(57)【要約】  本発明は、生理学的に許容可能な色素を腫瘍に加えて膀胱癌の治療コースの進捗度及び有効性を測定することによる、膀胱癌と診断された対象における膀胱癌治療コースの進捗及び有効性を測定する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
膀胱癌と診断された対象における膀胱癌治療コースの進捗及び有効性を測定する方法であって、
（ａ）生理学的に許容可能な溶液又は担体中の、膀胱の内壁における腫瘍組織を選択的に染色するのに有効な濃度の、ある容積の生理学的に許容可能な腫瘍選択的色素又は染色剤を前記対象の膀胱に注入するステップ、
（ｂ）前記対象に対して膀胱鏡で膀胱鏡的手技を行うことにより、ステップ（ａ）によって染色された任意の膀胱腫瘍を検出及び測定するステップであって、前記膀胱鏡が、前記対象の膀胱の内部を観察するための内視鏡と、前記対象の膀胱の内部を照明するためのシステムとを含むステップ、
（ｃ）前記対象の膀胱癌を治療するステップ、
（ｄ）ステップ（ｃ）の後にステップ（ａ）及び（ｂ）を繰り返すステップ、
（ｅ）ステップ（ｃ）及び（ｄ）の連続測定値を比較して前記膀胱癌治療コースの進捗度及び有効性を測定するステップ
を含む方法。
【請求項２】
前記抗膀胱癌療法が、経尿道的膀胱腫瘍切除術（ＴＵＲＢＴ）、抗癌化学療法、放射線療法及び免疫療法からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗膀胱癌療法が、抗癌化学療法、放射線療法及び免疫療法からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗膀胱癌療法が抗癌化学療法及び／又は免疫療法である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ステップ（ｃ）が、前記対象の膀胱癌の治療に関する臨床的判断に伴い繰り返され、ここでステップ（ａ）及び（ｂ）が、２日毎、毎週、２週間毎、毎月、２ヵ月毎、及び６ヵ月毎からなる群から選択される間隔を置いて、前記対象の膀胱癌が寛解に入るまで、又は前記治療プロトコルの変更が必要になるまで繰り返される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗膀胱癌療法が膀胱内経路又は全身経路によって投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記抗膀胱癌療法が免疫療法である、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記免疫療法が、膀胱内カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン療法、全身免疫チェックポイント療法、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞療法からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＮＫ細胞が同種異系由来及び自己由来であり、又はインビトロで活性化されて前記対象に再注入される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＮＫ細胞が前記対象にとって同種異系由来及び自己由来であり、
ここで前記自己ＮＫ細胞が、
（ａ）前記対象の血液からＮＫ細胞を単離すること、
（ｂ）前記単離されたＮＫ細胞をエキソビボで好適な細胞培養培地中において拡大すること、及び
（ｃ）ステップ（ｂ）によって拡大された前記自己ＮＫ細胞を回収すること
によって入手される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記回収した自己ＮＫ細胞を前記対象に注入し戻すステップを更に含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＮＫ細胞が、遺伝子修飾されたＮＫ−９２細胞である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＮＫ細胞が、前記ＮＫ細胞の表面上に少なくとも１つのマーカー又は抗原を発現するように修飾され、ここで前記マーカーが、前記ＮＫ細胞による前記対象の膀胱腫瘍への標的化した結合をもたらす、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＮＫ細胞が、前記対象の血流中への注入によって投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
自己ＮＫ細胞が、前記対象に１つ以上のＮＫ活性化サイトカインを投与することによりインビトロでインビトロで活性化される、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
前記腫瘍選択的色素又は染色剤が、メチレンブルー（塩化メチルチオニン）、トルイジンブルー（塩化トロニウム）、及びエバンスブルー、及び／又はゲンチアナバイオレットからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記超生体染色色素がメチレンブルーである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記腫瘍選択的色素又は染色剤が、腫瘍細胞によって取り込まれると光活性ポルフィリン化合物に変換される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記腫瘍選択的色素又は染色剤がヘキサアミノレブリン酸塩酸塩である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象の膀胱の内部を照明するためのシステムが、白色光源、青色光源、レーザー照明器及びこれらの組み合わせからなる群から選択される光源を含む、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、概して、免疫療法による膀胱癌の治療方法及びかかる治療を必要としている対象における治療の経過のモニタリング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
