出するために１つ以上のエレメントを含有する（例えば、抗体は、蛍光化合物、酵素基質、放射性化合物、または発光化合物などの検出可能な基質にコンジュゲートされ得るか、第１の抗体を認識する第２の抗体は、検出可能な基質にコンジュゲートされ得る）。特定の実施形態では、本明細書で提供されるキットは、組換えにより生成または化学合成されたＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）抗原を含むことができる。キットで提供されるＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）抗原はまた、固体支持体に結合していてもよい。より具体的な実施形態では、上記のキットの検出手段は、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）抗原が結合している固体支持体を含む。かかるキットはまた、非結合リポーター標識抗ヒト抗体または抗マウス／ラット抗体を含んでもよい。この実施形態では、ＡｐｏＣ３（例えば、ヒトＡｐｏＣ３）抗原への抗体の結合は、当該リポーター標識抗体の結合によって検出され得る。
【実施例】
【０２０５】
以前に同定された抗体クローン５Ｅ５は、ｐＨ７．４での高い親和性、およびｐＨ５．５での若干低減した親和性でＡｐｏＣ３に結合する（米国仮特許出願第６２／３６０，０８４号を参照されたい）。本開示は、５Ｅ５と比較して、ｐＨ７．４でのＡｐｏＣ３への高親和性結合を示すが、ｐＨ５．５でのＡｐｏＣ３へのより低減した親和性を示すクローン５Ｅ５の新規誘導体を提供する。以下の実施例は、新規５Ｅ５誘導体の特性評価について記載する。５Ｅ５のアミノ酸配列は、米国仮特許出願第６２／３６０，０８４号に記載されおり、新規５Ｅ５誘導体のアミノ配列は、本明細書の表１〜７に示される。
【０２０６】
このセクション中の実施例は、本出願の利点および特徴をさらに明瞭にするために提供されるが、本出願の範囲を限定することは意図しない。実施例は、例示目的のみのためのものである。
【０２０７】
実施例１：抗ＡｐｏＣ３  ｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体のインビトロ特性評価。
この実施例は、抗ＡｐｏＣ３  ｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体のｐＨ７．４およびｐＨ５．５の両方での抗原−結合速度を判定するために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベース実験を記載する。
【０２０８】
抗体クローン５Ｅ５の新規誘導体のパネルを、５Ｅ５のＶＨおよび／またはＶＬ内で、ヒスチジンと共に１種以上のＣＤＲアミノ酸の置換によって生成した。各５Ｅ５誘導体のｐＨ７．４およびｐＨ５．５の両方での抗原−結合速度を、ＳＰＲベース法を使用して評価し、５Ｅ５と比較して、ｐＨ７．４でのＡｐｏＣ３への高親和性結合を示すが、ｐＨ５．５でのＡｐｏＣ３へのより低減した親和性を示すクローンを、さらなる特性評価のために選択した。例示的な５Ｅ５誘導体５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬＷＴ、５Ｅ５ＶＨ１２＿ＶＬＷＴ、および５Ｅ５ＶＨＷＴ＿ＶＬ８の結合速度を、表１４に示す。
【０２０９】
試験抗体を、５０ｍｌの小規模培養でトランスフェクトＨＥＫ２９３細胞から産生し、ＡＫＴＡ純粋クロマトグラフィーシステムを使用してタンパク質Ａクロマトグラフィーによって精製した。精製された抗体断片の品質および収量を、分光光度法およびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって判定した。
【０２１０】
ＳＰＲベース法を用い、ビオチン化ヒトＡｐｏＣ３を、ストレプトアビジン（ＳＡ）でコーティングしたチップ上に捕捉し、コーティングしたチップに対する試験抗体の結合速度を、ｐＨ７．４およびｐＨ５．５の両方で測定した。簡潔には、約５００ＲＵの表面密度に達するように、２０μｌのビオチン化ヒトＡｐｏＣ３を、１０μｇ／ｍｌの濃度で注入した。６０μｌの各試験抗体を、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ−１００８−２６；０．０１０ＭのＨＥＰＥＳ、０．１５０ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５（ｖ／ｖ）％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）中で希釈し、１〜１００ｎＭの濃度で注入した。試験抗体を、３０μｌ／分の流量でフローセルに通し、続いてｐＨ７．４またはｐＨ５．５で５分間オフ速度洗浄した。ラングミュア１：１結合モデルを適用するＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ４．１ソフトウェアを使用して、得られたセンサーグラムを分析して、結合速度を得た。データをゼロ調節し、参照セルセンサーグラムを減じた。
【表１４】
2021501579.tif 000022
【０２１１】
