(57)【要約】  本発明は、１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含むフラビペプチドを含むワクチン組成物を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドを含むワクチン組成物。
【請求項２】
請求項１の前記ワクチン組成物であって、前記フラビウイルスペプチドが配列番号１から１４に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上、または配列番号１５から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含む前記ワクチン組成物。
【請求項３】
請求項１または２の前記ワクチン組成物であって、異なるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープをそれぞれ含む２つ以上のフラビウイルスペプチドを含む前記ワクチン組成物。
【請求項４】
請求項３の前記ワクチン組成物であって、前記の２つ以上のフラビウイルスペプチドが配列番号１から２３に記載される前記ペプチドまたはその変異体のうち２つ以上である前記ワクチン組成物。
【請求項５】
請求項４の前記ワクチン組成物であって、前記の２つ以上のフラビウイルスペプチドが配列番号１から１４に記載される前記ペプチドまたはその変異体のうち２つ以上、または配列番号１５から２３に記載される前記ペプチドまたはその変異体のうち２つ以上である前記ワクチン組成物。
【請求項６】
前述の請求項のうちいずれか１つの前記ワクチン組成物であって、それぞれが異なるＨＬＡスーパータイプと相互作用する、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含む２つ以上のフラビウイルスペプチドを含む前記ワクチン組成物。
【請求項７】
前述の請求項のうちいずれか１つの前記ワクチン組成物であって、少なくとも２つの異なるＨＬＡスーパータイプと相互作用するＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含む少なくとも１つのフラビウイルスペプチドを含む前記ワクチン組成物。
【請求項８】
請求項６または７の前記ワクチン組成物であって、前記の少なくとも２つの異なるＨＬＡスーパータイプが：
（ｉ）ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ２７、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ５８およびＨＬＡ−Ｂ６２から選択される；
（ｉｉ）ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ２４、およびＨＬＡ−Ｂ７から選択される；
（ｉｉｉ）ＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−Ａ２４；または
（ｉｖ）ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３およびＨＬＡ−Ａ２４である前記ワクチン組成物。
【請求項９】
前述の請求項のうちいずれか１つの前記ワクチン組成物であって、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープがフラビウイルス間で維持される前記ワクチン組成物。
【請求項１０】
前述の請求項のうちいずれか１つの前記ワクチン組成物であって、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープがジカウイルス、西ナイルウイルス、デングウイルス、黄熱病ウイルス、および／または日本脳炎ウイルスの間で維持される前記ワクチン組成物。
【請求項１１】
前述の請求項のうちいずれか１つの前記ワクチン組成物であって、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープがフラビウイルスとチクングニアウイルスの間で維持される前記ワクチン組成物。
【請求項１２】
前述の請求項のうちいずれか１つの前記ワクチン組成物であって、配列番号１５に記載される前記フラビウイルスペプチドまたはその変異体、配列番号１６に記載される前記フラビウイルスペプチドまたはその変異体、配列番号１７に記載される前記フラビウイルスペプチドまたはその変異体、配列番号１８に記載される前記フラビウイルスペプチドまたはその変異体、配列番号１９に記載される前記フラビウイルスペプチドまたはその変異体、配列番号２０に記載される前記フラビウイルスペプチドまたはその変異体、配列番号２１に記載される前記フラビウイルスペプチドまたはその変異体、配列番号２２に記載される前記フラビウイルスペプチドまたはその変異体、および配列番号２３に記載される前記フラビウイルスペプチドまたはその変異体を含む前記ワクチン組成物。
【請求項１３】
前述の請求項のうちいずれか１つの前記ワクチン組成物であって、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含むペプチドを含む前記ワクチン組成物。
【請求項１４】
請求項１３の前記ワクチン組成物であって、前記ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープが全てのＨＬＡクラスＩＩ型と相互作用する前記ワクチン組成物。
【請求項１５】
請求項１３または１４の前記ワクチン組成物であって、前記ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープが配列番号２４または２５に記載される配列を含む前記ワクチン組成物。
【請求項１６】
前述の請求項のうちいずれか１つの前記ワクチン組成物であって、前記フラビウイルスペプチドがナノ粒子と結合する前記ワクチン組成物。
【請求項１７】
請求項２から１６のうちいずれか１つの前記ワクチン組成物であって、前記２つ以上のフラビウイルスペプチドのそれぞれがナノ粒子と結合する前記ワクチン組成物。
【請求項１８】
請求項１６または１７の前記ワクチン組成物であって、前記ナノ粒子が金ナノ粒子、リン酸カルシウムナノ粒子またはシリコンナノ粒子である前記ワクチン組成物。
【請求項１９】
請求項１８の前記ワクチン組成物であって、前記金ナノ粒子がα−ガラクトースおよび／またはβ−Ｇ１ｃＮＨＡｃでコーティングされる前記ワクチン組成物。
【請求項２０】
請求項１６から１９のうちいずれか１つの前記ワクチン組成物であって、前記フラビウイルスペプチドがリンカーを介して前記ナノ粒子と結合する前記ワクチン組成物。
【請求項２１】
配列番号１から２３に記載される前記ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むワクチン組成物。
【請求項２２】
請求項２１の前記ワクチン組成物であって、異なるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープをそれぞれ含む２つ以上のフラビウイルスペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む前記ワクチン組成物。
【請求項２３】
請求項２１の前記ワクチン組成物であって、異なるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含むフラビウイルスペプチドをそれぞれコードする２つ以上のポリヌクレオチドを含む前記ワクチン組成物。
【請求項２４】
請求項２１または２２の前記ワクチン組成物であって、各フラビウイルスペプチドが配列番号１から２３に記載されるペプチドまたはその変異体を含む前記ワクチン組成物。
【請求項２５】
フラビウイルス感染を予防または治療する方法であって、フラビウイルスに感染しているか、またはこれに感染するリスクのある個体に前述の請求項のうちいずれか１つの前記ワクチン組成物を投与することを含む方法。
【請求項２６】
個体におけるフラビウイルス感染を予防または治療する方法における使用を目的とした請求項１から２４のうちいずれか１つの前記ワクチン組成物。
【請求項２７】
前記の請求項２４の方法または請求項２５のワクチン組成物であって、前記フラビウイルス感染がジカウイルス感染、西ナイルウイルス感染、デングウイルス感染、黄熱病ウイルス感染、および／または日本脳炎ウイルス感染である前記方法。
【請求項２８】
受動免疫療法における使用を目的とした細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を生成するための方法であって、フラビウイルスに感染した対象から採取したＴ細胞に配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドを接触させることを含む前記方法。
【請求項２９】
請求項２８の前記方法であって、前記ＣＴＬが前記ＣＴＬのレシピエントの自己由来であるかまたはＨＬＡ適合である前記方法。
【請求項３０】
対象におけるフラビウイルス感染を診断するための方法であって、（ｉ）前記対象から採取したＴ細胞に配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドを接触させることおよび（ｉｉ）前記Ｔ細胞の前記フラビウイルスペプチドに対する応答を判定することを含む前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フラビウイルスペプチドを含むワクチン組成物、およびフラビウイルス感染の治療および予防のためのそのような組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
フラビウイルスは、ヒトに感染して公衆衛生に重大な脅威を及ぼすことのあるプラス鎖単鎖エンベロープＲＮＡウイルスの科である。具体的には、フラビウイルスはジカ熱（Zika fever）、デング熱（Dengue fever）、日本脳炎（Japanese encephalitis）、黄熱病（yellow fever）および西ナイル熱（West Nile fever）の原因微生物である。これらの疾患は、熱、嘔吐、頭痛、関節痛および筋肉痛を含む症状を共通の特徴とするが、各疾患はより重篤な症状と関連することもある。たとえば、妊娠中のジカウイルスの母子伝播によって脳奇形が引き起こされることがあり、またジカウイルス感染はギランバレー症候群とも関連付けられている。デング熱は重篤なデング出血性症候群またはデングショック症候群に進行することもある。黄熱病は肝障害を誘発することがあり、これによって出血および腎障害がもたらされることがある。西ナイル熱は神経系まで拡散して脳炎または髄膜炎を引き起こすことがある。
【０００３】
フラビウイルスは、感染したカやマダニなどの媒介節足動物によって伝播することを意味するアルボウイルスである。フラビウイルスの地理的分布は、主としてその媒介節足動物の地理的分布によって決定される。媒介動物は、ほとんどが東南アジアや南米などの熱帯または亜熱帯地域に限定されている。しかし、気候変動によって一部の媒介動物の分布が拡大し、このためフラビウイルス感染に罹患するリスクの高い集団が増加しているとみられる。さらに、ジカウイルスおよび黄熱病ウイルスの蔓延の原因となるカは、密度の高い都市部で生存するよう適応できることが示されている。したがって、フラビウイルス感染を抑制するための方法を見つけることが重要である。一部のフラビウイルス（西ナイルウイルスなど）がヒトには偶発的にのみ感染する一方で、他のフラビウイルス（黄熱病ウイルス、デングウイルス、ジカウイルス）は主として節足動物−ヒト生活環に存在する。そのようなフラビウイルスはヒト宿主において盛んに増殖し、高いウイルス価によって媒介節足動物に再び感染し、また新たなヒト宿主に感染する。いずれにしても、媒介動物による伝播およびサルおよび鳥類などの他の種に感染する能力は、フラビウイルスが迅速に且つ容易に蔓延する傾向にあることを意味する。したがって、フラビウイルス感染の蔓延を抑制することは困難である。
【０００４】
フラビウイルスゲノムの構造も、蔓延を抑制することの困難さに寄与する。単鎖ＲＮＡの複製には、プルーフリーディングおよび修正メカニズムがわずかにしか存在しない。したがって、複製の過程で発生する変異はしばしばゲノムに残存し、次世代に受け継がれる。したがってフラビウイルスの進化は迅速である。
【０００５】
黄熱病ウイルス感染および日本脳炎ウイルス感染には安全且つ有効なワクチンが存在するが、これはジカウイルス、デングウイルス、または西ナイルウイルス感染には当てはまらない。デングウイルスに対するワクチンは存在するものの、過去に感染したことのない者では転帰が悪化する可能性があるので、過去にデングウイルスに感染した個体における使用のみが推奨される。デングウイルスの血清型（ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３またはＤＥＮＶ−４）の１つに曝露することは、その後の他のデング血清型の感染を悪化させる可能性がある。ジカウイルスはデングウイルスと密接に関連しているので、いずれのジカウイルスワクチンも、デングウイルス感染の抗体依存的促進の可能性を最小化する必要がある。したがって、ジカウイルス、デングウイルス、および西ナイルウイルス感染に対して有効なワクチンに対するニーズが存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ウイルスを含有するワクチンにしばしば随伴する有害な臨床作用を回避しながら、免疫応答を刺激するフラビウイルスワクチン組成物に関する。ワクチン組成物は、複数のフラビウイルス種（ジカウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、および／または日本脳炎ウイルスなど）および／または特定の種の複数の系統または血清型（アフリカジカウイルス、アジアジカウイルス、ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３および／またはＤＥＮＶ−４など）に対する防御を提供する可能性がある。
【０００７】
驚くべきことに、本発明者らは、たとえば金ナノ粒子などのナノ粒子を用いて、フラビウイルスに対するＴ細胞応答を刺激するようデザインされたワクチン組成物に対し、効率の良い応答を誘導することができることを確認している。ナノ粒子の使用によって、ワクチン組成物においてウイルスを用いる必要がなくなる。診療所における有害反応と関連することのある従来のアジュバントの使用も回避される。したがって、ワクチン組成物の投与後に個体が有害反応を経験する可能性は低下する。
【０００８】
また本発明者らは、異なるフラビウイルスの間で維持され、且つそれらのウイルスに感染した細胞上のＭＨＣ分子によって提示されるペプチドを数多く同定している。そのような維持ペプチドをワクチン組成物に含めることで、複数種のフラビウイルスおよび／または特定の種の複数系統または血清型に対する防御能を付与することができる。異なるＨＬＡスーパータイプと結合する複数の維持ペプチドをワクチン組成物に含めることにより、異なるＨＬＡタイプを有する個体において有効なワクチンがもたらされる。
【０００９】
したがって、本発明は配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドを含むワクチン組成物を提供する。一部の実施形態においては、フラビウイルスペプチドはナノ粒子と結合することがある。
【００１０】
本発明はさらに：
−配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むワクチン組成物；
−フラビウイルス感染を予防または治療するための方法であって、フラビウイルスに感染しているか、またはこれに感染するリスクのある個体に前述の請求項のうちいずれか１つのワクチン組成物を投与することを含む方法；
−個体におけるフラビウイルス感染を予防または治療する方法における使用を目的とした本発明のワクチン組成物；
−受動免疫療法における使用を目的とした細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を生成するためのエクスビボ法であって、フラビウイルスに感染した対象から採取したＴ細胞に配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドを接触させることを含む方法；および
−対象におけるフラビウイルス感染を診断するための方法であって、（ｉ）対象から採取したＴ細胞に配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドを接触させることおよび（ｉｉ）Ｔ細胞のフラビウイルスペプチドに対する応答を決定する（ディターミング：ｄｅｔｅｒｍｉｎｇ）することを含む方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】（ａ）デング、ジカおよびチクングニアウイルスはいずれも同じカによって運ばれ、且つ三者の間には著しい臨床的重複が存在する。（ｂ）ジカ、デング、黄熱病、日本脳炎ウイルスおよび他の６６以上のフラビウイルスの間にも著しい臨床的重複が存在する。
【図２】完全合成フラビウイルスワクチン。コアは、細菌病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）として認識される炭水化物リガンドによって不動態化された、素量制限ナノクラスターである。維持内部ウイルス領域に由来するペプチドの組み合わせを、抗原提示細胞内で容易に開裂されるリンカーによって表面に結合させ、主要組織適合性（ＭＨＣ）クラスＩ分子と決定的な結合をもたらす。粒子全体の直径は５ｎｍであり、自己集合超分子化学を用いた１段階反応で合成することができる。
【図３】（ａ）健常（ナイーブ）ヒトＨＬＡ−Ａ２＋ドナーを利用し、サイトカインカクテル中で末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をペプチドエピトープで刺激し、抗原特異的ＣＴＬ応答を誘導した。その後、ペプチド装填標的を共培養することによってこれらの刺激されたＰＢＭＣの抗原特異的応答を測定した。ペプチド装填にはＴＡＰ−欠損細胞（Ｔ２）を用い、ブランクＴ２細胞を対照として用いた。増殖したＰＢＭＣのＣＤ１０７ａ脱顆粒およびインターフェロンγ（ＩＦＮ−ｇ）マーカーの双方をフローサイトメトリーで測定した。６つのペプチドエピトープのいずれも、ペプチド装填Ｔ２細胞に対してＣＤ８＋  ＣＤ１０７ａおよびＩＦＮｇ発現をペプチド特異的に誘導した。ペプチド「ＰＭＡ」は特に明白なＩＦＮｇ＋効果を有する。（ｂ）健常（ナイーブ）ヒトＨＬＡ−Ａ２＋ドナーを利用し、サイトカインカクテル中で末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をペプチドエピトープで刺激し、抗原特異的ＣＴＬ応答を誘導した。その後、Ｈｅｐ２Ｇ感染細胞（ＤＶ２／Ｚｉｋａ）と共培養することによってこれらの刺激されたＰＢＭＣを測定した。未感染ＨｅｐＧ２細胞を対照として用いた。増殖したＰＢＭＣのＣＤ１０７ａ脱顆粒およびインターフェロンγ（ＩＦＮ−ｇ）マーカーの双方をフローサイトメトリーで測定した。
【図４】健常（ナイーブ）ヒトＨＬＡ−Ａ２４＋ドナーを利用し、サイトカインカクテル中で末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をペプチドエピトープで刺激し、抗原特異的ＣＴＬ応答を誘導した。その後、ペプチド装填標的を共培養することによってこれらの刺激されたＰＢＭＣの抗原特異的応答を測定した。ペプチド装填にはＨｅｐ２Ｇ細胞を用い、ブランクＨｅｐ２Ｇ細胞を対照として用いた。デング（ＤＶ２）およびジカに感染したＨｅｐＧ２細胞も用いた。ＣＤ８／ＩＦＮｇの双方の二重発現について、フローサイトメトリーで増殖ＰＢＭＣを測定した。４つのペプチドエピトープのいずれも、ペプチド装填ＨｅｐＧ２細胞に対してＣＤ８＋  ＩＦＮｇ発現をペプチド特異的に誘導した。ペプチド「ＰＭＡ」は特に明白なＩＦＮｇ＋効果を有する。
【図５】トランスジェニックＡ２マウスをＮＰ−デングペプチド２００ｎｇで免疫した。脾細胞を分離した後、ジカまたはデング感染細胞のいずれかに曝露した。図５は、ＨｅｐＧ２標的細胞が、トランスジェニックＡ２マウス由来の脾細胞を刺激することのできるペプチドクラスＩ標的を含むことを示す。ペプチドの酸ストリッピングにより細胞は無反応となる。
