(57)【要約】  本開示の態様はオリゴ糖組成物およびその製造方法に関する。アンモニアレベルを低下させるための、および高アンモニア血症関連疾患（例えば、尿素サイクル異常症および肝性脳症）の治療のためのマイクロバイオーム代謝療法としてのオリゴ糖組成物の使用方法も提供する。【選択図】図１Ｂ
2021534193.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物であって、該組成物が、表５に示されている特性を各シグナルが有するシグナル１、３および４を含む多重編集勾配増強１Ｈ−１３Ｃ異核種単一量子コヒーレンス（ＨＳＱＣ）ＮＭＲスペクトルにより特徴づけられる、オリゴ糖組成物。
【表１】
2021534193.tif 000070
【請求項２】
シグナル１、３および４が以下のとおりに定められる、請求項１記載の組成物。
【表２】
2021534193.tif 000071
【請求項３】
スペクトルが、表５に示されている特性を各シグナルが有するシグナル８および９から選択される１〜２個のシグナルを更に含む、請求項１または２記載の組成物。
【表３】
2021534193.tif 000072
【請求項４】
シグナル８および９が以下のとおりに定められる、請求項３記載の組成物。
【表４】
2021534193.tif 000073
【請求項５】
スペクトルが、表５に示されている特性を各シグナルが有するシグナル６、７、１１、１２、１３および１４から選択される１〜６個のシグナルを更に含む、請求項１〜４のいずれか１項記載の組成物。
【表５】
2021534193.tif 000074
【請求項６】
シグナル６、７、１１、１２、１３および１４が以下のとおりに定められる、請求項５記載の組成物。
【表６】
2021534193.tif 000075
【請求項７】
スペクトルが、表５に示されている特性を各シグナルが有するシグナル２、５および１０から選択される１〜３個のシグナルを更に含む、請求項１〜６のいずれか１項記載の組成物。
【表７】
2021534193.tif 000076
【請求項８】
シグナル２、５および１０が以下のとおりに定められる、請求項７記載の組成物。
【表８】
2021534193.tif 000077
【請求項９】
シグナル１〜１４がそれぞれ、以下のとおりに定められる１Ｈ積分領域および１３Ｃ積分領域によって更に特徴づけられる、請求項１〜８のいずれか１項記載の組成物。
【表９】
2021534193.tif 000078
【請求項１０】
ＮＭＲスペクトルが、以下のパルスシーケンス図、取得パラメータおよび処理パラメータを使用して、コヒーレンス選択のためにエコー−アンチエコースキームを用いる多重編集勾配増強１Ｈ−１３Ｃ異核種単一量子コヒーレンス（ＨＳＱＣ）実験に組成物のサンプルを付すことにより得られる、請求項１〜９のいずれか１項記載の組成物。
パルスシーケンス図
【化１】
2021534193.tif 000079
取得パラメータ
１Ｈキャリア周波数＝４ｐｐｍ
１３Ｃキャリア周波数＝６５ｐｐｍ
取得次元のポイント数＝５９６
取得次元のスペクトル範囲＝６．００ｐｐｍ〜２．０３ｐｐｍ
間接次元のポイント数＝３００個の複合ポイント
間接次元のスペクトル範囲＝１２０ｐｐｍ〜１０ｐｐｍ
リサイクル遅延＝１秒
１結合１Ｈ−１３Ｃ結合定数＝ＪＣＨ＝１４６Ｈｚ
スキャン数＝８
温度＝２９８Ｋ
溶媒＝Ｄ２Ｏ
処理パラメータ
直接次元における窓関数＝ガウシアン・ブロードニング、７．６６Ｈｚ
間接次元における窓関数＝ガウシアン・ブロードニング、２６．４８Ｈｚ
処理＝直接次元における５１２個の複合ポイント、間接次元における１０２４個の複合ポイント。
【請求項１１】
ＮＭＲスペクトルが、組成物のサンプル（ここで、サンプルはＤ２Ｏ中の溶液である）をＨＳＱＣ  ＮＭＲに付すことにより得られる、請求項１〜１０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１２】
オリゴ糖組成物の重合度（ＤＰ）の平均が約ＤＰ５〜約ＤＰ１１である、請求項１〜１１のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１３】
オリゴ糖組成物の重合度（ＤＰ）の平均が約ＤＰ４〜約ＤＰ８である、請求項１２記載の組成物。
【請求項１４】
オリゴ糖組成物の重合度（ＤＰ）の平均が約ＤＰ５〜約ＤＰ６である、請求項１２記載の組成物。
【請求項１５】
組成物が１６％〜２４％  デキストロース当量（乾燥量基準）を含む、請求項１〜１４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１６】
組成物が１３％〜２７％  デキストロース当量（乾燥量基準）を含む、請求項１〜１４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１７】
組成物が５０％〜９５％  全食物繊維（乾燥量基準）を含む、請求項１〜１６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８】
組成物が少なくとも６０％、７０％、８０％または９０％  全食物繊維（乾燥量基準）を含む、請求項１〜１６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９】
複数の単量体ラジカルを各オリゴ糖が含む複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物であって、前記の複数のオリゴ糖が、ラジカル（１）〜（７）：
（１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．１５〜９．５４モル％に相当する２−グルコピラノースジラジカル、
（２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも１８．９４モル％に相当する６−グルコピラノースジラジカル、
（３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．６３〜８．７４モル％に相当する４−グルコピラノースジラジカル、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．４２モル％未満に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカル、
（５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも１．０１〜２．５９モル％に相当する２，３−グルコピラノーストリラジカル、
（６）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．００モル％未満に相当する３，４，６−グルコピラノーステトララジカル、および
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７２モル％未満に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカル
から選択される２以上のタイプの単量体ラジカルを含み、ここで、選択されるラジカルが、定められたモル百分率（モル％）範囲で、複数のオリゴ糖に存在し、単量体ラジカルの前記の２以上のタイプの少なくとも１つが（４）または（７）である、オリゴ糖組成物。
【請求項２０】
単量体ラジカルの前記の２以上のタイプの少なくとも１つが、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７０モル％未満に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカル
である、請求項１９記載の組成物。
【請求項２１】
単量体ラジカルの前記の２以上のタイプの少なくとも１つが、
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．５０モル％未満に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカル
である、請求項１９記載の組成物。
【請求項２２】
オリゴ糖組成物が、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．４２モル％未満に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカル、および
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７２モル％未満に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカル
を含む、請求項１９〜２１のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２３】
オリゴ糖組成物が、
（６）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．４０モル％未満に相当する３，４，６−グルコピラノーステトララジカル
を含む、請求項１９〜２２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２４】
ラジカル（１）〜（７）から選択される３つ、４つ、５つ、６つまたは７つのタイプの単量体ラジカルを含む、請求項１９〜２２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２５】
ラジカル（８）〜（１２）：
（８）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの２６．８７〜４６．９８モル％に相当するｔ−グルコピラノースモノラジカル、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも６．９４モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカル、
（１０）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．４３モル％未満に相当する２，４−グルコピラノーストリラジカル、
（１１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの９．６６モル％未満に相当する２，６−グルコピラノース／４，６−グルコピラノーストリラジカル、および
（１２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．０７〜０．８５モル％に相当する２，３，４−グルコピラノースラジカル
から選択される１以上のタイプの単量体ラジカルを更に含む、請求項１９〜２４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２６】
オリゴ糖組成物が、
（８）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの３０．００〜４０．００モル％に相当するｔ−グルコピラノースモノラジカル
を含む、請求項２５記載の組成物。
【請求項２７】
オリゴ糖組成物が、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．９４〜９．２５モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカル
を含む、請求項２５記載の組成物。
【請求項２８】
オリゴ糖組成物が、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも９．１０モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカル
を含む、請求項２５記載の組成物。
【請求項２９】
オリゴ糖組成物が、
（１０）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．１０モル％未満に相当する２，４−グルコピラノーストリラジカル
を含む、請求項２５記載の組成物。
【請求項３０】
オリゴ糖組成物が、
（１１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．００モル％未満に相当する２，６−グルコピラノース／４，６−グルコピラノーストリラジカル
を含む、請求項２５記載の組成物。
【請求項３２】
ラジカル（８）〜（１２）から選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのタイプの単量体ラジカルを含む、請求項２５〜３０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３３】
ラジカル（１３）〜（１５）：
（１３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの２．３５〜６．０１モル％に相当する３，６−グルコピラノーストリラジカル、
（１４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．０６〜０．８６モル％に相当する２，３，６−グルコピラノーステトララジカル、および
（１５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．６１モル％未満に相当する２，３，４，６−グルコピラノースペンタラジカル
から選択される１以上のタイプの単量体ラジカルを更に含む、請求項１９〜３２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３４】
オリゴ糖組成物が、
（１５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．１０モル％未満に相当する２，３，４，６−グルコピラノースペンタラジカル
を含む、請求項３３記載の組成物。
【請求項３５】
ラジカル（１３）〜（１５）から選択される１つ、２つまたは３つのタイプの単量体ラジカルを含む、請求項３３または３４記載の組成物。
【請求項３６】
複数の単量体ラジカルを各オリゴ糖が含む複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物であって、前記の複数のオリゴ糖が、ラジカル（１）〜（１５）：
（１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．１５〜９．５４モル％に相当する２−グルコピラノースジラジカル、
（２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも１８．９４モル％に相当する６−グルコピラノースジラジカル、
（３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．６３〜８．７４モル％に相当する４−グルコピラノースジラジカル、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．４２モル％未満に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカル、
（５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．０１〜２．５９モル％に相当する２，３−グルコピラノーストリラジカル、
（６）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．００モル％未満に相当する３，４，６−グルコピラノーステトララジカル、
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７２モル％未満に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカル、
（８）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの２６．８７〜４６．９８モル％に相当するｔ−グルコピラノースモノラジカル、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも６．９４モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカル、
（１０）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．４３モル％未満に相当する２，４−グルコピラノーストリラジカル、
（１１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの９．６６モル％未満に相当する２，６−グルコピラノース／４，６−グルコピラノーストリラジカル、
（１２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．０７〜０．８５モル％に相当する２，３，４−グルコピラノースラジカル、
（１３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの２．３５〜６．０１モル％に相当する３，６−グルコピラノーストリラジカル、
（１４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．０６〜０．８６モル％に相当する２，３，６−グルコピラノーステトララジカル、および
（１５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．６１モル％未満に相当する２，３，４，６−グルコピラノースペンタラジカル
を含み、ここで、ラジカル（１）〜（１５）が、定められたモル百分率（モル％）範囲で複数のオリゴ糖に存在する、オリゴ糖組成物。
【請求項３７】
オリゴ糖組成物が、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７０モル％未満に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカル
を含む、請求項３６記載の組成物。
【請求項３８】
オリゴ糖組成物が、
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．５０モル％未満に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカル
を含む、請求項３６または３７記載の組成物。
【請求項３９】
オリゴ糖組成物が、
（６）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．４０モル％未満に相当する３，４，６−グルコピラノーステトララジカル
を含む、請求項３６〜３８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項４０】
オリゴ糖組成物が、
（８）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの３０．００〜４０．００モル％に相当するｔ−グルコピラノースモノラジカル
を含む、請求項３６〜３９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項４１】
オリゴ糖組成物が、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．９４〜９．２５モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカル
を含む、請求項３６〜４０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項４２】
オリゴ糖組成物が、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも９．１０モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカル
を含む、請求項３６〜４１のいずれか１項記載の組成物。
【請求項４３】
オリゴ糖組成物が、
（１０）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．１０モル％未満に相当する２，４−グルコピラノーストリラジカル
を含む、請求項３６〜４２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項４４】
オリゴ糖組成物が、
（１１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．００モル％未満に相当する２，６−グルコピラノース／４，６−グルコピラノーストリラジカル
を含む、請求項３６〜４３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項４５】
オリゴ糖組成物が、
（１５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．１０モル％未満に相当する２，３，４，６−グルコピラノースペンタラジカル
を含む、請求項３６〜４４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項４６】
単量体ラジカルのモル百分率が、過メチル化アッセイを用いて決定され、ここで、過メチル化アッセイが、ガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）の使用を含み、所望により、組成物を含むサンプルが、２０．０分にわたって１７０℃から２４０℃まで４℃／分で加熱しながらＧＣ−ＭＳにより分析される、請求項１９〜４５のいずれか１項記載の組成物。
【請求項４７】
式（Ｉ）：
【化２】
2021534193.tif 000080
（式中、Ｒは、独立して、水素から選択される）ならびに式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）：
【化３】
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［ここで、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）におけるＲは、独立して、式（Ｉ）における前記と同意義を有する］を含む複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物であって、該組成物が、
（ａ）酸性プロトンを含む触媒と共にデキストロース調製物を含む反応混合物を生成させること、および
（ｂ）（ａ）におけるローディング前のデキストロース調製物中の全デキストロースに対する、反応混合物により生成される正味の水凝縮物のモル比が０．３５〜１．０の範囲となるまで、反応混合物をその沸点で維持するために十分な熱を反応混合物に伝達させることにより、反応混合物において酸触媒オリゴ糖形成を促進させること（ここで、反応混合物は０．５〜１．５気圧の圧力で維持される）
を含む製造方法により製造される、オリゴ糖組成物。
【請求項４８】
製造方法が更に、
（ｃ）反応混合物の温度を１００℃以下にしながら、水を使用して反応混合物をクエンチすること
を含む、請求項４７記載の組成物。
【請求項４９】
製造方法が更に、
（ｄ）オリゴ糖の少なくとも一部を酸触媒から分離すること
を含む、請求項４７または３７記載の組成物。
【請求項５０】
酸触媒が、酸性プロトンを含む固体基体である、請求項４７〜４９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５１】
酸触媒が、表１による１以上の物理的および化学的特性を有する強酸カチオン交換樹脂であり、および／または、ここで、該触媒が、３．０ｍｍｏｌ／ｇを超えるスルホン酸部分および１．０ｍｍｏｌ／グラム未満のカチオン部分を含む、請求項５０記載の組成物。
【請求項５２】
触媒が４５〜５０重量％の名目含水量を有する、請求項５０または５１記載の組成物。
【請求項５３】
工程（ａ）において、酸触媒が、デキストロースに対する酸性プロトンのモル比が０．００１〜０．２５の範囲となる量で存在する、請求項４７〜５２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５４】
工程（ａ）において、酸触媒が、デキストロースに対する酸性プロトンのモル比が０．００１６〜０．０２２の範囲となる量で存在する、請求項４７〜５２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５５】
工程（ａ）において、デキストロース調製物がデキストロース単量体を含む、請求項４７〜５４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５６】
工程（ａ）において、デキストロース調製物がデキストロース一水和物または７０ＤＳコーンシロップを含む、請求項４７〜５４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５７】
式（Ｉ）を含む複数のオリゴ糖が全オリゴ糖組成物の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％を構成する、請求項４７〜５６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５８】
式（Ｉ）を含む複数のオリゴ糖が全オリゴ糖組成物の少なくとも９５％を構成する、請求項４７〜４６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５９】
式（Ｉ）を含む複数のオリゴ糖が全オリゴ糖組成物の少なくとも９８％を構成する、請求項４７〜５８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６０】
式（Ｉ）を含む複数のオリゴ糖が全オリゴ糖組成物の１００％を構成する、請求項４７〜４８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６１】
オリゴ糖組成物の単量体の多くとも１％、２％、３％、５％、７％または１０％が式（Ｉ）または式Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃおよびＩｄと異なる、請求項４７〜６０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６２】
オリゴ糖組成物の単量体の多くとも１％が式（Ｉ）または式Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃおよびＩｄと異なる、請求項４７〜６０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６３】
オリゴ糖組成物の単量体の多くとも５％が式（Ｉ）または式Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃおよびＩｄと異なる、請求項４７〜６０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６４】
式（Ｉ）または式Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃおよびＩｄと異なるオリゴ糖組成物の単量体が、誘導体化された又は化学的に変化した（例えば、分解した）糖単位（例えば、無水形態）を含む、請求項６１〜６３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６５】
（ａ）におけるローディング前のデキストロース調製物中の全デキストロースに対する、反応混合物により生成される正味の水凝縮物のモル比が０．４０〜０．９０の範囲となるまで、反応混合物をその沸点で維持する、請求項４７〜６４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６６】
工程（ｂ）の前に、均質性および均一熱伝達を達成するための適切な条件下、反応混合物の温度を室温から反応混合物の沸点へと徐々に上昇させる、請求項４７〜５４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６７】
反応混合物が１％未満のソルビトールを含む、請求項４７〜６６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６８】
オリゴ糖組成物が０．１％未満のソルビトールを含む、請求項４７〜６７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６９】
オリゴ糖組成物が少なくとも９０％、９５％または９９％のデキストロースを含む、請求項４７〜６８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７０】
オリゴ糖組成物の重合度（ＤＰ）の平均が約ＤＰ４〜約ＤＰ８である、請求項４７〜６９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７１】
オリゴ糖組成物の重合度（ＤＰ）の平均が約ＤＰ５〜約ＤＰ６である、請求項７０記載の組成物。
【請求項７２】
工程（ｂ）が更に、蒸発により反応混合物から水を除去することを含む、請求項４７〜７１のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７３】
工程（ｃ）において、水が脱イオン水である、請求項４８〜７２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７４】
工程（ｃ）において、水が約６０〜１００℃の温度を有する、請求項４８〜７３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７５】
工程（ｃ）において、混合物の固化を回避するのに十分な条件下、反応混合物に水を加える、請求項４８〜７４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７６】
工程（ｄ）において、前記分離が、濾過により触媒を除去することを含む、請求項４９〜７５のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７７】
工程（ｄ）が、濾過前に反応混合物を約８５℃未満に冷却することを含む、請求項４９〜７６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７８】
製造方法が更に、（ｄ）のオリゴ糖組成物を約５〜６５重量％の濃度に脱イオン水で希釈することを含む、請求項４８〜７７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７９】
製造方法が更に、工程（ｅ）〜（ｇ）：
（ｅ）希釈された組成物をカチオン交換樹脂に通す工程、
（ｆ）希釈された組成物をアニオン交換樹脂に通す工程、および
（ｇ）希釈された組成物を脱色ポリマー樹脂に通す工程
の１以上（例えば、２以上または３つ）を更に含み、ここで、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）のそれぞれが任意の順序で１回以上行われうる、請求項７８記載の組成物。
【請求項８０】
組成物が、室温での貯蔵の際の微生物増殖に必要なレベルより低いレベルの総含水量を含む、請求項４７〜７９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項８１】
組成物が２４〜３３重量パーセントの範囲の総含水量を含む、請求項８０記載の組成物。
【請求項８２】
組成物中のオリゴ糖が８５２〜１４７５の範囲のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有する、請求項４７〜８１のいずれか１項記載の組成物。
【請求項８３】
組成物中のオリゴ糖が８５５〜１１００の範囲のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有する、請求項８２記載の組成物。
【請求項８４】
組成物中のオリゴ糖が６１２〜９１２の範囲のＭＷｎ（ｇ／ｍｏｌ）を有する、請求項４７〜８３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項８５】
組成物中のオリゴ糖が６１２〜７１０の範囲のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有する、請求項８４記載の組成物。
【請求項８６】
オリゴ糖組成物が２．５〜７．５の範囲のｐＨを有する、請求項４７〜８５のいずれか１項記載の組成物。
【請求項８７】
オリゴ糖組成物が２．５〜５．０の範囲のｐＨを有する、請求項８６記載の組成物。
【請求項８８】
オリゴ糖組成物が、約７５〜約９５重量％（乾燥量基準）の２以上の単量体（ＤＰ２＋）を有するオリゴマーを含む、請求項４７〜８７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項８９】
