(57)【要約】  ＡＬＫ２およびその突然変異体を阻害する化合物、このような化合物を含む医薬組成物、ならびにこのような化合物および組成物を使用する方法が本明細書に記載される。2021500337.tif 000240
2021500337.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2021500337.tif 000232
またはその薬学的に許容される塩（式中、
環Ａは単環式アリール、単環式ヘテロアリール、キノリニルおよび二環式ヘテロシクリルから選択され、前記二環式ヘテロシクリルの１つの環のみが芳香族であり；
各Ｒ１はハロ、シアノ、オキソ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ８）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｒ８）２、−Ｎ（Ｒ８）−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｐ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキレン）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキレン）−Ｎ（Ｒ８）２、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキレン）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ８）２、−Ｓｉ（Ｒ９）（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）２、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル）、−Ｏ−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル）、−Ｏ−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル）、−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−アリール、−Ｏ−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−アリール、ヘテロシクリル、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクリル、−Ｏ−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−ヘテロシクリル、および−Ｏ−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクリルから独立に選択され、
Ｒ１の任意の前記アルキルまたは前記アルキレン部分は、場合によりハロ、シアノ、ヒドロキシルおよび−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ１の任意の前記カルボシクリル、前記アリールまたは前記ヘテロシクリル部分は、場合によりハロ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、シアノ、ヒドロキシル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ヘテロシクリル、−Ｎ（Ｒ８）２および−Ｎ（Ｒ８）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ２は結合または−Ｏ−であり；
Ｒ３はＣ１〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ６アルキレン）−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル）および−（Ｃ０〜Ｃ６アルキレン）−（単環式Ｏ−またはＳ−含有ヘテロシクリル）から選択され、
前記単環式ヘテロシクリルの炭素原子は前記単環式ヘテロシクリルの結合点であり；
Ｒ３の任意の前記アルキルまたは前記アルキレン部分は、場合によりハロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−（Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル）および−Ｓ（Ｏ）ｐ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ３の任意の前記カルボシクリルまたは前記ヘテロシクリル部分は、場合によりハロ、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｐ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−フェニル、−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）−フェニルおよびモルホリン−４−イルから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ４は水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ハロおよびシアノから選択され、
Ｒ４の任意の前記アルキル部分は、場合によりヒドロキシルで置換されており；
各Ｒ８は水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから独立に選択される、または２つのＲ８が、これらが結合している窒素原子と一緒になって、ヘテロシクリルを形成し；
各Ｒ９は水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびヒドロキシルから独立に選択され；
ｎは０、１、２、３、４、５または６であり；
ｐは０、１または２である）。
【請求項２】
環Ａが６員単環式アリール、５員ヘテロアリール、６員単環式ヘテロアリール、９員二環式ヘテロシクリルおよび１０員二環式ヘテロシクリルから選択される、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
環Ａがフェニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チオフェニル、１，２，４−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，３−トリアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、
【化２】
2021500337.tif 000233
から選択される、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
環Ａが、
【化３】
2021500337.tif 000234
（式中、
ＸはＯ、ＮおよびＳ（Ｏ）ｐから選択され；
ＹはＣＨまたはＮであり；
ＷはＣＨ、Ｎ、ＳおよびＯから選択され；
ＺはＣＨ、ＮＨ、ＳおよびＯから選択され；
ｐは０、１または２である）
から選択される、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
環Ａが、
【化４】
2021500337.tif 000235
（式中、
Ｒ１Ｂは水素、ハロ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｒ８）−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｐ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルおよび３〜６員ヘテロシクリルから選択され、
Ｒ１Ｂの任意の前記アルキル部分は、場合によりハロおよびシアノから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ１Ｂの任意の前記シクロアルキルまたは前記ヘテロシクリル部分は、場合によりハロ、−Ｎ（Ｒ８）２、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ヘテロシクリルおよびＣ１〜Ｃ４ハロアルキルから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
ｐは０、１または２であり；
Ｒ１Ｂが水素である場合、ｎ１は０、１、２、３、４、５または６であり、Ｒ１Ｂが水素でない場合、ｎ１は０、１、２、３、４または５である）
から選択される、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
環Ａが、
【化５】
2021500337.tif 000236
（式中、
Ｒ１ＢはＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−アリール、ヘテロシクリルおよび−Ｓ（Ｏ）ｐ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から選択され、
Ｒ１Ｂの任意の前記アルキル部分は、場合によりハロおよびシアノから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
ｐは０、１または２であり；
各Ｒ１はＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、ハロ、シアノおよび−Ｎ（Ｒ８）２から独立に選択され、
Ｒ１Ｂの任意の前記アルキル部分は、場合によりハロおよびシアノから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
各Ｒ８はＣ１〜Ｃ４アルキルから独立に選択され；
Ｒ１Ｂが水素である場合、ｎ１は０、１、２、３、４、５または６であり、Ｒ１Ｂが水素でない場合、ｎ１は０、１、２、３、４または５である）
から選択される、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
環Ａが、
【化６】
2021500337.tif 000237
（式中、
各Ｒ１はＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクリルおよびシアノから独立に選択され、
Ｒ１の任意の前記アルキル部分は、場合によりハロ、ヒドロキシルおよびシアノから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されている）
から選択される、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
環Ａが、
【化７】
2021500337.tif 000238
（式中、
各Ｒ１は、場合によりハロ、ヒドロキシルおよびシアノから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルから独立に選択される）
から選択される、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
環Ａが、
【化８】
2021500337.tif 000239
（式中、
各Ｒ１はＣ１〜Ｃ４アルキルおよびシアノから独立に選択され、
Ｒ１の任意の前記アルキル部分は、場合によりハロ、ヒドロキシルおよびシアノから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されている）
から選択される、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
各Ｒ１がテトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキセタニル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｓ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクリル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ハロ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−Ｏ−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｎ（ＣＨ３）２、Ｓｉ（ＣＨ３）２ＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３、−Ｏ−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−アリールおよびモルホリニルから独立に選択され、
前記ピペリジニルが、場合によりモルホリニル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４ハロアルキルから選択される１つの置換基またはハロから独立に選択される１つもしくは２つの置換基で置換されており；
前記テトラヒドロピラニルまたはテトラヒドロフラニルが、場合によりヒドロキシルおよび−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から選択される１つの置換基で置換されており；
前記オキセタニルが、場合によりＣ１〜Ｃ４アルキルから選択される１つの置換基で置換されており；
前記ピペラジニルが、場合によりＣ１〜Ｃ４アルキルおよびハロから選択される１つの置換基で置換されており；
Ｒ１の任意の前記シクロアルキル部分が、場合によりシアノおよびヒドロキシルから選択される１つの置換基で置換されており；
Ｒ１の任意の前記アルキル部分が、場合によりハロ、シアノ、ヒドロキシルおよび−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から独立に選択される１〜５個の置換基で置換されている、
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
Ｒ３がＣ１〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ３アルキレン）−（Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル）および−（Ｃ０〜Ｃ３アルキレン）−（単環式Ｏ−またはＳ−含有ヘテロシクリル）から選択され、
Ｒ３の任意の前記アルキルまたは前記アルキレン部分が、場合によりハロ、シアノおよびヒドロキシルから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ３の任意の前記カルボシクリルまたは前記ヘテロシクリル部分が、場合によりハロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｐ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−フェニル、−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）−フェニルおよびモルホリン−４−イルから独立に選択される１〜４個の置換基で置換されている、
請求項１から４または１０のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
表１の化合物のいずれか１つから選択される化合物。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物およびその薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの化合物と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１４】
それを必要とする対象の進行性骨化性線維異形成症を処置または改善する方法であって、請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物およびその薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの化合物の薬学的有効量を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１５】
前記対象が、Ｌ１９６Ｐ、ＰＦ１９７−８Ｌ、Ｒ２０２Ｉ、Ｒ２０６Ｈ、Ｑ２０７Ｅ、Ｒ２５８Ｓ、Ｒ２５８Ｇ、Ｇ３２８Ａ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８Ｅ、Ｇ３２８Ｒ、Ｇ３５６ＤおよびＲ３７５Ｐから選択される少なくとも１つのアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＡＬＫ２酵素がアミノ酸改変Ｒ２０６Ｈを有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
それを必要とする対象のびまん性内在性橋グリオーマを処置または改善する方法であって、請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物およびその薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの化合物の薬学的有効量を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１８】
前記対象が、Ｒ２０６Ｈ、Ｇ３２８Ｖ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８ＥおよびＧ３５６Ｄから選択される少なくとも１つのアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＡＬＫ２酵素がアミノ酸改変Ｒ２０６Ｈを有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
それを必要とする対象の異常なＡＬＫ２活性を阻害する方法であって、請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物およびその薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの化合物の薬学的有効量を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２１】
前記異常なＡＬＫ２活性が、Ｌ１９６Ｐ、ＰＦ１９７−８Ｌ、Ｒ２０２Ｉ、Ｒ２０６Ｈ、Ｑ２０７Ｅ、Ｒ２５８Ｓ、Ｒ２５８Ｇ、Ｇ３２８Ａ、Ｇ３２８Ｖ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８Ｅ、Ｇ３２８Ｒ、Ｇ３５６ＤおよびＲ３７５Ｐから選択される少なくとも１つのアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異によって引き起こされる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＡＬＫ２酵素がアミノ酸改変Ｒ２０６Ｈを有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象が進行性骨化性線維異形成症またはびまん性内在性橋グリオーマを患っている、請求項１４から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
それを必要とする対象の進行性骨化性線維異形成症を処置または改善する方法であって、請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物から選択される少なくとも１つの化合物の薬学的有効量を前記対象に投与するステップを含む方法に使用するための化合物。
【請求項２５】
前記対象が、Ｌ１９６Ｐ、ＰＦ１９７−８Ｌ、Ｒ２０２Ｉ、Ｒ２０６Ｈ、Ｑ２０７Ｅ、Ｒ２５８Ｓ、Ｒ２５８Ｇ、Ｇ３２８Ａ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８Ｅ、Ｇ３２８Ｒ、Ｇ３５６ＤおよびＲ３７５Ｐから選択される少なくとも１つのアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異を有する、請求項２４に記載の使用するための化合物。
【請求項２６】
前記ＡＬＫ２酵素がアミノ酸改変Ｒ２０６Ｈを有する、請求項２５に記載の使用するための化合物。
【請求項２７】
それを必要とする対象のびまん性内在性橋グリオーマを処置または改善する方法であって、請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物およびその薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの化合物の薬学的有効量を前記対象に投与するステップを含む方法に使用するための化合物。
【請求項２８】
前記対象が、Ｒ２０６Ｈ、Ｇ３２８Ｖ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８ＥおよびＧ３５６Ｄから選択される少なくとも１つのアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異を有する、請求項２７に記載の使用するための化合物。
【請求項２９】
前記ＡＬＫ２酵素がアミノ酸改変Ｒ２０６Ｈを有する、請求項２８に記載の使用するための化合物。
【請求項３０】
それを必要とする対象の異常なＡＬＫ２活性を阻害する方法であって、請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物およびその薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの化合物の薬学的有効量を前記対象に投与するステップを含む方法に使用するための化合物。
【請求項３１】
前記異常なＡＬＫ２活性が、Ｌ１９６Ｐ、ＰＦ１９７−８Ｌ、Ｒ２０２Ｉ、Ｒ２０６Ｈ、Ｑ２０７Ｅ、Ｒ２５８Ｓ、Ｒ２５８Ｇ、Ｇ３２８Ａ、Ｇ３２８Ｖ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８Ｅ、Ｇ３２８Ｒ、Ｇ３５６ＤおよびＲ３７５Ｐから選択される少なくとも１つのアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異によって引き起こされる、請求項３０に記載の使用するための化合物。
【請求項３２】
前記ＡＬＫ２酵素がアミノ酸改変Ｒ２０６Ｈを有する、請求項３１に記載の使用するための化合物。
【請求項３３】
前記対象が進行性骨化性線維異形成症またはびまん性内在性橋グリオーマを患っている、請求項３２に記載の使用するための化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]本開示は、アクチビン受容体様キナーゼ２（ＡＬＫ２）の阻害剤に関する。
[0002]本出願は、全体が本明細書に組み込まれる、２０１７年１０月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／５７４２００号に基づく優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
[0003]アクチビン受容体様キナーゼ２（ＡＬＫ２）は、アクチビンＡ受容体、Ｉ型遺伝子（ＡＣＶＲ１）によってコードされる。ＡＬＫ２は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）経路のセリン／スレオニンキナーゼである（Ｓｈｏｒｅら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２００６、３８：５２５〜２７）。これは、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を含む複合体に結合し、ＢＭＰシグナルの変換を担う。ＡＬＫ２の一定の突然変異は、キナーゼを構成的に活性にし、種々の疾患に関連している。進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）は、骨外性部位の進行性異所性骨化を特徴とする稀な重度に衰弱性の遺伝性障害である。この疾患を有する個体は、可動性の有意な減少および短命を経験する。現在の治療法は、この疾患を特徴付ける腫脹（再燃）を改善することに限定される。
