(57)【要約】  【解決手段】ＪＡＫ阻害剤としての［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン化合物、ならびにＪＡＫ１または／およびＴＹＫ２に関係する疾患を処置するための薬物の調製におけるその適用が開示される。特に、本発明は、式（Ｉ）によって表される化合物、またはその異性体もしくは薬学的に許容される塩に関する。（Ｉ）2021534259.tif 000084
2021534259.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩
【化１】
2021534259.tif 000070
（式中、
Ｅ１およびＥ２は、単結合、−ＣＨ２−または−（ＣＨ２）２−から独立して選択され、
Ｌ１は、単結合、−（ＣＨ２）ｇ−、−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｈ−から選択され、
ｍは１または２であり、
ｎは１または２であり、
ｇは１、２または３であり、
ｈは１、２または３であり、
Ｒ１は、Ｈ、ＣＮ、Ｃ１〜６アルキル基、または３〜６員のシクロアルキル基から選択され、前記Ｃ１〜６アルキル基および３〜６員のシクロアルキル基は、１、２または３つのＲａによって任意選択的に置換されており、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣ１〜３アルキル基から選択され、前記Ｃ１〜３アルキル基は、１、２または３つのＲｂによって任意選択的に置換されており、
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣ１〜３アルキル基から独立して選択され、前記Ｃ１〜３アルキル基は、１、２または３つのＲｃによって任意選択的に置換されており、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣ１〜３アルキル基から独立して選択され、前記Ｃ１〜３アルキル基は、１、２または３つのＲｄによって任意選択的に置換されており、
各Ｒａは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮまたはＣ１〜３アルキル基から独立して選択され、前記Ｃ１〜３アルキル基は、１、２または３つのＲによって任意選択的に置換されており、
各Ｒｂは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから独立して選択され、
各Ｒｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから独立して選択され、
各Ｒｄは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから独立して選択され、
各Ｒは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから独立して選択される）。
【請求項２】
各ＲａがＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣＮから独立して選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１が、Ｈ、ＣＮ、Ｃ１〜３アルキル基、または３〜５員のシクロアルキル基から選択され、前記Ｃ１〜３アルキル基および３〜５員のシクロアルキル基が、１、２または３つのＲａによって任意選択的に置換されている、請求項１または２に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ１が、Ｈ、ＣＮ、ＣＨ３、
【化２】
2021534259.tif 000071
から選択され、前記ＣＨ３、
2021534259.tif 000072
が、１、２または３つのＲａによって任意選択的に置換されている、請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒ１が、Ｈ、ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、
【化３】
2021534259.tif 000073
から選択される、請求項４に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒ２が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから独立して選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから独立して選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
Ｌ１が、単結合、−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２−、−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）−から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
構造単位
【化４】
2021534259.tif 000074
が、
2021534259.tif 000075
から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
構造単位
【化５】
2021534259.tif 000076
が、
2021534259.tif 000077
から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
構造単位
【化６】
2021534259.tif 000078
が、
2021534259.tif 000079
から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
【化７】
2021534259.tif 000080
（式中、
Ｌ１は、請求項１または９で定義された通りであり、
Ｒ１は、請求項１〜５で定義された通りであり、
Ｒ２は、請求項１または６で定義された通りであり、
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、請求項１または７で定義された通りであり、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、請求項１または８で定義された通りである）
から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
【化７】
2021534259.tif 000081
（式中、
Ｌ１は、請求項１または９で定義された通りであり、
Ｒａは、請求項１または２で定義された通りであり、
Ｒ２は、請求項１または６で定義された通りであり、
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、請求項１または７で定義された通りであり、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、請求項１または８で定義された通りである）
から選択される、請求項１３に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
以下の化合物、その異性体、およびその薬学的に許容される塩。
【化８】
2021534259.tif 000082
【請求項１６】
【化９】
2021534259.tif 000083
から選択される、請求項１５に記載の化合物、その異性体、およびその薬学的に許容される塩。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物、その異性体およびその薬学的に許容される塩、ならびに薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１８】
ＪＡＫ１および／またはＴＹＫ２に関係する疾患を処置するための薬物の調製における、請求項１から１６のいずれか一項に記載の化合物、その異性体およびその薬学的に許容される塩、または請求項１７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１９】
前記薬物が、関節リウマチを処置するために使用される薬物であることを特徴とする、請求項１８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年８月２３日出願の中国特許出願第ＣＮ２０１８１０９６８２０７．６号の優先権を主張する。
本発明は、ＪＡＫ阻害剤としての［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン化合物、ならびにＪＡＫ１および／またはＴＹＫ２に関連する疾患を処置するための医薬品を調製するためのその使用に関する。特に、本発明は、式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＪＡＫは、炎症、自己免疫疾患、増殖性疾患、移植片拒絶、軟骨代謝の損傷に関連する疾患、先天性軟骨形成異常および／またはＩＬ６の過剰分泌に関連する疾患に関係するチロシンキナーゼファミリーに属する。本出願はさらに、上記の化合物、上記の化合物を含有する医薬組成物を生産するための方法、本出願による化合物を投与することによって、炎症、自己免疫疾患、増殖性疾患、移植片拒絶、軟骨代謝の損傷に関連する疾患、先天性軟骨形成異常および／またはＩＬ６の過剰分泌に関連する疾患を予防および／または処置するための方法を提供する。
【０００３】
ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）は、膜受容体からＳＴＡＴ転写因子へのサイトカインシグナルを媒介する細胞質チロシンキナーゼである。既存の技術では、４つの種類のＪＡＫキナーゼ、すなわちＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２が記載されている。サイトカインがその受容体と結合すると、ＪＡＫキナーゼファミリーのメンバーは自己リン酸化し、かつ／または互いにトランスリン酸化し、次いでＳＴＡＴがリン酸化され、続いて核内に移行して転写を調節する。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ細胞内シグナル伝達は、インターフェロン、ほとんどのインターロイキンおよび種々のサイトカイン、ならびにＥＰＯ、ＴＰＯ、ＧＨ、ＯＳＭ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＰＲＬなどの内分泌因子に適用される（Vainchenker W. et al. (2008)）。
【０００４】
遺伝学モデルと小分子ＪＡＫ阻害剤の組合せについての研究により、ＪＡＫのいくつかの治療作用が明らかになっている。ＪＡＫ３は、マウスおよびヒトの遺伝学によって免疫抑制の標的として特定された（O’Shea J. et al. (2004)）。ＪＡＫ３阻害剤は、臨床開発において成功裏に使用されており、初期では移植片拒絶に使用され、後年では、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬、およびクローン病などの他の免疫炎症疾患に使用されている（http://clinicaltrials.gov/）。マウスの遺伝学および遺伝子ノックアウト研究（Levy D. and Loomis C.(2007)）により、ＴＹＫ２は、免疫炎症の潜在的な標的であることが示されている。ＪＡＫ１は、免疫炎症疾患の分野における新規の標的である。ＪＡＫ１は、他のＪＡＫとヘテロ二量体化され、炎症性シグナルの伝達によって駆動される細胞質シグナルを伝達する。したがって、ＪＡＫ１および／または他のＪＡＫの阻害は、種々の炎症疾患および／またはＪＡＫによって媒介されるシグナル伝達によって駆動される他の疾患に対する治療効果を示すことが予測される。
【０００５】
ＵＳ２００９２２０６８８は、Ｇａｌａｐａｇｏｓによって開発された、関節リウマチの処置に使用される臨床第ＩＩＩ相薬であるフィルゴチニブを開示している。
【０００６】
【化１】
2021534259.tif 000003
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００８】
【化２】
2021534259.tif 000004
【０００９】
（式中、
Ｅ１およびＥ２は、単結合、−ＣＨ２−または−（ＣＨ２）２−から独立して選択され、
Ｌ１は、単結合、−（ＣＨ２）ｇ−、−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｈ−から選択され、
ｍは１または２であり、
ｎは１または２であり、
ｇは１、２または３であり、
ｈは１、２または３であり、
Ｒ１は、Ｈ、ＣＮ、Ｃ１〜６アルキル基または３〜６員のシクロアルキル基から選択され、Ｃ１〜６アルキル基および３〜６員のシクロアルキル基は、１、２または３つのＲａによって任意選択的に置換されており、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣ１〜３アルキル基から選択され、Ｃ１〜３アルキル基は、１、２または３つのＲｂによって任意選択的に置換されており、
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣ１〜３アルキル基から独立して選択され、Ｃ１〜３アルキル基は、１、２または３つのＲｃによって任意選択的に置換されており、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣ１〜３アルキル基から独立して選択され、Ｃ１〜３アルキル基は、１、２または３つのＲｄによって任意選択的に置換されており、
Ｒａのそれぞれは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮまたはＣ１〜３アルキル基から独立して選択され、Ｃ１〜３アルキル基は、１、２または３つのＲによって任意選択的に置換されており、
各Ｒｂは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから独立して選択され、
各Ｒｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから独立して選択され、
各Ｒｄは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから独立して選択され、
各Ｒは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから独立して選択される）。
【００１０】
本発明の一部の実施形態では、上記のＲａのそれぞれは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣＮから独立して選択され、他の可変基は本明細書で定義される通りである。
本発明の一部の実施形態では、上記のＲ１は、Ｈ、ＣＮ、Ｃ１〜３アルキル基または３〜５員のシクロアルキル基から選択され、Ｃ１〜３アルキル基および３〜５員のシクロアルキル基は、１、２または３つのＲａによって任意選択的に置換されており、他の可変基は本出願で定義される通りである。
本発明の一部の実施形態では、上記のＲ１は、Ｈ、ＣＮ、ＣＨ３、
【００１１】
【化３】
2021534259.tif 000005
【００１２】
から選択され、ＣＨ３、
【００１３】
【化４】
2021534259.tif 000006
【００１４】
は、１、２または３つのＲａによって任意選択的に置換されており、他の可変基は本明細書で定義される通りである。
本発明の一部の実施形態では、上記のＲ１は、Ｈ、ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、
【００１５】
【化５】
2021534259.tif 000007
【００１６】
から選択され、他の可変基は本出願で定義される通りである。
本発明の一部の実施形態では、上記のＲ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから選択され、他の可変基は本明細書で定義される通りである。
本発明の一部の実施形態では、上記のＲ３、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから独立して選択され、他の可変基は本明細書で定義される通りである。
本発明の一部の実施形態では、上記のＲ６、Ｒ７およびＲ８は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩから独立して選択され、他の可変基は本明細書で定義される通りである。
本発明の一部の実施形態では、上記のＬ１は、単結合、−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２−、−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）−から選択され、他の可変基は本明細書で定義される通りである。
本発明の一部の実施形態では、上記の構造単位
【００１７】
【化６】
2021534259.tif 000008
【００１８】
は、
【００１９】
【化７】
2021534259.tif 000009
【００２０】
から選択され、他の可変基は本明細書で定義される通りである。
本発明の一部の実施形態では、上記の構造単位
【００２１】
【化８】
2021534259.tif 000010
【００２２】
は、
【００２３】
【化９】
2021534259.tif 000011
【００２４】
から選択され、他の可変基は本明細書で定義される通りである。
本発明の一部の実施形態では、上記の単位
【００２５】
【化１０】
2021534259.tif 000012
【００２６】
は、
【００２７】
【化１１】
2021534259.tif 000013
【００２８】
から選択され、他の可変基は本明細書で定義される通りである。
本発明の一部の実施形態では、上記の構造単位
【００２９】
【化１２】
2021534259.tif 000014
【００３０】
は、
【００３１】
【化１３】
2021534259.tif 000015
【００３２】
から選択され、他の可変基は本明細書で定義される通りである。
上記の変数のいずれかから組み合わされる一部の実施形態が存在する。
本発明の一部の実施形態では、上記の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩は、
【００３３】
【化１４】
2021534259.tif 000016
【００３４】
（式中、
Ｌ１、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は本明細書で定義される通りである）
から選択される。
本発明の一部の実施形態では、上記の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩は、
【００３５】
【化１５】
2021534259.tif 000017
【００３６】
（式中、
Ｌ１、Ｒａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は本明細書で定義される通りである）
から選択される。
本発明はさらに、以下の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩：
【００３７】
【化１６】
2021534259.tif 000018