組成物が、約８０〜約９０重量パーセント（乾燥量基準）の２以上の単量体の重合度（ＤＰ２＋）を有するオリゴマーを含む、請求項８８記載の組成物。
【請求項９０】
オリゴ糖組成物が２５％未満の単量体を含む、請求項４７〜８９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９１】
オリゴ糖組成物が１５％未満の単量体を含む、請求項４７〜８９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９２】
オリゴ糖組成物が３％未満の単量体を含む、請求項４７〜８９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９３】
オリゴ糖組成物が１％未満の単量体を含む、請求項４７〜８９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９４】
オリゴ糖組成物が３％  ｗ／ｗ未満の不純物を含む、請求項４７〜９３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９５】
オリゴ糖組成物がヒトにおいて実質的に非吸収性である、請求項４７〜９４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９６】
オリゴ糖組成物が最低限度でヒトにより消化可能である、請求項４７〜９５のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９７】
オリゴ糖組成物が１６％〜２４％のデキストロース当量（乾燥量基準）を含む、請求項４７〜９６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９８】
オリゴ糖組成物が１３％〜２７％のデキストロース当量（乾燥量基準）を含む、請求項４７〜９６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９９】
オリゴ糖組成物が少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％の全食物繊維（乾燥量基準）を含む、請求項４７〜９６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１００】
オリゴ糖組成物が６５％〜９５％の全食物繊維（乾燥量基準）を含む、請求項４７〜９６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１０１】
組成物が、検出可能な量の可溶性食物繊維沈殿物（ＳＤＦＰ）、不溶性食物繊維（ＩＤＦ）および／または高分子量食物繊維（ＨＭＷＤＦ）を含有しない、請求項４７〜１００のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１０２】
請求項１〜１０１のいずれか１項記載のオリゴ糖組成物の有効量をヒト対象に投与することを含む、ヒト対象におけるアンモニアレベルを低下させる方法。
【請求項１０３】
アンモニアレベルがヒト対象における血中アンモニアレベルである、請求項１０２記載の方法。
【請求項１０４】
対象が尿素サイクル異常症を有し、またはそれを有すると診断されている、請求項１０２または１０３記載の方法。
【請求項１０５】
対象が小児集団の対象である、請求項１０２〜１０４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０６】
請求項１〜１０１のいずれか１項記載のオリゴ糖組成物の有効量をヒト対象に投与することを含む、高アンモニア血症に関連した疾患もしくは状態を有する又は該疾患もしくは状態を有すると診断されたヒト対象における高アンモニア血症クリーゼの割合を低下させる方法。
【請求項１０７】
対象が尿素サイクル異常症を有し、またはそれを有すると診断されている、請求項１０６記載の方法。
【請求項１０８】
対象が小児集団の対象である、請求項１０６または１０７記載の方法。
【請求項１０９】
対象が肝性脳症（ＨＥ）を有し、またはそれを有すると診断されている、請求項１０６記載の方法。
【請求項１１０】
対象が老人集団の対象である、請求項１０９記載の方法。
【請求項１１１】
対象が肝硬変を有し、またはそれを有すると診断されている、請求項１０９または１１０記載の方法。
【請求項１１１】
対象が感染症を有し、またはそれを有すると診断されている、請求項１０９〜１１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１２】
請求項１〜１０１のいずれか１項記載のオリゴ糖組成物の有効量をヒト対象に投与することを含む、ヒト対象における脳症の治療方法。
【請求項１１３】
対象が肝性脳症（ＨＥ）を有し、またはそれを有すると診断されている、請求項１１２記載の方法。
【請求項１１４】
対象が老人集団の対象である、請求項１１２または１１３記載の方法。
【請求項１１５】
対象が肝硬変を有し、またはそれを有すると診断されている、請求項１１２または１１４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１６】
対象が非代償性肝硬変を有し、またはそれを有すると診断されている、請求項１１２〜１１５のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１７】
対象が感染症を有し、またはそれを有すると診断されている、請求項１１２〜１１６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１８】
請求項１〜１０１のいずれか１項記載のオリゴ糖組成物をヒト対象に投与することを含む、肝硬変を有するヒト対象または肝硬変を有すると診断されたヒト対象の治療方法。
【請求項１１９】
対象が非代償性肝硬変を有し、またはそれを有すると診断されている、請求項１１８記載の方法。
【請求項１２０】
対象が顕性肝性脳症（ＯＨＥ）を有し、またはそれを有すると診断されている、請求項１１８または１１９記載の方法。
【請求項１２１】
対象がラクツロースおよび／またはリファキシミンで治療されたことがあり、または現在治療されている、請求項１０６〜１２０のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２２】
請求項１〜１０１のいずれか１項記載のオリゴ糖組成物の有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）の治療方法。
【請求項１２３】
対象が小児集団の対象である、請求項１２２記載の方法。
【請求項１２４】
（ａ）デキストロース単量体を含むデキストロース調製物を、攪拌条件下、１２０℃〜１４５℃の範囲の温度に加熱すること、
（ｂ）酸性プロトンを含む触媒と共にデキストロース単量体を含むデキストロース調製物を含む反応混合物を生成させること（ここで、デキストロース単量体に対する酸性プロトンのモル比は０．００１〜０．２５の範囲である）、および
（ｃ）反応混合物中のデキストロース単量体の重量パーセントが３０％未満になるまで、反応混合物をその沸点で維持するために十分な熱を反応混合物に伝達させることにより、反応混合物において酸触媒オリゴ糖形成を促進させること（ここで、反応混合物は０．５〜１．５気圧の圧力で維持される）
を含む、複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物の製造方法。
【請求項１２５】
製造方法が更に、
（ｄ）反応混合物の温度を１００℃以下にしながら、水を使用して反応混合物をクエンチすること、および
（ｅ）オリゴ糖を酸触媒から分離すること
を含む、請求項１２４記載の製造方法。
【請求項１２６】
工程（ａ）において、酸触媒が、デキストロースに対する酸性プロトンのモル比が０．００１６〜０．０２２の範囲となる量で存在する、請求項１２４または１２５記載の製造方法。
【請求項１２７】
反応混合物中のデキストロース単量体の重量パーセントが２５％未満になるまで、反応混合物をその沸点で維持する、請求項１２４〜１２６のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項１２８】
反応混合物中のデキストロース単量体の重量パーセントが１３〜１８％になるまで、反応混合物をその沸点で維持する、請求項１２４〜１２７のいずれか１項記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１８年８月２１日付け出願の“ＯＬＩＧＯＳＡＣＣＨＡＲＩＤＥ  ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＯＦ  ＵＳＥ  ＴＨＥＲＥＯＦ  ＦＯＲ  ＲＥＤＵＣＩＮＧ  ＡＭＭＯＮＩＡ  ＬＥＶＥＬＳ”と題する米国仮特許出願第６２／７２０，９２４号、２０１８年１１月３日付け出願の“ＯＬＩＧＯＳＡＣＣＨＡＲＩＤＥ  ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＯＦ  ＵＳＥ  ＴＨＥＲＥＯＦ  ＦＯＲ  ＲＥＤＵＣＩＮＧ  ＡＭＭＯＮＩＡ  ＬＥＶＥＬＳ”と題する米国仮特許出願第６２／７５５，４６１号、２０１８年１１月８日付け出願の“ＯＬＩＧＯＳＡＣＣＨＡＲＩＤＥ  ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＯＦ  ＵＳＥ  ＴＨＥＲＥＯＦ  ＦＯＲ  ＲＥＤＵＣＩＮＧ  ＡＭＭＯＮＩＡ  ＬＥＶＥＬＳ”と題する米国仮特許出願第６２／７５７，７２３号、２０１９年５月８日付け出願の“ＯＬＩＧＯＳＡＣＣＨＡＲＩＤＥ  ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＯＦ  ＵＳＥ  ＴＨＥＲＥＯＦ  ＦＯＲ  ＲＥＤＵＣＩＮＧ  ＡＭＭＯＮＩＡ  ＬＥＶＥＬＳ”と題する米国仮特許出願第６２／８４５，２９５号（これらのそれぞれの全体を参照により本明細書に組み入れることとする）の出願日の利益を主張するものである。
【０００２】
発明の分野
本開示はオリゴ糖組成物およびその用途に関する。
【背景技術】
【０００３】
腸内の約１００兆（１×１０１４）個の微生物細胞の生態系である腸マイクロバイオームは、ヒト細胞が単独では行うことができない機能をもたらす、人体の重要な器官とみなされうる。腸内微生物叢は、栄養素利用、コロニー形成抵抗性、免疫系の発生、宿主代謝の調節、および宿主の生理機能の他の多様な側面に影響を及ぼすことにより、ヒトの健康および疾患において中心的な役割を果たす。宿主の代謝能力に対する腸内微生物叢の寄与の一例は窒素の利用に関するものである。結腸は窒素源に富み、これはムチン、尿素、および宿主の消化を逃れた食事性アミノ酸を含む。幾つかの腸内微生物はこれらの分子からアンモニアを遊離させ、このアンモニアをタンパク質および核酸のような細菌性生体分子内に取り込みうる。しかし、遊離されるアンモニアの量は、しばしば、これらの腸内細菌の代謝要求を上回り、これによりアンモニアが腸内に蓄積する。非酸性条件下、このアンモニアは腸上皮を越えて門脈循環内に拡散し、高アンモニア血症患者におけるアンモニアレベルの上昇に有意に関与する可能性がある。
【発明の概要】
【０００４】
発明の概括
幾つかの態様において、本発明は、例えば疾患を治療し全身健康状態を改善するために、腸マイクロバイオーム器官の機能的成果を誘導するのに有用であるオリゴ糖組成物を利用するマイクロバイオーム代謝療法を提供する。幾つかの実施形態においては、そのようなオリゴ糖組成物は、対象におけるアンモニアレベルを低下させるのに特に有効である。したがって、幾つかの実施形態においては、本明細書に開示されているオリゴ糖組成物は、尿素サイクル異常症（尿素サイクル障害）および肝性脳症のような高アンモニア血症に関連した障害を有する対象を治療するのに有用である。
【０００５】
１つの態様においては、式（Ｉ）：
【化１】
2021534193.tif 000003
【０００６】
（式中、Ｒは、独立して、水素から選択される）ならびに式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）：
【化２】
2021534193.tif 000004
【０００７】
（式中、Ｒは、独立して、前記と同意義を有する）を含む複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物を提供する。
【０００８】
幾つかの実施形態においては、式（Ｉ）：
【化３】
2021534193.tif 000005
【０００９】
（式中、Ｒは、独立して、水素から実質的になる群から選択される）、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）：
【化４】
2021534193.tif 000006
【００１０】
（式中、Ｒは、独立して、前記と同意義を有する）を含む複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物を提供する。
【００１１】
幾つかの態様においては、本発明は、複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物を提供し、該組成物は、シグナル１、３および４を含む多重編集勾配増強（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ−ｅｄｉｔｅｄ  ｇｒａｄｉｅｎｔ−ｅｎｈａｎｃｅｄ）１Ｈ−１３Ｃ異核種単一量子コヒーレンス（ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  ｓｉｎｇｌｅ  ｑｕａｎｔｕｍ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）（ＨＳＱＣ）ＮＭＲスペクトルにより特徴づけられ、前記の各シグナルは以下の中心位置および面積を有する。
【表１】
2021534193.tif 000007
【００１２】
幾つかの実施形態においては、シグナル１、３および４は以下のとおりに定められる。
【表２】
2021534193.tif 000008
【００１３】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物のＮＭＲスペクトルは、シグナル８および９から選択される１〜２個のシグナルを更に含み、前記の各シグナルは以下の中心位置および面積を有する。
【表３】
2021534193.tif 000009
【００１４】
幾つかの実施形態においては、シグナル８および９は以下のとおりに定められる。
【表４】
2021534193.tif 000010
【００１５】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物のＮＭＲスペクトルは、シグナル６、７、１１、１２、１３および１４から選択される１〜６個のシグナルを更に含み、前記の各シグナルは以下の中心位置および面積を有する。
【表５】
2021534193.tif 000011
【００１６】
幾つかの実施形態においては、シグナル６、７、１１、１２、１３および１４は以下のとおりに定められる。
【表６】
2021534193.tif 000012
【００１７】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物のＮＭＲスペクトルは、シグナル２、５および１０から選択される１〜３個のシグナルを更に含む。
【表７】
2021534193.tif 000013
【００１８】
幾つかの実施形態においては、シグナル２、５および１０は以下のとおりに定められる。
【表８】
2021534193.tif 000014
【００１９】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物のＮＭＲスペクトルのシグナル１〜１４は、以下のとおりに定められる１Ｈ積分領域および１３Ｃ積分領域によって更に特徴づけられる。
【表９】
2021534193.tif 000015
【００２０】
幾つかの実施形態においては、以下のパルスシーケンス図、取得パラメータおよび処理パラメータを使用して、コヒーレンス選択のためにエコー−アンチエコースキームを用いる多重編集勾配増強１Ｈ−１３Ｃ異核種単一量子コヒーレンス（ＨＳＱＣ）実験にオリゴ糖組成物のサンプルを付すことにより、オリゴ糖組成物のＮＭＲスペクトルを得る。
【００２１】
パルスシーケンス図
【化５】
2021534193.tif 000016
【００２２】
取得パラメータ
１Ｈキャリア周波数＝４ｐｐｍ
１３Ｃキャリア周波数＝６５ｐｐｍ
取得次元のポイント数＝５９６
取得次元のスペクトル範囲＝６．００ｐｐｍ〜２．０３ｐｐｍ
間接次元のポイント数＝３００個の複合ポイント
間接次元のスペクトル範囲＝１２０ｐｐｍ〜１０ｐｐｍ
リサイクル遅延＝１秒
１結合１Ｈ−１３Ｃ結合定数＝ＪＣＨ＝１４６Ｈｚ
スキャン数＝８
温度＝２９８Ｋ
溶媒＝Ｄ２Ｏ
処理パラメータ
直接次元における窓関数＝ガウシアン・ブロードニング、７．６６Ｈｚ
間接次元における窓関数＝ガウシアン・ブロードニング、２６．４８Ｈｚ
処理＝直接次元における５１２個の複合ポイント、間接次元における１０２４個の複合ポイント。
【００２３】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物のサンプル（ここで、サンプルはＤ２Ｏ中の溶液である）をＨＳＱＣ  ＮＭＲに付すことにより、オリゴ糖組成物のＮＭＲスペクトルを得る。
【００２４】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の重合度（ＤＰ）の平均は約ＤＰ５〜約ＤＰ１１である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の重合度（ＤＰ）の平均は約ＤＰ４〜約ＤＰ８である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の重合度（ＤＰ）の平均は約ＤＰ５〜約ＤＰ６である。
【００２５】
幾つかの実施形態においては、組成物は１６％〜２４％  デキストロース当量（乾燥量基準）を含む。幾つかの実施形態においては、組成物は１３％〜２７％  デキストロース当量（乾燥量基準）を含む。幾つかの実施形態においては、組成物は５０％〜９５％  全食物繊維（乾燥量基準）を含む。幾つかの実施形態においては、組成物は少なくとも６０％、７０％、８０％または９０％  全食物繊維（乾燥量基準）を含む。
【００２６】
幾つかの態様においては、本発明は、複数の単量体（モノマー）ラジカルを各オリゴ糖が含む複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物であり、前記の複数のオリゴ糖はラジカル（１）〜（７）：
（１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．１５〜９．５４モル％に相当する２−グルコピラノースジラジカル、
（２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１８．９４〜２４．６１モル％に相当する６−グルコピラノースジラジカル、
（３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．６３〜８．６４モル％に相当する４−グルコピラノースジラジカル、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．４２モル％未満に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカル、
（５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも１．４１モル％に相当する２，３−グルコピラノーストリラジカル、
（６）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．１１〜１．００モル％に相当する３，４，６−グルコピラノーステトララジカル、および
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７２モル％未満に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカル
から選択される２以上のタイプの単量体ラジカルを含み、ここで、選択されるラジカルは、定められたモル百分率（モル％（ｍｏｌ％））範囲で、複数のオリゴ糖に存在し、単量体ラジカルの前記の２以上のタイプの少なくとも１つは（４）、（５）または（７）である。
【００２７】
幾つかの実施形態においては、単量体ラジカルの前記の２以上のタイプの少なくとも１つは、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．４２モル％未満に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカルである。
【００２８】
幾つかの実施形態においては、単量体ラジカルの前記の２以上のタイプの少なくとも１つは、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．２２モル％未満に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカルである。
【００２９】
幾つかの実施形態においては、単量体ラジカルの前記の２以上のタイプの少なくとも１つは、
（５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも１．４１モル％に相当する２，３−グルコピラノーストリラジカルである。
【００３０】
幾つかの実施形態においては、単量体ラジカルの前記の２以上のタイプの少なくとも１つは、
（５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも１．５４モル％に相当する２，３−グルコピラノーストリラジカルである。
【００３１】
幾つかの実施形態においては、単量体ラジカルの前記の２以上のタイプの少なくとも１つは、
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７２モル％未満に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカルである。
【００３２】
幾つかの実施形態においては、単量体ラジカルの前記の２以上のタイプの少なくとも１つは、
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．６４モル％未満に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカルである。
【００３３】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、ラジカル（１）〜（７）から選択される３つ、４つ、５つ、６つまたは７つのタイプの単量体ラジカルを含む。
【００３４】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、ラジカル（４）、（５）または（７）から選択される単量体ラジカルの２つまたは３つを含む。
【００３５】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、ラジカル（８）〜（１２）：
（８）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの２６．８７〜４６．９８モル％に相当するｔ−グルコピラノースモノラジカル、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．９４〜９．２５モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカル、
（１０）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．６４〜１．４３モル％に相当する２，４−グルコピラノーストリラジカル、
（１１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの５．０９〜９．６６モル％に相当する２，６−グルコピラノース／４，６−グルコピラノーストリラジカル、および
（１２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．０８〜０．８５モル％に相当する２，３，４−グルコピラノースラジカル
から選択される１以上のタイプの単量体ラジカルを更に含む。
【００３６】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、ラジカル（１）〜（７）から選択される３つ、４つ、５つ、６つまたは７つのタイプの単量体ラジカルを含む。
【００３７】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、ラジカル（１３）〜（１５）：
（１３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの２．３５〜６．０１モル％に相当する３，６−グルコピラノーストリラジカル、
（１４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．０６〜０．８６モル％に相当する２，３，６−グルコピラノーステトララジカル、および
（１５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．６１モル％未満に相当する２，３，４，６−グルコピラノースペンタラジカル
から選択される１以上のタイプの単量体ラジカルを更に含む。
【００３８】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、ラジカル（１３）〜（１５）から選択される１つ、２つまたは３つのタイプの単量体ラジカルを含む。
【００３９】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、ラジカル（１）〜（１５）：
（１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．１５〜９．５４モル％に相当する２−グルコピラノースジラジカル、
（２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１８．９４〜２４．６１モル％に相当する６−グルコピラノースジラジカル、
（３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．６３〜８．６４モル％に相当する４−グルコピラノースジラジカル、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．４２モル％未満に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカル、
（５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも０．６４〜１．４３モル％に相当する２，３−グルコピラノーストリラジカル、
（６）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７２モル％未満に相当する３，４，６−グルコピラノーステトララジカル、
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．６１モル％未満に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカル、
（８）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの２６．８７〜４６．９８モル％に相当するｔ−グルコピラノースモノラジカル、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．９４〜９．２５モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカル、
（１０）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．６４〜１．４３モル％に相当する２，４−グルコピラノーストリラジカル、
（１１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの５．０９〜９．６６モル％に相当する２，６−グルコピラノース／４，６−グルコピラノーストリラジカル、
（１２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．０８〜０．８５モル％に相当する２，３，４−グルコピラノースラジカル、
（１３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの２．３５〜６．０１モル％に相当する３，６−グルコピラノーストリラジカル、
（１４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．０６〜０．８６モル％に相当する２，３，６−グルコピラノーステトララジカル、および
（１５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．６１モル％未満に相当する２，３，４，６−グルコピラノースペンタラジカル
を含む。
【００４０】
幾つかの実施形態においては、前記のオリゴ糖は、
２５〜４５モル％のグルコピラノースモノラジカル、
３５〜５５モル％のグルコピラノースジラジカル、
１０〜２５モル％のグルコピラノーストリラジカル、および
０．５〜５モル％のグルコピラノーステトララジカル
を含む。
【００４１】
幾つかの実施形態においては、前記のオリゴ糖は、
３０〜４３モル％のグルコピラノースモノラジカル、
４１〜５０モル％のグルコピラノースジラジカル、
１２〜１９モル％のグルコピラノーストリラジカル、および
０．８〜３モル％のグルコピラノーステトララジカル
を含む。
【００４２】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、複数の単量体ラジカルを各オリゴ糖が含む複数のオリゴ糖を含み、前記の複数のオリゴ糖は、ラジカル（１）〜（７）：
（１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．１５〜９．５４モル％に相当する２−グルコピラノースジラジカル、
（２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも１８．９４モル％に相当する６−グルコピラノースジラジカル、
（３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．６３〜８．７４モル％に相当する４−グルコピラノースジラジカル、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．４２モル％未満に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカル、
（５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．０１〜２．５９モル％に相当する２，３−グルコピラノーストリラジカル、
（６）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．００モル％未満に相当する３，４，６−グルコピラノーステトララジカル、および
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７２モル％未満に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカル
から選択される２以上のタイプの単量体ラジカルを含み、ここで、選択されるラジカルは、定められたモル百分率（モル％（ｍｏｌ％））範囲で、複数のオリゴ糖に存在し、単量体ラジカルの前記の２以上のタイプの少なくとも１つは（４）または（７）である。
【００４３】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、複数の単量体ラジカルを各オリゴ糖が含む複数のオリゴ糖を含み、前記の複数のオリゴ糖は、ラジカル（１）〜（１５）：
（１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．１５〜９．５４モル％に相当する２−グルコピラノースジラジカル、
（２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも１８．９４モル％に相当する６−グルコピラノースジラジカル、
