(57)【要約】【課題】トランスフェクトされた免疫細胞を患者に投与することに関する問題がある。【解決手段】  本明細書中で提供されるのは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を一過性に発現する細胞集団、及びその、癌等の高増殖性疾患の長期間にわたる処置における使用である。一部の態様において、本開示は、修飾された非刺激単核細胞の集団の１回を超える服用を長期的に施すことによって癌を処置する方法を提供し、非刺激単核細胞は、末梢血から得られて、キメラ抗原受容体をコードするｍＲＮＡでトランスフェクトされる。一部の実施形態において、本開示は：キメラ受容体をコードするｍＲＮＡによってコードされた導入遺伝子を一過性に発現する（これによって、キメラ受容体が、トランスフェクトされた単核細胞の表面上に発現される）トランスフェクトされた単核細胞；及び薬学的に許容されるキャリアを含む組成物を提供する。【選択図】  図１
2021509903.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
修飾された非刺激単核細胞の集団の１回を超える服用を長期的に施すことによって癌を処置する方法であって、前記非刺激単核細胞が、末梢血から得られて、キメラ抗原受容体をコードするｍＲＮＡでトランスフェクトされる、方法。
【請求項２】
前記服用が、毎日、毎週、又は毎月繰り返される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記服用が、毎週繰り返される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記服用が、３週間、毎週繰り返される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
用量が、１×１０７細胞又は５×１０７細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記キメラ抗原受容体が、抗原結合領域、４−１ＢＢ共刺激シグナリング領域、及びＣＤ３ゼータシグナリング領域を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗原結合領域が、ｓｃＦｖである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記抗原結合領域が、腫瘍抗原に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記癌が、乳癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、脳癌、肝癌、頸部癌、結腸癌、腎癌、皮膚癌、頭頸部癌、骨癌、食道癌、膀胱癌、子宮癌、リンパ癌、胃癌、膵癌、精巣癌、白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及びマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）からなる群から選択される癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記腫瘍抗原が、ＣＤ−１９、ＦＢＰ、ＴＡＧ−７２、ＣＥＡ、ＣＤ１７１、ＩＬ−１３受容体、Ｇ（Ｄ）２、ＰＳＭＡ、メソセリン、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、及びＣＤ３０からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記キメラ抗原受容体が、抗メソセリン結合領域を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗メソセリン結合領域が、ｓｃＦｖである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記単核細胞が、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、又はＰＢＭＣからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
[0001]  本出願は、２０１８年１月５日出願の米国仮特許出願第６２／６１３，９００号の優先権及び利益を主張し、その出願の内容は、全ての目的について、その全体が参照によって組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
背景
[0002]  キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、癌処置が挙げられる多くの臨床用途に用いられている。ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン及び細胞内Ｔ細胞シグナリングドメインで構成される組換え受容体である。Ｔ細胞内で発現される場合、ＣＡＲは、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とは独立して、標的抗原を発現する癌細胞を標的化するようにＴ細胞を再方向付けする。ＣＡＲを発現する細胞を作製するために、ＣＡＲをコードする核酸が、免疫細胞中にトランスフェクトされて、次にＣＡＲは、当該細胞内で安定して発現され、抗原結合領域は表面上に存在する。抗原結合領域がその標的に対象内で結合すると、細胞質内でＣＡＲシグナリング領域が活性化されて、免疫細胞は、抗原を有する細胞に対する免疫応答を増大させ、且つ誘発することによって、当該細胞を滅ぼす。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞の使用は、革新的な免疫療法アプローチである。ＣＡＲ細胞治療は、Ｔ細胞に受容体を発現させるようなリエンジニアリングに依存しており、これにより当該細胞は、標的細胞を認識することができる。典型的に、ＣＡＲ処置は、患者からＴ細胞を収集することと、収集された当該細胞中にキメラ抗原をエクスビボ導入することと、トランスフェクトされた当該細胞を増殖させてから、患者に注入することとを含む。
【０００３】
[0003]  キメラ抗原受容体を発現する、安定してトランスフェクトされた免疫細胞を患者に投与することに関する問題がある。第１に、ＣＡＲトランスフェクト細胞は、血液中へのサイトカインの大きな、迅速な放出をもたらして、発熱、吐き気、頻拍、低血圧、困難呼吸、及び死亡に至るおそれがあるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を引き起こすおそれがある。ＣＡＲ治療の別の潜在的副作用として、患者のＢ細胞が、注入されたＣＡＲ細胞によって死滅するＢ細胞形成不全として知られるオフターゲット作用がある。この副作用を補償するために、処置された患者は、今後ずっと、免疫グロブリン治療を受けなければならない。また、神経毒性及び脳腫脹が、安定してトランスフェクトされたＣＡＲ−Ｔ細胞による処置の後に観察された。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
発明の概要
[0004]  ＣＡＲ  Ｔ細胞治療をもたらす一方法は、単核細胞を一過性に修飾するためのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）の使用を含む。ｍＲＮＡを用いて患者の単核細胞に、腫瘍抗原標的ＣＡＲ  Ｔ細胞を発現させるような再操作は、数時間で達成することができ、多様な処置位置に対するオンサイトの調製及び配備が可能となる。ｍＲＮＡ  ＣＡＲ単核細胞は、寿命制限の安全因子を有し、半減期が抗体治療薬に類似する。さらに、当該細胞は、迅速な免疫活性化及び増殖を欠くことによって、重度のサイトカイン放出副作用についてのリスクを制限する。
【０００５】
[0005]  本開示は、キメラ抗原受容体を一過性に発現する細胞を患者に投与することによって、安定してトランスフェクトされたＣＡＲの処置の後に観察される不必要且つ危険な副作用に対する解決策を提供する。当該細胞は、有限の時間、場合によっては約７日間、ＣＡＲを発現する。さらに、細胞は、ＣＡＲを一過性にしか発現しないので、より長い期間にわたって複数回用量で投与され得、これによって、有害な副作用の縮小と共に、又は有害な副作用なしに、患者の病徴及び疾患を和らげる、長期間にわたる処置を実現し得る。
【０００６】
[0006]  一部の態様において、本開示は、修飾された非刺激単核細胞の集団の１回を超える服用を長期的に施すことによって癌を処置する方法を提供し、非刺激単核細胞は、末梢血から得られて、キメラ抗原受容体をコードするｍＲＮＡでトランスフェクトされる。
【０００７】
[0007]  一部の実施形態において、服用は、毎日、毎週、又は毎月繰り返される。一部の実施形態において、服用は、毎週繰り返される。一部の実施形態において、服用は、少なくとも３週間、毎週繰り返される。一部の実施形態において、用量は、１×１０７細胞又は５×１０７細胞である。
【０００８】
[0008]  一部の実施形態において、キメラ抗原受容体は、抗原結合領域、４−１ＢＢ共刺激シグナリング領域、及びＣＤ３ゼータシグナリング領域を含む。一部の実施形態において、抗原結合領域は、ｓｃＦｖである。
【０００９】
[0009]  一部の実施形態において、抗原結合領域は、腫瘍抗原に結合する。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、乳癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、脳癌、肝癌、頸部癌、結腸癌、腎癌、皮膚癌、頭頸部癌、骨癌、食道癌、膀胱癌、子宮癌、リンパ癌、胃癌、膵癌、精巣癌、白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及びマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）からなる群から選択される癌と関連する抗原である。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、ＣＤ−１９、ＦＢＰ、ＴＡＧ−７２、ＣＥＡ、ＣＤ１７１、ＩＬ−１３受容体、Ｇ（Ｄ）２、ＰＳＭＡ、メソセリン、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、及びＣＤ３０からなる群から選択される。
