(57)【要約】  本発明は、アンジオテンシンII２型受容体（ＡＴ2Ｒ）拮抗薬の塩形、結晶形及びその製造方法を開示し、慢性疼痛治療薬の製造における前記塩形及びび結晶形の応用をさらに含む。2021534143.tif 000030
2021534143.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が３．５２±０．２０°、６．０４±０．２０°、１８．２１±０．２０°に特徴的な回折ピークを有する、ことを特徴とする式（Ｉ）化合物の結晶形Ａ。
【化１】
2021534143.tif 000026
【請求項２】
Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が３．５２±０．２０°、６．０４±０．２０°、１４．４０±０．２０°、１５．１１±０．２０°、１８．２１±０．２０°、１８．４６±０．２０°、２０．１２±０．２０°、２４．１３±０．２０°に特徴的な回折ピークを有する、請求項１に記載の結晶形Ａ。
【請求項３】
ＸＲＰＤパターンが図１に示される、請求項２に記載の結晶形Ａ。
【請求項４】
示差走査熱量測定曲線において１５５．３６℃±３℃に吸熱ピークの開始点を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の結晶形Ａ。
【請求項５】
ＤＳＣパターンが図２に示される、請求項４に記載の結晶形Ａ。
【請求項６】
熱重量分析曲線において、１００．００℃±３℃に０．１４８９％の重量損失に達する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の結晶形Ａ。
【請求項７】
ＴＧＡパターンが図３に示される、請求項６に記載の結晶形Ａ。
【請求項８】
式（Ｉ）化合物を混合溶剤に加えて溶解するステップ（ａ）と、
３０〜５０℃で１０〜３０時間撹拌するステップ（ｂ）と、
ろ過後、３０〜５０℃でろ過ケーキを１５〜２５時間乾燥させるステップ（ｃ）と、を含み、
前記混合溶剤は、アセトンと水の体積比が１：１．５〜２．５である、式（Ｉ）化合物の結晶形Ａの調製方法。
【請求項９】
Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が６．０８±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１８．１９±０．２０°に特徴的な回折ピークを有する、ことを特徴とする式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂ。
【請求項１０】
Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が６．０８±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１８．１９±０．２０°、２４．３１±０．２０°、３０．５０±０．２０°に特徴的な回折ピークを有する、請求項９に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１１】
Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が３．５２±０．２０°、６．０８±０．２０°、９．２５±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１４．００±０．２０°、１８．１９±０．２０°、２４．３１±０．２０°、３０．５０±０．２０°に特徴的な回折ピークを有する、請求項１０に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１２】
ＸＲＰＤパターンが図４に示される、請求項１１に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１３】
示差走査熱量測定曲線において、１５０．９５℃±３℃に吸熱ピークの開始点を有する、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１４】
ＤＳＣパターンが図５に示される、請求項１３に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１５】
熱重量分析曲線において、１２０．００℃±３℃に０．０５５８％の重量損失に達する、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１６】
ＴＧＡパターンが図６に示される、請求項１５に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１７】
式（Ｉ）化合物を溶剤に加えて、懸濁液を形成するステップ（ａ）と、
懸濁液を３５〜４５℃で３０〜６０時間撹拌するステップ（ｂ）と、
遠心分離後、ろ過ケーキを８〜１６時間乾燥させるステップ（ｃ）と、を含み、
前記溶剤は、メタノール、エタノール、アセトニトリルから選ばれるものであり、または、アセトンと水との体積比が３：２の混合溶剤である、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂの調製方法。
【請求項１８】
慢性疼痛治療薬の調製における請求項１〜７のいずれか１項に記載の結晶形Ａまたは請求項９〜１６のいずれか１項に記載の結晶形Ｂの使用。
【請求項１９】
以下のステップを含む、式（Ｉ）化合物の調製方法。
【化２】
2021534143.tif 000027
（ここで、Ｒ1は、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから選ばれ、溶剤Ｆは、ｎ−ヘプタン、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、シクロヘキサン、及びジオキサンから選ばれ、試薬Ｇは酸化銀、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウム、及び硫酸ナトリウムから選ばれる。）
【化３】
2021534143.tif 000028
【請求項２０】
以下のステップを含む、請求項１９に記載の調製方法。
【化４】
2021534143.tif 000029
（ここで、溶剤Ｈは、テトラヒドロフラン、メタノール、及び水から選ばれ、試薬Ｉは、水酸化リチウム一水和物及び水酸化ナトリウムから選ばれ、溶剤Ｊはジクロロメタンから選ばれ、触媒ＫはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドから選ばれ、試薬Ｌは塩化オクサリルから選ばれ、溶剤Ｍはジクロロメタンから選ばれ、試薬Ｎはピラゾールから選ばれ、試薬ＯはＮ−メチルモルホリンから選ばれ、溶剤ＰはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、及びテトラヒドロフランから選ばれ、試薬Ｑはテトラメチルグアニジン、１,８−ジアザビシクロウンデク−７−エン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、及び２,６−ジメチルピリジンから選ばれる。）
【請求項２１】
化合物１Ｅと化合物１−０とのモル比は１．２〜５：１である、請求項１９または２０に記載の調製方法。
【請求項２２】
化合物１−４と化合物Ｄ１−１とのモル比は、１．１〜１．５：１である、請求項２０に記載の調製方法。
【請求項２３】
化合物１−１、１−２、及び１−３を調製するステップでは、反応系の温度範囲が２５±５℃に制御される、請求項１９または２０に記載の調製方法。
【請求項２４】
化合物１−４の調製には、ステップａとステップｂを含み、ステップａでは、反応系の温度範囲が２５±５℃に制御され、ステップｂでは、反応系に材料を投入する際に、反応系の温度範囲が５±５℃に制御され、試薬投入の終了後、反応系の温度範囲が２５±５℃に制御される、請求項２０に記載の調製方法。
【請求項２５】
溶剤Ｆはｎ−ヘプタンから選ばれ、前記ｎ−ヘプタンの体積と化合物１−０の質量との比が８．０〜１０．０：１であり、試薬Ｇは、酸化銀、硫酸マグネシウムから選ばれ、前記酸化銀、硫酸マグネシウムと化合物１−０とのモル比が１．０〜５．０：１である、請求項１９または２０に記載の調製方法。
【請求項２６】
試薬Ｇは投入過程においてバッチで投入される、請求項１９または２０に記載の調製方法。
【請求項２７】
溶剤Ｈは、テトラヒドロフランと水から選ばれる混合物であり、前記テトラヒドロフランと水の体積比が１〜２：１であり、試薬Ｉは水酸化リチウム一水和物であり、前記水酸化リチウム一水和物と化合物１−０とのモル比が１．０〜２．０：１であり、溶剤Ｊと化合物１−３との質量比は１０：１であり、触媒Ｋと化合物１−３とのモル比は０．００２〜０．００４：１であり、試薬Ｌと化合物１−３とのモル比は１．２〜２．０：１であり、溶剤Ｍと化合物１−３との質量比は６〜１０：１であり、試薬Ｎと化合物１−３とのモル比は１．０〜１．５：１であり、試薬Ｏと化合物１−３とのモル比は１．０〜１．５：１であり、溶剤ＰはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドから選ばれ、前記Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドから選ばれる溶剤Ｐと化合物１−４との質量比が１０：１であり、試薬Ｑはテトラメチルグアニジンから選ばれ、前記テトラメチルグアニジンから選ばれる試薬Ｑと化合物１−４とのモル比が１〜１．２：１である、請求項２０に記載の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、出願日２０１８．１１．０２のＣＮ２０１８１１３０１８９２．３の優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、アンジオテンシンII２型受容体（ＡＴ2Ｒ）拮抗薬の塩形、結晶形及びその製造方法に関し、慢性疼痛治療薬の製造における前記塩形及び結晶形の応用をさらに含む。
【背景技術】
【０００３】
アンジオテンシンII（ＡｎｇII）は、アンジオテンシンＩがアンジオテンシン変換酵素の作用を受けて加水分解して生じるオクトペプチド物質であり、血圧、体液のバランスや疼痛知覚などを調整する作用を有する。アンジオテンシン受容体は、アンジオテンシンをリガンドとするＧタンパク質結合受容体であり、レニン−アンジオテンシン系の重要な構成部分である。ＡｎｇIIは、アンジオテンシンII１型受容体（ＡＴ1Ｒ）及びアンジオテンシンII２型受容体（ＡＴ2Ｒ）を活性化することができる。これらの中でも、ＡＴ2Ｒは神経系において疼痛メカニズムに関連し、主に後根神経節及び三叉神経節で発現されている。正常な神経に比べて、損傷神経や痛みを伴う神経腫にはＡＴ2Ｒ発現がより高い。ＡＴ2Ｒは、活性化されると、Ｇタンパク質結合受容体により活性化されたセカンドメッセンジャー経路を介して、ニューロン中のイオンチャンネルを感作させることができる。イオンチャンネルが感作作用により活性化されて、ニューロンの興奮を引き起こす。ＡＴ2Ｒ拮抗薬は既に動物実験、臨床実験により疼痛の緩和に用いられ得ることが確認された。
【０００４】
国際公開第２０１１／０８８５０４号では、化合物ＥＭＡ−４０１が開示されている。
【化１】
2021534143.tif 000003
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、式（Ｉ）化合物を提供する。
【化２】
2021534143.tif 000004
【０００６】
