(57)【要約】  ＣＤ９９発現癌の標的治療のための組成物および方法が開示される。具体的には、ＣＤ９９発現癌を標的化して死滅させるために、養子細胞移植とともに使用することができる、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドが開示される。また、これらのＣＡＲを発現するように改変されたＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの免疫エフェクター細胞も開示される。したがって、ＣＤ９９発現癌を有する対象において、開示されるＣＡＲを発現するように改変された開示される免疫エフェクター細胞の養子移植を伴う、抗腫瘍免疫を提供する方法も開示される。また、Ｔ細胞にＣＤ９９発現悪性細胞を破壊させることができる多価抗体も開示される。【選択図】図１
2021509816.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ９９抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン、および共刺激シグナル伝達領域を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチド。
【請求項２】
前記ＣＤ９９抗原結合ドメインが、ＣＤ９９に特異的に結合する抗体の単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記ｓｃＦｖが、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を有する可変重（ＶＨ）ドメイン、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を有する可変軽（ＶＬ）ドメインを含み、前記ＶＨドメインの前記ＣＤＲ１配列が、アミノ酸配列：配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４を含み、前記ＶＨドメインの前記ＣＤＲ２配列が、アミノ酸配列：配列番号５、配列番号６、または配列番号７を含み、前記ＶＨドメインの前記ＣＤＲ３配列が、アミノ酸配列：配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１を含み、前記ＶＬの前記ＣＤＲ１配列が、アミノ酸配列：配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、または配列番号１５を含み、前記ＶＬドメインの前記ＣＤＲ２配列が、アミノ酸配列：配列番号１６、配列番号１７、または配列番号１８を含み、および前記ＶＬドメインの前記ＣＤＲ３配列が、アミノ酸配列：配列番号１９、配列番号２０、または配列番号２１を含む、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記共刺激シグナル伝達領域が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される共刺激分子の細胞質ドメインを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記ＣＡＲポリペプチドが、式
ＳＰ−ＣＤ９９−ＨＧ−ＴＭ−ＣＳＲ−ＩＳＤ、または
ＳＰ−ＣＤ９９−ＨＧ−ＴＭ−ＩＳＤ−ＣＳＲ
によって定義され、式中、「ＳＰ」は、シグナルペプチドを表し、
「ＣＤ９９」は、ＣＤ９９結合領域を表し、
「ＨＧ」は、任意選択的なヒンジドメインを表し、
「ＴＭ」は、膜貫通ドメインを表し、
「ＣＳＲ」は、共刺激シグナル伝達領域を表し、
「ＩＳＤ」は、細胞内シグナル伝達ドメインを表し、および
「−」は二価リンカーを表す、請求項１〜４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組換えポリペプチドをコードする単離された核酸配列。
【請求項８】
請求項７に記載の単離された核酸配列を含むベクター。
【請求項９】
請求項８に記載のベクターを含む細胞。
【請求項１０】
前記細胞が、αβＴ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、Ｂ細胞、自然リンパ球細胞（ＩＬＣ）、サイトカイン誘導キラー（ＣＩＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、制御性Ｔ細胞、またはこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項９に記載の細胞。
【請求項１１】
前記細胞が、前記ＣＡＲの前記抗原結合ドメインがＣＤ９９に結合するときに、抗腫瘍免疫を示す、請求項１０に記載の細胞。
【請求項１２】
請求項１に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを含む、細胞。
【請求項１３】
前記細胞が、自己または同種のエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）特異的細胞傷害性リンパ球である、請求項１２に記載の細胞。
【請求項１４】
ＣＤ９９発現癌を有する対象において抗癌免疫を提供する方法であって、前記方法が、前記対象に有効量の、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＣＡＲポリペプチドを発現するように遺伝子改変された免疫エフェクター細胞を投与することによって、哺乳動物における抗腫瘍免疫を提供することを含む、方法。
【請求項１５】
前記免疫エフェクター細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、および制御性Ｔ細胞からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記免疫エフェクター細胞が、自己または同種のエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）特異的細胞傷害性リンパ球である、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象にチェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、またはこれらの組み合わせを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記癌が、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、または混合表現型（ｂｉ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ）白血病を含む、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
以下の式を含む融合ポリペプチドであって、
ＶＬＩ−ＶＨＩ−ＶＬＴ−ＶＨＴ、
ＶＬＴ−ＶＨＴ−ＶＬＩ−ＶＨＩ、
ＶＨＴ−ＶＬＴ−ＶＨＩ−ＶＬＩ、
ＶＨＩ−ＶＬＩ−ＶＨＴ−ＶＬＴ、
ＶＬＩ−ＶＨＩ−ＶＨＴ−ＶＬＴ、
ＶＬＴ−ＶＨＴ−ＶＨＩ−ＶＬＩ、
式中、「ＶＬＩ」は、免疫細胞抗原に特異的な軽鎖可変ドメインであり、
「ＶＨＴ」は、ＣＤ９９に特異的な重鎖可変ドメインであり、
「ＶＬＴ」は、ＣＤ９９に特異的な軽鎖可変ドメインであり、
「ＶＨＩ」は、前記免疫細胞抗原に特異的な重鎖可変ドメインであり、
「−」は、ペプチドリンカーまたはペプチド結合からなる、融合ポリペプチド。
【請求項２１】
前記免疫細胞抗原が、ＣＤ３である、請求項２０に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２２】
前記ＶＨＴが、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬＴが、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＨドメインの前記ＣＤＲ１配列が、アミノ酸配列：配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４を含み、前記ＶＨドメインの前記ＣＤＲ２配列が、アミノ酸配列：配列番号５、配列番号６、または配列番号７を含み、前記ＶＨドメインの前記ＣＤＲ３配列が、アミノ酸配列：配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１を含み、前記ＶＬの前記ＣＤＲ１配列が、アミノ酸配列：配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、または配列番号１５を含み、前記ＶＬドメインの前記ＣＤＲ２配列が、アミノ酸配列：配列番号１６、配列番号１７、または配列番号１８を含み、前記ＶＬドメインの前記ＣＤＲ３配列が、アミノ酸配列：配列番号１９、配列番号２０、または配列番号２１を含む、請求項２０または２１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２３】
対象において癌を治療するための方法であって、薬学的に許容される担体中の、治療上有効量の請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドを、前記対象に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１月８日に出願された米国特許仮出願第６２／６１４，７７９号、２０１８年４月９日に出願された同第６２／６５４，６１７号、２０１８年４月９日に出願された同第６２／６５４，６２５号、２０１８年９月１２日に出願された同第６２／７３０，３７４号、２０１８年９月１２日に出願された同第６２／７３０，３９７号、２０１８年１１月１５日に出願された同第６２／７６７，８６４号、および２０１８年１１月１５日に出願された同第６２／７６７，８６７号の利益を主張し、これらは全て参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。
【０００２】
配列表
本出願は、２０１９年１月６日に作成された「３２０１０３−２０３０  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５」と題するＡＳＣＩＩ．ｔｘｔファイルとして電子形式で出願された配列表を含む。配列表の内容は、その全体が本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００３】
手術、放射線治療、および化学療法は、白血病、固形腫瘍、および転移を含む癌の治療のための標準的に受け入れられた手法である。身体の免疫系を直接的または間接的に利用して癌を縮小または根絶する免疫療法（生物学的療法、生物療法、または生物学的反応修飾物質療法と呼ばれることもある）は、従来の癌治療の補助として長年研究されてきた。ヒト免疫系は、癌治療のための未開発資源であり、免疫系の構成要素が適切に利用されれば、有効な治療を開発することができると考えられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ＣＤ９９発現癌の標的治療のための組成物および方法が開示される。例えば、ハイブリドーマ１Ｈ３、４Ｃ５、９Ｇ１２、３Ｃ７、２Ｆ１１、４Ｄ５、４Ｆ４および６Ａ１０由来の抗ＣＤ９９モノクローナル抗体が本明細書において提供される。例えば、ハイブリドーマクローン１Ｈ３Ｈ７、１Ｈ３Ｅ９、４Ｃ５Ｅ２、４Ｃ５Ｈ１０、９Ｇ１２Ｃ９、および９Ｇ１２Ｇ６由来の抗体は、ＣＤ９９への特に良好な結合を示した。これらの抗体の１つまたは複数の抗原結合領域を少なくとも含む組換え抗体、ヒト化抗体、および／またはキメラ抗体も開示される。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
また、ＣＤ９９発現悪性細胞を破壊するために、Ｔ細胞を関与させることができる多特異性多価抗体も本明細書に開示される。例えば、抗体は、二重特異性Ｔ細胞誘導体（Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒ）であり得る。抗体は、融合ポリペプチド、例えば、以下の式を有する融合ポリペプチドから改変することができる。
ＶＬＩ−ＶＨＩ−ＶＬＴ−ＶＨＴ、
ＶＬＴ−ＶＨＴ−ＶＬＩ−ＶＨＩ、
ＶＨＴ−ＶＬＴ−ＶＨＩ−ＶＬＩ、
ＶＨＩ−ＶＬＩ−ＶＨＴ−ＶＬＴ、
ＶＬＩ−ＶＨＩ−ＶＨＴ−ＶＬＴ、
ＶＬＴ−ＶＨＴ−ＶＨＩ−ＶＬＩ、
式中、「ＶＬＩ」は、免疫細胞抗原に特異的な軽鎖可変ドメインであり、
「ＶＨＴ」は、ＣＤ９９に特異的な重鎖可変ドメインであり、
「ＶＬＴ」は、ＣＤ９９に特異的な軽鎖可変ドメインであり、
「ＶＨＩ」は、免疫細胞抗原に特異的な重鎖可変ドメインであり、
「−」は、ペプチドリンカーまたはペプチド結合からなる。
免疫細胞抗原は、ヒトＮＫ細胞、Ｔ細胞、単球、マクロファージまたは顆粒球上で発現される細胞表面分子であってもよい。例えば、細胞表面分子は、抗原ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ６４、ＣＤ８９、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲ−Ｆ１）、ＮＫＧ２Ｃ、またはＮＫＧ２Ｄであり得る。
【０００６】
また、開示される融合ポリペプチドをコードする単離された核酸、ならびに発現制御配列に作動可能に結合されたこの単離された核酸を含有する核酸ベクターも開示される。また、これらのベクターでトランスフェクトされた細胞、および開示された融合ポリペプチドを産生するためのこれらの細胞の使用も開示される。
【０００７】
薬学的に許容される担体中に本明細書に開示する分子を含む医薬組成物もまた開示される。また、対象に治療上有効量の開示される医薬組成物を投与することを伴う、対象において癌を治療するための方法も開示される。一部の場合、癌は、任意のＣＤ９９発現悪性腫瘍であり得る。一部の場合、癌は、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、または混合表現型（ｂｉ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ）白血病を含む。
【０００８】
また、ＣＤ９９発現癌を標的化し、死滅させるために、養子細胞移植とともに使用することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドも開示される。開示されるＣＡＲポリペプチドは、ＣＤ９９発現癌細胞に結合することができる抗ＣＤ９９結合剤を外部ドメインに含有する。また、開示されるＣＡＲポリペプチドを発現するための、遺伝子改変の免疫エフェクター細胞も開示される。
【０００９】
抗ＣＤ９９結合剤は、一部の実施形態では、ＣＤ９９に特異的に結合する抗体断片である。例えば、抗原結合ドメインは、ＣＤ９９に特異的に結合する抗体のＦａｂまたは単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であり得る。抗ＣＤ９９結合剤は、一部の実施形態では、ＣＤ９９に特異的に結合するアプタマーである。例えば、抗ＣＤ９９結合剤は、ＣＤ９９に結合する能力に基づいてランダム配列プールから選択されるペプチドアプタマーであってもよい。また、抗ＣＤ９９結合剤は、ＣＤ９９の天然リガンド、またはＣＤ９９に結合することができるその変異体および／または断片であってもよい。
【００１０】
一部の実施形態では、開示される抗体またはＣＡＲの抗ＣＤ９９領域は、ハイブリドーマ１Ｈ３、４Ｃ５、９Ｇ１２、３Ｃ７、２Ｆ１１、４Ｄ５、４Ｆ４、６Ａ１０、またはこれらの組み合わせに由来する。一部の実施形態では、抗ＣＤ９９領域（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を有する可変重（ＶＨ）ドメインおよびＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を有する可変軽（ＶＬ）ドメインを含むことができる。
【００１１】
一部の実施形態では、ＶＨドメインのＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＧＦＤＩＫＤＴＹ（配列番号１）、ＴＹＡＭＹ（配列番号２）、ＴＦＷＭ（配列番号３）、またはＴＦＷＭＱ（配列番号４）を含み、ＶＨドメインのＣＤＲ２配列は、アミノ酸配列ＩＤＰＡＮＧＤＴ（配列番号５）、ＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴ（配列番号６）、またはＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴ（配列番号７）を含み、ＶＨドメインのＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＡＲＲＧＧＬＳ（配列番号８）、ＤＰＭＤＹ（配列番号９）、またはＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳ（配列番号１０）、またはＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦ（配列番号１１）を含み、ＶＬのＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＧＮＩＨＮＹ（配列番号１２）、ＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号１３）、ＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号１４）、またはＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号１５）を含み、ＶＬドメインのＣＤＲ２配列は、アミノ酸配列ＮＡＫＸ（配列番号１６）、ＲＶＳＮＬＡＳ（配列番号１７）、またはＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１８）を含み、ＶＬドメインのＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＱＨＦＷＳＴＰＷＴ（配列番号１９）、ＭＱＨＬＥＹＰＹＴ（配列番号２０）、またはＱＱＹＹＳＹＰＬＴ（配列番号２１）を含む。
【００１２】
したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＨドメインは、アミノ酸配列ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＤＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＤＴＲＹＤＰＥＦＱＧＫＡＳＬＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＦＳＮＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＧＬＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２２、１Ｈ３Ｈ７）を含む。
【００１３】
したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ９９重鎖は、次の核酸配列によってコードされる：
ＧＡＧＧＴＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＡＧＡＧＣＴＴＧＴＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＣＡＡＧＴＴＧＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＴＣＧＡＣＡＴＴＡＡＡＧＡＣＡＣＣＴＡＴＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＡＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＡＧＧＡＴＴＧＡＴＣＣＴＧＣＧＡＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＡＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＴＣＴＡＡＣＡＧＣＴＧＡＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＡＡＴＡＣＡＧＣＣＴＡＣＣＴＡＣＡＡＴＴＣＡＧＣＡＡＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＡＧＡＣＡＣＴＧＣＣＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＡＧＡＧＧＣＧＧＣＣＴＣＴＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号２３、１Ｈ３Ｈ７）。
【００１４】
したがって一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＨドメインは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳ（配列番号２４、４Ｃ５Ｅ２）。
【００１５】
したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ９９重鎖は、次の核酸配列によってコードされる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＡＡＧＧＡＴＣＡＴＴＧＡＡＡＣＴＣＴＣＡＴＧＴＧＣＣＧＣＣＴＣＣＧＧＴＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＡＴＡＣＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＧＧＧＴＣＴＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＴＴＴＧＡＡＡＴＧＧＧＴＴＧＣＴＣＧＣＡＴＡＡＧＡＡＧＴＡＡＡＧＴＴＡＡＴＡＡＴＴＡＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＴＧＣＣＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＡＡＧＡＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＧＡＴＴＣＡＣＡＡＡＡＣＡＴＧＣＴＣＴＴＴＣＴＧＣＡＣＡＴＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＡＡＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＴＡＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＧＡＴＣＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＴＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号２５、４Ｃ５Ｅ２）。
【００１６】
したがって一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＨドメインは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳ（配列番号２６、４Ｃ５Ｈ１０）。
【００１７】
したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ９９重鎖は、次の核酸配列によってコードされる：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＴＧＴＴＧＡＧＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＡＡＧＧＡＴＣＡＴＴＧＡＡＡＣＴＣＴＣＡＴＧＴＧＣＣＧＣＣＴＣＣＧＧＴＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＡＴＡＣＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＧＧＧＴＣＴＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＴＴＴＧＡＡＡＴＧＧＧＴＴＧＣＴＣＧＣＡＴＡＡＧＡＡＧＴＡＡＡＧＴＴＡＡＴＡＡＴＴＡＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＴＧＣＣＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＡＡＧＡＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＧＡＴＴＣＡＣＡＡＡＡＣＡＴＧＣＴＣＴＴＴＣＴＧＣＡＣＡＴＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＡＡＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＴＡＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＧＡＴＣＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＴＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号２７、４Ｃ５Ｈ１０）。
【００１８】
