(57)【要約】本発明は、一部の肉腫の治療及び／又は予防、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移の治療及び／又は予防に有用な、ＩＬ−８阻害薬化合物、好ましくは二重ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２受容体阻害薬に関する。【選択図】図２
2021500413.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫又は横紋筋肉腫の予防及び／又は治療、さらに好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫又は横紋筋肉腫に関連する肺転移の予防及び／又は治療に使用するためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項２】
小分子量分子及び抗体から選ばれ、好ましくは、前記ＩＬ−８阻害薬は、ＣＸＣＲ１受容体又はＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２受容体の両方によって媒介されるＩＬ−８の活性の阻害薬である、請求項１に記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項３】
１，３−チアゾール−２−イルアミノフェニルプロピオン酸誘導体、２−フェニル−プロピオン酸誘導体及びそれらの薬学的に許容可能な塩から選ばれる、請求項１又は２に記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項４】
前記１，３−チアゾール−２−イルアミノフェニルプロピオン酸誘導体が、式（Ｉ）：
【化１】
2021500413.tif 000006
［式中、
−Ｒ１は、水素又はＣＨ３であり； 
−Ｒ２は、水素又は直鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、好ましくはそれは水素であり；
−Ｙは、Ｓ、Ｏ及びＮから選ばれるヘテロ原子であり；好ましくはそれはＳであり；
−Ｚは、ハロゲン、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ４アルケニル、Ｃ２−Ｃ４アルキニル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、Ｃ１−Ｃ４アシルオキシ、フェノキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アシルアミノ、ハロＣ１−Ｃ３アルキル、ハロＣ１−Ｃ３アルコキシ、ベンゾイル、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ８アルカンスルホネート、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ８アルカンスルホンアミド、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ８アルキルスルホニルメチルから選ばれ；好ましくはそれはトリフルオロメチルであり；
−Ｘは、ＯＨ又は式ＮＨＲ３の残基であり；ここで、Ｒ３は、
−水素、ヒドロキシル、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ、
又はＣ１−Ｃ６フェニルアルキル（ここで、アルキル、シクロアルキル又はアルケニル基はＣＯＯＨ残基で置換されていてもよい）、
−式ＳＯ２Ｒ４の残基（ここで、Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ２アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ３ハロアルキルである）から選ばれる］の化合物である、請求項３に記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項５】
Ｒ１が水素又はＣＨ３であり； 
ＸがＯＨであり；
Ｒ２が水素又は直鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｙが、Ｓ、Ｏ及びＮから選ばれるヘテロ原子であり；
Ｚが、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルキル、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、ハロＣ１−Ｃ３アルキル及びハロＣ１−Ｃ３アルコキシから選ばれる、請求項４に記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項６】
Ｒ１が水素であり、フェニルプロピオン酸基のキラル炭素原子がＳ配置である、請求項４に記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項７】
２−メチル−２−（４−｛［４−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］アミノ｝フェニル）プロパン酸及びその薬学的に許容可能な塩、好ましくはそのナトリウム塩から選ばれる、請求項３、４又は５に記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項８】
前記化合物が、（２Ｓ）−２−（４−｛［４−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］アミノ｝フェニル）プロパン酸及びその薬学的に許容可能な塩、好ましくはそのナトリウム塩である、請求項３〜６のいずれかに記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項９】
前記２−フェニルプロピオン酸誘導体が、式（II）：
【化２】
2021500413.tif 000007
［式中、
Ｒ４は、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキル、ベンゾイル、フェノキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシであり；好ましくは、それは、ベンゾイル、イソブチル及びトリフルオロメタンスルホニルオキシから選ばれ、また、好適な態様によれば、Ｒ４は、フェニル環の３又は４位にあり、さらに好ましくは、それは、３−ベンゾイル、４−イソブチル又は４−トリフルオロメタンスルホニルオキシであり；
Ｒ５は、Ｈ又は直鎖もしくは分枝Ｃ１−Ｃ３アルキルであり、好ましくは、それはＨであり；
Ｒ６は、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキル又はトリフルオロメチルであり；好ましくは、それは直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、さらに好ましくはそれはＣＨ３である］の化合物又はその薬学的に許容可能な塩である、請求項３に記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項１０】
前記２−フェニル−プロピオン酸誘導体が、式（III）：
【化３】
2021500413.tif 000008
［式中、
Ｒ１は水素であり；
Ｒは、式ＳＯ２Ｒａの残基（ここで、Ｒａは、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルキル又はハロＣ１−Ｃ３アルキルであり、好ましくはそれはＣＨ３である）である］の化合物又はその薬学的に許容可能な塩である、請求項３に記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項１１】
フェニルプロピオン酸基のキラル炭素原子がＲ配置である、請求項９又は１０に記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項１２】
前記化合物が、Ｒ−（−）−２−（４−イソブチルフェニル）プロピオニルメタンスルホンアミド及びその薬学的に許容可能な塩、好ましくは、リシンｉｎ  ｓｉｔｕ塩から選ばれる、請求項９に記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項１３】
前記化合物が、Ｒ（−）−２−（４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ）フェニル］−Ｎ−メタンスルホニルプロピオンアミド及びその薬学的に許容可能な塩、好ましくはそのナトリウム塩である、請求項９〜１１のいずれかに記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬。
【請求項１４】
前記請求項のいずれかに記載の使用のためのＩＬ−８阻害薬と、薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は希釈剤とを含む医薬組成物。
【請求項１５】
少なくとも一つのＩＬ−６阻害薬及び／又は少なくとも一つのｇｐ１３０阻害薬をさらに含む、請求項１４に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１６】
少なくとも一つの化学療法薬、好ましくは、ドキソルビシン、シスプラチン、メトトレキサート、イホスファミド、エピルビシン、エトポシド、シクロホスファミド、ビンクリスチン及びアクチノマイシンＤを含む群から選ばれる化学療法薬をさらに含む、請求項１４に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１７】
Ａ）請求項１〜１３のいずれか１項に記載のＩＬ−８阻害薬、又は請求項１４に記載の医薬組成物、及び
