(57)【要約】  被験体において補体活性を阻害する方法であって、該方法は可溶性補体受容体１型（ｓＣＲ１）変異体を被験体に投与することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体において補体活性を阻害する方法であって、該方法は、可溶性補体受容体１型（ｓＣＲ１）変異体を被験体に投与することを含み、ｓＣＲ１変異体は：
（ｉ）  配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列；及び
（ｉｉ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、上記方法。
【請求項２】
ｓＣＲ１変異体は：
（ｉ）  配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列；
（ｉｉ）  配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列；
（ｉｉｉ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列；又は
（ｉｖ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ｓＣＲ１変異体は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して増加した補体阻害活性を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ｓＣＲ１変異体は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して、古典的経路、レクチン経路及び／又は副補体経路において増加した補体阻害活性を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
ｓＣＲ１変異体は：
（ｉ）  ＬＨＲ−Ａ及びＬＨＲ−Ｂ；
（ｉｉ）  ＬＨＲ−Ａ、ＬＨＲ−Ｂ及びＬＨＲ−Ｃ；
（ｉｉｉ）  ＬＨＲ−Ｂ及びＬＨＲ−Ｃ；並びに
（ｉｖ）  ＬＨＲ−Ｂ、ＬＨＲ−Ｃ及びＬＨＲ−Ｄ
からなる群より選択される長い相同反復（ＬＨＲ）領域を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ｓＣＲ１変異体は、半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤に結合されている、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
半減期延長部分は、ヒト血清アルブミン又はその機能性フラグメント、単量体又は二量体免疫グロブリンＦｃ領域又はその機能性フラグメント、アファミン、アルファ−フェトプロテイン、ビタミンＤ結合タンパク質、アルブミンに結合する抗体フラグメント及びポリマーから成る群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
さらなる可溶性補体阻害剤は、Ｃ１−阻害剤（Ｃ１−ＩＮＨ）、第Ｉ因子（ｆＩ）、Ｈ因子（ｆＨ）、補体Ｈ因子関連タンパク質（ＣＦＨＲ）、Ｃ４ｂ−結合タンパク質（Ｃ４ｂｐ）、可溶性ＣＤ５５（崩壊促進因子（ＤＡＦ））、可溶性ＣＤ４６（補体調節タンパク質（ＭＣＰ））、可溶性ＣＤ５９（プロテクチン）、可溶性補体受容体２（ｓＣＲ２）、ＴＴ３０（ＣＲ２−ｆＨ）及びコブラ毒因子（ＣＶＦ）からなる群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
被験体は、補体媒介障害に罹患しているか又は補体媒介障害の危険性がある、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
補体媒介障害は、移植拒絶（臓器移植後臓器機能障害、グラフトサルベージ及び抗体媒介拒絶を含む）、実質臓器移植、腎症、虚血再灌流傷害、視神経脊髄炎、重症筋無力症、糸球体病変、ループス腎炎（急性及び慢性）、ＩｇＡ腎症、水疱性類天疱瘡、抗リン脂質症候群、ぶどう膜炎、神経障害、パーキンソン病、ハンチントン病、脳梗塞、運動ニューロン疾患、自己免疫性溶血性貧血、ＡＮＣＡ関連血管炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、虚血発作（再灌流を伴うもの及び伴わないもの）、外傷性脳損傷、身体外傷及び抗糸球体基底膜（ＧＢＭ）腎炎からなる群より選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
（ｉ）  
ａ）  配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列；
ｂ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むｓＣＲ１変異体；並びに
（ｉｉ）  
ａ）  半減期延長部分；及び
ｂ）  さらなる可溶性補体阻害剤
からなる群より選択される化合物
を含む、可溶性補体受容体１型（ｓＣＲ１）結合体。
【請求項１３】
ｓＣＲ１変異体は：
（ｉ）  配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列；
（ｉｉ）  配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列；
（ｉｉｉ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列；又は
（ｉｖ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列
を含む、請求項１２に記載のｓＣＲ１結合体。
【請求項１４】
半減期延長部分は、ヒト血清アルブミン又はその機能性フラグメント、免疫グロブリンＦｃ領域又はその機能性フラグメント、アファミン、アルファ−フェトプロテイン、ビタミンＤ結合タンパク質、アルブミンに結合する抗体フラグメント及びポリマーからなる群より選択される、請求項１２又は１３に記載の結合体。
【請求項１５】
さらなる可溶性補体阻害剤は、Ｃ１−阻害剤（Ｃ１−ＩＮＨ）、第Ｉ因子（ｆＩ）、Ｈ因子（ｆＨ）、補体Ｈ因子関連タンパク質（ＣＦＨＲ）、Ｃ４ｂ−結合タンパク質（Ｃ４ｂｐ）、可溶性ＣＤ５５（崩壊促進因子（ＤＡＦ））、可溶性ＣＤ４６（補体調節タンパク質（ＭＣＰ））、可溶性ＣＤ５９（プロテクチン）、可溶性補体受容体２（ｓＣＲ２）、ＴＴ３０（ＣＲ２−ｆＨ）及びコブラ毒因子（ＣＶＦ）からなる群より選択される、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の結合体。
【請求項１６】
配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列及びヒト血清アルブミン又はその変異体を含む、可溶性補体受容体１型（ｓＣＲ１）結合体。
【請求項１７】
配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列及び単量体又は二量体免疫グロブリンＦｃ領域を含む、可溶性補体受容体１型（ｓＣＲ１）結合体。
【請求項１８】
ｓＣＲ１結合体は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して増加した補体阻害活性を有する、請求項１２〜１７のいずれか１項に記載のｓＣＲ１結合体。
【請求項１９】
ｓＣＲ１変異体は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して、古典的経路、レクチン経路及び／又は副補体経路において増加した補体阻害活性を有する、請求項１２〜１８のいずれか１項に記載のｓＣＲ１結合体。
【請求項２０】
ｓＣＲ１変異体は：
（ｉ）  ＬＨＲ−Ａ及びＬＨＲ−Ｂ；
（ｉｉ）  ＬＨＲ−Ａ、ＬＨＲ−Ｂ及びＬＨＲ−Ｃ；
（ｉｉｉ）  ＬＨＲ−Ｂ及びＬＨＲ−Ｃ；並びに
（ｉｖ）  ＬＨＲ−Ｂ、ＬＨＲ−Ｃ及びＬＨＲ−Ｄ
からなる群より選択される長い相同反復（ＬＨＲ）領域を含む、請求項１２〜１９のいずれか１項に記載のｓＣＲ１結合体。
【請求項２１】
請求項１２〜２０のいずれか１項に記載のｓＣＲ１結合体、並びに薬学的に許容しうる担体及び／又は賦形剤を含む組成物。
【請求項２２】
組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの少なくとも３０％は、シアル酸付加されたグリカンを含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
ｓＣＲ１変異体を含む組成物であって、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの少なくとも３０％はシアル酸付加されたグリカンを含み、そしてここでｓＣＲ１変異体は：
（ｉ）  配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列；及び
（ｉｉ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、上記組成物。
【請求項２４】
被験体における補体活性を阻害する際の使用のための、請求項１２〜２０のいずれか１項に記載のｓＣＲ１結合体、又は請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
請求項１２〜２０のいずれか１項に記載のｓＣＲ１結合体、又は請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、被験体における補体活性を阻害する方法
【請求項２６】
被験体において補体活性を阻害するための薬剤の製造における、請求項１２〜２０のいずれか１項に記載のｓＣＲ１結合体、又は請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項２７】
被験体において疾患又は状態を処置又は予防する際の使用のための、請求項１２〜２０のいずれか１項に記載のｓＣＲ１結合体又は請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２８】
請求項１２〜２０のいずれか１項に記載のｓＣＲ１結合体、又は請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、被験体において疾患又は状態を処置又は予防する方法。
【請求項２９】
被験体における疾患又は状態の処置又は予防のための薬剤の製造における、請求項１２〜２０のいずれか１項に記載のｓＣＲ１結合体又は請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項３０】
疾患又は状態は補体媒介障害である、請求項２７に記載の使用、請求項２８に記載の方法、又は請求項２９に記載の使用のための、ｓＣＲ１結合体又は組成物。
【請求項３１】
被験体は、補体媒介障害もしくは状態に罹患しているか又は補体媒介障害もしくは状態の危険性がある、請求項２４、２７もしくは３０のいずれか１項に記載の使用、請求項２５、２８もしくは３０のいずれか１項に記載の方法、又は請求項２６もしくは２９〜３０のいずれか１項に記載の使用のためのｓＣＲ１結合体又は組成物。
【請求項３２】
補体媒介障害は、移植拒絶（臓器移植後臓器機能障害、グラフトサルベージ及び抗体媒介拒絶を含む）、実質臓器移植、腎症、虚血再灌流傷害、視神経脊髄炎、重症筋無力症、糸球体病変、ループス腎炎（急性及び慢性）、ＩｇＡ腎症、水疱性類天疱瘡、抗リン脂質症候群、ぶどう膜炎、神経障害、パーキンソン病、ハンチントン病、脳梗塞、運動ニューロン疾患、自己免疫性溶血性貧血、ＡＮＣＡ関連血管炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、虚血発作（再灌流を伴うもの及び伴わないもの）、外傷性脳損傷、身体外傷及び抗糸球体基底膜（ＧＢＭ）腎炎からなる群より選択される、請求項２４、２７、３０もしくは３１のいずれか１項に記載の使用、請求項２５、２８、３０もしくは３１のいずれか１項に記載の方法、又は請求項２６もしくは２９〜３１のいずれか１項に記載の使用のためのｓＣＲ１結合体又は組成物。
【請求項３３】
被験体において補体活性を阻害する際の使用のためのキットであって：
（ａ）  請求項１２〜２０のいずれか１項に記載の少なくとも１つのｓＣＲ１結合体、又は請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の組成物；
（ｂ）  被験体において補体活性を阻害する際にキットを使用するための指示書；及び
（ｃ）  場合により、少なくとも１つのさらなる治療活性化合物又は薬物
を含む、上記キット。
【請求項３４】
被験体において補体媒介障害を処置又は予防する際の使用のためのキットであって：
（ａ）  請求項１２〜２０のいずれか１項に記載の少なくとも１つのｓＣＲ１結合体、又は請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の組成物；
（ｂ）  被験体において補体媒介障害を処置又は予防する際にキットを使用するための指示書；及び
（ｃ）  場合により、少なくとも１つのさらなる治療活性化合物又は薬物
を含む、上記キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願データ
本出願は、豪州特許出願第２０１８９０１７０３号  表題「可溶性補体受容体Ｉ型変異体及びそれらの使用（Ｓｏｌｕｂｌｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｖａｒｉａｎｔｓ  ａｎｄ  ｕｓｅｓ  ｔｈｅｒｅｏｆ）」（２０１８年５月１６日出願。その内容全体が参照により本明細書に加入される）からの優先権を主張する。
【０００２】
配列表
本出願は電子形態の配列表とともに出願される。配列表の内容全体が参照により本明細書に加入される。
【０００３】
分野
本開示は、可溶性補体受容体１型変異体及びそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
補体系は自然免疫系の一部であり、そして補体関連損傷から宿主を保護しながら、外来微生物の排除において役割を果たす多数の細胞表面の可溶性タンパク質から構成される。
【０００５】
補体系は可溶性成分Ｃ１−Ｃ９を含み、そしてその主要な成分が断片化された場合に活性化し、そしてそれらフラグメントは単独で又は他のタンパク質とともに、さらなる補体タンパク質を活性化して、タンパク質分解カスケードを生じる。補体系の活性化は、増加した血管透過性、貪食細胞の化学遊走、炎症細胞の活性化、異物粒子のオプソニン化、細胞の直接殺傷、及び組織損傷をもたらす。
【０００６】
補体系の３つの経路は全て、補体成分Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８及びＣ９を含む膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成、さらにはアナフィロトキシン（ａｎａｐｈｙｌｏｔｏｘｉｎｓ）Ｃ３ａ及びＣ５ａの放出を最終的にもたらす。しかし、各経路は異なるように開始される。古典的経路は、抗原−抗体複合体に応じて開始され、そして補体成分Ｃ１ｓによる補体成分Ｃ４の活性化を含み、これは補体成分Ｃ２、Ｃ３及びＣ５の連続的活性化、そしてＭＡＣの形成をもたらす。レクチン経路は、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）の病原体の表面上のそれぞれの炭水化物への結合によるマンナン結合レクチンセリンプロテアーゼ１（ＭＡＳＰ１）及びＭＡＳＰ２の活性化を含む。活性化されたＭＡＳＰ１／ＭＡＳＰ２はＣ４を活性化し、補体成分Ｃ２、Ｃ３及びＣ５の連続的活性化並びにＭＡＣの形成をもたらす。古典的経路及びレクチン経路とは異なり、副経路はＣ４及びＣ２の活性化を含まないが、Ｂ因子、Ｄ因子及びプロパージンを介するＣ３の活性化、続いてＣ５の活性化及びＭＡＣの形成を引き起こす病原体表面により開始される。Ｃ３及びＣ５はまた、凝固カスケードのタンパク質により活性化され得る。
【０００７】
補体受容体１型（ＣＲ１）は、補体の活性化の主要な制御因子である。ＣＲ１（Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂ受容体としても知られる）は、赤血球、マクロファージ／単球、顆粒球、Ｂ細胞、いくつかのＴ細胞、脾臓濾胞樹状細胞及び糸球体ポドサイト上に存在する膜結合タンパク質である。少量の可溶性ＣＲ１（ｓＣＲ１）は細胞表面ＣＲ１から切断される；この可溶性分子の組み換えバージョンは、以前に生成され、ＴＰ１０として知られる。ＣＲ１はＣ３活性化の負の制御因子であり、したがってｓＣＲ１は古典的経路、レクチン経路及び副経路のそれぞれを阻害することができる。
【０００８】
ｓＣＲ１は、約７０時間（３日）の比較的短い半減期を有する（非特許文献１）。１つもしくはそれ以上のアミノ酸置換を有するｓＣＲ１変異体及び／又は補体阻害活性を保持するｓＣＲ１切断型変異体は以前に記載されている（例えば、特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】ＷＯ１９９４０００５７１
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、２０００  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２８：３１４９−３１５４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかし、当業者には明らかであるが、当該分野において、増加した補体阻害活性及び／又は増加した半減期のような改善された活性を有するｓＣＲ１変異体の継続した必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
要旨
本開示は、被験体における増加した阻害性補体活性を有する可溶性補体受容体１型（ｓＣＲ１）変異体の本発明者らによる同定に基づく。
【００１３】
本開示の作製において、本発明者らは、１つ又はそれ以上の長い相同反復（ｌｏｎｇ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｒｅｐｅａｔ）（ＬＨＲ）領域（すなわち、ＬＨＲ−Ａ、ＬＨＲ−Ｂ、ＬＨＲ−Ｃ及び／又はＬＨＲ−Ｄ）に対応する規定されたアミノ酸配列を含むｓＣＲ１切断型変異体を製造した。本発明者らは、各ｓＣＲ１変異体の補体阻害活性についての効果を調べた。本開示のｓＣＲ１切断型変異体は、３つの補体経路の全てにおいて改善された又は増加した阻害活性を有する。本発明者らは、配列番号１の残基４２〜９３９及び／又は残基４９０〜１３９２を含むｓＣＲ１変異体が、ｓＣＲ１の別の形態と比較して増加した阻害活性を有するということを決定した。
【００１４】
本発明者らによる発見は、被験体において補体活性を阻害する方法のための基礎を提供し、該方法は、被験体にｓＣＲ１変異体を投与することを含む。本発明者らによる発見はまた、被験体において障害、例えば補体媒介障害を処置又は予防するための方法の基礎も提供する。
【００１５】
本開示は、被験体において補体活性を阻害する方法を提供し、該方法は可溶性補体受容体１型（ｓＣＲ１）変異体を被験体に投与することを含み、該ｓＣＲ１変異体は：
（ｉ）  配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列；及び
（ｉｉ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１６】
一例において、ｓＣＲ１変異体は：
（ｉ）  配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１３９３〜１９７１を欠いている）；
（ｉｉ）  配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基９４０〜１９７１を欠いている）；
（ｉｉｉ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１アミノ酸残基１〜４８９及び１３９３〜１９７１を欠いている）；又は
（ｉｖ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸１〜４８９を欠いている）
を含む。
【００１７】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１３９３〜１９７１を欠いている）を含む。
【００１８】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基９４０〜１９７１を欠いている）を含む。
【００１９】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１〜４８９及び１３９３〜１９７１を欠いている）を含む。
【００２０】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１〜４８９を欠いている）を含む。
【００２１】
一例において、ｓＣＲ１変異体は：
（ｉ）  配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列；
（ｉｉ）  配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列；
（ｉｉｉ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列；又は
（ｉｖ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列
からなる。
【００２２】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列からなるか、又は配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１３９３〜１９７１を欠いている）を含む。本発明者らは、上記ｓＣＲ１変異体が、配列番号１のアミノ酸４２〜１９７１を含むｓＣＲ１変異体と比較して改善された補体阻害活性を有することを示した。アミノ酸１３９３〜１９７１におけるＣＲ１の領域はＣ１ｑ及びマンノース結合レクチン（ＭＢＬ）に結合し、そしてその除去は補体阻害活性に有害であるか又は効果を有さないだろうと合理的に予測されたので、この発見は予想外であった。
【００２３】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列からなる。
【００２４】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列からなる。
【００２５】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列からなる。
【００２６】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸１〜１９７１に対応するアミノ酸配列からなるものではなく、配列番号１のアミノ酸１〜１９７１に対応するアミノ酸配列を含むものでもない。
【００２７】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１９７１に対応するアミノ酸配列からなるものではなく、配列番号１のアミノ酸４２〜１９７１に対応するアミノ酸配列を含むものでもない。
【００２８】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、本明細書に開示されるいずれかの配列の１つ又はそれ以上のアミノ酸置換、欠失又は挿入を場合により含む。本開示における使用に適したアミノ酸置換は当業者に明らかであり、そして天然に存在する置換及び操作された置換を含む。
【００２９】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、本明細書に開示される配列と比較して１つ又はそれ以上の保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの例において、ｓＣＲ１変異体は、１０又はそれ以下、例えば、９又は８又は７又は６又は５又は４又は３又は２又は１つの保存的アミノ酸置換を含む。
【００３０】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、１つ又はそれ以上の非保存的アミノ酸変化を含む。例えば、非保存的アミノ酸置換は、本開示のｓＣＲ１変異体の半減期を増加し、免疫原性を減少し、かつ／又は阻害活性を増加させる。一例において、ｓＣＲ１変異体は、６より少ない、又は５又は４又は３又は２又は１つの非保存的アミノ酸置換を含む。
【００３１】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、本明細書に開示される配列と、少なくとも約８５％又は約９０％又は約９５％又は約９７％又は約９８％又は約９９％同一である配列を含む。