したがって一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＨドメインは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２８、９Ｇ１２Ｃ９）。
【００１９】
したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ９９重鎖は、次の核酸配列によってコードされる：
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＣＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＴＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＴＴＣＴＧＧＡＴＧＣＡＧＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＣＴＡＧＧＴＡＣＡＣＴＣＡＧＡＡＡＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＴＣＧＴＣＣＡＣＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＡＣＴＣＡＧＣＡＡＣＴＴＧＴＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＴＣＧＧＧＧＴＡＴＧＡＧＡＧＧＧＧＣＣＣＡＴＡＣＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号２９、９Ｇ１２Ｃ９）。
【００２０】
したがって一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＨドメインは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＶＫＬＱＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＲＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号：３０、９Ｇ１２Ｇ６  ＨＢ１）。
【００２１】
したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ９９重鎖は、次の核酸配列によってコードされる：
ＧＡＴＧＴＧＡＡＧＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＴＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＴＴＣＴＧＧＡＴＧＣＡＧＣＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＣＴＡＧＧＴＡＣＡＣＴＣＡＧＡＡＡＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＴＣＧＴＣＣＡＣＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＡＣＴＣＡＧＣＡＡＣＴＴＧＴＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＴＣＧＧＧＧＴＡＴＧＡＧＡＧＧＧＧＣＣＣＡＴＡＣＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号３１、９Ｇ１２Ｇ６  ＨＢ１）。
【００２２】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＨドメインは、アミノ酸配列ＱＶＱＬＫＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３２、９Ｇ１２Ｇ６  ＨＢ３）を含む。
【００２３】
したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ９９重鎖は、次の核酸配列によってコードされる：
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＴＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＴＴＣＴＧＧＡＴＧＣＡＧＴＧＧＧＣＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＣＴＡＧＧＴＡＣＡＣＴＣＡＧＡＡＡＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＴＣＧＴＣＣＡＣＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＡＣＴＣＡＧＣＡＡＣＴＴＧＴＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＴＣＧＧＧＧＴＡＴＧＡＧＡＧＧＧＧＣＣＣＡＴＡＣＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号３３、９Ｇ１２Ｇ６  ＨＢ３）。
【００２４】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＬドメインは、アミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３４、１Ｈ３Ｈ９）を含む。
【００２５】
したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ９９軽鎖は、次の核酸配列によってコードされる：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＣＴＡＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＡＡＣＴＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＡＴＧＴＣＧＡＧＣＡＡＧＴＧＧＧＡＡＴＡＴＴＣＡＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＧＣＡＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＡＧＧＧＡＡＡＡＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＴＣＴＡＴＡＡＴＧＣＡＡＡＡＡＣＣＴＴＡＧＣＡＧＡＴＧＧＴＧＴＧＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＡＡＣＡＣＡＡＴＡＴＴＣＴＣＴＣＡＡＧＡＴＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＧＧＡＧＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＴＴＴＴＴＧＧＡＧＴＡＣＴＣＣＧＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ（配列番号：３５、１Ｈ３Ｈ９）。
【００２６】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＬドメインは、次のアミノ酸配列を含む：
ＧＮＳＷＳＨＳＬＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号：３６、１Ｈ３Ｈ７  ＬＣ１）。
【００２７】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＬドメインは、次のアミノ酸配列を含む：
ＧＮＳＷＲＨＳＰＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３７、１Ｈ３Ｈ７  ＬＣ２）。
【００２８】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＬドメインは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号３８、４Ｃ５Ｅ２）。
【００２９】
したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ９９軽鎖は、次の核酸配列によってコードされる：
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＧＣＴＧＣＡＣＣＣＴＣＴＧＴＡＣＣＴＧＴＣＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＧＴＣＡＧＴＡＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＧＧＧＴＣＴＡＧＴＡＡＧＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＣＡＡＣＡＣＴＴＡＣＴＴＧＴＡＴＴＧＧＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＡＴＡＴＣＧＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＣＴＴＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＧＧＡＡＣＴＧＣＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＧＡＡＴＣＡＧＴＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＡＴＧＣＡＡＣＡＴＣＴＡＧＡＡＴＡＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＧＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ（配列番号３９、４Ｃ５Ｅ２）。
【００３０】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＬドメインは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号４０、４Ｃ５Ｈ１０）。
【００３１】
したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ９９軽鎖は、次の核酸配列によってコードされる：
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＧＣＴＧＣＡＣＣＣＴＣＴＧＴＡＣＣＴＧＴＣＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＧＴＣＡＧＴＡＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＧＧＧＴＣＴＡＧＴＡＡＧＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＣＡＡＣＡＣＴＴＡＣＴＴＧＴＡＴＴＧＧＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＡＴＡＴＣＧＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＣＴＴＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＧＧＡＡＣＴＧＣＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＧＡＡＴＣＡＧＴＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＡＴＧＣＡＡＣＡＴＣＴＡＧＡＡＴＡＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＧＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ（配列番号４１、４Ｃ５Ｈ１０）。
【００３２】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＬドメインは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号４２、９Ｇ１２Ｃ９）。
【００３３】
したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ９９軽鎖は、次の核酸配列によってコードされる：
ＧＡＣＡＣＴＧＴＧＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＴＧＴＴＴＣＡＧＴＴＧＧＡＧＡＧＡＡＧＡＴＡＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＴＴＴＡＴＧＴＣＧＴＡＧＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＡＧＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＴＡＴＴＡＴＡＧＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ（配列番号４３、９Ｇ１２Ｃ９）。
【００３４】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ＶＬドメインは、アミノ酸配列ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号４４、９Ｇ１２Ｇ６）を含む。
【００３５】
したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ９９軽鎖は次の核酸配列によってコードされる：
ＧＡＣＡＣＴＧＴＧＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＴＧＴＴＴＣＡＧＴＴＧＧＡＧＡＧＡＡＧＡＴＡＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＴＴＴＡＴＡＴＣＧＴＡＧＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＡＧＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＴＡＴＴＡＴＡＧＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ（配列番号４５、９Ｇ１２Ｇ６）。
【００３６】
重鎖および軽鎖は、好ましくはリンカーによって分離される。ｓｃＦｖ抗体に好適なリンカーは当該技術分野で既知である。一部の実施形態では、リンカーはアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４６）を含む。ｓｃＦｖは、式ＮＨ３−ＶＨ−リンカー−ＶＬ−ＣＯＯＨまたはＮＨ３−ＶＬ−リンカー−ＶＨ−ＣＯＯＨを有し得る。
【００３７】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＤＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＤＴＲＹＤＰＥＦＱＧＫＡＳＬＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＦＳＮＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＧＬＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号４７）。
【００３８】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＤＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＤＴＲＹＤＰＥＦＱＧＫＡＳＬＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＦＳＮＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＧＬＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＮＳＷＳＨＳＬＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号４８）。
【００３９】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＤＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＤＴＲＹＤＰＥＦＱＧＫＡＳＬＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＦＳＮＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＧＬＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＮＳＷＲＨＳＰＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号４９）。
【００４０】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＤＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＤＴＲＹＤＰＥＦＱＧＫＡＳＬＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＦＳＮＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＧＬＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号５０）。
【００４１】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＤＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＤＴＲＹＤＰＥＦＱＧＫＡＳＬＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＦＳＮＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＧＬＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号５１）。
【００４２】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＤＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＤＴＲＹＤＰＥＦＱＧＫＡＳＬＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＦＳＮＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＧＬＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号５２）。
【００４３】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号５３）。
【００４４】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＮＳＷＳＨＳＬＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号５４）。
【００４５】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＮＳＷＲＨＳＰＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号５５）。
【００４６】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号５６）。
【００４７】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号５７）。
【００４８】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号５８）。
【００４９】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号５９）。
【００５０】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＮＳＷＳＨＳＬＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号６０）。
【００５１】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＮＳＷＲＨＳＰＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号６１）。
【００５２】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号６２）。
【００５３】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号６３）。
【００５４】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号６４）。
【００５５】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号６５）。
【００５６】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＮＳＷＳＨＳＬＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号６６）。
【００５７】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＮＳＷＲＨＳＰＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号６７）。
【００５８】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号６８）。
【００５９】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号６９）。
【００６０】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号７０）。
【００６１】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＶＫＬＱＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＲＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７１）。
【００６２】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＶＫＬＱＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＲＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＮＳＷＳＨＳＬＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７２）。
【００６３】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＶＫＬＱＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＲＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＮＳＷＲＨＳＰＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７３）。
【００６４】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＶＫＬＱＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＲＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号７４）。
【００６５】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＶＫＬＱＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＲＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号７５）。
【００６６】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＶＫＬＱＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＲＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号７６）。
【００６７】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＶＫＬＱＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＲＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号７７）。
