(57)【要約】本発明は、式Iの化合物、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、または製剤に関する。式Iの化合物は、低密度リポタンパク質受容体を有意に増加させ、コレステロール上昇の予防および処置に有用である。2021501210.tif 000060
2021501210.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の血流中の低密度リポタンパク質 (LDL)-コレステロールレベルを低下させる方法であって、該対象に、下記式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物のLDL低下量を投与する段階を含む、方法：
2021501210.tif 000055
式中、
Y-Xは、-C(R7)(R7a)N(R’)C(O)-;-C(R7)(R7a)OC(O)-;-C(R7)(R7a)N(R’)C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)S(O)2C(R6)(R6a)-;-S(O)2C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)C(R6)(R6a)-;-O-C(R6)(R6a)-;-N(R’)C(R6)(R6a)-;または-C(R7)(R7a)OC(R6)(R6a)-であり、ここでR6、R6a、R7、およびR7aの各々は、独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され、R’はH、C1〜6アルキル、ベンジル、S(O)2R”、およびC(O)R”より選択され、かつR”はC1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;
QがHである場合、PおよびR3は存在せず;
QがCH3である場合、PおよびR3は存在せず;
QはCH2またはC(O)であり;
PがHである場合、R3は存在せず;
Pは-O-、-N(R8)(R8a)であるか、または存在せず、ここでR8およびR8aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;
R1は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R9)、-C(O)O(R9)、-C(O)N(R9)(R9a)、または-S(O)2N(R9)(R9a)であり、ここでR9およびR9aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;
R2は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R10)、-C(O)O(R10)、または-C(O)N(R10)(R10a)であり、ここでR10およびR10aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;あるいはR1およびR2は一緒に炭素環系または複素環系を形成するオルト置換基であり;
R3はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、複素環であるか、または存在せず;
R5はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であるか;あるいはR3とR5は結合して複素環系を形成し;
R4はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であり;かつ
mは0または1である。
【請求項２】
QがCH2であり、Pが-O-であり、R3がHであり、Y-Xが-CH2NHCH2-または-CH2NHC(O)-であり、R1がハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2が存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4がHまたはベンジルであり、かつR5がHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項1記載の方法。
【請求項３】
QがCH2であり、Pが-O-であり、R3がCH3であり、Y-Xが-CH2OCH2-であり、R1がハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2が存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4がHまたはベンジルであり、かつR5がHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項1記載の方法。
【請求項４】
前記化合物が5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項1記載の方法。
【請求項５】
前記化合物が5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項1記載の方法。
【請求項６】
前記化合物が5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項1記載の方法。
【請求項７】
前記対象が、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、糖尿病性合併症、異脂肪血症、高脂血症、低αリポタンパク血症、メタボリックシンドローム、脳卒中、血管性認知症、慢性腎疾患、冠状動脈性心疾患、冠動脈疾患、網膜症、炎症、血栓症、末梢血管疾患、またはうっ血性心不全と診断されている、請求項1記載の方法。
【請求項８】
高コレステロール血症がヘテロ接合性家族性高コレステロール血症である、請求項7記載の方法。
【請求項９】
高コレステロール血症がホモ接合性家族性高コレステロール血症である、請求項7記載の方法。
【請求項１０】
アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、糖尿病性合併症、異脂肪血症、高脂血症、低αリポタンパク血症、メタボリックシンドローム、脳卒中、血管性認知症、慢性腎疾患、冠状動脈性心疾患、冠動脈疾患、網膜症、炎症、血栓症、末梢血管疾患、またはうっ血性心不全を処置する方法であって、それを必要とする対象に、下記式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量を投与する段階を含む、方法：
2021501210.tif 000056
式中、
Y-Xは、-C(R7)(R7a)N(R’)C(O)-;-C(R7)(R7a)OC(O)-;-C(R7)(R7a)N(R’)C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)S(O)2C(R6)(R6a)-;-S(O)2C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)C(R6)(R6a)-;-O-C(R6)(R6a)-;-N(R’)C(R6)(R6a)-;または-C(R7)(R7a)OC(R6)(R6a)-であり、ここでR6、R6a、R7、およびR7aの各々は、独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され、R’はH、C1〜6アルキル、ベンジル、S(O)2R”、およびC(O)R”より選択され、かつR”はC1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;
QがHである場合、PおよびR3は存在せず;
QがCH3である場合、PおよびR3は存在せず;
QはCH2またはC(O)であり;
PがHである場合、R3は存在せず;
Pは-O-、-N(R8)(R8a)であるか、または存在せず、ここでR8およびR8aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;
R1は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R9)、-C(O)O(R9)、-C(O)N(R9)(R9a)、または-S(O)2N(R9)(R9a)であり、ここでR9およびR9aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;
R2は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R10)、-C(O)O(R10)、または-C(O)N(R10)(R10a)であり、ここでR10およびR10aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;あるいはR1およびR2は一緒に炭素環系または複素環系を形成するオルト置換基であり;
R3はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、複素環であるか、または存在せず;
R5はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であるか;あるいはR3とR5は結合して複素環系を形成し;
R4はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であり;かつ
mは0または1である。
【請求項１１】
QがCH2であり、Pが-O-であり、R3がHであり、Y-Xが-CH2NHCH2-または-CH2NHC(O)-であり、R1がハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2が存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4がHまたはベンジルであり、かつR5がHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
QがCH2であり、Pが-O-であり、R3がCH3であり、Y-Xが-CH2OCH2-であり、R1がハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2が存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4がHまたはベンジルであり、かつR5がHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項10記載の方法。
【請求項１３】
前記化合物が5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項10記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物が5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項10記載の方法。
【請求項１５】
前記化合物が5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項10記載の方法。
【請求項１６】
高コレステロール血症がヘテロ接合性家族性高コレステロール血症である、請求項10記載の方法。
【請求項１７】
高コレステロール血症がホモ接合性家族性高コレステロール血症である、請求項10記載の方法。
【請求項１８】
前記化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む薬学的組成物が、前記対象に投与される、請求項1または10記載の方法。
【請求項１９】
細胞を、下記式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の有効量と接触させる段階を含む、細胞における低密度リポタンパク質受容体 (LDLR)の発現を誘導する方法：
2021501210.tif 000057
式中、
Y-Xは、-C(R7)(R7a)N(R’)C(O)-;-C(R7)(R7a)OC(O)-;-C(R7)(R7a)N(R’)C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)S(O)2C(R6)(R6a)-;-S(O)2C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)C(R6)(R6a)-;-O-C(R6)(R6a)-;-N(R’)C(R6)(R6a)-;または-C(R7)(R7a)OC(R6)(R6a)-であり、ここでR6、R6a、R7、およびR7aの各々は、独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され、R’はH、C1〜6アルキル、ベンジル、S(O)2R”、およびC(O)R”より選択され、かつR”はC1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;
QがHである場合、PおよびR3は存在せず;
QがCH3である場合、PおよびR3は存在せず;
QはCH2またはC(O)であり;
PがHである場合、R3は存在せず;
Pは-O-、-N(R8)(R8a)であるか、または存在せず、ここでR8およびR8aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;
R1は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R9)、-C(O)O(R9)、-C(O)N(R9)(R9a)、または-S(O)2N(R9)(R9a)であり、ここでR9およびR9aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;
R2は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R10)、-C(O)O(R10)、または-C(O)N(R10)(R10a)であり、ここでR10およびR10aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;あるいはR1およびR2は一緒に炭素環系または複素環系を形成するオルト置換基であり;
R3はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、複素環であるか、または存在せず;
R5はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であるか;あるいはR3とR5は結合して複素環系を形成し;
R4はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であり;かつ
mは0または1である。
【請求項２０】
QがCH2であり、Pが-O-であり、R3がHであり、Y-Xが-CH2NHCH2-または-CH2NHC(O)-であり、R1がハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2が存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4がHまたはベンジルであり、かつR5がHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項19記載の方法。
【請求項２１】
QがCH2であり、Pが-O-であり、R3がCH3であり、Y-Xが-CH2OCH2-であり、R1が、ハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2が存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4がHまたはベンジルであり、かつR5がHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項19記載の方法。
【請求項２２】
前記化合物が5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項19記載の方法。
【請求項２３】
前記化合物が5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項19記載の方法。
【請求項２４】
前記化合物が5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項19記載の方法。
【請求項２５】
前記細胞が心血管系細胞である、請求項19記載の方法。
【請求項２６】
前記細胞が対象内に存在している、請求項19記載の方法。
【請求項２７】
細胞を、下記式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の有効量と接触させる段階を含む、細胞におけるLDLR mRNA活性を調節する方法：
2021501210.tif 000058
式中、
Y-Xは、-C(R7)(R7a)N(R’)C(O)-;-C(R7)(R7a)OC(O)-;-C(R7)(R7a)N(R’)C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)S(O)2C(R6)(R6a)-;-S(O)2C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)C(R6)(R6a)-;-O-C(R6)(R6a)-;-N(R’)C(R6)(R6a)-;または-C(R7)(R7a)OC(R6)(R6a)-であり、ここでR6、R6a、R7、およびR7aの各々は、独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され、R’はH、C1〜6アルキル、ベンジル、S(O)2R”、およびC(O)R”より選択され、かつR”はC1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;
QがHである場合、PおよびR3は存在せず;
QがCH3である場合、PおよびR3は存在せず;
QはCH2またはC(O)であり;
PがHである場合、R3は存在せず;
Pは-O-、-N(R8)(R8a)であるか、または存在せず、ここでR8およびR8aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;
R1は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R9)、-C(O)O(R9)、-C(O)N(R9)(R9a)、または-S(O)2N(R9)(R9a)であり、ここでR9およびR9aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;
R2は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R10)、-C(O)O(R10)、または-C(O)N(R10)(R10a)であり、ここでR10およびR10aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;あるいはR1およびR2は一緒に炭素環系または複素環系を形成するオルト置換基であり;
R3はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、複素環であるか、または存在せず;
R5はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であるか;あるいはR3とR5は結合して複素環系を形成し;
R4はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であり;かつ
mは0または1である。
【請求項２８】
QがCH2であり、Pが-O-であり、R3がHであり、Y-Xが-CH2NHCH2-または-CH2NHC(O)-であり、R1がハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2が存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4がHまたはベンジルであり、かつR5がHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項27記載の方法。
【請求項２９】
QがCH2であり、Pが-O-であり、R3がCH3であり、Y-Xが-CH2OCH2-であり、R1がハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2が存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4がHまたはベンジルであり、かつR5がHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項27記載の方法。
【請求項３０】
前記化合物が5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項27記載の方法。
【請求項３１】
前記化合物が5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項27記載の方法。
【請求項３２】
前記化合物が5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項27記載の方法。
【請求項３３】
前記化合物がスタチンと組み合わせて投与される、請求項4〜6、13〜15、22〜24、または30〜32のいずれか一項記載の方法。
【請求項３４】
スタチンがアトルバスタチンである、請求項33記載の方法。
【請求項３５】
調節することが、LDLR mRNA活性を誘導することを含む、請求項27記載の方法。
【請求項３６】
調節することが、LDLR mRNA活性を安定させることを含む、請求項27記載の方法。
【請求項３７】
第2のコレステロール低下剤を前記対象に投与する段階をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項３８】
第2のコレステロール低下剤が、リパーゼ阻害剤、3-ヒドロキシ-3-メチル-グルタリル-補酵素A(HMG-CoA)還元酵素阻害剤、HMG-CoA合成酵素阻害剤、コレステリルエステル転送タンパク質(CETP)阻害剤、胆汁酸吸収阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、コレステロール合成阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤、スクアレンエポキシダーゼもしくはシクラーゼ阻害剤または両者の組み合わせ、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質(MTP)/アポリポタンパク質B(アポB)分泌阻害剤、フィブラート系薬剤、ナイアシン単独またはロバスタチンと組み合わせたナイアシン、イオン交換樹脂、抗酸化剤、アシル補酵素A：コレステロールアシルトランスフェラーゼ(ACAT)阻害剤および胆汁酸封鎖剤、HMG-CoA還元酵素遺伝子発現阻害剤、HMG-CoA合成酵素遺伝子発現阻害剤、またはプロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン9型(PCSK9)阻害剤である、請求項37記載の方法。
【請求項３９】
コレステロール合成阻害剤がスタチンである、請求項38記載の方法。
【請求項４０】
スタチンがアトルバスタチンである、請求項39記載の方法。
