(57)【要約】  全用量条件下でＢ型肝炎ウイルス関連肝疾患を治療と予防する医薬品および方法。具体的に、本発明はＢ型肝炎ウイルス関連肝疾患を治療または予防する方法を提供し、上記方法は、毎日に治療または予防が必要な対象へ全用量のポリペプチドまたはその医薬品組成物を投与することを含み、上記ポリペプチドは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）Ｐｒｅ−Ｓ１から由来するアミノ酸配列を含有する；上記全用量は、上記ポリペプチドを投与した数日後に、上記ポリペプチドが標的器官とする肝臓で飽和に達する毎日用量である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
毎日に治療または予防が必要な対象へ全用量のポリペプチドまたはその医薬品組成物を投与することを含み、前記ポリペプチドは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）Ｐｒｅ−Ｓ１から由来するアミノ酸配列を含有し、
前記全用量は、前記ポリペプチドを投与した数日後に、前記ポリペプチドが標的器官とする肝臓で飽和に達する毎日用量であることを特徴とするＢ型肝炎ウイルス関連肝疾患を治療または予防する方法。
【請求項２】
前記ポリペプチドが、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列を含有し、好ましくは、前記ポリペプチドのＮ末端は、疎水基の修飾基を含有し、好ましくは、前記疎水基は、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、コレステロールとアラキドン酸から選べられるものであり、より好ましくは、前記疎水基は、ミリスチン酸であり、及び／又は、前記ポリペプチドは、Ｃ末端修飾を有し、好ましくは、前記Ｃ末端修飾は、アミド化、イソペンタンジオール化又は無修飾であり、
好ましくは、前記ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ又はＩのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列を含有し、より好ましくは、前記ポリペプチドが、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列１３−５９の配列を含有し、或いはＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ又はＩのｐｒｅ−Ｓ１領域における、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列１３−５９に対応する配列を含有することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリペプチドの一つ又は複数のアミノ酸残基は欠失、置換又は挿入された；好ましくは、前記ポリペプチドにおける１−３０、１−２０、１−１０、１−８、１−５又は１−３個のアミノ酸残基は、欠失、置換又は挿入された；及び／又は
前記ポリペプチドは、そのＮ末端及び／又はＣ末端に、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域からの天然隣接アミノ酸配列を含有する；好ましくは、前記ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域の天然隣接アミノ酸配列の長さは、１−１０、１−８、１−５或１−３個のアミノ酸であることを特徴とする請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記ポリペプチドは、
（１）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１−４０又は４９から選べられるいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む；或いは
（２）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１−４０又は４９のいずれか一つに示されたアミノ配列と少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する；
好ましくは、前記ポリペプチドのＮ末端は、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸とコレステロールから選べられる疎水基を含む；Ｃ末端は、アミド化修飾を有する；好ましくは、前記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−２０又は５１のいずれか一つに示されたものであり、より好ましくは、前記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３又は５１に示されたものであることを特徴とする請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記全用量は、少なくとも連続７日間の投与後に、ポリペプチドが、標的器官とする肝臓の飽和に達する毎日用量である；好ましくは、前記全用量は、７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌの毎日用量、好ましくは７７７．９５ｎｍｏｌ又は９２６．１３ｎｍｏｌの毎日用量であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列を含有し、そのＮ末端は、ミリスチン酸に修飾され、かつＣ末端は、アミノ化修飾される；前記全用量は、４．２−５．０ｍｇの毎日用量で、好ましくは４．２ｍｇの毎日用量であり、前記方法は、少なくとも連続７日間の投与を含む；
又は前記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９に示されアミノ酸配列を含有し、そのＮ末端は、ミリスチン酸に修飾され、かつＣ末端は、アミノ化修飾される；前記全用量は、４．２−５．０ｍｇの毎日用量で、好ましくは５．０ｍｇの毎日用量であり、前記方法は、少なくとも連続７日間の投与を含むことを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列を含有し、そのＮ末端は、ミリスチン酸に修飾され、かつＣ末端は、アミノ化修飾され、前記方法は、４．２ｍｇの毎日用量になるように、毎日に前記対象へＮ服の前記医薬品組成物を投与することを含み、Ｎは、１〜４２からのいずれかの整数である；又は前記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９に示されたアミノ酸配列を含有し、そのＮ末端は、ミリスチン酸に修飾され、かつＣ末端は、アミノ化修飾され、前記方法は、５．０ｍｇの毎日用量になるように、毎日に前記対象へＮ服の前記医薬品組成物を投与することを含み、Ｎは、１〜５０からのいずれかの整数であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記Ｂ型肝炎ウイルス関連肝疾患は、Ｂ型慢性肝炎ウイルス感染、Ｂ型慢性肝炎、Ｂ型肝炎関連肝線維症および肝硬変、Ｂ型肝炎関連肝がん、Ｂ型肝炎関連肝移植、およびＢ型肝炎関連母子感染から選べられる；前記Ｂ型慢性肝炎は、ＨＢｅＡｇ陽性慢性Ｂ型肝炎およびＨＢｅＡｇ陰性慢性Ｂ型肝炎を含むことが好ましい；前記Ｂ型肝炎関連肝移植は、移植前、移植中、移植後のドナー肝のＨＢＶ感染の保護を含むことを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ポリペプチドは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）Ｐｒｅ−Ｓ１から由来するアミノ酸配列を含有し、医薬品組成物は、一定の量の前記ポリペプチドを含有する医薬品組成物であり、整数個の製剤規格の当該医薬品組成物を投与することより、前記ポリペプチドが標的器官とする肝臓で飽和に達することを特徴とする乙型肝炎ウイルス関連肝疾患を治療と予防するためのポリペプチドを含有する医薬品組成物。
【請求項１０】
前記医薬品組成物に含まれる前記ポリペプチドの量は、前記医薬品組成物を毎日１服又は数服で投与したことで、前記ポリペプチドの毎日用量が７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌ、好ましくは７７７．９５ｎｍｏｌ又は９２６．１３ｎｍｏｌに至るものであることを特徴とする請求項９に記載の医薬品組成物。
【請求項１１】
前記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３又は４９に示されたアミノ酸配列を含有し、そのＮ末端は、ミリスチン酸に修飾され、かつＣ末端は、アミノ化修飾される；医薬品組成物における当該ポリペプチドの量は、前記医薬品組成物を毎日１服又は数服で投与したことで、前記ポリペプチドの毎日用量が４．２−５．０ｍｇ、好ましくは毎日用量が、４．２ｍｇ又は５．０ｍｇに至るものであることを特徴とする請求項９又は１０に記載の医薬品組成物。
【請求項１２】
毎服の医薬品組成物は、４．２ｍｇ、２．１ｍｇ、１．４ｍｇ、０．７ｍｇ、０．６ｍｇ、０．３ｍｇ、０．２ｍｇ又は０．１ｍｇの前記ポリペプチドを含有し、すなわち前記医薬品組成物の規格は、４．２ｍｇ、２．１ｍｇ、１．４ｍｇ、０．７ｍｇ、０．６ｍｇ、０．３ｍｇ、０．２ｍｇ又は０．１ｍｇである；又は毎服の医薬品組成物は５．０ｍｇ、２．５ｍｇ、１．０ｍｇ、０．５ｍｇ、０．２５ｍｇ又は０．１ｍｇの前記ポリペプチドを含有し、すなわち前記医薬品組成物の規格は、５．０ｍｇ、２．５ｍｇ、１．０ｍｇ、０．５ｍｇ、０．２５ｍｇ又は０．１ｍｇであることを特徴とする請求項９〜１１のいずれか一項に記載の医薬品組成物。
【請求項１３】
前記ポリペプチドは、請求項２〜４のいずれか一項に記載のものであることを特徴とする請求項９〜１２のいずれか一項に記載の医薬品組成物。
【請求項１４】
１服又は数服の請求項９〜１３のいずれか一項に記載の医薬品組成物を含み、Ｂ型肝炎ウイルス関連肝疾患の患者の１日又は多日の予防又は治療に用いられることを特徴とするキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全用量条件下でＢ型肝炎ウイルス関連肝疾患を治療する医薬品および方法に関わる。
【背景技術】
【０００２】
世界中で毎年約１００万人が、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染による肝不全、肝硬変、原発性肝細胞癌で死亡している。現在、中国には２０００万人の慢性Ｂ型肝炎患者、毎年１００万人の新発症例、毎年５００万人のＢ型肝炎による肝硬変の症例、および毎年１００万人の死亡があると推定される。毎年３０万件のＢ型肝炎関連肝がんが発生し、３０万人が死亡する。
【０００３】
ＨＢＶウイルスエンベロープタンパク質には、３つの表面抗原タンパク質が含まれる：  Ｌａｒｇｅ表面抗原タンパク質（Ｌ）、Ｍｉｄｄｌｅ表面抗原タンパク質（Ｍ）、Ｓｍａｌｌ表面抗原タンパク質（Ｓ）。それらのタンパク質は、Ｓ遺伝子における単一のオープンリーディングフレームにコードされ、三つの異なる翻訳開始点、即、Ｌ（Ｐｒｅ−Ｓ１  ＋  Ｐｒｅ−Ｓ２  ＋  Ｓ）、Ｍ（Ｐｒｅ−Ｓ２  ＋  Ｓ）とＳ（Ｓ）から開始する。ＨＢＶは、９種類の遺伝子型（Ａ−Ｉ）に分けられ、各遺伝子型は、Ｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列には、ある程度の差を有する。研究では、ＨＢＶが肝細胞表面のタウロコール酸ナトリウム共輸送ポリペプチド（ｓｏｄｉｕｍ  ｔａｕｒｏｃｈｏｌａｔｅ  ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ、ＮＴＣＰ）にＬａｒｇｅ表面タンパク質（ｌａｒｇｅ  ＨＢｓＡｇ）を介して結合することにより、肝細胞に対する感染を媒介することが確認された（Ｙａｎら、ｅＬｉｆｅ、１：ｅ０００４９  （２０１２））。ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１アミノ酸配列を含む誘導ポリペプチドは、インビトロ（Ｇｒｉｐｏｎ  Ｐら、Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ２００５；７９（３）：１６１３-１６２２）および動物モデルで、肝細胞のＨＢＶ感染を遮断できる（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ  Ｊら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２００８  Ｍａｒ；２６（３）：３３５−４１．）。また、ＮＴＣＰは、門脈血から肝臓への胆汁酸輸送という生理学的な機能を引き受け、胆汁酸腸肝循環の重要なタンパク質の１つである（Ａｌｒｅｆａｉ  Ｗら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ２００７；  ２４（１０）：１８０３−１８２３）。
【０００４】
ＮＴＣＰは、肝臓で特異的に発現し、他の組織ではほとんど発現しない；ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１由来のポリペプチドは、動物において有意に肝臓に集中することを示す（Ｓｃｈｉｅｃｋ  Ａら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ。  ２０１３年７月；５８（１）：４３−５３）。ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１由来のポリペプチドＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂの人で単回用量上昇の第Ｉａ相臨床試験と薬物動態試験は完了された（ｌａｎｋ  Ａら、Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ．  ２０１６  Ｓｅｐ；６５（３）：４８３−９．）。当該研究には、１２個の用量群を設置し、それぞれに、単回２時間の連続静脈内注射で０．３ｕｇ、３ｕｇ、１０ｕｇ、１００ｕｇ、８００ｕｇ、３ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇと、単回皮下注射で８００ｕｇ、５ｍｇ、１０ｍｇの用量を投与した。合計３６名の健康な被験者が研究に登録され、それぞれに上記１２個の用量群に配られ、群ごと３名であった。３６名の被験者すべてが臨床試験を完了した。薬物動態パラメータに対する継続的な静脈内投与の影響により、静脈内投与の薬物動態パラメータを解析することは困難であった。皮下投与の見かけの分布体積パラメータＶの解析によると、８００ｕｇと５ｍｇの皮下単回投与後の見かけの分布体積は、いずれも１００Ｌを超え、体重よりはるかに大きく、ポリペプチドが標的臓器に分布したことを示す；用量を１０ｍｇに増加したところ、血中濃度が高くそびえ、見かけの分布体積は４３Ｌである。この試験では、設定された皮下投与の用量は少ないから、参照と比較が足りないことになり、標的器官とする肝臓におけるポリペプチドが飽和状況に至るという結論を得ることができない。Ｍｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂを１０ｍｇの用量で６日間連続皮下投与した臨床薬物動態研究では、６日間連続投与後の累積係数ＲＡＵＣは１．７９であり、累積効果があったが、見かけの分布体積パラメータは報告されなかった（Ｂｌａｎｋ  Ａら、Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２０１７  Ｍａｙ  ２４．  ｄｏｉ：１０．１００２／ｃｐｔ．７４４．）。１日２ｍｇの用量でインターフェロンと組み合わせたＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  ＢによるＤ型肝炎の患者の治療の臨床試験が行われており、当該用量は、オランウータンにおける当該ポリペプチドの薬物動態研究結果に基づいて選択された；しかし、臨床試験の結果としては、ＨＢｓＡｇのクリアランスという主な研究の終点指標には治療効果が示されていなかった（Ｂｏｇｏｍｏｌｏｖら、Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ．  ２０１６  Ｓｅｐ；６５（３）：４９０−８．  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１６．０４．０１６．  Ｅｐｕｂ  ２０１６  Ａｐｒ  ２７）。ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１由来のペプチドがＨＢＶ関連肝疾患を治療する全用量は、まだ確定していない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本開示がＢ型肝炎ウイルス関連肝疾患を治療または予防する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記方法は、毎日に治療または予防が必要な対象へ全用量のポリペプチドまたはその医薬品組成物を投与することを含み、ただし、上記ポリペプチドは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）Ｐｒｅ−Ｓ１から由来するアミノ酸配列を含有する；上記全用量は、上記ポリペプチドを投与した数日後に、上記ポリペプチドが標的器官とする肝臓で飽和に達する毎日用量である。
