(57)【要約】アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、抗体及びその抗原結合フラグメントなど、ならびに、制御性Ｔ細胞（Ｔ−ｒｅｇ）及び／または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の増殖を阻害する、Ｔエフェクター細胞の集団を増殖させるまたはＴエフェクター細胞の機能を増強する、及び、腫瘍細胞、例えば、ＴＮＦＲ２抗原を発現する腫瘍細胞などの増殖を抑制するまたは直接殺傷するための、これらのポリペプチドの使用について記載する。ポリペプチド、例えば、抗体及びその抗原結合フラグメントなどは、ＴＮＦＲ２アンタゴニスト、例えば、支配的ＴＮＦＲ２アンタゴニストなどである。腫瘍反応性Ｔリンパ球のＴ−ｒｅｇまたはＭＤＳＣ介在性不活性化を抑制する、腫瘍反応性細胞傷害性Ｔ細胞の集団を増殖させる、及び／またはＴＮＦＲ２＋腫瘍細胞を直接殺傷するために、ポリペプチドを使用することができる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを使用して、多種多様ながん及び感染症を治療することができる。【選択図】図１
2021534757.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
システインリッチドメイン（ＣＲＤ）３（ＣＲＤ３）及び／またはＣＲＤ４内のエピトープにおいて、ヒト腫瘍壊死因子受容体２（ＴＮＦＲ２）に特異的に結合し、かつ、ＣＲＤ１内の１つまたは複数のアミノ酸により定められたエピトープにおいて、ＴＮＦＲ２に特異的に結合しない、抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位及び／または２３３位のシステイン残基を欠くヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、及び／または、
（ｂ）少なくとも約１３３Åの距離分互いに離れた抗原結合部位を含む、
前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
ヒトＴＮＦＲ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、
（ｂ）配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、
（ｃ）配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、
（ｄ）配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、または、
（ｅ）配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び／または、
（ｆ）配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｇ）配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｈ）配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｉ）配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、または、
（ｊ）配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
請求項２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｂ）配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｃ）配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｄ）配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｅ）配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｆ）配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｇ）配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｈ）配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｉ）配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｊ）配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｋ）配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｌ）配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｍ）配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｎ）配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｏ）配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｐ）配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｑ）配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｒ）配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｓ）配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｔ）配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｕ）配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｖ）配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｗ）配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｘ）配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、または、
（ｙ）配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
請求項２または請求項３に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＲＤ３及び／またはＣＲＤ４内のエピトープにおいて、ヒトＴＮＦＲ２に特異的に結合し、かつ、ＣＲＤ１内の１つまたは複数のアミノ酸により定められたエピトープにおいて、ＴＮＦＲ２に特異的に結合せず、任意選択的に、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位及び／または２３３位のシステイン残基を欠くヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、及び／または、
（ｂ）少なくとも約１３３Åの距離分互いに離れた抗原結合部位を含む、
前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位及び／または２３３位のシステイン残基を欠くヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
請求項１から請求項５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位のシステイン残基を欠くヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３３位のシステイン残基を欠くヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
請求項１から請求項７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位及び／または２３３位にシステイン以外のアミノ酸を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項９】
請求項８に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位にシステイン以外のアミノ酸を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
請求項８または請求項９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３３位にシステイン以外のアミノ酸を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
請求項１から請求項１０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位及び／または２３３位にセリン残基を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
請求項１１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位にセリン残基を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
請求項１１または請求項１２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３３位にセリン残基を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
請求項１から請求項１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、システイン残基２３２及び２３３の一方または両方にアミノ酸置換または欠失を含むヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１５】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、システイン残基２３２及び２３３の一方または両方にアミノ酸置換を含む、請求項１４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１６】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、システイン残基２３２にアミノ酸置換を含む、請求項１５に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１７】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、システイン残基２３３にアミノ酸置換を含む、請求項１５または請求項１６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１８】
前記アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である、請求項１４から請求項１７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１９】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域はＣ２３２Ｓ置換を含む、請求項１８に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２０】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域はＣ２３３Ｓ置換を含む、請求項１８または請求項１９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２１】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、配列番号：２９１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１から請求項２０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２２】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、配列番号：２９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項２１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２３】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、配列番号：２９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有する、請求項２２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２４】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、アミノ酸置換Ｃ２３２Ｓ及びＣ２３３Ｓを除く配列番号：２９１のアミノ酸配列を有する、請求項２３に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２５】
請求項１から請求項２４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも約１３３Åの距離分互いに離れた抗原結合部位を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２６】
前記抗原結合部位は少なくとも約１３４Åの距離分互いに離れている、請求項２５に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２７】
前記抗原結合部位は少なくとも約１３９Åの距離分互いに離れている、請求項２６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２８】
前記抗原結合部位は少なくとも約１５０Åの距離分互いに離れている、請求項２７に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２９】
前記抗原結合部位は約１３３Å〜約１５０Åの距離分互いに離れている、請求項１から請求項２４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３０】
前記抗原結合部位は約１３３Å〜約１４５Åの距離分互いに離れている、請求項２９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３１】
前記抗原結合部位は約１３３Å〜約１３９Åの距離分互いに離れている、請求項２９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３２】
前記抗原結合部位は約１３４Å〜約１３９Åの距離分互いに離れている、請求項２９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３３】
請求項１から請求項３２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＪＴＦ（Ｊ）２Ｙ（配列番号：２７６）またはＧＪＴＦ（Ｊ）２ＹＪ（配列番号：２７７）を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）重鎖１（ＣＤＲ１）を含み、それぞれのＪは独立して、天然アミノ酸である、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３４】
請求項３３に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列（Ｊ）３ＧＳＪまたは（Ｊ）５ＧＳＪを有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｂ）アミノ酸配列ＪＲＪＤＧＪＳＪＹ（Ｊ）２ＦＤＪ（配列番号：２７８）またはＪＲＪＤＧＳＹ（Ｊ）２ＦＤ（Ｊ）３（配列番号：２７９）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
（ｃ）アミノ酸配列（Ｊ）９Ｙまたは（Ｊ）５Ｙを有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）アミノ酸配列（Ｊ）６Ｓまたは（Ｊ）２Ｓを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、
（ｅ）アミノ酸配列（Ｊ）５Ｙ（Ｊ）２Ｔまたは（Ｊ）３Ｙ（Ｊ）４Ｔを有するＣＤＲ−Ｌ３、
を更に含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３５】
請求項１から請求項３２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列Ｚ４ＦＺ３Ｚ５ＳＳＺ５またはＺ４ＹＺ３Ｚ５ＴＤＺ５Ｘを有するＣＤＲ−Ｈ１を含み、
それぞれのＺ３は独立して、極性で生理学的ｐＨにおいて非荷電の側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＺ４は独立して、グリシンまたはアラニンであり、
それぞれのＺ５は独立して、疎水性側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである、
前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３６】
請求項３５に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列ＳＳＧＺ４Ｚ３Ｙ（配列番号：２６３）またはＶＤＰＥＹＺ４Ｚ３Ｔ（配列番号：２６４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｂ）アミノ酸配列ＱＺ１ＶＺ２Ｚ４ＹＺ３ＳＺ５ＷＹＺ５Ｚ２Ｚ５（配列番号：２６５）またはＡＺ１ＤＺ２Ｚ４Ｚ３Ｚ５ＳＰＺ５Ｚ２Ｚ５ＷＧ（配列番号：２６６）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＺ５（配列番号：２６７）またはＱＮＩＮＫＺ５（配列番号：２６８）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＺ３（配列番号：２６９）、ＴＹＺ３、またはＹＴＺ３を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、
（ｅ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＺ５ＰＹＺ３（配列番号：２７０）またはＣＬＱＺ５ＶＮＬＸＺ３（配列番号：２７１）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を更に含み、
それぞれのＺ１は独立して、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＺ２は独立して、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を含むアミノ酸である、
前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３７】
請求項１から請求項３２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）、ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）、または前記配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１を含み、それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンであり、任意選択的に、前記アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３８】
請求項３７に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）、ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）、または前記配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｂ）アミノ酸配列ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）、ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）、または前記配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）、ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）、または前記配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２７）、ＴＹＳ、ＹＴＳ、または配列番号：２７と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、
（ｅ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）、ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）、または前記配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を更に含み、
任意選択的に、前記アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である、
前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３９】
請求項１から請求項３８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
のうちの１つまたは複数を含む重鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４０】
請求項１から請求項３８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
のうちの１つまたは複数を含む重鎖を含み、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである、
前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４１】
前記ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＬ（配列番号：２７４）を有する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４２】
前記ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＩ（配列番号：２７５）を有する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４３】
請求項１から請求項４２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２７）を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
のうちの１つまたは複数を含む軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４４】
請求項１から請求項４２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＴＹＳまたはＹＴＳを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
のうちの１つまたは複数を含む軽鎖を含み、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである、
前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４５】
前記ＣＤＲ−Ｌ２はアミノ酸配列ＴＹＳを有する、請求項４４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４６】
前記ＣＤＲ−Ｌ２はアミノ酸配列ＹＴＳを有する、請求項４４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４７】
前記ＣＤＲ−Ｌ３はアミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＬＴ（配列番号：２７２）を有する、請求項４４から請求項４６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４８】
前記ＣＤＲ−Ｌ３はアミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＩＴ（配列番号：２７３）を有する、請求項４５から請求項４６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４９】
請求項１から請求項４８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
を含む３つの重鎖ＣＤＲを含み、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ｄ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｅ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２７）を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｆ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を含む３つの軽鎖ＣＤＲを更に含む、
前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５０】
請求項１から請求項４８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
を含む３つの重鎖ＣＤＲを含み、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ｄ）アミノ酸配列ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｅ）アミノ酸配列ＴＹＳまたはＹＴＳを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｆ）アミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を含む３つの軽鎖ＣＤＲを更に含み、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである、
前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５１】
前記ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＬ（配列番号：２７４）を有する、請求項５０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５２】
前記ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＩ（配列番号：２７５）を有する、請求項５０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５３】
前記ＣＤＲ−Ｌ２はアミノ酸配列ＴＹＳを有する、請求項５０から請求項５３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５４】
前記ＣＤＲ−Ｌ２はアミノ酸配列ＹＴＳを有する、請求項５０から請求項５３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５５】
前記ＣＤＲ−Ｌ３はアミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＬＴ（配列番号：２７２）を有する、請求項５０から請求項５５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５６】
前記ＣＤＲ−Ｌ３はアミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＩＴ（配列番号：２７３）を有する、請求項５０から請求項５５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５７】
請求項３４、請求項３６、請求項３８、及び請求項４３から請求項５６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記ＣＤＲ−Ｌ２のＮ末端に結合したアミノ酸配列ＬＬＩＲ（配列番号：２６２）を有するフレームワーク領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５８】
請求項３４、請求項３６、請求項３８、及び請求項４３から請求項５７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記ＣＤＲ−Ｌ２のＣ末端に結合したアミノ酸配列ＴＬＥを有するフレームワーク領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５９】
請求項１から請求項５８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６０】
前記重鎖可変ドメインは、配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一、例えば、少なくとも９５％、９７％、９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を有する、請求項５９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６１】
請求項１から請求項６０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６２】
前記軽鎖可変ドメインは、配列番号：４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一、例えば、少なくとも９５％、９７％、９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を有する、請求項６１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６３】
請求項５９から請求項６２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン及び配列番号：４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６４】
請求項１から請求項６３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチドに約１００ｎＭ未満のＫＤで特異的に結合し、かつ、配列番号：７のアミノ酸５６〜６０（ＫＣＳＰＧ）を含むペプチドに結合しない、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６５】
請求項１から請求項６４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号：７のアミノ酸１４２〜１４６（ＫＣＲＰＧ）、
（ｂ）配列番号：７のアミノ酸１４２〜１４９（ＫＣＲＰＧＦＧＶ）、
（ｃ）配列番号：７のアミノ酸１３７〜１４４（ＣＡＰＬＲＫＣＲ）、
（ｄ）配列番号：７のアミノ酸１５０〜１９０（ＲＰＧＴＥＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡＰＧＴＦＳＮＴＴＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩＣＮＶＶＡＩ）、
（ｅ）配列番号：７のアミノ酸１６１〜１６９（ＣＫＰＣＡＰＧＴＦ）、
（ｆ）配列番号：７のアミノ酸７５〜１２８（ＣＤＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳＣＧＳＲＣＳＳＤＱＶＥＴＱＡＣＴＲＥＱＮＲＩＣＴＣＲＰＧＷＹＣＡＬ）（任意選択的に、前記エピトープは、配列番号：７のアミノ酸８０〜８６（ＤＳＴＹＴＱＬ）、９１〜９８（ＰＥＣＬＳＣＧＳ）、または１１６〜１２３（ＲＩＣＴＣＲＰＧ）の内部にある）、
（ｇ）配列番号：７のアミノ酸１７４〜１８４（ＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩ）、
（ｈ）配列番号：７のアミノ酸１２６〜１４０（ＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬ）、及び／または、
（ｉ）配列番号：７のアミノ酸１５６〜１６５（ＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡ）、
の内部のエピトープにおいて、前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６６】
請求項１から請求項６５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＴＮＦＲ２シグナル伝達を阻害する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６７】
請求項１から請求項６６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦＲ２を発現する細胞内における、ＣＨＵＫ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＦＫＢＩＡ、ＭＡＰ３Ｋ１１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ｒｅｌＢ、及びｃＩＡＰ２／ＢＩＲＣ３からなる群から選択される１種または複数種の遺伝子の発現を低下させる、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６８】
請求項１から請求項６７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦＲ２を発現する細胞内におけるＮＦκＢ活性化を抑制する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６９】
前記細胞は制御性Ｔ細胞（Ｔ−ｒｅｇ細胞）またはがん細胞である、請求項６７または請求項６８に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７０】
請求項１から請求項６９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１０ｎＭ以下のＫＤで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７１】
請求項７０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１ｎＭ以下のＫＤで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７２】
請求項７１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約６２１ｐＭのＫＤで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７３】
請求項７１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４４ｐＭのＫＤで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７４】
請求項１から請求項７３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合して抗体−抗原複合体を形成する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７５】
請求項７４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４．９×１０６Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合して抗体−抗原複合体を形成する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７６】
請求項７４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約３．６×１０５Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合して抗体−抗原複合体を形成する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７７】
請求項１から請求項７５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合して抗体−抗原複合体を形成し、前記複合体は約１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆで解離する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７８】
請求項７７に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約３．０×１０−５ｓ−１以下のＫｏｆｆで前記ＴＮＦＲ２から解離する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７９】
請求項７８に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約２．２×１０−４ｓ−１のＫｏｆｆで前記ＴＮＦＲ２から解離する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８０】
請求項１から請求項７９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｔ−ｒｅｇ細胞の集団の増殖を抑制または阻害する、及び／または、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の集団の増殖を誘導する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８１】
前記Ｔ−ｒｅｇ細胞はＣＤ２５Ｈｉを発現する、請求項８０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８２】
請求項８０または請求項８１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦαの存在下で、前記Ｔ−ｒｅｇ細胞の集団の増殖を抑制または阻害する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８３】
請求項１から請求項８２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦＲ２を発現するがん細胞の集団の増殖を抑制または阻害する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８４】
前記がん細胞は、ホジキンリンパ腫細胞、皮膚非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、及び腎細胞癌細胞からなる群から選択される、請求項８３に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８５】
請求項１から請求項８４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、骨髄由来抑制細胞の集団の増殖を抑制または阻害する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８６】
請求項１から請求項８５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、霊長類化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、多重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、デュアル可変免疫グロブリンドメイン、一価抗体またはその抗原結合フラグメント、キメラ抗体またはその抗原結合フラグメント、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ディアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャフォールド、ドメイン抗体、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２分子、及びタンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）からなる群から選択される、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８７】
請求項８６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体、またはその抗原結合フラグメントである、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８８】
請求項１から請求項８７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ抗体またはその抗原結合フラグメントである、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８９】
請求項１から請求項８７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体は治療薬にコンジュゲートしている、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項９０】
前記治療薬は細胞傷害剤である、請求項８９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項９１】
第１のポリペプチドドメイン及び第２のポリペプチドドメインを含む構築物であって、前記第１のポリペプチドドメイン及び前記第２のポリペプチドドメインはそれぞれ独立して、請求項１から請求項９０のいずれか１項に記載の抗原結合フラグメントである、前記構築物。
【請求項９２】
前記第１のポリペプチドドメイン及び前記第２のポリペプチドドメインは共有結合リンカーにより結合している、請求項９１に記載の構築物。
【請求項９３】
前記共有結合リンカーはアミド結合を含む、請求項９２に記載の構築物。
【請求項９４】
前記共有結合リンカーはジスルフィド結合を含む、請求項９３に記載の構築物。
【請求項９５】
請求項１から請求項９０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド。
【請求項９６】
請求項９１から請求項９４のいずれか１項に記載の構築物をコードするポリヌクレオチド。
【請求項９７】
請求項９５または請求項９６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項９８】
請求項９７に記載のベクターであって、前記ベクターは発現ベクターである、前記ベクター。
【請求項９９】
前記発現ベクターは真核細胞発現ベクターである、請求項９８に記載のベクター。
【請求項１００】
請求項９７に記載のベクターであって、前記ベクターはウイルスベクターである、前記ベクター。
【請求項１０１】
前記ウイルスベクターは、アデノウイルス（Ａｄ）、レトロウイルス、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス、バキュロウイルス、単純ヘルペスウイルス、及びワクシニアウイルスからなる群から選択される、請求項１００に記載のベクター。
【請求項１０２】
前記アデノウイルスは血清型１〜５７のアデノウイルスである、請求項１０１に記載のベクター。
【請求項１０３】
前記アデノウイルスは、血清型５、２６、３５、または４８のアデノウイルスである、請求項１０２に記載のベクター。
【請求項１０４】
前記レトロウイルスはγ−レトロウイルスまたはレンチウイルスである、請求項１０１に記載のベクター。
【請求項１０５】
前記ワクシニアウイルスは改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）である、請求項１０１に記載のベクター。
【請求項１０６】
請求項９７から請求項１０５のいずれか１項に記載のベクターを含む単離宿主細胞。
【請求項１０７】
請求項１０６に記載の宿主細胞であって、前記宿主細胞は原核細胞である、前記宿主細胞。
【請求項１０８】
請求項１０６に記載の宿主細胞であって、前記宿主細胞は真核細胞である、前記宿主細胞。
【請求項１０９】
前記真核細胞は哺乳動物細胞である、請求項１０８に記載の宿主細胞。
【請求項１１０】
前記哺乳動物細胞はＣＨＯ細胞である、請求項１０９に記載の宿主細胞。
【請求項１１１】
ＣＲＤ３及び／またはＣＲＤ４内のエピトープにおいて、ヒトＴＮＦＲ２に特異的に結合し、かつ、ＣＲＤ１内の１つまたは複数のアミノ酸により定められたエピトープにおいて、ＴＮＦＲ２に結合しない、抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物であって、前記医薬組成物中の前記抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも５０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、前記医薬組成物。
【請求項１１２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位及び／または２３３位のシステイン残基を欠くヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、請求項１１１に記載の医薬組成物。
【請求項１１３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位のシステイン残基を欠くヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、請求項１１１または請求項１１２に記載の医薬組成物。
【請求項１１４】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３３位のシステイン残基を欠くヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、請求項１１１から請求項１１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１５】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位及び／または２３３位にシステイン以外のアミノ酸を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、請求項１１１から請求項１１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１６】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位にシステイン以外のアミノ酸を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、請求項１１５に記載の医薬組成物。
【請求項１１７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３３位にシステイン以外のアミノ酸を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、請求項１１５または請求項１１６に記載の医薬組成物。
【請求項１１８】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位及び／または２３３位にセリン残基を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、請求項１１１から請求項１１７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１９】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位にセリン残基を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、請求項１１８に記載の医薬組成物。
【請求項１２０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３３位にセリン残基を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、請求項１１８または請求項１１９に記載の医薬組成物。
【請求項１２１】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、システイン残基２３２及び２３３の一方または両方にアミノ酸置換または欠失を含むヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、請求項１１１から請求項１２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２２】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、システイン残基２３２及び２３３の一方または両方にアミノ酸置換を含む、請求項１２１に記載の医薬組成物。
【請求項１２３】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、システイン残基２３２にアミノ酸置換を含む、請求項１２２に記載の医薬組成物。
【請求項１２４】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、システイン残基２３３にアミノ酸置換を含む、請求項１２２または請求項１２３に記載の医薬組成物。
【請求項１２５】
前記アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である、請求項１２２から請求項１２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２６】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域はＣ２３２Ｓ置換を含む、請求項１２５に記載の医薬組成物。
【請求項１２７】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域はＣ２３３Ｓ置換を含む、請求項１２５または請求項１２６に記載の医薬組成物。
【請求項１２８】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、配列番号：２９１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１１１から請求項１２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２９】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、配列番号：２９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３０】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、配列番号：２９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１２９に記載の医薬組成物。
【請求項１３１】
前記ＩｇＧ２ヒンジ領域は、アミノ酸置換Ｃ２３２Ｓ及びＣ２３３Ｓを除く配列番号：２９１のアミノ酸配列を有する、請求項１３０に記載の医薬組成物。
【請求項１３２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも約１３３Åの距離分互いに離れた抗原結合部位を含む、請求項１１１から請求項１３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３３】
前記抗原結合部位は少なくとも約１３４Åの距離分互いに離れている、請求項１３２に記載の医薬組成物。
【請求項１３４】
前記抗原結合部位は少なくとも約１３９Åの距離分互いに離れている、請求項１３３に記載の医薬組成物。
【請求項１３５】
前記抗原結合部位は少なくとも約１５０Åの距離分互いに離れている、請求項１３４に記載の医薬組成物。
【請求項１３６】
前記抗原結合部位は約１３３Å〜約１５０Åの距離分互いに離れている、請求項１１１から請求項１３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３７】
前記抗原結合部位は約１３３Å〜約１４５Åの距離分互いに離れている、請求項１３６に記載の医薬組成物。
【請求項１３８】
前記抗原結合部位は約１３３Å〜約１３９Åの距離分互いに離れている、請求項１３６に記載の医薬組成物。
【請求項１３９】
前記抗原結合部位は約１３４Å〜約１３９Åの距離分互いに離れている、請求項１３６に記載の医薬組成物。
【請求項１４０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、
（ｂ）配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、
（ｃ）配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、
（ｄ）配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、または、
（ｅ）配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び／または、
（ｆ）配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｇ）配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｈ）配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｉ）配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、または、
（ｊ）配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
を含む、請求項１１１から請求項１３９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４１】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｂ）配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｃ）配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｄ）配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｅ）配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｆ）配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｇ）配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｈ）配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｉ）配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｊ）配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｋ）配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｌ）配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｍ）配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｎ）配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｏ）配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｐ）配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｑ）配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｒ）配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｓ）配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｔ）配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｕ）配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｖ）配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｗ）配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
（ｘ）配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、または、
（ｙ）配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖、
を含む、請求項１４０に記載の医薬組成物。
【請求項１４２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＪＴＦ（Ｊ）２Ｙ（配列番号：２７６）またはＧＪＴＦ（Ｊ）２ＹＪ（配列番号：２７７）を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）重鎖１（ＣＤＲ１）を含み、それぞれのＪは独立して、天然アミノ酸である、請求項１１１から請求項１４１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列（Ｊ）３ＧＳＪまたは（Ｊ）５ＧＳＪを有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｂ）アミノ酸配列ＪＲＪＤＧＪＳＪＹ（Ｊ）２ＦＤＪ（配列番号：２７８）またはＪＲＪＤＧＳＹ（Ｊ）２ＦＤ（Ｊ）３（配列番号：２７９）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
（ｃ）アミノ酸配列（Ｊ）９Ｙまたは（Ｊ）５Ｙを有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）アミノ酸配列（Ｊ）６Ｓまたは（Ｊ）２Ｓを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、
（ｅ）アミノ酸配列（Ｊ）５Ｙ（Ｊ）２Ｔまたは（Ｊ）３Ｙ（Ｊ）４Ｔを有するＣＤＲ−Ｌ３、
を更に含む、請求項１４２に記載の医薬組成物。
【請求項１４４】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列Ｚ４ＦＺ３Ｚ５ＳＳＺ５またはＺ４ＹＺ３Ｚ５ＴＤＺ５Ｘを有するＣＤＲ−Ｈ１を含み、
それぞれのＺ３は独立して、極性で生理学的ｐＨにおいて非荷電の側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＺ４は独立して、グリシンまたはアラニンであり、
それぞれのＺ５は独立して、疎水性側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである、
請求項１１１から請求項１４１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４５】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列ＳＳＧＺ４Ｚ３Ｙ（配列番号：２６３）またはＶＤＰＥＹＺ４Ｚ３Ｔ（配列番号：２６４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｂ）アミノ酸配列ＱＺ１ＶＺ２Ｚ４ＹＺ３ＳＺ５ＷＹＺ５Ｚ２Ｚ５（配列番号：２６５）またはＡＺ１ＤＺ２Ｚ４Ｚ３Ｚ５ＳＰＺ５Ｚ２Ｚ５ＷＧ（配列番号：２６６）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＺ５（配列番号：２６７）またはＱＮＩＮＫＺ５（配列番号：２６８）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＺ３（配列番号：２６９）、ＴＹＺ３、またはＹＴＺ３を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、
（ｅ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＺ５ＰＹＺ３（配列番号：２７０）またはＣＬＱＺ５ＶＮＬＸＺ３（配列番号：２７１）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を更に含み、
それぞれのＺ１は独立して、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＺ２は独立して、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を含むアミノ酸である、
請求項１４２に記載の医薬組成物。
【請求項１４６】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）、ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）、または前記配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１を含み、それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンであり、任意選択的に、前記アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である、請求項１１１から請求項１４１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）、ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）、または前記配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｂ）アミノ酸配列ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）、ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）、または前記配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）、ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）、または前記配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２７）、ＴＹＳ、ＹＴＳ、または配列番号：２７と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、
（ｅ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）、ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）、または前記配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を更に含み、
任意選択的に、前記アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である、
請求項１４６に記載の医薬組成物。
【請求項１４８】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
のうちの１つまたは複数を含む重鎖を含む、請求項１１１から請求項１４７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４９】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
のうちの１つまたは複数を含む重鎖を含み、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである、
請求項１１１から請求項１４７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５０】
前記ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＬ（配列番号：２７４）を有する、請求項１４９に記載の医薬組成物。
【請求項１５１】
前記ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＩ（配列番号：２７５）を有する、請求項１４９に記載の医薬組成物。
【請求項１５２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２７）を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
のうちの１つまたは複数を含む軽鎖を含む、請求項１１１から請求項１５１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＴＹＳまたはＹＴＳを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
のうちの１つまたは複数を含む軽鎖を含み、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである、
請求項１１１から請求項１５１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５４】
前記ＣＤＲ−Ｌ２はアミノ酸配列ＴＹＳを有する、請求項１５３に記載の医薬組成物。
【請求項１５５】
前記ＣＤＲ−Ｌ２はアミノ酸配列ＹＴＳを有する、請求項１５３に記載の医薬組成物。
【請求項１５６】
前記ＣＤＲ−Ｌ３はアミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＬＴ（配列番号：２７２）を有する、請求項１５３から請求項１５５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５７】
前記ＣＤＲ−Ｌ３はアミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＩＴ（配列番号：２７３）を有する、請求項１４８から請求項１５０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５８】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
を含む３つの重鎖ＣＤＲを含み、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ｄ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｅ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２７）を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｆ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を含む３つの軽鎖ＣＤＲを更に含む、
請求項１１１から請求項１５７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５９】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
を含む３つの重鎖ＣＤＲを含み、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ｄ）アミノ酸配列ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｅ）アミノ酸配列ＴＹＳまたはＹＴＳを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｆ）アミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を含む３つの軽鎖ＣＤＲを更に含み、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである、
請求項１１１から請求項１５７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６０】
前記ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＬ（配列番号：２７４）を有する、請求項１５９に記載の医薬組成物。
【請求項１６１】
前記ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＩ（配列番号：２７５）を有する、請求項１５９に記載の医薬組成物。
【請求項１６２】
前記ＣＤＲ−Ｌ２はアミノ酸配列ＴＹＳを有する、請求項１５９から請求項１６１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６３】
前記ＣＤＲ−Ｌ２はアミノ酸配列ＹＴＳを有する、請求項１５９から請求項１６１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６４】
前記ＣＤＲ−Ｌ３はアミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＬＴ（配列番号：２７２）を有する、請求項１５９から請求項１６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６５】
前記ＣＤＲ−Ｌ３はアミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＩＴ（配列番号：２７３）を有する、請求項１５９から請求項１６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６６】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記ＣＤＲ−Ｌ２のＮ末端に結合したアミノ酸配列ＬＬＩＲ（配列番号：２６２）を有するフレームワーク領域を含む、請求項１４３、請求項１４５、請求項１４７、及び請求項１５２から請求項１６５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記ＣＤＲ−Ｌ２のＣ末端に結合したアミノ酸配列ＴＬＥを有するフレームワーク領域を含む、請求項１４３、請求項１４５、請求項１４６、及び請求項１５２から請求項１６６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６８】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む、請求項１１１から請求項１６７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６９】
前記重鎖可変ドメインは、配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一、例えば、少なくとも９５％、９７％、９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１６８に記載の医薬組成物。
【請求項１７０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む、請求項１１１から請求項１６９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７１】
前記軽鎖可変ドメインは、配列番号：４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一、例えば、少なくとも９５％、９７％、９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を有する、請求項１７０に記載の医薬組成物。
【請求項１７２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン及び配列番号：４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む、請求項１６８から請求項１７１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７３】
前記抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチドに約１００ｎＭ未満のＫＤで特異的に結合し、かつ、配列番号：７のアミノ酸５６〜６０（ＫＣＳＰＧ）を含むペプチドに結合しない、請求項１１１から請求項１７２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７４】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）配列番号：７のアミノ酸１４２〜１４６（ＫＣＲＰＧ）、
（ｂ）配列番号：７のアミノ酸１４２〜１４９（ＫＣＲＰＧＦＧＶ）、
（ｃ）配列番号：７のアミノ酸１３７〜１４４（ＣＡＰＬＲＫＣＲ）、
（ｄ）配列番号：７のアミノ酸１５０〜１９０（ＲＰＧＴＥＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡＰＧＴＦＳＮＴＴＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩＣＮＶＶＡＩ）、
（ｅ）配列番号：７のアミノ酸１６１〜１６９（ＣＫＰＣＡＰＧＴＦ）、
（ｆ）配列番号：７のアミノ酸７５〜１２８（ＣＤＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳＣＧＳＲＣＳＳＤＱＶＥＴＱＡＣＴＲＥＱＮＲＩＣＴＣＲＰＧＷＹＣＡＬ）（任意選択的に、前記エピトープは、配列番号：７のアミノ酸８０〜８６（ＤＳＴＹＴＱＬ）、９１〜９８（ＰＥＣＬＳＣＧＳ）、または１１６〜１２３（ＲＩＣＴＣＲＰＧ）の内部にある）、
（ｇ）配列番号：７のアミノ酸１７４〜１８４（ＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩ）、
（ｈ）配列番号：７のアミノ酸１２６〜１４０（ＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬ）、及び／または、
（ｉ）配列番号：７のアミノ酸１５６〜１６５（ＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡ）、
の内部のエピトープにおいて、前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合する、請求項１１１から請求項１７３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７５】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＴＮＦＲ２シグナル伝達を阻害する、請求項１１１から請求項１７４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７６】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦＲ２を発現する細胞内における、ＣＨＵＫ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＦＫＢＩＡ、ＭＡＰ３Ｋ１１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ｒｅｌＢ、及びｃＩＡＰ２／ＢＩＲＣ３からなる群から選択される１種または複数種の遺伝子の発現を低下させる、請求項１１１から請求項１７５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦＲ２を発現する細胞内におけるＮＦκＢ活性化を抑制する、請求項１１１から請求項１７６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７８】
前記細胞は制御性Ｔ（Ｔ−ｒｅｇ）細胞またはがん細胞である、請求項１７６または請求項１７７に記載の医薬組成物。
【請求項１７９】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１０ｎＭ以下のＫＤで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合する、請求項１１１から請求項１７８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１ｎＭ以下のＫＤで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合する、請求項１７９に記載の医薬組成物。
【請求項１８１】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約６２１ｐＭのＫＤで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合する、請求項１８０に記載の医薬組成物。
【請求項１８２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４４ｐＭのＫＤで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合する、請求項１８０に記載の医薬組成物。
【請求項１８３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合して抗体−抗原複合体を形成する、請求項１１１から請求項１８２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８４】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４．９×１０６Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合して抗体−抗原複合体を形成する、請求項１８３に記載の医薬組成物。
【請求項１８５】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約３．６×１０５Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎで前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合して抗体−抗原複合体を形成する、請求項１８４に記載の医薬組成物。
【請求項１８６】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記ＴＮＦＲ２に特異的に結合して抗体−抗原複合体を形成し、前記複合体は約１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆで解離する、請求項１１１から請求項１８５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約３．０×１０−５ｓ−１以下のＫｏｆｆで前記ＴＮＦＲ２から解離する、請求項１８６に記載の医薬組成物。
【請求項１８８】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約２．２×１０−４ｓ−１のＫｏｆｆで前記ＴＮＦＲ２から解離する、請求項１８６に記載の医薬組成物。
【請求項１８９】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｔ−ｒｅｇ細胞の集団の増殖を抑制または阻害する、及び／または、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の集団の増殖を誘導する、請求項１１１から請求項１８８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１９０】
前記Ｔ−ｒｅｇ細胞はＣＤ２５Ｈｉを発現する、請求項１８９に記載の医薬組成物。
【請求項１９１】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦαの存在下で、前記Ｔ−ｒｅｇ細胞の集団の増殖を抑制または阻害する、請求項１８８から請求項１９０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１９２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦＲ２を発現するがん細胞の集団の増殖を抑制または阻害する、請求項１１１から請求項１９１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１９３】
前記がん細胞は、ホジキンリンパ腫細胞、皮膚非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、及び腎細胞癌細胞からなる群から選択される、請求項１９２に記載の医薬組成物。
【請求項１９４】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、骨髄由来抑制細胞の集団の増殖を抑制または阻害する、請求項１１１から請求項１９３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１９５】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、霊長類化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、多重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、デュアル可変免疫グロブリンドメイン、一価抗体またはその抗原結合フラグメント、キメラ抗体またはその抗原結合フラグメント、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ディアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャフォールド、ドメイン抗体、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２分子、及びタンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）からなる群から選択される、請求項１１１から請求項１９４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１９６】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体、またはその抗原結合フラグメントである、請求項１９５に記載の医薬組成物。
【請求項１９７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１１１から請求項１９６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１９８】
前記抗体は治療薬にコンジュゲートしている、請求項１１１から請求項１９７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１９９】
前記治療薬は細胞傷害剤である、請求項１９８に記載の医薬組成物。
【請求項２００】
前記医薬組成物中の前記抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも７５％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、請求項１１１から請求項１９９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２０１】
前記医薬組成物中の前記抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも８０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、請求項２００に記載の医薬組成物。
【請求項２０２】
前記医薬組成物中の前記抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも８５％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、請求項２０１に記載の医薬組成物。
【請求項２０３】
前記医薬組成物中の前記抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも９０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、請求項２０２に記載の医薬組成物。
【請求項２０４】
前記医薬組成物中の前記抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも９５％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、請求項２０３に記載の医薬組成物。
【請求項２０５】
前記医薬組成物中の前記抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの約７５％〜約９９．９％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、請求項１１１から請求項１９９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２０６】
前記医薬組成物中の前記抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの約８０％〜約９９．９％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、請求項２０５に記載の医薬組成物。
【請求項２０７】
前記医薬組成物中の前記抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの約８５％〜約９９．９％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、請求項２０６に記載の医薬組成物。
【請求項２０８】
前記医薬組成物中の前記抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの約９０％〜約９９．９％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、請求項２０７に記載の医薬組成物。
【請求項２０９】
前記医薬組成物中の前記抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの約９５％〜約９９．９％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、請求項２０８に記載の医薬組成物。
【請求項２１０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、非還元条件下で実施するゲル電気泳動解析を行うと、単一の検出可能なバンドを生じさせる、請求項１１１から請求項２０９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２１１】
前記単一のジスルフィド結合アイソフォームはＩｇＧ２−Ａである、請求項１１１から請求項２１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２１２】
請求項１から請求項９０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、請求項９１から請求項９４のいずれか１項に記載の構築物、請求項９５または請求項９６に記載のポリヌクレオチド、請求項９７から請求項１０５のいずれか１項に記載のベクター、または請求項１０６、及び請求項１０８から請求項１１０のいずれか１項に記載の宿主細胞、及び、薬学的に許容される担体または賦形剤、を含む医薬組成物。
【請求項２１３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約０．００１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの量で前記医薬組成物中に含まれている、請求項１１１から請求項２１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２１４】
請求項１１１から請求項２１３のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、別の治療薬を更に含む、前記医薬組成物。
【請求項２１５】
前記別の治療薬は免疫療法剤である、請求項２１４に記載の医薬組成物。
【請求項２１６】
前記免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ−４剤、抗ＰＤ−１剤、抗ＰＤ−Ｌ１剤、抗ＰＤ−Ｌ２剤、ＴＮＦ−α架橋剤、ＴＲＡＩＬ架橋剤、抗ＣＤ２７剤、抗ＣＤ３０剤、抗ＣＤ４０剤、抗４−１ＢＢ剤、抗ＧＩＴＲ剤、抗ＯＸ４０剤、抗ＴＲＡＩＬＲ１剤、抗ＴＲＡＩＬＲ２剤、抗ＴＷＥＡＫ剤、抗ＴＷＥＡＫＲ剤、抗細胞表面リンパ球タンパク質剤、抗ＢＲＡＦ剤、抗ＭＥＫ剤、抗ＣＤ３３剤、抗ＣＤ２０剤、抗ＨＬＡ−ＤＲ剤、抗ＨＬＡクラスＩ剤、抗ＣＤ５２剤、抗Ａ３３剤、抗ＧＤ３剤、抗ＰＳＭＡ剤、抗Ｃｅａｃａｎ１剤、抗Ｇａｌｅｄｉｎ９剤、抗ＨＶＥＭ剤、抗ＶＩＳＴＡ剤、抗Ｂ７  Ｈ４剤、抗ＨＨＬＡ２剤、抗ＣＤ１５５剤、抗ＣＤ８０剤、抗ＢＴＬＡ剤、抗ＣＤ１６０剤、抗ＣＤ２８剤、抗ＣＤ２２６剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１剤、抗ＴＩＭ３剤、抗ＴＩＧＩＴ剤、抗ＣＤ９６剤、抗ＣＤ７０剤、抗ＣＤ２７剤、抗ＬＩＧＨＴ剤、抗ＣＤ１３７剤、抗ＤＲ４剤、抗ＣＲ５剤、抗ＴＮＦＲＳ剤、抗ＴＮＦＲ１剤、抗ＦＡＳ剤、抗ＣＤ９５剤、抗ＴＲＡＩＬ剤、抗ＤＲ６剤、抗ＥＤＡＲ剤、抗ＮＧＦＲ剤、抗ＯＰＧ剤、抗ＲＡＮＫＬ剤、抗ＬＴβ受容体剤、抗ＢＣＭＡ剤、抗ＴＡＣＩ剤、抗ＢＡＦＦＲ剤、抗ＥＤＡＲ２剤、抗ＴＲＯＹ剤、及び抗ＲＥＬＴ剤からなる群から選択され、任意選択的に、前記免疫療法剤は抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項２１５に記載の医薬組成物。
【請求項２１７】
前記免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−Ｌ２抗体またはその抗原結合フラグメント、ＴＮＦ−α架橋抗体またはその抗原結合フラグメント、ＴＲＡＩＬ架橋抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ３０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬＲ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＷＥＡＫ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗細胞表面リンパ球タンパク質抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＲＡＦ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＭＥＫ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ３３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＬＡクラスＩ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ５２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ａ３３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＧＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＳＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｃｅａｃａｎ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｇａｌｅｄｉｎ９抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｂ７  Ｈ４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＨＬＡ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１５５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ８０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１６０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２２６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ９６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＬＩＧＨＴ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＤＲ４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦＲＳ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦＲ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＦＡＳ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ９５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＤＲ６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＥＤＡＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＮＧＦＲ抗体またはその抗原結合フラグメン��、抗ＯＰＧ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＲＡＮＫＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＬＴβ受容体抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＡＣＩ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＡＦＦＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＥＤＡＲ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＯＹ抗体またはその抗原結合フラグメント、及び抗ＲＥＬＴ抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される、請求項２１６に記載の医薬組成物。
【請求項２１８】
前記免疫療法剤は抗ＣＴＬＡ−４剤または抗ＰＤ−１剤である、請求項２１６に記載の医薬組成物。
【請求項２１９】
前記免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合フラグメントである、請求項２１７に記載の医薬組成物。
【請求項２２０】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体はイピリムマブまたはトレメリムマブである、請求項２１８に記載の医薬組成物。
【請求項２２１】
前記抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、またはアテゾリズマブである、請求項２１９または請求項２２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２２】
前記別の治療薬は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ−Ｔ）薬、化学療法剤、低分子抗がん剤、またはがんワクチンである、請求項２１４に記載の医薬組成物。
【請求項２２３】
請求項１から請求項９０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法であって、前記方法は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを宿主細胞内で発現させること、及び前記抗体またはその抗原結合フラグメントを宿主細胞培地から回収することを含む、前記方法。
【請求項２２４】
請求項９１から請求項９４のいずれか１項に記載の構築物を作製するための方法であって、前記方法は、前記構築物をコードするポリヌクレオチドを宿主細胞内で発現させること、及び前記構築物を宿主細胞培地から回収することを含む、前記方法。
【請求項２２５】
ヒトにおけるＴ−ｒｅｇ細胞が関与する免疫応答を抑制または阻害するための方法であって、前記方法は、請求項１から請求項９０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、請求項９１から請求項９４のいずれか１項に記載の構築物、請求項９５または請求項９６に記載のポリヌクレオチド、請求項９７から請求項１０５のいずれか１項に記載のベクター、請求項１０６、及び請求項１０８から請求項１１０のいずれか１項に記載の宿主細胞、または請求項１１１から請求項２２２のいずれか１項に記載の医薬組成物を前記ヒトに投与することを含む、前記方法。
【請求項２２６】
ヒトにおける細胞増殖障害を治療するための方法であって、前記方法は、請求項１から請求項９０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、請求項９１から請求項９４のいずれか１項に記載の構築物、請求項９５または請求項９６に記載のポリヌクレオチド、請求項９７から請求項１０５のいずれか１項に記載のベクター、請求項１０６、及び請求項１０８から請求項１１０のいずれか１項に記載の宿主細胞、または請求項１１１から請求項２２２のいずれか１項に記載の医薬組成物を前記ヒトに投与することを含む、前記方法。
【請求項２２７】
前記細胞増殖障害は、白血病、リンパ腫、肝臓癌、骨癌、肺癌、脳癌、膀胱癌、消化管癌、乳癌、心臓癌、子宮頸癌、子宮癌、頭頸部癌、胆嚢癌、喉頭癌、唇及び口腔癌、眼球癌、黒色腫、膵臓癌、前立腺癌、結腸直腸癌、精巣癌、及び咽喉癌からなる群から選択されるがんである、請求項２２６に記載の方法。