【００１０】
[0010]  一部の実施形態において、キメラ抗原受容体は、抗メソセリン結合領域を含む。一部の実施形態において、抗メソセリン結合領域は、ｓｃＦｖである。
【００１１】
[0011]  一部の実施形態において、単核細胞は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、又はＰＢＭＣからなる群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
図面の簡単な説明
【図１】[0012]一過性に発現されるＣＡＲ（ＭＣＹ−Ｍ１１）のインビトロ発現を実証する図である。
【図２】[0013]ＭＣＹ−Ｍ１１が、ヌードマウスにおいて、ヒトメソセリン発現腫瘍（ＩＤ８）細胞の増殖を阻害することを実証する図である。
【図３】[0014]ＭＣＹ−Ｍ１１の複数回（毎週）投与が、全生存期間の延長の恩恵をもたらすことを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
詳細な説明
[0015]  用語「一過性のトランスフェクション」及び「一過性に修飾すること」は、核ゲノム中に挿入されることとなる核酸分子の導入が生じないトランスフェクションプロセスを用いた、細胞中への核酸分子の導入を指す。したがって、導入された核酸分子は、細胞が有糸分裂を経験するにつれて、失われる。適切なあらゆるトランスフェクション方法が用いられてもよい。一部の実施形態において、トランスフェクション方法は、物理的方法である。一部の実施形態において、トランスフェクション方法は、化学的方法である。一部の実施形態において、トランスフェクション方法は、リポフェクション法である。一部の実施形態において、トランスフェクション方法は、エレクトロポレーションである。一部の実施形態において、トランスフェクション方法は、マイクロフルイディクスである。一部の実施形態において、トランスフェクション方法は、バイオリスティック粒子送達システム法（例えば「遺伝子ガン」）である。一部の実施形態において、トランスフェクション方法は、リン酸カルシウムトランスフェクション法である。一部の実施形態において、トランスフェクション方法は、デンドリマーアシストトランスフェクション、カチオン性ポリマートランスフェクション、fugene、ナノ粒子アシストトランスフェクション、ソノポレーション、光学トランスフェクション、流体力学的送達、インペイルフェクション、及び粒子砲撃からなる群から選択される。これに対して、「安定したトランスフェクション」は、導入された核酸分子をゲノム中に組み込んだ細胞が選択されるトランスフェクションプロセスを指す。このように、安定してトランスフェクトされた核酸は、細胞、及び有糸分裂後のその娘細胞のゲノム内で、そのままである。用語「一過性に発現すること」は、一過性にトランスフェクトされた細胞内での核酸分子の一過性の発現を指す。
【００１４】
[0016]  本開示における用語「又は」の使用は、明示的に示されない限り、代替物のみを、又は代替物が互いに相容れないことを指すための「及び／又は」を意味するのに用いられるが、本開示は、代替物のみ、及び「及び／又は」を指す定義を支持する。
【００１５】
[0017]  用語「約」は、本明細書中で、値が、当該値を決定するのに使用されることとなる装置又は方法についての誤差の標準偏差を含むことを示すのに用いられる。
【００１６】
[0018]  文言「a」及び「an」は、請求項又は明細書中の文言「含む」と共に用いられる場合、別段の定めがない限り、１つ以上を表す。
【００１７】
[0019]  本明細書中で用いられる用語「長期投与」は、期間（例えば毎週、毎月、毎年その他）にわたる、複数回用量での、本開示の一過性にトランスフェクトされたＣＡＲ細胞の投与を含む。一部の実施形態において、以前の用量の細胞がＣＡＲをもはや発現しなくなるまで、以降の用量は投与されない。一部の実施形態において、本開示の一過性にトランスフェクトされたＣＡＲ細胞は、再発が起こるまで、又は患者が疾患の進行を示すまで、患者に投与される。一部の実施形態において、本開示の一過性にトランスフェクトされたＣＡＲ細胞は、患者の病徴が改善するまで、癌バイオマーカーの発現が変わるまで、癌のサイズ／罹患率が引き下げられ、若しくは改善される（例えば部分奏効）まで、又は癌がもはや検出可能でなくなる（例えば、完全奏効）まで、投与される。
【００１８】
[0020]  用語「非刺激」（本明細書中で用語「静止」と互換的に用いられる）は、例えばサイトカイン又は抗原によって、活性化されなかった細胞を指す。一部の実施形態において、非刺激細胞は、刺激された細胞によって発現されるマーカーを発現しない。一部の実施形態において、非刺激細胞は、ＰＤ１、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２５、ＣＸＣＲ３、及び／又はＣＣＲ４を発現しない。
【００１９】
キメラ抗原受容体を一過性に発現する細胞組成物
[0021]  一部の態様において、本開示は、ＤＮＡの代わりにｍＲＮＡを細胞にロードすることによって製造される一過性にトランスフェクトされた単核細胞を含む、又はそれからなる組成物を提供する。一部の実施形態において、組成物は、一過性にトランスフェクトされた単核細胞の細胞集団である。一部の実施形態において、一過性にトランスフェクトされた細胞は、米国特許第９，６６９，０５８号に記載されるプロセスを用いて製造される。この特許は、全ての目的について、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【００２０】
[0022]  ｍＲＮＡの細胞へのローディングは、とりわけ、静止細胞、及び患者に注入されることとなる細胞に関して、いくつかの利点をもたらし、そしてＤＮＡトランスフェクションに関連した問題を克服する。第１に、ｍＲＮＡは、プラスミドＤＮＡのローディングと比較して、細胞毒性が最小となる。これはとりわけ、静止細胞、例えば静止ＮＫ細胞及び末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のトランスフェクションについて、真である。また、ｍＲＮＡは、発現されることとなる細胞核に入る必要がないため、静止細胞は、ロードされたｍＲＮＡを容易に発現する。さらに、ｍＲＮＡは、核に運搬も、転写もプロセシングもされないため、細胞の細胞質中へのエントリの本質的に直後に翻訳が始められ得る。これにより、ｍＲＮＡによってコードされる配列の迅速な発現が可能となる。さらに、ｍＲＮＡは、複製もしないし、細胞の遺伝性の遺伝的物質を修飾もしない。一部の実施形態において、ｍＲＮＡは、エレクトロポレーションを介して細胞中にロードされる；ｍＲＮＡエレクトロローディングの種々の研究が報告されている（１８〜２１）。
【００２１】
[0023]  一部の実施形態において、本開示は：キメラ受容体をコードするｍＲＮＡによってコードされた導入遺伝子を一過性に発現する（これによって、キメラ受容体が、トランスフェクトされた単核細胞の表面上に発現される）トランスフェクトされた単核細胞；及び薬学的に許容されるキャリアを含む組成物を提供する。一部の実施形態において、単核細胞は、エレクトロポレーションによってトランスフェクトされる。本開示の一部の態様において、単核細胞は、静止単核細胞である。本開示の他の態様において、組成物は、凍結される。一部の実施形態において、トランスフェクトされる材料は、キメラ受容体をコードする、ＤＮＡプラスミド等のＤＮＡ、ウイルスベクター、又はウイルス様粒子を含有しない。特定の実施形態において、組成物は、非単核細胞から遊離する、又は実質的に遊離する。特定の態様において、組成物は、非単核細胞から約５０％〜約１００％遊離する。特定の態様において、組成物中の細胞の少なくとも約６０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約９９．５％、又は約９９．９％が、単核細胞である。一部の実施形態において、単核細胞は、ＰＢＭＣ、ＰＢＬ、リンパ球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、又は抗原提示細胞（ＡＰＣ）である。
【００２２】
[0024]  本開示は、キメラ抗原受容体をコードするｍＲＮＡで単核細胞をトランスフェクトする方法を提供し、これによれば、アフェレーシスから低温保存細胞治療までのプロセス全体が１日未満しかかからない。一部の実施形態において、修飾単核細胞を作製するプロセスは、ＣＡＲを一過性に発現する修飾細胞を製造する細胞を得るための白血球分離を含む。一部の実施形態において、白血球分離及び細胞のトランスフェクションは、治療開始の２週以上前に起こり、そして修飾細胞は、低温保存によって保存される（例えば、−１４０℃にて保存される）。一部の実施形態において、収率が少なくとも５．０×１０９細胞である白血球分離、及び細胞プロセシングは、複数回用量（例えば５．０×１０８細胞の少なくとも３回の毎週用量）に十分なトランスフェクト細胞を提供する。
【００２３】
[0025]  一部の実施形態において、このプロセスは、臨床スケールの製造について、最大２０×１０９末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）内へのｍＲＮＡ  ＣＡＲのトランスフェクションを可能にする。低温保存された細胞は、＞９５％の細胞内でＣＡＲの発現を示し、これは、腫瘍細胞を抗原特異的に認識して溶解させることができる。ＣＡＲの発現は、おおよそ７〜１０日にわたってインビトロで検出可能であり、ＣＡＲ発現の漸進的な低下が、インビトロ細胞増殖と相関する。これらの一過性にトランスフェクトされた細胞は、腫瘍をインビボで標的化する。例えば、マウスの卵巣癌モデルにおいて、抗メソセリンＣＡＲ（ＭＣＹ−Ｍ１１）の単回ＩＰ注射は、腫瘍増殖の用量依存的阻害を生じさせ、そしてマウスの全生存期間を向上させた。さらに、最適用量の毎週の反復的ＩＰ投与は、疾患制御及び全生存期間を長くした。
【００２４】
