(57)【要約】  本開示は、抗ＣＤ４０抗体を用いることによってシェーグレン症候群を治療するための方法、治療レジメン、使用、キット及び治療法に関する。
2021501748.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シェーグレン症候群の治療に使用するための抗ＣＤ４０抗体。
【請求項２】
シェーグレン症候群は、原発性シェーグレン症候群である、請求項１に記載の使用のための抗体。
【請求項３】
ａ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｂ．配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｃ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｄ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｅ．サイレントＦｃ  ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される、請求項１又は２に記載の使用のための抗体。
【請求項４】
配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項３に記載の使用のための抗体。
【請求項５】
治療有効量の、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための抗体と、１種又は複数の薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物。
【請求項６】
投与経路は、皮下若しくは静脈内又は皮下若しくは静脈内の組み合わせである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のための抗体。
【請求項７】
用量は、ヒト対象の１キログラムあたり約３ｍｇ〜約３０ｍｇの活性成分である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のための抗体。
【請求項８】
用量は、ヒト対象の１キログラムあたり約１０ｍｇの活性成分である、請求項７に記載の使用のための抗体化合物。
【請求項９】
用量は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇの活性成分である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のための抗体。
【請求項１０】
前記用量は、１５０ｍｇの活性成分、３００ｍｇの活性成分又は６００ｍｇの活性成分である、請求項９に記載の使用のための抗体化合物。
【請求項１１】
負荷投薬及び維持投薬を通して投与される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のための抗体。
【請求項１２】
負荷投薬は、第１の用量の皮下注射を介して投与され、且つ維持投薬は、第２の用量の皮下注射を介して投与される、請求項１１に記載の使用のための抗体。
【請求項１３】
第１の用量は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇの活性成分であり、且つ第２の用量は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇの活性成分である、請求項１２に記載の使用のための抗体。
【請求項１４】
第１の用量は、１５０ｍｇ、３００ｍｇ又は６００ｍｇの活性成分であり、且つ第２の用量は、１５０ｍｇ、３００ｍｇ又は６００ｍｇの活性成分である、請求項１２又は１３に記載の使用のための抗体。
【請求項１５】
前記負荷投薬は、少なくとも２回の皮下注射を含み、且つ前記維持投薬は、毎週（Ｑ１Ｗ）、隔週（Ｑ２Ｗ）又は毎月（Ｑ４Ｗ）の皮下注射からなる、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の使用のための抗体。
【請求項１６】
前記負荷投薬の少なくとも２回の皮下注射は、異なる用量である、請求項１５に記載の使用のための抗体。
【請求項１７】
ヒト対象におけるシェーグレン症候群を治療する方法であって、治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項１８】
シェーグレン症候群は、原発性シェーグレン症候群である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体は、
ａ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｂ．配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｃ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｄ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｅ．サイレントＦｃ  ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の治療の方法。
【請求項２１】
前記抗体は、１種又は複数の薬学的に許容し得る担体と共に投与される、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗体は、皮下若しくは静脈内又は皮下若しくは静脈内の組み合わせで投与される、請求項１７〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗体は、ヒト対象の１キログラムあたり約３ｍｇ〜約３０ｍｇの活性成分の用量として投与される、請求項１７〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記用量は、前記ヒト対象の１キログラムあたり約１０ｍｇの活性成分である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇの活性成分の用量として投与される、請求項１７〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記用量は、１５０ｍｇの活性成分、３００ｍｇの活性成分又は６００ｍｇの活性成分である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗体は、負荷投薬及び維持投薬で投与される、請求項１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記負荷投薬は、第１の用量の皮下注射を介して投与され、且つ前記維持投薬は、第２の用量の皮下注射を介して投与される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記第１の用量は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇの活性成分であり、且つ前記第２の用量は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇの活性成分である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記第１の用量は、１５０ｍｇ、３００ｍｇ又は６００ｍｇの活性成分であり、且つ前記第２の用量は、１５０ｍｇ、３００ｍｇ又は６００ｍｇの活性成分である、請求項２８又は２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記負荷投薬は、少なくとも２回の皮下注射を含み、且つ前記維持投薬は、毎週（Ｑ１Ｗ）、隔週（Ｑ２Ｗ）又は毎月（Ｑ４Ｗ）の皮下注射からなる、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記負荷投薬の少なくとも２回の皮下注射は、異なる用量である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
シェーグレン症候群の治療のための医薬品の製造のための、抗ＣＤ４０抗体、緩衝液、安定剤及び可溶化剤を含む液体医薬組成物の使用並びにシェーグレン症候群を有する患者に前記抗ＣＤ４０抗体を皮下投与するための手段であって、前記抗ＣＤ４０抗体は、
ａ．第１の負荷投薬で、且つ
ｂ．その後、第２の維持投薬で皮下投与され、ここで、前記抗ＣＤ４０抗体は、
ｉ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｉｉ．配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｉｉｉ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｖ．サイレントＦｃ  ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｖｉ．配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される、使用及び手段。
【請求項３４】
シェーグレン症候群は、原発性シェーグレン症候群である、請求項３３に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
先行出願
本出願は、その内容の全体が組み込まれる、２０１７年１１月３日に出願された米国仮特許出願第６２／５８１２１２号明細書及び２０１８年３月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／６４４９３９号明細書の優先権を主張する。
【０００２】
本開示は、ＣＦＺ５３３などの抗ＣＤ４０抗体を用いることにより、原発性シェーグレン症候群又は続発性シェーグレン症候群などのシェーグレン症候群を治療するための方法、治療レジメン、使用、キット及び治療法に関する。
【背景技術】
【０００３】
原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）又は続発性シェーグレン症候群（ｓＳＳ）などのシェーグレン症候群（ＳＳ）は、原因不明の一般的な慢性の自己免疫疾患である。
【０００４】
原発性ＳＳ患者と続発性ＳＳ患者との両方における疾患の特徴としては、唾液腺及び涙腺における抗Ｒｏ及び抗Ｌａ自己抗体の存在並びに単核細胞浸潤が挙げられる（Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒｉ，ｅｔ  ａｌ．２０１２）。場合により、Ｔ及びＢリンパ球のこれらの蓄積は、ＧＣとの形態的及び機能的類似性を有する異所性リンパ構造（ＥＬＳ）と称される十分に組織化された構造を形成する（Ｖｏｕｌｇａｒｅｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．２００８）。先行研究は、ＳＳ患者及びこの疾患の前臨床モデルからの唾液腺におけるＥＬＳのエビデンス並びに進行中の親和性成熟のエビデンスを報告しており（Ｊａｃｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．２００２；Ｓｔｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．１９９８；Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．２０１２）、これらの構造を疾患病態に関連付けている（Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．２０１７）。
【０００５】
この疾患の生活の質（ＱｏＬ）尺度に対する影響は、かなりのものであり、比較研究は、ｐＳＳ  ＱｏＬがうっ血性心不全又は多くの癌よりも量的に悪いスコアであることを示した（Ｓｅｇａｌ  ｅｔ  ａｌ  ２００９；Ｋｕｅｎｓｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２００２；Ｋｏｍａｒｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ  １９９６）。さらに、ＳＳにおけるＢ細胞活性の増大は、ＳＳ患者の５％に生じるリンパ腫発生を伴う悪性転換のリスクの増大をもたらす。ＳＳ患者の治療は、粘膜の徴候及び症状の対症処置に限られ、今日まで、ＳＳ患者に対する根拠に基づく全身療法は、利用可能ではない。
【０００６】
糖質コルチコイド及び典型的な疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）は、大抵、有効ではなく、いかなる薬理学的介入も、重度の、日常生活に支障をきたす倦怠に対して有効でない。有効性の説得力のあるエビデンスがないにもかかわらず、全身性エリテマトーデスなどの類似の自己免疫疾患からの事例証拠及び経験に基づいて、特に腎臓又は関節合併症などの腺外の症状の治療に対して抗マラリア薬（Ｔｉｓｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２００８）、メトトレキサート（Ｗｉｎｚｅｒ  ａｎｄ  Ａｒｉｎｇｅｒ  ２０１０）又はアザチオプリン（Ｋａｕｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  １９９９）がときに使用される。
【０００７】
Ｂ細胞枯渇剤リツキシマブを用いる小さい試験は、ある程度の治療有効性を示しているが、いかなる正規の大きい無作為化された対照試験も、腺外の及び腺の疾患顕在化に関する明確な有効性を示していない。分泌腺破壊を予防し、且つ腺外の疾患顕在化に対処する疾患修飾薬は、慢性ｐＳＳなどのＳＳの治療に対する革新的な進歩を導入するであろう。
【０００８】
ＣＦＺ５３３は、ヒトＣＤ４０に対して誘導されるヒトモノクローナル抗体である。これは、ＩｇＧ１アイソタイプサブクラスに属し、ＦｃγＲ結合並びにＡＤＣＣ及びＣＤＣのような関連するエフェクター機能を無効にするＦｃ−サイレンシング変異（Ｎ２９７Ａ）を含む。ＣＦＺ５３３は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８８２８３９６号明細書及び米国特許第９２２１９１３号明細書に開示されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
ＡＤＣＣ活性が抑制されたヒト、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体がシェーグレン症候群の治療に好適であることが判明した。具体的には、抗体ＣＦＺ５３３が、概念実証研究において、臨床的に活動性のｐＳＳにおける新規の治療モダリティを提供する見込みを示した。
【００１０】
本発明の第１の態様によれば、シェーグレン症候群の治療に使用するための抗ＣＤ４０抗体が提供される。一実施形態では、シェーグレン症候群は、原発性シェーグレン症候群である。
【００１１】
抗体は、
ａ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｂ．配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｃ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｄ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｅ．サイレントＦｃ  ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択され得る。
【００１２】
抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含むことができる。
【００１３】
一実施形態では、治療有効量の、第１の態様による使用のための抗体と、１種又は複数の薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物が提供される。
【００１４】
一実施形態では、投与経路は、第１の態様による抗体の皮下若しくは静脈内又は皮下若しくは静脈内の組み合わせである。
【００１５】
用量は、ヒト対象の１キログラムあたり約３ｍｇ〜約３０ｍｇの活性成分であり得る。この用量を毎週、２週おき又は４週おきに与えることができる。
【００１６】
一実施形態では、用量は、ヒト対象の１キログラムあたり約１０ｍｇの活性成分である。
【００１７】
一実施形態では、用量は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分である。この用量を毎週、２週おき又は４週おきに与えることができる。
【００１８】
一実施形態では、用量は、約３００ｍｇの活性成分である。
【００１９】
ある好ましい実施形態では、用量は、１５０ｍｇの活性成分である。別の好ましい実施形態では、用量は、３００ｍｇの活性成分である。さらに別の好ましい実施形態では、用量は、６００ｍｇの活性成分である。
【００２０】
一実施形態では、抗体は、負荷投薬及び維持投薬を通して投与される。
【００２１】
一実施形態では、負荷投薬は、第１の用量の皮下注射を介して投与され、且つ維持投薬は、第２の用量の皮下注射を介して投与される。第１の用量は、第２の用量と同じであるか又は第２の用量よりも高いことができる。
【００２２】
一実施形態では、第１の用量は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇの活性成分であり、且つ第２の用量は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇの活性成分である。
【００２３】
一実施形態では、第１の用量は、１５０ｍｇ、３００ｍｇ又は６００ｍｇの活性成分であり、且つ第２の用量は、１５０ｍｇ、３００ｍｇ又は６００ｍｇの活性成分である。
【００２４】
一実施形態では、負荷投薬は、少なくとも２回の皮下注射を含み、且つ維持投薬は、毎週（Ｑ１Ｗ）、隔週（Ｑ２Ｗ）又は毎月（Ｑ４Ｗ）の皮下注射からなる。一実施形態では、負荷投薬は、２回の皮下注射からなる。別の実施形態では、負荷投薬は、３回の皮下注射からなる。
【００２５】
一実施形態では、負荷投薬の各皮下注射は、異なる用量である。別の実施形態では、負荷投薬の各皮下注射は、同じ用量である。
【００２６】
第２の態様によれば、ヒト対象におけるシェーグレン症候群を治療する方法であって、治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体を前記対象に投与することを含む方法が提供される。好ましい実施形態では、シェーグレン症候群は、原発性シェーグレン症候群である。
【００２７】
一実施形態では、抗体は、
ａ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｂ．配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｃ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｄ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｅ．サイレントＦｃ  ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される。
【００２８】
一実施形態では、抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００２９】
一実施形態では、抗体は、１種又は複数の薬学的に許容し得る担体と共に投与される。
【００３０】
一実施形態では、抗体は、皮下若しくは静脈内又は皮下若しくは静脈内の組み合わせで投与される。
【００３１】
一実施形態では、抗体は、ヒト対象の１キログラムあたり約３ｍｇ〜約３０ｍｇの活性成分の用量として投与される。
【００３２】
一実施形態では、用量は、ヒト対象の１キログラムあたり約１０ｍｇの活性成分である。
【００３３】
一実施形態では、抗体は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇの活性成分の用量として投与される。
【００３４】
ある好ましい実施形態では、用量は、１５０ｍｇの活性成分である。別の好ましい実施形態では、用量は、３００ｍｇの活性成分である。さらに別の好ましい実施形態では、用量は、６００ｍｇの活性成分である。
【００３５】
一実施形態では、抗体は、負荷投薬及び維持投薬で投与される。
【００３６】
一実施形態では、負荷投薬は、第１の用量の皮下注射を介して投与され、且つ維持投薬は、第２の用量の皮下注射を介して投与される。
【００３７】
第１の用量は、第２の用量と同じであるか又は第２の用量よりも高いことができる。
【００３８】
一実施形態では、第１の用量は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇの活性成分であり、且つ第２の用量は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇの活性成分である。
【００３９】
一実施形態では、第１の用量は、１５０ｍｇ、３００ｍｇ又は６００ｍｇの活性成分であり、且つ第２の用量は、１５０ｍｇ、３００ｍｇ又は６００ｍｇの活性成分である。
【００４０】
一実施形態では、負荷投薬は、少なくとも２回の皮下注射を含み、且つ維持投薬は、毎週（Ｑ１Ｗ）、隔週（Ｑ２Ｗ）又は毎月（Ｑ４Ｗ）の皮下注射からなる。
【００４１】
一実施形態では、負荷投薬は、２回の皮下注射からなる。別の実施形態では、負荷投薬は、３回の皮下注射からなる。
【００４２】
一実施形態では、負荷投薬の各皮下注射は、異なる用量である。別の実施形態では、負荷投薬の各皮下注射は、同じ用量である。
【００４３】
第３の態様によれば、シェーグレン症候群の治療のための医薬品の製造のための、抗ＣＤ４０抗体、緩衝液、安定剤及び可溶化剤を含む液体医薬組成物の使用並びにシェーグレン症候群を有する患者に抗ＣＤ４０抗体を皮下投与するための手段が提供され、ここで、抗ＣＤ４０抗体は、
ａ．第１の負荷投薬で、且つ
ｂ．その後、第２の維持投薬で皮下投与され、ここで、前記抗ＣＤ４０抗体は、
ｉ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｉｉ．配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｉｉｉ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｖ．サイレントＦｃ  ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｖｉ．配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される。
【００４４】
好ましい実施形態では、シェーグレン症候群は、原発性シェーグレン症候群である。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】ｐＳＳ患者におけるＣＦＺ５３３についての概念実証研究（ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）の第１の及び第２のコホートの研究デザインの概略図である。
【図２】ｐＳＳ患者におけるＣＦＺ５３３についての概念実証研究（ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）の第３のコホートの研究デザインの概略図である。
【図３】概念実証研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３を開始する前の予備的なシミュレートした薬物動態プロフィールを示すグラフである。
【図４】静脈内投与後の薬物動態プロフィールを示すグラフである（研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３のコホート２；中間解析）。
【図５】ＩＶ投与後の臨床スコア（ＥＳＳＤＡＩ）を示すグラフである（コホート２；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図６】ＩＶ投与後のバイオマーカーレベル（ＣＸＣＬ１３）を示すグラフである（コホート２；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図７】ＩＶ投与後の異なる臨床エンドポイントに対する治療結果を示す概略図である（コホート２；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図８】薬力学プロフィールを示すグラフである（ＩＶ投与後の血漿における総可溶型ＣＤ４０；コホート２；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図９】皮下投与後の臨床スコア（ＥＳＳＤＡＩ）を示すグラフである（コホート１；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図１０】皮下投与後の薬物動態プロフィールを示すグラフである（コホート１；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図１１】ＳＣ投与後の薬力学プロフィール（総可溶型ＣＤ４０）を示すグラフである（コホート１；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図１２】ＳＣ投与後の臨床スコア（ＥＳＳＰＲＩ）を示すグラフである（コホート１；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図１３】ＩＶ投与後の臨床スコア（ＥＳＳＰＲＩ）を示すグラフである（コホート２；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図１４】ＩＶ投与後のバイオマーカーレベル（ＣＸＣＬ１３）を示すグラフである（コホート２；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図１５】ＩＶ投与後の臨床スコア（ＥＳＳＤＡＩ）を示すグラフである（コホート２；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図１６】ＩＶ投与後のＩＣＡＭ及びＢ細胞を示すグラフである（コホート２；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図１７】異なる臨床エンドポイントに対する治療結果を示す概略図である（ＩＶ及びＳＣ投与；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）。