本発明は、Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が３．５２±０．２０°、６．０４±０．２０°、１８．２１±０．２０°に特徴的な回折ピークを有する、ことを特徴とする式（Ｉ）化合物の結晶形Ａをさらに提供する。
【０００７】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＡのＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が３．５２±０．２０°、６．０４±０．２０°、１４．４０±０．２０°、１５．１１±０．２０°、１８．２１±０．２０°、１８．４６±０．２０°、２０．１２±０．２０°、２４．１３±０．２０°に特徴的な回折ピークを有する。
【０００８】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＡのＸＲＰＤパターンが図１に示される。
【０００９】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＡのＸＲＰＤパターンの分析データが表に示される。
【００１０】
【表１】
2021534143.tif 000005
【００１１】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ａの示差走査熱量測定曲線において１５５．３６℃±３℃に吸熱ピークの開始点を有する。
【００１２】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＡのＤＳＣパターンが図２に示される。
【００１３】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ａの熱重量量分析曲線において、１００．００℃±３℃に０．１４８９％の重量損失に達する。
【００１４】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＡのＴＧＡパターンが図３に示される。
【００１５】
本発明は、
式（Ｉ）化合物を混合溶剤に加えて溶解するステップ（ａ）と、
３０〜５０℃で１０〜３０時間撹拌するステップ（ｂ）と、
ろ過後水洗し、３０〜５０℃でろ過ケーキを１５〜２５時間乾燥させるステップ（ｃ）と、を含み、
前記混合溶剤は、アセトンと水の体積比が１：１．５〜２．５である、式（Ｉ）化合物の結晶形Ａの調製方法をさらに提供する。
【化３】
2021534143.tif 000006
【００１６】
本発明は、Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が６．０８±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１８．１９±０．２０°に特徴的な回折ピークを有する、ことを特徴とする式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂをさらに提供する。
【００１７】
本発明は、Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が６．０８±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１８．１９±０．２０°、２４．３１±０．２０°、３０．５０±０．２０°に特徴的な回折ピークを有する、ことを特徴とする式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂをさらに提供する。
【００１８】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ｂは、Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が３．５２±０．２０°、６．０８±０．２０°、９．２５±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１４．００±０．２０°、１８．１９±０．２０°、２４．３１±０．２０°、３０．５０±０．２０°に特徴的な回折ピークを有する。
【００１９】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＢのＸＲＰＤパターンが図４に示される。
【００２０】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＢのＸＲＰＤパターンの分析データが表２に示される。
【００２１】
【表２】
2021534143.tif 000007
【００２２】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ｂの示差走査熱量測定曲線において、１５０．９５℃±３℃に吸熱ピークの開始点を有する。
【００２３】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＢのＤＳＣパターンが図５に示される。
【００２４】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ｂの熱重量量分析曲線において、１２０．００℃±３℃に０．０５５８％の重量損失に達する。
【００２５】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＢのＴＧＡパターンが図６に示される。
【００２６】
本発明は、
式（Ｉ）化合物を溶剤に加えて、懸濁液を形成するステップ（ａ）と、
懸濁液を３５〜４５℃で３０〜６０時間撹拌するステップ（ｂ）と、
遠心分離後、ろ過ケーキを８〜１６時間乾燥させるステップ（ｃ）と、を含み、
前記溶剤は、メタノール、エタノール、アセトニトリルから選ばれるものであり、または、アセトンと水との体積比が３：２の混合溶剤である、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂの調製方法をさらに提供する。
【００２７】
本発明は、慢性疼痛治療薬の調製における上記結晶形Ａまたは結晶形Ｂの使用をさらに提供する。
【００２８】
本発明は、以下のステップを含む、式（Ｉ）化合物の調製方法をさらに提供する。
【化４】
2021534143.tif 000008
【化５】
2021534143.tif 000009
（ここで、Ｒ1は、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから選ばれ、
溶剤Ｆは、ｎ−ヘプタン、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、シクロヘキサン、及びジオキサンから選ばれ、
試薬Ｇは酸化銀、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウム、及び硫酸ナトリウムから選ばれる。）
【００２９】
本発明のいくつかの形態では、上記調製方法は、以下のステップを含む。
【化６】
2021534143.tif 000010
（ここで、溶剤Ｈは、テトラヒドロフラン、メタノール、及び水から選ばれ、
試薬Ｉは、水酸化リチウム一水和物及び水酸化ナトリウムから選ばれ、
溶剤Ｊはジクロロメタンから選ばれ、
触媒ＫはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドから選ばれ、
試薬Ｌは塩化オクサリルから選ばれ、
溶剤Ｍはジクロロメタンから選ばれ、
試薬Ｎはピラゾールから選ばれ、
試薬ＯはＮ−メチルモルホリンから選ばれ、
溶剤ＰはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、及びテトラヒドロフランから選ばれ、
試薬Ｑはテトラメチルグアニジン、１,８−ジアザビシクロウンデク−７−エン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、及び２,６−ジメチルピリジンから選ばれる。）
【００３０】
本発明のいくつかの形態では、化合物１Ｅと化合物１−０とのモル比は１．２〜５：１である。
【００３１】
本発明のいくつかの形態では、化合物１−４と化合物Ｄ１−１とのモル比は、１．１〜１．５：１である。
【００３２】
本発明のいくつかの形態では、上記調製方法において、化合物１−１、１−２、及び１−３を調製するステップでは、反応系の温度範囲が２５±５℃に制御される。
【００３３】
本発明のいくつかの形態では、化合物１−４の調製には、ステップａとステップｂを含み、ステップａでは、反応系の温度範囲が２５±５℃に制御され、ステップｂでは、反応系に材料を投入する際に、反応系の温度範囲が５±５℃に制御され、試薬投入の終了後、反応系の温度範囲が２５±５℃に制御される。
【００３４】
本発明のいくつかの形態では、溶剤Ｆはｎ−ヘプタンから選ばれ、前記ｎ−ヘプタンの体積と化合物１−０の質量との比が８．０〜１０．０：１であり、試薬Ｇは、酸化銀、硫酸マグネシウムから選ばれ、前記酸化銀、硫酸マグネシウムと化合物１−０とのモル比が１．０〜５．０：１である。
【００３５】
本発明のいくつかの形態では、試薬Ｇは投入過程においてバッチで投入される。
【００３６】
本発明のいくつかの形態では、溶剤Ｈは、テトラヒドロフランと水から選ばれる混合物であり、前記テトラヒドロフランと水の体積比が１〜２：１であり、試薬Ｉは水酸化リチウム一水和物であり、前記水酸化リチウム一水和物と化合物１−０とのモル比が１．０〜２．０：１であり、溶剤Ｊと化合物１−３との質量比は１０：１であり、触媒Ｋと化合物１−３とのモル比は０．００２〜０．００４：１であり、試薬Ｌと化合物１−３とのモル比は１．２〜２．０：１であり、溶剤Ｍと化合物１−３との質量比は６〜１０：１であり、試薬Ｎと化合物１−３とのモル比は１．０〜１．５：１であり、試薬Ｏと化合物１−３とのモル比は１．０〜１．５：１であり、溶剤ＰはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドから選ばれ、前記Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドから選ばれる溶剤Ｐと化合物１−４との質量比が１０：１であり、試薬Ｑはテトラメチルグアニジンから選ばれ、前記テトラメチルグアニジンから選ばれる試薬Ｑと化合物１−４とのモル比が１〜１．２：１である。
【発明の効果】
【００３７】
技術的効果
本発明の化合物はインビトロで優れた生物学的活性を示し、そして複数の属において良好な薬物動態特性を示す。その結晶形は安定的であり、吸湿性が低い。
【００３８】
定義及び説明
特に断らない限り、本明細書で使用される下記用語及び句は下記定義を含むことを意図する。１つの特定の句または用語は、特に定義されない場合、不明確または不明瞭であると理解できず、一般的な定義として理解すべきである。本明細書に商品名が記載されている場合、該商品名に対応する商品またはその活性成分を意味する。
【００３９】
本発明の中間体化合物は当業者に公知の複数の合成方法により製造することができ、以下で挙げられる特定実施形態、この実施形態と他の化学合成方法とを組み合わせた実施形態、及び当業者に公知の等同置換形態が含まれるが、好ましい実施形態には本発明の実施例が含まれるが、これらに制限されない。
【００４０】
本発明の特定実施形態の化学反応は適切な溶剤にて行われ、前記溶剤は本発明の化学変化及びそれに必要な試薬や材料に適していなければならない。本発明の化合物を得るために、当業者が既存の実施形態に基づいて合成ステップまたは反応手順を修正または選択することも必要とされる場合はある。
【００４１】
以下、実施例にて本発明を詳しく説明するが、これらの実施例は本発明を何ら制限するものではない。
【００４２】