[0026]  本開示はまた、ＰＢＭＣ中に、そして特に抗原提示細胞（ＡＰＣ）中にキメラ抗原受容体をロードして、又は抗原プロセシング、抗原提示、細胞輸送、及び局在化の有効性、並びに対象／患者内の免疫調節環境の制御を増強する他の化学剤又は生物剤と共に、前記キメラ抗原受容体をロードして、治療組成物として新たに単離した（未感作）、修飾ＰＢＭＣの使用を促進することを、そして癌及び免疫疾患の処置方法を提供する。
【００２５】
[0027]  多様な源（末梢血、骨髄穿刺液、吸引脂肪、組織特異的潅流液／単離物）から得られる単核細胞は効果的に、ｍＲＮＡ並びに化学剤及び／又は生物剤が、制御下でロードされ得る。一部の実施形態において、単核細胞は、電気エネルギーを用いてロードされて（その後、エレクトロローディングと呼ばれる）、所望のレベル及び調節期間の分子経路が得られる。分子経路の制御された介入により、対象／患者に投与して戻された場合に細胞の生物活性に影響を与えることで、無修飾の、新たに単離した細胞の投与において、普通であれば提供されない効能及び効力を軽減する能力を増強する手段が提供される。
【００２６】
ナチュラルキラー細胞
[0028]  特定の実施形態において、本開示は、高増殖性疾患及び／又は癌の処置において、遺伝的に修飾されたナチュラルキラー細胞を使用する。ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）は、インターフェロン又はマクロファージ由来のサイトカインに応答して活性化される一種の細胞毒性リンパ球であり、ウイルスによって感染された腫瘍及び細胞の排除において重要な役割を果たす。ＮＫ細胞は、標的細胞を死なせるパーフォリン及びグランザイムと呼ばれる小さな細胞質顆粒を放出することによって、癌細胞及びウイルス感染細胞を死滅させる。
【００２７】
[0029]  ＮＫ細胞は、その表面上でのＴ細胞受容体（ＣＤ３）の欠如、及びＣＤ５６の発現によって特徴付けられる。したがって、これらの特徴は、ＮＫ細胞を他の細胞型から分けるのに用いられてもよい。細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）と対照的に、ＮＫ細胞は、抗原活性化を必要とせず、そしてＭＨＣ制限されない。
【００２８】
[0030]  癌細胞は、ＮＫ細胞による死滅を回避し得る。なぜなら、癌細胞上の自己ＨＬＡ分子が、キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）に結合して、ＮＫ細胞死滅を阻害することができるからである。本開示は、この阻害を克服して、癌細胞のＮＫ細胞死滅を促進する方法及び組成物を提供する。
【００２９】
Ｔ細胞
[0031]  一部の実施形態において、本開示は、高増殖性疾患及び／又は癌の処置において、細胞媒介性免疫において役割を果たす、遺伝的に修飾されたＴ細胞を使用する。Ｔ細胞を他のリンパ球、例えばＢ細胞及びＮＫ細胞から区別し得る一方法が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞表面上の存在によるものである。ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ペプチド及びＢ７ファミリメンバーによるＴ細胞上でのＴ細胞受容体及びＣＤ２８の双方の係合を通して起こる。ＣＤ２８共刺激の不在下での抗原についてのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の係合は、クローンアネルギーと呼ばれる長期反応性低下状態をもたらし得る（２２）。アネルギー性Ｔ細胞は、ＴＣＲ及びＣＤ２８を介した再刺激の直ぐ後に、欠陥のあるＩＬ−２の産生及び増殖を示し、そして他のサイトカインを、引き下げられたレベルにて産生する。アネルギーは、末梢トレランスの一機構を表し得（２３）、そして非産生的な抗腫瘍免疫の状況において、インビボで起こることが報告されている（２４）。
【００３０】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
[0032]  キメラ抗原受容体は、通常、標的細胞表面上の特異的抗原を認識する細胞外抗原結合ドメイン、及び細胞質内の活性化／刺激ドメインを含む。
【００３１】
[0033]  キメラ抗原受容体は、いくつかのドメイン、シグナルペプチド又はリーダー配列を含有するエクトドメイン、抗原結合ドメイン、スペーサー領域、膜貫通ドメイン、及びシグナリング領域を含有するエンドドメインのいずれかを含んでもよい。一部の実施形態において、ＣＡＲは、リーダー配列、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナリングドメインを含む。
【００３２】
[0034]  抗原結合ドメインとして、注目する抗原に結合することとなるあらゆるドメインが挙げられ得る。一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、抗体配列、その変異体又はフラグメントを含有する。一部の実施形態において、抗体配列は、以下に限定されないが、ＣＨ１、ＣＨ２、若しくはＣＨ３ドメイン、重鎖、軽鎖、ｓｃＦｖ、ドメイン抗体、二重特異的抗体、ＣＤＲ、Ｆａｂ領域、Ｆｖ、Ｆｃ領域、又はそれらのフラグメントを含む。一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、受容体若しくはリガンド配列、又はそのフラグメントであってもよい。一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、腫瘍抗原又は腫瘍関連抗原に結合する。
【００３３】
[0035]  抗原結合ドメインは、通常、死滅のために標的化されることとなる細胞に基づいて選択されることとなる。例えば、ＣＤ１９が、Ｂ系列細胞、そして故に多くのＢ細胞癌上で発現される。したがって、白血病Ｂ細胞を死滅させるために、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体が、ＰＢＭＣ、例えばＮＫ細胞の表面上で発現されて、修飾ＮＫ細胞と標的Ｂ細胞との相互作用を増強することができる。ゆえに、一部の実施形態において、キメラ抗原受容体は、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体である。一部の実施形態において、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体は、４−１ＢＢ細胞間ドメイン及びＣＤ３ζドメインとコンジュゲートする一本鎖抗体をコードする抗ＣＤ１９ＢＢｚ  ＣＡＲである。
【００３４】
[0036]  特定の実施形態において、キメラ抗原受容体は、抗ＣＤ２０、抗ＦＢＰ、抗ＴＡＧ−７２、抗ＣＥＡ、抗炭酸脱水酵素ＩＸ、抗ＣＤ１７１、抗ＩＬ−１３受容体、抗Ｇ（Ｄ）２、抗ＰＳＭＡ、抗メソセリン、抗Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、又は抗ＣＤ３０キメラ抗原受容体である。これらの抗原に向けられるＣＡＲは、これらの抗原を発現する細胞と関連する疾患を処置するのに用いられ得る。例えば、これらの抗原は、少なくとも以下の腫瘍：ＣＤ−１９（白血病）、ＦＢＰ（卵巣）、ＴＡＧ−７２（結腸直腸）、ＣＥＡ（結腸直腸、乳、胃）、炭酸脱水酵素ＩＸ（腎臓）、ＣＤ１７１（神経芽細胞腫）、ＩＬ−１３受容体（神経膠芽腫）、Ｇ（Ｄ）２（神経芽細胞腫）、ＰＳＭＡ（前立腺）、メソセリン（膵臓）、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ（骨髄腫）、又はＣＤ３０（皮膚リンパ腫）と関連した。
【００３５】
[0037]  膜貫通ドメインは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合する。膜貫通ドメインは、天然源に由来しても合成源に由来してもよい。一部の実施形態において、膜貫通ドメインは、あらゆる膜結合タンパク質又は膜貫通タンパク質に由来する。一部の実施形態において、膜貫通は、以下に限定されないが、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、又はゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む群から選択される。
【００３６】
[0038]  一部の実施形態において、膜貫通ドメインはまた、ヒンジドメインを含んでもよい。一部の実施形態において、ヒンジドメインは、ＣＤ８ａヒンジドメインである。他の実施形態において、ヒンジドメインは、ＩｇＧヒンジドメインである。
【００３７】
[0039]  ＣＡＲの細胞質ドメイン（細胞内シグナリングドメインとも呼ぶ）は、トランスフェクトされた免疫細胞の通常のエフェクタ機能の少なくとも１つの活性化を担う。用語「エフェクタ機能」は、細胞の特殊化された機能を指す。Ｔ細胞のエフェクタ機能は、例えば、サイトカインの分泌が挙げられる細胞溶解活性又はヘルパー活性であってもよい。ゆえに、用語「細胞内シグナリングドメイン」は、エフェクタ機能シグナルを伝達するタンパク質の部分を指し、細胞に、特殊化された機能を実行するように指示する。通常、細胞内シグナリングドメインの全体が使用され得る一方、多くの場合、鎖の全体を用いることは必須でない。細胞内シグナリングドメインの切頂部分が用いられる範囲で、そのような切頂部分は、エフェクタ機能シグナルを伝達する限り、無傷の鎖の代わりに用いられてもよい。ゆえに、用語細胞内シグナリングドメインは、エフェクタ機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナリングドメインのあらゆる切頂部分を含むことを意味する。
【００３８】
[0040]  一部の実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、抗原受容体係合の後にシグナル伝達を開始するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）及び共受容体の細胞質配列から選択される。一部の実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、以下に限定されないが、ＴＣＲゼータ、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄを含む群から選択される。
