(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）によって表されるイカチバントの効率的な固相合成に関する。本発明は、固相アプローチを用いた連続的なカップリングによる、イカチバントの調製のための効率的なプロセスに関する。本発明はまた、カップリングの間の無機塩の使用に関係しており、Ｆｍｏｃの脱保護ステップの後に、ピペリジンの完全な除去を確実にするためにＤＭＦ中のＨＯＢｔ溶液で洗浄して、反応が完了に向かって進み、およびしたがって、シーケンスの追加／欠失を避け、プロセスの収率もまた改善する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
イカチバントの調製のためのプロセスであって、以下、
ａ）樹脂の固相支持体へとアルギニン（Ｐｂｆ）−ＯＨをローディングするステップ、
ｂ）未反応の官能部位をキャッピングするステップ、
ｃ）カップリング剤および無機塩の存在下で、イカチバントを調製するために、側鎖の保護されたアミノ酸を連続的にカップリングするステップ、
ｄ）保護基の除去および樹脂からのペプチドの切断によって、粗製イカチバントを得るステップ、
ｅ）任意に粗製イカチバントを精製するステップ、
を含む、前記プロセス。
【請求項２】
イカチバントの調製のためのプロセスであって、以下、
ａ）カップリング剤の存在下で、樹脂の固相支持体へとアルギニン（Ｐｂｆ）をローディングするステップ、
ｂ）カップリング剤、ＯｘｙｍａＰｕｒｅおよび無機塩の存在下で、イカチバントを調製するために、側鎖の保護されたアミノ酸を連続的にカップリングするステップ、
ｃ）保護基の除去および樹脂からのペプチドの切断によって、粗製イカチバントを得るステップ、
ｄ）任意に粗製イカチバントを精製するステップ、
を含む、請求項１に記載のイチカバントの調製のためのプロセス。
【請求項３】
カップリング剤が、ＨＢＴＵ、ＣＯＭＵ、ＤＥＰＢＴまたはそのいずれかの組み合わせから選択される、請求項１または２に記載のイチカバントの調製のためのプロセス。
【請求項４】
カップリング添加剤が、ＯｘｙｍａＰｕｒｅ、ＨＯＢｔまたはそのいずれかの組み合わせから選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載のイカチバントの調製のためのプロセス。
【請求項５】
保護基の脱保護とこれに続くＤＭＦ中０．０１〜０．５ＭのＨＯＢｔでの洗浄およびＴＦＡ：ＭＤＣ：フェノール：ｍ−クレゾール：ＴＩＳ：Ｈ２Ｏを使用する樹脂からの全切断を含む、イカチバントの調製のためのプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の技術分野
本発明は、式Ｉによって表される効率的なイカチバントの固相合成に関する。
【化１】
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イカチバント（フィラジル（登録商標））は、１８歳以上の成人の遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）の急性の発作の処置のために必要である。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景
イカチバントは、ブラジキニンＢ２受容体に選択的な競合的アンタゴニストであり、ブラジキニンと同様の親和性を有する。遺伝性血管浮腫は、ブラジキニンの産生につながる、第ＸＩＩ因子／カリクレインタンパク質分解カスケードの主要調節因子である、Ｃ１−エステラーゼ−インヒビターの不在または機能障害によって引き起こされる。ブラジキニンは、局在する腫れ、炎症、および疼痛といった特徴的なＨＡＥの症状の要因であると考えられている血管拡張成分である。イカチバントは、ブラジキニンがＢ２受容体に結合することを阻害し、それによってＨＡＥの急性の、突発性の発作といった臨床症状を処置する。フィラジル（登録商標）（イカチバント）は、５つの非タンパク質新生アミノ酸を有する合成デカペプチドである。
Shire Orphan Therapiesによって開発されたイカチバント（フィラジル（登録商標））は、２０１１年に米国において皮下注射として最初の承認を得た。
【０００３】
