(57)【要約】  免疫療法に反応しないがんを含めたがんを治療するための方法及び組成物を本明細書に提供する。１つの態様では、該治療方法は、対象に対して、治療有効量のβ−カテニン阻害剤、治療有効量のＩＤＯ阻害剤、及び治療有効量の免疫療法薬を投与することを含む。別の態様は、がんの治療用のβ−カテニン阻害剤を含む医薬組成物に関し、該組成物は、ＩＤＯ阻害剤及び免疫療法薬と組み合わせて投与される。さらに別の態様は、β−カテニン阻害剤、例えば、β−カテニン核酸阻害剤分子を、ＩＤＯ阻害剤と組み合わせて使用して、がんに対する免疫療法の治療効果を高める方法に関する。【選択図】なし
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象におけるがんの治療方法であって、前記対象に対して、
治療有効量のβ−カテニン核酸阻害剤分子、
治療有効量のインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（「ＩＤＯ」）阻害剤、及び
治療有効量の免疫療法薬を投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
がんの治療用のβ−カテニン核酸阻害剤分子を含む医薬組成物であって、免疫療法薬及びＩＤＯ阻害剤と組み合わせて投与される、前記組成物。
【請求項３】
前記対象がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記がんが、Ｗｎｔ活性化がんである、先行請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項５】
前記がんがＩＤＯ１を過剰発現する、請求項４に記載の方法または組成物。
【請求項６】
前記ＩＤＯ阻害剤が、エパカドスタット、インドキシモド、ＢＭＳ−９８６２０５、ＮＬＧ８０２、ＨＴＩ−１０９０、ナボキシモド、ＰＦ−０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ−７００９９、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジド、β−（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニン、または６−ニトロ−Ｄ−トリプトファンを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項７】
前記ＩＤＯ阻害剤がエパカドスタットである、先行請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項８】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子が、二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項９】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子が、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖間の約１５〜４５ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法または組成物であって、
ａ）前記センス鎖が、１５〜４５、１８〜２６、もしくは１９〜２１ヌクレオチドであり、前記アンチセンス鎖が、１５〜４５、１８〜２６、もしくは１９〜２１ヌクレオチドであるか、
ｂ）前記センス鎖が、１５〜６６ヌクレオチドであり、前記アンチセンス鎖が、１５〜６６ヌクレオチドであるか、
ｃ）前記センス鎖が、２５〜４０ヌクレオチドもしくは１９〜２５ヌクレオチドであるか、
ｄ）前記アンチセンス鎖が、２５〜４０ヌクレオチドもしくは１９〜２５ヌクレオチドであるか、
ｅ）前記センス鎖が、１９〜２５ヌクレオチドであり、前記アンチセンス鎖が、１９〜２５ヌクレオチドであるか、
ｆ）前記センス鎖が、２６〜３０もしくは３４〜４０ヌクレオチドであり、ステム及びテトラループを含み、前記アンチセンス鎖が、１８〜２４ヌクレオチドであり、前記センス鎖及びアンチセンス鎖が、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成するか、または
ｇ）前記センス鎖が、２７〜２９もしくは３３〜３９ヌクレオチドであり、ステム及びトリループを含み、前記アンチセンス鎖が、１８〜２４ヌクレオチドであり、前記センス鎖及びアンチセンス鎖が、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する、前記方法または組成物。
【請求項１１】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子が、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖間の１８〜３４ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、前記センス鎖が２５〜３６ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖が、２６〜３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に１〜５ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１２】
前記二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子の前記アンチセンス鎖が、さらに、その５’末端に１〜１０ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む、請求項１１に記載の方法または組成物。
【請求項１３】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子が、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖間の２０〜３０、２１〜２６、１９〜２４、または１９〜２１ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１４】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子が、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖間の１９ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、前記センス鎖が２１ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含み、前記アンチセンス鎖が、２１ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１５】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子が、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖間の２１ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、前記センス鎖が２１ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖が、２３ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１６】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子が、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖間の２６ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、前記センス鎖が２６ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖が、３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含み、その５’末端に１０ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む、請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１７】
前記センス鎖が、配列番号１の配列を含むか、または配列番号１の配列からなる、請求項９〜１３または１６のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１８】
前記アンチセンス鎖が、配列番号２の配列を含むか、または配列番号２の配列からなる、請求項９〜１３、１６、または１７のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１９】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子が、テトラループまたはトリループを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項２０】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子が、従来のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、ヒトβ−カテニン遺伝子のセグメントの逆相補体を含む、１２〜３０、１２〜２５、１２〜２２、１４〜２０、または１８〜２２ヌクレオチド長のヌクレオチド配列を５’から３’の方向に有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項２１】
前記従来のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、１６〜１８または１８〜２０ヌクレオチド長である、請求項２０に記載の方法または組成物。
【請求項２２】
前記免疫療法薬が、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストであるか、または、共刺激チェックポイント分子のアゴニストである、先行請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項２３】
前記免疫療法薬が、抑制性チェックポイントのアンタゴニストであり、前記抑制性チェックポイントが、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１である、請求項２２に記載の方法または組成物。
【請求項２４】
前記抑制性免疫チェックポイント分子の前記アンタゴニストまたは前記共刺激チェックポイント分子の前記アゴニストが、モノクローナル抗体である、請求項２２または２３に記載の方法または組成物。
【請求項２５】
前記モノクローナル抗体が、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体、または抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体と抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の組み合わせである、請求項２４に記載の方法または組成物。
【請求項２６】
ヒト対象におけるがんの治療方法であって、前記ヒト対象に対して、以下を投与することを含む、前記方法：
治療有効量のβ−カテニン核酸阻害剤分子であって、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖間の１８〜３４ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である前記β−カテニン核酸阻害剤分子であり、前記センス鎖が１９〜３６ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖が、１８〜３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に一本鎖の１〜５ヌクレオチドを含む、前記β−カテニン核酸阻害剤分子、
治療有効量のＩＤＯ阻害剤であって、エパカドスタット、インドキシモド、ＢＭＳ−９８６２０５、ＮＬＧ８０２、ＨＴＩ−１０９０、ナボキシモド、ＰＦ−０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ−７００９９、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジド、β−（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニン、または６−ニトロ−Ｄ−トリプトファンを含む前記ＩＤＯ阻害剤、及び
治療有効量の免疫療法薬であって、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体、または抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体と抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の組み合わせである、前記免疫療法薬。
【請求項２７】
がんの治療用のβ−カテニン核酸阻害剤分子を含む医薬組成物であって、免疫療法薬及びＩＤＯ阻害剤と組み合わせて投与される前記組成物であり、
前記β−カテニン核酸阻害剤分子が、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖間の１８〜３４ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、前記センス鎖が１９〜３６ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖が、１８〜３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に一本鎖の１〜５ヌクレオチドを含み、
前記免疫療法薬が、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体、または抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体と抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の組み合わせであり、
前記ＩＤＯ阻害剤が、エパカドスタット、インドキシモド、ＢＭＳ−９８６２０５、ＮＬＧ８０２、ＨＴＩ−１０９０、ナボキシモド、ＰＦ−０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ−７００９９、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジド、β−（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニン、または６−ニトロ−Ｄ−トリプトファンを含む、前記組成物。
【請求項２８】
前記ＩＤＯ阻害剤がエパカドスタットである、請求項２６または２７に記載の方法または組成物。
【請求項２９】
前記がんが、Ｗｎｔ活性化腫瘍である、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項３０】
前記がんがＩＤＯ１を過剰発現する、請求項２９に記載の方法または組成物。
【請求項３１】
前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖間の相補性領域が２１〜２６ヌクレオチドであり、前記センス鎖が２１〜２６ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖が、２３〜３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に１〜２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項３２】
前記アンチセンス鎖が、さらに、その５’末端に１〜１０ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む、請求項３１に記載の方法または組成物。
【請求項３３】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子が、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖間の２６ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、前記センス鎖が２６ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖が、３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含み、その５’末端に１０ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項３４】
前記センス鎖が、配列番号１の配列を含むか、または配列番号１の配列からなり、前記アンチセンス鎖が、配列番号２の配列を含むか、または配列番号２の配列からなる、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項３５】
請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の方法であって、
ａ）前記センス鎖が、３４〜３６ヌクレオチドであり、ステム及びテトラループを含み、前記アンチセンス鎖が、１８〜２４ヌクレオチドであり、前記センス鎖及びアンチセンス鎖が、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成するか、または
ｂ）前記センス鎖が、３３〜３５ヌクレオチドであり、ステム及びトリループを含み、前記アンチセンス鎖が、１８〜２４ヌクレオチドであり、前記センス鎖及びアンチセンス鎖が、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する、前記方法。
【請求項３６】
前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖間の前記相補性領域が１９ヌクレオチドであり、前記センス鎖が２１ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含み、前記アンチセンス鎖が、２１ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項３７】
前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖間の前記相補性領域が２１ヌクレオチドであり、前記センス鎖が２１ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖が、２３ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項３８】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子が、脂質ナノ粒子とともに製剤化される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項３９】
前記脂質ナノ粒子が、カチオン性脂質及びペグ化脂質を含む、請求項３８に記載の方法または組成物。
【請求項４０】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子、前記ＩＤＯ阻害剤、及び前記免疫療法薬の投与が、前記対象のがんの量を低減する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記対象が、前記投与ステップの前に、Ｗｎｔ活性化がんを有する、及び／またはＩＤＯ１を過剰発現するがんを有すると特定されている、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
さらに、前記投与ステップの前に、前記対象がＷｎｔ活性化がんを有するかどうか、またはＩＤＯ１を過剰発現するがんを有するかどうかを特定するため、前記対象の腫瘍サンプルを分析するステップを含む、先行請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
前記Ｗｎｔ活性化がんが、前記免疫療法薬が前記β−カテニン核酸阻害剤分子及び前記ＩＤＯ阻害剤と組み合わせて投与されない場合に、前記免疫療法薬での治療に対して耐性を示す、先行請求項のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項４４】
がんに対する免疫療法薬の治療効果を高める方法であって、前記がんを有する対象に対して、β−カテニン核酸阻害剤分子及びＩＤＯ阻害剤を、前記がんに対する前記免疫療法薬の治療効果を高めるのに十分な量で投与することを含む、前記方法。
【請求項４５】
前記がんが、Ｗｎｔ活性化がんである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記がんが、ＩＤＯ１を過剰発現する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記β−カテニン核酸阻害剤分子及び前記ＩＤＯ阻害剤の投与の前は、前記がんは、免疫療法に対して耐性を示す非Ｔ細胞炎症性表現型と関連しており、前記β−カテニン核酸阻害剤分子及びＩＤＯ阻害剤の投与が、前記非Ｔ細胞炎症性表現型を、免疫療法薬に反応するＴ細胞炎症性表現型に変換する、請求項４４〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＩＤＯ阻害剤が、エパカドスタット、インドキシモド、ＢＭＳ−９８６２０５、ＮＬＧ８０２、ＨＴＩ−１０９０、ナボキシモド、ＰＦ−０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ−７００９９、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジド、β−（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニン、または６−ニトロ−Ｄ−トリプトファンを含む、請求項４４〜４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＩＤＯ阻害剤がエパカドスタットである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記免疫療法薬が、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストであるか、または、共刺激チェックポイント分子のアゴニストである、請求項４４〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記免疫療法薬が、抑制性チェックポイントのアンタゴニストであり、前記抑制性チェックポイントが、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１である、請求項５０に記載の方法または組成物。
【請求項５２】
前記抑制性免疫チェックポイント分子の前記アンタゴニストまたは前記共刺激チェックポイント分子の前記アゴニストが、モノクローナル抗体である、請求項５０または５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記モノクローナル抗体が、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体、または抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体と抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の組み合わせである、請求項５２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１月５日に出願された米国仮特許出願第６２／６１４，２０６号の優先権を主張する。本段落で参照される各関連出願の全内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式にて電子出願され、その全体が参照することにより本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０１８年１２月１８日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーの名称は０２４３＿００２８−ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズは２キロバイトである。
【背景技術】
【０００３】
免疫系は、免疫細胞表面のある特定の分子をチェックポイントとして使用して、Ｔ細胞の活性化を制御し、免疫系が健康な細胞を標的とすること及び自己免疫を誘導することを防いでいる。ある特定のがん細胞は、これらの免疫チェックポイント分子を利用して、免疫系を回避することができる。近年、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）及びプログラム細胞死受容体１（ＰＤ−１）等の免疫チェックポイント分子をブロックする免疫療法戦略が、ある特定のがんに対して成功を収めている。抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体（イピリムマブ）が、２０１１年、進行性黒色腫患者の治療に承認された。２種の抗ＰＤ−１モノクローナル抗体（ニボルマブ及びペンブロリズマブ）が、２０１４年、ある特定の進行がんの患者の治療に承認された。３種の抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体（アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブ）は、２０１６年から、進行がんに対して承認されている。ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、及びＰＤ−Ｌ１のような免疫チェックポイント分子をブロックする抗体は、Ｔ細胞活性化のブレーキを解除し、強力な抗腫瘍免疫応答を促進すると思われる。しかしながら、一部の患者のみがこの免疫療法に反応する。
【０００４】
少なくともある特定の例では、免疫療法に反応する腫瘍は、浸潤Ｔ細胞、Ｔ細胞を腫瘍微小環境へと動員する広範なケモカインプロファイル、及び高レベルのＩＦＮガンマ分泌を伴う既存のＴ細胞炎症性表現型を有する（ホットなまたは炎症性腫瘍とも呼ばれる）。Ｇａｊｅｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１３，  １４（１０）：１０１４−２２、Ｊｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，２０１２，  ６１：１０１９−３１。逆に、免疫療法に反応しないある特定の腫瘍は、Ｔ細胞炎症性表現型を有さないことが示されている（コールドなまたは非炎症性腫瘍としても知られる）。同上。
【０００５】
腫瘍細胞は、免疫系を回避するために異なる戦略を発達させてきた。かかる戦略の１つに、酵素インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ−１（ＩＤＯ１）の発現が含まれる。ＩＤＯ１は、細胞内ヘム含有酵素であり、必須アミノ酸であるトリプトファンのキヌレニン及びその下流異化産物への分解を触媒する。ＩＤＯ１発現は、Ｔ細胞浸潤が減少した免疫抑制性の腫瘍微小環境（すなわち、コールドなまたは非炎症性腫瘍）を促進する。ＩＤＯ１は、多くのがんで発現され、ＩＤＯ１の過剰発現は、様々ながん型での進行した病期及び腫瘍転移と関連している。Ｍｕｎｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．，２０１２，（Ｅｌｉｔｅ  Ｅｄ．）４：７３４−４５。がんにおいて、ＩＤＯ１は、腫瘍細胞によって直接発現される場合もあれば、周囲の微小環境の抗原提示細胞によって間接的に誘導される場合もある。Ｈｏｌｍｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１５，  １３：４１２−２４。ＩＤＯの過剰発現が免疫療法に対する耐性を促進する機序は完全に理解されていないが、ＩＤＯ１は、必須アミノ酸であるトリプトファンの枯渇を通してエフェクターＴ細胞の活性化を阻害し、キヌレニンの産生を通してＦｏｘＰ３制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の分化及び活性化を促進することが知られている（Ｍｕｎｎ  ａｎｄ  Ｍｅｌｌｏｒ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，２００７，  １１７：１１４７−５４）。別のインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼアイソフォーム（ＩＤＯ２）は、ある特定の固形腫瘍で過剰発現し、免疫抵抗にも関与しており、トリプトファン異化酵素であるトリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）は、ＩＤＯ１及びＩＤＯ２と同様に関与している。Ｐｅｎｄｅｒｇａｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１７，  ７７（２４）：６７９５−６８１１。
【０００６】