【請求項２２８】
前記細胞増殖障害は、ホジキンリンパ腫、皮膚非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、卵巣癌、結腸癌、多発性骨髄腫、腎細胞癌、皮膚癌、肺癌、肝臓癌、子宮内膜癌、造血系またはリンパ系のがん、中枢神経系のがん、乳癌、膵臓癌、胃癌、食道癌、及び上部消化管の癌からなる群から選択されるがんである、請求項２２６に記載の方法。
【請求項２２９】
前記細胞増殖障害は、Ｔ細胞リンパ腫、卵巣癌、及び結腸癌からなる群から選択されるがんである、請求項２２８に記載の方法。
【請求項２３０】
前記細胞増殖障害は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、非定型奇形／桿状腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、肝外癌、ユーイング肉腫ファミリー、骨肉腫、及び悪性線維性組織球腫、中枢神経系胎児性腫瘍、中枢神経系胚細胞腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、原発性リンパ腫、脊索腫、慢性骨髄増殖性腫瘍、結腸癌、肝外胆管癌、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、感覚神経芽細胞腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵管癌、骨の線維性組織球腫、胃腸カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、精巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、小児期脳幹神経膠腫、毛様細胞性白血病、肝細胞癌、ランゲルハンス細胞組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞腫瘍、膵臓神経内分泌腫瘍、ウィルムス腫瘍、及びその他の小児期腎臓腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球症、小細胞肺癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、眼内黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性扁平頸部癌、正中管癌（ｍｉｄｌｉｎｅ  ｔｒａｃｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、上皮性卵巣癌、胚細胞性卵巣癌、低悪性度卵巣癌、膵臓神経内分泌腫瘍、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔及び鼻腔癌、上皮小体癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性腹膜癌、直腸癌、腎臓癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、カポジ肉腫、横紋筋肉腫、セザリー症候群、小腸癌、軟部組織肉腫、咽喉癌、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺癌、腎盂及び尿管の移行細胞癌、尿道癌、子宮内膜子宮癌、子宮肉腫、腟癌、外陰癌、ならびにワルデンシュトレームマクログロブリン血症からなる群から選択されるがんである、請求項２２６に記載の方法。
【請求項２３１】
ヒトにおける感染症を治療するための方法であって、前記方法は、請求項１から請求項９０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、請求項９１から請求項９４のいずれか１項に記載の構築物、請求項９５または請求項９６に記載のポリヌクレオチド、請求項９７から請求項１０５のいずれか１項に記載のベクター、請求項１０６、及び請求項１０８から請求項１１０のいずれか１項に記載の宿主細胞、または請求項１１１から請求項２２２のいずれか１項に記載の医薬組成物を前記ヒトに投与することを含む、前記方法。
【請求項２３２】
前記感染症は、ウイルス、細菌、真菌、または寄生生物からなる群から選択される１つまたは複数の因子によって引き起こされる、請求項２３１に記載の方法。
【請求項２３３】
前記感染症は、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱ウイルス、カダムウイルス、キャサヌル森林病ウイルス、ランガットウイルス、オムスク出血熱ウイルス、ポワッサンウイルス、ロイヤルファームウイルス、カリシウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、Ｎｅｕｄｏｅｒｆｌウイルス、Ｓｏｆｊｉｎウイルス、跳躍病ウイルス、ネギシウイルス、Ｍｅａｂａｎウイルス、Ｓａｕｍａｒｅｚ  Ｒｅｅｆウイルス、チュレニーウイルス、アロアウイルス、デング熱ウイルス、Ｋｅｄｏｕｇｏｕウイルス、Ｃａｃｉｐａｃｏｒｅウイルス、Ｋｏｕｔａｎｇｏウイルス、日本脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ウスツウイルス、ウエストナイルウイルス、Ｙａｏｕｎｄｅウイルス、ココベラウイルス、バガザウイルス、イレウスウイルス、イスラエル七面鳥髄膜脳炎ウイルス、ウンタヤウイルス、テンブスウイルス、ジカウイルス、バンジウイルス、Ｂｏｕｂｏｕｉウイルス、Ｅｄｇｅ  Ｈｉｌｌウイルス、Ｊｕｇｒａウイルス、Ｓａｂｏｙａウイルス、セピックウイルス、ウガンダＳウイルス、ウェッセルスブロンウイルス、黄熱ウイルス、エンテベコウモリウイルス、ヨコセウイルス、アポイウイルス、Ｃｏｗｂｏｎｅ  Ｒｉｄｇｅウイルス、Ｊｕｔｉａｐａウイルス、Ｍｏｄｏｃウイルス、Ｓａｌ  Ｖｉｅｊａウイルス、Ｓａｎ  Ｐｅｒｌｉｔａウイルス、ブカラサコウモリウイルス、Ｃａｒｅｙ  Ｉｓｌａｎｄウイルス、ダカールコウモリウイルス、モンタナホオヒゲコウモリ白質脳炎ウイルス、プノンペンコウモリウイルス、リオブラボーウイルス、タマナコウモリウイルス、細胞融合因子ウイルス、Ｉｐｐｙウイルス、ラッサウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、Ｍｏｂａｌａウイルス、モペイアウイルス、アマパリウイルス、フレキサルウイルス、グアナリトウイルス、フニンウイルス、ラティーノウイルス、マチュポウイルス、オリベロスウイルス、パラナウイルス、ピチンデウイルス、Ｐｉｒｉｔａｌウイルス、サビアウイルス、タカリベウイルス、タミアミウイルス、ホワイトウォーターアロヨウイルス、チャパレウイルス、ルジョウイルス、ハンタンウイルス、シンノンブレウイルス、Ｄｕｇｂｅウイルス、ブニヤンベラウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミアコンゴ出血熱（ＣＣＨＦ）ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）、東部ウマ脳炎ウイルス（ＥＥＥ）、西部ウマ脳炎ウイルス（ＷＥＥ）、シンドビスウイルス、風疹ウイルス、セムリキ森林ウイルス、ロスリバーウイルス、バーマ森林ウイルス、オニョンニョンウイルス、及びチクングニヤウイルス、天然痘ウイルス、サル痘ウイルス、ワクシニアウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒトヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、インフルエンザウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、狂犬病ウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ニューカッスル病ウイルス、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、麻疹ウイルス、牛疫ウイルス、イヌジステンパーウイルス、センダイウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス（例えば、１、２、３、及び４）ライノウイルス、ムンプスウイルス、ポリオウイルス、ヒトエンテロウイルス（Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤ）、Ａ型肝炎ウイルス、コクサッキーウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、アデノ随伴ウイルス、アストロウイルス、ＪＣウイルス、ＢＫウイルス、ＳＶ４０ウイルス、ノーウォークウイルス、ロタウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルスＩ型及びＩＩ型からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる、請求項２３２に記載の方法。
【請求項２３４】
前記感染症は、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｃａｒｄｉａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅｃｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂｏｒｄａｔｅｌｌａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓからなる群から選択される属に属する細菌によって引き起こされる、請求項２３２に記載の方法。
【請求項２３５】
前記感染症は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ、Ｍｕｃｏｒ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ、及びＡｂｓｉｄｉａからなる群から選択される真菌によって引き起こされる、請求項２３２に記載の方法。
【請求項２３６】
前記感染症は、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｙｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｍｕｒｉｓ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄａ  ｃｒｕｓｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍｅｘｉｃａｎａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、及びＨｉｓｔｏｍｏｎａｓ  ｍｅｌｅａｇｒｉｄｉｓからなる群から選択される寄生生物によって引き起こされる、請求項２３２に記載の方法。例示的な寄生虫としては、ｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ  ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ｎｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、ａｎｄ  Ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ  ｍｅｄｉｎｅｎｓｉｓ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｇｉｇａｎｔｉｃａ、Ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｅｓ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ、Ｔａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍ、Ｔａｅｎｉａ  ｓａｇｉｎａｔａ、Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ  ｎａｎａ、及びＥｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓが挙げられる。
【請求項２３７】
請求項２２５から請求項２３６のいずれか１項に記載の方法であって、前記方法は、免疫療法剤を前記ヒトに投与することを更に含む、前記方法。
【請求項２３８】
前記免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ−４剤、抗ＰＤ−１剤、抗ＰＤ−Ｌ１剤、抗ＰＤ−Ｌ２剤、ＴＮＦ−α架橋剤、ＴＲＡＩＬ架橋剤、抗ＣＤ２７剤、抗ＣＤ３０剤、抗ＣＤ４０剤、抗４−１ＢＢ剤、抗ＧＩＴＲ剤、抗ＯＸ４０剤、抗ＴＲＡＩＬＲ１剤、抗ＴＲＡＩＬＲ２剤、抗ＴＷＥＡＫ剤、抗ＴＷＥＡＫＲ剤、抗細胞表面リンパ球タンパク質剤、抗ＢＲＡＦ剤、抗ＭＥＫ剤、抗ＣＤ３３剤、抗ＣＤ２０剤、抗ＨＬＡ−ＤＲ剤、抗ＨＬＡクラスＩ剤、抗ＣＤ５２剤、抗Ａ３３剤、抗ＧＤ３剤、抗ＰＳＭＡ剤、抗Ｃｅａｃａｎ１剤、抗Ｇａｌｅｄｉｎ９剤、抗ＨＶＥＭ剤、抗ＶＩＳＴＡ剤、抗Ｂ７  Ｈ４剤、抗ＨＨＬＡ２剤、抗ＣＤ１５５剤、抗ＣＤ８０剤、抗ＢＴＬＡ剤、抗ＣＤ１６０剤、抗ＣＤ２８剤、抗ＣＤ２２６剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１剤、抗ＴＩＭ３剤、抗ＴＩＧＩＴ剤、抗ＣＤ９６剤、抗ＣＤ７０剤、抗ＣＤ２７剤、抗ＬＩＧＨＴ剤、抗ＣＤ１３７剤、抗ＤＲ４剤、抗ＣＲ５剤、抗ＴＮＦＲＳ剤、抗ＴＮＦＲ１剤、抗ＦＡＳ剤、抗ＣＤ９５剤、抗ＴＲＡＩＬ剤、抗ＤＲ６剤、抗ＥＤＡＲ剤、抗ＮＧＦＲ剤、抗ＯＰＧ剤、抗ＲＡＮＫＬ剤、抗ＬＴβ受容体剤、抗ＢＣＭＡ剤、抗ＴＡＣＩ剤、抗ＢＡＦＦＲ剤、抗ＥＤＡＲ２剤、抗ＴＲＯＹ剤、及び抗ＲＥＬＴ剤からなる群から選択され、任意選択的に、前記免疫療法剤は抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項２３７に記載の方法。
【請求項２３９】
前記免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−Ｌ２抗体またはその抗原結合フラグメント、ＴＮＦ−α架橋抗体またはその抗原結合フラグメント、ＴＲＡＩＬ架橋抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ３０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬＲ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＷＥＡＫ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗細胞表面リンパ球タンパク質抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＲＡＦ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＭＥＫ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ３３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＬＡクラスＩ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ５２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ａ３３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＧＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＳＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｃｅａｃａｎ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｇａｌｅｄｉｎ９抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｂ７  Ｈ４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＨＬＡ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１５５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ８０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１６０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２２６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ９６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＬＩＧＨＴ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＤＲ４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦＲＳ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦＲ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＦＡＳ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ９５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＤＲ６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＥＤＡＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＮＧＦＲ抗体またはその抗原結合フラグメン��、抗ＯＰＧ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＲＡＮＫＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＬＴβ受容体抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＡＣＩ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＡＦＦＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＥＤＡＲ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＯＹ抗体またはその抗原結合フラグメント、及び抗ＲＥＬＴ抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される、請求項２３８に記載の方法。
【請求項２４０】
前記免疫療法剤は抗ＣＴＬＡ−４剤または抗ＰＤ−１剤である、請求項２３８に記載の方法。
【請求項２４１】
前記免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合フラグメントである、請求項２４０に記載の方法。
【請求項２４２】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体はイピリムマブまたはトレメリムマブである、請求項２４１に記載の方法。
【請求項２４３】
前記抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、またはアテゾリズマブである、請求項２４１または請求項２４２に記載の方法。
【請求項２４４】
ＴＮＦＲ２に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの量で前記ヒトに投与される、請求項２２５から請求項２４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４５】
請求項１から請求項９０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、請求項９１から請求項９４のいずれか１項に記載の構築物、請求項９５または請求項９６に記載のポリヌクレオチド、請求項９７から請求項１０５のいずれか１項に記載のベクター、請求項１０６から請求項１１０のいずれか１項に記載の宿主細胞、または請求項１１１から請求項２２２のいずれか１項に記載の医薬組成物からなる群から選択される薬剤を含むキット。
【請求項２４６】
請求項２４５に記載のキットであって、前記キットは、請求項１から請求項９０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、前記キット。
【請求項２４７】
請求項２４５に記載のキットであって、前記キットは、請求項９１から請求項９４のいずれか１項に記載の構築物を含む、前記キット。
【請求項２４８】
請求項２４５に記載のキットであって、前記キットは、請求項９５または請求項９６に記載のポリヌクレオチドを含む、前記キット。
【請求項２４９】
請求項２４５に記載のキットであって、前記キットは、請求項９７から請求項１０５のいずれか１項に記載のベクターを含む、前記キット。
【請求項２５０】
請求項２４９に記載のキットであって、前記キットは、前記ベクターを宿主細胞にトランスフェクションするための取扱説明書を更に含む、前記キット。
【請求項２５１】
請求項２５０に記載のキットであって、前記キットは、前記抗体、その抗原結合フラグメント、または前記構築物を前記宿主細胞内で発現させるための取扱説明書を更に含む、前記キット。
【請求項２５２】
請求項２４５に記載のキットであって、前記キットは、請求項１０６から請求項１１０のいずれか１項に記載の宿主細胞を含む、前記キット。
【請求項２５３】
請求項２５２に記載のキットであって、前記キットは、前記抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物を前記宿主細胞内で発現させるために使用可能な試薬を更に含む、前記キット。
【請求項２５４】
請求項２４５に記載のキットであって、前記キットは、請求項１１１から請求項２２２のいずれか１項に記載の医薬組成物を含む、前記キット。
【請求項２５５】
前記薬剤をヒト患者に投与するための取扱説明書を更に含む、請求項２４５に記載のキット。
【請求項２５６】
前記薬剤を作製または使用するための取扱説明書を更に含む、請求項２４５に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。上記ＡＳＣＩＩのコピー（２０１９年８月２０日に作成）の名称は００７８６−００８３ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿０８．２０．１９＿ＳＴ２５であり、そのサイズは１９３，２３２バイトである。
技術分野
本発明は、「アンタゴニスト性抗腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーポリペプチド
」に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然及び遺伝子改変のＴリンパ球の使用は、様々なヒト病態を改善するための顕著なパラダイムである。例えば、がんを治療するための従来の治療用プラットフォームとしては、腫瘍塊の外科的切除、放射線療法、及び化学療法剤の投与（Ｓｈｅｗａｃｈ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１０９：２８５９−２８６１，２００９）が挙げられるが、ここ１０年では、養子免疫療法のがん治療レジメンへの適用復活が見られた。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ−Ｔ）療法の到来に伴い、自家及び同種異系の腫瘍反応性Ｔ細胞を患者に注入するための新しい方法が登場した（Ｊｕｎｅ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１１７：１４６６−１４７６，２００７）。ＣＡＲ−Ｔ療法は、がん細胞傷害を増強して腫瘍物質を根絶するために、適応免疫応答の資源を利用している。養子免疫療法における一般的な特色は、異なる腫瘍抗原を提示する細胞に対する細胞傷害を選択的に増強する能力を示すＴ細胞の使用である。この技術の例としては、腫瘍浸潤リンパ球の投与（Ｄｕｄｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２６：３３２−３４２，２００３）に加え、腫瘍特異的抗原との反応性を示すように遺伝子的に再改変された自家または同種異系のＴ細胞の投与（Ｙｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ．，９９：１６１６８−１６１７３，２００２）が挙げられる。
【０００３】
Ｔリンパ球をベースとしたがん免疫療法の将来性にもかかわらず、この治療用プラットフォームの開発は、自己細胞に対して開始された免疫攻撃を抑制する免疫系の天然の性質により妨げられている。がん細胞は、これらの自己細胞と外来細胞を区別するクラスＩ主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）タンパク質を発現している。細胞の同胞殺しを防止するために、「自己」ＭＨＣ抗原に対する反応性を示すＴ細胞の活性を抑制する制御性Ｔ細胞（Ｔ−ｒｅｇ細胞）が進化してきた。Ｔ−ｒｅｇ細胞は、Ｔ細胞の固有の表面タンパク質提示に基づいて区別することができる異なるクラスのＴ細胞の代表例である。最もよく理解されているＴ−ｒｅｇ細胞の集団としては、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＦｏｘＰ３＋Ｔ−ｒｅｇ細胞、及びＣＤ１７＋Ｔ−ｒｅｇ細胞が挙げられる。これらの細胞が自己反応性Ｔ細胞を抑制する正確なメカニズムは進行中の研究の主題であるが、ある特定のクラスのＴ−ｒｅｇ細胞が標的Ｔ細胞における増殖誘導サイトカインＩＬ−２の産生を阻害し、更に、ＩＬ−２に対するＣＤ２５（ＩＬ−２受容体のサブドメイン）の親和性に基づいて自己反応性細胞からＩＬ−２を隔離し得るということが判明している（Ｊｏｓｅｆｏｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎ．，３０：５３１−５６４，２０１２）。
【０００４】
Ｔ−ｒｅｇ細胞は末梢性免疫寛容の維持に重要な役割を果たしているが、これらの細胞が自己反応性Ｔ細胞を調節する能力の基礎をなす同一の生化学的特徴はまた、腫瘍反応性Ｔリンパ球の活性を抑制することにより、養子免疫療法及び自然免疫応答を根底から揺るがす作用をもたらしている。Ｔ−ｒｅｇ介在性Ｔ細胞抑制を阻害可能な薬剤を入手することにより、養子がん免疫療法の範囲及び効果が大幅に向上することに加えて、感染症を引き起こす病原性微生物を根絶する免疫系の能力が向上し得ることから、Ｔ−ｒｅｇ細胞活性の化学調節因子の開発は多くの薬理学的研究の主題となっている。
【０００５】
細胞増殖障害、例えば、がんなど、及び幅広く様々な感染症を治療するための改良された治療薬が求められている。
【発明の概要】
【０００６】
本明細書では、アンタゴニスト性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及び構築物などについて記載する。例えば、アンタゴニスト性腫瘍壊死因子受容体２（ＴＮＦＲ２）結合ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及び構築物などを特徴とする。ヒトＴＮＦＲ２は、４つのシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）：ＣＲＤ１（配列番号：７のアミノ酸残基４８〜７６）、ＣＲＤ２（配列番号：７のアミノ酸残基７８〜１２０）、ＣＲＤ３（配列番号：７のアミノ酸残基１２１〜１６２）、及びＣＲＤ４（配列番号：７のアミノ酸残基１６２〜２０２）を含有する。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、ＴＮＦＲ２のＣＲＤ３内の１つまたは複数のエピトープ及び／またはＴＮＦＲ２のＣＲＤ４内の１つまたは複数のエピトープに結合するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、ＣＲＤ１及び／またはＣＲＤ２内においてＴＮＦＲ２に結合することなく、ＣＲＤ３の１つまたは複数のエピトープ及び／またはＣＲＤ４の１つまたは複数のエピトープ内においてのみＴＮＦＲ２に結合するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドなどが挙げられる。
【０００７】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドとしては、上で詳細に記載するエピトープのうちの１つまたは複数において、ＴＮＦＲ２に特異的に結合するＩｇＧ２アイソタイプ抗体及びその抗原結合フラグメントが挙げられる。本開示は部分的に、抗体及びその抗原結合フラグメントが、これらの分子がＩｇＧ２アイソタイプの形態である場合に、その他の抗体アイソタイプと比較して明らかにより優れたＴＮＦＲ２アンタゴニスト特性を示すという驚くべき発見に基づいている。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドとしてはまた、結合部位が空間的に互いに約１３３Åまたはそれ以上離れた、少なくとも２つのＴＮＦＲ２結合部位（例えば、ＴＮＦＲ２が「抗原」である抗原結合部位）を有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドが挙げられ、その理由としては、上記のエピトープのうちの１つまたは複数においてＴＮＦＲ２に特異的に結合するが、約１３３Å未満互いに離れたＴＮＦＲ２結合部位（例えば、抗原結合部位）を含有するポリペプチド、例えば、約１１７Å互いに離れた抗原結合部位を含有するＩｇＧ１抗体及びその抗原結合フラグメント、及び１２５Å互いに離れた抗原結合部位を含有するＩｇＧ３抗体及びその抗原結合フラグメントなどと比較して、このようなポリペプチドが予想外により優れたＴＮＦＲ２アンタゴニスト作用を示すということが本明細書において発見されているからである。
【０００８】
単一のジスルフィド結合アイソフォームをとる抗ＴＮＦＲ２ポリペプチド、及びそれらを含有する医薬組成物もまた特徴とする。例えば、本開示の医薬組成物としては、例えば、医薬組成物中のポリペプチドのうちの１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、またはそれ以上が、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、アンタゴニストＴＮＦＲ２結合ポリペプチドを含有する医薬組成物が挙げられる。ヒトＩｇＧ２−Ａアイソフォームをとるアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２結合ポリペプチドは、その他のヒトＩｇＧ２アイソフォーム、例えば、ＩｇＧ２−Ｂ、ＩｇＧ２−Ａ／Ｂ１、及びＩｇＧ２−Ａ／Ｂ２などをとるＴＮＦＲ２結合ポリペプチドと比較して、実質的により優れたＴＮＦＲ２アンタゴニスト作用を示す。それゆえ、単一のジスルフィド結合アイソフォームをとるＴＮＦＲ２ポリペプチドを医薬組成物として調製して、本明細書に記載の治療方法を用いて投与することにより、強力なＴＮＦＲ２アンタゴニスト作用を促進させてもよい。
【０００９】
本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、１つまたは複数の有利な生物学的特性、例えば、制御性Ｔ細胞（Ｔ−ｒｅｇ細胞）及び／または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の増殖を阻害する能力、及び／または、制御性Ｔ細胞（Ｔ−ｒｅｇ細胞）及び／または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の死滅を促進する能力などを示す。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを使用して、ＴＮＦＲ２発現がん細胞及びがん遺伝子発現がん細胞の増殖を阻害してもよい、及び／または、ＴＮＦＲ２発現がん細胞及びがん遺伝子発現がん細胞の死滅を促進させてもよい。追加的にまたは代替的に、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを投与して、Ｔエフェクター細胞、例えば、細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞などの相互増殖を促進させてもよい。この相互増殖は、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖及び活性を減弱させることによって、または、Ｔエフェクター細胞、例えば、細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞などを直接増殖させることによって、生じ得る。それゆえ、アンタゴニストとしてのＴＮＦＲ２ポリペプチドの表記は、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＭＤＳＣ、及び／またはＴＮＦＲ２発現がん細胞の増殖及び活性を減弱させるＴＮＦＲ２ポリペプチドの能力を意味するものであり、はっきりさせると、Ｔエフェクター細胞応答のアンタゴニスト作用を示すものではない。本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を、がん及び感染症を含む様々な病態の治療に使用してもよい。
【００１０】
一態様において、本開示は、システインリッチドメイン（ＣＲＤ）３（ＣＲＤ３）及び／またはＣＲＤ４内のエピトープにおいて、ヒト腫瘍壊死因子受容体２（ＴＮＦＲ２）に特異的に結合し、かつ、ＣＲＤ１内の１つまたは複数のアミノ酸により定められたエピトープにおいて、ＴＮＦＲ２に特異的に結合しない、ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などを特徴とし、ポリペプチドは、
（ａ）ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位及び／または２３３位のシステイン残基を欠くヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含有する、及び／または、
（ｂ）少なくとも約１３３Åの距離分互いに離れた抗原結合部位を含有する。
【００１１】
上記の特性を示す例示的な本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、抗体及びその抗原結合フラグメント）を以下の表１に記載する。表１は、その重鎖アミノ酸配列及び軽鎖アミノ酸配列により定義される様々なアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びその抗原結合フラグメントの記述を提供する。本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びその抗原結合フラグメントとしては、表１に示す重鎖及び／または軽鎖を有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びその抗原結合フラグメントに加えて、表１に示す重鎖及び／または軽鎖に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％の配列同一性）を有する重鎖及び／または軽鎖を含有する抗体及びその抗原結合フラグメントが挙げられる。相補性決定領域を太字で示す。
【００１２】
表１．例示的な本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体
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【００１３】
例えば、一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列を有する重鎖を含有する。
【００１４】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列を有する重鎖を含有する。
【００１５】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列を有する重鎖を含有する。
【００１６】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列を有する重鎖を含有する。
【００１７】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列を有する重鎖を含有する。
【００１８】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２９７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００１９】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２９８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００２０】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２９９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００２１】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３００のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００２２】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００２３】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００２４】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００２５】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００２６】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００２７】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０２のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００２８】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００２９】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００３０】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００３１】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００３２】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０３のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００３３】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００３４】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００３５】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００３６】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００３７】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０４のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００３８】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００３９】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００４０】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００４１】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００４２】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０５のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００４３】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００４４】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００４５】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：２９９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００４６】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３００のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００４７】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：３０６のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号：３０１のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。
【００４８】
本開示の一部の実施形態では、ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位及び／または２３３位のシステイン残基を欠くヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含有する。例えば、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、ＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列の２３２位及び／または２３３位に、システイン以外のアミノ酸、例えば、セリン残基などを有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含有していてもよい。
【００４９】
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、例えば、システイン残基２３２及び２３３の一方または両方にアミノ酸置換または欠失を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含有していてもよい。アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換、例えば、Ｃ２３２Ｓアミノ酸置換及び／またはＣ２３３Ｓアミノ酸置換などであってもよい。
【００５０】
一部の実施形態では、例えば、ＩｇＧ２ヒンジ領域が、ＩｇＧ２ヒンジアミノ酸配列の２３２位及び２３３位の一方または両方にセリン残基を含有する場合、ＩｇＧ２ヒンジ領域は、配列番号：２９１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する。例えば、ＩｇＧ２ヒンジ領域が、ＩｇＧ２ヒンジアミノ酸配列の２３２位及び２３３位にセリン残基を含有する場合、ＩｇＧ２ヒンジ領域は、例えば、配列番号：２９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有し得る。一部の実施形態では、例えば、ＩｇＧ２ヒンジ領域が、ＩｇＧ２ヒンジアミノ酸配列の２３２位及び２３３位にセリン残基を含有する場合、ＩｇＧ２ヒンジ領域は、配列番号：２９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する。
【００５１】
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、少なくとも約１３３Åの距離分（例えば、約１３３Å〜約１６０Åの距離分、例えば、約１３３Å、１３４Å、１３５Å、１３６Å、１３７Å、１３８Å、１３９Å、１４０Å、１４１Å、１４２Å、１４３Å、１４４Å、１４５Å、１４６Å、１４７Å、１４８Å、１４９Å、１５０Å、１５１Å、１５２Å、１５３Å、１５４Å、１５５Å、１５６Å、１５７Å、１５８Å、１５９Å、または１６０Åの距離など）互いに離れた抗原結合部位を含有していてもよい。一部の実施形態では、抗原結合部位は、少なくとも約１３４Åの距離分（例えば、約１３４Å〜約１６０Åの距離分、例えば、約１３４Å、１３５Å、１３６Å、１３７Å、１３８Å、１３９Å、１４０Å、１４１Å、１４２Å、１４３Å、１４４Å、１４５Å、１４６Å、１４７Å、１４８Å、１４９Å、１５０Å、１５１Å、１５２Å、１５３Å、１５４Å、１５５Å、１５６Å、１５７Å、１５８Å、１５９Å、または１６０Åの距離など）互いに離れている。一部の実施形態では、抗原結合部位は、少なくとも約１３９Åの距離分（例えば、約１３９Å〜約１６０Åの距離分、例えば、約１３９Å、１４０Å、１４１Å、１４２Å、１４３Å、１４４Å、１４５Å、１４６Å、１４７Å、１４８Å、１４９Å、１５０Å、１５１Å、１５２Å、１５３Å、１５４Å、１５５Å、１５６Å、１５７Å、１５８Å、１５９Å、または１６０Åの距離など）互いに離れている。一部の実施形態では、抗原結合部位は、少なくとも約１５０Åの距離分（例えば、約１５０Å〜約１６０Åの距離分、例えば、約１５０Å、１５１Å、１５２Å、１５３Å、１５４Å、１５５Å、１５６Å、１５７Å、１５８Å、１５９Å、または１６０Åの距離など）互いに離れている。
【００５２】
例えば、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、約１３３Å〜約１５０Åの距離分、例えば、約１３３Å、１３４Å、１３５Å、１３６Å、１３７Å、１３８Å、１３９Å、１４０Å、１４１Å、１４２Å、１４３Å、１４４Å、１４５Å、１４６Å、１４７Å、１４８Å、１４９Å、または１５０Åの距離分、互いに離れた抗原結合部位を含有していてもよい。一部の実施形態では、抗原結合は、約１３３Å〜約１４５Åの距離分、例えば、約１３３Å、１３４Å、１３５Å、１３６Å、１３７Å、１３８Å、１３９Å、１４０Å、１４１Å、１４２Å、１４３Å、１４４Å、または１４５Åの距離分、互いに離れている。一部の実施形態では、抗原結合は、約１３３Å〜約１３９Åの距離分、例えば、約１３３Å、１３４Å、１３５Å、１３６Å、１３７Å、１３８Å、または１３９Åの距離分、互いに離れている。一部の実施形態では、抗原結合は、約１３４Å〜約１３９Åの距離分、例えば、約１３４Å、１３５Å、１３６Å、１３７Å、１３８Å、または１３９Åの距離分、互いに離れている。
【００５３】
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、アミノ酸配列ＧＪＴＦ（Ｊ）２Ｙ（配列番号：２７６）またはＧＪＴＦ（Ｊ）２ＹＪ（配列番号：２７７）を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）重鎖１（ＣＤＲ１）を含有していてもよく、それぞれのＪは独立して、天然アミノ酸である。一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、
（ａ）アミノ酸配列（Ｊ）３ＧＳＪまたは（Ｊ）５ＧＳＪを有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｂ）アミノ酸配列ＪＲＪＤＧＪＳＪＹ（Ｊ）２ＦＤＪ（配列番号：２７８）またはＪＲＪＤＧＳＹ（Ｊ）２ＦＤ（Ｊ）３（配列番号：２７９）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
（ｃ）アミノ酸配列（Ｊ）９Ｙまたは（Ｊ）５Ｙを有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）アミノ酸配列（Ｊ）６Ｓまたは（Ｊ）２Ｓを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、
（ｅ）アミノ酸配列（Ｊ）５Ｙ（Ｊ）２Ｔまたは（Ｊ）３Ｙ（Ｊ）４Ｔを有するＣＤＲ−Ｌ３、
を更に含み、
それぞれのＪは独立して、天然アミノ酸である。
【００５４】
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、アミノ酸配列Ｚ４ＦＺ３Ｚ５ＳＳＺ５またはＺ４ＹＺ３Ｚ５ＴＤＺ５Ｘを有するＣＤＲ−Ｈ１を含有していてもよく、
それぞれのＺ３は独立して、極性で生理学的ｐＨにおいて非荷電の側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＺ４は独立して、グリシンまたはアラニンであり、
それぞれのＺ５は独立して、疎水性側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである。
【００５５】
一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、
（ａ）アミノ酸配列ＳＳＧＺ４Ｚ３Ｙ（配列番号：２６３）またはＶＤＰＥＹＺ４Ｚ３Ｔ（配列番号：２６４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｂ）アミノ酸配列ＱＺ１ＶＺ２Ｚ４ＹＺ３ＳＺ５ＷＹＺ５Ｚ２Ｚ５（配列番号：２６５）またはＡＺ１ＤＺ２Ｚ４Ｚ３Ｚ５ＳＰＺ５Ｚ２Ｚ５ＷＧ（配列番号：２６６）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＺ５（配列番号：２６７）またはＱＮＩＮＫＺ５（配列番号：２６８）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＺ３（配列番号：２６９）、ＴＹＺ３、またはＹＴＺ３を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、
（ｅ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＺ５ＰＹＺ３（配列番号：２７０）またはＣＬＱＺ５ＶＮＬＸＺ３（配列番号：２７１）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を更に含み、
それぞれのＺ１は独立して、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＺ２は独立して、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＺ３は独立して、極性で生理学的ｐＨにおいて非荷電の側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＺ４は独立して、グリシンまたはアラニンであり、
それぞれのＺ５は独立して、疎水性側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである。
【００５６】
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）、ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）、またはこれらの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、を含有していてもよく、それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンであり、任意選択的に、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、
（ａ）アミノ酸配列ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）、ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）、またはこれらの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｂ）アミノ酸配列ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）、ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）、ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹ（配列番号：２９６）、またはこれらの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）、ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）、またはこれらの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２７）、ＴＹＳ、ＹＴＳ、または配列番号：２７と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、
（ｅ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）、ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）、またはこれらの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を更に含む。
【００５７】
一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
のうちの１つまたは複数を含む重鎖を含有する。
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、例えば、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
のうちの１つまたは複数を有する重鎖を含有していてもよく、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである。
【００５８】
一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＬ（配列番号：２７４）を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＩ（配列番号：２７５）を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＶＩ（配列番号：２９３）を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＳ（配列番号：２９４）を有する。
【００５９】
追加的にまたは代替的に、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、例えば、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２７）を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
のうちの１つまたは複数を有する軽鎖を含有していてもよい。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＴＹＳまたはＹＴＳを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
のうちの１つまたは複数を有する軽鎖を含有し、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである。
【００６０】
一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ２はアミノ酸配列ＴＹＳを有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ２はアミノ酸配列ＹＴＳを有する。ＣＤＲ−Ｌ３はアミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＬＴ（配列番号：２７２）を有していてもよい。一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ３はアミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＩＴ（配列番号：２７３）を有する。
【００６１】
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、
（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
を含む３つの重鎖ＣＤＲを含有していてもよく、
（ｄ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｅ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２７）を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｆ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を含む３つの軽鎖ＣＤＲを更に含有していてもよい。
【００６２】
一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、
（ａ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）、例えば、ＧＹＴＦＴＤＹＬ（配列番号：２７４）またはＧＹＴＦＴＤＹＩ（配列番号：２７５）などを有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
を含む３つの重鎖ＣＤＲを含有し、
（ｄ）アミノ酸配列ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｅ）アミノ酸配列ＴＹＳまたはＹＴＳを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｆ）アミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）、例えば、ＣＬＱＹＶＮＬＬＴ（配列番号：２７２）またはＣＬＱＹＶＮＬＩＴ（配列番号：２７３）などを有するＣＤＲ−Ｌ３、
を含む３つの軽鎖ＣＤＲを更に含有し、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである。
【００６３】
一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、ＣＤＲ−Ｌ２のＮ末端に結合したアミノ酸配列ＬＬＩＲ（配列番号：２６２）を有するフレームワーク領域、及び／またはＣＤＲ−Ｌ２のＣ末端に結合したアミノ酸配列ＴＬＥを有するフレームワーク領域を含む。
【００６４】
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを有していてもよい。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する。
【００６５】
追加的にまたは代替的に、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、配列番号：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有していてもよい。一部の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号：４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一な（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号：４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有する。
【００６６】
一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、約１００ｎＭ未満のＫＤで（例えば、約１０ｐＭ〜約９９ｎＭのＫＤ、例えば、約２０ｐＭ〜約８０ｎＭ、約３０ｐＭ〜約７０ｎＭ、約４０ｐＭ〜約６０ｎＭ、約５０ｐＭ〜約５０ｎＭ、約６０ｐＭ〜約４０ｎＭ、約７０ｐＭ〜約３０ｎＭ、約８０ｐＭ〜約２０ｎＭ、約９０ｐＭ〜約１０ｎＭ、または約１００ｐＭ〜約１ｎＭなどのＫＤで）、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチドに特異的に結合し、かつ、配列番号：７のアミノ酸５６〜６０（ＫＣＳＰＧ）を含有するペプチドに特異的に結合しない。ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、例えば、その他の値の中でも、約１ｐＭ、５ｐＭ、１０ｐＭ、１５ｐＭ、２０ｐＭ、２５ｐＭ、３０ｐＭ、３５ｐＭ、４０ｐＭ、４５ｐＭ、５０ｐＭ、５５ｐＭ、６０ｐＭ、６５ｐＭ、７０ｐＭ、７５ｐＭ、８０ｐＭ、８５ｐＭ、９０ｐＭ、９５ｐＭ、１００ｐＭ、１０５ｐＭ、１１０ｐＭ、１１５ｐＭ、１２０ｐＭ、１２５ｐＭ、１３０ｐＭ、１３５ｐＭ、１４０ｐＭ、１４５ｐＭ、１５０ｐＭ、１５５ｐＭ、１６０ｐＭ、１６５ｐＭ、１７０ｐＭ、１７５ｐＭ、１８０ｐＭ、１８５ｐＭ、１９０ｐＭ、１９５ｐＭ、２００ｐＭ、２０５ｐＭ、２１０ｐＭ、２１５ｐＭ、２２０ｐＭ、２２５ｐＭ、２３０ｐＭ、２３５ｐＭ、２４０ｐＭ、２４５ｐＭ、２５０ｐＭ、２５５ｐＭ、２６０ｐＭ、２６５ｐＭ、２７０ｐＭ、２７５ｐＭ、２８０ｐＭ、２８５ｐＭ、２９０ｐＭ、２９５ｐＭ、３００ｐＭ、３０５ｐＭ、３１０ｐＭ、３１５ｐＭ、３２０ｐＭ、３２５ｐＭ、３３０ｐＭ、３３５ｐＭ、３４０ｐＭ、３４５ｐＭ、３５０ｐＭ、３５５ｐＭ、３６０ｐＭ、３６５ｐＭ、３７０ｐＭ、３７５ｐＭ、３８０ｐＭ、３８５ｐＭ、３９０ｐＭ、３９５ｐＭ、４００ｐＭ、４０５ｐＭ、４１０ｐＭ、４１５ｐＭ、４２０ｐＭ、４２５ｐＭ、４３０ｐＭ、４３５ｐＭ、４４０ｐＭ、４４５ｐＭ、４５０ｐＭ、４５５ｐＭ、４６０ｐＭ、４６５ｐＭ、４７０ｐＭ、４７５ｐＭ、４８０ｐＭ、４８５ｐＭ、４９０ｐＭ、４９５ｐＭ、５００ｐＭ、５０５ｐＭ、５１０ｐＭ、５１５ｐＭ、５２０ｐＭ、５２５ｐＭ、５３０ｐＭ、５３５ｐＭ、５４０ｐＭ、５４５ｐＭ、５５０ｐＭ、５５５ｐＭ、５６０ｐＭ、５６５ｐＭ、５７０ｐＭ、５７５ｐＭ、５８０ｐＭ、５８５ｐＭ、５９０ｐＭ、５９５ｐＭ、６００ｐＭ、６０５ｐＭ、６１０ｐＭ、６１５ｐＭ、６２０ｐＭ、６２５ｐＭ、６３０ｐＭ、６３５ｐＭ、６４０ｐＭ、６４５ｐＭ、６５０ｐＭ、６５５ｐＭ、６６０ｐＭ、６６５ｐＭ、６７０ｐＭ、６７５ｐＭ、６８０ｐＭ、６８５ｐＭ、６９０ｐＭ、６９５ｐＭ、７００ｐＭ、７０５ｐＭ、７１０ｐＭ、７１５ｐＭ、７２０ｐＭ、７２５ｐＭ、７３０ｐＭ、７３５ｐＭ、７４０ｐＭ、７４５ｐＭ、７５０ｐＭ、７５５ｐＭ、７６０ｐＭ、７６５ｐＭ、７７０ｐＭ、７７５ｐＭ、７８０ｐＭ、７８５ｐＭ、７９０ｐＭ、７９５ｐＭ、８００ｐＭ、８０５ｐＭ、８１０ｐＭ、８１５ｐＭ、８２０ｐＭ、８２５ｐＭ、８３０ｐＭ、８３５ｐＭ、８４０ｐＭ、８４５ｐＭ、８５０ｐＭ、８５５ｐＭ、８６０ｐＭ、８６５ｐＭ、８７０ｐＭ、８７５ｐＭ、８８０ｐＭ、８８５ｐＭ、８９０ｐＭ、８９５ｐＭ、９００ｐＭ、９０５ｐＭ、９１０ｐＭ、９１５ｐＭ、９２０ｐＭ、９２５ｐＭ、９３０ｐＭ、９３５ｐＭ、９４０ｐＭ、９４５ｐＭ、９５０ｐＭ、９５５ｐＭ、９６０ｐＭ、９６５ｐＭ、９７０ｐＭ、９７５ｐＭ、９８０ｐＭ、９８５ｐＭ、９９０ｐＭ、９９５ｐＭ、１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、１５ｎＭ、２０ｎＭ、２５ｎＭ、３０ｎＭ、３５ｎＭ、４０ｎＭ、４５ｎＭ、５０ｎＭ、５５ｎＭ、６０ｎＭ、６５ｎＭ、７０ｎＭ、７５ｎＭ、８０ｎＭ、８５ｎＭ、９０ｎＭ、９５ｎＭ、９６ｎＭ、９７ｎＭ、９８ｎＭ、または９９ｎＭ、のＫＤで、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチドに結合し得る。
【００６７】
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、
（ａ）配列番号：７のアミノ酸１４２〜１４６（ＫＣＲＰＧ）、
（ｂ）配列番号：７のアミノ酸１４２〜１４９（ＫＣＲＰＧＦＧＶ）、
（ｃ）配列番号：７のアミノ酸１３７〜１４４（ＣＡＰＬＲＫＣＲ）、
（ｄ）配列番号：７のアミノ酸１５０〜１９０（ＲＰＧＴＥＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡＰＧＴＦＳＮＴＴＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩＣＮＶＶＡＩ）、
（ｅ）配列番号：７のアミノ酸１６１〜１６９（ＣＫＰＣＡＰＧＴＦ）、
（ｆ）配列番号：７のアミノ酸７５〜１２８（ＣＤＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳＣＧＳＲＣＳＳＤＱＶＥＴＱＡＣＴＲＥＱＮＲＩＣＴＣＲＰＧＷＹＣＡＬ）（任意選択的に、エピトープは、配列番号：７のアミノ酸８０〜８６（ＤＳＴＹＴＱＬ）、９１〜９８（ＰＥＣＬＳＣＧＳ）、または１１６〜１２３（ＲＩＣＴＣＲＰＧ）の内部にある）、
（ｇ）配列番号：７のアミノ酸１７４〜１８４（ＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩ）、
（ｈ）配列番号：７のアミノ酸１２６〜１４０（ＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬ）、及び／または、
（ｉ）配列番号：７のアミノ酸１５６〜１６５（ＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡ）、
の内部のエピトープにおいて、ＴＮＦＲ２に特異的に結合し得る。
【００６８】
一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、上記のエピトープのうちの２つまたはそれ以上において（例えば、上記のアミノ酸範囲の内部の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のエピトープにおいて）、ＴＮＦＲ２に特異的に結合する。
【００６９】
一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、約１０ｎＭ以下のＫＤ、例えば、約１ｎＭ以下などのＫＤで、ＴＮＦＲ２に特異的に結合する。例えば、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、約１ｐＭ〜約１０ｎＭのＫＤ、例えば、その他の値の中でも、約１ｐＭ、５ｐＭ、１０ｐＭ、１５ｐＭ、２０ｐＭ、２５ｐＭ、３０ｐＭ、３５ｐＭ、４０ｐＭ、４５ｐＭ、５０ｐＭ、５５ｐＭ、６０ｐＭ、６５ｐＭ、７０ｐＭ、７５ｐＭ、８０ｐＭ、８５ｐＭ、９０ｐＭ、９５ｐＭ、１００ｐＭ、１０５ｐＭ、１１０ｐＭ、１１５ｐＭ、１２０ｐＭ、１２５ｐＭ、１３０ｐＭ、１３５ｐＭ、１４０ｐＭ、１４５ｐＭ、１５０ｐＭ、１５５ｐＭ、１６０ｐＭ、１６５ｐＭ、１７０ｐＭ、１７５ｐＭ、１８０ｐＭ、１８５ｐＭ、１９０ｐＭ、１９５ｐＭ、２００ｐＭ、２０５ｐＭ、２１０ｐＭ、２１５ｐＭ、２２０ｐＭ、２２５ｐＭ、２３０ｐＭ、２３５ｐＭ、２４０ｐＭ、２４５ｐＭ、２５０ｐＭ、２５５ｐＭ、２６０ｐＭ、２６５ｐＭ、２７０ｐＭ、２７５ｐＭ、２８０ｐＭ、２８５ｐＭ、２９０ｐＭ、２９５ｐＭ、３００ｐＭ、３０５ｐＭ、３１０ｐＭ、３１５ｐＭ、３２０ｐＭ、３２５ｐＭ、３３０ｐＭ、３３５ｐＭ、３４０ｐＭ、３４５ｐＭ、３５０ｐＭ、３５５ｐＭ、３６０ｐＭ、３６５ｐＭ、３７０ｐＭ、３７５ｐＭ、３８０ｐＭ、３８５ｐＭ、３９０ｐＭ、３９５ｐＭ、４００ｐＭ、４０５ｐＭ、４１０ｐＭ、４１５ｐＭ、４２０ｐＭ、４２５ｐＭ、４３０ｐＭ、４３５ｐＭ、４４０ｐＭ、４４５ｐＭ、４５０ｐＭ、４５５ｐＭ、４６０ｐＭ、４６５ｐＭ、４７０ｐＭ、４７５ｐＭ、４８０ｐＭ、４８５ｐＭ、４９０ｐＭ、４９５ｐＭ、５００ｐＭ、５０５ｐＭ、５１０ｐＭ、５１５ｐＭ、５２０ｐＭ、５２５ｐＭ、５３０ｐＭ、５３５ｐＭ、５４０ｐＭ、５４５ｐＭ、５５０ｐＭ、５５５ｐＭ、５６０ｐＭ、５６５ｐＭ、５７０ｐＭ、５７５ｐＭ、５８０ｐＭ、５８５ｐＭ、５９０ｐＭ、５９５ｐＭ、６００ｐＭ、６０５ｐＭ、６１０ｐＭ、６１５ｐＭ、６２０ｐＭ、６２５ｐＭ、６３０ｐＭ、６３５ｐＭ、６４０ｐＭ、６４５ｐＭ、６５０ｐＭ、６５５ｐＭ、６６０ｐＭ、６６５ｐＭ、６７０ｐＭ、６７５ｐＭ、６８０ｐＭ、６８５ｐＭ、６９０ｐＭ、６９５ｐＭ、７００ｐＭ、７０５ｐＭ、７１０ｐＭ、７１５ｐＭ、７２０ｐＭ、７２５ｐＭ、７３０ｐＭ、７３５ｐＭ、７４０ｐＭ、７４５ｐＭ、７５０ｐＭ、７５５ｐＭ、７６０ｐＭ、７６５ｐＭ、７７０ｐＭ、７７５ｐＭ、７８０ｐＭ、７８５ｐＭ、７９０ｐＭ、７９５ｐＭ、８００ｐＭ、８０５ｐＭ、８１０ｐＭ、８１５ｐＭ、８２０ｐＭ、８２５ｐＭ、８３０ｐＭ、８３５ｐＭ、８４０ｐＭ、８４５ｐＭ、８５０ｐＭ、８５５ｐＭ、８６０ｐＭ、８６５ｐＭ、８７０ｐＭ、８７５ｐＭ、８８０ｐＭ、８８５ｐＭ、８９０ｐＭ、８９５ｐＭ、９００ｐＭ、９０５ｐＭ、９１０ｐＭ、９１５ｐＭ、９２０ｐＭ、９２５ｐＭ、９３０ｐＭ、９３５ｐＭ、９４０ｐＭ、９４５ｐＭ、９５０ｐＭ、９５５ｐＭ、９６０ｐＭ、９６５ｐＭ、９７０ｐＭ、９７５ｐＭ、９８０ｐＭ、９８５ｐＭ、９９０ｐＭ、９９５ｐＭ、１ｎＭ、５ｎＭ、または１０ｎＭなどのＫＤで、ＴＮＦＲ２に特異的に結合し得る。一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、約６２１ｐＭのＫＤでＴＮＦＲ２に特異的に結合する。一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、約４４ｐＭのＫＤでＴＮＦＲ２に特異的に結合する。
【００７０】
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎ、例えば、約１×１０４Ｍ−１ｓ−１〜約１×１０８Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎでＴＮＦＲ２に特異的に結合して抗体−抗原複合体を形成し得る。例えば、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、約１×１０４Ｍ−１ｓ−１、２×１０４Ｍ−１ｓ−１、３×１０４Ｍ−１ｓ−１、４×１０４Ｍ−１ｓ−１、５×１０４Ｍ−１ｓ−１、６×１０４Ｍ−１ｓ−１、７×１０４Ｍ−１ｓ−１、８×１０４Ｍ−１ｓ−１、９×１０４Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−１、２×１０５Ｍ−１ｓ−１、３×１０５Ｍ−１ｓ−１、４×１０５Ｍ−１ｓ−１、５×１０５Ｍ−１ｓ−１、６×１０５Ｍ−１ｓ−１、７×１０５Ｍ−１ｓ−１、８×１０５Ｍ−１ｓ−１、９×１０５Ｍ−１ｓ−１、１×１０６Ｍ−１ｓ−１、２×１０６Ｍ−１ｓ−１、３×１０６Ｍ−１ｓ−１、４×１０６Ｍ−１ｓ−１、５×１０６Ｍ−１ｓ−１、６×１０６Ｍ−１ｓ−１、７×１０６Ｍ−１ｓ−１、８×１０６Ｍ−１ｓ−１、９×１０６Ｍ−１ｓ−１、１×１０７Ｍ−１ｓ−１、２×１０７Ｍ−１ｓ−１、３×１０７Ｍ−１ｓ−１、４×１０７Ｍ−１ｓ−１、５×１０７Ｍ−１ｓ−１、６×１０７Ｍ−１ｓ−１、７×１０７Ｍ−１ｓ−１、８×１０７Ｍ−１ｓ−１、９×１０７Ｍ−１ｓ−１、または１×１０８Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎでＴＮＦＲ２に特異的に結合して抗体−抗原複合体を形成し得る。一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、約４．９×１０６Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎでＴＮＦＲ２に特異的に結合して抗体−抗原複合体を形成する。一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、約３．６×１０５Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎでＴＮＦＲ２に特異的に結合して抗体−抗原複合体を形成する。
【００７１】
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、ＴＮＦＲ２に特異的に結合して、例えば、約１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ、例えば、約１０−６ｓ−１〜約１０−３ｓ−１などのＫｏｆｆ（例えば、約１×１０−６ｓ−１、２×１０−６ｓ−１、３×１０−６ｓ−１、４×１０−６ｓ−１、５×１０−６ｓ−１、６×１０−６ｓ−１、７×１０−６ｓ−１、８×１０−６ｓ−１、９×１０−６ｓ−１、１×１０−５ｓ−１、２×１０−５ｓ−１、３×１０−５ｓ−１、４×１０−５ｓ−１、５×１０−５ｓ−１、６×１０−５ｓ−１、７×１０−５ｓ−１、８×１０−５ｓ−１、９×１０−５ｓ−１、１×１０−４ｓ−１、２×１０−４ｓ−１、３×１０−４ｓ−１、４×１０−４ｓ−１、５×１０−４ｓ−１、６×１０−４ｓ−１、７×１０−４ｓ−１、８×１０−４ｓ−１、９×１０−４ｓ−１、または１×１０−３ｓ−１のＫｏｆｆ）で解離する抗体−抗原複合体を形成し得る。一部の実施形態では、抗体−抗原複合体は約２．２×１０−４ｓ−１のＫｏｆｆで解離する。
【００７２】
本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、例えば、ＴＮＦＲ２を発現する細胞、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞（例えば、ＣＤ２５Ｈｉを発現するＴ−ｒｅｇ細胞）、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、及び／またはＴＮＦＲ２＋がん細胞などの内部におけるＴＮＦＲ２シグナル伝達を阻害し得る。一部の実施形態では、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、例えば、上記遺伝子のうちの１種または複数種の発現の低下を観察することによって、または、遺伝子活性化を評価するための当該技術分野において周知のその他の方法を用いることによって、評価した際に、ＣＨＵＫ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＦＫＢＩＡ、ＭＡＰ３Ｋ１１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ｒｅｌＢ、及びｃＩＡＰ２／ＢＩＲＣ３からなる群から選択される１種または複数種の遺伝子の発現を低下または阻害する。例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物は、ＣＨＵＫ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＦＫＢＩＡ、ＭＡＰ３Ｋ１１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ｒｅｌＢ、またはｃＩＡＰ２／ＢＩＲＣ３のうちの１種または複数種の発現または翻訳後修飾（例えば、リン酸化）を、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物で処理していない試料から単離したこれらのタンパク質のうちの１種または複数種の発現または翻訳後修飾（例えば、リン酸化）と比較して、例えば、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％阻害し得る。発現レベル及びリン酸化状態を測定するのに使用可能な例示的なアッセイは当技術分野において周知であり、例えば、タンパク質含有量を測定するためのウェスタンブロットアッセイ、及び、ｍＲＮＡ含有量を測定するための定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）実験が挙げられる。好ましい実施形態では、抗ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）は支配的ＴＮＦＲ２アンタゴニストであり、その結果、ＴＮＦＲ２アゴニスト（例えば、ＴＮＦαまたはＢａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）など）、またはＩＬ−２などの増殖促進因子の存在下であっても、ＴＮＦＲ２活性化を阻害することができる。
【００７３】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、以下の特性、
（ａ）例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞表面上のＴＮＦＲ２に結合してＴＮＦＲ２を不活性化させることによる、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖の抑制及び／またはＴ−ｒｅｇ細胞の直接的な殺傷（例えば、それにより、細胞の集団内におけるＴ−ｒｅｇ細胞の量を、ポリペプチドに曝露していない細胞の集団と比較して、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％低下させる）、
（ｂ）例えば、ＭＤＳＣ表面上のＴＮＦＲ２に結合してＴＮＦＲ２を不活性化させることによる、ＭＤＳＣの増殖の抑制及び／またはＭＤＳＣの直接的な殺傷（例えば、それにより、細胞の集団内におけるＭＤＳＣの量を、ポリペプチドに曝露していない細胞の集団と比較して、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％低下させる）、
（ｃ）Ｔエフェクター細胞、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞などの増殖の促進（例えば、それにより、細胞の集団内におけるＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の量を、ポリペプチドに曝露していない細胞の集団と比較して、約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、３倍、３．１倍、３．２倍、３．３倍、３．４倍、３．５倍、３．６倍、３．７倍、３．８倍、３．９倍、４倍、４．１倍、４．２倍、４．３倍、４．４倍、４．５倍、４．６倍、４．７倍、４．８倍、４．９倍、５倍、５．１倍、５．２倍、５．３倍、５．４倍、５．５倍、５．６倍、５．７倍、５．８倍、５．９倍、６倍、６．１倍、６．２倍、６．３倍、６．４倍、６．５倍、６．６倍、６．７倍、６．８倍、６．９倍、７倍、７．１倍、７．２倍、７．３倍、７．４倍、７．５倍、７．６倍、７．７倍、７．８倍、７．９倍、８倍、８．１倍、８．２倍、８．３倍、８．４倍、８．５倍、８．６倍、８．７倍、８．８倍、８．９倍、９倍、９．１倍、９．２倍、９．３倍、９．４倍、９．５倍、９．６倍、９．７倍、９．８倍、９．９倍，１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれ以上増加させる）、及び／または
（ｄ）ＴＮＦＲ２発現がん細胞（例えば、ホジキンリンパ腫細胞、皮膚非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、腎細胞癌細胞、皮膚癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、子宮内膜癌細胞、造血がん細胞またはリンパがん細胞、中枢神経系がん細胞、乳癌細胞、膵臓癌細胞、胃癌細胞、食道癌細胞、及び上部消化管癌細胞など）の増殖の抑制及び／またはＴＮＦＲ２発現がん細胞の直接的な殺傷（例えば、それにより、細胞の集団内におけるＴＮＦＲ２発現がん細胞の量を、ポリペプチドに曝露していない細胞の集団と比較して、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％低下させる）、
のうちの１つもしくは複数または全てを示し得る。
【００７４】
例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などを使用して、患者（例えば、ヒト患者など）内または試料（例えば、患者、例えば、本明細書に記載のがんまたは感染症に対する治療を受けているヒト患者などから単離した試料）中におけるＴ−ｒｅｇ細胞またはがん細胞の総量を、ポリペプチドを用いた治療を行っていない患者またはポリペプチドを用いた処理を行っていない試料とそれぞれ比較して、低下させてもよい。
【００７５】
一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）は、Ｔ−ｒｅｇ細胞またはがん細胞（例えば、ＴＮＦＲ２＋がん細胞、例えば、ホジキンリンパ腫細胞、皮膚非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、腎細胞癌細胞、皮膚癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、子宮内膜癌細胞、造血がん細胞またはリンパがん細胞、中枢神経系がん細胞、乳癌細胞、膵臓癌細胞、胃癌細胞、食道癌細胞、または上部消化管癌細胞など）によるＴＮＦＲ２の発現を低下させる、及び／または、上記の細胞のうちの１種または複数種による可溶性ＴＮＦＲ２の分泌を低下させる。
【００７６】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を使用して、患者（例えば、ヒト患者）内または試料（例えば、本明細書に記載のがんまたは感染症に対する治療を受けているヒト患者から単離した試料）中における、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖を阻害または抑制する、または、Ｔ−ｒｅｇ細胞の総量を低下させてもよい。
【００７７】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を使用して、ＴＮＦＲ２を発現するＴ−ｒｅｇ細胞（例えば、ＣＤ２５Ｈｉを発現する活性化Ｔ−ｒｅｇ細胞）及び／またはがん細胞の増殖を阻害または抑制する、及び／または、ＴＮＦＲ２を発現するＴ−ｒｅｇ細胞及び／またはがん細胞を直接的に殺傷してもよい。例えば、がん細胞は、ホジキンリンパ腫細胞、皮膚非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、腎細胞癌細胞、皮膚癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、子宮内膜癌細胞、造血がん細胞またはリンパがん細胞、中枢神経系がん細胞、乳癌細胞、膵臓癌細胞、胃癌細胞、食道癌細胞、または上部消化管癌細胞からなる群から選択され得る。メカニズムによって限定するものではないが、がん細胞上のＴＮＦＲ２に結合させて、がん細胞の増殖を阻害または抑制してもよく、及び／または、例えば、がん細胞のアポトーシスを促進させることなどによりがん細胞を直接的に殺傷してもよい。
【００７８】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、ＭＤＳＣ（例えば、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−Ｈ１（ＰＤ−Ｌ１）、ＣＣＲ２、ＣＤ１ｄ、ＣＤ１ｄ１、ＣＤ２、ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ−１）、ＣＤ４３、ＣＤ４４、補体成分Ｃ５ａ  Ｒ１、Ｆ４／８０（ＥＭＲ１）、Ｆｃγ  ＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、Ｆｃγ  ＲＩＩ（ＣＤ３２）、Ｆｃγ  ＲＩＩＡ（ＣＤ３２ａ）、Ｆｃγ  ＲＩＩＢ（ＣＤ３２ｂ）、Ｆｃγ  ＲＩＩＢ／Ｃ（ＣＤ３２ｂ／ｃ）、Ｆｃγ  ＲＩＩＣ（ＣＤ３２ｃ）、Ｆｃγ  ＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）、Ｆｃγ  ＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、ガレクチン−３、ＧＰ１３０、Ｇｒ−１（Ｌｙ−６Ｇ）、ＩＣＡＭ−１（ＣＤ５４）、ＩＬ−１ＲＩ、ＩＬ−４Ｒα、ＩＬ−６Ｒα、インテグリンα４（ＣＤ４９ｄ）、インテグリンαＬ（ＣＤ１１ａ）、インテグリンαＭ（ＣＤ１１ｂ）、Ｍ−ＣＳＦＲ、ＭＧＬ１（ＣＤ３０１ａ）、ＭＧＬ１／２（ＣＤ３０１ａ／ｂ）、ＭＧＬ２（ＣＤ３０１ｂ）、一酸化窒素、ＰＳＧＬ−１（ＣＤ１６２）、Ｌ−セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ｓｉｇｌｅｃ−３（ＣＤ３３）、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）、ＶＥＧＦＲ１（Ｆｌｔ−１）、及びＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲまたはＦｌｋ−１）からなる群から選択されるタンパク質及び低分子の全てまたは一部を発現する細胞）の表面上のＴＮＦＲ２に結合する。詳細には、ＭＤＳＣは、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ２１、ＣＤ２３（ＦｃεＲＩＩ）、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ１１７（ｃ−ｋｉｔ）、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＳｃａ−１（Ｌｙ６）からなる群から選択されるタンパク質を発現しない。ＭＤＳＣ上のＴＮＦＲ２に結合させて、ＭＤＳＣの増殖を阻害または抑制してもよく、及び／または、例えば、ＭＤＳＣのアポトーシスを促進させることなどによりＭＤＳＣを直接的に殺傷してもよい。本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、Ｔ−ｒｅｇ細胞、がん細胞（例えば、ＴＮＦＲ２発現がん細胞）、及び／またはＭＤＳＣの増殖を阻害するのに、ＴＮＦαを必要としないこともある。
【００７９】
一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がんを有していない対象と比較してがんを患う患者においてより高い力価で、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖を阻害する、及び／または、Ｔ−ｒｅｇ細胞を直接的に殺傷する。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がんを患う患者におけるがん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などと比較して腫瘍の微小環境においてより高い力価で、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖を阻害する、及び／または、Ｔ−ｒｅｇ細胞を直接的に殺傷する。
【００８０】
例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がんを患う患者におけるがん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などよりも、または、がんを有していない対象と比較して、腫瘍の微小環境においてより高い力価で、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖を阻害する、及び／または、Ｔ−ｒｅｇ細胞を直接的に殺傷する。例えば、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がん細胞を含まない部位におけるＴ−ｒｅｇ細胞の増殖を阻害するためのポリペプチドのＩＣ５０より、例えば、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、１００倍、１，０００倍、１０，０００倍、またはそれ以上の倍数低い、腫瘍微小環境におけるＴ−ｒｅｇ細胞の増殖を阻害するためのＩＣ５０を示し得る。本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、Ｔ細胞リンパ腫細胞（例えば、ホジキンリンパ腫細胞または皮膚非ホジキンリンパ腫細胞）、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、または腎細胞癌細胞を含有する腫瘍の微小環境において、上記のがんのうちの１種または複数種を患う患者におけるこのようながん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などよりも、または、がんを有していない対象と比較して、より高い力価で、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖を阻害し得る。
【００８１】
一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がんを有していない対象と比較してがんを患う患者においてより高い力価で、ＭＤＳＣの増殖を阻害または抑制する、及び／または、ＭＤＳＣを直接的に殺傷する。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がんを患う患者におけるがん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などと比較して、または、がんを有していない対象と比較して、腫瘍の微小環境においてより高い力価で、ＭＤＳＣの増殖を阻害または抑制する、及び／または、ＭＤＳＣを直接的に殺傷する。
【００８２】
例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、腫瘍の微小環境内に存在するＭＤＳＣの表面上のＴＮＦＲ２に結合し得、がんを患う患者におけるがん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などよりも、または、がんを有していない対象と比較して、腫瘍の微小環境においてより高い力価で、ＭＤＳＣの増殖を阻害または抑制し得る、または、ＭＤＳＣのアポトーシスを促進し得る。例えば、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がん細胞を含まない部位におけるＭＤＳＣの増殖を阻害するためのポリペプチドのＩＣ５０より、例えば、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、１００倍、１，０００倍、１０，０００倍、またはそれ以上の倍数低い、腫瘍微小環境におけるＭＤＳＣの増殖を阻害するためのＩＣ５０を示し得る。本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、Ｔ細胞リンパ腫細胞（例えば、ホジキンリンパ腫細胞または皮膚非ホジキンリンパ腫細胞）、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、または腎細胞癌細胞を含有する腫瘍の微小環境において、上記のがんのうちの１種または複数種を患う患者におけるこのようながん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などよりも、または、がんを有していない対象と比較して、より高い力価で、ＭＤＳＣの増殖を阻害し得る、または、ＭＤＳＣのアポトーシスを促進し得る。
【００８３】
一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がんを有していない対象と比較してがんを患う患者においてより高い力価で、Ｔエフェクター細胞、例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞などを増殖させる。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がんを患う患者におけるがん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などと比較して、または、がんを有していない対象と比較して、腫瘍の微小環境においてより高い力価で、Ｔエフェクター細胞、例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞などを増殖させる。
【００８４】
例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がんを患う患者におけるがん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などよりも、または、がんを有していない対象と比較して、腫瘍の微小環境においてより高い力価で、Ｔエフェクター細胞、例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞などを直接的に増殖させる。例えば、本明細書に記載のポリペプチドは、がんを有していない対象内のＴエフェクター細胞を増殖させるためのポリペプチドのＥＣ５０より、例えば、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、１００倍、１，０００倍、１０，０００倍、またはそれ以上の倍数低い、がん患者内のＴエフェクター細胞を増殖させるためのＥＣ５０を有し得る。本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、Ｔ細胞リンパ腫細胞（例えば、ホジキンリンパ腫細胞または皮膚非ホジキンリンパ腫細胞）、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、または腎細胞癌細胞を含有する腫瘍の微小環境において、上記のがんのうちの１種または複数種を患う患者またはがんを有していない対象におけるこのようながん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などよりも、より高い力価で、Ｔエフェクター細胞、例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞などを直接的に増殖させ得る。一部の実施形態では、Ｔエフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞）は、１種または複数種のがん細胞、例えば、ホジキンリンパ腫細胞、皮膚非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、または腎細胞癌細胞などの上に存在する抗原と特異的に反応する。
【００８５】
一部の実施形態では、ポリペプチドはヒトＩｇＧ２アイソタイプ抗体またはその抗原結合フラグメントである。追加的にまたは代替的に、ポリペプチドは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、霊長類化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、多重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、デュアル可変免疫グロブリンドメイン、一価抗体またはその抗原結合フラグメント、キメラ抗体またはその抗原結合フラグメント、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ディアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャフォールド、ドメイン抗体、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２分子、及びタンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）からなる群から選択される抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよい。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、アミド結合、チオエーテル結合、炭素−炭素結合、またはジスルフィド架橋により、または、リンカー、例えば、本明細書に記載のリンカーなどにより、互いに共有結合した２つまたはそれ以上のＣＤＲを含有する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体、またはその抗原結合フラグメントである。
【００８６】
一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、治療薬、例えば、細胞傷害剤（例えば、本明細書に記載の細胞傷害剤）などにコンジュゲートしている。
【００８７】
上記の態様のいずれかのアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体は、抗体の一方のアームがＴＮＦＲ２に特異的に結合し、もう一方が免疫チェックポイントタンパク質、例えば、とりわけ、本明細書に記載のＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＣＴＬＡ−４などに特異的に結合する、二重特異性抗体、例えば、二重特異性モノクローナル抗体などであってもよい。ＴＮＦＲ２に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、例えば、ＣＲＤ３内の１つまたは複数のアミノ酸により定められたヒトＴＮＦＲ２のエピトープ、及び／またはＣＲＤ４内の１つまたは複数のアミノ酸により定められたエピトープに特異的に結合し得る。一部の実施形態では、ＴＮＦＲ２に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、
（ａ）配列番号：７のアミノ酸１４２〜１４６（ＫＣＲＰＧ）、
（ｂ）配列番号：７のアミノ酸１４２〜１４９（ＫＣＲＰＧＦＧＶ）、
（ｃ）配列番号：７のアミノ酸１３７〜１４４（ＣＡＰＬＲＫＣＲ）、
（ｄ）配列番号：７のアミノ酸１５０〜１９０（ＲＰＧＴＥＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡＰＧＴＦＳＮＴＴＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩＣＮＶＶＡＩ）、
（ｅ）配列番号：７のアミノ酸１６１〜１６９（ＣＫＰＣＡＰＧＴＦ）、
（ｆ）配列番号：７のアミノ酸７５〜１２８（ＣＤＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳＣＧＳＲＣＳＳＤＱＶＥＴＱＡＣＴＲＥＱＮＲＩＣＴＣＲＰＧＷＹＣＡＬ）（任意選択的に、エピトープは、配列番号：７のアミノ酸８０〜８６（ＤＳＴＹＴＱＬ）、９１〜９８（ＰＥＣＬＳＣＧＳ）、または１１６〜１２３（ＲＩＣＴＣＲＰＧ）の内部にある）、
（ｇ）配列番号：７のアミノ酸１７４〜１８４（ＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩ）、
（ｈ）配列番号：７のアミノ酸１２６〜１４０（ＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬ）、及び、
（ｉ）配列番号：７のアミノ酸１５６〜１６５（ＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡ）、
から選択されるヒトＴＮＦＲ２のエピトープに特異的に結合する。
【００８８】
一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＮＦＲ２、例えば、上記のヒトＴＮＦＲ２のエピトープなどに特異的に結合する１つのアーム、及びＰＤ−１に特異的に結合する免疫チェックポイントタンパク質に特異的に結合する１つのアームを含有する。一部の実施形態では、ＰＤ−１に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、またはアテゾリズマブの場合と同じ、ＰＤ−１上のエピトープ（複数可）に特異的に結合し得る。例えば、ＰＤ−１に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、例えば、本明細書に記載の競合結合アッセイ、または当該技術分野において周知のもの、例えば、競合ＥＬＩＳＡなどを使用して評価した場合、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及び／またはアテゾリズマブへのＰＤ−１の結合を競合的に阻害し得る。
