(57)【要約】  本発明は、アレルギー疾患の治療又は予防において、ポリクローナル抗原特異的免疫グロブリンと組み合わせた、筋注用免疫グロブリン等の血漿免疫グロブリンの使用に関する。本発明は、さらに、ポリクローナル抗原特異的免疫グロブリンと組み合わせた血漿免疫グロブリンからなる医薬組成物に関する。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アレルギー疾患の治療又は予防のための血漿免疫グロブリンと抗原特異的免疫グロブリンとの組み合わせの使用。
【請求項２】
前記血漿免疫グロブリンは、筋注用免疫グロブリンである請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記筋注用免疫グロブリンは、ヒト筋注用免疫グロブリンである請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記血漿免疫グロブリンは、ヒト血漿免疫グロブリンである請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記血漿免疫グロブリンは、非ヒト種由来のものである請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記血漿免疫グロブリン及び抗原特異的免疫グロブリンは、同一種由来のものである請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記抗原特異的免疫グロブリンは、ポリクローナル抗破傷風トキソイド免疫グロブリンと、ポリクローナル抗Ｒｈ免疫グロブリンと、ポリクローナル抗Ｂ型肝炎免疫グロブリンと、ポリクローナル抗狂犬病免疫グロブリンと、ポリクローナル抗水痘免疫グロブリンとからなる群から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項８】
前記血漿免疫グロブリンは、体重１ｋｇあたり５０ｍｇを超える請求項１に記載の使用。
【請求項９】
アレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物であって、当該医薬組成物は、
血漿免疫グロブリンと、
抗原特異的免疫グロブリンと、を含む医薬組成物。
【請求項１０】
前記血漿免疫グロブリンは、筋注用免疫グロブリンである請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記筋注用免疫グロブリンは、ヒト筋注用免疫グロブリンである請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記血漿免疫グロブリンは、ヒト血漿免疫グロブリンである請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記血漿免疫グロブリンは、非ヒト種由来のものである請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記血漿免疫グロブリン及び前記抗原特異的免疫グロブリンは、同一種由来のものである請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記抗原特異的免疫グロブリンは、ポリクローナル抗破傷風トキソイド免疫グロブリンと、ポリクローナル抗Ｒｈ免疫グロブリンと、ポリクローナル抗Ｂ型肝炎免疫グロブリンと、ポリクローナル抗狂犬病免疫グロブリンと、ポリクローナル抗水痘免疫グロブリンと、からなる群から選択される請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記血漿免疫グロブリンは、体重１ｋｇあたり５０ｍｇを超える請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
血漿免疫グロブリン及び抗原特異的免疫グロブリンを注射することを含む、アレルギー疾患を治療又は予防する方法。
【請求項１８】
一定分量の血漿免疫グロブリンと、一定分量の抗原特異的免疫グロブリンと、取扱説明書とを含むキットであって、前記取扱説明書は、アレルギー疾患の治療又は予防のための前記一定分量の血漿免疫グロブリンと前記一定分量の抗原特異的免疫グロブリンとの使用向けの前記キットに関連付けられている、キット。
【請求項１９】