【００６８】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＫＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７８）。
【００６９】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＫＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＮＳＷＳＨＳＬＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７９）。
【００７０】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＫＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＮＳＷＲＨＳＰＲＳＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＧＮＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＬＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８０）。
【００７１】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＫＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号８１）。
【００７２】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＫＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号８２）。
【００７３】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＫＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号８３）。
【００７４】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＱＶＱＬＫＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号８４）。
【００７５】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＤＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＤＴＲＹＤＰＥＦＱＧＫＡＳＬＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＦＳＮＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＧＬＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号８５）。
【００７６】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳ（配列番号８６）。
【００７７】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳ（配列番号８７）。
【００７８】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号８８）。
【００７９】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＶＫＬＱＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＲＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号８９）。
【００８０】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＫＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号９０）。
【００８１】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＤＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＤＴＲＹＤＰＥＦＱＧＫＡＳＬＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＦＳＮＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＧＬＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号９１）。
【００８２】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳ（配列番号９２）。
【００８３】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳ（配列番号９３）。
【００８４】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号９４）。
【００８５】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＶＫＬＱＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＲＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号９５）。
【００８６】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＧＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＶＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＫＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号９６）。
【００８７】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＤＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＤＴＲＹＤＰＥＦＱＧＫＡＳＬＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＦＳＮＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＧＬＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号９７）。
【００８８】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳ（配列番号９８）。
【００８９】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳ（配列番号９９）。
【００９０】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１００）。
【００９１】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＶＫＬＱＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＲＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１０１）。
【００９２】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＣＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＫＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１０２）。
【００９３】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＤＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＧＤＴＲＹＤＰＥＦＱＧＫＡＳＬＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＦＳＮＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＧＬＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１０３）。
【００９４】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳ（配列番号１０４）。
【００９５】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＹＷＶＣＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＲＩＲＳＫＶＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＮＭＬＦＬＨＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＩＹＦＣＶＲＤＰＭＤＹＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳ（配列番号１０５）。
【００９６】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１０６）。
【００９７】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＶＫＬＱＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＲＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１０７）。
【００９８】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖは、次のアミノ酸配列を含む：
ＤＴＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＩＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＲＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＱＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＫＥＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＷＭＱＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＤＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＮＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＥＲＧＰＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１０８）。
【００９９】
他のＣＡＲと同様に、開示されるポリペプチドはまた、膜貫通ドメインおよび免疫エフェクター細胞を活性化することができる内部ドメインを含有することができる。例えば、内部ドメインは、シグナル伝達ドメインと、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達領域とを含有することができる。
【０１００】
一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）シグナル伝達ドメインである。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、またはこれらの組み合わせの細胞質ドメインを含む。場合によっては、共刺激シグナル伝達領域は、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達および／または共刺激分子の１、２、３、または４個の細胞質ドメインを含有する。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域は、シグナル伝達を増強するＣＤ２８および／または４−１ＢＢの細胞質ドメイン内に１つまたは複数の変異を含有する。
【０１０１】
一部の実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、不完全な内部ドメインを含有する。例えば、ＣＡＲポリペプチドは、細胞内シグナル伝達ドメインまたは共刺激ドメインのみを含有することができるが、両方は含有しない。これらの実施形態において、免疫エフェクター細胞は、それと、欠損ドメインを含有する第２のＣＡＲポリペプチド（または内因性Ｔ細胞受容体）の両方がそれぞれの抗原に結合しない限り、活性化されない。したがって、一部の実施形態では、ＣＡＲポリペプチドはＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）シグナル伝達ドメインを含有するが、共刺激シグナル伝達領域（ＣＳＲ）を含有しない。他の実施形態において、ＣＡＲポリペプチドは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、またはこれらの組み合わせの細胞質ドメインを含有するが、ＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）シグナル伝達ドメイン（ＳＤ）を含有しない。
【０１０２】
また、開示されるＣＡＲポリペプチドをコードする単離された核酸配列、これらの単離された核酸を含有するベクター、およびこれらのベクターを含有する細胞も開示される。例えば、細胞は、アルファ−ベータＴ細胞、ガンマ−デルタＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、Ｂ細胞、自然リンパ球細胞（ＩＬＣ）、サイトカイン誘導キラー（ＣＩＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、および制御性Ｔ細胞からなる群から選択される、免疫エフェクター細胞であり得る。
【０１０３】
一部の実施形態では、細胞は、ＣＡＲの抗原結合ドメインがＣＤ９９に結合するときに抗腫瘍免疫を示す。
【０１０４】
また、開示されるＣＤ９９特異的ＣＡＲで遺伝子改変された有効量の免疫エフェクター細胞を対象に投与することを伴う、ＣＤ９９発現癌を有する対象において抗腫瘍免疫を提供する方法も開示される。
【０１０５】
本発明の１つまたは複数の実施形態の詳細は、付属の図面および以下の説明に記載される。本発明の他の特徴、目的、および利点は、説明および図面から、および特許請求の範囲から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１０６】
【図１】図１は、ＣＤ９９−ＰＥ分析における生細胞に使用されるゲートを示すフローサイトメトリープロットを含む。
【図２】図２は、ＣＤ９９−ＰＥ分析に使用される陽性（右）および陰性（左）対照を示すフローサイトメトリープロットを含む。
【図３】図３は、ＣＤ９９に対して陽性のハイブリドーマを示すフローサイトメトリープロットを含む。
【図４】図４は、各ハイブリドーマのＥＬＩＳＡ吸光によるＣＤ９９結合を示すプロットを含む。
【図５】図５は、１Ｈ３Ｈ７、ＩＨ３Ｅ９、４Ｃ５Ｅ２、４Ｃ５Ｈ１０、９Ｇ１２Ｃ９、および９Ｇ１２Ｇ６の二次スクリーニングを示すフローサイトメトリープロットを含む。
【図６Ａ】図６〜６Ｄは、抗ＣＤ９９  ＣＡＲの細胞毒性活性を示す。ＣＤ９９を過剰発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ−ＣＤ９９）を標的細胞として使用した。抗ＣＤ９９  ＣＡＲを発現するガンマレトロウイルスを、健康なＰＢＭＣから単離した初代Ｔ細胞に形質導入した。各ＣＡＲの形質導入効率は、ｍＣｈｅｒｒｙ発現のフローサイトメトリー分析によって決定した（図６Ａおよび６Ｂ）。ＣＡＲ陽性細胞を、１：１（図６Ｃ）または１：５（図６Ｄ）のいずれかのエフェクター対標的比で標的細胞に添加した。ＵＴ＝非形質導入、ＭＦＩ＝蛍光強度の中央値。
【図６Ｂ】同上。
【図６Ｃ】同上。
【図６Ｄ】同上。
【図７Ａ】図７Ａ〜７Ｃは、抗ＣＤ９９  ＣＡＲによるサイトカイン分泌を示す。ＣＡＲ陽性細胞を、ＣＨＯ−ＣＤ９９標的細胞と、エフェクター対標的比１：１で一晩共インキュベートした。共インキュベート後、上清を収集し、サイトカインＩＦＮγ（図７Ａ）、ＩＬ−２（図７Ｂ）、およびＩＬ−６（図７Ｃ）の産生を分析した。ＵＴ＝非形質導入。
【図７Ｂ】同上。
【図７Ａ】同上。
【図８Ａ】図８Ａ〜８Ｉは、抗ＣＤ９９  ＣＡＲの免疫表現型を示す。ＰＢＭＣから単離された健康なＴ細胞を、抗ＣＤ９９  ＣＡＲで形質導入した。抗原刺激なしで１週間培養した後、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＰＤ１、ＣＣＲ７、およびＣＤ４５ＲＡについて細胞を染色し、フローサイトメーターでデータを収集した。形質導入効率は、ｍＣｈｅｒｒｙ発現に基づいて決定した（図８Ａおよび８Ｂ）。ＣＤ４、ＣＤ８、およびＰＤ１発現について、生きたＣＡＲ陽性のＴ細胞を分析した（図８Ｃ〜８Ｈ）。また、Ｔ細胞のサブセットも、ＣＣＲ７およびＣＤ４５ＲＡ発現に基づいて分析した（図８Ｉ）。ＥＦＦ＝エフェクター、ＥＭ＝エフェクターメモリー、ＣＭ＝セントラルメモリー、Ｎ＝未処理。
【図８Ｂ】同上。
【図８Ｃ】同上。
【図８Ｄ】同上。
【図８Ｅ】同上。
【図８Ｆ】同上。
【図８Ｇ】同上。
【図８Ｈ】同上。
【図８Ｉ】同上。
【図９Ａ】図９Ａ〜９Ｆは、抗ＣＤ９９  ＣＡＲのＣＤ４およびＣＤ８免疫表現型を示す。ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞を、ＰＤ１（図９Ａおよび９Ｂ、９Ｄおよび９Ｅ）の発現について、およびＴ細胞のサブセット（図９Ｃおよび９Ｆ）について分析した。ＥＦＦ＝エフェクター、ＥＭ＝エフェクターメモリー、ＣＭ＝セントラルメモリー、Ｎ＝未処理。
【図９Ｂ】同上。
【図９Ｃ】同上。
【図９Ｄ】同上。
【図９Ｅ】同上。
【図９Ｆ】同上。
【発明を実施するための形態】
【０１０７】
ＣＤ９９発現癌上の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を特異的に認識することができる、二重特異性抗体およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が本明細書に開示される。また、これらのＣＡＲを発現するように改変されたＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの免疫エフェクター細胞も開示される。したがって、開示される抗体および免疫エフェクター細胞を使用して、ＣＤ９９発現癌を有する対象において抗腫瘍免疫を提供するための方法も開示される。
【０１０８】
抗体
本開示の組成物および方法に使用することができる抗体としては、任意のクラスの全免疫グロブリン（すなわち、無傷の抗体）、その断片、および少なくとも抗体の抗原結合可変ドメインを含有する合成タンパク質が挙げられる。可変ドメインは、抗体間で配列が異なり、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合および特異性に使用される。しかしながら、可変性は、通常、抗体の可変ドメインを通じて均等に分布していない。典型的には、軽鎖および重鎖可変ドメインの両方において相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに濃縮される。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ４つのＦＲ領域を含み、主にβシートの立体配置をとり、３つのＣＤＲによって連結され、ＣＤＲは、ループを形成してβシート構造を連結し、場合によって、はその一部を形成する。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ領域によって近接して一緒に保持され、他方の鎖からのＣＤＲとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。
【０１０９】
免疫化時、内因性免疫グロブリン産生の非存在下で、ヒト抗体の完全なレパートリーを産生することが可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）を用いることができる。例えば、キメラおよび生殖系列変異マウスにおける抗体重鎖連結領域（Ｊ（Ｈ））遺伝子のホモ接合型欠失が、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている。そのような生殖系列変異マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移動は、抗原チャレンジ時にヒト抗体の産生をもたらす（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１−２５５（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．，７：３３（１９９３）を参照）。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリ内で産生され得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１））。ＣｏｔｅらおよびＢｏｅｒｎｅｒらの技術は、ヒトモノクローナル抗体の調製にも利用可能である（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１））。
【０１１０】
任意選択的に、抗体は、他の種で生成され、ヒトにおける投与のために「ヒト化」される。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合サブ配列など）である。ヒト化抗体としては、レシピエント抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、またはウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基に置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）が挙げられる。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にも、インポートされるＣＤＲ中もしくはフレームワーク配列中にも見出されない残基を含んでもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインを実質的に全て含み、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を含む（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）、およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２））。
【０１１１】
非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該技術分野で周知である。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からそこに導入される１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、典型的には、「インポート」可変ドメインから得られる「インポート」残基と称されることが多い。抗体ヒト化技術は、一般に、抗体分子の１つまたは複数のポリペプチド鎖をコードするＤＮＡ配列を操作するための組換えＤＮＡ技術の使用を伴う。ヒト化は、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法に従って、げっ歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列に置き換えることによって行うことができる（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））。したがって、非ヒト抗体（またはその断片）のヒト化形態は、キメラ抗体または断片（米国特許第４，８１６，５６７号）であり、実質的に無傷のヒト可変ドメイン未満が、非ヒト種由来の対応する配列によって置換されている。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかのＣＤＲ残基およびおそらくいくつかのＦＲ残基が、げっ歯類抗体中の類似部位からの残基によって置換されているヒト抗体である。
【０１１２】
また、生理活性を有する抗体の断片も開示される。断片は、他の配列に結合しているか否かにかかわらず、特定の領域または特定のアミノ酸残基の挿入、欠失、置換、または他の選択された修飾を含むが、ただし、断片の活性は、非修飾抗体または抗体断片と比較して著しく変化または障害されない。