本背景技術の記載には、本発明の理解に有用であり得る情報が含まれる。これは、本明細書に提供される任意の情報が先行技術である若しくはここに特許請求される発明に関連すること、又は具体的若しくは暗黙的に参照される任意の文献が先行技術であることを認めるものではない。
【０００３】
膀胱癌は、膀胱の細胞から発生する癌の一種である。９０％超の膀胱癌が、尿路上皮（ｕｒｏｔｈｅｌｅｕｍ）から生じる移行上皮癌として発生する。尿路上皮（ｕｒｏｔｈｅｌｅｕｍ）は、膀胱の内壁の上皮層である。膀胱に見られる他の癌種には、扁平上皮癌、腺癌、肉腫及び小細胞癌が含まれる。膀胱癌の診断及び治療は、癌がどのステージで発見されるかに依存するところが大きい。米国特許第９５２３６８９号明細書に要約されるとおり、膀胱癌は、腫瘍−結節−転移（ＴＮＭ）分類（対がん米国合同委員会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｉｎｔ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ））によりステージを決定することができる。ＴＮＭ方式では、膀胱癌腫瘍が詳細な特性によって区分される。例えば、粘膜上皮に限局している乳頭状腫瘍など、筋肉にない浸潤性腫瘍は、Ｔａ腫瘍として定義される。別の例において、上皮下組織（即ち、固有層）に浸潤する腫瘍は、Ｔ１腫瘍として定義される。特徴的な形態及び動的表現型を有する腫瘍は、上皮内癌（Ｔｉｓ）と見なされる。浸潤性腫瘍（Ｔ２〜４ａ及びＴ２〜４ｂ）は、病理組織学的検査によって明らかになるとおりのその肉眼的浸潤の程度に基づき更に区分される。従って、Ｔ２腫瘍は筋層まで達している。Ｔ３腫瘍は膀胱周囲の脂肪組織まで達しており、Ｔ４腫瘍は骨盤壁又は腹壁に到達するまで増殖している。
【０００４】
初期膀胱癌の検出及び診断に最も有効な手段の一つは膀胱鏡である。膀胱鏡は、Ｓａｍｐｌａｓｋｉ  ａｎｄ  Ｊｏｎｅｓ，２００９（ＢＪＵ  Ｉｎｔ．１０３（２）：１５４−８）によれば、少なくとも２世紀にわたる開発の産物である。現代の膀胱鏡は、光源及びカメラを備えた、剛性又は可撓性チューブの付いた内視鏡であり、尿道及び膀胱の内壁の目視検査、並びに任意選択で、尿道を通じた外科的介入又は組織標本採取が可能である。現在、癌の診断及びモニタリングには他のイメージング及び検出技術も利用可能になっているが、膀胱鏡には多くの利点がある。例えば、膀胱鏡では膀胱の内壁を直接可視化することができ、経尿道的生検標本採取又は尿路上皮（ｕｒｏｔｈｅｌｅｕｍ）上若しくはその近傍に見える表在性腫瘍の外科的除去が可能である。
【０００５】
膀胱の内壁又はその上に存在する腫瘍組織の可視化を助ける幾つもの方法が用いられている。その一つは、例えば、Ｇｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，（“Ｇｉｌ，”Ｃａｎｃｅｒ，５３：２１２４−２１２７）によって記載されるとおりの、膀胱癌をメチレンブルーで表面染色する選択的染色である。
【０００６】
米国特許第５３０１６８８号明細書は、癌性の尿路上皮と正常な尿路上皮との分染をもたらす膀胱内エレクトロモティーブ（ｅｌｅｃｔｒｏｍｏｔｉｖｅ）色素投与について記載している。この‘６８８号特許は、電気的勾配を利用してメチレンブルーなどの色素を腫瘍細胞に能動的に輸送する。
【０００７】
米国特許第６０８３４８７号明細書は、光増感剤としてのメチレンブルー又はトルイジンブルーによる膀胱腫瘍の膀胱内染色と、それに続く、メチレンブルー又はトルイジンブルー色素が結合した腫瘍組織に蛍光を誘起するのに適切な波長、例えば６３０又は６６０ｎｍでの膀胱壁のレーザー照射について記載している。
【０００８】
また、膀胱癌、特に上皮内癌（ＣＩＳ）の検出を増強するように設計されたポルフィリンベースの商業的システムもある。例えば、米国特許第７８５０００８号明細書を参照のこと。Ｃｙｓｖｉｅｗ（登録商標）（ヘキサアミノレブリン酸塩酸塩；欧州ではＨｅｘｖｉｘ（登録商標））は、Ｐｈｏｔｏｃｕｒｅ  ＡＳＡからＩｐｓｅｎによってライセンス化された光学イメージング造影剤である。ヘキサアミノレブリン酸塩酸塩は、米国では青色光膀胱鏡検査法によるＴａｔ１レベルの筋層非浸潤性乳頭状膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）の膀胱鏡的検出への使用がＦＤＡ承認を受けている。ヘキサアミノレブリン酸塩酸塩染色は、ＫＡＲＬ  ＳＴＯＲＺ  Ｄ−Ｌｉｇｈｔ  Ｃ光線力学的診断（ＰＤＤ）システムで膀胱腫瘍の検出を増強するためＢＬＣ（商標）（青色光膀胱鏡検査法セッティング）（モード２）による膀胱鏡検査法の実施に用いられている。この機構は、急速に分裂する腫瘍細胞におけるポルフィリンの選択的蓄積として説明される。Ｐｈｏｔｏｃｕｒｅは、膀胱癌患者の治療後モニタリングへのＣｙｓｖｉｅｗ（登録商標）の使用についてＦＤＡ承認を求めている。しかしながら、ポルフィリンには、ヘキサアミノレブリン酸塩酸塩から誘導されたものを含め、公知のアレルギー反応及び感作発生などの幾つもの欠点があり、全ての対象に好適となるわけではない。
【０００９】
膀胱癌の治療方法としては、経尿道的膀胱腫瘍切除術（ＴＵＲＢＴ）、抗癌化学療法、放射線療法及び免疫療法が挙げられる。化学療法には細胞複製又は細胞代謝の破壊が関わり、これは依然として癌の主要な治療選択肢の一つである。化学療法、又は各種放射線療法と併用した化学療法は有効であり得るが、重度の副作用があり得る。この毒性の副作用のため、かかる化学療法及び／又は放射線療法を受ける多くの対象は全化学療法レジームを無事に終えることができない。免疫療法の進歩は旧来の方法と比べて利益をもたらし、特定の標的細胞に対して細胞傷害活性を呈する免疫系の細胞を利用又は活性化する。
【００１０】
