(57)【要約】  本発明は，ヨウ化物及びヒアルロン酸誘導体−ヒアルロナンクロラミドを含む種々の形態の調製及び使用に関する。これらの組成物は，水性媒体中で混合された後，酸化度が−１より高いヨウ素化合物を放出させ，従って，広域スペクトルの抗菌活性を示す。生体適合性と安定性のおかげでこれらの組成物は創傷被覆材の分野での適用のため，又は種々の移植可能な医療機器の製造のために適する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミド基：−ＮＨ−ＣＯ−の水素が構造式：−ＮＣｌ−ＣＯ−に従って塩素原子で置換されたヒアルロン酸又は修飾されたヒアルロン酸のクロラミドを含む抗菌性組成物であって，さらにヨウ化物を含み，前記ヒアルロン酸又は前記修飾されたヒアルロン酸の塩素による置換度が５０〜１００％であることを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記アミド基：−ＮＨ−ＣＯ−の水素が構造式：−ＮＣｌ−ＣＯ−に従って塩素原子で置換され，かつ同時にクロラミドのいくつかの−ＯＨ基が−Ｏ−ＣＯ−Ｒ2基で置換され及び／又はいくつかの−ＣＨ2−ＯＨ基が−ＣＨ＝Ｏで置換され及び/又はいくつかの−ＣＯ−ＯＨ基が−ＣＯ−ＯＲ2基で置換され，式中のＲ2は１〜１７個の炭素原子を含む直鎖又は芳香族鎖であることを特徴とする請求項１記載の抗菌性組成物。
【請求項３】
前記修飾されたヒアルロン酸がエチルエステル，ベンジルエステル，ラウロイル，ホルミル，パルミトイル，ヘキサノイルヒアルロナンからなる群より選択され，且つ前記ヨウ化物が，ヨウ化ナトリウム，ヨウ化カリウム，ヨウ化カルシウム，ヨウ化マグネシウム及びそれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする請求項１又は２記載の抗菌性組成物。
【請求項４】
前記クロラミドの分子量が５〜５００kg.mol-1の範囲内であることを特徴とする請求項１〜３いずれか１項記載の抗菌性組成物。
【請求項５】
前記組成物中の前記クロラミド対前記ヨウ化物のモル比が１：１〜１：５の範囲内にあることを特徴とする請求項１〜４いずれか１項記載の抗菌性組成物。
【請求項６】
さらに添加剤を９０重量％以下の濃度で含むことを特徴とする請求項１〜５いずれか１項記載の抗菌性組成物。
【請求項７】
前記添加剤が，水，塩化ナトリウム，塩化カルシウム，グリセロール，ヒアルロン酸，コンドロイチン硫酸，アルギン酸ナトリウム，オキシセルロース，カルボキシメチルセルロース，ヒドロキシエチルセルロース，又はいくつかの−ＯＨ基が−Ｏ−ＣＯ−Ｒ2基で置換され及び／又はいくつかの−ＣＨ2−ＯＨ基が−ＣＨ＝Ｏ基で置換され及び/又はいくつかの−ＣＯ−ＯＨ基が−ＣＯ−ＯＲ2基で置換された修飾されたヒアルロン酸（式中，Ｒ2は１〜１７個の炭素原子を含む直鎖又は芳香族鎖である）からなる群から選択されることを特徴とする請求項６記載の抗菌性組成物。
【請求項８】
自己支持性フィルム，凍結乾燥物，ステープルファイバーの層(不織布)，エンドレスファイバー，織物，ニット布，組物，又はナノファイバー層からなる群から選択される固体基材の形態であって，最終組成物中の前記クロラミドの含有量が，乾燥物質に換算して計算して１０〜９０％の範囲内であることを特徴とする請求項１〜７いずれか１項記載の抗菌性組成物。
【請求項９】
二層以上の層からなる固体の基材の形態であることを特徴とする請求項８記載の抗菌性組成物。
【請求項１０】
最終組成物の適用直前に混合されることが意図される二つの分離した溶液又はゲルの形態であって，前記ヒアルロン酸のクロラミド又は前記修飾されたヒアルロン酸のクロラミドが第１の溶液又はゲルに含まれ，前記ヨウ化物が第２の溶液又はゲルに含まれ，該最終組成物中のクロラミドの含有量が乾燥物質に換算して計算して１０〜９０％の範囲であり，該最終組成物中のヨウ化物の含有量が乾燥物質に換算して計算して１０〜９０％の範囲内であることを特徴とする請求項１〜７いずれか１項記載の抗菌性組成物。
【請求項１１】
創傷被覆材の製造のための，又は移植可能な医療機器，痙瘡に対する製剤，抗菌性充填材，抗接着性バリア，膜，ポーチ（pouches）もしくはラップ(wrappings)の製造のための請求項１〜１０いずれか１項記載の抗菌性組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，ヨウ化物，及びヒアルロナンクロラミド (chloramide)としても言及される，アミド基−ＮＨ−ＣＯ−に含まれる水素原子の大部分が構造式−ＮＣｌ−ＣＯ−に従って塩素原子で置換されたヒアルロン酸誘導体を含む組成物に関する。水の存在下で，前記の混合物は，−１より高い酸化度を有し広域スペクトルの抗菌作用を付与するヨウ素を発生させる。最終組成物は，薄いフィルム，凍結乾燥物，ステープルファイバーの層，エンドレスファイバー，織物，ニット布，組物又はナノファイバー層のような多数の形態を含み，それによりヨウ化物とヒアルロナンクロラミドが両方とも医療用具又は薬剤に移行され得る。
【０００２】
さらに，本発明は，下記の特性又は下記の特性の任意の組み合わせが要求される分野におけるヨウ化物及びヒアルロナンクロラミドを含有する最終組成物の使用に関する:
・酸化又は抗菌又は抗真菌又は抗ウイルス活性
・生体適合性及び生分解性
・好適な安定度を有する様々な形態を製造する可能性
・治癒プロセスへの著しい寄与
【背景技術】
【０００３】
ヒアルロン酸
ヒアルロン酸又はそのナトリウム塩は，Ｄ−グルクロン酸及びＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの二つの繰り返し単位によって構成される，硫酸化されていないグリコサミノグリカンである。
2021534869.tif 000002
（式中，Ｒ1は水素又はナトリウムを表す）
【０００４】
天然のヒアルロン酸の分子量は５ｘ１０4〜５ｘ１０6g.mol-1の範囲内にある。この親水性の多糖は，水和，プロテオグリカン類の構成又は細胞の分化のような多数の生物学的プロセスに重要な役割を果たし，皮膚，滑液，そして結合組織の本質的な要素であることが知られている。上記ポリマーは生物系において自然に発生し，従って，それは生分解性で生体適合性であるとして特徴づけられ得る。従って，それは，広範囲の生物医学的な用途のための生物活性物質のキャリヤーの分野で適する基材を製造する。
【０００５】
ヒアルロン酸の化学的修飾及び形態
その物理的及び生物学的特性を調節する目的のためのヒアルロン酸の化学的修飾の多数の既知の方法が存在する(Burdick J. A. and Prestwich G. D., Adv. Mater. 23, 41-56, 2011)。特定用途に関して溶解度の本質的な変化が要求される場合，最も頻繁に行なわれる方法は，生分解性のエステル結合により疎水性鎖を高分子構造に共有結合することからなる(Kettou S. et al., PV 2009-399, Buffa R. et al., WO2010105582)。上記の方法で修飾した場合，該材料は，ファイバー(Scudlova J. et. al., EP2925916 A1), ニット布又は組物(Pitucha T. et al., CZ 306354)，自己支持性フィルム(Foglarova M. Et al. PV2015-166; Foglarova M. et al., Carbohydrate Polymers, 144, 68-75, 2016)又はナノファイバー層(Ruzickova J. et al. PV2013-913)のような様々な形態の製造に使用できる。不織布はステープルマイクロファイバーを結合することによって形成され，該ファイバーは非静止凝固浴（a non-stationary coagulation bath）中で湿式紡糸法によって製造される(Zapotocky V. et al., International Journal of Biological Macromolecules, 95, 903-909, 2017)。