最近になって、ＩＤＯ阻害剤が、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路を標的とするある特定の免疫療法の有効性を強化することが分かった。ＩＤＯ阻害剤であるエパカドスタット（Ｉｎｃｙｔｅ）と、ＰＤ−１阻害剤であるペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））及びニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））との組み合わせを用いた第Ｉ／ＩＩ相試験では、黒色腫の患者で陽性の初期の結果が示されている。Ｇａｎｇａｄｈａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ  ａｔ  ２０１６  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  ｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ，Ｏｃｔｏｂｅｒ  ７−１１，  ２０１６，Ａｂｓｔｒａｃｔ，１１１０ＰＤ、Ｐｅｒｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２０１７，ＡＳＣＯ  ａｂｓｔｒａｃｔ，３００３。該組み合わせはまた、転移性または再発性の頭頸部扁平上皮癌、進行性尿路上皮細胞癌、及び進行性腎細胞癌を含めた他の腫瘍でも有効性を示している。Ｉｎｃｙｔｅ及びＭｅｒｋの共同プレスリリース、Ｍｅｒｃｋウェブサイト、２０１７年６月５日から更新された、ＩｎｃｙｔｅのエパカドスタットとメルクのＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペンブロリズマブ）の組み合わせのＥＣＨＯ−２０２試験データでは、複数の腫瘍型にわたる臨床活性を示している。切除不能または転移性黒色腫に対するエパカドスタットとペンブロリズマブの第ＩＩＩ相試験は現在進行中である。ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子：ＮＣＴ０２７５２０７４。
【０００７】
小分子ＩＤＯ阻害剤、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）は、ペンブロリズマブと組み合わせた場合、進行性黒色腫の患者での第ＩＩ相試験で有効性を示している。ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓの２０１７年８月７日のプレスリリースから、更新されたインドキシモドプラスＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペンブロリズマブ）のデータでは、進行性黒色腫の患者に対して、奏効率の改善を示している。インドキシモドはまた、ＦＤＡで承認された以下のチェックポイント阻害剤のうちの１つと組み合わせて、進行性黒色腫の患者で評価されている：イピリムマブ、ニボルマブ、またはペンブロリズマブ。ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子：ＮＣＴ０２０７３１２３。別のＩＤＯ阻害剤、ＢＭＳ−９８６２０５は、進行がんの患者で問題なく忍容されることが示され、試験は、ニボルマブ及び／またはイピリムマブとの併用療法の評価へと拡大されている。Ｓｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＡＣＲ  ａｂｓｔｒａｃｔ  ＣＴ１１６，２０１７，７７（１３  ｓｕｐｐｌ）。ＮＬＧ８０２（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）及びＨＴＩ−１０９０（Ａｔｒｉｄｉａ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ）のような他のＩＤＯ阻害剤は、第Ｉ相試験で評価中である。
【０００８】
当技術分野において、非炎症性腫瘍の免疫療法に対する反応性を高める選択肢を含めた新たながん治療の選択肢を開発する必要性が依然として存在する。
【発明の概要】
【０００９】
本出願は、β−カテニン及びＩＤＯの発現を低減することが、ある特定の腫瘍の免疫療法に対する反応性を有意に高めることができることを開示する。いかなる理論にも拘束されることを意図するものではないが、β−カテニン及びＩＤＯの発現を低減することで、免疫療法に対して耐性を示すある特定の非炎症性またはコールドな腫瘍を、ＣＤ８Ｔ細胞浸潤が増加し、免疫抑制Ｆｏｘｐ３+制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のレベルが低下した炎症性またはホットな腫瘍へと変換することができると思われる。変換後は、該炎症性またはホットな腫瘍は、免疫療法（例えば、免疫チェックポイント分子の遮断）に反応するようになる。従って、本出願は、β−カテニン及びＩＤＯの両方の発現を低減することによって、ある特定の非炎症性腫瘍を免疫療法に反応する腫瘍へと変換する方法を提供する。
【００１０】
通常、β−カテニンの発現は、核酸阻害剤分子、例えば、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、従来のアンチセンスオリゴヌクレオチド、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、及びアプタマーが挙げられるがこれらに限定されないβ−カテニン核酸阻害剤分子を投与することにより低減される。しかしながら、いずれのβ−カテニン阻害剤も、本明細書に記載の方法及び組成物に使用することができる。本明細書に開示の通り、β−カテニン及びＩＤＯ阻害剤ならびに免疫療法の組み合わせでのがん治療は、腫瘍増殖を遅延させるだけでなく、実際にインビボ腫瘍モデルで腫瘍退縮を誘導する。
【００１１】
１つの態様は、対象におけるがんの治療方法に関し、これは、該対象に対して、治療有効量のβ−カテニン阻害剤、治療有効量のＩＤＯ阻害剤、及び治療有効量の免疫療法薬を投与することを含む。ある特定の実施形態では、該対象はヒトである。
【００１２】
別の態様は、がんの治療用のβ−カテニン阻害剤を含む医薬組成物に関し、該組成物は、ＩＤＯ阻害剤及び免疫療法薬と組み合わせて投与される。
【００１３】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該がんは、Ｗｎｔ活性化がんである。該方法または組成物のある特定の実施形態では、該がんは、ＩＤＯ１を過剰発現するＷｎｔ活性化がんである。
【００１４】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、エパカドスタット、インドキシモド、ＢＭＳ−９８６２０５、ＮＬＧ８０２、ＨＴＩ−１０９０、ナボキシモド、ＰＦ−０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ−７００９９、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジド、β−（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニン、または６−ニトロ−Ｄ−トリプトファンを含む。該方法または組成物のある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤はエパカドスタットを含む。
【００１５】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該β−カテニン阻害剤は、ｓｉＲＮＡ、従来のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｍｉＲＮＡ、リボザイム、及びアプタマーが挙げられるがこれらに限定されないβ−カテニン核酸阻害剤分子である。該方法または組成物のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、相補性領域を形成するセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、任意に、該センス鎖及びアンチセンス鎖間の相補性領域は、約１５〜４５ヌクレオチドである。
【００１６】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに該センス鎖及びアンチセンス鎖間の約１５〜４５、１８〜２６、または１９〜２１ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、１５〜６６ヌクレオチドであり、該アンチセンス鎖は、１５〜６６ヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、２５〜４０ヌクレオチドまたは１９〜２５ヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、該アンチセンス鎖は、２５〜４０ヌクレオチドまたは１９〜２５ヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、１９〜２５ヌクレオチドであり、該アンチセンス鎖は、１９〜２５ヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、２６〜３０または３４〜４０ヌクレオチドであり、ステム及びテトラループを含み、該アンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドであり、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、２７〜２９または３３〜３９ヌクレオチドであり、ステム及びトリループを含み、該アンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドであり、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。
【００１７】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに該センス鎖及びアンチセンス鎖間の１８〜３４ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、該センス鎖は２５〜３６ヌクレオチド長であり、該アンチセンス鎖は、２６〜３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に１〜５ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む。ある特定の実施形態では、該二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のアンチセンス鎖は、さらに、その５’末端に１〜１０ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む。
【００１８】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに該センス鎖及びアンチセンス鎖間の２０〜３０、２１〜２６、１９〜２４、または１９〜２１ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、２１ヌクレオチドを有し、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含み、該アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドであり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有し、センス鎖及びアンチセンス鎖は、１９ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、２１ヌクレオチドであり、該アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドであり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有し、センス鎖及びアンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。
【００１９】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに該センス鎖及びアンチセンス鎖間の２６ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、該センス鎖は２６ヌクレオチド長であり、該アンチセンス鎖は、３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含み、その５’末端に１０ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む。
【００２０】
該二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のある特定の実施形態では、該センス鎖は、配列番号１の配列を含むか、または配列番号１の配列からなる。該二本鎖ＲＮＡ阻害剤分子のある特定の実施形態では、該アンチセンス鎖は、配列番号２の配列を含むか、または配列番号２の配列からなる。
【００２１】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、テトラループを含む。該方法または組成物のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、トリループを含む。
【００２２】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、一本鎖オリゴヌクレオチドである。該方法または組成物のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、従来のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、ヒトβ−カテニン遺伝子のセグメントの逆相補体を含む、１２〜３０、１２〜２５、１２〜２２、１４〜２０、または１８〜２２ヌクレオチド長のヌクレオチド配列を５’から３’の方向に有する。ある特定の実施形態では、該従来のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１６〜１８または１８〜２０ヌクレオチド長である。
【００２３】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該免疫療法薬は、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストであるか、または、共刺激チェックポイント分子のアゴニストである。ある特定の実施形態では、該免疫療法薬は、抑制性チェックポイントのアンタゴニストであり、該抑制性チェックポイントは、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１である。ある特定の実施形態では、該抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストまたは該共刺激チェックポイント分子のアゴニストは、モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、該モノクローナル抗体は、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体、または抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体と抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の組み合わせである。
【００２４】
他の実施形態では、該免疫療法薬は、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストであり、該抑制性免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−１のリガンド、例えば、ＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４のリガンド、例えば、ＣＤ８０もしくはＣＤ８６、またはリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、ガレクチン９（ＧＡＬ９）、もしくはアデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）である。ある特定の実施形態では、該免疫療法薬は、共刺激分子のアゴニストであり、該共刺激分子は、ＣＤ２８、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、またはＣＤ２７である。他の実施形態では、該免疫療法薬は、例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、またはＣＤ７０を含めた共刺激分子のリガンドのアゴニストである。
【００２５】
１つの実施形態では、ヒト対象のがんの治療方法は、該ヒト対象に対して、以下を投与することを含む：
治療有効量のβ−カテニン核酸阻害剤分子であって、該β−カテニン核酸阻害剤分子が、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに該センス鎖及びアンチセンス鎖間の１８〜３４ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、該センス鎖が１９〜３６ヌクレオチド長であり、該アンチセンス鎖が、１８〜３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に一本鎖の１〜５ヌクレオチドを含むもの、
治療有効量のＩＤＯ阻害剤であって、該ＩＤＯ阻害剤が、エパカドスタット、インドキシモド、ＢＭＳ−９８６２０５、ＮＬＧ８０２、ＨＴＩ−１０９０、ナボキシモド、ＰＦ−０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ−７００９９、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジド、β−（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニン、または６−ニトロ−Ｄ−トリプトファンを含むもの、及び
治療有効量の免疫療法薬であって、該免疫療法薬が、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体、または抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体と抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の組み合わせであるもの。１つの実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、エパカドスタットを含む。ある特定の実施形態では、該がんは、Ｗｎｔ活性化がんである。ある特定の実施形態では、該がんは、ＩＤＯ１を過剰発現するＷｎｔ活性化がんである。
【００２６】
１つの実施形態では、該医薬組成物は、がんの治療用のβ−カテニン核酸阻害剤分子を含み、該組成物は、ＩＤＯ阻害剤及び免疫療法薬と組み合わせて投与され、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに該センス鎖及びアンチセンス鎖間の１８〜３４ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、該センス鎖は１９〜３６ヌクレオチド長であり、該アンチセンス鎖は、１９〜３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に一本鎖の１〜５ヌクレオチドを含み、該ＩＤＯ阻害剤は、エパカドスタット、インドキシモド、ＢＭＳ−９８６２０５、ＮＬＧ８０２、ＨＴＩ−１０９０、ナボキシモド、ＰＦ−０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ−７００９９、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジド、β−（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニン、または６−ニトロ−Ｄ−トリプトファンを含み、該免疫療法薬は、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体、または抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体と抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の組み合わせである。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、エパカドスタットを含む。ある特定の実施形態では、該がんは、Ｗｎｔ活性化がんである。ある特定の実施形態では、該がんは、ＩＤＯ１を過剰発現するＷｎｔ活性化がんである。
【００２７】
該方法または組成物の１つの実施形態では、該センス鎖及びアンチセンス鎖間の相補性領域は、２１〜２６ヌクレオチドであり、該センス鎖は２１〜２６ヌクレオチド長であり、該アンチセンス鎖は、２３〜３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に１〜２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む。ある特定の実施形態では、該アンチセンス鎖は、さらに、その５’末端に１〜１０ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む。
【００２８】
該方法または組成物の１つの実施形態では、該センス鎖及びアンチセンス鎖間の相補性領域は、１９ヌクレオチドであり、該センス鎖は２１ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含み、該アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む。別の実施形態では、該センス鎖及びアンチセンス鎖間の相補性領域は、２１ヌクレオチドであり、該センス鎖は２１ヌクレオチド長であり、該アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む。
【００２９】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに該センス鎖及びアンチセンス鎖間の２６ヌクレオチドの相補性領域を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子であり、該センス鎖は２６ヌクレオチド長であり、該アンチセンス鎖は、３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含み、その５’末端に１０ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む。
【００３０】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該センス鎖は、配列番号１の配列を含むか、または配列番号１の配列からなり、該アンチセンス鎖は、配列番号２の配列を含むか、または配列番号２の配列からなる。
【００３１】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該センス鎖は、３４〜３６ヌクレオチドであり、ステム及びテトラループを含み、該アンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドであり、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。該方法または組成物のある特定の実施形態では、該センス鎖は、２６〜３０ヌクレオチドであり、ステム及びテトラループを含み、該アンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドであり、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成し、該ステムは、１、２、または３つの塩基対及び少なくとも１つの二環式ヌクレオチドを含む。
【００３２】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該センス鎖は、３３〜３５ヌクレオチドであり、ステム及びトリループを含み、該アンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドであり、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。該方法または組成物のある特定の実施形態では、該センス鎖は、２７〜２９ヌクレオチドであり、ステム及びトリループを含み、該アンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドであり、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成し、該ステムは、２つまたは３つの塩基対及び少なくとも１つの二環式ヌクレオチドを含む。
【００３３】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、脂質ナノ粒子とともに製剤化される。ある特定の実施形態では、該脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質及びペグ化脂質を含む。
【００３４】
該方法のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子、ＩＤＯ阻害剤、及び免疫療法薬の投与が、当該対象のがんの量を低減する。
【００３５】
該方法のある特定の実施形態では、該対象は、該投与ステップの前に、非Ｗｎｔ活性化がんを有する、及び／またはＩＤＯ１を過剰発現するがんを有すると特定されている。
【００３６】
ある特定の実施形態では、該方法は、該投与ステップの前に、該対象が非Ｗｎｔ活性化がんを有するかどうかを特定するため、該対象の腫瘍サンプルを分析するステップをさらに含む。
【００３７】
該方法または組成物のある特定の実施形態では、該Ｗｎｔ活性化がんは、当該免疫療法薬が該β−カテニン核酸阻害剤分子及び該ＩＤＯ阻害剤と組み合わせて投与されない場合に、該免疫療法薬での治療に対して耐性を示す。
【００３８】
別の態様は、がんに対する免疫療法薬の治療効果を高める方法に関し、これは、該がんを有する対象に対して、β−カテニン核酸阻害剤分子、例えば、本明細書に記載の二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子、及びＩＤＯ阻害剤を、該がんに対する該免疫療法薬の治療効果を高めるのに十分な量で投与することを含む。ある特定の実施形態では、該がんは、Ｗｎｔ活性化がんである。ある特定の実施形態では、該がんは、ＩＤＯ１を過剰発現するＷｎｔ活性化がんである。
【００３９】
該方法のある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子及びＩＤＯ阻害剤の投与の前は、該がんは、免疫療法に対して耐性を示す非Ｔ細胞炎症性表現型と関連しており、該β−カテニン核酸阻害剤分子及びＩＤＯ阻害剤の投与が、該非Ｔ細胞炎症性表現型を、免疫療法薬に反応するＴ細胞炎症性表現型に変換する。
【００４０】
ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、エパカドスタット、インドキシモド、ＢＭＳ−９８６２０５、ＮＬＧ８０２、ＨＴＩ−１０９０、ナボキシモド、ＰＦ−０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ−７００９９、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジド、β−（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニン、または６−ニトロ−Ｄ−トリプトファンを含む。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、エパカドスタットを含む。
【００４１】
ある特定の実施形態では、該免疫療法薬は、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストであるか、または、共刺激チェックポイント分子のアゴニストである。ある特定の実施形態では、該免疫療法薬は、抑制性チェックポイントのアンタゴニストであり、該抑制性チェックポイントは、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１である。ある特定の実施形態では、該抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストまたは該共刺激チェックポイント分子のアゴニストは、モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、該モノクローナル抗体は、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体、または抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体と抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の組み合わせである。
【００４２】
