(57)【要約】  本発明は、臨床化学、特に、新規の生物学的に活性な化合物である、プロスタグランジンＦ２αのアミド誘導体に関する。これらの化合物は、低細胞毒性であり、哺乳類細胞中に内因性窒素酸化物の形成を刺激することができる。このような化合物の合成は、眼内圧を低下させることが可能な、プロスタグランジンＦ２αの生物学的に活性な誘導体の命名法の拡張を促進する。【選択図】  図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式：
【化１】
2021524862.tif 000020
（式中、Ｒ１およびＲ２は独立に水素、アルキル、シクロアルキル、ヒドロキシアルキル、アミノ酸、アミノ酸のエーテルおよびアミドを表し、かつＲ１＋Ｒ２は複素環（例えば、置換または非置換のピぺリジン、ピロリジンなど）となり得る）、を有するプロスタグランジンＦ２アルファ誘導体。
【請求項２】
薬学的に許容されるカチオンを有する塩を遊離カルボキシル基の存在下に作製する、請求項１の化合物。
【請求項３】
眼内圧を低下させることができる、請求項１の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、臨床化学、特に、新規の生物学的に活性な化合物である、プロスタグランジンＦ２αのアミド誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロスタグランジンは、生物中でシクロオキシゲナーゼ（СОХ）によりアラキドン酸から合成される多機能性の生物活性物質ファミリーである。これら酸化脂肪酸は、オートクリンおよびパラクリン脂質メディエーターであり、例えば、散大筋（気管支平滑筋）、括約筋（消化管平滑筋）、抗凝集（血小板）、血圧下降または血圧上昇作用の組み合わせ（非特許文献１）などの生理活性の広域スペクトルにより特徴づけられる。プロスタグランジンＦ２αは、生合成の最初の段階でのシクロオキシゲナーゼ、次いで第２段階での還元酵素に起因するアラキドン酸の酸化的代謝の結果として生物中に形成される（非特許文献２）。プロスタグランジンＦ２αは、Ｇタンパク質共役受容体ＦＰ内因性リガンドであり、その活性化は細胞内カルシウム動員をもたらす（非特許文献３）。
【０００３】
プロスタグランジンは、高血圧、血栓症、喘息、胃潰瘍および腸潰瘍の治療、アテローム性動脈硬化症の予防、および産科でも使用されている。ＦＰ受容体アゴニストは、眼内圧を低下させる薬剤としてクリニックで使用されている（非特許文献４）。
【０００４】
プロスタミド（プロスタグランジンのアミドおよびエタノールアミン）は、シクロオキシゲナーゼ−２に起因するアラキドン酸エタノールアミド（アナンダミド）の酸化により生物中で形成される（非特許文献５）。これらの誘導体は、眼内圧を低下させることができるようであった。このクラスの最もよく知られている製品は、プロスタミドＦ２の合成類似体である、エタノールアミン残基をエチルアミン残基により置換し、プロスタミドアルキル側鎖をフェニル基の導入により修飾したビマトプロストである（非特許文献６）。
【０００５】
分子のエタノールアミン部分が修飾されたプロスタノイドと同様に、様々なプロスタミド類似体が知られている。特許請求された化合物に最も近いのは、神経保護が可能なプロスタミドである（特許文献１）。この特許は、ニトロキシエトリアミン、グリシン、ガンマ−アミノ酪酸、ヒドロキシエチルアミン、チラミンおよびドーパミンの残基を有するプロスタミドＥ類似体を記載している。しかし、この特許は、同様のエタノールアミンの修飾残基を有するプロスタミドＦの類似体については記載していない。
【０００６】
プロスタグランジンＦ２αの類似体も知られており、例えば、特許（特許文献２）には、プロスタグランジンＦ２αの公知の類似体に比較して改変された生物活性を有し、医療分野に適用される修飾アルキル側鎖を有するプロスタグランジンＦ２αのエーテル、チオエーテル、アミド（ビマトプロスト、トラボプロストなど）が記載されている。  
【０００７】
ニトロキシ基を有するプロスタグランジンＦ２αの類似体もまた知られている。
【０００８】
特許文献３には、血管拡張剤、降圧剤または気管支拡張剤として使用可能である、プロスタグランジンＦ２αを含む、プロスタグランジンのジニトログリセロールエーテルが記載されている。
【０００９】
特許文献４には、緑内障および上昇した眼内圧の治療に使用可能である、窒素酸化物を生成するプロスタミドが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】ロシア国特許出願公開第２４７４４２６号