【０００６】
トリクロロイソシアヌル酸，又はトリクロロイソシアヌル酸ナトリウムによる酸化
トリクロロイソシアヌル酸（ＴＣＣ）は，ほとんどの場合非水溶媒中で，構造的に単純なアミドをＮ−塩素化してＮ−クロラミドにするためにしばしば使用される(Hiegel G. A. et al., Synthetic Communications, 35, 2099-2105, 2005)。さらに，ＴＣＣは，水の存在下で一級水酸基を選択的に酸化するための，ピペリジニルオキシのもの（ＴＥＭＰＯ）のような安定なラジカルとの組み合わせでしばしば言及される。ヒアルロン酸に関しては，水中でＴＥＭＰＯと共にＴＣＣを使用することが，例えば特許(Buffa R. et al., WO2011069475A3) に記載された。そこでは一級水酸基をアルデヒドとカルボン酸に酸化することのみが述べられクロラミドの形成は述べられていなかった。従って，大量の第二及び第一アルコールの両方を含む基質(多糖類)の場合，ＴＣＣ及びその類似化合物が使用される場合は水酸基上の反応が予測され得る。ジクロロイソシアヌル酸ナトリウム（ＤＣＣ−Ｎａ）としても知られているＴＣＣのモノナトリウム塩は，反応性はより低いが，より良好な水溶性のＴＣＣ類似化合物である。しかしながら，水酸基を含まないアミン及びアミドのいくつかを酸化させるためのＤＣＣ−Ｎａの使用が開示された(Sun X. et al., Ind. Eng. Chem. Res., 49, 22, 2010)。生じたクロラミンは重合され，最終基質は，ラテックス乳濁液の形態の抗菌性，抗真菌性及び抗ウイルス性物質として試験され成功した(Cao Z. et al., App. Mat. Inter. 1, 2, 494-504, 2009)。
【０００７】
上記の資料に基づくと，水中でのＮ−塩素化ヒアルロナンアミド（N-chlorinated hyaluronan amide）の選択的な調製のためのＴＣＣ又はその特定の類似化合物の使用は，想定されるヒアルロナンの水酸基との反応のため，予測可能でないことが結論付けられ得る。
【０００８】
多糖類の次亜塩素酸又は次亜塩素酸塩による酸化
次亜塩素酸及びその塩は，主としてピペリジニルオキシラジカル(TEMPO)と組み合わせて，多糖類の水酸基の酸化にしばしば使用される(Bragd P. et al., WO2002/48197, Buffa R. et al., WO2011/069475A3)。アミド基を含む多糖類に関しては，大部分の場合，各クロラミドの形成が観察されなかったと一般的には言えるであろう。初期の資料はヒアルロナンクロラミドの存在に全く言及しなかった(Green S. P. et al., J. Rheumatology, 17, 1670-5, 1990, Lindvall S. et al., Chem.-Biol. Interac. 90, 1-12, 1994, Baker M. S. et al. , 461-7Arthritis and Rheumatism, 32, 4, 1989)。前述の論文は，ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）と過酸化水素及び塩化物との反応において生じる次亜塩素酸又はその塩によって引き起こされたヒアルロナンの分解過程の検討を記載している。炎症過程をシミュレートする目的で主として細胞間マトリックスに含まれるグリコサミノグリカンの分解について記述しているいくつかの刊行物がさらに存在する。主な資料は，炎症プロセス自体及び予測される特定の化学構造の生体内での存在の両方に関する情報であった。より最近の情報は，既にヒアルロナンのクロラミドに言及している。例えば，刊行物(Hawkins C. L. et al., Free Radical Biology & Medicine, 24, 9, 1396-1410, 1998)は，アミド基を含む，低分子のものを含む，ヒアルロン酸，コンドロイチン硫酸及び他の物質の分解のメカニズムの研究を扱っている。使用された酸化剤はＨＯＣｌ／ＣｌＯ-であった。著者らは，不安定な中間体（それは直接的な方法では検出されなかったが）以外のヒアルロナンクロラミドの形態の存在を想定していない。その理由は，その急速な均等な又は還元的な開裂にあり，いずれの場合もポリマーの分解につながるように反応するラジカルの形成に帰着する。別の論文(Parsons B. J. et al., Biochem. J., 381, 175-184, 2004)には，ＭＰＯ（ミエロペルオキシダーゼ酵素)，過酸化水素及び塩化物による，ヒアルロナン，コンドロイチン硫酸及び他の基質のクロラミドの形成について記載されている。著者らはそれぞれのクロラミドは一定のライフタイムを有すると推定し，そのようなクロラミドの添加剤による分解の詳細な記載を提供している。別の非常に興味深い論文(Rees M. D. et al., 125, 13719-13733J. Am. Chem. Soc., 2003)には，アミド基を含む単糖，オリゴ糖及び多糖のＮａＣｌＯとの反応について記載されている。前述の論文は，Ｃｕ2+のような他の試薬及び物質の存在下及び不存在下の両方における，また酸素との組み合わせでの，各々３５％及び１６％の修飾度を有するヒアルロナン及びコンドロイチン硫酸のクロラミドの安定性の完全な分析を含んでいる。この分解がある種の金属の存在によってかなり加速されることが見出された。ヒアルロナン及びコンドロイチン硫酸のポリマークロラミドの５０ ℃の温度における急速な分解は，金属がない状態でさえ観察された。この分解は，より低い温度では著しく遅かった。直接観察の結果はさらに，過酸化水素の存在下及び生理学的な量の塩化物の存在下でおきるＭＰＯとグリコサミノグリカンとの反応が少量のグリコサミノグリカンクロラミドを生成させることを示す。従って，著者らは該クロラミドは生体内でも生成されるという結論に達した。
【０００９】
上記の資料に基づいて，低い修飾度を有するヒアルロナンクロラミドは，既知ではあっても，それらを生物医学的な用途のための組成物を調製するのに適切なものとする十分な安定性を有することを期待できないという結論になった。
【００１０】
ヒアルロン酸及び三ヨウ化物