【図６】トランスジェニックＡ２マウスをＮＰ−デングペプチド２００ｎｇで免疫した。脾細胞を分離した後、ジカまたはデング感染細胞のいずれかに曝露した。図６に示すように、ＨｅｐＧ２細胞のフラビウイルス感染により自己ペプチドが置換され、細胞表面上のウイルス由来ペプチドの露出がもたらされる。図６は、非免疫マウス由来の脾細胞がデングまたはジカ感染細胞に反応しないことを示す。対照的に、ＮＰ−デングまたはＮＰ−ジカで免疫されたＡ２マウスは、デングまたはジカ感染ＨｅｐＧ２細胞のいずれも死滅させることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（ワクチン組成物）
本発明は、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドを含むワクチン組成物を提供する。本発明は、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むワクチン組成物を提供する。これらのワクチン組成物は、以下の考察で明らかとなる数多くの長所を有する。しかし、重要な長所をここに要約する。
【００１３】
第１に、本発明のワクチン組成物は、（ｉ）配列番号１から２３に記載されかつ本発明者らによって新規に同定されたＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープ、またはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチド；または（ｉｉ）配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドのポリヌクレオチドを有利に含む。実施例で立証されるように、ワクチン組成物はそれゆえフラビウイルスに対する細胞性免疫応答（ＣＤ８＋Ｔ細胞応答など）を刺激することが可能である。ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）は、感染細胞に対するその細胞傷害性活性を介してウイルスクリアランスを媒介する。それゆえ、細胞性免疫を刺激することはフラビウイルス感染に対する有益な防御を提供する。
【００１４】
第２に、本発明者らによって同定された数多くのＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープは、多くの異なるフラビウイルスの間で維持され、且つそれらのウイルスに感染した細胞上でＭＨＣ分子によって提示されることが可能である。たとえば、本発明者らは、デングウイルスに感染した細胞において発現される一部のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープが、ジカウイルスなどの他のフラビウイルス、またはアルファウイルスであるチクングニアウイルスなどの他の関連ウイルスによって発現されるペプチドと１００％相同であることを特定した（表１参照）。そのような維持ペプチドをワクチン組成物に含めることで、（ｉ）関連する型のウイルス、（ｉｉ）複数種のフラビウイルスおよび／または（ｉｉｉ）特定の種の複数系統または血清型に対する防御能力を付与する、すなわち交差防御を付与することができる。付与しようとする交差防御にとっては、ウイルス間の１００％相同性は必要でない。むしろ、一定の残基が正しい位置に保持されている場合、異なるウイルスに感染した細胞に発現されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープとたとえば約５０％以上（６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％など）相同である配列での免疫後に交差防御が発生することがある。したがって、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上、または対応するポリヌクレオチドを含むワクチン組成物は、表１および２に列挙するもの全体およびそれを上回る多様な既存のフラビウイルスに対する交差防御を提供することが可能でありえる。１つ以上の維持ペプチドをワクチン組成物に含めることで、フラビウイルスゲノムの迅速な進化に随伴する新興フラビウイルス株に対する防御能力も付与することがある。このように、単一のフラビウイルスワクチン組成物を用いて、多様な異なるフラビウイルスに対する防御を付与することができる。これにより、フラビウイルス感染の蔓延を抑制する費用対効果の高い手段が提供される。
【００１５】
第３に、本発明者らによって同定された異なるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープは異なるＨＬＡスーパータイプと結合することが可能である。異なるＨＬＡスーパータイプ（または対応するポリヌクレオチド）と結合することの可能なＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープをそれぞれ含む複数のペプチドを含めることにより、異なるＨＬＡ型を有する個体において有効なワクチン組成物がもたらされる。このように、単一のフラビウイルスワクチン組成物を用いて、ヒト集団の大部分に防御を付与することができる。これによってもまた、フラビウイルス感染の蔓延を抑制する費用対効果の高い手段が提供される。
【００１６】
第４に、本発明のワクチン組成物に含まれるフラビウイルスペプチドは、たとえば金ナノ粒子などのナノ粒子と結合することができる。以下により詳細に記述するように、ナノ粒子への結合によってワクチン組成物にアジュバントを含める必要性が低減または除外される。ナノ粒子への結合によってワクチン組成物にウイルスを含める必要性も低減または除外されるので、ある個体に本発明のワクチン組成物を接種する際に有害な臨床作用を引き起こす可能性が低くなる。
【００１７】
（ペプチド）
本発明のワクチン組成物は、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドを含む。変異体は以下に詳細に定義する。ワクチン組成物は約１から約５０種類のそのようなペプチド、たとえば約２から４０、３から３０、４から２５、５から２０、６から１５、７、８、９または１０種類のそのようなペプチドを含むことがある。配列番号１から２３は表１に提示する。  
【００１８】
【表１】
2021509400.tif 000003
2021509400.tif 000004
【００１９】
配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドは、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つのみを含むことがある。またその代わりに、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドは、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち２つ以上、たとえば３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上、２０以上、２１以上、または２２以上を、任意の組み合わせで含むことがある。配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドは、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープの全てを含むことがある。
【００２０】
配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドは、配列番号１から１４に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つ以上を含むことがある。配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドは、配列番号１５から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つ以上を含むことがある。たとえば、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドは、（ａ）配列番号１５またはその変異体、（ｂ）配列番号１６またはその変異体、（ｃ）配列番号１７またはその変異体、（ｄ）配列番号１８またはその変異体、（ｅ）配列番号１９またはその変異体、（ｆ）配列番号２０またはその変異体、（ｇ）配列番号２１またはその変異体、（ｈ）配列番号２２またはその変異体、または（ｉ）配列番号２３またはその変異体を含むことがある。配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドは、たとえば（ａ）および（ｂ）；（ａ）および（ｃ）；（ａ）および（ｄ）；（ａ）および（ｅ）；（ａ）および（ｆ）；（ａ）および（ｇ）；（ａ）および（ｈ）；（ａ）および（ｉ）；（ｂ）および（ｃ）；（ｂ）および（ｄ）；（ｂ）、および（ｅ）；（ｂ）および（ｆ）；（ｂ）および（ｇ）；（ｂ）および（ｈ）；（ｂ）および（ｉ）；（ｃ）および（ｄ）；（ｃ）および（ｅ）；（ｃ）および（ｆ）；（ｃ）および（ｇ）；（ｃ）および（ｈ）；（ｃ）および（ｉ）；（ｄ）および（ｅ）；（ｄ）および（ｆ）；（ｄ）および（ｇ）；（ｄ）および（ｈ）；（ｄ）および（ｉ）；（ｅ）および（ｆ）；（ｅ）および（ｇ）；（ｅ）および（ｈ）；（ｅ）および（ｉ）；（ｆ）および（ｇ）；（ｆ）および（ｈ）；（ｆ）および（ｉ）；（ｇ）および（ｈ）；（ｇ）および（ｉ）；（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）および（ｃ）；（ａ）、（ｂ）および（ｄ）；（ａ）、（ｂ）および（ｅ）；（ａ）、（ｂ）および（ｆ）；（ａ）、（ｂ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）および（ｄ）；（ａ）、（ｃ）および（ｅ）；（ａ）、（ｃ）および（ｆ）；（ａ）、（ｃ）および（ｇ）；（ａ）、（ｃ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）および（ｅ）；（ａ）、（ｄ）および（ｆ）；（ａ）、（ｄ）および（ｇ）；（ａ）、（ｄ）および（ｈ）；（ａ）、（ｄ）および（ｉ）；（ａ）、（ｅ），および（ｆ）；（ａ）、（ｅ）および（ｇ）；（ａ）、（ｅ）および（ｈ）；（ａ）、（ｅ）および（ｉ）；（ａ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）；（ｂ）、（ｃ）および（ｅ）；（ｂ）、（ｃ）および（ｆ）；（ｂ）、（ｃ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｃ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）および（ｅ）；（ｂ）、（ｄ）および（ｆ）；（ｂ）、（ｄ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｄ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｄ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｅ）および（ｆ）；（ｂ）、（ｅ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｅ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｅ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）；（ｃ）、（ｄ）および（ｆ）；（ｃ）、（ｄ）および（ｇ）；（ｃ）、（ｄ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｄ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｅ）および（ｆ）；（ｃ）、（ｅ）および（ｇ）；（ｃ）、（ｅ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｅ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｃ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）；（ｄ）、（ｅ）および（ｇ）；（ｄ）、（ｅ）および（ｈ）；（ｄ）、（ｅ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｄ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｄ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｄ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）；（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｆ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｆ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｇ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｈ）、（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｇ）、（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ），および（ｇ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｈ）、（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ），および（ｈ）；（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）、（ｇ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（
ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）、（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ），および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；または（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）を含むことがある。
【００２１】
フラビウイルスペプチドは、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つ以上だけでなく、１つ以上の他のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープ、１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープおよび／または１つ以上のＢ細胞エピトープを含むことがある。たとえば、フラビウイルスペプチドは、配列番号１から２３に記載されるもの以外のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを２つ以上、たとえば３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０以上、１５以上、または２０以上の含むことがある。フラビウイルスペプチドは、２つ以上、たとえば３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０以上、１５以上、または２０以上のＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含むことがある。フラビウイルスペプチドは、２つ以上、たとえば３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０以上、１５以上、または２０以上のＢ細胞エピトープを含むことがある。
【００２２】
ワクチン組成物は、配列番号１から２３から選択される異なる配列を含むＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープをそれぞれ含む、２つ以上のフラビウイルスペプチドを含むことがある。それゆえワクチン組成物は、配列番号１から１４から選択される異なる配列を含むＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはそれの変異体をそれぞれ含む、２つ以上のフラビウイルスペプチドを含むことがある。ワクチン組成物は、配列番号１５から２３から選択される異なる配列を含むＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体をそれぞれ含む、２つ以上のフラビウイルスペプチドを含むことがある。フラビウイルスペプチドのそれぞれは、前述の段落に記載される特性のいずれかを有することがある。たとえば、各フラビウイルスペプチドは配列番号１から２３に記載される複数のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体、および任意に、１つ以上の他のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープ、１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープおよび／または１つ以上のＢ細胞エピトープを含むことがある。１つの態様においては、ワクチン組成物は、配列番号１から２３から選択される異なる配列を含むＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体をそれぞれ含む３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上、２０以上、２１以上、または２２以上のフラビウイルスペプチドを含むことがある。ワクチン組成物は、たとえば、配列番号１から２３から選択される異なる配列を含むＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体をそれぞれ含む、２３のフラビウイルスペプチドを含むことがある。ワクチン組成物は、たとえば、配列番号１から１４から選択される異なる配列を含むＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体をそれぞれ含む、１４のフラビウイルスペプチドを含むことがある。ワクチン組成物は、たとえば、配列番号１５から２３から選択される異なる配列を含むＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体をそれぞれ含む、９つのフラビウイルスペプチドを含むことがある。
【００２３】