血漿免疫グロブリンと抗原特異的免疫グロブリンとの一定分量の混合物と、取扱説明書とを含むキットであって、前記取扱説明書は、アレルギー疾患の治療又は予防のための血漿免疫グロブリンと抗原特異的免疫グロブリンとの前記一定分量の混合物の使用向けの前記キットに関連付けられている、キット。
【請求項２０】
血漿免疫グロブリンと、
抗原特異的免疫グロブリンと、を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギー疾患の治療に関する。特に、本発明は、アレルギー疾患の予防又は治療において、プールされた免疫グロブリンと抗原特異的ポリクローナル免疫グロブリンとの組み合わせの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギー疾患は、人口のかなりの部分及びペット数のかなりの部分を悩ませている。アレルゲン免疫療法が、アレルゲンに対する各自の耐性を増強させるために用いられる場合が時にある。その療法では、アレルゲン注入を増量段階と維持段階の２つの段階で行う。増量段階は、１週間に約１回から３回、３か月から６か月の間、アレルゲンの量を増やしながら注入することを必要とする場合がある。一旦、有効投与量に達すると、維持段階が、２週間から４週間ごとに約１回数年間さらに注入することから始まる。従って、増量段階も維持段階も、かなりの負担である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、アレルギー疾患を治療又は予防するための改良型医薬組成物及び方法を提供することである。
【０００４】
本発明のこの目的及び他の目的は、以下に続く好ましい実施形態の詳細な説明を参照することにより、さらによく理解してもらえるだろう。上に述べた目的は、確約というよりは本発明の動機となるものを述べたものであることに留意されたい。その目的は、必ずしも、以下に記載する本発明の全ての実施形態、又は請求項のそれぞれにより規定される本発明により果たされるとは限らない。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の一態様によれば、血漿免疫グロブリンと抗原特異的免疫グロブリンとの組み合わせを、アレルギー疾患の治療又は予防に用い得る。
【０００６】
別の態様において、本発明は、アレルギー疾患の治療又は予防のための血漿免疫グロブリンと抗原特異的免疫グロブリンとの組み合わせの使用を含む。
【０００７】
別の態様において、本発明は、アレルギー疾患の治療又は予防のための医薬組成物である。医薬組成物は、血漿免疫グロブリン及び抗原特異的免疫グロブリンを含む。
【０００８】
他の態様において、血漿免疫グロブリンは、筋注用免疫グロブリンである。
【０００９】
他の態様において、筋注用免疫グロブリンは、ヒト筋注用免疫グロブリンである。
【００１０】
他の態様において、血漿免疫グロブリンは、ヒト血漿免疫グロブリンである。
【００１１】
他の態様において、血漿免疫グロブリンは、非ヒト種由来のものである。
【００１２】
他の態様において、血漿免疫グロブリン及び抗原特異的免疫グロブリンは、同一種由来のものである。
【００１３】
別の態様において、抗原特異的免疫グロブリンは、ポリクローナル抗破傷風トキソド免疫グロブリン、ポリクローナル抗Ｒｈ免疫グロブリン、ポリクローナル抗Ｂ型肝炎免疫グロブリン、ポリクローナル抗狂犬病免疫グロブリン、及びポリクローナル抗水痘免疫グロブリンからなる群から選択される。
【００１４】
別の態様において、血漿免疫グロブリンは、体重１ｋｇあたり５０ｍｇを超える。
【００１５】
他の態様において、本発明は、血漿免疫グロブリン及び抗原特異的免疫グロブリンを注入投与することを含む、アレルギー疾患を治療又は予防する方法である。
【００１６】
他の態様において、本発明は、一定分量の血漿免疫グロブリンと、一定分量の抗原特異的免疫グロブリンと、取扱説明書とを含むキットであって、取扱説明書は、アレルギー疾患の治療又は予防のための一定分量の血漿免疫グロブリンと一定分量の抗原特異的免疫グロブリンとの使用向けのキットに関連付けられている、キットである。
【００１７】
他の態様において、本発明は、血漿免疫グロブリンと抗原特異的免疫グロブリンとの一定分量の混合物と、取扱説明書とを含むキットであって、取扱説明書は、アレルギー疾患の治療又は予防のための血漿免疫グロブリンと抗原特異的免疫グロブリンとの一定分量の混合物の使用向けのキットに関連付けられている、キットである。
【００１８】