Ｂ）少なくとも一つのＩＬ−６阻害薬及び／又は少なくとも一つのｇｐ１３０阻害薬
を含み、
Ａ）及びＢ）は、同時、別個又は順次使用のために２つの別個の製剤となっている、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用のための製品又はキット。
【請求項１８】
Ａ’）請求項１〜１３のいずれか１項に記載のＩＬ−８阻害薬、又は請求項１４に記載の医薬組成物、及び
Ｂ’）少なくとも一つの化学療法薬、好ましくは、ドキソルビシン、シスプラチン、メトトレキサート、イホスファミド、エピルビシン、エトポシド、シクロホスファミド、ビンクリスチン及びアクチノマイシンＤを含む群から選ばれる化学療法薬
を含み、
Ａ’）及びＢ’）は、同時、別個又は順次使用のために２つの別個の製剤となっている、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用のための製品又はキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一部の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、又はそれらに関連する肺転移の予防及び／又は治療のためのＩＬ−８阻害薬に関する。また、本発明は、ＩＬ−８阻害薬と、ＩＬ−６阻害薬又は化学療法薬とを含む医薬組成物、製品／キットにも関する。
【背景技術】
【０００２】
骨及び軟部組織の肉腫は、希少な不均一型のがんの一群であり、合わせて、診断された全悪性腫瘍のおよそ１％を占める。肉腫は、希少であることや診断が遅れることが多いため、臨床医にとって課題となっている。
【０００３】
肉腫には１００を超える様々な形態学的サブタイプがある。最も一般的な骨の肉腫のタイプは、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫及び脊索腫である。軟部組織の肉腫は、平滑筋細胞（平滑筋肉腫）、脂肪細胞（脂肪肉腫）、線維性結合組織（線維肉腫）、骨格筋（横紋筋肉腫）、滑膜（滑膜肉腫）、血管（血管肉腫）、乳管（葉状腫瘍）及び神経（神経鞘腫瘍）を含む軟部組織細胞から発生する。
【０００４】
骨肉腫（ＯＳ）は、間葉起源（ゆえに肉腫と言う）の原始形質転換細胞から発生する攻撃的な（侵襲性の）悪性新生物で、骨芽細胞分化を示し、悪性の類骨を産生する。
それは原発性骨がんの最も一般的な組織学的形態で、１０代の若者及び若年成人に好発する。
【０００５】
がんの完全根治的外科的一括切除が骨肉腫の最適な治療である。約９０％の患者が患肢救済手術を受けられるが、合併症、特に、感染症、人工装具の弛緩及び癒着不能、又は局所的な腫瘍再発によって、更なる手術又は切断が必要になることもある。
【０００６】
標準療法は、可能であれば患肢救済整形外科手術（又は一部の症例では切断）と化学療法の併用である。
ユーイング肉腫（ＥＳ）は、非常に攻撃的な骨腫瘍で、発生率のピークは青年人口にある。高い転移傾向を有しており、それがおよそ２５％という悲惨な生存率と関連する（Ｓａｔｔｅｒｆｉｅｌｄ，Ｌ．ら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，１４１：２０６２−２０７５；２０１７；Ｂｅｖｅｒｌｙ  Ａ．Ｔｅｉｃｈｅｒら，Ａｎｎ  Ｓａｕｄｉ  Ｍｅｄ．，３１（２）：１７４−１８２；２０１１）。
【０００７】
ユーイング肉腫ファミリー腫瘍（ＥＳＦＴ）のメンバーは、発がん性転写因子を生じる腫瘍関連転座を含有している。最も一般的なのはＥＷＳ／ＦＬＩ１である。ＥＷＳ／ＦＬＩ１は、何百もの標的遺伝子の発現を調節することによって腫瘍進行に主要な役割を果たしている。ここでは、ＲＮＡｉ媒介ノックダウンによるＥＷＳ／ＦＬＩ１阻害が細胞のシグナル伝達に及ぼす影響を、質量分析を基にしたリン酸化プロテオミクスを用いて調べ、リン酸化の全体的な変化を定量している。この偏りのない公平な手法により、細胞周期の調節及び細胞骨格の組織化などのプロセスに豊富な何百もの特異的ホスホペプチドが同定された。特に、ホスホチロシンのプロファイリングは、ＥＷＳ／ＦＬＩ１のノックダウンによりＳＴＡＴ３のリン酸化が大きくアップレギュレートされることを明らかにした。しかしながら、単一細胞分析により、これはＥＷＳ／ＦＬＩ１欠損の細胞自律的効果ではなく、むしろノックダウンが起きていない細胞で起こるシグナル伝達効果であることが示された。ノックダウン細胞由来の馴化培地は、対照細胞においてＳＴＡＴ３のリン酸化を誘導するのに十分であり、ＳＴＡＴ３を活性化できる可溶性因子の存在を立証した。サイトカイン分析及びリガンド／受容体阻害実験で、この活性化は、一部はＩＬ６依存性機序を通じて起こることが究明された。総合すれば、データは、ＥＷＳ／ＦＬＩ１欠損が、ＥＷＳ／ＦＬＩ１の発現を維持するバイスタンダー細胞でＳＴＡＴのシグナル伝達を活性化するＩＬ６などの可溶性因子の分泌をもたらすというモデルを支持している。さらに、これらの可溶性因子はアポトーシスから保護することも示された（Ｊｅｎｎｉｆｅｒ  Ｌ．Ａｎｄｅｒｓｏｎら；Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；１２（１２）；２０１４；Ａｎｄｒｅｊ  Ｌｉｓｓａｔら，ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ，１５：５５２；２０１５）。
【０００８】
横紋筋肉腫（ＲＭＳ）は、十分に分化し損ねた骨格（横紋）筋細胞から発生する攻撃的で極めて悪性の形態のがんである。一般的に小児の疾患と考えられており、症例の大多数は１８歳未満の子どもに発生する。
【０００９】
比較的希少ながんであるにも関わらず、すべての記録された軟部組織肉腫のおよそ４０％を占める。ＲＭＳは身体のどの部位にも発生しうるが、主に、頭部、頸部、眼窩、尿生殖路、生殖器、及び四肢に見られる。横紋筋肉腫の治療は、手術、化学療法、放射線、及びおそらくは免疫療法の使用を含む学際的なチーム医療(multidisciplinary practice)となる。手術は一般的に併用療法の第一段階である。切除可能性は腫瘍の部位によって変動するが、ＲＭＳは、重大な病的状態や機能の喪失をもたらすことなしに完全に外科的切除することができない部位に存在することが多い。断端陰性で十分に切除されるＲＭＳ腫瘍は２０％未満である。幸運なことに、横紋筋肉腫は一般的に化学療法に感受性があり、症例のおよそ８０％が化学療法に反応する。多剤併用化学療法がすべての横紋筋肉腫患者に適応される。化学療法薬を用いるアジュバント療法及びネオアジュバント療法が使用される前は、外科的手段だけによる治療の生存率は＜２０％であった。アジュバント療法を併用する現代の生存率はおよそ６０〜７０％である。
【００１０】
転移は固形腫瘍の患者を死に至らしめる。このことがどこよりも明らかなのは骨肉腫においてである。致命的な骨がんである骨肉腫（ＯＳ）は、主に肺への転移拡散を通じて死をもたらす。この肺への指向性を推進する機序は今も不明のままである。患者が診断時に肉眼で確認できる転移性疾患を呈していようと転移が治療の完了後何年もしてから生じようと、限局性疾患を有する患者は比較的良好な７０％の５年全生存率を享受するが、肺転移を有する患者は１５％という非常に悪い２年生存率に苦しむ（Ａｌｌｉｓｏｎ  Ｄ．Ｃ．ら；Ｓａｒｃｏｍａ  ２０１２，７０４８７２；２０１２）。
【００１１】
転移性疾患のための療法を増強する又は新規治療法を発見するために無数の試みがなされてきたにも関わらず、４０年にわたっても、著しい転帰の改善をもたらした治療法はない。転移性骨肉腫の治療に参入するためには、明らかに新規のアプローチが必要であろう（Ｌｕｅｔｋｅ  Ａ．ら；Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．４０，５２３−３２；２０１４）。当該分野の大きな研究者団体は、骨肉腫の治療における更なる進展は、転移の生物学の理解の改善なくして、及びそのような経路を標的にする薬物の開発なくしては実現しそうもないことを示唆している（Ｋｈａｎｎａ  Ｃ．ら；Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；２０（１６）；１−１０；２０１４）。一部の先行技術では、転移性横紋筋肉腫を有する小児の転帰に関連するリスク因子の特定（Ｏｂｅｒｌｉｎ  Ｏ．ら；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００８  Ｍａｙ  １０；２６（１４）：２３８４−２３８９）及び横紋筋肉腫（ＲＭＳ）と肺のみへの転移性疾患を有する小児の転帰（Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．，２００５  Ｊａｎ．；４０（１）：２５６−６２）について言及している。
【００１２】
骨肉腫の小児及び青年における肺転移の出現を防止する療法があれば、現在その疾患で死亡する患者の７０％を超える命を救えるであろう。