（３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．６３〜８．７４モル％に相当する４−グルコピラノースジラジカル、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．４２モル％未満に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカル、
（５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも１．０１〜２．５９モル％に相当する２，３−グルコピラノーストリラジカル、
（６）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．００モル％未満に相当する３，４，６−グルコピラノーステトララジカル、
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７２モル％未満に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカル、
（８）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの２６．８７〜４６．９８モル％に相当するｔ−グルコピラノースモノラジカル、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも６．９４モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカル、
（１０）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．４３モル％未満に相当する２，４−グルコピラノーストリラジカル、
（１１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの９．６６モル％未満に相当する２，６−グルコピラノース／４，６−グルコピラノーストリラジカル、
（１２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．０７〜０．８５モル％に相当する２，３，４−グルコピラノースラジカル、
（１３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの２．３５〜６．０１モル％に相当する３，６−グルコピラノーストリラジカル、
（１４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．０６〜０．８６モル％に相当する２，３，６−グルコピラノーステトララジカル、および／または
（１５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．６１モル％未満に相当する２，３，４，６−グルコピラノースペンタラジカル
から選択される２以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個）のタイプの単量体ラジカルを含み、ここで、選択されるラジカルは、定められたモル百分率（モル％（ｍｏｌ％））範囲で、複数のオリゴ糖に存在する。
【００４４】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７０モル％未満に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカルを含む。
【００４５】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．５０モル％未満に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカルを含む
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、
（６）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．４０モル％未満に相当する３，４，６−グルコピラノーステトララジカルを含む。
【００４６】
請求項３６〜３９のいずれか１項記載の組成物においては、オリゴ糖組成物は、
（８）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの３０．００〜４０．００モル％に相当するｔ−グルコピラノースモノラジカルを含む。
【００４７】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．９４〜９．２５モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカルを含む。
【００４８】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも９．１０モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカルを含む。
【００４９】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、
（１０）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの１．１０モル％未満に相当する２，４−グルコピラノーストリラジカルを含む。
【００５０】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、
（１１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．００モル％未満に相当する２，６−グルコピラノース／４，６−グルコピラノーストリラジカルを含む。
【００５１】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、
（１５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．１０モル％未満に相当する２，３，４，６−グルコピラノースペンタラジカルを含む。
【００５２】
幾つかの実施形態においては、単量体ラジカルのモル百分率は過メチル化アッセイにより決定され、ここで、過メチル化アッセイは、ガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）の使用を含み、所望により、組成物を含むサンプルは、２０．０分にわたって１７０℃から２４０℃まで４℃／分で加熱しながら、ＧＣ−ＭＳにより分析される。
【００５３】
幾つかの態様においては、本発明は、式（Ｉ）：
【化６】
2021534193.tif 000017
【００５４】
（式中、Ｒは、独立して、水素から選択される）ならびに式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）：
【化７】
2021534193.tif 000018
【００５５】
［ここで、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）におけるＲは、独立して、式（Ｉ）における前記と同意義を有する］を含む複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物であって、該組成物が、
（ａ）酸性プロトンを含む触媒と共にデキストロース調製物を含む反応混合物を生成させること、および
（ｂ）（ａ）におけるローディング前のデキストロース調製物中の全デキストロースに対する、反応混合物により生成される正味の水凝縮物（水縮合物）のモル比が０．３５〜１．０の範囲となるまで、反応混合物をその沸点で維持するために十分な熱を反応混合物に伝達させることにより、反応混合物において酸触媒オリゴ糖形成を促進させること（ここで、反応混合物は０．５〜１．５気圧の圧力で維持される）
を含む製造方法により製造される、オリゴ糖組成物を提供する。
【００５６】
幾つかの実施形態においては、該製造方法は更に、
（ｃ）反応混合物の温度を１００℃以下にしながら、水を使用して反応混合物をクエンチすることを含む。
【００５７】
幾つかの実施形態においては、該製造方法は更に、
（ｄ）オリゴ糖の少なくとも一部を酸触媒から分離することを含む。
【００５８】
幾つかの実施形態においては、酸触媒は、酸性プロトンを含む固体基体である。酸触媒は、表１による１以上の物理的および化学的特性を有する強酸カチオン交換樹脂であることが可能であり、および／または、ここで、該触媒は、３．０ｍｍｏｌ／ｇを超えるスルホン酸部分および１．０ｍｍｏｌ／グラム未満のカチオン部分を含む。幾つかの実施形態においては、該触媒は４５〜５０重量％の名目含水量を有する。
【００５９】
幾つかの実施形態においては、工程（ａ）において、酸触媒は、デキストロースに対する酸性プロトンのモル比が０．００１〜０．２５の範囲となる量で存在する。幾つかの実施形態においては、工程（ａ）において、酸触媒は、デキストロースに対する酸性プロトンのモル比が０．００１６〜０．０２２の範囲となる量で存在する。
【００６０】
幾つかの実施形態においては、工程（ａ）において、デキストロース調製物はデキストロース単量体を含む。幾つかの実施形態においては、工程（ａ）において、デキストロース調製物はデキストロース一水和物または７０ＤＳコーンシロップを含む。
【００６１】
幾つかの実施形態においては、式（Ｉ）を含む複数のオリゴ糖は全オリゴ糖組成物の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％を構成する。幾つかの実施形態においては、式（Ｉ）を含む複数のオリゴ糖は全オリゴ糖組成物の少なくとも９５％を構成する。幾つかの実施形態においては、式（Ｉ）を含む複数のオリゴ糖は全オリゴ糖組成物の少なくとも９８％を構成する。幾つかの実施形態においては、式（Ｉ）を含む複数のオリゴ糖は全オリゴ糖組成物の１００％を構成する。
【００６２】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の単量体の多くとも１％、２％、３％、５％、７％または１０％が式（Ｉ）または式Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃおよびＩｄと異なる。
【００６３】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の単量体の多くとも１％が式（Ｉ）または式Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃおよびＩｄと異なる。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の単量体の多くとも５％が式（Ｉ）または式Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃおよびＩｄと異なる。幾つかの実施形態においては、式（Ｉ）または式Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃおよびＩｄと異なるオリゴ糖組成物の単量体は、誘導体化された又は化学的に変化した（例えば、分解した）糖単位（例えば、無水形態）を含む。
【００６４】
幾つかの実施形態においては、（ａ）におけるローディング前のデキストロース調製物中の全デキストロースに対する、反応混合物により生成される正味の水凝縮物のモル比が０．４０〜０．９０の範囲となるまで、反応混合物をその沸点で維持する。
【００６５】
幾つかの実施形態においては、工程（ｂ）の前に、均質性および均一熱伝達を達成するための適切な条件下、反応混合物の温度を室温から反応混合物の沸点へと徐々に上昇させる。
【００６６】
幾つかの実施形態においては、反応混合物は１％未満のソルビトールを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．１％未満のソルビトールを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は少なくとも９０％、９５％または９９％のデキストロースを含む。
【００６７】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の重合度（ＤＰ）の平均は約ＤＰ４〜約ＤＰ８である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の重合度（ＤＰ）の平均は約ＤＰ５〜約ＤＰ６である。
【００６８】
幾つかの実施形態においては、工程（ｂ）は更に、蒸発により反応混合物から水を除去することを含む。幾つかの実施形態においては、工程（ｃ）において、水は（約６０〜１００℃の温度の）脱イオン水である。幾つかの実施形態においては、工程（ｃ）において、混合物の固化を回避するのに十分な条件下、反応混合物に水を加える。幾つかの実施形態においては、工程（ｄ）において、前記分離は、濾過により触媒を除去することを含む。幾つかの実施形態においては、工程（ｄ）は、濾過前に反応混合物を約８５℃未満に冷却することを含む。
【００６９】
幾つかの実施形態においては、該製造方法は更に、（ｄ）のオリゴ糖組成物を約５〜６５重量％の濃度に脱イオン水で希釈することを含む。幾つかの実施形態においては、該製造方法は更に、工程（ｅ）〜（ｇ）、すなわち、
（ｅ）希釈された組成物をカチオン交換樹脂に通す工程、
（ｆ）希釈された組成物をアニオン交換樹脂に通す工程、および
（ｇ）希釈された組成物を脱色ポリマー樹脂に通す工程
の１以上（例えば、２以上または３つ）を更に含み、ここで、（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）のそれぞれは任意の順序で１回以上行われうる。
【００７０】
幾つかの実施形態においては、組成物は、室温での貯蔵の際の微生物増殖に必要なレベルより低いレベルの総含水量を含む。幾つかの実施形態においては、組成物は２４〜３３重量パーセントの範囲の総含水量を含む。
【００７１】
幾つかの実施形態においては、組成物中のオリゴ糖は８５２〜１４７５の範囲のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有する。幾つかの実施形態においては、組成物中のオリゴ糖は８５５〜１１００の範囲のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有する。幾つかの実施形態においては、組成物中のオリゴ糖は６１２〜９１２の範囲のＭＷｎ（ｇ／ｍｏｌ）を有する。幾つかの実施形態においては、組成物中のオリゴ糖は６１２〜７１０の範囲のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有する。
【００７２】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は２．５〜７．５の範囲のｐＨを有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は２．５〜５．０の範囲のｐＨを有する。
【００７３】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、約７５〜約９５重量％（乾燥量基準）の２以上の単量体（ＤＰ２＋）を有するオリゴマーを含む。幾つかの実施形態においては、組成物は、約８０〜約９０重量パーセント（乾燥量基準）の２以上の単量体の重合度（ＤＰ２＋）を有するオリゴマーを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は２５％未満、１５％未満または３％未満または１％未満の単量体を含む。
【００７４】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は３％  ｗ／ｗ未満の不純物を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物はヒトにおいて実質的に非吸収性である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は最低限度でヒトにより消化可能である。
【００７５】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１６％〜２４％のデキストロース当量（乾燥量基準）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１３％〜２７％のデキストロース当量（乾燥量基準）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％の全食物繊維（乾燥量基準）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は６５％〜９５％の全食物繊維（乾燥量基準）を含む。
【００７６】
幾つかの実施形態においては、組成物は、検出可能な量の可溶性食物繊維沈殿物（ＳＤＦＰ）、不溶性食物繊維（ＩＤＦ）および／または高分子量食物繊維（ＨＭＷＤＦ）を含有しない。
【００７７】
幾つかの態様においては、本発明は、ヒト対象におけるアンモニアレベルを低下させる方法を提供する。幾つかの実施形態においては、ヒト対象におけるアンモニアレベルを低下させる方法は、本明細書に記載されているオリゴ糖組成物の有効量をヒト対象に投与することを含む。
【００７８】
幾つかの実施形態においては、アンモニアレベルはヒト対象における全身アンモニアレベルである。幾つかの実施形態においては、アンモニアレベルは、処置（治療）前のアンモニアレベルと比較して少なくとも２０％低下する。
【００７９】
幾つかの実施形態において、対象は尿素サイクル異常症を有し、またはそれを有すると診断されている。幾つかの実施形態においては、対象は小児集団の対象である。
【００８０】
幾つかの態様においては、本発明は、本明細書に記載されているオリゴ糖組成物の有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）の治療方法を提供する。
【００８１】
幾つかの実施形態においては、対象は小児集団の対象である。幾つかの実施形態においては、ヒト対象は少なくとも２歳である。幾つかの実施形態においては、ヒト対象は少なくとも２月齢である。
【００８２】
幾つかの実施形態においては、ヒト対象は肝性脳症（ＨＥ）を有する。
【００８３】
幾つかの態様においては、本発明は、本明細書に記載されているオリゴ糖をヒト対象に投与することを含む、肝硬変を有するヒト対象または肝硬変を有すると診断されたヒト対象の治療方法を提供する。
【００８４】
幾つかの実施形態においては、対象は非代償性肝硬変を有し、またはそれを有すると診断されている。幾つかの実施形態においては、対象は顕性肝性脳症（ＯＨＥ）を有し、またはそれを有すると診断されている。幾つかの実施形態においては、対象はラクツロースおよび／またはキシファキシンで治療されたことがあり、または現在治療されている。
【００８５】
幾つかの態様においては、本発明は、
（ａ）デキストロース単量体を含むデキストロース調製物を、攪拌条件下、１２０℃〜１４５℃の範囲の温度に加熱すること、
（ｂ）酸性プロトンを含む触媒と共にデキストロース単量体を含むデキストロース調製物を含む反応混合物を生成させること（ここで、デキストロース単量体に対する酸性プロトンのモル比は０．００１〜０．２５の範囲である）、および
（ｃ）反応混合物中のデキストロース単量体の重量パーセントが３０％未満になるまで、反応混合物をその沸点で維持するために十分な熱を反応混合物に伝達させることにより、反応混合物において酸触媒オリゴ糖形成を促進させること（ここで、反応混合物は０．５〜１．５気圧の圧力で維持される）
を含む、複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物の製造方法を提供する。
【００８６】
幾つかの実施形態においては、該製造方法は更に、
（ｄ）反応混合物の温度を１００℃以下にしながら、水を使用して反応混合物をクエンチすること、および
（ｅ）オリゴ糖を酸触媒から分離することを含む。
【００８７】
幾つかの実施形態においては、工程（ａ）において、酸触媒は、デキストロースに対する酸性プロトンのモル比が０．００１６〜０．０２２の範囲となる量で存在する。
【００８８】
幾つかの実施形態においては、反応混合物中のデキストロース単量体の重量パーセントが２５％未満（例えば、２０％未満、１５％未満、１０％未満）になるまで、反応混合物をその沸点で維持する。幾つかの実施形態においては、反応混合物中のデキストロース単量体の重量パーセントが１３〜１８％になるまで、反応混合物をその沸点で維持する。
【００８９】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、（ａ）酸性プロトンを含む触媒と共にデキストロース調製物を含む反応混合物を生成させること、および（ｂ）反応混合物中のデキストロース単量体の重量パーセントが３０％未満になるまで、反応混合物をその沸点で維持するために十分な熱を反応混合物に伝達させることにより、反応混合物において酸触媒オリゴ糖形成を促進させること（ここで、反応混合物は０．５〜１．５気圧の圧力で維持される）を含む製造方法により製造される。
【００９０】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１０％未満のソルビトール、例えば約１０％、８％、約６％、約４％、約２％、約１％のソルビトールまたは約０．１％以下のソルビトールを含む。幾つかの実施形態においては、反応混合物は、９０％を超えるグルコース、例えば約９５％、約９９％または約１００％のグルコースを含む。幾つかの実施形態においては、反応混合物は１０％未満のソルビトールおよび９０％を超えるグルコース、例えば、１％未満のソルビトールおよび９９％を超えるグルコースを含む。
【００９１】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１０％未満のソルビトール、例えば約１０％、８％、約６％、約４％、約２％、約１％のソルビトールまたは約０．１％以下のソルビトールを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１％未満のソルビトール、例えば約０．９％、約０．５％または約０．１％のソルビトールを含む。特定の実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．１％未満のソルビトールを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、９０％を超えるグルコース、例えば約９５％、約９９％または約１００％のグルコースを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１０％未満のソルビトールおよび９０％を超えるグルコース、例えば、１％未満のソルビトールおよび９９％を超えるグルコースを含む。幾つかの実施形態においては、全オリゴ糖の平均重合度は５〜６の範囲である。他の実施形態においては、全オリゴ糖の平均重合度は４〜９の範囲である。
【００９２】
幾つかの実施形態においては、デキストロース調製物はデキストロース一水和物またはコーンシロップ、例えば７０ＤＳコーンシロップを含む。幾つかの実施形態においては、デキストロース調製物の加熱は、均質性および均一熱伝達を達成するための適切な条件下、デキストロース製剤を溶融させること、および／またはデキストロース製剤を加熱することを含む。
【００９３】
幾つかの実施形態においては、触媒は、以下の表に従う物理的および化学的特性を有する強酸カチオン交換樹脂である。
【表１０】
2021534193.tif 000019
【００９４】
幾つかの実施形態においては、触媒は３．０ｍｍｏｌ／ｇのスルホン酸部分および１．０ｍｍｏｌ／グラム未満のカチオン性部分を含む。幾つかの実施形態においては、触媒は４５〜５０重量パーセントの名目含水量を有する。
【００９５】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、均質性および均一熱伝達を達成するための適切な条件下、温度を約１３０℃へと徐々に上昇させることにより製造される。幾つかの実施形態においては、水を蒸発により反応混合物から除去する。幾つかの実施形態においては、溶解固体が９３〜９４重量パーセントとなるように反応混合物を維持する。
【００９６】
幾つかの実施形態においては、水は脱イオン水である。幾つかの実施形態においては、水は約６０〜１００℃の温度を有する。幾つかの実施形態においては、混合物の固化を回避するのに十分な条件下、反応混合物に水を加える。幾つかの実施形態においては、分離は、触媒を濾過により除去することを含む。幾つかの実施形態においては、濾過前に、反応混合物を約８５℃未満に冷却する。
【００９７】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の製造方法は更に、（ｆ）（ｅ）のオリゴ糖組成物を約５〜６５重量％の濃度に例えば脱イオン水で希釈し、希釈された組成物をカチオン交換樹脂に通すこと、（ｇ）希釈された組成物をアニオン交換樹脂に通すこと、および（ｈ）希釈された組成物を脱色ポリマー樹脂に通すことを含む。幾つかの実施形態においては、（ｆ）、（ｇ）および（ｈ）のそれぞれは任意の順序で１回以上行われうる。
【００９８】
幾つかの実施形態においては、組成物は更に、室温での貯蔵の際の微生物増殖に必要なレベルより低いレベルの水を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は２４〜３３重量パーセントの範囲の水を含む。微生物増殖に対処するために水分レベルを制御する方法は、Ｅｒｇｕｎ，Ｒ．ら，“Ｍｏｉｓｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｓｈｅｌｆ  Ｌｉｆｅ  ｉｎ  Ｓｕｇａｒ  Ｃｏｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ”，２０１０，５０：２，１６２−１９２；およびＮＩＲＯＯＭＡＮＤ，Ｆ．ら．“Ｆａｔｅ  ｏｆ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ  ａｎｄ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ｉｎ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｓｗｅｅｔｅｎｅｒｓ”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．６１，Ｎｏ．３，１９９８，ｐ．２９５−２９９（それらのそれぞれの内容の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。
【００９９】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、８５２〜１４７５の範囲のＭＷｗ（重量平均分子量）（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、６１２〜９１２の範囲のＭＷｎ（数平均分子量）（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は３．０〜７．５の範囲のｐＨを有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、８３〜８６重量％の範囲の２以上の単量体（ＤＰ２＋）を有するオリゴマーを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、８０〜９９重量パーセントの範囲の２以上の単量体（ＤＰ２＋）を有するオリゴマーを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物はヒトにおいて実質的に非吸収性である（例えば、オリゴ糖組成物は胃または小腸によって実質的に吸収されない）。
【０１００】
１つの態様においては、本発明は、式（Ｉ）：
【化８】
2021534193.tif 000020
【０１０１】
（式中、各Ｒは、独立して、水素から選択される）ならびに式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）：
【化９】
2021534193.tif 000021
【０１０２】
（式中、各Ｒは、独立して、前記と同意義を有する）のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物を提供し、ここで、
ｉ）オリゴ糖の分岐度（ＤＢ）の平均は０．１〜０．４である；
ｉｉ）オリゴ糖の４５％〜５５％は少なくとも３の重合度（ＤＰ）および１０グリカン単位以下を有する；
ｉｉｉ）オリゴ糖の重合度（ＤＰ）の平均（平均ＤＰ）は約５〜８である；
ｉｖ）組成物中のオリゴ糖に存在するアルファ−グリコシド結合とベータ−グリコシド結合との比は約１：１〜約１．５：１または１：１〜約３：１である；
ｖ）オリゴ糖組成物は２０モル％〜６０モル％の１，６グリコシド結合を含む；
ｖｉ）オリゴ糖組成物は、５モル％〜２５モル％の、１，２グリコシド結合、１，３グリコシド結合および１，４グリコシド結合の少なくとも１つ、２つまたは３つを含む；
ｖｉｉ）オリゴ糖組成物は、２３℃で少なくとも約７０ブリックス（Ｂｒｉｘ）の、水中の最終溶解限度を有する；ならびに
ｖｉｉｉ）オリゴ糖組成物は少なくとも７０％の食物繊維含量を有する。
【０１０３】
もう１つの態様においては、本開示は、本明細書に記載されているオリゴ糖組成物をヒト対象に投与することを含む、ヒト対象におけるアンモニアレベルを低下させる方法に関する。
【０１０４】
幾つかの実施形態においては、アンモニアレベルはヒト対象における全身アンモニアレベルである。幾つかの実施形態においては、アンモニアレベルの低下は血中で測定される。幾つかの実施形態においては、アンモニアレベルの低下は脳脊髄液中のアンモニアレベルの低下を含む。幾つかの実施形態においては、アンモニアレベル（例えば、全身アンモニアレベルまたは血中アンモニアレベル）の低下は、オリゴ糖組成物の投与の前のヒト対象におけるアンモニアレベルと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％または少なくとも約２０％の低下である。幾つかの実施形態においては、アンモニアレベル（例えば、全身性アンモニアレベル）の低下は、健常ヒト対象におけるアンモニアレベルと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％または少なくとも約２０％の低下である。幾つかの実施形態においては、アンモニアレベル（例えば、全身アンモニアレベルまたは血中アンモニアレベル）の低下は、ヒト対象の集団（例えば、健常ヒト対象の集団）における平均アンモニアレベルと比較して少なくとも約５％、１０％、１５％または少なくとも約２０％の低下である。幾つかの実施形態においては、アンモニアレベルの低下は微生物由来アンモニアレベルの低下である。幾つかの実施形態においては、アンモニアレベル［例えば、（例えば腸内の）微生物由来アンモニアレベル］の低下は、オリゴ糖組成物の投与の前のヒト対象におけるアンモニアレベルと比較して少なくとも約１０％、２０％または少なくとも約３０％である。幾つかの実施形態においては、アンモニアレベル［例えば、（例えば腸内の）微生物由来アンモニアレベル］の低下は、健常ヒト対象におけるアンモニアレベルと比較して少なくとも約１０％、２０％または少なくとも約３０％である。幾つかの実施形態においては、アンモニアレベル［例えば、（例えば腸内の）微生物由来アンモニアレベル］の低下は、ヒト対象の集団（例えば、健常ヒト対象の集団）におけるアンモニアレベルと比較して少なくとも約１０％、２０％または少なくとも約３０％である。
【０１０５】
もう１つの態様においては、本開示は、本明細書に記載されているオリゴ糖組成物を対象に投与することを含む、対象、例えばヒト対象における尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）［例えば、カルバミルリン酸シンテターゼＩ（ＣＰＳＩ）欠損症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠損症、アルギニノコハク酸シンテターゼ（ＡＳＳ）欠損症、アルギニノコハク酸リアーゼ（ＡＳＬ）欠損症、Ｎ−アセチルグルタミン酸シンテターゼ（ＮＡＧＳ）欠損症、アルギナーゼ欠損症、オルニチントランスロカーゼ欠損症（ＨＨＨ）またはシトリン欠損症（ＣＩＴ  ＩＩ）］の治療方法に関する。幾つかの実施形態においては、ＵＣＤはＮ−アセチルグルタミン酸シンテターゼ（ＮＡＧＳ）欠損症を含まない。
【０１０６】
