(57)【要約】  本発明は、ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメイン（ＴＭ）もしくはその断片もしくはバリアントおよび／またはヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、およびＣＡＲを発現する免疫細胞に関する。本発明はさらに、ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメイン（ＴＭ）もしくはその断片もしくはバリアントおよび／またはヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、もしくはその断片もしくはバリアントを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞の投与を含む治療方法に関する。【選択図】図なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
（ｉ）前記膜貫通ドメインは、ヒト腫瘍壊死因子受容体２（ＴＮＦＲ２）膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントを含み、または
（ｉｉ）前記細胞内ドメインは、ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントを含み、または
（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）の両方である、
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項２】
細胞外ヒンジドメインをさらに含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
【請求項３】
前記ヒンジドメインが、ヒトＣＤ８またはＣＤ２８のヒンジ領域を含む、請求項２に記載のＣＡＲ。
【請求項４】
前記ヒンジドメインが、配列番号１４の配列または配列番号１４と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を含む、請求項３に記載のＣＡＲ。
【請求項５】
前記細胞内ドメインが、免疫細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項６】
前記細胞内ドメインが、ヒトＣＤ３のＴ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項５に記載のＣＡＲ。
【請求項７】
前記細胞内ドメインが、ヒトＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み、配列番号２８、２９、３０または３１の配列または配列番号２８、２９、３０または３１と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を任意により含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項８】
前記ＣＡＲが、
細胞外結合ドメインと、
ヒトＣＤ８またはＣＤ２８のヒンジ領域を含む細胞外ヒンジドメインと、
ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントを含む膜貫通ドメインと、
ヒトＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン、
を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項９】
前記ＣＡＲが、
細胞外結合ドメインと、
ヒトＣＤ８またはＣＤ２８のヒンジ領域を含む細胞外ヒンジドメインと、
膜貫通ドメインと、
ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、およびヒトＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン、
を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１０】
前記ＣＡＲが、
細胞外結合ドメインと、
ヒトＣＤ８またはＣＤ２８のヒンジ領域を含む細胞外ヒンジドメインと、
ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントを含む膜貫通ドメインと、
ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、およびヒトＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン、
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１１】
前記膜貫通ドメインが、配列番号２２のまたは配列番号２２と少なくとも約７０％の同一性を有する配列の少なくとも８つの連続アミノ酸を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１２】
前記膜貫通ドメインが、ＴＮＦＲ２でないタンパク質の膜貫通ドメイン由来のアミノ酸残基と組み合わせて配列番号２２の少なくとも８つの連続アミノ酸残基を含む、請求項１１に記載のＣＡＲ。
【請求項１３】
前記膜貫通ドメインが、ＶＮＣＶＩＭＴＱＶ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１４】
前記細胞内ドメインが、配列番号３４のまたは配列番号３４と少なくとも約７０％の同一性を有する配列の少なくとも３０の連続アミノ酸残基を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１５】
前記細胞内ドメインが、ＴＮＦＲ２でないタンパク質の共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン由来のアミノ酸残基と組み合わせて配列番号３４の少なくとも３０の連続アミノ酸残基を含む、請求項１４に記載のＣＡＲ。
【請求項１６】
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号３４の残基１〜７０、１〜１１５、または１〜１５６を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１７】
細胞外結合ドメインと、
配列番号１４のＣＤ８ヒンジ領域を含む細胞外ヒンジドメインと、
配列番号２２のＴＮＦＲ２膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインと、
ａ）配列番号２８、２９、３０、または３１の一次ヒトＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメイン、および
ｂ）配列番号３４のＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン、
を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１８】
前記細胞外結合ドメインが、抗体またはその抗原結合断片である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１９】
前記細胞外結合ドメインが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１８に記載のＣＡＲ。
【請求項２０】
前記細胞外結合ドメインが、
（ａ）任意によりＩＬ−２３受容体（ＩＬ−２３Ｒ）である、自己抗原、
（ｂ）ＣＤ１９およびＣＤ２０から任意により選択される、Ｂ細胞抗原、または
（ｃ）クラスＩ分子が、任意によりＨＬＡ−Ａ２である、同種ＨＬＡクラスＩ分子または同種ＨＬＡクラスＩＩ分子
を特異的に結合する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする核酸配列。
【請求項２２】
請求項２１に記載の核酸配列を含むベクター。
【請求項２３】
請求項２１に記載の核酸配列または請求項２２に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２４】
請求項１〜２０のいずれか一項に記載のＣＡＲを発現する免疫細胞の集団。
【請求項２５】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、ダブルネガティブ（ＤＮ）細胞、調節性免疫細胞、調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、エフェクター免疫細胞、エフェクターＴ細胞、Ｂ細胞、および骨髄系細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、かつ前記免疫細胞が、任意によりヒト細胞である、請求項２４に記載の免疫細胞集団。
【請求項２６】
前記集団が、Ｔｒｅｇ細胞を含み、前記Ｔｒｅｇ細胞が、任意によりヒト細胞である、請求項２４に記載の免疫細胞集団。
【請求項２７】
前記集団が、
細胞外結合ドメインと、
ヒトＣＤ８のヒンジ領域を含むヒンジドメインと、
ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインと、
ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインおよびヒトＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン、
を含むＣＡＲを発現するヒトＴｒｅｇ細胞を含む、請求項２６に記載の免疫細胞集団。
【請求項２８】
請求項１〜２０のいずれか一項に記載のＣＡＲを発現する免疫細胞、または請求項２３に記載の宿主細胞、または請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の免疫細胞集団、および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項２９】
それを必要とするヒト対象において疾患または障害を治療するための方法であって、請求項２８に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３０】
それを必要とするヒト対象における疾患または障害の治療における使用のための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体、または請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の免疫細胞集団。
【請求項３１】
それを必要とするヒト対象における疾患または障害の治療のための医薬品の製造のための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体、または請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の免疫細胞集団の使用。
【請求項３２】
前記疾患または障害が、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植状態、癌および感染症からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法、請求項３０に記載の使用のためのＣＡＲまたは免疫細胞集団、または請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記ヒト対象が、免疫抑制を必要としておりかつ前記ＣＡＲが、前記ヒト対象においてＴｒｅｇ細胞中で発現される、請求項２９に記載の方法、請求項３０に記載の使用のためのＣＡＲまたは免疫細胞集団、または請求項３１に記載の使用。
【請求項３４】
前記疾患または障害が、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、または臓器移植状態である、請求項３３に記載の方法、請求項３３に記載の使用のためのＣＡＲまたは免疫細胞集団、または請求項３３に記載の使用。
【請求項３５】
前記臓器移植状態が、移植片拒絶反応または移植片対宿主病である、請求項３４に記載の方法、請求項３４に記載の使用のためのＣＡＲまたは免疫細胞集団、または請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
医薬品としての使用のための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体、または請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の免疫細胞集団。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１８年８月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／７１７，２３４号の優先権を主張する。その出願の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
【０００２】
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。２０１９年８月９日に作成された配列表の電子コピーは、０２５２９７＿ＷＯ００３＿ＳＬ．ｔｘｔという名前で、サイズは１９５，５７８バイトである。
技術分野
【０００３】
本発明は、免疫療法の分野に関する。特に、本発明は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメイン（ＴＭ）もしくはその断片もしくはバリアント、および／またはＴＮＦＲ２細胞内ドメインもしくはその断片もしくはバリアントを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する。本発明はまた、ＣＡＲを発現する細胞集団、および疾患または障害を治療するためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）技術は近年、癌治療を、特にＢ細胞リンパ腫および白血病の文脈において、急進的に変えた。ＣＡＲにより操作されたプロ炎症性Ｔ細胞は広範囲に研究されており、初期の臨床試験では血液悪性腫瘍の治療において効果をもたらすことが示唆されているが、その一方でＣＡＲにより操作された調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）はあまり評価されていない。
【０００５】
ヒトＴｒｅｇは、免疫恒常性維持において重要な役割を果たしているため、様々な臨床状態の治療手段として利用され得る。また、ヒトＴｒｅｇは、強力な免疫抑制特性を有しており、治療の場において抗原特異的免疫調節を付与するためにそれらの特性を活用できる。これらの理由から、Ｔｒｅｇ細胞療法は、例えば、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、および移植片拒絶反応または移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）などの臓器移植状態を治療することを目的として開発されている。
【０００６】
当技術分野では、ＣＡＲ構築物を用いたＴｒｅｇ細胞の形質導入が、例えばＰＣＴ特許国際公開２００８／０９５１４１号において示唆されている。
【０００７】
それらの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインにおいて異なる、ＣＡＲの様々な分子フォーマットが開発されている。Ｔエフェクター細胞分野では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の細胞内モジュールは典型的には、ＣＤ３ゼータとタンデムであるＣＤ２８、ＩＣＯＳまたは４−１ＢＢドメインからなる。しかし、ＣＡＲ  Ｔｒｅｇ細胞を設計するためにこれらのプロトタイプモジュールを使用することは多くの場合、制御されない構成的活性化をもたらす制御されない構成的シグナル伝達をもたらす。この持続性シグナル伝達（抗原に依存しない活性化背景に対応する）は、ＣＡＲ  Ｔｒｅｇ細胞の早期枯渇をもたらし、それによりそれらの治療的使用を制限し得る。
【０００８】
したがって、免疫細胞、特にＴｒｅｇ細胞で発現される場合により少ない持続性シグナル伝達を有する新規ＣＡＲ構築物が必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、および／またはＴＮＦＲ２細胞内ドメインもしくはその断片もしくはバリアントを含む新規ＣＡＲ構築物を提供する。本明細書で実証されるように、ＣＡＲ構築物を発現する操作Ｔ細胞および操作Ｔｒｅｇ細胞は、従来のＣＡＲを発現する細胞と比較して、持続性シグナル伝達の強い減少を呈する。ＣＡＲの関与後、操作Ｔｒｅｇ細胞は、Ｔエフェクター細胞の増殖に対して高効率の抑制活性を示し、これにより、細胞療法でのこれらのＴｒｅｇ細胞の有利性が実証された。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ヒトＴｒｅｇ細胞は、以下の特徴の１つ以上を呈する：ａ）ヒトＣＤ８膜貫通ドメインおよび４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲを発現するＴｒｅｇ細胞と比較して、本発明のＴｒｅｇ細胞は細胞表面上にＣＡＲを低レベルで発現するが、ＣＡＲ特異的活性化の同等なレベルをなお示す、ｂ）本発明のＴｒｅｇ細胞は、１週間を超えた（例えば、９日間の培養）後に、それらのＴｒｅｇ表現型（例えば、ＦｏｘＰ３、Ｈｅｌｉｏｓ、およびＣＤ６２Ｌの高レベルの発現、ならびにＣＤ１２７の低レベルの発現）を保持する、ならびにｃ）本発明のＴｒｅｇ細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏで（例えば、マウスＧｖＨＤモデルにおいて）ＧｖＨＤを制御できる。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本発明は、細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含むＣＡＲを提供し、
−膜貫通ドメインは、ヒト腫瘍壊死因子受容体２（ＴＮＦＲ２）膜貫通ドメイン、もしくはその断片もしくはバリアントを含み、または
−細胞内ドメインは、ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントを含み、または
−（ｉ）および（ｉｉ）である。
【００１２】
ある実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、細胞外ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８またはＣＤ２８のヒンジ領域をさらに含む。特定の実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１４の配列、または配列番号１４と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を含む。
【００１３】
ある実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの細胞内ドメインは、免疫細胞一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ヒトＣＤ３のＴ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態では、細胞内ドメインは、ヒトＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意により、配列番号２８、２９、３０または３１の配列、または配列番号２８、２９、３０または３１と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を含む。
【００１４】
ある実施形態では、ＣＡＲは、
−細胞外結合ドメインと、
−ヒトＣＤ８またはＣＤ２８のヒンジ領域を含む細胞外ヒンジドメインと、
−ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントを含む膜貫通ドメインと、
−ヒトＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン、
を含む。
【００１５】
ある実施形態では、ＣＡＲは、
−細胞外結合ドメインと、
−ヒトＣＤ８またはＣＤ２８のヒンジ領域を含む細胞外ヒンジドメインと、
−膜貫通ドメインと、
−ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、およびヒトＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン、
を含む。
【００１６】
ある実施形態では、ＣＡＲは、
−細胞外結合ドメインと、
−ヒトＣＤ８またはＣＤ２８のヒンジ領域を含む細胞外ヒンジドメインと、
−ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントを含む膜貫通ドメインと、
−ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、およびヒトＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン、
を含む。
【００１７】
ある実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号２２のまたは配列番号２２と少なくとも約７０％の同一性を有する配列の少なくとも８つの連続アミノ酸を含む。ある実施形態では、膜貫通ドメインは、ＴＮＦＲ２ではないタンパク質の膜貫通ドメイン由来のアミノ酸残基と組み合わせて、配列番号２２の少なくとも８つの連続アミノ酸残基を含む。ある実施形態では、膜貫通ドメインは、ＶＮＣＶＩＭＴＱＶ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含む。
【００１８】
ある実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの細胞内ドメインは、配列番号３４のまたは配列番号３４と少なくとも約７０％の同一性を有する配列の少なくとも３０の連続アミノ酸残基を含む。ある実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＮＦＲ２ではないタンパク質の共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン由来のアミノ酸残基と組み合わせて、配列番号３４の少なくとも３０の連続アミノ酸残基を含む。ある実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３４の残基１〜７０、１〜１１５、または１〜１５６を含む。
【００１９】
ある実施形態では、ＣＡＲは、
−細胞外結合ドメインと、
−配列番号１４のＣＤ８ヒンジ領域を含む細胞外ヒンジドメインと、
−配列番号２２のＴＮＦＲ２膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインと、
−配列番号２８、２９、３０、または３１の一次ヒトＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメイン、および配列番号３４のＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン、
を含む。
【００２０】
ある実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片である。特定の実施形態では、細胞外結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。細胞外結合ドメインは、例えば、
−任意によりＩＬ−２３受容体（ＩＬ−２３Ｒ）である、自己抗原、
−ＣＤ１９およびＣＤ２０から任意により選択されるＢ細胞抗原、または
−クラスＩ分子が任意によりＨＬＡ−Ａ２である、同種ＨＬＡクラスＩ分子または同種ＨＬＡクラスＩＩ分子
を特異的に結合し得る。
【００２１】
本発明はまた、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸配列と、核酸配列を含むベクターと、核酸配列またはベクターを含む宿主細胞とを提供する。
【００２２】
本発明はまた、本明細書に記載のＣＡＲを発現する免疫細胞の集団を提供する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、ダブルネガティブ（ＤＮ）細胞、調節性免疫細胞、調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、エフェクター免疫細胞、エフェクターＴ細胞、Ｂ細胞、および骨髄系細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、免疫細胞は任意により、ヒト細胞である。特定の実施形態では、集団は、Ｔｒｅｇ細胞を含み、Ｔｒｅｇ細胞は任意によりヒト細胞である。
【００２３】
ある実施形態では、免疫細胞集団は、
−細胞外結合ドメインと、
−ヒトＣＤ８のヒンジ領域を含むヒンジドメインと、
−ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインと、
−ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、およびヒトＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン、
を含むＣＡＲを発現するヒトＴｒｅｇ細胞を含む。
【００２４】
本発明はまた、本明細書に記載のＣＡＲを発現する免疫細胞、宿主細胞、または免疫細胞集団、および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。また、それを必要とするヒト対象において疾患または障害を治療するための方法も提供され、本方法は、医薬組成物を対象に投与することを含む。
【００２５】
本発明はまた、それを必要とするヒト対象における疾患または障害の治療での使用のための、本明細書に記載のキメラ抗原受容体または免疫細胞集団を提供する。
【００２６】
本発明はまた、それを必要とするヒト対象における疾患または障害の治療のための医薬品の製造のための、本明細書に記載のキメラ抗原受容体または免疫細胞集団の使用を提供する。
【００２７】
いくつかの実施形態では、疾患または障害は、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植状態、癌および感染症からなる群から選択される。
【００２８】
いくつかの実施形態では、ヒト対象は免疫抑制を必要とし、ＣＡＲはヒト対象中のＴｒｅｇ細胞中で発現する。
【００２９】
いくつかの実施形態では、疾患または障害は、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、または臓器移植状態（例えば、移植片拒絶反応または移植片対宿主病）である。
【００３０】
本発明はまた、医薬品としての使用のための本明細書に記載のキメラ抗原受容体または免疫細胞集団を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】ＣＤ１９−ＣＡＲ、ＣＤ２０−ＣＡＲ、およびＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲの構築物の概略図を示す。ＣＡＲは、ヒトＣＤ８リーダー配列（ＣＤ８）、任意により血球凝集素タグ（ＨＡ）、ｓｃＦｖ配列（抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、または抗ＩＬ−２３Ｒ）、任意によりストレプトアビジンタグ（タグ）、ヒンジドメイン（リンカー）、膜貫通ドメイン（ＴＮＦＲ２またはＣＤ８）、共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（４−ＩＢＢまたはＴＮＦＲ２）およびＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）を含む。ＣＡＲ構築物は、Ｐ２Ａ−ＧＦＰコード配列とインフレームである。
【図２】Ｔｒｅｇの細胞表面での形質導入効率およびＣＡＲ発現を示すフローサイトメトリーのドットプロットを示す。形質導入効率をＧＦＰ発現によって評価し、ＣＡＲ発現を、ＣＤ１９−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢまたはＴＮＦＲ２）のＨＡ発現またはＣＤ２０−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢまたはＴＮＦＲ２）のプロテインＬ染色によって評価した。ＭＦＩ：平均蛍光強度。
【図３】ＣＤ２０−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢまたはＴＮＦＲ２）で形質導入された、または形質導入されていない（「ブランク」）ヒトＴｒｅｇにおけるＣＡＲ発現のウエスタンブロット分析を示す。ＣＤ３ゼータ特異的抗体による染色は、１６ｋＤで内因性ＣＤ３ゼータ、約６２ｋＤでＣＤ２０−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ）、８２ｋＤでＣＤ２０−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２）を明らかにした（パネルＡ、左上）。次に、メンブレンを洗浄し、ローディング対照としてβーアクチン抗体で再プローブした（パネルＡ、左下）。バンド強度はＩｍａｇｅ  Ｊを用いて定量し、２つの異なるドナーの結果をパネルＢに示す。
【図４】ＴＮＦＲ２由来ＣＡＲがＣＡＲ特異的活性化を維持することを示すヒストグラムを示す。９日目に、形質導入されたＦｏｘＰ３Ｔｒｅｇを単独で、または抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８コーティングビーズの存在下で、または新たに解凍した自家Ｂ細胞の存在下で播種した。２４時間後、ＣＤ４およびＣＤ６９細胞表面発現について、ＣＤ１９−ＣＡＲ（左上）、ＣＤ２０−ＣＡＲ（右上）、およびＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ（下）を染色した。エラーバーは、平均±ＳＥＭを表す。対照：ＣＡＲで形質導入されていないＴｒｅｇ細胞。
【図５】ＴＮＦＲ２由来ＣＡＲが効率的なＣＡＲ媒介抑制活性を呈することを示すグラフである。いかなる活性化もない場合（点線）またはＢ細胞由来ＣＡＲの活性化（実線）後に、ＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔｒｅｇ（パネルＡ）、ＣＤ２０−ＣＡＲ  Ｔｒｅｇ（パネルＢ）、またはＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ  Ｔｒｅｇ（パネルＣ）によって媒介される接触依存性抑制を、フローサイトメトリーを使用して従来のＴ細胞（Ｔｃｏｎｖ）の増殖を測定することにより評価した。丸線はＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ  ＣＡＲ構築物を表し、四角線はＴＮＦＲ２ＣＡＲ構築物を表す。エラーバーは、平均±ＳＥＭを表す。
【図６】本発明のＣＤ１９−ＣＡＲ構築物の概略図を示す。ＣＡＲは、ヒトＣＤ８リーダー配列（ＣＤ８）、ｓｃＦｖ配列（抗ＣＤ１９）、ストレプトアビジンタグ（タグ）、ヒンジドメイン（リンカー）、膜貫通ドメイン（ＣＤ８、ＴＮＦＲ２または融合ＣＤ８／ＴＮＦＲ２）、共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（４−ＩＢＢ、ＴＮＦＲ２またはＴＮＦＲ２断片）およびＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ｚ）を含む。ＣＡＲ構築物は、Ｐ２Ａ−ＧＦＰコード配列とインフレームである。
【図７】Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ細胞でＴＮＦＲ２−Ｃ末端欠失構築物が異なる表面発現レベルを呈し、かつＣＤ３ｚシグナル伝達において機能することを示す１組のグラフである。Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ細胞を、示された構築物で形質導入した。培養１週間後に、ＣＡＲ表面の発現をタンパク質染色により測定し（パネルＡ）、細胞を、１：１の比率でＣＤ１９を発現するＤａｕｄｉ細胞により活性化した。２４時間後に、ＮＦＡＴ依存性ルシフェラーゼ分泌を、Ｇｌｏｗｍａｘルミノメーターを使用して決定した（パネルＢ）。
【図８】形質導入効率および細胞表面（左上および左下）でのＣＡＲ発現を示す１組の点線プロットおよび、形質導入されたＣＡＲ−Ｔｒｅｇ細胞の生存率を示すグラフ（右下）のセットである。８日目での形質導入効率（％）を、ＧＦＰ発現レベルを使用して評価し、ＣＡＲ密度（ＭＦＩ）はプロテインＬ標識を用いて評価した。細胞生存率を、ヨウ化プロピジウム排除法を使用して評価した。エラーバーは、平均±ＳＤを表す。
【図９】抗ＣＤ２０ＣＡＲのリガンド非依存性持続性シグナル伝達および活性化能力を示すグラフである。９日目に、形質導入されたＦｏｘＰ３Ｔｒｅｇを単独（「なし」）で、または抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８コーティングビーズの存在下で、または新たに解凍した自家Ｂ細胞（「Ｂ細胞」）の存在下で播種した。２４時間後に、細胞をＣＤ４およびＣＤ６９細胞表面発現について染色した。エラーバーは、平均±ＳＤを表す。「なし」条件については、統計分析を、対照としてＧＦＰ条件を使用して行った（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１および＊＊＊ｐ＜０．００１、対応のあるＴ検定）。
【図１０】ＴＮＦＲ２由来ＣＤ２０ ＣＡＲは効率的なＣＡＲ媒介抑制活性を呈するが、４−１ＢＢおよびＴＮＦＲ１由来ＣＤ２０ ＣＡＲは呈さないことを示す一連のグラフである。いかなる活性化もない場合（「なし」）またはＢ細胞誘導ＣＡＲ活性化後（「Ｂ細胞」）に、ＣＡＲ  Ｔｒｅｇ細胞により媒介される接触依存性抑制を、従来のＴ細胞（Ｔｃｏｎｖ）の増殖を測定することにより評価した。
【図１１】ＣＡＲ媒介抑制活性の効力を示す一連のグラフである。ＴＮＦＲ２由来の（上）またはＴＮＦＲ１由来の（下）ＣＡＲを使用するＢ細胞誘導ＣＡＲ活性化後の接触依存性抑制（％）を、アッセイにおけるＣＡＲ−Ｔｒｅｇ細胞の数の関数として表した。この表示は、５０％の抑制をトリガーするために必要なＣＡＲ−Ｔｒｅｇの数の計算を可能にする。
【図１２】実施例５で使用されるＨＬＡ−Ａ２−ＣＡＲ構築物の概略図を示す。ＣＡＲは、ヒトＣＤ８リーダー配列（ＣＤ８）、抗ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖ配列、ヒンジドメイン（リンカー）、膜貫通ドメイン（ＴＮＦＲ２またはＣＤ８  ＴＭ）、共シグナル伝達ドメイン（ＣＤ２８またはＴＮＦＲ２またはＴＮＦＲ２＋４−１ＢＢ）およびＣＤ３ゼータ（ＣＤ３Ｚ）を含む。ＣＡＲ構築物は、Ｐ２Ａ−ＧＦＰコード配列とインフレームである。
【図１３】形質導入効率およびＴｒｅｇの細胞表面でのＣＡＲ発現を示すフローサイトメトリーのドットプロットを示す。形質導入効率をＧＦＰ発現によって評価し、細胞表面でのＣＡＲ発現をＤｅｘｔｒａｍｅｒ（登録商標）発現によって評価した。
【図１４】ＨＬＡ＊Ａ２ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ上のＴｒｅｇ表現型マーカーの存在を示すフローサイトメトリードットプロットを示す。
【図１５】ＴＮＦＲ２、ＣＤ２８、またはＴＮＦＲ２＋４−１ＢＢドメインを含むＨＬＡ＊Ａ２−ＣＡＲ−Ｔｒｅｇを注射したＮＳＧマウスの体重変化（左上）、ＧｖＨＤスコア（右上）、および無病生存の割合（下）を示す一連のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
定義
【００３３】
本発明において、以下の用語は、以下の意味を有する。
【００３４】
「ａ」および「ａｎ」という用語は、冠詞の文法的目的語の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）を指す。例として、「要素」は、１つの要素または複数の要素を意味する。
【００３５】
「約」という用語は、量、時間的持続時間などの測定可能な値を指す場合、そのような変動が、開示された方法を実施するために適切であるために、指定された値から±２０％、場合によっては±１０％、または場合によっては±５％、または場合によっては±１％、または場合によっては±０．１％の変動を包含することを意味する。
【００３６】
本明細書で使用される「活性化」という用語は、検出可能な細胞応答を誘導するために十分に刺激されているＴ細胞（例えば、調節性Ｔ細胞）の状態を指す。活性化はまた、サイトカイン産生または抑制活性などの検出可能なエフェクター機能（複数可）と関連し得る。「活性化された」調節性Ｔ細胞という用語は、とりわけ、免疫応答を抑制できる調節性Ｔ細胞を指す。
【００３７】
「アフィボディ」という用語は当技術分野で周知であり、黄色ブドウ球菌プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインの１つに由来する５８のアミノ酸残基のタンパク質ドメインに基づく親和性タンパク質を指す。
【００３８】
「同種」という用語は、材料が導入される個体と同じ種の異なる個体に由来する任意の材料を指す。１つ以上の遺伝子座での遺伝子が同一でない場合、２以上の個体は互いに同種であると言われる。いくつかの態様では、同じ種の個体からの同種材料は、抗原的に相互作用するために遺伝的に十分に異なっている場合がある。
【００３９】
本明細書で使用される「抗体」または「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質またはポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナル、多鎖または一本鎖、または無傷の免疫グロブリンであり得、天然源または組換え源に由来し得る。「抗体」という用語はまた、それらが所望の生物学的活性を示す限り、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）および抗体断片を含む。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体などの、免疫グロブリン分子の多量体であり得る。
【００４０】
基本的な四本鎖抗体ユニットは、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重鎖（Ｈ）で構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。任意の脊椎動物種のＬ鎖は、定常ドメイン（ＣＬ）のアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの明確に異なるタイプの一方に割り当てられ得る。重鎖（ＣＨ）の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを様々なクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの５つのクラスがあり、それぞれアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびミュー（μ）と呼ばれる重鎖を有する。γクラスおよびαクラスは、ＣＨ配列および機能における比較的小さい差に基づいてさらにサブクラスに細分化され、例えば、ヒトはサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２を発現する。各Ｌ鎖は１つの共有ジスルフィド結合によってＨ鎖に連結されるのに対して、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖のアイソタイプに応じて１つ以上のジスルフィド結合によって互いに連結される。各Ｈ鎖およびＬ鎖は、規則的に間隔を置いた鎖内ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に、可変ドメイン（ＶＨ）、およびそれに続くα鎖とγ鎖のそれぞれに対し３つの定常ドメイン（ＣＨ）、ならびにμおよびεアイソタイプに対し４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、もう一方の端で定常ドメイン（ＣＬ）が続く。ＶＬはＶＨと整列し、ＣＬは重鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列する。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の界面を形成すると考えられている。一対のＶＨおよびＶＬが、単一の抗原結合部位を形成する。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドと共に５つの基本的なヘテロ四量体ユニットからなり、そのため、１０の抗原結合部位を含み、また、分泌されたＩｇＡ抗体は重合して、Ｊ鎖とともに２つ〜５つの基本的な四本鎖ユニットを含む多価集合体を形成できる。ＩｇＧの場合、四鎖ユニットは、一般に約１５０，０００ダルトンである。異なるクラスの抗体の構造およびと特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第８版、Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ  Ｉ．Ｔｅｒｒ  ａｎｄ  Ｔｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（編）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎ．，１９９４年、７１ページ、第６章を参照されたい。
【００４１】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質である抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団に含まれる個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、単一の抗原部位に対して向けられている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体が混入せずに合成され得るという点で有利である。修飾子「モノクローナル」は、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５（１９７５年）によって最初に記載されたハイブリドーマ方法論によって調製され得るか、または細菌、真核生物の動物または植物細胞において組換えＤＮＡ法を使用して作製され得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１年）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１年）に記載された技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離され得る。本明細書に記載のモノクローナル抗体は、「キメラ」抗体を含み、これは、１つの抗体からの１つ以上の領域（例えば、非ヒト可変ドメイン）および１つ以上の他の抗体からの１つ以上の領域（例えば、ヒト定常領域）を含む。
【００４２】
「抗体断片」という用語は、抗原のエピトープと特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、および／または空間分布による）能力を保持する、インタクトな抗体の少なくとも一部分、例えば、インタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域を指す。抗体断片の例としては、これらに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨおよびＣＨＩドメインからなるＦｄ断片、直鎖抗体、ｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨのいずれか）などの単一ドメイン抗体、ラクダＶＨＨドメイン、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片などの抗体断片から形成された多重特異性抗体、および抗体の単離ＣＤＲまたは他のエピトープ結合断片が挙げられる。抗原結合断片は、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トライアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲおよびｂｉｓ−ｓｃＦｖに組み込まれてもよい（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６（２００５年）を参照のこと）。抗原結合断片は、フィブロネクチンＩＩＩ型などのポリペプチドをベースにした足場に移植されてもよい（例えば、フィブロネクチンポリペプチドミニボディについて記載している米国特許第６，７０３，１９９号を参照されたい）。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片、および容易に結晶化する能力を反映した名称である、残りの「Ｆｃ」断片を生成する。Ｆａｂ断片は、Ｌ鎖全体およびＨ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）、ならびに１つの重鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一の大きいＦ（ａｂ’）２断片を生成し、これは、２価の抗原結合活性を有し、かつ依然として抗原を架橋できる２つのジスルフィド連結Ｆａｂ断片にほぼ対応する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に追加のいくつかの残基を有するという点でＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書では、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’の呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は元々、それらの間にヒンジのシステインを有する一対のＦａｂ’断片として生成された。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。
【００４３】
「インタクトな抗体」は、抗原結合部位ならびにＣＬ、および少なくとも重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。「天然配列」ポリヌクレオチドは、自然由来のポリヌクレオチドと同じヌクレオチド配列を有するものである。「天然配列」ポリペプチドは、自然（例えば、任意の種）に由来するポリペプチド（例えば、抗体）と同じアミノ酸配列を有するものである。そのような天然配列のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、自然から単離でき、または組換え手段もしくは合成手段によって産生できる。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「抗体の機能的断片または類似体」は、完全長抗体と共通の定性的生物学的活性を有する化合物である。例えば、抗ＩｇＥ抗体の機能的断片または類似体は、そのような分子が高親和性受容体ＦｃεＲＩに結合する能力を有することを防ぐかまたは実質的に減少させるようにＩｇＥ免疫グロブリンに結合できるものである。
【００４５】
「抗体重鎖」という用語は、抗体分子中に天然に存在するコンフォメーションで存在する２種類のポリペプチド鎖の大きい方を指し、それは通常、抗体が属するクラスを決定する。
【００４６】
「抗体軽鎖」という用語は、抗体分子中に天然に存在するコンフォメーションで存在する２種類のポリペプチド鎖の小さい方を指す。カッパ（κ）軽鎖およびラムダ（λ）軽鎖は、２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
【００４７】
「アンチカリン」は当技術分野で周知であり、結合特異性がリポカリンに由来する抗体模倣技術を指す。アンチカリンは、デュオカリンと呼ばれるデュアルターゲティングタンパク質としてフォーマットされ得る。
【００４８】
「抗原」または「Ａｇ」という用語は、免疫応答を誘発する分子を指す。この免疫応答は、抗体産生、特定の免疫適格細胞の活性化、またはその両方を伴い得る。当業者は、事実上すべてのタンパク質またはペプチドを含む任意の高分子が抗原として作用し得ることを理解するであろう。さらに、抗原は、組換えまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者であれば、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡがしたがって、その用語が本明細書で使用される「抗原」をコードすることを理解するであろう。さらに、当業者であれば、抗原が必ずしも遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はないことを理解するであろう。本発明が２つ以上の遺伝子の部分ヌクレオチド配列の使用を含むこと、およびこれらのヌクレオチド配列が様々な組み合わせで配置されて、所望の免疫応答を誘発するポリペプチドをコードすることは容易に明らかである。さらに、当業者であれば、抗原が必ずしも「遺伝子」によってコードされる必要はないことを理解するであろう。抗原が合成され得るか、または生物学的サンプルに由来し得るか、またはポリペプチド以外の高分子であり得ることは容易に明らかである。そのような生物学的サンプルは、これらに限定されないが、例えば、組織サンプル、細胞、または他の生物学的成分を含む流体を含み得る。
【００４９】
「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」という用語は、その表面上で主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）と複合体を形成した外来抗原を提示するアクセサリー細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞など）などの免疫系細胞を指す。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を使用してこれらの複合体を認識し得る。ＡＰＣは抗原のプロセシングを行い、それらをＴ細胞に提示する。
【００５０】
「自家」という用語は、それが後に再導入される同じ個体に由来するあらゆる材料を指す。
【００５１】
「アビマー」は当技術分野において周知であり、抗体模倣技術を指す。
【００５２】
「キメラ受容体」または「キメラ抗原受容体」または「ＣＲ」または「ＣＡＲ」という用語は、１つのポリペプチドまたはポリペプチドのセット、典型的には最も単純な実施形態では２つのポリペプチを指し、免疫細胞中にある場合、細胞に標的リガンドに対する特異性を提供し、かつ細胞内シグナルの生成をもたらす。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのセットは互いに連続している。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ポリペプチドのセットを含むキメラ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのセットは、二量体化分子の存在時に、ポリペプチドを互いに結合でき、例えば、リガンド結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合できる、二量体化スイッチを含む。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、キメラ受容体融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ末端）に任意のリーダー配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、細胞外リガンド結合ドメインのＮ末端にリーダー配列を含み、リーダー配列は、細胞プロセシングおよびキメラ受容体の細胞膜への局在化の間に、任意によりリガンド結合ドメインから切断される。
【００５３】
「保存的配列修飾」という用語は、アミノ酸配列を含むタンパク質の生物学的機能に有意な影響を与えずまたは変更しないアミノ酸修飾を指す。そのような保存的修飾は、アミノ酸の置換、付加、および欠失を含む。修飾は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発などの、当技術分野で知られている標準技術によってタンパク質に導入することができる。「保存的アミノ酸置換」は、ペプチド化学の当業者によって、ポリペプチドの二次構造およびハイドロパシー性が実質的に変化しないことが期待されるように、アミノ酸残基が類似の特性を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。アミノ酸置換はしたがって一般に、アミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えば、それらの疎水性、親水性、電荷、サイズなどに基づく。前述の特徴の様々を考慮に入れる例示的な置換は、当業者に周知であり、アルギニンとリジン、グルタメートとアスパラギン酸、セリンとスレオニン、グルタミンとアスパラギン；ならびにバリン、ロイシン、およびイソロイシンを含む。アミノ酸置換は、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、および／または両親媒性の性質の類似性に基づいてさらに行われてよい。例えば、負に帯電したアミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられ、正に帯電したアミノ酸としては、リジンおよびアルギニンが挙げられ、同様の親水性値を有する非荷電極性頭部基を有するアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシン、およびバリン；グリシンおよびアラニン；アスパラギンおよびグルタミン；セリン、スレオニン、フェニルアラニン、およびチロシンが挙げられる。保存的変化を表し得る他のアミノ酸基としては、（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌｕ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ、ｔｈｒ；（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ；（４）ｌｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ；および（５）ｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓが挙げられる。同様の側鎖を有するアミノ酸残基の他のファミリーは、当技術分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。したがって、本発明のキメラ受容体内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置換されてよく、改変キメラ受容体は、本明細書に記載の機能アッセイを使用して試験され得る。
【００５４】
「構成的プロモーター」という用語は、遺伝子産物をコードまたは特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合に、細胞のほとんどまたはすべての生理学的条件下で遺伝子産物を細胞内で産生させるヌクレオチド配列を指す。
【００５５】
「共刺激分子」という用語は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それにより、これに限定されないが、増殖などのＴ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に寄与する抗原受容体またはそれらのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であり得る。共刺激分子は、次のタンパク質ファミリーで表すことができる：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、および活性化ＮＫ細胞受容体。
【００５６】
「細胞傷害性細胞」は、細胞傷害性応答を媒介できる任意の細胞を含む。
【００５７】
本明細書で使用される「由来する」という用語は、第１の分子と第２の分子との間の関係を示す。それは一般に、第１の分子と第２の分子との間の構造的類似性を指し、第２の分子に由来する第１の分子に対するプロセスまたは供給源の制限を暗示せずまたはそれらの制限を含まない。例えば、ＣＤ３ゼータ分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインの場合、細胞内シグナル伝達ドメインは、必要な機能、すなわち適切な条件下でシグナルを生成する能力を有するように、十分なＣＤ３ゼータ構造を保持する。これは、細胞内シグナル伝達ドメインを生成する特定のプロセスへの制限を暗示せずまたは制限を含まない。例えば、細胞内シグナル伝達ドメインを提供するために、細胞内シグナル伝達ドメインに到達するように、ＣＤ３ゼータ配列から開始し不要な配列を欠失させるか、変異を課す必要があることを意味しない。
【００５８】
「ダイアボディ」という用語は、Ｖドメインの鎖間ペアリングが達成されるがＶドメインの鎖内ペアリングは達成されないように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５〜１０残基）を有するｓＦｖ断片を構築することによって調製される小さい抗体断片を指し、結果として、二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片を生じる。二重特異性ダイアボディは、２つの「クロスオーバー」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体であり、２つの抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する。ダイアボディは、例えば、欧州特許第０４０４０９７号、国際公開第９３／１１１６１号、およびＨｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３年）に、より完全に記載される。
【００５９】
「ドメイン抗体」は当技術分野で周知であり、抗体の重鎖または軽鎖のいずれかの可変領域に対応する、抗体の最小の機能的結合単位を指す。
【００６０】
「コードする」という用語は、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性を指し、ヌクレオチド（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）の定義された配列またはアミノ酸の定義された配列およびそれらから生じる生物学的特性のいずれかを有する生物学的プロセスにおける他のポリマーおよび高分子の合成のための鋳型として機能する。したがって、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が細胞または他の生体系においてタンパク質を生成する場合、タンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、かつ通常は配列表に提供されているコード鎖、および遺伝子またはｃＤＮＡの転写の鋳型として使用される非コード鎖の両方を、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードすると称してよい。特に明記しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重型であり、かつ同じアミノ酸配列をコードする、すべてのヌクレオチド配列を含む。「タンパク質またはＲＮＡをコードするヌクレオチド配列」という語句はまた、タンパク質をコードするヌクレオチド配列がいくつかの型でイントロン（複数可）を含み得る程度に、イントロンを含み得る。
【００６１】
「内因性」という用語は、生物、細胞、組織、または系から自然に、またはその内部で自然に生成された任意の材料を指す。
【００６２】
「操作された」または「修飾された」という用語は、トランスフェクト、形質転換、または形質導入された細胞を指す。
【００６３】
「外因性」という用語は、生物、細胞、組織、または系に導入されたまたはそれらの外部で生成された任意の材料を指す。
【００６４】
「発現」という用語は、プロモーターによって駆動される特定のヌクレオチド配列の転写および／または翻訳を指す。
【００６５】
「発現ベクター」という用語は、発現されるヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現のために十分なシス作用エレメントを含む。発現のための他のエレメントは、宿主細胞によって、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現システムにおいて供給され得る。発現ベクターは、コスミド、プラスミド（例えば、裸であるかまたはリポソームに含まれる）、トランスポゾン（例えば、ｓｌｅｅｐｉｎｇ  ｂｅａｕｔｙ）、および組換えポリヌクレオチドを組み込むウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）など、当技術分野で公知であるすべてのものを含む。
【００６６】
本明細書で使用されるポリヌクレオチド「断片」という用語は、１つ以上の欠失において本明細書に具体的に開示されるポリヌクレオチドと典型的に異なるポリヌクレオチドである。そのような断片は、天然に存在し得るか、または、例えば、本発明のポリヌクレオチド配列の１つ以上を修飾することによって、および本明細書に記載のコードされた断片の１つ以上の生物学的活性を評価することによって、および／または当技術分野において周知である複数の技術のいずれかを使用することによって合成により生成され得る。したがって、本明細書で使用されるポリペプチド「断片」という用語は、１つ以上の欠失において本明細書に具体的に開示されるポリペプチドと典型的に異なるポリペプチドである。そのような断片は、天然に存在し得るか、または、例えば、本発明のポリペプチド配列の１つ以上を修飾することによって、および本明細書に記載のポリペプチドの１つ以上の生物学的活性を評価することによって、および／または当技術分野において周知である複数の技術のいずれかを使用することによって合成により生成され得る。修飾は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの構造において行われてよく、依然として、生物学的有用性または活性を明らかに喪失することなく、望ましい特性を有する断片ポリペプチドをコードするか、またはそのような断片ポリペプチドである機能性分子をもたらす。いくつかの実施形態では、ポリペプチド断片は、５０、４０、３０、２０、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１アミノ酸未満の欠失により天然配列と異なる。断片はまた、例えば、ポリペプチドの免疫原性、二次構造およびハイドロパシー性に最小の影響を有するアミノ酸の欠失によって（または代替的に）修飾され得る。
【００６７】
抗体の「Ｆｃ」断片は、ジスルフィドによって一緒に保持される両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域中の配列によって決定される。この領域は、特定の種類の細胞で見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される部分でもある。
【００６８】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、緊密に非共有的に会合した１つの重鎖および１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与しかつ抗体に抗原結合特異性を付与する、６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が発生する。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的である３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりも親和性は低いが、抗原を認識し結合する能力を有し得る。
【００６９】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義される超可変領域残基以外のそれらの可変ドメイン残基である。
【００７０】
本明細書で使用される「移植片対宿主病」または「ＧＶＨＤ」という用語は、遺伝的に異なるヒトから移植された組織を受け取った後の医学的合併症を指す。提供される組織（移植片）中の免疫細胞は、レシピエント（宿主）を異物として認識する。移植された免疫細胞はその後、宿主の体細胞を攻撃する。ＧＶＨＤは一般的に幹細胞移植に関連するが、この用語は、他の形態の組織移植片から生じるＧＶＨＤを含む。ＧＶＨＤは、輸血後にも生じ得る。
【００７１】