【請求項４１】
前記対象が、式1の化合物の投与に先行して、リパーゼ阻害剤、3-ヒドロキシ-3-メチル-グルタリル-補酵素A(HMG-CoA)還元酵素阻害剤、HMG-CoA合成酵素阻害剤、コレステリルエステル転送タンパク質(CETP)阻害剤、胆汁酸吸収阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、コレステロール合成阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤、スクアレンエポキシダーゼもしくはシクラーゼ阻害剤または両者の組み合わせ、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質(MTP)/アポリポタンパク質B(アポB)分泌阻害剤、フィブラート系薬剤、ナイアシン単独またはロバスタチンと組み合わせたナイアシン、イオン交換樹脂、抗酸化剤、アシル補酵素A：コレステロールアシルトランスフェラーゼ(ACAT)阻害剤および胆汁酸封鎖剤、HMG-CoA還元酵素遺伝子発現阻害剤、HMG-CoA合成酵素遺伝子発現阻害剤、またはプロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン9型(PCSK9)阻害剤で処置された、請求項1または10記載の方法。
【請求項４２】
前記先行投与が、前記対象の血流中のコレステロールレベルを効果的には低下させなかった、請求項41記載の方法。
【請求項４３】
対象の血流中のコレステロールレベルを低下させるための、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、糖尿病性合併症、異脂肪血症、高脂血症、低αリポタンパク血症、メタボリックシンドローム、脳卒中、血管性認知症、慢性腎疾患、冠状動脈性心疾患、冠動脈疾患、網膜症、炎症、血栓症、末梢血管疾患、もしくはうっ血性心不全を処置するための、細胞もしくは組織における低密度リポタンパク質受容体（LDLR）の発現を誘導するための、または細胞もしくは組織におけるLDLR mRNA活性を誘導するもしくは安定させるための医薬の製造における、下記式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用：
2021501210.tif 000059
式中、
Y-Xは、-C(R7)(R7a)N(R’)C(O)-;-C(R7)(R7a)OC(O)-;-C(R7)(R7a)N(R’)C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)S(O)2C(R6)(R6a)-;-S(O)2C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)C(R6)(R6a)-;-O-C(R6)(R6a)-;-N(R’)C(R6)(R6a)-;または-C(R7)(R7a)OC(R6)(R6a)-であり、ここでR6、R6a、R7、およびR7aの各々は、独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され、R’はH、C1〜6アルキル、ベンジル、S(O)2R”、およびC(O)R”より選択され、かつR”はC1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;
QがHである場合、PおよびR3は存在せず;
QがCH3である場合、PおよびR3は存在せず;
QはCH2またはC(O)であり;
PがHである場合、R3は存在せず;
Pは-O-、-N(R8)(R8a)であるか、または存在せず、ここでR8およびR8aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;
R1は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R9)、-C(O)O(R9)、-C(O)N(R9)(R9a)、または-S(O)2N(R9)(R9a)であり、ここでR9およびR9aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;
R2は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R10)、-C(O)O(R10)、または-C(O)N(R10)(R10a)であり、ここでR10およびR10aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;あるいはR1およびR2は一緒に炭素環系または複素環系を形成するオルト置換基であり;
R3はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、複素環であるか、または存在せず;
R5はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であるか;あるいはR3とR5は結合して複素環系を形成し;
R4はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であり;かつ
mは0または1である。
【請求項４４】
前記化合物が5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項43記載の使用。
【請求項４５】
前記化合物が5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項43記載の使用。
【請求項４６】
前記化合物が5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである、請求項43記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、式Iのピリドキシン由来化合物、その薬学的に許容される塩または溶媒和物、式Iの1つまたは複数の化合物を含む薬学的製剤、式Iの化合物を合成または製造する方法、および低密度リポタンパク質受容体 (LDLR)のモジュレーター (例えば、エンハンサー)としての該化合物の使用に指向する。本発明の化合物は、血漿コレステロールの上昇の予防、処置、アテローム性動脈硬化症 (ASCVD)の発症の遅延または進行の遅延に有用である。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
動脈の疾患であるアテローム性動脈硬化症は、ヨーロッパ、カナダ、および米国における主要な死因であると認識されている。アテローム性動脈硬化症および閉塞性心疾患の病理につながる一連の事象は周知である。この一連の最も初期の段階は、大血管における病変「脂肪線条」の形成である。脂肪線条内に見られるほとんどのコレステロールが次々に「線維性プラーク」の発生を引き起こし、細胞とマトリックスタンパク質が細胞破片と細胞外脂質のより深い沈着物を覆う線維性キャップを形成すると仮定される。疫学調査は、アテローム性動脈硬化症に起因した心血管疾患 (CVD)を引き起こす主な危険因子として高脂血症 (すなわち、高血漿脂質)を確固たるものとしている。アテローム発生につながる最も重要な要因は、長年の高コレステロール血症、動脈血管中のコレステロール沈着をもたらす低密度リポタンパク質 (LDL)の高い循環レベルである。
【０００３】
医療専門職のリーダーは、最近、ASCVDの予防に不可欠な段階として、血漿コレステロールレベルとLDLコレステロールレベルを下げることに新たな重点を置いている。欧米の人々は高いリスクにさらされている。追加の危険因子には、男性、閉経後の女性、高血圧、耐糖能異常、インスリン抵抗性、タバコの使用、運動不足、ストレス、および左室肥大が含まれる。一般集団および糖尿病対象における高脂血症の治療の成功は、医学的に非常に重要である。
【０００４】
総循環コレステロールの大部分を担う血漿LDL粒子は、肝LDL受容体 (LDLR)に結合し、エンドサイトーシスされ、異化されることによって除かれる。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の化合物は、低密度リポタンパク質受容体 (LDLR)活性を増強するため、とりわけ、低密度リポタンパク質受容体産生を誘導するため、並びに血漿コレステロールの上昇および関連する状態を処置するために有用である。本発明は、参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第8,742,123号B2に記載されている、ピリドキシンおよびその薬学的に許容される誘導体 (例えば、塩および溶媒和物)に由来する一連の低密度リポタンパク質受容体誘導剤に関する。
【０００６】
本発明の化合物は、LDLR活性を増強するため、とりわけLDLR産生を誘導するため、並びに血漿コレステロールの上昇および関連する状態を処置するために有用である。本発明は、参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第8,742,123号に記載されている、ピリドキシンおよびその薬学的に許容される誘導体 (例えば、塩および溶媒和物)に由来する一連のLDLR誘導剤に関する。
【０００７】
したがって、第1の局面において、本発明は、対象の血流中の低密度リポタンパク質 (LDL)-コレステロールレベルを低下させる方法を特徴とする。この方法は、下記式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物のLDL低下量を対象に投与する段階を含む：
2021501210.tif 000003
式中、Y-Xは、-C(R7)(R7a)N(R’)C(O)-;-C(R7)(R7a)OC(O)-;-C(R7)(R7a)N(R’)C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)S(O)2C(R6)(R6a)-;-S(O)2C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)C(R6)(R6a)-;-O-C(R6)(R6a)-;-N(R’)C(R6)(R6a)-;または-C(R7)(R7a)OC(R6)(R6a)-であり、ここでR6、R6a、R7、およびR7aの各々は、独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され、R’はH、C1〜6アルキル、ベンジル、S(O)2R”、およびC(O)R”より選択され、かつR”はC1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;QがHである場合、PおよびR3は存在せず;QがCH3である場合、PおよびR3は存在せず;QはCH2またはC(O)であり;PがHである場合、R3は存在せず;Pは-O-、-N(R8)(R8a)であるか、または存在せず、ここでR8およびR8aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;R1は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R9)、-C(O)O(R9)、-C(O)N(R9)(R9a)、または-S(O)2N(R9)(R9a)であり、ここでR9およびR9aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;R2は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R10)、-C(O)O(R10)、または-C(O)N(R10)(R10a)であり、ここでR10およびR10aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;あるいはR1およびR2は一緒に炭素環系または複素環系を形成するオルト置換基であり;R3はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、複素環であるか、または存在せず;R5はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であるか;あるいはR3とR5は結合して複素環系を形成し;R4はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であり;かつmは0または1である。
【０００８】
本発明の第1の局面のいくつかの態様では、QはCH2であり、Pは-O-であり、R3はHであり、Y-Xは-CH2NHCH2-または-CH2NHC(O)-であり、R1はハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2は存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4はHまたはベンジルであり、かつR5はHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【０００９】
本発明の第1の局面の別の態様では、QはCH2であり、Pは-O-であり、R3はCH3であり、Y-Xは-CH2OCH2-であり、R1はハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2は存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4はHまたはベンジルであり、かつR5はHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００１０】
本発明の第1の局面のある態様では、化合物は5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。ある態様において、5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチン (例えば、アトルバスタチン)と組み合わせて投与される。
【００１１】
本発明の第1の局面の別の態様において、化合物は5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。ある態様において、5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチン (例えば、アトルバスタチン)と組み合わせて投与される。
【００１２】
本発明の第1の局面のさらなる態様において、化合物は5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。ある態様において、5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチン (例えば、アトルバスタチン)と組み合わせて投与される。
【００１３】
本発明の第1の局面のさらなる態様において、対象は、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、糖尿病性合併症、異脂肪血症、高脂血症、低αリポタンパク血症、メタボリックシンドローム、脳卒中、血管性認知症、慢性腎疾患、冠状動脈性心疾患、冠動脈疾患、網膜症、炎症、血栓症、末梢血管疾患、またはうっ血性心不全と診断されている。いくつかの態様において、高コレステロール血症はヘテロ接合性家族性高コレステロール血症であり、別の態様において、高コレステロール血症はホモ接合性家族性高コレステロール血症である。
【００１４】
本発明の第1の局面のいくつかの態様において、対象はアテローム性動脈硬化症と診断されている。本発明の第1の局面のいくつかの態様において、対象は高コレステロール血症と診断されている。本発明の第1の局面のいくつかの態様において、対象は高トリグリセリド血症と診断されている。本発明の第1の局面のいくつかの態様において、対象は糖尿病性合併症と診断されている。本発明の第1の局面のいくつかの態様において、対象は、脂質異常症と診断されている。本発明の第1の局面のいくつかの態様において、対象は高脂血症と診断されている。本発明の第1の局面のいくつかの態様において、対象は低αリポタンパク血症と診断されている。本発明の第１の局面のいくつかの態様において、対象はメタボリックシンドロームと診断されている。本発明の第１の局面のいくつかの態様において、対象は脳卒中と診断されている。本発明の第１の局面のいくつかの態様において、対象は血管性認知症と診断されている。本発明の第１の局面のいくつかの態様において、対象は慢性腎疾患と診断されている。本発明の第１の局面のいくつかの態様において、対象は冠状動脈性心疾患と診断されている。本発明の第１の局面のいくつかの態様において、対象は冠状動脈疾患と診断されている。本発明の第１の局面のいくつかの態様において、対象は網膜症と診断されている。本発明の第１の局面のいくつかの態様において、対象は炎症と診断されている。本発明の第１の局面のいくつかの態様において、対象は血栓症と診断されている。本発明の第１の局面のいくつかの態様において、対象は末梢血管疾患と診断されている。本発明の第１の局面のいくつかの態様において、対象はうっ血性心不全と診断されている。
【００１５】
第2の局面において、本発明は、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、糖尿病性合併症、異脂肪血症、高脂血症、低αリポタンパク血症、メタボリックシンドローム、脳卒中、血管性認知症、慢性腎疾患、冠状動脈性心疾患、冠動脈疾患、網膜症、炎症、血栓症、末梢血管疾患、またはうっ血性心不全を処置する方法を特徴とする。この方法は、それを必要とする対象に、下記式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量を投与する段階を含む：
2021501210.tif 000004
式中、Y-Xは、-C(R7)(R7a)N(R’)C(O)-;-C(R7)(R7a)OC(O)-;-C(R7)(R7a)N(R’)C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)S(O)2C(R6)(R6a)-;-S(O)2C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)C(R6)(R6a)-;-O-C(R6)(R6a)-;-N(R’)C(R6)(R6a)-;または-C(R7)(R7a)OC(R6)(R6a)-であり、ここでR6、R6a、R7、およびR7aの各々は、独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され、R’はH、C1〜6アルキル、ベンジル、S(O)2R”、およびC(O)R”より選択され、かつR”はC1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;QがHである場合、PおよびR3は存在せず;QがCH3である場合、PおよびR3は存在せず;QはCH2またはC(O)であり;PがHである場合、R3は存在せず;Pは-O-、-N(R8)(R8a)であるか、または存在せず、ここでR8およびR8aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;R1は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R9)、-C(O)O(R9)、-C(O)N(R9)(R9a)、または-S(O)2N(R9)(R9a)であり、ここでR9およびR9aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;R2は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R10)、-C(O)O(R10)、または-C(O)N(R10)(R10a)であり、ここでR10およびR10aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;あるいはR1およびR2は一緒に炭素環系または複素環系を形成するオルト置換基であり;R3はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、複素環であるか、または存在せず;R5はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であるか;あるいはR3とR5は結合して複素環系を形成し;R4はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であり;かつmは0または1である。
【００１６】
本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、アテローム性動脈硬化症を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、高コレステロール血症を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、高トリグリセリド血症を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、糖尿病性合併症を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、異脂肪血症を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、高脂血症を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、低αリポタンパク血症を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、メタボリックシンドロームを処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、脳卒中を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、血管性認知症を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、慢性腎疾患を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、冠状動脈性心疾患を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、冠動脈疾患を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、網膜症を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、炎症を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、血栓症を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、末梢血管疾患を処置する。本発明の第2の局面のいくつかの態様において、前記方法は、うっ血性心不全を処置する。
【００１７】
本発明の第2の局面のいくつかの態様では、QはCH2であり、Pは-O-であり、R3はHであり、Y-Xは-CH2NHCH2-または-CH2NHC(O)-であり、R1はハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2は存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4はHまたはベンジルであり、かつR5はHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００１８】
