(57)【要約】本実施形態は、ＥＮａＣ発現を阻害するのに有用な方法、化合物、及び組成物を提供し、それらはＥＮａＣに関連する疾患を治療、予防、または改善するのに有用であり得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する８〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項２】
配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも９個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する９〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項３】
配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも１０個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１０〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項４】
配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも１１個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１１〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項５】
配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、または少なくとも１５個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１２〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項６】
配列番号６〜１９５４のうちのいずれかの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項７】
配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つからなる核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項８】
配列番号２の核酸塩基１７，９５１〜２４，１２０内で相補的な８〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、配列番号２と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、前記化合物。
【請求項９】
配列番号２の核酸塩基１７，９５１〜２４，１２０の等長部分と１００％相補的な少なくとも８個の隣接する核酸塩基の部分を含む核酸塩基配列を有する８〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号２と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、前記化合物。
【請求項１０】
配列番号２の核酸塩基３２，１２９〜３３，１７４内に相補的な８〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、配列番号２と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、前記化合物。
【請求項１１】
α−ＥＮａＣプレｍＲＮＡのイントロン４と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項１２】
α−ＥＮａＣ核酸の３’−ＵＴＲと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項１３】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、配列番号２の核酸塩基配列を有するα−ＥＮａＣ核酸の核酸塩基１７，９５１〜２４，１２０内で相補的である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
配列番号２の核酸塩基配列を有するα−ＥＮａＣ核酸の核酸塩基１９，０２２〜１９，０３７、２０，４１５〜２０，４３０、２１，７５０〜２１，７６６、３２，８４４〜３２，８５９、または３２，９８９〜３３，００４の等長部分と相補的な少なくとも８個の隣接する核酸塩基の部分を含む核酸塩基配列を有する８〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号２と相補的である、前記化合物。
【請求項１５】
配列番号２の核酸塩基１９，０２２〜１９，０３７、２０，４１５〜２０，４３０、２１，７５０〜２１，７６６、３２，８４４〜３２，８５９、または３２，９８９〜３３，００４内で相補的な８〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項１６】
配列番号２３９、４２６、５９３、１１１３、１５４１、または１８１２のうちのいずれかを含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項１７】
配列番号２３９、４２６、５９３、１１１３、１５４１、または１８１２のうちのいずれか１つからなる核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項１８】
配列番号２３９、４２６、５９３、１１１３、１５４１、または１８１２のうちのいずれかを含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、
結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を含み、
前記ギャップセグメントが、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントとの間に配置され、各末端ウイングヌクレオシドが、修飾された糖を含む、前記化合物。
【請求項１９】
配列番号２３９、４２６、５９３、１１１３、１５４１、または１８１２のうちのいずれかを含む２０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、
１０個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
５個の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
５個の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を含み、
前記ギャップセグメントが、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが、２’−Ｏ−メトキシエチル糖部分を含み、各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンが、５−メチルシトシンである、前記化合物。
【請求項２０】
配列番号２３９、４２６、５９３、１１１３、１５４１、または１８１２に列挙される前記配列のうちのいずれか１つからなる核酸塩基配列を有する１６結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、
１０個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
３個の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
３個の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を含み、
前記ギャップセグメントが、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが、ｃＥｔ糖部分を含み、各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンが、５−メチルシトシンである、前記化合物。
【請求項２１】
前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１、２、または１９５７のうちのいずれかと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２２】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合を含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２３】
前記少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの二環式糖を含む、請求項１〜１８または２１〜２３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２５】
前記少なくとも１つの二環式糖が、ＬＮＡ、ＥＮＡ、及びｃＥｔからなる群から選択される、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの２’−Ｏ−メトキシエチルまたは２’−Ｏ−メチル修飾された糖部分を含む、請求項１〜１８または２１〜２５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２７】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの５−メチルシトシンを含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２８】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、
結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を含み、
前記ギャップセグメントが、前記５’ウイングセグメント及び前記３’ウイングセグメントにすぐ隣接してかつそれらの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが、修飾された糖部分を含む、請求項１〜１８または２１〜２７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２９】
前記化合物が、一本鎖である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３０】
前記化合物が、二本鎖である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３１】
前記化合物が、少なくとも１つの修飾されていないリボシル糖部分を含む、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３２】
前記化合物が、少なくとも１つの修飾されていないデオキシリボシル糖部分を含む、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３３】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の結合されたヌクレオシドからなる、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３４】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、１２〜３０個の結合されたヌクレオシドからなる、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３５】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、１５〜３０個の結合されたヌクレオシドからなる、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３６】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドが、１６〜２０個の結合されたヌクレオシドからなる、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３７】
次式：ｍＣｋｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｋｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｋｓ  Ｇｋｓ  Ｔｋによる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５−メチルシトシン、
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン、
ｋ＝ｃＥｔ糖部分、
ｄ＝２’−デオキシリボシル糖部分、及び
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、前記化合物。
【請求項３８】
複合群を含む、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３９】
前記化合物が、前記修飾されたオリゴヌクレオチド及び前記複合群からなる、請求項３８に記載の化合物。
【請求項４０】
次式：
【化１】
2021500903.tif 000167
［配列番号１１１３］による化合物またはその塩。
【請求項４１】
前記化合物が、
前記修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、請求項１〜２９または３１〜３７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４２】
請求項１〜４１に記載の化合物のうちのいずれか１つの薬学的に許容される塩の形態からなる化合物。
【請求項４３】
前記薬学的に許容される塩が、ナトリウム塩である、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４４】
前記薬学的に許容される塩が、カリウム塩である、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４５】
請求項１〜４４のいずれか１項に記載の化合物及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体または希釈剤を含む薬学的組成物。
【請求項４６】
請求項１〜４４のいずれか１項に記載の化合物のキラル的に濃縮された集団であって、
前記集団が、特定の立体化学的配置を有する少なくとも１つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、前記キラル的に濃縮された集団。
【請求項４７】
前記集団が、
（Ｓｐ）配置を有する少なくとも１つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項４６に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項４８】
前記集団が、
（Ｒｐ）配置を有する少なくとも１つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項４６に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項４９】
前記集団が、
各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合において特定の、独立して選択される立体化学的配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項４６に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項５０】
前記集団が、
各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合において（Ｓｐ）配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項４９に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項５１】
前記集団が、
各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合において（Ｒｐ）配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項４９に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項５２】
前記集団が、
１つの特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合において（Ｒｐ）配置及び残りのホスホロチオエートヌクレオシド間結合の各々において（Ｓｐ）配置を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項４９に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項５３】
前記集団が、
５’から３’の方向で、Ｓｐ、Ｓｐ、及びＲｐ配置における少なくとも３個の隣接するホスホロチオエートヌクレオシド間結合を有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている、請求項４６または請求項４９に記載のキラル的に濃縮された集団。
【請求項５４】
請求項１〜４４のいずれか１項に記載の化合物のキラル的に濃縮された集団であって、
前記修飾されたオリゴヌクレオチドの前記ホスホロチオエートヌクレオシド間結合の全てが、ステレオランダムである、前記キラル的に濃縮された集団。
【請求項５５】
請求項４６〜５４のいずれか１項に記載の化合物の集団及び少なくとも１つの薬学的に許容される希釈剤または担体を含む薬学的組成物。
【請求項５６】
治療に使用するための、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の化合物、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の化合物及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体もしくは希釈剤を含む薬学的組成物、または請求項４６〜５４のいずれか１項に記載の化合物の集団及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体もしくは希釈剤を含む薬学的組成物。
【請求項５７】
嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎を治療、予防、または改善するのに使用するための、請求項５５に記載の化合物または組成物。
【請求項５８】
前記組成物が、噴霧器を使用する肺経路を介した個体への投与に好適な溶液である、請求項４５、５５、または５６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５９】
前記組成物が、吸入器を使用する肺経路を介した個体への投与に好適な溶液である、請求項４５、５５、または５６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６０】
前記組成物が、吸入器を使用する肺経路を介した個体への投与に好適な粉末である、請求項４５、５５、または５６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６１】
デバイス及び請求項４５、５５、または５６のいずれか１項に記載の薬学的組成物を含むキット。
【請求項６２】
前記デバイスが、吸入を介した個体への前記組成物の投与に好適である、請求項６１に記載のキット。
【請求項６３】
前記デバイスが、肺経路を介した個体への前記組成物の投与に好適である、請求項６１に記載のキット。
【請求項６４】
前記デバイスが、噴霧器である、請求項６１〜６３のいずれか１項に記載のキット。
【請求項６５】
前記薬学的組成物が、液体である、請求項６１〜６４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項６６】
前記薬学的に許容される担体または希釈剤が、リン酸緩衝食塩水である、請求項６１〜６５のいずれか１項に記載のキット。
【請求項６７】
前記噴霧器が、メッシュ式噴霧器である、請求項６４〜６６のいずれか１項に記載のキット。
【請求項６８】
前記メッシュ式噴霧器が、振動メッシュ式噴霧器である、請求項６７に記載のキット。
【請求項６９】
前記噴霧器が、ジェット式噴霧器である、請求項６４〜６６のいずれか１項に記載のキット。
【請求項７０】
前記噴霧器が、超音波式噴霧器である、請求項６４〜６６のいずれか１項に記載のキット。
【請求項７１】
前記デバイスが、吸入器である、請求項６１〜６３、６５、または６６のいずれか１項に記載のキット。
【請求項７２】
前記薬学的組成物が、固体である、請求項７１に記載のキット。
【請求項７３】
前記吸入器が、乾燥粉末粒子吸入器である、請求項７２に記載のキット。
【請求項７４】
前記吸入器が、定量吸入器である、請求項７１に記載のキット。
【請求項７５】
少なくとも１つの薬学的に許容される担体または希釈剤が、酸化防止剤、塩、高張食塩水、またはカプリン酸ナトリウム（Ｃ１０）である、請求項６１〜７４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項７６】
請求項４５、５５、または５６のいずれか１項に記載の薬学的組成物を含む密封された容器。
【請求項７７】
前記組成物が、噴霧器を使用する肺経路を介した個体への投与に好適な溶液である、請求項７６に記載の容器。
【請求項７８】
前記容器が、噴霧器において使用するのに好適なバイアルである、請求項７６に記載の容器。
【請求項７９】
前記組成物が、吸入器を使用する肺経路を介した個体への投与に好適な粉末である、請求項７６に記載の容器。
【請求項８０】
前記容器が、吸入器において使用するのに好適なキャニスターである、請求項７６に記載の噴霧器。
【請求項８１】
請求項４５、５５、または５６のいずれか１項に記載の薬学的組成物を含む噴霧器。
【請求項８２】
請求項４５、５５、または５６のいずれか１項に記載の薬学的組成物を含む吸入器。
【請求項８３】
個体におけるα−ＥＮａＣに関連する疾患を治療、予防、または改善する方法であって、α−ＥＮａＣ核酸転写物と１００％相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を前記個体に投与し、それにより前記疾患を治療、予防、または改善することを含む、前記方法。
【請求項８４】
前記化合物が、一本鎖である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記α−ＥＮａＣ核酸転写物が、プレｍＲＮＡである、請求項８３または８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記疾患が、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎である、請求項８３〜８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８７】
前記投与することが、肺活量測定または粘液線毛クリアランスを改善する、請求項８３〜８６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
細胞内のα−ＥＮａＣの発現を阻害する方法であって、前記細胞を、α−ＥＮａＣ核酸転写物と１００％相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む一本鎖化合物と接触させて、それにより前記細胞内のα−ＥＮａＣの発現を阻害することを含む、前記方法。
【請求項８９】
前記細胞が、個体の肺にある、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記個体が、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎を有するか、またはそれを有する危険性がある、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
α−ＥＮａＣに関連する疾患を有するか、またはそれを有する危険性がある個体の肺活量測定または粘液線毛クリアランスを改善する方法であって、α−ＥＮａＣ核酸転写物と１００％相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む一本鎖化合物を前記個体に投与し、それにより前記個体の肺活量測定または粘液線毛クリアランスを改善することを含む、前記方法。
【請求項９２】
前記個体が、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎を有するか、またはそれを有する危険性がある、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記化合物が、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の化合物である、請求項８３〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９４】
前記化合物が、請求項４６〜５４のいずれか１項に記載のキラル的に濃縮された集団のメンバーである、請求項８３〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９５】
前記化合物が、請求項４５、５５、または５６のいずれか１項に記載の薬学的組成物の構成成分である、請求項８３〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
前記化合物が、請求項６１〜７５のいずれか１項に記載のキットの構成要素である、請求項８３〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９７】
前記化合物が、吸入を介して前記個体に投与される、請求項８３〜８７または８９〜９６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９８】
前記化合物が、エアロゾルとして投与される、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記エアロゾルが、噴霧器によって生成される、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記化合物が、前記個体に全身投与される、請求項８３〜８７または８９〜９６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記化合物が、皮下投与を介して投与される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
α−ＥＮａＣに関連する疾患を治療、予防、または改善するための、α−ＥＮａＣ核酸転写物と１００％相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む一本鎖化合物の使用。
【請求項１０３】
前記疾患が、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、及び慢性気管支炎である、請求項１０２に記載の使用。
【請求項１０４】
α−ＥＮａＣに関連する疾患を治療、予防、または改善するための、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の化合物、請求項５６に記載の組成物、請求項６１〜７５のいずれか１項に記載のキット、または請求項７６〜８０のいずれか１項に記載の容器の使用。
【請求項１０５】
α−ＥＮａＣに関連する疾患を治療、予防、または改善するための医薬品の製造における、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の化合物または請求項５６に記載の組成物の使用。
【請求項１０６】
前記疾患が、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、及び慢性気管支炎である、請求項１０４または１０５に記載の使用。
【請求項１０７】
α−ＥＮａＣに関連する疾患を治療、予防、または改善するための、医薬品の調製における、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の化合物または請求項５６に記載の組成物の使用。
【請求項１０８】
前記疾患が、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、及び慢性気管支炎である、請求項１０７に記載の使用。
【請求項１０９】
少なくとも１つの二次薬剤を前記個体に投与することを含む、請求項８３〜８７または８９〜１０１のいずれかに記載の方法。
【請求項１１０】
前記少なくとも１つの二次薬剤が、テザカフトールである、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記少なくとも１つの二次薬剤が、アイバカフトールである、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記化合物が、前記少なくとも１つの二次薬剤と同時投与される、請求項１０９〜１１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１１３】
２つの二次薬剤を前記個体に投与することを含む、請求項１０９〜１１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１１４】
前記２つの二次薬剤が、テザカフトール及びアイバカフトールである、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記化合物及び前記２つの二次薬剤が、同時投与される、請求項１１３または１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
前記化合物が、少なくとも１つの二次薬剤と組み合わせて使用される、請求項１０２〜１０８のいずれかに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、電子形式で配列表と共に出願されている。配列表は、サイズが４８４ｋｂである、２０１８年１０月１０日に作成されたＢＩＯＬ０３１５ＷＯＳＥＱ．ｔｘｔのファイル名で提供される。配列表の電子形式での情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本実施形態は、ＥＮａＣ発現を阻害するのに有用な方法、化合物、及び組成物を提供し、それらはＥＮａＣに関連する疾患を治療、予防、または改善するのに有用であり得る。
【背景技術】
【０００３】
上皮性ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）は、肺を含むいくつかの組織内で発現される３つのサブユニット（典型的には、それぞれα−ＥＮａＣ、β−ＥＮａＣ、及びγ−ＥＮａＣ；またはＳＣＮＮ１Ａ、ＳＣＮＮ１Ｂ、及びＳＣＮＮ１Ｇ）で作られたチャネルである。それは、上皮性細胞膜にわたるナトリウムイオンの通過を可能にし、塩化物イオンによって負に調節される。嚢胞性線維症患者において、塩化物輸送体であるＣＦＴＲの減少された機能に起因してＥＮａＣの阻害が低減する。
【発明の概要】
【０００４】
本明細書に提供されるある特定の実施形態は、ＥＮａＣ発現を阻害するのに有用である、強力及び耐容性の化合物及び組成物を対象とし、それらは肺障害、例えば、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、及び喘息を治療、予防、改善、またはその進行を遅延させるのに有用であり得る。本明細書に提供されるある特定の実施形態は、動物におけるα−ＥＮａＣ発現を強力に低減するα−ＥＮａＣ核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
前述の概要及び以下の詳細な説明は共に、例示的かつ説明的であるに過ぎず、特許請求されるように、実施形態を制限するものではないことを理解されたい。本明細書において、単数の使用は、特に明記されない限り、複数を含む。本明細書で使用される場合、「または（ｏｒ）」の使用は、特に明記されない限り、「及び／または」を意味する。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、制限するものではない。
【０００６】
本明細書で使用される項の見出しは、構造的目的のためのみであり、記載される主題を限定するものとして解釈されるべきではない。これらに限定されないが、特許、特許出願、論説、書物、論文、ならびにＧｅｎＢａｎｋ及びＮＣＢＩ参照配列記録を含む、この出願に列挙される全ての書類、または書類の一部は、本明細書で考察される書類の一部、ならびにそれらの全体が参照により本明細書に明確に組み込まれる。
【０００７】
本明細書に含まれる各配列番号に示される配列は、糖部分、ヌクレオシド間結合、または核酸塩基に対する任意の修飾とは無関係であることが理解される。そのように、配列番号によって定義される化合物は独立して、糖部分、ヌクレオシド間結合、または核酸塩基に対する１つ以上の修飾を含み得る。
【０００８】
本明細書で使用される場合、「２’−デオキシヌクレオシド」とは、天然発生型のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）中に見出されるような、２’−Ｈ（Ｈ）リボシル糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ある特定の実施形態では、２’−デオキシヌクレオシドは、修飾された核酸塩基を含み得るか、またはＲＮＡ核酸塩基（ウラシル）を含み得る。
【０００９】
本明細書で使用される場合、「２’−置換ヌクレオシド」または「２−修飾ヌクレオシド」とは、２’−置換または２’−修飾糖部分を含むヌクレオシドを意味する。本明細書で使用される場合、フラノシル糖部分に関連する「２’−置換」または「２−修飾」とは、ＨまたはＯＨ以外の少なくとも１つの２’−置換基を含む糖部分を意味する。
【００１０】
本明細書で使用される場合、「投与」または「投与する」とは、本明細書に提供される化合物または組成物を個体に導入し、その意図される機能を実行する経路を指す。使用され得る投与の経路の例は、これに限定されないが、吸入による投与を含む。
【００１１】
本明細書で使用される場合、「同時に投与される」または「同時投与」とは、両方の薬理学的効果が患者において明白である任意の手段での２つ以上の化合物の投与を意味する。同時投与は、同じ剤形で、投与の同じ経路によって、または同時に、単一の薬学的組成物において両方の化合物が投与されることを必要としない。両方の化合物の効果は、同時にそれら自体が明白である必要はない。効果は、一定の期間重複している必要があるのみであり、同一の広がりをもつ必要はない。同時投与または（ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）または同時投与（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）は、並行または逐次的投与を包含する。
【００１２】
本明細書で使用される場合、「動物」とは、ヒト、またはこれらに限定されないが、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ならびにこれらに限定されないが、サル及びチンパンジーを含む非ヒト霊長類を含む非ヒト動物を指す。
【００１３】
本明細書で使用される場合、「アンチセンス活性」とは、アンチセンス化合物のその標的核酸へのハイブリダイゼーションに起因し得る任意の検出可能な及び／または測定可能な変化を意味する。ある特定の実施形態では、アンチセンス活性は、アンチセンス化合物の不在下で標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルと比較した、標的核酸またはそのような標的核酸によってコードされるタンパク質の量または発現の減少である。
【００１４】
本明細書で使用される場合、「アンチセンス化合物」とは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及び任意に、複合群または末端基などの１つ以上の追加の特徴を含む化合物を意味する。
【００１５】
本明細書で使用される場合、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、標的核酸と少なくとも部分的に相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。
本明細書で使用される場合、治療に関連する「改善する」とは、治療の不在下で同じ症状に対する少なくとも１つの症状における改善を意味する。ある特定の実施形態では、改善は、症状の重症度もしくは頻度の低減、または症状の発症の遅延、または症状の重症度もしくは頻度の進行の遅延である。
【００１６】
本明細書で使用される場合、「二環式ヌクレオシド」または「ＢＮＡ」とは、二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。本明細書で使用される場合、「二環式糖」または「二環式糖部分」とは、２つの環を含む修飾された糖部分を意味し、第２の環は、第１の環において原子のうち２つを接続する架橋を介して形成され、それにより二環式構造を形成する。ある特定の実施形態では、二環式糖部分の第１の環は、フラノシル部分である。ある特定の実施形態では、二環式糖部分は、フラノシル部分を含まない。
【００１７】
本明細書で使用される場合、「ｃＥｔ」または「拘束エチル」とは、二環式糖部分を意味し、二環式糖部分の第１の環は、リボシル糖部分であり、二環式糖の第２の環は、４’−炭素及び２’−炭素を接続する架橋を介して形成され、架橋は、式４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’を有し、架橋のメチル基は、Ｓ配置にある。ｃＥｔ二環式糖部分は、β−Ｄ配置にある。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「キラル的に濃縮された集団」とは、同一の分子式の複数の分子を意味し、特定のキラル中心で特定の立体化学的配置を含む集団内の分子の数または割合は、特定のキラル中心がステレオランダムであった場合に、集団内の同じ特定のキラル中心で同じ特定の立体化学的配置を含むと予期される分子の数または割合よりも大きい。各分子内に複数のキラル中心を有する分子のキラル的に濃縮された集団は、１つ以上のステレオランダムキラル中心を含み得る。ある特定の実施形態では、分子は、修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、分子は、修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物である。
【００１９】
本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドに関連する「相補的」とは、そのようなオリゴヌクレオチドまたはその１つ以上の領域の核酸塩基及び別の核酸またはその１つ以上の領域の核酸塩基の少なくとも７０％は、オリゴヌクレオチド及び他方の核酸の核酸塩基配列が反対の方向に整列されている場合に、互いに水素結合することができることを意味する。相補的核酸塩基とは、互いに水素結合を形成することができる核酸塩基対である。相補的核酸塩基対は、アデニン（Ａ）及びチミン（Ｔ）、アデニン（Ａ）及びウラシル（Ｕ）、シトシン（Ｃ）及びグアニン（Ｇ）、５−メチルシトシン（ｍＣ）及びグアニン（Ｇ）を含む。相補的オリゴヌクレオチド及び／または核酸は、各ヌクレオシドで核酸塩基相補性を有する必要はない。むしろ、いくつかの不適合が耐容される。本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドに関連する「完全に相補的」または「１００％相補的」とは、そのようなオリゴヌクレオチドが、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドで別のオリゴヌクレオチドまたは核酸と相補的であることを意味する。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「複合群」とは、オリゴヌクレオチドに直接または間接的に結合される原子の群を意味する。複合群は、複合体部分及び複合体部分をオリゴヌクレオチドに結合する複合リンカーを含む。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「複合リンカー」とは、複合体部分をオリゴヌクレオチドに接続する少なくとも１つの結合を含む原子の群を意味する。