他の実施形態では、該免疫療法薬は、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストであり、該抑制性免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−１のリガンド、例えば、ＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４のリガンド、例えば、ＣＤ８０もしくはＣＤ８６、またはリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、ガレクチン９（ＧＡＬ９）、もしくはアデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）である。ある特定の実施形態では、該免疫療法薬は、共刺激分子のアゴニストであり、該共刺激分子は、ＣＤ２８、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、またはＣＤ２７である。他の実施形態では、該免疫療法薬は、例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、またはＣＤ７０を含めた共刺激分子のリガンドのアゴニストである。
【００４３】
本明細書に組み込まれ、その一部を構成する添付の図面は、ある特定の実施形態を図示しており、本明細書と併せて、本明細書に開示の組成物及び方法のある特定の原理を説明する役割を果たす。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１Ａ】実施例３に記載の通り、Ｗｎｔ活性化４Ｔ１腫瘍を移植し、プラセボまたはＢＣＡＴ１で処理したＢａｌｂ／Ｃマウスの処理スケジュールを示す。
【図１Ｂ】ＢＣＡＴ１処理が、４Ｔ１腫瘍でβ−カテニンレベルを低下させ、ＣＤ８Ｔ細胞浸潤を増加させるが、ＩＤＯ１レベルは有意に低下させないことを免疫組織化学により示す。
【図１Ｃ】２サイクルのＢＣＡＴ１処理が、Ｂａｌｂ／Ｃマウスに移植した４Ｔ１腫瘍において、プラセボと比較して腫瘍増殖を阻害することを示す。
【図２Ａ】実施例３に記載の通り、４Ｔ１腫瘍を移植し、ＰＢＳまたはＢＣＡＴ１で処理したＢａｌｂ／Ｃマウスの処理スケジュールを示す。
【図２Ｂ−１】４Ｔ１腫瘍のＢＣＡＴ１処理が、腫瘍微小環境において、ＣＤ８＋Ｔ細胞を増加させ、複数のチェックポイント分子（ＰＤ−１、ＬＡＧ−３＋、及びＴｉｍ−３＋）を増加させ、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を増加させるが、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）数を有意に変更しないことをフローサイトメトリー分析により示す。
【図２Ｂ−２】４Ｔ１腫瘍のＢＣＡＴ１処理が、腫瘍微小環境において、ＣＤ８＋Ｔ細胞を増加させ、複数のチェックポイント分子（ＰＤ−１、ＬＡＧ−３＋、及びＴｉｍ−３＋）を増加させ、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を増加させるが、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）数を有意に変更しないことをフローサイトメトリー分析により示す。
【図３Ａ】実施例４に記載の通り、４Ｔ１腫瘍を移植し、媒体またはエパカドスタットと呼ばれるＩＤＯ阻害剤（ＩＤＯｉ）で処理したＢａｌｂ／Ｃマウスの処理スケジュールを示す。
【図３Ｂ】ＩＤＯｉ処理が、４Ｔ１腫瘍でβ−カテニンレベルを低下させ、ＣＤ８Ｔ細胞浸潤を増加させ、ＩＤＯ１レベルを低下させることを免疫組織化学により示す。
【図３Ｃ】２サイクルのＩＤＯｉ処理が、Ｂａｌｂ／Ｃマウスに移植した４Ｔ１腫瘍において、プラセボと比較して腫瘍増殖を阻害することを示す。
【図４Ａ】４Ｔ１腫瘍を移植したＢａｌｂ／Ｃマウスにおいて、単剤として投与したＩＤＯｉ（エパカドスタット）、抗ＰＤ−１抗体（ＰＤ−１）、及びＢＣＡＴの有効性を示す。
【図４Ｂ】４Ｔ１腫瘍を移植したＢａｌｂ／Ｃマウスにおいて、２剤の組み合わせで投与したＩＤＯｉ（エパカドスタット）、抗ＰＤ−１抗体（ＰＤ−１）、及びＢＣＡＴの有効性を示す。
【図４Ｃ】４Ｔ１腫瘍を移植したＢａｌｂ／Ｃマウスにおいて、３剤の組み合わせで投与したＩＤＯｉ（エパカドスタット）、抗ＰＤ−１抗体（ＰＤ−１）、及びＢＣＡＴの有効性を示す。実施例５に示す通り、３剤すべての組み合わせが腫瘍退縮を示している。
【図５Ａ】ＩＤＯｉ、抗ＰＤ−１抗体及び／またはＢＣＡＴ１で処理した４Ｔ１腫瘍におけるＣＤ８のｍＲＮＡレベルを示し、３剤すべての組み合わせのみが、有意にＣＤ８のｍＲＮＡレベルを増加させたことを示す。
【図５Ｂ】ＩＤＯｉ、抗ＰＤ−１抗体及び／またはＢＣＡＴ１で処理した４Ｔ１腫瘍におけるＦｏｘｐ３のｍＲＮＡレベルを示し、３剤すべての組み合わせのみが、有意にＦｏｘｐ３のｍＲＮＡレベルを低下させたことを示す。
【図６Ａ】実施例６に記載の通り、非Ｗｎｔ活性化Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を移植し、プラセボまたはＢＣＡＴ１で処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの処理スケジュールを示す。
【図６Ｂ】ＢＣＡＴ１処理が、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍でβ−カテニンレベルを低下させ、ＣＤ８Ｔ細胞浸潤を増加させ、ＩＤＯ１レベルを低下させることを免疫組織化学により示す。
【図６Ｃ】２サイクルのＢＣＡＴ１処理が、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに移植したＢ１６Ｆ１０腫瘍において、プラセボと比較して腫瘍増殖を有意に阻害しないことを示す。
【図７Ａ】実施例６に記載の通り、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を移植し、プラセボまたはＢＣＡＴ１で処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの処理スケジュールを示す。
【図７Ｂ−１】Ｂ１６Ｆ１０腫瘍のＢＣＡＴ１処理が、腫瘍微小環境において、ＣＤ８＋Ｔ細胞を増加させ、複数のチェックポイント分子（ＰＤ−１、ＬＡＧ−３＋、及びＴｉｍ−３＋）を増加させるが、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）数も、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）数も有意に変更しないことをフローサイトメトリー分析により示す。
【図７Ｂ−２】Ｂ１６Ｆ１０腫瘍のＢＣＡＴ１処理が、腫瘍微小環境において、ＣＤ８＋Ｔ細胞を増加させ、複数のチェックポイント分子（ＰＤ−１、ＬＡＧ−３＋、及びＴｉｍ−３＋）を増加させるが、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）数も、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）数も有意に変更しないことをフローサイトメトリー分析により示す。
【図８Ａ】実施例７に記載の通り、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を移植し、媒体またはエパカドスタットと呼ばれるＩＤＯ阻害剤（ＩＤＯｉ）で処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの処理スケジュールを示す。
【図８Ｂ】ＩＤＯｉ処理が、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍でβ−カテニンレベルを低下させ、ＣＤ８Ｔ細胞浸潤を増加させ、ＩＤＯ１レベルを低下させることを免疫組織化学により示す。
【図８Ｃ】２サイクルのＩＤＯｉ処理が、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに移植したＢ１６Ｆ１０腫瘍において、プラセボと比較して腫瘍増殖を有意に阻害しないことを示す。
【図９Ａ】実施例８に記載の通り、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を移植したＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて、単剤として投与したＩＤＯｉ（エパカドスタット）、抗ＰＤ−１抗体（ＰＤ−１）、及びＢＣＡＴ１の有効性を示す。
【図９Ｂ】実施例８に記載の通り、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を移植したＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて、２剤の組み合わせで投与したＩＤＯｉ（エパカドスタット）、抗ＰＤ−１抗体（ＰＤ−１）、及びＢＣＡＴ１の有効性を示す。
【図９Ｃ】実施例８に記載の通り、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を移植したＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて、３剤の組み合わせで投与したＩＤＯｉ（エパカドスタット）、抗ＰＤ−１抗体（ＰＤ−１）、及びＢＣＡＴ１の有効性を示す。
【図１０Ａ】実施例９に記載の通り、プラセボまたはＢＣＡＴ１で処理したＭＭＴＶ−Ｗｎｔ担腫瘍マウスの処理スケジュールを示す。
【図１０Ｂ】ＢＣＡＴ１処理が、ＭＭＴＶ−Ｗｎｔ腫瘍でβ−カテニンレベルを低下させ、ＣＤ８Ｔ細胞浸潤を増加させるが、ＩＤＯ１レベルは有意に低下させないことを免疫組織化学により示す。
【図１０Ｃ】２サイクルのＢＣＡＴ１処理が、ＭＭＴＶ−Ｗｎｔ担腫瘍マウスにおいて、プラセボと比較して腫瘍増殖を阻害することを示す。
【図１１Ａ】実施例１０に記載の通り、媒体またはエパカドスタットと呼ばれるＩＤＯ阻害剤（ＩＤＯｉ）で処理したＭＭＴＶ−Ｗｎｔ担腫瘍マウスの処理スケジュールを示す。
【図１１Ｂ】ＩＤＯｉ処理が、ＩＤＯ１レベルを低下させ、β−カテニン及びＣＤ８レベルを増加させることを免疫組織化学により示す。
【図１２】センス（またはパッセンジャー）鎖（配列番号１）及びアンチセンス（ガイド）鎖（配列番号２）を有する二本鎖β−カテニン核酸阻害剤分子の１つの非限定的な実施形態を示す。このβ−カテニン核酸阻害剤分子を本明細書ではＢＣＡＴ１と呼ぶ。
【図１３】β−カテニン核酸阻害剤分子を製剤化するために使用することができる脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の１つの非限定的な実施形態を示す。このＬＮＰは、以下のコア脂質：ＤＬ−０４８（カチオン性脂質）及びＤＳＧ−ＭＰＥＧ（ペグ化脂質）、ならびに以下のエンベロープ脂質を含む：ＤＬ−１０３（カチオン性脂質）、ＤＳＰＣ、コレステロール、及びＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ（ペグ化脂質）。
【図１４】Ｗｎｔシグナル伝達経路の簡略図を示す。左側は、Ｗｎｔリガンドがその表面受容体に結合しておらず、β−カテニンが分解複合体に隔離されるとともにユビキチン化及び分解の標的にされ、標的遺伝子が抑制される細胞を示す。右側は、Ｗｎｔリガンドがその表面受容体に結合した後の細胞を示しており、ここでは、分解複合体が分解され、安定化されたβ−カテニンが放出されて核に移動し、標的遺伝子が活性化される。
【００４５】
定義
本開示をより容易に理解するため、ある特定の用語を最初に以下に定義する。以下の用語及び他の用語のさらなる定義は、本明細書を通して記載され得る。以下に記載される用語の定義が、参照することにより組み込まれる出願または特許における定義と矛盾する場合、本出願に記載の定義を使用して該用語の意味を理解されたい。
【００４６】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに他の意味を示さない限り、複数の参照を含む。従って、例えば、「方法（ａ  ｍｅｔｈｏｄ）」への言及は、本明細書に記載の及び／または本開示等を読むことで当業者に明らかになるであろう種類の１つ以上の方法、及び／またはステップを含む。
【００４７】
投与する：本明細書で使用される、対象に対して組成物を「投与すること」とは、該組成物を該対象に与えること、適用することまたは接触させることを意味する。投与は、例えば、局所、経口、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、鞘内及び皮内を含めた多くの経路のいずれかにより達成され得る。
【００４８】
アシル：本明細書で使用される、「アシル」という用語は、アルキルカルボニル、シクロアルキルカルボニル及びアリールカルボニル部分を指す。
【００４９】
アルコキシ：本明細書で使用される、「アルコキシ」という用語は、酸素原子を介して分子の部分に結合するアルキル基を指す。
【００５０】
アルケニル：本明細書で使用される、「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの炭素間二重結合を有し、約２〜約２０個の範囲の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖ヒドロカルビル基を指す。「置換アルケニル」とは、さらに１つ以上の置換基を有するアルケニル基を指す。本明細書で使用される、「低級アルケニル」とは、２〜約６個の炭素原子を有するアルケニル部分を指す。
【００５１】
アルキル：本明細書で使用される、「アルキル」という用語は、１個〜最大約２０個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖ヒドロカルビル基を指す。本明細書に出現する場合は常に、数値範囲、例えば、「Ｃ1−Ｃ6アルキル」は、アルキル基が１個の炭素原子のみ、２個の炭素原子、３個の炭素原子等、６個を含めた最大６個の炭素原子を含み得ることを意味するが、「アルキル」という用語は、炭素原子の数値範囲が指定されていない場合も含む。例えば、「アルキル」という用語は、Ｃ1−Ｃ10の部分範囲（例えば、Ｃ1−Ｃ6）を指すことができる。「置換アルキル」とは、置換基を有するアルキル部分を指す。本明細書で使用される、「低級アルキル」とは、１〜約６個の炭素原子を有するアルキル部分を指す。
【００５２】
アルキニル：本明細書で使用される、「アルキニル」とは、少なくとも１つの炭素間三重結合を有し、約２〜約２０個の範囲の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖ヒドロカルビル基を指す。「置換アルキニル」とは、さらに１つ以上の置換基を有するアルキニル基を指す。本明細書で使用される、「低級アルキニル」とは、約２〜約６個の炭素原子を有するアルキニル部分を指す。
【００５３】
抗体：本明細書で使用される、「抗体」という用語は、免疫グロブリンまたはその抗原結合ドメインを指す。該用語は、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異性、多特異性、非特異性、ヒト化、ヒト、一本鎖、キメラ、合成、組み換え、ハイブリッド、変異型、グラフト、及びインビトロ生成抗体を含むがこれらに限定されない。抗体は、定常領域、またはその部分、例えば、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン及びミューの定常領域遺伝子を含み得る。例えば、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＭ、ＩｇＡ1、ＩｇＡ2、ＩｇＤ、及びＩｇＥを含めた様々なアイソタイプの重鎖定常領域が使用され得る。例として、軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダであり得る。
【００５４】
抗原結合ドメイン：本明細書で使用される、「抗原結合ドメイン」という用語は、抗体と抗原間の特異的結合に関与するアミノ酸を含む抗体分子の一部を指す。ある特定の抗原に関しては、抗原結合ドメインは、該抗原の一部に結合するのみの場合がある。抗体によって特異的に認識され、結合される抗原の部分は「エピトープ」または「抗原決定基」と呼ばれる。抗原結合ドメインとしては、Ｆａｂ（断片抗原結合）、Ｆ（ａｂ’）2断片、すなわち、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結される２つのＦａｂ断片を有する二価断片、Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３）参照、２つのＶH及びＣH１ドメインを有するＦｄ断片、ｄＡｂ（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）、ならびに抗原結合機能を保持する他の抗体断片が挙げられる。Ｆａｂ断片は、定常領域間でジスルフィド結合により共有結合したＶH−ＣH１及びＶL−ＣLドメインを有する。ＦV断片はより小さく、非共有結合的に連結されたＶH及びＶLドメインを有する。非共有結合的に連結されたドメインが解離する傾向を克服するため、ｓｃＦvが構築され得る。ｓｃＦVは、（１）ＶHのＣ末端をＶLのＮ末端へ、または（２）ＶLのＣ末端をＶHのＮ末端へと連結する柔軟なポリペプチドを含む。１５量体（Ｇｌｙ4Ｓｅｒ）3ペプチドがリンカーとして使用され得るが、他のリンカーは当技術分野では既知である。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来型技術を使用して得られ、該断片の機能は、インタクトな抗体と同じ方法で評価される。
【００５５】
アンチセンス鎖：ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、２つのオリゴヌクレオチド鎖、すなわち、アンチセンス鎖及びセンス鎖を含む。アンチセンス鎖またはその領域は、標的核酸の対応する領域に、部分的に、実質的にまたは完全に相補的である。さらに、二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子またはその領域のアンチセンス鎖は、該二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子またはその領域のセンス鎖に、部分的に、実質的にまたは完全に相補的である。ある特定の実施形態では、該アンチセンス鎖は、当該標的核酸配列に非相補的なヌクレオチドも含み得る。該非相補的ヌクレオチドは、該相補的配列のいずれかの側にある場合もあれば、該相補的配列の両側にある場合もある。ある特定の実施形態では、該アンチセンス鎖またはその領域が該センス鎖またはその領域に部分的または実質的に相補的である場合、該非相補的ヌクレオチドは、１つ以上の相補性領域の間に配置され得る（例えば、１つ以上のミスマッチ）。二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のアンチセンス鎖は、ガイド鎖とも呼ばれる。
【００５６】
およそ：本明細書で使用される、１つ以上の目的の値に適用される「およそ」または「約」という用語は、述べられた参照値と同様の値を指す。ある特定の実施形態では、用語「およそ」または「約」という用語は、特に記載のない限りまたは文脈から明らかでない限り（かかる数が可能な値の１００％を超える場合を除く）、述べられた参照値のいずれかの方向（上回るまたは下回る）において、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満に含まれる値の範囲を指す。
【００５７】
アリール：本明細書で使用される、「アリール」という用語は、５個〜最大１９個の範囲の炭素原子を有する芳香族単環式または多環式基を指す。「置換アリール」とは、さらに１つ以上の置換基を有するアリール基を指す。
【００５８】
β−カテニン：本明細書で使用される、「β−カテニン」とは、かかるβ−カテニンタンパク質をコードするポリペプチドまたは核酸配列のいずれかを指す。ポリペプチドを参照する場合、「β−カテニン」は、β−カテニン遺伝子／転写産物（ＣＴＮＮＢ１）のポリペプチド遺伝子産物（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１９０４．３（ヒトβ−カテニン転写産物バリアント１）、ＮＭ＿００１０９８２０９．１（ヒトβ−カテニン転写産物バリアント２）、ＮＭ＿００１０９８２１０．１（ヒトβ−カテニン転写産物バリアント３）、ならびにＮＭ＿００７６１４．２及びＮＭ＿００７６１４．３（マウスβ−カテニン）を指す。
【００５９】
ＢＣＡＴ１：本明細書で使用される、「ＢＣＡＴ１」とは、核酸阻害剤分子を指し、これは、β−カテニン遺伝子を標的とし、配列番号１からなる核酸配列のセンス鎖及び配列番号２からなる核酸配列のアンチセンス鎖を有する。
【００６０】
二環式ヌクレオチド：本明細書で使用される、「二環式ヌクレオチド」という用語は、二環式糖部分を含むヌクレオチドを指す。
【００６１】
二環式糖部分：本明細書で使用される、「二環式糖部分」という用語は、４〜７員環（フラノシルが挙げられるがこれに限定されない）を含み、該４〜７員環の２つの原子を接続して第二の環を形成する架橋を含むことにより、二環式構造を与える修飾糖部分を指す。通常、該４〜７員環は糖である。いくつかの実施形態では、該４〜７員環はフラノシルである。ある特定の実施形態では、該架橋は、該フラノシルの２’−炭素と４’−炭素を接続する。
【００６２】
相補的：本明細書で使用される、「相補的」という用語は、当該２つのヌクレオチドが互いに塩基対を形成することが可能となる２つのヌクレオチド間の構造的関係（例えば、２つの相対する核酸または単一の核酸鎖の相対する領域での）を指す。例えば、相対する核酸のピリミジンヌクレオチドと相補的なある核酸のプリンヌクレオチドは、互いに水素結合を形成することにより、塩基対合し得る。いくつかの実施形態では、相補的ヌクレオチドは、ワトソン・クリック様式で塩基対合する場合もあれば、安定な二本鎖の形成を可能にする任意の他の様式で塩基対合する場合もある。「完全に相補的」または１００％の相補性とは、第一のオリゴヌクレオチド鎖または第一のオリゴヌクレオチド鎖のセグメントの各ヌクレオチドモノマーが、第二のオリゴヌクレオチド鎖または第二のオリゴヌクレオチド鎖のセグメントの各ヌクレオチドモノマーと塩基対を形成することができる状況を指す。１００％未満の相補性とは、２つのオリゴヌクレオチド鎖（または２つのオリゴヌクレオチド鎖の２つのセグメント）のヌクレオチドモノマーのすべてではなく一部が互いに塩基対を形成することができる状況を指す。「実質的相補性」とは、互いに９０％以上の相補性を示す２つのオリゴヌクレオチド鎖（または２つのオリゴヌクレオチド鎖のセグメント）を指す。「十分に相補的」とは、標的ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の量に低下が生じるような標的ｍＲＮＡと核酸阻害剤分子間の相補性を指す。
【００６３】
相補鎖：本明細書で使用される、「相補鎖」という用語は、他方の鎖に部分的に、実質的にまたは完全に相補的な二本鎖核酸阻害剤分子の鎖を指す。
【００６４】
従来のアンチセンスオリゴヌクレオチド：本明細書で使用される、「従来のアンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、以下の機序の１つによって標的遺伝子の発現を阻害する一本鎖オリゴヌクレオチドを指す：（１）立体障害、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、遺伝子発現及び／またはコードされたタンパク質の産生に関与する一連の事象のいくつかのステップを、例えば、該遺伝子の転写、ｍＲＮＡ前駆体のスプライシング及び該ｍＲＮＡの翻訳を直接妨害することによって妨害する。（２）標的遺伝子のＲＮＡ転写産物のＲＮａｓｅ  Ｈによる酵素消化の誘導、（３）標的遺伝子のＲＮＡ転写産物のＲＮａｓｅ  Ｌによる酵素消化の誘導、（４）標的遺伝子のＲＮＡ転写産物のＲＮａｓｅ  Ｐによる酵素消化の誘導、（５）標的遺伝子のＲＮＡ転写産物の二本鎖ＲＮａｓｅによる酵素消化の誘導、及び（６）同じアンチセンスオリゴにおける立体障害及び酵素消化活性の誘導の組み合わせ。従来のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉ阻害剤分子のようなＲＮＡｉの作用機序を有さない。ＲＮＡｉ阻害剤分子は、いくつかの方法で従来のアンチセンスオリゴヌクレオチドとは区別することができ、該方法に含まれるのは、Ａｇｏ２の要求であり、これは、該アンチセンス鎖が、対象とする標的（複数可）にＡｇｏ２タンパク質を向けるようにＲＮＡｉアンチセンス鎖と結合するとともに、Ａｇｏ２が該標的のサイレンシングに必要とされる場合である。
【００６５】
シクロアルキル：本明細書で使用される、「シクロアルキル」という用語は、３〜１２個の炭素、例えば、３〜８個の炭素、例えば、３〜６個の炭素を含む環状（すなわち、環を含む）炭化水素基を指す。
【００６６】
デオキシリボフラノシル：本明細書で使用される、「デオキシリボフラノシル」という用語は、天然に存在するＤＮＡに見られ、２’−炭素に水素基を有する以下に示すフラノシルを指す。
【００６７】
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【００６８】
デオキシリボヌクレオチド：本明細書で使用される、「デオキシリボヌクレオチド」という用語は、糖部分の２’位に水素基を有する天然のヌクレオチド（本明細書で定義される）または修飾ヌクレオチド（本明細書で定義される）を指す。
【００６９】
二本鎖：本明細書で使用される、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）に関する「二本鎖」という用語は、ヌクレオチドの２つの逆平行配列の相補的塩基対合を通して形成される構造を指す。
【００７０】
賦形剤：本明細書で使用される、「賦形剤」という用語は、組成物に含まれ、例えば、所望の粘稠度または安定効果をもたらすまたはこれに寄与し得る非治療薬を指す。
【００７１】
フラノシル：本明細書で使用される、「フラノシル」という用語は、４個の炭素原子及び１つの酸素原子を有する５員環を含む構造を指す。
【００７２】
ハロゲン：本明細書で使用される、「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択される原子を指す。
【００７３】
ヘテロ環：本明細書で使用される、「ヘテロ環」または「ヘテロ環式」という用語は、当該環構造の一部として１つ以上のヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓ等）及び３個〜最大１４個の範囲の炭素原子を含む非芳香族環状（すなわち、環を含む）基を指す。「置換ヘテロ環式」または「置換ヘテロ環」とは、さらに１つ以上の置換基を有するヘテロ環式基を指す。
【００７４】
ＩＤＯ阻害剤：本明細書で使用される、「ＩＤＯ阻害剤」という用語は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（「ＩＤＯ」）酵素の活性を低減する化合物または薬剤を指す。
【００７５】
ヌクレオチド間結合基：本明細書で使用される、「ヌクレオチド間結合基」または「ヌクレオチド間結合」という用語は、２つのヌクレオシド部分を共有結合することが可能な化学基を指す。通常、該化学基は、ホスホまたはホスファイト基を含むリン含有結合基である。ホスホ結合基は、ホスホジエステル結合、ホスホロジチオエート結合、ホスホロチオエート結合、ホスホトリエステル結合、チオノアルキルホスホネート結合、チオンアルキルホスホトリエステル結合、ホスホラミダイト結合、ホスホネート結合及び／またはボラノホスフェート結合を含むことを意図している。例えば、米国特許第３，６８７，８０８号、第４，４６９，８６３号、第４，４７６，３０１号、第５，０２３，２４３号、第５，１７７，１９６号、第５，１８８，８９７号、第５，２６４，４２３号、第５，２７６，０１９号、第５，２７８，３０２号、第５，２８６，７１７号、第５，３２１，１３１号、第５，３９９，６７６号、第５，４０５，９３９号、第５，４５３，４９６号、第５，４５５，２３３号、第５，４６６，６７７号、第５，４７６，９２５号、第５，５１９，１２６号、第５，５３６，８２１号、第５，５４１，３０６号、第５，５５０，１１１号、第５，５６３，２５３号、第５，５７１，７９９号、第５，５８７，３６１号、第５，１９４，５９９号、第５，５６５，５５５号、第５，５２７，８９９号、第５，７２１，２１８号、第５，６７２，６９７号及び第５，６２５，０５０号に開示の通り、多くのリン含有結合が当技術分野で周知である。他の実施形態では、該オリゴヌクレオチドは、リン原子を含まない１つ以上のヌクレオチド間結合基、例えば、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオチド間結合、混合ヘテロ原子及びアルキルもしくはシクロアルキルヌクレオチド間結合、または１つ以上の短鎖ヘテロ原子もしくはヘテロ環式ヌクレオチド間結合を含み、これらとしては、シロキサン骨格、スルフィド、スルホキシド及びスルホン骨格、ホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、リボアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファメート骨格、メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格、スルホネート及びスルホンアミド骨格、ならびにアミド骨格を有するものが挙げられるがこれらに限定されない。例えば、米国特許第５，０３４，５０６号、第５，１６６，３１５号、第５，１８５，４４４号、第５，２１４，１３４号、第５，２１６，１４１号、第５，２３５，０３３号、第５，２６４，５６２号、第５，２６４，５６４号、第５，４０５，９３８号、第５，４３４，２５７号、第５，４６６，６７７号、第５，４７０，９６７号、第５，４８９，６７７号、第５，５４１，３０７号、第５，５６１，２２５号、第５，５９６，０８６号、第５，６０２，２４０号、第５，６１０，２８９号、第５，６０２，２４０号、第５，６０８，０４６号、第５，６１０，２８９号、第５，６１８，７０４号、第５，６２３，０７０号、第５，６６３，３１２号、第５，６３３，３６０号、第５，６７７，４３７号、第５，７９２，６０８号、第５，６４６，２６９号及び第５，６７７，４３９号に開示の非リン含有結合が当技術分野で周知である。