【００３２】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１３９３〜１９７１を欠いている）と、少なくとも約８５％又は約９０％又は約９５％又は約９７％又は約９８％又は約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。例えば、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列と約８５％同一であるアミノ酸配列を含む。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列と約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列と約９５％同一であるアミノ酸配列を含む。さらなる例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列と約９７％同一であるアミノ酸配列を含む。一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列と約９８％同一であるアミノ酸配列を含む。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列と約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００３３】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列と、少なくとも約８５％又は約９０％又は約９５％又は約９７％又は約９８％又は約９９％同一であるアミノ酸配列からなる。例えば、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列と約８５％同一であるアミノ酸配列を含む。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列と約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列と約９５％同一であるアミノ酸配列を含む。さらなる例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列と約９７％同一であるアミノ酸配列を含む。一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列と約９８％同一であるアミノ酸配列を含む。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列と約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００３４】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列と、少なくとも約８５％又は約９０％又は約９５％又は約９７％又は約９８％又は約９９％同一であるアミノ酸配列からなる。例えば、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列と約８５％同一であるアミノ酸配列を含む。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列と約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列と約９５％同一であるアミノ酸配列を含む。さらなる例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列と約９７％同一であるアミノ酸配列を含む。一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列と約９８％同一であるアミノ酸配列を含む。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列と約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００３５】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列と少なくとも約８５％又は約９０％又は約９５％又は約９７％又は約９８％又は約９９％同一であるアミノ酸配列からなる。例えば、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列と約８５％同一であるアミノ酸配列を含む。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列と約９０％  同一であるアミノ酸配列を含む。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列と約９５％同一であるアミノ酸配列を含む。さらなる例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列と約９７％同一であるアミノ酸配列を含む。一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列と約９８％同一であるアミノ酸配列を含む。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列と約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００３６】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して増加した阻害活性を有する。例えば、本開示のｓＣＲ１変異体の補体阻害活性は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して、少なくとも約１．５倍、又は約２倍、又は約３倍、又は約３．５倍、又は約４倍、又は約５倍、又は約６倍、又は約８倍、又は約１０倍増加する。
【００３７】
ｓＣＲ１変異体の阻害活性を決定する方法は、当業者に明らかであり、かつ／又は本明細書に記載される。一例において、補体阻害活性はインビトロアッセイを使用して決定される。例えば、補体活性は、酵素イムノアッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ（Ｒ）補体アッセイキットのような補体活性化を測定するイムノアッセイ）を使用して測定される。例えば、補体阻害活性は、補体活性化の間に産生された抗原又はエピトープ（例えば、Ｃ５ｂ−９又はＣ５ｂ−Ｃ９に存在するエピトープ）に特異的な標識された抗体を使用して決定される。一例において、マイクロタイタープレートのウェルを古典的経路、レクチン経路又は副経路の特異的活性化因子でコーティングする。一例において、ｓＣＲ１変異体を、正常ヒト血清及び適切なアッセイ希釈剤（すなわち、古典的経路、レクチン経路又は副経路の特異的活性化を確実にするための適切なブロッキング成分を含む希釈剤）とともにインキュベートし、そして古典的経路、レクチン経路又は副経路の特異的活性化因子でコーティングされたマイクロタイタープレートのウェルに加え、そして形成されたＣ５ｂ−９複合体の量を、Ｃ５ｂ−９に対する特異的アルカリホスファターゼ標識抗体を使用して検出する。一例において、産生された補体活性化産物（すなわち、Ｃ５ｂ−９）の量は、補体経路の機能的活性に比例する。一例において、半値幅阻害剤濃度（すなわち、ＩＣ５０）を決定する。例えば、ｓＣＲ１変異体のＩＣ５０を決定し、そして配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１のＩＣ５０と比較する。別の例において、補体阻害活性を、溶血アッセイを使用して決定する（例えば、古典的経路（すなわち、ＣＨ５０）及び副経路（ＡｐＨ５０）阻害アッセイ）。
【００３８】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して古典的経路、レクチン経路及び／又は副補体経路において増加した阻害活性を有する。
【００３９】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して古典的補体経路において増加した阻害活性を有する。例えば、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して、古典的補体経路における本開示のｓＣＲ１変異体の阻害活性は、少なくとも１．２５倍、又は約１．５倍、又は約１．７５倍、又は約２倍、又は約２．５倍、又は約３倍、又は約３．５倍、又は約４倍、又は約５倍増加する。
【００４０】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、古典的補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１よりも小さいＩＣ５０を有する。例えば、本開示のｓＣＲ１変異体は、古典的補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、約１．０ｎＭよりも小さい、例えば約０．９５ｎＭ、又は約０．９０ｎＭ、又は約０．８５ｎＭ、又は約０．８０ｎＭ、又は約０．７５ｎＭ、又は約０．７０ｎＭのＩＣ５０を有する。一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、古典的補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、約０．８５ｎＭと０．９０ｎＭとの間、例えば約０．８８ｎＭのＩＣ５０を有する。一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、古典的補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、約０．６５ｎＭ、又は約０．６０ｎＭ、又は約０．５５ｎＭ、又は約０．５０ｎＭ、又は約０．４５ｎＭ、又は約０．４０ｎＭ、又は約０．３５ｎＭ、又は約０．３０ｎＭ、又は約０．２５ｎＭ、又は約０．２０ｎＭ、又は約０．１５ｎＭ、又は約０．１０ｎＭより小さいＩＣ５０を有する。一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、古典的補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、約０．３５ｎＭと０．４５ｎＭとの間、例えば約０．４０ｎＭのＩＣ５０を有する。
【００４１】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して、レクチン補体経路において増加した阻害活性を有する。例えば、本開示のｓＣＲ１変異体のレクチン補体経路における阻害活性は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して、少なくとも１．２５倍、又は約１．５倍、又は約１．７５倍、又は約２倍、又は約２．５倍、又は約３倍、又は約３．５倍、又は約４倍、又は約５倍増加する。
【００４２】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、レクチン補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１よりも小さいＩＣ５０を有する。例えば、本開示のｓＣＲ１変異体は、レクチン補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、約０．６０ｎＭ、又は約０．５５ｎＭ、又は約０．５０ｎＭより小さいＩＣ５０を有する。一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、レクチン補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、約０．５０ｎＭと０．６０ｎＭとの間、例えば約０．５４７ｎＭのＩＣ５０を有する。一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、レクチン補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、約０．５０ｎＭ、又は約０．４５ｎＭ、又は約０．４０ｎＭ、又は約０．３５ｎＭ、又は約０．３０ｎＭより小さいＩＣ５０を有する。一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、レクチン補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、約０．４０ｎＭと０．４５ｎＭとの間、例えば約０．４３ｎＭのＩＣ５０を有する。
【００４３】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、副補体経路において、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して増加した阻害活性を有する。例えば、副補体経路における本開示のｓＣＲ１変異体の阻害活性は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して、少なくとも１．２５倍、又は約１．５倍、又は約１．７５倍、又は約２倍、又は約２．５倍、又は約３倍、又は約３．５倍、又は約４倍、又は約５倍増加する。
【００４４】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、副補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１よりも小さいＩＣ５０を有する。例えば、本開示のｓＣＲ１変異体は、副補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、約０．７５ｎＭ、又は約０．７０ｎＭ、又は約０．６５ｎＭ、又は約０．６０ｎＭ、又は約０．５５ｎＭ、又は約０．５０ｎＭ、又は約０．４５ｎＭ、又は約０．４０ｎＭ、又は約０．３５ｎＭ、又は約０．３０ｎＭ、又は約０．２５ｎＭより小さいＩＣ５０を有する。一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、副補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、約０．３５ｎＭと約０．４０ｎＭとの間、例えば約０．３８ｎＭのＩＣ５０を有する。一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、副補体アッセイ（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ補体アッセイ）において、約０．２５ｎＭと約０．３０ｎＭとの間、例えば約０．２７ｎＭのＩＣ５０を有する。
【００４５】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は：
（ｉ）  ＬＨＲ−Ａ及びＬＨＲ−Ｂ；
（ｉｉ）  ＬＨＲ−Ａ、ＬＨＲ−Ｂ及びＬＨＲ−Ｃ；
（ｉｉｉ）  ＬＨＲ−Ｂ及びＬＨＲ−Ｃ；並びに
（ｉｖ）  ＬＨＲ−Ｂ、ＬＨＲ−Ｃ及びＬＨＲ−Ｄ
からなる群より選択される長い相同反復（ＬＨＲ）領域を含む。
【００４６】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、ＬＨＲ−Ａ及びＬＨＲ−Ｂからなるが、ＬＨＲ−Ｃ及びＬＨＲ−Ｄを欠いているＬＨＲ領域を含む。
【００４７】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、ＬＨＲ−Ａ、ＬＨＲ−Ｂ及びＬＨＲ−Ｃからなるが、ＬＨＲ−Ｄを欠いているＬＨＲ領域を含む。
【００４８】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、ＬＨＲ−Ｂ及びＬＨＲ−Ｃからなるが、ＬＨＲ−Ａ及びＬＨＲ−Ｄを欠いているＬＨＲ領域を含む。
【００４９】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、ＬＨＲ−Ｂ、ＬＨＲ−Ｃ及びＬＨＲ−Ｄからなるが、ＬＨＲ−Ａを欠いているＬＨＲ領域を含む。
【００５０】
一例において、ＬＨＲ領域ＬＨＲ−Ａは、配列番号１のアミノ酸４２〜４８９に対応するアミノ酸配列を含む。例えば、ＬＨＲ−Ａ領域は配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む。一例において、ＬＨＲ領域ＬＨＲ−Ａは、短いコンセンサス反復（ＳＣＲ）配列１〜７を含む。例えば、ＳＣＲ配列１〜３（すなわち、部位１）はＣ４ｂに結合することができる。
【００５１】
一例において、ＬＨＲ領域ＬＨＲ−Ｂは、配列番号１のアミノ酸４９０〜９３９に対応するアミノ酸配列を含む。例えば、ＬＨＲ−Ｂ領域は配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む。一例において、ＬＨＲ領域ＬＨＲ−ＢはＳＣＲ配列８〜１４を含む。例えば、ＳＣＲ配列８〜１０（すなわち、部位２）はＣ３ｂ及びＣ４ｂに結合することができる。
【００５２】
一例において、ＬＨＲ領域ＬＨＲ−Ｃは、配列番号１のアミノ酸９４０〜１３９２に対応するアミノ酸配列を含む。例えば、ＬＨＲ−Ｃ領域は配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む。一例において、ＬＨＲ領域ＬＨＲ−ＣはＳＣＲ配列１５〜２１を含む。例えば、ＳＣＲ配列１５〜１７はＣ３ｂ及びＣ４ｂに結合することができる。
【００５３】
一例において、ＬＨＲ領域ＬＨＲ−Ｄは配列番号１のアミノ酸１３９３〜１９７１に対応するアミノ酸配列を含む。例えば、ＬＨＲ−Ｄ領域は配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む。一例において、ＬＨＲ領域ＬＨＲ−ＤはＳＣＲ配列２２〜２８を含む。例えば、ＳＣＲ配列２２〜２８はＣ１ｑ及びＭＢＬに結合することができる。
【００５４】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は：
（ｉ）  ＳＣＲ−１〜ＳＣＲ−１４（例えば、ＳＣＲ−１５〜ＳＣＲ−２８を欠いている）；
（ｉｉ）  ＳＣＲ−１〜ＳＣＲ−２１（例えば、ＳＣＲ−２２〜ＳＣＲ−２を欠いている８）；
（ｉｉｉ）  ＳＣＲ−８〜ＳＣＲ−２１（例えば、ＳＣＲ−１〜ＳＣＲ−７及びＳＣＲ−２２〜ＳＣＲ−２８を欠いている）；並びに
（ｉｖ）  ＳＣＲ−８〜ＳＣＲ−２８（例えば、ＳＣＲ−１〜ＳＣＲ−７を欠いている）
からなる群より選択されるＳＣＲ配列を含む（又はこれらからなる）。
【００５５】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体はＳＣＲ配列ＳＣＲ−１〜ＳＣＲ−１４（例えば、ＳＣＲ−１５〜ＳＣＲ−２８を欠いている）を含む。
【００５６】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体はＳＣＲ配列ＳＣＲ−１〜ＳＣＲ−２１（例えば、ＳＣＲ−２２〜ＳＣＲ−２８を欠いている）を含む。
【００５７】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体はＳＣＲ配列ＳＣＲ−８〜ＳＣＲ−２１（例えば、ＳＣＲ−１〜ＳＣＲ−７及びＳＣＲ−２２〜ＳＣＲ−２８を欠いている）を含む。
【００５８】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体はＳＣＲ配列ＳＣＲ−８〜ＳＣＲ−２８（例えば、ＳＣＲ−１〜ＳＣＲ−７を欠いている）を含む。
【００５９】
一例において、ｓＣＲ１変異体は単量体（すなわち、ｓＣＲ１変異体の１つのコピー）である。
【００６０】
一例において、ｓＣＲ１変異体は二量体であるか、又は二量体化されている（すなわち、ｓＣＲ１変異体の２つのコピーが融合タンパク質において連結されている）。
【００６１】
一例において、ｓＣＲ１変異体は多量体であるか、又は多量体化されている（すなわち、ｓＣＲ１変異体の多数のコピーが融合タンパク質において連結されている）。
【００６２】
一例において、２つ又はそれ以上の同じｓＣＲ１変異体が融合される（すなわち、融合タンパク質として発現される）。
【００６３】
一例において、２つ又はそれ以上の異なるｓＣＲ１変異体が融合される（すなわち融合タンパク質として発現される）。
【００６４】
一例において、二量体化又は多量体化されたｓＣＲ１変異体は、ｓＣＲ１変異体の間にリンカーを含む。
【００６５】
一例において、本開示は、多量体化ドメインを含む２つ又はそれ以上のｓＣＲ１変異体を含む多量体タンパク質を提供し、ここで多量体化ドメインは相互作用して多量体タンパク質を形成する。
【００６６】
一例において、多量体タンパク質における各ｓＣＲ１変異体は１つのｓＣＲ１変異体を含む。別の例において、多量体タンパク質における１つ又はそれ以上のｓＣＲ１変異体は、２つ又はそれ以上のｓＣＲ１変異体を含み、例えばｓＣＲ１変異体は融合タンパク質において連結されている。
【００６７】
一例において、多量体化ドメインは免疫グロブリンヒンジドメインを含む。
【００６８】
一例において、多量体化ドメインはロイシンジッパードメイン、シスチンノット又は抗体Ｆｃ領域である。
【００６９】
一例において、多量体化ｓＣＲ１変異体は線状である。
【００７０】
一例において、多量体化ｓＣＲ１変異体は環状である。
【００７１】
本開示は、半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤に結合されたいずれかの例で本明細書において記載されるｓＣＲ１変異体（例えば、補体活性を阻害するための方法に関連したｓＣＲ１変異体の記載は、ｓＣＲ１変異体自体に関連する以下の記載に適用されるとみなされるものとする）を提供する。一例において、ｓＣＲ１変異体は、半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤に化学的に結合される。別の例において、ｓＣＲ１変異体は融合され、例えば、半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤との融合タンパク質として発現される。一例において、半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤はｓＣＲ１変異体のＣ末端に結合される。一例において、半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤はｓＣＲ１変異体のＮ末端に結合される。
【００７２】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は半減期延長部分に結合される。例えば、半減期延長部分は、アルブミン又はその機能性フラグメントもしくは変異体、ヒト血清アルブミン又はその機能性フラグメントもしくは変異体、免疫グロブリン又はその機能性フラグメントアファミン、アルファ−フェトプロテイン、ビタミンＤ結合タンパク質、及びポリマーからなる群より選択される。
【００７３】
一例において、免疫グロブリン又はその機能性フラグメントは、アルブミンに結合する抗体フラグメントである。例えば、半減期延長部分は、抗体Ｆｃ領域（すなわち、単量体又は二量体免疫グロブリンＦｃ領域）、例えば、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域又はヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域又は安定化ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域である。例えば、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域である。一例において、抗体Ｆｃ領域は、（本明細書において考察されるように）二量体化を予防するように改変される。例えば、抗体Ｆｃ領域は単量体Ｆｃ領域である。一例において、Ｆｃフラグメント及び／又はその変異体は、１つ又はそれ以上のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。本開示における使用に適したアミノ酸置換は、当業者に明らかであり、そして例えばＷＯ２００００４２０７２、ＷＯ２００２０６０９１９、ＷＯ２００４０３５７５２及びＷＯ２００６０５３３０１に記載されるもののような天然に存在する置換及び操作された置換を含む。
【００７４】
一例において、ｓＣＲ１変異体はそのＣ末端で抗体Ｆｃ領域に融合される。例えば、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列からなるか、又は配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１３９３〜１９７１を欠いている）を含み、そしてそのＣ末端で抗体Ｆｃ領域に融合される。本発明者らは、このような融合タンパク質が、Ｆｃ領域を欠いているタンパク質と比較して、予測されるよりも高い補体阻害活性を有しているということを発見した。Ｆｃ領域が二量体化すると仮定すると、およそ２倍の活性の増加が期待されるが、しかし本発明者らは、約８倍までの改善を観察した。
【００７５】
一例において、結合体化した本開示のｓＣＲ１変異体は、配列番号２に示されるｓＣＲ１を含むｓＣＲ１変異体結合体と比較して長い血清半減期を有する。増加した血清半減期及び血清半減期を決定するためのアッセイの例は本明細書に記載され、そして変更するべきところは変更して本開示のこの例に適用されるとみなされるべきである。
【００７６】
一例において、半減期延長部分はアルブミン、その機能性フラグメントもしくは変異体である。一例において、アルブミン、その機能性フラグメント又は変異体は、血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミンである。一例において、アルブミン、その機能性フラグメント又は変異体は、１つ又はそれ以上のアミノ酸置換、欠失又は挿入、例えば、５を超えない又は４又は３又は２又は１つの置換を含む。本開示における使用に適したアミノ酸置換は当業者に明らかであり、例えば、ＷＯ２０１１０５１４８９、ＷＯ２０１４０７２４８１、ＷＯ２０１１１０３０７６、ＷＯ２０１２１１２１８８、ＷＯ２０１３０７５０６６、ＷＯ２０１５０６３６１１、ＷＯ２０１４１７９６５７及びＷＯ２０１９０７５５１９に記載されるもののような天然に存在する置換及び操作された置換を含む。
【００７７】
一例において、ｓＣＲ１変異体はそのＣ末端においてアルブミン、その機能性フラグメント又は変異体に融合される。例えば、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列からなるか、又は配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１３９３〜１９７１を欠いている）を含み、そしてそのＣ末端でアルブミン（例えば、血清アルブミン）、その機能性フラグメント又は変異体に融合される。
【００７８】