ワクチン組成物は、たとえば、（ａ）が配列番号１５またはその変異体、（ｂ）が配列番号１６またはその変異体、（ｃ）が配列番号１７またはその変異体、（ｄ）が配列番号１８またはその変異体、（ｅ）が配列番号１９またはその変異体、（ｆ）が配列番号２０またはその変異体、（ｇ）が配列番号２１またはその変異体、（ｈ）が配列番号２２またはその変異体、および（ｉ）が配列番号２３またはその変異体である以下のうち１つの組み合わせで、配列番号１５から２３から選択される２つ以上のフラビウイルスペプチドを含むことがある：（ａ）および（ｂ）；（ａ）および（ｃ）；（ａ）および（ｄ）；（ａ）および（ｅ）；（ａ）および（ｆ）；（ａ）および（ｇ）；（ａ）および（ｈ）；（ａ）および（ｉ）；（ｂ）および（ｃ）；（ｂ）および（ｄ）；（ｂ），および（ｅ）；（ｂ）および（ｆ）；（ｂ）および（ｇ）；（ｂ）および（ｈ）；（ｂ）および（ｉ）；（ｃ）および（ｄ）；（ｃ）および（ｅ）；（ｃ）および（ｆ）；（ｃ）および（ｇ）；（ｃ）および（ｈ）；（ｃ）および（ｉ）；（ｄ）および（ｅ）；（ｄ）および（ｆ）；（ｄ）および（ｇ）；（ｄ）および（ｈ）；（ｄ）および（ｉ）；（ｅ）および（ｆ）；（ｅ）および（ｇ）；（ｅ）および（ｈ）；（ｅ）および（ｉ）；（ｆ）および（ｇ）；（ｆ）および（ｈ）；（ｆ）および（ｉ）；（ｇ）および（ｈ）；（ｇ）および（ｉ）；（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）および（ｃ）；（ａ）、（ｂ）および（ｄ）；（ａ）、（ｂ）および（ｅ）；（ａ）、（ｂ）および（ｆ）；（ａ）、（ｂ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）および（ｄ）；（ａ）、（ｃ）および（ｅ）；（ａ）、（ｃ）および（ｆ）；（ａ）、（ｃ）および（ｇ）；（ａ）、（ｃ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）および（ｅ）；（ａ）、（ｄ）および（ｆ）；（ａ）、（ｄ）および（ｇ）；（ａ）、（ｄ）および（ｈ）；（ａ）、（ｄ）および（ｉ）；（ａ）、（ｅ），および（ｆ）；（ａ）、（ｅ）および（ｇ）；（ａ）、（ｅ）および（ｈ）；（ａ）、（ｅ）および（ｉ）；（ａ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）；（ｂ）、（ｃ）および（ｅ）；（ｂ）、（ｃ）および（ｆ）；（ｂ）、（ｃ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｃ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）および（ｅ）；（ｂ）、（ｄ）および（ｆ）；（ｂ）、（ｄ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｄ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｄ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｅ）および（ｆ）；（ｂ）、（ｅ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｅ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｅ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）；（ｃ）、（ｄ）および（ｆ）；（ｃ）、（ｄ）および（ｇ）；（ｃ）、（ｄ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｄ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｅ）および（ｆ）；（ｃ）、（ｅ）および（ｇ）；（ｃ）、（ｅ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｅ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｃ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）；（ｄ）、（ｅ）および（ｇ）；（ｄ）、（ｅ）および（ｈ）；（ｄ）、（ｅ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｄ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｄ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｄ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）；（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｆ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｆ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｇ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｈ）、（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｇ）、（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ），および（ｇ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｈ）、（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ），および（ｈ）；（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）、（ｇ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）
および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）、（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ），および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）；または（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）。
【００２４】
ワクチン組成物は、１つ以上のエピトープをそれぞれ含む１つ以上の（約１から５０、２から４０、３から３０、４から２５、５から２０、６から１５、７、８、１０または１０など）追加的ペプチドをさらに含むことがある。エピトープはＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープ、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープでありえる。ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープは、好ましくは配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープ以外のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体である。ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープは、たとえば、フラビウイルスＣＤ８＋エピトープ、すなわち１つ以上のフラビウイルスによって発現され、且つ（ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ分子による提示および（ｉｉ）ＣＤ８＋Ｔ細胞上に存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）による認識が可能であるペプチドでありえる。またその代わりに、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープは１つ以上のフラビウイルスによって発現されないＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープでありえる。ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは、たとえば、フラビウイルスＣＤ４＋エピトープ、すなわち１つ以上のフラビウイルスによって発現され、且つ（ｉ）クラスＩＩ  ＭＨＣ分子による提示および（ｉｉ）ＣＤ４＋Ｔ細胞上に存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）による認識が可能であるペプチドでありえる。またその代わりに、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは１つ以上のフラビウイルスによって発現されないＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープでありえる。ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは以下により詳細に記載される。
【００２５】
フラビウイルスペプチドは、１つ以上のフラビウイルスによって発現されるペプチドである。ジカウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルス、さらにはセントルイス脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、Ｋｕｎｊｉｎ脳炎ウイルス、ロシオ脳炎ウイルス、ロシア春夏脳炎ウイルス、ネギシ（Ｎｅｇｅｉｓｈｉ）ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、オムスク出血熱ウイルス、ポワッサンウイルス、跳躍病ウイルス、リオブラボーウイルス、チュレーニーウイルス、ウンタヤウイルスおよびモドックウイルスを含む、フラビウイルスの数多くの種が存在する。デングウイルスの４つの血清型（ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３およびＤＥＮＶ−４）およびジカウイルスの２系統（アフリカジカウイルスおよびアジアジカウイルス）が存在する。
【００２６】
本発明のワクチン組成物に含まれるいずれのフラビウイルスペプチドも、ジカウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、Ｋｕｎｊｉｎ脳炎ウイルス、ロシオ脳炎ウイルス、ロシア春夏脳炎ウイルス、Ｎｅｇｅｉｓｈｉウイルス、キャサヌール森林ウイルス、オムスク出血熱ウイルス、ポワッサンウイルス、跳躍病ウイルス、リオブラボーウイルス、チュレーニーウイルス、ウンタヤウイルスおよびモドックウイルスのうち１つ以上によって発現されるペプチドを含むことがある。たとえば、本発明のワクチン組成物に含まれるフラビウイルスペプチドは、ジカウイルスおよびデングウイルス、またはジカウイルス、デングウイルスおよび西ナイルウイルスによって発現されるペプチドを含むことがある。たとえば、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドは、（ｉ）ジカウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、Ｋｕｎｊｉｎ脳炎ウイルス、ロシオ脳炎ウイルス、ロシア春夏脳炎ウイルス、Ｎｅｇｅｉｓｈｉウイルス、キャサヌール森林ウイルス、オムスク出血熱ウイルス、ポワッサンウイルス、跳躍病ウイルス、リオブラボーウイルス、チュレーニーウイルス、ウンタヤウイルスおよびモドックウイルスのうち１つ以上；（ｉｉ）ジカウイルスおよびデングウイルス；または（ｉｉｉ）ジカウイルス、デングウイルスおよび西ナイルウイルスによって発現されることがある。同様に、組成物がフラビウイルスペプチドである追加的ペプチドを含む場合、その追加的フラビウイルスペプチドは（ｉ）ジカウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、Ｋｕｎｊｉｎ脳炎ウイルス、ロシオ脳炎ウイルス、ロシア春夏脳炎ウイルス、Ｎｅｇｅｉｓｈｉウイルス、キャサヌール森林、オムスク出血熱ウイルス、ポワッサンウイルス、跳躍病ウイルス、リオブラボーウイルス、チュレーニーウイルス、ウンタヤウイルスおよびモドックウイルスのうち１つ以上；（ｉｉ）ジカウイルスおよびデングウイルス；または（ｉｉｉ）ジカウイルス、デングウイルスおよび西ナイルウイルスによって発現されることがある。したがって、ワクチン組成物はフラビウイルスのうち１種以上、たとえば１から２０、２から１９、３から１８、４から１７、５から１６、６から１５、７から１４、８から１３、９から１２、１０または１１種のフラビウイルスなどに由来するフラビウイルスペプチドを含むことがある。
【００２７】
本発明のワクチン組成物に含まれるフラビウイルスペプチドがジカウイルスによって発現されるペプチドを含む場合、当該ペプチドはアフリカジカウイルス、アジアジカウイルス、またはアフリカジカウイルスおよびアジアジカウイルスの双方によって発現されることがある。本発明のワクチン組成物に含まれるフラビウイルスペプチドがデングウイルスによって発現されるペプチドを含む場合、当該ペプチドはＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３およびＤＥＮＶ−４のうち１つ以上の任意の組み合わせ、たとえば：１；２；３；４；１および２；１および３；１および４；２および３；２および４；３および４；１、２および３；１、２および４；１、３および４；２、３および４；または１、２、３および４などによって発現されることがある。
【００２８】
フラビウイルスペプチドは１つ以上のフラビウイルスの表面上、または細胞内で１つ以上のフラビウイルス内に発現されるペプチドでありえる。ペプチドは構造的ペプチド、またはフラビウイルスの代謝または複製に関与するペプチドなどの機能的ペプチドでありえる。好ましくは、ペプチドは内部ペプチドである。好ましくは、ペプチドは２つ以上の異なるフラビウイルスまたはフラビウイルス血清型間で維持される。２つ以上の異なるフラビウイルスまたはフラビウイルス血清型のそれぞれが、あるペプチドと５０％以上（６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％など）相同な配列をコードする場合、当該ペプチドはその２つ以上の異なるフラビウイルスまたはフラビウイルス血清型間で維持される。
【００２９】
フラビウイルスペプチドは任意の数のアミノ酸を含む可能性があり、すなわち任意の長さでありえる。典型的には、フラビウイルスペプチドは約８から約３０、３５または４０アミノ酸長，たとえば約９から約２９、約１０から約２８、約１１から約２７、約１２から約２６、約１３から約２５、約１３から約２４、約１４から約２３、約１５から約２２、約１６から約２１、約１７から約２０、または約１８から約２９アミノ酸長などである。
【００３０】
フラビウイルスペプチドは、ポリペプチドフラビウイルス抗原からたとえばタンパク質分解開裂などによって化学的に誘導されることがある。より典型的には、フラビウイルスペプチドは技術上周知の方法を用いて合成されることがある。
【００３１】
用語「ペプチド」は、アミノ酸残基がペプチド結合（−ＣＯ−ＮＨ−）で連結された分子のみでなく、ペプチド結合が逆転した分子も含む。そのようなレトロインベルソペプチド模倣体は、たとえばＭｅｚｉｅｒｅ他（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９，３２３０−３２３７に記載されたものなどの、技術上既知である方法を用いて作製されることがある。このアプローチは、骨格を包含するが側鎖の配向は包含しない変換を含むシュードペプチドを作製することを包含する。Ｍｅｚｉｅｒｅ他（１９９７）は、これらのシュードペプチドが少なくともＭＨＣクラスＩＩおよびＴヘルパー細胞応答に対して有用であることを示す。ＣＯ−ＮＨ結合の代わりにＮＨ−ＣＯ結合を含むレトロインバースペプチドの方がタンパク質分解に対する抵抗性がさらに強い。
【００３２】
同様に、アミノ酸残基の炭素原子間の間隔を保持する適切なリンカー部分が用いられるならば、ペプチド結合は全て省いてもよく；リンカー部分がペプチド結合とほぼ同じ電荷分布およびほぼ同じ平面性を有するならば特に好ましい。エキソタンパク質分解消化に対する感受性の低減を促すために、ペプチドをそのＮ末端またはＣ末端で簡便にブロッキングできることも評価される。たとえば、ペプチドのＮ末端アミノ基はカルボン酸と反応させることで保護し、かつペプチドのＣ末端カルボキシル基はアミンと反応させることで保護することがある。他の修飾の例はグリコシル化およびリン酸化を含む。他の有望な修飾は、ＲまたはＫ側鎖アミン上にある水素をメチレン基で置換できることである（−ＮＨ２を−ＮＨ（Ｍｅ）または−Ｎ（Ｍｅ）２に修飾できる）。
【００３３】
用語「ペプチド」は、インビボでペプチドの半減期を延長または短縮するペプチド変異体も含む。本発明にしたがって使用されるペプチドの半減期を延長することの可能なアナログの例は、ペプチドのペプトイドアナログ、ペプチドのＤ−アミノ酸誘導体、およびペプチド−ペプトイドハイブリッドである。本発明にしたがって使用されるポリペプチド変異体のさらなる実施形態は、ポリペプチドのＤ−アミノ酸型を含む。Ｌ−アミノ酸ではなくＤ−アミノ酸を用いたポリペプチドの調製は、通常の代謝プロセスによるこうした物質のあらゆる望まれない分解を大きく低下させ、投与する必要のある物質の量をその投与頻度と共に低下させる。
【００３４】
（変異体）
上記のように、本発明のワクチン組成物は、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つ以上の変異体を含むフラビウイルスペプチドを含むことがある。配列番号１から２３から選択される配列の変異体は、該当する配列と２アミノ酸以上異ならないＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープである。たとえば、配列番号１から２３から選択される配列の変異体は、該当する配列と比較して１アミノ酸の置換、欠失、または挿入を含むことがある。アミノ酸の置換は、たとえば保存的アミノ酸置換などでありえる。
【００３５】
保存的置換は、アミノ酸を同様な化学的構造、同様な化学的特性または同様な側鎖体積を有する他のアミノ酸で置換する。導入されるアミノ酸は、その置換するアミノ酸と同様な極性、親水性、疎水性、塩基性、酸性、中性または電荷を有することがある。またその代わりに、保存的置換は、既存の芳香族または脂肪族アミノ酸の代わりに他の芳香族または脂肪族であるアミノ酸を導入することができる。保存的アミノ酸変更は技術上周知であり、以下の表２に定義する２０の主要なアミノ酸の特性にしたがって選択することができる。アミノ酸が同様な極性を有する場合、表３のアミノ酸側鎖の疎水性親水性指標スケールを参照してこれを決定することもできる。
【００３６】
（表２：アミノ酸の化学的特性）
【表２】
2021509400.tif 000005
【００３７】
（表３：疎水性親水性スケール）
【表３】
2021509400.tif 000006
【００３８】
（ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープ）
本発明のワクチン組成物は、配列番号１から２３（表１を参照）に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドを含む。変異体は上記に定義する。配列表１から２３に記載のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドは、１つ以上の（たとえば２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０以上、１５以上、または２０以上など）他のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープをさらに含むことがある。ワクチン組成物は、１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープをそれぞれ含む１つ以上の（たとえば１から５０、２から４０、３から３０、４から２５、５から２０、６から１５、７、８、９または１０など）追加的ペプチドをさらに含むことがある。好ましくは、追加的ペプチドはフラビウイルスペプチドである。
【００３９】
ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープは、（ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ分子による提示および（ｉｉ）ＣＤ８＋Ｔ細胞上に存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）による認識が可能なペプチドである。好ましくは、ＴＣＲによる認識によってＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化がもたらされる。ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化は、増殖、サイトカイン産生および／または細胞傷害性効果の亢進をもたらしうる。
【００４０】
典型的には、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープは約９アミノ酸長である。しかしＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープはより短いこともあれば長いこともある。たとえば、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープは約８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸長でありえる。ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープは約８から１５、９から１４または１０から１２アミノ酸長でありえる。
