(57)【要約】本発明は、ベラグルセラーゼアルファなどのグルコセレブロシダーゼとイソファゴミンの、少なくとも約１：２．５のモル比率での組成物を提供する。ＧＣａｓｅ経路での機能障害に関する疾患を治療するための組成物の使用もまた、提供する。疾患はリソソーム蓄積症、例えばゴーシェ病、ファブリ病、ポンペ病、ムコ多糖体症、または多系統萎縮症であることができる。疾患は神経変性疾患、例えばパーキンソン病、アルツハイマー病、またはレヴィー小体型認知症でもあることができる。組成物は、０．５〜５．０ｍｇ／ｋｇのグルコセレブロシダーゼ、及び、グルコセレブロシダーゼに対して少なくとも約３倍モル過剰のイソファゴミンを有することができる。組成物は静脈内投与または皮下投与することができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）とイソファゴミン（ＩＦＧ）を、少なくとも約１：２．５のモル比で含む、組成物。
【請求項２】
前記ＧＣＢがベラグルセラーゼアルファである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物のｐＨが約６．０、約６．５、または約７．０である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＩＦＧに対する前記ＧＣＢの前記モル比が、約１：２．５〜約１：３０である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＩＦＧに対する前記ＧＣＢの前記モル比が、約１：２．５〜約１：１０である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ＩＦＧに対する前記ＧＣＢの前記モル比が、約１：１０〜約１：３０である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＩＦＧに対する前記ＧＣＢの前記モル比が、約１：２．５〜約１：３．５である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＩＦＧに対する前記ＧＣＢの前記モル比が、約１：３．０である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記ＩＦＧに対する前記ＧＣＢの前記モル比が、１：３．０である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が少なくとも２０℃の温度である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が０℃〜２０℃の温度である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物が０℃未満の温度である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が水溶液である、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が凍結乾燥物である、請求項１〜９、及び１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
製薬上許容できる賦形剤、製薬上許容できる塩、または製薬上許容できる賦形剤及び製薬上許容できる塩の両方を更に含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＩＦＧが酒石酸イソファゴミンである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記酒石酸イソファゴミンがＤ−酒石酸イソファゴミンである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物が液体である、請求項１〜１３、及び１５〜１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
酸化防止剤を更に含む、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
炭水化物を更に含む、請求項１〜１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
界面活性剤を更に含む、請求項１〜２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物が、４５〜１２０ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、及び０．２〜１．８ｍｇ／ｍＬのイソファゴミンを含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記組成物が６０ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、及び０．９ｍｇ／ｍＬのイソファゴミンを含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記組成物が、５０ｍＭのクエン酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウム、及び０．０１％のポリソルベート２０を更に含む、請求項２２または２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物が５〜２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び０．０１％のポリソルベート−２０を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物が１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び０．０１％のポリソルベート−２０を含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物が５〜２０ｍＭのリン酸ナトリウム、及び０．０１％のポリソルベート−２０を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物が１０ｍＭのリン酸ナトリウム、及び０．０１％のポリソルベート−２０を含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記組成物が約ｐＨ６．０である、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物がｐＨ６．０である、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
請求項１〜３０のいずれか一項に記載の組成物を含む容器。
【請求項３２】
前記容器が、予充填シリンジ、バイアル瓶、またはアンプルからなる群から選択される、請求項３１に記載の容器。
【請求項３３】
前記ＩＦＧを水に溶解させることと、ｐＨを約６．０に調節することと、前記ＧＣＢを添加して前記組成物を得ることと、を含む、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の組成物の調製方法。
【請求項３４】
ＧＣＢを添加する前に前記ＩＦＧを凍結乾燥させることを更に含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ポリソルベート２０を０．０１％まで添加することを更に含む、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記組成物を、０．２２μｍの膜に通して濾過することを更に含む、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＩＦＧが、前記組成物中での前記ＧＣＢの安定性を維持するのに十分な量で存在する、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＩＦＧが、少なくとも３日間、０〜５０℃にて、前記組成物中で前記ＧＣＢの安定性を維持するのに十分な量で存在する、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＩＦＧが、少なくとも６ヶ月間、０〜４０℃にて、前記組成物中で前記ＧＣＢの安定性を維持するのに十分な量で存在する、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
治療法で使用するための、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
ＧＣａｓｅ経路での機能障害に関する疾患の治療方法であって、それを必要とする患者に、請求項１〜１１、１３、及び１５〜３０のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項４２】
前記方法が、前記疾患を治療するのに効果的である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記組成物が静脈内投与または皮下投与される、請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記組成物が皮下投与される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記皮下投与が皮下注射である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記組成物が１週間に２回投与される、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記組成物が１週間に１回投与される、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記組成物が１週間に１回よりも少ない頻度で投与される、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記組成物が隔週に１回投与される、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記疾患がＧＣａｓｅ活性の欠損を含む、請求項４１〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＧＣａｓｅ活性の欠損は酵素活性の低下を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記疾患がα−シヌクレイン調節異常を含む、請求項４１〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記疾患がリソソーム蓄積症である、請求項４１〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記リソソーム蓄積症がゴーシェ病、ファブリ病、ポンペ病、ムコ多糖体症、及び多系統萎縮症から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記疾患が神経変性疾患である、請求項４１〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記神経変性疾患がパーキンソン病、アルツハイマー病、及びレヴィー小体型認知症から選択される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
ＧＣａｓｅ経路での機能障害の治療方法であって、それを必要とする対象に、請求項１〜１１、１３、及び１５〜３０のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項５８】
前記対象がヒトである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
０．５〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢと、前記ＧＣＢに対して少なくとも約３倍モル過剰であるＩＦＧと、を含む組成物を対象に投与することを含む、ＧＣａｓｅ経路での機能障害の治療方法であって、前記組成物が皮下投与される、前記方法。
【請求項６０】
前記組成物が０．８〜４．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記組成物が１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記組成物が１．２〜２．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記組成物が約１．５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
前記組成物が１．５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６５】
前記組成物が２．０〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６６】
前記組成物が２．２５〜４．５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６７】
前記組成物が２．２５〜３．７５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６８】
前記組成物が３．５〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＩＦＧが、前記ＧＣＢに対して３〜１０倍モル過剰で存在する、請求項６０〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記ＩＦＧが、前記ＧＣＢに対して１０〜３０倍モル過剰で存在する、請求項６０〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記ＩＦＧが、前記ＧＣＢに対して３０〜１００倍モル過剰で存在する、請求項６０〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記ＩＦＧが、前記ＧＣＢに対して３倍モル過剰で存在する、請求項６０〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
脾臓における前記ＧＣＢの曝露、活性、または生物学的利用能が増加する、請求項４１〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
肝臓における前記ＧＣＢの曝露、活性、または生物学的利用能が増加する、請求項４１〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
血清における前記ＧＣＢの曝露、活性、または生物学的利用能が増加する、請求項４１〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
請求項４１〜７５のいずれか一項に記載の方法で使用するための、請求項１〜１１、１３、及び１５〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７７】
請求項４１〜７６のいずれか一項に記載の方法のための薬剤の製造における、請求項１〜１１、１３、及び１５〜３０のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１７年１０月２６日に出願された米国特許仮出願第６２／５７７，４２９号に対する優先権を主張し、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【背景技術】
【０００２】
グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）は、（ＧＣＢ）の欠乏を特徴とする常染色体劣性リソソーム蓄積症であるゴーシェ病を治療するために使用可能な、タンパク質薬剤である。
【０００３】
ゴーシェ病は、ＧＢＡ遺伝子での変異により引き起こされる常染色体劣性疾患であり、リソソーム酵素のβ−グルコセレブロシダーゼの欠乏をもたらす。グルコセレブロシダーゼは、スフィンゴ脂質グルコセレブロシドの、グルコース及びセラミドへの転換を触媒する。酵素の欠乏は主にマクロファージのリソソーム区画における、グルコセレブロシドの蓄積を引き起こし、泡沫細胞または「ゴーシェ細胞」が生じる。ゴーシェ病では、１つまたは複数の変異アミノ酸に応じて、様々な形態の変異ＧＣａｓｅのグルコシルセラミド開裂活性は少ない、ほとんどない、または全くない。この疾患の重症度は、残った酵素活性の相対的なレベル、及び、得られた基質の蓄積度合いと相関している。
【０００４】
ＧＣＢは、白血球細胞及び赤血球細胞の膜内での、グリコスフィンゴリピドの分解後に形成される糖脂質グルコセレブロシドを加水分解するリソソーム酵素である。この酵素が欠乏していると、グルコセレブロシドが、ゴーシェ患者の肝臓、脾臓、及び骨髄に位置する食細胞のリソソームに、多量に蓄積する。これらの分子が蓄積することにより、脾腫、肝腫大、骨格疾患、血小板減少症、及び貧血を含む、様々な臨床症状が引き起こされる。（非特許文献１）
【０００５】
ベラグルセラーゼアルファは、ゴーシェ病を治療するために使用されるＧＣＢの一形態である。ＶＰＲＩＶは、ベラグルセラーゼアルファを含有する製剤である。ベラグルセラーゼアルファはグルコセレブロシドの加水分解を触媒し、蓄積するグルコセレブロシドの量を減少させる。臨床試験において、ＶＰＲＩＶは脾臓及び肝臓のサイズを減少させ、貧血及び血小板減少症を改善した。
【０００６】
ＶＰＲＩＶ及びベラグルセラーゼアルファ、ならびに、タンパク質を含有する他の類似の薬剤製品は、液体または凍結乾燥（即ちフリーズドライ）形態で保存される。凍結乾燥した薬剤製品は多くの場合、患者への使用の直前に、好適な投与希釈剤を添加することにより元に戻される。変性及び凝集を含む物理的不安定性、ならびに、例えば、加水分解、アミド分解、及び酸化を含む、化学的不安定性の結果として、液体または凍結乾燥形態での、ベラグルセラーゼアルファまたはＧＣＢの量の減少が起こる可能性がある。
【０００７】
ＧＣＢ、ＶＰＲＩＶ、またはベラグルセラーゼアルファの安定性が改善された、改善製剤、特に、皮下（ＳＣ）投与に好適な製剤が必要とされている。ＧＣＢは、２４時間にわたり、室温にて３０ｍｇ／ｍＬ未満の溶解限度を有する。ＳＣ注射製品の好都合な体積は、典型的には２．５ｍＬ以下である。このことは、治療に十分な用量を投与するために、十分に高いレベルに濃縮可能な製剤を有することが必要とされる。更に、製剤は理想的には、室温で、または冷蔵条件下にて、適切な保存安定性を有する。
【０００８】
ＧＣＢ、ＶＰＲＩＶ、またはベラグルセラーゼアルファの生物学的利用能が改善したＳＣ投与のための製剤もまた、必要とされている。静脈内（ＩＶ）投与される現在のＶＰＲＩＶ製剤は、約１％の血清生物学的利用能をもたらしている。皮下（ＳＣ）投与は、ＩＶ投与の組織曝露と同等の組織曝露を提供する可能性は低い。ＧＣＢは、ＩＶ投与薬剤として、１５分未満の血清半減期を有する。血清安定性が改善することにより、ＳＣ投与されたＧＣＢがより、ＳＣ区画から分散し、体循環内に入ることが可能となる。向上した血清安定性により、高循環ＧＣＢ濃度の維持もまた可能になり、これにより、ＧＣＢが単球、マクロファージ、及び組織常在型組織球により一層取り込まれることが可能になる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｂｅｕｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．“Ｇａｕｃｈｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ”Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｉｎｃ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９５，ｐｐ．２６２５−２６３９。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