【０１１３】
本開示の抗原タンパク質に特異的な単鎖抗体の産生にも技術を適合させることができる。単鎖抗体の産生方法は、当業者に周知である。単鎖抗体は、短いペプチドリンカーを使用して重鎖および軽鎖の可変ドメインを一緒に融合することによって生成することができ、それによって、一分子上に抗原結合部位を再構成することができる。１つの可変ドメインのＣ末端が、１５〜２５個のアミノ酸ペプチドまたはリンカーを介して他方の可変ドメインのＮ末端に繋がれた単鎖抗体可変断片（ｓｃＦｖ）は、抗原結合または結合の特異性を著しく妨害することがないように開発されている。リンカーは、重鎖および軽鎖が、それらの適切な立体構造の配向で、一緒に結合することできるように選択される。
【０１１４】
二価単鎖可変断片（ｄｉ−ｓｃＦｖ）は、２つのｓｃＦｖを連結することによって改変することができる。これは、２つのＶＨ領域および２つのＶＬ領域を有する単一のペプチド鎖を産生することによって行うことができ、タンデム型ｓｃＦｖが得られる。また、ｓｃＦｖは、２つの可変領域を一緒に折り畳むには短すぎるリンカーペプチド（約５個のアミノ酸）を用いて設計することができ、ｓｃＦｖを強制的に二量体化する。このタイプは、ダイアボディとして知られている。ダイアボディは、対応するｓｃＦｖよりも最大４０倍低い解離定数を有することが示されており、それらがそれらの標的に対してはるかに高い親和性を有していることを意味する。さらに短いリンカー（１つまたは２つのアミノ酸）は、三量体（トリアボディまたはトリボディ）の形成につながる。テトラボディも生産されている。それらは、ダイアボディよりも標的に対してさらに高い親和性を示す。
【０１１５】
ＣＤ３およびＣＤ９９に選択的に結合するように設計された二重特異性抗体は、非特異性Ｔ細胞の活性化およびサイトカインストームを引き起こすことがある。ＣＤ３およびＣＤ９９に選択的に結合するように設計された二重特異性ダイアボディは、腎クリアランス閾値よりも少ない分子量（５５〜６０ｋＤ）を有し、急速な排除をもたらすことがある。そうであるから、ダイアボディは、持続注入によって投与されなければならない。開示される四価二重特異性抗体は、顕著に伸長した薬物動態（ＰＫ）を伴う腎ろ過閾値よりも大きい分子量（例えば、１０５〜１１０ｋＤ）を有し得る。
【０１１６】
Ｔ細胞にＣＤ９９発現悪性細胞を破壊させ得る多価の改変抗体を形成することが可能な、融合ポリペプチドが提供される。改変抗体は、例えば、少なくとも１つのｓｃＦｖ、少なくとも１つのＦａｂ断片、少なくとも１つのＦｖ断片等を含んでもよい。それは、二価、三価、四価等であってもよい。多価抗体は、多特異性であり、例えば、二重特異性、三重特異性、四重特異性等である。多価抗体は、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ等の任意の形態であってもよい。
【０１１７】
二価および二重特異性抗体は、抗体可変ドメインのみを使用して構築することができる。かなり効率的で比較的単純な方法は、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のリンカー配列を、それらが折り畳んで互いに結合することができないほど短くすることである。リンカー長を３〜１２残基に減少させることで、ｓｃＦｖ分子の単量体の立体配置を防ぎ、６０ｋＤａの非共有結合性ｓｃＦｖ二量体「ダイアボディ」の形成との分子間ＶＨ−ＶＬ対合を助ける。また、ダイアボディ型式は、短いリンカーによって別の抗体のＶＬドメインに結合された１つの抗体からのＶＨドメインからなる２つの単鎖融合産物の非共有結合性の会合によって得られる、組換え二重特異性抗体の生成に使用され得る。リンカー長をさらに、３つの残基以下に減少させると、三量体（「トリアボディ」、約９０ｋＤａ）または四量体（「テトラボディ」、約１２０ｋＤａ）が形成され得る。改変抗体、特に単一ドメイン断片の総説については、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２３：１１２６−１１３６を参照されたい。そのような改変抗体の全ては、本明細書に提供される融合ポリペプチドにおいて使用され得る。四価Ｔａｎｄａｂ（登録商標）は、実質的に、ＷＯ１９９９／０５７１５０Ａ３またはＵＳ２００６／０２３３７８７に記載されているように調製されてもよく、これらは、Ｔａｎｄａｂ（登録商標）分子の製造方法の教示のために参照により援用される。
【０１１８】
改変抗体の抗原認識部位または可変領域全体は、任意の目的の抗原（例えば、ＣＤ９９）に対する１つまたは複数の親抗体に由来し得る。親抗体は、天然に存在する抗体または抗体断片、天然に存在する抗体から適合される抗体または抗体断片、目的の抗原に特異的であることが知られている抗体または抗体断片の配列を使用して新たに構築される抗体、を含むことができる。親抗体に由来し得る配列としては、重鎖および／または軽鎖可変領域および／またはＣＤＲ、フレームワーク領域またはその他の部分が挙げられる。
【０１１９】
多価多特異性抗体は、２つ以上の可変領域を含む重鎖および／または１つまたは複数の可変領域を含む軽鎖を含有してもよく、少なくとも２つの可変領域は、同じ抗原上の異なるエピトープを認識する。
【０１２０】
融合ポリペプチド、または融合ポリペプチド自体に含めるための候補改変抗体は、様々な既知のアッセイを使用して活性についてスクリーニングされ得る。例えば、結合特異性を決定するためのスクリーニングアッセイは、当該技術分野で周知であり、通常実施される。かかるアッセイの包括的な考察については、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．），ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８，Ｃｈａｐｔｅｒ  ６を参照されたい。
【０１２１】
医薬組成物
薬学的に許容される担体中に開示される分子を含む医薬組成物もまた開示される。医薬担体は、当業者に既知である。これらは、最も典型的には、生理的ｐＨにおける滅菌水、食塩水、および緩衝溶液などの溶液を含む、ヒトへの薬物投与のための標準的な担体であろう。例えば、好適な担体およびそれらの製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  （２１  ｅｄ．）  ｅｄ．ＰＰ．Ｇｅｒｂｉｎｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ．２００５に記載されている。典型的には、製剤中に適量の薬学的に許容される塩を使用して、製剤を等張性にする。薬学的に許容される担体の例としては、限定されないが、食塩水、リンゲル液、およびデキストロース溶液が挙げられる。溶液のｐＨは、好ましくは約５〜約８、より好ましくは約７〜約７．５である。溶液には、ＲＮＡ分解酵素が含まれないようにすべきである。さらなる担体としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックス等の徐放性調製物が挙げられ、マトリックスは、成形品、例えば、フィルム、リポソームまたは微小粒子の形態である。当業者には明白であろうが、例えば、投与される組成物の投与経路および濃度に応じて、ある特定の担体がより好ましいことがある。
【０１２２】
医薬組成物は、選択される分子に加えて、担体、増粘剤、希釈剤、緩衝液、防腐剤、表面活性剤等を含んでもよい。また、医薬組成物は、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔剤等の１つまたは複数の活性成分を含んでもよい。
【０１２３】
非経口投与のための調製物としては、滅菌水溶液または非水溶液、懸濁液、および乳剤が挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイル等の植物油、およびオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルである。水性担体としては、生理食塩水および緩衝培地を含む水、アルコール／水溶液、乳剤または懸濁液が挙げられる。非経口媒体としては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル、または不揮発油が挙げられる。静脈内媒体は、流体および栄養補給剤、電解質補給剤（リンゲルデキストロースに基づくものなど）等を含む。防腐剤および他の添加剤もまた、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガス等が存在し得る。
【０１２４】
組成物のいくつかは、潜在的に、薬学的に許容される酸または塩基付加塩として投与することができ、塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸、およびリン酸などの無機酸、ならびにギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、およびフマル酸などの有機酸、との反応によって、または水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウムなどの無機塩基、ならびにモノ−、ジ−、トリアルキルおよびアリールアミン、および置換エタノールアミンなどの有機塩基、との反応によって形成される。
【０１２５】
治療方法
治療上有効量の開示される医薬組成物を対象に投与することによって、対象においてＣＤ９９発現癌を治療するための方法も開示される。本方法は、対象に、フルダラビン、シタラビン、シクロホスファミド、イダルビシン、ダウノルビシン等の化学療法、またはイムブルビカ、ミドスタウリン、イデラリシブ等の標的阻害剤、またはＰＤ１もしくはＰＤＬ１阻害剤等の免疫剤を投与することをさらに含むことができる。
【０１２６】
医薬組成物を含む開示される組成物は、局所または全身治療が所望されるかどうか、および治療される領域に応じて、いくつかの方法で投与され得る。例えば、開示される組成物は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、体腔内、または経皮的に投与することができる。組成物は、経口的に、非経口的に（例えば、静脈内投与）、筋肉内注射によって、腹腔内注射によって、経皮的に、体外的に、点眼的に、膣内に、直腸に、鼻腔内に、局所的に等、局所鼻腔内投与または吸入による投与等を含めて、投与され得る。
【０１２７】
組成物の経口投与は、使用される場合、概して、注射によって特徴付けられる。注射剤は、液体溶液または懸濁液のいずれか、注射前の液体中の懸濁液の溶液に適した固体形態、または乳剤として、従来の形態で調製することができる。非経口投与のための改訂された手法は、一定の投与量が維持されるように、緩やかな放出または持続的な放出システムの使用を伴う。
【０１２８】
本明細書に開示される組成物を、ＣＤ９９発現癌の危険性がある患者または対象に、予防的に投与することができる。したがって、本方法は、本明細書に開示される組成物の投与前に、ＣＤ９９発現癌の危険性がある対象を特定することをさらに含むことができる。
【０１２９】
必要とされる組成物の正確な量は、対象の種、年齢、体重および全身状態、治療されるアレルギー障害の重症度、使用される特定の核酸またはベクター、その投与方法等に応じて、対象によって異なる。したがって、組成物ごとに正確な量を指定することは不可能である。しかしながら、適切な量は、本明細書に教示される通常の実験のみを用いて当業者によって決定され得る。例えば、組成物を投与するための有効な投与量およびスケジュールは、経験的に決定することができ、かかる決定を行うことは、当該技術分野の技術内である。組成物の投与のための投与量範囲は、症状の障害が影響を受ける所望の効果をもたらすのに十分に大きなものである。投与量は、望ましくない交差反応、アナフィラキシー反応などの有害な副作用を引き起こすほど多くてはならない。一般に、投与量は、患者の年齢、状態、性別および疾患の程度、投与経路、または他の薬物がレジメンに含まれるかどうかによって異なり、当業者によって決定することができる。投与量は、何らかの禁忌の場合、個々の医師によって調整することができる。投与量は様々であり得、１日１回または複数回以上の用量の投与で、１日または数日間投与することができる。所与のクラスの医薬製品に対する適切な投与量についてのガイダンスは、文献中に見出すことができる。単独で使用される開示される組成物の典型的な１日の投与量は、上に記載の要因に応じて、１日当たり約１μｇ／ｋｇから最大１００ｍｇ／ｋｇ体重以上の範囲であり得る。
【０１３０】
一部の実施形態では、分子は、体重１ｋｇ当たり約０．１ｎｇ〜約１００ｇ、体重１ｋｇ当たり約１０ｎｇ〜約５０ｇ、体重１ｋｇ当たり約１００ｎｇ〜約１ｇ、体重１ｋｇ当たり約１μｇ〜約１００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約１μｇ〜約５０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、および体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ〜約５０ｍｇの非経口投与に相当する用量で投与される。あるいは、治療有効量を達成するために投与されるレナリドミドを含有する分子の量は、体重１ｋｇ当たり約０．１ｎｇ、１ｎｇ、１０ｎｇ、１００ｎｇ、１μｇ、１０μｇ、１００μｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、５００ｍｇ、またはそれ以上である。
【０１３１】
ＣＤ９９特異的キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
ＣＡＲは、一般に、リンパ球活性化に関与する膜貫通シグナル伝達モチーフを有するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）由来の抗原認識ドメインを組み込む（Ｓａｄｅｌａｉｎ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００３  ３：３５−４５）。ＣＤ９９特異的キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に対する抗腫瘍活性を増強するために、免疫エフェクター細胞内で発現することができるＣＤ９９特異的ＣＡＲが、本明細書に開示される。
【０１３２】
開示されるＣＡＲは、概して、外部ドメイン、膜貫通ドメイン、および内部ドメインの３つのドメインで構成される。外部ドメインは、ＣＤ９９結合領域を含み、抗原認識に関与する。また、任意選択的にシグナルペプチド（ＳＰ）を含有して、ＣＡＲをグリコシル化し、免疫エフェクター細胞の細胞膜に繋留することができる。膜貫通ドメイン（ＴＤ）は、その名の通り、外部ドメインを内部ドメインに接続し、細胞によって発現されると、細胞膜内に存在する。内部ドメインは、抗原認識後に免疫エフェクター細胞に活性化シグナルを伝達するＣＡＲの役目を果たす部分である。例えば、内部ドメインは、シグナル伝達ドメイン（ＩＳＤ）および共刺激シグナル伝達領域（ＣＳＲ）を含有することができる。
【０１３３】
「シグナル伝達ドメイン（ＳＤ）」は、概して、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有し、ＩＴＡＭがリン酸化されると、シグナル伝達カスケードが活性化される。用語「共刺激シグナル伝達領域（ＣＳＲ）」は、ＣＤ２８、４１ＢＢ、およびＩＣＯＳ等の共刺激タンパク質受容体由来の細胞内シグナル伝達ドメインを指し、Ｔ細胞受容体によるＴ細胞活性化を増強することができる。
【０１３４】
一部の実施形態では、内部ドメインは、ＳＤまたはＣＳＲを含有するが、両方は含有しない。これらの実施形態では、開示されるＣＡＲを含有する免疫エフェクター細胞は、欠失しているドメインを含有する別のＣＡＲ（またはＴ細胞受容体）もまたそのそれぞれの抗原に結合する場合にのみ、活性化される。
【０１３５】
一部の実施形態では、開示されるＣＡＲは式：
ＳＰ−ＣＤ９９−ＨＧ−ＴＭ−ＣＳＲ−ＳＤ、または
ＳＰ−ＣＤ９９−ＨＧ−ＴＭ−ＳＤ−ＣＳＲ、によって定義され、
式中、「ＳＰ」は、任意選択的なシグナルペプチドを表し、
式中、「ＣＤ９９」は、ＣＤ９９結合領域を表し、
式中、「ＨＧ」は、任意選択的なヒンジドメインを表し、
式中、「ＴＭ」は膜貫通ドメインを表し、
式中、「ＣＳＲ」は、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達領域を表し、
式中、「ＳＤ」は、シグナル伝達ドメインを表し、
式中、「−」は、ペプチド結合またはリンカーを表す。
【０１３６】
追加のＣＡＲ構築物は、例えば、Ｆｒｅｓｎａｋ  ＡＤ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ：  ｔｈｅ  ｐｒｏｍｉｓｅ  ａｎｄ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１６  Ａｕｇ  ２３；１６（９）：５６６−８１に記載されており、これらのＣＡＲモデルの教示のために、その全体が参照により援用される。
【０１３７】
例えば、ＣＡＲは、トラック（ＴＲＵＣＫ）、普遍型ＣＡＲ（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＣＡＲ）、自己駆動型ＣＡＲ（Ｓｅｌｆ−ｄｒｉｖｉｎｇ  ＣＡＲ）、装甲型ＣＡＲ（Ａｒｍｏｒｅｄ  ＣＡＲ）、自己破壊型ＣＡＲ（Ｓｅｌｆ−ｄｅｓｔｒｕｃｔ  ＣＡＲ）、条件型ＣＡＲ（Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ＣＡＲ）、標識型ＣＡＲ（Ｍａｒｋｅｄ  ＣＡＲ）、タンデム型ＣＡＲ（ＴａｎＣＡＲ）、デュアル型ＣＡＲ（Ｄｕａｌ  ＣＡＲ）、または安全型（ｓＣＡＲ）であり得る。
【０１３８】
トラック（ＴＲＵＣＫ、Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｆｏｒ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｋｉｌｌｉｎｇ）は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および抗腫瘍サイトカインを共発現する。サイトカインの発現は、恒常的であり得る、またはＴ細胞活性化によって誘導され得る。ＣＡＲの特異性によって標的化されると、炎症促進性サイトカインが局所産生されて、腫瘍部位に内因性免疫細胞が補充され、抗腫瘍応答が増強され得る。
【０１３９】
普遍型の同種ＣＡＲ  Ｔ細胞は、内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／または主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子を発現しなくなるように改変され、それによって、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）または拒絶をそれぞれ防ぐ。
【０１４０】
自己駆動型ＣＡＲは、腫瘍リガンドに結合するＣＡＲおよびケモカイン受容体を共発現し、それによって、腫瘍ホーミングを増強する。
【０１４１】
免疫抑制に耐性であるように改変されたＣＡＲ  Ｔ細胞（装甲型ＣＡＲ）は、免疫チェックポイントスイッチ受容体とともに、種々の免疫チェックポイント分子（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）またはプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１））を発現しなくなるように遺伝子改変されてもよく、または免疫チェックポイントシグナル伝達を遮断するモノクローナル抗体とともに投与されてもよい。
【０１４２】
自己破壊型ＣＡＲは、エレクトロポレーションによって送達されるＲＮＡを使用して、ＣＡＲをコードするように設計され得る。あるいは、Ｔ細胞の誘導性アポトーシスは、遺伝子改変リンパ球におけるチミジンキナーゼへのガンシクロビル結合、または最近記載された小分子ダイマライザーによるヒトカスパーゼ９の活性化システムに基づいて達成され得る。
【０１４３】
条件型ＣＡＲ  Ｔ細胞は、デフォルトでは、回路を完全にする小分子を添加するまで無応答であるか、またはスイッチ「オフ」され、シグナル１とシグナル２の両方の完全な伝達が可能になり、それによって、ＣＡＲ  Ｔ細胞を活性化する。あるいは、Ｔ細胞を改変して、標的抗原に向けてその後に投与される二次抗体に対して親和性を有する、アダプター特異的受容体を発現させてもよい。
【０１４４】
標識型ＣＡＲ  Ｔ細胞は、既存のモノクローナル抗体剤が結合するＣＡＲと腫瘍エピトープを発現する。容認できない副作用の設定において、モノクローナル抗体の投与は、ＣＡＲ  Ｔ細胞を除去し、さらなるオフ腫瘍効果なしに症状を緩和する。
【０１４５】
タンデム型ＣＡＲ（ＴａｎＣＡＲ）Ｔ細胞は、細胞内共刺激ドメイン（複数可）およびＣＤ３ζドメインに融合した異なる親和性を有する２つの連結された単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）からなる単一のＣＡＲを発現する。タンデム型ＣＡＲ  Ｔ細胞の活性化は、標的細胞が両方の標的を共発現するときのみ、起こる。
【０１４６】
デュアル型ＣＡＲ  Ｔ細胞は、異なるリガンド結合標的を有する２つの別個のＣＡＲを発現し、一方のＣＡＲは、ＣＤ３ζドメインのみを含み、他方のＣＡＲは、共刺激ドメイン（複数可）のみを含む。デュアル型ＣＡＲ  Ｔ細胞の活性化は、腫瘍上の両方の標的の共発現を必要とする。
【０１４７】
安全型ＣＡＲ（ｓＣＡＲ）は、細胞内阻害ドメインに融合した細胞外ｓｃＦｖからなる。標準型ＣＡＲを共発現する安全型ＣＡＲ  Ｔ細胞は、標準型ＣＡＲの標的を有するが安全型ＣＡＲの標的を欠く標的細胞に遭遇したときにのみ、活性化される。
【０１４８】
開示されるＣＡＲの抗原認識ドメインは、通常、ｓｃＦｖである。しかし、多くの代替物がある。天然のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）αおよびβ単鎖由来の抗原認識ドメインが記載されており、単純な外部ドメイン（例えば、ＨＩＶ感染細胞を認識するＣＤ４外部ドメイン）、および連結サイトカイン（サイトカイン受容体を有する細胞の認識につながる）のようなより新奇な認識成分を有している。実際に、所与の標的に高い親和性で結合するほとんどのものが、抗原認識領域として使用され得る。
【０１４９】
内部ドメインは、ＣＡＲの役目を果たす部分であり、抗原認識によって免疫エフェクター細胞にシグナルが伝達された後、免疫エフェクター細胞の正常なエフェクター機能のうちの少なくとも１つを活性化する。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性またはヘルパー活性であり得る。したがって、内部ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および任意選択的な共受容体の「細胞内シグナル伝達ドメイン」を含んでもよい。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を用いることができるが、多くの場合、鎖全体を用いる必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が使用される範囲では、そのような切断部分は、エフェクター機能のシグナルを伝達する限り、無傷の鎖の代わりに使用されてもよい。
【０１５０】
刺激型の様式で作用するＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する細胞質シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）として知られているシグナル伝達モチーフを含有し得る。細胞質シグナル伝達配列を含有するＩＴＡＭの例としては、ＣＤ８、ＣＤ３ζ、ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３２（ＦｃγＲＩＩａ）、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃγＲＩγ、ＦｃγＲＩＩＩγ、ＦｃεＲＩβ（ＦＣＥＲＩＢ）、およびＦｃεＲＩγ（ＦＣＥＲＩＧ）に由来するものが挙げられる。
【０１５１】
特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）（ＴＣＲゼータ、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＡＧ３６６６４．１）である。Ｔ細胞受容体Ｔ３ゼータ鎖、またはＣＤ２４７（表面抗原分類２４７）としても知られる、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）鎖は、ヒトにおいてＣＤ２４７遺伝子によってコードされるタンパク質である。
【０１５２】
第１世代ＣＡＲは、典型的には、内因性ＴＣＲからのシグナルの一次伝達物質であるＣＤ３ζ鎖由来の細胞内ドメインを有していた。第２世代ＣＡＲは、様々な共刺激タンパク質受容体（例えば、ＣＤ２８、４１ＢＢ、ＩＣＯＳ）からの細胞内シグナル伝達ドメインを、ＣＡＲの内部ドメインに付加して、Ｔ細胞に追加のシグナルを提供する。前臨床の研究では、第２世代のＣＡＲの設計により、Ｔ細胞の抗腫瘍活性が改善することが示されている。さらに最近では、第３世代ＣＡＲは、複数のシグナル伝達ドメインを組み合わせることで、効力がさらに強化されている。これらのＣＡＲで移植されたＴ細胞は、共刺激受容体／リガンド相互作用とは無関係に、向上した増殖、活性化、持続性、および腫瘍根絶効率を示している（Ｉｍａｉ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００４  １８：６７６−８４、Ｍａｈｅｒ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２００２  ２０：７０−５）。