【図１８】ｒＣＤ１５４誘導性の経路活性化のインビトロＣＦＺ５３３阻害を示すグラフである。
【図１９】インビトロでのＣＦＺ５３３最小刺激活性を示すグラフである。
【図２０】ＣＦＺ５３３がインビトロで細胞枯渇を媒介しないことを示すグラフである。
【図２１】ｒｅｃＣＤ１５４又はＣＦＺ５３３による結合時のＣＤ４０受容体の内在化を示す、個々のＲＩ−１  Ｂ細胞の代表的な画像である。
【図２２】非ヒト霊長類におけるＣＦＺ５３３の薬物動態学的及び薬力学的（標的エンゲージメント；非Ｂ細胞枯渇）特性）を示すグラフである。
【図２３】図２３Ａは、非ヒト霊長類におけるＰＫ／ＰＤ及びワクチン接種研究の実験設計の概略図である。図２３Ｂは、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ及び血漿ＣＦＺ５３３濃度（薬物動態）を示すグラフである。図２３Ｃは、胚中心の組織学的分析の結果を示す。
【図２４】図２４Ａ〜Ｃは、皮下に与えられる活性成分の可能な毎週の負荷用量、それに続く（皮下への）活性成分の隔週の維持レジメンの図的表現である。
【図２５】図２５Ａは、皮下に与えられる活性成分の可能な毎週の負荷用量、それに続く（皮下への）活性成分の４週おきの投与の図的表現である。図２５Ｂは、皮下に与えられる活性成分の可能な毎週の負荷用量、それに続く（皮下への）活性成分の毎週の投与の図的表現である。
【図２６】ＭＲ１での１０週の治療後のＮＯＤマウスの実験結果；唾液腺におけるＥＬＳにおけるＣＤ４０の特徴及び唾液腺における三次リンパ組織の減少を示す。
【図２７】抗ＣＤ１５４での１０週の治療後のＮＯＤマウスの実験結果；唾液腺におけるＡＱＰ−５陽性細胞の割合の増大を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
ＣＤ４０−ＣＤ１５４（ＣＤ１５４はＣＤ４０Ｌである）経路は、シェーグレン症候群（ＳＳ）の病因において重要な役割を果たすと考えられている。
【００４７】
したがって、抑制されたＡＤＣＣ活性を有する抗ＣＤ４０抗体など、ＣＤ４０−ＣＤ１５４シグナル伝達を遮断する能力があるあらゆるモノクローナル抗体は、ＳＳ、例えば原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）の治療に適している可能性がある。
【００４８】
理論に拘泥されることを望まないが、本発明者らは、維持レジメン中のＣＦＺ５３３抗体の少なくとも約４０μｇ／ｍＬの血漿中濃度の持続が、ＳＳ患者、例えばｐＳＳ患者の標的組織におけるＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ経路を遮断するのに必要であることを明らかにした。また、ＣＦＺ５３３は、標的介在性の消失（これは、標的の代謝回転及び発現に関連する）にさらされ、且つＳＳ患者は、体内で高いＣＤ４０発現を呈しているため、治療の開始時により高い用量又はより高頻度のレジメンを必要とする、ＣＤ４０レベルが亢進されている状態では、これらの患者においてＣＤ４０受容体を十分に飽和させるために治療の開始時に負荷レジメンが必要であった。したがって、ＣＤ４０受容体の迅速な飽和を治療の開始時に（２〜３週）提供する負荷投薬レジメン、それに続く少なくとも４０μｇ／ｍＬ又は少なくとも１００μｇ／ｍＬの血漿中濃度の持続を、治療期間全体を通して提供する維持投薬レジメンが、罹患した組織においてＣＤ４０発現が亢進されるであろう状況（状態の重症度）において治療効果のために考慮される。定常状態での観察される最大血漿中濃度は、約３００〜４００μｇ／ｍＬ（コホート３；研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３）であり、感染症のリスク増大を示唆する重大なシグナルが存在せずに概ね安全且つ良好な耐容性を示した。血栓塞栓症は、観察されなかった。
【００４９】
適切な投薬量は、例えば、個々のＣＤ４０経路アンタゴニスト、例えば用いられる抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）又は抗ＣＤ４０Ｌ抗体（例えば、ＢＩＩＢ０６３）若しくはその抗原結合断片、治療の対象、投与様式及び治療される状態の性質及び重症度に応じて、また患者が受けてきた前治療の性質に応じて変わる。最終的に、担当する医療提供者が、それぞれ個々の患者を治療するＣＤ４０経路アンタゴニストの量を決定する。いくつかの実施形態では、担当する医療提供者は、低用量のＣＤ４０経路アンタゴニストを投与し、患者の反応を観察することができる。他の実施形態では、患者に投与されるＣＤ４０経路アンタゴニストの初回用量は、高く、その後、再発の徴候が生じるまで下向きに用量調整される。患者にとって最適な治療効果が得られるまで、より大きい用量のＣＤ４０経路アンタゴニストを投与することができ、この投薬量は、一般に、それ以上増大させない。
【００５０】
本開示の治療又は使用の方法のいくつかを実施する際、治療有効量のＣＤ４０経路アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）又は抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片が患者、例えば哺乳類（例えば、ヒト）に投与される。開示した方法は、ＣＤ４０経路アンタゴニスト（例えば、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）を使用してＳＳ患者の治療を提供することが理解されるが、これは、患者が最終的にＣＤ４０経路アンタゴニストで治療される場合、こうしたＣＤ４０経路アンタゴニスト療法が必然的に単剤療法であることを排除しない。実際、患者がＣＤ４０経路アンタゴニストでの治療について選択される場合、ＣＤ４０経路アンタゴニスト（例えば、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）は、本開示の方法に従い、単独で又は他の薬剤及び治療法と組み合わせて投与することができる。
【００５１】
ある種のＳＳ患者、例えばｐＳＳ患者、例えば用いられるＣＤ４０経路アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）又は抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片での治療に対して不十分な反応を呈する患者にとってレジメン変更が適切であり得ることが理解されるであろう。したがって、投与（例えば、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３又はｍＡｂ２）は、毎月の投薬よりも高頻度、例えば隔週の投薬（２週おき）又は毎週の投薬であり得る。
【００５２】
一部の患者は、負荷レジメン（例えば、数週間の毎週投与［例えば、１〜４週、例えば第０、１、２及び／又は３週、例えば２週での投薬、第０及び１週での負荷投薬レジメン］、それに続く例えば第３又は４週で開始する維持レジメン（ここで、ＣＦＺ５３３は、毎週、隔週又は４週おきに数週間投与することができる）から恩恵を受ける可能性が高い。
【００５３】
例えば、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３又はｍＡｂ２にとって適切なレジメンは、毎週、数週間［例えば、１〜４週、例えば第０、１、２及び３週での投薬］、それに続く毎月の維持レジメンであり得る。
【００５４】
別の例では、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３又はｍＡｂ２にとって適切なレジメンは、毎週、数週間（例えば、２〜８週、例えば３週、例えば第０、１、２週での投薬）、それに続く隔週の維持レジメンである。
【００５５】
投与（例えば、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３又はｍＡｂ２について）は、毎月の投薬よりも低頻度、例えば６週おき、８週おき（２か月おき）、年４回（３か月おき）の投薬などであり得ることも理解されるであろう。
【００５６】
ある種のＳＳ患者、例えばｐＳＳ患者、例えば用いられるＣＤ４０経路アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）又は抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片での治療に対して不十分な反応を呈する患者にとって、疾患の重症度に基づいて用量漸増が適切であり得ることが理解されるであろう。したがって、皮下（ｓ．ｃ．）投薬量（負荷又は維持用量）は、約１５０ｍｇ〜約９００ｍｇ（ｓ．ｃ．）、例えば約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇなどよりも大きい可能性があり、同様に、静脈内（ｉ．ｖ．）投薬量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇなどよりも大きい可能性がある。ある種のＳＳ患者、例えばｐＳＳ患者、例えばＣＤ４０経路アンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）又は抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片）での治療に対する有害事象又は有害反応を呈する患者にとって用量低下が適切である可能性もあることも理解されるであろう。したがって、ＣＤ４０経路アンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）又は抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片）の投薬量は、約１５０ｍｇ〜約９００ｍｇ（ｓ．ｃ．）、例えば約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇなどよりも小さい可能性がある。
【００５７】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）又は抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片は、ｓ．ｃ．送達される６００ｍｇの初回用量で患者に投与することができ、この用量は、その後、医師によって決定される通り、必要に応じて、ｓ．ｃ．送達される１５０ｍｇ又は３００ｍｇに調整することができる。
【００５８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）又は抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片は、ｉ．ｖ．送達される１０ｍｇ／ｋｇの初回用量で患者に投与することができ、この用量は、その後、医師によって決定される通り、必要に応じて、ｓ．ｃ．送達される１５０ｍｇ又は３００ｍｇに調整することができる。
【００５９】
具体的実施形態では、第１日（Ｄ１）、第１５日（Ｄ１５）、Ｄ２９、Ｄ５７、Ｄ８５、Ｄ９９、Ｄ１１３及びＤ１４１に３ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３がｓ．ｃ．投与される。
【００６０】
別の具体的実施形態では、Ｄ１、Ｄ１５、Ｄ２９、Ｄ５７、Ｄ８５、Ｄ９９、Ｄ１１３及びＤ１４１に１０ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３がｉ．ｖ．投与される。
【００６１】
さらに別の具体的実施形態では、６００ｍｇ  ＣＦＺ５３３の４つの単位用量を含む負荷用量が週１回（Ｑ１Ｗ）ｓ．ｃ．投与され（すなわちＤ１、Ｄ８、Ｄ１５及びＤ２２での６００ｍｇ  ＣＦＺ５３３（ｓ．ｃ．））、それに続いて３００ｍｇの単位用量を含む維持用量が週１回（Ｑ１Ｗ）ｓ．ｃ．投与される（すなわちＤ２９からＤ８５までの週１回の３００ｍｇ  ＣＦＺ５３３（ｓ．ｃ．））。
【００６２】
さらなる具体的実施形態では、対象１ｋｇあたり１０ｍｇのＣＦＺ５３３の単回用量を含む負荷用量が第１日に１回ｉ．ｖ．投与され、それに続いて３００ｍｇの単位用量を含む維持用量が週１回（Ｑ１Ｗ）ｓ．ｃ．投与される（すなわちＤ８からＤ８５までの週１回の３００ｍｇ  ＣＦＺ５３３（ｓ．ｃ．））。
【００６３】
ＣＦＺ５３３は、年４回、毎月、毎週又は隔週、例えば皮下に約７５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約４５０ｍｇ又は約６００ｍｇの単位用量で皮下注射により、約７５ｍｇ〜約６００ｍｇ又は約１５０ｍｇ〜約３００ｍｇが投与される投薬で投与することができる。
【００６４】
ＣＦＺ５３３は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの負荷用量で毎週、皮下注射により投与することができ、ここで、この負荷用量は、１〜４週間にわたって投与される。
【００６５】
負荷用量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｖ．投与でもあり得る。また、負荷用量は、約１５０ｍｇ、３００ｍｇ及び／又は６００ｍｇの活性成分の用量で毎週又は隔週、皮下に投与することができる。
【００６６】
ＣＦＺ５３３の負荷レジメン又は投薬（１５０／３００／６００ｍｇなど、毎週又は隔週）に、毎週、隔週又は毎月（４週おきに）投与される維持レジメン又は投薬が続くことが好ましい。維持用量は、毎週若しくは隔週３００ｍｇ（ｓ．ｃ．）、又は隔週６００ｍｇ、又は４週おきに６００ｍｇであることが好ましい。
【００６７】
抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片は、ＣＦＺ５３３、その機能性誘導体又はそのバイオ後続品であり得る。
【００６８】
本明細書で定義される場合、「単位用量」は、約７５ｍｇ〜９００ｍｇ、例えば約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇ、例えば約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇ、例えば約３００ｍｇ〜約６００ｍｇ又は例えば約１５０ｍｇ〜約３００ｍｇから構成され得るｓ．ｃ．用量を指す。例えば、単位ｓ．ｃ．用量は、約７５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇである。
【００６９】
定義
本明細書で使用する場合、ＣＤ４０は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５とも呼ばれる表面抗原分類４０を指す。用語ＣＤ４０は、別段の記述がない限り、配列番号１９において定義される通りのヒトＣＤ４０を指す。
【００７０】
数値ｘに関する用語「約」は、例えば、＋／−１０％を意味する。数値範囲又は数の列挙の前に使用される場合、用語「約」は、系列内のそれぞれの数に適用される。例えば、表現「約１〜５」は、「約１〜約５」と解釈されるべきであるか、又は例えば、表現「約１、２、３、４」は、「約１、約２、約３、約４など」と解釈されるべきである。
【００７１】
単語「実質的に」は、「完全に」を排除しない。例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まない可能性がある。必要に応じて、単語「実質的に」は、本開示の定義から省くことができる。
【００７２】
用語「含む」は、「包含する」並びに「からなる」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、専らＸのみからなる可能性があるか、又は何らかの追加のものが含まれる（例えば、Ｘ＋Ｙ）可能性がある。
【００７３】
ＡＵＣ０−ｔは、時間０から時間「ｔ」（ここで、ｔは、投与後の定義された時点である）までの血漿中濃度−時間曲線下面積を示す［質量×時間／体積］。
【００７４】
ＡＵＣｔｘ−ｔｙは、時間「ｘ」から時間「ｙ」（ここで、「時間ｘ」及び「時間ｙ」は、投与後の定義された時点である）までの血漿中濃度−時間曲線下面積を表す。
【００７５】
Ｃｍａｘは、薬物投与後に観察される最大血漿中濃度である［質量／体積］。
【００７６】
Ｃｍｉｎは、薬物投与後に観察される最小血漿中濃度である。
【００７７】
Ｃトラフは、投薬期間の開始の直前又は投薬間隔の最後に観察される血漿中濃度である。
【００７８】
Ｔｍａｘは、薬物投与後に最大濃度に到達するまでの時間である［時間］。
【００７９】
ｓｓ（下付き文字）は、パラメータが定常状態で定義されることを示す。
【００８０】
本明細書で使用される用語「抗体」又は「抗ＣＤ４０抗体」などは、ＣＤ４０と（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）相互作用する抗体全体を指す。天然起源の「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖とを含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）及び重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存される領域に割り込まれた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される高頻度可変性の領域にさらに細分化することができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含めた宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。用語「抗体」には、例えば、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ抗体又はキメラ抗体が含まれる。抗体は、あらゆるアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスのもの、好ましくはＩｇＧ、最も好ましくはＩｇＧ１であり得る。例示的な抗体としては、表１に記述した通り、ＣＦＺ５３３（本明細書ではｍＡｂ１とも称される）及びｍＡｂ２が挙げられる。
【００８１】
軽鎖及び重鎖の両方は、構造的及び機能的相同性の領域に分けられる。用語「定常」及び「可変」は、機能に関して使用される。この点に関して、軽（ＶＬ）鎖部分と重（ＶＨ）鎖部分との両方の可変ドメインが抗原認識及び特異性を決定することを理解されたい。逆に、軽鎖（ＣＬ）及び重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２又はＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的性質を与える。慣例により、定常領域ドメインの付番は、抗体の抗原結合部位又はアミノ末端から遠位になるにつれて増加する。Ｎ末端は、可変領域であり、Ｃ末端は、定常領域であり、ＣＨ３及びＣＬドメインは、それぞれ重鎖及び軽鎖のカルボキシ末端を事実上含む。具体的には、用語「抗体」には、特にＩｇＧ−ｓｃＦｖ型が含まれる。
【００８２】
抗体の用語「抗原結合部分」（又は単に「抗原部分」）は、本明細書で使用する場合、抗原又はエピトープと特異的に結合する能力を保持するタンパク質など、抗体の全長又は１つ又は複数の断片（例えば、ＣＤ４０の一部）を指す。
【００８３】
「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，」５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ  ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）及びＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）ナンバリング（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．，Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２−１３６（１９９９）；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７，５５−７７（２００３）（「ＩＭＧＴ」ナンバリングスキーム）によって記載されているものを含めた、いくつかの周知のスキームのいずれかを使用して決定される境界を伴うアミノ酸配列である。ＩＭＧＴでは、抗体のＣＤＲ領域は、ＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐ  Ａｌｉｇｎプログラムを使用して決定することができる。
【００８４】
本明細書で使用される用語「エピトープ」は、免疫グロブリンに高い親和性で結合する能力があるあらゆる決定基を指す。エピトープは、その抗原を特異的に標的にする抗体によって結合される抗原の領域であり、抗原がタンパク質である場合、抗体と直接的に接触する特異的なアミノ酸が含まれる。エピトープは、タンパク質上に存在することが最も多いが、核酸などの他の種類の分子上に存在する場合もあり得る。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面集団を含むことができ、特異的な三次元構造特性及び／又は特異的な電荷特性を有することができる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは、別の遺伝子によってコードされるが、これらが単一のタンパク質鎖（ここで、ＶＬ領域とＶＨ領域とが対合して、一価の分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５８７９−５８８３を参照されたい）を形成する）として振る舞うことを可能にする合成のリンカーにより、組換え方法を使用してこれらを連結することができる。
【００８５】
表現「単離された抗体」は、本明細書で使用する場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す（例えば、ＣＤ４０と特異的に結合する単離された抗体は、ＣＤ４０以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ＣＤ４０と特異的に結合する単離された抗体は、他の種由来のＣＤ４０分子などの他の抗原との交差反応性を有することができる。さらに、単離された抗体は、他の細胞性材料及び／又は化学物質を実質的に含まない可能性がある。本明細書で使用する場合の用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、単一分子組成の抗体分子の調製を指す。用語「ヒト抗体」には、本明細書で使用する場合、そのフレームワークもＣＤＲ領域もヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体が含まれることが意図される。「ヒト抗体」は、ヒト、ヒト組織又はヒト細胞によって産生される必要はない。本開示のヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム又は部位特異的変異誘発により、抗体遺伝子の組換え中のインビボでのジャンクションでのＮ−ヌクレオチド付加により、又はインビボでの体細胞変異により導入される変異）を含むことができる。
【００８６】
天然のポリペプチド及びその機能性誘導体に関する「同一性」は、本明細書では、最大のパーセント同一性を得るために、必要に応じて配列を整列し、ギャップを導入した後の、対応する天然のポリペプチドの残基と同一である候補配列内のアミノ酸残基の割合と定義され、いかなる保存的置換も配列同一性の一部とみなされない。Ｎ又はＣ末端伸長部も挿入も同一性を低下させると解釈されないものとする。アラインメントのための方法及びコンピュータプログラムは、周知である。パーセント同一性は、標準のアラインメントアルゴリズム、例えばＡｌｔｓｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３  ４１０）によって記載されているＢａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４４  ４５３）のアルゴリズム；又はＭｅｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１  １７）のアルゴリズムによって決定することができる。一連のパラメータは、１２のギャップペナルティ、４のギャップ伸長ペナルティ及び５のフレームシフトギャップペナルティを伴うＢｌｏｓｕｍ  ６２スコア行列であり得る。２つのアミノ酸又はヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＰＡＭ１２０重み剰余テーブル、１２のギャップ長ペナルティ及び４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７）のアルゴリズムを使用して決定することもできる。
【００８７】
「アミノ酸」は、すべての天然起源のＬ−α−アミノ酸を指し、例えばＤ−アミノ酸が含まれる。表現「アミノ酸配列変異体」は、本開示による配列と比較するとそのアミノ酸配列がいくらか違う分子を指す。例えば、特定の配列の、本開示による抗体のアミノ酸配列変異体は、ヒトＣＤ４０と結合する能力を依然として有するままである。アミノ酸配列変異体には、置換変異体（本開示によるポリペプチド内の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、代わりに同じ位置に別のアミノ酸が挿入されたもの）、挿入変異体（本開示によるポリペプチド内の特定の位置のアミノ酸の直接隣に１つ又は複数のアミノ酸が挿入されたもの）及び欠失変異体（本開示によるポリペプチド内の１つ又は複数のアミノ酸が除去されたもの）が含まれる。
【００８８】