本発明で使用されるすべての溶剤は市販品であり、さらなる精製を必要とせずに使用することができる。
【００４３】
本発明では、下記略語が使用される。
ｒ．ｔ．は室温を表し、ＴＨＦはテトラヒドロフランを表し、ＮＭＰはＮ−メチルピロリドンを表し、ＭｅＳＯ3Ｈはメタンスルホン酸を表し、ＤＭＥはエチレングリコールジメチルエーテルを表し、ＤＣＭはジクロロメタンを表し、Ｘｐｈｏｓは２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２',４',６'−トリイソプロピルビフェニルを表し、ＥｔＯＡｃは酢酸エチルを表し、ＭｅＯＨはメタノールを表し、ａｃｅｔｏｎｅはアセトンを表し、２−Ｍｅ−ＴＨＦは２−メチルテトラヒドロフランを表し、ＩＰＡはイソプロパノールを表し、ＨＡＴＵはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファートを表す。
化合物は手動またはＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアで命名され、市販化合物はサプライヤーのカタログ名を用いる。
本発明のＸ−線粉末回折（Ｘ−ｒａｙ  ｐｏｗｄｅｒ  ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、ＸＲＰＤ）方法
器具型番：Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８ａｄｖａｎｃｅ  Ｘ−線粉末回折計
テスト方法：ＸＲＰＤ検出に約１０〜２０ｍｇのサンプルが使用される。
詳細なＸＲＰＤパラメータは以下のとおりである。
Ｘ線管：Ｃｕ、ｋα（λ＝１．５４０５６Å）、
Ｘ線管電圧：４０ｋＶ、Ｘ線管電流流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
検出器スリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：３〜４０ｄｅｇまたは４〜４０ｄｅｇ
ステップ幅：０．０２ｄｅｇ
ステップ：０．１２秒
サンプルトレイの回転数：１５ｒｐｍ
本発明の示差走査熱量分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＤＳＣ）方法
器具型番号：ＴＡ  Ｑ２０００示差走査熱量計
テスト方法：サンプル（〜１ｍｇ）をＤＳＣ用アルミ鍋に入れてテストし、５０ｍＬ／ｍｉｎ、Ｎ2条件下、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、サンプルを室温から２５０℃（または２８０℃）に加熱する。
本発明の熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒ、ＴＧＡ）方法
器具型番：ＴＡ  Ｑ５０００熱重量分析計
テスト方法：サンプル（２〜５ｍｇ）をＴＧＡ用プラチナ鍋に入れてテストし、２５ｍＬ／ｍｉｎ、Ｎ2条件下、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、サンプルを室温から３０℃または重量が２０％損失されるまで加熱する。
本発明の動的蒸気収着分析（Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｖａｐｏｒ  Ｓｏｒｐｔｉｏｎ、ＤＶＳ）方法
器具型番：ＳＭＳ  ＤＶＳ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ動的蒸気収着装置
テスト条件：サンプル（１０〜１５ｍｇ）をＤＶＳサンプルトレイに入れてテストする。
詳細なＤＶＳパラメータは以下のとおりである。
温度：２５℃
平衡：ｄｍ／ｄｔ＝０．０１％／ｍｉｎ（最短：１０ｍｉｎ、最長：１８０ｍｉｎ）
乾燥：０％ＲＨ下、１２０ｍｉｎ乾燥
ＲＨ（％）テスト勾配：１０％
ＲＨ（％）テスト勾配範囲：０％〜９０％〜０％
吸湿性の評価は以下のように分類される。
【００４４】
2021534143.tif 000011
【００４５】
2021534143.tif 000012
【００４６】
本発明の高速液体クロマトグラフィー（Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ、ＨＰＬＣ）方法
詳細なパラメータは以下のとおりである。
2021534143.tif 000013
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】式（Ｉ）化合物の結晶形ＡのＣｕ−Ｋα放射のＸＲＰＤパターンである。
【図２】式（Ｉ）化合物の結晶形ＡのＤＳＣパターンである。
【図３】式（Ｉ）化合物の結晶形ＡのＴＧＡパターンである。
【図４】式（Ｉ）化合物の結晶形ＢのＣｕ−Ｋα放射のＸＲＰＤパターンである。
【図５】式（Ｉ）化合物の結晶形ＢのＤＳＣパターンである。
【図６】式（Ｉ）化合物の結晶形ＢのＴＧＡパターンである。
【図７】式（Ｉ）化合物の結晶形ＢのＤＶＳパターンである。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
本発明の内容をよりよく理解するために、以下、特定の実施例を参照しながらさらに説明するが、特定の実施形態は本発明の内容に対する制限ではない。
【００４９】
参照例１：化合物Ｓ−Ａ１の製造
【化７】
2021534143.tif 000014
【００５０】
ステップ１：化合物Ｓ−Ａ１−１の製造
酸化銀（１．５ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を化合物Ｓ−マンデル酸（５００．０ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）とブロモシクロペンタン（４９．０ｇ、３２８．６ｍｍｏｌ）の混合液に加え、次に、２０〜２５℃の条件下で撹拌しながら１６時間反応させた。反応液をろ過し、ろ液を真空濃縮させて溶剤を除去し、得た粗製物をシリカクロマトグラフィーカラム（溶離液：酢酸エチル／石油エーテル０〜１０％）により分離して精製し、化合物Ｓ−Ａ１−１を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.49-7.40(m,2H),7.38-7.28(m,3H),5.22-5.19(m,1H),4.88(s,1H),4.03-3.99(m,1H),1.89-1.64(m,10H),1.57-1.45(m,6H).MS m/z:311.1[M+Na]+.
【００５１】
ステップ２：化合物Ｓ−Ａ１の製造
化合物Ｓ−Ａ１−１（３４０．０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（６．０ｍＬ）と水（３．０ｍＬ）の混合溶剤に溶解し、水酸化リチウム一水和物（２８３．０ｍｇ、１１．８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を２０〜２５℃で４８時間撹拌した。反応液を１Ｎ塩酸でｐＨ＜３に調整した後、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。合併した有機相を飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮させて、得た粗製物をシリカクロマトグラフィーカラム（溶離液：０〜３７．５％石油エーテル／酢酸エチル）により分離して精製し、化合物Ｓ−Ａ１を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.45-7.34(m,5H),4.93(s,1H),4.07-4.03(m,1H),1.78-1.69(m,6H),1.62-1.48(m,2H).
ＳＦＣ：カラム：ＣｈｉｒａｌＣｅｌ  ＯＪ−Ｈ（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ、５ｕｍ）；移動相：Ａ：ＣＯ2、Ｂ：エタノール［０．０５％ジエチルアミン］；Ｂ％：５％〜４０％５．５ｍｉｎ、４０％３ｍｉｎ、５％１．５ｍｉｎ；Ｒｔ＝２．３２１ｍｉｎ；９５．６％ｅｅ．
【００５２】
参照例２：化合物（−）−Ｃ１の製造
【化８】
2021534143.tif 000015
【００５３】
ステップ１：化合物Ｃ１−２の製造
窒素ガスの保護下、化合物Ｃ１−１（２００．０ｇ、１．３１ｍｏｌ）を無水エタノール（１．５０Ｌ）に溶解した。１５℃で撹拌しながら無水炭酸カリウム（１８１．１ｇ、１．３１ｍｏｌ）及び臭化ベンジル（２６８．９ｇ、１．５７ｍｏｌ）を順次加え、次に反応液を１００℃に加熱して１５時間撹拌し続けた。反応液を室温に冷却させた後ろ過し、ろ液を真空濃縮させ、得た油状物を酢酸エチル（３．０Ｌ）で再溶解した後、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５００ｍＬ×２）及び飽和食塩水（６００ｍＬ×２）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてろ過して、真空濃縮させて粗製物を得た。粗製物を石油エーテルに分散させて１時間撹拌し、ろ過して化合物Ｃ１−２を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.25(s,1H),7.42-7.34(m,6H),7.21-7.12(m,2H),5.19(s,2H),3.96(s,3H).
【００５４】
ステップ２：化合物Ｃ１−３の製造
窒素ガスの保護下、化合物Ｃ１−２（２２０．０ｇ、９０８．０８ｍｍｏｌ）、２−ニトロ酢酸エチル（１４５．０ｇ、１．０９ｍｏｌ）、及びジエチルアミン塩酸塩（１４９．３ｇ、１．３６ｍｏｌ）の、無水トルエン（２．１Ｌ）中の混合溶液を１３０℃に加熱して１５時間還流させ、反応により生成した水をＤｅａｎｅ−Ｓｔａｒｋ分水器で分離した。反応液を室温に冷却した後、真空濃縮させてトルエンを除去した。残留物をジクロロメタン（５００ｍＬ）に再溶解した後、飽和食塩水（１０００ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてろ過し、真空濃縮させて化合物Ｃ１−３を得て、この化合物を精製せずに次のステップの反応に用いた。
【００５５】
ステップ３：化合物Ｃ１−４の製造
窒素ガスの保護下、上記ステップ２で得られた粗品化合物Ｃ１−３（４３０．０ｇ、１．２ｍｏｌ）をイソプロパノール（２．２ｇ、３６．０ｍｍｏｌ）及びクロロホルム（４．５Ｌ）に溶解し、混合液を０℃に冷却した後、撹拌しながら１００〜２００メッシュのシリカゲル（１．８ｋｇ）に加え、次に、１．５時間かけてホウ水素化ナトリウム（２０１．１ｇ、５．３ｍｏｌ）をバッチで加えた。反応液を１５℃に昇温した後、撹拌しながら１２時間反応させ続けた。酢酸（２１０ｍＬ）を緩やかに加えた後、１５分間撹拌し続け、反応液をろ過し、ろ過ケーキをジクロロメタン（５００ｍＬ）で洗浄した。合併したろ液を真空濃縮させて、得た残留物をシリカクロマトグラフィーカラム（溶離液：６％〜１０％石油エーテル／酢酸エチル）により分離して精製し、化合物Ｃ１−４を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.48-7.33(m,5H),7.02-6.97(m,1H),6.94-6.90(m,1H),6.64-6.62(dd,J=1.6,7.6Hz,1H),5.33-5.30(dd,J=6.0,9.2Hz,1H),5.19-5.05(m,2H),4.15-4.10(q,J=7.2Hz,2H),3.91(s,3H),3.44-3.31(m,2H),1.16-1.12(t,J=7.2Hz,3H).