インターロイキン−８（ＩＬ−８；ＣＸＣＬ８）は、ＰＭＮ（多形核好中球）動員の主要メディエーターと考えられ、乾癬、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患及び移植臓器での再潅流傷害を含むいくつかの病理に関与している（Ｇｒｉｆｆｉｎら，Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １９８８，１２４：２１６；Ｆｉｎｃｈａｍら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９８８，１４０：４２９４；Ｔａｋｅｍａｔｓｕら，Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １９９３，１２９：７４；Ｌｉｕら  １９９７，１００：１２５６；Ｊｅｆｆｅｒｙ，Ｔｈｏｒａｘ  １９９８，５３：１２９；Ｐｅｓｃｉら，Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ．１９９８，１２：３８０；Ｌａｆｅｒら，Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９１，１０３：１１５３；Ｒｏｍｓｏｎら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １９９３，６７：１０１６；Ｗｅｌｂｏｕｒｎら，Ｂｒ  Ｊ  Ｓｕｒｇ．１９９１，７８：６５１；Ｓｅｋｉｄｏら，Ｎａｔｕｒｅ  １９９３，３６５，６５４）。ＩＬ−８の生物活性は、ヒトＰＭＮの表面に発現されている、７ＴＭ−ＧＰＣＲファミリーに属する２つの受容体ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２との相互作用によって媒介される。ＣＸＣＲ１は選択的で、２つのケモカインＣＸＣＬ６及びＩＬ−８のみと高親和性で結合し、ＩＬ−８に対してはるかに高い親和性を示すが（Ｗｏｌｆら，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８，２８：１６４）、ヒトＣＸＣＲ２はより無差別な受容体で、いくつかの異なるサイトカイン及びケモカインと結合する。従って、ＣＸＣＲ２は、いくつかの異なる生物学的分子の活性を媒介する。インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、免疫調節、炎症、及び発がんに多機能を有する多機能性サイトカインである。ＩＬ−６のＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）への結合は、糖タンパク質１３０（ｇｐ１３０）のホモ二量体化と動員を誘導し、これが下流のシグナル伝達の活性化をもたらす。
【００１３】
ｇｐ１３０は、少なくとも８つのサイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−２７、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、ＯＳＭ、ＣＴ−１、及びＣＬＣ）の受容体シグナル伝達複合体の一部である。リガンド結合は、ｇｐ１３０とサイトカイン特異的受容体ａ鎖との会合と、次いでＪＡＫ／ＳＴＡＴ、ＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＡＰＫ、及びＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路を含む下流シグナル伝達カスケードの活性化を誘導する。Ｓｅｒ７８２でのｇｐ１３０のリン酸化は、ｇｐ１３０の細胞表面発現をダウンレギュレートすることが示されている。普遍的に発現した受容体として、ｇｐ１３０は、炎症、自己免疫、がん、幹細胞維持、及び胚発生を含む広範囲の重要な生物学的プロセスに関与している（Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ；１２（６）；９３７−４９；２０１３）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｓａｔｔｅｒｆｉｅｌｄ，Ｌ．ら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，１４１：２０６２−２０７５；２０１７
【非特許文献２】Ｂｅｖｅｒｌｙ  Ａ．Ｔｅｉｃｈｅｒら，Ａｎｎ  Ｓａｕｄｉ  Ｍｅｄ．，３１（２）：１７４−１８２；２０１１
【非特許文献３】Ｊｅｎｎｉｆｅｒ  Ｌ．Ａｎｄｅｒｓｏｎら；Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；１２（１２）；２０１４
【非特許文献４】Ａｎｄｒｅｊ  Ｌｉｓｓａｔら，ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ，１５：５５２；２０１５
【非特許文献５】Ａｌｌｉｓｏｎ  Ｄ．Ｃ．ら；Ｓａｒｃｏｍａ  ２０１２，７０４８７２；２０１２
【非特許文献６】Ｌｕｅｔｋｅ  Ａ．ら；Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．４０，５２３−３２；２０１４
【非特許文献７】Ｋｈａｎｎａ  Ｃ．ら；Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；２０（１６）；１−１０；２０１４
【非特許文献８】Ｏｂｅｒｌｉｎ  Ｏ．ら；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００８  Ｍａｙ  １０；２６（１４）：２３８４−２３８９
【非特許文献９】Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．，２００５  Ｊａｎ．；４０（１）：２５６−６２
【非特許文献１０】Ｇｒｉｆｆｉｎら，Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １９８８，１２４：２１６
【非特許文献１１】Ｆｉｎｃｈａｍら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９８８，１４０：４２９４
【非特許文献１２】Ｔａｋｅｍａｔｓｕら，Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １９９３，１２９：７４
【非特許文献１３】Ｌｉｕら  １９９７，１００：１２５６
【非特許文献１４】Ｊｅｆｆｅｒｙ，Ｔｈｏｒａｘ  １９９８，５３：１２９
【非特許文献１５】Ｐｅｓｃｉら，Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ．１９９８，１２：３８０
【非特許文献１６】Ｌａｆｅｒら，Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９１，１０３：１１５３
【非特許文献１７】Ｒｏｍｓｏｎら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １９９３，６７：１０１６
【非特許文献１８】Ｗｅｌｂｏｕｒｎら，Ｂｒ  Ｊ  Ｓｕｒｇ．１９９１，７８：６５１
【非特許文献１９】Ｓｅｋｉｄｏら，Ｎａｔｕｒｅ  １９９３，３６５，６５４
【非特許文献２０】Ｗｏｌｆら，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８，２８：１６４
【非特許文献２１】Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ；１２（６）；９３７−４９；２０１３
【発明の概要】
【００１５】
本発明者らは、驚くべきことに、ＩＬ−８の阻害が、骨肉腫、ユーイング肉腫又は横紋筋肉腫に関連する肺転移の発生を削減又は防止できることを見出した。特に、ＩＬ−８阻害薬とＩＬ−６阻害薬の組合せがより有効な結果をもたらす。
【００１６】
本発明者らは、驚くべきことに、ＩＬ−８阻害薬は、原発腫瘍の骨肉腫、ユーイング肉腫又は横紋筋肉腫の予防及び／又は治療にも有用であることも見出した。好ましくは、ＩＬ−８阻害薬を化学療法薬と併用した場合である。
【００１７】
従って、本発明の第一の目的は、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移の予防及び／又は治療に使用するためのＩＬ−８阻害薬、好ましくは抗体又は小分子量分子、好ましくはＣＸＣＲ１阻害薬、さらに好ましくは二重ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２阻害薬である。
【００１８】
本発明の第二の目的は、上に定義された前記ＩＬ−８阻害薬を、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移の予防及び／又は治療のための医薬の製造に使用することである。
【００１９】
本発明の第三の目的は、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移を予防及び／又は治療するための方法であって、それを必要とする対象に治療上有効量の前記ＩＬ−８阻害薬を投与する手順を含む方法である。
【００２０】
本発明の第四の目的は、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移を予防及び／又は治療するための医薬組成物であって、本発明によるＩＬ−８阻害薬と薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は希釈剤とを含む医薬組成物である。
【００２１】
一つの好適な態様に従って、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移、さらに好ましくは肺転移を予防及び／又は治療するための前記医薬組成物は、少なくとも一つのＩＬ−６阻害薬及び／又は少なくとも一つのｇｐ１３０阻害薬をさらに含む。
【００２２】
別の好適な態様に従って、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移、さらに好ましくは原発腫瘍を予防及び／又は治療するための前記医薬組成物は、少なくとも一つの化学療法薬をさらに含む。
【００２３】