【０００７】
ある実施の形態において、上記全用量は、７７７．９５〜９２６．１３ｎｍｏｌの毎日用量であって、より好ましくは、７７７．９５ｎｍｏｌ又は９２６．１３ｎｍｏｌの毎日用量である。
【０００８】
ある実施の形態において、上記全用量は、４．２〜５．０ｍｇの毎日用量であって、より好ましくは、４．２ｍｇ又は５．０ｍｇの毎日用量である。
ある実施の形態において、上記ポリペプチドが、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列を含有する。
【０００９】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドのＮ末端が疎水基修飾基を含有する。
【００１０】
ある実施の形態において、上記疎水基は、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、コレステロールとアラキドン酸から選べられるものである。
【００１１】
ある実施の形態において、上記疎水基は、ミリスチン酸である。
【００１２】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドは、Ｃ末端修飾を有し、或いは修飾されない。
【００１３】
ある実施の形態において、上記Ｃ末端修飾は、アミド化又はイソペンタンジオール化である。
【００１４】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドが、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨまたはＩのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列を含有する。
【００１５】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドが、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列１３−５９の配列を含有し、或いはＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ又はＩのｐｒｅ−Ｓ１領域における、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列１３−５９に対応する配列を含有する。
【００１６】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドの一つ又は複数のアミノ酸残基は欠失、置換又は挿入された；好ましくは、上記ポリペプチドにおける１−３０、１−２０、１−１０、１−８、１−５又は１−３個のアミノ酸残基は、欠失、置換又は挿入された。
ある実施の形態において、上記ポリペプチドは、そのＮ末端及び／又はＣ末端に、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域からの天然隣接アミノ酸配列を含有する；好ましくは、上記ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域の天然隣接アミノ酸配列の長さは、１−１０、１−８、１−５或１−３個のアミノ酸である。
【００１７】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸１３に対応するグリシン、及び／又はＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸２０に対応するアスパラギン又はアミノ酸５７に対応するリシンを含有する。
ある実施の形態において、上記ポリペプチドは、
（１）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１−４０又は４９から選べられるいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含む；好ましくは、上記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列を含む；又は
（２）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１−４０又は４９のいずれか一つに示されたアミノ酸配列と少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する。
【００１８】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−２０又は５１のいずれか一つに示された。
【００１９】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３又は４９を含有し、ただし、上記ポリペプチドは、さらにＮ末端ミリスチン酸修飾とＣ末端アミノ化修飾を含有し、または、上記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３又は５１を含有する。
【００２０】
ある実施の形態において、上記Ｂ型肝炎ウイルス関連肝疾患は、Ｂ型慢性肝炎ウイルス感染、Ｂ型慢性肝炎、Ｂ型肝炎関連肝線維症および肝硬変、Ｂ型肝炎関連肝がん、Ｂ型肝炎関連肝移植、およびＢ型肝炎関連母子感染を含む。
【００２１】
ある実施の形態において、上記Ｂ型慢性肝炎は、ＨＢｅＡｇ陽性慢性Ｂ型肝炎およびＨＢｅＡｇ陰性慢性Ｂ型肝炎を含む。
【００２２】
ある実施の形態において、上記Ｂ型肝炎関連肝移植は、移植前、移植中、移植後のドナー肝のＨＢＶ感染の保護を含む。
【００２３】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列を含有し、そのＮ末端はミリスチン酸に修飾され、かつＣ末端は、アミノ化修飾される；上記全用量は、４．２〜５．０ｍｇの毎日用量で、好ましくは４．２ｍｇの毎日用量であり、上記方法は、少なくとも連続７日間の投与を含む。
【００２４】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９に示されたアミノ酸配列を含有し、そのＮ末端はミリスチン酸に修飾され、かつＣ末端は、アミノ化修飾される；上記全用量は、４．２〜５．０ｍｇの毎日用量で、好ましくは５．０ｍｇの毎日用量であり、上記方法は、少なくとも連続７日間の投与を含む。
【００２５】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列を含有し、そのＮ末端はミリスチン酸に修飾され、かつＣ末端は、アミノ化修飾される；上記方法は、４．２ｍｇの毎日用量になるように、毎日に上記対象へＮ服の上記医薬品組成物を投与することを含み、ただし、Ｎは、１〜４２からのいずれかの整数である。
【００２６】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９に示されたアミノ酸配列を含有し、そのＮ末端はミリスチン酸に修飾され、かつＣ末端は、アミノ化修飾される；上記方法は、５．０ｍｇの毎日用量になるように、毎日に上記対象へＮ服の上記医薬品組成物を投与することを含み、ただし、Ｎは、１〜５０からのいずれかの整数である。
【００２７】
本開示が、さらに医薬品組成物を提供し、上記ポリペプチドは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）Ｐｒｅ−Ｓ１から由来するアミノ酸配列を含有する；上記医薬品組成物は、一定の量の上記ポリペプチドを含有する医薬品組成物であり、整数個の製剤規格の当該医薬品組成物を投与することより、上記ポリペプチドが標的器官とする肝臓で飽和に達する。
【００２８】
ある実施の形態において、上記医薬品組成物は、治療的有効量のポリペプチドを含有し、ただし、上記治療的有効量は、上記医薬品組成物を毎日に１服又は数服で投与した後に、上記ポリペプチドの毎日総用量が７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌになるものである。
【００２９】
ある実施の形態において、上記治療的有効量は、上記医薬品組成物を毎日に１服又は数服で投与した後に、上記ポリペプチドの毎日総用量が４．２〜５．０ｍｇになり、好ましくは毎日総用量が４．２ｍｇ又は５．０ｍｇになるものである。
【００３０】
ある実施の形態において、毎服の上記医薬品組成物は、４．２ｍｇ、２．１ｍｇ、１．４ｍｇ、０．７ｍｇ、０．６ｍｇ、０．３ｍｇ、０．２ｍｇ又は０．１ｍｇの上記ポリペプチドを含有し、すなわち上記医薬品組成物の規格は、４．２ｍｇ、２．１ｍｇ、１．４ｍｇ、０．７ｍｇ、０．６ｍｇ、０．３ｍｇ、０．２ｍｇ又は０．１ｍｇである；或いは、毎服の上記医薬品組成物は、５．０ｍｇ、２．５ｍｇ、１．０ｍｇ、０．５ｍｇ、０．２５ｍｇ又は０．１ｍｇの上記ポリペプチドを含有し、すなわち上記医薬品組成物の規格は、５．０ｍｇ、２．５ｍｇ、１．０ｍｇ、０．５ｍｇ、０．２５ｍｇ又は０．１ｍｇである。
【００３１】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドは、本開示のいずれか一つの実施の形態に記載されたものである。
【００３２】
本開示は、さらにキットを提供し、上記キットは、１服又は数服の、活性成分としてポリペプチドを含有する医薬品を含むものであって、患者へ１日又は数日の投与に用いられ、ただし、上記１服又は数服の医薬品に含まれるポリペプチドの量は、上記医薬品を毎日に１服又は数服で投与した後に、上記ポリペプチドで計算する場合に、毎日投与量が７７７．９５−８３３．５２ｎｍｏｌになる量であって、ただし、上記ポリペプチドは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）Ｐｒｅ−Ｓ１から由来するアミノ酸配列を含有する。
【００３３】
ある実施の形態において、上記１服又は数服の医薬品に含まれるポリペプチドの量は、上記医薬品を毎日に１服又は数服で投与した後に、毎日投与量が４．２〜５．０ｍｇに、好ましくは４．２ｍｇ又は５．０ｍｇになる量である。
【００３４】
ある実施の形態において、上記ポリペプチドは、本開示のいずれか一つの実施の形態に記載されたものである。
【００３５】
本開示は、さらに本明細書に記載された医薬品組成物の、Ｂ型肝炎ウイルス関連肝疾患を治療又は予防するための医薬品の調製における応用を提供する。
【００３６】
Ｂ型肝炎ウイルス関連肝疾患を治療と予防する、本明細書に記載されたポリペプチドまたはその医薬品組成物も開示された。
【００３７】
ある実施の形態において、上記のＢ型肝炎ウイルス関連肝疾患を治療と予防する方法は、本明細書のいずれか一つの実施の形態に記載の方法である。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】ＦＩＦＣで標識されたヘパラチド（Ｈｅｐａｌａｔｉｄｅ）は、ＮＴＣＰを発現するＨＥＫ２９３細胞（ＮＴＣＰ−２９３）を結合し、コントロールとするＨＥＫ２９３細胞（ＢＬＡＮＫ−２９３）を結合しない。ＦＩＦＣで標識されたサギＨＢＶから由来するポリペプチドを、コントロールポリペプチドとする。
【図２】インビトロでの胆汁酸取り込みに対するＣｍｙｒ−４７の効果。シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）を、ポジティブコントロールとする。Ａ、ＴＡの細胞への侵入は、ＮＴＣＰによって特異的に仲介され、ポジティブコントロールとするシクロスポリンＡが、ＮＴＣＰに有意な抑制効果を発揮した；Ｂ、ヘパラチドは、ＮＴＣＰの胆汁酸輸送機能に双方向的に影響した。
【図３】１２５Ｉ−ヘパラチド皮下注射後の沈殿放射性時間曲線。
【図４】第Ｉａ相ＰＫ研究の平均血中濃度−時間曲線（平均値＋ＳＤ）。
【図５】第Ｉｂ相ＰＫ研究の初回投与の平均血中濃度−時間曲線（平均値＋ＳＤ）。
【図６】第Ｉｂ相ＰＫ研究の２−７日目の投与前の平均血中濃度−時間曲線（平均値＋ＳＤ）。
【図７】第Ｉｂ相ＰＫ研究の最終投与の平均血中濃度−時間曲線（平均値＋ＳＤ）。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
特に説明しない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を持っている。この開示の目的のために、以下の用語は以下に定義されるとおりである。
【００４０】
冠詞「１つ」とは、１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）の当該冠詞の文法的対象を指す。たとえば、「１つの部品」とは、１つの部品または複数の部品を指す。
特に説明しない限り、「又は」という用語は、「及び／又は」という用語と交換可能に使用される。
【００４１】
「含む」、「有する」、「含有する」という用語またはその文法的変形が本開示または特許請求の範囲に使用される場合、これらの用語は、特許請求の範囲の転換語として使用される場合の「含む」という用語の解釈と同じように使用できる。「含む」という用語またはその文法的変形は「含むがそれに限定されない」を意味し、「含むがそれに限定されない」と交換可能に使用される。
【００４２】
「約」という用語は、特定の量、レベル、値、数値、頻度、パーセンテージ、サイズ、大きさ、数量、重量、または長さを指し、基準とする量、レベル、値、数値、頻度、パーセンテージ、サイズ、大きさ、数量、重量、または長さと比較すると、それらは、おおよそ３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％又は１％の差を有する。「約」という用語が数値範囲とともに使用される場合、この用語は該範囲を修飾し、その限界を該数値の上または下に拡張する。一般に、「約」という用語が値を修飾する場合、該値より１０％低いから該値より１０％高いまでの範囲を意味する。
【００４３】
本願は、ＡＳＣＩＩ形式の電子的に提出したシーケンスリストを含み、その全てを参考として組み入れる。