一例において、アルブミンと構造的に又は進化的に関連する他のタンパク質は半減期延長部分として使用され得、これらとしては、限定されないが、アルファ−フェトプロテイン（ＷＯ  ２００５０２４０４４；Ｂｅａｔｔｉｅ  ａｎｄ  Ｄｕｇａｉｃｚｙｋ、２０  Ｇｅｎｅ  ４１５−４２２、１９８２）、アファミン（Ｌｉｃｈｅｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２６９（２７）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８１４９−１８１５４、１９９４）、及びビタミンＤ結合タンパク質（Ｃｏｏｋｅ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ、７６  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２４２０−２４２４、１９８５）が挙げられる。
【００７９】
一例において、半減期延長部分はアルファ−フェトプロテインである。
【００８０】
一例において、半減期延長部分はアファミンである。
【００８１】
一例において、半減期延長部分はビタミンＤ結合タンパク質である。
【００８２】
一例において、半減期延長部分は免疫グロブリン又はその機能性フラグメントである。一例において、免疫グロブリンはＦｃ領域を含む。例えば、ＩｇはＦｃドメイン又はそのＦｃフラグメント及び／もしくは変異体である。一例において、Ｉｇは免疫グロブリン定常ドメインの一部である。一例において、免疫グロブリンはアルブミンに結合する抗体フラグメントである。
【００８３】
一例において、半減期延長部分はポリマーである。本開示における使用に適したポリマーは、当業者に明らかであり、そしてこれらとしては、例えばポリエチレングリコールが挙げられる。一例において、ポリマーはモノ−又はポリ−（例えば、２〜４）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。一例において、ポリマーはＰＥＧである。
【００８４】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体はさらなる可溶性補体阻害剤に結合される。例えば、さらなる可溶性補体阻害剤は、Ｃ１−阻害剤（Ｃ１−ＩＮＨ）、第Ｉ因子（ｆＩ）、Ｈ因子（ｆＨ）、補体Ｈ因子関連タンパク質（ＣＦＨＲ）、Ｃ４ｂ結合タンパク質（Ｃ４ｂｐ）、可溶性ＣＤ５５（崩壊促進因子（ＤＡＦ））、可溶性ＣＤ４６（補体調節タンパク質（ＭＣＰ））、可溶性ＣＤ５９（プロテクチン）、可溶性補体受容体２（ｓＣＲ２）、ＴＴ３０（ＣＲ２−ｆＨ）及びコブラ毒因子（ＣＶＦ）からなる群より選択される。
【００８５】
一例において、さらなる可溶性補体阻害剤はＣ１阻害剤（Ｃ１−ＩＮＨ）である。
【００８６】
一例において、さらなる可溶性補体阻害剤は第Ｉ因子（ｆＩ）である。
【００８７】
一例において、さらなる可溶性補体阻害剤はＨ因子（ｆＨ）である。一例において、さらなる可溶性補体阻害剤は、補体Ｈ因子関連タンパク質（ＣＦＨＲ）である。例えば、補体Ｈ因子関連タンパク質は、ＣＦＨＲ１、ＣＦＨＲ２、ＣＦＨＲ３、ＣＦＨＲ４及びＣＦＨＲ５からなる群より選択される。
【００８８】
一例において、さらなる可溶性補体阻害剤はＣ４ｂ結合タンパク質（Ｃ４ｂｐ）である。
【００８９】
一例において、さらなる可溶性補体阻害剤は可溶性ＣＤ５５（崩壊促進因子（ＤＡＦ））である。
【００９０】
一例において、さらなる可溶性補体阻害剤は可溶性ＣＤ４６（補体調節タンパク質（ＭＣＰ））である。
【００９１】
一例において、さらなる可溶性補体阻害剤は可溶性ＣＤ５９（プロテクチン）である。
【００９２】
一例において、さらなる可溶性補体阻害剤は可溶性補体受容体２（ｓＣＲ２）である。
【００９３】
一例において、さらなる可溶性補体阻害剤はＴＴ３０（ＣＲ２−ｆＨ）である。
【００９４】
一例において、さらなる可溶性補体阻害剤はコブラ毒因子（ＣＶＦ）である。
【００９５】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体はｓＣＲ１変異体グリコフォームである。例えば、ｓＣＲ１変異体グリコフォームはシアル酸付加されたｓＣＲ１変異体グリコフォームである。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームはシアル酸付加されたグリカンを含む。例えば、シアル酸付加されたｓＣＲ１変異体グリコフォームは、少なくとも１つのシアル酸付加されたグリカン（例えば、モノ−、ジ−、トリ−又はテトラ−シアリル化（ｓｉａｌｙｌａｔｅｄ）グリカン）を含む。一例において、シアル酸付加されたｓＣＲ１変異体グリコフォームは、１つのシアル酸付加されたグリカンを含むｓＣＲ１変異体グリコフォーム（すなわち、ｓＣＲ１変異体はモノ−シアリル化されている）である。一例において、シアル酸付加ｓＣＲ１変異体グリコフォームは、少なくとも２つのシアル酸付加されたグリカンを含む（例えば、ジ−、トリ−又はテトラ−シアリル化）。一例において、シアル酸付加ｓＣＲ１変異体グリコフォームは、２つのシアル酸付加グリカンを含むｓＣＲ１変異体グリコフォームである（すなわち、ｓＣＲ１変異体はジ−シアリル化されている）。一例において、ｓＣＲ１変異体は、３つのシアル酸付加グリカンを含むｓＣＲ１変異体グリコフォームである（すなわち、ｓＣＲ１変異体はトリ−シアリル化されている）。一例において、ｓＣＲ１変異体は、４つのシアル酸付加グリカンを含むｓＣＲ１変異体グリコフォームである（すなわち、ｓＣＲ１変異体はテトラ−シアリル化されている）。
【００９６】
一例において、ｓＣＲ１変異体グリコフォーム（すなわち、少なくとも２つのシアル酸付加グリカンを含む）は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１と比較して、古典的経路、レクチン経路及び／又は副補体経路において増加した阻害活性を有する。
【００９７】
本開示は、半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤に結合された本開示のｓＣＲ１変異体グリコフォーム（すなわち、少なくとも２つのシアル酸付加グリカンを含む）を提供する。一例において、本開示の結合体化ｓＣＲ１変異体グリコフォームは、配列番号２に示されるｓＣＲ１を含むｓＣＲ１変異体結合体と比較してより長い血清半減期を有する。増加した血清半減期及び血清半減期を決定するためのアッセイの例が本明細書に記載され、そして変更するべきところは変更して本開示のこの例に適用されるとみなされるべきである。
【００９８】
本開示はまた、本開示のｓＣＲ１変異体並びに医薬担体及び／又は賦形剤を含む組成物を提供する。一例において、本開示はまた、ｓＣＲ１変異体グリコフォームを含む組成物を提供する。例えば、組成物はシアル酸付加ｓＣＲ１変異体グリコフォームを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの少なくとも３０％はシアル酸付加されたグリカンを含む。例えば、シアル酸付加ｓＣＲ１変異体グリコフォームの少なくとも３０％は、モノ−、ジ−、トリ−及び／又はテトラ−シアリル化グリカンを含む。例えば、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約３０％、又は約３５％、又は約４０％、又は約４５％、又は約５０％、又は約５５％、又は約６０％、又は約６５％、又は約７０％、又は約７５％は、シアル酸付加グリカンを含む（例えば、モノ−、ジ−、トリ−及び／又はテトラ−シアリル化されている）。
【００９９】
一例において、組成物は、少なくとも２つのシアル酸付加グリカン（例えば、ジ−、トリ−又はテトラ−シアリル化グリカン）を含むシアル酸付加ｓＣＲ１変異体グリコフォームを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの少なくとも約３０％は、少なくとも２つのシアル酸付加グリカン（例えば、ジ−、トリ−又はテトラ−シアリル化グリカン）を含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの少なくとも約３０％は、ジ−、トリ−及び／又はテトラ−シアリル化グリカンを含む。例えば、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約３０％、又は約３５％、又は約４０％、又は約４５％、又は約５０％、又は約５５％、又は約６０％、又は約６５％、又は約７０％、又は約７５％は、少なくとも２つのシアリル化グリカン（例えば、ジ−、トリ−又はテトラ−シアリル化グリカン）を含む。例えば、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約３０％、又は約３５％、又は約４０％、又は約４５％、又は約５０％、又は約５５％、又は約６０％、又は約６５％、又は約７０％、又は約７５％は、ジ−、トリ−及び／又はテトラ−シアリル化グリカンを含む。一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列からなるか、又は配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１３９３〜１９７１を欠いている）を含む。
【０１００】
一例において、組成物は、モノ−シアリル化グリカンを含むｓＣＲ１変異体グリコフォームを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約２０％はモノ−シアリル化グリカンを含む。例えば、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約２０％、又は約２５％、又は約３０％、又は約３５％、又は約４０％又は約４５％はモノ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約２２．５％〜２５％はモノ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約３５％〜約４０％はモノ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約４０％〜約４５％はモノ−シアリル化グリカンを含む。
【０１０１】
一例において、組成物は、ジ−シアリル化グリカンを含むｓＣＲ１変異体グリコフォームを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの少なくとも約１５％はジ−シアリル化グリカンを含む。例えば、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約１５％、又は約１７．５％、又は約２０％、又は約２２．５％、又は約２５％はジ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの少なくとも約２５％はジ−シアリル化グリカンを含む。例えば、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約２５％、又は約２７．５％、又は約３０％、又は約３５％、又は約４０％、又は約４５％、又は約５０％、又は約５５％、又は約６０％はジ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約１７．５％〜約２０％はジ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のＣＲ１変異体グリコフォームの約２５％〜約３０％はジ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約４０％〜約４５％はジ−シアリル化グリカンを含む。一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列からなるか、又は配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１３９３〜１９７１を欠いている）を含む。
【０１０２】
一例において、組成物は、トリ−シアリル化グリカンを含むｓＣＲ１変異体グリコフォームを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの少なくとも約１％はトリ−シアリル化グリカンを含む。例えば、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約１％、又は約２％、又は約３％、又は約４％、又は約５％、又は約６％、又は約７％、又は約８％、又は約９％、又は約１０％、又は約１１％、又は約１２％、又は約１３％、又は約１４％、又は約１５％はトリ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約３．５％〜約４％はトリ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約８％〜約８．５％はトリ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約９％〜約９．５％はトリ−シアリル化グリカンを含む。一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列からなるか、又は配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１３９３〜１９７１を欠いている）を含む。
【０１０３】
一例において、組成物は、テトラ−シアリル化グリカンを含むｓＣＲ１変異体グリコフォームを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの少なくとも約０．５％はテトラ−シアリル化グリカンを含む。例えば、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約０．５％、又は約０．７５％、又は約１％、又は約１．２５％、又は約１．５％、又は約１．７５％、又は約２％、又は約２．２５％、又は約２．５％、又は約２．７５％、又は約３％、又は約４％、又は約５％、又は約６％、又は約７％、又は約８％、又は約９％、又は約１０％はテトラ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約０．５％はテトラ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約１．５％〜約２％はテトラ−シアリル化グリカンを含む。一例において、組成物中のｓＣＲ１変異体グリコフォームの約２％〜約２．５％はテトラ−シアリル化グリカンを含む。一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列からなるか、又は配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１３９３〜１９７１を欠いている）。
【０１０４】
本開示のｓＣＲ１変異体の複雑な炭水化物構造の分析方法は当業者に明らかであり、かつ／又は本明細書に記載される。
【０１０５】
本開示のｓＣＲ１変異体グリコフォーム組成物を製造するための方法は、当業者に明らかであり、そしてこれらとしては例えば、シアリルトランスフェラーゼを組み換え的に発現し、かつ／又は過剰発現する細胞においてｓＣＲ１変異体を発現させることが挙げられる。例えば、ｓＣＲ１変異体は、ヒトＳＴ３ＧＡＬ３（ＳＴ３  ベータ−ガラクトシド  アルファ−２，３−シアリルトランスフェラーゼ３）及び／又はヒトＢ４ＧＡＬＴ１（ヒトβ１，４−ガラクトシルトランスフェラーゼ）を組み換え的に発現し、かつ／又は過剰発現する細胞において発現される。別の例において、ｓＣＲ１変異体は、グリコシル化のレベルを増加させるためのさらなるグリコシル化部位を含むように改変され得る。
【０１０６】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は哺乳動物細胞株において発現される。例えば、ｓＣＲ１変異体は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児由来腎臓細胞（例えば、ＨＥＫ２９３）、ベビーハムスター腎臓（例えば、ＢＨＫ−２１）細胞、マウス骨髄腫細胞（例えば、ＮＳ０、Ｓｐ２）及びＣＡＰ（Ｒ）細胞（例えば、ＣＡＰ−Ｇｏ．１、ＣＡＰ−Ｇｏ．２）のような羊膜細胞由来細胞からなる群より選択される哺乳動物細胞株において発現される。
【０１０７】
一例において、ｓＣＲ１変異体はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において発現される。
【０１０８】
一例において、ｓＣＲ１変異体はヒト胎児由来腎臓細胞（例えば、ＨＥＫ２９３）において発現される。
【０１０９】
さらなる例において、ｓＣＲ１変異体は、ヒト羊膜細胞由来細胞、例えばＣＡＰ（Ｒ）細胞、例えば、ＣＡＰ（Ｒ）−Ｇｏ．１又はＣＡＰ（Ｒ）−Ｇｏ．２細胞のような羊膜細胞由来細胞において発現される。本開示のいずれかの方法における使用に適したＣＡＰ（Ｒ）細胞は、例えばＷｉｓｓｉｎｇら（２０１５；ＢＭＣ  Ｐｒｏｃ．、９（Ｓｕｐｐｌ  ９）：Ｐ１２）に記載される。
【０１１０】
本開示はまた、本開示のｓＣＲ１結合体並びに医薬担体及び／又は賦形剤を含む組成物を提供する。
【０１１１】
一例において、組成物は、配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１を含むｓＣＲ１結合体を含む組成物と比較して増加した血清半減期を有する。
【０１１２】
本開示は、被験体において補体活性を阻害する方法を提供し、該方法は本開示のｓＣＲ１変異体結合体、又はｓＣＲ１変異体を含む組成物を投与することを含む。
【０１１３】
本開示はまた、被験体において疾患又は状態を処置又は予防する方法を提供し、該方法は、本開示のｓＣＲ１変異体結合体、又はｓＣＲ１変異体を含む組成物を投与することを含む。
【０１１４】
一例において、本開示は、被験体において補体活性を阻害する際の使用のための、ｓＣＲ１変異体、又はｓＣＲ１変異体結合体、又はｓＣＲ１変異体を含む組成物を提供する。
【０１１５】
一例において、本開示は、被験体における疾患又は状態を処置又は予防する際の使用のための、ｓＣＲ１変異体、又はｓＣＲ１変異体結合体、又はｓＣＲ１変異体を含む組成物を提供する。
【０１１６】
一例において、本開示は、被験体において補体活性を阻害するための薬剤の製造における、本開示のｓＣＲ１変異体、又はｓＣＲ１変異体結合体、又はｓＣＲ１変異体を含む組成物の使用を提供する。
【０１１７】
一例において、本開示は、被験体における疾患又は状態の処置又は予防のための薬剤の製造における、本開示のｓＣＲ１変異体、又はｓＣＲ１変異体結合体、又はｓＣＲ１変異体を含む組成物の使用を提供する。
【０１１８】
一例において、被験体は、本開示のｓＣＲ１変異体を用いた処置を必要とする（すなわち、それを必要とする）。
【０１１９】
一例において、疾患又は状態は、疾患又は状態は補体媒介障害である。例えば、被験体は補体媒介障害に罹患しているか、又は補体媒介障害の危険性がある。
【０１２０】
一例において、被験体は補体媒介障害に罹患している。一例において、被験体は、補体媒介障害に罹患していると診断されたことがある。一例において、被験体は、補体媒介障害のための処置を受けている。
【０１２１】
本明細書に記載されるいずれかの方法の例において、本開示のｓＣＲ１変異体結合体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物は、補体媒介障害の発症の前に又は後に投与される。本明細書に記載されるいずれかの方法の例において、ｓＣＲ１変異体結合体又は本開示のｓＣＲ１変異体を含む組成物は、補体媒介障害の発症の前に投与される。本明細書に記載されるいずれかの方法の例において、本開示のｓＣＲ１変異体結合体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物は、補体媒介障害の発症の後に投与される。
【０１２２】
一例において、被験体は補体媒介障害を発症する危険性がある。
【０１２３】
一例において、ｓＣＲ１変異体結合体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物は、補体媒介障害の症状の発現前に又は発現後に投与される。一例において、ｓＣＲ１変異体結合体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物は、補体媒介障害の症状の発現前に投与される。一例において、ｓＣＲ１変異体結合体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物は、補体媒介障害の症状の発現後に投与される。一例において、本開示のｓＣＲ１変異体結合体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物は、補体媒介障害の症状の１つ又はそれ以上を軽減するか又は減少させる用量で投与される。
【０１２４】
補体媒介障害の症状は、当業者に明らかであり、そして状態に依存する。補体媒介障害の例となる症状としては、例えば：
・感染の再発；
・関節炎；
・筋力低下；
・発疹又は皮膚の変色；
・特に四肢（例えば、足、手、脚又は腕）又は眼における浮腫；
・腹部痛；
・呼吸困難；
・悪心；
・疲労；
・血尿；
・部分的又は完全麻痺；及び
・認知能力低下
が挙げられる。
【０１２５】
一例において、補体媒介障害は、補体系の原発性調節不全、自己免疫障害、急性損傷及び／又は炎症状態により引き起こされる。例えば、補体媒介障害は、遺伝性血管性浮腫、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、血栓性微小血管症、Ｃ３糸球体症、膜性増殖性糸球体腎炎（抗Ｔｈｙ  １糸球体腎炎、抗ｃｏｎＡびまん性増殖性糸球体腎炎及び／又は受動ヘイマン腎炎（ｐａｓｓｉｖｅ  ｈｅｙｍａｎｎ  ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）を含む）、移植拒絶（肺移植（グラフトサルベージ及び抗体媒介拒絶を含む）及び／又は実質臓器移植（例えば、腎移植（抗体媒介拒絶を含む）を含む）、視神経脊髄炎、多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症（自己免疫性重症筋無力症、脱髄性アレルギー性脳脊髄炎、ＩｇＧ免疫複合体肺胞炎、逆受身アルサス反応を含む）、ループス腎炎（急性ループス腎炎又は慢性ループス腎炎を含む）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩｇＡ腎症、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、自己免疫性溶血性貧血、天疱瘡（尋常性天疱瘡を含む）、類天疱瘡（水疱性類天疱瘡を含む）、抗リン脂質症候群、多発外傷、神経外傷、血液透析、感染後ＨＵＳ、黄斑変性症、ブドウ膜炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、アテローム性動脈硬化、気分障害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、アナフィラキシー、敗血症、脳性マラリア、乾癬性関節症、皮膚筋炎、変形性関節症、認知症、緑内障、糖尿病性血管障害、心筋梗塞、虚血発作（再灌流を伴うもの及び伴わないもの）、出血性卒中、バイパス手術後、抗糸球体基底膜（ＧＢＭ）腎炎（又はグッドパスチャー症候群）、自己免疫性てんかん、疱疹状皮膚炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（ＥＧＰＡ；又はチャーグ・ストラウス症候群）、外傷性脳損傷、身体的傷害、化膿性汗腺炎、シェーグレン症候群、シェーグレン症候群血管炎、外傷（グリコーゲン誘発腹膜炎、熱傷、神経挫滅及び／又は閉鎖性頭部外傷を含む）、虚血再灌流傷害（ＩＲＩ；心筋ＩＲＩ、腸管ＩＲＩ、肝臓ＩＲＩ及び／又は膵臓ＩＲＩを含む）並びに急性呼吸促迫症候群（又は急性肺損傷）からなる群より選択される。
【０１２６】
一例において、補体媒介障害は、移植拒絶（例えば、抗体媒介拒絶）、移植の前、間、又は後の虚血再灌流傷害（肺移植及び／又は腎臓移植を含む）、臓器移植後臓器機能障害（肺移植及び／又は腎臓移植を含む）、実質臓器移植、視神経脊髄炎、重症筋無力症、糸球体病変、ループス腎炎、ＩｇＡ腎症、水疱性類天疱瘡、抗リン脂質症候群、ぶどう膜炎、神経障害、パーキンソン病、ハンチントン病、脳梗塞、運動ニューロン疾患、自己免疫性溶血性貧血、ＡＮＣＡ関連血管炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）及び抗糸球体基底膜（ＧＢＭ）腎炎からなる群より選択される。一例において、被験体は予防的処置を必要とする状態を有する。
【０１２７】
一例において、補体媒介障害は、移植拒絶（臓器移植後臓器機能障害、グラフトサルベージ及び抗体媒介拒絶を含む）、実質臓器移植、腎症、虚血再灌流傷害、視神経脊髄炎、重症筋無力症、糸球体病変、ループス腎炎（急性及び慢性）、ＩｇＡ腎症、水疱性類天疱瘡、抗リン脂質症候群、ぶどう膜炎、神経障害、パーキンソン病、ハンチントン病、脳梗塞、運動ニューロン疾患、自己免疫性溶血性貧血、ＡＮＣＡ関連血管炎  慢性炎症性脱髄性多発神経炎、虚血発作（再灌流を伴うか又は伴わないもの）、外傷性脳損傷、身体的傷害及び抗糸球体基底膜（ＧＢＭ）腎炎からなる群より選択される。
【０１２８】
一例において、補体媒介障害は移植拒絶である（例えば、抗体媒介拒絶）。
【０１２９】
一例において、補体媒介障害は実質臓器移植である。
【０１３０】
一例において、補体媒介障害は、移植（肺移植及び／又は腎臓移植を含む）の前、間又は後の虚血再灌流傷害である。
【０１３１】
一例において、補体媒介障害は臓器移植後臓器機能障害（肺移植及び／又は腎臓移植を含む）である。
【０１３２】
一例において、補体媒介障害は視神経脊髄炎である。
【０１３３】
一例において、補体媒介障害は重症筋無力症である。例えば、重症筋無力症は、自己免疫性重症筋無力症、脱髄性アレルギー性脳脊髄炎、ＩｇＧ免疫複合体肺胞炎又は逆受身アルサス反応である。
【０１３４】
一例において、補体媒介障害は糸球体病変である。
【０１３５】