本発明の第五及び第六の目的は、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移の治療及び／又は予防に使用するための製品又はキットであって、上に定義されたＩＬ−８阻害薬と、同時、別個又は順次使用のための一つ又は複数の薬学的活性化合物とを含む製品又はキットである。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、ＩＬ−６及びＩＬ−８の発現が転移の異種移植モデルにおける転移効率及び転移挙動と相関していることを示す。１×１０６個のＯＳ細胞を接種されたＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスを接種の４９日後に安楽死させた。ａ）これらのマウスから採取された肺ブロックの肉眼的外観は、ＯＳ−１７によるコロニー形成の効率が他の細胞株と比べて著しく大きいことを示唆している。ｂ）パラフィン包埋左葉切片のＨ＆Ｅ染色をカウントして切片あたりの転移の数を定量した。ｃ）定量により、ＯＳ−１７切片中の転移数がＯＨＳと比べて著しく多いことが明らかである。ｄ）各細胞株の培養物の７２時間上清中のＩＬ−６及びＩＬ−８の濃度の測定から、転移性ＯＳ−１７細胞における両サイトカインの発現が、非転移性細胞株と比べて顕著であることが明らかである。ｅ）〜ｆ）ＩＬ−６及びＩＬ−８シグナルに応答する能力をトランスウェル遊走アッセイを用いて評価。
【図２】図２は、ＯＳ−１７細胞で血清に対する走化性応答を低減するＤＦ２１５６Ａ単独の効果又はｓｃ１４４と組み合わせた効果を示す。ＯＳ細胞をトランスウェルチャンバ膜上で培養した後、ＲＰＭＩと２．５％ＦＢＳ（陽性対照）又はＲＰＭＩ単独（陰性対照）を含有するチャンバに移行させた。下部チャンバに２．５％ＦＢＳを含有する他のウェルを、１ｕＭのｓｃ１４４、１０ｎＭのＤＦ２１５６Ａ、又はその両方で処理した。２４時間後、上部チャンバをこすり落としてきれいにし、膜を染色し、細胞をカウントした。
【図３】図３は、転移性肺コロニー形成に対するＩＬ−６及びＩＬ−８経路阻害の効果を示す。１×１０６個のＯＳ−１７−ｌｕｃ（ルシフェラーゼ）細胞を接種されたマウスを、ＩＬ−６（ｓｃ１４４）、ＩＬ−８（ＤＦ２１５６Ａ）、又はその両方の薬理学的阻害薬で処置した。Ａ）接種後２８日時点で完了した生物発光画像。Ｂ）Ａ）に示されたマウスの生存分析。
【図４】図４は、ＤＦ２１５６Ａ及びｓｃ１４４で処置されたマウスの肺組織におけるＰＤ（薬力学）分析を示す。毎日ＤＦ２１５６Ａ又はｓｃ１４４いずれかの注射により処置されたマウスを１４回目の薬物投与の２４時間後に安楽死させた。それらのマウスから採取された肺を標準的ＦＦＰＥ（ホルマリン固定パラフィン包埋）を用いて加工し、次いで切片化して、ＩＨＣでｐＦＡＫ（ＩＬ−８の下流）又はｐＳＴＡＴ３（ＩＬ−６の下流）を染色した。受容体の遮断は、トラフ濃度でも、見られる活性化の量及び浸潤細胞の数を減少させた。
【図５】図５は、ＯＳの多重モデルにおける肺転移防止のＤＦ２１５６Ａとｓｃ１４４の併用効果を示す。ＯＳ細胞の接種後、マウスは４２日間、ビヒクル処置又はｓｃ１４４とＤＦ２１５６Ａ両方による処置のいずれかを受けた。各群の１匹のマウスがエンドポイント基準を満たした時点で、その研究内の全マウスを安楽死させ、肺を採取し、転移性病変をカウントした。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
実験の項において詳細に開示されているとおり、本発明者らは、ＩＬ−８活性の阻害薬として作用する分子が、肉腫の動物モデルで治療効果を有することを見出した。さらに、本発明者らは、ＩＬ−８阻害が肺転移の発症を抑制できることも見出した。特に、ＩＬ−８とＩＬ−６の阻害の組合せが転移を防止する。
【００２６】
従って、本発明の第一の目的は、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫又は横紋筋肉腫の治療及び／又は予防に使用するためのＩＬ−８阻害薬である。
好適な態様に従って、前記ＩＬ−８阻害薬は、骨肉腫、ユーイング肉腫又は横紋筋肉腫に関連する肺転移の予防及び／又は治療に使用するためのものである。
【００２７】
本願による「ＩＬ−８阻害薬」という用語は、ＩＬ−８の生物活性を部分的に又は全体的に阻害できる全ての化合物を指す。そのような化合物は、ＩＬ−８の発現又は活性を低下させることによって、又はＩＬ−８受容体によって活性化される細胞内シグナル伝達の発動を阻害することによって作用することができる。前記ＩＬ−８阻害薬は、５００ｎＭ以下、好ましくは１００ｎＭ未満の濃度で、ＰＭＮにおいてＩＬ−８によって誘導される走化性の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％を阻害できるのが好適である。
【００２８】
好適な態様に従って、本発明のすべての目的のＩＬ−８阻害薬は、ＣＸＣＲ１受容体によって媒介される、又はＣＸＣＲ１とＣＸＣＲ２受容体の両方によって媒介されるＩＬ−８の活性を阻害する。
【００２９】
好ましくは、この態様に従って、前記ＩＬ−８阻害薬は、ＣＸＣＲ１受容体の又はＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２受容体両方のアロステリック阻害薬又はオルソステリックアンタゴニスト(orthosteric antagonist)のいずれかである。
【００３０】
好ましくは、前記ＩＬ−８阻害薬はＣＸＣＲ１受容体に対して選択的であるか又はＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２受容体に対して等しく効力がある。
本発明による「ＣＸＣＲ１に対して選択的」とは、ＣＸＣＲ２に対してよりもＣＸＣＲ１に対して少なくとも２、好ましくは３対数高いＩＣ５０値を示す化合物を意味する（Ｂｅｒｔｉｎｉ  Ｒ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２００４），１０１（３２），ｐｐ．１１７９１−１１７９６）。
【００３１】
「ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２に対して等しく効力がある」とは、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２に対して１０ピコモル（１０−１１Ｍ）〜１マイクロモル（１０−６Ｍ）の範囲のＩＣ５０値を示す化合物を意味する（Ｂｅｒｔｉｎｉ  Ｒ．ら，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．（２０１２），１６５，ｐｐ．４３６−４５４）。
【００３２】
さらに好ましくは、本発明によるＩＬ−８阻害薬は、ＣＸＣＲ１受容体に対して低ナノモル範囲、好ましくは０．０２〜５ナノモルの範囲のＩＣ５０値を有する。
好適な態様に従って、また前出の態様との組合せにおいても、前記ＩＬ−８阻害薬は、小分子量分子及び抗体から選ばれ、さらに好ましくは、それは小分子量分子である。
【００３３】
ＣＸＣＲ１受容体によって媒介される又はＣＸＣＲ１とＣＸＣＲ２受容体の両方によって媒介されるＩＬ−８の活性を阻害できる、上記定義によるＩＬ−８阻害薬は、当該技術分野で公知である。
【００３４】
本発明による好適なＩＬ−８阻害薬は、１，３−チアゾール−２−イルアミノフェニルプロピオン酸誘導体、２−フェニル−プロピオン酸誘導体及びそれらの薬学的に許容可能な塩から選ばれる。
【００３５】
上記化合物のうち、前記１，３−チアゾール−２−イルアミノフェニルプロピオン酸誘導体は、好ましくは、式（Ｉ）：
【００３６】
【化１】
2021500413.tif 000003
【００３７】
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
−Ｒ１は、水素又はＣＨ３であり； 
−Ｒ２は、水素又は直鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、好ましくはそれは水素であり；
−Ｙは、Ｓ、Ｏ及びＮから選ばれるヘテロ原子であり；好ましくはそれはＳであり；
−Ｚは、ハロゲン、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ４アルケニル、Ｃ２−Ｃ４アルキニル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、Ｃ１−Ｃ４アシルオキシ、フェノキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アシルアミノ、ハロＣ１−Ｃ３アルキル、ハロＣ１−Ｃ３アルコキシ、ベンゾイル、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ８アルカンスルホネート、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ８アルカンスルホンアミド、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ８アルキルスルホニルメチルから選ばれ；好ましくはそれはトリフルオロメチルであり；
−Ｘは、ＯＨ又は式ＮＨＲ３の残基であり；ここで、Ｒ３は、
−水素、ヒドロキシル、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ、
又はＣ１−Ｃ６フェニルアルキル（ここで、アルキル、シクロアルキル又はアルケニル基はＣＯＯＨ残基で置換されていてもよい）、
−式ＳＯ２Ｒ４の残基（ここで、Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ２アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ３ハロアルキルである）
から選ばれる。
【００３８】
好ましくは、上記化合物において、ＸはＯＨである。
上記化合物のうち、特に好適なのは、前記式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩において、
Ｒ１がＣＨ３であり； 