−１より高い酸化度を有するヨウ素（Ｉ-）の形態は，防腐効果及び消毒効果を付与するよく知られた生体適合性化合物である。最も普及した形態の一つは，分子状ヨウ素（Ｉ2）及びヨウ化物（Ｉ-）への可逆的な分解が起こりやすい三ヨウ化物（酸化度−１／３）である。分子状ヨウ素は，気体状態に変化しやすく，このことは三ヨウ化物を含む固形材料がＩ2の昇華により徐々にその酸化特性を失うことを意味する。この理由で，三ヨウ化物は様々な溶液の形で使用されることが殆どである。その一例は，その生体適合性及び有効性のため，防腐効果又は消毒効果を必要とする種々の用途に適する，いわゆるルゴールヨウ素溶液（三ヨウ化カリウムの水溶液）である。前記の溶液の軽微な欠点は，それが傷痕及び一時的な皮膚の脱色の形成を引き起こし得ることにある。後者の欠点は，傷跡が残ることを著しく抑制し，一般に，著しく治癒プロセスに寄与するヒアルロン酸の添加によって克服された。文献ＣＺ１２０１５は２００，０００〜２，５００，０００g.mol-1の範囲の分子量を有するヒアルロン酸の生理学的に許容可能な塩，ヨウ素及びヨウ化カリウムを含む包帯付着防止のための組成物を記載している。無菌の水溶液又はゲルの形態で入手可能なこの組成物は，創傷治癒プロセスを加速することができる。局所的な創傷治療の用途への，上記のヒアルロン酸及び三ヨウ化カリウムの溶液(商品名Hyiodine（登録商標）)の使用も，いくつかの文献（Bezdekova B. et al., Veterinarstvi 54, 516-519, 2004; Frankova J. et al., Journal of Materials Science: Materials in Medicine 17, 891-898, 2006; Slavkovsky R. et al. Clinical and Experimental Dermatology 35, 4, 373-379, 2010）に記載された。著者らは，主に生体適合性の抗菌性三ヨウ化物と生体適合性のヒアルロン酸を含む独特な組み合わせと，治癒プロセスをサポートする後者の存在のおかげで，慢性創傷の治療の分野で優れた結果を得た。
【００１１】
しかしながら，貯蔵，輸送及び可能な他の現場使用(in situ applications)が関係する場合，三ヨウ化物と多糖類を含む溶液の適用可能性の重要な制限を考慮に入れなければならない。一方，この材料(溶液)の体積は類似の固体形態の体積よりかなり大きく，またさらに現場使用の可能性は溶液の空間的な不安定性(流出)によりかなり制限される。一方，三ヨウ化物の酸化活性が，長期保存のために標準的であるが脆弱であるケイ酸塩ガラス以外のタイプの包装材料の使用を非常に困難にするので，包装材料の形態によって液体形態の利用性の範囲は制限される。多糖類と三ヨウ化物を含む固形物質を調製する試みは，溶媒がない状態での三ヨウ化物の固有の不安定性により成功していなかった。溶媒の存在は，Ｉ2分子の昇華プロセスを抑制し，これをＩ-と再結合させて三ヨウ化物Ｉ3-の形態を取り戻す。従って，溶媒の蒸発中に，ルゴールのヨウ素溶液は活性成分（Ｉ2）を急速に失い，該成分は固体状態から昇華する。これは三ヨウ化物を含む最終形態の長期保存の観点から決定的に根源的な問題を構成する。
【００１２】
文献ＣＺ２２３９４は，治癒プロセスを促進するための抗菌性混合物並びに創傷治癒を促進するための抗菌性ドレッシングを開示する。上記の混合物は，生理学的に活性なヒアルロン酸塩，及び場合によっては，さらに他の多糖類，及び活性な抗菌性物質を含む。それ以外に,ヨウ化カリウムのような電解質を含む。この組成物は，化学的又は物理的混合物の形態であることが可能であり，化学的なものの場合は水溶液であるのが有利であり，物理的なものの場合は多糖類ファイバーの層であり，該層の構造が抗菌性物質を含むのが有利である。この創傷ドレッシングは体表創傷の治療に適している。上記開示に特有の欠点は，三ヨウ化物以外の抗菌性物質の存在が不可欠で，それが局所的皮膚刺激，望ましくない毒性又はアレルギー反応の危険を含むことである。
【００１３】
文献ＣＺ３０３５４８は，−１より高い酸化度を有する活性なヨウ素を含む抗菌性組成物の安定性に関連した問題を回避する巧妙な可能性を開示する。上記の問題の解決は，その場でヨウ化物がヨウ素酸塩と反応するより早くには活性ヨウ素が発生しないことにある。しかしながら，別の問題は，使用される酸化剤（アルカリ金属のヨウ素酸塩）が非常に強い酸化作用を示し，活性ヨウ素の形成の過程で，それがヨウ化物と反応することが可能になる前に組織と接触するに至る場合，組織にダメージをもたらすことにある。言いかえれば，−１より高い酸化度を有するヨウ素へのヨウ化物の酸化を保証する組成物の部分は生体適合性ではない。
上記欠点は，本発明による技術的解決法によって解消し，ここでは完全に生体適合性の形態の製剤が示され，これは二つの部分：
１．ヨウ化物
２．生体適合性の酸化剤
を含む。
成分１及び２は単一の最終組成物に含まれる固体のものとして形成してもよく，また二つの分離した組成物に含まれる液体のものとして形成してもよい。後者の場合は，両方の成分が溶媒の存在下で共に混合される場合，−１より高い酸化度を有するヨウ素が発生し放出される。貯蔵及び輸送中の最終組成物の安定性は，現場で水性環境が存在するより早くは−１より高い酸化度を有する活性な（揮発性の）ヨウ素は生じないという点で保証される。より高い修飾度（５０％以上）を有するヒアルロン酸のクロラミドの形態の生体適合性の酸化剤は，活性ヨウ素発生剤（a generator of the active iodine)として寄与し，ヨウ化物との急速な反応中にその発生が起こり，同時に活性塩素源として寄与する。より低い修飾度（３５％以下）を有するヒアルロン酸のクロラミドは既に記載されてきたが，各々の開示は，不十分な安定に関する理由のため，その実用的な適用を提案するものではない。成分１及び２を含む最終組成物は，それが同じに（at the same)下記の要件を全て満たすという点で独特である：
・適用の種々のフェーズの全てにおける十分な生体適合性及び生分解性
・広範囲の種類の微生物，真菌類又はウイルスの増殖抑制（活性ヨウ素及び塩素の両方の含有に起因して）
・治癒プロセスに対する好ましい効果（ヒアルロン酸の存在に起因して）
・好適な安定度を有する広範囲の種類の形態を製造する可能性
【００１４】
一般に，前記の組み合わせは抗菌性が要求される外用及び内服用の両方，及び同時に生体適合性の創傷ドレッシング，充填材，抗接着性バリア，膜，ポケット（pockets）もしくはラップ(wraps)との関連で望ましい。
【００１５】
本発明は，ヒアルロナンクロラミド及びヨウ化物を含有する安定な，生体適合性の，かつ生分解性の組成物の調製及び使用を解決し，それにより塩素及び−１より高い酸化度を有するヨウ素の存在に起因する，治癒効果を伴う広域スペクトルの抗菌及び抗ウイルス作用を提供する。さらに，大きく調節可能な表面積及び分解時間を有する種々の形態が記述される。
【００１６】
発明の要約
本発明の主題は，ヨウ化物及びヒアルロン酸の誘導体を含む組成物であり，アミド基：−ＮＨ−ＣＯ−に含まれる水素原子の大部分が塩素原子ＮＣｌ−ＣＯ−で置換されており，「大部分」とは，５０〜１００％の範囲を指す。上記のように修飾された後，溶液の形態で存在するポリマー，即ちヒアルロナンクロラミドは，急速に，ヨウ化物（組成物の他方の部分）と反応し，Ｉ3-又はＩ2のような−１より高い酸化度を有するヨウ素化合物と天然のヒアルロン酸の形成に至る。下記式によりこの反応を記述できる。
2021534869.tif 000003
【００１７】
最終組成物は修飾されたヒアルロン酸をさらに含んでもよく，その化学的な修飾には，ヒアルロン酸のカルボキシル基及び/又は水酸基が含まれる。
【００１８】
