(57)【要約】  眼炎症の治療または予防をその必要のある対象に行う方法、および眼炎症に罹患した対象に投与するステロイドの用量を減少させる方法であって、対象の眼に、医薬組成物、少なくとも１つのホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体と、を含むホスホリルコリン−タフトシン複合体を投与することを含む、方法が提供される。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼炎症の治療または予防をその必要のある対象に行うための方法であって、少なくとも１つのホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体と、を含むホスホリルコリン−タフトシン複合体を非常に低い用量で含む医薬組成物を、前記対象の眼へ投与することを含む、方法。
【請求項２】
眼炎症に罹患した対象に投与するステロイドの用量を減少させる方法であって、少なくとも１つのホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体と、を含むホスホリルコリン−タフトシン複合体を含む医薬組成物を、前記対象の眼へ投与することを含む、方法。
【請求項３】
前記ホスホリルコリン部分またはその誘導体と、前記タフトシンまたはその誘導体とが連結している、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ホスホリルコリン部分またはその誘導体と、前記タフトシンまたはその誘導体とがスペーサーにより分離されている、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記スペーサーが、少なくとも２つのアミノ酸である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記スペーサーが、グリシン−チロシンである、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
前記治療が、炎症を軽減することを含む、請求項１または３〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ステロイドの用量の減少が、非減少用量の前記ステロイドによって誘導される炎症の軽減と同等またはそれより高い程度で、前記眼における炎症を軽減することを含む、請求項２〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記炎症の軽減が、前記対象の前記眼における少なくとも１つの炎症性サイトカインの分泌を減少させることを含む、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記炎症性サイトカインが、ＴＮＦαである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記炎症の軽減が、前記対象の前記眼における少なくとも１つの抗炎症性サイトカインの分泌を増加させることを含む、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗炎症性サイトカインが、ＩＬ−１０である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記方法が、ステロイドを投与することをさらに含む、請求項１または３〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記眼炎症が、ブドウ膜炎である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記眼炎症が、ドライアイ、乾性黄斑変性、および術後炎症を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記医薬組成物が、眼投与用に製剤化される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記眼投与用の製剤化が、点眼製剤、軟膏製剤、および注射製剤のうちのいずれか１つを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記医薬組成物が、増粘剤、浸透促進剤、または両方のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記医薬組成物が、増粘剤を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記非常に低い用量が、０．００５μｇ／ｍｌ以下の用量である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ステロイドが、コルチコステロイドである、請求項２〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ステロイドの用量の減少が、少なくとも１０％の減少である、請求項２〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１７年１１月２日に出願された米国仮特許出願第６２／５８０，８１７号の優先権の利益を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、眼炎症治療の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
眼炎症、眼の任意の部分の炎症は、最も一般的な眼疾患のうちの１つである。眼炎症は、実際には、広範囲の眼の炎症性疾患を指し、それらのうちの１つはブドウ膜炎である。これらの疾患は、全ての年齢群において広く認められ、いくつかは、クローン病、ベーチェット病、若年性特発性関節炎などの全身性疾患と関連している。炎症は、ドライアイ、および乾性黄斑変性のような他の一般的な眼の症状にも関連し得る。いくつかの薬物はまた、ブドウ膜炎および／またはドライアイを引き起こす既知の副作用も有する。眼炎症の最も一般的な治療は、ステロイド、特にコルチコステロイドである。しかしながら、これらの治療は、いくつかの既知の、時には重症の副作用を有する。
【０００４】
タフトシン−ホスホリルコリン（ＴＰＣ）は、免疫調節活性を有する新規な二分子性特異的小分子である。タフトシン（Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ）は、脾臓におけるＩｇＧの重鎖のＦｃドメインの酵素的切断により産生される自己の天然免疫調節性ペプチドである。ホスホリルコリン（ＰＣ）は、蠕虫により分泌される小双性イオン分子であり、免疫寛容の状況を誘導して、宿主内において、ならびにいくつかの細菌およびアポトーシス細胞の表面上で、蠕虫の生存を許すものである。ＴＰＣの皮下（５μｇ／マウス）および経口（５０μｇ／マウスおよび２５０μｇ／マウス）投与は、自己免疫疾患の３つの実験マウスモデルにおいて顕著な免疫調節効果を示した。ＴＰＣの投与は、ループス傾向マウスにおける糸球体腎炎の発症を予防し、デキストラン硫酸ナトリウム誘発性の大腸炎を有するマウスにおける大腸炎を軽減させ、コラーゲン誘発性関節炎を有するマウスにおける関節損傷を予防した。この３つのモデルにおいて、ＴＰＣは、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＴＮＦα、ＩＦＮγのような炎症性サイトカイン発現を抑制し、抗炎症性ＩＬ−１０を増加させ、ＴおよびＢ調節細胞の増殖を増強し、全体として、マウスの疾患の重症度の軽減およびより長い生存をもたらす。