試験される全てのｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体は、ｐＨ５．５よりもｐＨ７．４でＡｐｏＣ３に対してより高い親和性を示し、抗体５Ｅ５ＶＨ１２＿ＶＬＷＴは、最も顕著なｐＨ依存性結合を示した（表１４を参照されたい）。ｐＨ依存性結合の大きさは、酸性条件下で解離速度と正の相関関係にあった。
【０２１２】
実施例２：抗ＡｐｏＣ３ヒトＩｇＧ１抗体のインビトロ特性評価。
実施例１の結果に基づいて、試験ｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体を、ヒトＩｇＧ１抗体として生成した。ＳＰＲベースアッセイを用い、ヒトＡｐｏＣ３タンパク質を、ＣＭ５チップ上に固定し、コーティングしたチップに対する試験抗体の結合速度を、ｐＨ７．４およびｐＨ５．５の両方で測定した。簡潔には、１０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）中、５０μｇ／ｍｌの天然ヒトＡｐｏＣ３の溶液を調製し、表面密度が約５００ＲＵに達するまで注入した。６０μｌの各試験抗体を、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ−１００８−２６、０．０１０ＭのＨＥＰＥＳ，０．１５０ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５（ｖ／ｖ）％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）中で希釈し、表９に記載される濃度で注入した。試験抗体を、３０μｌ／分の流量でフローセルに通し、続いてｐＨ７．４またはｐＨ５．５で５分間オフ速度洗浄した。ラングミュア１：１結合モデルを適用するＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ４．１ソフトウェアを使用して、得られたセンサーグラムを分析して、結合速度を得た。データをゼロ調節し、参照セルセンサーグラムを減じた。
【表１５】
2021501579.tif 000023
【０２１３】
試験される全ての抗体は、ｐＨ７．４でヒトＡｐｏＣ３に結合し、かつｐＨ５．５でＡｐｏＣ３への低減した親和性を有した（表１５を参照されたい）。５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬＷＴ、５Ｅ５ＶＨ１２＿ＶＬＷＴ、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８、および５Ｅ５ＶＨ１２＿ＶＬ８は、部分的に顕著なｐＨ依存性結合を示す。
【０２１４】
実施例３：肝細胞によるＶＬＤＬの取り込みに対する抗ＡｐｏＣ３抗体の効果。
この実施例では、肝細胞によるＶＬＤＬの取り込みを減衰させるための抗ＡｐｏＣ３抗体の能力が、判定された。
【０２１５】
簡潔には、ＨｅｐＧ２細胞（ＡＴＣＣ  Ｈｂ−８０６５）を、１０％ＦＣＳを補充した完全最小必須培地（ＭＥＭ）中、２４時間、かつ０．０１２５％ウシ血清アルブミン（ＭＥＭ−ＢＳＡ培地）を補充した完全ＭＥＭ中、さらに２４時間、ポリ−ｄ−リジンでコーティングした表面上で培養した。細胞を、新鮮なＭＥＭ−ＢＳＡ培地中で、３μΜのヒトＡｐｏＣ３タンパク質（Ａｔｈｅｎｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、およびＩｇＧ１フォーマットの３μΜの試験抗体で１５分間プレインキュベートし、３０μｇ／ｍＬのＡｐｏＣ３枯渇ＤｉＩ標識ＶＬＤＬ（Ｋａｌｅｎ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，ＬＬＣ＃７７０１３０−９）を、培地に添加した。４時間のインキュベーション後、細胞を、１％イントラリピドを補充した新鮮な完全ＭＥＭで２０分間さらにインキュベートした。細胞によって取り込まれるＤｉＩ標識ＶＬＤＬの量を、室温で１５分間、細胞をイソプロパノールで溶解し、溶解物（ｅｘ＝５２０ｎｍ、ｅｍ＝５８０）中でＤｉＩ標識の蛍光を測定し、標準曲線を使用してＤｉＩ標識ＶＬＤＬの量を計算し、溶解物中の全タンパク質量に基づいてデータを正規化することにより判定した。データは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６を使用してグラフ化され、平均＋／−標準誤差として報告される。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６を使用して複数の比較を伴う一元配置分散分析を計算した。
【０２１６】
図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃに示されるように、５Ｅ５ＷＴ、５Ｅ５ＶＨＷＴ＿ＶＬ８、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬＷＴ、５Ｅ５ＶＨ１２＿ＶＬＷＴ、および５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８抗体は、ＨｅｐＧ２細胞によるＶＬＤＬの取り込みを増加させた。特に、５Ｅ５ＶＨＷＴ＿ＶＬ８、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬＷＴ、５Ｅ５ＶＨ１２＿ＶＬＷＴ、および５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８抗体は全て、ＡｐｏＣ３の存在下でＶＬＤＬの取り込みを完全に回復した。