本明細書で使用される用語「Ｆｃ領域」は、抗体の定常ドメインの、ＣＨ３、ＣＨ２及びヒンジ領域の少なくとも一部分を含むポリペプチドを指す。任意選択により、Ｆｃ領域には、いくつかの抗体クラスに存在するＣＨ４ドメインが含まれる可能性がある。Ｆｃ領域は、抗体の定常ドメインのヒンジ領域全体を含むことができる。一実施形態では、本発明は、抗体のＦｃ領域及びＣＨ１領域を含む。一実施形態では、本発明は、抗体のＦｃ領域のＣＨ３領域を含む。別の実施形態では、本発明は、抗体の定常ドメイン由来のＦｃ領域、ＣＨ１領域及びＣκ／λ領域を含む。一実施形態では、本発明の結合分子は、定常領域、例えば重鎖定常領域を含む。一実施形態では、こうした定常領域は、野生型の定常領域と比較して改変される。すなわち、本明細書で開示した本発明のポリペプチドは、３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２又はＣＨ３）の１つ又は複数に対する且つ／又は軽鎖定常領域ドメイン（ＣＬ）に対する変更又は改変を含むことができる。改変の例としては、１つ又は複数のドメイン内の１つ又は複数のアミノ酸の付加、欠失又は置換が含まれる。こうした変更は、エフェクター機能、半減期などを最適化するために含めることができる。
【００８９】
本明細書で使用する場合、用語「親和性」は、単一の抗原部位での抗体と抗原との間の相互作用の強さを指す。各抗原部位内では、抗体「アーム」の可変領域は、多数の部位で弱い非共有結合性の力を通じて抗原と相互作用し、相互作用が多いほど親和性が強くなる。本明細書で使用する場合、ＩｇＧ抗体又はその断片（例えば、Ｆａｂ断片）に関する用語「高親和性」は、標的抗原に対する１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、又は１０−１０Ｍ、又は１０−１１Ｍ以下、又は１０−１２Ｍ以下、又は１０−１３Ｍ以下のＫＤを有する抗体を指す。しかし、高親和性結合は、他の抗体アイソタイプについて異なる可能性がある。例えば、ＩｇＭアイソタイプについての高親和性結合は、１０−７Ｍ以下又は１０−８Ｍ以下のＫＤを有する抗体を指す。
【００９０】
本明細書で使用する場合、「ＣＤ４０ポリペプチドと特異的に結合する」抗体又はタンパク質は、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ４０ポリペプチドと結合する抗体又はタンパク質を指すことが意図される。
【００９１】
「ＣＤ４０以外の抗原と交差反応する」抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下のＫＤで抗原と結合する抗体を指すことが意図される。「特定の抗原と交差反応しない」抗体は、１００ｎＭ以上のＫＤ、又は１μＭ以上のＫＤ、又は１０μＭ以上のＫＤで抗原と結合する抗体を指すことが意図される。ある種の実施形態では、抗原と交差反応しないこうした抗体は、標準の結合アッセイにおいて、これらのタンパク質に対する本質的に検出不可能な結合を呈する。
【００９２】
用語「Ｋａｓｓｏｃ」又は「Ｋａ」は、本明細書で使用する場合、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を指すことが意図されるのに対して、用語「Ｋｄｉｓ」又は「Ｋｄ」は、本明細書で使用する場合、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指すことが意図される。
【００９３】
用語「ＫＤ」は、本明細書で使用する場合、Ｋａに対するＫｄの比（すなわちＫｄ／Ｋａ）から得られてモル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指すことが意図される。抗体についてのＫＤ値は、当技術分野で十分に確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫＤを決定するための方法は、表面プラズモン共鳴を使用するか又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用することによるものである。
【００９４】
本明細書で使用する場合、用語「ＡＤＣＣ」又は「抗体依存性細胞傷害」活性は、細胞枯渇活性を指す。ＡＤＣＣ活性は、当業者に周知のＡＤＣＣアッセイによって測定することができる。
【００９５】
本明細書で使用する場合、用語「サイレント」抗体は、ＡＤＣＣアッセイにおいて測定された場合にＡＤＣＣ活性を呈さないか又は低いＡＤＣＣ活性を呈する抗体を指す。
【００９６】
一実施形態では、用語「ＡＤＣＣ活性なし又は低いＡＤＣＣ活性」は、サイレント抗体が、標準のＡＤＣＣアッセイにおいて測定された場合に５０％未満の特異的細胞溶解、例えば１０％未満の特異的細胞溶解であるＡＤＣＣ活性を呈することを意味する。「ＡＤＣＣ活性なし」は、サイレント抗体が、１％未満であるＡＤＣＣ活性（特異的細胞溶解）を呈することを意味する。
【００９７】
エフェクター機能の抑制は、抗体のＦｃ領域内の変異によって得ることができ、当技術分野において記載されている：ＬＡＬＡ及びＮ２９７Ａ（Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．ｖｏｌ．２０（６）：６８５−６９１）；並びにＤ２６５Ａ（Ｂａｕｄｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．１８１：６６６４−６９；Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．，上記）。サイレントＦｃ  ＩｇＧ１抗体の例は、ＩｇＧ１  Ｆｃアミノ酸配列内のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異を含む、いわゆるＬＡＬＡ変異体を含む。サイレントＩｇＧ１抗体の別の例は、Ｄ２６５Ａ変異を含む。別のサイレントＩｇＧ１抗体は、グリコシル化／非グリコシル化抗体をもたらすＮ２９７Ａ変異を含む。
【００９８】
用語「治療」又は「治療する」は、本明細書では、本発明による抗ＣＤ４０抗体又はタンパク質、例えばｍＡｂ１又はｍＡｂ２抗体の対象への適用又は投与又は本発明の前記抗ＣＤ４０抗体又はタンパク質を含む医薬組成物の、対象由来の単離された組織若しくは細胞株への適用又は投与（ここで、対象は、自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患、自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患に随伴する症状又は自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患の発症の素因を有し、その目的は、自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患、自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患のあらゆる随伴症状又は自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患の発症の素因を軽減、回復又は改善することである）と定義される。
【００９９】
「治療」は、本発明の抗ＣＤ４０抗体又はタンパク質、例えばｍＡｂ１又はｍＡｂ２抗体を含む医薬組成物の対象への適用又は投与又は本発明の前記抗ＣＤ４０抗体又はタンパク質を含む医薬組成物の、対象由来の単離された組織若しくは細胞株への適用又は投与（ここで、対象は、自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患、自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患に随伴する症状又は自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患の発症の素因を有し、その目的は、自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患、自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患のあらゆる随伴症状又は自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患の発症の素因を軽減、回復又は改善することである）も意図する。
【０１００】
用語「予防する」又は「予防すること」は、予防的又は防止的処置を指し；疾患、障害及び／又はそれに随伴する症状の発症を遅らせること又はこれらの発症を予防することに関する。
【０１０１】
本明細書で使用する場合、対象は、こうした対象が、こうした治療から生物学的に、医学的に又は生活の質において恩恵を受ける場合、治療「を必要として」いる。
【０１０２】
用語「薬学的に許容し得る」は、活性成分の生物学的活性の有効性を邪魔しない非毒性の材料を意味する。
【０１０３】
本明細書で使用する場合、対象化合物の用語「投与」又は「投与すること」は、治療を必要としている対象に対して本発明の化合物及びそのプロドラッグを提供することを意味する。１つ又は複数のさらなる治療薬「と組み合わせた」投与には、任意の順序での任意の投与経路での同時（並行）及び連続的投与が含まれる。１つの投与は、治療効果を達成するためにどの程度の薬物物質が投与される必要があるかに応じて、単回注射又は互いに併せて送達される複数回注射であり得る。
【０１０４】
本明細書で使用する場合、「治療有効量」は、患者（ヒトなど）への単一用量又は反復用量投与時、障害又は再発性の障害の少なくとも１つの症状を治療するか、予防するか、発症を予防するか、治癒させるか、遅らせるか、重症度を低下させるか、回復させるか、又は患者の生存をこうした治療が存在しない場合に予測される生存よりも延長させるのに有効である、抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、例えばｍＡｂ１の量を指す。単独で投与される個々の活性成分（例えば、抗ＣＤ４０抗体、例えばｍＡｂ１）に適用される場合、この用語は、その成分単独を指す。組み合わせに適用される場合、この用語は、組み合わせで、連続的に又は同時に投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす活性成分の合わせた量を指す。
【０１０５】
表現「治療レジメン」は、病気を治療するために使用されるレジメン、例えばＳＳ、例えばｐＳＳの治療中に使用される投薬プロトコルを意味する。治療レジメンには、負荷レジメン（又は負荷投薬）、それに続く維持レジメン（又は維持投薬）が含まれ得る。
【０１０６】
表現「負荷レジメン」又は「負荷期間」は、疾患の初期治療のために使用される治療レジメン（又は治療レジメンの一部）を指す。いくつかの実施形態では、開示される方法、使用、キット、プロセス及びレジメン（例えば、ＳＳを治療する方法）は、負荷レジメン（又は負荷投薬）を用いる。いくつかの場合、負荷期間は、最大の有効性に到達するまでの期間である。負荷レジメンの一般的目標は、治療レジメンの最初の期間中、患者に対して高レベルの薬物を提供することである。負荷レジメンは、医師が維持レジメン中に用いるであろうよりも多い用量の薬物を投与すること若しくは医師が維持レジメン中に薬物を投与するであろうよりも頻繁に薬物を投与すること又はこれらの両方を含むことができる。用量漸増は、負荷レジメン中又は後に行うことができる。
【０１０７】
表現「維持レジメン」又は「維持期間」は、病気の治療中の患者の維持のため、例えば患者を負荷レジメン又は期間後に長期間（数か月又は数年）、寛解状態に維持するために使用される治療レジメン（又は治療レジメンの一部）を指す。いくつかの実施形態では、開示した方法、使用及びレジメンは、維持レジメンを用いる。維持レジメンは、継続療法（例えば、一定の間隔で、例えば毎週、隔週又は毎月（４週おきに）、毎年などで薬物を投与すること）又は間欠療法（例えば、断続的治療、間欠治療、再発時の治療又は特定のあらかじめ定められた基準の到達［例えば、疼痛、疾患顕在化など］時の治療）を用いることができる。用量漸増は、維持レジメン中に行うことができる。
【０１０８】
表現「投与するための手段」は、限定はされないが、プレフィルドシリンジ、バイアル及びシリンジ、ペン型注射器、自己注射器、点滴静注バッグ、ポンプ、パッチ式ポンプなどを含めた、患者に薬物を全身的に投与するためのあらゆる利用可能な道具を示すために使用される。こうしたものを用いて、患者が薬物を自己投与する（すなわち薬物を自分自身のために投与する）ことができるか、又は医師が薬物を投与することができる。
【実施例】
【０１０９】
実施例１．抗ＣＤ４０抗体
抑制されたＡＤＣＣ活性を有する抗ＣＤ４０  ｍＡｂは、参照により本明細書にその全体が組み込まれる米国特許第８８２８３９６号明細書及び米国特許第９２２１９１３号明細書に開示されている。抑制されたＡＤＣＣ活性を有する抗ＣＤ４０  ｍＡｂは、他の抗ＣＤ４０抗体と比較して改善された安全性プロフィールを有することが予測され、特に非腫瘍性の適応症、例えばシェーグレン症候群（ＳＳ）及び特に原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）により適している可能性がある。
【０１１０】
本発明者らの拘束力のない仮説によれば、ｍＡｂ１及びｍＡｂ２と称される、米国特許第８８２８３９６号明細書及び米国特許第９２２１９１３号明細書による２種のｍＡｂは、ＳＳの治療に適した化合物であると考えられる。ＣＦＺ５３３とも呼ばれる抗体ｍＡｂ１が特に好ましい。
【０１１１】
ｍＡｂ１は、インビトロでのＣＤ１５４誘導性の活性化並びにインビボでのＴ細胞依存性抗体形成及び胚中心形成を阻害する。ｐＳＳを有する患者では、ｍＡｂ１でのＣＤ４０遮断が新規の治療モダリティを提供することが示されている（実施例７）。
【０１１２】
当業者が本発明を実施できるようにするために、ｍＡｂ１及びｍＡｂ２のアミノ酸及びヌクレオチド配列を下の表１に提供する。
【０１１３】
当技術分野で公知の別の抗ＣＤ４０  ｍＡｂは、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８５６８７２５Ｂ２号明細書に記載されている通りの、Ａｓｔｅｌｌａｓ  Ｐｈａｒｍａ／Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｉｒｉｎ  ＣｏからのＡＳＫＰ１２４０である。
【０１１４】
当技術分野で公知のさらに別の抗ＣＤ４０  ｍＡｂは、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８５９１９００号明細書に記載されている通りの、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  ＩｎｇｅｌｈｅｉｍからのＢＩ６５５０６４である。
【０１１５】
当技術分野で公知のさらなる抗ＣＤ４０  ｍＡｂは、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８６６９３５２号明細書に記載されている通りの、Ｆａｓｔ  Ｆｏｒｗａｒｄ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによるＦＦＰ１０４である。
【０１１６】
別の治療モダリティは、抗ＣＤ４０Ｌ−Ｔｎ３融合タンパク質であるＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａからのＭＥＤＩ４９２０又はＢｉｏｇｅｎからの抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＢＩＩＢ０６３であり得る。
【０１１７】
上に言及した抗体と同じ作用様式を有する抗体、いわゆるバイオ後続品も、当業者によって理解されるであろう通り、本開示によって包含される。
【０１１８】
【表１】
2021501748.tif 000003
【０１１９】
【表２】
2021501748.tif 000004
【０１２０】
【表３】
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【０１２１】
【表４】
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【０１２２】
【表５】
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【０１２３】
【表６】
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【０１２４】
【表７】
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【０１２５】
一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体であって、配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体が提供される。
【０１２６】
一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体であって、配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体が提供される。
【０１２７】
一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体であって、配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体が提供される。
【０１２８】
一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体であって、配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体が提供される。
【０１２９】
一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体であって、サイレントＦｃ  ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体が提供される。
【０１３０】
好ましい実施形態では、ｍＡｂ１と称される抗ＣＤ４０抗体が提供される。具体的には、ｍＡｂ１は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含み、且つｍＡｂ２は、配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１３１】
１．発現系
軽鎖及び重鎖の発現のために、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクターを標準の技術によって宿主細胞に遺伝子導入させる。様々な形式の用語「遺伝子導入」は、外来性ＤＮＡの原核生物又は真核生物宿主細胞への導入のために一般に使用される非常に様々な技術、例えば電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラン遺伝子導入などを包含することが意図される。本発明の抗体を原核生物宿主細胞又は真核生物宿主細胞のいずれかにおいて発現させることは、理論的に可能である。真核細胞、例えば哺乳類宿主細胞、酵母又は糸状菌における抗体の発現が論じられている。なぜなら、こうした真核細胞、特に哺乳類の細胞が、適切にフォールディングされた免疫学的に活性な抗体を構築及び分泌する可能性は、原核細胞よりも高いからである。
【０１３２】
具体的には、クローニング又は発現ベクターは、好適なプロモーター配列に動作可能なように連結される、以下のコード配列（ａ）〜（ｂ）：
（ａ）ｍＡｂ１の全長重鎖及び軽鎖をそれぞれコードする配列番号１５及び配列番号１６、又は
（ｂ）ｍＡｂ２の全長重鎖及び軽鎖をそれぞれコードする配列番号１７及び配列番号１８
のいずれかの少なくとも１つを含むことができる。
【０１３３】
本発明の組換え抗体を発現させるための哺乳類宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｒ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ及びＰ．Ａ．Ｓｈａｒｐ，１９８２  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されている通りのＤＨ  ＦＲ選択可能マーカーと共に使用される、Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ，１９８０  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載されているｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞が含まれる）、ＣＨＯＫ１  ｄｈｆｒ＋細胞株、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞が含まれる。特に、ＮＳＯ骨髄腫細胞との使用のために、別の発現系は、ＰＣＴ公報国際公開第８７／０４４６２号パンフレット、国際公開第８９／０１０３６号パンフレット及び欧州特許第０３３８８４１号明細書に示されているＧＳ遺伝子発現系である。
【０１３４】
抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳類宿主細胞に導入する場合、抗体は、宿主細胞における抗体の発現又は宿主細胞が成長する培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準のタンパク質精製方法を使用して培養培地から回収することができる（例えば、Ａｂｈｉｎａｖ  ｅｔ  ａｌ．２００７，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ８４８：２８−３７を参照されたい）。
【０１３５】
宿主細胞は、ｍＡｂ１又はｍＡｂ２の発現及び産生に適した条件下で培養することができる。
【０１３６】
２．医薬組成物
治療用抗体は、典型的には、直ちに投与可能な水性の形態又は投与前の好適な希釈剤での再構成のための凍結乾燥物として製剤化される。抗ＣＤ４０抗体は、凍結乾燥物として又は例えばプレフィルドシリンジに入れた水性の組成物として製剤化することができる。製剤は、薬物製（ＤＰ）とも呼ばれる。
【０１３７】
好適な製剤は、再構成して、患者への送達のための高濃度の抗体活性成分且つ低レベルの抗体凝集を伴う溶液を与えることができる、水性の医薬組成物又は凍結乾燥物を提供することができる。高濃度の抗体は、これにより、患者に送達されなければならない材料の量が減るために有用である。投薬体積の低下により、患者に一定用量を送達するためにかかる時間が最小限になる。高濃度の抗ＣＤ４０抗体を含む本発明の水性組成物は、皮下投与に特に適している。
【０１３８】
したがって、本発明は、ｍＡｂ１又はｍＡｂ２などの抗ＣＤ４０抗体を含む、対象における投与、例えば皮下投与に適した水性医薬組成物を提供する。
【０１３９】
抗ＣＤ４０抗体は、薬学的に許容し得る担体と組み合わせた場合、医薬組成物として使用することができる。こうした組成物は、ｍＡｂ１又はｍＡｂ２などの抗ＣＤ４０抗体に加えて、担体、種々の希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤及び当技術分野で周知の他の材料を含有することができる。担体の特性は、投与経路に依存する。開示した方法に使用するための医薬組成物は、標的とされる特定の障害の治療のための追加の治療薬も含有することができる。
【０１４０】
ある具体的実施形態では、薬物製品（ＤＰ）とも呼ばれる組成物は、６．０のｐＨを有し、且つ
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１又はｍＡｂ２、
（ｉｉ）２７０ｍＭスクロース（安定剤として）、
（ｉｉｉ）３０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（緩衝剤として）、及び
（ｉｖ）０．０６％ポリソルベート２０（界面活性剤として）
を含む、水性製剤から調製される凍結乾燥製剤である。
【０１４１】
別の具体的実施形態では、薬物製品（ＤＰ）とも呼ばれる医薬組成物は、６．０のｐＨを有し、且つ
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１又はｍＡｂ２、
（ｉｉ）２７０ｍＭスクロース（安定剤として）、
（ｉｉｉ）３０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（緩衝剤として）、及び
（ｉｖ）０．０６％ポリソルベート２０（界面活性剤として）
を含む、水性医薬組成物である。
【０１４２】
３．投与経路
典型的には、抗体又はタンパク質は、注射により、例えば静脈内、腹腔内又は皮下に投与される。この投与を実行するための方法は、当業者に公知である。局所的若しくは経口的に投与することができるか、又は粘膜を透過する能力がある可能性がある組成物を得ることも可能である。当業者によって理解されるであろう通り、選択された特定の投与経路に対して適切であるような、投与するのに適したあらゆる手段を使用することができる。
【０１４３】
可能な投与経路の例としては、非経口（例えば、静脈内（Ｉ．Ｖ．若しくはＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、皮内、皮下（Ｓ．Ｃ．若しくはＳＣ）又は注入）、経口及び肺内（例えば、吸入）、経鼻、経皮（局所）、経粘膜及び直腸内投与が挙げられる。非経口、皮内又は皮下適用のために使用される液剤又は懸濁剤は、以下の構成成分を含むことができる：無菌の希釈剤、例えば注射用水、生理食塩溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒、抗菌剤、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベン、酸化防止剤、例えばアスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム、キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸、緩衝液、例えば酢酸、クエン酸又はリン酸及び張度の調整のための薬剤、例えば塩化ナトリウム又はデキストロース。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基を用いて調整することができる。非経口調製物は、ガラス又はプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器又は反復投与バイアルに封入することができる。
【０１４４】