【０１５３】
例えば、ＣＡＲの内部ドメインは、それ自体によってＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含むように設計され、または、本発明のＣＡＲの文脈において、有用な任意の他の所望の細胞質ドメイン（複数可）と組み合わせて設計され得る。例えば、ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３ζ鎖部分および共刺激シグナル伝達領域を含むことができる。共刺激シグナル伝達領域は、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの一部を指す。共刺激分子は、抗原に対するリンパ球の効率的な応答に必要な抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。そのような分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、およびＣＤ８３、ＣＤ８、ＣＤ４、ｂ２ｃ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＭｙＤ８８、ＢＴＮＬ３、およびＮＫＧ２Ｄと特異的に結合するリガンド、が挙げられる。したがって、ＣＡＲは、共刺激シグナル伝達エレメントとして主にＣＤ２８が例示されるが、他の共刺激エレメントを、単独でまたは他の共刺激シグナル伝達エレメントと組み合わせて使用することができる。
【０１５４】
一部の実施形態では、ＣＡＲはヒンジ配列を含む。ヒンジ配列は、抗体の柔軟性を促進するアミノ酸の短い配列である（例えば、Ｗｏｏｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４（２）：８９−９９（２００４）を参照）。ヒンジ配列は、抗原認識部分（例えば、抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖ）と膜貫通ドメインとの間に配置してもよい。ヒンジ配列は、任意の好適な分子に由来するか、またはそれから得られる任意の好適な配列であり得る。一部の実施形態では、例えば、ヒンジ配列はＣＤ８ａ分子またはＣＤ２８分子に由来する。
【０１５５】
膜貫通ドメインは、天然源または合成源のいずれかに由来し得る。供給源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来し得る。例えば、膜貫通領域は、Ｔ細胞受容体、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α、ＣＤ８β）、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、またはＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、およびＰＡＧ／Ｃｂｐ、のα、βまたはゼータ鎖に由来してもよい（すなわち、少なくともその膜貫通領域を含む）。あるいは、膜貫通ドメインは合成であってもよく、この場合、それは主に、ロイシンおよびバリンのような疎水性残基を含む。場合によっては、合成膜貫通ドメインの各末端に、フェニルアラニン、トリプトファン、およびバリンのトリプレットが見出されるであろう。２〜１０アミノ酸長のような短いオリゴまたはポリペプチドリンカーは、膜貫通ドメインとＣＡＲのエンドプラズムドメインとの間に連結を形成し得る。
【０１５６】
一部の実施形態では、ＣＡＲは２つ以上の膜貫通ドメインを有し、これは同じ膜貫通ドメインの反復か、または異なる膜貫通ドメインであり得る。
【０１５７】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＷＯ２０１５／０３９５２３に記載の多鎖ＣＡＲであり、本教示のために参照により援用される。多鎖ＣＡＲは、異なる膜貫通ポリペプチドにおいて、別個の細胞外リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含むことができる。シグナル伝達ドメインは、膜近傍の位置で組み立てられるように設計することができ、自然な受容体により近い柔軟なアーキテクチャを形成することで、最適なシグナル伝達を与える。例えば、多鎖ＣＡＲは、ＦＣＥＲＩα鎖の一部およびＦＣＥＲＩβ鎖の一部を含むことができ、それによって、ＦＣＥＲＩ鎖がともに自発的に二量体化して、ＣＡＲを形成する。
【０１５８】
以下の表１、２、および３は、開示されるＣＡＲ中で生じ得る、ＣＤ９９結合領域、共刺激シグナル伝達領域、および細胞内シグナル伝達ドメインの、いくつかの例示的な組み合わせを提示する。
【表１】
2021509816.tif 000003
【表２】
2021509816.tif 000004
2021509816.tif 000005
2021509816.tif 000006
【表３】
2021509816.tif 000007
2021509816.tif 000008
2021509816.tif 000009
2021509816.tif 000010
2021509816.tif 000011
2021509816.tif 000012
2021509816.tif 000013
2021509816.tif 000014
2021509816.tif 000015
2021509816.tif 000016
2021509816.tif 000017
2021509816.tif 000018
2021509816.tif 000019
2021509816.tif 000020
2021509816.tif 000021
2021509816.tif 000022
2021509816.tif 000023
2021509816.tif 000024
2021509816.tif 000025
2021509816.tif 000026
2021509816.tif 000027
2021509816.tif 000028
2021509816.tif 000029
2021509816.tif 000030
2021509816.tif 000031
2021509816.tif 000032
2021509816.tif 000033
2021509816.tif 000034
2021509816.tif 000035
2021509816.tif 000036
2021509816.tif 000037
2021509816.tif 000038
2021509816.tif 000039
2021509816.tif 000040
2021509816.tif 000041
2021509816.tif 000042
2021509816.tif 000043
2021509816.tif 000044
2021509816.tif 000045
2021509816.tif 000046
2021509816.tif 000047
2021509816.tif 000048
2021509816.tif 000049
2021509816.tif 000050
2021509816.tif 000051
2021509816.tif 000052
2021509816.tif 000053
2021509816.tif 000054
2021509816.tif 000055
2021509816.tif 000056
2021509816.tif 000057
2021509816.tif 000058
2021509816.tif 000059
2021509816.tif 000060
2021509816.tif 000061
2021509816.tif 000062
2021509816.tif 000063
2021509816.tif 000064
2021509816.tif 000065
2021509816.tif 000066
2021509816.tif 000067
2021509816.tif 000068
2021509816.tif 000069
2021509816.tif 000070
2021509816.tif 000071
2021509816.tif 000072
2021509816.tif 000073
2021509816.tif 000074
2021509816.tif 000075
2021509816.tif 000076
2021509816.tif 000077
2021509816.tif 000078
2021509816.tif 000079
2021509816.tif 000080
2021509816.tif 000081
2021509816.tif 000082
2021509816.tif 000083
2021509816.tif 000084
2021509816.tif 000085
2021509816.tif 000086
2021509816.tif 000087
【表４】
2021509816.tif 000088
【表５】
2021509816.tif 000089
【表６】
2021509816.tif 000090
2021509816.tif 000091
2021509816.tif 000092
2021509816.tif 000093
2021509816.tif 000094
2021509816.tif 000095
2021509816.tif 000096
【０１５９】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９結合剤は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）抗体である。抗ＣＤ９９  ｓｃＦｖの親和性／特異性は、重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）における相補性決定領域（ＣＤＲ）内の特異的配列によって大きく駆動される。各ＶＨおよびＶＬ配列は、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３）を有する。
【０１６０】
一部の実施形態では、抗ＣＤ９９結合剤は、モノクローナル抗体などの天然抗体に由来する。場合によっては、抗体はヒト型である。場合によっては、抗体は、ヒトに投与されるときに、免疫原性を低くするように変更される。例えば、変更は、最も近いヒト生殖系列配列に対応させるための、フレームワークアミノ酸のキメル化、ヒト化、ＣＤＲ移植、脱免疫化、および変異からなる群から選択される１つまたは複数の技術を含む。
【０１６１】
また、ＣＤ９９および少なくとも１つの追加の腫瘍抗原を標的とする二重特異性ＣＡＲも開示される。また、腫瘍抗原などの異なる抗原に結合する別のＣＡＲと組み合わせてのみ働くように設計されたＣＡＲも開示される。例えば、これらの実施形態では、開示されるＣＡＲの内部ドメインは、シグナル伝達ドメイン（ＳＤ）または共刺激シグナル伝達領域（ＣＳＲ）のみを含有することができるが、両方は含有しない。第２のＣＡＲ（または内因性Ｔ細胞）は、それが活性化された場合、欠損しているシグナルを提供する。例えば、開示されるＣＡＲがＳＤを含有するがＣＳＲを含有しない場合、このＣＡＲを含有する免疫エフェクター細胞は、ＣＳＲを含有する別のＣＡＲ（またはＴ細胞）がそのそれぞれの抗原に結合する場合にのみ、活性化される。同様に、開示されるＣＡＲがＣＳＲを含有するがＳＤを含有しない場合、このＣＡＲを含有する免疫エフェクター細胞は、ＳＤを含有する別のＣＡＲ（またはＴ細胞）がそのそれぞれの抗原に結合する場合にのみ、活性化される。
【０１６２】
腫瘍抗原は、免疫応答、特にＴ細胞媒介性免疫応答を誘発する腫瘍細胞によって産生されるタンパク質である。追加の抗原結合ドメインは、腫瘍抗原の抗体または天然リガンドであり得る。追加の抗原結合ドメインの選択は、治療される特定の種類の癌に依存するであろう。腫瘍抗原は、当該技術分野で周知であり、例えば、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＩＬ−ｌｌＲａ、ＩＬ−１３Ｒａ、ＥＧＦＲ、ＦＡＰ、Ｂ７Ｈ３、Ｋｉｔ、ＣＡ  ＬＸ、ＣＳ−１、ＭＵＣ１、ＢＣＭＡ、ｂｃｒ−ａｂｌ、ＨＥＲ２、β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＡＬＫ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、サイクリンＢｌ、レクチン反応性ＡＦＰ、Ｆｏｓ関連抗原１、ＡＤＲＢ３、チログロブリン、ＥｐｈＡ２、ＲＡＧＥ−１、ＲＵｌ、ＲＵ２、ＳＳＸ２、ＡＫＡＰ−４、ＬＣＫ、ＯＹ−ＴＥＳｌ、ＰＡＸ５、ＳＡＲＴ３、ＣＬＬ−１、フコシルＧＭ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＭＮ−ＣＡ  ＩＸ、ＥＰＣＡＭ、ＥＶＴ６−ＡＭＬ、ＴＧＳ５、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＲＵｌ、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｌｅｗｉｓＹ、ｓＬｅ、ＬＹ６Ｋ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰＩＢＩ、ＢＯＲＩＳ、プロスターゼ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＸ３、ＰＡＰ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−ｌａ、ＬＭＰ２、ＮＣＡＭ、ｐ５３、ｐ５３変異体、Ｒａｓ変異体、ｇｐｌＯＯ、プロステイン、ＯＲ５１Ｅ２、ＰＡＮＸ３、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ＨＭＷＭＡＡ、ＨＡＶＣＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲ−β、サバイビンおよびテロメラーゼ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６，Ｅ７、精子タンパク質１７、ＳＳＥＡ−４、チロシナーゼ、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴＡ−１）、ＭＬ−ＩＡＰ、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、メランＡ／ＭＡＲＴ１、ＸＡＧＥ１、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、好中球エラスターゼ、肉腫転位ブレイクポイント、ＮＹ−ＢＲ−１、ｅｐｈｎｎＢ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＴＩＭ３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ９７、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、アンドロゲン受容体、ＦＡＰ、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）−Ｉ、ＩＧＦＩＩ、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＧＤ２、ｏ−アセチル−ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ３、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲ２０、ＣＸＯＲＦ６１、葉酸受容体（ＦＲａ）、葉酸受容体β、ＲＯＲ１、Ｆｌｔ３、ＴＡＧ７２、ＴＮ  Ａｇ、Ｔｉｅ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＵＰＫ２、およびメソテリンが挙げられる。好ましい実施形態では、腫瘍抗原は、葉酸受容体（ＦＲａ）、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＩＬ−１３Ｒａ、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＴＩＭ３、ＢＣＭＡ、ＧＤ２、ＣＬＬ−１、ＣＡ−ＩＸ、ＭＵＣｌ、ＨＥＲ２、およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０１６３】
腫瘍抗原の非限定的な例としては、以下が挙げられる：チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２等の分化抗原およびＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ｐｉ  ５等の腫瘍特異的多系統抗原；ＣＥＡ等の過剰発現胎児性抗原；ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ等の過剰発現癌遺伝子および変異腫瘍抑制遺伝子；ＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ等の染色体転位から生じる固有の腫瘍抗原；ならびにエプスタインバーウイルス抗原ＥＢＶＡおよびヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７等のウイルス抗原。その他の大きなタンパク質系抗原としては、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ＲＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ、ｐｌ８５ｅｒｂＢ２、ｐｌ８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、β−カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ−１、ｐ１５、ｐ１６、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α−フェトプロテイン、β−ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３＼ＣＡ２７．２９＼ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼Ｐ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３＼ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳｌ、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０＼Ｍａｃ−２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ−関連タンパク質、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ１６、ＬＭＰ１、ＥＢＭＡ−１、ＢＡＲＦ−１、ＣＳ１、ＣＤ３１９、ＨＥＲ１、Ｂ７Ｈ６、Ｌ１ＣＡＭ、ＩＬ６、およびＭＥＴが挙げられる。
【０１６４】
核酸およびベクター
また、開示される免疫エフェクター細胞においてＣＤ９９特異的ＣＡＲの発現を可能にする、開示されるＣＤ９９特異的ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドおよびポリヌクレオチドベクターも開示される。
【０１６５】
開示されるＣＡＲをコードする核酸配列およびその領域は、例えば、遺伝子を発現する細胞からのライブラリをスクリーニングすること、遺伝子を含むことが知られているベクターから遺伝子を誘導すること、またはそれらを含有する細胞および組織から直接単離することなど、標準的な技術を使用して、当該技術分野で既知の組換え方法を使用して得ることができる。あるいは、対象遺伝子は、クローニングするのではなく、合成的に産生することができる。
【０１６６】
ＣＡＲをコードする核酸の発現は、典型的には、ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸をプロモーターに作動可能に連結し、構築物を発現ベクターに組み込むことによって達成される。典型的なクローニングベクターは、所望の核酸配列の発現の調節に有用な転写および翻訳ターミネーター、開始配列、およびプロモーターを含有する。
【０１６７】
開示される核酸は、いくつかの種類のベクターにクローニングすることができる。例えば、核酸は、限定されないが、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス、およびコスミドを含むベクターにクローニングされ得る。特に興味深いベクターは、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、および配列決定ベクターを含む。
【０１６８】
さらに、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供されてもよい。ウイルスベクター技術は、当該技術分野で周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、ならびに他のウイルス学および分子生物学のマニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスは、限定されないが、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、およびレンチウイルスが含まれる。一般に、好適なベクターは、少なくとも１つの生物において機能的な複製開始点、プロモーター配列、簡便な制限エンドヌクレアーゼ部位、および１つまたは複数の選択可能なマーカーを含有する。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドベクターは、レンチウイルスまたはレトロウイルスベクターである。
【０１６９】
哺乳動物細胞への遺伝子導入のために、いくつかのウイルス系システムが開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達システムのための簡便なプラットフォームを提供する。選択された遺伝子は、当該技術分野で既知の技術を使用して、ベクターに挿入され、レトロウイルス粒子にパッケージングされ得る。次いで、組換えウイルスを単離し、インビボまたはエクスビボのいずれかで、対象の細胞に送達することができる。
【０１７０】
好適なプロモーターの一例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、動作可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動することが可能な強力な恒常的プロモーター配列である。好適なプロモーターの別の例は、伸長成長因子−１α（ＥＦ−１α）である。しかしながら、他の恒常的プロモーター配列も使用することができ、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、ＭＮＤ（骨髄増殖性肉腫ウイルス）プロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタインバーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびに、限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、およびクレアチンキナーゼプロモーターを含むヒト遺伝子プロモーターなどが挙げられるが、これらに限定されない。プロモーターは、代替的には誘導性プロモーターであり得る。誘導性プロモーターの例としては、限定されないが、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、およびテトラサイクリンプロモーターが挙げられる。
【０１７１】
追加のプロモーター要素、例えば、エンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これらは、開始部位の３０〜１１０ｂｐ上流の領域に位置するが、いくつかのプロモーターは、開始部位の下流にも機能的要素を含有することが最近示されている。プロモーター要素間の間隔は、しばしば柔軟であるため、要素が互いに対して反転または移動しても、プロモーター機能は保持される。
【０１７２】
ＣＡＲポリペプチドまたはその一部の発現を評価するために、細胞内に導入される発現ベクターは、選択可能なマーカー遺伝子もしくはレポーター遺伝子のいずれか、またはその両方を含有することもでき、ウイルスベクターを介したトランスフェクションまたは感染に供する細胞の集団からの発現細胞の同定および選択を容易にすることができる。他の態様では、選択可能なマーカーを、別個のＤＮＡ片上に保有し、共トランスフェクションの手順で使用してもよい。選択可能なマーカーおよびレポーター遺伝子の両方には、宿主細胞における発現を可能にするために、適切な調節配列を隣接させてもよい。有用な選択マーカーとしては、例えば、抗生物質耐性遺伝子が挙げられる。
【０１７３】