一態様では、グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）とイソファゴミン（ＩＦＧ）とを、１：１、または少なくとも、約１：＞１（例えば、１：ｘ（ｘは１より大きい））のモル比で含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ＧＣＢはベラグルセラーゼアルファである。ベラグルセラーゼアルファは、ヒト細胞株で産生された、天然ヒトＧＣＢと同じアミノ酸配列を有する、組み換え産生酵素であり、特に、本発明を実施するのに好適なＧＣＢの形態である。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは約６．０である。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは約６．５である。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは約７．０である。いくつかの実施形態では、ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比は、約１：１〜約１：３０である。いくつかの実施形態では、ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比は、約１：１〜約１：１０である。いくつかの実施形態では、ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比は、約１：１〜約１：５である。いくつかの実施形態では、ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比は、約１：２〜約１：１０である。いくつかの実施形態では、ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比は、約１：２．５〜約１：１０である。いくつかの実施形態では、ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比は、約１：２．５〜約１：５である。いくつかの実施形態では、ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比は、約１：１０〜約１：３０である。いくつかの実施形態では、ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比は、約１：３０〜約１：１００である。いくつかの実施形態では、ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比は、約１：２．５〜約１：３．５である。いくつかの実施形態では、ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比は、約１：３．０である。いくつかの実施形態では、ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比は１：３．０であり、これは本発明を実施するのに特に好適である。
【００１１】
いくつかの実施形態では、組成物は少なくとも２０℃の温度である。いくつかの実施形態では、組成物は０℃〜２０℃の温度である。いくつかの実施形態では、組成物は０℃未満の温度である。いくつかの実施形態では、組成物は水溶液である。いくつかの実施形態では、組成物は凍結乾燥物である。
【００１２】
いくつかの実施形態では、組成物は、製薬上許容できる賦形剤、製薬上許容できる塩、または製薬上許容できる賦形剤及び製薬上許容できる塩の両方を更に含む。
【００１３】
いくつかの実施形態では、ＩＦＧは酒石酸イソファゴミン（ＩＦＧＴ）である。いくつかの実施形態では、酒石酸イソファゴミンはＤ−酒石酸イソファゴミンである。ＩＦＧＴ、そして特に、Ｄ−酒石酸イソファゴミンは、本発明を実施するためのＩＦＧの特に好適な塩である。酒石酸イソファゴミンは血清中において、通常、２．５ｍｇ／ｋｇの皮下投与量で達成される上限値を超えて、ＧＣＢ活性を有利に増加させることができる。したがって、ＩＦＧＴと同時に製剤化したＧＣＢは、特に、少なくとも１：３．０のＧＣＢ：ＩＦＧＴのモル比の際に、皮下投与を可能にする血清生物学的利用能を提供することができる。ＩＦＧＴ同時製剤化により、ＧＣＢの全体の酵素活性もまた増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＧは酒石酸イソファゴミン以外である。いくつかの実施形態では、組成物は液体である。いくつかの実施形態では、組成物は酸化防止剤を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は炭水化物を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は界面活性剤を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、４５〜１２０ｍｇ／ｍＬのベラグルセラーゼアルファ、及び０．２〜１．８ｍｇ／ｍＬのＤ−酒石酸イソファゴミンを含む。いくつかの実施形態では、組成物は６０ｍｇ／ｍＬのベラグルセラーゼアルファ、及び０．９ｍｇ／ｍＬのＤ−酒石酸イソファゴミンを含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、組成物は、クエン酸塩またはリン酸塩、及びポリソルベート２０（例えば、５０ｍＭのクエン酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウム、及び０．０１％のポリソルベート２０）を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は５〜２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び０．０１％のポリソルベート−２０を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム及び０．０１％のポリソルベート−２０を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、５〜２０ｍＭのリン酸ナトリウム、及び０．０１％のポリソルベート−２０を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、及び０．０１％のポリソルベート−２０を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は５〜２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート−２０を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム及び０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート−２０を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、５〜２０ｍＭのリン酸ナトリウム、及び０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート−２０を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、及び０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート−２０を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は５〜２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び０．０１％（ｖ／ｖ）のポリソルベート−２０を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム及び０．０１％（ｖ／ｖ）のポリソルベート−２０を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、５〜２０ｍＭのリン酸ナトリウム、及び０．０１％（ｖ／ｖ）のポリソルベート−２０を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、及び０．０１％（ｖ／ｖ）のポリソルベート−２０を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は約ｐＨ６．０である。いくつかの実施形態では、組成物はｐＨ６．０である。
【００１５】
別の態様では、本明細書で記載した組成物のいずれかを含む容器を提供する。いくつかの実施形態では、容器は予充填シリンジ、バイアル瓶、またはアンプルからなる群から選択される。
【００１６】
別の態様では、本明細書で記載した組成物のいずれかの調製方法を提供する。方法は、ＩＦＧを（例えば水に）溶解させることと、ｐＨを約６．０に調節することと、ＧＣＢを添加して組成物を得ることと、を含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＧＣＢを添加する前にＩＦＧを凍結乾燥させることを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、ポリソルベート２０を０．０１％まで添加することを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、ポリソルベート２０を０．０１％（ｗ／ｖ）まで添加することを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、ポリソルベート２０を０．０１％（ｖ／ｖ）まで添加することを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、０．２２μｍの膜に通して組成物を濾過することを更に含む。いくつかの実施形態では、ＩＦＧは、組成物中でのＧＣＢの安定性を維持するのに十分な量で存在する。いくつかの実施形態では、ＩＦＧは、少なくとも３日間、０〜５０℃にて、組成物中でＧＣＢの安定性を維持するのに十分な量で存在する。いくつかの実施形態では、ＩＦＧは、少なくとも６ヶ月間、０〜４０℃にて、組成物中でＧＣＢの安定性を維持するのに十分な量で存在する。
【００１７】
別の態様では、本明細書で記載した組成物のいずれかを投与することを含む、ＧＣａｓｅ経路での機能障害に関する疾患の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、疾患を治療するのに効果的である。いくつかの実施形態では、組成物は静脈内投与または皮下投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、例えば皮下注射により皮下投与され、これは、本発明を実施するのに特に好適である。いくつかの実施形態では、組成物は１週間に２回、１週間に１回、１週間に１回より頻度を落として、または隔週で投与される。典型的には、本明細書で記載した組成物は注射により、１週間に１回もしくは２回、または隔週に１回のいずれかで、皮下投与される。皮下投与される、本明細書で記載した組成物（特に、ＩＦＧＴとの製剤）は、比較可能なＧＣＢのみの静脈内投与量と比較して、著しく大きい血清曝露をもたらすことができる。より大きな血清生物学的利用能は、対象に投与されることが必要とされる皮下注射の回数を、有利に減少させることができる。例えば、治療的有効量を得るための、治療当たりで投与される必要のある注射の回数が減少し、及び／または複数の皮下注射の時間間隔を延ばすことができる。
【００１８】
別の態様では、本明細書で記載した組成物は治療法に使用するためのものである。一実施形態では、本明細書で記載した組成物は、本明細書で開示した、ＧＣａｓｅ経路での機能障害に関する疾患の治療方法で使用するためのものである。別の実施形態では、本明細書で記載した組成物は、例えば、本明細書で開示した方法による、ＧＣａｓｅ経路での機能障害に関する疾患を治療するための薬剤の製造で使用するためのものである。いくつかの実施形態では、組成物は静脈内投与または皮下投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、例えば皮下注射により、皮下投与される。いくつかの実施形態では、組成物は１週間に２回、１週間に１回、１週間に１回より頻度を落として、または隔週で投与される。典型的には、本明細書で記載した組成物は注射により、１週間に１回もしくは２回、または隔週に１回のいずれかで、皮下投与される。
【００１９】
いくつかの実施形態では、疾患は、ＧＣａｓｅ活性の欠損を含む。いくつかの実施形態では、ＧＣａｓｅ活性の欠損は、酵素活性の低下を含む。いくつかの実施形態では、疾患はα−シヌクレイン調節異常を含む。いくつかの実施形態では、疾患は、リソソーム蓄積症、例えばゴーシェ病、ファブリ病、ポンペ病、ムコ多糖体症、または多系統萎縮症である。本明細書で記載した組成物は、ゴーシェ病を治療するのに特に好適である。いくつかの実施形態では、疾患は、神経変性疾患、例えばパーキンソン病、アルツハイマー病、またはレヴィー小体型認知症である。
【００２０】
別の態様では、ＧＣａｓｅ経路での機能障害の治療を必要とする対象に、本明細書で記載した組成物のいずれかを投与することを含む、ＧＣａｓｅ経路での機能障害の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
【００２１】
別の態様では、０．５〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢ及びＩＦＧ（例えば、ＩＦＧはＧＣＢに対して少なくとも約１、１．２５、１．５、２、２．５、３、４、または５倍モル過剰である）を含む組成物を対象に投与することを含む、ＧＣａｓｅ経路での機能障害の治療方法を提供し、組成物は皮下投与される。別の態様では、ＧＣａｓｅ経路での機能障害の治療方法で使用するための、０．５〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢ及びＩＦＧ（例えば、ＩＦＧはＧＣＢに対して少なくとも約１、１．２５、１．５、２、２．５、３、４、または５倍モル過剰である）を含む組成物を提供し、組成物は皮下投与される。別の態様では、ＧＣａｓｅ経路での機能障害の治療方法のための薬剤の製造における、０．５〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢ及びＩＦＧ（例えば、ＩＦＧはＧＣＢに対して少なくとも約１、１．２５、１．５、２、２．５、３、４、または５倍モル過剰である）を含む組成物の使用を提供する。いくつかの実施形態では、組成物中のＩＦＧは、内因性血清ＧＣＢ活性を増加させない量で投与される。いくつかの実施形態では、組成物は０．８〜４．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む。いくつかの実施形態では、組成物は１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む。いくつかの実施形態では、組成物は１．２〜２．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む。いくつかの実施形態では、組成物は約１．５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む。いくつかの実施形態では、組成物は１．５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む。いくつかの実施形態では、組成物は２．０〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む。いくつかの実施形態では、組成物は２．２５〜４．５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む。いくつかの実施形態では、組成物は２．２５〜３．７５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む。いくつかの実施形態では、組成物は３．５〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む。いくつかの実施形態では、ＩＦＧは、ＧＣＢに対して１〜５、または１〜１０倍のモル比で存在する。いくつかの実施形態では、ＩＦＧはＧＣＢの２〜１０倍のモル比で存在する。いくつかの実施形態では、ＩＦＧはＧＣＢに対して１０〜３０倍のモル比で存在する。いくつかの実施形態では、ＩＦＧはＧＣＢに対して３０〜１００倍のモル比で存在する。いくつかの実施形態では、ＩＦＧはＧＣＢに対して２．５〜３．５倍のモル比で存在する。いくつかの実施形態では、ＩＦＧはＧＣＢに対して３倍のモル比で存在する。いくつかの実施形態では、ＧＣＢの曝露、活性、または生物学的利用能は、例えば、ＩＶ投与された等しい量のＧＣＢのみの曝露、活性、または生物学的利用能と比較して増加する。いくつかの実施形態では、脾臓におけるＧＣＢの曝露、活性、または生物学的利用能が増加する。いくつかの実施形態では、肝臓におけるＧＣＢの曝露、活性、または生物学的利用能が増加する。いくつかの実施形態では、血清におけるＧＣＢの曝露、活性、または生物学的利用能が増加する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）及びイソファゴミン（ＩＦＧ）製剤を調製するためのプロセスを示すフローチャートである。
【図２】ＩＦＧを添加した後の１日目（２Ａ）、及びＩＦＧを添加した２週間後（２Ｂ）における、ＧＣＢ試料のＳＤＳ−ＰＡＧＥ試験を示す。ＩＦＧのｐＨ調節は行わなかった。
【図３】ｐＨ調節した酒石酸イソファゴミン（ＩＦＧＴ）の凍結乾燥溶液を含有するエッペンドルフチューブを示す。
【図４】ＩＦＧを添加した同じ日（４Ａ）、及び、３日間の保存後（４Ｂ）における、ＧＣＢ試料のＳＤＳ−ＰＡＧＥ試験を示す。ＩＦＧはｐＨ調節を行った。
【図５】ＧＣＢに添加したｐＨ調節したＩＦＧＴの、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）アッセイの結果を示す。
【図６Ａ】ＧＣＢに添加したｐＨ調節ＩＦＧの、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）アッセイの結果を示す。
【図６Ｂ】ＧＣＢに添加したｐＨ調節ＩＦＧの、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）アッセイの結果を示す。
【図７Ａ】ＧＣＢへのＩＦＧ結合の表面プラズモン共鳴研究の結果を示す。
【図７Ｂ】ＧＣＢへのＩＦＧ結合の表面プラズモン共鳴研究の結果を示す。
【図７Ｃ】ＧＣＢへのＩＦＧ結合の表面プラズモン共鳴研究の結果を示す。
【図７Ｄ】ＧＣＢへのＩＦＧ結合の表面プラズモン共鳴研究の結果を示す。
【図８】ＧＣＢ：ＩＦＧが１：３〜１：１００の範囲の異なるＩＦＧモル比での、ＧＣＢ融解温度の変化を評価する、ナノ示差走査蛍光定量（ナノ−ＤＳＦ）アッセイの結果を示す。
【図９Ａ】ＩＦＧＴでプレインキュベートしたベラグルセラーゼアルファにて実施した酵素活性反応の結果を示し、合成比色分析ｐＮＰ−ＧＰＳ基質による阻害曲線を示す。
【図９Ｂ】ＩＦＧＴでプレインキュベートしたベラグルセラーゼアルファにて実施した酵素活性反応の結果を示し、合成蛍光定量４ＭＵ−ＧＰＳ基質による阻害曲線を示す。
【図９Ｃ】ＩＦＧＴでプレインキュベートしたベラグルセラーゼアルファにて実施した酵素活性反応の結果を示し、天然グリコスフィンゴリピドＣ１２−ＧｌｕＣｅｒ基質による阻害を示す。
【図１０Ａ】３週間４０℃にて保存した、ＧＣＢ／ＩＦＧＴ試料の外観を示す。
【図１０Ｂ】３週間保存したＧＣＢ／ＩＦＧＴ試料のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。群１〜３（Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３）の溶液は透明に見える。群４（Ｇ４）溶液は濁ったように見える。
【図１１】カニクイザルにおける、静脈内ＧＣＢ及び皮下ＧＣＢ＋ＩＦＧの薬物動態学研究からのＧＣＢ免疫組織化学分析（ＩＨＣ）のための、陰性及び陽性対照を示す。
【図１２】ＧＣＢの皮下注射（上パネル）、及びＧＣＢの静脈内注射（下パネル）後の様々な時点における、肝臓内でのＧＣＢの染色（２倍拡大）を示す。
【図１３】ＧＣＢの皮下注射（上パネル）、及びＧＣＢの静脈内注射（下パネル）後の様々な時点における、肝臓内でのＧＣＢの染色（２０倍拡大）を示す。
【図１４】ＧＣＢの皮下注射（上パネル）、及びＧＣＢの静脈内注射（下パネル）後の様々な時点における、脾臓内でのＧＣＢの染色（２倍拡大）を示す。
【図１５】ＧＣＢの皮下注射（上パネル）、及びＧＣＢの静脈内注射（下パネル）後の様々な時点における、脾臓内でのＧＣＢの染色（２０倍拡大）を示す。
【図１６Ａ】ベラグルセラーゼアルファの投与（１６Ａ）後の、肝臓及び脾臓ホモジェネートでの、ベラグルセラーゼアルファタンパク質及び酵素活性レベルのアッセイ結果を示す。
【図１６Ｂ】１：３のモル比での、ベラグルセラーゼアルファとＩＦＧＴの投与（１６Ｂ）後の、肝臓及び脾臓ホモジェネートでの、ベラグルセラーゼアルファタンパク質及び酵素活性レベルのアッセイ結果を示す。
【図１６Ｃ】ＩＦＧＴとベラグルセラーゼアルファの皮下投与後の、カニクイザルにおけるＧＣＢの血清活性レベルのアッセイ結果を示す。
【図１７】（１：３〜１：１００）の範囲の異なるモル比で、４ｍｇ／ｋｇのベラグルセラーゼアルファ及びＩＦＧを皮下投与した後の、ＧＣＢの血清生物学的利用能（１７Ａ）、及びＧＣＢ活性アッセイ（１７Ｂ）の、ＥＣＬ  ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す。
【図１８】１０ｍｇ／ｋｇのベラグルセラーゼアルファの静脈内投与後、または、１：１００のモル比での、４ｍｇ／ｋｇのベラグルセラーゼアルファ及びＩＦＧの皮下投与後の、肝臓（１８Ａ）及び脾臓（１８Ｂ）での、ＧＣＢ含有量プロファイルのＥＣＬ  ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す。
【図１９】１：３のモル比での、４ｍｇ／ｋｇのベラグルセラーゼアルファ及びＩＦＧの皮下投与後の、肝臓（１９Ａ）及び脾臓（１９Ｂ）での、ＧＣＢ含有量のＥＣＬ  ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す。