【００７６】
免疫チェックポイント分子：本明細書で使用される、「免疫チェックポイント分子」という用語は、免疫系が外来病原体に反応する際、通常の生理的条件下での自己寛容（または自己免疫の防止）の維持にとって、ならびに宿主細胞及び組織の防御にとって重要なＴ細胞等の免疫細胞上の分子を指す。ある特定の免疫チェックポイント分子は、抗原に対するＴ細胞の反応に関与するシグナルを増幅する共刺激分子である一方、ある特定の免疫チェックポイント分子は、抗原に対するＴ細胞の反応に関与するシグナルを低減する抑制分子（例えば、ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１）である。
【００７７】
ループ：本明細書で使用される、「ループ」という用語は、一本鎖の核酸によって形成される構造を指し、この場合、特定の一本鎖ヌクレオチド領域に隣接する相補性領域は、該相補性領域間の該一本鎖ヌクレオチド領域が、二本鎖形成またはワトソン・クリックの塩基対合から除外されるような様式でハイブリダイズする。ループは、任意の長さの一本鎖ヌクレオチド領域である。ループの例としては、ヘアピン、テトラループ、及びトリループ等の構造に存在する不対ヌクレオチドが挙げられる。
【００７８】
修飾核酸塩基：本明細書で使用される、「修飾核酸塩基」という用語は、天然の核酸塩基でもユニバーサル核酸塩基でもない任意の核酸塩基を指す。適切な修飾核酸塩基としては、ジアミノプリン及びその誘導体、アルキル化プリンまたはピリミジン、アシル化プリンまたはピリミジン、チオール化プリンまたはピリミジン等が挙げられる。他の適切な修飾核酸塩基としては、プリン及びピリミジンのアナログが挙げられる。適切なアナログとしては、１−メチルアデニン、２−メチルアデニン、Ｎ６−メチルアデニン、Ｎ６−イソペンチルアデニン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンチルアデニン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアデニン、８−ブロモアデニン、２−チオシトシン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、５−エチルシトシン、４−アセチルシトシン、１−メチルグアニン、２−メチルグアニン、７−メチルグアニン、２，２−ジメチルグアニン、８−ブロモグアニン、８−クロログアニン、８−アミノグアニン、８−メチルグアニン、８−チオグアニン、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、５−エチルウラシル、５−プロピルウラシル、５−メトキシウラシル、５−ヒドロキシメチルウラシル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５−（メチルアミノメチル）ウラシル、５−（カルボキシメチルアミノメチル）−ウラシル、２−チオウラシル、５−メチル−２−チオウラシル、５−（２−ブロモビニル）ウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、プソイドウラシル、１−メチルプソイドウラシル、キューオシン、ハイポキサンチン、キサンチン、２−アミノプリン、６−ヒドロキシアミノプリン、ニトロピロリル、ニトロインドリル及びジフルオロトリル、６−チオプリンならびに２，６−ジアミノプリンニトロピロリル、ニトロインドリル及びジフルオロトリルが挙げられるがこれらに限定されない。通常、核酸塩基は窒素塩基を含む。ある特定の実施形態では、該核酸塩基は窒素原子を含まない。例えば、米国公開特許出願第２００８０２７４４６２号を参照されたい。
【００７９】
修飾ヌクレオシド：本明細書で使用される、「修飾ヌクレオシド」という用語は、リン酸基または修飾リン酸基（本明細書で定義される）に結合していない糖（例えば、デオキシリボ−スもしくはリボースまたはそのアナログ）とＮ−グリコシド結合したヘテロ環式窒素塩基を指し、１つ以上の修飾核酸塩基（本明細書で定義される）、ユニバーサル核酸塩基（本明細書で定義される）または修飾糖部分（本明細書で定義される）を含む。該修飾またはユニバーサル核酸塩基（本明細書では塩基アナログとも呼ばれる）は、一般にヌクレオシドの糖部分の１’位に位置し、該１’位でのアデニン、グアニン、シトシン、チミン及びウラシル以外の核酸塩基を指す。ある特定の実施形態では、該修飾またはユニバーサル核酸塩基は、窒素塩基である。ある特定の実施形態では、該修飾核酸塩基は窒素原子を含まない。例えば、米国公開特許出願第２００８０２７４４６２号を参照されたい。ある特定の実施形態では、該修飾ヌクレオチドは核酸塩基を含まない（脱塩基）。本開示に照らして、適切な修飾もしくはユニバーサル核酸塩基または修飾糖を本明細書に記載する。
【００８０】
修飾ヌクレオチド：本明細書で使用される、「修飾ヌクレオチド」という用語は、リン酸基または修飾リン酸基（本明細書で定義される）に結合した糖（例えば、リボ−スもしくはデオキシリボースまたはそのアナログ）とＮ−グリコシド結合したヘテロ環式窒素塩基を指し、１つ以上の修飾核酸塩基（本明細書で定義される）、ユニバーサル核酸塩基（本明細書で定義される）、修飾糖部分（本明細書で定義される）、または修飾リン酸基（本明細書で定義される）を含む。該修飾またはユニバーサル核酸塩基（本明細書では塩基アナログとも呼ばれる）は、一般にヌクレオシドの糖部分の１’位に位置し、該１’位でのアデニン、グアニン、シトシン、チミン及びウラシル以外の核酸塩基を指す。ある特定の実施形態では、該修飾またはユニバーサル核酸塩基は、窒素塩基である。ある特定の実施形態では、該修飾核酸塩基は窒素原子を含まない。例えば、米国公開特許出願第２００８０２７４４６２号を参照されたい。ある特定の実施形態では、該修飾ヌクレオチドは核酸塩基を含まない（脱塩基）。本開示に照らして、適切な修飾もしくはユニバーサル核酸塩基、修飾糖部分、または修飾リン酸基を本明細書に記載する。
【００８１】
修飾リン酸基：本明細書で使用される、「修飾リン酸基」という用語は、天然のヌクレオチドには存在しないリン酸基の修飾を指し、本明細書に記載の天然には存在しないリン酸模倣体、すなわち、リン原子を含むリン酸模倣体及びリン酸を含まないアニオン性リン酸模倣体（例えば、酢酸）等を含む。修飾リン酸基はまた、天然に存在しないヌクレオチド間結合基、すなわち、リン含有ヌクレオチド間結合、例えば、ホスホロチオエート等、及び本明細書に記載の非リン含有結合基の両方等を含む。本開示に照らして、適切な修飾もしくはユニバーサル核酸塩基、修飾糖部分、または修飾リン酸を本明細書に記載する。
【００８２】
修飾糖部分：本明細書で使用される、「修飾糖部分」とは、置換された糖部分（本明細書で定義される）または糖アナログ（本明細書で定義される）を指す。
【００８３】
裸のオリゴヌクレオチド：本明細書で使用される、「裸のオリゴヌクレオチド」という用語は、保護用脂質ナノ粒子または他の保護製剤に製剤化されていないため、インビボで投与された場合、血液及びエンドソーム／リソソーム区画に曝露されるオリゴヌクレオチドを指す。
【００８４】
天然の核酸塩基：本明細書で使用される、「天然の核酸塩基」という用語は、５種の主要な天然に存在するＲＮＡ及びＤＮＡのヘテロ環式核酸塩基、すなわち、プリン塩基であるアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、及びウラシル（Ｕ）を指す。
【００８５】
天然の糖部分：本明細書で使用される、「天然の糖部分」という用語は、リボフラノシル（本明細書で定義される）またはデオキシリボフラノシル（本明細書で定義される）を指す。
【００８６】
天然のヌクレオシド：本明細書で使用される、「天然のヌクレオシド」という用語は、リン酸基に結合していない天然の糖部分（本明細書で定義される）にＮ−グリコシド結合した天然の核酸塩基（本明細書で定義される）を指す。
【００８７】
天然のヌクレオチド：本明細書で使用される、「天然のヌクレオチド」という用語は、リン酸基に結合した天然の糖部分にＮ−グリコシド結合した天然の核酸塩基（本明細書で定義される）を指す。
【００８８】
非Ｔ細胞炎症性表現型：本明細書で使用される、「非Ｔ細胞炎症性表現型」とは、当該腫瘍に対して、当該腫瘍の微小環境において浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞の蓄積がほとんどまたは全くないことから明らかである既存のＴ細胞反応を伴わない腫瘍の微小環境を指す。通常、該非Ｔ細胞炎症性表現型はまた、該腫瘍の微小環境でのＣＤ８＋Ｔ細胞の動員及び蓄積を促進しない限られたケモカインプロファイルによって、及び／またはＩ型ＩＦＮ遺伝子サインが最小限であるか、もしくは存在しないことによっても特徴づけられる。
【００８９】
非Ｗｎｔ活性化疾患または障害：本明細書で使用される、「非Ｗｎｔ活性化」疾患または障害とは、Ｗｎｔ／β−カテニン経路の活性化と関連していない疾患または障害を指す。「非Ｗｎｔ活性化」疾患または障害としては、ある特定のがん及び／または増殖性の疾患、状態、または障害が挙げられ、ある特定の結腸直腸癌、デスモイド、子宮内膜癌、胃癌、肝細胞癌、肝芽腫、腎臓癌（ウィルムス腫瘍）、髄芽腫、黒色腫、神経芽細胞腫、卵巣癌（類内膜）、膵臓癌、毛母腫、前立腺癌、腎臓癌、甲状腺（未分化）癌及び子宮（子宮内膜）癌が含まれる。１つの実施形態では、該「非Ｗｎｔ活性化」疾患または障害は、結腸直腸癌、肝細胞癌、または黒色腫である。１つの実施形態では、該「非Ｗｎｔ活性化」疾患または障害は、神経芽細胞腫、腎臓癌、または黒色腫である。上記のがん及び／または増殖性疾患を含めた疾患または障害は、該疾患または障害の非Ｗｎｔ活性化サブタイプ及び以下に示すＷｎｔ活性化疾患または障害の定義と一致する該疾患または障害のＷｎｔ活性化サブタイプの両方を含み得ることが理解される。
【００９０】
核酸阻害剤分子：本明細書で使用される、「核酸阻害剤分子」という用語は、標的遺伝子の発現を低減または排除するオリゴヌクレオチド分子を指し、この場合、該オリゴヌクレオチド分子は、該標的遺伝子のｍＲＮＡの配列を特異的に標的とする領域を含む。通常、該核酸阻害剤分子の標的領域は、指定された標的遺伝子に該核酸阻害剤分子の効果を向けるために、該標的遺伝子のｍＲＮＡの配列に対して十分相補的な配列を含む。該核酸阻害剤分子は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、及び／または修飾ヌクレオチドを含み得る。
【００９１】
核酸塩基：本明細書で使用される、「核酸塩基」という用語は、天然の核酸塩基（本明細書で定義される）、修飾核酸塩基（本明細書で定義される）、またはユニバーサル核酸塩基（本明細書で定義される）を指す。
【００９２】
ヌクレオシド：本明細書で使用される、「ヌクレオシド」という用語は、天然のヌクレオシド（本明細書で定義される）または修飾ヌクレオシド（本明細書で定義される）を指す。
【００９３】
ヌクレオチド：本明細書で使用される、「ヌクレオチド」という用語は、天然のヌクレオチド（本明細書で定義される）または修飾ヌクレオチド（本明細書で定義される）を指す。
【００９４】
オーバーハング：本明細書で使用される、「オーバーハング」という用語は、二本鎖核酸阻害剤分子のいずれかの鎖のいずれかの末端における、末端非塩基対合ヌクレオチド（複数可）を指す。ある特定の実施形態では、該オーバーハングは、第一の鎖または領域が二本鎖を形成する相補鎖の末端を超えて延びる１つの鎖または領域に由来する。塩基対の水素結合を介して二本鎖を形成することができる２つのオリゴヌクレオチド領域の一方または両方が、該２つのポリヌクレオチドまたは領域が共有する相補性の３’及び／または５’末端を超えて延びる５’及び／または３’末端を有し得る。該二本鎖の３’及び／または５’末端を超えて延びる一本鎖領域がオーバーハングと呼ばれる。
【００９５】
医薬組成物：本明細書で使用される、「医薬組成物」という用語は、薬理学的に有効な量のβ−カテニン核酸阻害剤分子、ＩＤＯ阻害剤、または免疫療法薬、例えば、抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体のうちの１つ以上を含む）及び医薬的に許容される賦形剤を含む。本明細書で使用される、「薬理学的に有効な量」、「治療有効量」または「有効量」とは、意図する薬理学的、治療的、または予防的結果を生成するのに有効なβ−カテニン核酸阻害剤分子、ＩＤＯ阻害剤、または免疫療法薬、例えば、抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体のうちの１つ以上を含む）の量を指す。
【００９６】
医薬的に許容される賦形剤：本明細書で使用される、「医薬的に許容される賦形剤」という用語は、当該賦形剤が、合理的なベネフィット／リスク比に見合う不要な有害副作用（例えば、毒性、炎症、及びアレルギー反応）なく、ヒト及び／または動物での使用に適したものであることを意味する。
【００９７】
リン酸模倣体：本明細書で使用される、「リン酸模倣体」という用語は、リン酸基の静電的及び立体的特性を模倣するオリゴヌクレオチドの５’末端での化学部分を指す。オリゴヌクレオチドの５’末端に結合することができる多くのリン酸模倣体が開発されている（例えば、米国特許第８，９２７，５１３号、Ｐｒａｋａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２０１５，４３（６）：２９９３−３０１１参照）。通常、これらの５’リン酸模倣体は、耐ホスファターゼ結合を含む。適切なリン酸模倣体としては、５’−ホスホネート、例えば、５’−メチレンホスホネート（５’−ＭＰ）及び５’−（Ｅ）−ビニルホスホネート（５’−ＶＰ）ならびにオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドの糖部分（例えば、リボースもしくはデオキシリボースまたはそのアナログ）の４’−炭素に結合した４’−リン酸アナログ、例えば、４’−オキシメチルホスホネート、４’−チオメチルホスホネート、または４’−アミノメチルホスホネートが挙げられ、参照することにより全体として本明細書に組み込まれるＰＣＴ国際公開第ＷＯ２０１８／０４５３１７号に記載されている。ある特定の実施形態では、該４’−オキシメチルホスホネートは、式−Ｏ−ＣＨ2−ＰＯ（ＯＨ）2または−Ｏ−ＣＨ2−ＰＯ（ＯＲ）2で表され、式中、Ｒは、独立して、Ｈ、ＣＨ3、アルキル基、または保護基から選択される。ある特定の実施形態では、該アルキル基は、ＣＨ2ＣＨ3である。より典型的には、Ｒは、独立して、Ｈ、ＣＨ3、またはＣＨ2ＣＨ3から選択される。他の修飾は、オリゴヌクレオチドの５’末端に関して開発されている（例えば、ＷＯ２０１１／１３３８７１参照）。
【００９８】
強化する：本明細書で使用される、「強化する」または「強化すること」という用語は、１つ以上の治療薬（例えば、β−カテニン核酸阻害剤分子及びＩＤＯ阻害剤）が、別の治療薬（例えば、抑制性免疫チェックポイント分子、例えば、ＣＴＬＡ−４もしくはＰＤ−１のアンタゴニスト、または共刺激チェックポイント分子のアゴニスト）の治療効果を増加または向上させる能力を指す。
【００９９】
保護基：本明細書で使用される、「保護基」という用語は、従来の化学感覚において、所望の反応のある特定の条件下で官能基を可逆的に非反応性にする基として使用される。所望の反応後、保護基は、保護された官能基を脱保護するために除去され得る。すべての保護基は、合成される分子の大部分を分解しない条件下で除去可能であるべきである。
【０１００】
低減する：本明細書で使用される、「低減する（ｒｅｄｕｃｅ）」または「低減する（ｒｅｄｕｃｅｓ）」という用語は、当技術分野で一般に認められているその意味を指す。例示的な核酸阻害剤分子（例えば、β−カテニンＲＮＡｉ阻害剤分子）に関して、該用語は概して、遺伝子の発現、あるいはＲＮＡ分子または１つ以上のタンパク質もしくはタンパク質のサブユニットをコードする同等のＲＮＡ分子のレベル、または１つ以上のタンパク質もしくはタンパク質のサブユニットの活性の、該核酸阻害剤分子の非存在下で認められるもの未満への低下を指す。
【０１０１】
耐性：免疫療法に関して使用される、「耐性（ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）」または「耐性（ｒｅｓｉｓｔａｎｔ）」という用語は、免疫療法に対して医学的に有意な反応を示さないがん及び／または増殖性疾患、状態または障害を指す。本明細書に開示されるように、免疫療法に対する耐性は、β−カテニン及びＩＤＯの発現を低減することにより逆転することができる。
【０１０２】
リボフラノシル：本明細書で使用される、「リボフラノシル」という用語は、天然に存在するＲＮＡに見られ、２’−炭素にヒドロキシル基を有する以下に示すフラノシルを指す。
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【０１０３】
リボヌクレオチド：本明細書で使用される、「リボヌクレオチド」という用語は、糖部分の２’位にヒドロキシル基を有する天然のヌクレオチド（本明細書で定義される）または修飾ヌクレオチド（本明細書で定義される）を指す。
【０１０４】
ＲＮＡｉ阻害剤分子：本明細書で使用される、「ＲＮＡｉ阻害剤分子」という用語は、（ａ）センス鎖（パッセンジャー）及びアンチセンス鎖（ガイド）を有する二本鎖核酸阻害剤分子（「ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子」）であって、該アンチセンス鎖もしくはアンチセンス鎖の一部が、標的ｍＲＮＡの切断でアルゴノート２（Ａｇｏ２）エンドヌクレアーゼによって使用されるもの、または（ｂ）単一のアンチセンス鎖を有する一本鎖核酸阻害剤分子（「ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子」）であって、該アンチセンス鎖（もしくは該アンチセンス鎖の一部）が、標的ｍＲＮＡの切断に該Ａｇｏ２エンドヌクレアーゼによって使用されるもの、のいずれかを指す。
【０１０５】
センス鎖：ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、２つのオリゴヌクレオチド鎖、すなわち、アンチセンス鎖及びセンス鎖を含む。該センス鎖またはその領域は、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子またはその領域のアンチセンス鎖に、部分的に、実質的にまたは完全に相補的である。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、当該アンチセンス鎖に非相補的なヌクレオチドも含み得る。該非相補的ヌクレオチドは、該相補的配列のいずれかの側にある場合もあれば、該相補的配列の両側にある場合もある。ある特定の実施形態では、該センス鎖またはその領域が該アンチセンス鎖またはその領域に部分的または実質的に相補的である場合、該非相補的ヌクレオチドは、１つ以上の相補性領域の間に配置され得る（例えば、１つ以上のミスマッチ）。センス鎖は、パッセンジャー鎖とも呼ばれる。
【０１０６】
対象：本明細書で使用される、「対象」という用語は、マウス、ウサギ、及びヒトを含めた任意の哺乳類を意味する。１つの実施形態では、該対象はヒトである。「個体」または「患者」という用語は、「対象」と同義であることが意図されている。
【０１０７】
置換基または置換される：本明細書で使用される、「置換基」または「置換される」という用語は、所与の構造における水素ラジカルを置換基のラジカルで置き換えることを指す。任意の所与の構造において２か所以上が２つ以上の置換基で置換され得る場合、該置換基は、特に明記しない限り、位置ごとに同じであっても異なっていてもよい。本明細書で使用される、「置換される」という用語は、有機化合物に適合するすべての許容される置換基を含むことを企図している。該許容される置換基としては、有機化合物の非環式及び環式、分岐及び非分岐、炭素環式及びヘテロ環式、芳香族及び非芳香族置換基が挙げられる。本開示は、該有機化合物の許容される置換基によって限定されるものでは決してない。
【０１０８】
置換糖部分：本明細書で使用される、「置換糖部分」としては、１つ以上の修飾を含むフラノシルが挙げられる。通常、該修飾は、該糖の２’−、３’−、４’−、または５’−炭素の位置で生じる。ある特定の実施形態では、該置換糖部分は、該フラノシルの２’−炭素と４−炭素を接続する架橋を含む二環式糖部分である。
【０１０９】
糖アナログ：本明細書で使用される、「糖アナログ」という用語は、フラノシルを含まず、得られるヌクレオチドが、（１）オリゴヌクレオチドへの組み込み及び（２）相補的ヌクレオチドへのハイブリダイゼーションが可能であるように天然に存在するヌクレオチドの糖部分を置き換えることが可能な構造を指す。かかる構造は、通常、フラノシルに対する比較的単純な、例えば、異なる原子数を含む環（例えば、４、６、もしくは７員環）への変更、該フラノシルの酸素の非酸素原子（例えば、炭素、硫黄、もしくは窒素）による置き換え、または原子数の変更及び酸素の置き換えの両方を含む。かかる構造はまた、置換糖部分に関して記載されるものと一致する置換を含む場合もある。糖アナログはまた、より複雑な糖の置き換え（例えば、ペプチド核酸の非環系）も含む。糖アナログとしては、モルホリノ、シクロヘキセニル、及びシクロヘキシトールが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１０】
糖部分：本明細書で使用される、「糖部分」という用語は、ヌクレオチドまたはヌクレオシドの天然の糖部分または修飾糖部分を指す。
【０１１１】
標的部位：本明細書で使用される、「標的部位」「標的配列」、「標的核酸」、「標的領域」、「標的遺伝子」という用語は、同義で用いられ、例えば、ＲＮＡｉ阻害剤分子によって媒介される切断に対して「標的とされる」ＲＮＡまたはＤＮＡ配列を指し、これは、そのガイド／アンチセンス領域内に、その標的配列に部分的に、実質的に、または完全にもしくは十分に相補的な配列を含む。
【０１１２】
Ｔ細胞炎症性腫瘍表現型：本明細書で使用される、「Ｔ細胞炎症性表現型」とは、当該腫瘍に対して、当該腫瘍の微小環境において浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞の蓄積によって明らかである既存のＴ細胞反応を伴う腫瘍の微小環境を指す。通常、該Ｔ細胞炎症性表現型はまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞を腫瘍微小環境（ＣＸＣＬ９及び／またはＣＸＣＬ１０を含む）へと動員することが可能な広範なケモカインプロファイル、及び／またはＩ型ＩＦＮ遺伝子サインによっても特徴づけられる。
【０１１３】
ＴＤＯ阻害剤：本明細書で使用される、「ＴＤＯ阻害剤」という用語は、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（「ＴＤＯ」）酵素の活性を低減する化合物または薬剤を指す。
【０１１４】
テトラループ：本明細書で使用される、「テトラループ」という用語は、隣接するワトソン・クリックのハイブリッド形成ヌクレオチドの安定性に寄与する安定な二次構造を形成するループ（一本鎖領域）を指す。理論に拘束されるものではないが、テトラループは、スタッキング相互作用によって隣接するワトソン・クリック塩基対を安定させ得る。さらに、テトラループにおけるヌクレオチド間の相互作用としては、非ワトソン・クリック塩基対合、スタッキング相互作用、水素結合、及び接触相互作用が挙げられるがこれらに限定されない（Ｃｈｅｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９０，３４６（６２８５）：６８０−２、Ｈｅｕｓ  ａｎｄ  Ｐａｒｄｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １９９１，２５３（５０１６）：１９１−４）。テトラループは、ランダムな塩基からなる単純モデルループ配列から予測されるよりも高い、隣接する二本鎖の融解温度（Ｔｍ）の上昇をもたらす。例えば、テトラループは、少なくとも２塩基対の長さの二本鎖を含むヘアピンに対して、１０ｍＭのＮａＨＰＯ４中、融解温度少なくとも５０℃、少なくとも５５℃、少なくとも５６℃、少なくとも５８℃、少なくとも６０℃、少なくとも６５℃、または少なくとも７５℃を与え得る。テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、及びそれらの組み合わせを含み得る。ある特定の実施形態では、テトラループは、４つのヌクレオチドからなる。ある特定の実施形態では、テトラループは、５つのヌクレオチドからなる。
【０１１５】
ＲＮＡのテトラループの例としては、ＵＮＣＧファミリーのテトラループ（例えば、ＵＵＣＧ）、ＧＮＲＡファミリーのテトラループ（例えば、ＧＡＡＡ）、及びＣＵＵＧのテトラループが挙げられる。（Ｗｏｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，１９９０，８７（２１）：８４６７−７１、Ａｎｔａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９１，１９（２１）：５９０１−５）。ＤＮＡのテトラループの例としては、ｄ（ＧＮＮＡ）ファミリーのテトラループ（例えば、ｄ（ＧＴＴＡ）、ｄ（ＧＮＲＡ））ファミリーのテトラループ、ｄ（ＧＮＡＢ）ファミリーのテトラループ、ｄ（ＣＮＮＧ）ファミリーのテトラループ、及びｄ（ＴＮＣＧ）ファミリーのテトラループ（例えば、ｄ（ＴＴＣＧ））が挙げられる。（Ｎａｋａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，４１（４８）：１４２８１−１４２９２．Ｓｈｉｎｊｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｉｐｐｏｎ  Ｋａｇａｋｋａｉ  Ｋｏｅｎ  Ｙｏｋｏｓｈｕ，２０００，７８（２）：７３１）。
【０１１６】
治療有効量：本明細書で使用される、「治療有効量」または「薬理学的に有効な量」とは、意図した薬理学的、治療的または予防的結果を生成するのに有効な化合物（複数可）の量を意味する。
【０１１７】
トリループ：本明細書で使用される、「トリループ」という用語は、隣接するワトソン・クリックのハイブリッド形成ヌクレオチドの安定性に寄与する安定な二次構造を形成する３つのヌクレオチドからなるループ（一本鎖領域）を指す。理論に限定されるものではないが、トリループは、該トリループ内のヌクレオチドの非ワトソン・クリック塩基対合及び塩基スタッキング相互作用により安定され得る。（Ｙｏｓｈｉｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９７；３６，  ４７６１−４７６７）。トリループもまた、ランダムな塩基からなる単純モデルループ配列から予測されるよりも高い、隣接する二本鎖の融解温度（Ｔｍ）の上昇をもたらし得る。トリループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、及びそれらの組み合わせを含み得る。トリループの例としては、ＧＮＡファミリーのトリループ（例えば、ＧＡＡ、ＧＴＡ、ＧＣＡ、及びＧＧＡ）が挙げられる。（Ｙｏｓｈｉｚａｗａ  １９９７）。ある特定の実施形態では、該トリループは、ヌクレオチド配列ＧＡＡを有する。
【０１１８】
ユニバーサル核酸塩基：本明細書で使用される、「ユニバーサル核酸塩基」とは、天然に存在する核酸に通常見られる塩基の２つ以上と対合することができるため、二本鎖においてかかる天然に存在する塩基を置換することができる塩基を指す。該塩基は、天然に存在する塩基の各々と対合可能である必要はない。例えば、ある特定の塩基は、唯一もしくは選択的にプリンと、または唯一もしくは選択的にピリミジンと対合する。該ユニバーサル核酸塩基は、ワトソン・クリックまたは非ワトソン・クリック相互作用（例えば、フーグスティーン相互作用）を介した水素結合を形成することにより塩基対合し得る。代表的なユニバーサル核酸塩基としては、イノシン及びその誘導体が挙げられる。
【０１１９】
Ｗｎｔ活性化疾患または障害：本明細書で使用される、「Ｗｎｔ活性化」疾患または障害とは、活性化Ｗｎｔ／β−カテニン経路と関連する疾患または障害を指す。「Ｗｎｔ関連」疾患または障害としては、がん及び／または増殖性の疾患、状態、または障害が挙げられ、結腸直腸癌、デスモイド、子宮内膜癌、胃癌、肝細胞癌、肝芽腫、腎臓癌（ウィルムス腫瘍）、髄芽腫、黒色腫、卵巣癌（類内膜）、膵臓癌、毛母腫、前立腺癌、甲状腺（未分化）癌及び子宮（子宮内膜）癌が挙げられる。１つの実施形態では、該「Ｗｎｔ活性化」疾患または障害は、結腸直腸癌、肝細胞癌、または黒色腫である。上記のがん及び／または増殖性疾患を含めた疾患または障害は、該疾患または障害のＷｎｔ活性化型及び上記非Ｗｎｔ活性化疾患または障害の定義と一致する該疾患または障害の非Ｗｎｔ活性化型の両方を含み得ることが理解される。
【０１２０】
Ｗｎｔ／β−カテニン経路：本明細書で使用される、「Ｗｎｔ／β−カテニン経路」とは、β−カテニンを含む下流のシグナル伝達経路を開始するＷｎｔリガンド、受容体、及び共受容体の組み合わせによって媒介される、細胞の分子シグナル伝達経路を指す（例えば、図１４参照）。Ｗｎｔシグナル伝達がない場合、β−カテニンは、細胞質のユビキチン化による分解の標的とされる。Ｗｎｔリガンド及びＷｎｔシグナル伝達の存在下で、β−カテニンは安定化され、細胞核に移動し、そこでこれが転写因子、例えば、Ｔ細胞転写因子（ＴＣＦ）及びリンパ系エンハンスド転写因子（ＬＥＦ）と相互作用し、遺伝子転写を活性化し得る。Ｗｎｔ／β−カテニン経路の脱制御及び活性化は、β−カテニン遺伝子または腺腫様多発結腸ポリープ（ＡＰＣ）をコードする遺伝子の変異によって最も頻繁に引き起こされ、これは、β−カテニン機能を負に調節するが、該Ｗｎｔ／β−カテニン経路の他の成分、例えば、アキシン、ＬＥＦ、及びＩＣＡＴをコードする遺伝子の変異によっても引き起こされ得る。