【００３８】
を提供する。
本発明の一部の実施形態では、上記の式（Ｉ）の化合物、その異性体、またはその薬学的に許容される塩は、
【００３９】
【化１７】
2021534259.tif 000019
【００４０】
から選択される。
本発明はさらに、活性物質として、治療有効量の上記の化合物、その異性体、その薬学的に許容される塩、またはその薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物を提供する。
本発明はさらに、ＪＡＫ１および／またはＴＹＫ２に関係する疾患を処置するための医薬品の調製における、上記の化合物、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物の使用を提供する。
本発明の一部の実施形態では、上記の使用は、上記の医薬品が、関節リウマチの処置のための医薬品であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００４１】
技術的効果
本発明における種々の化合物は、４つのＪＡＫキナーゼのサブタイプ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験でＪＡＫ１および／またはＴＹＫ２に対する良好な選択的阻害効果を示しており、これらの化合物は、薬物動態実験で高い曝露および良好な経口バイオアベイラビリティを示し、これは良好なｉｎ  ｖｉｖｏでの効力をもたらすのに有利である。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】関節炎を有するマウスの平均臨床スコアリングを示す図である。
【図２】投与期間におけるＡＵＣ下面積によって計算された、マウスの関節炎の阻害率を示す図である。
【図３】投与期間におけるマウスの関節炎の発症率を示す図である。
【図４】関節炎を有するマウスの体重の変化を示す図である。
【図５】関節炎を有するラットの臨床スコアリングを示す図である。
【図６】関節炎を有するラットの足の体積の変化曲線を示す図である。
【図７】関節炎を有するラットの体重変化曲線を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
定義および説明
別段述べられない限り、文脈における用語および語句は、以下の意味を指す。個別の定義を有さない特定の用語または語句は、不明確または不明瞭とみなされるべきではなく、それらの通常の意味とみなされるべきである。文脈において商品名が言及される場合、その製品または活性物質を指す。
【００４４】
「薬学的に許容される」という用語は、本明細書で使用される場合、信頼できる医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずに、ヒトおよび動物組織と接触して使用するのに好適であり、妥当なベネフィット／リスク比に見合う化合物、材料、組成物および／または剤形を指す。
「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書で見出される特定の置換基および相対的に非毒性の酸または塩基に由来する化合物によって調製される、本発明における化合物の塩を指す。本発明の化合物に相対的に酸性の官能基が存在する場合、そのような化合物の中性形態を、十分な量の純粋な溶液または好適な不活性溶媒中のアルカリと接触させることにより、アルカリ付加塩が調製されてもよい。薬学的に許容されるアルカリ付加塩として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミンまたはマグネシウム塩などが挙げられる。本発明の化合物が相対的にアルカリ性の官能基を含有する場合、そのような化合物の中性形態を、十分な量の純粋な溶液または好適な不活性溶媒中の酸と接触させることにより、酸付加塩が調製されてもよい。薬学的に許容される酸付加塩の例として、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、重炭酸、リン酸、リン酸一水素、リン酸二水素、硫酸、硫化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などを含む、鉱酸に由来する塩；酢酸、プロピオン酸、イソブチル酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、オクタン二酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、パラ−トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などを含む有機酸に由来する塩；ならびにアミノ酸（例えば、アルギニン）に由来する塩、ならびにグルクロン酸などの有機酸に由来する塩などが挙げられる。本発明における一部の特定の化合物は、アルカリ性および酸性官能基を含有し、したがって任意のアルカリまたは酸付加塩に変換されてもよい。
本発明における薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって酸基または塩基性基を有する親化合物から調製されてもよい。一般的に、そのような塩を調製するための方法は、有機酸または塩基の形態のこれらの化合物を、水もしくは有機溶媒またはそれらの混合物中の適切な化学量論の塩基または酸と反応させることにより、それらを調製することを含む。
【００４５】
本発明における化合物は、特定の幾何異性体または立体異性体の形態で存在してもよい。本発明で想定される化合物は、シスおよびトランス異性体、（−）および（＋）エナンチオマー、（Ｒ）および（Ｓ）エナンチオマー、ジアステレオ異性体、（Ｄ）体、（Ｌ）体ならびにそれらのラセミ混合物、およびエナンチオマーとジアステレオ異性体の混合物などの他の混合物を含み、これらのすべては本発明の範囲に含まれる。他の不斉炭素原子が、アルキル基などの置換基に存在してもよい。これらの異性体すべておよびそれらの混合物は、本発明の範囲に含まれる。
別段述べられない限り、「エナンチオマー」または「光学異性体」という用語は、互いに鏡像である立体異性体である。
別段述べられない限り、「シス−トランス異性体」または「幾何異性体」という用語は、環を形成する炭素原子の二重結合または単結合が自由に回転できないために形成される。
別段述べられない限り、「ジアステレオ異性体」という用語は、２つ以上のキラル中心を有し、分子間に鏡像関係を有さない立体異性体である分子を指す。
別段述べられない限り、「（Ｄ）」または「（＋）」は右回転を指し、「（Ｌ）」または「（−）」は左回転を指し、「（ＤＬ）」または「（±）」はラセミ体を指す。
別段述べられない限り、楔形の完全な線の結合
【００４６】
【化１８】
2021534259.tif 000020
および楔形の点線結合
2021534259.tif 000021
は、立体中心の絶対配置を表し、直線の実線結合
2021534259.tif 000022
および直線の点線
2021534259.tif 000023
は立体中心の相対配置を表し、波線
2021534259.tif 000024
は、楔形の実線結合
2021534259.tif 000025
または楔形の点線結合
2021534259.tif 000026
を表すか、または波線
2021534259.tif 000027
は、直線の実線結合
2021534259.tif 000028
および直線の点線
2021534259.tif 000029
を表す。
【００４７】
別段述べられない限り、化合物に、Ｃ＝Ｃ二重結合、Ｃ＝Ｎ二重結合およびＮ＝Ｎ二重結合などの二重結合が存在し、二重結合上の原子が２つの異なる置換基に接続される（窒素原子を含有する二重結合では、窒素原子上の孤立電子対は接続された置換基とみなされる）とき、化合物の二重結合上の原子が波線
【００４８】
【化１９】
2021534259.tif 000030
【００４９】
によってそれらの置換基に接続されている場合は、（Ｚ）異性体、（Ｅ）異性体、または化合物の両方の混合物であるとみなされる。例えば、以下の式（Ａ）は、化合物が、式（Ａ−１）もしくは式（Ａ−２）の単一の異性体、または式（Ａ−１）と式（Ａ−２）の２つの異性体の混合物として存在することを表し、以下の式（Ｂ）は、化合物が、式（Ｂ−１）もしくは式（Ｂ−２）の単一の異性体、または式（Ｂ−１）と式（Ｂ−２）の２つの異性体の混合物の形態で存在することを表す。以下の式（Ｃ）は、化合物が、式（Ｃ−１）もしくは式（Ｃ−２）の単一の異性体、または式（Ｃ−１）と式（Ｃ−２）の２つの異性体の混合物の形態で存在することを表す。
【００５０】
【化２０】
2021534259.tif 000031
【００５１】
別段述べられない限り、「互変異性体」または「互変異性体形態」という用語は、異なる官能基の異性体が動的平衡を保つことができ、かつ室温で相互変換可能であることを意味する。互変異性体が入手可能であるとき（例えば、溶液中）、互変異性体の化学平衡が存在しうる。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピック互変異性体とも呼ばれる）は、ケト−エノール互変異性およびイミン−エナミン互変異性などの、プロトリシスによる相互変換を含む。原子価互変異性体は、結合電子の一部の再組織化による相互変換を含む。特に、特定の例は、ペンタン−２，４−ジオンと４−ヒドロキシアミル−３−エン−２−オン互変異性体の相互変換である。
別段述べられない限り、「異性体に富む」、「異性体濃縮」、「エナンチオマーに富む」、「エナンチオマー濃縮」という用語は、これらの異性体またはエナンチオマーのうちの１つの含有量が１００％未満であり、そのような異性体またはエナンチオマーの含有量が、６０％以上、または７０％以上、または８０％以上、または９０％以上、または９５％以上、または９６％以上、または９７％以上、または９８％以上、または９９％以上、または９９．５％以上、または９９．６％以上、または９９．７％以上、または９９．８％以上、または９９．９％以上であることを意味する。
別段述べられない限り、「過剰の異性体」または「過剰のエナンチオマー」という用語は、２つの異性体またはエナンチオマーの相対的な割合間の差を指す。例えば、異性体またはエナンチオマーの含有量が９０％であり、別の異性体またはエナンチオマーの含有量が１０％である場合、過剰の異性体またはエナンチオマーの値（ｅｅ値）は８０％である。
【００５２】
光学活性（Ｒ）および（Ｓ）異性体ならびにＤおよびＬ体は、キラル合成またはキラル試薬または他の従来技術によって調製することができる。本発明の化合物のエナンチオマーが所望される場合、不斉合成またはキラル促進剤による誘導体化によって調製されてもよく、ここでは得られるジアステレオマー混合物を分離し、補助基を分裂させ、所望の純粋なエナンチオマーを得る。代替的に、分子がアルカリ性官能基（アミノ基など）または酸性官能基（カルボキシル基など）を含有する場合、適切な光学活性酸または塩基とジアステレオマーの塩を形成し、次いで当技術分野で公知の従来の方法によってジアステレオマーを分離し、純粋なエナンチオマーを回収する。さらに、エナンチオマーおよびジアステレオマーの分離は、通常、キラル固定相を使用し、かつ化学的誘導体化（例えば、アミンからカルバメートへ）と選択的に組み合わされるクロマトグラフィーを使用することによって達成される。本発明の化合物は、化合物を構成する１つまたは複数の原子で、非天然の比率の原子の同位体を含有してもよい。例えば、化合物は、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）、またはＣ−１４（１４Ｃ）などの放射性同位体で標識することができる。例えば、重水素を使用して水素を置き換え、重水素化薬物を形成することができる。ジュウテリウムと炭素によって形成される結合は、通常の水素と炭素によって形成されるものより強力である。非重水素化薬物と比較すると、重水素化薬物は、副作用を低減させ、薬物の安定性を増加させ、治癒的効果を増強し、薬物の生物学的半減期を延長させるという利点を有する。本発明の化合物のすべての同位体組成の変換は、放射性であるか否かにかかわらず、本発明の範囲に含まれる。「任意選択的な」または「任意選択的に」は、必ずしもそうではないが、後に記載されることがある事象または状況を意味し、そのような記載は、事象または条件が生じる環境、および事象または状況が生じない環境を含む。
【００５３】
「置換された」という用語は、特定の原子上のいずれか１つまたは複数の水素原子の、重水素および水素の変種を含みうる置換基による置換を指すが、ただし、特定の原子の原子価状態が正常であり、置換された化合物が安定であることを条件とする。置換基が酸素（すなわち、＝Ｏ）であるとき、２つの水素原子が置換されることを意味する。酸素の置換は、芳香族基では生じない。「任意選択的に置換されている」という用語は、置換されてもよく、非置換であってもよいことを意味する。別段指定されない限り、置換基の種類および数は、化学的実行可能性に基づいて任意選択的であり得る。
【００５４】
化合物の組成または構造に、任意の可変基（例えば、Ｒ）が１つより多く存在するとき、その定義は各場合において独立である。したがって、例えば、基が０〜２つのＲで置換される場合、基は、最大２つのＲによって任意選択的に置換されていてもよく、各場合のＲは、独立した選択肢を有する。さらに、置換基および／またはそれらの変種の組合せは、そのような組合せが安定な化合物を生成する場合にのみ許容される。
−（ＣＲＲ）０−など、連結基の数が０であるとき、連結基は単結合である。
可変基の１つが単結合から選択されるとき、２つの連結基が直接連結されることを意味する。例えば、Ｌが単結合を表すとき、Ａ−Ｌ−Ｚの構造は、実際にはＡ−Ｚである。
置換基が空であるとき、置換基が存在しないことを意味する。例えば、Ａ−ＸのＸが空であるとき、構造は実際にはＡであることを意味する。列挙される置換基が、どの原子が置換基に接続されるかを示さないとき、置換基は、置換基の任意の原子によって結合されてもよい。例えば、置換基としてのピリジニル基は、ピリジン環の任意の炭素原子によって置換される基に接続されてもよい。
【００５５】
列挙される連結基がその接続方向を示さないとき、接続方向は任意選択的である。例えば、
【００５６】
【化２１】
2021534259.tif 000032
【００５７】
における接続基Ｌが−Ｍ−Ｗ−であるとき、−Ｍ−Ｗ−は、左から右に読んで同じ方向で環ＡおよびＢを接続し、
【００５８】
【化２２】
2021534259.tif 000033
【００５９】
を形成してもよく、または左から右に読んで反対方向で環ＡおよびＢを接続し、
【００６０】
【化２３】
2021534259.tif 000034
【００６１】
を形成してもよい。連結基、置換基および／またはそれらの変種の組合せは、そのような組合せが安定な化合物を生成する場合にのみ許容される。
【００６２】
別段述べられない限り、環上の原子の数は環員の数と特定され、例えば「５〜７員環」は、周囲に５〜７個の原子が配置された環を指す。
別段指定されない限り、「５〜６員環」は、５〜６個の環原子からなるシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルケニル、シクロアルキニル、ヘテロシクロアルキニル、アリールまたはヘテロアリールを意味する。環は、単一の環、ならびにらせん環、複合環および架橋環などの二重環系も含む。別段指定されない限り、環は、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択される１、２または３個のヘテロ原子を任意選択的に含有する。５〜６員環は、５元素環、６元素環などを含む。「５〜６員環」は、例えば、フェニル、ピリジル、ピペリジニルなどを含み、一方で「５〜６員の複素環式アルキル」という用語は、ピペリジニルなどを含むが、フェニルは含まない。「環」という用語はまた、それぞれが独立して上記の定義に適合する、少なくとも１つの環を含有する環系を含む。
【００６３】
別段述べられない限り、「Ｃ１〜６アルキル基」という用語は、１〜６個の炭素原子からなる、非分岐または分岐飽和炭化水素基を指す。Ｃ１〜６アルキル基は、一価（例えば、メチル）、二価（例えば、メチレン）、または多価（例えば、メチン）でありうるＣ１〜５、Ｃ１〜４、Ｃ１〜３、Ｃ１〜２、Ｃ２〜６、Ｃ２〜４、Ｃ６およびＣ５アルキル基などを含む。Ｃ１〜６アルキル基の例として、これらに限定されないが、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（ｎ−プロピルおよびイソプロピルを含む）、ブチル（ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチルおよびｔ−ブチルを含む）、ペンチル（ｎ−ペンチル、イソペンチルおよびネオペンチルを含む）、ヘキシルなどが挙げられる。
別段述べられない限り、「Ｃ１〜３アルキル基」という用語は、１〜３個の炭素原子からなる、非分岐または分岐飽和炭化水素基を指す。記載されるＣ１〜３アルキル基は、一価（例えば、メチル）、二価（例えば、メチレン）、または多価（例えば、メチン）のものでありうるＣ１〜２およびＣ２〜３アルキル基などを含む。Ｃ１〜３アルキル基の例として、これらに限定されないが、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（ｎ−プロピルおよびイソプロピルを含む）などが挙げられる。
【００６４】
別段述べられない限り、「Ｃ３〜６シクロアルキル基」は、単環および二環系を含む飽和環式炭化水素基を指す。Ｃ３〜６シクロアルキル基は、一価、二価、または多価のものでありうるＣ３〜５、Ｃ４〜５およびＣ５〜６シクロアルキル基などを含む。Ｃ３〜６シクロアルキル基の例として、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられる。
別段述べられない限り、Ｃｎ〜ｎ＋ｍまたはＣｎ〜Ｃｎ＋ｍは、ｎ〜ｎ＋ｍ個の炭素を有する任意の特定の環境を含む、例えば、Ｃ１〜１２は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１およびＣ１２を含み、さらにｎ〜ｎ＋ｍの任意の範囲を含む、例えば、Ｃ１〜１２は、Ｃ１〜３、Ｃ１〜６、Ｃ１〜９、Ｃ３〜６、Ｃ３〜９、Ｃ３〜１２、Ｃ６〜９、Ｃ６〜１２およびＣ９〜１２などを含む。同様に、ｎ員〜ｎ＋ｍ員は、環上の原子の数がｎ〜ｎ＋ｍである、例えば、３〜１２員環は、３員環、４員環、５員環、６員環、７員環、８員環、９員環、１０員環、１１員環および１２員環を含み、さらにｎ〜ｎ＋ｍの任意の範囲を含む、例えば、３〜１２員環は、３〜６員環、３〜９員環、５〜６員環、５〜７員環、６〜７員環、６〜８員環および６〜１０員環などを含むことを意味する。
【００６５】
本発明の化合物は、以下に列挙される特定の実施形態、化合物と他の化学的合成方法との組合せによって形成される実施形態、および当業者に周知の同等の置換方法を含む、当業者に周知の種々の合成方法によって調製することができる。好ましい実施形態として、これらに限定されないが、本発明の実施形態が挙げられる。
【００６６】