【００４４】
本明細書に開示された実施の形態における各技術的特徴は、好ましい技術的解決方案を形成するために任意に組み合わせることができる。
【００４５】
Ｉ、ポリペプチド
本開示のある態様は、ＨＢＶ関連肝疾患を治療又は予防することに用いられる、ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１から由来するポリペプチドを提供する。好ましくは、上記ポリペプチドは、インビトロでＨＢＶ感染を遮断できる。より好ましくは、上記ポリペプチドは、インビトロでＮＴＣＰを結合でき、たとえば溶液中又は無細胞システム中（たとえば細胞溶解物又は再構築されたシステム中）において、或いは体外培養の細胞（たとえばＮＴＣＰを発現する細胞、又は肝細胞）のような細胞において、或いは対象の生体内細胞において、ＮＴＣＰを結合する。上記の対象は、哺乳類動物であっても良い。一部の実施の形態において、上記の対象は、ヒトであっても良い。
【００４６】
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は互換的に使用され、完全長のタンパク質および断片、ならびに完全長のタンパク質および断片のバリアントを含む。本明細書に記載のポリペプチドのこれらの断片およびバリアントは、ポリペプチドの少なくとも１つまたは複数の生物学的活性を保持している。「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、天然及び／又は非天然のアミノ酸残基を含んでも良い。これらの用語は、翻訳後修飾タンパク質も含み、たとえばグリコシル化、シアリル化、アセチル化、および／またはリン酸化されたタンパク質を含む。これらの用語は、一つ又は複数のアミノ酸残基（たとえばＮ末端及び／又はＣ末端にあるアミノ酸残基）が化学修飾されたタンパク質も含む。たとえば、本明細書に記載されたポリペプチドのＮ末端は、疎水基（たとえばミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、コレステロールとアラキドン酸）に修飾されても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドのＣ末端は、修飾されても良い。Ｃ末端の修飾は、アミド化（アミノ化）、イソペンタンジオール化又は無修飾から選べられてもよい。
【００４７】
本明細書に使用された用語「ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１から由来するポリペプチド」又は「ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１由来のポリペプチド」とは、その起源又は来源はＨＢＶであるポリペプチドを指し、天然、組換え、合成又は精製のものを含んでも良い。用語「ＨＢＶから由来するポリペプチド」又は「ＨＢＶ由来のポリペプチド」とは、完全長の天然ＨＢＶポリペプチドまたはその断片、及び完全長の天然ポリペプチドまたはその断片のバリアントを指す。一部の実施の形態において、断片は、少なくとも３−５個のアミノ酸、少なくとも５−１０個のアミノ酸、少なくとも１０−２０個のアミノ酸、少なくとも２０−３０個のアミノ酸、少なくとも３０−５０個のアミノ酸からなってもよく、又は天然配列の全体アミノ酸からなってもよく、或いは当業者に上記天然配列から由来するものとして識別されてもよい。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、任意のＨＢＶサブタイプＬタンパク質のｐｒｅ−Ｓ１領域から由来しても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＨＢＶサブタイプのいずれか一つのＬタンパク質の全ｐｒｅ−Ｓ１領域を含んでも良い。ある実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ又はＩのいずれか一つのＬタンパク質のｐｒｅ−Ｓ１領域から由来しても良い。これらのＨＢＶ遺伝子型のゲノム配列は、それぞれにＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＫＣ８７５２６０  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１）、ＡＹ２２０７０４  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２）、ＡＦ４６１３６３  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３）、ＡＹ７９６０３０  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）、ＡＢ２０５１２９  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５）、ＤＱ８２３０９５  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）、ＨＥ９８１１７６  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７）およびＡＢ１７９７４７  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）から見つけられる。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型ＣのＬタンパク質のｐｒｅ−Ｓ１領域から由来しても良い。本明細書に記載されたＨＢＶから由来するポリペプチドは、対応する天然ＨＢＶポリペプチドの本明細書に記載された１つまたは複数の生物学的活性を保持している。
【００４８】
本明細書に使用されや本明細書に記載されたポリペプチド、ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１から由来するポリペプチド、又はＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１由来のポリペプチドと関連する「バリアント」とは、所与のポリペプチド（すなわち本明細書に記載されたポリペプチド、ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１から由来するポリペプチド、又はＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１由来のポリペプチド）とアミノ酸配列に異なるが、所与のポリペプチドの本明細書に記載された１つまたは複数の生物学的活性を保持しているものを指す。本明細書に記載されたバリアントポリペプチドは、所与のポリペプチドに対して、一つ又は複数のアミノ酸の増加（例えば挿入）、削除又は置換を有してもよい。一部の実施の形態において、所与のポリペプチドに対して、本明細書に記載されたバリアントポリペプチドは、１−３０、１−２０、１−１０、１−８、１−５又は１−３個（これらの範囲内の全ての整数を含む）のアミノ酸の増加（たとえば挿入）、削除又は置換を有しても良い。たとえば、ポリペプチド配列は、アミノ酸の保存的置換を有しても良い。アミノ酸の保存的置換、すなわち類似した特性（例えば親水性や帯電の程度、帯電領域の分布など）を持つ別のアミノ酸で一つのアミノ酸を置換することは、一般的に、小さい変化を引き起こし、そしてポリペプチドの生物学的活性を著しく変えることがない。これらの小さい変化は、部分的に、当該アミノ酸の疎水性と電荷に基づきアミノ酸の親水性指数を考慮することより、鑑定されても良い。類似の親水性指数と親水性数値を持つアミノ酸は、相互に置き換えることができ、それでもタンパク質機能を保持できる。アミノ酸の親水性指数と親水性数値は、当該アミノ酸の特定側鎖に影響される。この観察と一致して、生物学的機能とマッチングするアミノ酸置換は、アミノ酸の相対的類似性に依存し、特にそれらのアミノ酸の側鎖の類似性は、疎水性、親水性、帯電状況、サイズ、およびその他の特性に現れる。
【００４９】
用語「バリアント」は、さらに所与のポリペプチドとある程度の同一性（例えば所与のポリペプチドと少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性）を有するものを含む。本明細書に使用された「バリアント」は、さらに、ＨＢＶタンパク質の天然配列に対応する所与のポリペプチドの一部を含有するポリペプチドを含む。「バリアント」とは、二種類又は複数種類の異なる来源のタンパク質から由来するポリペプチドを含有する融合タンパク質またはキメラタンパク質も指しても良い。本明細書に記載された融合タンパク質の非限定的な例として、ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１から由来する一つのポリペプチドと非ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１タンパク質から由来する別の一つのポリペプチドとの融合タンパク質、異なるＨＢＶサブタイプから由来する二つのポリペプチドの融合タンパク質、及びいずれか一つのＨＢＶサブタイプＬタンパク質の異なる領域から由来する二つのポリペプチド、又はいずれか一つのＨＢＶサブタイプＬタンパク質ｐｒｅ−Ｓ１領域内の異なる配列から由来する二つのポリペプチドの融合タンパク質を含む。
【００５０】
用語「バリアント」は、さらに、所与のポリペプチド（すなわち本明細書に記載されたポリペプチド、ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１から由来するポリペプチド又はＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１由来のポリペプチド）と同じアミノ酸配列を含有し、当該所与のポリペプチドの１つまたは複数の生物学的活性を保持するが、当該所与のポリペプチドと異なる方式で化学修飾及び／又は翻訳後修飾されたポリペプチドを含む。「バリアント」は、差別化処理（例えばタンパク質の加水分解、リン酸化、またはその他の翻訳後修飾）されたが、本明細書に記載された１つまたは複数の生物学的活性を保持しているものを説明するために使用することもできる。本明細書において、特に説明しない限り、「バリアント」は、バリアントの断片を含む。用語「バリアント」は、さらに、異なるウイルス種、菌株又は向肝性ウイルス（ｈｅｐａｔｏｔｒｏｐｉｃ  ｖｉｒｕｓ）サブタイプに見つけられた相同ポリペプチド配列を含む。そのエンベロープタンパク質における抗原性エピトープに基づき、ＨＢＶは、四つの主な血清型（ａｄｒ、ａｄｗ、ａｙｒとａｙｗ）に分けられ、ゲノムにおける全てのヌクレオチド配列の変異性に基づき、ＨＢＶは９種類の遺伝子型（Ａ−Ｉ）に分けられる。因此、用語「バリアント」は、これらのＨＢＶサブタイプに見つけるいずれか一つの相同ポリペプチドを含む。「バリアント」は、さらにＮ及び／又はＣ末端にこれらのいずれか一つのＨＢＶサブタイプからの天然隣接アミノ酸配列を添加したポリペプチドを含む。
【００５１】
用語「保存性アミノ酸置換」と「保存的置換」は、本明細書中には互換的に使用され、アミノ酸のグループ内の特定のアミノ酸の交換を意味し、ただし、アミノ酸は、サイズ、構造、電荷及び／又は極性が類似している異なるアミノ酸と交換される。類似する側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーは、当分野の公知常識であり、塩基性側鎖（例えばリシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β側鎖（例えばスレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香側鎖（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。そして、一部の実施の形態において、ポリペプチドにおけるアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの別の一つのアミノ酸残基に交換されても良い。他の実施の形態において、アミノ酸配列の一区間は、構造が類似するが側鎖ファミリーメンバーの順番及び／又は組成が異なるアミノ酸配列に交換されても良い。他の実施の形態において、突然変異は、ランダムに当該ポリペプチドの全配列又は部分配列に導入されても良い。保存性アミノ酸置換の例として、例えば、芳香族又は疎水アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕとＩｌｅからの一個のアミノ酸で当該グループの４個のアミノ酸の中のもう１つを置き換えすること；ヒドロキシ基含有残基ＳｅｒとＴｈｒ間の置き換え；酸性残基ＡｓｐとＧｌｕ間の置き換え；アミド残基ＡｓｎとＧｌｎ間の置き換え；塩基性残基Ｌｙｓ、ＡｒｇとＨｉｓ間の置き換え；芳香族残基Ｐｈｅ、ＴｙｒとＴｒｐ間の置き換え；及び小さいアミノ酸Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＭｅｔとＧｌｙ間の置き換えを含む。保存的置換（例えば保存的アミノ酸を類似する、構造的に関連するアミノ酸で置き換えること）がポリペプチドの生物学的活性に実質的な影響を及ぼさないことは合理的に予測できる。
用語「配列同一性」（例えば、所与の配列と５０％の同一性を有すること）とは、一つの比較ウィンドウには、アミノ酸ｖｓアミノ酸の方式で比較する際に、配列の同一性程度を指す。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、一つのアミノ酸配列を含有しても良く、当該アミノ酸配列は、所与のポリペプチドの配列と少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有し、かつ当該所与のポリペプチドの１つまたは複数の生物学的活性を保持している。比較ウィンドウで２つの配列の並べを最適化し、２つの配列で同じアミノ酸が出現する位置の数を計測することで一致する位置の数を取得し、一致する位置の数を比較ウィンドウの位置の総数で割り、その結果に１００を掛けて、配列同一性の百分比を得、「百分比同一性」または「％同一性」として計算できる。比較ウィンドウの最適な配列並べは、当技術分野で知られているアルゴリズム（たとえばＢＬＡＳＴ＠ファミリーのプログラム）をコンピュータで実行することや、目視で観察することなどより選択された任意の方法で得られる最適な並べ（すなわち、比較ウィンドウで最高の同一性百分比に至る並べ）から選べられる。配列比較に対して、一つの配列を参照配列として使用し、テスト配列を参照配列と比較する。配列比較アルゴリズムを使用する場合は、テスト配列と参照配列をコンピューターに入力し、必要に応じてサブ配列座標を設計し、配列アルゴリズムプログラムのパラメータを設定する。次に、配列比較アルゴリズムは、設定されたプログラムパラメータに基づいて、該参照配列に対する該テスト配列の現在の配列同一性を計算する。配列アルゴリズムプログラムパラメータの設定は、当技術分野で公知されたものである。例えば、比較ウィンドウは、１つまたは２つの比較配列の全長をカバーする（例えば参照配列の全長をカバーする）ように設定されても良く、同時に、参照配列の総アミノ酸数の５％の差異を許容する。
【００５２】