ＵＳ５，６４８，３３３Ｂ１は、イカチバントおよびそれを調製するためのプロセスを開示する。
ＣＮ１０２５３２２６７は、種々のアミノ酸をカップリングさせるための種々のカップリング剤を使用するＣＴＣ樹脂を使用したイカチバントの調製のためのプロセスを開示する。
ＣＮ１０３９９２３８３は、Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＯＨ．２ＨＣｌの液相合成とこれに続くワング樹脂を使用する固相合成による残存するフラグメントを用いたカップリングを使用したイカチバントの調製のためのプロセスを開示する。
【０００４】
ＣＮ１０４０７２５８５は、固体支持体としてワング樹脂またはｐ−ヒドロキシメチルフェノキシメチルスチレン樹脂を用いるアミノ酸の連続的なカップリングを使用したイカチバントの調製のためのプロセスを開示する。
ＷＯ２０１６１５７１７７は、触媒として生物学的に適合した三級アミンニコチンアミドの存在下でのイカチバントの調製のためのプロセスを開示する。
５４７３／ＣＨＥ／２０１４は、ワング樹脂上でのアミノ酸の連続的なカップリングを使用したイカチバントの調製のためのプロセスを開示する。
【０００５】
イカチバントを調製するための先行のプロセスは、不利な点を有する。方法は、複雑な技法および高い費用に起因して、イカチバントの大規模生産について好適ではない；ゆえに、プロセスは、商業的に実行可能ではないかまたは実行上の問題が存続している。
固相合成の間に、用いられる条件下でペプチドが凝集する強固な性質があることが観察された。それは、以下の理由による：
成長するペプチド配列は、β−シート様の構造を形成しやすく、そのことはペプチジル樹脂の崩壊をもたらす；かかる条件において、ペプチジル樹脂内への試薬の分散は制限され、カップリングおよび脱保護反応は、鈍く不十分になり、それによって精製における困難性につながる欠失／追加、ラセミ化ペプチド不純物を生成し、低収率をもたらすだろう。ゆえに、繰り返される煩雑で冗長な精製ステップを避けることによって、高収率であり、スケーラブルな、費用効果があり、環境にやさしくおよび商業的に実行可能である、イカチバントの調製のための効率的なプロセスを提供する必要が残存している。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の目的
本発明の目的は、シーケンスにおいて無機塩の補助、新規で効率的なカップリング条件、各アミノ酸の後の脱保護および洗浄条件を伴う、単純で、確固たる、および商業的に実行可能である、式Ｉで表されるイカチバントの調製のための連続的なプロセスを開発することである。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
図面の簡単な説明
【図１−１】図１：本発明に従った、イカチバント（式Ｉ）の固相合成のためのプロセスについてのフローチャート。
【図１−２】図１：本発明に従った、イカチバント（式Ｉ）の固相合成のためのプロセスについてのフローチャート。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明の概要
本発明の一態様は、以下のステップを含むイカチバントの調製のための合成プロセスに関係する：
Ａ）カップリング剤の存在下において、樹脂の固相支持体へアルギニンをローディングする。
Ｂ）未反応の官能部位をキャッピングする。
Ｃ）カップリング剤および無機塩の存在下において、イカチバントの主鎖を調製するために、側鎖の保護されたアミノ酸を連続的にカップリングする。
Ｄ）粗製イカチバントは、保護基の除去および樹脂からのペプチドの切断によって得られる。
Ｅ）粗製イカチバントの精製。
プロセスの概要の説明は、図１に示すとおりである。
【０００９】
用いられたアプローチは、連続的なアプローチによるイカチバントの固相ペプチド合成であり、標準のカップリング剤および添加剤と共にカップリングする間の無機塩に関係する。方法は、カップリングおよび脱保護反応の完了およびラセミ化の低減を提供し、それによって極めて標的分子の近くにある異性体の不純物を制御し、そして次にペプチドの精製プロセスを容易にする。
【００１０】
本発明の詳細な記載