本発明で使用される溶媒は市販されている。本発明は、以下の略語を用いる：ａｑは水、ＨＡＴＵはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート、ＥＤＣはＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩、ｍ−ＣＰＢＡは３−クロロペルオキシ安息香酸、ＥＱは当量または等量、ＣＤＩはカルボニルジイミダゾール、ＤＣＭはジクロロメタン、ＰＥは石油エーテル；、ＤＩＡＤはアゾジカルボン酸ジイソプロピル、ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシド、ＥｔＯＡｃは酢酸エチル、ＥｔＯＨはエタノール、ＭｅＯＨはメタノール、ＣＢｚはアミン保護基であるベンジルオキシカルボニル、ＢＯＣはアミン保護基であるｔｅｒｔブトキシカルボニル、ＨＯＡｃは酢酸、ＮａＣＮＢＨ３はエピシアノベルボヒドリド（epicyanoberbohydride）、Ｒ．Ｔ．は室温、Ｏ／Ｎは終夜、ＴＨＦはテトラヒドロフラン、Ｂｏｃ２Ｏは二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸、ＤＩＰＥＡはジイソプロピルエチルアミン、ＳＯＣｌ２は塩化スルホキシド、ＣＳ２は二硫化炭素、ＴｓＯＨはｐ−トルエンスルホン酸、ＮＦＳＩはＮ−フルオロ−Ｎ−（フェニルスルホニル）ベンゼンスルホンアミド、ＮＣＳは１−クロロピロリジン−２，５−ジオン、ｎ−Ｂｕ４ＮＦはフッ化テトラブチルアンモニウム、ｉＰｒＯＨは２−プロパノール、ｍｐは融点、ＬＤＡはジイソプロピルアミノリチウム、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２．ＣＨ２Ｃｌ２は［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリドのジクロロメタン錯体、ＤＩＥＡはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＩＰＡはイソプロパノール、ＨＯＢｔは１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、ＬｉＨＭＤＳはヘキサメチルジシリシルアミノリチウム（hexamethyldisilicylaminolithium）、ＴＥＡはトリエチルアミン、ＨＥＰＥＳは４−ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸、ＬｉＨＭＤＳはヘキサメチルジシリシルアミノリチウム、ＥＤＣＩはカルボジイミド、Ｐｄ／Ｃはパラジウム炭素、ＭＥＴＨＡＮＯＬはメタノール、ＫＯＡｃは酢酸カリウム、Ｋ２ＣＯ３は炭酸カリウムを表す。
化合物は人工的に、またはＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアによって命名され、市販の化合物は供給業者のカタログ名によって命名される。
【実施例】
【００６７】
本発明を以下の実施形態によって詳述するが、本発明に不利となる制限を課すものではない。本発明はここで詳述され、特定の実施形態もまた開示される。本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明の特定の実施形態に種々の変更および改良をなすことが当業者には明白である。
【００６８】
実施例１
【００６９】
【化２４】
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【００７０】
ステップ１：ＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、５１．２ｍＬ）を、化合物１−１（１０．２ｇ、４２．６ｍｍｏｌ）を含有するＴＨＦ（１５０ｍＬ）溶液に−７８℃で滴下した。反応溶液を−７８℃で１時間撹拌した後、１，１，１−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−Ｎ−（トリフルオロメタンスルホニル）メタンスルホンアミド（１６．７ｇ、４６．９ｍｍｏｌ）を含有するＴＨＦ（１５０ｍＬ）溶液を反応溶液に添加し、１５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により、原料が完全に消費され、新たな点が発生したことが示された。溶液を２５０ｍＬの飽和塩化アンモニウムを使用してクエンチし、２００ｍＬの水で希釈し、次いでＥｔＯＡｃで抽出した（２００ｍＬ＊３）。有機相を合わせ、飽和生理食塩水で洗浄して硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して濃縮し、化合物１−２を得た。粗生成物を精製することなく次の反応で使用した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.63 (br s, 1H) ,3.50-3.65 (m, 4H), 2.34 (br s, 4H), 1.88 (br t, J=5.90 Hz, 2H), 1.37 (s, 9H).
【００７１】
ステップ２：酢酸カリウム（１２．７ｇ、１２９．３ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２．ＣＨ２Ｃｌ２（３．５ｇ、４．３ｍｍｏｌ）を、化合物１−２（１６ｇ、４３．１ｍｍｏｌ）およびビス（ピナコラート）ジボロン（１２．０ｇ、４７．４ｍｍｏｌ）を含有するＤＭＦ（１００ｍＬ）溶液に添加し、窒素で３回置き換え、窒素条件で７０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣにより、原料が完全に消費され、新たな点が発生したことが示された。反応溶液を、３００ｍＬの水と４００ｍＬのＥｔＯＡｃの混合物に分散した。有機相を分離して飽和生理食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、化合物１−３を得た。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ6.46 (br s, 1H), 3.71 - 3.53 (m, 4H), 2.31 (br d, J=3.0 Hz, 2H), 2.24 - 2.16 (m, 2H), 1.74 (t, J=6.3 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.26 (s, 12H).
【００７２】
ステップ３：窒素雰囲気中、炭酸カリウム（３．８ｇ、２７．３ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２．ＣＨ２Ｃｌ２（７４４ｍｇ、９１１．０μｍｏｌ）を、化合物１−３（３．５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）およびＮ−（５−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）シクロプロパンホルムアミド（２．６ｇ、９．１ｍｍｏｌ）を含有するジオキサン（６０ｍＬ）と水（１５ｍＬ）の溶液に添加した。この反応溶液を９０℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。反応溶液を濃縮して粗生成物を得て、これをクロマトグラフィーによって精製して分離し、化合物１−４を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４２４．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ４：化合物１−４（３．５ｇ、８．２ｍｍｏｌ）を含有するジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に塩酸／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、３０ｍＬ）を添加し、２５℃で０．５時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。固形物を沈殿させ、濾過して乾燥し、化合物１−５（３．３ｇ塩酸塩，粗生成物）を得て、精製することなく次の反応に直接使用した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３２４．１。
【００７３】
ステップ５：窒素雰囲気中，Ｐｄ／Ｃ（１ｇ、１０％）を、化合物１−５（３．０ｇ、８．３４ｍｍｏｌ、塩酸塩）を含有するメタノール（１００ｍＬ）溶液に添加した。懸濁液を水素で３回置き換え、水素（３０ｐｓｉ）雰囲気中３０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。反応溶液を濾過し、次いで濃縮して化合物１−６を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３２６．２［Ｍ＋Ｈ］＋
【００７４】
ステップ６：化合物１−６（０．８７ｇ、２．４０ｍｍｏｌ、塩酸塩）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、ＨＯＢｔ（４８７ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（６９１ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）を添加し、次いで（１Ｓ）−２，２−ジフルオロシクロプロパンカルボン酸（３２３ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）およびエチルジイソプロピルアミン（６２１ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）を添加し、１５℃で１２時間放置して反応させた。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（中性系）で処理して、化合物１−１３を得た：1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ7.32-7.73 (m, 2H), 6.95 (br s, 1H), 3.62-4.22 (m, 4H), 3.45 (br s, 1H), 3.18-3.37 (m, 1H), 2.61 (br s, 1H), 1.45-2.27 (m, 10H), 0.78-1.17 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z: 430.0[M + H]+.
【００７５】
以下の特性データを有する以下の化合物は、化合物１−１３に使用されたものと同じ合成および分離方法を使用して、化合物１−６から共通の中間体として得た（すなわち、化合物１−１３を合成するためのカルボン酸を、酸アミド縮合反応において、以下の標的分子に対応するカルボン酸で置き換えた）：
【００７６】
【化２５】
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【００７７】
化合物１−７：1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ11.08 (br s, 1H), 7.48 - 7.78 (m, 2H), 7.03 (d, J=7.0 Hz, 1H), 3.86 - 4.25 (m, 2H), 3.61 - 3.80 (m, 2H), 3.29 - 3.38 (m, 1H), 2.69 - 2.88 (m, 1H), 1.85 - 2.19 (m, 7H), 1.51 - 1.79 (m, 4H), 0.83 - 0.96 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z: 430.0[M + H]+.
化合物１−８：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.14 (br s, 1H), 7.52-7.66 (m, 2H), 7.00 (d, J=7.03 Hz, 1H), 3.54-3.83 (m, 6H), 3.29 (br t, J=11.54 Hz, 1H), 1.94-2.09 (m, 5H), 1.41-1.70 (m, 4H), 0.77-0.90 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z: 393.1[M + H]+.
化合物１−９：1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 10.99 (br s, 1H), 7.49-7.65 (m, 2H), 6.99 (br d, J=7.03 Hz, 1H), 4.02-4.20 (m, 2H), 3.61-3.78 (m, 2H), 1.94-2.13 (m, 5H), 1.48-1.72 (m, 4H), 1.14-1.32 (m, 4H), 0.77-0.87 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z: 412.1[M + H]+.
化合物１−１０：1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 7.77-7.87 (m, 1H), 7.62 (d, J=8.78 Hz, 1H), 7.20 (dd, J=7.28, 11.80 Hz, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.96 (s, 1H), 3.83 (s, 1H), 3.72 (s, 1H), 3.43-3.56 (m, 1H), 3.22 (dq, J=6.90, 10.75 Hz, 2H), 2.06-2.23 (m, 4H), 1.94 (br s, 1H), 1.56-1.84 (m, 3H), 1.56-2.00 (m, 1H), 0.94-1.14 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z: 436.1[M + H]+.
化合物１−１１：1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 7.56-7.67 (m, 1H), 7.50 (d, J=8.78 Hz, 1H), 7.00 (t, J=7.15 Hz, 1H), 4.26-4.48 (m, 2H), 3.70-3.90 (m, 2H), 3.42-3.59 (m, 1H), 2.08-2.24 (m, 4H), 1.48-1.99 (m, 9H), 0.87-1.10 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z: 419.1[M + H]+.
化合物１−１２：1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 7.56-7.64 (m, 1H), 7.48 (d, J=9.03 Hz, 1H), 6.97 (d, J=7.28 Hz, 1H), 3.91-4.17 (m, 2H), 3.78-3.86 (m, 1H), 3.67-3.75 (m, 1H), 3.40-3.54 (m, 1H), 2.53-2.69 (m, 1H), 1.92-2.21 (m, 6H), 1.72-1.85 (m, 3H), 1.50-1.69 (m, 2H), 0.86-1.08 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z: 430.1[M + H]+.
化合物１−１４：1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 7.57-7.66 (m, 1H), 7.50 (d, J=8.78 Hz, 1H), 6.95-7.03 (m, 1H), 6.01-6.38 (m, 1H), 4.62 (s, 1H), 3.65-4.10 (m, 4H), 3.43-3.58 (m, 1H), 2.76-2.93 (m, 2H), 2.04-2.21 (m, 4H), 1.51-1.87 (m, 4H), 1.01-1.07 (m, 2H), 0.93 (qd, J=3.74, 7.34 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z: 418.1[M + H]+.
化合物１−１５：1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 11.01 (br s, 1H), 7.48-7.66 (m, 2H), 7.00 (dd, J=7.53, 9.79 Hz, 1H), 4.11-4.33 (m, 2H), 3.60-3.81 (m, 2H), 3.25-3.32 (m, 1H), 2.03 (br t, J=9.03 Hz, 5H), 1.53-1.73 (m, 4H), 1.49 (d, J=4.77 Hz, 6H), 0.76-0.88 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z: 421.1[M + H]+.
【００７８】
【化２６】
2021534259.tif 000037
【００７９】
化合物１−１６の合成：化合物１−６（１００ｍｇ、２２７．６μｍｏｌ、ＴＦＡ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（９４ｍｇ、６８２．７μｍｏｌ）および２−ブロモアセトニトリル（３０ｍｇ、２５０．３μｍｏｌ）を添加して、１０℃で１２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を水（５ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン／メタノール（１０／１、１０ｍＬ）によって抽出し、飽和生理食塩水で洗浄して（１０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濾過して濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（中性系）で処理し、化合物１−１６を得た。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ  7.83 (t, J=8.03 Hz, 1H), 7.64 (br d, J=8.78 Hz, 1H), 7.21 (d, J=7.53 Hz, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.23 (s, 2H), 4.08 (s, 2H), 3.49 (br t, J=11.92 Hz, 1H), 2.14-2.30 (m, 4H), 1.79-1.97 (m, 3H), 1.59-1.74 (m, 2H), 0.95-1.12 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z: 365.0[M + H]+.
【００８０】
以下の特性データを有する以下の化合物は、化合物１−１６に使用されたものと同じ合成および分離方法を使用して、化合物１−６から共通の中間体として得た（ブロモアセトニトリルを、標的分子のブロモプロピオニトリルで相応に置き換えた）：
化合物１−１７：1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ11.00 (br s, 1H), 7.50-7.63 (m, 2H), 6.96 (d, J=6.27 Hz, 1H), 3.33-3.34 (m, 2H), 3.23-3.30 (m, 1H), 2.95 (s, 2H), 3.05 (s, 2H), 2.58-2.69 (m, 2H), 1.99 (br d, J=10.29 Hz, 5H), 1.40-1.65 (m, 4H), 0.74-0.88 (m, 4H).LCMS (ESI) m/z: 379.0[M + H]+.