【００４１】
ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含むフラビウイルスペプチドは技術上既知である。ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを同定する方法は技術上既知である。エピトープマッピング法は、Ｘ線共結晶構造解析、アレイベースオリゴペプチドスキャンニング（時にオーバーラッピングペプチドスキャンまたはペプスキャン分析と呼ばれる）、部位指向変異生成、高スループット変異生成マッピング、水素−重水素交換、架橋結合質量分析、ファージディスプレイおよび制限タンパク分解を含む。ＭＣＨモチーフ予測法を用いることもある。
【００４２】
ワクチン組成物に含めることを目的としてＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを直接同定するために、フラビウイルス感染細胞によって提示されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを同定することができる。これは単独でも、またはＭＣＨモチーフ予測法によって同定されたＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープ候補の有用性を確認する目的でも用いることができる、効率的且つ論理的方法である。この方法は、本発明者らによって、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを同定するために用いられた（実施例を参照のこと）。
【００４３】
この方法を実施するために、細胞をフラビウイルスに感染させ、培養において約７２時間の間約３７℃の温度で維持する。培養後に細胞を回収して洗浄する。次に、たとえばホモジナイゼーションおよび凍結／解凍などによって、１％ＮＰ４０を含有するバッファーに細胞を溶解する。２０００ｒｐｍで３０分間遠心分離して細胞デブリを除去することにより、ライセートを清澄化する。
【００４４】
次に、Ｗ６／３２（汎ＭＨＣクラスＩ分子を認識するモノクローナル抗体）でコーティングしたプロテインＡ／Ｇビーズ（ＵｌｔｒａＬｉｎｋ  Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ／Ｇ，  ｐｉｅｒｃｅ、イリノイ州ロックフォード）を用いたイムノアフィニティークロマトグラフィーにより、ライセートからＭＨＣ／ペプチド複合体を分離する。ビーズを抗体でコーティングするために、ビーズを低ｐＨバッファーで洗浄した後、ＰＢＳですすぎ、抗体０．５ｍｇと共に２時間室温でインキュベートし、３回洗浄して未結合抗体を除去する。イムノアフィニティークロマトグラフィー用に、コーティングしたビーズをライセートと共に持続的に振盪しながら室温で２時間インキュベートする。その後、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離することにより、ビーズをライセートから分離する。０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ｐＨ１．５を添加することにより、結合したＭＨＣ複合体をビーズから溶離する。
【００４５】
次に、溶離液を８５℃で１５分間加熱して結合したペプチドをＭＣＨ分子から解離させる。室温まで冷却した後、たとえば３ｋＤａ分子量カットオフメンブランフィルター（ミリポア）などを用いて、遠心分離によりペプチドを抗体から分離する。真空遠心分離を用いて濾液を濃縮した後、再溶解して最終体積１００μＬとする。精製されたペプチド混合物を、たとえばオフラインＨＰＬＣを用いるＣ−１８逆相（ＲＰ）カラム（直径４．６ｎｍ×長さ１５０ｍｍなど）を用いて分画化する。このステップでは、移動相Ａは２％アセトニトリル（ＣＡＮ）および０．１％ギ酸水溶液である一方、移動相Ｂは０．１％ＦＡおよび９０％ＣＡＮ水溶液でありえる。
【００４６】
次にペプチド含有分画をカラムから溶離させ、真空乾燥し、質量分析で分析して画分中の配列を同定する。その後、取得されたスペクトルデータを全てのデータベース化フラビウイルスタンパク質と照合して検索し、フラビウイルス関連ペプチド配列を同定することができる。次に、同定された配列にしたがって合成ペプチドを生成し、質量分析に付して、ペプチド含有画分中のペプチドとのその同一性を確認する。
【００４７】
この方法においては、任意の種類の細胞をフラビウイルスに感染させることができる。細胞は抗原提示細胞でありえる。細胞はＨｅｐＧ２細胞などの肝癌細胞、ＪＹ細胞などのＥＢＶ形質転換リンパ芽球様Ｂ細胞、またはＴ２細胞などのリンパ芽球でありえる。
【００４８】
同様に、任意の目標とするフラビウイルスを用いて細胞を感染させることがある。たとえば、フラビウイルスはジカウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、Ｋｕｎｊｉｎ脳炎ウイルス、ロシオ脳炎ウイルス、ロシア春夏脳炎ウイルス、Ｎｅｇｅｉｓｈｉウイルス、キャサヌール森林、オムスク出血熱ウイルス、ポワッサンウイルス、跳躍病ウイルス、リオブラボーウイルス、チュレーニーウイルス、ウンタヤウイルスおよびモドックウイルスでありえる。ジカウイルスは、たとえば、アフリカジカウイルスまたはアジアジカウイルスでありえる。デングウイルスは、たとえば、ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３またはＤＥＮＶ−４でありえる。
【００４９】
フラビウイルス感染細胞によって提示されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープの直接的な同定は、ＭＨＣモチーフ予測法と比較して有利である。免疫エピトープデータベース（ＩＥＤＢ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｅｄｂ．ｏｒｇ）は、機能的な方法ではなくモチーフ予測法によって生成され、またＭＨＣ結合スコアが高く且つＣＴＬ特性が限定されたいくつかの共有エピトープを含む、数多くの予測ＨＬＡ特異的フラビウイルスＴ細胞エピトープを含む。優位および準優位エピトープのいずれもがフラビウイルス感染細胞によって提示される可能性があるので、データベースを用いて自然に提示されるエピトープの優位性の順位を決定することは困難である。したがって、リストに挙げられたエピトープのうちいずれが、ワクチン組成物に含まれた場合にＣＤ８＋Ｔ細胞応答を効率よく誘導すると期待できるかは、免疫エピトープデータベースのみからでは不明瞭である。上述の直接同定法は、エピトープの有用性を確認するためのメカニズムを提供する。
【００５０】
本発明のワクチン組成物などの、フラビウイルス感染細胞が提示するエピトープに基づくワクチン組成物は、ウイルスタンパク質サブユニットまたはモチーフ予測エピトープに基づくワクチンよりも優れている。免疫系によるタンパク質プロセシングは、ナイーブなウイルスエピトープを変化させる可能性がある。ワクチン組成物が、感染細胞によって提示されると証明されたペプチドを基にすると、ペプチドがすでにタンパク質プロセシングを受けていることから、この不確実性の元が取り除かれる。
【００５１】
さらに、直接同定法を用いて、異なるフラビウイルスに感染した細胞が提示する維持ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを同定することもある。このようにして、交差防御ワクチンに含めるのに適したＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを同定することもある。本発明者らは、上記の表１および実施例に提示するように、２つ以上で維持されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを数多く同定している。
【００５２】
（交差防御ワクチン組成物）
本発明者らによって同定された配列番号１から２３の多くが、複数のフラビウイルスによって発現される。たとえば、配列番号１、２および４はデングウイルスおよびジカウイルスによって発現され、また配列番号３はデングウイルス、ジカウイルスおよび西ナイルウイルスによって発現される。さらに、配列番号１から２３はフラビウイルス間で高度に維持されている。したがって本発明のワクチン組成物は、２つ以上のフラビウイルスに対する防御免疫応答を誘発する可能性がある。換言すると、本発明のワクチン組成物は異なる多くのフラビウイルスに対して交差防御的である免疫応答を誘発する可能性がある。
【００５３】
本発明者らによって同定された配列番号１から２３の多くがフラビウイルス（デングウイルスなど）によって、またチクングニアウイルスによっても発現される。たとえば、配列番号１１、１２、１３および１４はデングウイルスおよびチクングニアウイルスによって発現される。したがって、本発明のワクチン組成物は１つ以上のフラビウイルス（デングウイルスおよび／またはジカウイルスなど）およびチクングニアウイルスに対して防御的である免疫応答を誘発することがある。ワクチン組成物は、いずれも同じ種のカによって伝播される可能性のあるデングウイルス、ジカウイルス、チクングニアウイルスに対して有効な三重ワクチン組成物でありえる。
【００５４】
他のウイルスに由来する配列と１００％相同であるエピトープを含む組成物の接種によって生成される免疫応答は、後にそのウイルスによる感染に対して防御する可能性がある。他のウイルスによってコードされる配列と約５０％以上（たとえば６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％）相同であるエピトープを含む組成物の接種によって生成する免疫応答は、後にそのウイルスによる感染に対して防御する可能性がある。一部の例においては、防御効果は、他のウイルスによってコードされる配列とエピトープの間での一定の残基の維持と関連する。したがって、本発明のワクチン組成物による免疫は、他のフラビウイルスなどの、表１または表４で言及されていない多様なウイルスに対する防御免疫応答を誘導することがある。
【００５５】
このように、本発明のワクチン組成物は固有の種間および／または属間有効性を有する、すなわち交差防御的ワクチン組成物でありえる。したがって、本発明の単一のフラビウイルスワクチン組成物を用いて、多様な異なるフラビウイルスに対する防御を付与することができる。これにより、フラビウイルス感染の蔓延を抑制する費用対効果の高い手段が提供される。本発明の単一のワクチン組成物を用いて、１つ以上の異なるフラビウイルスおよびチクングニアウイルスなどの１つ以上の他のウイルスに対する防御を付与することができる。これにより、カによって伝播される感染症の蔓延を抑制する費用対効果の高い手段が提供される。
【００５６】
維持ペプチドをワクチン組成物に含めることで、フラビウイルスゲノムの迅速な進化に随伴する新興フラビウイルス株に対する防御能を付与することもできる。これによりフラビウイルス感染の長期的抑制を促進することができる。
【００５７】
維持されたＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含むフラビウイルスペプチドを本発明のワクチン組成物に含めることで、ワクチン組成物投与後のデングウイルス感染の抗体依存的亢進の発生を有利に予防または最小化することができる。
【００５８】
（ＨＬＡサブタイプとの相互作用）
ワクチン組成物は、異なるＨＬＡサブタイプとそれぞれ相互作用するＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含む少なくとも２つのフラビウイルスペプチドを含むことがある。ワクチン組成物にそのようなペプチドを複数含めることで、ワクチン組成物を投与した個体に対し、より高い割合でワクチン組成物がＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発することが可能となる。これは、複数のフラビウイルスペプチドに含まれるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つと相互作用するＨＬＡスーパータイプの個体全てに対し、ワクチン組成物がＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発することが可能であるはずであるからである。各ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープはＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ２７、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ５８またはＨＬＡ−Ｂ６２、または技術上既知である任意の他のＨＬＡスーパータイプと相互作用することができる。そのようなＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含むフラビウイルスペプチドのあらゆる組み合わせが可能である。たとえば、ワクチン組成物は（ｉ）ＨＬＡ−Ａ２と相互作用するフラビウイルスペプチド、（ｉｉ）ＨＬＡ−Ａ３と相互作用するフラビウイルスペプチド、（ｉｉｉ）ＨＬＡ−Ａ２４と相互作用するフラビウイルスペプチド、および（ｉｖ）ＨＬＡ−Ｂ７と相互作用するフラビウイルスペプチドのうち２つ以上を含むことがある。ワクチン組成物は（ｉ）および（ｉｉ）；（ｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；または（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）を含むことがある。
【００５９】
ワクチン組成物は、少なくとも２つの異なるＨＬＡスーパータイプと相互作用するＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含む少なくとも１つのフラビウイルスペプチドを含むことがある。やはりこれにより、ワクチン組成物を投与した個体に対し、ワクチン組成物がより高い割合でＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発することが可能となる。ワクチン組成物は、少なくとも２つの異なるＨＬＡサブタイプとそれぞれ相互作用するＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含む少なくとも２つの、少なくとも３つの、少なくとも４つの、少なくとも５つの、少なくとも２つの、少なくとも１５の、または少なくとも２０のフラビウイルスペプチドを含むことがある。各フラビウイルスペプチドは、少なくとも２つの、少なくとも３つの、少なくとも４つの、少なくとも５つの、少なくとも６つの、少なくとも７つの、少なくとも８つの、少なくとも９つのまたは少なくとも１０の異なるＨＬＡスーパータイプと相互作用することがある。各フラビウイルスペプチドは、ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ２７、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ５８またはＨＬＡ−Ｂ６２、または技術上既知である任意の他のＨＬＡスーパータイプのうち２つ以上と任意の組み合わせで相互作用することがある。たとえば、各フラビウイルスペプチドは（ｉ）ＨＬＡ−Ａ２、（ｉｉ）ＨＬＡ−Ａ３、（ｉｉｉ）ＨＬＡ−Ａ２４、および（ｉｖ）ＨＬＡ−Ｂ７のうち２つ以上と相互作用することがある。各フラビウイルスペプチドは（ｉ）および（ｉｉ）；（ｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；または（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）と相互作用することがある。
【００６０】
好ましくは、ワクチン組成物はＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−２４と相互作用するＣＤ８＋Ｔ細胞を含むフラビウイルスペプチドを含む。この場合ワクチン組成物は、たとえば、配列番号１、２、６、１２、１３  １５、１６、１７、１９または２０に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞を含むフラビウイルスペプチドを含む。
【００６１】
好ましくは、ワクチン組成物はＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３およびＨＬＡ−２４と相互作用するＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含むフラビウイルスペプチドを含む。この場合ワクチン組成物は、たとえば、配列番号１９または２０に記載される１つのＣＤ８＋Ｔ細胞を含むフラビウイルスペプチドを含む。
【００６２】
（ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ）
本発明のワクチン組成物は、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含むペプチドを含むことがある。ワクチン組成物は、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含むペプチドを２つ以上、たとえば３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０以上、１５以上、または２０以上含むことがある。ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは、（ｉ）クラスＩＩ  ＭＨＣ分子による提示および（ｉｉ）ＣＤ４＋Ｔ細胞上に存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）による認識が可能であるペプチドである。好ましくは、ＴＣＲによる認識によってＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化がもたらされる。ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化は、増殖および／またはサイトカイン産生の亢進をもたらすことがある。
【００６３】
ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープはフラビウイルスＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープでありえる。すなわち、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは１つ以上のフラビウイルスによって発現され、且つ（ｉ）クラスＩＩ  ＭＨＣ分子による提示および（ｉｉ）ＣＤ４＋Ｔ細胞上に存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）による認識が可能であるペプチドでありえる。そのようなペプチドは技術上既知である。
【００６４】
ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは、フラビウイルスＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ以外のＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープでありえる。たとえば、ＣＤ４＋Ｔ細胞はフラビウイルス以外の生物によって発現されることもある。ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは、たとえば、Ｃｌｏｓｔｒｉｕｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉによって発現されることもある。たとえば、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは破傷風毒素に由来することもある。
【００６５】
ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは、全てのクラスＩＩ  ＨＬＡ型と反応するＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ、すなわちいわゆる「乱交雑」エピトープでありえる。ワクチン組成物に乱交雑エピトープを含めることは、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドに対する免疫応答を誘導するワクチン組成物の能力を改善する可能性がある。ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは、たとえば配列ＦＫＬＱＴＭＶＫＬＦＮＲＩＫＮＮＶＡ（配列番号２４）および／または配列ＬＱＴＭＶＫＬＦＮＲＩＫＮＮＶＡＧＧＣ（配列番号２５）などを含む。配列番号２４および２５は破傷風毒素に由来する乱交雑エピトープである。
【００６６】
ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含むペプチドは、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドとは異なるペプチドでありえる。ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは、たとえばワクチン組成物中の追加的ペプチド、すなわち配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含まないペプチドに含まれることがある。上述のように、追加的ペプチドは１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープおよび／または１つ以上のＢ細胞エピトープさらにはＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含むことがある。たとえば、追加的ペプチドは１つ以上のフラビウイルスＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含むことがある。
【００６７】
ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含むペプチドは、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドと同じペプチドでありえる。すなわち、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドは、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープをさらに含むことがある。
【００６８】
ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含むペプチドがＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープ（配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上など）も含む場合、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープはＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ内に入れ子状に配置されることがある。ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは、典型的にはＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープよりも長い。したがって、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープの一方または双方の末端を延長することにより、その配列がなおＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含む、さらに長いＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを得ることがある。したがって、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープは、そのＮ末端またはＣ末端が延長された、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体などのＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含むことがある。ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープはそのＮ末端で１、２、３、４、または５アミノ酸延長されることがある。ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープはそのＣ末端で１、２、３、４、または５アミノ酸延長されることがある。好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープはＮ末端で３アミノ酸、且つＣ末端で３アミノ酸延長される。しかし、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープの各末端の延長アミノ酸数が同じである必要はない。
【００６９】
ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ内に入れ子状に配置されたＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープは、頑健なＣＴＬ応答を生成することが可能でありえる。延長ペプチド（ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ）は、Ｔヘルパー媒介サイトカイン応答を誘導することが可能でありえる。したがって、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープおよびＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含むフラビウイルスペプチドをワクチン組成物に含めることで、ワクチン組成物が細胞傷害性応答およびヘルパーＴ細胞応答の双方を誘導することが可能となることがある。
【００７０】
ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含むフラビウイルスペプチドはナノ粒子と結合することがある。ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含むペプチドが、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドと異なるペプチドである場合、各ペプチドが同じナノ粒子と結合することも、または異なるナノ粒子と結合することもある。ナノ粒子は金ナノ粒子でありえる。ナノ粒子およびこれとの結合は後述される。
【００７１】
（Ｂ細胞エピトープ）
本発明のワクチン組成物は、Ｂ細胞エピトープを含むペプチドを含むことがある。ワクチン組成物は、Ｂ細胞エピトープを含むペプチドを２つ以上、たとえば３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０以上、１５以上、または２０以上含むことがある。Ｂ細胞エピトープは、Ｂ細胞上に存在するＢ細胞受容体（ＢＣＲ）による認識が可能なペプチドである。好ましくは、ＢＣＲによる認識によってＢ細胞の活性化および／または成熟がもたらされる。Ｂ細胞活性化は増殖、および／または抗体産生の亢進をもたらすことがある。
【００７２】
Ｂ細胞エピトープはフラビウイルスＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープでありえる。すなわちＢ細胞エピトープは、１つ以上のフラビウイルスによって発現されることがあり、且つＢ細胞上に存在するＢ細胞受容体（ＢＣＲ）による認識が可能なペプチドでありえる。そのようなペプチドは技術上既知である。
【００７３】
Ｂ細胞エピトープは線型エピトープ、すなわちフィロウイルスタンパク質の特定領域のアミノ酸一次配列によって定義されるエピトープでありえる。またその代わりに、エピトープは高次構造的エピトープ、すなわちナイーブフラビウイルスタンパク質の高次構造によって定義されるエピトープでありえる。この場合、エピトープは連続的（すなわち抗体と相互作用するコンポーネントがタンパク質上で互いに隣接して連続的に位置する）であることも、非連続的（すなわち抗体と相互作用するコンポーネントがタンパク質上の異なる部分に位置し、折りたたまれたナイーブタンパク質構造において互いに近づく）であることもある。
【００７４】
典型的には、Ｂ細胞エピトープは約５から２０アミノ酸長、たとえば６から１９、７から１８、８から１７、９から１６、１０から１５、１１から１４または１２から１３アミノ酸長である。
【００７５】
Ｂ細胞エピトープを同定する方法も技術上既知である。たとえば、エピトープマッピング法を用いてＢ細胞エピトープを同定することもある。これらの方法は、既知のまたはモデル化したタンパク質の構造をアルゴリズムベースのアプローチに用いて表面エピトープを予測する構造的アプローチ、およびタンパク質全体、タンパク質フラグメントまたはペプチドと抗体との結合を、たとえば酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）などを用いて定量化することのできる機能的アプローチを含む。競合的マッピング、抗原修飾またはタンパク質フラグメント化法も用いることができる。
【００７６】
（ナノ粒子）
本発明のワクチン組成物においては、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドがナノ粒子と結合することもある。また、ワクチン組成物にさらに含まれる他の任意のペプチドも、ナノ粒子と結合することがある。たとえば金ナノ粒子などのナノ粒子との結合は有益である。
【００７７】
上記で、および以下の実施例に記載するように、ペプチドのナノ粒子（金ナノ粒子など）との結合は、ワクチン組成物にウイルスまたはアジュバントを含める必要性を低減または除外する。ナノ粒子は、ペプチドに対する免疫応答を効率的に誘導することを促進する免疫的「危険信号」を含むこともある。ナノ粒子は、頑健な免疫応答に必要とされる樹状細胞（ＤＣ）の活性化および成熟を誘導することもある。ナノ粒子は、抗原提示細胞などの細胞によるナノ粒子の取り込みを改善しかつこれによりペプチドの取り込みを改善する非自己コンポーネントを含むことがある。したがって、ペプチドのナノ粒子との結合は、抗原提示細胞がウイルス特異的Ｔおよび／またはＢ細胞を刺激する能力を促進することがある。またナノ粒子との結合により、皮下、皮内、経皮および経口／バッカル経路からのワクチン組成物の送達も促進され、投与における融通性を提供する。
【００７８】
ナノ粒子は，リガンドを固定するための基質として用いることのできる１から１００ナノメートル（ｎｍ）のサイズの粒子である。本発明のワクチン組成物においては、ナノ粒子は１から１００、２０から９０、３０から８０、４０から７０または５０から６０ｎｍの平均直径を有することがある。好ましくは、ナノ粒子は２０から４０ｎｍの平均直径を有する。２０から４０ｎｍの平均直径は、ナノ粒子のサイトゾルへの取り込みを促進する。平均直径は、透過電子顕微鏡などの技術上周知の技術を用いて測定することができる。
【００７９】
フラビウイルスペプチドなどの抗原の送達に適したナノ粒子は技術上既知である。そのようなナノ粒子を生成するための方法も既知である。
【００８０】
ナノ粒子は、たとえばポリマーナノ粒子、無機ナノ粒子、リポソーム、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、または自己集合タンパク質などでありえる。ナノ粒子は、好ましくはリン酸カルシウムナノ粒子、シリコンナノ粒子または金ナノ粒子である。
【００８１】
ナノ粒子はポリマーナノ粒子でありえる。ポリマーナノ粒子は、ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）、ポリ（ｄ，ｌ−乳酸−コグリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（ｇ−グルタミン酸）（ｇ−ＰＧＡ）ｍポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、またはポリスチレンなどの１つ以上の合成ポリマーを含むことがある。ポリマーナノ粒子は、たとえばプルラン、アルギン酸、イヌリンまたはキトサンなどの多糖類などの１つ以上の天然ポリマーを含むことがある。ポリマーナノ粒子の使用は、ナノ粒子に含まれることのできるポリマーの特性によって有利でありえる。たとえば、上に列挙した天然および合成ポリマーは、良好な生体適合性および生分解性、無毒性および／または操作されて所望の形状およびサイズとなる能力を有することがある。ポリマーナノ粒子はハイドロゲルナノ粒子を形成することがある。ハイドロゲルナノ粒子はナノサイズ親水性３次元ポリマーネットワークの一種である。ハイドロゲルナノ粒子は、融通性のあるメッシュサイズ、多価コンジュゲーションのための大きな表面積、高い水分含有量、および高い抗原装填能力を含む好ましい特性を有する。ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＡ）、ＰＬＧＡ、ＰＥＧおよび多糖類などのポリマーは、ハイドロゲルナノ粒子を形成するのに特に適している。
【００８２】
ナノ粒子は無機ナノ粒子でありえる。典型的には、無機ナノ粒子は強固な構造を有し且つ非生分解性である。しかし、無機ナノ粒子は生分解性でありえる。無機ナノ粒子は、その中に抗原がカプセル化されることのできるシェルを含むことがある。無機ナノ粒子は、そこに抗原が共有結合することのできるコアを含むことがある。コアは金属を含むことがある。たとえば、コアは金（Ａｕ）、銀（Ａｇ）または銅（Ｃｕ）原子を含むことがある。コアは、２種類以上の原子から形成されることがある。たとえば、コアはＡｕ／Ａｇ、Ａｕ／Ｃｕ、Ａｕ／Ａｇ／Ｃｕ、Ａｕ／Ｐｔ、Ａｕ／ＰｄまたはＡｕ／Ａｇ／Ｃｕ／Ｐｄの合金などの合金を含むことがある。コアはリン酸カルシウム（ＣａＰ）を含むことがある。コアは、たとえばセレン化カドミウムなどの半導体材料を含むことがある。
【００８３】
他の典型的な無機ナノ粒子は、カーボンナノ粒子およびシリカベースナノ粒子を含む。カーボンナノ粒子は良好な生体適合性を有し且つ合成してナノチューブおよびメソポーラス球とすることができる。シリカベースナノ粒子（ＳｉＮＰ）は生体適合性であり、且つ調整可能な構造パラメーターで調製してその治療的用途に適合させることができる。
【００８４】
ナノ粒子は、ケイ素元素ナノ粒子などのシリコンナノ粒子とすることができる。ナノ粒子はメソポーラスであることも、またはハニカム孔構造を有することもある。好ましくは、ナノ粒子はハニカム孔構造を有するケイ素元素粒子である。そのようなナノ粒子は技術上既知であり、ほぼ任意の装填、投与経路、標的または放出プロフィールに調節可能な、調整および制御可能な薬剤装填、標的化および放出を提供する。たとえば、そのようなナノ粒子はその装填物のバイオアベイラビリティを高め、且つ／または腸透過性および経口投与した活性体の吸収を改善する。ナノ粒子は、その多孔性構造および大きな表面積によって、例外的に高い装填能力を有する。ナノ粒子は、その物理的特性に応じて、その装填物を数日間、数週間または数ヶ月間にわたって放出することができる。ケイ素は人体の天然元素であるので、ナノ粒子が免疫系から応答を誘発する可能性はない。これは、ナノ粒子のインビボ安全性にとって有利である。
【００８５】
上記のいずれかのＳｉＮＰは、生分解性であることも非生分解性であることもある。生分解性ＳｉＮＰは、溶解してケイ素の生体利用可能な形態であるオルトケイ酸（ｏｒｔｈｏｓｉｌｉｃ  ａｃｉｄ）となる。オルトシリック酸は骨、結合組織、毛髪および皮膚の健康にとって有益であることが示されている。
【００８６】
ナノ粒子はリポソームでありえる。リポソームは、典型的には生分解性、無毒性リン脂質から形成され、且つ水性コアを伴う自己集合型リン脂質二重層シェルを含む。リポソームは単一リン脂質二重層を含む単層小胞であることも、水の層で隔てられた数層の同心性リン脂質シェルを含む多重膜小胞であることもある。その結果、リポソームは親水性分子を水性コアに、または疎水性分子をリン脂質二重層に取り込むよう調整することができる。リポソームは、送達を目的として抗原をコア内にカプセル化することができる。リポソームはウイルスエンベロープ糖タンパク質をシェルに取り込んでビロソームを形成することができる。当技術において数多くのリポソームベース製品が確立され、ヒトへの使用が承認される。
【００８７】
ナノ粒子は免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）でありえる。ＩＳＣＯＭは、典型的にはコロイドサポニン含有ミセルから形成される籠様粒子である。ＩＳＣＯＭはコレステロール、リン脂質（ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなど）およびサポニン（樹木Ｑｕｉｌｌａｉａ  ｓａｐｏｎａｒｉａに由来するＱｕｉｌ  Ａなど）を含むことがある。ＩＳＣＯＭは、従来、単純ヘルペスウイルス１型、Ｂ型肝炎ウイルスまたはインフルエンザウイルスに由来するエンベロープタンパク質などの、ウイルスエンベロープタンパク質を捕捉するために使用されている。
【００８８】
ナノ粒子はウイルス様粒子（ＶＬＰ）でありえる。ＶＬＰは感染性核酸が欠如した自己集合型ナノ粒子であり、生体適合性カプシドタンパク質の自己集合によって形成される。ＶＬＰは、典型的には直径約２０から約１５０ｎｍ、たとえば約２０から約４０ｎｍ、約３０から約１４０ｎｍ、約４０から約１３０ｎｍ、約５０から約１２０ｎｍ、約６０から約１１０ｎｍ、約７０から約１００ｎｍ、または約８０から約９０ｎｍでありえる。ＶＬＰは、免疫系との相互作用に対して自然に最適化される、進化したウイルス構造の力を有益に利用する。自然に最適化されたナノ粒子のサイズおよび繰り返し構造の順序は、アジュバントが欠如していてもＶＬＰが強力な免疫応答を誘導することを意味する。
【００８９】
ナノ粒子は自己集合型タンパク質でありえる。たとえば、ナノ粒子はフェリチンを含むことがある。フェリチンは、自己集合してほぼ球形の１０ｎｍ構造となることのできるタンパク質である。ナノ粒子は主要ヴォールトタンパク質（ＭＶＰ）を含むことがある。ＭＶＰの９６ユニットが自己集合して、幅約４０ｎｍ長さ約７０ｎｍサイズの樽型のヴォールトナノ粒子となることができる。
【００９０】
ナノ粒子はリン酸カルシウム（ＣａＰ）ナノ粒子でありえる。ＣａＰナノ粒子はＣａＰを１分子以上（２分子以上、１０分子以上、２０分子以上、５０分子以上、１００分子以上、２００分子以上、または５００分子以上など）含むコアを含むことがある。ＣａＰナノ粒子およびその生成方法は技術上既知である。たとえば、ＣＡＰナノ粒子の安定したナノ懸濁液は、所定の比率のカルシウムとリン酸の無機塩溶液を一定して混合することによって生成されることがある。
【００９１】
ＣａＰナノ粒子は、約８０から約１００ｎｍ、たとえば約８２から約９８ｎｍ、約８４から約９６ｎｍ、約８６から約９４ｎｍ，または約８８から約９２ｎｍの平均粒径を有することがある。この粒径は、免疫細胞取り込みおよび免疫応答の点で、他のより大きな粒径より優れた性能をもたらすことがある。粒径は、たとえば１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、３６ヶ月、または４８ヶ月にわたって測定する場合に安定でありえる（すなわち著しい変化を示さない）。
【００９２】
ＣａＰナノ粒子は、ナノ粒子の表面に吸着されたか、または粒子の合成中にＣａＰと共沈殿した１つまたは複数の抗原と共製剤化することができる。たとえば、フラビウイルスペプチドなどのペプチドは、ペプチドを（たとえば約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で）ＤＭＳＯに溶解し、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）（たとえば０．０９３ｍｏｌ／Ｌの濃度および超純水と共にＣａＰナノ粒子の懸濁液に添加し、約４時間の間（たとえば１時間、２時間、３時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間または１０時間）室温で混合することによってＣａＰナノ粒子と結合することができる。