【図２０】（１：１〜１：３０）の範囲の異なるモル比で、１．５ｍｇ／ｋｇのベラグルセラーゼアルファ及びＩＦＧを皮下投与した後の、ＧＣＢの血清生物学的利用能（２０Ａ）、及びＧＣＢ活性アッセイ（２０Ｂ）の、ＥＣＬ  ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す。
【図２１】ＩＦＧなし、３ｎＭのＩＦＧ、１０ｎＭのＩＦＧ、３０ｎＭのＩＦＧ、１００ｎＭのＩＦＧ、３００ｎＭのＩＦＧ、及び１０００ｎＭのＩＦＧを用いて、３７℃でインキュベートしたヒト血清中のＶＰＲＩＶの、活性アッセイの結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
概説
グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）を含む組成物は、組成物が液体のときなどに、安定性の増加の効果があり得る。ＧＣＢ内で曝露を受けた３つの遊離チオール基は反応を受けることができ、例えばＧＣＢ分子の凝集により、安定性の低下がもたらされ得る。例えば、ｐＨ６の緩衝液において、１ヶ月の保存で、典型的にはタンパク質の１〜２％が凝集し、６ヶ月の保存後には、約１５％が凝集した。理論またはメカニズムに厳格に束縛されるものではないが、タンパク質の安定性は、多数の因子に影響を受ける。
【００２４】
イソファゴミン（ＩＦＧ）、例えば酒石酸イソファゴミン（ＩＦＧＴ）を添加することにより、特に、ＩＦＧ（例えばＩＦＧＴ）が、ＧＣＢへの添加前にｐＨ６．０に調節されるときに、インビトロでのＧＣＢの安定性が改善する。ＩＦＧは以下の構造を有する：
【化１】
2021501135.tif 000003
【００２５】
理論に束縛されるものではないが、ＩＦＧは活性部位付近のアミノ酸残基と相互作用し、ＧＣＢを、安定性の向上をもたらすコンフォーメーションで固定することができる。Ｓｈｅｎ，Ｊ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，２００８，３６９：１０７１−１０７５を参照のこと。ＩＦＧはＧＣＢと会合して、ＧＣＢをよりコンパクトにし、一層熱安定性にするため、ＩＦＧは、ＧＣＢの凝集を防止することもまた可能である。
【００２６】
ＧＣＢに対するＩＦＧのモル比が、液体組成物中でのＧＣＢの安定化に決定的であることを、本発明らは示している。本出願を通してより詳細に記載するように、モル比が少なくとも１：２．５（ＧＣＢ：ＩＦＧ）（即ち、１：ｘ（ｘは少なくとも２．５である））の組成物は、実質的により少ない、ＧＣＢ凝集及び分解を有し得る。実質的に１：２．５を下回るモル比を有するＧＣＢでは、実質的により多くの凝集及び分解が生じ得る。
【００２７】
ＧＣＢに対するＩＦＧ／ＩＦＧＴのモル比が少なくとも１：２．５（ＧＣＢ：ＩＦＧ）である組成物は、皮下投与されたときに、ＧＣＢ生物学的利用能、活性、組織曝露、及び全身曝露を改善したこともまた、本発明者らは示している。生物学的利用能の改善は、肝臓でのＧＣＢの組織染色の増加、脾臓でのＧＣＢの組織染色の増加、血清でのＧＣＢの濃度増加、及び、血清でのＧＣＢ活性の増加の１つ以上により検出することができる。全身曝露の改善は、血清中での、ＧＣＢのタンパク質濃度、またはＧＣＢの酵素活性を測定することによりアッセイすることができる。ＩＦＧ（例えばＩＦＧＴ）をＧＣＢに、少なくとも１：２．５（ＧＣＢ：ＩＦＧ）のモル比で添加することにより、皮下製剤での、ＧＣＢの生物学的利用能、活性、組織曝露、または全身曝露が、静脈内製剤、特に、ＩＦＧを含まない製剤での、ＧＣＢ生物学的利用能、活性、組織曝露、または全身曝露と同等になる、またはこれを上回ることができる。
【００２８】
定義
用語「対象」とは、ヒト、非ヒト霊長類、霊長類、ヒヒ、チンパンジー、サル、齧歯類（例えばマウス、ラット）、ウサギ、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタなどを含む、これらに分類される任意の動物を含むがこれらに限定されない任意の哺乳類を意味する。用語「対象」とは、用語「患者」と同じ意味で用いることができる。
【００２９】
用語「単離された」とは、その自然環境を実質的に含まない分子を意味する。例えば、単離タンパク質とは、そのタンパク質が由来する細胞または組織源の、細胞材料または他のタンパク質を実質的に含まない。単離タンパク質を含む調製物は、治療用組成物として投与されるのに十分純粋である、または、少なくとも７０％〜８０％（ｗ／ｗ）純粋である、より好ましくは少なくとも８０％〜９０％（ｗ／ｗ）純粋である、更により好ましくは、９０〜９５％純粋である、そして、最も好ましくは、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、または１００％（ｗ／ｗ）純粋である。
【００３０】
本明細書で使用する場合、用語「約」とは、この用語により限定される値の、最大±１０％を意味する。例えば、約５０ｍＭとは、５０ｍＭ±５ｍＭを意味し、約４％とは、４％±０．４％を意味する。
【００３１】
本明細書で使用する場合、語句「非経口的投与」、「非経口投与される」、及び「非経口投与する」とは、通常注射による、また、静脈内（ＩＶ）、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心腔内、皮内、腹腔内、経気管、皮下（ＳＣ）、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外の及び胸骨内注射及び注入が挙げられるが、これらに限定されない、経腸及び局所投与以外の投与形態を意味する。
【００３２】
用語「治療的有効用量」、及び「治療的有効量」とは、症状の予防をもたらす化合物の量、例えば、症状（例えば、ゴーシェ病を有すると診断された対象における、ゴーシェ病の症状）の、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の予防、症状の開始の遅延、または、ゴーシェ病の症状の回復を意味する。治療的有効量は、例えば、ゴーシェ病に関連する疾患の１つ以上の症状を治療する、予防する、重症度を低下させる、開始を遅延させる、及び／または、その発生リスクを低下させるのに十分である。有効量は、当該技術分野において周知の方法により、そして、本明細書の後のセクションに記載のとおりに、測定することができる。
【００３３】
用語「治療」及び「治療法」とは、存在する疾患の治療、及び／または、予防的／予防用方法を意味する。治療が必要なものとしては、特定の医学疾患を既に有する個体、及び、その疾患を有するリスクにある、または、その疾患を最終的に獲得し得る個体を挙げることができる。治療の必要性は例えば、疾患の発症に関連する１つ以上の危険因子の存在、疾患の存在もしくは進行、または、その疾患を有する対象の治療の受容可能性により評価される。治療は、疾患の進行の遅延、または逆転を含むことができる。
【００３４】
用語「治療すること」とは、統計的に有意な程度、または、当業者が検出可能な程度のいずれかまで、疾患（例えば、本明細書で記載する疾患）に関連する状態、症状、もしくはパラメーターを改善もしくは予防する、または、その疾患の開始、進行、もしくは悪化を予防するのに効果的な量、方法、及び／または様式で治療法を投与することを意味する。したがって、治療することは、治療的、及び／または予防的効果を達成することができる。有効量、方法、または様式は、対象に応じて変化することができ、対象に対して個別対応してよい。特定の実施形態において、ＧＣａｓｅ経路での機能障害に関する疾患（例えばゴーシェ病）の治療は、例えば、ＧＣａｓｅ経路での機能障害が治療されていない対象における、ヘモグロビン濃度の増加、血小板レベルの増加、肝体積の減少、脾体積の減少、または、骨格パラメーターの変化（例えば、骨塩濃度の増加）の１つ以上をもたらす治療である。特定の実施形態において、ＧＣａｓｅ経路での機能障害に関する疾患（例えばゴーシェ病）の治療は、例えば、ＧＣａｓｅ経路での機能障害を治療した対象における、ヘモグロビン濃度の増加、血小板レベルの増加、肝体積の減少、脾体積の減少、または、骨格パラメーターの変化（例えば、骨塩濃度の増加）、または、これらのパラメーターの１つ以上の維持の１つ以上をもたらす治療である。
【００３５】
用語「組み合わせ」とは、同じ患者を治療するために、２種以上の作用物質または治療法を使用することを意味し、作用物質または治療法の使用または作用が、時間的に重複する。作用物質または治療法は、同時に（例えば、患者に投与される１つの製剤として、もしくは、同時に投与される２つの個別の製剤として）投与することができる、または、任意の順序で逐次的に投与することができる。
【００３６】
本明細書で使用する場合、用語「持続放出性」、「持続放出性送達」、及び「持続放出性薬剤送達」とは、薬剤の一回投与が、血液中での薬剤の有効濃度を長い間、例えば１２時間以上維持することを意味する。例えば、ポリペプチドの一般的な投与経路は皮下、筋肉内、または静脈内（ＩＶ）注射である。
【００３７】
用語「塩」は、遊離酸または遊離塩基の付加塩を含む。用語「製薬上許容できる塩」とは、薬剤用途での実用性をもたらす範囲内での毒性プロファイルを有する塩を意味する。製薬上許容できる塩ではない塩も依然として、高結晶性といった性質を考慮すると、合成、精製、または製剤化において有用であり得る。
【００３８】
ＧＣＢ、ベラグルセラーゼ、またはベラグルセラーゼアルファに関する用語「ユニット」とは、３７℃にて１分当たり、１マイクロモルのｐ−ニトロフェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドをｐ−ニトロフェノールに転換する、または４−メチルウンベリフェロンβ−Ｄ−グルコピラノシドを４−メチルウンベリフェロンに転換するのに必要なこれらの量を意味する。
【００３９】
グルコセレブロシダーゼ
ベラグルセラーゼは、ヒト細胞株における遺伝子活性化により、例えば、選択したヒト細胞株における、内因性β−グルコセレブロシダーゼ遺伝子を活性化するプロモーターを用いる、標的組み換えにより、産生されるヒトβ−グルコセレブロシダーゼである。ベラグルセラーゼは、約６３ｋＤａの単量体糖タンパク質として分泌される。ベラグルセラーゼは、天然のヒトタンパク質と同一の配列を有する、４９７のアミノ酸で構成される。Ｚｉｍｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ｍｏｌ．Ｄｉｓ．，２００７，３９：１１５−１１８を参照のこと。
【００４０】
ベラグルセラーゼアルファのグリコシル化は、ＷＯ２０１３／１３０９６３により詳細に記載されているように、細胞培養中にマンノシダーゼＩ阻害剤であるキフネンシンを用いて、主に、グリカン当たり、６〜９個のマンノース単位を有する高マンノース型グリカンを含有する分泌タンパク質を産生することにより変化することができる。
【００４１】
イミグルセラーゼ（Ｃｅｒｅｚｙｍｅ（登録商標））は、組み換えヒトβーグルコセレブロシダーゼの別の形態である。イミグルセラーゼは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内で組み換えにより産生される。
【００４２】
タリグルセラーゼα（Ｅｌｅｌｙｓｏ（登録商標）またはＵｐｌｙｓｏ（登録商標））は、植物細胞で発現する組み換えグルコセレブロシダーゼ（ｐｒＧＣＢ）である。植物組み換えグルコセレブロシダーゼは、米国特許出願公開第２００９／０２０８４７７号及び同第２００８／００３８２３２号、ならびに、国際公開第２００４／０９６９７８号及び同第２００８／１３２７４３号に少なくとも記載されている方法により得ることができる。
【００４３】
組み換えＧＣＢのいずれかは、当該技術分野において既知の、バイオリアクター及び製造規模の合成方法を用いて産生することができる。任意数の製造スケール精製系を使用することができる。
【００４４】
イソファゴミン
イソファゴミンの様々な代替形態を使用することができる。これらとしては、酒石酸イソファゴミン、イソファゴミンＨＣｌ、イソファゴミン遊離塩基、及びクエン酸イソファゴミンのいずれかが挙げられる。いくつかの実施形態では、イソファゴミンは、イソファゴミンＨＣｌ、イソファゴミン遊離塩基、及びクエン酸イソファゴミンの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、イソファゴミンは酒石酸イソファゴミンを含む。
【００４５】
イソファゴミンＨＣｌは、米国特許第５，８４４，１０２号、及び同第７，５０１，４３９号に記載されている。イソファゴミンＨＣｌは、融点が低い黄色固体である。イソファゴミン遊離塩基は、イソファゴミンＨＣｌを遊離塩基形態に転換することにより作製することができる。
【００４６】
本明細書で記載した態様及び実施形態のいずれかにおいて、イソファゴミンは酒石酸イソファゴミンの形態でなくてもよい、または、ＧＣＢ／ＩＦＧ組成物は、酒石酸イソファゴミンを含まなくてもよい。
【００４７】
酒石酸イソファゴミン
酒石酸イソファゴミン（ＩＦＧＴ）は、本明細書にて開示した様々な実施形態で使用可能な、特定の形態のイソファゴミン（ＩＦＧ）であり、本発明を実施するのに特に好適である。ＩＦＧＴは以下の式を有する：
【化２】
2021501135.tif 000004
【００４８】
ＩＦＧＴは、ＩＦＧと比較して改善された特性を有し、これには、改善された合成製造性が含まれる。例えば、水及びエタノールなどの溶媒中で、ＩＦＧＴを精製するのがより簡単となり得る。ＩＦＧＴは、イソファゴミンの他の既知の塩形態よりも高い安定性を有する。ＩＦＧＴは、工業規模での製造、例えば、１ｋｇを超える製品の製造においてもまた、特に好適である。
【００４９】
ＧＣＢ及びＩＦＧを含む組成物は場合により、本出願を通して、「ＧＣＢ／ＩＦＧ組成物」と呼ばれる。ＧＣＢ及びＩＦＧＴを含む組成物は場合により、本出願を通して、「ＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物」と呼ばれる。
【００５０】
ＩＦＧ／ＩＦＧＴに対するＧＣＢのモル比
様々な実施形態において、組成物は、グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）及びイソファゴミン（ＩＦＧ）、例えば、酒石酸イソファゴミン（ＩＦＧＴ）を、少なくとも約１：１、１：１．５、１：２、または１：２．５（ＧＣＢ：ＩＦＧ）のモル比で含む。ＩＦＧに対するＧＣＢ、例えば、ＩＦＧＴに対するＧＣＢのモル比は、１：１、１：１．５、１：２、１：２．５、１：２．６、１：２．７、１：２．８、１：２．９、１：３．０、１：３．１、１：３．２、１：３．３、１：３．４、１：３．５、１：３．６、１：３．７、１：３．８、１：３．９、１：４．０、１：４．１、１：４．２、１：４．３、１：４．４、１：４．５、１：４．６、１：４．７、１：４．８、１：４．９、１：５．０、１：５．１、１：５．２、１：５．３、１：５．４、１：５．５、１：５．６、１：５．７、１：５．８、１：５．９、１：６．０、１：６．１、１：６．２、１：６．３、１：６．４、１：６．５、１：６．６、１：６．７、１：６．８、１：６．９、１：７．０、１：７．１、１：７．２、１：７．３、１：７．４、１：７．５、１：７．６、１：７．７、１：７．８、１：７．９、１：８．０、１：８．１、１：８．２、１：８．３、１：８．４、１：８．５、１：８．６、１：８．７、１：８．８、１：８．９、１：９．０、１：９．１、１：９．２、１：９．３、１：９．４、１：９．５、１：９．６、１：９．７、１：９．８、１：９．９、１：１０．０、１：１０．１、１：１０．２、１：１０．３、１：１０．４、１：１０．５、１：１０．６、１：１０．７、１：１０．８、１：１０．９、１：１１．０、１：１１．１、１：１１．２、１：１１．３、１：１１．４、１：１１．５、１：１１．６、１：１１．７、１：１１．８、１：１１．９、１：１２．０、１：１２．１、１：１２．２、１：１２．３、１：１２．４、１：１２．５、１：１２．６、１：１２．７、１：１２．８、１：１２．９、１：１３．０、１：１３．１、１：１３．２、１：１３．３、１：１３．４、１：１３．５、１：１３．６、１：１３．７、１：１３．８、１：１３．９、１：１４．０、１：１４．１、１：１４．２、１：１４．３、１：１４．４、１：１４．５、１：１４．６、１：１４．７、１：１４．８、１：１４．９、１：１５．０、１：１５．１、１：１５．２、１：１５．３、１：１５．４、１：１５．５、１：１５．６、１：１５．７、１：１５．８、１：１５．９、１：１６．０、１：１６．１、１：１６．２、１：１６．３、１：１６．４、１：１６．５、１：１６．６、１：１６．７、１：１６．８、１：１６．９、１：１７．０、１：１７．１、１：１７．２、１：１７．３、１：１７．４、１：１７．５、１：１７．６、１：１７．７、１：１７．８、１：１７．９、１：１８．０、１：１８．１、１：１８．２、１：１８．３、１：１８．４、１：１８．５、１：１８．６、１：１８．７、１：１８．８、１：１８．９、１：１９．０、１：１９．１、１：１９．２、１：１９．３、１：１９．４、１：１９．５、１：１９．６、１：１９．７、１：１９．８、１：１９．９、１：２０．０、１：２０．１、１：２０．２、１：２０．３、１：２０．４、１：２０．５、１：２０．６、１：２０．７、１：２０．８、１：２０．９、１：２１．０、１：２１．１、１：２１．２、１：２１．３、１：２１．４、１：２１．５、１：２１．６、１：２１．７、１：２１．８、１：２１．９、１：２２．０、１：２２．１、１：２２．２、１：２２．３、１：２２．４、１：２２．５、１：２２．６、１：２２．７、１：２２．８、１：２２．９、１：２３．０、１：２３．１、１：２３．２、１：２３．３、１：２３．４、１：２３．５、１：２３．６、１：２３．７、１：２３．８、１：２３．９、１：２３．９、１：２４．０、１：２４．１、１：２４．２、１：２４．３、１：２４．４、１：２４．５、１：２４．６、１：２４．７、１：２４．８、１：２４．９、１：２５．０、１：２５．１、１：２５．２、１：２５．３、１：２５．４、１：２５．５、１：２５．６、１：２５．７、１：２５．８、１：２５．９、１：２６．０、１：２６．１、１：２６．２、１：２６．３、１：２６．４、１：２６．５、１：２６．６、１：２６．７、１：２６．８、１：２６．９、１：２７．０、１：２７．１、１：２７．２、１：２７．３、１：２７．４、１：２７．５、１：２７．６、１：２７．７、１：２７．８、１：２７．９、１：２８．０、１：２８．１、１：２８．２、１：２８．３、１：２８．４、１：２８．５、１：２８．６、１：２８．７、１：２８．８、１：２８．９、１：２９．０、１：２９．１、１：２９．２、１：２９．３、１：２９．４、１：２９．５、１：２９．６、１：２９．７、１：２９．８、１：２９．９、または１：３０．０であることができる。
【００５１】
ＩＦＧに対するＧＣＢ、例えば、ＩＦＧＴに対するＧＣＢのモル比は、１：２．５〜１：３．５、１：２．６〜１：３．４、１：２．７〜１：３．５、１：２．７〜１：３．４、１：２．５〜１：３．３、１：２．８〜１：３．５、１：２．８〜１：３．３、１：２．７〜１：３．２、１：２．６〜１：３．１、１：２．５〜１：３．０、１：２．９〜１：３．３、１：２．８〜１：３．２、１：２．７〜１：３．１、１：２．６〜１：３．０、１：２．５〜１：２．９、１：３．０〜１：３．４、または１：３．１〜１：３．５であることができる。
【００５２】
ＩＦＧに対するＧＣＢ、例えば、ＩＦＧＴに対するＧＣＢのモル比は、１：７〜１：３３、１：８〜１：３２、１：９〜１：３３、１：７〜１：３１、１：９〜１：３１、１：８〜１：３０、１：７〜１：２９、１：１０〜１：３２、１：１１〜１：３３、１：７〜１：２９、１：１０〜１：３０、１：９〜１：２９、１：８〜１：２８、１：７〜１：２７、１：１１〜１：３１、１：１２〜１：３２、１：１３〜１：３３、１：１１〜１：２９、１：１０〜１：２８、１：９〜１：２７、１：８〜１：２６、１：７〜１：２５、１：１２〜１：３０、１：１３〜１：３１、１：１４〜１：３２、１：１５〜１：３３、１：１３〜１：２９、１：１２〜１：２８、１：１１〜１：２７、１：１０〜１：２６、１：９〜１：２５、１：８〜１：２４、１：７〜１：２３、１：１４〜１：３０、１：１５〜１：３１、１：１６〜１：３２、１：１７〜１：３３、１：１４〜１：２８、１：１３〜１：２７、１：１２〜１：２６、１：１１〜１：２５、１：１０〜１：２４、１：９〜１：２３、１：８〜１：２２、１：７〜１：２１、１：１５〜１：２９、１：１６〜１：３０、１：１７〜１：３１、１：１８〜１：３２、１：１９〜１：３３、１：１５〜１：２７、１：１４〜１：２６、１：１３〜１：２５、１：１２〜１：２４、１：１１〜１：２３、１：１０〜１：２２、１：９〜１：２１、１：８〜１：２０、１：７〜１：１９、１：１６〜１：２８、１：１７〜１：２９、１：１８〜１：３０、１：１９〜１：３１、１：２０〜１：３２、または１：２１〜１：３３であることができる。
【００５３】