【発明を実施するための形態】
【０１２１】
本出願は、免疫療法（例えば、免疫チェックポイント分子の遮断）に反応しないがんを含めたがんを治療するための新たな方法及び組成物を提供する。通常、免疫療法に反応しないがんは、当該腫瘍の微小環境で炎症性ＣＤ８＋Ｔ細胞がほとんどまたは全くない、非Ｔ細胞炎症性表現型（別名コールドなまたは非炎症性腫瘍）を特徴とする。ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２０１８／１８３４２０号に開示の通り、β−カテニンの発現を低減させることで、コールドなまたは非炎症性腫瘍をホットなまたは炎症性腫瘍へと変換させ、活性化Ｗｎｔ／β−カテニン経路を有さない腫瘍においても、該免疫療法の効果を高めることができる。換言すれば、β−カテニン阻害剤、例えば、β−カテニン核酸阻害剤分子と、免疫療法を組み合わせることで、通常は免疫療法に反応しないコールドなまたは非炎症性腫瘍を治療することが可能である。ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２０１８／１８３４２０号に開示の通り、この併用療法アプローチが、活性化Ｗｎｔ／β−カテニン経路を有する及び有さないがんを含めた幅広いがんにわたって、インビボでの腫瘍増殖を阻害するために用いられた。
【０１２２】
本出願は、ＩＤＯの発現及びβ−カテニンの発現の両方を低減することが、ある特定のコールドなまたは非炎症性腫瘍をホットなまたは炎症性腫瘍に変換し、免疫療法の効果を高める別の戦略であることを実証する。β−カテニン阻害剤及び免疫療法の組み合わせが、がんのマウスモデルにおける腫瘍増殖を有意に遅延させることを示したと同時に、β−カテニン阻害剤、ＩＤＯ阻害剤及び免疫療法の３つの組み合わせが、同じマウスモデルにおいて実際に腫瘍退縮を誘導した。従って、β−カテニン及びＩＤＯの両方の発現を低減することで、ある特定の非炎症性またはコールドな腫瘍の免疫療法に対する感受性を高め、通常は免疫療法に反応しないある特定のコールドなまたは非炎症性腫瘍を治療するための改良された方法を提供することができる。
【０１２３】
通常、β−カテニン核酸阻害剤分子は、β−カテニンの発現を低減するために使用される。しかしながら、β−カテニンまたはＷｎｔ／β−カテニン経路の構成要素を標的とする小分子、ペプチド、及び抗体が挙げられるがこれらに限定されないβ−カテニンの発現を低減する任意のβ−カテニン阻害剤またはＷｎｔ／β−カテニン経路阻害剤は、本明細書に記載の方法及び組成物に使用することができる。
【０１２４】
核酸阻害剤分子
【０１２５】
ある特定の実施形態では、β−カテニンの発現は、核酸阻害剤分子を用いて低減される。一本鎖及び二本鎖オリゴヌクレオチドを含めた様々なオリゴヌクレオチド構造が、核酸阻害剤分子として使用されている。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、該核酸阻害剤分子は、センス（またはパッセンジャー）鎖及びアンチセンス（またはガイド）鎖を含む二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である。様々な二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子構造が当技術分野で知られている。例えば、ＲＮＡｉ阻害剤分子の初期の研究では、各鎖が１９〜２５ヌクレオチドのサイズを有し、１〜５ヌクレオチドの３’−オーバーハングを少なくとも１つ備えた二本鎖核酸分子に注目した（例えば、米国特許第８，３７２，９６８号参照）。その後、Ｄｉｃｅｒ酵素でインビボにてプロセッシングされてＲＮＡｉ阻害剤分子を活性化する、より長い二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子が発展した（例えば、米国特許第８，８８３，９９６号参照）。その後の研究では、当該鎖の一方が、熱力学的に安定化されたテトラループ構造を含む構造等、少なくとも１本の鎖の少なくとも１つの末端が、該分子の二本鎖標的領域を超えて延長された、延長二本鎖核酸阻害剤分子が発展した（例えば、米国特許第８，５１３，２０７号、米国特許第８，９２７，７０５号、ＷＯ２０１０／０３３２２５、及びＷＯ２０１６／１００４０１参照。これらは、参照することにより、これらの二本鎖核酸阻害剤分子の開示に関して組み込まれる）。これらの構造には、一本鎖の延長（分子の片側または両側）及び二本鎖の延長が含まれる。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、１５〜６６、２５〜４０、または１９〜２５ヌクレオチドの範囲である。いくつかの実施形態では、該センス鎖は、３０ヌクレオチド未満、例えば、１９〜２４ヌクレオチド、例えば、２１ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、該アンチセンス鎖は、３０ヌクレオチド未満、例えば、１９〜２４ヌクレオチド、例えば、２１、２２、または２３ヌクレオチドである。通常、該二本鎖構造は、１５〜５０、例えば、１５〜３０、例えば、１８〜２６、より典型的には１９〜２３、及びある特定の例では、１９〜２１塩基対の長さである。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、さらに、１つ以上の一本鎖ヌクレオチドのオーバーハング（複数可）を含み得る。通常、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、１〜１０、１〜４、または１〜２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有する。該一本鎖オーバーハングは、通常、センス鎖の３’末端及び／またはアンチセンス鎖の３’末端に位置している。ある特定の実施形態では、１〜１０、１〜４、または１〜２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングは、アンチセンス鎖の５’末端に位置している。ある特定の実施形態では、１〜１０、１〜４、または１〜２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングは、センス鎖の５’末端に位置している。ある特定の実施形態では、１〜２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングは、アンチセンス鎖の３’末端に位置している。ある特定の実施形態では、該ｄｓＲＮＡ阻害剤分子は、平滑末端を、通常はアンチセンス鎖の５’末端に有する。
【０１２９】
ある特定の実施形態では、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、該分子の右側（パッセンジャー鎖の３’末端／ガイド鎖の５’末端）に２つのヌクレオチドの３’パッセンジャー鎖オーバーハング及び該分子の左側（パッセンジャー鎖の５’末端／ガイド鎖の３’末端）に２つのヌクレオチドの３’ガイド鎖オーバーハングを有する２１ヌクレオチド長のガイド鎖及び２１ヌクレオチド長のパッセンジャー鎖を有する。かかる分子では、１９塩基対の二本鎖領域が存在する。
【０１３０】
ある特定の実施形態では、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、該分子の右側（パッセンジャー鎖の３’末端／ガイド鎖の５’末端）に平滑末端及び該分子の左側（パッセンジャー鎖の５’末端／ガイド鎖の３’末端）に２つのヌクレオチドの３’ガイド鎖オーバーハングを有する２３ヌクレオチド長のガイド鎖及び２１ヌクレオチド長のパッセンジャー鎖を有する。かかる分子では、２１塩基対の二本鎖領域が存在する。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、ステム及びループを含む。通常、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のパッセンジャー鎖の３’末端領域または５’末端領域は、一本鎖ステム及びループ構造を形成する。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、ステム及びテトラループまたはトリループを含む。ある特定の実施形態では、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、ガイド鎖及びパッセンジャー鎖を含み、該パッセンジャー鎖はステム及びテトラループまたはトリループを含み、２０〜６６ヌクレオチドの長さの範囲である。通常、該ガイド及びパッセンジャー鎖は、各々が５’及び３’末端を有する別々の鎖であり、連続したオリゴヌクレオチドを形成しない（「ニック」構造と呼ばれることがある）。
【０１３３】
ある特定のこれら実施形態では、該ガイド鎖は、１５〜４０ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、該ステム及びテトラループまたはトリループを含むパッセンジャー鎖の延長部分は、該鎖の３’末端である。ある特定の他の実施形態では、該ステム及びテトラループまたはトリループを含むパッセンジャー鎖の延長部分は、該鎖の５’末端である。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、ステム及びテトラループを含むｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のパッセンジャー鎖は、２６〜４０ヌクレオチド長であり、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のガイド鎖は、２０〜２４ヌクレオチドを含み、該パッセンジャー鎖及びガイド鎖は、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。ある特定の実施形態では、該パッセンジャー鎖は、２６〜３０ヌクレオチド長であり、該ステムは、１、２、または３塩基対の長さであり、１つ以上の二環式ヌクレオチドを含む。
【０１３５】
ある特定の実施形態では、ステム及びトリループを含むｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のパッセンジャー鎖は、２７〜３９ヌクレオチド長であり、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のガイド鎖は、２０〜２４ヌクレオチドを含み、該パッセンジャー鎖及びガイド鎖は、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。ある特定の実施形態では、該パッセンジャー鎖は、２７〜２９ヌクレオチド長であり、該ステムは、２または３塩基対の長さであり、１つ以上の二環式ヌクレオチドを含む。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、（ａ）ステム及びテトラループを含み、３６ヌクレオチド長のパッセンジャー鎖であって、該パッセンジャー鎖の５’末端から最初の２０ヌクレオチドは、ガイド鎖に相補的であり、該パッセンジャー鎖のそれに続く１６ヌクレオチドがステム及びテトラループを形成する該パッセンジャー鎖、ならびに（ｂ）２２ヌクレオチド長であり、その３’末端に２つのヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有するガイド鎖を含み、該ガイド及びパッセンジャー鎖は、連続したヌクレオチドを形成しない別々の鎖である。
【０１３７】
ある特定の実施形態では、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、（ａ）ステム及びトリループを含み、３５ヌクレオチド長のパッセンジャー鎖であって、該パッセンジャー鎖の５’末端から最初の２０ヌクレオチドは、ガイド鎖に相補的であり、該パッセンジャー鎖のそれに続く１６ヌクレオチドがステム及びトリループを形成する該パッセンジャー鎖、ならびに（ｂ）２２ヌクレオチド長であり、その３’末端に２つのヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有するガイド鎖を含み、該ガイド及びパッセンジャー鎖は、連続したヌクレオチドを形成しない別々の鎖である。
【０１３８】
ある特定の実施形態では、該核酸阻害剤分子は、一本鎖核酸阻害剤分子である。一本鎖核酸阻害剤分子は当技術分野で知られている。例えば、最近の取り組みで、ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子の活性が実証された（例えば、Ｍａｔｓｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，２０１６，２４（５）：９４６−５５参照）。また、アンチセンス分子は、特定の標的遺伝子の発現を低減させるために数十年間使用されている。Ｐｅｌｅｃｈａｎｏ  ａｎｄ  Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０１３，１４：８８０−９３。これら構造の共通のテーマに関する多くのバリエーションが、様々な標的用に発展している。一本鎖核酸阻害剤分子としては、例えば、従来のアンチセンスオリゴヌクレオチド、マイクロＲＮＡ、リボザイム、アプタマー、及びｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子が挙げられ、これらはすべて当技術分野で既知である。
【０１３９】
ある特定の実施形態では、該核酸阻害剤分子は、１４〜５０、１６〜３０、または１５〜２５ヌクレオチドを有するｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子である。他の実施形態では、該ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、１８〜２２または２０〜２２ヌクレオチドを有する。ある特定の実施形態では、該ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、２０ヌクレオチドを有する。他の実施形態では、該ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、２２ヌクレオチドを有する。ある特定の実施形態では、該核酸阻害剤分子は、外来ＲＮＡｉ阻害剤分子または天然のｍｉＲＮＡを阻害する一本鎖オリゴヌクレオチドである。
【０１４０】
ある特定の実施形態では、該核酸阻害剤分子は、８〜８０、１２〜５０、１２〜３０、または１２〜２２ヌクレオチドを有する一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、該一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１６〜２０、１６〜１８、１８〜２２または１８〜２０ヌクレオチドを有する。
【０１４１】
修飾
【０１４２】
通常、該核酸阻害剤分子の複数のヌクレオチドサブユニットは、ヌクレアーゼ耐性または低下した免疫原性等、該分子の様々な特徴を改善するために修飾される。例えば、Ｂｒａｍｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００９），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，３７，  ２８６７−２８８１を参照されたい。多くのヌクレオチドの、特に、核酸阻害剤分子用の修飾が、オリゴヌクレオチドの分野で使用されている。かかる修飾は、糖部分、ホスホエステル結合、及び核酸塩基を含めた該ヌクレオチドの任意の部分で行われ得る。該核酸阻害剤分子のある特定の実施形態では、１つからすべてのヌクレオチドが、当該糖部分の２’−炭素において、例えば、当技術分野で既知の、及び本明細書に記載の２’−炭素修飾を用いて修飾される。２’−炭素の修飾の代表例としては、２’−Ｆ、２’−Ｏ−メチル（「２’−ＯＭｅ」または「２’−ＯＣＨ3」）、２’−Ｏ−メトキシエチル（「２’−ＭＯＥ」または「２’−ＯＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ3」）が挙げられるがこれらに限定されない。修飾は、本明細書に記載の通り、該ヌクレオチドの糖部分の他の部分、例えば、５’−炭素でも行われ得る。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、該糖部分の環構造は修飾され、これらに限定されないが、ロックド核酸（「ＬＮＡ」）（例えば、Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８），Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５４，３６０７−３６３０参照）、架橋核酸（「ＢＮＡ」）（例えば、米国特許第７，４２７，６７２号及びＭｉｔｓｕｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．（２００９），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，３７（４）：１２２５−３８参照）、ならびにアンロックド核酸（「ＵＮＡ」）（例えば、Ｓｎｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ−Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，２，ｅ１０３（ｄｏｉ：１０．１０３８／ｍｔｎａ．２０１３．３６）参照）が挙げられる。
【０１４４】
修飾核酸塩基は、当技術分野で既知の、及び本明細書に記載の、アデニン、グアニン、シトシン、チミン及びウラシル以外の１’位での核酸塩基を含む。ある特定の実施形態では、該修飾またはユニバーサル核酸塩基は、窒素塩基である。ある特定の実施形態では、該修飾核酸塩基は窒素原子を含まない。例えば、米国公開特許出願第２００８０２７４４６２号を参照されたい。ある特定の実施形態では、該修飾ヌクレオチドは核酸塩基を含まない（脱塩基）。修飾核酸塩基の代表例は、５’−メチルシトシンである。
【０１４５】
天然に存在するＲＮＡ及びＤＮＡのヌクレオチド間結合は、３’−５’ホスホジエステル結合である。修飾ホスホジエステル結合としては、当技術分野で既知の、及び本明細書に記載の、リン原子を含むヌクレオチド間結合、及びリン原子を含まないヌクレオチド間結合を含めた天然に存在しないヌクレオチド間結合基が挙げられる。通常、該核酸阻害剤分子は、本明細書に記載の１つ以上のリン含有ヌクレオチド間結合基を含む。他の実施形態では、該核酸阻害剤分子のヌクレオチド間結合基の１つ以上は、本明細書に記載の非リン含有結合である。ある特定の実施形態では、該核酸阻害剤分子は、１つ以上のリン含有ヌクレオチド間結合基及び１つ以上の非リン含有ヌクレオチド間結合基を含む。
【０１４６】
ある特定の実施形態では、該二本鎖核酸阻害剤分子は、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合基を含む。ある特定の実施形態では、該二本鎖核酸阻害剤分子は、１０個未満、例えば、５個未満のホスホロチオエートヌクレオチド間結合基を含む。ある特定の実施形態では、該二本鎖核酸阻害剤分子は、４つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合基を含む。
【０１４７】
該核酸阻害剤分子の５’末端は、天然の置換基、例えば、ヒドロキシルまたはリン酸基を含み得る。ある特定の実施形態では、ヒドロキシル基は、該核酸阻害剤分子の５’末端に結合している。ある特定の実施形態では、リン酸基は、該核酸阻害剤分子の５’末端に結合している。通常、該リン酸は、オリゴヌクレオチド合成の前にモノマーに付加される。他の実施形態では、５’−リン酸化は、天然には、サイトゾルに核酸阻害剤分子が導入された後に、例えば、細胞質Ｃｌｐ１キナーゼによって達成される。いくつかの実施形態では、該５’末端リン酸は、５’−モノリン酸［（ＨＯ）2（Ｏ）Ｐ−Ｏ−５’］、５’−二リン酸［（ＨＯ）2（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’］または５’−三リン酸［（ＨＯ）2（Ｏ）Ｐ−Ｏ−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’］等のリン酸基である。
【０１４８】
該核酸阻害剤分子の５’末端もまた修飾され得る。例えば、いくつかの実施形態では、該核酸阻害剤分子の５’末端は、ホスホロアミデート［（ΗΟ）2（Ｏ）Ρ−ΝΗ−５’、（ΗΟ）（ΝΗ2）（Ｏ）Ρ−Ｏ−５’］に結合している。ある特定の実施形態では、該核酸阻害剤分子の５’末端は、リン酸模倣体に結合している。適切なリン酸模倣体としては、５’−ホスホネート、例えば、５’−メチレンホスホネート（５’−ＭＰ）、５’−（Ｅ）−ビニルホスホネート（５’−ＶＰ）が挙げられる。Ｌｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２０１２，  １５０−８８３−９４、ＷＯ２０１４／１３０６０７。他の適切なリン酸模倣体としては、参照することにより全体として本明細書に組み込まれるＰＣＴ国際公開第ＷＯ２０１８／０４５３１７号に記載のオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドの糖部分（例えば、リボースもしくはデオキシリボースまたはそのアナログ）の４’−炭素に結合した４’−リン酸アナログが挙げられる。例えば、いくつかの実施形態では、該核酸阻害剤分子の５’末端は、オキシメチルホスホネートに結合し、該オキシメチル基の酸素原子は、該糖部分またはそのアナログの４’−炭素に結合している。他の実施形態では、該リン酸アナログは、チオメチルホスホネートまたはアミノメチルホスホネートであり、該チオメチル基の硫黄原子または該アミノメチル基の窒素原子は、該糖部分またはそのアナログの４’−炭素に結合している。
【０１４９】
ある特定の実施形態では、該核酸阻害剤分子は、１つ以上のデオキシリボヌクレオチドを含む。通常、該核酸阻害剤分子は、５個未満のデオキシリボヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、該核酸阻害剤分子は、１つ以上のリボヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、該核酸阻害剤分子のヌクレオチドのすべてがリボヌクレオチドである。
【０１５０】
ある特定の実施形態では、核酸阻害剤分子の１つまたは２つのヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分で可逆的に修飾される。通常、該グルタチオン感受性部分は、該糖部分の２’−炭素に配置されるとともに、スルホニル基を含む。ある特定の実施形態では、該グルタチオン感受性部分は、例えば、参照することにより全体として本明細書に組み込まれるＰＣＴ国際公開第ＷＯ２０１８／０３９３６４号に記載のホスホラミダイトオリゴヌクレオチド合成法に適合する。ある特定の実施形態では、核酸阻害剤分子の３つ以上のヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分で可逆的に修飾される。ある特定の実施形態では、該ヌクレオチドのほとんどが、グルタチオン感受性部分で可逆的に修飾される。ある特定の実施形態では、核酸阻害剤分子のすべてのまたは実質的にすべてのヌクレオチドが、グルタチオン感受性部分で可逆的に修飾される。
【０１５１】
少なくとも１つのグルタチオン感受性部分は、通常、一本鎖核酸阻害剤分子の５’もしくは３’末端ヌクレオチドに、または、二本鎖核酸阻害剤分子のパッセンジャー鎖もしくはガイド鎖の５’もしくは３’末端ヌクレオチドに配置される。しかしながら、該少なくとも１つのグルタチオン感受性部分は、該核酸阻害剤分子の任意の目的のヌクレオチドに配置され得る。
【０１５２】
ある特定の実施形態では、核酸阻害剤分子は、完全に修飾され、この場合、該センス鎖及び／またはアンチセンス鎖のすべてのヌクレオチドが修飾され、通常、すべてのヌクレオチドは、該糖部分の２’位で修飾される。ある特定の実施形態では、該完全に修飾された核酸阻害剤分子は、可逆的修飾を含まない。いくつかの実施形態では、一本鎖核酸阻害剤分子、または二本鎖核酸阻害剤分子のガイド鎖の少なくとも１つ、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０ヌクレオチドが修飾される。いくつかの実施形態では、二本鎖核酸阻害剤分子のパッセンジャー鎖の少なくとも１つ、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６ヌクレオチドが修飾される。
【０１５３】
ある特定の実施形態では、該完全に修飾された核酸阻害剤分子は、１つ以上の可逆的グルタチオン感受性部分で修飾されている。ある特定の実施形態では、核酸阻害剤分子の実質的にすべてのヌクレオチドが修飾される。ある特定の実施形態では、核酸阻害剤分子のヌクレオチドの半分以上が、可逆的修飾以外の化学的修飾により修飾される。ある特定の実施形態では、核酸阻害剤分子のヌクレオチドの半分未満が、可逆的修飾以外の化学的修飾により修飾される。修飾は、該核酸阻害剤分子において集団で生じ得るか、または、異なる修飾ヌクレオチドが散在し得る。
【０１５４】
該核酸阻害剤分子のある特定の実施形態では、１つからすべてのヌクレオチドが、２’−炭素で修飾される。ある特定の実施形態では、該核酸阻害剤分子（またはそのセンス鎖及び／またはアンチセンス鎖）は、２’−Ｆ、２’−Ｏ−Ｍｅ、及び／または２’−ＭＯＥで部分的にまたは完全に修飾される。該核酸阻害剤分子のある特定の実施形態では、１つからすべてのリン原子が修飾され、１つからすべてのヌクレオチドが、当該糖部分の２’−炭素で修飾される。
【０１５５】
ある特定の実施形態では、該核酸阻害剤分子は、１つ以上の二環式ヌクレオチドを含む。本明細書に開示のトリループ及びテトラループ含有二本鎖核酸阻害剤分子は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、また、ある特定の実施形態では、センス鎖に存在するステムループ構造のステム部分に少なくとも１つの二環式ヌクレオチドを含む場合があり、各々が参照することにより全体として本明細書に組み込まれる、米国仮出願第６２／６５７，４２８号、出願日２０１８年４月１３日、米国仮出願第６２／７７８，７５５号、出願日２０１８年１２月１２日、及び米国仮出願第６２／７７８，７５９号、出願日２０１８年１２月１２日に記載の通りである。
【０１５６】
該二環式ヌクレオチドは、二環式糖部分を含む。ある特定の実施形態では、該二環式糖部分は、４〜７員の第一の環、及び該糖部分の第一の環の任意の２つの原子を接続するＮｏｒｔｈ型の糖配座を形成して第二の環を形成する架橋を含む。ある特定の実施形態では、該架橋は、該第一の環の２’−炭素と４’−炭素を接続して第二の環を形成する。
【０１５７】
通常、該架橋は２〜８個の原子を含む。ある特定の実施形態では、該架橋は３個の原子を含む。ある特定の実施形態では、該架橋は４個の原子を含む。ある特定の実施形態では、該架橋は５個の原子を含む。ある特定の実施形態では、該架橋は６個の原子を含む。ある特定の実施形態では、該架橋は７個の原子を含む。ある特定の実施形態では、該架橋は８個の原子を含む。ある特定の実施形態では、該架橋は８個を超える原子を含む。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、該二環式糖部分は、当該フラノシルの２’−炭素と４’−炭素を接続して第二の環を形成する架橋を含む置換フラノシルである。ある特定の実施形態では、該二環式ヌクレオチドは、式Ｉの構造を有する：
2021509669.tif 000005
【０１５９】
式中、Ｂは核酸塩基であり、
【０１６０】
Ｇは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ2、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ2−Ｃ6アルキニル、置換Ｃ1−Ｃ6アルキル、置換Ｃ2−Ｃ6アルケニル、置換Ｃ2−Ｃ6アルキニル、アシル、置換アシル、置換アミド、チオール、または置換チオであり、
【０１６１】
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ1であり、Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ベンゼンまたはピレンであり、
【０１６２】
Ｗa及びＷbは、各々独立して、Ｈ、ＯＨ、ヒドロキシル保護基、リン部分、または式Ｉで表されるヌクレオチドを別のヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオチド間結合基であり、ＷaまたはＷbの少なくとも一方は、式Ｉで表されるヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオチド間結合基である。
【０１６３】
式Ｉのある特定の実施形態では、ＧはＨであり、ＸはＮＲ1であり、Ｒ1は、ベンゼンまたはピレンである。式Ｉのある特定の実施形態では、ＧはＨであり、ＸはＳである。
【０１６４】
式Ｉのある特定の実施形態では、ＧはＨであり、ＸはＯである：
2021509669.tif 000006
【０１６５】
式Ｉのある特定の実施形態では、ＧはＨであり、ＸはＮＲ1であり、Ｒ1は、Ｈ、ＣＨ3、またはＯＣＨ3である：
2021509669.tif 000007
【０１６６】
式Ｉのある特定の実施形態では、ＧはＯＨまたはＮＨ2であり、ＸはＯである。
【０１６７】
式Ｉのある特定の実施形態では、ＧはＯＨであり、ＸはＯである：
2021509669.tif 000008