【０００３】
[0004]ＦＯＰ患者は全員、ＡＣＶＲ１遺伝子にヘテロ接合性の活性化突然変異を有する。さらに、ＦＯＰ患者の大部分は、同じＡＬＫ２突然変異、Ｒ２０６Ｈを有する。ＡＬＫ２−Ｒ２０６Ｈを発現するトランスジェニックマウスは、後肢の第１指の奇形および炎症性浸潤および筋細胞アポトーシス、引き続いて軟骨内経路を通した異所性骨の形成を含む、ヒト疾患の重要な特徴を再現する（Ｃｈａｋｋａｌａｋａｌら、Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ．２０１２、２７（８）：１７４６〜１７５６）。筋肉で活性化ＡＬＫ２−Ｑ２０７Ｄ変異を発現し、ヒトＦＯＰの重要な特徴を表現型コピーする第２の操作されたマウス系統が開発されている。これらのマウスをＢＭＰ受容体１型キナーゼの阻害剤で処置すると、ＳＭＡＤシグナル伝達の阻害ならびに異所性骨化および関連する機能障害の減少が得られた（Ｆｕｋｕｄａら、Ｇｅｎｅｓｉｓ  ２００６、４４、１５９〜１６７）。ＦＯＰに関連付けられているＡＬＫ２の他の突然変異は、それだけに限らないが、Ｌ１９６Ｐ、ＰＦ１９７−８Ｌ、Ｒ２０２Ｉ、Ｒ２５８Ｓ、Ｒ２５８Ｇ、Ｇ３２８Ａ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８Ｅ、Ｇ３２８Ｒ、Ｇ３５６ＤおよびＲ３７５Ｐを含む（Ｋａｐｌａｎら、Ｈｕｍ  Ｍｕｔａｔ．２００９、３０（３）：３７９〜３９０；Ｇｒｅｇｓｏｎら、Ｂｏｎｅ  ２０１１、４８：６５４〜６５８；Ｋａｐｌａｎら、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｇｅｎｅｔ  ２０１５、１６７：２２６５〜２２７１；Ｐｅｔｒｉｅら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２００９、４（３）：ｅ５００５；Ｂｏｃｃｉａｒｄｉら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２００９、１７：３１１〜３１８；ＰａｃｉｆｉｃｉおよびＳｈｏｒｅ、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ＆Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２０１６、２７：９３〜１０４）。
【０００４】
[0005]一定の状況では、異所性骨化（ＨＯ）が、野生型ＡＬＫ２の人でも誘発され得る。これらの状況は、骨軟骨腫、大きな外科的介入、外傷（頭部もしくは爆風損傷など）、長期間の固定化または重症熱傷を含み得る。衰弱性ＨＯは、遺伝性多発性外骨腫などの疾患で生じ得る。ＡＬＫ２阻害剤は、潜在的にＦＯＰおよびＨＯによって引き起こされる他の状態を処置するための有効な治療法となり得るだろう。
【０００５】
[0006]びまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）は、有効な処置選択肢がない、稀な侵攻性の、典型的には致死性の小児脳幹がんである。その解剖学的位置およびびまん性の性質のために、ＤＩＰＧは外科手術によって処置され得ない。ＤＩＰＧは、もっぱら幼児に生じ、２年生存率はおよそ１０％未満である。脳幹内のその位置のために、ＤＩＰＧは脳神経に対する圧迫を引き起こし、複視、眼球運動の制御困難、咀嚼および／または嚥下困難、ならびに腕および／または脚の衰弱をもたらし、運動喪失および発話困難をもたらす。腫瘍が進行するにつれて、頭蓋の内側の圧力が増加し、重度の頭痛、悪心／嘔吐および疲労を引き起こす。他の多くの小児がんとは異なり、この数十年にわたってＤＩＰＧの処置改善における進歩が実質的にない。歴史的に、ＤＩＰＧの駆動因子に関する理解の欠如が、潜在的な新規の処置選択肢の特定を妨げてきた。結果として、ＤＩＰＧ処置の医学的必要性は極めて高い。近年のゲノム特性評価が、ＤＩＰＧ腫瘍のおよそ２５％が体細胞性ヘテロ接合性ＡＬＫ２活性化突然変異を有することを実証した。ＤＩＰＧに関連するＡＬＫ２の突然変異は、それだけに限らないが、Ｒ２０６Ｈ、Ｇ３２８Ｖ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８ＥおよびＧ３５６Ｄを含む（ＪｏｎｅｓおよびＢａｋｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１４、１４：６５１〜６６１）。
【０００６】
[0007]特に、ＤＩＰＧに見られるＡＬＫ２突然変異は、ＦＯＰに見られるものと重複し、（例えば、重複スクリーニングファンネル（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｆｕｎｎｅｌ）および化学努力を介した）２つの疾患のための阻害剤開発努力間の潜在的な相乗作用を示唆している。ＤＩＰＧのかなりの割合が活性化ＡＬＫ２突然変異を含んでいるという所見は、ＡＬＫ２阻害剤がＤＩＰＧ患者にとって臨床的に有益となり得ることを示唆している。
【０００７】
[0008]慢性疾患、炎症またはがんの貧血は、慢性炎症性、感染性または新生物疾患の状況で発症し得る。この形態の貧血では、炎症性サイトカインが、フェロポルチンを不活性化することによって鉄の生物学的利用能を負に調節するヘプシジンの肝臓発現を誘発する。ヘプシジンは、特に、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達によって転写的に調節される。ＡＬＫ２の阻害を通したＢＭＰリン酸化の阻害がＢＭＰ媒介シグナル伝達を調節し、よってヘプシジン発現を低下させることができる。ヘプシジン発現低下は、慢性疾患、炎症またはがんの貧血を処置するための有効な戦略となり得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
[0009]本開示は、ＡＬＫ２およびＡＬＫ２突然変異体、例えば本明細書に定義されるＡＬＫ２突然変異体の阻害剤、例えば式（Ｉ）の阻害剤ならびにその薬学的に許容される塩および組成物を提供する。本開示はさらに、本開示の化合物、ならびにその薬学的に許容される塩および組成物を使用して、細胞または患者のＡＬＫ２またはＡＬＫ２突然変異体の活性を阻害する方法を提供する。本開示はさらに、本開示の化合物ならびにその薬学的に許容される塩および組成物を使用して、異常なＡＬＫ２活性によって媒介される状態、例えば進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）、または異所性骨化、またはびまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）、または慢性疾患の貧血、または炎症の貧血、またはがんの貧血の少なくとも１つを患っている対象または患者を処置する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
[0010]一態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の少なくとも１つ：
【００１０】
【化１】
2021500337.tif 000003
【００１１】
（式中、環Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびｎの各々は本明細書に記載される通り定義される）
を特徴とする。
【００１２】
[0011]別の態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
[0012]別の態様では、本開示は、対象の進行性骨化性線維異形成症を処置または改善する方法を提供する。いくつかの実施形態では、前記方法が、治療上有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を前記対象に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、対象が、Ｌ１９６Ｐ、ＰＦ１９７−８Ｌ、Ｒ２０２Ｉ、Ｒ２０６Ｈ、Ｑ２０７Ｅ、Ｒ２５８Ｓ、Ｒ２５８Ｇ、Ｇ３２８Ａ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８Ｅ、Ｇ３２８Ｒ、Ｇ３５６ＤおよびＲ３７５Ｐから選択される少なくとも１つのアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異を有する。
【００１３】
[0013]別の態様では、本開示は、対象のびまん性内在性橋グリオーマを処置または改善する方法を提供する。いくつかの実施形態では、前記方法が、治療上有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を前記対象に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、対象が、Ｒ２０６Ｈ、Ｇ３２８Ｖ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８ＥおよびＧ３５６Ｄから選択される少なくとも１つのアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異を有する。
【００１４】
[0014]別の態様では、本開示は、対象の異常なＡＬＫ２活性を阻害する方法を提供する。いくつかの実施形態では、前記方法が、治療上有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を前記対象に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、対象が、Ｌ１９６Ｐ、ＰＦ１９７−８Ｌ、Ｒ２０２Ｉ、Ｒ２０６Ｈ、Ｑ２０７Ｅ、Ｒ２５８Ｓ、Ｒ２５８Ｇ、Ｇ３２８Ａ、Ｇ３２８Ｖ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８Ｅ、Ｇ３２８Ｒ、Ｇ３５６ＤおよびＲ３７５Ｐから選択される少なくとも１つのアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異を有する。
【００１５】
[0015]本明細書に記載される方法は、本開示の化合物による処置の前、間および／または後に種々の評価ステップをさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、本開示の化合物による処置の前、間および／または後に、本方法が、対象の異所性骨化を評価する、例えば可視化するステップをさらに含む。これは、分光分析、例えば核磁気共鳴に基づく分析、例えばＭＲＩ、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）、マイクロトモグラフィ（μＣＴ）、または組織学によって達成され得る。
【００１６】
[0016]いくつかの実施形態では、本方法は、例えば分光分析、例えば核磁気共鳴に基づく分析、例えばＭＲＩ、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）、マイクロトモグラフィ（μＣＴ）を使用して、または組織学によって、対象の異所性骨化の処置前またはベースラインレベルを評価するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法が、本開示の化合物を対象に投与するステップと；例えば分光分析、例えば核磁気共鳴に基づく分析、例えばＭＲＩ、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）、マイクロトモグラフィ（μＣＴ）を使用して、または組織学によって、異所性骨化の処置後レベルを評価するステップと；対象の異所性骨化の処置後レベルを異所性骨化の処置前またはベースラインレベルと比較するステップと；例えば分光分析、例えば核磁気共鳴に基づく分析、例えばＭＲＩ、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）、マイクロトモグラフィ（μＣＴ）を使用して、または組織学によって、処置を続けるかどうかを決定するステップとを含む。
【００１７】
[0017]いくつかの実施形態では、異所性骨化の前に浮腫、例えば持続性浮腫が先行する。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
[0018]本明細書で使用される場合、「患者」、「対象」、「個体」および「宿主」という用語は、異常なＡＬＫ２活性（すなわち、アミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異による異常なＡＬＫ２活性）または異常なＡＬＫ２生物活性に関連する疾患または障害を患っているまたは患っている疑いがあるヒトまたはヒト以外の動物を指す。
【００１９】
[0019]本明細書で使用される場合、このような疾患または障害を「処置する」、「処置」および「処置すること」は、本明細書に記載される疾患または障害の少なくとも１つの症状を改善することを指す。これらの用語は、進行性骨化性線維異形成症などの状態に関連して使用される場合、異所性骨成長の速度を制御すること；新たな骨の発達に関連する疼痛および炎症を軽減すること；患者の予想生存期間を延長すること；異所性骨成長病変のサイズまたは数を減少させること；可動性を維持または改善すること；新たな再燃を予防または処置すること；新たな異所性骨病変の発達を阻害すること；指機能および／または可動性を回復するために既存の異所性骨化を除去するための外科手術を可能にすること；生存を延長すること；無増悪生存期間を延長すること；進行までの時間を延長すること；ＦＯＰ関連傷害誘発浮腫を阻害すること、ならびに／あるいは生活の質を高めることの１つまたは複数を指す。びまん性内在性橋グリオーマなどの状態に関連して使用される場合、これらの用語は、グリオーマの成長を妨害すること、グリオーマの重量または体積を縮小させること、患者の予想生存期間を延長すること、グリア組織成長を阻害すること、グリア腫瘍量を減少させること、転移性病変のサイズまたは数を減少させること、新たな転移性病変の発達を阻害すること、生存を延長すること、無増悪生存期間を延長すること、進行までの時間を延長すること、ならびに／あるいは生活の質を高めることの１つまたは複数を指す。
【００２０】
[0020]本明細書で使用される場合、「治療効果」という用語は、本開示の化合物または組成物の投与によって引き起こされる、動物、特に哺乳動物、さらに特にヒトにおける有益な局所または全身効果を指す。「治療上有効量」および「薬学的有効量」という句は、互換的に使用され、合理的なベネフィット／リスク比で異常なＡＬＫ２活性に関連する疾患または状態を処置するのに有効な本開示の化合物または組成物の量を意味する。このような物質の治療上有効量は、例えば、処置される対象および疾患状態、対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、投与様式等に応じて変化し、当業者によって容易に決定され得る。
【００２１】
[0021]本明細書で使用される「脂肪族基」は、直鎖、分岐鎖または環状炭化水素基を指し、アルキル基、アルケニル基またはアルキニル基などの飽和および不飽和基を含む。
[0022]本明細書で使用される「アルケニル」は、少なくとも１つの二重結合を含む脂肪族基を指す。
【００２２】
[0023]「アルキレン」という用語は、アルキル基の二価基、例えば−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−を指す。
[0024]本明細書で使用される「アルキニル」は、２〜１２個の炭素原子を含み、１つまたは複数の三重結合を有することを特徴とする直鎖または分岐炭化水素鎖を指す。アルキニル基の例は、それだけに限らないが、エチニル、プロパルギルおよび３−ヘキシニルを含む。三重結合炭素の１つは、場合によりアルキニル置換基の結合点となり得る。
【００２３】
[0025]「アルキル」または「アルキル基」は、本明細書でそれぞれＣ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルおよびＣ１〜Ｃ６アルキルと呼ばれる、１〜１２個、１〜１０個または１〜６個の炭素原子の直鎖または分岐基などの飽和直鎖または分岐炭化水素の一価基を指す。アルキル基の例は、それだけに限らないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、２−メチル−１−プロピル、２−メチル−２−プロピル、２−メチル−１−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−３−ブチル、２，２−ジメチル−１−プロピル、２−メチル−１−ペンチル、３−メチル−１−ペンチル、４−メチル−１−ペンチル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、２，２−ジメチル−１−ブチル、３，３−ジメチル−１−ブチル、２−エチル−１−ブチル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチルおよびオクチルを含む。
【００２４】
[0026]「芳香族」は、環を指す場合、（４ｎ＋２π）個の電子を有する完全共役不飽和環を指し、通常、交互の二重結合と単結合を示す構造式を特徴とする。芳香環は、アリール環（例えば、ベンゼン）とヘテロアリール環（例えば、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を含む環）の両方を含む。
【００２５】
[0027]「アリール」は、少なくとも１つの環が芳香族である単環式、二環式または多環式炭化水素環系を指す。
[0028]「ハロ」は、任意のハロゲンの基、例えば、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを指す。
【００２６】
[0029]「炭素環式環系」は、各環が完全飽和である、または１つもしくは複数の不飽和単位を含むが、いずれの環も芳香族ではない単環式、二環式または多環式炭化水素環系を指す。
【００２７】
[0030]「カルボシクリル」は、炭素環式環系の一価基を指す。代表的なカルボシクリル基は、シクロアルキル基（例えば、シクロペンチル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなど）およびシクロアルケニル基（例えば、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロペンタジエニルなど）を含む。本明細書で使用される場合、カルボシクリルは、分子の残りとのｓｐ２結合点を有する部分飽和単環式、二環式または多環式炭化水素環系の一価基である。
【００２８】
[0031]「シクロアルキル」は、３〜１２個の炭素を有する環式、二環式、三環式または多環式非芳香族炭化水素基を指す。いずれの置換可能な環原子も、（例えば、１つまたは複数の置換基によって）置換されていてよい。シクロアルキル基は縮合環またはスピロ環を含むことができる。縮合環は、少なくとも２つの共通の（炭素）原子を共有する環である。シクロアルキル部分の例は、それだけに限らないが、シクロプロピル、シクロヘキシル、メチルシクロヘキシル、アダマンチルおよびノルボルニルを含む。
【００２９】
[0032]「ヘテロアルキル」は、分子の残りに結合したメチレン単位以外の１つのメチレン単位が−Ｏ−、−Ｓ−または−Ｎ（Ｒｄ）（式中、Ｒｄは以下に定義される）で置換されている一価直鎖または分岐アルキル鎖を指す。明快にするために、部分−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３はヘテロアルキルであるが、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ３は、ＮＨ基が分子の残りに結合しているのでヘテロアルキルではない。
【００３０】
[0033]「ヘテロアルキレン」は、ヘテロアルキル基の二価基を指す。「複素芳香環系」は、少なくとも１つの環が芳香族であると同時に少なくとも１つのヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を含み、いずれの他の環もヘテロシクリル（以下に定義される）ではない単環式、二環式または多環式環系を指す。一定の例では、芳香族であり、ヘテロ原子を含む環が、このような環内に１、２、３または４個の環ヘテロ原子を含む。
【００３１】
[0034]「ヘテロアリール」は、複素芳香環系の一価基を指す。代表的なヘテロアリール基は、（ｉ）各環がヘテロ原子を含み、芳香族である環系、例えばイミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、トリアゾリル、ピロリル、フラニル、チオフェニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、インドリジニル、プリニル、ナフチリジニルおよびプテリジニル；（ｉｉ）各環が芳香族またはカルボシクリルであり、少なくとも１つの芳香環がヘテロ原子を含み、少なくとも１つの他の環が炭化水素環である環系、または例えばインドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、ピリド［２，３−ｂ］−１，４−オキサジン−３（４Ｈ）−オン、５，６，７，８−テトラヒドロキノリニルおよび５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニル；および（ｉｉｉ）各環が芳香族またはカルボシクリルであり、少なくとも１つの芳香環が別の芳香環と橋頭ヘテロ原子を共有する環系、例えば４Ｈ−キノリジニルを含む。
【００３２】
[0035]「複素環式環系」は、少なくとも１つの環が飽和または部分不飽和（但し、芳香族でない）であり、環が少なくとも１つのヘテロ原子を含む単環式、二環式および多環式環系を指す。複素環式環系は、安定な構造をもたらす任意のヘテロ原子または炭素原子でそのペンダント基に結合され得、環原子のいずれも場合により置換されていてよい。複素環式環系は縮合環またはスピロ環であり得る。
【００３３】
[0036]「ヘテロシクリル」は、複素環式環系の一価基を指す。代表的なヘテロシクリルは、（ｉ）全ての環が非芳香族であり、少なくとも１つの環がヘテロ原子を含む環系、例えばテトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチエニル、ピロリジニル、ピロリドニル、ピペリジニル、ピロリニル、デカヒドロキノリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ジアゼピニル、オキサゼピニル、チアゼピニル、モルホリニルおよびキヌクリジニル；（ｉｉ）少なくとも１つの環が非芳香族であり、ヘテロ原子を含み、少なくとも１つの他の環が芳香炭素環である環系、例えば１，２，３，４−テトラヒドロキノリニル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリニル；および（ｉｉｉ）少なくとも１つの環が非芳香族であり、ヘテロ原子を含み、少なくとも１つの他の環が芳香族であり、ヘテロ原子を含む環系、例えば３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４，３−ｃ］ピリジンおよび１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリジンを含む。
【００３４】
[0037]「シアノ」は−ＣＮ基を指す。
[0038]「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は−ＯＨを指す。