ヒアルロン酸誘導体は，修飾ヒアルロン酸のクロラミドによって表すこともでき，前記アミド基：−ＮＨ−ＣＯ−の水素原子が構造式：−ＮＣｌ−ＣＯ−に従って塩素原子で置換され，かつ同時にクロラミドのいくつかの−ＯＨ基が−Ｏ−ＣＯ−Ｒ2基で置換され及び／又はいくつかの−ＣＨ2−ＯＨ基が−ＣＨ＝Ｏで置換され及び/又はいくつかの−ＣＯ−ＯＨ基が−ＣＯ−ＯＲ2基で置換され，式中のＲ2は１〜１７個の炭素原子を含む直鎖又は芳香族鎖である。前記修飾されたヒアルロン酸のクロラミドの例はエチルエステル，ベンジルエステル，ラウロイル，ホルミル，パルミトイル，ヘキサノイルヒアルロナンである。前記ヨウ化物は，ヨウ化ナトリウム，ヨウ化カリウム，ヨウ化カルシウム，ヨウ化マグネシウム及びそれらの混合物を含む群から選択されることが好ましい。好ましくは，多糖類，すなわちクロラミドの分子量が，５〜５００kg.mol-1の範囲である。好ましくは，前記組成物中の前記クロラミド対前記ヨウ化物のモル比が１：１〜１：５の範囲内にある。
【００１９】
抗菌性組成物はまた，添加物を９０重量％以下の濃度で含んでもよく，前記添加剤は，ポリエチレンオキシド，水，グリセロール，ヒアルロン酸，コンドロイチン硫酸，エステル形態の修飾ヒアルロン酸，アルデヒド形態の修飾ヒアルロン酸，アルギン酸ナトリウム，オキシセルロース，カルボキシメチルセルロース，ヒドロキシエチルセルロース， 脂肪酸，塩化ナトリウム，塩化カリウム，又は塩化カルシウムを含む群から選択される。したがって，前記修飾されたヒアルロン酸はいくつかの−ＯＨ基が−Ｏ−ＣＯ−Ｒ2基で置換され及び／又はいくつかの−ＣＨ2−ＯＨ基が−ＣＨ＝Ｏ基で置換され及び／又はいくつかの−ＣＯ−ＯＨ基が−ＣＯ−ＯＲ2基で置換された修飾されたヒアルロン酸（式中，Ｒ2は１〜１７個の炭素原子を含む直鎖又は芳香族鎖である）である。
【００２０】
ヒアルロナンクロラミドの調製は，窒素に結合した塩素を含む試薬により，好ましくはトリクロロイソシアヌル酸又はジクロロイソシアヌル酸の塩により行なわれる。その調製（修飾）は，水中で，該溶液のｐＨを２．５〜７．５の範囲，好ましくは４．０〜６．０の範囲内として行なわれる。より低いｐＨ値は，０．２当量〜７当量の範囲，好ましくは２当量〜４当量の範囲の量の酢酸を添加することにより得られる。最初の基質はヒアルロン酸又はその化学的に修飾される誘導体によって構成することができ，該基質の分子量は４０〜２２００kg.mol-1の範囲である。さらに，最終組成物の調製は，下記：
・ヨウ化物及びヒアルロナンクロラミドを含む固体形態であって，該形態は例えば，自己支持性フィルム，凍結乾燥物，ステープルファイバーの層（不織布），エンドレスファイバー，織物，ニット布，組物又はナノファイバー層を含み，これらの全ては所望によりさらに添加物を含み，最終組成物中のクロラミドの割合が乾燥物質に換算して計算して１０〜９０％の範囲内として，ヨウ化物の割合が乾燥物質に換算して計算して１０〜９０％の範囲内としてもよく，該固体形態は２層又はそれ以上の共に押圧された異なる層からなっていても良い；
・所望により，さらに添加剤を含む液体及びゲル形態であって，ヨウ化物を含む成分がヒアルロナンクロラミドを含む成分と分離されており，最終適用の直前にそれらの成分が共に混合され，最終組成物中のクロラミドの割合が乾燥物質に換算して計算して１０〜９０％の範囲内となり，最終組成物中のヨウ化物の割合が乾燥物質に換算して計算して１０〜９０％の範囲内であるもの，
の形成を含む。
【００２１】
さらに，本発明は，特に下記の特性又は下記の特性の任意の組み合わせが要求される分野における，前記最終組成物の使用に関する：
・酸化又は抗菌又は抗真菌又は抗ウイルス活性
・生体適合性及び生分解性
・好適な安定度を有する様々な形態を製造する可能性
・治癒プロセスへの著しい寄与
・制御された生分解速度
最終組成物は生物医学的な適用において，特に創傷ドレッシング，移植可能な医療機器，痙瘡に対する製剤，抗菌性の充填材，抗接着性バリア，膜，ポケット又はラップ，吻合を行なった後の癒着の予防のための製品，又は傷の離開の予防のための製品，又は他の物質との組み合わせで，腹壁欠陥の外科的修復をサポートするための製品の製造のために使用可能である。
【００２２】
最終組成物の制御された生分解速度は，ヒアルロナンクロラミドを，アルギン酸ナトリウムもしくはカルボキシメチルセルロースのようなより遅い分解性を示す添加剤と組み合わせること，及び／又はヒアルロナンクロラミドそれ自体を例えば多価のＣａ2+陽イオンを用いて架橋することによって達成できる。
【００２３】
本発明は，ヒアルロナンクロラミドに加えて，ヨウ化カリウム，ヨウ化ナトリウム，ヨウ化カルシウム又はヨウ化マグネシウム又はそれらの混合物のようなヨウ化物を含み，治癒効果と共に抗菌及び抗ウイルス作用を示す，安定な，生体適合性及び生分解性の組成物の調製及び使用に関する。さらに，大きく調節可能な表面積，機械的又は流動学的性質及び分解期間を有する広範囲の形態が記載されている。
【００２４】
本発明による技術的解決法の実際の実行は，技術的な観点から複雑ではなく，また，入手しにくい化学薬品，溶剤又は単離手段を使用することを要しない。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
無し
【００２６】
図面の詳細な説明
図１Ａ，図１Ｂ：実施例２０により調製されたヒアルロナンクロラミド及びヨウ化カリウムをベースとする凍結乾燥物の形態を有する組成物の抗菌活性。
この図は，ヒアルロナンクロラミドをベースとする可溶性の凍結乾燥物及び実施例２０による５／１の比率のヒアルロナン及びヨウ化カリウムの混合物をベースとする可溶性の凍結乾燥物の組み合わせを含む組成物の存在下での（２回の繰り返し：左側と中央の図），対照材料（右側の図），即ち実施例１９による５／１の比率で天然のヒアルロン酸にヨウ化カリウムを添加したものの凍結乾燥物と比較した，微生物Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudomona aeruginosa, Candida albicans（全て図１Ａ中）及びStaphylolococus epidermidis (図１Ｂ)の増殖抑制を示す。図１Ｂは，１つの繰り返し（左側の図）と対照材料（右側の図）の間の比較を示す。
抗菌活性の測定方法は，実施例４３に記載されている。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
ＤＳ＝置換度＝１００％ｘ(修飾されたポリマー単位のモル量)／(全てのポリマー単位の総モル量)
別段の定めがない限り，ここに使用される表現「当量」(eq)は，ヒアルロナンの二糖のようなそれぞれの多糖類の繰り返し単位に関するものである。
別段の定めがない限り，パーセントは重量パーセントである。
ここに使用される限り，ポリマーの分子量はSEC-MALLS方法によって決定した重量平均値を表す。
【００２８】
実施例1
ヒアルロナンのエチルエステルの調製
ヒアルロナン水溶液(１g，３００kg.mol-1，４０mlの水中)にＮａＯＨをｐＨ値が９に達するまで添加した。続いて，２０mlのジメチルスルホキシド及び０．０８mlのヨウ化エチルを添加し，生じた混合物を，３日間４５℃の温度で撹拌した。その後，生じた混合物を，１００％のイソプロパノール１４０mlによって沈殿させ，濾過によって分離した固形物をイソプロパノールで洗浄し，真空乾燥した。この生成物(８９７mg)をＮＭＲによって分析した。
このエステルのＤＳ値は６％（ＮＭＲにより測定した。文献：Kettou S. et al., CZ PV 2009-399)であった。