一例において、補体媒介障害はループス腎炎である。例えば、ループス腎炎は急性ループス腎炎又は慢性ループス腎炎である。
【０１３６】
一例において、補体媒介障害は全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である。
【０１３７】
一例において、補体媒介障害ＩｇＡ腎症である。
【０１３８】
一例において、補体媒介障害は類天疱瘡である。例えば、類天疱瘡は水疱性類天疱瘡である。
【０１３９】
一例において、補体媒介障害は抗リン脂質症候群である。
【０１４０】
一例において、補体媒介障害はぶどう膜炎である。
【０１４１】
一例において、補体媒介障害は神経障害である
一例において、補体媒介障害はパーキンソン病である。
【０１４２】
一例において、補体媒介障害はハンチントン病である。
【０１４３】
一例において、補体媒介障害は脳梗塞である。
【０１４４】
一例において、補体媒介障害は運動ニューロン疾患である。
【０１４５】
一例において、補体媒介障害は自己免疫性溶血性貧血である。
【０１４６】
一例において、補体媒介障害はＡＮＣＡ関連血管炎である。
【０１４７】
一例において、補体媒介障害は慢性炎症性脱髄性多発神経炎である。
【０１４８】
一例において、補体媒介障害は遺伝性血管性浮腫である。
【０１４９】
一例において、補体媒介障害は発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）である。
【０１５０】
一例において、補体媒介障害は非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）である。
【０１５１】
一例において、補体媒介障害は血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）である。
【０１５２】
一例において、補体媒介障害は血栓性微小血管症である。
【０１５３】
一例において、補体媒介障害はＣ３腎症である。
【０１５４】
一例において、補体媒介障害は膜性増殖性糸球体腎炎である。例えば、糸球体腎炎は抗Ｔｈｙ  １糸球体腎炎、抗ｃｏｎＡびまん性増殖性糸球体腎炎及び／又は受動ヘイマン腎炎である。
【０１５５】
一例において、補体媒介障害は移植拒絶である。例えば、移植肺移植（グラフトサルベージ又は抗体媒介拒絶を含む）及び／又は腎臓移植（抗体媒介拒絶を含む）。
【０１５６】
一例において、補体媒介障害は多発性硬化症である。
【０１５７】
一例において、補体媒介障害はギラン・バレー症候群である。
【０１５８】
一例において、補体媒介障害は関節リウマチである。
【０１５９】
一例において、補体媒介障害は炎症性腸疾患である。例えば、炎症性腸疾患はクローン病又は潰瘍性大腸炎である。
【０１６０】
一例において、補体媒介障害は天疱瘡である。例えば、天疱瘡は尋常性天疱瘡である。
【０１６１】
一例において、補体媒介障害は多発外傷である。
【０１６２】
一例において、補体媒介障害は神経外傷である。
【０１６３】
一例において、補体媒介障害は血液透析である。
【０１６４】
一例において、補体媒介障害は感染後ＨＵＳである。
【０１６５】
一例において、補体媒介障害は黄斑変性症である。
【０１６６】
一例において、補体媒介障害は粥状動脈硬化である。
【０１６７】
一例において、補体媒介障害は気分障害である。
【０１６８】
一例において、補体媒介障害は喘息である。
【０１６９】
一例において、補体媒介障害は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。
【０１７０】
一例において、補体媒介障害は慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）である。
【０１７１】
一例において、補体媒介障害はアナフィラキシーである。
【０１７２】
一例において、補体媒介障害は敗血症である。
【０１７３】
一例において、補体媒介障害は脳性マラリアである。
【０１７４】
一例において、補体媒介障害は乾癬性関節症である。
【０１７５】
一例において、補体媒介障害は皮膚筋炎である。
【０１７６】
一例において、補体媒介障害は変形性関節症である。
【０１７７】
一例において、補体媒介障害は認知症である。
【０１７８】
一例において、補体媒介障害は緑内障である。
【０１７９】
一例において、補体媒介障害は糖尿病性血管障害である。
【０１８０】
一例において、補体媒介障害は心筋梗塞である。
【０１８１】
一例において、補体媒介障害は発作である。例えば、発作は虚血発作である（再灌流を伴うか又は伴わない）。別の例において、発作は出血性卒中である。
【０１８２】
一例において、補体媒介障害はバイパス手術後である。
【０１８３】
一例において、補体媒介障害は抗糸球体基底膜（ＧＢＭ）腎炎（又はグッドパスチャー症候群）である。
【０１８４】
一例において、補体媒介障害は自己免疫性てんかんである。
【０１８５】
一例において、補体媒介障害は疱疹状皮膚炎である。
【０１８６】
一例において、補体媒介障害は好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（ＥＧＰＡ；又はチャーグ・ストラウス症候群）である。
【０１８７】
一例において、補体媒介障害は外傷性脳損傷である。
【０１８８】
一例において、補体媒介障害は外傷である。例えば、外傷は身体的傷害である。一例において、外傷はグリコーゲン誘発腹膜炎である。別の例において、外傷は熱傷である。さらなる例において、外傷は神経挫滅及び／又は閉鎖性頭部外傷である。
【０１８９】
一例において、補体媒介障害は化膿性汗腺炎である。
【０１９０】
一例において、補体媒介障害はシェーグレン症候群である。例えば、シェーグレン症候群はシェーグレン症候群血管炎である。
【０１９１】
一例において、補体媒介障害は虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）である。例えば、ＩＲＩは心筋ＩＲＩ、腸管ＩＲＩ、肝臓ＩＲＩ及び／又は膵臓ＩＲＩである。
【０１９２】
一例において、補体媒介障害は急性呼吸促迫症候群（又は急性肺傷害）である。
【０１９３】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体結合体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物は、被験体における補体媒介障害の重症度を低減する量で被験体に投与される。
【０１９４】
本明細書に記載されるいずれかの方法の例において、被験体は哺乳動物、例えばヒトのような霊長類である。
【０１９５】
本明細書に記載される処置方法は、補体媒介障害の効果を低減するか、処置するか又は予防するためのさらなる化合物を投与することをさらに含み得る。
【０１９６】
本開示は、被験体において補体活性を阻害する際の使用のための指示書とともに包装された本開示の少なくとも１つのｓＣＲ１結合体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物を含むキットを提供する。場合により、キットはさらなる治療活性化合物又は薬物をさらに含む。
【０１９７】
本開示は、被験体において補体媒介障害を処置又は予防する際の使用のための指示書とともに包装された、本開示の少なくとも１つのｓＣＲ１結合体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物を含むキットをさらに提供する。場合により、キットはさらなる治療活性化合物又は薬物をさらに含む。
【０１９８】
本開示はまた、補体媒介障害を罹患しているか又は補体媒介障害に罹患している危険性がある被験体に、本開示の少なくとも１つのｓＣＲ１変異体結合体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物を投与するための指示とともに包装された該結合体又は組成物を、場合によりさらなる治療活性化合物又は薬物と組み合わせて含むキット提供する。
【０１９９】
本開示のｓＣＲ１変異体結合体又は組成物の例となる効果は本明細書において記載されており、そして前の４つの段落において述べられた本開示の例に変更するべきところは変更して適用されると解釈されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【０２００】
【図１】図１は、ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓのシアリル酸付加の血漿半減期に対する効果を示すグラフ表示である。
【図２】図２は、抗ＧＢＭ糸球体腎炎のインビボモデルにおけるｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ処置の効果を示すグラフ表示である。
【図３】図３は、抗ＧＢＭ糸球体腎炎のインビボモデルにおけるｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ処置の効果を示すグラフ表示である。
【発明を実施するための形態】
【０２０１】
配列表の要点
配列番号１  Ｎ末端内在性ヒトＣＲ１シグナルペプチドを有する可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１）のアミノ酸配列
配列番号２  Ｎ末端内在性ヒトＣＲ１シグナルペプチドを欠いている成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（１９７１））のアミノ酸配列
配列番号３  Ｎ末端内在性ヒトＣＲ１シグナルペプチドを欠いている切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（１３９２））のアミノ酸配列
配列番号４  Ｎ末端内在性ヒトＣＲ１シグナルペプチドを欠いている切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（９３９））のアミノ酸配列
配列番号５  切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（４９０−１３９２））のアミノ酸配列
配列番号６  切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（４９０−１９７１））のアミノ酸配列
配列番号７  Ｎ末端内在性ヒトＣＲ１シグナルペプチドを欠いている切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（２３４））のアミノ酸配列
配列番号８  Ｎ末端内在性ヒトＣＲ１シグナルペプチドを欠いている切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（４８９））のアミノ酸配列
配列番号９  切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（９４０−１９７１））のアミノ酸配列
配列番号１０  切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（４９０−９３９））のアミノ酸配列
配列番号１１  切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（９４０−１３９２））のアミノ酸配列
配列番号１２  切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（１３９３−１９７１））のアミノ酸配列
配列番号１３  ｓＣＲ１  ＬＨＲ−Ａのアミノ酸配列
配列番号１４  ｓＣＲ１  ＬＨＲ−Ｂのアミノ酸配列
配列番号１５  ｓＣＲ１  ＬＨＲ−Ｃのアミノ酸配列
配列番号１６  ｓＣＲ１  ＬＨＲ−Ｄのアミノ酸配列
配列番号１７  ８ｘＨｉｓタグ
配列番号１８  内在性シグナルペプチドのアミノ酸配列
配列番号１９  外来性シグナルペプチドのアミノ酸配列
配列番号２０  Ｎ末端内在性シグナルペプチドを欠いているＨｉｓタグ化可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（１９７１）−８Ｈｉｓ）のアミノ酸配列
配列番号２１  Ｎ末端内在性シグナルペプチドを有するＨｉｓタグ化切断型可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ）のアミノ酸配列
配列番号２２  Ｎ末端内在性シグナルペプチドを有する切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（９３９）−８Ｈｉｓ）のアミノ酸配列
配列番号２３  Ｎ末端外来性シグナルペプチドを有するＨｉｓタグ化切断型可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（４９０−１３９２）−８Ｈｉｓ）のアミノ酸配列
配列番号２４  Ｎ末端外来性シグナルペプチドを有するＨｉｓタグ化切断型可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（４９０−１９７１）−８Ｈｉｓ）のアミノ酸配列
配列番号２５  Ｎ末端内在性シグナルペプチドを有するＨｉｓタグ化切断型可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（２３４）−８Ｈｉｓ）のアミノ酸配列
配列番号２６  Ｎ末端内在性シグナルペプチドを有するＨｉｓタグ化切断型可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（４８９）−８Ｈｉｓ）のアミノ酸配列
配列番号２７  Ｎ末端外来性シグナルペプチドを有するＨｉｓタグ化切断型可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（９４０−１９７１）−８Ｈｉｓ）のアミノ酸配列
配列番号２８  Ｎ末端外来性シグナルペプチドを有するＨｉｓタグ化切断型可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（４９０−９３９）−８Ｈｉｓ）のアミノ酸配列
配列番号２９  Ｎ末端外来性シグナルペプチドを有するＨｉｓタグ化切断型可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（９４０−１３９２）−８Ｈｉｓ）のアミノ酸配列
配列番号３０  Ｎ末端外来性シグナルペプチドを有するＨｉｓタグ化切断型可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（１３９３−１９７１）−８Ｈｉｓ）のアミノ酸配列
配列番号３１  ＧＳ１３リンカー
配列番号３２  成熟ヒト血清アルブミンのアミノ酸配列
配列番号３３  ＩｇＧ１  Ｆｃのアミノ酸配列
配列番号３４  ＩｇＧ４  Ｆｃのアミノ酸配列
配列番号３５  ＧＳ３０リンカー
配列番号３６  外来性ＨＳＡシグナルペプチドのアミノ酸配列
配列番号３７  外来性シグナルペプチドのアミノ酸配列
配列番号３８  Ｎ末端内在性シグナルペプチドを有しＨＳＡに結合された可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（１９７１）−ＧＳ１３−ＨＳＡ）のアミノ酸配列
配列番号３９  Ｎ末端ＨＳＡシグナルペプチド及びプロ−ペプチドを有しＨＳＡに結合された可溶性補体受容体１（ＨＳＡ−ＧＳ１３−ｓＣＲ１（１９７１））のアミノ酸配列
配列番号４０  Ｎ末端内在性シグナルペプチドを有しＩｇＧ４  Ｆｃに結合された可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（１９７１）−ＩｇＧ４  Ｆｃ）のアミノ酸配列
配列番号４１  Ｎ末端外来性シグナルペプチドを有しＩｇＧ４  Ｆｃに結合された可溶性補体受容体１（ＩｇＧ４  Ｆｃ−ｓＣＲ１（１９７１））のアミノ酸配列
配列番号４２  ＨＳＡプロ−ペプチドのアミノ酸配列
配列番号４３  Ｎ末端内在性シグナルペプチドを有しＨＳＡに結合された切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（１３９２）−ＧＳ１３−ＨＳＡ）のアミノ酸配列
配列番号４４  Ｎ末端外来性シグナルペプチドを有しＨＳＡに結合された切断型成熟可溶性補体受容体１（ＨＳＡ−ＧＳ１３−ｓＣＲ１（１３９２））のアミノ酸配列
配列番号４５  Ｎ末端内在性シグナルペプチドを有しＩｇＧ１  Ｆｃに結合された切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（１３９２）−ＩｇＧ１  Ｆｃ）のアミノ酸配列
配列番号４６  Ｎ末端内在性シグナルペプチドを有しＩｇＧ４  Ｆｃに結合された切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（１３９２）−ＩｇＧ４  Ｆｃ）のアミノ酸配列
配列番号４７  Ｎ末端外来性シグナルペプチドを有しＩｇＧ４  Ｆｃに結合された切断型成熟可溶性補体受容体１（ＩｇＧ４  Ｆｃ−ｓＣＲ１（１３９２））のアミノ酸配列
配列番号４８  Ｎ末端内在性シグナルペプチドを有しＨＳＡに結合された切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（９３９）−ＧＳ１３−ＨＳＡ）のアミノ酸配列
配列番号４９  Ｎ末端内在性シグナルペプチドを有しＩｇＧ４  Ｆｃに結合された切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（９３９）−ＩｇＧ４  Ｆｃ））のアミノ酸配列
配列番号５０  Ｎ末端外来性シグナルペプチドを有しＩｇＧ４  Ｆｃに結合された切断型成熟可溶性補体受容体１（ＩｇＧ４  Ｆｃ−ｓＣＲ１（９３９））のアミノ酸配列
配列番号５１  ＨＳＡに結合された切断型成熟可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１（１３９２）−ＨＳＡ）のアミノ酸配列
【０２０２】
詳細な説明
一般
本明細書全体を通して、具体的に別の記述がなければ、又は状況が別の方法を必要としていなければ、単一の工程、物質の組成物、工程の群又は物質の組成物の群に対する言及は、それらの工程、物質の組成物、工程の群、又は物質の組成物の群の１つ及び複数（すなわち１つ又はそれ以上）を包含すると解釈されるべきである。
【０２０３】
当業者には当然のことながら、本開示は、具体的に記載されるもの以外の変形や改変を受けやすい。当然のことながら、本開示は全てのこのような変形及び改変を含む。本開示はまた、個別にまたは集合的に本明細書において言及されるかまたは示される工程、特徴、組成物及び化合物の全て、並びに上記工程または特徴の全ての組み合わせ又はいずれか２つもしくはそれ以上を含む。
【０２０４】
本開示は、説明の目的のみを意図される本明細書に記載される特定の例により範囲を限定されるべきではない。機能的に等価な製品、組成物及び方法は、明示的に本開示の範囲内である。
【０２０５】
本明細書における本開示のいずれの例も、具体的に別の記述がなければ、本開示のいずれかの他の例に変更するべきところは変更して適用されると解釈されるものとする。別の言い方をすれば、本開示のいずれの特定の例も、本開示のいずれかの他の特定の例と組み合わされ得る（互いに矛盾する場合を除いて）。
【０２０６】
特定の特徴又は特徴もしくは方法もしくは方法の工程の群を開示する本開示のいずれの例も、特定の特徴又は特徴もしくは方法もしくは方法の工程の群を排除するための明示的な支持を提供するものと解釈される。
【０２０７】
他に具体的に定義されていなければ、本明細書において使用される全ての技術的及び科学的用語は、（例えば、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、及び生化学における）当業者により一般的に理解される意味と同じ意味を有すると解釈されるものとする。
【０２０８】
他に指示がなければ、本開示において利用される組み換えタンパク質、細胞培養、及び免疫学的技術は、当業者に周知の標準的な手順である。このような技術は、Ｊ．Ｐｅｒｂａｌ、Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９８４）、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｕｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（ｅｄｉｔｏｒ）、Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｖｏｌｕｍｅｓ  １  ａｎｄ  ２、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９１）、Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ  ａｎｄ  Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（編）、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、１〜４巻、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５及び１９９６）、及びＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までの全ての更新を含む）、Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（編）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｕｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、（１９８８）、及びＪ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（編）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（現在までの全ての更新を含む）のような原典における文献全体を通して記載されそして説明される。
【０２０９】
本明細書における可変領域及びその部分、免疫グロブリン、抗体及びそのフラグメントの記載及び定義は、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９８７及び１９９１、Ｂｏｒｋ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４２、３０９−３２０、１９９４、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、１９８７、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３４２、８７７−８８３、１９８９並びに／又は又はＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２７３、９２７−９４８、１９９７における考察によりさらに明確にされ得る。
【０２１０】
用語「及び／又は」、例えば、「Ｘ及び／又はＹ」は、「Ｘ及びＹ」又は「Ｘ又はＹ」のいずれも意味すると理解されるものとし、そして両方の意味又はいずれかの意味の明示的な支持を提供すると解釈されるものとする。
【０２１１】
本明細書全体を通して、語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）もしくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような変形は、記述される要素、整数もしくは工程、又は要素、整数もしくは工程の群の包含を示唆するが、他の要素、整数、もしくは工程、又は要素、整数もしくは工程の群の排除は示唆しないと理解される。
【０２１２】
本明細書において使用される用語「から誘導される」は、特定の整数が、その元のものから必ずしも直接ではないが特定の元のものから得られ得るということを示すと解釈されるものとする。
【０２１３】
選択された定義
Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂ受容体又はＣＤ３５としても知られる補体受容体１型（ＣＲ１）は、補体活性の制御因子のファミリーのメンバーである。ＣＲ１は、赤血球、単球／マクロファージ、顆粒球、Ｂ細胞、いくつかのＴ細胞、脾臓濾胞樹状細胞、及び糸球体ポドサイトの膜上に存在し、そして補体を活性化した粒子及び免疫複合体への細胞結合を媒介する。コードされたタンパク質は、４１アミノ酸シグナルペプチド、１９３０残基の細胞外ドメイン、２５残基膜貫通ドメイン及び４３アミノ酸Ｃ末端細胞質領域を有する。限定ではなく命名の目的のみのために、ヒトＣＲ１の例となる配列はＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿０００５６４に示される。
【０２１４】
可溶性補体受容体１型（ｓＣＲ１）は、細胞表面ＣＲ１の切断により天然で産生され、そして炎症部位における補体活性化の制御において役割を果たす。「ｓＣＲ１」への言及が、膜貫通及び細胞質ドメインを欠く切断型ＣＲ１を指すということが理解されるべきである。限定ではなく命名の目的のみのために、ヒトｓＣＲ１の例となる配列は配列番号１に示される。アミノ酸の位置は、１９７１のアミノ酸からなるｓＣＲ１タンパク質（例えば、配列番号１に示される）を参照することにより本明細書で言及される。全長ｓＣＲ１は、４つの長い相同反復（ＬＨＲ）領域、すなわち、ＬＨＲ−Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤを含む。ＬＨＲ領域はヒトｓＣＲ１（配列番号１に示される）を参照して定義され得る。例えば、ＬＨＲ−Ａは配列番号１のアミノ酸４２〜４８９を含み、ＬＨＲ−Ｂは配列番号１のアミノ酸４９０〜９３９を含み、ＬＨＲ−Ｃは配列番号１のアミノ酸９４０〜１３９２を含み、そしてＬＨＲ−Ｄは配列番号１のアミノ酸１３９３〜１９７１を含む。各ＬＨＲは、それぞれ６０〜７０アミノ酸を有する合計３０のＳＣＲ配列を有する短いコンセンサス反復（ＳＣＲ）配列を含む。例えば、ＬＨＲ−ＡはＳＣＲ１〜７（配列番号１のアミノ酸４２〜４８９に対応する）を含み、ＬＨＲ−ＢはＳＣＲ８〜１４（配列番号１のアミノ酸４９１〜９３９に対応する）を含み、ＬＨＲ−ＣはＳＣＲ１５〜２１（配列番号１のアミノ酸９４１〜１３８９に対応する）を含み、そしてＬＨＲ−ＤはＳＣＲ２２〜２８（配列番号１のアミノ酸１３９４〜１８４２に対応する）、及びＳＣＲ２９〜３０（配列番号１のアミノ酸１８４６〜１９６７に対応する）を含む。成熟ヒトｓＣＲ１の配列は、配列番号１のアミノ酸１〜４１に対応するＮ末端シグナルペプチドを欠いている。例えば、成熟ヒトｓＣＲ１の配列（すなわちＮ末端シグナルペプチドを欠いている）は配列番号２に示される。