前記は、本発明の態様のいくつかのみをカバーし得る。本発明の他の態様は、１つ以上の実施例に関連して本発明を実施するための少なくとも１つの好ましい態様の以下の説明を参照することにより、理解することができる。本発明を実施するための以下の態様は、本発明自体を規定するものではなく、本発明の発明上の特徴を実施する例に過ぎない。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
いくつかの実施例に関連して本発明を実施する少なくとも１つの態様を、以下の図面を参照することにより説明する。
【００２０】
【図１Ａ】ＩＭＩＧとポリクローナル抗破傷風トキソイドＩｇとを組み合わせて注射することにより抗ＯＶＡ  ＩｇＥ応答が減弱したことを示すグラフである。
【図１Ｂ】ＩＭＩＧとポリクローナル抗破傷風トキソイドＩｇとを組み合わせて注射しても抗ＯＶＡ  ＩｇＧ応答に変化がないことを示すグラフである。
【図１Ｃ】ＩＭＩＧとポリクローナル抗破傷風Ｉｇとを組み合わせた注射を受けたＯＶＡ免疫化マウスの脾細胞におけるＯＶＡ誘発ＩＬ−４を示すグラフである。
【図１Ｄ】ＩＭＩＧとポリクローナル抗破傷風Ｉｇとを組み合わせた注射を受けたＯＶＡ免疫化マウスの脾細胞におけるＯＶＡ誘発ＩＬ−２を示すグラフである。
【図２Ａ】ＩＭＩＧと抗水痘Ｉｇとを注射したＯＶＡ免疫化マウスの脾細胞におけるＯＶＡ誘発ＩＬ−２を示すグラフである。
【図２Ｂ】ＩＭＩＧと抗水痘Ｉｇとを注射したＯＶＡ免疫化マウスの脾細胞におけるＯＶＡ誘発ＩＬ−４を示すグラフである。
【図３Ａ】ピーナツバターで感作し、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病免疫Ｉｇで治療する前又はヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇで治療する前の犬の血液中の血清ＩｇＧのレベル全体を示すグラフである。
【図３Ｂ】ピーナツバターで感作し、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病免疫Ｉｇで治療した後又はヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇで治療した後の犬の血液中の血清ＩｇＧのレベル全体を示すグラフである。
【図３Ｃ】ピーナツバターで感作し、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病免疫Ｉｇで治療する前又はヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇで治療する前の犬の血液中の血清ＩｇＥのレベル全体を示すグラフである。
【図３Ｄ】ピーナツバターで感作し、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病免疫Ｉｇで治療した後又はヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇで治療した後の犬の血液中の血清ＩｇＥのレベル全体を示すグラフである。
【図３Ｅ】ピーナツバターによる感作と、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病免疫Ｉｇによる治療又はヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇによる治療との前における、Ｃｏｎ−Ａが犬の末梢血リンパ球を刺激したことによるＩＬ−２の産生を示すグラフである。
【図３Ｆ】ピーナツバターによる感作と、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病免疫Ｉｇによる治療又はヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇによる治療との後における、Ｃｏｎ−Ａが犬の末梢血リンパ球を刺激したことによるＩＬ−２の産生を示すグラフである。
【図３Ｇ】ピーナツバターによる感作と、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病免疫Ｉｇによる治療又はヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇによる治療との前における、Ｃｏｎ−Ａが犬の末梢血リンパ球を刺激したことによるＩＬ−４の産生を示すグラフである。