「相同性」または「同一性」という用語は、２つのポリマー分子間、例えば、２つのＤＮＡ分子もしくは２つのＲＮＡ分子などの２つの核酸分子間、または２つのポリペプチド分子間のサブユニット配列同一性を指す。２つの分子の両方のサブユニット位置が同じ単量体サブユニットによって占有される場合、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンによって占有される場合、それらはその位置で相同または同一である。２つの配列間の相同性は、一致する位置または相同な位置の数の直接的な関数である。例えば、２つの配列中の位置の半分（例えば、ポリマー長１０サブユニットにおいて５つの位置）が相同である場合、２つの配列は５０％相同であり、位置の９０％（例えば、１０のうち９）が一致するまたは相同である場合、２つの配列は９０％相同である。したがって、「相同」または「同一」という用語は、２つ以上のポリペプチドまたは２つ以上の核酸分子の配列間の関係で使用される場合、２つ以上のアミノ酸またはヌクレオチド残基のストリング間の一致の数によって決定されるように、ポリペプチドまたは核酸分子間の配列関連性の程度を指す。「同一性」は、特定の数学的モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によって対処されるギャップアラインメント（存在する場合）を有する２つ以上の配列の小さい方の間の同一の一致の割合（パーセント）を測定する。関連するポリペプチドの同一性は、既知の方法によって容易に計算できる。そのような方法としては、これらに限定されないが、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．、編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８年；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．、編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３年；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．、編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４年；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７年；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．、編、  Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１年；およびＣａｒｉｌｌｏら、ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．４８：１０７３（１９８８年）に記載のものなどが挙げられる。同一性を決定するための好ましい方法は、試験対象の配列間で最大の一致が得られるように設計される。同一性を決定する方法は、公開されているコンピュータプログラム中に記載されている。２つの配列間の同一性を決定するための例示的なコンピュータプログラム方法は、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２：３８７（１９８４年）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．），ＢＬＡＳＴＰ，ＢＬＡＳＴＮ，およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０年））などのＧＣＧプログラムパッケージを含む。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他の情報源（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌら、ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、前出）から公開されている。周知のＳｍｉｔｈＷａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用して、同一性を決定することもできる。
【００７２】
「ヒト化」という用語は、非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態に関連する場合、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合サブ配列など）を指す。ほとんどの場合、ヒト化抗体およびその抗体断片は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基で置き換えられる、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体または抗体断片）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体／抗体断片は、レシピエント抗体にも、インポートされたＣＤＲ配列またはフレームワーク配列のいずれにも見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体または抗体断片の性能をさらに改良し、最適化できる。一般に、ヒト化抗体またはその抗体断片は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンの領域に対応し、かつＦＲ領域のすべてのまたはかなりの部分は、ヒト免疫グロブリン配列の部分である。ヒト化抗体または抗体断片はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの領域を含み得る。さらに詳細には、例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６年）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９（１９８８年）；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２年）を参照されたい。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「免疫細胞」という用語は一般に、骨髄で産生される造血幹細胞（ＨＳＣ）に由来する白血球（ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）（白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ））を含む。免疫細胞の例としては、これらに限定されないが、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）および骨髄系細胞（好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、および樹状細胞）が挙げられる。
【００７４】
本明細書で使用される場合、「免疫エフェクター細胞」という用語は、特定の免疫応答を開始できる形態にある、免疫系の細胞を指す。
【００７５】
本明細書で使用される場合、「免疫調節性細胞」という用語は、免疫系の活性化を抑制し、それによって免疫系の恒常性および自己抗原に対する耐性を維持する「調節的な」方法で作用する免疫細胞を指す。「調節性免疫細胞」はまた、非免疫細胞に対する影響を有し得、結果として、組織の修復または再生の促進などの臨床状態の改善をもたらす。調節性免疫細胞としては、調節性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８＋調節性Ｔ細胞、調節性γδＴ細胞、および／または調節性ＤＮ  Ｔ細胞）、調節性Ｂ細胞、調節性ＮＫ細胞、調節性マクロファージ、および調節性樹状細胞を挙げることができる。
【００７６】
本明細書で使用される場合、「免疫応答」という用語は、Ｔ細胞媒介性免疫応答および／またはＢ細胞媒介性免疫応答を含む。例示的な免疫応答としては、Ｔ細胞応答、例えば、増殖、サイトカイン産生、および細胞傷害性が挙げられる。さらに、免疫応答という用語は、Ｔ細胞活性化によって間接的に影響を受ける免疫応答、例えば、抗体産生（体液性応答）およびサイトカイン応答性細胞、例えば、マクロファージの活性化を含む。免疫応答に関与する免疫細胞としては、Ｂ細胞およびＴ細胞（ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、Ｔｈｌ、Ｔｈ２細胞）などのリンパ球、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂリンパ球、ランゲルハンス細胞などの専門的な抗原提示細胞、およびケラチノサイト、内皮細胞、アストロサイト、線維芽細胞、オリゴデンドロサイトなどの非専門的な抗原提示細胞）；ナチュラルキラー細胞；およびマクロファージ、好酸球、肥満細胞、好塩基球、および顆粒球などの骨髄細胞が挙げられる。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「免疫順応」という用語は、臓器または組織移植機能に特異的な抗体がレシピエントに存在するにもかかわらず、臓器または組織移植が正常に機能する移植レシピエントの状態を指す。
【００７８】
本明細書で使用される場合、「免疫学的寛容（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）」または「免疫寛容（ｉｍｍｕｎｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）」は、ａ）特定の免疫応答の低下されたレベル（少なくとも部分的には抗原特異的エフェクターＴリンパ球、Ｂリンパ球、抗体、もしくはそれらの同等物によって媒介されると考えられる）、ｂ）特定の免疫反応の開始もしくは進行における遅延、またはｃ）対象の異なる集団（例えば、本明細書に記載の治療などの治療を受けていない対象）と比較して、対象の１つの集団（例えば、本明細書に記載の治療などの治療を受けた対象）における、特定の免疫学的応答の開始または進行の低下されたリスク、を指す。「特定の」免疫学的寛容または免疫寛容は、免疫学的寛容または免疫寛容が他の抗原と比較して特定の抗原に対して優先的に誘起される場合に生じる。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「ｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写されるＲＮＡ」は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成されたＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡを指す。一般に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写されるＲＮＡは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写ベクターから生成される。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写ベクターは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写されるＲＮＡを生成するために使用される鋳型を含む。
【００８０】
「誘導性」プロモーターという用語は、遺伝子産物をコードするかまたは特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結される場合、プロモーターに対応する誘導因子が実質的に細胞内に存在する場合にのみ細胞内で遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列を指す。
【００８１】
本明細書で使用される場合、「５’キャップ」（ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ７−メチルグアノシンキャップまたはＲＮＡ  ｍ７Ｇキャップとも呼ばれる）は、転写開始直後に真核生物メッセンジャーＲＮＡの「前部」または５’末端に付加された修飾グアニンヌクレオチドである。５’キャップは、最初に転写されたヌクレオチドに連結される末端基からなる。その存在は、リボソームによる認識およびＲＮａｓｅからの保護にとって重要である。キャップの付加は転写と連動しており、それぞれが互いに影響を与えるように、同時転写的に生じる。転写開始直後に、合成されるｍＲＮＡの５’末端は、ＲＮＡポリメラーゼと会合するキャップ合成複合体に結合される。この酵素複合体は、ｍＲＮＡキャッピングに必要な化学反応を触媒する。合成は多段階生化学反応として進行する。キャッピング部分は、その安定性または翻訳の効率などの、ｍＲＮＡの機能を調節するように修飾できる。
【００８２】
本発明の文脈では、一般的に存在する核酸塩基について以下の略語を使用する。「Ａ」はアデニンを指し、「Ｃ」はシトシンを指し、「Ｇ」はグアニンを指し、「Ｔ」はチミンを指し、「Ｕ」はウラシルを指す。
【００８３】
「説明資料」という用語は、本発明の組成物および方法の有用性または使用を伝達するために使用できる刊行物、記録、図、または任意の他の表現媒体を含む。本発明のキットの説明資料は、例えば、本発明の核酸、ベクター、細胞集団、もしくは組成物を含む容器に貼付されるか、または本発明の核酸、ベクター、細胞集団、もしくは組成物を含む容器と一緒に出荷されてよい。あるいは、説明資料は、レシピエントが協働で使用することを意図して、容器とは別に出荷されてもよい。
【００８４】
本明細書で使用される「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、キメラ受容体含有細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。キメラ受容体Ｔ細胞における免疫エフェクター機能の例は、細胞溶解活性、抑制活性、調節活性、およびヘルパー活性、例えばサイトカインの分泌を含み得る。
【００８５】
「単離された」という用語は、自然状態から改変されたまたは除去された状態を意味する。例えば、生きている動物において自然に存在する核酸またはペプチドは、「単離され」ないが、その天然状態の共存物質から部分的にまたは完全に分離された同じ核酸またはペプチドは「単離される」。単離された核酸またはペプチドは、実質的に精製された形態で存在し得るか、または、例えば、宿主細胞などの非天然環境に存在し得る。典型的には、単離された核酸またはペプチドの調製物は、少なくとも約８０％の純度、少なくとも約８５％の純度、少なくとも約９０％の純度、少なくとも約９５％の純度、９５％を超える純度、約９６％を超える純度、約９７％を超える純度、約９８％を超える純度、または約９９％を超える純度の核酸またはペプチドを含む。「単離されたポリペプチド」は、その自然環境の成分から同定され、分離され、かつ／または回収されたものである。
【００８６】
「単離された核酸」または「単離された核酸配列」は、他のゲノムＤＮＡ配列、ならびに天然配列に自然に付随するリボソームおよびポリメラーゼなどのタンパク質または複合体から実質的に分離された核酸である。この用語は、その天然に存在する環境から除去された核酸配列を包含し、組換えまたはクローン化されたＤＮＡ単離物、および化学的に合成された類似体または異種系によって生物学的に合成された類似体を含む。実質的に純粋な核酸としては、単離形態の核酸が挙げられる。当然のことながら、これは最初に単離された核酸を指し、後にヒトの手によって単離された核酸に付加された遺伝子または配列を除外するものではない。いくつかの実施形態では、単離された核酸または単離された核酸配列は自然界には存在しない。
【００８７】
「単離されたポリペプチド」は、その自然環境の成分から同定され、分離され、かつ／または回収されたものである。ある実施形態では、単離されたポリペプチドは、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって決定されるとおり、９５重量％を超えるポリペプチド、特定の実施形態では、９９重量％を超えるまで、（２）スピニングカップシークエネーターを使用してＮ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クマシーブルーまたはある実施形態では銀染色を使用する還元条件または非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性まで、精製される。単離されたポリペプチドは、ポリペプチドの自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕのポリペプチドを含む。ある実施形態では、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製ステップによって調製されるであろう。いくつかの実施形態では、単離されたポリペプチドは、自然界には存在しない。
【００８８】
「レンチウイルス」という用語は、レトロウイルス科の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞に感染可能であるという点で、レトロウイルスの中で固有のものである。それらは、宿主細胞のＤＮＡ中に大量の遺伝子情報を送達できるため、最も効率的な遺伝子送達ベクターの１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ、およびＦＩＶはすべてレンチウイルスの例である。
【００８９】
「レンチウイルスベクター」という用語は、Ｍｉｌｏｎｅら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９年）に記載のとおり、例えば、自己不活化レンチウイルスベクターを含む、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部に由来するベクターを指す。診療所で使用できるレンチウイルスベクターの他の例としては、ＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子送達技術（Ｏｘｆｏｒｄ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａ）およびＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステム（Ｌｅｎｔｉｇｅｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。非臨床型のレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者には知られているであろう。
【００９０】
「リガンド」という用語は、リガンド／受容体対のメンバーを指し、対の他のメンバー（受容体）に結合する。
【００９１】
「核酸」または「ポリヌクレオチド」という用語は、一本鎖または二本鎖のいずれかの形態の、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）などのホスホジエステル結合によって共有結合されたヌクレオチドのポリマーを指す。特に限定されない限り、この用語は、基準核酸と同様の結合特性を有しかつ天然に存在するヌクレオチドと同様の様式で代謝される天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸を包含する。特に明記しない限り、特定の核酸配列はまた、その保存的に修飾されたバリアント（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、および相補的配列、ならびに明示的に示された配列も暗黙的に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（またはすべての）コドンの３位が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換される配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１年）；Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８（１９８５年）；およびＲｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８（１９９４年））。
【００９２】
「ナノボディ」は当技術分野で周知であり、天然に存在する重鎖抗体の固有の構造的および機能的特性を含む抗体由来の治療用タンパク質を指す。これらの重鎖抗体は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。
【００９３】
「天然配列」ポリヌクレオチドは、自然由来のポリヌクレオチドと同じヌクレオチド配列を有するものである。「天然配列」ポリペプチドは、自然（例えば、任意の種）に由来するポリペプチド（例えば、抗体）と同じアミノ酸配列を有するものである。そのような天然配列のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、自然から単離でき、または組換え手段もしくは合成手段によって産生できる。
【００９４】
「作動可能に連結された」または「転写調節」という用語は、調節配列と異種核酸配列との間の機能的連結を指し、異種核酸配列の発現をもたらす。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的関係に置かれる場合、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結される。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を与える場合、プロモーターはコード配列に作動可能に連結される。作動可能に連結されたＤＮＡ配列は、互いに連続し得、例えば、２つのタンパク質コード領域を連結する必要がある場合、同じリーディングフレーム中にある。
【００９５】
「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」という用語は同義的に使用され、ペプチド結合によって共有結合されたアミノ酸残基から構成される化合物を指す。タンパク質またはペプチドは少なくとも２つのアミノ酸を含む必要があり、タンパク質の配列またはペプチドの配列を含むことができるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いに結合された２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質を含む。本明細書で使用される場合、この用語は、例えば、当技術分野で一般にペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも呼ばれる短鎖、および当技術分野で一般にタンパク質と呼ばれるより長い鎖の両方を指し、これらには、多くの種類がある。「ポリペプチド」としては、とりわけ、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドのバリアント、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、および融合タンパク質が挙げられる。ポリペプチドとしては、天然ペプチド、組換えペプチド、またはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００９６】
「薬学的に許容される賦形剤」または「薬学的に許容される担体」という用語は、動物、例えばヒトに投与されたときに有害反応、アレルギー反応または他の有害な反応を生じない賦形剤を指す。賦形剤としては、任意のあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。ヒト投与の場合、調製物は、例えば、ＦＤＡ  ＯｆｆｉｃｅまたはＥＭＡなどの規制当局が要求する無菌性、発熱性、一般的な安全性および純度の基準を満たす必要がある。
【００９７】
「ポリ（Ａ）」という用語は、ｍＲＮＡに付着した一連のアデノシン一リン酸を指す。一過的発現のための構築物のいくつかの実施形態では、ポリＡは、５０〜５０００のアデノシン一リン酸、例えば、６４以上、１００以上、または３００または４００以上のアデノシン一リン酸である。ポリ（Ａ）配列を化学的または酵素的に修飾して、局在化、安定性、翻訳効率などのｍＲＮＡ機能を調節できる。
【００９８】
「ポリアデニル化」という用語は、メッセンジャーＲＮＡ分子へのポリアデニリル部分またはその修飾バリアントの共有結合を指す。真核生物では、ほとんどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子は、３’末端でポリアデニル化されている。３’ポリ（Ａ）テールは、酵素であるポリアデニル化ポリメラーゼの作用によってプレｍＲＮＡに付加されるアデニンヌクレオチドの長い配列（多くの場合数百）である。より高等な真核生物では、ポリ（Ａ）テールが、特定の配列であるポリアデニル化シグナルを含む転写産物に付加される。ポリ（Ａ）テールおよびポリ（Ａ）テールに結合したタンパク質は、エキソヌクレアーゼによる分解からｍＲＮＡを保護するのを補助する。ポリアデニル化は、転写終結、核からのｍＲＮＡのエクスポート、および翻訳にも重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡがＲＮＡに転写された直後に核で発生するが、後に細胞質で発生することもある。転写が終了した後、ｍＲＮＡ鎖はＲＮＡポリメラーゼと会合するエンドヌクレアーゼ複合体の作用によって切断される。切断部位は通常、切断部位の近くに塩基配列ＡＡＵＡＡＡが存在することを特徴とする。ｍＲＮＡが切断された後、アデノシン残基が切断部位の遊離３’末端に付加される。
【００９９】
「プロモーター」という用語は、ポリヌクレオチド配列の特定の転写を開始するために必要とされる、細胞の合成機構によって認識される、または導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。
【０１００】
「プロモーター／調節配列」という用語は、プロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要とされる核酸配列を指す。場合によっては、この配列はコアプロモーター配列であり得、他の例では、この配列はまた、遺伝子産物の発現に必要とされるエンハンサー配列および他の調節エレメントを含み得る。プロモーター／調節配列は、例えば、組織特異的な方法で遺伝子産物を発現するものであり得る。
【０１０１】
「組換えタンパク質またはペプチド」という用語は、
例えば、バクテリオファージまたは酵母発現システムによって発現されるタンパク質またはペプチド（例えば、抗体）などの組換えＤＮＡ技術を使用して生成されるタンパク質またはペプチド（例えば、抗体）を指す。この用語はまた、タンパク質またはペプチド（例えば、抗体）をコードするＤＮＡ分子の合成によって生成されたタンパク質もしくはペプチド（例えば、抗体）を意味すると解釈されるべきである。ここで、ＤＮＡ分子は、タンパク質もしくはペプチド（例えば、抗体）、またはタンパク質もしくはペプチド（例えば、抗体）を特定するアミノ酸配列を発現し、ＤＮＡまたはアミノ酸配列は、利用可能であり当技術分野で周知である組換えＤＮＡまたはアミノ酸配列技術を使用して、得られている。
【０１０２】
本発明で使用される「調節性Ｔリンパ球」、「調節性Ｔ細胞」、「Ｔ調節性細胞」、「Ｔｒｅｇ細胞」、および「Ｔｒｅｇ」という用語は同義であり、当技術分野で使用される標準的な定義を有することを意図している。Ｔｒｅｇ細胞は、免疫系の活性化を抑制し、それによって免疫系の恒常性および自己抗原に対する耐性を維持するために「調節的な」方法で作用するＴ細胞の特殊な亜集団である。Ｔｒｅｇは、サプレッサーＴ細胞と呼ばれることもある。Ｔｒｅｇ細胞は、常にではないが、多くの場合フォークヘッドファミリー転写因子ＦｏｘＰ３（フォークヘッドボックスＰ３）の発現を特徴とする。また、Ｔｒｅｇ細胞は、ＣＤ４またはＣＤ８表面タンパク質を発現し得る。それらは通常、ＣＤ２５も発現する。Ｔｒｅｇは多くの場合、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｌｏＦｏｘＰ３＋の表現型によってマークされる。いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇはまた、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、および／またはＧＩＴＲ＋である。特定の実施形態では、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｌｏＣＤ６２Ｌ＋またはＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ２５ｈｉＣＤ１２７ｌｏによってマークされる。本発明で使用される場合、特に明記しない限り、Ｔｒｅｇは、胸腺で発生する「天然」Ｔｒｅｇ、胸腺の外側（例えば、組織または二次リンパ系臓器、または定義された培養条件下での実験室環境）で起こる分化プロセスを介して生じる誘導／適応／末梢Ｔｒｅｇ、および組換えＤＮＡ技術を使用して作成されたＴｒｅｇを含む。天然に存在するＴｒｅｇ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋）は、胸腺内の他のすべてのＴ細胞と同様に生じる。対照的に、誘導／適応／末梢Ｔｒｅｇ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ、Ｔｒ１細胞、Ｔｈ３細胞、およびその他など）は胸腺の外側で生じる。調節性Ｔ細胞を誘導する１つの方法は、ＩＬ−１０またはＴＧＦ−βへのＴエフェクター細胞の暴露による。Ｔ細胞はまた、Ｔ細胞の混合集団へのＦｏｘＰ３遺伝子のトランスフェクションまたは形質導入によってＴｒｅｇ細胞に変換され得る。ＦｏｘＰ３を発現するように誘導されるＴ細胞はＴｒｅｇ表現型を採用し、そのような組換えＴｒｅｇは、本明細書では「Ｔｒｅｇ」とも定義される。
【０１０３】
「拒絶反応」という用語は、移植された臓器または組織がレシピエントの身体によって受け入れられない状態を指す。拒絶反応は、移植された臓器または組織を攻撃するレシピエントの免疫系によって生じる。拒絶反応は、移植後数日から数週間（急性）または移植後数ヶ月から数年（慢性）で発生し得る。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、抗体またはＣＡＲは、抗原と検出可能なレベル、例えば、親和性定数Ｋａ約１０４Ｍ−１以上、約１０５Ｍ−１以上、約１０６Ｍ−１以上、約１０７Ｍ−１以上、以上１０８Ｍ−１、１０９Ｍ−１以上、または１０１０Ｍ−１以上で反応する場合、抗原「に対し免疫特異的」、「に対し特異的」である、または抗原に「特異的に結合する」と言われる。同族の抗原に対する抗体の親和性もまた、一般に解離定数Ｋｄとして表され、ある実施形態において、抗体は、１０−４Ｍ以下、約１０−５Ｍ以下、約１０−６Ｍ以下、１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ以下、５ｘ１０−９Ｍ以下、または１０−９Ｍ以下、または５ｘ１０−１０Ｍ以下、または１０−１０Ｍ以下のＫｄで結合する場合、抗原に特異的に結合する。抗体またはＣＡＲの親和性は、従来の技術、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ５１：６６０（１９４９年））に記載のものを使用して容易に決定できる。抗体の抗原、細胞またはその組織への結合特性は一般に、例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ）および／または蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）などの免疫蛍光ベースのアッセイなどの免疫検出法を使用して決定され、評価され得る。いくつかの実施形態では、「特異的に結合する」という用語は、サンプル中に存在する結合パートナーを認識しそれと結合するが、サンプル中の他の分子を実質的に認識しないまたは結合しない抗体、ＣＡＲまたはリガンドを指す。
【０１０５】
「シグナル伝達経路」という用語は、細胞の一方の部分から細胞の他方の部分へのシグナルの伝達において役割を果たす様々なシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。
【０１０６】
「シグナル伝達ドメイン」という用語は、第２のメッセンジャーを生成することまたはそのようなメッセンジャーに応答することによりエフェクターとして機能することにより定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を制御するために、細胞内で情報を伝達することにより作用する、タンパク質の機能部分を指す。
【０１０７】
本明細書で使用される場合、「幹細胞」という用語は一般に、多能性または複能性の幹細胞を含む。「幹細胞」としては、これに限定されないが、胚性幹細胞（ＥＳ）、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）；人工多能性幹細胞（ｉＰＳ）；決定された前駆細胞（ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌ）（造血幹細胞（ＨＳＣ）、骨髄由来細胞など）が挙げられる。
【０１０８】
「刺激」という用語は、刺激性分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体またはキメラ受容体）とその同族リガンドとの結合によって誘導されそれにより、これらに限定されないが、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介したシグナル伝達またはキメラ受容体のシグナル伝達ドメインを介したシグナル伝達などのシグナル伝達イベントを媒介する、一次応答を指す。刺激は、特定の分子の改変された発現を媒介できる。
【０１０９】
「刺激分子」という用語は、免疫細胞シグナル伝達経路の少なくともいくつかの態様において免疫細胞の活性化を刺激的な方法で調節する細胞質シグナル伝達配列（複数可）を提供する、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＢ細胞）によって発現される分子を指す。一態様では、シグナルは、例えば、ペプチドがロードされたＭＨＣ分子にＴＣＲ／ＣＤ３複合体が結合することによって開始される一次シグナルであり、これは、限定されないが、増殖、活性化、分化、抑制などＴ細胞応答の媒介をもたらす。刺激的な方法で作用する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして公知であるシグナル伝達モチーフを含み得る。
【０１１０】
「対象」という用語は、免疫応答が誘発され得る生物（例えば、ヒトなどの哺乳動物）を含むことを意図される。いくつかの実施形態では、対象は「患者」、すなわち、医療を受けるのを待機しているもしくは医療を受けている、または医療処置の対象であった、もしくは対象である、もしくは対象となる、例えば、炎症性または自己免疫状態などの、標的とされる疾患または状態の発症について監視される、ヒトなどの温血動物であり得る。いくつかの実施形態では、対象は、成人（例えば、１８歳以上の対象）である。いくつかの実施形態では、対象は、小児（例えば、１８歳未満の対象）である。いくつかの実施形態では、対象は男性である。いくつかの実施形態では、対象は女性である。いくつかの実施形態では、対象は、自己抗体媒介自己免疫疾患などの自己免疫疾患に罹患している（例えば、診断されている）。いくつかの実施形態では、対象は、自己抗体媒介自己免疫疾患などの自己免疫疾患を発症するリスクがある。リスク因子の例としては、これらに限定されないが、自己抗体媒介自己免疫疾患の遺伝的素因および家族歴が挙げられる。
【０１１１】
「実質的に精製された細胞」という用語は、他の細胞型を本質的に含まない細胞を指す。実質的に精製された細胞はまた、それがその天然に存在する状態で通常会合される、他の細胞型から分離されている細胞を指す。いくつかの実施形態では、実質的に精製された細胞は、その天然に存在する状態で通常会合される他の細胞型から少なくとも約７５％遊離、８０％遊離、または８５％遊離、または約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％遊離している細胞を指す。場合によっては、実質的に精製された細胞の集団は、細胞の均質な集団を指す。いくつかの実施形態では、実質的に精製された細胞集団は、少なくとも約７５％均質、８０％均質、または８５％均質、特定の実施形態では、約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％均質である細胞集団を指す。場合によっては、実質的に精製された細胞は、それらの天然の状態で天然に会合される細胞から分離されている細胞を単に指す。いくつかの態様では、細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養される。他の態様では、細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養されない。ある実施形態では、本明細書に記載の細胞は、多細胞生物を生成するために使用できない。
【０１１２】
「Ｔ細胞」という用語は、ＣＤ４＋細胞（例えば、Ｔヘルパー細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞および調節性ＣＤ８＋Ｔ細胞）、Ｔ調節性細胞（Ｔｒｅｇ）、ガンマ−デルタＴ細胞、およびダブルネガティブＴ細胞を含むＣＤ３を発現するすべてのタイプの免疫細胞を含む。
【０１１３】
「治療有効量」という用語は、特定の生物学的結果を達成するのに有効な剤（例えば、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞）の量を指す。したがって、「治療有効量」という用語は、標的に重大な負の副作用または有害な副作用を引き起こすことなく、（１）標的とされる疾患もしくは状態の発症を遅延させるもしくは予防する、（２）標的とされる疾患もしくは状態の１つ以上の症状の進行、悪化、または悪化を減速させるもしくは停止する、（３）標的とされる疾患もしくは状態の症状の改善をもたらす、（４）標的とされる疾患もしくは状態の重症度もしくは発生率を低下させる、または（５）標的とされる疾患もしくは状態を治癒する、目的とする剤のレベルまたは量を意味する。いくつかの実施形態では、治療有効量は、予防的または防止的作用のために、標的とされる疾患または状態の発症の前に投与され得る。あるいはまたはさらに、治療有効量は、治療作用のために、標的とされる疾患または状態の開始後に投与され得る。
【０１１４】
「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」という用語は、それにより外因性核酸が宿主細胞に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、外因性核酸でトランスフェクト、形質転換、または形質導入された細胞である。細胞は、主要な対象細胞およびその子孫を含む。
【０１１５】
「移入ベクター」という用語は、単離された核酸を含みかつ単離された核酸を細胞の内部に送達するために使用できる、物質の組成物を指す。これらに限定されないが、直鎖ポリヌクレオチド、イオン性化合物または両親媒性化合物に会合するポリヌクレオチド、プラスミド、およびウイルスなど多数のベクターが当技術分野において公知である。したがって、「移入ベクター」という用語は、自律的に複製するプラスミドまたはウイルスを含む。この用語はまた、例えば、ポリリジン化合物、リポソームなどの、細胞への核酸の移入を容易にする非プラスミド化合物および非ウイルス化合物を含むと解釈されるべきである。ウイルス移入ベクターの例としては、これらに限定されないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどが挙げられる。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、「一過的な」は、数時間、数日、または数週間での非組み込み導入遺伝子の発現を指し、発現期間は、ゲノムに組み込まれた場合、または宿主細胞中で安定したプラスミドレプリコン内に含まれる場合、遺伝子の発現期間よりも短い。
【０１１７】
本明細書で使用される「移植」は、個体内に導入される細胞、組織、または臓器を指す。移植される材料の供給源は、培養細胞、別の個体からの細胞、または同じ個体からの細胞であり得る（例えば、細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養され、任意により改変された後）。例示的な臓器移植は、腎臓、肝臓、心臓、肺、および膵臓である。例示的な組織移植は、膵島である。例示的な細胞移植は、同種造血幹細胞移植である。
【０１１８】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」および「治療すること」という用語は、標的とされる疾患もしくは状態、例えば、自己免疫状態の進行、重症度、および／もしくは期間の減少もしくは改善、または標的とされる疾患もしくは状態、例えば自己免疫状態の１つ以上の症状（例えば、１つ以上の識別可能な症状）の改善を指し、ここで、改善は、１つ以上の療法（例えば、本発明のＴｒｅｇ細胞などの１つ以上の治療剤）の投与の結果生じる。特定の実施形態では、「治療する」、「治療」および「治療すること」という用語は、標的とされる疾患または状態、例えば自己免疫状態の少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの改善を指す。いくつかの実施形態では、「治療する」、「治療」および「治療すること」という用語は、例えば、識別可能な症状の安定化により物理的に、例えば、物理的パラメータの安定化により生理学的に、またはその両方での、標的とされる疾患または状態、例えば、自己免疫状態の進行の阻害を指す。いくつかの実施形態では、「治療する」、「治療」および「治療すること」という用語は、標的とされる疾患もしくは状態、例えば、自己免疫疾患の進行、重症度および／もしくは期間の減少もしくは改善、または、標的とされる疾患もしくは状態、例えば自己免疫疾患の１つ以上の症状の改善を指す。「治療すること」または「治療」は、治療的治療および予防的または防止的措置の両方を指し、ここで目的は、標的とされる疾患または状態を防止するかまたは減速させる（軽減する）ことである。治療を必要とする者は、すでにその状態を有する者、その状態を有する傾向にある者、またはその状態を防止する必要がある者を含む。治療量の剤（例えば、本発明によるキメラ受容体を含む細胞の集団）を受けた後、対象が以下の１つ以上について観察可能および／または測定可能な改善を示す場合、対象は、疾患または状態について、奏功して「治療」されている：病原性細胞の数の減少、病原性である全細胞の割合の減少、特定の状態に関連する症状の１つ以上のある程度の軽減、罹患率および死亡率の低下、ならびに／または生活の質の問題における改善。治療の奏功および状態の改善を評価するための上記のパラメータは、医師によく知られているルーチン手順によって容易に測定可能である。
【０１１９】
「Ｔｒｅｇ細胞」という用語は、例えば、自己免疫またはアレルギー反応などの過剰なまたは望ましくない炎症応答を抑制、阻害、または防止できる細胞を指す。いくつかの実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞集団は、抑制的活性が可能である。いくつかの実施形態では、抑制的活性は接触に依存しない。いくつかの実施形態では、抑制的活性は接触に依存する。いくつかの実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞集団は、エフェクターＴ細胞に対して抑制的作用を呈し、ある実施形態では、抑制的作用は、ＴＣＲ発現および／または活性化に依存する。
【０１２０】
「ユニボディ」は当技術分野で周知であり、ＩｇＧ４抗体のヒンジ領域を欠く抗体断片を指す。ヒンジ領域の欠失は、従来のＩｇＧ４抗体の本質的に半分のサイズでありかつＩｇＧ４抗体の二価の結合領域ではなく一価の結合領域を有する分子を生じる。
【０１２１】
「可変」という用語は、可変（Ｖ）ドメインの特定のセグメントが抗体間で配列において広範に異なることを指す。Ｖドメインは抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定義する。しかし、多様性は、可変ドメインの１１０〜１３０アミノ酸スパンに均等に分布しない。代わりに、Ｖ領域は、１５〜３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的不変のストレッチで構成され、それぞれ９〜１２アミノ酸長の「超可変領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる極めて可変性である短い領域によって分離される。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ４つのＦＲを含み、主にβシート構成を採用し、３つの超可変領域によって接続され、これは、βシート構造を接続する、かつ場合によってはその一部を形成する、ループを形成する。各鎖中の超可変領域は、ＦＲにより近接して共に保持され、他の鎖由来の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１年）を参照されたい）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）への抗体の関与などの、様々なエフェクター機能を呈する。
【０１２２】
本明細書で使用されるポリヌクレオチド「バリアント」という用語は、１つ以上の置換、欠失、付加および／または挿入において本明細書に具体的に開示されるポリヌクレオチドと典型的に異なるポリヌクレオチドである。そのようなバリアントは、天然に存在し得るか、または、例えば、本発明のポリヌクレオチド配列の１つ以上を修飾することによって、および本明細書に記載のコードされたポリペプチドの１つ以上の生物学的活性を評価することによって、および／または当技術分野において周知である複数の技術のいずれかを使用することによって合成により生成され得る。したがって本明細書で使用されるポリペプチド「バリアント」という用語は、１つ以上の置換、欠失、付加および／または挿入において本明細書に具体的に開示されるポリペプチドと典型的に異なるポリペプチドである。そのようなバリアントは、天然に存在し得るか、または、例えば、本発明のポリペプチド配列の１つ以上を修飾することによって、および本明細書に記載のポリペプチドの１つ以上の生物学的活性を評価することによって、および／または当技術分野において周知である複数の技術のいずれかを使用することによって合成により生成され得る。修飾が、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの構造に加えられてよく、それでも、望ましい特性を有するバリアントまたは誘導性ポリペプチドをコードするか、またはそれらである、機能性分子をもたらす。ポリペプチドのアミノ酸配列を改変して、本発明のポリペプチドの同等の、またはさらに改善されたバリアントまたは部分を作製することが望まれる場合、当業者は典型的には、コードするＤＮＡ配列のコドンの１つ以上を変更する。例えば、特定のアミノ酸は、その機能（例えば、他のポリペプチド（例えば、抗原）または細胞を結合する能力）を明らかに喪失することなく、タンパク質構造中の他のアミノ酸と置換され得る。そのタンパク質の生物学的機能活性を定義するのはタンパク質の結合能力および性質であるため、特定のアミノ酸配列置換が、タンパク質配列、および当然のことながらその基礎となるＤＮＡコード配列において行われ得、同様の特性を有するタンパク質をもたらす。したがって、様々な変更が、それらの生物学的有用性または活性を明らかに喪失することなく、本発明のペプチド配列、またはペプチドをコードする対応するＤＮＡ配列に加えられてよいことが企図される。多くの場合、ポリペプチドバリアントは、１つ以上の保存的置換を含むであろう。またあるいは代替的にはバリアントは、非保存的変更を含む場合もある。いくつかの実施形態では、バリアントポリペプチドは、６、５、４、３、２、または１つのアミノ酸の置換、欠失、または付加により天然配列と異なる。バリアントはまた（あるいは代替的に）、例えば、ポリペプチドの免疫原性、二次構造およびハイドロパシー性に最小の影響を有するアミノ酸の欠失または付加により修飾され得る。
【０１２３】
「バーサボディ」は当技術分野において周知であり、別の抗体模倣技術を指す。それらは、１５％を超えるシステインを有する３〜５ｋＤａの小さいタンパク質であり、典型的なタンパク質の疎水性コアに代わって、高ジスルフィド密度の足場を形成する。
【０１２４】
「異種」という用語は、異なる種の個体に由来する任意の材料を指す。「異種移植片」という用語は、異なる種の個体に由来する移植片を指す。
【０１２５】
「ゼータ」またはあるいは「ゼータ鎖」、「ＣＤ３ゼータ」または「ＴＣＲ−ゼータ」という用語は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＡＧ３６６６４．１として提供されるタンパク質、または非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など由来の同等の残基として定義され、「ゼータ刺激ドメイン」または代わりに「ＣＤ３ゼータ刺激ドメイン」または「ＴＣＲ−ゼータ刺激ドメイン」は、ゼータ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基、またはその機能的誘導体として定義され、これらは、Ｔ細胞の活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分である。いくつかの実施形態では、ゼータの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２〜１６４、またはその機能的オルソログである、非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などの同等の残基を含む。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
【０１２６】
本発明は、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−任意により、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメインと、
−少なくとも１つの膜貫通ドメイン（例えば、ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、任意の膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、またはそれらの任意の組み合わせ）と、
−少なくとも1つの細胞内ドメイン（少なくとも1つの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意により少なくとも1つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含み、少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、任意の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、またはそれらの任意の組み合わせである）、を含み、膜貫通ドメインは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアントであり、かつ／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントである、
キメラ受容体を提供する。
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、１つ以上のポリペプチドを含む。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、抗原結合ドメインであり、したがって、キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（またはＣＡＲ）とも呼ばれ得る。
Ｉ．細胞外結合ドメイン
【０１２８】
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、抗原結合ドメイン、例えば、抗体またはその抗原結合断片を含む。抗体またはその抗原結合断片を含む本発明のキメラ受容体の部分は、リガンド結合ドメインが、例えば、単一ドメイン抗体断片（ｓｄＡｂ）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ヒト化抗体または二重特異性抗体を含む連続するポリペプチド鎖の一部として発現される、様々な形態で存在し得る（Ｈａｒｌｏｗら、１９９９年，Ｉｎ：Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗら、１９８９年，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３（１９８８年）；Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３−４２６（１９８８年））。いくつかの態様では、本明細書に記載されるキメラ受容体の抗原結合ドメインは、抗体断片を含む。いくつかの態様では、キメラ受容体は、ｓｃＦｖを含む抗体断片を含む。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、抗体は、全抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、二量体一本鎖抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディからなる群から選択される抗体分子である。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、抗体は、ユニボディ、単一ドメイン抗体、およびナノボディからなる群から選択される抗体断片である。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、抗体は、アフィボディ、アフィリン、アフィチン、アドネクチン、アトリマー、エバシン（ｅｖａｓｉｎ）、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒ）、バーサボディ、およびデュオカリンからなる群から選択される抗体模倣物である。
【０１３２】
ＤＡＲＰｉｎ（設計されたアンキリンリピートタンパク質）は当技術分野でよく知られており、非抗体ポリペプチドの結合能力を利用するために開発された抗体模倣ＤＲＰ（設計されたリピートタンパク質）技術を指す。
【０１３３】
本発明の抗体の断片および誘導体（特に明記しない限り、または文脈によって明確に矛盾しない限り、それらは本明細書で使用される「抗体」という用語に含まれる）は、当技術分野で公知である技術によって生成することができる。「断片」は、インタクトな抗体の一部分、一般的には抗原結合部位または可変領域を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；連続するアミノ酸残基の１つの途切れのない配列からなる一次構造を有するポリペプチドである任意の抗体断片（本明細書では「一本鎖抗体断片」または「一本鎖ポリペプチド」と呼ばれる）を含み、これらに限定されないが、（１）一本鎖Ｆｖ分子、（２）１つの軽鎖可変ドメインのみを含む一本鎖ポリペプチド、または軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含み、関連する重鎖部分を含まないその断片、および（３）１つの重鎖可変領域のみを含む一本鎖ポリペプチド、または重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含み、関連する軽鎖部分を含まないその断片；ならびに抗体断片から形成される多重特異性抗体を含む。本発明の抗体の断片は、標準的な方法を使用して得ることができる。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、複数の周知であるスキーム、Ｋａｂａｔら（１９９１年）、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら、ＪＭＢ２７３：９２７−９４８（１９９７年）（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）のいずれか、またはこれらの組み合わせを使用して決定できる。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの抗原結合ドメインは、例えば、ｓｃＦｖなどの抗体断片を含むか、またはそれらからなる。特定の実施形態では、抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの抗原結合ドメインは、特定の抗原またはその断片（例えば、標的細胞に会合する）を認識する。したがって、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、例えば、感染した細胞、損傷した細胞、または機能不全細胞などの標的細胞を認識し得る。そのような標的細胞の例としては、機能不全免疫反応に関与する細胞（例えば、自己免疫疾患またはアレルギーに関与する細胞）、機能不全により活性化された炎症細胞（例えば、炎症性内皮細胞）、癌細胞、および感染した（例えば、ウイルス、細菌、または寄生虫に感染した）細胞を挙げることができる。
【０１３６】
本明細書で使用される場合、抗原の「断片」という用語は、より短いペプチドとしての、抗原の任意のサブセットを指す。いくつかの実施形態では、抗原の断片は、少なくとも６アミノ酸長のペプチドである。いくつかの実施形態では、抗原の断片は、６〜５０アミノ酸長、６〜３０アミノ酸長、または６〜２０アミノ酸長のペプチドである。
【０１３７】
抗原の「バリアント」という用語は、本明細書では、天然抗原とほぼ同一でありかつ同じ生物学的活性を共有する抗原を指す。天然抗原とそのバリアントとの間の最小差は、例えば、アミノ酸の置換、欠失、および／または付加にあり得る。そのようなバリアントは、例えば、保存的アミノ酸置換を含み得る。いくつかの実施形態では、抗原のバリアントは、天然抗原の配列と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％、または７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を示す。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、抗原は自己抗原である。自己抗原の例としては、これらに限定されないが、炎症性神経系状態に関連する抗原（例えば、多発性硬化症関連抗原）、関節関連抗原、眼関連抗原、ヒトＨＳＰ抗原、皮膚関連抗原、または移植片拒絶反応またはＧＶＨＤに関与する抗原が挙げられる。
【０１３９】
多発性硬化症関連抗原の例としては、これらに限定されないが、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質（ＯＭＧＰ）、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質（ＭＯＢＰ）、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質（ＯＳＰ／クローディン−１１）、熱ショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質（ＯＳＰ）、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）、２’３’−環状ヌクレオチド３′−ホスホジエステラーゼ（ＣＮＰａｓｅ）、または任意の断片、バリアントまたはそれらの混合物が挙げられる。
【０１４０】
関節関連抗原の例としては、これらに限定されないが、シトルリン置換環状および直鎖フィラグリンペプチド、ＩＩ型コラーゲンペプチド、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲン、ヒト軟骨糖タンパク質３９（ＨＣｇｐ３９）ペプチド、ＨＳＰ、異種核リボ核タンパク質（ｈｎＲＮＰ）Ａ２ペプチド、ｈｎＲＮＰ  Ｂ１、ｈｎＲＮＰ  Ｄ、Ｒｏ６０／５２、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＨＳＰ７０およびＨＳＰ９０、ＢｉＰ、ケラチン、ビメンチン、フィブリノーゲン、Ｉ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型およびＶ型コラーゲンペプチド、アネキシンＶ、グルコース６リン酸イソメラーゼ（ＧＰＩ）、アセチルカルパスタチン、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ（ＰＤＨ）、アルドラーゼ、トポイソメラーゼＩ、ｓｎＲＮＰ、ＰＡＲＰ、Ｓｃｌ−７０、Ｓｃｌ−１００、陰イオン性カルジオリピンおよびホスファチジルセリンなどのリン脂質抗原、中性に帯電したホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチジルコリン、マトリックスメタロプロテイナーゼ、フィブリリン、アグリカン、およびそれらの断片、バリアントおよびそれらの混合物が挙げられる。
【０１４１】
眼関連抗原の例としては、これらに限定されないが、ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲン、網膜アレスチン、Ｓ−アレスチン、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ１）、ベータ−クリスタリンＢ１、網膜タンパク質、脈絡膜タンパク質およびそれらの断片、バリアントおよびそれらの混合物が挙げられる。
【０１４２】
ヒトＨＳＰ抗原の例としては、これらに限定されないが、ヒトＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ならびにそれらの断片、バリアントおよび混合物が挙げられる。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、抗原は、炎症性神経系状態関連抗原、例えば、多発性硬化症関連抗原である。炎症性神経系状態関連抗原（例えば、多発性硬化症関連抗原）の例としては、これらに限定されないが、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質（ＯＭＧＰ）、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質（ＭＯＢＰ）、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質（ＯＳＰ／クローディン−１１）、熱ショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質（ＯＳＰ）、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）、２’３’−環状ヌクレオチド３′−ホスホジエステラーゼ（ＣＮＰａｓｅ）、およびそれらの断片、バリアントまたは混合物が挙げられる。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、抗原は関節関連抗原である。関節関連抗原の例としては、これらに限定されないが、シトルリン置換環状および直鎖フィラグリンペプチド、ＩＩ型コラーゲンペプチド、ヒト軟骨糖タンパク質３９（ＨＣｇｐ３９）ペプチド、ＨＳＰ、異種核リボ核タンパク質（ｈｎＲＮＰ）Ａ２ペプチド、ｈｎＲＮＰ  Ｂ１、ｈｎＲＮＰ  Ｄ、Ｒｏ６０／５２、ＨＳＰ６０、６５、７０および９０、ＢｉＰ、ケラチン、ビメンチン、フィブリノーゲン、コラーゲンＩ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型およびＶ型ペプチド、アネキシンＶ、グルコース６リン酸イソメラーゼ（ＧＰＩ）、アセチルカルパスタチン、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ（ｐｙｒｕｖａｔｅ  ｄｅｓｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）（ＰＤＨ）、アルドラーゼ、トポイソメラーゼＩ、ｓｎＲＮＰ、ＰＡＲＰ、Ｓｃｌ−７０、Ｓｃｌ−１００、陰イオン性カルジオリピンおよびホスファチジルセリンなどのリン脂質抗原、中性に帯電したホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチジルコリン、マトリックスメタロプロテイナーゼ、フィブリリン、アグリカン、およびそれらの断片、バリアントおよびそれらの混合物が挙げられる。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、抗原は眼関連抗原である。眼関連抗原の例としては、これらに限定されないが、ＩＩ型コラーゲン、網膜アレスチン、Ｓ−アレスチン、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ１）、ベータＢ１−クリスタリン、網膜タンパク質、脈絡膜タンパク質、およびそれらの断片、バリアント、および混合物が挙げられる。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、抗原はヒトＨＳＰ抗原である。ヒトＨＳＰ抗原の例としては、これらに限定されないが、ヒトＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ならびにそれらの断片、バリアントおよび混合物が挙げられる。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、抗原は、皮膚関連抗原である。皮膚関連抗原の例としては、これらに限定されないが、ケラチノサイト抗原、真皮または表皮に存在する抗原、メラノサイト抗原（例えば、メラニンまたはチロシナーゼ）、デスモグレイン（例えば、デスモグレイン１または３、これはＤｓｇ１／３とも呼ばれ得る）、ＢＰ１８０、ＢＰ２３０、プレクチン、インテグリン（例えば、インテグリンα４β６）、コラーゲン（例えば、ＶＩＩ型コラーゲン）、ラミニン（例えば、ラミニン３３２またはラミニンγ１）、プラキン（例えば、エンボプラキン、ペリプラキン、またはデスモプラキン）、ケラチン（例えば、ＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＫＲＴ１５、ＫＲＴ１７およびＫＲＴ３１）、ケラチンフィラメント関連タンパク質、フィラグリン、コルネデスモシン、およびエラスチンが挙げられる。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、抗原は、移植片拒絶反応またはＧＶＨＤに関与する抗原である。そのような抗原の例としては、これらに限定されないが、移植された組織または宿主に特異的なＭＨＣ、β２−ミクログロブリン、ＡＢＯ系からの抗原、アカゲザル系からの抗原（例えば、抗原Ｃ、ｃ、Ｅ、ｅおよびＤ）、およびイソハエマグルチニン（ｉｓｏｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）が挙げられる。移植片拒絶反応またはＧＶＨＤに関与し得る抗原の他の例としては、これらに限定されないが、ＨＬＡ−ＤＲ（特に移植後の最初の６ヶ月間）、ＨＬＡ−Ｂ（特に移植後の最初の２年間）、ＨＬＡ−Ａ、マイナー組織適合性抗原（ｍｉＨＡ、例えば、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−ＦおよびＨＬＡ−Ｇ）、ＭＨＣクラスＩに対応するＨＬＡ（Ａ、Ｂ、およびＣ）、ＭＨＣクラスＩＩに対応するＨＬＡ（ＤＰ、ＤＭ、ＤＯＡ、ＤＯＢ、ＤＱ、およびＤＲ）ならびにＭＨＣクラスＩＩＩに対応するＨＬＡ（例えば、補体系の構成要素）が挙げられる。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、抗原は、ＨＬＡ−Ａ２細胞表面タンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、ＨＬＡ−Ａ２に向けられた抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ−Ａ２結合ドメインは、ＨＬＡ−Ａ２に向けられたｓｃＦｖを含む。
【０１５０】