ＩＦＧに対するＧＣＢ、例えば、ＩＦＧＴに対するＧＣＢのモル比は、１：１６〜１：２６、１：１５〜１：２５、１：１４〜１：２４、１：１３〜１：２３、１：１２〜１：２２、１：１１〜１：３１、１：１０〜１：３０、１：９〜１：２９、１：８〜１：２８、１：７〜１：２７、１：１７〜１：２７、１：１８〜１：２８、１：１９〜１：２９、１：２０〜１：３０、１：２１〜１：３１、１：２２〜１：３２、１：２３〜１：３３、１：１７〜１：２５、１：１４〜１：２４、１：１３〜１：２３、１：１２〜１：２２、１：１１〜１：２１、１：１０〜１：２０、１：９〜１：１９、１：１８〜１：２６、１：１９〜１：２７、１：２０〜１：２８、１：２１〜１：２９、１：２２〜１：３０、１：２３〜１：３１、１：１８〜１：２４、１：１７〜１：２３、１：１６〜１：２２、１：１５〜１：２１、１：１４〜１：２０、１：１３〜１：１９、１：１２〜１：１８、１：１１〜１：１７、１：１９〜１：２５、１：２０〜１：２６、１：２１〜１：２７、１：２２〜１：２８、１：２３〜１：２９、１：２４〜１：３０、１：１９〜１：２３、１：１７〜１：２１、１：１５〜１：１９、１：１３〜１：１７、１：１１〜１：１５、１：９〜１：１３、１：７〜１：１１、１：２１〜１：２５、１：２３〜１：２７、１：２５〜１：２９、１：２７〜１：３１、１：２９〜１：３３、１：２０〜１：２３、１：１８〜１：２１、１：１６〜１：１９、１：１４〜１：１７、１：１２〜１：１５、１：１０〜１：１３、１：８〜１：１１、１：２２〜１：２５、１：２４〜１：２７、１：２６〜１：２９、１：２８〜１：３１、または１：３０〜１：３３であることができる。
【００５４】
ＩＦＧに対するＧＣＢ、例えば、ＩＦＧＴに対するＧＣＢのモル比は、１：３１、１：３２、１：３３、１：３４、１：３５、１：３６、１：３７、１：３８、１：３９、１：４０、１：４１、１：４２、１：４３、１：４４、１：４５、１：４６、１：４７、１：４８、１：４９、１：５０、１：５１、１：５２、１：５３、１：５４、１：５５、１：５６、１：５７、１：５８、１：３５、１：５９、１：６０、１：６１、１：６２、１：６３、１：６４、１：６５、１：６６、１：６７、１：６８、１：６９、１：７０、１：７１、１：７２、１：７３、１：７４、１：７５、１：７６、１：７７、１：７８、１：７９、１：８０、１：８１、１：８２、１：８３、１：８４、１：８５、１：８６、１：８７、１：８８、１：８９、１：９０、１：９１、１：９２、１：９３、１：９４、１：９５、１：９６、１：９７、１：９８、１：９９、または１：１００であることができる。
【００５５】
ＩＦＧに対するＧＣＢ、例えば、ＩＦＧＴに対するＧＣＢのモル比は、１：３０〜１：１００、１：３０〜１：８０、１：４０〜１：９０、１：５０〜１：１００、１：３０〜１：６０、１：４０〜１：７０、１：５０〜１：８０、１：６０〜１：９０、１：７０〜１：１００、１：３０〜１：５０、１：４０〜１：６０、１：５０〜１：７０、１：６０〜１：８０、１：７０〜１：９０、１：８０〜１：１００、１：３０〜１：４０、１：４０〜１：５０、１：５０〜１：６０、１：６０〜１：７０、１：７０〜１：８０、１：８０〜１：９０、または１：９０〜１：１００であることができる。
【００５６】
本明細書で記載される他の様々な実施形態では、組成物は、グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）と酒石酸イソファゴミン（ＩＦＧＴ）とを、少なくとも約１：２．５のモル比で含む。
【００５７】
本明細書で記載される他の様々な実施形態では、組成物は、グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）とクエン酸イソファゴミンとを、少なくとも約１．２．５のモル比で含む。
【００５８】
本明細書で記載される他の様々な実施形態では、組成物は、グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）とイソファゴミンＨＣｌとを、少なくとも約１：２．５のモル比で含む。
【００５９】
本明細書で記載される他の様々な実施形態では、組成物は、グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）とイソファゴミン遊離塩基とを、少なくとも約１：２．５のモル比で含む。
【００６０】
本明細書で記載される他の様々な実施形態では、組成物は、グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）と、ＩＦＧＴを含まないイソファゴミンとを、少なくとも約１：２．５のモル比で含む。
【００６１】
ＧＣＢ濃度
組成物のいずれかにおけるＧＣＢの濃度は、約０．１〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約０．５〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約５〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１０〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１５〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約２０〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約２５〜約３５ｍｇ／ｍＬ、約３０〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約２〜約８ｍｇ／ｍＬ、約５〜約１１ｍｇ／ｍＬ、約８〜約１４ｍｇ／ｍＬ、約１１〜約１７ｍｇ／ｍＬ、約１４〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１７〜約２３ｍｇ／ｍＬ、約２０〜約２６ｍｇ／ｍＬ、約２３〜約２９ｍｇ／ｍＬ、約２６〜約３２ｍｇ／ｍＬ、約２９〜約３５ｍｇ／ｍＬ、約３２〜約３８ｍｇ／ｍＬ、約２〜約５ｍｇ／ｍＬ、約５〜約８ｍｇ／ｍＬ、約８〜約１１ｍｇ／ｍＬ、約１１〜約１４ｍｇ／ｍＬ、約１４〜約１７ｍｇ／ｍＬ、約１７〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜約２３ｍｇ／ｍＬ、約２３〜約２６ｍｇ／ｍＬ、約２６〜約２９ｍｇ／ｍＬ、約２９〜約３２ｍｇ／ｍＬ、約３２〜約３５ｍｇ／ｍＬ、約３５〜約３８ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３１ｍｇ／ｍＬ、約３２ｍｇ／ｍＬ、約３３ｍｇ／ｍＬ、約３４ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約３６ｍｇ／ｍＬ、約３７ｍｇ／ｍＬ、約３８ｍｇ／ｍＬ、約３９ｍｇ／ｍＬ、または約４０ｍｇ／ｍＬであることができる。
【００６２】
ＧＣＢの濃度は、５０ユニット／ｍＬ〜２００ユニット／ｍＬ、７０ユニット／ｍＬ〜１６０ユニット／ｍＬ、８０ユニット／ｍＬ〜１７５ユニット／ｍＬ、９０ユニット／ｍＬ〜１９０ユニット／ｍＬ、６０ユニット／ｍＬ〜１４５ユニット／ｍＬ、５０ユニット／ｍＬ〜１３０ユニット／ｍＬ、８０ユニット／ｍＬ〜１４０ユニット／ｍＬ、７０ユニット／ｍＬ〜１２０ユニット／ｍＬ、６０ユニット／ｍＬ〜１００ユニット／ｍＬ、５０ユニット／ｍＬ〜８５ユニット／ｍＬ、９０ユニット／ｍＬ〜１６０ユニット／ｍＬ、１００ユニット／ｍＬ〜１８０ユニット／ｍＬ、１２０ユニット／ｍＬ〜２００ユニット／ｍＬ、９０ユニット／ｍＬ〜１２５ユニット／ｍＬ、８０ユニット／ｍＬ〜１０５ユニット／ｍＬ、７０ユニット／ｍＬ〜１００ユニット／ｍＬ、６０ユニット／ｍＬ〜９０ユニット／ｍＬ、５０ユニット／ｍＬ〜８０ユニット／ｍＬ、１００ユニット／ｍＬ〜１４０ユニット／ｍＬ、１１５ユニット／ｍＬ〜１６０ユニット／ｍＬ、１３０ユニット／ｍＬ〜１８０ユニット／ｍＬ、１４５ユニット／ｍＬ〜２００ユニット／ｍＬ、１００ユニット／ｍＬ〜１１５ユニット／ｍＬ、９０ユニット／ｍＬ〜１０５ユニット／ｍＬ、８０ユニット／ｍＬ〜９５ユニット／ｍＬ、７０ユニット／ｍＬ〜８５ユニット／ｍＬ、６０ユニット／ｍＬ〜７５ユニット／ｍＬ、５０ユニット／ｍＬ〜６５ユニット／ｍＬ、１１０ユニット／ｍＬ〜１２５ユニット／ｍＬ、１２０ユニット／ｍＬ〜１３５ユニット／ｍＬ、１３０ユニット／ｍＬ〜１４５ユニット／ｍＬ、１４０ユニット／ｍＬ〜１６０ユニット／ｍＬ、１６０ユニット／ｍＬ〜１８０ユニット／ｍＬ、１８０ユニット／ｍＬ〜２００ユニット／ｍＬ、約５０ユニット／ｍＬ、約６０ユニット／ｍＬ、約７０ユニット／ｍＬ、約８０ユニット／ｍＬ、約９０ユニット／ｍＬ、約１００ユニット／ｍＬ、約１１０ユニット／ｍＬ、約１２０ユニット／ｍＬ、約１３０ユニット／ｍＬ、約１４０ユニット／ｍＬ、約１５０ユニット／ｍＬ、約１６０ユニット／ｍＬ、約１７０ユニット／ｍＬ、約１８０ユニット／ｍＬ、約１９０ユニット／ｍＬ、約２００ユニット／ｍＬ、５０ユニット／ｍＬ、６０ユニット／ｍＬ、７０ユニット／ｍＬ、８０ユニット／ｍＬ、９０ユニット／ｍＬ、１００ユニット／ｍＬ、１１０ユニット／ｍＬ、１２０ユニット／ｍＬ、１３０ユニット／ｍＬ、１４０ユニット／ｍＬ、１５０ユニット／ｍＬ、１６０ユニット／ｍＬ、１７０ユニット／ｍＬ、１８０ユニット／ｍＬ、１９０ユニット／ｍＬ、または２００ユニット／ｍＬであることができる。
【００６３】
医薬組成物
医薬組成物は、「治療的有効量」の、本明細書で記載したＧＣＢ／ＩＦＧ、例えばＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物を含むことができる。そのような有効量は、投与される組成物の効果に基づいて決定することができる。ＧＣＢ／ＩＦＧ、例えばＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物の治療的有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに、組成物が個体における所望の応答、例えば、状態または疾患（例えばグルコセレブロシダーゼ欠乏症、例えばゴーシェ病）の少なくとも１つの症状の回復を誘発する能力などの因子によってもまた変化し得る。治療的有効量とは、治療の有益な効果が、組成物の任意の毒性または有害作用にまさる量でもある。
【００６４】
ＧＣＢ／ＩＦＧ組成物は、ＩＦＧＴを含まなくてもよい。
【００６５】
本発明の医薬組成物は、その所望する投与経路と適合性があるように製剤化することができる。例えば、ＧＣＢ／ＩＦＧ、例えばＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物は非経口様式、例えば静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉注射により投与されることができる。様々な実施形態では、投与経路は静脈内である。様々な実施形態では、投与経路は皮下である。非経口適用に使用される溶液または懸濁液としては、以下の構成成分を挙げることができる：注射用水、食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの滅菌希釈剤、；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；アセテート、シトレート、またはホスフェートなどの緩衝液、及び、塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの、張度調節剤。医薬組成物のｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基により調節することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または、複数投与用バイアル瓶に閉じ込めることができる。
【００６６】
ｐＨ
ｐＨは、本明細書で記載した、様々なＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物中での、ＧＣＢの安定性への影響力を有し得る。ｐＨは、ＧＣＢのコンフォーメーション、及び／または凝集、及び／または分解、及び／または反応性に影響を与え得る。例えば、高いｐＨにおいて、酸素はより反応性となることができる。ｐＨは、好ましくは７．０未満、より好ましくは約４．５〜約６．５の範囲内、より好ましくは約５．０〜約６．０、及びより好ましくは約５．５〜約５．８、より好ましくは約５．７である。ＧＣＢを用いると、７．０を上回るｐＨにおいて、凝集が望ましくないレベルに達する可能性があり、４．５もしくは５．０を下回るｐＨにおいて、または、６．５もしくは７．０を上回るｐＨにおいて、分解（例えば断片化）が望ましくないレベルに達する可能性がある。
【００６７】
候補となるｐＨは、試験用ＧＣＢ／ＩＦＧ、例えばＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物を提供し、その組成物を、候補となるｐＨに調節し、組成物の酸素をパージすることにより試験することができる。候補となるｐＨにおける、組成物中でのＧＣＢの安定性は、例えば、所定の時間における凝集率または分解率として測定することができる。測定した安定性は、１つ以上の基準と比較することができる。例えば、好適な基準は、組成物のｐＨが調製されていないことを除いて、試験組成物に類似している組成物である。次に、ｐＨを調節した組成物の安定性と、ｐＨを調節していない組成物の安定性とを比較してよい。ＧＣＢが、比較基準組成物における安定性よりも安定している場合、ＧＣＢ／ＩＦＧ、例えばＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物はより安定し得る。この基準と比較しての、試験処理による安定性の増加により、適性を示すことができる。例えば、比較基準ＧＣＢ／ＩＦＧ組成物が５．５のｐＨを有するものの、ＧＣＢ／ＩＦＧ組成物が６．３のｐＨを有する場合にＧＣＢの安定性が増加した場合、ＧＣＢが、ｐＨ５．５よりもｐＨ６．３にてより安定しているため、６．３のｐＨにおける組成物はより適している。
【００６８】
タンパク質組成物のｐＨを調節するために使用可能な緩衝液としては、ヒスチジン、シトレート、ホスフェート、グリシン、サクシネート、アセテート、グルタメート、トリス、タータラート、アスパルテート、マレエート、及びラクテートが挙げられる。
【００６９】
ＧＣＢ安定性アッセイ
タンパク質の安定性は、タンパク質凝集またはタンパク質分解を測定することにより、測定可能である。タンパク質凝集は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、非変性ＰＡＧＥ、または、サイズを測定する他の方法などを含む様々な方法により測定することができる。タンパク質分解は例えば、逆相ＨＰＬＣ、非変性ＰＡＧＥ、イオン交換クロマトグラフィー、ペプチドマッピング、または同様の方法により測定することができる。
【００７０】
本明細書で使用する場合、安定性には、タンパク質構造のパラメーター（例えば、タンパク質構造の変化、例えば、タンパク質凝集もしくはタンパク質分解（例えば断片化）の最小化、もしくは防止）、及び／または、タンパク質の生物活性（例えば、基質を生成物に転換する能力）が含まれる。
【００７１】
ＧＣＢ安定性は例えば、タンパク質凝集、タンパク質分解、または、ＧＣＢの生物活性レベルを測定することにより、測定することができる。ＧＣＢの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー、非変性ＰＡＧＥ、及び、サイズを測定する他の方法を含む様々な方法により測定することができる。例えば、組成物は、保存（例えば、２〜８℃にて、最大３、６、９、１２、または２４ヶ月（またはそれ以上）の期間の保存）前に組成物中に存在したタンパク質凝集の量と比較して、（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーにより測定すると、）ＧＣＢタンパク質凝集の、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０％未満の増加量を有することができる。
【００７２】
タンパク質分解は、逆相ＨＰＬＣ、非変性ＰＡＧＥ、イオン交換クロマトグラフィー、ペプチドマッピング、または同様の方法を含む様々な方法により測定することができる。例として、組成物は、保存（例えば、２〜８℃にて、最大３、６、９、１２、または２４ヶ月（またはそれ以上）の期間の保存）前に組成物中に存在したＧＣＢ分解の量と比較して、（例えば、逆相ＨＰＬＣにより測定すると、）ＧＣＢ分解の、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０％未満の増加量を有することができる。ＧＣＢの生物活性は例えば、インビトロまたはインビボアッセイ、例えばＥＬＩＳＡ（例えば、結合または酵素活性を測定するため）、及び他の酵素アッセイ（例えば、分光光度、蛍光定量、熱量分析、化学発光、放射分析、またはクロマトグラフアッセイ）、キナーゼアッセイなどにより測定することができる。例として、組成物は、保存（例えば、２〜８℃にて、最大３、６、９、１２、または２４ヶ月（またはそれ以上）の期間の保存）前に組成物中に存在した生物活性の量と比較して、ＧＣＢの生物活性（例えば酵素活性、例えば、インビトロアッセイにより測定される）の、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０％未満の減少を有することができる。
【００７３】
酸化防止剤及び安定剤
本明細書で記載したＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物は、酸化防止剤を更に含むことができる。１つの好適な酸化防止剤はシステインである。システインは、０．０３０％〜０．１００％、０．０５０％〜０．０８０％、０．０４０％〜０．０７０％、０．０３０％〜０．０６０％、０．０６０％〜０．０９０％、０．０７０％〜０．１００％、０．０６５％〜０．０８０％、０．０６０％〜０．０７５％、０．０５５％〜０．０７０％、０．０５０％〜０．０６５％、０．０７０％〜０．０８５％、０．０７５％〜０．０９０％、約０．０６５％、約０．０７０％、約０．０７５％、約０．０８０％、０．０６５％、０．０７０％、０．０７５％、または０．０８０％で存在することができる。理論に束縛されるものではないが、システインは更に、ＧＣＢを安定化させることができる。
【００７４】
本明細書で記載したＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物は、スクロースまたはトレハロースなどの炭水化物を更に含むことができる。炭水化物、例えばスクロースまたはトレハロースは、１２％〜１９％、１３％〜１８％、１４％〜１７％、１２％〜１５％、１３％〜１６％、１５％〜１７％、約１６％、または１６％で存在することができる。理論に束縛されるものではないが、スクロースまたはトレハロースは、チオール（−ＳＨ）基の有効性を低下させることにより、ＧＣＢを更に安定化させることができる。
【００７５】
本明細書のＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物は、界面活性剤を更に含むことができる。界面活性剤は、ポリソルベート２０（本発明を実施するのに特に好適である）、または、任意数のポロキサマー系化合物であることができる。
【００７６】
特定の実施形態において、ＧＣＢの安定性は、予め選択された条件下にて、炭水化物（スクロースもしくはトレハロース）、酸化防止剤、または、炭水化物と酸化防止剤の両方を欠いている点が異なる組成物中での、ＧＣＢの安定性よりも、少なくとも５〜８０％大きい（例えば、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％大きい）。
【００７７】
ＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物は、容器中で保存する前に、酸素をパージしてよい。更に、容器は理想的には、酸素の侵入を防止するために、気密性である。本明細書で記載したＧＣＢ組成物、例えば、ＧＣＢを含有する液体組成物は、より長い安定性を有することができる。例えば、予め選択された条件下にて、例えば、２〜８℃の温度にて、最大３、６、９、１２、または２４ヶ月（または、いくつかの実施形態では更に長く）、気密性容器にて保存する際、組成物中のＧＣＢは、保存前にＧＣＢが有していた、少なくとも５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、または１００％の安定性を保持する。
【００７８】
好適なタンパク質濃度は、０．０７５％のシステイン、１６％のスクロースを含有する組成物を提供し、ｐＨを５．７に調節し、ＧＣＢを候補となる濃度に調節し、組成物のＯ２をパージすることにより試験することができる。候補となる濃度における、所定の時間にて、例えば凝集率または分解率として測定した、ＧＣＢ／ＩＦＧ、例えばＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物中でのＧＣＢの安定性を、１つ以上の基準と比較する。各濃度におけるＧＣＢの安定性を比較する。適性は、本明細書で記載される濃度よりも、安定性において相当の、またはより良い影響を有する候補となる濃度により示すことができる。
【００７９】
ＧＣＢの安定性は、本出願を通して記載される方法のいずれかにより、例えば、タンパク質凝集またはタンパク質分解を測定することにより、測定することができる。タンパク質凝集は例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、非変性ＰＡＧＥ、または、サイズを測定する他の方法により測定することができる。タンパク質分解は例えば、逆相ＨＰＬＣ、非変性ＰＡＧＥ、イオン交換クロマトグラフィー、ＳＥＣ、ＳＥＣ  ＨＰＬＣ、ペプチドマッピング、または同様の方法により測定することができる。