一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、いずれか一つのＨＢＶサブタイプのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸配列を含有しても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸１３−５９：ＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＡＦＧＡＮＳＮＮＰＤＷＤＦＮＰＮＫＤＨＷＰＥＡＮＱＶＧ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３）又はＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＡＦＧＡＮＳＮＮＰＤＷＤＦＮＰＮＫＤＨＷＰＥＡＮＫＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９）を含有する。他の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、別のＨＢＶ遺伝子型から（例えば遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ又はＩのいずれか一つから）の対応するｐｒｅ−Ｓ１配列を含有しても良い。
【００５３】
たとえば、ある実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、以下のものを含有しても良い：
ＨＢＶ遺伝子型Ａのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸１３−５９：
ＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＡＦＧＡＮＳＮＮＰＤＷＤＦＮＰＶＫＤＤＷＰＡＡＮＱＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４）；
ＨＢＶ遺伝子型Ｂのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸１３−５９：
ＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＡＦＫＡＮＳＥＮＰＤＷＤＬＮＰＮＫＤＮＷＰＤＡＮＫＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５）；
ＨＢＶ遺伝子型Ｄのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸２−４８：
ＧＱＮＬＳＴＳＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＡＦＲＡＮＴＡＮＰＤＷＤＦＮＰＮＫＤＴＷＰＤＡＮＫＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）；
ＨＢＶ遺伝子型Ｅのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸１２−５８：
ＧＫＮＩＳＴＴＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＡＦＲＡＮＴＲＮＰＤＷＤＨＮＰＮＫＤＨＷＴＥＡＮＫＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）；
ＨＢＶ遺伝子型Ｆのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸１３−５９：
ＧＱＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＬＦＲＡＮＳＳＳＰＤＷＤＦＮＴＮＫＤＳＷＰＭＡＮＫＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）；
ＨＢＶ遺伝子型Ｇのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸１２−５８：
ＧＫＮＬＳＡＳＮＰＬＧＦＬＰＤＨＱＬＤＰＡＦＲＡＮＴＮＮＰＤＷＤＦＮＰＫＫＤＰＷＰＥＡＮＫＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９）；又は
ＨＢＶ遺伝子型Ｈのｐｒｅ−Ｓ１  アミノ酸１３−５９：
ＧＱＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＬＦＲＡＮＳＳＳＰＤＷＤＦＮＴＮＫＤＮＷＰＭＡＮＫＶＧ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）。
【００５４】
一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域の部分を含有しても良く、上記部分は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、３４−４０又は４９から選べられる少なくとも一つのアミノ酸配列を含有する。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＨＢＶの完全ｐｒｅ−Ｓ１領域を含有しても良い。
【００５５】
一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドの長さは、１０−１００個のアミノ酸であっても良い。たとえば、上記ポリペプチドの長さは、１５−１００、１５−８０、２０−１００、２０−８０、２０−６０、２５−６０、３０−６０、３５−６０又は４０−６０個（これらの範囲内のすべての整数を含む）のアミノ酸であっても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドの長さは、少なくとも２０個のアミノ酸であり、たとえば少なくとも２５、３０、３５又は４０個のアミノ酸である。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドの長さは、２０、２５、３０、３５、４０、４７、５５又は６０個のアミノ酸であっても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドの長さは、４７個のアミノ酸であっても良い。本明細書に記載されたポリペプチドの長さに異なるバリアントが、対応するポリペプチドに関連する１つまたは複数の生物学的活性を保持している。
【００５６】
一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドのＮ末端は、疎水基修飾を含有しても良い。たとえば、疎水基は、たとえばミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、コレステロールとアラキドン酸から選べられてもよい。一部の実施の形態において、上記疎水基は、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸とコレステロールから選べられてもよい。一部の実施の形態において、上記疎水基は、ミリスチン酸であっても良い。ある実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、３４−４０和４９から選べられるいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含有しても良く、ただし、上記ポリペプチドのＮ末端は、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸とコレステロールから選べられる疎水基で修飾されても良い。ある実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、３４−４０と４９から選べられるいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含有しても良く、ただし、上記ポリペプチドのＮ末端は、ミリストイル（Ｍｙｒｉｓｔｏｙｌ）化されても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列を含有しても良く、ただし、上記ポリペプチドのＮ末端は、ミリストイル化されても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、Ｃ末端の修飾を含有しても良く、又は修飾されなくても良い。たとえば、Ｃ末端の修飾は、アミド化（アミノ化）、イソペンタンジオール化又はＣ末端無修飾から選べられてもよい。一部の実施の形態において、上記Ｃ末端の修飾は、アミド化（アミノ化）であっても良い。たとえば、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列を含有しても良く、そのＮ末端はミリストイル化されても良く、及び／又はそのＣ末端は、アミド化（アミノ化）されても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列を含有しても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４−４０、４９から選べられるいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含有しても良く、ただし、そのＮ末端はミリストイル化されても良く、及び／又はそのＣ末端は、アミド化（アミノ化）されても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４−２０、５１から選べられるいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含有しても良い。本明細書に記載されたポリペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端に修飾されたバリアントが、同じ方法で修飾されていない対応するポリペプチドの１つまたは複数の生物学的活性を保持している。
【００５７】
本明細書に記載されたポリペプチドのバリアントも本開示に含まれ、一つ又は複数のアミノ酸の削除、置換又は挿入を有しつつ、上記ポリペプチドの１つまたは複数の生物学的活性を保持しているものを含む。本明細書に記載されたポリペプチドが、好ましくは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸１３に対応するグリシン（すなわちＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のＮ末端グリシン）を保留する。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドが、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸２０に対応するアスパラギン、又はアミノ酸５７に対応するリシンを保留する。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドが、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域に、一つ又は複数の自然発生の突然変異を有しても良い。一部の実施の形態において、ＨＢＶのｐｒｅ−Ｓ１領域からの配列に対して、本明細書に記載されたポリペプチドは、１−３０個、たとえば１−２０個、１−１０個、１−８個、１−５個又は１−３個（これらの範囲内の全ての整数を含む）のアミノ酸の欠失、置換又は挿入を有しても良い。一部の実施の形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、３４−４０和４９から選べられるいずれか一つに示されたアミノ酸配列に対して、本明細書に記載されたポリペプチドは、１−３０個、たとえば１−２０個、１−１０個、１−８個、１−５個又は１−３個（これらの範囲内の全ての整数を含む）のアミノ酸の欠失、置換又は挿入を有しても良い。一部の実施の形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列に対して、本明細書に記載されたポリペプチドは、１−３０個、たとえば１−２０個、１−１０個、１−８個、１−５個又は１−３個（これらの範囲内の全ての整数を含む）のアミノ酸の欠失、置換又は挿入を有する。一部の実施の形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列に対して、本明細書に記載されたポリペプチドは、１−３個のアミノ酸の欠失、置換又は挿入を有する。ある実施の形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、３４−４０和４９から選べられるいずれか一つに示されたアミノ酸配列に対して、本明細書に記載されたポリペプチドは、Ｃ末端に１−３０個、たとえば１−２０個、１−１０個、１−８個、１−５個又は１−３個（これらの範囲内の全ての整数を含む）のアミノ酸の欠失又は挿入を有する。たとえば、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１、２２和２４−２８から選べられるいずれか一つに示されたアミノ酸配列を含有しても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、表１に示されたいずれか一つのポリペプチドのアミノ酸配列を含有しても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、表１に示されたいずれか一つの翻訳後修飾ポリペプチドから選べられてもよい。
【００５８】
【表１−１】
2021500411.tif 000002
【表１−２】
2021500411.tif 000003
【表１−３】
2021500411.tif 000004
【００５９】
各実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、本明細書に記載されたいずれか一つのポリペプチドと、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有しても良い。たとえば、上記ポリペプチドは、一つのアミノ酸配列を含有しても良く、当該アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１−４０のいずれか一つの配列と少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する。一部の実施の形態において、上記ポリペプチドは、一つのアミノ酸配列を含有しても良く、当該アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、３４−４０と４９のいずれか一つの配列と少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する。一部の実施の形態において、上記ポリペプチドは、一つのアミノ酸配列を含有しても良く、当該アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３と少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する。本明細書に記載されたポリペプチドとある程度の配列同一性を有するバリアントは、対応するポリペプチドの１つまたは複数の生物学的活性を保持している。
【００６０】