本発明は、固相アプローチを用いることによる個々のアミノ酸の連続的なカップリングによる、効率的なイカチバントの調製のためのプロセスに関する。本発明において用いられたアプローチは、固体支持体として２−クロロトリチルクロリド、Ｆｍｏｃ−／ｔＢｕアプローチを使用することによる固相マニュアルペプチド合成であり、および部位特異的の効率的なカップリング剤および一般的なカップリング剤および添加剤と共にカップリングの間に使用される無機塩を包含する。そして１５〜２０％ピペリジンを使用したＦｍｏｃ基の脱保護の後に、ペプチジル樹脂は、不純物の挿入を避けるために都合の良いピぺリジンの完全な除去を確実にするために、未修飾ＤＭＦの代わりに０．０１〜０．５ＭのＨＯＢｔ／ＤＭＦを用いて洗浄された。完全な合成は、連続的なアプローチを通して達成される。方法は、カップリングおよび脱保護反応の完了およびラセミ化の低減を提供し、それによってきわめて標的分子の近くにある異性体の不純物を制御し、そして次にペプチドの精製プロセスを容易にする。
本発明は、以下の例によって表されている。これらの例は、説明のためにのみあるのであり、ゆえに発明の範囲を制限するものと解釈されるべきではない。
【００１１】
略語：
ＡＣＮ：アセトニトリル
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ＣＯＭＵ：（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ−モルホリノ−カルベニウムヘキサフルオロホスファート
ＣｕＣｌ２：塩化銅
ＤＥＰＢＴ：３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン
ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＭＡＰ：ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
【００１２】
Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＢＴＵ：Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
ＨＯＢｔ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＦＩＰ：１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール
Ｍｔｔ：メチルトリチル
ＭｅＯＨ：メタノール
ＭｇＣｌ２：塩化マグネシウム
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ：Ｎ−メチル−２−ピロリドン
【００１３】
ＴＥＳ：トリエチルシラン
ＴＦＥ：トリフルオロエタノール
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
Ｐｂｆ：２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン
ＲＴ：室温
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
Ｔｒｔ：トリチル
ＴＭＰ：２，４，６−トリメチルピリジン
【００１４】
本発明は、以下の例により表される。これらの例は、説明のみのためのものであり、ゆえに発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきでない。
【００１５】
例１：１．２２ｍｍｏｌ／ｇに置換したＣＴＣ樹脂（１０ｇ）を、固相ペプチド合成槽内に入れた。樹脂の膨張をＤＭＦ（８０〜１００ｍＬ）中で１時間実行し、徐々に排出した。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（７．９ｇ、１．０ｅｑ．）を、ＤＭＦ（８０〜１００ｍＬ）中で溶解し、膨張した樹脂へと添加した。ＤＩＰＥＡ、ＮＭＭ、およびＴＭＰ（２．０〜４．０ｅｑ．）、好ましくはＤＩＰＥＡは、攪拌しながら添加した。継続して２〜３時間室温にて攪拌し、反応混合物を徐々に排出した。樹脂をＤＭＦ（８０〜１００ｍＬ）で洗浄した。最初のアミノ酸のローディングの評価を実行し、０．６１ｍｍｏｌ／ｇであると見出された。樹脂の未反応部位のキャッピングを、ＤＭＦ（８６ｍＬ）中メタノール（１０％）、ＤＩＰＥＡ（４％）を使用して実行した。樹脂をＤＭＦ（８０〜１００ｍＬ＊３）で洗浄した。Ｆｍｏｃのデブロッキングを、樹脂を５〜２０％ピペリジン含有ＤＭＦで５〜１５分間を２回処理することによって実行した。樹脂を０．０１〜０．５ＭのＨＯＢｔ溶液含有ＤＭＦ（１００ｍＬ＊２）とこれに続くＤＭＦ（８０〜１００ｍＬ＊２）で洗浄した。