【００８０】
界面活性剤
本明細書で記載したＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物は、１種以上の界面活性剤を更に含む。理論に束縛されるものではないが、界面活性剤は、例えば振盪時、または輸送中にタンパク質分解を低下させることができる、気体／液体界面を提供することにより、タンパク質の安定性を増加させることができる。特定の液体組成物において、例えば、タンパク質分解を引き起こさずにタンパク質の安定性を増加させる界面活性剤を、選択してよい。例示的な界面活性剤は、ポロキサマー１８８またはＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８である。界面活性剤は、約０．００５％〜約５％、例えば約０．０１％〜約１％、例えば、約０．０２５％及び約０．５％、例えば、約０．０３％及び約０．２５％、例えば、約０．０４〜約０．１％、例えば、約０．０５％〜約０．０７５％、例えば、０．０５％の量で存在することができる。理想的な界面活性剤は、ＧＣＢにより変性しない、または開裂されないものである。
【００８１】
例えば、候補となる界面活性剤は、２ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、ある量のＩＦＧ、０．０７５％のシステイン、１６％のスクロースを含有する組成物を提供し、次いでｐＨを５．７に調節し、次いで候補となる界面活性剤を添加し、組成物のＯ２をパージすることにより試験することができる。候補となる界面活性剤を含有するＧＣＢ／ＩＦＧ組成物の安定性を、１つ以上の基準と比較して、所定の時間における凝集率または分解率として測定する。例えば、好適な基準は、界面活性剤が組成物に添加されていないことを除いて、試験条件に類似する組成物である。処理した（界面活性剤を含有する）組成物の安定性と、未処理の（界面活性剤を欠く）組成物の安定性を、「実世界」シナリオ（例えば保存及び輸送）をシミュレートする条件において、比較することができる。基準は、ポロキサマー１８８の代わりに別の界面活性剤を使用することを除いて、試験組成物に類似する組成物であることができる。次に、ポロキサマー１８８を、比較の土台としての基準とする。適性は、本明細書で記載した界面活性剤よりも、安定性において相当の、またはより良い影響を有する、候補となる界面活性剤により示すことができる。候補となる界面活性剤が好適である（例えば、基準の１つと比較して組成物の安定性を増加させる）ことが測定された場合、候補となる界面活性剤の濃度を洗練することができる。例えば、濃度を、広い範囲の値にわたって増加または低下させ、基準、及び試験されている他の濃度と比較し、どの濃度が最も大きな安定性の増加を引き起こすかを測定することができる。
【００８２】
あるいは、２種以上の界面活性剤の組み合わせを、本明細書で記載した組成物にて使用する。組み合わせの適性は、界面活性剤の試験の組み合わせによるＧＣＢ／ＩＦＧ組成物の安定性を、ポロキサマー１８８によるＧＣＢ／ＩＦＧ組成物の安定性と比較することにより、上述のとおりに試験することができる。
【００８３】
タンパク質の安定性は例えば、タンパク質凝集またはタンパク質分解を測定することにより測定可能である。タンパク質凝集は例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、非変性ＰＡＧＥ、または、サイズを測定する他の方法などにより測定することができる。タンパク質分解は例えば、逆相ＨＰＬＣ、非変性ＰＡＧＥ、イオン交換クロマトグラフィー、ペプチドマッピング、または同様の方法により測定することができる。
【００８４】
製薬上許容できる塩
医薬組成物は、塩または製薬上許容できる塩を更に含むことができる。
【００８５】
好適な、製薬上許容できる酸付加塩を、無機酸または有機酸から調製することができる。無機酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸、及びリン酸が挙げられる。好適な有機酸は、脂肪族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族（ａｒａｌｉｐｈａｔｉｃ）、複素環式、カルボキシル、及びスルホンクラスの有機酸から選択することができ、これらの例としては、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、４−ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボン（パモ）酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、スルファニル酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、ステアリン酸、アルギン酸、βーヒドロキシ酪酸、サリチル酸、ガラクタル酸、シュウ酸、マロン酸、及びガラクツロン酸が挙げられる。製薬上許容されない酸付加塩の例としては例えば、過塩素酸塩及びテトラフルオロホウ酸塩が挙げられる。これらの酸付加塩の全ては、例えば、イソファゴミンまたはＧＣＢから、それら化合物と適切な酸を反応させることにより調製することができる。
【００８６】
製薬上許容できる、イソファゴミンの好適な塩基付加塩としては、例えば、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、及び遷移金属塩を含む金属塩、例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、及び亜鉛塩などが挙げられる。製薬上許容できる塩基付加塩としては、例えばＮ，Ｎ’ージベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）、及びプロカインなどの塩基アミンから作製した有機塩もまた挙げられる。製薬上許容されない塩基付加塩の例としては、リチウム塩及びシアン酸塩が挙げられる。これらの塩基付加塩は全て、イソファゴミンから、例えば、好適な塩基をその化合物と反応させることにより調製することができる。
【００８７】
医薬担体
ＧＣＢ含有医薬組成物は、１種以上の製薬上許容できる担体を含むことができる。本明細書で使用する場合、「製薬上許容できる担体」という言葉は、薬剤投与に適合性のある、ありとあらゆる溶媒、賦形剤、分散媒、コーティング剤、抗菌及び抗カビ剤、等張剤及び吸着遅延剤などを含むことが意図される。製剤処方は十分に確立された技術であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；及び、Ｋｉｂｂｅ（ｅｄ．），Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，３ｒｄ  ｅｄ．（２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）において更に記載されている。任意の従来の媒体または作用物質が活性化合物と非適合性である場合を除き、このような媒体を、本発明の組成物で使用することができる。補助的活性化合物もまた、組成物に組み込むことができる。
【００８８】
本明細書で記載した組成物は、化合物が、体から急速に消失することを防止する担体、例えば、インプラント及びマイクロカプセル化送達系を含む、徐放性製剤を更に含むことができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤の調製方法は、当業者には明白であろう。リポソーム懸濁液（ウイルス性抗原に対するモノクローナル抗体を有する、感染細胞を標的にするリポソームを含む）もまた、製薬上許容できる担体として使用することができる。これらは、例えば米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているような、当業者に知られている方法に従い調製することができる。
【００８９】
ＩＶ投与に関して、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。いずれの場合も、組成物は滅菌されてなければならず、容易な注射可能性が存在する程度の流体でなければならない。組成物は、製造及び保存条件下において安定していなければならず、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにこれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒とすることができる。例えば、レシチンなどのコーティング剤を使用することにより、分散液の場合は必要な粒径を維持することにより、そして、界面活性剤を使用することにより、適切な流動性を維持することができる。様々な抗菌及び抗カビ剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより微生物作用の防止を達成することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖類、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトールなど）、塩化ナトリウムを含むのが好ましい。吸着を遅延させる作用物質、例えばモノステアリン酸アルミニウム、ヒト血清アルブミン、及びゼラチンを含めることにより、注射可能な組成物の安定性の持続をもたらすことができる。
【００９０】
ＧＣＢ／ＩＦＧを、上に列挙した成分の１つ、または組み合わせと共に、適切な溶媒に組み込み、必要により、続いて濾過滅菌を行うことにより、無菌注射可能な溶液を調製することができる。通常、塩基性分散媒と、上に列挙した必要な他の成分とを含有する滅菌ビヒクルに活性化合物を組み込むことにより分散液を調製する。無菌注射可能な溶液の組成物用の滅菌粉末の場合、組成物の好ましい方法は、真空乾燥及びフリーズドライ（例えば凍結乾燥）であり、これにより、先に滅菌濾過したその溶液から、活性成分の粉末に加えて、任意の追加の所望される成分が得られる。
【００９１】
活性化合物（例えば本明細書で記載したＧＣＢ組成物）は、化合物が、体から急速に消失することを防止する担体、例えば、インプラント及びマイクロカプセル化送達系を含む、徐放性製剤と共に調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤の調製方法は、当業者には明白であろう。材料は、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から、商業的に入手することもまた可能である。リポソーム懸濁液（ウイルス性抗原に対するモノクローナル抗体を有する、感染細胞を標的にするリポソームを含む）もまた、製薬上許容できる担体として使用することができる。これらは、例えば米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているような、当業者に知られている方法に従い調製することができる。
【００９２】
パッケージ化及び送達
本明細書で記載したＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物は、様々な医療デバイスを用いて投与することができる。例えば、本明細書に記載される組成物を、無針皮下注射デバイス、例えば、米国特許第５，３９９，１６３号、同第５，３８３，８５１号、同第５，３１２，３３５号、同第５，０６４，４１３号、同第４，９４１，８８０号、同第４，７９０，８２４号、または同第４，５９６，５５６号を用いて投与することができる。本発明で有用な周知のインプラント及びモジュールの例としては、制御した速度にて薬剤を分配するための、埋め込み型マイクロ注入ポンプについて開示している、米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を通して薬剤を投与するための治療用デバイスについて開示している、同第４，４８６，１９４号；正確な注入速度にて薬剤を送達するための薬剤注入ポンプについて開示している、同第４，４４７，２３３号；連続薬剤送達のための、流れ変更可能な埋め込み型注入装置について開示している、同第４，４４７，２２４号；複数のチャンバ区画を有する浸透性ドラッグ送達系について開示している、同第４，４３９，１９６号；及び、浸透性ドラッグ送達系について開示している、同第４，４７５，１９６号が挙げられる。もちろん、多くの他のこのようなインプラント、送達系、及びモジュールもまた知られている。
【００９３】
本明細書で記載したＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物は、ダブルチャンバーシリンジにパッケージ化することができる。例えば、凍結乾燥形態のＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物を第１のシリンジチャンバーに配置することができ、液体が、第２のシリンジチャンバーに存在することができる（例えば、米国公開出願番号第２００４−０２４９３３９号を参照のこと）。
【００９４】
本明細書で記載したＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物は、無針シリンジにパッケージ化することができる（例えば、米国特許第６，４０６，４５５号及び同第６，９３９，３２４号を参照のこと）。手短かに言えば、一例として、注射デバイスは、気体または気体源を含有するガスチャンバと、ガスチャンバから気体の放出を可能にさせるポートと、ガスチャンバからの気体の放出時に、少なくとも第１のピストンの移動を可能にさせるプランジャと、第１のピストンと、第２のピストンと、第１のチャンバ（例えば、薬剤保存及び混合に好適なチャンバ）と、中に第１のピストン、第２のピストン、及び第１のチャンバが収容されているピストンハウジングと、ガスチャンバからの気体の動力とは無関係に、第１及び第２ピストンの１つまたは両方を移動させることができる、変位部材（変位部材は、プランジャまたは個別の部材であることができる）と、第１のチャンバと連通している、無針注射に好適なオリフィスと、を備え、第１及び第２のピストンが、ピストンハウジング内で摺動可能に収容され、変位部材、気体源、及びプランジャが、ピストンの第１の位置において、第２のチャンバ、例えば流体リザーバーが、第１のピストン、ピストンハウジング、及び第２のピストンによりピストンハウジング内に画定され、変位部材が、ピストンの１つまたは両方を第２の位置に移動させることができ（ここで、第１のピストンは、流体リザーバーであることができる第２のチャンバが、薬剤保存装置及び混合チャンバであることができる第１のチャンバと連通しているような位置にある）、第２のピストンが第１のピストンの方向に移動することにより、第２のチャンバの容積を減少させ、第２のチャンバから第１のチャンバへの流体の移動を可能にし、プランジャが、ガスチャンバからの気体の放出の際に、第１のピストンを、第１のチャンバの容積を減少させて、物質がチャンバから、例えば対象へ、オリフィスを通して吐き出されるように移動させるように配置されている。
【００９５】
無針シリンジは、第１の成分（例えば乾燥または液状成分）用、及び第２の成分（例えば液状成分）用の個別のモジュールを含むことができる。モジュールは２つの個別の構成部品として提供され、例えば成分を自身に投与する対象により、または別の人により（例えば、健康管理を提供する、もしくはもたらす個人により）、組み立てられることができる。合わせて、モジュールは、本明細書で記載したデバイスのピストンハウジングの全てまたは一部を形成することができる。デバイスは、成分を個別に保存または提供し、対象への投与前に組み合わせるのが望ましい場合において、任意の第１及び第２成分を提供することができる。
【００９６】
治療方法
本明細書に記載するＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ製剤のいずれかを患者に投与することができる。本明細書に記載するＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ製剤は、ＧＣａｓｅ経路での機能障害に関する疾患、特にゴーシェ病の治療方法で使用するためのものである。組成物は、本明細書で記載する治療方法により、このような疾患を治療するための薬剤の製造においてもまた使用される。
【００９７】
用量は、約６０ユニット／ｋｇ、または６０ユニット／ｋｇであることができ、隔週で投与される。用量は、約３０ユニット／ｋｇ、または３０ユニット／ｋｇであることができ、毎週投与される。あるいは、用量は、隔週で投与される３０〜８０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される４０〜７０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される５０〜８０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される４５〜６５ユニット／ｋｇ、隔週で投与される４０〜６０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される３５〜５５ユニット／ｋｇ、隔週で投与される３０〜５０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される４５〜６５ユニット／ｋｇ、隔週で投与される５０〜７０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される５５〜７５ユニット／ｋｇ、隔週で投与される６０〜８０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される５５〜６５ユニット／ｋｇ、隔週で投与される４５〜５５ユニット／ｋｇ、隔週で投与される３５〜４５ユニット／ｋｇ、または、隔週で投与される６５〜７５ユニット／ｋｇの範囲であることができる。あるいは、用量は、毎週投与される１５〜４０ユニット／ｋｇ、毎週投与される２０〜３５ユニット／ｋｇ、毎週投与される２５〜４０ユニット／ｋｇ、毎週投与される２２．５〜３２．５ユニット／ｋｇ、毎週投与される２０〜３０ユニット／ｋｇ、毎週投与される１７．５〜２２．５ユニット／ｋｇ、毎週投与される１５〜２５ユニット／ｋｇ、毎週投与される２２．５〜３２．５ユニット／ｋｇ、毎週投与される２５〜３５ユニット／ｋｇ、毎週投与される２２．５〜３７．５ユニット／ｋｇ、毎週投与される３０〜４０ユニット／ｋｇ、毎週投与される２７．５〜３２．５ユニット／ｋｇ、毎週投与される２２．５〜２７．５ユニット／ｋｇ、毎週投与される１７．５〜２２．５ユニット／ｋｇ、または、毎週投与される３２．５〜３７．５ユニット／ｋｇの範囲であることができる。典型的には、用量は隔週で投与される１５〜６０ユニット／ｋｇ、特に、隔週で投与される６０ユニット／ｋｇである。治療目標の達成及び維持に基づいて、用量調節を個人ベースで行うことができる。
【００９８】
用量は、約１．５ｍｇ／ｋｇ、または１．５ｍｇ／ｋｇであることができ、隔週で投与される。用量は約０．７５ｍｇ／ｋｇ、または０．７５ｍｇ／ｋｇであることができ、毎週投与される。あるいは、用量は、隔週で投与される０．７５〜２．０ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される１．０〜１．７５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される１．２５〜２．０ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される１．１２５〜１．６２５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される１．０〜１．５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される０．８７５〜１．３７５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される０．７５〜１．２５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される１．２１５〜１．６２５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される１．２５〜１．７５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される１．３７５〜１．８７５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される１．５〜２．０ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される１．３７５〜１．６２５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される１．１２５〜１．３７５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される０．８７５〜１．１２５ｍｇ／ｋｇ、または、隔週で投与される１．６２５〜１．８７５ｍｇ／ｋｇの範囲であることができる。あるいは、用量は、毎週投与される０．３７５〜１．０ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．５〜０．８７５ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．６２５〜１．０ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．５６２５〜０．８１２５ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．５〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．４３７５〜０．５６２５ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．３７５〜０．６２５ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．５６２５〜０．８１２５ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．６２５〜０．８７５ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．５６２５〜０．９３７５ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．７５〜１．０ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．６８７５〜０．８１２５ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．５６２５〜０．６８７５ｍｇ／ｋｇ、毎週投与される０．４３７５〜０．５６２５ｍｇ／ｋｇ、または、毎週投与される０．８１２５〜０．９３７５ｍｇ／ｋｇの範囲であることができる。典型的には、用量は１５ｍｇ／ｋｇであり、隔週で、特に皮下投与により投与される。治療目標の達成及び維持に基づいて、用量調節を個人ベースで行うことができる。