本明細書で使用される場合、「複合体部分」とは、複合リンカーを介してオリゴヌクレオチドに結合される原子の群を意味する。
【００２２】
本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドの文脈における「隣接する」とは、ヌクレオシド、核酸塩基、糖部分、または互いにすぐに隣接するヌクレオシド間結合を指す。例えば、「隣接する核酸塩基」とは、配列において互いにすぐに隣接する核酸塩基を意味する。
【００２３】
本明細書で使用される場合、「二本鎖アンチセンス化合物」とは、互いに相補的でありかつ二本鎖を形成する２つのオリゴマー化合物を含むアンチセンス化合物を意味し、２つの当該オリゴマー化合物のうちの１つは、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
【００２４】
本明細書で使用される場合、「有効量」とは、化合物を必要とする個体において所望の生理学的結果を果たすのに十分な化合物の量を意味する。有効量は、治療される個体の健康及び身体状態、治療される個体の分類群、組成物の配合、個体の医学的状態の評価、ならびに他の関連する要因によって個体の間で異なり得る。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「有効性」とは、所望の効果を生み出す能力を意味する。
本明細書で使用される場合、「ＥＮａＣ」とは、任意のＥＮａＣ（上皮性ナトリウムチャネル）核酸またはタンパク質を意味する。「ＥＮａＣ核酸」とは、ＥＮａＣサブユニットをコードする任意の核酸を意味する。例えば、ある特定の実施形態では、ＥＮａＣ核酸は、ＥＮａＣをコードするＤＮＡ染色体領域、ＥＮａＣをコードするＤＮＡから転写されたＲＮＡ（例えば、プレｍＲＮＡ転写物）、及びＥＮａＣをコードするｍＲＮＡ転写物を含む。ある特定の実施形態では、ＥＮａＣ核酸またはタンパク質は、α−ＥＮａＣもしくはＳＣＮＮ１Ａ（ナトリウムチャネル上皮性１アルファサブユニット）核酸またはタンパク質である。本明細書において、α−ＥＮａＣ及びＳＣＮＮ１Ａは、交換可能に使用され、同じ意味を有する。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「発現」は、遺伝子のコードされた情報が細胞内に存在し機能する構造に変換される全ての機能を含む。そのような構造は、これらに限定されないが、転写及び翻訳の生成物を含む。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「ギャップマー」とは、各々が１つ以上のヌクレオシドを有する外部セグメントの間に位置するＲＮａｓｅ  Ｈ切断を支持する複数のヌクレオシドを有する内部セグメントを含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドを意味し、内部セグメントを含むヌクレオシドは、すぐに隣接するヌクレオシドまたは外部セグメントを含むヌクレオシドとは化学的に異なる。内部セグメントは、「ギャップ」または「ギャップセグメント」とも称され得、外部セグメントは、「ウイング」または「ウイングセグメント」と称され得る。
【００２８】
本明細書で使用される場合、「ハイブリダイゼーション」とは、相補的オリゴヌクレオチド及び／または核酸の対合またはアニーリングを意味する。特定のメカニズムに限定されないが、ハイブリダイゼーションの最も一般定なメカニズムは、相補的核酸塩基の間の、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ、Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎまたは逆Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ水素結合であり得る水素結合に関与する。
【００２９】
本明細書で使用される場合、「個体」とは、治療または療法のために選択されるヒトまたは非ヒト動物を意味する。
本明細書で使用される場合、「発現または活性を阻害する」は、治療されていないまたは対照試料における発現または活性に対する発現または活性の低減または遮断を指し、必ずしも発現または活性の全排除を示すわけではない。
【００３０】
本明細書で使用される場合、「ヌクレオシド間結合」という用語は、オリゴヌクレオチド内の隣接するヌクレオシド間に共有結合を形成する群または結合を意味する。本明細書で使用される場合、「修飾されたヌクレオシド間結合」とは、天然発生型のホスフェートヌクレオシド間結合以外の任意のヌクレオシド間結合を意味する。非ホスフェート結合は、本明細書で修飾されたヌクレオシド間結合として称される。「ホスホロチオエート結合」とは、非架橋酸素原子のうちの１つが硫黄原子で置き換えられる修飾されたホスフェート結合を意味する。ホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、修飾されたヌクレオシド間結合である。修飾されたヌクレオシド間結合は、脱塩基ヌクレオシドを含む結合を含む。本明細書で使用される場合、「脱塩基ヌクレオシド」とは、核酸塩基に直接的に接続されていないオリゴヌクレオチドまたはオリゴマー化合物の糖部分を意味する。ある特定の実施形態では、脱塩基ヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドにおいて１つまたは２つのヌクレオシドに隣接する。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「リンカーヌクレオシド」とは、オリゴヌクレオチドを複合体部分に直接または間接的のいずれかで結合するヌクレオシドを意味する。リンカーヌクレオシドは、オリゴマー化合物の複合リンカー内に配置される。リンカーヌクレオシドは、たとえそれらがオリゴヌクレオチドと隣接していても、オリゴマー化合物のオリゴヌクレオチド部分の一部と考えられていない。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「非二環式の修飾された糖」または「非二環式の修飾された糖部分」とは、糖の２つの原子間に架橋を形成せず第２の環を形成する、置換などの修飾を含む修飾された糖部分を意味する。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「結合されたヌクレオシド」は、連続する配列において接続されている（すなわち、追加のヌクレオシドが結合されているものの間に存在しない）ヌクレオシドである。
【００３４】
本明細書で使用される場合、「不適合」または「非相補的」とは、第１及び第２のオリゴマー化合物が整列されている場合に、第２のオリゴヌクレオチドまたは標的核酸の対応する核酸塩基と相補的でない第１のオリゴヌクレオチドの核酸塩基を意味する。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「調節する」は、細胞、組織、器官、または生物において特徴を変更または調整することを指す。例えば、ＥＮａＣ発現を調節することは、細胞、組織、器官、または生物におけるＥＮａＣ  ＲＮＡ及び／またはＥＮａＣタンパク質のレベルを増加または減少させることを意味し得る。「調節因子」は、細胞、組織、器官、または生物における変化に影響を与える。例えば、ＥＮａＣ発現を調節する化合物は、細胞、組織、器官、または生物におけるＥＮａＣ  ＲＮＡ及び／またはＥＮａＣタンパク質の量を減少させる調節因子であり得る。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「ＭＯＥ」は、メトキシエチルを意味する。「２’−ＭＯＥ」または「２’−Ｏ−メトキシエチル」は、リボシル環の２’−ＯＨ基の代わりに２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３基を意味する。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「モチーフ」は、オリゴヌクレオチドにおける修飾されていない及び／または修飾された糖部分、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間結合のパターンを意味する。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「天然発生型の」は、天然に見つけられることを意味する。
本明細書で使用される場合、「核酸塩基」は、修飾されていない核酸塩基または修飾された核酸塩基を意味する。本明細書で使用される場合、「修飾されていない核酸塩基」は、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、ウラシル（Ｕ）、及びグアニン（Ｇ）である。本明細書で使用される場合、修飾された核酸塩基は、少なくとも１つの修飾されていない核酸塩基と対合することができる原子の群である。一般的な塩基は、５つの修飾されていない核酸塩基のうちのいずれか１つと対になることがきる核酸塩基である。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「核酸塩基配列」は、任意の糖またはヌクレオシド間結合修飾とは無関係の核酸またはオリゴヌクレオチドにおける隣接する核酸塩基の順番を意味する。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「ヌクレオシド」は、核酸塩基及び糖部分を含む部分を意味する。核酸塩基及び糖部分はそれぞれ独立して、修飾されていないか、または修飾されている。本明細書で使用される場合、「修飾されたヌクレオシド」は、修飾された核酸塩基及び／または修飾された糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「オリゴマー化合物」とは、オリゴヌクレオチド、及び任意に、複合群または末端基などの１つ以上の追加の特徴からなる化合物を意味する。
本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」とは、ヌクレオシド間結合を介して接続される結合されたヌクレオシドの鎖を意味し、各ヌクレオシド及びヌクレオシド間結合は、修飾されているか、または修飾されていない。特に指示がない限り、オリゴヌクレオチドは、８〜５０個の結合されたヌクレオシドからなる。本明細書で使用される場合、「修飾されたオリゴヌクレオチド」とは、オリゴヌクレオチドを意味し、少なくとも１つのヌクレオシドまたはヌクレオシド間結合は、修飾されている。本明細書で使用される場合、「修飾されてないオリゴヌクレオチド」とは、任意のヌクレオシド修飾またはヌクレオシド間修飾を含まないオリゴヌクレオチドを意味する。
【００４２】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体または希釈剤」とは、動物に投与することにおいて使用するのに好適な任意の物質を意味する。ある特定のそのような担体は、薬学的組成物が、例えば、エアロゾル化またはそうでなければ対象による吸入のために分散される液体、粉末、または懸濁液として製剤化されることを可能にする。ある特定の実施形態では、薬学的に許容される担体または希釈剤は、滅菌水、減菌食塩水、または減菌緩衝溶液である。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」とは、オリゴマー化合物などの化合物の生理学的及び薬学的に許容される塩、すなわち、親化合物の所望の生物学的活性を保持する塩を意味し、所望でないそれに対する毒物学的効果を与えない。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「薬学的組成物」とは、対象に投与するのに好適な物質の混合物を意味する。例えば、薬学的組成物は、アンチセンス化合物及び水溶液を含み得る。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「リン部分」とは、リン原子を含む原子の群を意味する。ある特定の実施形態では、リン部分は、モノ−、ジ−、もしくはトリ−ホスフェート、またはホスホロチオエートを含む。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「プロドラッグ」とは、体またはその細胞内の異なる形態に変換される体外の形態である治療剤を意味する。典型的には、体内のプロドラッグの変換は、酵素（例えば、内因性またはウイルス性酵素）または細胞もしくは組織中に存在する化学物質の作用によって及び／または生理的状態によって促進される。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉ化合物」とは、少なくとも部分的に、ＲＩＳＣまたはＡｇｏ２を介して作用し、標的核酸及び／または標的核酸によってコードされるタンパク質を調節するアンチセンス化合物を意味する。ＲＮＡｉ化合物は、これらに限定されないが、二本鎖ｓｉＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、及びｍｉｃｒｏＲＮＡ模倣物を含むｍｉｃｒｏＲＮＡを含む。ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉ化合物は、標的核酸の量、活性、及び／またはスプライシングを調節する。ＲＮＡｉ化合物という用語は、ＲＮａｓｅ  Ｈを介して作用するアンチセンスオリゴヌクレオチドを除外する。
【００４８】
本明細書で使用される場合、アンチセンス化合物に関連する「一本鎖」という用語は、二本鎖が形成されるように第２のオリゴマー化合物と対合しない１つのオリゴマー化合物からなるそのような化合物を意味する。オリゴヌクレオチドに関連する「自己相補的」とは、それ自体に少なくとも部分的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを意味する。オリゴマー化合物のオリゴヌクレオチドが自己相補的である１つのオリゴマー化合物からなる化合物は、一本鎖化合物である。一本鎖アンチセンスまたはオリゴマー化合物は、相補的なオリゴマー化合物と結合して二本鎖を形成することができる場合があり、その場合、化合物はもはや一本鎖ではない。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「標準細胞アッセイ」とは、実施例３に記載されるアッセイ及びその合理的な変化を意味する。
本明細書で使用される場合、「標準インビボ実験」とは、実施例４、６、または７に記載される手順、及びその合理的な変化を意味する。
【００５０】
本明細書で使用される場合、同一の分子式の分子の集団の文脈における「ステレオランダムキラル中心」とは、ランダム立体化学的配置を有するキラル中心を意味する。例えば、ステレオランダムキラル中心を含む分子の集団において、ステレオランダムキラル中心の（Ｓ）配置を有する分子の数は、ステレオランダムキラル中心の（Ｒ）配置を有する分子の数と同じであり得るが、必ずしも同じであるとは限らない。キラル中心の立体化学的配置は、立体化学的配置を制御するように設計されていない合成方法の結果である場合に、ランダムと考えられる。ある特定の実施形態では、ステレオランダムキラル中心は、ステレオランダムホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【００５１】
本明細書で使用される場合、「糖部分」とは、修飾されていない糖部分または修飾された糖部分である。本明細書で使用される場合、「修飾されていない糖部分」とは、ＲＮＡ（「修飾されていないＲＮＡ糖部分」）中に見出されるような２’−ＯＨ（Ｈ）リボシル部分、またはＤＮＡ（「修飾されていないＤＮＡ糖部分」）中に見出されるような２’−Ｈ（Ｈ）部分を意味する。本明細書で使用される場合、「修飾された糖部分」または「修飾された糖」とは、修飾されたフラノシル糖部分または糖サロゲートを意味する。本明細書で使用される場合、修飾されたフラノシル糖部分とは、修飾されていない糖部分の少なくとも１つの水素の代わりに非水素置換基を含むフラノシル糖を意味する。ある特定の実施形態では、修飾されたフラノシル糖部分は、２’−置換糖部分である。そのような修飾されたフラノシル糖部分は、二環式糖及び非二環式糖を含む。本明細書で使用される場合、「糖サロゲート」とは、核酸塩基を、オリゴヌクレオチドにおけるヌクレオシド間結合、複合群、または末端基などの別の基に結合し得るフラノシル部分以外を有する修飾された糖部分を意味する。糖サロゲートを含む修飾されたヌクレオシドは、オリゴヌクレオチド内で１つ以上の位置に抱合され得、そのようなオリゴヌクレオチドは、相補的オリゴマー化合物または核酸にハイブリダイズすることができる。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」、「標的ＲＮＡ転写物」、及び「核酸標的」とは、アンチセンス化合物が影響するように設計されている核酸を意味する。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「標的領域」とは、アンチセンス化合物がハイブリダイズするように設計されている標的核酸の部分を意味する。
本明細書で使用される場合、「末端基」とは、オリゴヌクレオチドの末端に共有結合された化学基または原子の群を意味する。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「末端ウイングヌクレオシド」とは、ギャップマーのウイングセグメントの末端に位置するヌクレオシドを意味する。少なくとも２つのヌクレオシドを含むかまたはそれらからなる任意のウイングセグメントは、２つの末端を有し、１つはギャップセグメントにすぐに隣接し、１つはギャップセグメントと反対の端にある。したがって、少なくとも２つのヌクレオシドを含むかまたはそれらからなる任意のウイングセグメントは、２つの末端ヌクレオシドを有し、１つは各末端にある。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」とは、個体に治療効果を提供する化合物、薬学的剤、または組成物の量を意味する。
本明細書で使用される場合、「治療する」は、動物における疾患、障害、または状態の改変または改善に影響を与えるために化合物または薬学的組成物を動物に投与することを指す。
ある特定の実施形態
ある特定の実施形態は、ＥＮａＣ発現を阻害するための方法、化合物、及び組成物を提供する。
【００５６】
ある特定の実施形態は、α−ＥＮａＣまたはＳＣＮＮ１Ａ核酸と相補的なオリゴヌクレオチドを含むかまたはそれからなる化合物を提供する。ある特定の実施形態では、α−ＥＮａＣまたはＳＣＮＮ１Ａ核酸は、参照配列またはＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１０３８．５に示される配列（配列番号１として本明細書に開示される）、ヌクレオシド６３４３００１〜６３８００００から切断されたＮＣ＿００００１２．１２（配列番号２として本明細書に開示される）の補体、またはＮＧ＿０１１９４５．１（配列番号１９５７として本明細書に開示される）を有する。ある特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、一本鎖である。ある特定の実施形態では、化合物は、二本鎖である。
【００５７】
ある特定の実施形態は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、一本鎖である。ある特定の実施形態では、化合物は、二本鎖である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長である。
【００５８】
ある特定の実施形態は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。例えば、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号６、７など、または１９５４のうちのいずれか１つを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１６７を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号２４４を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号３９９を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号４２８を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号４３１を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号４３８を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号５９０を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号８２４を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号９３５を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１０４９を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１１１４を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１１２４を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１１３４を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１１３９を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１１４５を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１１７０を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１５３０を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１５３２を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１６７２を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１７３０を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１８０２を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１８３２を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、一本鎖である。ある特定の実施形態では、化合物は、二本鎖である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号６〜１９５４のうちのいずれかの少なくとも１２個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【００５９】
ある特定の実施形態は、１０〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも１０個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、一本鎖である。ある特定の実施形態では、化合物は、二本鎖である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長である。
【００６０】
ある特定の実施形態は、１１〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも１１個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、一本鎖である。ある特定の実施形態では、化合物は、二本鎖である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１１〜３０結合ヌクレオシド長である。
【００６１】
ある特定の実施形態は、１２〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも１２個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、一本鎖である。ある特定の実施形態では、化合物は、二本鎖である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１２〜３０結合ヌクレオシド長である。
【００６２】
ある特定の実施形態では、化合物は、３０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。
【００６３】
ある特定の実施形態は、１６〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、一本鎖である。ある特定の実施形態では、化合物は、二本鎖である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１６〜３０結合ヌクレオシド長である。
【００６４】
ある特定の実施形態は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列からなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、一本鎖である。ある特定の実施形態では、化合物は、二本鎖である。
【００６５】
ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロンと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、イントロン１０、イントロン１１、またはイントロン１２と相補的である。ある特定のそのような実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド４，４９７〜５，１６３、５，６３４〜１６，２９０、１６，５５９〜１７，７５９、１７，９５１〜２４，１２０、２４，２２５〜２４，５６５、２４，７３０〜２５，１５２、２５，２５２〜２５，４４５、２５，５６４〜３０，５９５、３０，６７５〜３０，７７９、３０，８３８〜３０，９９５、３１，０５２〜３１，１９８、または３１，２７５〜３１，７４７内の配列と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、イントロン１０、イントロン１１、またはイントロン１２の等長部分と相補的な少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の隣接する核酸塩基部分を有するオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、そのようなオリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド４，４９７〜５，１６３、５，６３４〜１６，２９０、１６，５５９〜１７，７５９、１７，９５１〜２４，１２０、２４，２２５〜２４，５６５、２４，７３０〜２５，１５２、２５，２５２〜２５，４４５、２５，５６４〜３０，５９５、３０，６７５〜３０，７７９、３０，８３８〜３０，９９５、３１，０５２〜３１，１９８、または３１，２７５〜３１，７４７内の等長部分と相補的な少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の隣接する核酸塩基部分を有する。ある特定の実施形態では、これらの化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。α−ＥＮａＣ核酸転写物のある特定のイントロン、例えば、α−ＥＮａＣプレｍＲＮＡのイントロン４のほぼ任意の部分と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物は、一般に、特に強力及び耐容性である。したがって、そのようなある特定のイントロンは、α−ＥＮａＣ核酸転写物を標的とするためのホットスポット領域と考えられ得る。
【００６６】
ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン４または３’−ＵＴＲと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド１７，９５１〜２４，１２０または３２，１２９〜３３，１７４内の配列と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン４または３’−ＵＴＲの等長部分と相補的な少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の隣接する核酸塩基部分を有するオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、そのようなオリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド１７，９５１〜２４，１２０または３２，１２９〜３３，１７４内で等長部分と相補的な少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の隣接する核酸塩基部分を有する。ある特定の実施形態では、これらの化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。
【００６７】
ある特定の実施形態では、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号２のヌクレオチド１９，０２２〜１９，０３７、２０，４１５〜２０，４３０、２１，７５０〜２１，７６６、３２，８４４〜３２，８５９、または３２，９８９〜３３，００４内で等長部分と相補的な少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の隣接する核酸塩基を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長である。
【００６８】
ある特定の実施形態では、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号２のヌクレオチド１９，０２２〜１９，０３７、２０，４１５〜２０，４３０、２１，７５０〜２１，７６６、３２，８４４〜３２，８５９、または３２，９８９〜３３，００４内で相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長である。
【００６９】
ある特定の実施形態では、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、または８２７３９２（配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３）のうちのいずれか１つの核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の隣接する核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号２３９を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号４２６を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１５４１を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１８１２を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１１１３を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号５９３を含むか、またはそれからなる。
【００７０】
ある特定の実施形態では、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、または８２７３９２（配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３）のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長である。
【００７１】
ある特定の実施形態では、化合物は、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、または８２７３９２（配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３）のうちのいずれか１つの核酸塩基配列からなる核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。
【００７２】
ある特定の実施形態では、α−ＥＮａＣと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含むかまたはそれからなる化合物は、化合物番号８２７３５９である。以下の実施例部分に記載されるようにスクリーニングされた１，９００超の化合物のうち、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、及び８２７３９２は、上位のリード化合物として現れた。特に、化合物番号８２７３５９は、１，９００超の化合物のうち有効性及び耐容性に関する特性の最も良好な組み合わせを呈した。
【００７３】
前述のオリゴヌクレオチドのうちのいずれかは、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合、少なくとも１つの修飾された糖、及び／または少なくとも１つの修飾された核酸塩基を含む修飾されたオリゴヌクレオチドである。
【００７４】
ある特定の実施形態では、前述の修飾されたオリゴヌクレオチドのうちのいずれかは、少なくとも１つの修飾された糖を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの修飾された糖は、２’−ＭＯＥ修飾を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの修飾された糖は、ｃＥｔ二環式糖、ＬＮＡ二環式糖、またはＥＮＡ二環式糖などの二環式糖である。
【００７５】
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合などの少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合を含む。
ある特定の実施形態では、前述の修飾されたオリゴヌクレオチドのうちのいずれかは、５−メチルシトシンなどの少なくとも１つの修飾された核酸塩基を含む。
【００７６】
ある特定の実施形態では、前述の修飾されたオリゴヌクレオチドのうちのいずれかは、
結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、
ギャップセグメントが、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが、修飾された糖を含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つに列挙される配列を含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つに列挙される配列を含む核酸塩基配列を有する１０〜３０結合ヌクレオシド長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つに列挙される配列からなる核酸塩基配列を有する１６結合ヌクレオシド長である。
【００７７】
ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つに列挙される配列を含む核酸塩基配列を有する２０〜８０結合核酸塩基長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなり、修飾されたオリゴヌクレオチドは、
１０個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
５個の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
５個の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を含み、
ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０〜３０個の結合されたヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０個の結合されたヌクレオシドからなる。
【００７８】
ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つに列挙される配列を含む核酸塩基配列を有する１６〜８０結合核酸塩基長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなり、修飾されたオリゴヌクレオチドは、
１０個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
３個の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
３個の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を含み、
ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に配置され、５’ウイングセグメントのヌクレオシドはそれぞれ、ｃＥｔ二環式糖を含み、３’ウイングセグメントのヌクレオシドはそれぞれ、ｃＥｔ二環式糖を含み、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１６〜８０結合ヌクレオシド長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１６〜３０結合ヌクレオシド長である。
【００７９】
ある特定の実施形態では、化合物は、以下の式のうちの１つによる修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなり、
ｍＣｋｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｋｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｋｓ  Ｇｋｓ  Ｔｋ（配列番号１１１３）、
Ａｋｓ  Ａｋｓ  Ｇｋｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｋｓ  Ａｋｓ  Ｇｋ（配列番号２３９）、
Ａｋｓ  ｍＣｋｓ  Ｇｋｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｋｓ  Ｔｋｓ  ｍＣｋ（配列番号４２６）、
Ｔｋｓ  Ｇｋｓ  ｍＣｋｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｋｓ  ｍＣｋｓ  Ｔｋ（配列番号１５４１）、
Ａｋｓ  Ｇｋｓ  Ａｋｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｋｓ  Ａｋ（配列番号１８１２）、