レポーター遺伝子は、潜在的にトランスフェクトされた細胞を同定し、調節配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物または組織に存在しないか、またはそれらによって発現されない遺伝子であり、その発現が、いくつかの容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によって顕在化するポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入された後の好適な時間にアッセイされる。好適なレポーター遺伝子としては、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ、または緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子が挙げられる。好適な発現系はよく知られており、既知の技術を使用して調製することができ、または商業的に入手することができる。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小の５’隣接領域を有する構築物は、プロモーターとして同定される。かかるプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結することができ、プロモーター駆動の転写を調節する能力について薬剤を評価するために使用することができる。
【０１７４】
細胞に遺伝子を導入し、発現する方法は、当該技術分野で既知である。発現ベクターの文脈において、ベクターは、当該技術分野の任意の方法によって、宿主細胞、例えば、哺乳類、細菌、酵母、または昆虫細胞に容易に導入され得る。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的、または生物学的手段によって宿主細胞に導入することができる。
【０１７５】
宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための物理的方法は、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション等を含む。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を産生するための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照されたい。
【０１７６】
目的のポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための生物学的方法は、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターの使用を含む。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、遺伝子を哺乳類、例えばヒト細胞に挿入するための最も広く使用される方法となっている。
【０１７７】
宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための化学手段としては、巨大分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフィア、ビーズ、および水中油乳剤、ミセル、混合ミセル、およびリポソームを含む脂質系等のコロイド分散系が挙げられる。インビトロおよびインビボで送達媒体として使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
【０１７８】
非ウイルス性送達系が利用される場合、例示的な送達媒体はリポソームである。別の態様では、核酸は、脂質と会合し得る。脂質に関連する核酸は、リポソームの水性内部にカプセル化され、リポソームの脂質二重層内に分散され、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方に会合する連結分子を介してリポソームに結合され、リポソームに封入され、リポソームと複合体化され、脂質を含有する溶液中に分散され、脂質と混合され、脂質と組み合わされ、脂質中に懸濁液として含有され、ミセルを含有するか、またはミセルと複合体化され、またはそれ以外の方法で脂質と会合され得る。脂質、脂質／ＤＮＡまたは脂質／発現ベクター関連組成物は、溶液中の任意の特定の構造に限定されない。例えば、それらは、ミセルとして二重層構造で、または「崩壊した」構造で存在してもよい。これらはまた、溶液中に単純に散在してもよく、おそらく、サイズまたは形状が均一ではない凝集体を形成する。脂質は、天然または合成の脂質であり得る脂肪性物質である。例えば、脂質には、細胞質内で天然に発生する脂肪滴、ならびに脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール、およびアルデヒド等の長鎖脂肪族炭化水素およびその誘導体を含有する化合物のクラスが含まれる。使用に好適な脂質は、商業的供給元から得ることができる。例えば、ジミリストイルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．から得ることができ、リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ＆Ｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．）から得ることができ、コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｅｈｒｉｎｇから得ることができ、ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）および他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ，（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，Ａｌａ．）から得ることができる。
【０１７９】
免疫エフェクター細胞
また、開示されるＣＡＲ（本明細書では「ＣＡＲ−Ｔ細胞」とも称される）を発現するように改変される免疫エフェクター細胞も開示される。これらの細胞は、好ましくは、治療される対象から得られる（すなわち、自己細胞である）。しかしながら、一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞株またはドナーエフェクター細胞（同種）が使用される。免疫エフェクター細胞は、いくつかの供給源から得ることができ、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍が含まれる。免疫エフェクター細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離等の当業者に既知の任意の数の技術を使用して、対象から採取された血液から得ることができる。例えば、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシスによって得ることができる。一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を介した遠心分離によって、または対向流遠心溶出によって、赤血球を溶解させ、単球を枯渇させることによって末梢血リンパ球から単離される。免疫エフェクター細胞の特定のサブ集団は、陽性または陰性選択技術によってさらに単離され得る。例えば、免疫エフェクター細胞は、例えば、所望の免疫エフェクター細胞の陽性選択に十分な期間、抗体結合ビーズとインキュベートすることによって、陽性選択細胞に固有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせを使用して単離され得る。あるいは、免疫エフェクター細胞集団の濃縮は、陰性選択細胞に固有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせを使用して、陰性選択によって達成することができる。
【０１８０】
一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、感染症および異物に対する身体の防御に関与する任意の白血球を含む。例えば、免疫エフェクター細胞は、リンパ球、単球、マクロファージ、樹状細胞、マスト細胞、好中球、好塩基球、好酸球、またはこれらの任意の組み合わせを含むことができる。例えば、免疫エフェクター細胞は、Ｔリンパ球を含むことができる。
【０１８１】
Ｔ細胞またはＴリンパ球は、細胞表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の存在によって、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）等の他のリンパ球と区別することができる。それらは胸腺で成熟するのでＴ細胞と呼ばれる（ただし、扁桃腺でも成熟するものもある）。Ｔ細胞のいくつかのサブセットがあり、それぞれ異なる機能を有する。
【０１８２】
Ｔヘルパー細胞（ＴＨ細胞）は、Ｂ細胞の形質細胞およびメモリーＢ細胞への成熟、ならびに細胞傷害性Ｔ細胞およびマクロファージの活性化を含む、免疫学的プロセスにおいて他の白血球を支援する。これらの細胞は、ＣＤ４糖タンパク質をそれらの表面に発現するため、ＣＤ４＋Ｔ細胞としても知られている。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上で発現されるＭＨＣクラスＩＩ分子によって、ペプチド抗原が提示されると活性化される。活性化すると、急速に分裂し、能動免疫応答を調節または補助するサイトカインと呼ばれる小さなタンパク質を分泌する。これらの細胞は、ＴＨ１、ＴＨ２、ＴＨ３、ＴＨ１７、ＴＨ９、またはＴＦＨを含むいくつかのサブタイプのうちの１つに分化することができ、異なるサイトカインを分泌して、異なるタイプの免疫応答を促進する。
【０１８３】
細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＣ細胞、またはＣＴＬ）は、ウイルス感染細胞および腫瘍細胞を破壊し、移植拒絶にも関与する。これらの細胞は、ＣＤ８糖タンパク質をそれらの表面に発現するため、ＣＤ８＋  Ｔ細胞としても知られている。これらの細胞は、全ての有核細胞の表面に存在するＭＨＣクラスＩ分子に付随する抗原に結合することによって、それらの標的を認識する。ＩＬ−１０、アデノシンおよび制御性Ｔ細胞によって分泌される他の分子を介して、ＣＤ８＋細胞をアネルギー状態へと不活性化することができ、これにより自己免疫疾患を防ぐ。
【０１８４】
メモリーＴ細胞は、感染が解消した後も長期間持続する、抗原特異的Ｔ細胞のサブセットである。それらは、同族の抗原に再曝露すると、多数のエフェクターＴ細胞に迅速に広がり、したがって、免疫系に過去の感染に対する「記憶」を提供する。メモリー細胞は、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋のいずれかであり得る。メモリーＴ細胞は、典型的には、細胞表面タンパク質ＣＤ４５ＲＯを発現する。
【０１８５】
制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）は、以前はサプレッサーＴ細胞として知られており、免疫学的寛容の維持に重要である。それらの主な役割は、免疫反応の終了に向けてＴ細胞媒介性免疫をシャットダウンし、胸腺における陰性選択プロセスから逃れた自己反応性Ｔ細胞を抑制することである。２つの主要なクラスのＣＤ４＋Ｔｒｅｇ細胞−内在性Ｔｒｅｇ細胞および適応性Ｔｒｅｇ細胞−が記載されている。
【０１８６】
ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞（ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞と混同されないように）は、適応免疫系と自然免疫系とを橋渡しする。主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子によって提示されるペプチド抗原を認識する従来のＴ細胞とは異なり、ＮＫＴ細胞は、ＣＤ１ｄという分子によって提示される糖脂質抗原を認識する。
【０１８７】
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋細胞の混合物を含む。他の実施形態では、Ｔ細胞は、細胞表面の発現に基づいて、１つまたは複数のサブセットについて濃縮される。例えば、場合によっては、Ｔは、細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔリンパ球である。一部の実施形態では、Ｔ細胞はγδＴ細胞を含み、α鎖およびβ鎖の代わりに、１つのγ鎖および１つのδ鎖を有する異なるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有する。
【０１８８】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、ウイルス感染細胞および形質転換細胞を死滅させることができ、自然免疫系の重要な細胞サブセットを構成するＣＤ５６＋ＣＤ３−大型顆粒リンパ球である（Ｇｏｄｆｒｅｙ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  ２０１２  ５３：１６６６−１６７６）。細胞傷害性ＣＤ８＋  Ｔリンパ球とは異なり、ＮＫ細胞は、事前の感作を必要とせず、腫瘍細胞に対して細胞傷害性を発揮し、ＭＨＣ−Ｉ陰性細胞を根絶することもできる（Ｎａｒｎｉ−Ｍａｎｃｉｎｅｌｌｉ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１１  ２３：４２７−４３１）。ＮＫ細胞は、サイトカインストーム（Ｍｏｒｇａｎ  ＲＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２０１０  １８：８４３−８５１）、腫瘍溶解症候群（Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１１  ３６５：７２５−７３３）、およびオンターゲット・オフ腫瘍効果の潜在的に致死的な合併症を回避できるため、より安全なエフェクター細胞である。ＮＫ細胞は、癌細胞のキラーとして周知の役割を有しており、ＮＫ細胞の障害が、ＭＭの進行にとって重要であると広く記述されている（Ｇｏｄｆｒｅｙ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  ２０１２  ５３：１６６６−１６７６；Ｆａｕｒｉａｔ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００６  ２０：７３２−７３３）が、ＮＫ細胞媒介性抗ＭＭ活性を増強する可能性がある手段は、開示されるＣＡＲ以前ではほぼ未調査であった。
【０１８９】
エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）誘発性リンパ増殖性疾患（ＥＢＶ−ＬＰＤ）は、特に、ＧＶＨＤを予防または治療するためにある特定のＴ細胞反応性Ａｂを受けた患者において、同種造血細胞移植（ＨＣＴ）のレシピエントの罹患率および死亡率の有意な原因となっている。ＥＢＶ特異的Ｔ細胞の養子移植による予防および治療、ならびにその後のＥＢＶ関連リンパ増殖に対する免疫の長期的な回復は、骨髄移植のこの一律に致命的な合併症の管理において、プラスの結果をもたらしている。したがって、一部の実施形態では、開示される免疫エフェクター細胞は、同種または自己ＥＢＶ特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）である。例えば、これは、自己または同種のドナー由来のＰＢＭＣを単離し、単球およびＮＫ細胞の枯渇によってＴ細胞についてそれらを濃縮することを含み得る。例えば、ドナーは、ＥＢＶ血清陽性ドナーであってもよい。これらのＴ細胞を、次いで、自己ＥＢＶ血清陽性または形質転換リンパ球で刺激することができる。ＥＢＶ抗原としては、ＬＭＰ−１、ＬＭＰ−２Ａ、およびＬＭＰ−２Ｂ、ならびにＥＢＮＡ−１、ＥＢＮＡ−２、ＥＢＮＡ−３Ａ、ＥＢＮＡ−３Ｂ、ＥＢＮＡ−３ＣおよびＥＢＮＡ−ＬＰ等の潜伏膜タンパク質（ＬＭＰ）およびＥＢＶ核抗原（ＥＢＮＡ）タンパク質が挙げられる。これらの方法は、例えば、Ｂａｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２０１０  １１６（２３）：５０４５−４９、Ｄｏｕｂｒｏｖｉｎａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２０１２  １１９（１１）：２６４４−５６、Ｋｏｅｈｎｅ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ２００２  ９９（５）：１７３０−４０、およびＳｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１２  ７２（５）：１１１６−２５に記載されており、これらの教示のために、参照により援用される。
【０１９０】
治療方法
開示されるＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞は、ＣＤ９９発現癌細胞に対する抗腫瘍免疫応答を誘発することができる。開示されるＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞によって誘発される抗腫瘍免疫応答は、能動または受動免疫応答であってもよい。加えて、ＣＡＲ媒介性免疫応答は、ＣＤ９９に特異的な免疫応答をＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞が誘導する養子免疫療法の手法の一部であり得る。
【０１９１】
キメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞の養子移植は、有望な抗癌治療である。患者の免疫エフェクター細胞の収集後、細胞は、開示されるＣＤ９９特異的ＣＡＲを発現するように遺伝子改変され、次いで患者に注入して戻され得る。
【０１９２】
開示されるＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞は、単独で投与されても、あるいは希釈剤と組み合わせて、および／またはＩＬ−２、ＩＬ−１５もしくは他のサイトカインもしくは細胞集団などの他の成分と組み合わせて、医薬組成物として投与されてもよい。手短に、医薬組成物は、１つまたは複数の薬学的または生理学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と組み合わせて、本明細書に記載の標的細胞集団を含んでもよい。かかる組成物は、中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水などの緩衝液、グルコース、マンノース、ショ糖またはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物、タンパク質、ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸、酸化防止剤、ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、および防腐剤を含んでもよい。本開示の方法で使用する組成物は、一部の実施形態では、静脈内投与用に製剤化される。医薬組成物は、ＭＭを適切に治療する任意の様式で投与され得る。投与の量および頻度は、患者の状態、および患者の疾患の重症度などの要因によって決定されるが、適切な投与量は、臨床治験によって決定され得る。
【０１９３】
「免疫学的有効量」、「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」、または「治療量」が示されるとき、投与される本発明の組成物の正確な量は、患者（対象）の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染もしくは転移の程度、および状態の個体差を考慮して、医師によって決定することができる。本明細書に記載のＴ細胞を含む医薬組成物は、１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、例えば１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重の投与量で、それらの範囲内の全ての整数値を含めて、投与されてもよいと概して述べることができる。Ｔ細胞組成物は、これらの投与量で複数回投与されてもよい。細胞は、免疫療法において一般に知られている注入技術を使用することによって投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照）。特定の患者に対する最適な投与量および治療レジメンは、疾患の兆候について患者をモニターし、それに応じて治療を調整することによって、医療分野の当業者により、容易に決定することができる。
【０１９４】
ある特定の実施形態では、活性化Ｔ細胞を対象に投与し、その後、再採血し（またはアフェレーシスを行い）、開示された方法に従ってＴ細胞をそれから活性化し、これらの活性化および増殖されたＴ細胞を患者に再注入することが望ましい場合がある。この処理は、数週間ごとに複数回行うことができる。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採血から活性化され得る。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、または１００ｃｃの採血から活性化される。この反復採血／反復再注入プロトコールを使用することは、ある特定のＴ細胞集団を選択するのに役立ち得る。
【０１９５】
開示される組成物の投与は、注射、輸液、または移植を含む、任意の簡便な様式で行われ得る。本明細書に記載の組成物は、皮下、皮内、腫瘍内、節内、髄内、筋肉内、静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって、または腹腔内に患者に投与され得る。一部の実施形態では、開示される組成物は、皮内または皮下注射によって患者に投与される。一部の実施形態では、開示される組成物は、静脈内注射によって投与される。また、組成物は、腫瘍、リンパ節、または感染部位に直接注射され得る。
【０１９６】
ある特定の実施形態では、開示されるＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞は、限定されないが、サリドマイド、デキサメタゾン、ボルテゾミブ、およびレナリドミドを含む任意の数の関連する治療様式と併せて（例えば、前に、同時に、または後で）患者に投与される。さらなる実施形態では、ＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞は、化学療法、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸、およびＦＫ５０６等の免疫抑制剤、抗体、または、キャンパスなどの他の免疫除去剤、抗ＣＤ３抗体、または他の抗体療法、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、サイトカイン、および照射と組み合わせて使用されてもよい。一部の実施形態では、ＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞は、骨髄移植、フルダラビンなどの化学療法剤のいずれかを使用したＴ細胞アブレーション療法、外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド、またはＯＫＴ３もしくはキャンパス等の抗体と併せて（例えば、前に、同時に、または後で）、患者に投与される。別の実施形態では、本発明の細胞組成物は、ＣＤ２０と反応する薬剤、例えば、リツキサンのようなＢ細胞アブレーション療法の後に、投与される。例えば、一部の実施形態では、対象は、高用量化学療法による標準的な治療、続いて末梢血幹細胞移植を受けることができる。特定の実施形態では、移植後、対象は、本発明の増殖された免疫細胞の注入を受ける。追加の実施形態では、増殖された細胞は、手術前または手術後に投与される。
【０１９７】
本開示の方法の癌は、制御されない成長、浸潤、または転移を経験している対象における任意のＣＤ９９発現細胞であり得る。ＣＤ９９を発現する癌としては、前立腺癌、卵巣癌、肺の腺癌、乳癌、子宮内膜癌、胃癌、大腸癌、および膵癌、が挙げられる。ＣＤ９９は、Ｊｕｒｋａｔ細胞でも見出されている。一部の態様では、癌は胆嚢癌、外分泌腺癌、またはアポクリン腺癌である。場合によっては、癌は、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、または混合表現型白血病を含む。
【０１９８】
一部の態様では、癌は、放射線療法が現在使用されている任意の新生物または腫瘍であり得る。あるいは、癌は、標準的な方法を用いた放射線治療に十分に感受性がない新生物または腫瘍であり得る。したがって、癌は、肉腫、リンパ腫、白血病、細胞腫、芽細胞腫、または生殖細胞腫瘍であってもよい。開示される組成物が治療に使用され得る癌の代表的な、ただし非限定的なリストとしては、リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、菌状息肉症、ホジキン病、骨髄性白血病、膀胱癌、脳癌、神経系癌、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌、腎癌、小細胞肺癌および非小細胞肺癌等の肺癌、神経芽細胞腫／膠芽細胞腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、皮膚癌、肝癌、黒色腫、口腔・咽頭・喉頭および肺の扁平上皮癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、子宮頸癌、乳癌、上皮癌、腎癌、泌尿生殖器癌、肺癌、食道癌、頭頸部癌、大腸癌、血液癌、精巣癌、結腸および直腸癌、前立腺癌、および膵癌が挙げられる。