【００８１】
実施例２
【００８２】
【化２７】
2021534259.tif 000038
【００８３】
ステップ１：窒素雰囲気中−７８℃で、ｔｅｒｔ−ブチル９−酸素−３−アザスピロ［５．５］ヘンデカン−３−カルボン酸（３−１）（５ｇ、１８．７ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）に溶解し、ビス（トリメチルシリル）アミンリチウム（１Ｍ、２２．４ｍＬ）をゆっくり滴下して、−７８℃で１時間撹拌した。次に、反応溶液に１，１，１−トリフルオロ−Ｎ−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−メタンスルホンアミド（７．３５ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）を含有する無水テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）溶液を添加し、１５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を飽和塩化アンモニウムによってクエンチし（５０ｍＬ）、ＥｔＯＡｃで抽出した（２００ｍＬ＊２）。合わせた有機相を飽和生理食塩水で洗浄し（５０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濾過して濃縮し、化合物３−２を得て、これを精製することなく次の反応に直接使用した。
【００８４】
ステップ２：化合物３−２（８ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）およびビス（ピナコラート）ジボロン（５．５９ｇ、２２．０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）に溶解し、酢酸カリウム（５．９０ｇ、６０．１ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン（１．６４ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を添加し、７０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を水（３００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した（２００ｍＬ＊２）。合わせた有機相を飽和生理食塩水で洗浄し（１５０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濾過して濃縮した。残渣を急速シリコンゲルカラム（０〜１０％ＥｔＯＡｃ／ＰＥ）で分離して、化合物３−３を得た。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ6.41 (br s, 1H), 6.34-6.47 (m, 1H), 3.32-3.44 (m, 2H), 3.14-3.29 (m, 2H), 2.00-2.10 (m, 2H), 1.90 (br d, J=3.01 Hz, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.28 (br t, J=5.52 Hz, 4H), 1.19 (s, 12H).
【００８５】
ステップ３：窒素雰囲気中、Ｎ−（５−ブロモ−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）シクロプロピルホルムアミド（２ｇ、７．１ｍｍｏｌ）、化合物３−３（３．４９ｇ、９．３ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．９５ｇ、２１．３ｍｍｏｌ）、および［１，１−ビス（ジフェニルホスフィン）フェロセン］パラジウムジクロリドジクロロメタン（５８１ｍｇ、７１１．５μｍｏｌ）を含有するジオキサン（４０ｍｌ）と水（１０ｍｌ）の混合溶液を窒素で３回置き換え、反応溶液を９０℃まで３時間加熱した。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣を急速シリカゲルカラム（０〜４％メタノール／ジクロロメタン）によって分離して、化合物３−４を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４５２．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ４：化合物３−４（３．５ｇ、７．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、塩酸／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、３０ｍＬ）を添加して、２０℃で３０分間放置して反応させた。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。固形物を沈殿させ，濾過して乾燥し、化合物３−５を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３５２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００８６】
ステップ５：Ｎ２雰囲気中、化合物３−５（２．９ｇ、７．４ｍｍｏｌ、塩酸塩）をメタノール（１００ｍＬ）に溶解し、触媒の乾燥パラジウム／炭素（１ｇ、１０％）を添加して、水素で３回置き換えた。反応溶液を水素圧（３０Ｐｓｉ）および２５℃の反応温度で１２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。固形物を珪藻土によって濾過し、濾液を得て、次いでこれを濃縮して化合物３−６（２．６ｇ塩酸塩）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３５４．７［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ６：化合物３−６（１ｇ、２．６ｍｍｏｌ、塩酸塩）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解し、ＨＯＢｔ（５７３ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（８１３ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）、次いで（１Ｓ）−２，２−ジフルオロシクロプロピルカルボン酸（３８０ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（７３１ｍｇ、５．７ｍｍｏｌ）を添加して、１５℃で１２時間放置して反応させた。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を水（１００ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン／メタノール（１０／１、１５０ｍＬ＊２）によって抽出した。合わせた有機相を飽和生理食塩水で洗浄し（１００ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濾過して濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（中性系）で処理し、化合物３−７を得た。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 7.57-7.64 (m, 1H), 7.48 (d, J=8.78 Hz, 1H), 7.02 (d, J=7.28 Hz, 1H), 3.63-3.77 (m, 3H), 3.41-3.61 (m, 2H), 2.93 (dt, J=8.28, 11.80 Hz, 1H), 1.36-2.06 (m, 15H), 1.04 (五重線, J=3.76 Hz, 2H), 0.93 (qd, J=3.66, 7.34 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z: 458.1[M + H]+.
【００８７】
以下の特性データを有する以下の化合物は、化合物３−７に使用されたものと同じ合成および分離方法を使用して、化合物３−６から共通の中間体として得た（化合物３−７のカルボン酸を、酸アミド縮合反応において、以下の標的分子のカルボン酸で置き換えた）：
【００８８】
【化２８】
2021534259.tif 000039
【００８９】
化合物３−８：1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ7.57-7.67 (m, 1H), 7.49 (d, J=8.53 Hz, 1H), 7.03 (dd, J=3.76, 6.78 Hz, 1H), 4.61 (s, 1H), 3.83-3.91 (m, 1H), 3.62 (td, J=3.76, 7.53 Hz, 2H), 3.42-3.54 (m, 3H), 1.68-2.08 (m, 9H), 1.40-1.56 (m, 4H), 1.05 (五重線, J=3.76 Hz, 2H), 0.88-0.97 (m, 2H).LCMS (ESI) m/z: 421.1[M + H]+.
化合物３−９：1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 7.61 (dd, J=7.28, 8.78 Hz, 1H), 7.49 (d, J=8.78 Hz, 1H), 7.02 (dd, J=4.52, 6.78 Hz, 1H), 3.63 (td, J=3.83, 7.40 Hz, 2H), 3.43-3.58 (m, 5H), 1.67-2.07 (m, 9H), 1.39-1.54 (m, 4H), 1.01-1.08 (m, 2H), 0.93 (qd, J=3.68, 7.28 Hz, 2H).LCMS (ESI) m/z: 464.1[M + H]+.
【００９０】
実施例３
【００９１】
【化２９】
2021534259.tif 000040
【００９２】
ステップ１：０℃で、５−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジル−２−アミン（４−１）（５ｇ、２３．５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１１．８７ｇ、１１７．４ｍｍｏｌ）およびシクロプロパンカルボニルクロリド（６．１３ｇ、５８．７ｍｍｏｌ）を添加して、２５℃で１２時間放置して反応させた。ＴＬＣにより、反応が完了したことが示された。溶媒のアセトニトリルを減圧下で濃縮して除去し、残渣を急速カラム（０〜５％メタノール／ジクロロメタン）で分離して、化合物４−２を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３５０．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９３】
ステップ２：Ｎ２雰囲気中、化合物４−２（１．９９ｇ、５．７ｍｍｏｌ）および化合物１−１（１．５ｇ、６．３ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）に溶解し、−７０℃でｎ−ブチルリチウム（２．５Ｍ、５．７ｍＬ）溶液をゆっくり添加して、１０℃で３０分間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を飽和塩化アンモニウム（５０ｍＬ）によって０℃でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した（１５０ｍＬ＊２）。合わせた有機相を飽和生理食塩水で洗浄し（１０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濾過して濃縮した。残渣を急速シリコンゲルカラム（０〜３％メタノール／ジクロロメタン）で分離し、化合物４−３を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４４２．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９４】
ステップ３：０℃で、化合物４−３（０．８ｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）（３５１ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１５分間放置して反応させ、次いで２５℃まで加熱した後、１時間放置して反応させた。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）によって０℃でクエンチし、水で希釈して（１０ｍＬ）、ジクロロメタンで抽出した（５０ｍＬ＊３）。合わせた有機相を飽和生理食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濾過して濃縮した。残渣を急速シリコンゲルカラム（０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ＰＥ）で分離し、化合物４−４を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４４４．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ４：化合物４−４（４１０ｍｇ、９２４．４μｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、塩酸／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１０ｍＬ）を添加して、２０℃で３０分間放置して反応させた。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。固形物を沈殿させ、濾過して乾燥し、化合物４−５（３９０ｍｇの塩酸塩）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３４４．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９５】
ステップ５：化合物４−５（１３０ｍｇ、３４２．２μｍｏｌ、塩酸塩）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、ＨＯＢｔ（７７ｍｇ、５６７．９μｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（１０９ｍｇ、５６７．９μｍｏｌ）を添加し、次いで２−シアノ酢酸（３５ｍｇ、４１６．４μｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（９８ｍｇ、７５７．１μｍｏｌ）を添加し、１５℃で１２時間放置して反応させた。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（中性系）で処理して化合物４−６を得た。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 7.66-7.72 (m, 1H), 7.56-7.62 (m, 1H), 7.25 (t, J=7.28 Hz, 1H), 4.29 (s, 1H), 4.03 (s, 1H), 3.97 (s, 1H), 3.76 (s, 1H), 3.26-3.30 (m, 2H), 2.97-3.28 (m, 2H), 1.74-2.08 (m, 7H), 0.89-1.13 (m, 4H).LCMS (ESI) m/z: 411.1[M + H]+.
【００９６】
以下の特性データを有する以下の化合物４−７および４−８は、化合物４−６に使用されたものと同じ合成および分離方法を使用して、化合物４−５から共通の中間体として得た（化合物４−６からの異なる置換基を有するカルボン酸化合物を添加した）：
【００９７】
【化３０】
2021534259.tif 000041
【００９８】
化合物４−７：1H NR (400MHz, メタノール-d4) δ = 7.65-7.73 (m, 1H), 7.59 (dt, J=1.13, 9.72 Hz, 1H), 7.20-7.29 (m, 1H), 4.33 (s, 1H), 4.01 (d, J=11.29 Hz, 2H), 3.76 (s, 1H), 2.99-3.30 (m, 4H), 1.74-2.10 (m, 7H), 0.88-1.12 (m, 4H).LCMS (ESI) m/z: 454.1[M + H]+.
化合物４−８：1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ = 7.64-7.73 (m, 1H), 7.59 (dt, J=1.25, 9.16 Hz, 1H), 7.20-7.28 (m, 1H), 6.01-6.44 (m, 1H), 4.30 (s, 1H), 3.99 (d, J=11.80 Hz, 2H), 3.73 (s, 1H), 2.99-3.27 (m, 2H), 2.76-2.99 (m, 2H), 1.75-2.10 (m, 7H), 0.89-1.10 (m, 4H).LCMS (ESI) m/z: 436.1[M + H]+.
【００９９】
実施例４
【０１００】
【化３１】
2021534259.tif 000042
【０１０１】
ステップ１：−７８℃で、ＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、７７０μＬ）を、化合物５−１（０．１５ｇ、５９２．１μｍｏｌ）を含有するＴＨＦ（８ｍＬ）に滴下した。混合物を−７８℃で１時間撹拌した。−７８℃で、１，１，１−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−Ｎ−（トリフルオロメチルスルホニル）メタンスルホンアミド（２３３ｍｇ、６５１μｍｏｌ）を含有するテトラヒドロフラン（４ｍＬ）溶液を反応溶液に滴下し、１５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により、反応が完了し、新たな点が発生したことが示された。反応溶液を１０ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液によってクエンチし、次いで２０ｍＬの水を添加して、ＥｔＯＡｃで抽出した（３０ｍＬ＊３）。有機相を合わせ、飽和生理食塩水で洗浄し（４０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して濃縮し、化合物５−２を得て、これを精製することなく次の反応に直接使用した。
【０１０２】
ステップ２：ＫＯＡｃ（１９１ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４８ｍｇ、６４．９μｍｏｌ）を、化合物５−２（０．２５ｇ、６４８．７μｍｏｌ）およびビス（ピナコラート）ジボロン（１６５ｍｇ、６４８．７μｍｏｌ）を含有するＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に添加した。反応溶液を７０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により、反応が完了し、新たな点の発生が検出されたことが示された。反応溶液に２０ｍＬの水を添加し、ＥｔＯＡｃで抽出した（３０ｍＬ＊３）。有機相を合わせ、飽和生理食塩水で洗浄し（４０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して濃縮し、粗生成物を得て、これをクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＰＥ：ＥＡ＝５０：０〜２０：１）によって分離して精製し、無色油状化合物５−３を得た。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ6.50 (br s, 1 H), 3.35 - 3.49 (m, 2 H), 3.07 - 3.15 (m, 2 H), 2.02 - 2.22 (m, 4 H), 1.54 - 1.81 (m, 4 H), 1.47 (s, 9 H), 1.27 (s, 12 H).