【図３Ｈ】ピーナツバターによる感作と、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病免疫Ｉｇによる治療又はヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇによる治療との後における、Ｃｏｎ−Ａが犬の末梢血リンパ球を刺激したことによるＩＬ−４の産生を示すグラフである。
【図３Ｉ】ピーナツバターによる感作と、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病免疫Ｉｇによる治療又はヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇによる治療との前後における、Ｃｏｎ−Ａが犬の末梢血リンパ球を刺激したことによるＩＬ−２の産生レベル／ＩＬ−４の産生レベルの比を示すグラフである。
【図３Ｊ】ピーナツバターによる感作と、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病免疫Ｉｇによる治療又はヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇによる治療との後における、ピーナツバターＡｇが犬の末梢血リンパ球を刺激したことによるＩＬ−２の産生及びＩＬ−４の産生を示すグラフである。
【図３Ｋ】ピーナツバターによる感作と、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病免疫Ｉｇによる治療又はヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇによる治療との後における、ピーナツバターＡｇが犬の末梢血リンパ球を刺激したことによるＩＬ−２産生レベル／ＩＬ−４産生レベルの比を示すグラフである。
【図４Ａ】ＩＭＩＧ及び抗破傷風Ｉｇの種々の投与量の注入を組み合わせた後のＯＶＡ免疫化マウスにおけるＯＶＡ特異的ＩｇＥ血清レベルを示すグラフである。
【図４Ｂ】ＩＭＩＧ及び抗破傷風Ｉｇの種々の投与量の注入を組み合わせた後のＯＶＡ免疫化マウスにおけるＯＶＡ特異的ＩｇＧ血清レベルを示すグラフである。
【図４Ｃ】ＩＭＩＧ及び抗破傷風Ｉｇの種々の投与量の注入を組み合わせた後のＯＶＡ免疫化マウスにおいてＯＶＡが脾細胞を刺激したことによるＩＬ−４産生を示すグラフである。
【図４Ｄ】ＩＭＩＧ及び抗破傷風Ｉｇの種々の投与量の注入を組み合わせた後のＯＶＡ免疫化マウスにおいてＯＶＡが脾細胞を刺激したことによるＩＬ−２産生を示すグラフである。
【図４Ｅ】ＩＭＩＧ及び抗破傷風Ｉｇの種々の投与量の注入を組み合わせた後のＯＶＡ免疫化マウスにおいてＯＶＡが脾細胞を刺激したことによるＩＬ−２産生レベル／ＩＬ−４産生レベルの比を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明の医薬組成物は、プール血漿免疫グロブリンと抗原特異的ポリクローナル免疫グロブリンとの組み合わせである。
【００２２】
血漿免疫グロブリンは、一般に、少なくとも１０００ドナーの血清から調製され、原発性免疫不全症の患者を治療することに用いられてきた。血漿免疫グロブリンをいかに製剤化し投与するかによって、筋注用免疫グロブリン（「ＩＭＩＧ」）、静注用免疫グロブリン（「ＩＶＩＧ」）、皮下注用免疫グロブリン（「ＳＣＩＧ」）、腹腔内投与用免疫グロブリン（「ＩＰＩＧ」）と呼ばれ得る。
【００２３】
抗原特異的ポリクローナル免疫グロブリンは、水痘帯状疱疹ウイルス等の特定の病原体に対して、又は破傷風トキソイド等の特定の抗原に対して、高い抗体数を伴って調製される免疫グロブリンである。
【００２４】
プール血漿免疫グロブリンと、抗原特異的ポリクローナル免疫グロブリンとの組み合わせが、アレルギー疾患の治療又は予防に有用であることが、本発明者らに分かった。
【００２５】
以下に詳細に述べていくように、本発明者らは、種々の抗原に対する種々の抗原特異的免疫グロブリンを用いた実験を実施した。使用される抗原特異的免疫グロブリン（ポリクローナル抗破傷風免疫グロブリン、ポリクローナル抗狂犬病免疫グロブリン、ポリクローナル抗水痘免疫グロブリン）の間の製剤及び化学組成における顕著な相違を考慮して、血漿免疫グロブリンを任意の抗原特異的免疫グロブリン（ポリクローナル抗Ｒｈ免疫グロブリン及びポリクローナル抗Ｂ型肝炎免疫グロブリンを含むがそれらに限定されない）と組み合わせることによって、治療対象の人間又は動物の免疫系が同様に変化する結果になり、またアレルギー疾患が同様に予防されかつ／又は治療されることが、予測される。