[0039]本開示の一定の化合物は、特定の幾何異性体型または立体異性体型で存在し得る。本開示は、シス異性体とトランス異性体、Ｒ−エナンチオマーとＳ−エナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、これらのラセミ混合物、および本開示の範囲に入るこれらの他の混合物を含む全てのこのような化合物を包含する。追加の不斉炭素原子が、アルキル基などの置換基中に存在してもよい。全てのこのような異性体ならびにこれらの混合物は、本開示に含まれることが意図されている。よって、開示される化合物が立体化学を指定することなく命名されるまたは構造によって示され、１つまたは複数のキラル中心を有する場合、化合物の全ての可能な立体異性体ならびにこれらのエナンチオマー混合物を表すと理解される。開示される化合物が、各キラル中心で立体化学を指定して命名されるまたは構造によって示される場合、このようなキラル中心で指定される立体化学を有する化合物のみを表すと理解される。しかしながら、開示される化合物がいくつかのキラル中心で立体化学を指定するが、全てのキラル中心では指定しない場合、化合物の指定されていないキラル中心での全ての可能な立体異性体ならびにこれらのエナンチオマー混合物を表すと理解される。
【００３５】
[0040]例えば、本開示の化合物の特定のエナンチオマーが望まれる場合、不斉合成またはキラル補助剤による誘導化によって調製され得、得られたジアステレオマー混合物が分離され、補助基が切断されて純粋な所望のエナンチオマーが得られる。あるいは、分子がアミノなどの塩基性官能基またはカルボキシルなどの酸性官能基を含む場合、適切な光学活性酸または塩基によってジアステレオマー塩が形成され、引き続いて分別結晶または当技術分野で周知のクロマトグラフィー手段によってこのように形成されたジアステレオマーが分割され、その後、純粋なエナンチオマーが回収される。
【００３６】
[0041]組成物の「エナンチオマー過剰」または「％エナンチオマー過剰」は、以下に示される式を使用して計算され得る。以下に示される例では、組成物が９０％の一方のエナンチオマー、例えばＳエナンチオマーおよび１０％の他方のエナンチオマー、すなわちＲエナンチオマーを含む。
ｅｅ＝（９０−１０）／１００＝８０％
[0042]よって、９０％の一方のエナンチオマーおよび１０％の他方のエナンチオマーを含む組成物は、８０％のエナンチオマー過剰を有すると言われる。
【００３７】
[0043]本明細書に記載される化合物または組成物は、少なくとも５０％、７５％、９０％、９５％または９９％のエナンチオマー過剰の化合物の一方の形態、例えばＳ−エナンチオマーを含み得る。換言すれば、このような化合物または組成物は、Ｒエナンチオマーを超えるエナンチオマー過剰のＳエナンチオマーを含む。
【００３８】
[0044]本明細書に記載される化合物はまた、このような化合物を構成する原子の１つまたは複数で不自然な割合の原子同位体を含んでもよい。例えば、化合物は、例えば重水素（２Ｈ）、トリチウム（３Ｈ）、炭素−１３（１３Ｃ）または炭素−１４（１４Ｃ）などの放射性同位元素で放射標識され得る。本明細書に開示される化合物の全ての同位体変種が、放射性であろうとなかろうと、本開示の範囲に包含されることが意図される。さらに、本明細書に記載される化合物の全ての互変異性体型が、請求される開示の範囲内にあることが意図される。
【００３９】
[0045]化合物は、遊離塩基または塩として有用であり得る。代表的な塩は、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフタレート、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩およびラウリルスルホン酸塩などを含む（例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７）「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１〜１９参照）。
【００４０】
[0046]本明細書で使用される場合、本開示の化合物は、「場合により置換された」部分を含んでもよい。一般に、「置換された」という用語は、「場合により」という用語が先行しようとしまいと、指定される部分の１つまたは複数の水素が適切な置換基で置換されていることを意味する。特に指示しない限り、「場合により置換された」基は、基の各置換可能な位置で適切な置換基を有することができ、任意の所与の構造中の２つ以上の位置が指定される基から選択される２つ以上の置換基で置換され得る場合、置換基は各位置で同じであっても異なっていてもよい。本開示で想起される置換基の組み合わせは、好ましくは安定なまたは化学的に実行可能な化合物の形成をもたらすものである。本明細書で使用される「安定な」という用語は、本明細書に開示される目的の１つまたは複数のためのそれらの製造、検出および、一定の実施形態では、それらの回収、精製および使用を可能にする条件に供された場合に、実質的に変化しない化合物を指す。
【００４１】
[0047]場合により置換されたアルキル、アルキレン、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール基またはヘテロアリール基に適した置換基は、ハロゲン、＝Ｏ、−ＣＮ、−ＯＲｃ、−ＮＲｄＲｅ、−Ｓ（Ｏ）ｋＲｃ、−ＮＲｃＳ（Ｏ）２Ｒｃ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｄＲｅ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＣ（＝Ｓ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲｃ、−Ｏ（Ｃ＝Ｓ）Ｒｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＲｅ、−ＮＲｃＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲｄＲｅ、−ＮＲｃＣ（＝Ｓ）Ｒｃ、−ＮＲｃ（Ｃ＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲｄＲｅ、−ＮＲｃ（Ｃ＝Ｓ）ＯＲｃ、−Ｏ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲｄＲｅ、−ＮＲｃ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲｄＲｅ、−ＮＲｃ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲｄＲｅ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒｃ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、カルボシクリル、（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−カルボシクリル、（Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキレン）−カルボシクリル、ヘテロシクリル、（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−ヘテロシクリル、（Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキレン）−ヘテロシクリル、アリール、（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−アリール、（Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキレン）−アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−ヘテロアリール、または（Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキレン）−ヘテロアリールを含み、前記アルキル、アルキレン、ヘテロアルキル、ヘテロアルキレン、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールの各々は、場合によりハロゲン、ＯＲｃ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＲｃＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲｄＲｅ、−Ｓ（Ｏ）ｋＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＲｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルまたはＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルの１つまたは複数で置換されており、Ｒｃは水素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、カルボシクリル、（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−カルボシクリル、（Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキレン）−カルボシクリル、ヘテロシクリル、（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−ヘテロシクリル、（Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキレン）−ヘテロシクリル、アリール、（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−アリール、（Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキレン）−アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−ヘテロアリールまたは（Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキレン）−ヘテロアリールであり、これらの各々は、場合によりハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールの１つまたは複数で置換されており；ＲｄおよびＲｅはそれぞれ独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルから選択され；ｋは０、１または２である。請求される開示は、置換基の上記の例のリストによっていかなる方法でも限定されることを意図されていない。
【００４２】
[0048]一態様では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物：
【００４３】
【化２】
2021500337.tif 000004
【００４４】
またはその薬学的に許容される塩（式中、
環Ａは単環式アリール、単環式ヘテロアリール、キノリニルおよび二環式ヘテロシクリルから選択され、前記二環式ヘテロシクリルの１つの環のみが芳香族であり；
各Ｒ１はハロ、シアノ、オキソ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ８）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｒ８）２、−Ｎ（Ｒ８）−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｐ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキレン）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキレン）−Ｎ（Ｒ８）２、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキレン）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ８）２、−Ｓｉ（Ｒ９）（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）２、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル）、−Ｏ−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル）、−Ｏ−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル）、−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−アリール、−Ｏ−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−アリール、ヘテロシクリル、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクリル、−Ｏ−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−ヘテロシクリル、および−Ｏ−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクリルから独立に選択され、
Ｒ１の任意の前記アルキルまたは前記アルキレン部分は、場合によりハロ、シアノ、ヒドロキシルおよび−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ１の任意の前記カルボシクリル、前記アリールまたは前記ヘテロシクリル部分は、場合によりハロ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、シアノ、ヒドロキシル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ヘテロシクリル、−Ｎ（Ｒ８）２および−Ｎ（Ｒ８）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ２は結合または−Ｏ−であり；
Ｒ３はＣ１〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ６アルキレン）−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル）および−（Ｃ０〜Ｃ６アルキレン）−（単環式Ｏ−またはＳ−含有ヘテロシクリル）から選択され、
前記単環式ヘテロシクリルの炭素原子は前記単環式ヘテロシクリルの結合点であり；
Ｒ３の任意の前記アルキルまたは前記アルキレン部分は、場合によりハロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−（Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル）および−Ｓ（Ｏ）ｐ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ３の任意の前記カルボシクリルまたは前記ヘテロシクリル部分は、場合によりハロ、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｐ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−フェニル、−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）−フェニルおよびモルホリン−４−イルから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ４は水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ハロおよびシアノから選択され、
Ｒ４の任意の前記アルキル部分は、場合によりヒドロキシルで置換されており；
各Ｒ８は水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから独立に選択される、または２つのＲ８が、これらが結合している窒素原子と一緒になって、ヘテロシクリルを形成し；
各Ｒ９は水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびヒドロキシルから独立に選択され；
ｎは０、１、２、３、４、５または６であり；
ｐは０、１または２である）
を特徴とする。
【００４５】
[0049]いくつかの実施形態では、ｐが０である。いくつかの実施形態では、ｐが１である。いくつかの実施形態では、ｐが２である。いくつかの実施形態では、ｐが１または２である。
【００４６】
[0050]いくつかの実施形態では、ｎが０である。いくつかの実施形態では、ｎが１である。いくつかの実施形態では、ｎが２である。いくつかの実施形態では、ｎが３である。いくつかの実施形態では、ｎが４である。いくつかの実施形態では、ｎが５である。いくつかの実施形態では、ｎが６である。いくつかの実施形態では、ｎが１、２または３である。
【００４７】
[0051]いくつかの実施形態では、Ｒ４がシアノ、メチル、クロロ、ブロモ、フルオロ、ブタ−２−イニルまたはブタン−２−オニルである。
[0052]いくつかの実施形態では、環Ａが６員単環式アリール、５員ヘテロアリール、６員単環式ヘテロアリール、９員二環式ヘテロシクリルおよび１０員二環式ヘテロシクリルから選択される。
【００４８】
[0053]例えば、いくつかの実施形態では、環Ａがフェニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チオフェニル、１，２，４−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，３−トリアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、
【００４９】
【化３】
2021500337.tif 000005
【００５０】
から選択される。
[0054]例えば、いくつかの実施形態では、環Ａが、
【００５１】
【化４】
2021500337.tif 000006
【００５２】
（式中、
ＸはＯ、ＮおよびＳ（Ｏ）ｐから選択され；
ＹはＣＨまたはＮであり；
ＷはＣＨ、Ｎ、ＳおよびＯから選択され；
ＺはＣＨ、ＮＨ、ＳおよびＯから選択され；
ｐは０、１または２である）
から選択される。
【００５３】
[0055]いくつかの実施形態では、環Ａが、
【００５４】
【化５】
2021500337.tif 000007
【００５５】
（式中、
Ｒ１Ｂは水素、ハロ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｒ８）−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｐ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルおよび３〜６員ヘテロシクリルから選択され、
Ｒ１Ｂの任意の前記アルキル部分は、場合によりハロおよびシアノから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ１Ｂの任意の前記シクロアルキルまたは前記ヘテロシクリル部分は、場合によりハロ、−Ｎ（Ｒ８）２、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ヘテロシクリルおよびＣ１〜Ｃ４ハロアルキルから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
ｐは０、１または２であり；
Ｒ１Ｂが水素である場合、ｎ１は０、１、２、３、４、５または６であり、Ｒ１Ｂが水素でない場合、ｎ１は０、１、２、３、４または５である）
から選択される。
【００５６】
[0056]いくつかの実施形態では、環Ａが、
【００５７】
【化６】
2021500337.tif 000008
【００５８】
（式中、
Ｒ１ＢはＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−アリール、ヘテロシクリルおよび−Ｓ（Ｏ）ｐ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から選択され、
Ｒ１Ｂの任意の前記アルキル部分は、場合によりハロおよびシアノから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
ｐは０、１または２であり；
各Ｒ１はＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、ハロ、シアノおよび−Ｎ（Ｒ８）２から独立に選択され、
Ｒ１Ｂの任意の前記アルキル部分は、場合によりハロおよびシアノから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
各Ｒ８はＣ１〜Ｃ４アルキルから独立に選択され；
Ｒ１Ｂが水素である場合、ｎ１は０、１、２、３、４、５または６であり、Ｒ１Ｂが水素でない場合、ｎ１は０、１、２、３、４または５である）
から選択される。
【００５９】
[0057]いくつかの実施形態では、環Ａが、
【００６０】
【化７】
2021500337.tif 000009
【００６１】
から選択される。いくつかの非限定的な実施形態では、各Ｒ１がＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクリルおよびシアノから独立に選択され、Ｒ１の任意の前記アルキル部分が、場合によりハロ、ヒドロキシルおよびシアノから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されている。
【００６２】
[0058]いくつかの実施形態では、環Ａが、
【００６３】
【化８】
2021500337.tif 000010
【００６４】
から選択される。いくつかの非限定的な実施形態では、各Ｒ１が、場合によりハロ、ヒドロキシルおよびシアノから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルから独立に選択される。
【００６５】
[0059]いくつかの実施形態では、環Ａが、
【００６６】
【化９】
2021500337.tif 000011
【００６７】
から選択される。いくつかの非限定的な実施形態では、各Ｒ１がＣ１〜Ｃ４アルキルおよびシアノから独立に選択され、Ｒ１の任意の前記アルキル部分が、場合によりハロ、ヒドロキシルおよびシアノから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されている。
【００６８】
[0060]いくつかの実施形態では、各Ｒ１がテトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキセタニル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｓ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクリル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ハロ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−Ｏ−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｎ（ＣＨ３）２、Ｓｉ（ＣＨ３）２ＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３、−Ｏ−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−アリールおよびモルホリニルから独立に選択され、