Ｒ２が水素又は直鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、好ましくはそれは水素であり；
Ｙが、Ｓ、Ｏ及びＮから選ばれるヘテロ原子であり；好ましくはそれはＳであり；
Ｚが、ハロゲン、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ４アルケニル、Ｃ２−Ｃ４アルキニル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、Ｃ１−Ｃ４アシルオキシ、フェノキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アシルアミノ、ハロＣ１−Ｃ３アルキル、ハロＣ１−Ｃ３アルコキシ、ベンゾイル、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ８アルカンスルホネート、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ８アルカンスルホンアミド、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ８アルキルスルホニルメチルから選ばれ；好ましくはそれはトリフルオロメチルであり；
ＸがＯＨ又は式ＮＨＲ３の残基であり；ここで、Ｒ３は、
−水素、ヒドロキシル、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ、
又はＣ１−Ｃ６フェニルアルキル（ここで、アルキル、シクロアルキル又はアルケニル基はＣＯＯＨ残基で置換されていてもよい）、
−式ＳＯ２Ｒ４の残基（ここで、Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ２アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ３ハロアルキルである）
から選ばれる、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩である。
【００３９】
好ましくは、これらの化合物において、ＸはＯＨである。
上記化合物のうち、特に好適なのは、前記式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩において、
Ｒ１が水素であり； 
Ｒ２が水素又は直鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、好ましくはそれは水素であり；
Ｙが、Ｓ、Ｏ及びＮから選ばれるヘテロ原子であり；好ましくはそれはＳであり；
Ｚが、ハロゲン、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ４アルケニル、Ｃ２−Ｃ４アルキニル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、Ｃ１−Ｃ４アシルオキシ、フェノキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アシルアミノ、ハロＣ１−Ｃ３アルキル、ハロＣ１−Ｃ３アルコキシ、ベンゾイル、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ８アルカンスルホネート、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ８アルカンスルホンアミド、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ８アルキルスルホニルメチルから選ばれ；好ましくはそれはトリフルオロメチルから選ばれ；
ＸがＯＨ又は式ＮＨＲ３の残基であり；ここで、Ｒ３は、
−水素、ヒドロキシル、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ、
又はＣ１−Ｃ６フェニルアルキル（ここで、アルキル、シクロアルキル又はアルケニル基はＣＯＯＨ残基で置換されていてもよい）；
−式ＳＯ２Ｒ４の残基（ここで、Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ２アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ３ハロアルキルである）
から選ばれ、さらに好ましくはＸがＮＨ２である、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩でもある。
【００４０】
好ましくは、上記化合物において、ＸはＯＨである。
上記化合物のうち、特に好適なのは、前記式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩において、
Ｒ１が水素又はＣＨ３であり； 
Ｒ２が水素又は直鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、好ましくはそれは水素であり；
Ｙが、Ｓ、Ｏ及びＮから選ばれるヘテロ原子であり；好ましくはそれはＳであり；
Ｚが、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルキル、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、ハロＣ１−Ｃ３アルキル及びハロＣ１−Ｃ３アルコキシから選ばれ；好ましくはそれはメチル、メトキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチルから選ばれ、さらに好ましくはそれはトリフルオロメチルであり；
ＸがＯＨである、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩でもある。
【００４１】
上記化合物のうち、特に好適なのは、前記式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩において、
Ｒ１がＣＨ３であり； 
Ｒ２が水素又は直鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、好ましくはそれは水素であり；
Ｙが、Ｓ、Ｏ及びＮから選ばれるヘテロ原子であり；好ましくはそれはＳであり；
Ｚが、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルキル、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、ハロＣ１−Ｃ３アルキル及びハロＣ１−Ｃ３アルコキシから選ばれ；好ましくはそれはメチル、メトキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチルから選ばれ、さらに好ましくはそれはトリフルオロメチルである、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩でもある。
【００４２】
上記化合物のうち、特に好適なのは、前記式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩において、
Ｒ１が水素であり； 
ＸがＯＨであり；
Ｒ２が水素又は直鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、好ましくはそれは水素であり；
Ｙが、Ｓ、Ｏ及びＮから選ばれるヘテロ原子であり；好ましくはそれはＳであり；
Ｚが、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルキル、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、ハロＣ１−Ｃ３アルキル及びハロＣ１−Ｃ３アルコキシから選ばれ；好ましくはそれはトリフルオロメチルである、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩でもある。
【００４３】
好ましくは、Ｒ１が水素であるすべての上記式（Ｉ）の化合物において、フェニルプロピオン酸基のキラル炭素原子はＳ配置である。
特に好適なのは、２−メチル−２−（４−｛［４−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］アミノ｝フェニル）プロパン酸（本明細書においてはＤＦ２７２６Ｙとしても示される）及びその薬学的に許容可能な塩、好ましくはそのナトリウム塩（本明細書においてはＤＦ２７２６Ａとしても示される）及び２−（４−｛［４−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］アミノ｝フェニル）プロパン酸及びその薬学的に許容可能な塩、好ましくは（２Ｓ）−２−（４−｛［４−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］アミノ｝フェニル）プロパン酸（ＤＦ２７５５Ｙとしても知られる）及びそのナトリウム塩（ＤＦ２７５５Ａとしても知られる）から選ばれる、本発明による式（Ｉ）の化合物である。
【００４４】
式（Ｉ）の化合物はＷＯ２０１０／０３１８３５に開示されており、そこにはそれらの合成法、ＩＬ−８阻害薬としてのそれらの活性のほか、ＩＬ−８依存性病変、例えば、一過性脳虚血、水疱性類天疱瘡、関節リウマチ、特発性線維症、糸球体腎炎及び虚血と再潅流によって引き起こされる損傷の治療におけるそれらの使用も開示されている。
【００４５】
上記ＩＬ−８阻害薬のうち、前記２−フェニルプロピオン酸誘導体は、好ましくは、式（II）：
【００４６】
【化２】
2021500413.tif 000004
【００４７】
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、
式中、