ｍＣｋｓ  Ｇｋｓ  Ａｋｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｋｓ  ｍＣｋｓ  Ａｋ（配列番号５９３）、
式中、Ａ＝アデニン、ｍＣ＝５−メチルシトシン、Ｇ＝グアニン、Ｔ＝チミン、ｋ＝ｃＥｔ糖部分、ｄ＝２’−デオキシリボシル糖部分、及びｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【００８０】
ある特定の実施形態では、化合物は、化合物８２７３５９またはその塩を含むか、またはそれからなり、修飾されたオリゴヌクレオチドは以下の化学構造を有する。
【００８１】
【化１】
2021500903.tif 000002
【００８２】
「配列番号１１１３］
ある特定の実施形態では、化合物は、以下の化学構造を有する化合物８２７３５９のナトリウム塩を含むか、またはそれからなる。
【００８３】
【化２】
2021500903.tif 000003
【００８４】
［配列番号１１１３］
前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物またはオリゴヌクレオチドは、α−ＥＮａＣをコードする核酸と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的であり得る。
【００８５】
前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、一本鎖であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、２’−デオキシリボヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、二本鎖である。ある特定の実施形態では、化合物は、二本鎖であり、リボヌクレオシドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物であり得る。
【００８６】
前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、８〜８０、１０〜３０、１２〜５０、１３〜３０、１３〜５０、１４〜３０、１４〜５０、１５〜３０、１５〜５０、１６〜３０、１６〜５０、１７〜３０、１７〜５０、１８〜２２、１８〜２４、１８〜３０、１８〜５０、１９〜２２、１９〜３０、１９〜５０、または２０〜３０結合ヌクレオシド長であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、オリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。
【００８７】
ある特定の実施形態では、化合物は、本明細書に記載される修飾されたオリゴヌクレオチド及び複合群を含む。ある特定の実施形態では、複合群は、修飾されたオリゴヌクレオチドの５’末端で修飾されたオリゴヌクレオチドに結合されている。ある特定の実施形態では、複合群は、修飾されたオリゴヌクレオチドの３’末端で修飾されたオリゴヌクレオチドに結合されている。
【００８８】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物または組成物は、修飾されたオリゴヌクレオチドの塩を含む。ある特定の実施形態では、塩は、ナトリウム塩である。ある特定の実施形態では、塩は、カリウム塩である。
【００８９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物または組成物は、標準細胞アッセイにおいて２５０ｎＭ未満、２００ｎＭ未満、１５０ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、９０ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、７０ｎＭ未満、６５ｎＭ未満、６０ｎＭ未満、５５ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、４５ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、３５ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、または１５ｎＭ未満のインビトロＩＣ５０の少なくとも１つを有することによって活性である。
【００９０】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物または組成物は、生理食塩水処置された動物と比較して４倍、３倍、２倍、または１．５倍以下のアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）値の増加、または対照の処置された動物と比較して３０％、２０％、１５％、１２％、１０％、５％、もしくは２％以下の肝臓、脾臓、または腎臓重量の増加のうちの少なくとも１つを有することによって示されるように高度に耐容性である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物または組成物は、対照の処置された動物と比較してＡＬＴまたはＡＳＴの増加を有さないことによって示されるように高度に耐容性である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物または組成物は、対照の動物と比較して肝臓、脾臓、または腎臓重量の増加を有さないことによって示されるように高度に耐容性である。
【００９１】
ある特定の実施形態は、前述の実施形態のうちのいずれかの化合物またはその塩、及び薬学的に許容される担体または希釈剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を提供する。ある特定の実施形態では、組成物は、約４０センチポアズ（ｃＰ）未満、約３０ｃＰ未満、約２０ｃＰ未満、約１５ｃＰ未満、約１０ｃＰ未満、約５ｃＰ未満、または約３ｃＰ未満、または約１．５ｃＰ未満の粘度を有する。ある特定の実施形態では、前述の粘度のうちのいずれかを有する組成物は、約１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で本明細書に提供される化合物を含む。ある特定の実施形態では、前述の粘度のうちのいずれか及び／または化合物濃度を有する組成物は、室温または約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、もしくは約３０℃の温度を有する。
【００９２】
前述の化合物のうちのいずれかは、本明細書にさらに記載されるように、ＥＮａＣに関連する疾患を治療、予防、または改善するために使用され得る。
ある特定の適応症
本明細書に提供されるある特定の実施形態は、ＥＮａＣ発現を阻害する方法に関し、それは、α−ＥＮａＣを標的とする化合物の投与によって個体におけるＥＮａＣに関連する疾患を治療、予防、または改善するのに有用であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ阻害剤であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣと相補的なアンチセンス化合物、オリゴマー化合物、またはオリゴヌクレオチドであり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、本明細書に記載される化合物のうちのいずれかであり得る。
【００９３】
本明細書に提供される方法で治療可能、予防可能、及び／または改善可能なＥＮａＣに関連する疾患の例には、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、及び慢性気管支炎が挙げられる。
【００９４】
ある特定の実施形態では、個体においてα−ＥＮａＣに関連する疾患を治療、予防、または改善する方法は、α−ＥＮａＣ阻害剤を含む化合物を個体に投与し、それにより疾患を治療、予防、または改善することを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣに標的化されたアンチセンス化合物を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的なオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロンと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、イントロン１０、イントロン１１、またはイントロン１２と相補的である。ある特定のそのような実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド４，４９７〜５，１６３、５，６３４〜１６，２９０、１６，５５９〜１７，７５９、１７，９５１〜２４，１２０、２４，２２５〜２４，５６５、２４，７３０〜２５，１５２、２５，２５２〜２５，４４５、２５，５６４〜３０，５９５、３０，６７５〜３０，７７９、３０，８３８〜３０，９９５、３１，０５２〜３１，１９８、または３１，２７５〜３１，７４７内の配列と相補的である。ある特定の実施形態は、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、１２〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列からなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つを含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つからなる核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかでは、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、または８２７３９２である。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、一本鎖または二本鎖であり得る。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、吸入を介して個体に投与される。ある特定の実施形態では、化合物を投与することは、肺活量測定または粘液線毛クリアランスを改善または保持する。
【００９５】
ある特定の実施形態では、嚢胞性線維、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎を治療、予防、または改善する方法は、α−ＥＮａＣ核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を個体に投与し、それにより嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎を治療、予防、または改善することを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣに標的化されたアンチセンス化合物である。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロンと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、イントロン１０、イントロン１１、またはイントロン１２と相補的である。ある特定のそのような実施態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド４，４９７〜５，１６３、５，６３４〜１６，２９０、１６，５５９〜１７，７５９、１７，９５１〜２４，１２０、２４，２２５〜２４，５６５、２４，７３０〜２５，１５２、２５，２５２〜２５，４４５、２５，５６４〜３０，５９５、３０，６７５〜３０，７７９、３０，８３８〜３０，９９５、３１，０５２〜３１，１９８、または３１，２７５〜３１，７４７内の配列と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、１２〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列からなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つを含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つからなる核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかでは、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、または８２７３９２である。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、一本鎖または二本鎖であり得る。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、吸入を介して個体に投与される。ある特定の実施形態では、化合物を投与する���とは、肺機能を改善または保持する。ある特定のそのような実施形態では、肺活量測定または粘液線毛クリアランスは、改善または保持される。ある特定のそのような実施形態では、１秒間の努力肺活量（ＦＥＶ１）、ＦＶＣまたはＦＥＦ２５−７５が増加される。ある特定の実施形態では、肺の増悪、入院率もしくは頻度、または抗生物質の使用が減少される。ある特定の実施形態では、呼吸アンケートであるＣＦＱ−Ｒによって測定されるように、クオリティオブライフが改善される。ある特定の実施形態では、個体は、ＥＮａＣに関連する疾患を有するか、またはそれを有する危険性があるとして確認される。
【００９６】
ある特定の実施形態では、ＥＮａＣに関連する疾患を有するか、あまたはそれを有する危険性がある個体におけるα−ＥＮａＣの発現を阻害する方法は、α−ＥＮａＣ阻害剤を含む化合物を個体に投与し、それにより個体におけるα−ＥＮａＣの発現を阻害することを含む。ある特定の実施形態では、化合物を投与することは、肺におけるα−ＥＮａＣの発現を阻害する。ある特定の実施形態では、個体は、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎を有するか、またはそれを有する危険性がある。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣに標的化されたアンチセンス化合物を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的なオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロンと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、イントロン１０、イントロン１１、またはイントロン１２と相補的である。ある特定のそのような実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド４，４９７〜５，１６３、５，６３４〜１６，２９０、１６，５５９〜１７，７５９、１７，９５１〜２４，１２０、２４，２２５〜２４，５６５、２４，７３０〜２５，１５２、２５，２５２〜２５，４４５、２５，５６４〜３０，５９５、３０，６７５〜３０，７７９、３０，８３８〜３０，９９５、３１，０５２〜３１，１９８、または３１，２７５〜３１，７４７内の配列と相補的である。ある特定の実施形態は、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、１２〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列からなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つを含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つからなる核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかでは、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、または８２７３９２である。前述の実施形態のうち��いずれかでは、化合物は、一本鎖または二本鎖であり得る。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、吸入を介して個体に投与される。ある特定の実施形態では、化合物を投与することは、肺活量測定または粘液線毛クリアランスを改善または保持する。ある特定の実施形態では、個体は、ＥＮａＣに関連する疾患を有するか、またはそれを有する危険性があるとして確認される。
【００９７】
ある特定の実施形態では、細胞内のα−ＥＮａＣの発現を阻害する方法は、細胞をα−ＥＮａＣ阻害剤を含む化合物と接触させて、それにより細胞内のα−ＥＮａＣの発現を阻害することを含む。ある特定の実施形態では、細胞は、肺細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、肺にある。ある特定の実施形態では、細胞は、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎を有するか、またはそれを有する危険性がある個体の肺にある。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣに標的化されたアンチセンス化合物を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的なオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロンと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、イントロン１０、イントロン１１、またはイントロン１２と相補的である。ある特定のそのような実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド４，４９７〜５，１６３、５，６３４〜１６，２９０、１６，５５９〜１７，７５９、１７，９５１〜２４，１２０、２４，２２５〜２４，５６５、２４，７３０〜２５，１５２、２５，２５２〜２５，４４５、２５，５６４〜３０，５９５、３０，６７５〜３０，７７９、３０，８３８〜３０，９９５、３１，０５２〜３１，１９８、または３１，２７５〜３１，７４７内の配列と相補的である。ある特定の実施形態は、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、１２〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列からなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つを含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つからなる核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかでは、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、または８２７３９２である。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、一本鎖または二本鎖であり得る。���述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物であり得る。
【００９８】
ある特定の実施形態では、ＥＮａＣに関連する疾患を有するか、またはそれを有する危険性がある個体の肺における肺活量測定または粘液線毛クリアランスを増加または改善する方法は、α−ＥＮａＣ阻害剤を含む化合物を個体に投与し、それにより個体の肺における肺活量測定または粘液線毛クリアランスを増加または改善することを含む。ある特定のそのような実施形態では、１秒間の努力肺活量（ＦＥＶ１）、ＦＶＣまたはＦＥＦ２５−７５が増加される。ある特定の実施形態では、肺の増悪、入院率もしくは頻度、または抗生物質の使用が減少される。ある特定の実施形態では、呼吸アンケートであるＣＦＱ−Ｒによって測定されるように、クオリティオブライフが改善される。ある特定の実施形態では、個体は、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎を有するか、またはそれを有する危険性がある。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣに標的化されたアンチセンス化合物を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的なオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロンと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、イントロン１０、イントロン１１、またはイントロン１２と相補的である。ある特定のそのような実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド４，４９７〜５，１６３、５，６３４〜１６，２９０、１６，５５９〜１７，７５９、１７，９５１〜２４，１２０、２４，２２５〜２４，５６５、２４，７３０〜２５，１５２、２５，２５２〜２５，４４５、２５，５６４〜３０，５９５、３０，６７５〜３０，７７９、３０，８３８〜３０，９９５、３１，０５２〜３１，１９８、または３１，２７５〜３１，７４７内の配列と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、１２〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列からなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つを含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つからなる核酸塩基配列を有する修飾されたオ��ゴヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかでは、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、または８２７３９２である。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、一本鎖または二本鎖であり得る。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、吸入を介して個体に投与される。ある特定の実施形態では、個体は、ＥＮａＣに関連する疾患を有するか、またはそれを有する危険性があるとして確認される。
【００９９】
ある特定の実施形態は、ＥＮａＣに関連する疾患を治療することにおいて使用するためのα−ＥＮａＣ阻害剤を含む化合物に注目する。ある特定の実施形態では、疾患は、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎である。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣに標的化されたアンチセンス化合物を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的なオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロンと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、イントロン１０、イントロン１１、またはイントロン１２と相補的である。ある特定のそのような実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド４，４９７〜５，１６３、５，６３４〜１６，２９０、１６，５５９〜１７，７５９、１７，９５１〜２４，１２０、２４，２２５〜２４，５６５、２４，７３０〜２５，１５２、２５，２５２〜２５，４４５、２５，５６４〜３０，５９５、３０，６７５〜３０，７７９、３０，８３８〜３０，９９５、３１，０５２〜３１，１９８、または３１，２７５〜３１，７４７内の配列と相補的である。ある特定の実施形態は、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、１２〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列からなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つを含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つからなる核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかでは、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、または８２７３９２である。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、一本鎖または二本鎖であり得る。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物であり得る。
【０１００】
ある特定の実施形態は、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎を有するか、またはそれを有する危険性がある個体の肺活量測定または粘液線毛クリアランスを増加または改善することにおいて使用するためのα−ＥＮａＣ阻害剤を含む化合物に注目する。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣに標的化されたアンチセンス化合物を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的なオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロンと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、イントロン１０、イントロン１１、またはイントロン１２と相補的である。ある特定のそのような実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド４，４９７〜５，１６３、５，６３４〜１６，２９０、１６，５５９〜１７，７５９、１７，９５１〜２４，１２０、２４，２２５〜２４，５６５、２４，７３０〜２５，１５２、２５，２５２〜２５，４４５、２５，５６４〜３０，５９５、３０，６７５〜３０，７７９、３０，８３８〜３０，９９５、３１，０５２〜３１，１９８、または３１，２７５〜３１，７４７内の配列と相補的である。ある特定の実施形態は、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、１２〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列からなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つを含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つからなる核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかでは、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、または８２７３９２である。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、一本鎖または二本鎖であり得る。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物であり得る。
【０１０１】
ある特定の実施形態は、ＥＮａＣに関連する疾患を治療するための医薬品の製造または調製のためのα−ＥＮａＣ阻害剤を含む化合物の使用に注目する。ある特定の実施形態は、ＥＮａＣに関連する疾患を治療するための医薬品の調製のためのα−ＥＮａＣ阻害剤を含む化合物の使用に注目する。ある特定の実施形態では、疾患は、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎である。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣに標的化されたアンチセンス化合物を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的なオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロンと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、イントロン１０、イントロン１１、またはイントロン１２と相補的である。ある特定のそのような実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド４，４９７〜５，１６３、５，６３４〜１６，２９０、１６，５５９〜１７，７５９、１７，９５１〜２４，１２０、２４，２２５〜２４，５６５、２４，７３０〜２５，１５２、２５，２５２〜２５，４４５、２５，５６４〜３０，５９５、３０，６７５〜３０，７７９、３０，８３８〜３０，９９５、３１，０５２〜３１，１９８、または３１，２７５〜３１，７４７内の配列と相補的である。ある特定の実施形態は、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、１２〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列からなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つを含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つからなる核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかでは、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、または８２７３９２である。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、一本鎖または二本鎖であり得る。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物であり得る。
【０１０２】
ある特定の実施形態は、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎を有するか、またはそれを有する危険性がある個体の肺活量測定または粘液線毛クリアランスを増加または改善するための医薬品の製造または調製のためのα−ＥＮａＣ阻害剤を含む化合物の使用に注目する。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣに標的化されたアンチセンス化合物を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的なオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロンと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、α−ＥＮａＣ核酸転写物のイントロン１、イントロン２、イントロン３、イントロン４、イントロン５、イントロン６、イントロン７、イントロン８、イントロン９、イントロン１０、イントロン１１、またはイントロン１２と相補的である。ある特定のそのような実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド４，４９７〜５，１６３、５，６３４〜１６，２９０、１６，５５９〜１７，７５９、１７，９５１〜２４，１２０、２４，２２５〜２４，５６５、２４，７３０〜２５，１５２、２５，２５２〜２５，４４５、２５，５６４〜３０，５９５、３０，６７５〜３０，７７９、３０，８３８〜３０，９９５、３１，０５２〜３１，１９８、または３１，２７５〜３１，７４７内の配列と相補的である。ある特定の実施形態は、化合物は、８〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、１２〜５０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態は、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列からなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つを含む核酸塩基配列を有する１６〜５０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号２３９、４２６、１５４１、１８１２、１１１３、または５９３のうちのいずれか１つからなる核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかでは、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１０〜３０結合ヌクレオシド長であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、化合物番号７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、または８２７３９２である。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、一本鎖または二本鎖であり得る。前述の実施形態のうちのいずれかでは、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物であり得る。
【０１０３】
前述の方法または使用のうちのいずれかでは、化合物は、α−ＥＮａＣに標的化され得る。ある特定の実施形態では、化合物は、修飾されたオリゴヌクレオチド、例えば、８〜５０結合ヌクレオシド長、１０〜３０結合ヌクレオシド長、１２〜３０結合ヌクレオシド長、または２０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号１、２、または１９５７に列挙される核酸塩基配列のうちのいずれかと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合、少なくとも１つの修飾された糖、及び少なくとも１つの修飾された核酸塩基を含む。ある特定のそのような実施形態では、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、少なくとも１つの修飾された糖は、二環式糖または２’−ＭＯＥ糖であり、少なくとも１つの修飾された核酸塩基は、５−メチルシトシンである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、及び結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントを含み、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメント及び３’ウイングセグメントにすぐ隣接してかつそれらの間に配置され、各末端ウイングヌクレオシドは、修飾された糖を含む。
【０１０４】
前述の実施形態のうちのいずれかでは、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１２〜３０、１５〜３０、１５〜２５、１５〜２４、１６〜２４、１７〜２４、１８〜２４、１９〜２４、２０〜２４、１９〜２２、２０〜２２、１６〜２０、または１７〜２０結合ヌクレオシド長である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号１、２、または１９５７に列挙される核酸塩基配列のうちのいずれかと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合、少なくとも１つの修飾された糖、及び少なくとも１つの修飾された核酸塩基を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、少なくとも１つの修飾された糖は、二環式糖または２’−ＭＯＥ糖であり、少なくとも１つの修飾された核酸塩基は、５−メチルシトシンである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、及び結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントを含み、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメント及び３’ウイングセグメントにすぐ隣接してかつそれらの間に配置され、各末端ウイングヌクレオシドは、修飾された糖を含む。
【０１０５】
前述の方法または使用のうちのいずれかでは、化合物は、１６〜３０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つを含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、それからなり、修飾されたオリゴヌクレオチドは、
結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、
ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、修飾された糖を含む。
【０１０６】
前述の方法または使用のうちのいずれかでは、化合物は、１６〜３０結合ヌクレオシド長であり、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つを含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、それからなり、修飾されたオリゴヌクレオチドは、
結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、
ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に配置され、各末端ウイングヌクレオシドは、修飾された糖を含む。
【０１０７】
前述の方法または使用のうちのいずれかでは、化合物は、配列番号６〜１９５４のいずれか１つに列挙される配列を含む核酸塩基配列を有する２０結合ヌクレオシド長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなり、修飾されたオリゴヌクレオチドは、
１０個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
５個の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
５個の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を含み、
ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０〜３０個の結合されたヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０個の結合されたヌクレオシドからなる。
【０１０８】
前述の方法または使用のうちのいずれかでは、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つに列挙される配列を含むかまたはそれからなる核酸塩基配列を有する１６〜５０結合核酸塩基長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなり、修飾されたオリゴヌクレオチドは、
１０個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