免疫療法の一つの形態は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活用する。ＮＫ細胞は、自然免疫系の主要な構成要素を成す細胞傷害性リンパ球である。ＮＫ細胞は、概して循環リンパ球の約１０〜１５％を占める。ＮＫ細胞は、抗原に関して非特異的に、且つ事前の免疫感作なしに、ウイルス感染細胞及び多くの悪性細胞を含めた標的細胞に結合してそれを死滅させる。Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２１４：２４（１９８１）。ＮＫによる標的細胞の死滅は、細胞溶解を誘導することにより起こる。この目的で利用されるＮＫ細胞は、対象の血液の末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）画分から単離され、十分な数の細胞を得るため細胞培養下で拡大され、次に対象に再注入される。ＮＫ細胞は、エキソビボ療法及びインビボ治療の両方で何らか有効であることが示されている。ＮＫ−９２は、非ホジキンリンパ腫に罹患している対象の血中に発見され、次にエキソビボで不死化された細胞溶解性癌細胞株である。ＮＫ−９２細胞はＮＫ細胞に由来するが、正常なＮＫ細胞によって提示される主要な抑制性受容体を欠いており、しかし一方で活性化受容体の大部分は保持している。しかしながら、ＮＫ−９２細胞は正常細胞を攻撃せず、またヒトにおいて容認できない免疫拒絶反応を誘発することもない。ＮＫ−９２細胞株の特徴付けについては、例えば、国際公開第１９９８０４９２６８号パンフレット、米国特許出願公開第２００４００５２７７０号明細書、及び米国特許出願公開第２００２００６８０４４号明細書によって開示されている。ＮＫ−９２細胞は、ある種の癌の治療における治療剤として評価されているが、腫瘍サイズ及び腫瘍容積が減少する経過を治療初期に確認することは依然として困難である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
従って、当該技術分野においては、膀胱癌治療下の対象における個別化された抗膀胱癌療法の有効性を立証又は実証する、費用対効果の高い、効率的で、且つ比較的迅速な方法が、長年にわたり必要とされ続けている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
従って、本発明は、膀胱癌と診断された対象における抗膀胱癌治療の有効性を確認する方法を提供する。一実施形態において、この方法は、
（ａ）生理学的に許容可能な溶液又は担体中の、膀胱の内壁における腫瘍組織を選択的に染色するのに有効な濃度の、ある容積の生理学的に許容可能な腫瘍選択的色素又は染色剤を対象の膀胱に注入するステップ、
（ｂ）対象に対して膀胱鏡で膀胱鏡的手技を行うことにより、ステップ（ａ）によって染色された任意の膀胱腫瘍を検出及び測定するステップであって、膀胱鏡が、対象の膀胱の内部を観察するための内視鏡と、対象の膀胱の内部を照明するためのシステムとを含むステップ、
（ｃ）対象の膀胱癌を治療するステップ、
（ｄ）ステップ（ｃ）の後に、必要に応じてステップ（ａ）及び（ｂ）を繰り返すステップ、
（ｅ）ステップ（ｃ）及び（ｄ）の連続測定値を比較して膀胱癌治療コースの進捗度及び有効性を測定するステップを含む。対象の膀胱の内部を照明するための膀胱鏡は、光源、例えば、白色光源、青色光源、レーザー照明器及び／又はこれらの組み合わせなどを含む。例えば、白色光源をレーザー照明器と同時に使用して、メチレンブルー及び／又はトルイジンブルー染色された癌組織を光活性化及び可視化することができる。青色光源を利用すると、腫瘍細胞内で光活性化可能化合物に代謝される色素を選択的に取り込んだ腫瘍組織を光活性化及び可視化することができる。
【００１３】
本発明によれば、ステップ（ｃ）は、対象の膀胱癌の治療に関する臨床的判断に伴い繰り返され、ここでステップ（ａ）及び（ｂ）は、２日毎、毎週、２週間毎、毎月、２ヵ月毎、及び／又は６ヵ月毎など、当業者が臨床的に適切と判断するとおりの間隔を置いて、対象の膀胱癌が寛解に入るまで、又は治療プロトコルの変更が必要になるまで繰り返される。
【００１４】
抗膀胱癌療法には、個別に、逐次的に及び／又は任意の組み合わせで投与される、例えば、経尿道的膀胱腫瘍切除術（ＴＵＲＢＴ）、抗癌化学療法、放射線療法及び免疫療法が含まれる。好ましくは、抗膀胱癌療法には免疫療法が含まれる。特定の実施形態において、抗膀胱癌療法は任意選択で膀胱内経路及び／又は全身経路により投与される。
【００１５】
抗膀胱癌療法に免疫療法が含まれるとき、免疫療法は、以下のモダリティ：膀胱内カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン療法、全身免疫チェックポイント療法、及びＮＫ細胞療法のうちの１つ以上である。
【００１６】
詳細な実施形態において、免疫療法がＮＫ細胞療法であるとき、ＮＫ細胞は同種異系由来及び自己由来であり、又はインビトロで活性化され、任意選択で、細胞を入手した対象に再注入される。ＮＫ細胞が対象にとって同種異系由来及び自己由来である場合、
自己ＮＫ細胞は、
（ａ）対象の血液からＮＫ細胞を単離すること、
（ｂ）単離されたＮＫ細胞をエキソビボで好適な細胞培養培地中において拡大すること、及び
（ｃ）ステップ（ｂ）によって拡大された自己ＮＫ細胞を回収すること
によって入手される。
【００１７】
更なるステップには、例えば、回収した自己ＮＫ細胞を対象に注入し戻すことが含まれる。
【００１８】
代替的実施形態において、ＮＫ細胞は、遺伝子修飾されているＮＫ−９２細胞である。遺伝子修飾されたＮＫ細胞は、例えば、ＮＫ細胞の表面上に少なくとも１つのマーカー又は抗原を発現するように修飾されており、ここでマーカーは、ＮＫ細胞による対象の膀胱腫瘍への標的化した結合をもたらす。更なる実施形態において、自己ＮＫ細胞は、１つ以上のＮＫ活性化サイトカインを対象に投与することによりインビトロで活性化される。
【００１９】
上記に記載されるＮＫ細胞のいずれも、対象の血流中に、及び／又は直接的に治療しようとする固形腫瘍若しくは癌の中若しくはその近傍に注入することにより対象に投与し得る。
【００２０】
一実施形態において、腫瘍選択的色素又は染色剤は、ヘキサアミノレブリン酸塩酸塩など、腫瘍細胞によって選択的に取り込まれると光活性ポルフィリン化合物に変換される色素である。
【００２１】