【００３９】
[0041]  一部の実施形態において、本開示のＣＡＲは、共刺激シグナリング領域を含む。共刺激シグナリング領域は、共刺激分子の細胞内ドメインを含む一部のＣＡＲを指す。共刺激分子は、抗原に対するリンパ球の有効な応答に必要とされる、抗原受容体以外の細胞表面分子又はそのリガンドである。そのような分子の例として、以下に限定されないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンド等が挙げられる。本開示の特定の態様において、キメラ受容体は、細胞内ドメインを含有しない。特定の実施形態において、キメラ受容体は、ＣＤ２８細胞内ドメインを含有しない。
【００４０】
[0042]  一部の実施形態において、本開示のＣＡＲは、リーダー配列を含む。一部の実施形態において、リーダー配列はＣＤ８である。
【００４１】
[0043]  一部の実施形態において、本開示のＣＡＲは、抗メソセリン結合ドメイン、共刺激シグナリング領域、及びシグナリング領域を含む。一部の実施形態において、本開示のＣＡＲは、ヒト抗Ｍｅｓｏ  ＳｃＦｖ、ＣＤ８ａ膜貫通領域、４−１ＢＢ共刺激シグナリング領域、及びＣＤ３ゼータシグナリング領域をコードするｍＲＮＡである。一部の実施形態において、本開示のＣＡＲは、ＣＤ８ａリーダー、ヒト抗Ｍｅｓｏ  ＳｃＦｖ、ＣＤ８ａ膜貫通領域、４−１ＢＢ共刺激シグナリング領域、及びＣＤ３ゼータシグナリング領域をコードするｍＲＮＡである。
【００４２】
[0044]  一部の実施形態において、本開示のＣＡＲは、ｓｃＦＶ−αＭＥＳＯ−Ｈ、膜貫通ドメイン、４−１ＢＢ、及びＣＤ３ζのペプチドドメインを含むヒトｍＲＮＡ  ＣＡＲである。一部の実施形態において、ペプチドドメインは連続している。一部の実施形態において、トランスフェクトされた細胞集団は、ｓｃＦＶ−αＭＥＳＯ−Ｈ、膜貫通ドメイン、４−１ＢＢ、及びＣＤ３ζの連続したペプチドドメインのヒトＣＡＲをコードするｍＲＮＡでトランスフェクトされた、非増殖型自己由来末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。この細胞集団生成物／治療薬は、ＭＣＹ−Ｍ１１とも呼ばれる。ＭＣＹ−Ｍ１１は、メソセリン発現細胞に結合し、ＣＤ３ζ及び共刺激分子４−１ＢＢを介した以降のＴ細胞活性化が、Ｔ−細胞依存性抗腫瘍活性を活性化する。
【００４３】
[0045]  一部の実施形態において、ＮＫ、Ｔ、ＰＢＬ、又はＰＢＭＣ細胞内で発現したキメラ受容体は、ＮＫ、Ｔ、ＰＢＬ、又はＰＢＭＣ細胞に直接連結して、細胞を標的化し、そして結果的に、ＮＫ又はＴ細胞は、標的細胞を死滅させることができる。この機構の下で、標的細胞の死滅は、ＨＬＡ型関連ＮＫ細胞死滅阻害、及びＴ細胞によって誘導される標的細胞死滅についてのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）要件を回避することができる。本開示の一実施形態において、キメラ受容体は、４−１ＢＢ細胞内ドメイン及びＣＤ３ζドメインとコンジュゲートする一本鎖抗体を含む抗ＣＤ１９キメラ受容体である。キメラ抗原受容体分子は、米国特許出願公開第２００４／００３８８８６号に記載されており、この出願は、全ての目的について、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【００４４】
高増殖性疾患
[0046]  本開示の組成物は、高増殖性疾患又は高増殖性病変の処置及び予防に用いられてもよい。高増殖性疾患は、その病理の一部として、細胞数の増大が異常なあらゆる疾患又は症状である。高増殖性疾患として、以下に限定されないが、良性の症状、例えば良性の前立腺肥大及び卵巣嚢胞、並びに前悪性病変、例えば扁平上皮過形成及び悪性癌が挙げられる。高増殖性病変の例として、以下に限定されないが、扁平上皮細胞過形成病変、前悪性上皮病変、乾癬の病変、皮膚疣贅、爪周囲疣贅、肛門性器疣贅、疣贅状表皮発育異常症、上皮内腫瘍性病変、巣状上皮性過形成、結膜パピローマ、結膜癌腫、又は扁平上皮癌腫病変が挙げられる。高増殖性疾患又は高増殖性病変に、あらゆる細胞型の細胞、例えばケラチン生成細胞、上皮細胞、皮膚細胞、及び粘膜細胞が関与し得、そして通常の細胞と比較して、個々の細胞のサイズの増大が関連しても関連しなくてもよい。
【００４５】
癌
[0047]  本開示は、癌の処置及び予防のための方法及び組成物を提供する。癌は、主要な死因の１つであり、米国において毎年おおよそ５２６，０００人の死亡の原因となっている。本明細書中で用いられる用語「癌」は、細胞の増殖（growth or proliferation）が制御不能な組織、例えば腫瘍と定義される。
【００４６】
[0048]  癌は、遺伝的変更の蓄積を通して発達して（２５）、正常な周囲細胞に勝る増殖優位性を得る。正常な細胞の、新生細胞への遺伝的変換は、一連の進行性の工程を通して起こる。遺伝的進行モデルは、一部の癌、例えば頭頸部癌において研究されてきた（２６）。あらゆるタイプの癌の処置及び予防が、本開示によって意図される。本開示はまた、癌の履歴がある対象における癌の予防方法を意図する。
【００４７】
[0049]  一部の実施形態において、本明細書中で開示される組成物及び方法は、癌又は制御不能の細胞増殖を処置するのに用いられてもよい。一部の実施形態において、本明細書中で開示される組成物及び方法は、転移、又は制御不能の細胞増殖を予防し、阻害し、改善し、又は低下させるのに用いられる。一部の実施形態において、本明細書中で開示される組成物及び方法は、腫瘍サイズを低下させるのに用いられる。一部の実施形態において、本明細書中で開示される組成物及び方法は、癌バイオマーカー発現を変更するのに用いられる。
【００４８】
[0050]  一部の実施形態において、癌は固形癌である。一部の実施形態において、癌は非固形癌である。一部の実施形態において、本開示は、以下に限定されないが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫（例えば、小児小脳又は大脳）、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨腫瘍（例えば、骨肉腫、悪性線維性組織球腫）、脳幹神経膠腫、脳癌、脳腫瘍（例えば、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、視経路神経膠腫、及び視床下部神経膠腫）、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、中枢神経系リンパ腫、小脳性星状細胞腫、頸部癌、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性脊髄増殖性障害、結腸癌、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼癌、胆嚢癌、胃癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍（例えば、頭蓋外、性腺外、卵巣）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫（例えば、脳幹、大脳星状細胞腫、視経路、及び視床下部）、胃癌腫、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞（肝臓）癌、下咽頭癌、視床下部神経膠腫及び視経路神経膠腫、眼内黒色腫、島細胞癌（膵臓内分泌部）、腎癌（腎細胞癌）、喉頭癌、白血病（例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄白血病、有毛細胞）、口唇癌及び口腔癌、脂肪肉腫、肝癌、肺癌（例えば、非小細胞、小細胞）、リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連、バーキット、皮膚Ｔ細胞ホジキン、非ホジキン、中枢神経系原発）、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性扁平上皮頸部癌、口癌、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／脊髄増殖性疾患、骨髄性白血病、骨髄白血病、骨髄白血病、脊髄増殖性障害、慢性鼻腔癌及び副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、口腔癌、口咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、膵癌、副鼻腔及び鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、クロム親和性細胞腫、松果体星状細胞腫及び／又は胚腫、松果体芽腫及びテント上原始神経外胚葉性腫瘍、下垂体腺腫、形質細胞腫瘍形成／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、中枢神経系原発性リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌（腎癌）、腎盤及び尿管、網膜芽腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫（例えば、ユーイングファミリー、カポジ、軟組織、子宮）、セザリー症候群、皮膚癌（例えば、非黒色腫、黒色腫、メルケル細胞）、小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉腫、扁平上皮細胞癌、扁平上皮頸部癌、胃癌、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、喉癌、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺癌、絨毛腫瘍、尿管癌及び腎盂癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、視経路神経膠腫及び視床下部神経膠腫、陰門癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、並びにウィルムス腫瘍が挙げられる癌に関する。一部の実施形態において、癌細胞は、メソセリンを発現する。一部の好ましい実施形態において、癌は、卵巣癌、上皮卵巣癌、原発性腹膜癌、卵管癌、���膜中皮腫、肋膜中皮腫、非小細胞肺癌（扁平上皮又は非扁平上皮）、三種陰性乳癌、結腸直腸癌、胆管癌、胃癌、胃食道癌、膵癌、及び胸腺癌からなる群から選択される。