本明細書で使用される「ＨＬＡ−Ａ２」という用語は、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ−Ａ遺伝子座においてＨＬＡ−Ａ＊０２対立遺伝子ファミリーによってコードされる、細胞表面タンパク質を含むヒト白血球抗原（ＨＬＡ）タンパク質を指す。「ＨＬＡ−Ａ２」という用語に含まれるＨＬＡタンパク質としては、血清学的検査または遺伝子型決定によってＨＬＡ−Ａ＊０２抗原型に属すると同定されたＨＬＡタンパク質が挙げられる。ＨＬＡ−Ａ＊０２抗原型の追加名としては、「ＨＬＡ−Ａ２」、「ＨＬＡ−Ａ０２」、および「ＨＬＡ−Ａ＊２」が挙げられる。２０１０年にＨＬＡシステムの因子に関するＷＨＯ委員会によって開発されたＨＬＡネーミングシステムを含む、この対立遺伝子ファミリーによってコードされるＨＬＡタンパク質を同定する様々なネーミングシステムが開発された。「ＨＬＡ−Ａ２」という用語は、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０３」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０５」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０８」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０９」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：１０」、および「ＨＬＡ−Ａ＊０２：１１」で始まる命名を含むがこれに限定されない、「ＨＬＡ−Ａ＊０２」で始まるこの命名システムによる指定を有する対立遺伝子によってコードされるＨＬＡタンパク質を指す。対立遺伝子の指定はイタリック体で示される場合もある。「ＨＬＡ−Ａ＊０２：」で始まり、その後に２桁または３桁の追加の数字が続く対立遺伝子指定は、完全な指定または指定の最初の部分を構成し得る。「ＨＬＡ−Ａ２」という用語はまた、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０３」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０５」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０８」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０９」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：１０」、および「ＨＬＡ−Ａ＊０２：１１」という名称を含むがこれらに限定されない、この命名システムによる「ＨＬＡ−Ａ＊０２」で始まる名称で同定されるＨＬＡタンパク質を指す。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ−Ａ２ドメインは、ＨＬＡ−Ａ２に向けられた抗体またはその抗原結合断片を含む。ある実施形態では、ＨＬＡ−Ａ２結合ドメインは、ＨＬＡ−Ａ２に向けられたｓｃＦｖを含む。ＨＬＡ−Ａ２に向けられたｓｃＦｖｓの例としては、これらに限定されないが、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７からなる群から選択される配列、およびそれらの断片またはバリアント；ＰＣＴ国際公開第２０１８／１８３２９３号および国際公開第２０１９／０５６０９９号に開示されている抗−ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖからなるか、またはこれらを含むｓｃＦｖが挙げられる。例えば、本明細書に記載のＣＡＲで使用される抗ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖは、配列番号６８のアミノ酸配列からなるか、またはそれを含み得る。さらに別の例では、本明細書に記載のＣＡＲで使用される抗ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖは、配列番号７０のアミノ酸配列からなるか、またはそれを含み得る。さらに別の例では、本明細書に記載のＣＡＲで使用される抗ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖは、配列番号９２のアミノ酸配列からなるか、またはそれを含み得る。さらに別の例では、本明細書に記載のＣＡＲで使用される抗ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖは、配列番号１０３のアミノ酸配列からなるか、またはそれを含み得る。さらに別の例では、本明細書に記載のＣＡＲで使用される抗ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖは、配列番号１０７のアミノ酸配列からなるか、またはそれを含み得る。
【０１５２】
自己抗原の他の例としては、これらに限定されないが、アクアポリン水チャネル（例えば、アクアポリン−４水チャネル（ＡＱＰ４））、Ｈｕ、Ｍａ２、コラプシン応答メディエータータンパク質５（ＣＲＭＰ５）、アンフィフィシン、電位依存性カリウムチャネル（ＶＧＫＣ）、Ｎ−メチル−ｄ−アスパラギン酸受容体（ＮＭＤＡＲ）、α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−４−イソキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡＲ）、甲状腺ペルオキシダーゼ、サイログロブリン、抗Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体（ＮＲ１サブユニット）、Ｒｈ血液型抗原、Ｉ抗原、デスモグレイン１または３（Ｄｓｇ１／３）、ＢＰ１８０、ＢＰ２３０、アセチルコリンニコチン性シナプス後受容体、甲状腺刺激ホルモン受容体、血小板インテグリン、ＧｐＩＩｂ：ＩＩＩａ、コラーゲン（例えば、コラーゲンアルファ−３（ＩＶ）鎖）、リウマチ因子、カルパスタチン、シトルリン化タンパク質、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド、アルファ−ベータ−クリスタリン、ＤＮＡ、ヒストン、リボソーム、ＲＮＰ、組織トランスグルタミナーゼ（ＴＧ２）、内因子、６５  ｋＤａ抗原、ホスファチジルセリン、リボソームリンタンパク質、抗好中球細胞質抗体、Ｓｃｌ−７０、Ｕ１−ＲＮＰ、ＡＮＡ、ＳＳＡ、抗ＳＳＢ、抗核抗体（ＡＮＡ）、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、Ｊｏ−１、抗ミトコンドリア抗体、ｇｐ２１０、ｐ６２、ｓｐ１００、抗リン脂質抗体、Ｕ１−７０  ｋｄ  ｓｎＲＮＰ、ＧＱ１ｂガングリオシド、ＧＭ１、ａｓｉａｌｏ  ＧＭ１ＧＤ１ｂ、抗平滑筋抗体（ＡＳＭＡ）、抗肝腎ミクロソーム−１抗体（ＡＬＫＭ−１）、抗肝サイトゾル抗体−１（ＡＬＣ−１）、ＩｇＡ抗筋内膜抗体、好中球顆粒タンパク質、連鎖球菌の細胞壁抗原、胃壁細胞の内因子、インスリン（ＩＡＡ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＡまたはＧＡＤ）、プロテインチロシンホスファターゼ（例えば、ＩＡ２またはＩＣＡ５１２）、ＰＬＡ２Ｒ１およびＴＨＳＤ７Ａ１が挙げられる。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、抗原は、細胞表面上で発現されるＩＬ−２３受容体（ＩＬ−２３Ｒ）である。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、ＩＬ−２３Ｒに向けられた抗体またはその抗原結合断片である。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、抗原は可溶性ＩＬ−２３Ｒである。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、可溶性ＩＬ−２３Ｒに向けられた抗体またはその抗原結合断片である。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、抗原は、ＩＬ−２３Ｒのバリアントである。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、ＩＬ−２３Ｒのバリアントに向けられた抗体またはその抗原結合断片である。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２３Ｒのバリアントペプチドは、修飾されたＩＬ−２３Ｒペプチドであり、ここで、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０のアミノ酸が、元のペプチドと比較して、欠失されるか、付加されるかまたは置換される。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、抗原は、ＩＬ−２３Ｒのスライスバリアントである。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、ＩＬ−２３Ｒのスライスバリアントに向けられた抗体またはその抗原結合断片である。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、ヒトＩＬ−２３Ｒを認識し、かつヒトＩＬ−２３Ｒに結合できる。いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、マウスＩＬ−２３Ｒを認識し、かつマウスＩＬ−２３Ｒに結合できる。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメインは、ＩＬ−２３Ｒに向けられた抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメインは、ＩＬ−２３Ｒに向けられたｓｃＦｖを含む。ＩＬ−２３Ｒに向けられたｓｃＦｖの例としては、これらに限定されないが、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７からなる群から選択される配列およびそれらの断片またはバリアントからなるかまたはそれらを含むｓｃＦｖが挙げられる。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、抗原は、吸入アレルゲン、摂取アレルゲン、または接触アレルゲンである。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、抗原は、一般的なヒトの食事からの食物抗原である。
【０１６２】
「一般的なヒトの食事からの食物抗原」という用語は、非限定的なリスト：オバルブミン、リポカリンなどのウシ抗原、Ｃａ結合Ｓ１００、アルファ−ラクトアルブミン、ベータラクトグロブリンなどのラクトグロブリン、ウシ血清アルブミン、およびカゼイン、の食品抗原などの、ヒトに一般的な食品に由来する免疫原性ペプチドを指す。また、食品抗原は、パルブアルブミンなどのタイセイヨウサケ抗原、オボムコイド、Ａｇ２２、コンアルブミン、リゾチームまたは鶏血清アルブミンなどのニワトリ抗原、ピーナッツ、トロポミオシンなどのエビ抗原、アグルチニンまたはグリアジンなどのコムギ抗原、セロリプロフィリンなどのセロリ抗原、ニンジンプロフィリンなどのニンジン抗原、ソーマチン、リンゴ脂質転移タンパク質、アップルプロフィリンなどのリンゴ抗原、ナシプロフィリン、イソフラボンレダクターゼなどのナシ抗原、エンドキチナーゼなどのアボカド抗原、アプリコット脂質転移タンパク質などのアプリコット抗原、モモ脂質転移タンパク質またはモモプロフィリンなどのモモ抗原、ＨＰＳ、ダイズプロフィリンまたは（ＳＡＭ２２）ＰＲ−Ｉ０  ｐｒｏｔなどのダイズ抗原、およびそれらの断片、バリアントおよびそれらの混合物であり得る。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、抗原は組織特異的タンパク質である。組織特異的タンパク質の例としては、これらに限定されないが、その発現が特定の組織または臓器に限定されるインテグリンおよびセレクチンが挙げられる。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、抗原は、Ｂ細胞の表面で発現されるＢ細胞表面マーカーである。Ｂ細胞の表面マーカーの例（例えば、ヒトＢ細胞）としては、これらに限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＢＣＭＡ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ７８、ＣＤ８０、ＣＤ１３８、ＣＤ３１９、ＰＤＬ−２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、Ｎｏｔｃｈ２、ＴＬＲ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＴＧＦβが挙げられる。ある実施形態では、Ｂ細胞表面マーカーは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＢＣＭＡ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ１３８から選択される。特定の実施形態では、Ｂ細胞表面マーカーは、ＣＤ１９およびＣＤ２０から選択される。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、抗原は、ｐｒｏＢ細胞の表面で発現されるｐｒｏＢ細胞表面マーカーである。ｐｒｏＢ細胞（例えば、ヒトｐｒｏＢ細胞）の表面マーカーの例としては、これらに限定されないが、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２４、ＣＤ３４およびＣＤ３８が挙げられる。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、抗原は、ｐｒｅＢ細胞の表面で発現されるｐｒｅＢ細胞表面マーカーである。ｐｒｅＢ細胞の表面マーカー（例えば、ヒトｐｒｅＢ細胞）の例としてはこれらに限定ないが、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ３４、ＣＤ３８が挙げられる。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、抗原は、Ｂ細胞の表面で発現される未成熟（または移行性）Ｂ細胞表面マーカーである。未成熟（または移行性）Ｂ細胞（例えば、ヒト未成熟Ｂ細胞）の表面マーカーの例としては、これらに限定されないが、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３８およびＩｇＧが挙げられる。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、抗原は、Ｂ細胞の表面で発現される辺縁帯Ｂ細胞表面マーカーである。辺縁帯Ｂ細胞（例えば、ヒト辺縁帯Ｂ細胞）の表面マーカーの例としては、これらに限定されないが、ＣＤ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２７、ＩｇＧおよびＮｏｔｃｈ２が挙げられる。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、抗原は、Ｂ細胞の表面で発現される形質細胞表面マーカーである。形質細胞（例えば、ヒト形質細胞）の表面マーカーの例としては、ＣＤ１９、ＣＤ２７、ＣＤ３８、ＣＤ１３８、ＩｇＧ、ＭＨＣＩＩ、およびＩＬ−６が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、抗原は、Ｂ細胞の表面で発現される形質細胞表面マーカーである。形質芽球（例えば、ヒト形質芽球）の表面マーカーの例としては、これらに限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２７、ＣＤ３８、ＩｇＧ、およびＭＨＣＩＩが挙げられる。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、抗原は、Ｂ細胞の表面で発現されるメモリーＢ細胞表面マーカーである。メモリーＢ細胞の表面マーカーの例（例えば、ヒトメモリーＢ細胞）としてはこれらに限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＰＤ−Ｌ２、ＩｇＧ、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＥが挙げられる。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、抗原は、Ｂ細胞の表面で発現される胚中心Ｂ細胞表面マーカーである。胚中心Ｂ細胞（例えば、ヒト胚中心Ｂ細胞）の表面マーカーの例としては、これらに限定されないが、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３８、およびＩｇＧが挙げられる。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、抗原は、Ｂ細胞の表面で発現される活性化Ｂ細胞表面マーカーである。活性化Ｂ細胞（例えば、ヒト活性化Ｂ細胞）の表面マーカーの例としては、これらに限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２５、およびＣＤ３０が挙げられる。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、抗原は、Ｂ細胞の表面で発現される調節性Ｂ細胞表面マーカーである。調節性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ細胞）の表面マーカーの例としては、これらに限定されないが、ＣＤ１、ＣＤ１ｄ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ４０、Ｆａｓリガンド、ＩＬ−１０、ＴＬＲ４、ＴＧＦβ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−１、ＴＮＦＳＦ１８、およびＴＲＡＩＬが挙げられる。特定の実施形態では、ヒトＢｒｅｇ細胞の表面マーカーの例としては、これらに限定されないが、ＣＤ１、ＣＤ１ｄ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ４０、ＩＬ−１０、ＴＬＲ４、ＴＧＦβ、ＩｇＤおよびＩｇＭが挙げられる。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、抗原は、Ｂ細胞の表面で発現される非分泌型Ｉｇを有するＢ細胞表面マーカーである。非分泌型Ｉｇを有するＢ細胞（例えば、ヒトＢ細胞）の表面マーカーの例としては、これらに限定されないが、ＣＤ１３８およびＮｏｔｃｈ２が挙げられる。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞表面マーカーは、ＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合ドメインは、ＣＤ１９に向けられた抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合ドメインは、ＣＤ１９に向けられたｓｃＦｖを含む。ＣＤ１９に向けられたｓｃＦｖの例としては、これらに限定されないが、配列番号１およびＦＭＣ６３（配列番号２）が挙げられる。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞表面マーカーは、ＣＤ２０である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０結合ドメインは、ＣＤ２０に向けられた抗体またはその抗原結合断片を含む。ＣＤ２０抗体の例としては、これらに限定されないが、リツキシマブまたはその断片またはバリアント（例えば、配列番号３またはその断片またはバリアント）が挙げられる。ＣＤ２０に向けられたｓｃＦｖの例としては、これらに限定されないが、配列番号４、配列番号５、配列番号６、およびその断片またはバリアントからなる群から選択される配列を含む、またはそれらからなるｓｃＦｖが挙げられる。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、抗原は癌抗原である。
【０１７９】
本明細書で使用される場合、「癌抗原」という用語は、癌細胞によって差次的に発現され、したがって癌細胞を標的とするために利用できる抗原を指す。癌抗原は、明らかに腫瘍特異的免疫応答を刺激する可能性のある抗原である。これらの抗原のいくつかは、必ずしも発現されないが、正常細胞によってコードされており、これらの抗原は、正常細胞では通常はサイレントである（すなわち、発現されない）もの、特定の分化段階でのみ発現されるもの、ならびに胚および胎児の抗原など、一時的に発現されるものとして特徴付けることができる。他の癌抗原は、癌遺伝子（例えば、活性化されたｒａｓ癌遺伝子）、抑制遺伝子（例えば、変異体ｐ５３）などの、変異細胞遺伝子によってコードされ、および内部欠失または染色体転座によって生じる融合タンパク質である。さらに他の癌抗原は、ＲＮＡ腫瘍ウイルスおよびＤＮＡ腫瘍ウイルス上で運ばれるものなどのウイルス遺伝子によってコードされ得る。多くの腫瘍抗原は、複数の固形腫瘍：ＭＡＧＥ１、２、および３（免疫によって定義される）、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＨＥＲ２、ムチン（すなわち、ＭＵＣ−１）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、および前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）に関して定義されている。さらに、Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）、エプスタインバー（ＥＢＶ）、およびヒトパピローマ（ＨＰＶ）によってコードされるいくつかなどのウイルスタンパク質は、それぞれ肝細胞癌、リンパ腫、および子宮頸癌の発症において重要であることが示されている。
【０１８０】
他の癌抗原としては、これらに限定されないが、７０７−ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＦＰ（アルファ（ａ）−フェトプロテイン）、ＡＲＴ−４（Ｔ４細胞によって認識される腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原；ｂ−カテニン／ｍ、ｂ−カテニン／変異型）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｃｒ−ａｂｌ（切断点クラスタ領域−Ａｂｅｌｓｏｎ）、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＤ１９（分化クラスター１９）、ＣＤ２０（分化クラスター２０）、ＣＤ２２（分化クラスター２２）、ＣＤ３０（分化クラスター３０）、ＣＤ３３（分化クラスター３３）、ＣＤ４４ｖ７／８（分化クラスター４４、エクソン７／８）、ＣＡＭＥＬ（メラノーマのＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ−１（癌胎児性抗原ペプチド−１）、ＣＡＳＰ−８（カスパーゼ−８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７変異型）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４変異型）、ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、ＣＴ（癌／精巣（抗原））、Ｃｙｐ−Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原メラノーマ）、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮成長因子受容体、バリアントＩＩＩ）、ＥＧＰ−２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ−４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ２、３，４（赤芽球性白血病ウイルス腫瘍遺伝子ホモログ−２、−３、４）、ＥＬＦ２Ｍ（伸長因子２変異型）、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１（Ｅｔｓバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ゲージ（Ｇ抗原）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＧＤ３（ジシアロガングリオシド３）、ＧｎＴ−Ｖ（Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ）、Ｇｐ１００（糖タンパク質１００ｋＤ）、ＨＡＧＥ（ヘリコース抗原）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（ヒト表皮受容体−２／神経学的；ＥＧＦＲ２としても公知である）、ＨＬＡ−Ａ（ヒト白血球抗原−Ａ）ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）、ＨＳＰ７０−２Ｍ（熱ショックタンパク質７０−２変異型）、ＨＳＴ−２（ヒトシグネットリング腫瘍−２）、ｈＴＥＲＴまたはｈＴＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ｉＣＥ（腸カルボキシルエステラーゼ）、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２（インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、κ−軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ−Ｌ−フコース：ｂＤ−ガラクトシダーゼ２−ａ−ルフコシルトランスフェラーゼ）、ＬｅＹ（Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗体）、Ｌ１ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＭＡＧＥ（メラノーマ抗原）、ＭＡＧＥ−Ａ１（メラノーマ関連抗原１）、メソテリン、マウスＣＭＶ感染細胞、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ（Ｔ細胞によって認識されるメラノーマ抗原−Ｉ／メラノーマ抗原Ａ）、ＭＣ１  Ｒ（メラノコルチン１受容体）、ヨシン／ｍ（ミオシン変異型）、ＭＵＣ１（ムチン１）、ＭＵＭ−１、−２、−３（メラノーマ遍在性変異型１、−２、−３）、ＮＡ８８−Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ  ｃＤＮＡクローン）、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２、メンバーＤ）リガンド、ＮＹ−ＢＲ−１（ニューヨーク乳房分化抗原１）、ＮＹ−ＥＳＯ−１（ニューヨーク食道扁平上皮癌−１）、腫瘍胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、Ｐ１５（タンパク質１５）、ｐ１９０  ｍｉｎｏｒ  ｂｃｒ−ａｂｌ（１９０ＫＤ  ｂｃｒ−ａｂｌのタンパク質）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（メラノーマの優先的に発現される抗原）、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＡＧＥ（腎抗原）、ＲＵ１またはＲＵ２（腎ユビキタス１または２）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＳＡＲＴ−１またはＳＡＲＴ−３（腫瘍拒絶扁平上皮抗原１または３）、滑膜肉腫Ｘ−１、−２、−３、−４（ＳＳＸ−１、−２、−３、−４）、ＴＡＡ（腫瘍関連抗原）、ＴＡＧ−７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ−ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースホスフェートイソメラーゼ変異型）、ＴＲＰ−１（チロシナーゼ関連タンパク質１、またはｇｐ７５）、ＴＲＰ−２（チロシナーゼ関連タンパク質２）、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ−２／イントロン２）、ＶＥＧＦ−Ｒ２（血管内皮増殖因子受容体２）、またはＷＴ１（ウィルムス腫瘍遺伝子）が挙げられる。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、抗原は、感染した細胞と関連する。
【０１８２】
本明細書で使用される場合、「感染した細胞」という用語は、それらの品質、特性、または状態に不利に影響を与える何かのものが混入した細胞を指す。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、抗原は、ウイルスに感染した細胞と関連する。いくつかの実施形態では、抗原は細菌に感染した細胞と関連する。いくつかの実施形態では、抗原は、真菌に感染した細胞と関連する。いくつかの実施形態では、抗原は、寄生虫に感染した細胞と関連する。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、タンパク質またはその断片またはバリアントである。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、Ｂ細胞上の自己抗体を認識する。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは自己抗原である。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、自己抗原（自己抗原とも呼ばれ得る）またはその断片またはバリアントを含み、したがって自己抗原に対して向けられた抗体を認識できる。本明細書で使用される場合、「自己抗原（ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ）または「自己抗原（ｓｅｌｆ−ａｎｔｉｇｅｎ）という用語は、自己抗体の産生を刺激する内因性抗原を指す。いくつかの実施形態では、自己抗原は、自己免疫疾患に関与する。いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は、自己抗原に対して向けられた抗体を産生するＢ細胞に対して細胞傷害性である。
【０１８８】
自己抗原の「バリアント」という用語は、本明細書では、天然の自己抗原とほぼ同一でありかつ同じ生物学的活性を共有する自己抗原を指す。天然自己抗原とそのバリアントとの間の最小差は、例えば、アミノ酸の置換、欠失、および／または付加にあり得る。そのようなバリアントは、例えば、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換される、保存的アミノ酸置換を含み得る。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、およびヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸およびグルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、およびシステイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、およびトリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、およびイソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、およびヒスチジン）を含み、当技術分野で定義されている。いくつかの実施形態では、自己抗原のバリアントは、天然抗原の配列と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％、または７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を示す。
【０１８９】
自己抗原の例としては、これらに限定されないが、アクアポリン水チャネル（例えば、アクアポリン−４水チャネル（ＡＱＰ４））、Ｈｕ、Ｍａ２、コラプシン応答メディエータータンパク質５（ＣＲＭＰ５）、アンフィフィシン、電位依存性カリウムチャネル（ＶＧＫＣ）、Ｎ−メチル−ｄ−アスパラギン酸受容体（ＮＭＤＡＲ）、α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−４−イソキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡＲ）、甲状腺ペルオキシダーゼ、サイログロブリン、抗Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体（ＮＲ１サブユニット）、Ｒｈ血液型抗原、Ｉ抗原、デスモグレイン１または３（Ｄｓｇ１／３）、ＢＰ１８０、ＢＰ２３０、アセチルコリンニコチン性シナプス後受容体、甲状腺刺激ホルモン受容体、血小板インテグリン、ＧｐＩＩｂ：ＩＩＩａ、コラーゲン（例えば、コラーゲンアルファ−３（ＩＶ）鎖）、リウマチ因子、カルパスタチン、シトルリン化タンパク質、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド、アルファ−ベータ−クリスタリン、ＤＮＡ、ヒストン、リボソーム、ＲＮＰ、組織トランスグルタミナーゼ（ＴＧ２）、内因子、６５  ｋＤａ抗原、ホスファチジルセリン、リボソームリンタンパク質、抗好中球細胞質抗体、Ｓｃｌ−７０、Ｕ１−ＲＮＰ、ＡＮＡ、ＳＳＡ、抗ＳＳＢ、抗核抗体（ＡＮＡ）、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、Ｊｏ−１、抗ミトコンドリア抗体、ｇｐ２１０、ｐ６２、ｓｐ１００、抗リン脂質抗体、Ｕ１−７０  ｋｄ  ｓｎＲＮＰ、ＧＱ１ｂガングリオシド、ＧＭ１、ａｓｉａｌｏ  ＧＭ１ＧＤ１ｂ、抗平滑筋抗体（ＡＳＭＡ）、抗肝腎ミクロソーム−１抗体（ＡＬＫＭ−１）、抗肝サイトゾル抗体−１（ＡＬＣ−１）、ＩｇＡ抗筋内膜抗体、好中球顆粒タンパク質、連鎖球菌の細胞壁抗原、胃壁細胞の内因子、インスリン（ＩＡＡ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＡまたはＧＡＤ）、プロテインチロシンホスファターゼ（例えば、ＩＡ２またはＩＣＡ５１２）、ＰＬＡ２Ｒ１およびＴＨＳＤ７Ａ１が挙げられる。
【０１９０】
自己抗原の他の例は、本明細書に記載されており、これらに限定されないが、多発性硬化症関連抗原（例えば、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質（ＯＭＧＰ）、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質（ＭＯＢＰ）、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質（ＯＳＰ／クローディン−１１）、熱ショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質（ＯＳＰ）、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）、２’３’−環状ヌクレオチド３’−ホスホジエステラーゼ（ＣＮＰａｓｅ）、およびそれらの断片、バリアントおよび混合物）；関節関連抗原（例えば、シトルリン置換環状および線状フィラグリンペプチド、ＩＩ型コラーゲンペプチドヒト軟骨糖タンパク質３９（ＨＣｇｐ３９）ペプチド、ＨＳＰ、異種核リボ核タンパク質（ｈｎＲＮＰ）Ａ２ペプチド、ｈｎＲＮＰ  Ｂ１、ｈｎＲＮＰ  Ｄ、Ｒｏ６０／５２、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＨＳＰ７０およびＨＳＰ９０、ＢｉＰ、ケラチン、ビメンチン、フィブリノーゲン、Ｉ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型およびＶ型コラーゲンペプチド、アネキシンＶ、グルコース６リン酸イソメラーゼ（ＧＰＩ）、アセチルカルパスタチン、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ（ＰＤＨ）、アルドラーゼ、トポイソメラーゼＩ、ｓｎＲＮＰ、ＰＡＲＰ、Ｓｃｌ−７０、Ｓｃｌ−１００、陰イオン性カルジオリピンおよびホスファチジルセリンを含むリン脂質抗原、中性に帯電したホスファチジルエタノールアミンとホスファチジルコリン、マトリックスメタロプロテイナーゼ、フィブリリン、アグレカン、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲン、およびそれらの断片、バリアントおよび混合物）；眼関連抗原（例えば、ＩＩ型コラーゲン、網膜アレスチン、Ｓ−アレスチン、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ１）、ベータクリスタリンＢ１、網膜タンパク質、脈絡膜タンパク質、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲン、およびそれらの断片、バリアントおよび混合物）；およびヒトＨＳＰ抗原（例えば、ヒトＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、およびそれらの断片、バリアントおよび混合物）を含む。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、自己抗原は、デスモグレイン１またはデスモグレイン３、あるいは、例えば、デスモグレイン１または３の細胞外ドメインなどのそのバリアントまたは断片である。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、例えば、配列番号７を含むまたはそれからなる配列などの、デスモグレイン３の細胞外ドメイン１〜４を含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、第１の抗原に対する細胞外結合ドメインと、別の抗原に対する少なくとも１つの他の細胞外結合ドメインとを含む。そのようなＣＡＲは、少なくとも２つの異なる抗原に結合できる。ある実施形態では、少なくとも１つの他の細胞外結合ドメインは、特定の抗原またはその抗原結合断片に対して向けられた抗体である。ある実施形態では、少なくとも１つの他の細胞外結合ドメインは、例えば、ｓｃＦｖなどの、抗体断片を含むか、またはそれらの抗体断片からなる。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲに含まれる抗体は、多重特異性抗体分子であり、例えば、それは複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つの抗原に対して特異性を有し、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列および第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列を特徴とする。
ＩＩ．スペーサードメインおよびヒンジドメイン
【０１９４】
いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、スペーサードメインまたはヒンジドメインによって膜貫通ドメインに接続される。リンカーの例としては、これに限定されないが、本明細書に記載のＧＳリンカーが挙げられる。ある実施形態では、リンカーは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１１）を含むか、またはその配列からなり得る。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、例えば２〜１０アミノ酸の範囲の長さを有する短いオリゴまたはポリペプチドリンカーは、ヒンジドメインを形成し得る。いくつかの実施形態では、「リンカー」という用語は、柔軟なポリペプチドリンカーを指す。
【０１９６】
例えば、グリシン−セリンダブレットは、好適なヒンジドメイン（ＧＳリンカー）を提供し得る。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインはＧｌｙ／Ｓｅｒリンカーである。Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーの例としては、これらに限定されないが、ＧＳリンカー、Ｇ２Ｓリンカー、Ｇ３Ｓリンカー、およびＧ４Ｓリンカーが挙げられる。
【０１９７】
Ｇ２Ｓリンカーの例としては、これに限定されないが、ＧＧＳが挙げられる。
【０１９８】
Ｇ３Ｓリンカーは、（ＧＧＧＳ）ｎまたは（配列番号１１２）ｎとも呼ばれるアミノ酸配列（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎを含み、ここで、ｎは１以上の正の整数である（例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５、ｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９またはｎ＝１０など）。Ｇ３Ｓリンカーの例としては、これに限定されないが、ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１１３）が挙げられる。
【０１９９】
Ｇ４Ｓリンカーの例としては、これらに限定されないが、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１４）に対応する（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１５）に対応する（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１６）に対応する（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３リンカー、およびＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１７）に対応する（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４が挙げられる。
【０２００】
いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、最大３００アミノ酸、例えば、１０〜１００アミノ酸、２５〜５０アミノ酸、または２〜１０アミノ酸の長さを有し得る。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、本明細書に記載のとおり、例えば、２〜１０アミノ酸の範囲の長さを有する短いオリゴまたはポリペプチドリンカーである。本発明で使用できるヒンジドメインの例は、ＰＣＴ国際公開第２０１２／１３８４７５号に記載されており、これは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＡＧＳＳＳＳＧＧＳＴＴＧＧＳＴＴ（配列番号８）、アミノ酸配列ＧＴＴＡＡＳＧＳＳＧＧＳＳＳＧＡ（配列番号９）、アミノ酸配列ＳＳＡＴＡＴＡＧＴＧＳＳＴＧＳＴ（配列番号１０）、およびＴＳＧＳＴＧＴＡＡＳＳＴＳＴＳＴ（配列番号１１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ヌクレオチド配列ＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣ（配列番号１２）によってコードされる。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＫＩＲＲＤＳＳ（配列番号１３）に対応するＫＩＲ２ＤＳ２である。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジのアミノ酸配列（例えば、配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）または配列番号１４に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１５の核酸配列、または配列番号１５に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＣＤ８ヒンジである。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジのアミノ酸配列（例えば、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）、または配列番号１６に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１７の核酸配列、または配列番号１７に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＩｇＧ４ヒンジである。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＤヒンジのアミノ酸配列（例えば、配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）、または配列番号１８に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１９の核酸配列、または配列番号１９に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＩｇＤヒンジである。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ２８ヒンジのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）または配列番号２０に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号２１の核酸、または配列番号２１に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＣＤ２８ヒンジである。
ＩＩＩ．膜貫通ドメイン
【０２０９】
本発明のキメラ受容体で使用され得る膜貫通ドメインの例としては、これらに限定されないが、ＴＮＦＲ２、ＣＤ２８、ＣＤ８の膜貫通ドメイン、またはＴ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、もしくはゼータ鎖の膜貫通ドメイン、またはＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＰＤ１、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、および／またはＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインが挙げられる。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、それが由来する分子の膜貫通ドメイン全体を含み得るか、またはその機能的断片またはそのバリアントを含み得る。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＴＮＦＲ２の膜貫通ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン、およびＣＤ２８の膜貫通ドメインから選択される少なくとも１つの膜貫通ドメインを含む。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）、または配列番号２２に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号２２のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾を有するが、２０、１０、もしくは５以下の修飾を有するアミノ酸配列、または配列番号２２に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインは、配列番号２３のヌクレオチド配列または配列番号２３に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインは、配列番号２２の配列由来の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０のアミノ酸、配列番号２２に対して、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列、例えば、配列番号２２の配列由来の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０の連続アミノ酸を含む。ある実施形態では、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインは、ＣＶＩＭＴＱＶ（配列番号６２）、ＶＮＣＶＩＭＴＱＶ（配列番号６３）、またはＴＡＬＧＬＬＩＩＧＶＶＮＣＶＩＭＴＱＶ（配列番号６４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインは、ＶＮＣＶＩＭＴＱＶ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインは、配列番号２３由来の少なくとも６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０、６３、６６、６９、７２、７５、７８、８１、８４または８７のヌクレオチド配列、配列番号２３に対して、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列由来、例えば、配列番号２３の配列由来の少なくとも６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０、６３、６６、６９、７２、７５、７８、８１、８４または８７の連続ヌクレオチドによってコードされる。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）、または配列番号２４に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号２４のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾を有するが、２０、１０、もしくは５以下の修飾を有するアミノ酸配列、または配列番号２４に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号２５のヌクレオチド配列または配列番号２５に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号２４の配列由来の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４のアミノ酸、配列番号２４に対して、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列、例えば、配列番号２４の配列由来の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４の連続アミノ酸を含む。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号２５の配列由来の少なくとも６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０、６３、６６、６９または７２のヌクレオチド配列、配列番号２５と、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列由来、例えば、配列番号２５の配列由来の少なくとも６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０、６３、６６、６９または７２または８７の連続ヌクレオチドによってコードされる。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）、または配列番号２６に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾を有するが、２０、１０、もしくは５以下の修飾を有するアミノ酸配列、または配列番号２６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号２７の核酸配列、または配列番号２７に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＣＤ２８膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号２６の配列由来の少なくとも２、３、４、５、６、７、８，１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６または２７のアミノ酸、配列番号２６と、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列、例えば、配列番号２６の配列由来の少なくとも３、４、５、６、７、８，１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６または２７の連続アミノ酸を含む。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号２７の配列由来の少なくとも６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０、６３、６６、６９、７２、７５、７８または８１のヌクレオチド配列、配列番号２７と、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列由来、例えば、配列番号２７の配列由来の少なくとも６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０、６３、６６、６９、７２、７５、７８または８１の連続ヌクレオチドによってコードされる。
【０２２３】
本発明のいくつかの実施形態では、キメラ受容体は、例えば、ＴＮＦＲ２の膜貫通ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン、およびＣＤ２８の膜貫通ドメインから選択される、少なくとも２つの膜貫通ドメインの組み合わせを含み得る。膜貫通ドメインは、全体の膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントであり得るか、ランダムにまたは指定された順序で互いに連結され得る。ある実施形態では、少なくとも２つの膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントの組み合わせは、少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０のアミノ酸を含む。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれらからなる）またはその断片またはバリアントおよびＣＤ８膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。ある実施形態では、キメラ受容体は、配列番号５９および６２、配列番号６０および６３、または配列番号６１および６４のアミノ酸配列を含む融合膜貫通ドメインを含む。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれらからなる）またはその断片またはバリアントおよびＣＤ２８膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＣＤ８膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれらからなる）またはその断片またはバリアントおよびＣＤ２８膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２２７】
本発明のいくつかの実施形態では、キメラ受容体は、例えば、ＴＮＦＲ２の膜貫通ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン、およびＣＤ２８の膜貫通ドメインから選択される、少なくとも３つの膜貫通ドメインの組み合わせを含み得る。膜貫通ドメインは、膜貫通ドメイン全体またはその断片またはバリアントであり得る。ある実施形態では、少なくとも３つの膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントの組み合わせは、少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０のアミノ酸を含む。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２４）のアミノ酸配列またはその断片またはバリアントを含むか、またはそれらからなる）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２２９】
このため、いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインの核酸配列（例えば、配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）もしくはその断片もしくはバリアント、および／またはＣＤ８膜貫通ドメインの核酸配列（例えば、配列番号２５のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）もしくはその断片もしくはバリアント、ＣＤ２８膜貫通ドメインの核酸配列（例えば、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）もしくはその断片もしくはバリアントを含む。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）もしくはその断片もしくはバリアント、および／またはＣＤ８膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）もしくはその断片もしくはバリアント、ＣＤ２８膜貫通ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）もしくはその断片もしくはバリアントを含み、ここで、膜貫通ドメイン内に含まれる配列は、同じフレーム中で、かつ単一のポリペプチド鎖として発現される。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ランダムにまたは指定された順序で互いに連結され得る少なくとも２つの異なるドメイン（例えば、ＴＮＦＲ２ドメインまたはその断片またはバリアントおよび少なくとも１つの他の膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ８またはＣＤ２８膜貫通ドメイン）またはその断片またはバリアント）を含む。
【０２３２】
任意により、例えば、長さが２〜１０のアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸）の短いオリゴまたはポリペプチドリンカーは、別個の膜貫通ドメイン間の連結を形成し得る。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは組換え体であり得る。ある実施形態では、組換え膜貫通ドメインは、バリンまたはロイシンなどの主に疎水性アミノ酸を含む。
ＩＶ．細胞内ドメイン
【０２３４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内ドメインは、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメイン（またはそれに由来する配列）および任意によりＴ細胞共刺激分子の１つ以上の細胞内ドメイン（複数可）（またはそれに由来する配列（複数可））を含む。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、それが由来する分子の細胞内部分全体、または天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、またはその機能的断片もしくはバリアントを含み得る。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの一次シグナル伝達ドメイン（例えば、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメイン）またはその断片またはバリアントからなる。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、Ｔ細胞共刺激分子細胞内ドメイン）またはその断片またはバリアントからなる。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞共刺激分子の細胞内ドメイン（複数可）、またはその断片またはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞共刺激分子の細胞内ドメイン（複数可）、またはその断片またはバリアントからなる。
【０２３９】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの共刺激ドメインまたはその断片またはバリアント、および少なくとも１つの一次シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントを含む。
【０２４０】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つの共刺激ドメインまたはその断片またはバリアント、および１つの一次シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントからなる。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つの共刺激ドメインまたはその断片またはバリアント、および少なくとも１つの一次シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントを含む。ある実施形態では、１つ以上の共刺激ドメインは、Ｔ細胞共刺激分子の細胞内ドメインである。ある実施形態では、少なくとも１つの一次シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインである。
【０２４２】
本発明のいくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、コモンＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲｉｂ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１からなる群から選択されるタンパク質のシグナル伝達ドメイン、ならびにそれらに由来する配列を含む。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータの少なくとも１つの機能的シグナル伝達ドメイン、またはその断片もしくはバリアントを含むかまたはそれらからなるＴ細胞一次シグナル伝達ドメインである。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、配列番号２８、２９、３０または３１のＣＤ３ゼータアミノ酸配列、または配列番号２８、２９、３０または３１に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメインは、配列番号２８、２９、３０または３１のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾であるが、２０、１０、もしくは５以下の修飾を有するアミノ酸配列、または配列番号２８、２９、３０または３１に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
【０２４６】
したがって、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、配列番号３２もしくは配列番号３３のＣＤ３ゼータドメイン核酸配列、または配列番号３２もしくは配列番号３３に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、またはそれらからなる。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメインは、配列番号２８、２９、３０または３１の配列由来の少なくとも２、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０または１１２のアミノ酸、配列番号２８、２９、３０または３１と少なくとも約７０％の同一性を有する配列、例えば、配列番号２８、２９、３０または３１の由来の少なくとも２、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０または１１２の連続アミノ酸を含む。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメインは、配列番号３２または３３の配列由来の少なくとも６、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０、３００、３３０または３３６のヌクレオチド配列、配列番号３２または３３と、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列由来、例えば、配列番号３２または３３由来の少なくとも６、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０、３００、３３０または３３６の連続ヌクレオチドによってコードされる。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、刺激的な様式で作用するＴ細胞一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭＳ）として公知であるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において特に使用されるＩＴＡＭ含有Ｔ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、これらに限定されないが、ＣＤ３ゼータ、コモンＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２のもの（またはそれら由来のもの）が挙げられる。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭドメイン、例えば、天然ＩＴＡＭドメインと比較して改変された（例えば、増加または減少された）活性を有する突然変異ＩＴＡＭドメインを含む。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、最適化および／または短縮ＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれより多いＩＴＡＭモチーフを含み得る。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントなど）を、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインと組み合わせて含み、共刺激シグナル伝達ドメインは、全体の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントである。
【０２５２】