【０１９９】
開示されるＣＡＲは、細胞傷害性または細胞分裂阻害効果を有する任意の化合物、部分または基と組み合わせて使用することができる。薬物部分としては、マイクロチューブリン阻害剤、有糸分裂阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、またはＤＮＡインターカレーターとして機能し得る化学療法剤、特に癌治療に使用されるものが含まれる。
【０２００】
開示されるＣＡＲは、チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用することができる。２つの既知の抑制性チェックポイント経路は、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原−４（ＣＴＬＡ−４）およびプログラム死１（ＰＤ−１）受容体を介したシグナル伝達を伴う。これらのタンパク質は、Ｔ細胞機能のすべての段階にわたって重要な役割を果たす共シグナル伝達分子のＣＤ２８−Ｂ７ファミリーのメンバーである。ＰＤ−１受容体（ＣＤ２７９としても知られる）は、活性化Ｔ細胞の表面に発現される。そのリガンド、ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１、ＣＤ２７４）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ、ＣＤ２７３）は、樹状細胞またはマクロファージ等のＡＰＣの表面に発現される。ＰＤ−Ｌ１は、主なリガンドであり、一方、ＰＤ−Ｌ２は、はるかに制限された発現パターンを有する。リガンドがＰＤ−１に結合すると、抑制性シグナルがＴ細胞に伝達され、サイトカイン産生を低減し、Ｔ細胞増殖を抑制する。チェックポイント阻害剤としては、ＰＤ−１（ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８またはＭＤＸ１１０６）、ＣＴ−０１１、ＭＫ−３４７５）、ＰＤ−Ｌ１（ＭＤＸ−１１０５（ＢＭＳ−９３６５５９）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＰＤ−Ｌ２（ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７）、ＣＴＬＡ−４（イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０）、トレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６））、ＩＤＯ、Ｂ７−Ｈ３（ＭＧＡ２７１）、Ｂ７−Ｈ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ−３（ＢＭＳ−９８６０１６）、が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０１】
プログラム死１（ＰＤ−１）に対するヒトモノクローナル抗体および抗ＰＤ−１抗体を単独でまたは他の免疫療法剤と組み合わせて使用して癌を治療するための方法は、米国特許第８，００８，４４９号に記載されており、これらの抗体について参照により援用される。抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびそれについての使用は、米国特許第８，５５２，１５４号に記載されており、これらの抗体について参照により援用される。抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む抗癌剤は、米国特許第８，６１７，５４６号に記載されており、これらの抗体について参照により援用される。
【０２０２】
一部の実施形態では、ＰＤＬ１阻害剤は、ＢＭＳ−９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）またはＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）等のＰＤＬ１に特異的に結合する抗体を含む。一部の実施形態では、ＰＤ１阻害剤は、ランブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、またはＭＥＤＩ４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）等のＰＤ１に特異的に結合する抗体を含む。ＰＤ−１に対するヒトモノクローナル抗体および抗ＰＤ−１抗体を単独で、または他の免疫療法剤と組み合わせて使用して癌を治療するための方法は、米国特許第８，００８，４４９号に記載されており、これらの抗体について参照により援用される。抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびそれについての使用は、米国特許第８，５５２，１５４号に記載されており、これらの抗体について参照により援用される。抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む抗癌剤は、米国特許第８，６１７，５４６号に記載されており、これらの抗体について参照により援用される。
【０２０３】
開示されるＣＡＲは、他の癌免疫療法と組み合わせて使用することができる。免疫療法には、２つの異なる種類があり、受動免疫療法は、患者において免疫応答を開始する必要はなく、免疫系の成分を用いて、癌細胞に対する標的細胞毒性活性を誘導し、一方、能動免疫療法は、内因性免疫応答を能動的に誘発する。受動的戦略は、特異的抗原に応答してＢ細胞によって産生されるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の使用を含む。１９７０年代のハイブリドーマ技術の開発と腫瘍特異的抗原の同定により、免疫系によって腫瘍細胞を特異的に標的化して破壊することができるｍＡｂの製剤開発が可能になった。これまで、ｍＡｂは、免疫療法にとって最大の成功例であり、２０１２年のベストセラー抗癌剤のトップ３はｍＡｂであった。その中には、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）などのＢ細胞悪性腫瘍の表面で高度に発現するＣＤ２０タンパク質に結合するリツキシマブ（リツキサン、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）がある。リツキシマブは、ＮＨＬおよび慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を化学療法と組み合わせて治療するため、ＦＤＡによって承認されている。別の重要なｍＡｂは、トラスツズマブ（ハーセプチン、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）であり、ＨＥＲ２（ヒト上皮増殖因子受容体２）の発現を標的とすることによって、ＨＥＲ２陽性乳癌の治療に革命をもたらした。
【０２０４】
最適な「キラー」ＣＤ８  Ｔ細胞応答を生成するには、Ｔ細胞受容体活性化に加えて共刺激も必要であり、これは、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）および４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）を含む腫瘍壊死因子受容体ファミリーメンバーの連結を通じて提供することができる。ＯＸ４０が特に興味深いのは、活性化（アゴニスト）抗ＯＸ４０  ｍＡｂによる治療が、Ｔ細胞分化および細胞溶解機能を増強して、様々な腫瘍に対する抗腫瘍免疫の向上をもたらすためである。
【０２０５】
一部の実施形態では、かかる追加の治療剤は、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、５−フルオロウラシル、ダカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、ゲムシタビンまたはクラドリビン等の代謝拮抗剤から選択され得る。
【０２０６】
一部の実施形態では、かかる追加の治療剤は、メクロレタミン、チオテパ、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、プロカルバジン、マイトマイシンＣ等のアルキル化剤、シスプラチンおよびカルボプラチン等の他の白金誘導体など、から選択され得る。
【０２０７】
一部の実施形態では、かかる追加の治療剤は、タキサン類、例えば、ドセタキセル、およびパクリタキセル、ならびにビンカアルカロイド類、例えば、ビンデシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびビノレルビン等の有糸分裂阻害剤から選択され得る。
【０２０８】
一部の実施形態では、かかる追加の治療剤は、トポテカンまたはイリノテカン等のトポイソメラーゼ阻害剤、またはエトポシドおよびテニポシド等の細胞分裂阻害剤から選択され得る。
【０２０９】
一部の実施形態では、そのような追加の治療剤は、成長因子阻害剤、例えばＥｒｂＢｌ（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、ザルツムマブ、セツキシマブ、パニツムマブもしくはニモツズマブ、または他のＥＧＦＲ阻害剤、例えば、ゲフィチニブもしくはエルロチニブ）、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）の別の阻害剤（例えば、ＨＥＲ２抗体、例えば、トラスツズマブ、トラスツズマブ−ＤＭｌもしくはペルツズマブ）、またはＥＧＦＲおよびＨＥＲ２の両方の阻害剤、例えば、ラパチニブ）から選択され得る。
【０２１０】
一部の実施形態では、かかる追加の治療剤は、イマチニブ（グリベック、Ｇｌｅｅｖｅｃ  ＳＴＩ５７１）またはラパチニブ等のチロシンキナーゼ阻害剤から選択され得る。
【０２１１】
したがって、一部の実施形態では、開示される抗体は、オファツムマブ、ザノリムマブ、ダラツムマブ、ラニビズマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、ｈｕ８０６、ダクリズマブ（ゼナパックス）、バシリキシマブ（シムレクト）、インフリキシマブ（レミケード）、アダリムマブ（ヒュミラ）、ナタリズマブ（タイサブリ）、オマリズマブ（ゾレア）、エファリズマブ（ラプティバ）、および／またはリツキシマブと組み合わせて使用される。
【０２１２】
一部の実施形態では、上に記載の疾患を治療するためのＣＡＲと組み合わせて使用する治療剤は、抗癌サイトカイン、ケモカイン、またはそれらの組み合わせであってもよい。好適なサイトカインおよび成長因子の例としては、ＩＦＮｙ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８ａ、ＩＬ−２８ｂ、ＩＬ−２９、ＫＧＦ、ＩＦＮａ（例えば、ＩＮＦａ２ｂ）、ＩＦＮ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＤ４０Ｌ、Ｆｌｔ３リガンド、幹細胞因子、アンセスチム、およびＴＮＦａが挙げられる。好適なケモカインとしては、ヒトＣＸＣおよびＣ−ＣケモカインファミリーからのＩＰ−１０、ＭＣＰ−３、ＭＩＧ、およびＳＤＦ−ｌａ等のＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＥＬＲ）−陰性ケモカインが含まれ得る。好適なサイトカインとしては、サイトカイン誘導体、サイトカイン変異体、サイトカイン断片、およびサイトカイン融合タンパク質が挙げられる。
【０２１３】
一部の実施形態では、上に記載の疾患を治療するためのＣＡＲと組み合わせて使用する治療剤は、細胞周期調節／アポトーシス調節剤（または「調節剤」）であり得る。細胞周期調節／アポトーシス調節因子は、（ｉ）ｃｄｃ−２５（ＮＳＣ６６３２８４など）、（ｉｉ）細胞周期を過剰刺激するサイクリン依存性キナーゼ（フラボピリドールなど（Ｌ８６８２７５、ＨＭＲ１２７５）、７−ヒドロキシスタウロスポリン（ＵＣＮ−０１、ＫＷ−２４０１）、およびロスコビチン（Ｒ−ロスコビチン、ＣＹＣ２０２））、ならびに（ｉｉｉ）テロメラーゼ修飾因子（ＢＩＢＲ１５３２、ＳＯＴ−０９５、ＧＲＮ１６３、ならびに、例えば、ＵＳ６，４４０，７３５およびＵＳ６，７１３，０５５に記載の組成物など）、のような細胞周期調節／アポトーシス調節因子を標的として調節する分子含んでもよい。アポトーシス経路を妨害する分子の非限定的な例としては、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）／ａｐｏｐｔｏｓｉｓ−２リガンド（Ａｐｏ−２Ｌ）、ＴＲＡＩＬ受容体を活性化する抗体、ＩＦＮ、およびアンチセンスＢｃｌ−２が挙げられる。
【０２１４】
一部の実施形態では、上に記載の疾患を治療するためのＣＡＲと組み合わせて使用するための治療剤は、抗アンドロゲン療法および抗エストロゲン療法に有用な薬剤等のホルモン調節剤であってもよい。そのようなホルモン調節剤の例は、タモキシフェン、イドキシフェン、フルベストラント、ドロロキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ジエチルスチルベストロール、エチニルエストラジオール／エスチニル、抗アンドロゲン（フルタミド／エウレキシンなど）、プロゲスチン（ヒドロキシプロゲステロンカプロン酸塩、メドロキシ−プロゲステロン／プロベラ、メゲストロール酢酸塩／メゲスなど）、副腎皮質ホルモン（ヒドロコルチゾン、プレドニゾンなど）、黄体化ホルモン放出ホルモン（およびそれらの類似体ならびにブセレリンおよびゴセレリンなどの他のＬＨＲＨアゴニスト）、アロマターゼ阻害剤（アナストロゾール／アリミデックス、アミノグルテチミド／シタドレン、エキセメスタンなど）、またはホルモン阻害剤（オクトレオチド／サンドスタチンなど）である。
【０２１５】
一部の実施形態では、上に記載の障害を治療するためのＣＡＲと組み合わせて使用するための治療剤は、抗癌核酸または抗癌阻害ＲＮＡ分子であってもよい。
【０２１６】
上に記載の併用投与は、同時的、個別的、または逐次的であり得る。同時投与の場合、薬剤は、１つの組成物として、または、必要に応じて別個の組成物として、投与され得る。
【０２１７】
一部の実施形態では、開示されるＣＡＲは、放射線療法と組み合わせて投与される。放射線療法は、患者への放射線照射、または放射線医薬品の随伴的な投与を含み得る。放射線源は、治療される患者の外部または内部のいずれかであり得る（放射線治療は、例えば、外照射療法（ＥＢＲＴ）または近接照射療法（ＢＴ）の形態であり得る）。かかる方法の実践において使用され得る放射性元素としては、例えば、ラジウム、セシウム−１３７、イリジウム−１９２、アメリシウム−２４１、金−１９８、コバルト−５７、銅−６７、テクネチウム−９９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、およびインジウム−１１１が挙げられる。
【０２１８】
一部の実施形態では、開示されるＣＡＲは、手術と組み合わせて投与される。
【０２１９】
ＣＡＲ−Ｔ細胞は、いくつかの方法で設計されてもよく、腫瘍細胞傷害性および特異性を増強し、腫瘍免疫抑制を避け、宿主拒絶を回避し、それらの治療上の半減期を延長する。例えば、トラック（ＴＲＵＣＫ、Ｔ−ｃｅｌｌｓ  Ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｆｏｒ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｋｉｌｌｉｎｇ）Ｔ細胞は、ＣＡＲを有するが、また、腫瘍殺傷を促進するＩＬ−１２等のサイトカインを放出するようにも改変される。これらの細胞は、腫瘍環境に局在すると、ＣＡＲの活性化時に分子搭載物を放出するように設計されるため、これらのＣＡＲ−Ｔ細胞は、「装甲型ＣＡＲ」とも呼ばれることがある。癌療法としてのいくつかのサイトカインは、臨床前および臨床の両方で調査されており、同様にＣＡＲ−Ｔ療法のトラック形態に組み込まれる場合にも有用であることが証明され得る。これらの中には、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＩＬ、ＦＬＴ３リガンド、リンホタクチン、およびＴＧＦ−β（Ｄｒａｎｏｆｆ  ２００４）が含まれる。「自己駆動型」または「ホーミング」ＣＡＲ−Ｔ細胞は、それらのＣＡＲに加えてケモカイン受容体を発現するように改変される。ある特定のケモカインは、腫瘍内で上方制御され得るため、ケモカイン受容体の組み込みは、養子Ｔ細胞への腫瘍輸送およびそれによる浸潤を補助し、それによってＣＡＲ−Ｔの特異性および機能性の両方を増強する（Ｍｏｏｎ  ２０１１）。また、普遍型ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＡＲを有するが、内因性ＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）またはＭＨＣ（主要組織適合複合体）タンパク質を発現しないように改変される。養子Ｔ細胞療法のシグナル伝達レパートリーからこれらの２つのタンパク質を除去することによって、それぞれ、移植片対宿主病および拒絶を防ぐ。装甲型ＣＡＲ−Ｔ細胞は、それらが腫瘍免疫抑制および腫瘍誘発ＣＡＲ−Ｔ機能低下を回避できることから、さらにそのように名付けられている。これらの特定のＣＡＲ−Ｔは、ＣＡＲを有し、チェックポイント阻害剤を発現しないように改変され得る。あるいは、これらのＣＡＲ−Ｔは、チェックポイントシグナル伝達を遮断するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）と同時投与することができる。抗ＰＤＬ１抗体の投与は、ＣＡＲ  ＴＩＬ（腫瘍浸潤リンパ球）の殺傷能力を有意に回復させた。ＰＤ１−ＰＤＬ１およびＣＴＬＡ−４−ＣＤ８０／ＣＤ８６シグナル伝達経路が調査されているが、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ−３、ＩＤＯ−１、２Ｂ４、およびＫＩＲを含む装甲型ＣＡＲ−Ｔの設計において、他の免疫チェックポイントシグナル伝達分子を標的とすることが可能である。ＴＩＬの他の細胞内阻害剤としては、ホスファターゼ（ＳＨＰ１）、ユビキチンリガーゼ（すなわち、ｃｂｌ−ｂ）、およびキナーゼ（すなわち、ジアシルグリセロールキナーゼ）が挙げられる。装甲型ＣＡＲ−Ｔは、また、腫瘍分泌型サイトカインの効果からそれらを保護するか、またはそれらに耐性を持たせる、タンパク質または受容体を発現するように改変され得る。例えば、ＴＧＦ−β受容体の二重陰性形態で形質導入されるＣＴ���（細胞傷害性Ｔリンパ球）は、リンパ腫分泌型ＴＧＦ−βによる免疫抑制に耐性がある。これらの形質導入細胞は、それらの対照相手と比較した場合、インビボでの抗腫瘍活性の顕著な増加を示した。
【０２２０】
タンデム型およびデュアル型ＣＡＲ−Ｔ細胞は、それらが２つの異なる抗原結合ドメインを有する点において独特である。タンデム型ＣＡＲは、細胞内共刺激ドメインおよび刺激ドメインと結合し、細胞外環境に面する、２つの連続した抗原結合ドメインを含有する。デュアル型ＣＡＲは、一つの細胞外抗原結合ドメインが細胞内共刺激ドメインに結合し、二つめの異なる細胞外抗原結合ドメインが細胞内刺激ドメインに結合されるように改変される。刺激ドメインおよび共刺激ドメインは、２つの別個の抗原結合ドメイン間で分割されるため、デュアル型ＣＡＲは、「分割型ＣＡＲ（ｓｐｌｉｔ  ＣＡＲ）」とも称される。タンデム型およびデュアル型ＣＡＲの両方の設計において、Ｔ細胞内のＣＡＲ回路のシグナル伝達を可能にするには、両方の抗原結合ドメインの結合が必要である。これらの２つのＣＡＲ設計は、異なる別個の抗原に対する結合親和性を有するため、それらは、「二重特異性」ＣＡＲとも称される。
【０２２１】
「生きている治療薬」の形態としてのＣＡＲ−Ｔ細胞に対する１つの主な懸念は、インビボでのそれらの操作性およびそれらの潜在的な免疫刺激副作用である。ＣＡＲ−Ｔ療法をより良く制御し、望ましくない副作用を防ぐために、オフスイッチ、安全機構、および条件的制御機構を含む様々な特徴が改変される。例えば、自己破壊型および標識型／タグ型ＣＡＲ−Ｔ細胞の両方は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞の除去を促進する「オフスイッチ」を有するように改変される。自己破壊型ＣＡＲ−Ｔは、ＣＡＲを含有するが、外因性分子の投与で誘導が可能なアポトーシス促進性の自殺遺伝子または「除去遺伝子」も発現するように改変される。ＨＳＶ−ＴＫ（単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ）、Ｆａｓ、ｉＣａｓｐ９（誘導性カスパーゼ９）、ＣＤ２０、ＭＹＣ  ＴＡＧ、および切断ＥＧＦＲ（内皮増殖因子受容体）を含む様々な自殺遺伝子が、この目的のために用いられてもよい。例えば、ＨＳＫは、プロドラッグのガンシクロビル（ＧＣＶ）を、複製中のＤＮＡに組み込まれるＧＣＶ三リン酸に変換して、最終的に細胞死をもたらす。ｉＣａｓｐ９は、小分子ＡＰ１９０３に結合するＦＫ５０６結合タンパク質の成分を含有するキメラタンパク質であり、カスパーゼ９の二量体化およびアポトーシスをもたらす。しかしながら、標識型／タグ型ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＡＲを有するが、選択マーカーを発現するようにも改変される細胞である。この選択マーカーに対するｍＡｂの投与は、ＣＡＲ−Ｔ細胞の除去を促進する。切断ＥＧＦＲは、抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂによるそのような標的化可能抗原の１つであり、セツキシマブの投与は、ＣＡＲ−Ｔ細胞の除去を促進するように働く。これらの特徴を有するように生成されたＣＡＲは、「スイッチ可能型ＣＡＲ」としてｓＣＡＲ、および「調節可能型ＣＡＲ」としてＲＣＡＲ、とも称される。「抑制型ＣＡＲ」（ｉＣＡＲ）とも呼ばれる「安全型ＣＡＲ」は、２つの抗原結合ドメインを発現するように改変される。これらの細胞外ドメインのうちの１つは、腫瘍関連抗原に対するもので、細胞内共刺激ドメインおよび刺激ドメインに結合する。しかしながら、第２の細胞外抗原結合ドメインは、正常組織に特異的であり、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、またはＣＤ４５などの細胞内チェックポイントドメインに結合する。ｉＣＡＲに、複数の細胞内阻害ドメインを組み込むことも可能である。これらの阻害ドメインを提供し得るいくつかの阻害分子としては、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−１、ＣＤ１６０、ＰＩＨ、２Ｂ４、ＣＥＡＣＡＭ（ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３、および／またはＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ−３、ＴＩＧＩＴ、ＢＴＬＡ、ＬＡＩＲ１、およびＴＧＦβ−Ｒ、が挙げられる。正常組織の存在下、この第２の抗原結合ドメインを刺激すると、ＣＡＲを阻害するように働くであろう。この二重抗原特異性のため、ｉＣＡＲも二重特異性ＣＡＲ−Ｔ細胞の一形態であることに留意されたい。安全型ＣＡＲ−Ｔの改変は、腫瘍組織に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の特異性を増強し、ある特定の正常組織が標準型ＣＡＲでオフターゲット効果をもたらす可能性のある非常に低いレベルの腫瘍関連抗原を発現し得る状況において、有利である（Ｍｏｒｇａｎ  ２０１０）。条件型ＣＡＲ−Ｔ細胞���、細胞内共刺激ドメインおよび別個の細胞内共刺激物質に結合された細胞外抗原結合ドメインを発現する。共刺激ドメイン配列および刺激ドメイン配列は、外因性分子の投与の際に、得られるタンパク質が細胞内で集まって、ＣＡＲ回路を完成するように改変される。このように、ＣＡＲ−Ｔ活性化は、調節が可能で、おそらく、特定の患者に対して「微調整」またはパーソナライズもされ得る。デュアル型ＣＡＲの設計と同様に、条件型ＣＡＲでも、不活性時に刺激ドメインと共刺激ドメインが物理的に分離しており、このような理由から、これらもまた、「分離型ＣＡＲ（ｓｐｌｉｔ  ＣＡＲ）」と称される。
【０２２２】
一部の実施形態では、これらの改変された特徴のうちの２つ以上を組み合わせて、強化された多機能ＣＡＲ−Ｔを作製することができる。例えば、トラックのようにサイトカインも放出するデュアル型または条件型ＣＡＲ設計のいずれかを有するＣＡＲ−Ｔ細胞を生成することが可能である。一部の実施形態では、デュアル型−条件型ＣＡＲ−Ｔ細胞は、それぞれ、それらのそれぞれの共刺激ドメインに結合する２つの異なる癌抗原に対する２つの別個の抗原結合ドメインを有する２つのＣＡＲを発現するように作製され得る。共刺激ドメインは、活性化分子が投与された後にのみ、刺激ドメインとともに機能的になる。このＣＡＲ−Ｔ細胞が有効であるためには、癌が両方の癌抗原を発現し、活性化分子が患者に投与される必要があり、この設計により、デュアル型および条件型ＣＡＲ−Ｔ細胞の両方の特徴が組み込まれる。
【０２２３】
典型的には、ＣＡＲ−Ｔ細胞はα−βＴ細胞を使用して作製されるが、γ−δＴ細胞を使用してもよい。一部の実施形態では、記載のＣＡＲ構築物、ドメイン、およびＣＡＲ−Ｔ細胞を生成するために使用される改変された特徴は、同様に、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、Ｂ細胞、マスト細胞、骨髄由来貪食細胞、およびＮＫＴ細胞、を含む他のタイプのＣＡＲ発現免疫細胞の生成に用いられ得る。あるいは、ＣＡＲ発現細胞は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞の両方の特性を有するように生成され得る。追加の実施形態では、ＣＡＲで形質導入されるものは、自己または同種であり得る。