本開示の各態様は、さらに本明細書に記載されたポリペプチドの、ＨＢＶのＬタンパク質（たとえばＬタンパク質のｐｒｅ−Ｓ１領域）からの天然隣接アミノ酸配列を有するバリアントを含み、上記隣接アミノ酸配列は、上記バリアントのＮ末端及び／又はＣ末端に位置する。上記天然隣接アミノ酸配列とは、対応するＨＢＶ遺伝子型又は任意の他のＨＢＶ遺伝子型のｐｒｅ−Ｓ１領域において、本明細書に記載されたポリペプチドのＮ又はＣ末端に隣接している天然配列を指す。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、３４−４０と４９から選べられるいずれか一つに示されたアミノ酸配列、及びＨＢＶ遺伝子型Ａ−Ｈのいずれか一つの遺伝子型のｐｒｅ−Ｓ１領域から由来してＮ末端及び／又はＣ末端に隣接する天然アミノ酸配列を含有しても良い。一部の実施の形態において、上記天然隣接アミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＫＣ８７５２６０  （遺伝子型Ａ；  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１）、ＡＹ２２０７０４  （遺伝子型Ｂ；  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２）、ＡＦ４６１３６３  （遺伝子型Ｃ；  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３）、ＡＹ７９６０３０  （遺伝子型Ｄ；  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）、ＡＢ２０５１２９  （遺伝子型Ｅ；  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５）、ＤＱ８２３０９５  （遺伝子型Ｆ；  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）、ＨＥ９８１１７６  （遺伝子型Ｇ；  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７）又はＡＢ１７９７４７  （遺伝子型Ｈ；  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）のＨＢＶ株のコンセンサス配列から由来しても良い。たとえば、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列を含有しても良く、かつそのＮ末端及び／又はＣ末端に、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域からの天然隣接アミノ酸配列を含有しても良い。或いは、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列を含有しても良く、かつそのＮ末端及び／又はＣ末端に、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧとＨのいずれか一つの遺伝子型のｐｒｅ−Ｓ１領域からの天然隣接アミノ酸配列を含有しても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端は、独立に、長さが１−１０個、たとえば１−８個、１−５個又は１−３個（これらの範囲内の全ての整数を含む）のアミノ酸である天然隣接アミノ酸配列を含有しても良い。たとえば、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列を含有しても良く、かつそのＮ末端に、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域からの長さが１０個のアミノ酸である天然隣接アミノ酸配列を含有しても良い。言い換えれば、当該ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸２−５９（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）を含有しても良い。別の例としては、本明細書に記載されたポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示されたアミノ酸配列を含有しても良く、かつそのＮ末端に、ＨＢＶ遺伝子型Ｅ又はＧのｐｒｅ−Ｓ１領域からの長さが９個のアミノ酸である天然隣接アミノ酸配列を含有しても良い。言い換えれば、当該ポリペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ｃのｐｒｅ−Ｓ１領域��アミノ酸１３−５９と、ＨＢＶ遺伝子型Ｅ又はＧのｐｒｅ−Ｓ１領域のアミノ酸２−１１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）を含有しても良い。理解すべきは、本明細書に記載されたいずれか一つのポリペプチドは、そのＮ末端及び／又はＣ末端から伸ばす任意長さの天然隣接アミノ酸配列を有しても良く、かつ産生するポリペプチドは、原始的なポリペプチドの１つまたは複数の生物学的活性を保持している。
【００６１】
本明細書に記載されたポリペプチドは、化学合成または組換え技術で調製することができる。
【００６２】
組換え方法を選択する場合、デノボで合成された遺伝子を構築し、或いはたとえばカセット突然変異で天然遺伝子を突然変異しても良い。本明細書に記載されたポリペプチドは、組換えＤＮＡ技術で調製されても良い。簡単に言えば、これらの技術は、当該ポリペプチドをコードする天然又は合成の遺伝子を得ること、それを適当のベクターに挿入すること、ベクターを適当の宿主細胞に移すこと、当該宿主細胞を培養することより当該遺伝子を発現させること、及び産生するペプチドを回収又は分離することを含む。一部の実施の形態において、回収されたペプチドを適当な純度まで精製する。
【００６３】
たとえば、適当な宿主で発現できるように、本明細書に記載されたポリペプチドをコードするＤＮＡ配列をクローンして操作する。ＨＢＶゲノムライブラリーのうち当該ポリペプチドを発現する細胞のｍＲＮＡから由来するｃＤＮＡから、親ポリペプチドをコードするＤＮＡを得られ、又は合成方法で当該ＤＮＡ配列を構築することより親ポリペプチドをコードするＤＮＡを得られる。その後、当該親ＤＮＡを、宿主細胞を形質転換するための適当なプラスミド又はベクターに挿入する。一般的に、宿主細胞と相容性のある種類のプラスミドベクターからの、複製および制御するための配列は、これらの宿主に用いられる。ベクターは、一般的に、複製サイト及び、形質転換された細胞に表現型的な選択肢を提供するタンパク質又はペプチドをコードする配列を持つ。ベクターは、当分野によく用いられるベクターであっても良く、又は標準的な技術を使用し、当分野で一般的に使用されるベクターの機能的断片との組み合わせで構築されたものであっても良い。
【００６４】
宿主細胞は、原核細胞または真核細胞であっても良い。例えば、原核宿主細胞は、大腸菌、枯草菌、および他の腸内細菌科（たとえばサルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）またはセラチア・マルセサンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓａｎｓ））、並びに様々なシュードモナス（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）を含んでも良い。原核生物に加えて、酵母培養物などの真核生物、または昆虫や哺乳動物細胞培養物などの多細胞生物に由来する細胞も使用することができる。そのような真核生物宿主細胞株の例として、ＶＥＲＯおよびＨｅｌａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、Ｗ１３８、２９３、ＢＨＫ、ＣＯＳ−７およびＭＤＣＫ細胞株を含む。
【００６５】
一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、固相合成または当分野で公知された同等の化学合成方法によって調製することができる。一部の実施の形態において、あらかじめ保護されたα−アミノ酸を、適当な樹脂にカップリングすることより、ポリペプチドのＣ末端の固相合成を開始する。出発物質は、α−アミノは保護されたアミノ酸を、エステル結合を介してクロロメチル化樹脂またはヒドロキシメチル化樹脂に結合し、或いはアミド結合を介してＢＨＡ樹脂又はＭＢＨＡ樹脂に結合することによって調製することができる。アミノ酸を、ペプチド結合を形成するための当分野で公知された技術で、ペプチド鎖に結合する。一つの方法は、アミノ酸を誘導体に変換し、当該誘導体が、ペプチド断片の遊離Ｎ末端のアミノ基と反応しやすいカルボキシル基を提供する。たとえば、保護されたアミノ酸と、クロロギ酸エチル、クロロギ酸フェニル、クロロギ酸ｔｅｒｔ−ブチル、クロロギ酸イソブチル、塩化ピバロイルおよび類似の酸塩化物との反応で、アミノ酸を混合の酸無水物に変換することができる。又は、アミノ酸を活性エステル（たとえば２，４，５−トリクロロフェニルエステル、ペンタクロロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾールからなるエステル）に変換してもよい。別のカップリング方法は、適当なカップリング剤（たとえばＮ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ、Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド）の使用に関わる。
【００６６】
一部の実施の形態において、ペプチド合成に使用される各アミノ酸のαアミノ基は、それの活性αアミノ基機能に関する副反応を防ぐように、カップリング反応から保護される。たとえば、適当な保護基で反応性側鎖官能基（たとえばメルカプト基、アミノ基、カルボキシル基とヒドロキシル基）を含有する特定のアミノ酸を保護し、最初及びその後のカップリングステップに当該サイトでの化学反応を防いでも良い。当業者は、適切な側鎖保護基を選択する方法を知っている。所要のアミノ酸のペプチドを得た後、ペプチド鎖構造を変えない反応条件で、保護基を容易に除去することができる。
【００６７】
αアミノ基の保護基を除去した後、所要の順番で、残ったαアミノ基と側鎖が保護されたアミノ酸を、次第にカップリングする。合成には、それぞれに各アミノ酸を添加することに加え、代わりをして、いくつかのアミノ酸は、固相合成装置に添加される前に、あらかじめ互いにカップリングされても良い。当業者は、適切なカップリング剤を選択する方法を知っている。
【００６８】
保護された各アミノ酸またはアミノ酸配列は、固相反応器に過剰に添加される；カップリングは、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）またはＣＨ２Ｃｌ２またはそれらの混合物のような媒体において適切に行われる。カップリングが完全しない場合、次のアミノ酸をカップリングする前に、Ｎ−アミノ保護基の存在下で、カップリングプロセスを繰り返す。合成の各段階でのカップリング反応が成功するかどうかをモニターする。カップリング反応は、公知の方法（たとえばＢＩＯＳＥＡＲＣＨ  ９５００TMペプチド合成装置）で自動的に行うことができる。
【００６９】
所要のペプチド配列を得た後、保護されたペプチドを樹脂支持体から切断する必要があり、かつすべての保護基を除去する必要がある。保護基の切断および除去は、同時にまたは連続して行うことができる。樹脂支持体はクロロメチル化されたポリスチレン樹脂である場合、ペプチドを樹脂に固定する結合は、Ｃ末端残基の遊離カルボキシル基と樹脂マトリックスにおける多量のクロロメチル基の１つとからなるエステル結合である。理解すべきは、固定用の結合は、エステル結合を切断可能かつ樹脂マトリックスに浸透可能な薬剤で切断されても良い。認識すべきは、ポリペプチドは、支持体からのポリペプチドの切断の前または後に、修飾されても良い；たとえば、疎水基（たとえばミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、コレステロールとアラキドン酸を含む）でＮ末端を修飾し、又はアミド化（アミノ化）、イソペンタンジオール化またはその他のＣ末端を安定化可能な修飾でＣ末端を修飾する。
【００７０】
本発明のポリペプチドは、分取ＨＰＬＣ（逆相ＨＰＬＣを含む）または他の既知のクロマトグラフィー技術（ゲル浸透、イオン交換、分配クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー（モノクローナル抗体カラムを含む）、又は逆流分配法）のような従来の方法によって精製することができる。
【００７１】
ＩＩ、医薬品組成物とキット
本開示は、さらに医薬品組成物を含む組成物を提供し、当該組成物は、本明細書に記載されたポリペプチドを含有する。ある実施の形態において、当該組成物は、本明細書に記載されたいずれか一つ又は複数のポリペプチドを含有しても良い。一部の実施の形態において、当該組成物は、さらに適当な薬学的に許容される担体を含有しても良い。
【００７２】
「薬学的に許容される担体」とは、活性を有しない成分、たとえば固体、半固体、液体の充填剤、希釈剤、コーティング剤、製剤補助剤、賦形剤、担体を指し、治療剤と併用し、対象に投与する「医薬品組成物」を構成する。被験者にとって、薬学的に許容される担体が使用された用量と濃度は、毒性を有しなく、かつ製剤における他の成分と相容する。採用された製剤にとって、薬学的に許容される担体は、適当である。たとえば、治療剤が経口投与される場合、担体はゲルカプセルであってもよい。治療剤が皮下投与される場合、担体は皮膚を刺激せず、注射部位で反応を引き起こさないことが望ましい。
【００７３】
上記ポリペプチドの医薬組成物は、本明細書に記載のポリペプチドを所望の純度で１つまたは複数の任意の薬学的に許容される担体と混合することにより調製することができる。薬学的に許容される担体は、緩衝液（たとえば、リン酸塩、クエン酸塩およびその他の有機酸）、酸化防止剤（たとえば、アスコルビン酸およびメチオニン）；防腐剤（たとえば、オクタデシルベンジルジメチルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブタノールまたはベンジルアルコール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸アルキル（たとえば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル）、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、ｍ−クレゾール）；低分子量（たとえば、約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質（たとえば、血清アルブミン、ゼラチン、免疫グロブリンなど）；親水性ポリマー（たとえば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（たとえば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン）；単糖；二糖；その他の炭水化物（たとえば、グルコース、マンノース、又はデキストリン）；キレート剤（たとえば、ＥＤＴＡ）；糖類（たとえば、スクロース、マンニトール、トレハロース、又はソルビトール）；塩類化対イオン（たとえば、ナトリウム）；金属複合体（たとえば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；及び／又は非イオン性界面活性剤（たとえば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））を含む。
【００７４】
例示的な医薬品担体は、アルファ化コーンスターチ、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの結合剤；乳糖又は他の糖、微結晶性セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレート又はリン酸水素カルシウムなどの充填剤；ステアリン酸マグネシウム、タルク、二酸化ケイ素、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸、ステアリン酸金属、水素化植物油、コーンスターチ、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなどの滑沢剤；デンプン、デンプングリコール酸ナトリウムなどの崩壊剤；及びラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤を含んでも良い。