Ｒ４は、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキル、ベンゾイル、フェノキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシであり；好ましくは、それは、ベンゾイル、イソブチル及びトリフルオロメタンスルホニルオキシから選ばれ、また、好適な態様によれば、Ｒ４は、フェニル環の３又は４位にあり、さらに好ましくは、それは、３−ベンゾイル、４−イソブチル又は４−トリフルオロメタンスルホニルオキシであり、
Ｒ５は、Ｈ又は直鎖もしくは分枝Ｃ１−Ｃ３アルキルであり、好ましくは、それはＨであり、
Ｒ６は、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキル又はトリフルオロメチルであり；好ましくは、それは直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、さらに好ましくはそれはＣＨ３である。
【００４８】
上記化合物のうち、好適なのは、式（II）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩において、
Ｒ４がＣ１−Ｃ６アルキル又はベンゾイルであり；好ましくはそれは３又は４位にあり、さらに好ましくはそれは３−ベンゾイル又は４−イソブチルであり、
Ｒ５がＨ又は直鎖もしくは分枝Ｃ１−Ｃ３アルキルであり、好ましくはそれはＨであり、
Ｒ６が直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキル又はトリフルオロメチルであり；好ましくはそれは直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、さらに好ましくはそれはＣＨ３である、式（II）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩である。
【００４９】
上記化合物のうち、好適なのは、式（II）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩において、
Ｒ４がトリフルオロメタンスルホニルオキシ、好ましくは４−トリフルオロメタンスルホニルオキシであり、
Ｒ５がＨ又は直鎖もしくは分枝Ｃ１−Ｃ３アルキルであり、好ましくはそれはＨであり、
Ｒ６が直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ６アルキル又はトリフルオロメチルであり；好ましくはそれは直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ１６アルキル、さらに好ましくはそれはＣＨ３である、式（II）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩である。
【００５０】
上記化合物のうち、好適なのは、式（III）：
【００５１】
【化３】
2021500413.tif 000005
【００５２】
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩でもあり、
式中、
Ｒ１は水素であり；
Ｒは、式ＳＯ２Ｒａの残基（ここで、Ｒａは、直鎖又は分枝Ｃ１−Ｃ４アルキル又はハロＣ１−Ｃ３アルキルであり、好ましくはそれはＣＨ３である）である。
【００５３】
好ましくは、上記式（II）又は（III）の化合物において、フェニルプロピオン酸基のキラル炭素原子はＲ配置である。
本発明に従って特に好適な式（II）の化合物は、Ｒ−（−）−２−（４−イソブチルフェニル）プロピオニルメタンスルホンアミド（レパリキシン(Reparixin)としても知られる）及びその薬学的に許容可能な塩から選ばれる。好ましくは、前記化合物は、Ｒ（−）−２−（４−イソブチルフェニル）プロピオニルメタンスルホンアミドのリシンｉｎ  ｓｉｔｕ塩（本明細書においてはＤＦ１６８１Ｂとしても示される）である。
【００５４】
さらに本発明に従って特に好適な式（II）又は（III）の化合物は、２−（４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ）フェニル］−Ｎ−メタンスルホニルプロピオンアミド及びその薬学的に許容可能な塩、好ましくはそのナトリウム塩、好ましくは、Ｒ（−）−２−（４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ）フェニル］−Ｎ−メタンスルホニルプロピオンアミド（ＤＦ２１５６Ｙとしても知られる）及びそのナトリウム塩（ラダリキシン(Ladarixin)又はＤＦ２１５６Ａとしても知られる）である。
【００５５】
式（II）及び（III）のＩＬ−８阻害薬は、ＷＯ００２４７１０及びＷＯ２００５／０９０２９５に開示されており、そこにはそれらの合成法、ＩＬ−８阻害薬としてのそれらの活性のほか、ＩＬ−８によって誘導される好中球の走化性及び脱顆粒の阻害薬としてのそれらの使用ならびにＩＬ−８依存性病変、例えば、乾癬、潰瘍性大腸炎、メラノーマ、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、水疱性類天疱瘡、関節リウマチ、特発性線維症、糸球体腎炎及び虚血と再潅流によって引き起こされる損傷の治療におけるそれらの使用も開示されている。
【００５６】
本発明の第二の目的は、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫又は横紋筋肉腫の治療及び／又は予防のための医薬の製造のためにＩＬ−８阻害薬を使用することである。
【００５７】
本発明の好適な態様によれば、前記医薬は、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫又は横紋筋肉腫に関連する肺転移を治療及び／又は予防するためのものである。
【００５８】
本発明の第三の目的は、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫又は横紋筋肉腫の治療及び／又は予防法であって、それを必要とする対象に治療上有効量の上記定義のＩＬ−８阻害薬を投与する手順を含む方法である。
【００５９】
本発明の好適な態様によれば、前記方法は、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫又は横紋筋肉腫に関連する肺転移を治療及び／又は予防するためのものである。
【００６０】
本明細書において「治療上有効量」とは、疾患の治療又は予防を達成するのに足る量を指す。有効量の決定は、所望効果の達成を基にして十分当業者の能力の範囲内である。有効量は、これらの因子に限定されないが、対象の体重及び／又は対象が苦しんでいる疾患又は望まざる状態の程度を含む因子に依存する。
【００６１】
本明細書中で使用されている用語「治療」及び「予防」とは、それぞれ、治療される疾患又はそれに付随する症状の一つ又は複数の根絶／改善又は発症の予防／遅延を指し、患者が依然としてその基礎疾患に苦しんでいるかもしれないという事実には関係しない。
【００６２】
本発明の第四の目的は、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移の治療及び／又は予防に使用するための、上記定義のＩＬ−８阻害薬を薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は希釈剤と共に含む医薬組成物である。
【００６３】
一つの好適な態様に従って、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移、さらに好ましくは肺転移の予防及び／又は治療のための前記医薬組成物は、少なくとも一つのＩＬ−６阻害薬及び／又は少なくとも一つのｇｐ１３０阻害薬をさらに含む。
【００６４】
本願による用語「ＩＬ−６阻害薬」とは、ＩＬ−６の生物活性を部分的に又は全体的に阻害できる全ての化合物を指す。
本願による用語「ｇｐ１３０阻害薬」とは、ｇｐ１３０の生物活性を部分的に又は全体的に阻害できる全ての化合物を指す。
【００６５】
別の好適な態様に従って、骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移、さらに好ましくは原発腫瘍の予防及び／又は治療のための前記医薬組成物は、少なくとも一つの化学療法薬をさらに含む。
【００６６】
本発明の第五の目的は、Ａ）骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移の治療及び／又は予防に使用するための上記定義のＩＬ−８阻害薬又は上記定義の医薬組成物、及びＢ）少なくとも一つのＩＬ−６阻害薬及び／又は少なくとも一つのｇｐ１３０阻害薬を含む製品又はキットであり、Ａ）及びＢ）は、同時、別個又は順次使用のために２つの別個の製剤となっている。好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫又は横紋筋肉腫に関連する肺転移の治療及び／又は予防に使用するためのものである。
【００６７】
一つの好適な態様に従って、前記ｇｐ１３０阻害薬は、２−（７−フルオロピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−イル）  ２−ピラジンカルボン酸ヒドラジド（ＳＣ１４４）、ラロキシフェン(Raloxifene)及び（４Ｒ）−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−２−メチル−４−メチレンノナノイル）−４−イソプロピルジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（ＬＭＴ−２８）を含む群から選ばれる（Ｔａｅ−Ｈｗｅ  Ｈｅｏら；Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，Ｖｏｌ．７，Ｎｏ．１３，１５４６０−１５４７３；２０１６）。