【００２９】
実施例２
ヒアルロナンのベンジルエステルの調製
ヒアルロナン水溶液(１g，３００kg.mol-1，４０mlの水中)にＮａＯＨをｐＨ値が９に達するまで添加した。続いて，２０mlのジメチルスルホキシド及び０．０８mlの臭化ベンジルを添加し，生じた混合物を，４日間２０℃の温度で撹拌した。その後，生じた混合物を，１００％のイソプロパノール１４０mlによって沈殿させ，濾過によって分離した固形物をイソプロパノールで洗浄し，真空乾燥した。最終生成物(９２０mgの量で得られた)をＮＭＲによって分析した。
このエステルのＤＳ値は３％（ＮＭＲにより測定した。文献：Kettou S. et al., CZ PV 2009-399)であった。
【００３０】
実施例３
ヒアルロナンのラウロイルの調製
７０mlのテトラヒドロフラン，４当量のトリエチルアミン及び０．１当量の４−ジメチルアミノピリジンを，蒸留水１００ml中のヒアルロナン(５g，２５０kg.mol-1)の溶液に添加した。同時に，ラウリン酸（４当量)を，３０mlのテトラヒドロフラン及び７mlのトリエチルアミンの混合物に溶解し，得られた溶液に，０〜５℃で１５分間で４．８mlのエチルクロロホルメートを添加した。続いて，生じた懸濁液を，前記ヒアルロナンの溶液に濾過して入れ，その反応混合物を２０℃で５時間撹拌した。生じた溶液を，１００％のイソプロパノール４００mlを加えることにより沈殿させ，８０％のイソプロパノールで，そして次に１００％のイソプロパノールで洗浄した。その後，その沈殿を４０℃で２日間乾燥した。置換度はＮＭＲによって測定され３７％であった。
【００３１】
実施例４
ヒアルロナンのホルミルの調製
ＮａＣｌ１％，ＫＢｒ１％，Ｎ−アセチルアミノ−ＴＥＭＰＯ(０．０１当量）及びＮａＨＣＯ3（２０当量）を含有するＨＡ（１g，２００kg.mol-1)の１％水溶液に，窒素雰囲気下でＮａＣｌＯ（０．５当量)の水溶液を徐々に添加した。この混合物を１０℃で１２時間撹拌し，そこに０．１ｇのエタノールを添加した。続いて，最終混合物をもう1時間撹拌した。生じた溶液を蒸留水で希釈して０．２％の濃度にし，混合物（０．１％ＮａＣｌ，０．１％ＮａＨＣＯ3）に対して５リットル３回(１ｘ１日)，その後蒸留水に対して５リットル７回（２ｘ１日)透析した。最終溶液を蒸発させ分析した。ＤＳ９％（ＮＭＲで決定した）。
【００３２】
実施例５
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン(Ｍｗ２２００kg.mol-1）を２５０mlの蒸留水に溶解した。続いて，２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃で１５分間撹拌した。その後，３．２g(１当量)の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，該混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，該混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ８２％（ＮＭＲによって決定した)。
【００３３】
実施例６
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ４０kg.mol-1）を，１００mlの蒸留水に溶解した。続いて，２mlの酢酸を添加し，該溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，３．２g（１当量)の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，該混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ８３％（ＮＭＲから決定した)。
【００３４】
実施例７
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ２２００kg.mol-1）を１０００mlの蒸留水に溶解した。続いて，２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，３．２g（１当量)の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，その混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ７２％（ＮＭＲから決定した)。
【００３５】
実施例８
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ２２００kg.mol-1）を２５０mlの蒸留水に溶解した。続いて，０．１４mlの酢酸（０．２当量)を添加し，その溶液を２０℃で１５分間撹拌した。その後，３．２g（１当量）の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，該混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，その混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ５３％（ＮＭＲから決定した)。
【００３６】
実施例９
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ１８０kg.mol-1）を２５０mlの蒸留水に溶解した。続いて，３mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，３．２g（１当量）の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，その混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ８３％（ＮＭＲから決定した）。
【００３７】
実施例１０
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ２２００kg.mol-1）を２５０mlの蒸留水に溶解した。続いて，５mlの酢酸（７当量）を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，３．２g（１当量）の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，その混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ９５％（ＮＭＲから決定した）。
【００３８】
実施例１１
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ２２００kg.mol-1）を２５０mlの蒸留水に溶解した。続いて，２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，１．０７g（０．３３当量）の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，その混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ５１％（ＮＭＲから決定した）。
【００３９】
実施例１２