【００１６】
Ｆｍｏｃ−Ｏｉｃ−ＯＨ（２．０〜４．０ｅｑ．）およびＨＯＢｔ（２．０〜４．０ｅｑ．）をＤＭＦ（８０〜１００ｍＬ）中で溶解し、反応槽に添加した。反応マス（mass）を攪拌し、およびＤＭＦ（２０ｍＬ）中に溶解したＨＢＴＵ（２．０〜４．０ｅｑ．）を添加した。ＤＩＰＥＡ（４．０〜６．０ｅｑ）を添加し、マスを窒素雰囲気下で１．０〜２．０時間攪拌した。カイザーテスト（Kaiser test）を通してカップリングの完了をモニターした。カップリングの完了後に、樹脂をＤＭＦ（８０〜１００ｍＬ＊３）で洗浄し、およびＦｍｏｃのデブロッキングのために取られた。シーケンス中の残りのアミノ酸のカップリングを、ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔを使用して実行した。シーケンスの通りに全てのアミノ酸をカップリングした後に、Ｆｍｏｃの配列脱保護を実行し、およびペプチジル樹脂を、ＤＭＦ、ＤＣＭ、メタノールおよびＭＴＢＥを用いて洗浄した。各洗浄を、３分間で２回実施した。ペプチジル樹脂は、乾燥して、全切断のために取られた。ペプチジル樹脂（３０ｇ）を、９０：５：５の比率でのＴＦＡ：ＴＩＳ：水で室温にて処理した。３時間攪拌し、濾過して、濾液をその容量の半分にまで濃縮し、およびＭＴＢＥを使用して固体を単離した。単離された粗製ペプチド（１４．４ｇ）は、６８．６９％の純度を有する。０．８８ＲＲＴの不純物は３．５５％であり、０．９７ＲＲＴの不純物は１．４６％であり、および１．０９ＲＲＴの不純物は０．１５％であった。
【００１７】
例２：ペプチドの合成を例１と同様に実行したが、全てのカップリングおよび脱保護をほぼ３８℃で実施した。全切断もまた例１と同様に実施し、純度６７．０８％の粗製ペプチドをもたらした。０．８８ＲＲＴの不純物は４．５１％であり、０．９７ＲＲＴの不純物は２．６１％であり、および１．０９ＲＲＴの不純物は０．８０％であった。
【００１８】
例３：ペプチドの合成を例１と同様に実行した。アミノ酸、具体的にはＦｍｏｃ−Ｏｉｃ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｉｃ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨのカップリングを、ＤＩＰＥＡおよび触媒量の塩化銅（ＩＩ）／塩化マグネシウムの存在下において、ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔを使用して実行した。そして、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨのカップリング反応を、ＤＩＰＥＡ、ＮＭＭ、ＴＭＰ、好ましくはＤＩＰＥＡおよび触媒量の塩化銅（ＩＩ）／塩化マグネシウムの存在化においてＤＥＰＢＴ／ＯｘｙｍａＰｕｒｅを使用して実施した。シーケンスに従った全てのアミノ酸のカップリングの後に、Ｆｍｏｃ基のデブロッキングを実行し、およびペプチジル樹脂を、ＤＭＦ、ＤＣＭ、メタノールおよびＭＴＢＥで洗浄した。各洗浄を、３分間２回ずつ実施した。ペプチジル樹脂は、乾燥して、および全切断のために取られた。ペプチジル樹脂（３０ｇ）を、９０：５：５の比率でのＴＦＡ：ＴＩＳ：水で室温にて処理した。３時間攪拌し、濾過して、濾液をその量の半分にまで濃縮し、ＭＴＢＥを使用して固体を単離して、および真空中で乾燥した。純度：７２．３８％、０．８８ＲＲＴの不純物は０．２６％であった。
【００１９】
例４：ペプチドの合成を例３と同様に実行した。シーケンスの完了に際して、保護されたペプチドを、１％のＴＦＡ含有ＭＤＣを使用して樹脂から放出させた。ペプチジル樹脂（１２ｇ）を、１％のＴＦＡ含有ＭＤＣ（１２０ｍＬ＊１２洗浄）で処理した。各洗浄を５分間ずつ実行した。合わせた洗浄液を、プールし、乾燥するまで濃縮した。得られた残留物を、７０：１０：１０：５：５の比率でのＴＦＡ：ＭＤＣ：フェノール：ｍ−クレゾール：ＴＩＳカクテル（１２０ｍＬ）で３時間室温にて処理した。粗製ペプチド（５．６ｇ）を、ＭＴＢＥを使用して単離した。純度はほぼ７７．９２％であり、０．８８ＲＲＴの不純物は０．１７％であった。