代替的実施形態において、腫瘍選択的色素又は染色剤は、腫瘍細胞によって選択的に取り込まれると光活性ポルフィリン化合物に変換される色素であるいかなる腫瘍選択的色素又は染色剤も除外する。
【００２２】
更なる実施形態において、超生体染色色素又は染色剤は、メチレンブルー（塩化メチルチオニン）、トルイジンブルー（塩化トロニウム）、エバンスブルー、及び／又はゲンチアナバイオレットからなる群から選択される。ヘキサアミノレブリン酸塩酸塩は別の色素であり、特定の種類の膀胱癌の診断用にＦＤＡ承認を受けている。
【００２３】
定義
本発明を理解するため、以下の用語が定義される。特に指示されない限り、以下に挙げる用語が使用されることになり、特に指示されない限り、記載のとおり定義されることが意図される。本明細書全体を通じて他の用語の定義が現れ得る。単数形の用語は全て、特に指示されない限り、用語の複数形、能動態及び過去形も包含することが意図される。
【００２４】
抗膀胱癌治療の「有効量」は、対象の膀胱腫瘍の成長を阻害し、減速させ、又は好転させるなど、有益な又は所望の結果を生じさせるのに十分な量である。腫瘍選択的色素又は染色剤の有効量とは、隣接正常組織に偽陽性染色を生じることなく腫瘍細胞を選択的に染色するのに十分な範囲の量又は濃度である。
【００２５】
語句「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、組成物又は方法が追加的な成分及び／又はステップを含み得るが、但し、その追加的な成分及び／又はステップが特許請求される組成物又は方法の基本的な及び新規の特徴を実質的に変えない、即ち、１つ又は複数の追加的な成分及び／又はステップが特許請求される組成物又は方法にとって実質的な目的を何ら果たさない場合に限ることを意味する。
【００２６】
当該技術分野において理解されるとおり、用語「腫瘍」及び「癌」は、重複する用語である。「腫瘍」は、広義には、生物に見られる腫瘤塊又は増殖であると考えられる。腫瘍細胞は、かかる腫瘤塊に由来する細胞である。腫瘍は良性又は癌性であり得る。癌性腫瘍、又は「癌」は、制御不能に広がり他の組織に浸潤し、又は血液癌の場合には循環系を打ちのめし、及び／又は体の他の部分に癌を播き得る組織増殖である。癌細胞は、癌に由来する細胞である。本発明の目的上、用語「腫瘍細胞」及び「癌細胞」は同義的に使用され、両方とも、腫瘍若しくは癌に見られる又は腫瘍若しくは癌から誘導及び培養された哺乳類細胞であって、分化した哺乳類細胞が呈する制限なしに異常に複製する哺乳類細胞を指すものと理解される。
【００２７】
また、本願全体を通じて便宜的に「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」などの単数形が使用されるが、文脈上又は明示的記載により特に指示される場合を除き、そうした単数形が複数形を含むものと意図されることも理解されなければならない。更に、本明細書において言及されるあらゆる学術誌論文、特許、特許出願、刊行物などが、本明細書によって全体としてあらゆる目的から参照により援用されることが理解されなければならない。
【００２８】
数値範囲は全て、その数値範囲内にあるあらゆる数値点を含むと理解されなければならず、且つあらゆる数値点を個別に記載していると解釈されなければならない。同じ構成要素又は特性に関する全ての範囲の端点は含まれ、独立に組み合わせ可能であることが意図される。
【００２９】
本明細書で使用されるとき、用語「約」は、報告される数値の１０％以内、好ましくは報告される数値の５％以内を意味する。
【００３０】
本発明に係る「対象」又は「患者」は、腫瘍又は癌を有するヒト患者など、ヒト対象である。特定の実施形態において、本発明はまた、獣医学実践においても、かかる治療を必要としている任意の対象、即ち脊椎動物に適用することができる。これには、例えば、本発明の方法が必要とされる非ヒト霊長類、イヌ類、ネコ類、ブタ類、ウマ類、及び／又は任意の他の哺乳類などの哺乳類が含まれる可能性がある。
【００３１】
以下の図面の説明及び発明の詳細な説明から、本発明の主題の様々な目的、特徴、態様及び利点が更に明らかとなるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
従って、本発明は、
（ａ）生理学的に許容可能な溶液又は担体中の、膀胱の内壁における腫瘍組織を選択的に染色するのに有効な濃度の、ある容積の生理学的に許容可能な腫瘍選択的色素又は染色剤を対象の膀胱に注入するステップ、
（ｂ）対象に対して膀胱鏡で膀胱鏡的手技を行うことにより、ステップ（ａ）によって染色された任意の膀胱腫瘍を検出及び測定するステップであって、膀胱鏡が、対象の膀胱の内部を観察するための内視鏡と、対象の膀胱の内部を照明するためのシステムとを含むステップ、
（ｃ）対象の膀胱癌を治療するステップ、    
（ｄ）ステップ（ｃ）の後にステップ（ａ）及び（ｂ）を繰り返すステップ、
（ｅ）ステップ（ｃ）及び（ｄ）の連続測定値を比較して膀胱癌治療コースの進捗度及び有効性を測定するステップ
による、膀胱癌と診断された対象における膀胱癌治療コースの進捗及び有効性を測定する方法を提供する。
【００３３】
本発明によれば、ステップ（ｃ）は、対象の膀胱癌の治療に関する臨床的判断に伴い繰り返され、ここでステップ（ａ）及び（ｂ）は、２日毎、毎週、２週間毎、毎月、２ヵ月毎、及び／又は６ヵ月毎など、当業者が臨床的に適切と判断するとおりの間隔を置いて、対象の膀胱癌が寛解に入るまで、又は治療プロトコルの変更が必要になるまで繰り返される。
【００３４】
膀胱鏡及び膀胱鏡検査法は当該技術分野において周知であり、当該技術分野において公知の任意の好適な膀胱鏡検査用機器及び技法が本発明の実施に容易に適合する。フレキシブル膀胱鏡は、対象が局所麻酔を受けるだけでよく、本発明に係る反復検査に最も適している。好適な機器は、例えば、Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｓｔｒｙｋｅｒ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｅｎｄｏｓｃｏｐｙ  Ｄｅｖｉｃｅｓ（ＡＥＤ）、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｗｏｌｆ、Ｆｕｊｉｎｏｎなどから入手することができる。