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ２２００kg.mol-1）を２５０mlの蒸留水に溶解した。続いて，２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，４．８g（１．５当量）の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，その混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ９６％（ＮＭＲから決定した）。
【００４０】
実施例１３
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ２２００kg.mol-1）を２５０mlの蒸留水に溶解した。続いて，２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，２．９１g（１当量）の量のトリクロロイソシアヌル酸を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，その混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ９７％（ＮＭＲから決定した）。
【００４１】
実施例１４
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ２２００kg.mol-1）を２５０mlの蒸留水に溶解した。続いて，２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，０．８７g（０．３当量）の量のトリクロロイソシアヌル酸を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，その混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ７１％（ＮＭＲから決定した）。
【００４２】
実施例１５
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ２２００kg.mol-1）を２５０mlの蒸留水に溶解した。続いて，２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，３．２g（１当量）の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で５時間撹拌した。続いて，その混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ５２％（ＮＭＲから決定した）。
【００４３】
実施例１６
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ２２００kg.mol-1）を２５０mlの蒸留水に溶解した。続いて，２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，３．２g（１当量）の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で４８時間撹拌した。続いて，その混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ８５％（ＮＭＲから決定した）。ＮＭＲ溶液（Ｄ2Ｏ０．７ml中の７mgの生成物）を，２０℃でさらに５日間放置した後に測定した。ＤＳ値は８４％と決定された。粉末の形態の固体部分は２０℃で１００日間放置し，その後，その試料をＤ2Ｏに溶解した。ＤＳ値は８４％と決定された。
【００４４】
実施例１７
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ２２００kg.mol-1）を２５０mlの蒸留水に溶解した。続いて，２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，３．２g（１当量）の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を５℃の温度で７２時間撹拌した。続いて，その混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ６４％（ＮＭＲから決定した）。
【００４５】
実施例１８
ヒアルロナンクロラミドの調製
５gのヒアルロナン（Ｍｗ２２００kg.mol-1）を２５０mlの蒸留水に溶解した。続いて，２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，３．２g（１当量）の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を４０℃の温度で５時間撹拌した。続いて，その混合物を２．５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を，２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ７５％（ＮＭＲから決定した）。
【００４６】
実施例１９
ヒアルロナン及びヨウ化カリウムを含む凍結乾燥物の調製
蒸留水５０ml中のヒアルロナン（１ｇ，Ｍｗ２，２００kg.mol-1）の溶液を，蒸留水５ml中のヨウ化カリウム０．２gの溶液と混合し，該混合物を１０分間撹拌した。その後，最終溶液を−５０℃の温度で急速冷凍し凍結乾燥した。
【００４７】
実施例２０
凍結乾燥物（ヒアルロナンクロラミド＋ヒアルロナン＋ヨウ化カリウム）の調製−ヨウ素発生剤
実施例１９により調製された凍結乾燥物１５mg及び実施例２５により調製された凍結乾燥物１５mgを，交互に積み重ねるやり方（最下層は実施例１９による凍結乾燥物である）で置き，２０℃で，対応する圧力を１分間加えて，平滑なガラスローラーによって機械的に共にプレスした。得られた材料を乾燥条件下で貯蔵した。
【００４８】
実施例２０ａ
凍結乾燥物（ヒアルロナンクロラミド＋ヒアルロナン＋ヨウ化カリウム）の調製−ヨウ素発生剤
実施例１９により調製された凍結乾燥物３０mg及び実施例２５により調製された凍結乾燥物３mgを，交互に積み重ねるやり方（最下層は実施例１９による凍結乾燥物である）で置き，２０℃で，必要な圧力を１分間加えて，平滑なガラスローラーによって機械的に共にプレスした。得られた材料を乾燥条件下で貯蔵した。
【００４９】
実施例２０ｂ
凍結乾燥物（ヒアルロナンクロラミド＋ヒアルロナン＋ヨウ化カリウム）の調製−ヨウ素発生剤の調製
実施例１９により調製された凍結乾燥物３mg及び実施例２５により調製された凍結乾燥物３０mgを，交互に積み重ねるやり方（最下層は実施例１９による凍結乾燥物である）で置き，２０℃で，必要な圧力を１分間加えて，平滑なガラスローラーによって機械的に共にプレスした。得られた材料を乾燥条件下で貯蔵した。
【００５０】
実施例２１
自己支持性フィルム（ヒアルロナンクロラミド＋ヒアルロナンラウロイル＋ヨウ化カリウム）−ヨウ素発生剤の製造
実施例３１及び３２により製造された自己支持性フィルムを交互に積み重ねるやり方（最下層はヒアルロナンラウロイル＋ヨウ化カリウムである）で置き，２０℃で，必要な圧力を１分間加えて，平滑なガラスローラーによって機械的に共にプレスした。得られた材料を乾燥条件下で貯蔵した。
【００５１】
実施例２２
ヒアルロナンのエチルエステルのクロラミドの調製