【０２１７】
実施例４：抗ＡｐｏＣ３抗体の薬物動態学および薬力学。
この実施例は、ヒトＡｐｏＣ３のトランスジェニック発現によってトリグリセリドクリアランスが正常に機能しないマウスモデルを使用して、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８抗体のインビボ特性評価を記載する。
【０２１８】
４．１  マウスモデルの生成
標準的な食物の食餌で維持される６０〜６３日齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６雄マウスに、チロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）プロモーター（ＲｅｇｅｎＸＢｉｏ）に操作可能に連結した、ヒトＡｐｏＣ３遺伝子を保有するＡＡＶ８ベクターの３×１０１１個のウイルス粒子を腹腔内投与によって感染させた。投与から１２日後に、血液試料を後眼窩洞から採集し、血液試料中のヒトＡｐｏＣ３のレベルを、一次抗ＡｐｏＣ３抗体（Ａｂｃａｍウサギポリクローナル抗ヒトＡｐｏＣ３＃ａｂ２１０３２）、および二次ＡｐｏＣ３抗体（ＡｂｃａｍヤギポリクローナルビオチンコンジュゲートＡｐｏＣ３＃ａｂ２１０２４）を使用して、ＥＬＩＳＡによって測定した。感染マウスにおいて、ヒトＡｐｏＣ３の平均血清レベルは、９．９μΜであった。４時間の絶食後の平均循環トリグリセリドレベルは、これらのマウスにおいて１６３ｍｇ／ｄＬであり、一方対照マウスにおける平均循環トリグリセリドレベルは、１０９ｍｇ／ｄＬ（ｐ＝０．００６５）であった。
【０２１９】
その後、全ての群が１２日目に同様の平均ＡｐｏＣ３レベルを有するようにマウスを群分けした。ＡＡＶ感染から１４日後に、後眼窩洞から血液試料を採集して、ベースライン（Ｔ＝０）ＡｐｏＣ３レベルを確立した。２５ｍｇ／ｋｇの試験抗ＡｐｏＣ３ヒトＩｇＧ１抗体を、背部皮下腔内への注射により各マウスに投与した。抗鶏卵リソソームヒトＩｇＧ１抗体（ＨｙＨＥＬ５）をアイソタイプ対照として使用した。試験抗体の投与から０、２、４、８、および２４時間後、ならびにその後３０日間にわたりおよそ２日ごとに血液試料を、後眼窩洞から採集した。全ての動物実験は、Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈにおける推奨に従って実施した。全ての手順は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  Ｖａｓｃｕｍａｂ，ＬＬＣによって承認された。
【０２２０】
４．２  抗ＡｐｏＣ３抗体の薬物動態
ヒトＡｐｏＣ３を発現するマウスを生成し、セクション４．１に記載されるように処置した。ＥＬＩＳＡアッセイを用いてヒトＩｇＧ１抗体の血漿レベルを判定した。具体的には、９６ウェルプレート（Ｇｒｉｅｎｅｒ＃６５５０６１）を、ＰＢＳ中で希釈した５０μＬの一次ＩｇＧ抗体（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  ４１−ＸＧ５７ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃポリクローナル）で、４℃で一晩コーティングした。２００μＬのＴＢＳ−Ｔでプレートを４回洗浄し、ＰＢＳ中の、３％ＢＳＡ（Ｒｏｃｈｅ  ＢＳＡ画分Ｖプロテアーゼ不含＃０３  １１７  ３３２  ００１）およびクリアミルク（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｌｅａｒ  Ｍｉｌｋ  Ｂｌｏｃｋｅｒ＃３７５８７）からなる２００μＬのブロック緩衝液を用いて３０℃で９０分間ブロックした。ブロック緩衝液を除去し、ブロック緩衝液中で希釈した５０μＬの試験試料を添加し、３００ｒｐｍでの回転と共に室温で２時間インキュベートさせた。２００μＬのＴＢＳ−Ｔでプレートを４回洗浄し、ブロック緩衝液中で希釈した５０μＬの二次抗体（Ａｂｃａｍヤギ抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃ（ビオチン）ポリクローナル＃ａｂ９７２２３）を添加し、３００ｒｐｍでの回転と共に室温で１時間インキュベートさせた。ＴＢＳ−Ｔでプレートを１回洗浄し、ＰＢＳ中で１００倍希釈した５０μＬのＳＡ−ＨＲＰ（Ａｂｃａｍ＃６４２６９）を添加し、３００ｒｐｍでの回転と共に室温で３０分間インキュベートさせた。次いで、２００μＬのＴＢＳ−Ｔでプレートを４回洗浄し、８０μＬのＴＭＢで開発した。５０μＬの０．５Ｎ  ＨＣＬにより発色反応を停止させた。吸光度を波長４５０ｎｍで読み出した。精製された試験抗体を使用して構築した標準曲線（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）の４パラメーター適合から試験ウェル中のヒトＩｇＧの量を計算した。この方法は、ヒトＡｐｏＣ３を特異的に検出し、マウスＡｐｏＣ３と交差反応しない。