幾つかの実施形態においては、ＵＣＤを有する対象へのオリゴ糖組成物の投与は、［例えば、オリゴ糖組成物が投与されていない対象（同一対象を含む）と比較した場合に］高アンモニア血症クリーゼのリスク、重症度および／または頻度を低減する。幾つかの実施形態においては、対象は低タンパク質または他の補足食を摂取している。幾つかの実施形態においては、対象はグリセロールフェニルブチレート（例えば、ラビッチ（Ｒａｖｉｃｔｉ））（または類似した窒素スカベンジャー療法）で同時に治療される。幾つかの実施形態においては、対象は低タンパク質または他の補足食を摂取しており、グリセロールフェニルブチレート（例えば、ラビッチ（Ｒａｖｉｃｔｉ））（または類似した窒素スカベンジャー療法）で同時に治療されている。幾つかの実施形態においては、対象は窒素スカベンジャー（例えば、グリセロールフェニルブチレート）での治療に応答しない。幾つかの実施形態においては、対象は乳児、小児または若年成体ある。幾つかの実施形態においては、対象は（未だ）肝移植を受けていない。幾つかの実施形態においては、対象は尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）［例えば、カルバミルリン酸シンテターゼＩ（ＣＰＳＩ）欠損症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠損症、アルギニノコハク酸シンテターゼ（ＡＳＳ）欠損症、アルギニノコハク酸リアーゼ（ＡＳＬ）欠損症、Ｎ−アセチルグルタミン酸シンテターゼ（ＮＡＧＳ）欠損症またはアルギナーゼ欠損症、オルニチントランスロカーゼ欠損症（ＨＨＨ）またはシトリン欠損症（ＣＩＴ  ＩＩ）］を有する。幾つかの実施形態においては、対象におけるＵＣＤ、例えば慢性ＵＣＤは、本明細書に記載されているオリゴ糖組成物を少なくとも１年、例えば１年、５年、１０年、２０年、５０年または生涯にわたって投与することにより治療される。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、実施例３および４に記載されているとおりに使用されうる。
【０１０７】
幾つかの実施形態においては、ヒト対象は少なくとも２歳である。幾つかの実施形態においては、ヒト対象は少なくとも２月齢である。
【０１０８】
幾つかの実施形態においては、窒素スカベンジャー療法をヒト対象に投与する。幾つかの実施形態においては、制限された食事（例えば、タンパク質摂取に対する食事制限）をヒト対象に投与する。幾つかの実施形態においては、タンパク質摂取に対するオリゴ糖食事制限の適用（投与）は緩和されうる（例えば、アミノ酸摂取の回数または量が増加される）。幾つかの実施形態においては、対象は、［例えば、例えばｉ）対象の循環におけるアンモニアの平均レベル、および／またはｉｉ）対象が経験するアンモニアクリーゼの回数により決定されるとおりに］窒素スカベンジャー療法で低制御される。幾つかの実施形態においては、対象は、正常の上限を持続的に０．５倍上回る全身アンモニアレベルを示す。
【０１０９】
幾つかの実施形態においては、以下のうちの一方または両方が低減する：ｉ）１年間にわたるアンモニアクリーゼ（少なくとも１つ、２つまたは少なくとも３つのクリーゼによるもの）の回数、ｉｉ）神経発達遅延および／または認知機能低下を含む、（例えば、オリゴ糖組成物の投与を受けていない適切な対照群と比較した場合の）アンモニアクリーゼによる合併症の重症度。幾つかの実施形態においては、複数のアンモニアクリーゼの間の期間が、（例えば、オリゴ糖の投与を受けていない適切な対照群と比較して）例えば少なくとも１５％、３０％、６０％、１００％または２００％増加する。
【０１１０】
もう１つの態様においては、本開示は、肝性脳症（ＨＥ）［例えば、顕性ＨＥ（ＯＨＥ）または潜在性（ミニマル）ＨＥ（ＭＨＥ）］の治療方法に関する。
【０１１１】
幾つかの実施形態においては、肝硬変を有するヒト対象または肝硬変を有すると診断されたヒト対象の治療方法を提供する。幾つかの実施形態においては、該方法は、本明細書に開示されているオリゴ糖組成物をヒト対象に投与することを含む。幾つかの実施形態においては、対象は非代償性肝硬変を有し、またはそれを有すると診断されている。幾つかの実施形態においては、対象は顕性肝性脳症（ＯＨＥ）を有し、またはそれを有すると診断されている。幾つかの実施形態においては、対象は、ラクツロース（ｌａｃｔｕｌｏｓｅ）および／またはキシファキシン（Ｘｉｆａｘｉｎ）で治療されたことがあり、または現在治療されている。幾つかの実施形態においては、対象は、１以上の神経精神医学的試験および／または先発肝疾患の診断に基づいて、そのような治療から利益を得る、またはそのような治療のための候補であると（例えば、医師により）決定されている。
【０１１２】
幾つかの実施形態においては、ＨＥを有する対象へのオリゴ糖組成物の投与は、例えばオリゴ糖組成物の投与を受けていない対象（同一対象を含む）と比較して、ＨＥのリスクおよび／または再発（例えば、ＨＥの重症度および／または頻度）を低減する。幾つかの実施形態においては、対象をラクツロースで同時に治療する。幾つかの実施形態においては、対象をリファキシミン（ｒｉｆａｘｉｍｉｎ）で同時に治療する。幾つかの実施形態においては、対象はオリゴ糖組成物の投与の前にラクツロースで治療されている。幾つかの実施形態においては、対象はオリゴ糖組成物の投与の前にリファキシミンで治療されている。幾つかの実施形態においては、対象はオリゴ糖組成物の投与の前にラクツロースおよびリファキシミンで治療されている。幾つかの実施形態においては、対象は顕性肝性脳症（ＯＨＥ）を有し、またはそれを有すると診断されている。幾つかの実施形態においては、対象は（例えば、オリゴ糖組成物の投与の前に）ＨＥに対して（未だ）治療されていない。幾つかの実施形態においては、対象は潜在性肝性脳症（ＭＨＥ）を有し、幾つかの実施形態においては、対象は（例えば、ＯＨＥ症状に関して）ほとんど無症候性である。
【０１１３】
幾つかの実施形態においては、高アンモニア血症を有する対象は肝性脳症（ＨＥ）に罹患している。幾つかの実施形態においては、高アンモニア血症は、少なくとも部分的に、アルコールおよび／またはアルコール性肝硬変、自己免疫性肝炎、慢性Ｂ型肝炎または慢性Ｃ型肝炎、脂肪肝、Ｃ型肝炎、Ｃ型肝炎およびアルコール、鉄過剰症および脂肪症、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎およびＢ型肝炎、または原発性胆道肝硬変により引き起こされ、またはそれらに関連している。幾つかの実施形態においては、高アンモニア血症を有する対象は以前にラクツロースまたはリファキシミンで治療または投与されている。幾つかの実施形態においては、対象は成人（例えば、２０〜６４歳）または高齢成人（例えば、６５歳以上）である。幾つかの実施形態においては、対象におけるＨＥ、例えば慢性ＨＥは、少なくとも１年の持続期間（例えば、１年、５年、１０年、２０年、５０年または生涯にわたる持続期間）にわたって、本明細書に記載されているオリゴ糖組成物を投与することにより治療される。幾つかの実施形態においては、ＨＥは顕性肝性脳症（ＯＨＥ）である。幾つかの実施形態においては、ＨＥは潜在性肝性脳症（ＭＨＥ）である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、実施例２に記載されているとおりに使用されうる。
【０１１４】
もう１つの態様においては、本開示は、最低限度でヒトにより消化可能である複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物の製造方法に関する。幾つかの実施形態においては、該製造方法は、（ａ）デキストロース単量体を含むデキストロース調製物を、攪拌条件下、１２０℃〜１３５℃の範囲の温度へと加熱し、（ｂ）デキストロース単量体に対する酸性プロトンのモル比が０．０１６〜０．０２２の範囲となるような量で、酸性プロトンを含む固体触媒をデキストロース調製物にローディングし、それにより反応混合物を生成させ、（ｃ）組成物中のデキストロース単量体の重量パーセントが１４〜１７の範囲になるまで、酸触媒オリゴ糖形成を促進させる条件下、１２０℃〜１３５℃の範囲の温度で大気圧で反応混合物を維持し、（ｄ）反応混合物の温度を１００℃以下にしながら、水を使用して反応混合物をクエンチし、所望により、（ｅ）オリゴ糖を酸触媒から分離し、それによりオリゴ糖組成物を得ることを含む。
【０１１５】
幾つかの実施形態においては、本発明は、式（Ｉ）：
【化１０】
2021534193.tif 000022
【０１１６】
（式中、各Ｒは、独立して、水素から選択される）ならびに式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）：
【化１１】
2021534193.tif 000023
【０１１７】
（式中、各Ｒは、独立して、前記と同意義を有する）を含む、ヒトにおいて最低限度で消化可能である複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物を提供する。
【０１１８】
他の実施形態においては、オリゴ糖組成物は、（ａ）デキストロース単量体を含むデキストロース調製物を、例えば攪拌条件下、１２０℃〜１３５℃の範囲の温度へと加熱し、（ｂ）例えばデキストロース単量体に対する酸性プロトンのモル比が０．０１６〜０．０２２の範囲となるような量で、酸性プロトンを含む固体触媒をデキストロース調製物にローディングし、それにより反応混合物を生成させ、（ｃ）組成物中のデキストロース単量体の重量パーセントが１４〜１７の範囲になるまで、酸触媒オリゴ糖形成を促進させる条件下、１２０℃〜１３５℃の範囲の温度で大気圧で反応混合物を維持し、（ｄ）反応混合物の温度を１００℃以下にしながら、水を使用して反応混合物をクエンチし、所望により、（ｅ）オリゴ糖を酸触媒から分離し、それによりオリゴ糖組成物を得ることを含む製造方法により製造される。
【０１１９】
他の実施形態においては、該製造方法は、（ａ）デキストロース単量体を含むデキストロース調製物を、攪拌条件下、１２０℃〜１３５℃の範囲の温度へと加熱し、（ｂ）デキストロース単量体に対する酸性プロトンのモル比が０．０１６〜０．０２２の範囲となるような量で、酸性プロトンを含む固体触媒をデキストロース調製物にローディングし、それにより反応混合物を生成させ、（ｃ）組成物中のデキストロース単量体の重量パーセントが１４〜１７の範囲になるまで、酸触媒オリゴ糖形成を促進させる条件下、反応混合物を０．５〜１．５気圧の範囲の圧力でその沸点で維持し、（ｄ）反応混合物の温度を１００℃以下にしながら、水を使用して反応混合物をクエンチし、所望により、（ｅ）オリゴ糖を酸触媒から分離し、それによりオリゴ糖組成物を得ることを含む。
【図面の簡単な説明】
【０１２０】
【図１】図１Ａ〜１Ｂは、糞便スラリーを種々のオリゴ糖組成物と共にインキュベートした場合のエクスビボアンモニア減少アッセイにおけるアンモニア減少の結果（水対照に対して正規化されている）を示す非限定的なグラフを示す。図１Ａは、陰性対照（水）に対して正規化された、アンモニアレベルの調節における有効性に基づくオリゴ糖組成物の順位を示すグラフである。矢印は陰性対照（水）、および選択されたオリゴ糖組成物を示す。図１Ｂは、陰性対照（水）に対して正規化されたアンモニアレベルの棒グラフを示す。
【図２】図２は、オリゴ糖組成物の消費に応答した患者の忍容性のグラフを示す。図２は、種々の摂取用量レベルにおいて下痢を報告した患者の数を示す［１群当たり１２名の患者のうち：マルトデキストリン（プラセボ）、選択されたオリゴ糖組成物および陽性対照繊維］。
【図３】図３Ａ〜３Ｂは、選択されたオリゴ糖組成物と共に患者からの糞便サンプルをインキュベートした場合のエクスビボアンモニア減少アッセイにおけるアンモニア減少（水対照に対して正規化されている）を示すグラフを示す。図３Ａは、尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）患者からのサンプルにおける、選択されたオリゴ糖組成物によるアンモニアの減少を示すグラフである。図３Ｂは、肝障害患者からのサンプルにおける、選択されたオリゴ糖組成物によるアンモニアの減少を示すグラフである。
【図４】図４は未修飾オリゴ糖組成物のＳＥＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムと、実施例９に記載されているとおりにアミンカラムフラッシュクロマトグラフィーによって脱単量体化されたオリゴ糖組成物のＳＥＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムとの重ね合わせを示す。
【図５】図５は、実施例１３における使用のための標準グリカンのＳＥＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムの重ね合わせを示す。
【０１２１】
発明の詳細な説明
本開示の幾つかの態様は、対象、例えばヒト対象におけるアンモニアレベルを低下させるのに有効であるオリゴ糖組成物に関する。したがって、幾つかの実施形態においては、本明細書に開示されているオリゴ糖組成物は、例えば尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）のような高アンモニア血症に関連した障害を有する対象を治療するのに有用である。幾つかの実施形態においては、本明細書に開示されているオリゴ糖組成物は、例えば肝性脳症［ＨＥ、例えば潜在性ＨＥ（ＭＨＥ）または顕性ＨＥ（ＯＨＥ）］のような高アンモニア血症に関連した別の障害を有する対象を治療するのに有用である。
【０１２２】
本開示の幾つかの態様は、対象におけるアンモニアのレベルを調節しうる、例えば低下させうるオリゴ糖組成物を特定するために行った広範なスクリーニング実施の結果に基づく。何百個もの一意的（ユニーク）オリゴ糖組成物をアンモニアレベルに対するそれらの効果に関して分析した。スクリーニングにおいて調べたオリゴ糖組成物は、種々の糖単量体、例えばデキストロース単量体、キシロース単量体などを使用して、種々の反応温度を含む条件下、種々の期間にわたって、および／または種々の触媒条件の存在下で製造された。
【０１２３】
このスクリーニング実施から、アンモニアレベルを低下させるのに、スクリーニングにおいて調べた比較組成物よりも有意に有効であった、アンモニアレベルの非常に有効なモジュレーターとして、選択されたオリゴ糖組成物を特定した（実施例１）。更なる研究において、該オリゴ糖組成物はまた、健常成人におけるプラセボ対照試験で安全かつ高忍容性であることが判明した（実施例２）。したがって、幾つかの実施形態においては、このオリゴ糖組成物は、尿素サイクル異常症および肝性脳症のような高アンモニア血症に関連した障害を有する対象を治療するのに特に有用である。
【０１２４】
用語の定義の説明を含む本開示の更なる態様を以下に示す。
【０１２５】
Ｉ．定義
攪拌条件：本明細書中で用いる「撹拌条件」なる語は、固体（例えば、固体触媒）の分散、熱伝達の均一性または他の類似パラメータに関する混合物（例えば、デキストロース調製物を含む反応混合物）の実質的に均一または均質な状態を促進または維持させる条件を指す。攪拌条件は、一般に、反応混合物の攪拌、振とうおよび／または混合を含む。幾つかの実施形態においては、攪拌条件は溶液中への気体または他の液体の添加を含みうる。幾つかの実施形態においては、攪拌条件は、触媒、例えば酸触媒の実質的に均一または均質な分布を維持させるために用いられる。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物を合成するために、均質性および均一熱伝達を達成するための適切な条件下、デキストロース調製物を加熱する。
【０１２６】
約：関心のある１以上の値に適用される、本明細書中で用いる「約」または「おおよそ」なる語は、示されている参照値に類似した値を指す。特定の実施形態においては、「約」または「おおよそ」なる語は、特に明記されていない限り又は文脈から明らかでない限り、示されている基準値のいずれかの方向（その上下）への１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ未満の範囲内に含まれる値の範囲を指す（そのような数値が、可能な値の１００％を超える場合は除かれる）。
【０１２７】
デキストロース単量体：本明細書中で用いる「デキストロース単量体」なる語は、Ｄ−グルコースとしても公知である、グルコース単量体のＤ−異性体を指す。
【０１２８】
デキストロース調製物：本明細書中で用いる「デキストロース調製物」なる語は、デキストロースを構成する２以上の糖単位を含む調製物を指す。幾つかの実施形態においては、デキストロースを構成する糖単位はデキストロース単量体である。幾つかの実施形態においては、デキストロース調製物はデキストロース一水和物を含む。幾つかの実施形態においては、デキストロース調製物はデキストロース一水和物を含む。幾つかの実施形態においては、デキストロース調製物は７０ＤＳコーンシロップを含む。幾つかの実施形態においては、デキストロース調製物は、デンプン加水分解物、例えばコーンシロップ［例えば、２０％を超えるデキストロース当量（ＤＥ）の還元糖含量を有するコーンシロップ］またはマルトデキストリン（例えば、２０％  ＤＥ未満の還元糖含量を有するマルトデキストリン）を含む。幾つかの実施形態においては、デキストロース調製物は、固体、例えば、粉末またはシロップ、例えば、７０％を超える固体を含む液体でありうる。幾つかの実施形態においては、デキストロース単量体は優良製造規範（ＧＭＰ）条件に準拠している。
【０１２９】
有効量：本明細書中で用いる「有効量」なる語は、例えば対象または患者において、生物学的応答を誘発するのに必要かつ十分であるオリゴ糖組成物の投与量または投与濃度を指す。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の有効量は、対象における酵素の活性またはレベルを調節（モジュレーション）することが可能であり、例えば増強または低減することが可能である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の有効量は代謝産物のプロセシング（加工）を調節することが可能であり、例えば増強または低減することが可能である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の有効量は少なくとも１つの微生物種の濃度または数を調節することが可能であり、例えば増強または低減することが可能である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の有効量は対象における高アンモニア血症に関連した疾患の症状（例えば、症状の重症度または数）を調節することが可能であり、例えば低減することが可能である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の有効量は対象における高アンモニア血症に関連した疾患を治療することが可能である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の有効量は対象における尿素サイクル異常症に関連した症状（例えば、症状の重症度または数）を調節することが可能であり、例えば低減することが可能である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の有効量は対象における尿素サイクル異常症を治療することが可能である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の有効量は対象における肝性脳症に関連した症状（例えば、症状の重症度または数）を調節することが可能であり、例えば低減することが可能である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の有効量は対象における肝性脳症を治療することが可能である。
【０１３０】
肝性脳症（ＨＥ）：本明細書中で用いる「肝性脳症（ＨＥ）」は、進行した肝疾患の結果として生じる、またはアンモニアのような毒性物質を肝臓が血液から除去できない場合に生じる複数の有害な神経学的症状を含む疾患のクラスを指す。幾つかの実施形態においては、ＨＥは肝硬変の結果として、または肝硬変に関連して生じる。幾つかの実施形態においては、肝性脳症を有する対象は、健常対象と比較して上昇したアンモニアレベルを有する。幾つかの実施形態においては、肝性脳症を有する対象は軽度ＨＥ、重度ＨＥまたは顕性ＨＥを有しうる。ＨＥの標準治療はラクツロース、ラクチトールおよび抗生物質（例えば、リファキシミンまたはネオマイシン）を含む。治療は食事改善およびプロバイオティクスをも含みうる。治療効果は、前記症状の解消（例えば、血清アンモニアレベルの低下）、ＨＥの将来のエピソードの発生率の低下、またはＨＥのリスクを有する対象においては、ＨＥの初期エピソードの発生の減少により評価されうる。幾つかの実施形態においては、長期的な高アンモニア血症または高いピークアンモニアを有する患者、特に肝障害を有する患者（例えば、肝硬変を有する患者、例えば、高齢患者）は、重度および慢性の神経学的病態、例えば重度知的障害、日常活動に影響を及ぼす実行機能における欠陥、例えば錯乱、健忘症、不安もしくは興奮、人格もしくは行動の急変、睡眠パターンの変化、見当識障害、甘い若しくはカビ臭い息、不明瞭発語および／または運動機能制御困難に関連した肝性脳症（ＨＥ）を発生しうる。
【０１３１】
高アンモニア血症：本明細書中で用いる「高アンモニア血症」なる語は、アンモニアのレベルの上昇に関連した、対象（例えば、ヒト対象）における状態を指す。一般に、高アンモニア血症を有する対象は循環中アンモニア、例えば血中アンモニアのレベルの上昇を示す。幾つかの実施形態においては、高アンモニア血症の持続時間および重症度は脳損傷と正に相関する。幾つかの実施形態においては、長期的な高アンモニア血症または高いピークアンモニアを有する患者、特に小児患者は、重度および慢性の神経学的病態、例えば発達遅延、重度知的障害、日常活動に影響を及ぼす実行機能における欠陥、脳性麻痺および発作性障害を発生しうる。
【０１３２】
オリゴ糖：本明細書中で用いる「オリゴ糖」なる語（文脈によっては「グリカン」なる語と互換的に用いられうる）は、グリコシド結合によって互いに連結された少なくとも２個の単糖（例えば、デキストロース単量体）を含む糖分子［少なくとも２の重合度（ＤＰ）（例えば、ＤＰ２＋）を有する］を指す。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖は、グリコシド結合により連結された少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個または少なくとも１０個の単糖サブユニットを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖は、グリコシド結合により連結された１０〜２５個、２０〜５０個、４０〜８０個、７５〜１００個、１００〜１５０個の範囲の単糖または少なくとも１００個の単糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖は少なくとも１つの１，２；１，３；１，４および／または１，６グリコシド結合を含む。オリゴ糖は直鎖状または分枝状でありうる。オリゴ糖は、アルファ配置である１以上のグリコシド結合および／またはベータ配置である１以上のグリコシド結合を有しうる。
【０１３３】
医薬組成物：本明細書中で用いる「医薬組成物」は、疾患の緩和、治療もしくは予防における薬理活性もしくは他の直接的作用を有する組成物、および／または最終的な剤形もしくはその製剤を指し、ヒトにおいて使用される。医薬組成物または医薬製剤は、典型的には、優良製造規範（ＧＭＰ）条件下で製造される。医薬組成物または製剤は無菌性または非無菌性でありうる。非無菌性の場合、そのような医薬組成物または製剤は、典型的には、米国薬局方（ＵＳＰ）または欧州薬局方（ＥＰ）に記載されている、非無菌性医薬品に関する微生物学的な仕様および基準を満たしている。本明細書に記載されている任意のオリゴ糖組成物は医薬組成物として製剤化（処方）されうる。
【０１３４】
対象：本明細書中で用いる「対象」なる語はヒト対象または患者を指す。対象には、新生児（早産児、満期産児）、１歳までの乳児、幼児（例えば、１歳〜１２歳）、１０代の者（例えば、１３〜１９歳）、成人（例えば、２０〜６４歳）および高齢者（６５歳以上）が含まれうる。幾つかの実施形態においては、対象は小児集団またはその亜集団、例えば新生児（出生時〜１月齢）、乳児（１月齢〜２歳）、発育中の小児（２〜１２歳）および青年（１２〜１６歳）の対象である。
【０１３５】
治療および治療する：本明細書中で用いる「治療する」および「治療」なる語は、症状の重症度および／もしくは頻度の低減をもたらすように、ならびに／または症状および／もしくはその根本原因を排除するように、ならびに／または損傷の改善もしくは修復を促進させるように、ならびに／または個々の有害な状態、障害もしくは疾患に罹患し易い、または該状態、障害もしくは疾患を発生していると疑われる、またはそれらを発生するリスクを有する無症候性対象における有害な状態、障害もしくは疾患を予防するように、対象（例えば、有害な状態、障害または疾患に罹患している無症候性対象）に組成物を投与することを指す。
【０１３６】
尿素サイクル異常症：本明細書中で用いる「尿素サイクル異常症」なる語は、尿素サイクルにおける１以上の酵素の欠損をもたらす突然変異により引き起こされる遺伝病の一群を指す。幾つかの実施形態においては、そのような酵素は、一般に、血流からのアンモニアを除去をもたらす。例えば、尿素サイクルは、一般に、末梢（筋肉）および経腸（タンパク質摂取）由来の窒素を排泄のために尿素に変換する一連の反応を含む。幾つかの実施形態においては、この代謝経路に関与する酵素における遺伝的欠損はアンモニア解毒／アルギニン合成の種々の機能不全を引き起こす。幾つかの実施形態においては、尿素サイクルにおける欠損は、脳浮腫、神経学的損傷、呼吸性アルカローシス、昏睡、そして時には死を引き起こしうる、アンモニアレベルが上昇した代謝状態（高アンモニア血症）の代謝状態をもたらす。疾患の重症度は、酵素／トランスポーターにおける欠損のレベル、尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）亜型およびその他の要因によって有意に変動する。幾つかの実施形態においては、ＵＣＤの発症には新生児性および遅発性の２つのタイプが存在する。症例の６９％以上は遅発性であり、これは、それらが新生児期後に発生することを意味する。症例の５０％以上は０〜１８歳の米国の小児集団で発生している。
【０１３７】
ＩＩ．オリゴ糖組成物
本発明は、オリゴ糖組成物（例えば、グリカンポリマー）、およびヒト対象におけるアンモニアレベルの調節のための、および尿素サイクル異常症の治療のための、それらの使用方法を提供する。
【０１３８】
１つの態様においては、本発明は、式（Ｉ）：
【化１２】
2021534193.tif 000024
【０１３９】
（式中、各Ｒは、独立して、水素から選択される）ならびに式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）：
【化１３】
2021534193.tif 000025
【０１４０】
（式中、各Ｒは、独立して、前記と同意義を有する）を含む複数のオリゴ糖（例えば、最低限度でヒトにより消化可能である複数のオリゴ糖）を含むオリゴ糖組成物を提供する。
【０１４１】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖は最低限度でヒトにより消化可能である（例えば、ヒト細胞により、またはヒト酵素の酵素作用により破壊も触媒もされない）。
【０１４２】
オリゴ糖組成物の製造
オリゴ糖組成物を含む製剤は、例えばＷＯ  ２０１９／０９０１８１，ＭＥＴＨＯＤＳ  ＯＦ  ＰＲＯＤＵＣＩＮＧ  ＧＬＹＣＡＮ  ＰＯＬＹＭＥＲＳに記載されているとおり、非酵素触媒を使用して製造されうる。幾つかの場合には、オリゴ糖組成物は、ＷＯ  ２０１２／１１８７６７，“ＰＯＬＹＭＥＲＩＣ  ＡＣＩＤ  ＣＡＴＡＬＹＳＴＳ  ＡＮＤ  ＵＳＥＳ  ＴＨＥＲＥＯＦ”に記載されているポリマー触媒を使用して、または他の適切な方法、例えばＷＯ  ２０１６／００７７７８，“ＯＬＩＧＯＳＡＣＣＨＡＲＩＤＥ  ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＦＯＲ  ＰＲＯＤＵＣＩＮＧ  ＴＨＥＲＥＯＦ”（それらのそれぞれの全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている方法により製造されうる。他の酸触媒（例えば、固体触媒）も使用されうる。本明細書に記載されているポリマー性および固体担持触媒の製造方法はＷＯ  ２０１４／０３１９５６，“ＰＯＬＹＭＥＲＩＣ  ＡＮＤ  ＳＯＬＩＤ−ＳＵＰＰＯＲＴＥＤ  ＣＡＴＡＬＹＳＴＳ，ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＯＦ  ＤＩＧＥＳＴＩＮＧ  ＣＥＬＬＵＬＯＳＩＣ  ＭＡＴＥＲＩＡＬＳ  ＵＳＩＮＧ  ＳＵＣＨ  ＣＡＴＡＬＹＳＴＳ，”（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）において見出されうる。
【０１４３】
幾つかの実施形態においては、そのようなオリゴ糖組成物は、まず、デキストロース（例えば、デキストロース単量体または単糖）を含むデキストロース調製物を約１２０℃〜約１３５℃、例えば１２０℃〜１３０℃、１２５℃〜１３０℃、１２５℃〜１３５℃、１２８℃〜１３２℃、１３０℃〜１３３℃、１３０℃〜１３５℃または１３２℃〜１３５℃の範囲の温度に加熱することを含む製造方法により製造される。幾つかの実施形態においては、デキストロース単量体を含むデキストロース調製物を１２０℃、１２１℃、１２２℃、１２３℃、１２４℃、１２５℃、１２６℃、１２７℃、１２８℃、１２９℃、１３０℃、１３１℃、１３２℃、１３３℃、１３４℃または１３５℃の温度に加熱する。加熱は攪拌条件下で行われうる。
【０１４４】
デキストロース調製物に（例えば、加熱中または加熱後に）、酸性プロトンを含む触媒を加えて、デキストロース単位（例えば、デキストロース単量体）間の１以上のグリコシド結合の形成を促進させ、それにより、オリゴ糖組成物を得る。適切な触媒は酸性単量体を含み、所望により、ここで、各酸性単量体は少なくとも１つのブレンステッド−ローリー酸を含有する。典型的には、触媒は、デキストロース単量体に対する酸性プロトンのモル比が０．００１〜０．２５、例えば、０．００１〜０．１、０．０１〜０．１、０．００１〜０．０８、０．０１〜０．０５、０．０１６〜０．０２２、０．０５〜０．１または０．０５〜０．２の範囲となる量で加える。幾つかの実施形態においては、触媒は、３．０ｍｍｏｌ／ｇを超えるスルホン酸部分および１．０ｍｍｏｌ／グラム未満のカチオン性部分を含む。幾つかの実施形態においては、触媒は４５〜５０重量パーセントの名目含水量を有する。
【０１４５】
幾つかの実施形態においては、触媒はアルカリ性または酸性触媒、触媒樹脂または金属触媒でありうる。幾つかの実施形態においては、触媒は有機酸、無機酸または無水物である。幾つかの実施形態においては、触媒は均一酸触媒である。幾つかの実施形態においては、触媒は不均一酸触媒である。幾つかの実施形態においては、触媒は酵素ではない。
【０１４６】
本明細書に記載されているオリゴ糖を製造するために使用されうる酸触媒の非限定的な例には以下のものが含まれる：アジピン酸、酢酸、クエン酸、フマル酸、グルコン酸、イタコン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、テレフタル酸、塩酸、硫酸、亜硫酸、チオ硫酸、ジチオン酸、ピロ硫酸、セレン酸、亜セレン酸、硝酸、リン酸、亜リン酸、次亜リン酸、ピロリン酸、ポリリン酸、次リン酸、ホウ酸、過塩素酸、次亜塩素酸、臭化水素酸。幾つかの実施形態においては、酸触媒は酸性アルカリ金属、または無機酸のアルカリ土類金属塩である。