本発明の第2の局面の別の態様では、QはCH2であり、Pは-O-であり、R3はCH3であり、Y-Xは-CH2OCH2-であり、R1はハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2は存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4はHまたはベンジルであり、かつR5はHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００１９】
本発明の第2の局面の特定の態様では、化合物は5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。ある態様において、5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチン (例えば、アトルバスタチン)と組み合わせて投与される。
【００２０】
本発明の第2の局面の別の態様において、化合物は5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。ある態様において、5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチン (例えば、アトルバスタチン)と組み合わせて投与される。
【００２１】
本発明の第2の局面のさらなる態様において、化合物は5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。ある態様において、5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチン (例えば、アトルバスタチン)と組み合わせて投与される。
【００２２】
本発明の第2の局面のある態様において、高コレステロール血症はヘテロ接合性家族性高コレステロール血症であり、本発明の第2の局面の別の態様において、高コレステロール血症はホモ接合性家族性高コレステロール血症である。
【００２３】
本発明の第1の局面または第2の局面のさらなる態様において、化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む薬学的組成物が対象に投与される。
【００２４】
第3の局面において、本発明は、細胞における低密度リポタンパク質受容体 (LDLR)の発現を誘導する方法を特徴とする。この方法は、細胞を、下記式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の有効量と接触させる段階を含む：
2021501210.tif 000005
式中、Y-Xは、-C(R7)(R7a)N(R’)C(O)-;-C(R7)(R7a)OC(O)-;-C(R7)(R7a)N(R’)C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)S(O)2C(R6)(R6a)-;-S(O)2C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)C(R6)(R6a)-;-O-C(R6)(R6a)-;-N(R’)C(R6)(R6a)-;または-C(R7)(R7a)OC(R6)(R6a)-であり、ここでR6、R6a、R7、およびR7aの各々は、独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され、R’はH、C1〜6アルキル、ベンジル、S(O)2R”、およびC(O)R”より選択され、かつR”はC1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;QがHである場合、PおよびR3は存在せず;QがCH3である場合、PおよびR3は存在せず;QはCH2またはC(O)であり;PがHである場合、R3は存在せず;Pは-O-、-N(R8)(R8a)であるか、または存在せず、ここでR8およびR8aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;R1は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R9)、-C(O)O(R9)、-C(O)N(R9)(R9a)、または-S(O)2N(R9)(R9a)であり、ここでR9およびR9aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;R2は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R10)、-C(O)O(R10)、または-C(O)N(R10)(R10a)であり、ここでR10およびR10aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;あるいはR1およびR2は一緒に炭素環系または複素環系を形成するオルト置換基であり;R3はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、複素環であるか、または存在せず;R5はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であるか;あるいはR3とR5は結合して複素環系を形成し;R4はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であり;かつmは0または1である。
【００２５】
本発明の第3の局面のある態様では、QはCH2であり、Pは-O-であり、R3はHであり、Y-Xは-CH2NHCH2-または-CH2NHC(O)-であり、R1はハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2は存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4はHまたはベンジルであり、かつR5はHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００２６】
本発明の第3の局面の別の態様では、QはCH2であり、Pは-O-であり、R3はCH3であり、Y-Xは-CH2OCH2-であり、R1はハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2は存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4はHまたはベンジルであり、かつR5はHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００２７】
本発明の第3の局面の特定の態様では、化合物は5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。ある態様において、5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチン (例えば、アトルバスタチン)と組み合わせて投与される。
【００２８】
本発明の第3の局面の別の態様において、化合物は5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。ある態様において、5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチン (例えば、アトルバスタチン)と組み合わせて投与される。
【００２９】
本発明の第3の局面のさらなる態様において、化合物は5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。ある態様において、5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチン (例えば、アトルバスタチン)と組み合わせて投与される。
【００３０】
本発明の第3の局面のさらなる態様において、細胞は心血管系細胞であり、本発明の第3の局面の別の態様において、細胞は組織内に存在し、さらなる態様において、細胞または組織は対象内に存在している。
【００３１】
第4の局面において、本発明は、細胞におけるLDLR mRNA活性を調節する方法を特徴とする。この方法は、細胞を、下記式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の有効量と接触させる段階を含む：
2021501210.tif 000006
式中、Y-Xは、-C(R7)(R7a)N(R’)C(O)-;-C(R7)(R7a)OC(O)-;-C(R7)(R7a)N(R’)C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)S(O)2C(R6)(R6a)-;-S(O)2C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)C(R6)(R6a)-;-O-C(R6)(R6a)-;-N(R’)C(R6)(R6a)-;または-C(R7)(R7a)OC(R6)(R6a)-であり、ここでR6、R6a、R7、およびR7aの各々は、独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され、R’はH、C1〜6アルキル、ベンジル、S(O)2R”、およびC(O)R”より選択され、かつR”はC1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;QがHである場合、PおよびR3は存在せず;QがCH3である場合、PおよびR3は存在せず;QはCH2またはC(O)であり;PがHである場合、R3は存在せず;Pは-O-、-N(R8)(R8a)であるか、または存在せず、ここでR8およびR8aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;R1は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R9)、-C(O)O(R9)、-C(O)N(R9)(R9a)、または-S(O)2N(R9)(R9a)であり、ここでR9およびR9aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;R2は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R10)、-C(O)O(R10)、または-C(O)N(R10)(R10a)であり、ここでR10およびR10aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;あるいはR1およびR2は一緒に炭素環系または複素環系を形成するオルト置換基であり;R3はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、複素環であるか、または存在せず;R5はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であるか;あるいはR3とR5は結合して複素環系を形成し;R4はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であり;かつmは0または1である。
【００３２】
本発明の第4の局面のいくつか態様では、QはCH2であり、Pは-O-であり、R3はHであり、Y-Xは-CH2NHCH2-または-CH2NHC(O)-であり、R1はハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2は存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4はHまたはベンジルであり、かつR5はHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００３３】
本発明の第4の局面の別の態様では、QはCH2であり、Pは-O-であり、R3はCH3であり、Y-Xは-CH2OCH2-であり、R1はハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2は存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択され、R4はHまたはベンジルであり、かつR5はHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００３４】
本発明の第4の局面の特定の態様において、化合物は5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。ある態様において、5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチン (例えば、アトルバスタチン)と組み合わせて投与される。
【００３５】
本発明の第4の局面の別の態様において、化合物は5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。ある態様において、5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチン (例えば、アトルバスタチン)と組み合わせて投与される。
【００３６】
本発明の第4の局面のさらなる態様において、化合物は5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。ある態様において、5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチン (例えば、アトルバスタチン)と組み合わせて投与される。
【００３７】
本発明の第4の局面の別の態様において、調節することは、LDLR mRNA活性を誘導することを含み、本発明の第4の局面の別の態様において、調節することは、LDLR mRNA活性を安定させることを含む。
【００３８】
本発明の第1の局面のさらなる態様において、前記方法は、第2のコレステロール低下剤を対象に投与する段階を含む。いくつかの態様において、第2のコレステロール低下剤は、リパーゼ阻害剤、3-ヒドロキシ-3-メチル-グルタリル-補酵素A (HMG-CoA)還元酵素阻害剤、HMG-CoA合成酵素阻害剤、コレステリルエステル転送タンパク質 (CETP)阻害剤、胆汁酸吸収阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、コレステロール合成阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤、スクアレンエポキシダーゼもしくはシクラーゼ阻害剤または両者の組み合わせ、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質 (MTP)/アポリポタンパク質B (アポB)分泌阻害剤、フィブラート系薬剤、ナイアシン単独またはロバスタチンと組み合わせたナイアシン、イオン交換樹脂、抗酸化剤、アシル補酵素A：コレステロールアシルトランスフェラーゼ (ACAT)阻害剤および胆汁酸封鎖剤、HMG-CoA還元酵素遺伝子発現阻害剤、HMG-CoA合成酵素遺伝子発現阻害剤、またはプロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン9型 (PCSK9)阻害剤である。ある態様において、5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドは、スタチンと組み合わせて (例えば、アトルバスタチンと組み合わせて)投与される。
【００３９】
本発明の第1の局面または第2の局面のさらなる態様において、対象は、式1の化合物の投与に先行して、リパーゼ阻害剤、3-ヒドロキシ-3-メチル-グルタリル-補酵素A (HMG-CoA)還元酵素阻害剤、HMG-CoA合成酵素阻害剤、コレステリルエステル転送タンパク質 (CETP)阻害剤、胆汁酸吸収阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、コレステロール合成阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤、スクアレンエポキシダーゼもしくはシクラーゼ阻害剤または両者の組み合わせ、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質 (MTP)/アポリポタンパク質B (アポB)分泌阻害剤、フィブラート系薬剤、ナイアシン単独またはロバスタチンと組み合わせたナイアシン、イオン交換樹脂、抗酸化剤、アシル補酵素A：コレステロールアシルトランスフェラーゼ (ACAT)阻害剤および胆汁酸封鎖剤、HMG-CoA還元酵素遺伝子発現阻害剤、HMG-CoA合成酵素遺伝子発現阻害剤、またはプロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン9型 (PCSK9)阻害剤で処置された。いくつかの態様において、先行投与は、対象の血流中のコレステロールレベルを効果的には低下させなかった。
【００４０】
第5の局面において、本発明は、対象の血流中のコレステロールレベルを低下させるための、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、糖尿病性合併症、異脂肪血症、高脂血症、低αリポタンパク血症、メタボリックシンドローム、脳卒中、血管性認知症、慢性腎疾患、冠状動脈性心疾患、冠動脈疾患、網膜症、炎症、血栓症、末梢血管疾患、もしくはうっ血性心不全を処置するための、細胞もしくは組織における低密度リポタンパク質受容体 (LDLR)の発現を誘導するための、または細胞もしくは組織におけるLDLR mRNA活性を誘導するもしくは安定させるため医薬の製造における、下記式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用を特徴とする：
2021501210.tif 000007
式中、Y-Xは、-C(R7)(R7a)N(R’)C(O)-;-C(R7)(R7a)OC(O)-;-C(R7)(R7a)N(R’)C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)S(O)2C(R6)(R6a)-;-S(O)2C(R6)(R6a)-;-C(R7)(R7a)C(R6)(R6a)-;-O-C(R6)(R6a)-;-N(R’)C(R6)(R6a)-;または-C(R7)(R7a)OC(R6)(R6a)-であり、ここでR6、R6a、R7、およびR7aの各々は、独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され、R’はH、C1〜6アルキル、ベンジル、S(O)2R”、およびC(O)R”より選択され、かつR”はC1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;QがHである場合、PおよびR3は存在せず;QがCH3である場合、PおよびR3は存在せず;QはCH2またはC(O)であり;PがHである場合、R3は存在せず;Pは-O-、-N(R8)(R8a)であるか、または存在せず、ここでR8およびR8aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より選択され;R1は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R9)、-C(O)O(R9)、-C(O)N(R9)(R9a)、または-S(O)2N(R9)(R9a)であり、ここでR9およびR9aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;R2は不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R10)、-C(O)O(R10)、または-C(O)N(R10)(R10a)であり、ここでR10およびR10aは独立して、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され;あるいはR1およびR2は一緒に炭素環系または複素環系を形成するオルト置換基であり;R3はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、複素環であるか、または存在せず;R5はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であるか;あるいはR3とR5は結合して複素環系を形成し;R4はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であり;かつmは0または1である。
【００４１】
本発明の第5の局面の特定の態様において、化合物は5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。
【００４２】
本発明の第5の局面の別の特定の態様において、化合物は5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。
【００４３】
本発明の第5の局面のさらなる特定の態様において、化合物は5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。
【００４４】
定義
本明細書で使用される「冠動脈疾患」という用語は、アテローム斑 (例えば、予防、退縮、安定化)、脆弱性プラーク (例えば、予防、退縮、安定化)、脆弱プラーク領域 (減少)、動脈石灰化 (例えば、石灰沈着性大動脈狭窄)、冠動脈カルシウムスコアの上昇、機能不全の血管反応性、血管拡張障害、冠動脈攣縮、最初の心筋梗塞、心筋再梗塞、虚血性心筋症、ステント再狭窄、PTCA再狭窄、動脈再狭窄、冠状動脈バイパス移植再狭窄、血管バイパス再狭窄、運動トレッドミル時間の減少、狭心症/胸痛、不安定狭心症、労作性呼吸困難、運動能力の低下、虚血 (までの時間を短縮)、無症候性虚血 (までの時間を短縮)、虚血症状の重症度と頻度の増加、および急性心筋梗塞に対する血栓溶解療法後の再灌流を含む。
【００４５】
「高血圧」という用語は、高血圧、収縮期高血圧、および拡張期高血圧を伴う脂質障害を含む。
【００４６】
本明細書で使用される「末梢血管疾患」という用語は、末梢血管疾患および跛行を含む。
【００４７】
本明細書で使用される「糖尿病」という用語は、I型糖尿病、II型糖尿病、シンドロームX、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性に関連する脂質障害、耐糖能異常、インスリン非依存性糖尿病、微小血管糖尿病合併症、神経伝導速度の低下、視力の低下または喪失、糖尿病性網膜症、切断のリスク上昇、腎機能の低下、腎不全、インスリン抵抗性症候群、多発性メタボリックシンドローム、中枢性脂肪症 (内臓) (上半身)、糖尿病性脂質異常症、インスリン感作の減少、糖尿病性網膜症/神経障害、糖尿病性腎症/ミクロおよびマクロ血管障害およびミクロ/マクロアルブミン尿症、糖尿病性心筋症、糖尿病性胃不全麻痺、肥満、(HbA1Cを含む)ヘモグロビングリコシル化の増加、グルコース制御の改善、腎機能障害 (透析または末期)、および肝機能障害 (軽度、中等度、または重度)を含む、多くの糖尿病誘発状態のいずれかを意味する。
【００４８】