【０１６８】
式Ｉのある特定の実施形態では、ＧはＮＨ2であり、ＸはＯである：
2021509669.tif 000009
【０１６９】
式Ｉのある特定の実施形態では、Ｇは、ＣＨ3またはＣＨ2ＯＣＨ3であり、ＸはＯである。式Ｉのある特定の実施形態では、ＧはＣＨ3であり、ＸはＯである：
2021509669.tif 000010
【０１７０】
式Ｉのある特定の実施形態では、ＧはＣＨ2ＯＣＨ3であり、ＸはＯである：
2021509669.tif 000011
【０１７１】
ある特定の実施形態では、該二環式ヌクレオチドは、式ＩＩの構造を有する：
2021509669.tif 000012
【０１７２】
式中、Ｂは核酸塩基であり、
【０１７３】
Ｑ1は、ＣＨ2またはＯであり、
【０１７４】
Ｘは、ＣＨ2、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ1であり、Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ベンゼンまたはピレンであり、
【０１７５】
Ｑ1がＯの場合、ＸはＣＨ2であり、
【０１７６】
Ｑ1がＣＨ2の場合、Ｘは、ＣＨ2、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ1であり、Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ベンゼンまたはピレンであり、
【０１７７】
Ｗa及びＷbは、各々独立して、Ｈ、ＯＨ、ヒドロキシル保護基、リン部分、または式ＩＩで表されるヌクレオチドを別のヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオチド間結合基であり、ＷaまたはＷbの少なくとも一方は、式ＩＩで表されるヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオチド間結合基である。
【０１７８】
式ＩＩのある特定の実施形態では、Ｑ1はＯであり、ＸはＣＨ2である：
2021509669.tif 000013
【０１７９】
式ＩＩのある特定の実施形態では、Ｑ1はＣＨ2であり、ＸはＯである：
2021509669.tif 000014
【０１８０】
式ＩＩのある特定の実施形態では、Ｑ1はＣＨ2であり、ＸはＮＲ1であり、Ｒ1は、Ｈ、ＣＨ3またはＯＣＨ3である：
2021509669.tif 000015
【０１８１】
式ＩＩのある特定の実施形態では、Ｑ1はＣＨ2であり、ＸはＮＨである：
2021509669.tif 000016
【０１８２】
ある特定の実施形態では、該二環式ヌクレオチドは、式ＩＩＩの構造を有する：
2021509669.tif 000017
【０１８３】
式中、Ｂは核酸塩基であり、
【０１８４】
Ｑ2は、ＯまたはＮＲ1であり、Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ベンゼンまたはピレンであり、
【０１８５】
Ｘは、ＣＨ2、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ1であり、Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ベンゼンまたはピレンであり、
【０１８６】
Ｑ2がＯの場合、ＸはＮＲ1であり、
【０１８７】
Ｑ2がＮＲ1の場合、Ｘは、ＯまたはＳであり、
【０１８８】
Ｗa及びＷbは、各々独立して、Ｈ、ＯＨ、ヒドロキシル保護基、リン部分、または式ＩＩＩで表されるヌクレオチドを別のヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオチド間結合基であり、ＷaまたはＷbの少なくとも一方は、式ＩＩＩで表されるヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオチド間結合基である。
【０１８９】
式ＩＩＩのある特定の実施形態では、Ｑ2はＯであり、ＸはＮＲ1である。式ＩＩＩのある特定の実施形態では、Ｑ2はＯであり、ＸはＮＲ1であり、Ｒ1はＣ1−Ｃ6アルキルである。式ＩＩＩのある特定の実施形態では、Ｑ2はＯであり、ＸはＮＲ1であり、Ｒ1は、ＨまたはＣＨ3である。
【０１９０】
式ＩＩＩのある特定の実施形態では、Ｑ2はＯであり、ＸはＮＲ1であり、Ｒ1はＣＨ3である：
2021509669.tif 000018
【０１９１】
式ＩＩＩのある特定の実施形態では、Ｑ2はＮＲ1であり、ＸはＯである。式ＩＩＩのある特定の実施形態では、Ｑ2はＮＲ1であり、Ｒ1はＣ1−Ｃ6アルキルであり、ＸはＯである。
【０１９２】
式ＩＩＩのある特定の実施形態では、Ｑ2はＮＣＨ3であり、ＸはＯである：
2021509669.tif 000019
【０１９３】
ある特定の実施形態では、該二環式ヌクレオチドは、式ＩＶの構造を有する：
2021509669.tif 000020
【０１９４】
式中、Ｂは核酸塩基であり、
【０１９５】
Ｐ1及びＰ3は、ＣＨ2であり、Ｐ2は、ＣＨ2またはＯであり、Ｐ4はＯであり、
【０１９６】
Ｗa及びＷbは、各々独立して、Ｈ、ＯＨ、ヒドロキシル保護基、リン部分、または式ＩＶで表されるヌクレオチドを別のヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオチド間結合基であり、ＷaまたはＷbの少なくとも一方は、式ＩＶで表されるヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオチド間結合基である。式ＩＶのある特定の実施形態では、Ｐ1、Ｐ2、及びＰ3は、ＣＨ2であり、Ｐ4はＯである：
2021509669.tif 000021
【０１９７】
式ＩＶのある特定の実施形態では、Ｐ1及びＰ3はＣＨ2であり、Ｐ2はＯであり、Ｐ4はＯである：
2021509669.tif 000022
【０１９８】
ある特定の実施形態では、該二環式ヌクレオチドは、式ＶａまたはＶｂの構造を有する：
2021509669.tif 000023
【０１９９】
式中、Ｂは核酸塩基であり、
【０２００】
ｒ１、ｒ２、ｒ３、及びｒ４は、各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ12アルキル、置換Ｃ1−Ｃ12アルキル、Ｃ2−Ｃ12アルケニル、置換Ｃ2−Ｃ12アルケニル、Ｃ2−Ｃ12アルキニル、置換Ｃ2−Ｃ12アルキニル、Ｃ1−Ｃ12アルコキシ、置換Ｃ1−Ｃ12アルコキシ、ＯＴ1、ＳＴ1、ＳＯＴ1、ＳＯ2Ｔ1、ＮＴ1Ｔ2、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＴ1、Ｃ（＝Ｏ）ＮＴ1Ｔ2、Ｃ（＝Ｏ）Ｔ1、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＴ1Ｔ２、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＴ1Ｔ2、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＴ1Ｔ2もしくはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＴ1Ｔ2であり、Ｔ１及びＴ２の各々は、独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、もしくは置換Ｃ1−Ｃ16アルキルであるか、または
【０２０１】
ｒ１及びｒ２もしくはｒ３及びｒ４が合わせて＝Ｃ（ｒ５）（ｒ６）であり、ｒ５及びｒ６は、各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ12アルキル、もしくは置換Ｃ1−Ｃ12アルキルであり、
【０２０２】
Ｗa及びＷbは、各々独立して、Ｈ、ＯＨ、ヒドロキシル保護基、リン部分、または式Ｖで表されるヌクレオチドを別のヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオチド間結合基であり、ＷaまたはＷbの少なくとも一方は、式Ｖで表されるヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオチド間結合基である。
【０２０３】
ある特定の実施形態では、該二環式糖部分は、当該フラノシルの２’−炭素と４’−炭素を接続して第二の環を形成する架橋を含む置換フラノシルであり、該フラノシルの２’−炭素と４’−炭素を接続する架橋としては：
ａ）４’−ＣＨ2−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’及び４’−ＣＨ2−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’、ここで、Ｒは、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキル、または、例えば、４’−ＣＨ2−ＮＨ−Ｏ−２’（別名ＢＮＡNC）、４’−ＣＨ2−Ｎ（ＣＨ3）−Ｏ−２’（別名ＢＮＡNC［ＮＭｅ］）を含めた保護基（参照することにより全体として本明細書に組み込まれる米国特許第７，４２７，６７２号に記載の通り）、
ｂ）４’−ＣＨ2−２’、４’−（ＣＨ2）2−２’、４’−（ＣＨ2）3−２’、４’−（ＣＨ2）−Ｏ−２’（別名ＬＮＡ）、４’−（ＣＨ2）−Ｓ−２’、４’−（ＣＨ2）2−Ｏ−２’（別名ＥＮＡ）、４’−ＣＨ（ＣＨ3）−Ｏ−２’（別名ｃＥｔ）、及び４’−ＣＨ（ＣＨ2ＯＣＨ3）−Ｏ−２’（別名ｃＭＯＥ）、ならびにそれらのアナログ（参照することにより全体として本明細書に組み込まれる米国特許第７，３９９，８４５号に記載の通り）、
ｃ）４’−Ｃ（ＣＨ3）（ＣＨ3）−Ｏ−２’及びそのアナログ（参照することにより全体として本明細書に組み込まれる米国特許第８，２７８，２８３号に記載の通り）、
ｄ）４’−ＣＨ2−Ｎ（ＯＣＨ3）−２’及びそのアナログ（参照することにより全体として本明細書に組み込まれる米国特許第８，２７８，４２５号に記載の通り）、
ｅ）４’−ＣＨ2−Ｏ−Ｎ（ＣＨ3）−２’及びそのアナログ（参照することにより全体として本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００４／０１７１５７０号に記載の通り）、
ｆ）４’−ＣＨ2−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ3）−２’及びそのアナログ（参照することにより全体として本明細書に組み込まれるＣｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，  ７４，  １１８−３４に記載の通り）、ならびに
ｇ）４’−ＣＨ2−Ｃ（＝ＣＨ2）−２’及びそのアナログ（参照することにより全体として本明細書に組み込まれる米国特許第８，２７８，４２６号に記載の通り）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２０４】
ある特定の実施形態では、該二環式ヌクレオチド（ＢＮ）は、下記に示す、以下のうちの１つ以上である：（ａ）メチレンオキシＢＮ、（ｂ）エチレンオキシＢＮ、（ｃ）アミノオキシＢＮ、（ｄ）オキシアミノＢＮ、（ｅ）メチル（メチレンオキシ）ＢＮ（別名拘束エチルまたはｃＥＴ）、（ｆ）メチレン−チオＢＮ、（ｇ）メチレンアミノＢＮ、（ｈ）メチル炭素環式ＢＮ、及び（ｉ）プロピレン炭素環式ＢＮ。
【０２０５】
2021509669.tif 000024
【０２０６】
2021509669.tif 000025
【０２０７】
2021509669.tif 000026
【０２０８】
2021509669.tif 000027
【０２０９】
2021509669.tif 000028
【０２１０】
2021509669.tif 000029
【０２１１】
2021509669.tif 000030
【０２１２】
2021509669.tif 000031
【０２１３】
2021509669.tif 000032
【０２１４】
上記（ａ）〜（ｉ）の二環式ヌクレオチドにおいて、Ｂは核酸塩基であり、Ｒ2はＨまたはＣＨ3であり、Ｗa及びＷbは、各々独立して、Ｈ、ＯＨ、ヒドロキシル保護基、リン部分、または該二環式ヌクレオチドを別のヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオチド間結合基であり、ＷaまたはＷbの少なくとも一方は、該二環式ヌクレオチドをオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオチド間結合基である。
【０２１５】
該オキシアミノＢＮ（ｄ）の１つの実施形態では、Ｒ2は、下記の通りＣＨ3である（別名ＢＮＡNC［ＮＭｅ］）。
2021509669.tif 000033
【０２１６】
ある特定の実施形態では、かかる二環式糖部分を組み込む二環式糖部分及び二環式ヌクレオチドは、異性体配置によってさらに定義される。ある特定の実施形態では、該二環式糖部分またはヌクレオチドは、α−Ｌ配置である。ある特定の実施形態では、該二環式糖部分またはヌクレオチドは、β−Ｄ配置である。例えば、ある特定の実施形態では、該二環式糖部分またはヌクレオチドは、２’Ｏ，４’−Ｃ−メチレン架橋（２’−Ｏ−ＣＨ2−４’）を該α−Ｌ配置（α−Ｌ  ＬＮＡ）に含む。ある特定の実施形態では、該二環式糖部分またはヌクレオチドは、Ｒ配置である。ある特定の実施形態では、該二環式糖部分またはヌクレオチドは、Ｓ配置である。例えば、ある特定の実施形態では、該二環式糖部分またはヌクレオチドは、４’−ＣＨ（ＣＨ3）−Ｏ−２’架橋（すなわち、ｃＥｔ）を、該Ｓ配置に含む。
【０２１７】
β−カテニン核酸阻害剤
【０２１８】
本明細書に開示のβ−カテニン核酸阻害剤分子は、ＩＤＯ阻害剤及びある特定の疾患または障害、例えば、Ｗｎｔ活性化がんの治療用の免疫療法と組み合わせることができる。
【０２１９】
β−カテニン核酸阻害剤分子は、例えば、これらのすべてが参照することによりこれらβ−カテニン核酸阻害剤分子の開示に関して組み込まれるＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５６３１７号、米国公開出願第２０１５／０２９１９５４号及び第２０１５／０２９１９５６号、ならびに米国特許第６，０６６，５００号、第８，１９８，４２７号、第８，８３５，６２３号、または第９，２４３，２４４号に開示の通り既知である。ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、米国特許第９，２４３，２４４号に開示の分子である。ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれるＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５６３１７号に開示の分子である。
【０２２０】
ある特定の実施形態では、本発明のβ−カテニン核酸阻害剤分子は、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子であり、該分子の二本鎖領域は、１５〜４０ヌクレオチド長である。ある特定のこれら実施形態では、該二本鎖領域は、１９〜３０、１９〜２３、または１９〜２１ヌクレオチド長である。ある特定のこれら実施形態では、該二本鎖領域は、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、または２６ヌクレオチド長である。
【０２２１】
ある特定の実施形態では、本発明のβ−カテニン核酸阻害剤分子は、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子であり、この場合、該センス鎖は、１８〜６６ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、１８〜２５ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチド長である。ある特定のこれら実施形態では、該センス鎖は、２５〜４５ヌクレオチド長である。ある特定のこれら実施形態では、該センス鎖は、２６〜３０ヌクレオチド長である。ある特定のこれら実施形態では、該センス鎖は、２７〜２９ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、３０〜４０ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、３６、３７、３８、３９、または４０ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、２５〜３０ヌクレオチド長である。ある特定のこれら実施形態では、該センス鎖は、２５、２６、または２７ヌクレオチド長である。
【０２２２】
ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子であり、この場合、該アンチセンス鎖は、１８〜６６ヌクレオチド長である。通常、該アンチセンス鎖は、該標的遺伝子に該核酸阻害剤分子の効果を向けるために、該標的遺伝子のｍＲＮＡの配列に対して十分相補的な配列を含む。ある特定の実施形態では、該アンチセンス鎖は、該標的遺伝子のｍＲＮＡに含まれる配列と完全に相補的であり、該完全に相補的な配列が、１８〜４０ヌクレオチド長である配列を含む。ある特定のこれら実施形態では、該アンチセンス鎖は、２０〜５０ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、該アンチセンス鎖は、２０〜３０ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、該アンチセンス鎖は、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、該アンチセンス鎖は、３５〜４０ヌクレオチド長である。ある特定のこれら実施形態では、該アンチセンス鎖は、３６、３７、３８、または３９ヌクレオチド長である。
【０２２３】
ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに１８〜３４ヌクレオチドの二本鎖領域を含むｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子であり、該センス鎖は２５〜３４ヌクレオチド長であり、該アンチセンス鎖は２６〜３８ヌクレオチド長であり、その３’末端に１〜５個の一本鎖ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、該センス鎖は２６ヌクレオチドであり、該アンチセンス鎖は３８ヌクレオチドであり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハング及びその５’末端に１０ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有し、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、２６ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。ある特定の実施形態では、該センス鎖は２５ヌクレオチドであり、該アンチセンス鎖は２７ヌクレオチドであり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有し、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、２５ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。
【０２２４】
ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、センス鎖及びアンチセンス鎖ならびに１９〜２１ヌクレオチドの二本鎖領域を含むｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子であり、該センス鎖は１９〜２１ヌクレオチド長であり、該アンチセンス鎖は２１〜２３ヌクレオチド長であり、その３’末端に１〜２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含む。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、２１ヌクレオチドであり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有し、該アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドであり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有し、センス鎖及びアンチセンス鎖は、１９ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。ある特定の実施形態では、該センス鎖は、２１ヌクレオチドであり、該アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドであり、その３’末端に２ヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有し、センス鎖及びアンチセンス鎖は、２１ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、ステム及びテトラループまたはトリループを含むｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子である。ある特定の実施形態では、ステム及びテトラループを含む該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のセンス鎖は、３４〜４０、２６〜３６、２６〜３０、または３４〜３６ヌクレオチド長であり、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のアンチセンス鎖は、２０〜２４ヌクレオチドを含み、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。ある特定の実施形態では、ステム及びトリループを含むｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のセンス鎖は、３３〜３９、２７〜２９、または３３〜３５ヌクレオチド長であり、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子のアンチセンス鎖は、２０〜２４ヌクレオチドを含み、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、１８〜２４ヌクレオチドの二本鎖領域を形成する。
【０２２６】
ある特定の実施形態では、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、（ａ）ステム及びテトラループを含み、３６ヌクレオチド長のセンス鎖であって、該センス鎖の５’末端から最初の２０ヌクレオチドは、アンチセンス鎖に相補的であり、該センス鎖のそれに続く１６ヌクレオチドがステム及びテトラループを形成する該センス鎖、ならびに（ｂ）２２ヌクレオチド長であり、その３’末端に２つのヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有するアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖及びセンス鎖は、連続したオリゴヌクレオチドを形成しない別々の鎖である。ある特定の実施形態では、該センス鎖はステム及びテトラループを含み、２６、２８、または３０ヌクレオチド長であり、該ステムは１つ以上の二環式ヌクレオチドを含み、１、２、または３塩基対の長さである。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、該ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子は、（ａ）ステム及びトリループを含み、３５ヌクレオチド長のセンス鎖であって、該センス鎖の５’末端から最初の２０ヌクレオチドは、アンチセンス鎖に相補的であり、該センス鎖のそれに続く１５ヌクレオチドがステム及びトリループを形成する該センス鎖、ならびに（ｂ）２２ヌクレオチド長であり、その３’末端に２つのヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを有するアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖及びセンス鎖は、連続したオリゴヌクレオチドを形成しない別々の鎖である。ある特定の実施形態では、該センス鎖はステム及びトリループを含み、２７または２９ヌクレオチド長であり、該ステムは１つ以上の二環式ヌクレオチドを含み、２または３塩基対の長さである。
【０２２８】
ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、従来のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、標的核酸（例えば、β−カテニン）のセグメントの逆相補体を含む配列を５’から３’の方向に有する。ある特定の実施形態では、該アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１２〜３０、１２〜２５、１２〜２２、１４〜２０、１６〜２０、または１８〜２２ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、該アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１６〜１８ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、該アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１８〜２０ヌクレオチドを含む。他の実施形態では、該アンチセンスオリゴヌクレオチドは、８〜８０または１２〜５０ヌクレオチドを有する。ある特定の実施形態では、該アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその部分は、標的核酸（例えば、β−カテニン）またはその特定の部分に完全に相補的である。ある特定の実施形態では、該アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその部分は、標的核酸（例えば、β−カテニン）の少なくとも１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれを超える連続したヌクレオチドに相補的である。ある特定の実施形態では、該アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的核酸（例えば、β−カテニン）またはその部分に対して、非相補的ヌクレオチドを５、４、３、２、または１つしか含まない。活性を排除することなく、アンチセンスオリゴヌクレオチドの長さを短縮すること及び／またはミスマッチ塩基を導入することが可能である。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、本発明のβ−カテニン核酸阻害剤分子は、ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子である。
【０２３０】
ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子のアンチセンス鎖は、配列番号２の配列を含む。ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子のアンチセンス鎖は、配列番号２の配列からなる。ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子であり、該センス鎖は、配列番号１の配列を含む。ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子であり、該センス鎖は、配列番号１の配列からなる。ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子であり、該センス鎖は、配列番号１の配列を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２の配列を含む。ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子であり、該センス鎖は、配列番号１の配列からなり、該アンチセンス鎖は、配列番号２の配列からなる。
【０２３１】
β−カテニンＲＮＡのレベルまたは活性は、当技術分野で現在既知の、または後に開発される適切な方法で特定され得る。標的ＲＮＡ及び／または標的遺伝子の「発現」を測定するために使用される方法は、標的遺伝子及びそのコードＲＮＡの性質に依存し得ることが理解され得る。例えば、該標的β−カテニンＲＮＡ配列がタンパク質をコードする場合、「発現」という用語は、該β−カテニン遺伝子（ゲノムまたは外来起源のいずれか）由来のタンパク質を指す場合もあれば、β−カテニンＲＮＡ／転写産物を指す場合もある。かかる場合には、該標的β−カテニンＲＮＡの発現は、β−カテニンＲＮＡ／転写産物の量を直接測定することによって特定される場合もあれば、β−カテニンタンパク質の量を測定することによって特定される場合もある。タンパク質は、タンパク質アッセイで、例えば、染色または免疫ブロット法により測定することができ、または、該タンパク質が測定され得る反応を触媒する場合には、反応速度を測定することによって測定することができる。すべてのかかる方法は、当技術分野で既知でありかつ使用することができる。標的β−カテニンＲＮＡレベルを測定する場合、当技術分野で承認されているＲＮＡレベルの検出方法を用いることができる（例えば、ＲＴ−ＰＣＲ、ノーザンブロット法等）。β−カテニンＲＮＡを標的とする場合、対象、組織、細胞のインビトロもしくはインビボのいずれか、または細胞抽出物におけるβ−カテニンＲＮＡまたはタンパク質のレベルの低減における該核酸阻害剤分子の有効性の測定を用いて、例えば、ＷＯ／２０１７／１６０９８３として公開される国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２２５１０号に開示の通り、β−カテニン関連表現型（例えば、疾患または障害、例えば、がんまたは腫瘍形成、増殖、転移、広がり等）の低減の程度を特定することもできる。上記の測定は、細胞、細胞抽出物、組織、組織抽出物または他の適切な原料でなされ得る。