【００２６】
人間及びペットにおけるアレルギー疾患の治療及び予防のために、その組み合わせの血漿免疫グロブリンの成分は、限定はされないが、Ｇａｍｕｎｅｘ（登録商標）及びＨｉｚｅｎｔｒａ（登録商標）等、人間における使用が承認された血漿免疫グロブリンであり得る。
【００２７】
血漿免疫グロブリン及び抗原特異的ポリクローナル免疫グロブリンは、適切な任意の方法で投与し得る。例えば、抗体は、非免疫原性方式で、すなわち、アジュバントなしに、非免疫原性量、例えば、筋注、静注、皮下注、又は腹腔内投与式に、投与し得る。血漿免疫グロブリンと、抗原特異的ポリクローナル免疫グロブリンとの組み合わせを含む医薬組成物は、緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、又は中性ＰＨのリン酸緩衝生理食塩水等、製薬上許容される基剤を含み得る。
【００２８】
本発明の別の態様は、一定分量の血漿免疫グロブリンと、一定分量のポリクローナル抗原特異的免疫グロブリンと、アレルギー疾患の治療又は予防に対するこのような２つの異なる一定分量の使用向けの取扱説明書とを含むキットである。
【００２９】
本発明の別の態様は、血漿免疫グロブリンとポリクローナル抗原特異的免疫グロブリンとの混合物の一定分量と、アレルギー疾患の治療又は予防のためのこのような一定分量の使用向けの取扱説明書とを含むキットである。
【００３０】
抗体は、任意の適切な部位に、任意の適切な時間に、投与し得る。しかしながら、抗体は、同時に又は実質的に同時に投与されることが好ましい。抗体は、別々の組成物で連続して又は同時に、或いは混合物として一緒に投与してよい。
【実施例】
【００３１】
［実施例１］
ポリクローナルヒトＩＭＩＧとポリクローナルヒト抗破傷風Ｉｇを用いたアレルギー実験プロトコル
５匹のＢＡＬＢ／ｃマウス（研究開始時点で８週齢）を群ごとに使用した。対照群以外の全てのマウス（１群、以下参照）に、オボアルブミン（１０μｇ  ＯＶＡ  プラス  Ａｌ（ＯＨ）３）を０．３ｍｌのリン酸緩衝生理食塩水（「ＰＢＳ」）を溶媒として０日目と１４日目に腹腔内投与し、さらに５６日目に追加免疫を与えた。全てのマウスに、１４日目から飲料水で卵白溶液（２０％（ｗ／ｖ）をフィルターろ過  ＥＷＳ）を与えた。
【００３２】
筋注用免疫グロブリン（Ｇａｍｕｎｅｘ（登録商標）２５μｇ：  Ｇｒｉｆｏｌｓ社）投与を受けるマウスに対して、２日目、７日目、１４日目、２１日目、２８日目、３５日目、及び４２日目に、０．０５ｍｌのＰＢＳを溶媒として左臀筋に筋肉注射した。抗破傷風免疫Ｉｇ（ＨｙｐｅｒＴＥＴ  ２５μｇ：  Ｇｒｉｆｏｌｓ社）投与を受ける動物に対して、２日目、７日目、１４日目、２１日目、２８日目、３５日目、及び４２日目に、０．０５ｍｌのＰＢＳを溶媒として右三角筋に筋肉注射した。いくつかの事例では、ＩＭＩＧ又は抗破傷風が、使用前に破傷風トキソイドにより吸着処理された（ｘ３）。対照群には、同一部位にのみＰＢＳを投与した。
【００３３】
以下の群を用いた。
１群：  ＯＶＡ−／ＥＷＳ＋
２群：  ＯＶＡ＋／ＥＷＳ＋
３群：  ２群について＋ＩＭＩＧ（ＯＶＡ＋／ＥＷＳ＋＋ＩＭＩＧ）
４群：  ２群について＋抗破傷風Ｉｇ（ＯＶＡ＋／ＥＷＳ＋＋Ａｎｔｉ−ＴｅｔＩｇ）
５群：  ２群について＋ＩＭＩＧ＋抗破傷風Ｉｇ（ＯＶＡ＋／ＥＷＳ＋＋ＩＭＩＧ＋Ａｎｔｉ−ＴｅｔＩｇ）
６群：  ２群について＋ＩＭＩＧ（破傷風によりｘ３吸着処理される）＋抗破傷風Ｉｇ（ＯＶＡ＋／ＥＷＳ＋＋ＩＭＩＧＡｂｓ＋Ａｎｔｉ−Ｔｅｔ）
７群：  ２群について＋ＩＭＩＧ＋抗破傷風Ｉｇ（破傷風により吸着処理されるｘ３）（ＯＶＡ＋／ＥＷＳ＋＋ＩＭＩＧ＋Ａｎｔｉ−Ｔｅｔａｂｓ）
【００３４】
全てのマウスは、研究の６３日目に屠殺した。屠殺した時に、心臓穿刺により得たＯＶＡに対する血清ＩｇＥを、ＯＶＡが１００ｎｇ／ｗｅｌｌコーティングされＨＲＰ−抗マウスＩｇＥ及び適切な基板とともに開発されたプレートを使うＥＬＩＳＡ法により測定した。
【００３５】
その上、個々の動物からの５ｘ１０６の脾細胞を、インビトロで、ＯＶＡ１μｇ／ｍｌとの培養液２ｍｌに７２時間暴露し、ＩＬ−２／ＩＬ−４を、市販のＥＬＩＳＡキット（ｅＢＩＯＳｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して培養上清液中で測定した。
【００３６】
結果