【００７５】
例示的な薬学的に許容される担体は、さらに間質性薬物分散剤、たとえば、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、人可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ  R、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｉｎｃ．）を含んでも良い。一部の実施の形態において、ｓＨＡＳＥＧＰは、１つまたは複数の他のグリコサミノグリカナーゼ（ｇｌｙｃｏｓａｍｍｏｇｌｙｃａｎａｓｅｓ）（たとえばコンドロイチナーゼ）を含む医薬品組成物に混合されても良い。
【００７６】
医薬品組成物は更に、治療される特定の適応症に適した複数の活性成分を含んでもよく、そのような活性剤は、例えば、悪い影響がない補完的な活性剤であってもよい。適当的に、そのような活性剤は、所期の目的を満たすことに有効な量で、それと組み合わせて存在できる。
【００７７】
一部の実施の形態において、活性剤は、凝集技術または界面重合のような技術を使用して調製されたマイクロカプセル（ヒドロキシメチルセルロースや、ゲルマイクロカプセルや、ポリメチルメタクリレートマイクロカプセルなど）に、又はコロイド状薬物送達システム（リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、ナノカプセルなど）に、又は粗いエマルジョンに包まれても良い。
【００７８】
一部の実施の形態において、当該医薬品組成物は徐放性製剤を含んでも良い。徐放性調製物の適当な例としては、本明細書に記載されたポリペプチドを含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含んでもよく、ただし、当該マトリックスは、フィルムまたはマイクロカプセルなどの成形製品の形態であってもよい。
【００７９】
一部の実施の形態において、上記医薬品組成物は、体内投与に用いられてもよく、かつ無菌であってもよい。無菌は、例えば、無菌フィルターで濾過することにより、容易に達成することができる。
【００８０】
上記医薬品組成物は、錠剤、カプセル、ゲルカプセル、粉末または顆粒などの様々な可能な剤形のいずれか一つに調製されても良い。上記医薬品組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、または混合媒体に調製されても良い。一部の実施の形態において、上記医薬品組成物は、凍結乾燥製剤または水性溶液に調製されても良い。
【００８１】
一部の実施の形態において、上記医薬品組成物は、溶液に調製されても良い。例えば、本明細書に記載されたポリペプチドは、非緩衝溶液（生理食塩水または水など）に投入して使用されても良い。一部の実施の形態において、ポリペプチドは、適当な緩衝溶液に加えて使用されても良い。例えば、緩衝溶液は、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩またはリン酸塩、またはそれらの任意の組み合わせを含んでも良い。一部の実施の形態において、緩衝溶液は、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）であっても良い。上記ポリペプチドを含む緩衝溶液のｐＨおよび浸透圧を、対象への投与に適したレベルに調整することができる。
一部の実施の形態において、上記医薬品組成物は、水性懸濁液、非水性懸濁液または混合マトリックス懸濁液に調製されても良い。水性懸濁液は、懸濁液の粘度を増加する物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および／またはグルカンを含んでもよい。懸濁液は安定剤を含んでもよい。
【００８２】
一部の実施の形態において、上記医薬品組成物は、エマルジョンに調製されても良い。例示的なエマルジョンは、一種類の液体がもう一種類の液体に、通常に直径が０．１μｍを超える液滴で分散してなる不均一なシステムを含む。分散相と、水相溶液、油相溶液に存在するもの、または自体が独立相として存在する活性薬物以外、エマルションは、他の成分を含んでも良い。本開示の一つの実施の形態として、マイクロエマルションも含んでも良い。一部の実施の形態において、上記医薬品組成物は、リポソーム製剤に調製されても良い。
【００８３】
ある実施の形態において、上記医薬品組成物は、投与に適した剤形、例えば皮下投与に適した注射剤に調製される。これらの実施の形態中、医薬品組成物は、上記医薬品組成物を毎日１服又は数服で投与したことでその日の毎日用量が治療的有効量に至るように、一定量の本明細書に記載されたポリペプチドを含む。本明細書中、治療的有効量とは、上記治療的有効量のポリペプチドを数日で投与した（≧７日）後に、標的器官とする肝臓で飽和の量に至るポリペプチドの量を指す。
【００８４】
ある実施の形態において、上記治療的有効量は、７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌの毎日用量である。ある実施の形態において、上記治療的有効量は、４．２〜５．０ｍｇの毎日用量である。
【００８５】
ある実施の形態において、医薬品組成物におけるポリペプチドは、ヘパラチドであり、治療的有効量は、４．２〜５．０ｍｇ／日、より好ましくは４．２ｍｇ／日である。ある実施の形態において、医薬品組成物におけるポリペプチドは、Ｍｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂであり、治療的有効量は、４．２〜５．０ｍｇ／日、より好ましくは５．０ｍｇ／日である。
ある実施の形態において、毎日数回に上記医薬品組成物を投与することで、治療的有効量に至ることができる。したがって、これらの実施の形態において、本明細書の医薬品組成物は、多個の単位剤形で製造され、たとえば、単位剤形ごとは、少なくても１８．５２ｎｍｏｌを含有しても良く、又は３７．０５ｎｍｏｌ、５５．５７ｎｍｏｌ、１１１．１４ｎｍｏｌ、１２９．６６ｎｍｏｌ、２５９．３２ｎｍｏｌ又は３８８．９８ｎｍｏｌを含有しても良い。対応する数の単位剤形を毎日投与して、その日に投与される総投与量が治療的有効量に達するようにすることができる。これらの実施の形態において、医薬品組成物がヘパラチドを含有する場合、単位剤形ごとが、少なくとも０．１ｍｇのヘパラチドを含有しても良く、又は０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、１．４ｍｇ、２．１ｍｇ又は４．２ｍｇのヘパラチドを含有しても良く、すなわち医薬品組成物の規格は、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、１．４ｍｇ、２．１ｍｇ又は４．２ｍｇであっても良い。たとえば、単位剤形ごとが、０．１ｍｇのヘパラチドを含有する場合、毎日に、４２個単位剤形の医薬品組成物を投与しても良い。これらの実施の形態において、医薬品組成物がＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂを含有する場合、単位剤形ごとが、少なくとも０．１ｍｇのＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂを含有しても良く、又は０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１．０ｍｇ、２．５ｍｇ又は５．０ｍｇのＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂを含有しても良く、すなわち医薬品組成物の規格は、０．１ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１．０ｍｇ、２．５ｍｇ又は５．０ｍｇであっても良い。たとえば、単位剤形ごとが、０．１ｍｇのＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂを含有する場合、毎日に、５０個単位剤形の医薬品組成物を投与しても良い。したがって、本発明の医薬品組成物には、単位剤形の数は、１〜５０服、たとえば１〜４２服の範囲にあっても良い。
【００８６】
ある実施の形態において、単位剤形ごとが、７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌ又は４．２〜５．０ｍｇの本明細書に記載されたポリペプチドを含有する。したがって、毎日１単位剤形を投与すると、上記治療的有効量に達成できる。
【００８７】
本明細書の医薬品組成物は、凍結乾燥剤形であってよい。たとえば、凍結乾燥の一服の医薬品には、３７．０５〜９２６．１３ｎｍｏｌ又は０．１〜５ｍｇの本明細書に記載されたポリペプチド、たとえば２５９．３２〜９２６．１３ｎｍｏｌ又は１．４〜５ｍｇ、３８８．９８〜９２６．１３ｎｍｏｌ又は２．１〜５ｍｇ、又は７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌ又は４．２〜５ｍｇの本明細書に記載されたポリペプチドを含有しても良い。使用時に、適量の溶剤に溶解し、注射剤として対象へ使用できる。毎日の総用量が、７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌ又は４．２〜５ｍｇの範囲になるように、１服又は数服の上記注射剤を投与できる。たとえば、凍結乾燥の製剤は、２本の医薬品を含有し、１本につき３８８．９８ｎｍｏｌ又は２．１ｍｇの凍結乾燥ポリペプチドを含有し、毎日に総用量が７７７．９５ｎｍｏｌ又は４．２ｍｇに達成するように、上記製剤を毎日に二回に分けて対象へ投与しても良い。
【００８８】
本明細書には、本明細書に記載された医薬品組成物を含有するキットを含んでも良い。キットには、１服又は数服の本明細書に記載された医薬品組成物を含有し、１日又は多日による投与で使用し、Ｂ型肝炎ウイルス関連の肝疾患を予防又は治療する。
【００８９】
ある実施の形態において、キットが、少なくとも７服の医薬品組成物を含有し、毎服の医薬品組成物が、少なくとも７日間の連続投与に使用されるように、７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌ又は４．２〜５．０ｍｇの本明細書に記載されたポリペプチドを含有する。ある実施の形態において、上記キットが、７日間の連続投与を満たす。
【００９０】
ある実施の形態において、キットが、少なくとも７服の医薬品組成物を含有し、毎服の医薬品組成物が、少なくとも７日間の連続投与に使用されるように、４．２〜５．０ｍｇ、好ましくは４．２ｍｇのヘパラチド又は５．０ｍｇのＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂを含有する。
【００９１】
ある実施の形態において、キットが、少なくとも２服の医薬品組成物を含有し、キットにおける全ての医薬品組成物に含まれるポリペプチドの含有量の総計が、１日の総用量として、７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌ又は４．２〜５．０ｍｇに至る。これらの実施の形態において、毎服の医薬品組成物が、たとえば１８．５２ｎｍｏｌ、３７．０５ｎｍｏｌ、５５．５７ｎｍｏｌ、１１１．１４ｎｍｏｌ、１２９．６６ｎｍｏｌ、２５９．３２ｎｍｏｌ又は３８８．９８ｎｍｏｌ、又は０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、１．４ｍｇ又は２．１ｍｇのポリペプチドを含有し、キットに含まれる医薬品組成物は、４２服、２１服、１４服、７服、６服、３服又は２服であっても良い；或いは、毎服の医薬品組成物が、１８．５２ｎｍｏｌ、４６．３１ｎｍｏｌ、９２．６１ｎｍｏｌ、１８５．２３ｎｍｏｌ又は４６３．０６ｎｍｏｌを含有しても良く、又は０．１ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１．０ｍｇ又は２．５ｍｇのポリペプチドを含有しても良い；医薬品に含まれる医薬品組成物は、少なくとも５０服、２０服、１０服、５服、２服であっても良い。
【００９２】
ある実施の形態において、キットが、２服又は２服以上の医薬品組成物を含有し、医薬品組成物におけるポリペプチドはヘパラチドであり、毎服の医薬品組成物におけるヘパラチドの含有量は、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、１．４ｍｇ又は２．１ｍｇであり、キットにおける全ての医薬品組成物に含まれるポリペプチドの含有量の総計は、４．２ｍｇである。
【００９３】
ある実施の形態において、キットが、２服又は２服以上の医薬品組成物を含有し、医薬品組成物におけるポリペプチドはＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂであり、毎服の医薬品組成物におけるＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂの含有量は、０．１ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１．０ｍｇ又は２．５ｍｇであり、キットにおける全ての医薬品組成物に含まれるポリペプチドの含有量の総計は、５．０ｍｇである。
【００９４】
ある実施の形態において、キットが、多服の医薬品組成物を含有し、少なくとも７日間の連続投与を満たし、多服の医薬品組成物のうちの数服に含まれるポリペプチドの含有量の総計が、一日の投与量、すなわち７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌ又は４．２〜５．０ｍｇに至る。たとえば、ある実施の形態において、毎服の医薬品組成物が、３８８．９８ｎｍｏｌ又は２．１ｍｇのポリペプチドを含有すると、キットに、少なくとも１４服の医薬品組成物を含有し、２服ごとに一日の投与量を満たす。毎服の医薬品組成物が、２５９．３２ｎｍｏｌ又は１．４ｍｇのポリペプチドを含有する場合、キットが、少なくとも２１服の医薬品組成物を含有し、３服ごとに、一日の投与量を満たす。これによって類推すればよい。ある実施の形態において、上記医薬品組成物に含まれるポリペプチドは、ヘパラチド又はＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂである。ある実施の形態において、上記医薬品が、７日間の連続投与を満たす。
【００９５】
本明細書に記載された医薬品組成物とキットは、少なくとも７日間に連続投与した後、上記ポリペプチドが、標的器官とする肝臓で飽和に至るように、必要がある対象へ本明細書に記載されたポリペプチドを投与することに用いられる。
【００９６】
ＩＩＩ、使用方法
本開示の実施の形態は、本明細書に記載されたポリペプチドの治療と予防用途を含む。一態様では、本明細書に記載されたポリペプチドの医薬品としての使用は提供される。もう一態様では、本明細書に記載されたポリペプチドのＨＢＶ関連肝疾患を治療と予防するための使用は提供される。
【００９７】
本明細書において、上記Ｂ型肝炎ウイルス関連肝疾患は、Ｂ型慢性肝炎ウイルス感染、Ｂ型慢性肝炎、Ｂ型肝炎関連肝線維症および肝硬変、Ｂ型肝炎関連肝がん、Ｂ型肝炎関連肝移植、およびＢ型肝炎関連母子感染を含む。上記Ｂ型慢性肝炎は、ＨＢｅＡｇ陽性慢性Ｂ型肝炎およびＨＢｅＡｇ陰性慢性Ｂ型肝炎を含む。ある実施の形態において、上記Ｂ型肝炎関連肝移植は、移植前、移植中、移植後のドナー肝のＨＢＶ感染の保護を含む。
【００９８】