「メタボリックシンドローム」は、「シンドロームX」としても知られ、高脂血症、脂質異常症、内蔵型肥満、高血糖、高血圧、および潜在的高尿酸血症および腎機能障害を含む、他の障害に関連してインスリン濃度の上昇が存在するとして定義される一般的な臨床障害を意味する。
【００４９】
本明細書で使用される「ビタミンB6」という用語は、ビタミンB6と一般に言及される3つの化合物、すなわちピリドキサール、ピリドキサミン、およびピリドキシンの1つまたは複数を意味する。ピリドキシンはピリドキサミンとは「4」位の置換基が異なる。ピリドキシンは、ヒドロキシル、メチル、およびヒドロキシメチル置換基を有するピリジン環に基づき、ピリドキシンの生物学的に活性な形態であるピリドキサール5-リン酸にインビボで変換される。
【００５０】
本明細書で使用される「含む (comprising)」および「含む (including)」という用語は、それらのオープンで非限定的な意味で使用される。
【００５１】
本明細書で使用される「C1〜6アルキル」という用語は、直鎖または分岐鎖部分を有し、1〜6個の炭素原子を含む飽和の一価炭化水素基を意味する。C1〜6アルキル基は置換されていても置換されていなくてもよい。そのような基の例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、およびtertブチルが含まれるが、これらに限定されない。「C1〜6フルオロアルキル」という用語は、1つまたは複数のフッ素原子で置換されたC1〜6アルキルを意味する。例示的なC1〜6フルオロアルキル基には、フルオロメチル、トリフルオロメチル、およびペンタフルオロエチルが含まれるが、これらに限定されない。「C1〜6分岐アルキル」という用語は、1つまたは複数の第3級または第4級炭素原子を含むアルキル基を意味する。
【００５２】
「C1〜6アルケニル」とは、1つまたは複数の二重結合を含み、1〜6個の炭素原子を有する分岐または非分岐の炭化水素基を意味する。例えば、C2アルケニルは、単環式または多環式の環を含んでいてもよく、各環は、望ましくは3〜6員を有する。C2〜4アルケニル基は、置換されていても置換されていなくてもよい。
【００５３】
「炭素環式基」または「炭素環」とは、飽和、部分不飽和、または不飽和 (芳香族)であり、(特に明記しない限り) 3〜8個の炭素原子からなる単環式または多環式環系を意味する。炭素環式基は、そのような単環式または多環式環系で置換されたアルキル基を含む。例示的な環式基には、フェニル、ベンジル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、2-フェニルシクロプロパン、およびシクロヘキシルが含まれる。炭素環式基は置換されていても置換されていなくてもよい。
【００５４】
本明細書で使用される「複素環 (heterocycle)」および「複素環 (heterocyclic ring)」という用語は、該基の環が2つの隣接するO原子または2つの隣接するS原子を含まないことを条件として、その環系に合計3〜10個の原子を有し、2〜9個の炭素原子と、O、S、およびNからそれぞれ独立して選択される1〜4個のヘテロ原子とを含む、芳香族または非芳香族の単環式、二環式、三環式、四環式、またはスピロ環式基を意味する。さらに、そのような複素環式基は、安定な化合物をもたらす任意の利用可能な原子にオキソ置換基を含んでいてもよい。例えば、そのような基は、利用可能な炭素または窒素原子にオキソ原子を含んでいてもよい。そのような基は、化学的に実現可能な場合、複数のオキソ置換基を含んでいてもよい。加えて、そのような複素環基が硫黄原子を含む場合、硫黄原子は1個または2個の酸素原子で酸化されて、スルホキシドまたはスルホンのいずれかを与えてもよいことが理解される。4員の複素環式基の例は、(アゼチジンから誘導される)アゼチジニルである。5員の複素環式基の例はチアゾリルであり、10員の複素環式基の例はキノリニルである。そのような複素環基のさらなる例には、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、1,2,3,6-テトラヒドロピリジニル、2-ピロリニル、3-ピロリニル、インドリニル、2H-ピラニル、4H-ピラニル、ジオキサニル、1,3-ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキサニル、3-アザビシクロ[4.1.0]ヘプタニル、3H-インドリル、およびキノリジニルが含まれるが、これらに限定されない。複素環基は置換されていても置換されていなくてもよい。
【００５５】
本明細書で使用される、「ベンジル」および「フェニル」という用語は、それぞれ、置換および非置換の両方のベンジルおよびフェニル基を意味する。
【００５６】
本明細書で使用される、「置換された」という用語は、基中の1個または複数個の水素原子が、独立して、例えば、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、シアノ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシ、クロロメチル、トリクロロメチル、トリフルオロメチル、メトキシエチル、-CH2C(O)NH2、-C(O)CH2N(CH3)2、-CH2CH2OH、-CH2OC(O)NH2、-CH2CH2NH2、-CH2CH2-CH2NEt2、-CH2OCH3、-C(O)NH2、-C(NH)NH2、-C(=NH)OEt、-C(O)NH-シクロプロピル、-C(O)NHCH2CH2OCH3、-C(O)CH2CH2NHCH3、-CH2CH2F、または-CH2C(O)NHCH3より選択される置換基で置換された基 (例えば、「C1〜6アルキル」、「C1〜6アルケニル」、「C1〜6フルオロアルキル」、「ベンジル」、「フェニル」、「複素環」または「炭素環式基」)を意味する。
【００５７】
本明細書で使用される「溶媒和物」という用語は、そのような化合物の生物学的有効性を保持する、本発明の化合物の薬学的に許容される溶媒和物形態を意味する。溶媒和物の例には、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ジメチルスルホキシド (DMSO)、酢酸エチル、酢酸、エタノールアミン、またはそれらの混合物と組み合わせた本発明の化合物が含まれるが、これらに限定されない。本発明においては、水和物など、1つの溶媒分子が本発明の化合物の1つの分子と会合し得ることが具体的に企図される。さらに、本発明において、二水和物など、2つ以上の溶媒分子が本発明の化合物の1つの分子と会合し得ることが具体的に企図される。さらに、本発明においては、半水和物など、1つ未満の溶媒分子が本発明の化合物の1つの分子と会合し得ることが具体的に企図される。さらに、本発明の溶媒和物は、化合物の非水和物形態の生物学的有効性を保持する本発明の化合物の溶媒和物として企図される。
【００５８】
本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」は、薬理学的に許容される陰イオンまたは陽イオンを含み、特定の誘導体の遊離酸および塩基の生物学的有効性を保持し、かつ生物学的またはその他の点で望ましくないものではない塩を意味する。薬学的に許容される塩の例には、酢酸塩、アクリル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、(クロロ安息香酸塩、安息香酸メチル、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、およびメトキシ安息香酸塩などの)安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重亜硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、ブチン-1,4-二酸塩、エデト酸カルシウム塩、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、カプロン酸塩、カプリル酸塩、クラブラン酸塩、クエン酸塩、デカン酸、二塩酸塩、リン酸二水素塩、エデト酸塩、エジスリエート (edislyate)、エストレート、エシレート、エチルコハク酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコール酸塩、グリコリルアルサニレート (glycollylarsanilate)、ヘプタン酸塩、ヘキシン-1,6-二酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシ酪酸塩、ヨウ化物、イソ酪酸塩、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メタリン酸塩、メタンスルホン酸塩、メチル硫酸塩、リン酸一水素塩、ムチン酸塩 (mucate)、ナプシル酸塩、ナフタレン-1-スルホン酸塩、ナフタレン-2-スルホン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩 (エンボニン酸塩)、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニル酪酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フタル酸塩、リン酸塩/二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、プロパンスルホン酸塩、プロピオン酸塩 (propionate)、プロピオン酸塩 (propiolate)、ピロリン酸塩、ピロ硫酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、亜酢酸塩、スベリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、亜硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクリン酸塩、トシル酸塩、トリエチオドード (triethiodode)、および吉草酸塩、並びにとりわけナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、およびテトラアルキルアンモニウムなどの陽イオンが含まれるが、これらに限定されない。
【００５９】
本明細書で使用される「治療的有効量」という用語は、本明細書に定義されるような処置を必要とする哺乳動物に投与した場合に処置の達成に十分である、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の量を意味する。
【００６０】
「有効量」は、所望の結果、例えば、細胞におけるLDLRレベルの増加または細胞における機能的LDLR受容体の発現の増加を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を意味する。LDLRレベルの増加または機能的なLDLR受容体の発現の増加は、細胞を本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と接触させる前のレベルと比較して、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、または15倍であり得る。
【００６１】
本明細書で使用される「LDL低下量」という用語は、そのような治療を必要とする哺乳動物に投与した場合に、処置前の血清LDLレベルと比較して血清LDLレベルを低下させる、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の量を意味する。血清LDLレベルは、処置前の血清LDLレベルと比較して3分の2、2分の1、3分の1、4分の1、5分の1、6分の1、7分の1、8分の1、9分の1、10分の1、11分の1、12分の1、または15分の1に低くなり得る。血清LDLレベルは、標準的な方法、例えば脂質パネルを使用して測定することができる。
【００６２】
本明細書で使用される「組織」という用語は、ある特別な機能を共に実行する同様に特殊化された細胞の群または層を意味する。組織の例には、肝臓、血液、脂肪組織 (adipose tissue)、脂肪組織 (fatty tissue)、皮下組織、および筋肉組織が含まれる。
【００６３】
本明細書で使用される「器官」という用語は、ある特定の機能を実行するように適合されている、例えば哺乳動物などの生体内の組織の群を意味する。例えば、哺乳動物では、器官は器官系に分類され、例えば、食道、胃、および肝臓は消化器系の器官である。
【００６４】
本明細書で使用される「心血管系細胞」という用語は、血管を通じて身体のすべての部分に血液を運び、栄養素と酸素を組織に運び、二酸化炭素と他の老廃物を除去する心血管系の一部である細胞を意味する。心血管系細胞は、血管の一部である場合もあれば、血液それ自体の一部である場合もある。
【００６５】
本明細書で使用される「ヘテロ接合性家族性高コレステロール血症」という用語は、対象が1つの対立遺伝子で突然変異した1つの家族性高コレステロール血症遺伝子を有する、高い低密度リポタンパク質 (LDL)コレステロールを引き起こす遺伝的状態を意味する。
【００６６】
本明細書で使用される「ホモ接合性家族性高コレステロール血症」という用語は、対象が両方の対立遺伝子で変異した1つの家族性高コレステロール血症遺伝子を有する、高い低密度リポタンパク質 (LDL)コレステロールを引き起こす遺伝的状態を意味する。
【００６７】
多遺伝子性家族性高コレステロール血症および多遺伝子性高コレステロール血症は、対象が疾患に寄与するいくつかの遺伝子を有する、高い低密度リポタンパク質 (LDL)コレステロールを引き起こす遺伝的状態を意味する。
【００６８】
本明細書で使用される「薬学的に許容される製剤」という用語は、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、本発明の化合物に適合性があり、かつその受容者に有害ではない、担体、希釈剤、および/または賦形剤との組み合わせを意味する。薬学的製剤は、当業者に既知の手順によって調製することができる。例えば、本発明の化合物は、一般的な賦形剤、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセルなどに形成され得る。そのような製剤に適した賦形剤、希釈剤、および担体の例には、以下が含まれる：デンプン、糖、マンニトール、ケイ酸誘導体などの充填剤および増量剤; カルボキシメチルセルロースおよび他のセルロース誘導体、アルギン酸塩、ゼラチン、およびポリビニルピロリドンなどの結合剤; グリセロールなどの保湿剤;ポビドン、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、寒天、炭酸カルシウム、重炭酸ナトリウムなどの崩壊剤; パラフィンなどの溶解遅延剤; 第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤; セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロールなどの界面活性剤; カオリンやベントナイトなどの吸着性担体; タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコールなどの潤滑剤。最終的な薬学的形態は、使用される賦形剤のタイプに応じて、丸剤、錠剤、粉末、ロゼンジ剤、サシェ剤、カシェ剤、または無菌包装粉末などであり得る。さらに、本発明の薬学的に許容される製剤は、2つ以上の活性成分を含み得ることが具体的に企図される。あるいは、そのような製剤は、本発明の1つまたは複数の化合物および1つまたは複数の追加のコレステロール調節剤を含み得る。薬学的に許容される製剤は、受容者または患者への投与時に、本発明の化合物、活性代謝産物、またはその残基が直接的または間接的に提供されるような構造を有する、式Iの化合物以外の化合物も含み得るが、これらに限定されない。
【００６９】
「処置する」、「処置すること」、および「処置」という用語には、以下が含まれる: (i) 処置が病的状態の予防的処置を構成するように、その状態になりやすい可能性のある対象において疾患または症状が生じるのを予防すること; (ii)疾患または症状を調節または阻害する、すなわち、その発症を阻止すること; (iii)疾患または症状の緩和、すなわち疾患または症状の退縮を引き起こすこと;または(iv)疾患または症状または疾患または症状から生じる症候を軽減および/または緩和すること、例えば、根本的な疾患または症状に対処することなしに炎症反応を緩和すること。
【００７０】
本明細書で使用される「同時投与」、「同時投与すること」、「同時投与する」、「同時投与される」、または「併用療法」という用語は、本発明に従う少なくとも第1の薬剤および第2の薬剤または2つ以上の薬剤の組み合わせの投与を意味する。そのような同時投与は、2つまたは複数の薬剤が同一の組成物の一部または同一の単一剤形の一部であるように実施することができる。同時投与はまた; 同じ治療レジメンの一部として第1の薬剤と第2の薬剤、または2つ以上の薬剤を別個に投与することが含まれる。別個に投与される場合、薬剤は、そのように望まれる場合は可能だが、必ずしも本質的に同時に投与される必要はない。したがって、同時投与は、例えば、第1の薬剤および第2の薬剤を別個の投与量または剤形として、しかし同時に投与することを含む。同時投与は、異なる時間に任意の順序で別個に投与することも含む。
【００７１】
「本発明の化合物」という用語は、上記の化合物のいずれか、および以下の実施例中の化合物を意味し、一般化して記載されているものまたは種として記載されているものを含む。この用語は、これらの化合物の薬学的に許容される塩または溶媒和物も意味する。
【００７２】
本書で使用される略語は、以下を意味する。
2021501210.tif 000008
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】化合物VIの合成を示す合成スキームである。
【図２】化合物IXの合成を示す合成スキームである。
【図３】化合物XIの合成を示す合成スキームである。
【図４】化合物XIXの合成を示す合成スキームである。
【図５】化合物XXIIおよびXXIIIの合成を示す合成スキームである。
【図６】化合物XXXIIの合成を示す合成スキームである。
【図７】化合物XXXVの合成を示す合成スキームである。
【図８】化合物XXXIXの合成を示す合成スキームである。
【図９】化合物XLVの合成を示す合成スキームである。
【図１０】化合物XLVIIの合成を示す合成スキームである。
【図１１】化合物Lの合成を示す合成スキームである。
【図１２】化合物LVIの合成を示す合成スキームである。
【図１３】図13A〜図13Cは、以下を示す一連の画像およびグラフである：(AおよびB) HepG2細胞株における化合物1、2、3、および21のLDLRタンパク質のウエスタンブロット分析および相対定量; (C) HepG2細胞における化合物2の用量応答効果。
【図１４】共焦点顕微鏡法を用いたLDLRタンパク質の免疫蛍光分析を示す一連の画像である。
【図１５】種々の細胞型のウエスタンブロット分析によるLDLRタンパク質レベルについての化合物2の効果を示す一連のグラフである。
【図１６】化合物1、2、3、および21で処理した細胞におけるLDLR、HMGCR、およびPCSK9 mRNAの相対量を示すグラフである。
【図１７】ヒトLDLR遺伝子のLDLRプロモーターまたはLDLR 3’UTRについての化合物2の効果を示す一連のグラフである。
【図１８】mRNA分解またはヒトLDLRおよびヒトGAPDH遺伝子についての化合物2の効果を示す一連のグラフである。
【図１９】HepG2細胞のウエスタンブロット分析によるLDLRタンパク質レベルについての化合物2および別の併用阻害剤の効果を示す一連のグラフである。
【図２０】成体のSprague-Dawleyラットにおける化合物2の薬物動態を示す一連のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００７４】
詳細な説明
本開示は、対象におけるLDLコレステロールレベルを低下させるための方法を記載する。該方法は、対象にLDL低下量の式Iの化合物を投与することを含むことができる。さらに、式Iの化合物を投与することによる、細胞、例えば、組織または臓器の細胞における低密度リポタンパク質受容体 (LDLR)の発現を誘導するための方法、並びに細胞におけるLDLR mRNAまたはタンパク質発現およびLDLR活性を調節するための方法が提供される。
【００７５】
利用可能な化合物ライブラリのスクリーニングにより、米国特許第8,742,123号B2に記載されている化合物から選択された、肝細胞における低密度リポタンパク質受容体 (LDLR)の強力な誘導剤が得られた。
【００７６】
化合物
本発明のある局面は、式Iを有する化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する：
2021501210.tif 000009
【００７７】
いくつかの態様において、Y-Xは、-C(R7)(R7a)N(R’)C(O)-; -C(R7)(R7a)OC(O)-; 
-C(R7)(R7a)N(R’)C(R6)(R6a)-; -C(R7)(R7a)S(O)2C(R6)(R6a)-; -S(O)2C(R6)(R6a)-; -C(R7)(R7a)C(R6)(R6a)-; -O-C(R6)(R6a)-; -N(R’)C(R6)(R6a)-; または -C(R7)(R7a)OC(R6)(R6a)-である。R6、R6a、R7、およびR7aの各々は、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より独立して選択でき、R'はH、C1〜6アルキル、ベンジル、S(O)2R”、およびC(O)R”より選択でき、かつR”は、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環より選択され得る。
【００７８】
いくつかの態様において、QがHである場合、PおよびR3は存在しない。他の態様において、QがCH3である場合、PおよびR3は存在しない。いくつかの態様において、Qは、CH2またはC(O)である。
【００７９】
いくつかの態様において、PがHである場合、R3は存在しない。他の態様において、Pは-O-、-N(R8)(R8a)であるか、または存在せず、R8およびR8aは、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より独立して選択される。
【００８０】
いくつかの態様において、R1は、不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R9)、-C(O)O(R9)、-C(O)N(R9)(R9a)、または-S(O)2N(R9)(R9a)である。R9およびR9aは、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニルおよび複素環からなる群より独立して選択することができる。
【００８１】
いくつかの態様において、R2は、不存在、C1〜6アルキル、C1〜6分岐アルキル、C1〜6アルケン、ハロゲン(F、Cl、Br、I)、OH、-O-(C1〜6アルキル)、-O-(C1〜6分岐アルキル)、-C(O)(R10)、-C(O)O(R10)、または-C(O)N(R10)(R10a)である。R10およびR10aは、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、および複素環からなる群より独立して選択できる;またはR1およびR2は、一緒に炭素環系または複素環系を形成するオルト置換基であることができる。