【００８９】
一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＮＦＲ２、例えば、上記のヒトＴＮＦＲ２のエピトープなどに特異的に結合する１つのアーム、及びＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する１つのアームを含有する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、アテゾリズマブまたはアベルマブの場合と同じ、ＰＤ−Ｌ１上のエピトープ（複数可）に特異的に結合し得る。例えば、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、例えば、本明細書に記載の競合結合アッセイ、または当該技術分野において周知のもの、例えば、競合ＥＬＩＳＡなどを使用した場合、アテゾリズマブ及び／またはアベルマブへのＰＤ−Ｌ１の結合を競合的に阻害し得る。
【００９０】
一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＮＦＲ２、例えば、上記のヒトＴＮＦＲ２のエピトープなどに特異的に結合する１つのアーム、及びＣＴＬＡ−４に特異的に結合する１つのアームを含有する。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、イピリムマブまたはトレメリムマブの場合と同じ、ＣＴＬＡ−４上のエピトープ（複数可）に特異的に結合し得る。例えば、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、例えば、本明細書に記載の競合結合アッセイ、または当該技術分野において周知のもの、例えば、競合ＥＬＩＳＡなどを使用して評価した場合、イピリムマブ及び／またはトレメリムマブへのＣＴＬＡ−４の結合を競合的に阻害し得る。
【００９１】
第２の態様は、第１のポリペプチドドメイン及び第２のポリペプチドドメインを含有する構築物を特徴とする。第１のポリペプチドドメイン及び第２のポリペプチドドメインはそれぞれ独立して、第１の態様またはその実施形態のいずれかの抗原結合フラグメントである。第１のポリペプチドドメイン及び第２のポリペプチドドメインは、例えば、共有結合リンカー、例えば、アミド結合またはジスルフィド結合を含有する（例えば、アミド結合またはジスルフィド結合である）リンカーなどにより、互いに結合していてもよい。
【００９２】
第３の態様は、第１の態様のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）、及び／または第２の態様またはその実施形態のいずれかの構築物をコードするポリヌクレオチドを特徴とする。
【００９３】
第４の態様は、第３の態様のポリヌクレオチドをコードするベクターを特徴とする。ベクターは、発現ベクター、例えば、真核細胞発現ベクターなどであってもよい。一部の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクター、例えば、アデノウイルス（例えば、血清型１〜５７のアデノウイルス、例えば、血清型２、５、１１、１２、２４、２６、３４、３５、４０、４８、４９、５０、５２、またはＰａｎ９のアデノウイルスなど）、レトロウイルス（例えば、γ−レトロウイルスまたはレンチウイルス）、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス、バキュロウイルス、単純ヘルペスウイルス、またはワクシニアウイルス（例えば、改変ワクシニアアンカラウイルス）などである。
【００９４】
第５の態様は、第３の態様のポリヌクレオチド及び／または第４の態様のベクターを含有する単離宿主細胞を特徴とする。宿主細胞は、原核細胞または真核細胞、例えば、哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）などであってもよい。宿主細胞は、例えば、Ｄｉｎｎｉｓ  ａｎｄ  Ｊａｍｅｓ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ９１：１８０−１８９，２００５（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている宿主細胞であってもよい。
【００９５】
第６の態様は、ヒトＴＮＦＲ２に特異的に結合し、結合時にＴＮＦＲ２活性に対するアンタゴニスト作用を示すポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）を含有する医薬組成物を特徴とする。ポリペプチドは、例えば、第１の態様またはその実施形態のいずれかの抗体または抗原結合フラグメントであってもよい。追加的にまたは代替的に、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＲＤ３及び／またはＣＲＤ４内のエピトープにおいて、ヒトＴＮＦＲ２に特異的に結合し、かつ、ＣＲＤ１内の１つまたは複数のアミノ酸により定められたエピトープにおいて、ＴＮＦＲ２に結合しない、抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよく、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも１０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォーム、例えば、ＩｇＧ２−Ａジスルフィド結合アイソフォームまたはＩｇＧ２−Ｂジスルフィド結合アイソフォームなどで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの約１０％〜約９９．９９９％、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの約１１％〜約９９．９％、約１２％〜約９９．９％、約１３％〜約９９．９％、約１４％〜約９９．９％、約１５％〜約９９％、約１６％〜約９９．９％、約１７％〜約９９．９％、約１８％〜約９９．９％、約１９％〜約９９．９％、約２０％〜約９９．９％、約２１％〜約９９．９％、約２２％〜約９９．９％、約２３％〜約９９．９％、約２４％〜約９９．９％、約２５％〜約９９．９％、約２６％〜約９９．９％、約２７％〜約９９．９％、約２８％〜約９９．９％、約２９％〜約９９．９％、約３０％〜約９９．９％、約３１％〜約９９．９％、約３２％〜約９９．９％、約３３％〜約９９．９％、約３４％〜約９９．９％、約３５％〜約９９．９％、約３６％〜約９９．９％、約３７％〜約９９．９％、約３８％〜約９９．９％、約３９％〜約９９．９％、約４０％〜約９９．９％、約４１％〜約９９．９％、約４２％〜約９９．９％、約４３％〜約９９．９％、約４４％〜約９９．９％、約４５％〜約９９．９％、約４６％〜約９９．９％、約４７％〜約９９．９％、約４８％〜約９９．９％、約４９％〜約９９．９％、約５０％〜約９９．９％、約５１％〜約９９．９％、約５２％〜約９９．９％、約５３％〜約９９．９％、約５４％〜約９９．９％、約５５％〜約９９．９％、約５６％〜約９９．９％、約５７％〜約９９．９％、約５８％〜約９９．９％、約５９％〜約９９．９％、約６０％〜約９９．９％、約６１％〜約９９．９％、約６２％〜約９９．９％、約６３％〜約９９．９％、約６４％〜約９９．９％、約６５％〜約９９．９％、約６６％〜約９９．９％、約６７％〜約９９．９％、約６８％〜約９９．９％、約６９％〜約９９．９％、約７０％〜約９９．９％、約７１％〜約９９．９％、約７２％〜約９９．９％、約７３％〜約９９．９％、約７４％〜約９９．９％、約７５％〜約９９．９％、約７６％〜約９９．９％、約７７％〜約９９．９％、約７８％〜約９９．９％、約７９％〜約９９．９％、約８０％〜約９９．９％、約８１％〜約９９．９％、約８２％〜約９９．９％、約８３％〜約９９．９％、約８４％〜約９９．９％、約８５％〜約９９．９％、約８６％〜約９９．９％、約８７％〜約９９．９％、約８８％〜約９９．９％、約８９％〜約９９．９％、約９０％〜約９９．９％、約９１％〜約９９．９％、約９２％〜約９９．９％、約９３％〜約９９．９％、約９４％〜約９９．９％、約９５％〜約９９．９％、約９６％〜約９９．９％、約９７％〜約９９．９％、約９８％〜約９９．９％、または約９９％〜約９９．９９％などは、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。
【００９６】
一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約１０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約１５％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約２０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約２５％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約３０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約３５％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約４０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約４５％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約５０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約６０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約６５％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約７０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約７５％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約８０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約８５％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約９０％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約９５％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約９６％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約９７％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約９８％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約９９％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。一部の実施形態では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの少なくとも約９９．９％は、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している。
【００９７】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、非還元条件下で実施するゲル電気泳動解析を行うと、単一の検出可能なバンドのみを生じさせる。
【００９８】
一部の実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントの単一のジスルフィド結合アイソフォームは、本明細書に記載するとおり、ＩｇＧ２−Ａである。一部の実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントの単一のジスルフィド結合アイソフォームは、本明細書に記載するとおり、ＩｇＧ２−Ｂである。
【００９９】
追加的にまたは代替的に、医薬組成物は、第２の態様またはその任意の実施形態の構築物、第３の態様またはその任意の実施形態のポリヌクレオチド、第４の態様またはその任意の実施形態のベクター、及び／または、第５の態様またはその任意の実施形態の宿主細胞を含有していてもよい。医薬組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤を更に含有していてもよい。
【０１００】
一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、約０．００１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの量、例えば、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌなどの量で医薬組成物中に含まれている。
【０１０１】
医薬組成物は、別の治療薬、例えば、免疫療法剤などを更に含有していてもよい。一部の実施形態では、免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ−４剤、抗ＰＤ−１剤、抗ＰＤ−Ｌ１剤、抗ＰＤ−Ｌ２剤、ＴＮＦ−α架橋剤、ＴＲＡＩＬ架橋剤、抗ＣＤ２７剤、抗ＣＤ３０剤、抗ＣＤ４０剤、抗４−１ＢＢ剤、抗ＧＩＴＲ剤、抗ＯＸ４０剤、抗ＴＲＡＩＬＲ１剤、抗ＴＲＡＩＬＲ２剤、抗ＴＷＥＡＫ剤、抗ＴＷＥＡＫＲ剤、抗細胞表面リンパ球タンパク質剤、抗ＢＲＡＦ剤、抗ＭＥＫ剤、抗ＣＤ３３剤、抗ＣＤ２０剤、抗ＨＬＡ−ＤＲ剤、抗ＨＬＡクラスＩ剤、抗ＣＤ５２剤、抗Ａ３３剤、抗ＧＤ３剤、抗ＰＳＭＡ剤、抗Ｃｅａｃａｎ１剤、抗Ｇａｌｅｄｉｎ９剤、抗ＨＶＥＭ剤、抗ＶＩＳＴＡ剤、抗Ｂ７  Ｈ４剤、抗ＨＨＬＡ２剤、抗ＣＤ１５５剤、抗ＣＤ８０剤、抗ＢＴＬＡ剤、抗ＣＤ１６０剤、抗ＣＤ２８剤、抗ＣＤ２２６剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１剤、抗ＴＩＭ３剤、抗ＴＩＧＩＴ剤、抗ＣＤ９６剤、抗ＣＤ７０剤、抗ＣＤ２７剤、抗ＬＩＧＨＴ剤、抗ＣＤ１３７剤、抗ＤＲ４剤、抗ＣＲ５剤、抗ＴＮＦＲＳ剤、抗ＴＮＦＲ１剤、抗ＦＡＳ剤、抗ＣＤ９５剤、抗ＴＲＡＩＬ剤、抗ＤＲ６剤、抗ＥＤＡＲ剤、抗ＮＧＦＲ剤、抗ＯＰＧ剤、抗ＲＡＮＫＬ剤、抗ＬＴβ受容体剤、抗ＢＣＭＡ剤、抗ＴＡＣＩ剤、抗ＢＡＦＦＲ剤、抗ＥＤＡＲ２剤、抗ＴＲＯＹ剤、及び抗ＲＥＬＴ剤からなる群から選択される。例えば、免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ−４剤、抗ＰＤ−１剤、または抗ＰＤ−Ｌ１剤であってもよい。
【０１０２】
一部の実施形態では、免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−Ｌ２抗体またはその抗原結合フラグメント、ＴＮＦ−α架橋抗体またはその抗原結合フラグメント、ＴＲＡＩＬ架橋抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ３０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬＲ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＷＥＡＫ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗細胞表面リンパ球タンパク質抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＲＡＦ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＭＥＫ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ３３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＬＡクラスＩ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ５２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ａ３３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＧＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＳＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｃｅａｃａｎ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｇａｌｅｄｉｎ９抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｂ７  Ｈ４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＨＬＡ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１５５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ８０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１６０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２２６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ９６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＬＩＧＨＴ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＤＲ４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦＲＳ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦＲ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＦＡＳ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ９５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＤＲ６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＥＤＡＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＮＧＦＲ抗体またはその抗��結合フラグメント、抗ＯＰＧ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＲＡＮＫＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＬＴβ受容体抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＡＣＩ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＡＦＦＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＥＤＡＲ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＯＹ抗体またはその抗原結合フラグメント、及び抗ＲＥＬＴ抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される。例えば、免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよい。
【０１０３】
一部の実施形態では、医薬組成物は、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、イピリムマブまたはトレメリムマブなどを含有する。追加的にまたは代替的に、医薬組成物は、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、またはアテゾリズマブなどを含有していてもよい。
【０１０４】
一部の実施形態では、免疫療法剤は、抗細胞表面リンパ球タンパク質抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１、ＣＤ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４２、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６０、ＣＤ６１、ＣＤ６２、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６５、ＣＤ６６、ＣＤ６７、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８８、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤ９２、ＣＤ９３、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０７、ＣＤ１０８、ＣＤ１０９、ＣＤ１１０、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１４、ＣＤ１１５、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０、ＣＤ１２１、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤ１２８、ＣＤ１２９、ＣＤ１３０、ＣＤ１３１、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３５、ＣＤ１３６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１３９、ＣＤ１４０、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４５、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１４９、ＣＤ１５０、ＣＤ１５１、ＣＤ１５２、ＣＤ１５３、ＣＤ１５４、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８、ＣＤ１５９、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６５、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７、ＣＤ１６８、ＣＤ１６９、ＣＤ１７０、ＣＤ１７１、ＣＤ１７２、ＣＤ１７３、ＣＤ１７４、ＣＤ１７５、ＣＤ１７６、ＣＤ１７７、ＣＤ１７８、ＣＤ１７９、ＣＤ１８０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８３、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、ＣＤ１８６、ＣＤ１８７、ＣＤ１８８、ＣＤ１８９、ＣＤ１９０、ＣＤ１９１、ＣＤ１９２、ＣＤ１９３、ＣＤ１９４、ＣＤ１９５、ＣＤ１９６、ＣＤ１９７、ＣＤ１９８、ＣＤ１９９、ＣＤ２００、ＣＤ２０１、ＣＤ２０２、ＣＤ２０３、ＣＤ２０４、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＣＤ２０７、ＣＤ２０８、ＣＤ２０９、ＣＤ２１０、ＣＤ２１１、ＣＤ２１２、ＣＤ２１３、ＣＤ２１４、ＣＤ２１５、ＣＤ２１６、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８、ＣＤ２１９、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２３、ＣＤ２２４、ＣＤ２２５、ＣＤ２２６、ＣＤ２２７、ＣＤ２２８、ＣＤ２２９、ＣＤ２３０、ＣＤ２３１、ＣＤ２３２、ＣＤ２３３、ＣＤ２３４、ＣＤ２３５、ＣＤ２３６、ＣＤ２３７、ＣＤ２３８、ＣＤ２３９、ＣＤ２４０、ＣＤ２４１、ＣＤ２４２、ＣＤ２４３、ＣＤ２４４、ＣＤ２４５、ＣＤ２４６、ＣＤ２４７、ＣＤ２４８、ＣＤ２４９、ＣＤ２５０、ＣＤ２５１、ＣＤ２５２、ＣＤ２５３、ＣＤ２５４、ＣＤ２５５、ＣＤ２５６、ＣＤ２５７、ＣＤ２５８、ＣＤ２５９、ＣＤ２６０、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ２６３、ＣＤ２６４、ＣＤ２６５、ＣＤ２６６、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２７０、ＣＤ２７１、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７７、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤ２８０、ＣＤ２８１、ＣＤ２８２、ＣＤ２８３、ＣＤ２８４、ＣＤ２８５、ＣＤ２８６、ＣＤ２８７、ＣＤ２８８、ＣＤ２８９、ＣＤ２９０、ＣＤ２９１、ＣＤ２９２、ＣＤ２９３、ＣＤ２９４、ＣＤ２９５、ＣＤ２９６、ＣＤ２９７、ＣＤ２９８、ＣＤ２９９、ＣＤ３００、ＣＤ３０１、ＣＤ３０２、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４、ＣＤ３０５、ＣＤ３０６、ＣＤ３０７、ＣＤ３０８、ＣＤ３０９、ＣＤ３１０、ＣＤ３１１、ＣＤ３１２、ＣＤ３１３、ＣＤ３１４、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１８、ＣＤ３１９、及び／またはＣＤ３２０のうちの１種または複数種に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントなどである。
【０１０５】
一部の実施形態では、免疫療法剤は、ケモカインまたはリンフォカイン、例えば、腫瘍の増殖に関与するケモカインまたはリンフォカインなどに結合する薬剤（例えば、ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、またはその構築物）である。例えば、免疫療法剤は、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ８、ＣＣＬ２、及びＣＣＬ５のうちの１種もしくは複数種または全てに結合してその活性を阻害する薬剤（例えば、ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、またはその構築物）であってもよい。一部の実施形態では、免疫療法剤は、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ８、及びＣＣＬ２２のうちの１種もしくは複数種または全てに結合してその活性を阻害する薬剤（例えば、ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、またはその構築物）である。
【０１０６】
免疫療法剤は、Ｍａｈｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，１４：５６１−５８４（２０１５）（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる）の表１に記載の免疫学的標的のうちの１種または複数種に特異的に結合することができ得る。例えば、免疫療法剤は、薬剤、例えば、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｓｉｎｇｌｅｃｓ、ＩＣＯＳ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＴＭＩＧＤ２、ＢＴＮＬ２、ＣＤ４８、ＫＩＲ、ＬＩＲ、ＬＩＲ抗体、ＩＬＴ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ａ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＣＤ２４４、ＣＳＦ１Ｒ、ＩＤＯ、ＴＧＦβ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＬ１２、ＳＩＲＰＡ、ＣＤ４７、ＶＥＧＦ、またはニューロピリンのうちの１種または複数種に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントなどであってもよい。
【０１０７】
一部の実施形態では、免疫療法剤は、ターグレチン、インターフェロン−α、クロベスタゾール、ペグインターフェロン（例えば、ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標））、プレドニゾン、ロミデプシン、ベキサロテン、メトトレキサート、トリムシノロンクリーム、抗ケモカイン、ボリノスタット、ガバペンチン、リンパ球系細胞表面受容体及び／またはリンフォカインに対する抗体、表面がんタンパク質に対する抗体、及び／または、ボリノスタットのような低分子治療薬である。
【０１０８】
一部の実施形態では、医薬組成物は、抗体の一方のアームがＴＮＦＲ２に特異的に結合し、もう一方が免疫チェックポイントタンパク質、例えば、とりわけ、本明細書に記載のＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＣＴＬＡ−４などに特異的に結合する、二重特異性抗体、例えば、二重特異性モノクローナル抗体を含有する。ＴＮＦＲ２に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、アンタゴニスト性（支配的アンタゴニスト性）表現型を生じることから、例えば、ＣＲＤ３内の１つまたは複数のアミノ酸により定められたヒトＴＮＦＲ２のエピトープ、及び／またはＣＲＤ４内の１つまたは複数のアミノ酸により定められたエピトープ、例えば、上記及び本明細書に記載のヒトＴＮＦＲ２上のエピトープなどに特異的に結合し得る。
【０１０９】
一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＮＦＲ２、例えば、上記のヒトＴＮＦＲ２のエピトープなどに特異的に結合する１つのアーム、及びＰＤ−１に特異的に結合する免疫チェックポイントタンパク質に特異的に結合する１つのアームを含有する。一部の実施形態では、ＰＤ−１に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、またはアテゾリズマブの場合と同じ、ＰＤ−１上のエピトープ（複数可）に特異的に結合し得る。例えば、ＰＤ−１に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、例えば、本明細書に記載の競合結合アッセイ、または当該技術分野において周知のもの、例えば、競合ＥＬＩＳＡなどを使用して評価した場合、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及び／またはアテゾリズマブへのＰＤ−１の結合を競合的に阻害し得る。
【０１１０】
一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＮＦＲ２、例えば、上記のヒトＴＮＦＲ２のエピトープなどに特異的に結合する１つのアーム、及びＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する１つのアームを含有する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、アテゾリズマブまたはアベルマブの場合と同じ、ＰＤ−Ｌ１上のエピトープ（複数可）に特異的に結合し得る。例えば、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、例えば、本明細書に記載の競合結合アッセイ、または当該技術分野において周知のもの、例えば、競合ＥＬＩＳＡなどを使用した場合、アテゾリズマブ及び／またはアベルマブへのＰＤ−Ｌ１の結合を競合的に阻害し得る。
【０１１１】
一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＮＦＲ２、例えば、上記のヒトＴＮＦＲ２のエピトープなどに特異的に結合する１つのアーム、及びＣＴＬＡ−４に特異的に結合する１つのアームを含有する。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、イピリムマブまたはトレメリムマブの場合と同じ、ＣＴＬＡ−４上のエピトープ（複数可）に特異的に結合し得る。例えば、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する二重特異性抗体のアームは、例えば、本明細書に記載の競合結合アッセイ、または当該技術分野において周知のもの、例えば、競合ＥＬＩＳＡなどを使用して評価した場合、イピリムマブ及び／またはトレメリムマブへのＣＴＬＡ−４の結合を競合的に阻害し得る。
【０１１２】
一部の実施形態では、医薬組成物中の別の治療薬は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ−Ｔ）薬、化学療法剤、低分子抗がん剤、またはがんワクチンである。
【０１１３】
一部の実施形態では、医薬組成物中の別の治療薬は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ−Ｔ）薬、例えば、がん細胞の表面上に発現した１種または複数種の抗原に特異的に結合するＴ細胞受容体を発現するように改変されたＴ細胞などである。本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、構築物、ポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞（例えば、ＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメント）は、例えば、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、構築物、ポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞をＣＡＲ−Ｔ薬と混合することにより、ＣＡＲ−Ｔ薬との同時投与用に製剤化され得る。一部の実施形態では、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、構築物、ポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞は、化学療法剤とは別の投与用、例えば、連続投与用として、製剤化される。
【０１１４】
一部の実施形態では、医薬組成物中の別の治療薬は、化学療法剤、例えば、本明細書に記載の化学療法剤などである。本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、構築物、ポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞（例えば、ＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメント）は、例えば、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、構築物、ポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞を化学療法剤と混合することにより、化学療法剤との同時投与用に製剤化され得る。一部の実施形態では、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、構築物、ポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞は、化学療法剤とは別の投与用に製剤化される。一部の実施形態では、化学療法剤は、例えば、本明細書に記載または当該技術分野において周知の結合形成技術を使用して、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、構築物、ポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞に直接コンジュゲートされる。
【０１１５】
一部の実施形態では、別の治療薬は、低分子抗がん剤、例えば、Ｉｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  ６：７１４−７２７（２００６）（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載の低分子などである。
【０１１６】
一部の実施形態では、別の治療薬は、がんワクチン、例えば、Ｐａｌｕｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １８６：１３２５−１３３１（２０１１）（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載のワクチンなどである。
【０１１７】
第７の態様は、第１の態様のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）、及び／または第２の態様またはその任意の実施形態の構築物を製造するための方法を特徴とする。方法は、ポリペプチドまたは構築物をコードするポリヌクレオチドを宿主細胞（例えば、本明細書に記載の宿主細胞）内で発現させてから、宿主細胞培地からポリペプチドを回収することを含んでいてもよい。
【０１１８】
第８の態様は、第１の態様またはその任意の実施形態のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）、第２の態様またはその任意の実施形態の構築物、第３の態様またはその任意の実施形態のポリヌクレオチド、第４の態様またはその任意の実施形態のベクター、第５の態様またはその任意の実施形態の宿主細胞、及び／または、第６の態様またはその任意の実施形態の医薬組成物を哺乳動物に投与することにより、哺乳動物（例えば、ヒト）におけるＴ−ｒｅｇ細胞が関与する免疫応答を抑制または阻害するための方法を特徴とする。
【０１１９】
第９の態様は、第１の態様またはその任意の実施形態のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）、第２の態様またはその任意の実施形態の構築物、第３の態様またはその任意の実施形態のポリヌクレオチド、第４の態様またはその任意の実施形態のベクター、第５の態様またはその任意の実施形態の宿主細胞、及び／または、第６の態様またはその任意の実施形態の医薬組成物を哺乳動物に投与することにより、哺乳動物（例えば、ヒト）における細胞増殖障害を治療するための方法を特徴とする。
【０１２０】
細胞増殖障害は、例えば、がん、例えば、白血病、リンパ腫、肝臓癌、骨癌、肺癌、脳癌、膀胱癌、消化管癌、乳癌、心臓癌、子宮頸癌、子宮癌、頭頸部癌、胆嚢癌、喉頭癌、唇及び口腔癌、眼球癌、黒色腫、膵臓癌、前立腺癌、結腸直腸癌、精巣癌、及び咽喉癌からなる群から選択されるがんなどであってもよい。一部の実施形態では、がんは、ホジキンリンパ腫、皮膚非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、卵巣癌、結腸癌、多発性骨髄腫、腎細胞癌、皮膚癌、肺癌、肝臓癌、子宮内膜癌、造血系またはリンパ系のがん、中枢神経系のがん、乳癌、膵臓癌、胃癌、食道癌、及び上部消化管の癌からなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは、Ｔ細胞リンパ腫、卵巣癌、及び結腸癌からなる群から選択される。
【０１２１】
一部の実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、非定型奇形／桿状腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、肝外癌、ユーイング肉腫ファミリー、骨肉腫、及び悪性線維性組織球腫、中枢神経系胎児性腫瘍、中枢神経系胚細胞腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、原発性リンパ腫、脊索腫、慢性骨髄増殖性腫瘍、結腸癌、肝外胆管癌、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、感覚神経芽細胞腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵管癌、骨の線維性組織球腫、胃腸カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、精巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、小児期脳幹神経膠腫、毛様細胞性白血病、肝細胞癌、ランゲルハンス細胞組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞腫瘍、膵臓神経内分泌腫瘍、ウィルムス腫瘍、及びその他の小児期腎臓腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球症、小細胞肺癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、眼内黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性扁平頸部癌、正中管癌（ｍｉｄｌｉｎｅ  ｔｒａｃｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、上皮性卵巣癌、胚細胞性卵巣癌、低悪性度卵巣癌、膵臓神経内分泌腫瘍、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔及び鼻腔癌、上皮小体癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性腹膜癌、直腸癌、腎臓癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、カポジ肉腫、横紋筋肉腫、セザリー症候群、小腸癌、軟部組織肉腫、咽喉癌、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺癌、腎盂及び尿管の移行細胞癌、尿道癌、子宮内膜子宮癌、子宮肉腫、腟癌、外陰癌、ならびにワルデンシュトレームマクログロブリン血症からなる群から選択される。
【０１２２】
第１０の態様は、第１の態様またはその任意の実施形態のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）、第２の態様またはその任意の実施形態の構築物、第３の態様またはその任意の実施形態のポリヌクレオチド、第４の態様またはその任意の実施形態のベクター、第５の態様またはその任意の実施形態の宿主細胞、及び／または、第６の態様またはその任意の実施形態の医薬組成物を哺乳動物に投与することにより、哺乳動物（例えば、ヒト）における感染症を治療するための方法を特徴とする。感染症は、例えば、ウイルス、細菌、真菌、及び／または寄生生物によって引き起こされ得る。
【０１２３】
一部の実施形態では、感染症は、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱ウイルス、カダムウイルス、キャサヌル森林病ウイルス、ランガットウイルス、オムスク出血熱ウイルス、ポワッサンウイルス、ロイヤルファームウイルス、カリシウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、Ｎｅｕｄｏｅｒｆｌウイルス、Ｓｏｆｊｉｎウイルス、跳躍病ウイルス、ネギシウイルス、Ｍｅａｂａｎウイルス、Ｓａｕｍａｒｅｚ  Ｒｅｅｆウイルス、チュレニーウイルス、アロアウイルス、デング熱ウイルス、Ｋｅｄｏｕｇｏｕウイルス、Ｃａｃｉｐａｃｏｒｅウイルス、Ｋｏｕｔａｎｇｏウイルス、日本脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ウスツウイルス、ウエストナイルウイルス、Ｙａｏｕｎｄｅウイルス、ココベラウイルス、バガザウイルス、イレウスウイルス、イスラエル七面鳥髄膜脳炎ウイルス、ウンタヤウイルス、テンブスウイルス、ジカウイルス、バンジウイルス、Ｂｏｕｂｏｕｉウイルス、Ｅｄｇｅ  Ｈｉｌｌウイルス、Ｊｕｇｒａウイルス、Ｓａｂｏｙａウイルス、セピックウイルス、ウガンダＳウイルス、ウェッセルスブロンウイルス、黄熱ウイルス、エンテベコウモリウイルス、ヨコセウイルス、アポイウイルス、Ｃｏｗｂｏｎｅ  Ｒｉｄｇｅウイルス、Ｊｕｔｉａｐａウイルス、Ｍｏｄｏｃウイルス、Ｓａｌ  Ｖｉｅｊａウイルス、Ｓａｎ  Ｐｅｒｌｉｔａウイルス、ブカラサコウモリウイルス、Ｃａｒｅｙ  Ｉｓｌａｎｄウイルス、ダカールコウモリウイルス、モンタナホオヒゲコウモリ白質脳炎ウイルス、プノンペンコウモリウイルス、リオブラボーウイルス、タマナコウモリウイルス、細胞融合因子ウイルス、Ｉｐｐｙウイルス、ラッサウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、Ｍｏｂａｌａウイルス、モペイアウイルス、アマパリウイルス、フレキサルウイルス、グアナリトウイルス、フニンウイルス、ラティーノウイルス、マチュポウイルス、オリベロスウイルス、パラナウイルス、ピチンデウイルス、Ｐｉｒｉｔａｌウイルス、サビアウイルス、タカリベウイルス、タミアミウイルス、ホワイトウォーターアロヨウイルス、チャパレウイルス、ルジョウイルス、ハンタンウイルス、シンノンブレウイルス、Ｄｕｇｂｅウイルス、ブニヤンベラウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミアコンゴ出血熱（ＣＣＨＦ）ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）、東部ウマ脳炎ウイルス（ＥＥＥ）、西部ウマ脳炎ウイルス（ＷＥＥ）、シンドビスウイルス、風疹ウイルス、セムリキ森林ウイルス、ロスリバーウイルス、バーマ森林ウイルス、オニョンニョンウイルス、及びチクングニヤウイルス、天然痘ウイルス、サル痘ウイルス、ワクシニアウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒトヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、インフルエンザウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、狂犬病ウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ニューカッスル病ウイルス、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、麻疹ウイルス、牛疫ウイルス、イヌジステンパーウイルス、センダイウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス（例えば、１、２、３、及び４）ライノウイルス、ムンプスウイルス、ポリオウイルス、ヒトエンテロウイルス（Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤ）、Ａ型肝炎ウイルス、コクサッキーウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、アデノ随伴ウイルス、アストロウイルス、ＪＣウイルス、ＢＫウイルス、ＳＶ４０ウイルス、ノーウォークウイルス、ロタウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルスＩ型及びＩＩ型からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる。
【０１２４】
一部の実施形態では、感染症は、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｃａｒｄｉａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅｃｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂｏｒｄａｔｅｌｌａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓからなる群から選択される属に属する細菌によって引き起こされる。
【０１２５】
一部の実施形態では、感染症は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ、Ｍｕｃｏｒ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ、及びＡｂｓｉｄｉａからなる群から選択される真菌によって引き起こされる。
【０１２６】
一部の実施形態では、感染症は、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｙｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｍｕｒｉｓ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄａ  ｃｒｕｓｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍｅｘｉｃａｎａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、及びＨｉｓｔｏｍｏｎａｓ  ｍｅｌｅａｇｒｉｄｉｓからなる群から選択される寄生生物によって引き起こされる。例示的な寄生虫としては、ｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ  ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ｎｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、ａｎｄ  Ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ  ｍｅｄｉｎｅｎｓｉｓ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｇｉｇａｎｔｉｃａ、Ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｅｓ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ、Ｔａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍ、Ｔａｅｎｉａ  ｓａｇｉｎａｔａ、Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ  ｎａｎａ、及びＥｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓが挙げられる。
【０１２７】
第８、第９、及び／または第１０の態様の一部の実施形態では、方法は、免疫療法剤をヒトに投与することを更に含む。免疫療法剤は、例えば、抗ＣＴＬＡ−４剤、抗ＰＤ−１剤、抗ＰＤ−Ｌ１剤、抗ＰＤ−Ｌ２剤、ＴＮＦ−α架橋剤、ＴＲＡＩＬ架橋剤、抗ＣＤ２７剤、抗ＣＤ３０剤、抗ＣＤ４０剤、抗４−１ＢＢ剤、抗ＧＩＴＲ剤、抗ＯＸ４０剤、抗ＴＲＡＩＬＲ１剤、抗ＴＲＡＩＬＲ２剤、抗ＴＷＥＡＫ剤、抗ＴＷＥＡＫＲ剤、抗細胞表面リンパ球タンパク質剤、抗ＢＲＡＦ剤、抗ＭＥＫ剤、抗ＣＤ３３剤、抗ＣＤ２０剤、抗ＨＬＡ−ＤＲ剤、抗ＨＬＡクラスＩ剤、抗ＣＤ５２剤、抗Ａ３３剤、抗ＧＤ３剤、抗ＰＳＭＡ剤、抗Ｃｅａｃａｎ１剤、抗Ｇａｌｅｄｉｎ９剤、抗ＨＶＥＭ剤、抗ＶＩＳＴＡ剤、抗Ｂ７  Ｈ４剤、抗ＨＨＬＡ２剤、抗ＣＤ１５５剤、抗ＣＤ８０剤、抗ＢＴＬＡ剤、抗ＣＤ１６０剤、抗ＣＤ２８剤、抗ＣＤ２２６剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１剤、抗ＴＩＭ３剤、抗ＴＩＧＩＴ剤、抗ＣＤ９６剤、抗ＣＤ７０剤、抗ＣＤ２７剤、抗ＬＩＧＨＴ剤、抗ＣＤ１３７剤、抗ＤＲ４剤、抗ＣＲ５剤、抗ＴＮＦＲＳ剤、抗ＴＮＦＲ１剤、抗ＦＡＳ剤、抗ＣＤ９５剤、抗ＴＲＡＩＬ剤、抗ＤＲ６剤、抗ＥＤＡＲ剤、抗ＮＧＦＲ剤、抗ＯＰＧ剤、抗ＲＡＮＫＬ剤、抗ＬＴβ受容体剤、抗ＢＣＭＡ剤、抗ＴＡＣＩ剤、抗ＢＡＦＦＲ剤、抗ＥＤＡＲ２剤、抗ＴＲＯＹ剤、及び抗ＲＥＬＴ剤、例えば、抗ＣＴＬＡ−４剤、抗ＰＤ−１剤、及び／または抗ＰＤ−Ｌ１剤などからなる群から選択されてもよい。
【０１２８】
ヒトに投与する免疫療法剤は、例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−Ｌ２抗体またはその抗原結合フラグメント、ＴＮＦ−α架橋抗体またはその抗原結合フラグメント、ＴＲＡＩＬ架橋抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ３０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬＲ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＷＥＡＫ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗細胞表面リンパ球タンパク質抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＲＡＦ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＭＥＫ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ３３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＬＡクラスＩ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ５２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ａ３３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＧＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＳＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｃｅａｃａｎ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｇａｌｅｄｉｎ９抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｂ７  Ｈ４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＨＬＡ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１５５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ８０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１６０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２２６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ９６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＬＩＧＨＴ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＤＲ４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦＲＳ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦＲ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＦＡＳ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ９５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＤＲ６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＥＤＡＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＮＧＦＲ抗体またはその��原結合フラグメント、抗ＯＰＧ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＲＡＮＫＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＬＴβ受容体抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＡＣＩ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＡＦＦＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＥＤＡＲ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＯＹ抗体またはその抗原結合フラグメント、及び抗ＲＥＬＴ抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択されてもよい。一部の実施形態では、ヒトに投与する免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０１２９】
第８、第９、及び／または第１０の態様の一部の実施形態では、方法は、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、イピリムマブまたはトレメリムマブなどを哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することを含む。追加的にまたは代替的に、方法は、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、またはアテゾリズマブなどをヒトに投与することを含んでいてもよい。
【０１３０】
第８、第９、及び／または第１０の態様の一部の実施形態では、方法は、抗細胞表面リンパ球タンパク質抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１、ＣＤ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４２、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６０、ＣＤ６１、ＣＤ６２、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６５、ＣＤ６６、ＣＤ６７、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８８、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤ９２、ＣＤ９３、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０７、ＣＤ１０８、ＣＤ１０９、ＣＤ１１０、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１４、ＣＤ１１５、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０、ＣＤ１２１、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤ１２８、ＣＤ１２９、ＣＤ１３０、ＣＤ１３１、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３５、ＣＤ１３６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１３９、ＣＤ１４０、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４５、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１４９、ＣＤ１５０、ＣＤ１５１、ＣＤ１５２、ＣＤ１５３、ＣＤ１５４、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８、ＣＤ１５９、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６５、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７、ＣＤ１６８、ＣＤ１６９、ＣＤ１７０、ＣＤ１７１、ＣＤ１７２、ＣＤ１７３、ＣＤ１７４、ＣＤ１７５、ＣＤ１７６、ＣＤ１７７、ＣＤ１７８、ＣＤ１７９、ＣＤ１８０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８３、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、ＣＤ１８６、ＣＤ１８７、ＣＤ１８８、ＣＤ１８９、ＣＤ１９０、ＣＤ１９１、ＣＤ１９２、ＣＤ１９３、ＣＤ１９４、ＣＤ１９５、ＣＤ１９６、ＣＤ１９７、ＣＤ１９８、ＣＤ１９９、ＣＤ２００、ＣＤ２０１、ＣＤ２０２、ＣＤ２０３、ＣＤ２０４、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＣＤ２０７、ＣＤ２０８、ＣＤ２０９、ＣＤ２１０、ＣＤ２１１、ＣＤ２１２、ＣＤ２１３、ＣＤ２１４、ＣＤ２１５、ＣＤ２１６、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８、ＣＤ２１９、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２３、ＣＤ２２４、ＣＤ２２５、ＣＤ２２６、ＣＤ２２７、ＣＤ２２８、ＣＤ２２９、ＣＤ２３０、ＣＤ２３１、ＣＤ２３２、ＣＤ２３３、ＣＤ２３４、ＣＤ２３５、ＣＤ２３６、ＣＤ２３７、ＣＤ２３８、ＣＤ２３９、ＣＤ２４０、ＣＤ２４１、ＣＤ２４２、ＣＤ２４３、ＣＤ２４４、ＣＤ２４５、ＣＤ２４６、ＣＤ２４７、ＣＤ２４８、ＣＤ２４９、ＣＤ２５０、ＣＤ２５１、ＣＤ２５２、ＣＤ２５３、ＣＤ２５４、ＣＤ２５５、ＣＤ２５６、ＣＤ２５７、ＣＤ２５８、ＣＤ２５９、ＣＤ２６０、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ２６３、ＣＤ２６４、ＣＤ２６５、ＣＤ２６６、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２７０、ＣＤ２７１、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７７、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤ２８０、ＣＤ２８１、ＣＤ２８２、ＣＤ２８３、ＣＤ２８４、ＣＤ２８５、ＣＤ２８６、ＣＤ２８７、ＣＤ２８８、ＣＤ２８９、ＣＤ２９０、ＣＤ２９１、ＣＤ２９２、ＣＤ２９３、ＣＤ２９４、ＣＤ２９５、ＣＤ２９６、ＣＤ２９７、ＣＤ２９８、ＣＤ２９９、ＣＤ３００、ＣＤ３０１、ＣＤ３０２、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４、ＣＤ３０５、ＣＤ３０６、ＣＤ３０７、ＣＤ３０８、ＣＤ３０９、ＣＤ３１０、ＣＤ３１１、ＣＤ３１２、ＣＤ３１３、ＣＤ３１４、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１８、ＣＤ３１９、及び／またはＣＤ３２０のうちの１種または複数種に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントなどを哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することを含む。
【０１３１】
第８、第９、及び／または第１０の態様の一部の実施形態では、方法は、ケモカインまたはリンフォカイン、例えば、腫瘍の増殖に関与するケモカインまたはリンフォカインなどに結合する薬剤（例えば、ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、またはその構築物）を哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することを含む。例えば、免疫療法剤は、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ８、ＣＣＬ２、及びＣＣＬ５のうちの１種もしくは複数種または全てに結合してその活性を阻害する薬剤（例えば、ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、またはその構築物）であってもよい。一部の実施形態では、免疫療法剤は、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ８、及びＣＣＬ２２のうちの１種もしくは複数種または全てに結合してその活性を阻害する薬剤（例えば、ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、またはその構築物）である。
【０１３２】
第８、第９、及び／または第１０の態様の一部の実施形態では、方法は、Ｍａｈｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，１４：５６１−５８４（２０１５）（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる）の表１に記載の免疫学的標的のうちの１種または複数種に特異的に結合することができる免疫療法剤を哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することを含む。例えば、免疫療法剤は、薬剤、例えば、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｓｉｎｇｌｅｃｓ、ＩＣＯＳ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＴＭＩＧＤ２、ＢＴＮＬ２、ＣＤ４８、ＫＩＲ、ＬＩＲ、ＬＩＲ抗体、ＩＬＴ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ａ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＣＤ２４４、ＣＳＦ１Ｒ、ＩＤＯ、ＴＧＦβ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＬ１２、ＳＩＲＰＡ、ＣＤ４７、ＶＥＧＦ、またはニューロピリンのうちの１種または複数種に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントなどであってもよい。
【０１３３】
第８、第９、及び／または第１０の態様の一部の実施形態では、方法は、ターグレチン、インターフェロン−α、クロベスタゾール、ペグインターフェロン（例えば、ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標））、プレドニゾン、ロミデプシン、ベキサロテン、メトトレキサート、トリムシノロンクリーム、抗ケモカイン、ボリノスタット、ガバペンチン、リンパ球系細胞表面受容体及び／またはリンフォカインに対する抗体、表面がんタンパク質に対する抗体、及びボリノスタットのような低分子治療薬からなる群から選択される免疫療法剤を哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することを含む。
【０１３４】
一部の実施形態では、方法は、ＣＡＲ−Ｔ薬、化学療法剤、低分子抗がん剤、またはがんワクチン、例えば、上記及び本明細書に記載のＣＡＲ−Ｔ薬、化学療法剤、低分子抗がん剤、またはがんワクチンなどを哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することを含む。
【０１３５】
一部の実施形態では、ＴＮＦＲ２に特異的に結合するポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物などは、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの量、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇなどの量で哺乳動物（例えば、ヒト）に投与される。
【０１３６】
第１１の態様は、第１の態様またはその任意の実施形態のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）、第２の態様またはその任意の実施形態の構築物、第３の態様またはその任意の実施形態のポリヌクレオチド、第４の態様またはその任意の実施形態のベクター、第５の態様またはその任意の実施形態の宿主細胞、及び／または、第６の態様またはその任意の実施形態の医薬組成物を含有するキットを特徴とする。
【０１３７】
一部の実施形態では、キットは、ベクターを宿主細胞にトランスフェクションするための取扱説明書を含有する。追加的にまたは代替的に、キットは、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）を宿主細胞内で発現させるための取扱説明書を含有していてもよい。キットは、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）を宿主細胞内で発現させるのに使用可能な試薬を含んでいてもよい。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載の細胞増殖障害及び／または感染症を患う哺乳動物（例えば、ヒト）、例えば、ヒト患者などに薬剤を投与するための取扱説明書を含む。一部の実施形態では、キットは、薬剤を作製または使用するための取扱説明書を含有する。
【０１３８】
定義
本明細書で使用する場合、用語「約」とは、記載する値の１０％超以下または１０％未満以下の値のことを意味する。例えば、用語「約５ｎＭ」は、４．５ｎＭ〜５．５ｎＭの範囲を示す。
【０１３９】
本明細書で使用する場合、用語「抗体」（Ａｂ）とは、特定の抗原に特異的に結合するまたは特定の抗原と免疫学的に反応する免疫グロブリン分子のことを意味し、キメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体、三重特異性抗体、及び四重特異性抗体、ディアボディ、トリアボディ、ならびにテトラボディ）、ならびに、例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒｌｇＧ、及びｓｃＦｖフラグメントを含む、抗体の抗原結合フラグメントを含むがこれらに限定されないポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、遺伝子改変抗体、及び別様に修飾された形態の抗体を含む。更に、特に明記しない限り、用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）とは、標的タンパク質に特異的に結合可能なインタクト分子と、標的タンパク質に特異的に結合可能な抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント及びＦ（ａｂ’）２フラグメントなど）の両方を含むことを意味する。Ｆａｂフラグメント及びＦ（ａｂ’）２フラグメントは、インタクト抗体のＦｃフラグメントを欠いており、インタクト抗体と比較して、動物の循環血液からより速やかに排出され、より低い非特異的組織結合性を示し得る（Ｗａｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４：３１６，１９８３（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
【０１４０】
用語「抗原結合フラグメント」とは、本明細書で使用する場合、標的抗原に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つまたは複数のフラグメントのことを意味する。抗体の抗原結合機能は、全長抗体のフラグメントにより実施され得る。抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、ディアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、またはドメイン抗体であってもよい。用語抗体の「抗原結合フラグメント」に包含される結合フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメイン、及びＣＨ１ドメインで構成される一価フラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域のジスルフィド架橋により連結した２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインで構成されるＦｄフラグメント、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメイン及びＶＨドメインで構成されるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含むｄＡｂ、（ｖｉ）ＶＨドメインで構成されるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９８９）、（ｖｉｉ）ＶＨドメインまたはＶＬドメインで構成されるｄＡｂ、（ｖｉｉｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び（ｉｘ）合成リンカーにより任意選択的に連結していてもよい２つまたはそれ以上の単離ＣＤＲの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。更に、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬ及びＶＨが別々の遺伝子によってコードされていたとしても、組換え法を用いて、ＶＬ領域及びＶＨ領域のペアが一価分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られており、例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６，１９８８，及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３，１９８８を参照のこと）を形成する単一のタンパク質鎖へとそれらＶＬ及びＶＨを生成可能なリンカーにより、それらＶＬ及びＶＨを連結させることができる。当業者に周知の通常の技術を用いてこれらの抗体フラグメントを得てもよく、インタクト抗体の場合と同じ方法で、実用性のためにフラグメントをスクリーニングしてもよい。組換えＤＮＡ技術、インタクト免疫グロブリンの酵素的開裂もしくは化学的開裂、または、一部の実施形態では、当該技術分野において周知の化学的ペプチド合成法を用いて、抗原結合フラグメントを作製してもよい。
【０１４１】
本明細書で使用する場合、用語「抗腫瘍壊死因子受容体２抗体」、「ＴＮＦＲ２抗体」、「抗ＴＮＦＲ２抗体部分」、及び／または「抗ＴＮＦＲ２抗体フラグメント」などは、免疫グロブリン分子の少なくとも一部、限定するわけではないが例えば、ＴＮＦＲ２に特異的に結合可能な、重鎖もしくは軽鎖またはそのリガンド結合部分の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖可変領域もしくは軽鎖可変領域、重鎖定常領域もしくは軽鎖定常領域、またはその任意の部分などを含む、任意のタンパク質またはペプチド含有分子を含む。例えば、免疫グロブリン分子の２つまたはそれ以上の部分は、例えば、アミド結合、チオエーテル結合、炭素−炭素結合、ジスルフィド架橋、またはリンカー、例えば、本明細書に記載または当該技術分野において周知のリンカーなどにより、互いに共有結合していてもよい。ＴＮＦＲ２抗体としてはまた、抗体様タンパク質スキャフォールド、例えば、構造及び溶媒露出度が抗体ＣＤＲに類似したＢＣ、ＤＥ、及びＦＧ構造ループを含有する第１０番目のフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（１０Ｆｎ３）などが挙げられる。１０Ｆｎ３ドメインの三次構造はＩｇＧ重鎖の可変領域の三次構造に類似しており、当業者は、例えば、１０Ｆｎ３のＢＣ、ＤＥ及びＦＧループの残基を、ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、またはＣＤＲ−Ｈ３領域に由来する残基に置き換えることによって、フィブロネクチンスキャフォールド上にＴＮＦＲ２モノクローナル抗体のＣＤＲをグラフトすることができる。
【０１４２】
本明細書で使用する場合、用語「アンタゴニストＴＮＦＲ２抗体」及び「アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体」とは、ＴＮＦＲ２の活性化を阻害または抑制する、ＴＮＦＲ２が関与する１つまたは複数のシグナル伝達経路を減弱させる、及び／またはＴＮＦＲ２の活性化が関与する少なくとも１つの活性を抑制または阻害することが可能なＴＮＦＲ２抗体のことを意味する。例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体は、制御性Ｔ細胞の成長及び増殖を阻害または抑制し得る。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体は、ＴＮＦＲ２がＴＮＦαに結合するのを阻害することにより、ＴＮＦＲ２活性化を阻害または抑制し得る。この様式において、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体は、さもなければＴＮＦαとの相互作用により誘導され得るＴＮＦＲ２の三量体化を阻害することにより、ＴＮＦＲ２活性の抑制をもたらし得る。
【０１４３】
本明細書で使用する場合、用語「二重特異性抗体」とは、少なくとも２種の異なる抗原に対する結合特異性を有する抗体（例えば、モノクローナル抗体、多くの場合、ヒト抗体またはヒト化抗体）のことを意味する。例えば、結合特異性のうちの一方はＴＮＦＲ２に向かっていてもよく、もう一方は、任意のその他の抗原、例えば、細胞表面タンパク質、受容体、受容体サブユニット、組織特異的抗原、ウイルス由来タンパク質、ウイルスがコードするエンベロープタンパク質、細菌由来タンパク質、または細菌表面タンパク質などに対するものであってもよい。
【０１４４】
本明細書で使用する場合、語句「化学療法剤」とは、がん、例えば、本明細書に記載のがんなどの治療において治療的有用性を有する任意の化学的薬剤のことを意味する。化学療法剤は化学的薬剤と生物学的薬剤の両方を包含する。これらの薬剤は、生存し続けるためにがん細胞が依存している細胞活性を阻害するように機能し得る。化学療法剤のカテゴリーとしては、アルキル化／アルカロイド剤、代謝拮抗薬、ホルモン、ホルモン類似体、及び抗腫瘍剤が挙げられる。本明細書に記載の組成物及び方法と共に用いるのに好適な例示的な化学療法剤としては、Ｓｌａｐａｋ  ａｎｄ  Ｋｕｆｅ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ８６  ｉｎ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｐｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ，Ｃｈａｐｔｅｒ  １７  ｉｎ  Ａｂｅｌｏｆｆ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２ｎｄ  ｅｄ．，２０００；Ｂａｌｔｚｅｒ  Ｌ．ａｎｄ  Ｂｅｒｋｅｒｙ  Ｒ．（ｅｄｓ）：Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｐｏｃｋｅｔ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ，２ｎｄ  ｅｄ．Ｓｔ．Ｌｕｏｉｓ，ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ  Ｂｏｏｋ，１９９５；Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｄ．Ｓ．，Ｋｎｏｂｆ  Ｍ．Ｆ．，Ｄｕｒｉｖａｇｅ  Ｈ．Ｊ．（ｅｄｓ）：Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，４ｔｈ  ｅｄ．Ｓｔ．Ｌｕｏｉｓ，Ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ（化学療法剤に関する場合、そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載の化学療法剤が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１４５】
本明細書で使用する場合、用語「キメラ」抗体とは、ある供給源生物、例えば、ラットまたはマウスなどの免疫グロブリンに由来する可変ドメイン配列（例えば、ＣＤＲ配列）、及び、異なる生物（例えば、とりわけ、ヒト、別の霊長類、ブタ、ヤギ、ウサギ、ハムスター、ネコ、イヌ、モルモット、ウシ科のメンバー（例えば、とりわけ、ウシ、バイソン、スイギュウ、ヘラジカ、及びヤクなど）、雌ウシ、ヒツジ、ウマ、またはバイソン）の免疫グロブリンに由来する定常領域を有する抗体のことを意味する。キメラ抗体を作製するための方法は当該技術分野において周知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９（４７１９）：１２０２−７；Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４−２２１；Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ，１９８５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２；米国特許第５，８０７，７１５号；第４，８１６，５６７号；及び第４，８１６，３９７号（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０１４６】
本明細書で使用する場合、用語「相補性決定領域」（ＣＤＲ）とは、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方に存在する超可変領域のことを意味する。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。当該技術分野において理解されていることだが、抗体の超可変領域を示すアミノ酸位置は、文脈及び当該技術分野において周知の様々な定義に応じて変化し得る。可変ドメイン内の一部の位置は、これらの位置が、ある一連の基準のもとで超可変領域内にあるとみなされ得る一方で、異なる一連の基準のもとでは超可変領域外にあるとみなされ得ることから、ハイブリッド超可変位置とみなされ得る。これらの位置のうちの１つまたは複数はまた、延長超可変領域内に存在し得る。本明細書に記載の抗体は、これらのハイブリッド超可変位置内に修飾を含んでいてもよい。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、βシート構造に結合するループを形成する３つのＣＤＲによって結合した、場合によってはβシート構造の一部を形成する３つのＣＤＲによって結合した、主にβシート構造をとる４つのフレームワーク領域を含む。それぞれの分子鎖内のＣＤＲは、ＦＲ領域により、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順で共に近接して維持されており、もう一方の抗体鎖のＣＤＲと共に、抗体の標的結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．１９８７）（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。本明細書で使用する場合、免疫グロブリンアミノ酸残基のナンバリングは、特に明記しない限り、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌの免疫グロブリンアミノ酸残基ナンバリングシステムに従って行う。
【０１４７】
本明細書で使用する場合、用語「保存的変異」、「保存的置換」、または「保存的アミノ酸置換」とは、１つまたは複数のアミノ酸の、類似した物理化学的特性、例えば、極性、静電荷、及び立体容積などを示す１つまたは複数の異なるアミノ酸への置換のことを意味する。これらの特性については、２０種の天然アミノ酸のそれぞれについて以下の表２にまとめている。
【０１４８】
2021534757.tif 000015
2021534757.tif 000016
【０１４９】
この表から、保存的アミノ酸ファミリーとしては、例えば、（ｉ）Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、及びＭ、（ｉｉ）Ｄ及びＥ、（ｉｉｉ）Ｃ、Ｓ及びＴ、（ｉｖ）Ｈ、Ｋ及びＲ、（ｖ）Ｎ及びＱ、ならびに（ｖｉ）Ｆ、Ｙ及びＷが挙げられるということが理解されよう。それゆえ、保存的変異または保存的置換は、１つのアミノ酸を同一アミノ酸ファミリーのメンバーに置換した（例えば、ＳｅｒのＴｈｒへの置換、またはＬｙｓのＡｒｇへの置換）保存的変異または保存的置換である。
【０１５０】
本明細書において、アミノ酸置換を取り決め：（ＡＡ１）（Ｎ）（ＡＡ２）を用いて表してもよく、「ＡＡ１」は、アミノ酸配列内の特定の部位に通常は存在するアミノ酸を表し、「Ｎ」は、置換が生じたアミノ酸配列内の残基番号を表し、「ＡＡ２」は、置換が生じた後にアミノ酸配列内に存在するアミノ酸を表す。例えば、抗体ヒンジ領域、例えば、ＩｇＧ２抗体ヒンジ領域などに関する表記「Ｃ２３２Ｓ」とは、指定ヒンジアミノ酸配列のアミノ酸残基２３２における天然システイン残基のセリン残基への置換のことを意味する。同様に、抗体ヒンジ領域、例えば、ＩｇＧ２抗体ヒンジ領域などに関する表記「Ｃ２３３Ｓ」とは、指定ヒンジアミノ酸配列のアミノ酸残基２３３における天然システイン残基のセリン残基への置換のことを意味する。
【０１５１】
本明細書で使用する場合、用語「コンジュゲート」とは、ある分子の反応性官能基が別の分子の適切な反応性官能基と化学結合することによって形成された化合物のことを意味する。
【０１５２】
ＴＮＦＲ２アンタゴニストに関して本明細書で使用する場合、用語「構築物」とは、第２のポリペプチドドメインに結合した第１のポリペプチドドメインを含有する融合タンパク質のことを意味する。ポリペプチドドメインはそれぞれ独立して、例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２一本鎖ポリペプチドであってもよい。第１のポリペプチドドメインは、例えば、リンカー、例えば、とりわけペプチドリンカーまたはジスルフィド架橋などにより、第２のポリペプチドドメインに結合していてもよい。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２構築物のポリペプチドドメインを連結させるのに用いてもよい例示的なリンカーとしては、Ｌｅｒｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０：５７１−５８２（２０１２）（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載のリンカーが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１５３】
本明細書で使用する場合、用語「誘導体化抗体」とは、化学反応によって、残基が開裂するように、または天然ではない化合物部分が単離抗体に付加されるように修飾された抗体のことを意味する。誘導体化抗体は、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、周知の化学的な保護基／ブロック基を付加することによる誘導体化、タンパク質分解開裂、細胞リガンドまたはその他のタンパク質への結合によって得ることができる。限定するわけではないが、特定の化学的開裂、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含む周知の技術を用い、確立された手法を使用して、様々な化学修飾のいずれかを実施してもよい。加えて、例えば、アンバーサプレッション法（例えば、米国特許第６，９６４，８５９号（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）を用いて、誘導体に１種または複数種の非天然アミノ酸を含ませてもよい。
【０１５４】
本明細書で使用する場合、用語「ディアボディ」とは、同一ペプチド鎖上のＶＨドメイン及びＶＬドメインの分子内結合が可能となるには短すぎるリンカー（例えば、５つのアミノ酸で構成されるリンカー）によって連結したＶＨドメイン及びＶＬドメインをそれぞれのポリペプチド鎖が含む、２つのポリペプチド鎖を含む二価抗体のことを意味する。この構造は、ホモ二量体構造が形成されるように、それぞれのドメインが別のポリペプチド鎖上の相補ドメインとペアをなすように強制する。それゆえ、用語「トリアボディ」とは、３つのペプチド鎖を含む三価抗体のことを意味し、ペプチド鎖のそれぞれは、同一ペプチド鎖内のＶＨドメイン及びＶＬドメインの分子内結合が可能となるには極めて短いリンカー（例えば、１〜２つのアミノ酸で構成されるリンカー）によって連結した１つのＶＨドメイン及び１つのＶＬドメインを含む。このように構成されたペプチドは通常、その天然構造へとフォールディングするために、隣接するペプチド鎖のＶＨドメイン及びＶＬドメインが空間的に互いに近接して位置することによって適切なフォールディングが可能となるように三量体化している（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−４８，１９９３（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
【０１５５】
本明細書で使用する場合、抗体またはその抗原結合フラグメントの「ジスルフィド結合アイソフォーム」は、特定の内部ジスルフィド結合パターンを有する、抗体またはその抗原結合フラグメントの形態である。ジスルフィド結合アイソフォームは、アミノ酸配列において互いに異なるものではないが異なるジスルフィド結合の結合性を示す、任意の抗体またはその抗原結合フラグメントの構造異性体である。例えば、ヒトＩｇＧ２抗体またはそのバリアントに関して、抗体は、本明細書においてアイソフォームＩｇＧ２−Ａ、ＩｇＧ２−Ｂ、ＩｇＧ２−Ａ／Ｂ１、及びＩｇＧ２−Ａ／Ｂ２と表される４つの発生し得るジスルフィド結合アイソフォームのうちの１つで存在し得る。これらアイソフォームのそれぞれの内部におけるジスルフィド結合の結合性を図１３Ａ〜図１３Ｄに図示する。
【０１５６】
本明細書で使用する場合、ＴＮＦＲ２の「支配的アンタゴニスト」は、ＴＮＦＲ２アゴニスト、例えば、ＴＮＦαまたはＩＬ−２などの存在下であってもＴＮＦＲ２活性化を阻害することができるアンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト性ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメントなど）である。例えば、ＴＮＦＲ２アゴニスト、例えば、ＴＮＦαまたはＩＬ−２などの不在下における同一アッセイで測定したアンタゴニストのＩＣ５０と比較して、ＴＮＦＲ２アゴニスト（例えば、ＴＮＦα）またはＩＬ−２の存在下におけるアンタゴニストのＩＣ５０が２００％未満（例えば、２００％未満、１００％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、１％未満、またはそれ以下）高くなる場合、そのＴＮＦＲ２アンタゴニストは支配的アンタゴニストである。ＴＮＦＲ２活性化の阻害は、例えば、ＴＮＦＲ２＋細胞、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＴＮＦＲ２を発現するがん細胞、または骨髄由来抑制細胞などの増殖の阻害を測定することに加えて、ＮＦκＢシグナル伝達の阻害を測定することによって（例えば、通常の遺伝子発現アッセイを用いて、ＣＨＵＫ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＦＫＢＩＡ、ＭＡＰ３Ｋ１１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ｒｅｌＢ、及びｃＩＡＰ２／ＢＩＲＣ３からなる群から選択される１種または複数種の遺伝子の発現の低下をモニターすることによって）、評価することができる。
【０１５７】
本明細書で使用する場合、「デュアル可変ドメイン免疫グロブリン」（「ＤＶＤ−Ｉｇ」）とは、四価のデュアル標的化単一因子を作製するために２つのモノクローナル抗体の標的結合可変ドメインをリンカーを介して結合させた抗体のことを意味する（Ｇｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，５０２：２５−４１，２０１２（参照により本明細書に組み込まれる））。本明細書に記載のＤＶＤの軽鎖に用いる好適なリンカーとしては、Ｇｕ  ｅｔ  ａｌ．の３０ページの表２．１において特定されるリンカー：短Ｋ鎖リンカーＡＤＡＡＰ（配列番号：１１８）（マウス）及びＴＶＡＡＰ（配列番号：１１９）（ヒト）；長κ鎖リンカーＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰ（配列番号：１２０）（マウス）及びＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号：１２１）（ヒト）；短λ鎖リンカーＱＰＫＡＡＰ（配列番号：１２２）（ヒト）；長λ鎖リンカーＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号：１２３）（ヒト）；ＧＳ−短リンカーＧＧＳＧＧ（配列番号：１２４）、ＧＳ−中リンカーＧＧＳＧＧＧＧＳＧ（配列番号：１２５）、及びＧＳ−長リンカーＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：１２６）（全てのＧＳリンカーはマウス及びヒトである）が挙げられる。ＤＶＤの重鎖に用いる好適なリンカーとしては、Ｇｕ  ＆  Ｇｈａｙｕｒ，２０１２，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ５０２：２５−４１（参照により本明細書に組み込まれる）の３０ページの表２．１において特定されるリンカー：短リンカーＡＫＴＴＡＰ（配列番号：１２７）（マウス）及びＡＳＴＫＧＰ（配列番号：１２８）（ヒト）；長リンカーＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号：１２９）（マウス）及びＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号：１３０）（ヒト）；ＧＳ−短リンカーＧＧＧＧＳＧ（配列番号：１３１）、ＧＳ−中リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：２６）、及びＧＳ−長リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号：１３３）（全てのＧＳリンカーはマウス及びヒトである）が挙げられる。
【０１５８】
本明細書で使用する場合、用語「内在性」は、特定の生物（例えば、ヒト）内または生物内の特定の場所（例えば、器官、組織、または細胞、例えば、ヒト細胞など）に、天然に存在する分子（例えば、ポリペプチド、核酸、または補因子）を表している。
【０１５９】
本明細書で使用する場合、用語「エピトープ」とは、ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、または構築物などが認識及び結合する、抗原の一部のことを意味する。タンパク質抗原（例えば、ＴＮＦＲ２など、例えば、配列番号：７が示すヒトＴＮＦＲ２、または、非ヒト哺乳動物、例えば、本明細書に記載の非ヒト哺乳動物などのＴＮＦＲ２）との関係において、エピトープは、全ての構成アミノ酸がポリペプチド（例えば、抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、またはその構築物）に結合している、ペプチド結合により互いに共有結合で連結した１つまたは複数のアミノ酸の単一の途切れないセグメントである連続エピトープであってもよい。抗原内の特定のアミノ酸へのアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの結合性を測定するための例示的なアッセイについては、以下の実施例１に記載する。連続エピトープは、例えば、抗原、例えば、本明細書に記載のＴＮＦＲ２タンパク質（例えば、配列番号：７が示すヒトＴＮＦＲ２）などの内部の１、５、１０、１５、２０、またはそれ以上のアミノ酸で構成されていてもよい。例えば、連続エピトープは、抗原内の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、またはそれ以上のアミノ酸で構成されていてもよい。本明細書に記載のアンタゴニスト性ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）が結合するＴＮＦＲ２上の連続エピトープの例としては、ＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩモチーフ（配列番号：２８８）の１つもしくは複数の連続残基または全ての残基、ＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬモチーフ（配列番号：２８９）の１つもしくは複数の連続残基または全ての残基、及びＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡモチーフ（配列番号：２９０）の１つもしくは複数の連続残基または全ての残基、ならびに非ヒト哺乳動物（例えば、バイソン、ウシ、及び本明細書に記載のその他非ヒト哺乳動物）のＴＮＦＲ２タンパク質上の対応する領域が挙げられる。一部の実施形態では、エピトープは、抗原のアミノ酸配列において１つまたは複数の介在アミノ酸残基分それぞれ互いに離れた２つまたはそれ以上のセグメントのアミノ酸を含有する非連続エピトープであってもよい。非連続エピトープは、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のこのようなセグメントのアミノ酸残基、例えば、ＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩモチーフ（配列番号：２８８）、ＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬモチーフ（配列番号：２８９）、及びヒトＴＮＦＲ２内のＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡモチーフ（配列番号：２９０）、ならびに非ヒト哺乳動物（例えば、バイソン、ウシ、及び本明細書に記載のその他非ヒト哺乳動物）のＴＮＦＲ２タンパク質上の対応する領域のうちの１つまたは複数の内部に由来するアミノ酸を含有する１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）のセグメントなどで構成されていてもよい。介在アミノ酸によるこの分離にもかかわらず、非連続エピトープで構成されるセグメントは、例えば、抗原の三次元構造において空間的に互いに近接していてもよい。本明細書に記載のアンタゴニスト性ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）が結合するＴＮＦＲ２上の例示的な非連続エピトープとしては、以下のエレメント：（ｉ）ＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩモチーフ（配列番号：２８８）の１つもしくは複数の残基または全ての残基、（ｉｉ）ＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬモチーフ（配列番号：２８９）の１つもしくは複数の残基または全ての残基、及び（ｉｉｉ）ＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡモチーフ（配列番号：２９０）の１つもしくは複数の残基または全ての残基、を含有するエピトープが挙げられる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）が結合するＴＮＦＲ２上の非連続エピトープの別の例としては、上記のエレメント（ｉ）及び（ｉｉ）を含有するエピトープ、上記のエレメント（ｉ）及び（ｉｉｉ）を含有するエピトープ、及び上記のエレメント（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）を含有するエピトープが挙げられる。