【０２２１】
図２Ａに示されるように、５Ｅ５抗体は、ヒトＡｐｏＣ３を発現するマウス内で急速に分解された。これは、ＡｐｏＣ３含有脂質粒子の取り込みを通して、ＡｐｏＣ３の急速な交代によって説明することができる。より低いｐＨでのＡｐｏＣ３への低減した親和性を有する５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８抗体は、酸性オルガネラ中でＡｐｏＣ３から解離し得、エンドソーム再利用を介して血流に戻り得る。５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８の半減期は、約１週間であり、アイソタイプ対照抗体ＨｙＨｅｌ５（マウス内の特定の抗原に結合しない抗体）の半減期と同様である。５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８の血漿レベルは、注射後約１カ月でベースラインに戻る。５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８の延長された半減期は、血清中の抗体の治療レベルを維持するために必要な低い投与頻度のため、この抗体を臨床用途の優れた候補にする。
【０２２２】
４．３  抗ＡｐｏＣ３抗体の薬力学
ヒトＡｐｏＣ３を発現するマウスを生成し、セクション４．１に記載されるように処置した。ＥＬＩＳＡアッセイを用いてヒトＡｐｏＣ３およびＡｐｏＢの血漿レベルを判定した。具体的には、９６ウェルプレート（Ｇｒｉｅｎｅｒ＃６５５０６１）を、ＰＢＳで希釈した５０μＬの一次ＡｐｏＣ３抗体（Ａｂｃａｍウサギポリクローナル抗ヒトＡｐｏＣ３＃ａｂ２１０３２）または５０μＬの一次ＡｐｏＢ抗体（Ｍｅｒｉｄｉａｎ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓヤギポリクローナル抗ヒトＡｐｏＢ＃Ｋ４５２５３Ｇ）で、４℃で一晩コーティングした。２００μＬのＴＢＳ−Ｔでプレートを４回洗浄し、２００μＬのブロック緩衝液（ＰＢＳ中のＰｉｅｒｃｅ  Ｃｌｅａｒ  Ｍｉｌｋ  Ｂｌｏｃｋｅｒ＃３７５８７）を用いて３０℃で９０分間ブロックした。ブロック緩衝液を除去し、ブロック緩衝液で希釈した５０μＬの試験試料を添加し、３００ｒｐｍでの回転と共に室温で２時間インキュベートさせた。２００μＬのＴＢＳ−Ｔでプレートを４回洗浄し、ブロック緩衝液で希釈した５０μＬの二次ＡｐｏＣ３抗体（ＡｂｃａｍヤギポリクローナルビオチンコンジュゲートＡｐｏＣ３＃ａｂ２１０２４）または二次ＡｐｏＢ抗体（Ｍｅｒｉｄｉａｎ  Ｌｉｆｅ  ＳｃｉｅｎｃｅｓヤギポリクローナルビオチンコンジュゲートＡｐｏＢ４８／１００＃３４００３Ｇ）を添加し、３００ｒｐｍでの回転と共に室温で１時間インキュベートさせた。ＴＢＳ−Ｔでプレートを１回洗浄し、ＰＢＳ中で１００倍希釈した５０μＬのＳＡ−ＨＲＰ（Ａｂｃａｍ＃６４２６９）を添加し、３００ｒｐｍでの回転と共に室温で３０分間インキュベートさせた。次いで、２００μＬのＴＢＳ−Ｔでプレートを４回洗浄し、８０μＬのＴＭＢ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｕｌｔｒａ−ＴＭＢ  ＥＬＩＳＡ＃３４０２８）、続いて５０μＬの０．５Ｎ  ＨＣＬで開発した。吸光度を４５０ｎｍで読み出した。精製されたＡｐｏＣ３（Ａｔｈｅｎｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して構築した標準曲線（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）の４パラメーター適合から試験ウェル中のＡｐｏＣ３の量を計算した。遠心分離によって単離したマウスＶＬＤＬを使用して構築した標準曲線（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）の４パラメーター適合から、試験ウェル中のＡｐｏＢの量を計算した（ＡｐｏＢ含量は全タンパク質含量の２０％であると想定する）。データを計算し、ＨｙＨｅｌ５対照抗体で処置したマウスにおける対応するレベルと比較して、パーセンテージ値としてプロットした。
【０２２３】
図２Ｂおよび２Ｃに示されるように、５Ｅ５抗体は、初めにヒトＡｐｏＣ３およびＡｐｏＢの血漿レベルを低減させたが、レベルは、約２日後正常に戻った。対照的に、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８は、約１カ月間ヒトＡｐｏＣ３およびＡｐｏＢの血漿レベルを低減させた。この長い有効期間は、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８の長い半減期に一致し、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８は、優れた臨床候補であろうことを確認した。
【０２２４】
実施例５：抗ＡｐｏＣ３抗体のヒト化。