【００６８】
一つの好適な態様に従って、前記ＩＬ−６阻害薬は、ＳＣ１４４、ボバリリズマブ(Vobarilizumab)、シルツキシマブ(Siltuximab)、シルクマブ(Sirukumab)、オロキズマブ(Olokizumab)、クラザキズマブ(Clazakizumab)、ＭＡｂ  １３３９、トシリズマブ(Tocilizumab)及びサリルマブ(Sarilumab)を含む群から選ばれる（Ｔａｅ−Ｈｗｅ  Ｈｅｏら；Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，Ｖｏｌ．７，Ｎｏ．１３，１５４６０−１５４７３；２０１６）。
【００６９】
好ましくは、前記ＩＬ−６阻害薬はＳＣ１４４である。
本発明の第六の目的は、Ａ’）骨及び軟部組織の肉腫、好ましくは、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫又はそれらに関連する肺転移の治療及び／又は予防に使用するための上記定義のＩＬ−８阻害薬又は上記定義の医薬組成物、及びＢ’）少なくとも一つの化学療法薬を含む製品又はキットであり、Ａ’）及びＢ’）は、同時、別個又は順次使用のために２つの別個の製剤となっている。好ましくは、原発腫瘍の骨肉腫、ユーイング肉腫又は横紋筋肉腫の治療及び／又は予防に使用するためのものである。
【００７０】
好ましくは、前記化学療法薬は、ドキソルビシン、シスプラチン、メトトレキサート、イホスファミド、エピルビシン、エトポシド、シクロホスファミド、ビンクリスチン及びアクチノマイシンＤを含む群から選ばれる。
【００７１】
本発明の目的のために、本発明によるＩＬ−８の阻害薬は、錠剤、カプセル、シロップなどの経口製剤（好ましくは制御放出製剤の形態で）によって、又は非経口投与（好ましくは静脈内もしくは筋肉内投与に適切な無菌溶液の形態で）によって使用するのに適切な医薬組成物に製剤化される。医薬組成物は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎの“Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，第２１版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ）に開示されているような従来法に従って製造できる。
【００７２】
平均の日用量は、疾患の重症度、患者の状態、年齢、性別及び体重などのいくつかの因子に依存する。用量は、一般的に、１日あたり式（Ｉ）の化合物１〜１５００ｍｇの間で変動する。前記用量は任意に複数回の投与用に分割されてもよい。
【００７３】
本発明を以下の実験の項でさらに詳細に説明する。
【実施例】
【００７４】
実験の項
方法
細胞株と初代細胞培養。ＯＳ−１７はＯＳ−１７異種移植由来であり、イタリア・ボローニャのＩｓｔｉｔｕｔｉ  Ｏｒｔｏｐｅｄｉｃｉ  Ｒｉｚｚｏｌｉから入手した。ＯＳ−２５とＯＨＳは、オスロのラジウム病院(Radium Hospital)の Ｄｒ．Ｆｏｄｓｔａｄ研究室からの寄贈であった。すべて、１０％ＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ  ＃Ｓ１１１５０Ｈ）を補充したＲＰＭＩ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ＃１０−０４０−ＣＶ）中で維持された。１４３Ｂ及びＫ７Ｍ２細胞は、ＡＴＣＣから入手し（ＡＴＣＣ  ＃ＣＲＬ−８３０３及び＃ＣＲＬ２８３６）、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ＃１０−０１３−ＣＶ）中で増殖させた。ＯＳＣＡ−８及びＯＳＣＡ−１６は、Ｊａｍｉｅ  Ｍｏｄｉａｎｏ及びミネソタ大学から提供され、１０％ＦＢＳ入りＲＰＭＩ中で増殖させた。肺平滑筋細胞（ＡＴＣＣ  ＃ＰＣＳ−１３０−１０）は、血管平滑筋細胞増殖キット（ＡＴＣＣ  ＃ＰＣＳ−１００−０４２）を補充した血管細胞基本培地（ＡＴＣＣ  ＃ＰＣＳ−１００−０３０）中で増殖させた。ＨＵＶＥＣ細胞（Ｌｏｎｚａ  ＣＣ−２５１７）は、ＥＧＭ−ｐｌｕｓ  ｓｉｎｇｌｅ  ｑｕｏｔｅ（Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−４５４２）を補充した内皮細胞基本培地（Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−５０３６）中で増殖させた。ヒト肺線維芽細胞（ＡＴＣＣ  ＃ＰＣＳ−２０１−０１３）は、１０％ＦＢＳを補充したＥＭＥＭ（ＡＴＣＣ  ＃３０−２００３）中で増殖させた。ＨＢＥＣ３−ＫＴ細胞（ＡＴＣＣ  ＃ＣＲＬ−４０５１）は、気管支上皮細胞増殖キット（ＡＴＣＣ  ＃ＰＣＳ−３００−０４０）を補充した気道上皮細胞基本培地（ＡＴＣＣ  ＃ＰＣＳ−３００−０３０）中で増殖させた。マクロファージは、全血（新鮮ヒト血液を調達するための施設内ＩＲＢ承認プロトコルを通じて得た）から、ＣＤ１４磁気ビーズ分離システム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＃１３０−０５０−２０１）とその後の２０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＭ−ＣＳＦ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  ＃５７４８０２）を毎日補充したＸＶＩＶＯ無血清培地（Ｌｏｎｚａ  ＃０４−３８０Ｑ）中での７２時間の培養を用いて単離された単球から誘導された。共培養実験の場合、各群内の培養（共培養及び関連する単独培養）は、培地成分の相違を調整するために二つの対応する増殖培地の１：１混合物を用いて実施した。
【００７５】
ＩＬ−６とＩＬ−８のＥＬＩＳＡ。２４ウェルプレートで実施された各細胞株の７２時間培養物の無細胞上清のＩＬ−６及びＩＬ−８の濃度を、Ｒ＆Ｄ  ＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｋｉｔｓ（＃ＤＹ２０６及び＃ＤＹ２０８）を製造業者の推奨に従って使用して評価した。
【００７６】
スクラッチ（「創傷治癒」）アッセイ。ＯＳ−１７又はＯＨＳ細胞株の単層培養物をＥｓｓｅｎ  Ｉｎｃｕｃｙｔｅ  ＷｏｕｎｄＭａｋｅｒ（Ｅｓｓｅｎ  Ｃｅｌｌ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ＃４４９３）を用いて分断した（傷つけた）。次に、個々のウェルをＥｓｓｅｎ  Ｉｎｃｕｃｙｔｅ  Ｚｏｏｍを用いて連続的に画像化した。分析を実施し、創傷幅をＥｓｓｅｎ’ｓ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｍｏｄｕｌｅ（Ｅｓｓｅｎ  ＃９６００−００１２）を用いて定量した。
【００７７】
トランスウェル遊走／浸潤アッセイ。１×１０４個のＯＳ細胞を、適切な走化性因子を含有するトランスウェルインサート（遊走の場合Ｆａｌｃｏｎ  ＃３５３０９７、又はマトリゲル(Matrigel)浸潤アッセイの場合Ｃｏｒｎｉｎｇ  ＃３５４４８３のいずれか）に播種した。２４時間のインキュベーション後、トランスウェルを排水し、上部チャンバ／膜の上面をポリエステルスワブでこすり落とした。膜をＤｉｆ−Ｑｕｉｋ染色セット（Ｓｉｅｍｅｎｓ  ＃Ｂ４１３２−１Ａ）で染色し、乾燥させた後、倒立顕微鏡で画像化した。細胞をＡｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ計数ツールを用いて定量した。ＩＬ−６及びＩＬ−８の走化性を含む実験の場合、培地は両チャンバとも１％ＦＢＳを含有し、組換えタンパク質を下部チャンバに加えて、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ６（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  ＃５７０８０４）又は１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−８（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  ＃５７４２０４）とした。血清を化学誘引物質として使用する実験の場合、上部チャンバはＲＰＭＩしか含有しないが、下部チャンバは１％又は２．５％血清を含有していた。注記されている場合(where noted)、ＩＬ６（Ａｂｃａｍ  ＃ＡＢ６６７２）、ＩＬ−８（Ａｂｃａｍ  ＃ＡＢ１８６７２）、又はその両方のいずれかに対する中和抗体２０ｕｇ／ｍｌを上部及び下部チャンバの両方に加えた。血清誘導遊走／浸潤を遮断する小分子の能力を試験する実験では、１μＭのｓｃ１４４（Ｓｉｇｍａ  ＃ＳＭＬ０７６３）及び／又は１００ｎＭのＤＦ２１５６Ａ（Ｄｏｍｐｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，イタリア・ミラノ）を培地に加えた。
【００７８】
ＯＳ細胞増殖。２０％コンフルエンスで播種された細胞を各図面に記載された阻害薬を含有する上記の増殖培地で培養した。増殖は、Ｅｓｓｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃｕｃｙｔｅ  Ｚｏｏｍを用いて、各図面に記載の期間にわたって連続的に定量した。
【００７９】
コロニー形成。１×１０４個のＯＳ細胞を、６ウェルプレート中１％軟寒天床１．５ｍｌ上の０．５％軟寒天１．５ｍｌ中に播種した後、５００ｍｌのＲＰＭＩで覆った（軟寒天：Ｌｏｎｚａ  ＳｅａＰｌａｑｕｅ  ＧＴＧ  Ａｇａｒｏｓｅ，＃５０１１１、Ｇｉｂｃｏの粉末ＲＰＭＩ  ＃４３０−１８００中）。注記されている場合、培地と寒天の両方全体に拡散した場合に規定濃度を生じるのに十分な薬物をＲＰＭＩ層に加えた。