【０２１５】
他の種由来のｓＣＲ１の配列は、本明細書において提供され、かつ／もしくは公開されて利用可能なデータベースにおける配列を使用して決定され得、かつ／又は標準的な技術（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までの全ての更新を含む）又はＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）に記載される）を使用して決定され得る。
【０２１６】
配列番号１におけるアミノ酸の一部を参照して本明細書で使用される句「に対応する」は、ｓＣＲ１配列内のアミノ酸残基又は位置への参照と理解されるべきであるが、必ずしも配列番号１を含む配列である必要はない。例えば、４１アミノ酸Ｎ末端切断を含むｓＣＲ１配列（すなわち、成熟ｓＣＲ１）における「配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応する位置」への言及は、必然的に位置１〜８９８におけるアミノ酸を指す。一例において、ｓＣＲ１は配列番号１に示される配列を含む。
【０２１７】
本明細書で使用される用語「変異体」は、周知の技術を使用して１つ又はそれ以上のアミノ酸の欠失又は切断を受けたｓＣＲ１を指す。
【０２１８】
補体活性の文脈において本明細書で使用される用語「阻害する」又は「阻害すること」は、本開示のｓＣＲ１変異体が補体活性のレベルを低減するか又は減少させることを意味すると理解されるものとする。前述のことから当然のことながら、本開示のｓＣＲ１変異体は補体活性を完全に阻害する必要はなく、むしろ統計的に有意な量、例えば少なくとも約１０％、又は約２０％、又は約３０％、又は約４０％、又は約５０％、又は約６０％、又は約７０％、又は約８０％、又は約９０％、又は約９５％だけ活性低減する必要がある。補体活性の阻害を決定する方法は当該分野で公知であるか、かつ／又は本明細書に記載される。
【０２１９】
本明細書で使用される用語「補体阻害剤」は、補体活性のレベルを直接的又は間接的に低減するか又は減少させる化合物を指すと理解されるものとし、例えば、補体化合物の阻害、ブロッキング、分解、及び消費によるものが含まれる。本明細書に記載されるいずれかの方法の一例において、補体阻害剤は補体活性のレベルを直接減少させる。前述から明らかなように、本開示の補体阻害剤は、補体活性を完全に阻害する必要はなく、むしろ統計的に有意な量、例えば、少なくとも約１０％、又は約２０％、又は約３０％、又は約４０％、又は約５０％、又は約６０％、又は約７０％、又は約８０％、又は約９０％、又は約９５％だけ活性を減少する必要がある。補体活性の阻害を決定するための方法は当該分野で公知であり、かつ／又は本明細書に記載される。
【０２２０】
本明細書において使用される用語「半減期延長部分」は、被験体において本開示のｓＣＲ１変異体のインビボでの半減期を増加し得るポリペプチド融合パートナーを指すと理解されるものとする。例となる半減期延長部分としては、アルブミン、抗体Ｆｃ領域及びポリマーが挙げられる。
【０２２１】
本開示の文脈において本明細書で使用される用語「血清半減期」又は「血漿半減期」は、例えば分解及び／もしくはクリアランス又は天然の機構によるゼクエストレーションにより、血清中のｓＣＲ１の濃度又は量を５０％減少する（すなわち２分の１）ために必要とされる時間を指す。当業者は、被験体におけるｓＣＲ１の血清半減期が様々な生理条件（例えば、健康状態、身体サイズ／体重）に依存するということを認識するだろう。健常ヒト被験体において、ｓＣＲ１の血清半減期は約７０時間（３日）である。ｓＣＲ１の血清半減期を決定する方法は当該分野で公知であり、そしてこれらとしては、例えば薬物動態分析が挙げられる。本開示の目的のために、「増加」又は「増強された」血清半減期は、ｓＣＲ１変異体の血清濃度が、配列番号２に示されるｓＣＲ１と比較して５０％減少するためにかかった時間の上昇又は増加を指す。
【０２２２】
用語「組み換え体」は、人工的遺伝子組み換えの産物を意味すると理解されるものとする。組み換えタンパク質はまた、例えば、それが発現される細胞、組織又は被験体内にある場合に人工的組み換え手段により発現されるタンパク質を包含する。
【０２２３】
用語「タンパク質」は、単一ポリペプチド鎖、すなわち、ペプチド結合により連結された一連の連続したアミノ酸又は互いに共有結合もしくは非共有結合で連結された一連のポリペプチド鎖（すなわち、ポリペプチド複合体）を含むと解釈されるものとする。例えば、一連のポリペプチド鎖は、適切な化学結合又はジスルフィド結合を使用して共有結合で連結され得る。非共有結合の例としては、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力、及び疎水性相互作用が挙げられる。
【０２２４】
用語「ポリペプチド」又は「ポリペプチド鎖」は、前述の段落から、ペプチド結合により連結された一連の連続したアミノ酸を意味すると理解されるだろう。
【０２２５】
句「保存的アミノ酸置換」は、類似した側鎖及び／又は疎水性親水性指標（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃｉｔｙ）及び／又は親水性を有するアミノ酸残基でアミノ酸残基を置き換え又は置換することを指す。類似した側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該分野で定義されており、これらとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、無極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β−分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。疎水性親水性指標は、例えばＫｙｔｅ  ａｎｄ  Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５７：１０５−１３２、１９８２に記載され、そして水性指標は例えば、ＵＳ４５５４１０１に記載される。
【０２２６】
本明細書で使用される用語「状態」は、正常機能の破壊又は正常機能との干渉を指し、そしていずれの特定の状態にも限定されるべきではなく、疾患又は障害を含む。
【０２２７】
本明細書で使用される疾患もしくは状態もしくはその再発を発症するか又は再発する「危険性がある」被験体は、検出可能な疾患又は疾患の症状を有していても有していなくてもよく、そして検出可能な疾患又は疾患の症状を本開示に従う処置の前に示していても示していなくてもよい。「危険性がある」は、被験体が１つ又はそれ以上の危険因子を有することを示し、これは当該分野で公知であるか、かつ／又は本明細書に記載される疾患又は状態の発症と相関する測定可能なパラメーターである。
【０２２８】
本明細書で使用される用語「処置すること」、「処置する」又は「処置」は、本明細書に記載される血清アルブミン変異体結合体を投与して、それにより特定の疾患もしくは状態の少なくとも１つの症状を低減するかもしくは除去し、又は疾患もしくは状態の進行を遅延させることを含む。
【０２２９】
本明細書で使用される用語「予防すること」、「予防する」又は「予防」は、個体における特定の疾患又は状態の発生又は再発に関して予防を提供することを含む。個体は疾患の発症又は疾患再発の素因を有するか又は危険性があり得るが、疾患又は再発とはまだ診断されていない。
【０２３０】
本明細書で使用される用語「被験体」は、ヒトを含むいずれかの動物、例えば哺乳動物を意味すると解釈されるものとする。例となる被験体としては、限定されないが、ヒト及び非ヒト霊長類が挙げられる。例えば、被験体はヒトである。
【０２３１】
補体活性の阻害
本開示は、例えば、被験体に本開示の可溶性補体受容体１型（ｓＣＲ１）変異体を投与することを含む、被験体において補体活性を阻害する方法を提供する。
【０２３２】
本開示はまた、被験体において疾患又は状態を処置又は予防する方法を提供し、該方法は、本開示のｓＣＲ１変異体、又はｓＣＲ１変異体結合体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物を被験体に投与することを含む。一例において、本開示は、それを必要とする被験体において疾患又は状態を処置する方法を提供する。
【０２３３】
本開示はまた、被験体において疾患又は状態を処置又は予防するための本開示のｓＣＲ１変異体、又はｓＣＲ１変異体結合体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物の使用を提供する。一例において、本開示は、それを必要とする被験体において疾患又は状態を処置するための、本開示の血清アルブミン結合体の使用を提供する
一例において、方法は、古典的経路、レクチン経路及び／又は副補体経路において活性を阻害することを含む。例えば、該方法は、古典的補体経路の活性化を阻害するために本開示のｓＣＲ１変異体を投与することを含む。別の例において、該方法は、レクチン経路の活性化を阻害するために本開示のｓＣＲ１変異体を投与することを含む。さらなる例において、該方法は副補体経路の活性化を阻害するために本開示のｓＣＲ１変異体を投与することを含む。
【０２３４】
一例において、方法は外因性補体経路において活性を阻害することを含む。例えば、該方法は外因性補体経路の活性化を阻害するために本開示のｓＣＲ１変異体を投与することを含む。
【０２３５】
一例において、疾患又は状態は補体媒介障害である。
【０２３６】
一例において、被験体は補体媒介障害に罹患している。補体媒介障害は遺伝性でも後天性でもよい。
【０２３７】
一例において、補体媒介障害は、移植拒絶（臓器移植後臓器機能障害、グラフトサルベージ及び抗体媒介拒絶を含む）、実質臓器移植、腎症、虚血再灌流傷害、視神経脊髄炎、重症筋無力症、糸球体病変、ループス腎炎（急性及び慢性）、ＩｇＡ腎症、水疱性類天疱瘡、抗リン脂質症候群、ぶどう膜炎、神経障害、パーキンソン病、ハンチントン病、脳梗塞、運動ニューロン疾患、自己免疫性溶血性貧血、ＡＮＣＡ関連血管炎  慢性炎症性脱髄性多発神経炎、虚血発作（再灌流を伴うか又は伴わないもの）、外傷性脳損傷、身体的傷害及び抗糸球体基底膜（ＧＢＭ）腎炎からなる群より選択される。
【０２３８】
一例において、補体媒介障害は、原発性調節不全、例えば遺伝性血管性浮腫、発作性夜間ヘモグロビン尿症、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、血栓性微小血管症、Ｃ３糸球体症、膜性増殖性糸球体腎炎又は移植拒絶（臓器移植後臓器機能障害、グラフトサルベージ及び抗体媒介拒絶）である。
【０２３９】
一例において、補体媒介障害は、自己免疫状態、例えば視神経脊髄炎、多発性硬化症、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、ループス腎炎（急性及び慢性）、ＩｇＡ腎症、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、自己免疫性溶血性貧血、天疱瘡、類天疱瘡（水疱性類天疱瘡を含む）  慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、抗糸球体基底膜（ＧＢＭ）腎炎又は抗リン脂質症候群である。
【０２４０】
一例において、補体媒介障害は、急性外傷、例えば多発外傷、神経外傷、血液透析、外傷性脳損傷、身体的傷害又は感染後ＨＵＳである。
【０２４１】
一例において、補体媒介障害は、炎症性状態、例えば黄斑変性症、ぶどう膜炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、アテローム性動脈硬化、喘息、ＣＯＰＤ、敗血症、急性呼吸促迫症候群、脳性マラリア、乾癬性関節症又は皮膚筋炎である。
【０２４２】
一例において、補体媒介障害は、変性状態、例えば変形性関節症、認知症、緑内障、神経障害、パーキンソン病、ハンチントン病、運動ニューロン疾患又は  糖尿病性血管障害である。
【０２４３】
一例において、補体媒介障害は、例えば、臓器移植において、又は手術後もしくは発作もしくは心筋梗塞後に発生するような虚血再灌流状態／傷害である。
【０２４４】
補体媒介障害の診断方法は、当業者には容易に明らかとなり、そしてこれらとしては例えば、溶血古典的補体経路（ＣＨ−５０）試験、溶血副補体経路（ＡＰ−５０）試験、免疫複合体疾患についてのスクリーニング、ループスについて試験するための抗核血清学、尿検査及び全血球計算（ＣＢＣ）が挙げられる。
【０２４５】
一例において、被験体は補体媒介障害を発症する危険性がある。被験体は、彼又は彼女が対照集団よりも補体媒介障害を発症する高い危険性を有する場合危険性がある。対照集団は、補体媒介障害に罹患したことがなく、又は補体媒介障害の家族歴も有していない一般集団（例えば、年齢、性別、人種及び／又は民族性により整合される）から無作為に選択された１又はそれ以上の被験体を含み得る。被験体は、補体媒介障害に関連する「危険因子」がその被験体に付随すると分かった場合、補体媒介障害の危険性があるとみなされ得る。危険因子としては、例えば、被験体の集団に対する統計学的又は疫学的な研究により所定の障害と関連付けられるいずれかの活性、形質、事象又は特性が挙げられ得る。従って、被験体は、たとえ内在する危険因子を同定する試験がその被験体を具体的に含んでいなくても、補体媒介障害の危険性があるとして分類され得る。
【０２４６】
一例において、被験体は補体媒介障害を発症する危険性があり、そしてｓＣＲ１変異体は補体媒介障害の症状の開始前又は後に投与される。一例において、ｓＣＲ１変異体は、補体媒介障害の症状の開始前に投与される。一例において、ｓＣＲ１は補体媒介障害の症状の開始後に投与される。一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、危険性がある被験体において補体媒介障害の症状の１つ又はそれ以上を軽減するか又は低減する用量で投与される。
【０２４７】
本開示の方法は、被験体において補体媒介障害のいずれの形態にも容易に適用され得る。
【０２４８】
一例において、本開示の方法は、当該分野で公知であり、かつ／又は本明細書に記載される補体媒介障害のいずれかの症状を低減する。
【０２４９】
当業者には当然のことながら、被験体における補体媒介障害の症状の「低減」は、同様に補体媒介障害に罹患しているが本明細書に記載される方法を用いた処置を受けたことがない別の被験体に対して相対的なものである。これは必ずしも２つの被験体の対照比較を必要としない。むしろ集団データを信頼することができる。例えば、補体媒介障害に罹患しており本明細書に記載される方法を用いた処置を受けたことがない被験体の集団（場合により、処置される被験体と類似した被験体の集団、例えば、年齢、体重、人種）が評価され、そして平均値が本明細書に記載される方法を用いて処置された被験体又は被験体の集団の結果と比較される。
【０２５０】
臓器移植に起因するか又は臓器移植に付随する虚血再灌流傷害である補体媒介状態の場合において、本開示のｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体を含む組成物は、移植の前、間又は後に投与され得る。いくつかの例において、ｓＣＲ１変異体又は組成物は臓器移植ドナーに投与される。他の例において、ｓＣＲ１変異体又は組成物は被験体に投与され、ここで被験体は臓器移植レシピエントである。一例において、ｓＣＲ１変異体又は組成物は、摘出された臓器にエクスビボで臓器移植の前に投与される。例えば、摘出された臓器は、移植前にｓＣＲ１変異体又は組成物を含む溶液で灌流され得るかその溶液を注入され得る。
【０２５１】
一例において、臓器移植は実質臓器移植である。例えば、実質臓器移植は肺移植である。
【０２５２】
前述のことから当業者には当然のことながら、本開示は、臓器移植の方法又は臓器移植の結果を改善するかもしくは移植された臓器の機能を改善するため又は臓器移植後臓器機能障害を予防するための方法を提供し、該方法は、ｓＣＲ１変異体又は組成物を臓器移植ドナーに臓器の採取前に投与すること；臓器を採取し、そしてその臓器を臓器移植レシピエントに移植することを含む。
【０２５３】
本開示はまた、臓器移植レシピエントにおける臓器機能を改善するために臓器ドナーからの移植臓器を準備するための方法を提供し、該方法は、臓器ドナーにｓＣＲ１変異体又は組成物を臓器の採取前に投与することを含む。
【０２５４】
本開示は、臓器移植拒絶を予防するための方法をさらに提供し、該方法は、臓器ドナーにｓＣＲ１変異体又は組成物を臓器の採取前に投与すること、臓器を採取すること、及び該臓器を臓器移植レシピエントに移植することを含む。
【０２５５】
いくつかの例において、該方法は、ｓＣＲ１変異体又は組成物を臓器移植レシピエントに投与することを更に含む。例えば、ｓＣＲ１変異体又は組成物は、移植前に又は臓器を移植する時点で（すなわち、移植の間に）臓器移植レシピエントに投与される。
【０２５６】
本開示はまた、臓器移植の方法又は臓器移植の結果を改善するか、もしくは移植された臓器の機能を改善するための方法、又は臓器移植後臓器機能障害を予防するための方法を提供し、該方法は、ｓＣＲ１変異体又は組成物を臓器移植レシピエントに移植前に投与すること、ついで臓器を臓器移植レシピエント内に移植することを含む。
【０２５７】
一例において、臓器移植ドナーは脳死状態である。例えば、臓器ドナーは生命維持のおかげで生存しているが脳死状態である。
【０２５８】
開示の一例において、ｓＣＲ１変異体又は組成物は、例えば臓器移植の場合に再灌流の前に投与され、ｓＣＲ１変異体又は組成物は、移植された臓器の再灌流の前に臓器移植レシピエントに投与される（例えば、ｓＣＲ１変異体又は組成物は移植の前又は移植の間であるが再灌流の前に投与される）。
【０２５９】
脳死状態ドナーへの投与の場合、ｓＣＲ１変異体又は組成物は、脳死と臓器採取の間のいずれかの時点に投与されてもよい。いくつかの例において、ｓＣＲ１変異体又は組成物は、摘出された臓器にエクスビボで、臓器移植前に投与される。例えば、摘出された臓器は、ｓＣＲ１変異体又は組成物を含む溶液を移植前に灌流又は注入され得る。
【０２６０】
可溶性補体受容体１型変異体
本開示は、本明細書に記載されるいずれかの方法における使用のためのｓＣＲ１変異体を提供する。
【０２６１】
一例において、本開示は、配列番号２に示される配列と比較して改善されたか又は増加した補体阻害活性を有するｓＣＲ１変異体を提供する。本発明者らは、配列番号１の残基４２〜９３９及び／又は残基４９０〜１３９２を含むｓＣＲ１変異体が改善されかつ／又は増加した補体阻害活性を有すると特定した。
【０２６２】
本開示は、被験体において補体活性を阻害する方法を提供し、該方法は可溶性補体受容体１型（ｓＣＲ１）変異体を被験体に投与することを含み、該ｓＣＲ１変異体は：
（ｉ）  配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列；及び
（ｉｉ）  配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０２６３】
例えば、本発明者らは、機能を喪失することなく欠失されることができるか又は改善された機能を生じる、配列番号１に示される配列中のアミノ酸残基を同定した。一例において、ｓＣＲ１変異体は、配列番号１に示される配列と比較して４８９と１０７３との間のアミノ酸の欠失を含む。例えば、ｓＣＲ１変異は、配列番号１に示される配列と比較して４８９又は６２０又は１０６８又は１０７３アミノ酸の欠失を含む。
【０２６４】
一例において、本開示は、配列番号１に示される配列と比較して８９８と１４８２との間のアミノ酸を含む切断型ｓＣＲ１を提供する。例えば、切断型ｓＣＲ１は、配列番号１に示される配列と比較して８９８又は９０３又は１３５１又は１４８２アミノ酸を含む。
【０２６５】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、配列番号１に示される配列の変異体を含み、ここで変異体配列は、配列番号１のアミノ酸４２〜１３９２に対応するアミノ酸配列を含む。
【０２６６】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は配列番号１に示される配列の変異体を含み、ここで変異体配列は配列番号１のアミノ酸４２〜９３９に対応するアミノ酸配列を含む。
【０２６７】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は配列番号１に示される配列の変異体を含み、ここで変異体配列は、配列番号１のアミノ酸４９０〜１３９２に対応するアミノ酸配列を含む。
【０２６８】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、配列番号１に示される配列の変異体を含み、ここで変異体配列は配列番号１のアミノ酸４９０〜１９７１に対応するアミノ酸配列を含む。
【０２６９】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、配列番号１及び／又は配列番号２に示される配列を含まず、これらからなるものでもない。
【０２７０】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、配列番号１のアミノ酸１〜４１に対応するアミノ酸配列を含まない。
【０２７１】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は配列番号１のアミノ酸９４０〜１９７１に対応するアミノ酸配列を含まない。
【０２７２】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は配列番号１のアミノ酸１３９３〜１９７１に対応するアミノ酸配列を含まない。
【０２７３】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は配列番号１アミノ酸１〜４８９に対応するアミノ酸配列を含まない。
【０２７４】
一例において、ｓＣＲ１変異体は単量体である（すなわち、ｓＣＲ１変異体の１つのコピー）。
【０２７５】
一例において、ｓＣＲ１変異体は二量体であるか、又は二量体化している（すなわち、ｓＣＲ１変異体の２つのコピーが融合タンパク質において連結されている）。
【０２７６】
一例において、ｓＣＲ１変異体は多量体であるか、又は多量体化している（すなわち、ｓＣＲ１変異体の多数のコピーが融合タンパク質において連結されている）。
【０２７７】
ｓＣＲ１変異体の二量体化又は多量体化を達成するための方法は、当該分野で公知でありかつ／又は本明細書に記載され、これらとしては、例えば、２つもしくはそれ以上のｓＣＲ１変異体間の直接結合体化又は間接的結合（例えば、２つ又はそれ以上のｓＣＲ１変異体間のリンカーによる）が挙げられる。一例において、二量体化又は多量体化は、化学結合（例えば、ジスルフィド結合又はシスチンノットによる）又は遺伝子融合により形成される。
【０２７８】
一例において、２つ又はそれ以上の同じｓＣＲ１変異体が融合される（すなわち、融合タンパク質として発現される）。
【０２７９】
一例において、２つ又はそれ以上の異なるｓＣＲ１変異体が融合される（すなわち、融合タンパク質として発現される）。
【０２８０】
一例において、二量体化又は多量体化したｓＣＲ１変異体はｓＣＲ１変異体の間にリンカーを含む。
【０２８１】
一例において、開示は、多量体化ドメインを含む２つ又はそれ以上のｓＣＲ１変異体を含む多量体タンパク質を提供し、ここで多量体化ドメインは相互作用して多量体タンパク質を形成する。
【０２８２】
一例において、多量体タンパク質中の各ｓＣＲ１変異体は１つのｓＣＲ１変異体を含む。別の例において、多量体タンパク質中の１つ又はそれ以上のｓＣＲ１変異体は、２つ又はそれ以上のｓＣＲ１変異体を含み、例えば、変異体は融合タンパク質において連結されている。
【０２８３】
一例において、多量体化ドメインは免疫グロブリンヒンジドメインを含む。
【０２８４】
一例において、多量体化ドメインはロイシンジッパードメイン、シスチンノット又は抗体Ｆｃ領域である。例えば、多量体化ドメインはロイシンジッパードメインである。適切なロイシンジッパーポリペプチドは、当該分野で公知であり、そしてこれらとしてはｃ−Ｊｕｎ及びｃ−Ｆｏｓロイシンジッパードメインが挙げられる。ロイシンジッパー融合物は、Ｒｉｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．（１９９６）（これは参照により本明細書に加入される）に記載される。別の例において、多量体化ドメインはシスチンノットである。例えば、シスチンノットは３つ又はそれ以上の折り合わされたジスルフィド結合のコアドメインを含めて６０アミノ酸長までを含む。さらなる例において、多量体化ドメインは抗体Ｆｃ領域である（例えば、本明細書に記載される）。
【０２８５】
一例において、多量体化ｓＣＲ１変異体は線状である。
【０２８６】
一例において、多量体化ｓＣＲ１変異体は環状である。例えば、多量体化ｓＣＲ１変異体は、Ｐｏｐｐ、Ｍ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ（２０１１）（参照により本明細書に加入される）に記載されるようなソルターゼ酵素切断部位を含み得る。
【０２８７】