【０００５】
ステロイドに依存しない眼炎症を治療する方法が大いに必要とされている。さらに、眼への直接投与のためのＴＰＣの製剤であり、かつその薬物を非常に低い用量で含む、ＴＰＣの製剤は大いに有益である。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、眼炎症の予防または治療をその必要のある対象に行う方法、および眼炎症に罹患した対象に投与するステロイドの用量を減少させる方法であって、少なくとも１つのホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体と、を含む、ホスホリルコリン−タフトシン複合体を含む医薬組成物を、対象の眼へ投与することを含む、方法を提供する。
【０００７】
第一の態様によれば、眼炎症の治療または予防をその必要のある対象に行うための方法であって、少なくとも１つのホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体と、を含むホスホリルコリン−タフトシン複合体を非常に低い容量で含む医薬組成物を、対象の眼へ投与することを含む、方法を提供する。
【０００８】
別の態様によれば、眼炎症に罹患した対象に投与するステロイドの用量を減少させる方法であって、少なくとも１つのホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体と、を含むホスホリルコリン−タフトシン複合体を含む医薬組成物を、対象の眼へ投与することを含む、方法が提供される。
【０００９】
いくつかの実施形態によれば、ホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体とが連結している。いくつかの実施形態によれば、ホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体とがスペーサーによって分離されている。いくつかの実施形態によれば、スペーサーは、少なくとも２つのアミノ酸である。いくつかの実施形態によれば、スペーサーはグリシン−チロシンである。
【００１０】
いくつかの実施形態によれば、治療は、炎症を軽減することを含む。いくつかの実施形態によれば、炎症を軽減することは、対象の眼における少なくとも１つの炎症性サイトカインの分泌を減少させることを含む。いくつかの実施形態によれば、炎症性サイトカインは、ＴＮＦαである。いくつかの実施形態によれば、炎症を軽減することは、対象の眼における少なくとも１つの抗炎症性サイトカインの分泌を増加することを含む。いくつかの実施形態によれば、抗炎症性サイトカインは、ＩＬ−１０である。
【００１１】
いくつかの実施形態によれば、ステロイドの用量の減少は、非減少用量のステロイドによって誘導される炎症の軽減と同等又はそれより高い程度で、眼における炎症を軽減することを含む。
【００１２】
いくつかの実施形態によれば、本方法は、ステロイドを投与することをさらに含む。
【００１３】
いくつかの実施形態によれば、眼炎症は、ブドウ膜炎である。いくつかの実施形態によれば、眼炎症は、ドライアイ、乾性黄斑変性、および術後炎症を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態によれば、医薬組成物は、眼投与用に製剤化される。いくつかの実施形態によれば、眼投与用の製剤は、点眼製剤、軟膏製剤、および注射製剤のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態によれば、医薬組成物は、増粘剤、浸透促進剤、または両方のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態によれば、医薬組成物は、増粘剤を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態によれば、非常に低い用量は、０．００５μｇ／ｍｌ以下の用量である。
【００１６】
いくつかの実施形態によれば、ステロイドは、コルチコステロイドである。いくつかの実施形態によれば、ステロイドの用量の減少は、少なくとも１０％の減少である。
【００１７】
本発明のさらなる実施形態および適用可能の全範囲は、以下に与えられる詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、本発明の精神および範囲内の様々な変更および改変は、この詳細な説明から当業者には明らかになるのであるから、詳細な説明および具体的実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すが、説明のみの目的で与えられることが、理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
本発明のいくつかの実施形態は、添付の図面を参照しながら、単なる例として本明細書に述べられる。ここで図面を詳細に具体的に参照するが、詳細は例示のため、および、本発明の実施形態の例示的な説明のために示されることを強調する。この点に関して、説明は図面と共に、当業者に、本発明の実施形態がどのように実施され得るかを明らかにする。
【００１９】
【図１Ａ−１Ｂ】非常に低い用量のＴＰＣは強い免疫調節効果を有する。治療後４８時間の抗ＣＤ３活性化ＰＢＭＣに対する用量範囲におけるＴＰＣの効果を示す棒グラフ。炎症性サイトカインＴＮＦα（１Ａ）および抗炎症性サイトカインＩＬ−１０（１Ｂ）の分泌が示されている。列の統計、１００の仮想値と比較した、１サンプルｔテストを使用した。＊−Ｐ＜０．０５、＊＊−Ｐ＜０．０１、＊＊＊−Ｐ＜０．００５
【図２】ＴＰＣは、ステロイドの抗炎症作用を増強する。マクロファージによるＩＬ−１０分泌に対するＩＬ−４／ＩＬ−１３、ＴＰＣ、デキサメタゾン、およびデキサメタゾン＋ＴＰＣの効果を示す棒グラフ。＊−Ｐ＜０．０５、＊＊−Ｐ＜０．０１
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、いくつかの実施形態において、眼炎症の治療または予防をその必要のある対象に行う方法を提供し、および眼炎症に罹患した対象に投与するステロイドの用量を減少させる方法であって、少なくとも１つのホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体と、を含むホスホリルコリン−タフトシン複合体を含む、非常に低い用量の医薬組成物を、対象の眼へ投与することを含む、方法を提供する。
【００２１】
第一の態様によれば、眼炎症を治療または予防をその必要のある対象に行うための方法が提供され、少なくとも１つのホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体と、を含むホスホリルコリン−タフトシン複合体を含む医薬組成物を、対象へ投与することを含む。
【００２２】