【０１４７】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物を製造するために使用される触媒は固体酸性触媒、例えば固体担持または樹脂結合酸性触媒である。幾つかの実施形態においては、グリカンポリマー調製物を調製するために使用される触媒は固体酸触媒（例えば、粘土鉱物、例えば、モンタイオリロナイト、ベントナイト、カオリナイトまたはカチオン交換ゼオライトおよび粘土、ならびに／またはそれらの硫酸化もしくは酸性化形態）、ゼオライト、アルミナ、シリコ−アルミノ−ホスファート、ヘテロポリオキソメタラート、金属酸化物および硫化物（ＡＬＡおよびＺｎＳ）、金属塩（ＭｇＳＯ４）、混合酸化物（ＳｉＯ２−Ａｌ２Ｏ３）、スルファート促進性金属酸化物および混合酸化物（ＳＯ４（２−）／ＺｒＯ２、ＳＯ４（２−）／ＴｉＯ２およびＳＯ４（２−）／Ｆｅ２Ｏ３）、マウント化（ｍｏｕｎｔｅｄ）酸（適切な担体、例えば多孔質酸化物、グラファイト、金属塩であって、液体酸、例えばＨ２ＳＯ４／ＳｉＯ２、ＳｂＦ５／ＳｉＯ２−Ａｌ２Ｏ３、ＡｌＣｌ３／ＣｕＳＯ４で処理され又はそれと組合されているもの）、カチオン交換樹脂、全フッ素化ポリマー硫酸（Ｎａｆｉｏｎ−Ｈ）およびヘクトロポリ酸（１２−タングストリン酸）、ヘテロポリオキソメタラート、スルホン化炭素、硫酸化炭素、硫酸化灰である。特定の実施形態においては、触媒は、そのプロトン化形態で、イオン交換樹脂（例えば、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＦＰＣ１１  Ｎａ、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＦＰＣ１４  Ｎａ、ＤＯＷＥＸ  ８８、ＤＯＷＥＸ  ８８  Ｈ、ＤＯＷＥＸ  ８８  ＭＢ、ＤＯＷＥＸ  ８８  ＭＢ  Ｈ、ＤＯＷＥＸ  ＦＰＣ１６ＵＰＳ  Ｈ、ＤＯＷＥＸ  ＦＰＣ１６ＵＰＳ  Ｎａ、ＤＯＷＥＸ  ＦＰＣ２３ＵＰＳ  Ｈ、ＤＯＷＥＸ  ＭＡＣ−３、ＤＯＷＥＸ  ＭＯＮＯＳＰＨＥＲＥ  ８８、ＤＯＷＥＸ  ＭＯＮＯＳＰＨＥＲＥ  ８８  Ｈ、ＤＯＷＥＸ  ＭＯＮＯＳＰＨＥＲＥ  ９９  Ｃａ／３１０、ＤＯＷＥＸ  ＭＯＮＯＳＰＨＥＲＥ  ９９  Ｃａ／３２０、ＤＯＷＥＸ  ＭＯＮＯＳＰＨＥＲＥ  ９９  Ｋ／３１０、ＤＯＷＥＸ  ＭＯＮＯＳＰＨＥＲＥ  ９９  Ｋ／３２０、ＤＯＷＥＸ  ＭＯＮＯＳＰＨＥＲＥ  ９９  Ｋ／３５０、ＤＯＷＥＸ（商標）ＰＳＲ−２、ＤＯＷＥＸ（商標）Ｇ−２６  Ｈ、ＡＭＢＥＲＪＥＴ  １６００  Ｈ、ＡＭＢＥＲＪＥＴ  ２０００  Ｈ、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＮ１５０、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＮ１６０、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＮ１７０、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＮ２１７、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＮ３１７、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＮ３６０、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＮ７７、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＮ９７  Ｈ、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＮ９９  Ｈ、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＮ９６５２、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥＩＲＮ９８８２、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＮ９６８７、ＡＭＢＥＲＳＥＰ  ２５２  Ｈ、ＤＯＷＥＸ  ＭＯＮＯＳＰＨＥＲＥ  １４００ＰＣ  Ｈ、ＤＯＷＥＸ  ＭＯＮＯＳＰＨＥＲＥ  ６５０Ｃ  Ｈ、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ２００Ｃ  Ｎａ、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲ１２０  Ｈ、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲ１２０  Ｎａ、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＣ８３、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＭＢ２０、ＤＯＷＥＸ  ＭＡＲＡＴＨＯＮ  １２００  Ｈ、ＤＯＷＥＸ  ＭＡＲＡＴＨＯＮ  １２００  Ｎａ、ＤＯＷＥＸ  ＭＡＲＡＴＨＯＮ  １３００  Ｈ、ＤＯＷＥＸ  ＭＡＲＡＴＨＯＮ  ８３００、ＤＯＷＥＸ  ＭＡＲＡＴＨＯＮ  Ｃ、ＤＯＷＥＸ  ＭＡＲＡＴＨＯＮ  Ｃ−１０、ＤＯＷＥＸ  ＭＡＲＡＴＨＯＮ  ＭＲ−３、ＤＯＷＥＸ  ＭＡＲＡＴＨＯＮ  ＭＳＣ、ＤＯＷＥＸ  ＭＡＲＡＴＨＯＮ  ＭＳＣ  Ｈ、ＤＯＷＥＸ（商標）ＨＣＲ−Ｓ／Ｓ、ＩＭＡＣ（商標）ＨＰ３３３、ＡＭＢＥＲＪＥＴ  ＵＰ１４００、ＡＭＢＥＲＪＥＴ  ＵＰ６０４０、ＡＭＢＥＲＪＥＴ  ＵＰ６１５０、ＤＯＷＥＸ  ＭＯＮＯＳＰＨＥＲＥ  ＭＲ−３  ＵＰＷ、ＤＯＷＥＸ  ＭＯＮＯＳＰＨＥＲＥ  ＭＲ−４５０  ＵＰＷ、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＣＧ５０  Ｔｙｐｅ  １、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＣＯＢＡＬＡＭＩＯＮ、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＦＰＣ３５００、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＰ４７６、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＰ６４、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＰ６９、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＰ８８、ＤＯＷＥＸ  ５０ＷＸ２（Ｈ＋）、ＤＯＷＥＸ  ５０ＷＸ４（Ｈ＋）、ＤＯＷＥＸ  ５０ＷＸ８（Ｈ＋）、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＢＤ１０、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＩＲＣ８４ＳＰＩ  Ｈ、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  １２３、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  １２５、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  １３１、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  １５、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  １６、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  １９、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  ３３、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  ３５、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  ３６、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  ３９、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  ４０、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  ４５、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  ＢＤ２０、ＡＭＢＥＲＬＹＳＴ  ＣＨ２８、ＡＭＢＥＲＳＥＰ  ＢＤ１９、ＡＭＢＥＲＳＥＰ  ２００  Ｈ）である。
【０１４８】
幾つかの実施形態においては、触媒は以下のものから選択される：ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ニトラート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−３−エチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−３−エチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−３−エチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−３−エチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ニトラート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ヨージド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ブロミド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−１−イウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−１−イウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−１−イ���ム  ホルマート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−ピリジニウム−クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−ピリジニウム−ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−ピリジニウム−アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−ピリジニウム−ニトラート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−ピリジニウム−クロリド−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−ピリジニウム−ブロミド−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−ピリジニウム−ヨージド−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−ピリジニウム−ビスルファート−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−（４−ビニルベンジル）−ピリジニウム−アセタート−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−４−メチル−４−（４−ビニルベンジル）−モルホリン−４−イウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−４−メチル−４−（４−ビニルベンジル）−モルホリン−４−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−４−メチル−４−（４−ビニルベンジル）−モルホリン−４−イウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−４−メチル−４−（４−ビニルベンジル）−モルホリン−４−イウム  ホルマート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−トリフェニル−（４−ビニルベンジル）−ホスホニウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−トリフェニル−（４−ビニルベンジル）−ホスホニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−トリフェニル−（４−ビニルベンジル）−ホスホニウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポ��［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−ピペリジン−１−イウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−ピペリジン−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−１−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−ピペリジン−１−イウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−４−（４−ビニルベンジル）−モルホリン−４−オキシド−コ−ジビニル  ベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−トリエチル−（４−ビニルベンジル）−アンモニウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−トリエチル−（４−ビニルベンジル）−アンモニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−トリエチル−（４−ビニルベンジル）−アンモニウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  クロリド−コ−４−ボロニル−１−（４−ビニルベンジル）−ピリジニウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  クロリド−コ−１−（４−ビニルフェニル）メチルホスホン酸−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−１−（４−ビニルフェニル）メチルホスホン酸−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  アセタート−コ−１−（４−ビニルフェニル）メチルホスホン酸−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ニトラート−コ−１−（４−ビニルフェニル）メチルホスホン酸−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルクロリド−コ−１−メチル−２−ビニル−ピリジニウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルクロリド−コ−１−メチル−２−ビニル−ピリジニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルクロリド−コ−１−メチル−２−ビニル−ピリジニウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−４−（４−ビニルベンジル）−モルホリン−４−オキシド−コ−ジビニル  ベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルフェニルホスホン酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルフェニルホスホン酸−コ−３−��チル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−４−ビニルフェニルホスホン酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−３−カルボキシメチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−３−カルボキシメチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−３−カルボキシメチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−５−（４−ビニルベンジルアミノ）−イソフタル酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−５−（４−ビニルベンジルアミノ）−イソフタル酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−５−（４−ビニルベンジルアミノ）−イソフタル酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−（４−ビニルベンジルアミノ）−酢酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−（４−ビニルベンジルアミノ）−酢酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ［スチレン−コ−（４−ビニルベンジルアミノ）−酢酸−コ−３−メチル−１−（４−ビニルベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−１−イウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン］；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルメチルイミダゾリウム  クロリド−コ−ビニルベンジルメチルモルホリニウム  クロリド−コ−ビニルベンジルトリフェニル  ホスホニウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビ
ニルベンジルメチルイミダゾリウム  クロリド−コ−ビニルベンジルメチルモルホリニウム  クロリド−コ−ビニルベンジルトリフェニル  ホスホニウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルメチルイミダゾリウム  ビスルファート−コ−ビニルベンジルメチルモルホリニウム  ビスルファート−コ−ビニルベンジルトリフェニル  ホスホニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジルメチルイミダゾリウム  ビスルファート−コ−ビニルベンジルメチルモルホリニウム  ビスルファート−コ−ビニルベンジルトリフェニル  ホスホニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルメチルイミダゾリウム  アセタート−コ−ビニルベンジルメチルモルホリニウム  アセタート−コ−ビニルベンジルトリフェニル  ホスホニウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジルメチルイミダゾリウム  アセタート−コ−ビニルベンジルメチルモルホリニウム  アセタート−コ−ビニルベンジルトリフェニル  ホスホニウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルメチルモルホリニウム  クロリド−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジルメチルモルホリニウム  クロリド−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルメチルモルホリニウム  ビスルファート−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジルメチルモルホリニウム  ビスルファート−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルメチルモルホリニウム  アセタート−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジルメチルモルホリニウム  アセタート−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルメチルイミダゾリウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルメチルイミダゾリウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルメチルイミダゾリウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルメチルイミダゾリウム  ニトラート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルメチルイミダゾリウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルメチルイミダゾリウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルメチルイミダゾリウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジル−トリフェニルホスホニウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジル−トリフェニルホスホニウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジル−トリフェニルホスホニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルメチルイミダゾリウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルメチルイミダゾリウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジル−メチルイミダゾリウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジルメチルイミダゾリウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジルメチルイミダゾリウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジルメチルイミダゾリウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジル−トリフェニルホスホニウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  クロリド−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジル−トリフェニルホスホニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−４−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  アセタート−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（ブチル−ビニルイミダゾリウム  クロリド−コ−ブチルイミダゾリウム  ビスル��ァート−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸）；ポリ（ブチル−ビニルイミダゾリウム  ビスルファート−コ−ブチルイミダゾリウム  ビスルファート−コ−４−ビニルベンゼンスルホン酸）；ポリ（ベンジル  アルコール−コ−４−ビニルベンジルアルコール  スルホン酸−コ−ビニルベンジル−トリフェニルホスホニウム  クロリド−コ−ジビニルベンジル  アルコール）；ポリ（ベンジル  アルコール−コ−４−ビニルベンジルアルコール  スルホン酸−コ−ビニルベンジルトリフェニルホスホニウム  ビスルファート−コ−ジビニルベンジル  アルコール）；ポリ（スチレン−コ−ビニルベンゼンスルホン酸−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−ビニルベンゼンホスホン酸−コ−ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレン−コ−ビニルベンゼンボロン酸−コ−ジビニルベンゼン）；スルホン化ポリスチレン−コ−ジビニルベンゼン微孔性ゲル樹脂；スルホン化ポリスチレン−コ−ジビニルベンゼン微孔性樹脂。
【０１４９】
幾つかの実施形態においては、触媒は、表１による１以上の物理的および化学的特性を有する強酸カチオン交換樹脂である。幾つかの実施形態においては、触媒は、３．０ｍｍｏｌ／ｇを超えるスルホン酸部分および１．０ｍｍｏｌ／グラム未満のカチオン性部分を含む。
【０１５０】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物を製造するために使用される触媒は可溶性酸性触媒である。
【０１５１】
幾つかの実施形態においては、触媒をデキストロース調製物にローディングした後、得られた反応混合物を、酸触媒オリゴ糖形成を促進させる条件下、大気圧および約１２０℃〜１３５℃の範囲の温度で維持する。幾つかの実施形態においては、触媒をローディングした後、酸触媒オリゴ糖形成を促進させる条件下、反応混合物をその沸点で維持する。反応混合物の雰囲気圧は０．５〜１．５気圧の範囲の圧力でありうる。例えば、圧力は１気圧未満（例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８または０．９気圧）、約１気圧または１気圧超（例えば、約１．１、１．２、１．３、１．４または１．５気圧）でありうる。幾つかの実施形態においては、触媒をデキストロース調製物にローディングした後、得られた反応混合物を大気圧以外の圧力（例えば、０．５気圧未満または１．５気圧超）で、かつ、酸触媒オリゴ糖形成を促進させる温度および条件下で維持する。
【０１５２】
幾つかの実施形態においては、合成オリゴ糖組成物中のデキストロース単量体の重量パーセントが特定の範囲になるまで、例えば、合成オリゴ糖組成物中のデキストロース単量体の重量パーセントが３０％以下（例えば、２８％以下、２５％以下、２２％以下、２０％以下、１９％以下、１８％以下、１７％以下、１６％以下、１５％以下、１４％以下、１３％以下、１２％以下、１１％以下または１０％以下）になったら、反応混合物をその沸点で維持する。幾つかの実施形態においては、合成オリゴ糖組成物中のデキストロース単量体の重量パーセントが特定の範囲、例えば、１０％〜２０％、１２％〜２２％、１４％〜２２％、１４％〜２０％、１４％〜１８％、１２％〜１８％または１６％〜２４％になるまで、反応混合物をその沸点で維持する。幾つかの実施形態においては、合成オリゴ糖組成物中のデキストロース単量体の重量パーセントが特定の範囲になったら、例えば、合成オリゴ糖組成物中のデキストロース単量体の重量パーセントが３０％以下（例えば、２８％以下、２５％以下、２２％以下、２０％以下、１９％以下、１８％以下、１７％以下、１６％以下、１５％以下、１４％以下、１３％以下、１２％以下、１１％以下または１０％以下）になったら、反応混合物をクエンチする。幾つかの実施形態においては、合成オリゴ糖組成物中のデキストロース単量体の重量パーセントが特定の範囲、例えば、１０％〜２０％、１２％〜２２％、１４％〜２２％、１４％〜２０％、１４％〜１８％、１２％〜１８％または１６％〜２４％になったら、反応混合物をクエンチする。幾つかの実施形態においては、クエンチは、水（例えば、脱イオン水）を使用して反応混合物を希釈し、反応混合物の温度を１００℃以下に徐々に低下させることを含む。
【０１５３】
幾つかの実施形態においては、加熱前の反応混合物中に存在した全デキストロースに対する正味の水凝縮物のモル比が特定の範囲、例えば、０．３５〜１．０の範囲（例えば、０．３５〜０．８、０．４〜０．９、０．５〜０．９、０．５〜０．８、０．６〜０．９、０．６〜０．８または０．７〜０．９の範囲）になるまで、反応混合物をその沸点で維持する。例えば、幾つかの実施形態においては、加熱前の反応混合物中の全デキストロース単量体に対する正味の水凝縮物のモル比が０．４〜０．９（例えば、約０．６〜０．８）になるまで、反応混合物をその沸点で維持する。
【０１５４】
幾つかの実施形態においては、加熱前の反応混合物中に存在した全デキストロースに対する正味の水凝縮物のモル比が特定の範囲、例えば、０．３５〜１．０の範囲（例えば、０．３５〜０．８、０．４〜０．９、０．５〜０．９、０．５〜０．８、０．６〜０．９、０．６〜０．８または０．７〜０．９の範囲）になったら、反応混合物をクエンチする。例えば、幾つかの実施形態においては、加熱前の反応混合物中の全デキストロース単量体に対する正味の水凝縮物のモル比が０．４〜０．９（例えば、約０．６〜０．８）になったら、反応混合物をクエンチする。幾つかの実施形態においては、クエンチは、水（例えば、脱イオン水）を使用して反応混合物を希釈し、反応混合物の温度を１００℃以下に徐々に低下させることを含む。
【０１５５】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１０％未満のソルビトール、例えば約１０％、約８％、約６％、約４％、約２％、約１％のソルビトールまたは約０．１％以下のソルビトールを反応混合物中に含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１０％未満のソルビトール、例えば約１０％、約８％、約６％、約４％、約２％、約１％のソルビトールまたは約０．１％以下のソルビトール反応混合物中に、そして１０％未満のソルビトール、例えば約１０％、約８％、約６％、約４％、約２％、約１％のソルビトールまたは約０．１％以下のソルビトールをオリゴ糖組成物中に含む。
【０１５６】
一般に、触媒とデキストロース調製物とを同時または連続的に反応器の内部チャンバに導入する。オリゴ糖合成はバッチプロセスまたは連続プロセスで行われうる。例えば、１つの実施形態においては、グリカンポリマー合成をバッチプロセスで行い、この場合、反応器の内容物を連続的に混合または混和し、反応の生成物の全て又は相当な量を取り出す（例えば、単離および／または回収する）。１つの変形態様においては、グリカンポリマー合成をバッチプロセスで行い、この場合、反応器の内容物を最初に混合または混和するが、それ以上の物理的混合を行わない。もう１つの変形態様においては、グリカンポリマー合成をバッチプロセスで行い、この場合、内容物の更なる混合または反応器の内容物の定期的混合を（例えば、１時間に１回以上）行ったら、反応の生成物の全て又は相当な量を、ある時間の後で取り出す（例えば、単離および／または回収する）。
【０１５７】
他の実施形態においては、オリゴ糖合成を連続プロセスで行い、この場合、内容物は平均連続流速で反応容器内を流動する。触媒およびグルコースを反応器に導入した後、反応器の内容物を連続的または定期的に混合または混和し、ある時間の後、反応の生成物の一部を取り出す（例えば、単離および／または回収する）。１つの変形態様においては、グリカンポリマー合成を連続プロセスで行い、この場合、触媒とグルコースとを含有する混合物を能動的には混合しない。また、触媒とデキストロースとの混合は、重力により沈降する触媒の再分配の結果として生じる可能性があり、あるいは物質が連続反応器内を流動するにつれて発生する非能動的混合の結果として生じる可能性がある。もう１つの変形態様においては、反応物の流れにより反応器に連続的に供給が行われると同時に、生成物の流れが反応器から連続的に除去される。更にもう１つの変形態様においては、反応器は定常状態で操作され、この場合、反応物の流れおよび生成物の流れは一定の流速で維持される。他の変形態様においては、例えば、温度、密度、ｐＨ、粘度、含水量および／または化学的組成のような、反応器内容物の特性を制御または測定する目的で、反応器内容物の一部を外部リサイクルループを通して連続的にポンプ送出させる。幾つかの変形態様においては、反応器内容物の混合は、そのような外部リサイクルループを通して反応器内容物の一部をポンプ送出する動作により達成される。特定の変形態様においては、外部リサイクルループはインライン熱交換器、フラッシュまたはブローダウンタンクを含有する。もう１つの変形態様においては、外部リサイクルループは静的混合要素または混合チャンバーを含有する。
【０１５８】
本発明で提供する方法の幾つかの実施形態においては、重合反応の出発物質は１以上の単糖、１以上の二糖、１以上の三糖またはそれらの組合せである。例えば、重合反応の出発物質は、デキストロース単量体、デキストロース二量体および／またはデキストロース三量体から構成されるデキストロース調製物でありうる。幾つかの実施形態においては、重合反応の出発物質はデキストロース一水和物である。幾つかの実施形態においては、重合反応の出発物質は１以上のグルコース単量体、二量体および／または三量体である。該方法の幾つかの実施形態においては、重合反応の出発物質はフラノース糖および／またはピラノース糖である。該方法の幾つかの実施形態においては、重合反応の出発物質は、テトロース、ペントース、ヘキソースまたはヘプトースから選択される１以上のグリカン単位である。該方法の幾つかの実施形態においては、重合反応の出発物質は、Ｌ型もしくはＤ型のいずれか、アルファもしくはベータ配置（グルコース二量体の場合）および／またはデオキシ型（適用可能な場合）ならびにそれらの任意の組合せであってもよいグルコースである。幾つかの実施形態においては、グルコースは、１以上の酢酸エステル、硫酸半エステル、リン酸エステルまたはピルビル環状アセタール基により置換または誘導体化されており、あるいは例えば１以上のヒドロキシル基において誘導体化されている。