【００５６】
ステップ４：化合物Ｃ１−５の製造
１５℃で、化合物Ｃ１−４（７６．２ｇ、２１２．０４ｍｍｏｌ）を酢酸（７００ｍＬ）に溶解し、反応温度を６０〜６５℃の間に維持しながら亜鉛粉（１１０．９ｇ、１．７０ｍｏｌ）を緩やかに加え、添加終了後、６０℃で撹拌しながら２時間反応させ続けた。反応液を室温に冷却した後、ろ過し、ろ過ケーキを酢酸（３００ｍＬ）で洗浄した。合併したろ液を真空濃縮させて、得た残留物をジクロロメタン（５００ｍＬ）に再溶解し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２００ｍＬ×２）及び飽和食塩水（２００ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてろ過し、真空濃縮させて粗製物Ｃ１−５を得て、この化合物を精製せずに次のステップに用いた。MS m/z:330.1[M+1]+.
【００５７】
ステップ５：化合物Ｃ１の製造
１５℃、窒素ガスの保護下、化合物Ｃ１−５（４８．９ｇ、１４９．４ｍｍｏｌ）を２Ｎ塩酸溶液（５００ｍＬ）に溶解し、その後、３７％ホルムアルデヒド水溶液（３６．４ｇ、４４８．１ｍｍｏｌ）を加えて、反応液を２５時間撹拌した。ろ過し、ろ過ケーキを水（１００ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥させて、化合物Ｃ１の塩酸塩を得た。MS m/z:342.1[M+1]+.
【００５８】
ステップ６：化合物（−）−Ｃ１及び（＋）−Ｃ１の製造
化合物Ｃ１（４０．０ｇ、１１７．２ｍｍｏｌ）をキラルカラムにより分離して、２つの異性体（−）−Ｃ１及び（＋）−Ｃ１を得た。
（−）−Ｃ１：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.40-7.38(m,2H),7.33-7.22(m,3H),6.73-6.71(m,2H),4.93-4.92(m,2H),4.17-4.15(q,J=7.2Hz,2H),4.10-3.93(m,2H),3.79(s,3H),3.62-3.58(m,1H),3.07-3.06(m,1H),2.77-2.65(m,1H),1.21(t,J=7.2Hz,3H).MS m/z:342.1[M+1]+.[α]=-23.4.
（＋）−Ｃ１：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.43-7.40(m,2H),7.33-7.22(m,3H),6.86(s,2H),5.06-4.95(q,J=11.2Hz,2H),4.54-4.50(m,1H),4.33-4.21(m,3H),4.07-4.05(m,1H),3.88(s,3H),3.34-3.25(m,1H),3.20-3.14(m,1H),1.30-1.26(t,J=7.2Hz,3H).MS m/z:342.1[M+1]+.[α]=+9.8.
【００５９】
参照例３：化合物Ｄ１の製造
【化９】
2021534143.tif 000016
【００６０】
ステップ１：化合物Ｄ１−１の製造
アセトン（２１．２Ｌ）を５０Ｌの反応釜に加えて、撹拌を開始し、次に、出発原料Ｄ１−０（２．６９ｋｇ）、炭酸カリウム（３．４８ｋｇ）及び臭化ベンジル（３．３９ｋｇ）を反応釜に順次加え、反応液を５５〜６０℃で約１８時間撹拌した。反応液を１０〜２０℃に降温して、減圧して吸引濾過し、ろ過ケーキをアセトン（２Ｌ、１．５Ｌ）で洗浄した。ろ液をロータリーエバポレータに移し、外温４０〜４５℃で減圧濃縮させ、得た粗品を酢酸エチル（２６Ｌ）に溶解して、１３Ｌ水で２回洗浄し（毎回６．５Ｌ）、１３Ｌ飽和塩化ナトリウム水溶液で２回洗浄し（毎回６．５Ｌ）、有機相を無水硫酸ナトリウム（１．５ｋｇ）で乾燥させてろ過し、ろ液を外温４０〜４５℃で減圧濃縮させ、別のバッチと合併して処理し、さらに、得た粗品を石油エーテル３０Ｌに加え、外温０〜５℃で２１時間撹拌し、ろ過して、ろ過ケーキを石油エーテル４Ｌで２回洗浄し（毎回２Ｌ）、得たろ過ケーキをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：０〜１０％酢酸エチル／石油エーテル）により分離して精製し、化合物Ｄ１−１を得た。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.25(s,1H),7.41-7.36(m,6H),7.17-7.07(m,2H),5.19(s,2H),3.95(s,3H)。
【００６１】
ステップ２：化合物Ｄ１−３の製造
テトラヒドロフラン（５．０Ｌ）を５０Ｌの反応釜に加え、撹拌を開始し、次に、出発原料Ｄ１−２（３．２１ｋｇ）及びテトラメチルグアニジン（１．３１ｋｇ）を反応釜に順次加え、降温して、内温を１０℃以下に維持しながら原料Ａ−１（２．３ｋｇ）のテトラヒドロフラン（４．８Ｌ）溶液を滴下し、反応液を２０〜３０℃で約１６時間撹拌した。反応液を外温３５〜４０℃で減圧濃縮させ、得た粗品を酢酸エチル（２０Ｌ）に溶解し、１０％のクエン酸水溶液８Ｌ、飽和塩化ナトリウム水溶液１０Ｌで順次２回洗浄し（毎回５Ｌ）、有機相を無水硫酸ナトリウム（１．０ｋｇ）で乾燥させてろ過し、ろ液を外温３５〜４０℃で減圧濃縮させ、得た粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：０〜３０％酢酸エチル／石油エーテル）により分離して精製し、化合物Ｄ１−３を得た。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.38-7.32(m,5H),7.08-7.03(m,2H),6.94-6.91(m,1H),4.98(s,2H),3.90(s,3H),3.84(s,3H),1.39(s,9H)。
【００６２】
ステップ３：化合物Ｄ１−４の製造
ビス（１,５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）トリフルオロメタンスルホナート（２４９．２０ｍｇ）及び（＋）−１,２−ビス［（２Ｒ,５Ｒ）−２,５−ジエチルホスフォラノ］ベンゼン（２１０．４０ｍｇ）をメタノール（２０ｍＬ）に溶解し、混合液を窒素ガスの保護下、１５分間撹拌し、アルゴンガスの雰囲気下、化合物Ｄ１−３（２００ｇ）のメタノール（１Ｌ）溶液に加え、アルゴンガスを用いて３回置換し、水素ガスを用いて３回置換し、反応液を水素ガス（５０ｐｓｉ）雰囲気、及び２０〜２５℃の条件で１８時間撹拌した。有機溶剤を減圧除去し、得た粗製物を別のバッチと合併し、シリカゲルでろ過して、化合物Ｄ１−４を得た。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.54-7.46(m,2H),7.41-7.35(m,3H),7.03-7.00(m,1H),6.90-6.86(m,1H),6.76-6.74(m,1H),5.35-5.32(m,1H),5.05(s,2H),4.49-4.44(m,1H),3.90(s,3H),3.62(s,3H),3.06-2.95(m,2H),1.39(s,9H)。
ＳＦＣ：カラム：Ｌｕｘ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ−２（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ、３ｕｍ）；移動相：Ｂ：イソプロパノール［０．０５％エチルアミン］；Ｂ％：５％〜４０％５．５ｍｉｎ、４０％３ｍｉｎ、５％１．５ｍｉｎ；Ｒｔ＝３．２４７ｍｉｎ；９７．８％ｅｅ．
【００６３】
ステップ４：化合物Ｄ１−５の製造
水酸化リチウム一水和物（０．７６ｋｇ）を水（１６．０Ｌ）に溶解し、内温を１５℃以下に維持しながら化合物Ａ−４（３．６９ｋｇ）のテトラヒドロフラン（１０．６Ｌ）溶液を滴下し、反応液を１０〜２０℃の条件下で１８時間撹拌した。飽和クエン酸水溶液でｐＨを約５に調整し、有機溶剤を減圧除去し、得た粗製物を酢酸エチル１６．０Ｌに加えて、分液し、有機相を１０％のクエン酸水溶液（８Ｌ）で洗浄し、１０％の塩化ナトリウム水溶液で３回洗浄し（毎回６．０Ｌ）、無水硫酸ナトリウム１．０ｋｇで乾燥させてろ過し、有機溶剤を減圧除去し、化合物Ｄ１−５を得た。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.49-7.33(m,5H),7.03-7.00(m,1H),6.90-6.86(m,1H),6.76-6.74(m,1H),5.47-5.45(m,1H),5.11(s,2H),4.49-4.44(m,1H),3.90(s,3H),3.06-2.95(m,2H),1.39(s,9H)。
【００６４】
ステップ５：化合物Ｄ１−６の製造
酢酸エチル（４．０Ｌ）を１０Ｌ三口フラスコに加え、ドライアイス／エタノールで冷却し、塩化水素ガス（９００．０ｇ）を導入して、さらに酢酸エチル１Ｌを加えて希釈し、４Ｍ塩化水素酢酸エチル溶液として使用に備えた。化合物Ａ−５（１．５ｋｇ）を酢酸エチル（１０．０Ｌ）に溶解して、内温を１０℃以下に維持しながら４Ｍの塩化水素酢酸エチル溶液を加え、反応液を５〜１５℃の条件下で２時間撹拌した。イソプロピルエーテル６．０Ｌを加えて、反応液を５〜１０℃の条件下で１６時間撹拌し続けた。ろ過し、ろ過ケーキをイソプロピルエーテルで２回洗浄し（毎回１．２Ｌ）、化合物Ｄ１−６を得た。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.49-7.44(m,2H),7.37-7.33(m,3H),7.09-7.04(m,2H),6.83-6.80(m,1H),5.19-5.07(m,2H),4.18-4.14(m,1H),3.93(s,3H),3.33-3.28(m,1H),2.90-2.84(m,1H)。