前記ピペリジニルが、場合によりモルホリニル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４ハロアルキルまたはハロから独立に選択される１つもしくは複数の置換基から選択される１つの置換基で置換されており；
前記テトラヒドロピラニルまたはテトラヒドロフラニルが、場合によりヒドロキシルおよび−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から選択される１つの置換基で置換されており；
前記オキセタニルが、場合によりＣ１〜Ｃ４アルキルから選択される１つの置換基で置換されており；
前記ピペラジニルが、場合によりＣ１〜Ｃ４アルキルおよびハロから選択される１つの置換基で置換されており；
Ｒ１の任意の前記シクロアルキル部分が、場合によりシアノおよびヒドロキシルから選択される１つの置換基で置換されており；
Ｒ１の任意の前記アルキル部分が、場合によりハロ、シアノ、ヒドロキシルおよび−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から独立に選択される１〜５個の置換基で置換されている。
【００６９】
[0061]いくつかの実施形態では、Ｒ３がＣ１〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ３アルキレン）−（Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル）および−（Ｃ０〜Ｃ３アルキレン）−（単環式Ｏ−またはＳ−含有ヘテロシクリル）から選択され、
Ｒ３の任意の前記アルキルまたは前記アルキレン部分が、場合によりハロ、シアノおよびヒドロキシルから独立に選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ３の任意の前記カルボシクリルまたは前記ヘテロシクリル部分が、場合によりハロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｐ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、−Ｏ−フェニル、−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）−フェニルおよびモルホリン−４−イルから独立に選択される１〜４個の置換基で置換されている。
【００７０】
[0062]例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ３がシクロブチル、シクロプロピル、シクロヘキサニル、オキセタニル、チエタニル、テトラヒドロフラニルおよびテトラヒドロピラニルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ３が−（Ｃ１アルキレン）−テトラヒドロピラニル、−（Ｃ１アルキレン）−テトラヒドロフラニル、−（Ｃ１またはＣ２アルキレン）−オキセタニル、−（Ｃ１またはＣ２アルキレン）−シクロプロピル、−（Ｃ１またはＣ２アルキレン）−シクロブチルおよび−（Ｃ１またはＣ２アルキレン）−シクロヘキサニルから選択される。いくつかの実施形態では、前記シクロプロピル、前記シクロブチルまたは前記シクロヘキサニル基が、ハロ、ヒドロキシルおよびシアノから独立に選択される１〜４個の置換基によって独立に選択されている。
【００７１】
[0063]いくつかの実施形態では、Ｒ３がシクロブチル、シクロプロピルおよびシクロヘキサニルから選択され、前記シクロブチル、前記シクロプロピルまたは前記シクロヘキサニルが１〜４個のハロ基によって独立に置換されている。いくつかの実施形態では、Ｒ３がシクロブチル、シクロプロピルおよびシクロヘキサニルから選択され、前記シクロブチル、前記シクロプロピルまたは前記シクロヘキサニルが１つのシアノまたはヒドロキシル基によって置換されている。いくつかの実施形態では、Ｒ３がオキセタニルおよび−（Ｃ１アルキレン）−オキセタニルから選択され、Ｒ３の前記オキセタニル部分がＣ１〜Ｃ４アルキルで置換されている。
【００７２】
[0064]いくつかの実施形態では、Ｒ３がＣ１〜Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３が１〜４個のハロ基で独立に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである。
[0065]いくつかの実施形態では、化合物が、表１の化合物から選択される式（Ｉ）の化合物である。
【００７３】
[0066]別の態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物（例えば、表１の化合物）またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を特徴とする。
[0067]以下の表１は、本明細書に記載される化合物の構造を示す。
【００７４】
【表１−１】
2021500337.tif 000012
【００７５】
【表１−２】
2021500337.tif 000013
【００７６】
【表１−３】
2021500337.tif 000014
【００７７】
【表１−４】
2021500337.tif 000015
【００７８】
【表１−５】
2021500337.tif 000016
【００７９】
【表１−６】
2021500337.tif 000017
【００８０】
【表１−７】
2021500337.tif 000018
【００８１】
【表１−８】
2021500337.tif 000019
【００８２】
【表１−９】
2021500337.tif 000020
【００８３】
【表１−１０】
2021500337.tif 000021
【００８４】
【表１−１１】
2021500337.tif 000022
【００８５】
【表１−１２】
2021500337.tif 000023
【００８６】
【表１−１３】
2021500337.tif 000024
【００８７】
【表１−１４】
2021500337.tif 000025
【００８８】
【表１−１５】
2021500337.tif 000026
【００８９】
【表１−１６】
2021500337.tif 000027
【００９０】
【表１−１７】
2021500337.tif 000028
【００９１】
【表１−１８】
2021500337.tif 000029
【００９２】
【表１−１９】
2021500337.tif 000030
【００９３】
【表１−２０】
2021500337.tif 000031
【００９４】
【表１−２１】
2021500337.tif 000032
【００９５】
【表１−２２】
2021500337.tif 000033
【００９６】
【表１−２３】
2021500337.tif 000034
【００９７】
【表１−２４】
2021500337.tif 000035
【００９８】
【表１−２５】
2021500337.tif 000036
【００９９】
【表１−２６】
2021500337.tif 000037
【０１００】
【表１−２７】
2021500337.tif 000038
【０１０１】
【表１−２８】
2021500337.tif 000039
【０１０２】
【表１−２９】
2021500337.tif 000040
【０１０３】
【表１−３０】
2021500337.tif 000041
【０１０４】
【表１−３１】
2021500337.tif 000042
【０１０５】
【表１−３２】
2021500337.tif 000043
【０１０６】
【表１−３３】
2021500337.tif 000044
【０１０７】
【表１−３４】
2021500337.tif 000045
【０１０８】
【表１−３５】
2021500337.tif 000046
【０１０９】
【表１−３６】
2021500337.tif 000047
【０１１０】
【表１−３７】
2021500337.tif 000048
【０１１１】
【表１−３８】
2021500337.tif 000049
【０１１２】
【表１−３９】
2021500337.tif 000050
【０１１３】
【表１−４０】
2021500337.tif 000051
【０１１４】
【表１−４１】
2021500337.tif 000052
【０１１５】
【表１−４２】
2021500337.tif 000053
【０１１６】
【表１−４３】
2021500337.tif 000054
【０１１７】
【表１−４４】
2021500337.tif 000055
【０１１８】
【表１−４５】
2021500337.tif 000056
【０１１９】
【表１−４６】
2021500337.tif 000057
【０１２０】
【表１−４７】
2021500337.tif 000058
【０１２１】
【表１−４８】
2021500337.tif 000059
【０１２２】
【表１−４９】
2021500337.tif 000060
【０１２３】
【表１−５０】
2021500337.tif 000061
【０１２４】
【表１−５１】
2021500337.tif 000062
【０１２５】
【表１−５２】
2021500337.tif 000063
【０１２６】
【表１−５３】
2021500337.tif 000064
【０１２７】
【表１−５４】
2021500337.tif 000065
【０１２８】
【表１−５５】
2021500337.tif 000066
【０１２９】
【表１−５６】
2021500337.tif 000067
【０１３０】
【表１−５７】
2021500337.tif 000068
【０１３１】
【表１−５８】
2021500337.tif 000069
【０１３２】
【表１−５９】
2021500337.tif 000070
【０１３３】
【表１−６０】
2021500337.tif 000071
【０１３４】
【表１−６１】
2021500337.tif 000072
【０１３５】
【表１−６２】
2021500337.tif 000073
【０１３６】
【表１−６３】
2021500337.tif 000074
【０１３７】
【表１−６４】
2021500337.tif 000075
【０１３８】
【表１−６５】
2021500337.tif 000076
【０１３９】
【表１−６６】
2021500337.tif 000077
【０１４０】
【表１−６７】
2021500337.tif 000078
【０１４１】
【表１−６８】
2021500337.tif 000079
【０１４２】
【表１−６９】
2021500337.tif 000080
【０１４３】
【表１−７０】
2021500337.tif 000081
【０１４４】
【表１−７１】
2021500337.tif 000082
【０１４５】
【表１−７２】
2021500337.tif 000083
【０１４６】
【表１−７３】
2021500337.tif 000084
【０１４７】
【表１−７４】
2021500337.tif 000085
【０１４８】
【表１−７５】
2021500337.tif 000086
【０１４９】
【表１−７６】
2021500337.tif 000087
【０１５０】
【表１−７７】
2021500337.tif 000088
【０１５１】
【表１−７８】
2021500337.tif 000089
【０１５２】
【表１−７９】
2021500337.tif 000090
【０１５３】
【表１−８０】
2021500337.tif 000091
【０１５４】
【表１−８１】
2021500337.tif 000092
【０１５５】
【表１−８２】
2021500337.tif 000093
【０１５６】
【表１−８３】
2021500337.tif 000094
【０１５７】
【表１−８４】
2021500337.tif 000095
【０１５８】
【表１−８５】
2021500337.tif 000096
【０１５９】
【表１−８６】
2021500337.tif 000097
【０１６０】
【表１−８７】
2021500337.tif 000098
【０１６１】
【表１−８８】
2021500337.tif 000099
【０１６２】
【表１−８９】
2021500337.tif 000100
【０１６３】
【表１−９０】
2021500337.tif 000101
【０１６４】
【表１−９１】
2021500337.tif 000102
【０１６５】
【表１−９２】
2021500337.tif 000103
【０１６６】
【表１−９３】
2021500337.tif 000104
【０１６７】
【表１−９４】
2021500337.tif 000105
【０１６８】
【表１−９５】
2021500337.tif 000106
【０１６９】
【表１−９６】
2021500337.tif 000107
【０１７０】
【表１−９７】
2021500337.tif 000108
【０１７１】
【表１−９８】
2021500337.tif 000109
【０１７２】
【表１−９９】
2021500337.tif 000110
【０１７３】
【表１−１００】
2021500337.tif 000111
【０１７４】
【表１−１０１】
2021500337.tif 000112
【０１７５】
【表１−１０２】
2021500337.tif 000113
【０１７６】
【表１−１０３】
2021500337.tif 000114
【０１７７】
【表１−１０４】
2021500337.tif 000115
【０１７８】
【表１−１０５】
2021500337.tif 000116
【０１７９】
【表１−１０６】
2021500337.tif 000117
【０１８０】
【表１−１０７】
2021500337.tif 000118
【０１８１】
【表１−１０８】
2021500337.tif 000119
【０１８２】
【表１−１０９】
2021500337.tif 000120
【０１８３】
【表１−１１０】
2021500337.tif 000121
【０１８４】
【表１−１１１】
2021500337.tif 000122
【０１８５】
【表１−１１２】
2021500337.tif 000123
【０１８６】
【表１−１１３】
2021500337.tif 000124
【０１８７】
【表１−１１４】
2021500337.tif 000125
【０１８８】
【表１−１１５】
2021500337.tif 000126
【０１８９】
【表１−１１６】
2021500337.tif 000127
【０１９０】
【表１−１１７】
2021500337.tif 000128
【０１９１】
【表１−１１８】
2021500337.tif 000129
【０１９２】
【表１−１１９】
2021500337.tif 000130
【０１９３】
【表１−１２０】
2021500337.tif 000131
【０１９４】
【表１−１２１】
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【０１９５】
【表１−１２２】
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【０１９６】
【表１−１２３】
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【０１９７】
【表１−１２４】
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【０１９８】
【表１−１２５】
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【０１９９】
【表１−１２６】
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【０２００】
【表１−１２７】
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【０２０１】
【表１−１２８】
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【０２０２】
【表１−１２９】
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【０２０３】
【表１−１３０】
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【０２０４】
【表１−１３１】
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【０２０５】
【表１−１３２】
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【０２０６】
【表１−１３３】
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【０２０７】
【表１−１３４】
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【０２０８】
【表１−１３５】
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【０２０９】
【表１−１３６】
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【０２１０】
【表１−１３７】
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【０２１１】
【表１−１３８】
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【０２１２】
【表１−１３９】
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【０２１３】
【表１−１４０】
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【０２１４】
【表１−１４１】
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【０２１５】
【表１−１４２】
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【０２１６】
【表１−１４３】
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【０２１７】
【表１−１４４】
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【０２１８】
【表１−１４５】
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【０２１９】
【表１−１４６】
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【０２２０】
【表１−１４７】
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【０２２１】
【表１−１４８】
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【０２２２】
【表１−１４９】
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【０２２３】
【表１−１５０】
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【０２２４】
【表１−１５１】
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【０２２５】
【表１−１５２】
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【０２２６】
【表１−１５３】
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【０２２７】
【表１−１５４】
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【０２２８】
【表１−１５５】
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【０２２９】
【表１−１５６】
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【０２３０】
[0068]別の態様では、本開示は、対象の進行性骨化性線維異形成症を処置または改善する方法であって、薬学的有効量の本明細書に記載される化合物（例えば、表１の化合物）、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法を特徴とする。
【０２３１】
[0069]別の態様では、本開示は、対象のびまん性内在性橋グリオーマを処置または改善する方法であって、薬学的有効量の本明細書に記載される化合物（例えば、表１の化合物）、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法を特徴とする。
【０２３２】
[0070]別の態様では、本開示は、対象の異常なＡＬＫ２活性を阻害する方法であって、治療上有効量の本明細書に記載される化合物（例えば、表１の化合物）、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法を特徴とする。
【０２３３】
[0071]これらの化合物の薬学的に許容される塩も本明細書に記載される使用に企図される。
[0072]「薬学的に許容される塩」は、生物特性を保持し、毒性でなく、医薬使用にとって望ましくないこともない本開示の化合物の任意の塩を指す。薬学的に許容される塩は、種々の有機および無機対イオンから誘導され得る。このような塩は、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンチルプロピオン酸、グリコール酸、グルタル酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、ソルビン酸、アスコルビン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ピクリン酸、桂皮酸、マンデル酸、フタル酸、ラウリン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン二スルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、樟脳酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクタ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、安息香酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、シクロヘキシルスルファミン酸、キナ酸、ムコン酸および同様の酸などの有機もしくは無機酸によって形成される酸付加塩；あるいは（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが（ａ）金属イオン、例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類イオンもしくはアルミニウムイオン、またはアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属水酸化物、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、リチウム、亜鉛およびバリウム水酸化物、アンモニアによって置換される、または（ｂ）有機塩基、例えば脂肪族、脂環式もしくは芳香族有機アミン、例えばアンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、リジン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレン−ジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェニルアミン、Ｎ−メチルグルカミンピペラジン、トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、テトラメチルアンモニウムヒドロキシドなどと配位すると、形成される塩の１つまたは複数を含む。薬学的に許容される塩はさらに、単なる例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなどを含み、化合物が塩基性官能基を含む場合、非毒性有機または無機酸の塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、ベシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩などを含む。本開示による薬学的に許容される塩は少なくとも１つの塩を含み、２つ以上の塩の混合物であってもよい。