【０１５９】
幾つかの実施形態においては、重合反応の出発物質はデンプン加水分解物、例えばグルコースシロップ、コーンシロップまたはそれらの混合物である。幾つかの実施形態においては、重合反応の出発物質はデキストロースシロップである。幾つかの実施形態においては、出発物質は、デキストロース当量（ＤＥ）のシロップの範囲内の任意のシロップから選択されるシロップ、例えば、２０〜９９ＤＥのシロップから選択されるシロップでありうる。
【０１６０】
１つの実施形態においては、本明細書に記載されている方法において使用されるグルコース（例えば、デキストロース）は１以上のＣ５またはＣ６単糖でありうる。幾つかの実施形態においては、グルコースはＣ５単糖である。幾つかの実施形態においては、グルコースはＣ６単糖である。幾つかの実施形態においては、重合反応の出発物質は、アミノ糖、デオキシ糖、イミノ糖、糖酸、糖アミド、糖エーテル、短鎖脂肪酸、糖アルコールまたはそれらの任意の組合せから選択される１以上のグリカン単位である。
【０１６１】
幾つかの実施形態においては、精製オリゴ糖組成物を得るために、例えば、クエンチされた反応混合物を約５〜６５重量パーセントの濃度に水で希釈し、ついで、該混合物を一連のクロマトグラフィー樹脂に通過させることにより、組成物を酸触媒から分離することが可能である。この一連のクロマトグラフィー樹脂はカチオン交換樹脂およびそれに続くアニオン交換樹脂および最後の脱色ポリマー樹脂を含みうる。幾つかの実施形態においては、任意または全てのタイプの樹脂は任意の順序で１回以上使用されうる。
【０１６２】
幾つかの用途には、残留糖単量体のレベルを、合成中に達成されるものより低いレベルに、例えば、約２０％から１０％未満（例えば、５％未満、２％未満または１％未満の単量体）に低減することが望ましい。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は脱単量体化されうる。幾つかの実施形態においては、脱単量体化は、オリゴ糖組成物から残留糖単量体を除去することを含む。オリゴ糖調製物から単糖を除去するためには、例えば、分別沈殿、膜分離、クロマトグラフィー分離および発酵のような種々の方法が用いられうる。例えば、Ｓｅｎら，２０１１，Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，１２８（３），７７３−７７７；Ｐｉｎｅｌｏら．，２００９，Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．，７０，１−１１；Ｖａｎｎｅｓｔｅら，２０１１，Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．，８０，６００−６０９；およびＧｕｅｒｒｅｒｏら，２０１４，Ｉｎｔ．Ｄａｉｒｙ  Ｊ．，３９，７８−８８（それらの全てを参照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい。これらの脱単量体化法は、オリゴ糖調製物中の単量体のレベルを低下させるために、単独で、または組合せて用いられうる。幾つかの実施形態においては、クロマトグラフィー樹脂を使用して、脱単量体化を行う。したがって、幾つかの実施形態においては、存在する単量体の割合に応じて、異なる組成物が製造されうる。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物を約１％、約３％、約５％、約１０％または約１５％の単量体含量に脱単量体化する。１つの実施形態においては、オリゴ糖組成物を１％未満の単量体含量に脱単量体化する。１つの実施形態においては、オリゴ糖組成物を約１２％〜１８％の単量体含量に脱単量体化する。１つの実施形態においては、オリゴ糖組成物を約１３％〜１７％の単量体含量に脱単量体化する。幾つかの実施形態においては、浸透圧分離により脱単量体化を達成する。幾つかの実施形態においては、タンジェント流濾過（ＴＦＦ）により非単量体化を達成する。幾つかの実施形態においては、エタノール沈殿により脱単量体化を達成する。
【０１６３】
幾つかの実施形態においては、表２に示されているとおり、オリゴ糖組成物は、それが有する単量体含量によって異なる、全食物繊維、水分、食物繊維（乾燥量基準）またはＤＥ率に関する測定値を有しうる。
【表１１】
2021534193.tif 000026
【０１６４】
幾つかの実施形態においては、全食物繊維はＡＯＡＣ  ２０１１．２５の方法に従い測定される。幾つかの実施形態においては、水分は、６０℃で真空オーブンを使用することにより測定される。幾つかの実施形態においては、全食物繊維（乾燥量基準）は計算される。幾つかの実施形態においては、デキストロース当量（ＤＥ）（％）（乾燥量基準）はＦｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏｄｅｘ（ＦＣＣ）に従い測定される。
【０１６５】
幾つかの実施形態においては、例えば実施例９に記載されている方法により、オリゴ糖組成物を脱単量体化する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約１３〜２７％  ＤＥ（乾燥量基準）、約１８〜２８％  ＤＥ（乾燥量基準）、約１６〜２４％（乾燥量基準）または２０〜２６％（乾燥量基準）を有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１５〜２５または１６〜２４（乾燥量基準）のＤＥを有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は少なくとも７０％、例えば７０％〜９９％（乾燥量基準）の全食物繊維（乾燥量基準）を有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は少なくとも７０％（乾燥量基準）、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の全食物繊維含量を有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、定量限界未満である可溶性食物繊維沈殿物（ＳＤＦＰ）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、定量限界未満である不溶性食物繊維（ＩＤＦ）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、定量限界未満である、ＳＤＦＰおよびＩＤＦである高分子量食物繊維（ＨＭＷＤＦ）を含む。幾つかの実施形態においては、本発明で提供する方法に従うオリゴ糖組成物の製造はバッチプロセスまたは連続プロセスで行われうる。例えば、１つの実施形態においては、オリゴ糖組成物をバッチプロセスで製造し、この場合、反応器の内容物を攪拌条件（例えば、連続的な混合または混和）に付し、反応の生成物の全て又は相当な量を取り出す（例えば、単離および／または回収する）。
【０１６６】
特定の実施形態においては、触媒を使用する方法は水性環境中で行われる。１つの適切な水性溶媒は水であり、これは種々の供給源から得られうる。一般に、幾つかの実施形態においては、より低い濃度のイオン種（例えば、ナトリウム、リン、アンモニウムまたはマグネシウムの塩）を含有する水源が使用されうる。なぜなら、そのようなイオン種は触媒の有効性を低下させうるからである。水性溶媒が水である幾つかの実施形態においては、水は１０％未満のイオン種（例えば、ナトリウム、リン、アンモニウム、マグネシウムの塩）を含有する。水性溶媒が水である幾つかの実施形態においては、水は少なくとも０．１メガオームセンチメートル、少なくとも１メガオームセンチメートル、少なくとも２メガオームセンチメートル、少なくとも５メガオームセンチメートルまたは少なくとも１０メガオームセンチメートルの抵抗率を有する。幾つかの実施形態においては、本明細書に記載されている反応が進行するにつれて、例えば２以上の糖単量体間の各グリコシドカップリングにより、水（例えば、発生する水）が生成される。特定の実施形態においては、本明細書に記載されている方法は、反応混合物中に存在する水の量および／または単量体もしくは触媒に対する水の比率を或る時間にわたってモニターすることを更に含みうる。したがって、幾つかの実施形態においては、反応混合物の含水量は、例えば、生成した発生水を除去することにより、反応の経過にわたって変化可能である。反応混合物中の水（例えば、発生した水）を除去するためには、例えば蒸留のような蒸発を含む適切な方法が用いられうる。幾つかの実施形態においては、該方法は、反応混合物中に水を含有させることを含む。特定の実施形態においては、該方法は、蒸発により反応混合物から水を除去することを含む。
【０１６７】
幾つかの実施形態においては、反応混合物の温度を１００℃以下にすることにより反応をクエンチするために、反応混合物に水を添加する。幾つかの実施形態においては、添加する水は脱イオン水である。幾つかの実施形態においては、添加する水は約６０℃〜約１００℃の温度を有する。幾つかの実施形態においては、混合物の固化を回避するのに十分な条件下、反応混合物に水を添加する。
【０１６８】
反応混合物の粘度は反応の経過にわたって測定および／または改変されうる。一般に、粘度は、流動に対する流体の内部抵抗（例えば、「厚さ」）の測定値を指し、センチポイズ（ｃＰ）またはパスカル秒の単位で表される。幾つかの実施形態においては、反応混合物の粘度は約１００ｃＰ〜約９５，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ〜約７５，０００ｃＰ、約５，０００〜約５０，０００ｃＰまたは約１０，０００〜約５０，０００ｃＰである。特定の実施形態においては、反応混合物の粘度は約５０ｃＰ〜約２００ｃＰである。
【０１６９】
幾つかの実施形態においては、本発明で提供するオリゴ糖組成物は１以上の追加的処理工程に付されうる。追加的処理工程は、例えば、精製工程を含みうる。精製工程は、例えば、分離、脱単量体化、希釈、濃縮、濾過、脱塩またはイオン交換、クロマトグラフィー分離または脱色、あるいはそれらの任意の組合せを含みうる。
【０１７０】
幾つかの実施形態においては、本明細書に記載されている方法は脱色工程を更に含む。製造された１以上のオリゴ糖組成物は、例えば、吸収剤、活性炭、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換樹脂を使用）での処理および／または濾過（例えば、精密濾過）を含む適切な方法を用いる脱色工程に付されうる。
【０１７１】
幾つかの実施形態においては、製造された１以上のオリゴ糖組成物を、塩、ミネラルおよび／または他のイオン種を除去するための物質と接触させる。例えば、特定の実施形態においては、製造された１以上のオリゴ糖組成物をアニオン交換カラムに貫動させる。他の実施形態においては、製造されたオリゴ糖組成物をアニオン／カチオン交換カラムペアに貫流させる。
【０１７２】
幾つかの実施形態においては、本明細書に記載されている方法は濃縮工程を更に含みうる。例えば、幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物を蒸発（例えば、真空蒸発）に付して、濃縮オリゴ糖組成物を得ることが可能である。他の実施形態においては、オリゴ糖組成物を噴霧乾燥工程に付して、オリゴ糖粉末を得ることが可能である。特定の実施形態においては、オリゴ糖組成物を蒸発工程と噴霧乾燥工程との両方に付すことが可能である。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物を凍結乾燥（例えば、冷凍乾燥）工程に付して水を除去し、粉末生成物を得ることが可能である。
【０１７３】
幾つかの実施形態においては、本明細書に記載されている方法は分画工程を更に含む。製造され精製されたオリゴ糖組成物は、例えば高速液体クロマトグラフィー、吸着／脱着（例えば、低圧活性炭クロマトグラフィー）または濾過（例えば、限外濾過またはダイアフィルトレーション）を含む、当技術分野で公知の任意の方法を用いて、分子量により分離されうる。特定の実施形態においては、オリゴ糖組成物を、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９８％超の短い種（約ＤＰ１〜２）、中等度の種（約ＤＰ３〜１０）、長い種（約ＤＰ１１〜１８）または非常に長い種（約ＤＰ１８超）に相当するプールに分離する。
【０１７４】
特定の実施形態においては、炭素質材料上への吸着、およびそれに続く、１％、５％、１０％、２０％、５０％または１００％の濃度の水中の有機溶媒の混合物で該材料を洗浄することによる画分の脱着により、製造されたオリゴ糖組成物を分画する。１つの実施形態においては、吸着材量は活性炭である。もう１つの実施形態においては、吸着材料は、活性炭と、５％、１０％、２０％、３０％、４０％または５０％（容量％または重量％）部分の増量剤（例えば、珪藻土またはセライト５４５）との混合物である。
【０１７５】
更なる実施形態においては、本明細書に記載されているとおりに製造されたオリゴ糖組成物を、高速液体クロマトグラフィー系に通過させることにより分離する。特定の変形態様においては、製造されたオリゴ糖組成物をイオンアフィニティークロマトグラフィー、親水性相互作用クロマトグラフィーまたはサイズ排除クロマトグラフィー、例えばゲル浸透およびゲル濾過により分離する。幾つかの実施形態においては、触媒を濾過により除去する。他の実施形態においては、低分子量物質を濾過法により除去する。特定の変形態様においては、低分子量物質を透析、限外濾過、透析またはタンジェント流濾過により除去することが可能である。特定の実施形態においては、濾過を静的透析管装置で行う。他の実施形態においては、濾過を動的流動濾過系において行う。他の実施形態においては、濾過を遠心力駆動濾過カートリッジにおいて行う。特定の実施形態においては、反応混合物を濾過前に約８５℃未満に冷却する。
【０１７６】
オリゴ糖組成物の特徴づけ
幾つかの実施形態においては、全てのグリカンの平均重合度は４〜１０の範囲である。幾つかの実施形態においては、全てのグリカンの平均重合度は４〜８、５〜９、５〜８、５〜７、６〜９、６〜８、４〜５、５〜６、６〜７、７〜８、８〜９または９〜１０の範囲である。幾つかの実施形態においては、全てのグリカンの平均重合度は約５．５〜８．５である。特定の実施形態においては、全てのグリカンの平均重合度は約６である。特定の実施形態においては、全てのグリカンの平均重合度は約７である。幾つかの実施形態においては、全てのグリカンの平均重合度は約４、約５、約６、約７、約８、約９または約１０の範囲である。
【０１７７】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、７００〜１６２０の範囲のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、８５２〜１４７５の範囲のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、８５０〜１４５００、例えば、８５０〜１４１０、８７０〜１４１０、８５０〜１２００、９００〜１１００または９００〜１０５０の範囲のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、１００５〜１３１５の範囲のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、７００〜８５０、９００〜１０００、８５０〜１０００、８５０〜１０５０、１０００〜１２００、１２００〜１４００、１４００〜１６００または１５００〜１６２０の範囲のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、約９００、９５０、９８０、１０００、１０５０、１０７５、１１００、１１５０または１２００のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、約９６０または１１５０のＭＷｗ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、５６０〜９６０の範囲のＭＷｎ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、６００〜９００の範囲、例えば、６００〜８５０、６２５〜８６０、６５０〜８５０、６５０〜８００、６００〜７００、６００〜７００または７００〜８００の範囲のＭＷｎ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、６１２〜９１２の範囲のＭＷｎ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、７００〜８２０の範囲のＭＷｎ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、６００〜７００、例えば、６２０〜７００または６５０〜７００の範囲のＭＷｎ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、５６０〜７００、６００〜７５０、６５０〜８００、７００〜８５０、８５０〜９００、９００〜９６０または９００〜１０００の範囲のＭＷｎ（ｇ／ｍｏｌ）を有するオリゴ糖を含む。
【０１７８】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、例えば実施例１１に記載されている方法に従う例えばサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による測定で７０〜９９重量％（乾燥量基準）の範囲の２以上の単量体（ＤＰ２＋）を有するオリゴマーを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、８０〜９５重量％、８０〜９０重量％、８２〜９５重量％、８２〜９０重量％、８３〜９１重量％、８３〜８９重量％、８３〜８６重量％、８３〜８５重量％、８４〜８９重量％、８４〜８６重量％、８５〜８７重量％、８６〜８９重量％、８７〜８９重量％、８８〜９０重量％または８９〜９１重量％の範囲の２以上の単量体（ＤＰ２＋）を有するオリゴマーを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、８３〜８６重量％の範囲の２以上の単量体（ＤＰ２＋）を有するオリゴマーを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、約８０％、約８１％、約８２、約８３、約８４、約８５、約８６、約８７重量％、約８８％、約８９％または約９０％の範囲の２以上の単量体（ＤＰ２＋）を有するオリゴマーを含む。幾つかの実施形態においては、組成物は約６％〜約２３％の単量体（ＤＰ１）および／または約４％〜約１２％の二糖（ＤＰ２）を含む。幾つかの実施形態においては、組成物は８％〜１７％の単量体（ＤＰ１）および／または約６％〜約１０％の二糖（ＤＰ２）を含む。幾つかの実施形態においては、組成物は約１２％〜約２１％の単量体（ＤＰ１）および／または約７％〜約１２％の二糖（ＤＰ２）を含む。
【０１７９】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物はグルコース（例えば、デキストロース）単糖を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、例えば実施例１１に記載されている例えばＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で３０％以下の単糖または単量体（乾燥量基準）を含有する。幾つかの場合には、オリゴ糖組成物は２８％未満の単量体（乾燥量基準）、２５％未満の単量体、２２％未満の単量体、２０％未満の単量体、１８％未満の単量体、１６％未満の単量体、１４％未満の単量体、１２％未満の単量体、１０％未満の単量体、８％未満の単量体、６％未満の単量体、４％未満の単量体または２％未満の単量体を含有する。幾つかの場合には、オリゴ糖組成物は１２〜２５％の単量体（乾燥量基準）、１０〜２０％の単量体、１２〜２２％の単量体、１０〜１８％の単量体、１２〜１８％の単量体、１３〜１８％の単量体、１〜１０％の単量体または５〜１０％の単量体を含有する。幾つかの場合には、例えば実施例９に記載されている方法に従い、オリゴ糖組成物を脱単量体化する。幾つかの場合には、オリゴ糖組成物は５％未満（乾燥量基準）、例えば４％未満、２％未満または１％未満の単量体を含有する。幾つかの場合には、オリゴ糖組成物は０〜５％の単量体または２〜５％の単量体を含有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１．３〜１．８の多分散指数（ＰＤＩ）、例えば１．４〜１．７または１．５〜１．７のＰＤＩを有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１．０〜１．２、１．２〜１．３、１．３〜１．４、１．４〜１．５、１．５〜１．６、１．７〜１．８または１．８〜２．０のＰＤＩを有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７または約１．８のＰＤＩを有する。
【０１８０】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物中のオリゴ糖に関するＭＷｗ、ＭＷｎ、ＰＤＩ、単量体含量（ＤＰ１）および／またはＤＰ２＋値は、実施例１１に記載されているサイズ排除クロマトグラフィー法を用いて決定される。
【０１８１】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物中の単糖および二糖の量は、実施例１３に記載されているサイズ排除クロマトグラフィー法を用いて決定される。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物中のオリゴ糖の単量体（ＤＰ１）、二糖（ＤＰ２）およびＤＰ３＋含量は、実施例１３に記載されているサイズ排除クロマトグラフィー法を用いて決定される。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は５．５％〜２４％の単量体（ＤＰ１）、例えば５．６１％〜２３．２１％または１２％〜２２％の単量体（ＤＰ１）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約１０％〜約２０％の単量体ＤＰ１を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は５％〜８％、５％〜１０％、７％〜１０％、１０％〜１５％、９％〜１２％、１１％〜１４％、１５％〜２０％、１３％〜１６％、１５％〜１８％、１２％〜１９％、１７％〜２０％、２０％〜２５％、１９％〜２２％、２１％〜２４％または２０％〜２３％の単量体（ＤＰ１）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は８．２７％〜１６．８９％または１２．３４％〜２１．３９％の単量体（ＤＰ１）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は４％〜１４％の二糖（ＤＰ２）、例えば４．４５％〜１２．３０％または７％〜１２％の二糖（ＤＰ２）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約６％〜約１１％の二糖（ＤＰ２）、例えば６％〜９％、７％〜１１％または８％〜１０％の二糖（ＤＰ２）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は４％〜５％、５％〜６％、６％〜７％、７％〜８％、８％〜９％、９％〜１０％、１０％〜１１％、１１％〜１２％または１２％〜１３％の二糖（ＤＰ２）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は５％〜１０％、５％〜１５％、１０％〜１５％または１５％〜２０％の二糖（ＤＰ２）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は５．７３％〜９．６８％または６．９７％〜１１．８６％の二糖（ＤＰ２）を含む。
【０１８２】
幾つかの実施形態においては、本明細書に記載されているオリゴ糖組成物における不純物の量は、例えば実施例１２に記載されているとおりに、例えばＳＥＣ  ＨＰＬＣにより測定される。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は３．０％以下の総不純物（単量体を除く）、例えば３．０％未満、２．５％未満、２．０％未満、１．５％未満、１．０％未満または０．５％未満の不純物を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．２％未満の総不純物（単量体を除く）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．１０％未満の総不純物（単量体を除く）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．０５％未満の総不純物（単量体を除く）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．３０％、０．２０％、０．１５％、０．１０％または０．０５％未満の総不純物（単量体を除く）を含む。
【０１８３】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．２％  ｗ／ｗ以下の乳酸（例えば、０．０〜０．０５％  ｗ／ｗの乳酸）、０．７％  ｗ／ｗ以下のギ酸（例えば、０．０５〜０．４５％  ｗ／ｗのギ酸）、０．２％  ｗ／ｗ以下の酢酸（例えば、０．０〜０．０５％  ｗ／ｗの酢酸）、２．０％  ｗ／ｗ以下のレブリン酸（例えば、０．１〜０．８％または０．１〜１．５％  ｗ／ｗ  レブリン酸）、２．０％  ｗ／ｗ以下のレボグルコサン（例えば、０．０〜０．５％または０．０〜１．３％  ｗ／ｗのレボグルコサン）、１．０％  ｗ／ｗ以下のレボグルコサン（０．０〜０．５％  ｗ／ｗのレボグルコサン異性体）および／または０．２％  ｗ／ｗ以下のヒドロキシメチルフルフラール（ＨＭＦ）（例えば、０．０〜０．０５％  ｗ／ｗのＨＭＦ）、あるいはそれらの任意の組合せ［例えば、オリゴ糖組成物における総不純物が３．０％以下である、オリゴ糖組成物におけるこれらの不純物の任意の組合せ］を含有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．１％  ｗ／ｗ未満の乳酸、０．１％  ｗ／ｗ未満のギ酸、０．１％  ｗ／ｗ未満の酢酸、および／または０．１％  ｗ／ｗ未満のＨＭＦを含む。
【０１８４】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約０．０１％  ｗ／ｗの酢酸、約０．２％  ｗ／ｗのギ酸、約０．６％  ｗ／ｗのレブリン酸および／または約０．４％のレボグルコサンを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．００％〜０．０３％  ｗ／ｗの酢酸、０．５％〜０．７％  ｗ／ｗのレブリン酸、０．２％〜０．３％  ｗ／ｗのギ酸および０．４％〜０．５％のレボグルコサンを含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、検出可能な量の酢酸、乳酸もしくはＨＭＦまたはそれらの任意の組合せを含有しない。
【０１８５】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約０．０％  ｗ／ｗ〜１．０％  ｗ／ｗの乳酸（例えば、０．０〜０．０５％  ｗ／ｗの乳酸）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約０．０％  ｗ／ｗ〜０．５％  ｗ／ｗのギ酸（例えば、０．２〜０．３％  ｗ／ｗのギ酸）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約０．０％  ｗ／ｗ〜０．１％  ｗ／ｗの酢酸（例えば、０．０〜０．０５％  ｗ／ｗの酢酸）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約０．０％  ｗ／ｗ〜１．２％  ｗ／ｗのレブリン酸（例えば、０．５〜０．８％  ｗ／ｗのレブリン酸）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約０．０％  ｗ／ｗ〜１．０％  ｗ／ｗのＨＭＦ（例えば、０．０〜０．０３％  ｗ／ｗのＨＭＦ）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約０．０％  ｗ／ｗ〜１．３％  ｗ／ｗのレボグルコサン（例えば、０．０〜０．５％  ｗ／ｗのレボグルコサン）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約０．０％  ｗ／ｗ〜０．６％  ｗ／ｗのレボグルコサン異性体（例えば、０．０〜０．２５％  ｗ／ｗのレボグルコサン異性体）を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．１％  ｗ／ｗ以下の乳酸、例えば０．０５％、０．０３％、０．０２％または０．０１％以下の乳酸を含有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．５％  ｗ／ｗ以下のギ酸、例えば０．４％、０．３％、０．２％または０．１％以下のギ酸を含有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．１％  ｗ／ｗ以下の酢酸、例えば０．０５％、０．０３％、０．０２％または０．０１％以下の酢酸を含有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１．０％  ｗ／ｗ以下のレブリン酸、例えば０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％または０．１％以下のレブリン酸を含有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．１％  ｗ／ｗ以下のＨＭＦ、例えば０．０５％、０．０３％、０．０２％または０．０１％以下のＨＭＦを含有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．８％  ｗ／ｗ以下のレボグルコサン、例えば０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４５％、０．４％、０．３％、０．２％または０．１％以下のレボグルコサンを含有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．５％  ｗ／ｗ以下のレボグルコサン異性体、例えば０．５％、０．４％、０．３％、０．２％または０．１％以下のレボグルコサン異性体を含有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は脱単量体化されている。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物を脱単量体化されていない。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．０％〜０．４％  ｗ／ｗのギ酸（例えば、０．１％〜０．３％  ｗ／ｗのギ酸）を含有し、０．３％〜１．０％  ｗ／ｗのレブリン酸（例えば、０．５％〜０．７％）を含有せず、検出可能な量の乳酸を含有せず、検出可能な量の酢酸を含有せず、または検出可能な量のＨＭＦを含有しない。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は０．０％〜０．４％  ｗ／ｗのギ酸（例えば、０．��％〜０．３％  ｗ／ｗのギ酸）を含有し、０．３％〜１．０％  ｗ／ｗのレブリン酸（例えば、０．５％〜０．７％）を含有し、検出可能な量の乳酸を含有せず、検出可能な量の酢酸を含有せず、そして検出可能な量のＨＭＦを含有しない。
【０１８６】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は２０〜３５重量％の総含水量、例えば２２〜３２％、２５〜３５％、２４〜３３％、２６〜３２％または２８〜３０％（それぞれ重量％）の含水量を有する。