【００６５】
ステップ６：化合物Ｄ１の製造
化合物Ｄ１−６（２．２４ｋｇ）を８個のバッチ（３０２．５６ｇ）に等分して遊離し、各バッチを水（４．８Ｌ）に加えて、炭酸ナトリウム（５３．９６ｇ）の水（３０２．５ｍＬ）溶液を滴下し、反応液を０．５時間撹拌し、ろ過したろ過ケーキを合併して、水（６．２Ｌ）で１回洗浄した。遊離したろ過ケーキを水（２２．０Ｌ）に加え、８５％のリン酸（８５０．０ｍＬ）及び３７％のホルムアルデヒド水溶液（９００．０ｍＬ）を順次加え、反応液を５５〜６５℃に昇温した条件下で１６時間撹拌し続けた。酢酸ナトリウム（９８８．７ｇ）の水（３．０Ｌ）溶液を滴下し、ｐＨを約３に調整してろ過し、ろ過ケーキを水で４回洗浄し（毎回６．０Ｌ）、アセトン（１２．０Ｌ）で１回洗浄し、真空乾燥させて、化合物Ｄ１を得た。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.49-7.30(m,5H),7.02-6.93(m,2H),5.04(s,2H),4.30-4.20(m,2H),3.89(s,3H),3.74-3.70(m,1H),3.54-3.48(m,1H),2.92-2.84(m,1H)。
【００６６】
実施例１：式（Ｉ）化合物の製造
【化１０】
2021534143.tif 000017
【００６７】
ステップ１：化合物Ｉ−１の製造
化合物（−）−Ｃ１（１５５．００ｍｇ、４５４．００μｍｏｌ）及び化合物Ｓ−Ａ１（９０．００ｍｇ、４０８．６０μｍｏｌ）をジクロロメタン（５．００ｍＬ）に溶解し、ＨＡＴＵ（２５９．００ｍｇ、６８１．００μｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１１８．００ｍｇ、９１２．５４μｍｏｌ、１５９．４６μＬ）を順次加え、反応液を２０〜２５℃で１６時間撹拌し続けた。反応液を水１５ｍＬに注入して、分液し、水相をジクロロメタンで３回抽出し（２０ｍＬ×３）、合併した有機相を飽和食塩水３０ｍＬで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空乾燥させて粗品を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：０−５０％石油エーテル／酢酸エチル）により分離して精製し、化合物Ｉ−１を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.50-7.20(m,10H),6.84(m,1H),6.66(d,J=8.0Hz,0.5H),6.43(d,J=12.0Hz,0.5H),5.50-5.48(m,0.5H),5.32(d,J=8.0Hz,1H),5.07-4.76(m,3H),4.60(d,J=16.0Hz,0.5H),4.51-4.45(m,1H),4.18-4.07(m,2H),3.84(d,J=12Hz,3H),3.66-3.61(m,0.5H),3.55-3.40(m,1H),3.17-3.11(m,0.5H),2.99-2.93(m,0.5H),2.74-2.68(m,0.5H),1.90-1.70(m,5H),1.60-1.57(m,3H),1.29-1.17(m,3H).MS m/z=544.4[M+H]+.
ＳＦＣ：カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−３（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ、３μｍ）；移動相：Ａ：ＣＯ２、Ｂ：イソプロパノール［０．０５％ジエチルアミン］；Ｂ％：５％〜４０％５．５ｍｉｎ、４０％３ｍｉｎ、５％１．５ｍｉｎ；Ｒｔ＝５．０３４ｍｉｎ；８６．３％ｄｅ．
【００６８】
ステップ２：化合物Ｉの製造
化合物Ｉ−１（１６３．００ｍｇ、２９９．８３μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３．００ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウム（７２．００ｍｇ、３．０１ｍｍｏｌ）の水（１．５０ｍＬ）溶液を加え、反応液を１５〜２０℃で４８時間撹拌し続けた。反応液に１Ｍの塩酸水溶液を加えてｐＨ＜４に調整し、酢酸エチルで抽出し（１５ｍＬ×３）、合併した有機相を飽和食塩水３０ｍＬで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、有機溶剤を減圧除去し、得た粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：０−２０％ジクロロメタン／メタノール）により分離して精製し、得た化合物を再度キラルカラムにより分離し、化合物Ｉを得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.53-7.16(m,10H),7.00-6.80(m,1.5H),6.68(d,J=8.0Hz,0.5H),5.36(d,J=12.0Hz,1H),5.01-4.66(m,3H),4.41(d,J=24.0Hz,0.5 H),4.30(d,J=24Hz,0.5H),4.13-3.95(m,1H),3.79(s,3H),2.84-2.79(m,1H),2.68-2.64(m,1H),2.39-2.27(m,1H),1.80-1.38(m,8H).MS m/z:516.3[M+1]+.
ＳＦＣ：カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−３（１００ｍｍ×４．６ｍｍ、３μｍ）；移動相：Ｂ：イソプロパノール［０．０５％ジエチルアミン］；Ｂ％：５％〜４０％４．５ｍｉｎ、４０％２．５ｍｉｎ、５％１ｍｉｎ；Ｒｔ＝４．１９８ｍｉｎ；１００．０％ｄｅ．
【００６９】
実施例２．式（Ｉ）化合物の結晶形Ａの製造
【化１１】
2021534143.tif 000018
【００７０】
ステップ１：化合物１−１及び１−２の製造
ｎ−ヘプタン（８．０Ｌ）を５０Ｌの反応釜に加え、撹拌を開始し、出発原料１−０（１．０ｋｇ）、ブロモシクロペンタン（３．４ｋｇ）、硫酸マグネシウム（１．０ｋｇ）、酸化銀（２．０ｋｇ）を反応釜に順次加え、反応液を２０〜３０℃で約１９時間撹拌し、硫酸マグネシウム（０．３ｋｇ）及び酸化銀（０．７ｋｇ）を補充して、反応液を２０〜３０℃で撹拌しながら約４６時間反応させ続けた。反応液をシリカゲル（１００〜２００メッシュ、２．０ｋｇ）に通し、卓上式吸引濾過漏斗で減圧吸引濾過し、ろ過ケーキを１２．０Ｌジクロロメタンで３回に分けて洗浄し、毎回ジクロロメタン４．０Ｌを加えた。ろ液をロータリーエバポレータに移し、外温３５〜４０℃で減圧濃縮させ、化合物１−１と１−２の混合物を得て、この混合物をさらに精製せずに次のステップの反応に用いた。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.49-7.43(m,2H),7.40-7.29(m,3H),4.95(s,1H),4.04-3.96(m,1H),3.72(s,3H),1.81-1.69(m,6H),1.58-1.46(m,2H)。
【００７１】
ステップ２：化合物１−３の製造
テトラヒドロフラン（５．３Ｌ）を５０Ｌ反応釜に加え、撹拌を開始し、化合物１−１と１−２の混合物（１．３ｋｇ）を加え、水酸化リチウム一水和物（０．３ｋｇ）の水（２．７Ｌ）溶液を加え、反応液を２０〜３０℃で４時間撹拌し続けた。反応液にｎ−ヘプタン（１０．５Ｌ）を加え、１０分間撹拌して、分液し、水相を２Ｍ塩化水素水溶液でｐＨ３〜４に調整し、ジクロロメタン１６．０Ｌで２回抽出し、毎回８．０Ｌとし、合併した有機相を無水硫酸ナトリウム（１．０ｋｇ）で乾燥させ、ろ過して、ろ液を外温３５〜４０℃で減圧濃縮させ、化合物１−３を得た。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.41-7.29(m,5H),4.88(s,1H),4.00-3.94(m,1H),1.74-1.57(m,6H),1.52-1.43(m,2H)。
【００７２】
ステップ３：化合物１−４の製造
ジクロロメタン（１２．０Ｌ）を５０Ｌ反応釜に加え、化合物１−３（１．２ｋｇ）を加えて、撹拌を開始し、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２．０ｇ）を加えて、１．５時間内で塩化オクサリル（１．０４ｋｇ）を滴下し、反応液を２０〜３０℃で１時間撹拌した。反応液を外温３５〜４０℃で減圧濃縮させ、得た粗品を使用に備えた。ジクロロメタン（８．０Ｌ）を５０Ｌ反応釜に加え、窒素ガスを用いて２回置換し、撹拌を開始し、ピラゾール（０．４ｋｇ）及びＮ−メチルモルホリン（０．７ｋｇ）を順次加え、０〜１０℃に降温し、窒素ガスを用いて１回置換し、上記粗品をジクロロメタン（４．０Ｌ）に溶解して溶液を調製し、反応釜に緩やかに滴下し、滴下終了後、窒素ガスを用いて１回置換し、反応液を２０〜３０℃に昇温し、約１６時間撹拌し続けた。反応液を順次、１Ｍ硫酸水溶液１０．０Ｌで２回洗浄し（毎回５．０Ｌ）、飽和重炭酸ナトリウム水溶液１１．０Ｌで２回洗浄し（毎回５．５Ｌ）、水７．０Ｌで１回洗浄し、飽和塩化ナトリウム溶液８．０Ｌで１回洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウム（０．５ｋｇ）で乾燥させてろ過し、ろ液を外温３５〜４０℃で減圧濃縮させて、粗品を得た。粗品をｎ−ヘキサン７．２Ｌに分散させ、反応液を６５〜７５℃に昇温して２時間撹拌し、１５〜２５℃に降温して１６時間撹拌し続けた。ろ過し、ろ過ケーキをｎ−ヘキサンで２回洗浄し（毎回６００．０ｍＬ）、ろ過ケーキを外温２０〜３０℃で５時間減圧乾燥させ、化合物１−４を得た。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.24(d,J=2.8Hz,1H),7.73(s,1H),7.59(d,J=6.8Hz,2H),7.41-7.27(m,3H),6.43(dd,J=1.5,2.8Hz,1H),6.36(s,1H),4.21-3.98(m,1H),1.87-1.67(m,6H),1.57-1.43(m,2H)。