【０１６０】
本明細書で使用する場合、用語「外来」は、特定の生物（例えば、ヒト）内または生物内の特定の場所（例えば、器官、組織、または細胞、例えば、ヒト細胞など）に、天然に存在しない分子（例えば、ポリペプチド、核酸、または補因子）を表している。外来物質としては、外部の供給源から生物にもたらされた外来物質、またはその外来物質から抽出された培養物質が挙げられる。
【０１６１】
本明細書で使用する場合、用語「フレームワーク領域」または「ＦＷ領域」としては、ＣＤＲに隣接したアミノ酸残基が挙げられる。ＦＷ領域残基は、例えば、とりわけ、ヒト抗体、げっ歯類由来抗体（例えば、マウス抗体）、ヒト化抗体、霊長類化抗体、キメラ抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント）、一本鎖抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖフラグメント）、抗体ドメイン、及び二重特異性抗体、の内部に存在していてもよい。
【０１６２】
本明細書で使用する場合、用語「融合タンパク質」とは、共有結合によって別の分子に連結したタンパク質のことを意味する。融合タンパク質は、例えば、あるタンパク質のＮ末端と別のタンパク質のＣ末端の間のアミド結合形成反応を用いて、化学合成することができる。代替的に、ベクターまたは細胞のゲノムからの、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの発現により、別のタンパク質に共有結合したあるタンパク質を含有する融合タンパク質を、細胞（例えば、真核細胞または原核細胞）内で組換え的に発現させることができる。融合タンパク質は、リンカーに共有結合した（更にそのリンカーが別の分子に共有結合した）あるタンパク質を含有していてもよい。融合タンパク質の形成に使用可能なリンカーの例としては、ペプチド含有リンカー、例えば、天然アミノ酸または非天然アミノ酸を含有するペプチド含有リンカーなどが挙げられる。一部の実施形態では、Ｄ−アミノ酸残基が天然タンパク質内には存在せず、それにより、内在性プロテアーゼによる分解により耐性を示していることから、リンカー内にそれらＤ−アミノ酸を含ませることが望ましい場合がある。当該技術分野において周知でありリンカーの反応構成要素に依存する様々な戦略を用いてリンカーを調製することができ、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下の加水分解、塩基性条件下の加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核開裂、または有機金属開裂により、リンカーを開裂させることができる（Ｌｅｒｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０：５７１−５８２，２０１２）。
【０１６３】
本明細書で使用する場合、用語「ヘテロ特異性抗体」とは、少なくとも２種の異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくは、ヒト抗体またはヒト化抗体のことを意味する。従来より、ヘテロ特異性抗体の組換え産生は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアの共発現をベースとしており、そこで、２つの重鎖は異なる特異性を有している（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７，１９８３）。類似の手法については、例えば、ＷＯ９３／０８８２９、米国特許第６，２１０，６６８号、第６，１９３，９６７号、第６，１３２，９９２号、第６，１０６，８３３号、第６，０６０，２８５号、第６，０３７，４５３号、第６，０１０，９０２号、第５，９８９，５３０号、第５，９５９，０８４号、第５，９５９，０８３号、第５，９３２，４４８号、第５，８３３，９８５号、第５，８２１，３３３号、第５，８０７，７０６号、第５，６４３，７５９号、第５，６０１，８１９号、第５，５８２，９９６号、第５，４９６，５４９号、第４，６７６，９８０号、ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／００３７３、ＥＰ０３０８９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１），Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０（１９８６）（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。ヘテロ特異性抗体は、Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ，ｍＡｂｓ  ４（６）：６５３−６６３，２０１２（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているとおり、多重特異性抗体における正確な分子鎖結合を強制するＦｃ変異を含んでいてもよい。
【０１６４】
本明細書で使用する場合、用語「ヒンジ領域」とは、抗体またはその抗原結合フラグメントの抗原結合部位（複数可）、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントのＦａｂ領域、及び、抗体またはその抗原結合フラグメントのアイソタイプを決定する抗体またはその抗原結合フラグメントの部分、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントのＦｃ領域などの間に位置する、抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ＩｇＧ２抗体またはその抗原結合フラグメント）のドメインのことを意味する。例えば、モノクローナル抗体との関係において、ヒンジ領域は、それぞれの重鎖のほぼ中央に位置し、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインに連結するポリペプチドである。抗体またはその抗原結合フラグメントのヒンジ領域は、抗体またはその抗原結合フラグメントの分子鎖間の化学結合をもたらし得る。例えば、モノクローナル抗体において、ヒンジ領域内のシステイン残基は、鎖間ジスルフィド結合を形成することにより、重鎖間の明確な共有結合をもたらす。野生型ヒトＩｇＧ２のアミノ酸配列はＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号：２９２）である。本明細書で使用する場合、抗体ヒンジ領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．１９８７）（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）のナンバリングシステムに従ってナンバリングされる。例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌのナンバリングスキームを用いると、配列番号：２９２に記載の野生型ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域は残基２２６から残基２４３までナンバリングされ、その結果、配列番号：２９２のＮ末端グルタミン酸残基は残基２２６となり、配列番号：２９２のＣ末端プロリン残基は残基２４３となる。本開示の全体にわたり、バリアントＩｇＧ２ヒンジ領域、例えば、配列番号：２９１（ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ）に記載のバリアントなどは、反対のことを明確に明記しない限り、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌの取り決めに従ってナンバリングされる。
【０１６５】
本明細書で使用する場合、用語「ヒト抗体」とは、わずかに小さな配列の変化または変異を有しているが、タンパク質（例えば、ＣＤＲ、フレームワーク、ＣＬ、ＣＨドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）、ヒンジ、（ＶＬ、ＶＨ））の実質的に全ての部分がヒトにおいて実質的に非免疫原性である抗体のことを意味する。ヒト抗体は、ヒト細胞を用いて（例えば、組換え発現により）、または、機能的に再構成されたヒト免疫グロブリン（例えば、重鎖及び／または軽鎖）遺伝子を発現することができる非ヒト動物細胞または原核細胞もしくは真核細胞を用いて、作製することができる。更に、ヒト抗体が一本鎖抗体である場合、そのヒト抗体は、天然ヒト抗体内には存在しないリンカーペプチドを含んでいてもよい。例えば、Ｆｖは、重鎖の可変領域及び軽鎖の可変領域を連結させるリンカーペプチド、例えば、２〜約８つのグリシンまたはその他のアミノ酸残基などを含んでいてもよい。このようなリンカーペプチドはヒト起源であると考えられる。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを使用したファージディスプレイ法を含む当該技術分野において周知の様々な方法を用いて作製することができる。米国特許第４，４４４，８８７号及び第４，７１６，１１１号、ならびにＰＣＴ公開ＷＯ１９９８／４６６４５、ＷＯ１９９８／５０４３３、ＷＯ１９９８／２４８９３、ＷＯ１９９８／１６６５４、ＷＯ１９９６／３４０９６、ＷＯ１９９６／３３７３５、及びＷＯ１９９１／１０７４１（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。ヒト抗体はまた、機能性内在免疫グロブリンを発現することはできないがヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを用いて、作製することができる。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、米国特許第５，４１３，９２３号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，５６９，８２５号、第５，６６１，０１６号、第５，５４５，８０６号、第５，８１４，３１８号、第５，８８５，７９３号、第５，９１６，７７１号、及び第５，９３９，５９８号（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０１６６】
本明細書で使用する場合、用語「ヒト化」抗体とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体のその他の標的結合サブドメインなど）である、非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態のことを意味する。一般的に、ヒト化抗体は、全てまたはほぼ全てのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応する、少なくとも１つの、通常は２つの可変ドメインのほぼ全てを含む。全てまたはほぼ全てのＦＲ領域はまた、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域であってもよい。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常は、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体をヒト化するための方法は当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−７，１９８８；Ｑｕｅｅｎｅｔａｌの米国特許第５，５３０，１０１号、第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号、及び第６，１８０，３７０号、ＥＰ２３９４００、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７、米国特許第５，２２５，５３９号、ＥＰ５９２１０６、及びＥＰ５１９５９６（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０１６７】
本明細書で使用する場合、用語「疎水性側鎖」とは、例えば、側鎖内に存在する化合物部分の立体または電気的特性により、水中における相対的に低い溶解性を示すアミノ酸側鎖のことを意味する。疎水性側鎖を含有するアミノ酸の例としては、不飽和脂肪族炭化水素を含有するアミノ酸、例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、及びメチオニンなどに加えて、生理学的ｐＨにおいて静電気的に中性の芳香族環系を含有するアミノ酸、例えば、トリプトファン、フェニルアラニン、及びチロシンなどが挙げられる。
【０１６８】
本明細書で使用する場合、用語「免疫療法剤」とは、免疫チェックポイントタンパク質（例えば、免疫チェックポイント受容体または免疫チェックポイントリガンド）に特異的に結合し、その受容体またはリガンドに対するアンタゴニスト作用を発揮することにより、さもなければ免疫応答の下方制御をもたらし得るその受容体またはリガンドのシグナル伝達を低下または阻害する、化合物、例えば、本明細書に記載の抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、または構築物などのことを意味する。免疫療法剤としては、造血細胞、例えば、リンパ球（例えば、Ｔ細胞）などの表面上に発現した受容体に特異的に結合して、さもなければ内在性（「自己」）抗原、例えば、腫瘍関連抗原などに対する免疫寛容を引き起こし得る受容体またはリガンドが誘導するシグナル伝達を抑制することができる、化合物、例えば、抗体、抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、及び構築物などが挙げられる。免疫療法剤は、受容体またはリガンドが誘導するシグナル伝達を、免疫療法剤の不在下で示される受容体またはリガンドが誘導するシグナル伝達と比較して、例えば、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％低下させ得る。受容体またはリガンドのシグナル伝達の度合いを測定するのに使用可能な例示的なアッセイとしては、例えば、とりわけ、特定のシグナル伝達経路が関与するタンパク質発現の変化を測定するための酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）技術、ならびに、特定のシグナル伝達経路が関与する遺伝子発現の変化を測定するのに有用なポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）をベースとした技術、例えば、定量ＰＣＲ実験、逆転写ＰＣＲ実験、及びリアルタイムＰＣＲ実験などが挙げられる。薬剤が「免疫療法剤」であるかどうかを確認するのに使用可能な例示的な方法としては、Ｍａｈｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，１４：５６１−５８４（２０１５）（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載のアッセイが挙げられる。免疫療法剤の例としては、例えば、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｓｉｎｇｌｅｃｓ、ＩＣＯＳ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＴＭＩＧＤ２、ＢＴＮＬ２、ＣＤ４８、ＫＩＲ、ＬＩＲ、ＬＩＲ抗体、ＩＬＴ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ａ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＣＤ２４４、ＣＳＦ１Ｒ、ＩＤＯ、ＴＧＦβ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＬ１２、ＳＩＲＰＡ、ＣＤ４７、ＶＥＧＦ、及びニューロピリンのうちの１種または複数種に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが挙げられる。免疫療法剤の別の例としては、ターグレチン、インターフェロン−α、クロベスタゾール、ペグインターフェロン（例えば、ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標））、プレドニゾン、ロミデプシン、ベキサロテン、メトトレキサート、トリムシノロンクリーム、抗ケモカイン、ボリノスタット、ガバペンチン、リンパ球系細胞表面受容体及び／またはリンフォカインに対する抗体、表面がんタンパク質に対する抗体、及び��または、ボリノスタットのような低分子治療薬が挙げられる。本明細書に記載の組成物及び方法と共に使用可能な免疫療法剤の特定の例としては、抗ＰＤ−１抗体及びその抗原結合フラグメント、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及びアテゾリズマブなどに加えて、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及びその抗原結合フラグメント、例えば、アテゾリズマブ及びアベルマブなど、ならびに、抗ＣＴＬＡ−４抗体及びその抗原結合フラグメント、例えば、イピリムマブまたはトレメリムマブなどが挙げられる。
【０１６９】
本明細書で使用する場合、用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核細胞クローン、原核細胞クローン、またはファージクローンを含む単一クローンに由来する抗体のことを意味し、モノクローナル抗体を作製する方法のことではない。
【０１７０】
本明細書で使用する場合、用語「多重特異性抗体」とは、２種以上の標的抗原に対する親和性を示す抗体のことを意味する。多重特異性抗体は、完全な免疫グロブリン分子に類似した構造を有し得、Ｆｃ領域、例えば、ＩｇＧ  Ｆｃ領域を含み得る。このような構造としては、ＩｇＧ−Ｆｖ、ＩｇＧ−（ｓｃＦｖ）２、ＤＶＤ−Ｉｇ、（ｓｃＦｖ）２−（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃ、及び（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃ−（ｓｃＦｖ）２を挙げることができるがこれらに限定されない。ＩｇＧ−（ｓｃＦｖ）２の場合、ｓｃＦｖは、重鎖または軽鎖のいずれかのＮ末端またはＣ末端のいずれかに結合させることができる。Ｆｃ領域を含み、かつ抗ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを組み込むことができる、例示的な多重特異性分子については、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，２０１２，ｍＡｂｓ  ４（２）：１８２−１９７，Ｙａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ，２０１３，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ  ＆  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ２６（３）：１８７−１９３，及びＧｒｏｔｅ  ｅｔ  ａｌ，２０１２，ｉｎ  Ｐｒｏｅｔｚｅｌ  ＆  Ｅｂｅｒｓｂａｃｈ（ｅｄｓ．），Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．９０１，ｃｈａｐｔｅｒ  １６：２４７−２６３（参照により本明細書に組み込まれる）によって考察されている。一部の実施形態では、抗体フラグメントは、ＩｇＧまたはＤＶＤもしくはｓｃＦｖのフラグメントをベースとした、Ｆｃ領域を含まない多重特異性分子の構成要素であってもよい。Ｆｃ領域を欠き、かつ抗体または抗体フラグメントを組み込むことができる、例示的な多重特異性分子としては、Ｈｕｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｓｏｕｒｉａｕ，２００３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ９：１２９−１３４（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているｓｃＦｖ二量体（ディアボディ）、三量体（トリアボディ）、及び四量体（テトラボディ）、Ｆａｂ二量体（接着性のポリペプチドまたはタンパク質ドメインによるコンジュゲート）及びＦａｂ三量体（化学的にコンジュゲートした）が挙げられる。
【０１７１】
本明細書で使用する場合、用語「骨髄由来抑制細胞」または「ＭＤＳＣ」とは、様々なエフェクター細胞及び抗原提示細胞、例えば、とりわけ、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、及びマクロファージなどの活性を調節する免疫系の細胞のことを意味する。骨髄由来抑制細胞はその遺伝子発現プロファイルによって区別され、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−Ｈ１（ＰＤ−Ｌ１）、ＣＣＲ２、ＣＤ１ｄ、ＣＤ１ｄ１、ＣＤ２、ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ−１）、ＣＤ４３、ＣＤ４４、補体成分Ｃ５ａ  Ｒ１、Ｆ４／８０（ＥＭＲ１）、Ｆｃγ  ＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、Ｆｃγ  ＲＩＩ（ＣＤ３２）、Ｆｃγ  ＲＩＩＡ（ＣＤ３２ａ）、Ｆｃγ  ＲＩＩＢ（ＣＤ３２ｂ）、Ｆｃγ  ＲＩＩＢ／Ｃ（ＣＤ３２ｂ／ｃ）、Ｆｃγ  ＲＩＩＣ（ＣＤ３２ｃ）、Ｆｃγ  ＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）、Ｆｃγ  ＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、ガレクチン−３、ＧＰ１３０、Ｇｒ−１（Ｌｙ−６Ｇ）、ＩＣＡＭ−１（ＣＤ５４）、ＩＬ−１ＲＩ、ＩＬ−４Ｒα、ＩＬ−６Ｒα、インテグリンα４（ＣＤ４９ｄ）、インテグリンαＬ（ＣＤ１１ａ）、インテグリンαＭ（ＣＤ１１ｂ）、Ｍ−ＣＳＦＲ、ＭＧＬ１（ＣＤ３０１ａ）、ＭＧＬ１／２（ＣＤ３０１ａ／ｂ）、ＭＧＬ２（ＣＤ３０１ｂ）、一酸化窒素、ＰＳＧＬ−１（ＣＤ１６２）、Ｌ−セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ｓｉｇｌｅｃ−３（ＣＤ３３）、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）、ＶＥＧＦＲ１（Ｆｌｔ−１）、及びＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲまたはＦｌｋ−１）からなる群から選択されるタンパク質及び低分子の全てまたは一部を発現する。詳細には、ＭＤＳＣは、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ２１、ＣＤ２３（ＦｃεＲＩＩ）、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ１１７（ｃ−ｋｉｔ）、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＳｃａ−１（Ｌｙ６）からなる群から選択されるタンパク質を発現しない。
【０１７２】
本明細書で使用する場合、用語「中性ＴＮＦＲ２ポリペプチド」及び「表現型中性ＴＮＦＲ２ポリペプチド」とは、ＴＮＦＲ２に結合するがＴＮＦＲ２活性化に対するアンタゴニスト作用またはアゴニスト作用を発揮しないポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、または抗体フラグメントなど）のことを意味する。例えば、ポリペプチドがＴＮＦＲ２に結合し、例えば、ＴＮＦＲ２発現細胞（例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＴＮＦＲ２＋がん細胞、及び／またはＭＤＳＣ）の増殖を測定することによって、及び／または、１種または複数種のＮＦκＢ標的遺伝子、例えば、ＣＨＵＫ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＦＫＢＩＡ、ＭＡＰ３Ｋ１１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ｒｅｌＢ、及び／またはｃＩＡＰ２／ＢＩＲＣ３などの発現を測定することによって、評価した際に、ＴＮＦＲ２活性化を増強も抑制もしない場合、そのＴＮＦＲ２ポリペプチドは中性ＴＮＦＲ２ポリペプチドである。
【０１７３】
本明細書で使用する場合、用語「非天然定常領域」とは、抗体可変領域とは異なる供給源に由来する抗体定常領域、または、天然抗体定常領域配列とは異なるアミノ配列を有する人間が作製した合成ポリペプチドである抗体定常領域のことを意味する。例えば、非天然定常領域を含有する抗体は、非ヒト供給源（例えば、マウス、ラット、またはウサギ）に由来する可変領域、及び、ヒト供給源に由来する定常領域（例えば、ヒト抗体定常領域）、または、とりわけ、別の霊長類、ブタ、ヤギ、ウサギ、ハムスター、ネコ、イヌ、モルモット、ウシ科のメンバー（例えば、とりわけ、ウシ、バイソン、スイギュウ、ヘラジカ、及びヤクなど）、雌ウシ、ヒツジ、ウマ、またはバイソンに由来する定常領域を有していてもよい。
【０１７４】
本明細書で使用する場合、用語「パーセント（％）配列同一性」とは、最大パーセント配列同一性を得るために適宜ギャップを導入して配列をアラインした（例えば、アライメントを最適化するために候補配列及び参照配列の一方または両方にギャップを導入してもよく、比較目的のために非相同配列を無視してもよい）後における、参照配列のアミノ酸（または核酸）残基と同一な候補配列のアミノ酸（または核酸）残基のパーセンテージのことを意味する。当業者に周知の様々な方法で、例えば、一般に利用可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）などのソフトウェアを使用して、パーセント配列同一性を測定することを目的としたアライメントを実施することができる。当業者は、比較する配列の全長にわたる最大アライメントを得るのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。例えば、比較用に参照配列を候補配列にアラインすると、候補配列が、候補配列の全長または候補配列の連続アミノ酸（または核酸）残基の選択部分に対して５０％〜１００％の配列同一性を示すことが示され得る。比較目的のためにアラインした候補配列の長さは、例えば、参照配列の長さの少なくとも３０％（例えば、３０％、４０、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％）であってもよい。候補配列内のある位置に、参照配列内の対応する位置にあるものと同じアミノ酸残基が存在する場合、それら分子はその位置において同一である。
【０１７５】
本明細書で使用する場合、用語「霊長類化抗体」とは、霊長類由来抗体のフレームワーク領域、及び非霊長類供給源の抗体のその他の領域、例えば、ＣＤＲ及び／または定常領域などを含む抗体のことを意味する。霊長類化抗体を作製するための方法は当該技術分野において周知である。例えば、米国特許第５，６５８，５７０号、第５，６８１，７２２号、及び第５，６９３，７８０号（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。例えば、本明細書に記載の霊長類化抗体またはその抗原結合フラグメントは、非霊長類抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤＲを、霊長類の１つまたは複数のフレームワーク領域を含有する抗体またはその抗原結合フラグメントに挿入することにより作製することができる。
【０１７６】
本明細書で使用する場合、細胞の集団、例えば、ＴＮＦＲ２＋細胞（例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＭＤＳＣ、またはＴＮＦＲ２＋がん細胞）の集団などに関する用語「増殖」とは、複数の細胞を産生するための有糸分裂及び細胞質分裂のことを意味する。細胞増殖は、例えば、細胞試料中における細胞（例えば、ＴＮＦＲ２＋細胞）の量が任意の期間にわたり、例えば、１時間もしくは複数時間、１日間もしくは複数日間、または１週間もしくは複数週間にわたり増加したという結果により立証され得る。当業者は、様々な周知の技術を用いて、例えば、可視顕微鏡検査法、血球計算法、フローサイトメトリー、蛍光活性化細胞分離法、及び当該技術分野において周知のその他のアッセイなどにより、細胞増殖をモニターすることができる。本開示では、細胞の集団、例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドと接触したＴＮＦＲ２＋細胞の集団などの増殖の速度が、対照細胞の集団、例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドと接触していないＴＮＦＲ２＋細胞の集団などの増殖の速度と比較して低下した場合に、細胞増殖が「阻害」されたとみなす。増殖の速度の低下は、例えば、試料中における目的の細胞の量が任意の期間にわたり低下する、例えば、試料中における目的の細胞の量が任意の期間にわたり１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上低下することにより明らかとなり得る。追加的にまたは代替的に、細胞増殖の阻害は、目的の細胞（例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドと接触したＴＮＦＲ２＋細胞）が分裂する速度が、対照細胞（例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドと接触していないＴＮＦＲ２＋細胞）が分裂する速度と比較して、例えば、％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上低下したという結果により立証され得る。
【０１７７】
本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチドフラグメントに関する用語「機能的に連結した」とは、２つのポリヌクレオチドフラグメントがコードするアミノ酸配列がインフレームに維持されるように、２つのポリヌクレオチドフラグメントが連結していることを意味することを意図する。
【０１７８】
本明細書で使用する場合、用語「薬物動態プロファイル」とは、薬物を患者に投与した後の経時的な薬物の吸収、分布、代謝、及びクリアランスのことを意味する。
【０１７９】
本明細書で使用する場合、ＴＮＦＲ２の「逆行的アンタゴニスト」は、ＴＮＦＲ２アゴニスト、例えば、ＴＮＦαまたはＩＬ−２などの不在下で測定した同一アンタゴニストの阻害の度合いと比較して、ＴＮＦＲ２アゴニスト、例えば、ＴＮＦαまたはＩＬ−２などの存在下でＴＮＦＲ２活性化を有意により低い度合いにまで阻害するアンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト性ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメントなど）である。例えば、ＴＮＦＲ２アゴニスト、例えば、ＴＮＦαまたはＩＬ−２などの不在下における同一アッセイで測定したアンタゴニストのＩＣ５０と比較して、ＴＮＦＲ２アゴニスト（例えば、ＴＮＦαまたはＢａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ））またはＩＬ−２の存在下におけるアンタゴニストのＩＣ５０が、例えば、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれ以上の倍数高くなる場合、そのＴＮＦＲ２アンタゴニストは逆行的アンタゴニストである。ＴＮＦＲ２活性化の阻害は、例えば、ＴＮＦＲ２＋細胞、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＴＮＦＲ２を発現するがん細胞、または骨髄由来抑制細胞などの増殖の阻害を測定することに加えて、ＮＦκＢシグナル伝達の阻害を測定することによって（例えば、通常の遺伝子発現アッセイを用いて、ＣＨＵＫ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＦＫＢＩＡ、ＭＡＰ３Ｋ１１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ｒｅｌＢ、及びｃＩＡＰ２／ＢＩＲＣ３からなる群から選択される１種または複数種の遺伝子の発現の低下をモニターすることによって）、評価することができる。
【０１８０】
本明細書で使用する場合、用語「制御配列」としては、プロモーター、エンハンサー、及び、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御するその他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）が挙げられる。このような制御配列については、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９０）（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１８１】
本明細書で使用する場合、用語「ｓｃＦｖ」とは、抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメインが連結して１つの分子鎖を形成した一本鎖Ｆｖ抗体のことを意味する。ｓｃＦｖフラグメントは、リンカーにより隔てられた抗体軽鎖（ＶＬ）の可変領域（例えば、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及び／またはＣＤＲ−Ｌ３）及び抗体重鎖（ＶＨ）の可変領域（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及び／またはＣＤＲ−Ｈ３）を含む単一のポリペプチド鎖を含有する。ｓｃＦｖフラグメントのＶＬ領域及びＶＨ領域を連結させるリンカーは、タンパク質構成アミノ酸で構成されるペプチドリンカーであってもよい。タンパク質分解に対するｓｃＦｖフラグメントの耐性を高めるために（例えば、Ｄ−アミノ酸を含有するリンカー）、ｓｃＦｖフラグメントの溶解性を高めるために（例えば、親水性リンカー、例えば、ポリエチレングリコール含有リンカー、またはグリシン残基及びセリン残基の繰り返しを含有するポリペプチドなど）、分子の生物物理学的安定性を向上させるために（例えば、分子内ジスルフィド結合または分子間ジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含有するリンカー）、または、ｓｃＦｖフラグメントの免疫原性を減弱させるために（例えば、グリコシル化部位を含有するリンカー）、代替リンカーを使用してもよい。ｓｃＦｖ分子は当該技術分野において周知であり、例えば、米国特許５，８９２，０１９、Ｆｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｇｅｎｅ  ７７：５１，１９８９）；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３，１９８８）；Ｐａｎｔｏｌｉａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３０：１０１１７，１９９１）；Ｍｉｌｅｎｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５１：６３６３，１９９１）；及びＴａｋｋｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：８３７，１９９１）に記載されている。ｓｃＦｖ分子のＶＬドメイン及びＶＨドメインは、１種または複数種の抗体分子に由来していてもよい。本明細書に記載のｓｃＦｖ分子の可変領域を、その可変領域を誘導する抗体分子からアミノ酸配列が変化するように修飾してもよいということもまた当業者は理解するであろう。例えば、一実施形態では、アミノ酸残基に保存的置換または保存的変異をもたらすヌクレオチド置換またはアミノ酸置換を行ってもよい（例えば、ＣＤＲ残基及び／またはフレームワーク残基において）。代替的にまたは加えて、当該技術分野において認識されている技術を用いて、ＣＤＲアミノ酸残基に変異を生じさせて抗原結合を最適化する。ｓｃＦｖフラグメントについては、例えば、ＷＯ２０１１／０８４７１４（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１８２】
本明細書で使用する場合、語句「特異的に結合する」とは、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントが特異性を持って認識する、タンパク質及びその他の生体分子の不均一な集団内における抗原の存在を決定付ける結合反応のことを意味する。抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、１００ｎＭ未満のＫＤで抗原に結合する。例えば、抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、最大１００ｎＭ（例えば、１ｐＭ〜１００ｎＭ）のＫＤで抗原に結合する。特定の抗原またはそのエピトープに対する特異的結合を示さない抗体またはその抗原結合フラグメントは、その特定の抗原またはそのエピトープに対する１００ｎＭ超（例えば、５００ｎｍ超、１μＭ超、１００μＭ超、５００μＭ超、または１ｍＭ超）のＫＤを示す。様々なイムノアッセイフォーマットを使用して、特定のタンパク質または糖質と特異的に免疫反応を起こす抗体を選択してもよい。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイを慣例的に使用して、タンパク質または糖質と特異的に免疫反応を起こす抗体を選択する。特異的免疫反応を測定するのに使用可能なイムノアッセイフォーマット及び条件の記述については、Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）及びＨａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９）を参照されたい。
【０１８３】
本明細書で使用する場合、用語「対象」及び「患者」とは、本明細書に記載の特定の疾患または症状（例えば、がんまたは感染症など）に対する治療を受ける生物のことを意味する。対象及び患者の例としては、疾患または症状、例えば、がんなどの細胞増殖障害、または感染症などに対する治療を受けている哺乳動物、例えば、とりわけ、ヒト、霊長類、ブタ、ヤギ、ウサギ、ハムスター、ネコ、イヌ、モルモット、ウシ科のメンバー（例えば、とりわけ、ウシ、バイソン、スイギュウ、ヘラジカ、及びヤクなど）、雌ウシ、ヒツジ、ウマ、及びバイソンなどが挙げられる。
【０１８４】
本明細書で使用する場合、用語「トランスフェクション」とは、外来ＤＮＡを原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞に導入するために一般的に用いられる多種多様な技術、例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどのいずれかのことを意味する。
【０１８５】
本明細書で使用する場合、用語「治療する」または「治療」とは、望ましくない生理学的変化または障害、例えば、がんなどの細胞増殖障害または感染症の進行などを予防または遅延（軽減）させることを目的とする治療処置のことを意味する。有利または望ましい臨床結果としては、検出可能または検出不能を問わない、症候の緩和、疾患の度合いの低下、疾患の安定（すなわち、悪化していない）状態、疾患進行の遅延または緩徐、病態の改善または一時的軽減、及び寛解（部分または完全を問わない）が挙げられるがこれらに限定されない。治療を必要とする対象及び患者としては、既に症状または障害を有している対象及び患者に加え、症状または障害を有する傾向のある対象及び患者、または、症状または障害の予防が行われる対象及び患者が挙げられる。
【０１８６】
本明細書で使用する場合、用語「腫瘍微小環境」とは、腫瘍を形成するがん細胞、ならびに、非がん細胞の集団、非がん分子の集団、及び／または、腫瘍内にある血管またはがん細胞に隣接するもしくはがん細胞を取り囲む血管のことを意味する。
【０１８７】
本明細書で使用する場合、用語「腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー」、「ＴＮＦＲスーパーファミリー」、または「ＴＮＦＲＳ」とは、カルボキシ末端細胞内ドメイン、及び共通のシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）を特徴とするアミノ末端細胞外ドメインを有するＩ型膜貫通タンパク質のグループのことを意味する。ＴＮＦＲスーパーファミリーとしては、ＴＮＦスーパーファミリーの１種または複数種のリガンドに結合した結果として細胞シグナル伝達を媒介する受容体が挙げられる。ＴＮＦＲスーパーファミリーは、２つのサブグループ：細胞内デスドメインを含有する受容体、及びこのドメインを欠く受容体に分類することができる。デスドメインは、受容体の活性化に続いてアポトーシスシグナル伝達カスケードを伝播させる８０アミノ酸モチーフである。細胞内デスドメインを含有する例示的なＴＮＦＲスーパーファミリーメンバーがＴＮＦＲ１を含む一方で、ＴＮＦＲ２は、このドメインを含有しないＴＮＦＲスーパーファミリータンパク質を表す。ＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーとしては、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＲＡＮＫ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、リンフォトキシンβ受容体（ＬＴ−βＲ）、ＯＸ４０、Ｆａｓ受容体、デコイ受容体３（ＤＣＲ３）、ＣＤ２７、４−１ＢＢ、デス受容体４（ＤＲ４）、デス受容体５（ＤＲ５）、デコイ受容体１（ＤＣＲ１）、デコイ受容体２（ＤＣＲ２）、オステオプロテゲリン、ＴＷＥＡＫ受容体、ＴＡＣＩ、ＢＡＦＦ受容体、ヘルペスウイルス侵入メディエーター、神経成長因子受容体、Ｂ細胞成熟抗原、グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連、ＴＲＯＹ、デス受容体６（ＤＲ６）、デス受容体３（ＤＲ３）、及びエクトジスプラシンＡ２受容体が挙げられる。
【０１８８】
本明細書で使用する場合、用語「腫瘍壊死因子受容体２シグナル伝達」、「ＴＮＦＲ２シグナル伝達（ＴＮＦＲ２  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）」、「ＴＮＦＲ２シグナル伝達（ＴＮＦＲ２  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）」などは同じ意味で用いられ、内在性ＴＮＦＲ２リガンド、例えば、ＴＮＦαなどによる、ＴＮＦＲ２＋細胞、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＭＤＳＣ、またはＴＮＦＲ２＋がん細胞などの表面上におけるＴＮＦＲ２の活性化時に通常は生じる細胞イベントのことを意味する。ＴＮＦＲ２シグナル伝達は、ＣＨＵＫ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＦＫＢＩＡ、ＭＡＰ３Ｋ１１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ｒｅｌＢ、及びｃＩＡＰ２／ＢＩＲＣ３からなる群から選択される１種または複数種の遺伝子の発現が上昇したという結果により立証され得る。本明細書で使用する場合、薬剤、例えば、本明細書に記載のＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチドなどと細胞を接触させた際に、薬剤（例えば、ＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチド）と接触させていないＴＮＦＲ２＋細胞と比較して、上記遺伝子のうちの１種もしくは複数種または全ての発現（及び／または翻訳後修飾（コードタンパク質の活性化にこのような修飾が必要とされる場合））がＴＮＦＲ２＋細胞内において低下した場合に、ＴＮＦＲ２シグナル伝達が「阻害」されたとみなす。例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドと接触したＴＮＦＲ２＋細胞内における、ＣＨＵＫ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＦＫＢＩＡ、ＭＡＰ３Ｋ１１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ｒｅｌＢ、またはｃＩＡＰ２／ＢＩＲＣ３のうちの１種または複数種の発現または翻訳後修飾（例えば、リン酸化）が、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドと接触していないＴＮＦＲ２＋細胞内における、これらの遺伝子のうちの１種または複数種の発現または翻訳後修飾（例えば、リン酸化）と比較して、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％低下した場合に、ＴＮＦＲ２シグナル伝達が「阻害」されたとみなす。発現レベル及びリン酸化状態を測定するのに使用可能な例示的なアッセイは当技術分野において周知であり、例えば、タンパク質含有量を測定するためのウェスタンブロットアッセイ、及び、ｍＲＮＡ含有量を測定するための定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）実験が挙げられる。
【０１８９】
本明細書で使用する場合、用語「可変領域ＣＤＲ」としては、配列または構造をベースとした方法を用いて同定された、ＣＤＲすなわち相補性決定領域内のアミノ酸が挙げられる。本明細書で使用する場合、用語「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」とは、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に存在する非連続抗原結合部位のことを意味する。これらの特定の領域については、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６，１９７７及びＫａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２，１９９１；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７，１９８７），ならびにＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５，１９９６）に記載されており、定義は、互いに比較する際のアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。用語「ＣＤＲ」は、例えば、配列比較に基づいてＫａｂａｔが定義するＣＤＲであってもよい。
【０１９０】
本明細書で使用する場合、用語「ベクター」としては、核酸ベクター、例えば、ＤＮＡベクター、例えば、プラスミド、ＲＮＡベクター、ウイルスまたはその他の好適なレプリコン（例えば、ウイルスベクター）などが挙げられる。外来タンパク質をコードするポリヌクレオチドを原核細胞または真核細胞に送達するための様々なベクターが開発されている。このような発現ベクターの例については、例えば、ＷＯ１９９４／１１０２６（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。本明細書に記載の発現ベクターは、ポリヌクレオチド配列に加えて、例えば、タンパク質を発現させるために用いる別の配列エレメント、及び／または、これらのポリヌクレオチド配列を哺乳動物細胞のゲノムに導入するために用いる別の配列エレメントを含有する。本明細書に記載の抗体及び抗体フラグメントを発現させるのに使用可能な特定のベクターとしては、制御配列、例えば、遺伝子転写を誘導するプロモーター領域及びエンハンサー領域などを含有するプラスミドが挙げられる。抗体及び抗体フラグメントを発現させるためのその他の有用なベクターは、これらの遺伝子の翻訳速度を高めるポリヌクレオチド配列、または、遺伝子転写により生じたｍＲＮＡの安定性または核外移行を向上させるポリヌクレオチド配列を含有する。これらの配列エレメントとしては、例えば、５´非翻訳領域及び３´非翻訳領域、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、ならびに、発現ベクター上に搭載された遺伝子の効率的な転写を誘導するためのポリアデニル化シグナル部位が挙げられる。本明細書に記載の発現ベクターはまた、このようなベクターを含有する細胞を選択するためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含有していてもよい。好適なマーカーの例としては、抗生物質、例えば、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、またはノーセオスリシンなどに対する耐性をコードする遺伝子が挙げられる。
【０１９１】
本明細書で使用する場合、用語「ＶＨ」とは、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、またはＦａｂの重鎖を含む抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域のことを意味する。「ＶＬ」への言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、またはＦａｂの軽鎖を含む免疫グロブリン軽鎖の可変領域のことを意味する。抗体（Ａｂ）及び免疫グロブリン（Ｉｇ）とは、同一の構造的特徴を有する糖タンパク質のことである。抗体が特定の標的に対する結合特異性を示す一方、免疫グロブリンは、抗体と、標的特異性を欠くその他の抗体様分子の両方を含む。天然の抗体及び免疫グロブリンは通常、２つの同一軽（Ｌ）鎖及び２つの同一重（Ｈ）鎖で構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。天然抗体のそれぞれの重鎖は、多くの定常ドメインに続いてアミノ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有している。天然抗体のそれぞれの軽鎖は、アミノ末端の可変ドメイン（ＶＬ）、及びカルボキシ末端の定常ドメインを有している。
【図面の簡単な説明】
【０１９２】
【図１】ヒトＴＮＦＲ２のアミノ酸配列（配列番号：７）を示す。ヒトＴＮＦＲ２は本明細書において、Ｎ末端の１位のメチオニンで始まりＣ末端の４６１位のセリンで終わるようにナンバリングされている（配列番号：７）。ＴＮＦＲ２内のアミノ酸位置への全ての参照は、図１に示すＴＮＦＲ２ナンバリングスキームとの関係において実施される。太字及び下線のフォントで示す残基（ＫＣＲＰＧ、配列番号：１９）に加えて、ヒトＴＮＦＲ２のシステインリッチドメイン３（ＣＲＤ３）及びＣＲＤ４（それぞれ配列番号：７の残基１２１〜１６２及び１６２〜２０２）内ならびに非ヒト、例えば、非ヒト哺乳動物などのＴＮＦＲ２内の同等の領域内に存在するその他のエピトープの結合により、ＴＮＦＲ２シグナル伝達のアンタゴニスト作用が促進される。イタリック体の残基（ＫＣＳＰＧ、配列番号：１２）に加えて、ヒトＴＮＦＲ２のＣＲＤ１（配列番号：７の残基４８〜７６）内及び非ヒト、例えば、非ヒト哺乳動物などのＴＮＦＲ２内の同等の領域内に存在するその他のエピトープの結合により、ＴＮＦＲ２アンタゴニスト作用が阻害される。
【図２】マウスモノクローナルＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体ＴＮＦＲＡＢ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける制御性Ｔ（Ｔ−ｒｅｇ）細胞の生存率に対する作用（左）を、ＴＮＦＲＡＢ２のヒトキメラ型の同一アッセイ条件下におけるＴ−ｒｅｇ細胞の生存率に対する作用（右）と対比させたグラフである。ＴＮＦＲＡＢ２はマウスＩｇＧ２抗体であり、この実施例で試験したヒトキメラＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体はヒトＩｇＧ１アイソタイプを示す。ｘ軸に沿った値は、μｇ／ｍｌの単位の抗体濃度を表す。ｙ軸に沿った値は、表示濃度のＴＮＦＲ２抗体と共に試料を培養した後におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞試料中に含まれるＴ−ｒｅｇ細胞のパーセンテージを表す。
【図３】マウスモノクローナルＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体ＴＮＦＲＡＢ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試料中におけるエフェクターＴ細胞の量に対する作用（左）を、ＴＮＦＲＡＢ２のヒトキメラ型の同一アッセイ条件下のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試料中におけるエフェクターＴ細胞の量に対する作用（右）と対比させたグラフである。ヒトキメラＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体は図２に記載のものと同一である。ｘ軸に沿った値は、μｇ／ｍｌの単位の抗体濃度を表す。ｙ軸に沿った値は、表示濃度のＴＮＦＲ２抗体と共に試料を培養した後におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞試料中に含まれるＴエフェクター細胞のパーセンテージを表す。
【図４】マウスモノクローナルＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体ＴＮＦＲＡＢ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試料中におけるＴＮＦＲ２＋ＳＷ４８０結腸癌細胞の量に対する作用（左）を、ＴＮＦＲＡＢ２のヒトキメラ型の同一アッセイ条件下のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試料中におけるＴＮＦＲ２＋ＳＷ４８０結腸癌細胞の量に対する作用（右）と対比させたグラフである。ヒトキメラＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体は図２に記載のものと同一である。ｘ軸に沿った値は、μｇ／ｍｌの単位の抗体濃度を表す。ｙ軸に沿った値は、表示濃度のＴＮＦＲ２抗体と共に試料を培養した後におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞試料中に含まれるＴＮＦＲ２＋ＳＷ４８０結腸癌細胞の量を表す。
【図５】マウスモノクローナルＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体ＴＮＦＲＡＢ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試料中におけるエフェクターＴ細胞の量に対する作用（左）を、ＴＮＦＲＡＢ２のヒトキメラ型の同一アッセイ条件下のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試料中におけるエフェクターＴ細胞の量に対する作用（右）と対比させたグラフである。ヒトキメラＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体は図２に記載のものと同一である。ｘ軸に沿った値は、μｇ／ｍｌの単位の抗体濃度を表す。ｙ軸に沿った値は、表示濃度のＴＮＦＲ２抗体と共に試料を培養した後におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞試料中に含まれるＴエフェクター細胞のパーセンテージを表す。
【図６】マウスモノクローナルＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体ＴＮＦＲＡＢ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＴ−ｒｅｇ細胞の生存率に対する作用（左）を、ＴＮＦＲＡＢ２のヒトキメラ型の同一アッセイ条件下におけるＴ−ｒｅｇ細胞の生存率に対する作用（右）と対比させたグラフである。ヒトキメラＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体は図２に記載のものと同一である。ｘ軸に沿った値は、μｇ／ｍｌの単位の抗体濃度を表す。ｙ軸に沿った値は、表示濃度のＴＮＦＲ２抗体と共に試料を培養した後におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞試料中に含まれるＴ−ｒｅｇ細胞のパーセンテージを表す。
【図７】マウスモノクローナルＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体ＴＮＦＲＡＢ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試料中におけるＴＮＦＲ２＋ＳＷ４８０結腸癌細胞の量に対する作用（左）を、ＴＮＦＲＡＢ２のヒトキメラ型の同一アッセイ条件下のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試料中におけるＴＮＦＲ２＋ＳＷ４８０結腸癌細胞の量に対する作用（右）と対比させたグラフである。ヒトキメラＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体は図２に記載のものと同一である。ｘ軸に沿った値は、μｇ／ｍｌの単位の抗体濃度を表す。ｙ軸に沿った値は、表示濃度のＴＮＦＲ２抗体と共に試料を培養した後におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞試料中に含まれるＴＮＦＲ２＋ＳＷ４８０結腸癌細胞の量を表す。
【図８】マウスモノクローナルＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体ＴＮＦＲＡＢ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試料中におけるエフェクターＴ細胞の量に対する作用（左）を、ＴＮＦＲＡＢ２のヒトキメラ型の同一アッセイ条件下のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試料中におけるエフェクターＴ細胞の量に対する作用（右）と対比させたグラフである。この実施例で試験したヒトキメラＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体はヒトＩｇＧ２アイソタイプを示し、Ｃ２３２Ｓアミノ酸置換及びＣ２３３Ｓアミノ酸置換を特徴とするヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を有する。ｘ軸に沿った値は、μｇ／ｍｌの単位の抗体濃度を表す。ｙ軸に沿った値は、表示濃度のＴＮＦＲ２抗体と共に試料を培養した後におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞試料中に含まれるＴエフェクター細胞のパーセンテージを表す。
【図９】マウスモノクローナルＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体ＴＮＦＲＡＢ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＴ−ｒｅｇ細胞の生存率に対する作用（左）を、ＴＮＦＲＡＢ２のヒトキメラ型の同一アッセイ条件下におけるＴ−ｒｅｇ細胞の生存率に対する作用（右）と対比させたグラフである。この実施例で試験したヒトキメラＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体はヒトＩｇＧ２アイソタイプを示し、Ｃ２３２Ｓアミノ酸置換及びＣ２３３Ｓアミノ酸置換を特徴とするヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を有する。ｘ軸に沿った値は、μｇ／ｍｌの単位の抗体濃度を表す。ｙ軸に沿った値は、表示濃度のＴＮＦＲ２抗体と共に試料を培養した後におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞試料中に含まれるＴ−ｒｅｇ細胞のパーセンテージを表す。
【図１０】マウスモノクローナルＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体ＴＮＦＲＡＢ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試料中におけるＴＮＦＲ２＋ＳＷ４８０結腸癌細胞の量に対する作用（左）を、ＴＮＦＲＡＢ２のヒトキメラ型の同一アッセイ条件下のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試料中におけるＴＮＦＲ２＋ＳＷ４８０結腸癌細胞の量に対する作用（右）と対比させたグラフである。この実施例で試験したヒトキメラＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体はヒトＩｇＧ２アイソタイプを示し、Ｃ２３２Ｓアミノ酸置換及びＣ２３３Ｓアミノ酸置換を特徴とするヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を有する。ｘ軸に沿った値は、μｇ／ｍｌの単位の抗体濃度を表す。ｙ軸に沿った値は、表示濃度のＴＮＦＲ２抗体と共に試料を培養した後におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞試料中に含まれるＴＮＦＲ２＋ＳＷ４８０結腸癌細胞の量を表す。
【図１１】モノクローナル抗体ＴＮＦＲＡＢ２のキメラバリアントのＴＮＦＲ２＋がん細胞殺傷特性を示すグラフである。この実施例で試験したヒトキメラＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体はヒトＩｇＧ２アイソタイプを示し、Ｃ２３２Ｓアミノ酸置換及びＣ２３３Ｓアミノ酸置換を特徴とするヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を有する。ｘ軸に沿った値は、ＴＮＦＲ２＋ＳＷ４８０腫瘍細胞をキメラＴＮＦＲＡＢ２バリアント抗体で処理した後の日数を表す。ｙ軸に沿った値は、ＴＮＦＲＡＢ２バリアント抗体を用いた処理後における、立方ミリメートルの単位のＳＷ４８０腫瘍容積を表す。ＴＮＦＲＡＢ２バリアント抗体を用いた処理後に認められた腫瘍容積の値（四角）を、溶媒対照を用いた処理後に認められた値（丸）と比較する。
【図１２】ヒトＩｇＧ２定常ドメインに加えて、野生型ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域及び本明細書に記載のマウスＴＮＦＲＡＢ２モノクローナル抗体の可変ドメインを含有するキメラＴＮＦＲＡＢ２バリアント抗体のポリアクリルアミドゲル電気泳動分離の結果を示す画像である。この図に示すゲル電気泳動分離は非還元条件下で実施した。この分離を実施すると４つの固有のバンドが認められ、ヒトＩｇＧ２アイソタイプのＩｇＧ２−Ａ、ＩｇＧ２−Ｂ、ＩｇＧ２−Ａ／Ｂ１、及びＩｇＧ２−Ａ／Ｂ２ジスルフィド結合アイソフォームに対応していた。分かりやすくするために、これらのバンドを白色のボックスで強調している。
【図１３】Ａ〜Ｄは、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ抗体のＩｇＧ２−Ａ（Ａ）、ＩｇＧ２−Ｂ（Ｂ）、ＩｇＧ２−Ａ／Ｂ１（Ｃ）、及びＩｇＧ２−Ａ／Ｂ２（Ｄ）アイソフォームのそれぞれの内部に存在するジスルフィド結合の配置を比較した一連の概略図である。細い線は、それぞれの抗体重鎖または抗体軽鎖（網掛け長方形で表す）の様々な部分を連結するジスルフィド結合を表す。重鎖は、それぞれの抗体のより長い最も外側の長方形で表されている。それぞれの重鎖内において、黒色の網掛けは定常領域を表し、明るい網掛けは可変領域を表す。軽鎖は、それぞれの抗体のより短い最も内側の長方形で表されている。それぞれの軽鎖内において、より暗い網掛けは定常領域を表し、より明るい網掛けは可変領域を表す。
【発明を実施するための形態】
【０１９３】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、ＴＮＦＲ２発現細胞上のＴＮＦＲ２の活性化を阻害する。この阻害は、例えば、ＴＮＦＲ２（例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＴＮＦＲ２を発現するがん細胞、または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の外表面上の）に結合して、受容体が、その関連リガンド、ＴＮＦαに結合するのに好適な三次元構造をとるのを防止することによって生じ得る。ＴＮＦαは、ＴＮＦＲ２タンパク質の三量体を凝集させることによってＴＮＦＲ２シグナル伝達を増強する。この三量体化イベントが、個々のＴＮＦＲ２タンパク質を近接させて、ＭＡＰＫ／ＮＦκＢ／ＴＲＡＦ２／３経路を介したＴＮＦＲ２シグナル伝達を惹起し、最終的には、細胞増殖、及びアポトーシスからの回避を引き起こす。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、例えば、受容体に結合して受容体の三量体化を防止することによって、この相互作用を相殺することができる。例えば、この相殺を生じさせ得る１つのメカニズムは、受容体の不活性構造形態である逆平行ＴＮＦＲ２二量体の形成によるものである。
【０１９４】
本明細書に記載のＴＮＦＲ２ポリペプチドは、受容体のアンタゴニスト作用及び様々な有利な下流の生物学的活性を促進するＴＮＦＲ２内のエピトープに特異的に結合する。ヒトＴＮＦＲ２は、４つのシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）：ＣＲＤ１（配列番号：７のアミノ酸残基４８〜７６）、ＣＲＤ２（配列番号：７のアミノ酸残基７８〜１２０）、ＣＲＤ３（配列番号：７のアミノ酸残基１２１〜１６２）、及びＣＲＤ４（配列番号：７のアミノ酸残基１６２〜２０２）を含有する。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、ＣＲＤ３及び／またはＣＲＤ４内の１つまたは複数のエピトープにおいて、ＴＮＦＲ２に特異的に結合する。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、ＣＲＤ１及び／またはＣＲＤ２内のエピトープに結合しない。例えば、本開示のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、以下の残基、
（ａ）配列番号：７のアミノ酸１４２〜１４６（ＫＣＲＰＧ）、
（ｂ）配列番号：７のアミノ酸１４２〜１４９（ＫＣＲＰＧＦＧＶ）、
（ｃ）配列番号：７のアミノ酸１３７〜１４４（ＣＡＰＬＲＫＣＲ）、
（ｄ）配列番号：７のアミノ酸１５０〜１９０（ＲＰＧＴＥＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡＰＧＴＦＳＮＴＴＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩＣＮＶＶＡＩ）、
（ｅ）配列番号：７のアミノ酸１６１〜１６９（ＣＫＰＣＡＰＧＴＦ）、
（ｆ）配列番号：７のアミノ酸７５〜１２８（ＣＤＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳＣＧＳＲＣＳＳＤＱＶＥＴＱＡＣＴＲＥＱＮＲＩＣＴＣＲＰＧＷＹＣＡＬ）（任意選択的に、エピトープは、配列番号：７のアミノ酸８０〜８６（ＤＳＴＹＴＱＬ）、９１〜９８（ＰＥＣＬＳＣＧＳ）、または１１６〜１２３（ＲＩＣＴＣＲＰＧ）の内部にある）、
（ｇ）配列番号：７のアミノ酸１７４〜１８４（ＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩ）、
（ｈ）配列番号：７のアミノ酸１２６〜１４０（ＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬ）、及び／または、
（ｉ）配列番号：７のアミノ酸１５６〜１６５（ＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡ）、
のうちの１つまたは複数の内部のエピトープ、
または、非ヒト哺乳動物、例えば、本明細書に記載の非ヒト哺乳動物などのＴＮＦＲ２内の同等のエピトープ
において、ヒトＴＮＦＲ２に結合し得る。
【０１９５】
本開示は部分的に、抗ＴＮＦＲ２ポリペプチドが、これらの分子がＩｇＧ２アイソタイプの形態である場合に、実質的に向上したＴＮＦＲ２アンタゴニスト作用を示すという発見に基づいている。以下の実施例において記載するとおり、この部類のＴＮＦＲ２ポリペプチドが、その他のアイソタイプのＴＮＦＲ２結合ポリペプチドと比較して、ＴＮＦＲ２シグナル伝達を阻害する、Ｔ−ｒｅｇ細胞及びがん細胞の増殖を減弱させる、及びエフェクターＴ細胞の増殖を増強させる、驚くほどより優れた能力を示すことが現時点において発見されている。
【０１９６】
本開示の基礎をなす別の発見は、上記のエピトープのうちの１つまたは複数においてＴＮＦＲ２に特異的に結合するが、約１３３Å未満互いに離れた抗原結合部位を含有するポリペプチドと比較して、約１３３Åまたはそれ以上空間的に互いに離れた抗原結合部位を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドが、予想外により優れたＴＮＦＲ２アンタゴニスト作用を示すという発見である。このようなポリペプチドの例としては、約１１７Å互いに離れた抗原結合部位を含有するＩｇＧ１抗体及びその抗原結合フラグメント、及び１２５Å互いに離れた抗原結合部位を含有するＩｇＧ３抗体及びその抗原結合フラグメントが挙げられる。
【０１９７】
本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、医薬組成物へと製剤化することができる。医薬組成物中に含まれるポリペプチドは単一のジスルフィド結合アイソフォームをとっていることが好ましい。例えば、本開示の医薬組成物としては、例えば、医薬組成物中のポリペプチドのうちの１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、またはそれ以上が、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、アンタゴニストＴＮＦＲ２ポリペプチドを含有する医薬組成物が挙げられる。本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは有利に、その他のＩｇＧ２ジスルフィド結合アイソフォーム、例えば、ＩｇＧ２−Ｂアイソフォーム、ＩｇＧ２−Ａ／Ｂ１アイソフォーム、及びＩｇＧ２−Ａ／Ｂ２アイソフォームなどと比較して、実質的により強力なレベルのＴＮＦＲ２アンタゴニスト作用を促進することが驚くべきことに判明している、ＩｇＧ２−Ａジスルフィド結合アイソフォームをとり得る。これらのアイソフォームを図１３Ａ〜図１３Ｄに図示する。例えば、その他のジスルフィド結合アイソフォームの形成を阻害する変異をＩｇＧ２ヒンジ領域に導入することによって、主にＩｇＧ２−Ａアイソフォームをとるように本開示のポリペプチドを改変してもよい。残る上記のアイソフォームを除く、ＩｇＧ２−Ａアイソフォームの形成を促進するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列内における例示的な変異としては、野生型ヒトＩｇＧ２ヒンジアミノ酸配列の２３２位及び２３３位におけるシステイン残基の欠失及び／または置換が挙げられ、配列番号：２９１に記載されている。
例えば、主にＩｇＧ２−ＡアイソフォームをとるようにＩｇＧ２抗体またはその抗原結合フラグメントを改変するために、配列番号：２９１のシステイン残基２３２及び／または２３３に保存的アミノ酸置換を導入してもよい。主にＩｇＧ２−Ａアイソフォームで存在する例示的なＩｇＧ２ヒンジ領域は、配列番号：２９２のアミノ酸配列を有し、配列番号：２９１と比較してＣ２３２Ｓ置換及びＣ２３３Ｓ置換を含有する。
【０１９８】
以下の生物学的活性、
（ａ）例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞表面上のＴＮＦＲ２に結合してＴＮＦＲ２を不活性化させることによる、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖の抑制、及び／またはＴ−ｒｅｇ細胞の直接的な殺傷、
（ｂ）例えば、ＭＤＳＣ表面上のＴＮＦＲ２に結合してＴＮＦＲ２を不活性化させることによる、ＭＤＳＣの増殖の抑制、及び／またはＭＤＳＣの直接的な殺傷、
（ｃ）Ｔエフェクター細胞、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞などの増殖の促進、及び／または、
（ｄ）ＴＮＦＲ２発現がん細胞（例えば、ホジキンリンパ腫細胞、皮膚非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、腎細胞癌細胞、皮膚癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、子宮内膜癌細胞、造血がん細胞またはリンパがん細胞、中枢神経系がん細胞、乳癌細胞、膵臓癌細胞、胃癌細胞、食道癌細胞、及び上部消化管癌細胞など）の増殖の抑制及び／またはＴＮＦＲ２発現がん細胞の直接的な殺傷、
は、（ｉ）ＩｇＧ２以外のアイソタイプを示す、（ｉｉ）１３３Å未満互いに離れた抗原結合部位を含有する、及び／または（ｉｉｉ）主に単一のジスルフィド結合アイソフォーム（例えば、ＩｇＧ２−Ａアイソフォーム）で存在しない、ＴＮＦＲ２結合ポリペプチドと比較して、本開示のポリペプチドがより優れた度合いで示すアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２表現型の例である。
【０１９９】
続くセクションでは、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などの例示的な特性に加え、治療方法におけるその使用に関する説明を提供する。
【０２００】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド
ＩｇＧ２アイソタイプ抗体は最適なＴＮＦＲ２アンタゴニスト作用を促進する
上記及び本明細書に記載するとおり、ヒトＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体、ヒト化ＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体、及びキメラＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体、ならびにその抗原結合フラグメントにおける最適なＴＮＦＲ２アンタゴニスト作用は、抗体または抗体フラグメントがヒトＩｇＧ２アイソタイプを示す場合、とりわけ、抗体または抗体フラグメントがＩｇＧ２−Ａジスルフィド結合アイソフォームを示す場合に、得られる。ヒトＩｇＧ２抗体の様々なアイソフォームにおけるジスルフィド結合パターンを図１３Ａ〜図１３Ｄに示す。図１３Ａに示すとおり、ＩｇＧ２−Ａアイソフォームは、重鎖のシステイン残基Ｃ１３３と軽鎖のＣ２１４の間のジスルフィド結合に加え、それぞれの重鎖上に存在する対応するシステイン残基Ｃ２２１、Ｃ２２２、Ｃ２２５、及びＣ２２８の間のジスルフィド結合を示す。
【０２０１】
ＩｇＧ２−Ａジスルフィド結合アイソフォームを安定させるため、ＩｇＧ２−Ａアイソフォーム内において非結合チオールとして存在するシステイン残基間のジスルフィド結合の発生が防止または抑制されるように、ＩｇＧ２ヒンジ領域に変異を導入してもよい。このような変異の例は、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域の残基Ｃ２３２及びＣ２３３におけるアミノ酸置換または欠失である。これらの残基の一方または両方を除去することにより、及び任意選択的に、これらの残基を、ジスルフィド結合を形成することができないアミノ酸に置き換えることにより、ＩｇＧ２アイソフォームの集団におけるジスルフィド結合パターンをＩｇＧ２−Ａアイソフォームへと偏らせることができる。ＩｇＧ２−Ａアイソフォーム抗体の集団を得るために使用可能なアミノ酸置換の例としては、保存的アミノ酸置換、例えば、Ｃ２３２Ｓアミノ酸置換及びＣ２３３Ｓアミノ酸置換などが挙げられる。システイン及びセリンの類似した分子体積及び分子極性により、Ｃ２３２Ｓ置換及びＣ２３３Ｓ置換は、天然システイン残基の立体特性及び電気陰性度特性を保持しつつ、ＩｇＧ２ヒンジ領域の２３２位及び／または２３３位におけるジスルフィド結合の形成を阻害するという有利な作用を特徴とする。ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントにＣ２３２Ｓ置換及び／またはＣ２３３Ｓ置換を導入することにより、ＩｇＧ２−Ａアイソフォームを示すＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体またはフラグメントの集団を得ることができる。抗体またはその抗原結合フラグメントにアミノ酸置換及び欠失を生じさせるための方法としては、本明細書に記載及び当該技術分野において周知の変異誘発技術が挙げられる。
【０２０２】
抗原結合部位間の間隔
本明細書に記載のアンタゴニストＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、少なくとも約１３３Åの距離分互いに離れた抗原結合部位（すなわち、抗原結合アーム）を含有していてもよく、その距離は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ抗体の抗原結合アーム間に認められる間隔である。以下の実施例において記載するとおり、この間隔によって最適なＴＮＦＲ２アンタゴニスト特性を有する抗体が生じることが発見されている。本開示のＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチドとしては、例えば、約１３３Å〜約１６０Åの距離、例えば、約１３３Å、１３４Å、１３５Å、１３６Å、１３７Å、１３８Å、１３９Å、１４０Å、１４１Å、１４２Å、１４３Å、１４４Å、１４５Å、１４６Å、１４７Å、１４８Å、１４９Å、１５０Å、１５１Å、１５２Å、１５３Å、１５４Å、１５５Å、１５６Å、１５７Å、１５８Å、１５９Å、または１６０Åの距離分、離れた抗原結合アームを含有するＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチドが挙げられる。例えば、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、約１３３Å〜約１５０Åの距離分、例えば、約１３３Å、１３４Å、１３５Å、１３６Å、１３７Å、１３８Å、１３９Å、１４０Å、１４１Å、１４２Å、１４３Å、１４４Å、１４５Å、１４６Å、１４７Å、１４８Å、１４９Å、または１５０Åの距離分、互いに離れた抗原結合部位を含有していてもよい。一部の実施形態では、抗原結合は、約１３３Å〜約１４５Åの距離分、例えば、約１３３Å、１３４Å、１３５Å、１３６Å、１３７Å、１３８Å、１３９Å、１４０Å、１４１Å、１４２Å、１４３Å、１４４Å、または１４５Åの距離分、互いに離れている。一部の実施形態では、抗原結合は、約１３３Å〜約１３９Åの距離分、例えば、約１３３Å、１３４Å、１３５Å、１３６Å、１３７Å、１３８Å、または１３９Åの距離分、互いに離れている。一部の実施形態では、抗原結合は、約１３４Å〜約１３９Åの距離分、例えば、約１３４Å、１３５Å、１３６Å、１３７Å、１３８Å、または１３９Åの距離分、互いに離れている。
【０２０３】
本明細書に記載のＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチドは、例えば、上で明記した距離分離れた、２、３、４、５、またはそれ以上の抗原結合アームを有していてもよい。２つまたはそれ以上の抗原結合アームを有する抗体フラグメントの例としては、とりわけ、ディアボディ、トリアボディ、Ｆ（ａｂ’）２分子、及びタンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）分子が挙げられるがこれらに限定されない。これらの抗体フラグメントを作製するための方法としては、本明細書に記載及び当該技術分野において周知のペプチド合成技術及び組換えタンパク質発現技術が挙げられる。
【０２０４】
抗体または抗体フラグメントの抗原結合アーム間の距離を測定するための様々な方法が存在している。例えば、抗体の抗原結合アーム間の距離は、コンピュータソフトウェアを使用して、例えば、ＰＹＭＯＬ（登録商標）及びその他の分子イメージングソフトウェアの使用により、抗体または抗体フラグメントの三次元構造を解析することによって測定することができる。当該技術分野において周知のＸ線結晶構造解析実験及び核磁気共鳴（ＮＭＲ）技術から得たデータを使用して、ポリペプチド、例えば、抗体及び抗体フラグメントなどの三次元構造を計算することができる。三次元ポリペプチド構造を得るのに使用可能なＸ線結晶構造解析法及びＮＭＲ法の例については、例えば、Ｅｉｇｅｎｂｒｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２２９：９６９−９９５，１９９３；及びＨｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１７：１９３０−１９３４，２００７（そのそれぞれの開示の全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２０５】
ＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチドの集団の均一性
本明細書に記載のＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチド（例えば、抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、またはその構築物）が単一のジスルフィド結合アイソフォームとして存在している医薬組成物を作製することができる。例えば、医薬組成物中のポリペプチドのうちの少なくとも１０％、またはそれ以上は、単一のジスルフィド結合アイソフォーム（例えば、ＩｇＧ２−Ａアイソフォーム）として存在していてもよい。これは、例えば、システイン残基２３２及び２３３の一方または両方にアミノ酸置換または欠失を生じさせることで、ＩｇＧ２−Ａ以外のＩｇＧ２アイソフォームを生じさせ得るジスルフィド結合の発生を防止または抑制することにより、達成され得る（例えば、図１３Ａ〜図１３Ｄを参照のこと）。本開示の医薬組成物としては、例えば、医薬組成物中のアンタゴニストＴＮＦＲ２ポリペプチドのうちの約１０％〜約９９．９９９％が単一のジスルフィド結合アイソフォーム、例えば、ＩｇＧ２−Ａアイソフォームなどで存在している医薬組成物が挙げられる。例えば、本開示の医薬組成物としては、例えば、医薬組成物中のポリペプチドのうちの１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、またはそれ以上が、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している、アンタゴニストＴＮＦＲ２ポリペプチドを含有する医薬組成物が挙げられる。
【０２０６】
アンタゴニストＴＮＦＲ２ポリペプチドの試料中に含まれる様々なジスルフィド結合アイソフォームの相対量を測定するための技術としては、当該技術分野において周知及び本明細書に記載の液体クロマトグラフィー技術、例えば、Ｗｙｐｙｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８３：１６１９４−１６２０５，２００８（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる）において例示されている液体クロマトグラフィー技術などが挙げられる。
【０２０７】
ＴＮＦＲ２／ＭＡＰＫ／ＴＲＡＦ２／３シグナル伝達カスケードに対する作用
本明細書に記載の抗ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメント）は、ＴＮＦＲ２と相互作用してＴＮＦＲ２の活性を阻害することができる。それゆえ、本明細書に記載の抗ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、ＴＮＦＲ２シグナル伝達を促進するのではなく、ＴＮＦα−ＴＮＦＲ２相互作用を選択的に相殺することができる。この相殺は、ＴＮＦαと結合した際のＴＮＦＲ２活性化が、ＭＡＰＫ及びＴＲＡＦ２／３シグナルカスケードの伝播、及びＴ−ｒｅｇ細胞増殖に関与する遺伝子のＮＦκＢ介在性転写の活性化、ならびにアポトーシスからの回避を引き起こす（Ｆａｕｓｔｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．，９：４８２−４９３，２０１０）ことから、治療用途、例えば、がん免疫療法などにおいて特に重要である。本明細書に記載のＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメント）は、受容体が隣接するＴＮＦＲ２タンパク質と三量体を形成するのを防止する１つまたは複数の特定のエピトープにおいて、ＴＮＦＲ２に結合する。この三量体化は、ＴＮＦＲ２による細胞内シグナル伝達を活性化させるが、その活性化は、例えば、ＴＮＦＲ２＋細胞、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＭＤＳＣ、及び／またはＴＮＦＲ２＋がん細胞などの増殖を促進する。有利なことに、本明細書に記載のＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチドは、ＴＮＦα結合部位が立体的に接近し難い逆平行二量体構造にＴＮＦＲ２を安定させるように、特定のエピトープにおいてＴＮＦＲ２に結合する。この結合は、さもなければＴＮＦＲ２シグナル伝達を誘発させ得るＴＮＦＲ２三量体形成をＴＮＦαが凝集させるのを防止する。それゆえ、本明細書に記載のポリペプチドを使用して、ＴＮＦＲ２＋細胞、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＭＤＳＣ、及びＴＮＦＲ２＋がん細胞などの成長及び増殖を抑制することができる。例えば、Ｔ−ｒｅｇ及びＭＤＳＣの増殖の抑制により、例えば、がん細胞または外来病原体に対する免疫応答を開始することができるＴエフェクター細胞の増殖が可能となる。それゆえ、対象における免疫応答（例えば、がん細胞または病原性微生物に対する免疫応答）の効果を増強させるために、細胞増殖障害または感染症を有する哺乳動物対象、例えば、ヒトなどに、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを投与してもよい。
【０２０８】
Ｔ−ｒｅｇ細胞増殖に対する作用
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメントなどを使用して、自己細胞に対するＴ細胞介在性細胞傷害、例えば、Ｔリンパ球による腫瘍細胞の攻撃などに一般的に関与するＴ−ｒｅｇ細胞の活性を減弱させてもよい。この減弱は、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖を阻害する、及び／またはＴ−ｒｅｇ細胞を直接的に殺傷する、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの能力により達成することができる。それゆえ、適応免疫応答、例えば、がん細胞または病原性微生物に対する応答などの持続期間を延長するために、哺乳動物対象、例えば、ヒトなどに、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを投与してもよい（例えば、本明細書に記載の様々な投与経路のいずれかにより）。この方法では、例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメントなどを、がん及び感染症に対するＴリンパ球をベースとした療法を増強するための既存の技術と相乗させてもよい。例えば、本明細書に記載のＴＮＦＲ２アンタゴニストを投与してＴ−ｒｅｇ細胞の活性を抑制することにより、腫瘍反応性Ｔ細胞の細胞傷害効果を増強してもよい。ＴＮＦＲ２アンタゴニストをまた、腫瘍反応性Ｔ細胞の生存率を高めるための既存の戦略、例えば、リンパ球枯渇療法及び増殖因子療法などと相乗させて、それにより、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける抗腫瘍反応性の持続期間を延長させてもよい。
【０２０９】
Ｔ−ｒｅｇ増殖の阻害が、病原性微生物に対する攻撃を開始することができるＣＤ８＋Ｔリンパ球の活性を増強することから、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメントなどもまた使用して、哺乳動物対象（例えば、ヒト）における広く様々な感染症を治療してもよい。加えて、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びその抗原結合フラグメントもまた使用して、ヒトまたは農業用家畜（例えば、ウシ科哺乳動物、ブタ、雌ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ、ウサギ、ハムスター、モルモット、またはその他の非ヒト哺乳動物）における多種多様な感染症、例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓなどを治療してもよい。
【０２１０】
ＴＮＦＲ２＋がん細胞に対する直接的な作用
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメントなどは、がん細胞、例えば、ＴＮＦＲ２＋腫瘍細胞などの表面上のＴＮＦＲ２に結合してＴＮＦＲ２を不活性化させ得る。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びその抗原結合フラグメントは、とりわけ、Ｔ細胞リンパ腫細胞（例えば、ホジキンリンパ腫細胞または皮膚非ホジキンリンパ腫細胞）、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、または腎細胞癌細胞の表面上のＴＮＦＲ２に結合し得る。がん細胞上のＴＮＦＲ２に直接結合する本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びその抗原結合フラグメントの能力により、これらの分子ががん細胞の生存率及び増殖を減弱させ得る別の経路がもたらされる。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物などは、増殖する細胞の能力を抑制する及び／または細胞のアポトーシスを促進するために、がん細胞（例えば、皮膚Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、または多発性骨髄腫細胞、例えば、卵巣癌細胞など）の表面上のＴＮＦＲ２に直接結合し得る。
【０２１１】
ＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチドは活性において別のＴＮＦＲ２結合因子に依存しない
重要なことに、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメントなどは、内在性ＴＮＦＲ２結合因子、例えば、ＴＮＦαなどを必要とすることなく、ＴＮＦＲ２に結合してＴＮＦＲ２介在性シグナル伝達を抑制することができる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメントなどは、Ｔ−ｒｅｇ及び／またはがん細胞の増殖を減弱させるのにＴＮＦαを必要としない。メカニズムによって限定するものではないが、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、これらの抗体またはその抗原結合フラグメントが特定のエピトープにおいてＴＮＦＲ２に結合する能力により、この特性を示し得るが、特定のエピトープは、結合すると、この受容体の逆平行二量体構造を安定させる。この構造形態では、ＮＦκＢシグナル伝達を増強させることはできない。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、不活性構造状態にＴＮＦＲ２を維持することにより、ＴＮＦＲ２アゴニストが細胞増殖を回復させるのを防止することができる、及び／または、ＴＮＦＲ２＋細胞、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＭＤＳＣ、またはＴＮＦＲ２＋がん細胞などの直接的な殺傷（例えば、アポトーシスによる）をもたらすことができる。
【０２１２】
例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、ＴＮＦＲ２＋細胞、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞、がん細胞、または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）などの表面上のＴＮＦＲ２に結合して、ＴＮＦαの存在下または不在下において、このような細胞の増殖を阻害し得る。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメントなどは、このような細胞の増殖を、ＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチドで処理していないこのような細胞と比較して、例えば、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはそれ以上阻害し得る。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）は、ＴＮＦαの存在または不存在によって大幅に変化しない、このような細胞増殖アッセイにおけるＩＣ５０値を示し得る（例えば、ＴＮＦαの不在下の同一細胞増殖アッセイにおける、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）のＩＣ５０値と比較して、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満変化した、ＴＮＦαの存在下におけるＩＣ５０値）。ＴＮＦＲ２抗体のアンタゴニスト作用を測定するのに使用可能な細胞死アッセイの例については、例えば、以下の実施例２に記載している。同様に、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、ＣＨＵＫ、ＮＦＫＢＩＥ、ＮＦＫＢＩＡ、ＭＡＰ３Ｋ１１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ｒｅｌＢ、及びｃＩＡＰ２／ＢＩＲＣ３からなる群から選択される１種または複数種の遺伝子の発現を測定することによって評価した場合、ＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチドで処理していないこのような細胞と比較して、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはそれ以上、ＴＮＦＲ２シグナル伝達を阻害し得る。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）は、ＴＮＦαの存在または不存在によって大幅に変化しない、このような遺伝子発現アッセイにおけるＩＣ５０値を示し得る（例えば、ＴＮＦαの不在下の同一遺伝子発現アッセイにおける、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）のＩＣ５０値と比較して、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満変化した、ＴＮＦαの存在下におけるＩＣ５０値）。
【０２１３】
Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＭＤＳＣ、及びＴＮＦＲ２＋がん細胞の直接的な殺傷
本明細書で開示するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、例えば、試料（例えば、患者内、例えば、ヒト患者内）中において、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＴＮＦＲ２＋がん細胞、及び／またはＭＤＳＣの増殖を抑制し得るだけではなく、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＴＮＦＲ２＋がん細胞、及び／またはＭＤＳＣの死滅もまた誘導し得る。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、例えば、アンタゴニストＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した試料（例えば、本明細書に記載のがんまたは感染症に対する治療を受けているヒト患者から単離した試料など）中におけるＴ−ｒｅｇ細胞、がん細胞（例えば、とりわけ、皮膚Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、腎細胞癌細胞、または多発性骨髄腫細胞など）、及び／またはＭＤＳＣの総量を、アンタゴニストＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントで処理していない試料と比較して、例えば、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはそれ以上低下させることができ得る。
【０２１４】
Ｔ−ｒｅｇ、ＭＤＳＣ、及び／またはがん細胞の増殖を減弱させる本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及び抗原結合フラグメント）の能力は、部分的に、試料（例えば、本明細書に記載のがんまたは感染症に対する治療を受けているヒト患者から単離した試料）中の可溶性ＴＮＦＲ２の量を低下させるこれらのポリペプチドの能力によるものであり得る。この有利な作用がない場合、可溶性ＴＮＦＲ２は、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞によって分泌され得、細胞外環境のＴＮＦＲ２アンタゴニストに結合してそれらを引き離すことにより、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＴＮＦＲ２＋がん細胞、またはＭＤＳＣの表面のＴＮＦＲ２に局在化するＴＮＦＲ２アンタゴニストの能力を妨げ得る。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＮＦＲ２の分泌を抑制することにより、治療用分子、例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメント、及び／または別の抗がん剤、例えば、本明細書に記載の組成物及び方法と共に使用することができる本明細書に記載または当該技術分野において周知の抗がん剤などの影響を、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＴＮＦＲ２＋がん細胞、及び／またはＭＤＳＣが一層受けやすくさせ得る。
【０２１５】
活性（ＣＤ２５Ｈｉ及びＣＤ４５ＲＡＬｏｗ）Ｔ−ｒｅｇ細胞の選択的な調節