【０２３２】
ＩＤＯ阻害剤
【０２３３】
インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）は、２つのアイソフォーム、ＩＤＯ１及びＩＤＯ２を有する細胞内酵素であり、必須アミノ酸であるトリプトファンをキヌレニンに変換する代謝経路に関与している。ＩＤＯ１は、多くのヒトがんで発現され、ＩＤＯ１の過剰発現は、様々な腫瘍型での進行がん及びがん転移と関連している。Ｍｕｎｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．，２０１２，（Ｅｌｉｔｅ  Ｅｄ．）４：７３４−４５。ＩＤＯ１の過剰発現はまた、免疫療法に対して耐性を示す非炎症性またはコールドな腫瘍をもたらすＴ細胞の浸潤を減少させる免疫抑制性の腫瘍微小環境と関連している。ＩＤＯ２は、ある特定の固形腫瘍で過剰発現し、免疫調節にも関与しており、別のトリプトファン異化酵素であるトリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）も、ＩＤＯ１及びＩＤＯ２と同様に関与している。Ｐｅｎｄｅｒｇａｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１７，  ７７（２４）：６７９５−６８１１。従って、ＴＤＯの阻害は、ＩＤＯの阻害と同様に、抗腫瘍活性を高めるためにβ−カテニン及びＩＤＯ阻害と組み合わせて使用することができる別の免疫調節戦略を提供する。
【０２３４】
近年、ＩＤＯ経路は、新たな抗腫瘍薬の開発の主要な目標として浮上している。従って、多くのＩＤＯ阻害剤が当技術分野で知られており、例えば、米国特許第９，８５０，２４９号、第９，７８９，０９４号、第９，７９０，１６９号、第９，７７１，３７０号、第９，７６５，０１８号、第９，７５８，４９２号、第９，６７５，５７１号、第９，６２４，１８８号、第９，６１７，２７２号、第９，５９８，４２２号、第９，４９９，４９７号、第９，１７４，９４２号、第９，０７３，８７５号、第８，９５１，５３６号、第８，８４６，７２６号及び第８，７４８，４６９号、米国公開出願第２００６／０２５８７１９号及び第２００７／０１８５１６５号、ならびにＰＣＴ国際公開第ＷＯ２００４／０９４４０９号、ならびにＰｅｎｄｅｒｇａｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１７，  ７７（２４）：６７９５−６８１１に開示のものが挙げられる。これらのすべては、参照することにより全体として組み込まれる。
【０２３５】
当技術分野で既知のものを含めた任意のＩＤＯ阻害剤を本出願に開示の方法及び組成物に使用することができる。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤としては、エパカドスタット（ＩＮＣＢ２４３６０）、インドキシモド（ＮＬＧ８１８９、別名１−メチル−Ｄ−トリプトファン）、ＢＭＳ−９８６２０５、ＮＬＧ８０２、ＨＴＩ−１０９０、ナボキシモド（ＮＬＧ９１９）、ＰＦ−０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ−７００９９、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジド（例えば、Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ，２０１４，  ２４：３４０３−０６参照）、β−（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニン、及び６−ニトロ−Ｄ−トリプトファンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２３６】
ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、エパカドスタットである。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、インドキシモドである。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、ＢＭＳ−９８６２０５である。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、ＮＬＧ８０２である。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、ＨＴＩ−１０９０である。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、ナボキシモドである。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、ＰＦ−０６８４０００３である。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、ＩＯＭ２９８３である。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、ＲＧ−７００９９である。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジドである。
【０２３７】
通常、該ＩＤＯ阻害剤は、ＩＤＯ１を選択的に阻害する。例えば、エパカドスタット、ＢＭＳ−９８６２０５、ＰＦ−０６８４０００３、及びＩＯＭ２９８３は、ＩＤＯ１を選択的に標的とする。他の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、ＩＤＯ２を阻害する。例えば、インドキシモドは、ＩＤＯ２を間接的に阻害することが報告されている。Ｐｅｎｄｅｒｇａｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１７，  ７７（２４）：６７９５−６８１１。ある特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、ＩＤＯ１ならびに１つ以上のＩＤＯ２及び／またはＴＤＯを阻害する。ナボキシモドは、例えば、ＩＤＯ１及びＴＤＯの両方を阻害するが、ＩＤＯ１に対しては、ＴＤＯより約２０倍選択性が高い。Ｐｅｎｄｅｒｇａｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１７，  ７７（２４）：６７９５−６８１１。本明細書に開示の方法及び組成物の他の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、ＴＤＯ阻害剤で置き換えられる。
【０２３８】
免疫療法
【０２３９】
本明細書に開示の方法及び組成物は、β−カテニン阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、及び免疫療法（または免疫療法薬）の併用療法に関する。免疫療法とは、免疫応答を高める方法を指す。通常、本明細書に開示の方法では、抗腫瘍免疫応答が高められる。ある特定の実施形態では、免疫療法は、腫瘍またはがんに対するＴ細胞応答を高める方法を指す。
【０２４０】
ある特定の実施形態では、該免疫療法または免疫療法薬は、免疫チェックポイント分子を標的とする。ある特定の腫瘍は、免疫チェックポイント経路を利用することにより免疫系を回避することが可能である。従って、免疫チェックポイントの標的化は、腫瘍が免疫系を回避する能力に対抗するための、及びある特定のがんに対して抗腫瘍免疫を活性化するための有効なアプローチとして浮上している。Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，２０１２，  １２：２５２−２６４。
【０２４１】
ある特定の実施形態では、該免疫チェックポイント分子は、抗原に対するＴ細胞応答に関与するシグナルを減少させる抑制分子である。例えば、ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞上で発現され、抗原提示細胞上のＣＤ８０（別名Ｂ７．１）またはＣＤ８６（別名Ｂ７．２）に結合することにより、Ｔ細胞活性化を下方制御する役割を果たす。ＰＤ−１は、Ｔ細胞上で発現される別の抑制性免疫チェックポイント分子である。ＰＤ−１は、炎症反応の過程で、末梢組織におけるＴ細胞の活性を制限する。さらに、ＰＤ−１のリガンド（ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２）は、通常、多くの異なる腫瘍の表面で上方制御され、該腫瘍の微小環境で抗腫瘍免疫応答の下方制御をもたらす。ある特定の実施形態では、該抑制性免疫チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ４またはＰＤ−１である。他の実施形態では、該抑制性免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−１のリガンド、例えばＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２である。他の実施形態では、該抑制性免疫チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ４のリガンド、例えばＣＤ８０またはＣＤ８６である。他の実施形態では、該抑制性免疫チェックポイント分子は、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、ガレクチン９（ＧＡＬ９）、またはアデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）である。
【０２４２】
これら抑制性免疫チェックポイント分子を標的とするアンタゴニストは、ある特定のがんに対する抗原特異的Ｔ細胞応答を高めるために使用され得る。従って、ある特定の実施形態では、該免疫療法または免疫療法薬は、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストである。ある特定の実施形態では、該抑制性免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−１である。ある特定の実施形態では、該抑制性免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１である。ある特定の実施形態では、該抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストは、抗体であり、好ましくは、モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、該抗体またはモノクローナル抗体は、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、または抗ＰＤ−Ｌ２抗体である。ある特定の実施形態では、該抗体は、モノクローナル抗ＰＤ−１抗体である。ある特定の実施形態では、該抗体は、モノクローナル抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。ある特定の実施形態では、該モノクローナル抗体は、抗ＣＴＬＡ−４抗体と抗ＰＤ−１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体と抗ＰＤ−Ｌ１抗体、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせである。ある特定の実施形態では、該抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））またはニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））のうちの１つ以上である。ある特定の実施形態では、該抗ＣＴＬＡ４抗体は、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））である。ある特定の実施形態では、該抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標））、またはデュルバルマブ（Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標））のうちの１つ以上である。
【０２４３】
ある特定の実施形態では、該免疫療法または免疫療法薬は、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＬＡＧ３、ＫＩＲ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、またはＡ２ａＲに対するアンタゴニスト（例えば、抗体）である。他の実施形態では、該アンタゴニストは、当該抑制性免疫チェックポイント分子の可溶性型、例えば、該抑制性免疫チェックポイント分子の細胞外ドメイン及び抗体のＦｃドメインを含む可溶性融合タンパク質である。ある特定の実施形態では、該可溶性融合タンパク質は、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２の細胞外ドメインを含む。ある特定の実施形態では、該可溶性融合タンパク質は、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＬＡＧ３、ＫＩＲ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、またはＡ２ａＲの細胞外ドメインを含む。１つの実施形態では、該可溶性融合タンパク質は、ＰＤ−Ｌ２またはＬＡＧ３の細胞外ドメインを含む。
【０２４４】
ある特定の実施形態では、該免疫チェックポイント分子は、抗原に対するＴ細胞応答に関与するシグナルを増幅する共刺激分子である。例えば、ＣＤ２８は、Ｔ細胞上で発現する共刺激受容体である。Ｔ細胞がそのＴ細胞受容体を介して抗原に結合する場合、ＣＤ２８は、抗原提示細胞上のＣＤ８０（別名Ｂ７．１）またはＣＤ８６（別名Ｂ７．２）に結合し、Ｔ細胞受容体のシグナル伝達を増幅し、Ｔ細胞活性化を促進する。ＣＤ２８は、ＣＴＬＡ４と同じリガンド（ＣＤ８０及びＣＤ８６）に結合するため、ＣＴＬＡ４は、ＣＤ２８が媒介する共刺激シグナル伝達に対抗することまたはこれを調節することが可能である。ある特定の実施形態では、該免疫チェックポイント分子は、ＣＤ２８、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、またはＣＤ２７から選択される共刺激分子である。他の実施形態では、該免疫チェックポイント分子は、例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、またはＣＤ７０を含めた共刺激分子のリガンドである。
【０２４５】
これら共刺激チェックポイント分子を標的とするアゴニストは、ある特定のがんに対する抗原特異的Ｔ細胞応答を高めるために使用され得る。従って、ある特定の実施形態では、該免疫療法または免疫療法薬は、共刺激チェックポイント分子のアゴニストである。ある特定の実施形態では、該共刺激チェックポイント分子のアゴニストは、アゴニスト抗体であり、好ましくは、モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、該アゴニスト抗体またはモノクローナル抗体は、抗ＣＤ−２８抗体である。他の実施形態では、該アゴニスト抗体またはモノクローナル抗体は、抗ＩＣＯＳ、抗ＣＤ１３７、抗ＯＸ４０、または抗ＣＤ２７抗体である。他の実施形態では、該アゴニスト抗体またはモノクローナル抗体は、抗ＣＤ８０、抗ＣＤ８６、抗ＣＤ８６、抗Ｂ７ＲＰ１、抗Ｂ７−Ｈ３、抗Ｂ７−Ｈ４、抗ＣＤ１３７Ｌ、抗ＯＸ４０Ｌ、または抗ＣＤ７０抗体である。
【０２４６】
医薬組成物
【０２４７】
本開示は、治療有効量のβ−カテニン核酸阻害剤分子及び医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。通常、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、ＩＤＯ阻害剤または免疫療法薬と同じ医薬組成物には含まれない。しかしながら、ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子及び該医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物は、さらに、治療有効量のＩＤＯ阻害剤（例えば、エパカドスタット、インドキシモド、ＢＭＳ−９８６２０５、ＮＬＧ８０２、ＨＴＩ−１０９０、ナボキシモド、ＰＦ−０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ−７００９９、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジド、β−（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニン、もしくは６−ニトロ−Ｄ−トリプトファンのうちの１つ以上）、及び／または治療有効量の免疫治療薬、例えば、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体のうちの１つ以上）もしくは共刺激チェックポイント分子のアゴニストを含む。
【０２４８】
これらの医薬組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌される場合もあれば、滅菌濾過される場合もある。得られる水溶液は、そのまま使用するために包装される場合もあれば、凍結乾燥される場合もあり、当該凍結乾燥製剤は、投与前に滅菌水性賦形剤と混合される。該製剤のｐＨは、通常、３〜１１であり、より好ましくは５〜９または６〜８であり、最も好ましくは７〜８、例えば、７〜７．５である。
【０２４９】
本開示の医薬組成物は、治療的使用に適用される。従って、本開示の１つの態様は、疾患または状態に罹患したヒトが挙げられるがこれに限定されない対象を、該対象に対して治療有効量の本開示の医薬組成物を投与することにより治療するために使用され得る医薬組成物を提供する。通常、該疾患または状態は、本明細書に記載のがんである。
【０２５０】
ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の医薬組成物の治療有効量を、それを必要とする対象の治療用の薬剤の製造のために使用することを特徴とする。通常、該対象は、本明細書に記載のがんを有する。
【０２５１】
医薬的に許容される賦形剤
【０２５２】
通常、本開示において有用な医薬的に許容される賦形剤は、従来のものである。Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１５th  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９７５）によるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓは、１つ以上の治療用組成物の薬剤送達に適した組成物及び製剤を記載している。医薬的に許容される賦形剤としての役割を果たすことができる材料のいくつかの例としては、糖、例えば、ラクトース、グルコース及びスクロース、デンプン、例えば、トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプン、セルロース及びその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース、モルト、ゼラチン、賦形剤、例えば、カカオ脂及び坐薬用ワックス、油、例えば、落花生油、綿実油、紅花油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及び大豆油、緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム、（等張食塩水、リンゲル溶液）、エチルアルコール、ｐＨ緩衝液、ポリオール、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等、ならびに医薬製剤で使用される他の非毒性親和性物質が挙げられる。
【０２５３】
剤形
【０２５４】
該医薬組成物は、任意の意図された投与経路用の従来の賦形剤とともに製剤化され得る。
【０２５５】
通常、核酸阻害剤分子を含む本開示の医薬組成物は、例えば、皮下、筋肉内、静脈内または硬膜外注射による非経口投与用の液体形態で製剤化される。
【０２５６】
通常、免疫療法薬、例えば、抑制性免疫チェックポイント分子（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体のうちの１つ以上）または共刺激チェックポイント分子のアゴニストを含む本開示の医薬組成物は、例えば、皮下、筋肉内、静脈内または硬膜外注射による非経口投与用の液体形態で製剤化される。
【０２５７】
通常、ＩＤＯ阻害剤、例えば、エパカドスタット、インドキシモド、またはＢＭＳ−９８６２０５を含む本開示の医薬組成物は、例えば、経口投与等の腸内投与用に製剤化される。
【０２５８】
非経口投与に適した剤形は、通常、例として、滅菌水溶液、生理食塩水、低分子量アルコール、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、ゼラチン、脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチル等を含めた非経口投与に適した１つ以上の媒体を含む。該非経口製剤は、糖、アルコール、酸化防止剤、緩衝剤、静菌薬、該製剤を対象とするレシピエントの血液と等張にする溶質、または懸濁剤もしくは増粘剤を含み得る。適切な流動性は、例えば、界面活性剤の使用によって維持され得る。液体製剤を凍結乾燥し、滅菌注射剤による再構成での後の使用のために保存することができる。
【０２５９】
該医薬組成物はまた、局所または経皮投与、直腸または膣内投与、眼内投与、経鼻投与、口腔投与、または舌下投与を含めた他の投与経路用にも製剤化され得る。
【０２６０】
送達剤
【０２６１】
該β−カテニン核酸阻害剤分子は、例えば、リポソーム及び脂質、例えば、米国特許第６，８１５，４３２号、第６，５８６，４１０号、第６，８５８，２２５号、第７，８１１，６０２号、第７，２４４，４４８号及び第８，１５８，６０１号に開示のもの、ポリマー材料、例えば、米国特許第６，８３５，３９３号、第７，３７４，７７８号、第７，７３７，１０８号、第７，７１８，１９３号、第８，１３７，６９５号ならびに米国公開特許出願第２０１１／０１４３４３４号、第２０１１／０１２９９２１号、第２０１１／０１２３６３６号、第２０１１／０１４３４３５号、第２０１１／０１４２９５１号、第２０１２／００２１５１４号、第２０１１／０２８１９３４号、第２０１１／０２８６９５７号及び第２００８／０１５２６６１号に開示のもの、カプシド、カプソイド、または、摂取、分布もしくは吸収を助ける受容体標的分子を含めた他の分子、分子構造または化合物の混合物に混合、封入、コンジュゲート、または会合されてもよい。
【０２６２】
ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に製剤化される。脂質−核酸ナノ粒子は、通常、脂質と核酸の混合時に自然に生じて複合体を形成する。所望の粒径分布に応じて、得られたナノ粒子混合物を、任意に、例えば、サーモバレル押し出し機、例えば、ＬＩＰＥＸ（登録商標）押し出し機（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ）を用いてポリカーボネート膜（例えば、カットオフ１００ｎｍ）を通して押し出すことができる。治療的使用のための脂質ナノ粒子を調製するため、該ナノ粒子を形成するために使用した溶媒（例えば、エタノール）を除去すること及び／または緩衝液を交換することが望ましい場合があり、これは、例えば、透析または接線流濾過によって達成され得る。核酸干渉分子を含む脂質ナノ粒子の製造方法は、例えば、米国公開特許出願第２０１５／０３７４８４２号及び第２０１４／０１０７１７８号に開示の通り、当技術分野で既知である。
【０２６３】
ある特定の実施形態では、該ＬＮＰは、カチオン性リポソーム及びペグ化脂質を含むコア脂質成分を含む。該ＬＮＰは、さらに、１つ以上のエンベロープ脂質、例えば、カチオン性脂質、構造もしくは中性脂質、ステロール、ペグ化脂質、またはそれらの混合物を含み得る。
【０２６４】
ＬＮＰで使用するカチオン性脂質は、例えば、米国公開特許出願第２０１５／０３７４８４２号及び第２０１４／０１０７１７８号に論じられる通り、当技術分野で既知である。通常、該カチオン性脂質は、生理学的ｐＨで正味の正電荷を有する脂質である。ある特定の実施形態では、該カチオン性リポソームは、ＤＯＤＭＡ、ＤＯＴＭＡ、ＤＬ−０４８、またはＤＬ−１０３である。ある特定の実施形態では、該構造脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣまたはＤＯＰＣである。ある特定の実施形態では、該ステロールはコレステロールである。ある特定の実施形態では、該ペグ化脂質は、ＤＭＰＥ−ＰＥＧ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ、ＤＳＧ−ＰＥＧ、ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２Ｋ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２Ｋ、ＤＳＧ−ＰＥＧ２Ｋ、またはＤＳＧ−ＭＰＥＧである。１つの実施形態では、該カチオン性脂質はＤＬ−０４８であり、該ペグ化脂質はＤＳＧ−ＭＰＥＧであり、該１つ以上のエンベロープ脂質は、ＤＬ−１０３、ＤＳＰＣ、コレステロール、及びＤＳＰＥ−ＭＰＥＧである。例えば、該β−カテニン核酸阻害剤分子の製剤化に使用され得るＬＮＰの１つの非限定的な実施形態を示す図１３を参照されたい。
【０２６５】
ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、該オリゴヌクレオチドを目的の組織へ送達するリガンドに共有結合でコンジュゲートされる。多くのかかるリガンドが探索されている。例えば、Ｗｉｎｋｌｅｒ，Ｔｈｅｒ．Ｄｅｌｉｖ．４（７）：７９１−８０９（２０１３）を参照されたい。例えば、該β−カテニン核酸阻害剤分子を１つ以上の糖リガンド部分（例えば、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ））にコンジュゲートし、該オリゴヌクレオチドの摂取を肝臓に向けることができる。例えば、ＷＯ２０１６／１００４０１を参照されたい。通常、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、３つまたは４つの糖リガンド部分にコンジュゲートされる。使用され得る他のリガンドとしては、マンノース−６−リン酸、コレステロール、葉酸、トランスフェリン、及びガラクトースが挙げられるがこれに限定されない（他の特定の例示的なリガンドに関しては、ＷＯ２０１２／０８９３５２を参照されたい）。通常、オリゴヌクレオチドがリガンドにコンジュゲートされる場合、該オリゴヌクレオチドは、裸のオリゴヌクレオチドとして投与され、この場合、該オリゴヌクレオチドは、ＬＮＰにも他の保護コーティングにも製剤化されない。ある特定の実施形態では、該裸のオリゴヌクレオチド内の各ヌクレオチドは、該糖部分の２’位で、通常は２’−Ｆ、２’−ＯＭｅ、及び／または２’−ＭＯＥで修飾される。
【０２６６】
投与／治療方法
【０２６７】
β−カテニン核酸阻害剤分子または免疫療法薬を含む本明細書に記載の医薬組成物は、通常、非経口投与される。該β−カテニン核酸阻害剤分子を含む医薬組成物は、通常、静脈内または皮下投与される。該免疫療法薬を含む医薬組成物は、通常、静脈内投与される。ＩＤＯ阻害剤、例えばエパカドスタット、インドキシモド、またはＢＭＳ−９８６２０５を含む医薬組成物は、通常、経口投与される。しかしながら、本明細書に開示の医薬組成物はまた、例えば、口腔、舌下、直腸、膣、尿道内、局所、眼内、鼻腔内、及び／または耳介内を含めた当技術分野で既知の任意の方法で投与され得る。この投与には、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、水性懸濁剤、ゲル剤、スプレー剤、坐剤、軟膏等が含まれ得る。
【０２６８】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の医薬組成物は、Ｗｎｔ活性化疾患または障害、例えば、がんに関連する症状の治療または予防に有用であり得る。他の実施形態では、本明細書に開示の医薬組成物は、非Ｗｎｔ活性化疾患または障害、例えば、がんに関連する症状の治療または予防に有用であり得る。
【０２６９】