【特許文献２】米国特許第７９１０７６７号
【特許文献３】米国特許第５６２５０８３号
【特許文献４】米国特許第８１０１６５８号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｎｉｃｏｌａｕ  Ａ．，  Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｌｉｐｉｄｓ，  Ｅｄｓ．  Ｎｉｃｏｌａｕ  Ａ．，  Ｋｏｋｏｔｏｓ  Ｊ．，  Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，  Ｏｉｌｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ２００４．  １９７ｐ
【非特許文献２】Ｓｍｉｔｈ  Ｗ．Ｌ．，  Ｍａｒｎｅｔｔ  Ｌ．Ｊ．，  ＤｅＷｉｔｔ  Ｄ．Ｌ．  Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  ａｎｄ  ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．  １９９１，  Ｖｏｌ．  ４９，  Ｎｏ．  ３，  ｐ．  １５３１７９
【非特許文献３】Ｔｏｈ  Ｈ，  Ｉｃｈｉｋａｗａ  Ａ，  Ｎａｒｕｍｉｙａ  Ｓ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｅｉｃｏｓａｎｏｉｄｓ，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  １９９５，  Ｖｏｌ．  ３６１，  ｐ．  １７-２１
【非特許文献４】Ｗｏｏｄｗａｒｄ  Ｄ．Ｆ．，  Ｌａｗｒｅｎｃｅ  Ｒ．Ａ．，  Ｆａｉｒｂａｉｒｎ  Ｃ．Ｅ．，  Ｓｈａｎ  Ｔ．，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｌ．Ｓ．  Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｓｔａｎｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔｓ  ｉｎｖｏｌｖｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｂｔｙｐｅｓ  ａｃｃｏｒｄｉｎｇ  ｔｏ  ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｔｕｄｉｅｓ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ．  １９９３，  Ｖｏｌ．  ６，  Ｎｏ．  １−３，  ｐ．  ５４５−５５３
【非特許文献５】Ｋｏｚａｋ  Ｋ．Ｒ．，  Ｃｒｅｗｓ  Ｂ．Ｃ．，  Ｒａｙ  Ｊ．Ｌ．，  Ｔａｉ  Ｈ．Ｈ．，  Ｍｏｒｒｏｗ  Ｊ．Ｄ．，  Ｍａｒｎｅｔｔ  Ｌ．Ｊ．  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｅｓｔｅｒｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｄｅｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ，  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ    Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  ２００１，  Ｖｏｌ．  ２７６，  Ｎｏ．  ４０，  ｐ．  ３６９９３−３６９９８