【０２３４】
[0073]本開示の医薬組成物は、１つまたは複数の本開示の化合物と、１つまたは複数の薬学的に許容される担体とを含む。「薬学的に許容される担体」という用語は、任意の本組成物またはその成分を保有するまたは輸送するのに関与する、液体もしくは固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材料などの薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクルを指す。各担体は、本組成物およびその成分と適合性であり、患者に有害ではないという意味で「許容される」ものでなければならない。薬学的に許容される担体として役立ち得る材料のいくつかの例は、（１）糖、例えばラクトース、グルコースおよびスクロース；（２）デンプン、例えばコーンスターチおよびジャガイモデンプン；（３）セルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；（４）粉末状トラガント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えばカカオ脂および坐剤ワックス；（９）油、例えば落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油；（１０）グリコール、例えばプロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えばオレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝化剤、例えば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）パイロジェンフリー水（ｐｙｒｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ  ｗａｔｅｒ）；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝液；および（２１）医薬製剤に使用される他の非毒性適合性物質を含む。
【０２３５】
[0074]本開示の組成物は、経口、非経口、吸入スプレーにより、局所、直腸、経鼻、頬側、経膣、または埋め込み型リザーバーを介して投与され得る。本明細書で使用される「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、関節滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内および頭蓋内注射または注入技術を含む。いくつかの実施形態では、本開示の組成物が、経口、腹腔内または静脈内投与される。本開示の組成物の滅菌注射形態は水性または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、適切な分散または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、当技術分野で既知の技術によって製剤化され得る。滅菌注射調製物はまた、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射溶液または懸濁液、例えば１，３−ブタンジオール中溶液としてであってもよい。使用され得る許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌不揮発性油が溶媒または懸濁化媒体として慣用的に使用される。
【０２３６】
[0075]この目的のために、合成モノ−およびジ−グリセリドを含む任意の無刺激不揮発性油が使用され得る。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸が注射剤の調製に有用であり、特にポリオキシエチル化バージョンのオリーブ油またはヒマシ油などの天然の薬学的に許容される油も同様である。これらの油溶液または懸濁液はまた、長鎖アルコール希釈剤または分散剤、例えば乳剤および懸濁剤を含む薬学的に許容される剤形の製剤に一般的に使用されるカルボキシメチルセルロースまたは同様の分散化剤も含有し得る。薬学的に許容される固体、液体または他の剤形の製造に一般的に使用される、他の一般的に使用される界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎ、Ｓｐａｎｓおよび他の乳化剤または生物学的利用能力増強剤も製剤化の目的に使用され得る。
【０２３７】
[0076]本開示の薬学的に許容される組成物は、それだけに限らないが、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤または液剤を含む任意の経口的に許容される剤形で経口投与され得る。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用される担体は、ラクトースおよびコーンスターチを含む。ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も典型的に添加される。カプセル形態での経口投与では、有用な希釈剤は、ラクトースおよび乾燥コーンスターチを含む。水性懸濁剤が経口使用に必要とされる場合、有効成分が乳化剤および懸濁化剤と組み合わせられる。所望であれば、一定の甘味剤、香味剤または着色剤も添加され得る。
【０２３８】
[0077]あるいは、本開示の薬学的に許容される組成物は、直腸投与用の坐剤の形態で投与され得る。これらは、薬剤を、室温で固体であるが、直腸温度で液体であり、そのため、直腸内で融解して薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤と混合することによって調製され得る。このような材料は、カカオ脂、蜜蝋およびポリエチレングリコールを含む。
【０２３９】
[0078]本開示の薬学的に許容される組成物はまた、特に処置の標的が、眼、皮膚または下部腸管の疾患を含む、局所施用によって容易にアクセス可能な領域または器官を含む場合に、局所投与され得る。適切な局所製剤は、これらの領域または器官の各々のために容易に調製される。下部腸管用の局所施用は、直腸坐剤製剤（上記参照）または適切な浣腸製剤で行われ得る。局所的経皮パッチも使用され得る。
【０２４０】
[0079]局所施用では、薬学的に許容される組成物が、１つまたは複数の担体に懸濁または溶解された活性成分を含有する適切な軟膏に製剤化され得る。本開示の化合物の局所投与用の担体は、それだけに限らないが、鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化蝋および水を含む。あるいは、薬学的に許容される組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される担体に懸濁または溶解された活性成分を含有する適切なローションまたはクリームに製剤化され得る。適切な担体は、それだけに限らないが、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セチルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水を含む。
【０２４１】
[0080]本開示の薬学的に許容される組成物はまた、鼻エアロゾルまたは吸入によって投与され得る。このような組成物は、医薬製剤の分野で周知の技術によって調製され、ベンジルアルコールもしくは他の適切な保存剤、生物学的利用能を増強するための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または他の慣用的な可溶化剤もしくは分散剤を使用して、生理食塩水中溶液として調製され得る。
【０２４２】
[0081]単一剤形の組成物を製造するために担体と組み合わせられ得る本開示の化合物の量は、処置される宿主、特定の投与様式、および単一剤形を投与する人によって決定される他の因子に応じて変化するだろう。
【０２４３】
[0082]薬学的に許容される塩および重水素化変種を含む、本開示の化合物の毒性および治療有効性は、細胞培養物または実験動物で標準的な医薬手順によって決定され得る。ＬＤ５０は集団の５０％に致死性の用量である。ＥＤ５０は集団の５０％で治療上有効な用量である。毒性効果と治療効果の用量比（ＬＤ５０／ＥＤ５０）が治療指数である。大きな治療指数を示す化合物が好ましい。毒性副作用を示す化合物も使用され得るが、非感染細胞への潜在的な損傷を最小化し、それによって、副作用を減少させるために、このような化合物を罹患組織の部位に標的化する送達システムを設計するよう留意すべきである。
【０２４４】
[0083]細胞培養アッセイおよび動物試験から得られるデータが、ヒトに使用するための範囲の投与量を製剤化するのに使用され得る。このような化合物の投与量は、ほとんどまたは全く毒性のないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にあり得る。投与量は、使用される剤形および利用される投与経路に応じてこの範囲内で変化し得る。いずれの化合物についても、治療上有効用量が、細胞培養アッセイから最初に推定され得る。用量は、細胞培養で決定されるＩＣ５０（すなわち、症状の半数最大阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するよう動物モデルで製剤化され得る。このような情報は、ヒトで有用な用量をより正確に決定するために使用され得る。血漿中のレベルは、例えば高速液体クロマトグラフィーによって測定され得る。
【０２４５】
[0084]任意の特定の患者のための具体的な投与量および処置レジメンは、それだけに限らないが、使用される具体的な化合物の活性、年齢、体重、健康全般、性別、食餌、投与時間、排出率、薬物組み合わせ、および処置する医師の判断、および処置される特定の疾患の重症度を含む種々の因子に依存することも理解されるべきである。組成物中の本開示の化合物の量も、組成物中の特定の化合物に依存する。
【０２４６】
[0085]ＡＬＫ２の突然変異は、キナーゼを不適切に活性にし、種々の疾患に関連している。本開示は、突然変異ＡＬＫ２遺伝子、例えばアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらす突然変異ＡＬＫ２遺伝子を阻害する化合物を提供する。別の態様では、本開示は、野生型（ＷＴ）ＡＬＫ２タンパク質とＡＬＫ２タンパク質の突然変異型の両方を阻害する化合物を提供する。本開示の目的のために、ＡＬＫ２についての配列情報は、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）ウェブページ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）上に、ＡＣＶＲ１アクチビンＡ受容体１型［ホモ・サピエンス（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ヒト）］；Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ  ＩＤ（ＮＣＢＩ）：９０で見出される。これはまた、ＦＯＰ；ＡＬＫ２；ＳＫＲ１；ＴＳＲＩ；ＡＣＴＲＩ；ＡＣＶＲ１Ａ；ＡＣＶＲＬＫ２としても知られており、前記配列情報は参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４７】
[0086]いくつかの実施形態では、本開示は、対象の異常なＡＬＫ２活性を阻害する方法であって、薬学的有効量の少なくとも１つの本明細書に記載される化合物または医薬組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、異常なＡＬＫ２活性が、Ｌ１９６Ｐ、ＰＦ１９７−８Ｌ、Ｒ２０２Ｉ、Ｒ２０６Ｈ、Ｑ２０７Ｅ、Ｒ２５８Ｓ、Ｒ２５８Ｇ、Ｇ３２８Ａ、Ｇ３２８Ｖ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８Ｅ、Ｇ３２８Ｒ、Ｇ３５６ＤおよびＲ３７５Ｐの１つまたは複数から選択されるアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ２酵素がアミノ酸改変Ｒ２０６Ｈを有する。
【０２４８】
[0087]ＡＬＫ２に対するその活性のために、本明細書に記載される化合物は、異常なＡＬＫ２活性に関連する状態を有する患者を処置するために使用され得る。いくつかの実施形態では、異常なＡＬＫ２活性に関連する状態が、進行性骨化性線維異形成症である。ＦＯＰ診断は、母趾の先天性奇形（外反母趾）の存在および軟組織の線維性小結節の形成に基づく。小結節は異所性骨に変化してもしなくてもよい。これらの軟組織病変は通常、最初に頭部、頸部、背中に認められる。ＦＯＰ患者のおよそ９７％が、ＡＣＶＲ１（Ａｌｋ２）遺伝子中に同じｃ．６１７Ｇ＞Ａ；Ｒ２０６Ｈ突然変異を有する。遺伝子検査がペンシルバニア大学（Ｋａｐｌａｎら、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  ２００８、１２１（５）：ｅ１２９５〜ｅ１３００）を通して利用可能である。
【０２４９】
[0088]他の一般的な先天性異常は、親指の奇形、短く広い大腿骨頸部、脛骨の骨軟骨種および頸椎の癒着椎間関節を含む。頸部の癒着椎間関節により、通常、幼児が這うよりもむしろ臀部で駆けだすようになる。ＦＯＰは一般的に誤診断され（およそ８０％；がんまたは線維腫症）、患者は頻繁に、疾患を悪化させ、恒久的障害を引き起こす生検などの不適切な診断手順に供される。
【０２５０】
[0089]いくつかの実施形態では、本開示は、対象の進行性骨化性線維異形成症を処置または改善する方法であって、薬学的有効量の本明細書に記載される化合物または医薬組成物を、それを必要とする前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【０２５１】
[0090]いくつかの実施形態では、異常なＡＬＫ２活性に関連する状態が進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）であり、対象が、Ｌ１９６Ｐ、ＰＦ１９７−８Ｌ、Ｒ２０２Ｉ、Ｒ２０６Ｈ、Ｑ２０７Ｅ、Ｒ２５８Ｓ、Ｒ２５８Ｇ、Ｇ３２８Ａ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８Ｅ、Ｇ３２８Ｒ、Ｇ３５６ＤおよびＲ３７５Ｐの１つまたは複数から選択されるアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ２酵素がアミノ酸改変Ｒ２０６Ｈを有する。
【０２５２】
[0091]本開示は、１つまたは複数の本明細書に記載される化合物または医薬組成物による処置のために患者を特定および／または診断する方法を含む。いくつかの実施形態では、本開示は、対象の異常なＡＬＫ２活性に関連する状態、例えばＦＯＢを検出する方法であって、（ａ）対象、例えばヒト患者から試料、例えば血漿を得るステップと；（ｂ）１つまたは複数の本明細書に記載されるＡＬＫ２遺伝子の突然変異が試料中に存在するかどうかを検出するステップとを含む方法を提供する。別の実施形態では、本開示は、対象の異常なＡＬＫ２活性に関連する状態を診断する方法であって、（ａ）対象から試料を得るステップと；（ｂ）本明細書に記載される検出方法を使用して、１つまたは複数の本明細書に記載されるＡＬＫ２遺伝子の突然変異が試料中に存在するかどうかを検出するステップと；（ｃ）１つまたは複数の突然変異の存在が検出された場合、状態を有する対象を診断するステップとを含む方法を提供する。突然変異を検出する方法は、それだけに限らないが、ハイブリダイゼーションに基づく方法、増幅に基づく方法、マイクロアレイ分析、フローサイトメトリー分析、ＤＮＡ配列決定、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）、プライマー伸長、ＰＣＲ、インサイツハイブリダイゼーション、ドットブロットおよびサザンブロットを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、対象の異常なＡＬＫ２活性に関連する状態を診断および処置する方法であって、（ａ）対象から試料を得るステップと；（ｂ）１つまたは複数の本明細書に記載されるＡＬＫ２遺伝子の突然変異が試料中に存在するかどうかを検出するステップと；（ｃ）試料中の１つまたは複数の突然変異が検出された場合、状態を有する対象を診断するステップと；（ｄ）有効量の１つまたは複数の本明細書に記載される化合物または医薬組成物を診断された患者に投与するステップとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、対象の異常なＡＬＫ２活性に関連する状態を処置する方法であって、ａ．前記対象が１つまたは複数の本明細書に記載されるＡＬＫ２遺伝子の突然変異を有するかどうかを決定する、決定したまたは情報を受け取るステップと；（ｂ）対象を、１つまたは複数の本明細書に記載される化合物または医薬組成物に反応すると特定するステップと；（ｃ）有効量の１つまたは複数の化合物または医薬組成物を対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【０２５３】
[0092]いくつかの実施形態では、異常なＡＬＫ２活性に関連する状態が脳腫瘍、例えばグリア系腫瘍である。いくつかの実施形態では、グリア系腫瘍がびまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）である。いくつかの実施形態では、本開示は、それを必要とする対象のびまん性内在性橋グリオーマを処置または改善する方法であって、薬学的有効量の本明細書に記載される化合物または医薬組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【０２５４】
[0093]いくつかの実施形態では、異常なＡＬＫ２活性に関連する状態がびまん性内在性橋グリオーマであり、対象が、Ｒ２０６Ｈ、Ｇ３２８Ｖ、Ｇ３２８Ｗ、Ｇ３２８ＥおよびＧ３５６Ｄから選択される少なくとも１つのアミノ酸改変を有するＡＬＫ２酵素の発現をもたらすＡＬＫ２遺伝子の突然変異を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ２酵素がアミノ酸改変Ｒ２０６Ｈを有する。
【０２５５】
[0094]いくつかの実施形態では、異常なＡＬＫ２活性に関連する状態が、炎症、がんまたは慢性疾患に関連する貧血である。
[0095]いくつかの実施形態では、異常なＡＬＫ２活性に関連する状態が、外傷−または外科手術−誘発性異所性骨化である。
【０２５６】
[0096]いくつかの実施形態では、本開示の化合物が、処置される疾患、例えばＦＯＰの処置に有用な第２の治療剤と同時投与（組み合わせ剤形の一部として、または投与の前、順次にもしくは後に投与される別個の剤形として）される。いくつかの実施形態では、本開示の化合物が、ステロイド（例えば、プレドニゾン）または他の抗アレルギー剤、例えばオマリズマブと同時投与される。
【０２５７】
[0097]いくつかの実施形態では、本開示の化合物が、ＲＡＲ−γアゴニストまたは処置される疾患、例えばＦＯＰを処置するためのアクチビンＡに対する抗体と同時投与される。いくつかの実施形態では、同時投与されるＲＡＲ−γアゴニストがパロバロテンである。いくつかの実施形態では、同時投与されるアクチビン−に対する抗体がＲＥＧＮ２４７７である。
【０２５８】
[0098]いくつかの実施形態では、本開示の化合物が、ＦＯＰの処置に有用な肥満細胞を標的とする治療薬と同時投与される。いくつかの実施形態では、本開示の化合物が、それだけに限らないが、ＫＩＴ阻害剤を含む肥満細胞阻害剤と同時投与される。いくつかの実施形態では、同時投与される肥満細胞阻害剤が、クロモリンナトリウム（もしくはクロモグリク酸ナトリウム）、ブレンツキシマブ（ＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標））、イブルチニブ（ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（登録商標））、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標））、抗ロイコトリエン薬（例えば、モンテルカスト（ＳＩＮＧＵＬＡＩＲ（登録商標））またはジレウトン（ＺＹＦＬＯ（登録商標）もしくはＺＹＦＬＯ  ＣＲ（登録商標））、およびＫＩＴ阻害剤（例えば、イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、ミドスタウリン（ＰＫＣ４１２Ａ）、マシチニブ（ＭＡＳＩＶＥＴ（登録商標）もしくはＫＩＮＡＶＥＴ（登録商標））、ＢＬＵ−２８５、ＤＣＣ−２６１８、ＰＬＸ９４８６）から選択される。
【０２５９】
[0099]その塩およびＮ−オキシドを含む本開示の化合物は、既知の有機合成技術を使用して調製され得、多数の可能な合成経路のいずれか、例えば以下のスキームのものによって合成され得る。本開示の化合物を調製するための反応は、有機合成の分野の当業者によって容易に選択され得る適切な溶媒中で行われ得る。適切な溶媒は、反応が行われる温度、例えば溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度に及び得る温度で出発材料（反応物質）、中間体または生成物と実質的に非反応性であり得る。所与の反応は、１つの溶媒または２つ以上の溶媒の混合物中で行われ得る。特定の反応ステップに応じて、特定の反応ステップに適した溶媒が当業者によって選択され得る。
【０２６０】
[00100]本開示の化合物の調製は、種々の化学基の保護および脱保護を伴うことができる。保護および脱保護の必要性、ならびに適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定され得る。保護基の化学は、例えば全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷｕｔｓおよびＧｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第４版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：ニュージャージー、（２００６）に見出され得る。
【０２６１】
[00101]反応は、当技術分野で既知の任意の適切な方法によって監視され得る。例えば、生成物形成は、分光手段、例えば核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法（例えば、１Ｈもしくは１３Ｃ）、赤外（ＩＲ）分光法、分光光度法（例えば、ＵＶ−可視）、質量分析（ＭＳ）によって、またはクロマトグラフィー法、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）もしくは薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって監視され得る。