抗ＣＤ４０療法は、本発明の抗体又はタンパク質の負荷レジメン又は負荷投薬を、抗ＣＤ４０療法を必要としている対象に投与することによって開始することができる。「負荷用量」は、対象に１回又は数回投与される本発明の抗ＣＤ４０抗体又はタンパク質の初回投薬を意図し、ここで、投与される本発明の抗体又はタンパク質の用量は、より高い投薬範囲（すなわち約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、例えば約３０ｍｇ／ｋｇ（静脈内）又は約６００ｍｇ若しくは約３００ｍｇ若しくは約１５０ｍｇ（毎週、隔週、最大４週間））の範囲内にある。「負荷レジメン」は、単回投与又は反復投与、例えば単回又は反復静脈内注入として又は疾患の重症度に応じて、「負荷投薬」レジメンにおいて組み合わせられる反復皮下投与として施すことができる）。次いで、「負荷レジメン」の施与後、１種又は複数の追加の治療有効用量の本発明の抗ＣＤ４０抗体又はタンパク質を対象に投与する。その後の治療有効用量は、例えば、毎週の投薬スケジュールに従って又は２週に１回（隔週）、３週に１回若しくは４週に１回投与することができる。こうした実施形態では、その後の治療有効用量は、一般に、より低い投薬範囲（すなわち約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）又は毎週、隔週若しくは４週おきに皮下に投与される、約１５０ｍｇ、約３００ｍｇ若しくは約６００ｍｇ）の範囲内にある。
【０１４５】
代わりに、いくつかの実施形態では、「負荷レジメン」後、その後の治療有効用量の本発明の抗ＣＤ４０抗体又はタンパク質が、「維持スケジュール」（ここで、本発明の治療有効用量の抗体又はタンパク質は、１か月に１回、６週に１回、２か月に１回、１０週に１回、３か月に１回、１４週に１回、４か月に１回、１８週に１回、５か月に１回、２２週に１回、６か月に１回、７か月に１回、８か月に１回、９か月に１回、１０か月に１回、１１か月に１回又は１２か月に１回投与される）に従って投与される。こうした実施形態では、本発明の抗ＣＤ４０抗体又はタンパク質の治療有効用量は、特に、その後の用量がより高頻度の間隔、例えば毎週、２週に１回〜４週に１回投与される場合、より低い投薬範囲（すなわち約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば１０ｍｇ／ｋｇ）の範囲内にあるか、又は特にその後の用量がより低頻度の間隔で投与される場合、例えばその後の用量が１か月〜１２か月離れて投与される場合、より高い投薬範囲（すなわち１０ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、例えば３０ｍｇ／ｋｇ）の範囲内にある。
【０１４６】
投薬のタイミングは、一般に、「ベースライン」としても公知である、活性な化合物（例えば、ｍＡｂ１）の第１の投与の日から測定される。しかし、異なる医療提供者が異なる命名規則を使用する。
【０１４７】
特に、第０週は、医療提供者によって第１週とみなされる可能性がある一方、第０日は、医療提供者によって第１日とみなされる可能性がある。したがって、異なる医師が、同じ投薬スケジュールを指すのに、例えば３週中／第２１日、３週中／第２２日、４週中／第２１日、４週中／第２２日にある用量が与えられると称する可能性がある。一貫性を保つために、投薬の最初の週は、本明細書では第０週とみなすこととするのに対して、投薬の最初の日は、第１日とみなすこととする。しかし、この命名規則は、単に一貫性を保つために使用され、限定的なものと解釈されるべきではなく、すなわち医師が特定の週を「第１週」と呼ぶか「第２週」と呼ぶかにかかわらず、毎週の投薬は、抗ＣＤ４０抗体（例えば、ｍＡｂ１）の毎週の用量の規定であることが当業者によって理解されるであろう。本明細書に記述する投薬計画の例は、図１及び２において参照される。ある用量が厳密な時点で提供される必要はないことが理解されるであろう。例えば、およそ第２９日の予定である用量は、これが適切な週に提供されるのであれば、例えば第２４日〜第３４日、例えば第３０日に提供される可能性がある。
【０１４８】
本明細書で使用する場合、表現「［指定された用量］の送達を可能にするのに十分な量の抗ＣＤ４０抗体を有する容器」は、所与の容器（例えば、バイアル、ペン（ｐｅｎ）、シリンジ）が、所望される用量を提供するために使用することができる、（例えば、医薬組成物の一部としての）ある体積の抗ＣＤ４０抗体をその中に配置していることを意味するために使用される。一例としては、所望される用量が５００ｍｇである場合、臨床医は、２５０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤を含有する容器からの２ｍｌ、５００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤を含有する容器からの１ｍｌ、１０００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤を含有する容器からの０．５ｍｌなどを使用することができる。こうした各場合において、これらの容器は、所望される５００ｍｇ用量の送達を可能にするのに十分な量の抗ＣＤ４０抗体を有する。
【０１４９】
本明細書で使用する場合、表現「［指定された用量］の［投与経路］送達を可能にするための投薬量で製剤化される」は、所与の医薬組成物が、指定された投与経路（例えば、ｓ．ｃ．又はｉ．ｖ．）を介して、所望される用量の抗ＣＤ４０抗体、例えばｍＡｂ１を提供するために使用できることを意味するために使用される。一例として、所望される皮下用量が５００ｍｇである場合、臨床医は、２５０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤の２ｍｌ、５００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤の１ｍｌ、１０００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤の０．５ｍｌなどを使用することができる。こうした各場合において、これらの抗ＣＤ４０抗体製剤は、抗ＣＤ４０抗体の皮下送達を可能にするのに十分に高い濃度である。皮下送達は、典型的には、約２ｍｌ未満の体積、好ましくは約１ｍｌ以下の体積の送達を必要とする。しかし、例えばパッチ／ポンプ機構を使用して、時間をかけてより高い体積を送達することができる。
【０１５０】
本明細書で開示するのは、患者におけるシェーグレン症候群の治療のための医薬品（ここで、医薬品は、容器を含むように製剤化され、各容器は、単位用量あたり少なくとも約７５ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ又は６００ｍｇの抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１）の送達を可能にするのに十分な量の抗ＣＤ４０抗体を有する）の製造のための抗ＣＤ４０抗体（例えば、ｍＡｂ１）の使用である。
【０１５１】
本明細書で開示するのは、患者におけるシェーグレン症候群の治療のための医薬品（ここで、医薬品は、単位用量あたり７５ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ又は６００ｍｇの抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１）の全身送達（例えば、ｉ．ｖ．又はｓ．ｃ．送達）を可能にするための投薬量で製剤化される）の製造のための抗ＣＤ４０抗体（例えば、ｍＡｂ１）の使用である。
【０１５２】
４．キット
本開示は、（場合に応じて）抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片、例えばｍＡｂ１で、シェーグレン症候群を患う患者を治療するためのキットも包含する。こうしたキットは、（例えば、液体又は凍結乾燥形態の）抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片、例えばｍＡｂ１又は（上に記載した）抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物を含む。さらに、こうしたキットは、抗ＣＤ４０抗体を投与するための手段（例えば、シリンジ及びバイアル、プレフィルドシリンジ、プレフィルドペン、パッチ／ポンプ）及び使用のための説明書を含むことができる。説明書は、具体的な投薬レジメンの一部として、患者に抗ＣＤ４０抗体（例えば、ｍＡｂ１）を提供することを明らかにすることができる。これらのキットは、乾癬を治療するため、例えば封入される抗ＣＤ４０抗体、例えばｍＡｂ１と組み合わせた送達のための（上に記載した）追加の治療薬も含有することができる。
【０１５３】
表現「投与するための手段」は、限定はされないが、プレフィルドシリンジ、バイアル及びシリンジ、ペン型注射器、自己注射器、点滴静注バッグ、ポンプ、パッチ／ポンプなどを含めた、患者に薬物を全身的に投与するためのあらゆる利用可能な道具を示すために使用される。こうしたものを用いて、患者が薬物を自己投与する（すなわち薬物を自分自身のために投与する）ことができるか、又は介護者又は医師が薬物を投与することができる。
【０１５４】
本明細書で開示するのは、ａ）治療有効量の抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片を含む医薬組成物、ｂ）抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片を患者に投与するための手段、及びｃ）抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片を、それを必要とする患者にヒト対象の１キログラムあたり約３〜約３０ｍｇの活性成分の用量（１週おきに１回を３回）、それに続いてヒト対象の１キログラムあたり約３〜約３０ｍｇ、例えば１０ｍｇの活性成分の毎月投薬、又は約１５０ｍｇ、約３００ｍｇ、又は約６００ｍｇ（維持レジメン中、毎週、隔週又は毎月）として皮下に投与することを提供する説明書を含む、シェーグレン症候群を有する患者の治療のためのキットである。
【０１５５】
ある具体的実施形態では、シェーグレン症候群の治療のための医薬品の製造のための、ａ）抗ＣＤ４０抗体、緩衝液、安定剤及び可溶化剤を含む液体医薬組成物、及びｂ）抗ＣＤ４０抗体を、シェーグレン症候群を有する患者に皮下投与するための手段の使用が提供され、ここで、抗ＣＤ４０抗体は、
ｉ）ヒト対象の１キログラムあたり約３〜約３０ｍｇ、例えば１０ｍｇの活性成分の用量で１週おきに１回を３回、患者に静脈内投与され、
ｉｉ）その後、ヒト対象の１キログラムあたり約３〜約３０ｍｇ、例えば１０ｍｇの活性成分の毎月の用量として患者に静脈内投与され、ここで、前記抗ＣＤ４０抗体は、
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｂ）配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｅ）サイレントＦｃ  ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｆ）配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される。
【０１５６】
別の具体的実施形態では、シェーグレン症候群の治療のための医薬品の製造のための、ａ）抗ＣＤ４０抗体、緩衝液、安定剤及び可溶化剤を含む液体医薬組成物、及びｂ）抗ＣＤ４０抗体を、シェーグレン症候群を有する患者に皮下投与するための手段の使用が提供され、ここで、抗ＣＤ４０抗体は、
ｉ）約１５０ｍｇの活性物質、約３００ｍｇの活性物質又は約６００ｍｇの活性物質（毎週又は隔週）の用量で患者に皮下投与され、
ｉｉ）その後、約１５０ｍｇの活性物質、約３００ｍｇの活性物質又は約６００ｍｇの活性物質の毎週、隔週又は毎月（４週おき）の用量として患者に皮下投与され、ここで、前記抗ＣＤ４０抗体は、
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｂ）配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｅ）サイレントＦｃ  ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｆ）配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される。
【０１５７】
実施例２．薬理学
１．第１の薬理学
ｍＡｂ１は、ヒトＣＤ４０と高親和性（０．３ｎＭのＫｄ）で結合する。しかし、これは、Ｆｃγ受容体（ＣＤ１６が含まれる）と結合せず、又は抗体依存性細胞傷害若しくは補体依存性細胞傷害を媒介しない。ｍＡｂ１は、ヒト白血球の組換えＣＤ１５４（ｒＣＤ１５４）誘導性の活性化を阻害するが、単球由来樹状細胞（ＤＣ）によるＰＢＭＣ増殖又はサイトカイン産生を誘発しない。ｍＡｂ１は、非常に類似の親和性でヒト及び非ヒト霊長類ＣＤ４０と結合する。
【０１５８】
ｍＡｂ１は、インビボで一次及び二次Ｔ細胞依存性抗体反応（ＴＤＡＲ）を阻止し、非ヒト霊長類における腎臓同種移植片の生存を延長させることができる（Ｃｏｒｄｏｂａ  ｅｔ  ａｌ  ２０１５）。さらに、ｍＡｂ１は、構築された胚中心（ＧＣ）をインビボで崩壊させることができる。
【０１５９】
ＣＤ４０受容体占有率と機能活性を、ヒト全血培養を使用してインビトロで同時に評価した。機能活性は、ＣＤ２０陽性細胞（Ｂ細胞）上のＣＤ６９（活性化マーカー）のＣＤ１５４誘導性の発現を介して定量化し、ＣＤ４０占有は、蛍光標識したｍＡｂ１を使用して観察した。ｒＣＤ１５４誘導性のＣＤ６９発現の十分な阻害のために、ｍＡｂ１によるほぼ完全なＣＤ４０占有が必要であった。
【０１６０】
２．第２の薬理学
血小板機能及び止血に対するｍＡｂ１の効果を研究し、ｍＡｂ１が血小板凝集反応を誘発せず、むしろ、高濃度で血小板凝集に対するある種の穏やかな抑制効果を呈することが示された。
【０１６１】
実施例３．非臨床の毒性学及び安全性薬理学
ｍＡｂ１を用いる毒性研究は、抗ＣＤ１５４  ｍＡｂを用いる臨床試験において報告された場合に血栓塞栓症の証拠がなかったことを含めて、いずれの有意な臓器毒性も示さなかった（Ｋａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ  ２０００）。１３週のＧＬＰアカゲザル研究（１０、５０及び１５０ｍｇ／ｋｇでの毎週の投薬）では、５／２２匹の動物において、進行中の感染症に起因すると考えられるリンパの細胞充実性の増大が認められ、観察結果は、ｍＡｂ１の薬理学と一致していた。５０ｍｇ／ｋｇの２匹の動物の腎臓及び肺において炎症性病変が認められ、２匹の動物のうちの１匹では眼及び気管における病変も認められた。腎臓及び肺に対するｍＡｂ１の直接的影響は、排除することができないが、日和見病原体の確認を含めた証拠の重みは、これらの所見が、ｍＡｂ１介在性の免疫抑制に続発する可能性が高く、感染症由来のものであることを示唆する。これらの炎症所見を考慮して、１３週の毒性研究についての無毒性量（ＮＯＡＥＬ）を１０ｍｇ／ｋｇに設定した。カニクイザルにおける２６週の慢性毒性研究では、有害なｍＡｂ１関連の所見は発見されなかった。これらのデータに基づいてＮＯＡＥＬを１５０ｍｇ／ｋｇ（２６週）に設定した。平均（全動物）Ｃｍａｘ，ｓｓは、１、５０及び１５０（ＮＯＡＥＬ）ｍｇ／ｋｇ（Ｓ．Ｃ．、毎週）でそれぞれ４４、３２３５及び９６９０μｇ／ｍＬであった。２６週のカニクイザル研究から得られたＮＯＡＥＬは、臨床投薬レジメンを裏付けるために最も適切であると考えられる。
【０１６２】
死後の組織学的及び免疫組織学的評価は、脾臓の皮質Ｂ細胞領域及びリンパ組織におけるＧＣの低下を示した。回復動物は、正常なＴ細胞領域及び増大したＢ細胞領域を伴うリンパ節細胞充実性の増大といういくつかの症例を示し、これは、退薬後のＧＣの再構成と一致していた。回復動物は、ｍＡｂ１の血中濃度が、十分な受容体占有に必要な濃度未満に低下した直後に、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に対する一次ＴＤＡＲを開始することができた。
【０１６３】
Ｔ細胞依存性抗体反応（ＴＤＡＲ）の完全な阻害が原因で、ＫＬＨ、すなわちｍＡｂ１に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成が期待されず、したがってｍＡｂ１の濃度が継続的に薬理学的レベルに維持される場合、ＡＤＡ関連の副作用はなさそうであると考えられる。
【０１６４】
組織交差反応性研究は、ＣＤ４０が、免疫細胞上に存在するだけでなく、様々な組織内にも存在することを示した。これは、主として、内皮及び上皮細胞（ここで、ＣＤ４０は、創傷治癒プロセスに反応することなどのシグナル伝達、ウイルス防御の上方調節及び炎症関連メディエーターに関与する）上でのその発現に起因する。ｍＡｂ１のような拮抗性の抗ＣＤ４０モノクローナル抗体は、炎症プロセスに寄与することが期待されず、これは、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を使用するインビトロ研究によって確認された。
【０１６５】
完全にガイドラインに従う生殖毒性研究は、これまでのところ行われていない。しかし、適切な生殖毒性学種としてのウサギを確認するために、ウサギにおける用量範囲設定、胚−胎児発生（ＥＦＤ）研究が行われている。胚−胎児発生に対する影響は見られず、いずれの群でも治療関連の胎児外部奇形は存在しなかった。
【０１６６】
結論として、この非臨床データは、原発性シェーグレン症候群を患う患者における第１の反復用量研究を支持する。
【０１６７】
実施例４．非臨床の薬物動態及び薬力学
１．薬物動態（ＰＫ）
ＩｇＧ免疫グロブリンに典型的であるが、ｍＡｂ１の排除の主要な経路は、血漿と平衡状態にある部位で起こるタンパク質分解性の異化作用を介する可能性が高い。さらに、ｍＡｂ１−ＣＤ４０複合体の結合及び内在化は、迅速な飽和性のクリアランス経路をもたらした。これは、約１０〜２０μｇ／ｍＬでの屈曲点を示す非線形のｍＡｂ１血清中濃度−時間プロフィールによって示された。クリアランス全体に対するＣＤ４０介在性のクリアランスの寄与は、ＣＤ４０発現、内在化及び受容体代謝回転速度のレベルと共にｍＡｂ１濃度に依存する。ｍＡｂ１＞１０〜２０μｇ／ｍＬの血清中濃度について線形の動態が予想されるのに対し、より低い濃度では非線形動態が明らかになる。
【０１６８】
２．薬力学（ＰＤ）
カニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ研究では、ＰＫプロフィールにおける屈曲点（約１０μｇ／ｍＬ）は、独立したリンパ球標的飽和アッセイにおいて決定される場合のＣＤ４０飽和の低下と関係があった。したがって、この屈曲点は、ＣＤ４０の飽和のレベルについてのマーカー及び標的エンゲージメントを示す証拠とみなされる。
【０１６９】
ＣＤ４０占有率と薬力学的活性との関連を、ＫＬＨで免疫を受けたアカゲザルにおいてさらに実証した。サルは、ＫＬＨで３回免疫を受けた（１回目は、投薬の約３週前であり、２回目は、ｍＡｂ１投与の２週後であり、３回目は、ｍＡｂ１の完全なウォッシュアウト後であった）。第２のＫＬＨワクチン接種時の血漿中濃度＞４０μｇ／ｍＬのｍＡｂ１によるＣＤ４０占有は、リコール抗体反応を完全に予防した。ｍＡｂ１がなくなると、すべての動物は、第３のＫＬＨに対する十分なメモリー抗体反応を開始した。これらの結果は、既存のメモリーＢ細胞の機能が影響を受けなかったことを示唆する。ｍＡｂ１の完全な排除後、破傷風トキソイド（ＴＴｘ）での免疫化は、治療されていない動物と同様の抗ＴＴｘ−ＩｇＧ／ＩｇＭ力価をもたらし、ｍＡｂ１排除後に十分なＴＤＡＲが回復したことを実証した。
【０１７０】
３．免疫原性
免疫抑制薬から予測される通り、アカゲザル（単一用量）における免疫原性データは、ＫＬＨ−ＴＤＡＲ実験からの結果と一致しており、ｍＡｂ１による十分なＣＤ４０占有下ではｍＡｂ１に対する免疫応答が開始されない可能性があることを裏付けた。
【０１７１】
４．治療レジメン
ｍＡｂ１の薬物動態学的及び薬力学的プロフィール並びにｍＡｂ１の前臨床及び臨床研究の結果に基づいて、以下の治療レジメンを使用することができる。
【０１７２】
一実施形態では（図２４Ａ、１を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、２回の投与間に１週間をおいて投与される６００ｍｇ  ｍＡｂ１の２回投与からなる負荷投薬、それに続く２週おきに（Ｑ２Ｗ）投与される６００ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。
【０１７３】
別の実施形態では（図２４Ａ、２を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、６００ｍｇ  ｍＡｂ１の第１の投与及び３００ｍｇ  ｍＡｂ１の第２の投与からなる負荷投薬（ここで、第２の用量は、第１の用量の１週後に投与される）、それに続く２週おきに（Ｑ２Ｗ）投与される６００ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。３００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。
【０１７４】
さらに別の実施形態では（図２４Ａ、３を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、６００ｍｇ  ｍＡｂ１の第１の投与及び１５０ｍｇ  ｍＡｂ１の第２の投与からなる負荷投薬（ここで、第２の用量は、第１の用量の１週後に投与される）、それに続く２週おきに（Ｑ２Ｗ）投与される６００ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。１５０ｍｇ用量は、好ましくは、１ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して、代わりに１／２倍希釈した２ｍＬ薬物製品（７５ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。
【０１７５】
一実施形態では（図２４Ｂ、１を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、２回の投与間に１週間をおいて投与される６００ｍｇ  ｍＡｂ１の２回投与からなる負荷投薬、それに続く２週おきに（Ｑ２Ｗ）投与される３００ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。３００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。
【０１７６】
別の実施形態では（図２４Ｂ、２を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、６００ｍｇ  ｍＡｂ１の第１の投与及び３００ｍｇ  ｍＡｂ１の第２の投与からなる負荷投薬（ここで、第２の用量は、第１の用量の１週後に投与される）、それに続く２週おきに（Ｑ２Ｗ）投与される３００ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。３００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。
【０１７７】
さらに別の実施形態では（図２４Ｂ、３を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、６００ｍｇ  ｍＡｂ１の第１の投与及び１５０ｍｇ  ｍＡｂ１の第２の投与からなる負荷投薬（ここで、第２の用量は、第１の用量の１週後に投与される）、それに続く２週おきに（Ｑ２Ｗ）投与される３００ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。１５０ｍｇ用量は、好ましくは、１ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して、代わりに１／２倍希釈した２ｍＬ薬物製品（７５ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。３００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。
【０１７８】
一実施形態では（図２４Ｃ、１を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、２回の投与間に１週間をおいて投与される６００ｍｇ  ｍＡｂ１の２回投与からなる負荷投薬、それに続く２週おきに（Ｑ２Ｗ）投与される１５０ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。１５０ｍｇ用量は、好ましくは、１ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して、代わりに１／２倍希釈した２ｍＬ薬物製品（７５ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。
【０１７９】
別の実施形態では（図２４Ｃ、２を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、６００ｍｇ  ｍＡｂ１の第１の投与及び３００ｍｇ  ｍＡｂ１の第２の投与からなる負荷投薬（ここで、第２の用量は、第１の用量の１週後に投与される）、それに続く２週おきに（Ｑ２Ｗ）投与される１５０ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。３００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。１５０ｍｇ用量は、好ましくは、１ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して、代わりに１／２倍希釈した２ｍＬ薬物製品（７５ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。
【０１８０】
さらに別の実施形態では（図２４Ｃ、３を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、６００ｍｇ  ｍＡｂ１の第１の投与及び１５０ｍｇ  ｍＡｂ１の第２の投与からなる負荷投薬（ここで、第２の用量は、第１の用量の１週後に投与される）、それに続く２週おきに（Ｑ２Ｗ）投与される１５０ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。１５０ｍｇ用量は、好ましくは、１ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して、代わりに１／２倍希釈した２ｍＬ薬物製品（７５ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。３００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。