【非特許文献６】Ｗｏｏｄｗａｒｄ  Ｄ．Ｆ．，  Ｋｒａｕｓｓ  Ａ．Ｈ．，  Ｃｈｅｎ  Ｊ．，  Ｌａｉ  Ｒ．Ｋ．，  Ｓｐａｄａ  Ｃ．Ｓ．，  Ｂｕｒｋ  Ｒ．Ｍ．，  Ａｎｄｒｅｗｓ  Ｓ．Ｗ．，  Ｓｈｉ  Ｌ．，  Ｌｉａｎｇ  Ｙ．，  Ｋｅｄｚｉｅ  Ｋ．Ｍ．，  Ｃｈｅｎ  Ｒ．，  Ｇｉｌ  Ｄ．Ｗ．，  Ｋｈａｒｌａｍｂ  Ａ．，  Ａｒｃｈｅａｍｐｏｎｇ  Ａ．，  Ｌｉｎｇ  Ｊ．，  Ｍａｄｈｕ  Ｃ．，  Ｎｉ  Ｊ．，  Ｒｉｘ  Ｐ．，  Ｕｓａｎｓｋｙ  Ｊ．，  Ｕｓａｎｓｋｙ  Ｈ．，  Ｗｅｂｅｒ  Ａ．，  Ｗｅｌｔｙ  Ｄ．，  Ｙａｎｇ  Ｗ．，  Ｔａｎｇ−Ｌｉｕ  Ｄ．Ｄ．，  Ｇａｒｓｔ  Ｍ．Ｅ．，  Ｂｒａｒ  Ｂ．，  Ｗｈｅｅｌｅｒ  Ｌ．Ａ．，  Ｋａｐｌａｎ  Ｌ．Ｊ．，  Ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｂｉｍａｔｏｐｒｏｓｔ  （Ｌｕｍｉｇａｎ），  Ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ２００１，  Ｖｏｌ．  ４５，  Ｓｕｐｐｌ．  ４，  ｐ．  Ｓ３３７−Ｓ３４５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
しかし、これらの発明は、本発明に開示されている構造を有していない。
【００１３】
本発明の目的は、眼内圧を低下させることが可能な、プロスタグランジンＦ２αの生物学的に活性な誘導体の命名法の拡張を促進することである。この課題は、そのアミド部がアミノ酸、そのニトロ誘導体、環状アミンまたは置換エタノールアミンにより表される、プロスタグランジンＦ２αアミド誘導体の合成により解決される。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
【化１】
2021524862.tif 000002
【００１５】
このように、本発明の主題は、上記の一般式（１）（式中、Ｒ１およびＲ２は独立に水素、アルキル、シクロアルキル、ヒドロキシアルキル、アミノ酸、アミノ酸のエーテルおよびアミドを表し、かつＲ１＋Ｒ２は複素環（例えば、置換または非置換のピぺリジン、ピロリジンなど）となり得る）を有するプロスタグランジンＦ２αのアミド誘導体であり、さらに遊離カルボキシル基を有する一般式（１）の化合物の薬学的に許容される塩、および異なる割合の２以上の一般式（１）の化合物の混合物である。
【００１６】
これらの物質は、低細胞毒性であり、哺乳類細胞中に内因性一酸化窒素の形成を刺激することができる。
【００１７】
別段の指定がない限り、本明細書で使用されている全ての技術的および科学的用語は、当技術分野で一般的であり、当業者によって理解され得るものと同じ意味を有する。
【００１８】
「置換の」とは、特定の基または残基が水素以外の１つまたは複数の置換基を有することを意味する。
【００１９】
「非置換の」とは、特定の基または残基が水素以外の置換基を有していないことを意味する。
【００２０】
「アルキル」は、炭素数１〜６の直鎖または分岐鎖状の非置換のアルキル基を意味する。
【００２１】
「シクロアルキル」は、炭素数３〜６の環状の飽和炭化水素基（例えば、シクロプロピル、シクロブチルなど）を意味する。
【００２２】
「混合物」とは、化学結合することなく２以上の物質を共に有することを意味し、各成分の物性が変化されずに保持されている。
【００２３】
「薬学的に許容される塩」とは、特許請求された物質のカルボキシル基と塩を作製する成分が人体に害を及ぼさないことを意味する。
【００２４】
「薬学的に許容されるカチオン」とは、このカチオンが塩の形成において人体に害を及ぼさないことを意味する。
【００２５】
一般的な形での本発明の物質は、化学分野で公知の技術により合成することができる。本発明の特定の物質を作製するいくつかの工程を実施例に図解する。
【００２６】
本発明の物質の生物活性には、１００μＭの濃度まで細胞毒性がないこと、眼内圧を下げることができること、細胞内カルシウム濃度を上げることができること、窒素酸化物生成を上げることができることが含まれる。
【００２７】
天然プロスタグランジンＦ２αの類似体である、特許請求された物質は、特定のプロスタノイド受容体ＦＰと相互作用することができ、その結果、細胞内カルシウム動員を刺激する。
【００２８】
本発明の予想外の成果は、特許請求された物質が哺乳類細胞において一酸化窒素の内因性合成を誘導する能力を有することである。このような特性は、プロスタグランジンＦ２α誘導体のいずれにおいても観察されていなかった。さらに、ＮＯドナー基を有さない化合物、例えば、セリンイソプロピルエステルを有するプロスタグランジンＦ２αのアミド（化合物３）は報告されていない。
【発明の効果】
【００２９】