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、試料（例えば、本明細書に記載のがんまたは感染症に対する治療を受けているヒト患者から単離した試料）中における、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖を阻害する、またはＴ−ｒｅｇ細胞の総量を低下させることができ得、活発に分裂している状態のＴ−ｒｅｇ細胞に対して選択的に作用し得る。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、ＣＤ２５Ｍｅｄ及びＣＤ４５ＲＡＨｉを発現する休止Ｔ−ｒｅｇ細胞と比較して、ＣＤ２５Ｈｉ及びＣＤ４５ＲＡＬｏｗを発現する活性Ｔ−ｒｅｇ細胞を選択的に標的とし得る。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ２５Ｈｉ及びＣＤ４５ＲＡＬｏｗを発現するＴ−ｒｅｇ細胞の増殖を、ＣＤ２５Ｈｉタンパク質及びＣＤ４５ＲＡＬｏｗタンパク質を発現しないＴ−ｒｅｇ細胞、例えば、ＣＤ２５Ｍｅｄタンパク質及びＣＤ４５ＲＡＨｉタンパク質を発現するＴ−ｒｅｇ細胞などと比較して、例えば、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはそれ以上抑制することができ得る。
【０２１６】
腫瘍微小環境におけるＴ−ｒｅｇ細胞、ＭＤＳＣ、及びＴエフェクター細胞の調節
本明細書に記載のアンタゴニストＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメントなどは、がん有していない対象と比較してがんを患う患者においてより高い力価で、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖を阻害し得る。本明細書に記載のアンタゴニストＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメントなどは、がんを患う患者におけるまたはがんを有していない対象におけるがん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などと比較して腫瘍の微小環境においてより高い力価で、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖を阻害し得る。例えば、本明細書に記載の細胞死アッセイを使用して、この作用を測定してもよい。例えば、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がん細胞を含まない部位におけるＴ−ｒｅｇ細胞の増殖を抑制または阻害するためのポリペプチドのＩＣ５０より、例えば、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、１００倍、１，０００倍、１０，０００倍、またはそれ以上の倍数低い、腫瘍の微小環境におけるＴ−ｒｅｇ細胞の増殖を抑制または阻害するためのＩＣ５０を示し得る。抗ＴＮＦＲ２ポリペプチドのアンタゴニスト作用を測定するのに使用可能な細胞死アッセイの例については、例えば、以下の実施例２に記載している。本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、ＴＮＦＲ２＋がん細胞（例えば、ホジキンリンパ腫細胞、皮膚非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、腎細胞癌細胞、皮膚癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、子宮内膜癌細胞、造血がん細胞またはリンパがん細胞、中枢神経系がん細胞、乳癌細胞、膵臓癌細胞、胃癌細胞、食道癌細胞、及び上部消化管癌細胞など）を含有する腫瘍の微小環境において、上記のがんのうちの１種または複数種を患う患者におけるまたはがんを有していない対象におけるこのようながん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などよりも、より高い力価で、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖を阻害し得る、または、Ｔ−ｒｅｇ細胞のアポトーシスを促進し得る。
【０２１７】
追加的にまたは代替的に、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がんを有していない対象と比較してがんを患う患者においてより高い力価で、ＭＤＳＣの増殖を阻害し得る。本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がんを患う患者におけるまたはがんを有していない対象におけるがん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などと比較して腫瘍の微小環境においてより高い力価で、ＭＤＳＣの増殖を阻害し得る。例えば、本明細書に記載の細胞死アッセイを使用して、この作用を測定してもよい。例えば、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がん細胞を含まない部位におけるＭＤＳＣの増殖を抑制または阻害するためのポリペプチドのＩＣ５０より、例えば、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、１００倍、１，０００倍、１０，０００倍、またはそれ以上の倍数低い、腫瘍の微小環境におけるＭＤＳＣの増殖を抑制または阻害するためのＩＣ５０を示し得る。抗ＴＮＦＲ２ポリペプチドのアンタゴニスト作用を測定するのに使用可能な細胞死アッセイの例については、例えば、以下の実施例２に記載している。本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、ＴＮＦＲ２＋がん細胞（例えば、ホジキンリンパ腫細胞、皮膚非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、腎細胞癌細胞、皮膚癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、子宮内膜癌細胞、造血がん細胞またはリンパがん細胞、中枢神経系がん細胞、乳癌細胞、膵臓癌細胞、胃癌細胞、食道癌細胞、及び上部消化管癌細胞など）を含有する腫瘍の微小環境において、上記のがんのうちの１種または複数種を患う患者におけるまたはがんを有していない対象におけるこのようながん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などよりも、より高い力価で、ＭＤＳＣの増殖を阻害し得る、または、ＭＤＳＣのアポトーシスを促進し得る。
【０２１８】
追加的にまたは代替的に、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がんを有していない対象と比較してがんを患う患者においてより高い力価で、Ｔエフェクター細胞、例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞などを増殖させ得る。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメントなどは、がんを患う患者におけるまたはがんを有していない対象におけるがん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などと比較して腫瘍の微小環境においてより高い力価で、Ｔエフェクター細胞、例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞などを増殖させる。例えば、本明細書に記載の細胞増殖アッセイを使用して、この作用を測定してもよい。例えば、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、がん細胞を含まない部位におけるＴエフェクター細胞を増殖させるためのポリペプチドのＥＣ５０より、例えば、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、１００倍、１，０００倍、１０，０００倍、またはそれ以上の倍数低い、腫瘍の微小環境におけるＴエフェクター細胞を増殖させるためのＥＣ５０を有し得る。Ｔエフェクター細胞に対する抗ＴＮＦＲ２ポリペプチドの作用を測定するのに使用可能な細胞増殖アッセイの例については、例えば、以下の実施例２に記載している。本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、ＴＮＦＲ２＋がん細胞（例えば、ホジキンリンパ腫細胞、皮膚非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、腎細胞癌細胞、皮膚癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、子宮内膜癌細胞、造血がん細胞またはリンパがん細胞、中枢神経系がん細胞、乳癌細胞、膵臓癌細胞、胃癌細胞、食道癌細胞、及び上部消化管癌細胞など）を含有する腫瘍の微小環境において、上記のがんのうちの１種または複数種を患う患者におけるまたはがんを有していない対象におけるこのようながん細胞を含まない部位、例えば、腫瘍から遠い部位などよりも、より高い力価で、Ｔエフェクター細胞、例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞などを直接的に増殖させ得る。Ｔエフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞）は、例えば、１種または複数種のがん細胞、例えば、本明細書に記載のその他のがんの細胞の中でも、ホジキンリンパ腫細胞、皮膚非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、腎細胞癌細胞、皮膚癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、子宮内膜癌細胞、造血がん細胞またはリンパがん細胞、中枢神経系がん細胞、乳癌細胞、膵臓癌細胞、胃癌細胞、食道癌細胞、及び上部消化管癌細胞などの上に存在する抗原と特異的に反応する。
【０２１９】
全長ＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体の抗原結合フラグメントの活性
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体は、このような抗体の抗原結合フラグメントが示すのと類似した力価で、例えば、Ｔ−ｒｅｇ、がん細胞、及び／またはＭＤＳＣの増殖を阻害し得る、または、Ｔエフェクター細胞の増殖を促進し得る。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体のＦｃ領域を除去しても、試料（例えば、本明細書に記載のがんまたは感染症に対する治療を受けているヒト患者から単離した試料）中における、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＭＤＳＣ、及び／またはがん細胞の増殖を減弱させる、または、Ｔ−ｒｅｇ細胞、ＭＤＳＣ、及び／またはがん細胞の総量を低下させる、分子の能力は、変化しない場合がある。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びその抗原結合フラグメントは、例えば、細胞死を誘導するためエフェクタータンパク質をリクルートするのにＦｃ領域を必要とする抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）とは異なる経路を介して機能し得る。加えて、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、様々な形態、例えば、一本鎖ポリペプチド（例えば、例えば、アミド結合、チオエーテル結合、炭素−炭素結合、またはジスルフィド架橋により、互いに共有結合した１つまたは複数のＣＤＲを含有する一本鎖ポリペプチド）、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、霊長類化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、多重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、デュアル可変免疫グロブリンドメイン、一価抗体またはその抗原結合フラグメント、キメラ抗体またはその抗原結合フラグメント、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ディアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャフォールド、ドメイン抗体、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２分子、及びタンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）などで、治療活性を示し得る。
【０２２０】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの特異的結合特性
本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、または抗体フラグメントなどのヒトＴＮＦＲ２に対する特異的結合は、確立された様々な方法のいずれかを用いて測定することができる。親和性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＴＮＦα−ＴＮＦＲ２相互作用の半数阻害を達成するのに必要な抗体の濃度（ＩＣ５０）、及び抗体−ＴＮＦＲ２複合体解離の平衡定数（ＫＤ）を含む様々な測定値を用いて、定量的に表すことができる。本明細書に記載の抗体とのＴＮＦＲ２の相互作用を記述する平衡定数、ＫＤは、ＴＮＦＲ２−抗体複合体が互いに相互作用しない溶媒で分離されたＴＮＦＲ２及び抗体分子へと解離する反応のための化学平衡定数である。
【０２２１】
本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及び抗原結合フラグメント）としては、１００ｎＭ未満（例えば、９５ｎＭ、９０ｎＭ、８５ｎＭ、８０ｎＭ、７５ｎＭ、７０ｎＭ、６５ｎＭ、６０ｎＭ、５５ｎＭ、５０ｎＭ、４５ｎＭ、４０ｎＭ、３５ｎＭ、３０ｎＭ、２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、または１ｎＭ）のＫＤ値でＴＮＦＲ２に特異的に結合するポリペプチドが挙げられる。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、１ｎＭ未満（例えば、９９０ｐＭ、９８０ｐＭ、９７０ｐＭ、９６０ｐＭ、９５０ｐＭ、９４０ｐＭ、９３０ｐＭ、９２０ｐＭ、９１０ｐＭ、９００ｐＭ、８９０ｐＭ、８８０ｐＭ、８７０ｐＭ、８６０ｐＭ、８５０ｐＭ、８４０ｐＭ、８３０ｐＭ、８２０ｐＭ、８１０ｐＭ、８００ｐＭ、７９０ｐＭ、７８０ｐＭ、７７０ｐＭ、７６０ｐＭ、７５０ｐＭ、７４０ｐＭ、７３０ｐＭ、７２０ｐＭ、７１０ｐＭ、７００ｐＭ、６９０ｐＭ、６８０ｐＭ、６７０ｐＭ、６６０ｐＭ、６５０ｐＭ、６４０ｐＭ、６３０ｐＭ、６２０ｐＭ、６１０ｐＭ、６００ｐＭ、５９０ｐＭ、５８０ｐＭ、５７０ｐＭ、５６０ｐＭ、５５０ｐＭ、５４０ｐＭ、５３０ｐＭ、５２０ｐＭ、５１０ｐＭ、５００ｐＭ、４９０ｐＭ、４８０ｐＭ、４７０ｐＭ、４６０ｐＭ、４５０ｐＭ、４４０ｐＭ、４３０ｐＭ、４２０ｐＭ、４１０ｐＭ、４００ｐＭ、３９０ｐＭ、３８０ｐＭ、３７０ｐＭ、３６０ｐＭ、３５０ｐＭ、３４０ｐＭ、３３０ｐＭ、３２０ｐＭ、３１０ｐＭ、３００ｐＭ、２９０ｐＭ、２８０ｐＭ、２７０ｐＭ、２６０ｐＭ、２５０ｐＭ、２４０ｐＭ、２３０ｐＭ、２２０ｐＭ、２１０ｐＭ、２００ｐＭ、１９０ｐＭ、１８０ｐＭ、１７０ｐＭ、１６０ｐＭ、１５０ｐＭ、１４０ｐＭ、１３０ｐＭ、１２０ｐＭ、１１０ｐＭ、１００ｐＭ、９０ｐＭ、８０ｐＭ、７０ｐＭ、６０ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、または１ｐＭ）のＫＤ値でＴＮＦＲ２に特異的に結合する。
【０２２２】
本明細書に記載のポリペプチドはまた、様々なｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイを用いて特性決定することができる。抗ＴＮＦＲ２ポリペプチドのＫＤまたはＩＣ５０を測定するのに使用可能な実験の例としては、例えば、とりわけ、表面プラズモン共鳴、等温滴定カロリメトリー、蛍光異方性、及びＥＬＩＳＡベースアッセイが挙げられる。ＥＬＩＳＡは、このようなアッセイが一般的に極めて低い濃度の抗体を必要とすることから、抗体活性を解析するための特に有用な方法の代表例である。標準的なＥＬＩＳＡアッセイを用いて解析される一般的なシグナルは蛍光であり、その蛍光は一般的に、一次抗体（例えば、本明細書に記載のＴＮＦＲ２抗体）に特異的に結合する二次抗体にコンジュゲートしたペルオキシダーゼの活性の結果である。本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及び抗原結合フラグメント）は、ＴＮＦＲ２及びその内部のエピトープ、例えば、ヒトＴＮＦＲ２のＣＲＤ３及び／またはＣＲＤ４内の１つまたは複数の連続残基または非連続残基を含有するエピトープなどに結合することができる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ポリペプチドは更に、天然タンパク質内の上記エピトープの構造を模倣するように様々な残基を予め構造的に組織した、ＴＮＦＲ２に由来する単離ペプチドに結合し得る。例えば、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含有するペプチド、または配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大５つのアミノ酸置換を有するペプチド（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大５つの保存的アミノ酸置換を有するペプチドなど）、及び／または、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一な（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一な）アミノ酸配列を有するペプチド、に結合し得る。直接ＥＬＩＳＡ実験において、この結合は、例えば、ＨＲＰをコンジュゲートした二次抗体に結合した抗原抗体複合体とのＨＲＰ基質（例えば、２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート）の培養時に生じる蛍光を解析することにより、定量することができる。
【０２２３】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの動力学的特性
ＴＮＦＲ２−ポリペプチド相互作用の熱力学的パラメータに加えて、本明細書に記載のポリペプチドのＴＮＦＲ２との動力学的な結合及び解離を定量的に特性決定することもまた可能である。これは、例えば、確立された手法に従ってポリペプチド−抗原（例えば、抗体−抗原）複合体の形成の速度をモニターすることにより、実施することができる。例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、抗体−ＴＮＦＲ２複合体の形成（ｋｏｎ）及び解離（Ｋｏｆｆ）の速度定数を測定することができる。この単分子解離の平衡定数をＫｏｆｆ値とｋｏｎ値の比率として表すことが可能であることから、これらのデータはまた、抗体−ＴＮＦＲ２複合体解離の平衡定数（ＫＤ）の計算を可能とする。ＳＰＲは、その実験が化学標識の結合による一方の構成要素の修飾を必要としないことから、受容体−抗体相互作用の動力学的パラメータ及び熱力学的パラメータを測定するのに特に有利な技術である。逆に、受容体は通常、固体金属表面上に固定され、その表面は、抗体濃度を上げていく溶液でパルスをかけて処理される。抗体−受容体結合が金属表面における入射光の反射の角度のひずみを誘導するため、抗体−受容体相互作用の結合速度定数及び解離速度定数を計算するために、抗体を系に導入する際の経時的な屈折率のこの変化を確立された回帰モデルにフィッティングしてもよい。
【０２２４】
本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、ＴＮＦＲ２と相互作用する際に高ｋｏｎ値及び低Ｋｏｆｆ値を示し得るが、これは高親和性受容体結合と一致する。例えば、本明細書に記載のポリペプチドは、ＴＮＦＲ２の存在下で、１０４Ｍ−１ｓ−１超（例えば、１．０×１０４Ｍ−１ｓ−１、１．５×１０４Ｍ−１ｓ−１、２．０×１０４Ｍ−１ｓ−１、２．５×１０４Ｍ−１ｓ−１、３．０×１０４Ｍ−１ｓ−１、３．５×１０４Ｍ−１ｓ−１、４．０×１０４Ｍ−１ｓ−１、４．５×１０４Ｍ−１ｓ−１、５．０×１０４Ｍ−１ｓ−１、５．５×１０４Ｍ−１ｓ−１、６．０×１０４Ｍ−１ｓ−１、６．５×１０４Ｍ−１ｓ−１、７．０×１０４Ｍ−１ｓ−１、７．５×１０４Ｍ−１ｓ−１、８．０×１０４Ｍ−１ｓ−１、８．５×１０４Ｍ−１ｓ−１、９．０×１０４Ｍ−１ｓ−１、９．５×１０４Ｍ−１ｓ−１、１．０×１０５Ｍ−１ｓ−１、１．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、２．０×１０５Ｍ−１ｓ−１、２．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、３．０×１０５Ｍ−１ｓ−１、３．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、４．０×１０５Ｍ−１ｓ−１、４．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、５．０×１０５Ｍ−１ｓ−１、５．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、６．０×１０５Ｍ−１ｓ−１、６．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、７．０×１０５Ｍ−１ｓ−１、７．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、８．０×１０５Ｍ−１ｓ−１、８．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、９．０×１０５Ｍ−１ｓ−１、９．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、または１．０×１０６Ｍ−１ｓ−１）のｋｏｎ値を示し得る。本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、これらのポリペプチドが異なるＴＮＦＲ２エピトープと高親和性で相互作用可能であることから、ＴＮＦＲ２に結合する際に低Ｋｏｆｆ値を示し得る。これらのエピトープ内の残基は、ＴＮＦＲ２との強い分子間接触を形成し得、これにより、抗体−ＴＮＦＲ２複合体の解離が遅れることがある。この高い受容体親和性は低Ｋｏｆｆ値で顕在化し得る。例えば、本明細書に記載のポリペプチドは、ＴＮＦＲ２と複合体を形成した際に、１０−３ｓ−１未満（例えば、１．０×１０−３ｓ−１、９．５×１０−４ｓ−１、９．０×１０−４ｓ−１、８．５×１０−４ｓ−１、８．０×１０−４ｓ−１、７．５×１０−４ｓ−１、７．０×１０−４ｓ−１、６．５×１０−４ｓ−１、６．０×１０−４ｓ−１、５．５×１０−４ｓ−１、５．０×１０−４ｓ−１、４．５×１０−４ｓ−１、４．０×１０−４ｓ−１、３．５×１０−４ｓ−１、３．０×１０−４ｓ−１、２．５×１０−４ｓ−１、２．０×１０−４ｓ−１、１．５×１０−４ｓ−１、１．０×１０−４ｓ−１、９．５×１０−５ｓ−１、９．０×１０−５ｓ−１、８．５×１０−５ｓ−１、８．０×１０−５ｓ−１、７．５×１０−５ｓ−１、７．０×１０−５ｓ−１、６．５×１０−５ｓ−１、６．０×１０−５ｓ−１、５．５×１０−５ｓ−１、５．０×１０−５ｓ−１、４．５×１０−５ｓ−１、４．０×１０−５ｓ−１、３．５×１０−５ｓ−１、３．０×１０−５ｓ−１、２．５×１０−５ｓ−１、２．０×１０−５ｓ−１、１．５×１０−５ｓ−１、または１．０×１０−５ｓ��１）のＫｏｆｆ値を示し得る。
【０２２５】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドが結合するＴＮＦＲ２内のエピトープ
ＴＮＦＲ２に拮抗可能な抗ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及び抗原結合フラグメント）の開発における問題点の１つは、シグナル伝達を促進するエピトープではなく、アンタゴニスト性複合体の形成に関与するＴＮＦＲ２内のエピトープの解明である。本開示は部分的に、結合すると、受容体アンタゴニスト作用を促進し、以下の有利な生物学的活性、
（ａ）例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞表面上のＴＮＦＲ２に結合してＴＮＦＲ２を不活性化させることによる、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖の抑制、及び／またはＴ−ｒｅｇ細胞の直接的な殺傷、
（ｂ）例えば、ＭＤＳＣ表面上のＴＮＦＲ２に結合してＴＮＦＲ２を不活性化させることによる、ＭＤＳＣの増殖の抑制、及び／またはＭＤＳＣの直接的な殺傷、
（ｃ）Ｔエフェクター細胞、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞などの増殖の促進、及び／または、
（ｄ）ＴＮＦＲ２発現がん細胞（例えば、ホジキンリンパ腫細胞、皮膚非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、多発性骨髄腫細胞、腎細胞癌細胞、皮膚癌細胞、肺癌細胞、肝臓癌細胞、子宮内膜癌細胞、造血がん細胞またはリンパがん細胞、中枢神経系がん細胞、乳癌細胞、膵臓癌細胞、胃癌細胞、食道癌細胞、及び上部消化管癌細胞など）の増殖の抑制及び／またはＴＮＦＲ２発現がん細胞の直接的な殺傷、
のうちの１つもしくは複数または全てを促進する能力を有する、ＴＮＦＲ２内のエピトープの発見に基づいている。
【０２２６】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の支配的アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、抗原結合フラグメント、及びその構築物）などは、ヒトＴＮＦＲ２上の以下のエピトープ、
（ａ）配列番号：７のアミノ酸１４２〜１４６（ＫＣＲＰＧ）、
（ｂ）配列番号：７のアミノ酸１４２〜１４９（ＫＣＲＰＧＦＧＶ）、
（ｃ）配列番号：７のアミノ酸１３７〜１４４（ＣＡＰＬＲＫＣＲ）、
（ｄ）配列番号：７のアミノ酸１５０〜１９０（ＲＰＧＴＥＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡＰＧＴＦＳＮＴＴＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩＣＮＶＶＡＩ）、
（ｅ）配列番号：７のアミノ酸１６１〜１６９（ＣＫＰＣＡＰＧＴＦ）、
（ｆ）配列番号：７のアミノ酸７５〜１２８（ＣＤＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳＣＧＳＲＣＳＳＤＱＶＥＴＱＡＣＴＲＥＱＮＲＩＣＴＣＲＰＧＷＹＣＡＬ）（任意選択的に、エピトープは、配列番号：７のアミノ酸８０〜８６（ＤＳＴＹＴＱＬ）、９１〜９８（ＰＥＣＬＳＣＧＳ）、または１１６〜１２３（ＲＩＣＴＣＲＰＧ）の内部にある）、
（ｇ）配列番号：７のアミノ酸１７４〜１８４（ＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩ）、
（ｈ）配列番号：７のアミノ酸１２６〜１４０（ＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬ）、
（ｉ）配列番号：７のアミノ酸１５６〜１６５（ＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡ）、
（ｊ）非ヒト哺乳動物、例えば、本明細書に記載の非ヒト哺乳動物などのＴＮＦＲ２内の同等のエピトープ、上記のエピトープのいずれかに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性）を示すエピトープ、及び／または、これらのエピトープと比較して１つまたは複数の保存的アミノ酸置換を含有するエピトープ、
のうちの１つまたは複数に特異的に結合し得る。
【０２２７】
一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の支配的アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、抗原結合フラグメント、及びその構築物）などは、ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の１４２〜１４６の残基（ＫＣＲＰＧ、配列番号：１９）のうちの１つもしくは複数または全てに結合しない。加えて、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは明確に、ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の残基５６〜６０（ＫＣＳＰＧ、配列番号：１２）を含有するエピトープに対する特異的結合を示さない。ヒトＴＮＦＲ２内の上記のエピトープのうちの１つまたは複数、及びヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の残基５６〜６０を含有するエピトープに結合する能力を示すポリペプチドは、阻害（アンタゴニスト性）活性を欠いている。それゆえ、これらのエピトープを識別して上記のエピトープのうちの１つまたは複数と特異的に相互作用する、及び、ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の残基５６〜６０で構成されるエピトープに特異的結合で結合しない、ＴＮＦＲ２ポリペプチドの能力が、ＴＮＦＲ２シグナル伝達を相殺する本明細書に記載のポリペプチドを特徴付けている。
【０２２８】
本明細書に記載のＴＮＦＲ２ポリペプチドの阻害活性を予測するのに使用可能な１つの例示的な手法は、ＫＣＲＰＧモチーフ（配列番号：１９）を含有するペプチド、例えば、このモチーフを含有する直鎖状ペプチドまたは環状ペプチドなどに対する、抗体または抗体フラグメントの親和性を測定することである。ペプチドは、例えば、ＫＣＲＰＧモチーフ（配列番号：１９）の三次元配置を模倣するように、１つまたは複数の構造上の制約条件（例えば、主鎖または側鎖−側鎖の環化）に基づいて予め構造的に組織されていてもよい。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の残基４８〜６７（ＱＴＡＱＭＣＣＳＫＣＳＰＧＱＨＡＫＶＦＣ、配列番号：１８）により定められたペプチドフラグメントに対するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの親和性と比較して、より高い親和性でこのようなペプチドに特異的に結合し得る。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、例えば、配列番号：１８のアミノ酸配列を有するペプチドに対するアンタゴニスト性ポリペプチドの親和性と比較して、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍、または１０００倍超、より高い親和性で、ＫＣＲＰＧモチーフ（配列番号：１９）を含有するペプチドに結合し得る。
【０２２９】
非ヒト動物由来のＴＮＦＲ２に結合するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド
ヒトＴＮＦＲ２内の上で詳述したエピトープへの結合に加えて、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、支配的アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドなどとしてはまた、非ヒト動物由来のＴＮＦＲ２内の１つまたは複数の同等のモチーフを含有するエピトープに特異的に結合するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドが挙げられる。結合時にアンタゴニスト性表現型を生じさせるヒトＴＮＦＲ２内のエピトープと同等なエピトープの位置については、例えば、ＷＯ２０１６／１８７０６８及びＷＯ２０１７／１９７３３１（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。本開示のアンタゴニスト性ポリペプチドが結合し得る例示的な非ヒト動物のＴＮＦＲ２タンパク質としては、ウシ、バイソン、及び本明細書に記載のその他の農業用動物に由来するＴＮＦＲ２タンパク質が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２３０】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体ＴＮＦＲＡＢ１
例示的な本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、ＴＮＦＲα−ＴＮＦＲ２相互作用を相殺するマウス抗体であるＴＮＦＲＡＢ１のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含んでいてもよい。例えば、本明細書に記載または当該技術分野において周知の抗体ヒト化法を使用し、例えば、ＴＮＦＲＡＢ１のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及び／またはＣＤＲ−Ｌ３、ならびにこれらのＣＤＲのバリアント（例えば、これらのＣＤＲ配列と比較して保存的アミノ酸置換を示すバリアント）を用いて、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを作製してもよい。
【０２３１】
本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及び抗原結合フラグメント）は、ＴＮＦＲＡＢ１の結合特性と同一のまたはＴＮＦＲＡＢ１の結合特性に類似した結合特性を示し得る。これらの特性は以下のとおりである。ＴＮＦＲ２の存在下、ＴＮＦＲＡＢ１は、ＴＮＦＲ２との複合体形成において、４．９８×１０６Ｍ−１ｓ−１の高ｋｏｎ値、ならびに２．２１×１０−４ｓ−１の低Ｋｏｆｆ及び約４４．４ｐＭのＫＤを示す。ＫＣＲＰＧＦＧＶモチーフ（配列番号：２０）、及びとりわけ、ＫＣＲＰＧ配列（配列番号：１９）は、エピトープマッピング解析で確認した際に、ＴＮＦＲＡＢ１との分子間接触を確立する機能性エピトープの特に重要な構成要素として同定されている。本開示の抗ＴＮＦＲ２抗体とのこれらの残基の相互作用は、アンタゴニスト作用を選択的に促進する。重要なことに、ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７のアミノ酸残基５６〜６０（ＫＣＳＰＧ、配列番号：１２）を含むＴＮＦＲ２エピトープは明確に、これらのエピトープの両方に対する特異的結合がアンタゴニスト作用の喪失または著しい低下をもたらすことが判明していることから、ＴＮＦＲＡＢ１または本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体もしくは抗体フラグメントが特異的に結合する構造的エピトープの一部ではない。
【０２３２】
配列ＫＣＲＰＧＦＧＶ（配列番号：２０）内に含まれるエピトープへの結合に加えて、ＴＮＦＲＡＢ１はまた、ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の１６１位〜１６９位により定められた配列（ＣＫＰＣＡＰＧＴＦ、配列番号：２１）内に含まれる下流のエピトープに結合する。本開示のＴＮＦＲ２抗体及び抗体フラグメントはまた、このエピトープ、またはこのエピトープを含有するＴＮＦＲ２内のより大きな領域（例えば、ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の１５０位〜１９０位（ＡＲＰＧＴＥＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡＰＧＴＦＳＮＴＴＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩＣＮＶＶＡＩ、配列番号：２２）に由来する少なくとも５つの連続残基または非連続残基を含む配列）に結合し得る。ＴＮＦＲＡＢ１は、２つの重鎖に加えて２つの軽鎖を含有する。ＴＮＦＲＡＢ１の重鎖は以下のアミノ酸配列を含有する（ＣＤＲは太字で示す）。
2021534757.tif 000017
【０２３３】
ＴＮＦＲＡＢ１軽鎖の配列は以下のとおりである（ＣＤＲは太字で示す）。
2021534757.tif 000018
【０２３４】
ＴＮＦＲＡＢ２の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを以下に示す。
ＴＮＦＲＡＢ１  ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）
ＴＮＦＲＡＢ１  ＣＤＲ−Ｈ２：ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）
ＴＮＦＲＡＢ１  ＣＤＲ−Ｈ３：ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）
ＴＮＦＲＡＢ１  ＣＤＲ−Ｌ１：ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）
ＴＮＦＲＡＢ１  ＣＤＲ−Ｌ２：ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２６）
ＴＮＦＲＡＢ１  ＣＤＲ−Ｌ３：ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）
【０２３５】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体ＴＮＦＲＡＢ２
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、ＴＮＦＲα−ＴＮＦＲ２相互作用を相殺する別の抗体であるＴＮＦＲＡＢ２のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含んでいてもよい。例えば、本明細書に記載または当該技術分野において周知の抗体ヒト化法を使用し、例えば、ＴＮＦＲＡＢ２のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及び／またはＣＤＲ−Ｌ３、ならびにこれらのＣＤＲのバリアント（例えば、これらのＣＤＲ配列と比較して保存的アミノ酸置換を示すバリアント）を用いて、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントを作製してもよい。
【０２３６】
例えば、本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及び抗原結合フラグメント）は、ＴＮＦＲＡＢ２の結合特性と同一のまたはＴＮＦＲＡＢ２の結合特性に類似した結合特性を示し得る。これらの特性は以下のとおりである。ＴＮＦＲ２の存在下、ＴＮＦＲＡＢ２は、ＴＮＦＲ２との複合体形成において、３．６０９９×１０５Ｍ−１ｓ−１の高ｋｏｎ値、ならびに２．２４×１０−４ｓ−１の低Ｋｏｆｆ及び約６２１ｐＭのＫＤを示す。ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の残基１３７〜１４４（ＣＡＰＬＲＫＣＲ、配列番号：１１）を含有するエピトープは、エピトープマッピング解析で確認した際に、ＴＮＦＲＡＢ２との分子間接触を確立する機能性エピトープの特に重要な構成要素として同定されている。このエピトープに特異的に結合するＴＮＦＲ２抗体及び抗体フラグメントは本開示に含まれる。
【０２３７】
残基ＣＡＰＬＲＫＣＲ（配列番号：１１）を含有するエピトープへの結合に加えて、ＴＮＦＲＡＢ２はまた、ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の８０位〜８６位（ＤＳＴＹＴＱＬ、配列番号：８）、ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の９１位〜９８位（ＰＥＣＬＳＣＧＳ、配列番号：９）、ならびにヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の１１６位〜１２３位（ＲＩＣＴＣＲＰＧ、配列番号：１０）の内部の１つまたは複数の残基を含むエピトープに結合する。本開示のＴＮＦＲ２抗体及び抗体フラグメントはまた、これらのエピトープのうちの１つまたは複数に結合し得る。ＴＮＦＲＡＢ２が特異的に結合するエピトープの情報を用いて、本開示の抗体及び抗体フラグメントを設計及び同定することができる。例えば、これらのエピトープに高い親和性及び選択性で結合可能な抗体をスクリーニングするために、本明細書に記載または当該技術分野において周知の様々なｉｎ  ｖｉｔｒｏペプチドディスプレイ技術またはコンビナトリアル抗体ライブラリスクリーニングのいずれかを使用することができる。
【０２３８】
ＴＮＦＲＡＢ２の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを以下に示す。
ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＴＦＴＤＹＬ（配列番号：２７４）
ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｈ２：ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）
ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｈ３：ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）
ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｌ１：ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）
ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｌ２：ＴＹＳ
ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｌ３：ＣＬＱＹＶＮＬＬＴ（配列番号：２７２）
【０２３９】
加えて、ＴＮＦＲＡＢ２のＣＤＲ−Ｌ２は、Ｎ末端フレームワーク残基ＬＬＩＲ（配列番号：２６２）及びＣ末端フレームワーク残基ＴＬＥに隣接している。それゆえ、本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及び抗原結合フラグメント）としては、ＴＮＦＲＡＢ２の上記のＣＤＲのうちの１つまたは複数に加えて、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤＲ−Ｌ２配列に隣接するＮ末端ＬＬＩＲ残基（配列番号：２６２）及びＣ末端ＴＬＥ残基を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドが挙げられる。
【０２４０】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体ＴＮＦＲＡＢ３
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、ＴＮＦＲＡＢ３の結合特性と同一のまたはＴＮＦＲＡＢ３の結合特性に類似した結合特性を示し得る。ＴＮＦＲＡＢ３は、モノクローナル抗体であり、支配的ＴＮＦＲ２アンタゴニストである。モノクローナル抗体ＴＮＦＲＡＢ３は、ＧＹＴＦＴＤＶＩのＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列（配列番号：２９３）を有する。ＴＮＦＲＡＢ３は、ヒトＴＮＦＲ２のＣＲＤ１内のエピトープを除く、ヒトＴＮＦＲ２のＣＤＲ３及び／またはＣＲＤ４内のエピトープに結合する。
【０２４１】
以下で詳細に記載するとおり、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、ＴＮＦＲＡＢ３のエピトープ結合特性に類似したエピトープ結合特性を示す抗体を作製及び同定することにより作製することができる。ＴＮＦＲＡＢ３のエピトープ結合特性に類似したエピトープ結合特性を有するポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を作製するための例示的な技術としては、ＴＮＦＲＡＢ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つもしくは複数または全てを組み込んだ完全ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、及びキメラ抗体の作製に加えて、ＴＮＦＲＡＢ３が特異的に結合するＴＮＦＲ２上の１つもしくは複数または全てのエピトープに特異的に結合するポリペプチドのスクリーニングが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２４２】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体ＴＮＦＲＡＢ４
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、ＴＮＦＲＡＢ４の結合特性と同一のまたはＴＮＦＲＡＢ４の結合特性に類似した結合特性を示し得る。ＴＮＦＲＡＢ４は本明細書に記載のモノクローナルマウス抗体である。この抗体は支配的ＴＮＦＲ２アンタゴニストである。モノクローナル抗体ＴＮＦＲＡＢ４は、以下のアミノ酸残基、
（ａ）  ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の残基１７４〜１８４（ＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩ、配列番号：２８８）、
（ｂ）ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の残基１２６〜１４０（ＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬ、配列番号：２８９）、及び、
（ｃ）ヒトＴＮＦＲ２内の配列番号：７の残基１５６〜１６５（ＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡ、配列番号：２９０）、
を含有するヒトＴＮＦＲ２内のエピトープに結合する。
【０２４３】
以下で詳細に記載するとおり、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、ＴＮＦＲＡＢ４のエピトープ結合特性に類似したエピトープ結合特性を示す抗体を作製及び同定することにより作製することができる。ＴＮＦＲＡＢ４のエピトープ結合特性に類似したエピトープ結合特性を有するポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を作製するための例示的な技術としては、ＴＮＦＲＡＢ４の相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つもしくは複数または全てを組み込んだ完全ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、及びキメラ抗体の作製に加えて、ＴＮＦＲＡＢ４が特異的に結合するＴＮＦＲ２上の１つもしくは複数または全てのエピトープに特異的に結合するポリペプチドのスクリーニングが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２４４】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体ＴＮＦＲＡＢ５
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物などは、ＴＮＦＲＡＢ５の結合特性と同一のまたはＴＮＦＲＡＢ５の結合特性に類似した結合特性を示し得る。ＴＮＦＲＡＢ５は、モノクローナル抗体であり、支配的ＴＮＦＲ２アンタゴニストである。モノクローナル抗体ＴＮＦＲＡＢ５は、ＧＹＴＦＴＤＹＳのＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列（配列番号：２９４）を有する。ＴＮＦＲＡＢ５は、ヒトＴＮＦＲ２のＣＲＤ１内のエピトープを除く、ヒトＴＮＦＲ２のＣＤＲ３及び／またはＣＲＤ４内のエピトープに結合する。
【０２４５】
以下で詳細に記載するとおり、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、ＴＮＦＲＡＢ５のエピトープ結合特性に類似したエピトープ結合特性を示す抗体を作製及び同定することにより作製することができる。ＴＮＦＲＡＢ５のエピトープ結合特性に類似したエピトープ結合特性を有するポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を作製するための例示的な技術としては、ＴＮＦＲＡＢ５の相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つもしくは複数または全てを組み込んだ完全ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、及びキメラ抗体の作製に加えて、ＴＮＦＲＡＢ５が特異的に結合するＴＮＦＲ２上の１つもしくは複数または全てのエピトープに特異的に結合するポリペプチドのスクリーニングが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２４６】
完全ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、及びキメラ抗体
本明細書に記載の抗体としては、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲ配列（例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、及び／またはＣＤＲ−Ｌ３配列）のうちの１つもしくは複数または全てを含有する完全ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、及びキメラ抗体が挙げられる。加えて、本明細書に記載の抗体としては、ＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数または全てがＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の対応するＣＤＲ配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を示すＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、及びＣＤＲ−Ｌ３配列のうちの１つもしくは複数または全てを含有する完全ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、及びキメラ抗体が挙げられる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体としては、ＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数または全てがＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の対応するＣＤＲ配列と比較して１つまたは複数の（例えば、最大３つの）アミノ酸置換（例えば、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換）を含有するＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、及びＣＤＲ−Ｌ３配列のうちの１つもしくは複数または全てを含有する完全ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、及びキメラ抗体が更に挙げられる。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体は、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲ配列のうちのいずれか１つまたは複数をヒト抗体のフレームワーク領域（例えば、ＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３、及びＦＷ４）に組み込むことにより、作製することができる。ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲのうちの１つまたは複数を含有するヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体を開発するのに使用可能な例示的なフレームワーク領域としては、米国特許第７，７３２，５７８号、米国特許第８，０９３，０６８号、及びＷＯ２００３／１０５７８２（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載のフレームワーク領域が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２４７】
１つの例として、本明細書に記載のヒト化抗体を設計するのに使用可能な１つの戦略は、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列を、コンセンサスヒト抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域にアラインすることである。コンセンサスヒト抗体の重鎖配列及び軽鎖配列は当該技術分野において周知である（例えば、「ＶＢＡＳＥ」ヒト生殖細胞系配列データベースを参照のこと。Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２，１９９１；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−９８，１９９２；及びＣｏｘ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７−８３６，１９９４（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）もまた参照のこと）。この方法では、配列アライメントにより可変ドメインのフレームワーク残基及びＣＤＲを同定することができる（上記のＫａｂａｔを参照のこと）。ヒト化ＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体を作製するために、例えば、コンセンサスヒト抗体のＣＤＲのうちの１つまたは複数を、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の対応するＣＤＲ（複数可）に置き換えてもよい。コンセンサスヒト抗体の例示的な可変ドメインは、米国特許第６，０５４，２９７号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）において同定されている
重鎖可変ドメイン：
2021534757.tif 000019
及び軽鎖可変ドメイン
2021534757.tif 000020
を含む（太字で示すＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１９６：９０１−９１７，１９８７の方法に従って同定した）。これらのアミノ酸置換は、例えば、当該技術分野において周知または本明細書に記載の方法を用いた、宿主細胞内におけるヒト化抗体の重鎖及び軽鎖をコードするポリヌクレオチドの組換え発現により実施することができる。
【０２４８】
同様に、例えば、霊長類抗体コンセンサス配列のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを、例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てに置き換えることが可能であることから、この戦略をまた使用して、霊長類化アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体を作製することができる。コンセンサス霊長類抗体配列は当該技術分野において周知である（例えば、米国特許第５，６５８，５７０号、第５，６８１，７２２号、及び第５，６９３，７８０号（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
【０２４９】
一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体、例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５などに由来するＣＤＲ配列に加えて、特定のフレームワーク残基を、ヒト抗体の重鎖可変ドメイン及び／または軽鎖可変ドメインに導入することが望ましい場合がある。例えば、米国特許第６，０５４，２９７号では、特定の抗体重鎖可変領域または抗体軽鎖可変領域に由来する特定のフレームワーク残基が得られたヒト化抗体内に保持されていることが有利となり得る場合のいくつかの例を確認している。一部の実施形態では、フレームワーク残基は、非共有結合相互作用で抗原に結合し得ることから、標的抗原に対する抗体の親和性に寄与し得る。一部の実施形態では、個々のフレームワーク残基は、ＣＤＲの構造を調節し得ることから、抗体の抗原との相互作用に間接的に影響を及ぼし得る。特定のフレームワーク残基は、ＶＨドメインとＶＬドメインの間の界面を形成し得ることから、全体的な抗体構造に寄与し得る。一部の例では、フレームワーク残基は、抗体の構造及び糖質部分に結合する際の抗原親和性を規定し得る機能性グリコシル化部位（例えば、Ａｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）を構成し得る。上記のような例では、様々なフレームワーク残基が、抗体またはその抗原結合フラグメントの高エピトープ親和性及び優れた生化学的活性を促進し得ることから、ＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体（例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５）の特定のフレームワーク残基を、例えば、ヒト化または霊長類化アンタゴニスト性抗体またはその抗原結合フラグメント内に保持することは、有利となり得る。
【０２５０】
本明細書に記載の抗体としてはまた、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全て、または、ＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数または全てがＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の対応するＣＤＲ配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を示すＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、及びＣＤＲ−Ｌ３配列のうちの１つもしくは複数または全て、を含有する、抗体フラグメント、Ｆａｂドメイン、Ｆ（ａｂ’）分子、Ｆ（ａｂ’）２分子、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、タンデムｓｃＦｖフラグメント、ディアボディ、トリアボディ、デュアル可変ドメイン免疫グロブリン、多重特異性抗体、二重特異性抗体、及びヘテロ特異性抗体が挙げられる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体としては、ＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数または全てがＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の対応するＣＤＲ配列と比較して１つまたは複数の（例えば、最大３つの）アミノ酸置換（例えば、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換）を含有するＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、及びＣＤＲ−Ｌ３配列のうちの１つもしくは複数または全てを含有する完全ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、及びキメラ抗体が更に挙げられる。これらの分子は、例えば、本明細書に記載または当該技術分野において周知の技術を用いて、これらのタンパク質をコードするポリヌクレオチドを、真核細胞または原核細胞内トランスフェクション用の発現ベクターに組み込むことにより、組換え的に発現させることができる、または、例えば、本明細書に記載または当該技術分野において周知の固相ペプチド合成法を用いて、化学的に合成することができる。
【０２５１】
本明細書に記載のポリペプチドとしては更に、例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全て、または、ＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数または全てがＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の対応するＣＤＲ配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を示すＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、及びＣＤＲ−Ｌ３配列のうちの１つもしくは複数または全て、を含有する、または、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の対応するＣＤＲ配列と比較して１つまたは複数の（例えば、最大３つの）アミノ酸置換（例えば、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換）を含有する、抗体様スキャフォールドが挙げられる。抗体様スキャフォールドの例としては、標準的な抗体に類似したＢＣ、ＤＥ、及びＦＧ構造ループを含有する第１０番目のフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（１０Ｆｎ３）を含有するタンパク質が挙げられる。１０Ｆｎ３ドメインの三次構造はＩｇＧ重鎖の可変領域の三次構造に類似しており、当業者は、例えば、１０Ｆｎ３のＢＣ、ＤＥ及びＦＧループの残基を、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の対応するＣＤＲ配列の残基に置き換えることによって、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数または全て、または、これらのＣＤＲ配列のうちのいずれか１つまたは複数に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性）を有する配列、または、これらのＣＤＲ配列のうちの１つまたは複数と比較してアミノ酸置換、例えば、保存的または非保存的アミノ酸置換（例えば、最大３つのアミノ酸置換）などを含有する配列を、フィブロネクチンスキャフォールド上にグラフトすることができる。このグラフトは、原核細胞または真核細胞内における改変１０Ｆｎ３ドメインの組換え発現（例えば、本明細書に記載のベクター及び技術を使用して）により達成することができる。抗体由来のＣＤＲをＢＣ、ＤＥ、及びＦＧ構造ループ上にグラフトするための抗体様スキャフォールドとして１０Ｆｎ３ドメインを使用する例は、ＷＯ２０００／０３４７８４、ＷＯ２００９／１４２７７３、ＷＯ２０１２／０８８００６、及び米国特許第８，２７８，４１９号（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）において報告されている。
【０２５２】
ＴＮＦＲ２親和性及びアンタゴニスト作用の分子決定因子
本開示のポリペプチドは、ＴＮＦＲ２アンタゴニスト表現型（例えば、支配的ＴＮＦＲ２アンタゴニスト表現型）を生じさせる一連の共通の構造的特徴を示し得る。例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、及びＴＮＦＲＡＢ５のそれぞれのＣＤＲ−Ｈ１のアミノ酸配列のアライメントにより、これらの抗体が、以下、
Ｇ      Ｆ      Ｔ      Ｆ      Ｓ      Ｓ      Ｙ（ＴＮＦＲＡＢ１  ＣＤＲ−Ｈ１、配列番号：２３）
Ｇ      Ｙ      Ｔ      Ｆ      Ｔ      Ｄ      Ｙ      Ｌ（ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｈ１、配列番号：２７４）
Ｇ      Ｙ      Ｔ      Ｆ      Ｔ      Ｄ      Ｖ      Ｉ（ＴＮＦＲＡＢ３  ＣＤＲ−Ｈ１、配列番号：２９３）
Ｇ      Ｙ      Ｔ      Ｆ      Ｔ      Ｄ      Ｙ      Ｓ（ＴＮＦＲＡＢ５  ＣＤＲ−Ｈ１、配列番号：２９４）
Ｇ  （Ｙ／Ｆ）  Ｔ      Ｆ  （Ｓ／Ｔ）  −      Ｙ      −（コンセンサス配列、配列番号：２９５）
に示す保存されたコンセンサス配列を特徴とすることが判明している。
【０２５３】
配列のアライメントにより、共通のＧＸＴＦＸＸＹＸモチーフが判明しているが、「Ｘ」は独立して、任意のアミノ酸、例えば、２位の芳香族残基（例えば、チロシン残基またはフェニルアラニン残基）、５位の極性で非荷電の残基（例えば、セリン残基またはスレオニン残基）、６位の極性で、任意選択的に負に荷電した残基（例えば、セリン残基、アスパラギン酸残基、またはグルタミン酸残基）、及び７位のロイシン残基、イソロイシン残基、またはセリン残基などを表す。免疫化により様々な異なる動物種から作製しているにもかかわらず、驚くべきことに、本明細書に記載の表現型を示すアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドが共通のＣＤＲ−Ｈ１コア配列を示すことが発見されている。
【０２５４】
加えて、ＴＮＦＲＡＢ１及びＴＮＦＲＡＢ２のＣＤＲ−Ｈ２領域の配列解析を行うことにより、これらの領域中の様々な位置における一連の保存されたアミノ酸、
ＳＳＧ−−ＧＳＹ（ＴＮＦＲＡＢ１  ＣＤＲ−Ｈ２、配列番号：２４）
ＶＤＰＥＹＧＳＴ（ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｈ２、配列番号：２５８）
−−−−−ＧＳ−（コンセンサス配列）
が同様に判明している。
【０２５５】
この配列アライメントの解析は、ＣＤＲ−Ｈ２配列が、ＣＤＲ−Ｈ２領域のＣ末端に保存されたＧＳモチーフを示し、可変分子の側鎖のサイズ、極性、及び静電荷が残りの位置において許容されていることを示している。
【０２５６】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体のＣＤＲ−Ｈ３領域は、コンセンサスアミノ酸配列への類似した収束を示している。以下に示すのは、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、及びＴＮＦＲ２Ａ３（別のモノクローナルアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体）のＣＤＲ−Ｈ３配列である。ＴＮＦＲ２Ａ３についてはＷＯ２０１７／１９７３３１（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。これらの抗体のＣＤＲ−Ｈ３配列に共通する残基の解析は、ＴＮＦＲ２に結合してアンタゴニスト作用、例えば、支配的アンタゴニスト作用などを示す抗体の分子的特徴への洞察をもたらす。エピトープマッピング解析により、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２と、ＴＮＦＲ２Ａ３の両方が、配列番号：７の残基１４２〜１４６を含有するＴＮＦＲ２内のエピトープに結合し、かつ配列番号：７の残基５６〜６０を含有するエピトープに結合しないということが判明している。対応するＣＤＲ−Ｈ３領域間の構造的類似性は、ＴＮＦＲ２の親和性及びアンタゴニスト作用（例えば、支配的アンタゴニスト作用）を保持または向上させ得る残基置換を予測するための基準を提供する。ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、及びＴＮＦＲ２Ａ３のＣＤＲ−Ｈ３配列を以下、
ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（ＴＮＦＲＡＢ１  ＣＤＲ−Ｈ３、配列番号：２５）
ＡＲＤＤＧ−Ｓ−ＹＳＰＦＤＹＷＧ（ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｈ３、配列番号：２５９）
ＡＲＤＤＧ−Ｓ−ＹＳＰＦＤＹＦＧ（ＴＮＦＲ２Ａ３  ＣＤＲ−Ｈ３、配列番号：２８４）
−Ｒ−ＤＧ−Ｓ−Ｙ−−ＦＤ−−−（コンセンサス配列）
に示す。
【０２５７】
ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、及びＴＮＦＲ２Ａ３のＣＤＲ−Ｈ３配列の調査により、このＣＤＲ中における保存されたアルギニン残基、アスパラギン酸残基、グリシン残基、セリン残基、チロシン残基、及びフェニルアラニン残基が明らかとなっている。注目すべきことに、残りの位置において、様々な立体特性及び静電特性の残基が許容されている。ＴＮＦＲＡＢ１におけるＣＤＲ−Ｈ３の第１位が、水素結合供与体分及び受容体部分を有するカルボキサミド側鎖を含有する極性グルタミン残基を特徴とする一方で、ＴＮＦＲＡＢ２及びＴＮＦＲ２Ａ３における対応する位置に、非官能化メチル側鎖を有するアラニン残基が存在していることから、例えば、ＣＤＲ−Ｈ３配列の第１位は、対照的なサイズ傾向及び水素結合形成傾向のアミノ酸残基を許容している。加えて、上記ＣＤＲ−Ｈ３配列の第３位は、ＴＮＦＲＡＢ１における疎水性バリン、及びＴＮＦＲＡＢ２の対応する位置におけるアニオン性アスパラギン酸部分を特徴としている。同様に、ＴＮＦＲＡＢ１のＣＤＲ−Ｈ３の１０位及び１１位が芳香族系を含有する一方で、ＴＮＦＲＡＢ２及びＴＮＦＲ２Ａ３における対応する残基は、極性で環式の脂肪族置換基を含有する。
【０２５８】
類似した解析により、ＴＮＦＲＡＢ１のＣＤＲ−Ｌ配列及びＴＮＦＲＡＢ２のＣＤＲ−Ｌ配列に共通する分子的特徴が判明している。例えば、ＴＮＦＲＡＢ１及びＴＮＦＲＡＢ２のＣＤＲ−Ｌ１配列を以下、
ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（ＴＮＦＲＡＢ１  ＣＤＲ−Ｌ１、配列番号：２６）
Ｑ−Ｎ−−ＩＮＫ−Ｙ（ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｌ１、配列番号：２６０）
Ｙ（コンセンサス残基）
に示す。
【０２５９】
これらの配列を調査することにより、ＣＤＲ−Ｌ１の最後の位置におけるヒドロキシル基含有チロシン残基を特徴とする一方で、残りの位置においては、様々な物理化学的特性の残基が許容されていることが判明している。同様に、ＴＮＦＲＡＢ１及びＴＮＦＲＡＢ２のＣＤＲ−Ｌ２領域の解析を行うことにより、両方の領域内の最後の位置における保存されたアミノ酸、
ＳＴＳＮＬＡＳ（ＴＮＦＲＡＢ１  ＣＤＲ−Ｌ２、配列番号：２７）
ＹＴ−−−−Ｓ（ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｌ２）
Ｔ−−−−Ｓ（コンセンサス配列）
が判明している。
【０２６０】
上記の配列アライメントの解析を行うことにより、これらのＣＤＲ−Ｌ２配列の第３位におけるセリン残基を特徴とする一方で、残りの残基においては、置換が広く許容されていることが判明している。同様に、ＴＮＦＲＡＢ１及びＴＮＦＲＡＢ２のＣＤＲ−Ｌ３配列を以下、
Ｑ−ＱＲＲＮＹＰＹ−−−−−−Ｔ（ＴＮＦＲＡＢ１  ＣＤＲ−Ｌ３、配列番号：２８）
ＣＬＱ−−−ＹＶＮＬ（Ｌ／Ｉ）Ｔ（ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｌ３、配列番号：２６１）
−−Ｑ−−−Ｙ−−−−−−−−Ｔ（コンセンサス配列）
に示す。
【０２６１】
ＴＮＦＲＡＢ１及びＴＮＦＲＡＢ２のＣＤＲ−Ｌ３配列の解析を行うことにより、これらの領域内の異なる位置においてチロシン残基及びスレオニン残基の優先性がある一方で、その他の位置においては、カチオン性側鎖を有する残基（Ａｒｇ）、構造的に制限された側鎖を有する残基（Ｐｒｏ）、及び様々な極性の側鎖を有する残基（例えば、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、及びＶａｌ）を含む幅広い物理化学的特性のアミノ酸が許容されていることが判明している。まとめると、上記のＣＤＲ−Ｈ配列及びＣＤＲ−Ｌ配列の共通の構造的特徴は、逆平行二量体構造のＴＮＦＲ２のＫＣＲＰＧエピトープ（配列番号：７の１４２位〜１４６位であり、配列番号：１９に示す）の１つまたは複数の残基に対する選択的な結合において重要なこれらの残基への洞察をもたらし、親和性及び支配的アンタゴニスト作用を維持しつつ特定のアミノ酸を変更することができることを示している。
【０２６２】
それゆえ、本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、支配的アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）などは、上記のコンセンサス配列を含有する重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを有していてもよい。例えば、本開示のＴＮＦＲ２アンタゴニストは、アミノ酸配列Ｚ４ＪＺ３Ｚ５（Ｊ）２Ｚ５Ｊを有するＣＤＲ−Ｈ１、アミノ酸配列（Ｊ）５Ｚ４Ｚ３Ｊを有するＣＤＲ−Ｈ２、アミノ酸配列（Ｊ）５Ｚ５を有するＣＤＲ−Ｌ１、アミノ酸配列（Ｊ）２Ｚ３を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／またはアミノ酸配列（Ｊ）３Ｚ５（Ｊ）４Ｚ３を有するＣＤＲ−Ｌ３を有していてもよく、それぞれのＪは独立して、天然アミノ酸であり、それぞれのＺ１は独立して、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を含有する天然アミノ酸であり、それぞれのＺ２は独立して、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を含有する天然アミノ酸であり、それぞれのＺ３は独立して、極性で生理学的ｐＨにおいて非荷電の側鎖を含有する天然アミノ酸であり、それぞれのＺ４は独立して、グリシンまたはアラニンであり、それぞれのＺ５は独立して、疎水性側鎖を含有する天然アミノ酸である。
【０２６３】
一部の実施形態では、本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、支配的アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）などは、アミノ酸配列ＧＪＴＦ（Ｊ）２ＹＪ（配列番号：２７７）を有するＣＤＲ−Ｈ１、アミノ酸配列（Ｊ）５ＧＳＪを有するＣＤＲ−Ｈ２、アミノ酸配列（Ｊ）５Ｙを有するＣＤＲ−Ｌ１、アミノ酸配列（Ｊ）２Ｓを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／またはアミノ酸配列（Ｊ）３Ｙ（Ｊ）４Ｔを有するＣＤＲ−Ｌ３を有していてもよく、それぞれのＪは独立して、天然アミノ酸である。
【０２６４】
本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、支配的アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）などは、アミノ酸配列Ｚ４ＹＺ３Ｚ５ＴＤＺ５Ｘを有するＣＤＲ−Ｈ１、アミノ酸配列ＶＤＰＥＹＺ４Ｚ３Ｔ（配列番号：２６４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、アミノ酸配列ＱＮＩＮＫＺ５（配列番号：２６８）を有するＣＤＲ−Ｌ１、アミノ酸配列ＴＹＺ３またはＹＴＺ３を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／またはアミノ酸配列ＣＬＱＺ５ＶＮＬＸＺ３（配列番号：２７１）を有するＣＤＲ−Ｌ３を有していてもよく、それぞれのＺ１は独立して、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を含有するアミノ酸であり、それぞれのＺ２は独立して、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を含有するアミノ酸であり、それぞれのＺ３は独立して、極性で生理学的ｐＨにおいて非荷電の側鎖を含有するアミノ酸であり、それぞれのＺ４は独立して、グリシンまたはアラニンであり、それぞれのＺ５は独立して、疎水性側鎖を含有するアミノ酸であり、それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである。
【０２６５】
一部の実施形態では、本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、支配的アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）などは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）、またはこの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、アミノ酸配列ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）、またはこの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、アミノ酸配列ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）、またはこの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、アミノ酸配列ＴＹＳまたはＹＴＳを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、アミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）、またはこの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、を有していてもよい。
【０２６６】
例えば、一部の実施形態では、本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、支配的アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）などは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＬ（配列番号：２７４）、またはこの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、及び、アミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＩＴ（配列番号：２７３）、またはこの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、を有していてもよい。本開示は部分的に、ＣＤＲ−Ｈ１領域及びＣＤＲ−Ｌ３領域のこの特定の組み合わせが、活性化Ｔ−ｒｅｇ細胞の選択的な殺傷を促進し、増強したＴエフェクター細胞の増殖を増強するという発見に基づいている。本明細書に記載するとおり、これらの表現型は、がん及び感染症の治療において有利であるが、それは、このような病態を患う患者における活性化Ｔ−ｒｅｇ細胞集団を枯渇させる能力が細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞の減弱を低下させ得、それにより、エフェクター細胞ががん性細胞及び感染性細胞に対する免疫応答を開始できるようにするからである。
【０２６７】
例示的なヒト化ＴＮＦＲ２抗体及びその抗原結合フラグメント
本開示のヒト化アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びその抗原結合フラグメントの例としては、表１に示す重鎖及び／または軽鎖を有するヒト化アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びその抗原結合フラグメントが挙げられ、それらについては以下に転記する。実施例において更に詳細に記載するとおり、上の表１に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体は、本明細書に記載のヒト化技術を用いたマウスモノクローナル抗体のヒト化により開発された。ヒト化に加えて、表１に示す抗体は、免疫グロブリンヒンジ領域内にＣ２３２Ｓ置換及びＣ２３３Ｓ置換を導入している。上記のとおり、これらの置換は、ＴＮＦＲ２シグナル伝達に対する高い阻害作用（及び、その結果として高まるＴｒｅｇ枯渇及びエフェクターＴ細胞増殖）を含む様々な有利な特性をアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体に付与する。例示的な本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及び抗原結合フラグメントとしては、上の表１に示すアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及び抗原結合フラグメントに加えて、表１に示す重鎖及び／または軽鎖に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を有する重鎖及び／または軽鎖を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及び抗原結合フラグメントが挙げられる。
【０２６８】
ヒト化アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びその抗原結合フラグメントの例としてはまた、上の表１に示すＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全て、または本明細書に記載の別のＣＤＲを含有する抗体及び抗原結合フラグメントが挙げられる。例えば、本開示のヒト化ＴＮＦＲ２抗体または抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＪＴＦ（Ｊ）２Ｙ（配列番号：２７６）またはＧＪＴＦ（Ｊ）２ＹＪ（配列番号：２７７）を有するＣＤＲ−Ｈ１を含有していてもよく、それぞれのＪは独立して、天然アミノ酸である。一部の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、
（ａ）アミノ酸配列（Ｊ）３ＧＳＪまたは（Ｊ）５ＧＳＪを有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｂ）アミノ酸配列ＪＲＪＤＧＪＳＪＹ（Ｊ）２ＦＤＪ（配列番号：２７８）またはＪＲＪＤＧＳＹ（Ｊ）２ＦＤ（Ｊ）３（配列番号：２７９）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
（ｃ）アミノ酸配列（Ｊ）９Ｙまたは（Ｊ）５Ｙを有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）アミノ酸配列（Ｊ）６Ｓまたは（Ｊ）２Ｓを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、
（ｅ）アミノ酸配列（Ｊ）５Ｙ（Ｊ）２Ｔまたは（Ｊ）３Ｙ（Ｊ）４Ｔを有するＣＤＲ−Ｌ３、
を更に含み、
それぞれのＪは独立して、天然アミノ酸である。
【０２６９】
ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列Ｚ４ＦＺ３Ｚ５ＳＳＺ５またはＺ４ＹＺ３Ｚ５ＴＤＺ５Ｘを有するＣＤＲ−Ｈ１を含有していてもよく、
それぞれのＺ３は独立して、極性で生理学的ｐＨにおいて非荷電の側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＺ４は独立して、グリシンまたはアラニンであり、
それぞれのＺ５は独立して、疎水性側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである。
【０２７０】
一部の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列ＳＳＧＺ４Ｚ３Ｙ（配列番号：２６３）またはＶＤＰＥＹＺ４Ｚ３Ｔ（配列番号：２６４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｂ）アミノ酸配列ＱＺ１ＶＺ２Ｚ４ＹＺ３ＳＺ５ＷＹＺ５Ｚ２Ｚ５（配列番号：２６５）またはＡＺ１ＤＺ２Ｚ４Ｚ３Ｚ５ＳＰＺ５Ｚ２Ｚ５ＷＧ（配列番号：２６６）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＺ５（配列番号：２６７）またはＱＮＩＮＫＺ５（配列番号：２６８）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＺ３（配列番号：２６９）、ＴＹＺ３、またはＹＴＺ３を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、
（ｅ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＺ５ＰＹＺ３（配列番号：２７０）またはＣＬＱＺ５ＶＮＬＸＺ３（配列番号：２７１）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を更に含有し、
それぞれのＺ１は独立して、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＺ２は独立して、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＺ３は独立して、極性で生理学的ｐＨにおいて非荷電の側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＺ４は独立して、グリシンまたはアラニンであり、
それぞれのＺ５は独立して、疎水性側鎖を含むアミノ酸であり、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである。
【０２７１】
ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）、ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）、またはこれらの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、を含有していてもよく、それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンであり、任意選択的に、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。
【０２７２】
一部の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）、ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）、またはこれらの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２、
（ｂ）アミノ酸配列ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）、ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）、ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹ（配列番号：２９６）、またはこれらの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）、ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）、またはこれらの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２７）、ＴＹＳ、ＹＴＳ、または配列番号：２７と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び／または、
（ｅ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）、ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）、またはこれらの配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を更に含有する。
【０２７３】
一部の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
のうちの１つまたは複数を含む重鎖を含有する。
【０２７４】
ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
のうちの１つまたは複数を有する重鎖を含有していてもよく、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである。
【０２７５】
一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＬ（配列番号：２７４）を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＩ（配列番号：２７５）を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＶＩ（配列番号：２９３）を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＳ（配列番号：２９４）を有する。
【０２７６】
追加的にまたは代替的に、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２７）を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
のうちの１つまたは複数を有する軽鎖を含有していてもよい。
一部の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のＣＤＲ、
（ａ）アミノ酸配列ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＴＹＳまたはＹＴＳを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
のうちの１つまたは複数を有する軽鎖を含有し、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである。
【０２７７】
一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ２はアミノ酸配列ＴＹＳを有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ２はアミノ酸配列ＹＴＳを有する。ＣＤＲ−Ｌ３はアミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＬＴ（配列番号：２７２）を有していてもよい。一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ３はアミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＩＴ（配列番号：２７３）を有する。
【０２７８】
ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号：２３）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＳＧＧＳＹ（配列番号：２４）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＲＶＤＧＹＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号：２５）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
を含む３つの重鎖ＣＤＲを含有していてもよく、
（ａ）アミノ酸配列ＳＡＳＳＳＶＹＹＭＹ（配列番号：２６）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号：２７）を有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＱＱＲＲＮＹＰＹＴ（配列番号：２８）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を含む３つの軽鎖ＣＤＲを更に含有していてもよい。
一部の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＸ（配列番号：２５７）、例えば、ＧＹＴＦＴＤＹＬ（配列番号：２７４）またはＧＹＴＦＴＤＹＩ（配列番号：２７５）など、好ましくはＧＹＴＦＴＤＹＬ（配列番号：２７４）を有するＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）アミノ酸配列ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）を有するＣＤＲ−Ｈ２、及び、
（ｃ）アミノ酸配列ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）を有するＣＤＲ−Ｈ３、
を含む３つの重鎖ＣＤＲを含有し、
（ｄ）アミノ酸配列ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）を有するＣＤＲ−Ｌ１、
（ｅ）アミノ酸配列ＴＹＳまたはＹＴＳを有するＣＤＲ−Ｌ２、及び、
（ｆ）アミノ酸配列ＣＬＱＹＶＮＬＸＴ（配列番号：２６１）、例えば、ＣＬＱＹＶＮＬＬＴ（配列番号：２７２）またはＣＬＱＹＶＮＬＩＴ（配列番号：２７３）など、好ましくはＣＬＱＹＶＮＬＩＴ（配列番号：２７３）を有するＣＤＲ−Ｌ３、
を含む３つの軽鎖ＣＤＲを更に含有し、
それぞれのＸは独立して、ロイシンまたはイソロイシンである。
【０２７９】
一部の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲ−Ｌ２のＮ末端に結合したアミノ酸配列ＬＬＩＲ（配列番号：２６２）を有するフレームワーク領域、及び／またはＣＤＲ−Ｌ２のＣ末端に結合したアミノ酸配列ＴＬＥを有するフレームワーク領域を含む。
【０２８０】
核酸及び発現系
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）は、様々な確立された技術のいずれかを用いて調製することができる。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントは、宿主細胞内における免疫グロブリン軽鎖遺伝子及び重鎖遺伝子の組換え発現により調製することができる。抗体を組換え的に発現させるために、抗体の免疫グロブリン軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡフラグメントを搭載した１種または複数種の組換え発現ベクターを宿主細胞にトランスフェクションし、それにより、宿主細胞内で軽鎖及び重鎖を発現させ、任意選択的に、宿主細胞を培養してそこから抗体を回収可能な培地内にそれら軽鎖及び重鎖を分泌させてもよい。標準的な組換えＤＮＡ法を使用して抗体の重鎖遺伝子及び軽鎖遺伝子を得てから、これらの遺伝子を組換え発現ベクターに組み込み、それらのベクターを、宿主細胞、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ（ｅｄｓ），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，１９８９），及び米国特許第４，８１６，３９７号（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載の宿主細胞などに導入する。
【０２８１】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを発現させるためのベクター
ウイルスゲノムは、外来遺伝子を細胞（例えば、真核細胞または原核細胞）のゲノムに効率的に送達するために使用可能であり本明細書に記載のＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチド（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を発現させるために使用可能なベクターの豊富な供給源を提供する。ウイルスゲノムは、このようなゲノムの内部に含まれるポリヌクレオチドが通常、一般的または特殊な形質導入により、標的細胞のゲノムに組み込まれることから、遺伝子送達のための特に有用なベクターである。これらのプロセスは、天然のウイルス複製サイクルの一部として生じ、遺伝子導入を誘導するために追加のタンパク質または試薬を必要としない。ウイルスベクターの例としては、レトロウイルス、アデノウイルス（例えば、Ａｄ５、Ａｄ２６、Ａｄ３４、Ａｄ３５、及びＡｄ４８）、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、マイナス鎖ＲＮＡウイルス、例えば、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）など、ラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス及び水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹及びセンダイ）、プラス鎖ＲＮＡウイルス、例えば、ピコルナウイルス及びアルファウイルスなど、ならびに二本鎖ＤＮＡウイルス（アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型及び２型、エプスタインバーウイルス、サイトメガロウイルス）、及びポックスウイルス（例えば、ワクシニア、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）、鶏痘、及びカナリア痘）を含む）が挙げられる。本明細書に記載の抗体軽鎖及び重鎖または抗体フラグメントをコードするポリヌクレオチドを送達するのに有用なその他のウイルスとしては、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポーバウイルス、ヘパドナウイルス、及び肝炎ウイルスが挙げられる。レトロウイルスの例としては、トリ白血病肉腫、哺乳動物Ｃ型、Ｂ型ウイルス、Ｄ型ウイルス、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ群、レンチウイルス、スプーマウイルスが挙げられる（Ｃｏｆｆｉｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｉｎ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９６）。その他の例としては、マウス白血病ウイルス、マウス肉腫ウイルス、マウス乳癌ウイルス、ウシ白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒヒ内在性ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、メイソンファイザーサルウイルス、サル免疫不全ウイルス、サル肉腫ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、及びレンチウイルスが挙げられる。ベクターのその他の例については、例えば、ＭｃＶｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許第５，８０１，０３０号）（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に��み込まれる）に記載されている。
【０２８２】
ゲノム編集技術