【００９３】
ワクチン組成物は、約０．１５から約０．８％、たとえば０．２から約０．７５％、０．２５から約０．７％、０．３から約０．６％、０．３５から約０．６５％、０．４から約０．６％、または０．４５から約０．５５％のＣａＰナノ粒子を含むことがある。好ましくは、ワクチン組成物はＣａＰナノ粒子を約０．３％含む。
【００９４】
ＣａＰナノ粒子は、骨や歯などのヒト硬組織とのその化学的類似性により高度な生体適合性を有する。したがって、有利なことに、ＣａＰナノ粒子は治療用途に用いるとき無毒性である。ＣａＰナノ粒子は、筋肉内、皮下、経口または吸入経路からの投与について安全である。ＣａＰナノ粒子は、商業的に合成する上で簡便でもある。さらに、ＣａＰナノ粒子は抗原の緩徐な放出を伴い、これはナノ粒子と結合したペプチドに対する免疫応答の誘導を促進することがある。ＣａＰナノ粒子はアジュバントとしても、また薬剤送達担体としても用いられることがある。
【００９５】
ナノ粒子は金ナノ粒子でありえる。金ナノ粒子は技術上既知であり、具体的には国際公開第２００２／３２４０４号、国際公開第２００６／０３７９７９号、国際公開第２００７／１２２３８８号、国際公開第２００７／０１５１０５および国際公開第２０１３／０３４７２６号に記載される。各ペプチドと結合した金ナノ粒子は国際公開第２００２／３２４０４号、国際公開第２００６／０３７９７９号、国際公開第２００７／１２２３８８号、国際公開第２００７／０１５１０５号、および国際公開第２０１３／０３４７２６のいずれかに記載された金ナノ粒子でありえる。
【００９６】
金ナノ粒子は金（Ａｕ）原子を含むコアを含む。コアは１つ以上のＦｅ、ＣｕまたはＧｄ原子をさらに含むことがある。コアは、Ａｕ／Ｆｅ、Ａｕ／Ｃｕ、Ａｕ／Ｇｄ、Ａｕ／Ｆｅ／Ｃｕ、Ａｕ／Ｆｅ／ＧｄまたはＡｕ／Ｆｅ／Ｃｕ／Ｇｄなどの金合金から形成されることがある。コア内の原子の総数は１００から５００原子、たとえば１５０から４５０、２００から４００または２５０から３５０原子などでありえる。金ナノ粒子は１から１００、２０から９０、３０から８０、４０から７０または５０から６０ｎｍの平均直径を有することがある。好ましくは、金ナノ粒子は平均直径２０から４０ｎｍを有する。
【００９７】
ナノ粒子は、α−ガラクトースおよび／またはβ−ＧｌｃＮＨＡｃでコーティングされた表面を含むことがある。たとえば、ナノ粒子はα−ガラクトースおよび／またはβ−ＧｌｃＮＨＡｃで不動態化された表面を含むことがある。この場合ナノ粒子は、たとえば金属および／または半導体原子を含むコアを含むナノ粒子などでありえる。たとえば、ナノ粒子は金ナノ粒子でありえる。β−ＧｌｃＮＨＡｃは細菌病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）であり、これは抗原提示細胞を活性化することができる。このようにして、β−ＧｌｃＮＨＡｃでコーティングまたは不動態化された表面を含むナノ粒子は、免疫応答を非特異的に刺激することがある。したがって、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドとそのようなナノ粒子との結合は、本発明のワクチン組成物の個体への投与によって誘発される免疫応答を改善することがある。
【００９８】
当該ペプチド以外の１つ以上のリガンドをナノ粒子と結合させることもあり、これは上記のナノ粒子の任意の種類でありえる。リガンドは、コアの表面を部分的に被覆することもあれば完全に被覆することもある層またはコーティングである「コロナ」を形成することがある。コロナは、ナノ粒子コアを取り囲むかまたは部分的に取り囲む有機層と考えることができる。コロナは、ナノ粒子のコアの不動態化を提供することもあれば、これに関与することもある。したがって一定の例においては、コロナはコアを安定化させるための十分に完全なコーティング層でありえる。コロナは、本発明のナノ粒子の水溶性などの溶解性を促進することがある。
【００９９】
ナノ粒子は少なくとも１０個、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、または少なくとも５０個のリガンドを含むことがある。リガンドは１つ以上のペプチド、タンパク質ドメイン、核酸分子、脂質基、炭水化物基、陰イオン基、または陽イオン基、糖脂質および／または糖タンパク質を含むことがある。炭水化物基は多糖類、またはオリゴ糖類または単糖類（グルコースなど）でありえる。リガンドのうち１つ以上は非自己コンポーネントであってもよく、これは病原性コンポーネントと類似しているのでナノ粒子が抗原提示細胞によって取り込まれる可能性を高める。たとえば、１つ以上のリガンドが炭水化物部分（細菌炭水化物部分など）、界面活性物質部分および／またはグルタチオン部分を含むことがある。典型的なリガンドはグルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、グルタチオン、２’−チオエチル−β−Ｄ−グルコピラノシドおよび２’−チオエチル−Ｄ−グルコピラノシドを含む。好ましいリガンドは、糖ナノ粒子を形成する糖コンジュゲートを含む。
【０１００】
リガンドのコアとの結合はリンカーによって促進されることがある。リンカーはチオール基、アルキル基、グリコール基またはペプチド基を含むことがある。たとえば、リンカーはＣ２〜Ｃ１５アルキルおよび／またはＣ２〜Ｃ１５グリコールを含むことがある。リンカーは、コアとの共有結合が可能であるイオウ含有基、アミノ含有基、リン酸含有基または酸素含有基を含むことがある。またその代わりに、リガンドが、たとえばリガンドに含まれるイオウ含有基、アミノ含有基、リン酸含有基または酸素含有基を介してコアと直接結合することもある。
【０１０１】
（ナノ粒子との結合）
ペプチドはそのＮ末端でナノ粒子と結合することがある。典型的には、ペプチドはナノ粒子のコアと結合するが、コロナまたはリガンドとの結合もまた可能である。
【０１０２】
ペプチドは、たとえばペプチド内のイオウ含有基、アミノ含有基、リン酸含有基または酸素含有基内の原子と、ナノ粒子またはそのコア内の原子との共有結合などにより、ナノ粒子と直接連結されることもある。
【０１０３】
リンカーを用いてペプチドをナノ粒子と結合することもある。リンカーは、コア内の原子との共有結合が可能であるイオウ含有基、アミノ含有基、リン酸含有基または酸素含有基を含むことがある。たとえば、リンカーはチオール基、アルキル基、グリコール基またはペプチド基を含むことがある。
【０１０４】
リンカーはペプチド部分と非ペプチド部分を含むことがある。ペプチド部分は、Ｘ１がＡおよびＧから選択されるアミノ酸；Ｘ２がＡおよびＧから選択されるアミノ酸；且つＺ１がＹおよびＦから選択されるアミノ酸である配列Ｘ１Ｘ２Ｚ１を含むことがある。ペプチド部分は配列ＡＡＹまたはＦＬＡＡＹを含むことがある。リンカーのペプチド部分はペプチドのＮ末端と結合することがある。リンカーの非ペプチド部分はＣ２〜Ｃ１５アルキルおよび／Ｃ２〜Ｃ１５グリコール、たとえばチオエチル基またはチオプロピル基を含むことがある。
【０１０５】
リンカーは（ｉ）ＨＳ−（ＣＨ２）２−ＣＯＮＨ−ＡＡＹ；（ｉｉ）ＨＳ−（ＣＨ２）２−ＣＯＮＨ−ＬＡＡＹ；（ｉｉｉ）ＨＳ−（ＣＨ２）３−ＣＯＮＨ−ＡＡＹ；（ｉｖ）ＨＳ−（ＣＨ２）３−ＣＯＮＨ−ＦＬＡＡＹ；（ｖ）ＨＳ−（ＣＨ２）１０−（ＣＨ２ＯＣＨ２）７−ＣＯＮＨ−ＡＡＹ；および（ｖｉ）ＨＳ−（ＣＨ２）１０−（ＣＨ２ＯＣＨ２）７−ＣＯＮＨ−ＦＬＡＡＹでありえる。この場合、リンカーの非ペプチド部分のチオール基がリンカーをコアに結合する。
【０１０６】
ペプチドをナノ粒子と結合するのに適した他のリンカーは技術上既知であり、当業者によって容易に同定および施行されることができる。
【０１０７】
上記に説明されるように、ワクチン組成物は、配列番号１から９に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのうち１つ以上をそれぞれ含む複数のフラビウイルスペプチドを含むことがある。ワクチン組成物はエピトープ、たとえばＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ、Ｂ細胞エピトープ、または配列番号１から９に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープ以外のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープなどをそれぞれ含む１つ以上の追加的ペプチドを含むことがある。したがって、ワクチン組成物は２つ以上のペプチドを含むことがある。
【０１０８】
ワクチン組成物が２つ以上のペプチドを含む場合、ペプチドのうち２つ以上（３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０以上、または２０以上など）が同じナノ粒子と結合することがある。ペプチドのうち２つ以上（３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０以上、または２０以上など）が異なるナノとそれぞれ結合することがある。しかし、ペプチドが結合するナノ粒子は同じ種類のナノ粒子でありえる。たとえば、各ペプチドが金ナノ粒子と結合することがある。各ペプチドがＣａＰナノ粒子と結合することがある。ペプチドが結合するナノ粒子は、異なる種類のナノ粒子でありえる。たとえば、一方のペプチドが金ナノ粒子と結合し、且つ他方のペプチドがＣａＰナノ粒子と結合することがある。
【０１０９】
（ポリヌクレオチドワクチン）
本発明は、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むワクチン組成物を提供する。そのようなポリヌクレオチドワクチンの有利な特性を以下に記載する。
【０１１０】
ワクチン組成物は、異なるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープをそれぞれ含む２つ以上のフラビウイルスペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むことがある。ワクチン組成物は、異なるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含むフラビウイルスペプチドをそれぞれコードする２つ以上のポリヌクレオチドを含むことがある。いずれの場合も、各フラビウイルスペプチドは配列番号１から２３に記載されるペプチドまたはその変異体を含むことがある。
【０１１１】
フラビウイルスペプチド、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープおよび変異体は、本発明のペプチドワクチンに関連して上記に詳述される。ペプチドワクチンに関連して記載された態様のいずれも、ポリヌクレオチドワクチンに適用することができる。
【０１１２】
ポリヌクレオチドはＤＮＡでありえる。ポリヌクレオチドはＲＮＡでありえる。たとえば、ポリヌクレオチドはｍＲＮＡでありえる。換言すると、ポリヌクレオチドは、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドをコードするＤＮＡポリヌクレオチドと相補的なＲＮＡポリヌクレオチドでありえる。
【０１１３】
（医薬品、治療の方法および治療的使用）
本発明は、フラビウイルス感染を予防または治療するための方法であって、フラビウイルスに感染したか、またはこれに感染するリスクのある個体に本発明のワクチン組成物を投与することを含む方法を提供する。また本発明は、個体におけるフラビウイルス感染を予防または治療する方法における使用を目的とした本発明のワクチン組成物も提供する。
【０１１４】
たとえば、フラビウイルス感染はジカウイルス感染、デングウイルス感染、西ナイルウイルス感染、黄熱病ウイルス感染、セントルイス脳炎ウイルス感染、日本脳炎ウイルス感染、マレー渓谷脳炎ウイルス感染、ダニ媒介性脳炎ウイルス感染、Ｋｕｎｊｉｎ脳炎ウイルス感染、ロシオ脳炎ウイルス感染、ロシア春夏脳炎ウイルス感染、Ｎｅｇｅｉｓｈｉウイルス感染、キャサヌール森林感染、オムスク出血熱ウイルス感染、ポワッサンウイルス感染、跳躍病ウイルス感染、リオブラボーウイルス感染、チュレーニーウイルス感染、ウンタヤウイルス感染またはモドックウイルス感染などでありえる。ジカウイルス感染は、たとえば、アフリカジカウイルス感染またはアジアジカウイルス感染でありえる。デングウイルスは、たとえば、ＤＥＮＶ−１感染、ＤＥＮＶ−２感染、ＤＥＮＶ−３感染またはＤＥＮＶ−４感染でありえる。
【０１１５】
ワクチン組成物は医薬組成物として提供することができる。医薬組成物は、好ましくは医薬として許容できる担体または希釈液を含む。医薬組成物は任意の適切な方法を用いて製剤化することができる。標準的な医薬として許容できる担体および／または添加剤を用いた細胞の製剤化は、医薬技術において常用的な方法を用いて遂行することができる。製剤の厳密な性質は、投与しようとする細胞および所望の投与経路を含む数種類の因子に依存するであろう。適切な製剤の種類は、『Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ薬剤学』第１９版、Ｍａｃｋ出版、米国東ペンシルバニアに完全に記載されている。
【０１１６】
ワクチン組成物または医薬組成物は任意の経路によって投与することができる。適切な経路は静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、皮内、経皮および経口／バッカル経路を含むが、これに限定されない。
【０１１７】
組成物は、生理学的に許容される担体または希釈液と共に調製されることができる。典型的には、そのような組成物はペプチドおよび／またはペプチド結合ナノ粒子の液状懸濁液として調製される。ペプチドおよび／またはペプチド結合ナノ粒子は、医薬として許容でき且つ有効成分と適合する添加剤と混合されることもできる。適切な添加剤は、たとえば水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールなど、およびその組み合わせである。
【０１１８】
さらに所望の場合、医薬組成物は、湿潤剤または乳化剤、および／またはｐＨ緩衝化剤などの少量の補助物質を含むことができる。
【０１１９】
ペプチドまたはペプチド結合ナノ粒子は、投与製剤と適合する方法で投与され、且つそのような量で治療的に有効であろう。投与しようとする量は、治療しようとする対象、治療しようとする疾患、および対象の免疫系の能力に依存する。投与する必要のあるナノ粒子の正確な量は、臨床家の判断に依存し、且つ各対象に特有でありえる。
【０１２０】
任意の適切な数のペプチドまたはペプチド結合ナノ粒子を対象に投与することができる。たとえば、少なくとも、または約０．２×１０６、０．２５×１０６、０．５×１０６、１．５×１０６、４．０×１０６または５．０×１０６個／患者体重ｋｇのペプチドまたはペプチド結合ナノ粒子を投与することができる。たとえば、少なくとも、または約１０５、１０６、１０７、１０８、１０９ペプチドまたはペプチド結合ナノ粒子を投与することができる。目安として、投与しようとする本発明のペプチドまたはペプチド結合ナノ粒子の数は１０５から１０９、好ましくは１０６から１０８でありえる。
【０１２１】
（方法）
本発明は、受動免疫療法における使用を目的とした細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を生成するための方法であって、フラビウイルスに感染した対象から採取したＴ細胞を、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドに接触させることを含む方法を提供する。
【０１２２】
用語「受動免疫療法」は、疾患の治療において支援する個体に対する免疫系コンポーネント（免疫細胞など）の投与に関する。疾患は感染でありえる。感染は、ジカウイルス感染、デングウイルス感染、西ナイルウイルス感染、黄熱病ウイルス感染、セントルイス脳炎ウイルス感染、日本脳炎ウイルス感染、マレー渓谷脳炎ウイルス感染、ダニ媒介性脳炎ウイルス感染、Ｋｕｎｊｉｎ脳炎ウイルス感染、ロシオ脳炎ウイルス感染、ロシア春夏脳炎ウイルス感染、Ｎｅｇｅｉｓｈｉウイルス感染、キャサヌール森林感染、オムスク出血熱ウイルス感染、ポワッサンウイルス感染、跳躍病ウイルス感染、リオブラボーウイルス感染、チュレーニーウイルス感染、ウンタヤウイルス感染またはモドックウイルス感染などのフラビウイルス感染でありえる。ジカウイルス感染は、たとえば、アフリカジカウイルス感染またはアジアジカウイルス感染でありえる。デングウイルスは、たとえば、ＤＥＮＶ−１感染、ＤＥＮＶ−２感染、ＤＥＮＶ−３感染またはＤＥＮＶ−４感染でありえる。
【０１２３】
フラビウイルスペプチド、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープおよび変異体は、本発明のペプチドワクチンに関連して上記に詳述される。ペプチドワクチンに関連して記載されたフラビウイルスペプチド、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープおよび変異体に関連する態様のいずれも、ＣＴＬを生成するための方法に適用することができる。
【０１２４】
方法はインビトロまたはエクスビボで実施することができる。接触させるステップはインビトロまたはエクスビボで実施することができる。
【０１２５】
対象から採取されたＴ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞を含むことがある。対象から採取されたＴ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞を含むことがある。
【０１２６】
そこからＴ細胞を採取した対象は、当該方法によって生成されるＣＴＬのレシピエントでもありえる。すなわち、そこからＴ細胞を採取した対象は、当該方法によって生成されるＣＴＬによって治療されることがある。この場合、ＣＴＬはＣＴＬのレシピエントの自己由来である。
【０１２７】
そこからＴ細胞を採取した対象は、当該方法によって生成されるＣＴＬのレシピエントと異なる個体でありえる。換言すると、Ｔ細胞はドナーから採取され且つ当該方法で使用され、且つ生成されるＣＴＬが異なる個体に投与されることがある。したがって、ＣＴＬはＣＴＬのレシピエントに対して同種異系でありえる。
【０１２８】
そこからＴ細胞を採取した対象は、当該方法によって生成されるＣＴＬのレシピエントとＨＬＡ適合することがある。換言すると、Ｔ細胞はドナーから採取され且つ当該方法で使用され、且つ生成されるＣＴＬがＨＬＡ適合する個体に投与されることがある。したがって、ＣＴＬはＣＴＬのレシピエントに対してＨＬＡ適合することがある
【０１２９】
本発明は、対象におけるフラビウイルス感染を診断するための方法であって、（ｉ）対象から採取したＴ細胞を、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含むフラビウイルスペプチドに接触させることおよび（ｉｉ）Ｔ細胞のフラビウイルスペプチドに対する応答を判定することを含む方法をさらに提供する。
【０１３０】
たとえば、フラビウイルス感染はジカウイルス感染、デングウイルス感染、西ナイルウイルス感染、黄熱病ウイルス感染、セントルイス脳炎ウイルス感染、日本脳炎ウイルス感染、マレー渓谷脳炎ウイルス感染、ダニ媒介性脳炎ウイルス感染、Ｋｕｎｊｉｎ脳炎ウイルス感染、ロシオ脳炎ウイルス感染、ロシア春夏脳炎ウイルス感染、Ｎｅｇｅｉｓｈｉウイルス感染、キャサヌール森林感染、オムスク出血熱ウイルス感染、ポワッサンウイルス感染、跳躍病ウイルス感染、リオブラボーウイルス感染、チュレーニーウイルス感染、ウンタヤウイルス感染またはモドックウイルス感染などでありえる。ジカウイルス感染は、たとえば、アフリカジカウイルス感染またはアジアジカウイルス感染でありえる。デングウイルスは、たとえば、ＤＥＮＶ−１感染、ＤＥＮＶ−２感染、ＤＥＮＶ−３感染またはＤＥＮＶ−４感染でありえる。
【０１３１】