実施例１によって調製したヒアルロナンエチルエステル０．５gを２５mlの蒸留水に溶解した。続いて，０．２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，０．３２g（１当量）の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，その混合物を２５０mlのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を０．２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ８０％（ＮＭＲから決定した）。
【００５２】
実施例２３
ヒアルロナンのベンジルエステルのクロラミドの調製
実施例２によって調製したヒアルロナンのベンジルエステル０．５gを，２５mlの蒸留水に溶解した。続いて，０．２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，０．３２g（１当量）の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，その混合物を０．２５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を０．２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ７８％（ＮＭＲから決定した）。
【００５３】
実施例２４
ヒアルロナンのホルミルの調製
実施例４によって調製したヒアルロナンホルミル０．５gを２５mlの蒸留水に溶解した。続いて，０．２mlの酢酸を添加し，その溶液を２０℃の温度で１５分間撹拌した。その後，０．３２g（１当量）の量のジクロロイソシアヌル酸のナトリウム塩を添加した。その後，その混合物を２０℃の温度で２４時間撹拌した。続いて，その混合物を０．２５リットルのイソプロパノールによって沈殿させ濾過した。固体の部分を０．２リットルのイソプロパノールで洗浄し，２０時間真空乾燥した。ＤＳ７５％（ＮＭＲから決定した）。
【００５４】
実施例２５
凍結乾燥したヒアルロナンクロラミドの調製
蒸留水５０ml中の実施例１６により調製された１gのヒアルロナンクロラミドの溶液を直ちに均質化に続いて，−５０℃の温度で急速冷凍し，凍結乾燥した。ＤＳ値はＮＭＲによって８３％として決定した。
【００５５】
実施例２６
ヒアルロナンのエチルエステルの凍結乾燥したクロラミドの調製
蒸留水中１０ml中の実施例２２により調製されたヒアルロナンのエチルエステルのクロラミド０．２gの溶液を，均質化に続いて直ちに−５０℃の温度で急速冷凍し，凍結乾燥した。ＤＳ値はＮＭＲによって６８％と決定された。
【００５６】
実施例２７
凍結乾燥したヒアルロナンのベンジルエステルのクロラミドの調製
蒸留水中１０ml中の実施例２３により調製されたヒアルロナンのベンジルエステルのクロラミド０．２gの溶液を，均質化に続いて直ちに−５０℃の温度で急速冷凍し，凍結乾燥した。ＤＳ値はＮＭＲによって６７％と決定された。
【００５７】
実施例２８
ヒアルロナンクロラミドで製造されたステープルファイバーからの不織布の製造
２％溶液の調製は，ＮＭＲによる置換度が７１％のヒアルロナンクロラミド（実施例１４）の使用をベースとした。上記の成分を秤量し，必要な量を得るために蒸留水を添加した。全混合物を，室温で，攪拌機中，その規定速度を５００rpm，撹拌時間を２４時間として撹拌した。最終溶液は透明で僅かに粘性であった。ステープルファイバーの製造法は，１００％のイソプロパノールを含有する可動の凝固浴の液流中での高分子溶液の析出をベースとする。上記溶液を糸道ダクト（１管／直径８mm）を通して供給される凝固浴の液流中へ押出ノズルにより室温でドーズした。この浴の制御された流速は１．１５m/sであった。ステープルファイバーの形成は析出によって得られた。形成されたファイバーを浴流中に漂わせ，分離コーム（separation combs）に捕獲し，１００％イソプロパノールを含有する熟成浴に移した。熟成浴に入れた直後に，この粗ファイバー（raw fiber）を，ファイバーの量と浴の量の比率を０．５g／３５０mlとして，攪拌機の回転ブレードにより粉砕した。最終的な繊維の分散液をフィルターフレームを通し多孔基材を通して濾過した。与えられた実験については，表面積６４cm2のフィルターフレームを使用した。濾過した後に，ＰＡＤニットファブリック（a PAD knitted fabric）を用いてファイバーを乾燥装置上に移した。該装置は不織布の固定のための手段を備えていた。乾燥装置上に置かれる前に，ローラーを用いて析出残渣をファイバーから取り除いた。この不織布を４０℃の温度で３０分間乾燥した。生じた層を，自己支持性層として基材から分離し，化学天秤によって秤量した。該布の面積重量は５０．２g/m2であった。形成した不織布の置換度はＮＭＲによって６４％と決定された。
【００５８】
実施例２９
ヒアルロナンクロラミドからのナノファイバー層の製造
ヒアルロン酸を含むナノファイバー層の製造のために，下記の組成の水溶液を調製した。実施例５により調製されたヒアルロナンクロラミドの濃度は乾燥分で３７．５％であり，８０kg.mol-1の分子量の天然のヒアルロナンの濃度は３７．５％であり，６００kg.mol-1の分子量のポリエチレンオキシドの量は２５％であった。全乾燥分の濃度は５％であった。この溶液をシリンジに供給し，針なし線状ノズル（a needleless linear nozzle）を用いて，コレクタエミッタ間の電圧５０kV及び間隔１６cmで，プレート型コレクター上の静電場で紡糸した。ファイバーの寸法は１１０±２７nmであった。ＤＳ値はＮＭＲによって３０％と決定された。
【００５９】
実施例２９ａ
ヒアルロナンとヨウ化カリウムを含むナノファイバー層の製造
ヒアルロン酸を含むナノファイバー層の調製の目的で，下記の組成を有する水溶液を調製した。８０kg.mol-1の分子量を有する天然のヒアルロナンの濃度は６２．５％であり，６００kg.mol-1の分子量を有するポリエチレンオキシドの量は２５％であり，ＫＩの量は１２．５％であった。乾燥分の全濃度は５％であった。この溶液をシリンジに移し，針なし線状ノズルを用いて，コレクタエミッタ間の電圧及び間隔を各々５６kV及び１８cmとして，プレート型コレクター上の静電場で紡糸した。ファイバーの寸法は１４０±３５nmであった。
【００６０】
実施例３０
ヒアルロナンクロラミドからの自己支持性フィルムの製造
該フィルムの調製を，密閉チャンバーでフィルムを乾燥する特別な乾燥装置中行った。該装置は温度が制御可能な底板及び天板を装備していた。装置の詳細な説明は刊行物（Foglarova et al., PV2015-166; FoglarovaM. Et al., Carbohydrate Polymers 2016, 144, 68-75)に提供されている。実施例５に記載した秤量２００mgのヒアルロナンクロラミドを，２０mlの脱塩水に溶解し，生じた溶液を２時間撹拌した。その後，最終溶液を乾燥装置内のパッド（疎水化ガラス）上にドーズし，１８時間密閉チャンバーで乾燥した。乾燥機の底板及び天板の温度は各々５０℃及び２０℃であった。乾燥した後に，フィルムをパッドから外し，将来の使用のために保管した。ＤＳ値はＮＭＲによって６０％と決定された。
【００６１】
実施例３１
ヒアルロナン及びヨウ化カリウム（１０／１）からの自己支持性フィルムの製造