図１Ａは、ＩＭＩＧと、ポリクローナル抗破傷風Ｉｇとを組み合わせた結果、ＯＶＡ特異的ＩｇＥがかなり抑制されることを示し、図１Ｂは、ＯＶＡ特異的ＩｇＧに有意な効果がないことを示している。ここで図１Ａを参照すると、破傷風によるＩＭＩＧの吸着処理（６群）と、破傷風によるポリクローナル抗破傷風の吸着処理（７群）とには差違がない。このことは、活性製薬成分が抗破傷風抗体ではないことを示唆している。
【００３７】
図１Ｃは、ＩＭＩＧと抗破傷風Ｉｇとを組み合わせた注射を受けた５群、６群及び７群のマウスの脾細胞におけるＯＶＡ誘発ＩＬ−４のレベルの低下を示す。ＯＶＡ誘発ＩＬ−２レベルを示す図１Ｄとともに検討すると、ＩＬ−４対ＩＬ−２の比が、ＩＭＩＧプラス抗破傷風Ｉｇで治療された群（５群、６群及び７群）については、対照群の２、３及び４よりも小さくなることは、明らかである。この結果は、図１Ａ及び図１Ｂに示したアレルギーの抑制とその結果と一致している。
【００３８】
［実施例２］
ポリクローナルヒトＩＭＩＧとポリクローナルヒト抗破傷風Ｉｇを使用したアレルギー実験プロトコル
８匹のＢＡＬＢ／ｃマウス（研究開始時点で８週齢）を群ごとに使用した。対照群（群１、以下参照）以外の全てのマウスが、オボアルブミン（１０μｇ  ＯＶＡ  プラス  Ａｌ（ＯＨ）３）を０．３ｍｌのリン酸緩衝生理食塩水（「ＰＢＳ」）を溶媒として０日目と１４日目と４２日目に腹腔内投与した。全てのマウスに、１４日目〜４２日目に飲料水で卵白溶液（２０％（ｗ／ｖ）ＥＷＳをフィルターろ過）を与えた。
【００３９】
ＩＭＩＧ（Ｇａｍｕｎｅｘ（登録商標）  ２５μｇ：  Ｇｒｉｆｏｌｓ社）及び抗水痘Ｉｇ（２５μｇ：  Ｇｒｉｆｏｌｓ社）を、７日目〜３５日目から毎週静脈内に注入した。
【００４０】
以下の群を用いた。
１群：  ＯＶＡ−／ＥＷＳ＋
２群：  ＯＶＡ＋／ＥＷＳ＋
３群：  ２群について＋ＩＭＩＧ（ＯＶＡ＋／ＥＷＳ＋＋ＩＭＩＧ）
４群：  ２群について＋抗水痘Ｉｇ（ＯＶＡ＋／ＥＷＳ＋＋Ａｎｔｉ−ＶａｒｉｃｅｌｌａＩｇ）
５群：  ２群について＋ＩＭＩＧ＋抗水痘Ｉｇ（ＯＶＡ＋／ＥＷＳ＋＋ＩＭＩＧ＋Ａｎｔｉ−ＶａｒｉｃｅｌｌａＩｇ）
【００４１】
全てのマウスは、研究の４９日目に屠殺した。屠殺した時に、心臓穿刺により得たＯＶＡに対する血清ＩｇＥを、ＯＶＡが１００ｎｇ／ｗｅｌｌコーティングされＨＲＰ−抗マウスＩｇＥ及び適切な基板とともに開発されたプレートを使うＥＬＩＳＡ法により測定した。
【００４２】
その上、個々の動物からの５ｘ１０６の脾細胞を、インビトロで、ＯＶＡ１μｇ／ｍｌとの培養液２ｍｌに７２時間暴露し、ＩＬ−２／ＩＬ−４を、市販のＥＬＩＳＡキット（ｅＢＩＯＳｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して培養上清液中で測定した。
【００４３】
結果
図２Ａは、ＯＶＡがマウスの個別の脾細胞を刺激してもＩＬ−２の産生が減弱しなかったことを示す。一方で、図２Ｂは、ＩＬ−４の産生の明らかな減弱を示す。この結果は、ＩＭＩＧと抗破傷風Ｉｇとを組み合わせた注入を用いて実施例１において実施した本研究と一致する（図１Ｃ及び図１Ｄを参照）。
【００４４】
［実施例３］
ピーナツバターに感作させたビーグル犬を用いた、ポリクローナルヒトＩＭＩＧ及びポリクローナルヒト抗破傷風Ｉｇ、又はポリクローナルイヌＩｇ及びイヌ抗狂犬病Ｉｇを用いたアレルギー実験プロトコル
実施例１及び実施例２におけるプロトコルの変更において、本発明者らは、局所的に塗布したピーナツバターに誘発されるアレルギー感作の有症率が高い（＞８０％）ことをこれまでの文献報告が示している大型動物（ビーグル犬）において、アレルギー感作を減弱させ得るか否かを検討した。
【００４５】
動物に、治療前に第１の暴露を１週間受けさせるとともに、毎週ピーナツバターへの局所（腹）の暴露を受けさせた。ピーナツバターの次の５回の暴露は、組み合わせ型イヌＩｇ（ＩＭＩＧとプールされたイヌ抗狂犬病Ｉｇ）又は組み合わせ型ヒトＩｇ（ＩＭＩＧと抗破傷風Ｉｇ）による５週間の治療を伴った。５週間の治療後、全ての動物に、同一のＩｇ混合物を１４日ごとに投与する治療をさらに３回受けさせた。最後に、全ての犬に、ピーナツバターの経口負荷を受けさせ、血清ＩｇＧ、血清ＩｇＥ、及びピーナツバターの誘発によるＩＬ−２／ＩＬ−４の産生を測定した。
【００４６】