当該方法のステップ（ｉ）はインビトロまたはエクスビボで実施することができる。Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の混合でありえる。好ましくは、Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。ステップ（ｉ）においては、Ｔ細胞は配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上を含む１つのフラビウイルスペプチドと接触させることがある。Ｔ細胞は、配列番号１から２３に記載されるＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープまたはその変異体のうち１つ以上をそれぞれ含む、任意の組み合わせの２つ以上のフラビウイルスペプチドと接触させることがある。フラビウイルスペプチド、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープおよび変異体は、本発明のペプチドワクチンに関連して上記に詳述される。ペプチドワクチンに関連して記載されたフラビウイルスペプチド、ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープおよび変異体に関連する態様のいずれも、フラビウイルス感染を診断するための方法に適用されることがある。
【０１３２】
ペプチドと接触するＴ細胞の応答を判定するメカニズムは、技術上既知である。そのようなメカニズムのいずれも、当該方法のステップ（ｉｉ）においてＴ細胞のフラビウイルスペプチドに対する応答を判定するために用いることができる。応答はたとえばＴ細胞の増殖などでありえる。Ｔ細胞増殖は、たとえば、トリチウム標識チミジンの取り込みを測定すること、ＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインサクシニミジルエステル）などの細胞内色素の希釈、またはアラマーブルーなどの代謝活性の蛍光またはカラリメティック（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｉｃ）指示薬を使用することによって判定することができる。応答はたとえばＴ細胞の活性化などでありえる。活性化Ｔ細胞のマーカーは技術上周知である。フローサイトメトリーまたは免疫蛍光イメージングを用いてマーカーの発現を判定することができる。応答はたとえばサイトカイン発現などでありえる。フローサイトメトリー、免疫蛍光イメージングまたはＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫測定法）を用いてサイトカインの発現を判定することができる。パーフォリンまたはグランザイムなどの他の免疫系メディエーターの発現も、同様に判定することができる。
【０１３３】
（本発明のさらなる実施形態）
本発明のさらなる実施形態は以下のものを含む：
１．配列番号１から１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドを含む医薬組成物中の分離オリゴペプチドまたはペプチドであって、前記オリゴペプチドまたはペプチドが８から約３０個のアミノ酸残基からなり、前記オリゴペプチドまたはペプチドがクラスＩ  ＭＨＣ分子と結合するかまたはクラスＩ  ＭＨＣ分子と結合するようプロセシングすることが可能で且つＴリンパ球応答を活性化し、且つオリゴペプチドまたはペプチドが医薬として許容できる塩の形態にあるオリゴペプチドまたはペプチド。
２．態様１のオリゴペプチドであって、前記オリゴペプチドが少なくとも２つのエピトープペプチドを含むオリゴペプチド。
３．態様１のオリゴペプチドであって、前記オリゴペプチドが少なくとも３つのエピトープペプチドを含むオリゴペプチド。
４．態様１のオリゴペプチドであって、前記オリゴペプチドが少なくとも４つのエピトープペプチドを含むオリゴペプチド。
５．態様１のオリゴペプチドまたはペプチドであって、前記オリゴペプチドまたはペプチドが配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４と異なり前記の差異が１アミノ酸単位を越えないオリゴペプチドまたはペプチド。
６．態様５のオリゴペプチドまたはペプチドであって、前記１つのアミノ酸の差異が保存的アミノ酸置換の結果であるオリゴペプチドまたはペプチド。
７．態様５のオリゴペプチドまたはペプチドであって、前記１つのアミノ酸の差異が１つの疎水性アミノ酸の他の疎水性アミノ酸による置換であるオリゴペプチドまたはペプチド。
８．態様５のオリゴペプチドまたはペプチドであって、前記のアミノ酸の差異が前記エピトープペプチドへの１つのアミノ酸の追加またはこれからの削除であるオリゴペプチドまたはペプチド。
９．（ａ）態様１のオリゴペプチドまたはペプチドをコードするポリヌクレオチド、および（ｂ）（ａ）の完全補体からなる群から選択されるポリヌクレオチドを含む医薬組成物中のポリヌクレオチドであって、ポリヌクレオチドが医薬として許容できる塩の形態にあるポリヌクレオチド。
１０．態様９のポリヌクレオチドであって、（ａ）のポリヌクレオチドがＤＮＡであるポリヌクレオチド。
１１．態様９のポリヌクレオチドであって、（ａ）のポリヌクレオチドがＲＮＡであるポリヌクレオチド。
１２．対象に任意のフラビウイルス感染に対する予防接種および治療をするための方法であって、前記感染細胞が任意のクラスＩ  ＭＨＣ分子を発現し、クラスＩ  ＭＨＣ分子と結合するかまたはクラスＩ  ＭＨＣ分子と結合するようプロセシングすることが可能な組成物であって：配列番号１から１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むエピトープペプチドを、前記感染細胞に対するＣＴＬ応答を誘導するのに十分な量、且つ医薬として許容できる塩の形態で含む少なくとも１つのポリペプチド；または配列番号１から１４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも１アミノ酸の差異を有するエピトープペプチドを、前記感染細胞に対するＣＴＬ応答を誘導するのに十分な量、且つ医薬として許容できる塩の形態で含む少なくとも１つのポリペプチドを含む組成物を前記対象に投与することを含む方法。
１３．任意のフラビウイルス感染を有する対象に予防接種および治療をするための方法であって、前記感染細胞が任意のクラスＩ  ＭＨＣ分子を発現し、前記方法が、クラスＩ  ＭＨＣと結合するかまたはクラスＩ  ＭＨＣ分子と結合するようプロセシングすることが可能な組成物であって：配列番号１から１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を、前記感染細胞に対するＣＴＬ応答を誘導するのに十分な量、且つ医薬として許容できる塩の形態で含む少なくとも１つのポリペプチド；または配列番号１から１４からなる群から選択されるアミノ酸配列との少なくとも１アミノ酸の差異を含むエピトープペプチドを、前記感染細胞に対するＣＴＬ応答を誘導するのに十分な量、且つ医薬品として許容できる塩の形態で含む少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含む組成物を前記対象に投与することを含む方法。
１４．任意のフラビウイルスに感染した対象に由来するＴ細胞を用いてエクスビボで免疫応答を生成するための方法であって、前記方法が：配列番号１から１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、且つ医薬品として許容できる塩の形態にある少なくとも１つのポリペプチド；または配列番号１から１４からなる群から選択されるアミノ酸配列との１アミノ酸の差異を含み、且つ医薬品として許容できる塩の形態にある少なくとも１つのポリペプチドと前記Ｔ細胞が反応する、受動免疫療法における使用を目的としたＣＴＬ応答の生成を刺激することを含む方法。
１５．態様１４の方法であって、前記Ｔ細胞養子療法が自己由来またはＨＬＡ適合対象から生成される方法。
１６．任意のフラビウイルスに感染したか、または任意のフラビウイルスおよび関連ウイルスに対する予防接種を受けた対象における免疫応答を評価または診断するための方法であって、前記方法が：配列番号１から１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、且つ医薬として許容できる塩の形態にある少なくとも１つのポリペプチド；または配列番号１から１４からなる群から選択されるアミノ酸配列との１アミノ酸の差異を含み、且つ医薬として許容できる塩の形態にある少なくとも１つのポリペプチドと前記Ｔ細胞が反応する、ＣＴＬ応答の生成を刺激することを含む方法。
１７．医薬として許容できる塩の形態にある配列番号１から１４を用いて任意のフラビウイルス感染に対してヒトに予防接種するための方法。
【０１３４】
開示された生成物および方法の異なる用途は、技術上の特定のニーズに合わせて調整されることがあることを理解すべきである。本願で用いる用語は本発明の具体的な実施形態を記述することのみを目的とし、制限することを意図していないことも理解すべきである。
【０１３５】
さらに、本明細書および付属の請求項に用いられるように、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈より別段明示されない限り、複数の指示対象を含む。したがって、たとえば、「１つのペプチド」への言及は「複数のペプチド」を含み、「１つのナノ粒子」への言及は２つ以上のそのようなナノ粒子を含むなどである。
【０１３６】
本願に引用する全ての出版物、特許および特許明細書は、上記であれ下記であれ、その全文を参照文献として本願に援用する。
【０１３７】
以下の実施例は本発明を例示する。
【実施例１】
【０１３８】
（序論）
ジカウイルス（ＺＩＫＶ）は、ヤブカ属のカによってヒトに伝播されるＲＮＡウイルスである。最近までは、感染のわずか２０％が発疹、頭痛および結膜炎といった軽度で短期的な症状をもたらし、比較的無害と考えられていた。最近の報告で、現在の南米でのＺＩＫＶ集団発生がブラジルにおける小頭症乳児の出生数およびエルサルバドルにおけるギランバレー症候群症例の増加と関連付けられ、再評価を促している。これらの病状の重症度により、製薬業界のワクチン開発への関心が高まっている。関連疾患に対するワクチンの修飾に集中して取り組むことも可能である。フラビウイルスはデング熱と密接に関連する。フラビウイルスはフラビウイルス科の一員であり、デング熱、黄熱病、日本脳炎、ダニ媒介脳炎、および西ナイルウイルスを含む。現在はＺＩＫＶに対するワクチンまたは特効薬が存在しない。
【０１３９】
デング熱（１〜３）およびチクングニアは、それ自体が世界的に優先度の高い感染症であり、デング熱は年間３億９千万人に感染し、チクングニアは間欠的に注目度の高い集団発生を引き起こす。ジカ、デング熱およびチクングニアは、同じ低／中所得地域において同じ種類のカによって蔓延するので、共有Ｔ細胞エピトープからなるワクチンは、３つの感染症全てに対して三重防御を提供し、実践的且つ合理的利点を提供できるであろう
【０１４０】
デング、ジカおよびチクングニアウイルスはいずれも同じカによって運ばれ、且つ三者の間には著しい臨床的重複が存在する（図１（ａ））。それらは全て同様のウイルスタンパク質配列を共有する。３つのウイルスの間には、デング熱、ジカおよびチクングニアに対する三重ワクチンを生成することができるような、十分な交差反応性エピトープが存在することが実験によって確認されている。
【０１４１】
ヒトフラビウイルス感染は、吸血性ヤブカ属の雌性カがヒトの皮膚および血流にウイルスを沈着させるときに発生する。ヒト表皮角化細胞および真皮線維芽細胞のいずれも、フラビウイルス感染に対して許容的である。病原体認識受容体（ＰＲＲ）、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＲＩＧ−１およびＭＤＡ−５の発現は、真皮線維芽細胞のフラビウイルス感染によってアップレギュレートされ、これらの受容体は後に１型ＩＦＮ、ＯＡＳ２、ＩＳＧ−１５およびＭＸ−１を含むＩＦＮ刺激遺伝子、および炎症性サイトカインの発現を惹起する。１型および２型ＩＦＮは全てのフラビウイルス感染の抑制にとって重要であることが知られている。いずれのＩＦＮ型もヒト線維芽細胞におけるフラビウイルスの複製を阻害する。宿主防御メカニズムにおけるこれらのサイトカインの役割はマウスモデルにおいてさらに確認され、このモデルにおいて、１型ＩＦＮ受容体欠損マウス（Ａ１２９）または１型および２型ＩＦＮ受容体欠損マウス（ＡＧ１２９）は、ウイルス血症および年齢依存的死亡を示し、フラビウイルス感染に対する感受性が高かった。フラビウイルス疾患を有する患者の血清学的分析により抗ＺＩＫＶウイルスＩｇＧおよびＩｇＭおよび中和抗体が証明され、これは乳仔および成体マウスにおいて致死的フラビウイルス感染に対する部分的防御を提供することが証明された。中和抗体は部分的防御を提供し、その一方で１型および２型ＩＦＮはフラビウイルス感染を抑制する上で重要である（４）。ヒトにおけるフラビウイルスの伝播は、カによる伝播に加えて輸血、性交渉、および分娩の際の母体から胎児への周産期伝播を介して証明される。したがって、末梢におけるウイルスクリアランスをもたらす免疫因子を同定することは、フラビウイルス感染に対する免疫療法およびワクチンの開発に対する重大な見通しを提供するであろう（５）。
【０１４２】
フラビウイルスワクチンプログラムの利点は、デング熱、西ナイルウイルス、およびチクングニアなどのフラビウイルスと呼ばれる科の一部である同様のカによる疾患を「出発点」として用いることができることである。研究者らは、現在、疾患がどのように新規であるかを前提として、フラビウイルスの基礎およびその人体への影響についてさらに知ろうと努めているが、その一方で、他のフラビウイルスが同様の様態で蔓延することから、他のフラビウイルスからの過去のワクチン開発プラットフォームをすでに基盤として用いることができる。ＮＩＡＩＤは、西ナイルウイルスに対して用いた戦略と類似し、第Ｉ相治験で安全および有効であると認められているＤＮＡベースワクチンを含むフラビウイルス感染予防のための複数のワクチン候補を積極的に追求している。デング熱予防のためにすでに開発されたものと同様の、主としてウシに感染する動物ウイルスである小胞性口内炎ウイルスの遺伝子操作型を用いた、より従来型の生ワクチンである治験ＺＩＫＶワクチン、およびＷａｌｔｅｒ  Ｒｅｅｄ  Ａｒｍｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＷＲＡＩＲ）が関連する日本脳炎ウイルスおよびデング熱ウイルスに対するワクチンを開発するために用いた同様のワクチンアプローチに基づく全粒子不活化ＺＩＫＶワクチンにも取り組んでいる。治験ＺＩＫＶワクチンは２０１６年の秋に初期ヒト治験に入る準備ができる可能性がある。初期治験では、実験ワクチンが安全であり且つ接種されたボランティアに免疫応答を生成するか検討するであろう。安全且つ有効で、完全に承認されたＺＩＫＶワクチンは数年間利用できない可能性がある。
【０１４３】
具体的には、先天性ジカウイルス症候群の住民の健康に対する持続的影響を前提とすると、ＺＩＫＶの流行は主として胎児−母体の問題である（６）。エビデンスより、妊娠母体のＺＩＫＶ感染と先天性欠損（すなわち小頭症、頭蓋内病変、視力障害、難聴）との関連が確認されている（７，８）。また現在、母体ＺＩＫＶ症例の２０％は胎児に対して何らかの形態の神経障害をもたらす可能性があるとも提唱されている。ＺＩＫＶ集団発生の主たる胎児関連病態特性に対抗するための有効な予防接種レジメンを得るために、母体と胎児の双方に同時に接種することのできるワクチンが必要とされる。最近のワクチン技術の大半は子宮内接種に適合していない（９−１８）。抗体は妊娠後期まで胎盤を通過できないので抗体ワクチンは適合せず、それゆえ第１／２三半期に発生するＺＩＫＶ関連病態は母体の抗体によって減少しない。母体ＣＤ８＋ＣＴＬ細胞は胎盤においてＨＬＡ−Ｇ系を介して破壊されるので、母体においてＴ細胞応答を促進するワクチンは胎児を保護できない（１４，１５）。何らかの胎児または母体微小キメラ化も、胎児調節性Ｔ細胞によって抑制される（１６）。弱毒性生ウイルスであれば通過して胎児に到達し、免疫応答を誘発することができるが（胎児は約１０週間免疫能力を有する）、胎児を生ウイルスに曝露することは安全性の観点から不適切であろう（９〜１８）。さらに、母体が事前にＺＩＫＶに対して免疫されていても短期間のウイルス血症期間が常に存在し（完全と見なされるワクチンはない）、胎児が常に感染リスクを有することを意味する。母体の感染細胞を消失させて長期的なウイルス血症を短縮するＴ細胞免疫応答を生成し、且つより重要なことに胎児に接種することのできる純合成ワクチンは、胎児における先天性欠損を低減する可能性を有するであろう。この性質のワクチンは、それを子宮内接種に適合させるいくつかの重要な性質を有する。
【０１４４】
（裏付けデータ）
我々のＴ細胞エピトープ発見に対するアプローチは、罹患しているが健常ではない細胞に発現された特異抗原に対し、免疫系が有効な応答を開始することができるという前提に基づいている。イムノプロテオミクスの方法論は、感染細胞からＭＨＣ関連ペプチドを直接分離し、罹患細胞の表面に提示されたエピトープ（真のＴ細胞標的）を同定する。我々は、この技術的アプローチを用いてＺＩＫＶ、デングウイルス、ＨＢＶおよびインフルエンザウイルス感染細胞さらには多様な癌指標からＴ細胞エピトープを同定している。
【０１４５】
（イムノプロテオミクス分析によって感染細胞から同定されたフラビウイルスエピトープ）
当初の発見の時期には、我々はＨＬＡ−Ａ２およびＡ２４陽性ＨｅｐＧ２細胞を感染に用いた。ＺＩＫＶはＡＴＣＣから取得し（ＡＴＣＣ  ＃１８３９）、Ｖｅｒｏ細胞の７２時間感染により増殖させた。デングウイルスはＷａｌｔｅｒ  Ｒｅｅｄ研究所から取得し、Ｖｅｒｏ細胞感染を用いて増殖させた。感染より７２時間後（ｈｐｉ）、上清からのウイルス価をプラーク測定法により特性解析した。ＨｅｐＧ２細胞をＭＯＩ  ０．１で７２時間感染させた。感染ＨｅｐＧ２細胞を回収し、透過処理および抗フラビウイルスグループ抗原（抗４Ｇ２  ＭＡｂ；ＭＡＢ１０２１６、ミリポア）抗体染色し、フローサイトメトリーで分析することにより感染性について評価した。感染細胞をさらに処理し、文献の記載に従いイムノプロテオミクスで分析した（１９〜２１）。簡単に述べると、感染細胞から細胞ライセートを調製し、汎ＭＨＣクラスＩ抗体Ｗ６３２を用いた免疫沈降によってＭＨＣ／ペプチド複合体を分離した。その後、ＭＨＣ分子に関連するペプチドを分離し、分析的方法で精製した。オフラインＨＰＬＣを用いて精製したペプチド混合物を分画化し、ナノアルティメットＨＰＬＣ（ダイオネクス）に接続するＶｅｌｏｓ  ＬＴＱ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析計（サーモフィッシャー）上で画分をデータ依存的ナノＬＣ−ＭＳ／ＭＳ実験によって分析した。Ｓｅｑｕｅｓｔ検索アルゴリズム（サーモ）によるプロテオーム発見ソフトウェア（ｖ１．３）を用いて、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ生データをＺＩＫＶゲノムデータベースと比較して探索することにより、ＭＨＣペプチドおよびその配列を同定した。さらに、他のフラビウイルス、デングウイルス、チクングニアウイルスゲノムデータベースと比較してデータを検索した。ＺＩＫＶ感染細胞のイムノプロテオミクス分析により、数種類のＴ細胞エピトープが同定された（表４）。エピトープの大半は、我々のデング熱ワクチン研究で認識しているように、ＨＬＡ−Ａ２またはＡ２／Ａ２４二重ＨＬＡ結合エピトープであった（１９）。さらに、我々は多様なＺＩＫＶタンパク質からＢ７およびＢ４４結合エピトープを同定した。最も重要なことに、我々はＺＩＫＶ、デングウイルスおよびチクングニアウイルスの間で維持される数種類のエピトープを同定した。これらのエピトープはウイルスゲノムの維持領域に由来し、この領域は宿主であるカにおける生存を担う可能性がある。これらのエピトープは合成ペプチド共溶離実験によってさらに確認された（図２−実験および合成ペプチド質量スペクトル分析から得られたＰＭＡペプチド（表４）スペクトルおよび図３−実験および合成ペプチド質量スペクトル分析から得られたＦＬＭペプチド（表４）スペクトル）。
【０１４６】
【表４】
2021509400.tif 000007
2021509400.tif 000008
【０１４７】
（参照文献）
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【実施例２】
【０１４８】
（序論）