従って、本発明の課題は、一酸化窒素の内因性合成を誘導することができる、一般式（１）の新規プロスタグランジンＦ２αアミド誘導体の合成によって解決され、内因性制御因子である窒素酸化物を薬理効果機構に関与させることにより、特許請求された物質の医療用途の機会を大幅に拡大する。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明の実施例７に係る、ＤＭＳＯと各プロスタグランジンＦ２αアミドの濃度に対する、３Ｔ３−Ｌ１細胞の窒素酸化物（ＮＯ）生成レベルを表す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
以下の実施例は、本発明を説明するためものであり、なんら本発明の範囲を限定すると見なされるべきではない。
【実施例１】
【００３２】
セリンを有するプロスタグランジンＦ２αアミドおよびその誘導体、シクロプロピルアミンおよびＬ−プロリノール
【００３３】
【化２】
2021524862.tif 000003
【００３４】
Ｌ−ニトロセリンを有するプロスタグランジンＦ２αアミド（１）
７６μＬ（０．５５μｍｏｌ）のＥｔ３Ｎを、アルゴン雰囲気下、１５０ｍｇ（０．４２μｍｏｌ）のプロスタグランジンＦ２αを含有するアセトニトリル２ｍＬの溶液に添加し、５分間混合した後、７１μＬ（０．５５μｍｏｌ）のクロロ蟻酸イソブチルを含有するアセトニトリル５００μＬの溶液を添加する。反応混合物を４℃で３０分間混合し、体積が半分になるまで濃縮し、５０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、水（２×２０ｍＬ）およびＮａＣｌの飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。乾燥物を濾過し、濾液を吸水ポンプ真空下にロータリーエバポレーターで煮詰める。残留物を油ポンプ真空下に乾燥し、１７１ｍｇの混合無水物の黄色油を得る。
【００３５】
得られた混合無水物を含有するＤＭＦ１ｍＬおよび５２μＬのＮーメチルモルホリンの溶液を１０４ｍｇ（０．４９μｍｏｌ）のＬ−ニトロセリン硝酸塩を含有するＤＭＦ０．５００ｍＬの溶液に４℃でアルゴン雰囲気下に添加し、得られた混合物を９０分間混合する。溶媒を煮詰め、残留物を５０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、２ＭのＮａＨＳＯ４水溶液（２０ｍＬ）およびＮａＣｌの飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。乾燥物を濾過し、濾液を吸水ポンプ真空下にロータリーエバポレーターで濃縮する。１６２ｍｇのＬ−ニトロセリンを有するプロスタグランジンＦ２αアミドの黄色油を得る（収率：７０％）。
【００３６】
ＰＭＲ：０．９０（３Ｈ），１．２９（６Ｈ），１．５３（３Ｈ），１．７５（２Ｈ），２．１８（７Ｈ），２．４１（２Ｈ），２．７１（１Ｈ），３．９５（１Ｈ），４．１４（２Ｈ），４．３３（１Ｈ），４．８８（２Ｈ），５．５２（４Ｈ）．質量スペクトル：５０９．２８３２［Ｍ＋Ｎａ］＋，４４１．３２８２［Ｍ-ＮＯ２＋Ｎａ＋Ｈ］＋．
【００３７】
【数１】
2021524862.tif 000004
【００３８】
Ｌ−セリンを有するプロスタグランジンＦ２αアミド（２）
プロスタグランジンＦ２αおよびＬ−セリンから同様に得た（収率：５１％）。ＰＭＲ：０．８４（３Ｈ），１．３（６Ｈ），１．５２（３Ｈ），１．９５（３Ｈ），２．１６（６Ｈ），２．３３（２Ｈ），２．６８（１Ｈ），３．８９（２Ｈ），３．９２（１Ｈ），４．１９（１Ｈ），４．３２（２Н），５．３４（４Ｈ），７．８（１Ｈ）．
【００３９】
【数２】
2021524862.tif 000005
【００４０】
Ｌ−セリンイソプロピルエーテルを有するプロスタグランジンＦ２αアミド（３）
プロスタグランジンＦ２αおよびＬ−セリンイソプロピルエーテル塩酸塩から同様に得た（収率：５７％）。ＰＭＲ：０．８９（３Ｈ），１．２２（６Ｈ），１．３（９Ｈ），１．７６（３Ｈ），２．０４（６Ｈ），２．３９（２Ｈ），３．９（２Ｈ），４．０３（２Ｈ），４．１３（１Ｈ），４．６３（１Ｈ），５．０８（１Ｈ），５．４５（４Ｈ），６．８３（１Ｈ）．
【００４１】
【数３】
2021524862.tif 000006
【００４２】
Ｄ−セリンイソプロピルエーテルを有するプロスタグランジンＦ２αアミド（４）
プロスタグランジンＦ２αおよびＤ−セリンイソプロピルエーテル塩酸塩から同様に得た（収率：３５％）。ＰＭＲ：０．８９（３Ｈ），１．２１（６Ｈ），１．３（９Ｈ），１．７４（３Ｈ），２．０１（６Ｈ），２．４（２Ｈ），３．９（２Ｈ），４．０（２Ｈ），４．１（１Ｈ），４．６（１Ｈ），５．１（１Ｈ），５．４３（４Ｈ），６．９（１Ｈ）．