【００８２】
いくつかの態様において、R3は、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、複素環であるか、または存在しない。
【００８３】
いくつかの態様において、R5は、H、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環であるか; あるいは、R3とR5は結合して複素環系を形成する。
【００８４】
いくつかの態様において、R4はH、C1〜6アルキル、C1〜6フルオロアルキル、ベンジル、フェニル、または複素環である。
【００８５】
いくつかの態様において、mは0または1である。
【００８６】
いくつかの態様において、QはCH2であり、Pは-O-、R3はHであり、Y-Xは-CH2NHCH2-または-CH2NHC(O)-である。いくつかの態様において、R1はハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2は存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択される。いくつかの態様において、R4はHまたはベンジルであり、かつR5はHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００８７】
いくつかの態様において、QはCH2であり、Pは-O-であり、R3はCH3であり、Y-Xは-CH2OCH2-である。いくつかの態様において、R1はハロゲン、-OH、または-OCH3より選択され、R2は存在しないかまたは-OHおよびハロゲンより選択される。いくつかの態様において、R4はHまたはベンジルであり、かつR5はHまたはベンジルであるか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００８８】
いくつかの態様において、式Iの化合物は、5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。いくつかの態様において、式Iの化合物は、5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。いくつかの態様において、式Iの化合物は、5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミドである。
【００８９】
薬学的組成物
本明細書で企図される薬学的組成物は、本発明の少なくとも1つの化合物、およびその薬学的に許容される塩、溶媒和物、または製剤を、薬学的に許容される担体、補助剤またはビヒクルと共に含む。本発明の薬学的組成物に使用することができる薬学的に許容される担体、補助剤およびビヒクルには、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸などの緩衝剤、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、硫酸プロタミンなどの電解質、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン-ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール、リポソーム、および羊毛脂肪が含まれるが、これらに限定されない。
【００９０】
塩基性である本発明の化合物は、塩酸; 臭化水素酸; 硫酸; 硝酸; リン酸などの無機酸による、または酢酸;マレイン酸;コハク酸;マンデル酸;フマル酸;マロン酸;ピルビン酸;シュウ酸;グリコール酸;サリチル酸; グルクロン酸またはガラクツロン酸などのピラノシジル酸; クエン酸や酒石酸などのα-ヒドロキシ酸; アスパラギン酸やグルタミン酸などのアミノ酸; 安息香酸またはケイ皮酸などの芳香族酸; p-トルエンスルホン酸やメタンスルホン酸などのスルホン酸などの有機酸による、遊離塩基の処理を含む、本技術分野に既知の適切な方法を使用して塩として調製することができる。
【００９１】
本発明の化合物、その塩、または溶媒和物は、本発明および特定の式の範囲内にある異なる結晶または多形で存在し得ることが当業者に理解される。
【００９２】
本発明の塩基性化合物は、様々な無機および有機酸と様々な塩を形成することができる。そのような塩は、動物への投与のために薬学的に許容できなければならないが、本発明の化合物を最初に薬学的に許容できない塩として単離し、次いでアルカリ試薬での処理により遊離塩基化合物に変換し、続いて、後者の遊離塩基を薬学的に許容される酸付加塩に変換することは一般的な手法である。本発明の塩基化合物の酸付加塩は、水性溶媒媒体中またはメタノールまたはエタノールなどの適切な有機溶媒中で実質的に等量の選択された鉱酸または有機酸で塩基化合物を処理することによって調製できる。
【００９３】
酸性である本発明の化合物は、遊離酸をアミン(一級、二級、または三級);アルカリ金属またはアルカリ土類金属水酸化物;などの無機または有機塩基で処理することを含む、本技術分野で既知の適切な方法を用いて塩として調製できる。適切な塩の例には、グリシンおよびアルギニンなどのアミノ酸; アンモニア;第一級、第二級、および第三級アミン;ピペリジン、モルホリン、ピペラジンなどの環状アミンに由来する有機塩; 並びにナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム、およびリチウムに由来する無機塩が含まれる。
【００９４】
本発明の酸性化合物は、様々な薬理学的に許容されるカチオンと塩基性塩を形成することができる。このような塩の例には、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩、とりわけ、慣用技術を用いて調製できる、ナトリウムおよびカリウム塩が含まれる。本発明の薬学的に許容される塩基塩を調製する際の試薬として適切な化学塩基は、本発明の酸性化合物と非毒性の塩基塩を形成するものである。そのような非毒性の塩基塩には、ナトリウム、カリウム、カルシウム、およびマグネシウムなどの薬理学的に許容されるカチオンから誘導されるものが含まれる。これらの塩は、対応する酸性化合物を所望の薬理学的に許容されるカチオンを含む水溶液で処理し、次いで得られた溶液を、好ましくは減圧下で蒸発乾固することによって調製できる。あるいは、それらはまた、酸性化合物の低級アルカノール溶液と所望のアルカリ金属アルコキシドを一緒に混合し、次いで得られた溶液を前と同じ方法で蒸発乾固することによっても調製され得る。いずれの場合でも、反応の完全性と所望の最終生成物の最大収量を確保するために、化学量論量の試薬が好ましく用いられる。
【００９５】
コレステロールの上昇によって引き起こされるまたは媒介される疾患または症状を処置または予防するために、本発明の化合物の少なくとも1つを含む薬学的組成物は、治療的有効量の化合物を、活性化合物の薬学的に許容される製剤への加工を容易にする希釈剤、賦形剤および補助剤を含む1つまたは複数の薬学的に適切な担体と組み合わせることによって調製される薬学的に許容される製剤で投与される。用いられる担体は、固体または液体のいずれかであり得る。例示的な固体担体は、ラクトース、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などである。例示的な液体担体は、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、水などである。同様に、本発明の組成物は、モノステアリン酸グリセリルもしくはジステアリン酸グリセリル単独、またはワックス、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルメタクリレートと一緒のモノステアリン酸グリセリルもしくはジステアリン酸グリセリルなど、本技術分野で既知の時間遅延または徐放性材料を含み得る。所望の製剤特性を達成するために、さらなる添加剤または賦形剤を加えてもよい。例えば、Labrasol (登録商標) (非イオン性水中油型界面活性剤)、Gelucire (登録商標) (非イオン性水分散性界面活性剤)などの生物学的利用能増強剤、またはCHIC (カルボキシメチルセルロース)、PG (プロピレングリコール)、またはPEG (ポリエチレングリコール)などの配合剤を加えてもよい。光、湿気、酸化から有効成分を保護する半固体のビヒクルであるGelucire (登録商標)は、たとえばカプセル製剤を調製する際に添加することができる。
【００９６】
固体担体を使用する場合、製剤を錠剤化するか、粉末またはペレットの形態で硬ゼラチンカプセルに入れるか、またはトローチもしくはロゼンジに形成することができる。固体担体の量は変動し得るが、一般的には約25 mg〜約1 gである。液体担体が使用される場合、製剤は、シロップ、エマルジョン、軟ゼラチンカプセル、アンプルもしくはバイアル中の無菌の注射可能な溶液もしくは懸濁液、または非水性液体懸濁液の形態であり得る。本発明の組成物は、投与様式、例えば、非経口または経口投与に適した単位剤形で調製される。
【００９７】
安定した水溶性剤形を得るために、本発明の化合物の薬学的に許容される塩を、0.3 Mのコハク酸またはクエン酸の溶液などの有機または無機酸の水溶液に溶解することができる。可溶性の塩の形態が利用できない場合、薬剤は適切な共溶媒または共溶媒の組み合わせ中に溶解することができる。適切な共溶媒の例には、総容量の0〜60 ％の範囲の濃度での、アルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール300、ポリソルベート80、グリセリンなどが含まれる。例示的な態様において、本発明の化合物をDMSOに溶解し、水で希釈する。組成物はまた、水または等張食塩水またはデキストロース溶液などの適切な水性ビヒクル中の活性成分の塩形態の溶液の形態であってもよい。
【００９８】
経口使用のための薬学的製剤は、有効成分 (薬剤)と混合した固体賦形剤を使用し、任意で得られた混合物を粉砕し、必要に応じて適切な助剤を添加した後、顆粒の混合物を処理して、錠剤または糖衣錠コアを得ることができる。適切な賦形剤には、乳糖、ショ糖、マンニトール、ソルビトールを含む糖などの充填剤、例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、ガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、またはポリビニルピロリドン (PVP)などのセルロース調製物が含まれる。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩といった崩壊剤を加えてもよい。
【００９９】
本発明の化合物を含む薬学的組成物はまた、適切な固相またはゲル相の担体、または賦形剤を含み得る。これらの担体および賦形剤は、難溶性薬物の生物学的利用能を著しく改善し得る。そのような担体または賦形剤の例には、炭酸カルシウム、カルシウム、リン酸塩、糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーが含まれる。さらに、Gelucire (登録商標) (非イオン性水分散性界面活性剤)、Capryol (登録商標) (非イオン性水不溶性界面活性剤)、Labrafil (登録商標) (非イオン性水分散性界面活性剤)、Labrasol (登録商標) (非イオン性水中油型界面活性剤)、Lauroglycol (登録商標) (非イオン性水不溶性界面活性剤)、Plurol (登録商標) (非イオン性油中水型乳化剤)、Peceol (登録商標) (油性液体ビヒクル)、Transcutol (登録商標) (高純度溶剤)などの添加剤または賦形剤を使用することができる。さらに、薬学的組成物は、薬物を皮膚に直接送達するための皮膚パッチに組み込むことができる。
【０１００】
本発明の化合物は、選択的な生物学的特性を増強するために適切な機能性を付加することによって修飾され得る。そのような修飾は本技術分野に既知であり、所定の生物学的システム (例えば、血液、リンパ系、中枢神経系)への生物学的浸透を増加させるもの、経口生物学的利用能を増加させるもの、注射による投与を可能にするために溶解度を増加させるもの、代謝を変化させるもの、または排泄速度を変化させるものが含まれる (Pharmacokinetic Optimization in Drug Research, Testa, B. et al, 2001, Wiley-VCH, VCHA)。
【０１０１】
本発明の薬学的組成物は、経口投与、非経口投与、吸入スプレーによる投与、局所投与、直腸投与、経鼻投与、口腔投与、経膣投与、または埋め込み型リザーバーを介した投与をされ得、好ましくは経口投与または非経口投与される。本発明の薬学的組成物は、任意の通常の非毒性の薬学的に許容される担体、補助剤またはビヒクルを含み得る。本明細書で使用される「非経口」または「非経口的に」という用語は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、および頭蓋内注射または注入技術を含む。
【０１０２】
本発明の薬学的組成物は、例えば、無菌の注射可能な水性または油性の懸濁液として、無菌の注射可能な製剤の形態であることができる。この懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤 (例えば、Tween 80)および懸濁剤を使用して、本技術分野に既知の技術に従って製剤化され得る。無菌の注射可能な製剤はまた、例えば、1,3-ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌の注射可能な溶液または懸濁液であり得る。使用できる許容可能なビヒクルおよび溶媒には、マンニトール、水、リンガー溶液および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の不揮発油は、溶媒または懸濁媒体として従来から使用されている。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性不揮発油が使用され得る。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、特にポリオキシエチル化版のオリーブ油またはヒマシ油などの天然の薬学的に許容される油と同様に、注射剤の調製に有用である。
【０１０３】
本発明の薬学的組成物は、カプセル、錠剤、並びに水性懸濁液および溶液を含むがこれらに限定されない、任意の経口的に許容される剤形で経口投与することができる。経口用錠剤の場合、一般的に使用される担体には、乳糖およびコーンスターチが含まれる。ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も通常添加される。カプセル形態での経口投与のために、有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが含まれる。水性懸濁液が経口投与される場合、有効成分は乳化剤および懸濁剤と組み合わされる。必要に応じて、特定の甘味剤および/または香味剤および/または着色剤を添加することができる。
【０１０４】
本発明の薬学的組成物は、直腸投与用の坐剤の形態で投与することもできる。これらの組成物は、本発明の化合物を、室温では固体であるが直腸温度では液体であり、したがって直腸で溶けて活性成分を放出する、適切な非刺激性賦形剤と混合することによって調製できる。そのような材料には、カカオバター、蜜蝋、およびポリエチレングリコールが含まれるが、これらに限定されない。
【０１０５】
本発明の薬学的組成物は、鼻エアロゾルまたは吸入によって投与することができる。そのような組成物は、薬学的製剤の分野で周知の技術に従って調製され、ベンジルアルコールまたは他の適切な防腐剤、バイオアベイラビリティを高めるための吸収促進剤、フルオロカーボン、および/または本技術分野に既知の他の可溶化剤または分散剤を用いて、生理食塩水の溶液として調製できる。
【０１０６】
投与量
本発明の薬剤の実際の投与量は、使用されている特定の薬剤、製剤化された特定の組成物、投与様式、および特定の部位、宿主、および処置される疾患によって変動することが理解される。当業者は、所与の一連の症状の最適な投与量の確定に、所与の化合物の実験データを考慮した従来の投与量決定試験を用いることができる。経口投与の場合、一般的に使用される例示的な1日用量は、約0.001〜約1000 mg/kg体重であり、治療単位は適切な間隔で繰り返され、好ましくは1日当たり0.01〜約 25mg/kg体重、より好ましくは1日当たり約0.5〜約25mg/kg体重の活性成分化合物が、高循環LDLを含むコレステロール上昇の予防および処置に有用である。
【０１０７】
さらに、本発明の薬学的に許容される製剤は、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を、約10 mg〜約2000 mg、または約10 mg〜約1500 mg、または約10 mg〜約1000 mg、または約10 mg〜約750 mg、または約10 mg〜約500 mg、または約25 mg〜約500 mg、または 約50〜約500 mg、または約100 mg〜約500 mgの量で含んでもよい。さらに、本発明の薬学的に許容される製剤は、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を、約0.5 w/w％〜約95 w/w％、または約1 w/w％〜約95 w/w％、または約1 w/w％〜約75 w/w％、または約5 w/w％〜約75 w/w％、または約10 w/w％〜約75 w/w％、または約10 w/w％〜約50 w/w％の量で含んでもよい。
【０１０８】
通常、本発明の薬学的組成物は、1日当たり約1〜約5回、あるいは連続注入として投与される。そのような投与は、慢性または急性療法として使用することができる。単一剤形を製造するために担体材料と組み合わされ得る活性成分の量は、処置される患者および特定の投与様式に応じて変化するであろう。典型的な製剤は、約5％〜約75％の活性化合物(w/w)を含む。好ましくは、そのような製剤は、約20％〜約50％の活性化合物を含む。
【０１０９】
患者の症状が改善したら、本発明の化合物、組成物または組み合わせの維持量を必要に応じて投与することができる。その後、投与量または投与頻度、あるいはその両方を、症状に応じて、改善された状態が維持されるレベルまで減らすことができる。症状が望ましいレベルまで緩和されたら、少なくとも原則として処置を中止すべきである。しかしながら、患者は、特にコレステロールの高い上昇のために、疾患の症状が再発した場合、長期的に断続的な処置を必要とし得る。
【０１１０】
当業者が理解するとおり、精密医療、上記されたものより低いまたは高い用量が必要とされる場合がある。任意の特定の患者のための特定の投与量および治療計画は、遺伝的背景、使用した特定の化合物の活性、年齢、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与時間、排泄率、薬物の組み合わせ、感染の重症度および経過、感染に対する患者の素因、ならびに治療を行う医師の判断を含む、種々の要因に依存する。
【０１１１】
本発明の化合物に関し、そのような処置を必要とする哺乳動物に1日あたりに与えられる特定の医薬製剤、投与量、および投与回数は、当業者の知識の範囲内のすべての選択肢であり、過度の実験なしに決定され得る。
【０１１２】
処置
本発明の化合物は、循環コレステロールを効果的に低下させる市販試薬としても有用である。市販試薬として、本発明の化合物およびそれらの誘導体は、アフィニティークロマトグラフィー適用のための繋がれた基質として安定な樹脂に結合するように誘導体化され得る。市販のコレステロール低下剤を特徴付けるこれらおよび他の用途は、当業者に明らかであろう。
【０１１３】
本発明の化合物は、例えば、哺乳動物における、アテローム性動脈硬化症 (脂質関連心血管障害、例えば、米国特許第4,891,220号)、高コレステロール血症 (脂質関連心血管障害、例えば、米国特許第4,891,220号)、高トリグリセリド血症 (高レベルの血中トリグリセリド、例えば米国特許第8,293,727号)、糖尿病性合併症 (例えば、微小血管機能の異常から生じる、糖尿病性網膜症、腎症、および神経障害を含む、例えば、米国特許第5,281,619号)、脂質異常症 (血中の異常に高いコレステロールまたは脂質、例えば、米国特許第6,630,450号)、高脂血症 (脂質関連の心血管障害、例えば、米国特許第4,891,220号)、低αリポタンパク血症 (高密度リポタンパク欠乏症、例えば：米国特許第 6,147,089号)、メタボリックシンドローム (高血圧、耐糖能異常、アテローム性動脈硬化症、脂質異常症に関連する肥満、例えば、米国特許出願公開第2006/0211020号)、脳卒中 (その血液供給の中断による脳への損傷、例えば、米国特許第 5,385,940号)、血管性認知症 (複数の脳卒中によって引き起こされる脳損傷、例えば、米国特許第6,458,807号)、慢性腎疾患 (腎不全につながる腎臓の長年の疾患、例えば、米国特許出願公開第2009/0081713号)、冠状動脈性心臓病 (心臓の主要血管の損傷または疾患、例えば、米国特許第6,242,186号)、冠状動脈疾患 (心臓の主要血管の損傷または疾患、例えば米国特許第5,036,857号)、網膜症 (眼に影響を与える糖尿病の合併症、例えば、米国特許第5,019,591号)、炎症 (生体組織への損傷によって引き起こされる反応、例えば、米国特許第6,136,839号)、血栓症 (循環系を通る血流を妨害する、血管内の血栓の形成、例えば、米国特許第4,880,788号)、末梢血管疾患 (狭窄した血管が四肢への血流を減少させる循環器疾患、例えば、米国特許第8,143,316号)、またはうっ血性心不全 (心臓が血液を十分に送り出せず、身体のニーズを満たすための血流を維持できない、例えば、米国特許第5,935,924号)の処置において、単独で (すなわち、単剤療法)、または1つもしくは複数の他のコレステロール低下剤と組み合わせて使用することができる。 
【０１１４】