１つの属全体を包含する「汎用」ワクチンの概念は、（抗体の標的であるビリオンの表面抗原自体とは対照的に）ウイルス感染細胞の表面上に発現される同一または交差反応性クラスＩウイルスエピトープの生成に依存する。これらのペプチド標的は（抗体ベースワクチンで必要とされるような）無傷のウイルスの認識とは無関係で、且つ宿主細胞におけるその合成の際にウイルスの内部タンパク質からプロセシングされたクラスＩペプチドに概ね由来する。免疫−リボソームまたは欠陥リボソーム産物（ＤＲｉＰ）経路によって生成されるペプチドは、ある属の生物全てに存在するタンパク質に由来することがある。たとえば、フラビウイルス属はデングウイルス、ジカウイルス、黄熱病ウイルスを含む６６の種を含み、且つこれらのウイルス系統の全ては、宿主感染細胞上に広範な交差反応性ペプチドリガンドームシグネチャ（ＣＤ８Ｔ細胞の標的）を生成する共通の（著しい相同性を伴う）内部タンパク質を有する。高い安定性および好ましい生産タイムスケール／経済性は、これらのワクチンがデング熱／フラビウイルス集団発生に対するオンデマンド型の実践的解決策として完全に適合することを意味する。
【０１４９】
デングウイルスの全系統に対するワクチンを開発するためには、ＣＤ８Ｔ細胞は必ず宿主デング熱感染細胞上のクラスＩウイルスシグネチャを標的とするナイーブクローンから増殖しなければならない。これらのクラスＩ複合体は、同族Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の認識を介して感染細胞を死滅させるＣＤ８Ｔ細胞の標的である。Ｔ細胞ワクチンは、ウイルス血症を低減することのみが可能な抗体ワクチンと対照的に、「滅菌」ワクチンと考えられ、その後宿主免疫系に残り、ＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞を用いてウイルス工場細胞を除去する。自然感染においては、リガンドーム情報はエキソソームを介して遠隔の感染細胞からリンパ系器官、皮膚などにある免疫系（すなわち抗原提示細胞（ＡＰＣ））に伝達される。これらの粒子はＡＰＣにペプチド情報を送達し、ＡＰＣはその後ナイーブＴ細胞を活性化する。これは純粋な情報転送系である。ワクチンによってこのプロセスを模倣するには、感染細胞のウイルスシグネチャ（すなわちリガンドーム）を知る必要がある。一旦その情報を得たならば、何らかの形態の人工エキソソームによってそれを免疫系に送達する必要がある。本願における用語「ワクチン」は、一般的な意味で、ウイルス感染時点で存在している初期免疫条件を変更することのできる物質を示すために用いられる。本願に記載されたワクチン候補は、ナイーブＴ細胞を活性化するために、ＡＰＣへの移行時の分解からペプチドを保護すると共に、ＡＰＣ表面上のクラスＩ構造への取り込みを目的とした未変化クラスＩペプチドの細胞質放出を可能とする特殊な粒子のリンパ系取り込みを介して、クラスＩペプチドをＡＰＣに直接送達する素量クラスターを用いる。他のワクチン企業はこの一連の技術上の問題を解決していない。現在、汎用ワクチンを生産する試みは、導入後にプロセシングされてクラスＩペプチドを産生することが望まれるウイルスタンパク質の宿主細胞への導入に概ね依存する。この方法論は質量作用の法則により機能しない可能性がある。ヒト細胞上では任意の所与の時間においてわずか１００，０００のクラスＩ分子が発現する。しかし、全ての宿主タンパク質から誘導することのできるクラスＩ結合タンパク質は数百万存在する。これらは全て１００，００のクラスＩ分子上の結合部位について拮抗する。ウイルス感染細胞においては、全ての内部ペプチドがそこに「殺到」しないよう、ウイルスシグネチャを表すクラスＩペプチドを生成するために別のプロセシング経路が用いられる。ベクターによってクラスＩペプチドを生成しようと試みるウイルスワクチンについては、これらのタンパク質はあたかも宿主タンパク質であるかのようにプロセシングされるので、生成されるあらゆるペプチドは希釈され、トランスフェクトされた細胞の表面上に現れる確率が低くなる。さらに、これらの細胞は、一般に、ペプチドフラグメントを遠隔のＡＰＣに送達するエキソソームを大量に放出しない（対照的に、ウイルス感染細胞はもろく、大量のデブリを放出する）。実験的汎用ワクチンを開発する過去の試みが失敗した原因のうち少なくとも１つはこれである。さらに、一般的に、単一のウイルスベクターまたはＲＮＡパッケージにおいては、宿主細胞に送達できるウイルスタンパク質は１／２個のみであるので、ウイルス発現タンパク質から生成されるペプチドが実際に細胞リガンドームの一部として現れるか知るために、実験的リガンドームの知識が必要とされる。これらのワクチンは実験的に判定されたリガンドームの知識無しに開発されるので、失敗率は高いであろう。
【０１５０】
（１．技術的要約）
（１．１ワクチンのデザインおよびペプチド選択戦略）
イムノプロテオミクスアプローチを用いて、フラビウイルスの維持領域に由来するＭＨＣ−クラスＩウイルスペプチドを同定している。簡単に述べると、既定のヒトＨＬＡスーパータイプのヒト細胞にフラビウイルス（すなわちデングウイルスまたはジカウイルス）を感染させ、その細胞の表面に発現したペプチドを抽出し、質量分析法を用いて同定する。抽出および同定ペプチドのタンパク質源を、ウイルスタンパク質または内因性（すなわちヒト）タンパク質（自己）のいずれかの由来に割り当てることができる。感染と関連するＭＨＣ−１ペプチドは確認することが可能であり、この同定されたＭＨＣ−１ペプチドのライブラリーは、Ｔ細胞免疫系が感染シグナルと認識するペプチドのレパトワであり―そのクラスＩ分子内に発現されたこれらのペプチドを発現する感染細胞の死滅に至る。リガンドームは、自然免疫応答が誘導されることのできる構造の完全なセットである。したがって、それらのペプチドは感染に対して免疫系を刺激する予防接種物質の基盤として用いることができる。同定されたペプチドのセットはウイルス「リガンドーム」と呼ばれる。ワクチンおよびペプチドのデザインの困難な点は、最終的な臨床ワクチン候補を形成し且つ訓練されたナイーブＴ細胞への送達メカニズムも有する「リガンドーム」ライブラリーからペプチドを選択し、自然感染後に発生するものと同様のメモリーＴ細胞の免疫レパトワをもたらすことである。
【０１５１】
以下はそのようなペプチドを選択するための根拠および基準である：
【０１５２】
（１．ＨＬＡの範囲）
ペプチドは、適切な人口範囲を提供するために一定のＨＬＡスーパータイプを包含しなければならない。一般に、１つのＨＬＡスーパータイプは人口の約３０〜５０％、２つのＨＬＡスーパータイプは人口の７０〜７５％を包含し、３つのＨＬＡスーパータイプは人口の約８５〜９５％を包含し、且つ４つのＨＬＡ型は９５％以上を包含する。このワクチンのデザインを目的として、４つのスーパータイプの範囲が選択されている（ＨＬＡ−Ａ２／Ａ３／２４／Ｂ７）。この選択の背後にある根拠は、それが合理的な人口範囲と、その一方で必要なペプチド数を限定することでワクチンデザインを単純化することとの適切なバランスと考えられることである。
【０１５３】
（２．複数のタンパク質／ペプチド範囲）
最適なＴ細胞ワクチンは、ペプチドクラスＩ（ｐＭＨＣ）の認識を介した感染細胞に対する免疫系により複数の「攻撃」の標的を促進するであろう。したがって、各ＨＬＡ型について複数のペプチドを有すれば有利であろう。同様に、内部および維持タンパク質である幅広いウイルスタンパク質に由来するペプチドを有することで、感染細胞認識の範囲が拡張するので、ワクチンは抗原ドリフトおよび／またはシフトに対して非感受性となるであろう。デングウイルスなどのＲＮＡウイルスは、協調的に作用して疾患を引き起こす疑似種と呼ばれるウイルス集団から形成されるので、「クラウド」構造と考えられる。したがって、全ての変異体が同じクラスＩペプチドの組を発生させるわけではない。実際には、カの咬傷によるデングウイルスの宿主への接種は、その都度新規創始ウイルス集団と考えられる。感染宿主において疾患を引き起こし、新規集団を生成するには複数の咬傷が同時に必要とされる。この問題に対処するために、ディープシーケンシング分析で異なるフラビウイルス属から同定された交差反応性クラスペプチドは、ウイルスの生存にとって決定的であり且つ致死的な結果を生成する変異事象に対する感受性がより低いペプチド部位の高い確率を提供する（Ｍｕｌｌｅｒのラチェット）。そのため、異なるタンパク質に由来する複数のクラスＩペプチドが、ボトルネックの拡張を低減することにより疾患を予防するＴ細胞レパトワを作製するはずである。現在の我々のワクチン候補は以下の表５に示すように９つのペプチドを含む。
【０１５４】
（３．製造しやすさ）
全般的に、ペプチドが疎水性であればあるほど、合成およびナノ粒子担体システムとのコンジュゲート化がより複雑となる。したがって、可能であれば親水性ペプチドが選好される。
【０１５５】
上記の基準に基づき、デング熱（フラビウイルス）臨床候補を構成するために９つのペプチドが選択されている（表５）：
【０１５６】
（表５：臨床的候補ペプチドの選択）
【表５】
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【０１５７】
（１．２金ナノ粒子担体）
最終的なワクチン候補は、それぞれにフラビウイルスペプチドエピトープが結合してＧＮＰ−ペプチドコンジュゲートを形成する金ＧＮＰベース粒子の混合物から構成されるであろう（図２）。（数多くの異なるペプチドを有する各ナノ粒子と反対に）各粒子は特定の単一ペプチドを有する。ペプチドが結合する基盤粒子は、ガラクトース／ＧｌｃＮＡｃの不動態化表面に被覆されれば、ヘルパー／アジュバントシグナルを含むであろう。ペプチドエピトープは、Ｎ末端ＡＡＹ−メカプト酢酸リンカーを介して基盤粒子と結合するであろう。内部抗原が一旦細胞に現れると、このリンカーは開裂してＧＮＰ−ペプチドコンジュゲートから遊離ペプチドを放出する。ＧＮＰ−ペプチドコンジュゲートはヒト皮膚の皮内注射部位から広範囲に拡散し、コンジュゲートが結合したペプチドを表皮ランゲルハンス細胞および真皮樹状細胞に接触させることができる。ヒト皮膚生検材料を用いた注射実験より、存在する表皮ランゲルハンス細胞の９４％がＧＮＰ−ペプチド構築物を取り込んだことが示されている。このことは、遊離ペプチドまたは硫酸アルミニウムと複合体化したペプチドが注射部位外に拡散せず、それゆえ抗原提示細胞との遭遇が少ないことと対照的である。
【０１５８】
（１．３  ＣＴＬ分析）
通例、全てのリガンドームペプチドはＣＴＬ応答を生成することが可能であり、またそれゆえ特定のペプチドに対するＣＴＬ応答の定量的評価はワクチンデザインの決定における決定因子ではない。しかし、原理の証明として、遊離ペプチドおよびナノ粒子担体系と結合したペプチドのＣＬＴ誘導活性を示すデータがこれに含まれる。これらの試験は以下のものを含む：
【０１５９】
（ａ．エクスビボ）
ナイーブドナー（すなわち過去にデング熱に感染したことのない健常ドナー）から提供されたヒト血液を、ワクチン構築物に対する一次免疫応答について試験する。これらの実験は、免疫のプロセスを細胞レベルで有効に模倣し、且つ実験ワクチンがナイーブＴ細胞を活性化して、デング熱感染ヒト標的細胞を死滅させることのできる抗原特異的ＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞とすることができるメカニズムの証拠を提供する。これらの実験は、過去に感染に曝露した者の血液を用いて感染後のメモリーＴ細胞を観察することで拡張される。同定されたペプチドが感染後血液におけるＣＴＬ応答を誘導する場合（リコール応答）、それらが通常の感染においてＴ細胞応答を誘導した同じＭＨＣ−１ペプチドであることが例示される。デンドリマー染色でも、候補ワクチンで用いようとするペプチドに対する、自然感染において存在するメモリーＴ細胞の個数が定量される。
【０１６０】
（ｂ．インビボ）
ＨＬＡトランスジェニックマウスを用いて、ペプチドが生体系において一次免疫応答を誘導する能力を用いている。これは、特定のペプチド構築物で免疫したトランスジェニックマウスから脾細胞を摘出すること、およびペプチド標的およびデング熱感染ヒト細胞に対するそれらの活性化細胞のＣＴＬ活性を評価することを含む。
【０１６１】
（ｃ．）
ヒト特異的ＨＬＡワクチンによるウイルス攻撃試験を実施することは不可能である。ヒト化マウスはヒト免疫系を有する一方で、標的組織はマウスのままである（ヒトＨＬＡではなくマウスＭＨＣを有するであろう）。
【０１６２】
（１．３．１  インビトロ）
ナイーブドナー（すなわち過去にデング熱／ジカに感染したことのない健常ドナー）から提供されたヒト血液を、ワクチン構築物に対する一次免疫応答について試験した。これらの実験は免疫のプロセスを細胞レベルで有効に模倣し、且つ実験ワクチンがナイーブ細胞を免疫することができるメカニズムの証拠を提供する。これらの実験はＨＬＡ−Ａ２（図３ａ／図３ｂ）およびＨＬＡ−Ａ２４（図４）スーパータイプについて完了している。
【０１６３】
１つの実験においては、健常（ナイーブ）ヒトＨＬＡ−Ａ２＋ドナーを利用し、サイトカインカクテル中で末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をペプチドエピトープで刺激し、抗原特異的ＣＴＬ応答を誘導した。その後、抗原特異的応答を目的としてペプチド装填標的で共培養することにより、これらの刺激されたＰＢＭＣを測定した（図３ａ）。ペプチド装填にはＴＡＰ−欠損細胞（Ｔ２）を用い、ブランクＴ２細胞を対照として用いた。増殖したＰＢＭＣのＣＤ１０７ａ脱顆粒およびインターフェロンγ（ＩＦＮ−ｇ）マーカーの双方をフローサイトメトリーで測定した。６つのペプチドエピトープのいずれも、ペプチド装填Ｔ２細胞に対してＣＤ８＋  ＣＤ１０７ａおよびＩＦＮｇ発現をペプチド特異的に誘導した。ペプチド「ＰＭＡ」は特に明確なＩＦＮｇ＋効果を有する。
【０１６４】
もう１つの実験においては、健常（ナイーブ）ヒトＨＬＡ−Ａ２＋ドナーを利用し、サイトカインカクテル中で末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をペプチドエピトープで刺激し、抗原特異的ＣＴＬ応答を誘導した。その後、Ｈｅｐ２Ｇ感染細胞（ＤＶ２／Ｚｉｋａ）と共培養することによってこれらの刺激されたＰＢＭＣを測定した（図３ｂ）。未感染ＨｅｐＧ２細胞を対照として用いた。増殖したＰＢＭＣのＣＤ１０７ａ脱顆粒およびインターフェロンγ（ＩＦＮ−ｇ）マーカーの双方をフローサイトメトリーで測定した。
【０１６５】
さらなる実験においては、健常（ナイーブ）ヒトＨＬＡ−Ａ２４＋ドナーを利用し、サイトカインカクテル中で末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をペプチドエピトープで刺激し、抗原特異的ＣＴＬ応答を誘導した。その後、ペプチド装填標的を共培養することによってこれらの刺激されたＰＢＭＣの抗原特異的応答を測定した（図４）。ペプチド装填にはＨｅｐ２Ｇ細胞を用い、ブランクＨｅｐ２Ｇ細胞を対照として用いた。デング熱（ＤＶ２）およびジカに感染したＨｅｐＧ２細胞も用いた。ＣＤ８／ＩＦＮｇの双方の二重発現について、フローサイトメトリーで増殖ＰＢＭＣを測定した。４つのペプチドエピトープのいずれも、ペプチド装填ＨｅｐＧ２細胞に対してＣＤ８＋  ＩＦＮｇ発現をペプチド特異的に誘導した。ペプチド「ＰＭＡ」は特に明確なＩＦＮｇ＋効果を有する。
【０１６６】
トランスジェニックＡ２マウスも、ＮＰ−デング熱ペプチド２００ｎｇで免疫した。脾細胞を分離した後、ジカまたはデング熱感染細胞のいずれかに曝露した。図５は、ＨｅｐＧ２標的細胞が、トランスジェニックＡ２マウス由来の脾細胞を刺激することのできるペプチドクラスＩ標的を含むことを示す。ペプチドの酸ストリッピングにより細胞は無反応となる。同様に、図６に示すように、ＨｅｐＧ２細胞のフラビウイルス感染により自己ペプチドが置換され、細胞表面上のウイルス由来ペプチドの露出がもたらされる。図６は、非免疫マウス由来の脾細胞がデングまたはジカ感染細胞に反応しないことを示す。対照的に、ＮＰ−デングまたはＮＰ−ジカで免疫されたＡ２マウスは、デングまたはジカ感染ＨｅｐＧ２細胞のいずれも死滅させることができる。
【０１６７】
（２．ワクチンプラットフォーム）
本願に記載されたワクチンプラットフォームは２つの技術の組み合わせに由来し、これらは実験的に検証された交差反応性ウイルスペプチドのライブラリーと金ナノ粒子担体系である。本発明者らは、幅広いウイルス指標に対するＴ細胞応答に関与する、実験的に検証された交差反応性ウイルスＭＨＣクラスＩペプチドのライブラリーを生成している。金ナノ粒子技術は、ペプチドのインビボ免疫原性を改善して、その投与が有効な臨床ワクチンに対して十分なＴ細胞応答を生成することの担保に役立つことがある。ウイルスペプチドおよび多様な炭水化物を金ナノコア（典型的には＜１．６ｎｍナノメートル）に結合することにより、免疫原性であり且つ免疫応答を誘導して抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞を生成するウイルスペプチドを送達することのできるワクチン構築物を生成することができる。ペプチドライブラリーと金ナノ粒子担体技術の組み合わせに成功すると、正しいペプチドをＡＰＣ（抗原提示細胞）に送達することの可能なワクチンが生成され、且つ強力なＴ細胞ワクチン応答が生成されるであろう。
【０１６８】
この技術を用いて生成されたワクチンは以下の特性を有する：
【０１６９】
（ａ．）
全てのデング熱に共通する維持された内部Ｔ細胞誘導エピトープの組み合わせを用いて、単一ワクチン２回投与レジメンにより全ての既存株および新興株に対する生涯免疫防御を誘導することも可能である。一定のＨＬＡスーパータイプ（ＨＬＡ−Ａ２／Ａ２４／Ａ３）を有するエピトープを含むペプチドの正しい組み合わせを選択することにより、人口の９５％以上を有効に免疫することが可能である。
【０１７０】
（ｂ．）
活性免疫原／ワクチンが合成されているという性質は、ワクチン製品が環境温度で高度に安定であり且つ長い有効期間（＞２年）を有することを意味する。ワクチンは低温流通システムを必要とせず、機能条件でのユーザーベースへの到達および／または長期的な備蓄の費用およびリスクが低減される。同じＧＮＰ送達システムを用いたペプチド製品の安定性は、＞２年の安定性を示している。また、ＧＮＰは結合ペプチドをタンパク質分解からも保護する。
【０１７１】
（ｃ．）
ワクチンは従来の非経口投与経路に適合されると思われるものの、ワクチンの小さなサイズおよび安定性は、マイクロニードルパッチを用いた真皮（皮膚）を介する送達にも適合できることを意味する。この投与方法の簡便さは、接種に専門家の技能が必要とされないことを意味する。これにより、ユーザーは初回の用量を地域のワクチン供給者／販売者から受けながらも、家庭で任意の追加接種を自己投与で接種することができる。この方法により移動の必要性が低下するので、おそらくはコンプライアンスが改善されるであろう。
【０１７２】
（ｄ．）
経皮送達のもう１つの利点は、ワクチンが真皮／表皮の抗原提示細胞に直接提示されるので、他の投与方法と比較して必要とされる用量がさらに少なくなることであり、これは安全性および保健経済的視点の双方から好ましい。ウイルスペプチド受容体を取り込むＡＰＣは局所／遠隔リンパ節に迅速に移動し、そこで強力且つ長期間持続する免疫応答を開始するであろう。
【０１７３】
（ｅ．）
生産プロセスは迅速で、安価で、高スケール化することができる。全てのコンポーネントは広範に利用可能な器具を用いて合成することができるので、原則的に生産能力の限界も、原料供給の既知のボトルネックもない。ＧＮＰ−ペプチド製品はＧＭＰ品質で成功裏に製造されてきた。一旦プロセスが完全に開発された場合、現在の年間１０００万用量以上の生産能力では、製造コストは１用量あたり０．１０６４米ドルと概算される。この能力は、施設の拡張および多数の製造所を用いることで著しく高めることも可能である。
【０１７４】
（ｆ．）
このプラットフォームを用いたワクチンは優れた安全性プロフィールを示すことが予測される。これは、ワクチンが生ウイルスまたは弱毒化ウイルスをコンポーネントとして必要としないこと、または有効とするために潜在的に毒性である化学アジュバントを必要としないことによる。ＧＮＰ担体技術は、インスリン送達系（Ｓｗｉｓｓ  Ｍｅｄｉｃ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２０１１  ＤＲ１１８３）および１型糖尿病ワクチン（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ：ＮＣＴ０２８３７０９４）を含む第Ｉ相および第ＩＩ相治験ですでに安全であることが示されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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