Ｔ細胞共刺激分子の細胞内ドメインの例としては、これらに限定されないが、ＴＮＦＲ２（ＣＤ１２０ｂ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２）、ＰＤ−１、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＡＲＨＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２ｒａ、ＩＬ６Ｒａ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＬ−１３ＲＡ１／ＲＡ２、ＩＬ−３３Ｒ（ＩＬ１ＲＬ１）、ＩＬ−１０ＲＡ／ＲＢ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５Ｒ（ＣＳＦ２ＲＢ）、ＩＬ−２１Ｒ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ９５、ＴＮＦＲ１（ＣＤ１２０ａ／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）、ＴＧＦｂＲ１／２／３、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、コモンガンマ鎖、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるタンパク質のシグナル伝達ドメインが挙げられる。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＴＮＦＲ２、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４およびＰＤ−１からなる群から選択されるＴ細胞共刺激分子の少なくとも１つの細胞内ドメインを含む。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインを含み、共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメイン全体またはその断片またはバリアントである。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）、または配列番号３４に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つ、２つ、または３つの修飾であるが２０、１０、または５以下の修飾を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのヌクレオチド配列（例えば、配列番号３５のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）、または配列番号３５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号３４の配列由来の少なくとも２、６、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０または１７４のアミノ酸、配列番号３４と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列、例えば、配列番号３４由来の少なくとも２、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０または１７４の連続アミノ酸を含む。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号３５の配列由来の少なくとも６、１８、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２６０、２７０、３００、３３０、３６０、３９０、４２０、４５０、４８０、５１０または５２２のヌクレオチド配列、配列番号３５と、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列由来、例えば、配列番号３５由来の少なくとも６、１８、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２６０、２７０、３００、３３０、３６０、３９０、４２０、４５０、４８０、５１０または５２２の連続ヌクレオチドによってコードされる。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ２細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号３４）のドメインＩおよびＩＩ、ドメインＩ〜ＩＩＩ、ドメインＩ〜ＩＶ、またはドメインＩ〜Ｖを含む。ある実施形態では、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ２細胞内共刺激ドメインのドメインＩおよびＩＩを含む。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号３４の残基１〜２０（Δ１５１）、１〜７０（Δ１０４）、１〜１１５（Δ５９）、または１〜１５６（Δ１８）を含む。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）、または配列番号３６に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つ、２つ、または３つの修飾であるが２０、１０、または５以下の修飾を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインヌクレオチド配列（例えば、配列番号３７のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）、または配列番号３７に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３６の配列由来の少なくとも２、３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、または４２のアミノ酸、配列番号３６と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列、例えば、配列番号３６由来の少なくとも２、３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、または４２の連続アミノ酸を含む。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３７の配列由来の少なくとも６、１８、２７、３６、４５、５４、６３、７２、８１、９６、９９、１０８、１１７または１２６のヌクレオチド配列、配列番号３７と、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列由来、例えば、配列番号３７由来の少なくとも６、１８、２７、３６、４５、５４、６３、７２、８１、９６、９９、１０８、１１７または１２６の連続ヌクレオチドによってコードされる。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）、または配列番号３８に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つ、２つ、または３つの修飾であるが２０、１０、または５以下の修飾を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメインヌクレオチド配列（例えば、配列番号３９のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）、または配列番号３９に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３８の配列由来の少なくとも２、３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５または４８のアミノ酸、配列番号３８と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列、例えば、配列番号３８由来の少なくとも２、３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５または４８の連続アミノ酸を含む。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３９の配列由来の少なくとも６、１８、２７、３６、４５、５４、６３、７２、８１、９６、９９、１０８、１１７、１２６、１３５または１４４のヌクレオチド配列、配列番号３９と、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列由来、例えば、配列番号３９由来の少なくとも６、１８、２７、３６、４５、５４、６３、７２、８１、９６、９９、１０８、１１７、１２６、１３５または１４４の連続ヌクレオチドによってコードされる。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）、または配列番号４０に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つ、２つ、または３つの修飾であるが２０、１０、または５以下の修飾を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインヌクレオチド配列（例えば、配列番号４１を含むか、またはそれからなる）、または配列番号４１に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４０の配列由来の少なくとも２、３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、または４１のアミノ酸、配列番号４０と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列、例えば、配列番号４０由来の少なくとも２、３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９または４１の連続アミノ酸を含む。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４１の配列由来の少なくとも６、１８、２７、３６、４５、５４、６３、７２、８１、９６、９９、１０８、１１７または１２３のヌクレオチド配列、配列番号４１と、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列由来、例えば、配列番号４１由来の少なくとも６、１８、２７、３６、４５、５４、６３、７２、８１、９６、９９、１０８、１１７または１２３の連続ヌクレオチドによってコードされる。
【０２７３】
本発明のいくつかの実施形態では、キメラ受容体は、Ｔ細胞共刺激分子の少なくとも２つの細胞内ドメインの組み合わせを含む。ある実施形態では、少なくとも２つの細胞内ドメインは、ＴＮＦＲ２の細胞内ドメイン、４−１ＢＢの細胞内ドメイン、ＣＤ２７の細胞内ドメイン、およびＣＤ２８の細胞内ドメインから選択され得る。特定の実施形態では、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン全体またはその断片またはバリアントである。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれらからなる）またはその断片またはバリアントおよび４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれらからなる）またはその断片またはバリアントおよびＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれらからなる）またはその断片またはバリアントおよびＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれらからなる）またはその断片またはバリアントおよびＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれらからなる）またはその断片またはバリアントおよびＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれらからなる）またはその断片またはバリアントおよびＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２８０】
本発明のいくつかの実施形態では、キメラ受容体は、Ｔ細胞共刺激分子の少なくとも３つの細胞内ドメインの組み合わせを含み、例えば、ＴＮＦＲ２の細胞内ドメイン、４−１ＢＢの細胞内ドメイン、ＣＤ２７の細胞内ドメイン、およびＣＤ２８の細胞内ドメインから選択される。
【０２８１】
本発明のいくつかの実施形態では、キメラ受容体は、少なくとも３つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含み得、ドメインは、共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン全体またはその断片またはバリアントである。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３６のアミノ酸配列またはその断片またはバリアントを含むか、またはそれらからなり）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３６のアミノ酸配列またはその断片またはバリアントを含むか、またはそれらからなる）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３８のアミノ酸配列またはその断片またはバリアントを含むか、またはそれらからなる）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列、（例えば、配列番号３８のアミノ酸配列またはその断片またはバリアントを含むか、またはそれらからなる）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２８６】
本発明のいくつかの実施形態では、キメラ受容体は、Ｔ細胞共刺激分子の少なくとも４つの細胞内ドメインの組み合わせを含み、例えば、ＴＮＦＲ２の細胞内ドメイン、４−１ＢＢの細胞内ドメイン、ＣＤ２７の細胞内ドメイン、およびＣＤ２８の細胞内ドメインから選択される。
【０２８７】
本発明のいくつかの実施形態では、キメラ受容体は、Ｔ細胞共刺激分子の少なくとも４つの細胞内ドメインの組み合わせを含み得、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン全体またはその断片またはバリアントである。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３６）のアミノ酸配列またはその断片またはバリアントを含むか、またはそれらからなる）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）またはその断片またはバリアントを含む。
【０２８９】
したがって、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３５のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）もしくはその断片もしくはバリアント、および／または４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号３７）のアミノ酸配列もしくはその断片もしくはバリアントを含むか、またはそれらからなる）もしくはその断片もしくはバリアント、および／またはＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの核酸配列（例えば、配列番号３９のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）もしくはその断片もしくはバリアント、および／またはＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの核酸配列（例えば、配列番号４１のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）もしくはその断片もしくはバリアントを含む。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、
−配列番号３４のアミノ酸配列を有するＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、もしくはその断片もしくはバリアント、および／または配列番号３６のアミノ酸配列を有する４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、もしくはその断片もしくはバリアント、および／または配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、および／または配列番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン；および／または
−配列番号２８、２９、３０または３１のアミノ酸配列を有するＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、もしくはそれらの断片もしくはバリアント
を含み、
細胞内ドメインに含まれる配列は、同じフレームで単一のポリペプチド鎖として発現される。
【０２９１】
したがって、いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、
−配列番号３５のＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン核酸配列、もしくはその断片もしくはバリアント、および／または配列番号３７の４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン核酸配列、もしくはその断片もしくはバリアント、および／または配列番号３９の核酸配列を有するＣＤ２７共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン核酸配列、および／または配列番号４１のＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン核酸配列；および／または
−配列番号３２または配列番号３３のＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント
を含む。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ランダムにまたは指定された順序で互いに連結され得る少なくとも２つの異なるドメイン（例えば、一次シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、ならびにＴ細胞共刺激分子またはその断片またはバリアントの少なくとも１つの細胞内ドメイン）を含み得る。
【０２９３】
任意により、例えば、長さが２〜１０のアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸）の短いオリゴまたはポリペプチドリンカーは、別個のシグナル伝達ドメイン間の連結を形成し得る。いくつかの実施形態では、グリシン−セリンダブレット（ＧＳ）が好適なリンカーとして使用される。いくつかの実施形態では、単一のアミノ酸、例えば、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）が、好適なリンカーとして使用される。リンカーの他の例は、本明細書に記載される。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上（例えば、２、３、４、５、またはそれ以上）の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、２つ以上（例えば、２、３、４、５、またはそれ以上）の共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかまたはすべては、リンカー分子、例えば、本明細書に記載のリンカー分子によって分離される。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）およびＴＮＦＲ２の共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号３４）を含む。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）および４−１ＢＢの共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号３６）を含む。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）およびＣＤ２７の共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号３８）を含む。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）およびＣＤ２８の共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号４０）を含む。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、本明細書に記載の細胞外結合ドメイン、本明細書に記載の膜貫通ドメイン、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン、および任意により本明細書に記載のスペーサーまたはヒンジドメインの任意の組み合わせを含む。
【０３００】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、特定の細胞外結合ドメインからＮ末端に位置するリーダー配列をさらに含む。非限定的な例は、配列番号４２の配列を含み得るか、またはそれからなり得るＣＤ８のリーダー配列である。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、例えば、品質管理、濃縮、ｉｎ  ｖｉｖｏでの追跡などのためのタグなどの、タグをさらに含む。タグは、Ｎ末端、Ｃ末端、および／または内部に局在化されてよい。本発明のＣＡＲで使用され得るタグの例は、当業者に周知である。例えば、これらに限定されないが、本発明で使用されるタグは、ストレプトアビジンタグ（例えば、配列番号４７）、血球凝集素タグ、ポリアルギニンタグ、ポリヒスチジンタグ、Ｍｙｃタグ、ｓｔｒｅｐタグ、Ｓ−タグ、ＨＡＴタグ、３ｘフラグタグ、カルモジュリン結合ペプチドタグ、ＳＢＰタグ、キチン結合ドメインタグ、ＧＳＴタグ、マルトース結合タンパク質タグ、蛍光タンパク質タグ、Ｔ７タグ、Ｖ５タグおよびＸｐｒｅｓｓタグからなる群から選択されるタグであり得る。タグの他の例としては、これらに限定されないが、ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ（配列番号４３）またはＳＡＷＳＨＰＱＦＥＫ（配列番号４４）が挙げられる。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、Ｐ２Ａ（配列番号４５）および／またはＧＦＰ（配列番号４６）配列をさらに含む。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−任意により、細胞外ヒンジドメインと、
−少なくとも１つのＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−少なくとも１つの細胞内一次シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、
を含む。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−少なくとも１つのＴＮＦＲ２膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアントと、
−少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含む。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＣＤ８（例えば、配列番号１４）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２８（例えば、配列番号２０）またはその断片またはバリアント、ＩｇＧ４（例えば、配列番号１６）またはその断片またはバリアント、およびＩｇＤ（例えば、配列番号１８）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つのヒンジドメインと、
−ＴＮＦＲ２の少なくとも１つの膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアントと、
−少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含む。特定の実施形態では、少なくとも１つのヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジドメインである（例えば、配列番号１４）。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−任意により、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメインと、
−少なくとも１つの膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、
を含み、膜貫通ドメインおよび共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通またはＴＮＦＲ２共刺激細胞内ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。
【０３０６】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＴＮＦＲ２膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの膜貫通ドメインと、
−ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３４）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３６）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３８）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号４０）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、
を含み、
膜貫通ドメインおよび共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＣＤ８（例えば、配列番号１４）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２８（例えば、配列番号２０）またはその断片またはバリアント、ＩｇＧ４（例えば、配列番号１６）またはその断片またはバリアント、およびＩｇＤ（例えば、配列番号１８）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つのヒンジドメインと、
−ＴＮＦＲ２膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの膜貫通ドメインと、
−ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３４）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３６）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３８）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号４０）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、
を含み、
膜貫通ドメインおよび共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。特定の実施形態では、少なくとも１つのヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジドメインである（例えば、配列番号１４）。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−任意により、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメインと、
−少なくとも１つの膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−少なくとも１つの細胞内共刺激シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−少なくとも１つのＴ細胞一次シグナル伝達細胞内ドメインまたはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＴＮＦＲ２膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの膜貫通ドメインと、
−ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３４）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３６）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３８）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号４０）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインと、
−少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＣＤ８（例えば、配列番号１４）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２８（例えば、配列番号２０）またはその断片またはバリアント、ＩｇＧ４（例えば、配列番号１６）またはその断片またはバリアント、およびＩｇＤ（例えば、配列番号１８）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つのヒンジドメインと、
−ＴＮＦＲ２（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの膜貫通ドメインと、
−ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３４）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３６）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３８）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号４０）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインと、
−少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。特定の実施形態では、少なくとも１つのヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジドメインである（例えば、配列番号１４）。
【０３１１】
いくつかの実施形態によれば、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−任意により、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメインと、
−少なくとも１つの膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−少なくとも２つの細胞内共刺激シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−任意により少なくとも１つのＴ細胞一次シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、
を含み、膜貫通ドメインおよび／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通またはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＴＮＦＲ２（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの膜貫通ドメインと、
−ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３４）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３６）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３８）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号４０）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも２つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインと、
−任意により、少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＣＤ８（例えば、配列番号１４）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２８（例えば、配列番号２０）またはその断片またはバリアント、ＩｇＧ４（例えば、配列番号１６）またはその断片またはバリアント、およびＩｇＤ（例えば、配列番号１８）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つのヒンジドメインと、
−ＴＮＦＲ２（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの膜貫通ドメインと、
−ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３４）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３６）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３８）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号４０）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも２つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインと、
−任意により、少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。特定の実施形態では、少なくとも１つのヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジドメインである（例えば、配列番号１４）。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−任意により、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメインと、
−少なくとも１つの膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−少なくとも３つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−任意により、少なくとも１つのＴ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。
【０３１５】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＴＮＦＲ２（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの膜貫通ドメインと、
−ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３４）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３６）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３８）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号４０）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも３つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインと、
−任意により、少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたは共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。
【０３１６】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＣＤ８（例えば、配列番号１４）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２８（例えば、配列番号２０）またはその断片またはバリアント、ＩｇＧ４（例えば、配列番号１６）またはその断片またはバリアント、およびＩｇＤ（例えば、配列番号１８）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つのヒンジドメインと、
−ＴＮＦＲ２（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの膜貫通ドメインと、
−ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３４）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３６）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３８）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号４０）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも３つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインと、
−任意により、少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたは共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。特定の実施形態では、少なくとも１つのヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジドメインである（例えば、配列番号１４）。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−任意により、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメインと、
−少なくとも１つの膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−少なくとも４つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−任意により、少なくとも１つのＴ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＴＮＦＲ２（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの膜貫通ドメインと、
−ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３４）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３６）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３８）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号４０）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも４つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインと、
−任意により、少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたは共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＣＤ８（例えば、配列番号１４）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２８（例えば、配列番号２０）またはその断片またはバリアント、ＩｇＧ４（配列番号１６）またはその断片またはバリアント、およびＩｇＤ（例えば、配列番号１８）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つのヒンジドメインと、
−ＴＮＦＲ２膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つの膜貫通ドメインと、
−ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３４）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３６）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３８）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号４０）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも４つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインと、
−任意により、少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激シグナル伝達細胞内ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。特定の実施形態では、少なくとも１つのヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジドメインである（例えば、配列番号１４）。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−任意により、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメインと、
−少なくとも１、２、または３の膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−任意により、少なくとも１つのＴ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントある。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＴＮＦＲ２膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つ、２つ、３つの膜貫通ドメインと、
−任意により、少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントある。
【０３２２】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＣＤ８（例えば、配列番号１４）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２８（例えば、配列番号２０）またはその断片またはバリアント、ＩｇＧ４（例えば、配列番号１６）またはその断片またはバリアント、およびＩｇＤ（例えば、配列番号１８）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つのヒンジドメインと、
−ＴＮＦＲ２（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つ、２つまたは３つの膜貫通ドメインと、
−任意により、少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントある。特定の実施形態では、少なくとも１つのヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジドメインである（例えば、配列番号１４）。
【０３２３】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−任意により、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメインと、
−少なくとも１つ、２つ、または３つの膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つの細胞内共刺激シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントと、
−任意により、少なくとも１つのＴ細胞一次シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＴＮＦＲ２膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つ、２つ、３つの膜貫通ドメインと、
−ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３４）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３６）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３８）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号４０）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインと、
−任意により、少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。
【０３２５】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−ＣＤ８（例えば、配列番号１４）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２８（例えば、配列番号２０）またはその断片またはバリアント、ＩｇＧ４（例えば、配列番号１６）またはその断片またはバリアント、およびＩｇＤ（例えば、配列番号１８）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つのヒンジドメインと、
−ＴＮＦＲ２膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２２）またはその断片またはバリアント、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２４）またはその断片またはバリアント、またはＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２６）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つ、２つ、３つの膜貫通ドメインと、
−ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３４）またはその断片またはバリアント、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３６）またはその断片またはバリアント、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３８）またはその断片またはバリアント、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号４０）またはその断片またはバリアントからなる群から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインと、
−任意により、少なくとも１つのＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号２８、２９、３０または３１）またはその断片またはバリアント、
を含み、
膜貫通ドメインおよび／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそれらの断片またはバリアントである。特定の実施形態では、少なくとも１つのヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジドメインである（例えば、配列番号１４）。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−任意により、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメインと、
−少なくとも１つの膜貫通ドメインと、
−少なくとも１つの細胞内ドメインであって、少なくとも１つの一次細胞内シグナル伝達ドメイン、および任意により少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む、少なくとも１つの細胞内ドメイン、
を含み、
少なくとも１つの膜貫通ドメインは、ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアント、あるいは任意の膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントまたはそれらの組み合わせであり、および／または少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアント、あるいは任意の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのまたはその断片またはバリアントまたはそれらの組み合わせであり、膜貫通ドメインおよび共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアント、あるいはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントである。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＴＮＦＲ２の膜貫通ドメイン、ヒトＴＮＦＲ２の共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、およびヒトＣＤ３ζ鎖の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列を含み、配列は、配列番号４８のアミノ酸配列または配列番号４８に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列に対応する。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号４８に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号４８のアミノ酸配列に連結される抗ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６または１０７の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号４８に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号４８のアミノ酸配列に連結される抗ＩＬ−２３Ｒ  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号６５、６６または６７の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３３０】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号４８に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号４８のアミノ酸配列に連結される抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１または２の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３３１】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号４８に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列またはアミノ酸配列の配列番号４８のアミノ酸配列に連結される抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号４、５または６の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＴＮＦＲ２の膜貫通ドメイン、ヒトＴＮＦＲ２の共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、およびヒトＣＤ３ζ鎖の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列を含み、配列は、配列番号４９、５０、５１または１１０のアミノ酸配列または配列番号４９、５０、５１または１１０に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列に対応する。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号４９、５０、５１または１１０に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号４９、５０、５１または１１０のアミノ酸配列に連結される抗ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６または１０７の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号４９、５０、５１または１１０に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号４９、５０、５１または１１０のアミノ酸配列に連結される抗ＩＬ−２３Ｒ  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号６５、６６または６７の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号４９、５０、５１、または１１０に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号４９、５０、５１、または１１０のアミノ酸配列に連結される抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１または２の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号４９、５０、５１、または１１０に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号４９、５０、５１、または１１０のアミノ酸配列に連結される抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号４、５または６の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＴＮＦＲ２の膜貫通ドメイン、およびヒトＣＤ３ζ鎖の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列を含み、配列は、配列番号５２のアミノ酸配列または配列番号５２に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列に対応する。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５２に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５２のアミノ酸配列に連結される抗ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６または１０７の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５２に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５２のアミノ酸配列に連結される抗ＩＬ−２３Ｒ  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号６５、６６または６７の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３４０】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５２に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５２のアミノ酸配列に連結される抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１または２の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５２に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５２のアミノ酸配列に連結される抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号４、５または６の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ３ζ鎖の一次細胞内シグナル伝達ドメイン、およびヒトＴＮＦＲ２の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列を含み、配列は、配列番号５３のアミノ酸配列または配列番号５３に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列に対応する。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５３に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５３のアミノ酸配列に連結される抗ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６または１０７の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５３に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５３のアミノ酸配列に連結される抗ＩＬ−２３Ｒ  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号６５、６６または６７の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５３に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５３のアミノ酸配列に連結される抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１または２の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５３に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５３のアミノ酸配列に連結される抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号４、５または６の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＴＮＦＲ２の共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、およびヒトＣＤ３ζ鎖の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列を含み、配列は、配列番号５４のアミノ酸配列または配列番号５４に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列に対応する。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５４に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５４のアミノ酸配列に連結される抗ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６または１０７の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３４９】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５４に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５４のアミノ酸配列に連結される抗ＩＬ−２３Ｒ  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号６５、６６または６７の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５４に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５４のアミノ酸配列に連結される抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１または２の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５４に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５４のアミノ酸配列に連結される抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号４、５または６の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８膜貫通ドメインおよびヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインの組み合わせ、ヒトＴＮＦＲ２の共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、およびヒトＣＤ３ζ鎖の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列を含み、配列は、配列番号５５、５６または５７のアミノ酸配列または配列番号５５、５６または５７に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列に対応する。
【０３５３】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５５、５６または５７に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５５、５６または５７のアミノ酸配列に連結される抗ＨＬＡ−Ａ２  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６または１０７の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５５、５６または５７に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５５、５６または５７のアミノ酸配列に連結される抗ＩＬ−２３Ｒ  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号６５、６６または６７の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３５５】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５５、５６または５７に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５５、５６または５７のアミノ酸配列に連結される抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１または２の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３５６】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５５、５６または５７に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列の配列番号５５、５６または５７のアミノ酸配列に連結される抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（例えば、配列番号４、５または６の結合ドメイン配列を含むかまたはそれらからなる）を含む。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ（例えば、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントを含む本明細書に記載の任意のＣＡＲおよび／またはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントを含む細胞内ドメイン）は、以下の特性の少なくとも１つを有する：
ａ）膜貫通ドメインがＣＤ８膜貫通ドメインでありかつ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインであることを除いて同じ配列を有するＣＡＲよりも細胞表面において少ない発現を呈する、