別の態様によれば、眼炎症に罹患した対象に投与するステロイドの用量を減少させる方法であって、少なくとも１つのホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンと、を含むホスホリルコリン−タフトシン複合体を含む医薬組成物を、対象へ投与することを含む。
【００２３】
本明細書で使用されるとき、用語「ホスホリルコリン（ＰＣ）複合体」は、任意にスペーサーを介して、タフトシン（Ｔ）に連結されたホスホリルコリン部分またはその誘導体を指す。
【００２４】
本明細書で使用されるとき、用語「タフトシン」は、テトラペプチド（トレオニン−リジン−プロリン−アルギニン、ＴＫＰＲ；配列番号１）を指す。タフトシンは、化学的に合成でき、またはＩｇＧ重鎖のＦｃドメインの酵素的切断により、脾臓から単離され得る。タフトシンは、その食作用刺激活性および、生体外およびインビボにおけるマクロファージの抗原提示能力の増強により知られている。いくつかの実施形態によれば、タフトシンは、免疫調節分子と見なされ得る。
【００２５】
本明細書中で使用されるとき、用語「ホスホリルコリン誘導体」は、ホスホリルコリンを基礎とする任意の化合物を指す。本明細書中で使用されるとき、用語「タフトシン誘導体」は、ＴＫＰＲを基礎とする任意のポリペプチドを指す。いくつかの態様において、該誘導体は、ホスホリルコリンおよび／またはタフトシンの免疫調節効果を保持する。いくつかの態様において、該誘導体は、ホスホリルコリンを含む誘導体である。いくつかの形態において、該誘導体は、ＴＫＰＲを含む誘導体である。誘導体は、ポリペプチドのフラグメントだけではなく、アミノ酸を置換または除去したもの（アナログ）だけでもなく、むしろ、翻訳後修飾などの、該ポリペプチドに対してなされる追加の修飾を有してもよい。
【００２６】
いくつかの実施形態において、ホスホリルコリンの誘導体は、とりわけ、４−アミノ−フェニル−ホスホコリン、４−ジアゾニオ−フェニル−ホスホリルコリン、４−ニトロ−フェニル−ホスホコリン、および１２−（３−ヨードフェニル）ドデシル−ホスホコリンから選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態である。
【００２７】
用語「タフトシン誘導体」、「ＴＤ」および「タフトシン由来担体部分」は、交換可能であり、独立して選択される少なくとも２つの追加のアミノ酸に結合したタフトシン（ＴＫＰＲ、配列番号１  ）を指す。非天然アミノ酸、好ましくは非荷電および非極性非天然アミノ酸、例えば、β−アラニン−６−アミノヘキサン酸および５−アミノペンタン酸、もタフトシン誘導体に含まれていてもよい。いくつかの実施形態において、タフトシン誘導体は、トレオニン−リジン−プロリン−アルギニン−グリシン−チロシン（ＴＫＰＲＧＹ、配列番号２）である。
【００２８】
本明細書で使用されるとき、用語「部分」は、分子の一部を指し、対応する分子と比較して１つ以上の原子（複数可）を欠いている。本明細書で使用されるとき、用語「部分」は、さらに、部分構造として、全官能基、または官能基の一部を含むことができる分子の一部に関する。用語「部分」は、対応する分子に類似する、特定の組の化学的および／または薬理学的特性を示す分子の一部をさらに意味する。
【００２９】
本明細書で使用されるとき、用語「連結された（ｌｉｎｋｅｄ）」または「結合された（ａｔｔａｃｈｅｄ）」は、少なくとも２つの分子または部分の間の結合であり、それらが単一の分子であるようにするものを指す。いくつかの実施形態では、結合は化学結合である。いくつかの実施形態では、結合は共有結合である。本発明の原理によれば、タフトシン誘導体に含まれる天然および非天然のアミノ酸は隣接して互いに結合し、一方、少なくとも１つのホスホリルコリン誘導体は、スペーサーを介して直接、または間接的に少なくとも１つのタフトシン誘導体に結合されている。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのホスホリルコリンまたはその誘導体は、少なくとも１つのタフトシンまたはその誘導体のＮ末端に連結される。いくつかの形態において、少なくとも１つのホスホリルコリンまたはその誘導体は、少なくとも１つのタフトシンまたはその誘導体のＣ末端に連結される。
【００３０】
本明細書で使用されるとき、用語「スペーサー」は、典型的には化学的方法または生物学的手段によって連結されたタフトシン誘導体とＰＣ誘導体との間の結合または他の架橋要素をいう。スペーサーの非限定的な例としては、とりわけ、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭化水素およびポリマーが挙げられる。各可能性は、本発明の別の実施形態である。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくとも２つのアミノ酸である。いくつかの実施形態では、スペーサーは、グリシン−チロシンである。いくつかの実施形態において、スペーサーは、ＴＫＰＲのＣ末端に結合される。いくつかの実施形態において、スペーサーは、ＴＫＰＲのＮ末端に結合される。
【００３１】
ある実施形態では、上記のホスホリルコリン−タフトシン複合体は、１つのタフトシン誘導体に結合した１つのホスホリルコリン誘導体を含む。ある実施形態では、上記のホスホリルコリン−タフトシン複合体は、複数のタフトシン誘導体に結合した複数のホスホリルコリン誘導体を含む。ある実施形態では、上記のホスホリルコリン−タフトシン複合体は、１つのホスホリルコリン誘導体に結合した複数のタフトシン誘導体を含む。ある実施形態では、上記のホスホリルコリン−タフトシン複合体は、１つのタフトシン誘導体に結合した複数のホスホリルコリン誘導体を含む。
【００３２】
ある実施形態では、上記のホスホリルコリン−タフトシン複合体は、少なくとも１つのホスホリルコリンまたはその誘導体と、スペーサーによって分離された少なくとも１つのタフトシンまたはその誘導体と、を含む。
【００３３】
いくつかの実施形態では、投与は、対象の眼への投与である。薬物または組成物の眼への投与は、当該技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、眼への投与は、眼に組成物を滴下することを含む。いくつかの実施形態では、眼への投与は、眼に、眼の外表面に、眼の内部に、眼と接触する血管に、眼窩に、眼の受け口に、眼を囲む表皮表面および組織に、まぶたに、まつ毛に、および眼を取り囲む脂肪沈着物に適用することを含む。いくつかの実施形態では、眼に接触する血管は、眼動脈、網膜中心動脈、後毛様体動脈、および前毛様体動脈から選択される。いくつかの実施形態では、眼への投与は、眼への、眼の周囲の流体への、眼角への、涙管への、前眼房への、後眼房への、脈絡膜への、網膜への、水晶体への、ブドウ膜への、まぶたの下への適用を含む。各々の可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
【００３４】
本明細書で使用されるとき、用語「医薬組成物」は、ホスホリルコリン複合体と、少なくとも１つの他の成分と、任意の２つ以上成分の組み合わせ、複合化、または凝集から、１つ以上の成分の解離から、または、１つ以上の成分の他のタイプの反応または相互作用から、直接的または間接的に生じる任意の生成物と、を含む、任意の組成物をいう。したがって、本明細書で使用されるとき、用語「医薬組成物」は、とりわけ、薬学的に活性な量の複合体と、１種以上の薬学的に許容される担体とを混合することによって調製された任意の組成物を包含することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む。