一例において、本開示における使用のためのｓＣＲ１変異体は、少なくとも２つのシアリル化グリカン（例えば、ジ−、トリ−又はテトラ−シアリル化グリカン）を含む。例えば、本明細書に記載されるいずれかの方法における使用のための組成物は、シアリル化ｓＣＲ１変異体グリコフォームを含む。一例において、本明細書に記載されるいずれかの方法における使用のためのシアリル化ｓＣＲ１変異体グリコフォームは、ジ−、トリ−又はテトラ−シアリル化グリコフォームを含む。少なくとも２つのシアリル化グリカン（例えば、ジ−、トリ−又はテトラ−シアリル化グリカン）を含む変異体ｓＣＲ１グリコフォームを製造するための方法は、当業者に明らかであるか、かつ／又は本明細書に記載される。
【０２８８】
本開示のｓＣＲ１変異体の生物学的活性を決定するための例となる方法は、当業者に明らかであり、かつ／又は本明細書に記載される。例えば、古典的経路、レクチン経路及び／又は副経路の阻害活性を決定する方法が本明細書に記載される。
【０２８９】
結合体
本開示は、本明細書に記載されるいずれかの方法における使用のためのｓＣＲ１変異体結合体を提供する。ｓＣＲ１変異体の結合体化のための方法は、当業者に明らかであり、かつ／又は本明細書に記載される。結合体化の全ての形態及び方法（すなわち、結合）は本開示により企図され、これらとしては、例えば、ｓＣＲ１変異体と本明細書に記載されるような別の化合物／部分との間の直接結合体化、又は間接的結合（例えば、ｓＣＲ１変異体と他の化合物／部分との間のリンカーによる）が挙げられる。一例において、結合体は化学的結合により（例えば、アミン結合又はジスルフィド結合により）又は遺伝子融合により形成される。
【０２９０】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤に結合される。
【０２９１】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体は、半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤に結合され、これはｓＣＲ１変異体に直接的又は間接的に結合される。半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤は、ｓＣＲ１変異体に直接的又は間接的に結合され得る（例えば、間接的結合の場合にはリンカーを含み得る）。
【０２９２】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、アミン結合により半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤に結合される。
【０２９３】
一例において、開示は、ｓＣＲ１変異体及び半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤を含む融合タンパク質を提供する。例えば、半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤は、ｓＣＲ１変異体のＮ末端、ｓＣＲ１変異体のＣ末端又はそれらのいずれかの組み合わせに位置付けられる。
【０２９４】
一例において、ｓＣＲ１変異体は、リンカーを介して半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤に結合される。例えば、リンカーはペプチドリンカーである。
【０２９５】
一例において、リンカーは可動性リンカーである。「可動性」リンカーは、溶液中で固定された構造（二次又は三次構造）を有していないアミノ酸配列である。従ってこのような可動性リンカーは、様々なコンホメーションに自由に適合する。本開示における使用に適した可動性リンカーは当該分野で公知である。本発明における使用のための可動性リンカーの例は、リンカー配列ＳＧＧＧＧＳ／ＧＧＧＧＳ／ＧＧＧＧＳ又は（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３である。可動性リンカーはＷＯ１９９９０４５１３２にも開示されている。
【０２９６】
リンカーは、結合領域のその標的との相互作用を実質的に妨げないいずれのアミノ酸配列を含んでいてもよい。可動性リンカー配列に好ましいアミノ酸残基としては、限定されないが、グリシン、アラニン、セリン、スレオニン  プロリン、リジン、アルギニン、グルタミン及びグルタミン酸が挙げられる。
【０２９７】
結合領域間のリンカー配列は、好ましくは５つ又はそれ以上のアミノ酸残基を含む。本開示に従う可動性リンカー配列は、５つ又はそれ以上の残基、好ましくは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０又は２５又は３０又はそれ以上の残基からなる。本発明の非常に好ましい実施態様において、可動性リンカー配列は５、７、１０、１３又は１６又は３０残基からなる。
【０２９８】
一例において、可動性リンカーは、配列番号３１に従うアミノ酸配列、すなわち、ＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＳ（ＧＳ１３）を有する。
【０２９９】
一例において、可動性リンカーは、配列番号３５に従うアミノ酸配列、すなわち、ＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＳ（ＧＳ３０）を有する。
【０３００】
本開示のｓＣＲ１変異体に結合され得る例となる化合物及びこのような結合体化の方法は、当該分野で公知でありかつ本明細書に記載される。
【０３０１】
半減期延長部分
一例において、ｓＣＲ１変異体は半減期延長部分に結合される。本開示における使用に適した半減期延長部分は、当業者に明らかであり、そしてこれらとしては、限定されないが、本明細書に記載されるものが挙げられる。例えば、半減期延長部分は、ヒト血清アルブミン又はその機能性フラグメント、免疫グロブリンＦｃ領域又はその機能性フラグメント、アファミン、アルファ−フェトプロテイン、ビタミンＤ結合タンパク質、アルブミンに結合する抗体フラグメント、及びポリマーからなる群より選択される。
【０３０２】
一例において、半減期延長部分はヒト血清アルブミン又はその機能性フラグメントである。
【０３０３】
一例において、半減期延長部分は免疫グロブリンＦｃ領域又はその機能性フラグメントである。
【０３０４】
一例において、半減期延長部分はアファミンである。
【０３０５】
一例において、半減期延長部分はアルファ−フェトプロテインである。
【０３０６】
一例において、半減期延長部分はビタミンＤ結合タンパク質である。
【０３０７】
一例において、半減期延長部分はアルブミンに結合する抗体フラグメントである。
【０３０８】
一例において、半減期延長部分はポリマーである。
【０３０９】
アルブミンタンパク質及びその変異体
一例において、半減期延長部分はアルブミン、又はその機能性フラグメントもしくは変異体である。
【０３１０】
血清アルブミン、又は血中アルブミンは、最も豊富な血中タンパク質であり、そして血中のステロイド、脂肪酸及び甲状腺ホルモンの担体タンパク質として機能し、さらには細胞外液量の安定化において主要な役割を果たす。
【０３１１】
一例において、アルブミン、その機能性フラグメント又は変異体は、血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミンである。限定ではなく命名のみの目的のために、成熟ヒト血清アルブミンの例となる配列はＮＣＢＩ  ＧｅｎＢａｎｋ受入ＩＤ：ＡＥＥ６０９０８及び配列番号３２に示される。
【０３１２】
一例において、アルブミン、その機能性フラグメント又は変異体は、１つ又はそれ以上のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。本開示における使用に適したアミノ酸置換は、当業者に明らかであり、これらとしては、天然に存在する置換並びに例えば、ＷＯ２０１１０５１４８９、ＷＯ２０１４０７２４８１、ＷＯ２０１１１０３０７６、ＷＯ２０１２１１２１８８、ＷＯ２０１３０７５０６６、ＷＯ２０１５０６３６１１、ＷＯ２０１４１７９６５７及びＷＯ２０１９０７５５１９に記載されるような操作された置換が挙げられる。
【０３１３】
一例において、本開示は、アルブミンファミリータンパク質、例えば、構造的又は進化的にアルブミンに関連するタンパク質に結合されたｓＣＲ１変異体を提供する。例えば、ｓＣＲ１変異体は、アファミン、アルファ−フェトプロテイン又はビタミンＤ結合タンパク質に結合される。
【０３１４】
別の例において、ｓＣＲ１変異体は、アルブミンファミリータンパク質、例えば構造的又は進化的にアルブミンと関連するタンパク質に融合される、例えば、融合タンパク質として発現される。例えば、ｓＣＲ１変異体は、アファミン、アルファ−フェトプロテイン、又はビタミンＤ結合タンパク質に、例えば融合タンパク質として融合される。
【０３１５】
免疫グロブリンＦｃ領域及びそのフラグメント
一例において、半減期延長部分は免疫グロブリン又はその機能性フラグメントである。例えば、免疫グロブリンはＦｃ領域、例えばＦｃドメイン又はＦｃフラグメント及び／又はその変異体を含む。一例において、Ｉｇは免疫グロブリン定常ドメインの一部である。限定ではなく命名の目的のみのために、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃの例となる配列を配列番号３３に示す。限定ではなく命名の目的のみのために、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃの例となる配列を  配列番号３４に示す。
【０３１６】
一例において、Ｆｃフラグメント及び／又はその変異体は、１つ又はそれ以上のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。本開示における使用に適したアミノ酸置換は、当業者に明らかであり、そしてこれらとしては、例えば、ＷＯ２００００４２０７２、ＷＯ２００２０６０９１９、ＷＯ２００４０３５７５２及びＷＯ２００６０５３３０１に記載されるような天然に存在する置換及び操作された置換が挙げられる。
【０３１７】
一例において、本開示における使用のための免疫グロブリン又はそのフラグメントは、ＩｇＧ４定常領域又は安定化ＩｇＧ４定常領域を含む。例えば、安定化ＩｇＧ４定常領域は、Ｋａｂａｔのシステム（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９８７及び／又は１９９１）に従ってヒンジ領域の位置２４１にプロリン、又はＥＵナンバリングシステム（Ｅｄｅｌｍａｎ、Ｇ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ、６３、７８−８５（１９６９））に従ってヒンジ領域の位置２２８にプロリンを含む。
【０３１８】
一例において、Ｆｃドメインは、それが二量体化することができるのを防ぐように改変される。例えば、Ｆｃ領域は単量体Ｆｃ領域である。
【０３１９】
半抗体を生成するための方法は当該分野で公知であり、そして例となる方法は本明細書に記載される。
【０３２０】
一例において、半抗体は、発現のために目的のＦｃドメインを含むタンパク質の遺伝子を細胞に導入することにより分泌され得る。一例において、定常領域（例えば、ＩｇＧ４  Ｆｃドメイン）は、ヘテロ二量体形成を防止するために「鍵又は穴（ｋｅｙ  ｏｒ  ｈｏｌｅ）」（又は「ノブ又は穴」）変異を含む。一例において、定常領域（例えば、ＩｇＧ４  Ｆｃドメイン）はＴ３６６Ｗ変異（又はノブ）を含む。別の例において、定常領域（例えば、ＩｇＧ４  Ｆｃドメイン）は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ変異（又は穴）を含む。別の例において、Ｆｃドメインは、Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ及びＴ３９４Ｗ変異（ノブ）を含む。別の例において、定常領域はＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ及びＹ４０７Ｖ変異（ホール）を含む。例となる定常領域アミノ酸置換は、ＥＵナンバリングシステムに従って番号付けられる。
【０３２１】
例えば、Ｆｃドメインは、以下の置換を有する配列番号３４に示される配列を含むＩｇＧ４  Ｆｃドメインである：
・  位置２２８におけるプロリンと置き換えられたアルギニン；
・  位置３５１におけるロイシンと置き換えられたフェニルアラニン；
・  位置３６６におけるスレオニンと置き換えられたアルギニン；
・  位置３９５におけるプロリンと置き換えられたリジン；
・  位置４０５におけるフェニルアラニンと置き換えられたアルギニン；及び
・  位置４０７におけるチロシンと置き換えられたグルタミン酸。
【０３２２】
一例において、本開示は、免疫グロブリン又はその機能性フラグメント、例えば、Ｆｃ領域、例えばＦｃドメイン又はＦｃフラグメント及び／もしくはその変異体に結合されたｓＣＲ１変異体を提供する。例えば、ｓＣＲ１変異体はヒトＩｇＧ４  Ｆｃに結合される。
【０３２３】
別の例において、ｓＣＲ１変異体は、免疫グロブリン又はその機能性フラグメント、例えば、Ｆｃ領域、例えばＦｃドメイン又はＦｃフラグメント及び／もしくはその変異体に融合され、例えば融合タンパク質として発現される。例えば、ｓＣＲ１変異体は、例えば融合タンパク質として、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃに融合される。
【０３２４】
抗体及びそのフラグメント
一例において、免疫グロブリンは、アルブミンに結合する抗体又は抗原結合フラグメントである。例となる抗体又は抗体結合フラグメントは当該分野で公知であり、例えば、Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ．；１６９：３３−４０、２０１６；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ．２１（５）：２８３−８、２００８；及びＨｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．、ＭＡｂｓ．８（７）：１３３６−１３４６、２０１６に記載される。
【０３２５】
本開示における使用のためのさらなる例となる抗体又はその抗原結合フラグメントは本明細書に記載されるか又は当該分野で公知であり、そしてこれらとしては以下が挙げられる：
・  ヒト化抗体又はそのフラグメント、例えば、ヒト様可変領域を含むタンパク質、これはヒト抗体由来のフレームワーク領域（ＦＲ）上にグラフトされるか又は挿入された非ヒト種（例えば、マウス又はラット又は非ヒト霊長類）由来の抗体からのＣＤＲを含む（例えば、ＵＳ５２２５５３９、ＵＳ６０５４２９７、ＵＳ７５６６７７１又はＵＳ５５８５０８９に記載される方法により製造される）
・  ヒト抗体又はそのフラグメント、例えば、可変領域、及び場合により、ヒト、例えばヒト生殖系列もしくは体細胞において、又はこのような領域を使用して製造されたライブラリーから発見される定常抗体領域を有する抗体。「ヒト」抗体は、ヒト配列によりコードされていないアミノ酸残基、例えばランダム又は部位特異的変異によりインビトロで導入された変異（例えば、ＵＳ５５６５３３２に記載される方法により製造される）及びこのような抗体の親和性成熟形態を含み得る。
【０３２６】
・  シンヒューマナイズド（ｓｙｎｈｕｍａｎｉｚｅｄ）抗体又はそのフラグメント、例えば、新世界霊長類抗体可変領域からのＦＲ及び非新世界霊長類抗体可変領域からのＣＤＲを含む可変領域を含む抗体（例えば、ＷＯ２００７０１９６２０に記載される方法により製造される）。
【０３２７】
・  霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）抗体又はそのフラグメント、例えば、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ））の免疫後に生成された抗体からの可変領域を含む抗体（例えば、ＵＳ６１１３８９８に記載される方法により製造される）
・  キメラ抗体又はキメラ抗原結合フラグメント、例えば、可変ドメインの１つ又はそれ以上が特定の種（例えば、マウス又はラットのようなネズミ科動物）由来であるか又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属するが、抗体又はフラグメントの残りは別の種（例えばヒト又は非ヒト霊長類）由来であるか又は別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体又はフラグメント（例えば、ＵＳ６３３１４１５；ＵＳ５８０７７１５；ＵＳ４８１６５６７及びＵＳ４８１６３９７に記載される方法により製造される）
・  脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、１つ又はそれ以上のエピトープ、例えば、Ｂ細胞エピトープ又はＴ細胞エピトープが除去されて（すなわち、変異した）、それにより被験体が抗体又はタンパク質対する免疫応答を惹起する可能性を低減した抗体及びフラグメント（例えば、ＷＯ２００００３４３１７及びＷＯ２００４１０８１５８に記載される）。
【０３２８】
・  二重特異的抗体又はそのフラグメント、例えば、異なる抗原又はエピトープに対する特異性を有する２つの型の抗体又は抗体フラグメントを含む抗体（例えば、１つの半抗体）（例えば、ＵＳ５７３１１６８に記載される）。
本開示における使用のためのさらなる例となる抗体フラグメントは、本明細書に記載されるか又は当該分野で公知であり、そしてこれらとしては以下が挙げられる：
・  単一ドメイン抗体（ドメイン抗体又はｄＡｂ）、例えば、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部を含む単一ポリペプチド鎖
・  二特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、三特異性抗体（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、四特異性抗体（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）又はより高次のタンパク質複合体（例えば、ＷＯ９８／０４４００１及び／又はＷＯ９４／００７９２１に記載される）
・  単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、例えば、単一ポリペプチド鎖中にＶＨ及びＶＬ領域並びに抗原結合に望ましい構造をｓｃＦｖが形成することを可能にするＶＨとＶＬとの間のポリペプチドリンカーを含むフラグメント（すなわち、単一ポリペプチド鎖のＶＨ及びＶＬが互いに結合してＦｖを形成する）
・  半抗体又は半分子、例えば、単一重鎖及び単一軽鎖を含むタンパク質。
【０３２９】
本開示はまた：
（ｉ）  例えばＵＳ５８３７８２１に記載されるようなミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｉｅｓ）；
（ｉｉ）  例えば、ＵＳ４６７６９８０に記載されるようなヘテロ結合体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）タンパク質；
（ｉｉｉ）  例えば、ＵＳ４６７６９８０に記載されるような、化学的架橋剤を使用して製造されたヘテロ結合体タンパク質；及び
（ｉｖ）  Ｆａｂ３（例えば、ＥＰ１９９３０３０２８９４に記載される）
のような他の抗体及び抗体フラグメントを企図する。
【０３３０】
ポリマー
一例において、本開示はポリマーに結合されたｓＣＲ１変異体を提供する。本開示における使用に適したポリマーは、当業者に明らかであり、かつ／又は本明細書に記載される。
【０３３１】
一例において、ｓＣＲ１変異体はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に結合される。例えば、ポリマーはモノ−又はポリ−（例えば、２〜４）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含む。例えば、モノ−  ポリ−（例えば、２〜４）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分は、ｓＣＲ１変異体のインビボ半減期を延長する。
【０３３２】
ペグ化（Ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）は利用可能なペグ化反応のいずれかにより行われ得る。ペグ化タンパク質生成物を製造するための例となる方法は、一般的に、（ａ）タンパク質が１つ又はそれ以上のＰＥＧ基に結合されるようになる条件下でポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧの反応性エステル又はアルデヒド誘導体）とポリペプチドを反応させること；及び（ｂ）反応生成物を得ることを含む。
【０３３３】
当業者は様々なＰＥＧ結合法を知っており、これらとしては、限定されないが、例えば、ＥＰ  ０  ４０１  ３８４；Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．、２０：１０２８−１０３５（１９９２）；Ｆｒａｎｃｉｓ、Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ、３（２）：４−１０（１９９２）；ＥＰ  ０  １５４  ３１６；ＥＰ  ０  ４０１  ３８４；ＷＯ  ９２／１６２２１；ＷＯ  ９５／３４３２６；米国特許第５，２５２，７１４号に記載されるものが挙げられる。
【０３３４】
可溶性補体阻害剤
本開示は、さらなる可溶性補体阻害剤に結合されたｓＣＲ１変異体を提供する。
【０３３５】
一例において、ｓＣＲ１変異体は可溶性補体阻害剤、又はその改変された（すなわち、変異体）形態に結合される。
【０３３６】
本開示における使用のために適した補体阻害剤は、当業者に明らかであり、そしてこれらとしては、例えば第Ｉ因子（ｆＩ）、Ｈ因子（ｆＨ）、補体Ｈ因子関連タンパク質（ＣＦＨＲ）、Ｃ４ｂ結合タンパク質（Ｃ４ｂｐ）、可溶性ＣＤ５５（崩壊促進因子（ＤＡＦ））、可溶性ＣＤ４６（補体調節タンパク質（ＭＣＰ））、可溶性ＣＤ５９（プロテクチン）、可溶性補体受容体２（ｓＣＲ２）、ＴＴ３０（ＣＲ２−ｆＨ）、コブラ毒因子（ＣＶＦ）及びそれらの機能性フラグメント又は変異体が挙げられる。
【０３３７】
ｓＣＲ１変異体の活性の試験
本開示のｓＣＲ１変異体は、例えば以下に記載されるように、生物学的活性について容易にスクリーニングされる。
【０３３８】
補体活性の測定
一例において、補体活性は、酵素免疫測定法（例えば、Ｗｉｅｓｌａｂ（Ｒ）補体アッセイキット）を使用して測定される。例えば、補体阻害活性は、補体活性化の間に産生される抗原又はエピトープ（例えば、Ｃ５ｂ−９又はＣ５ｂ−９に存在するエピトープ）に特異的な標識された抗体を使用して測定される。一例において、マイクロタイタープレートのウェルを、古典的経路、レクチン経路又は副経路の特異的活性化因子でコーティングする。別の例において、ｓＣＲ１変異体を正常ヒト血清及び適切なアッセイ希釈剤（すなわち、古典的経路、レクチン経路又は副経路の特異的活性化を確実にするために適切な成分を含む希釈剤）とともにインキュベートし、そして古典的経路、レクチン経路又は副経路の特異的活性化因子でコーティングされたマイクロタイタープレートウェルに加え、そして形成されたＣ５ｂ−９複合体の量を、Ｃ５ｂ−９に対して特異的なアルカリホスファターゼ標識抗体を使用して検出する。一例において、生成された補体活性化生成物（すなわち、Ｃ５ｂ−９）の量は、補体経路の機能的活性に比例する。一例において、最大半量阻害剤濃度（すなわち、ＩＣ５０）を決定する。例えば、ｓＣＲ１変異体のＩＣ５０を決定し、そして配列番号２に示される配列を含むｓＣＲ１のＩＣ５０と比較する。
【０３３９】
別の例において、補体阻害活性は溶血アッセイ（例えば、古典的経路（すなわちＣＨ５０）及び副経路（ＡｐＨ５０）阻害アッセイ）を使用して決定される。ＣＨ５０アッセイは、血清中の総古典的補体活性を測定するための方法である。この試験は溶解アッセイであり、古典的補体経路の活性化因子として抗体感作赤血球及び補体源としてヒト血清を使用する。例えば分光光度計を使用して溶血パーセントを決定することができる。ＴＣＣ自体は測定される溶血の直接の原因であるので、ＣＨ５０アッセイは終末補体複合体（ＴＣＣ）形成の間接的評価基準を提供する。このアッセイは周知である。手短には、古典的補体経路の阻害を評価するために、予め希釈したヒト血清を、段階希釈したｓＣＲ１変異体とともにマイクロアッセイウェルにおいてプレインキュベートする。次に、抗体感作赤血球（例えば、ウサギ抗ヒツジ抗体で感作されたヒツジ赤血球）を加える。遠心分離後に、遊離ヘモグロビンを分光光度計を使用して上清において測定する。遊離ヘモグロビンの減少は、ＴＣＣ媒介赤血球溶解の阻害を反映する。ついでｓＣＲ１媒介阻害を、ヒト血清のみとインキュベートされた赤血球（１００％溶解サンプル）と比較して計算する。
【０３４０】
補体阻害はまた、当該分野で公知のいずれかの歩法に基づいて評価することができ、これらとしては、例えば、インビトロザイモサンアッセイ、赤血球の溶解についてのアッセイ、抗体又は免疫複合体活性化アッセイ、副経路活性化アッセイ、及びレクチン経路活性化アッセイが挙げられる。
【０３４１】
医薬組成物及び処置方法
適切には、本開示のｓＣＲ１変異体の被験体への投与のための組成物又は方法において、本開示のｓＣＲ１変異体結合体（すなわち、半減期延長部分又はさらなる可溶性補体阻害剤に結合されたｓＣＲ１変異体）は、当該分野で理解されるような薬学的に許容しうる担体と組み合わされる。従って、本開示の一例は、薬学的に許容しうる担体と組み合わされた本開示のｓＣＲ１変異体を含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。本開示のさらなる例は、薬学的に許容しうる担体と組み合わされた本開示のｓＣＲ１変異体結合体を含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。
【０３４２】