ｂ）膜貫通ドメインがＣＤ８膜貫通ドメインでありかつ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインであることを除いて同じ配列を有するＣＡＲと同等レベルのＣＡＲ特異的活性化を呈する、
ｃ）培養の少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日またはそれより多い日の後でＦｏｘＰ３、Ｈｅｌｉｏｓ、およびＣＤ６２Ｌのいずれか１つ以上（例えば、すべて）などの調節性Ｔ細胞マーカーの細胞表面レベルを低下させない、および
ｄ）培養の少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日またはそれより多い日の後でＣＤ１２７などの非調節性Ｔ細胞マーカーの細胞表面レベルを増加させない。
免疫細胞
【０３５８】
本発明はさらに、本明細書に記載のＣＡＲを発現する免疫細胞、およびそのような免疫細胞の集団に関する。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲをコードする核酸は、免疫細胞に導入され、それにより、細胞表面上にＣＡＲを発現する操作された細胞を生成する。
【０３６０】
本明細書で使用される場合、「免疫細胞」という用語は一般に、骨髄で産生される造血幹細胞（ＨＳＣ）に由来する白血球（ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）（白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ））を含む。免疫細胞の例としては、これらに限定されないが、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）および骨髄系細胞（好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、樹状細胞）が挙げられる。
【０３６１】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、および／またはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントを含むキメラ受容体を発現するように遺伝的に修飾される。
【０３６２】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は、哺乳動物の免疫細胞、例えば、ヒト免疫細胞、家畜（例えば、ウシ、ブタ、またはウマ）からの免疫細胞、またはペット（例えば、ネコまたはイヌ）からの免疫細胞である。
【０３６３】
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、リンパ球、骨髄系細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。ある実施形態では、免疫細胞は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるリンパ球である。特定の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞であり、それはある実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、ダブルネガティブ（ＤＮ）Ｔ細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。ある実施形態では、免疫細胞は、例えば、Ｔヘルパー細胞、調節性Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞、およびそれらの任意の組み合わせなどのＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、例えば、細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋調節性Ｔ細胞などのＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、γδＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、定義されたガンマデルタＴＣＲ（ＴＥＧγδ）細胞を発現するように操作されたＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＤＮ  Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＮＫ細胞である。
【０３６４】
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、例えば、好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、骨髄系細胞である。ある実施形態では、免疫細胞はマクロファージである。ある実施形態では、免疫細胞は樹状細胞である。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、例えば、細胞療法での使用に好適な任意の調節性免疫細胞などの、調節性免疫細胞である。ある実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性Ｔ細胞、ＣＤ４＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８＋調節性Ｔ細胞、調節性γδＴ細胞、調節性ＤＮ  Ｔ細胞、調節性Ｂ細胞、調節性ＮＫ細胞、調節性マクロファージ、調節性樹状細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０３６６】
いくつかの実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、特に胸腺由来Ｔｒｅｇまたは適応性または誘導性Ｔｒｅｇである。ある実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ４＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。ある実施形態では、Ｔｒｅｇは、胸腺由来Ｔｒｅｇ、または適応型または誘導性Ｔｒｅｇである。ある実施形態では、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞またはＣＤ４＋ＦｏｘＰ３−調節性Ｔ細胞（Ｔｒ１細胞）である。特定の実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞である。
【０３６７】
いくつかの実施形態では、免疫細胞はＣＤ８＋調節性Ｔ細胞である。ＣＤ８＋調節性Ｔ細胞の例としては、これらに限定されないが、ＣＤ８＋ＣＤ２８−調節性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ１０３＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ１２２＋調節性Ｔ細胞、および任意の組み合わせが挙げられる。
【０３６８】
いくつかの実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性γδＴ細胞である。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性ＤＮ  Ｔ細胞である。
【０３７０】
いくつかの実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性Ｂ細胞である。調節性Ｂ細胞の例としては、これに限定されないが、ＣＤ１９＋ＣＤ２４ｈｉＣＤ３８ｈｉＢ細胞が挙げられる。
【０３７１】
いくつかの実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性ＮＫ細胞である。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性マクロファージである。
【０３７３】
いくつかの実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性樹状細胞である。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、例えば、細胞療法での使用に好適な任意のエフェクター免疫細胞などの、エフェクター免疫細胞である。ある実施形態では、エフェクター免疫細胞は、エフェクターＴ細胞、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞、エフェクターγδＴ細胞、エフェクターＤＮ  Ｔ細胞、エフェクターＢ細胞、エフェクターＮＫ細胞、エフェクターマクロファージ、エフェクター樹状細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、エフェクターＴ細胞である。ある実施形態では、エフェクター免疫細胞は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の例としては、これらに限定されないが、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、ＣＤ４＋Ｔ濾胞ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつか実施形態では、エフェクター免疫細胞は、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞である。ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の例としては、これらに限定されないが、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７−ＣＤ６２Ｌ−エフェクターＴ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＣＲ７−ＣＤ６２Ｌ−エフェクターＴ細胞、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０３７６】
一実施形態では、免疫細胞は、エフェクターγδＴ細胞である。
【０３７７】
一実施形態では、免疫細胞は、エフェクターＤＮ  Ｔ細胞である。
【０３７８】
一実施形態では、免疫細胞は、エフェクターＢ細胞である。エフェクターＢ細胞の例としては、これらに限定されないが、ＣＤ１９＋ＣＤ２５ｈｉＢ細胞、活性化Ｂ細胞および形質細胞、ならびにそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、エフェクターＮＫ細胞である。
【０３８０】
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、エフェクターマクロファージである。
【０３８１】
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、エフェクター樹状細胞である。
【０３８２】
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、γδＴ細胞、ダブルネガティブ（ＤＮ）細胞、調節性免疫細胞、調節性Ｔ細胞、エフェクター免疫細胞、エフェクターＴ細胞、Ｂ細胞、および骨髄系細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０３８３】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲをコードする核酸は、多能性幹細胞（ＰＳＣ）中に導入され、次いで、これは、Ｔ細胞に分化され得る。ＰＳＣは、体内で任意の細胞型を生じさせることができる細胞であり、例えば、胚性幹細胞（ＥＳＣ）、体細胞核移植により誘導されるＰＳＣ、および誘導されたＰＳＣ（ｉＰＳＣ）が挙げられる。本明細書で使用される場合、「胚性幹細胞」という用語は、初期胚から得られる多能性幹細胞を指し、いくつかの実施形態では、この用語は、以前に確立された胚性幹細胞株から得られるＥＳＣを指し、ヒト胚の最近の破壊によって得られる幹細胞は除く。
【０３８４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲをコードする核酸は、造血幹細胞（骨髄または臍帯血から単離されたものなどのＨＳＣ）、造血前駆細胞（例えば、リンパ系前駆細胞）、または間葉系幹細胞（ＭＳＣ）などの複能性細胞中に導入される。複能性細胞は、複数の細胞型に発達し得るが、多能性細胞よりも細胞型の可能性が制限される。複能性細胞は、確立された細胞株に由来し得るか、またはヒト骨髄もしくは臍帯から単離され得る。一例として、ＨＳＣは、Ｇ−ＣＳＦ誘導動員、プレリキサフォル誘導動員、またはそれらの組み合わせの後に、患者または健康なドナーから単離され得る。血液または骨髄からＨＳＣを単離するために、血液中または骨髄中の細胞は、ＣＤ４およびＣＤ８（Ｔ細胞）、ＣＤ４５（Ｂ細胞）、ＧＲ−１（顆粒球）、およびＩａｄ（分化抗原提示細胞）に対する抗体など、不要な細胞に結合する抗体によって選択（ｐａｎ）され得る。その後、ＨＳＣはＣＤ３４に対する抗体によってポジティブに選択され得る。
【０３８５】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲをコードする核酸は、ゲノム編集後にＴｒｅｇ細胞に分化する非Ｔｒｅｇリンパ系細胞中に導入される。編集された非Ｔｒｅｇ細胞は、上記のように患者に生着する前に、Ｔｒｅｇ細胞に分化され得る。あるいは、編集された非Ｔｒｅｇ細胞は、患者に生着後、Ｔｒｅｇ細胞に分化するように誘導され得る。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、分子の発現レベルは、フローサイトメトリー、免疫蛍光法、または画像分析、例えば、ハイコンテント分析によって決定される。ある実施形態では、分子の発現レベルはフローサイトメトリーによって決定される。特定の実施形態では、フローサイトメトリー分析を実施する前に、細胞を固定し透過処理し、これにより、細胞内タンパク質の検出を可能にする。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、細胞集団における分子の発現レベルを決定することは、分子を発現する細胞集団の細胞（すなわち、分子の細胞「＋」）の割合を決定することを含む。ある実施形態では、分子を発現する細胞の割合は、ＦＡＣＳによって測定される。
【０３８８】
「発現する」、「陽性」、または「＋」および「発現しない」、「陰性」、または「−」という用語は、当技術分野で周知であり、目的の細胞マーカーの発現レベルを指す。その場合、「＋」に対応する細胞マーカーの発現レベルは高または中（「＋／−」とも呼ばれる）であり、「−」に対応する細胞マーカーの発現レベルはヌルである。
【０３８９】
「低」または「ｌｏ」または「ｌｏ／−」という用語は当技術分野で周知であり、目的の細胞マーカーの発現レベルを指す。この場合、全体として分析されている細胞の集団におけるその細胞マーカーの発現レベルと比較して、細胞マーカーの発現レベルが低い。より具体的には、「ｌｏ」という用語は、他の別個の細胞集団よりも低いレベルで細胞マーカーを発現する別個の細胞集団を指す。
【０３９０】
「高」または「ｈｉ」または「明」という用語は当技術分野で周知であり、目的の細胞マーカーの発現レベルを指す。この場合、全体として分析されている細胞の集団におけるその細胞マーカーの発現レベルと比較して、細胞マーカーの発現レベルが高い。
【０３９１】
一般に、染色強度の上位２、３、４、または５％にある細胞は「ｈｉ」と呼ばれ、集団の上半分にある細胞は「＋」に分類される。蛍光強度が５０％を下回る細胞は「ｌｏ」細胞と呼ばれ、５％を下回る細胞は「−」細胞と呼ばれる。
【０３９２】
目的の細胞マーカーの発現レベルは、このマーカーに特異的な蛍光標識抗体で染色された細胞集団からの細胞の中央蛍光強度または平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、無関係な特異性を有するが同じアイソタイプ、同じ蛍光プローブを有し、同じ種に由来する蛍光標識抗体で染色された同じ細胞集団（アイソタイプ対照と呼ばれる）の細胞の蛍光強度（ＦＩ）と比較することによって決定される。このマーカーに特異的な蛍光標識抗体で染色され、アイソタイプ対照で染色された細胞よりも同等のまたは低いＭＦＩを示す集団の細胞は、このマーカーを発現していないと見なされ、（−）または陰性と指定される。このマーカーに特異的な蛍光標識抗体で染色され、アイソタイプ対照で染色された細胞よりも高いＭＦＩ値を示す集団の細胞は、このマーカーを発現していると見なされ、（＋）または陽性と指定される。
【０３９３】
本発明はまた、本明細書で定義される免疫細胞の単離されたかつ／または実質的に精製された集団に関する。
【０３９４】
したがって、本発明は、免疫細胞の単離されたかつ／または実質的に精製された集団を提供し、ここで集団の細胞は、本明細書に記載のＣＡＲ、例えば、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、および／またはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントを含むＣＡＲを含む。
【０３９５】
本明細書で使用される場合、「単離された集団」は、その自然環境（末梢血など）から除去され、かつ単離、精製、または分離された細胞集団を指し、それが自然に存在するが、それに基づき細胞が単離される細胞表面マーカーを含まない他の細胞から、少なくとも約７５％遊離、８０％遊離、８５％遊離、およびある実施形態では約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％遊離している。
【０３９６】
本発明はさらに、本明細書で定義される濃縮された免疫細胞集団に関する。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、本発明の単離され、精製され、かつ／または濃縮された免疫細胞集団は、凍結され、解凍されている。
【０３９８】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞集団のＴ細胞は、本明細書に記載のキメラ受容体（ＣＡＲ）を発現し、したがって、ＣＡＲ単一特異性として定義され得る（すなわち、すべてのＴｒｅｇ細胞は、それらが発現するＣＡＲと同じ抗原を認識する）。いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ単一特異性である（すなわち、すべてのＴｒｅｇ細胞は、それらのＴＣＲにより同じ抗原を認識する）。いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ多特異性である（すなわち、Ｔｒｅｇ細胞は、それらのＴＣＲにより異なる抗原を認識し得る）。
【０３９９】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団は、ＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲは抗原、抗原の断片、抗原のバリアント、またはそれらの混合物を認識する。
【０４００】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団は、ＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲは一般的なヒトの食事からの食物抗原に特異的である。
【０４０１】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲは、例えば、多発性硬化症関連抗原、関節関連抗原、眼関連抗原、ヒトＨＳＰ抗原、皮膚関連抗原または移植片拒絶反応またはＧＶＨＤに関与する抗原などの自己抗原に特異的である。そのような自己抗原の例は、本明細書に記載される。
【０４０２】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲは吸入アレルゲン、摂取アレルゲン、または接触アレルゲンに特異的である。
【０４０３】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲは、卵白アルブミン、ＭＯＧ、ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲン、およびそれらの断片、バリアント、および混合物からなる群から選択される抗原に特異的である。
【０４０４】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲは卵白アルブミンまたはその断片、バリアント、または混合物に特異的である。
【０４０５】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲはＭＯＧまたはその断片、バリアント、または混合物に特異的である。
【０４０６】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲはＩＩ型コラーゲンまたはその断片、バリアント、または混合物に特異的である。
【０４０７】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団は、ＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲはシトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲン、またはそれらの断片、バリアント、または混合物に特異的である。
【０４０８】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲはＨＬＡ−Ａ２またはその断片、バリアント、または混合物（例えば、本明細書に記載される）に特異的である。
【０４０９】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲはＩＬ−２３Ｒまたはその断片、バリアント、または混合物（例えば、本明細書に記載される）に特異的である。
【０４１０】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団は、ＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲは、例えば、ＣＤ１９またはＣＤ２０、あるいはそれらの断片、バリアント、または混合物（例えば、本明細書に記載される）などの、Ｂ細胞表面マーカーに特異的である。
【０４１１】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲは癌抗原またはその断片、バリアント、または混合物に特異的である（例えば、本明細書に記載のとおり）。
【０４１２】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲは感染細胞を認識する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲは細菌抗原またはその断片、バリアント、または混合物に特異的である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲはウイルス抗原またはその断片、バリアント、または混合物に特異的である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲは真菌抗原またはその断片、バリアント、または混合物に特異的である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団はＴＣＲ単一特異性であり、ＴＣＲは寄生抗原またはその断片、バリアント、または混合物に特異的である。
【０４１３】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲを発現する免疫細胞は、ＣＡＲによって認識される細胞に対して抑制的である。ある実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。特定の実施形態では、免疫細胞は、Ｔｒｅｇ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、ナイーブＴ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化によって得られる。
【０４１４】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は細胞傷害性ではない。ある実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。特定の実施形態では、免疫細胞は、Ｔｒｅｇ細胞である。
【０４１５】
本発明の調節性免疫細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ、Ｔｒ１細胞、Ｔｈ３細胞を分泌するＴＧＦ−β、調節性ＮＫ  Ｔ細胞、調節性γδＴ細胞、調節性ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびダブルネガティブ調節性Ｔ細胞からなる群から選択され得る。
【０４１６】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は細胞傷害性である。ある実施形態では、本明細書に記載のとおり、免疫細胞は、癌抗原またはその断片またはバリアントを発現する細胞に対して細胞傷害性である。特定の実施形態では、本発明の免疫細胞は、癌性細胞に対して細胞傷害性である。特定の実施形態では、本発明の免疫細胞は、感染細胞に対して細胞傷害性である。
【０４１７】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は細胞傷害性免疫細胞である。細胞傷害性免疫細胞としては、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｂ細胞、マクロファージ、および単球が挙げられる。活性化されると、これらの細胞傷害性免疫細胞のそれぞれが標的細胞の破壊を引き起こす。例えば、細胞傷害性免疫細胞は、以下の手段のいずれかまたは両方によって標的癌細胞の破壊を引き起こす。第１に、活性化されると、免疫細胞はパーフォリン、グランザイム、グラニュリシンなどの細胞毒素を放出する。パーフォリンおよびグラニュリシンは標的細胞内に細孔を作り出し、グランザイムは細胞に入り、細胞質中で、細胞のアポトーシス（プログラムされた細胞死）を誘導するカスパーゼカスケードを引き起こす。第２に、アポトーシスは、免疫細胞と標的腫瘍細胞の間のＦＡＳ−ＦＡＳリガンド相互作用を介して誘導され得る。
【０４１８】
いくつかの実施形態では、細胞傷害性免疫細胞は、自家細胞である。
【０４１９】
いくつかの実施形態では、細胞傷害性免疫細胞は、異種細胞である。
【０４２０】
いくつかの実施形態では、細胞傷害性免疫細胞は、同種細胞である。
【０４２１】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は、ｐｒｏＢ細胞、ｐｒｅＢ細胞、未成熟（または移行）Ｂ細胞、成熟ナイーブＢ細胞、活性化Ｂ細胞、メモリーＢ細胞、形質細胞、リンパ芽球、辺縁帯Ｂ細胞、胚中心Ｂ細胞、形質芽球細胞および／または調節性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ細胞）に対して細胞傷害性である。
【０４２２】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は、Ｂｒｅｇ細胞に対して細胞傷害性でない。
【０４２３】
いくつかの実施形態では、本発明の単一特異性Ｔｒｅｇ細胞集団は、それらの表面で免疫グロブリンを発現および提示するＢ細胞に対して細胞傷害性である。免疫グロブリンを表面に発現および提示するＢ細胞の例としては、これらに限定されないが、ｐｒｅＢ細胞、未成熟（または移行）Ｂ細胞、成熟ナイーブＢ細胞、活性化Ｂ細胞、メモリーＢ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、胚中心Ｂ細胞、および調節性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ細胞）が挙げられる。
【０４２４】
いくつかの実施形態では、本発明の単一特異性Ｔｒｅｇ細胞集団は、成熟Ｂ細胞、例えば、成熟活性化Ｂ細胞に対して細胞傷害性である。ある実施形態では、本発明の単一特異性Ｔｒｅｇ細胞集団は、単一特異性Ｔｒｅｇ細胞集団の細胞により発現されるキメラ受容体により認識されるＢ細胞表面マーカーをそれらの表面で発現する成熟Ｂ細胞（例えば、成熟活性化Ｂ細胞）に対して細胞傷害性である。
【０４２５】
いくつかの実施形態では、本発明の単一特異性Ｔｒｅｇ細胞集団は、ｐｒｏＢ細胞、ｐｒｅＢ細胞、未成熟（または移行）Ｂ細胞、成熟ナイーブＢ細胞、活性化Ｂ細胞、メモリーＢ細胞、形質細胞、リンパ芽球、辺縁帯Ｂ細胞、胚中心Ｂ細胞、形質芽球細胞および調節性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ細胞）から選択される少なくとも１つの細胞型に対して細胞傷害性である。特定の実施形態では、単一特異性Ｔｒｅｇ細胞集団は、ｐｒｅＢ細胞、未成熟（または移行）Ｂ細胞、成熟ナイーブＢ細胞、活性化Ｂ細胞、メモリーＢ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、胚中心Ｂ細胞、および調節性Ｂ細胞（Ｂｒｅｇ細胞）から選択される少なくとも１つの細胞型に対して細胞傷害性である。
【０４２６】
いくつかの実施形態では、本発明の単一特異性Ｔｒｅｇ細胞集団は、ｐｒｏＢ細胞、ｐｒｅＢ細胞、未成熟（または移行）Ｂ細胞、成熟ナイーブＢ細胞、活性化Ｂ細胞、メモリーＢ細胞、形質細胞、リンパ芽球、辺縁帯Ｂ細胞、胚中心Ｂ細胞、および形質芽球細胞から選択される少なくとも１つの細胞型に対して細胞傷害性である。特定の実施形態では、単一特異性Ｔｒｅｇ細胞集団は、ｐｒｅＢ細胞、未成熟（または移行）Ｂ細胞、成熟ナイーブＢ細胞、活性化Ｂ細胞、メモリーＢ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、および胚中心Ｂ細胞から選択される少なくとも１つの細胞型に対して細胞傷害性である。
【０４２７】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞集団は、その細胞表面で、本発明のＣＡＲ（本明細書では「第１の受容体」と呼ぶ）、および別の、別個のリガンドに結合する別の受容体（本明細書では「第２の受容体」と呼ぶ）を発現する。ある実施形態では、第２の受容体は、例えば本明細書に記載されるとおり、細胞外リガンド結合ドメイン、任意によりヒンジドメイン、少なくとも１つの膜貫通ドメイン、および少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０４２８】
いくつかの実施形態では、第２の受容体は内因性である（例えば、内因性ＴＣＲなど）。いくつかの実施形態では、第２の受容体は外因性であり、その発現は、それをコードする核酸の形質転換または形質導入により、本発明の免疫細胞集団において誘導される。外因性受容体は、外因性ＴＣＲまたはＣＡＲであり得る。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞集団は、２つのＣＡＲを発現し、第１のＣＡＲおよび第２のＣＡＲは、それぞれ別個のリガンドを認識する。いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞集団は、２つのＣＡＲを発現し、第１のＣＡＲは抗原上の第１のエピトープを認識し、第２のＣＡＲは同じ抗原上の第２の別個のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞集団は２つのＣＡＲを発現し、第１のＣＡＲは抗原を認識し、第２のＣＡＲは第２の別個の抗原（例えば、抗原バリアントなど）を認識する。
【０４２９】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲおよび第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）の少なくとも１つは誘導性であり、すなわち、細胞表面でのその発現が誘導され得る。
【０４３０】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲおよび第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）の少なくとも１つの発現は、他の受容体の活性化により誘導される。ある実施形態では、本発明のＣＡＲの発現は、第２の受容体の活性化により誘導される。ある実施形態では、第２の受容体の発現は、本発明のＣＡＲの活性化により誘導される。誘導性ＣＡＲは当技術分野において例えば、Ｒｏｙｂａｌら（Ｃｅｌｌ  １６７（２）：４１９−４３２（２０１６年））により、説明されている。
【０４３１】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、抗原、抗原の断片、抗原のバリアント、またはそれらの混合物に特異的である。
【０４３２】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、一般的なヒトの食事からの食物抗原に特異的である。
【０４３３】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、自己抗原（例えば、本明細書に記載の自己抗原）に特異的であり、例えば、多発性硬化症関連抗原、関節関連抗原、眼関連抗原、ヒトＨＳＰ抗原、皮膚関連抗原または移植片拒絶反応またはＧＶＨＤに関与する抗原などの、自己抗原に特異的である。ある実施形態では、抗原は、皮膚関連抗原である。ある実施形態では、抗原は、移植片拒絶反応またはＧＶＨＤに関与する抗原である。
【０４３４】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、吸入アレルゲン、摂取アレルゲン、または接触アレルゲンに特異的である。
【０４３５】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、卵白アルブミン、ＭＯＧ、ＩＩ型コラーゲン断片、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲン、およびそれらの断片、バリアント、および混合物からなる群から選択される抗原に特異的である。
【０４３６】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、卵白アルブミンまたはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。
【０４３７】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、ＭＯＧまたはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。
【０４３８】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、ＩＩ型コラーゲンまたはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。
【０４３９】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲンまたはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。
【０４４０】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、ＨＬＡ−Ａ２またはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。
【０４４１】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、ＩＬ−２３Ｒまたはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。
【０４４２】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、例えば、ＣＤ１９またはＣＤ２０、あるいはそれらの断片、バリアントまたは混合物などのＢ細胞表面マーカーに特異的である。
【０４４３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のとおり、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、癌抗原またはその断片、バリアントまたは混合物に特異的である。
【０４４４】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は感染した細胞を認識する。いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、細菌抗原またはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、ウイルス抗原またはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、真菌抗原またはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。
【０４４５】
いくつかの実施形態では、第２の受容体の細胞外結合ドメインは、タンパク質または断片またはそのバリアント、例えば、自己抗原またはその断片またはバリアントである。
【０４４６】
いくつかの実施形態では、第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）は、例えば、Ｂ細胞またはその断片、バリアントまたは混合物上に発現する自己抗体などの、自己抗体に特異的である。
【０４４７】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、第１の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第２の受容体は、別個の第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＡＲは、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ゼータなど）を含み、第２の受容体は、共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＮＦＲ２もしくはＣＤ８の共刺激ドメイン、またはＴＮＦＲ２およびＣＤ８の共刺激シグナル伝達ドメインの組み合わせなど）を含む。ある実施形態では、本発明のＣＡＲは、共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＮＦＲ２、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、またはＣＤ２８の共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、またはＴＮＦＲ２および４−１ＢＢの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの組み合わせなど）を含み、第２の受容体は、Ｔ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ゼータなど）を含む。これらの実施形態によれば、本発明の免疫細胞集団の完全な活性化は、本発明のＣＡＲの、それが向けられるリガンドへの結合、および第２の受容体の、それが向けられるリガンドへの結合の両方を必要とする。
【０４４８】
いくつかの実施形態では、第２の受容体によって認識されるリガンドは、罹患した組織もしくは臓器、または自己免疫応答の部位で発現されるかまたは存在する。結果として、本発明の第１のＣＡＲのリガンドを発現する細胞に対する抑制的活性は、リガンドが存在し、免疫細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）集団の細胞上の第２の受容体によって認識される場合に、罹患組織もしくは臓器または自己免疫応答の部位でのみ誘導される。
【０４４９】
いくつかの実施形態では、第２のキメラ受容体は、本発明の第１のキメラ受容体によって認識されるリガンドとは異なるリガンドを認識する細胞外リガンド結合ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、第２のキメラ受容体は、第１のキメラ受容体によって認識される同じ抗原の別個のエピトープを認識する細胞外リガンド結合ドメインをさらに含む。
【０４５０】
いくつかの実施形態では、本発明のキメラ受容体は、第１のリガンドに結合する第１のリガンド結合ドメインと、第１のリガンドとは異なる第２のリガンドに結合する第２のリガンド結合ドメインとを含む細胞外リガンド結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、第１のリガンドおよび第２のリガンドの両方を認識する二機能性抗体である。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、同じ抗原の２つの異なるエピトープを認識する二機能性抗体である。
核酸、ベクター、およびＣＡＲの調製
【０４５１】
本発明はまた、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸配列に関し、核酸配列は、
−細胞外結合ドメインの少なくとも１つの核酸配列、
−任意により、細胞外ヒンジドメインの少なくとも１つの核酸配列、膜貫通ドメインの少なくとも１つの核酸配列、
−細胞内ドメインの少なくとも１つの核酸配列
を含み、細胞内ドメインの少なくとも１つの核酸配列は、一次細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つの核酸配列、および任意により、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つの核酸配列を含み、
膜貫通ドメインの核酸配列は、ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアントの核酸配列、または任意の膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアントもしくはそれらの組み合わせの核酸配列であり、かつ／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの核酸配列は、ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントの核酸配列、または任意の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントもしくはそれらの組み合わせの核酸配列であり、膜貫通ドメインの核酸配列は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアントの核酸配列であり、および／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの核酸配列は、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントである。
【０４５２】
本発明はまた、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターを提供する。本発明で使用され得るベクターの例としては、これらに限定されないが、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、ウイルス、およびコスミドが挙げられる。
【０４５３】
ウイルスベクター技術は、当技術分野において周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅら（２００１年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）および他のウイルス学および分子生物学マニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスとしては、これらに限定されないが、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、およびレンチウイルスが挙げられる。
【０４５４】
一般に、好適なベクターは、少なくとも１つの生物において機能する複製起点、プロモーター配列、簡便な制限エンドヌクレアーゼ部位、および１つ以上の選択性マーカーを含む（例えば、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第０１／９６５８４号および同第０１／２９０５８号および米国特許第６，３２６，１９３号を参照されたい）。
【０４５５】
哺乳動物細胞への遺伝子導入のために、複数のウイルスベースシステムが開発されている。例えば、レトロウイルスは遺伝子送達システムのための簡便なプラットフォームを提供する。選択された遺伝子は、当技術分野で公知である技術を使用して、ベクターに挿入され、レトロウイルス粒子にパッケージングされ得る。次に、組換えウイルスを単離し、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏのいずれかで対象の細胞に送達できる。複数のレトロウイルスシステムが当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。さらに、複数のアデノウイルスベクターが当技術分野において公知である。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。
【０４５６】
追加の転写活性要素、例えば、プロモーターおよびエンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。典型的には、コアプロモーターであり、これらは開始部位の３０〜１１０ｂｐ上流の領域に位置するが、多数のプロモーターが近年、開始部位の下流にも機能要素を含むことが示されており、かつエンハンサー要素は一般に、開始部位の５００〜２０００ｂｐ上流に位置する。プロモーター要素間の間隔は、要素が互いに反転するかまたは移動したときにプロモーター機能が保持されるように、多くの場合柔軟である。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターでは、活性が低下し始める前に、プロモーターエレメント間の間隔を５０ｂｐまで延長できる。プロモーターに応じて、個々のエレメントが協働でまたは独立して機能し、転写を活性化できると考えられている。
【０４５７】
好適なプロモーターの一例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、作動可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動できる強力な構成的プロモーター配列である。好適なプロモーターの別の例は、伸長成長因子−ｌａ（ＥＦ−ｌａ）である。好適なプロモーターの別の例は、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである。しかし、これらに限定されないが、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタインバーウイルスの最初期プロモーター、およびラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびにこれらに限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、およびクレアチンキナーゼプロモーターなどのヒト遺伝子プロモーターを含む、他の構成的プロモーター配列も使用され得る。さらに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモーターも本発明の一部として企図される。誘導性プロモーターの使用は、そのような発現が望まれるときにそれが作動可能に連結されるポリヌクレオチド配列の発現をオンにするか、または発現が望まれないときに発現をオフにできる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例としては、これらに限定されないが、メタロチオネインプロモーター、糖質コルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、およびテトラサイクリンプロモーターが挙げられる。さらに、２つ以上の遺伝子の効率的かつ協調的な発現を可能にする双方向プロモーターもまた、本発明において興味深い可能性がある。双方向プロモーターの例は、ｉ）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ゲノムまたはマウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）ゲノムに由来する第１の最小プロモーター配列、およびｉｉ）動物遺伝子に由来する完全に効率的なプロモーター配列、を含む双方向プロモーターを開示する、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２００６／２００８６９号においてＬｕｉｇｉ  Ｎａｌｄｉｎｉにより記載されるプロモーターを含むが、これらに限定されない。
【０４５８】
ＣＡＲポリペプチドまたはその部分の発現を評価するために、Ｔ細胞に導入される発現ベクターはまた、選択性マーカー遺伝子（ＣＤ３４、ＣＤ２７１）またはレポーター遺伝子のいずれか、またはその両方を含んで、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染させようとする細胞集団からの発現細胞の同定および選択を容易にできる。他の態様では、選択性マーカーは、別個のＤＮＡ片上で運ばれ、共トランスフェクション手順で使用され得る。選択性マーカーおよびレポーター遺伝子の両方は、宿主細胞での発現を可能にする適切な調節配列に隣接され得る。有用な選択性マーカーとしては、例えば、ネオマイシンなどの抗生物質耐性遺伝子が挙げられる。
【０４５９】
本発明のいくつかの実施形態では、自殺遺伝子技術が使用されてもよい。異なる自殺遺伝子技術は、それらの作用機序に応じて当技術分野で説明される（例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５：２５４（２０１４年）を参照のこと）。非毒性薬物を毒性薬物に変換する遺伝子指向酵素プロドラッグ療法（ＧＤＥＰＴ）の例としては、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ−ＴＫ）およびシトシンデアミナーゼ（ＣＤ）が挙げられる。他の例は、例えば、誘導性Ｆａｓ（ｉＦａｓ）または誘導性カスパーゼ９（ｉＣａｓｐ９）システムなどのアポトーシス成分に連結された薬物結合ドメインから構成されるキメラタンパク質である。他の例としては、操作された細胞の表面でのｃ−ｍｙｃの過剰発現を誘導して、抗ｃ−ｍｙｃ抗体を投与することによりその欠失を誘導するなどの、治療用抗体によって媒介されるシステムが挙げられる。ＥＧＦＲの使用は、ｃ−ｍｙｃシステムと比較して同様のシステムとして記載される。
【０４６０】
レポーター遺伝子は、トランスフェクトされた可能性のある細胞を特定するため、および調節配列の機能を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエントの生物または組織に存在しないか、またはそれらにより発現されない遺伝子であり、その発現がいくつかの容易に検出可能な特性、例えば酵素活性によって表されるポリペプチドをコードする。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入された後の好適な時期にアッセイされる。好適なレポーター遺伝子としては、ルシフェラーゼ、ベータガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ、または緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を挙げることができる（例えば、Ｕｉ−Ｔｅｉら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４７９：７９−８２（２０００年）を参照のこと）。好適な発現システムは周知であり、既知の技術を使用して調製されるか、または商業的に入手できる。一般に、レポーター遺伝子の最も高い発現レベルを示す最小の５’隣接領域を有する構築物がプロモーターとして同定される。そのようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結され、かつプロモーター駆動型転写を調整する能力について剤を評価するために使用され得る。
【０４６１】
遺伝子を細胞中に導入し、発現する方法は、当技術分野において公知である。発現ベクターの文脈において、ベクターは、当技術分野の任意の方法によって、宿主細胞、例えば、哺乳動物、細菌、酵母、または昆虫細胞中に容易に導入できる。例えば、発現ベクターは、物理的手段、化学的手段、または生物学的手段によって宿主細胞中に移すことができる。
【０４６２】
ポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための物理的方法としては、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、粒子衝撃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが挙げられる。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を産生するための方法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照のこと。本発明のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、リン酸カルシウムトランスフェクションを使用して宿主細胞中に導入される。
【０４６３】
目的のポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための生物学的方法は、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターの使用を含む。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えばヒト細胞中に遺伝子を挿入するために最も広く使用される方法になっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号および第５，５８５，３６２号を参照されたい。
【０４６４】
ポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための化学的手段としては、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズなどのコロイド分散システム、および水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、およびリポソームなど、脂質ベースシステムが挙げられる。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。「リポソーム」は、封入された脂質二重層または凝集体の生成によって形成される様々な単一および多層脂質ビヒクルを包含する総称である。リポソームは、リン脂質二重膜および内部水性媒体を備えた小胞構造を有するものとして特徴付けることができる。多重膜リポソームは、水性媒体によって分離される複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁されたときに自発的に形成される。脂質成分は、閉鎖構造を形成する前に自己再配列され、脂質二重層間に水および溶解した溶質を封入する（Ｇｈｏｓｈら、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５：５０５−１０（１９９１年））。しかし、溶液中で通常の小胞構造とは異なる構造を有する組成物も包含される。例えば、脂質はミセル構造をとるか、または単に脂質分子の不均一な凝集体として存在し得る。リポフェクタミン−核酸複合体も企図される。
【０４６５】
宿主細胞への核酸の導入のために脂質製剤の使用が企図される（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｖｏ）。別の態様では、核酸は脂質と会合し得る。脂質に会合する核酸は、リポソームの水性内部でカプセル化されるか、リポソームの脂質二重層内に散在するか、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方に会合する連結分子を介してリポソームに付着されるか、リポソームに封入されるか、リポソームと複合体を形成するか、脂質を含む溶液に分散されるか、脂質と混合されるか、脂質と組み合わされるか、脂質中に懸濁液として含まれるか、ミセルに含まれるか、またはミセルと複合体を形成するか、または他の方法で脂質と会合する可能性がある。脂質、脂質／ＤＮＡまたは脂質／発現ベクター会合組成物は、溶液中の任意の特定の構造に限定されない。例えば、それらは、ミセルとして、または「崩壊した」構造を有する二層構造で存在し得る。それらはまた、単に溶液中に散在し、サイズまたは形状が均一でない凝集体を形成する可能性がある。脂質は、天然に存在する脂質または合成脂質であり得る脂肪物質である。例えば、脂質としては、細胞質に自然に存在する脂肪滴ならびに、脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール、およびアルデヒドなどの長鎖脂肪族炭化水素およびその誘導体を含む化合物のクラスが挙げられる。
【０４６６】
使用に好適な脂質は、商業的供給源から入手可能である。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯから入手でき、リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ＆Ｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ）から入手でき、コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｅｈｒｉｎｇから入手でき、ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）および他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）から入手できる。クロロホルムまたはクロロホルム／メタノール中の脂質のストック溶液は、約−２０℃で保存できる。クロロホルムは、メタノールよりも容易に蒸発するため、唯一の溶媒として使用される。
【０４６７】
外因性核酸を宿主細胞中に導入するために使用される方法に関係なく、宿主細胞における組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、様々なアッセイが実施され得る。そのようなアッセイは、例えば、サザンブロッティングおよびノーザンブロッティング、ＲＴ−ＰＣＲおよびＰＣＲなどの、当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ、特定のペプチドの存在または不在を、例えば免疫学的手段（ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロット）により、または本発明の範囲内にある剤を同定するための本明細書に記載のアッセイにより検出するなどの、「生化学的」アッセイを含む。
【０４６８】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は、ＲＮＡの導入によって修飾される。いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写されたＲＮＡ  ＣＡＲは、一過的トランスフェクションの一形態として細胞に導入され得る。ＲＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）で生成された鋳型を使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写によって生成される。任意の供給源からの目的のＤＮＡは、適切なプライマーおよびＲＮＡポリメラーゼを使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｍＲＮＡ合成用の鋳型へとＰＣＲにより直接変換できる。ＤＮＡの供給源は、例えば、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列、または任意の他の適切なＤＮＡの供給源であり得る。ある実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写のための鋳型は、本発明のＣＡＲである。
【０４６９】
いくつかの実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、オープンリーディングフレームを含む。ＤＮＡは、例えば、生物のゲノムの天然に存在するＤＮＡ配列由来であり得る。いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、目的の完全長遺伝子または遺伝子の一部分である。遺伝子は、５’および／または３’非翻訳領域（ＵＴＲ）のいくつかまたはすべてを含み得る。遺伝子は、エクソンおよびイントロンを含んでよい。いくつかの実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、ヒト遺伝子である。いくつかの実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、５’および３’ＵＴＲを含むヒト遺伝子である。あるいは、ＤＮＡは、天然に存在する生物では通常発現されない人工ＤＮＡ配列であり得る。例示的な人工ＤＮＡ配列は、融合タンパク質をコードするオープンリーディングフレームを形成するために一緒にライゲートされる遺伝子の部分を含むものである。一緒にライゲートされるＤＮＡの部分は、単一の生物由来でも、複数の生物由来でもよい。
【０４７０】
ＰＣＲは、トランスフェクションに使用されるｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写用の鋳型を生成するために使用され得る。ＰＣＲを実施するための方法は当技術分野でよく知られている。ＰＣＲでの使用のためのプライマーは、ＰＣＲの鋳型として使用されるＤＮＡの領域に実質的に相補的である領域を有するように設計される。本明細書で使用される「実質的に相補的」は、プライマー配列中の塩基の大部分またはすべてが相補的であるか、または１つ以上の塩基が非相補的であるか、またはミスマッチであるヌクレオチドの配列を指す。実質的に相補的な配列は、ＰＣＲに使用されるアニーリング条件下で意図するＤＮＡ標的とアニーリングまたはハイブリダイズし得る。プライマーは、ＤＮＡ鋳型の任意の部分に実質的に相補的であるように設計され得る。例えば、プライマーは、細胞中で通常転写される遺伝子の部分（オープンリーディングフレーム）を増幅するように設計でき、これは５’および３’ＵＴＲを含み得る。また、プライマーは、目的の特定のドメインをコードする遺伝子の一部分を増幅するようにも設計できる。いくつかの実施形態では、プライマーは、５’および３’ＵＴＲの全部またはいくつかを含むヒトｃＤＮＡのコード領域を増幅するように設計される。ＰＣＲに有用なプライマーは、当技術分野で周知である合成方法によって生成される。
【０４７１】
「フォワードプライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の上流にあるＤＮＡ鋳型上のヌクレオチドに実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「上流」は、本明細書では、コード鎖に対して増幅されるＤＮＡ配列に対し５’の位置を指すために使用される。「リバースプライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の下流にある二本鎖ＤＮＡ鋳型に実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「下流」は、本明細書では、コード鎖に対して増幅されるＤＮＡ配列に対し３’の位置を指すために使用される。
【０４７２】
ＰＣＲに有用な任意のＤＮＡポリメラーゼを、本明細書に開示される方法で使用できる。試薬およびポリメラーゼは、複数の供給元から市販される。
【０４７３】
安定性および／または翻訳効率を促進する能力を有する化学構造もまた使用され得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、５’および３’ＵＴＲを有し得る。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲの長さは０〜３０００ヌクレオチドである。コード領域に追加される５’および３’ＵＴＲ配列の長さは、これに限定されないが、ＵＴＲの異なる領域にアニーリングするＰＣＲ用のプライマーを設計することを含む、異なる方法によって改変できる。このアプローチを使用して、当業者は、転写されたＲＮＡのトランスフェクション後に最適な翻訳効率を達成するために必要とされる５’および３’のＵＴＲ長を変化させることができる。５’および３’ＵＴＲは、目的の遺伝子の天然に存在する内因性の５’および３’ＵＴＲであり得る。あるいは、目的の遺伝子に対し内因性でないＵＴＲ配列を、ＵＴＲ配列をフォワードプライマーおよびリバースプライマーに組み込むことにより、または鋳型の他の修飾により付加できる。目的の遺伝子に対し内因性でないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率を変更するのに有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列中のＡＵに富む要素は、ｍＲＮＡの安定性を低下させ得ることが知られている。したがって、３’ＵＴＲは、当技術分野において周知のＵＴＲの特性に基づいて、転写されたＲＮＡの安定性を高めるように選択または設計され得る。
【０４７４】
いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、内因性遺伝子のコザック配列を含んでよい。あるいは、目的の遺伝子に対し内因性でない５’ＵＴＲが上記のようにＰＣＲにより付加される場合、コンセンサスコザック配列を、５’ＵＴＲ配列を付加することにより再設計できる。コザック配列は、いくつかのＲＮＡ転写産物の翻訳効率を高めることができるが、効率的な翻訳を可能にするためにすべてのＲＮＡに必要だとは考えられない。多くのｍＲＮＡに対するコザック配列の要件は当技術分野で知られている。他の実施形態では、５’ＵＴＲは、そのＲＮＡゲノムが細胞中で安定なＲＮＡウイルスに由来し得る。他の実施形態では、様々なヌクレオチド類似体を３’ＵＴＲまたは５’ＵＴＲで使用して、ｍＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨げることができる。
【０４７５】