【００４３】
【数４】
2021524862.tif 000007
【００４４】
Ｌ−ニトロセリンイソプロピルエーテルを有するプロスタグランジンＦ２αアミド（５）
プロスタグランジンＦ２αおよびＬ−ニトロセリンイソプロピルエーテルから同様に得た（収率：６４％）。ＰＭＲ：０．８４（３Ｈ），１．１６（６Ｈ），１．２３（８Ｈ），１．５１（４Ｈ），１．９６（４Ｈ），２．１２（４Ｈ），３．８８（３Ｈ），４．５２（１Ｈ），４．９（２Ｈ），５．３４（５Ｈ），７．９（１Ｈ）．
【００４５】
シクロプロピルアミンを有するプロスタグランジンＦ２αアミド（６）
プロスタグランジンＦ２αおよびシクロプロピルアミンから同様に得た（収率：７３％）。ＰＭＲ：０．５０（２Ｈ），０．７８（２Ｈ），０．９０（３Ｈ），１．３１（６Ｈ），１．６１（４Ｈ），１．８６（４Ｈ），２．０６（４Ｈ），２．３６（２Ｈ），２．７０（１Ｈ），４．００（１Ｈ），４．０９（１Ｈ），４．２０（１Ｈ），５．４１（１Ｈ），５．５７（２Ｈ），５．７８（２Ｈ）．
【００４６】
【数５】
2021524862.tif 000008
【００４７】
Ｌ−プロリノールを有するプロスタグランジンＦ２αアミド（７）
プロスタグランジンＦ２αおよびＬ−プロリノールから同様に得た（収率：６１％）。ＰＭＲ：０．９１（３Ｈ），１．３６（６Ｈ），１．６０（６Ｈ），１．８９（６Ｈ），２．０８（４Ｈ），２．３９（１Ｈ），２．６５（１Ｈ），３．２（１Ｈ），３．４５（１Ｈ），３．５７（１Ｈ），３．７３（１Ｈ），３．９０（１Ｈ），４．０６（１Ｈ），４．２１（２Ｈ），５．４８（２Ｈ），５．６９（２Ｈ）．
【００４８】
【数６】
2021524862.tif 000009
【実施例２】
【００４９】
γ−アミノ酪酸誘導体を有するプロスタグランジンＦ２αのアミド
【００５０】
【化３】
2021524862.tif 000010
【００５１】
γ−アミノ酪酸を有するプロスタグランジンＦ２αのアミド
６００μＬのＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセタミドを１０３ｍｇ（１．００μｍｏｌ）のγ−アミノ酪酸を含有するアセトニトリル１ｍＬの溶液に添加し、２３℃で１８時間混合する。
【００５２】
１４５μ（１．０５μｍｏｌ）のトリエチルアミンおよび１２５μＬ（０．９６μｍｏｌ）のクロロ蟻酸イソブチルを２８４ｍｇ（０．８μｍｏｌ）のプロスタグランジンＦ２αを含有する３ｍＬのアセトニトリルに添加し、２３℃で３０分間混合する。得られた混合無水物をシリル化されたγ−アミノ酪酸溶液に添加し、２３℃で４時間混合する。メタノール（５ｍＬ）を反応混合物に添加し、２０分間混合し、吸水ポンプ真空下ロータリーエバポレーターで濃縮した。残留物を酢酸エチル（２０ｍＬ）に溶解し、２ＭのＮａＨＳＯ４水溶液（２０ｍＬ）およびＮａＣｌの飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。乾燥物を濾過し、濾液を吸水ポンプ真空下にロータリーエバポレーターで濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製する。１３２ｍｇのプロスタグランジンＦ２αおよびγ−アミノ酪酸アミドの澄明な油を得る（収率：６０％）。質量スペクトル，ｍ／ｚ：４６２．２８８８［Ｍ＋Ｎａ］＋．
【００５３】
γ−アミノ酪酸ニトロエタノールアミドを有するプロスタグランジンＦ２αアミド（８）
３０μＬ（０．２３μｍｏｌ）のＥｔ３Ｎをアルゴン雰囲気下に８０ｍｇ（０．１８μｍｏｌ）のγ−アミノ酪酸を有するプロスタグランジンＦ２αアミドを含有するアセトニトリル３ｍＬの溶液に添加し、５分間混合し、３０μＬ（０．２２μｍｏｌ）のクロロ蟻酸イソブチルを添加する。反応混合物を４℃で３０分間混合し、３８  ｍｇ（０．３７μｍｏｌ）のニトロエタノールアミン硝酸塩および５０μＬのＥｔ３Ｎを含有する２ｍＬのジクロロメタン溶液を添加し、２３℃で１２時間混合する。溶媒を煮詰め、残留物を２０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、２ＭのＮａＨＳＯ４水溶液（２０ｍＬ）およびＮａＣｌの飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。乾燥物を濾過し、濾液を吸水ポンプ真空下にロータリーエバポレーターで濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、３５ｍｇのγ−アミノ酪酸ニトロエタノールアミドを有するプロスタグランジンＦ２αのアミド（８）を得る（収率：３６％）。ＰＭＲ：０．８８（３Ｈ），１．２１（６Ｈ），１．６５（３Ｈ），１．７７（４Ｈ），２．１１（７Ｈ），２．３８（１Ｈ），２．６２（１Ｈ），３．３３（２Ｈ），３．５５（２Н），３．９７（１Ｈ），４．１８（２Ｈ），４．５３（２Н），４．６８（２Ｈ），５．４７（４Ｈ）．