【００２０】
例５：ペプチドの合成を、例１と同様に実行した。アミノ酸、具体的にはＦｍｏｃ−Ｏｉｃ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｉｃ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、およびＦｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨのカップリング反応を、ＤＩＰＥＡおよび触媒量の塩化銅（ＩＩ）／塩化マグネシウムの存在下でＨＢＴＵ／ＨＯＢｔを使用して実行した。そして、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨのカップリングを、ＤＩＰＥＡ、ＮＭＭ、ＴＭＰ、好ましくはＤＩＰＥＡおよび触媒量の塩化銅（ＩＩ）／塩化マグネシウムの存在下で、ＤＩＣ／ＨＯＢｔを使用して実施した。
【００２１】
シーケンスに従った全てのアミノ酸のカップリングの後に、Ｆｍｏｃ基のデブロッキングを実行し、およびペプチジル樹脂を、ＤＭＦ、ＤＣＭ、メタノールおよびＭＴＢＥで洗浄した。各洗浄を、３分間２回ずつ実施した。ペプチジル樹脂は、乾燥して、および１％のＴＦＡ含有ＭＤＣを使用する切断のために取られた。ペプチジル樹脂（１２ｇ）を、１％のＴＦＡ含有ＭＤＣ（１２０ｍＬ＊１２洗浄）で処理した。各洗浄を５分間ずつ実行した。合わせた濾液を乾燥するまで濃縮し、および７０：１０：１０：５：５の比率でのＴＦＡ：ＭＤＣ：フェノール：ｍ−クレゾール：ＴＩＳカクテル（１２０ｍＬ）で３時間室温にて処理した。粗製ペプチドを、ＭＴＢＥを使用して単離した。純度：６４．９７％、０．８８ＲＲＴの不純物は０．９７％であった。
【００２２】
例６：ペプチドの合成を、例１と同様に実行した。アミノ酸、具体的には、Ｆｍｏｃ−Ｏｉｃ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｉｃ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、およびＦｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨのカップリング反応を、ＤＩＰＥＡおよび触媒量の塩化銅（ＩＩ）／塩化マグネシウムの存在下で、ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔを使用して実行した。そして、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨのカップリングを、ＤＩＰＥＡ、ＮＭＭ、ＴＭＰ、好ましくはＤＩＰＥＡおよび触媒量の塩化銅（ＩＩ）／塩化マグネシウムの存在下で、ＨＡＴＵ／ＨＯＢｔを使用して実施した。
【００２３】
シーケンスに従った全てのアミノ酸のカップリングの後に、Ｆｍｏｃ基のデブロッキングを実行し、およびペプチジル樹脂を、ＤＭＦ、ＤＣＭ、メタノールおよびＭＴＢＥで洗浄した。各洗浄を、３分間２回ずつ実施した。ペプチジル樹脂は、乾燥して、および１％のＴＦＡ含有ＭＤＣを使用する切断のために取られた。ペプチジル樹脂（１２ｇ）を、１％のＴＦＡ含有ＭＤＣ（１２０ｍＬ＊１２洗浄）で処理した。各洗浄を５分間ずつ実行した。合わせた濾液を乾燥するまで濃縮して、および７０：１０：１０：５：５の比率でのＴＦＡ：ＭＤＣ：フェノール：ｍ−クレゾール：ＴＩＳカクテル（１２０ｍＬ）で３時間室温にて処理した。粗製ペプチドを、ＭＴＢＥを使用して単離した。純度：７４．５４％、０．８８ＲＲＴの不純物は１．５５％であった。
【００２４】