【００９９】
本明細書に記載するＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ製剤のいずれかを患者に投与することができる。用量は約９０〜１８０ユニット／ｋｇであることができ、隔週で投与される。用量は、約９０ユニット／ｋｇ、または９０ユニット／ｋｇであることができ、毎週投与される。あるいは、用量は、隔週で投与される９０〜１５０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１１０〜１６０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１２０〜１８０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１２０〜１５０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される９０〜１２０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１００〜１３０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１１０〜１４０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１２０〜１５０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１３０〜１６０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１４０〜１７０ユニット／ｋｇ、または、隔週で投与される１５０〜１８０ユニット／ｋｇの範囲であることができる。あるいは、用量は、隔週で投与される９０〜１１０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１００〜１２０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１１０〜１３０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１２０〜１４０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１３０〜１５０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１４０〜１６０ユニット／ｋｇ、隔週で投与される１５０〜１７０ユニット／ｋｇ、または、隔週で投与される１６０〜１８０ユニット／ｋｇの範囲であることができる。
【０１００】
用量は、約２．２５〜４．５ｍｇ／ｋｇであることができ、隔週で投与される。あるいは、用量は、隔週で投与される２．２５〜３．７５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される２．７５〜４．０ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される３．０〜４．５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される３．０〜３．７５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される２．２５〜３．０ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される２．５〜３．２５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される２．７５〜３．５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される３．０〜３．７５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される３．２５〜４．０ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される３．５〜４．２５ｍｇ／ｋｇ、または、隔週で投与される３．７５〜４．５ｍｇ／ｋｇの範囲であることができる。あるいは、用量は、隔週で投与される２．２５〜２．７５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される２．５〜３．０ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される２．７５〜３．２５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される３．０〜３．５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される３．２５〜３．７５ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される３．５〜４．０ｍｇ／ｋｇ、隔週で投与される３．７５〜４．２５ｍｇ／ｋｇ、または、隔週で投与される４．０〜４．５ｍｇ／ｋｇの範囲であることができる。
【０１０１】
ＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物の投与を行い、ＧＣａｓｅ経路における機能障害に関連する疾患、例えばリソソーム蓄積症を治療することができる。例示的なリソソーム蓄積症としては、ゴーシェ病、ファブリ病、ポンペ病、ムコ多糖体症、及び多系統萎縮症が挙げられる。本明細書で記載した組成物は、ゴーシェ病を治療するのに特に好適である。疾患は、神経変性疾患、例えばパーキンソン病、アルツハイマー病、またはレヴィー小体型認知症であることができる。あるいは、疾患はα−シヌクレインの調節異常を伴ってよい。
【０１０２】
疾患の治療において、ＧＣＢ／ＩＦＧ及びＧＣＢ／ＩＦＧＴ組成物を静脈内投与または皮下投与することができる。皮下投与としては皮下注射が挙げられ、これが、本発明を実施するのに特に好適である。様々な投与スケジュールを使用して、組成物を投与することができる。例えば、組成物は週に１回、２週に１回、または１ヶ月に１回投与することができる。組成物は例えば、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、８日に１回、９日に１回、１０日に１回、１１日に１回、１２日に１回、１３日に１回、１５日に１回、または１６日に１回投与することができる。様々な因子により、治療の過程全体を通して投与頻度を変更してよい。典型的には、本明細書で記載した組成物は注射により、１週間に１回もしくは２回、または隔週に１回のいずれかで、皮下投与される。
【０１０３】
本明細書で記載した組成物が皮下投与により記載される場合、投与中の患者の不快感を最小限にするように注意が払われなければならない。したがって、典型的には、注射１回当たりで患者に投与される全体積は、５ｍＬを超えない。より典型的には、皮下投与される体積は、注射毎で２．５ｍＬ未満である。治療的有効量を達成するために複数回の皮下注射が必要とされる場合、これらは異なる部位に投与されることができる。あるいは、治療間隔を減らすことができる。治療目標の達成及び維持に基づいて、用量調節を個人ベースで行うことができる。
【実施例】
【０１０４】
本発明は、以下の実施例によってもまた記載及び実証される。しかし、明細書のいかなる場所においても、これらの、及び他の実施例の使用は例示のためだけのものであり、本発明の、またはあらゆる例示形態の範囲及び意味を少しも制限するものではない。同様に、本発明は、本明細書で記載された任意の特定の好ましい実施形態に限定されるものではない。実際、本発明の多くの修正及び変形が、本明細書を読むと当業者には明らかとなり得、このような変形は、本発明の精神及び範囲を逸脱することなく実施することができる。それ故、本発明は、これらの特許請求の範囲が権利を与えられる等価物の全ての範囲と共に、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ限定されなければならない。
【０１０５】
実施例１：ＧＣＢの濃度
ＧＣＢ（１０ｍｇ／ｍＬで５ｍＬ）を、−８０℃で保存した後解凍した。次に、ＧＣＢを３８００ｒｐｍ、４℃にて３０分間、遠心濾過し、濃縮した。次に、ＧＣＢを５０倍に希釈し、Ａ２８０で濃度を測定した。濃度が１００ｍｇ／ｍＬのＧＣＢを得た。次に、１％のポリソルベート２０を添加して、０．１％の終濃度にした。溶液のいくつかには、２０ｍｇのｐＨ調節イソファゴミンを添加した。
【０１０６】
０．２２ｕｍの膜に通して濾過を行った。具体的なプロセスを図１に示す。
【０１０７】
実施例２：ｐＨ未調節のＩＦＧを添加すると、ＧＣＢが不安定化する
以下に示すように、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて、様々なＧＣＢ試料を分析した。３７℃で１５分間、試料を変性した。８〜１６％のＮｏｖｅｘ（商標）トリス−グリシンプレキャストゲルで、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。５０ｍＭのジチオトレイトールを還元剤として使用した。試料のいくつかに、ｐＨ未調節のイソファゴミンを添加した。初日の結果を図２Ａに示す：
レーン１：分子量マーカー
レーン２：０．５％アッセイ対照（６０ｎｇのＧＣＢ）
レーン３：１％アッセイ対照（１２０ｎｇのＧＣＢ）
レーン４：１２μｇのＧＣＢ参照、還元
レーン５：１２μｇのＧＣＢ（４℃）、１日目、非還元
レーン６：１２μｇのＧＣＢ（４℃）、１日目、還元
レーン７：１２μｇのＧＣＢ（４℃）、１日目、１２μｇのイソファゴミン含有、非還元
レーン８：１２μｇのＧＣＢ（４℃）、１日目、１２μｇのイソファゴミン含有、還元
レーン９：１２μｇのＧＣＢ（−８０℃）、１日目、非還元
レーン１０：１２μｇのＧＣＢ（−８０℃）、１日目、還元
レーン１１：１２μｇのＧＣＢ（−８０℃）、１日目、１２μｇのイソファゴミン含有、非還元
レーン１２：１２μｇのＧＣＢ（−８０℃）、１日目、１２μｇのイソファゴミン含有、還元
【０１０８】
２週間後の結果を図２Ｂに示す：
レーン１：分子量マーカー
レーン２：０．５％アッセイ対照（６０ｎｇのＧＣＢ）
レーン３：１％アッセイ対照（１２０ｎｇのＧＣＢ）
レーン４：１２μｇのＧＣＢ参照、還元
レーン５：１２μｇのＧＣＢ（４℃）、２週目、非還元
レーン６：１２μｇのＧＣＢ（４℃）、２週目、還元
レーン７：１２μｇのＧＣＢ（４℃）、２週目、１２μｇのイソファゴミン含有、非還元
レーン８：１２μｇのＧＣＢ（４℃）、２週目、１２μｇのイソファゴミン含有、還元
レーン９：１２μｇのＧＣＢ（−８０℃）、２週目、非還元
レーン１０：１２μｇのＧＣＢ（−８０℃）、２週目、還元
レーン１１：１２μｇのＧＣＢ（−８０℃）、２週目、１２μｇのイソファゴミン含有、非還元
レーン１２：１２μｇのＧＣＢ（−８０℃）、２週目、１２μｇのイソファゴミン含有、還元
【０１０９】
約０．５％の総タンパク質を含み得る、レーン４〜１２における、１５０ｋＤａ〜２００ｋＤａのかすかなバンドにより示されるように、濃縮手順自体が、ＧＣＢのシステイン関連オリゴマー化を誘発した可能性がある。図２Ａのレーン７及び８における、５０ｋＤａ未満のサイズでのいくつかのかすかなバンドにより示されるように、イソファゴミンを−８０℃でＧＣＢに添加したときよりも、イソファゴミンを４℃でＧＣＢに添加したときに、実質的により多くのＧＣＢの断片が確認された。かすかなバンドの出現は、酸性イソファゴミンによるＧＣＢの不安定化によるものであり得る。
【０１１０】
イソファゴミンを添加することにより、４℃ではＧＣＢの断片が得られたが、−８０℃では得られなかった。図２Ａ及び２Ｂのレーン５〜８を参照のこと。
【０１１１】
実施例３：ＩＦＧＴのｐＨ調節、及びそれに続く凍結乾燥
ＩＦＧＴが水に溶解すると、酸性溶液が得られる。特に、１０３ｍｇの酒石酸イソファゴミンを５ｍＬの水に溶解させると、溶液のｐＨは３．２５となる。１５μＬの１０Ｍ  水酸化ナトリウムを溶液に添加することにより、ｐＨを６．０に調節した。
【０１１２】
ｐＨ調節ＩＦＧＴ溶液の５００μＬアリコートを、２ｍＬのエッペンドルフチューブに添加した。ドライアイス上で、エッペンドルフチューブ含有溶液を１時間冷凍し、針で穴を開けたパラフィルムを被せ、一晩凍結乾燥させた。凍結乾燥物を含むエッペンドルフチューブを図３に示す。
【０１１３】
実施例４：ｐＨ調節ＩＦＧへの、ＧＣＢの添加
ｐＨを６．０に調節したＩＦＧＴにＧＣＢを添加する前に、ＧＣＢ溶液のｐＨもまた、クエン酸ナトリウムにより６．０に調節した。特に、５０ｍＭ  クエン酸ナトリウム中の１００ｍｇ／ｍＬ  ＧＣＢは、ｐＨが６．０の溶液をもたらす。１００ｍＭ／ｍＬのＩＦＧＴ（ｐＨ６．０にて）を、５０ｍＭ  クエン酸ナトリウム中の１００ｍｇ／ｍＬのＧＣＢに添加したとき、ｐＨは６．０であった。
【０１１４】
実施例５：ｐＨ調節ＩＦＧの添加は、ＧＣＢを不安定化させない
以下に示すように、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して、ｐＨ調節したイソファゴミンに添加したＧＣＢを含む、調製した様々なＧＣＢ試料を、同じ日（０日目）、及び３日間の保存後（３日目）に分析した。３７℃で１５分間、試料を変性した。８〜１６％のＮｏｖｅｘ（商標）トリス−グリシンプレキャストゲルで、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。５０ｍＭのジチオトレイトールを還元剤として使用した。試料のいくつかを、ｐＨ未調節のイソファゴミンに添加した。
レーン１：分子量マーカー
レーン２：０．５％アッセイ対照（６０ｎｇのＧＣＢ）
レーン３：１％アッセイ対照（１２０ｎｇのＧＣＢ）
レーン４：１２μｇのＧＣＢ参照、非還元
レーン５：１００ｍｇ／ｍＬ濃度からの１２μｇのＧＣＢ、非還元
レーン６：１００ｍｇ／ｍＬ濃度からの１２μｇのＧＣＢ、還元
レーン７：１００ｍｇ／ｍＬ濃度からの１２μｇのＧＣＢ、１２μｇのｐＨ調節イソファゴミン含有、非還元
レーン８：１００ｍｇ／ｍＬ濃度からの１２μｇのＧＣＢ、１２μｇのｐＨ調節イソファゴミン含有、還元
【０１１５】
３日目に、試料にＳＥＣ  ＨＰＬＣを実施し、安定性を確認した。パラメーターには、移動相として、４００ｍＭ  塩化ナトリウムを添加したＧｉｂｃｏ  ＤＰＢＳ、０．８ｍＬ／分の流速、ＳＥＣカラムとしての、Ｓｅｐａｘ  Ｚｅｎｉｘ−Ｃ  ＳＥＣ−１５０（３μｍ、１５０Ａ、７．８×３００ｍｍ）、及び２５℃のカラム温度を含んだ。
【０１１６】
０日目の結果を図４Ａに、３日目の結果を図４Ｂに示す。ＧＣＢバンドはレーン４〜８に確認された。５０ｋＤａ未満のサイズを有する、より小さなバンドは、０日目でも３日目でも観察されなかった。イソファゴミンのｐＨを、ＧＣＢのｐＨに類似する６．０に調節することにより、ＧＣＢの不安定化を最小限にすることができる。
【０１１７】
実施例６：ｐＨ調節ＩＦＧＴにおける、ＧＣＢ安定性の分析
ＧＣＢを１００ｍｇ／ｍＬに濃縮した。１００ｍｇ／ｍＬの酒石酸イソファゴミン（ＩＦＧＴ）のｐＨを６．０に調節した。次に、ＩＦＧＴをＧＣＢと混合した。ＩＦＧＴのｐＨ調節を行わなかった場合、ＧＣＢ／ＩＦＧは安定せず、タンパク質クリッピングがＳＤＳ−ＰＡＧＥにより観察された。
【０１１８】
ｐＨ調節を行った場合、溶液中のＧＣＢは、ＳＥＣにより測定すると、少なくとも３日間安定した。移動相は、４００ｍＭ  塩化ナトリウムを添加したＧｉｂｃｏ  ＤＰＢＳであり、流速は０．８ｍＬ／分であり、ＳＥＣカラムはＳｅｐａｘ  Ｚｅｎｉｃ−Ｃ  ＳＥＣ−１５０（３μｍ、１５０Ａ、７．８×３００ｍｍ）であった。カラム温度は２５℃であった。図５に示すように、４つの試料をＳＥＣにより分析した。ＤＳ緩衝液中のＧＣＢ、９８．８％純度のＧＣＢ参照、及び９８．７％純度のＧＣＢを、基準として実施した。３日間保存した、中和イソファゴミンを有するＧＣＢ（ｐＨを６．０に調節）もまたＳＥＣで分析すると、安定していたようであった。
【０１１９】
実施例７：ｐＨ調節ＩＦＧの、ＧＣＢ安定性のサイズ排除クロマトグラフィー分析
下表１に記載する、少なくとも以下の試料にて、ＳＥＣ分離アッセイを実施した：
【表１】
2021501135.tif 000005
【０１２０】
以下のパラメーターをＳＥＣに使用した：４００ｍＭ  塩化ナトリウムを添加したＧｉｂｃｏ  ＤＰＢＳを移動相として使用した。流速は０．８ｍＬ／分であった。ＳＥＣカラムはＳｅｐａｘ  Ｚｅｎｉｘ−Ｃ  ＳＥＣ−１５０（３μｍ、１５０Ａ、７．８×３００ｍｍ）であった。カラム温度は２５℃であった。
【０１２１】
結果を図６Ａ及び６Ｂに示す。ＳＤＳ−ＰＡＧＥで観察したペプチド断片は、約１０分３０秒〜１０分４５秒にて溶出するピークに現れる。イソファゴミン及びＧＣＢの両方を含む、−８０℃の試料は、４℃の試料、または更に、−８０℃のＧＣＢ試料のいずれかよりもペプチド断片と関連するピークが少ない。
【０１２２】
実施例８：ＧＣＢ及びＩＦＧ濃度の、粘度への影響
（ａ）ＧＣＢ、及び、（ｂ）イソファゴミンと混合したＧＣＢ（ＧＣＢ／ＩＦＧ）の様々な製剤を調製した。ＧＣＢ製剤は、１０ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、２５ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、５０ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、７５ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、及び１００ｍｇ／ｍＬのＧＣＢを含んだ。ＧＣＢ／ＩＦＧ製剤は、５ｍｇ／ｍＬの酒石酸ＩＦＧを含む１０ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、１２．５ｍｇ／ｍＬの酒石酸ＩＦＧを含む２５ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、２５ｍｇ／ｍＬの酒石酸ＩＦＧを含む５０ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、３７．５ｍｇ／ｍＬの酒石酸ＩＦＧを含む７５ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、及び、５０ｍｇ／ｍＬの酒石酸ＩＦＧを含む１００ｍｇ／ｍＬのＧＣＢを含んだ。各製剤の粘度及び剪断速度を、粘度計（ＲｈｅｏＳｅｎｓｅ，Ｓａｎ  Ｒａｍｏｎ，ＣＡ，ＵＳＡ製のｍ−ＶＲＯＣ）で測定した。各測定のために、サイズが約２００μＬの試料が必要である。Ｓｌｏｐｅ  Ｆｉｔ  Ｒ２乗が＞０．９８である粘度結果を報告する。下表に結果を示す：
【表２】
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【表３】
2021501135.tif 000007
【０１２３】
粘度は、ＧＣＢの濃度と相関している。１００ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ及び５０ｍｇ／ｍＬの酒石酸ＩＦＧによる製剤は約５ｃＰの粘度を有し、皮下注射に許容される。
【０１２４】
実施例９：Ｂｉａｃｏｒｅにより測定した、ｐＨ７．４及びｐＨ５．０における、ＧＣＢへのＩＦＧの結合