【０１８１】
さらなる実施形態では（図２５Ａ、１を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、２回の投与間に１週間をおいて投与される６００ｍｇ  ｍＡｂ１の２回投与からなる負荷投薬、それに続く４週おきに（Ｑ４Ｗ）投与される６００ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。
【０１８２】
別の実施形態では（図２５Ａ、２を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、６００ｍｇ  ｍＡｂ１の第１の投与及び３００ｍｇ  ｍＡｂ１の第２の投与からなる負荷投薬（ここで、第２の用量は、第１の用量の１週後に投与される）、それに続く４週おきに（Ｑ４Ｗ）投与される６００ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。３００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。
【０１８３】
さらに別の実施形態では（図２５Ａ、３を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、６００ｍｇ  ｍＡｂ１の第１の投与及び１５０ｍｇ  ｍＡｂ１の第２の投与からなる負荷投薬（ここで、第２の用量は、第１の用量の１週後に投与される）、それに続く４週おきに（Ｑ４Ｗ）投与される６００ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。１５０ｍｇ用量は、好ましくは、１ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して、代わりに１／２倍希釈した２ｍＬ薬物製品（７５ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。
【０１８４】
さらなる実施形態では（図２５Ｂ、１を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、２回の投与間に１週間をおいて投与される６００ｍｇ  ｍＡｂ１の２回投与からなる負荷投薬、それに続く毎週（Ｑ１Ｗ）投与される３００ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。３００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。
【０１８５】
別の実施形態では（図２５Ｂ、２を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、６００ｍｇ  ｍＡｂ１の第１の投与及び３００ｍｇ  ｍＡｂ１の第２の投与からなる負荷投薬（ここで、第２の用量は、第１の用量の１週後に投与される）、それに続く毎週（Ｑ１Ｗ）投与される３００ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。３００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。
【０１８６】
さらに別の実施形態では（図２５Ｂ、３を参照されたい）、ｍＡｂ１治療レジメンは、６００ｍｇ  ｍＡｂ１の第１の投与及び１５０ｍｇ  ｍＡｂ１の第２の投与からなる負荷投薬（ここで、第２の用量は、第１の用量の１週後に投与される）、それに続く毎週（Ｑ１Ｗ）投与される３００ｍｇ  ｍＡｂ１の投与からなる維持投薬からなる。１５０ｍｇ用量は、好ましくは、１ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して、代わりに１／２倍希釈した２ｍＬ薬物製品（７５ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。３００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の１回の注射を通して皮下投与される。６００ｍｇ用量は、好ましくは、２ｍＬ薬物製品（１５０ｍｇ／ｍＬ）の２回の注射を通して皮下投与される。
【０１８７】
負荷投薬部分と維持投薬部分とに分けられた治療レジメンを有することの利点は、最適な治療効果を可能にすることである。
【０１８８】
本明細書に記載したすべての治療レジメンについて、負荷投薬の目的は、標的飽和（４０μｇ／ｍＬに近い血漿中濃度）、したがって治療効果の開始を達成することであり、維持投薬の目的は、有効性を持続させることである。
【０１８９】
実施例５．ヒト安全性及び忍容性データ
ｍＡｂ１の安全性、忍容性、ＰＫ及びＰＤ活性は、健康な対象及び関節リウマチ（ＲＡ）を患う患者における、ｍＡｂ１の進行中の、無作為化された、二重盲検の、プラセボ対照の単一用量漸増研究において評価されている。合計４８人の対象が登録されている：最大３ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ又はＳ．Ｃ．）の単一用量のｍＡｂ１を受けた３６人の健康な対象及びＲＡを有する１２人の患者（そのうちの６人は、１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）の単一用量のｍＡｂ１を受けた）。全体的に見ると、健康なボランティアにおける最大３ｍｇ／ｋｇ  ｍＡｂ１までの単一用量及びＲＡ患者における単一の１０ｍｇ／ｋｇ  ｍＡｂ１は、安全且つ良好な耐容性を示しており、重篤な有害事象の疑い（ＳＡＥ）は発生していない。３０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）用量の研究は、ＲＡ患者において進行中である。この研究は、依然として進行中であるため、すべての臨床データは、事実上、予備的であり、ＲＡ患者において最大１０ｍｇ／ｋｇの用量で行われた中間解析に基づいている。
【０１９０】
実施例６．ヒト薬物動態及び薬力学（健康なボランティア及び関節リウマチ患者）
単回ＩＶ又はＳＣ投与後の、健康な対象並びに関節リウマチを患う患者では、ＣＦＺ５３３  ＰＫプロフィールは、標的介在性の消失と一致しており、ＣＤ４０受容体占有率がおよそ９０％未満に低下した場合、非線形ＰＫプロフィール及びより急速なクリアランスがもたらされた。
【０１９１】
中国人対象からのＰＫプロフィールにおけるいくらかの個人間の変動性はあるものの、中国人対象におけるＣＦＺ５３３の消失は、概して、非中国人対象と同様であり、３ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）ＣＦＺ５３３後の標的エンゲージメントも同様（約４週）であった。この用量レベルにおいて、血漿中の遊離ＣＦＺ５３３プロフィール、遊離ＣＤ４０及び総ＣＤ４０を測定する末梢Ｂ細胞上のＣＤ４０占有率並びに血漿中の総ＣＤ４０濃度を通して同様のＰＫ／ＰＤプロフィールが示された。
【０１９２】
健康な対象におけるＳＣ投与後、ＣＦＺ５３３は、急速に吸収され、ヒトにおける典型的なＩｇＧ１抗体について予測されるものと一致して分配された。３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）では、ＣＦＺ５３３は、概して、投与後３日（２人の対象について７日）でピークになり、投薬の１週後、血漿中濃度は、ＩＶ後と同じ範囲であった。３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）では、標的エンゲージメントの期間は、やはり約４週であった。
【０１９３】
関節リウマチを患う１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）の患者では、投与前平均と比較される全血Ｂ細胞上の遊離ＣＤ４０及び血漿中の総ｓＣＤ４０プロフィールによって測定された場合、十分なＣＤ４０占有は、概して、８週間維持された。３０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）では、ＰＫ及び血漿中の総ｓＣＤ４０プロフィールは、１６週の標的エンゲージメントの期間と一致していた。
【０１９４】
健康な対象では、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０エンゲージメントは、Ｂ細胞上の遊離ＣＤ４０によって測定される場合のＢ細胞上のＣＤ４０占有率を追跡すると、概して、末梢Ｂ細胞上の総ＣＤ４０の約５０％の減少をもたらした。これは、ＣＦＺ５３３への結合時の膜結合型ＣＤ４０の内在化及び／又はシェディングに起因する可能性が高い。関節リウマチを患う患者では、末梢Ｂ細胞上の総ＣＤ４０の減少は確認されなかった。
【０１９５】
血漿中のＣＦＺ５３３と、全血Ｂ細胞上のＣＤ４０占有率（Ｂ細胞上の遊離ＣＤ４０）との関係が明らかにされ、０．３〜０．４μｇ／ｍＬのＣＦＺ５３３濃度は、全血Ｂ細胞上の十分な（≧９０％と定義される）ＣＤ４０占有と関係があった。
【０１９６】
より一般的には、ＣＦＺ５３３について、非特異的及び特異的な排除経路が特定されている。ＦｃＲｎ受容体によって介在される非特異的な高容量の経路は、一般に、内在性ＩｇＧによって共有される。ＣＦＺ５３３の特異的な標的介在性の消失は、（その後のリソソーム分解を伴って）部分的に内在化され、且つ／又は膜からシェディングされるＣＦＺ５３３−ＣＤ４０複合体の形成をもたらした。標的介在性のプロセスは、ＣＦＺ５３３の飽和性の及び非線形消失をもたらした。ＣＦＺ５３３−ＣＤ４０複合体の形成は、用量／濃度−依存性であり、高濃度のＣＦＺ５３３で飽和が生じた。
【０１９７】
全体的に見ると、ＣＦＺ５３３の消失は、ＣＦＺ５３３のクリアランス全体に対する、特異的な（標的介在性の）及び非特異的な排除経路の相対的寄与に依存する。ＣＦＺ５３３濃度が標的の濃度よりも低い場合、非線形ＰＫ挙動が観察されたのに対し、ＣＤ４０受容体が飽和しているより高い濃度では非特異的経路が優勢であり、ＣＦＺ５３３の排除が線形であった。
【０１９８】
膜結合型受容体を標的にし、且つ標的介在性の消失を示す典型的なＩｇＧ１抗体について予測される通り、ＣＦＺ５３３の曝露の程度（ＡＵＣｌａｓｔ）は、用量の増大よりも大きく（比例を超えて）増大した。したがって、これは、より高い用量でのＣＦＺ５３３の分布容積及びクリアランスの低下と関係があることが予測される。
【０１９９】
１ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）ＣＦＺ５３３（１週、十分なＣＤ４０占有）の１人の対象は、ＣＦＺ５３３に対する特異的な抗体を生じた。これは、ＣＦＺ５３３血漿中濃度が定量化の限界未満になり、且つ組織内でいずれかのＣＤ４０経路関連の影響を遮断するのには確実に低すぎるようになってから６週後に検出された。この対象における抗薬物抗体（ＡＤＡ）の存在は、曝露を損なわず、免疫関連の安全性シグナルと関係がなかった。これは、この研究では２％のＡＤＡ発生率に相当する。
【０２００】
３ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ及びＳＣ）の単一用量のＣＦＺ５３３は、十分な（≧９０％）受容体占有率に相当するＣＦＺ５３３濃度において、第１のＫＬＨ免疫化に対する抗ＫＬＨ反応を一時的に抑制した（約３〜４週間）。抗ＫＬＨ一次反応は、ＣＦＺ５３３濃度としてすべての対象において検出され、それに伴って受容体占有率が低下した。すべての対象は、第２のＫＬＨ免疫化（受容体占有の喪失が予測された後に投与される）に対するリコール反応を開始することができた。
【０２０１】
データは、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０エンゲージメントがヒト全血における組換え型ヒトＣＤ１５４（ｒＣＤ１５４）介在性のＢ細胞活性化を防止することを示唆する。Ｂ細胞上のｒＣＤ１５４誘導性ＣＤ６９発現は、概して、Ｂ細胞上の十分なＣＤ４０占有に相当する期間中に抑制された。ＣＤ４０占有が不完全であった場合、ｒＣＤ１５４の機能活性は回復した。
【０２０２】
免疫表現型検査データに対するＣＦＺ５３３のいかなる影響の証拠も存在しなかった。
【０２０３】
実施例７．原発性シェーグレン症候群を有する患者におけるＣＦＺ５３３の安全性、忍容性、薬物動態及び予備的な有効性を評価するための、多施設の、無作為化された、二重盲検の、プラセボ対照の並行群研究
シェーグレン症候群の治療における、ＡＤＣＣ活性が抑制されたヒト、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体を利用する適合性を評価するために、本明細書ではｍＡｂ１とも呼ばれる抗体ＣＦＺ５３３を使用して、臨床研究を設計及び実行した。
【０２０４】
シェーグレン症候群（ＳＳ）は、原発性である可能性があるか、又は多くの場合に全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）又は関節リウマチ（ＲＡ）などの他の自己免疫疾患を伴う。この場合、ＳＳは、続発性と呼ばれる。原発性の疾患（例えば、ＲＡ又はＳＬＥ）及びその併用治療が、原発性ＳＳを評価することを著しく邪魔するであろうことから、続発性シェーグレン症候群を有する患者は、ＣＦＺ５３３臨床試験から除外されている。例えば、ＲＡにおける関節合併症／損傷は、ＥＳＳＤＡＩの関節痛領域を解釈不可能にし、抗ＴＮＦ治療は、ＣＦＺ５３３の使用と適合しないであろう。しかし、続発性ＳＳの病因は、ＣＤ４０−ＣＤ１５４経路の異常な活性化によって媒介される胚中心形成及び自己抗体形成など、ｐＳＳにおいて見られるのと同じ病態生物学的事象によって引き起こされるため、ＣＦＺ５３３での治療は、続発性ＳＳに有益であると期待され、熱心な臨床試験の正当な根拠となる。
【０２０５】
原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）は、外分泌腺における異所性胚中心の形成及び分泌腺機能障害を特徴とする、全身性の進行性の自己免疫疾患である。一部の患者は、腺外の症状も発症する。ＣＦＺ５３３は、ＣＤ４０、すなわちｐＳＳ病因に関与する胚中心反応及び他の免疫介在性の機能に必須の共刺激経路受容体を強力且つ選択的に遮断する新規のモノクローナル抗体である。ｐＳＳを有する患者におけるＣＦＺ５３３の安全性、忍容性及び有効性を評価するために、無作為化された、二重盲検の、プラセボ対照の、多施設の、部分的クロスオーバー第ＩＩａ相概念実証（ＰｏＣ）研究を実行した。
【０２０６】
いくつかの系統のエビデンスは、ＣＤ４０−ＣＤ１５４経路によって駆動されるか又はＣＤ４０−ＣＤ１５４経路と密接に関連する疾患病態がｐＳＳに不可欠であることを示唆している。ｐＳＳの特徴を診断する特性には、唾液腺における胚中心様構造の形成（患者の１８〜５９％に観察される）及び自己抗体などのＢ細胞反応性亢進が含まれる（Ｖｏｓｓｅｎｋａｅｍｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２０１２）。ｐＳＳ病変では、活性化Ｔ細胞が優勢であり、Ｂ細胞活性亢進、Ｉｇ分泌を誘発し、且つ腺の破壊を促進する能力がある（Ｍａｎｇａｎｅｌｌｉ  ａｎｄ  Ｆｉｅｔｔａ  ２００３）。さらに、これらの患者の唾液腺におけるＴ及びＢ細胞浸潤は、ＣＤ４０及びＣＤ１５４の上方調節を示す。ＣＤ４０−ＣＤ１５４介在性の組織炎症もｐＳＳ病因の一因となる可能性がある。
【０２０７】
さらに、ＣＤ４０−ＣＤ１５４介在性の組織炎症もＰｓｓ病因の一因となる可能性がある。ｐＳＳ患者から得られる上皮細胞株は、恒常的に上方調節される表面ＣＤ４０を有する（Ｄｉｍｉｔｒｉｏｕ  ｅｔ  ａｌ  ２００２）。ｐＳＳ血清では、ｓＣＤ１５４濃度の上昇と共に、血小板由来及びまた白血球由来の微小粒子のレベルの増大が報告されている（Ｓｅｌｌａｍ  ｅｔ  ａｌ  ２００９）。
【０２０８】
１．ＳＳにおける概念実証研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３の設計
これは、次のコホート１及び２におけるＣＦＺ５３３の反復投与の安全性、忍容性、薬物動態及び予備的な臨床的有効性を評価するための、二重盲検の、それに続く非盲検の、無作為化された、プラセボ対照の、並行群の、非確証的な研究である：
・コホート１：二重盲検のプラセボ対照様式、それに続く非盲検の治療における、ｐＳＳを有する患者において皮下投与される３ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３；
・コホート２：二重盲検のプラセボ対照様式、それに続く非盲検の治療における、ｐＳＳを有する患者において静脈内注入によって投与される１０ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３。
【０２０９】
これらのコホートに、非盲検の、無作為化された、並行群の、非確証的な部分のコホート３が続く：
・コホート３：治療群１では、ＣＦＺ５３３は、４回の６００ｍｇ  ｓ．ｃ．（毎週）（負荷レジメン）、それに続く９回の３００ｍｇ  ｓ．ｃ．（毎週）（研究第２９日に開始する維持レジメン）で与えられた。
【０２１０】
治療群２では、負荷レジメンは、１０ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３の単回ｉ．ｖ．投与（研究第１日に）、それに続く１２回の３００ｍｇ  ｓ．ｃ．（毎週）（研究第８日に開始する維持レジメン）であった。
【０２１１】
コホート１及び２では、無作為化は、経口副腎皮質ステロイドのベースライン摂取（あり／なし）によって層別化されることになる。コホート３には層別化が存在しないことになる。
【０２１２】
この研究は、コホート１及びコホート２について３つの期間を含む：
１．プラセボ対照期間（第１日、第１週から第８５日、第１３週の投与前評価の完了まで）（その間、ｐＳＳを治療するのに必要である標準治療の療法（例えば、低用量副腎皮質ステロイド）に加えて、ＣＦＺ５３３又はプラセボの４回の投与が施された）；
２．非盲検期間（第８５日、第１３週の投薬から第１６９日、第２５週の評価の完了まで）（すべての患者が非盲検のＣＦＺ５３３治療の４回の投与を受けた場合）、及び
３．追跡調査期間（第２５〜３２週）（患者が研究薬物を受けずに追跡される場合）。
【０２１３】
図１は、コホート１及び２の研究デザインの概略図である。
【０２１４】
コホート３は、２つの期間を含む：
１．非盲検治療期間（第１日、第１週の投薬から第８５日、第１３週の最終投与及び評価の完了まで）、
２．追跡調査期間（最終投与の完了後の第１３週から第１４１日、第２１週まで）（患者が研究薬物を受けずに８週間追跡される場合）。
【０２１５】
非盲検治療期間では、治療群１の投薬は、ＣＦＺ５３３  ６００ｍｇ（ｓ．ｃ．）（週１回、４週間）で開始し；治療群２では、投薬は、第１日のＣＦＺ５３３  １０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）で開始する。
【０２１６】
その後、ＣＦＺ５３３  ３００ｍｇ（ｓ．ｃ．）（それぞれ週１回、４週間（治療群１）及び９週間（治療群２））で投薬を継続する。
【０２１７】
図２は、コホート３の研究デザインの概略図である。
【０２１８】
コホート１
このコホートは、およそ１２人の患者を無作為に割り付けた。各患者について、第−２８日から第−２日までのスクリーニング期間が存在していた。スクリーニング時に適格性基準を満たした患者は、ベースライン評価に入った。ベースライン評価は、第１日での治療前の、第−１日での評価の完了を可能にするために第−６日から開始した。
【０２１９】
すべてのベースライン安全性評価結果は、投薬の前に利用可能であり、且つ適格性基準を満たしていた。適格の患者は、第１日（第１週）のプラセボ対照期間に入り、２：１の比で無作為化されて、ＣＦＺ５３３又はプラセボでの治療を受けた。第１日に３ｍｇ／ｋｇの用量のＣＦＺ５３３又はプラセボを皮下注射（ｓ．ｃ．）によって投与し、それに続いて最大６時間、ＰＫ、薬力学（ＰＤ）及び安全性の評価を行った。患者は、すべての評価の完了後、同日に、安全上の懸念が存在しないという条件で施設から解放された。
【０２２０】
患者は、第１５日（第３週）、第２９日（第５週）及び第５７日（第９週）にそれぞれ研究拠点に戻って、ＣＦＺ５３３又はプラセボ（第１日に受けたのと同じ）の３回のｓ．ｃ．投与を受けた。これらの来診では、安全性及び有効性評価を実行し、ＰＫ及びバイオマーカー試料を収集した。
【０２２１】
第８５日（第１３週）に、プラセボ対照期間の最後の評価である安全性及び他の評価後、すべての患者は、非盲検期間に入り、非盲検の３ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３のｓ．ｃ．投与を受けた。これに続いて、第９９日（第１５週）、第１１３日（第１７週）及び第１４１日（第２１週）にそれぞれＣＦＺ５３３（各３ｍｇ／ｋｇ）の３回の非盲検のｓ．ｃ．投与を受けた。これらの来診では、安全性及び有効性評価を実行し、ＰＫ及びバイオマーカー試料を収集した。対照期間の盲検化は、研究者と患者に対して研究終了まで維持した。
【０２２２】
第１６９日（第２５週）に、患者は、非盲検期間の最後の評価を受け、研究薬物が投与されない追跡調査期間に入った。患者は、この期間中、安全性モニタリングのために研究拠点に戻った。
【０２２３】
第２２５日（第３３週）に研究終了の来診（これには、研究完了時評価、それに続く研究からの解放が含まれる）を行う。
【０２２４】
コホート２
およそ１２人の対象がコホート１に登録されている場合、コホート２は、およそ３０人の患者を、およそ２４人の患者が１２週の治療を完了するように無作為に割り付ける登録を開始した。コホート２の研究デザインは、１０ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３の反復静脈内投薬、それに続くＰＫ、薬力学（ＰＤ）及び安全性の評価（注入終了後最大２時間）を含む投薬レジメンを除いて、コホート１と同一であった。さらに、投薬来診ごとに体重を測定して、対象の実際の重量に従って薬物投薬量を算出した（コホート１では、対象のベースライン重量を、研究全体を通して使用した）。
【０２２５】
コホート３
コホート３は、およそ２４人の患者を、およそ２０人の患者（治療群１に１０人、治療群２に１０人）が１２週の治療を完了するように無作為に割り付ける。
【０２２６】
患者は、治療が研究中に一定レベルに維持されるという条件でその患者の標準治療の療法を続けることができる。
【０２２７】
安全性評価には、身体検査、ＥＣＧ、バイタルサイン、標準の臨床検査評価（血液学、血液化学、尿分析、妊娠検査、血液凝固）、有害事象及び重篤有害事象モニタリングが含まれる。
【０２２８】
すべてのｓ．ｃ．注射及びｉ．ｖ．注入は、監視設備内で行われる。患者は、コホート１ではｓ．ｃ．注射後の少なくとも６時間、コホート２ではｉ．ｖ．注入の完了後の２時間に綿密に観察する。コホート３では、患者は、ｉ．ｖ．注入の完了後の少なくとも１時間及びｓ．ｃ．注射後の３０分間又はバイタルサイン及び注射反応の発生を含めた有害事象の徴候又は症状に関する研究者の裁量でより長時間観察する。薬物動態学的、薬力学的及び安全性評価は、コホート１ではｓ．ｃ．注射後の最大６時間、コホート２ではｉ．ｖ．注入の完了後の２時間又はコホート３ではｉ．ｖ．注入の完了後の１時間及びｓ．ｃ．注射後の３０分にわたって行った。対象は、これらの評価後、安全性データを十分に見直した後の研究者の裁量で開放された。
【０２２９】
ＰＫ評価には、血漿中の遊離ＣＦＺ５３３の測定が含まれる。
【０２３０】
併用ＰＤマーカー：ＰＫ／ＰＤモデル化を可能にするために、末梢血Ｂ細胞上のＣＤ４０飽和（Ｂ細胞上の遊離ＣＤ４０及び総ＣＤ４０、コホート１及び２のみ）、総可溶型ＣＤ４０及び総可溶型ＣＤ１５４（任意選択、コホート１及び２のみ）を患者の血漿において測定する。さらに、自己抗体及びいくつかの探索的バイオマーカーを調べる。免疫原性は、抗ＣＦＺ５３３抗体の準定量的分析を介して評価する。
【０２３１】
コホート１及びコホート２では、ベースラインで且つプラセボ対照期間の最後（第８５日、第１３週）に任意選択の口唇生検を採取する。
【０２３２】
コホート１における１２週の治療期間を完了したおよそ１２人の患者を含める中間解析（初回ＩＡ）を実施する。これらの患者について、主要な安全性及び忍容性データ及び予備的な有効性を評価する。
【０２３３】
現在の臨床研究、試験依頼者の臨床開発プロジェクトに関して一般に又は何らかの安全性への懸念の場合に行っている決定を裏付けるために、さらなる安全性及び有効性中間解析を実行する。
【０２３４】
２．研究デザインの理論的根拠
コホート１及び２
２つの異なる用量（３ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．及び１０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｖ．）のＣＦＺ５３３を２つの別のコホートにおいて評価した。
【０２３５】
ｐＳＳ患者におけるこの第１の探索的研究における、安全性及び臨床有効性データを報告する際の潜在的な偏りをなくすために、無作為化された、プラセボ対照の、二重盲検の手法を使用した。
【０２３６】
プラセボへの曝露を最小限にし、ＣＦＺ５３３に関するより多くのデータを集めるために、患者をＣＦＺ５３３又はプラセボに２：１の比で無作為化した。活性成分群とプラセボ群との間の経口副腎皮質ステロイドのベースライン摂取の不均衡を制限するために、層別化される無作為化を行った。
【０２３７】
非盲検期間は、ＣＦＺ５３３を、プラセボ対照期間にプラセボを投与した患者を含めたすべての患者に投与する。非盲検期間は、これらの患者にとっての治療利益の可能性を提供し、ｐＳＳ患者におけるＣＦＺ５３３についてのさらなる安全性及び有効性データを収集する。非盲検期間後、患者は、追跡調査期間（安全性を観察し且つ奏効期間を探索するのに十分な時間を設けるために、８週（ＣＦＺ５３３での最終投薬の１２週後）という期間が選択される）に入った。
【０２３８】