【００３５】
本明細書で使用されるとき、用語「担体」、「補助剤」または「賦形剤」は、活性薬剤ではない医薬組成物の任意の成分をいう。本明細書で使用するとき、用語「薬学的に許容される担体」は、非毒性の不活性固体、半固体の液体充填剤、希釈剤、カプセル化材料、任意のタイプの製剤補助剤、または生理食塩水のような、単に滅菌された水性媒体をいう。薬学的に許容される担体として使用することができる物質のいくつかの例は、糖、例えばラクトース、グルコースおよびスクロース、デンプン、例えばコーンスターチおよびジャガイモデンプン、セルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース、粉末トラガカント、麦芽、ゼラチン、タルク、賦形剤、例えばココアバターおよび坐剤ワックス、油、例えば、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油、グリコール類、例えば、プロピレングリコール、ポリオール類、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、エステル、例えば、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、寒天、緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱性物質を含まない水、等張生理食塩水、リンゲル液、エチルアルコール、リン酸緩衝液、医薬製剤に使用される他の非毒性の適合性物質等を挙げられる。本明細書で担体として使用できる物質のいくつかの非限定的な例は、糖、デンプン、セルロースおよびその誘導体、粉末トラガカント、麦芽、ゼラチン、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、硫酸カルシウム、植物油、ポリオール、アルギン酸、発熱物質を含まない水、等張生理食塩水、リン酸緩衝液、ココアバター（座薬ベース）、乳化剤、ならびに他の医薬製剤に使用される他の非毒性の薬学的に適合した物質を含む。湿潤剤およびラウリル硫酸ナトリウムのような潤滑剤、ならびに着色剤、香味料、賦形剤、安定剤、酸化防止剤、および保存剤もまた存在し得る。任意の非毒性、不活性、および有効な担体は、本明細書で企図される組成物を製剤化するため使用することができる。この点に関して、適切な薬学的に許容される担体、賦形剤および希釈剤は、当業者に周知であり、例えば、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、第１３版、Ｂｕｄａｖａｒｉら編、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．（２００１）と、ｔｈｅ  ＣＴＦＡ（Ｃｏｓｍｅｔｉｃ，Ｔｏｉｌｅｔｒｙ，ａｎｄ  Ｆｒａｇｒａｎｃｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第１０版（２００４）と、「不活性成分ガイド」、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）医薬品評価研究センター（ＣＤＥＲ）管理室と、に述べられている（それらの全て内容はその全体が参照により本明細書に援用される）ものを含む。本組成物に有用な薬学的に許容される賦形剤、担体および希釈剤の例には、蒸留水、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、ハンクス溶液、およびＤＭＳＯが含まれる。これらの付加的な不活性成分、有効な製剤および投与方法は、当該技術分野で周知であり、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａ��ｄ  Ｇｉｌｌｍａｎの、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｇｉｌｍａｎら編、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（１９９０）と、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９９０）と、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ（２００５）とのような標準的教科書に述べられている。これら各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ここで述べている組成物は、リポソーム、ＩＳＣＯＭＳ、徐放性粒子、およびペプチドまたはポリペプチドの半減期を増加させる他のビヒクルのような人工的に作成された構造に含まれてもよい。リポソームには、エマルジョン、フォーム、ミセル、不溶性単層、液晶、リン脂質分散体、ラメラ層などが含まれる。ここで述べているペプチドと共に使用するためのリポソームは、一般に中性および負に荷電したリン脂質およびコレステロールのようなステロールを含む、標準的な小胞形成脂質から形成される。脂質の選択は、一般に、リポソームのサイズおよび血液中の安定性などを考慮して決定される。種々の方法が、リポソームを調製するために利用可能である。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ、Ｊ．Ｅ．らによる、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋにより概説されているよう方法など。また、米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，５０１，７２８号、同第４，８３７，０２８号、および同第５，０１９，３６９号も参照されたい。
【００３６】
担体は、全部で、本明細書に提示される医薬組成物の約０．１重量％〜約９９．９９９９９重量％を構成することができる。
【００３７】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、眼への投与のために製剤化される。眼投与用の医療組成物は当該技術分野において周知であり、このために特定の補助剤、賦形剤または担体を含むことができる。そのような例としては、生物学的ｐＨ（６．５〜７．５）の流体、保存剤、増粘剤および浸透促進剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、浸透促進剤、粘度増強剤または両方を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、増粘剤を含む。いくつかの実施形態では、眼投与用の製剤は、点眼製剤、軟膏製剤、および注射製剤のうちのいずれか１つを含む。
【００３８】
本明細書で使用されるとき、「増粘剤」は、眼に投与される溶液の粘度を増加させる任意の物質を指す。いくつかの実施形態では、増粘剤は水溶液の粘度を増加させる。当業者は、増加した粘度が眼における滞留時間を改善し、局所投与の際の生物学的利用能を増大させることを理解するであろう。増粘剤の例としては、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよび多価アルコールを含むが、これらに限定されない。