一般的な用語において、「担体」は、いずれかの被験体、例えばヒトに安全に投与され得る固体もしくは液体のフィラー、結合剤、希釈剤、封入物質、乳化剤、湿潤剤、溶媒、懸濁化剤、コーティング又は滑沢剤を意味する。特定の投与経路に依存して、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．Ｎ．Ｊ．ＵＳＡ、１９９１）に記載されるような当該分野で公知の様々な許容しうる担体が使用され得る。
【０３４３】
本開示のｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体は、非経口、外用、経口、又は局所投与、エアロゾル投与、髄腔内投与又は経皮投与、予防的又は治療的処置に有用である。一例において、ｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体は、皮下又は静脈内のような非経口投与される。例えば、ｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体は静脈内投与される。
【０３４４】
投与しようとするｓＣＲ１変異体からｓＣＲ１変異体結合体の処方は、選択される投与経路及び処方（例えば、液剤、乳剤、カプセル剤によって変わる。投与しようとする適切な医薬組成物は、生理学的に許容しうる担体中で製造され得る。液剤又は乳剤については、適切な担体としては、例えば、食塩水及び緩衝化媒体を含む水溶液又はアルコール性／水溶液、エマルション又は懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲル又は固定油が挙げられ得る。様々な適切な水性担体が当業者に公知であり、これらとしては、水、緩衝化水、緩衝化食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、デキストロース溶液並びに例えば、グリシン、プロリン、リジン、ヒスチジン、メチオニン、アルギニン、アラニン、バリン、セリン、アスパラギン、フェニルアラニン、チロシン、システイン、スレオニン、ロイシン、トリプトファン、グルタミン、イソロイシン、グルタメート及びそれらの組み合わせを含むアミノ酸が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、様々な添加剤、保存料、又は流体、栄養剤又は電解質補液（一般に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｍａｃｋ、Ｅｄ．１９８０を参照のこと）が挙げられ得る。組成物は、ｐＨ調整剤及び緩衝剤及び毒性調整剤、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム及び乳酸ナトリウムのような生理的条件に近づけるために必要な薬学的に許容しうる補助物質を場合により含有し得る。組成物は液体段階で貯蔵することができ、又は当該分野で公知の凍結乾燥及び再構成技術に従って貯蔵のために凍結乾燥し、使用前に適切な担体中で再構成され得る。
【０３４５】
本開示の方法はまた、補体活性を阻害するため又は補体媒介障害の予防もしくは処置のための別の治療上有効な薬剤の投与と一緒の、本開示に従うｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体の同時投与も含み得る。
【０３４６】
一例において、本開示のｓＣＲ１変異体又はその結合体は、補体活性を阻害するため又は補体媒介障害を予防もしくは処置するために現在使用されているか又は開発中である少なくとも１つのさらなる公知の化合物又は治療用タンパク質と組み合わせて使用される。補体媒介障害の処置において現在使用される化合物は当該分野で公知であり、そしてこれらとしては、Ｃ５及びその活性化形態（Ｃ５ａ）に対する抗体、例えば、エクリズマブ、ベリナートヒトＣ１エステラーゼ阻害剤、ヒトＣ１エステラーゼ阻害剤、ルコネスト組み換えＣ１エステラーゼ阻害剤、シンライズヒトＣ１エステラーゼ阻害剤、抗ヒトＭＡＳＰ−２モノクローナル抗体、ＡＰＬ−２  Ｃ３阻害ペプチド、ランパリズマブ（Ｌａｍｐａｌｉｚｕｍａｂ）、ＴＮＴ００９抗−Ｃ１ｓ抗体が挙げられる。さらなる化合物はＲｅｉｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｄｅｃ；１６１（２）：２２５-２４０、２０１５に記載される。
【０３４７】
前述から明らかなように、本開示は、有効量の第一の薬剤及び第二の薬剤をそれを必要とする被験体に投与することを含む被験体の併用治療処置の方法を提供し、ここで第一の薬剤は本開示のｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体であり、そして第二の薬剤もまた補体活性阻害するため又は補体媒介障害の予防もしくは処置のためのものである。
【０３４８】
句「併用治療処置」におけるような本明細書で使用される用語「併用」は、第二の薬剤の存在化で第一の薬剤を投与することを含む。併用治療処置方法は、第一、第二、第三又はさらなる薬剤が同時投与される方法を含む。併用治療処置方法はまた、第一又はさらなる薬剤が第二又はさらなる薬剤の存在化で投与される方法も含み、ここで第二又はさらなる薬剤は、例えば、事前に投与されていてもよい。併用治療処置は、段階的に異なる者により実行されてもよい。例えば、一人の実行者が被験体に第一の薬剤を投与し、そして第二の実行者が被験体に第二の薬剤を投与してもよく、そして投与工程は、第一の薬剤（及び／又はさらなる薬剤）が第二の薬剤（及び／又はさらなる薬剤）の存在下での投与後である限り、同時に、又はほとんど同時に、又は離れた時点で実行されてもよい。実行者及び被験体は同じ実体（例えば、ヒト）でもよい。
【０３４９】
選択された媒体中の活性成分の最適な濃度は、経験的に、当業者に公知の手順に従って決定され得、そして所望される最終的な医薬製剤に依存する。
【０３５０】
本開示のｓＣＲ１変異体の投与のための投薬量範囲は、所望の効果を生じるために十分大きなものである。例えば、組成物は有効量のｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体を含む。一例において、組成物は治療有効量のｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体を含む。別の例において、組成物は予防有効量のｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体を含む。
【０３５１】
投薬量は、有害な副作用を引き起こすほど大きくないものであるべきである。一般に、投薬量は、患者における年齢、状態、性別及び疾患の程度によって変化し、そして当業者により決定され得る。投薬量は、いずれかの合併症の事象において個々の医師により調整され得る。
【０３５２】
投薬量は、１日に１回又はそれ以上の投与において、１又は数日間、約０．１ｍｇ／ｋｇから約３００ｍｇ／ｋｇまで、例えば、約０．２ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇまで、例えば約０．５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇまで変化し得る。
【０３５３】
いくつかの例において、ｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体は、その後（維持量）よりも高い初期（又は負荷）用量で投与される。例えば、ｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間の初期用量で投与される。次いでｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間の維持量で投与される。維持量は、２〜３０日ごとに、例えば２又は３又は６又は９又は１２又は１５又は１８又は２１又は２４又は２７又は３０日ごとに投与され得る。
【０３５４】
いくつかの例において、用量増大体制が使用され、ここではｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体は最初に、その後の用量で使用されるよりもより低い用量で最初に投与される。この投薬量体制は、被験体が初期に有害事象を患う場合に有用である。
【０３５５】
処置に適切に応答しない被験体の場合、週に複数回の用量が投与され得る。あるいは、又はさらに、増加する用量が投与され得る。
【０３５６】
被験体は、１より多くの曝露又は用量セット、例えば少なくとも約２曝露、例えば、約２〜６０曝露、そして詳細には約２〜４０曝露、最も詳細には約２〜２０曝露を与えられることによりｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体で再処置され得る。
【０３５７】
一例において、いずれかの再処置は、疾患の徴候又は症状が再発した場合、例えば、細菌感染の場合に与えられ得る。
【０３５８】
別の例において、再処置は規定された間隔で与えられ得る。例えば、その後の曝露が例えば、約２４〜２８週又は４８〜５６週もしくはそれ以上のような様々な間隔で投与され得る。例えば、このような曝露はそれぞれ約２４〜２６週又は約３８〜４２週、又は約５０〜５４週の間隔で投与される。
【０３５９】
処置に適切に応答しない被験体の場合、週に複数回の用量が投与され得る。あるいは、又はさらに、増加する用量が投与され得る。
【０３６０】
別の例において、有害反応を経験した被験体については、初期（又は負荷）用量は１週に数日又は連続した多数の日にわたって分割され得る。
【０３６１】
本開示の方法に従うｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体の投与は、例えば、投与の目的が治療的でも予防的でも、レシピエントの生理学的条件に依存して、及び当業者に公知の他の因子に依存して連続的でも間欠的でもよい。投与は、予め選択された期間にわたって本質的に連続的でも、一連の間隔を開けた投薬、例えば状態の間又は発症後のいずれかでもよい。
【０３６２】
キット及び他の組成物
本開示の別の例は、補体活性を阻害するため又は上記のような補体媒介障害の処置もしくは予防のために有用な本開示のｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体を含有するキットを提供する。
【０３６３】
一例において、キットは、（ａ）場合により薬学的に許容しうる担体又は希釈剤中にｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体を含む容器；及び（ｂ）被験体において補体活性を阻害するため又は補体媒介障害を処置もしくは予防するための指示含む添付文書を含む。
【０３６４】
一例において、キットは、（ａ）場合により薬学的に許容しうる担体又は希釈剤中の少なくとも１つのｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体；（ｂ）被験体において補体活性を阻害する際に又は補体媒介障害を処置もしくは予防するためにキットを使用するための指示書；及び（ｃ）場合により少なくとも１つのさらなる治療活性化合物又は薬物を含む。
【０３６５】
本開示のこの例に従って、添付文書は容器上にあるか容器に付随している。適切な容器としては、例えば、瓶、バイアル、シリンジ等が挙げられる、容器はガラス又はプラスチックのような様々な材料から形成され得る。容器は、補体活性を阻害するため又は補体媒介障害を処置又は予防するために有効な組成物を保持するか又は収容し、そして滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は静脈内液剤バッグ又は皮下組織注射針により穿孔可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤はｓＣＲ１変異体である。ラベル又は添付文書は、処置に適格な被験体、例えば、補体媒介障害を発症したか又は発症する素因を有する被験体を処置するために組成物が使用されることを示し、ｓＣＲ１変異体及び任意の他の薬剤の投薬量及び間隔に関する具体的な指導が提供される。キットは、静菌水、注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化食塩水、リンゲル液、及び／又はデキストロース溶液のような薬学的に許容しうる希釈剤緩衝液を含むさらなる容器を更に含み得る。キットは、商業的かつ使用者の立場から望ましい他の材料を更に含み得、これらとしては、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジが挙げられる。
【０３６６】
キットは、第二の薬剤を含む容器を場合により更に含み、ここでｓＣＲ１変異体又はｓＣＲ１変異体結合体は第一の薬剤であり、そしてこの物品は有効量で第二の薬剤を用いて被験体を処置するための指示書を添付文書にさらに含む。第二の薬剤は上で示された治療用タンパク質であってもよい。
【０３６７】
本開示は以下の非限定的な実施例を含む。
【実施例】
【０３６８】
実施例１：ｓＣＲ１変異体の生成
ヒト補体受容体１型（ＣＲ１）ｃＤＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿０００５６４）をヒト発現用にコドン最適化し、そしてＧｅｎｅａｒｔ（Ｒ）（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＴＭ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により合成した。全長及び切断型可溶性ＣＲ１（ｓＣＲ１）変異体を、標準的なＰＣＲベースの変異誘発技術を使用して生成した。開始メチオニン（＋１）のすぐ上流でＫｏｚａｋコンセンサス配列（ＧＣＣＡＣＣ）を用いてｃＤＮＡを生成し、その後これをＮｈｅＩ及びＸｈｏＩで消化し、そしてｐｃＤＮＡ３．１（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＴＭ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に連結した。ｓＣＲ１変異体ｃＤＮＡをＣ末端８ｘヒスチジンタグとインフレームでクローニングした。ｓＣＲ１−８Ｈｉｓ変異体のリストについては表１を参照のこと。
【０３６９】
プラスミドＤＮＡの大規模製造を、ＱＩＡＧＥＮ  Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｇｉｇａキットを使用して製造者の指示に従って行った。全てのプレスミド構築物のヌクレオチド配列を、ＢｉｇＤｙｅＴＭ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒバージョン３．１  Ｒｅａｄｙ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＴＭ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ３１３０ｘｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して両方の鎖を配列決定することにより確認した。
【０３７０】
Ｅｘｐｉ２９３ＦＴＭ細胞のｓＣＲ１発現プレスミドでの一過性トランスフェクションを、Ｅｘｐｉ２９３ＴＭ発現系を使用して製造者の推奨に従って行った（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＴＭ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。全ての細胞培養培地に抗生物質−抗真菌剤（ＧＩＢＣＯ（Ｒ）、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を補充し、そして細胞をインキュベーターにおいて８％  ＣＯ２、３７℃に維持した。
【０３７１】
ｓＣＲ１−８Ｈｉｓポリペプチドを精製した。手短には、ヘキサヒスチジンタグ化ｓＣＲ１タンパク質の精製のために、２０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭイミダゾール、ｐＨ  ７．４で予め平衡化したｎｉｃｋｅｌ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ｅｘｃｅｌアフィニティ樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に培養上清を直接ロードした。ローディング後に、樹脂を２０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、２５ｍＭイミダゾール、ｐＨ  ７．４で洗浄した。樹脂結合ｓＣＲ１を２０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、５００ｍＭイミダゾール、ｐＨ  ７．４でブロック溶出し、２８０ｎｍでの吸光度に基づいて溶出されたタンパク質を集めた。混入したタンパク質を除去し、そして所望の緩衝液に緩衝液交換するために、ｍｔ−ＰＢＳ（１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２７ｍＭ  ＫＣｌ、８．１ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．１５ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ  ７．４）で予め平衡化されたＨｉＬｏａｄ  ２６／６０  ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００分取等級カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に集めたタンパク質をロードした。精製されたタンパク質を、５０ｋＤａ  ＭＷＣＯを有するアミコンウルトラ遠心分離フィルターを使用して濃縮して所望の濃度とし、滅菌濾過し、そして−８０℃で貯蔵した。細胞内プロセシングにより、成熟ｓＣＲ１−８Ｈｉｓ変異体はＮ末端４１アミノ酸ヒトＣＲ１シグナルペプチドを欠いている。
【０３７２】
【表１】
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【０３７３】
実施例２：ｓＣＲ１−８Ｈｉｓ変異体はインビトロで補体阻害活性を有する
補体阻害活性を評価するために、ｓＣＲ１−８Ｈｉｓ変異体をＷｉｅｓｌａｂ（Ｒ）補体アッセイ（Ｅｕｒｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）において製造者の指示に従って試験した。手短には、ｓＣＲ１−８Ｈｉｓ変異体タンパク質をＰＢＳ中で９６ウェルプレートにて段階希釈した。各希釈したｓＣＲ１−８Ｈｉｓ変異体サンプル又はＰＢＳ単独５０μｌを、各補体経路について（製造者の指示により）適切なアッセイ希釈剤中で予め希釈されたヒト血清（古典的／レクチンについて１：１０１）２０２．５μｌ又は希釈された血清（副について１：１８）２２０μｌに加え、そして３０分間室温（ＲＴ）でインキュベートした。予め希釈した血清に加えたら、各タンパク質の最終開始濃度は４０ｎＭであった。各サンプル１００μｌをアッセイプレートに二連で移し、そして１時間３７℃（ＣＯ２無し）でインキュベートした。ウェルを空にして１ｘ洗浄緩衝液（製造者の指示どおり）３００μｌ／ウェルで３回洗浄した。Ｃ５ｂ−９の終末複合体を、１００μｌ／ウェルアルカリホスファターゼ結合抗Ｃ５ｂ−９特異的モノクローナル抗体を使用して検出し、これを３０分間室温（ＲＴ）でインキュベートした。未結合の抗体を廃棄し、そしてウェルを３回１ｘ洗浄緩衝液３００μｌ／ウェルで洗浄した。結合した抗体を、アルカリホスファターゼ基質溶液１００μｌ／ウェルを使用して検出し、そして３０分間ＲＴでインキュベートした。４０５ｎｍでの吸光度をＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して読み取った。
【０３７４】
生の値を、血清及びＰＢＳのみの対照（すなわち１００％  Ｃ５ｂ−９形成）によりＣ５ｂ−９形成のパーセンテージとして表した。結果をＧｒａｐｈ  Ｐａｄ  ＰｒｉｓｍにおいてＩＣ５０値についてｌｏｇ（阻害剤）対反応  −−  可変傾斜（４パラメーター）フィットを使用して解析した。最低及び最高をそれぞれ値０及び１００に制限した。
【０３７５】
ｓＣＲ１（４９０−９３９）−８Ｈｉｓ、ｓＣＲ１（９４０−１３９２）−８Ｈｉｓ及びｓＣＲ１（１３９３−１９７１）−８Ｈｉｓを除いて全てのｓＣＲ１−８Ｈｉｓ変異体が、古典的経路、レクチン経路及び副経路において機能的活性を有していた。ｓＣＲ１（４９０−９３９）−８Ｈｉｓは副経路のみで機能的活性を有していたが、ｓＣＲ１（９４０−１３９２）−８Ｈｉｓはレクチン経路及び副経路において機能的活性を有していた。ｓＣＲ１（１９３９−１９７１）−８Ｈｉｓは古典的、レクチン又は副経路のいずれにおいても検出可能な活性を有していなかった。
【０３７６】
以下の表２に示されるように、ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓは、Ｗｉｅｓｌａｂアッセイにおいて全長ｓＣＲ１（１９７１）−８Ｈｉｓ及び他のｓＣＲ１フラグメントと比較して、３つの補体経路全て（すなわち、古典的、レクチン及び副）において増加した阻害活性を有していた。
【０３７７】
ｓＣＲ１−８Ｈｉｓ変異体を、溶血アッセイ（例えば、古典的経路（すなわち、ＣＨ５０）及び副経路（ＡｐＨ５０）阻害アッセイ）を使用して機能的活性についても試験した。
【０３７８】
補体系（すなわち、ＣＨ５０）の古典的経路のｓＣＲ１変異体による阻害を評価するために、ヒツジ赤血球（Ｓｉｅｍｅｎｓ）をウサギ抗ヒツジ抗体（Ａｍｂｏｚｅｐｔｏｒ  ６０００；Ｓｉｅｍｅｎｓ）を用いて感作し、そして４ｘ１０８細胞／ｍＬ  ＧＶＢ＋＋（ＧＶＢ、０．１５  ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．５  ｍＭ  ＭｇＣｌ２）に希釈した。ｓＣＲ１変異体を１／４０希釈ＮＨＳ中でプレインキュベートし（ＲＴで３０分）、その後赤血球に１／１（体積／体積）比で加え、そして１時間の間３７℃でマイクロタイタープレート振盪装置においてインキュベートした。氷冷ＧＶＢＥ（ＧＶＢ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ）を加えて遠心分離（１２５０ｘ  ｇ、４℃で５分）した後、溶血を上清において放出されたヘモグロビンを４１２ｎｍの吸光度を測定することにより決定した。ＮＨＳ及び緩衝液のみとインキュベートされた細胞は１００％溶解対照として役立った。ｓＣＲ１変異体による溶解の阻害を対照と比べて計算した。
【０３７９】
補体系の副経路（すなわち、ＡｐＨ５０）のｓＣＲ１変異体による阻害を評価するために、ウサギ赤血球（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を洗浄しそして２ｘ１０８細胞／ｍＬ  ＧＶＢ／ＭｇＥＧＴＡ（ＧＶＢ、５ｍＭ  ＭｇＥＧＴＡ）に希釈した。ｓＣＲ１変異体を１／６希釈ＮＨＳ（ＲＴで３０分）中でプレインキュベートし、そしてその後赤血球に２／１（体積／体積）比で加え、そして１時間３７℃でマイクロタイタープレート振盪装置においてインキュベートした。氷冷ＧＶＢＥを加えて遠心分離（１２５０ｘ  ｇ  １０分）した後、溶血を上清において４１２ｎｍにおける放出されたヘモグロビンの吸光度を測定することにより決定した。ＮＨＳ及び緩衝液のみとインキュベートした細胞は１００％溶解対照として役立った。ｓＣＲ１変異体による溶解の阻害を対照と比べて計算した。
【０３８０】
ｓＣＲ１（１３９３−１９７１）−８Ｈｉｓを除く全ての変異体は、ＣＨ５０及びＡｐＨ５０アッセイの両方において機能的活性を示した。表３に示されるように、ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓは両方のアッセイにおいてｓＣＲ１（１９７１）−８Ｈｉｓと比較して増加した活性を有していた。
【０３８１】
【表２】
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【０３８２】
【表３】
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【０３８３】
実施例３：ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ変異体はｓＣＲ１（１９７１）−８Ｈｉｓと比較して増加した安定性を示す
様々な緩衝液条件下でのｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓの安定性を評価するために、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）アッセイを行い、全長ｓＣＲ１（１９７１）−８Ｈｉｓタンパク質と比較したｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓタンパク質の熱安定性を測定した。タンパク質の安定性を一定範囲の塩（ＮａＣｌ  ０ｍＭ、５０ｍＭ、１５０ｍＭ及び５００ｍＭ）及びｐＨ条件下で以下の緩衝液について評価した：クエン酸塩、ＨＥＰＥＳ、酢酸ナトリウム、リン酸塩、グリシン、ヒスチジン、ＴＲＩＳ及びプロリン。
【０３８４】