「患者」と「対象」は、交換可能に使用され、疾患、不調、または病症について治療または評価しようとする動物（哺乳動物またはヒトなど）、或いは疾患、不調、または病症のリスクについて評価し、或いは疾患、不調、または病症を有する動物（たとえば哺乳動物）またはヒトを指す。一部の実施の形態において、これらの疾患、不調、または病症は、代謝性疾患を含んでも良い。一部の実施の形態において、当該代謝性疾患は、脂質代謝不調に関わる可能性がある。
【００９９】
ＨＢＶ関連の肝疾患を予防又は治療するために、必要がある対象へ、全用量の本明細書に記載されたポリペプチドまたはその医薬品組成物を投与しても良い。本明細書に記載された「全用量」とは、毎日に当該用量のポリペプチドを投与し、数日（≧７日）に連続投与した後に、標的器官とする肝臓が飽和に至る毎日用量を指す。これらの実施の形態において、上記の「全用量」は、一般的に、７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌ又は４．２〜５．０ｍｇ、たとえば７７７．９５−８３３．５２ｎｍｏｌ又は４．２〜４．５ｍｇ、又は７７７．９５ｎｍｏｌ又は４．２ｍｇ、又は９２６．１３ｎｍｏｌ又は５．０ｍｇの毎日用量であり、初回に、当該量のポリペプチドを投与する際に標的器官が飽和に達しないが、７回に連続投与した後に、標的器官が飽和に達する。したがって、本明細書に記載された予防又は治療の方法は、少なくとも７日の全用量のポリペプチドまたはその医薬品組成物を連続投与するステップを含む。
【０１００】
本明細書に記載された標的器官が飽和に達することとは、一定量の上記ポリペプチドを投与した後に、見かけの分布体積は、１００Ｌ未満であることを指す。これらの実施の形態において、見かけの分布体積は、一般的に、１０〜１００Ｌ、たとえば１０〜５０Ｌ又は２０〜４０Ｌである。
【０１０１】
各実施の形態において、用語「治療」は、対象（たとえば、ヒトのような哺乳動物）又は細胞を処理し、当該対象又は細胞の現在のプロセスを変えることを含む。治療は、たとえば本明細書に記載されたポリペプチド又は当該ポリペプチドを含む医薬品組成物を投与することを含み、治療は、予防的な方式で行っても良く、或いは病理学的事象または発症物質との接触後に開始されても良い。治療は、「予防的な」治療も含み、当該治療は、治療しようとする疾患又は病症の進行速度を低下させること、当該疾患又は病症の発症を遅らせること、その発病の重症度を軽減することを目的とする。「治療」又は「予防」は、必ず疾患または病症または関連する症状の発生を、完全に根絶、治癒、または予防することを意味しない。各実施の形態において、用語「治療」は、ＨＢＶ関連肝疾患の病理学的経過を軽減、緩和、または逆転することを含んでも良い。一部の実施の形態において、用語「治療」は、代謝性疾患の少なくとも１つの症状または少なくとも１つの測定可能なパラメータを改善することを含んでも良い。生物学的および／または生理学的パラメータを使用して代謝性疾患の病理学的プロセスを評価できることは、当業者には明らかである。これらの病理学的プロセスまたは症状は、例えば、健康な対象と比べて１つ又は複数の代謝関連の化学的または生物学的分子（たとえばＡＬＴ、ＨＢＶ  ＤＮＡ、）の過剰または増加、又は代謝変化を計りにかける１つ又は複数の生理学的パラメータの過剰または増加（肝機能指数など）を含んでも良い。
【０１０２】
用語「給薬」又は「投与」は、本明細書に記載されたポリペプチドを、局所又は全身性投与の方式で投与することを含む。投与は、局所的（目または膣と直腸の粘膜投与を含む）であっても良く、肺（ネブライザー、気管内、鼻腔内投与を含む、粉末またはエアロゾルによる吸入または吹送など）、表皮、経皮、経口、または胃腸外での投与であっても良い。胃腸外投与は、静脈内、皮下、腹腔内または筋肉内注射または注入、または髄腔内または脳室内投与などの頭蓋内投与を含む。
【０１０３】
本開示は、さらに対象において本明細書に記載されたポリペプチドの上記の使用を実施するための方法を提供する。これらの方法は、上記対象へ、治療又は予防するための有效量の本明細書に記載されたポリペプチド又は上記ポリペプチドを含む医薬品組成物を投与することを含む。一部の実施の形態において、上記の対象は、哺乳動物であっても良い。一部の実施の形態において、上記の対象は、ヒトであっても良い。一部の実施の形態において、上記対象は、ＨＢＶ関連肝疾患を罹患し、又は上記疾病を罹患するリスクを有する。
本明細書に記載されたこれらの併用治療は、併用投与（ただし、二つの種類又は複数の種類の治療剤は、同一製剤であっても、又は別々の製剤であっても良い）、及び個別投与（この場合、本明細書に記載されたポリペプチドは、他の治療薬の前、同時、または後に投与することができる）を含んでも良い。これらの医薬品は、インターフェロン、ヌクレオチド薬、Ｂ型肝炎免疫グロブリン、Ｂ型肝炎ワクチンを含む。ただし、インターフェロンは、一般的なインターフェロンとＰＥＧ長時間作用型インターフェロンを含む。一般的なインターフェロンは、インターフェロンα−２ａおよびインターフェロンα−２ｂを含み、ＰＥＧ長時間作用型インターフェロンは、ＰＥＧインターフェロンα−２ａおよびＰＥＧインターフェロンα−２ｂを含む。ヌクレオチド薬は、ラミブジン（Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）ＬＡＭ、エンテカビル（Ｅｎｔｅｃａｖｉｒ）ＥＴＶ、テノホビル（Ｔｅｎｏｆｏｖｉｒ）ＴＤＦ、テルビブジン（Ｔｅｌｂｉｖｕｄｉｎｅ）ＴＢＶ、アデホビルジピボキシル（Ａｄｅｆｏｖｉｒ  Ｄｉｐｉｖｏｘｉｌ）ＡＤＶ、およびテノホビルアラフェナミド（Ｔｅｎｏｆｏｖｉｒ  ａｌａｆｅｎａｍｉｄｅ）ＴＡＦを含む。
【０１０４】
本明細書に記載のポリペプチド（および他の任意の治療薬）は、胃腸外、肺内、および鼻腔内を含む適切な方法で投与することができ、局所的または病巣内に投与することもできる。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、胃腸外投与されても良い。胃腸外投与は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下での投与を含んでもよい。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、皮下投与されても良い。一部の実施の形態において、本明細書に記載されたポリペプチドは、静脈内投与されても良い。静脈内または皮下注射または注入などの注射または注入などの任意の適切な手段によって投与することができ、これは、投与が短期か長期かによって決めされる。様々な時点での単回投与または複数回投与、大量投与、およびパルス注射を含む、様々な投与計画も考慮される。
【０１０５】
したがって、本明細書は、本明細書に記載されたＢ型肝炎ウイルス関連肝疾患を治療と予防する方法に使用される本明細書に記載されたポリペプチドまたはその医薬品組成物も開示する。より具体的に、上記ポリペプチドまたはその医薬品組成物は、７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌ  又は４．２〜５．０ｍｇの毎日用量（ポリペプチドで）で、上記治療と予防する方法に用いられ、ただし、数日の連続投与（好ましくは少なくとも７日間の連続投与）で、標的器官とする肝臓が飽和に達する。
【０１０６】
ある実施の形態において、本明細書は、本明細書に記載されたＢ型肝炎ウイルス関連肝疾患を治療又は予防する方法に使用されるヘパラチドまたはその医薬品組成物を含み、ただし、上記方法は、数日の連続投与（好ましくは少なくとも７日間の連続投与）で、標的器官とする肝臓が飽和に達するように、毎日７７７．９５−９２６．１３ｎｍｏｌ  又は４．２〜５．０ｍｇの量、好ましくは７７７．９５ｎｍｏｌ又は４．２ｍｇの量で、対象ヘパラチドを投与し、好ましくは９２６．１３ｎｍｏｌ又は５．０ｍｇで対象へＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂを投与することを含む。
【０１０７】
好ましくは、上記医薬品組成物は、本明細書のいずれか一つの実施形態に記載されるとおりである。
【実施例】
【０１０８】
以下の実施例は、例示の目的で使用することができ、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０１０９】
実施例１：ポリペプチドの合成
ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０８６５５８の実施例１．１の方法を参照し、ポリペプチドを合成した。具体的には、表１に示されるポリペプチドは、ポリペプチド合成のための標準的なＦｍｏｃスキームに従って合成された。一般に、単一のアミノ酸残基が、ＭＢＨＡ樹脂から、カルボキシル末端からアミノ末端まで伸びる。次に、Ｎ末端を、ミリストイル化した。ペプチドの合成が完了した後、切断溶液を使用し、樹脂からペプチドを切り取り、ポリペプチドのＣ末端をアミノ化修飾した。樹脂をＧ６砂コア漏斗で濾過し、ポリペプチドを含む濾液を真空で吸引した。ペプチド生成物を脱イオン水に溶解し、Ｃ１８カラムを備えたAＫＴＡｅｘｐｌｏｒｅｒ  １００高圧液体クロマトグラフを使用して精製し、メインピークを段階的に収集した。ターゲットピークから収集されたサンプルは、Ｃ１８カラムを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で純度を分析され、質量分析計でそれらの分子量を測定した。回収した溶液を中圧液体クロマトグラフィーで精製し、凍結乾燥した。乾燥したサンプルをＰＢＳに溶解し、０．２０μＭのフィルムでろ過した。ＰＢＳに溶解したペプチドストック溶液を、使用するまで−８０℃で保存した。ヘパラチドアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に示され、そのＮ末端は、ミリスチン酸に修飾され、Ｃ末端はアミノ化修飾され、分子量は、５３９８．８Ｄａで、分子式はＣ２４７Ｈ３５２Ｎ６５Ｏ７３である。
【０１１０】
実施例２：ポリペプチドのインビトロでＨＢＶ感染に対する遮断
成体の雄のツパイに麻酔をかけた後、肝門脈コラゲナーゼの２段階灌流法を用い、顕微手術技術により、遊離のツパイの初代肝細胞を取得し、専用の肝細胞培養システムで培養した。肝細胞培養３日後の肝細胞に精製ＨＢＶウイルスを添加し、複数のＭＯＩ  ＝  ０、６．２５、１２．５、２５、５０、および１００ゲノムＤＮＡ  ／細胞で肝細胞を感染させた；１２日後の上澄中のＨＢｅＡｇの分泌はＭＯＩ（Ｒ２  ＝  ０．９８７３）と良好な直線関係にあり、上澄中のＨＢｓＡｇがＨＢＶ感染の程度を定量的に反映できることを確認した。
【０１１１】
肝細胞のＨＢＶ感染と同時に（ＭＯＩ＝１００ゲノムＤＮＡ／細胞）、ヘパラチド（０、２．５、５、１０、２０、４０ｎｇ／ｍｌ）を添加し、ＨＢＶ感染を遮断した。ヘパラチドの濃度の増加とともに、上澄中のＨＢｅＡｇの分泌量は減少し、ロジットログ回帰分析は、両者が良好な線形相関線量依存性を持っていることを示している（Ｒ２＝０．９５６３）。ヘパラチドは用量依存的にＨＢＶ感染を阻害し、この時点で、計算されたヘパラチドの半数阻害濃度ＩＣ５０は３．９５６ｎｇ／ｍｌであった。
【０１１２】
実施例３：ポリペプチドのモデル動物でインビボでＨＢＶ感染に対する遮断
５０匹の成体の雄のツパイを、ランダムに５つの群に分けた：ＰＢＳコントロール群、ヘパラチドの高（２ｍｇ／ｋｇ）、中（０．４ｍｇ／ｋｇ）、低（０．０８ｍｇ／ｋｇ）用量群、Ｂ型肝炎免疫グロブリンＨＢＩＧ遮断群（６０  ＩＵ／ｋｇ）。１０８  ＨＢＶ  ＤＮＡ  ／  ｍｌ力価のＨＢＶウイルス血清１ｍｌを腹腔内注射し、ツパイを感染し、ヘパラチドの遮断群は、感染後０、１、２、３、５、７、９、１１、１３日目に、異なる用量のヘパラチドを皮下注射された。ＨＢＩＧ遮断群は、感染当日と感染後３日目に、免疫グロブリンＨＢＩＧを筋肉内注射された。感染の４日前と感染の９、１４、２１、４２日後に、ツパイの血清を収集し、血清におけるＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶ  ＤＮＡ力価およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）を検出した；感染後２１日目に肝組織の病理検査を行った。
【０１１３】
ＰＢＳコントロール群では、ＨＢｓＡｇが感染後９日目にピークに達し、１５日目に実質的にクリアされた。ヘパラチド（高、中、低用量群）は、いずれも効果的にＨＢＶ感染を遮断でき、感染過程において、ＨＢｓＡｇは、常によく制御された。しかしながら、ＨＢＩＧが、当該感染量でのＨＢＶ感染を効果的に遮断できなかった；ＰＢＳコントロール群と比べて、ＨＢｓＡｇは、感染後９日目に有意に減少せず、逆にＨＢｓＡｇ分泌が延長する傾向があり、１５日目に、ＨＢｓＡｇレベルはＰＢＳコントロール群よりも高かった。ヘパラチドの各群（高、中、低用量）の９日目のＨＢｓＡｇレベルは、いずれもＰＢＳコントロール群とＨＢＩＧ遮断群よりも低かった；ただし、ヘパラチドの各群（高、中、低用量）の９日目のＨＢｓＡｇのレベルは、いずれもＨＢＩＧ遮断群よりも有意に低かった（すべてのＰが０．０５未満）。
【０１１４】
ＰＢＳコントロール群では、ＨＢｅＡｇが感染後９日目にピークに達し、２１日目に実質的にクリアされた。ヘパラチドはＨＢＶ感染を効果的に遮断でき、高用量および中用量のヘパラチドは、感染過程にＨＢｓＡｇを効果的に制御できた。しかし、ＨＢＩＧは、当該感染量でのＨＢＶ感染を効果的に遮断できなく、ＨＢｓＡｇは、感染後９日目と１５日目のＰＢＳコントロール群と同等であった。ヘパラチドの各群（高、中、低用量）の９日目のＨＢｅＡｇレベルは、いずれもＰＢＳコントロール群とＨＢＩＧ遮断群よりも低かった；ただし、ヘパラチドの各群（高、中、低用量）の９日目のＨＢｓＡｇのレベルは、いずれもＰＢＳコントロール群よりも有意に低かった（すべてのＰが０．０５未満）。
【０１１５】
ＰＢＳコントロール群では、ＨＢＶ  ＤＮＡが感染後９日目にピークに達し、１５日目に実質的にクリアされた。ヘパラチドはＨＢＶ感染を効果的に遮断でき、高用量および中用量のヘパラチドは、感染過程にＨＢＶ  ＤＮＡを効果的に制御できた。しかし、ＨＢＩＧは、当該感染量でのＨＢＶ感染を効果的に遮断できなく、感染後１５日目のＨＢＶ  ＤＮＡはＰＢＳコントロール群よりさらに高くなり、感染後２１日までクリアされた。ヘパラチドの各群（高、中、低用量）の９日目のＨＢＶ  ＤＮＡレベルは、いずれもＰＢＳコントロール群とＨＢＩＧ遮断群よりも低かった；ただし、ヘパラチドの高用量群のＨＢＶ  ＤＮＡのレベルは、ＨＢＩＧ遮断群よりも有意に低かった（Ｐが０．０５未満）。
【０１１６】
感染前のＡＬＴの平均値は５６．８  ＩＵ／ｍｌで、これを、通常のツパイＡＬＴのレベルに設定した。ＰＢＳコントロール群では、ＡＬＴが感染後２１日目にピークに達し、４２日目に通常のレベルまで回復した。ヘパラチドはＨＢＶ感染を効果的に遮断でき、高用量および中用量のヘパラチドは、感染過程にＡＬＴを効果的に制御できた。しかし、ＨＢＩＧは、当該感染量でのＨＢＶ感染を効果的に遮断できなく、ＡＬＴは、感染後２１日目でも通常の値よりも高く、感染した４２日後に通常のレベルまで回復した。ヘパラチドの各群（高、中、低用量）の２１日目のＡＬＴレベルは、ＰＢＳコントロール群とＨＢＩＧ遮断群よりも低かった；ただし、ヘパラチドの高、中用量群のＡＬＴのレベルは、ＨＢＩＧ遮断群よりも有意に低かった（Ｐが０．０５未満）。
【０１１７】
感染後２１日目の肝臓の病理組織学的検査のために、各試験群の１匹のツパイをランダムに選択し、正常なツパイの肝臓組織を正常コントロールとして使用した。ＰＢＳ群には、ＨＢＶ感染が、ツパイの肝組織に明らかな病理学的変化を引き起こすことが示され、主に肝小葉周囲の門脈域における肝細胞の混濁腫脹とバルーン状の変化を引き起こし、少量のリンパ球浸潤を伴うことが示された；当該病理学的変化は、成人のＨＢＶ急性感染によって引き起こされる肝炎に非常に似ていた。しかし、ＨＢＩＧは、ＨＢＶ感染によるツパイの肝臓組織の病理学的変化を軽減できなく、ヘパラチドの低用量群における肝臓の病理学的変化は、ＰＢＳ群と類似し、病変の程度はわずかに軽減した。高用量および中用量のヘパラチドは、ＨＢＶによる肝細胞のバルーン状の変化などの病理学的損傷を完全に遮断し、肝臓組織は通常のツパイの肝臓と実質的に同じだった。