５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８のヒト化バリアントは、ＷＯ２０１２１２３５８６Ａ１に記載されている「生殖系列化」方法に従って生成された。簡潔には、同じ標準的な折り畳み構造と５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８のＶＨおよびＶＬ領域に対する最高のアミノ酸配列同一性を持つヒト生殖系列遺伝子セグメントは、既知のヒト生殖系列遺伝子配列と比較することによって識別された。最も近いヒト重鎖および軽鎖生殖系列配列は、それぞれ、ヒトＩＧＨＶ３−２３＊０１およびヒトＩＧＫＶ２−２８＊０１であった。５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８バリアントのファージディスプレイＦａｂライブラリが構築され、ヒトＩＧＨＶ３−２３＊０１およびＩＧＫＶ２−２８＊０１生殖系列配列とは異なる５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８のアミノ酸残基にヒト化変異が組み込まれ、各標的位置のラマ残基およびヒト残基がライブラリでも同様に提示された。配列責任モチーフＤＧ、ＤＳ、ＮＲ、またはＭを削除する変異もまた、ライブラリに組み込まれた。いくつかのラウンドの親和性駆動型ファージディスプレイ選択の後に、最高の標的結合特性（例えば、ｐＨ７．４でのＡｐｏＣ３への高親和性結合、ただしｐＨ５．５でのＡｐｏＣ３へのより低減した親和性）を持つヒト化５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８バリアントが、特定された。
【０２２５】
上記の初期選択およびスクリーニングから、高い親和性、ｐＨ依存性結合を保持する２０個のヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体が、特定された。これらの抗体のＶＨおよびＶκコード配列を発現ベクターにクローニングし、完全長ＩｇＧ１分子としてＥｘｐｉＣＨＯ−Ｓ細胞で産生した。次いで、ＡＫＴＡ  ＰｕｒｅシステムでＨｉｔｒａｐ  ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  Ｓｕｒｅカラム（ＧＥ、カタログ番号１１−００３４−９４）を使用して抗体を精製した。抗体を、ｐＨ３．０で１．０ｍｌの０．１Ｍクエン酸塩緩衝液を使用して溶出し、溶出画分を、中和のために０．１ｍｌのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ９．０を含むチューブに収集した。ＡＫＴＡ  ＰｕｒｅシステムのＨｉＴｒａｐ脱塩カラムを使用して、抗体含有画分をプールし、１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；ＮａＣｌ  １３７ｍＭ、ＫＣｌ  ３ｍＭ、Ｎａ２ＨＰＯ４  ８ｍＭ、ＫＨ２ＰＯ４  １５ｍＭ、ｐＨ７．４）で脱塩した。タンパク質濃度は、２８０ｎｍでの吸光度を測定し、減衰係数を次のように補正して決定した：（Ａ２８０ｎｍ−Ａ３４０ｎｍ）／ε（減衰係数（ｇ／Ｌ））。精製された試料は、試料の正しいサイズおよび純度を確認するために、還元および非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって検査された。
【０２２６】
２つの異なる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイは、ヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体のｐＨ依存性会合および解離パラメーターを評価するために行われた。２つのアッセイの方法および結果を以下に示す。
【０２２７】
５．１  固定化ＡｐｏＣ３に結合するヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体のＳＰＲ分析
ビオチン化天然ヒトＡｐｏＣ３を、Ｂｉａｃｏｒｅによって提供される方法に従い、２０μｌの１０μｇ／ｍｌのビオチン化天然ヒトＡｐｏＣ３の注入によって、ｐＨ７．４でストレプトアビジンでコーティングしたＳＰＲチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号ＢＲ１０００３２）上で捕捉し、それにより約５００ＲＵの表面密度に達した。ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ−１００８−２６、０．０１０ＭのＨＥＰＥＳ、０．１５０ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５（ｖ／ｖ）％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）中で希釈された１〜５０ｎＭの範囲の６０μＬの試験抗体を注入し、３０μｌ／分の流量でフローセルに通し、続いてｐＨ７．４で５分間オフ速度洗浄した。解離後、１０μｌの１０ｍＭのＮａＯＨ／１ＭのＮａＣｌおよび１０μｌの１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．５）を注入することによってフローセル表面を再生させた。同じ一般的なプロトコルを使用して、ｐＨ５．５でアッセイを繰り返した。ここで、ランニングおよび試料希釈緩衝液を、１０ｍＭの最終濃度までクエン酸緩衝液を補充したＨＢＳ−ＥＰ緩衝液で置き換え、ｐＨを５．５に調整した。