安全性に加えて、欧州リウマチ学会（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｌｅａｇｕｅ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ）（ＥＵＬＡＲ）シェーグレン症候群疾患活動性指標（ＥＳＳＤＡＩ）によって推定される有効性を研究の主要評価項目として選択した。ＥＳＳＤＡＩ測定基準は、当業者に周知である（例えば、Ｓｅｒｏｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１１ａを参照されたい）。ＥＳＳＤＡＩは、リツキシマブに対する無作為化された対照試験の遡及的分析において反応性であることが示されており、リツキシマブ治療の有効性を評価するための高感度なツールであると示唆される（Ｍｏｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２０１４）。著者らは、第１２週及び第２４週でのプラセボ群と比較したリツキシマブ群における有意に低いＥＳＳＤＡＩを報告し、これは、この小さい研究における疾患活動性を低下させることにおけるいくらかの有効性を示している。
【０２３９】
同様に、この研究では、ＥＵＬＡＲシェーグレン症候群患者報告指標（ＥＳＳＰＲＩ）を使用する（例えば、Ｓｅｒｏｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１１ｂを参照されたい）。
【０２４０】
コホート３
このコホートの主要目的により、プラセボ対照は、必要とされず、非盲検の治療が正当化される。コホート３では、２つの負荷レジメン（治療群１における反復ｓ．ｃ．投与又は治療群２における単回ｉ．ｖ．投与）、それに続く維持レジメン（両群反復ｓ．ｃ．投与）が１２週（第１日〜第８５日）に設定されるかどうかを評価して、コホート２（１０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｖ．レジメン）において観察されるトラフ濃度と同様のレベルの血漿中のＣＦＺ５３３濃度についての定常状態条件を確立するために２つの治療群が実施される。
【０２４１】
追跡調査期間は、
（ｉ）標的が十分に飽和される（ゆっくりした排除）条件下及び不完全なＣＤ４０飽和（急速な排除）下でのＣＦＺ５３３の排除を追跡するために、且つ
（ｉｉ）１２週の治療後の、ＣＦＺ５３３に対する標的介在性の排除経路の能力を特徴付けるために
８週（第８５日〜第１４１日）に設定する。
【０２４２】
３．用量／レジメン、治療の期間の理論的根拠
ヒト原発性シェーグレン症候群における、抗ＣＤ４０遮断剤を用いる以前の実験は、存在しない。しかし、エビデンスは、罹患した個人の唾液腺におけるリンパ系凝集体及び胚中心様構造の存在、疾患特異的な自己抗体並びにＣＤ４０及びそのリガンドの腺での発現を含めた、疾患の病態生理学におけるＣＤ４０依存性の免疫過程の関与を指し示す。前臨床及びヒト初回投与研究結果は、Ｔ細胞依存性のＢ細胞機能の十分な抑制並びに実質部のＣＤ４０関連機能の遮断のために完全なＣＤ４０受容体占有が必要とされ、また最大の治療的利益を達成するために必要とされるであろうことを示唆している。例えば、２６週の毒性研究の結果は、１ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３（毎週）で末梢Ｂ細胞上の十分なＣＤ４０占有が測定されたが、何匹かの動物（３匹／６匹）では、胚中心の部分的減少として現れる不完全な薬理学的効果が観察されたことを示した。
【０２４３】
これは、ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用及び組織におけるその後のシグナル伝達事象の完全な抑制のために、１ｍｇ／ｋｇ（毎週）よりも大きい用量のＣＦＺ５３３が必要となることを示した。
【０２４４】
コホート１（皮下、３ｍｇ／ｋｇ）
健康なボランティアにおいて試験されているＣＦＺ５３３の最大の皮下用量は、現在、３ｍｇ／ｋｇであり、健康なボランティアに対する単回投与として安全であり且つ良好な耐容性を示すことが証明されている。１及び３ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）の用量は、末梢血Ｂ細胞上のそれぞれ１及び４週の十分な（≧９０％と定義される）ＣＤ４０占有を伴っていた。さらに、３ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３（ｉ．ｖ．）を受けている健康なボランティアからのＰＢＭＣを使用する、エクスビボでのＣＤ１５４誘導性のＣＤ６９発現は、およそ４週間抑制された。ＣＤ４０占有率は、３ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３の単回皮下投与後、４週時点で９０％（平均ｎ＝６；範囲７３〜９７％）であった。
【０２４５】
まとめると、本コホート１のために３ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）が選択される。なぜなら、この投薬は、健康なボランティアにおいて安全であり且つ良好な耐容性を示しており、且つ所望される薬理学的及び薬力学的効果をもたらす可能性があるからである。
【０２４６】
開始時の２週の投薬期間は、皮下投与後の組織における末梢Ｂ細胞上の十分なＣＤ４０飽和並びにＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用の完全な抑制を確実にするように意図されている。１２週の治療期間の最後までに、主要評価項目並びに他の主要な有効性及びバイオマーカー読み取りの臨床的に意味のある変化が起こることが期待された。単一サイクルのリツキシマブを用いる、発表された結果に基づくと、早ければ第５週にｐＳＳ患者における有意な臨床反応を検出することができる（最大の効果は、第１２週に示される）（Ｍｅｉｊｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２０１０）。追加の１２週の非盲検の延長期間中、ＣＦＺ５３３の、より長期の有効性及び安全性に関するさらなるデータを収集した。
【０２４７】
コホート２（静脈内、１０ｍｇ／ｋｇ）
より高いＣＤ４０発現が起こり得る条件における標的組織における完全な且つ持続するＣＤ４０経路遮断を確実にするために、１０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｖ．レジメンを導入して、治療期間全体を通したより高い血漿曝露を提供した。このレジメンは、ヒトにおける安全性データ、前臨床毒性学的研究から得られる適切な安全率、非ヒト霊長類における組織における関連するＰＤ効果及びＡＳＫＰ１２４０からの最近発表されたデータによって裏付けられる。
【０２４８】
ヒトにおいて確認される安全性及び忍容性：単一用量漸増（０．０３〜３０ｍｇ／ｋｇ）のＣＦＺ５３３（ｉ．ｖ．）及び３ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）を試験する第１相研究（ＣＣＦＺ５３３Ｘ２１０１）が完了し、試験された最大用量（１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．））まで、安全上の大きい懸念は示されなかった。今までの臨床経験に基づくと、１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）の投薬レジメンは、安全であり且つｐＳＳ患者において容認できると予測される。
【０２４９】
前臨床毒性学的研究から得られる適切な安全域：これまでのＧＬＰ毒性研究は、（ｉ）アカゲザルにおける１０、５０及び１５０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．及びｉ．ｖ．）での１３週間の毎週のｓ．ｃ．投薬、並びに（ｉｉ）カニクイザルにおける１、５０及び１５０ｍｇ／ｋｇでの２６週間の毎週のｓ．ｃ．投薬でＣＦＺ５３３を試験している。これらの研究は、１２週又は２４週間の提案された静脈内レジメンでのＣＦＺ５３３の使用を妨げることになるいかなる主要所見も示さなかった。カニクイザルにおける２６週の毒性研究では、定常状態で、１５０ｍｇ／ｋｇ（ＮＯＡＥＬ）での毎週の投薬後、８３００μｇ／ｍＬ（Ｃａｖ，ｓｓ）の平均濃度が得られた。１か月の期間にわたる相当する全身曝露（ＡＵＣ、定常状態条件）は、２３２４００日＊μｇ／ｍＬであろう。これは、最初の１か月にわたる予測される全身的血漿曝露よりも約５７倍高い（ＡＵＣ０−２８日；図３）。２６週の毒性研究では、ＮＯＡＥＬで、Ｃｍａｘ，ｓｓは、９４９５μｇ／ｍＬであった。これは、ｐＳＳ患者における提案された静脈内レジメンについての予測されるＣｍａｘ（約４００μｇ／ｍＬ）よりも２４倍高い（図３）。
【０２５０】
図３は、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内に与えられるＣＦＺ５３３（コホート２）についての予測される平均血漿中濃度−時間プロフィールを示す。研究第１日、１５日、２９日及び５７日（プラセボ対照期間）並びに研究第８５日、９９日、１１３日及び１４１日（非盲検期間）に与えられる１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）ＣＦＺ５３３についての平均ＰＫプロフィールをシミュレートした。健康な対象におけるＦＩＨ研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２１０１からのコホート５（３ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．））ＰＫデータの予備的モデルに基づく集団分析から得られたパラメータを使用して、ミカエリスメンテンモデルを適用した。抗ＣＤ４０遮断剤を用いた以前の経験は、ヒトｐＳＳに存在せず、また健康な対象とｐＳＳ患者との間のＣＤ４０（発現、ターンオーバー）の生物学のいかなる潜在的な違いも不明であった。提案されたｉ．ｖ．レジメンは、治療期間全体を通して、ｐＳＳ患者における標的組織におけるＣＤ４０発現の増大について予測するための、４０μｇ／ｍＬを超えて維持される血漿中濃度を提供することが期待された。４０μｇ／ｍＬでの水平な点線は、標的組織における十分なＣＤ４０占有及び経路遮断が期待される濃度を超える血漿中濃度を表している（カニクイザル−１ｍｇ／ｋｇ用量群における２６週の毒性研究からのＰＤデータに基づく）。最初の１か月（より高い投薬頻度）中の予測される全身曝露は、４０８７日＊μｇ／ｍＬであり（カニクイザル−毎週の１５０ｍｇ／ｋｇのＮＯＡＥＬにおける２６週の毒性研究における定常状態での１か月にわたって観察された全身的血漿曝露よりも５７倍低い）、予測されるＣｍａｘは、約４００μｇ／ｍＬである。
【０２５１】
非ヒト霊長類における組織における関連するＰＤ効果：２６週の毒性学的研究（１ｍｇ／ｋｇ用量群）では、平均の定常状態血漿中濃度が≧３８μｇ／ｍＬである動物は、リンパ節の皮質Ｂ細胞領域における胚中心の完全な抑制を有していた。１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）レジメンは、治療期間全体（プラセボ対照及び非盲検、図３を参照されたい）を通して、ｐＳＳ患者における、より高いＣＤ４０発現について予測するための、４０μｇ／ｍＬを超えて維持される血漿中濃度並びに標的飽和の喪失に起因する標的組織における不完全なＰＤ効果を提供することが期待された。
【０２５２】
ＡＳＫＰ１２４０、ＣＤ４０を遮断するモノクローナル抗体からのデータ：実質臓器移植における、Ａｓｔｅｌｌａｓの抗ＣＤ４０抗体ＡＳＫＰ１２４０からの開示されたＰＫ／有効性データの最近の分析（Ｈａｒｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ  ２０１５）は、組織における効率的な標的介在性の抗体クリアランスが、標的組織における標的発現の有意な増大の結果として、ＣＤ４０遮断の喪失及び有効性の喪失の可能性をもたらす可能性があることを実証した。提案された静脈内レジメンは、治療期間全体を通して、より高いＣＤ４０発現が起こり得る条件において、ＣＤ４０排除経路を飽和させることを目的としている。社内のデータは、原発性シェーグレン症候群を有する患者から得られた組織におけるＣＤ４０の過剰発現を示唆し（社内資料）、元の皮下レジメンは、これらの条件において、標的組織における完全な且つ持続するＣＤ４０経路遮断を提供しない可能性がある。
【０２５３】
コホート３
コホート１及び２の結果に基づくと、ｐＳＳを有する患者における効率的な投薬レジメンは、早期の十分なＣＤ４０飽和及び最小限の標的介在性の消失（ＴＭＤＤ）を提供する負荷レジメン（ｉ．ｖ．又はｓ．ｃ．）、それに続くｓ．ｃ．維持レジメンを必要とすると考えられた。
【０２５４】
コホート３では、負荷レジメン（ｉ．ｖ．又はｓ．ｃ．）、それに続くｓ．ｃ．維持レジメンは、コホート２において試験されたｉ．ｖ．レジメンと同様の定常状態血漿中濃度を送達することが可能であり、且つｓ．ｃ．経路を介するＣＦＺ５３３の標的介在性の消失を克服する能力を有していたかどうかを評価するために、治療群１及び治療群２における用量／レジメンを設定する。
【０２５５】
治療群１：ＣＦＺ５３３は、４回の毎週の６００ｍｇ  ｓ．ｃ．（１ｍＬの４回の注射）（負荷）、それに続く９回の毎週の３００ｍｇ  ｓ．ｃ．（１ｍＬの２回の注射）（維持；研究第２９日に開始する）で与えられる。負荷段階中、ＣＤ４０プールの飽和の割合及びｓ．ｃ．投与のバイオアベイラビリティは、不明である。しかし、最初の１か月にわたる（第２９日までの）２７００ｍｇの累積用量は、ＴＭＤＤを克服する能力を有していたことが予測される（累積用量は、コホート１及びコホート２では第２９日にそれぞれ６３０及び２１００ｍｇであった）。６００ｍｇの毎週の負荷レジメン、それに続く３００ｍｇの毎週の維持レジメンは、第８５日までに定常状態条件を与えることが予測される。なぜなら、標的飽和が達成される場合、皮下投与のバイオアベイラビリティは、健康なボランティアに関して≧７５％であると予測されるからである。コホート１及びコホート２におけるそれぞれ１０５０及び３５００ｍｇと比較して、治療群１では、第８５日（最終投与）までの累積用量は、５１００ｍｇであろう）。
【０２５６】
治療群２：負荷レジメンは、１０ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３の単回ｉ．ｖ．投与（研究第１日に）、それに続く１２回の毎週の３００ｍｇ  ｓ．ｃ．（研究第８日に開始する維持レジメン）からなる。コホート３の治療群２では、コホート２  ｉ．ｖ．において既に実証された通り、１０ｍｇ／ｋｇの単回ｉ．ｖ．投与（第１日）は、研究第８日（維持レジメンの開始）までの血漿中濃度≧１００μｇ／ｍＬ及び十分なＣＤ４０飽和状態を提供することが予測される。治療群２では、有意な標的介在性の消失及び初回通過効果（ｓ．ｃ．経路）がない場合の毎週ｓ．ｃ．維持レジメンを評価する。
【０２５７】
薬物製品の各バイアルは、１５０ｍｇ／ｍＬ  ＣＦＺ５３３を含んで提供されるため、コホート３では、すべての皮下投与（３００ｍｇ又は６００ｍｇ、毎週）は、投与を容易にし、且つ利便性を向上させるために（体重に対して調整しない）一定の用量として与えられる。
【０２５８】
コホート１（３ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．レジメン）では、中間解析時、平均体重は、７０．７ｋｇ（５０．０〜９１．１ｋｇの範囲）であり、これは、２１２．２ｍｇの一定の用量（１５０〜２７３．３ｍｇの範囲）に相当する。コホート２（１０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｖ．レジメン）では、平均体重は、７２．６ｋｇ（５０．０〜１０７．２ｋｇの範囲）であり、これは、７２６ｍｇの一定の用量（５００〜１０７２ｍｇの範囲）に相当する。コホート３では、各場合の３００ｍｇ又は６００ｍｇの皮下用量は、コホート１及び２で既に適用された用量の範囲内であり、安全性及び忍容性に影響を与える可能性が低い。体重がＣＦＺ５３３の消失に影響を与える様式は、十分に特徴付けられていないが、いずれの群についても、治療期間全体を通して、平均最大血漿中濃度（Ｃｍａｘ）が、（すべての皮下投与が安全性の理由で１００％生体利用可能であり、且つｐＳＳ患者の平均体重が７０ｋｇであると仮定すると）およそ３００μｇ／ｍＬ未満となることが期待され、且つコホート２において認められた平均Ｃｍａｘ（約３８６μｇ／ｍＬ、コホート２のプラセボ対照期間１の第８５日の第５投与）を超えることが期待されない。これは、ＮＯＡＥＬ（１５０ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．、毎週）でのカニクイザルにおける２６週の毒性研究におけるＣｍａｘ値（９４９５μｇ／ｍＬの平均）よりも３２倍低いことになる。
【０２５９】
ＰＫ／ＰＤ及び免疫原性評価項目は、治療及び追跡調査期間中に評価されている。表２は、この研究についてのプロトコル骨子を提供する。
【０２６０】
【表８】
2021501748.tif 000010
【０２６１】
【表９】
2021501748.tif 000011
【０２６２】
【表１０】
2021501748.tif 000012
【０２６３】
【表１１】
2021501748.tif 000013
【０２６４】
【表１２】
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【０２６５】
【表１３】
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【０２６６】
４．結果
コホート１及び２
４４人の患者が登録された：８人の患者は、コホート１における３ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）のＣＦＺ５３３及びプラセボ（４人）を受け、２１人は、コホート２における１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）のＣＦＺ５３３及びプラセボ（１１人）を受けた。ＰＫ／ＰＤは、ヒト初回投与試験からのデータに基づくと、ＣＦＺ５３３  １０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）コホートにおいて予測された通りであったが、ＣＦＺ５３３曝露は、３ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）コホートにおいて予測されたよりも低いように見え、ＣＤ４０発現が亢進されている可能性が高い状態における効率的な標的介在性の消失（初回通過効果）に起因する可能性が高い。全体的に見ると、ＣＦＺ５３３は、安全且つ良好な耐容性を示し、大多数のＡＥが軽度又は中等度であった。３ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）コホートにおいて、１件の重篤なＡＥ（細菌性結膜炎）が存在したが、これは、研究薬物と関連しなかった。コホート１では、ＥＳＳＤＡＩが、プラセボ群と３ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）群の両方において、およそ１２という平均ベースラインスコアからおよそ２ポイント向上することが認められ、したがって治療差のエビデンスがなかった（ΔＥＳＳＤＡＩ＝０．６８、９５％  ＣＩ＝−４．７１〜６．４６）。しかし、コホート２では、およそ１１人の平均ベースラインからのＥＳＳＤＡＩの改善が、プラセボ群における１．２７と比較して１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）群において６．３５であることが認められ、ΔＥＳＳＤＡＩ＝５．２（９５％  ＣＩ＝１．０２〜１０．５８）という群間のモデル化された差は、ＣＦＺ５３３（ｉ．ｖ．）治療を強く支持していた。１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）ＣＦＺ５３３群では、ＥＳＳＰＲＩ、ＭＦＩ、医師総合評価（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｇｌｏｂａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）、及び患者総合評価（Ｐａｔｉｅｎｔ’ｓ  Ｇｌｏｂａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）、及び胚中心関連の血清バイオマーカーＣＸＣＬ１３の減少などの他の尺度の改善も認められた。
【０２６７】
図４は、ＣＦＺ５３３−１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）の薬物動態を示すグラフである。ＩＶレジメンは、標的組織における十分な標的飽和及び完全なＣＤ４０経路遮断を提供した。血漿中濃度＞４０μｇ／ｍＬ（グラフ内の点線）で組織中のＣＤ４０経路遮断が予測される（ＧＣ発達及びＴ依存性抗原反応の抑制）。１２／２４週の治療後、何人かのｐＳＳ患者では、ＣＤ４０発現が下方調節されるという徴候が現れた。
【０２６８】
図５は、ベースライン補正したＥＳＳＤＡＩ合計スコア−１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）を示す。上の線は、プラセボ（ｉｖ）であり、下の線は、ＣＦＺ５３３  １０ｍｇ／ｋｇ（ｉｖ）である。この図から分かる通り、プラセボに対するＣＦＺ５３３群の明確な改善（第１２週までに平均Δ（ｄｅｌｔａ）＝５．６）が存在していた。
【０２６９】
図６は、ベースライン補正したＣＸＣＬ１３−１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）を示す。上の線は、プラセボ（ｉｖ）であり、下の線は、ＣＦＺ５３３  １０ｍｇ／ｋｇ（ｉｖ）である。
【０２７０】
図７は、第１３週での（１２週の治療−期間１後の）プラセボに対する１０ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３についての様々なエンドポイントにおける治療群の差を示す。
【０２７１】
ＥＳＳＤＡＩ及び医師総合評価（ＶＡＳ）の明確な改善が存在することを結論付けることができる。また、大抵の副次的評価項目の傾向は、ＣＦＺ５３３が優勢である。ＥＳＳＤＡＩ変化は、非盲検期間において持続した。ＣＸＣＬ１３レベルの有意な低下を伴う、１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ  ＣＦＺ５３３に切り替えた場合のプラセボ群におけるいくつかの改善は、同じパターンをたどった。
【０２７２】
原発性シェーグレン症候群において初めて遮断性の非細胞枯渇抗ＣＤ４０抗体を試験するこの概念実証研究では、結果は、ＣＦＺ５３３が臨床的に活動性のｐＳＳにおける新規の治療モダリティを提供できることを示唆している。
【０２７３】
さらに、図８は、薬力学／標的エンゲージメント（１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ））  −  血漿中の総可溶型ＣＤ４０における  −  治療及び追跡調査期間中の標的エンゲージメントの持続を示す。１２／２４週の治療後、何人かのｐＳＳ患者では、ＣＤ４０発現が下方調節されるという徴候が現れた。
【０２７４】
図９は、ＥＳＳＤＡＩ合計スコア−コホート１：３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）のプロフィールプロットを示す。
【０２７５】
図１０は、薬物動態：遊離ＣＦＺ５３３−コホート１：３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）を示す。この図から分かる通り、全身を巡る前の効率的な標的介在性のクリアランス（初回通過効果；ＣＤ４０発現の上昇に起因する可能性が高い）が存在する  −  組織におけるＣＤ４０経路遮断は、達成されない（ＣＦＺ５３３＜４０μｇ／ｍＬ）。
【０２７６】
図１１は、薬力学／標的エンゲージメント：血漿中の総可溶型ＣＤ４０−コホート１：３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）を示す。この図から分かる通り、標的エンゲージメントは、ＣＤ４０発現が亢進されている可能性が高い状態における標的介在性の排除に起因して持続しなかった。
【０２７７】
図１２は、ＥＳＳＰＲＩ合計スコア−コホート１：３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）のプロフィールプロットを示す。
【０２７８】
図１３は、ＥＳＳＰＲＩ合計スコア−コホート２：１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）のプロフィールプロットを示す。
【０２７９】
図１４は、ＣＸＣＬ１３（ｐｇ／ｍＬ）−コホート２：１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）のプロフィールプロットを示す。
【０２８０】
図１５は、１０ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３コホートにおけるＥＳＳＤＡＩ合計スコアのプロフィールプロットを示す。
【０２８１】
図１６は、ＩＣＡＭ＋Ｂ細胞（％）−コホート２：１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）のプロフィールプロットを示す。
【０２８２】
図１７は、第１３週での（１２週の治療−期間１後の）様々なエンドポイントにおける治療群の差、プラセボに対するＣＦＺ５３３を示す。
【０２８３】
ＣＤ４０シグナル伝達は、自己免疫疾患（ＡＤ）の病因と関連しており、全身性ＡＤを有する患者は、一般に、ＣＤ４０発現の増大及び血清／血漿ｓＣＤ４０レベルの上昇を呈する。原発性シェーグレン症候群患者からの唾液腺生検では、ＣＤ４０は、リンパ球、管上皮細胞及び内皮細胞によって恒常的に発現され（Ｄｉｍｉｔｒｉｏｕ  ｅｔ  ａｌ，２００２）、これは、研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３で認められたベースラインでの血漿中濃度の上昇と一致している。
【０２８４】
ＣＦＺ５３３は、標的介在性消失（ＴＭＤ）、すなわち（用量に相関して）かなりの割合のＣＦＺ５３３がＣＤ４０と高親和性で結合され、その結果、この相互作用は、ＣＦＺ５３３のＰＫプロフィールに反映されるプロセスを受ける。こうした状況では、ｐＳＳ患者を治療するための適切な用法用量を定義するために検討するための追加の因子には、体内のＣＤ４０発現レベル、ＣＤ４０合成及び分解（標的の生物学）並びにＣＦＺ５３３−ＣＤ４０結合動態が含まれる。