【００４９】
[0051]  一部の実施形態において、癌は、処置に対して難治性である、又は耐性を示す。一部の実施形態において、癌は、再発した、又は進行したものである。一部の実施形態において、癌は、寛解期にある。一部の実施形態において、癌は、部分奏効を実証してきた。
【００５０】
メソセリン及び癌免疫療法
[0052]  卵巣癌
[0053]  卵巣癌は典型的に、卵巣、原発性腹膜、又は卵管の腫瘍を含む。まとめて、卵巣癌として一般的に記載される腫瘍のこのグループ分けは、女性において５番目に最も共通する癌であり、米国での癌の死因として第５位にランクされる。２０１７年のNIH SEERデータに従えば、米国において、２２，４４０人の女性が卵巣癌と診断され、そして１４，０８０人の女性が卵巣癌で死亡することとなると推定される。
【００５１】
[0054]  これらの女性のおおよそ９０％が、卵巣、原発性腹膜、又は卵管の高悪性度漿液腺癌を有する。メソセリンの発現が、８０％超の上皮卵巣癌において起こる［２］。疾患が進行した女性の７０％超が、最適な減量手術に続くプラチナ−タキサンベースの化学療法に応答するが、応答の期間は典型的に、２年未満であり、再発が一般的である。サルベージ治療レジメンに対する以降の応答は、化学療法に対する腫瘍の漸増抵抗に起因して、短い（６ヶ月未満）傾向がある。再発したプラチナ製剤抵抗性の卵巣癌は、大きなチャレンジを表す。ドキソルビシン、トポテカン、及びゲムシタビン等の二次治療に対する奏効率は、２０％の範囲内にあり、メジアン全生存期間は、１年未満である［３〜５］。
【００５２】
[0055]  プラチナ製剤抵抗性卵巣癌の患者は、しばしば、広範な腹膜疾患を伴う進行性疾患を有する。現在の標準的な化学療法の選択肢は、滅多に有効でなく、せいぜい短期的な恩恵しかない。疾患が進行した患者は、調査中の剤についての臨床治験の適切な候補である。
【００５３】
[0056]  悪性腹膜中皮腫
[0057]  悪性腹膜中皮腫（ＭＰＭ）は、臓側腹膜又は側壁腹膜のいずれかの漿膜面から生じる稀なタイプの中皮腫であり、全中皮腫のおおよそ３０％を表す［６］。上皮様（最も高頻繁）、肉腫様、又は二相性が挙げられる３つの基本的な組織構造型がある。肉腫様中皮腫は、極めて稀である。メソセリンの発現が、上皮様中皮腫の患者のほぼ１００％で起こる。二相性型中皮腫の患者は、上皮成分のパーセンテージに応じて、メソセリン発現のレベルが可変的である。肉腫様中皮腫は、メソセリンの低い発現を実証する。
【００５４】
[0058]  米国において、全体的な罹患率は、１００万人あたりおおよそ１〜２患者であり、推定出現率は、一年毎に、２００〜４００人の新患である。稀である一方、出現率は、過去２０年にわたって、アスベストへの曝露の増大についての主なリスク要因と関連して、増大してきた。これは、５０〜６９歳の年齢群の罹患率が最も高いが、あらゆる年齢群で起こり得、男性の間で症状がより共通し、続いてアスベストへの男性のより高い職業的曝露が考えられる。
【００５５】
[0059]  ＭＰＭの患者は、予後が極めて悪く、メジアン生存期間が６〜１２ヶ月である。外科的切除がＭＰＭの最適な治療である一方、ほとんどの患者は、切除可能でない疾患の進行を呈する。切除不能な疾患の患者は、シスプラチン又はカルボプラチン等のプラチナベースの剤と組み合わせたペメトレキセドによる、対症的目的の一次化学療法が企てられる。進行性疾患の患者は、以降の化学療法による、制限的且つ短期的な応答を実証し、臨床治験を通して調査中の治療に適している。
【００５６】
[0060]  メソセリン及び癌免疫療法
[0061]  全長メソセリン遺伝子は、７１ｋＤａの前駆体タンパク質（これは、巨核球増強因子（ＭＰＦ）と呼ばれる３１ｋＤａの可溶性の放出フラグメントにプロセシングされる）及びメソセリン（ＭＥＳＯ）と呼ばれる４０ｋＤａの膜結合タンパク質をコードする。ＭＥＳＯは、卵巣の高悪性度漿液腺癌（７５％）、膵臓腺癌（８５％）、三種陰性乳癌（６６％）、及び上皮様中皮腫（９５％）が挙げられる多くのヒト癌において、高度に発現される［７］。
【００５７】
[0062]  正常な細胞上でのＭＥＳＯの機能は必須ではない一方、癌細胞上でのＭＥＳＯの発現は、癌の病理に寄与し得、発現が高いほど、悪い予後、転移拡散の増大、及び細胞増殖経路の活性化と関連する［７］。ＭＥＳＯは、ＭＥＳＯ発現悪性腫瘍を有する患者用の治療標的化の重要な機会を提供する一方、ＭＥＳＯを発現する正常な細胞の毒性について、リスクが低い。
【００５８】
[0063]  この重要な治療指標の機会（opportunity for significant therapeutic index）は、全身のＭＥＳＯ発現中皮細胞の必須ではない機能に起因する。
【００５９】
[0064]  ｍＲＮＡを用いたＭｅｓｏ標的ＣＡＲ  Ｔ細胞は、腫瘍内、腹腔内（ＩＰ）、及び静脈内（ＩＶ）の投与経路による臨床前研究及び臨床研究において、重要な将来性を実証してきた［１０〜１２］。重要なことに、Ｍｅｓｏ標的ｍＲＮＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、反復的な投薬による前臨床研究において、抗腫瘍実現可能性、忍容性、及び効力を実証した。ペンシルベニア大学（University of Pennsylvania）にて、ｍＲＮＡ修飾を用いてＭＥＳＯを標的化するように操作されたＣＡＲ  Ｔ細胞のフェーズ１臨床研究は、膵癌を有する６人の患者の実行可能且つ安全な処置を実証した［１０、１１］。この研究は、５４回の計画的なＣＡＲ  Ｔ細胞点滴のうちの５３回が、ＩＶ療法によって投与されて、忍容性が優れ、そしてＢ細胞悪性腫瘍におけるＣＡＲ  Ｔ細胞治療へのウイルスベクターアプローチを主に制限してきたサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の証拠がないことを実証した。加えて、オンターゲット／オフ腫瘍（on-target/off-tumor）メソセリン関連毒性の証拠が、正常な組織においてなく、肋膜、心膜、又は腹膜の毒性も報告されなかった。また、抗腫瘍活性の放射線学的徴候による見込みのある臨床活性の証拠もあった。また、相関薬力学的研究も支えとなり、ｍＲＮＡ  ＭＥＳＯ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のインビボ持続性及び腫瘍輸送を実証した。
【００６０】
[0065]  免疫学的活性が、ｍＲＮＡ  ＭＥＳＯ  ＣＡＲ  Ｔ細胞点滴後の体液エピトープ拡散の誘導の実証によって支持された。ＭＥＳＯに対して向けられるＣＡＲ療法のこの早期の臨床研究は、この見込のあるアプローチの更なる開発が進行するための実現可能性、安全性、及び抗腫瘍活性を強く支持する。
【００６１】
[0066]  ｍＲＮＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞アプローチの開発に必要不可欠であったのが、イクスビボ細胞操作にとって高度に有効な系、MaxCyte GT（商標）の開発であった。この系は、ペンシルベニア大学の臨床研究において、ｍＲＮＡ  ＭＥＳＯ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の製造に利用された。MaxCyte GT（商標）系は、自動化された、ロバストな、現在のGood Manufacturing Practice（ｃＧＭＰ）細胞プロセシング、及び造血細胞プロセシング用に備えられたあらゆる臨床施設にて数時間で完了され得る閉鎖系における製造を可能にする。この系を用いて、ＣＡＲＭＡとして知られているあらゆるｍＲＮＡ修飾ＣＡＲ  Ｔ細胞が、抗原特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞治療についての潜在的臨床試験用に作製され得る。Ｍｅｓｏ標的ＣＡＲ  Ｔ細胞による先の研究と類似して、ヒトメソセリンに特異的なＣＡＲＭＡ（ＭＣＹ−Ｍ１１）は、臨床前研究及び臨床研究において同定された、安全性、有効性、及び細胞製造利点の全てを組み込んだ、ＭＥＳＯ発現悪性腫瘍を有する患者にとって臨床的に有効且つ十分に耐容性のある細胞免疫治療を開発する特有の機会を提供する。
【００６２】
医薬組成物
[0067]  対象への投与用のトランスフェクトされた細胞の医薬組成物が、本開示によって考えられる。当業者であれば、対象に細胞を投与する技術に精通しているであろう。さらに、当業者であれば、対象への投与前の当該細胞の調製に必須の技術及び医薬用試薬に精通しているであろう。本開示の特定の実施形態において、医薬組成物は、ＣＡＲを一過性に発現するように修飾された、トランスフェクトされた細胞を含む水性組成物となろう。特定の実施形態において、トランスフェクトされた細胞は、対象から得られた細胞（すなわち、自己由来細胞）を用いて調製される。特定の実施形態において、トランスフェクトされた細胞は、ドナーから得られた細胞（すなわち、同種異系細胞）を用いて調製される。特定の実施形態において、トランスフェクトされた細胞は、細胞培養から得られた細胞を用いて調製される。本開示の医薬組成物は、薬学的に許容されるキャリア又は水性媒体中の、有効量のトランスフェクトされた細胞の溶液を含む。本明細書中で用いられる「医薬品」又は「医薬組成物」は、あらゆる全ての溶媒、分散系媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤、並びに吸収遅延剤等を含む。医薬活性物質へのそのような媒体及び剤の使用は、当該技術において周知である。従来のあらゆる媒体又は剤は、トランスフェクトされた癌細胞と適合しない限りは、治療組成物への使用が考えられる。また、補完活性成分が、組成物中に組み込まれてもよい。ヒト投与のために、調製は、FDA Center for Biologicsによって求められる滅菌状態、発熱性、一般的な安全性、及び純度の基準を満たすべきである。トランスフェクトされた癌細胞は、知られているあらゆる経路による、例えば、皮下注射、筋肉内注射、脈管内注射、腫瘍内注射、静脈内注射、肋膜投与、局所塗布、腹腔内注射、又は他のあらゆる経路による塗布による投与用に製剤化されてもよい。当業者であれば、他のあらゆる経路による注射又は塗布用の滅菌溶液を生成する技術に精通しているであろう。