フィルムの調製は実施例３０に記載した装置中で行なった。秤量１６０mgのヒアルロン酸ナトリウム及び１６mgのヨウ化カリウムは，脱塩水１６mlの脱塩水に溶解し，生じた溶液を１５分間撹拌した。その後，最終溶液を，乾燥装置のパッド（疎水化ガラス）上にドーズし，密閉チャンバー内で７時間乾燥した。該乾燥機の底板及び天板の温度は各々５０℃及び２０℃であった。乾燥した後に，フィルムをパッドから外し，将来の使用のために保管した。
【００６２】
実施例３２
ラウロイルヒアルロナン及びヒアルロナンクロラミド（３／１）からの自己支持性フィルムの製造
フィルムの調製は実施例３０に記載した装置中で行なった。秤量１５０mgのヒアルロン酸ナトリウムのラウロイル誘導体（実施例３に記載）を，２−プロパノールの水溶液（５０重量％）１５mlに溶解し，生じた溶液を１８時間撹拌した。秤量５０mgの実施例５に記載のヒアルロナンクロラミドを５mlの脱塩水に溶解し，生じた溶液を２時間撹拌した。続いて，両方の溶液を３０分間で混合した。その後，最終溶液を，乾燥装置のパッド（疎水化ガラス）上にドーズし，密閉チャンバー内で７時間乾燥した。乾燥機の底板及び天板の温度は各々５０℃及び２０℃であった。乾燥した後に，フィルムをパッドから外し，将来の使用のために保管した。最終材料中のヒアルロナンクロラミドのＤＳ値はＮＭＲによって２５％と決定された。
【００６３】
実施例３３
ナノファイバー層（ヒアルロナンクロラミド＋ヒアルロナン＋ヨウ化カリウム）−ヨウ素発生剤の製造
実施例２９及び２９ａにより製造されたナノファイバー層を，互いに積み重ねるやり方（最下層はヒアルロナン＋ヨウ化カリウム）で配置した。この材料を乾燥条件下で貯蔵した。
【００６４】
実施例３４
溶液の形態の二成分混合物（ヒアルロナンクロラミド＋ヨウ化ナトリウム１／１）の調製−ヨウ素発生剤
適用の直前に，蒸留水３ml中の実施例５により調製されたヒアルロナンクロラミド１００mgの溶液を，蒸留水１ml中に２９mgのヨウ化ナトリウムを含む溶液と静電ミキサー(a static mixer)により混合した。その直後，生じた混合物中にオレンジ色に着色した三ヨウ化物及びヨウ素が生じた。
【００６５】
実施例３５
ゲルの形態の二成分混合物（ヒアルロナンクロラミド＋ヨウ化カルシウム１／５）の調製−ヨウ素発生剤
適用直前に，蒸留水６ml中の実施例５により調製されたヒアルロナンクロラミド１００mgの溶液を，３５mlの蒸留水中に１，９００kg.mol-1の分子量を有する天然のヒアルロナン７５８mg及びヨウ化カルシウム１４２mgを含む溶液と静電ミキサーにより混合した。その直後，生じた粘性の混合物中にオレンジ色に着色した三ヨウ化物及びヨウ素が生じた。
【００６６】
実施例３６
酸化セルロース／ヒアルロナンクロラミド凍結乾燥物の調製
蒸留水１００ml中の酸化セルロース（Ｍｗ５０kg.mol-1）０．３ｇ及び実施例５により調製したヒアルロナンクロラミド０．１gの溶液を，均質化に続いて直ちに−５０℃の温度で急速冷凍し，凍結乾燥した。ヒアルロナンクロラミドのＤＳ値はＮＭＲによって２４％と決定された。
【００６７】
実施例３７
アルギナート／ヒアルロナンクロラミド凍結乾燥物の調製
蒸留水１００ml中のアルギナート（Ｍｗ４０kg.mol-1）０．３g及び実施例５によって調製したヒアルロナンクロラミド０．１gの溶液を，均質化に続いて直ちに−５０℃の温度で急速冷凍し，凍結乾燥した。ヒアルロナンクロラミドのＤＳ値はＮＭＲによって２６％と決定された。
【００６８】
実施例３８
カルボキシメチルセルロース／ヒアルロナンクロラミド凍結乾燥物の調製
蒸留水中１００mlのカルボキシメチルセルロース（Ｍｗ３０kg.mol-1）０．３ｇ及び実施例５によって調製したヒアルロナンクロラミド０．０３ｇの溶液を，均質化に続いて直ちに−５０℃の温度で急速冷凍し，凍結乾燥した。ヒアルロナンクロラミドのＤＳ値はＮＭＲによって３％と決定された。
【００６９】
実施例３９
コンドロイチン硫酸／ヒアルロナンクロラミド凍結乾燥物の調製
蒸留水１００ml中のコンドロイチン硫酸（Ｍｗ４５kg.mol-1）０．３ｇ及び実施例５によって調製したヒアルロナンクロラミド０．１ｇの溶液を，均質化に続いて直ちに−５０℃の温度で急速冷凍し，凍結乾燥した。ヒアルロナンクロラミドのＤＳ値はＮＭＲによって２５％と決定された。
【００７０】
実施例４０
ヒドロキシエチルセルロース／ヒアルロナンクロラミド凍結乾燥物の調製
蒸留水１００ml中のヒドロキシエチルセルロース（Ｍｗ３５kg.mol-1）０．３g及び実施例５によって調製したヒアルロナンクロラミド０．１gの溶液を，均質化に続いて直ちに−５０℃の温度で急速冷凍し，凍結乾燥した。ヒアルロナンクロラミドのＤＳ値はＮＭＲによって２５％決定された。
【００７１】
実施例４１
ホルミルヒアルロナン／ヒアルロナンクロラミド凍結乾燥物の調製
蒸留水１００ml中の実施例４により調製されたヒアルロナンホルミル（Ｍｗ５０kg.mol-1）０．３g及び実施例５により調製されたヒアルロナンクロラミド０．１ｇの溶液を，均質化に続いて直ちに−５０℃の温度で急速冷凍し，凍結乾燥した。ヒアルロナンクロラミドのＤＳ値はＮＭＲによって２５％と決定された。
【００７２】
実施例４２
ＣａＣｌ2で架橋したヒアルロナンクロラミドの凍結乾燥物の調製
蒸留水１００ml中の実施例５によって調製したヒアルロナンクロラミド（０．１g）の溶液に０．０１ｇのＣａＣｌ2．２Ｈ2Ｏを添加し，その混合物を２０℃で１時間撹拌した。均質化に続いて，最終粘稠溶液を−５０℃の温度で急速冷凍し，凍結乾燥した。ヒアルロナンクロラミドのＤＳ値はＮＭＲによって６４％と決定された。
【００７３】
実施例４３
インビトロ抗菌活性試験（図１Ａ及び１Ｂ）：
試験する個々の微生物について，約１０5のCFU/mlの濃度を有する懸濁液を調製した。１００μlの量の懸濁液を，ペトリ皿中のトリプトンソイ寒天の表面に接種した（各皿に適用した微生物の概数は１０4CFUであった）。その懸濁液を，滅菌ループにより皿の全表面に一様に広げた。寒天に懸濁液を吸収させた後に，寒天の表面を試験のために選択された無菌の四角形の試料で覆った。試験する細菌株を有する皿を３７℃で２４時間培養した。この試験は，重さ２５〜３５mg，おおよその大きさ１５mmｘ１５mmの四角片の形態の実施例２０により調製されたヒアルロナンクロラミド及びヨウ化カリウムの凍結乾燥物を含み，それぞれの対照材料は実施例１９により調製されたヒアルロナンクロラミドを含まない類似の凍結乾燥物である。有効性試験については拡散プレート法（２Ｄレイアウト）を選択した。培養のためには非選択的な基材（トリプトンソイ寒天）を選択した。四角片の試料を下記の微生物に関して試験した： Bacillus subtilis, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida Albicans, Pseudomona aeruginosa, Staphylolococus epidermidis。図１は，ヒアルロナンクロラミドを含まない対照材料と比較して，本発明によるヨウ化物と共にヒアルロナンクロラミドを含む組成物が著しく高い効果を与えることを明確に示す。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【国際調査報告】
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