例７：ペプチドの合成を、例１と同様に実行した。アミノ酸、具体的には、Ｆｍｏｃ−Ｏｉｃ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｉｃ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、およびＦｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨのカップリング反応を、ＤＩＰＥＡおよび触媒量の塩化銅（ＩＩ）／塩化マグネシウムの存在下で、ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＯｘｙｍａＰｕｒｅを使用して実行した。そして、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨのカップリングを、ＤＩＰＥＡ、ＮＭＭ、ＴＭＰ、好ましくはＤＩＰＥＡおよび触媒量の塩化銅（ＩＩ）／塩化マグネシウムの存在下で、ＰｙＢＯＰ／ＨＯＢｔ／ＯｘｙｍａＰｕｒｅを使用して実施した。
【００２５】
シーケンスに従った全てのアミノ酸のカップリングの後に、Ｆｍｏｃ基のデブロッキングを実行し、およびペプチジル樹脂を、ＤＭＦ、ＤＣＭ、メタノールおよびＭＴＢＥで洗浄した。各洗浄を３分間２回ずつ実施した。ペプチジル樹脂は、乾燥して、および１％のＴＦＡ含有ＭＤＣを使用する切断のために取られた。ペプチジル樹脂（１２ｇ）を、１％のＴＦＡ含有ＭＤＣ（１２０ｍＬ＊１２洗浄）で処理した。各洗浄を５分間ずつ実行した。合わせた濾液を、乾燥するまで濃縮して、および７０：１０：１０：５：５の比率でのＴＦＡ：ＭＤＣ：フェノール：ｍ−クレゾール：ＴＩＳカクテル（１２０ｍＬ）で３時間室温にて処理した。粗製ペプチドを、ＭＴＢＥを使用して単離した。
【００２６】
例８：ペプチドの合成を、例１と同様に実行した。アミノ酸、具体的には、Ｆｍｏｃ−Ｏｉｃ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｉｃ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、およびＦｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨのカップリング反応を、ＤＩＰＥＡおよび触媒量の塩化銅（ＩＩ）／塩化マグネシウムの存在下で、ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔを使用して実行した。そして、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨのカップリングを、ＤＩＰＥＡ、ＮＭＭ、ＴＭＰ、好ましくはＤＩＰＥＡおよび触媒量の塩化銅（ＩＩ）／塩化マグネシウムの存在下で、ＣＯＭＵ／ＯｘｙｍａＰｕｒｅを使用して実施した。
【００２７】
シーケンスに従った全てのアミノ酸のカップリングの後に、Ｆｍｏｃ基のデブロッキングを実行し、およびペプチジル樹脂を、ＤＭＦ、ＤＣＭ、メタノールおよびＭＴＢＥで洗浄した。各洗浄を３分間２回ずつ実施した。ペプチジル樹脂は、乾燥して、および１％のＴＦＡ含有ＭＤＣを使用する切断のために取られた。ペプチジル樹脂（１２ｇ）を、１％のＴＦＡ含有ＭＤＣ（１２０ｍＬ＊１２洗浄）で処理した。各洗浄を５分間ずつ実行した。合わせた濾液を、乾燥するまで濃縮して、および７０：１０：１０：５：５の比率でのＴＦＡ：ＭＤＣ：フェノール：ｍ−クレゾール：ＴＩＳカクテル（１２０ｍＬ）で３時間室温にて処理した。粗製のペプチドを、ＭＴＢＥを使用して単離した。
【００２８】
例９：ペプチドの合成を、例１と同様に、３５ｍｍｏｌスケールで実行した。全てのアミノ酸のカップリングを、ＤＩＰＥＡおよび触媒量の塩化銅（ＩＩ）／塩化マグネシウムの存在下で、ＨＢＴＵ／ＯｘｙｍａＰｕｒｅを使用して実行し、およびシーケンスが完了する際に、ペプチジル樹脂を、ＤＭＦ、ＤＣＭ、メタノールおよびＭＴＢＥで洗浄し、ペプチジル樹脂を、真空中で乾燥し、および１％のＴＦＡ含有ＭＤＣを使用して保護されたペプチドを放出させた。ペプチジル樹脂（１３０ｇ）を、１％のＴＦＡ含有ＭＤＣ（１．３Ｌ＊１５洗浄）で処理した。各洗浄を５分間ずつ実行した。合わせた濾液を、乾燥するまで濃縮して、およびペプチドの全切断を、７０：１０：５：５：５：５の比率でのＴＦＡ：ＭＤＣ：フェノール：ｍ−クレゾール：ＴＩＳ：Ｈ２Ｏのカクテルで室温にて３時間処理することによって実行した。粗製ペプチドをＭＴＢＥを使用して、７６．８％および６８％の濃度の収率で単離した。
【図１−１】
2021500313.tif 000004
【図１−２】
2021500313.tif 000005
【国際調査報告】
2021500313.tif 000006
2021500313.tif 000007