イヌ筋注用免疫グロブリン（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ社、米国）を受ける犬の臀筋に、ＰＢＳ０．５ｍｌを溶媒として１ｍｇ／ｋｇの筋肉内注射を行い、プールされたイヌ抗狂犬病免疫Ｉｇ（プールされた犬を狂犬病ワクチンで再免疫化することにより調製）を受ける犬の反対側の臀筋に、ＰＢＳ０．５ｍｌを溶媒として１ｍｇ／ｋｇの筋肉内注射を行った。
【００４７】
ヒト筋注用免疫グロブリン（Ｇａｍｕｎｅｘ（登録商標）Ｇｒｉｆｏｌｓ社）を受ける犬の臀筋に、ＰＢＳ０．５ｍｌを溶媒として１ｍｇ／ｋｇの筋肉内注射を行い、ヒト抗破傷風Ｉｇ（ＨｙｐｅｒＴＥＴ、Ｇｒｉｆｏｌｓ社）を受ける犬の反対側の臀筋に、ＰＢＳ０．５ｍｌを溶媒として１ｍｇ／ｋｇの筋肉内注射を行った。
【００４８】
結果
図３Ａ及び図３Ｂは、本研究の開始時点（ｔ０）における総血清ＩｇＧレベルと終了時点（ｔ１）における総血清ＩｇＧレベルとの比較をそれぞれ示す。図３Ｃ及び図３Ｄは、本研究の開始時点（ｔ０）における総血清ＩｇＥレベルと終了時点（ｔ１）における総血清ＩｇＥレベルとの比較をそれぞれ示す。ＩｇＧレベルに大きな変化はないが、ＩｇＥレベルにおける減少が、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病Ｉｇによる治療と、ヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇによる治療との両方に、観察された。
【００４９】
図３Ｅ及び図３Ｆは、治療前（ｔ０）のイヌ末梢血リンパ球（ＰＢＬ）におけるコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）によるＩＬ−２産生と、治療後（ｔ１）のイヌ末梢血リンパ球（ＰＢＬ）におけるコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）によるＩＬ−２産生との比較をそれぞれ示す。
【００５０】
図３Ｇ及び図３Ｈは、治療前（ｔ０）のイヌＰＢＬにおけるＣｏｎＡによるＩＬ−４産生と治療後（ｔ１）のイヌＰＢＬにおけるＣｏｎＡによるＩＬ−４産生との比較をそれぞれ示す。
【００５１】
図３Ｉは、Ｉｇ治療前後のイヌＰＢＬにおけるＣｏｎＡによるＩＬ−２／ＩＬ−４誘発の比較を示す。このポリクローナル応答に対してさえ、ＩＬ−２／ＩＬ−４比は、イヌＩｇＧ又はヒトＩｇＧによる治療後の犬において高くなる（＊、ｐ＜０．０５）ことに留意されたい。
【００５２】
図３Ｊは、イヌＩＭＩＧ及びイヌ抗狂犬病Ｉｇによる治療後と、ヒトＩＭＩＧ及びヒト抗破傷風Ｉｇによる治療後とにおける、ピーナツバターがイヌＰＢＬを刺激することによるＩＬ−２及びＩＬ−４の産生を示す。図３Ｋは、治療後のＩＬ−２：ＩＬ−４の比を示す。他の実験と一致するが、ＩＬ−４産生は、Ｉｇ治療により減弱するが、ＩＬ−２産生は、減弱しない。その上、ＩＬ−２：ＩＬ−４の比は、治療後高くなる（＊、ｐ＜０．０５）。
【００５３】
［実施例４］
用量反応研究−免疫前マウスにおけるポリクローナルヒトＩＭＩＧとポリクローナルヒト抗破傷風Ｉｇ
本発明者らは、免疫前マウスにおいてポリクローナルヒトＩＭＩＧとポリクローナルヒト抗破傷風Ｉｇとを用いて、用量反応研究も行った。
【００５４】
用量反応研究において、全群に、それぞれ５匹ずつＢＡＬＢ／ｃマウスがいた。マウスは、約２５グラムだった。全てのマウスに、０日目及び１４日目にＯＶＡ（１０μｇ  ＯＶＡ  プラス  Ａｌ（ＯＨ３））を与え、５６日目に追加免疫をした。全てのマウスに、１４日目から飲料用容器でＥＷＳ（フィルターろ過した２０％（ｗ／ｖ）の卵白溶液）を与えた。
【００５５】
マウスに、５６日目、６３日目、７０日目、７７日目及び８４日目に免疫グロブリンを注射する治療を開始した。
【００５６】
以下の群を用いた。
１群（対照）：  ＯＶＡ免疫化及びＥＷＳ（Ｎｏ  ＩＭＩＧ  ｏｒ  Ａｎｔｉ−Ｔｅｔ）
２群：  １群について＋ＩＭＩＧ（２５０μｇ／マウス）＋抗破傷風Ｉｇ（１０μｇ／マウス）（ＩＭＩＧ２５０：Ｔｅｔ１０）
３群：  １群について＋ＩＭＩＧ（２５０μｇ／マウス）＋抗破傷風Ｉｇ（５０μｇ／マウス）（ＩＭＩＧ２５０：Ｔｅｔ5０）
４群：  １群について＋ＩＭＩＧ（２５０μｇ／マウス）＋抗破傷風Ｉｇ（２５０μｇ／マウス）（ＩＭＩＧ２５０：Ｔｅｔ２５０）
５群：  １群について＋ＩＭＩＧ（５０μｇ／マウス）＋抗破傷風Ｉｇ（１０μｇ／マウス）（ＩＭＩＧ５０：Ｔｅｔ１０）
６群：  １群について＋ＩＭＩＧ（５０μｇ／マウス）＋抗破傷風Ｉｇ（５０μｇ／マウス）（ＩＭＩＧ５０：Ｔｅｔ５０）