遺伝子クローニングを必要とせずにＤＮＡ鋳型からのＲＮＡの合成を可能にするには、転写プロモーターが、転写される配列の上流のＤＮＡ鋳型に付着される必要がある。ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターとして機能する配列がフォワードプライマーの５’末端に付加されると、ＲＮＡポリメラーゼプロモーターは、転写されるオープンリーディングフレームの上流のＰＣＲ産物に組み込まれるようになる。いくつかの実施形態では、本明細書の他の場所に記載されるとおり、プロモーターは、Ｔ７ポリメラーゼプロモーターである。他の有用なプロモーターとしては、これらに限定されないが、Ｔ３およびＳＰ６  ＲＮＡポリメラーゼプロモーターが挙げられる。Ｔ７、Ｔ３およびＳＰ６プロモーターのコンセンサスヌクレオチド配列は、当技術分野で公知である。
【０４７６】
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、リボソーム結合、翻訳の開始、および細胞内のｍＲＮＡの安定性を決定する５’末端にキャップおよび３’ポリ（Ａ）テールの両方を有する。環状ＤＮＡ鋳型、例えばプラスミドＤＮＡ上で、ＲＮＡポリメラーゼは、真核細胞での発現に好適でない長いコンカテマー生成物を生成する。３’ＵＴＲの末端で直鎖状になったプラスミドＤＮＡの転写は、転写後にポリアデニル化されたとしても真核生物のトランスフェクションにおいて効果的でない通常のサイズのｍＲＮＡをもたらす。
【０４７７】
直鎖ＤＮＡ鋳型上で、ファージＴ７ＲＮＡポリメラーゼは、転写産物の３’末端を鋳型の最後の塩基を超えて延長し得る（Ｓｃｈｅｎｂｏｒｎ  ａｎｄ  Ｍｉｅｒｅｎｄｏｒｆ，Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１３：６２２３−３６（１９８５年）；Ｎａｃｈｅｖａ  ａｎｄ  Ｂｅｒｚａｌ−Ｈｅｒｒａｎｚ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：１４８５−６５（２００３年）。
【０４７８】
ポリＡ／ＴストレッチをＤＮＡ鋳型中に組み込む従来の方法は、分子クローニングである。しかし、プラスミドＤＮＡに組み込まれたポリＡ／Ｔ配列は、プラスミドの不安定性を引き起こす可能性があり、そのため、細菌細胞から得られたプラスミドＤＮＡ鋳型には多くの場合、欠失および他の異常が多く混入する。これは、クローン作製手順を、困難で時間を要するものにするのみでなく、多くの場合、信頼できないものにする。そのため、クローニングなしにポリＡ／Ｔ  ３’ストレッチによりＤＮＡ鋳型を構築できる方法が非常に望ましい。
【０４７９】
転写ＤＮＡ鋳型のポリＡ／Ｔセグメントは、１００Ｔテール（サイズは５０〜５０００Ｔ）などのポリＴテールを含むリバースプライマーを使用することによりＰＣＲ中に生成されるか、またはこれらに限定されないが、ＤＮＡライゲーションまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ組換えを含む、任意の他の方法によりＰＣＲ後に生成され得る。ポリ（Ａ）テールはまた、ＲＮＡに安定性をもたらし、ＲＮＡの分解を減少させる。一般に、ポリ（Ａ）テールの長さは、転写されたＲＮＡの安定性と正に相関する。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）テールは１００〜５０００アデノシンである。
【０４８０】
ＲＮＡのポリ（Ａ）テールは、Ｅ．ｃｏｌｉポリＡポリメラーゼ（Ｅ−ＰＡＰ）などのポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写後にさらに拡張させ得る。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）テールの長さを１００ヌクレオチドから３００〜４００ヌクレオチドに増加させることにより、ＲＮＡの翻訳効率が約２倍増加する。さらに、３’末端への異なる化学基の付着は、ｍＲＮＡの安定性を高め得る。そのような付着物は、修飾された／人工のヌクレオチド、アプタマーおよび他の化合物を含み得る。例えば、ＡＴＰ類似体は、ポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用してポリ（Ａ）テールに組み込むことができる。ＡＴＰ類似体は、ＲＮＡの安定性をさらに高めることができる。
【０４８１】
ＲＮＡ上の５’キャップも、ＲＮＡ分子に安定性をもたらし得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法によって生成されるＲＮＡは、５’キャップを含む。５’キャップは、当技術分野において公知であり、本明細書に記載される技術を使用して提供される（Ｃｏｕｇｏｔら、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２９：４３６−４４４（２００１年）；Ｓｔｅｐｉｎｓｋｉら、ＲＮＡ７：１４６８−９５（２００１年）；Ｅｌａｎｇｏら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３３０：９５８−９６６（２００５年））。
【０４８２】
本明細書に開示される方法によって生成されるＲＮＡはまた、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）配列を含み得る。ＩＲＥＳ配列は、ｍＲＮＡへのキャップ非依存性リボソーム結合を開始しかつ翻訳の開始を促進する、任意のウイルス、染色体、または人工的に設計された配列であり得る。糖、ペプチド、脂質、タンパク質、抗酸化剤、および界面活性剤などの、細胞の透過性および生存率を促進する因子を含み得る、細胞エレクトロポレーションに好適な任意の溶質を含めることができる。
【０４８３】
ＲＮＡは、複数の異なる方法のいずれかを使用して標的細胞中に導入でき、方法は例えば、これらに限定されないが、エレクトロポレーション（例えば、Ａｍａｘａ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ−ＩＩ（Ａｍａｘａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＣＭ８３０（ＢＴＸ）（Ｈａｒｖａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）、Ｇｅｎｅ  ＰｕｌｓｅｒＩＩ（ＢｉｏＲａｄ，Ｄｅｎｖｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、またはＭｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｔ，Ｈａｍｂｕｒｇ  Ｇｅｒｍａｎ））、リポフェクションを使用したカチオン性リポソーム媒介トランスフェクション、ポリマーカプセル化、ペプチド媒介トランスフェクション、または「遺伝子銃」などの微粒子銃送達システムなどの市販の方法である（例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａら、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１２（８）：８６１−７０（２００１年））。
【０４８４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ配列は、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターを使用することにより、本発明の免疫細胞中に送達される。ＣＡＲ発現レトロウイルスおよびレンチウイルスベクターは、担体として形質導入細胞を使用して、またはカプセル化された、結合した、または裸のベクターの無細胞の局所的または全身の送達を使用して、異なるタイプの真核細胞、ならびに組織および生物全体に送達され得る。使用される方法は、安定な発現が必要とされるかまたは十分である、任意の目的のためであってよい。
【０４８５】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ配列は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写されたｍＲＮＡを使用することにより、本発明の免疫細胞中に送達される。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写されたｍＲＮＡ  ＣＡＲは、担体としてトランスフェクトされた細胞を使用して、またはカプセル化された、結合されたまたは裸のｍＲＮＡの無細胞の局所的または全身の送達を使用して、異なるタイプの真核細胞、ならびに組織および生物全体に送達され得る。使用される方法は、一過的発現が必要とされるかまたは十分である、任意の目的のためであってよい。
【０４８６】
いくつかの実施形態では、所望のＣＡＲは、トランスポゾンを介して細胞内で発現され得る。
【０４８７】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は、例えば、Ｔ細胞である。本明細書に記載されるようなＴ細胞（Ｔｒｅｇ細胞など）の拡大および遺伝子修飾の前に、細胞は対象から得られる。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含む、様々な供給源から入手され得る。本発明のある実施形態では、当技術分野で利用可能な任意の数のＴ細胞株を使用できる。本発明のある実施形態では、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離、赤血球溶解、単球の枯渇、向流遠心水簸、白血球除去後のＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離、およびその後の細胞表面マーカーベースの磁気またはフローサイトメトリーによる単離などの、当業者に公知である任意の数の技術を使用して対象から収集された血液の単位から得ることができる。いくつかの実施形態では、個体の循環血液からの細胞は、アフェレシスによって得られる。アフェレシス産物は典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板などのリンパ球を含む。いくつかの実施形態では、個体の循環血液からの細胞は、白血球アフェレシスによって得られる。
【０４８８】
いくつかの実施形態では、白血球アフェレシスによって収集された細胞を洗浄して、血漿画分を除去し、その後の処理ステップのために細胞を適切な緩衝液または培地に入れることができる。本発明のいくつかの実施形態では、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。いくつかの実施形態では、洗浄液はカルシウムを含まず、またマグネシウムを含まず、またはすべてではないが、多くの二価カチオンを含まない場合がある。洗浄後に、細胞は、例えば、Ｃａ２＋を含まない、Ｍｇ２＋を含まないＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、または緩衝液を含むもしくは含まない他の生理食塩水などの、様々な生体適合性緩衝液のいずれかに再懸濁され得る。あるいは、白血球アフェレシスサンプルの望ましくない成分を除去し、細胞を培地に直接再懸濁できる。
【０４８９】
Ｔ細胞の特定の亜集団は、ポジティブまたはネガティブセレクション技術によってさらに単離され得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、目的のＴ細胞のポジティブセレクションに十分な期間、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３ｘ２８）コンジュゲート結合ビーズとのインキュベーションによって単離される。いくつかの実施形態では、期間は、約３０分である。さらなる実施形態では、期間は、３０分〜３６時間またはそれを超える時間およびそれらの間のすべての整数値の範囲である。さらなる実施形態では、期間は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、または６時間である。いくつかの実施形態では、期間は、１０〜２４時間である。ある実施形態では、インキュベーション期間は２４時間である。他の細胞型と比較してＴ細胞が少ないいかなる状況においても、より長いインキュベーション時間を使用してＴ細胞を単離できる。したがって、Ｔ細胞が抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズに結合できる時間を単に短縮または延長することにより、かつ／またはビーズ対Ｔ細胞の比率を増加または減少させることにより（本明細書でさらに記載するように）、培養開始時にまたはプロセス中の他の時点で、Ｔ細胞の亜集団を、それについてまたはそれに対し優先的に選択できる。さらに、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または減少させることにより、培養開始時にまたは他の所望の時点で、Ｔ細胞の亜集団を、それについてまたはそれに対し優先的に選択できる。当業者は、本発明の文脈において、複数の選択ラウンドも使用できることを認識するであろう。
【０４９０】
いくつかの実施形態では、選択手順を実行し、活性化および拡大のプロセスにおいて「選択されない」細胞を使用することが望ましい場合もある。「選択されない」細胞は、さらに選択ラウンドを受けてもよい。ネガティブセレクションによるＴ細胞集団の濃縮は、ネガティブセレクション細胞に固有の表面マーカーに向けられた抗体の組み合わせにより達成され得る。１つの方法は、ネガティブ選択される細胞上に存在する細胞表面マーカーに向けられたモノクローナル抗体のカクテルを使用する、ネガティブ磁気免疫接着またはフローサイトメトリーによる細胞選別および／または選択である。例えば、ネガティブセレクションによりＣＤ４＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。ある実施形態では、Ｔ調節性細胞は、抗ＣＤ２５コンジュゲート結合ビーズまたは他の同様の選択方法により枯渇される。
【０４９１】
ポジティブまたはネガティブセレクションによる所望の細胞集団の単離のために、細胞および表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度を変えることができる。ある実施形態では、細胞およびビーズを確実に最大限接触させるために、ビーズおよび細胞が一緒に混合される体積を大幅に減少させる（すなわち、細胞の濃度を上げる）ことが望ましい場合がある。例えば、いくつかの実施形態では、濃度２０億細胞／ｍＬが使用される。いくつかの実施形態では、１０億／ｍＬの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億／ｍＬを超える細胞が使用される。さらなる実施形態では、１，０００万、１，５００万、２，０００万、２，５００万、３，０００万、３，５００万、４，０００万、４，５００万または５，０００万細胞／ｍＬの細胞濃度が使用される。いくつかの実施形態では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億細胞／ｍＬの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億２５００万または１億５０００万細胞／ｍＬの濃度が使用され得る。高濃度を使用することは、増加された細胞収量、細胞活性化、および細胞拡大をもたらし得る。さらに、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの、目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞、または多くの腫瘍細胞が存在するサンプル（すなわち、白血病血液、腫瘍組織など）からの細胞をより効率的に捕捉できるようにする。そのような細胞の集団は、治療的価値を有し得、かつ得ることが望ましい場合がある。
【０４９２】
刺激用のＴ細胞は、洗浄ステップ後に凍結されてもよい。理論により拘束されることを望むものではないが、凍結およびその後の解凍ステップは、細胞集団中の顆粒球およびある程度の単球を除去することにより、より均一な産物をもたらす。血漿および血小板を除去する洗浄ステップの後に、細胞を凍結溶液に懸濁させてもよい。多くの凍結溶液およびパラメータが当技術分野において公知であり、この文脈において有用であり、１つの方法は、２０％ＤＭＳＯおよび８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ、または１０％デキストラン４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミンおよび７．５％ＤＭＳＯ、または３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ−Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０％デキストラン４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン、および７．５％ＤＭＳＯを含む培養培地、または例えば、ＨｅｓｐａｎおよびＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａを含む他の好適な細胞凍結培地を使用することを伴い、次に、細胞を毎分１℃の速度で−８０℃に凍結し、液体窒素貯蔵タンクの気相中で貯蔵する。他の制御された凍結方法、ならびに−２０℃または液体窒素での制御されない急速凍結を使用できる。
【０４９３】
ある実施形態では、凍結保存細胞は、本明細書に記載のとおり解凍されかつ洗浄され、活性化前に室温で１時間休止させられる。
【０４９４】
また、本発明の文脈において企図されるのは、本明細書に記載の拡大細胞が必要となり得る前の期間に、対象から血液サンプルまたは白血球アフェレシス産物を収集することである。このように、拡大される細胞の供給源は、任意の必要な時点で収集でき、Ｔ細胞などの所望の細胞が、本明細書に記載されるようなものなどの、Ｔ細胞療法から恩恵を受けるであろう任意の数の疾患または状態のＴ細胞療法での後の使用のために単離および凍結される。いくつかの実施形態では、血液サンプルまたは白血球アフェレシス産物は、一般的に健康な対象から採取される。ある実施形態では、血液サンプルまたは白血球アフェレシス産物は、疾患を発症するリスクがあるか、まだ疾患を発症していない一般的に健康な対象から採取され、目的の細胞は後の使用のために単離され、凍結される。ある実施形態では、Ｔ細胞は、拡大され、凍結され、後に使用され得る。
【０４９５】
所望のＣＡＲを発現させるためのＴｒｅｇ細胞の遺伝子修飾の前または後のいずれかに、Ｔ細胞は、参照により本明細書に組み込まれる、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号、および同第６，８６７，０４１号、ならびに米国特許公開第２００６／０１２１００５号に記載されている方法を一般に使用して活性化および拡大できる。
【０４９６】
一般に、本発明のＴ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ細胞）は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する剤および細胞表面上の共刺激分子を刺激するリガンドをそれに付着させた表面と接触させることにより拡大される。特に、Ｔ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ細胞）は、例えば、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片または表面に固定化された抗ＣＤ２抗体との接触により、またはカルシウムイオノフォアと組み合わせたプロテインキナーゼＣ活性化因子（例えば、ブリオスタチン）との接触により、本明細書に記載のとおり刺激され得る。Ｔ細胞表面のアクセサリー分子の共刺激には、アクセサリー分子を結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触されてよい。ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を使用してもよい。抗ＣＤ２８抗体の例としては、これらに限定されないが、９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８が挙げられる（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）。当技術分野において一般に知られる他の拡大方法を使用できる（Ｂｅｒｇら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５−３９７７（１９９８年）；Ｈａａｎｅｎら、Ｊ．  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９−１３２８（１９９９年）；Ｇａｒｌａｎｄら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ．２２７（ｌ−２）：５３−６３（１９９９年））。
【０４９７】
ある実施形態では、本発明のＴ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）の一次刺激シグナルおよび共刺激シグナルは、異なるプロトコルによって提供され得る。例えば、各シグナルを提供する剤は、溶液中にあってよく、かつ／または表面に結合され得る。表面に結合される場合、剤は、同じ表面に結合されても（すなわち、「シス」形成）、または別個の表面に結合されてもよい（すなわち、「トランス」形成）。あるいは、一方の剤が表面に結合され、他方の剤が溶液中にあってもよい。いくつかの実施形態では、共刺激シグナルを提供する剤が細胞表面に結合され、一次活性化シグナルを提供する剤は溶液中にあるか、または表面に結合される。ある実施形態では、両方の剤が溶液中にあり得る。いくつかの実施形態では、剤は可溶形態であり得、Ｆｃ受容体を発現する細胞、または剤に結合する抗体または他の結合剤などの表面に架橋され得る。これに関して、本発明においてＴ細胞を活性化し、拡大する際に使用することが企図される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）について、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００４／０１０１５１９号および第２００６／００３４８１０号を参照されたい。
【０４９８】
いくつかの実施形態では、２つの剤は、同じビーズ上、すなわち「シス」、または別のビーズ上、すなわち「トランス」のいずれかで、ビーズ上に固定化される。例として、一次活性化シグナルを提供する剤は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片であり、共刺激シグナルを提供する剤は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合断片であり、両方の剤は、同等の分子量で同じビーズに共固定化される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡大およびＴ細胞の成長のために１：１の比率のビーズに結合された各抗体が使用される。本発明の特定の態様において、ビーズに結合された抗ＣＤ３抗体：抗ＣＤ２８抗体の比率は、１：１の比率を使用して観察された拡大と比較してＴ細胞拡大の増加が観察されるように使用される。いくつかの実施形態では、１：１の比率を使用して観察された拡大と比較して、約１倍から約３倍の増加が観察される。いくつかの実施形態では、ビーズに結合した抗ＣＤ３抗体：抗ＣＤ２８抗体の比率は１００：１〜１：１００およびその間のすべての整数値の範囲である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体よりも多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合され、すなわち、ＣＤ３：ＣＤ２８の比率は１未満である。本発明のある実施形態では、ビーズに結合された抗ＣＤ２８抗体対抗ＣＤ３抗体の比率は２：１を超える。１つの特定の実施形態では、ビーズに結合された抗体のＣＤ３：ＣＤ２８比１：１００が使用される。いくつかの実施形態では、ビーズに結合された抗体のＣＤ３：ＣＤ２８比１：７５が使用される。さらなる実施形態では、ビーズに結合された抗体のＣＤ３：ＣＤ２８比１：５０が使用される。いくつかの実施形態では、ビーズに結合された抗体のＣＤ３：ＣＤ２８比１：３０が使用される。ある実施形態では、ビーズに結合された抗体のＣＤ３：ＣＤ２８比１：１０が使用される。いくつかの実施形態では、ビーズに結合された抗体のＣＤ３：ＣＤ２８比１：３が使用される。いくつかの実施形態では、ビーズに結合された抗体のＣＤ３：ＣＤ２８比３：１が使用される。
【０４９９】
１：５００〜５００：１およびその間の任意の整数値の粒子対細胞の比率を使用して、Ｔ細胞または他の標的細胞を刺激してもよい。当業者が容易に理解できるように、粒子対細胞の比率は、標的細胞に対する粒子径に依存し得る。例えば、小さいサイズのビーズは少数の細胞にのみ結合し得るが、大きいビーズは多くの細胞に結合し得る。ある実施形態では、Ｔ細胞は、１：１００〜１００：１およびその間の任意の整数値の範囲の細胞対粒子の比率で刺激され得る。特定の実施形態では、この比率は、１：９〜９：１、およびその間の任意の整数値を含む。Ｔ細胞刺激をもたらす、Ｔ細胞に対する抗ＣＤ３連結粒子対抗ＣＤ２８連結粒子の比率は、上記のように変化し得るが、これらの数値のある実施例としては、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、および１５：１が挙げられ、１つの特定の比率は、Ｔ細胞あたり少なくとも１：１の粒子である。いくつかの実施形態では、１：１またはそれ未満の粒子対細胞の比率が使用される。ある実施形態では、粒子対細胞の比率は、１：５である。さらなる実施形態では、粒子対細胞の比率を、刺激の日に応じて変化させ得る。例えば、いくつかの実施形態では、粒子対細胞の比率は、第１日目に１：１〜１０：１であり、追加の粒子を、毎日または隔日でその後最長１０日間、最終比率１：１〜１：１０（添加日の細胞数に基づく）で細胞に添加する。１つの特定の実施形態では、粒子対細胞の比率は、刺激の第１日目に１：１であり、刺激の３日目および５日目に１：５に調整される。いくつかの実施形態では、粒子を、刺激の第１日目に最終比率１：１、３日目および５日目に１：５になるように、毎日または隔日添加する。いくつかの実施形態では、粒子対細胞の比率は、刺激の第１日目に２：１であり、刺激の３日目および５日目に１：１０に調整される。いくつかの実施形態では、粒子を、刺激の第１日目に最終比率１：１、３日目および５日目に１：１０になるように、毎日または隔日添加する。当業者であれば、様々な他の比率が本発明での使用に好適であり得ることを理解するであろう。特に、比率は粒子径、ならびに細胞径および細胞型によって異なるであろう。
【０５００】
本発明のさらなる実施形態では、免疫細胞は剤でコーティングされたビーズと組み合わされ、ビーズおよび細胞はその後分離され、次いで細胞が培養される。代替的実施形態では、培養前に、剤でコーティングされたビーズおよび細胞は分離されないが、一緒に培養される。いくつかの実施形態では、ビーズおよび細胞は、磁力などの力を適用することにより最初に濃縮され、細胞表面マーカーのライゲーションが増加し、それにより細胞刺激を誘導する。
【０５０１】
例として、細胞表面タンパク質は、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体が付着される常磁性ビーズ（３ｘ２８ビーズ）を本発明のＴｒｅｇ細胞に接触させることにより、ライゲートされ得る。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、１０４〜１０９のＴ細胞）およびビーズ（例えば、比率１：１のＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（商標登録）Ｍ−４５０ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ常磁性ビーズ）は、ＰＢＳなどの緩衝液（例えば、カルシウムおよびマグネシウムなどの二価カチオンを含まない）中で組み合わされる。ここでも、当業者であれば、状況に応じて任意の細胞濃度を使用できることを容易に理解できる。例えば、標的細胞は、サンプル中で非常にまれでありサンプルの０．０１％のみを構成するか、またはサンプル全体（すなわち、１００％）が、対象の標的細胞を含み得る。したがって、任意の細胞数が、本発明の文脈内にある。ある実施形態では、細胞および粒子を確実に最大限接触させるために、粒子および細胞が一緒に混合される体積を大幅に減少させる（すなわち、細胞の濃度を上げる）ことが望ましい場合がある。例えば、一実施形態では、約２０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。別の実施形態では、１億／ｍＬを超える細胞が使用される。さらなる実施形態では、１，０００万、１，５００万、２，０００万、２，５００万、３，０００万、３，５００万、４，０００万、４，５００万または５，０００万細胞／ｍＬの細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億細胞／ｍＬからの細胞の濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億２５００万または１億５０００万細胞／ｍＬの濃度が使用され得る。高濃度を使用することは、増加された細胞収量、細胞活性化、および／または細胞拡大をもたらし得る。さらに、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞をより効率的に捕捉できるようにする。そのような細胞の集団は、治療的価値を有し得、ある実施形態では、得ることが望ましい場合がある。
【０５０２】
本発明のいくつかの実施形態では、混合物は、数時間（例えば、約３時間）から約１４日間、またはその間の任意の時間整数値で培養されてよい。いくつかの実施形態では、混合物は２１日間培養され得る。本発明のいくつかの実施形態では、ビーズおよびＴ細胞は約８日間一緒に培養される。いくつかの実施形態では、ビーズおよびＴ細胞は、２〜３日間一緒に培養される。いくつかの刺激サイクルが、Ｔ細胞培養時間が６０日またはそれ以上であるように、望まれ得る。Ｔ細胞培養に適した状態は、血清（例えば、ウシ胎児またはヒト血清）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβ、およびＴＮＦ−α、または当業者に公知である細胞の成長のための任意の他の添加剤を含む、増殖および生存に必要な因子を含み得る適切な培地（例えば、Ｍｉｎｉｍａｌ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ＭｅｄｉａまたはＲＰＭＩ  Ｍｅｄｉａ  １６４０、またはＸ−ｖｉｖｏ  １５、（Ｌｏｎｚａ））を含む。細胞の成長のための他の添加剤としては、これらに限定されないが、界面活性剤、ｐｌａｓｍａｎａｔｅ、およびＮ−アセチル−システインおよび２−メルカプトエタノールなどの還元剤が挙げられる。培地としては、ＲＰＭＩ１６４０、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、ａ−ＭＥＭ、Ｆ−１２、Ｘ−Ｖｉｖｏ１５、およびＸ−Ｖｉｖｏ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒを挙げることができ、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、およびビタミンが添加され、無血清であるか、または適切な量の血清（もしくは血漿）、または規定のホルモンのセット、および／もしくはＴ細胞の成長および拡大に十分な量のサイトカイン（複数可）が補充される。ペニシリンおよびストレプトマイシンなどの抗生物質は、実験培養にのみ含まれ、対象に注入される予定である細胞の培養には含まれない。標的細胞は、成長を支援するために必要な条件下、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）および雰囲気（例えば、空気プラス５％ＣＯ２）下で維持される。
【０５０３】
様々な刺激時間に暴露されたＴ細胞は、異なる特性を呈し得る。例えば、典型的な血液または末梢血単核細胞産物は、細胞傷害性またはサプレッサーＴ細胞集団（Ｔｃ、ＣＤ８＋）よりも多いヘルパーＴ細胞集団（Ｔｈ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３受容体およびＣＤ２８受容体を刺激することによるＴ細胞のｅｘ  ｖｉｖｏ拡大は、約８〜９日目以前は主にＴｈ細胞からなるＴ細胞の集団を生成するのに対し、約８〜９日目以降に、Ｔ細胞の集団はますます多くのＴｃ細胞の集団を含む。治療の目的に応じて、いくつかの実施形態では、主にＴｈ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが有利であり得る。いくつかの実施形態では、Ｔｃ細胞の抗原特異的サブセットが単離されている場合、このサブセットをさらに拡大することが有益であり得る。
【０５０４】
さらに、ＣＤ４マーカーおよびＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは大幅に異なるが、大部分は、細胞拡大プロセスの過程で再現性があるように異なる。そのような再現性は、特定の目的のために活性化Ｔ細胞産物を調整することを可能にする。
【０５０５】
本発明のいくつかの実施形態では、調節性Ｔ細胞を得るために、例えば、ＰＣＴ特許公開２００７／１１０７８５（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているとおり、Ｔ細胞をラパマイシンの存在下で培養してもよい。調節性Ｔ細胞を生成する別の方法は、米国特許公開第２０１６／０２４４７０号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、Ｔ細胞は、例えばＴＣＲ／ＣＤ３抗体などのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３活性化因子、例えばＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１  ＢＢ）、ＧＩＴＲ、Ｂ７−１／２、ＣＤ５、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＣＤ４０またはＣＤ１３７抗体などのＴＣＲ共刺激活性化因子、およびラパマイシンと共に培養される。
【０５０６】
本発明のいくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの発現により遺伝子修飾されたＴ細胞はまた、ＲＯＲ−Ｃ、ＦｏｘＰ３、Ｆｏｘｏ１、Ｔ−ｂｅｔ、またはＧａｔａ３、ｃ−Ｍａｆ、またはＡｈＲなどの少なくとも１つの細胞内因子の発現により遺伝子修飾されていてもよい。いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子修飾された免疫細胞は、ＦｏｘＰ３を発現する。いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子修飾された免疫細胞は、Ｆｏｘｏ１を発現する。
【０５０７】
いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子修飾された免疫細胞は、同種免疫細胞であり得る。そのような場合、細胞は、細胞に対する宿主拒絶反応（移植片拒絶反応）および／または宿主に対する細胞の潜在的な攻撃（移植片対宿主病）を減少させるように操作され得る。例として、細胞は、以下の１つ以上のヌル遺伝子型を有するように操作され得る：（ｉ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲアルファ鎖またはベータ鎖）、（ｉｉ）多型性主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子またはクラスＩＩ分子（例えば、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃ；ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、またはＨＬＡ−ＤＲ；またはβ２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ））、（ｉｉｉ）抗原プロセシングに関連するトランスポーター（例えば、ＴＡＰ−１またはＴＡＰ−２）、（ｉｖ）クラスＩＩ  ＭＨＣトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）、（ｖ）マイナー組織適合性抗原（ＭｉＨＡ；例えば、ＨＡ−１／Ａ２、ＨＡ−２、ＨＡ−３、ＨＡ−８、ＨＢ−１Ｈ、またはＨＢ−１Ｙ）、（ｖｉ）それらの任意の組み合わせ。同種の操作された細胞はまた、操作されたＴｒｅｇ細胞を宿主拒絶反応から保護するためにインバリアントＨＬＡまたはＣＤ４７を発現し得る。これらのさらなる遺伝子修飾は、当技術分野で公知である遺伝子編集技術および本明細書に記載の技術によって実施され得る。
【０５０８】
さらに編集された同種細胞は、それらが互換性の問題なしに複数の患者に使用できるため、特に有用である。したがって、同種細胞を「ユニバーサル」と呼ぶことができ、「既製品（ｏｆｆ  ｔｈｅ  ｓｈｅｌｆ）」で使用できる。「ユニバーサル」細胞の使用は、効率を大幅に向上し、採用された細胞療法のコストを削減する。
【０５０９】
ある実施形態では、同種免疫細胞は、その表面にいかなる機能的ＴＣＲも発現しないように操作され得るか、機能的ＴＣＲを含む１つ以上のサブユニットを発現しないように操作され得るか、またはその表面に機能的ＴＣＲを非常にわずかのみ生成するように操作され得る。例えば、本明細書に記載の免疫細胞は、ＴＣＲ分子の細胞表面発現が下方制御されるように操作され得る。あるいは、Ｔ細胞は、例えば、ＴＣＲのサブユニットの１つ以上の変異型または短縮型の発現により、実質的に障害のあるＴＣＲを発現し得る。「実質的に障害のあるＴＣＲ」という用語は、このＴＣＲが宿主において有害な免疫反応を誘発しないことを意味する。
【０５１０】
ある実施形態では、同種免疫細胞は、それらの表面に機能的なＨＬＡを発現しないように操作され得る。例えば、本明細書に記載の免疫細胞は、ＨＬＡ、例えば、ＨＬＡクラス１および／またはＨＬＡクラスＩＩおよび／または非古典的ＨＬＡ分子の細胞表面発現が下方制御されるように操作され得る。
【０５１１】
ある実施形態では、Ｔ細胞は、機能的ＴＣＲおよびＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスＩＩなどの機能的ＨＬＡを欠いてよい。
【０５１２】
機能的ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現を欠く修飾免疫細胞は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの１つ以上のサブユニットのノックアウトまたはノックダウンを含む、任意の好適な手段によって得ることができる。例えば、Ｔｒｅｇ細胞は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、クラスタ化され規則的に間隔を置いた短鎖パリンドローム反復（ＣＲＩＳＰＲ）転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、メガヌクレアーゼ（ｍｎ、ホーミングエンドヌクレアーゼとしても知られる）、またはｍｅｇａＴＡＬ（ＴＡＬエフェクターとｍｎ切断ドメインとの組み合わせ）を用いた、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡのノックダウンを含む。
【０５１３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、欠失される遺伝子の遺伝子座でなど、免疫細胞のゲノム内の特定の遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子座内に挿入され、それにより、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ発現の阻害をもたらす。
【０５１４】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現は、Ｔ細胞中のＴＣＲおよび／またはＨＬＡをコードする核酸を標的とするｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡを使用して阻害され得る。Ｔ細胞におけるｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡの発現は、例えばレンチウイルス発現システムなどの、任意の従来の発現システムを使用して達成され得る。ＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスＩＩ遺伝子の発現を下方制御する例示的なｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡは、例えば、米国特許公開第２００７／００３６７７３号に記載されている。ＴＣＲの成分の発現を下方制御する例示的なｓｈＲＮＡは、例えば、米国特許公開第２０１２／０３２１６６７に記載されている。
【０５１５】
本明細書で使用される「ＣＲＩＳＰＲ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するＣＲＩＳＰＲ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ」は、クラスタ化され規則的に間隔を置いた短鎖パリンドローム反復のセット、またはそのようなＣＲＩＳＰＲのセットを含むシステムを指す。本明細書で使用される「Ｃａｓ」は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質を指す。「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ」システムは、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子をサイレンシングするかまたは変異させるために使用できる、ＣＲＩＳＰＲおよびＣａｓから派生したシステムを指す。
【０５１６】
天然に存在するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、配列決定された真正細菌ゲノムの約４０％および配列決定された古細菌の９０％に見られる。例えば、Ｇｒｉｓｓａら、（ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ８：１７２（２００７年））を参照のこと。このシステムは、プラスミドおよびファージなどの外来遺伝要素に対する耐性を付与し、かつ獲得免疫の一形態を提供する、原核生物の免疫系の一種である。例えば、Ｂａｒｒａｎｇｏｕら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１５：１７０９−１７１２（２００７年）；Ｍａｒｒａｇｉｎｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２２：１８４３−１８４５（２００８年）を参照のこと。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、マウスまたは霊長類などの真核生物の遺伝子編集（特定の遺伝子のサイレンシング、向上、または変更）での使用のために改変されている。例えば、Ｗｉｅｄｅｎｈｅｆｔら、Ｎａｔｕｒｅ  ４８２：３３１−８（２０１２年）を参照のこと。これは、特別に設計されたＣＲＩＳＰＲおよび１つ以上の適切なＣａｓをコードする配列を含むプラスミドを真核細胞に導入することによって達成される。ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座と呼ばれることもあるＣＲＩＳＰＲ配列は、リピートおよびスペーサーを交互に含む。天然に存在するＣＲＩＳＰＲでは、スペーサーは通常、プラスミドまたはファージ配列などの、細菌にとって外来の配列を含み、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ  ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムでは、スペーサーはＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子配列に由来する。ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座からのＲＮＡは、構成的に発現され、Ｃａｓタンパク質により低分子ＲＮＡへとプロセシングされる。これらは、反復配列に隣接されるスペーサーを含む。ＲＮＡは、他のＣａｓタンパク質を導いて、ＲＮＡまたはＤＮＡレベルで外因性遺伝的要素のサイレンシングを行う。例えば、Ｈｏｒｖａｔｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ３２７：１６７−１７０（２０１０年）；Ｍａｋａｒｏｖａら、Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｄｉｒｅｃｔ１：７（２００６年）を参照されたい。したがって、スペーサーは、ｓｉＲＮＡと類似的に、ＲＮＡ分子の鋳型として作用する。例えば、Ｐｅｎｎｉｓｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ３４１：８３３−８３６（２０１３年）を参照されたい。したがって、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を編集し（塩基対を付加するか欠失させる）、またはＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡの発現を減少させる早期停止を導入できる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、ＲＮＡ干渉のように代替的または追加的に使用でき、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を可逆的にオフにする。哺乳動物細胞では、例えば、ＲＮＡは、Ｃａｓタンパク質をＴＣＲおよび／またはＨＬＡプロモーターに誘導し、ＲＮＡポリメラーゼを立体的に遮断する。
【０５１７】
当技術分野で公知である技術を使用して、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害する人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム、例えば、米国特許公開第２０１４／００６８７９７号、およびＣｏｎｇ，Ｓｃｉｅｎｃｅ３３９：８１９−８２３（２０１３年）に記載のものなどを生成できる。例えば、Ｔｓａｉ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２：６５６９−５７６（２０１４年）および米国特許第８，８７１，４４５号；同第８，８６５，４０６号；同第８，７９５，９６５号；同第８，７７１，９４５号；および同第８，６９７，３５９号に記載のものなど、当技術分野において公知である他の人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムもまた、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するために生成され得る。
【０５１８】
上記の手順は、Ｃｐｆ１およびＣ２ｃ１／２／３などのＣａｓ以外のエンドヌクレアーゼを利用するＣＲＩＳＰＲシステムによっても実施され得ることが理解される。
【０５１９】
「ＴＡＬＥＮ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するＴＡＬＥＮ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するためのＴＡＬＥＮ」は、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を編集するために使用できる人工ヌクレアーゼを指す。ＴＡＬＥＮは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインに融合することにより人工的に生成される。転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子の一部分を含む任意の所望のＤＮＡ配列を結合するように操作され得る。操作されたＴＡＬＥをＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることにより、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ配列を含む、任意の所望のＤＮＡ配列に特異的な制限酵素を生成できる。次に、これらを細胞中に導入し、ゲノム編集に使用できる。例えば、Ｂｏｃｈ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１３５−６（２０１１年）；Ｂｏｃｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：１５０９−１２（２００９）；およびＭｏｓｃｏｕら、Ｓｃｉｅｎｃｅ３２６：３５０１（２００９年）を参照されたい。
【０５２０】
ＴＡＬＥは、キサントモナス菌によって分泌されるタンパク質である。ＤＮＡ結合ドメインは、１２番目および１３番目のアミノ酸を除いて高度に保存された３３〜３４個のアミノ酸配列の反復を含む。これらの２つの位置は非常に可変であり、特定のヌクレオチド認識との強い相関関係を示している。したがって、それらは、所望のＤＮＡ配列に結合するように操作できる。ＴＡＬＥＮを生成するために、ＴＡＬＥタンパク質をヌクレアーゼ（Ｎ）に融合し、ヌクレアーゼ（Ｎ）は、野生型または変異型のＦｏｋｌエンドヌクレアーゼである。ＴＡＬＥＮにおけるその使用のために、Ｆｏｋｌにいくつかの変異が加えられ、これらは、例えば、切断の特異性または活性を改善する。例えば、Ｃｅｒｍａｋら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３９：ｅ８２（２０１１）；Ｍｉｌｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３−８（２０１１年）；Ｈｏｃｋｅｍｅｙｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：７３１−７３４（２０１１年）；Ｗｏｏｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３３：３０７（２０１１年）；Ｄｏｙｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ８：７４−７９（２０１０年）；Ｓｚｃｚｅｐｅｋら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５：７８６−７９３（２００７年）；およびＧｕｏら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００：９６（２０１０年）を参照されたい。Ｆｏｋｌドメインは二量体として機能し、適切な配向および間隔で標的ゲノム中の部位に対する固有のＤＮＡ結合ドメインを有する２つの構築物を必要とする。ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋｌ切断ドメインの間のアミノ酸残基の数、および２つの個々のＴＡＬＥＮ結合部位間の塩基の数の両方が、高レベルの活性を達成するための重要なパラメーターであると考えられる（Ｍｉｌｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３−８（２０１１年））。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ  ＴＡＬＥＮを細胞内で使用して、二本鎖切断（ＤＳＢ）を生成できる。修復メカニズムが非相同末端結合を介して破断を不適切に修復する場合、破断部位に変異が導入され得る。例えば、不適切な修復は、フレームシフト突然変異を導入し得る。あるいは、外来ＤＮＡをＴＡＬＥＮと共に細胞中に導入することもでき、外来ＤＮＡの配列および染色体配列に応じて、このプロセスを使用してＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子の欠陥を修正するか、そのような欠陥をｗｔ  ＨＬＡ遺伝子に導入して、これによりＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現を減少させることができる。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ中の配列に特異的なＴＡＬＥＮは、モジュラー成分を使用する様々なスキームを含む、当技術分野において公知である任意の方法を使用して構築できる（Ｚｈａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４９−５３（２０１１年）；Ｇｅｉｂｌｅｒら、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ６：ｅｌ９５０９（２０１１年））。
【０５２１】
「ＺＦＮ」または「ジンクフィンガーヌクレアーゼ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するＺＦＮ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するためのＺＦＮ」は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を編集するために使用できる人工ヌクレアーゼを指す。ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡ結合ドメインに融合されたＦｏｋｌヌクレアーゼドメイン（またはその誘導体）を含む。ＺＦＮの場合、ＤＮＡ結合ドメインは１つ以上のジンクフィンガーを含む。例えば、Ｃａｒｒｏｌｌら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １８８：７７３−７８２（２０１１年）；およびＫｉｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：１１５６−１１６０（１９９６年）を参照のこと。ジンクフィンガーは、１つ以上の亜鉛イオンによって安定化された小さいタンパク質構造モチーフである。ジンクフィンガーは、例えば、Ｃｙｓ２Ｈｉｓ２を含み得、かつ約３ｂｐの配列を認識できる。既知の特異性の様々なジンクフィンガーを組み合わせて、約６、９、１２、１５または１８ｂｐの配列を認識するマルチフィンガーポリペプチドを生成できる。ファージディスプレイ、酵母ワンハイブリッドシステム、バクテリアワンハイブリッドおよびツーハイブリッドシステム、および哺乳動物細胞を含む、特定の配列を認識するジンクフィンガー（およびそれらの組み合わせ）を生成するために、様々な選択およびモジュラーアセンブリ技術が利用可能である。
【０５２２】
ＴＡＬＥＮのように、ＺＦＮはＤＮＡを切断するために二量体化される必要がある。したがって、一対のＺＦＮが、非パリンドロームＤＮＡ部位を標的とするために必要とされる。２つの個々のＺＦＮは、ヌクレアーゼが適切な間隔で配置された状態でＤＮＡの反対側の鎖を結合する必要がある（Ｂｉｔｉｎａｉｔｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：１０５７０−５（１９９８年））。またＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮはＤＮＡ中に二本鎖破断を引き起こすことができ、これは、不適切に修復された場合にフレームシフト変異を引き起こし、細胞中のＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現およびそれらの量の減少をもたらし得る。ＺＦＮは、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を変異させるために相同組換えと共に使用され得る。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ中の配列に特異的なＺＦＮは、当技術分野において公知である任意の方法を使用して構築できる。例えば、Ｐｒｏｖａｓｉ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．１８：８０７−８１５（２０１１年）；Ｔｏｒｉｋａｉ，Ｂｌｏｏｄ  １２２：１３４１−１３４９（２０１３年）；Ｃａｔｈｏｍｅｎら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：１２００−７（２００８）；Ｑｕｏら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４００：９６（２０１０年）；および米国特許公開第２０１１／０１５８９５７号および同第２０１２／００６０２３０号を参照されたい。
【０５２３】
「メガヌクレアーゼ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するメガヌクレアーゼ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するためのメガヌクレアーゼ」は、大きい（＞１４塩基対）認識部位を有する単量体エンドヌクレアーゼを指し、これはＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を編集するために使用できる。メガヌクレアーゼ（ｍｎ）は、細菌のホーミングエンドヌクレアーゼに由来し、かつ固有の標的部位用に操作された、生来のヌクレアーゼ活性を有する単量体タンパク質である。ホーミングエンドヌクレアーゼは、それらの宿主ゲノム中の個々の遺伝子座で二本鎖破断を作り出し、それにより部位特異的遺伝子変換イベントを駆動できるＤＮＡ切断酵素である（Ｓｔｏｄｄａｒｄ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ１９（１）：７−１５（２０１１年））。ホーミングエンドヌクレアーゼは、サイズが小さいにもかかわらず、長いＤＮＡ配列（典型的には、２０〜３０塩基対）を認識する。ホーミングエンドヌクレアーゼは、非常に広く普及しており、微生物中で、ならびにファージおよびウイルスにも見られる。ＬＡＧＬＩＤＡＤＧおよびＨｉｓ−Ｃｙｓボックス酵素（これらの酵素の中で最も配列特異的である）は、ＤＮＡ標的部位の主要な溝にドッキングする逆平行βシートに依存する（Ｆｌｉｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ３９４（６６８８）：９６−１０１（１９９８年）；Ｊｕｒｉｃａら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．２（４）：４６９−７６（１９９８年）。そこでそれらは、複数の連続する塩基対にわたり不均一に分布される配列特異的および非特異的接触のコレクションを確立する（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３２９（２）：２５３−２６９（２００３年）；Ｓｃａｌｌｅｙ−Ｋｉｍら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．３７２（５）：１３０５−１９（２００７年）。
【０５２４】
ＬＡＧＬＩＤＡＤＧホーミングエンドヌクレアーゼ（ＬＨＥ）ファミリーは、遺伝子ターゲティングアプリケーションに使用される操作された酵素の主要な供給源である。ＬＨＥファミリーは、主に古細菌内、葉緑体内、ならびに藻類および真菌のミトコンドリアゲノムにおいてコードされる（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒら、Ｈｏｍｉｎｇ  Ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｉｎｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１６（２００５年）；Ｄａｌｇａａｒｄら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（２２）：４６２６−３８（１９９７）；Ｓｅｔｈｕｒａｍａｎら、Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｅｖｏｌ．２６（１０）：２２９９−３１５（２００９年）。タンパク質鎖ごとに単一の保存されたＬＡＧＬＩＤＡＤＧモチーフ（配列番号５８）を所有するメガヌクレアーゼは、パリンドロームおよびほぼパリンドロームのＤＮＡ標的配列を切断するホモ二量体タンパク質を形成し、一方でタンパク質鎖ごとに２つのそのようなモチーフを含むものは、完全に非対称なＤＮＡ配列を標的にできる、より大きい疑似対称モノマーを形成する。
【０５２５】
メガヌクレアーゼは、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを標的とするように操作でき、したがってＤＮＡ中に二本鎖破断を作り出し、これは、不適切に修復された場合にフレームシフト変異を生じ、細胞中でＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現および量の減少をもたらし得る。
【０５２６】
「ＭｅｇａＴＡＬ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するｍｅｇａＴＡＬ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するためのｍｅｇａＴＡＬ」は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を編集するために使用できる人工ヌクレアーゼを指す。ＭｅｇａＴＡＬは、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧホーミングエンドヌクレアーゼファミリーに由来するメガヌクレアーゼのＮ末端への最小ＴＡＬ（転写活性化因子様）エフェクタードメインの融合により得られるハイブリッド単量体ヌクレアーゼである（Ｂｏｉｓｓｅｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．４２（４）：２５９１−６０１（２０１４年）；Ｔａｋｅｕｃｈｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．１２３９：１０５−３２（２０１５年））。したがって、ＭｅｇａＴＡＬは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインにより提供される追加の親和性および特異性を有する部位特異的メガヌクレアーゼ切断ヘッドから構成される。
【０５２７】
ＭｅｇａＴＡＬは、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを標的とするように操作でき、したがってＤＮＡ中に二本鎖破断を作り出し、これは、不適切に修復された場合にフレームシフト変異を生じ、細胞中でＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現および量の減少をもたらし得る。Ｉ−ＯｎｕＩメガヌクレアーゼ（ｍｎ）のバリアントを使用して、Ｔ細胞受容体アルファ（ＴＣＲα）遺伝子をノックアウトするためのＴＣＲα−ｍｅｇａＴＡＬを設計した。ＴＣＲαｍｎを、ＴＣＲαｍｎ結合部位の上流のＤＮＡ配列に結合するように設計された１０．５リピートＴＡＬＥアレイに融合した。ＴＣＲαを標的とするｍｅｇａＴＡＬは、ヒト初代Ｔ細胞において検出可能なオフターゲット切断を伴わずに非常に多い遺伝子破壊を達成することが見出された（Ｂｏｉｓｓｅｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ４２（４）：２５９１−６０１（２０１４年））。
【０５２８】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲを発現するＴ細胞集団は、内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を欠くか、または内因性ＴＣＲの発現もしくは活性を低減するかもしくは排除するように改変されたものである。ＨＬＡ発現を阻害するかまたは排除するための本明細書に記載の方法はいずれも、内因性ＴＣＲの１つ以上の成分を標的にするために使用され得ることが理解される。
【０５２９】
いくつかの実施形態では、テロメラーゼ遺伝子によるトランスフェクションは、Ｔ細胞のテロメアを延長し、患者のＴ細胞の持続性を改善できる。例えば、Ｊｕｎｅ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ１１７：１４６６−１４７６（２００７年）を参照されたい。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子修飾されたＴｒｅｇ細胞は、テロメラーゼサブユニット、例えば、テロメラーゼの触媒サブユニット、例えば、ＴＥＲＴ、例えば、ｈＴＥＲＴを異所的に発現する。いくつかの態様では、本開示は、テロメラーゼサブユニット、例えば、テロメラーゼの触媒サブユニット、例えば、ＴＥＲＴ、例えば、ｈＴＥＲＴをコードする核酸と細胞を接触させることを含む、本発明のキメラ受容体発現細胞を生成する方法を提供する。細胞は、キメラ受容体をコードする構築物（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ）と接触される前、接触と同時に、または接触した後に、核酸と接触されてもよい。
【０５３０】
本発明はさらに、本発明の免疫細胞を得るための方法に関し、本方法は、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸により少なくとも１つの免疫細胞を形質導入し、任意により形質導入細胞を拡大させることを含む。いくつかの実施形態では、この方法はｅｘ  ｖｉｖｏ法である。
【０５３１】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞を得るための方法は、
−ＰＢＭＣ集団から免疫細胞を単離／濃縮するステップ（例えば、白血球アフェレシスにより回収される）、
−任意により活性化ステップ、
−本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターを用いた形質導入ステップ、
−任意により拡大ステップ、
−任意により洗浄ステップ、および
−任意により凍結ステップ、
を含む。
【０５３２】
いくつかの実施形態では、本発明の操作Ｔｒｅｇ細胞は、Ｔｒｅｇ表現型を維持するため、および／またはＦｏｘＰ３および導入遺伝子の発現を増加させるために、ラパマイシンおよび／または高濃度のＩＬ−２を含む組織培養培地中で培養され得る。
組成物
【０５３３】
本発明の別の目的は、本明細書に記載の本発明の少なくとも１つの免疫細胞または免疫細胞集団を含む、それからなる、または本質的にそれからなる組成物である。いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞または免疫細胞集団は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、γδＴ細胞、ダブルネガティブ（ＤＮ）細胞、調節性免疫細胞、調節性Ｔ細胞、エフェクター免疫細胞、エフェクターＴ細胞、Ｂ細胞、および骨髄系細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０５３４】