ウイルスベクターに加えて、遺伝子、例えば、とりわけ、抗体軽鎖及び重鎖、一本鎖ポリペプチド、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、タンデムｓｃＦｖ、Ｆａｂドメイン、Ｆ（ａｂ’）２ドメイン、ディアボディ、及びトリアボディをコードする遺伝子を、ポリペプチド発現用の標的細胞のゲノムに導入するための様々な別の方法が開発されている。本明細書に記載の抗ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）をコードするポリヌクレオチドを、原核細胞または真核細胞に導入するのに使用可能な１つのこのような方法としては、トランスポゾンが挙げられる。トランスポゾンは、トランスポザーゼ酵素をコードし、５’位置及び３’位置の切除部位に隣接した目的のポリヌクレオチド配列または遺伝子を含有するポリヌクレオチドである。トランスポゾンが細胞内へと送達されると、トランスポザーゼ遺伝子の発現が開始し、トランスポゾンから目的の遺伝子を開裂させる活性酵素がもたらされる。トランスポザーゼによるトランスポゾン切除部位の部位特異的認識がこの活性に関与している。一部の実施形態では、これらの切除部位は、末端反復または逆末端反復であってもよい。トランスポゾンから切除されると、目的の遺伝子は、原核細胞または真核細胞の核ゲノム内に存在する類似した切除部位のトランスポザーゼ触媒開裂により、それら原核細胞または真核細胞のゲノムに組み込まれ得る。この組込みにより、抗ＴＮＦＲ２抗体もしくはフラグメントまたはそのドメインをコードする遺伝子が開裂核ＤＮＡの切除部位に挿入され、それに続く、目的の遺伝子を原核細胞ゲノムまたは真核細胞ゲノムのＤＮＡに連結させるホスホジエステル結合のライゲーションにより、導入プロセスが完了する。一部の実施形態では、トランスポゾンは、抗体をコードする遺伝子が先ずＲＮＡ産物へと転写され、次にＤＮＡへと逆転写されてから、原核細胞ゲノムまたは真核細胞ゲノムに組み込まれるような、レトロトランスポゾンであってもよい。例示的なトランスポゾンシステムとしては、ｐｉｇｇｙｂａｃトランスポゾン（ＷＯ２０１０／０８５６９９に詳細が記載されている）及びｓｌｅｅｐｉｎｇ  ｂｅａｕｔｙトランスポゾン（ＵＳ２００５０１１２７６４に詳細が記載されている）（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）が挙げられる。
【０２８３】
本明細書に記載の抗ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）をコードする核酸分子を、原核細胞または真核細胞のゲノムに組み込むための別の有用な方法は、元々は、細菌及び古細菌における感染またはウイルスに対する適応防御機構として進化したシステムである、ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓシステムである。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、プラスミドＤＮＡ内のパリンドローム反復配列、及び関連するＣａｓ９ヌクレアーゼで構成されている。ＤＮＡ及びタンパク質のこのアンサンブルは、先ず外来ＤＮＡをＣＲＩＳＰＲ遺伝子座に導入することにより、標的配列の部位特異的ＤＮＡ開裂を誘導する。次に、これらの外来配列及びＣＲＩＳＰＲ遺伝子座の反復スペーサーエレメントを含有するポリヌクレオチドが宿主細胞内において転写されてガイドＲＮＡを生成し、それに続いて、そのガイドＲＮＡが標的配列にアニールしてこの部位にＣａｓ９ヌクレアーゼを局在化させ得る。このようにして、外来ポリヌクレオチドを用いた極めて部位特異的なＣａｓ９介在性ＤＮＡ開裂が生じ得るが、その理由は、Ｃａｓ９を標的ＤＮＡ分子内に近接させる相互作用がＲＮＡ：ＤＮＡハイブリダイゼーションによって制御されているからである。その結果、任意の目的の標的ＤＮＡ分子を開裂させるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを理論的に設計することができる。この技術は、真核細胞ゲノムを編集するために利用されており（Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，３１：２２７−２２９，２０１３）、ＤＮＡを開裂させてから本明細書に記載の抗ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）をコードするポリヌクレオチドを導入するために、真核細胞ゲノムまたは原核細胞ゲノムの部位特異的な編集を行うための効率的な方法としてこの技術を使用してもよい。遺伝子発現を調節するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓの使用については、米国特許第８，６９７，３５９号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２８４】
ゲノムＤＮＡを部位特異的に開裂させてから本明細書に記載のＴＮＦＲ２抗体または抗体フラグメント（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）をコードするポリヌクレオチドを導入するための代替法としては、ジンクフィンガーヌクレアーゼ及び転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）の使用が挙げられる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムとは異なり、これらの酵素は、特定の標的配列へと局在化させるためのガイドポリヌクレオチドを含有していない。その代わり、標的特異性は、これらの酵素内のＤＮＡ結合ドメインによって制御される。ゲノム編集用途に使用するジンクフィンガーヌクレアーゼ及びＴＡＬＥＮについては、Ｕｒｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，１１：６３６−６４６，２０１０）；及びＪｏｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ．１４：４９−５５，２０１３）（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを原核細胞または真核細胞のゲノムに導入するのに使用可能な別のゲノム編集技術としては、ゲノムＤＮＡを部位特異的に開裂させるように合理的に設計され得るＡＲＣＵＳ（商標）メガヌクレアーゼの使用が挙げられる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）をコードするポリヌクレオチドを原核細胞または真核細胞のゲノムに導入するためのこれらの酵素の使用は、このような酵素について確立された構造−活性関係の観点から特に有利である。それゆえ、所望の位置のＤＮＡを選択的に開裂させるヌクレアーゼを作製するために、一本鎖メガヌクレアーゼの特定のアミノ酸位置を修飾してもよい。これらの一本鎖ヌクレアーゼについては、例えば、米国特許第８，０２１，８６７号及び第８，４４５，２５１号（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に広く記載されている。
【０２８５】
ポリヌクレオチド配列エレメント
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を発現させるために、遺伝子が転写制御配列及び翻訳制御配列と機能的に連結するように、部分的または完全な軽鎖及び重鎖をコードするポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数または全てをコードするポリヌクレオチドを発現ベクターに挿入してもよい。使用する発現宿主と適合するように発現ベクター及び発現制御配列を選択する。本明細書に記載または当該技術分野において周知の確立された技術を使用して、ＴＮＦＲ２抗体の軽鎖遺伝子をコードするポリヌクレオチド及びＴＮＦＲ２抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチドを別々のベクターに挿入してもよく、または任意選択的に、両方のポリヌクレオチドを同一の発現ベクターに導入してもよい。
【０２８６】
抗体の重鎖及び軽鎖をコードするポリヌクレオチド（または、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体フラグメント、例えば、ｓｃＦｖ分子など、もしくは構築物をコードするポリヌクレオチド）に加えて、本明細書に記載の組換え発現ベクターは、宿主細胞内において抗体鎖遺伝子の発現を制御する制御配列を搭載していてもよい。制御配列の選択を含む発現ベクターの設計は、形質転換する宿主細胞の選択またはタンパク質の所望の発現レベルなどの因子に依存し得る。例えば、哺乳動物宿主細胞発現用の好適な制御配列としては、哺乳動物細胞内において高レベルのタンパク質発現を誘導するウイルスエレメント、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に由来するプロモーター及び／またはエンハンサー（例えば、ＣＭＶプロモーター／エンハンサーなど）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）に由来するプロモーター及び／またはエンハンサー（例えば、ＳＶ４０プロモーター／エンハンサーなど）、アデノウイルスに由来するプロモーター及び／またはエンハンサー（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、ならびにポリオーマに由来するプロモーター及び／またはエンハンサーなどが挙げられる。ウイルス制御エレメント及びその配列については、例えば、米国特許第５，１６８，０６２号、米国特許第４，５１０，２４５号、及び米国特許第４，９６８，６１５号（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に詳細に記載されている。
【０２８７】
抗体鎖遺伝子及び制御配列に加えて、本明細書に記載の組換え発現ベクターは、別の配列、例えば、宿主細胞内においてベクターの複製を制御する配列（例えば、複製起点）、及び選択マーカー遺伝子などを搭載していてもよい。選択マーカー遺伝子は、ベクターを内部に導入した宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号、及び第５，１７９，０１７号を参照のこと）。例えば、選択マーカー遺伝子は通常、細胞傷害性薬物、例えば、Ｇ４１８、ピューロマイシン、ブラストサイジン、ヒグロマイシン、またはメトトレキサートなどに対する耐性を、ベクターを内部に導入した宿主細胞に付与する。好適な選択マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサートを有するＤＨＦＲ宿主細胞の選択／増幅に用いる）及びｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択用）が挙げられる。ＴＮＦＲ２抗体またはＴＮＦＲ２抗体フラグメントの軽鎖及び重鎖を発現させるために、標準的な技術を用いて、重鎖及び軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクター（複数可）を宿主細胞にトランスフェクションしてもよい。
【０２８８】
改変アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドとしては、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなどが挙げられる。追加的にまたは代替的に、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）は、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全て、または、ＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数または全てがＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の対応するＣＤＲ配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を示すＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、及びＣＤＲ−Ｌ３配列のうちの１つもしくは複数または全て、を含有する、または、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の対応するＣＤＲ配列と比較して１つまたは複数の（例えば、最大３つの）アミノ酸置換（例えば、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換）を含有していてもよいが、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の１つまたは複数のフレームワーク領域における差異を特徴としていてもよい。例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の１つまたは複数のフレームワーク領域は、ヒト抗体のフレームワーク領域で置換されていてもよい。例示的なフレームワーク領域としては、例えば、ＵＳ７，８２９，０８６に記載のヒトフレームワーク領域、及びＥＰ１９４５６６８に記載の霊長類フレームワーク領域（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）が挙げられる。このようなＴＮＦＲ２抗体をコードする核酸を作製するために、例えば、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の少なくとも一方または両方をコードするＤＮＡフラグメントを、化学合成により（例えば、固相ポリヌクレオチド合成技術により）、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ遺伝子増幅により（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応技術により）、または宿主生物内におけるポリヌクレオチドの複製により、作製してもよい。例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てがコンセンサス抗体のフレームワーク残基に組み込まれるように、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体をコードする核酸を、軽鎖可変配列及び重鎖可変配列をコードする生殖細胞系ＤＮＡまたはｃＤＮＡの増幅及び改変により得てもよい。
【０２８９】
一部の実施形態では、ヒト化アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体（例えば、表１に記載のヒト化抗体など）は、ＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数または全てがＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の対応するＣＤＲ配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を示すＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、及びＣＤＲ−Ｌ３配列のうちの１つもしくは複数または全て、を含む、または、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５の対応するＣＤＲ配列と比較して１つまたは複数の（例えば、最大３つの）アミノ酸置換（例えば、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換）を含有していてもよい。これは、例えば、生殖細胞系ＤＮＡまたはｃＤＮＡの部位特異的変異誘発を実施してから、確立された手法に従ってポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、得られたポリヌクレオチドを増幅することにより達成することができる。ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子用の生殖細胞系ＤＮＡ配列は当該技術分野において周知である（例えば、「ＶＢＡＳＥ」ヒト生殖細胞系配列データベースを参照のこと。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２，１９９１；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８，１９９２；及びＣｏｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７−８３６，１９９４（参照により本明細書に組み込まれる）もまた参照のこと）。ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲまたは上記の類似した配列のうちの１つもしくは複数または全てを含有するヒト重鎖及び軽鎖可変領域をコードするキメラ核酸構築物を、例えば、当該技術分野において周知の確立されたクローニング技術を使用して、作製してもよい。加えて、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲまたは上記の類似した配列のうちの１つまたは複数を含有する重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを合成してから、通常の変異誘発技術を用いて、そのポリヌクレオチドを変異誘発用の鋳型として使用して、本明細書に記載のバリアントを作製してもよい。代替的に、バリアントをコードするＤＮＡフラグメントを直接合成してもよい（例えば、確立された固相核酸化学合成法を用いて）。
【０２９０】
ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、及びＣＤＲ−Ｈ３配列のうちの１つもしくは複数または全てを含有するＶＨセグメントをコードするＤＮＡフラグメントを得ると、標準的な組換えＤＮＡ技術を用いてこれらのＤＮＡフラグメントを更に操作して、例えば、可変領域遺伝子を、全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂフラグメント遺伝子、またはｓｃＦｖ遺伝子へと変換してもよい。これらの操作において、ＶＬコードＤＮＡフラグメントまたはＶＨコードＤＮＡフラグメントは、別のタンパク質、例えば、抗体定常領域またはフレキシブルリンカーなどをコードする別のＤＮＡフラグメントと機能的に連結している。
【０２９１】
例えば、ＶＨコードＤＮＡを、重鎖定常領域ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意選択的にＣＨ４）をコードする別のＤＮＡ分子と機能的に連結させることにより、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体のＶＨ領域をコードする単離ＤＮＡを全長重鎖遺伝子（Ｆａｂ重鎖遺伝子に加えて）に変換してもよい。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は当技術分野において周知であり（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２，１９９１を参照のこと）、これらの領域に包含されるＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＤ定常領域であってもよく、特定の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域である。Ｆａｂフラグメント重鎖遺伝子用に、ＶＨコードＤＮＡを、重鎖ＣＨ１ドメインのみをコードする別のＤＮＡ分子と機能的に連結させてもよい。
【０２９２】
ＶＬコードＤＮＡを、軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子と機能的に連結させることにより、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体のＶＬ領域をコードする単離ＤＮＡを、全長軽鎖遺伝子（Ｆａｂ軽鎖遺伝子に加えて）に変換してもよい。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は当該技術分野において周知であり（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２，１９９１）を参照のこと）、これらの領域に包含されるＤＮＡフラグメントは、例えば、これらの領域をコードするポリヌクレオチドの原核細胞または真核細胞内における増幅により、ＰＣＲ増幅により、または化学的ポリヌクレオチド合成により、得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパ（κ）またはラムダ（λ）定常領域であってもよいが、特定の実施形態では、カッパ定常領域である。ｓｃＦｖ遺伝子を作製するために、ＶＨ配列及びＶＬ配列が、リンカーにより連結したＶＬ領域及びＶＨ領域を有する連続一本鎖タンパク質として発現可能となるように、ＶＨコードＤＮＡフラグメント及びＶＬコードＤＮＡフラグメントを、フレキシブルリンカーをコードする別のフラグメント、例えば、フレキシブルな親水性アミノ酸配列、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３などをコードするポリヌクレオチドなどと機能的に連結させる（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６，１９８８；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３，１９８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４，１９９０を参照のこと）。
【０２９３】
組換えＤＮＡ技術もまた使用して、ＴＮＦＲ２への結合に必須ではない軽鎖及び重鎖の一方または両方をコードするＤＮＡの一部または全てを除去してもよい。このようなトランケートＤＮＡ分子から発現される分子はまた、本明細書に記載の抗体に包含される。加えて、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲまたは上記の類似したＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数または全てを一方の重鎖が含有し、もう一方の重鎖及び／または軽鎖がＴＮＦＲ２以外の抗原に特異的である、二官能性抗体を作製してもよい。このような抗体は、例えば、標準的な化学架橋法（例えば、ジスルフィド結合形成による）を使用して、例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲまたは上記の類似したＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数または全てを含有する重鎖及び軽鎖を、異なる抗原に特異的な第２の抗体の重鎖及び軽鎖に架橋することにより、作製することができる。二官能性抗体はまた、二官能性抗体をコードするように改変した核酸分子を原核細胞または真核細胞内で発現させることにより、作製することができる。
【０２９４】
デュアル特異性抗体、すなわち、同一の結合部位を用いてＴＮＦＲ２及び異なる抗原に結合する抗体は、軽鎖ＣＤＲ及び／または重鎖ＣＤＲ内のアミノ酸残基を変異させることにより、作製することができる。一部の実施形態では、２種の抗体、例えば、ＴＮＦＲ２及び第２の細胞表面受容体などに結合するデュアル特異性抗体は、抗原結合部位の周辺のアミノ酸残基を変異させることにより、作製することができる（Ｂｏｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２３：１６１０−１６１４，２００９）。デュアル官能性抗体は、デュアル特異性抗体をコードするように改変したポリヌクレオチドを発現させることにより、作製することができる。
【０２９５】
本明細書に記載の改変アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及び抗体フラグメントはまた、化学合成により（例えば、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  ｅｄ．，１９８４  Ｔｈｅ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，１１１（参照により本明細書に組み込まれる）に記載の方法により）、作製することができる。バリアント抗体はまた、無細胞合成プラットフォームを使用して作製することができる（例えば、Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉａ  Ｎｏ．２，２００１（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
【０２９６】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを発現させるための宿主細胞
本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞のいずれかの内部で発現させることができる。特定の実施形態では、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメント）の発現は、適切にフォールディングされた免疫学的に活性な抗体の最適な分泌のために、真核細胞、例えば、哺乳動物宿主細胞内で実施される。本明細書に記載の組換え抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させるための例示的な哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ（１９８２，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１）に記載のＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用する、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ（１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０）に記載のＤＨＦＲ  ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、２９３細胞、及びＳＰ２／０細胞が挙げられる。抗体及びそのフラグメントの発現に有用となり得る別の細胞タイプとしては、確立されたプロトコルに従って外来ＤＮＡを含有するベクターで形質転換可能な、細菌細胞、例えば、ＢＬ−２１（ＤＥ３）Ｅ．ｃｏｌｉ細胞などが挙げられる。抗体の発現に有用となり得る別の真核細胞としては、当該技術分野において周知の確立された手法に従って形質転換してから不完全培地内で選択的に増殖させることができる、イースト菌、例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの栄養要求性株などが挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞に導入した場合、抗体は、宿主細胞内で抗体を発現させるのに、または宿主細胞を増殖させる培地に抗体を分泌させるのに十分な期間、宿主細胞を培養することにより、生成される。
【０２９７】
標準的なタンパク質精製法を使用して、培地からポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を回収してもよい。宿主細胞をまた使用して、インタクト抗体の一部、例えば、ＦａｂフラグメントまたはｓｃＦｖ分子などを作製してもよい。当該技術分野において周知の確立されたプロトコルに従って上記の手法を変化させた方法もまた本明細書に含まれる。例えば、抗体の抗原結合フラグメントを作製するために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体の軽鎖または重鎖のいずれか（しかし、両方ではない）をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクションすることが望ましい場合がある。
【０２９８】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を組換え発現により作製すると、当該技術分野において周知の任意の方法、例えば、免疫グロブリン分子の精製に有用な方法など、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、とりわけ、プロテインＡまたはプロテインＧの後のＴＮＦＲ２に対するアフィニティークロマトグラフィー、及びサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度、またはタンパク質を精製するための任意のその他の標準的な技術を用いて、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを精製してもよい。更に、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドまたはそのフラグメントを、本明細書に記載の非相同ポリペプチド配列または当該技術分野において周知の別の配列に融合して、精製を容易とする、または治療用コンジュゲート（以下の「アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドコンジュゲート」を参照のこと）を作製してもよい。
【０２９９】
単離すると、必要に応じ、例えば、高速液体クロマトグラフィー（例えば、Ｆｉｓｈｅｒ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｏｒｋ  ａｎｄ  Ｂｕｒｄｏｎ，ｅｄｓ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８０）（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）、または、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ（商標）７５カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を搭載したゲル濾過クロマトグラフィーを用いて、抗ＴＮＦＲ２一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメントを更に精製してもよい。
【０３００】
アンタゴニスト性抗ＴＮＦＲ２ポリペプチドを作製及び親和性成熟させるためのプラットフォーム
受容体アンタゴニスト作用を促進するＴＮＦＲ２のマッピングエピトープ
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）は、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）のライブラリを、受容体活性化ではなく受容体アンタゴニスト作用を選択的に促進するＴＮＦＲ２内のエピトープに結合可能な機能性分子でスクリーニングすることにより、作製することができる。ＴＮＦＲ２内の所望のエピトープに対応する残基を含有する一連の直鎖状ペプチドまたは環状ペプチドに対して、抗体またはその抗原結合フラグメントをスクリーニングすることにより、このようなエピトープを作製してもよい。
【０３０１】
１つの例として、受容体アンタゴニスト作用を促進するＴＮＦＲ２から単離した個々のフラグメントを含有するペプチドは、本明細書に記載または当該技術分野において周知のペプチド合成技術により、合成することができる。これらのペプチドを固体表面上に固定してから、例えば、確立された手法を用いたＥＬＩＳＡベースのスクリーニングプラットフォームを使用して、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）に結合する分子でスクリーニングしてもよい。このアッセイを使用することにより、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５、または表１に記載の抗体１〜２５またはそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなどに高親和性で特異的に結合するペプチドは、これらの抗体に優先的に結合するＴＮＦＲ２のエピトープ内の残基を含有する。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを同定するために、この方法で同定したペプチド（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つの配列を有するペプチド）を使用して、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）のライブラリをスクリーニングしてもよい。更に、これらのペプチドが、受容体アンタゴニスト作用を促進するＴＮＦＲ２内のエピトープの代用として機能することから、このスクリーニング技術を使用して作製したポリペプチドは、ＴＮＦＲ２内の対応するエピトープに結合し得、受容体活性に対してアンタゴニスト性であることが予想され得る。
【０３０２】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドのためのライブラリのスクリーニング
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、抗体フラグメント、またはその構築物）ライブラリを、ＴＮＦＲ２内のエピトープに結合可能な分子（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つの配列を有するペプチド）でハイスループットスクリーニングするための方法としては、ファージディスプレイ、細菌ディスプレイ、酵母ディスプレイ、哺乳動物ディスプレイ、リボソームディスプレイ、ｍＲＮＡディスプレイ、及びｃＤＮＡディスプレイを含むディスプレイ技術が挙げられるがこれらに限定されない。生物学的に有意味な分子に結合するリガンドを単離するためのファージディスプレイの使用については、例えば、Ｆｅｌｉｃｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．１：１４９−１８３，１９９５），Ｋａｔｚ（Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｔｒｕｃｔ．２６：２７−４５，１９９７），及びＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４：１−２０，１９９８）において考察されている。異なる標的、例えば、細胞表面受容体またはＤＮＡに結合するポリペプチドを選択するための数種類の無作為化コンビナトリアルペプチドライブラリが構築されている（Ｋａｙ（Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｄｅｓ．２，２５１−２６８，１９９５），Ｋａｙ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｍｏｌ．Ｄｉｖｅｒｓ．１：１３９−１４０，１９９６）により考察されている）。タンパク質及び多量体タンパク質が機能性分子として成功裏にファージディスプレイされている（ＥＰ０３４９５７８Ａ、ＥＰ４５２７８３９Ａ、ＥＰ０５８９８７７Ａ；Ｃｈｉｓｗｅｌｌ  ａｎｄ  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ（Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０，８０−８４  １９９２）を参照のこと）。加えて、機能性抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、一本鎖Ｆｖ［ｓｃＦｖ］）が発現されている（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４，１９９０），Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：７９７８−７９８２，１９９１），Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８，１９９１））。これらの参照文献の全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【０３０３】
（ｉ）ファージディスプレイ技術
１つの例として、ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）のライブラリを、受容体アンタゴニスト作用を促進するＴＮＦＲ２内のエピトープを含有する環状ペプチドまたは多環式ペプチド（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つの配列を有するペプチド）に結合可能な機能性分子でスクリーニングするために、ファージディスプレイ技術を使用してもよい。例えば、無作為化超可変領域を含有する、一本鎖抗体フラグメント、例えば、ｓｃＦｖフラグメントなどをコードするポリヌクレオチドのライブラリは、確立された手法（例えば、固相ポリヌクレオチド合成技術またはｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎｅ  ＰＣＲ技術、ＭｃＣｕｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，６３４：１０３−１０９，２０１０）（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）を使用して、得ることができる。それに続いて、これらの遺伝子がコードする無作為化抗体鎖が、例えば、抗体鎖と外殻タンパク質（例えば、Ｍ１３ファージの表面上のｐＩＩＩ外殻タンパク質）の間の共有結合により繊維状ファージの表面上に発現するように、これらの無作為化ポリヌクレオチドをウイルスゲノムに導入してもよい。これにより、抗体鎖の遺伝子型と表現型の間の物理的な結合がもたらされる。この方法では、確立された手法を使用して、超可変領域内にランダム変異を含有する多様な抗体鎖を提示するファージのライブラリを、表面に固定されたＴＮＦＲ２エピトープ（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つの配列を有するペプチド）に外側の抗体鎖が結合する能力でスクリーニングしてもよい。例えば、ペプチドとエピトープタグ（例えば、ビオチン）の間に共有結合を形成することにより、このようなペプチドをマイクロタイタープレートの表面に物理的に結合させてから、ペプチドに結合したタグに高親和性で結合する相補的なタグ（例えば、アビジン）で予めコーティングしたマイクロタイタープレートのウェル内でそのペプチドを培養してもよい。好適なエピトープタグとしては、マルトース結合タンパク質、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ポリヒスチジンタグ、ＦＬＡＧタグ、ｍｙｃタグ、ヒトインフルエンザヘマグルチニン（ＨＡ）タグ、ビオチン、ストレプトアビジンが挙げられるがこれらに限定されない。これらの分子が提示するエピトープを含有するペプチドを、マルトース、グルタチオン、ニッケル含有錯体、抗ＦＬＡＧ抗体、抗ｍｙｃ抗体、抗ＨＡ抗体、ストレプトアビジン、またはビオチンなどの相補的な分子をそれぞれ含有する表面上に固定することができる。この方法では、抗体を規制ペプチドに結合させるのに好適な期間、適切なバッファー系（例えば、生理学的塩濃度、イオン強度を含有し、緩衝剤により生理学的ｐＨに維持されたバッファー系）の存在下で、固定したＴＮＦＲ２由来ペプチドを含有する表面と共にファージを培養してもよい。その後、ＴＮＦＲ２由来ペプチドと特定の閾値超の親和性で相互作用する抗体鎖を提示していないファージを除去するために、表面を洗浄してもよい（例えば、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するリン酸塩緩衝剤を用いて）。
【０３０４】
この最初のパニング（すなわち、スクリーニング）工程後に残ったポリペプチドの親和性は、洗浄工程の条件を調節することにより（例えば、酸性成分または塩基性成分を少し加えることにより、または、抗原結合部位で固定ペプチドと競合させるために低濃度のその他のＴＮＦＲ２由来ペプチドを加えることにより）、調節することができる。この方法では、洗浄工程後にマイクロタイタープレートの表面に結合したままのファージの集団を、受容体アンタゴニスト作用を促進するＴＮＦＲ２由来ペプチドエピトープに結合するファージで濃縮する。その後、タンパク質−タンパク質相互作用の強度が低下するように、これらのペプチドを含有する表面からファージを溶出することにより（例えば、周囲のｐＨ、イオン強度、または温度を変化させることにより）、残ったファージを増幅させてもよい。次に、例えば、細菌細胞に感染させることにより単離ファージを増幅させてもよく、より高親和性の抗ＴＮＦＲ２ポリペプチドを有するファージの集団でファージの集団を更に濃縮するために、任意選択的に、スクリーニングの追加反復によるパニングに得られたファージを供してもよい。これらのパニング段階後に続いて、高親和性抗体またはその抗原結合フラグメントを提示するファージを単離してもよく、コード抗体のポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列を同定するためにこれらのファージのゲノムをシークエンスしてもよい。このようなファージディスプレイ技術を使用して、例えば、抗体鎖、例えば、ＴＮＦＲ２のアンタゴニストとして使用可能な本明細書に記載のｓｃＦｖフラグメント、タンデムｓｃＦｖフラグメント、及びその他の抗原結合フラグメントなどを作製してもよい。特定の抗原に高親和性で結合する抗体鎖及びその抗原結合フラグメントを同定するための例示的なファージディスプレイプロトコルは確立されており、例えば、米国特許第７，８４６，８９２号、ＷＯ１９９７／００２３４２、米国特許第８，８４６，８６７号、及びＷＯ２００７／１３２９１７（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。類似したファージディスプレイ技術を使用して、受容体アンタゴニスト作用を促進するＴＮＦＲ２内のエピトープ（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つの配列を有するペプチドが提示するエピトープ）に結合する本明細書に記載の抗体様スキャフォールド（例えば、１０Ｆｎ３ドメイン）を作製してもよい。抗体様スキャフォールドタンパク質を同定するための例示的なファージディスプレイプロトコルについては、例えば、ＷＯ２００９／０８６１１６（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０３０５】
（ｉｉ）細胞ベースのディスプレイ技術
溶媒露出ポリペプチドの遺伝子型と表現型の間の連結を利用するその他のｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術としては、酵母ディスプレイ及び細菌ディスプレイが挙げられる。酵母ディスプレイ技術は当該技術分野において確立されており、多量の抗体（多くの場合、最大３０，０００）を個々の酵母細胞の表面上に提示可能という点で、有利であることが多い（例えば、Ｂｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ．１５：５５３，１９９７）（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。繊維状ファージと比較してより大きなサイズの酵母細胞は、フローサイトメトリーを使用して酵母菌のライブラリを解析することとソートすることの両方が可能となることから、別のスクリーニング戦略を可能とする。例えば、確立された手法を使用して、無作為化超可変領域を含有するポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメント）を発現する細菌細胞または酵母細胞のライブラリを作製することができる（例えば、米国特許第７，７４９，５０１号及びＵＳ２０１３／００８５０７２（そのそれぞれの教示は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。例えば、確立された手法（ｄｅ  Ｂｒｕｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７：３９７，１９９９（参照により本明細書に組み込まれる））を使用して、ナイーブｓｃＦｖフラグメントをコードするポリヌクレオチドを発現する酵母細胞の大規模ライブラリを作製してもよい。その後、パニング工程の間、これらのポリヌクレオチドを発現する酵母細胞を２種の異なる蛍光分子と共に培養してもよく、一方は、抗体内の保存残基に結合することにより、提示された抗体の量を示す色素であり、もう一方は、異なる波長で蛍光を発し、抗原に結合することにより、結合した抗原の量を示す色素である。例えば、当業者は、任意選択的に、ペプチドのＮ末端またはＣ末端、または、抗体−抗原結合に干渉することが予測されない残基に、エピトープタグ（例えば、ビオチン）をコンジュゲートした、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つの配列を含有するＴＮＦＲ２由来ペプチドを使用してもよい。これにより、相補的なタグ（例えば、アビジン）で標識した蛍光色素を抗体−抗原複合体へと局在化させることが可能となる。これにより、選択の進行に関する優れた自由度及び速やかなフィードバックがもたらされる。ファージディスプレイとは対照的に、抗体の提示レベルに正規化することにより、より高い発現レベルを有する抗体ではなく、より高い親和性を有する抗体を容易に選択することができる。実際、わずか２倍だけ異なる親和性を有する抗体を識別及びソートすることが可能である（ＶａｎＡｎｔｗｅｒｐ  ａｎｄ  Ｗｉｔｔｒｕｐ（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｐｒｏｇ  １６：３１，２０００））。
【０３０６】
（ｉｉｉ）ヌクレオチドディスプレイ技術
無作為化ポリヌクレオチドライブラリのｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳を利用したディスプレイ技術はまた、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを作製するための強力なアプローチを提供する。例えば、指定の超可変領域内に変異を含有するポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメント）をコードする無作為化ＤＮＡライブラリは、例えば、本明細書に記載の確立されたＰＣＲベース変異誘発技術を使用して、得ることができる。これらのライブラリのポリヌクレオチドは、転写制御配列、例えば、プロモーター及び転写停止配列などを含有していてもよく、得られたｍＲＮＡ構築物の翻訳速度を高める配列（例えば、ＩＲＥＳ配列、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲ、ポリアデニル化トラクトなど）を更にコードしていてもよい。ＤＮＡ配列のコンピテントｍＲＮＡ分子への転写を可能とするために、ＲＮＡポリメラーゼ及びＲＮＡヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）を含有する適切な緩衝溶液中でこれらのポリヌクレオチドライブラリを培養してもよく、それに続き、そのｍＲＮＡ分子は、溶液中に存在する大リボソームサブユニット及び小リボソームサブユニット、アミノアシルｔＲＮＡ分子、ならびに翻訳開始因子及び翻訳伸長因子によって翻訳され得る（例えば、ＰＵＲＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏタンパク質合成キット，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ（登録商標）を使用する）。ｍＲＮＡ修飾の設計により、抗体産物をピューロマイシンへの化学結合によりｍＲＮＡ鋳型に共有結合したままとすることが可能となり得る（例えば、Ｋｅｅｆｅ（Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｏｃ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２４，Ｕｎｉｔ  ２４．５，２００１）（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。それゆえ、この遺伝子型−表現型連結を使用して、ｍＲＮＡ：抗体融合構築物を表面固定ペプチドと共に培養して、ファージディスプレイ技術に類似した方法（例えば、ＷＯ２００６／０７２７７３（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）でパニングすることにより、ＴＮＦＲ２由来ペプチド（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つの配列を有するペプチド）に結合する抗体を選択してもよい。
【０３０７】
任意選択的に、ピューロマイシンリンカーを介した共有結合ではなく非共有結合でリボソーム−ｍＲＮＡ複合体に結合し得る抗体産物を除く、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメント）は、類似した技術を使用して作製することができる。リボソームディスプレイとして知られているこのプラットフォームについては、例えば、米国特許第７，０７４，５５７号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。代替的に、抗体は、ｍＲＮＡではなくｃＤＮＡをピューロマイシンリンカーを介して抗体産物に共有結合させるという点を除けばｍＲＮＡディスプレイに類似した技術である、ｃＤＮＡディスプレイを使用して、作製することができる。ｃＤＮＡディスプレイ技術は、一層厳しい条件下、例えば、ＴＮＦＲ２由来ペプチドに対して特に高親和性の抗体をスクリーニングするための、環境の塩濃度、イオン強度、ｐＨ、及び／または温度を調節した条件下で、パニング工程を実施することができるという利点を提供する。これは、一本鎖ｍＲＮＡと比較してより高い、二本鎖ｃＤＮＡ固有の安定性によるものである。ｃＤＮＡディスプレイスクリーニング技術については、例えば、Ｕｅｎｏ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，８０５：１１３−１３５，２０１２）（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０３０８】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を作製することに加えて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術（例えば、本明細書に記載及び当該技術分野において周知のｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術）はまた、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの親和性を向上させるための方法を提供する。例えば、完全に無作為化された超可変領域を含有する抗体及びそのフラグメントのライブラリをスクリーニングする代わりに、超可変領域内の特定の部位の対象変異を特徴とする抗体及びその抗原結合フラグメントのより範囲の狭いライブラリをスクリーニングすることができる。このスクリーニングは、例えば、超可変領域内の特定の部位のみにランダム変異をコードする抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドのライブラリを構築することにより、実施することができる。その後、ＴＮＦＲ２エピトープ（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つの配列を含有するペプチド）に向上した結合親和性で特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントをスクリーニングするために、例えば、繊維状ファージ内、細菌細胞内、酵母細胞内、哺乳動物細胞内で、または、例えば、リボソームディスプレイ技術、ｍＲＮＡディスプレイ技術、またはｃＤＮＡディスプレイ技術を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで、これらのポリヌクレオチドを発現させてもよい。例えば、酵母ディスプレイは親和性成熟に適しており、一本鎖抗体の親和性を４８ｆＭのＫＤにまで向上させるために以前から使用されている（Ｂｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：１０７０１，２０００））。
【０３０９】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメント）の作製及び親和性成熟に使用可能な別のｉｎ  ｖｉｔｒｏ技術としては、ＴＮＦＲ２由来ペプチド（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチド）に特異的に結合可能な機能性分子による、抗体またはその抗原結合フラグメントのコンビナトリアルライブラリのスクリーニングが挙げられる。コンビナトリアル抗体ライブラリは、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントの無作為化超可変領域をコードするポリヌクレオチドの真核細胞または原核細胞内における発現により、得ることができる。これは、例えば、本明細書に記載または当該技術分野において周知の遺伝子発現技術を使用して達成することができる。抗体の不均一混合物は、例えば、プロテインＡ選択またはプロテインＧ選択、サイズカラムクロマトグラフィー、遠心分離、示差溶解度、及び／またはタンパク質を精製するための任意のその他の標準的な技術により、精製することができる。こうして得られたコンビナトリアルライブラリのライブラリは、例えば、これらの抗体の不均一混合物を、表面に固定されたＴＮＦＲ２に由来するペプチド（例えば、固相樹脂またはマイクロタイタープレートのウェルの表面に固定された、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチド）と共に、抗体−抗原結合を可能とするのに十分な期間培養することにより、スクリーニングすることができる。適切な緩衝剤（例えば、生理学的ｐＨ（約７．４）に緩衝し、生理学的塩濃度及びイオン強度を含有し、任意選択的に、界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ−２０などを含有する溶液）で表面を洗浄することにより、非結合抗体またはそのフラグメントを除去してもよい。それに続き、例えば、ＥＬＩＳＡベースの検出プロトコル（例えば、米国特許第４，６６１，４４５号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）を使用して、結合したままの抗体を検出してもよい。
【０３１０】
ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）のコンビナトリアルライブラリを、ＴＮＦＲ２由来ペプチド（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含有するペプチド）に特異的に結合するポリペプチドでスクリーニングするための別の技術としては、抗体フラグメントのｏｎｅ−ｂｅａｄ−ｏｎｅ−ｃｏｍｐｏｕｎｄライブラリのスクリーニングが挙げられる。それぞれのビーズが単一の抗体フラグメントを提示するように、親水性の水膨潤性材料からなる固体ビーズ上に抗体フラグメントを化学合成してもよい（例えば、確立されたｓｐｌｉｔ−ａｎｄ−ｐｏｏｌ固相ペプチド合成プロトコルを使用して）。次に、任意選択的に検出可能部分（例えば、蛍光色素）で標識した、または、後ほど相補的なタグ（例えば、それぞれアビジン、ビオチン、抗ＦＬＡＧ抗体、抗ＨＡ抗体）で処理することにより検出可能となるエピトープタグ（例えば、ビオチン、アビジン、ＦＬＡＧタグ、ＨＡタグ）にコンジュゲートした、ＴＮＦＲ２由来ペプチドと共に、不均一ビーズ混合物を培養してもよい。蛍光標識抗原または相補的なタグとの培養後にビーズの蛍光特性を解析することにより（例えば、共焦点蛍光顕微鏡または蛍光活性化ビーズソーティングにより。例えば、Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１６５００−１６５０５，１９９６）（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）、ＴＮＦＲ２由来ペプチド（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含有するペプチド）に特異的に結合する抗体フラグメントを含有するビーズを同定してもよい。それにより、ＴＮＦＲ２由来ペプチドに特異的に結合する抗体フラグメントを含有するビーズを、高親和性抗体フラグメントを含有していないビーズから分離させてもよい。例えば、とりわけ、エドマン分解、タンデム質量分析法、マトリックス支援レーザー脱離飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、及び２Ｄゲル電気泳動を含む当該技術分野において周知の技術により、ＴＮＦＲ２由来ペプチドに特異的に結合する抗体フラグメントの配列を同定してもよい（例えば、ＷＯ２００４／０６２５５３（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
【０３１１】
ポリペプチドのネガティブスクリーニング
ＫＣＳＰＧ配列を含有するエピトープにもまた結合し得る抗体または抗体フラグメントを除去するために、受容体アンタゴニスト作用を促進するヒトＴＮＦＲ２に由来するエピトープに特異的に結合する一本鎖ポリペプチド、抗体、または抗体フラグメントをスクリーニングするための上記の方法に加えて、ネガティブスクリーニングを追加で実施してもよい。例えば、上記のスクリーニング技術のいずれかの結果として単離された抗体または抗体フラグメントの混合物を、ＫＣＳＰＧモチーフを含有するヒトＴＮＦＲ２に由来するペプチド、例えば、配列番号：７の残基４８〜６７（ＱＴＡＱＭＣＣＳＫＣＳＰＧＱＨＡＫＶＦＣ、配列番号：１８）を含有するペプチドなどにもまた特異的に結合する抗体または抗体フラグメントでスクリーニングしてもよい。このスクリーニングは、上記の方法またはその変化形態のいずれかを使用して、実施することができるが、例えば、スクリーニングされた抗体または抗体フラグメントは、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７の１つまたは複数の残基を含有するペプチドに特異的に結合可能であることが予め確認された抗体または抗体フラグメントである。ネガティブスクリーニングに有用な例示的な技術としては、上記または当該技術分野において周知の技術、例えば、ファージディスプレイ、酵母ディスプレイ、細菌ディスプレイ、リボソームディスプレイ、ｍＲＮＡディスプレイ、ｃＤＮＡディスプレイ、または表面ベースのコンビナトリアルライブラリスクリーニング（例えば、ＥＬＩＳＡフォーマット）などが挙げられる。このスクリーニング技術は、ＫＣＳＰＧ配列を含有するＴＮＦＲ２エピトープに結合可能な抗体または抗体フラグメントが、アンタゴニスト作用を欠いているまたは著しく低下したアンタゴニスト作用を有していることから、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体または抗体フラグメントを同定するための有用な戦略の代表例である。
【０３１２】
非ヒト哺乳動物の免疫化
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びその抗原結合フラグメントを作製するのに使用可能な別の戦略としては、非ヒト哺乳動物を免疫化することが挙げられる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びそのフラグメントを作製するために免疫化可能な非ヒト哺乳動物の例としては、ウサギ、マウス、ラット、ヤギ、モルモット、ハムスター、ウマ、及びヒツジ、ならびに非ヒト霊長類が挙げられる。例えば、霊長類を免疫化するための確立された手法は当該技術分野において周知である（例えば、ＷＯ１９８６／６００４７８２（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。免疫化は、Ｂリンパ球の抗原特異性を利用することによってモノクローナル抗体を作製するための強力な方法の代表例である。例えば、Ｋｏｈｌｅｒ−Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ法（例えば、ＥＰ０１１０７１６（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている）によりモノクローナル抗体を調製してもよく、その方法においては、非ヒト動物（例えば、霊長類）に由来する脾臓細胞を、受容体アンタゴニスト作用を促進するＴＮＦＲ２由来抗原を提示するペプチド（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含有するペプチド）で免疫化する。免疫化により産生されたクローン増殖Ｂリンパ球を動物の血清から単離してから、ハイブリドーマを形成するために骨髄腫細胞と融合させてもよい。ハイブリドーマは、これらの不死化細胞が抗原特異的抗体の永続的な供給源を提供し得ることから、抗体産生のための特に有用な物質である。続いて、当該技術分野において周知の技術を使用して、例えば、細胞培養培地の抗体を、プロテインＡまたはプロテインＧなどの試薬を用いたアフィニティークロマトグラフィーで精製することにより、このようなハイブリドーマに由来する抗体を単離してもよい。
【０３１３】
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドコンジュゲート
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメント）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を哺乳動物対象（例えば、ヒト）に投与する前に、例えば、抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を調節するために、抗体またはそのフラグメントを第２の分子にコンジュゲートすることが望ましい場合がある。当該技術分野において周知の様々な確立されたコンジュゲート戦略のうちのいずれか１つを使用して、抗体の軽鎖または重鎖のＮ末端またはＣ末端のいずれかにおいて、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びそのフラグメントをその他の分子にコンジュゲートしてもよい。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントを別の分子に共有結合でつなぐのに使用可能な反応性官能基のペアの例としては、チオールペア、カルボン酸及びアミノ基、ケトン及びアミノ基、アルデヒド及びアミノ基、チオール及びα、β−不飽和部分（例えば、マレイミドまたはデヒドロアラニンなど）、チオール及びα−ハロアミド、カルボン酸及びヒドラジド、アルデヒド及びヒドラジド、ならびにケトン及びヒドラジドが挙げられるがこれらに限定されない。
【０３１４】
記載する化学的コンジュゲートにより、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を別の分子に直接、共有結合で付加してもよい。代替的に、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びそのフラグメントを含有する融合タンパク質を細胞（例えば、真核細胞または原核細胞）から組換え的に発現させてもよい。この発現は、例えば、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを細胞の核ゲノムに導入することにより（例えば、本明細書に記載または当該技術分野において周知の技術を使用して）、達成することができる。任意選択的に、抗体とリンカーの間の共有結合を形成することにより、本明細書に記載の抗体及びそのフラグメントを第２の分子に連結させてもよい。次に、このリンカーを別の分子にコンジュゲートしてもよく、または、リンカーを別の分子にコンジュゲートしてから抗ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントにライゲートしてもよい。コンジュゲートの形成に使用可能なリンカーの例としては、ポリペプチドリンカー、例えば、天然アミノ酸または非天然アミノ酸を含有するポリペプチドリンカーなどが挙げられる。一部の実施形態では、Ｄ−アミノ酸残基が天然タンパク質内には存在せず、それにより、内在性プロテアーゼによる分解により耐性を示していることから、リンカー内にそれらＤ−アミノ酸を含ませることが望ましい場合がある。ポリペプチドリンカーを含有する融合タンパク質は、化学合成技術、例えば、本明細書に記載の化学合成技術などを使用して、または、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの細胞（例えば、原核細胞または真核細胞）内における組換え発現により、作製することができる。当該技術分野において周知でありリンカーの反応構成要素に依存する様々な戦略を用いてリンカーを調製することができ、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下の加水分解、塩基性条件下の加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核開裂、または有機金属開裂により、リンカーを開裂させることができる（Ｌｅｒｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０：５７１−５８２，２０１２）。
【０３１５】
薬物−ポリペプチドコンジュゲート
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメント）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を更に、治療薬、例えば、細胞傷害性分子などにコンジュゲートしてもよい、それと混合してもよい、またはそれとは別に投与してもよい。本明細書に記載のコンジュゲートは、異常細胞増殖を伴う疾患、例えば、本明細書に記載のがんなどの治療または予防に適用可能であり得る。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドにコンジュゲートする、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドと混合する、またはアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドとは別に投与することができる例示的な細胞傷害剤としては、抗腫瘍剤、例えば、アシビシン、アクラルビシン、塩酸アコダゾール、アクロニン、アドゼレシン、アドリアマイシン、アルデスロイキン、アルトレタミン、アンボマイシン、酢酸アメタントロン、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アントラマイシン、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アザシチジン、アゼテパ、アゾトマイシン、バチマスタット、ベンゾデパ、ビカルタミド、塩酸ビサントレン、ビスナフィドジメシレート、ビゼレシン、硫酸ブレオマイシン、ブレキナールナトリウム、ブロピリミン、ブスルファン、カクチノマイシン、カルステロン、カンプトテシン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルムスチン、塩酸カルビシン、カルゼレシン、セデフィンゴール、クロラムブシル、シロレマイシン、シスプラチン、クラドリビン、コンブレスタチンａ−４、メシル酸クリスナトール、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ｄａｃａ（ｎ−［２−（ジメチル−アミノ）エチル］アクリジン−４−カルボキサミド）、ダクチノマイシン、塩酸ダウノルビシン、ダウノマイシン、デシタビン、デキソルマプラチン、デザグアニン、メシル酸デザグアニン、ジアジクオン、ドセタキセル、ドラサチン、ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシン、ドロロキシフェン、クエン酸ドロロキシフェン、プロピオン酸ドロモスタノロン、デュアゾマイシン、エダトレキサート、塩酸エフロルニチン、エリプチシン、エルサミトルシン、エンロプラチン、エンプロマート、エピプロピジン、塩酸エピルビシン、エルブロゾール、塩酸エソルビシン、エストラムスチン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エタニダゾール、エチルヨウ化油ｉ  １３１、エトポシド、リン酸エトポシド、エトプリン、塩酸ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フロクスウリジン、リン酸フルダラビン、フルオロウラシル、５−ｆｄｕｍｐ、フルロシタビン、ホスキドン、ホストリエシンナトリウム、ゲムシタビン、塩酸ゲムシタビン、金ａｕ  １９８、ホモカンプトテシン、ヒドロキシウレア、塩酸イダルビシン、イホスファミド、イルモホシン、インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−ｎｌ、インターフェロンα−ｎ３、インターフェロンβ−ｉ  ａ、インターフェロンγ−ｉ  ｂ、イプロプラチン、塩���イリノテカン、酢酸ランレオチド、レトロゾール、酢酸ロイプロリド、塩酸リアロゾール、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、塩酸ロソキサントロン、マソプロコール、マイタンシン、塩酸メクロレタミン、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、メトプリン、メツレデパ、ミチンドミド、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン、ミトマルシン、マイトマイシン、ミトスペル、ミトタン、塩酸ミトキサントロン、ミコフェノール酸、ノコダゾール、ノガラマイシン、オルマプラチン、オキシスラン、パクリタキセル、ペグアスパルガーゼ、ペリオマイシン、ペンタムスチン、硫酸ペプロイシン、ペルホスファミド、ピポブロマン、ピポスルファン、塩酸ピロキサントロン、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、塩酸プロカルバジン、ピューロマイシン、塩酸ピューロマイシン、ピラゾフリン、リゾキシン、リゾキシンｄ、リボプリン、ログレチミド、サフィンゴール、塩酸サフィンゴール、セムスチン、シムトラゼン、スパルホサートナトリウム、スパルソマイシン、塩酸スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、塩化ストロンチウムｓｒ  ８９、スロフェヌル、タリソマイシン、タキサン、タキソイド、テコガランナトリウム、テガフール、塩酸テロキサントロン、テモポルフィン、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、チアミプリン、チオグアニン、チオテパ、チミタク、チアゾフリン、チラパザミン、トムデックス、ｔｏｐ５３、塩酸トポテカン、クエン酸トレミフェン、酢酸トレストロン、リン酸トリシリビン、トリメトレキセート、グルクロン酸トリメトレキセート、トリプトレリン、塩酸ツブロゾール、ウラシルマスタード、ウレデパ、バプレオチド、ベルテポルフィン、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンクリスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、硫酸ビンデシン、硫酸ビネピジン、硫酸ビングリシナート、硫酸ビンロイロシン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンロシジン、硫酸ビンゾリジン、ボロゾール、ゼニプラチン、ジノスタチン、塩酸ゾルビシン、２−クロロデオキシアデノシン、２’−デオキシホルマイシン、９−アミノカンプトテシン、ラルチトレキセド、Ｎ−プロパルギル−５，８−ジデアザ葉酸、２−クロロ−２’−アラビノ−フルオロ−２’−デオキシアデノシン、２−クロロ−２’−デオキシアデノシン、アニソマイシン、トリコスタチンＡ、ｈＰＲＬ−Ｇ１２９Ｒ、ＣＥＰ−７５１、リノミド、サルファマスタード、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン）、シクロホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、イホスファミド、ブスルファン、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロソウレア（ＭＮＵ）、Ｎ，  Ｎ’−ビス（２−クロロエチル）−Ｎ−ニトロソウレア（ＢＣＮＵ）、Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ’−シクロヘキシル−Ｎ−ニトロソウレア（ＣＣＮＵ）、Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ’−（トランス−４−メチルシクロヘキシル−Ｎ−ニトロソウレア（ＭｅＣＣＮＵ）、Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ’−（ジエチル）エチルホスホネート−Ｎ−ニトロソウレア（ホテムスチン）、ストレプトゾトシン、ジアカルバジン（ＤＴＩＣ）、ミトゾロミド、テモゾロミド、チオテパ、マイトマイシンＣ、ＡＺＱ、アドゼレシン、シスプラチン、カルボプラチン、オルマプラチン、オキサリプラチン、Ｃ１−９７３、ＤＷＡ  ２１１４Ｒ、ＪＭ２１６、ＪＭ３３５、ビス（白金）、トムデックス、アザシチジン、シタラビン、ゲムシタビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、ヒポキサンチン、テニポシド、９−アミノカンプトテシン、トポテカン、ＣＰＴ−１１、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、ダルビシン、ミトキサントロン、ロソキサントロン、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、アムサクリン、ピラゾロアクリジン、全トランス型レチノール、１４−ヒドロキシ−レトロ−レチノール、全トランス型レチノイン酸、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチンアミド、１３−シスレチノイン酸、３−メチルＴＴＮＥＢ、９−シスレチノイン酸、フルダラビン（２−Ｆ−ａｒａ−ＡＭＰ）、または２−クロロデオキシアデノシン（２−Ｃｄａ）などが挙げられるがこれらに限定されない。
【０３１６】
異常細胞増殖を伴う疾患を治療する、異常細胞増殖を伴う疾患を予防する、または異常細胞増殖を伴う疾患の進行を調査するために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメントにコンジュゲートする、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメントと混合する、または本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメントとは別に投与することができるその他の治療用化合物としては、細胞傷害剤、例えば、２０−ｐｉ−１，２５  ジヒドロキシビタミンＤ３、５−エチニルウラシル、アビラテロン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、全ＴＫアンタゴニスト、アルトレタミン、アンバムスチン、アミドックス、アミホスチン、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラホリド、血管新生阻害剤、アンタゴニストＤ、アンタゴニストＧ、アンタレリックス、抗背方化形態形成タンパク質１、抗アンドロゲン剤、前立腺癌薬、抗エストロゲン剤、抗新生物剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、グリシン酸アフィジコリン、アポトーシス遺伝子調節因子、アポトーシス調節因子、アプリン酸、ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ、アルギニンデアミナーゼ、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト、ベンゾクロリン、ベンゾイルスタウロスポリン、βラクタム誘導体、βアレチン、βクラマイシンＢ、ベツリン酸、ｂＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレフレート、ブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２、ブロピリミン、ブドチタン、ブチオニンスルホキシミン、カルシポトリオール、カルホスチンＣ、カンプトテシン誘導体（例えば、１０−ヒドロキシ−カンプトテシン）、カナリア痘ＩＬ−２、カペシタビン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３、ＣＡＲＮ  ７００、軟骨由来阻害剤、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セトロレリクス、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シスポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クランベシジン８１６、クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、クラシンＡ、シクロペンタントラキノン、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビンオクホスファート、細胞溶解因子、サイトスタチン、ダクリキシマブ、デシタビン、デヒドロジデムニンＢ、２’デオキシコホルマイシン（ＤＣＦ）、デスロレリン、デキシホスファミド、デキスラゾキサン、デクスベラパミル、ジアジクオン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジヒドロタキソール、９−ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ディスコデルモライド、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドロロキシフェン、ドロナビノール、デュオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン、エデルホシン、エドレコロマブ、エフロルニチン、エレメン、エミテフール、エピルビシン、エポチロン（Ａ、Ｒ＝Ｈ；Ｂ、Ｒ＝Ｍｅ）、エピチロン、エプリステリド、エストラムスチン類似体、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、エトポシド、４’−リン酸エトポシド（エトポフォス）、エキセメスタン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フルアステロン、フルダラビン、塩酸フルオロダウノルビシン、ホルフェニメクス、ホルメスタン、ホストリエシン、ホテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリクス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ホモハリングトニン（ＨＨＴ）、ヒペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イルモホシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモド、免疫促進ペプチド、インスリン様増殖因子１受容体阻害剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロン、インターロイキン、ヨーベングアン、ヨードドキソルビシン、イポメアノール、イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンＢ、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン−Ｎトリアセテート、ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトルスタチン、レトロゾール、白血病阻害因子、白血球αインターフェロン、ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン、リュープロレリン、レバミゾール、リアロゾール、直鎖ポリアミン類似体、親油性二糖ペプチド、親油性白金化合物、リッソクリナミド７、ロバプラチン、ロンブリシン、ロメトレキソール、ロニダミン、ロソキサントロン、ロバスタチン、ロキソリビン、ラルトテカン、ルテチウムテキサフィリン、リソフィリン、溶解性ペプチド、マイタンシン、マンノスタチンＡ、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリライシン阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル、メルバロン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトクロプラミド、ＭＩＦ阻害剤、ミフェプリストン、ミルテフォシン、ミリモスチム；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ、ミトラシン、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシン類似体、ミトナフィド、マイトトキシン線維芽細胞増殖因子−サポリン、ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム、モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、モノホスホリルリピドＡ＋ミオバクテリウム細胞壁ｓｋ、モピダモール、多薬剤耐性遺伝子阻害剤、多腫瘍抑制因子１系治療薬、マスタード抗がん剤、ミカペルオキシドＢ、マイコバクテリア細胞壁抽出物、ミリアポロン、Ｎ−アセチルジナリン、Ｎ置換���ンズアミド、ナファレリン、ナグレスチップ、ナロキソン＋ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド、ニサマイシン、一酸化窒素調節因子、窒素酸化物抗酸化剤、ニトルリン、０６−ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカイン誘導物質、オルマプラチン、オサテロン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペグアスパルガーゼ、ペルデシン、ペントサン多硫酸ナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、ペルフルブロン、ペルホスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、酢酸フェニル、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニール、塩酸ピロカルピン、ピラルビシン、ピリトレキシム、プラセチンＡ、プラセチンＢ、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤、白金錯体、白金化合物、白金−トリアミン錯体、ポドフィロトキシン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プロピルビス−アクリドン、プロスタグランジンＪ２、プロテアソーム阻害剤、タンパク質Ａ系免疫調節因子、プロテインキナーゼＣ阻害剤、プロテインキナーゼＣ阻害剤、微細藻類、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、プルプリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレン複合体、ｒａｆアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ｒａｓ阻害剤、ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤、脱メチル化レテリプチン、エチドロン酸レニウムＲｅ１８６、リゾキシン、リボザイム、ＲＩＩレチンアミド、ログレチミド、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメックス、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、サイントピン、ＳａｒＣＮＵ、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、Ｓｄｉ１模倣薬、セムスチン、老化誘導阻害剤１、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シグナル伝達調節因子、一本鎖抗原結合タンパク質、シゾフィラン、ソブゾキサン、ボロカプテイトナトリウム、フェニルアセテートナトリウム、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルホス酸、スピカマイシンＤ、スピロムスチン、スプレノペンチン、スポンジスタチン１、スクアラミン、幹細胞阻害剤、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド、ストロメリシン阻害剤、スルフィノシン、超活性血管活性腸管ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリムスチン、タモキシフェンメチオジド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフール、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、テモポルフィン、テモゾロミド、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、タリブラスチン、サリドマイド、チオコラリン、トロンボポイエチン、トロンボポイエチン模倣薬、チマルファシン、チモポエチン受容体アゴ���スト、チモトリナン、甲状腺刺激ホルモン、エチルエチオプルプリンスズ、チラパザミン、二塩化チタノセン、トポテカン、トプセンチン、トレミフェン、全能性幹細胞因子、翻訳阻害剤、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、トリメトレキセート、トリプトレリン、トロピセトロン、ツロステリド、チロシンキナーゼ阻害剤、チルホスチン、ＵＢＣ阻害剤、ウベニメクス、尿生殖洞由来増殖阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンＢ、ベクター系、赤血球遺伝子治療薬、ベラレソール、ベラミン、ベルディンス、ベルテポルフィン、ビノレルビン、ビンキサルチン、ビタキシン、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコルブ、及びジノスタチンスチマラマーなどが挙げられるがこれらに限定されない。
【０３１７】
標識抗ＴＮＦＲ２ポリペプチド
一部の実施形態では、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を、精製または検出の目的で、別の分子（例えば、エピトープタグ）にコンジュゲートする。タンパク質精製に有用なこのような分子の例としては、第２の分子が認識することができる構造エピトープを提示する分子が挙げられる。これは、アフィニティークロマトグラフィーを用いたタンパク質精製に採用されている一般的な戦略であり、そこで、分子は固体支持体上に固定されており、固定化合物に結合可能な分子にコンジュゲートした標的タンパク質を含有する不均一混合物に曝露される。分子認識の目的でアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドにコンジュゲートすることができるエピトープタグ分子の例としては、マルトース結合タンパク質、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ポリヒスチジンタグ、ＦＬＡＧタグ、ｍｙｃタグ、ヒトインフルエンザヘマグルチニン（ＨＡ）タグ、ビオチン、ストレプトアビジンが挙げられるがこれらに限定されない。マルトース、グルタチオン、ニッケル含有錯体、抗ＦＬＡＧ抗体、抗ｍｙｃ抗体、抗ＨＡ抗体、ストレプトアビジン、またはビオチンなどの相補的な分子はそれぞれ、これらの分子が提示するエピトープを含有するコンジュゲートを認識することができる。例えば、アンタゴニスト性抗ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントのエピトープタグを選択的に認識して結合することができる相補的な分子を含有する固相樹脂で、その他のタンパク質及び生体分子（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、糖質、リン脂質など）の複合混合物を処理することにより、その混合物に由来するエピトープタグにコンジュゲートした本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントを精製することができる。固相樹脂の例としては、水溶液中における精製と相性の良いアガロースビーズが挙げられる。
【０３１８】
例えば、蛍光光度計を用いることによって、及び／または蛍光顕微鏡を用いて直接可視化することによって、抗体またはその抗原結合フラグメントを検出するために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドをまた、蛍光分子に共有結合で付加してもよい。本明細書に記載の抗体にコンジュゲートすることができる例示的な蛍光分子としては、緑色蛍光タンパク質、青緑色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、フィコエリスリン、アロフィコシアニン、ｈｏｅｓｃｈｔ、４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）、ヨウ化プロピジウム、フルオレセイン、クマリン、ローダミン、テトラメチルローダミン、及びシアニンが挙げられる。本明細書に記載の抗体へのコンジュゲートに好適な蛍光分子の別の例は当該技術分野において周知であり、例えば、米国特許第７，４１７，１３１号及び第７，４１３，８７４号（そのそれぞれは参照により本明細書に組み込まれる）に詳細が記載されている。
【０３１９】
蛍光分子を含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、本明細書に記載の抗体及びそのフラグメントの細胞表面局在化特性をモニターするのに特に有用である。例えば、蛍光分子に共有結合でコンジュゲートした本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドに培養哺乳動物細胞（例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞）を曝露してから、当該技術分野において周知の一般的な蛍光顕微鏡技術を使用して、これらの細胞を解析してもよい。共焦点蛍光顕微鏡は、例えば、受容体介在性エンドサイトーシスにより細胞の内部に内部移行した抗体またはそのフラグメントを、細胞膜の外表面に結合した抗体またはそのフラグメントと識別するために細胞の個々の平面を解析することが可能であることから、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの細胞表面局在化を測定するための特に強力な方法である。加えて、特定の波長の可視光を放出する蛍光分子（例えば、約５３５ｎｍにおいて蛍光を発するフルオレセイン）、及びＴ−ｒｅｇ細胞表面上の特定の部位に局在化し異なる波長において蛍光を発する別の蛍光分子（例えば、ＣＤ２５に局在化し約５９９ｎｍにおいて蛍光を発する分子）にコンジュゲートしたアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体で、細胞を処理してもよい。得られた放出パターンを共焦点蛍光顕微鏡で可視化してもよく、その他の受容体と比較した、Ｔ−ｒｅｇ細胞表面上におけるアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントの位置に関する情報を明らかにするために、これら２つの波長の画像をマージしてもよい。
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはそのフラグメントなどの検出及び可視化の目的で、生物発光タンパク質もまた融合タンパク質に組み込んでもよい。生物発光タンパク質、例えば、ルシフェラーゼ及びエクオリンなどは、基質（例えば、ルシフェリン及びセレンテラジン）との化学反応の一部として、光を放出する。診断配列として用いるのに好適な例示的な生物発光タンパク質及びその使用方法については、例えば、米国特許第５，２９２，６５８号、第５，６７０，３５６号、第６，１７１，８０９号、及び第７，１８３，０９２号（そのそれぞれは参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。生物発光タンパク質で標識したアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ後に本明細書に記載の抗体を検出するための有用なツールである。例えば、当該技術分野において周知のゲル電気泳動法（例えば、未変性ゲル解析）を使用して混合物の構成成分を分離してから、ウェスタンブロットを実施するために分離タンパク質を膜に転写することにより、別のタンパク質の複合混合物の中から、生物発光タンパク質にコンジュゲートしたアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体の存在を検出してもよい。その他のタンパク質の混合物の中からアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを検出することは、確立されたプロトコルを使用して、適切なルシフェラーゼ基質で膜を処理してからフィルム上のタンパク質の混合物を可視化することにより実施することができる。
【０３２０】
核の放射性放出パターンを解析することにより本明細書に記載の抗体またはそのフラグメントが検出可能となるように、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）をまた、放射性核を含む分子にコンジュゲートしてもよい。代替的に、タンパク質の調製中に抗体に放射性核を導入することにより、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントを直接改変してもよい。例えば、メチオニンの放射性同位体（３５Ｓ）、窒素の放射性同位体（１５Ｎ）、または炭素の放射性同位体（１３Ｃ）を含有する栄養素を補足した培地内で細菌を培養することにより、これらの同位体を本明細書に記載の抗体またはそのフラグメントに導入してもよい。任意選択的に、例えば、放射能標識チロシンを補足した培地内で細菌細胞を培養することにより、放射性ハロゲンを含有するチロシン誘導体をアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドに導入してもよい。内在性翻訳酵素をｉｎ  ｖｉｖｏで使用すると、フェノール系のＣ２位において放射性ハロゲンで官能化されたチロシンが伸長ポリペプチド鎖に速やかに導入されることが判明している（米国特許第４，９２５，６５１号（参照により本明細書に組み込まれる））。ハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、及びアスタチンが挙げられる。加えて、細胞培養液から単離及び精製した後に、本明細書に記載のポリペプチドを放射性同位体で官能化することにより、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを改変してもよい。ハロゲンは、例えば、チロシン残基及びトリプトファン残基のうちの１つまたは複数の求電子性ハロゲン種との反応による、チロシンまたはトリプトファンにおける芳香族置換により、精製タンパク質に容易に導入することができる同位体の部類の代表例である。放射性ハロゲン同位体の例としては、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、１３１Ｉ、または２１１Ａｔが挙げられる。
【０３２１】
放射性同位体を導入するための別の代替戦略は、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、そのフラグメント、または構築物などへのキレート基の共有結合である。キレート基は、反応性官能基、例えば、チオール基、アミノ基、アルコール、またはカルボン酸などへの結合により、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントへと共有結合させることができる。次に、１２５Ｉ、６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、９９Ｔｃ、１６９Ｙｂ、１８６Ｒｅ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、７７Ａｓ、７２Ａｓ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、または２２５Ａｃなどの放射性核種を含むがこれらに限定されない様々な金属放射性同位体のいずれかを含有するように、キレート基を修飾してもよい。
【０３２２】
一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、そのフラグメント、またはその構築物）を、重元素の金属イオンまたは希土類元素イオン、例えば、Ｇｄ３＋、Ｆｅ３＋、Ｍｎ３＋、またはＣｒ２＋などに結合可能なキレート基と共有結合でコンジュゲートさせることが望ましい場合がある。このような常磁性金属に配位するキレート基を含有するコンジュゲートはＭＲＩイメージング用途において有用である。常磁性金属としては、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、プラセオジム（ＩＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、エルビウム（ＩＩＩ）、及びイッテルビウム（ＩＩＩ）が挙げられるがこれらに限定されない。この方法では、ＭＲＩスペクトロスコピーを用いてアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを検出することができる。例えば、投与後における抗体の分布をモニターするために、常磁性イオンに結合したキレート基にコンジュゲートしたアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントを哺乳動物対象（例えば、ヒト患者）に投与してもよい。このことは、本明細書に記載の投与経路のいずれか、例えば、静脈内などにより、抗体を患者に投与してから、確立されたプロトコルに従って患者のＭＲＩを記録することで投与抗体の位置を解析することにより実施することができる。
【０３２３】