【０１８７】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は２．５〜７．５の範囲、例えば２．５〜５．０または３．０〜４．０のｐＨを有する。
【０１８８】
過メチル化分析による特徴づけ
本明細書に記載されており、本明細書に記載の方法に従い製造されたオリゴ糖組成物は、過メチル化（ｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）分析を用いて特徴づけられ、先行技術組成物から区別されうる。Ｚｈａｏ，Ｙ．ら，‘Ｒａｐｉｄ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，’ＰＮＡＳ  Ｍａｒｃｈ  ４，１９９７  ９４  （５）１６２９−１６３３；Ｋａｉｌｅｍｉａ，Ｍ．Ｊ．ら，‘Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｂｙ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ：Ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｒｅｃｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ，’Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ．２０１４  Ｊａｎ  ７；８６（１）：１９６−２１２を参照されたい。したがって、もう１つの態様においては、本発明は、最低限度でヒトにより消化可能であり単量体ラジカルを含む複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物を提供する。複数のオリゴ糖における種々のタイプの単量体ラジカルのモル濃度は、過メチル化アッセイを用いて定量されうる。幾つかの実施形態においては、組成物の脱単量体化サンプルにおいて過メチル化アッセイを行う。
【０１８９】
特定の実施形態においては、複数のオリゴ糖は、表３のラジカル（１）〜（１５）から選択される単量体ラジカルを含む。
【表１２】
2021534193.tif 000027
2021534193.tif 000028
【０１９０】
特定の実施形態においては、複数のオリゴ糖は、ラジカル（１）〜（７）：
（１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．８〜８．９モル％に相当する２−グルコピラノースジラジカル、
（２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも２０．０〜２３．５モル％に相当する６−グルコピラノースジラジカル、
（３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの７．０〜８．３モル％に相当する４−グルコピラノースジラジカル、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．６〜１．３モル％に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカル、
（５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも１．５〜２．４モル％に相当する２，３−グルコピラノーストリラジカル、
（６）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．２〜０．９モル％未満に相当する３，４，６−グルコピラノーステトララジカル、および
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．４〜０．７モル％に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカル
から選択される２以上の単量体ラジカルを含む。
【０１９１】
特定の実施形態においては、複数のオリゴ糖は、ラジカル（１）〜（７）から選択される２、３、４、５、６または７個のタイプの単量体ラジカルを含む。
【０１９２】
特定の実施形態においては、複数のオリゴ糖は更に、ラジカル（８）〜（１２）：
（８）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの３０．９〜４３モル％に相当するｔ−グルコピラノースモノラジカル、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの７．４〜８．８モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカル、
（１０）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７〜１．３モル％未満に相当する２，４−グルコピラノーストリラジカル、
（１１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．０〜８．８モル％未満に相当する２，６−グルコピラノース／４，６−グルコピラノーストリラジカル、および
（１２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．２〜０．７モル％に相当する２，３，４−グルコピラノースラジカル
から選択される１以上のタイプの単量体ラジカルを含む。
【０１９３】
特定の実施形態においては、複数のオリゴ糖は、ラジカル（８）〜（１２）から選択される１、２、３、４または５個のタイプの単量体ラジカルを含む。
【０１９４】
特定の実施形態においては、複数のオリゴ糖は更に、ラジカル（１３）〜（１５）：
（１３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの３．０〜５．３モル％に相当する３，６−グルコピラノーストリラジカル、
（１４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．２〜０．７モル％に相当する２，３，６−グルコピラノーステトララジカル、および
（１５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．１〜０．５モル％に相当する２，３，４，６−グルコピラノースペンタラジカル
から選択される１以上のタイプの単量体ラジカルを含む。
【０１９５】
特定の実施形態においては、複数のオリゴ糖は、ラジカル（１３）〜（１５）から選択される１、２または３個のタイプの単量体ラジカルを含む。
【０１９６】
特定の実施形態においては、複数のオリゴ糖は以下の単量体ラジカルを含む：
（１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．８〜８．９モル％に相当する２−グルコピラノースジラジカル、
（２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも２０．０〜２３．５モル％に相当する６−グルコピラノースジラジカル、
（３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの７．０〜８．３モル％に相当する４−グルコピラノースジラジカル、
（４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．６〜１．３モル％に相当する３，４−グルコピラノーストリラジカル、
（５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの少なくとも１．５〜２．４モル％に相当する２，３−グルコピラノーストリラジカル、
（６）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．２〜０．９モル％未満に相当する３，４，６−グルコピラノーステトララジカル、および
（７）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．４〜０．７モル％に相当する２，４，６−グルコピラノーステトララジカル、
（８）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの３０．９〜４３モル％に相当するｔ−グルコピラノースモノラジカル、
（９）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの７．４〜８．８モル％に相当する３−グルコピラノースジラジカル、
（１０）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．７〜１．３モル％未満に相当する２，４−グルコピラノーストリラジカル、
（１１）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの６．０〜８．８モル％未満に相当する２，６−グルコピラノース／４，６−グルコピラノーストリラジカル、
（１２）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．２〜０．７モル％に相当する２，３，４−グルコピラノースラジカル、
（１３）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの３．０〜５．３モル％に相当する３，６−グルコピラノーストリラジカル、
（１４）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．２〜０．７モル％に相当する２，３，６−グルコピラノーステトララジカル、および
（１５）複数のオリゴ糖における単量体ラジカルの０．１〜０．５モル％に相当する２，３，４，６−グルコピラノースペンタラジカル。
【０１９７】
特定の実施形態においては、表４に示されているモル百分率の単量体ラジカル（１）〜（１５）を含む複数のオリゴ糖を含むオリゴ糖組成物を提供する。特定の実施形態においては、オリゴ糖組成物は脱単量体化されており、例えば、オリゴ糖組成物は３％以下のグルコース（例えば、デキストロース）単量体（例えば、２％以下のグルコースまたはデキストロース単量体）を含む。
【０１９８】
ラジカルに関する定められているモル百分率（モル％（ｍｏｌ％））の範囲は、複数のオリゴ糖における全ラジカルのモルの量に対する個々のラジカル（例えば、単量体ラジカル）のモルの量を指す。例えば、ｔ−グルコピラノースラジカルのモル％は、ｔ−グルコピラノースラジカルの総モル数を、複数のオリゴ糖における全ラジカルのモル数で割り算することにより決定される。
【０１９９】
幾つかの実施形態においては、個々のラジカルのモル％は、フラノースから誘導されるラジカルのシグナルを除去した後に決定される。幾つかの実施形態においては、個々のラジカルのモル％は脱単量体化オリゴ糖に対して正規化される。
【表１３】
2021534193.tif 000029
【０２００】
特定の実施形態においては、複数のオリゴ糖は３０〜４３モル％のグルコピラノースモノラジカル、４１〜５０モル％のグルコピラノースジラジカル、１２〜１９モル％のグルコピラノーストリラジカル、および０．８〜３モル％のグルコピラノーステトララジカルを含む。
【０２０１】
特定の実施形態においては、オリゴ糖組成物は単量体を含有しない。他の実施形態においては、オリゴ糖組成物は単量体を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、５％以下の単量体、例えば５％、４％、３％、２％または１％以下の単量体を含有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は１０％以下の単量体を含有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は３０％以下の単量体、２５％以下、２０％以下または１８％以下の単量体を含有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、例えば実施例９に記載されている方法を用いて、脱単量体化される。
【０２０２】
幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約９％〜約１３％、例えば約１０％〜約１２％の総分岐率を有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約１％〜約４％、例えば約２％または約３％の総フラノース率（末端を含む）を有する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は約４２％〜約５０％、例えば約４５％〜約４８％の総末端糖率を有する。
【０２０３】
２ＤＮＭＲ分析による特徴づけ
本明細書に記載されており、本明細書に記載の方法に従い製造されたオリゴ糖組成物は、二次元異核ＮＭＲを用いて特徴づけられ、先行技術組成物から区別されうる。したがって、幾つかの実施形態においては、本発明は、複数のオリゴ糖（例えば、最低限度でヒトにより消化可能であるもの）を含むオリゴ糖組成物を提供し、ここで、該組成物は、表５に定められている中心位置および面積を各シグナルが有するシグナル１〜１４を含む１Ｈ−１３Ｃ異核種単一量子コヒーレンス（ＨＳＱＣ）ＮＭＲスペクトルにより特徴づけられる。
【表１４】
2021534193.tif 000030
【０２０４】
特定の実施形態においては、スペクトルは、以下の中心位置および面積を各シグナルが有するシグナル１、３および４を含む。
【表１５】
2021534193.tif 000031
【０２０５】
特定の実施形態においては、シグナル１、３および４は以下のとおりに定められる。
【表１６】
2021534193.tif 000032
【０２０６】
特定の実施形態においては、シグナル１、３および４は以下のとおりに定められる。
【表１７】
2021534193.tif 000033
【０２０７】
特定の実施形態においては、シグナル１、３および４は以下のとおりに定められる。
【表１８】
2021534193.tif 000034
【０２０８】
特定の実施形態においては、シグナル１、３および４は以下のとおりに定められる。
【表１９】
2021534193.tif 000035
【０２０９】
特定の実施形態においては、シグナル１、３および４は以下のとおりに定められる。
【表２０】
2021534193.tif 000036
【０２１０】
特定の実施形態においては、スペクトルは、シグナル８および９から選択される１〜２個（例えば、１個または２個）のシグナルを更に含む。
【表２１】
2021534193.tif 000037
【０２１１】
特定の実施形態においては、スペクトルは、シグナル８および９から選択される１〜２個（例えば、１個または２個）のシグナルを更に含む。
【表２２】
2021534193.tif 000038
【０２１２】
特定の実施形態においては、シグナル８および９は以下のとおりに定められる。
【表２３】
2021534193.tif 000039
【０２１３】
特定の実施形態においては、シグナル８および９は以下のとおりに定められる。
【表２４】
2021534193.tif 000040
【０２１４】
特定の実施形態においては、シグナル８および９は以下のとおりに定められる。
【表２５】
2021534193.tif 000041
【０２１５】
特定の実施形態においては、シグナル８および９は以下のとおりに定められる。
【表２６】
2021534193.tif 000042
【０２１６】
特定の実施形態においては、スペクトルは、シグナル６、７、１１、１２、１３および１４から選択される１〜６個（例えば、１、２、３、４、５または６個）のシグナルを更に含む。
【表２７】
2021534193.tif 000043
【０２１７】
特定の実施形態においては、シグナル６、７、１１、１２、１３および１４は以下のとおりに定められる。
【表２８】
2021534193.tif 000044
【０２１８】
特定の実施形態においては、シグナル６、７、１１、１２、１３および１４は以下のとおりに定められる。
【表２９】
2021534193.tif 000045
【０２１９】
特定の実施形態においては、シグナル６、７、１１、１２、１３および１４は以下のとおりに定められる。
【表３０】
2021534193.tif 000046
【０２２０】
特定の実施形態においては、シグナル６、７、１１、１２、１３および１４は以下のとおりに定められる。
【表３１】
2021534193.tif 000047
【０２２１】
特定の実施形態においては、シグナル６、７、１１、１２、１３および１４は以下のとおりに定められる。
【表３２】
2021534193.tif 000048
【０２２２】
特定の実施形態においては、スペクトルは、シグナル２、５および１０から選択される１〜３個のシグナルを更に含む。
【表３３】
2021534193.tif 000049
【０２２３】
特定の実施形態においては、スペクトルは、シグナル２、５および１０から選択される１〜３個のシグナルを更に含む。
【表３４】
2021534193.tif 000050
【０２２４】
特定の実施形態においては、シグナル２、５および１０は以下のとおりに定められる。
【表３５】
2021534193.tif 000051
【０２２５】
特定の実施形態においては、シグナル２、５および１０は以下のとおりに定められる。
【表３６】
2021534193.tif 000052
【０２２６】
特定の実施形態においては、シグナル２、５および１０は以下のとおりに定められる。
【表３７】
2021534193.tif 000053
【０２２７】
特定の実施形態においては、シグナル２、５および１０は以下のとおりに定められる。
【表３８】
2021534193.tif 000054
【０２２８】
特定の実施形態においては、シグナル１〜１４は以下のとおりに定められる。
【表３９】
2021534193.tif 000055
【０２２９】
特定の実施形態においては、シグナル１〜１４は以下のとおりに定められる。
【表４０】
2021534193.tif 000056
【０２３０】
特定の実施形態においては、シグナル１〜１４のそれぞれは、以下に定められているとおりに、１Ｈ積分領域および１３Ｃ積分領域によって更に特徴づけられる。
【表４１】
2021534193.tif 000057
【０２３１】
特定の実施形態においては、ＮＭＲスペクトルは、組成物のサンプルを異核種単一量子コヒーレンス（ＨＳＱＣ）ＮＭＲに付すことにより得られ、ここで、サンプルは重水素化溶媒中の溶液である。適切な重水素化溶媒には、重水素化アセトニトリル、重水素化アセトン、重水素化メタノール、Ｄ２Ｏおよびそれらの混合物が含まれる。特定の実施形態においては、重水素化溶媒はＤ２Ｏである。
【０２３２】
個々のシグナル（またはピーク）の曲線下面積（ＡＵＣ）は、定められたグループの全シグナルの合計ＡＵＣ（例えば、表５に示されている全シグナル位置の合計ＡＵＣ）に対して１Ｈ位置（ｐｐｍ）および１３Ｃ位置（ｐｐｍ）を中心とするピーク積分を用いて決定される。幾つかの実施形態においては、総面積は表５のシグナル１〜１４のそれぞれの面積の和である。幾つかの実施形態においては、それぞれの個々のシグナル１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３および／または１４の曲線下面積（ＡＵＣ）は、表５に示されているシグナル１〜１４の総面積に対する百分率として定められる。幾つかの実施形態においては、シグナルの総面積（例えば、表５のシグナル１〜１４のそれぞれの面積の和）に対する個々のシグナルの面積の百分率に相当する、シグナル１〜１４の総面積に対する百分率（％）が示される。幾つかの実施形態においては、この百分率は曲線下面積（ＡＵＣ）パラメータと称されうる。幾つかの実施形態においては、そのようなパラメータは、特定のサンプルまたは組成物が含まれる範囲として特定されうる。幾つかの実施形態においては、「シグナル」なる語は、ＮＭＲスペクトルを指す場合、「ピーク」なる語と互換的に用いられる。幾つかの実施形態においては、個々のシグナルまたはピークの曲線下面積は積分領域（例えば、楕円積分領域）から導出される。幾つかの実施形態においては、個々のシグナルまたはピークの積分領域（例えば、楕円積分領域）は、表５に記載されている表示位置（例えば、１Ｈ位置（ｐｐｍ）および１３Ｃ位置（ｐｐｍ））により定められる。
【０２３３】
特定の実施形態においては、実施例１０に記載されているとおりにＮＭＲスペクトルを得る。例えば、以下のパルスシーケンス図ならびに取得および処理パラメータを使用して、コヒーレンス選択のためにエコー−アンチエコースキームを用いる多重編集勾配増強１Ｈ−１３Ｃ異核種単一量子コヒーレンス（ＨＳＱＣ）実験に組成物のサンプルを付すことにより、組成物のＮＭＲスペクトルを得る。
【０２３４】
パルスシーケンス図
【化１４】
2021534193.tif 000058
【０２３５】
取得パラメータ
・１Ｈキャリア周波数＝４ｐｐｍ
・１３Ｃキャリア周波数＝６５ｐｐｍ
・取得次元のポイント数＝５９６
・取得次元のスペクトル範囲＝６．００ｐｐｍ〜２．０３ｐｐｍ
・間接次元のポイント数＝３００個の複合ポイント
・間接次元のスペクトル範囲＝１２０ｐｐｍ〜１０ｐｐｍ
・リサイクル遅延＝１秒
・１結合１Ｈ−１３Ｃ結合定数＝ＪＣＨ＝１４６Ｈｚ
・スキャン数＝８
・温度＝２９８Ｋ
・溶媒＝Ｄ２Ｏ
処理パラメータ
・直接次元における窓関数＝ガウシアン・ブロードニング、７．６６Ｈｚ
・間接次元における窓関数＝ガウシアン・ブロードニング、２６．４８Ｈｚ
処理＝直接次元における５１２個の複合ポイント、間接次元における１０２４個の複合ポイント
特定の実施形態においては、ＮＭＲにより分析される組成物は単糖単量体（ＤＰ１）を含有し、すなわち、ＤＰ１成分はＮＭＲ分析前に組成物から除去されない。特定の実施形態においては、ＮＭＲにより分析される組成物は脱単量体化されており、すなわち、組成物のＤＰ１成分はＮＭＲ分析の前に除去される。
【０２３６】
ＩＩＩ．使用方法
ｉ．概観
本明細書に記載されているとおり、オリゴ糖組成物（例えば、実施例１〜４に記載されているもの）は、対象、例えばアンモニアレベルの上昇を示している対象におけるアンモニアレベルを低下させるために使用されうる。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物は、例えば、経口投与のための（例えば、水中での）再構成のための粉末として製剤化（処方）される。したがって、幾つかの実施形態においては、本発明は、アンモニアレベルの上昇に関連した尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）の治療方法を提供する。幾つかの実施形態においては、該方法は、代謝産物、例えばＵＣＤを有する対象において蓄積する代謝産物のレベルを低下させる。幾つかの実施形態においては、該方法は、対象における、例えば対象の胃腸管における微生物または微生物分類群の保有率を減少または増加させる。
【０２３７】
幾つかの実施形態においては、尿素サイクル異常症は、対象、例えばヒト対象におけるカルバミルリン酸シンテターゼＩ（ＣＰＳＩ）欠損症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠損症、アルギニノコハク酸シンテターゼ（ＡＳＳ）欠損症、アルギニノコハク酸リアーゼ（ＡＳＬ）欠損症、Ｎ−アセチルグルタミン酸シンテターゼ（ＮＡＧＳ）欠損症、アルギナーゼ欠損症、オルニチントランスロカーゼ欠損症（ＨＨＨ）またはシトリン欠損症（ＣＩＴ  ＩＩ）に関連している。幾つかの実施形態においては、ＵＣＤはＮ−アセチルグルタミン酸シンテターゼ（ＮＡＧＳ）欠損症を含まない。
【０２３８】
幾つかの実施形態においては、ＵＣＤを有する対象、例えば患者は、ＵＣＤの症状の１以上（例えば、１、２、３、４、５、６個またはそれ以上）を示しうる。ＵＣＤの症状には、神経学的症状（例えば、意識レベルの低下、精神状態の変化、異常な運動機能および発作を含む）および胃腸症状（例えば、嘔吐、摂食不良、下痢、悪心、便秘およびタンパク質嫌悪を含む）が含まれる。ＵＣＤを有する対象は、血液（例えば、血漿、血清または全血）中のアンモニア濃度が上昇している可能性がある。幾つかの実施形態においては、対象は、正常の上限の０．５倍を持続的に超える全身アンモニアレベルを示す。ＵＣＤは神経画像（ニューロイメージング）（例えば、ＭＲＩ）により診断されうる。ＤＮＡ配列決定に基づく突然変異試験および／または次世代シーケンシングも、対象、例えば患者がＵＣＤ関連突然変異を有するかどうかを評価するのに有用でありうる。
【０２３９】
幾つかの実施形態においては、本発明で提供される方法に従い処理される対象はＵＣＤの標準治療を現在受けており、または（例えば、過去１年以内に）受けたことがあり、該標準治療は、一般に、窒素結合療法または窒素スカベンジャー療法、食事（例えば、タンパク質）制限および／または血液透析を含む。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物はＵＣＤの標準治療と共に投与可能であり、例えば、オリゴ糖組成物は窒素結合療法または窒素スカベンジャー療法と共に投与可能である。
【０２４０】
幾つかの実施形態においては、肝性脳症（ＨＥ）を有する対象が、本発明で提供される方法に従い治療されうる。幾つかの実施形態においては、対象は、肝硬変の結果として、ＨＥを有する。幾つかの実施形態においては、そのような対象は、肝臓がアンモニアのような毒性物質を血液から除去できない場合に生じる複数の肝性有害神経症状を示す。幾つかの実施形態においては、対象は潜在性ＨＥを有し、またはそれを有する疑いがある。幾つかの実施形態においては、対象は顕性ＨＥを有し、またはそれを有する疑いがある。顕性ＨＥの標準治療はラクツロース、ラクチトールおよび抗生物質（例えば、リファキシミンまたはネオマイシン）を含む。治療は食事療法およびプロバイオティクスをも含みうる。幾つかの実施形態においては、そのような方法はアンモニアクリーゼの将来のエピソードの頻度の減少をもたらし、あるいはＨＥのリスクを有する対象においては、アンモニアクリーゼの初期エピソードの発生の減少をもたらす。
【０２４１】
幾つかの実施形態においては、本発明で提供される治療の有効性は症状の消散または前記診断基準（例えば、血清アンモニアレベルの低下）により評価されうる。幾つかの実施形態においては、以下の一方または両方が減少する：ｉ）１年間にわたるアンモニアクリーゼの数（例えば、少なくとも１つ、２つまたは少なくとも３つのクリーゼの減少）、ｉｉ）神経発達遅延および／または認知機能低下を含むアンモニアクリーゼからの合併症の（例えば、オリゴ糖組成物の投与を受けていない適切な対照群と比較した場合の）重症度。幾つかの実施形態においては、複数のアンモニアクリーゼの間の間隔は、（例えば、オリゴ糖組成物の投与を受けていない適切な対照群と比較して）例えば少なくとも１５％、３０％、６０％、１００％または２００％増加する。
【０２４２】
幾つかの実施形態においては、（例えば、実施例５、６または１４に従い製造された）オリゴ糖組成物の投与は、微生物酵素活性を調節（例えば、増強または低減）すること、および／または代謝産物（例えば、蓄積し疾患症状に関連した代謝産物、例えば、アンモニア）、例えば代謝産物レベルを調節（例えば、増強または低減）することにより、対象（例えば、対象の胃腸管）、例えば、ＵＣＤまたはＨＥ（例えば、ＭＨＥまたはＯＨＥ）を有する対象において、微生物（例えば、微生物群、例えば、マイクロバイオーム）を調節する。幾つかの実施形態においては、オリゴ糖組成物の投与は、対象（例えば、対象の胃腸管）、例えば、ＵＣＤまたはＨＥ（例えば、ＭＨＥまたはＯＨＥ）を有する対象における微生物の分類群の１以上のレベルを調節（例えば、増強または低減）し、微生物酵素活性を有効に調節（例えば、増強または低減）し、および／または代謝産物（例えば、蓄積し疾患症状に関連した代謝産物、例えば、アンモニア）、例えば代謝産物レベルを調節（例えば、増強または低減）する。
【０２４３】
ｉｉ．アンモニア試験
高アンモニア血症（例えば、ＵＣＤおよび肝性脳症（ＨＥ））を有する、または有する疑いがある、または有するリスクがある対象は、対照対象（例えば、高アンモニア血症を有する疑いのない対象）と比較して上昇した血中アンモニアレベル、例えば血漿アンモニアレベル、血清アンモニアレベルまたは全血中アンモニアレベルを有しうる。幾つかの実施形態においては、健常成人対象（例えば、高アンモニア血症を有する疑いのない対象）における血中アンモニアレベルは１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０μｍｏｌ／Ｌ未満、例えば３０μｍｏｌ／Ｌ未満である。幾つかの実施形態においては、正常より約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約２．５倍または約３倍高い血中アンモニアレベルはＵＣＤまたはＨＥを示唆する。幾つかの実施形態においては、ＵＣＤまたはＨＥを有する、または有する疑いがある対象は、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５または１８０μｍｏｌ／Ｌ以上の血中アンモニアレベルを有する。幾つかの実施形態においては、ＵＣＤまたはＨＥを有する、または有する疑いがある対象は、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５または１５０μｍｏｌ／Ｌ以上の血中アンモニアレベルを有する。幾つかの実施形態においては、ＵＣＤまたはＨＥを有する、または有する疑いがある対象は１００μｍｏｌ／Ｌ以上の血中アンモニアレベルを有する。幾つかの実施形態においては、ＵＣＤまたはＨＥを有する、または有する疑いがある対象は１５０μモル／Ｌ以上の血中アンモニアレベルを有する。
【０２４４】
高アンモニア血症（例えば、ＵＣＤおよび肝性脳症（ＨＥ））を有する、または有する疑いがある、または有するリスクがある新生児および小児は、健常新生児または小児と比較して上昇した血中アンモニアレベル、例えば血漿アンモニアレベル、血清アンモニアレベルまたは全血中アンモニアレベルを有しうる。幾つかの実施形態においては、健常新生児または小児は４５±１０μｍｏｌ／Ｌの平均血中アンモニア濃度を有する。幾つかの実施形態においては、健常新生児または小児（例えば、高アンモニア血症を有する疑いのない対象）は７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４または９５μｍｏｌ／Ｌ、例えば８０または９０μｍｏｌ／Ｌ以下の平均血中アンモニア濃度を有する。幾つかの実施形態においては、ＵＣＤまたはＨＥを有する、または有する疑いがある新生児または小児は５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０または９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５または１８０μｍｏｌ／Ｌ以上の血中アンモニアレベルを有する。
【０２４５】
幾つかの実施形態においては、血中アンモニア濃度は静脈および動脈血サンプルにおいて測定されうる。幾つかの実施形態においては、血清アンモニアレベルの測定は、本明細書に記載されているグリカン調製物の有効性をモニターするために用いられうる。例えば、幾つかの実施形態においては、血清アンモニアレベルは、対象、例えば血清アンモニアレベルが上昇した対象において、本明細書に記載されているオリゴ糖組成物の投与の前の少なくとも１つの時点および該投与の後の少なくとも１つの時点、例えば、オリゴ糖組成物の投与の３時間、６時間、９時間、１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、２日、３日、４日、５日、７日、１０日、１２日、１４日、２１日、３０日もしくは４５日後またはそれより後の１以上の時点で測定される。オリゴ糖組成物を投与する前の時点と比較した場合の、オリゴ糖組成物を投与した後の時点での血清アンモニアレベルの減少は、組成物が有効性を示すことを示している。
【０２４６】
幾つかの実施形態においては、高アンモニア血症のグレード（等級）または重症度は、例えば脳内の、気体アンモニアの分圧（ｐＮＨ３）を測定することにより評価されうる。ｐＮＨ３値は総アンモニアおよびｐＨから計算されうる。幾つかの実施形態においては、高アンモニア血症を有する対象は、対照対象（例えば、高アンモニア血症を有する疑いのない対象）と比較して上昇したレベルのｐＮＨ３を有する。
【０２４７】
幾つかの実施形態においては、潜在性肝性脳症（ＭＨＥ）を有する、またはそれを有する疑いがある、またはそのリスクがある対象においては、３−ニトロチロシンの血清レベルが評価されうる。幾つかの実施形態においては、ＭＨＥを有する、またはそれを有する疑いがある、またはそのリスクがある対象は、約１０ｎＭ、１５ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、５０ｎＭ、６０ｎＭ、７０ｎＭ、８０ｎＭ、９０ｎＭまたは１００ｎＭを超える血清３−ニトロチロシンレベルを有する。幾つかの実施形態においては、ＭＨＥを有する、またはそれを有する疑いがある、またはそのリスクがある対象は、約１０ｎＭまたは約１５ｎＭを超える血清３−ニトロチロシンレベルを有する。