【００５４】
【数７】
2021524862.tif 000011
【００５５】
γ−アミノ酪酸ニトロエチレングリコールエーテルを有するプロスタグランジンＦ２αアミド（９）  
２４ｍｇ（０．１２μｍｏｌ）のＮ−３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル炭酸塩酸塩、３ｍｇ（０．０２μｍｏｌ）のジメチルアミノピリジンおよび４５ｍｇ（０．１μｍｏｌ）のγ−アミノ酪酸を有するプロスタグランジンＦ２αアミドを１４μＬ（０．１２μｍｏｌ）のニトロエチレングリコールを含有するジクロロメタン１ｍＬの溶液に添加し、２３℃で９０分間混合する。反応混合物をクロロホルム（２０ｍＬ）で希釈し、２ＭのＮａＨＳＯ４水溶液（２０ｍＬ）、水（２×２０ｍＬ）およびＮａＣｌの飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。乾燥物を濾過し、濾液を吸水ポンプ真空下にロータリーエバポレーターで濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、２０ｍｇのアミド（９）の白色の油を得る（収率：３７％）。
【００５６】
ＰＭＲ：０．８９（３Ｈ），１．３８（１１Ｈ），１．８８（９Ｈ），２．２７（２Ｈ），２．８７（２Ｈ），３．２２（２Ｈ），３．８１（１Н），３．９９（１Ｈ），４．０７（１Ｈ），４．３７（２Ｈ），４．６７（２Ｈ），５．３６（４Ｈ），７．５７（１Ｈ）．
【００５７】
【数８】
2021524862.tif 000012
【００５８】
γ−アミノ酪酸ジニトログリセロールエステルを有するプロスタグランジンＦ２αアミド（１０）
４４ｍｇ（０．４３μｍｏｌ）のＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩を含有するジクロロメタン０．５ｍＬ、５ｍｇ（０．０４μｍｏｌ）のＮ−ジメチルアミノピリジンおよび４２ｍｇ（０．２２μｍｏｌ）のグリセロール二硝酸塩をアルゴン雰囲気下８４ｍｇ（０．２μｍｏｌ）のγ−アミノ酪酸を有するプロスタグランジンＦ２αアミドを含有するクロロメタン１ｍＬの溶液に添加し、２３℃で２時間混合する。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈し、２ＭのＮａＨＳＯ４水溶液（２０ｍＬ）、水（２×２０ｍＬ）およびＮａＣｌの飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。乾燥物を濾過し、濾液を吸水ポンプ真空下にロータリーエバポレーターで濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、３８ｍｇのγ−アミノ酪酸ジニトログリセロールエステルを有するプロスタグランジンＦ２αアミド（１０）を得る（収率：３３％）。ＰＭＲ：０．８４（３Ｈ），１．４３（１４Ｈ），１．９８（８Ｈ），２．３４（２Ｈ），３．０４（２Ｈ），３．８８（２Ｈ），４．３１（１Ｈ），４．４６（２Ｈ），４．７７（２Ｈ），５．３６（５Ｈ），７．７５（１Ｈ）．質量スペクトル，ｍ／ｚ：６２６．２９６８［Ｍ＋Ｎａ］＋，５８６．３９４３［Ｍ＋Ｈ-Ｈ２Ｏ］＋．
【００５９】
【数９】
2021524862.tif 000013
【実施例３】
【００６０】
２−アミノエチル−［２−（ニトロキシ）エチル］カルバミン酸塩を有するプロスタグランジンＦ２αアミド（１１）
【００６１】
【化４】
2021524862.tif 000014
【００６２】