【００７３】
ステップ４：式（Ｉ）化合物の結晶形Ａの製造
Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２．０Ｌ）を５０Ｌ反応釜に加え、撹拌を開始し、化合物Ｄ−１（１２２０．３ｇ）及びテトラメチルグアニジン（４９３．８ｇ）を順次加え、反応液を１５〜２５℃で１時間撹拌し、化合物１−４（１２１１．６ｇ）を反応釜に加え、反応液を１５〜２５℃で１７時間撹拌し続けた。反応液を水１２．０Ｌに投入し、２Ｍ塩酸水溶液でｐＨを３に調整し、酢酸エチル２４．０Ｌで２回抽出し（毎回１２．０Ｌ）、合併した有機相を水１２．０Ｌで３回洗浄し（毎回４．０Ｌ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（３．０Ｌ）で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウム（５００．０ｇ）で乾燥させてろ過し、ろ液を３５〜４０℃の条件下で減圧濃縮させて、粗品を得た。アセトン（４．０Ｌ）、水（８．０Ｌ）、及び粗品を５０Ｌ反応釜に順次加え、反応液を３５〜４５℃で２０時間撹拌し、ろ過し、ろ過ケーキを水８．０Ｌで２回洗浄し（毎回４．０Ｌ）、４０℃の条件下で真空乾燥箱によりろ過ケーキを２１時間乾燥させ、式（Ｉ）化合物の結晶形Ａを得た。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.68(brs,1H),7.48-7.30(m,10H),6.95-6.70(m,2H),5.38-5.21(m,1.5H),4.96-4.69(m,3.5H),4.42-4.32(m,1H),4.10-3.95(m,1H),3.80(s,3H),3.39-3.36(m,0.5H),3.24-3.19(m,0.5H),2.88-2.70(m,0.5H),2.48-2.42(m,0.5H),1.73-1.48(m,8H)。LCMS(ESI)m/z:516.0[M+1]+。
【００７４】
実施例３：式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂの製造
式（Ｉ）化合物の結晶形Ａ約５０ｍｇを適量のメタノールに加えた。サンプル液を磁気撹拌機（４０℃）にて２日間撹拌して遠心分離し、沈殿を得て、室温で溶液から溶剤を揮発させて結晶化させた。その後、真空乾燥箱に入れて室温で一晩乾燥させ、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂを得た。
【００７５】
式（Ｉ）化合物の結晶形Ａ約５０ｍｇを適量のエタノールに加えた。サンプル液を磁気撹拌機（４０℃）にて２日間撹拌して遠心分離し、沈殿を得て、室温で溶液から溶剤を揮発させて結晶化させた。その後、真空乾燥箱に入れて室温で一晩乾燥させ、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂを得た。
【００７６】
式（Ｉ）化合物の結晶形Ａ約５０ｍｇを適量のアセトニトリルに加えた。サンプル液を磁気撹拌機（４０℃）にて２日間撹拌して遠心分離し、沈殿を得て、室温で溶液から溶剤を揮発させて結晶化させた。その後、真空乾燥箱に入れて室温で一晩乾燥させ、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂを得た。
【００７７】
式（Ｉ）化合物の結晶形Ａ約５０ｍｇを適量の混合溶剤としてのアセトン：水（３：２）に加えた。サンプル液を磁気撹拌機（４０℃）にて２日間撹拌して遠心分離し、沈殿を得て、室温で溶液から溶剤を揮発させて結晶化させた。その後、真空乾燥箱に入れて室温で一晩乾燥させ、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂを得た。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.68(brs,1H),7.48-7.30(m,10H),6.95-6.70(m,2H),5.38-5.21(m,1.5H),4.96-4.69(m,3.5H),4.42-4.32(m,1H),4.10-3.95(m,1H),3.80(s,3H),3.39-3.36(m,0.5H),3.24-3.19(m,0.5H),2.88-2.70(m,0.5H),2.48-2.42(m,0.5H),1.73-1.48(m,8H)。
LCMS(ESI)m/z:516.0[M+1]+。
【００７８】
実施例４：式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂの吸湿性の研究
実験材料：
ＳＭＳ  ＤＶＳ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ動的蒸気収着装置
実験方法：
式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂ  １０〜１５ｍｇをＤＶＳサンプルトレイに入れてテストした。
実験結果：
式（Ｉ）化合物の結晶形ＢのＤＶＳパターンを図に示し、△Ｗ＝０．０５３２７％であった。
実験結論：
式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂは、２５℃、８０％ＲＨで、吸湿による重量増加が０．０５３２７％であり、実質的には吸湿性無しであった。
【００７９】
実施例５：式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂの固体安定性試験
『原薬及び製剤安定性試験の指導原則』（中国薬局方２０１５版四部通則９００１）に準じて、高温（６０℃、開放）、高湿（室温／相対湿度９２．５％、開放）及び光照射（総照度１．２×１０6Ｌｕｘ・ｈｒ／近紫外線２００ｗ・ｈｒ／ｍ2、開放）条件での式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂの安定性を調べた。
【００８０】
影響要素及び加速試験条件に従って、化合物の結晶形Ｂ約５ｍｇを正確に秤量したものをそれぞれの条件に対して２つ準備し、それぞれを４０ｍＬガラスサンプル瓶の底部に入れて、薄い層とした。高温（６０℃）、高湿（９２．５％湿度、室温）、高温高湿（４０℃／７５％湿度、６０℃／７５％湿度）、及び光照射が安定的である条件にそれぞれ放置した。アルミホイルに孔を開けて開放条件とし、サンプルが環境における空気と十分に接触できるようにし、強い光照射の条件下で放置したサンプルをスクリューキャップで密封した。高温（６０℃）、及び高湿（９２．５％湿度、室温）の条件下で放置したサンプルについて５日目、１０日目にサンプリングして検出し（ＸＲＰＤ及び純度）、高温高湿（４０℃／７５％湿度、６０℃／７５％湿度）条件下で放置したサンプルについて１０日目、１ヵ月目、２ヵ月目、３ヵ月目にサンプリングして検出し（ＸＲＰＤ及び純度）、光照射条件下で放置したサンプルについて総照度が１．２×１０6Ｌｕｘ・ｈｒに達するときにサンプリングして検出し、検出結果を０日目の初期検出結果と比較し、試験結果を下記表３に示した。
【００８１】
【表３】
2021534143.tif 000019
【００８２】
結論：式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂは、影響要素である高温、高湿、強い光照射条件、及び加速条件のいずれでも、良好な結晶形及び化学安定性を有した。
【００８３】
実施例６：式（Ｉ）化合物のｈＡＴ２受容体結合実験
試薬：
溶液及び緩衝液
緩衝液
５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ
１００ｍＭ  ＮａＣｌ
５ｍＭ  ＭｇＣｌ2
０．１％ＢＳＡ
プロテアーゼ阻害剤混合物、エチレンジアミン四酢酸不含−１錠（Ｒｏｃｈｅ＃１１８７３５８０００１）（５０ｍＬの場合、１錠追加）
ｐＨ  ７．４
【００８４】
実験方法及びステップ：
１．化合物の調製
リガンドＰＤ１２３３１９及びテスト化合物を参照して、ＤＭＳＯを用いて７５０μＭの母液を調製し、化合物ごとに８個の濃度勾配（最高濃度７５０ｕＭ、３倍希釈）に調製し、１０ｕｌ／ウェルで３８４ウェルプレートのマザープレートに加えた。
ＳＰＡ  ｂｅａｄｓを緩衝液で２５ｍｇ／ｍｌの母液とし、
同位体［125Ｉ］−Ｓａｒ１−Ｉｌｅ８−Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  IIに純水を加えて５０ｕＣｉ／ｍｌの母液を調製した。
２．膜の製造
ＨＥＫ−２９３細胞のｈＡＴ２を過剰発現させた細胞膜を緩衝液で２．５ｍｇ／ｍｌとした。
３．具体的な操作
ＥＣＨＯを用いてマザープレートから化合物２００ｎｌをテスト用３８４プレートの各ウェルに吸い取った。ＺＰＥに等体積のＤＭＳＯを加えた。（テスト化合物の反応中の濃度について２５０倍希釈した）。
１０μｇ／μｌの磁気ビーズ、０．０５μｇ／μｌのＡＴ２膜を含有する溶液を５０ｍｌ調製し、シェーカーにて均一に混合した（１００ｒｐｍ、３０ｍｉｎ）。テストプレートには、最終的に１．２５μｇ／ウェルのｈＡＴ２膜、２５０μｇ／ウェルの磁気ビーズが含まれている。