【００３９】
本明細書で使用されるとき、「浸透促進剤」は、角膜の一体性を改変することによって角膜の取り込みを改善し、それにより眼における生物学的利用性を増大させる任意の物質を指す。増粘剤の例としては、塩化ベンザルコニウム、ポリオキシエチレングリコールエステル、ポリカルボフィルーシステインおよびシクロデキストリンを含むが、これらに限定されるものではない。
【００４０】
用語「治療有効量」は、哺乳動物における疾患または障害を治療するのに有効な複合体の量を指す。用語「治療有効量」は、所望の治療的または予防的な結果を達成するために必要な用量および時間での有効量を指す。正確な投薬形態および投与計画は、患者の状態に応じて医師によって決定される。
【００４１】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、非常に低い用量のホスホリルコリン−タフトシン複合体を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、最大５０μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ、０．００５μｇ／ｍｌ、０．０００５μｇ／ｍｌ、０．００００５μｇ／ｍｌ、０．０００００５μｇ／ｍｌ、０．００００００５μｇ／ｍｌ、０．０００００００５μｇ／ｍｌのＴＰＣを含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、非常に低い用量は、０．５、０．０５、０．００５、０．０００５、０．００００５、０．０００００５、０．００００００５、または０．０００００００５μｇ／ｍｌ以下の用量である。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、非常に低い用量は、０．００５μｇ／ｍｌ以下の用量である。炎症部位への薬物の直接投与は、非常に低い用量を使用して炎症を治療する能力を高められることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、ＴＰＣのステロイドを減量する用量は、ＴＰＣの非常に低い用量である。いくつかの実施形態では、ステロイドを減量する用量は、非常に低い用量よりも高い用量である。
【００４２】
いくつかの実施形態では、炎症部位に到達する薬物の用量は非常に低い。いくつかの実施形態では、炎症部位に達する用量は、最大５０μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ、０．００５μｇ／ｍｌ、０．０００５μｇ／ｍｌ、０．００００５μｇ／ｍｌ、０．０００００５μｇ／ｍｌ、０．００００００５μｇ／ｍｌ、０．０００００００５μｇ／ｍｌのＴＰＣである。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。当業者は、特に点眼剤が、ある程度軟膏も、炎症部位に完全には到達する訳ではないことを理解するであろう。そのため、投与方法を補うために当業者による決定に従い、用量は増加または減少される必要があるだろう。眼内注射による用量は、より直接に炎症部位に到達し、再度、投与される用量は、それに応じて調節されることが必要であろう。
【００４３】
本明細書で使用されるとき、用語「眼炎症」は、眼球の任意の部分の任意の炎症を指す。いくつかの実施形態では、炎症は、眼の中間層の炎症である。いくつかの実施形態では、炎症は、ブドウ膜炎である。いくつかの実施形態では、眼炎症は、ドライアイまたは乾性黄斑変性を含む。いくつかの実施形態では、眼炎症は、別の疾患と関連している。眼炎症を生じる可能性のある全身性疾患の非限定的な例は、クローン病、ベーチェット病、若年性特発性関節炎である。いくつかの実施形態では、眼炎症は、薬物または環境トリガーに対する有害な反応に関連する。そのような非限定的な例としては、リファブチン、キノロン、ワクチンおよびアレルゲンを含む。いくつかの実施形態では、眼炎症は、術後炎症と関連する。そのような非限定的な例としては、白内障術後、レーザー眼手術、および角膜移植を含む。
【００４４】
本明細書で使用されるとき、眼炎症の「治療」という用語は、少なくとも１つの眼炎症の症状の軽減、その重症度の軽減、またはその進行の抑制を包含する。治療は、疾患、障害、または状態が完全に取り除かれることを意味する必要はない。有効な治療であるために、本明細書における有用な組成物は、疾患、障害、または状態の重症度を軽減させ、それに関連する症状の重症度を軽減させ、または患者もしくは対象の生活の質を改善することのみを必要とする。いくつかの実施形態では、眼炎症の治療は、眼炎症の発症を予防すること、眼炎症の進行を低下させること、および眼炎症の進行を抑制することのうちの少なくとも１つを含む。
【００４５】
いくつかの実施形態では、治療は、炎症を軽減させることを含む。いくつかの実施形態では、治療は、異常な炎症を軽減させることを含む。いくつかの実施形態では、治療は、対象の眼における炎症を軽減させることを含む。いくつかの実施形態では、治療は、眼炎症に関連する眼内圧力を減少させることを含む。
【００４６】
いくつかの実施形態では、治療または予防する方法は、ステロイドを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ステロイドは、コルチコステロイドである。いくつかの実施形態では、ＴＰＣおよびステロイドを一緒に投与する。いくつかの実施形態では、ＴＰＣおよびステロイドは共に投与される。いくつかの実施形態では、ＴＰＣは、最初に投与される。いくつかの実施形態では、ステロイドは、最初に投与される。いくつかの実施形態では、非常に低い用量のＴＰＣが、ステロイドと共に投与される。
【００４７】
いくつかの実施形態では、ステロイドの用量の減少は、ステロイド全用量により誘導される炎症の軽減を保持することを含む。いくつかの実施形態では、ステロイドの用量の減少は、ステロイドの全用量により誘導される症状の緩和を保持することを含む。すなわち、ステロイドを減少しても、炎症の軽減および／または症状の緩和は低減されないであろう。いくつかの実施形態では、ステロイドの用量の減少は、非減少用量のステロイドによって誘導される炎症の軽減と同等またはそれより高い程度で、眼における炎症および／または症状を軽減することを含む。いくつかの実施形態では、非減少用量とは、全用量である。いくつかの実施形態では、炎症の同等の軽減は、炎症性ステロイドの分泌を増加させることによってもたらされる。いくつかの実施形態では、炎症の同等の軽減は、炎症性ステロイドの分泌を減少させ、抗炎症性ステロイドの分泌を増加または減少することによってもたらされる。
【００４８】