【０２６２】
[00102]ＬＣ−ＭＳ／ＨＰＬＣ：特に指示しない限り、全ての液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）データ（試料は純度および同一性について分析された）は、以下の機器および移動相の１つを使用して得られた：
[00103]摂氏２２．４℃で、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｏｒｏｓｈｅｌ  １２０（ＥＣ−Ｃ１８、粒径２．７μｍ、寸法３．０×５０ｍｍ）を取り付けたＥＳ−ＡＰＩイオン化を利用するＡｇｉｌｅｎｔモデル６１２０（または１９５６）質量分析計を使用したＡｇｉｌｅｎｔモデル１２６０ＬＣシステム（または１２００モデル）。移動相は、溶媒、水中０．１％ギ酸とアセトニトリル中０．１％ギ酸の混合物からなっていた。４分間の過程にわたって、９５％水性／５％有機から５％水性／９５％有機移動相の一定勾配を利用した。流量は１ｍＬ／分で一定であった。
【０２６３】
[00104]ＬＣ−ＭＳ：塩基性移動相：Ａ：水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）Ｂ：ＡＣＮ；勾配：５％Ｂが１．２分以内に９５％Ｂまで増加、１．３分間９５％Ｂ、０．０１分以内に５％Ｂに戻る；流量：２ｍＬ／分；カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ、３．５μｍ、５０＊４．６ｍｍ；オーブン温度：５０℃。酸性移動相：Ａ：水（０．０１％ＴＦＡ）Ｂ：ＣＡＮ（０．０１％ＴＦＡ）；勾配：５％Ｂが１．２分以内に９５％Ｂまで増加、１．３分間９５％Ｂ、０．０１分以内に５％Ｂに戻る；流量：２ｍＬ／分；カラム：Ｓｕｎｆｉｒｅ、３．５μｍ、５０＊４．６ｍｍ；オーブン温度：５０℃
[00105]ＨＰＬＣ：塩基性移動相：Ａ：水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）Ｂ：ＡＣＮ；勾配：５％Ｂが１．２分以内に９５％Ｂまで増加、１．３分間９５％Ｂ、０．０１分以内に５％Ｂに戻る；流量：２ｍＬ／分；カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ、３．５μｍ、５０＊４．６ｍｍ；オーブン温度：５０℃。酸性移動相：Ａ：水（０．０１％ＴＦＡ）Ｂ：ＡＣＮ（０．０１％ＴＦＡ）；勾配：０分５％Ｂ、３分５％Ｂ、１０分９５％Ｂ、１５分９５％Ｂ；流量：１．２ｍＬ／分、カラム：Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ−Ｃ１８、４．６＊１５０ｍｍ、５μｍ；オーブン温度：４０℃
[00106]分取ＬＣ−ＭＳ方法１：分取ＨＰＬＣを、摂氏２２．４℃でＬｕｎａ  ５ｕ  Ｃ１８（２）１００Ａ、ＡＸＩＡ充填、２５０×２１．２ｍｍ逆相カラムを取り付けたＳｈｉｍａｄｚｕ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＶＰ（登録商標）分取システムで実施した。移動相は、溶媒、水中０．１％ギ酸とアセトニトリル中０．１％ギ酸の混合物からなっていた。２５分間の過程にわたって９５％水性／５％有機から５％水性／９５％有機移動相の一定勾配を利用した。流量は２０ｍＬ／分で一定であった。マイクロ波中で行われる反応をＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒマイクロ波ユニットで行った。
【０２６４】
[00107]分取ＬＣ−ＭＳ方法２：
[00108]ＭＳ方法：キャピラリー（ｋｖ）：３．５；コーン（ｖ）：２０；エクストラクタ（ｖ）３；ＲＦレンズ（ｖ）：０．５；ソース温度（℃）：１００；デソレーション温度（Ｄｅｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｔｅｍｐ）（℃）：４００
[00109]入口方法：溶媒：ＣＨ３ＯＨ、Ｈ２Ｏ、０．００１ＴＦＡ／５〜９５ＮＨ３／ＣＡＮ／５〜９５ＴＦＡ／ＣＡＮ；勾配：１０〜７０；実行時間：３．５分；流量：６０ｍＬ／分
[00110]分画方法：分画トリガー：質量；分割／コレクター減衰（秒）：１０．５：最大管充填（％）８５；陽イオン検出−分。強度閾値（ｍｉｔ）：２００００００；カラムｉｄ：Ｘ−ｂｒｉｄｇｅ、Ｃ１８、２０ｍｍ＊５０ｍｍ、１０μｍ
[00111]キラルＨＰＬＣ：キラル混合物を分割するための分取ＨＰＬＣを、以下に列挙されるカラムの１つおよび一般的な条件のセットを使用して以下の機器で実施した。
【０２６５】
[00112]ＳＦＣ詳細：
[00113]機器：ＳＦＣ−８０（Ｔｈａｒ、Ｗａｔｅｒｓ）またはＳＦＣ−２００（Ｔｈａｒ、Ｗａｔｅｒｓ）
カラム：ＡＤ−Ｈ  ２０＊２５０ｍｍ、５μｍ（Ｄａｉｃｅｌ）
カラム温度：３５℃
移動相：ＣＯ２／メタノール（０．１％ＮＨ４ＯＨ）＝４０／６０〜９０／１０
流量：８０〜１８０ｇ／分
背圧：１００ｂａｒ
検出波長：２１４〜３６０ｎｍ
[00114]ＨＰＬＣ詳細：
[00115]機器：Ｇｉｌｓｏｎ−２８１
カラム：ＡＤ−Ｈ  ２０＊２５０、１０μｍ（Ｄａｉｃｅｌ）
移動相：ヘキサン（０．１％ＤＥＡ）：ＥｔＯＨ（０．１％ＤＥＡ）＝０／１００〜１００／０
[00116]カラム温度：４０℃
注入：１ｍＬ
検出波長：２１４〜３６０ｎｍ
[00117]カラム
【０２６６】
【表２】
2021500337.tif 000168
【０２６７】
[00118]シリカゲルクロマトグラフィー：シリカゲルクロマトグラフィーをＴｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ  ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）ＲｆユニットまたはＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒユニットで実施した。
【０２６８】
[00119]プロトンＮＭＲ：特に指示しない限り、全ての１Ｈ  ＮＭＲスペクトルをＶａｒｉａｎ  ４００ＭＨｚ  Ｕｎｉｔｙ  Ｉｎｏｖａ  ４００ＭＨｚ  ＮＭＲ機器（取得時間＝１秒遅延で３．５秒；１６〜６４回スキャン）、Ｂｒｕｋｅｒ、Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ  ５００ＭＨｚ  ＵｌｔｒａＳｈｉｅｌｄ−ＰｌｕｓデジタルＮＭＲ分光計、またはＢｒｕｋｅｒ、ＡＶＡＮＣＥ  ＩＩＩ  ４００ＭＨｚ  ＵｌｔｒａＳｈｉｅｌｄ−ＰｌｕｓデジタルＮＭＲ分光計で得た。特徴付ける場合、全てのプロトンを、残留ＤＭＳＯ（２．５０ｐｐｍ）に対する百万分率（ｐｐｍ）としてＤＭＳＯ−ｄ６溶媒中で報告した。
【実施例】
【０２６９】
[00120]以下の実施例は、例示的であることを意図しており、限定することを何ら意図していない。
[00121]以下のスキームは、本発明の化合物の調製に関する一般的なガイダンスを提供することを意図している。当業者であれば、スキームに示される調製が、本発明の種々の化合物を調製するために、有機化学の一般的な知識を使用して修正または最適化され得ることを理解するだろう。
合成プロトコルＡ
【０２７０】
【化１０】
2021500337.tif 000169
【０２７１】
[00122]ピロロピリジンＡをスルホニル基で保護して中間体Ｂを得ることができる。中間体Ｂを、置換反応を介してピペラジンＣで官能化して中間体Ｄを得ることができる。中間体ＤをＢｏｃなどの基で保護し（中間体Ｅ）、次いで、特異的にハロゲン化して中間体Ｆを得ることができる。中間体Ｆがハロゲン−金属交換反応を受けて、ボロネートまたはスズ含有中間体としての中間体Ｇを得ることができる。中間体Ｆを、パラジウム媒介カップリング反応、例えばＳｕｚｕｋｉ、ＳｔｉｌｌｅまたはＮｅｇｉｓｈｉカップリングを介してボロネート、ボロネートエステル、トリアルキルスズまたはアルキル亜鉛試薬とカップリングして中間体Ｈを得ることもできる。これらの変換を中間体Ｇが受けて中間体Ｈを得ることも可能である。Ｈの脱保護（脱Ｂｏｃ）、引き続いてアミド結合形成またはカルバメート形成などのキャッピング反応によって、中間体Ｉが得られる。最終化合物Ｊは、中間体Ｉの脱保護（スルホニル基）によって達成され得る。以下に示されるように、表１、２および３の化合物２０、２６２および４１０を、合成プロトコルＡを使用して調製した。
【０２７２】
実施例１．ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−ヨード−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０２７３】
【化１１】
2021500337.tif 000170
【０２７４】
[00123]ステップ１．４−クロロ−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成
【０２７５】
【化１２】
2021500337.tif 000171
【０２７６】
化合物Ａ（５０ｇ、０．３２７６ｍｏｌ、１当量）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）５００ｍＬ、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（５０ｇ、０．４９４１ｍｏｌ、１．５当量）およびジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（４ｇ、０．０３２７ｍｏｌ、０．１当量）を２０℃で、１Ｌ丸底（ＲＢＦ）フラスコ中で合わせた。次いで、混合物を１０℃に冷却し、引き続いて１０〜２０℃でＢｓＣｌ（７０ｇ、０．３９６３ｍｏｌ、１．２当量）を滴加した。２０℃で１８時間攪拌した後、ＬＣ−ＭＳは、Ａ／ＢｓＣｌ／Ｂ＝０／８／８４の比を示した。反応混合物を水２５０ｍＬに希釈した。有機相を分離し、飽和Ｎａ２ＣＯ３  ２５０ｍＬ、水２５０ｍＬおよびブライン２５０ｍＬで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、石油エーテルでスラリー化して、標記生成物８３ｇ（純度９９％、収率８６％）を得た。
【０２７７】
[00124]ステップ２および３．ｔｅｒｔ−ブチル４−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０２７８】
【化１３】
2021500337.tif 000172
【０２７９】
[00125]化合物Ｂ（２７ｇ、０．０６３１ｍｏｌ、１．０当量）、化合物Ｃ（２４ｇ、０．２７８６ｍｏｌ、３．０当量）およびＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）１９０ｍＬを、ＲＢＦ５００ｍＬに１５℃で添加した。混合物を１４０℃に加熱し、３時間攪拌した。ＬＣ−ＭＳは、Ｂ／Ｄの比が０／８３であることを示した。混合物を１５℃に冷却し、さらに１８時間攪拌した。次いで、不溶性固体を濾別し、Ｂｏｃ２Ｏ（８５ｇ、０．３８９５ｍｏｌ、４．２当量）を１０〜２５℃で滴加した。混合物を１５℃で１８時間攪拌した；ＬＳ−ＭＳは、Ｄ／Ｅ比が０／８１であることを示した。次いで、酢酸エチル５４０ｍＬを混合物に添加し、引き続いて濾過した。濾液を水２００ｍＬで３回洗浄し、得られた有機相をＮａＨＳＯ４水溶液（水１５０ｍＬ中１２．５ｇ）および水（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をＤＣＭ１５０ｍＬで溶解し、引き続いて３０分間にわたって１５℃で石油エーテル７５０ｍＬを滴加した。次いで、溶液を１５℃で３０分間攪拌して沈殿を形成した。白色固体としての標記生成物２１ｇが濾過後に得られた（純度９９％、収率５１％（２段階））。
【０２８０】
[00126]ステップ４．ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−ヨード−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０２８１】
【化１４】
2021500337.tif 000173
【０２８２】
[00127]リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）（２Ｍ、６２ｍＬ、１２４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（６００ｍＬ）中ｔｅｒｔ−ブチル４−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５０ｇ、１１３ｍｍｏｌ）の混合物に−７８℃で滴加した。混合物を−７８℃で１時間攪拌した。ＴＨＦ（１００ｍＬ）中Ｉ２（３１ｇ、１２２ｍｍｏｌ）を−７８℃で添加し、混合物を−７８℃で１時間攪拌した。混合物を０℃に加温し、０．５時間攪拌した。反応物をＮａ２Ｓ２Ｏ３水溶液およびＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）によって精製して、標記生成物（４５ｇ、７０％）を淡黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２２Ｈ２５ＩＮ４Ｏ４Ｓ必要値：５６８、実測値：５６９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２８３】
実施例２．オキセタン−３−イル４−（２−（４−（トリフルオロメチル）チアゾール−２−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０２８４】
【化１５】
2021500337.tif 000174
【０２８５】
[00128]ステップ１．オキセタン−３−イル４−（１−（フェニルスルホニル）−２−（トリブチルスタンニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０２８６】
【化１６】
2021500337.tif 000175
【０２８７】
[00129]ｎ−ＢｕＬｉ（２１．２ｍｍｏｌ、２．５Ｍ）を、オキセタン−３−イル４−（２−ヨード−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１０ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）中溶液に−７８℃で添加した。−７８℃で１時間攪拌した後、Ｂｕ３ＳｎＣｌ（６．９ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を−７８℃でさらに１時間攪拌し、次いで、室温で一晩攪拌した。反応混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：３）によって精製して、標記生成物（５ｇ、９２％）、収率：３９％を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ３３Ｈ４８Ｎ４Ｏ５ＳＳｎ必要値：７３１、実測値７３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２８８】
[00130]ステップ２．オキセタン−３−イル４−（１−（フェニルスルホニル）−２−（４−（トリフルオロメチル）チアゾール−２−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０２８９】
【化１７】
2021500337.tif 000176
【０２９０】
[00131]トルエン（１０ｍＬ）中オキセタン−３−イル４−（１−（フェニルスルホニル）−２−（トリブチルスタンニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２５０ｍｇ、３４２μｍｏｌ）、２−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）チアゾール（１２０ｍｇ、５１３μｍｏｌ）、ＣｕＩ（６５ｍｇ、３４２ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（１９７ｍｇ、１７１μｍｏｌ）の混合物をＮ２で脱気し、次いで、Ｎ２下１００℃で１６時間攪拌した。混合物を室温に冷却し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝３：１０）によって直接精製して、標記生成物（７０ｍｇ、収率３５％）を淡黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２５Ｈ２２Ｆ３Ｎ５Ｏ５Ｓ２必要値：５９３、実測値：５９４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２９１】
[00132]ステップ３．オキセタン−３−イル４−（２−（４−（トリフルオロメチル）チアゾール−２−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０２９２】
【化１８】
2021500337.tif 000177
【０２９３】
[00133]テトラブチルアンモニウムフルオリド水和物（ＴＢＡＦ）（２ｍＬ、１Ｍ、２．０ｍｍｏｌ）を、オキセタン−３−イル４−（１−（フェニルスルホニル）−２−（４−（トリフルオロメチル）チアゾール−２−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（７０ｍｇ、１１８μｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に添加した。反応混合物を６０℃で６時間攪拌した。ＬＣ−ＭＳは反応が完了していることを示した。混合物をＤＣＭで希釈し、水およびブラインで洗浄し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラム（ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：１５）および分取ＨＰＬＣによって直接精製して、標記生成物（１３．９ｍｇ、収率２６％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ１９Ｈ１８Ｆ３Ｎ５Ｏ３Ｓ必要値：４５３、実測値４５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２９４】
実施例３．２，２−ジフルオロシクロブチル４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０２９５】
【化１９】
2021500337.tif 000178
【０２９６】
[00134]ステップ１．２−（ベンジルオキシ）シクロブタノンの合成
【０２９７】
【化２０】
2021500337.tif 000179
【０２９８】
[00135]１，２−ビス（（トリメチルシリル）オキシ）シクロブタ−１−エン（１ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）を、フェニルメタノール（５６１ｍｇ、５．１９ｍｍｏｌ）の４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン（２ｍＬ）中溶液に室温で添加した。反応物を４時間８０℃に加熱した。濃縮した後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１）によって精製して、標記生成物（０．３ｇ、３９％）を無色油として得た。
【０２９９】
[00136]ステップ２．（（２，２−ジフルオロシクロブトキシ）メチル）ベンゼンの合成
【０３００】
【化２１】
2021500337.tif 000180
【０３０１】
[00137]ＤＣＭ中２−（ベンジルオキシ）シクロブタノン（０．３ｇ、１．７０ｍｍｏｌ）の混合物を０℃に冷却し、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（ＤＡＳＴ）（５４８ｍｇ、３．４０ｍｍｏｌ）を添加した。室温で４時間攪拌した後、反応混合物をＤＣＭで希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄した。有機抽出物を乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１）によって精製して、標記生成物（６０ｍｇ、１８％）を無色油として得た。
【０３０２】
[00138]ステップ３．２，２−ジフルオロシクロブタノールの合成
【０３０３】
【化２２】
2021500337.tif 000181
【０３０４】
[00139]（（２，２−ジフルオロシクロブトキシ）メチル）ベンゼン（６０ｍｇ、０．３０２７ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）のジエチルエーテル中懸濁液混合物を、Ｈ２雰囲気下で１５時間攪拌した。濾過した後、残渣を次のステップにエーテルの溶液として使用した。
【０３０５】
[00140]ステップ４．２，２−ジフルオロシクロブチル１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシレートの合成
【０３０６】
【化２３】
2021500337.tif 000182
【０３０７】
[00141]ＤＣＭ中２，２−ジフルオロシクロブタノール（上記エーテル溶液、０．３０２７ｍｍｏｌと仮定）およびＣＤＩ（５０ｍｇ、０．３０５ｍｍｏｌ）の混合物を室温で４時間攪拌した。得られた溶液をさらに精製することなく次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ８Ｈ８Ｆ２Ｎ２Ｏ２必要値：２０２、実測値：２０３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３０８】
[00142]ステップ５．２，２−ジフルオロシクロブチル４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３０９】
【化２４】
2021500337.tif 000183
【０３１０】
[00143]トリエチルアミン（６０．０ｍｇ、０．５９３４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ中２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン塩酸塩（９４．５ｍｇ、０．２９６７ｍｍｏｌ）の混合物に添加し、室温で１０分間攪拌し、引き続いて２，２−ジフルオロシクロブチル１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシレート（６０ｍｇ、０．２９６７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ中溶液を添加した。室温で１５時間攪拌した後、反応混合物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄した。有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製し、次いで、分取ＨＰＬＣによって精製して、標記生成物（１４．４ｍｇ、１２％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２０Ｈ２２Ｆ２Ｎ６Ｏ２必要値：４１６、実測値４１７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３１１】
実施例４．シクロブチル（４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）メタノンの合成
【０３１２】
【化２５】