実験を行い、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により、ｐＨ７．４及び５．０における、ＧＣＢ及びイソファゴミンの結合親和性、及び動態を同定した。これらのｐＨは、例えば、異なるｐＨ値を有する血漿、細胞質、及びリソソーム区画などの異なる環境において、ＧＣＢ及びイソファゴミンが互いにどのように結合するかを示し得る。
【０１２５】
全てのＳＰＲ実験は、シングルサイクルカイネティクス法により、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｓ−２００で実施した。ｐＨ７．４における実験のために、２ｍｇ／ｍＬのＧＣＢを、酢酸ＧＥ（ｐＨ５．０）緩衝液に希釈し、終濃度を１００μｇ／ｍＬにした。固定ランニング緩衝液は、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０１％のＰ−２０（ｐＨ７．４）であった。この緩衝液はその後、結合アッセイにて直接使用した。
【０１２６】
ｐＨ５．０における実験のために、２ｍｇ／ｍＬのＧＣＢを、酢酸ＧＥ（ｐＨ５．０）緩衝液に希釈し、終濃度を１００μｇ／ｍＬにした。固定ランニング緩衝液は、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、２．７ｍＭの塩化カリウム、１３７ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの酒石酸塩、０．０１％のＰ−２０（ｐＨ５．０）であった。酒石酸塩をランニング緩衝液に添加し、酒石酸イソファゴミンにより取り入れられた溶質効果を取り除いた。通常のイミンカップリング手順を用いて、ＣＭ５チップにＧＣＢを固定した。目標の固定レベルは４０００ＲＵであった。
【０１２７】
ｐＨ７．４でのＢｉａｃｏｒｅ実験に関して、濃度範囲は０．３９〜１００ｎＭであった。合計は、２倍連続希釈で９ポイントであった。ｐＨ５．０でのＢｉａｃｏｒｅ実験に関して、濃度範囲は０．３９〜１００ｎＭであった。合計は、２倍連続希釈で９ポイントであった。
【０１２８】
結合アッセイの条件は、以下のとおりであった：３０μＬ／分の流速、１２０秒の会合時間、６００秒の解離時間、及び、再生試薬としての３Ｍの塩化マグネシウム。初期濃度範囲が０．３μｍ〜１００μＭのイソファゴミンを、表面再生することなく、シングルサイクルモードで固定したベラグルセラーゼアルファに流した。
【０１２９】
ｐＨ５．０及びｐＨ７．４研究のそれぞれに関して、２回の操作を行った。得られたデータを下表、及び図７Ａ〜７Ｄに示す。黒線は実際のデータを表し、赤線はモデルフィッティングを表す。
【表４】
2021501135.tif 000008
【表５】
2021501135.tif 000009
【表６】
2021501135.tif 000010
【表７】
2021501135.tif 000011
【０１３０】
ｐＨ５．０における、ＧＣＢ／ＩＦＧ結合のＫＤは１９８〜２５１ｎＭである。ｐＨ７．４における、ＧＣＢ／ＩＦＧ結合のＫＤは６．４〜９．４ｎＭである。
【０１３１】
実施例１０：イソファゴミンは、ベラグルセラーゼアルファの融解温度を増加させる
ベラグルセラーゼのみ、または、異なる比率でのイソファゴミンの組み合わせの熱安定性を、ナノ示差走査蛍光定量法（ｎａｎｏ−ＤＳＦ）を用いて評価した（図８）。４０ｍｇ／ｍＬのベラグルセラーゼアルファ濃度における示したイソファゴミンのモル比にて、まず試料を調製した。ｎａｎｏ−ＤＳＦ装置にロードする前に、試料を２ｍｇ／ｍＬのベラグルセラーゼアルファ濃度まで希釈した。図８に列挙する試料条件は、以下のとおりである：
対照：Ｄ−酒石酸イソファゴミン（ＩＦＧＴ）なし
試料１：１００倍のモル比のＩＦＧＴ
試料２：３０倍のモル比のＩＦＧＴ
試料３：１０倍のモル比のＩＦＧＴ
試料４：３倍のモル比のＩＦＧＴ
試料５：ＩＦＧＴなし
試料７：１００倍のモル比の塩酸イソファゴミン
試料８：１００倍のモル比の酢酸イソファゴミン
【０１３２】
ベラグルセラーゼアルファへのイソファゴミンの結合もまた、ＧＣＢ酵素活性アッセイで測定した。酵素反応を、３７℃で１時間行った。酒石酸イソファゴミンをベラグルセラーゼアルファで、約１０分間プレインキュベートした。
【０１３３】
酒石酸イソファゴミンのアッセイ濃度は、図９Ａ〜９Ｃに示すグラフに表示されるとおりである。ベラグルセラーゼアルファの最終アッセイ濃度は、ｐＨ５．０において約１ｎＭ、及びｐＨ７．４において約１０ｎＭであった。図９Ａは、合成比色分析ｐＮＰ−ＧＰＳ基質による活性阻害曲線を示す。図９Ｂは、合成蛍光定量４ＭＵ−ＧＰＳ基質による活性阻害曲線を示す。図９Ｃは、天然グリコスフィンゴリピドＣ１２−ＧｌｕＣｅｒ基質による活性阻害を示す。Ｃ１２−ＧｌｕＣｅｒ開裂反応は、グルコースオキシダーゼアッセイキットでグルコース産生を測定することによりアッセイした。
【０１３４】
実施例１１：３週間の安定性研究
４種類の異なる、ＧＣＢとＤ−酒石酸イソファゴミンの混合物を、下表８に示すように調製した。
【表８】
2021501135.tif 000012
【０１３５】
最初の時点、及び、４０℃で３週間保存した後で、ＳＥＣ、ｒｐＨＰＬＣ、及びＳＤＳ−ＰＡＧＥのそれぞれで測定した比活性及び純度をアッセイした。ＳＥＣは、可溶性の高分子量種を検出できる一方で、ｒｐＨＰＬＣは、酸化への耐性などの、ＧＣＢの化学的安定性についての情報を提供する。ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、タンパク質のクリッピング及び凝集を検出することができる。比活性に関して、参照基準の活性は、１６μｍｏｌ／分／ｍｇ（０日目）、及び１８μｍｏｌ／分／ｍｇ（３週目）であった。蛍光ベースの活性アッセイにより、日ごとで著しい変化が観察された。全ての安定性試料は、参照基準の活性よりもわずかに高い活性を有していた。
【０１３６】
目視検査もまた実施した。試料の画像を図１０Ａに示す。データを下表に示す。図１に示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ結果において、以下のレーンが上の試料に対応する。
レーン１：分子量マーカー
レーン２：１２μｇのＧＣＢ参照、非還元
レーン３：１２μｇのＧＣＢ群１、非還元
レーン４：１２μｇのＧＣＢ群２、非還元
レーン５：１２μｇのＧＣＢ群３、非還元
レーン６：１２μｇのＧＣＢ群４、非還元
【表９】
2021501135.tif 000013
【表１０】
2021501135.tif 000014
【表１１】
2021501135.tif 000015
【表１２】
2021501135.tif 000016
【０１３７】
ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比が１：１では、４０℃にて３週間にわたり安定性を付与するには小さすぎた。ＳＤＳ−ＰＡＧＥアッセイで凝集が見られ、３週間にて溶液が混濁した。しかし、ＩＦＧに対するＧＣＢのモル比が１：３以上だと、３週間で、ＳＤＳ−ＰＡＧＥでの純度は少なくとも９８％であり、溶液は透明であった。
【０１３８】
実施例１２：カニクイザルにおける、静脈内ＧＣＢ及び皮下ＧＣＢ＋ＩＦＧの、薬物動態研究
２群のカニクイザルを、ＧＣＢの薬物動態について試験した。群１では、ＧＣＢは静脈内注射で１回投与した。群２では、ＧＣＢとＩＦＧの製剤を、皮下注射で１回投与した。肝臓及び脾臓からの３つの試料を、投与後１時間、２時間、８時間、及び２４時間のそれぞれにて収集した。研究設計の更なる詳細を、下表１３に示す。
【表１３】
2021501135.tif 000017
【０１３９】
投与後１、２、８、及び２４時間にて、肝臓及び脾臓で収集を行った（ｎ＝３）。
【０１４０】
次に、組織学的分析を全ての試料で行った。１０％ＮＢＦで固定した肝臓及び脾臓を、パラフィンブロックのために処理した。ＧＣＢ  ＩＨＣ（一次抗体ＴＫ３６−マウス抗ｈｕＧＣＢ、１：１０，０００）、ならびにヘマトキシリン及びエオシン染色のために、５マイクロメートルの断片を準備した。
【０１４１】
図１１は、肝臓及び脾臓における、サル組織へのＧＣＢ  ＩＨＣ染色のための陰性及び陽性対照を示す。ＧＣＢ  ＩＨＣ抗体が不存在下にて、無視できる染色が確認された（上パネル）。ＧＣＢ  ＩＨＣ抗体の存在下にて、未処理肝臓でかすかな背景染色が確認された（左下パネル）。ＧＣＢ  ＩＨＣ抗体の存在下にて、処理済み肝臓及び脾臓にて、暗い染色が確認された（下の中、及び右下パネル）。特に、肝臓は、クッパー細胞、内皮、及び肝細胞にてＧＣＢ陽性染色を示し、脾臓は、内皮及びマクロファージ陽性染色を示した。
【０１４２】
肝臓でのＧＣＢの生体内分布を、静脈内注射によるＧＣＢの送達後、及び、皮下注射によるＧＣＢ＋ＩＦＧの送達後に研究した。皮下注射で処理したサルの肝臓では、８時間の時点で強力なＧＣＢが確認された。静脈内注射により処理したサルの肝臓内で、１時間及び２時間の時点にて、強力なＧＣＢ染色が確認された。結果を図１２（２倍倍率）に示す、及び図１３（２０倍倍率）で示す。
【０１４３】
図１４（２倍倍率）及び図１５（２０倍倍率）で示すように、脾臓でも同様の結果が確認された。ＧＣＢ＋ＩＦＧを皮下投与することにより、ＧＣＢのＩＶ投与におけるものに相当するＧＣＢ組織曝露を提供することができることを、これらのデータは示唆している。
【０１４４】
実施例１３：肝臓及び脾臓での、ベラグルセラーゼアルファ活性とタンパク質レベルの相関
カニクイザルでのＩＶ用量投与の後、肝臓及び脾臓ホモジェネートにて、ベラグルセラーゼアルファタンパク質及び酵素活性レベルを評価した。投与後の所定の時点（０．５〜２４時間）にて、組織を収集した。図１６Ａ及び１６Ｂにデータを示す。具体的には、図１６Ａは、２〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲にわたって、ベラグルセラーゼアルファのみをＩＶ投与した結果を示す。図１６Ｂは、イソファゴミンに対するベラグルセラーゼアルファのモル比が１：３となるように、相当量のイソファゴミン（０．００７５〜５ｍｇ／ｋｇ）で製剤化した、１．５〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲でベラグルセラーゼアルファをＳＣ投与した結果を示す。
【０１４５】
実施例１４：酒石酸イソファゴミンの皮下投与後での、カニクイザルでの血清ＧＣＢ活性レベル
ベラグルセラーゼアルファ＋酒石酸イソファゴミンを皮下（ＳＣ）投与した後、カニクイザルにて、ＧＣＢの血清活性レベルをアッセイした。図１６Ｃにデータを示す。ビヒクル、ならびに４〜１４ｎｇ／ｍＬまたは０．０７〜０．２５ｎｍｏｌ  ４ＭＵ／分／ｍＬの範囲のＧＣＢで処理した投与前動物（ｎ＝３９）から、内因性ＧＣＢ血清活性を測定した。通常は２．５ｍｇ／ｋｇのＳＣ投与の上限を超えて、酒石酸イソファゴミンは血清中でＧＣＢ活性を増加させることができる。血清活性のこの増加は、血清で連続して生じる、内在性ＧＣＢ分解プロセスの防止によるものである可能性がある。より多い０．０２５ｍｇ／ｋｇの用量のデータに基づくと、Ｖｅｌａ−３ｘＩＦＧＴに組み込まれた酒石酸イソファゴミンの用量（０．０２２５ｍｇ／ｋｇ）は、内因性血清ＧＣＢ活性を増加させない。
【０１４６】
実施例１５：ＩＦＧは、ベラグルセラーゼアルファＳＣ血清曝露において、２５倍を超える向上をもたらす
４ｍｇ／ｋｇの用量で、カニクイザルに皮下投与したベラグルセラーゼアルファ及びＩＦＧ（１：３のモル比）は、４ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与のベラグルセラーゼアルファと比較して、血清曝露において２５倍を超える改善をもたらすことができた。ベラグルセラーゼアルファに対して、３倍〜１００倍モル過剰のＩＦＧの比率により、血清曝露の同様の増加が促進された。ＥＣＬ  ＥＬＩＳＡアッセイから測定した血清生物学的利用能の増加は、ＧＣＢ活性アッセイ（４ＭＵ−ＧＰＳ基質）により実証された。結果を図１７Ａ及び１７Ｂに示す。４ｍｇ／ｋｇのＧＣＢに０．０７ｍｇ／ｋｇのＩＦＧＴを添加することにより、血清でのＧＣＢの量（１６Ａ）、及び、ＧＣＢの全体の酵素活性（１６Ｂ）の量が実質的に増加した。それ故、ＧＣＢをＩＦＧ、例えばＩＦＧＴ、特に少なくとも１：３（ＧＣＢ：ＩＦＧ、例えばＧＣＢ：ＩＦＧＴ）のモル比で共に製剤化すると、ＳＣ投与を可能にする血清生物学的利用能が提供可能であることをデータは示す。
【０１４７】
実施例１６：ＶＰＲＩＶのみの静脈内投与と比較しての、皮下ＶＰＲＩＶとＩＦＧが１：１００のモル比率の場合の、優れた組織生体内分布
４ｍｇ／ｋｇの用量で、カニクイザルに皮下投与したベラグルセラーゼアルファ及びＩＦＧ（１：１００のモル比）は、ベラグルセラーゼアルファの組織取り込みを付与することが可能であり、これはベラグルセラーゼアルファのみを１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ投与した場合の組織取り込みを上回った。ＶＰＲＩＶの標準治療でのＩＶ注入用量は、１．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、約１．５ｍｇ／ｋｇの目標皮下用量を使用してよい。約２５０ｍｇの組織を、１ｍＬのＨＥＰＥＳ／Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００細胞溶解緩衝液中で均質化した。ＥＣＬ  ＥＬＩＳＡアッセイを使用して組織のベラグルセラーゼアルファの含有量を測定し、ＢＣＡアッセイにより測定した総タンパク質含有量に正規化した。結果を図１８Ａ及び１８Ｂに示す。ＧＣＢ：ＩＦＧを１：１００のモル比で皮下投与した後の、肝臓（１８Ａ）及び脾臓（１８Ｂ）に存在するＧＣＢの曝露プロファイルは、５日間（１２０時間）にわたってＧＣＢを静脈内投与した際の曝露プロファイルより優れていた。
【０１４８】
実施例１７：ＶＰＲＩＶのみを静脈内投与した場合に対する、皮下ＶＰＲＩＶとＩＦＧが１：３のモル比における、組織生体内分布の比較可能性
目標の１．５ｍｇ／ｋｇの臨床用量で、カニクイザルに皮下投与したベラグルセラーゼアルファ及びＩＦＧ（１：３のモル比）は、ベラグルセラーゼアルファのみを２ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ投与した場合の組織取り込みに相当する、ベラグルセラーゼアルファの組織取り込みを付与することができた。ＶＰＲＩＶの標準治療でのＩＶ注入用量は、１．５ｍｇ／ｋｇである。約２５０ｍｇの組織を、１ｍＬのＨＥＰＥＳ／Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００細胞溶解緩衝液中で均質化した。ＥＣＬ  ＥＬＩＳＡアッセイを使用して組織のベラグルセラーゼアルファの含有量を測定し、ＢＣＡアッセイにより測定した総タンパク質含有量に正規化した。結果を図１９Ａ及び１９Ｂに示す。ＧＣＢ：ＩＦＧを１：３のモル比で皮下投与した後に、肝臓に存在するＧＣＢの量は、８時間及び２４時間の両方の時点における、ＧＣＢの静脈内投与の場合の量に相当した。同様に、ＧＣＢ：ＩＦＧを１：３のモル比で皮下投与した後の、脾臓におけるＧＣＢ組織曝露は、８時間及び２４時間の両方の時点における、ＧＣＢの静脈内投与の場合の量に相当した。
【０１４９】
同様に、ＧＣＢ：ＩＦＧを１：３のモル比で皮下投与した後の、脾臓におけるＧＣＢ組織曝露は、８時間及び２４時間の両方の時点における、ＧＣＢの静脈内投与の場合の量に相当した。したがって、ＩＦＧ、例えばＩＦＧＴをＧＣＢ製剤に添加することで、ＧＣＢ含有製剤の皮下投与が可能となる。
【０１５０】
実施例１８：最低１：１のイソファゴミン比率により、それより高いイソファゴミンのモル比と同様の血清曝露がもたらされる
１．５ｍｇ／ｋｇの用量で、カニクイザルに皮下投与したベラグルセラーゼアルファ及びＩＦＧ（１：１のモル比）は、より高いイソファゴミン比率と同様のＧＣＢ血清曝露をもたらすことができた。１：１〜１：１００のモル比では、ＧＣＢ血清曝露において明らかな差は観察されなかった。ＥＣＬ  ＥＬＩＳＡアッセイから測定した血清生物学的利用能の増加は、ＧＣＢ活性アッセイ（４ＭＵ−ＧＰＳ基質）により実証された。結果を図２０Ａ及び２０Ｂに示す。
【０１５１】
投与のための試験物品を、投与前に動物設備への冷凍製剤として準備した。試験物品は、投与の約１〜３時間前に解凍した。それ故、冷温保存（例えば凍結）により室温保存の責任を回避することができる場合、ＧＣＢをＩＦＧ、例えばＩＦＧＴと、特に少なくとも１：１（ＧＣＢ：ＩＦＧ、例えばＧＣＢ：ＩＦＧＴ）のモル比率で共に製剤化したときに、ＳＣ投与を可能にする、十分な血清生物学的利用能を提供することができることをデータは示す。
【０１５２】
実施例１９：イソファゴミンは、ヒト血清において、３７℃での熱変性からＶＰＲＩＶを保護する
１０ｎＭ  ＶＰＲＩＶ（ある形態のＧＣＢ）を含有する血清を試験し、ＩＦＧがＧＣＢを安定化させられるか否かを測定した。ＩＦＧが血清中で、以下のＩＦＧ濃度：１ｎＭ、３ｎＭ、１０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ，及び１０００ｎＭを有するように、ＩＦＧをＶＰＲＩＶに添加した。陰性対照にはＩＦＧを添加せずに使用した。
【０１５３】
４−メチルウンベリフェロン  ｂ−Ｄ−グルコピラノシド基質の開裂を用いて、酵素活性を測定した。陰性対照、１ｎＭ  ＩＦＧ、及び１０ｎＭ  ＩＦＧにおいて、活性は６０分間で１００％から約４０％まで下がった。図２１を参照のこと。しかし、３０ｎＭ（３倍のモル比）以上の濃度を添加することで、活性喪失の大部分が防止された。ＩＦＧは、血清中での熱変性からＧＣＢを保護するのに効果的であり得る。ＩＦＧ及びＩＦＧＴが媒介して、熱変性からＧＣＢを保護することにより、ＧＣＢの生物学的利用能を向上させ、血清中でのＧＣＢ耐性を向上させ、かつ、ＧＣＢの細胞及び組織取り込みプロセスが生じる時間を長くすることができる可能性がある。
【０１５４】
本発明は、本明細書において記載される特定の実施形態による範囲に限定されない。実際、本明細書において記載されるものに加えての本発明の様々な修正は、先の記載及び添付の図から当業者らに明白になるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。全ての値はおよそのものであり、説明のために提供されていることが更に理解されなければならない。
【０１５５】
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によってその全体が組み込まれる。矛盾が生じた場合は、定義を含め、本明細書が優先される。加えて、材料、方法、及び実施例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。
【図１】
2021501135.tif 000018
【図２Ａ】
2021501135.tif 000019
【図２Ｂ】
2021501135.tif 000020
【図３】
2021501135.tif 000021
【図４Ａ】
2021501135.tif 000022
【図４Ｂ】
2021501135.tif 000023
【図５】
2021501135.tif 000024
【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
2021501135.tif 000030
【図８】
2021501135.tif 000031
【図９Ａ】
2021501135.tif 000032
【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
2021501135.tif 000035
【図１０Ｂ】
2021501135.tif 000036
【図１１】
2021501135.tif 000037
【図１２】
2021501135.tif 000038
【図１３】
2021501135.tif 000039
【図１４】
2021501135.tif 000040
【図１５】
2021501135.tif 000041
【図１６Ａ】
2021501135.tif 000042
【図１６Ｂ】
2021501135.tif 000043
【図１６Ｃ】
2021501135.tif 000044
【図１７】
2021501135.tif 000045
【図１８】
2021501135.tif 000046
【図１９】
2021501135.tif 000047
【図２０】
2021501135.tif 000048
【図２１】
2021501135.tif 000049
【手続補正書】
【提出日】令和2年8月20日(2020.8.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）とイソファゴミン（ＩＦＧ）とを、約１：少なくとも２．５のモル比で含む、組成物。
【請求項２】