３個の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
３個の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を含み、
ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、ｃＥｔ糖を含み、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１６〜３０個の結合されたヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１６個の結合されたヌクレオシドからなる。
【０１０９】
前述の方法または使用のうちのいずれかでは、化合物は、配列番号２３９、４２６、５９３、１１１３、１５４１、または１８１２のうちのいずれか１つに列挙される配列を含むかまたはそれからなる核酸塩基配列を有する１６〜５０結合核酸塩基長の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなり、修飾されたオリゴヌクレオチドは、
１０個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
３個の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
３個の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を含み、
ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、ｃＥｔ糖を含み、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１６〜３０個の結合されたヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１６個の結合されたヌクレオシドからなる。
【０１１０】
前述の方法または使用のうちのいずれかでは、化合物は、以下の化学構造を有する。
［配列番号１１１３］
【０１１１】
【化３】
2021500903.tif 000004
【０１１２】
前述の方法または使用のうちのいずれかでは、化合物は、吸入を介して投与され得る。ある特定の実施形態では、前述の方法または使用のうちのいずれかの化合物は、注射または注入によって投与され得る。ある特定の実施形態では、前述の方法または使用のうちのいずれかの化合物は、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または脳内投与、例えば、髄腔内または脳室内投与を介して投与され得る。ある特定の実施形態では、前述の方法または使用のうちのいずれかの化合物は、全身投与され得る。ある特定の実施形態では、前述の方法または使用のうちのいずれかの化合物は、経口投与され得る。
ある特定の組み合わせ及び併用療法
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物を含む第１の薬剤は、１つ以上の二次薬剤と共に同時投与される。ある特定の実施形態では、そのような第２の薬剤は、本明細書に記載される第１の薬剤と同じ疾患、障害、または状態を治療するように設計されている。ある特定の実施形態では、そのような第２の薬剤は、本明細書に記載される第１の薬剤と異なる疾患、障害、または状態を治療するように設計されている。ある特定の実施形態では、第１の薬剤は、第２の薬剤の所望でない副作用を治療するように設計されている。ある特定の実施形態では、第２の薬剤は、第１の薬剤の所望でない効果を治療するために第１の薬剤と共に同時投与される。ある特定の実施形態では、そのような第２の薬剤は、本明細書に記載されるような１つ以上の薬学的組成物の所望でない副作用を治療するように設計されている。ある特定の実施形態では、第２の薬剤は、併用効果を生み出すために第１の薬剤と共に同時投与される。ある特定の実施形態では、第２の薬剤は、相乗効果を生み出すために第１の薬剤と共に同時投与される。ある特定の実施形態では、第１及び第２の薬剤の同時投与は、薬剤が独立した療法として投与された場合に治療または予防効果を達成するために必要とされるより低い投与量の使用を可能にする。
【０１１３】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される１つ以上の化合物または組成物は、１つ以上の二次薬剤と共に同時投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される１つ以上の化合物または組成物及び１つ以上の二次薬剤は、異なる時間に投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される１つ以上の化合物または組成物及び１つ以上の二次薬剤は、単一の製剤中で一緒に調製される。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される１つ以上の化合物または組成物及び１つ以上の二次薬剤は、別々に調製される。ある特定の実施形態では、二次薬剤は、気管支拡張剤、コルチコステロイド、抗生物質、修飾されたオリゴヌクレオチドを含むかもしくはそれからなる第２の化合物、及び／またはクロライドチャネル（ＣＦＴＲ）調節因子である。ある特定の実施形態では、二次薬剤は、高張食塩水、ドルナーゼアルファ、アイバカフトール、テザカフトール、及びルマカフトールから選択される。
【０１１４】
ある特定の実施形態は、二次薬剤と組み合わせて本明細書に記載されるようなα−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物の使用を対象とする。特定の実施形態では、そのような使用は、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、もしくは慢性気管支炎に罹患する患者を治療する方法にあるか、または嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、もしくは慢性気管支炎を治療するための医薬品の調製または製造にある。ある特定の実施形態では、二次薬剤は、気管支拡張剤、コルチコステロイド、抗生物質、またはクロライドチャネル（ＣＦＴＲ）調節因子である。ある特定の実施形態では、二次薬剤は、高張食塩水、ドルナーゼアルファ、アイバカフトール、テザカフトール、及びルマカフトールから選択される。
【０１１５】
ある特定の実施形態は、２つ以上の二次薬剤と組み合わせて本明細書に記載されるようなα−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物の使用を対象とする。特定の実施形態では、そのような使用は、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、もしくは慢性気管支炎に罹患する患者を治療する方法にあるか、または嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、もしくは慢性気管支炎を治療するための医薬品の調製または製造にある。ある特定の実施形態では、２つ以上の二次薬剤は、気管支拡張剤、コルチコステロイド、抗生物質、及びクロライドチャネル（ＣＦＴＲ）調節因子から選択される。ある特定の実施形態では、２つ以上の二次薬剤は、高張食塩水、ドルナーゼアルファ、アイバカフトール、テザカフトール、及びルマカフトールから選択される。
【０１１６】
ある特定の実施形態は、本明細書に記載されるようにα−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物と、高張食塩水、ドルナーゼアルファ、アイバカフトール、テザカフトール、及びルマカフトールから選択される二次薬剤などの二次薬剤との組み合わせに注目する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるようなα−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物と、高張食塩水、ドルナーゼアルファ、アイバカフトール、テザカフトール、及びルマカフトールから選択される二次薬剤などの二次薬剤とのそのような組み合わせは、肺活量測定または粘液線毛クリアランスを改善もしくは保持及び／または嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎を治療するのに有用である。
【０１１７】
ある特定の実施形態は、本明細書に記載されるようにα−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物と、高張食塩水、ドルナーゼアルファ、アイバカフトール、テザカフトール、及びルマカフトールから選択される二次薬剤などの２つ以上の二次薬剤との組み合わせに注目する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるようなα−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物と、高張食塩水、ドルナーゼアルファ、アイバカフトール、テザカフトール、及びルマカフトールから選択される二次薬剤などの２つ以上の二次薬剤とのそのような組み合わせは、肺活量測定または粘液線毛クリアランスを改善もしくは保持及び／または嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、喘息、または慢性気管支炎を治療するのに有用である。
【０１１８】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるようなα−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物及び二次薬剤は、２つの薬剤を同時に、別個に、または逐次的に投与することによる併用治療において使用される。ある特定の実施形態では、２つの薬剤は、固定用量併用製品として製剤化される。他の実施形態では、２つの薬剤は、同時にまたは連続して（逐次的に）のいずれかで後に取り込まれ得る別個のユニットとして患者に提供される。
【０１１９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるようなα−ＥＮａＣ核酸転写物と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物及び２つ以上の二次薬剤は、３つ以上の薬剤を同時に、別個に、または逐次的に投与することによる併用治療において使用される。ある特定の実施形態では、３つ以上の薬剤は、固定用量併用製品として製剤化される。他の実施形態では、３つ以上の薬剤は、同時にまたは連続して（逐次的に）のいずれかで後に取り込まれ得る別個のユニットとして患者に提供される。
【０１２０】
ある特定の化合物
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、アンチセンス化合物であり得る。ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物は、オリゴマー化合物を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、標的核酸のものと相補的な核酸塩基配列を有する。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、標的核酸のものと相補的な核酸塩基配列を有する。
【０１２２】
ある特定の実施形態では、化合物またはアンチセンス化合物は、一本鎖である。そのような一本鎖化合物またはアンチセンス化合物は、オリゴマー化合物を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、そのようなオリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチド、及び任意に複合群を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾されている。ある特定の実施形態では、一本鎖アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物のオリゴヌクレオチドは、自己相補的核酸塩基配列を含む。
【０１２３】
ある特定の実施形態では、化合物またはアンチセンス化合物は、二本鎖である。そのような二本鎖化合物は、標的核酸と相補的な領域を有する第１の修飾されたオリゴヌクレオチドを含むかまたはそれからなる第１のオリゴマー化合物、及び第１の修飾されたオリゴヌクレオチドと相補的な領域を有する第２のオリゴヌクレオチドを含むかまたはそれからなる第２のオリゴマー化合物を含む。ある特定の実施形態では、第１のオリゴヌクレオチドは、第２のオリゴヌクレオチドと１００％相補的である。ある特定の実施形態では、第１及び第２のオリゴヌクレオチドは、非相補的なオーバーハング型ヌクレオシドを含む。
【０１２４】
ある特定の実施形態では、第１の修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ内に見出されるもののような修飾されていないリボシル糖部分を含む。そのような実施形態では、第１及び／または第２のオリゴヌクレオチド中のチミン核酸塩基は、ウラシル核酸塩基によって置き換えられる。ある特定の実施形態では、第１及び／または第２のオリゴマー化合物は、複合群を含む。ある特定の実施形態では、第１の修飾されたオリゴヌクレオチドは、１２〜３０結合ヌクレオシド長であり、第２のオリゴヌクレオチドは、１２〜３０結合ヌクレオシド長である。ある特定の実施形態では、第２のオリゴヌクレオチドは、修飾されている。ある特定の実施形態では、第１の修飾されたオリゴヌクレオチドは、配列番号６〜１９５４のうちのいずれかの少なくとも８個の隣接する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１２５】
一本鎖及び二本鎖化合物の例には、これらに限定されないが、小さいヘピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、一本鎖ｓｉＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、及びｍｉｃｒｏＲＮＡ模倣物などの、オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ標的オリゴヌクレオチド、及び一本鎖ＲＮＡｉ化合物が挙げられる。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、５’から３’方向に書かれる場合に、それが標的化される標的核酸の標的セグメントの逆相補を含む核酸塩基配列を有する。
【０１２７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１０〜３０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１２〜３０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１２〜２２結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１４〜３０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１４〜２０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１５〜３０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１５〜２０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１６〜３０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１６〜２０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１７〜３０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１７〜２０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１８〜３０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１８〜２１結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１８〜２０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、２０〜３０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。言い換えると、そのようなオリゴヌクレオチドは、それぞれ１２〜３０結合サブユニット、１４〜３０結合サブユニット、１４〜２０サブユニット、１５〜３０サブユニット、１５〜２０サブユニット、１６〜３０サブユニット、１６〜２０サブユニット、１７〜３０サブユニット、１７〜２０サブユニット、１８〜３０サブユニット、１８〜２０サブユニット、１８〜２１サブユニット、２０〜３０サブユニット、または１２〜２２結合サブユニット長である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１４結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１６結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１７結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１８結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、１９結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、２０結合サブユニット長のオリゴヌクレオチドを含む。他の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、８〜８０、１２〜５０、１３〜３０、１３〜５０、１４〜３０、１４〜５０、１５〜３０、１５〜５０、１６〜３０、１６〜５０、１７〜３０、１７〜５０、１８〜２２、１８〜２４、１８〜３０、１８〜５０、１９〜２２、１９〜３０、１９〜５０、または２０〜３０結合サブユニットのオリゴヌクレオチドを含む。ある特定のそのような実施形態では、本明細書に記載される化合物は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、もしくは５０結合サブユニット長、または上記の値のうちのいずれか２つによって定義される範囲のオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、結合されたサブユニットは、ヌクレオチド、ヌクレオシド、または核酸塩基である。
【０１２８】
ある特定の実施形態では、化合物は、複合群などの、オリゴヌクレオチドに結合されている追加の特徴または要素をさらに含み得る。ある特定の実施形態では、そのような化合物は、アンチセンス化合物である。ある特定の実施形態では、そのような化合物は、オリゴマー化合物である。複合群がヌクレオシド（すなわち、複合群をオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオシド）を含む実施形態では、複合群のヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの長さにおいて計数されない。
【０１２９】
ある特定の実施形態では、化合物は、短縮または切断され得る。例えば、単一のサブユニットは、５’末端（５’切断）から、または代替的には３’末端（３’切断）から削除され得る。α−ＥＮａＣ核酸に標的化された短縮または切断された化合物は、化合物の５’末端から削除された２つのサブユニットを有し得、または代替的には３’末端から削除された２つのサブユニットを有し得る。代替的には、削除されたヌクレオシドは、化合物全体に分散され得る。
【０１３０】
単一の追加のサブユニットが延長された化合物に存在する場合、追加のサブユニットは、化合物の５’または３’末端に位置し得る。２つ以上の追加のサブユニットが存在する場合、追加されたサブユニットは、例えば、化合物の５’末端（５’付加）、または代替的には３’末端（３’付加）に付加された２つのサブユニットを有する化合物において、互いに隣接し得る。代替的には、付加されたサブユニットは、化合物全体に分散され得る。
【０１３１】
オリゴヌクレオチドなどの化合物の長さを増加もしくは減少及び／または活性を排除することなく不適合塩基を導入することが可能である（Ｗｏｏｌｆ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９９２，８９：７３０５−７３０９；Ｇａｕｔｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．Ｍａｒｃｈ  ２００１，９３：４６３−４７１；Ｍａｈｅｒ  ａｎｄ  ＤｏｌｎｉｃｋＮｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１９９８，１６：３３４１−３３５８）。しかしながら、表面的にはオリゴヌクレオチド配列、化学、及びモチーフの小さな変化は、臨床開発に必要される多くの特性のうちの１つ以上の大きな違いを作ることができる（Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００９，５２，１０；Ｅｇｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１１，１３３，１６６４２）。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、ＲＮＡ化合物（ＲＮＡｉ）を干渉しており、それは、二本鎖ＲＮＡ化合物（短干渉ＲＮＡまたはｓｉＲＮＡとしても称される）及び一本鎖ＲＮＡｉ化合物（またはｓｓＲＮＡ）を含む。そのような化合物は、少なくとも部分的にＲＩＳＣ経路を通して作用し、標的核酸を分解及び／または隔離する（したがって、ｍｉｃｒｏＲＮＡ／ｍｉｃｒｏＲＮＡ模倣化合物を含む）。本明細書で使用される場合、ｓｉＲＮＡという用語は、配列特異的ＲＮＡｉ、例えば、短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、ｍｉｃｒｏ−ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、短干渉オリゴヌクレオチド、短干渉核酸、短干渉修飾されたオリゴヌクレオチド、化学的に修飾されたｓｉＲＮＡ、転写後遺伝子サイレンシングＲＮＡ（ｐｔｇｓＲＮＡ）、及びその他のものを媒介することができる核酸分子を説明するのに使用される他の用語を同等であることを意味する。加えて、本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉ」という用語は、転写後遺伝子サイレンシング、翻訳阻害、またはエピジェネティクスなどの配列特異的ＲＮＡ干渉を説明するのに使用される他の用語と同等であることを意味する。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、本明細書に記載されるα−ＥＮａＣ核酸転写物に標的化されたオリゴヌクレオチド配列のうちのいずれかを含み得る。ある特定の実施形態では、化合物は、二本鎖であり得る。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の隣接する核酸塩基部分を含む第１の鎖、及び第２の鎖を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む第１の鎖、及び第２の鎖を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、第１の鎖が配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つにおいてチミン（Ｔ）の代わりにウラシル（Ｕ）を有するリボヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、（ｉ）配列番号６〜１９５４のうちのいずれかが相補的であるα−ＥＮａＣ核酸の部位と相補的な核酸塩基配列を含む第１の鎖と、（ｉｉ）第２の鎖とを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、糖における２’位置がハロゲン（フッ素基、２’−Ｆなど）を含むか、またはアルコキシ基（メトキシ基、２’−ＯＭｅなど）を含む１つ以上の修飾されたヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、少なくとも１つの２’−Ｆ糖修飾及び少なくとも１つの２’−ＯＭｅ糖修飾を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの２’−Ｆ糖修飾及び少なくとも１つの２’−ＯＭｅ糖修飾は、ｄｓＲＮＡ化合物の鎖に沿って少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の隣接する核酸塩基の交互パターンで配列される。ある特定の実施形態では、化合物は、天然発生型ホスホジエステル結合以外に隣接するヌクレオチドの間に１つ以上の結合を含む。そのような結合の例には、ホスホルアミド、ホスホロチオエート、及びホスホロジチオエート結合が挙げられる。化合物はまた、米国特許第６，６７３，６６１号に教示されるような化学的に修飾された核酸分子であり得る。他の実施形態では、化合物は、例えば、２０００年４月１９日に出願されたＷＯ００／６３３６４によって開示されるような１つまたは２つのキャッピングされた鎖を含む。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、化合物の第１の鎖は、ｓｉＲＮＡ誘導鎖であり、化合物の第２の鎖は、ｓｉＲＮＡパッセンジャー鎖である。ある特定の実施形態では、化合物の第２の鎖は、第１の鎖と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物の各鎖は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３結合ヌクレオシド長である。ある特定の実施形態では、化合物の第１または第２の鎖は、複合群を含み得る。
【０１３５】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、本明細書に記載されるα−ＥＮａＣ核酸に標的化されたオリゴヌクレオチド配列のうちのいずれかを含み得る。ある特定の実施形態では、化合物は、一本鎖である。ある特定の実施形態では、そのような化合物は、一本鎖ＲＮＡｉ（ｓｓＲＮＡｉ）化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の隣接する核酸塩基部分を含む。ある特定の実施形態は、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、ウラシル（Ｕ）が配列番号６〜１９５４のうちのいずれか１つにおいてチミン（Ｔ）の代わりであるリボヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、配列番号６〜１９５４のうちのいずれかが標的化されるα−ＥＮａＣの部位と相補的な核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、糖における２’位置がハロゲン（フッ素基、２’−Ｆなど）を含むか、またはアルコキシ基（メトキシ基、２’−ＯＭｅなど）を含む１つ以上の修飾されたヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、少なくとも１つの２’−Ｆ糖修飾及び少なくとも１つの２’−ＯＭｅ糖修飾を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの２’−Ｆ糖修飾及び少なくとも１つの２’−ＯＭｅ糖修飾は、化合物の鎖に沿って少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の隣接する核酸塩基の交互パターンで配列される。ある特定の実施形態では、化合物は、天然発生型ホスホジエステル結合以外に隣接するヌクレオチドの間に１つ以上の結合を含む。そのような結合の例には、ホスホルアミド、ホスホロチオエート、及びホスホロジチオエート結合が挙げられる。化合物はまた、米国特許第６，６７３，６６１号に教示されるような化学的に修飾された核酸分子であり得る。他の実施形態では、化合物は、例えば、２０００年４月１９日に出願されたＷＯ００／６３３６４によって開示されるようなキャッピングされた鎖を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３個の結合されたヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態では、化合物は、複合群を含み得る。
【０１３６】
本明細書に記載されるある特定の化合物（例えば、修飾されたオリゴヌクレオチド）は、１つ以上の不斉中心を有し、したがってエナンチオマー、ジアステレオマー、及び（Ｒ）または（Ｓ）として、糖アノマーなどのαもしくはβとして、またはアミノ酸などの（Ｄ）もしくは（Ｌ）として、絶対立体化学に関して定義され得る他の立体異性体配置を生じさせる。ある特定の立体異性体配置を有するとして注目されるかまたは記載される本明細書に記載される化合物は、示される化合物のみを含む。定義されていない立体化学と共に注目されるかまたは記載される本明細書に記載される化合物は、それらのステレオランダム及び任意に純粋な形態を含む、全てのそのような可能な異性体を含む。本明細書に記載される化合物の全ての互変異性型は、特に指示がない限り含まれる。
【０１３７】
本明細書に記載される化合物は、１つ以上の原子が、示される要素の非放射性アイソトープまたは放射性アイソトープで置き換えられる変形を含む。例えば、水素原子を含む本明細書の化合物は、１Ｈ水素原子の各々に対して全ての可能な重水素置換を包含する。本明細書の化合物によって包含される同位体置換は、これらに限定されないが、１Ｈの代わりに２Ｈまたは３Ｈ、１２Ｃの代わりに１３Ｃまたは１４Ｃ、１４Ｎの代わりに１５Ｎ、１６Ｏの代わりに１７Ｏまたは１８Ｏ、及び３２Ｓの代わりに３３Ｓ、３４Ｓ、３５Ｓ、または３６Ｓを含む。ある特定の実施形態では、非放射性同位体置換は、治療または研究ツールとして使用するために有益であるオリゴマー化合物に新しい特性を与え得る。ある特定の実施形態では、放射性同位体置換は、化合物を、画像化などの研究または診断目的に好適にし得る。
【０１３８】
ある特定のメカニズム
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、アンチセンス化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、オリゴマー化合物を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、α−ＥＮａＣ標的核酸にハイブリダイズすることができ、少なくとも１つのアンチセンス活性をもたらす。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、選択的に１つ以上の標的核酸に影響を与える。そのような化合物は、１つ以上の標的核酸にハイブリダイズする核酸塩基配列を含み、１つ以上の所望のアンチセンス活性をもたらし、重要な所望でないアンチセンス活性をもたらすような方法で１つ以上の非標的核酸にハイブリダイズしないか、または１つ以上の非標的核酸にハイブリダイズしない。
【０１３９】
ある特定のアンチセンス活性では、標的核酸への本明細書に記載される化合物のハイブリダイゼーションは、標的核酸を切断するタンパク質の動員をもたらす。例えば、本明細書に記載されるある特定の化合物は、標的核酸のＲＮａｓｅ  Ｈ媒介切断をもたらす。ＲＮａｓｅ  Ｈは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼである。そのようなＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＤＮＡは、修飾されていないＤＮＡである必要はない。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、ＲＮａｓｅ  Ｈ活性を誘発するのに十分に「ＤＮＡ様」である。さらに、ある特定の実施形態では、ギャップマーのギャップにおける１つ以上の非ＤＮＡ様ヌクレオシドは、耐容される。
【０１４０】
ある特定のアンチセンス活性では、本明細書に記載される化合物または化合物の部分は、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に取り込まれ、最終的に標的核酸の切断をもたらす。例えば、本明細書に記載されるある特定の化合物は、アルゴノートによる標的核酸の切断をもたらす。ＲＩＳＣに取り込まれた化合物は、ＲＮＡｉ化合物である。ＲＮＡｉ化合物は、二本鎖（ｓｉＲＮＡ）または一本鎖（ｓｓＲＮＡ）であり得る。
【０１４１】
アンチセンス活性は、直接または間接的に観察され得る。ある特定の実施形態では、アンチセンス活性の観察または検出は、標的核酸またはそのような標的核酸によってコードされるタンパク質の量の変化、核酸もしくはタンパク質のスプライスバリアントの比の変化、及び／または細胞もしくは動物の表現型変化の観察または検出を含む。
【０１４２】
標的核酸、標的領域、及びヌクレオチド配列
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、標的核酸と相補的な領域を含むオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、標的核酸は、内因性ＲＮＡ分子である。ある特定の実施形態では、標的核酸は、タンパク質をコードする。ある特定のそのような実施形態では、標的核酸は、イントロン、エキソン、及び非翻訳領域を含むｍＲＮＡ及びプレｍＲＮＡから選択される。ある特定の実施形態では、標的ＲＮＡは、ｍＲＮＡである。ある特定の実施形態では、標的核酸は、プレｍＲＮＡである。ある特定の実施形態では、プレｍＲＮＡ及び対応するｍＲＮＡは、両方単一の化合物の標的核酸である。ある特定のそのような実施形態では、標的領域は、全体的に標的プレｍＲＮＡのイントロン内にある。ある特定の実施形態では、標的領域は、イントロン／エキソンジャンクションにわたる。ある特定の実施形態では、標的領域は、イントロン内で少なくとも５０％である。α−ＥＮａＣをコードする標的核酸配列は、限定することなく、参照配列番号ＮＭ＿００１０３８．５、ヌクレオシド６３４３００１〜６３８００００から切断されたＮＣ＿００００１２．１２の補体、及びＮＧ＿０１１９４５．１（それぞれ配列番号１、２、及び１９５７）を含む。
【０１４３】
ハイブリダイゼーション
いくつかの実施形態では、ハイブリダイゼーションは、本明細書に開示される化合物とα−ＥＮａＣ核酸との間で生じる。ハイブリダイゼーションの最も一般的なメカニズムは、核酸分子の相補的核酸塩基の間に水素結合（例えば、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ、Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎまたは逆Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ水素結合）を含む。
【０１４４】
ハイブリダイゼーションは、異なる条件下で生じ得る。ハイブリダイゼーション条件は、配列依存性であり、ハイブリダイズされる核酸分子の性質及び組成物によって決定される。
【０１４５】
配列が標的核酸に特異的にハイブリダイズすることができるかどうかを決定する方法は、当該技術分野で周知である。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物は、α−ＥＮａＣ核酸と共に特異的にハイブリダイズすることができる。
【０１４６】
相補性
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、アンチセンス化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、オリゴマー化合物を含む。ある特定の実施形態では、α−ＥＮａＣ核酸と相補的なオリゴヌクレオチドは、α−ＥＮａＣ核酸と非相補的な核酸塩基を含み、さらに、耐容され得るが、化合物が標的核酸に特異的にハイブリダイズすることができることを条件とする。さらに、化合物は、干渉または隣接するセグメントが、ハイブリダイゼーションイベント（例えば、ループ構造またはヘアピン構造）に含まれないように、α−ＥＮａＣ核酸の１つ以上のセグメントにわたってハイブリダイズし得る。
【０１４７】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物、またはその特定の部分は、α−ＥＮａＣ核酸、標的領域、標的セグメント、またはその特定の部分と少なくともまたは最大７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％相補的である。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物、またはその特定の部分は、α−ＥＮａＣ核酸、標的領域、標的セグメント、またはその特定の部分と７０％〜７５％、７５％〜８０％、８０％〜８５％、８５％〜９０％、９０％〜９５％、９５％〜１００％、またはこれらの範囲の間の任意の数相補的である。化合物の標的核酸との相補性パーセントは、日常的な方法を使用して決定され得る。
【０１４８】
例えば、化合物の２０個中１８個の核酸塩基が標的領域と相補的であり、したがって特異的にハイブリダイズする化合物は、９０パーセントの相補性を表す。この例では、残りの非相補的核酸塩基は、相補的核酸塩基と共にクラスター化または散在され得、互いにまたは相補的核酸塩基に隣接する必要はない。そのようにして、標的核酸と完全な相補性の２つの領域に隣接する４個の非相補的核酸塩基を有する１８核酸塩基長の化合物は、標的核酸と７７．８％の全体相補性を有する。標的核酸の領域との化合物の相補性パーセントは、当該技術分野で既知のＢＬＡＳＴプログラム（基本的な局所的アラインメント検索ツール（ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌｓ））及びＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラムを日常的に使用して決定され得る（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５，４０３  ４１０、Ｚｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｍａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．，１９９７，７，６４９  ６５６）。相同性、配列同一性、または相補性パーセントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，１９８１，２，４８２  ４８９）のアルゴリズムを使用するデフォルト設定を使用して、Ｇａｐプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，Ｍａｄｉｓｏｎ  Ｗｉｓ．）によって決定され得る。