【００６３】
投与
[0068]  本開示の組成物は、適切なあらゆる手段を介して投与されてよい。一部の実施形態において、核酸は、経皮的に、注射を介して、筋肉内に、皮下に、経口的に、経鼻的に、膣内に、経直腸的に、経粘膜的に、経腸的に、非経口的に、局所的に（例えば術後部位に）、硬膜外に、大脳内に、脳室内に、動脈内に、関節内に、皮内に、病巣内に、眼内に、骨内に、腹膜内に、髄腔内に、子宮内に、静脈内に、膀胱内点滴で、又は硝子体内に投与される。好ましい投与経路は、腹膜内又は静脈内による。
【００６４】
[0069]  一部の実施形態において、投与経路は、処置されることとなる疾患によって決まる。一部の実施形態において、静脈内投与が、上皮卵巣癌、原発性腹膜癌、卵管癌、腹膜中皮腫、肋膜中皮腫、非小細胞肺癌（扁平上皮又は非扁平上皮）、三種陰性乳癌、結腸直腸癌、胆管癌、胃癌、胃食道癌、膵癌、及び胸腺癌の処置に好まれ得る。他の実施形態において、腹腔内投与が、上皮卵巣癌、原発性腹膜癌、卵管癌、及び腹膜中皮腫の処置に好まれ得る。
【００６５】
[0070]  投与されることとなる細胞数の決定は、当業者によってなされることとなり、そして癌の程度及び重症度に、そして、トランスフェクトされた細胞が、既存の癌の処置又は癌の予防のために投与されているかに部分的に依存することとなる。トランスフェクトされた細胞を含有する医薬組成物の調製は、本開示を考慮して、当業者に理解されるであろう。
【００６６】
[0071]  適切な用量のあらゆる数の細胞が投与されてもよい。一部の実施形態において、トランスフェクトされた細胞は、約１×１０７〜約１×１０１０細胞の用量にて投与される。一部の実施形態において、トランスフェクトされた細胞は、用量あたり約１×１０７、約５×１０７細胞、約１×１０８、約５×１０８細胞、約１×１０９、約５×１０９細胞、約１×１０１０細胞、又はそれ以上の用量にて投与される。一部の実施形態において、用量は、約１×１０７細胞である。一部の実施形態において、用量は、約５×１０７細胞である。一部の実施形態において、用量は、約１×１０８細胞である。一部の実施形態において、用量は、約５×１０８細胞である。
【００６７】
[0072]  トランスフェクトされた細胞は、対象の治療レジメンの一部である他の剤、例えば、他の免疫治療、チェックポイントインヒビタ、免疫治療薬、標的剤、化学療法、及び／又は放射線と共に投与されてもよい。本開示の組成物と組み合わせて用いられてもよい剤／治療レジメンの例として、以下に限定されないが、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、及び／又はＰＤ−Ｌ１を阻止する薬物、ＣＳＦ−１Ｒインヒビタ、ＴＬＲアゴニスト、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、アテゾリズマブ、アレムツズマブ、アベルマブ、オファツムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、リツキシマブ、デュルバルマブ、サイトカイン療法、インターフェロン、インターフェロン−α、インターロイキン、インターロイキン−２、樹状細胞療法（例えばシプリューセル−Ｔ）、ＣＨＯＰ、シクロホスファミド、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、ビノレルビン、ドキソルビシン、ドセタキセル、ブレオマイシン、ダカルバジン、ムスチン、プロカルバジン、プレドニゾロン、エトポシド、シスプラチン、エピルビシン、フォリン酸、並びにオキサリプラチンが挙げられる。本開示の組成物は、付加的な剤の前に投与されても、付加的な剤と同時に投与されても、付加的な剤の後に投与されてもよい。
【００６８】
[0073]  本開示は、患者に組成物を長期投与する方法を提供する。一部の実施形態において、患者は、３回以上の別個の用量を受ける。一部の実施形態において、患者に長期投与される用量は、各投与にて同じである。一部の実施形態において、患者に長期投与される用量は、投与の１回以上の例にて異なる。一部の実施形態において、最初の用量が最も高く、そして以降の用量がより低い。一部の実施形態において、以降のより低い用量は、同じである。一部の実施形態において、以降のより低い用量は、異なる。一部の実施形態において、最初の用量が最も低く、そして以降の用量がより高い。一部の実施形態において、以降のより高い用量は、同じである。一部の実施形態において、以降のより高い用量は、異なる。一部の実施形態において、各用量が異なる。
【００６９】
[0074]  一部の実施形態において、複数回用量は、相加作用を免疫系に及ぼす。一部の実施形態において、複数回用量は、相乗作用を免疫系に及ぼす。理論によって拘束されないが、一部の実施形態において、より早期の用量は、免疫寛容を壊し、そして以降の用量は、免疫系を再活性化させてから、免疫カスケードを生じさせる。一部の実施形態において、３回用量が投与される場合、第１の用量が免疫寛容を壊し、第２の用量が免疫系を再活性化させ、そして第３の用量が免疫カスケードを生じさせる。
【００７０】
[0075]  特定の態様において、複数回用量は、日、週、月、若しくは年、又はそれ以上の期間にわたって、長期投与されてもよい。一部の実施形態において、用量は、毎日、毎週、月２回、毎月、１ヶ月おき、６ヵ月毎、毎年、又はそれ以上で投与される。対象は、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、若しくは２０回、又はそれ以上の用量を受けてもよい。一部の実施形態において、用量は、毎週投与される。一部の実施形態において、用量は、１〜５２週間、毎週投与される。一部の実施形態において、用量は、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、又はそれ以上の週の間、毎週投与される。一部の実施形態において、以降の用量は、以前の用量の細胞がＣＡＲをもはや発現しなくなるまで、投与されない。一部の実施形態において、以降の用量は、以前の用量の１日後、３日後、又は７日後まで、投与されない。一部の実施形態において、以降の用量は、以前の用量がまだＣＡＲを発現する間に、投与される。一部の実施形態において、以降の用量は、以前の用量が投与された１日未満、３日未満、又は７日未満の後に、投与される。
【００７１】
[0076]  一部の実施形態において、患者は３週間、毎週、用量あたり約１×１０７細胞を投与される（約３×１０７細胞の総用量）。一部の実施形態において、患者は３週間、毎週、用量あたり約５×１０７細胞を投与される（約１５×１０７細胞の総用量）。一部の実施形態において、患者は３週間、毎週、用量あたり約１×１０８細胞を投与される（約３×１０８細胞の総用量）。一部の実施形態において、患者は３週間、毎週、用量あたり約５×１０８細胞を投与される（約１５×１０８細胞の総用量）。
【００７２】
[0077]  本開示のトランスフェクトされた細胞は、患者が再発するまで、若しくは疾患の進行の徴候を示すまで、病徴の向上、腫瘍サイズ、若しくは負荷の低下（例えば部分奏効）を示すまで、癌バイオマーカーの発現が変化するまで、患者が完全奏効を示すまで、又は患者の生活の質が向上するまで、長期投与されてもよい。これらの測定基準は、以下に限定されないが、画像化（例えば、ＣＡＴスキャン、ＭＲＩ）、病変の所見、バイオマーカーアッセイ（例えばＣＡ１２５試験）、又はアンケートが挙げられるあらゆる適切な手段によって測定されてもよい。
【００７３】
[0078]  トランスフェクトされた細胞は、対象に、対象内の腫瘍に、若しくはその近くに、又は腫瘍が対象から外科的に除去された部位に、投与されてもよい。他の実施形態において、トランスフェクトされた細胞は、例えば腫瘍内注射によって、腫瘍部位に局所的に投与される。しかしながら、トランスフェクトされた細胞が、治療効果を達成するために腫瘍部位に投与されることは、必須でない。ゆえに、特定の実施形態において、トランスフェクトされた細胞は、腫瘍部位から遠く離れた部位に投与されてもよい。医療従事者であれば、部分的に、高増殖性疾患のタイプ及び位置に基づいて、特定の対象にとって適した投与経路を決定することができるであろう。トランスフェクトされた細胞は、疾患部位に局所的に（locally）、疾患部位に局部的に（regionally）、又は全身的に投与されてもよい。一部の実施形態において、細胞は、静脈内注射、腹腔内注射、又はリンパ管内注射によって投与される。
【００７４】
[0079]  一部の実施形態において、トランスフェクトされた細胞は、（例えば、ドナーから、又は同じ対象から）末梢血が収集された時点から２週以内に患者に投与される。一部の実施形態において、トランスフェクトされた細胞は、末梢血が収集された時点から２週〜約１時間で患者に投与される。一部の実施形態において、トランスフェクトされた細胞は、末梢血が収集された時点から４８時間未満、２４時間未満、又は１２時間未満で患者に投与して戻される。本開示の特定の態様において、トランスフェクトされた細胞は、末梢血が収集された時点から約１〜４８時間、約１〜２４時間、約１〜１５時間、約１〜１２時間、約１〜１０時間、又は約１〜５時間以内に、患者に投与して戻される。ドナー及び処置されることとなる対象は、同じ人であっても異なる人々であってもよい。ゆえに、一部の実施形態において、細胞は、対象にとって自己由来である；そして他の実施形態において、細胞は、対象にとって同種異系である。
【００７５】