【０２８５】
健康なボランティア、関節リウマチ、原発性シェーグレン症候群、腎移植、グレーブス病及び重症筋無力症患者におけるＣＦＺ５３３の以前の臨床経験は、ＣＤ４０発現の上昇が、ＣＤ４０が十分に飽和していなければ、ＣＦＺ５３３の高い排除（クリアランス）速度、標的エンゲージメントの喪失及び標的組織におけるＣＤ４０経路遮断の喪失と関連することを示している。十分なＣＤ４０占有下では、ＣＦＺ５３３のクリアランス全体へのＣＤ４０の寄与は、最小限であり、ＣＦＺ５３３の消失は、主として、ＦｃＲｎ受容体（再利用／サルベージによるＩｇＧ恒常性を担う高能力受容体へのＣＦＺ５３３結合の結果である。
【０２８６】
データから分かる通り、薬物動態学的／薬力学的展望及び用量設定戦略から、ｐＳＳ患者における適切な用法用量が負荷レジメン、それに続く維持レジメンを含むであろう可能性が高い。
【０２８７】
おそらく最初の１か月にわたり、ＩＶ又はＳＣ投与を通した負荷レジメンが正当化される。なぜなら、ＣＦＺ５３３は、ＣＤ４０介在性の排除を受けるからである。治療の開始時にＣＤ４０が十分には飽和されていない場合、ＣＤ４０発現の上昇の状況において、ＣＦＺ５３３の高い排除（クリアランス）率は、標的エンゲージメントの喪失及び標的組織におけるＣＤ４０経路遮断の喪失と関連する可能性が高い。負荷期間後、ｐＳＳ患者における進行中の研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３からのＰＫデータを使用する予備的なモデル化に基づいて、ＳＣ維持レジメンが、標的組織における十分なＣＤ４０経路遮断を確実にするように選択されることになる。
【０２８８】
コホート３
コホート３におけるベースラインから第１２週までのＥＳＳＤＡＩの低下は、コホート２において見られるように、いずれの投薬群においても類似のパターンを示し、したがってＣＦＺ５３３の２つのＩＶ／ＳＣ又はＳＣ／ＳＣ投薬レジメンの有効性を裏付けている。しかし、コホート３は、非盲検であり、且つプラセボ対照を含まないため、有効性データは、探索的なものに過ぎず、慎重に解釈されるべきである。
【０２８９】
実施例８．ＣＤ４０−ＣＤ１５４経路相互作用の遮断は、異所性胚中心を抑制し、且つシェーグレン症候群のＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪマウスモデルにおける病態を阻害する
シェーグレン症候群（ＳＳ）は、唾液腺炎及び外分泌腺機能障害を特徴とする慢性の自己免疫疾患である。これは、ＲＡ後の最も一般的なリウマチ性の全身性自己免疫疾患の１つであり、成人集団の有病率は、０．３〜０．５％である。臨床症状としては、倦怠、乾性角結膜炎、口内乾燥、鼻内乾燥、膣乾燥、気管乾燥、皮膚乾燥、関節痛／関節炎、レイノー病、リンパ節腫脹、間質性肺炎、（通常、皮膚の）血管炎、腎炎及びリンパ腫が挙げられる。
【０２９０】
ＥＵＬＡＲシェーグレン症候群疾患活動性指標（ＥＳＳＤＡＩ）は、原発性ＳＳを有する患者における疾患活動性を測定するために設計された。ＥＳＳＤＡＩは、ＳＳのためのＨＡ承認の主要評価基準であり、患者報告型の転帰（ＥＳＳＰＲＩ）を補完するものとして設計されている。
【０２９１】
原発性ＳＳ患者と続発性ＳＳ患者との両方における疾患の特異的な徴候としては、唾液腺及び涙腺における抗Ｒｏ及び抗Ｌａ自己抗体の存在並びに単核細胞浸潤が挙げられる（Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒｉ，ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。場合により、Ｔ及びＢリンパ球のこれらの蓄積は、ＧＣとの形態的及び機能的類似性を有する異所性リンパ構造（ＥＬＳ）と称される十分に組織化された構造を形成する（Ｖｏｕｌｇａｒｅｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。先行研究は、ＳＳ患者及びこの疾患の前臨床モデルからの唾液腺におけるＥＬＳのエビデンス並びに進行中の親和性成熟のエビデンスを報告しており（Ｊａｃｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｓｔｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）、これらの構造を疾患病態に関連付けている（Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７）。
【０２９２】
ＧＣ生物学におけるＣＤ４０−ＣＤ１５４（ＣＤ４０リガンド）のような経路の基本的役割を裏付ける明確なデータ（Ｌａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）にもかかわらず、ＥＬＳ形成及び作用における様々な免疫共刺激経路の役割に関する発表されたデータは、比較的に少ない。こうした相互作用がＥＬＳ形成及び作用における役割を果たす場合、経路遮断は、罹患した組織における構築された構造を排除し、且つ器官機能を潜在的に向上させることが予測されるであろう。この仮説を検証するために、本発明者らは、続発性ＳＳの非肥満糖尿病（ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪ）マウスモデルにおける抗ＣＤ１５４モノクローナル抗体の治療的投与の効果を調べ（Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓ−Ｂｅｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）、また唾液腺ＥＬＳ、抗体分泌細胞及びアクアポリン−５（ＡＱＰ−５）、すなわち分泌細胞機能に必須のタンパク質の発現をモニタリングした（Ｄｅｌｐｏｒｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。
【０２９３】
１．材料及び方法
唾液腺におけるＣＤ４０経路遺伝子の特徴
治療していないＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）からの唾液腺の凍結切片をマイクロアレイによる遺伝子発現プロファイリングのために使用した。レーザーキャプチャーマイクロダイセクションを適用してＥＬＳを濃縮した。
【０２９４】
続発性ＳＳのＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪマウスモデル
ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪ系統は、ＳＳ様疾患に加えて、１型糖尿病様の疾患を発症するため、続発性ＳＳのモデルとみなすことができる（Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓ−Ｂｅｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。１２週齢の雌のＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪを、１０週間、２×／週、腹腔内への（ｉ．ｐ．）１５ｍｇ／ｋｇでの２つの治療群（群あたりｎ＝１５、２つの実験）：ＭＲ１（アルメニアンハムスター抗マウスＣＤ１５４  ＩｇＧ）及びアイソタイプ対照（ＩＣ、ハムスター抗マウスＩｇＧ、ＢｉｏＸ細胞）に無作為に割り付けた。すべての手順は、動物保護のためのスイスの法律に従って実施し、Ｂａｓｅｌ、ＳｗｉｔｚｅｒｌａｎｄのＣａｎｔｏｎａｌ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｏｆｆｉｃｅによって承認された（Ａｎｉｍａｌ  Ｌｉｃｅｎｓｅ  Ｎｏ．ＢＳ−２４８２）。
【０２９５】
ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪマウスからの脾臓及び唾液腺の病理組織学及び免疫組織化学
左の唾液腺の３μｍ厚のパラフィン切片をヘマトキシリン及びエオシン（ＨＥ）で染色した。ＣＤ３、ＣＤ４５Ｒ、ＣＤ１３８、Ｉｂａ−１、Ｋｉ−６７及びＡＱＰ−５に対する自動化された免疫組織化学的染色をＶｅｎｔａｎａ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＸＴ免疫染色機（ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｅｒ）（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）上で実施した。ＮＯＤマウスからの脾臓をＫｉ−６７で染色した。
【０２９６】
抗体分泌細胞（ＡＳＣ）に対するＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
唾液腺及び脾臓からの単一細胞の懸濁液を調製し（オンライン補足ファイル）、あらかじめコートされたＥＬＩＳＰＯＴプレートに新鮮なＣＤ４５＋細胞を添加し、暗所で３７℃において２０時間インキュベートした。ＴＭＢ基質溶液を添加することにより、プレートへのＡＳＣ結合が明らかになり、ＥｌｉＳｐｏｔ  Ｒｅａｄｅｒ「ＡＩＤ  ｃｌａｓｓｉｃ」を用いてスポットの密度を測定した。
【０２９７】
抗Ｒｏ  ＥＬＩＳＡ
マウス抗ＳＳＡ／Ｒｏ６０は、製造業者の指示書に従ってＥＬＩＳＡキットｃａｔ．Ｎｏ．５７１０（Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．ＵＳＡ）を使用して、血清中で評価した。
【０２９８】
２．結果
唾液腺におけるＢ細胞ＣＤ４０遺伝子シグネチャーの上方調節
マイクロアレイ分析を使用して、初代のヒトＣＤ１９ｐｏｓ  Ｂ細胞のｒＣＤ１５４刺激後のＢ細胞におけるＣＤ４０の下流の遺伝子を同定し、そのうちの４３個をマウス遺伝子に位置付けることができた。次いで、これらの遺伝子の発現が１２及び２４週齢のＮＯＤマウスからの唾液腺（ＳＧ）組織において調節されたかどうかを調べた。Ｃｄ４０、Ｃｄ８０及びＡｉｃｄａを含めた１４個の遺伝子は、いずれの時点でも、唾液腺（ＷＳ）組織全体と比較して、マイクロダイセクションを行ったＥＬＳにおいて有意に上方調節され、これは、慢性の経路活性化（図２６Ａ）を示唆していた。精工なパスウェイ解析も、ＣＤ４０及びＣＤ１５４（ＣＤ４０ＬＧ）が、第１２週と第２４週の両方で最高の上流調節因子の１つであることを示し（図２６Ｂ）、ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪマウスからのＳＧ及びｐＳＳを有する患者からのＳＧにおいて上方調節されるＣＤ４０経路遺伝子間のオーバーラップを実証することが可能であった（Ｈｏｒｖａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０２９９】
ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用は、ＥＬＳ形成に必須である
ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪマウスは、１００％の発生率において、８〜１２週齢で、ＳＧ機能の減退に先行するＳＧにおける限局的な細胞浸潤を起こす（Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１２）。上述のデータは、ＮＯＤ  ＳＧ組織における慢性のＣＤ４０経路シグナル伝達を示唆し、これは、炎症性病巣における単核細胞によるＣＤ４０発現のエビデンスによって裏付けられた（Ｒｏｅｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１２）。したがって、抗ＣＤ１５４  ｍＡｂ  ＭＲ１を１２週齢で開始し、隔週、１５ｍｇ／ｋｇで１０週間投与することにより、治療的なＣＤ４０−ＣＤ１５４遮断の効果を試験することが選択された。
【０３００】
図２６Ｂは、ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪマウスにおける１０週間のＭＲ１の長期的な投薬が、Ｋｉ６７陽性細胞のクラスターによって定義される場合の、唾液腺におけるＥＬＳの有意な減少をもたらしたことを示す。さらに、ＳＧ常在のＢ及びＴ細胞並びにマクロファージの割合の強い低下が存在した。組織学的画像は、ＭＲ１が、投薬の開始の１０週後、ＥＬＳを抑制することができたことを示した（図２６Ｃ）。
【０３０１】
ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用の遮断は、ＡＳＣ形成及び自己抗体産生を阻害（ｉｎｈｉｂｉｔ）する
ＭＲ１投与はまた、脾臓、ＳＧ及び骨髄における総ＩｇＧ（ただし、ＩｇＭではない）ＡＳＣの減少（図２６Ｂ）並びに脾臓ＧＣの完全な抑制をもたらした。抗ＣＤ１５４で治療したマウスは、血清の抗Ｒｏ  ＩｇＧレベルの有意な低下も呈したが、唾液腺におけるＲｏ特異的なＡＳＣの頻度は、有意に影響を受けたように見えなかった（図２６Ｃ）。
【０３０２】
ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用の遮断は、ＡＱＰ−５陽性細胞の喪失を予防する
マウスにおける刺激された唾液分泌を評価することが可能であるが、こうした分析のための試料採取は、絶食、麻酔及びピロカルピン刺激（Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．２００６）；動物の福祉に影響を与える可能性がある因子並びに読み取りの解釈を必要とする。したがって、ＳＳにおける分泌機能に関与することが示唆されている（Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）、ＡＱＰ−５、すなわち唾液及び涙の産生の調節に関与する水チャネルタンパク質（Ｄｅｌｐｏｒｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）の発現をモニタリングすることが選択された。ＩＨＣ染色（図２７）によって評価される場合のＡＱＰ−５陽性の評価は、ＭＲ１治療された動物では、対照動物と比較してより高い割合のＡＱＰ−５陽性細胞を示し、これは、ＣＤ４０−ＣＤ１５４遮断が唾液腺分泌細胞機能の喪失を予防するか又は遅らせ得ることを示唆している。
【０３０３】
３．考察
唾液腺ＥＬＳにおける親和性成熟のエビデンス及び自己反応性Ｂ細胞の存在は、ＳＳ病態におけるこれらの構造の潜在的役割を示唆している（Ｓｔｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。ＥＬＳとＧＣとの間の機能的類似性を考慮すると、ＧＣ生物学に関与する免疫学的な共刺激経路がＥＬＳにおいて同様の役割を果たす可能性があると仮定された。ＣＤ４０又はＣＤ１５４の欠乏は、ＧＣ形成を予防し、リガンド又は受容体の薬理学的遮断も、構築されたＧＣを崩壊する（Ｒｉｓｔｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２０１８；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．２０１４）。ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用は、ＥＬＳ生物学にも関連付けられている。なぜなら、ＣＤ４０発現は、ｐＳＳ患者からのＳＧ腺における浸潤細胞上で且つＮＯＤマウスにおいて観察されているからである（Ｒｏｅｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１２；Ｏｈｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．２００２）。ＮＯＤマウスからのＥＬＳにおける、且つｐＳＳ患者からのＳＧ生検におけるＣＤ４０の下流の遺伝子の永続的な上方調節と合わせると、これらのデータは、この共刺激経路が、浸潤する唾液腺白血球において活性であることを示唆していた。
【０３０４】
さらに、ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用の治療的遮断がＥＬＳの排除、浸潤白血球の大きい減少並びに血清抗Ｒｏ自己抗体レベルの低下をもたらすことが実証され、ＣＤ４０−ＣＤ１５４遮断は、（唾液産生の評価が、ＳＧ機能の、より直接的な尺度ではあるだろうが）ＡＱＰ−５、すなわち分泌細胞機能に必須のタンパク質を発現している細胞の喪失を予防するようにも見えた（Ｄｅｌｐｏｒｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。以前のデータは、若いＮＯＤマウス（４〜５週齢；唾液腺炎のエビデンスの前の１〜２か月）におけるＭＲ１の単回投与の予防的投与が唾液腺炎の発症を予防し、且つ抗Ｒｏ自己抗体のレベルを低下させることができたことを示し（Ｍａｈｍｏｕｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）、ＣＤ４０欠損ＮＯＤマウスの結果と一致していた。しかし、ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用の治療的遮断がこのモデルにおいてＳＧ炎症、ＥＬＳを消失させ、且つ自己抗体レベルを低下させ得ることは、以前に示されていない。
【０３０５】
このデータを、ＮＯＤマウスのＳＧにおける可溶型ＣＤ４０−Ｉｇ融合タンパク質のアデノ随伴ウイルス発現が、唾液腺炎を軽減させることができなかった以前の研究（Ｒｏｅｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）と対比させる。著者らは、ＳＧにおける融合タンパク質発現の証拠がなかったことを報告したため、薬物の濃度が、十分なＣＤ４０−ＣＤ１５４経路遮断を達成するのに不十分であった可能性が高い。対照的に、この研究は、脾臓ＧＣの阻止を明確に実証することができ、これは、組織における、完全な、経路関連のＰＤ効果に十分なＭＲ１曝露が存在することを示唆していた。まとめると、このデータは、抗ＣＤ４０抗体ｍＡｂ１などの生物製剤を用いるＣＤ４０−ＣＤ１５４共刺激経路の治療的遮断がＳＳ患者における有益な治療効果を提供できた（Ｒｉｓｔｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２０１８）ことを示唆している。
【０３０６】
実施例９．ＣＦＺ５３３、すなわち遮断性の非細胞枯渇抗ＣＤ４０モノクローナル抗体のインビトロ及びインビボ特性の特徴
１．方法
ＣＤ４０に対するＣＦＺ５３３の親和性の表面プラズモン共鳴分析
組換えＣＦＺ５３３の結合分析を、ランニング緩衝液としてＨＢＳ−ＥＰ＋を用いて２５℃で実施した。典型的な結合分析サイクルは、３つのステップ（ｉ）チップ表面上に固定されたタンパク質Ａを介する抗体の捕捉、（ｉｉ）捕捉された抗ＣＤ４０抗体へのＣＤ４０抗原の結合、及び（ｉｉｉ）タンパク質Ａ表面の再生から構成されていた。抗原−抗体結合相互作用の動態速度定数を決定するために、ブランク注射からの反応を二重参照して、結合データを処理した。結合曲線を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアの１：１相互作用モデルを使用して局所的に適合させて、動態速度定数を決定した。平衡解離定数（ＫＤ）の値を速度定数ｋｄ／ｋａの比として算出した。すべての結合測定は、２つの独立した実験で実施した。
【０３０７】
ＦｃγＲＩＩＩＡに対するＣＦＺ５３３の親和性の表面プラズモン共鳴分析
４−アミノ酸精製タグ（４ＡＰＰ；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）及びＡｖｉビオチン標識タグ（ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ；Ａｖｉｄｉｔｙ）でタグ付けされたヒトＦｃγＲＩＩＩＡの細胞外ドメインをＧｅｎｅａｒｔ：ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）１５８Ｖ（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０８６３７、１７−１９９）、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ  １５８Ｆ（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０８６３７、１７−１９９）によって合成し、ＨＥＫ２９３細胞において発現させ、抗４ＡＰＰ親和性クロマトグラフィーを用いて精製した。受容体を、ストレプトアビジンセンサーチップ（Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ）に結合させたＢｉｒＡ（Ａｖｉｄｉｔｙ）を用いて部位特異的にビオチン標識し、異なるＡｂの平衡−結合レベルを、記載されている通りに表面プラズモン共鳴（Ｔ１００、Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ）によって分析した（Ｗａｒｎｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．２０１２）。平衡解離定数（ＫＤ）は、１：１モデルによって算出した。
【０３０８】
ヒト白血球培養
全血バフィーコートは、健康なボランティア（Ｂｌｕｔｓｐｅｎｄｅｚｅｎｔｒｕｍ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から、又はＳｗｉｓｓ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａｃｔ及び責任ある倫理委員会（Ｅｔｈｉｋｋｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  Ｎｏｒｄｗｅｓｔ−ｕｎｄ  Ｚｅｎｔｒａｌｓｃｈｗｅｉｚ；ＥＫＮＺ）の承認に従ってインフォームドコンセント下で提供された健康なボランティアから採取された全血から得た。ヒト扁桃試料は、Ｅｒｇｏｌｚ  Ｋｌｉｎｉｋ（Ｌｉｅｓｔａｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）（研究プロトコルＮｏ．１０００２４４  ｖ．０３；Ｅｔｈｉｋｋｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｂｅｉｄｅｒ  Ｂａｓｅｌ；ＥＫＢＢによって承認されている）及びＫａｎｔｏｎｓｐｉｔａｌ（Ｌｉｅｓｔａｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）（研究プロトコルＮｏ．ＴＲＩ０１４９  ｖ．０１；ＥＫＮＺによって承認されている）の両方から得た。インビトロ培養実験については、詳細な方法についての補足資料を参照されたい。簡単に言うと、全血、単離されたＰＢＭＣ、インビトロで得られた単球ＤＣ又はヒト扁桃Ｂ細胞を単一濃度の又は用量漸増のＣＦＺ５３３又は適切な対照抗体と共にインキュベートした。経路遮断実験について、これらの培養物は、ＥＣ８０濃度の組換えヒトＣＤ１５４（５μｇ／ｍｌ）及びＩＬ−４（７５ｎｇ／ｍｌ）も含んでいた。インビトロアッセイの読み取りには、チミジン取り込み（３Ｈ−ＴｄＲ）によって評価される増殖、Ｂ細胞上の活性化分子ＣＤ６９の発現のフローサイトメトリーに基づく評価及びＥＬＩＳＡによって評価されるサイトカイン分泌が含まれていた。ＮＨＰ全血及びＰＢＭＣについて、同様のアッセイを使用した。いくつかのヒト全血実験では、蛍光的にタグ付けしたＣＦＺ５３３を使用してＣＤ４０受容体占有も調べた。適切な場合、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェアにおける線形回帰に基づく曲線適合を使用してＩＣ５０値を推定した。
【０３０９】
インビトロ細胞枯渇アッセイ
詳細な方法についての補足資料を参照されたい。簡単に言うと、ＣＦＺ５３３がＣＤ２０ｐｏｓＢ細胞の枯渇を媒介する能力を、Ｂ細胞枯渇抗体リツキシマブと比較して、３日の期間にわたってヒト全血においてモニタリングした。ＣＤＣについて、ＣＦＺ５３３又はリツキシマブをウサギ補体の存在又は非存在下でＲＡＪＩ  Ｂ細胞と共にインキュベートし、細胞溶解を発光によって評価した。
【０３１０】
ＣＦＺ５３３の内在化
蛍光的にタグ付けしたＣＦＺ５３３及びｒＣＤ１５４の内在化を、ヒトＢ細胞株ＲＩ−１（Ｔｈ’ｎｇ  ｅｔ  ａｌ，１９８７）を使用してインビトロで評価した。ＣＦＺ５３３内在化のＣＤ４０依存性は、ＣＤ４０ノックアウトＲＩ−１細胞株を使用して評価した。内在化は、製造業者の指示書に従ってＡｍｎｉｓ（登録商標）イメージフローサイトメーター（ｉｍａｇｅ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）（Ｍｅｒｃｋ  ＫＨａＡ，Ｄａｒｎｓｔａｄｔ）を使用して評価し、データはＩｍａｇｅＳｔｒｅａｍ（登録商標）Ｘソフトウェアを使用して解析した。
【０３１１】
インビボ研究
単一用量薬物動態／薬力学的（ＰＫ／ＰＤ）研究は、７．５〜８．５歳（６．５±２．６ｋｇ）の、フィリピン（Ｓｉｃｏｎｂｒｅｃ，Ｍａｋａｔｉ  Ｃｉｔｙ，Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ）で飼育下繁殖された、生物製剤治療を受けていないカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）を利用した。動物の取り扱い、世話、薬物治療及び血液採取は、動物保護に関するＳｗｉｓｓ  Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｌａｗに従って実施される（動物ライセンスＢＳ  ＃１９００、ＢＳ＃１４９５）。リコール免疫化実験について、本発明者らは、Ｃｏｖａｎｃｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ＧｍｂＨ，Ｍｕｅｎｓｔｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙで行われた毒性研究からの動物を利用した（論文準備中）。この研究は、動物福祉法及び認められている動物福祉の標準に関して国の法的規制の徹底順守で、認可された研究プロトコル及び地域の標準の手術手順に従って実施した。
【０３１２】