【００３５】
対象の膀胱の内部を照明するためのシステムは、光源、例えば、白色光源、青色光源、レーザー照明器及び／又はこれらの組み合わせなどである。光エネルギーは好適な導光ファイバーによって膀胱の内側に送達されるか、又は挿入された小型照明器、例えば小型発光ダイオード光源から直接送達される。加えて、白色光源をレーザー照明器と同時に、又はそれに代えて使用して、メチレンブルー及び／又はトルイジンブルー又は他の適切な染色剤若しくは色素で染色された癌組織を光活性化及び可視化することができる。青色光源を利用すると、腫瘍細胞内で光活性化可能化合物である色素又は代謝されると光活性化可能化合物を形成する色素を選択的に取り込んだ腫瘍組織を光活性化及び可視化することができる。
【００３６】
抗膀胱癌療法には、個別に、逐次的に又は任意の組み合わせで投与される、例えば、経尿道的膀胱腫瘍切除術（ＴＵＲＢＴ）、抗癌化学療法、放射線療法及び免疫療法が含まれる。
【００３７】
抗膀胱癌療法は、抗癌化学療法剤を、単独で、又は免疫療法、放射線療法及び／又は癌性膀胱組織の外科的除去、若しくは膀胱癌が発生源の腫瘍の外科的除去との併用のいずれかで投与することを含む。抗癌化学療法剤は、小分子薬物又は生物学的製剤、例えばモノクローナル抗体であり得る。米国国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）のウェブページ（ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ）によれば、米国ＦＤＡによって承認された抗膀胱癌化学療法剤としては、限定はされないが、アテゾリズマブ、Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標）（アベルマブ）、シスプラチン、塩酸ドキソルビシン、Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標）（デュルバルマブ）  Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）、Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）（ニボルマブ）  ペンブロリズマブ、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）（シスプラチン）  Ｐｌａｔｉｎｏｌ−ＡＱ（登録商標）（シスプラチン）、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）、及び（Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ（登録商標））チオテパが挙げられる。
【００３８】
抗膀胱癌化学療法剤は多くの場合に併用で投与され、例えば、シスプラチンとゲムシタビンとの併用治療コース、カルボプラチン（パラプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ））とゲムシタビンとの併用治療コース、及びＭＶＡＣ治療コースが挙げられる。ＭＶＡＣは、個別に投与される４種の薬物：メトトレキサート、ビンブラスチン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、及びシスプラチンによる治療コースである。これら及び他の化学療法剤は、１つ以上の個別の投与経路によって、及び１つ以上の投薬スケジュールに従い投与することができる。ＭＶＡＣはまた、任意選択でドーズデンスな（ＤＤ）ＭＶＡＣとしても投与される。これは、急速に複製する腫瘍細胞をより有効に死滅させ又は阻害するため、標準ＭＶＡＣに用いられるものと比べて少ない日数に圧縮された投与スケジュールによるＭＶＡＣ治療として当該技術分野において公知である。
【００３９】
詳細な一実施形態において、抗膀胱癌療法は免疫療法である。免疫療法には、膀胱内カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン療法が含まれ得る。免疫療法にはまた、米国特許第８１０１１７３号明細書により記載されるとおり、膀胱の腫瘍又は膀胱の腫瘍から生じた転移が流れ出る１つ以上のセンチネル節又はセンチネルリンパ節から入手可能な腫瘍応答性ＣＤ４ヘルパー及び／又はＣＤ８＋  Ｔリンパ球を拡大したものを注入することも含まれ得る。本発明に係る他の免疫療法には、全身免疫チェックポイント療法、例えば、疾患の進行又は許容できない毒性が生じるまで６０分間かけて注入するニボルマブ２４０ｍｇ  ＩＶ  ｑ２ｗｋ、疾患の進行又は許容できない毒性が生じるまで６０分間かけて注入するデュルバルマブ１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ  ｑ２ｗｋ、疾患の進行又は許容できない毒性が生じるまで６０分間かけて注入するアベルマブ１０ｍｇ／ｋｇを投与すること［１７］、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞療法が含まれる。
【００４０】
特定の詳細な実施形態において、免疫療法は、治療用ＮＫ細胞の投与による。臨床要件に依存して、ＮＫ細胞は同種異系由来及び自己由来であり、又はインビトロで活性化されて対象に再注入される。ＮＫ細胞が対象にとって同種異系由来及び自己由来である場合、自己ＮＫ細胞は、
（ａ）対象の血液からＮＫ細胞を単離すること、
（ｂ）単離されたＮＫ細胞をエキソビボで好適な細胞培養培地中において拡大すること、及び
（ｃ）ステップ（ｂ）によって拡大された自己ＮＫ細胞を回収すること、及び必要に応じてその回収した自己ＮＫ細胞を対象に注入し戻すこと
により入手される。
【００４１】
例えば、ＣＤ３＋  Ｔ細胞枯渇と、続くＣＤ５６＋細胞ポジティブ選択によるＮＫ細胞の入手からなる二段階免疫磁気手順について記載するＴｏｒｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１０１５，Ｂｌｏｏｄ  Ｔｒａｎｓｆｕｓ  １３；４６４−７１  ＤＯＩ１０．２４５０／  ２０１５．０２３１−１４を参照のこと。