【０１４９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物、またはその特定の部分は、標的核酸、またはその特定の部分と完全に相補的（すなわち、１００％相補的）である。例えば、化合物は、α−ＥＮａＣ核酸、または標的領域、または標的セグメントもしくはその標的配列と１００％相補的であり得る。本明細書で使用される場合、「完全に相補的」とは、化合物の各核酸塩基が、標的核酸の対応する核酸塩基と相補的であることを意味する。例えば、２０個の核酸塩基化合物は、化合物と完全に相補的な標的核酸の対応する２０個の核酸塩基部分が存在する限り、４００核酸塩基長である標的配列と完全に相補的である。完全に相補的はまた、第１及び／または第２の核酸の特定の部分に関して使用され得る。例えば、３０個の核酸塩基化合物の２０個の核酸塩基部分は、４００核酸塩基長の標的配列と「完全に相補的」であり得る。３０個の核酸塩基化合物の２０個の核酸塩基部分は、標的配列が、対応する２０個の核酸塩基部分を有する場合、標的配列と完全に相補的であり、各核酸塩基は、化合物の２０個の核酸塩基部分と相補的である。同時に、３０個全体の核酸塩基化合物は、化合物の残りの１０個の核酸塩基がまた標的配列と相補的であるかどうかに応じて、標的配列と完全に相補的であってもそうでなくてもよい。
【０１５０】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、標的核酸に対して１つ以上の不適合核酸塩基を含む。ある特定のそのような実施形態では、標的に対するアンチセンス活性は、そのような不適合によって低減されるが、非標的に対する活性は、より大きな量によって低減される。したがって、ある特定のそのような実施形態では、化合物の選択性が改善される。ある特定の実施形態では、不適合は、ギャップマーモチーフを有するオリゴヌクレオチド内に特異的に配置される。ある特定のそのような実施形態では、不適合は、ギャップセグメントの５’−末端からの位置１、２、３、４、５、６、７、または８にある。ある特定のそのような実施形態では、不適合は、ギャップセグメントの３’−末端からの位置９、８、７、６、５、４、３、２、１にある。ある特定のそのような実施形態では、不適合は、ウイングセグメントの５’−末端からの位置１、２、３、または４にある。ある特定のそのような実施形態では、不適合は、ウイングセグメントの３’−末端からの位置４、３、２、または１にある。ある特定の実施形態では、不適合は、ギャップマーモチーフを有さないオリゴヌクレオチド内に特異的に配置される。ある特定のそのような実施形態では、不適合は、オリゴヌクレオチドの５’−末端からの位置１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２にある。ある特定のそのような実施形態では、不適合は、オリゴヌクレオチドの３’−末端からの位置２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２にある。
【０１５１】
非相補的核酸塩基の位置は、化合物の５’末端または３’末端にあり得る。代替的には、非相補的核酸塩基または核酸塩基は、化合物の内部部分にあり得る。２個以上の非相補的核酸塩基が存在する場合、それらは隣接しているか（すなわち、結合されている）、または隣接していない。一実施形態では、非相補的核酸塩基は、ギャップマーオリゴヌクレオチドのウイングセグメントに配置される。
【０１５２】
ある特定の実施形態では、最大１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基長である本明細書に記載される化合物は、α−ＥＮａＣ核酸などの標的核酸、またはその特定の部分に対して、４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の非相補的な核酸塩基（複数可）を含む。
【０１５３】
ある特定の実施形態では、最大１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０核酸塩基長である本明細書に記載される化合物は、α−ＥＮａＣ核酸などの標的核酸、またはその特定の部分に対して、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の非相補的な核酸塩基（複数可）を含む。
【０１５４】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物はまた、標的核酸の部分（領域またはセグメント内で隣接する核酸塩基の定義された数）と相補的なものを含む。ある特定の実施形態では、化合物は、標的セグメントの少なくとも８個の核酸塩基部分と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物は、標的セグメントの少なくとも９個の核酸塩基部分と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物は、標的セグメントの少なくとも１０個の核酸塩基部分と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物は、標的セグメントの少なくとも１１個の核酸塩基部分と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物は、標的セグメントの少なくとも１２個の核酸塩基部分と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物は、標的セグメントの少なくとも１３個の核酸塩基部分と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物は、標的セグメントの少なくとも１４個の核酸塩基部分と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物は、標的セグメントの少なくとも１５個の核酸塩基部分と相補的である。ある特定の実施形態では、化合物は、標的セグメントの少なくとも１６個の核酸塩基部分と相補的である。標的セグメントの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個、またはそれ以上の核酸塩基部分と、またはこれらの値うちのいずれか２つによって定義される範囲で相補的である化合物もまた企図される。
【０１５５】
ある特定の化合物
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、結合されたヌクレオシドからなるオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。オリゴヌクレオチドは、修飾されていないオリゴヌクレオチド（ＲＮＡまたはＤＮＡ）であり得るか、または修飾されたオリゴヌクレオチドであり得る。修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾されていないＲＮＡまたはＤＮＡに対して少なくとも１つの修飾を含む（すなわち、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド（修飾された糖部分及び／または修飾された核酸塩基を含む）及び／または少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合を含む）。
【０１５６】
Ｉ．修飾
Ａ．修飾されたヌクレオシド
修飾されたヌクレオシドは、修飾された糖部分または修飾された核酸塩基または修飾された糖部分及び修飾された核酸塩基の両方を含む。
【０１５７】
１．修飾された糖部分
ある特定の実施形態では、糖部分は、非二環式修飾糖部分である。ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、二環式または三環式糖部分である。ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、糖サロゲートである。そのような糖サロゲートは、修飾された糖部分の他の種類のものに対応する１つ以上の置換を含み得る。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、これらに限定されないが、２’、４’、及び／または５’位置における置換基を含む、１つ以上の非環式置換基を含む非二環式修飾フラノシル糖部分である。ある特定の実施形態では、フラノシル糖部分は、リボシル糖部分である。ある特定の実施形態では、非二環式修飾糖部分の１つ以上の非環式置換基は、分岐である。非二環式修飾糖部分に好適な２’−置換基群の例には、これらに限定されないが、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３（「ＯＭｅ」または「Ｏ−メチル」）、及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３（「ＭＯＥ」）を含む。ある特定の実施形態では、２’−置換基は、ハロ、アリル、アミノ、アジド、ＳＨ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０置換アルコキシ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０置換アルキル、Ｓ−アルキル、Ｎ（Ｒｍ）−アルキル、Ｏ−アルケニル、Ｓ−アルケニル、Ｎ（Ｒｍ）−アルケニル、Ｏ−アルキニル、Ｓ−アルキニル、Ｎ（Ｒｍ）−アルキニル、Ｏ−アルキレニル−Ｏ−アルキル、アルキニル、アルカリール、アラルキル、Ｏ−アルカリール、Ｏ−アラルキル、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、またはＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）の中から選択され、各Ｒｍ及びＲｎは独立して、Ｈ、アミノ保護基、または置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルであり、２’−置換基は、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，５３１，５８４、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，８５９，２２１、及びＣｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，００５，０８７に記載されている。これらの２’−置換基のある特定の実施形態は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ（ＮＯ２）、チオール、チオアルコキシ、チオアルキル、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル、及びアルキニルの中から独立して選択される１つ以上の置換基でさらに置換され得る。非二環式修飾糖部分に好適な４’−置換基の例には、これらに限定されないが、アルコキシ（例えば、メトキシ）、アルキル、及びＭａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ２０１５／１０６１２８に記載されるものが挙げられる。非二環式修飾糖部分に好適な５’−置換基群の例には、これらに限定されないが、５’−メチル（ＲまたはＳ）、５’−ビニル、及び５’−メトキシが挙げられる。ある特定の実施形態では、非二環式修飾糖は、２つ以上の非架橋糖置換基、例えば、２’−Ｆ−５’−メチル糖部分、ならびにＭｉｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ２００８／１０１１５７及びＲａｊｅｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ２０１３／０２０３８３６．）に記載される修飾された糖部分及び修飾されたヌクレオシドを含む。
【０１５９】
ある特定の実施形態では、２’−置換ヌクレオシドまたは２’−非二環式修飾ヌクレオシドは、Ｆ、ＮＨ２、Ｎ３、ＯＣＦ３、ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）３ＮＨ２、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、ＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、及びＮ−置換アセトアミド（ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ））から選択される非架橋２’−置換基を含む糖部分を含み、各Ｒｍ及びＲｎは独立して、Ｈ、アミノ保護基、または置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、２’−置換ヌクレオシドまたは２’−非二環式修飾されたヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＦ３、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２、Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、及びＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３（「ＮＭＡ」）から選択される非架橋２’−置換基を含む糖部分を含む。
【０１６１】
ある特定の実施形態では、２’−置換ヌクレオシドまたは２’−非二環式修飾されたヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＨ３、及びＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される非架橋２’−置換基を含む糖部分を含む。
【０１６２】
非二環式修飾糖部分などの修飾された糖部分を含むヌクレオシドは、ヌクレオシドの糖部分の置換（複数可）の位置（複数可）と称され得る。例えば、２’−置換または２−修飾糖部分を含むヌクレオシドは、２’−置換ヌクレオシドまたは２−修飾ヌクレオシドと称される。
【０１６３】
ある特定の修飾された糖部分は、二環式糖部分をもたらす第２の環を形成する架橋糖置換基を含む。ある特定のそのような実施形態では、二環式糖部分は、４’及び２’フラノース環原子の間に架橋を含む。ある特定のそのような実施形態では、フラノース環は、リボース環である。そのような４’〜２’架橋糖置換基の例には、これらに限定されないが、４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’（「ＬＮＡ」）、４’−ＣＨ２−Ｓ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（「ＥＮＡ」）、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（Ｓ配置にある場合に、「拘束エチル」または「ｃＥｔ」と称される）、４’−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−２’、４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’、４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’（「拘束ＭＯＥ」または「ｃＭＯＥ」）及びその類似体（例えば、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，３９９，８４５、Ｂｈａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，５６９，６８６、Ｓｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，７４１，４５７、及びＳｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，０２２，１９３を参照のこと）、４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’及びその類似体（例えば、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，２７８，２８３を参照のこと）、４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’及びその類似体（例えば、Ｐｒａｋａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，２７８，４２５）、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（例えば、Ａｌｌｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，６９６，３４５及びＡｌｌｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，１２４，７４５を参照のこと）、４’−ＣＨ２−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（例えば、Ｚｈｏｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８−１３４を参照のこと）、４’−ＣＨ２−Ｃ（＝ＣＨ２）−２’及びその類似体（例えば、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，２７８，４２６を参照のこと）、４’−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’、４’−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’、ならびに４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（各Ｒ、Ｒａ、及びＲｂが独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである）（例えば、Ｉｍａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，４２７，６７２）が挙げられる。
【０１６４】
ある特定の実施形態では、そのような４’〜２’架橋は独立して、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−、及び−Ｎ（Ｒａ）−から独立して選択される１〜４個の結合された基を含み、
式中、
ｘは、０、１、または２であり、
ｎは、１、２、３、または４であり、
各Ｒａ及びＲｂは独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり、
各Ｊ１及びＪ２は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、または保護基である。
【０１６５】
追加の二環式糖部分は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｆｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９−４４４３、Ａｌｂａｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１−７７４０、Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５−４５６、Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０、Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２、Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００１７，１２９，８３６２−８３７９、Ｅｌａｙａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，；Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａ．，Ｕ．Ｓ．７，０５３，２０７、Ｉｍａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，２６８，４９０、Ｉｍａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｕ．Ｓ．６，７７０，７４８、Ｉｍａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．ＲＥ４４，７７９、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，７９４，４９９、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，６７０，４６１、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，０３４，１３３、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，０８０，６４４、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，０３４，９０９、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，１５３，３６５、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，５７２，５８２、及びＲａｍａｓａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，５２５，１９１、Ｔｏｒｓｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ２００４／１０６３５６、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ１９９９／０１４２２６、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ２００７／１３４１８１、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，５４７，６８４、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，６６６，８５４、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，０８８，７４６、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，７５０，１３１、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，０３０，４６７、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，２６８，９８０、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，５４６，５５６、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，５３０，６４０、Ｍｉｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．９，０１２，４２１、Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，５０１，８０５、ならびに米国特許公開Ａｌｌｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，第ＵＳ２００８／００３９６１８号及びＭｉｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，同第ＵＳ２０１５／０１９１７２７号を参照のこと。
【０１６６】
ある特定の実施形態では、二環式糖部分及びそのような二環式糖部分を抱合するヌクレオシドは、異性体配置によってさらに定義される。例えば、ＬＮＡ  ヌクレオシド（本明細書に記載される）は、α−Ｌ配置またはβ−Ｄ配置にあり得る。
【０１６７】
【化４】
2021500903.tif 000005
【０１６８】
α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）またはα−Ｌ−ＬＮＡ二環式ヌクレオシドは、アンチセンス活性を示したアンチセンスオリゴヌクレオチドに抱合されている（Ｆｒｉｅｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５−６３７２）。本明細書において、二環式ヌクレオシドの一般的な説明は、両方の異性体配置を含む。特定の二環式ヌクレオシド（例えば、ＬＮＡ）の位置が本明細書に例示される実施形態で特定される場合、別段の定めがない限り、それらはβ−Ｄ配置にある。
【０１６９】
ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、１つ以上の非架橋糖置換基及び１つ以上の架橋糖置換基（例えば、５’−置換及び４’−２架橋糖）を含む。
ある特定の実施形態では、修飾された糖部分は、糖サロゲートである。ある特定のそのような実施形態では、糖部分の酸素原子は、例えば、硫黄、炭素、または窒素原子で置き換えられる。ある特定のそのような実施形態では、そのような修飾された糖部分はまた、本明細書に記載されるように、架橋及び／または非架橋置換基を含む。例えば、ある特定の糖サロゲートは、４’−硫黄原子ならびに２’−位置（例えば、Ｂｈａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，８７５，７３３及びＢｈａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．７，９３９，６７７を参照のこと）及び／または５’位置での置換を含む。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、糖サロゲートは、５個の原子以外を有する環を含む。例えば、ある特定の実施形態では、糖サロゲートは、６員テトラヒドロピラン（「ＴＨＰ」）を含む。そのようなテトラヒドロピランは、さらに修飾されているか、または置換されていてもよい。そのような修飾されたテトラヒドロピランを含むヌクレオシドは、これらに限定されないが、ヘキシトール核酸（「ＨＮＡ」）、アニトール核酸（「ＡＮＡ」）、マンニトール核酸（「ＭＮＡ」）（例えば、Ｌｅｕｍａｎｎ，ＣＪ．Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００２，１０，８４１−８５４を参照のこと）、フルオロＨＮＡ：
【０１７１】
【化５】
2021500903.tif 000006
【０１７２】
（「Ｆ−ＨＮＡ」、例えば、Ｓｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，０８８，９０４、Ｓｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，４４０，８０３、Ｓｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．８，７９６，４３７、及びＳｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．９，００５，９０６を参照のこと；Ｆ−ＨＮＡはまた、Ｆ−ＴＨＰまたは３’−フルオロテトラヒドロピランとも称され得る）、及び以下の式を有する追加の修飾されたＴＨＰ化合物を含むヌクレオシドを含み、
【０１７３】
【化６】
2021500903.tif 000007
【０１７４】
式中、独立して、当該修飾されたＴＨＰヌクレオシドの各々について、
Ｂｘは、核酸塩基部分であり、
Ｔ３及びａＴ４は各々独立して、修飾されたＴＨＰヌクレオシドをオリゴヌクレオチドの残りに結合するヌクレオシド間結合基であるか、またはＴ３及びＴ４の一方は、修飾されたＴＨＰヌクレオシドをオリゴヌクレオチドの残りに結合するヌクレオシド間結合基であり、Ｔ３及びＴ４の他方は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、結合された複合群、または５’もしくは３’−末端基であり、
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、及びｑ７は各々独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニルであり、
Ｒ１及びＲ２の各々は独立して、水素、ハロゲン、置換または非置換アルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、及びＣＮの中から選択され、Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＪ１であり、各Ｊ１、Ｊ２、及びＪ３は独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、修飾されたＴＨＰヌクレオシドが提供され、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、及びｑ７はそれぞれ、Ｈである。ある特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、及びｑ７の少なくとも１つは、Ｈ以外である。ある特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、及びｑ７の少なくとも１つは、メチルである。ある特定の実施形態では、修飾されたＴＨＰヌクレオシドが提供され、Ｒ１及びＲ２のうちの１つは、Ｆである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、Ｆであり、Ｒ２は、Ｈであり、ある特定の実施形態では、Ｒ１は、メトキシであり、Ｒ２は、Ｈであり、ある特定の実施形態では、Ｒ１は、メトキシエトキシであり、Ｒ２は、Ｈである。
【０１７６】
ある特定の実施形態では、糖サロゲートは、５個を超える原子及び２個以上のヘテロ原子を有する環を含む。例えば、モルホリノ糖部分を含むヌクレオシド及びオリゴヌクレオチドにおけるそれらの使用が報告されている（例えば、Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，４１，４５０３−４５１０及びＳｕｍｍｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，６９８，６８５、Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，１６６，３１５、Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，１８５，４４４、ならびにＳｕｍｍｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，０３４，５０６を参照のこと）。本明細書で使用される場合、「モルホリノ」とは、以下の構造を有する糖サロゲートを意味する。
【０１７７】
【化７】
2021500903.tif 000008
【０１７８】
ある特定の実施形態では、モルホリノは、例えば、上記のモルホリノ構造から様々な置換基を付加または改変することによって修飾され得る。そのような糖サロゲートは、本明細書で「修飾されたモルホリノ」と称される。
【０１７９】
ある特定の実施形態では、糖サロゲートは、非環式部分を含む。そのような非環式糖サロゲートを含むヌクレオシド及びオリゴヌクレオチドの例には、これらに限定されないが、ペプチド核酸（「ＰＮＡ」）、非環式ブチル核酸（例えば、Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１３，１１，５８５３−５８６５を参照のこと）、ならびにＭａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ２０１１／１３３８７６に記載されるヌクレオシド及びオリゴヌクレオチドが挙げられる。
【０１８０】
多くの他の二環式及び三環式糖ならびに糖サロゲート環系は、修飾されたヌクレオシドで使用され得る当該技術分野で既知である。
２．修飾された核酸塩基
ある特定の実施形態では、修飾された核酸塩基は、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、アルキルまたはアルキニル置換ピリミジン、アルキル置換プリン、ならびにＮ−２、Ｎ−６、及びＯ−６置換プリンから選択される。ある特定の実施形態では、修飾された核酸塩基は、２−アミノプロピルアデニン、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−Ｎ−メチルグアニン、６−Ｎ−メチルアデニン、２−プロピルアデニン、２−チオウラシル、２−チオチミン及び２−チオシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−リボシルウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル、８−アザ及び他の８−置換プリン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチル、５−ハロウラシル、及び５−ハロシトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、６−Ｎ−ベンゾイルアデニン、２−Ｎ−イソブチリルグアニン、４−Ｎ−ベンゾイルシトシン、４−Ｎ−ベンゾイルウラシル、５−メチル４−Ｎ−ベンゾイルシトシン、５−メチル４−Ｎ−ベンゾイルウラシル、一般的な塩基、疎水性塩基、無差別塩基、サイズ拡張された塩基、ならびにフッ素化塩基から選択される。さらなる修飾された核酸塩基は、１，３−ジアザフェノキサジン−２−オン、１，３−ジアザフェノチアジン−２−オン、及び９−（２−アミノエトキシ）−１，３−ジアザフェノキサジン−２−オン（Ｇクランプ）などの三環式ピリミジンを含む。修飾された核酸塩基はまた、プリンまたはピリミジン塩基が他の複素環、例えば、７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、及び２−ピリドンで置き換えられるものを含み得る。さらなる核酸塩基は、Ｍｅｒｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．３，６８７，８０８に開示されるもの、Ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  Ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．，Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９０，８５８−８５９、Ｅｎｇｌｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，３０，６１３、Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １５，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，Ｅｄｓ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３，２７３−２８８に開示されるもの、及びＣｈａｐｔｅｒｓ  ６  ａｎｄ  １５，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｒｏｏｋｅ  Ｓ．Ｔ．，Ｅｄ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，２００８，１６３−１６６  ａｎｄ  ４４２−４４３に開示されるものを含む。
【０１８１】
確実な上記の修飾された核酸塩基、ならびに他の修飾された核酸塩基の調製を教示する出版物は、限定することなく、Ｍａｎｏｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ２００３／０１５８４０３、Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ２００３／０１７５９０６、Ｄｉｎｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．４，８４５，２０５、Ｓｐｉｅｌｖｏｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，１３０，３０２、Ｒｏｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，１３４，０６６、Ｂｉｓｃｈｏｆｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，１７５，２７３、Ｕｒｄｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，３６７，０６６、Ｂｅｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，４３２，２７２、Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，４３４，２５７、Ｇｍｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，４５７，１８７、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，４５９，２５５、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，４８４，９０８、Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５０２，１７７、Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５２５，７１１、Ｈａｒａｌａｍｂｉｄｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５５２，５４０、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５８７，４６９、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５９４，１２１、Ｓｗｉｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５９６，０９１、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，６１４，６１７、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，６４５，９８５、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，６８１，９４１、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，８１１，５３４、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，７５０，６９２、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，９４８，９０３、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，５８７，４７０、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，４５７，１９１、Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，７６３，５８８、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，８３０，６５３、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．５，８０８，０２７、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，６，１６６，１９９、及びＭａｔｔｅｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．６，００５，０９６を含む。
【０１８２】
ある特定の実施形態では、化合物は、１つ以上の修飾された核酸塩基を含むα−ＥＮａＣ核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾された核酸塩基は、５−メチルシトシンである。ある特定の実施形態では、各シトシンは、５−メチルシトシンである。