2021500337.tif 000184
【０３１３】
[00144]ステップ１．２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（フェニルスルホニル）−４−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成
【０３１４】
【化２６】
2021500337.tif 000185
【０３１５】
[00145]化合物１（２００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）にＭｅＯＨ／ＨＣｌ（５ｍｌ）を添加した。混合物を３０℃で５時間攪拌した。混合物を真空下で濃縮して標的化合物を得た。
【０３１６】
[00146]ステップ２．シクロブチル（４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）メタノンの合成
【０３１７】
【化２７】
2021500337.tif 000186
【０３１８】
[00147]シクロブタンカルボン酸（１４ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）（６１ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４９ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中化合物２（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の混合物に添加した。混合物を２５℃で５時間攪拌した。混合物を次のステップに直接使用した。
【０３１９】
[00148]ステップ３．シクロブチル（４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）メタノンの合成
【０３２０】
【化２８】
2021500337.tif 000187
【０３２１】
[00149]ＫＯＨ（１０当量）を、ＭｅＯＨ２ｍＬ中化合物３（１．０当量）に添加した。混合物を室温で３時間攪拌した。酢酸を混合物に添加してｐＨを７に調整し、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製して標的化合物を得た。
合成プロトコルＢ
【０３２２】
【化２９】
2021500337.tif 000188
【０３２３】
[00150]中間体Ｈを、合成プロトコルＡに記載される方法を使用して調製した。中間体Ｈをハロゲン化、ハロゲン化に続いてパラジウム媒介カップリング反応（例えば、Ｓｕｚｕｋｉ、Ｓｔｉｌｌｅ、ＳｏｎｏｇａｓｈｉｒａまたはＮｅｇｉｓｈｉカップリング）またはメタレーションに続いて求電子試薬との反応を介してさらに官能化して中間体Ｋを得ることができる。Ｋの脱保護（脱Ｂｏｃ）、引き続いてキャッピング反応、例えばアミド結合形成またはカルバメート形成によって、中間体Ｌが得られる。最終化合物Ｍを、中間体Ｌの脱保護（スルホニル基）によって達成することができる。以下に示されるように、表１、２および３の化合物１３２、２５８および２６７を、合成プロトコルＢを使用して調製した。
【０３２４】
実施例５．（１ｒ，３ｒ）−３−フルオロシクロブチル４−（３−フルオロ−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３２５】
【化３０】
2021500337.tif 000189
【０３２６】
[00151]ステップ１．（ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−フルオロ−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３２７】
【化３１】
2021500337.tif 000190
【０３２８】
[00152]Ｎ−フルオロ−Ｎ−（フェニルスルホニル）ベンゼンスルホンアミド（８２．４ｍｇ、０．２６１４ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１００ｍｇ、０．２６１４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ中溶液に添加した。室温で１５時間攪拌した後、反応混合物をＤＣＭで希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）によって精製して、標記生成物（３０ｍｇ、純度４０％、１２％）を黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２０Ｈ２５ＦＮ６Ｏ２必要値：４００、実測値４０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３２９】
[00153]ステップ２．３−フルオロ−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成
【０３３０】
【化３２】
2021500337.tif 000191
【０３３１】
[00154]４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサンを、ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−フルオロ−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（６０ｍｇ、０．１４９８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ中溶液に添加した。室温で３時間攪拌した後、反応混合物を濃縮して、標記生成物（粗ＨＣｌ塩、４５ｍｇ、定量的）を黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ１５Ｈ１７ＦＮ６必要値：３００、実測値３０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３３２】
[00155]ステップ３．（１ｒ，３ｒ）−３−フルオロシクロブチル４−（３−フルオロ−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３３３】
【化３３】
2021500337.tif 000192
【０３３４】
[00156]ＣＤＩ（７２．８ｍｇ、０．４４９４ｍｍｏｌ）を、（１ｒ，３ｒ）−３−フルオロシクロブタノール（４０．４ｍｇ、０．４４９４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に添加した。室温で６時間攪拌した後、得られた溶液を、ＤＣＭ中３−フルオロ−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（４５ｍｇ、０．１４９８ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（３０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の混合物に添加した。室温でさらに１５時間攪拌した後、反応混合物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄した。有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた沈殿をＭｅＯＨで洗浄して、標記生成物（３４．８ｍｇ、５６％）を黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２０Ｈ２２Ｆ２Ｎ６Ｏ２必要値：４１６、実測値４１７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３３５】
実施例６．エチル４−（３−シアノ−２−（１−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３３６】
【化３４】
2021500337.tif 000193
【０３３７】
[00157]ステップ１．ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（１−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３３８】
【化３５】
2021500337.tif 000194
【０３３９】
[00158]ＴＨＦ（２０ｍＬ）／Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）中１−（ジフルオロメチル）−４−ヨード−１Ｈ−ピラゾール（２００ｍｇ、８１９μｍｏｌ）および（４−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−イル）ボロン酸（３９０ｍｇ、８１９μｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（２５９ｍｇ、２．４５ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（６０ｍｇ、８２μｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下７５℃で１時間攪拌した。ＬＣ−ＭＳは反応が完了していることを示した。反応混合物を冷却し、濃縮し、シリカゲルカラム（酢酸エチル／石油エーテル＝１／５〜５／１）によって直接精製して、標記化合物（３１２ｍｇ、収率６９％）を無色油として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２６Ｈ３８Ｆ２Ｎ６Ｏ３Ｓｉ必要値：５４８、実測値５４９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３４０】
[00159]ステップ２．ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−ブロモ−２−（１−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３４１】
【化３６】
2021500337.tif 000195
【０３４２】
[00160]Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）（１０１ｍｇ、５６８μｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（１−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（３１２ｍｇ、５６８μｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に室温で添加し、次いで、室温で１時間攪拌した。ＬＣ−ＭＳは反応が完了していることを示した。反応混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルカラム（酢酸エチル／石油エーテル＝１／５〜５／１）によって直接精製して、標記化合物（２８１ｍｇ、収率７９％）を無色油として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２６Ｈ３７ＢｒＦ２Ｎ６Ｏ３Ｓｉ必要値：６２６、６２８、実測値６２７、６２９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３４３】
[00161]ステップ３．ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−シアノ−２−（１−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３４４】
【化３７】
2021500337.tif 000196
【０３４５】
[00162]ＤＭＡ（２ｍＬ）中ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−ブロモ−２−（１−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２８１ｍｇ、４４７μｍｏｌ）、ジシアノ亜鉛（１０４ｍｇ、８９４μｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（５１．６ｍｇ、４４．７μｍｏｌ）の混合物を１２０℃で１時間攪拌した。ＬＣ−ＭＳは反応が完了していることを示した。反応混合物を冷却し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラム（酢酸エチル／石油エーテル＝３／１０〜３：１）によって精製して、標記化合物（２２３ｍｇ、収率８６％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２７Ｈ３７Ｆ２Ｎ７Ｏ３Ｓｉ必要値：５７３、実測値５７４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３４６】
[00163]ステップ４．２−（１−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリルの合成
【０３４７】
【化３８】
2021500337.tif 000197
【０３４８】
[00164]ＴＦＡ（１ｍＬ）を、ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−シアノ−２−（１−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２２５ｍｇ、３９２μｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に室温で添加し、次いで、１６時間攪拌した。ＬＣ−ＭＳは反応が完了していることを示した。反応混合物を濃縮して、粗生成物（１３０ｍｇ）を黄色油として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ１６Ｈ１５Ｆ２Ｎ７必要値：３４３、実測値３４４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３４９】
[00165]ステップ５．エチル４−（３−シアノ−２−（１−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３５０】
【化３９】
2021500337.tif 000198
【０３５１】
[00166]クロロギ酸エチル（３８ｍｇ、３４８μｍｏｌ）を、２−（１−（ジフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−４−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（６０ｍｇ、１７４μｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５２２ｍｇ、５２２μｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に添加し、次いで、室温で１時間攪拌した。ＬＣ−ＭＳは反応が完了していることを示した。反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、標記化合物（３３．１ｍｇ、４５％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ１９Ｈ１９Ｆ２Ｎ７Ｏ２必要値：４１５、実測値４１６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３５２】
実施例７．エチル４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３５３】
【化４０】
2021500337.tif 000199
【０３５４】
[00167]ステップ１．ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（フェニルスルホニル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３５５】
【化４１】
2021500337.tif 000200
【０３５６】
[00168]ＤＭＦ（１０ｍＬ）中ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−ブロモ−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（６００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、トリメチル（プロパ−１−イン−１−イル）シラン（５６０ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｔ−Ｂｕ３Ｐ）２（１００ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（３８ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（５００ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（４０８ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）の混合物を窒素で脱気し、次いで、１００℃で３時間攪拌した。反応混合物を蒸発乾固した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１〜１：５）によって精製して、標記化合物（２００ｍｇ、収率３５％）を黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２９Ｈ３２Ｎ６Ｏ４Ｓ必要値：５６０、実測値５６１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３５７】
[00169]ステップ２．２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（フェニルスルホニル）−４−（ピペラジン−１−イル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成
【０３５８】
【化４２】
2021500337.tif 000201
【０３５９】
[00170]ＴＦＡ（１ｍＬ）を、ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（フェニルスルホニル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２００ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に添加し、次いで、室温で４時間攪拌した。ＬＣ−ＭＳは出発材料が完全に消費されていることを示した。反応混合物を蒸発乾固して、さらに精製することなく粗生成物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２４Ｈ２４Ｎ６Ｏ２Ｓ必要値：４６０、実測値４６１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３６０】
[00171]ステップ３．エチル４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（フェニルスルホニル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３６１】
【化４３】
2021500337.tif 000202
【０３６２】
[00172]クロロギ酸エチル（５７ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を、２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（フェニルスルホニル）−４−（ピペラジン−１−イル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（粗、０．３５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３５０ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に添加し、次いで、室温で２時間攪拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、水およびブラインで洗浄した。有機層を蒸発乾固して、さらに精製することなく粗生成物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２７Ｈ２８Ｎ６Ｏ４Ｓ必要値：５３２、実測値５３３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３６３】
[00173]ステップ４．エチル４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３６４】
【化４４】
2021500337.tif 000203
【０３６５】
[00174]ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１．０Ｍ、１．０ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を、エチル４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（フェニルスルホニル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（粗、０．３５ｍｍｏｌと仮定）のＴＨＦ（２ｍＬ）中溶液に添加し、次いで、６０℃で２時間攪拌した。反応混合物を冷却し、濃縮し、分取ＨＰＬＣによって直接精製して、標記化合物（２３ｍｇ、収率１６％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２１Ｈ２４Ｎ６Ｏ２必要値：３９２、実測値：３９３［Ｍ＋Ｈ］＋。
合成プロトコルＣ
【０３６６】
【化４５】
2021500337.tif 000204
【０３６７】
[00175]中間体Ｅを、合成プロトコルＡに記載される方法を使用して調製した。中間体Ｅを選択的に脱保護して中間体Ｎを得て、引き続いて再保護して中間体Ｐを得ることができる。中間体Ｐを、メタレーション／ホウ素化反応を介してさらに官能化して、ボロン酸／エステル中間体Ｑを得ることができる。中間体Ｑをパラジウム媒介カップリング反応（例えば、Ｓｕｚｕｋｉ、Ｓｔｉｌｌｅ、ＳｏｎｏｇａｓｈｉｒａまたはＮｅｇｉｓｈｉカップリング）によって官能化して、中間体Ｒを得ることができる。Ｒの二重脱保護、引き続いてキャッピング反応、例えばアミド結合形成またはカルバメート形成によって、中間体Ｉが得られる。最終化合物Ｊを、中間体Ｉの置換、ハロゲン化または他のキャッピング反応によって達成することができる。以下に示されるように、表１、２および３の化合物２０５を、合成プロトコルＣを使用して調製した。
【０３６８】
実施例８．（１ｒ，３ｒ）−３−（４−（２−（２−メチルチアゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボニル）シクロブタンカルボニトリルの合成
【０３６９】
【化４６】
2021500337.tif 000205
【０３７０】
[00176]ステップ１．ｔｅｒｔ−ブチルｔｅｒｔ−ブチル４−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３７１】
【化４７】
2021500337.tif 000206
【０３７２】