[0080]  一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、処置された患者において、腫瘍の増殖を予防し、改善し、低下させ、又は遅延させる。一部の実施形態において、腫瘍の増殖は、他の処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、処置された患者において、１日目から１０年目の間で予防され、改善され、低下し、又は遅延する。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者における腫瘍の増殖と比較して、約１日目、約２日目、約３日目、約４日目、約５日目、約６日目、約１週目、約２週目、約３週目、約４週目、約５週目、約６週目、約７週目、約８週目、約９週目、約１０週目、約２０週目、約３０週目、約４０週目、約５０週目、約６０週目、約７０週目、約８０週目、約９０週目、約１００週目、約１年目、約２年目、又は約３年目にて、腫瘍の増殖を予防し、改善し、低下させ、又は遅延させる。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者における腫瘍の増殖と比較して、約１日、約１週、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約１年、約２年、約５年、若しくは約１０年、又はそれ以上の間、腫瘍の増殖を予防し、改善し、低下させ、又は遅延させる。
【００７６】
[0081]  一部の実施形態において、腫瘍の増殖は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％低下する。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日目、約２日目、約３日目、約４日目、約５日目、約６日目、約１週目、約２週目、約３週目、約４週目、約５週目、約６週目、約７週目、約８週目、約９週目、約１０週目、約２０週目、約３０週目、約４０週目、約５０週目、約６０週目、約７０週目、約８０週目、約９０週目、約１００週目、約１年目、約２年目、又は約３年目にて、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％、腫瘍の増殖を引き下げる。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週、約２週、約３週、約４週、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約１年、約２年、約５年、若しくは約１０年、又はそれ以上の間、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％、腫瘍の増殖を引き下げる。
【００７７】
[0082]  一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、処置された患者において、癌バイオマーカー発現を引き下げる。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、処置された患者において、１日目から１０年目の間で、癌バイオマーカー発現を引き下げる。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日目、約２日目、約３日目、約４日目、約５日目、約６日目、約１週目、約２週目、約３週目、約４週目、約５週目、約６週目、約７週目、約８週目、約９週目、約１０週目、約２０週目、約３０週目、約４０週目、約５０週目、約６０週目、約７０週目、約８０週目、約９０週目、約１００週目、約１年目、約２年目、又は約３年目にて、癌バイオマーカー発現を引き下げる。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日、２日、３日、４日、５日、６日、約１週、約２週、約３週、約４週、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約１年、約２年、約５年、若しくは約１０年、又はそれ以上の間、癌バイオマーカー発現を引き下げる。
【００７８】
[0083]  一部の実施形態において、癌バイオマーカー発現は、他の処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％低下する。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日目、約２日目、約３日目、約４日目、約５日目、約６日目、約１週目、約２週目、約３週目、約４週目、約５週目、約６週目、約７週目、約８週目、約９週目、約１０週目、約２０週目、約３０週目、約４０週目、約５０週目、約６０週目、約７０週目、約８０週目、約９０週目、約１００週目、約１年目、約２年目、又は約３年目にて、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％、癌バイオマーカー発現を引き下げる。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週、約２週、約３週、約４週、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約１年、約２年、約５年、若しくは約１０年、又はそれ以上の間、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％、癌バイオマーカー発現を引き下げる。一部の実施形態において、癌バイオマーカーは、サイトカイン、ケモカイン、細胞表現型（例えば、ＦＡＣＳによって測定される）、メソセリン発現、巨核球増強因子（ＭＰＦ）、腫瘍抗原、及び／又は腫瘍関連抗原である。
【００７９】
[0084]  一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、処置された患者において、腫瘍サイズを引き下げる。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、処置された患者において、１日目から１０年目の間で、腫瘍サイズを引き下げる。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日目、約２日目、約３日目、約４日目、約５日目、約６日目、約１週目、約２週目、約３週目、約４週目、約５週目、約６週目、約７週目、約８週目、約９週目、約１０週目、約２０週目、約３０週目、約４０週目、約５０週目、約６０週目、約７０週目、約８０週目、約９０週目、約１００週目、約１年目、約２年目、又は約３年目にて、腫瘍サイズを引き下げる。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日、２日、３日、４日、５日、６日、約１週、約２週、約３週、約４週、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約１年、約２年、約５年、若しくは約１０年、又はそれ以上の間、腫瘍サイズを引き下げる。
【００８０】
[0085]  一部の実施形態において、腫瘍サイズは、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％低下する。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日目、約２日目、約３日目、約４日目、約５日目、約６日目、約１週目、約２週目、約３週目、約４週目、約５週目、約６週目、約７週目、約８週目、約９週目、約１０週目、約２０週目、約３０週目、約４０週目、約５０週目、約６０週目、約７０週目、約８０週目、約９０週目、約１００週目、約１年目、約２年目、又は約３年目にて、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％、腫瘍サイズを引き下げる。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週、約２週、約３週、約４週、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約１年、約２年、約５年、若しくは約１０年、又はそれ以上の間、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％、腫瘍サイズを引き下げる。
【００８１】
[0086]  一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、処置された患者において、癌の病徴を改善する。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、処置された患者において、１日目から１０年目の間で、癌の病徴を改善する。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日目、約２日目、約３日目、約４日目、約５日目、約６日目、約１週目、約２週目、約３週目、約４週目、約５週目、約６週目、約７週目、約８週目、約９週目、約１０週目、約２０週目、約３０週目、約４０週目、約５０週目、約６０週目、約７０週目、約８０週目、約９０週目、約１００週目、約１年目、約２年目、又は約３年目にて、癌の病徴を改善する。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日、２日、３日、４日、５日、６日、約１週、約２週、約３週、約４週、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約１年、約２年、約５年、若しくは約１０年、又はそれ以上の間、癌の病徴を改善する。
【００８２】
[0087]  一部の実施形態において、癌の病徴は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％改善される。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日目、約２日目、約３日目、約４日目、約５日目、約６日目、約１週目、約２週目、約３週目、約４週目、約５週目、約６週目、約７週目、約８週目、約９週目、約１０週目、約２０週目、約３０週目、約４０週目、約５０週目、約６０週目、約７０週目、約８０週目、約９０週目、約１００週目、約１年目、約２年目、又は約３年目にて、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％、癌の病徴を改善する。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるトランスフェクトされた細胞の投与は、他の癌処置により処置された対照若しくは患者、又は処置前の同じ患者と比較して、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週、約２週、約３週、約４週、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約１年、約２年、約５年、若しくは約１０年、又はそれ以上の間、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％、癌の病徴を改善する。