【０１８３】
Ｂ．修飾されたヌクレオシド間結合
ある特定の実施形態では、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合を有する本明細書に記載される化合物は、例えば、高められた細胞取り込み、標的核酸の高められた親和性、及びヌクレアーゼの存在下での増加された安定性などの望ましい特性のために、ホスホジエステルヌクレオシド間結合のみを有する化合物より選択される。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、化合物は、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合を含むα−ＥＮａＣ核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、修飾されたヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物の各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０１８５】
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、任意のヌクレオシド間結合を使用して一緒に結合されてもよい。ヌクレオシド間結合基の２つの主な分類は、リン原子の存在または不在下によって定義される。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合は、これらに限定されないが、ホスホジエステル結合（「Ｐ＝Ｏ」）（修飾されていないまたは天然型結合とも称される）を含むホスフェート、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホルアミデート、及びホスホロチオエート（「Ｐ＝Ｓ」）、及びホスホロジチオエート（「ＨＳ−Ｐ＝Ｓ」）を含む。代表的な非リン含有ヌクレオシド間結合基は、これらに限定されないが、メチレンメチルイミノ（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−）、チオジエステル、チオノカルバメート（−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）（ＮＨ）−Ｓ−）、シロキサン（−Ｏ−ＳｉＨ２−Ｏ−）、及びＮ，Ｎ’−ジメチルヒドラジン（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−）を含む。修飾されたヌクレオシド間結合は、天然型ホスフェート結合と比較して、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性を改変、典型的には増加させるために使用され得る。リン含有及び非リン含有ヌクレオシド間結合の調製方法は、当業者に周知である。
【０１８６】
キラル中心を有する代表的なヌクレオシド間結合は、これらに限定されないが、アルキルホスホネート及びホスホロチオエートを含む。キラル中心を有するヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドは、特定の立体化学的配置において、ステレオランダムヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドとして、またはホスホロチオエート結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドの集団として調製され得る。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含み、全てのホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、ステレオランダムである。そのような修飾されたオリゴヌクレオチドは、各ホスホロチオエート結合の立体化学的配置のランダム選択をもたらす合成方法を使用して生成され得る。それにもかかわらず、当業者によって十分に理解されるように、各個々のオリゴヌクレオチド分子の各個々のホスホロチオエートは、定義される立体配置を有する。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、特定の、独立して選択される立体化学的配置において１つ以上の特定のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む修飾されたオリゴヌクレオチドが濃縮されている。ある特定の実施形態では、特定のホスホロチオエート結合の特定の配置は、集団中の少なくとも６５％の分子に存在する。ある特定の実施形態では、特定のホスホロチオエート結合の特定の配置は、集団中の少なくとも７０％の分子に存在する。ある特定の実施形態では、特定のホスホロチオエート結合の特定の配置は、集団中の少なくとも８０％の分子に存在する。ある特定の実施形態では、特定のホスホロチオエート結合の特定の配置は、集団中の少なくとも９０％の分子に存在する。ある特定の実施形態では、特定のホスホロチオエート結合の特定の配置は、集団中の少なくとも９９％の分子に存在する。修飾されたオリゴヌクレオチドのそのようなキラル的に濃縮された集団は、当該技術分野で既知の合成方法、例えば、Ｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＣＳ  １２５，８３０７（２００３）、Ｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．４２，１３４５６（２０１４）、及びＷＯ２０１７／０１５５５５に記載される方法を使用して生成され得る。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、（Ｓｐ）配置において少なくとも１つの示されるホスホロチオエートを有する修飾されたオリゴヌクレオチドが濃縮されている。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、（Ｒｐ）配置において少なくとも１つのホスホロチオエートを有する修飾されたオリゴヌクレオチドについて濃縮されている。ある特定の実施形態では、（Ｒｐ）及び／または（Ｓｐ）ホスホロチオエートを含む修飾されたオリゴヌクレオチドは、それぞれ以下の式のうちの１つ以上を含み、式中、「Ｂ」は、核酸塩基を示す。
【０１８７】
【化８】
2021500903.tif 000009
【０１８８】
特に指示がない限り、本明細書に記載される修飾されたオリゴヌクレオチドのキラルヌクレオシド間結合は、ステレオランダムであり得るか、または特定の立体化学的配置にあり得る。
【０１８９】
中性ヌクレオシド間結合には、限定することなく、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ＭＭＩ（３’−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−５’）、アミド−３（３’−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−５’）、アミド−４（３’−ＣＨ２−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−５’）、ホルムアセタール（３’−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−５’）、メトキシプロピル、及びチオホルムアセタール（３’−Ｓ−ＣＨ２−Ｏ−５’）が挙げられる。さらなる中性ヌクレオシド間結合は、シロキサン（ジアルキルシロキサン）、カルボキシレートエステル、カルボキサミド、スルフィド、スルホネートエステル、及びアミドを含む非イオン結合を含む（例えば、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｙ．Ｓ．Ｓａｎｇｈｖｉ  ａｎｄ  Ｐ．Ｄ．Ｃｏｏｋ，Ｅｄｓ．，ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５８０；Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ３  ａｎｄ  ４，４０−６５を参照のこと）。さらなる中性ヌクレオシド間結合は、混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＣＨ２構成要素部分を含む非イオン結合を含む。
【０１９０】
ＩＩ．ある特定のモチーフ
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、オリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。オリゴヌクレオチドは、モチーフ、例えば、修飾されていない及び／または修飾された糖部分、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間結合のパターンを有し得る。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾された糖を含む１つ以上の修飾されたヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾された核酸塩基を含む１つ以上の修飾されたヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合を含む。そのような実施形態では、修飾された、修飾されていない、及び異なって修飾された糖部分、核酸塩基、及び／または修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、パターンまたはモチーフを定義する。ある特定の実施形態では、糖部分、核酸塩基、及びヌクレオシド間結合のパターンまたはモチーフはそれぞれ、互いに無関係である。したがって、修飾されたオリゴヌクレオチドは、その糖モチーフ、核酸塩基モチーフ、及び／またはヌクレオシド間結合モチーフによって説明され得る（本明細書で使用される場合、核酸塩基モチーフは、核酸塩基の配列とは無関係である核酸塩基に対する修飾を説明する）。
【０１９１】
Ａ．ある特定の糖モチーフ
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、オリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、定義されるパターンまたは糖モチーフにおいてオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配列される１つ以上の種類の修飾された糖及び／または修飾されていない糖部分を含む。ある特定の例では、そのような糖モチーフは、これらに限定されないが、本明細書に記載される糖修飾うちのいずれかを含む。
【０１９２】
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２つの外部セグメントまたは「ウイング」及び中心もしくは内部セグメントまたは「ギャップ」を含むギャップマーモチーフを有する領域を含むか、またはそれからなる。ギャップマーモチーフの３つのセグメント（５’−ウイング、ギャップ、及び３’−ウイング）は、ヌクレオシドの隣接する配列を形成し、ウイングの各々のヌクレオシドの糖部分の少なくとも一部は、ギャップのヌクレオシドの糖部分の少なくとも一部とは異なる。具体的には、ギャップにすぐ隣接する各ウイングのヌクレオシドの少なくとも糖部分（５’−ウイングの３’末端ウイングヌクレオシド及び３’−ウイングの５’−末端ウイングヌクレオシド）は、隣接するギャップヌクレオシドの糖部分とは異なる。ある特定の実施形態では、ギャップ内の糖部分は、互いに同じである。ある特定の実施形態では、ギャップは、ギャップの１つ以上の他のヌクレオシドの糖部分とは異なる糖部分を有する１つ以上のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、２つのウイングの糖モチーフは、互いに同じである（対称ギャップマー）。ある特定の実施形態では、５’−ウイングの糖モチーフは、３’−ウイングの糖モチーフとは異なる（非対称ギャップマー）。
【０１９３】
ある特定の実施形態では、ギャップマーのウイングはそれぞれ、１〜５個のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、ギャップマーのウイングはそれぞれ、２〜５個のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、ギャップマーのウイングはそれぞれ、３〜５個のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、ギャップマーのウイングのヌクレオシドは全て、修飾されたヌクレオシドである。ある特定のそのような実施形態、ギャップマーのウイングの糖部分は全て、修飾された糖部分である。
【０１９４】
ある特定の実施形態では、ギャップマーのギャップは、７〜１２個のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、ギャップマーのギャップは、７〜１０個のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、ギャップマーのギャップは、８〜１０個のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、ギャップマーのギャップは、１０個のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、ギャップマーのギャップの各ヌクレオシドは、２’−デオキシヌクレオシドである。
【０１９５】
ある特定の実施形態では、ギャップマーは、デオキシギャップマーである。そのような実施形態では、各ウイング／ギャップジャンクションのギャップ側のヌクレオシドは、２’−デオキシヌクレオシドであり、ギャップにすぐ隣接する末端ウイングヌクレオシドは、修飾された糖部分を含む。ある特定のそのような実施形態では、ギャップの各ヌクレオシドは、２’−デオキシヌクレオシドである。ある特定のそのような実施形態では、各ウイングの各ヌクレオシドは、修飾された糖部分を含む
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、完全に修飾された糖モチーフを有し、修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドは、修飾された糖部分を含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、完全に修飾された糖モチーフを有する領域を含むか、またはそれからなり、領域の各ヌクレオシドは、修飾された糖部分を含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、完全に修飾された糖モチーフを有する領域を含むか、またはそれからなり、完全に修飾された領域内の各ヌクレオシドは、本明細書で均一に修飾された糖モチーフと称される同じ修飾された糖部分を含む。ある特定の実施形態では、完全に修飾されたオリゴヌクレオチドは、均一に修飾されたオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、均一に修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドは、同じ２’−修飾を含む。
【０１９６】
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、Ｓｗａｙｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ２０１０／０１９７７６２、Ｆｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ２０１４／０１０７３３０、Ｆｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ２０１５／０１８４１５３、及びＳｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ２０１５／０２６７１９５に記載される糖モチーフを含み得る。
【０１９７】
Ｂ．ある特定の核酸モチーフ
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、オリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、定義されるパターンまたはモチーフにおいてオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配列される修飾された及び／または修飾されていない核酸塩基を含む。ある特定の実施形態では、各核酸塩基は、修飾されている。ある特定の実施形態では、核酸塩基のうちのいずれも修飾されていない。ある特定の実施形態では、各プリンまたは各ピリミジンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各アデニンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各グアニンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各チミンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各ウラシルは、修飾されている。ある特定の実施形態では、各シトシンは、修飾されている。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドにおけるシトシン核酸塩基のいくつかまたは全ては、５−メチルシトシンである。
【０１９８】
ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、修飾された核酸塩基のブロックを含む。ある特定のそのような実施形態では、ブロックは、オリゴヌクレオチドの３’−末端にある。ある特定の実施形態では、ブロックは、オリゴヌクレオチドの３’−末端の３ヌクレオシド以内にある。ある特定の実施形態では、ブロックは、オリゴヌクレオチドの５’−末端にある。ある特定の実施形態では、ブロックは、オリゴヌクレオチドの５’−末端の３ヌクレオシド以内にある。
【０１９９】
ある特定の実施形態では、ギャップマーモチーフを有するオリゴヌクレオチドは、修飾された核酸塩基を含むヌクレオシドを含む。ある特定のそのような実施形態では、修飾された核酸塩基を含む１つのヌクレオシドは、ギャップマーモチーフを有するオリゴヌクレオチドのギャップにある。ある特定のそのような実施形態では、当該ヌクレオシドの糖部分は、２’−デオキシリボシル部分である。ある特定の実施形態では、修飾された核酸塩基は、２−チオピリミジン及び５−プロピンピリミジンから選択される。
【０２００】
Ｃ．ある特定のヌクレオシドモチーフ
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、オリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、定義されるパターンまたはモチーフにおいてオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配列される修飾された及び／または修飾されていないヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態では、各ヌクレオシド間結合基は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（Ｐ＝Ｏ）である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合基は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（Ｐ＝Ｓ）である。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は独立して、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合及びホスホジエステルヌクレオシド間結合から選択される。ある特定の実施形態では、各ホスホロチオエートヌクレオシド間結合は独立して、ステレオランダムホスホロチオエート、（Ｓｐ）ホスホロチオエート、及び（Ｒｐ）ホスホロチオエートから選択される。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの糖モチーフは、ギャップマーであり、ギャップ内のヌクレオシド間結合は全て、修飾されている。ある特定のそのような実施形態では、ウイングにおけるヌクレオシド間結合のうちのいくつかまたは全ては、修飾されていないホスフェート結合である。ある特定の実施形態では、末端ヌクレオシド間結合は、修飾されている。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの糖モチーフは、ギャップマーであり、ヌクレオシド間結合モチーフは、少なくとも１つのウイングにおいて少なくとも１つのホスホジエステルヌクレオシド間結合を含み、少なくとも１つのホスホジエステル結合は、末端ヌクレオシド間結合ではなく、残りのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。ある特定のそのような実施形態では、全てのホスホロチオエート結合は、ステレオランダムである。ある特定の実施形態では、ウイングにおける全てのホスホロチオエート結合は、（Ｓｐ）ホスホロチオエートであり、ギャップは、少なくとも１つのＳｐ、Ｓｐ、Ｒｐモチーフを含む。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドの集団は、そのようなヌクレオシド間結合モチーフを含む修飾されたオリゴヌクレオチドが濃縮されている。
【０２０１】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、交互ヌクレオシド間結合モチーフを有する領域を含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、均一に修飾されたヌクレオシド間結合の領域を含む。ある特定のそのような実施形態では、ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルまたはホスフェート及びホスホロチオエートから選択される。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルまたはホスフェート及びホスホロチオエートから選択され、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートである。
【０２０２】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも６個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも８個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも６個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも１つのブロックを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも８個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも１つのブロックを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも１つのブロックを含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの１２個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくともブロックを含む。ある特定のそのような実施形態では、少なくとも１つのそのようなブロックは、オリゴヌクレオチドの３’末端に配置される。ある特定のそのような実施形態では、少なくとも１つのそのようなブロックは、オリゴヌクレオチドの３’末端の３ヌクレオシド以内に配置される。
【０２０３】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上のメチルホスホネート結合を含む。ある特定の実施形態では、ギャップマーヌクレオシドモチーフを有するオリゴヌクレオチドは、１つまたは２つのメチルホスホネート結合を除く全てのホスホロチオエート結合を含む結合モチーフを含む。ある特定の実施形態では、１つのメチルホスホネート結合は、ギャップマー糖モチーフを有するオリゴヌクレオチドのギャップにある。
【０２０４】
ある特定の実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合及びホスホジエステルヌクレオシド間結合の数を配列し、ヌクレアーゼ耐性を維持することが望ましい。ある特定の実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合の数及び位置ならびにホスホジエステルヌクレオシド間結合の数及び位置を配列し、ヌクレアーゼ耐性を維持することが望ましい。ある特定の実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合の数は、減少され得、ホスホジエステルヌクレオシド間結合の数は、増加され得る。ある特定の実施形態では、ヌクレアーゼ耐性を依然として維持しながら、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合の数は、減少され得、ホスホジエステルヌクレオシド間結合の数は、増加され得る。ある特定の実施形態では、ヌクレアーゼ耐性を保持しながら、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合の数を減少させることが望ましい。ある特定の実施形態では、ヌクレアーゼ耐性を保持しながら、ホスホジエステルヌクレオシド間結合の数を増加させることが望ましい。
【０２０５】
ｉｉｉ．ある特定の修飾されたオリゴヌクレオチド
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、上記の修飾（糖、核酸塩基、ヌクレオシド間結合）は、修飾されたオリゴヌクレオチドに抱合される。ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、それらの修飾、モチーフ、及び全体の長さによって特徴付けられる。ある特定の実施形態では、そのようなパラメータはそれぞれ、互いに無関係である。したがって、特に指示がない限り、ギャップマー糖モチーフを有するオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、修飾されていても修飾されていなくてもよく、糖修飾のギャップマー修飾パターンに従っていても従っていなくてもよい。同様に、そのようなギャップマーオリゴヌクレオチドは、糖修飾のギャップマーパターンとは無関係の１つ以上の修飾された核酸塩基を含み得る。さらに、ある特定の例では、オリゴヌクレオチドは、全体長さまたは範囲によって、及び２つ以上の領域（例えば、特定の糖修飾を有するヌクレオシドの領域）の長さまたは長さ範囲によって説明され、そのような状況では、特定の範囲外に逸脱する全体長さを有するオリゴヌクレオチドをもたらす各範囲に数を選択することが可能であり得る。そのような状況では、両方の要素が満たされなければならない。例えば、ある特定の実施形態では、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１５〜２０個の結合されたヌクレオシドからなり、３つの領域またはセグメントＡ、Ｂ、及びＣからなる糖モチーフを有し、領域またはセグメントＡは、特定の糖モチーフを有する２〜６個の結合されたヌクレオシドからなり、領域またはセグメントＢは、特定の糖モチーフを有する６〜１０個の結合されたヌクレオシドからなり、領域またはセグメントＣは、特定の糖モチーフを有する２〜６個の結合されたヌクレオシドからなる。そのような実施形態は、修飾されたオリゴヌクレオチドの全体長さの２０の上限を超える、そのようなオリゴヌクレオチドの全体長さが２２である故に、Ａ及びＣがそれぞれ、６個の結合されたヌクレオシドからなり、Ｂが、１０個の結合されたヌクレオシドからなる（ヌクレオシドのそれらの数は、Ａ、Ｂ、及びＣへの必要条件内で可能であるにもかかわらず）修飾されたオリゴヌクレオチドを含まない。特に指示がない限り、全ての修飾は、修飾された核酸塩基５−メチルシトシンが、オリゴヌクレオチド配列において必ず「Ｃ」であることを除いて、核酸塩基配列とは無関係である。
【０２０６】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、Ｘが、範囲内でヌクレオシドの最も少ない数を表し、Ｙが、範囲内でヌクレオシドの最も大きい数を表す、Ｘ〜Ｙの結合されたヌクレオシドからなる。ある特定のそのような実施形態では、Ｘ及びＹは各々独立して、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、及び５０から選択され、但し、Ｘ≦Ｙを条件とする。例えば、ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２〜１３、１２〜１４、１２〜１５、１２〜１６、１２〜１７、１２〜１８、１２〜１９、１２〜２０、１２〜２１、１２〜２２、１２〜２３、１２〜２４、１２〜２５、１２〜２６、１２〜２７、１２〜２８、１２〜２９、１２〜３０、１３〜１４、１３〜１５、１３〜１６、１３〜１７、１３〜１８、１３〜１９、１３〜２０、１３〜２１、１３〜２２、１３〜２３、１３〜２４、１３〜２５、１３〜２６、１３〜２７、１３〜２８、１３〜２９、１３〜３０、１４〜１５、１４〜１６、１４〜１７、１４〜１８、１４〜１９、１４〜２０、１４〜２１、１４〜２２、１４〜２３、１４〜２４、１４〜２５、１４〜２６、１４〜２７、１４〜２８、１４〜２９、１４〜３０、１５〜１６、１５〜１７、１５〜１８、１５〜１９、１５〜２０、１５〜２１、１５〜２２、１５〜２３、１５〜２４、１５〜２５、１５〜２６、１５〜２７、１５〜２８、１５〜２９、１５〜３０、１６〜１７、１６〜１８、１６〜１９、１６〜２０、１６〜２１、１６〜２２、１６〜２３、１６〜２４、１６〜２５、１６〜２６、１６〜２７、１６〜２８、１６〜２９、１６〜３０、１７〜１８、１７〜１９、１７〜２０、１７〜２１、１７〜２２、１７〜２３、１７〜２４、１７〜２５、１７〜２６、１７〜２７、１７〜２８、１７〜２９、１７〜３０、１８〜１９、１８〜２０、１８〜２１、１８〜２２、１８〜２３、１８〜２４、１８〜２５、１８〜２６、１８〜２７、１８〜２８、１８〜２９、１８〜３０、１９〜２０、１９〜２１、１９〜２２、１９〜２３、１９〜２４、１９〜２５、１９〜２６、１９〜２９、１９〜２８、１９〜２９、１９〜３０、２０〜２１、２０〜２２、２０〜２３、２０〜２４、２０〜２５、２０〜２６、２０〜２７、２０〜２８、２０〜２９、２０〜３０、２１〜２２、２１〜２３、２１〜２４、２１〜２５、２１〜２６、２１〜２７、２１〜２８、２１〜２９、２１〜３０、２２〜２３、２２〜２４、２２〜２５、２２〜２６、２２〜２７、２２〜２８、２２〜２９、２２〜３０、２３〜２４、２３〜２５、２３〜２６、２３〜２７、２３〜２８、２３〜２９、２３〜３０、２４〜２５、２４〜２６、２４〜２７、２４〜２８、２４〜２９、２４〜３０、２５〜２６、２５〜２７、２５〜２８、２５〜２９、２５〜３０、２６〜２７、２６〜２８、２６〜２９、２６〜３０、２７〜２８、２７〜２９、２７〜３０、２８〜２９、２８〜３０、または２９〜３０個の結合されたヌクレオシドからなる。
【０２０７】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、第２のオリゴヌクレオチドまたは標的核酸などの同定された参照核酸と相補的な核酸塩基配列を有する。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの領域は、第２のオリゴヌクレオチドまたは標的核酸などの同定された参照核酸と相補的な核酸塩基配列を有する。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの領域または全体の長さの核酸塩基配列は、第２のオリゴヌクレオチドまたは標的核酸などの核酸と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
【０２０８】
ＩＶ．ある特定の複合体化された化合物
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、オリゴヌクレオチド（修飾されたまたは修飾されていない）、ならびに任意に１つ以上の複合群及び／または末端基を含むか、またはそれからなる。複合群は、１つ以上の複合体部分、及び複合体部分をオリゴヌクレオチドに結合する複合リンカーからなる。複合群は、オリゴヌクレオチドのいずれかまたは両方の末端に、及び／または任意の内部位置で結合され得る。ある特定の実施形態では、複合群は、修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシドの２’−位置に結合され得る。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのいずれかまたは両方の末端に結合される複合群は、末端基である。ある特定のそのような実施形態では、複合群または末端基は、オリゴヌクレオチドの３’及び／または５’−末端で結合される。ある特定のそのような実施形態では、複合群（または末端基）は、オリゴヌクレオチドの３’−末端で結合される。ある特定の実施形態では、複合群は、オリゴヌクレオチドの３’−末端に近接して結合される。ある特定の実施形態では、複合群（または末端基）は、オリゴヌクレオチドの５’−末端で結合される。ある特定の実施形態では、複合群は、オリゴヌクレオチドの５’−末端に近接して結合される。
【０２０９】
末端基の例には、これらに限定されないが、複合群、キャッピング基、ホスフェート部分、保護基、修飾されたまたは修飾されていないヌクレオシド、及び独立して修飾されたまたは修飾されていない２つ以上のヌクレオシドが挙げられる。
【０２１０】
Ａ．ある特定の複合群
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の複合群に共有結合される。ある特定の実施形態では、複合群は、これらに限定されないが、薬力学、薬物動態学、安定性、結合、吸収、組織分布、細胞分布、細胞取り込み、電荷、及びクリアランスを含む、結合されたオリゴヌクレオチドの１つ以上の特性を修飾する。ある特定の実施形態では、複合群は、結合されたオリゴヌクレオチド、例えば、オリゴヌクレオチドの検出を可能にするフルオロフォアまたはレポーター基に新しい特性を与える。
【０２１１】
ある特定の複合群及び複合体部分は、以前に説明されており、例えば、コレステロール部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３−６５５６）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９４，４，１０５３−１０６０）、チオエーテル、例えば、ヘキシル−Ｓ−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０，３０６−３０９、Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９３，３，２７６５−２７７０）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９２，２０，５３３−５３８）、脂肪族鎖、例えば、ド−デカン−ジオールもしくはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１９９１，１０，１１１１−１１１８、Ｋａｂａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９，３２７−３３０、Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５，４９−５４）、リン脂質、例えば、ジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールもしくはトリエチル−アンモニウム１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホネート（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１−３６５４、Ｓｈｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９０，１８，３７７７−３７８３）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４，９６９−９７３）、または酢酸アダマンタン、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４，２２９−２３７）、オクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，ｉ，９２３−９３７）、トコフェロール基（Ｎｉｓｈｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，２０１５，４，ｅ２２０；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｍｔｎａ．２０１４．７２及びＮｉｓｈｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，２００８，１６，７３４−７４０）、またはＧａｌＮＡｃクラスター（例えば、ＷＯ２０１４／１７９６２０）である。
【０２１２】
１．複合体部分
複合体部分には、限定することなく、インターカレーター、レポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ペプチド、炭水化物（例えば、ＧａｌＮＡｃ）、ビタミン部分、ポリエチレングリコール、チオエーテル、ポリエーテル、コレステロール、チオコレステロール、コール酸部分、葉酸塩、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、フェナントリジン、アントラキノン、アダマンタン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、フルオロフォア、及び色素が含まれる。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、複合体部分は、活性薬原薬、例えば、アスピリン、ワルファリン、フェニルブタゾン、イブプロフェン、スプロフェン、フェンブフェン、ケトプロフェン、（Ｓ）−（＋）−プラノプロフェン、カルプロフェン、ダンシルサルコシン、２，３，５−トリヨード安息香酸、フィンゴリモド、フルフェナム酸、フォリン酸、ベンゾチアジアジド、クロロチアジド、ジアゼピン、インドメタシン、バルビツレート、セファロスポリン、サルファ薬、抗糖尿病薬、抗菌薬、または抗生物質を含む。
【０２１４】
２．複合リンカー
複合体部分は、複合リンカーによってオリゴヌクレオチドに結合される。ある特定の化合物では、複合群は、単一の化学結合である（すなわち、複合体部分は、単結合によって複合リンカーを介してオリゴヌクレオチドに結合される）。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、ヒドロカルビル鎖などの鎖構造、またはエチレングリコール、ヌクレオシド、もしくはアミノ酸単位などの繰り返し単位のオリゴマーを含む。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、複合リンカーは、アルキル、アミノ、オキソ、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル、及びヒドロキシルアミノから選択される１つ以上の基を含む。ある特定のそのような実施形態では、複合リンカーは、アルキル、アミノ、オキソ、アミド、及びエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、アルキル及びアミド基から選択される基を含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、アルキル及びエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、少なくとも１つのリン部分を含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、少なくとも１つのホスフェート基を含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、少なくとも１つの中性結合基を含む。