【０１０３】
ステップ３：化合物５−３（０．１３ｇ、３５７．８μｍｏｌ）、Ｎ−（５−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）シクロプロパンホルムアミド（１０１ｍｇ、３５７．８μｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１４９ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２６ｍｇ、３５．８μｍｏｌ）を含有するジオキサン（４ｍＬ）と水（１ｍＬ）の溶液を窒素ガスで置き換えた。混合物を、窒素雰囲気中９０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳによって反応が完了し、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。反応溶液から溶媒を濃縮によって除去し、次いで１０ｍＬの水に分散させ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨで抽出した（１０：１、３０ｍＬ＊３）。有機相を合わせ、飽和生理食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで濾過して濾液を得て、これを減圧下で蒸留し、粗生成物を得た。粗生成物をクロマトグラフィーカラム方法（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０〜２０：１）によって精製し、化合物５−４を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４３８．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０４】
ステップ４：アルゴン雰囲気中、Ｐｄ／Ｃ（１０％、５０ｍｇ）を、化合物５−４（０．２ｇ、４５７．１μｍｏｌ）を含有するメタノール（１０ｍＬ）に添加した。混合物を水素で３回置き換え、水素雰囲気（１５ｐｓｉ）中２５℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。反応溶液を濾過して濃縮し、化合物５−５を得て、これを精製することなく次の反応に直接使用した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４４０．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ５：化合物５−５（１５０ｍｇ、３４１．３μｍｏｌ）およびＴＦＡ（４ｍＬ）を含有するジクロロメタン（１０ｍＬ）を窒素で３回置き換え、反応溶液を２５℃で３０分撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。反応溶液を濃縮して溶媒を除去し、化合物５−６（０．１５ｇ、ＴＦＡ塩）を得て、これを精製することなく次の反応に直接使用した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３４０．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０５】
ステップ６：ＥＤＣＩ（１０４ｍｇ、５４１．１μｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（７３ｍｇ、５４１．１μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１４０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ、１８９μＬ）を、（１Ｓ）−２，２−ジフルオロシクロプロピルギ酸（４４ｍｇ、３６０．７μｍｏｌ）を含有するＤＭＦ（４ｍＬ）に添加し、２５℃で５分撹拌して反応させ、次いで化合物５−６（１２２ｍｇ、２７０μｍｏｌ、ＴＦＡ塩）を添加して２５℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。粗生成物を分離し（中性分離条件、クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０ｍｍ＊２５ｍｍ  ５μｍ；移動相：［Ｈ２Ｏ（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ（ＣＨ３ＣＮ）％：２５％〜５５％、７分）およびＳＦＣキラル分離（クロマトグラフィーカラム：ＤＡＩＣＥＬ  ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ  ＯＤ−Ｈ（２５０ｍｍ＊３０ｍｍ、５μｍ）；移動相：［０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ  ＥｔＯＨ］；Ｂ（ＣＯ２）％：４０％）、化合物５−７を得た。ＳＦＣ保持時間：３．６８５分。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 7.48 - 7.55 (m, 1 H), 7.39 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 6.92 (dd, J=6.90, 3.39 Hz, 1 H), 3.35 - 3.76 (m, 5 H), 2.66 - 2.94 (m, 1 H), 1.51 - 2.10 (m, 13 H), 0.94 (br s, 2 H), 0.78 - 0.88 (m, 2 H). LCMS (ESI) m/z: 444.1[M + H]+. 化合物５−８、ＳＦＣ保持時間：４．２８３分。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 7.48 - 7.59 (m, 1 H), 7.40 (br d, J=8.53 Hz, 1 H) , 6.94 (br d, J=6.78 Hz, 1 H), 3.23 - 3.78 (m, 5 H) , 2.65 - 2.81 (m, 1 H), 1.54 - 2.06 (m, 13 H), 0.95 (br s, 2 H) , 0.77 - 0.87 (m, 2 H). LCMS (ESI) m/z: 444.2[M + H]+.
【０１０６】
以下の特性データを有する以下の化合物は、化合物５−７に使用されたものと同じ合成および分離方法を使用して、化合物５−６から共通の中間体として得た（化合物５−７からの異なる置換基を有するカルボン酸化合物を添加した）：
【０１０７】
【化３２】
2021534259.tif 000043
【０１０８】
化合物５−９：ＨＰＬＣ（中性分離条件，クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ１５０ｍｍ＊２５ｍｍ  ５μｍ；移動相：［Ｈ２Ｏ（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ（ＣＨ３ＣＮ）％：１８％〜３２％，９分）を分離に使用し、保持時間は２．１１７分であった。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ  7.60 - 7.68 (m, 1H), 7.52 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.05 (dd, J=3.4, 6.8 Hz, 1H), 3.44 - 3.73 (m, 4H), 3.31 (br s, 2H), 2.11 (td, J=7.6, 14.9 Hz, 3H), 2.01 (br t, J=7.3 Hz, 1H), 1.96 (br s, 1H), 1.66 - 1.88 (m, 6H), 1.31 (br s, 1H), 1.02 - 1.10 (m, 2H), 0.91 - 0.99 (m, 2H).LCMS (ESI) m/z: 407.2[M + H]+.
化合物５−１０：ＳＦＣキラル分割条件、クロマトグラフィーカラム：ＤＡＩＣＥＬ  ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ  ＯＤ−Ｈ（２５０ｍｍ＊３０ｍｍ、５μｍ）；移動相：［０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ  ＥｔＯＨ］；Ｂ（ＣＯ２）％：４０％〜４０％、保持時間４．１１４分。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ = 7.52 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 7.40 (br d, J=8.8 Hz, 1H), 6.89 - 6.98 (m, 1H), 3.57 (t, J=7.0 Hz, 1H), 3.25 - 3.51 (m, 6H), 1.78 - 2.09 (m, 5H), 1.51 - 1.76 (m, 6H), 0.94 (br d, J=3.8 Hz, 2H), 0.79 - 0.88 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 450.2[M + H]+.
【０１０９】
実施例５
【０１１０】
【化３３】
2021534259.tif 000044
【０１１１】
ステップ１：−７８℃で、ＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、１．３ｍＬ）を、化合物６−１（２５０ｍｇ、９８６．８μｍｏｌ）を含有するＴＨＦ（８ｍＬ）に滴下した。混合物を−７８℃で１時間撹拌した。−７８℃で、１，１，１−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−Ｎ−（トリフルオロメチルスルホニル）メタンスルホンアミド（３８８ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を含有するテトラヒドロフラン（４ｍＬ）を反応溶液に滴下し、２５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）によって、原料が完全に反応し、新たな点が発生したことが示された。反応溶液を１０ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液を使用してクエンチし、次いで２０ｍＬの水を添加し、ＥｔＯＡｃで抽出した（３０ｍＬ＊３）。有機相を合わせ，飽和生理食塩水で洗浄し（４０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して濃縮し、粗生成物を得て、クロマトグラフィーカラム（ＳｉＯ２、ＰＥ：ＥＡ＝２０：１〜１０：１）によって分離して精製し、化合物６−２を得た。
【０１１２】
ステップ２：ＫＯＡｃ（２９５ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２．ＣＨ２Ｃｌ２（８２ｍｇ、１００μｍｏｌ）を、化合物６−２（３８６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）およびビス（ピナコラート）ジボロン（２５４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を含有するＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に添加した。反応溶液を７０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により、原料が完全に消費され、新たな点の発生が検出されたことが示された。反応溶液に２０ｍＬの水を添加し、ＥｔＯＡｃで抽出した（３０ｍＬ＊３）。有機相を合わせ、生理食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して濃縮し、粗生成物を得て、これをクロマトグラフィーカラム（ＳｉＯ２，ＰＥ：ＥＡ＝５０：０〜２０：１）によって分離して精製し、化合物６−３を得た。
【０１１３】
ステップ３：化合物６−３（１８６ｍｇ、５１２μｍｏｌ）、Ｎ−（５−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）シクロプロパンホルムアミド（１４４ｍｇ、５１２μｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２１２ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２．ＣＨ２Ｃｌ２（４２ｍｇ、５１．２μｍｏｌ）を含有するジオキサン（４ｍＬ）と水（１ｍＬ）の溶液を、窒素で３回置き換えた。窒素条件下で、混合物を９０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。反応溶液から溶媒を除去し、１０ｍＬの水に分散させ、ＤＣＭ：ＭｅＯＨで抽出した（１０：１、３０ｍＬ＊３）。有機相を合わせて飽和生理食塩水で洗浄し（４０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して減圧下で蒸留し、粗生成物を得た。粗生成物をクロマトグラフィーカラム方法（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０〜２０：１）によって精製し、化合物６−４を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４３８．７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１４】
ステップ４：アルゴン雰囲気中、Ｐｄ／Ｃ（１０％、５０ｍｇ）を、化合物６−４（１９６ｍｇ、４４８μｍｏｌ）を含有するメタノール溶液（１０ｍＬ）に添加した。混合物を水素で３回置き換え、水素雰囲気（１５ｐｓｉ）中２５℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。反応溶液を濾過した後濃縮し、化合物６−５を得て、これを精製することなく次の反応に直接使用した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４４０．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１５】
ステップ５：化合物６−５（１３０ｍｇ、２９６μｍｏｌ）およびＴＦＡ（４ｍＬ）を含有するジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液を窒素で３回置き換え、２５℃で３０分撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。反応溶液を濃縮して溶媒を除去し、化合物６−６（１３４ｍｇ、ＴＦＡ塩）を得て、これを精製することなく次の反応に直接使用した。
【０１１６】
ステップ６：ＥＤＣＩ（８５ｍｇ、４４３．３μｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（６０ｍｇ、４４３．３μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１１５ｍｇ、８８６．５μｍｏｌ、１５４．４μＬ）を、（１Ｓ）−２，２−ビフルオロシクロプロパンカルボン酸（３６ｍｇ、２９５．５μｍｏｌ）を含有するＤＭＦ（４ｍＬ）に添加し、２５℃で５分撹拌して反応させ、次いで化合物６−６（１３４ｍｇ、２９５．５μｍｏｌ、ＴＦＡ塩）を添加し、２５℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。粗生成物を分離した（中性条件、クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ１５０＊２５  ５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：３０％〜５０％，７分）およびＳＦＣキラル分離（クロマトグラフィーカラム：ＹＭＣ  ＣＨＩＲＡＬ  Ａｍｙｌｏｓｅ−Ｃ（２５０ｍｍ＊３０ｍｍ、１０μｍ；移動相：［０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ  ＥｔＯＨ］；Ｂ％：５０％）。２．３３９分のＳＦＣ保持時間で化合物６−７を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ  11.01 (br s, 1 H), 7.51 - 7.63 (m, 2 H), 7.08 (br d, J=6.78 Hz, 1 H), 3.83 (br s, 1 H), 3.41 - 3.66 (m, 4 H), 3.15 (br d, J=5.02 Hz, 1 H), 2.14 - 2.35 (m, 2 H), 2.06 (br s, 1 H), 1.75 - 1.95 (m, 4 H), 1.40 - 1.73 (m, 6 H) , 0.84 (br s, 4 H).LCMS (ESI) m/z: 444.1[M + H]+. 化合物６−８：ＳＦＣ保持時間は４．１４２分。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.01 (br s, 1 H), 7.54 - 7.65 (m, 2 H), 7.08 (br s, 1 H), 3.80 - 3.90 (m, 1 H), 3.45 - 3.66 (m, 4 H), 3.09 - 3.22 (m, 1 H), 2.18 - 2.36 (m, 2 H), 2.06 (br s, 1 H), 1.75 - 1.95 (m, 4 H) , 1.68 (br d, J=7.28 Hz, 3 H) , 1.50 (br d, J=4.77 Hz, 3 H), 0.77 - 0.88 (m, 4 H). LCMS (ESI) m/z: 444.1[M + H]+.
【０１１７】
実施例６
【０１１８】
【化３４】
2021534259.tif 000045
【０１１９】
ステップ１：−７８℃で、ＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、１．７ｍＬ）を、化合物７−１（０．３ｇ、１．３３ｍｍｏｌ）を含有するＴＨＦ（８ｍＬ）溶液に添加した。−７８℃で１時間撹拌した後、混合物に１，１，１−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−Ｎ−（トリフルオロメチルスルホニル）メタンスルホンアミド（５２３ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を含有するテトラヒドロフラン（４ｍＬ）溶液を滴下し、次いで２５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により、原料が完全に反応し、新たな点が発生したことが示された。反応溶液を飽和塩化アンモニウムによってクエンチし、２０ｍＬの水を添加し、ＥｔＯＡｃで抽出した（３０ｍＬ＊３）。有機相を合わせて飽和生理食塩水で洗浄し（４０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して濃縮し、粗生成物を得て、これをクロマトグラフィーカラム方法（ＳｉＯ２、ＰＥ：ＥＡ＝２０：１〜１０：１）によって分離して精製し、化合物７−２を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.72 (s, 1 H), 3.86 - 3.92 (m, 2 H), 3.76 - 3.82 (m, 2 H), 2.53 - 2.61 (m, 2 H), 2.18 - 2.25 (m, 2 H), 1.37 (s, 9 H).
【０１２０】
ステップ２：ＫＯＡｃ（３７９ｍｇ、３．９ｍｍｏｌおよびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２．ＣＨ２Ｃｌ２（１０５ｍｇ、１２８．７μｍｏｌ）を、化合物７−２（０．４６ｇ、１．３ｍｍｏｌ）およびビス（ピナコラート）ジボロン（３２７ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を含有するＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に添加した。反応溶液を７０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により、原料が完全に反応し、新たな点の発生が検出されたことが示された。２０ｍＬの水を添加することによって反応溶液をクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した（３０ｍＬ＊３）。有機相を合わせ，飽和生理食塩水で洗浄し（４０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して濃縮し、粗生成物を得て、これをクロマトグラフィー方法（ＳｉＯ２、ＰＥ：ＥＡ＝５０：０〜２０：１）によって精製し、化合物７−３を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.45 (t, J=1.88 Hz, 1 H), 3.83 - 3.88 (m, 2 H), 3.73 - 3.78 (m, 2 H), 2.36 - 2.42 (m, 2 H), 2.04 (t, J=7.03 Hz, 2 H), 1.37 (s, 9 H), 1.21 (s, 12H).