手短には、４ｘ緩衝液濃縮物５μｌを二連で３８４ウェルプレートに分けた。ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ及びｓＣＲ１（１９７１）−８Ｈｉｓタンパク質を０．１３ｍｇ／ｍｌにＭＴ−ＰＢＳ中で希釈し、次いで水中で構成された１／２０色素ストック（Ｓｙｐｒｏ（Ｒ）橙色；Ｓｉｇｍａ）を添加して各アッセイ反応において１／４００最終希釈とした。次いでタンパク質／色素混合物１５μｌを、緩衝液濃縮物を含有する３８４ウェルプレートの各ウェルに分配した。このプレートを粘着型光学カバーで密封し、そしてＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏＴＭリアルタイムＰＣＲ機器（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で実行する前に１分間３２２０ｇで遠心分離した。冷却し、そして１分間２０．０℃の温度に保持した後に、２０．０℃から９９．０℃に０．０５℃／秒の速度で上昇させることにより溶融曲線を作成した。Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｈｉｆｔソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用し、一次導関数を使用して各溶融曲線から転移中点（Ｔｍ）値を計算した。ＮａＣｌ濃度（ｘ軸）及びｐＨ（ｙ軸）に関連してＴｍ値がどのように変化するかをグラフで示すためにＪＭＰ１３を使用して等高線図を作成した。
【０３８５】
ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓは以下を含むいくつかの緩衝液条件下で安定であった：リン酸塩（ｐＨ６．０〜８．０；ＮａＣｌ  ０〜５００ｍＭ）；リン酸塩−クエン酸塩（ｐＨ６．０〜８．０；ＮａＣｌ  ０〜５００ｍＭ）；Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．０〜９．０；ＮａＣｌ  ０〜５００ｍＭ）；グリシン（ｐＨ９．０〜１０．０；ＮａＣｌ  ０〜５００ｍＭ）；ＨＥＰＥＳ（ｐＨ６．５〜８．５；ＮａＣｌ  ０〜５００ｍＭ）及びヒスチジン（ｐＨ６．０〜７．０；ＮａＣｌ  ０〜５００ｍＭ）。測定された最大Ｔｍ値は、ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓについて６１．４℃及びｓＣＲ１（１９７１）−８Ｈｉｓについて６１．７℃であった。
【０３８６】
緩衝液スクリーニングに基づいて、ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓはｓＣＲ１（１９７１）−８Ｈｉｓよりも安定であった。
【０３８７】
実施例４：シアリル化ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓは改善されたインビボ半減期を有していた
ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓのインビボ半減期を延長することができたか否かを評価するために、ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓのシアリル化バージョンを製造した（ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ）。手短には、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞を、ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓをコードするｃＤＮＡを、ヒトＳＴ３ＧＡＬ３をコードするｃＤＮＡ（ＳＴ３ベータ−ガラクトシド  アルファ−２，３−シアリルトランスフェラーゼ３、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿００６２７０）及びヒトＢ４ＧＡＬＴ１をコードするｃＤＮＡ（ヒトβ１，４−ガラクトシルトランスフェラーゼ、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿００１４８８．２）と一緒に９４：３：３の比で同時トランスフェクトすることによりシアリル化材料を生成した。
【０３８８】
表４に示されるように、ＳＴ３ＧＡＬ３／Ｂ４ＧＡＬＴ１−トランスフェクト細胞において産生されたｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ材料は、かなりより高い比率のシアリル化グリカンを有していた。特に、シアリル化ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ材料は、より高い比率のジ−、トリ−及びテトラ−シアリル化グリカンを有していた。
【０３８９】
【表４】
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【０３９０】
ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ及びそのシアリル化バージョン（ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ）のインビボ半減期を、ヒトＦｃＲｎトランスジェニックマウス（Ｂ６．Ｃｇ−Ｆｃｇｒｔｔｍ１Ｄｃｒ  Ｔｇ（ＦＣＧＲＴ）３２Ｄｃｒ／ＤｃｒＪ；Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙストック番号０１４５６５）において調べた。マウスに、ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ又はｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ  ３０ｍｇ／ｋｇを静脈内注射し（尾静脈内への単回ボーラス注射）、そして血漿を様々な時点で集めた（グループＡ：５分及び４時間、ｎ＝３；グループＢ：０．５時間及び８時間、ｎ＝３；グループＣ：１時間及び１６時間、ｎ＝３；グループＤ：２時間及び４８時間、ｎ＝３）。血液をクエン酸緩衝液と血液８部クエン酸緩衝液２部の比で混合した。ヒトｓＣＲ１の血漿レベルを抗ヒトＣＤ３５  ＥＬＩＳＡ（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号ＥＬＨ  ＣＤ３５）において製造者の指示に従い、以下の変更点を用いて測定した：標準曲線（３〜２５０ｎｇ／ｍＬの範囲に及ぶ）を各試験品を使用して生成し、使用したアッセイ緩衝液は１％  ＢＳＡ熱ショック画分、プロテアーゼ非含有（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ３０５９）であり、そして洗浄緩衝液はＰＢＳ＋０．０５％体積／体積Ｔｗｅｅｎ−２０であった。平均滞留時間（ＭＲＴ）及び曲線下面積（ＡＵＣ）を標準的統計式を使用して計算した。
【０３９１】
図１に示されるように、ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡは、ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓと比較してインビボ保持を改善し、ＭＲＴは２５倍増加し（１４．７時間対３５分）そしてＡＵＣにおいて８倍増加した（ＡＵＣ＝５１６．５対６５．７４）。
【０３９２】
実施例５：ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓは抗ＧＢＭ糸球体腎炎を低減する
ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ処置の効果を、抗糸球体基底膜（ＧＢＭ）糸球体腎炎のインビボモデルにおいて評価した。手短には、抗ＧＢＭ糸球体腎炎を、ポリクローナルウサギ抗ＧＢＭ抗血清（ＩｇＧフラクション）１ｍｇを０日目に静脈内注射することによりＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて誘導し、続いてマウスモノクローナル抗ウサギＩｇＧ（ハイブリドーマＣＲＬ−１７５３（ＡＴＣＣ）から製造されたＭｓαＲｂ  ＩｇＧ）  ２ｍｇを６日目に腹腔内注射した。マウスに、ＰＢＳ又はｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ、ｓＣＲ１（１９７１）−８Ｈｉｓ、もしくは抗マウスＣ５  ｍＡｂ（ｍｕＢＢ５．１−ｍＩｇＧ１κ；Ｒｏｔｈｅｒ  Ｒ、ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００７；Ｗａｎｇ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １９９５）６０ｍｇ／ｋｇを５及び６日目に腹腔内注射した。マウスのさらなるグループを６０ｍｇ／ｋｇ  ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓを用いて６日目のみに処置し、５日目には処置しなかった（ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ  ｘ１）。６日目に、薬物（すなわち、ｓＣＲ１変異体又はＢＢ５．１）又はＰＢＳ対照を、ＭｓαＲｂ  ＩｇＧ  ｍＡｂの注射の約１時間前に投与した。ＭｓαＲｂの注射後に、マウスを個別に代謝ゲージに入れて２４時間の期間にわたって尿を集めた。尿アルブミンレベルをＥＬＩＳＡキット（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて測定し、そしてマウスあたりのアルブミン尿をμｇ／２４時間としてプロットした。
【０３９３】
本実験において使用されたｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ及びｓＣＲ１（１９７１）−８Ｈｉｓ材料は、比較的非シアリル化（ｕｎｓｉａｌｙｌａｔｅｄ）されており、そしてＳＴ３ＧＡＬ３及びＢ４ＧＡＬＴ１  ｃＤＮＡと同時トランスフェクトされていないＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞において製造された。
【０３９４】
図２に示されるように、尿アルブミンレベルはｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ処置マウスにおいて有意に減少した（ＰＢＳ対ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ  ｘ２：ｐ＝０．０１４７；ＰＢＳ対ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ  ｘ１：ｐ＝０．１５２６；ＰＢＳ対ＢＢ５．１：ｐ＝０．００７８）。
【０３９５】
実施例６：シアリル化ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓは抗ＧＢＭ糸球体腎炎を低減する
ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ処置の効果を、実施例４で以前に記載したように抗糸球体基底膜（ＧＢＭ）糸球体腎炎のインビボモデルにおいて評価した。マウスにＰＢＳ又はｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ  １０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇもしくは６０ｍｇ／ｋｇのいずれかを６日目に腹腔内注射した。
【０３９６】
６日目に、ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ又はＰＢＳ対照を、ＭｓαＲｂ  ＩｇＧ  ｍＡｂの注射の約１時間前に投与した。ＭｓαＲｂの注射後に、マウスを個別の代謝ゲージに入れて２４時間の期間にわたって尿を集めた。尿アルブミンレベルをＥＬＩＳＡキット（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて測定し、そしてマウスあたりのアルブミン尿をμｇ／２４時間としてプロットした。
【０３９７】
図３に示されるように、尿中アルブミンレベルは、対照（すなわち、ＰＢＳ）処置マウスと比較してｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ処置マウスにおいて１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ及び６０ｍｇ／ｋｇで処置されたマウスにおいて減少した。
【０３９８】
実施例７：シアリル化ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓは腎臓虚血再灌流傷害に対して保護する
ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ処置の効果を腎臓温虚血再灌流（ＩＲ）傷害のインビボモデルにおいて評価した。雄性１０〜２０週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスを麻酔し、そして右腎摘出び２２分の左腎虚血、又は右腎摘出のみ（シャム）を３７℃で行った。手短には、正中線腹部切開を行い、そして腎茎部を鈍的切開した。右腎摘出後、動物を３７℃に維持しながら、微小血管クランプを左腎茎部に２２分間置いた。虚血後にクランプを取り外し、そして再灌流の完了を確認するために腎臓を観察した。虚血の１時間前に６０ｍｇ／ｋｇ  ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ（ｎ＝１４）、又はビヒクル対照（ｎ＝８）の腹腔内（ｉ．ｐ．）投与を用いてマウスを処置した。マウスを再灌流の２４時間後に屠殺し、そして腎機能（クレアチニン、尿素）及び補体活性（Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ  ＥＬＩＳＡ）を評価するために血清及び血漿を集めた。腎臓を補体Ｃ９沈着及び免疫細胞浸潤を免疫蛍光法／共焦点顕微鏡により分析するために摘出した。
【０３９９】
以下の表５に示されるように、シャムと比較して、重篤な腎損傷が、有意に増加した血清クレアチニン及び尿素、血漿Ｃ３ｂ及びＣ５ａ、並びに組織Ｃ９沈着並びに好中球及びマクロファージ浸潤により示されるように、ビヒクル処置マウスにおいてＩＲ後に誘導された。
【０４００】
ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡを用いた処置は、ＩＲ誘導損傷を有意に保護し、腎機能障害（すなわち、血清クレアチニン、尿素）、補体活性化及び沈着（すなわち、血漿Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、及び組織Ｃ９沈着）、並びに細胞浸潤（すなわち、好中球及びマクロファージ浸潤）（表５を参照のこと）を有意に低下することにより表された。
【０４０１】
これらの結果は、ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡがこのモデルにおいてＩＲ媒介腎損傷に対して保護し、そして血清クレアチニン及び尿素により示される腎機能の顕著に減少した喪失、さらには低下した血漿補体活性化産物、並びに補体の組織沈着及び自然免疫細胞による浸潤を伴っていたということを示した。
【０４０２】
【表５】
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【０４０３】
実施例８：腎虚血再灌流傷害に対するシアリル化ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓの変更された投薬の効果
腎温虚血再灌流（ＩＲ）傷害のインビボモデルにおけるｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ用量応答関係を評価するために、マウスを１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇもしくは６０ｍｇ／ｋｇ  ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ、又はビヒクル対照のいずれかの腹腔内（ｉ．ｐ．）投与で虚血１時間前に処置した。上記のようにＩＲを誘導し、そしてＩＲ媒介腎損傷を以前に記載されたように評価した。
【０４０４】
ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡの上昇したレベルを維持する効果を、６０ｍｇ／ｋｇ  ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ、又はビヒクル対照を虚血１時間前に、並びに６０ｍｇ／ｋｇ  ｓＣＲ１（１３９２）−８ＨｉｓＳＩＡ、又はビヒクル対照を虚血１時間後及び／又は２時間後に投与することにより評価した。ＩＲを上記のように誘導し、そしてＩＲ媒介腎損傷を以前に記載されたように評価した。
【０４０５】
実施例９：ｓＣＲ１変異体融合物の生成
組み換えｓＣＲ１融合物を、ｓＣＲ１変異体をヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿０００４６８）、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号Ｐ０１８５７）又はヒトＩｇＧ４Ｆｃ（ａａ９９−３２７；ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｐ０１８６１）に、ｓＣＲ１配列のＮ末端又はＣ末端のいずれかに融合することにより生成した（表６）。組み換え融合物を、標準的なクローニング技術を使用して作製した。ＨＳＡ融合物の場合、ＧＳ１３リンカー（ＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＳ）を使用してｓＣＲ１配列とＨＳＡ配列とを連結した。ＩｇＧ４  Ｆｃ及びＩｇＧ１  Ｆｃ融合物の場合、リンカーを使用しなかった。いくつかの構築物については、セルロプラスミンシグナルペプチドを使用した（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿００００８７）。全ての融合タンパク質をＥｘｐｉ２９３ＦＴＭ細胞で発現させ、そしてｓＣＲ１タンパク質を上記のように精製した。
【０４０６】
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）タグ化ｓＣＲ１融合物の精製については、培養上清を、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ  ７．４で予め平衡化したＣａｐｔｕｒｅ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｈｕｍａｎ  Ａｌｂｕｍｉｎ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｒｉｘアフィニティ樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に直接ロードした。全ての上清をロードした後、樹脂を２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ  ７．４で洗浄した。樹脂に結合したｓＣＲ１を２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、２Ｍ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ  ７．４でブロック溶出し、溶出されたタンパク質を２８０ｎｍでの吸光度に基づいて集めた。溶出されたタンパク質を、ｍｔ−ＰＢＳ（１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２７ｍＭ  ＫＣｌ、８．１ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．１５ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ  ７．４）で予め平衡化したＨｉＬｏａｄ  ２６／６０  ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００分取等級カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にロードして、混入タンパク質を除去し、そして緩衝液を望ましい緩衝液に交換した。精製されたタンパク質を５０ｋＤａ  ＭＷＣＯを有するアミコン超遠心フィルターを使用して所望の濃度まで濃縮し、滅菌濾過し、そして−８０℃で貯蔵した。
【０４０７】
Ｆｃ融合ｓＣＲ１変異体の精製のために、培養上清を、ｍｔ−ＰＢＳ（１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２７ｍＭ  ＫＣｌ、８．１ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．１５ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．４）で予め平衡化したＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅアフィニティ樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に直接ロードした。全ての上清をロードした後、樹脂をｍｔ−ＰＢＳ、ｐＨ７．４で洗浄した。弱く結合した非標的タンパク質を０．１Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ  ５．０でブロック溶出した。樹脂結合ｓＣＲ１を０．１Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ  ３．０でブロック溶出し、２８０ｎｍでの吸光度に基づいて溶出されたタンパク質を集めた。溶出されたタンパク質を、ｍｔ−ＰＢＳで予め平衡化したＨｉＬｏａｄ  ２６／６０  ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００分取等級カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にロードして、混入したタンパク質を除去し、そして緩衝液を所望の緩衝液に交換した。精製されたタンパク質を５０ｋＤａ  ＭＷＣＯを有するアミコン超遠心フィルターを使用して所望の濃度まで濃縮し、滅菌濾過し、そして−８０℃で貯蔵した。
【０４０８】
【表６】
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【表７】
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【０４０９】
ＨＳＡ、ＩｇＧ１  Ｆｃ又はＩｇＧ４  ＦｃにＮ末端又はＣ末端結合体化した全てのｓＣＲ１変異体は、以前に記載されたようにＷｉｅｓｌａｂアッセイを使用して測定して、古典的経路、レクチン経路及び副経路において補体阻害活性を有していた。
【０４１０】
以下の表７及び８に示されるように、ｓＣＲ１（１３９２）−ＧＳ１３−ＨＳＡ及びｓＣＲ１（１３９２）−ＩｇＧ４  Ｆｃは、Ｗｉｅｓｌａｂアッセイ、さらには溶血（すなわち、ＣＨ５０及びＡｐＨ５０）阻害アッセイにおいて測定して、全ての３つの補体経路（すなわち、古典的、レクチン及び副）においてｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓと比較して増加した補体阻害活性を有していた。ｓＣＲ１（１３９２）−ＩｇＧ４  Ｆｃ融合物は、ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓと比較して、古典的経路（平均２．３１±０．１６）及びレクチン経路（平均２．３７±０．４４）において補体阻害活性の約２倍の増加、並びに副経路（平均７．６１±２．５２）において補体阻害活性の７〜８倍の増加を有していた。ＨＳＡ及びＩｇＧ４  ＦｃとのＣ末端融合物は、ｓＣＲ１（１３９２）の補体阻害活性に不利な影響を及ぼさなかった。
【０４１１】
【表８】
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【０４１２】
【表９】
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【０４１３】
組み換えｓＣＲ１−ＨＳＡ融合物（ｓＣＲ１（１３９２）−ＨＳＡ；配列番号５１）を、上記のように生成し、ＣＨＯ  Ｘｃｅｅｄ（Ｒ）細胞において発現させ、そして上記のように精製した。古典的及びレクチン経路における補体活性をＷｉｅｓｌａｂアッセイを使用して測定し、ＣＨＯ  Ｘｃｅｅｄ（Ｒ）由来材料がＥｘｐｉ２９３ＦＴＭ由来材料と比較して同様の活性を有するこを確認した。
【０４１４】
実施例１０：二量体Ｆｃ  ｓＣＲ１変異体融合物は、単量体Ｆｃ  ｓＣＲ１変異体融合物と比較して増加した阻害活性を有していた
二量体ＩｇＧ１  Ｆｃ、二量体ＩｇＧ４  Ｆｃ又は単量体ＩｇＧ４  ＦｃにＣ末端で結合した組み換えｓＣＲ１融合物を以前に記載されたように生成した。
【０４１５】
以下の表９及び１０に示されるように、ｓＣＲ１（１３９２）−ＩｇＧ１  Ｆｃ及びｓＣＲ１（１３９２）−ＩｇＧ４  Ｆｃは、Ｗｉｅｓｌａｂアッセイにおいて、さらには溶血（すなわち、ＣＨ５０及びＡｐＨ５０）阻害アッセイにおいて、全３つの補体経路（すなわち、古典的、レクチン及び副）において測定して、ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓと比較して増加した補体阻害活性を有していた。特に、ｓＣＲ１（１３９２）−二量体ＩｇＧ１  Ｆｃ融合物及びｓＣＲ１（１３９２）−二量体ＩｇＧ４  Ｆｃ融合物は、ｓＣＲ１（１３９２）−８Ｈｉｓ及びｓＣＲ１（１３９２）−単量体ＩｇＧ４  Ｆｃ融合物と比較して、古典的経路及びレクチン経路において補体阻害活性の約２倍の増加、並びに副経路において補体阻害活性の４倍の増加を有していた。これらの結果はまた、Ｎ末端融合物が副経路においてｓＣＲ１（１３９２）の補体阻害活性に不利な影響を及ぼすということも示す。
【０４１６】
【表１０】
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【０４１７】
【表１１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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