前記ＧＣＢがベラグルセラーゼアルファである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物のｐＨが約６．０、約６．５、または約７．０である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＧＣＢと前記ＩＦＧとのモル比が、約１：２．５〜約１：３０である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＧＣＢと前記ＩＦＧとのモル比が、約１：２．５〜約１：１０である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ＧＣＢと前記ＩＦＧとのモル比が、約１：１０〜約１：３０である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＧＣＢと前記ＩＦＧとのモル比が、約１：２．５〜約１：３．５である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＧＣＢと前記ＩＦＧとのモル比が、約１：３．０である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が、２０℃以上、０℃〜２０℃、または０℃未満の温度である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が水溶液である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が凍結乾燥物である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
製薬上許容できる賦形剤、製薬上許容できる塩、または製薬上許容できる賦形剤および製薬上許容できる塩の両方をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＩＦＧが酒石酸イソファゴミンである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記酒石酸イソファゴミンがＤ−酒石酸イソファゴミンである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
液体である、請求項１〜１０および１２〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
酸化防止剤、炭水化物、および／または界面活性剤をさらに含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
４５〜１２０ｍｇ／ｍＬのＧＣＢと、０．２〜１．８ｍｇ／ｍＬのイソファゴミンとを含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
６０ｍｇ／ｍＬのＧＣＢと、０．９ｍｇ／ｍＬのイソファゴミンとを含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
５０ｍＭのクエン酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウム、および０．０１％のポリソルベート２０をさらに含む、請求項１７または１８に記載の組成物。
【請求項２０】
５〜２０ｍＭのクエン酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウム、および０．０１％のポリソルベート−２０をさらに含む、請求項１７または１８に記載の組成物。
【請求項２１】
１０ｍＭのクエン酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウム、および０．０１％のポリソルベート−２０を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
約ｐＨ６．０である、請求項１７〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか一項に記載の組成物を含む容器。
【請求項２４】
前記容器が、予充填シリンジ、バイアル瓶、またはアンプルからなる群より選択される、請求項２３に記載の容器。
【請求項２５】
ＩＦＧを水に溶解させること、ｐＨを約６．０に調節すること、およびＧＣＢを添加して組成物を得ることを含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の組成物の調製方法。
【請求項２６】
ａ）ＧＣＢを添加する前にＩＦＧを凍結乾燥させること；
ｂ）ポリソルベート２０を０．０１％まで添加すること；
ｃ）前記組成物を、０．２２μｍの膜に通して濾過すること
の１つまたは複数をさらに含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＩＦＧが、前記組成物中において前記ＧＣＢの安定性を維持するのに十分な量で存在する、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＩＦＧが、０〜５０℃で少なくとも３日間、前記組成物中において前記ＧＣＢの安定性を維持するのに十分な量で存在する、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＩＦＧが、０〜４０℃で少なくとも６ヶ月間、前記組成物中において前記ＧＣＢの安定性を維持するのに十分な量で存在する、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項３０】
治療で使用するための請求項１〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
対象におけるＧＣａｓｅ経路の機能障害またはそれに関連する疾患の治療に使用するための、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
静脈内投与または皮下投与される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
皮下投与される、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記皮下投与が皮下注射である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
１週間に２回、１週間に１回、１週間に１回よりも少ない頻度、または隔週に１回投与される、請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３６】
前記疾患が、ＧＣａｓｅ活性の欠損またはα−シヌクレイン調節異常を含む、請求項３１〜３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
前記ＧＣａｓｅ活性の欠損が酵素活性の低下を含む、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記疾患がリソソーム蓄積症である、請求項３１〜３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記リソソーム蓄積症がゴーシェ病、ファブリ病、ポンペ病、ムコ多糖体症、および多系統萎縮症から選択される、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記疾患が神経変性疾患である、請求項３１〜３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記神経変性疾患がパーキンソン病、アルツハイマー病、およびレヴィー小体型認知症から選択される、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記対象がヒトである、請求項３１〜４１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４３】
ＧＣａｓｅ経路での機能障害を治療するための組成物であって、０．５〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢと、前記ＧＣＢに対して少なくとも約３倍モル過剰のＩＦＧとを含み、該組成物が皮下投与される、組成物。
【請求項４４】
０．８〜４．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４６】
１．２〜２．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４７】
約１．５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４８】
２．０〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４９】
２．２５〜４．５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項５０】
２．２５〜３．７５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項５１】
３．５〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項５２】
前記ＩＦＧが、前記ＧＣＢに対して３〜１０倍モル過剰、１０〜３０倍モル過剰、または３０〜１００倍モル過剰で存在する、請求項４３〜５１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５３】
前記ＩＦＧが、前記ＧＣＢに対して３倍モル過剰で存在する、請求項４３〜５１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５４】
脾臓、肝臓および／または血清における前記ＧＣＢの曝露、活性、または生物学的利用能が増大する、請求項３１〜５３のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５５】
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、参照によってその全体が組み込まれる。矛盾が生じた場合は、定義を含め、本明細書が優先される。加えて、材料、方法、および実施例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。
最後に、本発明の好ましい実施態様を項分け記載する。
［実施態様１］
グルコセレブロシダーゼ（ＧＣＢ）とイソファゴミン（ＩＦＧ）を、少なくとも約１：２．５のモル比で含む、組成物。
［実施態様２］
前記ＧＣＢがベラグルセラーゼアルファである、実施態様１に記載の組成物。
［実施態様３］
前記組成物のｐＨが約６．０、約６．５、または約７．０である、実施態様１または２に記載の組成物。
［実施態様４］
前記ＩＦＧに対する前記ＧＣＢの前記モル比が、約１：２．５〜約１：３０である、実施態様１〜３のいずれかに記載の組成物。
［実施態様５］
前記ＩＦＧに対する前記ＧＣＢの前記モル比が、約１：２．５〜約１：１０である、実施態様１〜３のいずれかに記載の組成物。
［実施態様６］
前記ＩＦＧに対する前記ＧＣＢの前記モル比が、約１：１０〜約１：３０である、実施態様１〜３のいずれかに記載の組成物。
［実施態様７］
前記ＩＦＧに対する前記ＧＣＢの前記モル比が、約１：２．５〜約１：３．５である、実施態様１〜３のいずれかに記載の組成物。
［実施態様８］
前記ＩＦＧに対する前記ＧＣＢの前記モル比が、約１：３．０である、実施態様１〜３のいずれかに記載の組成物。
［実施態様９］
前記ＩＦＧに対する前記ＧＣＢの前記モル比が、１：３．０である、実施態様１〜３のいずれかに記載の組成物。
［実施態様１０］
前記組成物が少なくとも２０℃の温度である、実施態様１〜９のいずれかに記載の組成物。
［実施態様１１］
前記組成物が０℃〜２０℃の温度である、実施態様１〜９のいずれかに記載の組成物。
［実施態様１２］
前記組成物が０℃未満の温度である、実施態様１〜９のいずれかに記載の組成物。
［実施態様１３］
前記組成物が水溶液である、実施態様８〜１２のいずれかに記載の組成物。
［実施態様１４］
前記組成物が凍結乾燥物である、実施態様１〜９、および１２のいずれかに記載の組成物。
［実施態様１５］
製薬上許容できる賦形剤、製薬上許容できる塩、または製薬上許容できる賦形剤および製薬上許容できる塩の両方をさらに含む、実施態様１〜１４のいずれかに記載の組成物。
［実施態様１６］
前記ＩＦＧが酒石酸イソファゴミンである、実施態様１〜１５のいずれかに記載の組成物。
［実施態様１７］
前記酒石酸イソファゴミンがＤ−酒石酸イソファゴミンである、実施態様１６に記載の組成物。
［実施態様１８］
前記組成物が液体である、実施態様１〜１３、および１５〜１７のいずれかに記載の組成物。
［実施態様１９］
酸化防止剤をさらに含む、実施態様１〜１８のいずれかに記載の組成物。
［実施態様２０］
炭水化物をさらに含む、実施態様１〜１９のいずれかに記載の組成物。
［実施態様２１］
界面活性剤をさらに含む、実施態様１〜２０のいずれかに記載の組成物。
［実施態様２２］
前記組成物が、４５〜１２０ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、および０．２〜１．８ｍｇ／ｍＬのイソファゴミンを含む、実施態様１〜２１のいずれかに記載の組成物。
［実施態様２３］
前記組成物が６０ｍｇ／ｍＬのＧＣＢ、および０．９ｍｇ／ｍＬのイソファゴミンを含む、実施態様２２に記載の組成物。
［実施態様２４］
前記組成物が、５０ｍＭのクエン酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウム、および０．０１％のポリソルベート２０をさらに含む、実施態様２２または２３に記載の組成物。
［実施態様２５］
前記組成物が５〜２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、および０．０１％のポリソルベート−２０を含む、実施態様２４に記載の組成物。
［実施態様２６］
前記組成物が１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、および０．０１％のポリソルベート−２０を含む、実施態様２５に記載の組成物。
［実施態様２７］
前記組成物が５〜２０ｍＭのリン酸ナトリウム、および０．０１％のポリソルベート−２０を含む、実施態様２４に記載の組成物。
［実施態様２８］
前記組成物が１０ｍＭのリン酸ナトリウム、および０．０１％のポリソルベート−２０を含む、実施態様２７に記載の組成物。
［実施態様２９］
前記組成物が約ｐＨ６．０である、実施態様２２〜２８のいずれかに記載の組成物。
［実施態様３０］
前記組成物がｐＨ６．０である、実施態様２２〜２８のいずれかに記載の組成物。
［実施態様３１］
実施態様１〜３０のいずれかに記載の組成物を含む容器。
［実施態様３２］
前記容器が、予充填シリンジ、バイアル瓶、またはアンプルからなる群から選択される、実施態様３１に記載の容器。
［実施態様３３］
前記ＩＦＧを水に溶解させることと、ｐＨを約６．０に調節することと、前記ＧＣＢを添加して前記組成物を得ることと、を含む、実施態様１〜３０のいずれかに記載の組成物の調製方法。
［実施態様３４］
ＧＣＢを添加する前に前記ＩＦＧを凍結乾燥させることをさらに含む、実施態様３３に記載の方法。
［実施態様３５］
ポリソルベート２０を０．０１％まで添加することをさらに含む、実施態様３３または３４に記載の方法。
［実施態様３６］
前記組成物を、０．２２μｍの膜に通して濾過することをさらに含む、実施態様３３〜３５のいずれかに記載の方法。
［実施態様３７］
前記ＩＦＧが、前記組成物中での前記ＧＣＢの安定性を維持するのに十分な量で存在する、実施態様３３〜３６のいずれかに記載の方法。
［実施態様３８］
前記ＩＦＧが、少なくとも３日間、０〜５０℃にて、前記組成物中で前記ＧＣＢの安定性を維持するのに十分な量で存在する、実施態様３３〜３６のいずれかに記載の方法。
［実施態様３９］
前記ＩＦＧが、少なくとも６ヶ月間、０〜４０℃にて、前記組成物中で前記ＧＣＢの安定性を維持するのに十分な量で存在する、実施態様３３〜３６のいずれかに記載の方法。
［実施態様４０］
治療法で使用するための、実施態様１〜３０のいずれかに記載の組成物。
［実施態様４１］
ＧＣａｓｅ経路での機能障害に関する疾患の治療方法であって、それを必要とする患者に、実施態様１〜１１、１３、および１５〜３０のいずれかに記載の組成物を投与することを含む、前記方法。
［実施態様４２］
前記方法が、前記疾患を治療するのに効果的である、実施態様４１に記載の方法。
［実施態様４３］
前記組成物が静脈内投与または皮下投与される、実施態様４１または４２に記載の方法。
［実施態様４４］
前記組成物が皮下投与される、実施態様４３に記載の方法。
［実施態様４５］
前記皮下投与が皮下注射である、実施態様４４に記載の方法。
［実施態様４６］
前記組成物が１週間に２回投与される、実施態様４１〜４５のいずれかに記載の方法。
［実施態様４７］
前記組成物が１週間に１回投与される、実施態様４１〜４５のいずれかに記載の方法。
［実施態様４８］
前記組成物が１週間に１回よりも少ない頻度で投与される、実施態様４１〜４５のいずれかに記載の方法。
［実施態様４９］
前記組成物が隔週に１回投与される、実施態様４１〜４５のいずれかに記載の方法。
［実施態様５０］
前記疾患がＧＣａｓｅ活性の欠損を含む、実施態様４１〜４９のいずれかに記載の方法。
［実施態様５１］
前記ＧＣａｓｅ活性の欠損は酵素活性の低下を含む、実施態様５０に記載の方法。
［実施態様５２］
前記疾患がα−シヌクレイン調節異常を含む、実施態様４１〜４９のいずれかに記載の方法。
［実施態様５３］
前記疾患がリソソーム蓄積症である、実施態様４１〜５２のいずれかに記載の方法。
［実施態様５４］
前記リソソーム蓄積症がゴーシェ病、ファブリ病、ポンペ病、ムコ多糖体症、および多系統萎縮症から選択される、実施態様５３に記載の方法。
［実施態様５５］
前記疾患が神経変性疾患である、実施態様４１〜５４のいずれかに記載の方法。
［実施態様５６］
前記神経変性疾患がパーキンソン病、アルツハイマー病、およびレヴィー小体型認知症から選択される、実施態様５５に記載の方法。
［実施態様５７］
ＧＣａｓｅ経路での機能障害の治療方法であって、それを必要とする対象に、実施態様１〜１１、１３、および１５〜３０のいずれかに記載の組成物を投与することを含む、前記方法。
［実施態様５８］
前記対象がヒトである、実施態様５７に記載の方法。
［実施態様５９］
０．５〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢと、前記ＧＣＢに対して少なくとも約３倍モル過剰であるＩＦＧと、を含む組成物を対象に投与することを含む、ＧＣａｓｅ経路での機能障害の治療方法であって、前記組成物が皮下投与される、前記方法。
［実施態様６０］
前記組成物が０．８〜４．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、実施態様５９に記載の方法。
［実施態様６１］
前記組成物が１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、実施態様６０に記載の方法。
［実施態様６２］
前記組成物が１．２〜２．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、実施態様６０に記載の方法。
［実施態様６３］
前記組成物が約１．５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、実施態様６０に記載の方法。
［実施態様６４］
前記組成物が１．５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、実施態様６０に記載の方法。
［実施態様６５］
前記組成物が２．０〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、実施態様５９に記載の方法。
［実施態様６６］
前記組成物が２．２５〜４．５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、実施態様５９に記載の方法。
［実施態様６７］
前記組成物が２．２５〜３．７５ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、実施態様５９に記載の方法。
［実施態様６８］
前記組成物が３．５〜５．０ｍｇ／ｋｇのＧＣＢを含む、実施態様５９に記載の方法。
［実施態様６９］
前記ＩＦＧが、前記ＧＣＢに対して３〜１０倍モル過剰で存在する、実施態様６０〜６８のいずれかに記載の方法。
［実施態様７０］
前記ＩＦＧが、前記ＧＣＢに対して１０〜３０倍モル過剰で存在する、実施態様６０〜６８のいずれかに記載の方法。
［実施態様７１］
前記ＩＦＧが、前記ＧＣＢに対して３０〜１００倍モル過剰で存在する、実施態様６０〜６８のいずれかに記載の方法。
［実施態様７２］
前記ＩＦＧが、前記ＧＣＢに対して３倍モル過剰で存在する、実施態様６０〜６８のいずれかに記載の方法。
［実施態様７３］
脾臓における前記ＧＣＢの曝露、活性、または生物学的利用能が増加する、実施態様４１〜７２のいずれかに記載の方法。
［実施態様７４］
肝臓における前記ＧＣＢの曝露、活性、または生物学的利用能が増加する、実施態様４１〜７３のいずれかに記載の方法。
［実施態様７５］
血清における前記ＧＣＢの曝露、活性、または生物学的利用能が増加する、実施態様４１〜７４のいずれかに記載の方法。
［実施態様７６］
実施態様４１〜７５のいずれかに記載の方法で使用するための、実施態様１〜１１、１３、および１５〜３０のいずれかに記載の組成物。
［実施態様７７］
実施態様４１〜７６のいずれかに記載の方法のための薬剤の製造における、実施態様１〜１１、１３、および１５〜３０のいずれかに記載の組成物の使用。
【国際調査報告】
2021501135.tif 000050
2021501135.tif 000051