【０２１６】
ある特定の実施形態では、上に記載される複合リンカーを含む複合リンカーは、二官能性結合部分、例えば、複合群を本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドなどの親化合物に結合するのに有用であることが当該技術分野で既知のものである。一般に、二官能性結合部分は、少なくとも２つの官能性基を含む。官能性基のうちの一方は、化合物の特定の部位と結合するように選択され、他方は、複合群と結合するように選択される。二官能性結合部分で使用される官能性基の例には、これらに限定されないが、求核基と反応させるための求電子剤及び求電子基と反応させるための求核剤が含まれる。ある特定の実施形態では、二官能性結合部分は、アミノ、ヒドロキシル、カルボン酸、チオール、アルキル、アルケニル、及びアルキニルから選択される１つ以上の基を含む。
【０２１７】
複合リンカーの例には、これらに限定されないが、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、及び６−アミノヘキサン酸（ＡＨＥＸまたはＡＨＡ）が含まれる。他の複合リンカーには、これらに限定されないが、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、置換もしくは非置換Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル、または置換もしくは非置換Ｃ２〜Ｃ１０アルキニルが含まれ、好ましい置換基の非限定的一覧には、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ、チオール、チオアルコキシ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル、及びアルキニルが含まれる。
【０２１８】
ある特定の実施形態では、複合リンカーは、１〜１０個のリンカーヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、そのようなリンカーヌクレオシドは、修飾されたヌクレオシドである。ある特定の実施形態では、そのようなリンカーヌクレオシドは、修飾された糖部分を含む。ある特定の実施形態では、リンカーヌクレオシドは、修飾されていない。ある特定の実施形態では、リンカーヌクレオシドは、プリン、置換されているプリン、ピリミジン、または置換されているピリミジンから選択される任意に保護された複素環式塩基を含む。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、ウラシル、チミン、シトシン、４−Ｎ−ベンゾイルシトシン、５−メチルシトシン、４−Ｎ−ベンゾイル−５−メチルシトシン、アデニン、６−Ｎ−ベンゾイルアデニン、グアニン、及び２−Ｎ−イソブチリルグアニンから選択されるヌクレオシドである。リンカーヌクレオシドが、標的組織に到達した後に化合物から切断されることが典型的には望ましい。したがって、リンカーヌクレオシドは、典型的には、互いに及び切断可能な結合によって化合物の残りに結合される。ある特定の実施形態では、そのような切断可能な結合は、ホスホジエステル結合である。
【０２１９】
本明細書において、リンカーヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの一部であるとは考えられていない。したがって、化合物が、特定の数または範囲の結合されたヌクレオシド及び／または参照核酸との特定のパーセントの相補性からなるオリゴヌクレオチドを含み、化合物もまた、リンカーヌクレオシドを含む複合リンカーを含む複合群を含む実施形態では、それらのリンカーヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの長さに計算されず、参照核酸に対するオリゴヌクレオチドの相補性パーセントを決定することにおいて使用されない。例えば、化合物は、（１）８〜３０個のヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチド、及び（２）修飾されたオリゴヌクレオチドのヌクレオシドと隣接する１〜１０個のリンカーヌクレオシドを含む複合群を含み得る。そのような化合物における隣接する結合されたヌクレオシドの合計数は、３０個を超える。代替的には、化合物は、８〜３０個のヌクレオシドからなりかつ複合群は存在しない修飾されたオリゴヌクレオチドを含み得る。そのような化合物における隣接する結合されたヌクレオシドの合計数は、３０個以下である。特に指示がない限り、複合リンカーは、１０個以下のリンカーヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、５個以下のリンカーヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、３個以下のリンカーヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、２個以下のリンカーヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、複合リンカーは、１個以下のリンカーヌクレオシドを含む。
【０２２０】
ある特定の実施形態では、複合群を、オリゴヌクレオチドから切断させることが望ましい。例えば、ある特定の状況では、特定の複合体部分を含む化合物は、特定の細胞型によってよく取り込まれるが、一旦化合物が取り込まれると、複合群が切断されて非複合体化または親オリゴヌクレオチドを放出することが望ましい。したがって、ある特定の複合体は、１つ以上の切断可能な部分を、典型的には複合リンカー内に含み得る。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、切断可能な結合である。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、少なくとも１つの切断可能な結合を含む原子の群である。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、１、２、３、４、または５個以上の切断可能な結合を有する原子の群を含む。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、リソソームなど細胞または細胞内コンパートメントの内側で選択的に切断される。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、ヌクレアーゼなどの内因性酵素によって選択的に切断される。
【０２２１】
ある特定の実施形態では、切断可能な結合は、アミド、エステル、エーテル、ホスホジエステルの一方または両方のエステル、ホスフェートエステル、カルバメート、またはジスルフィドの中から選択される。ある特定の実施形態では、切断可能な結合は、ホスホジエステルの一方または両方のエステルである。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、ホスフェートまたはホスホジエステルを含む。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、オリゴヌクレオチド及び複合体部分または複合群の間のホスフェート結合である。
【０２２２】
ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、１つ以上のリンカーヌクレオシドを含むか、またはそれからなる。ある特定のそのような実施形態では、１つ以上のリンカーヌクレオシドは、互いに及び／または切断可能な結合によって化合物の残りに結合される。ある特定の実施形態では、そのような切断可能な結合は、修飾されていないホスホジエステル結合である。ある特定の実施形態では、切断可能な部分は、ホスフェートヌクレオシド間結合によってオリゴヌクレオチドの３’または５’−末端ヌクレオシドのいずれかに結合され、ホスフェートまたはホスホロチオエート結合によって複合リンカーまたは複合体部分の残りに共有結合される２’−デオキシヌクレオシドである。ある特定のそのような実施形態では、切断可能な部分は、２’−デオキシアデノシンである。
【０２２３】
３．ある特定の細胞標的化複合体部分
ある特定の実施形態では、複合群は、細胞標的化複合体部分を含む。ある特定の実施形態では、複合群は、以下の一般式を有し、
【０２２４】
【化９】
2021500903.tif 000010
【０２２５】
式中、ｎは、１〜約３であり、ｍは、ｎが１である場合に０であり、ｍは、ｎが２以上である場合に１であり、ｊは、１または０であり、ｋは、１または０である。
ある特定の実施形態では、ｎは１であり、ｊは１であり、ｋは０である。ある特定の実施形態では、ｎは１であり、ｊは０であり、ｋは１である。ある特定の実施形態では、ｎは１であり、ｊは１であり、ｋは１である。ある特定の実施形態では、ｎは２であり、ｊは１であり、ｋは０である。ある特定の実施形態では、ｎは２であり、ｊは０であり、ｋは１である。ある特定の実施形態では、ｎは２であり、ｊは１であり、ｋは１である。ある特定の実施形態では、ｎは３であり、ｊは１であり、ｋは０である。ある特定の実施形態では、ｎは３であり、ｊは０であり、ｋは１である。ある特定の実施形態では、ｎは３であり、ｊは１であり、ｋは１である。
【０２２６】
ある特定の実施形態では、複合群は、少なくとも１つのテザーリガンドを有する細胞標的化部分を含む。ある特定の実施形態では、細胞標的化部分は、分岐基に共有結合されている２つのテザーリガンドを含む。ある特定の実施形態では、細胞標的化部分は、分岐基に共有結合されている３つのテザーリガンドを含む。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、細胞標的化部分は、アルキル、アミノ、オキソ、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル、及びヒドロキシルアミノ基から選択される１つ以上の基を含む分岐基を含む。ある特定の実施形態では、分岐基は、アルキル、アミノ、オキソ、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル、及びヒドロキシルアミノ基から選択される基を含む分岐脂肪族基を含む。ある特定のそのような実施形態では、分岐脂肪族基は、アルキル、アミノ、オキソ、アミド、及びエーテル基から選択される基を含む。ある特定のそのような実施形態では、分岐脂肪族基は、アルキル、アミノ、及びエーテル基から選択される基を含む。ある特定のそのような実施形態では、分岐脂肪族基は、アルキル及びエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態では、分岐基は、単環式または多環式環系を含む。
【０２２８】
ある特定の実施形態では、細胞標的化部分の各テザーは、任意の組み合わせの、アルキル、置換アルキル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、アミノ、オキソ、アミド、ホスホジエステル、及びポリエチレングリコールから選択される１つ以上の基を含む。ある特定の実施形態では、各テザーは、任意の組み合わせの、アルキル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、アミノ、オキソ、アミド、及びポリエチレングリコールから選択される１つ以上の基を含む直鎖状脂肪族基である。ある特定の実施形態では、各テザーは、任意の組み合わせの、アルキル、ホスホジエステル、エーテル、アミノ、オキソ、及びアミドから選択される１つ以上の基を含む直鎖状脂肪族基である。ある特定の実施形態では、各テザーは、任意の組み合わせの、アルキル、エーテル、アミノ、オキソ、及びアミドから選択される１つ以上の基を含む直鎖状脂肪族基である。ある特定の実施形態では、各テザーは、任意の組み合わせの、アルキル、アミノ、及びオキソから選択される１つ以上の基を含む直鎖状脂肪族基である。ある特定の実施形態では、各テザーは、任意の組み合わせの、アルキル及びオキソから選択される１つ以上の基を含む直鎖状脂肪族基である。ある特定の実施形態では、各テザーは、任意の組み合わせの、アルキル及びホスホジエステルから選択される１つ以上の基を含む直鎖状脂肪族基である。ある特定の実施形態では、各テザーは、少なくとも１つのリン結合基または中性結合基を含む。ある特定の実施形態では、各テザーは、約６〜約２０原子長の鎖を含む。ある特定の実施形態では、各テザーは、約１０〜約１８原子長の鎖を含む。ある特定の実施形態では、各テザーは、約１０原子長を含む。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、細胞標的化部分の各リガンドは、標的細胞の少なくとも１つの種類の受容体に対して親和性を有する。ある特定の実施形態では、各リガンドは、哺乳動物の肺細胞の表面の少なくとも１つの種類の受容体に対して親和性を有する。
【０２３０】
ある特定の実施形態では、細胞標的化部分の各リガンドは、炭水化物、炭水化物誘導体、修飾された炭水化物、多糖類、修飾された多糖類、または多糖類誘導体である。ある特定のそのような実施形態では、複合群は、炭水化物クラスターを含む（例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｔｏ  ａ  Ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，”Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，１４，１８−２９、またはＲｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ−Ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ  Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ  ｆｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｃ  Ａｓｉａｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，４７，５７９８−５８０８を参照のこと）。ある特定のそのような実施形態では、各リガンドは、アミノ糖またはチオ糖である。例えば、アミノ糖は、シアル酸、α−Ｄ−ガラクトサミン、β−ムラミン酸、２−デオキシ−２−メチルアミノ−Ｌ−グルコピラノース、４，６−ジデオキシ−４−ホルムアミド−２，３−ジ−Ｏ−メチル−Ｄ−マンノピラノース、２−デオキシ−２−スルホアミノ−Ｄ−グルコピラノース及びＮ−スルホ−Ｄ−グルコサミン、ならびにＮ−グリコロイル−α−ノイラミン酸などの、当該技術分野で既知の任意の数の化合物から選択され得る。例えば、チオ糖は、５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース、メチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−チオ−６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−グルコピラノシド、４−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノース、及びエチル３，４，６，７−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−１，５−ジチオ−α−Ｄ−グルコ−ヘプトピラノシドから選択され得る。
【０２３１】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、以下の参考文献のうちのいずれかに見出される複合群を含む：Ｌｅｅ，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ  Ｒｅｓ，１９７８，６７，５０９−５１４、Ｃｏｎｎｏｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，１９８２，２５７，９３９−９４５、Ｐａｖｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｅｐ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ，１９８３，２２，５３９−５４８、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９８４，２３，４２５５−４２６１、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｊ，１９８７，４，３１７−３２８、Ｔｏｙｏｋｕｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ，１９９０，３１，２６７３−２６７６、Ｂｉｅｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，１９９５，３８，１５３８−１５４６、Ｖａｌｅｎｔｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９７，５３，７５９−７７０、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ，１９９７，３８，３４８７−３４９０、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ，１９９７，８，７６２−７６５、Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ，２００１，１１，８２１−８２９、Ｒｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２００１，２７６，３７５７７−３７５８４、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，２００３，３６２，３８−４３、Ｗｅｓｔｅｒｌｉｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ  Ｊ，２００４，２１，２２７−２４１、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ，２００６，１６（１９），５１３２−５１３５、Ｍａｉｅｒｈｏｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２００７，１５，７６６１−７６７６、Ｋｈｏｒｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２００８，１６，５２１６−５２３１、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２０１１，１９，２４９４−２５００、Ｋｏｒｎｉｌｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌｙｔ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０１２，４２５，４３−４６、Ｐｕｊｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  Ｅｎｇｌ，２０１２，５１，７４４５−７４４８、Ｂｉｅｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，１９９５，３８，１８４６−１８５２、Ｓｌｉｅｄｒｅｇｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，１９９９，４２，６０９−６１８、Ｒｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２００４，４７，５７９８−５８０８、Ｒｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ，２００６，２６，１６９−１７５、ｖａｎ  Ｒｏｓｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ，２００４，１１，４５７−４６４、Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ，２００４，１２６，１４０１３−１４０２２、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ，２０１２，７７，７５６４−７５７１、Ｂｉｅｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ，２０００，１４，１７８４−１７９２、Ｒａｊｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ，１９９７，８，９３５−９４０、Ｄｕｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，２０００，３１３，２９７−３２１、Ｍａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ，２００３，１４，１８−２９、Ｊａｙａｐｒａｋａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒｇ  Ｌｅｔｔ，２０１０，１２，５４１０−５４１３、Ｍａｎｏｈａｒａｎ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ，２００２，１２，１０３−１２８、Ｍｅｒｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ，１９９４，５，６１２−６２０、Ｔｏｍｉｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２０１３，２１，５２７５−５２８１、国際出願ＷＯ１９９８／０１３３８１、ＷＯ２０１１／０３８３５６、ＷＯ１９９７／０４６０９８、ＷＯ２００８／０９８７８８、ＷＯ２００４／１０１６１９、ＷＯ２０１２／０３７２５４、ＷＯ２０１１／１２００５３、ＷＯ２０１１／１００１３１、ＷＯ２０１１／１６３１２１、ＷＯ２０１２／１７７９４７、ＷＯ２０１３／０３３２３０、ＷＯ２０１３／０７５０３５、ＷＯ２０１２／０８３１８５、ＷＯ２０１２／０８３０４６、ＷＯ２００９／０８２６０７、ＷＯ２００９／１３４４８７、ＷＯ２０１０／１４４７４０、ＷＯ２０１０／１４８０１３、ＷＯ１９９７／０２０５６３、ＷＯ２０１０／０８８５３７、ＷＯ２００２／０４３７７１、ＷＯ２０１０／１２９７０９、ＷＯ２０１２／０６８１８７、ＷＯ２００９／１２６９３３、ＷＯ２００４／０２４７５７、ＷＯ２０１０／０５４４０６、ＷＯ２０１２／０８９３５２、ＷＯ２０１２／０８９６０２、ＷＯ２０１３／１６６１２１、ＷＯ２０１３／１６５８１６、米国特許４，７５１，２１９、８，５５２，１６３、６，９０８，９０３、７，２６２，１７７、５，９９４，５１７、６，３００，３１９、８，１０６，０２２、７，４９１，８０５、７，４９１，８０５、７，５８２，７４４、８，１３７，６９５、６，３８３，８１２、６，５２５，０３１、６，６６０，７２０、７，７２３，５０９、８，５４１，５４８、８，３４４，１２５、８，３１３，７７２、８，３４９，３０８、８，４５０，４６７、８，５０１，９３０、８，１５８，６０１、７，２６２，１７７、６，９０６，１８２、６，６２０，９１６、８，４３５，４９１、８，４０４，８６２、７，８５１，６１５、公開された米国特許出願公開ＵＳ２０１１／００９７２６４、ＵＳ２０１１／００９７２６５、ＵＳ２０１３／０００４４２７、ＵＳ２００５／０１６４２３５、ＵＳ２００６／０１４８７４０、ＵＳ２００８／０２８１０４４、ＵＳ２０１０／０２４０７３０、ＵＳ２００３／０１１９７２４、ＵＳ２００６／０１８３８８６、ＵＳ２００８／０２０６８６９、ＵＳ２０１１／０２６９８１４、ＵＳ２００９／０２８６９７３、ＵＳ２０１１／０２０７７９９、ＵＳ２０１２／０１３６０４２、ＵＳ２０１２／０１６５３９３、ＵＳ２００８／０２８１０４１、ＵＳ２００９／０２０３１３５、ＵＳ２０１２／００３５１１５、ＵＳ２０１２／００９５０７５、ＵＳ２０１２／０１０１１４８、ＵＳ２０１２／０１２８７６０、ＵＳ２０１２／０１５７５０９、ＵＳ２０１２／０２３０９３８、ＵＳ２０１３／０１０９８１７、ＵＳ２０１３／０１２１９５４、ＵＳ２０１３／０１７８５１２、��Ｓ２０１３／０２３６９６８、ＵＳ２０１１／０１２３５２０、ＵＳ２００３／００７７８２９、ＵＳ２００８／０１０８８０１、及びＵＳ２００９／０２０３１３２。
薬学的組成物を製剤化するための組成物及び方法
本明細書に記載される化合物は、薬学的組成物の調製のために薬学的に許容される活性または不活性物質と混合されてもよい。薬学的組成物の製剤化のための組成物及び方法は、これらに限定されないが、投与の経路、疾患の程度、または投与される用量を含む、いくつかの基準に依存する。
【０２３２】
ある特定の実施形態は、１つ以上の化合物またはその塩を含む薬学的組成物を提供する。ある特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。ある特定のそのような実施形態では、薬学的組成物は、好適な薬学的に許容される希釈剤または担体を含む。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、減菌食塩水溶液及び１つ以上の化合物を含む。ある特定の実施形態では、そのような薬学的組成物は、減菌食塩水溶液及び１つ以上の化合物からなる。ある特定の実施形態では、減菌食塩水は、薬学的等級の生理食塩水である。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、１つ以上の化合物及び減菌水を含む。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、１つの化合物及び減菌水からなる。ある特定の実施形態では、減菌水は、薬学的等級の水である。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、１つ以上の化合物及びリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含むか、またはそれらからなる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、１つ以上の化合物及び減菌ＰＢＳからなる。ある特定の実施形態では、減菌ＰＢＳは、薬学的等級のＰＢＳを含む。薬学的組成物の製剤化のための組成物及び方法は、これらに限定されないが、投与の経路、疾患の程度、または投与される用量を含む、いくつかの基準に依存する。
【０２３３】
ある特定の実施形態は、噴霧器または吸入器によるエアロゾル化及び／または分散に好適な薬学的組成物を提供する。そのようなデバイスは、当該技術分野で周知である。ある特定のそのような実施形態では、薬学的組成物は、呼吸可能なサイズの化合物の粒子を含む固体である。固体微粒子組成物は、エアロゾル、例えば、ラクトースの形成を促進するのに役立つ分散剤を任意に含み得る。オリゴヌクレオチドを含む固体薬学的組成物はまた、当該技術分野で既知の任意の固体微粒子薬剤エアロゾル発生器、例えば、乾燥粉末吸入器を使用してエアロゾル化することができる。ある特定の実施形態では、吸入器で用いられる粉末は、活性化合物を含む化合物または活性化合物を含む粉末ブレンド、好適な粉末希釈剤、及び任意の界面活性剤からなる。
【０２３４】
ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、液体である。ある特定のそのような実施形態では、液体は、噴霧器または吸入器などの任意の好適な手段によって生成されるエアロゾルとして投与される。例えば、米国特許第４，５０１，７２９号を参照のこと。噴霧器は、溶液または懸濁液をエアロゾルミストに転換するデバイスであり、当該技術分野で周知である。好適な噴霧器には、ジェット噴霧器、超音波噴霧器、電気メッシュ噴霧器、及び振動メッシュ噴霧器が挙げられる。ＰＡＲＩ及びＶｅｃｔｕｒａなどの会社は、いくつかの種類のそのような好適な噴霧器を販売している。ある特定の実施形態では、エアロゾルは、典型的には液体化された推進剤中に活性化合物の懸濁液または溶液製剤を含む定量吸入器によって生成される。液体エアロゾルを分散するのに好適な吸入器には、Ｒｅｓｐｉｍａｔより販売されているある特定の吸入器も含まれる（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｈｒｏｎ  Ｏｂｓｔｒｕｃｔ  Ｐｕｌｍｏｎ  Ｄｉｓ．１，２５１（２００６）を参照のこと）。エアロゾル化に好適な薬学的組成物は、推進剤、界面活性剤、助溶剤、分散剤、防腐剤、及び／または他の添加剤もしくは賦形剤を含み得る。
【０２３５】
α−ＥＮａＣ核酸と相補的な本明細書に記載される化合物は、薬学的組成物が噴霧器によるエアロゾル化に好適となるように、化合物を好適な薬学的に許容される希釈剤もしくは担体及び／または追加の構成成分と組み合わせることによって、薬学的組成物において利用され得る。ある特定の実施形態では、薬学的に許容される希釈剤は、リン酸緩衝食塩水である。したがって、一実施形態では、α−ＥＮａＣ核酸と相補的な化合物及び薬学的に許容される希釈剤を含む薬学的組成物が、本明細書で記載される方法において用いられる。ある特定の実施形態では、薬学的に許容される希釈剤は、リン酸緩衝食塩水である。ある特定の実施形態では、化合物は、本明細書に提供される修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。
【０２３６】
本明細書に提供される化合物を含む薬学的組成物は、任意の薬学的に許容される塩、エステル、もしくはそのようなエステルの塩、またはヒトを含む動物への投与の際に、生物学的に活性な代謝産物またはその残基を提供する（直接または間接的に）ことができる任意の他のオリゴヌクレオチドを包含する。ある特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴマー化合物である。ある特定の実施形態では、化合物は、修飾されたオリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる。したがって、例えば、本開示はまた、化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ、そのようなプロドラッグの薬学的に許容される塩、及び他の生物学的同等性にも注目する。好適な薬学的に許容される塩には、これらに限定されないが、ナトリウム及びカリウム塩が含まれる。
【０２３７】
プロドラッグは、体内で内因性ヌクレアーゼによって切断される化合物の一方または両方の末端で追加のヌクレオシドの抱合を含み、活性化合物を形成し得る。
ある特定の実施形態では、化合物または組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤をさらに含む。
【実施例】
【０２３８】
以下の実施例は、α−ＥＮａＣに標的化されたリード化合物を同定するために使用されるスクリーニングプロセスを説明する。スクリーニングされた１，９００個超のオリゴヌクレオチドのうち、多くの強力及び耐容性であるオリゴヌクレオチドを同定し、化合物７９７３０８、７９７４９５、８２６７６３、８２７３０７、８２７３５９、及び８２７３９２は、上位のリード化合物として現れた。特に、化合物番号８２７３５９は、有効性及び耐容性に関する特性の最も良好な組み合わせを呈した。
【０２３９】
参照による非限定的開示及び組み込み
この出願に添付している配列表は、必要に応じて「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のいずれかとして各配列、実際には、化学修飾の任意の組み合わせで修飾され得る配列を同定する。当業者は、修飾されたオリゴヌクレオチドを説明するための「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」などの指定は、ある特定の例では、恣意的であることを容易に理解するであろう。例えば、２’−ＯＨ糖部分及びチミン核酸塩基を含むヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ糖を有するＤＮＡとして、またはＤＮＡ核酸塩基を有するＲＮＡとして記載され得る。
【０２４０】
したがって、本明細書に提供される核酸配列は、これらに限定されないが、配列表にあるものを含め、これらに限定されないが修飾された核酸塩基を有するそのような核酸を含む、修飾されていないもしくは修飾されたＲＮＡ及び／またはＤＮＡの任意の組み合わせを含む核酸を包含することが意図される。さらなる例として、限定することなく、核酸塩基配列「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」を有するオリゴヌクレオチドは、修飾されているかまたは修飾されていないかにかかわらず、これらに限定されないが、配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有するものならびにいくつかのＤＮＡ塩基及び「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」などのいくつかのＲＮＡ塩基を有するものなどのＲＮＡ塩基を含むそのような化合物と、「ＡＴｍＣＧＡＵＣＧ」などの他の修飾された核酸塩基を有する化合物とを含む、そのような核酸塩基配列を有する任意のオリゴヌクレオチドを包含し、式中、ｍＣは、５−位置でメチル基を含むシトシン塩基を示す。
【０２４１】
本明細書に記載されるある特定の化合物、組成物、及び方法は、ある特定の実施形態に従って、特異性と共に説明されている一方で、以下の実施例は、本明細書に記載される化合物を説明するためだけに役立ち、それを限定することは意図されていない。本出願に列挙される参考文献の各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
実施例１：インビトロでα−ＥＮａＣと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの影響
１つ以上のヒトα−ＥＮａＣ核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでα−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡへのそれらの影響について試験した。修飾されたオリゴヌクレオチドを、同様の培養条件を有した一連の実験で試験した。
【０２４２】
１ウエルあたり２０，０００個の細胞の密度で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞を、未処理の対照に対して２，０００ｎＭの修飾されたオリゴヌクレオチドでまたは修飾されたオリゴヌクレオチドなしで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約２４時間後、ＲＮＡを、細胞から単離し、α−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットｈＳＣＮＮ１Ａ＿ＬＴＳ０１１７０（配列番号３として本明細書で指定されるフォワード配列ＡＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＡＴＧＧＧＴＣＴＴＣ、配列番号４として本明細書で指定されるリバース配列ＡＣＴＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＡＴＴＴＣＴＣＴＴ、配列番号５として本明細書で指定されるプローブ配列ＴＧＣＴＡＴＣＧＣＧＡＣＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＣＣＧＴＣ）を使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。α−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるように、総ＲＮＡ含有量に正規化した。結果を、未処理の対照細胞に対して、正規化したα−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡレベルとして以下の表に表す（これらの条件は、「標準細胞アッセイ」を説明する）。
【０２４３】
以下の表の修飾されたオリゴヌクレオチドはそれぞれ、３−１０−３ホスホチオレート（ｐｈｏｓｐｈｏｔｈｉｏｒａｔｅ）ｃＥｔギャップマーモチーフを有する。修飾されたオリゴヌクレオチドは、１６核酸塩基長であり、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、各々が３個のｃＥｔヌクレオシドを含む３’及び５’末端のウイングセグメントに隣接している。各修飾されたオリゴヌクレオチドにわたる全てのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。ヌクレオシド間結合は全て、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０２４４】
以下の表に列挙される各修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＮＭ＿００１０３８．５（配列番号１として本明細書で指定される）、ヌクレオシド６３４３００１〜６３８００００から切断されたＧｅｎＢａｎｋ番号ＮＣ＿００００１２．１２の補体（配列番号２として本明細書で指定される）、及び／またはＧｅｎＢａｎｋ番号ＮＧ＿０１１９４５．１（配列番号１９５７として本明細書で指定される）のヒトα−ＥＮａＣ核酸配列と１００％相補的である。「開始部位」は、オリゴヌクレオチドが相補的である指定のα−ＥＮａＣ核酸の５’−モストヌクレオシド（５’−ｍｏｓｔ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）を示す。「停止部位」は、オリゴヌクレオチドが相補的であるヒトα−ＥＮａＣ核酸の３’−モストヌクレオシド（３’−ｍｏｓｔ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）を示す。「Ｎ／Ａ」は、修飾されたオリゴヌクレオチドが、１００％の相補性でその特定の核酸と相補的でないことを示す。いくつかのオリゴヌクレオチドは、以下の表に示されるように、ｍＲＮＡの２つ以上の部位と適合する。以下に示されるように、ヒトα−ＥＮａＣと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドは、インビトロでヒトα−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡの量を低減した。
【０２４５】
【表１】
2021500903.tif 000011
【０２４６】
2021500903.tif 000012
【０２４７】
2021500903.tif 000013
【０２４８】
2021500903.tif 000014
【０２４９】
2021500903.tif 000015
【０２５０】
2021500903.tif 000016
【０２５１】
2021500903.tif 000017
【０２５２】
2021500903.tif 000018
【０２５３】
2021500903.tif 000019
【０２５４】
2021500903.tif 000020
【０２５５】
2021500903.tif 000021
【０２５６】
2021500903.tif 000022
【０２５７】