９３ｍｇ（０．３７μｍｏｌ）のジスクシンイミジル炭酸塩および５２μＬ（０．３７μｍｏｌ）のＥｔ３Ｎを１５０ｍｇ（０．３７μｍｏｌ）のエタノールアミンを有するプロスタグランジンＦ２αアミドを含有するアセトニトリル３ｍＬの溶液に添加し、２３℃で１．５時間混合した。その後、６２ｍｇ（０．３７μｍｏｌ）のニトロエタノールアミン硝酸塩および３７ｍｇ（０．３７μｍｏｌ）のＥｔ３Ｎを添加し、４℃で１８時間混合する。溶媒を蒸発させ、残留物を２０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、２ＭのＮａＨＳＯ４水溶液（２０ｍＬ）およびＮａＣｌの飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。乾燥物を濾過し、濾液を吸水ポンプ真空下にロータリーエバポレーターで濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、３８ｍｇのアミド（１１）の白色の油を得る（収率：１９％）。ＰＭＲ：０．９０（３Ｈ），１．３１（６Ｈ），１．５５（４Ｈ），１．７６（３Ｈ），２．１５（５Ｈ），２．５３（２Н），３．３４（２Ｈ），３．５３（２Ｈ），４．０１（１Ｈ），４．１８（４Ｈ），４．５６（２Ｈ），５．４０（２Ｈ），５．５７（２Ｈ），５．７１（１Ｈ），６．２５（１Ｈ）．質量スペクトル，ｍ／ｚ：５５２．２９８３［Ｍ＋Ｎａ］＋．
【００６３】
【数１０】
2021524862.tif 000015
【００６４】
２−アミノエチル−２−（ニトロキシ）−１−［（ニトロキシ）メチル］エチル］炭酸塩を有するプロスタグランジンＦ２αアミド（１２）
【００６５】
【化５】
2021524862.tif 000016
【００６６】
３２ｍｇ（０．１２μｍｏｌ）のジスクシンイミジル炭酸塩および２０μＬ（０．１４μｍｏｌ）のＥｔ３ＮКを５５ｍｇ（０．１４μｍｏｌ）のエタノールアミンを有するプロスタグランジンＦ２αアミドを含有するジクロロメタン１．５ｍＬの溶液に添加し、２３℃で４０分間混合する。その後、２５ｍｇ（０．１４μｍｏｌ）のグリセロール二硝酸塩および１６ｍｇ（０．１４μｍｏｌ）のＮ−ジメチルアミノピリジンを添加し、４℃で１８時間混合する。溶媒を蒸発させ、残留物を２０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、２ＭのＮａＨＳＯ４水溶液（２０ｍＬ）およびＮａＣｌの飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。乾燥物を濾過し、濾液を吸水ポンプ真空下にロータリーエバポレーターで濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、２０ｍｇのアミド（１２）の白色の油を得る（収率：１９％）。ＰＭＲ：０．８４（３Ｈ），１．２４−１．５３（１２Ｈ），２．０１（８Ｈ），２．３９（１Ｈ），２．５１（１Ｈ），２．６４（２Ｈ），３．６４（２Ｈ），４．００（２Ｈ），４．１８（１Ｈ），４．４６（２Ｈ），４．８１（２Ｈ），５．３１（５Ｈ），７．９５（１Ｈ）．質量スペクトル，ｍ／ｚ：６２８．２７７０［Ｍ＋Ｎａ］＋，５８８．２８４３［Ｍ＋Ｈ−Ｈ２Ｏ］＋．
【実施例４】
【００６７】
プロスタグランジンＦ２α誘導体の細胞毒性活性
３Т３ーＬ１細胞を湿度９５％、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で培養した。培養は、７％のＦСＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンおよび０．２５μｇ／ｍＬのアムホテリシンＢを含有するＤＭＥＭ培地で行った。細胞は４８〜７２時間毎に継代培養した。懸濁の目的で、細胞をバーゼン液中で１分間、トリプシン−ＥＤＴＡ液（０．２５％）中で１分間培養した。
【００６８】
細胞培養に対する物質の影響の評価
９６穴プレートのＭＴＴテスト用培地１００μＬを含むウェル（単層）に３００００個の細胞を接種した。２４時間の培養後、テスト物質を細胞培養に使用した培地と同じ培地１００μＬに加え、新しい培地に交換した細胞に添加した。細胞をテスト物質と共に、２４時間培養した。細胞培養と同じ培地１００μＬを添加された細胞を陽性コントロールとして使用した。
【００６９】
ＭＴＴアッセイを使用した培養物中の細胞生存の評価
培養後、培地を各ウェルから除去し、その後１００μＬのＭＴＴ液（０．５ｍｇ／ｍＬのМТТおよび３．５ｍｇ／ｍＬのＤ−グルコースを含有するハンクス液）を各ウェルに添加した。プレートをСО２インキュベーター（エッペンドルフ、独）内に１．５時間置いた。その後、ＭＴＴを除去し、１００μＬのＤＭＳＯを各ウェルに添加し、撹拌機を使用して５５０ｒｐｍで２分間混合した。その後、溶液の光学濃度をプレートリーダー（ＥＦＯＳ９３０５、ＯＡＯ  МＺ  Ｓａｐｐｈｉｒ）を使用して波長５７６ｎｍおよび６２０ｎｍで測定した。