【００８３】
[0088]  本発明はさらに、以下の実施例によって説明されるが、限定として解釈されるべきでない。本出願及び図の全体を通して引用される全ての参考文献、特許、及び公開特許出願の内容は、全ての目的について、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【００８４】
実施例
実施例１−抗メソセリンＣＡＲを一過性に発現する細胞の投与により、ヌードマウスにおいて腫瘍サイズが引き下げられ、且つ生存期間が延びる
[0089]  本組成物（ＭＣＹ−Ｍ１１）は、おおよそ７日続くインビトロでの抗メソセリンＣＡＲの一過性の発現を実証する。短い発現持続期間にも拘らず、最初の投薬は、寛容性を壊して、損なわれていない免疫系を再活性化させて、免疫カスケードを生じさせることが意図される。当該活性は、以降の（例えば長期）投与によって強化される。図１は、ＭＣＹ−Ｍ１１発現のカイネティクスを実証する。
【００８５】
[0090]  ヌードマウスの群（Ｎ＝６）に、ＩＤ８卵巣腫瘍細胞を注射した。腫瘍細胞の注射の１日後、動物を以下で処置した：１）１×１０８メソセリンＣＡＲＭＡ（すなわちＭＣＹ−Ｍ１１）；２）３ｈ  １×１０８メソセリンＣＡＲＭＡ；３）１×１０７メソセリンＣＡＲＭＡ；４）ＰＢＳ；５）１×１０７非特異的ＣＡＲ；又は６）１×１０８非特異的ＣＡＲ。図２に示すように、抗メソセリンＣＡＲ（ＭＣＹ−Ｍ１１）を一過性に発現する細胞の投与は、腫瘍の増殖を阻害する。
【００８６】
[0091]  さらに、図３に示すように、抗メソセリンＣＡＲ（ＭＣＹ−Ｍ１１）を一過性に発現する細胞の投与は、固形腫瘍を有するヌードマウスの生存期間を延ばす。１回用量の投与により、生存期間が６０日から７５日に延びる。ＣＡＲ細胞の３回用量の投与により、生存期間がさらに１１０日を超えて延びる。
【００８７】
実施例２−卵巣、原発性腹膜、若しくはファロピウス管の、プラチナ製剤抵抗性の高悪性度漿液腺癌を有する女性、又は以前の化学療法後に腹膜中皮腫が再発した対象についての、腹腔内ＭＣＹ−Ｍ１１治療のフェーズ１研究
[0092]  薬物の説明：ＭＣＹ−Ｍ１１細胞は、ｓｃＦＶ−αＭｅｓｏ−Ｈ、膜貫通ドメイン、４−１ＢＢ、及びＣＤ３ζシグナリング領域の連続したペプチドドメインのヒトＣＡＲをコードするｍＲＮＡ（ＭＣＹ−Ｍ１１）でトランスフェクトした非増殖型自己由来末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。ＭＣＹ−Ｍ１１  Ｔ細胞は、メソセリン発現細胞に結合し、ＣＤ３ζ及び共刺激分子４−１ＢＢを介した以降のＴ細胞活性化により、Ｔ細胞依存性抗腫瘍活性が活性化される。ＭＣＹ−Ｍ１１は、寿命が制限された細胞として、ウイルスベクター操作ＣＡＲ  Ｔ治療と比較して、より大きな安全性プロファイルの恩恵をもたらす。加えて、治療投与までの製造及びタイムラインは、ウイルスベクター操作を必要とするＣＡＲ  Ｔ細胞よりも信頼性が高く、且つより速い。
【００８８】
[0093]  ＭＣＹ−Ｍ１１細胞を、ヒトメソセリンを標的化するＣＡＲ構築体でトランスフェクトした、新たに単離したヒトＰＢＬを用いて、MaxCyte GT（商標）閉鎖系で作製した。米国特許第９，６６９，０５８号を参照（全ての目的について、その全体が参照によって組み込まれる）。MaxCyte GT（商標）を用いて、ＣＡＲＭＡの臨床スケール製造用の最大２０×１０９末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中でのｍＲＮＡ  ＣＡＲのトランスフェクションが、確かに実証された。低温保存した生成物は、細胞の＞９５％においてＭＣＴ−Ｍ１１の発現を示し、そして腫瘍細胞を抗原特異的に認識し、且つ溶解させることができた。ＭＣＹ−Ｍ１１の発現は、おおよそ７〜１０日にわたってインビトロで検出可能であり、ＭＣＹ−Ｍ１１発現の漸進的な低下が、インビトロ細胞増殖と相関した。
【００８９】
[0094]  本研究は、ヒト対象におけるＭＣＹ−Ｍ１１細胞のＩＰ投与のファースト・イン・ヒューマン研究であった。
【００９０】
[0095]  卵巣癌の臨床前モデルを用いたＭＣＹ−Ｍ１１細胞の臨床前インビトロ及びインビボ研究において、ＭＣＹ−Ｍ１１細胞は、高い生存度及びＣＡＲ発現を実証し、非常に低いエフェクタ対標的比にてメソセリン発現腫瘍細胞を認識して死滅させる能力があった。ヒト卵巣癌ヌードマウスモデルにおけるＭＣＹ−Ｍ１１細胞の単回ＩＰ注射は、腫瘍増殖の用量依存的阻害を実証し、非処置対照及びＣＡＲＭＡ−ＣＤ１９（無関係なＣＡＲ）処置群と比較して、より長い全生存期間の恩恵があった。１、３、及び６週にわたるＭＣＹ−Ｍ１１細胞の毎週投与は、疾患制御を延長し、ＭＣＹ−Ｍ１１細胞の単回投与と比較して、全生存期間を延ばした。さらに、最大１×１０８ＭＣＹ−Ｍ１１細胞の単回ＩＰ投与、最大４×１０７ＭＣＹ−Ｍ１１細胞の単回ＩＶ投与後の、又は５×１０７ＭＣＴ−Ｍ１１細胞の週に一度の合計６回のＩＰ投与後のヒト卵巣癌ヌードマウスモデルにおいて、注目される明白な毒性はなかった。
【００９１】
[0096]  第１の目的：３回の毎週点滴用の腹腔内（ＩＰ）点滴として投与した場合のＭＣＹ−Ｍ１１の実現可能性、安全性、及び忍容性を特徴付けること。
【００９２】
[0097]  第２の目的：１）ＭＣＹ−Ｍ１１を投与した対象において抗腫瘍活性を評価すること（例えば、Response Evaluation Criteria in Solid Tumors（ＲＥＣＩＳＴ）、Immune-related Response Evaluation Criteria in solid Tumors（ｉｒＲＥＣＩＳＴ）、ＣＡ  １２５）。２）メソセリン、血清、及び腹水サイトカインレベルの腫瘍発現、メソセリン及び巨核球増強因子（ＭＰＦ）の血清及び腹水レベル、腫瘍関連抗原、並びに血液及び腹水の蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）の表現型タイピングが挙げられる相関エンドポイントを評価すること。
【００９３】
[0098]  対象採用基準：
[0099]  対象は、少なくとも１８歳でなければならず、且つ循環白血球のイクスビボ単離のための末梢血白血球分離を受けることができなければならない。対象は、腹腔内（ＩＰ）送達用の腹腔内カテーテル／ポートの配置が首尾良くなければならない。
【００９４】
[0100]  研究設計：
[0101]  研究サイズ：おおよそ１５〜２４人の対象を、このフェーズ１研究に登録して、ＩＰ送達によるフェーズ２試験に適した用量を定義する。何人かの対象は既に登録して、投薬を始めていた。
【００９５】
[0102]  用量レベル漸増群：用量漸増設計を、標準的な３＋３アプローチの後に続ける。ＭＣＹ−Ｍ１１処置のサイクルは、３回の毎週用量（すなわち、週に一度の用量を３回投与した）からなる。対象は、処置応答に拘らず、３回の点滴の処置の１サイクルのみを受ける。
【００９６】
[0103]  対象を、以下の標準的な３＋３用量漸増設計に基づいて、群あたりの用量レベルを固定した、そして群あたりの用量を漸増した、４つの用量レベルの１つに登録した：
[0104]  用量レベル１−毎週投薬×３回用量について、１．０×１０７細胞／用量
[0105]  用量レベル２−毎週投薬×３回用量について、５．０×１０７細胞／用量
[0106]  用量レベル３−毎週投薬×３回用量について、１．０×１０８細胞／用量
[0107]  用量レベル４−毎週投薬×３回用量について、５．０×１０８細胞／用量
【００９７】
[0108]  付加的な用量レベルが、研究中に追加されてもよい。付加的な用量レベルについての決定は、以前の用量レベル由来のデータの全体のレビューに基づく。
【００９８】
[0109]  用量レベル１、２、及び３について、少なくとも３人の対象を登録した。
【００９９】
[0110]  第１の２人の研究対象は、完全な処置サイクル（３回の毎週用量）プラス１４日を、次の対象が投薬を始めてもよい前に、完了した。第２の研究対象が、完全な処置サイクル（３回の毎週用量）プラス１４日を完了した後、以降の対象は、以前の対象についての投薬の開始の１４日後、直ぐに投薬を開始してもよい。
【０１００】
[0111]  ＭＣＹ−Ｍ１１投与
[0112]  ＭＣＹ−Ｍ１１を、ＩＰ送達によって３週間、毎週投与した。ＩＰカテーテル／ポートを、処置の開始前に配置した。カテーテル／ポート及びケアの選択は、局所部位によって決定した。カテーテル／ポートの配置が複雑な対象は、研究から撤退させて、入れ替えた。
【０１０１】
[0113]  結果
[0114]  これまで、２人の患者が、用量あたり１．０×１０７細胞の３回の毎週用量を受けた（総用量は、患者毎に３．０×１０７細胞であった）。悪性度３又は悪性度４の毒性も、いかなるＳＡＥも観察されなかった。
【０１０２】
文献の援用
[0115]  引用される全ての刊行物、特許、及び特許刊行物は、全ての目的について、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１０３】
[0116]  本出願は、以下の刊行物及び出願の全体を、全ての目的について、参照によって組み込む：２００８年４月９日出願の米国仮特許出願第６１／０４３，６５３号；２００９年４月９日出願の米国特許第８，４５０，１１２号；２０１３年５月２４日出願の米国特許第９，１３２，１５３号；及び２０１５年８月２５日出願の米国特許第９，６６９，０５８号。
【０１０４】
REFERENCES
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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