【０２２８】
ラングミュア１：１結合モデルを使用するＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ４．１ソフトウェアを使用して、得られたセンサーグラムを分析して、結合速度を得た。データをゼロ調節し、参照セルセンサーグラムを減じた。センサーグラムは、検体を含まないブランクアッセイに二重に参照された。オフ速度値が装置の検出限界ｋｄ：１×１０−６  １／ｓを下回る場合、適合したパラメーターは適用できないと見なされた。
【０２２９】
生成されたヒト化抗体について、計算された速度論的パラメーターの概要を表１６に示す。図３は、２つのアッセイｐＨ値で、２５ｎＭの均一なｍＡｂ濃度で生成された各ヒト化ｍＡｂのオーバーレイされたセンサーグラムを示す。
【表１６−１】
2021501579.tif 000024
【表１６−２】
2021501579.tif 000025
【０２３０】
図３に示されるように、ｍＡｂ１からｍＡｂ６は、ｐＨ７．４とｐＨ５．５の両方で非常に低いオフ速度を示した。それらのｐＨ５．５での見かけの親和性は、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８と比較して改善され、ｐＨ依存性の標的結合は、観察されなかった。ｍＡｂ７抗体は、ｐＨ５．５でオフ速度が高く、ｐＨに依存する明確な標的結合を示す。しかしながら、両方のｐＨ値での結合フェーズのＲｍａｘ値は、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８の値よりも高かった。ｍＡｂ８からｍＡｂ１２への抗体は、ｐＨ７．４で非常に低いオフ速度を示し、ｐＨ７．４よりもｐＨ５．５でより高いＲｍａｘレベルを示した。それらのｐＨ５．５での見かけの親和性は、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８と比較して改善され、ｐＨ依存性の標的結合は、観察されなかった。ｍＡｂ１３およびｍＡｂ１４抗体は、ＨＣＤＲおよびＬＣＤＲ配列を最も近いヒト生殖細胞系フレームワーク配列に移植することによって生成され、明確なｐＨ依存性の標的結合特性を示した。しかしながら、ヒトＡｐｏＣ３へのそれらの親和性は、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８と比較してｐＨ７．４で低減した。ｍＡｂ１５、ｍＡｂ１７、およびｍＡｂ１９抗体は、ＬＣＤＲ３（Ｑ９０Ｈ）にヒスチジン残基を含んでいなかったが、画面上に所望のｐＨ依存性標的結合特性を提示した。ｍＡｂ１６、ｍＡｂ１８、およびｍＡｂ２０抗体の配列は、Ｈ９０  ５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８に対応する残基がヒスチジンであることを除いて、それぞれ、ｍＡｂ１５、ｍＡｂ１７、およびｍＡｂ１９と同一であった。図３に示されるように、ｍＡｂ１６、ｍＡｂ１８、およびｍＡｂ２０は、ｐＨ５．５では標的への親和性が低減し、ｐＨ７．４ではオフ速度が増加したため、明確なｐＨ依存性標的結合を示した。
【０２３１】
５．２  固定化したヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体へのＡｐｏＣ３結合のＳＰＲ分析
試験抗体をＳＰＲチップ上に捕捉し、ヒトＡｐｏＣ３タンパク質を注入し、抗体へのＡｐｏＣ３の結合を測定する逆ＳＰＲアッセイを設計した。具体的には、ヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１０９−００５−０９８）を、ＣＭ５チップ表面（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号ＢＲ１０００１２）上に固定した。固定化は、ＮＨＳ／ＥＤＣキット（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ、カタログ番号ＢＲ−１０００−５０）を使用してＢｉａｃｏｒｅ／ＧＥによって提供された方法に従い、チップの活性化後、ｐＨ５．０の１０ｍＭの酢酸緩衝液中の３０μｇ／ｍｌの抗ヒトＦｃγ抗体の溶液を調製し、表面密度が約１００００ＲＵに達するまで注入した。分析サイクルは、次のステップで構成された。
（１）抗体の捕捉：ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ−１００８−２６；０．０１０  ＭのＨＥＰＥＳ、０．１５０ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５（ｖ／ｖ）％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）で希釈したｐＨ７．４またはｐＨ５．５での、５０ｎＭの濃度で抗体を注入し、最大８００ＲＵの高親和性抗ｈｕＦｃγ抗体による捕捉を可能にする。