【０１２１】
ステップ３：化合物７−３（０．１５ｇ、４４７．４３μｍｏｌ）、Ｎ−（５−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）シクロプロパンホルムアミド（１２６ｍｇ、４４７．４３μｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１８６ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２．ＣＨ２Ｃｌ２（３７ｍｇ、４４．７μｍｏｌ）を含有するジオキサン（４ｍＬ）と水（１ｍＬ）の溶液を窒素で３回置き換えた。混合物を、窒素雰囲気中９０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。反応溶液を濃縮して溶媒を除去し、次いで１０ｍＬの水に分散させ、ＤＣＭ：ＭｅＯＨで抽出した（１０：１、３０ｍＬ＊３）。有機相を合わせて飽和生理食塩水で洗浄し（４０ｍＬ）、含水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して減圧下で蒸留し、粗生成物を得て、これをクロマトグラフィーカラム方法（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０〜２０：１）によって精製し、化合物７−４を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４１０．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２２】
ステップ４：アルゴン雰囲気中、Ｐｄ／Ｃ（１０％、０．０５ｇ）を、化合物７−４（０．１５ｇ、３６６．３μｍｏｌ）を含有するメタノール（１０ｍＬ）溶液に添加した。混合物を水素で３回置き換え、水素雰囲気（１５ｐｓｉ）中２５℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。反応溶液を濾過して濃縮し、化合物７−５を得て、これを精製することなく次の反応に直接使用した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４１２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２３】
ステップ５：化合物７−５（０．１３ｇ、３１５．９μｍｏｌ）およびＴＦＡ（４ｍＬ）を含有するジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）を窒素で３回置き換え、次いで２５℃で３０分撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。反応溶液から溶媒を除去し、化合物７−６（１３０ｍｇ、ＴＦＡ塩）を得て、これを精製することなく次の反応に直接使用した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３１２．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２４】
ステップ６：ＥＤＣＩ（８８ｍｇ、４５８．４μｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（６２ｍｇ、４５８．４μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１１９ｍｇ、９１６．８μｍｏｌ、１６０μＬ）を、（１Ｓ）−２，２−ビフルオロシクロプロピルギ酸（３７ｍｇ、３０５．６μｍｏｌ）を含有するＤＭＦ（４ｍＬ）溶液に添加し、次いで２５℃で５分撹拌して反応させた後、化合物７−６（０．１３ｇ、３０５．６μｍｏｌ、ＴＦＡ塩）を添加し、２５℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。粗生成物を分離し（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０＊２５  ５μｍ；移動相：［Ｈ２Ｏ（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ（ＣＨ３ＣＮ）％：２０％〜５０％，７分）、キラル分離して（クロマトグラフィーカラム：ＤＡＩＣＥＬ  ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ（２５０ｍｍ＊３０ｍｍ、１０μｍ）；移動相、Ａ％：（０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ  ＥｔＯＨ）；Ｂ（ＣＯ２）％：（４０％〜４０％））、化合物７−７を得た。ＳＦＣ保持時間：３．７１４分。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ =9.59 (br d, J=12.05 Hz, 1 H), 7.34 - 7.57 (m, 2 H) , 6.70 - 6.84 (m, 1 H), 4.06 - 4.21 (m, 2 H), 3.92 - 3.99 (m, 1 H), 3.74 - 3.92 (m, 2 H), 1.81 - 2.38 (m, 8 H), 1.59 (dtd, J=11.36, 7.62, 7.62, 3.76 Hz, 1 H) , 1.08 - 1.24 (m, 2 H), 0.79 - 0.96 (m, 2 H) . LCMS (ESI) m/z: 416.0[M + H]+.
分離を実施して化合物７−８を得た。ＳＦＣ保持時間：４．４６８分。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.48 (br s, 1 H), 7.34 - 7.54 (m, 2 H), 6.76 (br d, J=7.03 Hz, 1 H), 4.03 - 4.25 (m, 2 H), 3.73 - 3.99 (m, 3 H), 2.50 (ddd, J=16.81, 13.18, 8.16 Hz, 1 H), 1.80 - 2.40 (m, 8 H), 1.53 - 1.66 (m, 1 H), 1.05 - 1.23 (m, 2 H), 0.80 - 0.95 (m, 2 H). LCMS (ESI) m/z: 416.0[M + H]+.
【０１２５】
実施例７
【０１２６】
【化３５】
2021534259.tif 000046
【０１２７】
ステップ１：窒素雰囲気中、化合物８−１（１．１１ｇ、５．２１ｍｍｏｌ）、化合物１−３、炭酸カリウム（２．１６ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）、および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン（４２５ｍｇ、５２０．６μｍｏｌ）を含有するジオキサン（４０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）の混合溶液を窒素で３回置き換え、次いで９０℃まで加熱し、３時間反応させた。ＬＣ−ＭＳによって反応が完了したことが示された。反応溶液を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを急速カラム（０〜４％メタノール／ジクロロメタン）によって分離し、化合物８−２を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３５６．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２８】
ステップ２：Ｎ２雰囲気の保護下で、化合物８−２（２ｇ、５．６ｍｍｏｌ）をメタノール（１００ｍＬ）溶液に溶解し、触媒、すなわち乾燥パラジウム／炭素（０．５ｇ、１０％）を添加し、水素で３回置き換えた。反応溶液を、水素圧（３０Ｐｓｉ）および３０℃の反応温度の条件下で１２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより、原料の５０％が残存したことが示された。触媒を濾過によって除去し、新たな触媒、すなわち乾燥パラジウム／炭素（１ｇ）を添加して反応を３時間継続した。ＬＣＭＳにより、反応が完了したことが示された。固形物を珪藻土によって濾過して濾液を得て、これを減圧下で濃縮して化合物８−３を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３５８．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２９】
ステップ３：（１Ｒ）−２，２−ジフルオロシクロプロピルカルボン酸（２８２ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）をピリジン（１０ｍＬ）に溶解し、ＥＤＣＩ（４．０ｇ、２１．０ｍｍｏｌ）および化合物８−３（０．７５ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を添加して１０℃で１２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を水（３０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン／メタノールで抽出した（１０／１、５０ｍＬ＊３）。合わせた有機相を飽和生理食塩水で洗浄し（３０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濾過して濃縮した。残渣を急速シリコンゲルカラム（０〜３％メタノール／ジクロロメタン）で分離し、次いでＥｔＯＡｃによってビーティング精製し、化合物８−４を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４６２．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３０】
ステップ４：化合物８−４（３００ｍｇ、６５０．１μｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解して塩酸／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１０ｍＬ）を添加し、１５℃で３０分放置して反応させた。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を濃縮し、化合物８−５（塩酸塩）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３６２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３１】
ステップ５：化合物８−５（１００ｍｇ、２５１．４μｍｏｌ、ＨＣｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、ＨＯＢｔ（５１ｍｇ、３７７．０μｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（７２．２８ｍｇ、３７７．０μｍｏｌ）を添加し、次いで（１Ｓ）−２，２−ジフルオロシクロプロピルカルボン酸（３４ｍｇ、２７６．５μｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（６５ｍｇ、５０２．７μｍｏｌ）を添加し、１５℃で１２時間放置して反応させた。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（中性系）によって処理して化合物８−６を得た。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ7.59-7.67 (m, 1H), 7.51 (d, J=8.78 Hz, 1H), 7.01 (br d, J=7.53 Hz, 1H), 3.92-4.20 (m, 2H), 3.79-3.88 (m, 1H), 3.67-3.77 (m, 1H), 3.43-3.57 (m, 1H), 2.81 (br s, 1H), 2.62 (dq, J=7.78, 11.96 Hz, 1H), 2.07-2.24 (m, 5H), 1.52-2.05 (m, 7H).LCMS (ESI) m/z: 466.2[M + H]+.
【０１３２】
以下の特性データを有する以下の化合物８−７および８−８は、化合物８−６に使用されたものと同じ合成および分離方法を使用して、化合物８−５から共通の中間体として得た（化合物８−６からの異なる置換基を有するカルボン酸化合物を添加した）：
【０１３３】
【化３６】
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【０１３４】
化合物８−７、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（中性系）によって処理して精製した。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 7.59-7.66 (m, 1H), 7.51 (d, J=8.78 Hz, 1H), 6.97-7.04 (m, 1H), 4.30 (d, J=4.27 Hz, 1H), 4.18 (d, J=4.27 Hz, 1H), 3.87 (s, 1H), 3.76 (s, 1H), 3.49 (br t, J=11.80 Hz, 1H), 2.81 (br s, 1H), 2.05-2.28 (m, 5H), 1.74-1.96 (m, 3H), 1.53-1.70 (m, 2H), 1.23-1.33 (m, 4H).LCMS (ESI) m/z: 448.2[M + H]+.
化合物８−８、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（中性系）によって処理して精製した。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ7.59-7.67 (m, 1H), 7.51 (d, J=8.78 Hz, 1H), 7.00 (t, J=7.40 Hz, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.69-4.11 (m, 4H), 3.41-3.54 (m, 1H), 2.82 (br s, 1H), 2.04-2.26 (m, 5H), 1.72-1.93 (m, 3H), 1.61 (q, J=11.80 Hz, 2H).LCMS (ESI) m/z: 429.0[M + H]+.
【０１３５】
【化３７】
2021534259.tif 000048
【０１３６】
化合物８−９の合成：中間体８−５（１００ｍｇ、２２７．６μｍｏｌ、ＴＦＡ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（９４ｍｇ、６８２．７μｍｏｌ）および２−ブロモアセトニトリル（３０ｍｇ、２５０．３μｍｏｌ）を添加し、１０℃で１２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を水（５ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン／メタノールで抽出した（１０／１、１０ｍＬ）。有機相を飽和生理食塩水で洗浄し（１０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで減圧下で濾過して濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（中性系）によって処理して精製し、化合物８−９を得た。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 7.59-7.66 (m, 1H), 7.50 (d, J=8.78 Hz, 1H), 6.99 (d, J=7.53 Hz, 1H), 3.62 (s, 2H), 3.46 (br t, J=12.05 Hz, 1H), 3.33 (s, 2H), 3.21 (s, 2H), 2.80 (br s, 1H), 2.14 (br d, J=9.79 Hz, 5H), 1.82-1.95 (m, 1H), 1.52-1.77 (m, 4H).LCMS (ESI) m/z: 401.0[M + H]+.
【０１３７】
実施例８
【０１３８】
【化３８】
2021534259.tif 000049
【０１３９】
ステップ１：（Ｓ）−２，２−ジフルオロシクロプロピルカルボン酸（１．１３ｇ、９．２ｍｍｏｌ）をピリジン（１５０ｍＬ）に溶解し、ＥＤＣＩ（１６．１ｇ、８４ｍｍｏｌ）および化合物８−３（３ｇ、８．４ｍｍｏｌ）を添加し１０℃で１２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を水溶液で希釈し（１００ｍＬ）、ジクロロメタン／メタノールで抽出した（１０／１、１００ｍＬ＊３）。合わせた有機相を飽和生理食塩水で洗浄し（３０ｍＬ）、次いで無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濾過して濃縮した。残渣を急速カラム（０〜３％メタノール／ジクロロメタン）によって分離し、次いでＥｔＯＡｃを使用してビーティング精製し、化合物９−１を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４６２．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４０】
ステップ２：化合物９−１（２．３ｇ、４．９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、塩酸／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、２０ｍＬ）を添加し、１５℃で３０分放置して反応させた。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了し、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。沈殿した固形物を濾過して乾燥し、化合物９−２（塩酸塩）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３６２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４１】
ステップ３：化合物９−２（１．２３ｇ、３．１ｍｍｏｌ、ＨＣｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解し、ＨＯＢｔ（６２６ｍｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（８８９ｍｇ、４．６ｍｍｏｌ）を添加し、次いで（１Ｓ）−２，２−ジフルオロシクロプロピルカルボン酸（４１４．９２ｍｇ、３．４０ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（７９８．７０ｍｇ、６．１８ｍｍｏｌ）を添加し、１５℃で１２時間放置して反応させた。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を水（１０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン／メタノールで抽出した（１０／１、５０ｍＬ）。有機相を飽和生理食塩水で洗浄し（１０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濾過して濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（中性系）によって処理し、化合物９−３を得た。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ  7.63 (dd, J=7.53, 8.78 Hz, 1H), 7.51 (d, J=8.78 Hz, 1H), 7.01 (br d, J=7.28 Hz, 1H), 3.92-4.19 (m, 2H), 3.79-3.87 (m, 1H), 3.67-3.76 (m, 1H), 3.44-3.55 (m, 1H), 2.52-2.92 (m, 2H), 1.53-2.25 (m, 12H).LCMS (ESI) m/z: 466.1[M + H]+.
【０１４２】
以下の特性データを有する以下の化合物９−４、９−５は、化合物９−３に使用されたものと同じ合成および分離方法を使用して、化合物９−２から共通の中間体として得た（化合物９−３からの異なる置換基を有するカルボン酸化合物を添加した）：
【０１４３】
【化３９】
2021534259.tif 000050
【０１４４】
化合物９−４：1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 7.58-7.68 (m, 1H), 7.51 (d, J=8.78 Hz, 1H), 6.97-7.05 (m, 1H), 4.30 (d, J=4.02 Hz, 1H), 4.18 (d, J=4.27 Hz, 1H), 3.87 (s, 1H), 3.76 (s, 1H), 3.49 (br t, J=11.80 Hz, 1H), 2.82 (br s, 1H), 2.07-2.25 (m, 5H), 1.73-1.95 (m, 3H), 1.51-1.70 (m, 2H), 1.24-1.35 (m, 4H).LCMS (ESI) m/z: 448.2[M + H]+.
化合物９−５：1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 7.58-7.68 (m, 1H), 7.51 (d, J=9.03 Hz, 1H), 7.00 (t, J=7.53 Hz, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.69-4.10 (m, 4H), 3.43-3.55 (m, 1H), 2.82 (br s, 1H), 2.05-2.25 (m, 5H), 1.72-1.97 (m, 3H), 1.51-1.69 (m, 2H).LCMS (ESI) m/z: 429.0[M + H]+.
【０１４５】
【化４０】
2021534259.tif 000051
【０１４６】
化合物９−６の合成：中間体化合物９−２（１９０ｍｇ、５２５．８μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（２１８ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）および２−ブロモアセトニトリル（７０ｍｇ、５７８．３μｍｏｌ）を添加して、反応溶液を１０℃で１２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより、反応が完了したことが示された。反応溶液を水（５ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン／メタノールで抽出し（１０／１、１０ｍＬ）、有機相を飽和生理食塩水（１０ｍＬ）で洗浄して無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濾過して濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（中性系）によって処理して精製し、化合物９−６を得た。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ7.58-7.66 (m, 1H), 7.50 (d, J=8.53 Hz, 1H), 6.99 (d, J=7.28 Hz, 1H), 3.62 (s, 2H), 3.46 (br t, J=11.42 Hz, 1H), 3.33 (s, 2H), 3.21 (s, 2H), 2.81 (br s, 1H), 2.14 (br d, J=10.29 Hz, 5H), 1.81-1.95 (m, 1H), 1.51-1.78 (m, 4H).LCMS (ESI) m/z: 401.2[M + H]+.