【０２２４】
ＣＡＲの発現には、いくつかの異なる方法を使用することができ、レトロウイルス形質導入（γ−レトロウイルスを含む）、レンチウイルス形質導入、トランスポソン／トランスポサーゼ（Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  ＢｅａｕｔｙおよびＰｉｇｇｙＢａｃ系）、ならびにメッセンジャーＲＮＡ導入媒介遺伝子発現が含まれる。ＣＡＲ−Ｔ細胞を改変する可能性に関して、遺伝子編集（遺伝子挿入または遺伝子欠失／破壊）も同様に重要性が増してきている。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９、ＺＦＮ（ジンクフィンガーヌクレアーゼ）、およびＴＡＬＥＮ（転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ）系は、それらを介してＣＡＲ−Ｔ細胞を生成することができる、３つの潜在的な方法である。
【０２２５】
定義
用語「アミノ酸配列」は、アミノ酸残基を表す略称、文字、記号または単語のリストを指す。本明細書で使用されるアミノ酸の略称は、アミノ酸の従来の１文字コードであり、以下のように表される。Ａ．アラニン、Ｂ．アスパラギンまたはアスパラギン酸、Ｃ．システイン、Ｄ．アスパラギン酸、Ｅ．グルタミン酸、グルタミン酸、Ｆ．フェニルアラニン、Ｇ．グリシン、Ｈ．ヒスチジン、Ｉ．イソロイシン、Ｋ．リジン、Ｌ．ロイシン、Ｍ．メチオニン、Ｎ．アスパラギン、Ｐ．プロリン、Ｑ．グルタミン、Ｒ．アルギニン、Ｓ．セリン、Ｔ．スレオニン、Ｖ．バリン、Ｗ．トリプトファン、Ｙ．チロシン、Ｚ．グルタミンまたはグルタミン酸。
【０２２６】
用語「抗体」は、免疫グロブリン、特異的結合能力を維持するその誘導体、および免疫グロブリン結合ドメインと相同またはほぼ相同である結合ドメインを有するタンパク質を指す。これらのタンパク質は、天然源に由来し得るか、もしくは部分的または完全に合成されて産生され得る。抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体は、任意の種からの任意の免疫グロブリンのクラスのメンバーであってもよく、任意のヒトのクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む。例示的な実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物とともに使用される抗体は、ＩｇＧクラスの誘導体である。「抗体」という用語には、無傷の免疫グロブリン分子に加えて、それらの免疫グロブリン分子の断片またはポリマー、および標的抗原に選択的に結合するヒトまたはヒト化バージョンの免疫グロブリン分子も含まれる。
【０２２７】
用語「抗体断片」は、全長未満の抗体の任意の誘導体を指す。例示的な実施形態では、抗体断片は、全長の抗体の特異的結合能力の少なくとも有意な部分を保持する。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖダイアボディ、Ｆｃ、およびＦｄ断片が挙げられる。抗体断片は、任意の方法によって産生され得る。例えば、抗体断片は、無傷の抗体の断片化によって酵素的または化学的に産生されてもよく、部分抗体配列をコードする遺伝子から組換えて産生されてもよく、または完全にもしくは部分的に合成されて産生されてもよい。抗体断片は、任意選択的に、単鎖抗体断片であってもよい。あるいは、断片は、例えばジスルフィド結合によって一緒に連結される、複数の鎖を含んでもよい。断片は、任意選択的に多分子複合体であってもよい。機能性抗体断片は、典型的には、少なくとも約５０アミノ酸を含み、より典型的には、少なくとも約２００アミノ酸を含む。
【０２２８】
用語「抗原結合部位」は、抗原上のエピトープに特異的に結合する抗体の領域を指す。
【０２２９】
用語「アプタマー」は、特定の標的分子に結合するオリゴ核酸またはペプチド分子を指す。これらの分子は、一般に、ランダム配列のプールから選択される。選択されたアプタマーは、固有の三次構造に適応し、高い親和性および特異性で標的分子を認識することができる。「核酸アプタマー」は、ＤＮＡまたはＲＮＡオリゴ核酸であり、その立体構造を介して標的分子に結合し、それによって、そのような分子の機能を阻害または抑制する。核酸アプタマーは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはそれらの組み合わせによって構成され得る。「ペプチドアプタマー」は、一定の足場タンパク質内に挿入された可変ペプチド配列を有する組み合わせタンパク質分子である。ペプチドアプタマーの同定は、典型的には、厳しい酵母ダイハイブリッド条件下で行われ、これは、選択されたペプチドアプタマーが細胞内文脈において安定して発現され、正しく折り畳まれる可能性を高める。
【０２３０】
「担体」という用語は、化合物または組成物と組み合わせて、その意図された用途または目的のために、化合物または組成物の調製、保存、投与、送達、有効性、選択性、または任意の他の特徴を補助または促進する、化合物、組成物、物質、または構造を意味する。例えば、担体を選択して、活性成分の任意の分解を最小限に抑え、対象における任意の有害な副作用を最小限に抑えることができる。
【０２３１】
用語「キメラ分子」は、それらの天然状態で別個に存在する２つ以上の分子を結合することによって生成される単一分子を指す。単一のキメラ分子は、その構成分子の全ての所望の機能を有する。キメラ分子の一種は、融合タンパク質である。
【０２３２】
用語「改変抗体」は、抗体断片を少なくとも含む組換え分子を指し、抗体の重鎖および／または軽鎖の可変ドメインに由来する抗原結合部位を含み、任意選択的に、Ｉｇクラス（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭおよびＩｇＹ）のいずれかに由来する抗体の可変ドメインおよび／または定常ドメインの全体または一部を含み得る。
【０２３３】
用語「エピトープ」は、抗体が優先的かつ特異的に結合する抗原の領域を指す。モノクローナル抗体は、分子的に定義され得る分子の単一の特異的エピトープに優先的に結合する。本発明において、複数のエピトープは、多特異性抗体によって認識することができる。
【０２３４】
用語「融合タンパク質」は、１つのポリペプチドのアミノ末端と別のポリペプチドのカルボキシル末端との間に形成されるペプチド結合を介して、２つ以上のポリペプチドを結合することによって形成されるポリペプチドを指す。融合タンパク質は、構成ポリペプチドの化学カップリングによって形成され得、または単一の連続した融合タンパク質をコードする核酸配列からの単一のポリペプチドとして発現され得る。単鎖融合タンパク質は、単一の連続したポリペプチド骨格を有する融合タンパク質である。融合タンパク質は、分子生物学における従来の技術を使用して調製することができ、２つの遺伝子をインフレームで単一の核酸に結合して、次いで、融合タンパク質が産生される条件下で、適切な宿主細胞で核酸を発現させる。
【０２３５】
用語「Ｆａｂ断片」は、酵素パパインによる抗体の切断によって生成される抗原結合部位を含む抗体の断片を指し、Ｈ鎖間ジスルフィド結合のＮ末端側のヒンジ領域が切断されて、１つの抗体分子から２つのＦａｂ断片が生成される。
【０２３６】
用語「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、Ｈ鎖間ジスルフィド結合のＣ末端側のヒンジ領域で切断する、酵素ペプシンで抗体分子を切断することによって生成される、２つの抗原結合部位を含有する抗体の断片を指す。
【０２３７】
用語「Ｆｃ断片」は、その重鎖の定常ドメインを含む抗体の断片を指す。
【０２３８】
用語「Ｆｖ断片」は、その重鎖および軽鎖の可変ドメインを含む抗体の断片を指す。
【０２３９】
「遺伝子構築物」は、ベクター、プラスミド、ウイルスゲノム等のような核酸を指し、ポリペプチドの「コード配列」を含むか、または、そうでなければ、生物学的に活性なＲＮＡ（例えば、アンチセンス、デコイ、リボザイム等）に転写可能であり、細胞、例えば、ある特定の実施形態では哺乳動物細胞、にトランスフェクトすることができ、構築物でトランスフェクトされた細胞において、コード配列の発現を引き起こし得る。遺伝子構築物は、コード配列、ならびにイントロン配列、ポリアデニル化部位、複製開始点、マーカー遺伝子などに作動可能に連結された１つまたは複数の調節要素を含んでもよい。
【０２４０】
用語「同一性」は、２つの核酸分子またはポリペプチド間の配列同一性を指す。同一性は、比較のためにアラインメントされ得る各配列中の位置を比較することによって決定することができる。比較される配列中の位置が同じ塩基によって占有されていれば、分子は、その位置において同一である。核酸またはアミノ酸の配列間の類似性または同一性の程度は、核酸配列によって共有される位置において同一のまたは一致するヌクレオチドの数の関数である。様々なアラインメントアルゴリズムおよび／またはプログラムを使用して２つの配列間の同一性を計算することができ、それにはＦＡＳＴＡまたはＢＬＡＳＴが含まれ、ＧＣＧ配列解析パッケージ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）の一部として利用可能で、例えば、デフォルト設定で使用することができる。例えば、本明細書に記載される特定のポリペプチドと少なくとも７０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有し、好ましくは、実質的に同じ機能を示し、ならびにそのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが考慮される。別段の指示がない限り、類似性スコアはＢＬＯＳＵＭ６２の使用に基づく。ＢＬＡＳＴＰが使用される場合、類似性パーセントは、ＢＬＡＳＴＰポジティブスコアに基づき、配列同一性パーセントは、ＢＬＡＳＴＰ同一性スコアに基づく。ＢＬＡＳＴＰ「同一性」は、同一である高スコア配列対における総残基の数および割合を示し、ＢＬＡＳＴＰ「ポジティブ」は、アラインメントスコアがポジティブ値を有し、互いに類似している残基の数および割合を示す。本明細書に開示されるアミノ酸配列に対して、これらの程度の同一性もしくは類似性、または任意の中間程度の同一性もしくは類似性を有するアミノ酸配列は、本開示によって考慮され、包含される。類似するポリペプチドのポリヌクレオチド配列は、遺伝コードを使用して推定され、従来の手段によって、特に遺伝コードを使用してそのアミノ酸配列を逆翻訳することによって、得ることができる。
【０２４１】
用語「リンカー」は、当該技術分野で周知であり、２つのポリペプチド等の２つの化合物を結合する分子または分子のグループを指す。リンカーは、単一の連結分子から構成されてもよく、または連結分子およびスペーサー分子を含んでもよく、連結分子および化合物を特定の距離で分離することが意図されている。
【０２４２】
用語「多価抗体」は、２つ以上の抗原認識部位を含む抗体または改変抗体を指す。例えば、「二価」抗体は、２つの抗原認識部位を有するのに対し、「四価」抗体は、４つの抗原認識部位を有する。用語「単一特異性」、「二重特異性」、「三重特異性」、「四重特異性」等は、多価抗体に存在する異なる抗原認識部位の特異性の数（抗原認識部位の数とは対照的に）を指す。例えば、「単一特異性」抗体の抗原認識部位は、すべて同じエピトープに結合する。「二重特異性」抗体は、第１のエピトープに結合する少なくとも１つの抗原認識部位と、第１のエピトープとは異なる第２のエピトープに結合する少なくとも１つの抗原認識部位を有する。「多価単一特異性」抗体は、すべて同じエピトープに結合する複数の抗原認識部位を有する。「多価二重特異性」抗体は、複数の抗原認識部位を有し、そのうちのいくつかは第１のエピトープに結合し、そのうちのいくつかは第１のエピトープとは異なる第２のエピトープに結合する。
【０２４３】
用語「核酸」は、１つのヌクレオチドの３’位で別のヌクレオチドの５’末端にリン酸基によって連結された、単一のヌクレオチドまたは２つ以上のヌクレオチドを含む、天然または合成分子を指す。核酸は長さによって限定されず、したがって、核酸は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）を含むことができる。
【０２４４】
「に作動可能に連結された」という用語は、別の核酸配列との核酸の機能関係を指す。プロモーター、エンハンサー、転写および翻訳停止部位、ならびに他のシグナル配列は、他の配列に作動可能に連結された核酸配列の例である。例えば、ＤＮＡの転写調節エレメントへの作動可能な連結は、ＤＮＡとプロモーターとの間の物理的および機能的関係を指し、ＤＮＡを特異的に認識し、結合し、転写するＲＮＡポリメラーゼによって、そのようなＤＮＡの転写が、プロモーターから開始されるようになる。
【０２４５】
用語「ペプチド」、「タンパク質」、および「ポリペプチド」は、互換的に使用され、１つのアミノ酸のカルボキシル基によって別のアミノ酸のアルファアミノ基に連結された２つ以上のアミノ酸を含む天然または合成分子を指す。
【０２４６】
「薬学的に許容される」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症が無く、合理的なベネフィット／リスク比に見合った、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適している化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。
【０２４７】
用語「ポリペプチド断片」または「断片」は、特定のポリペプチドに関して使用される場合、参照ポリペプチド自体と比較して、アミノ酸残基が欠失しているが、残りのアミノ酸配列が参照ポリペプチドの配列と通常同一であるポリペプチドを指す。そのような欠失は、参照ポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端、または代替的に両方で起こり得る。断片は、典型的には、少なくとも約５、６、８または１０個のアミノ酸長、少なくとも約１４個のアミノ酸長、少なくとも約２０、３０、４０、または５０個のアミノ酸長、少なくとも約７５個のアミノ酸長、または少なくとも約１００、１５０、２００、３００、５００個またはそれ以上のアミノ酸長である。断片は、参照ポリペプチドの生物学的活性のうちの１つまたは複数を保持し得る。種々の実施形態において、断片は、参照ポリペプチドの酵素活性および／または相互作用部位を含んでもよい。別の実施形態では、断片は、免疫原的な特性を有し得る。
【０２４８】
「タンパク質ドメイン」という用語は、タンパク質の一部、タンパク質の複数の部分、または構造的完全性を示すタンパク質全体を指し、この決定は、タンパク質の一部、タンパク質の複数の部分、またはタンパク質全体のアミノ酸組成に基づいてよい。
【０２４９】
用語「単鎖可変断片またはｓｃＦｖ」は、重鎖ドメインおよび軽鎖ドメインが連結されるＦｖ断片を指す。１つまたは複数のｓｃＦｖ断片は、１つまたは複数の抗原認識部位を有する抗体構築物を形成するために、他の抗体断片（重鎖または軽鎖の定常ドメイン等）に連結されてもよい。
【０２５０】
本明細書で使用される「スペーサー」は、融合タンパク質を含むタンパク質を結合するペプチドを指す。一般に、スペーサーは、タンパク質を結合する以外で、またはそれらの間にある最小距離もしくは他の空間関係を維持する以外で、特異的な生物学的活性を有しない。しかしながら、スペーサーの構成アミノ酸は、分子の折り畳み、正味電荷、または疎水性などの、分子のある特性に影響を与えるように選択してもよい。
【０２５１】
本明細書で使用される「特異的に結合する」という用語は、ポリペプチド（抗体を含む）または受容体を指す場合、タンパク質および他の生体物質の異種集団において、タンパク質またはポリペプチドまたは受容体の存在を決定付ける結合反応を指す。したがって、指定された条件（例えば、抗体の場合の免疫アッセイ条件）では、特定のリガンドまたは抗体が、試料中に存在する他のタンパク質と、またはリガンドもしくは抗体が生物中で接触し得る他のタンパク質と、有意な量で結合しないとき、その特定の「標的」に「特異的に結合する」（例えば、抗体が内皮抗原に、特異的に結合する）。一般に、第２の分子に「特異的に結合する」第１の分子は、その第２の分子と、約１０５Ｍ−１を超える（例えば、１０６Ｍ−１、１０７Ｍ−１、１０８Ｍ−１、１０９Ｍ−１、１０１０Ｍ−１、１０１１Ｍ−１、および１０１２Ｍ−１以上）親和性定数（Ｋａ）を有する。
【０２５２】
本明細書で使用される「特異的に送達する」という用語は、分子が特定の標的分子またはマーカーを有する細胞または組織と優先的に結合し、その標的分子を欠く細胞または組織とは結合しないことを指す。もちろん、分子と非標的細胞または組織との間で、ある程度の非特異的相互作用が起こり得ることは認識されている。しかしながら、特異的送達は、標的分子の特異的認識を通じて媒介されるものとして区別され得る。典型的には、特異的送達は、送達分子と標的分子を有する細胞との間で、送達分子と標的分子を欠く細胞との間よりもはるかに強い結合をもたらす。
【０２５３】
用語「対象」は、投与または治療の標的である任意の個体を指す。対象は、脊椎動物、例えば、哺乳動物であり得る。したがって、対象は、ヒトまたは動物の患者であり得る。用語「患者」は、臨床医、例えば医師の治療下にある対象を指す。
【０２５４】
用語「治療上有効」は、疾患または障害の１つまたは複数の原因または症状を寛解するのに十分な量で使用される組成物の量を指す。そのような寛解には、縮減または変更が必要であるだけで、除去される必要はない。
【０２５５】
「形質転換」および「トランスフェクション」という用語は、核酸、例えば発現ベクターを、当該細胞の染色体ＤＮＡに核酸を導入することを含め、レシピエント細胞に導入することを意味する。
【０２５６】
用語「治療」は、疾患、病態、または障害を治癒、寛解、安定化、または予防することを意図した患者の医療管理を指す。この用語は、能動的治療、すなわち、疾患、病態、または障害の改善に特異的に向けられた治療を含み、また、原因的治療、すなわち、関連する疾患、病態、または障害の原因の除去に向けられた治療を含む。加えて、この用語は、緩和的治療、すなわち、疾患、病態、または障害の治癒ではなく症状の緩和のために設計された治療、予防的治療、すなわち、関連する疾患、病態、または障害の発症を最小限にすること、または部分的もしくは完全に阻害することに向けられた治療、および支持的治療、すなわち、関連する疾患、病態、または障害の改善に向けられた別の特定の療法を補完するために用いられる治療を含む。
【０２５７】
「変異体」という用語は、保存的アミノ酸置換、非保存的アミノ酸置換（すなわち、縮重変異体）、ペプチドまたは参照配列に対して６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するペプチドのＣ末端に添加されるアミノ酸をコードする各コドン（すなわち、ＤＮＡおよびＲＮＡ）のゆらぎ位置内の置換、を有するアミノ酸またはペプチド配列を指す。
【０２５８】
用語「ベクター」は、ベクター配列が連結された別の核酸を細胞内に輸送することができる核酸配列を指す。用語「発現ベクター」は、細胞による発現に好適な形態の（例えば、転写制御エレメントに連結された）遺伝子構築物を含有する任意のベクター（例えば、プラスミド、コスミド、またはファージ染色体）を含む。
【０２５９】
本発明のいくつかの実施形態が説明されている。しかしながら、本発明の主旨および範囲から逸脱することなく、種々の変更が行われ得ることを理解されたい。したがって、他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。
【実施例】
【０２６０】
実施例１：ＣＤ９９ハイブリドーマのスクリーニング
ＥＬ４−ｈＣＤ９９細胞を、ハイブリドーマ由来の抗体／上清とインキュベートした。次いで、細胞をＬｉｖｅ  ｄｅａｄ  Ｚｏｍｂｉｅ  Ｇｒｅｅｎ色素で染色し、Ｆ（ａｂ２）抗ｍＩｇＧ−ＰＥで染色した。ＩＮＴＥＬＬＩＣＹＴハイスループットスクリーナー（ｉＱｕｅ）を使用して、ＣＤ９９  ＰＥに対して陽性の細胞を評価した。図１は、ＣＤ９９−ＰＥ分析において生細胞に使用されるゲートを示すフローサイトメトリープロットを含む。図２は、ＣＤ９９−ＰＥ分析に使用される陽性（右）および陰性（左）対照を示すフローサイトメトリープロットを含む。左のヒストグラムは、上清、すなわち抗体（Ａｂｓ）、を使用しなかった対照試料のものである。右ヒストグラムは、ＰＥ標識ＣＤ９９抗体を使用した陽性対照である。ゲートは、ＣＤ９９−ＰＥ陽性集団を表す。図３は、ＣＤ９９に対して陽性であるハイブリドーマを示すフローサイトメトリープロットを含む。ヒストグラムの下部の数字は、ウェル／ハイブリドーマを表す。
【０２６１】
一次スクリーニングから選択されるハイブリドーマをサブクローニングした。ＥＬＩＳＡプレートを、ＤＰＢＳ（Ｌｏｎｚａカタログ＃１７−５１２Ｆ、ロット＃００００６１５３３４）中で０．５ｕｇ／ｍｌのＣＤ９９抗原（Ｏｒｉｇｅｎｅ、Ｓｋｕ＃ＴＰ３０４０５８、ロット＃＃１０５４７０）を用いて、５０ｕｌ／ウェル、室温で１時間コーティングし、次いで、１００ｕｌ／ウェルの１％ＢＳＡ／ＤＰＢＳを用いて、室温で１時間ブロックした。次いで、モノクローナルハイブリドーマ由来の上清を、コーティングされたプレートに添加した（５０ｕｌ／ウェル）。ヤギ抗マウスＩｇ−ＨＲＰ（１０１０−０５）を、ＴＢＳＴ中で１：４０００、５０ｕｌ／ウェル、室温で４０分間、続いてＡＢＴｓ／Ｈ２Ｏ２を１０分間、使用して抗体を検出した。このスクリーニングの結果を表７〜１２に示す。
【表７】
2021509816.tif 000097
【表８】
2021509816.tif 000098
【表９】
2021509816.tif 000099
【表１０】
2021509816.tif 000100
【表１１】
2021509816.tif 000101
【表１２】
2021509816.tif 000102
【０２６２】
図４は、ＥＬＩＳＡで陽性であり、ＩｇＨ／ＩｇＬクローニングのために選択されたクローンを示すプロットを含む。クローン１Ｈ３  Ｄ１は、ＣＤ９９に対して陰性／低である。図５は、１Ｈ３Ｈ７、ＩＨ３Ｅ９、４Ｃ５Ｅ２、４Ｃ５Ｈ１０、９Ｇ１２Ｃ９、および９Ｇ１２Ｇ６の二次スクリーニングを示すフローサイトメトリープロットを含む。
【０２６３】
ｉＱＵｅを用いた一次スクリーニング、ならびにｉＱｕｅおよびＥＬＩＳＡを用いた二次スクリーニングを用いて、モノクローナルＣＤ９９抗体を産生するハイブリドーマおよびクローンを選択した。二次スクリーニングからのモノクローナルハイブリドーマをさらにサブクローニングし、ＣＤ９９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を設計するために、抗体の重鎖および軽鎖の遺伝子再編成を決定する。
【０２６４】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、開示された発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に引用される出版物およびそれらが引用される材料は、参照により具体的に援用される。
【０２６５】
当業者は、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態との多くの同等物を認識するか、または通常の実験のみを使用して確認することができるであろう。そのような同等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【図１】
2021509816.tif 000103
【図２】
2021509816.tif 000104
【図３】
2021509816.tif 000105
【図４】
2021509816.tif 000106
【図５】
2021509816.tif 000107
【図６Ａ】
2021509816.tif 000108
【図６Ｂ】
2021509816.tif 000109
【図６Ｃ】
2021509816.tif 000110
【図６Ｄ】
2021509816.tif 000111
【図７Ａ】
2021509816.tif 000112
【図７Ｂ】
2021509816.tif 000113
【図７Ｃ】
2021509816.tif 000114
【図８Ａ】
2021509816.tif 000115
【図８Ｂ】
2021509816.tif 000116
【図８Ｃ】
2021509816.tif 000117
【図８Ｄ】
2021509816.tif 000118
【図８Ｅ】
2021509816.tif 000119
【図８Ｆ】
2021509816.tif 000120
【図８Ｇ】
2021509816.tif 000121
【図８Ｈ】
2021509816.tif 000122
【図８Ｉ】
2021509816.tif 000123
【図９Ａ】
2021509816.tif 000124
【図９Ｂ】
2021509816.tif 000125
【図９Ｃ】
2021509816.tif 000126
【図９Ｄ】
2021509816.tif 000127
【図９Ｅ】
2021509816.tif 000128
【配列表】
2021509816000001.app
【国際調査報告】
2021509816.tif 000129
2021509816.tif 000130
2021509816.tif 000131