本明細書で使用される場合、医薬組成物または医薬品に関して「本質的にからなる」という用語は、本発明の少なくとも１つの免疫細胞または細胞集団が、医薬組成物または医薬品内で生物学的活性を有する唯一の治療剤または剤であることを意味する。
【０５３５】
いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の本発明の少なくとも１つの単離されたかつ／または実質的に精製された免疫細胞集団を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。
【０５３６】
いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲは、少なくとも１つの細胞外結合ドメイン、任意により、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメイン、少なくとも１つの膜貫通ドメイン、および少なくとも１つの細胞内ドメインを含み、少なくとも１つの細胞内ドメインは、少なくとも１つの一次細胞内シグナル伝達ドメイン、および任意により少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む）を細胞表面で発現するように操作された、本明細書に記載の本発明の少なくとも１つの免疫細胞集団を含むか、それからなるか、または本質的になり、少なくとも１つの膜貫通ドメインは、ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアント、あるいは任意の膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントまたはそれらの組み合わせであり、かつ／または少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、または任意の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントもしくはそれらの組み合わせであり、膜貫通ドメインおよび共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、またはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントである。
【０５３７】
いくつかの実施形態では、本組成物は、冷凍され、解凍されている。
【０５３８】
本発明の別の目的は、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞または集団、および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む、それからなる、または本質的にそれらからなる医薬組成物である。
【０５３９】
本発明の別の目的は、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる医薬品である。
【０５４０】
いくつかの実施形態では、医薬組成物または医薬品は、本明細書に記載の本発明の少なくとも１つの単離されたかつ／または実質的に精製された免疫細胞集団を含む。
【０５４１】
いくつかの実施形態では、医薬組成物または医薬品は、本明細書に記載の免疫細胞集団の組み合わせ（すなわち、本発明の少なくとも２つの別個の免疫細胞集団）を含む。
【０５４２】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物または医薬品は、少なくとも第２の別個の免疫細胞集団をさらに含み、第２の免疫細胞集団の細胞は、抗原、抗原の断片、抗原のバリアント、またはそれらの混合物に特異的な第２の別個のＣＡＲを細胞表面上で発現する。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、一般的なヒトの食事からの食物抗原に特異的である。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、例えば、多発性硬化症関連抗原、関節関連抗原、眼関連抗原、ヒトＨＳＰ抗原、皮膚関連抗原または移植片拒絶反応またはＧＶＨＤに関与する抗原などの自己抗原に特異的である。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、吸入アレルゲン、摂取アレルゲン、または接触アレルゲンに特異的である。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、卵白アルブミン、ＭＯＧ、ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲン、およびそれらの断片、バリアント、および混合物からなる群から選択される抗原に特異的である。
【０５４３】
いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、卵白アルブミンまたはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、ＭＯＧまたはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、ＩＩ型コラーゲンまたはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲンまたはシトルリン化フィブリノーゲン、あるいはそれらの断片、バリアントおよび混合物に特異的である。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、ＨＬＡ−Ａ２またはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒまたはそれらの断片、バリアントまたは混合物に特異的である。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、またはそれらの断片、バリアント、および混合物などのＢ細胞表面マーカーに特異的である。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、本明細書に記載の癌抗原またはその断片、バリアントまたは混合物に特異的である。
【０５４４】
いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、感染した細胞を認識する。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲは、ウイルス抗原もしくはその断片、バリアント、もしくは混合物；細菌抗原またはその断片、バリアント、もしくは混合物；または真菌抗原もしくはその断片、バリアント、もしくは混合物に特異的である。
【０５４５】
いくつかの実施形態では、第２の免疫細胞集団の細胞は、細胞表面上でＣＡＲを発現し、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、タンパク質またはその断片またはバリアント、例えば、自己抗原またはその断片またはバリアントである。
【０５４６】
いくつかの実施形態では、他の免疫細胞集団の細胞は、細胞表面上で、例えば、Ｂ細胞上で発現される自己抗体などの、自己抗体に特異的なＣＡＲを発現する。
【０５４７】
本明細書に記載の組成物および医薬品は、例えば、滅菌水、生理食塩水、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液；塩；抗生物質；等張剤；グルコース、マンノース、スクロース、デキストラン、およびマンニトールなどの炭水化物；ヒト血清アルブミンなどのタンパク質）；ポリペプチド；グリシンおよびアルギニンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤を含んでもよい。組成物および医薬品は、Ｔｒｅｇ表現型および成長を支持する因子（例えば、ＩＬ−２およびラパマイシンまたはその誘導体）、抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、およびＩＬ−３５）、および細胞療法用の他の細胞（例えば、癌治療用のＣＡＲ  Ｔエフェクター細胞または再生治療用の細胞）をさらに含み得る。貯蔵および輸送のために、細胞は任意により凍結保存され得る。使用前に、細胞を解凍し、薬学的に許容される担体で希釈してもよい。
【０５４８】
本発明の組成物は、いくつかの実施形態では、静脈内投与用に製剤化される。
【０５４９】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲを発現する細胞は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントなしに、かつ／またはＴＮＦＲ２細胞内共刺激シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントなしにＣＡＲを発現する細胞と比較して、低下された持続性シグナル伝達を呈する。
【０５５０】
本明細書で使用される「持続性シグナル伝達」という用語は、抗原非依存性活性化のバックグランドを指す。
【０５５１】
持続性シグナル伝達を測定するための方法は、当業者に周知であり、これらに限定されないが、ＣＡＲ発現細胞の代謝活性を測定すること、受容体によって認識される抗原による刺激がない場合に、細胞活性化の１つ以上の指標を測定すること、細胞加齢または細胞老化に関連する１つ以上の表現型の変化を測定すること、抗原刺激の不在下で細胞周期の進行を決定すること、および未修飾細胞のサイズと比較して、受容体を発現する細胞のサイズを測定することを含む。
【０５５２】
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアントおよび／またはＴＮＦＲ２細胞内共刺激シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントを発現するＣＡＲ操作された免疫細胞は、試験Ａの条件で測定した場合、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアントおよび／またはＴＮＦＲ２細胞内共刺激ドメインもしくはその断片もしくはバリアントを発現しないＣＡＲ操作された免疫細胞と比較して、低下された持続性シグナル伝達を有する。
試験Ａ：
【０５５３】
Ｔ細胞活性化の指標を使用して、持続性シグナル伝達を測定する。試験Ａの条件において、ＣＤ６９陽性細胞のレベルを、本発明のＣＡＲの活性化の前および後の細胞集団において測定する。活性化アッセイを、免疫細胞培養の９日目に実施する。簡潔に言えば、０．０５ｘ１０６の免疫細胞を、最終容量２００μＬで９６Ｕの底プレートに、単独でまたは抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３コーティングビーズの存在下（１：１の免疫細胞対ビーズ比）で、もしくは新鮮な解凍自家Ｂ細胞（免疫細胞対Ｂ細胞の比率が１：１）の存在下で播種する。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間後に、細胞をＣＤ６９および特定の免疫細胞集団に関連するマーカー（Ｂ細胞の場合はＣＤ１９、Ｔ細胞の場合はＣＤ４またはＣＤ８など）について染色し、次いでフローサイトメトリーを使用して分析する。非形質導入細胞と比較して、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、および／またはＴＮＦＲ２細胞内共刺激シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントを含む）を発現する細胞によるＣＤ６９自発的発現（いかなる抗原シミュレーションもないことを意味する）を監視することにより、持続性シグナル伝達の強度を決定できる。ＴＮＦＲ２膜貫通またはＴＮＦＲ２細胞内共刺激シグナル伝達ドメインを含まないＣＡＲにより形質導入された細胞を、対照として使用する。
【０５５４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ構築物は、低下された持続性シグナル伝達を有する操作免疫細胞を産生するために使用され得る。いくつかの実施形態では、本発明は、低下された持続性シグナル伝達を有する操作された免疫細胞（すなわち、ＣＡＲを発現する細胞）を産生する方法を提供する。現在利用可能なＣＡＲ構築物、特にＣＡＲエフェクター分野で使用されるものは多くの場合、高持続性シグナル伝達に関連しており、ＣＡＲ操作された細胞の効力を制限する。実際に、そのような持続性シグナル伝達は、ＣＡＲ操作された細胞の構成的活性化に関連しており、それらの早期の消耗または死さえももたらす。本発明のＣＡＲ構築物（ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、および／またはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアントを含む）は、細胞の持続性シグナル伝達および構成的活性化の低下をもたらす。
治療用途
【０５５５】
本発明は、それを必要とする対象における１つ以上の疾患、障害、症状、または状態を治療するための方法を提供し、本方法は、本明細書に記載のとおり、ＣＡＲ操作された免疫細胞または組成物を対象に投与することを含む。本発明はまた、医薬品としての使用のための、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物、または医薬品中において）を提供する。本発明はまた、医薬品の調製物中での使用のための、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物、または医薬品中において）を提供する。本発明の操作免疫細胞により治療され得る疾患としては、これらに限定されないが、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植状態、癌および感染症が挙げられる。
【０５５６】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象における疾患または障害を治療するための方法は、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団、例えば、操作された調節性免疫細胞集団（Ｔｒｅｇ細胞集団など）を対象に投与することを含み、疾患または障害は、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、または臓器移植状態である。ある実施形態では、疾患または障害は、移植片拒絶反応または移植片対宿主病である。
【０５５７】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象において疾患または障害を治療するための方法は、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団、例えば、操作エフェクター免疫細胞集団（Ｔｒｅｇ細胞集団など）を対象に投与することを含み、疾患または障害は、癌または感染症である。
【０５５８】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象において疾患または障害を治療するための方法は、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団、例えば、操作されたエフェクター免疫細胞集団（例えば、Ｔｒｅｇ細胞集団）を対象に投与することを含み、対象は、疾患または障害のための遺伝子治療（例えば、ＡＡＶベースの遺伝子療法）を必要としている。
【０５５９】
いくつかの実施形態では、方法は細胞療法である。
【０５６０】
いくつかの実施形態では、細胞療法は自家である。
【０５６１】
いくつかの実施形態では、細胞療法は異種である。
【０５６２】
いくつかの実施形態では、細胞療法は同種である。
【０５６３】
いくつかの実施形態では、方法は、遺伝子治療法であり、本明細書に記載の核酸またはベクターの投与を伴う。
１．炎症性疾患
【０５６４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、それを必要とする対象における１つ以上の炎症性疾患、障害、症状、または状態の治療において使用され得る。ある実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、この文脈において免疫寛容を促進するために使用され得る。本発明は、それを必要とする対象における炎症性疾患または障害を治療する方法を提供し、本方法は、本明細書に記載のとおり、治療有効量の少なくとも１つの免疫細胞集団を投与することを含む。本発明はまた、炎症性疾患または障害の治療における使用のための、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物または医薬品）に関する。本発明はまた、炎症性疾患または障害を治療するための医薬品の調製物における使用のための、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物または医薬品）に関する。
【０５６５】
「炎症性障害」および「炎症性疾患」という用語は互換的に使用され、本明細書で使用される場合、炎症に関連する任意の異常を指す。
【０５６６】
いくつかの実施形態では、炎症状態は、炎症性疾患および感染症に関連するまたは癌に関連する炎症を含む。
【０５６７】
いくつかの実施形態では、炎症状態は、炎症性疾患および自己免疫疾患に関連する炎症を含む。
【０５６８】
炎症性疾患、障害または状態の例としては、これらに限定されないが、関節炎、関節リウマチ、強直性脊椎炎、変形性関節症、乾癬性関節炎、若年性特発性関節炎、若年性関節リウマチ、尿酸塩関節炎、痛風、慢性多発性関節炎、肩関節周囲炎、頸部関節炎、腰仙関節炎、腸炎性関節炎および強直性脊椎炎、喘息、皮膚炎、乾癬、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、線維症、嚢胞性線維症、肺線維症、肝硬変、心内膜心筋線維症、ｄｅｄｉａｓｔｉｎａｌ線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腎性線維症、ケロイド、強皮症、関節線維症、移植後の遅発性および慢性の固形臓器拒絶反応、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、天疱瘡、尋常性天疱瘡、疱疹状天疱瘡、増殖性天疱瘡、ＩｇＡ天疱瘡、紅斑性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、妊娠性類天疱瘡、粘膜皮膚病、結節性類天疱瘡、線状ＩｇＡ水疱性皮膚症、水疱性扁平苔癬、後天性表皮水疱症、自己免疫性糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性血管症、眼の炎症、ブドウ膜炎、鼻炎、虚血−再灌流障害、血管形成術後の再狭窄、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、糸球体腎炎、バセドウ病、胃腸アレルギー、結膜炎、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、狭心症、小動脈疾患、急性散在性脳脊髄炎、特発性血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、全身性硬化症、抗リン脂質抗体症候群、シェーグレン症候群、自己免疫性溶血性貧血、大腸炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、塞栓症、肺塞栓症、動脈塞栓症、静脈塞栓症、アレルギー性炎症、循環器疾患、移植関連疾患、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植片移植拒絶反応に関連する障害、慢性拒絶反応、および組織または細胞の同種移植片または異種移植片、自己免疫疾患、外傷後の変性、脳卒中、移植拒絶反応、アレルギー状態および過敏症、例えば、アレルギー性鼻炎、アレルギー性湿疹など、皮膚疾患、皮膚の炎症性疾患、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０５６９】
皮膚病の例としては、これらに限定されないが、ざ瘡；日光角化症；アトピー性皮膚炎；接触性皮膚炎；褥瘡性潰瘍（床ずれ）；湿疹；紅皮症；血管腫、例えば、小児血管腫；肥厚性瘢痕；扁平苔癬；苔癬様発疹；リンパ管新生；乾癬；化膿性肉芽腫；伝染性軟属腫；神経線維腫症；酒さ様皮膚炎；劣性ジストロフィー表皮水疱症；傷跡（ケロイド）；強皮症；脂漏性角化症；血管肉腫、基底細胞癌、血管内皮腫、カポジ肉腫、悪性黒色腫、黒色腫、扁平上皮癌などの皮膚癌；皮膚潰瘍；自家移植および同種移植などの植皮後の皮膚の損傷；スティーブンス・ジョンソン症候群および中毒性表皮壊死症；スタージーウェーバー症候群；結節性硬化症；静脈性潰瘍；尋常性疣贅；疣贅、例えば、ウイルス性疣贅；創傷；などが挙げられる。
【０５７０】
皮膚の炎症性疾患の例としては、これらに限定されないが、乾癬、滴状乾癬、反対型乾癬、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、急性熱性好中球性皮膚症、湿疹、皮脂欠乏性湿疹、異汗性湿疹、汗疱状湿疹（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｐａｌｍｏｐｌａｎａｒ  ｅｃｚｅｍａ）、尋常性ざ瘡、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、皮膚筋炎、剥脱性皮膚炎、手湿疹、汗疱、酒さ様皮膚炎、サルコイドーシスによって引き起こされる酒さ、強皮症によって引き起こされる酒さ、スウィート症候群によって引き起こされる酒さ、全身性エリテマトーデスによって引き起こされる酒さ、蕁麻疹による酒さ、帯状疱疹に伴う痛みによって引き起こされる酒さ、スウィート病、好中球性汗腺炎、無菌性膿疱症、薬疹、脂漏性皮膚炎、ばら色粃糠疹、皮膚菊池病、掻痒性蕁麻疹および妊娠性痒疹、スティーブンス・ジョンソン症候群および中毒性表皮壊死、入墨反応、ウェルズ症候群（好酸球性蜂巣炎）、反応性関節炎（ライター症候群）、腸関連皮膚症−関節炎症候群、リウマチ性好中球性皮膚症、好中球性エクリン汗腺炎、背側の好中球性皮膚症、プラズマ細胞性周囲炎、亀頭包皮炎、ベーチェット病、遠心性環状紅斑、色素異常性固定紅斑、多形紅斑、環状肉芽腫、手湿疹、光沢苔癬、扁平苔癬、硬化性苔癬および萎縮性苔癬、慢性単純性苔癬、棘状苔癬、貨幣状湿疹、壊疽性膿皮症、サルコイドーシス、角層下膿疱症、蕁麻疹、および一過性棘融解性皮膚症が挙げられる。
２．自己免疫疾患
【０５７１】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、それを必要とする対象における１つ以上の自己免疫疾患、障害、症状、または状態の治療において使用され得る。ある実施形態では、本発明のＣＡＲ修飾免疫細胞は、この文脈において免疫寛容を促進するために使用され得る。したがって、本発明は、それを必要とする対象における自己免疫疾患を治療する方法を提供し、本方法は、本明細書に記載のとおり、治療有効量の少なくとも１つの免疫細胞集団を投与することを含む。本発明はまた、自己免疫疾患の治療における使用のための、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物、または医薬品中において）を提供する。本発明はまた、自己免疫疾患を治療するための医薬品の製造における使用のための、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物、または医薬品中において）を提供する。
【０５７２】
自己免疫疾患の例としては、これらに限定されないが、狼瘡（例えば、エリテマトーデス、ループス腎炎、など）、橋本甲状腺炎、原発性粘液水腫、バセドウ病、悪性貧血、自己免疫性萎縮性胃炎、アディソン病、糖尿病（例えば、インスリン依存性糖尿病、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、など）、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、天疱瘡、クローン病、交感性眼炎、自己免疫性ブドウ膜炎、多発性硬化症、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少症、原発性胆汁性肝硬変、慢性作用型肝炎、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、リウマチ性疾患（例えば、関節リウマチ）、多発性筋炎、強皮症、乾癬、混合性結合組織病などが挙げられる。
３．アレルギー性疾患
【０５７３】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、それを必要とする対象における１つ以上のアレルギー性疾患、障害、症状、または状態の治療において使用され得る。ある実施形態では、本発明のＣＡＲ修飾免疫細胞は、この文脈において免疫寛容を促進するために使用され得る。したがって、本発明は、それを必要とする対象におけるアレルギー性疾患、障害、症状、または状態を治療する方法を提供し、本方法は、本明細書に記載のとおり、治療有効量の少なくとも１つの免疫細胞集団を投与することを含む。本発明はまた、アレルギー性疾患、障害、症状、または状態の治療における使用のための、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物、または医薬品中において）を提供する。本発明はまた、アレルギー性疾患、障害、症状、または状態を治療するための医薬品の製造における使用するための、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物、または医薬品中において）を提供する。
【０５７４】
アレルギー性疾患の例としては、これらに限定されないが、吸入アレルゲン、摂取アレルゲン、または接触アレルゲンに対するアレルギー性疾患が挙げられる。アレルギー性疾患の他の例としては、これらに限定されないが、アレルギー性喘息、過敏性肺疾患、食物アレルギー、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性鼻結膜炎、慢性蕁麻疹、遅延型過敏症障害および系統的アナフィラキシーが挙げられる。
４．移植
【０５７５】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、臓器または組織移植に関連する１つ以上の疾患、障害、症状、または状態（例えば、臓器または組織の拒絶反応／機能不全、ＧＶＨＤ、および／またはそれらに関連する状態）の治療ににおいて使用できる。移植片拒絶反応は、免疫応答を介するレシピエントの免疫細胞によるドナーの移植組織の破壊を伴う。免疫応答もＧＶＨＤに関与するが、この場合、レシピエントの組織は、移植によりレシピエントに移されたドナーの免疫細胞により破壊される。したがって、ＣＡＲを介した免疫細胞の再方向付けおよび活性化は、移植レシピエントにおける免疫エフェクター細胞によるミスマッチ細胞および／または組織の拒絶を抑制する方法、またはＧＶＨＤの場合に移植された免疫担当細胞の病原性作用を阻害する方法をもたらす。いくつかの実施形態では、ミスマッチ細胞および／または組織は、ＨＬＡ−Ａ２ミスマッチの細胞および／または組織を含む。本発明のＣＡＲ修飾免疫細胞は、特に臓器移植後または組織移植後の、対象における免疫寛容、操作上の寛容、および／または免疫順応を促進するために使用され得る。したがって、本発明は、対象における免疫寛容、操作上の寛容、および／または免疫順応を促進する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載のとおり、ＣＡＲ操作された免疫細胞または医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、対象の移植された臓器または組織に対する免疫寛容、操作上の寛容、および／または免疫順応を促進するためのものであり得る。本発明はまた、対象における移植された臓器または組織に対する免疫寛容、操作上の寛容、および／または免疫順応を促進することにおける、または対象における移植された臓器または組織に対する使用のための本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物または医薬品）を提供する。本発明はまた、対象における移植された臓器または組織に対する免疫寛容、操作上の寛容、および／または免疫順応を促進するための医薬品の製造における、または対象における移植された臓器または組織に対する使用のための本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物または医薬品）を提供する。
【０５７６】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作されたＴｒｅｇ細胞）は、臓器または組織の移植と同時に、その前に、またはその後に投与される。
【０５７７】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作されたＴｒｅｇ細胞）は、移植された臓器または組織の拒絶反応を予防するかまたは治療するために使用され得る。移植された臓器または組織の拒絶の例としては、これらに限定されないが、移植された臓器または組織の超急性拒絶反応、および移植された臓器または組織の抗体媒介性拒絶反応が挙げられる。
【０５７８】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、移植された臓器または組織に暴露された対象に、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作されたＴｒｅｇ細胞）を投与することを含む。
【０５７９】
いくつかの実施形態では、移植された臓器または組織は、骨髄移植、臓器移植、輸血、または対象に意図的に導入された他の任意の外来組織または細胞を包含し得る。
【０５８０】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作されたＴｒｅｇ細胞）は、これらに限定されないが、同種移植片拒絶反応または異種移植片拒絶反応を含む、移植後の移植片拒絶反応を阻害するための療法として使用され得る。
【０５８１】
本発明の別の目的は、対象における臓器または組織移植片拒絶反応を予防するかまたは治療する方法であり、方法は、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作されたＴｒｅｇ細胞）、または本免疫細胞を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。
【０５８２】
本発明の別の目的は、対象における移植片生存の期間を延長させる方法であり、方法は、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作されたＴｒｅｇ細胞）、または同細胞を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。
【０５８３】
いくつかの実施形態では、この方法は、１週間、２週間、３週間、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、２０年間、３０年間、４０年間、５０年間、６０年間、７０年間、８０年間、９０年間、１００年間の、または対象の生涯の移植片生存期間をもたらす。
【０５８４】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞または組成物の投与は、対象が受ける免疫抑制剤療法の量の減少を可能にする。いくつかの実施形態では、対象は、免疫抑制剤療法を必要としない、かつ／または本療法を受けていない。
【０５８５】
いくつかの実施形態では、移植片は同種移植片である。いくつかの実施形態では、移植片は、レシピエントへの移植片の移植と同時に、その前に、またはその後に、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作されたＴｒｅｇ細胞）に暴露され得る。いくつかの実施形態では、臓器または組織移植は、心臓、心臓弁、肺、腎臓、肝臓、膵臓、腸、皮膚、血管、骨髄、幹細胞、骨、または膵島細胞であり得る。しかし、本発明は、特定の種類の移植に限定されない。
【０５８６】
いくつかの実施形態では、ドナー移植は、レシピエントに対する移植片の免疫原性を低下させるために、レシピエントへの移植前に臓器または組織移植片を本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞により治療することにより「プレコンディショニングされ」または「前処理され」てよく、それにより、または移植片拒絶反応を低減させるかまたは防ぐ。
【０５８７】
いくつかの実施形態では、移植宿主またはレシピエントは、ＨＬＡ−Ａ２陰性である。いくつかの実施形態では、移植宿主またはレシピエントはＨＬＡ−Ａ２陰性であり、ＨＬＡ−Ａ２５、ＨＬＡ−Ａ２９およびＨＬＡ−Ａ３０からなる群から選択されるＨＬＡ−Ａサブタイプについて陽性である。
【０５８８】
いくつかの実施形態では、移植はＨＬＡ−Ａ２陽性である。
【０５８９】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防するかまたは治療するために使用され得る。ある実施形態では、ＧＶＨＤは、造血幹細胞移植後に発生し得る。いくつかの実施形態では、本方法は、移植された臓器または組織に暴露された対象に、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、移植された臓器または組織は、骨髄移植、臓器移植、輸血、または対象に意図的に導入された他の任意の外来組織または細胞を包含し得る。例えば、ＧＶＨＤは、心臓、心臓弁、肺、腎臓、肝臓、膵臓、腸、皮膚、血管、骨髄、幹細胞、骨、または膵島細胞の移植後に発生し得る。しかし、本発明は、特定の種類の移植に限定されない。
【０５９０】
本発明の別の目的は、対象における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防するかまたは治療する方法であり、本方法は、ＣＡＲ操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む。
【０５９１】
いくつかの実施形態では、本発明は、ドナー移植片、例えば、生体適合性格子またはドナー組織、臓器または細胞を、レシピエントへの移植片の移植と同時に、その前に、またはその後に、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）と接触させる方法を提供する。
【０５９２】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）を使用して、ドナー移植によるレシピエントに対する有害応答を改善するか、阻害するかまたは低減させて、それによってＧＶＨＤを予防するかまたは治療してもよい。
【０５９３】
本発明の別の目的は、対象におけるＧＶＨＤの発症を予防するかまたは遅延させる方法であり、本方法は、ＣＡＲ操作された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む。
【０５９４】
いくつかの実施形態では、ＧＶＨＤの発症は、１週間、２週間、３週間、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、２０年間、３０年間、４０年間、５０年間、６０年間、７０年間、８０年間、９０年間、１００年間、または対象の生涯の間遅延される。
【０５９５】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞または組成物の投与は、対象が受ける免疫抑制剤療法の量の減少を可能にする。いくつかの実施形態では、対象は、免疫抑制剤療法を必要としない、かつ／または本療法を受けていない。
【０５９６】
いくつかの実施形態では、ＧＶＨＤは、急性ＧＶＨＤまたは慢性ＧＶＨＤであり得る。
【０５９７】
いくつかの実施形態では、ドナー移植は、レシピエントに対する移植片の免疫原性を低下させるために、レシピエントへの移植前に移植片を本発明のＣＡＲ操作免疫細胞に（例えば、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）より処理することにより「プレコンディショニングされ」または「前処理され」てよく、それにより移植片拒絶反応を低減させるかまたは防ぐ。いくつかの実施形態では、移植に関連し得るＴ細胞を活性化するために、移植前に移植片をレシピエントからの細胞または組織と接触させてもよい。レシピエントからの細胞または組織による移植片の治療後に、細胞または組織を移植片から除去してもよい。次に、処理された移植片を本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）と接触させて、レシピエントの細胞または組織による処理により活性化された免疫エフェクター細胞の活性を低減するか、阻害するかまたは排除することができる。この処理後に、ＣＡＲ操作免疫細胞は、レシピエントへの移植の前に移植から除去され得る。しかし、一部のＣＡＲ操作免疫細胞は、移植片に付着し得るため、移植片と共にレシピエントに導入され得る。この状況で、レシピエントに導入されたＣＡＲ操作免疫細胞は、移植に関連する細胞によって引き起こされるレシピエントに対する免疫応答を抑制し得る。
【０５９８】
いくつかの実施形態では、移植宿主またはレシピエントは、ＨＬＡ−Ａ２陰性である。いくつかの実施形態では、移植宿主またはレシピエントはＨＬＡ−Ａ２陰性であり、ＨＬＡ−Ａ２５、ＨＬＡ−Ａ２９およびＨＬＡ−Ａ３０からなる群から選択されるＨＬＡ−Ａサブタイプについて陽性である。
【０５９９】
いくつかの実施形態では、移植はＨＬＡ−Ａ２陽性である。
【０６００】
免疫細胞は、任意の供給源から入手できる。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、本発明のＣＡＲ修飾免疫細胞の生成のために、組織ドナー、移植レシピエント、またはそうでなければ関係のない供給源（例えば、異なる個体または種全体）から得られ得る。したがって、本発明のＣＡＲ修飾免疫細胞は、移植レシピエントに対して、または他の点では関係のない供給源から、自家、同種、または異種であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ修飾免疫細胞は、ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ細胞であり、移植レシピエントに対して自家、同種、または異種であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ細胞は、移植レシピエントに対して自家であり得る。
５．癌
【０６０１】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞は、それを必要とする対象における１つ以上の癌の治療で使用され得る。ある実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞は、癌細胞に対する特定の免疫応答を促進するために使用され得る。したがって、本発明は、それを必要とする対象において癌を治療する方法を提供し、本方法は、本明細書に記載のとおり、治療有効量の少なくとも１つの免疫細胞集団を投与することを含む。本発明はまた、癌の治療における使用のための、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物、または医薬品中において）を提供する。本発明はまた、癌を治療するための医薬品の製造における使用のための、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団を提供する（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物、または医薬品中において）。
【０６０２】
本明細書で使用される場合、「癌」は、表面抗原または癌マーカーに関連する任意の癌であり得る。
【０６０３】
癌の例としては、これらに限定されないが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、腺様嚢胞癌、副腎皮質、癌腫、エイズ関連癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、異型奇形／ラブドイド腫瘍、Ｂ細胞白血病、リンパ腫または他のＢ細胞悪性腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨肉腫および悪性線維性組織球腫、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳癌、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、中枢神経系癌、子宮頸癌、脊索腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性疾患、大腸癌、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、胚性腫瘍、子宮内膜癌、上胚葉腫、上衣腫、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、骨および骨肉腫の眼癌線維性組織球腫、胆嚢癌、胃（胃）癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、軟部肉腫、胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、有毛細胞白血病、頭頸部癌、心臓ガン、肝細胞（肝）癌、組織球増殖症、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼内黒色腫、膵島細胞腫瘍（内分泌膵臓）、カポジ肉腫、腎癌、ランゲルハンス細胞組織球症、喉頭癌、白血病、口唇および口腔癌、肝癌（原発性）、非浸潤性小葉癌（ＬＣＩＳ）、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、男性の乳癌、骨悪性線維性組織球腫、髄芽腫、髄上皮腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頸部癌（ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｎｅｃｋ  ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ｏｃｃｕｌｔ  ｐｒｉｍａｒｙ）、ＮＵＴ遺伝子が関連する正中線管癌（ｍｉｄｌｉｎｅ  ｔｒａｃｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ  ＮＵＴ  ｇｅｎｅ）口腔癌、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性腫瘍、骨髄性白血病、慢性（ＣＭＬ）骨髄性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、鼻腔および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、口癌（ｏｒａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔および鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、中間分化型松果体実質腫瘍、松果体芽細胞腫およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、下垂体腫瘍、形質細胞新生物／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫および乳癌、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎）癌、腎盂と尿管、移行上皮癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、小細胞肺癌、小腸癌、軟部肉腫、扁平上皮癌、扁平上皮癌、胃（胃）癌、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、皮膚癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺癌、腎盂と尿管の移行上皮癌、絨毛性腫瘍、尿管および腎盂癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ならびにウィルムス腫瘍が挙げられる。
【０６０４】
いくつかの態様では、癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。Ｂ細胞悪性腫瘍の例としては、これらに限定されないが、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ／ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、節外（例えば、ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性（例えば、単球様Ｂ細胞）リンパ腫、脾臓リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／リンパ腫、バーキットリンパ腫およびリンパ芽球性リンパ腫が挙げられる。
６．感染症
【０６０５】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞は、それを必要とする対象における１つ以上の感染症、障害、症状、または状態の治療において使用され得る。ある実施形態では、本発明のＣＡＲ修飾免疫細胞は、この文脈において免疫寛容を促進するために使用され得る。いくつかの実施形態では、本発明は、それを必要とする対象における感染症を治療する方法を提供し、本方法は、本明細書に記載のとおり、治療有効量の少なくとも１つの免疫細胞集団を投与することを含む。本発明はまた、感染症の治療における使用のための、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団を提供する（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物、または医薬品中において）。本発明はまた、感染症を治療するための医薬品の製造における使用のために、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団を提供する（例えば、本明細書に記載の組成物、医薬組成物、または医薬品中において）。
【０６０６】
いくつかの実施形態では、感染症はウイルス感染症である。本明細書で使用されるとき、「ウイルス感染症」は、宿主に疾患または病理学的状態を引き起こす任意のウイルスによって引き起こされる感染症であり得る。
【０６０７】
ウイルス感染症の例としては、これらに限定されないが、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）によって引き起こされるウイルス感染、Ａ型肝炎ウイルスによって引き起こされるウイルス感染、Ｂ型肝炎ウイルスまたはＣ型肝炎ウイルス；単純ヘルペス１型ウイルス、単純ヘルペス２型ウイルスによって引き起こされるウイルス感染、または単純ヘルペス８型ウイルス；サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）によって引き起こされるウイルス感染；ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）によって引き起こされるウイルス感染；インフルエンザウイルスによって引き起こされるウイルス感染；麻疹またはムンプスウイルスによって引き起こされるウイルス感染；ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）によって引き起こされるウイルス感染症。パラインフルエンザウイルスによって引き起こされるウイルス感染；風疹ウイルスによって引き起こされるウイルス感染；呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）によって引き起こされるウイルス感染；または水痘帯状疱疹ウイルスによって引き起こされるウイルス感染が挙げられる。いくつかの態様では、ウイルス感染は、ウイルス感染を有する対象において癌の発症を導くかまたはもたらす可能性がある（例えば、ＨＰＶ感染は、頸部癌、外陰癌、膣癌、陰茎癌、肛門癌、口腔咽頭癌などのいくつかの癌の発症を引き起こすか、または関連し得、ＨＩＶ感染は、カポジ肉腫の発症を引き起こし得る）。
【０６０８】
いくつかの実施形態では、感染症は、細菌感染症である。本明細書で使用されるとき、「細菌感染症」は、宿主に疾患または病理学的状態を引き起こす任意の細菌によって引き起こされる感染症であり得る。
【０６０９】
細菌感染症の例としては、これらに限定されないが、肺炎、中耳炎、副鼻腔炎、気管支炎、肺炎レンサ球菌による感染に関連する扁桃炎および乳様突起炎、インフルエンザ菌、モラクセラ・カタラーリス、黄色ブドウ球菌またはペプトストレプトコッカス属；咽頭炎、化膿レンサ球菌による感染によって引き起こされるリウマチ熱および糸球体腎炎、Ｃ群およびＧ群溶連菌、ＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｐｔｈｅｒｉａｅまたはＡｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ；肺炎連鎖球菌による感染に関連する気道感染症、レジオネラニューモフィラ、肺炎連鎖球菌、インフルエンザ菌、またはクラミジア肺炎；複雑でない皮膚および軟部組織感染症、ボイル、黄色ブドウ球菌による感染に関連する骨髄炎および産褥熱、コアグラーゼ陽性ブドウ球菌（例えば、表皮ブドウ球菌、ブドウ球菌など）、化膿レンサ球菌、Ｂ群溶血性連鎖球、化膿レンサ球菌グループＣＦ（マイクロコロニー連鎖球菌）、緑色連鎖球菌、コリネバクテリウムミヌチシマム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ）、クロストリジウム属、またはバルトネラヘンセラエ；合併症のない急性尿路感染症；スタフィロコッカス・サプロフィティカスまたはエンテロコッカス属による感染に関連する尿道炎および子宮頸管炎；クラミジア・トラコマチスによる感染に関連する性感染症、軟性下疳菌、梅毒トレポネーマ、ウレアプラズマ・ウレアリチカム、または淋菌；黄色ブドウ球菌による感染に関連する毒性疾患（食中毒および毒素性ショック症候群）、Ａ群、Ｂ群およびＣ群連鎖球菌；ヘリコバクターピロリによる感染に関連する潰瘍；回帰熱ボレリアによる感染に関連する全身性発熱症候群；ボレリアブルグドルフェリによる感染に関連するライム病；結膜炎、クラミジア・トラコマチスによる感染に関連する角膜炎および涙嚢炎、ナイセリア淋菌、黄色ブドウ球菌、肺炎球菌、化膿レンサ球菌、Ｈ．インフルエンザ菌またはリステリア属；マイコバクテリウムアビウムによる感染に関連するびまん性マイコバクテリウムアビウム症候群（ＭＡＣ）疾患、マイコバクテリウムイントラセルラーレ；カンピロバクタージェジュニによる感染に関連する胃腸炎；緑色連鎖球菌による感染に関連する歯科感染；百日咳菌による感染に伴う持続性の咳；ウェルシュ菌またはバクテロイデス属による感染に関連するガス壊疽；ヘリコバクターピロリまたはクラミジア肺炎による感染を伴うアテローム性動脈硬化症が挙げられる。ある実施形態では、細菌感染は、例えば、エシェリキア属、リステリア属、サルモネラ属、またはブドウ球菌属の細菌によって引き起こされ得る。
【０６１０】
いくつかの実施形態では、感染症は真菌感染症である。本明細書で使用されるとき、「真菌感染症」は、宿主に疾患または病理学的状態を引き起こす任意の真菌によって引き起こされる感染症であり得る。
【０６１１】
真菌によって引き起こされる感染症の例としては、これらに限定されないが、例えば、カンジダ・アルビカンス、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、アスペルギルス・フラバス、アスペルギルス・フミガーツス、コクシジオイデス、パラコクシジオイデス、ヒストプラズマまたはブラストプラズマによって引き起こされる局所、粘膜および／または全身性真菌感染症が挙げられる。他の例示的な真菌関連障害としては、動物（例えば、ヒト）における口腔カンジダ症、膣カンジダ症、アスペルギルス症、カンジダ症、クロモミコーシス症、コクシジウム症、クリプトコッカス症、エントモフトラ症、伝染性リンパ管炎、ゲオトリクム症、ヒストプラズマ症、ムコール症、マイセトーマ、北米ブラストミセス症、卵菌症、ペシロミセス属、ペニシリウム症、リノスポリジウム症、およびスポロトリクム症が挙げられる。
【０６１２】
いくつかの実施形態では、感染症は、寄生虫感染症である。本明細書で使用される場合、「寄生虫感染症」は、宿主に疾患または病理学的状態を引き起こす任意の原生動物、蠕虫、または外部寄生虫によって引き起こされる感染症であり得る。
【０６１３】
ヒトに感染する可能性のある原生動物の例としては、これらに限定されないが、エントアメーバ、ジアルジア、リーシュマニアバランティジム、マラリア原虫、クリプトスポリジウムが挙げられる。
【０６１４】
ヒトに感染する可能性のある蠕虫の例としては、これらに限定されないが、フィラリア症、オンコセルカ症、回虫症、鞭虫症、アメリカ鉤虫症、毛様線虫症、メジナ虫症、アライグマ回虫症、エキノコックス症、膜様条虫症、条虫症、嚢虫症、共尾虫症、双口吸虫症、肝吸虫症、肝蛭症、肝蛭症、肥大吸虫症、オピストルキス症、肺吸虫症、住血吸虫症、およびビルハルツ住血吸虫症が挙げられる。
【０６１５】
ヒトに感染する可能性のある外部寄生虫の例としては、これらに限定されないが、昆虫（六本足の節足動物）およびクモ類（八本足の節足動物）が挙げられる。
ＣＡＲの投与
【０６１６】
本発明のＣＡＲ操作免疫細胞は、単独で、または本明細書に記載の医薬組成物として投与されてよい（例えば、希釈剤かつ／または他の成分（これらに限定されないが、ＩＬ−２または他のサイトカイン、または細胞集団）と組み合わせて）。
【０６１７】
本発明の医薬組成物は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、インプラントまたは移植など、任意の好適な方法で対象に投与されてよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、非経口投与によって対象に投与できる。ある実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、対象の皮下、皮内、腫瘍内、結節内、髄内、筋肉内、胸骨内、静脈内（ｉ．ｖ．）注射、注入技術、または腹腔内に投与できる。特定の実施形態では、本発明のＣＡＲ修飾免疫細胞組成物は、皮内注射または皮下注射によって対象に投与できる。いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ修飾免疫細胞組成物は、ｉ．ｖ．注射によって投与できる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ修飾免疫細胞組成物は、リンパ節、感染部位、炎症部位、または組織もしくは臓器拒絶反応の部位に直接注射できる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ修飾免疫細胞組成物は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患の部位に直接注射ができる。
【０６１８】
いくつかの実施形態では、対象は、自家細胞を投与される（または投与される予定である）。
【０６１９】
いくつかの実施形態では、対象は、同種細胞を投与される（または投与される予定である）。
【０６２０】
いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物であり得る。特定の実施形態では、対象はヒトであり得る。
【０６２１】
本発明の医薬組成物は、予防されるかまたは治療される疾患に適切な方法で投与できる。投与の量および頻度は、対象の状態ならびに対象の疾患の種類および重症度などの要因により決定されるが、適切な投与量は、臨床試験により決定され得る。
【０６２２】
「有効量」または「治療量」が示される場合、投与される本発明の組成物の正確な量は、対象の年齢、体重、抗体価、および状態の個人差を考慮して決定され得る。本明細書に記載のＣＡＲ操作された免疫細胞を含む医薬組成物は、少なくとも１ｘ１０２、１ｘ１０３、１ｘ１０４、１ｘ１０５、１ｘ１０６、１ｘ１０７、１ｘ１０８または１ｘ１０９細胞／ｋｇ体重または１ｘ１０５〜１００ｘ１０５細胞／ｋｇ体重（これらの範囲内のすべての整数値を含む）の投与量で投与できると一般的に記述できる。ＣＡＲ操作された免疫細胞組成物はまた、これらの投与量のいずれかまたはそれらの任意の組み合わせで複数回投与され得る。ＣＡＲ操作された免疫細胞は、免疫療法において一般的に公知である注入技術を使用して投与できる。特定の対象に最適な投与量および治療レジメンは、対象の疾患の徴候を監視すること、およびそれに応じて治療を調整することにより容易に決定できる。
【０６２３】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、これらに限定されないが、抗ウイルス療法、化学療法（すなわち、化学療法剤）、アルキル化剤、放射線、免疫抑制剤、抗体、免疫除去剤、サイトカイン、照射および抗感染剤などの剤による治療など任意の数の関連する治療モダリティと組み合わせて（例えば、その前に、それと同時に、またはその後に）対象に投与され得る。
【０６２４】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、化学療法剤と組み合わせて投与できる。当技術分野で公知である任意の化学療法剤が使用され得る。化学療法剤の例としては、これらに限定されないが、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（例えば、リポソームドキソルビシン））、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、またはビノレルビン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、デカルバジン、メルファラン、イホスファミド、またはテモゾロミド）、免疫細胞抗体（例、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、またはブレンツキシマブ）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸拮抗薬、ピリミジン類似体、プリン類似体およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、フルダラビン））、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲ糖質コルチコイド誘発性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラシノマイシンＡ、グリオトキシンまたはボルテゾミブ）、サリドマイドまたはサリドマイド誘導体などの免疫調節剤（例えば、レナリドマイド）が挙げられる。
【０６２５】
本発明の併用療法での使用が考えられる他の化学療法剤としては、これらに限定されないが、アナストロゾール（アリミデックス（登録商標））、ビカルタミド（カソデックス（登録商標））、ブレオマイシン硫酸塩（ブレノキサン（登録商標））、ブスルファン（マイレラン（登録商標））、ブスルファン注射（ブスルフェクス（登録商標））、カペシタビン（ゼローダ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（リューケラン（登録商標））、シスプラチン（プラチノール（登録商標））、クラドリビン（ロイスタチン（登録商標））、シクロホスファミド（サイトキサン（登録商標）またはネオサール（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（サイトサール−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、ダウノルビシン塩酸塩（セルビジン（登録商標））、ダウノルビシンクエン酸塩リポソーム注射（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、ドキソルビシン塩酸塩（アドリアマイシン（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（ベプシド（登録商標））、リン酸フルダラビン（フルダラ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、エフデックス（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（イダマイシン（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（カンプトサール（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（エルスパー（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（アルケラン（登録商標））、６−メルカプトプリン（プリントール（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（ノバントロン（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、フェニックス（イットリウム９０  ／  ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラント（ギリアデル（登録商標））を使用したポリフェプロサン２０、クエン酸タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標））、テニポシド（ブモン（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用トポテカン塩酸塩（ハイカムチン（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））、およびビノレルビン（ナベルビン（登録商標））が挙げられる。
【０６２６】
本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、化学療法剤の前に、後で、または同時に対象に投与できる。
【０６２７】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、アルキル化剤と組み合わせて投与できる。当技術分野において公知である任意のアルキル化剤を使用できる。アルキル化剤の例としては、これらに限定されないが、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレアとトリアゼン、ウラシルマスタード（アミノウラシルマスタード（登録商標）、クロレタミナシル（登録商標）、デメチルドパン（登録商標）、デスメチルドパン（登録商標）、ヘマンタミン（登録商標）、ノルドパン（登録商標）、ウラシル窒素マスタード（登録商標）、ウラシロスト（登録商標）、ウラシルモスターザ（登録商標）、ウラシルマスタード（登録商標）、およびウラムスチン（登録商標））、クロメチン（マスタージェン（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）、ネオサール（登録商標）、クラフェン（登録商標）、エンドキサン（登録商標）、プロサイトックス（登録商標）、およびレビミュン（商標））、イホスファミド（ミトキサーナ（登録商標））、メルファラン（アルケラン（登録商標））、クロラムブシル（ロイケラン（登録商標））、ピポブロマン（アメデール（登録商標）、バーサイト（登録商標））、トリエチレンメラミン（ヘメル（登録商標）、ヘキサレン（登録商標）、およびヘキサスタット（登録商標））、トリエチレンチオホスホラミン、テモゾロミド（テモダール（登録商標））、チオテパ（チオプレックス（登録商標））、ブスルファン（ブシルベックス（登録商標）およびミレラン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（ザノサール（登録商標））、およびダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））が挙げられる。追加の例示的なアルキル化剤としては、これらに限定されないが、オキサリプラチン（エロキサチン(登録商標)）;テモゾロミド（Temodar(登録商標)およびTemodal(登録商標)）;ダクチノマイシン（アクチノマイシン-Dとしても公知である。コスメゲン(登録商標)）;メルファラン（L-PAMとも称されるL-サルコリシン、およびフェニルアラニンマスタード、アルケラン(登録商標)）;アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（HMM）としても公知である）ヘキサレン(登録商標)）;カルムスチン（BiCNU(登録商標)）;ベンダムスチン（トレアンダ(登録商標)）;ブスルファン（ブスルフェクス(登録商標)およびミレラン(登録商標)）;カルボプラチン（パラプラチン(登録商標)）;ロムスチン（CCNUとしても公知である、CeeNU(登録商標)）;シスプラチン（CDDPとしても公知である;プラチノール(登録商標)およびプラチノール(登録商標)-AQ）;クロラムブシル（ロイケラン(登録商標)）;シクロホスファミド（サイトキサン(登録商標)およびネオサール(登録商標)）;ダカルバジン（DTICとも呼ばれる。DICおよびイミダゾールカルボキサミド、DTIC-Dome(登録商標)）;アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（HMM）としても公知である）、ヘキサレン(登録商標);イホスファミド（Ifex(登録商標)）;プレドニマスチン;プロカルバジン（Matulane(登録商標)）;メクロレタミン（ナイトロジェンマスタードとしても公知である、ムスティンおよび塩酸メクロレタミン、マスタージェ��(登録商標)）;ストレプトゾシン（ザノサー(登録商標)）;チオテパ（チオホスホアミドとしても公知である、TESPAおよびTSPA、およびチオプレックス(登録商標)）;シクロホスファミド（エンドキサン(登録商標)、サイトキサン(登録商標)、ネオサール(登録商標)、プロサイトックス(登録商標)、およびレビミュン（商標）;およびベンダムスチンHC1（トレアンダ(登録商標)）が挙げられる。
【０６２８】
本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、アルキル化剤の前に、後で、または同時に対象に投与できる。
【０６２９】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、免疫抑制剤と組み合わせて投与できる。当技術分野において公知である任意の免疫抑制剤を使用できる。免疫抑制剤の例としては、これらに限定されないが、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、メトックスサレン、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸、リツキシマブ、シロリムス、バシリキシマブ、ダクリズマブ、ムロモナブ−ＣＤ３、タクロリムス、グルココルチコイドのほか、プレドニゾン、プレドニゾロンなどの副腎皮質ステロイド、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０６３０】