水溶液中におけるタンパク質の溶解性及び安定性を向上させる目的で、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を更に、その他の分子にコンジュゲートしてもよい。このような分子の例としては、とりわけ、ＰＥＧ、ＰＳＡ、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、及びヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）が挙げられる。例えば、治療を受けている患者の免疫系による抗体またはそのフラグメントの検出を回避するために、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを糖質部分にコンジュゲートしてもよい。この高グリコシル化プロセスは、循環血液中におけるタンパク質のＢ細胞受容体との相互作用を立体的に阻害することにより、治療用タンパク質の免疫原性を低下させる。代替的に、本明細書に記載の抗体のヒト血清からのクリアランスを防止してその薬物動態プロファイルを向上させる分子に、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントをコンジュゲートしてもよい。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びフラグメントのクリアランスを減弱させてその薬物動態プロファイルを向上させるために、本明細書に記載の抗体またはそのフラグメントにコンジュゲート可能またはその内部に挿入可能な例示的な分子としては、サルベージ受容体結合エピトープが挙げられる。これらのエピトープは、ＩｇＧ免疫グロブリンのＦｃ領域内に存在しており、Ｆｃ受容体に結合してヒト血清中における抗体半減期を延長することが判明している。サルベージ受容体結合エピトープの抗ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントへの挿入は、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載のとおりに実施することができる。
【０３２４】
改変アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド
その他の治療薬及び同定または可視化用の標識へのコンジュゲートに加えて、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）をまた、その薬物動態プロファイル、生物物理学的安定性、または阻害能が向上するように、改変してもよい。例えば、分子の酸化安定性を向上させて異常架橋を防止するために、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの適切な構造の維持に関与していない任意のシステイン残基を、等配電子的または等電子的なアミノ酸（例えば、セリン）で置換してもよい。逆に、抗体またはそのフラグメントにシスチン結合（複数可）を付加して、その安定性を向上させてもよい（とりわけ、抗体が抗体フラグメント、例えば、Ｆｖフラグメントなどである場合）。この安定化は、例えば、抗体の三次構造を強化するために、酸化条件下でジスルフィド結合を形成することができる１つまたは複数の別のペアのシステイン残基をコードするように、抗体の重鎖及び軽鎖をコードするポリヌクレオチドまたは抗体フラグメントをコードするポリヌクレオチドを変化させることにより、達成することができる（例えば、米国特許第７，４２２，８９９号（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
【０３２５】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）に実施してもよい別の有用な改変としては、これらの抗体及びそのフラグメントのグリコシル化プロファイルを変化させることが挙げられる。この変化は、例えば、グリコシル化部位が挿入または除去されるようにアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体内のアミノ酸を置換、挿入、または欠失させることにより達成することができる。抗体のグリコシル化は一般的に、Ｎ−結合型またはＯ−結合型で生じる。Ｎ−結合型グリコシル化は、糖質部分の抗体への結合がアスパラギン残基の側鎖において生じるプロセスである。Ｎ−結合型グリコシル化用のコンセンサスアミノ酸配列は、トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン（ＮＸＳ）及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ＮＸＴ）を含む（Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）。これらのトリペプチド配列のいずれかのポリペプチド（例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体）への挿入により、潜在的なグリコシル化部位が生成される。Ｏ−結合型グリコシル化とは、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンもまたグリコシド形成用の十分な基質ではあるが、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つのヒドロキシアミノ酸（最も一般的には、セリンまたはスレオニン）への結合のことを意味する。それゆえ、グリコシル化部位の抗ＴＮＦＲ２抗体への付加は、Ｎ−結合型グリコシル化を促進させるための上記トリペプチド配列のうちの１つまたは複数を抗体が含有するように、抗体のアミノ酸配列を変化させることにより（例えば、本明細書に記載の組換え発現技術を使用して）、実施することができる、または、元の抗体の配列への１つまたは複数のセリン残基またはスレオニン残基の付加がＯ−結合型グリコシル化を生じさせる（例えば、米国特許第７，４２２，８９９号（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
【０３２６】
代替的な例では、エフェクター機能という点において、例えば、抗体の抗原依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が増強するように、本明細書に記載の抗体またはそのフラグメントを改変することが望ましい場合がある。この改変は、抗体のＦｃ領域に１つまたは複数のアミノ酸置換を導入することにより実施され得る。例えば、抗ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントのＦｃ領域において別の鎖間ジスルフィド結合形成が促進されるように、抗ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントのＦｃ領域にシステイン残基を導入してもよい（例えば、本明細書に記載の組換え発現技術により）。このように作製されたホモ二量体抗体は構造上の制約条件を多く有し得、それにより、内部移行能の向上及び／または補体介在性細胞殺傷及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の増強が促進され得る。抗腫瘍活性が増強したホモ二量体抗体はまた、例えば、Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．，５３：２５６０−２５６５，１９９３）（参照により本明細書に組み込まれる）に記載のヘテロ二官能性クロスリンカーを使用して調製することができる。代替的に、デュアルＦｃ領域を有するように抗体を改変することができ、それにより、補体溶解能及びＡＤＣＣ能を増強させてもよい（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．，３：２１９−２３０，１９８９）（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
【０３２７】
一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸修飾を導入することにより、例えば、ＦａｂドメインのＣＨ１領域またはＣＬ領域を変化させて、例えば、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループに存在するサルベージ受容体モチーフを導入することにより、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメント）の血清中半減期を向上させることができる。このような改変については、例えば、米国特許第５，８６９，０４６号及び米国特許第６，１２１，０２２号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。例えば、ＵＳ２００３／０１５３０４３（参照により本明細書に組み込まれる）に記載のとおりに、別のフレームワーク修飾をまた実施して、抗体またはそのフラグメントの免疫原性を低下させてもよく、または、その中にあるＴ細胞エピトープを減少または除去してもよい。
【０３２８】
治療方法
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の支配的アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドなど（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を使用して、細胞増殖障害（例えば、本明細書に記載のがんなど）、感染症（例えば、本明細書に記載のウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、または寄生虫感染症など）、またはＴＮＦＲ２シグナル伝達が関与する別の疾患を患う患者を治療してもよい。これらの適応症については以下のセクションにおいて詳細に説明する。
【０３２９】
細胞増殖障害を治療するための方法
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）、例えば、支配的アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドなどは、幅広く様々ながん及び細胞増殖障害を治療するための有用な治療薬である。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）、例えば、支配的アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドなどは、例えば、標的がん細胞に対する適応免疫応答の効果を増強させるために、細胞増殖障害、例えば、がんなどを患う哺乳動物対象、例えば、ヒトなどに投与してもよい。
【０３３０】
これらの目的のために使用可能な例示的な本開示の組成物としては、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）、例えば、結合部位が空間的に互いに約１３３Åまたはそれ以上離れた、少なくとも２つのＴＮＦＲ２結合部位を有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドなどに加えて、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ、例えば、ヒトＩｇＧ２−Ａアイソタイプを示すアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、Ｃ２３２Ｓアミノ酸置換及び／またはＣ２３３Ｓアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）が挙げられる。これらの目的のために使用可能な本開示の組成物としてはまた、単一のジスルフィド結合アイソフォーム、例えば、医薬組成物中のポリペプチドのうちの１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、またはそれ以上が、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している単一のジスルフィド結合アイソフォームなどをとるアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを含有する医薬組成物が挙げられる。
【０３３１】
詳細には、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を哺乳動物対象、例えば、ヒトなどに投与して、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖及び活性化を阻害することにより、腫瘍関連抗原を提示する細胞へと腫瘍浸潤Ｔリンパ球を局在化させて細胞傷害を増強してもよい。加えて、この戦略の効果に対する制限のうちの１つが、哺乳動物対象（例えば、ヒト）への注入後に腫瘍反応性Ｔ細胞の細胞傷害を延長することの難しさであることから、本明細書に記載のポリペプチドを、既存の養子Ｔ細胞療法プラットフォームと相乗させてもよい。本明細書に記載のポリペプチドはまた、外来ＭＨＣタンパク質を発現し得、宿主免疫系によって一層不活性化されやすくなり得る同種異系Ｔリンパ球の活性を増強し得る。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、Ｔ細胞浸潤に一般的に関与するＴ−ｒｅｇ細胞の成長及び増殖を抑制することにより、腫瘍反応性Ｔ細胞のＴ−ｒｅｇ介在性枯渇を軽減させることができる。例えば、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、Ｔ−ｒｅｇ細胞の成長を、未処理細胞と比較して、約５０％〜約２００％（例えば、５０％、７５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、または２００％）抑制することができ得る。細胞成長の抑制はＴＮＦαの存在を必要としない。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、ＴＮＦαの存在下、Ｔ−ｒｅｇ細胞の成長を、未処理細胞と比較して、９０％〜１５０％（例えば、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、または１５０％）にまで制限することができ得る。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）はまた、Ｔ−ｒｅｇ細胞の増殖を、Ｔ−ｒｅｇ細胞の未処理集団の増殖の７０％未満（例えば、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、または１％）にまで制限することができる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）はまた、Ｔ−ｒｅｇ細胞の生存率を、Ｔ−ｒｅｇ細胞の未処理集団の生存率と比較して、約１０％（例えば、約２０％、３０％、４０％、もしくは５０％、またはそれ以上）低下させることができる。
【０３３２】
がん細胞及び発がん性物質に対する免疫応答を増強することによって患者の症状を改善させるために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を、がんを患う哺乳動物対象（例えば、ヒト）に投与してもよい。本明細書に記載のポリペプチドは、例えば、本明細書に記載の投与経路のいずれかを介して対象に投与することができる。本明細書に記載のポリペプチドはまた、賦形剤、生物学的に許容される担体と共に製剤化することができ、任意選択的に、別の治療薬、例えば、抗がん剤などにコンジュゲートしてもよい、それと混合してもよい、またはそれと別々に（例えば、連続的に）同時投与してもよい。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの投与により治療可能ながんとしては、白血病、リンパ腫、肝臓癌、骨癌、肺癌、脳癌、膀胱癌、胃腸癌、乳癌、心臓癌、子宮頸癌、子宮癌、頭頸部癌、胆嚢癌、喉頭癌、唇及び口腔癌、眼球癌、黒色腫、膵臓癌、前立腺癌、結腸直腸癌、精巣癌、及び咽喉癌などのがんが挙げられる。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの投与により治療可能な詳細ながんとしては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、非定型奇形／桿状腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、肝外癌、ユーイング肉腫ファミリー、骨肉腫、及び悪性線維性組織球腫、中枢神経系胎児性腫瘍、中枢神経系胚細胞腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、原発性リンパ腫、脊索腫、慢性骨髄増殖性腫瘍、結腸癌、肝外胆管癌、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、感覚神経芽細胞腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵管癌、骨の線維性組織球腫、胃腸カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、精巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、小児期脳幹神経膠腫、毛様細胞性白血病、肝細胞癌、ランゲルハンス細胞組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞腫瘍、膵臓神経内分泌腫瘍、ウィルムス腫瘍、及びその他の小児期腎臓腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球症、小細胞肺癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、眼内黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性扁平頸部癌、正中管癌（ｍｉｄｌｉｎｅ  ｔｒａｃｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、上皮性卵巣癌、胚細胞性卵巣癌、低悪性度卵巣癌、膵臓神経内分泌腫瘍、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔及び鼻腔癌、上皮小体癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性腹膜癌、直腸癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、カポジ肉腫、横紋筋肉��、セザリー症候群、小腸癌、軟部組織肉腫、咽喉癌、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺癌、腎盂及び尿管の移行細胞癌、尿道癌、子宮内膜子宮癌、子宮肉腫、腟癌、外陰癌、ならびにワルデンシュトレームマクログロブリン血症が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３３３】
例えば、ＴＮＦＲ２＋がん細胞を特徴とするがん、例えば、ホジキンリンパ腫、皮膚非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、卵巣癌、結腸癌、多発性骨髄腫、腎細胞癌、皮膚癌、肺癌、肝臓癌、子宮内膜癌、造血がんまたはリンパがん、中枢神経系がん（例えば、神経膠腫、神経芽細胞腫、または、本明細書に記載または当該技術分野において周知の別の中枢神経系のがん）、乳癌、膵臓癌、胃癌、食道癌、及び上部消化管癌などを治療するために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を患者（例えば、哺乳動物患者、例えば、ヒト患者など）に投与してもよい。
【０３３４】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）をまた、がん細胞に対する反応性を示す治療抗体と同時投与してもよい。この方法では、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を、例えば、Ｔリンパ球の腫瘍反応性を延長することによる適応免疫応答とだけではなく、その他の腫瘍細胞増殖阻害剤とも相乗させてもよい。がん及びその他の細胞増殖障害を治療するのに使用可能な別の治療抗体の例としては、がん細胞の表面上に過剰発現した腫瘍抗原または細胞表面タンパク質との反応性を示す治療抗体が挙げられる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドと混合してもよい、それと同時投与してもよい、またはそれと連続的に投与してもよい例示的な抗体としては、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、セツキシマブ（アービタックス（登録商標））、パニツムマブ（ベクティビックス（登録商標））、イピリムマブ（ヤーボイ（登録商標））、リツキシマブ（リツキサン（登録商標）及びマブセラ（登録商標））、アレムツズマブ（キャンパス（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（登録商標））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（登録商標））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（登録商標））、９０Ｙ−イブリツモマブチウキセタン（ゼヴァリン（登録商標））、及び１３１Ｉ−トシツモマブ（ベキサール（登録商標））が挙げられるがこれらに限定されない（Ｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎ．，１２：１４−２１，２０１２）（参照により本明細書に組み込まれる）に詳細が記載されている）。
【０３３５】
当該技術分野における通常のスキルを有する医師は、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを必要とする哺乳動物対象（例えば、ヒト）に投与するための、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、抗体フラグメント、または構築物など（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）の有効量を容易に決定することができる。例えば、医師は、所望の治療効果を得るために必要なレベル未満のレベルで、本明細書に記載のポリペプチドの処方用量を開始して、所望の効果が得られるまで用量を徐々に増加させることができる。代替的に、医師は、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、抗体フラグメント、または構築物などを高用量で投与することにより治療レジメンを開始し、それに続いて、治療効果（例えば、１つまたは複数の腫瘍の容積の減少、Ｔ−ｒｅｇ細胞の集団の減少、または細胞増殖障害の寛解）が得られるまで漸次より少ない用量を投与してもよい。一般的に、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物の好適な１日量は、治療効果をもたらすことが可能な最も少ない用量である化合物の量である。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを、例えば、注射により、例えば、任意選択的に、標的組織（例えば、腫瘍）の部位の近くで、静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下注射などにより投与してもよい。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの治療用組成物の１日量を、任意選択的に、単位投与剤形で、単回用量として、または、日、週、月、または年を通じた適切な間隔で別々に投与される２回、３回、４回、５回、６回、もしくはそれ以上の回数の用量として投与してもよい。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを単独で投与することも可能だが、賦形剤、担体、及び任意選択的に、別の治療薬と組み合わせた医薬品製剤として投与することもまた可能である。
【０３３６】
本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）が細胞増殖疾患、例えば、がんなどの進行を減弱させる能力を、当該技術分野において周知の様々な方法のいずれかを用いてモニターしてもよい。例えば、医師は、患者内の１つまたは複数の腫瘍の容積を解析することにより、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、抗体フラグメント、または構築物などを用いた治療に対する哺乳動物対象（例えば、ヒト）の応答をモニターしてもよい。例えば、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、腫瘍容積を１％〜１００％（例えば、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％）減少させることができ得る。代替的に、医師は、特定の対象のリンパ液内のＴ−ｒｅｇ細胞集団を解析することにより、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物などを用いた治療に対する対象（例えば、ヒト）の応答性をモニターしてもよい。例えば、医師は、哺乳動物対象（例えば、ヒト）から血液試料を採取してから、確立された手法、例えば、蛍光活性化細胞分離法などを使用して、Ｔ−ｒｅｇ細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋Ｔ−ｒｅｇ細胞またはＣＤ１７＋Ｔ−ｒｅｇ細胞）の量または密度を測定してもよい。
【０３３７】
感染症を治療するための方法
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）もまた、感染症、例えば、ウイルス、細菌、真菌、または寄生生物（例えば、真核寄生生物）のうちのいずれか１種または複数種が引き起こす感染症などを治療するために使用することができる。例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を、感染症を患う哺乳動物対象（例えば、ヒト）に、その疾患を治療することに加えてその疾患の１種または複数種の症候を緩和するために投与してもよい。
【０３３８】
これらの目的のために使用可能な例示的な本開示の組成物としては、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）、例えば、結合部位が空間的に互いに約１３３Åまたはそれ以上離れた、少なくとも２つのＴＮＦＲ２結合部位を有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドなどに加えて、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ、例えば、ヒトＩｇＧ２−Ａアイソタイプを示すアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、Ｃ２３２Ｓアミノ酸置換及び／またはＣ２３３Ｓアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）が挙げられる。これらの目的のために使用可能な本開示の組成物としてはまた、単一のジスルフィド結合アイソフォーム、例えば、医薬組成物中のポリペプチドのうちの１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、またはそれ以上が、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している単一のジスルフィド結合アイソフォームなどをとるアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを含有する医薬組成物が挙げられる。
【０３３９】
例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を、哺乳動物対象、例えば、ヒトなどにおける、例えば、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（例えば、Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ属、Ｐｅｓｔｉｖｉｒｕｓ属、及びＨｅｐａｃｉｖｉｒｕｓ属のメンバー）（Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱ウイルスを含む）、ダニ媒介ウイルス、例えば、ガジェットガリーウイルス、カダムウイルス、キャサヌル森林病ウイルス、ランガットウイルス、オムスク出血熱ウイルス、ポワッサンウイルス、ロイヤルファームウイルス、カリシウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、Ｎｅｕｄｏｅｒｆｌウイルス、Ｓｏｆｊｉｎウイルス、跳躍病ウイルス、及びネギシウイルスなど、海鳥ダニ媒介ウイルス、例えば、Ｍｅａｂａｎウイルス、Ｓａｕｍａｒｅｚ  Ｒｅｅｆウイルス、及びチュレニーウイルスなど、蚊媒介ウイルス、例えば、アロアウイルス、デング熱ウイルス、Ｋｅｄｏｕｇｏｕウイルス、Ｃａｃｉｐａｃｏｒｅウイルス、Ｋｏｕｔａｎｇｏウイルス、日本脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ウスツウイルス、ウエストナイルウイルス、Ｙａｏｕｎｄｅウイルス、ココベラウイルス、バガザウイルス、イレウスウイルス、イスラエル七面鳥髄膜脳炎ウイルス、ウンタヤウイルス、テンブスウイルス、ジカウイルス、バンジウイルス、Ｂｏｕｂｏｕｉウイルス、Ｅｄｇｅ  Ｈｉｌｌウイルス、Ｊｕｇｒａウイルス、Ｓａｂｏｙａウイルス、セピックウイルス、ウガンダＳウイルス、ウェッセルスブロンウイルス、黄熱ウイルスなど、及び未知の節足動物が媒介するウイルス、例えば、エンテベコウモリウイルス、ヨコセウイルス、アポイウイルス、Ｃｏｗｂｏｎｅ  Ｒｉｄｇｅウイルス、Ｊｕｔｉａｐａウイルス、Ｍｏｄｏｃウイルス、Ｓａｌ  Ｖｉｅｊａウイルス、Ｓａｎ  Ｐｅｒｌｉｔａウイルス、ブカラサコウモリウイルス、Ｃａｒｅｙ  Ｉｓｌａｎｄウイルス、ダカールコウモリウイルス、モンタナホオヒゲコウモリ白質脳炎ウイルス、プノンペンコウモリウイルス、リオブラボーウイルス、タマナコウモリウイルス、及び細胞融合因子ウイルスなど、Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（Ｉｐｐｙウイルス、ラッサウイルス（例えば、Ｊｏｓｉａｈ株、ＬＰ株、またはＧＡ３９１株）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、Ｍｏｂａｌａウイルス、モペイアウイルス、アマパリウイルス、フレキサルウイルス、グアナリトウイルス、フニンウイルス、ラティーノウイルス、マチュポウイルス、オリベロスウイルス、パラナウイルス、ピチンデウイルス、Ｐｉｒｉｔａｌウイルス、サビアウイルス、タカリベウイルス、タミアミウイルス、ホワイトウォーターアロヨウイルス、チャパレウイルス、及びルジョウイルスを含む）、Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（例えば、Ｈａｎｔａｖｉｒｕｓ属、Ｎａｉｒｏｖｉｒｕｓ属、Ｏｒｔｈｏｂｕｎｙａｖｉｒｕｓ属、及びＰｈｌｅｂｏｖｉｒｕｓ属のメンバー）（ハンタンウイルス、シンノンブレウイルス、Ｄｕｇｂｅウイルス、ブニヤンベラウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、及びクリミアコンゴ出血熱（ＣＣＨＦ）ウイルスを含む）、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（エボラウイルス（例えば、Ｚａｉｒｅ株、Ｓｕｄａｎ株、Ｉｖｏｒｙ  Ｃｏａｓｔ株、Ｒｅｓｔｏｎ株、及びＵｇａｎｄａ株）及びマールブルグウイルス（例えば、Ａｎｇｏｌａ株、Ｃｉ６７株、Ｍｕｓｏｋｅ株、Ｐｏｐｐ株、Ｒａｖｎ株、及びＬａｋｅ  Ｖｉｃｔｏｒｉａ株）を含む）、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（例えば、Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ属のメンバー）（ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）、東部ウマ脳炎ウイルス（ＥＥＥ）、西部ウマ脳炎ウイルス（ＷＥＥ）、シンドビスウイルス、風疹ウイルス、セムリキ森林ウイルス、ロスリバーウイルス、バーマ森林ウイルス、オニョンニョンウイルス、及びチクングニヤウイルスを含む）、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（例えば、Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ属のメンバー）（天然痘ウイルス、サル痘ウイルス、及びワクシニアウイルスを含む）、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ、１型、２型、及び６型）、ヒトヘルペスウイルス（例えば、７型及び８型）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス、及びカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）を含む）、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（インフルエンザウイルス（Ａ、Ｂ、及びＣ）、例えば、Ｈ５Ｎ１トリインフルエンザウイルスまたはＨ１Ｎ１ブタインフルエンザなどを含む）、Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスを含む）、Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（狂犬病ウイルス及び水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を含む）、Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ニューカッスル病ウイルス、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、麻疹ウイルス、牛疫ウイルス、イヌジステンパーウイルス、センダイウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス（例えば、１、２、３、及び４）ライノウイルス、及びムンプスウイルスを含む）、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（ポリオウイルス、ヒトエンテロウイルス（Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤ）、Ａ型肝炎ウイルス、及びコクサッキーウイルスを含む）、Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（Ｂ型肝炎ウイルスを含む）、Ｐａｐｉｌｌａｍｏｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（ヒトパピローマウイルスを含む）、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（アデノ随伴ウイルスを含む）、Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（アストロウイルスを含む）、Ｐｏｌｙｏｍａｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（ＪＣウイルス、ＢＫウイルス、及びＳＶ４０ウイルスを含む）、Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（ノーウォークウイルスを含む）、Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（ロタウイルスを含む）、及びＲｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ科のメンバー（ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ、例えば、１型及び２型）��びヒトＴリンパ指向性ウイルスＩ型及びＩＩ型（それぞれＨＴＬＶ−１及びＨＴＬＶ−２）を含む）、フレンド白血病ウイルス、ならびに伝染性海綿状脳症、例えば、慢性消耗病などが引き起こすウイルス感染症を治療するまたはウイルス感染症の１種または複数種の症候を緩和するために使用することができる。とりわけ、本明細書に記載の方法は、ＨＩＶ感染症（例えば、ＡＩＤＳを患うヒトなど）を治療するために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドをヒトに投与することを含む。
【０３４０】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）をまた、哺乳動物対象（例えば、ヒト）における、細菌感染症を治療するまたは細菌感染症の１種または複数種の症候を緩和するために使用することができる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、または抗体フラグメントなどの投与により治療可能な細菌感染症の例としては、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｃａｒｄｉａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅｃｅ（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、例えば、Ｏ１５７：Ｈ７など）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ（例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａなど）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓなど）、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓなど）、及びＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ（例えば、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ及びＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｈｅｐａｔｉｃｕｓなど）の属内の細菌によって引き起こされる細菌感染症が挙げられるがこれらに限定されない。とりわけ、本明細書に記載の方法は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染症を治療するために、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数または全てを含有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物など、例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のヒトバリアント、ヒト化バリアント、またはキメラバリアントなどを、ヒトまたは非ヒト哺乳動物に投与することを含む。本明細書に記載の特定の方法は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染症を治療するために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドをウシ科哺乳動物またはバイソンに投与することを含む。加えて、本明細書に記載の方法は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染症を治療す��ために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドをヒトまたは非ヒト哺乳動物に投与することを含む。本明細書に記載の特定の方法は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染症を治療するために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドをウシ科哺乳動物またはバイソンに投与することを含む。
【０３４１】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）をまた、寄生原虫（例えば、腸内原虫、組織原虫、または血液原虫）または寄生虫（例えば、線虫、蠕虫、双器綱、双腺綱、吸虫綱、吸虫類（住血吸虫、肝吸虫、腸管寄生吸虫、及び肺吸虫）、または条虫）が引き起こす寄生虫感染症を治療するまたは寄生虫感染症の１種または複数種の症候を緩和するために、使用哺乳動物対象（例えば、ヒト）に投与してもよい。本明細書に記載の方法に従い治療可能な例示的な寄生原虫としては、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｙｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｍｕｒｉｓ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄａ  ｃｒｕｓｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍｅｘｉｃａｎａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍａｊｏｒ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｙｏｅｌｌｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、及びＨｉｓｔｏｍｏｎａｓ  ｍｅｌｅａｇｒｉｄｉｓが挙げられるがこれらに限定されない。例示的な寄生虫としては、ｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ  ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ｎｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、ａｎｄ  Ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ  ｍｅｄｉｎｅｎｓｉｓ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｇｉｇａｎｔｉｃａ、Ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｅｓ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ、Ｔａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍ、Ｔａｅｎｉａ  ｓａｇｉｎａｔａ、Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ  ｎａｎａ、及びＥｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓが挙げられる。本明細書に記載の方法に従い治療可能な別の寄生虫感染症としてはＯｎｃｈｏｃｅｒｃａｓ  ｖｏｌｖｕｌｕｓが挙げられる。
【０３４２】
真菌感染症を治療するために、または真菌感染症の１種または複数種の症候を緩和するために、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメント、例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）をまた、哺乳動物対象（例えば、ヒト）に投与してもよい。本明細書に記載の方法に従い治療可能な真菌感染症の例としては、例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ、Ｍｕｃｏｒ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ、及びＡｂｓｉｄｉａによって引き起こされる真菌感染症が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書に記載の方法に従い治療可能な例示的な真菌感染症としてはまた、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、及びＨｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍが挙げられる。
【０３４３】
医薬組成物
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物など（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を含有する医薬組成物は、当該技術分野において周知の方法を用いて調製することができる。本開示の医薬組成物に混合可能な例示的なアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドとしては、結合部位が空間的に互いに約１３３Åまたはそれ以上離れた、少なくとも２つのＴＮＦＲ２結合部位を有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドに加えて、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ、例えば、ヒトＩｇＧ２−Ａアイソタイプを示すアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、Ｃ２３２Ｓアミノ酸置換及び／またはＣ２３３Ｓアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）が挙げられる。
【０３４４】
本明細書に記載の医薬組成物は、１種または複数種の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を含有していてもよい。例えば、本明細書に記載の医薬組成物は、例えば、生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）（参照により本明細書に組み込まれる））を使用して、所望の形態、例えば、凍結乾燥製剤または水溶剤の形態で調製することができる。活性剤（例えば、アンタゴニスト性抗ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメント）を所望の濃度で含有するように、組成物もまた調製することができる。例えば、本明細書に記載の医薬組成物は、少なくとも１０重量％（重量／重量）（例えば、１０重量％、２０重量％、３０重量％、４０重量％、５０重量％、６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９５重量％、９７重量％、９８重量％、９９重量％、９９．５重量％、９９．９重量％、または１００重量％）の活性剤を含有していてもよい。
【０３４５】
加えて、医薬品製剤に混合可能な活性剤（例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の支配的アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドなど）はそれ自体、所望のレベルの純度を有していてもよい。例えば、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合フラグメントなどは、抗体を細胞培養培地から単離した後、または、例えば、本明細書に記載の確立された固相ペプチド合成法または天然の化学的ライゲーションによる、一本鎖抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）の化学合成後における、ある特定の度合いの純度を特徴としていてもよい。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、抗体を医薬組成物に混合する前において、少なくとも１０％の純度（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、９９．９９％、または１００％の純度）であってもよい。
【０３４６】
加えて、医薬組成物中に含まれるポリペプチドの多くが単一のジスルフィド結合アイソフォームをとることになるように、本開示のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を医薬組成物に混合してもよい。例えば、本開示の医薬組成物としては、例えば、医薬組成物中のポリペプチドのうちの１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、またはそれ以上が、単一のジスルフィド結合アイソフォーム、例えば、本明細書に記載のＩｇＧ２−Ａアイソフォームなどで存在している、アンタゴニストＴＮＦＲ２ポリペプチドを含有する医薬組成物が挙げられる。
【０３４７】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの医薬組成物（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）は、所望の度合いの純度を有する抗体を、当該技術分野において採用される任意選択的な薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤、例えば、緩衝剤、安定化剤、防腐剤、等張化剤、非イオン性界面活性剤、酸化防止剤、及びその他の種々雑多な添加剤類と混合することにより、凍結乾燥製剤または水溶剤として保存されるように調製することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｏｓｏｌ，ｅｄ．１９８０）（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。このような添加剤は、採用する用量及び濃度において、レシピエントに非毒性である必要がある。
【０３４８】
緩衝剤
緩衝剤は、ほぼ生理学的条件の範囲にｐＨを維持するのに役立つ。緩衝剤は約２ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲の濃度で含まれていてもよい。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメント）と共に使用するための好適な緩衝剤としては、有機酸と無機酸の両方及びその塩、例えば、クエン酸塩緩衝剤（例えば、クエン酸一ナトリウム−クエン酸二ナトリウム混合物、クエン酸−クエン酸三ナトリウム混合物、クエン酸−クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸塩緩衝剤（例えば、コハク酸−コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸−水酸化ナトリウム混合物、コハク酸−コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸塩緩衝剤（例えば、酒石酸−酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸−酒石酸カリウム混合物、酒石酸−水酸化ナトリウム混合物など）、フマル酸塩緩衝剤（例えば、フマル酸−フマル酸一ナトリウム混合物、フマル酸−フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム−フマル酸二ナトリウム混合物など）、グルコン酸塩緩衝剤（例えば、グルコン酸−グルコン酸ナトリウム混合物、グルコン酸−水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸−グルコン酸カリウム混合物など）、シュウ酸塩緩衝剤（例えば、シュウ酸−シュウ酸ナトリウム混合物、シュウ酸−水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸−シュウ酸カリウム混合物など）、乳酸塩緩衝剤（例えば、乳酸−乳酸ナトリウム混合物、乳酸−水酸化ナトリウム混合物、乳酸−乳酸カリウム混合物など）、及び酢酸塩緩衝剤（例えば、酢酸−酢酸ナトリウム混合物、酢酸−水酸化ナトリウム混合物など）などが挙げられる。加えて、リン酸塩緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤、及びトリメチルアミン塩、例えば、トリスなどを使用してもよい。
【０３４９】
防腐剤
本明細書に記載の組成物に防腐剤を加えて微生物の増殖を遅延させてもよく、０．２％〜１％（重量／体積）の範囲の量で防腐剤を加えてもよい。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）と共に使用するための好適な防腐剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタ−クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ハロゲン化ベンザルコニウム（例えば、塩化、臭化、及びヨウ化）、塩化ヘキサメトニウム、及びアルキルパラベン、例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベンなど、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、ならびに３−ペンタノールが挙げられる。時に「安定剤」として知られる等張化剤を加えて本明細書に記載の液体組成物の等張性を確保してもよく、等張化剤としては、多価糖アルコール、例えば、三価またはそれ以上の価数の糖アルコール、例えば、グリセリン、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、及びマンニトールなどが挙げられる。安定剤とは、増量剤から、治療薬を可溶化させる、または変性するまたは容器の壁に付着するのを防止する添加剤の範囲で機能し得る広いカテゴリーの賦形剤のことを意味する。典型的な安定剤は、多価糖アルコール（上で挙げた）、アミノ酸、例えば、アルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ−ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなど、有機糖または糖アルコール、例えば、イノシトールなどのシクリトールを含む、ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイニシトール、ガラクチトール、グリセロールなど、ポリエチレングリコール、アミノ酸ポリマー、硫黄含有還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、ａ−モノチオグリセロール、及びチオ硫酸ナトリウムなど、低分子量ポリペプチド（例えば、１０残基以下のペプチド）、タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど、親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン単糖、例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコースなど、二糖、例えば、ラクトース、マルトース、スクロースなど、及び三糖、例えば、ラフィノースなど、ならびに多糖、例えば、デキストランなどであってもよい。安定剤は、活性タンパク質１重量部あたり０．１〜１０，０００重量の範囲で含まれていてもよい。
【０３５０】
界面活性剤
非イオン性界面活性剤または界面活性剤（「湿潤剤」としても周知）を加えて、治療薬を可溶化させることに加えて、攪拌が引き起こす凝集から治療用タンパク質を保護することを補助してもよく、それにより、タンパク質の変性を引き起こすことなく、負荷がかかったせん断表面に製剤を曝露することもまた可能となる。好適な非イオン性界面活性剤としては、ポリソルベート（２０、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、プルロニックポリオール、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０など）が挙げられる。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１．０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．０７ｍｇ／ｍＬ〜約０．２ｍｇ／ｍＬの範囲で含まれていてもよい。
【０３５１】
別の種々雑多な賦形剤類としては、増量剤（例えば、デンプン）、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、及び共溶媒が挙げられる。
【０３５２】
その他の医薬品担体
本明細書に記載の医薬組成物に混合可能な代替的な薬学的に許容される担体としては、限定するわけではないが、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、耕作に適したゴム、リン酸カリウム、アルギニン酸、ゼラチン、ケイ酸カリウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、オキシ安息香酸メチル、オキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び鉱油を挙げることができる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体を含有する組成物は、滑沢剤、湿潤剤、甘味剤、風味剤、乳化剤、懸濁剤、及び防腐剤を更に含んでいてもよい。好適な薬学的に許容される担体及び製剤の詳細については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９ｔｈ  ｅｄ．，１９９５）（参照により本明細書に組み込まれる）に見出すことができる。
【０３５３】
組み合わせ治療用の組成物及び方法
本明細書に記載の医薬組成物は任意選択的に、２種以上の活性剤を含んでいてもよい。例えば、本明細書に記載の組成物は、別の薬学的に活性な分子、例えば、細胞傷害剤、抗生物質、またはＴリンパ球（例えば、ＣＡＲ−Ｔ療法に使用するための遺伝子編集Ｔリンパ球）にコンジュゲートした、それらと混合した、またはそれらとは別に投与される、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物、例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を含有していてもよい。例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドまたはその治療用コンジュゲート（例えば、本明細書に記載の薬物−抗体コンジュゲート）を、がんまたは別の細胞増殖障害（例えば、腫瘍）を治療するのに使用可能な１種または複数種の別の活性剤と混合してもよい。代替的に、本明細書に記載の医薬組成物は、がんまたはその他の細胞増殖障害を治療するのに使用可能な１種または複数種の別の活性剤との同時投与または連続投与用に製剤化してもよい。がん及びその他の細胞増殖障害を治療するのに使用可能な別の活性剤の例、及び、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドにコンジュゲートする、それと混合する、またはそれとは別に投与することができる別の活性剤の例としては、細胞傷害剤（例えば、本明細書に記載の細胞傷害剤）に加え、がん細胞の表面上に過剰発現した腫瘍抗原または細胞表面タンパク質との反応性を示す抗体が挙げられる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体にコンジュゲートする、それと混合する、またはそれとは別に投与することができる例示的な抗体としては、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、セツキシマブ（アービタックス（登録商標））、パニツムマブ（ベクティビックス（登録商標））、イピリムマブ（ヤーボイ（登録商標））、リツキシマブ（リツキサン（登録商標）及びマブセラ（登録商標））、アレムツズマブ（キャンパス（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（登録商標））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（登録商標））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（登録商標））、９０Ｙ−イブリツモマブチウキセタン（ゼヴァリン（登録商標））、及び１３１Ｉ−トシツモマブ（ベキサール（登録商標））が挙げられるがこれらに限定されない（Ｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎ．，１２：１４−２１，２０１２）（参照により本明細書に組み込まれる）に詳細が記載されている）。
【０３５４】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）にコンジュゲートする、それと混合する、またはそれとは別に投与することができる別の薬剤としては、特定の病変に関連する特定の抗原との反応性を示すＴリンパ球が挙げられる。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、細胞増殖障害、例えば、本明細書に記載のがんなどを治療するために、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ−Ｔ）を発現するＴ細胞との投与用に製剤化することができる。腫瘍反応性抗原受容体を発現するように遺伝子改変されたＴリンパ球をＴ−ｒｅｇ細胞が不活性化させることを防止することにより、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、及びその抗原結合フラグメント）を、ＣＡＲ−Ｔ療法と相乗させることができる。この方法では、細胞増殖障害、例えば、がんなどを患う哺乳動物対象（例えば、ヒト）を治療するために、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの投与前、その投与と同時、またはその投与後に、ＣＡＲ−Ｔ細胞を患者に投与してもよい。
【０３５５】
ＣＡＲ−Ｔ療法は、腫瘍関連抗原に特異的な抗原受容体を発現するようにＴリンパ球を遺伝子改変する能力を考慮して、がん細胞を標的とするための特に強力なプラットフォームである。例えば、腫瘍及びその他のがん細胞の表面上に過剰発現した抗原を同定することにより、キメラＴ細胞受容体の設計及び発見が報告されることもあり、そのキメラＴ細胞受容体は多くの場合、特定の抗原ペプチドに特異的に結合する細胞外ｓｃＦｖフラグメントと機能的に連結した、天然Ｔ細胞受容体に由来する細胞質ドメイン及び膜貫通ドメインで構成される。特定の腫瘍抗原に特異的に結合する抗原受容体を発現させるために、本明細書に記載または当該技術分野において周知の様々なゲノム編集技術のいずれかを用いて、Ｔ細胞を遺伝子改変してもよい。キメラ抗原受容体をコードする遺伝子が導入されるようにＴ細胞ゲノムを改変するための例示的な技術としては、本明細書に記載のＣＲＩＳＰＥＲ／Ｃａｓプラットフォーム、ジンクフィンガーヌクレアーゼプラットフォーム、ＴＡＬＥＮプラットフォーム、ＡＲＣＵＳ（商標）プラットフォームが挙げられる。ＣＡＲ−Ｔリンパ球を遺伝子改変するための方法については、例えば、ＷＯ２０１４／１２７２６１、ＷＯ２０１４／０３９５２３、ＷＯ２０１４／０９９６７１、及びＷＯ２０１２０７９００００（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０３５６】
本明細書に記載の組成物及び方法において有用なＣＡＲ−Ｔ細胞としては、細胞が内在性Ｔ細胞受容体を発現しないように遺伝子改変されたＣＡＲ−Ｔ細胞が挙げられる。例えば、ＣＡＲ−Ｔ注入を受けている患者における移植片対宿主反応を予防するために、内在性Ｔ細胞受容体の発現が抑制されるように、ゲノム編集技術、例えば、本明細書に記載のゲノム編集技術などを用いて、ＣＡＲ−Ｔ細胞を改変してもよい。追加的にまたは代替的に、１種または複数種の内在性ＭＨＣタンパク質の発現が低下するようにＣＡＲ−Ｔ細胞を遺伝子改変してもよい。これは、外来ＭＨＣタンパク質の認識が同種移植片拒絶反応を増強する１つのメカニズムを示すことから、同種異系Ｔリンパ球を注入するための特に有用な技術である。当業者はまた、免疫抑制タンパク質、例えば、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）及び細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）などの発現が抑制されるようにＴリンパ球を改変することができる。これらのタンパク質は、活性化するとＴ細胞活性化を減弱させる細胞表面受容体である。１種または複数種の免疫抑制タンパク質の発現が低下するように遺伝子改変されたＣＡＲ−Ｔ細胞の注入は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＴリンパ球介在性細胞傷害を延長するのに使用可能な１つの戦略を示す。
【０３５７】
特定の遺伝子を欠失させることに加えて、所望の抗原特異性を有するＴ細胞受容体を発現させるために、ＣＡＲ−Ｔ細胞を改変することもまた可能である。例えば、注入Ｔ細胞をがん細胞へと向かわせるために、腫瘍関連抗原に特異的に結合するＴ細胞受容体を発現するようにＴリンパ球を遺伝子改変してもよい。ＣＡＲ−Ｔ細胞が発現し得る例示的なＴ細胞受容体は、様々な腫瘍細胞上に過剰発現することが多い細胞表面タンパク質であるＰＤ−Ｌ１に結合するＴ細胞受容体である。ＰＤ−Ｌ１がＴリンパ球の表面上のＰＤ−１を活性化させることから、ＣＡＲ−Ｔ療法によるこの腫瘍抗原の標的化は、Ｔリンパ球が関与する免疫応答のｉｎ  ｖｉｖｏにおける持続期間を延長させるために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体または抗体フラグメントと相乗し得る。１種または複数種の感染症に関連する抗原、例えば、ウイルスタンパク質、細菌細胞、真菌、またはその他の寄生虫生物に由来する抗原などに特異的に結合するＴ細胞受容体を発現するように、ＣＡＲ−Ｔ細胞をまた改変してもよい。
【０３５８】
本明細書に記載のその他の医薬組成物としては、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体または抗体フラグメント（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）、インターフェロンα、及び／または、感染症を患う患者（例えば、ヒト患者）に投与可能な１種または複数種の抗生物質を含有する医薬組成物が挙げられる。例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体または抗体フラグメントは、１種または複数種の感染症を治療するのに有用な抗生物質、例えば、とりわけ、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、スペクチノマイシン、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、リファキシミン、ロラカルベフ、エルタペネム、ドリペネム、イミペネム、メロペネム、セファドロキシル、セファゾリン、セファレキシン、セファクロル、セフォキシチン、セフプロジル、セフロキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、クリンダマイシン、リンコマイシン、ダプトマイシン、エリスロマイシン、リネゾリド、トレゾリド、アモキシシリン、アンピシリン、バシトラシン、シプロフロキサシン、ドキシサイクリン、及びテトラサイクリンなどにコンジュゲートする、それと混合する、またはそれとは別に投与することができる。
【０３５９】
免疫療法剤
例えば、がんまたは感染症、例えば、本明細書に記載のがんまたは感染症などを治療するために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を、免疫療法剤と混合する、それにコンジュゲートする、それと共に投与する、またはそれとは別に投与してもよい。本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて有用な例示的な免疫療法剤としては、抗ＣＴＬＡ−４剤、抗ＰＤ−１剤、抗ＰＤ−Ｌ１剤、抗ＰＤ−Ｌ２剤、抗ＴＮＦ−α架橋剤、抗ＴＲＡＩＬ架橋剤、抗ＣＤ２７剤、抗ＣＤ３０剤、抗ＣＤ４０剤、抗４−１ＢＢ剤、抗ＧＩＴＲ剤、抗ＯＸ４０剤、抗ＴＲＡＩＬＲ１剤、抗ＴＲＡＩＬＲ２剤、及び抗ＴＷＥＡＫＲ剤に加えて、例えば、Ｍａｈｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，１４：５６１−５８４（２０１５）（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる）の表１に記載の免疫学的標的に向かう薬剤が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、イピリムマブ及びトレメリムマブなどであってもよい。免疫療法剤は、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及びアテゾリズマブなどであってもよい。免疫療法剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、アテゾリズマブまたはアベルマブなどであってもよい。その他の例として、免疫学的標的４−１ＢＢリガンドは抗４−１ＢＢリガンド抗体の標的となり得、免疫学的標的ＯＸ４０Ｌは抗ＯＸ４０Ｌ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＧＩＴＲは抗ＧＩＴＲ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＣＤ２７は抗ＣＤ２７抗体の標的となり得、免疫学的標的ＴＬ１Ａは抗ＴＬ１Ａ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＣＤ４０ＬまたはＣＤ４０は抗ＣＤ４０Ｌ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＬＩＧＨＴは抗ＬＩＧＨＴ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＢＴＬＡは抗ＢＴＬＡ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＬＡＧ３は抗ＬＡＧ３抗体の標的となり得、免疫学的標的ＴＩＭ３は抗ＴＩＭ３抗体の標的となり得、免疫学的標的Ｓｉｎｇｌｅｃｓは抗Ｓｉｎｇｌｅｃｓ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＩＣＯＳリガンドは抗ＩＣＯＳリガンド抗体の標的となり得、免疫学的標的Ｂ７−Ｈ３は抗Ｂ７−Ｈ３抗体の標的となり得、免疫学的標的Ｂ７−Ｈ４は抗Ｂ７−Ｈ４抗体の標的となり得、免疫学的標的ＶＩＳＴＡは抗ＶＩＳＴＡ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＴＭＩＧＤ２は抗ＴＭＩＧＤ２抗体の標的となり得、免疫学的標的ＢＴＮＬ２は抗ＢＴＮＬ２抗体の標的となり得、免疫学的標的ＣＤ４８は抗ＣＤ４８抗体の標的となり得、免疫学的標的ＫＩＲは抗ＫＩＲ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＬＩＲは抗ＬＩＲ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＩＬＴは抗ＩＬＴ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＮＫＧ２Ｄは抗���ＫＧ２Ｄ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＮＫＧ２Ａは抗ＮＫＧ２Ａ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＭＩＣＡは抗ＭＩＣＡ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＭＩＣＢは抗ＭＩＣＢ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＣＤ２４４は抗ＣＤ２４４抗体の標的となり得、免疫学的標的ＣＳＦ１Ｒは抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＩＤＯは抗ＩＤＯ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＴＧＦβは抗ＴＧＦβ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＣＤ３９は抗ＣＤ３９抗体の標的となり得、免疫学的標的ＣＤ７３は抗ＣＤ７３抗体の標的となり得、免疫学的標的ＣＸＣＲ４は抗ＣＸＣＲ４抗体の標的となり得、免疫学的標的ＣＸＣＬ１２は抗ＣＸＣＬ１２抗体の標的となり得、免疫学的標的ＳＩＲＰＡは抗ＳＩＲＰＡ抗体の標的となり得、免疫学的標的ＣＤ４７は抗ＣＤ４７抗体の標的となり得、免疫学的標的ＶＥＧＦは抗ＶＥＧＦ抗体の標的となり得、免疫学的標的ニューロピリンは抗ニューロピリン抗体の標的となり得る（例えば、Ｍａｈｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．の表１を参照のこと）。
【０３６０】
本明細書に記載の組成物及び方法と共に使用可能な免疫療法剤としては、例えば、抗ＴＷＥＡＫ剤、抗細胞表面リンパ球タンパク質剤、抗ＢＲＡＦ剤、抗ＭＥＫ剤、抗ＣＤ３３剤、抗ＣＤ２０剤、抗ＨＬＡ−ＤＲ剤、抗ＨＬＡクラスＩ剤、抗ＣＤ５２剤、抗Ａ３３剤、抗ＧＤ３剤、抗ＰＳＭＡ剤、抗Ｃｅａｃａｎ１剤、抗Ｇａｌｅｄｉｎ９剤、抗ＨＶＥＭ剤、抗ＶＩＳＴＡ剤、抗Ｂ７  Ｈ４剤、抗ＨＨＬＡ２剤、抗ＣＤ１５５剤、抗ＣＤ８０剤、抗ＢＴＬＡ剤、抗ＣＤ１６０剤、抗ＣＤ２８剤、抗ＣＤ２２６剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１剤、抗ＴＩＭ３剤、抗ＴＩＧＩＴ剤、抗ＣＤ９６剤、抗ＣＤ７０剤、抗ＣＤ２７剤、抗ＬＩＧＨＴ剤、抗ＣＤ１３７剤、抗ＤＲ４剤、抗ＣＲ５剤、抗ＴＮＦＲＳ剤、抗ＴＮＦＲ１剤、抗ＦＡＳ剤、抗ＣＤ９５剤、抗ＴＲＡＩＬ剤、抗ＤＲ６剤、抗ＥＤＡＲ剤、抗ＮＧＦＲ剤、抗ＯＰＧ剤、抗ＲＡＮＫＬ剤、抗ＬＴβ受容体剤、抗ＢＣＭＡ剤、抗ＴＡＣＩ剤、抗ＢＡＦＦＲ剤、抗ＥＤＡＲ２剤、抗ＴＲＯＹ剤、及び抗ＲＥＬＴ剤が挙げられる。例えば、免疫療法剤は、抗ＴＷＥＡＫ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗細胞表面リンパ球タンパク質抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＲＡＦ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＭＥＫ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ３３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＬＡクラスＩ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ５２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ａ３３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＧＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＳＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｃｅａｃａｎ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｇａｌｅｄｉｎ９抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｂ７  Ｈ４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＨＨＬＡ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１５５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ８０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１６０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２２６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ９６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＬＩＧＨＴ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＤＲ４抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦＲＳ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦＲ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＦＡＳ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＤ９５抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＡＩＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＤＲ６抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＥＤＡＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＮＧＦＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＯＰＧ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＲＡＮＫＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＬＴβ受容体抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＡＣＩ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＢＡＦＦＲ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＥＤＡＲ２抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＴＲＯＹ抗体またはその抗原結合フラグメント、または抗ＲＥＬＴ抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよい。
【０３６１】
一部の実施形態では、免疫療法剤は、抗細胞表面リンパ球タンパク質抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１、ＣＤ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４２、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６０、ＣＤ６１、ＣＤ６２、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６５、ＣＤ６６、ＣＤ６７、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８８、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤ９２、ＣＤ９３、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０７、ＣＤ１０８、ＣＤ１０９、ＣＤ１１０、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１４、ＣＤ１１５、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０、ＣＤ１２１、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤ１２８、ＣＤ１２９、ＣＤ１３０、ＣＤ１３１、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３５、ＣＤ１３６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１３９、ＣＤ１４０、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４５、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１４９、ＣＤ１５０、ＣＤ１５１、ＣＤ１５２、ＣＤ１５３、ＣＤ１５４、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８、ＣＤ１５９、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６５、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７、ＣＤ１６８、ＣＤ１６９、ＣＤ１７０、ＣＤ１７１、ＣＤ１７２、ＣＤ１７３、ＣＤ１７４、ＣＤ１７５、ＣＤ１７６、ＣＤ１７７、ＣＤ１７８、ＣＤ１７９、ＣＤ１８０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８３、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、ＣＤ１８６、ＣＤ１８７、ＣＤ１８８、ＣＤ１８９、ＣＤ１９０、ＣＤ１９１、ＣＤ１９２、ＣＤ１９３、ＣＤ１９４、ＣＤ１９５、ＣＤ１９６、ＣＤ１９７、ＣＤ１９８、ＣＤ１９９、ＣＤ２００、ＣＤ２０１、ＣＤ２０２、ＣＤ２０３、ＣＤ２０４、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＣＤ２０７、ＣＤ２０８、ＣＤ２０９、ＣＤ２１０、ＣＤ２１１、ＣＤ２１２、ＣＤ２１３、ＣＤ２１４、ＣＤ２１５、ＣＤ２１６、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８、ＣＤ２１９、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２３、ＣＤ２２４、ＣＤ２２５、ＣＤ２２６、ＣＤ２２７、ＣＤ２２８、ＣＤ２２９、ＣＤ２３０、ＣＤ２３１、ＣＤ２３２、ＣＤ２３３、ＣＤ２３４、ＣＤ２３５、ＣＤ２３６、ＣＤ２３７、ＣＤ２３８、ＣＤ２３９、ＣＤ２４０、ＣＤ２４１、ＣＤ２４２、ＣＤ２４３、ＣＤ２４４、ＣＤ２４５、ＣＤ２４６、ＣＤ２４７、ＣＤ２４８、ＣＤ２４９、ＣＤ２５０、ＣＤ２５１、ＣＤ２５２、ＣＤ２５３、ＣＤ２５４、ＣＤ２５５、ＣＤ２５６、ＣＤ２５７、ＣＤ２５８、ＣＤ２５９、ＣＤ２６０、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ２６３、ＣＤ２６４、ＣＤ２６５、ＣＤ２６６、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２７０、ＣＤ２７１、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７７、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤ２８０、ＣＤ２８１、ＣＤ２８２、ＣＤ２８３、ＣＤ２８４、ＣＤ２８５、ＣＤ２８６、ＣＤ２８７、ＣＤ２８８、ＣＤ２８９、ＣＤ２９０、ＣＤ２９１、ＣＤ２９２、ＣＤ２９３、ＣＤ２９４、ＣＤ２９５、ＣＤ２９６、ＣＤ２９７、ＣＤ２９８、ＣＤ２９９、ＣＤ３００、ＣＤ３０１、ＣＤ３０２、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４、ＣＤ３０５、ＣＤ３０６、ＣＤ３０７、ＣＤ３０８、ＣＤ３０９、ＣＤ３１０、ＣＤ３１１、ＣＤ３１２、ＣＤ３１３、ＣＤ３１４、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１８、ＣＤ３１９、及び／またはＣＤ３２０のうちの１種または複数種に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントなどである。
【０３６２】
一部の実施形態では、免疫療法剤は、ケモカインまたはリンフォカイン、例えば、腫瘍の増殖に関与するケモカインまたはリンフォカインなどに結合する薬剤（例えば、ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、またはその構築物）である。例えば、本明細書に記載の組成物及び方法と共に使用可能な例示的な免疫療法剤としては、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ８、ＣＣＬ２、及びＣＣＬ５のうちの１種もしくは複数種または全てに結合してその活性を阻害する薬剤（例えば、ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、及びその構築物）が挙げられる。腫瘍の増殖に関与し、本明細書に記載の免疫療法剤を用いて標的とすることができる例示的なケモカインとしては、例えば、Ｃｈｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．，２：１１２５−１１３１，２０１４（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載のケモカインが挙げられる。本明細書に記載の組成物及び方法と共に使用可能な例示的な免疫療法剤としては更に、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ８、及びＣＣＬ２２のうちの１種もしくは複数種または全てに結合してその活性を阻害する薬剤（例えば、ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、及びその構築物）が挙げられ、例えば、Ｂａｌｋｗｉｌｌ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ，４：５４０−５５０，２００４（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０３６３】
本明細書に記載の組成物及び方法と共に使用可能な免疫療法剤の別の例としては、ターグレチン、インターフェロン−α、クロベスタゾール、ペグインターフェロン（例えば、ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標））、プレドニゾン、ロミデプシン、ベキサロテン、メトトレキサート、トリムシノロンクリーム、抗ケモカイン、ボリノスタット、ガバペンチン、リンパ球系細胞表面受容体及び／またはリンフォカインに対する抗体、表面がんタンパク質に対する抗体、及び／または、ボリノスタットのような低分子治療薬が挙げられる。
【０３６４】
本明細書に記載の方法を使用して、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を、免疫療法剤と共に同時投与する（例えば、免疫療法剤と混合して）、または、免疫療法剤とは別に投与してもよい。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物など）を、がんまたは感染症を患う患者、例えば、ヒト患者などに、同時または異なる時間に投与してもよい。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物）は、免疫療法剤を患者に投与する前に、患者に投与される。代替的に、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物）は、免疫療法剤の後に患者に投与され得る。例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物）は、免疫療法治療が失敗した後に患者に投与され得る。当業者の医師は、本明細書に記載及び当該技術分野において周知の方法を使用し、免疫療法治療の効果をモニターして、その治療が治療する病変（例えば、がんまたは感染症、例えば、本明細書に記載のがんまたは感染症など）を成功裏に改善しているかどうかを確認することができる。
【０３６５】
例えば、当業者の医師は、例えば、フローサイトメトリーまたはＦＡＣＳ解析を使用して、患者、例えば、ヒト患者などから単離した試料（例えば、血液試料または生検試料）中のがん細胞の量をモニターしてもよい。追加的にまたは代替的に、当業者の医師は、例えば、患者内の１つまたは複数の腫瘍のサイズを、例えば、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、またはＸ線解析を用いてモニターすることにより、患者におけるがん性疾患の進行をモニターすることができる。当業者の医師は、患者内の腫瘍バイオマーカーの量及び／または濃度、例えば、患者の細胞表面に結合した腫瘍関連抗原または患者の血液中に含まれる分泌腫瘍抗原の量及び／または濃度などを腫瘍存在の指標として評価することにより、がん、例えば、本明細書に記載のがんなどの進行をモニターしてもよい。患者内または患者から単離した試料中に含まれるがん細胞の量、腫瘍のサイズ、及び／または、１種または複数種の腫瘍抗原の量または濃度が、例えば、免疫療法剤の投与後特定の期間（例えば、１日間〜６ヶ月間、例えば、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、２週間、３週間、４週間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、または６ヶ月間など）内に、統計的に有意な量減少していないという所見は、免疫療法治療ががんを改善できていないということを示し得る。この指標に基づいて、当業者の医師は、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物などを投与してもよい。同様に、当業者の医師は、感染症、例えば、本明細書に記載の感染症などを患う患者から単離した試料中の細菌細胞、真菌細胞、または寄生虫細胞の量、またはウイルス粒子の量をモニターしてもよい。追加的にまたは代替的に、当業者の医師は、このような病状を患う患者の症候を評価することにより、感染症の進行をモニターしてもよい。例えば、医師は、感染症の１種または複数種の症候の頻度及び／または重症度が、免疫療法剤を用いた治療後に、安定（例えば、そのままを維持）または低下しているかどうかを確認することにより、患者をモニターしてもよい。患者から単離した試料中の細菌細胞、真菌細胞、もしくは寄生虫細胞、またはウイルス粒子の量、及び／または、感染症の１種または複数種の症候の頻度または重症度が、例えば、免疫療法剤の投与後特定の期間（例えば、１日間〜６ヶ月間、例えば、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、２週間、３週間、４週間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、または６ヶ月間など）内に、統計的に有意な量減少していないという所見は、免疫療法治療が感染症を改善できていないということを示し得る。この指標に基づいて、当業者の医師は、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物などを投与してもよい。
【０３６６】
化学療法剤及び放射線療法
追加的にまたは代替的に、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を、例えば、がん、例えば、本明細書に記載のがんなどを治療するために、化学療法剤と混合する、それにコンジュゲートする、それと共に投与する、またはそれとは別に投与してもよい。本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて有用な例示的な化学療法剤としては、アビラテロン酢酸エステル、アビトレキサート（登録商標）（メトトレキサート）、アブラキサン（登録商標）（パクリタキセルアルブミン）、アドリアマイシン（登録商標）、ブレオマイシン、ビンブラスチン、及びダカルバジン（ＡＢＶＤ）、アドリアマイシン（登録商標）、ブレオマイシン、硫酸ビンクリスチン、及びリン酸エトポシド（ＡＢＶＥ）、アドリアマイシン（登録商標）、ブレオマイシン、硫酸ビンクリスチン、リン酸エトポシド、プレドニゾン、及びシクロホスファミド（ＡＢＶＥ−ＰＣ）、ドキソルビシン及びシクロホスファミド（ＡＣ）、ドキソルビシン、シクロホスファミド、及びパクリタキセルまたはドセタキセル（ＡＣ−Ｔ）、アドセトリス（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）、シタラビン、ダウノルビシン、及びエトポシド（ＡＤＥ）、アドトラスツズマブエムタンシン、アドリアマイシン（登録商標）（塩酸ドキソルビシン）、アファチニブ二マレイン酸塩、アフィニトール（登録商標）（エベロリムス）、アキンゼオ（登録商標）（ネツピタントパロノセトロン塩酸塩）、アルダラ（登録商標）（イミキモド）、アルデスロイキン、アレセンサ（登録商標）（アレクチニブ）、アレクチニブ、アレムツズマブ、注射用アルケラン（登録商標）（メルファラン塩酸塩）、アルケラン（登録商標）錠剤（メルファラン）、アリムタ（登録商標）（ペメトレキセド二ナトリウム）、アロキシ（登録商標）（パロノセトロン塩酸塩）、アンボクロリン（登録商標）（クロラムブシル）、アンボクロリン（登録商標）（クロラムブシル）、アミノレブリン酸、アナストロゾール、アプレピタント、アレディア（登録商標）（パミドロン酸二ナトリウム）、アリミデックス（登録商標）（アナストロゾール）、アロマシン（登録商標）（エキセメスタン）、アラノン（登録商標）（ネララビン）、三酸化ヒ素、アーゼラ（登録商標）（オファツムマブ）、アスパラギナーゼエルウィニアクリサンチミー、アバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）、アキシチニブ、アザシチジン、ＢＥＡＣＯＰＰ  Ｂｅｃｅｎｕｍ（カルムスチン）、ベレオダク（登録商標）（ベリノスタット）、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ブレオマイシン、エトポシド、及びシスプラチン（ＢＥＰ）、ベバシズマブ、ベキサロテン、ベキサール（登録商標）（トシツモマブ及びヨウ素１３１Ｉトシツモマブ）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ（カルムスチン）、ブレオマイシン、ブリナツモマブ、ビーリンサイト（登録商標）（ブリナツモマブ）、ボルテゾミ���、ボシュリフ（登録商標）（ボスチニブ）、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、ブスルファン、ブスルフェクス（登録商標）（ブスルファン）、カバジタキセル、カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩、ＣＡＦ、キャンパス（登録商標）（アレムツズマブ）、カンプトサール（登録商標）（塩酸イリノテカン）、カペシタビン、カポックス、カラック（登録商標）（フルオロウラシル）、カルボプラチン、カルボプラチン−タキソール（登録商標）、カルフィルゾミブ、カルムブリス（登録商標）（カルムスチン）、カルムスチン、カルムスチンインプラント、カソデックス（登録商標）（ビカルタミド）、シーヌ（ロムスチン）、シスプラチン、エトポシド、及びメトトレキサート（ＣＥＭ）、セリチニブ、セルビジン（登録商標）（塩酸ダウノルビシン）、サーバリックス（登録商標）（組換えＨＰＶ二価ワクチン）、セツキシマブ、クロラムブシル、クロラムブシル−プレドニゾン、ＣＨＯＰ、シスプラチン、クラフェン（登録商標）（シクロホスファミド）、クロファラビン、クロファレックス（登録商標）（クロファラビン）、クロラール（登録商標）（クロファラビン）、ＣＭＦ、コビメチニブ、コメトリック（カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩）、ＣＯＰＤＡＣ、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ−ＡＢＶ、コスメゲン（登録商標）（ダクチノマイシン）、コテリック（登録商標）（コビメチニブ）、クリゾチニブ、ＣＶＰ、シクロホスファミド、ＣＹＦＯＳ（登録商標）（イホスファミド）、サイラムザ（登録商標）（ラムシルマブ）、シタラビン、シタラビンリポソーム、サイトサール（登録商標）（シタラビン）、サイトキサン（登録商標）（シクロホスファミド）、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダコゲン（登録商標）（デシタビン）、ダクチノマイシン、ダラツムマブ、ダラザレックス（登録商標）（ダラツムマブ）、ダサチニブ、塩酸ダウノルビシン、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンディフティトックス、デノスマブ、デポサイト（登録商標）（シタラビンリポソーム）、デキサメタゾン、デキスラゾキサン塩酸塩、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、ドキシル（登録商標）（塩酸ドキソルビシン）、塩酸ドキソルビシン、ＤＯＸ−ＳＬ（登録商標）（塩酸ドキソルビシン）、ＤＴＩＣ−ドーム（登録商標）（ダカルバジン）、エフデックス（フルオロウラシル）、エリテック（登録商標）（ラスブリカーゼ）、エレンス（登録商標）（塩酸エピルビシン）、エロツズマブ、エロキサチン（登録商標）（オキサリプラチン）、エルトロンボパグオラミン、イメンド（登録商標）（アプレピタント）、エムプリシティ（登録商標）（エロツズマブ）、エンザルタミド、塩酸エピルビシン、ＥＰＯＣＨ、アービタックス（登録商標）（セツキシマブ）、メシル酸エリブリン、エリベッジ（登録商標）（ビスモデギブ）、エルロチニブ塩酸塩、エルウィナーゼ（登録商標）（アスパラギナーゼエルウィニアクリサンチミー）、エトポフォス（登録商標）（リン酸エトポシド）、エトポシド、リン酸エトポシド、ＥＶＡＣＥＴ（登録商標）（塩酸ドキソルビシンリポソーム）、エベロリムス、エビスタ（登録商標）（ラロキシフェン塩酸塩）、ＥＶＯＭＥＬＡ（登録商標）（メルファラン塩酸塩）、エキセメスタ���、５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）、フェアストン（登録商標）（トレミフェン）、ファリーダック（登録商標）（パノビノスタット）、フェソロデックス（登録商標）（フルベストラント）、ＦＥＣ、フェマーラ（登録商標）（レトロゾール）、フィルグラスチム、フルダラ（登録商標）（リン酸フルダラビン）、リン酸フルダラビン、フルオロプレックス（登録商標）（フルオロウラシル）、フルオロウラシル注射液、フルタミド、フォレックス（登録商標）（メトトレキサート）、フォレックス（登録商標）ＰＦＳ（メトトレキサート）、ＦＯＬＦＩＲＩ、ＦＯＬＦＩＲＩ−ベバシズマブ、ＦＯＬＦＩＲＩ−セツキシマブ、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ、ＦＯＬＦＯＸ、フォロチン（登録商標）（プララトレキサート）、ＦＵ−ＬＶ、フルベストラント、ガーダシル（登録商標）（組換えＨＰＶ四価ワクチン）、ガーダシル９（登録商標）（組換えＨＰＶ９価ワクチン）、ガザイバ（登録商標）（オビヌツズマブ）、ゲフィチニブ、塩酸ゲムシタビン、ゲムシタビン−シスプラチン、ゲムシタビン−オキサリプラチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ジェムザール（登録商標）（塩酸ゲムシタビン）、ジオトリフ（登録商標）（アファチニブ二マレイン酸塩）、グリベック（登録商標）（メシル酸イマチニブ）、ギリアデル（登録商標）（カルムスチンインプラント）、ギリアデル（登録商標）ウェハー（カルムスチンインプラント）、グルカルピダーゼ、酢酸ゴセレリン、ハラヴェン（登録商標）（メシル酸エリブリン）、ハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ）、ＨＰＶ二価ワクチン、ハイカムチン（登録商標）（塩酸トポテカン）、ハイパーシーバッド、イブランス（パルボシクリブ）、イブリツモマブ（登録商標）チウキセタン、イブルチニブ、ＩＣＥ、アイクルシグ（登録商標）（ポナチニブ塩酸塩）、イダマイシン（登録商標）（塩酸イダルビシン）、塩酸イダルビシン、イデラリシブ、ＩＦＥＸ（登録商標）（イホスファミド）、イホスファミド、イホスファミダム、ＩＬ−２（アルデスロイキン）、メシル酸イマチニブ、イムブルビカ（登録商標）（イブルチニブ）、イミキモド、イムリジック（登録商標）（タリモジーンラハーパレプベック）、インライタ（アキシチニブ）、組換えインターフェロンα−２ｂ、イントロンＡ、トシツモマブ、例えば、１３１Ｉトシツモマブなど、イピリムマブ、イレッサ（登録商標）（ゲフィチニブ）、塩酸イリノテカン、イストダックス（登録商標）（ロミデプシン）、イクサベピロン、イキサゾミブクエン酸塩、イグゼンプラ（登録商標）（イクサベピロン）、ジャカビ（登録商標）（ルキソリチニブリン酸塩）、ジェブタナ（登録商標）（カバジタキセル）、カドサイラ（登録商標）（アドトラスツズマブエムタンシン）、ケオキシフェン（登録商標）（ラロキシフェン塩酸塩）、ケピバンス（登録商標）（パリフェルミン）、キイトルーダ（登録商標）（ペンブロリズマブ）、カイプロリス（登録商標）（カルフィルゾミブ）、酢酸ランレオチド、二トシル酸ラパチニブ、レナリドミド、レンバチニブメシル酸塩、レンビマ（登録商標）（レンバチニブメシル酸塩）、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、ロイケラン（クロラムブシル）、酢酸ロイプロリ��、レブラン（アミノレブリン酸）、ＬＩＮＦＯＬＩＺＩＮ（登録商標）（クロラムブシル）、リポドックス（登録商標）（塩酸ドキソルビシンリポソーム）、ロムスチン、ロンサーフ（登録商標）（トリフルリジン及びチピラシル塩酸塩）、リュープロン（登録商標）（酢酸ロイプロリド）、リムパーザ（登録商標）（オラパリブ）、マーキボ（登録商標）（硫酸ビンクリスチンリポソーム）、マチュレーン（登録商標）（塩酸プロカルバジン）、塩酸メクロレタミン、酢酸メゲストロール、メキニスト（登録商標）（トラメチニブ）、メルファラン、メルファラン塩酸塩、メルカプトプリン、メスネックス（登録商標）（メスナ）、メタゾラストン（登録商標）（テモゾロミド）、メトトレキサート、メトトレキサートＬＰＦ、メキサート（登録商標）（メトトレキサート）、メキサート−ＡＱ（登録商標）（メトトレキサート）、マイトマイシンＣ、塩酸ミトキサントロン、ミトザイトレックス（登録商標）（マイトマイシンＣ）、ＭＯＰＰ、モゾビル（登録商標）（プレリキサフォル）、ムスタルゲン（登録商標）（塩酸メクロレタミン）、ムタマイシン（登録商標）（マイトマイシンＣ）、マイレラン（登録商標）（ブスルファン）、マイロサール（登録商標）（アザシチジン）、マイロターグ（登録商標）（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ナノ粒子パクリタキセル、ナベルビン（登録商標）（酒石酸ビノレルビン）、ネシツムマブ、ネララビン、ネオサール（登録商標）（シクロホスファミド）、ネツピタント及びパロノセトロン塩酸塩、ニューポジェン（登録商標）（フィルグラスチム）、ネクサバール（登録商標）（ソラフェニブトシレート）、ニロチニブ、ニンラーロ（登録商標）（クエン酸イキサゾミブ）、ニボルマブ、ノルバデックス（登録商標）（クエン酸タモキシフェン）、エヌプレート（登録商標）（ロミプロスチム）、オビヌツズマブ、ＯＤＯＭＺＯ（登録商標）（ソニデギブ）、ＯＥＰＡ、オファツムマブ、ＯＦＦ、オラパリブ、オマセタキシンメペスクシナート、オンキャスパー（登録商標）（ペグアスパルガーゼ）、オンダンセトロン塩酸塩、オニバイド（登録商標）