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉピペットを用いて、１ウェルあたり２５μｌで３．２の膜混合液を化合物のテストプレートに加えた。
５０ｕＣｉ／ｍｌの同位体［125Ｉ］−Ｓａｒ１−Ｉｌｅ８−Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  II母液を用いて緩衝液で０．２ｎＭの溶液とし、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉピペットを用いて０．２ｎＭの１２５Ｉを、体積で１ウェルあたり２５μｌで化合物テストプレートに加えた。125Ｉ同位体の最終濃度を０．１ｎＭとした。
製造されたテストプレートをシェーカーに置き、２００ｒｐｍで、室温下一晩放置した。
遠心分離機を用いて１２００ｒｐｍでテストプレートを１ｍｉｎ遠心分離した。
遠心分離後のテストプレートについてＭｉｃｒｏｂｅｔａにより読み取った。
実験結果は表４に示される。
【００８５】
【表４】
2021534143.tif 000020
【００８６】
結論：結果から明らかなように、式（Ｉ）化合物は、ＥＭＡ−４０１に比べて、良好なインビトロ活性を有した。
【００８７】
実施例６：式（Ｉ）化合物の動力学的溶解度の測定
測定対象化合物をＤＭＳＯに溶解して、１０ｍｍｏｌ／Ｌの原液を調製した。ピペット（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ社）を用いて溶出媒体９８０μＬを２ｍＬのスクリューキャップ付きガラス管形瓶に加えた。各試験化合物の原液２０μＬ及びＱＣサンプルをｐＨ  ７．４の動力学的検出溶液に相当する緩衝溶液に加えた。試験化合物及びＤＭＳＯ溶液のそれぞれの最終濃度は２００μＭ及び２％であった。薬瓶にキャップを付けた。最大濃度の理論値は２００μＭであった。室温下、１分間あたり８８０回転の速度でこの混合物を２４時間回転して振とうさせた。バイアルを１分間あたり１３０００回転で３０分間遠心分離した。デジタルピペットを用いて上澄み液２００μＬを９６ウェルプレートに加えた。高速液体クロマトグラフィーのスペクトルにより測定された試験化合物の溶解度、実験結果を表５に示した。
【００８８】
【表５】
2021534143.tif 000021
【００８９】
結論：結果から明らかなように、式（Ｉ）化合物は、良好な溶解度を有した（ｐＨ＝７．４）。
【００９０】
実施例７：式（Ｉ）化合物のヒト肝ミクロソームＣＹＰ阻害実験
研究項目として、各アイソザイムの特異的プローブ基質を用いて、ヒト肝ミクロソームチトクロームＰ４５０アイソザイム（ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、及びＣＹＰ３Ａ４）に対する測定対象化合物の阻害性を評価した。
【００９１】
混合ヒト肝ミクロソーム（ｐｏｏｌｅｄ  ＨＬＭ、ｎ≧５０）は、Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．（Ｓｔｅｕｂｅｎ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＵＳＡ）または他のその他の資格のあるサプライヤーから購入され、使用までに−６０℃以下の冷蔵庫に保存した。
希釈済みの一連の濃度の測定対象化合物の作動液を、ヒト肝ミクロソーム、プローブ基質、及び循環系の補因子を含有するインキュベート系に加え、メタノールの含有量を最終的なインキュベート系の約１％（ｖ／ｖ）とした。測定対象化合物を含有せず溶剤を含有する対照を酵素活性対照（１００％）とした。サンプル中の分析物の濃度は、液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）方法によって測定する。サンプル（空白溶剤、陽性対照阻害剤または測定対象化合物）濃度の平均値を用いて計算した。ＳｉｇｍａＰｌｏｔ（Ｖ．１１）を用いて測定対象化合物の平均百分率で示される活性を用いて、濃度について非線形回帰分析を行った。３パラメータまたは４パラメータ逆対数方程式を用いてＩＣ50値を計算した。実験結果を表６に示した。
【００９２】
【表６】
2021534143.tif 000022
【００９３】
結論：式（Ｉ）化合物は、５つのＣＹＰアイソザイムに対して阻害作用がない、または阻害作用がすべて低く、このことから、人体内で薬物−薬物相互作用が発生する可能性が低いことを示している。
【００９４】
実施例８：式（Ｉ）化合物のＣＡＣＯ−２細胞での双方向透過性の研究
測定対象化合物のＣａｃｏ−２細胞での双方向透過性を測定し、そして測定対象化合物が外部へ排出されて輸送されるか否かをテストした。
実験方法：
ストック液の調製
化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）または他の適切な溶剤に溶解し、適切な濃度のストック液を調製した。
適切な内部標準（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｓｔａｎｄａｒｄ、ＩＳ）をアセトニトリル（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ、ＡＣＮ）または他の適切な有機溶剤に溶解して停止液とし、具体的な情報は研究レポートに記載されている。
ナドロール（ｎａｄｏｌｏｌ）、メトプロロール（ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ）、ジゴキシン（ｄｉｇｏｘｉｎ）、３−（ポタシオスルホオキシ）エストラ−１,３,５（１０）−トリエン−１７−オン（ｅｓｔｒｏｎｅ３−ｓｕｌｆａｔｅ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ、Ｅ３Ｓ）、及びＧＦ１２０９１８は、本研究においてそれぞれ低張性対照化合物、高張性対照化合物、Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）基質、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）基質、及び排出トランスポーター阻害剤とした。これらの化合物のストック液はＤＭＳＯを用いて調製され、≦−３０℃に保存し、６ヵ月内で使用する。
投与液及び受容液の調製
本研究では、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］−エタンスルホン酸）を含有するＨＢＳＳ（Ｈａｎｋｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を輸送緩衝液（ｐＨ７．４０±０．０５）とした。投与液及び受容液の調製方法を下記表７に示した。
【００９５】
【表７】
2021534143.tif 000023
【００９６】
細胞培養
３７±１℃、５％ＣＯ2、及び飽和湿度の培養条件で、Ｃａｃｏ−２細胞をＭＥＭ培地（Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉａ）で培養した。次に、１×１０5細胞／ｃｍ2の接種密度で細胞をＣｏｒｎｉｎｇ  Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ−９６ウェルプレートに接種し、次に、細胞を二酸化炭素インキュベータに入れて２１〜２８日間培養した後、輸送実験に用い、この間、４〜５日間おきに培地を１回交換した。
【００９７】
輸送実験
化合物の投与濃度を２、１０、及び１００μＭとし、１０μＭ  ＧＦ１２０９１８含有または不含の条件下で双方向に（Ａ−Ｂ及びＢ−Ａ方向）投与し、投与濃度ごとに３つの平行試験を行った。Ｄｉｇｏｘｉｎ及びＥ３Ｓは、テスト濃度をそれぞれ１０、及び５μＭとし、１０μＭ  ＧＦ１２０９１８含有または不含の条件で双方向に投与し、ｎａｄｏｌｏｌ及びｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌは、いずれのテスト濃度も２μＭであり、１０μＭ  ＧＦ１２０９１８不含の条件下で一方向（Ａ−Ｂ方向）に投与し、３つの対照化合物についても３つの平行試験を行った。
【００９８】
投与液、受容液、及び輸送緩衝液を、３７℃で３０分間プレインキュベートした。細胞層を輸送緩衝液で２回濡らして洗浄した。投与液と受容液をそれぞれ対応する細胞プレートのウェル（各頂端及び底端のウェルのそれぞれに７５及び２５０μＬを注入した）に加えた。注入後、細胞プレートを３７±１℃、５％ＣＯ2、及び飽和湿度のインキュベータに入れて１２０分間インキュベートした。
サンプル収集情報を下記表８に示した。
【００９９】
【表８】
2021534143.tif 000024
【０１００】
すべての化合物をボルテックス振とうした後、３２２０×ｇ、２０℃で２０分間遠心分離し、適切な体積の上澄み液をサンプル分析プレートに移し、化合物はプレートをシールした直後に分析しない場合、２〜８℃に保存した。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法によって分析を行い、化合物の具体的な処理方法については研究レポートに記載した。
【０１０１】
細胞膜の完全性テスト
Ｃａｃｏ−２細胞の完全性はルシファーイエロー検出実験（Ｌｕｃｉｆｅｒ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ）を用いてテストした。細胞プレートごとに６個の細胞ウェルをランダムに選択し、それぞれ１００μＭルシファーイエローを加え、ルシファーイエロー検出実験を輸送実験と同時に行った。１２０分間インキュベート後、ルシファーイエローサンプルを取り、４２５／５２８ｎｍ（励起／放射）スペクトルでサンプル中のルシファーイエローの相対蛍光強度（ｔｈｅ  ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｕｎｉｔ、ＲＦＵ）を検出した。