【０１４７】
実施例９
【０１４８】
【化４１】
2021534259.tif 000052
【０１４９】
ステップ１：化合物１０−１（１００ｍｇ、３３４．３μｍｏｌ）、化合物３−３（１２６ｍｇ、３３４．３μｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２５ｍｇ、３３．４μｍｏｌ）および炭酸カリウム（１３９ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を含有するジオキサン（１２ｍＬ）とＨ２Ｏ（３ｍＬ）の混合物を窒素で３回置き換え、窒素雰囲気中９０℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークとして主ピークが検出されたことが示された。反応溶液を濾過して濃縮して溶媒を除去し、分取プレートを使用することによって分離して精製し、化合物１０−２を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４７０．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５０】
ステップ２：化合物１０−２（１３０ｍｇ、２７６．９μｍｏｌ）およびＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、２ｍＬ）を含有するジクロロメタン（１ｍＬ）溶液を、２５℃で５分撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークとして主ピークが検出されたことが示された。反応溶液を減圧下で濃縮し、黄色固形化合物１０−３（１２０ｍｇ、塩酸塩）を得て、これを精製することなく次の反応に直接使用した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３７０．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５１】
ステップ３：窒素雰囲気中、Ｐｄ／Ｃ（２０ｍｇ、１０％）を、化合物１０−３（１２０ｍｇ、２９５．６μｍｏｌ、塩酸塩）を含有するＭｅＯＨ（２５ｍＬ）溶液に添加した。懸濁液を水素で３回置き換え、窒素雰囲気（１５Ｐｓｉ）中２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークとして主ピークが検出されたことが示された。反応溶液を減圧下で濾過して濃縮して溶媒を除去し、化合物１０−４（１３０ｍｇ、塩酸塩）を得て、これを精製することなく次の反応に直接使用した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３７２．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５２】
ステップ４：化合物１０−４（１３０ｍｇ、３１８．７μｍｏｌ、塩酸塩）、２−シアノ酢酸（３３ｍｇ、３８２．４μｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（９２ｍｇ、４７８μｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（６５ｍｇ、４７８μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２０６ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ、２７７．６μＬ）を含有するＤＭＦ（５ｍＬ）溶液を２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳにより、原料が完全に消費され、標的分子イオンピークが検出されたことが示された。反応溶液を減圧下で濃縮して溶媒を除去し、次いで分離して化合物（中性系）１０−５を得た。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ =7.57-7.65 (m, 1H), 7.49-7.55 (m, 1H), 3.59-3.81 (m, 3H), 3.44-3.54 (m, 2H), 3.34-3.38 (m, 2H), 2.48 (br s, 2H), 1.81-2.04 (m, 5H), 1.64-1.77 (m, 2H), 1.36-1.58 (m, 4H), 0.86-1.12 (m, 4H).LCMS (ESI) m/z: 439.1[M + H]+.
【０１５３】
生物学的活性試験
実験１：Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２キナーゼの活性のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験
材料
組換えヒトＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、Ｔｙｋ２プロテアーゼ、装置および試薬のほとんどはＥｕｒｏｆｉｎｓ（英国）によって供給された。
方法
ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２の希釈：２０ｍＭの３−（Ｎ−モルホリン）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．０１％のＢｒｉｊ−３５、５％のグリセロール、０．１％のβ−メルカプトエタノール、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ；ＪＡＫ１の希釈：２０ｍＭのＴＲＩＳ、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％のβ−メルカプトエタノール、０．０１％のＢｒｉｊ−３５、５％のグリセロール。すべての化合物を１００％のＤＭＳＯ溶液に調製し、濃度は５０倍の最終測定濃度に達した。試験化合物を３倍の濃度勾配で希釈し、最終濃度は１０μＭ〜０．００１μＭの９つの濃度であった。検出された反応物中のＤＭＳＯの含有量は２％であった。この化合物のストック溶液を最初の成分としてウェルに添加し、次いで以下の詳細なプロセスとして他の成分を添加した。
【０１５４】
ＪＡＫ１（ｈ）の酵素反応
ＪＡＫ１（ｈ）を、ｐＨ７．５の２０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、５００μＭのＭＧＥＥＰＬＹＷＳＦＰＡＫＫＫ、１０ｍＭの酢酸マグネシウムおよび［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰとともにインキュベートした（活性および濃度は必要に応じてカスタマイズした）。Ｍｇ／ＡＴＰの混合物を出発反応物に添加し、これを室温で４０分のインキュベーション後に０．５％のリン酸を添加することによって停止させた。次に、１０μＬの反応物をＰ３０フィルターパッド上に分散させ、０．４２５％のリン酸で３回、およびメタノールで４分以内に１回洗浄し、乾燥し、シンチレーション計数した。
【０１５５】
ＪＡＫ２（ｈ）の酵素反応
ＪＡＫ２（ｈ）を、ｐＨ７．０の８ｍＭのＭＯＰＳ、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、１００μＭのＫＴＦＣＧＴＰＥＹＬＡＰＥＶＲＲＥＰＲＩＬＳＥＥＥＱＥＭＦＲＤＦＤＹＩＡＤＷＣ、１０ｍＭの酢酸マグネシウムおよび［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰとともにインキュベートした（活性および濃度は必要に応じてカスタマイズした）。Ｍｇ／ＡＴＰの混合物を出発反応物に添加し、これを４０分のインキュベーション後に０．５％のリン酸を添加することによって停止させた。次に、１０μＬの反応溶液をＰ３０フィルターパッド上に分散させ、０．４２５％のリン酸で３回、およびメタノールで４分以内に１回洗浄し、乾燥し、シンチレーション計数した。
【０１５６】
ＪＡＫ３（ｈ）の酵素反応
ＪＡＫ３（ｈ）を、ｐＨ７．０の８ｍＭのＭＯＰＳ、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、５００μＭのＧＧＥＥＥＥＹＦＥＬＶＫＫＫＫ、１０ｍＭの酢酸マグネシウムおよび［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰとともにインキュベートした（活性および濃度は必要に応じてカスタマイズした）。Ｍｇ／ＡＴＰの混合物を出発反応物に添加し、これを４０分のインキュベーション後に０．５％のリン酸を添加することによって停止させた。次に、１０μＬの反応溶液をＰ３０フィルターパッド上に分散させ、０．４２５％のリン酸で３回、およびメタノールで４分以内に１回洗浄し、乾燥し、シンチレーション計数した。
【０１５７】
ＴＹＫ２（ｈ）の酵素反応
ＴＹＫ２（ｈ）を、ｐＨ７．０の８ｍＭのＭＯＰＳ、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、２５０μＭのＧＧＭＥＤＩＹＦＥＦＭＧＧＫＫＫ、１０ｍＭの酢酸マグネシウムおよび［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰとともにインキュベートした（活性および濃度は必要に応じてカスタマイズした）。Ｍｇ／ＡＴＰの混合物を出発反応物に添加し、これを４０分のインキュベーション後に０．５％のリン酸を添加することによって停止させた。次に、１０μＬの反応溶液をＰ３０フィルターパッド上に分散させ、０．４２５％のリン酸で３回、およびメタノールで４分以内に１回洗浄し、乾燥し、シンチレーション計数した。
データ分析
ＩＣ５０の結果は、ＩＤＢＳからのＸＬＦＩＴ５（２０５式）の分析によって得られ、詳細を表１に示す。
【０１５８】
【表１】
2021534259.tif 000053
【０１５９】
結論：本発明における化合物は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２キナーゼの、キナーゼの４種のサブタイプの活性のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験で、ＪＡＫ１および／またはＴＹＫ２に対して良好な選択性の阻害を示した。
【０１６０】
実験２：薬物動態（ＰＫ）試験
試験化合物を溶解することによって得られた透明な溶液を、雄のマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）またはラット（ＳＤ）（終夜絶食、７〜８週齢）に尾静脈注射および胃内投与した。試験化合物の投与後、静脈内群（２ｍｇ／ｋｇ）では０．１１７、０．３３３、１、２、４、７および２４時間目に、静脈内群（１５ｍｇ／ｋｇ）では０．２５、０．５、１、２、４、８および２４時間目に下顎静脈から採血し、遠心分離して血漿を得た。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ方法を使用して血漿濃度を定量し、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（商標）バージョン６．３の薬物動態ソフトウェアを使用して、ノンコンパートメントモデルの線形対数ラダー法によって相対的な薬物動態パラメータを計算した。試験結果は以下の通りである：
【０１６１】
【表２−１】
2021534259.tif 000054
【０１６２】
【表２−２】
2021534259.tif 000055
【０１６３】
【表２−３】
2021534259.tif 000056
【０１６４】
結論：本発明における化合物は、良好なバイオアベイラビリティ、高い曝露を示し、ｉｎ  ｖｉｖｏでの効力に優れる。
【０１６５】
実験３：マウスにおけるコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）のｉｎ  ｖｉｖｏでの効力試験
実験目的：
関節リウマチ（ＲＡ）は、世界中の発症率が約１％である、複数の自己免疫疾患の１種であり、炎症、関節の損傷および形成異常をもたらし、重篤な状況では全身の炎症反応をもたらす。ＲＡ処置のための薬物の試験は、関節リウマチの症状の緩和に役立つ可能性があり、患者の生活の質を改善する可能性がある。マウスのコラーゲン誘発関節炎モデルは、ＲＡの処置における薬物の効力を評価するのに使用されることが多い動物モデルである。その病態形成および症状は、ＲＡ疾患に有意に関係する。Ｂ細胞およびＴ細胞の骨のコラーゲンに対する反応性は、モデルにＩＩ型コラーゲンを注射することによって活性化され、活性化されたＢ細胞およびＴ細胞は関節部位に進入して関節損傷を引き起こし、それによりヒトの関節リウマチと同様の一連の症状を生じる。マウスにおける関節炎、コラーゲン誘発関節炎の候補化合物のプロセスにおける、臨床前のリウマチ様疾患に対する薬物処置の評価は、多くの場合、その有効性を評価するために使用される。
この実験の目的は、マウスのコラーゲン誘発関節炎における化合物１−１３、化合物３−７および参照化合物であるフィルゴチニブの治療効果を試験し、それにより後続の臨床試験に前臨床薬力学情報を提供することである。
実験方法：
１．ＩＩ型コラーゲン／完全フロイントアジュバント免疫
酢酸の調製：２Ｎの酢酸を１００ｍＭに希釈し、０．２２ミクロンのフィルター膜によって濾過して４℃で保管した。
ウシ２型コラーゲン（ＣＩＩ）を１００ｍＭの酢酸溶液に溶解させ、４℃で終夜保管した。コラーゲンの最終濃度は８ｍｇ／ｍｌである。
エマルジョンの調製：終夜保管したＣＩＩ溶液を等体積の完全フロイントアジュバントと混合し、高速ホモジナイザーで、溶液が安定なエマルジョンを形成するまで、毎分３０，０００回転でおよそ６０分間、氷上でホモジナイズした。
２．関節炎の誘発：
マウスを異なる処置群に無作為に分けた。最初の免疫化の日を０日目と記録し、後続の日にちは順番に印を付した。
ＤＢＡ／１マウスにイソフルランで麻酔し、５０ｍｌの調製したコラーゲンエマルジョン（２００ｍｇのＣＩＩを含有する）を皮下注射した（尾の付け根から２〜３ｃｍ）。２１日目に、同じ体積のコラーゲンエマルジョンを同じ様態で尾に注射した。正常群のマウスは免疫化しなかった。
３．投与および投薬量の設計
平均臨床スコアが約１である２８日目に、中程度の発症率を示す５０匹のマウスを選択し、体重およびスコアに基づいて、各群８匹のマウスを含む５つの処置群に無作為に分けた。
デキサメタゾン（Ｄｅｘ．）を０．３ｍｇ／ｋｇの用量（ＣＩＡモデルにおいて一般的に使用される用量）で参照薬物として使用し、モデルが良好に確立されたかどうか測定した。さらに、予備実験の結果により、化合物１−１３、化合物３−７および参照化合物のフィルゴチニブの投薬量を決定し、表３−１に示す：第１群は処置を伴わない正常なマウスの群であり、第２群は溶媒のみが与えられるブランク群であり、第３群は０．３ｍｇ／ｋｇの用量のデキサメタゾンが与えられ、第６群、第７群および第８群は、１５ｍｇ／ｋｇの用量が与えられる。合計１４日間にわたり、１日２回マウスに投与した。
【０１６６】
【表３−１】
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【０１６７】
４．関節炎の発症指数の測定
臨床観察：免疫化の７日前から免疫化の２１日後まで、ＤＢＡ／１マウスの基本健康状態および体重の変化を毎日観察した（１週間に１回記録した）。２２日目以降は、マウスの健康状態、発症状況および体重の変化を実験終了まで毎日観察した（少なくとも１週間に３回記録した）。
臨床スコアリング：マウスの発症率を、免疫機能のブースト後に毎日観察した。マウスが発病した（関節炎の臨床症状を示す）後、発症率を、疾患の異なるレベル（発赤、関節変形）により、スコアリング基準通りに０〜４でスコアリングした。各肢の最高スコアは４であり、各動物の最高スコアは１６である。スコアリング基準を表３−２に示す。スコアリングは、１週間に３回実施した。
【０１６８】
【表３−２】
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【０１６９】
５．統計処理
実験データを平均±標準誤差（平均±ＳＥＭ）として表し、曲線下面積（ＡＵＣ）を一元配置ＡＮＯＶＡによって分析する。Ｐ＜０．０５を有意とみなす。
実験結果：
１．臨床スコアリングおよび発症率：