（塩酸イリノテカンリポソーム）、オンタック（登録商標）（デニロイキンディフティトックス）、オプジーボ（登録商標）（ニボルマブ）、ＯＰＰＡ、オシメルチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤、ＰＡＤ、パルボシクリブ、パリフェルミン、パロノセトロン塩酸塩、パロノセトロン塩酸塩及びネツピタント、パミドロン酸二ナトリウム、パニツムマブ、パノビノスタット、パラプラット（登録商標）（カルボプラチン）、パラプラチン（登録商標）（カルボプラチン）、パゾパニブ塩酸塩、ＰＣＶ、ペグアスパルガーゼ、ペグインターフェロンα−２ｂ、ペグ−イントロン（登録商標）（ペグインターフェロンα−２ｂ）ペンブロリズマブ、ペメトレキセド二ナトリウム、パージェタ（登録商標）（ペルツズマブ）、ペルツズマブ、プラチノール（登録商標）（シスプラチン）、プラチノール−ＡＱ（登録商標）（シスプラチン）、プレリキサフォル、ポマリドミド、ポマリスト（登録商標）（ポマリドミド）、ポナチニブ塩酸塩、ポートラーザ（登録商標）（ネシツムマブ）、プララトレキサート、プレドニゾン、塩酸プロカルバジン、プロロイキン（登録商標）（アルデスロイキン）、プラリア（登録商標）（デノスマブ）、プロマクタ（エルトロンボパグオラミン）、プロベンジ（登録商標）（シプリューセル−Ｔ）、プリネトール（登録商標）（メルカプトプリン）、プリキサン（登録商標）（メルカプトプリン）、２２３Ｒａジクロリド、ラロキシフェン塩酸塩、ラムシルマブ、ラスブリカーゼ、Ｒ−ＣＨＯＰ、Ｒ−ＣＶＰ、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、組換えインターフェロンα−２ｂ、レゴラフェニブ、Ｒ−ＥＰＯＣＨ、レブラミド（登録商標）（レナリドミド）、リウマトレックス（登録商標）（メトトレキサート）、リツキサン（登録商標）（リツキシマブ）、ロラピタント塩酸塩、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルビドマイシン（塩酸ダウノルビシン）、ルキソリチニブリン酸塩、スクレロゾール（登録商標）胸膜内エアロゾル（タルク）、シルツキシマブ、シプリューセル−Ｔ、ソマチュリンデポー（酢酸ランレオチド）、ソニデギブ、ソラフェニブトシレート、スプリセル（登録商標）（ダサチニブ）、スタンフォードＶ、滅菌タルク粉末（タルク）、滅菌タルク（登録商標）（タルク）、スチバーガ（登録商標）（レゴラフェニブ）、リンゴ酸塩スニチニブ、スーテント（登録商標）（リンゴ酸塩スニチニブ）、シラトロン（登録商標）（ペグインターフェロンα−２ｂ）、シルヴァント（登録商標）（シルツキシマブ）、ＳＹＮＯＶＩＲ（登録商標）（サリドマイド）、シンリボ（登録商標）（オマセタキシンメペスクシナート）、チオグアニン、ＴＡＣ、タフィンラー（登録商標）（ダブラフェニブ）、タグリッソ（登録商標）（オシメルチニブ）、タリモジーンラハーパレプベック、クエン酸タモキシフェン、タラビンＰＦＳ（シタラビン）、タルセバ（エルロチニブ塩酸塩）、ターグレチン（登録商標）（ベキサロテン）、タシグナ（登録商標）（ニロチニブ）、タキソール（登録商標）（パクリタキセル）、タキソテール（登録商標）（ドセタキセル）、テモダール（登録商標）（テモゾロミド）、テムシロリムス、���リドマイド、サロミド（登録商標）（サリドマイド）、チオグアニン、チオテパ、トラック（登録商標）（局所フルオロウラシル）、塩酸トポテカン、トレミフェン、トーリセル（登録商標）（テムシロリムス）、ＴＯＴＥＣＴ（登録商標）（デキスラゾキサン塩酸塩）、ＴＰＦ、トラベクテジン、トラメチニブ、トレアンダ（登録商標）（ベンダムスチン塩酸塩）、トリフルリジン及びチピラシル塩酸塩、トリセノックス（登録商標）（三酸化ヒ素）、タイケルブ（登録商標）（二トシル酸ラパチニブ）、ユニツキシン（登録商標）（ジヌツキシマブ）、ウリジントリアセテート、ＶＡＣ、バンデタニブ、ＶＡＭＰ、バルビ（登録商標）（ロラピタント塩酸塩）、ベクティビックス（パニツムマブ）、ＶｅｌＰ、ヴェルバン（登録商標）（硫酸ビンブラスチン）、ベルケイド（登録商標）（ボルテゾミブ）、ＶＥＬＳＡＲ（硫酸ビンブラスチン）、ベムラフェニブ、ＶＩＡＤＵＲ（酢酸ロイプロリド）、ビダーザ（アザシチジン）、硫酸ビンブラスチン、ビンカサール（登録商標）ＰＦＳ（硫酸ビンクリスチン）、硫酸ビンクリスチン、酒石酸ビノレルビン、ＶＩＰ、ビスモデギブ、ビストガード（登録商標）（ウリジントリアセテート）、ＶＯＲＡＸＡＺＥ（登録商標）（グルカルピダーゼ）、ボリノスタット、ヴォトリエント（登録商標）（パゾパニブ塩酸塩）、ウェルコボリン（登録商標）（ロイコボリンカルシウム）、ザーコリ（登録商標）（クリゾチニブ）、ゼローダ（登録商標）（カペシタビン）、ゼリリ、ゼロックス、ＸＧＥＶＡ（登録商標）（デノスマブ）、ゾーフィゴ（登録商標）（２２３Ｒａジクロリド）、イクスタンジ（登録商標）（エンザルタミド）、ヤーボイ（登録商標）（イピリムマブ）、ヨンデリス（登録商標）（トラベクテジン）、ザルトラップ（登録商標）（ジブアフリベルセプト）、ザルキシオ（登録商標）（フィルグラスチム）、ゼルボラフ（登録商標）（ベムラフェニブ）、ゼヴァリン（登録商標）（イブリツモマブチウキセタン）、ジネカルド（登録商標）（デキスラゾキサン塩酸塩）、ジブアフリベルセプト、ゾフラン（登録商標）（オンダンセトロン塩酸塩）、ゾラデックス（登録商標）（酢酸ゴセレリン）、ゾレドロン酸、ゾリンザ（登録商標）（ボリノスタット）、ゾメタ（登録商標）（ゾレドロン酸）、ザイデリグ（登録商標）（イデラリシブ）、ザイカディア（登録商標）（セリチニブ）、及びザイティガ（酢酸アビラテロン）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３６７】
本明細書に記載の方法を使用して、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）を、がんを治療するために、化学療法剤と共に同時投与する（例えば、化学療法剤と混合して）、または、化学療法剤とは別に投与してもよい。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物など）を、がんを患う患者、例えば、ヒト患者などに、同時または異なる時間に投与してもよい。一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物）は、化学療法剤を患者に投与する前に、患者に投与される。代替的に、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物）は、化学療法剤の後に患者に投与され得る。例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物）は、化学療法治療が失敗した後に患者に投与され得る。当業者の医師は、本明細書に記載及び当該技術分野において周知の方法を使用し、化学療法治療の効果をモニターして、その治療が治療する病変（例えば、本明細書に記載のがんなど）を成功裏に改善しているかどうかを確認することができる。
【０３６８】
例えば、当業者の医師は、例えば、フローサイトメトリーまたはＦＡＣＳ解析を使用して、患者、例えば、ヒト患者などから単離した試料（例えば、血液試料または生検試料）中のがん細胞の量をモニターしてもよい。追加的にまたは代替的に、当業者の医師は、例えば、患者内の１つまたは複数の腫瘍のサイズを、例えば、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、またはＸ線解析を用いてモニターすることにより、患者におけるがん性疾患の進行をモニターすることができる。当業者の医師は、患者内の腫瘍バイオマーカーの量及び／または濃度、例えば、患者の細胞表面に結合した腫瘍関連抗原または患者の血液中に含まれる分泌腫瘍抗原の量及び／または濃度などを腫瘍存在の指標として評価することにより、がん、例えば、本明細書に記載のがんなどの進行をモニターしてもよい。患者内または患者から単離した試料中に含まれるがん細胞の量、腫瘍のサイズ、及び／または、１種または複数種の腫瘍抗原の量または濃度が、例えば、化学療法剤の投与後特定の期間（例えば、１日間〜６ヶ月間、例えば、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、２週間、３週間、４週間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、または６ヶ月間など）内に、統計的に有意な量減少していないという所見は、化学療法治療ががんを改善できていないということを示し得る。この指標に基づいて、当業者の医師は、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物などを投与してもよい。
【０３６９】
追加的にまたは代替的に、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）を、放射線療法と同時に投与する、または、放射線療法とは別に投与してもよい。例えば、当業者の医師は、外部電磁放射線及び／または内部電磁放射線で患者を治療することにより、本明細書に記載のがんを患う患者、例えば、ヒト患者などに放射線療法を実施してもよい。一般的にＸ線の形態、ガンマ線の形態、及び類似形態の短い波長のエネルギーであるこのような放射線が出すエネルギーは、がん細胞のＤＮＡに酸化損傷を引き起こすことにより、例えば、アポトーシスによる細胞死をもたらすことができる。例えば、放射線ビームなどの装置を使用してパルスを制御した電磁放射線に患者を曝露することにより、外部放射線療法を実施してもよい。追加的にまたは代替的に、例えば、放射性置換基を含有する治療薬、例えば、高エネルギーのα粒子及びβ粒子をそれぞれが放出する２２３Ｒａまたは１３１Ｉを含有する薬剤などを患者に投与することにより、内部放射線を施してもよい。放射能標識にコンジュゲートしてもよい例示的な治療薬としては、例えば、とりわけ、低分子化学療法剤、抗体、及びその抗原結合フラグメントが挙げられる。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）を、例えば、当該技術分野において周知または本明細書に記載の結合形成技術を使用して、放射性置換基またはこのような置換基に結合した部分にコンジュゲートしてもよい。治療量の放射線治療薬及び本明細書に記載のＴＮＦＲ２アンタゴニストを同時投与で送達するために、このようなコンジュゲートを対象に投与してもよい（例えば、上の「アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドコンジュゲート」を参照のこと）。
【０３７０】
一部の実施形態では、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物）は、放射線治療が失敗した後に患者に投与される。当業者の医師は、例えば、本明細書に記載の方法を使用し、放射線治療の効果をモニターして、その治療が治療する病変（例えば、本明細書に記載のがんなど）を成功裏に改善しているかどうかを確認することができる。例えば、当業者の医師は、例えば、フローサイトメトリーまたはＦＡＣＳ解析を使用して、患者、例えば、ヒト患者などから単離した試料（例えば、血液試料または生検試料）中のがん細胞の量をモニターしてもよい。追加的にまたは代替的に、当業者の医師は、例えば、患者内の１つまたは複数の腫瘍のサイズを、例えば、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、またはＸ線解析を用いてモニターすることにより、患者におけるがん性疾患の進行をモニターすることができる。当業者の医師は、患者内の腫瘍バイオマーカーの量及び／または濃度、例えば、患者の細胞表面に結合した腫瘍関連抗原または患者の血液中に含まれる分泌腫瘍抗原の量及び／または濃度などを腫瘍存在の指標として評価することにより、がん、例えば、本明細書に記載のがんなどの進行をモニターしてもよい。患者内または患者から単離した試料中に含まれるがん細胞の量、腫瘍のサイズ、及び／または、１種または複数種の腫瘍抗原の量または濃度が、例えば、放射線治療薬の投与後特定の期間（例えば、１日間〜６ヶ月間、例えば、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、２週間、３週間、４週間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、または６ヶ月間など）内に、統計的に有意な量減少していないという所見は、放射線治療ががんを改善できていないということを示し得る。この指標に基づいて、当業者の医師は、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物などを投与してもよい。
【０３７１】
一部の実施形態では、当業者の医師は、化学療法剤、放射線治療薬、及び本明細書に記載のＴＮＦＲ２アンタゴニスト（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物など）をがんを患う患者に投与してもよい。本明細書に記載のＴＮＦＲ２アンタゴニスト、化学療法剤、及び放射線治療薬を、同時（例えば、単一の医薬組成物で、または患者に同時に投与される複数の組成物で）または異なる時間に、患者に投与してもよい。一部の実施形態では、ＴＮＦＲ２アンタゴニスト（例えば、本明細書に記載の抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、または構築物など）を最初に患者に投与してから、化学療法剤及び放射線治療薬を続ける。代替的に、化学療法及び放射線治療に続いて、ＴＮＦＲ２アンタゴニスト（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物など）を患者に投与してもよい。例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物）は、化学療法及び／または放射線治療が失敗した後に患者に投与され得る。
【０３７２】
当業者の医師は、本明細書に記載の方法、例えば、上記の方法などを使用し、化学療法及び放射線治療の効果をモニターして、その治療が治療する病変（例えば、本明細書に記載のがんなど）を成功裏に改善しているかどうかを確認することができる。例えば、当業者の医師は、例えば、フローサイトメトリーまたはＦＡＣＳ解析を使用して、患者、例えば、ヒト患者などから単離した試料（例えば、血液試料または生検試料）中のがん細胞の量をモニターしてもよい。追加的にまたは代替的に、当業者の医師は、例えば、患者内の１つまたは複数の腫瘍のサイズを、例えば、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、またはＸ線解析を用いてモニターすることにより、患者におけるがん性疾患の進行をモニターすることができる。当業者の医師は、患者内の腫瘍バイオマーカーの量及び／または濃度、例えば、患者の細胞表面に結合した腫瘍関連抗原または患者の血液中に含まれる分泌腫瘍抗原の量及び／または濃度などを腫瘍存在の指標として評価することにより、がん、例えば、本明細書に記載のがんなどの進行をモニターしてもよく、更に血清中可溶性ＴＮＦＲ２を測定してもよい。当業者は、活性化Ｔ−ｒｅｇの数の減少、及びＴエフェクターの数の増加、ならびにがん細胞の総数の減少を予測するであろう。これらのＴＮＦＲ２抗体のがんに対する特異性ゆえに、臨床モニタリングが腫瘍微小環境において最も劇的であることが予測され得る。患者内または患者から単離した試料中に含まれるがん細胞の量、腫瘍のサイズ、及び／または、１種または複数種の腫瘍抗原の量または濃度が、例えば、化学療法剤及び放射線治療薬の投与後特定の期間（例えば、１日間〜６ヶ月間、例えば、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、２週間、３週間、４週間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、または６ヶ月間など）内に、統計的に有意な量減少していないという所見は、化学療法治療及び放射線治療ががんを改善できていないということを示し得る。この指標に基づいて、当業者の医師は、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、または構築物などを投与してもよい。
【０３７３】
血液脳関門透過性
特定の実施形態では、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）は、適切なｉｎ  ｖｉｖｏ分布を確保するように製剤化され得る。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は多くの高親水性化合物を排除している。本明細書に記載の治療用組成物のＢＢＢ通過を確保するために（必要な場合）、治療用組成物を、例えば、リポソームに製剤化してもよい。リポソームを製造するための方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号、第５，３７４，５４８号、及び第５，３９９，３３１号に記載されている。リポソームは、特定の細胞または器官へと選択的に輸送される１つまたは複数の部分を含んでいてもよく、それにより、標的化薬物送達が向上する（例えば、Ｖ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５，１９８９）を参照のこと）。例示的な標的化部分としては、例えば、葉酸またはビオチン（例えば、米国特許第５，４１６，０１６号を参照のこと）、マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８，１９８８））、抗体（Ｐ．Ｇ．Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３５７：１４０，１９９５）；Ｍ．Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０，１９９５））、界面活性プロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４，１９９５））（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）が挙げられる。
【０３７４】
投与経路及び投与
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）（例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を、様々な経路、例えば、経口、経皮、皮下、経鼻、静脈内、筋肉内、眼内、腫瘍内、非経口、局所、硬膜内、及び脳室内などで、哺乳動物対象（例えば、ヒト）に投与してもよい。任意のケースにおける投与のための最も好適な経路は、投与する個々のポリペプチド、患者、医薬品の製剤化方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、患者の年齢、体重、性別、治療する疾患の重症度、患者の栄養、及び患者の排出速度によって決まる。
【０３７５】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの有効量は、例えば、単回（例えば、ボーラス）投与、複数回投与、または持続投与（例えば、持続注入）あたり約０．０００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲であってもよく、または、単回（例えば、ボーラス）投与、複数回投与、または持続投与（例えば、持続注入）あたり０．０００１〜５０００μｇ／ｍＬの血清中濃度を得るためのものであってもよく、または、治療する症状、投与経路、ならびに対象の年齢、体重、及び症状に応じた任意の有効な範囲またはその範囲に含まれる値であってもよい。特定の実施形態では、例えば、がんを治療するためのそれぞれの用量は、約０．０００１ｍｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲であってもよい。例えば、本明細書に記載の医薬組成物を、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の１日量で投与してもよい。用量を、１日、１週、１ヶ月、または１年あたり１回または複数回（例えば、２〜１０回）、それを必要とする哺乳動物対象（例えば、ヒト）に投与してもよい。
【０３７６】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を、持続静注または単回ボーラス投与により、患者に投与してもよい。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を、例えば、０．０１μｇ〜約５ｇの量で、例えば、１０μＬ〜１０ｍＬの容量で、患者に投与してもよい。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを、数分間〜数時間にわたって、患者に投与してもよい。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを、５分間〜５時間にわたって、例えば、５分間、１０分間、１５分間、２０分間、２５分間、３０分間、３５分間、４０分間、４５分間、５０分間、５５分間、６０分間、６５分間、７０分間、８０分間、９０分間、９５分間、１００分間、１０５分間、１１０分間、１１５分間、１２０分間、１２５分間、１３０分間、１３５分間、１４０分間、１４５分間、１５０分間、１５５分間、１６０分間、１６５分間、１７０分間、１７５分間、１８０分間、１８５分間、１９０分間、１９５分間、２００分間、２０５分間、２１０分間、２１５分間、２２０分間、２２５分間、２３０分間、２３５分間、２４０分間、２４５分間、２５０分間、２５５分間、２６０分間、２６５分間、２７０分間、２７５分間、２８０分間、２８５分間、２９０分間、２９５分間、もしくは３００分間、またはそれ以上の時間にわたって、患者に投与してもよい。
【０３７７】
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を、免疫療法剤、例えば、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、及び／または抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメントなどと組み合わせて投与してもよい。例示的な抗ＰＤ−１抗体としては、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及びアテゾリズマブが挙げられる。例示的な抗ＣＴＬＡ４抗体としてはイピリムマブ及びトレメリムマブが挙げられる。例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体としてはアテゾリズマブ及びアベルマブが挙げられる。
【０３７８】
アンタゴニストＴＮＦＲ２ポリペプチドと組み合わせて抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメントを患者（例えば、本明細書に記載のがんまたは感染症を有する患者）に投与する場合、抗ＰＤ−１抗体を単回ボーラス投与または持続静注で患者に投与してもよい。例えば、ペンブロリズマブを、必要に応じて、例えば、３週間に１回、２００ｍｇの持続静注で３０分間にわたりヒト患者に投与してもよい（キイトルーダ（登録商標）（ペンブロリズマブ）［添付文書］．Ｍｅｒｃｋ  Ｓｈａｒｐ  ＆  Ｄｏｈｍｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ，ＮＪ（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる））。別の例では、ニボルマブを、必要に応じて、例えば、２週間に１回、２４０ｍｇの持続静注で３０分間にわたり患者に投与してもよい。代替的に、ニボルマブを、必要に応じて、例えば、４週間に１回、４８０ｍｇの持続静注で３０分間にわたり患者に投与してもよい（オプジーボ（登録商標）（ニボルマブ）［添付文書］．Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる））。
【０３７９】
アンタゴニストＴＮＦＲ２ポリペプチドと組み合わせて抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメントを患者（例えば、本明細書に記載のがんまたは感染症を有する患者）に投与する場合、抗ＣＴＬＡ−４抗体を単回ボーラス投与または持続静注で患者に投与してもよい。例えば、イピリムマブを、必要に応じて、例えば、３週間に１回、３ｍｇ／ｋｇの持続静注で９０分間にわたり、または、４回の用量を３週間に１回、１０ｍｇ／ｋｇの持続静注で９０分間にわたりヒト患者に投与してから、最長３年間の間１２週間に１回、９０分間にわたり１０ｍｇ／ｋｇを投与してもよい（ヤーボイ（登録商標）（イピリムマブ））［添付文書］．Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる））。
【０３８０】
免疫療法剤、例えば、抗ＰＤ−１抗体または抗ＣＴＬＡ−４抗体などと組み合わせてＴＮＦＲ２アンタゴニストポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を患者に投与する場合、アンタゴニストＴＮＦＲ２ポリペプチド及び免疫療法剤を、例えば、第１の薬剤の持続静注またはボーラス投与に続く第２の薬剤の持続静注またはボーラス投与で、患者に同時投与してもよい。２種の薬剤の投与を同時に行ってもよい。代替的に、アンタゴニストＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、免疫療法剤の投与の前または後であってもよい。一部の実施形態では、第１の薬剤（例えば、免疫療法剤）の投与の終了の約５分間〜約４週間またはそれ以上の期間以内に、第２の薬剤（例えば、アンタゴニストＴＮＦＲ２ポリペプチド）の投与を開始する。例えば、第１の薬剤の投与の終了の約５分間、１０分間、２０分間、３０分間、４０分間、５０分間、６０分間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、２週間、３週間、４週間、またはそれ以上の期間以内に、第２の薬剤の投与を開始してもよい。
【０３８１】
当該技術分野において周知の医療用器具を用いて治療用組成物を投与してもよい。例えば、ある実施形態では、針を使用しない皮下注射用器具、例えば、米国特許第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号、または第４，５９６，５５６号に開示されている器具などを用いて、本明細書に記載の治療用組成物を投与してもよい。本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて有用な周知のインプラント及びモジュールの例としては、米国特許第４，４８７，６０３号（制御速度で薬剤を供給する植込み可能なマイクロ注入用ポンプを開示する）、米国特許第４，４８６，１９４号（皮膚を通して薬剤を投与するための治療用器具を開示する）、米国特許第４，４４７，２３３号（精密な注入速度で薬剤を送達するための薬剤注入用ポンプを開示する）、米国特許第４，４４７，２２４号（持続薬物送達用の可変流量式の植込み可能な注入用器具を開示する）、米国特許第４，４３９，１９６号（マルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧薬物送達システムを開示する）、及び米国特許第４，４７５，１９６号（浸透圧薬物送達システムを開示する）が挙げられる。これらの特許は参照により本明細書に組み込まれる。多くのその他のこのようなインプラント、送達システム、及びモジュールは当業者に周知である。
【０３８２】
アンタゴニスト性抗ＴＮＦＲ２ポリペプチドを含有するキット
アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物、例えば、表１に記載の抗体１〜２５及びそのバリアントのうちのいずれか１つまたは複数、例えば、表１に記載のＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを含有する抗体または抗原結合フラグメントなど）を含有するキットもまた本明細書に含まれる。本明細書で提供するキットは、上記のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドのいずれかに加えて、これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、これらのポリヌクレオチドを含有するベクター、または本明細書に記載の抗体を発現及び分泌するように改変された細胞（例えば、原核細胞または真核細胞）のいずれかを含有していてもよい。
【０３８３】
本明細書に記載のキットに含ませることができる例示的な本開示の組成物としては、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、結合部位が空間的に互いに約１３３Åまたはそれ以上離れた、少なくとも２つのＴＮＦＲ２結合部位を有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドに加えて、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ、例えば、ヒトＩｇＧ２−Ａアイソタイプを示すアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、Ｃ２３２Ｓアミノ酸置換及び／またはＣ２３３Ｓアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を有するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）が挙げられる。本明細書に記載のキットに含ませることができる本開示の組成物としてはまた、単一のジスルフィド結合アイソフォーム、例えば、医薬組成物中のポリペプチドのうちの１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、またはそれ以上が、単一のジスルフィド結合アイソフォームで存在している単一のジスルフィド結合アイソフォームなどをとるアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを含有する医薬組成物が挙げられる。
【０３８４】
本明細書に記載のキットは、本明細書に記載の組成物（例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、構築物、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを含有するコンジュゲート、アンタゴニスト性抗ＴＮＦＲ２ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、これらのポリヌクレオチドを含有するベクターなど）を作製するのに使用可能な試薬を含んでいてもよい。任意選択的に、本明細書に記載のキットは、細胞（例えば、哺乳動物細胞）内においてアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの発現を誘導することができる試薬、例えば、ドキシサイクリンまたはテトラサイクリンなどを含んでいてもよい。その他の例では、本明細書に記載のキットは、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体及びエピトープタグを含有する融合タンパク質に結合してその融合タンパク質を検出することができる化合物を含有していてもよい。例えば、このような例では、本明細書に記載のキットは、マルトース、グルタチオン、ニッケル含有錯体、抗ＦＬＡＧ抗体、抗ｍｙｃ抗体、抗ＨＡ抗体、ビオチン、またはストレプトアビジンを含有していてもよい。
【０３８５】
本明細書に記載のキットはまた、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、そのフラグメント、またはその構築物）を直接検出することができる試薬を含んでいてもよい。このような試薬の例としては、本明細書に記載のＴＮＦＲ２抗体のＦｃ領域内の特定の構造的特徴物を選択的に認識して結合する二次抗体が挙げられる。本明細書に記載のキットは、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体のＦｃ領域を認識し蛍光分子にコンジュゲートした二次抗体を含有していてもよい。これらの抗体−蛍光体コンジュゲートは、確立された免疫蛍光技術を使用した、例えば、特定の組織または培養哺乳動物細胞内における、アンタゴニスト性抗ＴＮＦＲ２抗体の局在化を解析するためのツールを提供する。一部の実施形態では、本明細書に記載のキットは、既知の細胞内局在化パターンを示す別の蛍光化合物を含んでいてもよい。その他の細胞表面タンパク質と比較した抗ＴＮＦＲ２抗体の局在化を解析するために、これらの試薬を、別の抗体−蛍光体コンジュゲート、例えば、細胞表面上の異なる受容体を特異的に認識する抗体−蛍光体コンジュゲートと組み合わせて使用してもよい。
【０３８６】
本明細書に記載のキットはまた、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）の投与による治療に対する患者の応答を解析するのに使用可能な試薬を含有していてもよい。例えば、本明細書に記載のキットは、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体、及び、本明細書に記載の抗体を用いた治療を受けている対象（例えば、ヒト）から採取した血液試料中におけるＴ−ｒｅｇ細胞の量を測定するのに使用可能な１種または複数種の試薬を含んでいてもよい。このようなキットは、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞が提示する細胞表面抗原、例えば、ＣＤ４及びＣＤ２５などに選択的に結合する抗体を含有していてもよい。任意選択的に、当該技術分野において周知の蛍光活性化細胞分離（ＦＡＣＳ）法を用いたＴ−ｒｅｇ細胞の解析を容易とするために、これらの抗体を蛍光色素、例えば、フルオレセインまたはテトラメチルローダミンなどで標識してもよい。本明細書に記載のキットは、任意選択的に、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドが腫瘍浸潤リンパ球の増殖を回復させる効果を測定するための、腫瘍反応性Ｔリンパ球を定量するのに使用可能な１種または複数種の試薬を含有していてもよい。例えば、本明細書に記載のキットは、細胞傷害性Ｔ細胞の表面上の細胞表面マーカー、例えば、ＣＤ８またはＣＤ３などに選択的に結合する抗体を含有していてもよい。任意選択的に、ＦＡＣＳ解析による定量化を可能とするために、これらの抗体を蛍光分子で標識してもよい。
【０３８７】
本明細書に記載のキットはまた、ＴＮＦＲ２に由来する１種または複数種のペプチド（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つの配列を含有するペプチド）に対する本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの親和性及び選択性を測定するのに有用な１種または複数種の試薬を含有していてもよい。例えば、キットは、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、及び、天然タンパク質におけるエピトープの構造に類似した構造のＴＮＦＲ２エピトープを提示する１種または複数種のペプチドに対する本明細書に記載の抗体のＫＤを測定するためのＥＬＩＳＡアッセイにおいて使用可能な１種または複数種の試薬を含有していてもよい。キットは、例えば、予めアビジンにコンジュゲートしたウェルを含有するマイクロタイタープレートを含有していてもよく、そのそれぞれがビオチン部分にコンジュゲートしたＴＮＦＲ２由来ペプチドのライブラリを含有していてもよい。このようなキットは任意選択的に、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体のＦｃ領域に特異的に結合する二次抗体を含有していてもよく、その二次抗体は、発光の放出をもたらす化学反応を触媒する酵素（例えば、西洋わさびペルオキシダーゼ）にコンジュゲートしていてもよい。
【０３８８】
本明細書に記載のキットはまた、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド、及び、上記の試薬（例えば、細胞傷害薬、蛍光分子、生物発光分子、放射性同位体を含有する分子、常磁性イオンに結合したキレート基を含有する分子など）を含む、このような抗体にコンジュゲート可能な試薬を含有していてもよい。これらのキットは更に、第２の分子、例えば、上記の分子などへの本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体のコンジュゲートをどのように実施可能とするかの取扱説明書を含有していてもよい。
【０３８９】
本明細書に記載のキットはまた、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するベクター、例えば、本明細書に記載のベクターのいずれかなどを含有していてもよい。代替的に、キットは、細胞の核ゲノムからアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントを発現及び分泌するように遺伝子改変された哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）を含んでいてもよい。このようなキットはまた、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメントのポリヌクレオチドからの発現をどのように誘導可能とするかを記載した取扱説明書を含有していてもよく、これらのポリヌクレオチドの転写を促進するのに使用可能な試薬（例えば、ドキシサイクリンまたはテトラサイクリンなど）を更に含有していてもよい。このようなキットは、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントの作製に有用であり得る。
【０３９０】
本明細書に記載のその他のキットは、細胞の核ゲノムから本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを発現及び分泌するように原核細胞または真核細胞（例えば、ＣＨＯ細胞またはＢＬ２１（ＤＥ３）Ｅ．ｃｏｌｉ細胞）を改変するためのツールを含んでいてもよい。例えば、キットは、適切な培地内で保存され、任意選択的に、当該技術分野において周知の方法に従って凍結された、ＣＨＯ細胞を含有していてもよい。キットはまた、ヌクレアーゼ（例えば、本明細書に記載のＣＲＩＳＰＥＲ／Ｃａｓヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮヌクレアーゼ、ＡＲＣＵＳ（商標）ヌクレアーゼなど）をコードするポリヌクレオチドを含有するベクターに加えて、細胞内でヌクレアーゼを発現させるための試薬を提供してもよい。キットは更に、特定の目的の標的ＤＮＡ配列の開裂を誘導するためにヌクレアーゼのＤＮＡ配列を改変することを可能とするために、ヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドを改変するためのツールを提供してもよい。このようなツールの例としては、目的のヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドの増幅及び部位特異的変異誘発のためのプライマーが挙げられる。キットはまた、ベクターからヌクレアーゼコードポリヌクレオチドを選択的に切り出してから、ユーザーが遺伝子を改変した際にその改変ポリヌクレオチドをベクターに再導入するのに使用可能な制限酵素を含んでいてもよい。このようなキットはまた、改変ヌクレアーゼコードポリヌクレオチドと標的ベクターの間の共有ホスホジエステル結合の形成を触媒するのに使用可能なＤＮＡリガーゼを含んでいてもよい。本明細書に記載のキットはまた、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに加えて、細胞のゲノム内における特定のＤＮＡ配列を選択的に開裂する（アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体をコードするポリヌクレオチドをゲノムのこの部位に導入するために）のに使用可能な方法を記載した添付文書を提供し得る。任意選択的に、キットは、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体またはそのフラグメント及び別のポリペプチド、例えば、本明細書に記載のポリペプチドなどを含有する融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供し得る。
【実施例】
【０３９１】
以下の実施例は、本願請求項に記載の組成物及び方法をどのように実施、作製、及び評価するのかの説明を当業者に提供するために記載するものであり、本明細書に記載の例示を単に意図するものであり、本発明者が自身の発明とみなす範囲を限定することを意図するものではない。
【０３９２】
実施例１．アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドが結合するＴＮＦＲ２内の不連続エピトープのマッピング
ヒトＴＮＦＲ２に由来する直鎖状ペプチド、環状ペプチド、及び二環式ペプチドのライブラリを、ＴＮＦＲ２抗体ＴＮＦＲＡＢ４に対して高親和性を示すタンパク質内の異なる配列でスクリーニングした。ＴＮＦＲ２内の構造的エピトープをスクリーニングするために、一次タンパク質配列の異なる領域に由来するペプチドを互いにコンジュゲートさせてキメラペプチドを形成した。これらのペプチドは、その一次配列内の戦略的位置にシステイン残基を含有していた。これにより、幅広く様々な三次元構造のうちの１つに個々のペプチドを制限するために使用する分子内架橋戦略が容易となった。構造的に制限された環状ペプチド及び二環式ペプチドをそれぞれ形成するように、求核置換反応により、システイン残基の非保護チオールを二価及び三価の求電子試薬、例えば、２，６−ビス（ブロモメチル）ピリジン及び１，３，５−トリス（ブロモメチル）ベンゼンなどと架橋した。この方法では、ＴＮＦＲ２一次配列の異なる領域に由来するアミノ酸の固有の組み合わせを含有するペプチドを、天然ＴＮＦＲ２三次構造において提示されるエピトープに類似し得るエピトープを予め構造的に組織するように規制した。固体表面の異なる領域にペプチドを固定し、次に、過酸化水素の存在下で、その表面をアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体、例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５などに続けて、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートした二次抗体及びＨＲＰ基質（２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート）で処理することにより、これらのペプチドを含有するライブラリをスクリーニングした。過剰物質すなわち非特異的結合物質を除去するために、試薬を用いた連続的な処理の間に固体表面を洗浄した。それに続いて、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラ及び画像処理システムを使用して、それぞれの表面におけるそれぞれの領域の蛍光を解析した。
【０３９３】
「表面上のペプチド立体構造規制ライブラリ（Ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ  Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｎ  Ｓｕｒｆａｃｅｓ）」（ＣＬＩＰＳ）プラットフォームでは、コンビナトリアルマトリックスデザインを使用して、標的タンパク質、例えば、ＴＮＦＲ２を最大１０，０００の重複ペプチド構築物のライブラリに変換することで開始する（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．，２０：２８３−２９，２００７）。直鎖状ペプチドのマトリックスを固体担体上で合成し、続いて、そのマトリックスを空間的に画定されたＣＬＩＰＳ構築物へと形成する。非連続エピトープの複数の部分を適切な構造で示す構築物は抗体に高親和性で結合することから、検出及び定量化される。不完全なエピトープを示す構築物が抗体により低い親和性で結合する一方で、エピトープを含有しない構築物は全く結合しない。反復スクリーニングの親和性情報を使用して、エピトープの配列及び構造を詳細に規定する。これらのＥＬＩＳＡ実験から得た生の蛍光データにより、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体に結合するＴＮＦＲ２の表面上に存在するエピトープの解析に関する情報がもたらされた。
【０３９４】
ペプチド合成
標的分子のエピトープを再構築するために、ペプチドのライブラリを合成した。Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）と共にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いた反応により、所有権のある親水性ポリマー配合物をｔ−ブチルオキシカルボニル−ヘキサメチレンジアミン（ＢｏｃＨＭＤＡ）にグラフトしてから、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用してＢｏｃ基を開裂させることにより、アミノ官能化ポリプロピレン支持体を得た。標準的なＦｍｏｃペプチド合成法を使用し、カスタム調整したＪＡＮＵＳ（登録商標）液体処理ステーション（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて、アミノ官能化固体支持体上にペプチドを合成した。ＣＬＩＰＳ技術により、１つのループ、２つのループ、３つのループ、シート様フォールド、ヘリックス様フォールド、及びこれらの組み合わせへとペプチドを構築することが可能となる。ＣＬＩＰＳ鋳型をシステイン残基に結合させる。ペプチド内の複数のシステインの側鎖を、１つまたは２つのＣＬＩＰＳ鋳型に結合させる。例えば、ＣＬＩＰＳ鋳型の０．５ｍＭ溶液（２，６−ビス（ブロモメチル）ピリジン）を、重炭酸アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．８）／アセトニトリル（１：３（体積／体積））中に溶解させる。この溶液を表面結合ペプチドアレイに加える。ペプチドアレイの固相結合ペプチド（３μｌのウェルを備えた４５５ウェルプレート）中に含まれることから、ＣＬＩＰＳ鋳型は２つのシステインの側鎖と反応する。溶液中に完全に浸した状態で、ペプチドアレイを溶液中で軽く３０〜６０分間振盪する。最後に、過剰のＨ２Ｏでペプチドアレイを十分に洗浄してから、ＰＢＳ中の１％ＳＤＳ／０．１％β−メルカプトエタノールを含有する破砕用バッファー（ｐＨ７．２）中、７０℃で３０分間超音波処理を行い、続いて、Ｈ２Ｏ中で更に４５分間超音波処理を行う。
【０３９５】
表面プラズモン共鳴を用いたアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体の結合親和性の解析
ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ）を使用して、組換えヒトＴＮＦＲ２に対するアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体の親和性を測定した。簡潔に説明すると、ＰＢＳ中のビオチニル−ＬＣ−ＬＣ−ＮＯＳＥ（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して、５：１の化学量論比で抗体をビオチン化した。遠心分離クロマトグラフィーを用いて過剰なビオチン化試薬を除去し、１００ＲＵのレベルまで、３０００ＲＵのストレプトアビジン表面上にビオチン化抗体を捕捉した。そのレベルの抗体捕捉を示すＴＮＦＲ２のシグナルの理論上の最大値は２６ＲＵであり、泳動バッファー中の５００ｎＭのＴＮＦＲ２を使用した予備実験でそのシグナルに到達した。２分間の注入、６０μＬ／分のフローで、抗原結合の動力学の解析を実施した。１００ＲＵの最終捕捉となるように１ｍｇ／ｍｌの濃度で抗体を注入した。使用した機器はＢｉｏＣａｐチップを備えたＢＩＡＣＯＲＥ（商標）３０００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）であった。解析には二重参照法を使用した。参照チャネルは同一レベルのストレプトアビジンを含有していた。
【０３９６】
ＥＬＩＳＡスクリーニング
合成ペプチドのそれぞれに対する抗体の結合をＥＬＩＳＡフォーマットで試験した。一次抗体溶液で表面固定ペプチドアレイを培養した（４℃で一晩）。洗浄後、適切な抗体ペルオキシダーゼコンジュゲート（ＳＢＡ）の１／１０００希釈溶液でペプチドアレイを２５℃で１時間培養した。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）及び２μｌ／ｍｌの３パーセントＨ２Ｏ２を加えた。１時間後、発色を測定した。電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラ及び画像処理システムを用いて発色を定量した。ＣＣＤカメラから得た値は０〜３０００ｍＡＵの範囲であり、標準的な９６ウェルプレートＥＬＩＳＡリーダーに類似していた。結果を定量してＰｅｐｌａｂデータベースに格納する。場合によっては、偽陽性値につながる気泡がウェルに含まれることがあるため、カードを手動で検査して、気泡によって生じた全ての値を０にスコア付けする。
【０３９７】
合成ペプチドの品質を確実なものとするために、陽性対照ペプチド及び陰性対照ペプチドの別々のセットを並行して合成した。陰性対照でスクリーニングした抗体は５７．９であり、ＴＮＦＲ２に特異的に結合しなかった（Ｐｏｓｔｈｕｍｕｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．６４：３３０４−３３０９，１９９０））。
【０３９８】
エピトープマッピング
ＥＬＩＳＡをまた使用して、ＴＮＦＲ２の細胞外表面上に存在する直鎖状エピトープを測定した。ＴＮＦＲ２一次配列内の様々な領域に対応する直鎖状ペプチドをＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）から購入し、コーティングバッファー中に希釈してから、Ｉｍｍｕｌｏｎ  ４ＨＢＸ平底マイクロタイタープレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上に１μｇ／ウェルの濃度で定置した。一次ＴＮＦＲ２アンタゴニスト性抗体（０．１μｇ／ウェル）を基質と共に培養した。げっ歯類ＩｇＧに対する二次抗体を使用して一次抗体を検出した。ＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）１９０吸光度プレートリーダーを使用して吸光度を測定し、ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ  ６．３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて解析した。
【０３９９】
エピトープマッピング解析の結果を図１に示すが、図１は、例示的なアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体であるＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、及びＴＮＦＲＡＢ５が結合する領域を強調したヒトＴＮＦＲ２の一次構造を示している。
【０４００】
実施例２．ヒトＩｇＧ２−Ａアイソフォームのアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは最適に、Ｔ−ｒｅｇ細胞を殺傷し、Ｔエフェクター細胞を増殖させ、ＴＮＦＲ２＋がん細胞を枯渇させる
ＴＮＦＲＡＢ２の可変ドメイン及び様々なヒトＩｇＧ抗体アイソタイプの定常ドメインを含有するモノクローナル抗体ＴＮＦＲＡＢ２のキメラバリアントを作製した。ＴＮＦＲＡＢ２は、ＩｇＧ２アイソタイプを示すマウス抗体であり、支配的ＴＮＦＲ２アンタゴニストである。ＴＮＦＲＡＢ２のＴＮＦＲ２結合特性については上述したとおりである。ＴＮＦＲＡＢ２は、以下のＣＤＲ、
ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＴＦＴＤＹＬ（配列番号：２７４）
ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｈ２：ＶＤＰＥＹＧＳＴ（配列番号：２５８）
ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｈ３：ＡＲＤＤＧＳＹＳＰＦＤＹＷＧ（配列番号：２５９）
ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｌ１：ＱＮＩＮＫＹ（配列番号：２６０）
ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｌ２：ＴＹＳ
ＴＮＦＲＡＢ２  ＣＤＲ−Ｌ３：ＣＬＱＹＶＮＬＬＴ（配列番号：２７２）
を含有する。
【０４０１】
３つの異なるヒトＩｇＧ定常ドメインサブタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ３のうちの１つを使用して、キメラ抗体を作製した。キメラ抗体の作用を調査するために、分子生物学技術、例えば、本明細書に記載の分子生物学技術などを使用してこれらの抗体をコードする核酸を作製してから、宿主細胞からコード抗体を発現させ、その後ｉｎ  ｖｉｔｒｏ評価を行った。
【０４０２】
一連の実験を実施して、これらのキメラ抗体のＴＮＦＲ２アンタゴニスト特性、とりわけ、Ｔ−ｒｅｇ細胞を殺傷する能力、Ｔエフェクター細胞の増殖を誘導する能力、及びＴＮＦＲ２＋ＳＷ４８０結腸癌細胞を殺傷する能力を評価した。図２〜図４は、ヒトＩｇＧ１サブタイプを示すキメラ抗体におけるこれらの特性を示し、図５〜７は、ヒトＩｇＧ２サブタイプを示すキメラ抗体におけるこれらの特性を示す。ヒトＩｇＧ３サブタイプを示すキメラ抗体の作用については以下の表３に記載しており、表３はまた、ＩｇＧ１サブタイプ及びＩｇＧ２サブタイプにおいて認められた特性の一覧についても提供している。
【０４０３】
表３．Ｔ−ｒｅｇ細胞及びエフェクターＴ細胞に対するキメラＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体の作用  
2021534757.tif 000021
【０４０４】
表３においては、Ｔ−ｒｅｇの殺傷特性及びＴエフェクターの増殖特性を質的に記載している。括弧内の値は、ｎ＝５の個々の実験のうちの、特定の作用（例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞の殺傷またはＴエフェクターの増殖）が認められた事例の数を示す。
【０４０５】
図２〜図７及び表３に示すとおり、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを示すキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ定常ドメインまたはヒトＩｇＧ３アイソタイプ定常ドメインのいずれかを示すキメラ抗体と比較して、Ｔ−ｒｅｇ細胞及びＴＮＦＲ２＋がん細胞を殺傷するより優れた能力、及びＴエフェクター細胞を増殖させるより優れた能力を示すことが判明した。上の表３では、抗体アイソタイプと対応する抗体の抗原結合アーム間の間隔を対比している。まとめると、これらのデータは、最適なＴＮＦＲ２アンタゴニスト表現型のために抗原結合アーム間の最小限の間隔が必要となることを示している。例えば、これらの実験の結果に基づくと、抗原結合アーム間の距離をヒトＩｇＧ２抗体に存在する抗原結合アーム間の距離に合わせることにより、最適なＴＮＦＲ２アンタゴニスト特性を有する抗体を開発することができる。
【０４０６】
ヒトＩｇＧ１アイソタイプ定常ドメインまたはヒトＩｇＧ３アイソタイプ定常ドメインを有するキメラ抗体と比較した、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ定常ドメインを有するキメラ抗体のより優れた結果にもかかわらず、ヒトＩｇＧ２サブタイプを示すキメラ抗体がＴ−ｒｅｇ細胞、Ｔエフェクター細胞、及びＴＮＦＲ２＋がん細胞に対する二峰性の作用を示すことが認められた。つまり、これらのアッセイでは、ＩｇＧ２抗体の濃度が上昇するにつれて、測定される値が一方向に変化していき、その後方向が変化するものと考えられる。例えば、図５では、より低い濃度の抗体においてはＴエフェクター細胞の量が減少し、その後、抗体の濃度が上昇するにつれてＴエフェクター細胞の量が増加するものと考えられる。同様に、図６及び図７では、Ｔ−ｒｅｇ細胞及びＴＮＦＲ２＋がん細胞の量はそれぞれ、より低い濃度の抗体において増加し、その後、より高い濃度の抗体において減少するものと考えられる。この挙動がキメラＩｇＧ２抗体の構造調査の動機付けとなった。
【０４０７】
非還元条件下でキメラＩｇＧ２抗体のポリアクリルアミドゲル電気泳動分離を実施すると、４つの固有のバンドが認められた。これらの結果を図１２に示す。これらの４つのバンドはヒトＩｇＧ２アイソタイプの４つの異なるジスルフィド結合アイソフォームに対応しており、それらのジスルフィド結合アイソフォームは図１３Ａ〜図１３Ｄに図示されている。これらのジスルフィド結合アイソフォームのＴＮＦＲ２アンタゴニスト特性を評価するために、個々のバンドを精製してから、上記のＴ−ｒｅｇ殺傷アッセイ、Ｔエフェクター増殖アッセイ、及びＴＮＦＲ２＋がん細胞殺傷アッセイに供した。これらの実験の結果を表４に示す。
【０４０８】
表４．ＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体がＴ−ｒｅｇ細胞を殺傷する能力及びエフェクターＴ細胞を増殖させる能力に対するヒトＩｇＧ２ジスルフィド結合アイソフォームの影響
2021534757.tif 000022
【０４０９】
驚くべきことに、表４に示すとおり、図１２に示すゲルのバンド１に含まれるジスルフィド結合アイソフォームは、バンド３及びバンド４に含まれるジスルフィド結合アイソフォームと比較してより優れたＴＮＦＲ２アンタゴニスト作用を示した。バンド２に含まれるジスルフィド結合アイソフォームも同様に、バンド３及びバンド４と比較してより優れたアンタゴニスト作用を示した。バンド１がＩｇＧ２−Ａジスルフィド結合アイソフォームに対応し、バンド２がＩｇＧ２−Ｂジスルフィド結合アイソフォームに対応することを同定した。これらのアイソフォームの構造をそれぞれ図１３Ａ及び図１３Ｂに示す。
【０４１０】
ＩｇＧ２−Ａアイソフォームを安定させるために、ＴＮＦＲＡＢ２をベースとしたキメラＩｇＧ２抗体のヒトＩｇＧ２ヒンジ領域に一連の変異を導入した。これらの変異としてはＣ２３２Ｓアミノ酸置換及びＣ２３３Ｓアミノ酸置換が挙げられ、それらの置換は、２３２位及び２３３位においてシステインの立体特性及び電気陰性度特性を保持しつつ、ＩｇＧ２−Ａアイソフォームには存在しないジスルフィド結合の形成を阻害する。キメラＩｇＧ２抗体のＴＮＦＲ２アンタゴニスト特性に対するこれらの変異の影響を以下の表５に示す。
【０４１１】
表５．ＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体がＴ−ｒｅｇ細胞を殺傷する能力及びエフェクターＴ細胞を増殖させる能力に対するＩｇＧ２ヒンジ領域アミノ酸置換の影響
2021534757.tif 000023
【０４１２】
表５に示すとおり、ヒトＩｇＧ２のヒンジ領域内におけるＣ２３２Ｓ変異及びＣ２３３Ｓ変異は、Ｔ−ｒｅｇ細胞を殺傷するより優れた能力及びＴエフェクター細胞の増殖を誘導するより優れた能力を示すアンタゴニストＴＮＦＲ２抗体をもたらす。図８〜図１０に示すとおり、ＴＮＦＲＡＢ２をベースとしたキメラ抗体のヒトＩｇＧ２ヒンジ領域にＣ２３２Ｓ変異及びＣ２３３Ｓ変異を導入すると、Ｔ−ｒｅｇ細胞殺傷アッセイ、Ｔエフェクター細胞増殖アッセイ、及びＴＮＦＲ２＋がん細胞殺傷アッセイにおいて、二峰性の作用をもはや示さなくなる。ＩｇＧ２抗体に最適ながん細胞殺傷特性を付与するこれらの変異の能力は図１１に示すデータによって更に立証されているが、図１１は、Ｃ２３２Ｓアミノ酸置換及びＣ２３３Ｓアミノ酸置換を特徴とするヒトＩｇＧ２アイソタイプを含有するキメラ抗体が時間依存的な腫瘍容積減少能を示すことを示している。
【０４１３】
まとめると、これらのデータは、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ、とりわけＩｇＧ２−Ａジスルフィド結合アイソフォーム、及び度合いはより低いが、ＩｇＧ２−Ｂジスルフィド結合アイソフォーム、を示すＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体が、より優れたＴＮＦＲ２アンタゴニスト特性を示すことを示している。本明細書に記載の組成物及び方法を使用し、様々な技術を用いて、とりわけ、ＩｇＧ２−Ａジスルフィド結合パターンをとる抗体を作製することができる。
【０４１４】
Ｔ−ｒｅｇ殺傷アッセイのための物質及び方法
●ヒトＴ−ｒｅｇ  Ｆｌｏｗ（商標）キット（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ．Ｎｏ．３２０４０１）
●カクテル抗ヒトＣＤ４  ＰＥ−Ｃｙ５／ＣＤ２５  ＰＥ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｐａｒｔ  Ｎｏ．７８９３０）
●Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８抗ヒトＦＯＸＰ３、クローン２５９Ｄ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｐａｒｔ  Ｎｏ．７９４６７）
●Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８マウスＩｇＧ１、ｋアイソタイプＣｔｒｌ（ＩＣＦＣ）、クローンＭＯＰＣ−２１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｐａｒｔ  Ｎｏ．７９４８６）
●ＦＯＸＰ３  Ｆｉｘ／Ｐｅｒｍバッファー（４Ｘ）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ．Ｎｏ．４２１４０１）
●ＦＯＸＰ３  Ｐｅｒｍバッファー（１０Ｘ）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ．Ｎｏ．４２１４０２）
●ＰＥ抗ヒトＣＤ２５、クローン：ＢＣ９６（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ．Ｎｏ．３０２６０６）
●Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８抗ヒトＦＯＸＰ３、クローン２５９Ｄ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ．Ｎｏ．３２０２１２）
●ＰＢＳ  ｐＨ７．４（１Ｘ）（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔ．Ｎｏ．１００１０−０２３）
●ＨＢＳＳ（１Ｘ）（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔ．Ｎｏ．１４１７５−０９５）
●ＦＢＳ（熱不活性化）
●１５ｍｌチューブ
●１５ｍｌチューブ用スイングバケットローターを備えた卓上型遠心分離機（設定速度１１００ｒｐｍまたは２００ｇ）
【０４１５】
培養Ｔ−ｒｅｇ細胞を様々な濃度のＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体で一定期間処理した。上記条件下におけるＴ−ｒｅｇ細胞の培養後、フローサイトメトリー解析を使用して細胞カウントを測定した。０．２−１×１０６細胞／１００μｌの密度のＴ−ｒｅｇ細胞を１５ｍｌコニカルチューブに分配してから、細胞をペレット化するために５分間遠心分離にかけた。上清を廃棄し、細胞を１００μｌの洗浄バッファー（２％ＦＢＳを含有する１×ＨＢＳＳ）中に再懸濁させた。５μｌのＰＥ抗ヒトＣＤ２５蛍光体−抗体コンジュゲートをこの混合液に加え、それに続き、細胞をボルテックスし、暗黒下で２５分間培養した。その後、１ｍｌの洗浄バッファーを加えることにより細胞を洗浄してから、５分間遠心分離にかけた。次に、上清を廃棄し、１ｍｌのＦｏｘＰ３固定／透過処理用バッファー（ＰＢＳ中の４×ＦＯＸＰ３  Ｆｉｘ／Ｐｅｒｍバッファーの１：４の希釈液）を細胞に加えた。その後、細胞をボルテックスし、暗黒下で２０分間培養した。それに続き、細胞を５分間遠心分離にかけ、上清を廃棄した。次に、細胞を１ｍｌの新鮮な洗浄バッファー中に再懸濁させて、ボルテックスし、５分間遠心分離にかけた。それに続き、細胞を１ｍｌの１×ＦＯＸＰ３  Ｐｅｒｍバッファー（ＰＢＳ中の１０×ＦＯＸＰ３  Ｐｅｒｍバッファーの１：１０の希釈液）中に再懸濁させて、ボルテックスし、暗黒下で１５分間培養した。培養後、細胞を５分間遠心分離にかけてから、上清を廃棄した。次に、細胞ペレットを１００μｌの１×ＦＯＸＰ３  Ｐｅｒｍバッファー中に再懸濁させた。この時点で、５μｌのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８抗ヒトＦＯＸＰ３またはＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８マウスＩｇＧ１、ｋアイソタイプ対照のいずれかを細胞に加えた。その後、細胞をボルテックスし、暗黒下で３５分間培養した。培養後、１ｍｌの新鮮な洗浄バッファーを細胞に加えることにより細胞を洗浄し、細胞をボルテックスし、５分間遠心分離にかけた。次に、上清を廃棄し、細胞ペレットを、ＦＢＳを含まない０．２〜０．５ｍｌの１×ＨＢＳＳ中に再懸濁させた。次に、フローサイトメトリー解析を用いて細胞カウントを測定した。
【０４１６】
Ｔエフェクター誘導アッセイのための物質及び方法
Ｔｏｒｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  １０：４６２，２０１７（その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる））において概要が示されているとおりに、本実施例に記載のＴエフェクター誘導アッセイを実施した。
【０４１７】
がん細胞殺傷アッセイのための物質及び方法
９６ウェル平底プレート内、２００ｍｌの培地中ウェルあたり０．１×１０６細胞の濃度でＳＷ４８０結腸癌細胞を培養した。細胞をＴＮＦＲ２アンタゴニスト性抗体で直接処理し、２〜３日毎に培地の半分を新しいものに交換しながら最長２１日間培養した。
【０４１８】
培養後、０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ）を用いて細胞をプレートから剥離し、回収し、ＦＡＣＳ解析用に、または、生存細胞をカウントするためにトリパンブルー（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で、または、細胞生存アッセイ用に染色した。
【０４１９】
実施例３．ファージディスプレイによるアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体の作製
本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏタンパク質進化のための例示的な方法は、当該技術分野において周知の技術であるファージディスプレイである。抗体のＣＤＲまたは抗体様スキャフォールドの類似領域（例えば、１０Ｆｎ３ドメインのＢＣ、ＣＤ、及びＤＥループ）のコード配列内に、設計した一連の変異または変化を生じさせることにより、ファージディスプレイライブラリを作製することができる。これらの変異を導入可能な鋳型抗体コード配列は、例えば、本明細書に記載のナイーブヒト生殖細胞系配列であってもよい。これらの変異は、本明細書に記載または当該技術分野において周知の標準的な変異誘発技術を使用して実施することができる。それゆえ、それぞれの変異配列は、鋳型の配列内に１つまたは複数のアミノ酸変化を有していることを除き、全体的な構造において鋳型に対応した抗体をコードしている。レトロウイルスベクター及びファージディスプレイベクターは、本明細書に記載または当該技術分野において周知の標準的なベクター構築技術を使用して改変することができる。当該技術分野において周知ではあるが、相性のよいタンパク質発現ベクターと共にＰ３ファージディスプレイベクターを使用して、本明細書に記載の抗体多様化用のファージディスプレイベクターを作製することができる。
【０４２０】
変異ＤＮＡは配列の多様性をもたらし、それぞれの形質転換ファージは、ＤＮＡがコードする最初の鋳型アミノ酸配列の１つのバリアントを提示し、膨大な数の異なってはいるが構造的に関連したアミノ酸配列を提示するファージ集団（ライブラリ）がもたらされる。抗体超可変領域の明確な構造により、ファージディスプレイスクリーニングに導入されたアミノ酸変化が、結合ペプチドまたは結合ドメインの構造を著しく変化させることなくその結合特性を変化させるものと予測される。
【０４２１】
標準的なスクリーニングでは、ファージライブラリをＴＮＦＲ２由来ペプチド（例えば、配列番号：１１、１９、２０、及び３４〜１１７のうちのいずれか１つの配列を有するペプチド）またはその特定のサブコンポーネントと接触させてそれに結合させる。結合物及び非結合物の分離を容易とするためには、標的を固体支持体に固定するのが好都合である。ＴＮＦＲ２結合部分を有するファージが固体支持体上の標的と複合体を形成することができるのに対し、非結合ファージは溶液中に残ったままであり、過剰バッファーで洗浄除去され得る。次に、極端なｐＨ（ｐＨ２またはｐＨ１０）のものにバッファーを交換すること、バッファーのイオン強度を変化させること、変性剤を加えること、またはその他の周知の方法を用いることにより、結合ファージを標的から遊離させてもよい。結合ファージを単離するために、タンパク質溶出を実施してもよい。
【０４２２】
次に、回収したファージを細菌細胞の感染によって増幅させてもよく、今や非結合抗体が除去され標的ペプチドに結合する抗体に富んだ新しいプールを用いて、スクリーニングプロセスを繰り返してもよい。結合ファージの回収がたとえ小量であったとしても、その後のスクリーニング反復用のファージを増幅させるのには十分である。数ラウンドの選択後、結合プール内の選択ファージクローンに由来する抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする遺伝子配列を通常の方法で同定することにより、標的に対するファージの結合親和性を付与するペプチド配列を明らかにする。パニングプロセス中、集団の配列多様性は、所望のペプチド結合抗体が残るまでそれぞれの選択ラウンド毎に減少する。配列は少数の関連抗体またはその抗原結合フラグメント、一般的には、それぞれのライブラリに由来する約１０９〜１０１０の元の候補のうちの１０〜５０に収束し得る。それぞれの選択ラウンドにおける回収ファージの数の増加は、スクリーニングにおいてライブラリの収束が生じているという良い徴候である。一連の結合ポリペプチドを同定した後、その配列情報を使用して、別の所望の特性を有する構成要素に偏らせたその他の二次的なファージライブラリを設計してもよい（例えば、ＷＯ２０１４／１５２６６０（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
【０４２３】
実施例４．ヒト化アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体の作製
本明細書に記載のヒト化ＴＮＦＲ２抗体を作製するための１つの方法は、非ヒトアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体、例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５などのＣＤＲのうちの１つもしくは複数または全てを、ヒト抗体コンセンサス配列に導入することである。コンセンサスヒト抗体の重鎖配列及び軽鎖配列は当該技術分野において周知である（例えば、「ＶＢＡＳＥ」ヒト生殖細胞系配列データベース；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２，１９９１）；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８，１９９２）；及びＣｏｘ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７−８３６，１９９４）（そのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。確立された手法を使用して、コンセンサス抗体配列の可変ドメインフレームワーク残基及びＣＤＲを同定してもよい（例えば、配列アライメントにより（上記のＫａｂａｔを参照のこと））。本明細書に記載のヒト化アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体を作製するために、例えば、コンセンサス抗体のＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、及びＣＤＲ−Ｌ３配列のうちの１つもしくは複数または全てを、本明細書に記載の非ヒトアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体の対応するＣＤＲ配列（複数可）で置換してもよい。例えば、本明細書に記載または当該技術分野において周知の技術を使用して、上記のＣＤＲ配列をコードするポリヌクレオチドを合成的または組換え的に作製してもよい。
【０４２４】
コンセンサスヒト抗体の可変ドメインの１つの例としては、米国特許第６，０５４，２９７号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）において同定されている重鎖可変ドメイン
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及び軽鎖可変ドメイン
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（ＣＤＲを太字で示す）が挙げられる。本開示のヒト化アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体を作製するために、ＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、及びＣＤＲ−Ｌ３配列のうちの１つもしくは複数または全てが本明細書に記載の非ヒトアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体、例えば、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５などの対応するＣＤＲ配列、例えば、配列番号：２３、２５７、２７４、２７５、２９３、２９４、または２９５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１などで置換されている上記コンセンサス配列の可変ドメインをコードするポリヌクレオチドを組換え的に発現させてもよい。
【０４２５】
互いに機能的に連結した上記の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチドを、発現ベクター（例えば、本明細書に記載または当該技術分野において周知の、原核細胞または真核細胞内におけるタンパク質発現用に最適化した発現ベクター）に導入してもよい。例えば、ポリヌクレオチドは、ＴＮＦＲＡＢ１、ＴＮＦＲＡＢ２、ＴＮＦＲＡＢ３、ＴＮＦＲＡＢ４、またはＴＮＦＲＡＢ５のＣＤＲ−Ｈ１、例えば、配列番号：２３、２５７、２７４、２７５、２９３、２９４、または２９５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１などをコードする領域を含有していてもよい。ヒト化抗体を宿主細胞内で発現させてから、本明細書に記載の確立された技術、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー及び／またはアフィニティークロマトグラフィーなどを使用して、その宿主細胞培地から精製してもよく、または、その宿主細胞を精製してもよい。
【０４２６】
実施例５．Ｃ２３２Ｓアミノ酸置換及びＣ２３３Ｓアミノ酸置換を含有するヒト化ＴＮＦＲ２抗体
本明細書に記載のヒト化技術を使用して、モノクローナルマウス抗体ＴＮＦＲＡＢ２のヒト化により、一連の２５種のヒト化ＴＮＦＲ２抗体を開発した。これらのヒト化ＴＮＦＲ２抗体はＩｇＧ２アイソタイプを示し、ＩｇＧ２ヒンジ領域内にＣ２３２Ｓアミノ酸置換及びＣ２３３Ｓアミノ酸置換を含有する。本明細書に記載するとおり、これらの置換は、Ｔｒｅｇ細胞を殺傷する高い能力、及びＣＤ８＋エフェクターＴ細胞を増殖させる高い能力を含む有利な特性をＴＮＦＲ２抗体に付与する。ＩｇＧ２サブタイプを示すヒト化アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体に対するＣ２３２Ｓアミノ酸置換及びＣ２３３Ｓアミノ酸置換の影響を調査するために、全２５種のヒト化抗体のアンタゴニスト作用を少なくとも３種の機能アッセイで試験した。先ず、全てのヒト化抗体が、ヒト血液ドナーから得たＴｒｅｇ細胞を殺傷する能力を用量依存的な方法で試験した。次に、全てのヒト化抗体が、ヒト血液ドナーに由来するＴエフェクター細胞を増殖させる能力を試験した。ヒト化抗体が、少なくとも１種のＴＮＦＲ２発現腫瘍細胞株、例えば、ＳＷ４８０細胞株またはＭＯＴＮ−１細胞株などを殺傷する能力を更に試験した。
【０４２７】
ＩｇＧ２ヒンジ領域内にＣ２３２Ｓ置換及びＣ２３３Ｓ置換を含有する２５種全てのヒト化ＴＮＦＲ２抗体は、Ｔｒｅｇ細胞を殺傷する能力、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞を増殖させる能力、及びＴＮＦＲ２発現がん細胞を殺傷する能力を示した。これらの結果については以下の表６にまとめている。
【０４２８】
表６．ＩｇＧ２ヒンジ領域内にＣ２３２Ｓ置換及びＣ２３３Ｓ置換を含有するヒト化ＴＮＦＲ２抗体が、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させる能力、ＣＤ８＋Ｔエフェクター細胞を増殖させる能力、及びＴＮＦＲ２発現がん細胞を殺傷する能力
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【０４２９】
実施例６．アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの投与によるヒト患者におけるがんの治療
細胞増殖障害、例えば、がんなどを治療するために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、またはその構築物）をヒト患者に投与してもよい。アンタゴニスト性ポリペプチドは、例えば、配列番号：２３、２５７、２７４、２７５、２９３、２９４、または２９５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１を含有していてもよい。これらのポリペプチドの投与は、Ｔ−ｒｅｇ細胞の成長及び増殖を抑制し得る。それゆえ、Ｔ−ｒｅｇ介在性免疫応答を抑制するために、本明細書に記載の抗体を患者に投与してもよい。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを、適切な経路（例えば、静脈内）で、特定の用量（例えば、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日）で、数日、数週、数ヶ月、または数年の期間にわたって投与することにより、がん、例えば、本明細書に記載のがんを患うヒト患者を治療してもよい。必要に応じ、例えば、免疫認識を回避する及び／またはポリペプチドの薬物動態プロファイルを向上させるように高グリコシル化するまたはＰＥＧとコンジュゲートすることにより、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを改変してもよい。
【０４３０】
がんは、例えば、ＴＮＦＲ２を発現する細胞を特徴とするがん、例えば、ホジキンリンパ腫、皮膚非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、卵巣癌、結腸癌、多発性骨髄腫、腎細胞癌、皮膚癌、肺癌、肝臓癌、子宮内膜癌、造血がんまたはリンパがん、中枢神経系がん（例えば、神経膠腫、神経芽細胞腫、及び本明細書に記載の中枢神経系細胞のその他のがん）、乳癌、膵臓癌、胃癌、食道癌、及び上部消化管癌などであってもよい。このような例において、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、１つまたは複数のメカニズムによりがんを治療し得る。例えば、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、Ｔ−ｒｅｇ細胞、例えば、ＣＤ２５Ｈｉ及びＣＤ４５ＲＡＬｏｗを発現する活性化Ｔ−ｒｅｇ細胞などの表面上またはＭＤＳＣの表面上のＴＮＦＲ２に結合することにより、Ｔ−ｒｅｇ細胞またはＭＤＳＣの増殖を阻害し得る及び／またはＴ−ｒｅｇ細胞またはＭＤＳＣを直接殺傷し得る。殺傷されるまたは増殖が抑制されるＴ−ｒｅｇ細胞及び／またはＭＤＳＣは、腫瘍の微小環境に位置するＴ−ｒｅｇ細胞及び／またはＭＤＳＣであってもよい。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドにより生じたＴ−ｒｅｇ細胞及び／またはＭＤＳＣの集団減少により、がん性細胞に対する免疫応答を開始することができる腫瘍反応性ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞の集団の増殖が可能となり得る。追加的にまたは代替的に、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の直接的な増殖を誘導し得る。追加的にまたは代替的に、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドは、ＴＮＦＲ２＋がん細胞の表面上のＴＮＦＲ２に結合することにより、がん細胞の増殖を阻害し得る及び／またはがん細胞を直接殺傷し得る。
【０４３１】
数種類の確立された方法のうちのいずれか１種または複数種を用いて、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドで治療するがんの進行をモニターしてもよい。医師は、患者が示す症候が治療に応じてどのように変化しているかを評価するための直接的な観察によって患者をモニターすることができる。腫瘍が転移しているかどうか、または、腫瘍のサイズが変化、例えば、本明細書に記載の抗ＴＮＦＲ２抗体を用いた治療に応じて縮小しているかどうかを確認するために、患者にまたＭＲＩ、ＣＴスキャン、またはＰＥＴ解析を実施してもよい。任意選択的に、様々な増殖因子受容体、例えば、上皮増殖因子受容体などの相対的な細胞表面濃度を測定するために、患者から細胞を採取して定量的な生化学的解析を実施してもよい。これらの解析の結果に基づいて、医師は、その後の治療ラウンドにおけるアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドのより多い／より少ない用量またはより多い／より少ない頻度の投与を指示してもよい。
【０４３２】
実施例７．アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの投与によるヒト患者におけるＨＩＶの治療
ウイルス感染症、例えば、ＨＩＶなどを治療するために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）をヒト患者に投与してもよい。これらのポリペプチドの投与により、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞及びＭＤＳＣの成長及び増殖を抑制することができ、それにより、感染細胞に対する攻撃を開始することができる細胞傷害性Ｔリンパ球を増殖させることによる患者の免疫応答の増強が可能となる。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを、適切な経路（例えば、静脈内）で、特定の用量（例えば、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日）で、数日、数週、数ヶ月、または数年の期間にわたって投与することにより、ＨＩＶを患うヒト患者を治療してもよい。アンタゴニスト性ポリペプチドは、例えば、配列番号：２３、２５７、２７４、２７５、２９３、２９４、または２９５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１を含有していてもよい。必要に応じ、例えば、免疫認識を回避する及び／またはポリペプチドの薬物動態プロファイルを向上させるように高グリコシル化するまたはＰＥＧとコンジュゲートすることにより、ポリペプチドを改変してもよい。
【０４３３】
数種類の確立された方法のうちのいずれか１種または複数種を用いて、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドで治療するＨＩＶの進行をモニターしてもよい。医師は、患者が示す症候が治療に応じてどのように変化しているかを評価するための直接的な観察によって患者をモニターすることができる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを用いた治療に応じて感染細胞の量が変化している（例えば、減少している）かどうかを確認するために、１種または複数種の白血球の細胞カウントを解析するために、血液試料をまた患者から採取してもよい。これらの解析の結果に基づいて、医師は、その後の治療ラウンドにおけるアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドのより多い／より少ない用量またはより多い／より少ない頻度の投与を指示してもよい。
【０４３４】
実施例８．アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの投与による非ヒト哺乳動物におけるＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの治療
細菌感染症、例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓなどを治療するために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチド（例えば、一本鎖ポリペプチド、抗体、その抗原結合フラグメント、及びその構築物）を非ヒト哺乳動物（例えば、ウシ科哺乳動物、ブタ、バイソン、ウマ、ヒツジ、ヤギ、雌ウシ、ネコ、イヌ、ウサギ、ハムスター、モルモット、またはその他の非ヒト哺乳動物）に投与してもよい。これらのポリペプチドの投与により、例えば、Ｔ−ｒｅｇ細胞及び／またはＭＤＳＣの増殖を抑制する及び／またはＴ−ｒｅｇ細胞及び／またはＭＤＳＣを直接殺傷することができ、それにより、病原性微生物に対する攻撃を開始することができる細胞傷害性Ｔリンパ球を増殖させることによる患者の免疫応答の増強が可能となる。例えば、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを、適切な経路（例えば、静脈内）で、特定の用量（例えば、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日）で、数日、数週、数ヶ月、または数年の期間にわたって投与することにより、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを患う非ヒト哺乳動物を治療してもよい。アンタゴニスト性ポリペプチドは、例えば、配列番号：２３、２５７、２７４、２７５、２９３、２９４、または２９５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１を含有していてもよい。必要に応じ、例えば、免疫認識を回避する及び／またはポリペプチドの薬物動態プロファイルを向上させるように高グリコシル化するまたはＰＥＧとコンジュゲートすることにより、アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを改変してもよい。
【０４３５】
数種類の確立された方法のうちのいずれか１種または複数種を用いて、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドで治療するＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染症の進行をモニターしてもよい。医師は、患者が示す症候が治療に応じてどのように変化しているかを評価するための直接的な観察によって患者をモニターすることができる。本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドを用いた治療に応じて免疫応答が変化している（例えば、増強している）かどうかを確認するために、１種または複数種の白血球の細胞カウントを解析するために、血液試料をまた患者から採取してもよい。これらの解析の結果に基づいて、医師は、その後の治療ラウンドにおけるアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドのより多い／より少ない用量またはより多い／より少ない頻度の投与を指示してもよい。
【０４３６】
実施例９．免疫療法剤と組み合わせたアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２ポリペプチドの投与によるヒト患者におけるがんまたは感染症の治療
細胞増殖障害、例えば、がんなど、または感染症、例えば、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、または寄生虫感染症などを治療するために、本明細書に記載のアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体、抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、及び構築物を、免疫療法剤と組み合わせて（例えば、免疫療法剤と混合する、それと同時投与する、またはそれとは別に投与する）ヒト患者に投与してもよい。抗体、抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、または構築物の投与により、Ｔ−ｒｅｇ細胞及び／またはＴＮＦＲ２を発現するがん細胞の成長及び増殖を抑制することができる。アンタゴニストＴＮＦＲ２抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、または構築物と組み合わせて免疫療法剤として機能し得る免疫療法剤、例えば、抗ＣＴＬＡ−４剤（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、イピリムマブ及びトレメリムマブなど）、抗ＰＤ−１剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及びアテゾリズマブなど）、抗ＰＤ−Ｌ１剤（例えば、アテゾリズマブ及びアベルマブ）、抗ＰＤ−Ｌ２剤、ＴＮＦ−α架橋剤、ＴＲＡＩＬ架橋剤、抗ＣＤ２７剤、抗ＣＤ３０剤、抗ＣＤ４０剤、抗４−１ＢＢ剤、抗ＧＩＴＲ剤、抗ＯＸ４０剤、抗ＴＲＡＩＬＲ１剤、抗ＴＲＡＩＬＲ２剤、及び抗ＴＷＥＡＫＲ剤などは、さもなければ腫瘍関連抗原に対する免疫寛容及び細胞傷害性Ｔ細胞応答の下方制御を引き起こし得る免疫チェックポイントタンパク質（例えば、免疫チェックポイント受容体及び／または免疫チェックポイントリガンド）のシグナル伝達を下方制御することができる。アンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、または構築物と共に使用可能な免疫療法剤の別の例としては、ターグレチン、インターフェロン−α、クロベスタゾール、ペグインターフェロン（例えば、ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標））、プレドニゾン、ロミデプシン、ベキサロテン、メトトレキサート、トリムシノロンクリーム、抗ケモカイン、ボリノスタット、ガバペンチン、リンパ球系細胞表面受容体及び／またはリンフォカインに対する抗体、表面がんタンパク質に対する抗体、及び／または、ボリノスタットのような低分子治療薬が挙げられる。
【０４３７】
当業者の医師は、ＴＮＦＲ２に特異的に結合する本明細書に記載のポリペプチドをアンタゴニスト（例えば、抗体、その抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、またはその構築物）として、免疫療法剤と組み合わせて、がんまたは感染症を患うヒト患者に投与してもよい。アンタゴニスト性ポリペプチドは、例えば、配列番号：２３、２５７、２７４、２７５、２９３、２９４、または２９５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１を含有していてもよい。ポリペプチド及び免疫療法剤を、適切な投与経路（例えば、とりわけ、静脈内、筋肉内、または皮下）で、特定の用量（例えば、その他の範囲の中でも、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日）で、数日、数週、数ヶ月、または数年の期間にわたって患者に投与してもよい。必要に応じ、例えば、免疫認識を回避する及び／または抗体、抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、または構築物の薬物動態プロファイルを向上させるように高グリコシル化するまたはＰＥＧとコンジュゲートすることにより、抗ＴＮＦＲ２抗体、抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、または構築物を改変してもよい。
【０４３８】
数種類の確立された方法のうちのいずれか１種または複数種を用いて、このように治療するがんまたは感染症の進行をモニターしてもよい。医師は、患者が示す症候が治療に応じてどのように変化しているかを評価するための直接的な観察によって患者をモニターすることができる。腫瘍が転移しているかどうか、または、腫瘍のサイズが変化、例えば、抗ＴＮＦＲ２抗体、抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、または構築物、及び免疫療法剤を用いた治療に応じて縮小しているかどうかを確認するために、患者にまたＭＲＩ、ＣＴスキャン、またはＰＥＴ解析を実施してもよい。任意選択的に、様々な増殖因子受容体、例えば、上皮増殖因子受容体などの相対的な細胞表面濃度を測定するために、患者から細胞を採取して定量的な生化学的解析を実施してもよい。これらの解析の結果に基づいて、医師は、その後の治療ラウンドにおけるアンタゴニスト性ＴＮＦＲ２抗体、抗原結合フラグメント、一本鎖ポリペプチド、または構築物、及び免疫療法剤のより多い／より少ない用量またはより多い／より少ない頻度の投与を指示してもよい。
【０４３９】
その他の実施形態
本明細書で言及する全ての刊行物、特許、及び特許出願は、それぞれの独立した刊行物または特許出願が参照により組み込まれることが明示的及び個別に示されるかのように、同程度に参照により本明細書に組み込まれる。
【０４４０】
本発明をその特定の実施形態と関連させて記載してきたが、更なる修正を行うことが可能であり、本出願の範囲が、一般的に、本明細書に記載の原理に従った本明細書に記載の全ての変化形態、使用、または改変に及び、本発明が属する技術分野内における周知または慣例的な実施の範囲内にある本発明からの逸脱を含み、上に記載の本質的な特徴に適用可能であり、特許請求の範囲に従うことを意図するものと理解されたい。
【０４４１】
その他の実施形態は特許請求の範囲内である。
【図１】
2021534757.tif 000048
【図２】
2021534757.tif 000049
【図３】
2021534757.tif 000050
【図４】
2021534757.tif 000051
【図５】
2021534757.tif 000052
【図６】
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【図７】
2021534757.tif 000054
【図８】
2021534757.tif 000055
【図９】
2021534757.tif 000056
【図１０】
2021534757.tif 000057
【図１１】
2021534757.tif 000058
【図１２】
2021534757.tif 000059
【図１３】
2021534757.tif 000060
【配列表】
2021534757000001.app
【国際調査報告】
2021534757.tif 000061
2021534757.tif 000062
2021534757.tif 000063