７群：  １群について＋ＩＭＩＧ（５０μｇ／マウス）＋抗破傷風Ｉｇ（２５０μｇ／マウス）（ＩＭＩＧ５０：Ｔｅｔ２５０）
８群：  １群について＋ＩＭＩＧ（１０μｇ／マウス）＋抗破傷風Ｉｇ（１０μｇ／マウス）（ＩＭＩＧ1０：Ｔｅｔ1０）
９群：  １群について＋ＩＭＩＧ（１０μｇ／マウス）＋抗破傷風Ｉｇ（５０μｇ／マウス）（ＩＭＩＧ1０：Ｔｅｔ５０）
１０群：  １群について＋ＩＭＩＧ（１０μｇ／マウス）＋抗破傷風Ｉｇ（２５０μｇ／マウス）（ＩＭＩＧ1０：Ｔｅｔ２５０）
１１群：  １群について＋ＩＭＩＧ（５０μｇ／マウス）＋抗破傷風Ｉｇ（５０μｇ／マウス）  ＋  コエンザイムＱ１０  ｉｐ  （１００μｇ／マウス）５６日目〜９０日目まで２日ごと（ＩＭＩＧ５０：Ｔｅｔ５０：Ｑ１０）
１２群：  １群について＋ＩＭＩＧ（２５０μｇ／マウス）（ＩＭＩＧ２５０）
１３群：  １群について＋抗破傷風Ｉｇ（５０μｇ／マウス）（Ａｎｔｉ−Ｔｅｔ５０）
【００５７】
ＯＶＡを用いた最終の追加免疫は９０日目であり、マウスは９７日目に屠殺した。
【００５８】
血清ＯＶＡ特異型ＩｇＧ／ＩｇＥをＥＬＩＳＡ法により測定した。その上、２ｘ１０６の脾細胞を、インビトロで、ＯＶＡ  １μｇ／ｍｌの培養液２ｍｌに７２時間暴露し、ＩＬ−２／ＩＬ−４を、市販のＥＬＩＳＡキット（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）を使用して培養上清液中で測定した。
【００５９】
結果
図４Ａ及び図４Ｂは、ＩｇＥ応答の最適な抑制が、ＩＭＩＧを２５０μｇ／マウスと５０μｇ／マウス投与することで、広範囲の抗破傷風投与（１０〜２５０μｇ／マウス）にわたって起こることを示す。ＩＭＩＧ投与量が少なくなると（１０μｇ／マウス）、抑制が表れることが少なくなる。動物にコエンザイムＱ１０を抗酸化剤として２日ごとに（１００μｇ／マウス）投与した場合、比較的少ないＩＭＩＧ投与量（５０）と抗破傷風投与量（５０）で抑制においてある程度相乗効果があった。ＩｇＧ応答の減弱は、起こらなかった（図４Ｂ）。
【００６０】
図４Ｃ、図４Ｄ及び図４Ｅは、ＩＬ−４及びＩＬ−２の産生を測定値として用いた図４Ａ及び図４Ｂのデータを確認するものである。繰り返すが、ＩＭＩＧを２５０μｇ／マウスと５０μｇ／マウス投与した場合、広範囲の抗破傷風投与（１０〜２５０μｇ／マウス）にわたって、ＩＬ−４産生の抑制は、見て取れるが、ＩＬ−２産生の抑制は見て取れない。ＩＭＩＧ投与量が少なくなると（１０μｇ／マウス）、抑制が表れることが少なくなる。動物に、コエンザイムＱ１０を抗酸化剤として２日ごとに（１００μｇ／マウス）投与した場合、比較的少ないＩＭＩＧの投与量（５０）と抗破傷風の投与量（５０）で抑制において相乗効果があった。このデータは、図４Ｅに示すようにＩＬ−２：ＩＬ−４比の比較によって、さらに強調される。
【００６１】
上の説明において、実施例に関連して本発明を実施する典型的な態様を説明してきた。しかしながら、特許請求の範囲は、その実施例により限定すべきではなく、全体として本説明と一致する最も広い解釈をすべきである。ゆえに、明細書及び図面は、限定的な意味というよりは例示としてみなされるものである。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
2021509918.tif 000004
【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図３Ｆ】
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【図３Ｇ】
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【図３Ｈ】
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【図３Ｉ】
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【図３Ｊ】
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【図３Ｋ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【国際調査報告】
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