いくつかの実施形態では、治療は、少なくとも１つの炎症性サイトカインの分泌を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、炎症を軽減することは、少なくとも１つの炎症性サイトカインの分泌を減少することを含む。いくつかの実施形態では、分泌は、対象の眼で行われる。いくつかの実施形態では、治療は、複数の炎症性サイトカインの分泌を減少することを含む。いくつかの実施形態では、炎症を軽減することは、複数の炎症性サイトカインの分泌を減少することを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１，２，３，４，または５つの炎症性サイトカインが減少する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、治療は、対象の少なくとも１つの炎症性サイトカインの水準を低下させることを含む。いくつかの実施形態では、炎症を軽減することは、対象の少なくとも１つの炎症性サイトカインの水準を低下させることを含む。いくつかの実施形態では、眼において水準が低下する。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＴＮＦ−αである。炎症性サイトカインの他の例は、ＩＬ−１、ＩＬ−１Ｂ、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８およびコロニー刺激因子２（ＣＳＦ２）を含むが、これらに限定されない。
【００４９】
いくつかの実施形態では、炎症を軽減することは、対象の眼における少なくとも１つの抗炎症性サイトカインの分泌を増加させることと、対象の眼における少なくとも１つの炎症性サイトカインの分泌を減少させることと、対象の眼におけるＴｒｅｇの数を増加させることと、対象の眼におけるＭ２マクロファージの数を増加させることと、のうち少なくとも１つ含む。制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は当該技術分野で周知であり、免疫抑制効果および局所的に炎症を軽減する能力を有することが知られている。Ｍ２マクロファージもまた、免疫寛容性であり、抗炎症性サイトカインを分泌する。
【００５０】
いくつかの実施形態では、治療は、少なくとも１つの抗炎症性サイトカインの分泌を増加させることを含む。いくつかの実施形態では、炎症を軽減することは、少なくとも１つの抗炎症性サイトカインの分泌を増加させることを含む。いくつかの実施形態では、分泌は、対象の眼に行われる。いくつかの実施形態では、治療は、複数の抗炎症性サイトカインの分泌を増加させることを含む。いくつかの実施形態では、炎症を軽減することは、複数の抗炎症性サイトカインの分泌を増加させることを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１、２、３、４または５つの抗炎症性サイトカインが増加する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、水準は、対象の眼において増加される。いくつかの実施形態では、抗炎症性サイトカインはＩＬ−１０である。抗炎症性サイトカインの他の例としては、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＮＦαおよび形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）を含むが、これらに限定されない。
【００５１】
いくつかの実施形態では、減少は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％または１００％の減少を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。当業者であれば、各サイトカインが同じ量だけ減少される必要はないことを理解するであろう。いくつかのサイトカインは、他のものよりも大きく減少され得る。
【００５２】
いくつかの実施形態では、増加は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％、１０００％、または１００００％の増加を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。当業者であれば、各サイトカインが同じ量だけ増加する必要はないことは理解するであろう。いくつかのサイトカインは、他のものよりも増加され得る。
【００５３】
眼炎症を治療するためのステロイド投与は、当該技術分野において周知である。眼炎症のタイプは、当技術分野で示されているように、異なる用量のステロイドを有することができる。本発明の方法によれば、眼炎症のある対象に投与されるステロイドの用量を減少させるため、ＴＰＣを使用できる。いくつかの実施形態では、ステロイドは、コルチコステロイドである。いくつかの実施形態では、用量の減少は、コルチコステロイドの用量の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％の減少である。いくつかの実施形態では、用量の減少は、投与頻度の減少である。以前にはその用量が毎日投与されていたときに、１日おきにステロイドを受けることは、用量の減少とみなされることは、当業者には理解されるであろう。同様に、１０日間のステロイド投与／１０日間の不投与であった間欠的な投与計画が、１０日間のステロイド投与／１５日間の不投与、または５日間のステロイド投与／１０日間の不投与、または同様の交互の投与不投与も、また用量の減少とみなされるであろう。対象が所与の期間にわたって受けるステロイドの量のいかなる減少も、用量の減少とみなされるべきである。
【００５４】
いくつかの実施形態では、ステロイドの用量の減少はゼロまでの減少である。いくつかの実施形態では、用量の減少は、ステロイドでもはや治療しないことを含む。いくつかの実施形態では、対象が既にステロイドで治療された後に、用量の減少が起こる。いくつかの実施形態では、対象がステロイド療法を開始する前に、用量の減少が起こる。いくつかの実施形態では、対象が任意の両方を開始する前に、用量の減少が起こる。いくつかの実施形態では、用量の減少は、経時的に、投与計画における減少を含む。いくつかの実施形態では、用量の減少は、本発明の治療をしない場合に減少が起こるよりも早く、投与計画における減少を含む。
【００５５】
本明細書で使用されるとき、用語「投与する」、「投与」、および同様の用語は、健全な医療の実施では、治療効果をもたらすように、活性剤を含有する組成物を対象に送達する任意の方法を指す。いくつかの実施形態では、投与は、眼または眼内である。
【００５６】
他の実施形態によれば、医薬組成物は、他のタイプの医薬品組成物のうち、溶液、懸濁液、点眼剤、軟膏剤、眼内注射の形態である。各可能性は、本発明の別の実施形態である。
【００５７】
別の態様によれば、眼炎症を治療または予防するための、少なくとも１つのホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体と、を含むホスホリルコリン−タフトシン複合体を含む医薬組成物の使用が提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、非常に低い用量のホスホリルコリン−タフトシン複合体を含む。
【００５８】
別の態様によれば、眼炎症を治療または予防するための、少なくとも１つのホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体とを含むホスホリルコリン−タフトシン複合体と、ステロイドとの使用が提供される。いくつかの実施形態では、ホスホリルコリン−タフトシン複合体と、ステロイドとは、１つの薬学的組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、ホスホリルコリン−タフトシン複合体と、ステロイドとは、別の組成物に含まれる。