【００４２】
更なる実施形態において、自己ＮＫ細胞は、ＩＬ−１５などの１つ以上のＮＫ活性化サイトカインを対象に投与することによりインビトロで活性化される。更に別の実施形態において、ＮＫ細胞は、例えば、ＮＫ細胞の表面上に少なくとも１つのマーカー又は抗原を発現するように修飾されたＮＫ細胞を含む遺伝子修飾されたＮＫ−９２細胞であり、ここでマーカーは、ＮＫ−９２細胞による対象の膀胱腫瘍細胞への標的化した結合をもたらし、及び／又はインビボでのＮＫ細胞の可視化又はモニタリングを可能にする。
【００４３】
より詳細な実施形態において、遺伝子操作された同種異系ＮＫ細胞は、かかる細胞を（阻害の欠如又は低下によって）構成的に活性化したものにするであろう少なくとも１つのキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）の発現が低下又は消失したＮＫ−９２誘導体（即ち、遺伝子修飾されたＮＫ−９２細胞）である。これらについては、例えば、国際公開第２０１７１００７０９号パンフレットによって記載されている。従って、好適な修飾ＮＫ細胞は、ＭＨＣクラスＩ分子との相互作用が低下又は消失するように突然変異している１つ以上の修飾キラー細胞免疫グロブリン様受容体を有し得る。当然ながら、１つ以上のＫＩＲはまた欠失させてもよく、又は発現を（例えば、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ等によって）抑制してもよいことに留意しなければならない。最も典型的には、２つ以上のＫＩＲを突然変異させ、欠失させ、又はサイレンシングすることになり、特に企図されるＫＩＲには、短い又は長い細胞質テールを備えた、２又は３ドメインを有するものが含まれる。別の見方をすれば、修飾された、サイレンシングされた、又は欠失したＫＩＲは、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、及び／又はＫＩＲ３ＤＳ１を含むことになる。かかる修飾ＮＫ−９２細胞は、例えば、当該技術分野において周知のサイレンシングプロトコル、ＣＩＲＳＰＲ−ＣＡＳゲノム編集、又はノックアウト若しくはノックダウンプロトコルを用いて調製し得る。或いは、かかる修飾ＮＫ−９２細胞はまた、ＮａｎｔＫｗｅｓｔ（Ｎａｎｔｋｗｅｓｔ．ｃｏｍウェブサイトを参照）からａＮＫ細胞（「活性化ナチュラルキラー細胞）として商業的に入手されてもよい。かかる細胞は、次に宿主生物のＮＫ細胞の１つ以上の抑制性受容体に対する１つ以上のリガンドを発現するように更に修飾されてもよい。
【００４４】
ＮＫ−９２細胞は、ＮＫ細胞に関連する活性化受容体及び細胞溶解経路のほぼ全てを保持しているが、その細胞表面上にＣＤＩ６を発現しない。ＣＤ１６はＦｃ受容体であり、抗体のＦｃ部分を認識し、それに結合して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のためにＮＫ細胞を活性化する。ＣＤ１６受容体がないため、ＮＫ−９２細胞はＡＤＣＣ機構によって標的細胞を溶解することができない。従って、本発明の別の態様において、遺伝子操作されたＮＫ細胞はまた、国際公開第２０１６１６０６０２号パンフレットにより記載されるとおり高親和性Ｆｃγ受容体（例えば、ＣＤ１６、Ｖ１５８）を発現するように修飾されているＮＫ−９２誘導体であってもよい。Ｆｃγ受容体の高親和性変異体の配列は当該技術分野において周知であり、全ての作成及び発現方法が、本明細書での使用に好適と見なされる。これらの受容体の働きに関していかなる理論又は仮説によっても拘束されることは意図しないが、かかる受容体の発現が、患者の腫瘍細胞（例えば、ネオエピトープ）、特定の腫瘍型（例えば、ｈｅｒ２ｎｅｕ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ等）、又は癌に関連するもの（例えば、ＣＥＡ−ＣＡＭ）に特異的な抗体を用いた腫瘍細胞の特異的標的化を可能にすると考えられる。
【００４５】
有利には、かかる抗ネオエピトープ抗体は市販されており、ＮＫ−９２誘導体細胞（例えば、Ｆｃγ受容体に結合したもの）と併せて使用することができる。或いは、かかる細胞はまた、ＮａｎｔＫｗｅｓｔからｈａＮＫ細胞（「高親和性ナチュラルキラー細胞）として商業的に入手されてもよい。かかる細胞は、次に宿主生物のＮＫ細胞の１つ以上の抑制性受容体に対する１つ以上のリガンドを発現するように更に修飾されてもよい。
【００４６】
本発明の更なる態様において、遺伝子操作されたＮＫ細胞はまた、国際公開第２０１６１６０６２１号パンフレットにより記載されるとおり、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子操作されてもよい。特に好ましい態様において、キメラ抗原受容体は、腫瘍関連抗原、腫瘍特異抗原、及び癌ネオエピトープに対して結合特異性を有するｓｃＦｖ部分又は他の外部ドメインを有することになる。先述のとおり、かかるキメラＴ細胞受容体を発現するようにＮＫ細胞を遺伝子操作する当該技術分野で公知の方法は多数あり、かかる当該技術分野で公知の方法は全て、本明細書での使用に好適と見なされる。或いは、かかる細胞はまた、ＮａｎｔＫｗｅｓｔからｔａＮＫ細胞（「標的活性化ナチュラルキラー細胞」）として商業的に入手されてもよい。かかる細胞は、次に宿主生物のＮＫ細胞の１つ以上の抑制性受容体に対する１つ以上のリガンドを発現するように更に修飾されてもよい。
【００４７】