【０１１８】
以上により、ヘパラチドが、血清学（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ）、ウイルス学（血清ＨＢＶ  ＤＮＡコピー数）、酵素学（ＡＬＴ）および病理学のレベルで、ＨＢＶ感染を効果的に遮断できる。
【０１１９】
実施例４：ポリペプチドが、ＮＴＣＰと特異的に結合する
非肝細胞由来の２９３細胞をＮＴＣＰでトランスフェクションして、ＮＴＣＰ−２９３細胞株を形成した。ＦＩＴＣ蛍光で、ヘパラタイド（Ｃｍｙｒ−４７）の３７位目のＫアミノ酸、または無関係のコントロールペプチド（サギＢ型肝炎ウイルスｈｅｒｏｎ  ＨＢＶ  Ｐｒｅ−Ｓ１領域から由来する４７ペプチド、ミリストイル化−ＧＬＮＱＳＴＦＮＰＬＧＦＦＰＳＨＱＬＤＰＬＦＫＡＮＡＧＳＡＤＷＤＫＮＰＮＫＤＰＷＰ  ＱＡＨＤＴＡ−アミド化、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０）を標識した。図１に示すように、ＦＩＴＣ−ヘパラチドはＮＴＣＰ−２９３細胞に結合するが、ＮＴＣＰでトランスフェクションされていない２９３細胞（ＢＬＡＮＫ−２９３）に結合しなく、ヘパラチドと細胞との結合は、ＮＴＣＰに対する特異性を有することを示した。ＦＩＴＣ標識された無関係のコントロールペプチドは、ＮＴＣＰ−２９３細胞に結合しなく、当該結合が、ヘパラタイド配列に対する特異性を有することを示した。
【０１２０】
実施例５：ポリペプチドが、ＮＴＣＰ胆汁酸輸送機能に対する影響
文献におけるＮＴＣＰ胆汁酸輸送機能の研究方法（Ｋｉｍ  ＲＢら．  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．  １９９９  Ｄｅｃ；２９１（３）：１２０４−９）を参考にして、ＮＴＣＰ胆汁酸輸送機能に及ぼすヘパラチドの影響を検討した。細胞モデルとしてヒトＮＴＣＰでトランスフェクションされた２９３細胞（ＮＴＣＰ−２９３）を使用して、ＮＴＣＰ−２９３の３Ｈ標識胆汁酸（３Ｈ−ＴＡ）取り込みに対するヘパラチドの効果を検討した。結果は次のとおりであった（図２のＡを参照）：１）２９３細胞自体がＴＡをあまり吸収しないから、ＴＡの細胞への侵入はＮＴＣＰに特異的に媒介される；２）ポジティブコントロールのシクロスポリンＡは、ＮＴＣＰに対して有意な抑制効果を発揮し、文献の報告と一致する；３）ヘパラチドはＮＴＣＰに双方向的な影響をもち（図２のＢを参照）、低濃度（≦５００ｎｇ／ｍｌ、５０×ＩＣ５０に相当）では、ＴＡ吸収を促進し、高濃度（＞  ５００ｎｇ／ｍｌ）では、ＴＡ吸収を阻害し、ＩＣ５０濃度は８３８．８１  ｎｇ／ｍｌである。
【０１２１】
実施例６：ポリペプチドの前臨床薬物動態研究
１２５Ｉで標識されたヘパラチドを４０  ｕｇ・ｋｇ−１の用量で１回の皮下注射でラットに投与した後、各組織でのヘパラチドの分布が検出された。研究の結果（図３）は、ヘパラチドが主に肝臓と尿路系に分布し、ただし、その代謝産物が主に尿路系に分布することを示している。薬物は、肝臓には２時間でピークに達し、Ｃｍａｘは４４．３±２８．９  ｎｇ−Ｅｑｕ．ｍＬ−１であった；肝臓での最終消失半減期ｔ１／２は８．７時間と長く、２４時間でも肝臓に比較に高い濃度を有した（４．５±１．２  ｎｇ−Ｅｑｕ．ｍＬ−１）；４８時間での肝臓の推定薬物濃度は約０．６６  ｎｇ−Ｅｑｕ．ｍＬ−１で、これは皮下注射の４時間後の血清薬物濃度レベルに相当した。血清における薬剤は速やかに消失し、基本的に、投与された６時間後に、ベースラインまで低下した。前臨床薬物動態の結果は、ヘパラチドが標的器官とする肝臓に、かなり集中することを示した。
【０１２２】
実施例７：ポリペプチドの単回用量上昇の第Ｉａ相臨床試験及び臨床薬物動態研究
薬物治療／暴露程度：ヘパラタイドの単回用量上昇第Ｉａ相臨床試験は、無作為化二重盲検、ブランクコントロール、単施設、用量上昇試験であり、６つの用量群（０．５２５ｍｇ、２．１ｍｇ、４．２ｍｇ、６．３ｍｇ、８．４ｍｇ、１０．５ｍｇ）を設定し、５ケース、５ケース、１０ケース、１０ケース、１０ケース、および５ケースの健康な被験者を登録し、男性と女性の比率を２２：２３にした。スクリーニング後、健康なボランティアは、４：１の比率の二重盲検に従って、ランダムに実験群とブランクコントロール群に入れられ、ヘパラチドの単回皮下注射を受け、薬物離脱後７日間観察された。試験中のヘパラチド薬物治療と暴露程度を、表２に示した。
【０１２３】
被験者群のケース数と特徴：４５人の成人の健康な被験者が参加する予定であり、実際に４５人の被験者が参加した；すべての被験者が、試験を完了し、安全性解析対象集団に含まれた。第Ｉａ相臨床研究の安全性解析対象集団を、表３に示した。各試験群の年齢、性別、民族、職業、身長、体重、ＢＭＩ、過去履歴などの人口統計学的指標に有意差がなかった。
【０１２４】
【表２】
2021500411.tif 000005
【０１２５】
【表３】
2021500411.tif 000006
【０１２６】
安全性研究：ヘパラタイドの単回用量上昇第Ｉａ相臨床試験では、死亡および重篤な有害事象は発生しなかった；試験中に合計６３件の有害事象が記録され、そのすべてがグレードＩの有害事象であった；試験薬に関連し、関連する可能性が高い、関連する可能性がある有害事象は、２９件であった（表４を参照）。有害事象の発生率は、各用量群とブランクコントロール群の間で有意差はなかった；８．４ｍｇ用量群の有害事象の発生率は、ブランクコントロール群よりも有意に高かった；有害事象の発生率は、０．５２５ｍｇ、２．１０ｍｇ、４．２０ｍｇ、６．３０ｍｇ、１０．５０ｍｇとブランクコントロールの間で有意差はなかった。
【０１２７】
【表４】
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【０１２８】
第Ｉａ相臨床薬物動態試験：４５人の健康な被験者を対象に、皮下単回投与で用量上昇第Ｉａ相臨床薬物動態試験を実施し、用量設定とＰＫ解析集団を表５に示した。投与前と投与後の２分、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間に採血した。生体サンプルは、液体質量分析法で医薬品濃度を検出され、定量下限は０．２ｎｇ／ｍｌであった。血中薬物濃度曲線を図４に示し、血中薬物動態の主なパラメータを表４に示した。研究の結果としては、被験者がヘパラチドの単回皮下注射を受けた場合、０．５２５ｍｇ〜４．２ｍｇの用量範囲でヘパラチドの単回皮下注射を受けた後、血液薬物曲線は低いが、６．３ｍｇ〜１０．５ｍｇの用量範囲では、血液薬物曲線は有意に高くそびえた。０．２１−４．２ｍｇの用量範囲では、見かけの分布体積Ｖｚ／Ｆは１００Ｌより大きく、薬物が主に標的器官に分布していることを示した。前臨床試験と組み合わせると、ヘパラチドはＮＴＣＰに特異的に結合することを示し（例４）、前臨床薬物動態研究が、ヘパラチドが肝臓に、著しく集中することを示し（実施例６）、薬物標的とするＮＴＣＰが肝臓で特異的に発現するから、薬物が、主に標的器官とする肝臓に集中していると判断される。６．３−１０．５ｍｇの用量範囲では、Ｖｚ／Ｆは人体の総体液量に近く、かつ用量の増加とともに減少し、これは、薬物が、標的器官で飽和に達した後に、体液に分配されることを示した。したがって、単回投与用量０．５２５ｍｇ−４．２ｍｇと６．３ｍｇ−１０．５ｍｇは、それぞれ、標的器官とする肝臓の不飽和用量範囲と飽和用量範囲とした。５ｍｇのＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂを単回皮下注射で投与した後、見かけの分布容積は１３５Ｌであり（ｌａｎｋ  Ａら．  Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ．  ２０１６  Ｓｅｐ；６５（３）：４８３−９）、本実施例の結果によると、Ｍｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂは当該用量で皮下投与される場合、標的器官とする肝臓で飽和に達しなかった。
【０１２９】
【表５】
2021500411.tif 000008
【０１３０】
実施例８：ポリペプチドの多回用量上昇第Ｉｂ相臨床試験及び臨床薬物動態研究
薬物治療／暴露程度：ヘパラチドの多回用量上昇第Ｉｂ相臨床試験は、無作為化二重盲検、ブランクコントロール、単施設臨床試験である。試験が、３つの用量群（４．２０ｍｇ、６．３０ｍｇ、８．４０ｍｇ）を設定し、それぞれに１０ケース、１０ケースと１５ケースの健康な被験者を登録し、男性と女性の比率を１８：１７にした。スクリーニング後、健康なボランティアは、４：１の比率の二重盲検に従って、ランダムに実験群とブランクコントロール群に入れられ、１日１回、連続７日間の皮下注射を受けた。薬物離脱後３日間観察された。試験中のヘパラチド薬物治療と暴露程度を、表６に示した。
被験者群のケース数と特徴：ヘパラチド第Ｉｂ相臨床研究では、３５人の成人の健康な被験者が参加する予定であり、実際に３５人の被験者が参加した；すべての被験者が、試験を完了し、安全性解析対象集団に含まれた。第Ｉｂ相臨床試験の安全性解析対象集団と各試験群の人口統計学的指標を表７に示した。各試験群の年齢、性別、民族、職業、身長、体重、ＢＭＩ、過去履歴などの人口統計学的指標に有意差がなかった。
【０１３１】
【表６】
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【０１３２】
【表７】
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【０１３３】
安全性評価：ヘパラチド第Ｉｂ相臨床研究では、合計７４件の有害事象が記録され、そのすべてがグレードＩの有害事象であった；すべては治療せずに自然に緩和され、後遺症は残らない。試験過程には、記録された試験薬に関連し、関連する可能性が高い、関連する可能性がある有害事象は、合計３６件（表８を参照）であった。主な有害事象は総胆汁酸の増加であり、合計２７例が発生し、全有害事象の７５．０％を占めた。胆汁酸の増加はヘパラチドの薬理学的応答であるため、総胆汁酸増加の有害事象を差し引いた後、ブランクコントロールと比較して、４．２、６．３、および８．４  ｍｇ用量群の有害事象の発生率は、それぞれ２５．０％、３７．５％、８．３％であり、ブランクコントロール群の有害事象の発生率４２．９％に相当した。第Ｉｂ相臨床試験において、ヘパラタイドの用量制限毒性ＤＬＴは発生せず、用量が、本試験で設計された最大用量の８．４ｍｇに上昇したときに、最大耐量ＭＴＤに到達しなかった。
【０１３４】
【表８】
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【０１３５】
臨床薬物動態試験：３５人の健康な被験者を対象に、皮下多回投与で用量上昇第Ｉｂ相臨床薬物動態試験を実施し、被験者は連続７日間、毎日１回の投与を受け、用量設定とＰＫ解析集団を表９に示した。血液サンプルは次のように収集された：投与前と投与後の２分、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１２時間の血液サンプル；２日目：１日目の２４時間血液サンプル（２日目の投与前）；３日目〜６日目：投与前；７日目：投与前と投与後の２分、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１２時間の血液サンプル。生体サンプルは、液体質量分析法で医薬品濃度を検出され、定量下限は０．２ｎｇ／ｍｌであった。初回投与、２〜７日目の投与前、および最終投与の血液サンプルの血中濃度時間曲線を図５−７に示し、主な薬物動態パラメータを表１０に示した。研究の結果として、初回投与の後、各用量群の血中濃度曲線は第Ｉａ期と一致し、４．２ｍｇの初回投与は標的器官の飽和に達せず、６．３と８．４ｍｇの初回投与は標的器官の飽和に達した。２〜６日目の連続投与期間において、血中トラフ濃度は、定常状態に達した。７日間連続投与した後、４．２ｍｇ、６．３ｍｇ、および８．４ｍｇ用量群の累積係数ＲＡＵＣは、それぞれに４．４３±１．６０、２．７６±０．７６および１．９１±０．３９であり、連続投与場合のヘパラチドが、累積効果を示した。蓄積後、４．２ｍｇの見かけの分布体積は、初回投与時の１５３．６０２５±１０７．１８０７リットルから最終投与時の２２．１８８０±８．０７２１リットルに減少し、４．２ｍｇ用量である場合、連続投与による累積の後に、最終投与量が標的器官の飽和に達したことを示した。最高用量８．４  ｍｇの連続投与で、標的器官に十分に蓄積した後に、見かけの分布体積は１５．１０２１±４．４７４３リットルで、１４リットルの体内の血管外液の空間に近く、これは、標的臓器の外では、薬物が主に細胞外液に分布していたことがわかる。
【０１３６】
【表９】
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【０１３７】
【表１０】
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【０１３８】
臨床薬物動態試験：多回用量上昇第Ｉｂ相臨床試験では、４．２〜８．４ｍｇの用量範囲内で、被験者はヘパラチドの皮下注射を毎日１回、連続７日間に受けた；投与期間中、総血中胆汁酸のレベルが有意的に増加し、薬物離脱後に、総血中胆汁酸は正常に戻った。総胆汁酸は理想的な薬力学的バイオマーカーとして使用できる。研究の結果として、ヘパラチド４．２  ｍｇを毎日、７日間連続皮下注射することで、薬力学的反応を達成するための十分な用量を達成できることを示した。
【０１３９】
実施例９：ポリペプチドの第Ｉ相臨床試験の臨床薬物動態のまとめ
０．５２５〜４．２  ｍｇの用量範囲でヘパラチドを単回皮下注射した後、ヘパラチドは主に標的器官に分布した；６．３−１０．５ｍｇの用量範囲内で単回皮下注射後に、標的器官の飽和に達し、薬物が血漿に分配された。驚いたことに、単回皮下注射でヘパラタイドを４．２０ｍｇの用量で投与した場合、標的器官とする肝臓の飽和に達していないが、この用量の皮下注射で７日間連続投与した場合、蓄積より、標的器官とする肝臓の飽和に達して、これは報告せぬ、予期できない結果である。本出願で開示された結果によれば、４．２ｍｇの毎日用量は、ヘパラチドの連続投与における標的器官飽和用量の最低用量であることを確認した。本開示の結果から判断すると、単回皮下注射でＭｙｒｃｌｕｄｅｘ  Ｂを５ｍｇの用量で投与した場合、標的器官とする肝臓の飽和に達していないが、この用量で連続投与した場合、蓄積より、標的器官とする肝臓の飽和に達できる。
【０１４０】
実施例１０：ペプチドの第Ｉ相臨床試験の安全性のまとめ
被験者は、０．５２５〜１０．５ｍｇの用量範囲のヘパラチドを単回皮下注射で投与した場合のトレランスは十分で、用量制限毒性を示さず、最大許容用量に達しなかった。被験者は、４．２−８．４ｍｇの用量範囲のヘパラチドを７日間連続皮下注射で投与した場合のトレランスは十分で、用量制限毒性を示さず、最大許容用量に達しなかった。
【０１４１】
実施例１１：臨床的に推奨される用量
ヘパラチドは、４．２ｍｇの日用量で、連続投与の後に蓄積され、標的器官とする肝臓の飽和に達した；同時に、当該用量での臨床的安全性は良好であり、総胆汁酸の薬力学的バイオマーカー反応が達成された。したがって、当該用量は臨床的に推奨される用量であると決定される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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