本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、免疫抑制剤の前に、後で、または同時に対象に投与できる。
【０６３１】
本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞および／または免疫抑制剤（複数可）は、移植後に対象に投与され得る。代替的にまたは追加的に、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞および／または免疫抑制剤（複数可）は、移植前に対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞および／または免疫抑制剤は、移植手術中に対象に投与され得る。
【０６３２】
いくつかの実施形態では、対象へのＣＡＲ操作された免疫細胞の投与は、免疫抑制療法が開始されると実施される。
【０６３３】
いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、移植レシピエントを経時的に監視するために、および該当する場合、異なる免疫抑制療法レジメで、複数回実施される。
【０６３４】
いくつかの実施形態では、移植レシピエントが移植に耐性があると予測される場合、免疫抑制療法は減少される。いくつかの実施形態では、免疫抑制療法は処方されない。例えば、移植レシピエントが移植に耐性があると予測される場合、免疫抑制療法は中止される。
【０６３５】
本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、移植臓器または組織拒絶反応の診断後に、臓器または組織拒絶の症状が弱まるまで、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞および免疫抑制剤（複数可）の両方の用量で投与できる。
【０６３６】
さらなる実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞組成物は、骨髄移植と併せて（例えば、骨髄移植の前に、同時に、または後に）対象に投与され得る。
【０６３７】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、ＣＤ２０と反応する剤、例えばリツキシマブなどのＢ細胞除去療法の後に投与できる。例えば、いくつかの実施形態では、対象は、高用量化学療法、およびその後の末梢血幹細胞移植による標準的な治療を受けることができる。ある実施形態では、移植後、対象は、本発明の拡大されたＣＡＲ操作された免疫細胞の注入を受けることができる。ある実施形態では、拡大されたＣＡＲ操作された免疫細胞は、手術の前または後に投与できる。
【０６３８】
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、抗感染症剤と組み合わせて投与できる。当技術分野において公知である任意の抗感染症剤を使用できる。抗感染症剤の例としては、これらに限定されないが、殺ダニ剤、アミノグリコシド、駆虫薬、駆虫剤、抗真菌剤（アゾール系抗真菌剤、エキノカンジン、他の抗真菌剤、およびポリエン）、抗マラリア剤（抗マラリア剤の組み合わせ、抗マラリアキノリン、および他の抗マラリア薬）、抗結核剤（アミノサリチル酸、抗結核の組み合わせ、ジアリールキノリン、ヒドラジド誘導体、他の抗結核剤、ニコチン酸誘導体、リファマイシン誘導体、およびストレプトマイセス誘導体）、抗ウイルス剤（アダマンタン抗ウイルス剤、抗ウイルスブースター、抗ウイルス剤の組み合わせ、抗ウイルス性インターフェロン、ケモカイン受容体拮抗薬、インテグラーゼ鎖転移阻害剤、他の抗ウイルス剤、ノイラミニダーゼ阻害剤、ＮＮＲＴＩ、ＮＳ５Ａ阻害剤、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）、プロテアーゼ阻害剤、およびプリンヌクレオシド）、カルバペネム、カルバペネム／ベータラクタマーゼ阻害剤、セファロスポリン（セファロスポリン／ベータラクタマーゼ阻害剤、第一世代セファロスポリン、第四世代セファロスポリン、次世代セファロスポリン、第二世代セファロスポリン、および第三世代セファロスポリン）、抗生物質、糖ペプチド抗生物質、グリシルサイクリン、抗らい菌薬、リンコマイシン誘導体、マクロライド誘導体（ケトライドおよびマクロライド）、他の抗生物質、オキサゾリジノン系抗生物質、ペニシリン（アミノペニシリン、抗偽性ペニシリン、ベータラクタマーゼ阻害剤、天然ペニシリン、ペニシリナーゼ、および耐性ペニシリン）、キノロン、スルホンアミド、テトラサイクリン、および尿路抗感染症剤が挙げられる。
【０６３９】
いくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト）は、本発明の免疫細胞または集団の最初の投与、およびその後の１回以上の投与を受ける。ここで、その後の１回以上の投与は、前回の投与から１５日未満に、例えば、１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日、または２日の後に投与される。
【０６４０】
いくつかの実施形態では、治療有効量の本発明の免疫細胞は、対象に投与されるか、または投与される予定である。
【０６４１】
いくつかの実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞集団の免疫細胞の数は、少なくとも１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８または１０９細胞である。
【０６４２】
いくつかの実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞集団の免疫細胞の数は、約１０２〜約１０９、約１０３〜約１０８、約１０４〜約１０７、または約１０５〜約１０６細胞の範囲である。
【０６４３】
いくつかの実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞集団の免疫細胞の数は、約１０２〜約１０９、約１０２〜１０８、約１０２〜１０７、約１０２〜１０６、約１０２〜１０５、約１０２〜１０４、または約１０２〜１０３の細胞の範囲である。いくつかの実施形態では、対象に投与される本発明の免疫集団の免疫細胞の数は、約１０２、約１０３、約１０４、約１０５、約１０６、約１０７、約１０８、または約１０９細胞である。
【０６４４】
いくつかの実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞集団の免疫細胞の数は、少なくとも１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８または１０９細胞／ｋｇ体重である。
【０６４５】
いくつかの実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞集団の免疫細胞の数は、約１０２〜１０９細胞／ｋｇ体重または１０３〜１０８細胞／ｋｇ体重（これらの範囲内のすべての整数値を含む）の範囲である。
【０６４６】
いくつかの実施形態では、対象は、本発明の免疫細胞集団の週に２回以上の投与を受け、例えば、対象に週に１回投与される本発明のＴｒｅｇ細胞集団の２、３、または４回の投与を受ける。
【０６４７】
いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、それを必要とする対象に、活性剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態によれば、免疫細胞集団は、活性剤の投与の前に、同時に、または後に投与される。
【０６４８】
いくつかの実施形態では、本発明の活性化免疫細胞を対象に投与し、次いで採血（またはアフェレシスを実施）し、本発明に従いそこから免疫細胞を活性化し、これらの活性化され拡大された免疫細胞を対象に再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週間ごとに複数回実施できる。ある実施形態では、免疫細胞は、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採血から活性化される。ある実施形態では、免疫細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、または１００ｃｃの採血から活性化される。理論により拘束されないが、この複数回の採血／複数回の再注入プロトコルを使用することは、免疫細胞の特定の集団を選択するために役立つ場合がある。
【０６４９】
本明細書に記載のＣＡＲ、細胞集団、および組成物は、本明細書に記載の治療方法で使用でき、本明細書に記載の剤として使用でき、本明細書に記載の治療で使用でき、かつ／または、本明細書に記載の治療用の医薬品の製造における使用のためのものであり得ることが理解される。
製造品およびキット
【０６５０】
本発明はまた、本明細書に記載の核酸、ベクター、細胞集団、または組成物のいずれかを含む製造品、ならびに上記の製造品を製造するための方法を提供する。
【０６５１】
さらに、本発明は、本明細書に記載の核酸、ベクター、細胞集団、または組成物のいずれかを好適な容器中に含むキットを提供する。
実施形態
【０６５２】
本発明の特定の実施形態を以下に列挙する：
１．
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−任意により、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメインと、
−少なくとも１つの膜貫通ドメインと、
−少なくとも１つの細胞内ドメイン、
を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
少なくとも１つの細胞内ドメインは任意により、少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインおよび少なくとも１つの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み、
−少なくとも１つの膜貫通ドメインは、ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、任意の膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、またはそれらの組み合わせであり、かつ／または
−少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、または任意の共刺激性細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、またはそれらの組み合わせであり、
膜貫通ドメインおよび共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、またはＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはそれらの断片もしくはバリアントである、
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
２．
ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインが、配列番号２２の配列からの、または配列番号２２と少なくとも約７０％の同一性を有する配列からの少なくとも２つのアミノ酸、好ましくは、配列番号２２からの、または配列番号２２と少なくとも約７０％の同一性を有する配列からの少なくとも２つの連続するアミノ酸を含む、実施形態１に記載のＣＡＲ。
３．
ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインが、少なくとも１つの他の膜貫通ドメインと組み合わされる、実施形態１または実施形態２に記載のＣＡＲ。
４．
ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号３４の配列からの、または配列番号３４と少なくとも約７０％の同一性を有する配列からの少なくとも２つのアミノ酸、好ましくは、配列番号３４からの、または配列番号３４と少なくとも約７０％の同一性を有する配列からの少なくとも２つの連続するアミノ酸を含む、実施形態１〜３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
５．
ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが、少なくとも１つの他の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わされる、実施形態１〜４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
６．
一次細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫細胞一次細胞内シグナル伝達ドメイン、好ましくはヒトＣＤ３のＴ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメイン、より好ましくは配列番号２８、２９、３０もしくは３１の配列、または配列番号２８、２９、３０もしくは３１と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有するヒトＣＤ３ゼータのＴ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１〜５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
７．
ヒンジドメインが、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、好ましくは配列番号１４または配列番号１４と少なくとも約７０％の同一性を有する配列である、実施形態１〜６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
８．
ＣＡＲが、少なくとも１つのＴＮＦＲ２膜貫通ドメインおよび少なくとも１つの細胞内ドメインを含み、細胞内ドメインが任意により、少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインおよび少なくとも１つの免疫細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１〜７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
９．
ＣＡＲが、少なくとも１つの膜貫通ドメインおよび少なくとも１つの細胞内ドメインを含み、細胞内ドメインが、少なくとも１つのＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインおよび少なくとも１つの免疫細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１〜７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
１０．
実施形態１〜９のいずれか１つによるＣＡＲをコードする核酸配列。
１１．
実施形態１０による核酸配列を含むベクター。
１２．
実施形態１０の核酸配列または実施形態１１のベクターを含むか、または実施形態１〜９のいずれか一項に記載のＣＡＲを発現する免疫細胞集団。
１３．
Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、γδＴ細胞、ダブルネガティブ（ＤＮ）細胞、調節性免疫細胞、調節性Ｔ細胞、エフェクター免疫細胞、エフェクターＴ細胞、Ｂ細胞、および骨髄系細胞、およびそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される、実施形態１２に記載の免疫細胞集団。
１４．
実施形態１２または１３のいずれか一項に記載の少なくとも１つの細胞集団を含む組成物。
１５．
医薬組成物であり、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、実施形態１４に記載の組成物。
１６．
実施形態１２または１３に記載の少なくとも１つの免疫細胞集団または実施形態１４または１５に記載の組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における疾患または障害を治療するための方法。
１７．
方法が、細胞療法である、実施形態１６に記載の方法。
１８．
疾患または障害が、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植状態、癌および感染症を含む、実施形態１６または１７に記載の方法。
１９．
免疫細胞集団が、調節性免疫細胞集団、またはＴｒｅｇ細胞集団であり、疾患または障害が、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、または好ましくは移植片拒絶反応および移植片対宿主病から選択される臓器移植状態である、実施形態１６〜１８のいずれか一項に記載の方法。
２０．
免疫細胞集団が、Ｔエフェクター細胞集団、ＮＫ細胞集団、またはγδ細胞集団であり、疾患または障害が、癌または感染症である、実施形態１６〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【０６５３】
本発明は、
−少なくとも１つの細胞外結合ドメインと、
−任意により、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメインと、
−少なくとも１つの膜貫通ドメイン（例えば、ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、任意の膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、またはそれらの任意の組み合わせ）と、
−少なくとも１つの細胞内ドメイン（少なくとも１つの一次細胞内シグナル伝達ドメインを含みかつ任意により少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントを含み、少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、任意の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその断片もしくはバリアント、またはそれらの任意の組み合わせである）、
を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
膜貫通ドメインは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインもしくはその断片もしくはバリアントであり、かつ／または共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインもしくはそれらの断片もしくはバリアントである、
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する。
【０６５４】
いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントは、配列番号２２の配列からの、または配列番号２２と少なくとも約７０％の同一性を有する配列からの少なくとも２つのアミノ酸（例えば、少なくとも２つの連続するアミノ酸）を含む。
【０６５５】
いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントは、少なくとも１つの他の膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアントと組み合わされる。
【０６５６】
いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのバリアントまたは断片は、配列番号３４の配列からの、または配列番号３４と少なくとも約７０％の同一性を有する配列からの少なくとも２つのアミノ酸（例えば、少なくとも２つの連続するアミノ酸）を含む。
【０６５７】
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのバリアントまたは断片は、少なくとも１つの他の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはバリアントと組み合わされる。
【０６５８】
いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３のＴ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインである。特定の実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２８、２９、３０または３１の配列、または配列番号２８、２９、３０または３１と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有するヒトＣＤ３ゼータのＴ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインである。
【０６５９】
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、好ましくは配列番号１４、または配列番号１４と少なくとも約７０％の同一性を有する配列である。
【０６６０】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも１つのＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはその断片またはバリアント、および少なくとも１つの細胞内ドメインを含み、細胞内ドメインは、少なくとも１つの免疫細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインを含みかつ任意により少なくとも１つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０６６１】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも１つの膜貫通ドメインおよび少なくとも１つの細胞内ドメインを含み、細胞内ドメインは、少なくとも１つのＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片またはそのバリアントおよび少なくとも１つの免疫細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０６６２】
本発明は、本発明によるＣＡＲをコードする核酸配列にさらに関する。
【０６６３】
本発明は、本発明による核酸配列を含むベクターにさらに関する。
【０６６４】
本発明はさらに、本発明による核酸配列、または本発明によるベクターを含む、または本発明によるＣＡＲを発現する、免疫細胞集団に関する。いくつかの実施形態では、免疫細胞集団は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、γδＴ細胞、ダブルネガティブ（ＤＮ）細胞、調節性免疫細胞、調節性Ｔ細胞、エフェクター免疫細胞、エフェクターＴ細胞、Ｂ細胞、および骨髄系細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０６６５】
本発明はさらに、本発明による少なくとも１つの細胞集団を含む組成物に関する。いくつかの実施形態では、組成物は、医薬組成物であり、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。
【０６６６】
本発明は、本発明による少なくとも１つの細胞集団または組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における疾患または障害を治療するための方法にさらに関する。いくつかの実施形態では、この方法は細胞療法である。いくつかの実施形態では、疾患または障害としては、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、臓器移植状態、癌および感染症が挙げられる。いくつかの実施形態では、細胞集団は、調節性免疫細胞集団またはＴｒｅｇ細胞集団であり、疾患または障害は、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、または臓器移植状態（例えば、移植片拒絶反応または移植片対宿主病）である。いくつかの実施形態では、免疫細胞集団は、Ｔエフェクター細胞集団、ＮＫ細胞集団、またはγδ細胞集団であり、疾患または障害は、癌または感染症である。
【０６６７】
本明細書で別段の定義がない限り、本開示に関連して使用される科学的および技術的用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。例示的な方法および材料を以下に説明するが、本明細書に記載のものと類似であるかまたは同等である方法および材料もまた、本開示の実施または試験で使用できる。矛盾がある場合は、定義を含み、本明細書が優先するものとする。一般に、細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、分析化学、合成有機化学、医薬品化学、ならびに本明細書に記載のタンパク質および核酸化学およびハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法およびそれらの技術は、当技術分野において周知のものであり、一般的に使用されている。酵素反応および精製技術は、当技術分野において一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように、製造業者の仕様に従って実施される。さらに、文脈によって別段必要とされない限り、単数形は複数形を含み、複数形は単数形を含むものとする。本明細書および実施形態を通して、「有する（ｈａｖｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語、または「有する（ｈａｓ）」、「有している（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、記載されている整数または整数の群を含むが、他の整数または整数の群を除外しないことを意味すると理解される。本明細書に記載の本発明の態様および変形例は、態様および変形例「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」および／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」ことを含むことが理解される。本明細書で言及されるすべての刊行物および他の参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。本明細書では複数の文書が引用されるが、この引用は、これらの文書のいずれかが当技術分野における共通の一般知識の一部を形成していることを認めるものではない。
実施例
【０６６８】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明される。
実施例１：ＴＮＦＲ２由来ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ
材料および方法
ＰＢＭＣ単離
【０６６９】
匿名の健康なドナーの血液細胞を、ＥＦＳガイドラインおよびドナーのインフォームドコンセントに従いＥｔａｂｌｉｓｓｅｍｅｎｔ Ｆｒａｎｃａｉｓｄｕ Ｓａｎｇ（ＥＦＳ）により採取した。血液採取の翌日に、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をフィコール勾配遠心分離によりバフィーコートから単離した。これは、顆粒球、血小板、および残りの赤血球汚染物質などの血液製剤の不要な部分の除去を可能にする。目的の細胞を次に、以下に説明するように単離した。
ＦｏｘＰ３  Ｔｒｅｇ単離
【０６７０】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇを、ヒトＣＤ４＋ＣＤ１２７ｌｏｗＣＤ２５＋調節性Ｔ細胞分離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ）を使用して、製造業者の指示に従い単離した。簡潔に言えば、ＣＤ２５＋細胞を、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｒｅｌｅａｓａｂｌｅ  Ｒａｐｉｄ  Ｓｐｈｅｒｅｓ（商標）を使用するカラムフリーの免疫磁気ポジティブセレクションにより、４００〜５００ｘ１０６ＰＢＭＣから最初に単離した。次に、結合した磁性粒子をＥａｓｙＳｅｐ（商標）により単離したＣＤ２５＋細胞から除去し、不要な非Ｔｒｅｇを枯渇の標的にした。最終的に単離された画分は、高レベルのＦｏｘＰ３を発現する高度に精製されたＣＤ４＋ＣＤ１２７ｌｏｗＣＤ２５＋細胞を含み、これを直ちに下流のアプリケーションに使用した。自家Ｂ細胞の単離
【０６７１】
自家ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋Ｂ細胞を、ヒトＢ細胞単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ）を使用して、製造業者の指示に従い単離した。簡潔に言えば、ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋Ｂ細胞を、免疫磁気ネガティブセレクションにより２００ｘ１０６ＰＢＭＣから単離した。単離後に、細胞を、ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋提示細胞としてさらに使用するために、直ちに凍結した。
ＣＤ４＋ＣＤ２５−従来のＴ細胞単離
ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞を、調節性Ｔ細胞単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ）のオプションのプロトコルを実行することにより単離し、Ｔｒｅｇと並行して機能研究で使用するためのＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞の単離を可能にした。
単離されたＴｒｅｇの活性化および培養
【０６７２】
単離されたＴｒｅｇ細胞を活性化し、９日間培養した。簡潔に言えば、０日目に、Ｔｒｅｇ細胞（０．５ｘ１０６）を、ヒトトランスフェリン（ＯＺＹＭＥ）を含み１０００Ｕ／ｍＬ  ＩＬ−２（Ｅｕｒｏｍｅｄｅｘ）および１００ｎＭラパマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加したＸｖｉｖｏ１５無血清培地中で２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に培養した。ポリクローナル活性化を、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ダイナビーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（ウェルあたり０．５ｘ１０６ビーズ）を使用して実施した。２日目、４日目または５日目、および７日目または８日目に、１０００Ｕ／ｍＬＩＬ−２を補充した新鮮な培地を細胞に供給した。最後に、８日目または９日目に、細胞を回収し、カウントし、再活性化した。
形質導入プロトコル
【０６７３】
Ｔｒｅｇに、活性化の２日後にキメラ抗原受容体（下記参照）を形質導入した。簡潔に言えば、形質導入を、各ウェルに１ｍＬあたり０．５ｘ１０７の形質導入単位（ＴＵ）をロードすることにより実施した。３７℃で６時間後に、ウイルス粒子を洗い流しにより除去した。次に、プレートを５％ＣＯ２と共に３７℃でインキュベートした。５日後に、形質導入効率を、フローサイトメトリーでＧＦＰ陽性細胞の割合を測定することにより分析した。
ＣＡＲ発現の定量化
【０６７４】
細胞表面のＣＡＲ発現の定量化を、ＣＡＲをＡＰＣコンジュゲートプロテインＬまたはＨＡタグ付きＣＡＲ用のＡＰＣコンジュゲート抗血球凝集素（ＨＡ）抗体で標識することにより行い、フローサイトメトリーを使用して分析した。
【０６７５】
総ＣＡＲ発現の定量化を、ウエスタンブロット分析により実施した。簡潔に言えば、５ｘ１０４の形質導入Ｔｒｅｇまたは非形質導入（「ブランク」）Ｔｒｅｇを、ＲＩＰＡバッファー中で溶解し、変性条件でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供し、ＰＶＤＦメンブレンにブロットした。次に、ＣＡＲ発現ＣＤ３ζおよび内因性ＣＤ３ζを、ＣＤ３ζ特異的抗体（抗ＣＤ２４７、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で染色した。最後に、メンブレンを洗浄し、ローディング対照としてβ−アクチン抗体で再プローブした。Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを使用して、バンド強度を定量化した。
形質導入に使用されるＣＡＲ構築物
【０６７６】
ＣＤ３ζとタンデムでＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲ１、またはＣＤ８膜貫通（ＴＭ）、および共刺激細胞内シグナル伝達ドメインから構成され、ＣＤ１９（ＦＭＣ６３）、ＣＤ２０（Ｂ９Ｅ９）、および／またはＩＬ−２３Ｒに対して向けられたプロトタイプｓｃＦｖと会合するＣＡＲ（１４−１１−Ｄ０７；ＰＣＴ国際公開２０１６／１８４５７０；配列番号６５）を設計した。この研究で使用した構築物を、表１および図１に列挙し記載する。
【表１】
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【０６７７】
より正確には、抗ＣＤ１９  ＣＡＲは、ヒトＣＤ８リーダー配列（ａａ１−２２）、血球凝集素タグ、ヒトＣＤ１９に対して向けられたＦＭＣ６３  ｓｃＦｖ、およびヒトＣＤ８アルファに由来するリンカー（ａａ１３８−１８２）で構成される。
【０６７８】
リンカーに続き、ＣＤ１９−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ）構築物は、膜貫通（ＴＭ）ドメインヒトＣＤ８アルファ（ａａ１８３−２０６）および共刺激細胞内シグナル伝達ドメインヒト４−１ＢＢ（ａａ２１４−２５５）およびＣＤ３ゼータ（ａａ５２−１６４）で構成されるのに対し、ＣＤ１９−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２）構築物は、ＴＭ、および細胞内ドメインヒトＴＮＦＲ２（ａａ２５８−４６１）およびＣＤ３ゼータで構成される。
【０６７９】
抗ＣＤ２０ＣＡＲは、ヒトＣＤ８リーダー配列（ａａ１−２２）、ヒトＣＤ２０に対して向けられたＢ９Ｅ９  ｓｃＦｖ、ストレプトアビジンタグ、およびヒトＣＤ８アルファ由来のリンカー（ａａ１３８−１８２）で構成される。
【０６８０】
リンカーに続き、ＣＤ２０−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ）構築物は、ＴＭドメインヒトＣＤ８アルファ（ａａ１８３−２０６）、共刺激細胞内シグナル伝達ヒト４−１ＢＢ（ａａ２１４−２５５）およびＣＤ３ゼータ（ａａ５２−１６４）で構成され、
−ＣＤ２０−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２）構築物は、ＴＭ、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインヒトＴＮＦＲ２（ａａ２５８−４６１）およびＣＤ３ゼータで構成され、
−ＣＤ２０−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ１）は、ＴＭおよび共刺激細胞内シグナル伝達ドメインヒトＴＮＦＲ１（ａａ２１２−４５５）およびＣＤ３ゼータで構成される。
【０６８１】
抗ＩＬ−２３ＲＣＡＲは、ヒトＣＤ８リーダー配列（ａａ１−２２）、ヒトＩＬ−２３Ｒに対して向けられたｓｃＦｖ、およびヒトＣＤ８アルファ（ａａ１３８−１８２）由来のリンカーで構成される。
【０６８２】
リンカーに続き、ＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ）構築物は、膜貫通ドメインヒトＣＤ８アルファ（ａａ１８３−２０６）および共刺激細胞内シグナル伝達ドメインヒト４−１ＢＢ（ａａ２１４−２５５）およびＣＤ３ゼータ（ａａ５２−１６４）で構成され；一方、ＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２）構築物は、膜貫通および共刺激細胞内シグナル伝達ドメインヒトＴＮＦＲ２（ａａ２５８−４６１）およびＣＤ３ゼータで構成される。
【０６８３】
すべてのＣＡＲ構築物を、Ｐ２Ａリンカーおよびオープンリーディングフレーム増強緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を有する相でクローン化する。
形質導入されたＴｒｅｇの表現型分析
【０６８４】
培養９日目に、Ｔｒｅｇ表現型をフローサイトメトリーによって分析して、形質導入手順がＴｒｅｇの状態に影響を与えないことを確認した。この分析に使用したマーカーを表２に示す。
【表２】
2021534815.tif 000003
ＣＡＲの活性化アッセイ
【０６８５】
ＣＡＲの活性化を、Ｊｕｒｋａｔ−Ｌｕｃｉａ−ＮＦＡＴ細胞株（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）またはヒト初代Ｔｒｅｇのいずれかで評価した。レポーター細胞株については、ＣＡＲとＣＤ１９＋Ｄａｕｄｉ細胞（比率１：１）との連結後、ＮＦＡＴ活性化を、Ｌｕｃｉａルシフェラーゼ活性（製造元の指示を参照）を監視すること、およびＧｌｏＭａｘルミノメーター（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用することにより評価した。
【０６８６】
Ｔｒｅｇについて、活性化アッセイを培養９日目に実施した。簡潔に言えば、０．０５ｘ１０６のＴｒｅｇを、最終容量２００μＬで９６Ｕの底プレートに、単独でまたは抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３コーティングビーズの存在下（１：１のＴｒｅｇ対ビーズ比）で、もしくは新鮮な解凍自家Ｂ細胞もしくはＣＤ１９＋Ｄａｕｄｉ  Ｂ細胞（Ｔｒｅｇ対Ｂ細胞の比率が１：１）の存在下で播種した。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間後に、細胞をＣＤ４およびＣＤ６９について染色し、次いでフローサイトメトリーを使用して分析した。非形質導入Ｔｒｅｇ細胞と比較してＣＡＲ Ｔｒｅｇ細胞によるＣＤ６９自発的発現を監視することは、持続性シグナル伝達強度の決定を可能にする。
Ｔ細胞増殖の抑制アッセイ
【０６８７】
抑制アッセイを培養９日目に行った。簡潔に言えば、Ｔｒｅｇを、抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３コーティングビーズを使用するＴＣＲ（Ｔｒｅｇ対ビーズ比１：１）または新鮮な解凍自家Ｂ細胞を使用するＣＡＲ（Ｔｒｅｇ対ビーズ比１：１）のいずれかを介して、回収し、カウントし、および活性化し、または活性化せずに維持して、それらの自発的な抑制的活性を評価した。
【０６８８】
並行して、同種Ｔｃｏｎｖ（従来のＴ細胞）を解凍し、Ｄｙｅ４５０で染色し、抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３コーティングビーズ（Ｔｃｏｎｖ対ビーズ比３：１）で活性化した。翌日、ビーズを、非活性化または活性化されたＴｒｅｇ（非形質導入または形質導入）と共培養する前にＴｃｏｎｖから除去した。
【０６８９】
３日目に、細胞を採取し、Ｔｃｏｎｖの増殖を、Ｄｙｅ４５０希釈の決定によるフローサイトメトリーにより評価した。Ｔｃｏｎｖ増殖の阻害の割合を以下のように計算した：
【数１】
2021534815.tif 000004
結果
形質導入効率および細胞表面でのＣＡＲの発現
【０６９０】
形質導入効率を、ＧＦＰ陽性細胞の割合を評価することにより決定し、ＣＡＲの発現を、ＣＤ２０−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢおよびＴＮＦＲ２）およびＩＬ−２３ＲＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢおよびＴＮＦＲ２）またはＣＤ１９−ＣＡＲのＨＡタグに対して向けられる抗体（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢおよびＴＮＦＲ２）の免疫グロブリンカッパ軽鎖結合タンパク質である組換えプロテインＬを評価することにより監視した。
【０６９１】
この実施例で試験されたすべてのドナーの概要として（ｎ＝５）、形質導入効率の割合および細胞表面でＣＡＲを発現した形質導入細胞の割合の結果を、表３に示す（図２は、生データの例を示す）。
【表３】
2021534815.tif 000005
【０６９２】
図２および／または表３に示すように、ＣＤ１９−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ）、ＣＤ２０−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ）、およびＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ）形質導入細胞は、細胞表面で９５％以上のＣＡＲを保有し、ＣＤ１９−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２）、ＣＤ２０−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２）、およびＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２）形質導入細胞は、細胞表面で、４６％〜７５％のＣＡＲを発現した。さらに、細胞あたりのＣＡＲ数を表す平均蛍光強度（ＭＦＩ）は、ＣＤ１９−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２）で約１５倍、ＣＤ２０−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２）で約６倍、ＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２）で約９倍低下された。ＧＦＰ発現はすべての実験条件で同等であったため、細胞表面でのＣＡＲ発現のこの強い減少は、形質導入効率の低下の結果ではなかった。
【０６９３】
さらに、図３のパネルＡに示すとおり、ＣＤ２０−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ）で形質導入された細胞は、ＣＤ３ζ抗体で染色した後、ＣＡＲに対応する６２ｋＤタンパク質を発現し、ＣＤ２０−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２）で形質導入された細胞では８２ｋＤタンパク質を発現したのに対して、非形質導入細胞は内因性ＣＤ３ゼータに対応する１６ｋＤのバンドでのみ標識された。興味深いことに、バンド強度の定量化は、フローサイトメトリー（図２）を使用して観察されたＣＤ２０−ＣＡＲ（ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ）（図３、パネルＢ）と比較して低いＣＤ２０−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２）の発現を示した。
【０６９４】
要約すると、これらの結果は、ＴＮＦＲ２細胞内ドメインおよびＴＮＦＲ２膜貫通ドメインが驚くべきことに、特に細胞表面において、ＣＡＲの全体的な発現の減少をもたらしたことを示した。
ＣＡＲ特異的活性化
【０６９５】
抗原非依存性の持続性シグナル伝達の完全な減少は、古典的な４−１ＢＢ／ＣＤ３ζ構築物と比較して、３つの異なるｓｃＦｖ標的（ＣＤ１９、ＣＤ２０、およびＩＬ−２３Ｒ）のＴＮＦＲ２ドメインを含むＣＡＲで形質導入されたＴｒｅｇ細胞で観察される（図４、パネルＡ〜Ｃ）。さらに、細胞表面でのＴＮＦＲ２由来ＣＡＲ発現（ＣＤ１９、ＣＤ２０、またはＩＬ−２３Ｒ）の大幅な減少（表３）にもかかわらず、ＣＡＲ特異的活性化は維持される。
【０６９６】
したがって、これらの結果は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインおよびＴＮＦＲ２細胞内ドメインの存在が驚くべきことに、ＣＡＲ  Ｔｒｅｇ細胞における活性化バックグラウンドの強力な減少をもたらし、その結果、ＣＡＲ特異的活性化とリガンド非依存性持続性シグナル伝達の間の比率を増加させたことを示す。３つの異なるｓｃＦｖ（ＣＤ１９、ＣＤ２０、およびＩＬ−２３Ｒ）の試験を行い、同じように挙動したため、この現象は目的のｓｃＦｖには依存しない。
ＣＡＲに媒介される抑制的活性
【０６９７】
ＴＮＦＲ２由来ドメインを保有するＣＤ１９−ＣＡＲ構築物について、４−１ＢＢ由来構築物の抑制的活性に匹敵する抑制的活性のＣＡＲ特異的なトリガーが、細胞表面でのＣＡＲ発現が１５分の１に減少した状態でさえ観察された（図５、パネルＡ）。
【０６９８】
最も興味深いことに、ＣＤ２０−ＣＡＲ構築物およびＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ構築物の場合、４−１ＢＢ由来構築物の自発的抑制活性は、ＣＡＲに媒介される抑制的活性を強調するには強すぎた一方で、ＴＮＦＲ２由来ＣＡＲ構築物は、これにより、初めて特定のＣＡＲに媒介される抑制的活性の観察を可能にした、抑制的活性の大幅に減少されたバックグラウンドをもたらした（図５、パネルＢおよび５Ｃ）。
【０６９９】
結論として、ＴＮＦＲ２／ＣＤ３ζ由来ＣＡＲにおけるリガンド非依存性持続性シグナル伝達の減少は、ＣＤ２０−ＣＡＲおよびＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲに媒介される抑制的活性の観察を初めて可能にしたのに対し、同じ４−１ＢＢ／ＣＤ３ζドメインに融合されたｓｃＦｖには、バックグラウンドを超える観察可能な活性はなかった。
実施例２：ＴＮＦＲ２由来ＣＤ１９−ＣＡＲの比較
材料および方法
【０７００】
ＣＡＲ構築物を除いて、材料および方法は実施例１に記載したものと同じである。ここでは、２種類の細胞：ヒトＴｒｅｇおよびＪｕｒｋａｔ−Ｌｕｃｉａ−ＮＦＡＴ細胞をＣＡＲ構築物で形質導入した。
形質導入に使用されるＣＡＲ構築物
【０７０１】
この研究で使用した構築物を、表４および図６に列挙し、記載する。
【表４】
2021534815.tif 000006
【０７０２】
抗ＣＤ１９ＣＡＲは、ヒトＣＤ８リーダー配列（ａａ１−２２）、ヒトＣＤ１９に対して向けられたＦＭＣ６３  ｓｃＦｖ、ストレプトアビジンタグ、およびヒトＣＤ８アルファ由来のリンカー（ａａ１３８−１８２）で構成される。
【０７０３】
場合によっては、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｃ末端において１８、５９、１０４、または１５１アミノ酸残基が除去されているＴＮＦＲ２ドメインの断片である（それぞれ、Δ１８、Δ５９、Δ１０４、またはΔ１５１）。ＴＮＦＲ２シグナル伝達ドメインは５つのドメインに細分でき、ドメインの各々は、異なるシグナル伝達分子と相互作用して様々なシグナル伝達経路をトリガーするために重要である。さらに、特定のドメインは、ＴＮＦＲ２のエンドサイトーシスを調節することが記載されている（Ｊｉら、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．３２（９）：２２７１−９（２０１２年）。特定のドメインがそれぞれの表現型に関与するかを分析するために、いくつかの欠失変異体を構築した。欠失を、マッピングされた細胞内ドメインと協調して行い、Ｃ末端からＴＮＦＲ２ドメインを欠失させた。詳細には、ドメインＶを構築物ＴＮＦＲ２Δ１８中で欠失させ、ドメインＶおよびＩＶをＴＮＦＲ２Δ５９中で；ドメインＶ、ＩＶ、およびＩＩＩをＴＮＦＲ２Δ１０４中で、ならびにドメインＶ、ＩＶ、ＩＩＩ、およびＩＩをＴＮＦＲ２Δ１５１中で欠失させた。ドメインの推定される機能を表５に示す。
【表５】
2021534815.tif 000007
【０７０４】
ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインの影響をさらに詳細に分析するために、ＣＤ８  ＴＭ、それに続くＴＮＦＲ２膜貫通ドメインを保有する構築物、およびＴＮＦＲ２ＴＭ、それに続くＣＤ３ζまたは膜ハイブリッドのみを有し、異なる量のＣＤ８およびＴＮＦＲ２由来アミノ酸からなる構築物を作製した。
【０７０５】
膜貫通ドメインの融合は、ヒトＴＮＦＲ２膜貫通ドメインの一部と融合されたヒトＣＤ８アルファ膜貫通ドメインの全部または部分で構成される。実施例２で使用される融合アミノ酸配列を表６に記載する。
【表６】
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結果
ヒトＴｒｅｇの細胞表面でのＣＤ１９−ＣＡＲの発現
【０７０６】
ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインおよび任意により全ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片を含むＣＤ１９−ＣＡＲを使用して、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが細胞表面でのＣＡＲ発現の減少に関与するかを決定した。ＣＤ８膜貫通ドメインおよび４−１ＢＢ細胞内ドメインを含むＣＤ１９−ＣＡＲを対照として使用した。
【０７０７】
ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインおよび任意によりＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＣＤ８／ＴＮＦＲ２融合膜貫通ドメインを含むＣＤ１９−ＣＡＲを使用して、ＴＦＮＲ２膜貫通ドメインが細胞表面でのＣＡＲ発現の減少に関与しているかを決定した。ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインおよびＣＤ８膜貫通ドメインを含むＣＤ１９−ＣＡＲを対照として使用した。
【０７０８】
表７に示すように、細胞表面でのＣＡＲ発現の減少は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインを含むＣＡＲおよびＴＮＦＲ２細胞内ドメインを含むＣＡＲで観察されたが、ＣＤ８膜貫通ドメインおよび４−１ＢＢ細胞内ドメインを含み、いかなるＴＮＦＲ２ドメインも含まないＣＡＲでは観察されなかった。
【表７】
2021534815.tif 000009
【０７０９】
全体的に、これらの結果は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインおよび共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの両方がヒトＴｒｅｇの細胞表面でのＣＡＲ発現の減少に関与することを示す。
ヒトＴｒｅｇにおけるＣＤ１９−ＣＡＲ特異的活性化
【０７１０】
ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインおよび任意により全ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはその断片を含むＣＤ１９−ＣＡＲを使用して、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインがＣＡＲ活性化に関与するかを決定した。４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインおよびＣＤ８膜貫通ドメインを含むＣＤ１９−ＣＡＲを対照として使用した。
【０７１１】
ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインおよび任意によりＴＮＦＲ２膜貫通ドメインまたはＣＤ８／ＴＮＦＲ２融合膜貫通ドメインを含むＣＤ１９−ＣＡＲを使用して、ＴＦＮＲ２膜貫通ドメインがＣＡＲ活性化に関与しているかを決定した。４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインおよびＣＤ８膜貫通ドメインを含むＣＤ１９−ＣＡＲを対照として使用した。
【０７１２】
表８に示すように、ＣＤ６９初期活性化マーカーの発現レベルによって評価される持続性シグナル伝達の減少は、ＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインおよびＣＤ８／ＴＮＦＲ２融合膜貫通ドメインを含むＣＡＲで観察されたが、ＣＤ８膜貫通ドメイン／４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲでは観察されなかった。低レベルの発現にもかかわらず、ＴＮＦＲ２由来ＣＡＲは、ＣＤ１９＋Ｄａｕｄｉ細胞で効率的に活性化された。非形質導入細胞では、ＣＤ６９発現バックグラウンドはＤａｕｄｉ細胞の非存在下で９％、またはＤａｕｄｉ細胞の存在下で３２％である。
【表８】
2021534815.tif 000010
Ｊｕｒｋａｔ−Ｔ細胞の細胞表面でのＣＤ１９−ＣＡＲの発現
【０７１３】
ヒトＴｒｅｇ細胞と同様に、ＣＤ１９−ＣＡＲの発現も、表５に記載のＣＡＲ構築物を使用してＪｕｒｋａｔ−Ｌｕｃｉａ−ＮＦＡＴ細胞で分析した。このレポーター細胞株は、不死化したヒトＴリンパ球Ｊｕｒｋａｔ細胞に由来する。
【０７１４】
表９に示すように、細胞表面でのＣＡＲ発現の減少は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインを含むＣＡＲおよびＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲでも観察されたが、ＣＤ８膜貫通ドメイン／４−１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン構築物を含むＣＡＲでは観察されなかった。
【表９】
2021534815.tif 000011
【０７１５】
これらの結果は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインおよびＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの両方がＪｕｒｋａｔ−Ｔの細胞表面でのＣＡＲ発現の減少に関与することを示す。
ＴＮＦＲ−ｃ末端欠失構築物は、異なる表面発現パターンを呈し、Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ細胞中のＣＤ３ζシグナル伝達において機能する
【０７１６】
作製されたＣＤ１９−ＣＡＲ構築物の完全性の試験を行うために、表面発現レベルおよびＮＦＡＴシグナル伝達をＪｕｒｋａｔ  ＮＦＡＴ−ＬｕｃｉａＴ細胞株でアッセイした。
【０７１７】
細胞表面発現の強い減少が、ＣＤ８ＴＭ−４１ＢＢ  ＣＡＲと比較して、完全ＴＮＦＲ２  ＣＡＲで観察された（図７）。この発現レベルの減少は、ＴＮＦＲ２−ＴＭドメインがＣＤ８ＴＭドメインに置き換えられたとき、部分的に取り消された。さらに、ＴＮＦＲ２ドメインＶ、ＩＶおよびＩＩＩの欠失は、完全ＴＮＦＲ２ドメインから検出可能に細胞表面発現を変化させなかった。しかし、ドメインＩＩおよびＩの欠失後に、発現レベルは４−１ＢＢ構築物で観察されたレベルの半分に増加した。同時に、すべての構築物は、標的依存性ＮＦＡＴシグナル伝達を継続して呈した。これらの結果は共に、ＴＮＦＲ２ドメインＩおよびＩＩがＴＮＦＲ２由来ＣＡＲにおける細胞表面発現の減少に寄与すること、ならびにＣＡＲが依然としてＣＤ３ｚ依存性ＮＦＡＴシグナル伝達を呈する可能性があるため欠失変異体の効果の低下は、折り畳まれていないタンパク質によるものではないことを示している。
Ｊｕｒｋａｔ−Ｔ細胞におけるＣＤ１９−ＣＡＲ特異的活性化
【０７１８】
ＣＤ１９−ＣＡＲ特異的活性化をまた、ＣＤ１９＋Ｄａｕｄｉ  細胞とのインキュベーション後のＣＡＲ−リガンド結合後のＮＦＡＴ活性化を測定することにより、Ｊｕｒｋａｔ−Ｌｕｃｉａ−ＮＦＡＴ細胞において分析した。
【０７１９】
表１０に示すとおり、低い発現レベルにもかかわらず、すべてのＴＮＦＲ２由来ＣＡＲはＣＤ１９＋Ｄａｕｄｉ細胞で効率的に活性化される。
【表１０】
2021534815.tif 000012
実施例３：多様なＴＮＦＲ受容体（４−１ＢＢ、ＴＮＦＲ１、およびＴＮＦＲ２）に由来する異なる膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを保有する抗ＣＤ２０ＣＡＲの評価
材料および方法
【０７２０】
使用した材料および方法は、実施例１で説明したものと同じであった。
結果
異なるＴＮＦＲ細胞内ドメインを保有する抗ＣＤ２０ＣＡＲの発現レベル
【０７２１】
以前の研究および本研究において、抗ＣＤ２０  ＣＡＲ発現の減少が、４−１ＢＢ細胞内ドメインを保有する構築物と比較して、ＴＮＦＲ２膜貫通および細胞内ドメインを保有する構築物で観察された（図８）。この研究では、ＴＮＦＲ由来のシグナル伝達ドメインを保有する新規ＣＡＲを、ヒトＴＮＦＲ１の膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを使用して設計した（ＣＤ２０−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ１ＴＭ−ＴＮＦＲ１−ＣＤ３ｚ）−Ｐ２Ａ−ＧＦＰのヌクレオチドおよびアミノ酸配列はそれぞれ配列番号１０８および１０９である）。図８に示すとおり、これらの新規ＣＡＲもまた、４−１ＢＢ由来ＣＡＲと比較して細胞表面で低レベルで発現される。しかし、ＴＮＦＲ１由来配列を含むＣＡＲは毒性であり、ＦｏｘＰ３  Ｔｒｅｇの生存に強く影響する（生存率６３％）。さらに、生細胞／アポトーシス細胞は、ある拡散パターンでＴＮＦＲ１由来ＣＡＲを発現する（図８、左下パネル）。
異なるＴＮＦＲ細胞内ドメインを保有する抗ＣＤ２０  ＣＡＲのリガンド非依存性持続性シグナル伝達および活性化能力
【０７２２】
非活性化ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ細胞でのＣＤ６９マーカーの発現を監視することにより、強いリガンド非依存性持続性シグナル伝達が、４−１ＢＢ細胞内ドメインを保有する抗ＣＤ２０  ＣＡＲ構築物で以前に観察された。対照的に、この持続性シグナル伝達は、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを保有する抗ＣＤ２０  ＣＡＲでは、大幅に減少した。本研究は、すべてのＴＮＦＲ由来ＣＡＲ（図９）の中で、ＴＮＦＲ２由来ＣＡＲのみが、持続性シグナル伝達を強力に低減でき（対照の１１％に対して１５％）、一方で４−１ＢＢおよびＴＮＦＲ１配列を保有する構築物は、それぞれ約４０％および３２％の持続性シグナル伝達を有することを示す。この結果は、リガンド非依存性持続性シグナル伝達を特異的に減少させるＴＮＦＲ２由来ＣＡＲの能力を強調する。
【０７２３】
ＣＡＲの活性化を評価するために、ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ細胞を、ＣＤ２０ＣＡＲリガンドを発現する自家Ｂ細胞と共に２４時間インキュベートした。図９に示すとおり、最も効力の高いＣＡＲ活性化が、ＴＮＦＲ２由来ＣＡＲ（２．５倍）で観察され、一方で他のすべてのＣＡＲ−Ｔｒｅｇは、あまり活性化されない（１．８倍未満）。
【０７２４】
ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ細胞の抑制的活性を、Ｂ細胞（Ｂ細胞）の非存在下または存在下でＣＡＲ−Ｔｒｅｇと共培養されたＴｖｏｎ細胞の増殖を監視することにより評価した（図１０）。ここでも、古典的抗ＣＤ２０  ＣＡＲ構築物（ＣＤ８  ＴＭ／４−１ＢＢ）の自発的抑制活性は強すぎてＣＡＲに媒介される抑制的活性を強調できなかった。対照的に、ＴＮＦＲ２由来の抗ＣＤ２０  ＣＡＲは、ＣＡＲに媒介される抑制的活性の観察を可能にした。ＴＮＦＲ１由来の抗ＣＤ２０  ＣＡＲは、非常に弱い抑制的活性を呈した。
【０７２５】
様々なＴＮＦＲ由来ＣＡＲのＣＡＲ効力をより適切に定義し比較するために、Ｔｃｏｎｖ増殖を抑制する能力を、共培養に存在するＣＡＲ−Ｔｒｅｇ細胞の絶対数の関数として表した。図１１に示すとおり、ＴＮＦＲ１由来ＣＡＲは、非常に非効率的であった（５０％の抑制をトリガーする１４７５０のＣＡＲ−Ｔｒｅｇ）。
【０７２６】
これらの結果は、異なるヒトＴＮＦＲ候補の中でも、ＣＡＲにおけるＴＮＦＲ２膜貫通シグナル伝達ドメインおよびＴＮＦＲ２共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの使用が、リガンド非依存性持続性シグナル伝達が非常に低くかつＣＡＲ依存性のＴｒｅｇ活性化および抑制的活性が最適であるＣＡＲ−Ｔｒｅｇの設計に最適な組み合わせであることを示す。
実施例４：Ｔｒｅｇマーカー／表現型
材料および方法
【０７２７】
使用した材料および方法は、実施例１で説明したものと同じであった。
結果
培養における抗ＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ表現型
【０７２８】
９日目のＩＬ−２３ＲＣＡＲ−Ｔｒｅｇ表現型の結果を次表に提示する（表１１）。結果を、各マーカーについて陽性の細胞の割合として表す。
【表１１】
2021534815.tif 000013
2021534815.tif 000014
【０７２９】
興味深いことに、細胞表面において高度に発現されるＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ（４−１ＢＢ／ＣＤ３ｚ）が形質導入されたＴｒｅｇは、ＦｏｘＰ３、Ｈｅｌｉｏｓ、ＣＤ６２Ｌ（太字）の減少およびＣＤ１２７（太字）の増加によって強調される安定性の喪失を示したことを観察した。しかし、ＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ（ＴＮＦＲ２／ＣＤ３ｚ）で形質導入されたＴｒｅｇは、細胞表面の発現の９分の１の減少を示し（４−１ＢＢ由来ＣＡＲでは１９１．１±５３．２、ＴＮＦＲ２由来ＣＡＲでは２０．５±３．４、表３を参照のこと）、培養９日後での堅牢なＴｒｅｇ表現型を強調表示する。
培養における抗ＣＤ２０  ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ表現型
【０７３０】
１５日目の抗−ＣＤ２０  ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ表現型の結果を次表に提示する（表１２）。結果を、各マーカーの陽性細胞の割合または平均蛍光として表す。
【表１２】
2021534815.tif 000015
【０７３１】
興味深いことに、Ｔｒｅｇ表現型は、異なるＣＡＲ−Ｔｒｅｇ構築物およびＧＦＰのみで形質導入された対照の間で統計的に異ならない。
実施例５：ＣＡＲ−Ｔｒｅｇのｉｎ  ｖｉｖｏでの使用
材料および方法
ＧｖＨＤ
【０７３２】
ヒトＨＬＡ−Ａ２＋ＰＢＭＣ注射の１日前に、合計２３匹のＮＳＧマウス（８週）をブスルファン３０ｍｇ／ｋｇのＩＰ注射でコンディショニングして、ヒト細胞の生着を促進した。１日後（０日目）、マウスにＨＬＡ−Ａ＊０２＋ヒトＰＢＭＣ（マウスあたり５ｘ１０６ＰＢＭＣ）をＩＶ注射し、ヒトＨＬＡ−Ａ２  ＣＡＲ  Ｔｒｅｇを１：１のＰＢＭＣ：ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ比で注射した。週に３回、マウスの体重を測定し（ＢＷ）、ＧｖＨＤスコアを評価した。血液サンプルを毎週採取した。屠殺時に、脾臓および肺も分析した。ヒトＴｒｅｇを、ＨＬＡ−Ａ２陰性の健常ボランティアから単離し、前述のとおり形質導入した。
結果
【０７３３】
ＣＤ２８、ＴＮＦＲ２、またはＴＮＦＲ２＋４−１ＢＢ共シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ  Ｔｒｅｇを、ＧｖＨＤマウスモデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏでの活性について試験した。３つの異なるＣＡＲ構築物（図１２）を、前述のとおり、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｌｏｗ、ＣＤ４５ＲＡ＋ヒトＴｒｅｇに形質導入した。
【０７３４】
形質導入効率をＧＦＰ陽性細胞発現の割合により評価し、ＣＡＲ発現を、Ｄｅｘｔｒａｍｅｒ（登録商標）を使用して監視した。図１３に示すとおり、ＴｒｅｇはＣＤ２８またはＴＮＦＲ２またはＴＮＦＲ２＋４−１ＢＢ  ＨＬＡ＊Ａ２  ＣＡＲでそれぞれ２７％、５６％および３４％で形質導入された。
【０７３５】
３つの異なるＨＬＡ＊Ａ２ＣＡＲ−Ｔｒｅｇは、堅牢なＴｒｅｇ表現型ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＦｏｘＰ３＋ＣＴＬＡ−４＋を示した（図１４）。
【０７３６】
ＨＬＡ＊Ａ２  ＣＡＲ−Ｔｒｅｇを比率１：１でＮＳＧマウスに注射した（ＰＢＭＣ：ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ）。ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲ２＋４−１ＢＢまたはＣＤ２８共シグナル伝達ドメインを含むＨＬＡ＊Ａ２ ＣＡＲ−Ｔｒｅｇはすべて、ＧｖＨＤを制御できた（図１５）。
【表１３】
2021534815.tif 000016
2021534815.tif 000017
【図１】
2021534815.tif 000018
【図２】
2021534815.tif 000019
【図３】
2021534815.tif 000020
【図４】
2021534815.tif 000021
【図５】
2021534815.tif 000022
【図６】
2021534815.tif 000023
【図７】
2021534815.tif 000024
【図８】
2021534815.tif 000025
【図９】
2021534815.tif 000026
【図１０】
2021534815.tif 000027
【図１１】
2021534815.tif 000028
【図１２】
2021534815.tif 000029
【図１３】
2021534815.tif 000030
【図１４】
2021534815.tif 000031
【図１５】
2021534815.tif 000032
【手続補正書】
【提出日】令和3年4月19日(2021.4.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021534815000001.app
【国際調査報告】
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