癌関連抗原又は癌関連抗原に特異性を備える抗体に対して親和性を有するようにＮＫ細胞が操作される場合、あらゆる既知の癌関連抗原が使用に適切と見なされることが企図される。例えば、癌関連抗原としては、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＣＹＰＢ１等が挙げられる。同様に、癌特異抗原又は癌特異抗原への特異性を備える抗体に対して親和性を有するように細胞が操作される場合、あらゆる既知の癌特異抗原が使用に適切と見なされることが企図される。例えば、癌特異抗原としては、ＰＳＡ、Ｈｅｒ−２、ＰＳＡ、ブラキウリ等が挙げられる。癌ネオエピトープ又は癌ネオエピトープへの特異性を備える抗体に対して親和性を有するように細胞が操作される場合、ネオエピトープを同定するあらゆる既知の方法が好適な標的につながるであろうことが企図される。例えば、ネオエピトープは、患者腫瘍から第１のステップで腫瘍生検（又はリンパ生検又は転移部位の生検）及び対応する正常組織（即ち、同じ患者からの非罹患組織）の全ゲノム解析によって、そのようにして入手されたオミクス情報の同期比較により同定されてもよい。そのようにして同定されたネオエピトープは、次に更に患者のＨＬＡ型とのマッチに関してフィルタリングして、ネオエピトープの抗原提示の可能性を増加させることができる。最も好ましくは、かかるマッチングはインシリコで行われ得る。
【００４８】
本発明の更に企図される態様において、同種異系ＮＫ細胞はまた、細胞バンク又は細胞培養物から入手されてもよく、ここで同種異系ＮＫ細胞は、好ましくは（必須ではないが）少なくとも２桁、より典型的には少なくとも４桁に至るまでＨＬＡがマッチングされる。かかる細胞が利用可能でない又はその他望ましくない場合、例えば、国際公開第２０１７０７０３３７号パンフレット又は米国特許出願公開第２０１４０１８６３１９号明細書に記載されるとおり、同種異系ＮＫ細胞をまた様々な前駆細胞から成長させてもよいことが企図される。
【００４９】
抗膀胱癌化学療法及び／又は免疫療法の投与経路、用量決定及び頻度は、治療モダリティ及び対象の臨床状態に合わせて適宜当業者により選択され、化学療法又は免疫療法は、適宜、当該技術分野において公知の代替的な当該技術分野において公知の投与経路によって送達することができる。利用可能な投与経路としては、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射、動脈内注射、経口投与、膀胱内投与又は注入、膀胱への適切な経尿道器具による膀胱腫瘍組織への直接注射、及び他の非経口経路が挙げられる。
【００５０】
色素及び染色剤
色素又は染色剤は、生理学的に許容可能な溶液又は担体中に溶解される。これは概して、０．９％生理食塩水の、水溶液中の等浸透圧性生理食塩水、及び／又はリン酸緩衝液又は他の生理学的に許容可能な緩衝系など、非毒性の等浸透圧性緩衝溶液であり、ここでは選択的な組織染色を最適化するためｐＨ調整が必要である。
【００５１】
概して、色素又は染色剤は、メチレンブルー（塩化メチルチオニン）、トルイジンブルー（塩化トロニウム）、エバンスブルー、ヘキサアミノレブリン酸塩酸塩及び／又はゲンチアナバイオレットからなる群から選択される超生体染色色素である。好ましくは、超生体染色色素はメチレンブルーである。特定の実施形態において、色素は、対比を増強するように設計された混合物である。例えば、胃腸腫瘍の選択的染色用のＲｉａｚ  ｅｔ  ａｌ．（ＳｐｒｉｎｇｅｒＰｌｕｓ  ２０１３，２：９５）により記載されるとおりのメチレンブルー、マラカイト、及びエオシンの混合物。
【００５２】
膀胱腫瘍を膀胱鏡的に直接可視化するには、メチレンブルーが例えばフォーリーカテーテルによって対象の膀胱に生理食塩水中約０．５％〜約１．８％のメチレンブルー濃度で注入され、但し概して１％のメチレンブルーが用いられる。約５分後、メチレンブルー溶液が排出され、Ｇｉｌにより記載されるとおり、膀胱が生理食塩水で少なくとも３回洗浄される。或いは、膀胱は、Ｒｉａｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｄ．ｓｕｐｒａによって口腔癌に関する非特異的染色の除去の向上に利用されるとおり、１％乳酸溶液で洗浄される。次に標準的な膀胱鏡を使用して膀胱内壁の青色に染色された組織が可視化され、それが膀胱表面上又はその中に見える腫瘍を強調する。
【００５３】
光増感メチレンブルーの膀胱鏡的可視化には、生理学的に許容可能な溶液中の約０．００７５％〜約０．０２％の濃度のメチレンブルーが膀胱壁又は膀胱腫瘍の近傍に投与され、染色された組織が約６６０ｎｍの光エネルギーで照明される。光増感トルイジンブルーの可視化には、生理学的に許容可能な溶液中の約０．００７５％〜約０．０２％の濃度のトルイジンブルーが膀胱壁又は腫瘍における膀胱腫瘍の近傍に投与され、染色された組織が約６６０ｎｍの光エネルギーで照明される。光エネルギーは、好ましくは好適なレーザー照明器によって送達され、例えば、光ファイバーシステムを介して、又は膀胱に挿入されたレーザー器具から直接的に膀胱まで伝達される。
【００５４】
異なる実施形態において、ヘキサアミノレブリン酸塩酸塩など、ポルフィリンベースのシステムもまた、本発明によれば利用されてもよい。腫瘍細胞はヘキサアミノレブリン酸塩酸塩を選択的に取り込み、ヘキサアミノレブリン酸塩酸塩を幾つかの光活性化可能なポルフィリン化合物に変換する。或いは、ヘキサアミノレブリン酸塩酸塩及び／又はポルフィリン化合物で腫瘍細胞を選択的に染色する他の色素は、本発明の実施から明示的に除外される。
【００５５】
対象が膀胱腫瘍と診断されると、適切な染色剤又は色素によって膀胱壁が可視化され、染色の面積、強度及び解剖学的分布が測定及び記録される。測定方法としては、当業者による腫瘍の目視グレード分け、染色組織からの蛍光光の光度測定（即ち、蛍光定量的強度）、及び／又は対象の治療前膀胱壁の写真記録を記録して、それ以降の対象の膀胱壁の治療後染色の写真記録と比較することにより抗膀胱癌療法の経過を追跡することによるものが挙げられる。
【００５６】
臨床的に適切な抗膀胱癌治療の開始後は、対象は定期的に再検査され、選択の抗膀胱癌療法の経過及び結果が測定される。検査頻度は当業者により対象の臨床状態に鑑みて決定され、治療の最大利益が実現するまで継続される。当業者の判断次第で、検査は、２日毎、毎週、２週間毎、毎月、２ヵ月毎、及び／又は６ヵ月毎に、抗腫瘍膀胱治療の目標が達成されるまで、又は治療プロトコルの変更が必要となり得るまで行うことができる。
【００５７】
参照による援用