本発明の化合物は、コレステロール代謝の他の段階を標的とするコレステロール低下剤と組み合わせて投与され得る。これらの薬剤は、例えば、リパーゼ阻害剤 (オルリスタットなどの腸で見られるリパーゼの活性を低下させるために使用される物質、例えば、米国特許第6,558,690号)、3-ヒドロキシ-3-メチル-グルタリル-コエンザイムA (HMG CoA)還元酵素阻害剤 (低密度リポタンパク質コレステロールを低下させることにより、心血管疾患の予防を促進するスタチン、例えば、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン; 例えば、Hong et al. Healthc. Inform. Res. 2017, 3, 199); HMG CoA合成酵素阻害剤 (コレステロール合成とケトン体生成における中間体であるHMG-CoAシンターゼ酵素を阻害する; 例えば、Skaff et al. Biochemistry 2012, 51, 4713)、コレステリルエステル転送タンパク質 (CETP)阻害剤 (HDLから超低密度リポタンパク質およびLDLへのコレステリルエステルの転送の促進を阻害する、例えば、アナセトラピブ、エバセトラピブ、ダルセトラピブ; 例えば、Kosmas et al. Clin. Med. Insights Cardiol. 2016; 10, 37)、胆汁酸吸収阻害剤 (低密度リポタンパク質 (LDL)コレステロールレベルを低下させる、例えば、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム; 例えば、Kramer et at. Curr. Med. Chem. 2006, 13, 997)、コレステロール吸収阻害剤 (小腸から循環器系へのコレステロール取り込みを防ぐ、例えば、エゼチミブ; 例えば、Dujovne et al. Am. J. Cardiol. 2002, 90, 1092)、コレステロール合成阻害剤 (HMG-CoA還元酵素阻害剤、例えば、スタチン; 例えば、Endo Atheroscler. Suppl. 2004, 3, 67)、スクアレン合成酵素阻害剤 (コレステロール合成と血漿トリグリセリドレベルを低下させる、例えば、ザラゴジン酸、2,8-ジオキサビシクロ[3.2.1]オクタン誘導体; 例えば、Kourounakis et al. Curr. Med. Chem. 2011,18, 4418)、スクアレンエポキシダーゼ (スクアレンを酸化してスクアレンエポキシドにする酵素;例えば、Ryder et al. Biochem. J. 1985, 230, 765)もしくはシクラーゼ阻害剤 (細胞の調節と活性において多様な役割を持つ酵素;例えば、Wang et al. Sci. Transl. Med. 2011, 3, 65ra3)もしくはミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質 (MTP)阻害剤もしくはアポリポタンパク質B (アポB)分泌阻害剤、もしくは両者の組み合わせ (リポタンパク質の集合を阻害する;例えばHussain et al. J. Lipid Res. 2003, 44, 22)、フィブラート系薬剤 (脂質低下薬、例えば、コリンフェノフィブラート;例えば、Shepherd Postgrad. Med. J. 1993, 69, S34)、ナイアシン (脂質低下薬; 例えば、Canner et al. J. Am. Col. Cardiol. 1986, 8, 1245)単独もしくはロバスタチン (高コレステロールとトリグリセリドのレベルを処置するスタチン; 例えば、Downs et al. JAMA 1998, 279, 1615)と組み合わせたナイアシン、イオン交換樹脂 (例えば、コレスチラミンは胆汁酸封鎖剤である;例えば、Hashim et al. JAMA 1965, 192, 289)、抗酸化剤 (LDLコレステロールのレベルを低下させるために使用される; 例えば、Anderson et al. N. Engl J. Med. 1995, 332, 488)、アシル補酵素A; コレステロールアシルトランスフェラーゼ (ACAT)阻害剤 (コレステロールと脂肪アシル補酵素からのコレステロールエステルの形成を触媒する細胞内酵素を阻害する; 例えば、Chang et al. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2009, 297, E1)、および胆汁酸封鎖剤 (胃腸管内の胆汁の成分を結合するために使用されるイオン交換樹脂として作用する高分子樹脂、例えば、コレスチポール; 例��ば、Ast et al. Clin. Pharmacol. 1990, 30, 99)、HMG-CoA還元酵素遺伝子発現阻害剤、HMG-CoA合成酵素遺伝子発現阻害剤 (SREBP2阻害剤はHMG-CoA還元酵素と合成酵素の遺伝子発現を強力に低下させる; Pandyra et al. Oncotarget. 2015, 6(29): 26909-26921; Pandyra et al. Cancer Res. 2014, 74(17): 4772-82; スタチンはHMG-CoA還元酵素阻害剤であり、したがって (転写因子SREBP-2によって媒介される)フィードバック機構によってHMG-CoA還元酵素および合成酵素遺伝子発現を増加させるが、それらの主な作用は、LDLR mRNA (SREBP-2によっても)のアップレギュレーションを介する; 併用に適した薬物のリストを表1に示す); プロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン9型 (PCSK9)阻害剤 (LDL血中濃度を低下させる、例えば、アリロクマブ、エボロクマブ;例えば、N. Engl. J. Med. 2015, 373, 1588)またはリポタンパク質リパーゼ活性を高めるアポCIII、ANGPTL3、ANGPTL4の阻害剤などの他の脂質低下薬との組み合わせ、ゲムカベン (Gemphire)またはベンペド酸 (Esperio)である。
【０１１５】
本発明に従う併用療法は、併用される各治療剤がコレステロール代謝の異なる部位に作用するので、上昇したコレステロールの低下に相加効果または併用効果を発揮する。そのような併用療法の使用はまた、同等以上の治療効果または予防効果を提供しつつ、単剤療法としてのいずれかの薬剤単独の投与と比較して、上昇したコレステロールの低下剤それぞれの投与量の減少を有利に可能にする。より少ない用量の各治療薬の投与はしばしば、単剤療法と比較して、副作用または毒性を低減しまたは排除すらする。さらに、併用療法は、単剤療法と比較して、投与された薬剤に望ましくない副作用が発生する可能性を低減する。
【０１１６】
他の薬剤との併用療法における本発明の化合物の患者への投与は、連続的または同時であり得る。さらに、本発明の薬学的または予防的組成物は、本発明のコレステロール低下剤と別の治療剤または予防剤との組み合わせを含み得る。上昇したコレステロールの処置に有用であり、本発明の化合物との併用療法に適した薬剤のさらなる例を表1に列挙する。
【０１１７】
（表１）
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【０１１８】
本発明の化合物は、生物学的利用能を向上させるか、または化合物の代謝を遅延させる追加の薬剤または薬学的組成物と組み合わせて投与することができる。本明細書の化合物の生物学的利用能を向上させるかまたは代謝を遅延させることができる薬剤または薬学的組成物は、シトクロムP450 (CYP450)酵素、好ましくはCYP1A2、CYP2d6、CYP2C9、CYP2C19およびCYP3A4の少なくとも1つのアイソフォームの阻害剤を含む。CYP3A4を阻害するために使用できる適切な薬剤には、ネフィジピンおよびリトナビルが含まれるが、これらに限定されない。そのような組み合わせは、本発明の化合物または化合物群が単一の製剤中に存在するように、または適切な期間を置いて連続してまたは同時に投与され得る別個の製剤の形態で投与され得る。本発明の化合物または化合物群を追加の薬剤または薬剤群と同じ製剤に含めるかどうかの選択は、当業者の知識の範囲内にある。
【０１１９】
中間体および化合物の調製
いくつかの態様において、第1のアプローチ (図1)は、Paulら (J. Med. Chem. 1977, 20, 745)に記載された方法論を使用して中間体Iを製造するように修飾されたピリドキシンから出発する。中間体Iは、エステル置換によって保護されたヒドロキサム酸(II)を製造するように修飾され得る。IIのイソプロピリデン保護基を、ギ酸を用いた穏やかな加水分解により除去して、中間体IIIを得ることができる。二酸化マンガン (MnO2)を使用してIIIの5-CH2OH基の選択的酸化を行うことができ、IIIは自発的に環化して対応するラクトン中間体 (IV)となり得る。いくつかの態様において、IVをアミンで置換し、対応するアミドVを生じる。水素化分解を使用して保護基を除去し、所望の生成物VIを得ることができる。
【０１２０】
いくつかの態様において、第2のアプローチ (図2)は、中間体VIIIから出発する。図1の工程2および3を用いて、中間体IからVIIIを得ることができる:図1の工程2および3を用いて、中間体IからVIIIを得ることができる: (図1の工程2として)加水分解によるイソプロピリデン保護基の除去、続いて (図1の工程3として) MnO2を用いた5-CH2OHの選択的酸化。次いで、VIIIをトリメチルシラノ酸カリウムを用いて加水分解し、中間体VIIを生成することができる。VIIは、O-保護ヒドロキシルアミンとハロゲン化アリールスルホニルを用いて中間体IVに変換できる。いくつかの態様において、VIをアミンで置換し、対応するアミドVを生じる。保護基は、水素化分解 (VI)によって除去できる。いくつかの態様において、さらに水素化すると、所望の生成物IXが生じる。
【０１２１】
いくつかの態様において、第3のアプローチ (図3)は、図1のように保護されたピロ (pyro)で出発し、MnO2を用いた制御された酸化によりラクトールIVが生成する。ラクトールIVは還元的アミノ化を通じてアミンXに容易に変換でき、接触水素化によるさらなる還元により、化合物XIが生成する。
【０１２２】
いくつかの態様において、第4のアプローチ (図4)は、ピリドキシンから出発し、Adamczyk Mら (Tetrahedron 2000, 56, 2379)に記載されるのと同様の方法で中間体XIIIを生成する。次に、XIIIを、N-オキシド中間体XIVを通じて2 メチル基で選択的に酸化し、続いてアルコールXVに転位する。さらに段階的酸化を行い、アルデヒドXVI、続いてエステルXVIIが生成する。いくつかの態様において、XVIIのイソプロピリデンの加水分解およびヒドロキシルアミンによるエステルXVIIIの置換により、所望の生成物化合物XIXが得られる。
【０１２３】
いくつかの態様において、本発明のDENV RdRp阻害剤化合物の合成のため、第5のアプローチ (図5)は、図4の中間体XVIIから出発する。XVIIを酸XXに加水分解し、続いて XXをO-ベンジルヒドロキシルアミンにカップリングしてXXIとなる。 XXIを水素化に供して、生成物化合物XXIIIを生成するか、または加水分解に供して生成物化合物XXIIを生成し得る。
【０１２４】
いくつかの態様において、第6のアプローチ (図6)は、7-(ベンジルオキシ) -6-メチルフロ[3,4-c]ピリジン-3(1H)-オン、中間体XXIVから出発する (Paul, B. et al. J. Het. Chem., 1976, 13, 701)。XXIVをアミンと反応させて中間体XXVを得ることができる。次いで、XXVをXXVIにアルキル化し、図4に記載されているように、N-オキシド転位を通じて2位で選択的に酸化して、中間体XXXを生成する。次に、XXXを置換および水素化して、所望の生成物化合物XXXIIを得ることができる。
【０１２５】
いくつかの態様において、第7のアプローチ (図7)は、図5の化合物XVIIの類似体から出発する。17eを無水条件で酸性化して、生成物XXXIIIを得ることができる。 この生成物を酸化して中間体アルデヒドXXXIVを得、さらに制御された条件下で酸化して、カルボン酸中間体XXXVを得ることができる。
【０１２６】
いくつかの態様において、第8のアプローチ (図8)は、XXXVIまたはXXXVIIをそれぞれ得るために、第1級または第2級アミンのいずれかで中間体XXXIVを還元アミノ化することからなる。XXXVII類似体は、XXXVIを用いたアルデヒドの別の還元的アミノ化によって得られる。XXXVIおよびXXXVII類似体を水性酸で処理して、中間体XXXVIIIを得ることができ、これをヒドロキシルアミン溶液とさらに反応させて、生成物XXXIXを得ることができる。
【０１２７】
いくつかの態様において、第9のアプローチ (図9)は、中間体XXXIIIから出発し、光延反応にてフェノールと反応させて、エーテルXLIVを生じる。次に、これらのエーテルを水性ギ酸に曝露し、続いてヒドロキシルアミンと反応させて生成物XLVを得ることができる。
【０１２８】
いくつかの態様において、第10のアプローチ (図10)は、活性化カルボン酸、ハロゲン化アシル、クロロギ酸イソシアネート、および他の求電子試薬による化合物XXXVIのアシル化からなり、式XLVIの化合物を得る。次に、XLVI化合物を水性ギ酸に曝露し、ヒドロキシルアミンと反応させて、生成物XLVIIを得ることができる。
【０１２９】
いくつかの態様において、第11のアプローチ (図11)は、中間体XXXIVのウィッティヒ反応で始まり、式XLVIIのアルケンを生成する。次に、XLVIIを水素化して飽和アルカンを生成し、さらに水性ギ酸に曝露し、ヒドロキシルアミンと反応させて生成物Lを得ることができる。
【０１３０】
いくつかの態様において、第12のアプローチ (図12)は、中間体XXXIIIおよびXXXIIIとメタンスルホニルクロリドとの反応から出発し、反応性中間体アルキルクロリドLIを生じる。いくつかの態様において、LIを直ちにかつ注意深くメルカプタンと反応させ、チオエーテルLIIを生成する。LIIと過剰の過酸化物mCPBAとの反応により、スルホン-N-オキシド中間体LIIIを生成し、これは無水トリフルオロ酢酸への曝露により、生成物LIVに転位し得る。次に、中間体アルコールを段階的に酸化してLVエステルとし、次いでこれを水性ギ酸に曝露し、ヒドロキシルアミンと反応させて、生成物LVIを得ることができる。
【０１３１】
上記の合成スキームは、上記の化合物を合成することができるすべての手段の包括的なリストであることを意図するものではないことを当業者は理解することができる。さらなる方法は、当業者に明らかであろう。
【０１３２】
一般的手順
一般的手順は、米国特許第 8,742,123号B2に記載されている。
【実施例】
【０１３３】
以下の実施例は、現在の特許請求の範囲に係る発明を実証するために提供されるが、これらに限定されない。
【０１３４】
実施例1. 5-[(4-フルオロ-フェニルアミノ)-メチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミド (化合物1)の調製
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工程1a. 5-((4-フルオロフェニル-アミノ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル(化合物1a)の調製：乾燥メタノール (4 mL)中、5-ホルミル-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチルエステル (J. Org. Chem. 1999, 64, 4537) (220 mg, 0.87 mmol)と4-フルオロアニリン (125 μL, 1.3 mmol)の混合物に酢酸 (50 μL, 0.87 mmol)を加え、室温で15分間攪拌し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム (72 mg, 1.3 mmol)を加えた。この混合物を室温で3時間撹拌し、続いて減圧下でメタノール体積の90％を蒸発させた。残渣をジクロロメタン (3x25 mL)で抽出し、合わせた有機層を乾燥させ (無水Na2SO4)、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル (メタノール/ジクロロメタン、0から10％のメタノール)によって精製して、0.290gの5-((4-フルオロフェニルアミノ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル (化合物1a) (96%)を白色固体として得た MS-ESI m/z 347 [MI-1]+。
【０１３５】
工程1b. 5-((4-フルオロフェニルアミノ)メチル)-3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピコリネート (化合物1b)の調製：ギ酸 (2 mL)を5-((4-フルオロフェニルアミノ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル (180 mg, 0.5 mmol)に0℃で加え、室温で2時間攪拌した。減圧下での蒸発により残渣 5-((4-フルオロフェニルアミノ)メチル)-3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピコリネート (化合物1b)を得、これをアセトニトリル中でトリチュレートした。MS-ESI m/z 307 [MH]+。
【０１３６】
工程1c. N5-(3,4-ジフルオロベンジル)-N2,3-ジヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピリジン-2,5-ジカルボキサミド (化合物1c)の調製：5-((4-フルオロフェニルアミノ)メチル)-3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピコリネート (化合物1b) (50.0 mg, 0.16 mmol)のメタノール (1.0 mL)溶液に、ジイソプロピルエチルアミン (142 μL, 0.8 mmol)とヒドロキシルアミン塩酸塩 (45 mg, 0.64 mmol)を加えた。反応混合物を55℃に16時間加熱した。 反応混合物を室温に冷却し、塩化アンモニウムの飽和溶液を加えた。反応混合物を酢酸エチル (3x25 mL)で抽出し、合わせた有機層を乾燥させ (無水Na2SO4)、濾過し、減圧下で濃縮して固体残渣を得、これをアセトニトリルで再結晶して、化合物1を得た。
【０１３７】
実施例2. 5-(4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミド (化合物2)の調製
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工程2a. 5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル (化合物2a)の調製：トリフェニルホスフィン (0.105 g, 0.40 mmol)、続いてアゾジカルボン酸ジエチル (DEAD) (0.06 mL, 0.40 mmol)を、アルゴン (Ar)下、5-(ヒドロキシメチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル (0.102 g, 0.40 mmol)の10 mLのTHF溶液に室温で加えた。得られた混合物を室温で6時間撹拌してから濃縮した。粗残渣を、溶離液としてヘキサン/酢酸エチル (1:1)を用いるクロマトグラフィー (SiO2)により精製して、混入物質を伴う標題化合物を得た。LC-MS (M+H)+ m/z 348。
【０１３８】
工程2b. 5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピコリン酸メチル (化合物2b)の調製：5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル (化合物2a) (0.129 g, 0.37 mmol)の3 mLのギ酸溶液を23℃で2時間撹拌し、次いで濃縮した。粗残渣を、溶離液としてヘキサン/酢酸エチル (3:7)を用いるクロマトグラフィー (SiO2)により精製して、標題化合物を白色固体として得た: LC-MS (M+H)+ m/z 308。
2021501210.tif 000013
【０１３９】
工程2c. 化合物2の調製：ヒドロキシルアミン塩酸塩 (0.045 g, 0.65 mmol)とN,N-ジイソプロピルエチルアミン (0.14 mL, 0.81 mmol)を、5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピコリン酸メチル (化合物 2b) (0.050 g, 0.16 mmol)のMeOH (3 mL)溶液に加え、70℃に5時間加熱した。粗混合物をEtOAcで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液およびブラインで洗浄した。有機抽出物を乾燥させ (Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮して、表題化合物 (0.048 g, 収率96％)を得た: LC-MS (M+H)+ m/z 309。
【０１４０】
実施例3. 5-(3-クロロ-4-フルオロ-フェノキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミド (化合物3)の調製
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工程3a. 5-((3-クロロ-4-フルオロフェノキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル (化合物3a)の調製： 5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチルの実施例2で記載したのと同様の手順を用いて (工程2a)、化合物3aを得た: ESI-MS (M+H)+ m/z 382。
【０１４１】
工程3b. 5-((3-クロロ-4-フルオロフェノキシ)メチル)-3-ヒドロキシ-4(ヒドロキシメチル)ピコリン酸メチル (化合物3b)の調製：実施例2の5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピコリン酸メチル (化合物 2b)の調製において記載したのと同様の手順を用いて、化合物3bを白色固体として得た (収率63%); LC-MS (M+H)+ m/z 342。
【０１４２】
工程3c. 化合物3の調製：実施例2の工程2c、5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-N,3-ジヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピコリンアミドの調製において記載したのと同様の手順を用いて、化合物3をベージュ色固体として得た (収率98%); LC-MS (M+H)+ m/z 342。
【０１４３】
実施例4. N5-(3-クロロ-4-フルオロベンジル)-N2,3-ジヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピリジン-2,5-ジカルボキサミド (化合物4)の調製
2021501210.tif 000015
N2,3-ビス(ベンジルオキシ)-N5-(3-クロロ-4-フルオロベンジル)-4-(ヒドロキシメチル)ピリジン-2,5-ジカルボキサミド (0.03 g, 0.330 mmol)と10％ Pd/C触媒 (25mg)を水素雰囲気下、メタノール (4.0 mL)中で1時間撹拌した。触媒を濾過し、反応混合物を真空下で濃縮して、0.015 gのN5-(3-クロロ-4-フルオロベンジル)N2,3-ジヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピリジン-2,5-ジカルボキサミドを白色固体として得た; 
2021501210.tif 000016
【０１４４】
実施例5. 5-{(1-3-クロロ-4-フルオロ-フェニル)アミノメチル}2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸ヒドロキサミド (化合物5)の調製
2021501210.tif 000017