ＰＫ研究では、ＣＦＺ５３３は、１６．２（５５３２）、１８．５（５５３１）及び２０（５５３０）ｍｇ／ｋｇの計算された単一用量で３匹の動物に投与された。ＣＦＺ５３３血清中濃度、末梢Ｔ及びＢリンパ球の数及びＣＦＺ５３３による末梢Ｂ細胞上のＣＤ４０占有の分析のために血液を採取した。リコールＴＤＡＲ実験について、動物は、研究第８日（初回抗原刺激）及び４３日（リコール；ＣＦＺ５３３治療中）にそれぞれＡｌｕｍ中のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）で免疫を受けた。初回抗原刺激及びリコール免疫化の１日前並びに７、１４及び２１日後に血清を採取した。ＫＬＨ特異的なＩｇＭ／ＩｇＧ力価は、標準としてカニクイザル抗ＫＬＨ  ＩｇＭ／ＩｇＧ標準血清を使用するサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて決定した。ＰＫ評価は、上に記載している通りに実施した。ＰＫ及びＴＤＡＲ実験の追加的詳細については、補足資料を参照されたい。
【０３１３】
胚中心の組織学的分析
ホルマリン固定し、パラフィンワックスに包埋した（ＦＦＰＥ）脾臓及びリンパ節（腋窩、下顎及び腸間膜）の切片を、ヘマトキシリン及びエオジンで、且つ以下のマーカー：抗ＣＤ２０抗体（Ｍ０７５５、Ｄａｋｏ）、抗ＣＤ８抗体（ＲＭ−９１１６−ＳＯ、Ｍｅｄａｃ）及びＫｉ６７（Ｍ７２４０、Ｄａｋｏ）を用いる間接的な免疫ペルオキシダーゼ方法（ＤａｋｏによるＨＲＰ＋ＤＡＢ）で染色した。すべてのスライドを評価し、染色の強度に従って（陰性〜強度）等級分けした。さらに、組織内のあらゆる免疫組織化学的染色された細胞の染色パターン及び分布も記載した。
【０３１４】
２．結果
ＣＦＺ５３３は、ヒトＣＤ４０と結合し、複数のＣＤ４０発現細胞型のｒＣＤ１５４誘導性の活性化を阻害する。
表３は、組換えヒトＣＤ４０に対するＣＦＺ５３３のＫＤが表面プラズモン共鳴によって０．３ｎＭと決定され、したがってその親抗体ＨＣＤ１２２（ＣＦＺ５３３の野生型ＩｇＧ１バージョン）と非常に類似していたことを示す。
【０３１５】
【表１４】
2021501748.tif 000016
【０３１６】
図１８Ａは、複数のドナー（それぞれ５、３２及び６人のドナー）からのヒト全血培養物、ＰＢＭＣ及び単離された扁桃Ｂ細胞のｒＣＤ１５４及びＩＬ−４介在性の増殖（３Ｈ−ＴｄＲ）に対するＣＦＺ５３３の効果を示す。データは、正規化されたｃｐｍとして示す（ｒＣＤ１５４＋ＩＬ−４＝１００；点線）。図１８Ｂは、ＣＦＺ５３３が、一晩の培養後のｒＣＤ１５４刺激されたｍｏＤＣによるＴＮＦ−α産生を阻害したことを示す。図１８Ｃは、ＣＦＺ５３３の添加の遅延がｒＣＤ１５４＋ＩＬ−４介在性のヒトＰＢＭＣ増殖を阻害したことを示す。ｒＣＤ１５４＋ＩＬ−４での刺激の１時間前、同時又は２及び６時間後にＣＦＺ５３３をヒトＰＢＭＣに添加し、その後の４日間の培養後に増殖（３Ｈ−ＴｄＲ）を評価した（点線及び破線は、ｒＣＤ１５４＋ＩＬ−４及び細胞＋培地対照を表す）。すべてのデータについて、ｒＣＤ１５４誘導性の刺激の読み取りの平均値及びＳＤを、対数変換したＣＦＺ５３３濃度の関数としてグラフで示した。適切な場合、ＩＣ５０値を、線形回帰に基づく曲線適合を使用して決定した。図１８Ｄは、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０占有と経路遮断との関係を示す。１０人のドナーからのヒト全血を用量漸増のＣＦＺ５３３の存在下でｒＣＤ１５４と共に一晩培養した。経路活性化の程度（Ｂ細胞上の％ＣＤ６９ｐｏｓ）及びＣＤ４０占有の程度（ＣＦＺ５３３をＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ  ４８８標識して染色）を評価した。白丸及び黒丸は、それぞれＣＦＺ５３３によって占有されるＣＤ４０の割合及びＣＤ２０ｐｏｓ  Ｂ細胞上のＣＤ６９ｐｏｓ発現細胞の割合を、対数変換したＣＦＺ５３３濃度の関数として示す（平均値及びＳＤを示す）。点線及び破線は、すべてのドナーに対して正規化されたｒＣＤ１５４誘導性のＣＤ６９発現及び細胞＋培地対照培養物を表す。
【０３１７】
図１８Ａは、ＣＦＺ５３３が複数のドナーからのヒト全血培養物、ＰＢＭＣ並びに精製された扁桃Ｂ細胞のｒＣＤ１５４誘導性の増殖をそれぞれ０．０２４μｇ／ｍｌ（０．１６ｎＭ）、０．０１７μｇ／ｍｌ（０．１２ｎＭ）及び０．０７１μｇ／ｍｌ（０．４７ｎＭ）の力価（ＩＣ５０値）で完全に阻害したことを示す。さらに、本発明者らは、ＣＦＺ５３３が初代単球由来樹状細胞（ｍｏＤＣ）によるｒＣＤ１５４誘導性のＴＮＦ産生を０．０４μｇ／ｍｌ（０．２７ｎＭ）のＩＣ５０で完全に阻止したことを実証することができた（図１８Ｂ）。
【０３１８】
以前に公表されている通り、ＣＦＺ５３３は、カニクイザル由来のＰＢＭＣのｒＣＤ１５４誘導性の増殖を阻害した（Ｃｏｒｄｏｂａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＣＦＺ５３３は、ヒト、アカゲザル及びカニクイザル動物由来のＰＢＭＣのｒＣＤ１５４誘導性の増殖を同様の力価（それぞれ０．０２、０．０３及び０．０１μｇ／ｍｌのＩＣ５０）で阻害し、またこれらの種由来のＢ細胞上のＣＤ４０とおよそ０．２μｇ／ｍｌのＥＣ５０値で結合することができた（表４を参照されたい）。
【０３１９】
【表１５】
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【０３２０】
上の細胞データは、ＣＦＺ５３３がｒＣＤ１５４の前に又はｒＣＤ１５４と同時に添加される実験から得られ、この抗体が内在性リガンドの結合を妨げることができたことを示している。本発明者らは、ｒＣＤ１５４を含有する白血球培養の開始の最大６時間後のＣＦＺ５３３の添加が、最小限の力価の損失を伴って、細胞活性化の完全な阻害をもたらすことを実証することもでき、これは、ＣＦＺ５３３がＣＤ４０から内在性リガンドを外して取って代わることができることを示している（図１８Ｃ）。
【０３２１】
本発明者らは、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０占有の程度と、経路阻害の程度との間の関係を評価することも望んでいた。それを行うために、本発明者らは、複数のドナーからの全血において、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０受容体占有及びｒＣＤ１５４誘導性のＣＤ６９を同時に評価した。図１８Ｄは、ＣＦＺ５３３による少なくとも９０％のＣＤ４０受容体占有率がＣＤ４０経路活性化の完全な遮断のために必要とされていたことを示す。受容体占有と経路阻害との間の同様の関係は、ＣＤ４０経路活性化の読み取りとしてＣＤ２３及びＣＤ５４を使用しても認められた（データは示さない）。
【０３２２】
ＣＦＺ５３３は、インビトロで最小限の刺激の可能性を呈する
ＣＦＺ５３３がヒト白血球の活性化を刺激する能力を、全血におけるＢ細胞上の活性化分子ＣＤ６９の増殖及び上方調節を使用して評価した。図１９Ａは、以下に関するデータを示す。ｉ．複数のドナー（ｎ＝１３）からのヒト全血を用量漸増のＣＦＺ５３３と共にインキュベートし、培養の３日後に増殖（３Ｈ−ＴｄＲ）を評価した。ｉｉ．複数のドナー（ｎ＝２６）からのヒトＰＢＭＣを用量漸増のＣＦＺ５３３と共にインキュベートし、培養の３日後に増殖（３Ｈ−ＴｄＲ）を評価した。いずれのグラフについても、データは、対数変換したＣＦＺ５３３濃度の関数として、正規化されたｃｐｍの平均値及びＳＤとして示す（ｒＣＤ１５４＋ＩＬ−４＝１００；点線、細胞＋培地＝０；破線）。図１９Ｂは、ＣＦＺ５３３が追加の刺激の存在下でヒトＰＢＭＣ増殖を誘発しないことを示す。ヒトＰＢＭＣをＩＬ−４（ｉ）又は抗ＩｇＭ  Ｆ（ａｂ’）２．（ｉｉ）の存在下において用量漸増のＣＦＺ５３３で３日間刺激した。３Ｈ−ＴｄＲ（ｃｐｍ）の平均及びＳＤを、対数変換したＣＦＺ５３３濃度の関数として示す。図１９Ｃでは、ヒト全血（４１人のドナー）が、刺激なし、ＣＦＺ５３３、アイソタイプ対照又はｒＣＤ１５４と共にどのように一晩培養されたか、またＢ細胞上のＣＤ６９発現がＦＡＣＳによってどのように評価されたかを示す。それぞれの点は、単一のドナーからのデータを表し、平均の％ＣＤ６９値は、水平な赤線によって示される。
【０３２３】
図１９Ａは、ＣＦＺ５３３が、ｒＣＤ１５４と対照的に、ヒト全血（１：１０希釈）又はＰＢＭＣによるチミジン取り込みを誘発できなかったことを示す。ＣＦＺ５３３が増殖を誘発できないことは、ＩＬ−４又は抗ＩｇＭなどの追加の共刺激物質の添加によって影響を受けなかった（図１９Ｂ）。本発明者らは、ＣＦＺ５３３が、やはりｒＣＤ１５４と対照的に、複数のドナーからの全血におけるＢ細胞上のＣＤ６９の上方調節を誘発できなかったことを実証することもできた（図１９Ｃ）。最後に、ＣＦＺ５３３は、ＣＤ４０を発現している単球由来ＤＣ又はヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）によるサイトカイン産生を誘発できなかった（データは示さない）。
【０３２４】
ＣＦＺ５３３は、細胞枯渇を媒介しない
ＣＦＺ５３３を、ＦｃγＲ結合を阻止し、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介できないことをもたらすことが以前に示されているＮ２９７Ａ変異を含有するように操作した。ＣＦＺ５３３は、ＨＣＤ１２２（野生型ＩｇＧ１）と比較すると、ＦｃγＲＩＩＩＡと結合することができず（表５）、本発明者らは、結合のこの欠如が、ＣＦＺ５３３が細胞枯渇を媒介する能力にどのようにして影響を与えるかを調べることを望んでいた。
【０３２５】
【表１６】
2021501748.tif 000018
【０３２６】
図２０Ａは、用量漸増のＣＦＺ５３３又は５０μｇ／ｍｌリツキシマブの存在下で７２時間インキュベートされたヒト全血培養物からのデータを示す。Ｂ細胞数は、リンパ球ＦＳＣ／ＳＳＣゲートの範囲内にあるＣＤ４５ｐｏｓ及びＣＤ１９ｐｏｓ事象に基づいて決定した。個々の抗体濃度についての結果を、治療していない試料に関して、残存するＢ細胞（パーセント）として算出し、対数変換した抗体濃度の関数としてグラフで示した（１００％に補正し、点線として示した）。データは、８人の独立したドナーの平均値及びＳＤを表す。図２０Ｂは、異なる濃度のリツキシマブ又はＣＦＺ５３３及び一定濃度のウサギ補体と共にインキュベートしたＲａｊｉ  Ｂ細胞からの結果を示す。Ｒａｊｉ細胞の濃度依存性の死滅を２時間後に分析し、ここで、細胞の生存率を、ルシフェラーゼを使用する各ウェル内のＡＴＰ濃度の決定によって測定した。結果は、対数変換した抗体濃度の関数として、アイソタイプ対照に対して正規化された相対ルシフェラーゼ単位（ＲＬＵ）として示す。
【０３２７】
図２０Ａは、枯渇抗ＣＤ２０抗体リツキシマブがヒト全血におけるＢ細胞のおよそ８０％を排除することができたのに対して、ＣＦＺ５３３が細胞枯渇を少しも媒介できなかったことを示す。さらに、ＣＦＺ５３３は、リツキシマブとは対照的に、Ｒａｊｉ  Ｂ細胞の補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介することができなかった（図２０Ｂ）。
【０３２８】
ＣＦＺ５３３は、Ｂ細胞によってＣＤ４０依存的に内在化される
本発明者らは、次に、ＣＦＺ５３３が、ヒトＢ細胞株ＲＩ−１において発現しているＣＤ４０によって内在化される可能性があるかどうかを調べることを望んでいた。図２１Ａは、ｒＣＤ１５４が、非許容条件（４℃）と比較して、許容条件（３７℃）下で内在化された（ここで、ｒＣＤ１５４の弱い染色を原形質膜上に観察することができた）ことを示す。ＣＦＺ５３３も内在化されたが、３７℃において残留する膜染色が確かにあるように見えた。図２１Ｂは、ｒＣＤ１５４の内在化の程度が、ＣＦＺ５３３について観察されるものよりも大きいように見えることを示した。本発明者らは、ＣＤ４０ノックアウトＲＩ−１  Ｂ細胞株を使用して、ＣＦＺ５３３（図２１Ｃ）及びｒＣＤ１５４（データは示さない）の結合及び内在化がＣＤ４０依存性であることを実証することができた。
【０３２９】
図２１Ａは、ＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ  ４８８で標識したｒＣＤ１５４又はＣＦＺ５３３と共に３７℃又は４℃で３時間培養した個々のＲＩ−１  Ｂ細胞の代表的な画像を示す。図２１Ｂ．許容条件下でのＣＦＺ５３３及びｒＣＤ１５４の相対的な内在化侵食（非許容侵食値を引いたもの）。それぞれの点は、個々の実験からのデータを表し、集団平均は、水平な赤線として示される。図２１Ｃ．Ａｌｅｘａ４８８で標識したＣＦＺ５３３と共に３７℃で３時間培養した個々のＣＤ４０発現又はＣＤ４０ノックアウトＲＩ−１細胞の代表的な画像。すべての実験において、細胞膜の境界を明確にするために、細胞は、ＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ  ６４７標識されたＣＤ４５で共染色した。
【０３３０】
非ヒト霊長類におけるＣＦＺ５３３の薬物動態特性
図２２Ａ．１６．２（５５３２）、１８．５（５５３１）及び２０（５５３０）ｍｇ／ｋｇ（静脈内）の計算された用量での単一用量投与後の３匹のカニクイザルにおけるＣＦＺ５３３の血清中濃度。図２２Ｂ．ＣＤ４０占有率：利用可能なＣＤ４０（パーセント）（ｉ）及び総ＣＤ４０（パーセント）（ｉｉ）Ｃ．末梢Ｂ／Ｔ細胞：単回投与後の末梢血Ｂ細胞の割合。第０日は、ＣＦＺ５３３が投与された時である。
【０３３１】
上のデータは、ＣＦＺ５３３がＮＨＰ  ＣＤ４０に結合し、ＮＨＰ  Ｂ細胞のｒＣＤ１５４誘導性の活性化を同様の力価で阻害することができたことを示した。これは、カニクイザル及びアカゲザルが、ＣＦＺ５３３  ＰＫとＰＤとの間の関係を調べるインビボ研究に適した種であろうことを示唆している。図２２Ａ中のデータは、ＣＦＺ５３３の単回静脈内投与（１６．２、１８．５及び２０ｍｇ／ｋｇの計算された用量）後の３匹のカニクイザルのＰＫプロフィールを示す。内在化している膜結合型抗原を標的にするモノクローナル抗体に典型的であるが（Ｍａｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００６及びＮｇ  ｅｔ  ａｌ．２００６）、ＣＦＺ５３３濃度の時間経過は、明らかな標的介在性の消失を呈し、非線形ＰＫプロフィール並びに濃度依存性のクリアランス速度及び半減期がもたらされた。ＰＫプロフィールにおいて観察される屈曲点は、標的エンゲージメントのマーカーであり、ＣＦＺ５３３のクリアランス全体へのＣＤ４０の寄与の増大及びより短い半減期と関連している。さらに、ＰＫプロフィールにおける屈曲点は、ＣＤ４０飽和の低下が観察される時間と一致していた（図２２Ｂ、ｉ）。これは、ＣＦＺ５３３がより急速な排除を受けた場合、およそ１０〜２０μｇ／ｍｌで起こった。すべての動物において、細胞上のＣＤ４０受容体発現の喪失は存在しなかった（図２２Ｂ、ｉｉ）。さらに、ＣＦＺ５３３は、研究全体を通したいくつかの観察される変動にもかかわらず、末梢血Ｂ細胞（図２２Ｃ）又はＴ細胞（データは示さない）を枯渇させなかった。
【０３３２】
ＣＦＺ５３３は、リコールＴ細胞依存性抗体産生を阻害する
図２３Ａは、リコールＴＤＡＲに対するＣＦＺ５３３の効果を評価するための実験設計の概略図を示す。ｘ軸よりも下の矢印は、一次及び二次ＫＬＨ免疫化を強調する。単一用量の１０ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ５３３のタイミングを上に示す。アスタリスクは、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ及び／又はＣＦＺ５３３濃度が測定された時点を示す。図２３Ｂ．各グラフは、個々の動物についての抗ＫＬＨ  ＩｇＧ（黒塗記号）及び血漿ＣＦＺ５３３濃度（対数スケール；実線）を示す。対照動物からの平均抗ＫＬＨ  ＩｇＧレベル（白抜き記号）を比較目的で各グラフに重ね合わせる。図２３Ｃ．ＣＦＺ５３３を使用する１ｍｇ／ｋｇ／週の皮下反復投与（２６週研究）から得られるアカゲザルからのｍＬＮにおける胚中心（Ｋｉ６７染色）の組織学的分析。６匹の動物からの代表的なｍＬＮ切片を、（ｉ）対照の画像、（ｉｉ）．ｉｉｉ．治療期間の最後の個々の動物からの投薬期間にわたる平均の定常状態ＣＦＺ５３３血清中濃度と共に示す。
【０３３３】
ＣＤ４０が遮断されることの予測される狙い通りのＰＤ効果は、ＴＤＡＲの阻害である（Ｋａｗａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．１９９４）。ＣＦＺ５３３は、ＮＨＰ及びヒトにおける一次ＴＤＡＲを阻害し、本発明者らは、リコールＴＤＡＲに対するこの抗体の効果を調べることも望んでいた。その実験設計の概要を図２３Ａに示す。簡単に言うと、４匹のアカゲザルは、研究第１日の１０ｍｇ／ｋｇでのＣＦＺ５３３の単回静脈内投与前、研究第−２８日（初回抗原刺激）にＡｌｕｍ中のＫＬＨで免疫を受け、それに続いて研究第１５日に第２のＫＬＨ免疫化を行った。
【０３３４】
図２３Ｂは、４匹のそれぞれの動物における、免疫を受けた対照（ＣＦＺ５３３なし）からのデータと比較した、抗ＫＬＨ  ＩｇＧリコール反応に対するＣＦＺ５３３の効果を示す。ＣＦＺ５３３のＰＫプロフィールでは、動物間の変動性が存在しており、動物＃１及び＃３では、より迅速なＣＦＺ５３３の排除が観察された。動物＃２及び＃４では、より長い期間、より高い血漿中濃度が観察された。興味深いことに、これらの動物は、研究第１５日での抗ＫＬＨ  ＩｇＧ（及びＩｇＭ；データは示さない）リコール反応の完全な抑制を示した（すべての動物は、ＫＬＨに対する一次ＴＤＡＲを開始したことに留意されたい）。対照的に、より迅速なＣＦＺ５３３のクリアランスを有する動物（動物＃１と比較すると、動物＃３がより大きい遅延）では、特に血清ＣＦＺ５３３濃度が第２のＫＬＨ免疫化の時点でおよそ４０μｇ／ｍｌ未満である場合、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ反応が（いくらかの遅れを伴っているが）観察された。移植された（Ｃｏｒｄｏｂａ  ｅｔ  ａｌ．２０１５）及び移植されていない（図２２Ｂ）動物における、ＣＦＺ５３３での以前のインビボ実験で観察されている通り、末梢Ｂ細胞枯渇は、観察されなかった（データは示さない）。
【０３３５】
上の結果は、ＮＨＰにおけるリコールＴＤＡＲの完全な抑制のためにおよそ４０μｇ／ｍｌよりも高いＣＦＺ５３３血清中濃度が必要であることを示した。本発明者らは、ＣＦＺ５３３曝露とＣＤ４０経路関連の組織薬力学的効果との間の関係をさらに調べることを望んでいた。１ｍｇ／ｋｇ／週のＣＦＺ５３３（皮下）での２６週の毒性研究の停止時、本発明者らは、腸間膜リンパ節（ｍＬＮ）におけるＧＣの組織学的及び分子的分析を実施した。図２３Ｃ（ｉ）は、本発明者らが、投与された６匹の動物のうち、３匹の個体においてＧＣの完全な抑制を観察することができたのに対して、残りの動物のｍＬＮでは依然としてＧＣが観察されたことを示す。図２３Ｃ（ｉｉｉ）は、少なくとも３８μｇ／ｍＬの血清中濃度（投薬期間にわたる平均の定常状態濃度）がリンパ節の皮質Ｂ細胞領域におけるＧＣ発達の完全な抑制を伴っていたのに対して、全血ＣＤ２０ｐｏｓＢ細胞上の十分なＣＤ４０占有にもかかわらず（動物２６８４２及び２６７７２；データは示さない）、ＧＣの不完全な抑制（動物２６８４２）又は抑制なし（動物２６７７２及び２６８３７）が２０μｇ／ｍＬ未満の血清中濃度で観察されたことを示す。末梢Ｂ細胞枯渇の証拠は存在しなかった（データは示さない）。
【０３３６】
考察
ＣＦＺ５３３は、ＣＤ４０−ＣＤ１５４共刺激経路の調節不全を伴う実質臓器移植及び自己免疫疾患の潜在的治療法として開発されている。本発明者らは、本明細書において、ＣＤ４０経路関連のインビトロ及びインビボモデル系におけるＣＦＺ５３３の機能特性の特徴を記載し、またＣＦＺ５３３曝露とＰＤ効果との関係を追求する。
【０３３７】
ＣＦＺ５３３は、ＣＤ４０と結合し、Ｂ細胞及びＤＣを含めた様々なヒト免疫細胞型上のｒＣＤ１５４誘導性の経路活性化を完全に妨げることができた。さらに、ＣＦＺ５３３が全血における経路活性化を完全に遮断するために、９０％を超えるＣＤ４０占有が必要とされたように見える。まとめると、これらのデータは、十分な受容体占有が得られると仮定すれば、ＣＦＺ５３３が、細胞型に関係なくＣＤ４０経路依存性エフェクター機能を阻止する可能性を有することを示唆する。本発明者らのデータは、ＰＢＭＣでは、ＣＦＺ５３３が、ＣＤ４０から、あらかじめ結合されているｒＣＤ１５４を外して取って代わることができたことも示し、これは、ｍＡｂと生理的リガンドのエピトープが重複する可能性があること；構造研究における調査段階にある概念を示唆している。
【０３３８】
単一用量ＰＫ研究では、ＣＦＺ５３３について、インビボでの濃度依存性のクリアランス速度及び半減期が観察された。このＰＫプロフィールは、ＣＤ４０受容体発現がＣＦＺ５３３の排除に影響を与えることを示唆していた。低いＣＦＺ５３３濃度（すなわち不完全な標的飽和）では、ＣＦＺ５３３のクリアランス全体へのＣＤ４０の寄与が上昇し、半減期は、ＩｇＧ１型抗体について通常観察されるよりもいくらか短かった。完全な標的飽和（及び十分な機能上経路阻害）に対応するより高い濃度では、ＣＦＺ５３３のクリアランス全体への受容体の寄与が制限され、半減期が増大した。ＣＦＺ５３３の標的介在性のクリアランスは、インビトロで観察されたＣＦＺ５３３のＣＤ４０介在性の内在化（この複合体のリソソーム分解がこれに続くと思われる）と一致していた。
【０３３９】
ＰＫ／ＰＤ研究からの追加の発見は、ＣＦＺ５３３が末梢Ｂ細胞をインビボで枯渇できないことを裏付けた（Ｃｏｒｄｏｂａ  ｅｔ  ａｌ．２０１５）。言及した通り、ＣＦＺ５３３がＣＤ４０発現細胞を枯渇できないことは、ヒンジ領域内のＮ結合型グリコシル化の欠如をもたらしてＦｃγＲＩＩＩＡと結合できないように又はＡＤＣＣ又はＣＤＣを媒介できないようにする抗体におけるＮ２９７Ａ変異の存在に起因する。ＣＤ４０発現細胞型（特に炎症条件下での、免疫及び非免疫細胞型上のこの受容体の広い組織分布に特に関心が持たれる）の枯渇を防止するためにＣＦＺ５３３のＦｃ−サイレンシングを行った。
【０３４０】
ＮＨＰ腎移植における有効性（Ｃｏｒｄｏｂａ  ｅｔ  ａｌ．２０１５）に加えて、この文献における結果は、ＣＦＺ５３３がリコールＴＤＡＲを完全に阻害することを示した。この結果は、Ｔ細胞依存性抗原に対するメモリーＢ細胞の反応がＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用に十分に依存していることを示唆していた。リコール反応の阻害の程度は、ＣＦＺ５３３の濃度に関連するように見え、（追加免疫後の少なくとも１週間の）３０〜４０μｇ／ｍｌを超える血清レベルが抗原特異的な抗体反応の十分な抑制のために必要である。血清中濃度と、ＣＤ４０経路関連の組織ＰＤ読み取りとの間のこの関係は、腸間膜リンパ節ＧＣに対するＣＦＺ５３３の効果を調べる場合にも適用され、ここで、平均の定常状態血清ＣＦＺ５３３濃度の最小閾値がＧＣの完全な抑制のために必要であった。これらのデータは、投薬戦略を提供するための、末梢の薬物曝露と、組織における標的関連のＰＤ効果との間の関係を確立することの重要性を指し示す。ＣＤ４０−ＣＤ１５４共刺激経路を標的にするいくつかの生物製剤が様々な自己免疫疾患のために開発されている。血栓塞栓症のリスクの可能性（Ｂｏｕｍｐａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）にもかかわらず、ＣＦＺ５３３のような抗ＣＤ４０  ｍＡｂに加えて、抗ＣＤ１５４  ｍＡｂが引き続き臨床中である。最近の結果は、Ｆｃサイレンシング及びペグ化Ｆ（ａｂ’）２手法が、ＣＤ１５４を標的にする抗体の血栓塞栓傾向を排除することができることを示唆している。しかし、Ｆｃサイレント抗ＣＤ１５４  ｍＡｂは、効果が低い可能性があるという報告が存在する。これまで、前臨床モデルにおける又は臨床中の複数の抗ＣＤ４０抗体の投与に伴う血栓塞栓症の証拠は存在しない。
【０３４１】
結論として、本発明者らのデータは、ＣＦＺ５３３が、最小のアゴニスト特性を有する経路遮断性の非細胞枯渇抗ＣＤ４０抗体であることを示す。十分で薬理学的に適切な曝露で、ＣＦＺ５３３は、ＣＤ４０発現細胞型を枯渇せずに、リコールＴＤＡＲを完全に阻害し、また胚中心を抑制することができる。これらのデータは、腎移植における前臨床有効性と組み合わせて、選択された自己免疫疾患及び実質臓器移植におけるＣＦＺ５３３の臨床的有用性の可能性の確固たる科学的な理論的根拠を提供する。
【０３４２】
参考文献
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【図１】
2021501748.tif 000019
【図２】
2021501748.tif 000020
【図３】
2021501748.tif 000021
【図４】
2021501748.tif 000022
【図５】
2021501748.tif 000023
【図６】
2021501748.tif 000024
【図７】
2021501748.tif 000025
【図８】
2021501748.tif 000026
【図９】
2021501748.tif 000027
【図１０】
2021501748.tif 000028
【図１１】
2021501748.tif 000029
【図１２】
2021501748.tif 000030
【図１３】
2021501748.tif 000031
【図１４】
2021501748.tif 000032
【図１５】
2021501748.tif 000033
【図１６】
2021501748.tif 000034
【図１７】
2021501748.tif 000035
【図１８】
2021501748.tif 000036
【図１９】
2021501748.tif 000037
【図２０】
2021501748.tif 000038
【図２１】
2021501748.tif 000039
【図２２】
2021501748.tif 000040
【図２３】
2021501748.tif 000041
【図２４】
2021501748.tif 000042
【図２５】
2021501748.tif 000043
【図２６】
2021501748.tif 000044
【図２７】
2021501748.tif 000045
【配列表】
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【国際調査報告】
2021501748.tif 000046
2021501748.tif 000047
2021501748.tif 000048
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