【００５９】
別の態様によれば、眼炎症を治療するために投与されるステロイドの用量を減少させるために、少なくとも１つのホスホリルコリン部分またはその誘導体と、タフトシンまたはその誘導体と、を含むホスホリルコリン−タフトシン複合体の使用が提供される。
【００６０】
本明細書で使用されるとき、値と組み合わされるときの「約」という用語は、基準値のプラスおよびマイナス１０％を指す。例えば、約１０００ナノメートル（ｎｍ）の長さは、１０００ｎｍ＋−１００ｎｍの長さを指す。
【００６１】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるときに、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に指示しない限り、複数のものをいう場合を含むことに留意されたい。したがって、例えば、「ポリヌクレオチド（ａ  ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）」を参照することは、複数のそのようなポリヌクレオチドを含み、「ポリペプチド（ｔｈｅ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」を参照することは、１つ以上のポリペプチドおよび当業者に知られているその等価物などを参照することを含む。請求項は、任意の要素を除外するように記載されてもよいことにさらに留意されたい。そのように、この言明は、請求項の発明特定事項の記載に関連して「単独で」、「唯一」のような除外的な用語の使用、または「否定的」限定を使用するための前提的基礎として機能することを意図している。
【００６２】
「Ａ、Ｂ、Ｃなどのうちの少なくとも１つ」に類する慣用的表現が使用される例において、一般にそのような構造は、当業者が該慣用的表現を理解するであろう意味（例えば、「Ａ、Ｂ、およびＣのうちの少なくとも１つを有するシステム」はＡのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、ＡとＢとを共に、ＡとＣとを共に、ＢとＣとを共に、および／またはＡとＢとＣとを共に有するシステムを含むがそれらに限定されない、など）が意図されている。明細書、特許請求の範囲、または図面においてであっても、２つ以上の択一的な用語群を提示する、事実上任意の分離語および／または句は、その用語のうちの１つ、その用語のうちのいずれか、または両方の用語を含むことがあり得ることを意図していると理解すべきであることが、当業者によってさらに理解されるであろう。例えば、「ＡまたはＢ」という語句は、「Ａ」または「Ｂ」または「ＡおよびＢ」があり得ることが理解されるであろう。
【００６３】
本発明のある特徴は、明確化するために、別個の実施形態の中で述べられるが、単一の実施形態において組み合わせて提供されてもよいことを理解されたい。逆に、本発明の様々な特徴は、簡潔にするために、単一の実施形態の中で述べられるが、別々にまたは任意の適切なサブコンビネーションで提供されてもよい。本発明に関連する実施形態の全ての組み合わせは、本発明に具体的形態で含まれ、そして、ちょうどそれぞれのおよび全ての組み合わせが独立して、明示的に開示されているかのように、本明細書に開示されている。さらに、様々な実施形態の全てのサブコンビネーションおよびそれらの要素も、本発明によって具体的形態で包含され、そしてちょうどそれぞれのおよび全てのそのサブコンビネーションが独立してかつ明示的に本明細書に開示されているかのように、本明細書に開示されている。
【００６４】
本発明のさらなる目的、利点、および新規な特徴は、以下の実施例、これは限定することを意図するものではない、を検討することにより当業者に明らかになるであろう。さらに、これまで明細書に記載され、そして以下の特許請求の範囲に記載される本発明の様々な実施形態および態様の各々は、以下の実施例で実験的に裏付けられている。
【００６５】
これまで明細書に記載され、そして以下の特許請求の範囲に記載される本発明の様々な実施形態および態様は、以下の実施例で実験的に裏付けられている。
【実施例】
【００６６】
一般に、本明細書で使用される命名法および本発明で利用される実験室手順は、分子、化学、生化学、微生物学的および組換えＤＮＡ技術を含む。このような技術は文献で余すところなく説明されている。例えば，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”Ｓａｍｂｒｏｏｋら，（１９８９）、“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”  Ｉ−ＩＩＩ  巻Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．，編．（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌら，“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ，“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎら，“Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ”，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎら．（編）“Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ”，１−４巻，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９８）、米国特許第４，６６６，８２８号、第４，６８３，２０２号、第４，８０１，５３１号、第５，１９２，６５９号  および第  ５，２７２，０５７号に記載された方法論”Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ”，Ｉ−ＩＩＩ巻、Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．，編．（１９９４）、Ｆｒｅｓｈｎｅｙによる”Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ−Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ”  Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９４），第３版、”Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”    Ｉ−ＩＩＩ巻  Ｃｏｌｉｇａｎ  Ｊ．Ｅ．，編．（１９９４）、Ｓｔｉｔｅｓら．（編），“Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（第８版），Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ（１９９４）、Ｍｉｓｈｅｌｌ  および  Ｓｈｉｉｇｉ（編），“Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ”  ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照されたい。これらの全ては参照により組み込まれる。他の一般的な参考文献は、本明細書全体を通して提供される。