１つの実施形態は、がんの治療方法に関し、これは、対象に対して、治療有効量のβ−カテニン核酸阻害剤分子を含む第一の医薬組成物、治療有効量のＩＤＯ阻害剤を含む第二の医薬組成物、及び治療有効量の免疫療法薬を含む第三の医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子またはｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子を含むＲＮＡｉ阻害剤分子である。いくつかの特定の実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、エパカドスタット、インドキシモド、ＢＭＳ−９８６２０５、ＮＬＧ８０２、ＨＴＩ−１０９０、ナボキシモド、ＰＦ−０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ−７００９９、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジド、β−（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニン、または６−ニトロ−Ｄ−トリプトファンのうちの１つ以上である。１つの実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、エパカドスタットである。いくつかの実施形態では、該免疫療法薬は、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストとしてであるか、または、共刺激チェックポイント分子のアゴニストとしてである。ある特定の実施形態では、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストは、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、またはそれらの組み合わせである。
【０２７０】
別の実施形態は、がんの治療方法に関し、これは、対象に対して、治療有効量のβ−カテニン核酸阻害剤分子を含む第一の医薬組成物、及び治療有効量のＩＤＯ阻害剤を含む第二の医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子またはｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子を含むＲＮＡｉ阻害剤分子である。いくつかの実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、エパカドスタット、インドキシモド、ＢＭＳ−９８６２０５、ＮＬＧ８０２、ＨＴＩ−１０９０、ナボキシモド、ＰＦ−０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ−７００９９、フェニルベンゼンスルホニルヒドラジド、β−（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニン、または６−ニトロ−Ｄ−トリプトファンのうちの１つ以上である。１つの実施形態では、該ＩＤＯ阻害剤は、エパカドスタットである。
【０２７１】
かかるがんの非限定的な例としては、胆道癌、膀胱癌、移行上皮癌、尿路上皮癌、脳癌、神経膠腫、星状細胞腫、乳癌、化生性癌、子宮頸癌、子宮頸部扁平上皮癌、直腸癌、結腸直腸癌、結腸癌、遺伝性非ポリポーシス大腸癌、結腸直腸腺癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、子宮内膜癌、子宮内膜間質肉腫、食道癌、食道扁平上皮癌、食道腺癌、眼内黒色腫、ブドウ膜黒色腫、胆嚢癌、胆嚢腺癌、腎細胞癌、明細胞腎細胞癌、移行上皮癌、尿路上皮癌、ウィルムス腫瘍、白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性（ＣＬＬ）、慢性骨髄性（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性（ＣＭＭＬ）、肝臓癌（ｌｉｖｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）、肝臓癌（ｌｉｖｅｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、ヘパトーマ、肝細胞癌、胆管癌、肝芽腫、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、前駆Ｔ細胞リンパ芽球性リンパ腫／白血病、末梢Ｔ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、上咽頭癌（ＮＰＣ）、神経芽細胞腫、口腔咽頭癌、口腔扁平上皮癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、膵管腺癌、偽乳頭状腫瘍、腺房細胞癌が挙げられる。前立腺癌、前立腺腺癌、皮膚癌、黒色腫、悪性黒色腫、皮膚黒色腫、小腸癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、子宮癌、または子宮肉腫。ある特定の実施形態では、本開示は、肝臓癌（ｌｉｖｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）、肝臓癌（ｌｉｖｅｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、ヘパトーマ、肝細胞癌、胆管癌及び肝芽腫の治療方法を特徴とする。該治療方法の特定の実施形態では、該がんは、結腸直腸癌、肝細胞癌、または黒色腫である。
【０２７２】
該治療方法のある特定の実施形態では、β−カテニン核酸阻害剤分子及びＩＤＯ阻害剤の投与前、該がんは、免疫療法、例えば、抑制性免疫チェックポイント分子（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体のうちの１つ以上）のアンタゴニストまたは共刺激チェックポイント分子のアゴニスト、例えば、抗ＣＤ２８抗体に反応しない。
【０２７３】
該治療方法のある特定の実施形態では、該がんは転移性がんである。該治療方法のある特定の実施形態では、該がんは黒色腫である。ある特定の実施形態では、該黒色腫は、ステージＩＩＩまたはステージＩＶの黒色腫である。ある特定の実施形態では、該がんは非小細胞肺癌である。ある特定の実施形態では、該がんは膀胱癌である。ある特定の実施形態では、該がんは、頭頸部の転移性または再発性扁平上皮癌である。ある特定の実施形態では、該がんは進行性尿路上皮細胞癌である。ある特定の実施形態では、該がんは転移性膵臓癌である。ある特定の実施形態では、該がんは、進行性固形腫瘍である。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、該がんは、活性化Ｗｎｔ／β−カテニン経路と関連している。他の実施形態では、該がんは、非Ｗｎｔ活性化がんである。ある特定の実施形態では、該がんは、ＩＤＯ１を過剰発現する。ある特定の実施形態では、該対象は、該β−カテニン核酸阻害剤分子の投与前に、Ｗｎｔ活性化がんを有することまたはＩＤＯを過剰発現することが特定されている。該対象は、当業者に利用可能な任意の方法を用いて、Ｗｎｔ活性化がんを有することまたはＩＤＯを過剰発現することが特定され得る。通常、しかしながら、該対象由来のサンプルを分析して、該対象がＷｎｔ活性化がんを有しているかどうか、またはＩＤＯを過剰発現しているかどうかが特定される。ある特定の実施形態では、該サンプルは、組織、細胞、血液、または尿を含む。ある特定の実施形態では、該試料は、活性化Ｗｎｔ／β−カテニン経路、不活性Ｗｎｔ／β−カテニン経路及び／または非Ｔ細胞炎症性表現型と関連した１つ以上のバイオマーカーに関して分析される。核酸（例えば、ｍＲＮＡ）、タンパク質、及びペプチドが挙げられるがこれらに限定されない任意の適切なバイオマーカーが、任意の適切なアッセイまたは技術を用いて分析され得る。ある特定の実施形態では、該バイオマーカーは、活性化Ｗｎｔ／β−カテニン経路と関連する遺伝子突然変異、例えば、β−カテニンもしくはＡＰＣまたはＷｎｔ／β−カテニン経路に関与する１つ以上の他の構成要素、例えば、アキシン、ＬＥＦ、及びＩＣＡＴをコードする遺伝子の突然変異である。
【０２７５】
ある特定の実施形態では、該Ｗｎｔ活性化がんは、免疫療法に対して耐性を示すが、該免疫療法に対する耐性は、該免疫療法が該β−カテニン核酸阻害剤分子及び該ＩＤＯ阻害剤と組み合わせて投与された場合に逆転され得る。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、本開示は、がんに対するインビボ免疫応答を強化する方法を提供し、これは、がんを有する対象に対して、β−カテニン核酸阻害剤分子及びＩＤＯ阻害剤を、該がんに対する免疫療法の治療効果を高めるのに十分な、または該がんを該免疫療法に対して感受性にするのに十分な量投与することを含む。通常、該β−カテニン核酸阻害剤分子及びＩＤＯ阻害剤の投与の前は、該がんは、免疫療法に対して耐性を示す非Ｔ細胞炎症性表現型と関連しており、該β−カテニン核酸阻害剤分子及びＩＤＯ阻害剤の投与が、該非Ｔ細胞炎症性表現型をＴ細胞炎症性表現型に変換し、該がんは免疫療法に反応性となる。ある特定の実施形態では、該対象は、該β−カテニン核酸阻害剤分子、該ＩＤＯ阻害剤、及び該免疫療法での治療後に、腫瘍退縮を経験する。ある特定の実施形態では、免疫療法に対して耐性を示す該がんは、Ｗｎｔ活性化がんである。ある特定の実施形態では、免疫療法に対して耐性を示す該がんは、ＩＤＯ１を過剰発現する。
【０２７７】
通常、該対象は、該β−カテニン核酸阻害剤分子及び該ＩＤＯ阻害剤の投与の開始後、該免疫療法薬の摂取を開始する。他の実施形態では、該対象は、該β−カテニン核酸阻害剤分子及び／または該ＩＤＯ阻害剤の投与の開始時、すでに該免疫療法薬を摂取していてもよい。さらに他の実施形態では、該対象は、該免疫療法薬ならびに該β−カテニン核酸阻害剤分子及び／または該ＩＤＯ阻害剤の投与をほぼ同時に開始してもよい。
【０２７８】
投薬及びスケジュール
【０２７９】
通常、該β−カテニン核酸阻害剤分子及びＩＤＯ阻害剤は、該免疫療法薬とは別に、及び異なるスケジュールで投与される。例えば、単剤として使用される場合、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４抗体）は、推奨用量３ｍｇ／ｋｇを３週間ごとに合計４回、９０分かけて静脈内投与される。同様に、単剤として使用される場合、ニボルマブ（抗ＰＤ−１抗体）は、推奨用量２４０ｍｇ（または３ｍｇ／ｋｇ）を６０分かけて２週間ごとに静脈内投与される。ニボルマブがイピリムマブと組み合わせて投与される場合、ニボルマブの推奨用量は１ｍｇ／ｋｇで６０分かけて静脈内投与され、その後同じ日にイピリムマブが推奨用量３ｍｇ／ｋｇにて３週間ごとに合計４回投与され、次いでニボルマブが推奨用量２４０ｍｇで２週間ごとに投与される。ペンブロリズマブが単剤として使用される場合、通常、３０分かけて、推奨用量２００ｍｇにて３週間ごとに、疾患が進行するまで、毒性が許容されなくなるまで、または疾患の進行なく２４ヶ月まで静脈内投与される。
【０２８０】
通常、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、非経口投与される（例えば、静脈内、筋肉内、または皮下投与を介して）。ある特定の実施形態では、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、１日に、レシピエントの体重１キログラム当たり２０マイクログラム〜１０ミリグラム、１キログラム当たり１００マイクログラム〜５ミリグラム、１キログラム当たり０．２５ミリグラム〜５．０ミリグラム、または１キログラム当たり０．５〜３．０ミリグラムの用量で投与される。通常、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、１日に、レシピエントの体重１キログラム当たり０．２５〜２．０ミリグラムの用量で投与される。
【０２８１】
該β−カテニン核酸阻害剤分子は、毎日投与される場合もあれば断続的に投与される場合もある。例えば、該β−カテニン核酸阻害剤分子の断続的投与は、１週間に１〜６日、１ヶ月に１〜６日、週１回、１週間おきに１回、月１回、１ヶ月おきに１回、または１年に１回もしくは２回、あるいは複数年、月、週、または日用量に分割される。通常、該β−カテニン核酸阻害剤分子は、毎週または２週間おきに投与される。いくつかの実施形態では、断続的投与とは、初回の最適化β−カテニン核酸阻害剤分子または免疫療法薬の投与に続いて、最大１週間、最大１ヶ月、最大２ヶ月、最大３ヶ月または最大６ヶ月以上投与のない休息期間の周期での投与を意味する場合もあれば、１日おきに、１週間おきに、１ヶ月おきに、または１年おきに投与することを意味する場合もある。
【０２８２】
該ＩＤＯ阻害剤は、その推奨投薬スケジュール及び投与経路に応じて投与され得る。通常、エパカドスタット、インドキシモド、及びＢＭＳ−９８６２０５は経口投与される。エパカドスタットは、通常、１日２回、約５０〜３００ｍｇの用量で、より典型的には、約１００ｍｇの用量で投与される。インドキシモドは、通常、１日２回、約６００〜１５００ｍｇの用量で、より典型的には、約１０００〜１２００ｍｇの用量で投与される。ＢＭＳ−９８６２０５は、通常、１日１回、約５０〜１００ｍｇの用量で、より典型的には、約１００ｍｇの用量で投与される。
【０２８３】
該β−カテニン核酸阻害剤分子は、通常、該免疫療法薬及び／または該ＩＤＯ阻害剤とは別に、及び異なるスケジュールで投与される。
【０２８４】
β−カテニン核酸阻害剤分子、ＩＤＯ阻害剤、または免疫療法薬の治療有効量は、投与経路及び当該患者の身体的特徴、例えば、該対象のサイズ及び体重、当該疾患の進行または侵入の程度、該対象の年齢、健康状態、及び性別によって決まる場合があり、これら及び他の要因次第で、必要に応じて調節することができる。
【実施例】
【０２８５】
実施例１：ＢＣＡＴ１構築物
【０２８６】
β−カテニン遺伝子を標的とする核酸阻害剤分子を構築した（「ＢＣＡＴ１」）。ＢＣＡＴ１は、２６塩基対のパッセンジャー鎖及び３８塩基対のガイド鎖を有し、これらが２６塩基対からなる二本鎖領域を形成する。図１２。該ガイド鎖の５’末端は、１０塩基対、一本鎖オーバーハングからなり、該ガイド鎖の３’末端は、２塩基対一本鎖オーバーハングからなる。図１２。
【０２８７】
該ＢＣＡＴ１構築物は、ＥｎＣｏｒｅ脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に製剤化した。該ＬＮＰ製剤化ＢＣＡＴ１は、該核酸ペイロードを、皮下、同所、播種性及び転移性異種移植腫瘍、患者由来異種移植片（ＰＤＸ）、ならびに遺伝子組み換えモデル（ＧＥＭ）を含めた複数の腫瘍型（下記表Ｉ参照）に効果的に送達することが分かった。
【０２８８】
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【０２８９】
実施例２：腫瘍試験
【０２９０】
６〜８週齢の免疫応答性マウス（Ｃ５７ＢＬ／６またはＢａｌｂ／Ｃ）に、１．５×１０6個のＢ１６Ｆ１０または１．５×１０6個の４Ｔ１腫瘍細胞を、右肩下から皮下注射した。腫瘍の体積を１週間に２〜３日ごとに測定し、腫瘍増殖を観察した。腫瘍が約１５０〜２００ｍｍ3に達した時点で投与を開始した。腫瘍増殖阻害試験用に、動物をランダム化し、異なるコホートに割り当て、投与サイクルに供した。ＢＣＡＴ１処方ＬＮＰまたはプラセボ（暗号化ＣＴＮＮＢ１  ｄｓＲＮＡｉ）処方ＬＮＰを、外側尾静脈を介して、合計体積１０ｍｌ／ｋｇにて静脈内投与した。免疫療法処理（抗ＰＤ−１抗体）を、体積１０ｍｌ／ｋｇにて腹腔内投与した。エパカドスタット（ＩＤＯ１阻害剤）は、合計体積１０ｍｌ／ｋｇにて経口投与した。
【０２９１】
マウス細胞株Ｂ１６Ｆ１０及び４Ｔ１細胞は、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から入手し、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ／ＤＭＥＭ培地で増殖させた。Ｂ１６Ｆ１０細胞は、Ｗｎｔ活性化もＩＤＯ１活性化もないマウス黒色腫細胞株である。４Ｔ１は、Ｗｎｔ活性化及びＩＤＯ１の構成的活性化を伴うマウス乳腺細胞株である。
【０２９２】
ＭＭＴＶ−Ｗｎｔマウスモデルでは、ＭＭＴＶ−ＬＴＲによるＷｎｔ１の乳腺特異的過剰発現が、活性化Ｗｎｔ／β−カテニンシグナル伝達による自然発生乳房腫瘍をもたらす。ＭＭＴＶ−Ｗｎｔ乳腺腫瘍は、出生時から３〜６ヶ月でＷｎｔ経路の活性化により自然発生的にマウスで増殖する。
【０２９３】
実施例３：Ｗｎｔ活性化４Ｔ１腫瘍におけるβ−カテニンの阻害
【０２９４】
Ｂａｌｂ／Ｃマウスに４Ｔ１腫瘍を移植した。図１Ａに示す通り、４Ｔ１腫瘍細胞移植の６日後、平均腫瘍サイズ１５０〜２００ｍｍ3で、マウスを２つの群に分類し、移植後６日及び７日、ならびに１２日及び１３日目にプラセボまたはＢＣＡＴ１のいずれかの３ｍｇ／ｋｇで処理した。最後の投与の４８時間後、腫瘍を採取し、免疫組織化学によりβ−カテニン、ＣＤ８及びＩＤＯ１のタンパク質レベルをアッセイした。図１Ｂに示す通り、ＢＣＡＴ１処理はβ−カテニンレベルを低下させ、ＣＤ８レベルを増加させたが、ＩＤＯ１レベルを２ラウンドの処理後に有意に低下させることはなかった。
【０２９５】
別の試験では、４Ｔ１腫瘍細胞をＢａｌｂ／Ｃマウスに移植し、移植の４日後、これらマウスを２つの群にランダム化し、プラセボまたはＢＣＡＴ１で処理した。図１Ｃに示す通り、マウスに、プラセボまたはＢＣＡＴ１の２回の３ｍｇ／ｋｇの投与を４日目及び５日目に施した。この投与サイクルを、その後９日目と１０日目に反復した。腫瘍増殖をこの処理期間にわたって腫瘍のサイズを測定することにより観察した。マウスをＢＣＡＴ１単独で処理することにより、約４０％の腫瘍増殖阻害がもたらされた。図１Ｃ。
【０２９６】
別の同様の試験では、図２Ａに示す通り、４Ｔ１担腫瘍マウスを、移植後６日目及び７日目ならびに１２日目及び１３日目に、３ｍｇ／ｋｇのＰＢＳまたはＢＣＡＴ１で処理した。腫瘍を最後の投与の２４時間後に採取し、フローサイトメトリーに供して、抽出した腫瘍から調製した単個細胞浮遊液の表面マーカーを測定した。ＰＢＳ対照が腫瘍免疫微小環境に有意な影響を及ぼさなかった一方、ＢＣＡＴ１処理により、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８）、ならびに複数のチェックポイント（ＰＤ−１、ＬＡＧ−３及びＴｉｍ−３）が有意に増加した。図２Ｂ。ＢＣＡＴ１処理は、免疫系の他の細胞の調節または抑制に重要な役割を果たす制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を有意に増加させた。図２Ｂ。免疫抑制ＭＤＳＣ細胞では効果は観察されなかった。図２Ｂ。
【０２９７】
実施例４：Ｗｎｔ活性化４Ｔ１腫瘍におけるＩＤＯ１の阻害
【０２９８】
ＩＤＯ１阻害剤であるエパカドスタット（ＩＤＯｉ）による別の有効性試験を４Ｔ１腫瘍で行った。図３Ａに示す通り、４Ｔ１担腫瘍マウスを２つの群にランダム化し、移植後６日目及び８日目に媒体またはＩＤＯｉにより１日２回、１回当たり１００ｍｇ／ｋｇにて経口で処理した。腫瘍を最後の投与の４８時間後に採取し、免疫組織化学に供してβ−カテニン、ＣＤ８及びＩＤＯ１レベルを観察した。１００ｍｇ／ｋｇのＩＤＯｉは、ＩＤＯ１レベルをほぼ完全に低下させたが、β−カテニン及びＣＤ８のレベルを穏やかにしか変更しなかった。図３Ｂ。図３Ｂ。関連試験では、図３Ｃに示す通り、４Ｔ１担腫瘍マウスに、移植後６日目及び８日目にプラセボまたはＩＤＯｉを１日２回、１日当たり１００ｍｇ／ｋｇ投与した。腫瘍増殖をこの処理期間にわたって腫瘍のサイズを測定することにより観察した。マウスをＩＤＯｉ単独で処理することは腫瘍増殖阻害をもたらし、このことは、β−カテニンに加えて、該４Ｔ１腫瘍は、腫瘍増殖に関してＩＤＯ１にも依存することを示唆している。図３Ｃ。
【０２９９】
実施例５：Ｗｎｔ活性化４Ｔ１腫瘍におけるβ−カテニン阻害及び／またはチェックポイント阻害剤と組み合わせたＩＤＯ１の阻害
【０３００】
次に、４Ｔ１腫瘍でのＢＣＡＴ１及びＩＤＯｉもしくはＢＣＡＴ及びチェックポイント阻害剤（抗ＰＤ−１抗体）による併用療法またはＢＣＡＴ１、ＩＤＯ１、及び抗ＰＤ−１抗体による３剤併用療法を評価した。図４Ｃに示す通り、４Ｔ１担腫瘍マウスを８群（ｎ＝５）に分類し、１日２回、移植後４日目及び６日目にＩＤＯｉで（１回当たり経口で１００ｍｇ／ｋｇ）、及び移植後５日目及び６日目にＢＣＡＴ１またはプラセボで（１回当たりｉｖで３ｍｇ／ｋｇ）、その後移植後７日目及び８日目に抗ＰＤ−１抗体で（１回当たりｉｐで５ｍｇ／ｋｇ）前処理した。マウスには、ＢＣＡＴ１、ＩＤＯｉ及びＰＤ−１抗体を単剤として（図４Ａ）、ならびに２剤の組み合わせ（図４Ｂ）も投与した。ＢＣＡＴ１、ＩＤＯｉ、または抗ＰＤ−１抗体を単剤療法として投与したマウスは、穏やかな抗腫瘍効果を示した。図４Ａ。ＢＣＡＴ１及び抗ＰＤ−１抗体またはＢＣＡＴ１及びＩＤＯｉの併用療法を受けたマウスは、腫瘍増殖速度が低下する腫瘍の停止を示した。図４Ｂ。意外なことに、３剤すべて（ＢＣＡＴ１、ＩＤＯｉ及び抗ＰＤ−１抗体）で処理したマウスは、図４Ｃに示す通り、腫瘍退縮を示し、３剤すべての投与後に腫瘍体積の顕著な減少が始まった。特に、図４Ｃに示す通り、ＢＣＡＴ１、エパカドスタット（ＩＤＯｉ）、及び抗ＰＤ−１抗体の３剤併用の抗腫瘍効果は、第ＩＩＩ相試験で現在評価中のエパカドスタット（ＩＤＯｉ）及び抗ＰＤ−１の２剤併用で認められた効果より著しく優れていた。
【０３０１】
試験の終了時（最後の抗ＰＤ−１抗体処理の７２時間後）、腫瘍を採取し、ｑＰＣＲに供してある特定のＴ細胞マーカーを分析した。３剤併用処理を受けたマウスでは、他の群と比較して、ＣＤ８のｍＲＮＡが大幅に増加した。図５Ａ。ＦｏｘＰ３は、Ｔｒｅｇと呼ばれる免疫抑制Ｔ細胞のマーカーである。抗ＰＤ−１抗体をプラセボまたはＢＣＡＴ１処理のいずれかに追加すると、Ｆｏｘｐ３のｍＲＮＡレベルが増加した。図５Ｂ。これらのレベルは、ＩＤＯｉの追加でバックグラウンドレベルに戻った。図５Ｂ。いかなる理論にも拘束されることを意図するものではないが、これらのｍＲＮＡのデータは、ＢＣＡＴ１、ＩＤＯｉ、及び抗ＰＤ−１抗体の３剤併用により、ＣＤ８Ｔ細胞の大幅な増加及び免疫抑制Ｔｒｅｇのレベルの低下の両方をもたらすこと、ならびにこの４Ｔ１腫瘍微小環境内のＴ細胞集団のこれら変化が、観察された腫瘍退縮に寄与している可能性があることを示唆している。
【０３０２】
実施例６：非Ｗｎｔ活性化Ｂ１６Ｆ１０腫瘍におけるβ−カテニンの阻害
【０３０３】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＢ１６Ｆ１０腫瘍を移植した。図６Ａに示す通り、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞移植の６日後、平均腫瘍サイズ２００ｍｍ3で、マウスを２つの群に分類し、移植後６日及び７日、ならびに移植後１２日及び１３日目に再度プラセボまたはＢＣＡＴ１のいずれかの３ｍｇ／ｋｇで処理した。最後の投与の４８時間後、腫瘍を採取し、免疫組織化学によりβ−カテニン、ＣＤ８及びＩＤＯ１のタンパク質レベルをアッセイした。４Ｔ１腫瘍で観察されたように、ＢＣＡＴ１処理は、β−カテニンのレベルを低下させ、ＣＤ８レベルを増加させた（図６Ｂ）。しかしながら、４Ｔ１腫瘍とは異なり、ＢＣＡＴ１処理は、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍でＩＤＯ１のレベルを低下させた。図６Ｂ。
【０３０４】
同様の試験では、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに移植し、移植の５日後、これらマウスを２つの群にランダム化し、プラセボまたはＢＣＡＴ１で処理した。図６Ｃに示す通り、マウスに、プラセボまたはＢＣＡＴ１の３ｍｇ／ｋｇを５日目及び６日目に投与した。この投与サイクルを、その後１１日目と１２日目に反復した。腫瘍増殖をこの処理期間にわたって腫瘍のサイズを測定することにより観察した。単剤として投与したＢＣＡＴ１は、これらＢ１６Ｆ１０腫瘍における腫瘍増殖を有意に阻害しなかった。図６Ｃ。
【０３０５】
同様の試験を行い、２ラウンドのＢＣＡＴ１処理後の免疫細胞浸潤のレベルを観察した。図７Ａに示す通り、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を、ＰＢＳ、プラセボ、またはＢＣＡＴ１の３ｍｇ／ｋｇで、移植後６日目及び７日目、ならびに移植後１２日目及び１３日目に再度処理した。最後の投与の２４時間後に腫瘍を採取し、フローサイトメトリーに供した。図７Ｂに示すように、ＣＤ８Ｔ細胞ならびに複数のチェックポイント（ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、及びＴｉｍ−３）は、ＢＣＡＴ１による処理後に上昇した。ＭＤＳＣ細胞集団は変化しなかった。図７Ｂ。プラセボ処理は、Ｔｒｅｇのレベルをわずかに低下させたが、ＢＣＡＴ１処理は、ＰＢＳと比較してＴｒｅｇのレベルを有意に変化させず（図７Ｂ）、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍のＢＣＡＴ１での処理が、免疫抑制ＭＤＳＣ及びＴｒｅｇ細胞集団を有意に変更しなかったことを示唆する。
【０３０６】
実施例７：非Ｗｎｔ活性化Ｂ１６Ｆ１０腫瘍におけるＩＤＯ１の阻害
【０３０７】
ＩＤＯ阻害剤であるエパカドスタット（ＩＤＯｉ）による別の有効性試験をＢ１６Ｆ１０腫瘍で行った。図８Ａに示す通り、Ｂ１６Ｆ１０担腫瘍マウスを２つの群にランダム化し、移植後７日目及び９日目に媒体またはＩＤＯｉにより１日２回、１回当たり１００ｍｇ／ｋｇにて経口で処理した。腫瘍を最後の投与の４８時間後に採取し、免疫組織化学に供してβ−カテニン、ＣＤ８及びＩＤＯ１レベルを分析した。１００ｍｇ／ｋｇのＩＤＯｉは、ＩＤＯ１レベルをほぼ完全に低下させた。ＩＤＯｉも同様に、β−カテニンレベルを低下させ、ＣＤ８レベルを増加させた。図８Ｂ。
【０３０８】
同様の試験で、図８Ｃに示す通り、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに移植し、移植の７日後、これらのマウスを２つの群にランダム化し、７日目及び９日目に媒体またはＩＤＯｉにより１日２回、１回当たり１００ｍｇ／ｋｇで処理した。腫瘍増殖をこの処理期間にわたって腫瘍のサイズを測定することにより観察した。ＩＤＯ１の枯渇は、有意な腫瘍増殖阻害をもたらさなかった。図８Ｃ。
【０３０９】
実施例８：Ｂ１６Ｆ１０腫瘍におけるβ−カテニン阻害及び／またはチェックポイント阻害剤と組み合わせたＩＤＯ１の阻害
【０３１０】
次に、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍でのＢＣＡＴ１及びＩＤＯｉもしくはＢＣＡＴ及びチェックポイント阻害剤（抗ＰＤ−１抗体）による併用療法またはＢＣＡＴ１、ＩＤＯｉ、及び抗ＰＤ−１抗体による３剤併用療法を評価した。図９Ａ〜Ｃに示す通り、２００ｍｍ3のＢ１６Ｆ１０担腫瘍マウスを群に分け、単剤または２剤または３剤のいずれかで処理した。これらの試験では、図９Ａ〜Ｃに示す通り、マウスを１日２回、移植後６日目及び８日目にＩＤＯｉで（１回当たり経口で１００ｍｇ／ｋｇ）、移植後７日目及び８日目にＢＣＡＴ１またはプラセボで（１回当たりｉｖで３ｍｇ／ｋｇ）、その後、移植後９日目及び１０日目に抗ＰＤ−１抗体で（１回当たりｉｐで５ｍｇ／ｋｇ）処理した。
【０３１１】
これらＢ１６Ｆ１０腫瘍では、単剤は効果がなく、ＢＣＡＴ１及びＩＤＯ１の併用も同様であった（図９Ａ〜Ｂ）。ＢＣＡＴ１と抗ＰＤ−１抗体またはＩＤＯｉと抗ＰＤ−１抗体の併用で処理した腫瘍は、これらの単剤での処理と比較して相乗的な腫瘍増殖阻害を示した。図９Ｂ〜Ｃ。しかしながら、この組み合わせへの第３の薬剤の追加（すなわち、ＢＣＡＴ、ＩＤＯｉ及び抗ＰＤ−１抗体）は、ＢＣＡＴ１＋抗ＰＤ−１抗体またはＩＤＯｉ＋抗ＰＤ−１抗体と比較して有意にＢ１６Ｆ１０腫瘍増殖阻害を高めるとは思われなかった。図９Ｂ〜Ｃ。Ｂ１６Ｆ１０腫瘍のＢＣＡＴ１処理がＩＤＯ１レベルを枯渇させ、免疫抑制ＭＤＳＣ及びＴｒｅｇを変更しなかったことから、ＩＤＯｉを含めることはさらなる利点に寄与しないと思われた。同様に、ＩＤＯｉは単剤でＩＤＯ１及びβ−カテニンレベルを低下させた。本知見と一致して、ＩＤＯｉと抗ＰＤ−１抗体の併用により、ＢＣＡＴ１と抗ＰＤ−１抗体の併用と同様の有効性が生じた。
【０３１２】
実施例９：Ｗｎｔ活性化ＭＭＴＶ腫瘍モデルにおけるβ−カテニンの阻害
【０３１３】
β−カテニン阻害が自然発生腫瘍におけるＴ細胞浸潤及びＩＤＯ１レベルに与える効果を調べるため、ＭＭＴＶ−Ｗｎｔ１モデルを使用した。ＭＭＴＶ−Ｗｎｔ担腫瘍マウスを、図１０Ａに示す通り、１、２、及び３試験日に１回当たり５ｍｇ／ｋｇにてＢＣＡＴ１で処理した。腫瘍を最後の投与の２４時間後に採取し、免疫組織化学に供してβ−カテニン、ＣＤ８及びＩＤＯ１レベルを特定した。これらの結果は、４Ｔ１腫瘍で観察されたものとよく似ていた。β−カテニンレベルは低下し、ＣＤ８レベルは上昇し、ＩＤＯ１レベルは変化しなかった（図１０Ｂ）。
【０３１４】
別の試験では、ＭＭＴＶ−Ｗｎｔ担腫瘍マウスを１、２、６、及び７試験日に３ｍｇ／ｋｇにてＢＣＡＴ１で処理し、腫瘍増殖を観察した。マウスをＢＣＡＴ１単独で処理することにより、４Ｔ１腫瘍で観察された腫瘍減少と同様、約５０％の腫瘍増殖阻害が生じた（図１０Ｃ）。
【０３１５】
実施例１０：Ｗｎｔ活性化ＭＭＴＶ腫瘍モデルにおけるＩＤＯ１の阻害
【０３１６】
別の試験では、ＭＭＴＶ担腫瘍マウスを、図１１Ａに示す通り、３日連続して、１日２回、１回当たり３０ｍｇ／ｋｇにてＩＤＯ１阻害剤（ＩＤＯｉ）で処理した。腫瘍を最後の投与の２４時間後に採取し、免疫組織化学に供してβ−カテニン、ＣＤ８及びＩＤＯ１レベルを特定した。３０ｍｇ／ｋｇのＩＤＯｉは、ＩＤＯ１レベルをほぼ完全に低下させたが、β−カテニン及びＣＤ８のレベルは、ＩＤＯｉ処理後に上昇した（図１１Ｂ）。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ−１】
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【図２Ｂ−２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ−１】
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【図７Ｂ−２】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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