251mgの5-ホルミル-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチルエステル (J. Org. Chem. 1999, 64, 4537) (1 mmol)と3-クロロ-4-フルオロベンジルアミン (125 μL, 1.3 mmol)を乾燥メタノール (4 mL)中、室温で15分間撹拌し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム (72 mg, 1.3 mmol)を加えた。この混合物を室温で3時間撹拌し、続いて減圧下でメタノール体積の90％を蒸発させた。残渣をジクロロメタン (3x25 mL)で抽出し、合わせた有機層を乾燥させ (無水Na2SO4)、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル(メタノール/ジクロロメタン, 0〜10％メタノール)によって精製して、0.300 mgの5-{(1-3-クロロ-4-フルオロ-フェニル)アミノメチル}2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸ヒドロキサミドを得た。次に、この化合物50 mgを乾燥EtOAcに溶解し、HClのエーテル溶液を、沈殿物の形成が見られなくなるまで滴下した。この沈殿物を濾過し、デシケーターで乾燥させて、わずかに吸湿性の物質40 mgを得た。
【０１４５】
実施例6. 5-[2-(4-フルオロ-フェニル)-エチル]-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキサミド (化合物6)の調製
2021501210.tif 000018
THF中、-78℃で5-ホルミル (0.751 g, 3 mmol)と1000 mg (3.5 mmol)の(4-フルオロベンジル)トリフェニルホスホニウムブロミドを反応させ、次いで室温で一晩攪拌して化合物6を合成した。反応をNH4Cl (飽和)でクエンチした。粗生成物をシリカゲルで分離して、417 mg (収率31％)を得た。この生成物を、EtOAc中、Pd/C 5％での接触水素化により水素化した。シリカゲルクロマトグラフィー精製により305 mgを得、エタノール中でヒドロキシルアミン (過剰量)と反応させた (2時間, 80℃)。化合物を1N HClで沈殿させ、濾過し、6N HClを添加してMeOHに再溶解し、4時間撹拌し、続いて蒸発させ、所望の生成物を得た。MS-ESI m/z 307 [MH]+。
【０１４６】
実施例7. 5-(4-メトキシ-ベンジルオキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-メチル-ピリジン-2-カルボン酸 (化合物7)の調製
2021501210.tif 000019
0.05 g (0.15 mmol)の化合物8を乾燥THF中に溶解した。2当量 (0.3 mmol)のトリメチルシラノ酸カリウムを加え、混合物を温めてスラリーを形成した。75℃で一晩急速攪拌すると、完全な変換が示された。溶液の濃縮、25 mL EtOAcへの再溶解、および1.0 N HClによる酸性化を、化合物を有機相への抽出を伴って行った。有機相をブラインで乾燥させ、次いで蒸発乾固させて、所望の化合物を得た。
【０１４７】
実施例8. 5-(4-メトキシ-ベンジルオキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-メチル-ピリジン-2-カルボン酸メチルエステル (化合物8)の調製
2021501210.tif 000020
0.5 g (1.5 mmol)の3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)-5-((4-エトキシベンジルオキシ)メチル)ピコリン酸メチルを2 mLのAc2Oに溶解し、2時間攪拌した。5 mLのMeOHを加え、溶媒を蒸発乾固させた。残渣を、脱気しN2をフラッシュした50 mLのEtOAcに溶解した。0.25gの10％Pd/Cを加えた。H2ガスを4時間吹き込み、混合物を一晩攪拌した。N2を吹き込み、溶液をシリカゲルパッドで濾過した。次いて、透明な溶液を蒸発乾固させ、得られたシロップを結晶化して、所望の生成物を定量的に得た。
【０１４８】
実施例9. 5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)-2,2,8-トリメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン (化合物9)の調製
2021501210.tif 000021
窒素雰囲気下、無水THF (200 mL)をNaH (60%, 24 g, 600 mmol)に0℃で加えた。この懸濁混合物に、2,2,8-トリメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-5-イル)メタノール (32.0 g, 150 mmol)の400 mLのTHF溶液 (J. Med. Chem., 1977, 20, 745)を加えた。得られた混合物を30分間還流させた。還流中に顕著な量の沈殿物が蓄積した。室温に冷却した後、p-メトキシベンジルクロリド (23.5 g, 150 mmol)を滴下し、得られた混合物をさらに8時間還流した。粘性のある混合物に0℃で氷冷水を加えて反応を注意深くクエンチし、飽和塩化アンモニウム溶液で希釈した後、塩化メチレンで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥させ (Na2SO4)、濃縮して褐色油状物を得た。粗生成物をクロマトグラフィー (10% 酢酸エチル/石油エーテル)により精製して、25.0 gの化合物9を得た (収率50%); LC-MS (M+H)+ m/z 331。
【０１４９】
実施例10. 5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル (化合物10)の調製
2021501210.tif 000022
工程10a. 5-((4-エトキシベンジルオキシ)メチル)-2,2,8-トリメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン7-オキシド
2021501210.tif 000023
5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)-2,2,8-トリメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン (50.0 g, 152 mmol, 1.0当量)を乾燥CH2Cl2 (500 mL)に溶解し、溶液を0℃に冷却した。この溶液に、m-クロロ過安息香酸 (試薬の純度85％, 37.0 g, 182 mmol, 1.2当量)を加えた。23℃で12時間撹拌した後、反応混合物をNa2SO3 (10%, 2×200 mL)、NaHCO3 (5%, 2×200 mL)、H2Oで抽出し、乾燥し (Na2SO4)、ろ過し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をクロマトグラフィー (10％メタノール/酢酸エチル)により精製して、標題化合物を淡黄色固体として得た (35 g, 68%); LC-MS (M+H)+ m/z 346。
【０１５０】
工程10b. (5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-イル)メタノール
2021501210.tif 000024
無水トリフルオロ酢酸 (4.5 mL, 32 mmol)を5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)-2,2,8-トリメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン7-オキシド (21.2 g, 61 mmol)の乾燥CH2Cl2 (200 mL)溶液に0℃で加え、5分間撹拌した。追加量の無水トリフルオロ酢酸 (11.5 mL, 82.7 mmol)を加え、反応混合物を23℃で一晩撹拌した。次に、反応混合物を0℃に冷却し、攪拌を続けながらMeOH (150 mL)を加えた。溶媒を蒸発させ、得られた残渣をCH2Cl2に溶解し、pHが中性になるまでNa2CO3 (20％水溶液)およびH2Oで洗浄した。有機相を乾燥させ (Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮した。残渣をEtOH-CH2Cl2から結晶化して、標題化合物を得た (17.5 g, 83%); LC-MS (M+H)+ m/z 346。
【０１５１】
工程10c. 5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルバルデヒド
2021501210.tif 000025
(5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-イル)メタノール (14.60 g, 42.3 mmol)の酢酸エチル (500 mL)溶液にIBX (35.5 g, 128 mmol)を加え、懸濁液を加熱し4時間還流した。沈殿物を濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮して、標題化合物を得た (14.0 g, 95%)。粗物質をさらに精製することなく次の工程に使用した: LC-MS (M+H)+ m/z 344。
【０１５２】
工程10d. 5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル
5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルバルデヒド (10.3 g, 30 mmol)の無水MeOH (12 0 mL) 溶液へ、KOH (85%, 5.3 g, 78 mmol)およびヨウ素 (9.9 g, 39 mmol)を0℃で加えた。反応混合物を23℃に保ち、TLCにより出発物質が検出されなくなるまで12時間撹拌した。次に、溶液をNa2SO3 (固体)で処理し、pHを7に調整した。固体を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。残渣をEtOAcに溶解し、水で洗浄した。合わせた有機抽出物を乾燥させ (Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮した。粗残渣を、溶離液として石油エーテル:酢酸エチル (5:1)を用いるクロマトグラフィー (SiO2)により精製して、標題化合物を淡黄色固体 (8.8 g, 78%)として得た: LC-MS (M+H)+ m/z 374。
【０１５３】
実施例11. 5-(4-メトキシベンジルオキシメチル-3-ヒドロキシ-4-メチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミド (化合物11)の調製
2021501210.tif 000026
工程11a. 3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)-5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)ピコリン酸メチル
2021501210.tif 000027
5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル (8.8 g, 23.6 mmol)の200 mL のHCl/MeOH溶液を23℃で24時間撹拌した。MeOH (500 mL)を加えて懸濁液を溶解し、NaHCO3 (固体)を加えて反応混合物を中和した。過剰な固体を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。残渣をEtOAcに溶解し、水で洗浄した。合わせた有機抽出物を乾燥させ (Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮して、表題化合物を淡黄色固体 (6.0 g, 100%)として得た: LC-MS (M+H)+ m/z 334。
【０１５４】
工程11b. N,3-ジヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)-5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)ピコリンアミド
3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)-5-((4-メトキシベンジルオキシ)メチル)ピコリン酸メチル (0.050 g, 0.15 mmol)のMeOH (3 mL)溶液に、ヒドロキシルアミン塩酸塩 (0.042 g, 0.60 mmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン (0.13 mL, 0.75 mmol)を加えた。得られた混合物をマイクロ波中に置き、80℃に1.5時間加熱した。粗混合物をEtOAcで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液およびブラインで洗浄した。有機抽出物を乾燥させ (Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮して、表題化合物 (0.039 g, 78%)を得た: LC-MS (M+H)+ m/z 335。
【０１５５】
実施例12. 5-((4-フルオロフェニルアミノ)メチル)-3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピコリン酸メチル (化合物12)の調製
2021501210.tif 000028
ギ酸 (2 mL)を5(4-フルオロフェニルアミノ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル (180 mg, 0.5 mmol)に0℃で加え、室温で2時間撹拌した。減圧下での蒸発により、残渣5-((4-フルオロフェニルアミノ)メチル)-3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピコリネートを得、これをアセトニトリル中でトリチュレートした。 MS-ESI m/z 307 [MH]+。
【０１５６】
実施例13. N5-(2-N-メチルカルボキサミド-4-フルオロベンジル)-N2,3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピリジン-2-メチルカルボキシレート, 5-カルボキサミド (化合物13)の調製
2021501210.tif 000029
100 mgの5-カルボキシル-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチルエステルを2 mLのDMFに溶解し、約300 mgのHBTUと共に0.2 mLのN-メチルモルホリンを加えた。約30分後、溶液に100 mgの2-N-メチルカルボキサミド-4-フルオロベンジルアミンを加えた。混合物を一晩撹拌した後、20 mLの10％クエン酸を加えることによりクエンチした。25 mLのEtOAcを加え、有機相をクエン酸 (2x)、K2CO3 (2x)、およびブラインで洗浄した。収量は101 mgであった。LCMS (100%) MS-ESI m/z 432[MH]+。
【０１５７】
実施例14. 3-(ベンジルオキシ)-5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-4-メチルピコリン酸メチル (化合物14)の調製
2021501210.tif 000030
実施例2の工程2aに記載されたものと同様の手順を使用して、化合物14を無色油状物として調製した: 収率72％。LC-MS (M+H)F m/z 382。
【０１５８】
実施例15. 5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル (化合物15)の調製
2021501210.tif 000031
トリフェニルホスフィン (0.105 g, 0.40 mmol)、続いてアゾジカルボン酸ジエチル (DEAD) ( 0.06 mL, 0.40 mmol)を、Ar雰囲気下、室温で5-(ヒドロキシメチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル (0.102g、0.40 mmol)の10 mLのTHF溶液に加えた。得られた混合物を室温で6時間撹拌し、次いで濃縮した。粗残渣を、溶離液としてヘキサン/酢酸エチル (1:1)を用いるクロマトグラフィー (SiO2)によって精製して、混入物質を伴う標題化合物を得た。LC-MS (M+H)+ m/z 348。
【０１５９】
実施例16. 5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピコリン酸メチル (化合物16)の調製
2021501210.tif 000032
5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-8-カルボン酸メチル (0.129 g, 0.37 mmol)の3 mLのギ酸溶液を23℃で2時間撹拌し、次いでそれを濃縮した。粗残渣を、溶離液としてヘキサン/酢酸エチル (3:7)を用いるクロマトグラフィー (SiO2)により精製して、標題化合物を白色固体として得た。
2021501210.tif 000033
【０１６０】
次に、該固体を1 mmolのKOTMSを含むTHFに溶解し、1時間還流した。得られたスラリーを冷ヘキサンに滴下し、濾別した。濾過された吸湿性体を水に溶解し、90％のギ酸で酸性化して、カルボン酸を形成した。これを濾別し、真空で乾燥させた。収量: 40 mgのオフホワイト粉末 (UV下で青色の蛍光)。
【０１６１】
実施例17. 5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-3-ヒドロキシ-4-メチルピコリン酸メチル (化合物17)の調製
2021501210.tif 000034
3-(ベンジルオキシ)-5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-4-メチルピコリン酸メチル (0.245 g, 0.64 mmol)の酢酸エチル (10 mL)溶液を、1 atmの水素下、活性炭上の10％パラジウム上で23℃で1時間水素化した。反応混合物を濾過し、溶液を真空で濃縮して、化合物17を白色固体 (0.171 g, 92%)として得た。LC-MS (M+H)+ m/z 292。
【０１６２】
実施例18.(3-クロロ-4-フルオロ-ベンジル)-(5-ヒドロキシ-6-ヒドロキシカルバモイル-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-3-イルメチル)-カルバミン酸ベンジルエステル (化合物18)の調製
2021501210.tif 000035
70 mgの化合物5をDCM (20 mL)に溶解した。次にトリエチルアミン (100 μL)を加え、続いてクロロギ酸ベンジル (約60 mg)を加えた。混合物を4時間撹拌し、その後20 mLの10％クエン酸を加えた。DCM相を除去し、K2CO3でさらに洗浄し、Mg2SO4で乾燥させ、蒸発乾固させた。1 mLのギ酸 (90％)を加え、溶液を4時間75℃に温めた。溶液を水で希釈して沈殿物を形成し、それを濾過して乾燥した。沈殿物を1 mLのピリジンと250 μLの50％のヒドロキシルアミン水溶液に溶解した。黄色の溶液を80℃に8時間温めた後、ピリジンを真空で除去した。5％の冷酢酸を注意深く加えて沈殿物を得、これを濾過し、5％の冷酢酸で洗浄した。収量: 51 mgの生成物。LC-MS (M+H)F m/z 490.1。
【０１６３】
実施例19. 4-ヒドロキシメチル-3-メトキシ-ピリジン-2,5-ジカルボン酸5-(4-フルオロ-ベンジルアミド) 2-ヒドロキシアミド (化合物19)の調製
2021501210.tif 000036
3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2,5-ジカルボン酸5-シクロヘキシルメチル-アミド2-ヒドロキシアミド (0.060 g, 0.137 mmol, 1当量)およびメタノール (4.0 mL)中の10％Pd/C (5 mg)を水素雰囲気下で1時間撹拌した。触媒を濾過し、反応混合物を真空下で濃縮して、0.040gの53 (85％)を白色固体として得た。MS-ESI m/z 350 [MH]+。
【０１６４】
実施例20. 3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2,5-ジカルボン酸5-ジベンジルアミド2-ヒドロキシアミド (化合物20)の調製
2021501210.tif 000037
米国特許第8,742,123号B2の実施例55に記載されている手順。
【０１６５】
実施例21. 5-ベンゼンスルホニルメチル-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミド (化合物21)の調製
2021501210.tif 000038
30 mLのDCM に溶解した550 mgの図1の化合物Iを、5当量のトリエチルアミンの存在下で2.5当量の塩化メタンスルホニルと反応させた。5％クエン酸で抽出を行い、Na2SO4で乾燥し、蒸発させて500 mgの所望のメシレートを得た。このメシレートを、DMF (2 mL)中の400 mgのベンゼンスルフィン酸と直ちに反応させた。水中での沈殿および濾過により生成物を単離した。粗生成物をCHCl3 (30 mL)に溶解し、400 mgのmCPBA (70％)を加えた。1時間撹拌した後、反応物をK2CO3を用いて抽出し、有機相をCaCO3で乾燥させ、蒸発させた。残渣を3 mLのDCMに溶解し、3 mLの無水トリフルオロ酢酸を加えた。45℃での還流で20時間撹拌して転移生成物を得、溶媒を蒸発させて単離した。次に、残渣を、MnO2 2gのCHCl3 (30 mL)溶液に加え、還流で1時間撹拌した。濾過および蒸発により、アルデヒド (250 mg)を得た。これを、1.2当量のI2および3当量のKOTMSを含む10 mLのMeOH中に入れた。室温で1時間撹拌し、定量的に変換されたエステルを得た。生成物をシリカゲルで精製した。100 mgのエステルをピリジン中で過剰量 (ヒドロキシルアミン50％水溶液)と反応させて、ヒドロキサメートを得た。EtOAcで希釈し、5％クエン酸で抽出して、所望の中間体を得た。50 mgの上記アセトニドをニートの70％ギ酸に添加することにより最終生成物を得た。15分後、反応が完了し、ギ酸を蒸発させ、残渣を水でトリチュレートして、化合物21を白色粉末として得る。MS-ESI m/z 339 [MH]+。
【０１６６】
実施例22. 5-((3-クロロ4-フルオロベンジルアミノ)メチル)-4-(ヒドロキシメチル)ピコリンヒドロキサミド (化合物22)の調製
2021501210.tif 000039