本明細書に記載される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各個別の刊行物、特許、又は特許出願が具体的且つ個別的に参照によって援用されるものとするのと同程度に参照によって援用される。援用される刊行物、特許、又は特許出願中の用語の定義又は使用が、本明細書に提供される当該用語の定義と矛盾している又はそれに反する場合、本明細書に提供される当該用語の定義が適用され、参照文献中の当該用語の定義は適用されない。
【手続補正書】
【提出日】令和2年10月28日(2020.10.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
膀胱癌と診断された対象における膀胱癌治療コースの進捗及び有効性を測定する方法であって、
（ａ）生理学的に許容可能な溶液又は担体中の、膀胱の内壁における腫瘍組織を選択的に染色するのに有効な濃度の、ある容積の生理学的に許容可能な腫瘍選択的色素又は染色剤を前記対象の膀胱に注入するステップ、
（ｂ）前記対象に対して膀胱鏡で膀胱鏡的手技を行うことにより、ステップ（ａ）によって染色された任意の膀胱腫瘍を検出及び測定するステップであって、前記膀胱鏡が、前記対象の膀胱の内部を観察するための内視鏡と、前記対象の膀胱の内部を照明するためのシステムとを含むステップ、
（ｃ）前記対象の膀胱癌を治療するステップ、
（ｄ）ステップ（ｃ）の後にステップ（ａ）及び（ｂ）を繰り返すステップ、
（ｅ）ステップ（ｃ）及び（ｄ）の連続測定値を比較して前記膀胱癌治療コースの進捗度及び有効性を測定するステップ
を含む方法。
【請求項２】
前記抗膀胱癌療法が、経尿道的膀胱腫瘍切除術（ＴＵＲＢＴ）、抗癌化学療法、放射線療法及び免疫療法からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗膀胱癌療法が、抗癌化学療法、放射線療法及び免疫療法からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗膀胱癌療法が抗癌化学療法及び／又は免疫療法である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ステップ（ｃ）が、前記対象の膀胱癌の治療に関する臨床的判断に伴い繰り返され、ここでステップ（ａ）及び（ｂ）が、２日毎、毎週、２週間毎、毎月、２ヵ月毎、及び６ヵ月毎からなる群から選択される間隔を置いて、前記対象の膀胱癌が寛解に入るまで、又は前記治療プロトコルの変更が必要になるまで繰り返される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗膀胱癌療法が膀胱内経路又は全身経路によって投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記抗膀胱癌療法が免疫療法である、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記免疫療法が、膀胱内カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン療法、全身免疫チェックポイント療法、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞療法からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＮＫ細胞が同種異系由来及び自己由来であり、又はインビトロで活性化されて前記対象に再注入される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＮＫ細胞が前記対象にとって同種異系由来及び自己由来であり、
ここで前記自己ＮＫ細胞が、
（ａ）前記対象の血液からＮＫ細胞を単離すること、
（ｂ）前記単離されたＮＫ細胞をエキソビボで好適な細胞培養培地中において拡大すること、及び
（ｃ）ステップ（ｂ）によって拡大された前記自己ＮＫ細胞を回収すること
によって入手される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記回収した自己ＮＫ細胞を前記対象に注入し戻すステップを更に含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＮＫ細胞が、遺伝子修飾されたＮＫ−９２細胞である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＮＫ細胞が、前記ＮＫ細胞の表面上に少なくとも１つのマーカー又は抗原を発現するように修飾され、ここで前記マーカーが、前記ＮＫ細胞による前記対象の膀胱腫瘍への標的化した結合をもたらす、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＮＫ細胞が、前記対象の血流中への注入によって投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
自己ＮＫ細胞が、前記対象に１つ以上のＮＫ活性化サイトカインを投与することによりインビトロで活性化される、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
前記腫瘍選択的色素又は染色剤が、メチレンブルー（塩化メチルチオニン）、トルイジンブルー（塩化トロニウム）、及びエバンスブルー、及び／又はゲンチアナバイオレットからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記超生体染色色素がメチレンブルーである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記腫瘍選択的色素又は染色剤が、腫瘍細胞によって取り込まれると光活性ポルフィリン化合物に変換される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記腫瘍選択的色素又は染色剤がヘキサアミノレブリン酸塩酸塩である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象の膀胱の内部を照明するためのシステムが、白色光源、青色光源、レーザー照明器及びこれらの組み合わせからなる群から選択される光源を含む、請求項１に記載の方法。
【国際調査報告】
2021500552.tif 000002