最初の免疫から２８日後（２回目の免疫から７日後）、マウスは関節炎の臨床症状を示し始めた。２８日目に投与を開始した。詳細な実験結果を表５および図１に示した。溶媒対照群の平均臨床スコアは漸増し、４１日目に５．８に達し、コラーゲン誘発関節炎モデルが良好に確立されたことを示唆する。１５ｍｇ／ｋｇの同じ用量の化合物１−１３、３−７およびフィルゴチニブは、実験のエンドポイント（４１日目）において関節炎のマウスの臨床スコアを顕著に低減しうる。同じ投薬量の化合物１−１３、３−７およびフィルゴチニブの平均スコアは１．５、３．０および５．６点に低下し（表５の値を参照されたい）、１５ｍｇ／ｋｇの化合物１−１３、３−７がコラーゲン誘発関節炎を有効に低減させることができることを示す。０．３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（Ｇ３群）処置は、コラーゲン誘発関節炎の臨床スコアを有意に阻害することができ、２７日目から、臨床スコアは約０．３に維持され、３１日目で（臨床スコアは０に低下する、表３−３の値を参照されたい）、曲線が実験終了まで正常群の曲線（Ｇ１群）と一致する（図１を参照されたい）。
【０１７０】
【表３−３】
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【０１７１】
各群における各動物の臨床スコアリング曲線を分析することにより、曲線下面積（ＡＵＣ）を計算し、溶媒対照群に対する各投与群の阻害率を、群間のＡＵＣの平均によって計算した。詳細な結果を表３−４および図２に示す。１５ｍｇ／ｋｇの同じ用量の化合物１−１３、３−７およびフィルゴチニブは、関節炎の動物の臨床スコアのＡＵＣを低減させることができ、阻害率はそれぞれ５９．９％、４８．６％および１８．７％である。デキサメタゾンもまた関節炎の動物の臨床スコアを有意に低減させることができ、阻害率は９７．３％である。
【０１７２】
【表３−４】
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【０１７３】
種々の処置因子もまた、コラーゲン誘発関節炎の発症率に影響を及ぼしうる。実験の詳細な結果を表７および図３に示す。試験化合物１−１３の発症率は２９日目に６３％に達し、実験終了まで維持された（表３−５の特定の値を参照されたい）。化合物３−７の発症率は３４日目に８８％に達し、終了まで１００％に維持された。フィルゴチニブ群の発症率は初回投与後に減少し、最後の投与後に１００％まで漸増した。溶媒対照群における関節炎の発症率は、免疫化から３４日後に１００％に達して維持され、陽性対照である０．３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン群の発症率は投与後に減少し始め、３１日目に０％に減少した。
【０１７４】
【表３−５】
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【０１７５】
２．体重
実験の詳細な結果を表８および図４に示す。正常群と比較すると、免疫化およびモデル化後のマウスの体重は免疫化後に低下し、各投与群の体重は２８日目から３４日目まで減少し（図４を参照されたい）、その後緩慢に回復し始めた。デキサメタゾン群は最も大きな体重の減少を示したが、他の群と比べて有意差はなかった。化合物１−１３、３−７およびフィルゴチニブ群間に有意差はなく、それらの体重は基本的に同じ様態で変化し（表３−６の特定の値を参照されたい）、化合物がマウスの体重に大きな影響を及ぼさないことを示唆する。
【０１７６】
【表３−６】
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【０１７７】
結論：コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）のマウスモデルでは、本出願による化合物は、疾患に対する良好な治療効果を示し、マウスの体重に有意な影響を有さず、同じ用量のフィルゴチニブより向上したｉｎ  ｖｉｖｏでの効力を有する。
【０１７８】
実験４：アジュバント誘発関節炎（ＡＩＡ）のｉｎ  ｖｉｖｏでの効力試験
実験目的：
アジュバント誘発関節炎（ＡＩＡ）のラットモデルは、関節リウマチ疾患の研究および新薬の開発において一般的に使用される動物モデルの１種である。その病態形成および臨床症状は、ヒトの関節リウマチのものと同様である。モデルは、足蹠に結核菌を注射し、骨および関節損傷機能を有する免疫細胞および抗体を誘発し、これにより関節腫脹、骨溶解症、滑膜損傷およびヒトの関節リウマチと同様の他の症状として現れる全身応答をもたらすことによって確立される。この実験の目的は、デキサメタゾンおよびフィルゴチニブを参照化合物として使用することにより、化合物１−１３の、アジュバント誘発関節炎のラットモデルに対する治療効果を評価することである。この実験には８つの群、すなわち、正常群（正常群）、溶媒対照群（ビヒクル群）、化合物１−１３の１ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ用量群、３ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ用量群、１０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ用量群および３０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ用量群、陽性薬物デキサメタゾンの０．３ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ群、ならびに参照化合物フィルゴチニブの３０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ群が存在する。正常群を除き、０日目にすべてのラットの左足に完全フロイントアジュバントを皮下注射し、関節炎を誘発した。実験プロトコールに従い、群を体重およびスコアによって群分けし、１３日目に投与を開始して１４日間継続した。実験期間中、ラットの体重、足の体積（１３日目以降１週間に３回測定した）および臨床スコアをモニタリングした。実験終了時に、ラットの右後足を採取してヘマトキシリン−エオシン染色（ＨＥ）し、病理学的スコア分析を行った。
実験方法：
１．関節炎モデル
アジュバントの調製：１００ｍｇの結核菌Ｈ３７Ｒａを秤量し、約５分間粉砕し、３ｍＬのパラフィン油を添加して粉末を溶解し、褐色の分配ボトルに移した。乳鉢を３ｍＬと４ｍＬのパラフィン油で２回洗浄し、すべての油を褐色の分配ボトルに移し、油の最終濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった。溶液を氷水混合物中で超音波によって約３０分間分解した。
２．関節炎の誘発
調製されたアジュバントを振盪しながらホモジナイズし、１ｍＬのガラスシリンジ（２０Ｇの針）、次に２５Ｇの針で抜引することによって気泡を除去した。ラットをイソフルランで麻酔した。免疫化前に、結核菌が完全に混合されるようにシリンジを反転した。麻酔後、０．１ｍＬのアジュバントをラットの左足底に皮下注射した。正常群のラットの足底に０．１ｍＬのパラフィン油を皮下注射した日を０日目とした。
３．投与
１３日目に、すべての動物が足の紅斑または腫脹などの関節炎の症状を示し、これらをスコア、足のサイズおよび体重に応じて層化し、無作為に群分けした。群分けを表９に示す。７０匹のラットを各群ラット１０匹の７つの群に分け、正常群はラット５匹であった。表４−１によると、各群の投薬量は以下の通りである。胃内投与体積は５ｍＬ／ｋｇであった。化合物は、合計１４日間にわたって１日２回投与した。
【０１７９】
【表４−１】
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【０１８０】
４．関節炎の発症率の決定
体重：ラットを、１３日目から２７日目まで１週間に３回秤量した。
足の体積：免疫化前に１回、１３日目から２７日目まで１週間に３回測定した。
スコアリング：スコアリングは、１３日目から２７日目まで１週間に３回実施した。病変（発赤、関節変形）の異なる程度および０〜４点の基準により、各肢の最高スコアは４点であり、各動物の最高スコアは１２点である（注射した側の左後肢を除く）。スコアリング基準を表４−２に示す。
【０１８１】
【表４−２】
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【０１８２】
５．病理学的分析
２７日目にラットを安楽死させた。採血後、ラットの右後脚を採取し、１０％ホルマリン溶液に浸し、ギ酸溶液で脱灰してパラフィンに包埋し、薄片化してＨＥ染色し、顕微鏡で観察した。関節損傷の程度を４つの態様：炎症細胞の浸潤、パンヌス形成、軟骨傷害および骨吸収から評価し、０〜４点の基準によってスコアリングした。スコアリング基準は以下の通りである（表４−３）。
【０１８３】
【表４−３】
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【０１８４】
６．統計処理
実験データを平均±標準誤差（平均±ＳＥＭ）によって表し、体重、臨床スコアおよび病理スコアを一元配置ＡＮＯＶＡによって表し、Ｐ＜０．５を有意とみなす。
実験結果：
１．臨床スコアリング
この実験は、デキサメタゾンおよびフィルゴチニブを参照物質として使用することにより、化合物１−１３の、関節炎（ＡＩＡ）ラットモデルの臨床スコアに対する改善効果を評価した。ラットは、アジュバント免疫化から６日後に関節炎の症状を発生し始めた。１３日目に投与を開始すると、溶媒対照群の平均臨床スコアが漸増した。実験結果は、溶媒対照群の平均臨床スコアが２４日目にピークに達し、約８点で安定化したことを示しており、ＡＩＡモデルの確立が成功したことを示唆する（図５、表４−４）。
実験終了時（２７日目）、１、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇの４つの用量の化合物１−１３は、関節炎ラットの臨床スコアを有意に阻害し（溶媒対照群と比較して、ｐ値はすべて＜０．０００１）、関節炎ラットの臨床スコアは、それぞれ５．４、３．９、３．２および２．７に用量依存的に低減した（高用量群と低用量群を比較して、ｐ＜０．０００１）。これらの中で、３０ｍｇ／ｋｇの化合物１−１３の効果が最も明白であった（１７日目から開始して、溶媒対照群と比較して非常に有意な差がある、ｐ＜０．０００１）。この群の関節炎の平均臨床スコアは、１３日目のピークの６．０から実験エンドポイントである２７日目の２．７点に低下した（図５、表１２）。参照化合物である３０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤのフィルゴチニブのスコアは、実験エンドポイントである２７日目に５．１に低下し、これは溶媒対照群より有意に低い（ｐ＜０．００１）が、３０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤの化合物１−１３より有意に高かった（ｐ＜０．００１）。化合物１−１３の関節炎の臨床スコアに対する改善効果は、同じ投薬量のフィルゴチニブの効果より有意に良好であった。
陽性対照のデキサメタゾン処置群の平均臨床スコアは、１３日目以降に最高値の６．０に達した。投与後、臨床スコアは減少を続け、２７日目の実験エンドポイントで２．７に低下した。対照群と比較して非常に有意な差がある（図５、表４−４）。
２．足の体積
この実験は、デキサメタゾンおよびフィルゴチニブを参照物質として用いて、化合物１−１３の、関節炎（ＡＩＡ）ラットモデルの足の体積に対する効果を評価した。溶媒対照群の動物の平均的な足の体積は、１３日目の１．９ｍＬから２７日目の実験終了時の２．９ｍＬまで安定的に増加し、ＡＩＡモデルが良好に確立されたことを示す（図６、表４−５）。実験終了時、１、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇの用量の化合物１−１３は、関節炎ラットの足の体積の増加を有意に阻害することができた（溶媒対照群と比較して、ｐ値はすべて＜０．０００１である）。炎症ラットの平均の足の体積は、それぞれ１．５９ｍＬ、１．２６ｍＬおよび１，２１ｍＬに用量依存的に低減した（高用量群と低用量群の間を比較して、ｐ＜０．０００１）。参照化合物である３０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤのフィルゴチニブは、実験エンドポイントの２７日目に足の体積が１．９１点に減少し、これはラットに対して、溶媒対照群より有意に低い（ｐ＜０．０００１）が、３０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤの化合物１−１３のものより有意に高かった（ｐ＜０．０００１）。足の体積の改善効果は、同じ投薬量のフィルゴチニブのものより有意に良好である。陽性対照のデキサメタゾン処置群もまた、平均的な足の体積の増加を非常に良好に抑制した。投与後、足の体積は実験終了まで安定的に減少し、１７日目に安定化し、ｐ＜０．０００１で溶媒対照群と有意に異なった（図６、表４−５）。
３．体重
正常群と比較すると、ラットの体重は免疫化およびモデル化後に減少した。１３日目の投与開始後、各投与群の体重は、溶媒対照群と比較して緩慢かつ継続的に増加したが、陽性対照のデキサメタゾン群の体重はさらに緩慢に回復し、ラットがフィルゴチニブおよび化合物１−１３に十分に耐性であることを示唆する。３０ｍｇ／ｋｇの化合物１−１３群の体重が最も迅速に増加し、体重は４つの投薬量で用量依存的に増加した（図７および表４−６）。
４．組織病理学的試験の結果
溶媒対照群の関節炎ラットは１６±０．００の合計病理学的スコアを示し、１ｍｇ／ｋｇの用量の化合物１−１３を投与されたラットでは、スコアは１３．３±０．４４に減少し（溶媒対照群と比較してｐ＝０．０９、統計学的差異なし）、阻害率は１６．９％であった一方、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇの用量は、関節炎ラットの病理学的スコアをそれぞれ１１．３±１．６４、４．４±１．１６および１．６±０．４７まで有意に低減させることができ、ｐ値は０．０１４、＜０．０００１および＜０．０００１、阻害率は２９．４％、７２．５％および９０％であった。参照化合物である３０ｍｇ／ｋｇのフィルゴチニブは１５．２±０．４９の合計病理学的スコアを示し、阻害率は５％であった。溶媒群と比較して有意差はなかった。同じ用量（３０ｍｇ／ｋｇ）の化合物１−１３は、フィルゴチニブより有意に低い合計病理学的スコアを示す（ｐ＜０．０００１）。対照化合物の０．３ｍｇ／ｋｇの用量のデキサメタゾンは、関節炎ラットの病理学的スコアを４．４±０．８まで極めて有意に低減させ、ｐ値は＜０．０００１、阻害率は７２．５％であった（表４−７）。
【０１８５】
【表４−４】
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【０１８６】
【表４−５】
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【０１８７】
【表４−６】
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【０１８８】
【表４−７】
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【０１８９】
結論：溶媒対照群のラットは関節炎の臨床症状を示し、継続して悪化した。溶媒対照群と比較して、化合物１−１３（１、３、１０、３０ｍｇ／ｋｇ）、フィルゴチニブ（３０ｍｇ／ｋｇ）およびデキサメタゾン（０．３ｍｇ／ｋｇ）は、発現時間の遅延をもって現れるアジュバント誘発関節炎に対して有意な阻害効果を示し、臨床症状および病理学的変化を有意に低減させ、さらに化合物１−１３は、アジュバント誘発関節炎モデルに対して用量依存的な治療効果を示す。上記の実験結果は、化合物１−１３が、ラットにおけるアジュバント誘発関節炎に対して有意な治療効果を有し、効果はフィルゴチニブより良好であることを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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