【００６７】
実施例  １：ＰＢＭＣに対するＴＰＣの効果
ＴＰＣの免疫調節効果は、健康なドナーからのＰＢＭＣで、生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で測定された。ＰＢＭＣを採取し、培養プレートに付着させた。次いで、様々な濃度のＴＰＣ、または対照としてのＰＢＳまたはデキサメタゾンを添加し、１時間後に抗ＣＤ３刺激抗体を添加して、炎症状態を誘導した。４８時間後、上清を細胞から採取し、標準的なＬｕｍｉｎｅｘプロトコルを用いてサイトカインの水準をアッセイした。５パラメータ非線形回帰分析を用いて、標準曲線からサイトカイン誘導の水準を補間した。この場合、ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（（Ｂ−Ｅ）／（Ｅ−Ａ））＊（（ｘ／Ｃ）＾Ｄ）））））。次いで、補間されたデータを、ビヒクル対照（抗ＣＤ３刺激抗体のみ）に対して正規化した。ＴＰＣ処理は、炎症性サイトカインＴＮＦαの発現を減少させたが、非常に低い用量で最大の減少が見られたことが注目された（図１Ａ）。０．００５μｇ／ｍｌという低い用量で、ＴＰＣは、その最大の有効性を示し、ＴＮＦα水準を４１％低下させた。ＴＰＣ処理はまた、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０の発現を増加させる（図１Ｂ）。０．００５μｇ／ｍｌのＴＰＣ用量がＩＬ−１０水準の３３％の増加を引き起こす最も強い効果を有するので、再び、効果は、非常に低い用量で最大であった。ＰＢＭＣサイトカイン分泌に対するＴＰＣの効果は、ステロイドがＩＬ−１０水準に対して負の効果を有しているので、デキサメタゾンに優れていないとしても同等であった。（図１Ｂ）。実際、デキサメタゾンと比較して、ＴＰＣは、ＩＬ−１０分泌について２２０％の増加を有した。これは、デキサメタゾンの用量をＴＰＣで補うことが、炎症軽減に対して有益な効果を有することを示唆している。
【００６８】
実施例２ＴＰＣはステロイド用量を減少させることができる
ステロイドとＴＰＣとの組み合わせが炎症を治療するのに有益な効果を有するという仮説を試験するために、ＴＨＰ−１ヒト単球細胞株の細胞を１００ｎｇ／ｍｌ  ＰＭＡで４８時間、Ｍ０マクロファージに分化させ、次いで、１０ｎｇ／ｍｌのＬＰＳを用いてＭ１マクロファージに分極させた。次いで、これらの細胞を、以下の化合物で試験した。ＰＢＳ（陰性対照）、ＩＬ−４およびＩＬ−１３（２０ｎｇ／ｍｌ、細胞をＭ２表現型に誘導するための陽性対照）、ＴＰＣ（４００ｕｇ／ｍｌ）、デキサメタゾン（１ｕＭ）、およびデキサメタゾン（１ｕＭ）と、ＴＰＣ（４００ｕｇ／ｍｌ）との組合せ。ＩＬ−４およびＩＬ−１３は、ＩＬ−１０の強力な発現を誘導した（図２）。ＴＰＣもまた、ＩＬ−１０発現の強い増加を誘導し、一方、デキサメタゾンは、実際にはこの抗炎症性サイトカインの発現を減少させた。重要なことは、デキサメタゾンおよびＴＰＣの同時処理は、ＩＬ−１０発現水準を対照の水準に戻し、デキサメタゾンの否定的効果を改善することである。これは、ステロイド治療へのＴＰＣの添加が、抗炎症性サイトカイン分泌に対するステロイドの負の効果を逆転させることができることを示唆する。さらに、ＴＰＣ自体も炎症性サイトカイン分泌を減少させるので、組み合わせるだけでなく、投与されるステロイドの全用量を減少するためにも使用することができる。
【００６９】
実施例３：ステロイド用量を減少させるための最低のＴＰＣ用量
前と同様に、ＰＢＭＣを採取し、プレートに加え、刺激する。段階的に低くした用量のＴＰＣが細胞に添加され、炎症性および／または抗炎症性サイトカインおよび／またはＴｒｅｇおよびＭ１／Ｍ２マクロファージ数に対する効果が評価される。投与可能であり、かつ依然、抗炎症性サイトカイン（少なくともＩＬ−１０）の発現を増やし、Ｔｒｅｇ／Ｍ２マクロファージ数を増やし、および／または炎症性サイトカイン（少なくもＴＮＦα）の分泌を減らすことができるＴＰＣ最小濃度に基づき、最小有効用量が決定される。ある用量のＴＰＣもまた段階的に低くした用量のデキサメタゾン、または別のステロイドと組み合わされ、組み合せた治療の抗炎症性サイトカイン（少なくともＩＬ−１０）の発現を増加させる能力、Ｔｒｅｇ／Ｍ２マクロファージ数を増加させる能力、および／または炎症性サイトカイン（少なくともＴＮＦα）を減少させる能力が測定される。
【００７０】
実施例４：眼免疫細胞に対するエクスビボ効果
ヒト体液試料は、活性非感染性ブドウ膜炎または他の眼炎症に罹患し、診断または治療的な穿刺または白内障手術を受ける、患者から取得される。試料は遠心分離され、得られた細胞のペレットは培養液に再懸濁される。同数の細胞が様々な濃度のＴＰＣと共に培養され、およびそれを加えずに培養され、デキサメタゾンまたは他のステロイドは陽性対照として使用され、細胞は陰性対照として活性化され得る。上記のように、最小有効濃度が決定される。上記のように、ＴＰＣと段階的に減少させた濃度のデキサメタゾンの組み合わせが、炎症を軽減させるおよび／または軽減した炎症を維持する能力についてモニターされる。サイトカイン、ケモカインの産生およびＴｒｅｇ／マクロファージが測定される（少なくともＩＬ−１０および／またはＴＮＦα）。
【００７１】
実施例５：インビボ効果
ブドウ膜炎の動物モデルまたは他の炎症性／自己免疫性眼状態を用いて、低用量ＴＰＣのインビボ効果および／またはＴＰＣのステロイド用量を減少させる能力を試験する。ブドウ膜炎のため、実験的自己免疫ブドウ膜炎は、マウス、ラット、ウサギおよび／またはサルにおいて、網膜抗原（アレスチン、光受容体間レチノイド結合タンパク質、ロドプシン、オプシン、リカバリン、ホスデューシンまたは類似物）で感作することにより誘導される。百日咳毒素または結核菌を、疾患の誘導のためのアジュバントとして使用することができる。疾患／状態の誘導後、動物に、様々な用量のＴＰＣ、ステロイド（デキサメタゾンまたは他のステロイド）単独、および、減少した用量のステロイドと共にＴＰＣを投与する。動物を眼炎症および臨床症状についてモニターし、房水、血漿試料および／または他の組織を抽出してインビボ効果を調べる。
【００７２】
本発明をその具体的な実施形態と関連付けて述べてきたが、多くの代替となり得る形態、改変および変更は当業者にとり明らかである。従って、添付した請求項の精神と広い範囲の内にある全てのそのような代替となり得る形態、改変および変更を包含することが意図されている。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年7月22日(2020.7.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021501796000001.app
【国際調査報告】
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