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【０２５８】
2021500903.tif 000024
【０２５９】
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【０２６０】
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【０２６１】
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【０２６２】
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【０２６３】
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【０２６４】
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【０２６５】
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【０２６６】
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【０２６７】
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【０２６８】
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【０２６９】
【表２】
2021500903.tif 000035
【０２７０】
2021500903.tif 000036
【０２７１】
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【０２７２】
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【０２７３】
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【０２７４】
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【０２７５】
2021500903.tif 000041
【０２７６】
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【０２７７】
【表３】
2021500903.tif 000043
【０２７８】
2021500903.tif 000044
【０２７９】
2021500903.tif 000045
【０２８０】
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【０２８１】
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【０２８２】
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【０２８３】
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【０２８４】
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【０２８５】
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【０２８６】
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【０２８７】
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【０２８８】
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【０２８９】
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【０２９０】
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【０２９１】
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【０２９２】
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【０２９３】
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【０２９４】
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【０２９５】
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【０２９６】
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【０２９７】
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【０２９８】
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【０２９９】
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【０３００】
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【０３０１】
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【０３０２】
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【０３０３】
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【０３０４】
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【０３０５】
【表４】
2021500903.tif 000071
【０３０６】
2021500903.tif 000072
【０３０７】
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【０３０８】
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【０３０９】
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【０３１０】
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【０３１１】
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【０３１２】
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【０３１３】
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【０３１４】
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【０３１５】
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【０３１６】
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【０３１７】
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【０３１８】
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【０３１９】
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【０３２０】
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【０３２１】
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【０３２２】
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【０３２３】
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【０３２４】
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【０３２５】
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【０３２６】
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【０３２７】
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【０３２８】
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【０３２９】
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【０３３０】
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【０３３１】
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【０３３２】
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【０３３３】
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【０３３４】
2021500903.tif 000100
【０３３５】
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【０３３６】
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【０３３７】
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【０３３８】
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【０３３９】
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【０３４０】
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【０３４１】
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【０３４２】
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【０３４３】
【表５】
2021500903.tif 000109
【０３４４】
2021500903.tif 000110
【０３４５】
2021500903.tif 000111
【０３４６】
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【０３４７】
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【０３４８】
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【０３４９】
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【０３５０】
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【０３５１】
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【０３５２】
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【０３５３】
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【０３５４】
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【０３５５】
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【０３５６】
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【０３５７】
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【０３５８】
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【０３５９】
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【０３６０】
2021500903.tif 000126
【０３６１】
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【０３６２】
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【０３６３】
2021500903.tif 000129
【０３６４】
2021500903.tif 000130
【０３６５】
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【０３６６】
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【０３６７】
2021500903.tif 000133
【０３６８】
2021500903.tif 000134
【０３６９】
2021500903.tif 000135
【０３７０】
実施例２：様々な用量でのＨｅｐ３Ｂ細胞におけるα−ＥＮａＣと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの影響
実施例１に列挙される選択されたオリゴヌクレオチドを、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を１ウエルあたり２０，０００個の細胞の密度で播種し、１４８、４４４、１，３３３、または４，０００ｎＭの修飾されたオリゴヌクレオチドで電気穿孔法を使用してトランスフェクトした。約２４時間の処置期間の後、総ＲＮＡを単離し、実施例１に記載されるように分析した。以下の表に示されるように、α−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡレベルを、α−ＥＮａＣ核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドで処理した細胞において用量依存的様式で低減した。
【０３７１】
【表６】
2021500903.tif 000136
【０３７２】
【表７】
2021500903.tif 000137
【０３７３】
【表８】
2021500903.tif 000138
【０３７４】
【表９】
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【０３７５】
【表１０】
2021500903.tif 000140
【０３７６】
【表１１】
2021500903.tif 000141
【０３７７】
【表１２】
2021500903.tif 000142
【０３７８】
【表１３】
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【０３７９】
【表１４】
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【０３８０】
【表１５】
2021500903.tif 000145
【０３８１】
実施例３：自由取り込みを介したインビトロでのヒトα−ＥＮａＣと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの様々な用量の影響
選択したオリゴヌクレオチドを、自由取り込みによってＡ４３１細胞において様々な用量で試験した。以下の表に指定されるように、細胞を１ウエルあたり１０，０００個の細胞の密度で、１６、４９、１４８、１，３３３、または４，０００ｎＭの修飾されたオリゴヌクレオチドで播種した。約２４時間の処置期間の後、総ＲＮＡを単離し、実施例１のように分析した。以下の表に示されるように、α−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡレベルを、α−ＥＮａＣ核酸と相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドで処理した細胞において用量依存的様式で低減した。
【０３８２】
【表１６】
2021500903.tif 000146
【０３８３】
【表１７】
2021500903.tif 000147
【０３８４】
実施例４：全身送達後のＣＤ１マウスにおけるヒトα−ＥＮａＣと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの耐容性
ＣＤ１（登録商標）マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，ＭＡ）は、安全性及び有効性試験のために頻繁に利用される、多目的用マウスモデルである。マウスを、上に記載される研究から選択される修飾されたオリゴヌクレオチドで処置し、様々なプラズマ化学マーカーのレベルの変化について評価した。
処置
６〜８週齢の雄のＣＤ１マウスの群に、５０ｍｇ／ｋｇの以下の表に列挙される修飾されたオリゴヌクレオチドを、１週間に１回で６週間皮下注射した（５０ｍｇ／ｋｇ／週用量）。各群は、４匹のマウスを含んだ。雄のＣＤ１マウスの１つの群に、ＰＢＳを、１週間に１回で６週間皮下注射した。マウスを、最後の投与の４８時間後に屠殺し、器官及び血漿をさらなる分析のために採取した。
プラズマ化学マーカー
肝臓及び腎臓機能への修飾されたオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、トランスアミナーゼ、アルブミン、ＢＵＮ、及びビリルビンの血漿レベルを、臨床化学自動分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。以下の表の結果は、試験した修飾されたオリゴヌクレオチドのほとんどが、約２００ＩＵ／Ｌを下回るＡＬＴ及びＡＳＴレベルでならびに許容範囲内のアルブミン、ＢＵＮ、クレアチン、及び総ビリルビンで、全身的に送達された場合に良好な耐容性であったことを示す。
【０３８５】
【表１８】
2021500903.tif 000148
【０３８６】
【表１９】
2021500903.tif 000149
【０３８７】
【表２０】
2021500903.tif 000150
【０３８８】
器官重量
器官重量を、研究の終了時に測定し、腎臓、肝臓、及び脾臓重量を、以下の表に表す。結果は、修飾されたオリゴヌクレオチドのほとんどが、全身的に送達された場合に良好な耐容性であったという追加の証拠を提供する。
【０３８９】
【表２１】
2021500903.tif 000151
【０３９０】
【表２２】
2021500903.tif 000152
【０３９１】
【表２３】
2021500903.tif 000153
【０３９２】
実施例５：ヒトα−ＥＮａＣを発現するトランスジェニックマウス株の確立
トランスジェニックマウスを発生させ、マウスモデルにおいてヒトα−ＥＮａＣのノックダウンを分析した。ヒトα−ＥＮａＣ  ＡＢＣ１４−５０９２９３００Ｋ１４（ＮｏｔＩで消化された）の遺伝子の４１，２７９ｂｐ部分を、Ｃ５７ＢＬ／６  ＷＴマウスの胚に微量注入した。５匹の導入遺伝子陽性Ｆ０仔マウスを得て、１匹のファウンダーを使用して、Ｃ５７ＢＬ／６  ｈα−ＥＮａＣマウス株を生成した。舌、脳、心臓、結腸、気管、膵臓、腎臓、肝臓、脾臓、骨格筋、脂肪、子宮、ならびに全肺及び肺画分の両方におけるｈα−ＥＮａＣの発現について株を評価した。マウスモデルは、様々な組織においてｈα−ＥＮａＣ発現を呈し、重要なことには、肺の全ての画分において高レベルの発現を呈する。
実施例６：トランスジェニックマウスにおけるヒトα−ＥＮａＣ発現への修飾されたオリゴヌクレオチドの影響
処置
トランスジェニックマウスを、１２時間の明暗サイクルで維持し、適宜に通常の食事を与えた。実験の開始前に、動物を、研究施設で少なくとも７日間順応させた。修飾されたオリゴヌクレオチドを、緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で調製し、０．２ミクロンのフィルターに通して濾過することによって減菌した。オリゴヌクレオチドを、注射のために０．９％ＰＢＳに溶解した。
【０３９３】
約２０ｇの重量のＣ５７Ｂｌ／６−ＴＧ（ｈα−ＥＮａＣ）マウスを、２〜４匹のマウスの群に分割した。マウスの群に、２．５ｍｇ／ｋｇの修飾されたオリゴヌクレオチドを、口腔咽頭吸引を介して１週間に２回で２週間（５ｍｇ／ｋｇ／週）投与した。６匹のマウスの対照群に、ＰＢＳを１週間に２回で２週間与えた。対照群として機能したＰＢＳ群を、修飾されたオリゴヌクレオチドを投与された動物と比較した。マウスを、最後の投与の４８時間後に屠殺し、器官をさらなる分析のために採取した。
ヒトα−ＥＮａＣ発現レベル
実施例１に記載されるように、総ＲＮＡを全肺から単離し、ヒトα−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡレベルを測定した。治療されていない対照に対するα−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡの量の低減パーセントとして以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、α−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療動物の肺において低減された。
【０３９４】
【表２４】
2021500903.tif 000154
【０３９５】
実施例７：トランスジェニックマウスにおけるヒトα−ＥＮａＣ発現への化合物８２７３５９の用量応答
処置
トランスジェニックマウスを、１２時間の明暗サイクルで維持し、適宜に通常の食事を与えた。実験の開始前に、動物を、研究施設で少なくとも７日間順応させた。修飾されたオリゴヌクレオチドを、緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で調製し、０．２ミクロンのフィルターに通して濾過することによって減菌した。オリゴヌクレオチドを、０．９％ＰＢＳに溶解した。
【０３９６】
約２０ｇの重量のＣ５７Ｂｌ／６−ＴＧ（ｈα−ＥＮａＣ）マウスを、１２匹のマウスの群に分割した。１２匹のマウスの群に、０．０３３、０．１、０．３３、または１．０ｍｇ／ｋｇの修飾されたオリゴヌクレオチドを、エアロゾル投与を介して１週間に２回で３週間（５ｍｇ／ｋｇ／週）投与した。１２匹のマウスの対照群に、エアロゾル生理食塩水を１週間に２回で３週間与えた。対照群として機能したＰＢＳ群を、修飾されたオリゴヌクレオチドを投与された動物と比較した。マウスを、最後の投与の３日後に屠殺し、器官をさらなる分析のために採取した。
ヒトα−ＥＮａＣ発現レベル
実施例１に記載されるように、総ＲＮＡを全肺から単離し、ヒトα−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。処置されていない対照に対するα−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡの量の低減パーセントとして以下の表に結果を表す。以下の表に示されるように、α−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡレベルは、修飾されたオリゴヌクレオチド治療動物において用量依存的様式で低減された。
【０３９７】
【表２５】
2021500903.tif 000155
【０３９８】
実施例８：ヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）アッセイ
ＢＤ  Ｖａｕｔａｉｎｅｒ  ＣＰＴチューブ方法を使用して、ｈＰＢＭＣアッセイを行った。ＵＳ  ＨｅａｌｔｈＷｏｒｋｓ  ｃｌｉｎｉｃ（Ｆａｒａｄａｙ＆Ｅｌ  Ｃａｍｉｎｏ  Ｒｅａｌ，Ｃａｒｌｓｂａｄ）でインフォームド・コンセントを受けたボランティアのドナーからの全血の試料を得て、４−１５  ＢＤ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  ＣＰＴ  ８ｍｌチューブ（ＶＷＲ  カタログ番号ＢＤ３６２７５３）に収集した。各ドナーのＣＰＴチューブのおおよその開始合計全血体積を、ＰＢＭＣアッセイデータシートを使用して記録した。
【０３９９】
血液試料を、チューブを８〜１０回穏やかに反転させることによって、遠心分離の直前に再混合した。ＣＰＴチューブを、ブレーキオフ（２７００  ＲＰＭ  Ｂｅｃｋｍａｎ  Ａｌｌｅｇｒａ  ６Ｒ）と共に１５００〜１８００ＲＣＦで、水平（スイングアウト）ローターで、３０分間室温で（１８〜２５℃）で遠心分離した。細胞を、バフィーコート界面（フィコール及びポリマーゲル層の間）から回収し、減菌５０ｍｌコニカルチューブに移し、５つのＣＰＴチューブ／５０ｍｌコニカルチューブ／ドナーまでプールした。次いで、細胞をＰＢＳ（Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋を含まない；ＧＩＢＣＯ）を用いて２回洗浄した。チューブを、５０ｍｌまで充填し、数回反転させることによって混合した。次いで、試料を、室温で１５分間、３３０ｘｇで遠心分離し（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ａｌｌｅｇｒａ  ６Ｒで１２１５ＲＰＭ）、ペレットを撹乱することなくできるだけ多くの上清を吸引した。細胞ペレットを、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ（約１ｍｌ／１０ｍｌ開始全血体積）中でチューブ及び懸濁された細胞を穏やかに渦巻き状に撹拌することによって取り除いた。６０μｌ試料を、６００μｌ  ＶｅｒｓａＬｙｓｅ試薬（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  カタログ番号Ａ０９７７７）を含む試料バイアル（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）にピペットで移し、１０〜１５秒間穏やかにボルテックスした。試料を、室温で１０分間インキュベートし、カウントする前に再度混合させた。細胞懸濁液を、ＰＢＭＣ細胞型を使用してＶｉｃｅｌｌ  ＸＲ細胞生存性アナライザー（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）上でカウントした（１：１１の希釈倍率を他のパラメータと共に保存した）。生きた細胞／ｍｌ及び生存性を記録した。細胞懸濁液を、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ中１×１０７生きたＰＢＭＣ／ｍｌに希釈した。
【０４００】
細胞を、９６ウエルの組織培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ  Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔ）の５０μｌ／ウエルで、５×１０５で播種した。ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ中に希釈された５０μｌ／ウエルの２倍濃度オリゴ／対照を、実験テンプレートに従って添加した（合計１００μｌ／ウエル）。プレートを、振盪機上に置き、約１分間混合させた。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、プレートを、ＭＳＤサイトカインアッセイのために上清（すなわち、ヒトＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＴＮＦ−α）を除去する前に４００ｘｇで１０分間遠心分離した。
【０４０１】
化合物３５３５１２は、アッセイにおいてＩＬ−６放出に対する高レスポンダーであると知られている内部標準であるが、一方で化合物１０４８３８は、陰性対照である。ｈＰＢＭＣを、新鮮な、ボランティアのドナーから単離し、０．０６４、０．３２、及び１．６  ２００μＭの濃度で、修飾されたオリゴヌクレオチドで処置した。２４時間の処置後、サイトカインレベルを測定し、２ドナーで平均した。以下の表に表される結果は、ヒトα−ＥＮａＣを標的化する選択され修飾されたオリゴヌクレオチドが、ヒト末梢血単核細胞において低い炎症誘発応答を有することを示す。
【０４０２】
【表２６】
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【０４０３】
【表２７】
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【０４０４】
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【０４０５】
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【０４０６】
実施例９：嚢胞性線維症のマウスモデルにおけるα−ＥＮａＣと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの影響
マウスα−ＥＮａＣと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドを、嚢胞性線維症のマウスモデルにおける気道制限を予防及び治療することへのその影響について試験した。Ｎｅｄｄ４Ｌと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドによる野生型マウスの処置は、嚢胞性線維症様表現型を誘発した（Ｃｒｏｓｂｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．ｏｆ  Ｃｙｓｔｉｃ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ，２０１７を参照のこと）。化合物６６８３９５は、３−１０−３ホスホチオレート（ｐｈｏｓｐｈｏｔｈｉｏｒａｔｅ）ｃＥｔギャップマーモチーフを有する。それは、１６核酸塩基長であり、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、各々が３個のｃＥｔヌクレオシドを含む３’及び５’末端のウイングセグメントに隣接している。修飾されたオリゴヌクレオチドにわたる全てのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。ヌクレオシド間結合は全て、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。配列は、ＧＡＧＣＡＴＣＴＡＡＴＡＣＡＧＣ（配列番号１９５８）であり、それはマウスα−ＥＮａＣと１００％相補的である。
【０４０７】
成体マウスを、エアロゾル投与を介して０．３３ｍｇ／ｋｇ／用量で、化合物６６８３９５またはビヒクル（対照）で、１週間に２回で２週間処置した。次いで、マウスを、１週間に１回で６週間、１０ｍｇ／ｋｇ／用量で、口腔咽頭投与を介してＮｅｄｄ４Ｌ（Ｎｅｄｄ  ４Ｌ  ＡＳＯ）を低減するアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した。８週間後、気道制限をメタコリン誘発を用いて試験した。肺機能を、非拘束プレチスモグラフィによって得られたＰｅｎｈスコアを使用して測定した。より高いＰｅｎｈスコアは、より多くの肺狭窄を示す。各群は、８匹のマウスを含んだ。以下の表に示される結果は、α−ＥＮａＣと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドによる事前処置が、嚢胞性線維症のマウスモデルで観察された肺機能の減少を防止したことを示す。
【０４０８】
【表２８】
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【０４０９】
嚢胞性線維症のマウスモデルにおける気道制限の反転へのマウスα−ＥＮａＣと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの影響を試験するために、成体マウスを、１０ｍｇ／ｋｇ／用量で、１週間に１回で合計９週間、口腔咽頭投与を介してＮｅｄｄ４Ｌ  ＡＳＯで処置し、化合物６６８３９５は、６週目まで投与されなかった。６週間で開始して、マウスに、１週間に３回で３週間、エアロゾル投与を介して化合物６６８３９５、ビヒクル、または対照３−１０−３  ｃＥｔ修飾されたオリゴヌクレオチド（対照化合物）を投与した。肺機能を、６週間及び９週間で、第１の処置の前にメタコリン誘発を用いて試験し、非拘束プレチスモグラフィによってＰｅｎｈスコアを得た。各群は、１２匹のマウスを含んだ。以下の表に示される結果は、α−ＥＮａＣと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドでの処置が、嚢胞性線維症のマウスモデルにおける肺機能を回復させたことを示す。
【０４１０】
【表２９】
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【０４１１】
【表３０】
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【０４１２】
実施例１０：嚢胞性線維症患者に由来する初代ヒト気管支上皮細胞へのヒトα−ＥＮａＣと相補的な修飾されたオリゴヌクレオチドの影響
嚢胞性線維症患者からの初代ヒト気管支上皮細胞を、Ｅｐｉｔｈｅｌｉｘから得た。細胞を、基底外側膜に、ＰｎｅｕｍａＣｕｌｔ（商標）−ＡＬＩ培地（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてトランスウエルメンブレンインサート（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標））上で、気相液相界面（ＡＬＩ）で培養した。播種後６週間で、細胞を、ＩＯＮ番号８２７３５９、またはα−ＥＮａＣを標的としない陰性対照として機能したＩＯＮ番号５４９１４８（配列番号１９５９として本明細書で指定される、３−１０−３  ｃＥＴギャップマー、ＧＧＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＧＴＣＡ）のいずれかで処置した。両方の修飾されたオリゴヌクレオチドを、基底外側に１μＭの濃度で自由取り込みを用いて処置した。細胞を処置後７２時間で溶解した。
ヒトα−ＥＮａＣ発現レベル
総ＲＮＡを、処置後７２時間で細胞から単離した。α−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡレベルを、ヒトプライマープローブセットｈＳＣＮＮ１Ａ＿ＬＴＳ０１１７０を使用して測定した。α−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡレベルを、シクロフィリンＡに正規化した。シクロフィリンＡを、プライマープローブセットＨＴＳ３９３６を使用して増幅した（配列番号１９６０として本明細書で指定されるフォワード配列、ＧＣＣＡＴＧＧＡＧＣＧＣＴＴＴＧＧ；配列番号１９６１として本明細書で指定されるリバース配列、ＴＣＣＡＣＡＧＴＣＡＧＣＡＡＴＧＧＴＧＡＴＣ；配列番号１９６２として本明細書で指定されるプローブ配列、ＴＣＣＡＧＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡ）。対照細胞に対するα−ＥＮａＣ  ｍＲＮＡの量の対照パーセントとして以下の表に結果を表す（対照％）。
【０４１３】
【表３１】
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【０４１４】
アミロライド感受性電流の測定
修飾されたオリゴヌクレオチドでの処置後７２時間で、トランスウエルインサートを、Ｕｓｓｉｎｇチャンバー（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に取り付けた。短絡電流（Ｉｓｃ）を測定した。ＡＣＱＵＩＲＥ＆ＡＮＡＬＹＺＥ  ２．３（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用してデータを分析した。基底外側溶液は、（ｍＭ単位で）１４５  ＮａＣｌ、３．３  Ｋ２ＨＰＯ４、０．８  ＫＨ２ＰＯ４、１．２  ＭｇＣｌ２、１．２  ＣａＣｌ２、１０グルコース、１０  Ｈｅｐｅｓ（ＮａＯＨでｐＨ７．３５に調節される）を含み、頂端溶液は、（ｍＭ単位で）１４５グルコン酸ナトリウム、３．３  Ｋ２ＨＰＯ４、０．８  ＫＨ２ＰＯ４、１．２  ＭｇＣｌ２、１．２  ＣａＣｌ２、１０グルコース、１０  Ｈｅｐｅｓ（ＮａＯＨでｐＨ７．３５に調節される）を含んだ。アミロライドを、１００μＭで頂端側に添加した。アミロライド感受性電流を、ＥＮａＣ機能活性を評価するために測定した。
【０４１５】
【表３２】
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【０４１６】
気道表面液体（ＡＳＬ）の測定
処置の開始後７２時間に、気道表面液体（ＡＳＬ）への修飾されたオリゴヌクレオチドの影響を測定した。ＡＳＬを測定する直前に、培養をＰＢＳを用いて３回洗浄し、過剰な粘液を除去した。１５０μＬのＫＢＲ緩衝駅（８９ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＫＣｌ、１．２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１．２ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、１６ｍＭ  Ｎａ−グルコン酸塩、１０  ｍＭグルコース）を、吸収体積として細胞の頂端面に添加した。次いで、ＡＳＬ体積を、ＫＢＲ緩衝液の添加後２４時間、４８時間、及び７２時間で測定した。
【０４１７】
【表３３】
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【０４１８】
実施例１１：修飾されたオリゴヌクレオチドのＶｘ−６６１（テザカフトール）及びＶＸ−７７０（アイバカフトール）との併用治療の影響
嚢胞性線維症患者からの初代ヒト気管支上皮下線細胞を、Ｅｐｉｔｈｅｌｉｘから得た。細胞を、処置の前に６週間、基底外側膜に、ＰｎｅｕｍａＣｕｌｔ（商標）−ＡＬＩ培地（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてトランスウエルメンブレンインサート（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標））上で、気相液相界面（ＡＬＩ）で培養した。処置の０日目、４日目、及び８日目に、細胞を、基底外側膜に、１０μＭでＩＯＮ番号８２７３５９、または５４９１４８のいずれかで処置した（各ＡＳＯの合計３回投与）。細胞の１つのセットを修飾されたオリゴヌクレオチドで処置されていないままにした。１１日目に、ＶＸ−６６１（テザカフトール）（Ｍｅｄｃｈｅｍ  Ｅｘｐｒｅｓｓ）を、以前に処置されていないウェル及びＩＯＮ番号８２７３５９で処置したウェルのうちの１つの両方に、１８μＭで添加した。１４日目に、ＶＸ−７７０（アイバカフトール）（Ｍｅｄｃｈｅｍ  Ｅｘｐｒｅｓｓ）を、ＶＸ−６６１で以前に処置された細胞に１０μＭで添加した。同じ日（１４日目）に、培養物を、ＰＢＳを用いて頂端側上で３回洗浄し、過剰な粘液を除去した。１５０μＬのＰＢＳ（吸収体積）を、細胞の頂端面に添加した。ＡＳＬ体積を次の日（１５日目）に測定した。併用治療は、対照と比較してＡＳＬ体積をさらに増加させることが見出された。
【０４１９】
【表３４】
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【国際調査報告】
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