[00177]水酸化ナトリウム（１７０ｍＬ、２．０Ｍ）を、ｔｅｒｔ−ブチル４−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５０ｇ、１１２．０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１７０ｍＬ）中溶液に添加した。次いで、得られた混合物を７０℃で１６時間加熱した。室温に冷却した後、沈殿固体を濾過によって回収し、次いで、これを乾燥させて、標記化合物（３０．０ｇ、８９％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ１６Ｈ２２Ｎ４Ｏ２必要値：３０２、実測値：３０３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３７３】
[00178]ステップ２．ｔｅｒｔ−ブチル４−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３７４】
【化４８】
2021500337.tif 000207
【０３７５】
[00179]水素化ナトリウム（１．１８ｇ、４９．５ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル４−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１０ｇ、３３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５０ｍＬ）中溶液にゆっくり添加し、０℃で３０分間攪拌した。２−（トリメチルシリル）エトキシメチルクロリド（ＳＥＭＣｌ）（５．５ｇ、３３ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、さらに２時間攪拌した。ＬＣ−ＭＳは、反応が十分にクリーンであることを示した。反応物をＨ２Ｏでクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、次いで、濃縮して粗生成物を得て、これを、石油エーテル／酢酸エチル（３：１）で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物（１２．０ｇ、８４％）を黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２２Ｈ３６Ｎ４Ｏ３Ｓｉ必要値：４３２、実測値：４３３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３７６】
[00180]ステップ３．４−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−イルボロン酸の合成
【０３７７】
【化４９】
2021500337.tif 000208
【０３７８】
[00181]ＬＤＡ（２９．５ｇ、２７６ｍｍｏｌ、２．０Ｍ）を、ｔｅｒｔ−ブチル４−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２３ｇ、５３．１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（３００ｍＬ）中溶液に−７℃で滴加し、次いで、−７８℃で３０分間攪拌した。次いで、トリイソプロピルボレート（６４．８ｇ、３４５．０ｍｍｏｌ）を−７８℃で滴加した。その後、反応物を−７８℃でさらに１時間攪拌すると、ＬＣ−ＭＳは反応が完了していることを示した。冷浴を除去した。反応物をＮＨ４Ｃｌ水溶液によってクエンチし、ＥＡで抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、次いで、濃縮して、標記化合物（１７．６６ｇ、７０％）を黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２２Ｈ３７ＢＮ４Ｏ５Ｓｉ必要値：４７６、実測値：４７７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３７９】
[00182]ステップ４．ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（２−メチルチアゾール−４−イル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【０３８０】
【化５０】
2021500337.tif 000209
【０３８１】
[00183]ジオキサン（２０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５ｍＬ）中４−ブロモ−２−メチルチアゾール（６００ｍｇ、３．３６ｍｍｏｌ）、（４−（４−（エトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−イル）ボロン酸（１．６０ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２４５ｍｇ、３３６μｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．０１ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の混合物を７０℃で２時間攪拌した。その後、反応混合物を冷却し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル＝２／１）によって精製して、標記化合物を黄色固体（１．５ｇ、８４％）として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２６Ｈ３９Ｎ５Ｏ３ＳＳｉ必要値：５２９、実測値：５３０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３８２】
[00184]ステップ５．２−メチル−４−（４−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−イル）チアゾールの合成
【０３８３】
【化５１】
2021500337.tif 000210
【０３８４】
[00185]ＴＦＡ（５ｍＬ）を、ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（２−メチルチアゾール−４−イル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１．５ｇ、２．８３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に添加し、次いで、溶液を４０℃で１２時間攪拌した。次に、溶液を４０〜５０℃で濃縮した。残渣を逆相カラムによって精製し、次いで、ＣＨ３ＯＨ（１５ｍＬ）で研和して、標記化合物を白色固体（６２０ｍｇ、７３％）として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ１５Ｈ１７Ｎ５Ｓ必要値：２９９、実測値：３００［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３８５】
[00186]ステップ６．（１ｓ，３ｓ）−３−（４−（２−（２−メチルチアゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボニル）シクロブチル４−メチルベンゼンスルホネートの合成
【０３８６】
【化５２】
2021500337.tif 000211
【０３８７】
[00187]ＨＡＴＵ（３０６ｍｇ、８０５μｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５ｍＬ）中２−メチル−４−（４−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−イル）チアゾール（２０１ｍｇ、６７１μｍｏｌ）、（１ｓ，３ｓ）−３−（トシルオキシ）シクロブタンカルボン酸（２００ｍｇ、７３８μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２６０ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ）の混合物に添加し、次いで、室温で１６時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水およびブラインで洗浄した。有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラム（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ＝１／１０）によって精製して、標記化合物（２２６ｍｇ、５５％）を無色油として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２７Ｈ２９Ｎ５Ｏ４Ｓ２必要値：５５１、実測値５５２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３８８】
[00188]ステップ７．（１ｒ，３ｒ）−３−（４−（２−（２−メチルチアゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボニル）シクロブタンカルボニトリルの合成
【０３８９】
【化５３】
2021500337.tif 000212
【０３９０】
テトラエチルアンモニウムシアニド（３２ｍｇ、２．０５μｍｏｌ）を、ＣＨ３ＣＮ（１０ｍＬ）中（１ｓ，３ｓ）−３−（４−（２−（２−メチルチアゾール−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボニル）シクロブチル４−メチルベンゼンスルホネート（２２６ｍｇ、４０９μｍｏｌ）の混合物に添加し、次いで、８０℃で１６時間攪拌した。反応混合物を冷却し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣによって直接精製して、標記化合物（４４．３ｍｇ、３６％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｃ２１Ｈ２２Ｎ６ＯＳ必要値：４０６、実測値４０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９１】
実施例９．他の実施例化合物の合成．
[00189]表２は、本開示に記載される合成プロトコルＡ、ＢまたはＣのどれが本明細書に記載される種々の化合物を合成するために使用されたかを示す。ブランク値は、合成プロトコルＡ、ＢまたはＣの１つ以外の合成スキームが使用され、このような化合物の合成スキームは実施例に示されることを示している。
【０３９２】
【表３−１】
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【０３９３】
【表３−２】
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【０３９４】
【表３−３】
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【０３９５】
【表３−４】
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【０３９６】
【表３−５】
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【０３９７】
【表３−６】
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【０３９８】
【表３−７】
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【０３９９】
【表３−８】
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【０４００】
実施例１０  ＡＬＫ結合アッセイ
[00190]ＬＡＮＴＨＡＳＣＲＥＥＮ（登録商標）技術（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、結合アッセイを行った。ＬＡＮＴＨＡＳＣＲＥＥＮ（登録商標）は、競合的結合置換アッセイであり、蛍光トレーサーと目的のキナーゼまたは発現タグ（例えば、ＧＳＴ）に特異的なユーロピウム（Ｅｕ）タグ付き抗体との間の時間分解蛍光エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）読出しを使用して、結合部位の仮定される定常状態占有率が測定される。本開示の化合物によるトレーサーの置換は減少し、トレーサーと抗体との間のＴＲ−ＦＲＥＴに正比例する。トレーサーを、キナーゼのＫｄと等しいまたはこれに近い濃度で使用した。Ｅｕタグ付き抗体を典型的には過剰に使用して、トレーサーに結合することができる全ての適格性タンパク質のサンプリングを保証した。
【０４０１】
[00191]これらのアッセイのために、ＧＳＴ（ＡＬＫ２  Ｒ２０６Ｈ  Ｃａｒｎａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（０９−１４８）またはＡＬＫ２  Ｒ２０６Ｈ  ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ（ＰＶ６２３２））；Ｅｕタグ付き抗ＧＳＴ抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）およびＫｉｎａｓｅ  Ｔｒａｃｅｒ  １７８（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）でＮ末端をタグ付けした突然変異ＡＬＫ２を使用した。
【０４０２】
[00192]全ての場合で、キナーゼ（２〜５ｎＭ）をＥｕタグ付き抗体（４〜１０ｎＭ）ミックスと混合し、トレーサー（５０ｎＭ）を１００％ＤＭＳＯ（最終１％ＤＭＳＯ）中に調製した試験化合物滴定と室温で３０分間インキュベートした。全ての試薬および化合物をＫｉｎａｓｅ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ａ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に溶解して、最終濃度を達成した。プレートをＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）マルチラベルプレートリーダーまたはＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｎｅｏプレートリーダーで読み取り、アッセイシグナルをＴＲ−ＦＲＥＴ放射（λｅｘ３３０ｎｍ、λｅｍ６６２ｎｍおよびλｅｍ６６５ｎｍ）の比として表した。この読出しを０％に正規化し、１００％は対照ウェルを阻害し、阻害剤濃度に対してプロットし、４パラメータ対数用量反応曲線に当てはめた。
【０４０３】
[00193]このアッセイの結果は表３に示され、「結合アッセイ」と標識された列中、「Ａ」は１０ｎＭ以下のＩＣ５０を表し；「Ｂ」は１０ｎＭ超５０ｎＭ以下のＩＣ５０を表し；「Ｃ」は５０ｎＭ超のＩＣ５０を表す。表中のブランク値は、特定の化合物がこのアッセイで試験されなかったことを示している。
【０４０４】
実施例１１．細胞ベースのＡＬＫ２−Ｒ２０６Ｈ細胞活性アッセイ
Ａ．細胞株ＨＥＫ２９３−ＡＬＫ２−Ｒ２０６Ｈ
[00194]レンチウイルス形質導入およびその後の２週間超の１０μｇ／ｍｌのブラストサイジン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ａ１１１３９０２）選択によって、ヒトＡＬＫ２  Ｒ２０６Ｈ  ｃＤＮＡ（ＧｅｎｅＳｃｒｉｐｔ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪによって合成）およびＣ末端でＦＬＡＧタグを発現するＨＥＫ２９３（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ１５７３）に基づく安定な細胞株を作製した。この細胞株をＨＥＫ２９３−ＡＬＫ２−Ｒ２０６Ｈと命名した。
Ｂ．ＡｌｐｈａＬＩＳＡによるＳｍａｄ１−Ｓｅｒ４６３／Ｓｅｒ４６５リン酸化の測定
[00195]ＨＥＫ２９３−ＡＬＫ２−Ｒ２０６Ｈ細胞を培養し、収集し、次いで、無血清フェノールレッドフリーＤＭＥＭ高グルコース培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号３１０５３）に再懸濁した。培地はまた、５０ユニット／ｍｌペニシリンおよび５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１５０７０−０６３）も含有していた。次いで、ＨＥＫ２９３−ＡＬＫ２−Ｒ２０６Ｈ細胞を、白色不透明３８４ウェルマイクロプレート（２×１０４／ウェル）（ＯｐｔｉＰｌａｔｅ−３８４、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、カタログ番号６００７２９９）に、アッセイに使用するため３７℃、５％ＣＯ２で一晩（１６時間超）蒔いた。
【０４０５】
[00196]試験化合物を最初に、４ｍＭまたは０．４ｍＭに希釈し、次いで、ＤＭＳＯを使用して３倍段階希釈して１０の異なる濃度にした。各濃度の化合物をフェノールレッドフリーＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号３１０５３）でさらに４０倍希釈した。次いで、希釈化合物２μｌを、マイクロプレートのＨＥＫ２９３−ＡＬＫ２−Ｒ２０６Ｈ細胞含有ウェルに二連で分注した。このようにして、各化合物を１０用量（１０μＭまたは１μＭである最高濃度で３倍段階希釈）で試験した。Ｂｒａｖｏ  Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｈａｎｄｌｉｎｇ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、液体取り扱いを達成した。化合物を含まないＤＭＳＯを陰性対照として使用した。陽性対照は、１μＭのＬＤＮ１９３１８９、既知の骨形成タンパク質（ＢＭＰ阻害剤）とした。
【０４０６】
[00197]試験化合物または対照との２〜３時間のインキュベーション後、細胞を溶解し、製造業者の推奨プロトコルに従って、ＡＬＰＨＡＳＣＲＥＥＮ（登録商標）ＳＵＲＥＦＩＲＥ（登録商標）ＳＭＡＤ１（ｐ−Ｓｅｒ４６３／４６５）細胞キナーゼアッセイキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、カタログ番号ＴＧＲＳＭ１Ｓ１０Ｋ）を使用してシグナルを発生させた。Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）プレートリーダー（放射５２０〜６２０ｎＭ）を使用してマイクロプレートを読み取った。シグナルは可溶化液中のホスホ−Ｓｅｒ／４６３／４６５−Ｓｍａｄ１のレベルを反映していた。それぞれ０％阻害および１００％阻害としてのＤＭＳＯ陰性対照およびＬＤＮ１９３１８９陽性対照を使用して、生データをプロットした。１０点用量反応曲線を使用してＩＣ５０値を計算した。
【０４０７】
[00198]このアッセイの結果は表３に示され、「細胞アッセイ」と標識された列中、「Ａ」は１００ｎＭ以下のＩＣ５０を表し；「Ｂ」は１００ｎＭ超５００ｎＭ以下のＩＣ５０を表し；「Ｃ」は５００ｎＭ超のＩＣ５０を表す。表中のブランク値は、特定の化合物がこのアッセイで試験されなかったことを示す。
【０４０８】
[00199]表３では、以下の名称が使用される：
[00200]「結合アッセイ」データについて：１０ｎＭ以下＝Ａ；１０以上〜５０ｎＭ＝Ｂ；５０ｎＭ超＝Ｃ；および表中のブランク値は、特定の化合物がこのアッセイで試験されなかったことを示す。
【０４０９】
[00201]「細胞株」データについて：１００ｎＭ以下＝Ａ；１００以上〜５００ｎＭ＝Ｂ；５００ｎＭ超＝Ｃ；および表中のブランク値は、特定の化合物がこのアッセイで試験されなかったことを示す。
【０４１０】
【表４−１】
2021500337.tif 000221
【０４１１】
【表４−２】
2021500337.tif 000222
【０４１２】
【表４−３】
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【０４１３】
【表４−４】
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【０４１４】
【表４−５】
2021500337.tif 000225
【０４１５】
【表４−６】
2021500337.tif 000226
【０４１６】
【表４−７】
2021500337.tif 000227
【０４１７】
【表４−８】
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【０４１８】
【表４−９】
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【０４１９】
【表４−１０】
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【０４２０】
【表４−１１】
2021500337.tif 000231
【０４２１】
参照による組み込み
[00202]本明細書に言及される全ての刊行物および特許は、あたかも各個々の刊行物または特許が具体的かつ個別的に参照により組み込まれることが示されているように、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
等価物
[00203]請求項において、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「該（ｔｈｅ）」などの冠詞は、反対のことを指示しない限りまたは文脈から他が自明でない限り、１つまたは２つ以上を意味し得る。反対のことを指示しない限りまたは文脈から他が自明でない限り、群のメンバーの１つ、２つ以上または全てが所与の生成物またはプロセスに存在する、使用されるまたは関連する場合に、群の１つまたは複数のメンバーの間で「または（ｏｒ）」を含む請求項または明細書が満足するとみなされる。本開示は、群の正確に１つのメンバーが所与の生成物またはプロセスに存在する、使用されるまたは関連する実施形態を含む。本開示は、群のメンバーの２つ以上または全てが所与の生成物またはプロセスに存在する、使用されるまたは関連する実施形態を含む。
【０４２２】
[00204]さらに、本開示は、列挙される請求項の１つまたは複数からの１つまたは複数の限定、要素、条項および記述用語が別の請求項に導入される全ての変形、組み合わせおよび順列を包含する。例えば、別の請求項に従属するいずれの請求項も、同じベース請求項に従属する他の請求項に見られる１つまたは複数の限定を含むよう修正され得る。要素がリストとして、例えばマーカッシュ群形式で提示される場合、要素の各サブグループも開示され、いずれの要素（複数可）も群から除去され得る。一般に、本開示または本開示の態様が特定の要素および／または特徴を含むと言及される場合、本開示または本開示の態様の一定の実施形態が、このような要素および／または特徴からなる、またはから本質的になると理解されるべきである。簡素化のために、これらの実施形態は、本明細書においてこれらの言葉で具体的に示されていない。範囲が与えられる場合、終点が含まれる。さらに、特に指示しない限りまたは文脈および当業者の理解から他が自明でない限り、範囲として表される値は、文脈上別段の解釈を必要としない限り、範囲の下限の単位の１０分の１までの本開示の様々な実施形態で明言される範囲内の具体的な値または部分範囲を想定することができる。
【０４２３】
[00205]当業者であれば、日常的な実験に過ぎないものを使用して、本明細書に記載および請求される本開示の具体的な実施形態の多くの等価物を認識する、または確認することができるだろう。このような等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【国際調査報告】
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