【０１０２】
サンプル分析
サンプル中の測定対象化合物、対照化合物ｎａｄｏｌｏｌ、ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ、ｄｉｇｏｘｉｎ及びＥ３Ｓの濃度はすべて液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）方法によって測定した。分析物及び内部標準の保留時間、クロマトグラムの収集、及びクロマトグラムの積分は、ソフトウェアＡｎａｌｙｓｔ（ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ、ＵＳＡ）で処理され、実験結果は表９に示された。
【０１０３】
【表９】
2021534143.tif 000025
【０１０４】
結論：テスト結果から明らかなように、ＥＭＡ−４０１に比べて、式（Ｉ）化合物の透過性がある程度改善し、それは化合物の吸収に有利であった。
【図１】
2021534143.tif 000031
【図２】
2021534143.tif 000032
【図３】
2021534143.tif 000033
【図４】
2021534143.tif 000034
【図５】
2021534143.tif 000035
【図６】
2021534143.tif 000036
【図７】
2021534143.tif 000037
【手続補正書】
【提出日】令和3年2月10日(2021.2.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が３．５２±０．２０°、６．０４±０．２０°、１８．２１±０．２０°に特徴的な回折ピークを有する、ことを特徴とする式（Ｉ）化合物の結晶形Ａ。
【化１】
2021534143.tif 000038
【請求項２】
Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が３．５２±０．２０°、６．０４±０．２０°、１４．４０±０．２０°、１５．１１±０．２０°、１８．２１±０．２０°、１８．４６±０．２０°、２０．１２±０．２０°、２４．１３±０．２０°に特徴的な回折ピークを有し、好ましくは、ＸＲＰＤパターンが図１に示される、請求項１に記載の結晶形Ａ。
【請求項３】
示差走査熱量測定曲線において１５５．３６℃±３℃に吸熱ピークの開始点を有し、好ましくは、ＤＳＣパターンが図２に示される、請求項１または２に記載の結晶形Ａ。
【請求項４】
熱重量分析曲線において、１００．００℃±３℃に０．１４８９％の重量損失に達し、好ましくは、ＴＧＡパターンが図３に示される、請求項１または２に記載の結晶形Ａ。
【請求項５】
式（Ｉ）化合物を混合溶剤に加えて溶解するステップ（ａ）と、
３０〜５０℃で１０〜３０時間撹拌するステップ（ｂ）と、
ろ過後、３０〜５０℃でろ過ケーキを１５〜２５時間乾燥させるステップ（ｃ）と、を含み、
前記混合溶剤は、アセトンと水の体積比が１：１．５〜２．５である、式（Ｉ）化合物の結晶形Ａの調製方法。
【請求項６】
Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ角が６．０８±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１８．１９±０．２０°に特徴的な回折ピークを有し、好ましくは、２θ角が６．０８±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１８．１９±０．２０°、２４．３１±０．２０°、３０．５０±０．２０°に特徴的な回折ピークを有し、好ましくは、２θ角が３．５２±０．２０°、６．０８±０．２０°、９．２５±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１４．００±０．２０°、１８．１９±０．２０°、２４．３１±０．２０°、３０．５０±０．２０°に特徴的な回折ピークを有し、好ましくは、ＸＲＰＤパターンが図４に示される、ことを特徴とする式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂ。
【請求項７】
示差走査熱量測定曲線において、１５０．９５℃±３℃に吸熱ピークの開始点を有し、好ましくは、ＤＳＣパターンが図５に示される、請求項６に記載の結晶形Ｂ。
【請求項８】
熱重量分析曲線において、１２０．００℃±３℃に０．０５５８％の重量損失に達し、好ましくは、ＴＧＡパターンが図６に示される、請求項６に記載の結晶形Ｂ。
【請求項９】
式（Ｉ）化合物を溶剤に加えて、懸濁液を形成するステップ（ａ）と、
懸濁液を３５〜４５℃で３０〜６０時間撹拌するステップ（ｂ）と、
遠心分離後、ろ過ケーキを８〜１６時間乾燥させるステップ（ｃ）と、を含み、
前記溶剤は、メタノール、エタノール、アセトニトリルから選ばれるものであり、または、アセトンと水との体積比が３：２の混合溶剤である、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂの調製方法。
【請求項１０】
慢性疼痛治療薬の調製における請求項１〜４のいずれか１項に記載の結晶形Ａまたは請求項６〜８のいずれか１項に記載の結晶形Ｂの使用。
【請求項１１】
以下のステップを含む、式（Ｉ）化合物の調製方法。
【化２】
2021534143.tif 000039
（ここで、Ｒ1は、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから選ばれ、溶剤Ｆは、ｎ−ヘプタン、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、シクロヘキサン、及びジオキサンから選ばれ、試薬Ｇは酸化銀、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウム、及び硫酸ナトリウムから選ばれる。）
【化３】
2021534143.tif 000040
【請求項１２】
以下のステップを含む、請求項１１に記載の調製方法。
【化４】
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（ここで、溶剤Ｈは、テトラヒドロフラン、メタノール、及び水から選ばれ、試薬Ｉは、水酸化リチウム一水和物及び水酸化ナトリウムから選ばれ、溶剤Ｊはジクロロメタンから選ばれ、触媒ＫはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドから選ばれ、試薬Ｌは塩化オクサリルから選ばれ、溶剤Ｍはジクロロメタンから選ばれ、試薬Ｎはピラゾールから選ばれ、試薬ＯはＮ−メチルモルホリンから選ばれ、溶剤ＰはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、及びテトラヒドロフランから選ばれ、試薬Ｑはテトラメチルグアニジン、１,８−ジアザビシクロウンデク−７−エン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、及び２,６−ジメチルピリジンから選ばれる。）
【請求項１３】
化合物１Ｅと化合物１−０とのモル比は１．２〜５：１であり、或いは、化合物１−４と化合物Ｄ１−１とのモル比は、１．１〜１．５：１であり、或いは、化合物１−１、１−２、及び１−３を調製するステップでは、反応系の温度範囲が２５±５℃に制御され、或いは、化合物１−４の調製には、ステップａとステップｂを含み、ステップａでは、反応系の温度範囲が２５±５℃に制御され、ステップｂでは、反応系に材料を投入する際に、反応系の温度範囲が５±５℃に制御され、試薬投入の終了後、反応系の温度範囲が２５±５℃に制御され、或いは、溶剤Ｆはｎ−ヘプタンから選ばれ、前記ｎ−ヘプタンの体積と化合物１−０の質量との比が８．０〜１０．０：１であり、試薬Ｇは、酸化銀、硫酸マグネシウムから選ばれ、前記酸化銀、硫酸マグネシウムと化合物１−０とのモル比が１．０〜５．０：１である、請求項１２に記載の調製方法。
【請求項１４】
試薬Ｇは投入過程においてバッチで投入される、請求項１１または１２に記載の調製方法。
【請求項１５】
溶剤Ｈは、テトラヒドロフランと水から選ばれる混合物であり、前記テトラヒドロフランと水の体積比が１〜２：１であり、試薬Ｉは水酸化リチウム一水和物であり、前記水酸化リチウム一水和物と化合物１−０とのモル比が１．０〜２．０：１であり、溶剤Ｊと化合物１−３との質量比は１０：１であり、触媒Ｋと化合物１−３とのモル比は０．００２〜０．００４：１であり、試薬Ｌと化合物１−３とのモル比は１．２〜２．０：１であり、溶剤Ｍと化合物１−３との質量比は６〜１０：１であり、試薬Ｎと化合物１−３とのモル比は１．０〜１．５：１であり、試薬Ｏと化合物１−３とのモル比は１．０〜１．５：１であり、溶剤ＰはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドから選ばれ、前記Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドから選ばれる溶剤Ｐと化合物１−４との質量比が１０：１であり、試薬Ｑはテトラメチルグアニジンから選ばれ、前記テトラメチルグアニジンから選ばれる試薬Ｑと化合物１−４とのモル比が１〜１．２：１である、請求項１２に記載の調製方法。
【国際調査報告】
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