（２）ベースラインの安定化：３０μｌ／ｍｌの流量で１００μｌのＨＢＳ−ＥＰ緩衝液を注入する。
（３）標的結合：ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液で４００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、および５０ｎＭの濃度で希釈した６０μｌの標的ＡｐｏＣ３タンパク質を注入する。
（４）オフ速度洗浄：解離相を評価するために、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液を３０μｌ／ｍｌの流量で５分間注入する。
（５）ｐＨ１．５で２０μｌの１０ｍＭのグリシンを注入することによるチップの再生。
【０２３２】
ラングミュア１：１結合モデルを使用するＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ４．１ソフトウェアを使用して、得られたセンサーグラムを分析して、結合速度を得た。データをゼロ調節し、参照セルセンサーグラムを減じた。検体を含まないブランクアッセイを、検体の注入に対応するセンサーグラムを二重に参照するために使用した。解離および会合相センサーグラムは、４つの異なる濃度曲線に個別に適合した。到達した最大ＲＵ値が機器の検出限界（＜５ＲＵ）、Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ）を下回る場合、センサーグラムはフィッティングから除外された。
【０２３３】
生成されたヒト化抗体について、計算された速度論的パラメーターの概要を表１７に示す。図４は、生成されたバリアントの結合特性を示す。標的タンパク質の提示が異なるため、このセットアップでは全ての抗体のオフ速度が増加した。
【表１７−１】
2021501579.tif 000026
【表１７−２】
2021501579.tif 000027
【０２３４】
図４に示されるように、ｍＡｂ１からｍＡｂ６は、ｐＨ７．４でＡｐｏＣ３に対する改善された見かけの親和性を示し、ｐＨ依存性の標的結合が観察されたことを示した。ｍＡｂ７抗体は、両方のｐＨ値でオフ速度が高く、ｐＨに依存する明確な標的結合を示した。会合期のｐＨ５．５でのＲｍａｘ値は、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８と比較して増加した。ｍＡｂ８からｍＡｂ１２への抗体は、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８よりもｐＨ７．４でより低いオフ速度を示し、ｐＨ７．４よりもｐＨ５．５でより高いＲｍａｘレベルを示し、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８のオフ速度よりもｐＨ５．５でより高いオフ速度を示し、ｐＨに依存する標的結合を示した。ｍＡｂ１３およびｍＡｂ１４抗体（ＨＣＤＲおよびＬＣＤＲ配列を最も近いヒト生殖細胞系列フレームワーク配列に移植することによって生成された）は、両方のｐＨレベルで結合の喪失を示したため、ｐＨ５．５での親和性値は計算されなかった。ｍＡｂ１６、ｍＡｂ１８、およびｍＡｂ２０抗体は、ｐＨ５．５では標的への親和性が低減し、ｐＨに依存する明確な標的結合を示したが、ｐＨ７．４でのそれらのオフ速度も増加したことを示した。
【０２３５】
要約すると、以下の結合プロファイルグループは、ＳＰＲアッセイの結果に従って、ヒト化抗体について特定された。
グループ１：ｍＡｂ１、２、３、４、５、６、８、９、１０、１１、および１２、
グループ２：ｍＡｂ１５、１７、および１９、
グループ３：ｍＡｂ１６、１８、および２０、
グループ４は、ｍＡｂ７を含み、かつ
グループ５：ｍＡｂ１３および１４。
【０２３６】
各グループ内で、全てのバリアントは、同様のＳＰＲの関連付けおよび解離プロファイルを示した。したがって、各グループの代表的な抗体を選択して、最高のヒト相同性パーセンテージの基準に基づいて、それらの開発可能性パラメーターのうちの１つとしてそれらの耐熱性を評価した。
【０２３７】
５．３  選択したヒト化抗ＡｐｏＣ３抗体の耐熱性の特性評価
ヒト化抗体の耐熱性は、５６〜６８℃の範囲の異なる温度で１時間インキュベートした後に評価された。抗体の活性は、５００ＲＵの天然ｈｕＡｐｏＣ３タンパク質がＣＭ５チップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号ＢＲ１０００１２）上に固定したＳＰＲアッセイで決定された。Ｂｉａｃｏｒｅによって提供される方法に従い、ＮＨＳ／ＥＤＣキット（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ）を使用して固定化を実施し、チップの活性化後、１０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）中、６０μｇ／ｍｌのヒトＡｐｏＣ３の溶液を調製し、表面密度が約５００ＲＵに達するまでこれを注入した。
【０２３８】
ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ−１００８−２６、０．０１０ＭのＨＥＰＥＳ、０．１５０ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５（ｖ／ｖ）％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）中で希釈された１０ｎＭで１００μＬの試験抗体を注入し、３０μｌ／分の流量でフローセルに通し、続いてｐＨ７．４で１０分間、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液でオフ速度洗浄した。解離後、１０μｌの１０ｍＭのＮａＯＨ／１ＭのＮａＣｌおよび１０μｌの１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．５）を注入することによってフローセル表面を再生させた。
【０２３９】
会合速度および結合段階で到達した最大ＲＵ値が、読み出しパラメーターとして測定された。会合速度（勾配）は、２００秒までの初期結合段階で評価され、ＲＵ最大値（Ｒ０）は、３４５秒の解離段階の開始時に読み取られた。機能的抗体のパーセンテージは、１００％に設定された参照（４°Ｃでインキュベートされた試料）に基づいて計算された。各抗体の融解温度は、活性対温度曲線での変曲点として決定された。
【０２４０】
図５Ａおよび５Ｂに示されるように、また表１８に示されるように、試験したほとんどのヒト化抗体は、親クローン５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８と比較して、大幅に改善された融解温度を示した。しかしながら、ｍＡｂ１４は、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８よりも大幅に低い溶融温度を有した。
【表１８】
2021501579.tif 000028
【０２４１】
ｍＡｂ１３の耐熱性も前述のアッセイで評価され、観察された耐熱性の変化が、バリアント１３および１４のＣＤＲグラフトに使用された生殖細胞系列フレームワーク配列に関連しているかどうかを判定した。アッセイは、ヒト化抗体および５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８（対照としてアッセイされた）の予想される到達温度を網羅するために、拡張した温度範囲で実行された。図５Ｃに示されるように、ｍＡｂ１３およびｍＡｂ１４は、類似の耐熱性曲線を有し、５Ｅ５ＶＨ５＿ＶＬ８の溶融温度よりも約６℃低い約５７℃の溶融温度を示した。
【０２４２】
本発明は、本明細書に開示される特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際、説明されたものに加えて、本発明の様々な修正が、上述の説明および添付の図面から当業者に明らかになるであろう。かかる修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。
【０２４３】
本明細書に引用される全ての参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）は、各個々の参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）が具体的かつ個々に全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれると示されているのと同程度に、全ての目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４４】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。
【図１Ａ】
2021501579.tif 000029
【図１Ｂ】
2021501579.tif 000030
【図１Ｃ】
2021501579.tif 000031
【図２Ａ】
2021501579.tif 000032
【図２Ｂ】
2021501579.tif 000033
【図２Ｃ】
2021501579.tif 000034
【図３Ａ】
2021501579.tif 000035
【図３Ｂ】
2021501579.tif 000036
【図３Ｃ】
2021501579.tif 000037
【図３Ｄ】
2021501579.tif 000038
【図３Ｅ】
2021501579.tif 000039
【図４Ａ】
2021501579.tif 000040
【図４Ｂ】
2021501579.tif 000041
【図４Ｃ】
2021501579.tif 000042
【図４Ｄ】
2021501579.tif 000043
【図４Ｅ】
2021501579.tif 000044
【図５Ａ】
2021501579.tif 000045
【図５Ｂ】
2021501579.tif 000046
【図５Ｃ】
2021501579.tif 000047
【配列表】
2021501579000001.app
【国際調査報告】
2021501579.tif 000048
2021501579.tif 000049
2021501579.tif 000050