【００７０】
全てのテスト物質が、１００μＭの濃度まで顕著な細胞毒性を示さなかった（表１）。
【００７１】
【表１】
2021524862.tif 000017
【実施例５】
【００７２】
プロスタグランジンＦ２α誘導体に起因する眼内圧の低下
この研究は、体重２．５〜３ｋｇのチンチラウサギで行った。ＩＯＰは自動手動獣医眼圧計Ｔｏｎｏｖｅｔ（Ｉｃａｒｅ、フィンランド）により測定した。
【００７３】
２グループのウサギを各サンプルのテストに使用した。
【００７４】
５匹のウサギの両眼にサンプルを単回点眼した。
【００７５】
５匹のウサギの両眼に生理食塩水を単回点眼した。
【００７６】
全てのテストサンプルを、使い捨てピペットを使用して２滴点眼した。ＩＯＰを点眼の前および１時間毎に６時間にわたって測定した。結果を表２に示す。テストした物質の全てが、正常圧のウサギの眼内圧を低下させることができた。この効果は化合物３および６においてより顕著である。
【００７７】
【表２】
2021524862.tif 000018
【実施例６】
【００７８】
プロスタグランジンＦ２α誘導体に起因する細胞内カルシウム濃度の上昇
３Ｔ３−Ｌ１細胞を、１０％のウシ胎児血清（ＦＣＳ）、４ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンおよび２．５μｇ／ｍＬのアムホテリシンＢを含有するＤＭＥＭ培地で培養した。細胞は湿度９５％、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で培養した。
【００７９】
実験時の細胞密度は９６穴プレートの１ウェル当たり７０００、カルシウム緑色染料（１．５ｍＭ、０．４％のＰｌｕｒｏｎｉｃＦ−６２を含有するＢＳＡ不含培養培地に３７℃で１時間充填し、充填後に２００μＬの培養培地を３回洗浄）、培養培地：ハンクス液，  １ｇ／ＬのＤ−グルコース、１ｍｇ／ｍＬの脂肪不含ＢＳＡ、エタノールへの物質の導入（＜０．５％最終濃度）、２５℃で培養、励起波長４８５ｎｍおよび発光波長５３５ｎｍで検出。
【００８０】
結果
テスト物質の３Ｔ３−Ｌ１細胞への添加により細胞内カルシウム濃度が増加する。このように、参照物質、６７μＭのプロスタグランジンＦ２αおよびプロスタミドＦ２（プロスタグランジンＦ２α  エタノールアミド）、を添加すると、カルシウムセンサー蛍光が１０分間でコントロールと比較してそれぞれ１９５ＡＵおよび１８５ＡＵ増加するが、物質３が存在するとそのような増加は４０５ＡＵであった。
【実施例７】
【００８１】
プロスタグランジンＦ２α誘導体に起因する窒素酸化物の生成
３Т３−Ｌ１細胞を湿度９５％、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で培養した。培養は、７％のＦСＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンおよび０．２５μｇ／ｍＬのアムホテリシンＢを含有するＤＭＥＭ培地で行った。細胞は４８〜７２時間毎に継代培養した。懸濁の目的で、細胞をバーゼン液中で２〜３分間およびトリプシン−ＥＤＴＡ液（０．２５％）中で培養した。
【００８２】
ＮＯ生成レベルの決定
９６穴プレートの培地１００μＬを含むウェル（単層）に３００００個の細胞を接種した。物質の培養を２０時間続けた。その後、培地の一定量を各ウェルから採取し、ＮＯ濃度をグリース変法により決定した。１２．５μＬの０．０４％のスルファニルアミド水溶液をＥＩＡ用の９６穴プレートのウェル中の７５μＬの培地に添加し、遮光して室温に１０分間維持した後、２％のナフチルエチレンジアミンを含有する３ＭのＨＣＬ溶液１２．５μＬを添加し、再度遮光して室温に１０分間維持した後、光吸収を５４０ｎｍの波長で決定した。
【００８３】
ほとんどのテスト化合物の窒素酸化物生成の誘導による最大活性は、テスト物質濃度が１００μＭの際に観察された。結果を表３に示す。
【００８４】
【表３】
2021524862.tif 000019
【００８５】
しかし、プロスタグランジンＦ２αアミド（３）では、最も効果的な濃度は２５μＭであった。この濃度で、３Т３ーＬ１細胞の一酸化窒素レベルは、図１に示すコントロールに比較して６０％上昇した。
【図１】
2021524862.tif 000021
【国際調査報告】
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