【００８０】
異種移植生存試験。１×１０６個のＯＳ−１７細胞を尾静脈から接種された（０日）６〜８週齢のＣＢ１７−ＳＣＩＤ（Ｅｎｖｉｇｏ  Ｃ．Ｂ−１７／ＩｃｒＨｓｄ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ）マウスに、毎日、ｓｃ１４４（１０ｍｇ／ｋｇ  ＳＣ  １日１回、Ｓｉｇｍａ  ＃ＳＭＬ０７６３）、ＤＦ２１５６Ａ（３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  １日１回）、又はその両方の注射を接種２４時間後から開始した。ｓｃ１４４は、温めながらＤＭＳＯ中に溶解して４０ｍｇ／ｋｇ溶液にすることによって調製され、これを水中４０％プロピレングリコール／１％Ｔｗｅｅｎ−２０を用いて直ちに２ｍｇ／ｋｇに希釈した。平均２０ｇのマウスに１００ｕｌ／用量を投与した。ｓｃ１４４の用量は毎日新たに調製された。ＤＦ２１５６Ａは、２０ｇのマウスに同様の１００ｕｌ用量を投与するために、ＰＢＳ中に溶解して６ｍｇ／ｍｌ溶液にすることによって調製された。処置は４２日間継続され、その後停止された。マウスは、週２回、体重と増強されたボディ・コンディション・スコアリング（ｅＢＣＳ（２８））についてモニタされた。＞１０％の体重減少又はｅＢＣＳ＜８を示すマウスは安楽死させ、組織を採取し、肺に通気し、１０％中性緩衝ホルマリン中に固定し、次いで上記のように包埋及び加工した。転移性疾患負荷を示さないマウス（おそらくは他の原因で死亡する）は、生存分析から脱落する。これに含まれるのは、併用療法を受けた２匹のマウス、ｓｃ１４４を投与された１匹、及び１匹の対照マウスである。
【００８１】
時点処置試験。６〜８週齢のＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスに、１×１０６個の１４３Ｂ、ＯＳＣＡ−８、ＯＳＣＡ−１６、又はＫ７Ｍ２細胞を接種した（Ｋ７Ｍ２細胞については、免疫応答性（正常の免疫反応を引き起こす）Ｂａｌｂ／ｃマウスが使用された）。接種２４時間後、マウスに対し、毎日のｓｃ１４４及び／又はＤＦ２１５６Ａによる処置を開始し、上記のように４２日間継続した。次に、任意の所与の細胞株群の１匹のマウスがエンドポイントに到達するまでマウスを上記のように観察した。このセンチネルマウスから採取した肺に転移性疾患の徴候が認められた場合、その群の全マウスを安楽死させ、肺を採取し、通気し、固定し、包埋し、そして染色した。Ｈ＆Ｅで染色された左葉の中央切片を顕微鏡検査を用いて検査し、経験を積んだ盲検検査者(blinded reviewer)が転移性病変をカウントした。
【００８２】
統計分析。データは、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ７を用いてグラフ化及び分析された。使用された具体的な統計的検定及び行われた比較は各図面の説明文中に特定されている。必要な場合、多重比較の調整は、０．０５の偽発見率を制御するＢｅｎｊａｍｉｎｉ−Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法を用いて実施された。
【００８３】
実施例１
ＩＬ−６及びＩＬ−８の産生は、肺コロニー形成のマウス異種移植モデルにおける転移能と相関する
本発明者らは、骨肉腫細胞株集団がマウス肺にコロニーを形成する能力について試験した。本発明者らは、ＯＳ−１７細胞は尾静脈から循環に導入されると非常に高い効率で転移巣を形成したが、ＯＨＳ細胞株ははるかに低い転移効率しか示さないことを見出した（図１）。この効果は、多数回の細胞継代及び多数のアッセイにわたって一貫していた。本発明者らは、これらの細胞株のＩＬ−６及びＩＬ−８産生について、無細胞上清をＥＬＩＳＡに付すことによって調べた（図１ｄ）。その結果、腫瘍細胞のこれら二つのサイトカインの産生と、細胞株のマウス肺へのコロニー形成能力との間に強い相関があることが判明した。
【００８４】
ＩＬ−６及びＩＬ−８は、転移能に関わらず、ＯＳ細胞において化学運動性と指向性遊走を刺激する
これらの高転移性及び低転移性の細胞株がこれらのサイトカインに応答する特徴を維持しているかどうかを示すために、我々は、スクラッチアッセイ（創傷治癒アッセイ）とトランスウェル遊走アッセイの両方を実施し、応答を評価した。ＯＳ−１７及びＯＨＳ両方の細胞単層に作製された標準化創傷は、ＩＬ−６及び／又はＩＬ−８を補充した培地中で培養された場合に、より効果的に閉じ、いずれのサイトカインも、そのサイトカインの何らかの基本的産生に関わらず、いずれの細胞株においても化学運動性を刺激できること（細胞運動性の増大）を示していた。これらの細胞は、指向性遊走を試験するアッセイでも同様の結果を示す。トランスウェル系の上部チャンバで増殖させたＯＳ−１７及びＯＨＳ細胞とも、ＩＬ−６か又はＩＬ−８の走化性勾配に応答して強い指向性遊走を示す。
【００８５】
ＯＳ細胞の指向性遊走及び浸潤を防止するＤＦ２１５６Ａ単独の又はｓｃ１４４と組み合わせた効果
考えられる走化性因子のずっと広い環境内でのＯＳ細胞遊走に対するこれらのサイトカインの重要性を決定するために、本発明者らは、血清を化学誘引物質として使用した場合にＩＬ−６及び／又はＩＬ−８遮断が持つであろう効果を調べた。どちらの細胞株も、血清の走化性勾配に応答して、マトリゲル障壁を通過する非常に強いトランスウェル遊走及び浸潤を示した（図１ｅ−ｆ）。ＩＬ−６又はＩＬ−８遮断抗体を培地に添加すると、走化性応答に一定の低下が明らかであったが、抗体を組み合わせた場合にはるかに大きい効果が見られた。より大きい効果は、ＩＬ−６及びＩＬ−８の受容体の小分子阻害薬［ｓｃ１４４（これは新規機序を通じてｇｐ１３０の劣化を刺激する）及びＤＦ２１５６Ａ（ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２のアロステリック阻害薬）］を使用する同様の実験で見られた。受容体レベルでの阻害で、いずれの経路の遮断も指向性遊走及び浸潤を防止するのに十分であり（図２）、これらの経路の一定レベルの活性化（おそらくは非ＩＬ−６及び非ＩＬ−８サイトカインによる）が、ＯＳ細胞がこれらの挙動を生じるのに必要であることを示唆している。どちらの阻害薬もＯＳ細胞の遊走量を著しく減少させた。
【００８６】
実施例２
肺転移の防止におけるＤＦ２１５６Ａ単独の又はｓｃ１４４と組み合わせた効果
ＯＳ肺転移に対するＩＬ−６及びＩＬ−８経路の機能的重要性を評価するために、本発明者らは異種移植モデルを使用した。尾静脈から１×１０６個のルシフェラーゼ標識ＯＳ−１７細胞を接種されたＢａｌｂ−ＳＣＩＤマウスを、ｓｃ１４４（ｇｐ１３０阻害薬）、ＤＦ２１５６Ａ（ＣＸＣＲ１／２阻害薬）、又はその両方で処置した。マウスは４２日間処置を受け続け、その後処置は停止された。腫瘍量をインビボ評価するための生体内イメージングを１４日及び２４日に標準的生物発光技術を用いて実施した。生物発光イメージングから、併用療法を受けたマウスの肺における腫瘍量が、処置を受けなかったか又は単剤療法を受けたマウスと比べて著しく減少していることが示唆された（図３Ａ）。重要なことに、イメージングで腫瘍細胞の他の臓器への遊走は示されなかったが、生物発光が総体的に失われていることから、循環腫瘍細胞の総体的な生存が減少していることが示唆された。各単剤処置群からの２匹のマウスを１４回目の薬物投与の２４時間後に安楽死させ、標的阻害の薬力学（ＰＤ）評価を実施した。ＩＨＣでｐＦＡＫ（ＤＦ２１５６Ａ）又はｐＳＴＡＴ３（ｇｐ１３０）を染色したマウスの肺は、投与のトラフ（次の投与直前の最低血中濃度）でも標的阻害の持続（すなわち薬物活性の持続）を示していた（図４）。
【００８７】
処置後、マウスを、臨床的悪化の徴候、すなわち我々の規定のエンドポイントである体重減少＞１０％又は増強されたボディ・コンディション・スコア（ｅＢＣＳ）＜８のいずれかを示すまで観察した。エンドポイント時点で、マウスを認可された方法を用いて安楽死させ、肺を採取、通気、固定、包埋、切片化、及び染色した。生存分析（図３Ｂ）から、薬物療法を受けていないか又は単剤療法を受けていたほぼすべてのマウスは６０日までに致死的肺転移を起こしたことが示された。特に、薬物を投与されなかったマウスは、単剤投与されたマウスより早く致死的肺転移を起こした。ところが、併用療法（ｇｐ１３０阻害薬＋ＣＸＣＲ１／２阻害薬）を受けた大部分のマウスは＞１００日でも健康状態を保っていた。肺切片上に明白な肺転移を示さなかったマウスは、生存分析から脱落した（ｎ＝２）。
【００８８】
実施例３
ＯＳの多重モデルにおける肺転移防止のＤＦ２１５６Ａとｓｃ１４４の併用の効果
これらの研究で得られた結果が広く適用可能であること及び免疫不全の異種移植又はＯＳ−１７細胞に特異的でないことを保証するために、本発明者らはいくつかの異なるモデルを用いて処置関連の実験を繰り返した。これらには、Ｂａｌｂ／ｃマウスに自然発生するＯＳから誘導された細胞株を用いる同系免疫応答性モデル（Ｋ７Ｍ２）、イヌＯＳの異種移植モデル（ＯＳＣＡ−８及びＯＳＣＡ−１６）、及びヒトＯＳの追加の異種移植モデル（１４３Ｂ）が含まれた。腫瘍細胞を接種されたマウスを薬物なし又はｓｃ１４４とＤＦ２１５６Ａの併用のいずれかで４２日間処置した。いずれかの群（いずれかの細胞株）の少なくとも１匹のマウスが肺転移の確認によりエンドポイントに到達した時点で、その群の全マウスを安楽死させ、肺を採取し、転移性病変を定量化した。転移性肺病変の発生を防止する二重ｇｐ１３０−ＣＸＣＲ１／２阻害の能力は全モデルで一貫していた（図５）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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