25 mgの化合物18と10％のPd/C触媒 (5 mg)を水素雰囲気下、4 mLのメタノール中で12時間撹拌した。触媒を濾過し、反応混合物を真空下で濃縮して、0.018 gの化合物22を白色固体として得た; MS-ESI m/z 356 [MH]+。
【０１６７】
実施例23. 3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2,5-ジカルボン酸5-(4-フルオロ-ベンジルアミド)2-(メトキシ-アミド) (化合物23)の調製
2021501210.tif 000040
ギ酸 (2 mL)を2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-5,8-ジカルボン酸5-(4-フルオロ-ベンジルアミド)8-(メトキシ-アミド) (0.048g, 0.123mmol, 1当量)に加えた。反応混合物を室温で10分間撹拌した。ギ酸を真空下で濃縮し、固体をジエチルエーテルでトリチュレートして、0.030gの化合物23 (71％)を白色固体として得た。MS-ESI m/z 350 [MH]+。
【０１６８】
実施例24. 5-(4-フルオロ-ベンジルオキシメチル)-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシメチル-ピリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミド (化合物24)の調製
2021501210.tif 000041
第一工程で4-フルオロベンジルブロミドを用いる、米国特許第8,742,123号B2の実施例34に記載されるもの、すなわち化合物11と同様の手順。
【０１６９】
実施例25. 2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピリジン-5,8-ジカルボン酸5-(3-クロロ-4-フルオロ-ベンジルアミド)-8- (メチルエステル) (化合物25) の調製
2021501210.tif 000042
第一工程で3-クロロ-4フルオロベンジルアミンを用いて、実施例13aのように調製した。
【０１７０】
実施例26. 5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピコリン (化合物26)の調製
2021501210.tif 000043
2.09g (3.5 mmol)の5-ヒドロキシメチル2,2-ジメチル-4H-[1,3]ジオキシノ[4,5-c]ピコリンを50 mLのEtOAcに溶解し、次いで0℃に冷却した。1 mLのトリエチルアミンを加え、続いて1.15 gのメタンスルホニルクロリドを加えた。混合物を30分間撹拌した。1.12gの4-フルオロフェノールの5 mL DMF溶液を0℃に冷却し、1.12gのtert-ブタン酸カリウムを添加してフェノール塩を形成した。この溶液を他の溶液に加えて、ゲルを形成した。これを攪拌し、室温まで1時間温めた。次に、水を加えて溶液をクエンチし、酢酸でpHを4に調整した。有機相を蒸発させた。次に、残渣をシリカゲルに吸着させ、次にDCMでシリカゲルのパッド上で洗浄した。DCMを蒸発させて、自発的に結晶化する2.4 gの透明な油状物を得た。
【０１７１】
実施例27. 5-((4-フルオロフェノキシ)メチル)-3-ヒドロキシ-4-(ヒドロキシメチル)ピコリン (化合物27)の調製
2021501210.tif 000044
実施例26からの化合物50 mgを1 mLの90％ギ酸に溶解した。混合物を75℃に4時間温めた。ギ酸を真空で除去し、残渣を水中でトリチュレートして、オフホワイトの粉末懸濁液を得た。これを濾過して、26 mgの所望の化合物を得た。
【０１７２】
実施例28. 細胞培養および処置
ヒト肝癌細胞株のHepG2およびHuh-7を、10％ウシ胎児血清 (FBS; カタログ番号080-350, Wisent)を添加したダルベッコ改変イーグル培地 (DMEM; カタログ番号319-005-CL, Wisent)で規定通りに培養した。実施例1〜27のLDLR小分子誘導物質の表現型スクリーニングのために、細胞を、100 pM〜10 μMの範囲の濃度でDMSOに再懸濁した所与の化合物1〜27を含む馴化培地中で一晩インキュベートした。ステロール調節条件の場合、HepG2細胞を、5％ LPDS、50 μM メバスタチン、および50μM メバロノラクトン中で、1 μg/mlの25-ヒドロキシコレステロールと10 μg/mlコレステロールの非存在下 (-ステロール)または存在下 (+ステロール)でインキュベートした。阻害剤の処置のために、HepG2細胞をU0126 (25 μM, カタログ番号9903, Cell Signaling Technology)、シクロヘキシミド (CHX; 20 μg/ml, カタログ番号C7698, Sigma-Aldrich)、PD153035 (20 μM, カタログ番号14879, Cayman Chemical)、ビスインドリルマレイミドI (BIM; 10 μM, カタログ番号13298, Cayman Chemical)、H-89 (10 μM, カタログ番号10010556, Cayman Chemical)、ドルソモルフィン (5 μM, カタログ番号11967, Cayman Chemical)または5-アザシチジン (10 μM, カタログ番号A2385, Sigma-Aldrich)と組み合わせて、DMSOまたは10μMの化合物2で処理した。図19は、CHXおよびU0126が、化合物2によるLDLRの増加を阻害し、試験した他の阻害剤は阻害しないことを示す。
【０１７３】
ヒト胎児腎細胞293 (HEK-293, カタログ番号CRL-1573; ATCC)を、ピルビン酸ナトリウムを含まない完全なDMEM (カタログ番号319-015-CL, Wisent)中で、およびヒト臍帯静脈/血管内皮細胞 (HUVEC; カタログ番号CRL-1730, ATCC)をF12 K培地中 (カタログ番号312-250-CL, Wisent)で、両方に10％ウシ胎児血清 (FBS; カタログ番号080-350, Wisent)を添加して培養した。
【０１７４】
実施例29. ウエスタンブロット分析
実施例28からの処理された細胞をリン酸緩衝生理食塩水 (PBS)で3回洗浄し、完全なプロテアーゼ阻害剤混合物 (カタログ番号11 697 498 001, Roche Applied Science)を添加した放射免疫沈降アッセイ緩衝液 (50 mM Tris/HCl, pH 8.0, 1% (v/v) Nonidet P-40, 0.5% デオキシコール酸ナトリウム, 150 mM NaCl, および0.1% (v/v) SDS)中に溶解させた。タンパク質を8％ SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離し、ニトロセルロース膜 (Bio-Rad)にブロットし、5％脱脂粉乳を含むTris緩衝生理食塩水-Tween20 (TBS-T; 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1% Tween 20)で1時間ブロックした。次に、膜を1％脱脂乳と指示された抗体; ヤギ抗ヒトLDLR (1:1000; カタログ番号AF2148, R&D Systems)、ウサギ抗アクチン (1:5000; カタログ番号A2066, Sigma-Aldrich)を添加したTBS-T中で一晩インキュベートした。Western Lightning Ultra化学発光キット (カタログ番号NEl112001EA, PerkinElmer Life Sciences)とBioFlex ECフィルム (カタログ番号CLEC810, InterScience)を使用した検出には、適切なHRP結合二次抗体(1:10,000; GE healthcare)を使用した。高解像度のCanoScan 9000Fスキャナーを使用して不飽和フィルムを数値化し、ImageJソフトウェア (NIH)を使用して対応するバンドを定量化した。LDLRタンパク質レベルの相対定量を、アクチンのそれに対して正規化し、本明細書中で1として決定されたビヒクル (DMSO)と比較した。結果を表2に記載し、図13A〜図13Cに示す。
【０１７５】
（表２）化合物の有効性および細胞毒性の結果
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【０１７６】
図15は、HepG2、Huh7、HEK293、およびHUVEC細胞におけるウエスタンブロット分析によるLDLRタンパク質レベルについての化合物2の効果を示す。
【０１７７】
実施例30. 免疫細胞化学
細胞を0.1％ Triton X-100/PBSで10分間透過処理するかまたは処理せずに、(アルデヒドの安定化のため)150 mMグリシンと共にインキュベートし、0.1％ Triton X-100を含むかまたは含まない1％ BSA (Fraction V, Sigma)と共に30分間インキュベートし、続いてヤギ抗ヒトLDLR (1:100; R&D Systems, カタログ番号AF2148)と共に4℃で一晩インキュベートした。その後、細胞を、対応するAlexa Fluor結合二次抗体 (Molecular Probes)と共に60分間インキュベートし、5％の1,4-ジアザビシクロ[2.2.2]オクタン (Sigma)を含む90％グリセロール中に封入した。Olympus FluoView FV10i共焦点顕微鏡を用いて免疫蛍光分析を行った。 図14に低密度リポタンパク質受容体の発現増加を視覚化したものを見ることができる。 
【０１７８】
実施例31. 逆転写および定量的リアルタイムPCR
Ribozol RNA Extraction Reagent (カタログ番号N580-100, Amresco)を使用して単離された全RNAサンプルの完全性を、アガロースゲル電気泳動またはAgilent 2100 BioAnalyzerを使用して確認した。製造元の指示に従って、iScript cDNA合成キット (カタログ番号1708891, Bio-Rad Laboratories)を使用してcDNAを調製した。iTaq Universal SYBR Green Supermix (カタログ番号1725121, Bio-Rad Laboratories)を使用して、MX3000pリアルタイムサーマルサイクラー(Agilent)で定量的リアルタイムPCRを行った。目的の遺伝子ごとに、解離曲線分析とアガロースゲル電気泳動を行い、固有のPCR産物を確認した。ヒト（Homo sapiens）TATAボックス結合タンパク質 (hTBP)をノーマライザとして使用して、各サンプルのPCR複製物から任意単位を決定した。使用したオリゴヌクレオチド配列は、ヒト低密度リポタンパク質受容体
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、ヒト3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-コエンザイムA還元酵素
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、ヒトグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ
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であった。ヒトプロタンパク質転換酵素サブチリシン-ケキシン9型 (hPCSK9) mRNA発現を、TaqMan遺伝子発現アッセイ Hs00545399_m1 (カタログ番号4331182, ThermoFisher Scientific)とTaqMan Fast Advanced Master Mix (カタログ番号4444557, ThermoFisher Scientific)を使用して、全cDNAで評価した。QPCR LDLR mRNA増加の結果を図16に示す。
【０１７９】
実施例32. 細胞生存率アッセイ
細胞を96ウェルプレートに播種し、1、5、10、50、100、または500 μMの所与の化合物と共にフェノールレッド不含馴化培地 (カタログ番号319-051-CL, Wisent)中でコンフルエントになるまで一晩インキュベートした。インキュベート後、培地を交換し、0.5 mg/mLのMTT (3-[4,5-ジメチルチアゾール-2-イル]-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド; チアゾリルブルー; カタログ番号M5655, Sigma-Aldrich)を含むフェノールレッド不含DMEM 100 μLで細胞を4時間インキュベートした。その後、培地を除去し、100 μLの酸性イソプロパノール (0.06 N)で可溶化した色素に交換し、650 nmでバックグラウンドを差引きして570 nmの波長で吸光度を測定した。所与の実施例の細胞生存率の任意単位を、使用した各濃度について、等量のDMSO (ビヒクル)と比較して決定した。結果を表2に示す。
【０１８０】
実施例33. ガウシアルシフェラーゼアッセイ
ヒトLDLR近位 (-1020 bp)プロモーターおよび部分的な3’UTR (nt 11131317〜11132220 第9染色体)を、HepG2細胞からのゲノムDNAをテンプレートとして使用してPCRによって生成し、ベクターのCMVプロモーターまたは3’UTR領域を置き換えるためにpCMV-GLucベクター (カタログ番号N8081S, New England Biolabs)にサブクローニングした。選択されたクローンを、DNAシーケンシングによって検証した。使用したオリゴヌクレオチドは、hLDLRプロモーター
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であった。一過性の実験のために、HepG2細胞を24ウェルプレートに1.5 × 105 /ウェルの密度で播種した。 24時間後、Lipofectamine 3000 (カタログ番号L3000008, Thermo Fisher Scientific)を使用して、対応するpGLuc構築物を2連で細胞にトランスフェクトした。一晩のインキュベーション後、細胞をDMEMで2回洗浄し、所与の実施例を用いてあるいは用いずに、様々な濃度で24時間、0.5 mLのDMEM中でインキュベートした。20 μLの馴化培地を96ブラックウェルプレートに添加し、BioLuxキット (カタログ番号E3300L, New England Biolabs)とBioTek Synergy 2マイクロプレートリーダーを使用した発光測定により、分泌されたガウシアルシフェラーゼの相対活性を評価した。0.75 mg/mLのG418硫酸塩抗生物質 (カタログ400-130-IG, Wisent)で選択した後、pGLuc-LDLR-3’UTRを発現する高品質のHepG2細胞の安定性も生じた。結果を図17に示す。
【０１８１】
実施例34. mRNA分解の測定
HepG2細胞をDMSOまたは10μMの化合物2と共に24時間インキュベートした。インキュベート後、細胞をDMEMで2回洗浄し、5 μg/mlのアクチノマイシンDと共に0、60、120、および240分間インキュベートした。LDLRおよびGAPDHの相対mRNAレベルを、実施例31に記載されるように、定量的リアルタイムPCRによって分析した。QPCR LDLR mRNA安定化の結果を図18に示す。
【０１８２】
実施例35. ミクロソーム安定性アッセイ
プールされたヒト肝ミクロソーム (HLM; カタログ番号008067 lot IHG)およびプールされた雄のSprague Dawleyラット肝ミクロソーム (RLM; カタログ番号M00001 Lot NNK)を、メリーランド州ボルチモアのBioreclamationIVTから購入した。 NADPH (カタログ番号N1630, 95% HPLC)およびDMSO (GCグレード)をカナダのSigma-Aldrichから購入した。 塩化マグネシウムpH 7.4を含むリン酸カリウム緩衝液 (100 mM)を新たに調製した。ヒトまたはラットの肝ミクロソーム (0.50 mg/ml)を含むリン酸カリウム緩衝液 (100 mM, pH 7.4, + 2 mM MgCl2)を、温度を37℃に設定した水浴中で5分間、化合物2 (1 μM)または陽性対照 (loperamide, 1 μM)と共に別々にプレインキュベートした (N=2)。すべてのウェルにNADPH (最終濃度 1 mM)を添加することで反応を開始した。NADPHを含まない反応も、インキュベーションバッファー中での非NADPH代謝または化学的不安定性を除外するためにインキュベートした (終点のみ)。新しい96ウェルプレートに50 μLを移し、内部標準 (2μMのラベタロール)を含むアセトニトリル100 μLを加えることで、各時点 (0、5、10、20、30、45、および60分)で反応を停止した。プレートを4000 rpmで5分間遠心分離し、LC-MS/MSで分析する前に、上清のアリコートを1倍量の水+ 0.1％ギ酸で希釈した。内部標準を含む2倍量のアセトニトリルでクエンチしたミクロソームを含む緩衝液に、化合物の希釈溶液を加えることにより、ミクロソームを含む緩衝液中、0.002〜2μMの濃度の参照サンプルを調製した (一方、インキュベーションT0は、化合物を含むミクロソームをクエンチしてからNADPHを添加することで得られる)。LC-MS/MSを使用して、多重反応モニタリング (MRM)モードでサンプルの親化合物の消失をモニタリングした。検量線と比較した分析物 対 内部標準のピーク面積比を使用して、各時点での濃度を計算した。濃度 (y)と時間 (t)の対数線形回帰から、消失定数 (elimination constant) (ke, min-1)を得た。半減期をT1/2 (分) = 0.693/keとして計算した。ミクロソーム固有クリアランス (Clint, μL/分/mg タンパク質)を、次の式から計算した。
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結果を表3に示す。
【０１８３】
（表３）ミクロソーム安定性
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【０１８４】
実施例36. 動物実験
すべての動物実験は、モントリオール心臓研究所 (MHI)の動物管理および倫理委員会によって承認された。モントリオール心臓研究所で、モントリオール大学の生物薬剤学のプラットフォームと共同で薬物動態実験を実施した。簡潔には、化合物2 (処方PG: H2O;50:50ストック溶液2.5 mg/ml)を、成体のSprague-Dawley雄ラット (約200g)に5 mg/kgで静脈内投与 (iv)するか (n=4)、25 mg/kgで経口投与 (PO)した (n=4)。5、15、30、60、120、240、360、480、1440分の時点で血液サンプルを収集し、125 μLの沈殿溶液 (0.1 μMのIS Loperamideを含む、80％アセトニトリルと20％メタノール)を添加した。サンプルを混合し、15000 rpmで5分間遠心分離した。 50 μLの上清をHPLCプレートに移し、水100 μL+ 0.1％ギ酸を添加した。実施例2の16ポイントの検量線を、0.002〜15 μMの範囲でラットのブランク血液で作成した。 LC-MS/MSを使用してMRMモードでサンプルを分析した。二次回帰を使用し、分析物のピーク面積とISピーク面積の比率を使用して検量線をプロットした。PK/PDデータ分析、シミュレーション、およびレポーティング用のKineticaソフトウェア (ThermoFisher)を使用し、各動物の血中濃度に基づいて、薬物動態 (PK)パラメータを計算した。結果を表4に記載し、図20に示す。
【０１８５】
（表４）薬物動態パラメータ
2021501210.tif 000053
【０１８６】
インビボでの概念実証動物実験のために、野生型C57BL/6雄マウス (約25g; Charles River Laboratoriesから得た)またはゴールデンシリアン (約120g, Envigo ++から得た)を、12時間明/ 12時間暗サイクルの、温度および湿度が制御されたMHI動物施設に収容した。順化の5日後、48.5 ％ w/wの炭水化物、21.2 ％ w/wの脂肪、17.3 ％ w/wのタンパク質、0.2 ％ w/wのコレステロール (カタログ番号TD.88137, Envigo)を含む固形飼料またはWestern dietを動物に14日間与えた。実施例1、2および6を、エタノール/プロピレングリコール/水; 1:7:8または1:2:1 (v/v)のいずれか中に混合するか、または0.01％のTween 20を含むリン酸緩衝生理食塩水 (PBS; カタログ番号311-010-CL, Wisent)中に混合し、固形飼料またはWestern dietで飼育されたマウスに5、25または40 mg/kg/日で3日間または10日間強制経口投与した。等量のビヒクルを含む対応する製剤をマウスに毎日経口投与し、プラセボ (ビヒクル)として指定した。血漿リポタンパク質コレステロールプロファイルを、Superose 6 10/300 GL (カタログ番号17-5172-01, GE Life Sciences)に注入した100μLのプール血漿から得、AKTAエクスプローラーシステム (GE Healthcare)に入れ、4℃、0.1 mL/分の流速でPBSで溶出した。総コレステロール (カタログ番号439-17501, Wako)を、全血漿中および収集した各0.3 mLの画分または製造元の指示に従ってインライン (Lipidomics Core of The Group on Molecular and Cell Biology of Lipids, University of Alberta)で定量化した。FPLCプロファイルから取得した非HDLリポタンパク質陽性画分に対応する総コレステロールのAUCの相対定量を表3に含める。血清アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ (AST)およびアラニントランスアミナーゼ (ALT)を、製造元の推奨に従ってモントリオール心臓研究所生化学臨床化学プラットフォームによって測定した。結果を表5に示す。
【０１８７】
（表５）高コレステロール血症動物モデルにおける化合物2の有効性および安全性
2021501210.tif 000054
【０１８８】
他の態様
上述の発明は、理解を明確にする目的で、例証および例を通じていくらか詳細に説明してきたが、説明および実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書中に引用したすべての特許文献および科学文献の開示は、参照によりその全体が明示的に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
2021501210.tif 000070
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
2021501210.tif 000079
【図２０】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年6月30日(2020.6.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021501210000001.app
【国際調査報告】
2021501210.tif 000081
2021501210.tif 000082