【０２４８】
ｉｉｉ．肝性脳症（ＨＥ）
幾つかの実施形態においては、肝性脳症（ＨＥ）を有する対象は（実施例５，６または１４に記載されているとおりに製造されたオリゴ糖組成物を使用して）本発明で提供される方法に従い治療されうる。肝性脳症は、患者とその親族との両方の生活の質に影響を及ぼす神経精神症状と臨床症状との複雑な組合せを含む。肝性脳症は、全ての形態の肝硬変を含む進行性肝疾患の一般的な合併症であり、肝硬変患者の８０％までが、潜在性肝性脳症（ＭＨＥ）から顕性肝性脳症（ＯＨＥ）までの範囲の何らかの形態のＨＥを有する。
【０２４９】
ＯＨＥは、特別な試験を行うことなく臨床医により観察可能である神経学的異常として定義される。症状は手または腕の震え、見当識障害および不明瞭発語を含みうる。患者は昏睡状態へと進行しうる。ＯＨＥは、肝疾患、肝硬変を有する患者、および経頸静脈的肝内門脈体循環シャント（ＴＩＰＳ）を有する患者において発生しうる。この状態は胃腸出血または感染に続発しうる。ＯＨＥの発生は死亡率の増加に関連している。ＯＨＥによる入院は、末期肝疾患（ＥＳＬＤ）を有する患者で頻繁に見られる。
【０２５０】
ＭＨＥを有する患者は、専門的な心理測定試験を用いて初めて検出可能である微妙な症状を有し、ＭＨＥは一般に過少診断される。現在、ＭＨＥを定めるための、臨床診療における一般的な診断方法は存在せず、ＭＨＥに対する承認された治療方法も存在しない。ＭＨＥは自立生活技能（例えば、自動車運転）の喪失をもたらす可能性があり、ＯＨＥの後続発生を予測する。誘発因子により引き起こされることが多いＯＨＥの単一エピソードを有し、その後回復する患者も、ある程度のＭＨＥを有する可能性がある。
【０２５１】
ａ．症状および徴候
肝性脳症は、アンモニアのような毒性物質を肝臓が血液から除去することができない場合に生じる複数の有害な神経学的症状を含む。肝機能障害には以下のものが含まれる：肝硬変（および門脈圧亢進）、例えば、Ａ型（急性肝不全（ＡＬＦ）から生じる）、Ｂ型（主にＰＳＳから生じる）またはＣ型（肝硬変から生じる）（肝硬変の重症度に関するチャイルド・ピュー分類）；肝硬変の非存在下の、自発的または外科的に生じた門脈体循環シャント（門脈体循環シャント手術）を伴うもの；門脈体循環バイパス、急性肝不全（ＡＬＦ）または慢性肝炎の急性増悪（ＡＣＬＦ）。
【０２５２】
ＨＥに対処するための２０１４  ＡＡＳＬＤおよびＥＡＳＬ診療ガイドラインは、基礎的肝疾患、症状の重症度、時間経過および誘発因子に従いＨＥを分類することを推奨した。ＨＥの重症度は、以下のとおりに、臨床症状に基づいて評価されうる：潜在性（臨床症状を伴わないが、心理測定試験または神経生理学的試験においては異常な結果のもの）；グレードＩ（軽度錯乱、不明瞭発語、睡眠障害、行動変化）；グレードＩＩ（無気力、軽度錯乱）；グレードＩＩＩ（著しい錯乱（昏迷）、思考散乱性言語、覚醒可能睡眠）；およびグレードＩＶ（昏睡、疼痛無反応）。ＨＥは、疾患の時間経過に応じて、すなわち、突発性、再発性（ＨＥの発作が６ヶ月以下にわたって生じる）および持続性（行動変化のパターンが常に存在し、顕性ＨＥの再発が散在する）に更に細分されうる。
【０２５３】
「潜在性肝性脳症」（ＭＨＥ）は「隠れ肝性脳症」（ＣＨＥ）なる語と互換的に用いられ、見当識障害を有さず羽ばたき振戦も示さない慢性肝疾患（ＣＬＤ）を有する患者における脳機能障害の試験依存的または臨床的徴候の存在として定義される。「潜在性」なる語は、臨床的徴候、認知的徴候または他のＨＥの徴候が存在しないことを意味する。「隠れ」なる語は潜在性およびグレード１のＨＥを含む。ＣＬＤ患者におけるＭＨＥおよびＣＨＥの発生率は５０％にもなりうるため、リスクを有する患者は検査されるべきである。
【０２５４】
ＨＥを有する対象は、認知障害、例えば錯乱、健忘症、不安もしくは興奮、人格もしくは行動の急変、睡眠パターンの変化、見当識障害、甘い若しくはカビ臭い息、不明瞭発語および／または運動機能制御困難を示しうる。この状態は、進行性肝疾患または大きな門脈体循環シャント（例えば、ＴＩＰＳ）による脳機能のびまん性障害を反映している。患者は、動作緩慢、反射亢進、硬直、ミオクローヌスおよび羽ばたき振戦を含む神経筋障害を示しうる。日中の睡眠パターンの乱れ（不眠症および過眠症）は肝性脳症の一般的な初期症状であり、典型的には、他の精神状態変化または神経筋症状に先行する。
【０２５５】
ｂ．診断
ＨＥの診断は、肝機能、血清アンモニアレベル、ＥＥＧの検査ならびに他の血液および神経学的検査を用いて行われうる。診断のための心理測定試験には、以下のものが含まれる：数字連結試験（Ｎｕｍｂｅｒ  Ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ）（レイタン（Ｒｅｉｔａｎ）試験）（数字を結ぶのにかかる時間を測定する試験であり、２つの部分で行われ、ここで、肝性脳症を有さない患者はその年齢以下の秒数で試験を終了すべきである）、心理測定肝性脳症スコア（ＰＨＥＳ）（認知および精神運動処理速度および視覚運動協調性を評価する５つの紙−鉛筆試験）、抑制機能試験（Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｔｅｓｔ）（ＩＣＴ）（注意欠損障害、統合失調症および外傷性脳損傷を特徴づけるために用いられている、注意および反応抑制のコンピューター化試験）、ストループタスク（ＳＴＲＯＯＰ  Ｔａｓｋ）（前方注意システムの機能を評価し、潜在性肝性脳症における認知障害の検出に感受性である、精神運動速度および認知柔軟性の試験）、神経心理学的状態評価用反復可能バッテリー（Ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ  Ｂａｔｔｅｒｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｔｕｓ）（ＲＢＡＮＳ）（潜在性肝性脳症に関連した広範な神経認知機能を測定する）、および連続反応時間（ＣＲＴ）試験［聴覚刺激（ヘッドフォンを介したもの）に対する運動反応時間（ボタンを押す）の反復記録によるもの］。
【０２５６】
診断のための神経生理学的試験には、以下のものが含まれる：臨界フリッカ周波数（ＣＦＦ）試験［融合光（ｆｕｓｅｄ  ｌｉｇｈｔ）（６０Ｈｚ下方から与えられる）が観察者にとって点滅しているように見える周波数として定められる精神心理学的手段］、脳波検査（患者の協力も学習効果のリスクも伴うことなくＨＥのスペクトル全体にわたる皮質脳活動の変化を検出しうる）、および誘発電位（種々の求心性刺激に応答した神経回路網を介した放電の同期斉射を反映する外的記録電気シグナル）。幾つかの実施形態においては、肝性脳症は、２以上の心理測定的または神経生理学的試験の任意の組合せを用いて診断される。
【０２５７】
ｃ．ＨＥの治療
ＨＥの医学的治療は現在、胃腸出血または感染のような基礎的誘発因子がある場合にはそれを治療することを含む。ＨＥの標準治療はラクツロース、ラクチトールおよび抗生物質（例えば、リファキシミンまたはネオマイシン）を含む。
【０２５８】
ラクツロースは、ＯＨＥ患者における高アンモニア血症を軽減するために数十年にわたって使用されている非吸収性二糖である。ラクツロースの作用メカニズムは、主に糞便の一掃および結腸環境の酸性化により働いて、アンモニアからアンモニウムへの変換をもたらすと考えられており、アンモニウムは結腸バリアの通過および血流への侵入がより困難である。ラクツロースは細菌増殖を刺激して、アンモニアから細菌タンパク質への同化を促進させることも示されている。ラクツロースは、ＯＨＥのエピソードを、プラセボと比較して最大５０％低減する。
【０２５９】
リファキシミンはリファマイシン由来の難吸収性抗生物質であり、現在、ＯＨＥに対する第２選択治療として承認されており、ラクツロースが単独ではＯＨＥを抑制しない場合にラクツロースと共に使用される。リファキシミンは、ラクツロースと組合せて投与されると、ＯＨＥのエピソードを約５０％低減する。ラクツロースもリファキシミンもＯＨＥ再発のリスクを十分には低減せず、その各エピソードは死亡リスクを有意に増加させる。
【０２６０】
治療は食事改善およびプロバイオティクスをも含みうる。治療効果は、前記診断基準または症状の解消（例えば、血清アンモニアレベルの低下）、ＨＥの将来のエピソードの発生率の低下、またはＨＥのリスクを有する対象においては、ＨＥの初期エピソードの発生の減少により評価されうる。
【０２６１】
ＩＶ．キット
キットも想定される。例えば、キットは、オリゴ糖組成物の単位剤形と、尿素サイクル異常症または肝性脳症のような高アンモニア血症に関連した疾患の治療における組成物の使用のための説明を含む添付文書とを含みうる。幾つかの実施形態においては、組成物は乾燥粉末形態で提供される。幾つかの実施形態においては、組成物は溶液として提供される。キットは、それを要する対象による使用のための適切なパッケージ内にオリゴ糖組成物を含む。本明細書に記載されている組成物はいずれも、キットの形態でパッケージング（包装）されうる。キットは、治療過程の全体または治療過程の一部に十分な量のオリゴ糖組成物を含有しうる。オリゴ糖組成物の用量は個別にパッケージングされることが可能であり、あるいはオリゴ糖組成物はバルクで提供されることが可能であり、あるいはそれらの組合せも可能である。したがって、１つの実施形態においては、キットは、適切なパッケージングにおいて、治療レジメンにおける投与点に対応するオリゴ糖組成物の個々の用量を提供し、この場合、用量は１以上のパケット内にパッケージングされる。
【０２６２】
キットは更に、書面資料、例えば指示書、予想結果、証明書、説明書、警告、臨床データ、医療専門家向けの情報などを含みうる。１つの実施形態においては、キットは、キットが医療専門家の管理下でのみ使用されることを示すラベルまたは他の情報を含む。容器は更に、大さじ、シリンジ、ボトル、カップ、アプリケーターまたは他の測定もしくは供給装置を含みうる。
【０２６３】
実施例
実施例１．オリゴ糖組成物の存在下のヒト由来糞便スラリーにおけるアンモニアの還元
約３５０個のオリゴ糖組成物を、健常ヒト対象からの糞便スラリー中のアンモニアのレベルを調節（モジュレーション）するそれらの能力に関してインビトロで試験した（エクスビボアッセイとも称される）。糞便サンプルおよびスラリーを、パラジウム触媒の存在下、嫌気性チャンバー（ＡＳ−５８０，Ａｎａｅｒｏｂｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）において処理した。オリゴ糖組成物を５％  ｗ／ｖで水中で調製し、濾過滅菌し、９６ウェル・ディープ・ウェル・マイクロプレート・アッセイプレートに加え、陰性対照として水を供給してアッセイにおける最終濃度を０．５％または０．０５％  ｗ／ｖにした。
【０２６４】
ヒト糞便サンプル提供物を−８０℃で保存した。糞便スラリーの実施ストックを調製するために、糞便サンプルを嫌気性チャンバー内に移し、解凍した。ついで糞便サンプルをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）（Ｐ０２６１，Ｔｅｋｎｏｖａ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）、１５％  グリセロール中、２０％  ｗ／ｖで調製した。その２０％  ｗ／ｖ  糞便スラリー＋１５％  グリセロールを２，０００×ｇで遠心分離し、上清を除去し、ペレットを１％  ＰＢＳに懸濁させた後、９００ｍｇ／Ｌ  塩化ナトリウム、２６ｍｇ／Ｌ  塩化カルシウム二水和物、２０ｍｇ／Ｌ  塩化マグネシウム六水和物、１０ｍｇ／Ｌ  塩化マンガン四水和物、４０ｍｇ／Ｌ  硫酸アンモニウム、４ｍｇ／Ｌ  硫酸鉄七水和物、１ｍｇ／Ｌ  塩化コバルト六水和物、３００ｍｇ／Ｌ  リン酸カリウム二塩基性、１．５ｇ／Ｌ  リン酸ナトリウム二塩基性、５ｇ／Ｌ  重炭酸ナトリウム、０．１２５ｍｇ／Ｌ  ビオチン、１ｍｇ／Ｌ  ピリドキシン、１ｍ／Ｌ  パントテナート、７５ｍｇ／Ｌ  ヒスチジン、７５ｍｇ／Ｌ  グリシン、７５ｍｇ／Ｌ  トリプトファン、１５０ｍｇ／Ｌ  アルギニン、１５０ｍｇ／Ｌ  メチオニン、１５０ｍｇ／Ｌ  スレオニン、２２５ｍｇ／Ｌ  バリン、２２５ｍｇ／Ｌ  イソロイシン、３００ｍｇ／Ｌ  ロイシン、４００ｍｇ／Ｌ  システインおよび４５０ｍｇ／Ｌ  プロリンからなり（Ｔｈｅｒｉｏｔ  ＣＭら，Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１４；５：３１１４）、７５０μＭ  尿素で更に補足された培地中で希釈して、１％  ｗ／ｖ  糞便スラリーの最終希釈液を得た。
【０２６５】
調製された１％  ｗ／ｖ  糞便スラリーを、最終濃度０．５％  ｗ／ｖ、ウェル当たりの最終体積３５０μＬ、３７℃で４５時間、オリゴ糖組成物の９６ウェルプレートに嫌気的にさらした。
【０２６６】
エクスビボでのインキュベーションの後、３，７１６×ｇで１０分間の遠心分離を用いて細胞をペレット化し、分析前に上清を−８０℃またはドライアイス上で保存した。サンプルを、１０ｋＤａフィルター（ＡｃｒｏＰｒｅｐ  Ｏｍｅｇａ  １０Ｋ，Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐｏｒｔ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を使用して１，５００×ｇで１５分間濾過し、水中で元の体積の１／１０に希釈した。ついでアンモニア比色分析キットＩＩ（Ａｍｍｏｎｉａ  Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  ＩＩ）（Ｋ４７０，Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，Ｍｉｌｐｉｔａｓ  ＣＡ）を使用して、サンプルを分析した。オリゴ糖組成物のアンモニア比色分析の結果を図１Ａおよび１Ｂに示す。アンモニアレベルを陰性対照（水）に対して正規化した。図１Ａ〜１Ｂに示されているとおり、選択されたオリゴ糖組成物は、陰性対照と比較して、アンモニアレベルの低減において９５％を超える効力を示した。
【０２６７】
実施例２：健常対象における選択されたオリゴ糖組成物の研究
実施例１に記載されている選択されたオリゴ糖組成物の安全性および忍容性を、高タンパク食の存在下でプレバイオティック活性を測定するように設計された無作為化二重盲検プラセボ対照試験（ｎ＝４７）で健常成人において評価した。忍容性を最大にするために、用量を４段階で漸増し、９ｇを食事と共に１日２回４日間投与することから開始し、３６ｇを１日２回６日間投与することまで行い、忍容性に基づいて対象への投与量を減少させた（用量漸減）。
【０２６８】
腸は（例えば、腸内細菌による食物の発酵および腸細胞によるグルタミナーゼ活性により）相当な量のアンモニアをヒト代謝に供与している。幾つかの推定によれば、高アンモニア血症の対象における過剰アンモニアの最大７０％が胃腸管内に蓄積する（米国特許第９，４８７，７６４号）。腸内で、アンモニアは微生物ウレアーゼおよびアミノ酸脱アミノ化ならびに腸細胞グルタミナーゼにより産生される（Ｒｏｍｅｒｏ−Ｇｏｍｅｚら，Ｍｅｔａｂ  Ｂｒａｉｎ  Ｄｉｓ（２００９）２４：１４７−１５７）。腸内微生物叢に由来するアンモニアの量を減少させることは、高アンモニア血症に関連した疾患における治療効果をもたらしうる。高アンモニア血症関連疾患である肝性脳症［ＨＥ；顕性ＨＥ（ＯＨＥ）を含む］はラクツロース（４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトシル−Ｄ−フルクトース）および／またはリファキシミン（リファマイシンＳＶ由来の抗生物質）で治療される。どちらの物質も全身アンモニア負荷に対する腸内細菌アンモニア供与を標的化する。高アンモニア血症に関連した他の疾患、例えば尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）を有する対象、および高アンモニア血症を発生するリスクを有する対象［例えば、潜在性ＨＥ（ＭＨＥ）を示す対象］も全身アンモニア負荷に対する腸内細菌アンモニア供与の減少によって改善される可能性が高いであろう。しかし、ラクツロースおよびリファキシミンはこれらの対象では使用されない。
【０２６９】
本明細書に記載されているグリカンの経口投与が腸由来アンモニアの量を減少させうるかどうかを試験するために、ヒトにおける高タンパク質チャレンジ研究を行った。
【０２７０】
健常対象は無傷肝代謝（例えば、尿素サイクル能および肝臓のバイパスの非存在）および腎機能（例えば、機能的な尿素およびアンモニア排泄）ゆえにタンパク質チャレンジの際に高アンモニア血症を発生しない。血清アンモニアレベルは非常に変動しやすい。これは、例えば１つには、測定バイアス（例えば、静脈血は、アンモニアを貯蔵する筋肉を通過した後、アンモニアを捕捉する）、アナライトの揮発性および対象の食事の影響によるものである。結腸アンモニア産生のための基質を運ぶ高タンパク質食（１日当たり２ｇ／ｋｇのタンパク質で４週間）で健常対象をチャレンジし、腸内細菌由来アンモニアを定量するために安定同位体トレーサー（１５Ｎラクトウレイド）を投与した。対象は、選択されたオリゴ糖組成物、対照、商業的に入手可能な繊維調製物（陽性対照）またはマルトデキストリン（ＭＤＸ）（プラセボまたは陰性対照として）のいずれかを摂取した。ＭＤＸは完全に消化可能であり、細菌発酵の基質としては結腸に到達しない。対象（Ｎ＝１２／群）に高タンパク質食を７日間与え（馴化）、ついで１５Ｎ−トレーサーを投与した。グリカン調製物の漸増と共に該食事を更に１６日間与え続け、ついで１５Ｎ−トレーサーの２回目の投与を行った。対象に９ｇ／日  ＢＩＤから３６ｇ／日  ＢＩＤ（合計７２ｇ／日）へと漸増投与した。血液、尿および糞便サンプルを採取した。
【０２７１】
この研究からの知見は、選択されたオリゴ糖組成物が安全であり、概ね良好な忍容性を有することを示した［胃腸忍容性質問票（ＧＩＴＱ）を用いて評価した場合；この場合、鼓腸、悪心、嘔吐、腹部痙攣、膨満感、腹鳴、げっぷおよび胸焼けの胃腸症状の重症度および頻度ならびに便通の頻度および緊急性が毎日の質問票において記録される］。
【０２７２】
選択されたオリゴ糖組成物の忍容性を下痢スコアによっても評価した（図２）。各対象の糞便組成を毎日の７ポイントのブリストル便性状スコア（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｓｔｏｏｌ  Ｓｃｏｒｅ）質問票で評価した。図２に示されているとおり、選択されたオリゴ糖組成物では、プラセボの場合と同数か又はそれより少ない対象が下痢を報告したが、商業的に入手可能な陽性対照繊維では、下痢を報告した対象が増加し、１２人の対象のうち１０人が最高用量で下痢を報告した。
【０２７３】
高タンパク食のバックグラウンドにおけるマルトデキストリン対照は１５Ｎ−窒素排泄を増加させ、一方、選択されたオリゴ糖組成物および陽性対照繊維は共に、尿１５Ｎ−窒素排泄を対照に対して３０〜４０％減少させた（ｐ＝０．００２）。選択されたオリゴ糖組成物および陽性対照繊維による尿１５Ｎ−尿素排泄の減少は、対照と比較して有意であり（それぞれ、ｐ＝０．０３４３およびｐ＝０．０００２）、同様の効果量（３０〜４０％の減少）であった。１５Ｎ尿アンモニア排泄は変動し、統計的に有意でなかったが、同様の減少傾向を示した。
【０２７４】
４週間にわたる２×１０ｇおよび２×５ｇ／日のラクツロースは、通常の食事の健常対象において、１５Ｎ窒素の尿排泄を、ベースラインと比較して１２〜２２％減少させた（Ｄｅ  Ｐｒｅｔｅｒら，Ａｌｉｍｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ（２００６）２３，９６３−９７４）。ＨＥ患者における直接比較試験においては、ラクツロースおよびリファキシミンは血中アンモニアをそれぞれ３３％および３２％減少させた（Ｐａｉｋら，Ｙｏｎｓｅｉ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｖｏｌ．４６，Ｎｏ．３，ｐｐ．３９９−４０７，２００５）。ある研究においては、ラクツロースは動脈アンモニアを２３％減少させ（６０名のＨＥ患者）、５３％の患者で１０日以内にＨＥの完全な回復を示した（Ｓｈａｒｍａら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ３２（２０１７）１２３４−１２３９）。本発明で試験された選択されたオリゴ糖組成物に関して観察された腸由来アンモニアの減少（尿１５Ｎ窒素排泄における３０〜４０％の減少）は、該減少が臨床的に重要であること、および本明細書に記載されている選択されたオリゴ糖組成物が、血中アンモニアを減少させるために使用されうることを示唆している。
【０２７５】
選択されたオリゴ糖組成物は、考慮すべき下痢を引き起こさなかった。このことは、該窒素減少効果が、下痢に起因する窒素一掃によってもたらされたのではなく、微生物分類群および／または関連窒素代謝における変化の効果によってもたらされた可能性が高いことを示唆している。陽性対照繊維の効果は、主に、陽性対照繊維によって引き起こされる下痢（および窒素の物理的一掃）によるものでありうる。下痢は、望ましくない副作用である。
【０２７６】
したがって、選択されたオリゴ糖組成物は、例えばＨＥ（例えば、ＯＨＥ）およびＵＣＤのような高アンモニア血症関連疾患を有する対象、ならびに例えばＭＨＥにような高アンモニア血症を発生するリスクを有する対象の治療に使用されうる。
【０２７７】
実施例３：尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）患者から得られた糞便サンプルを使用するエクスビボアッセイにおけるアンモニアレベルの低下
尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）患者から採取されたヒト糞便群が実施例１に記載の選択されたオリゴ糖組成物を利用し、アンモニア産生を減少させ、またはアンモニア消費を増加させる能力を評価するために、エクスビボアッセイを行った。尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）と診断された１２名の患者（Ｐｔ１〜Ｐｔ１２；図３Ａ）から糞便サンプルを採取した。
【０２７８】
ヒト糞便サンプル提供物を−８０℃で保存した。実施ストックを調製するために、糞便サンプルを嫌気性チャンバー内に移し、解凍した。各糞便サンプルをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）（Ｐ０２６１，Ｔｅｋｎｏｖａ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）、１５％  グリセロール中、２０％  ｗ／ｖとなるように調製し、−８０℃で保存した。その２０％  ｗ／ｖ  糞便スラリー＋１５％  グリセロールを２，０００×ｇで遠心分離し、上清を除去し、ペレットを、７５０ｍＬ  尿素で補足された９００ｍｇ／Ｌ  塩化ナトリウム、２６ｍｇ／Ｌ  塩化カルシウム二水和物、２０ｍｇ／Ｌ  塩化マグネシウム六水和物、１０ｍｇ／Ｌ  塩化マンガン四水和物、４０ｍｇ／Ｌ  硫酸アンモニウム、４ｍｇ／Ｌ  硫酸鉄七水和物、１ｍｇ／Ｌ  塩化コバルト六水和物、３００ｍｇ／Ｌ  リン酸カリウム二塩基性、１．５ｇ／Ｌ  リン酸ナトリウム二塩基性、５ｇ／Ｌ  重炭酸ナトリウム、０．１２５ｍｇ／Ｌ  ビオチン、１ｍｇ／Ｌ  ピリドキシン、１ｍ／Ｌ  パントテナート、７５ｍｇ／Ｌ  ヒスチジン、７５ｍｇ／Ｌ  グリシン、７５ｍｇ／Ｌ  トリプトファン、１５０ｍｇ／Ｌ  アルギニン、１５０ｍｇ／Ｌ  メチオニン、１５０ｍｇ／Ｌ  スレオニン、２２５ｍｇ／Ｌ  バリン、２２５ｍｇ／Ｌ  イソロイシン、３００ｍｇ／Ｌ  ロイシン、４００ｍｇ／Ｌ  システインおよび４５０ｍｇ／Ｌ  プロリン（Ｔｈｅｒｉｏｔ  ＣＭら，Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１４；５：３１１４）に懸濁させて、１％  ｗ／ｖ  糞便スラリーを調製した。
【０２７９】
調製された１％  ｗ／ｖ  糞便スラリーを、選択されたオリゴ糖組成物にさらし、アンモニアレベルが有効に減少するかどうかを試験した。選択されたオリゴ糖組成物を０．５％  ｗ／ｖの最終濃度で９６ウェル・ディープ・ウェル・マイクロプレートに加え、「無添加グリカン」対照には水を加え、ウェル当たりの最終体積を５００μＬにした。グリカンとスラリーとの混合物を嫌気的に３７℃で４５時間インキュベートした。
【０２８０】
本明細書に記載されているとおりのエクスビボでのインキュベーションの後、３，７１６×ｇで１０分間の遠心分離により細胞をペレット化し、上清を、それが分析されるまで、−８０℃またはドライアイス上で保存した。サンプルを、１０ｋＤａフィルター（ＡｃｒｏＰｒｅｐ  Ｏｍｅｇａ  １０Ｋ，Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐｏｒｔ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）で１，５００×ｇで１５分間濾過し、水中で元の濃度の１／１０に希釈した。アンモニア比色分析キットＩＩ（Ａｍｍｏｎｉａ  Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  ＩＩ）（Ｋ４７０，Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，Ｍｉｌｐｉｔａｓ  ＣＡ）を使用して、サンプルを分析した。オリゴ糖組成物のアンモニア比色分析の結果を図３Ａに示す。アンモニアレベルを陰性対照（水）に対して正規化した。
【０２８１】
４５時間の時点で試験された糞便サンプルにおいて、選択されたオリゴ糖組成物は全ての尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）患者のサンプルでアンモニアレベルの低下を示した（図３Ａ）。特に、選択されたオリゴ糖組成物は、１２名中１０名の患者において、対照と比較してアンモニアレベルにおける約５０％を超える低下をもたらした（図３Ａ）。これは、選択されたオリゴ糖組成物の投与が、尿素サイクル異常症患者のアンモニアレベルを低下させるために利用されうることを示唆している。
【０２８２】
実施例４：肝障害患者から得られた糞便サンプルを使用するエクスビボアッセイにおけるアンモニアレベルの低下
肝障害患者から採取されたヒト糞便群が実施例１に記載の選択されたオリゴ糖組成物を利用し、既存治療方法と比較してアンモニア産生を減少させ、またはアンモニア消費を増加させる能力を評価するために、エクスビボアッセイを行った。腸内で、アンモニアは微生物ウレアーゼおよびアミノ酸脱アミノ化ならびに腸細胞グルタミナーゼにより産生される（Ｒｏｍｅｒｏ−Ｇｏｍｅｚら，Ｍｅｔａｂ  Ｂｒａｉｎ  Ｄｉｓ（２００９）２４：１４７−１５７）。腸内微生物叢に由来するアンモニアの量を減少させることは、高アンモニア血症に関連した疾患における治療効果をもたらしうる。高アンモニア血症関連疾患である肝性脳症（ＨＥ）はラクツロース（４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトシル−Ｄ−フルクトース）で治療され、これは全身アンモニア負荷に対する腸内細菌アンモニア供与を標的化する。アルコール、自己免疫性肝炎、慢性Ｂ型肝炎、脂肪肝疾患／ＮＡＳＨまたは鉄過剰症および脂肪症により引き起こされた肝性脳症（ＨＥ）と診断された１９名の患者から糞便サンプルを採取した。
【０２８３】
ヒト糞便サンプル提供物を−８０℃で保存した。実施ストックを調製するために、糞便サンプルを嫌気性チャンバー内に移し、解凍した。各糞便サンプルをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）（Ｐ０２６１，Ｔｅｋｎｏｖａ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）、１５％  グリセロール中、２０％  ｗ／ｖとなるように調製し、−８０℃で保存した。その２０％  ｗ／ｖ  糞便スラリー＋１５％  グリセロールを２，０００×ｇで遠心分離し、上清を除去し、ペレットを、７５０ｍＬ  尿素で補足された９００ｍｇ／Ｌ  塩化ナトリウム、２６ｍｇ／Ｌ  塩化カルシウム二水和物、２０ｍｇ／Ｌ  塩化マグネシウム六水和物、１０ｍｇ／Ｌ  塩化マンガン四水和物、４０ｍｇ／Ｌ  硫酸アンモニウム、４ｍｇ／Ｌ  硫酸鉄七水和物、１ｍｇ／Ｌ  塩化コバルト六水和物、３００ｍｇ／Ｌ  リン酸カリウム二塩基性、１．５ｇ／Ｌ  リン酸ナトリウム二塩基性、５ｇ／Ｌ  重炭酸ナトリウム、０．１２５ｍｇ／Ｌ  ビオチン、１ｍｇ／Ｌ  ピリドキシン、１ｍ／Ｌ  パントテナート、７５ｍｇ／Ｌ  ヒスチジン、７５ｍｇ／Ｌ  グリシン、７５ｍｇ／Ｌ  トリプトファン、１５０ｍｇ／Ｌ  アルギニン、１５０ｍｇ／Ｌ  メチオニン、１５０ｍｇ／Ｌ  スレオニン、２２５ｍｇ／Ｌ  バリン、２２５ｍｇ／Ｌ  イソロイシン、３００ｍｇ／Ｌ  ロイシン、４００ｍｇ／Ｌ  システインおよび４５０ｍｇ／Ｌ  プロリン（Ｔｈｅｒｉｏｔ  ＣＭら，Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１４；５：３１１４）に懸濁させて、１％  ｗ／ｖ  糞便スラリーを調製した。
【０２８４】
調製された１％  ｗ／ｖ  糞便スラリーを、選択されたオリゴ糖組成物またはラクツロースにさらし、アンモニアレベルが有効に減少するかどうかを試験したオリゴ糖組成物およびラクツロースを０．５％  ｗ／ｖの最終濃度で９６ウェル・ディープ・ウェル・マイクロプレートに加え、「無添加グリカン」対照には水を加え、ウェル当たりの最終体積を５００μＬにした。試験化合物とスラリーとの混合物を嫌気的に３７℃で４５時間インキュベートした。
【０２８５】
本明細書に記載されているとおりのエクスビボでのインキュベーションの後、３，７１６×ｇで１０分間の遠心分離により細胞をペレット化し、上清を、それが分析されるまで、−８０℃またはドライアイス上で保存した。サンプルを、１０ｋＤａフィルター（ＡｃｒｏＰｒｅｐ  Ｏｍｅｇａ  １０Ｋ，Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐｏｒｔ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）で１，５００×ｇで１５分間濾過し、水中で元の濃度の１／１０に希釈した。アンモニア比色分析キットＩＩ（Ａｍｍｏｎｉａ  Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  ＩＩ）（Ｋ４７０，Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，Ｍｉｌｐｉｔａｓ  ＣＡ）を使用して、サンプルを分析した。オリゴ糖組成物およびラクツロースのアンモニア比色分析の結果を図３Ｂに示す。アンモニアレベルを陰性対照（水）に対して正規化した。
【０２８６】
４５時間の時点で試験された糞便サンプルにおいて、オリゴ糖組成物は１９名中１８名の肝障害患者のサンプルでアンモニアレベルの低下を示した（図３Ｂ）。オリゴ糖組成物は１９名中１４名の患者でアンモニアレベルの低下においてラクツロースを上回った（図３Ｂ）。これは、オリゴ糖組成物の投与が、肝障害患者のアンモニアレベルを低下させるために利用されうることを示唆している。
【０２８７】
実施例５：デキストロース一水和物または７０ＤＳコーンデキストロースシロップからの１００ｇスケールでのオリゴ糖組成物の製造
実施例１〜４に記載されている選択されたオリゴ糖組成物を１００グラムのスケールで合成するための方法を開発した。この方法は、後記のとおり、デキストロース一水和物またはコーンデキストロースシロップのいずれかのようなグルコース源から出発する、選択されたオリゴ糖組成物の合成を可能にする。この方法では、オーバーヘッドスターラーが配置された加熱マントルを備えた多頚反応容器を利用した。プローブ熱電対をセプタムを介して容器内に配置し、この場合、プローブ先端が攪拌ブレードの上方に位置するようにし、反応容器の壁と接触しないようにした。
【０２８８】
デキストロース一水和物（１００グラム、乾燥固体基準）または９５ＤＥ，７０ＤＳコーンデキストロースシロップ（１００グラム、乾燥固体基準）のいずれかとしてのＤ（＋）グルコースを使用して、該方法を実施した。デキストロース一水和物を使用してオリゴ糖を製造する場合には、最初に還流反応配置で冷却器を配置した。７０ＤＳコーンデキストロースシロップを使用してオリゴ糖を製造する場合には、最初に装置を蒸留用に構築した。
【０２８９】
該方法においては、多頚反応容器に、まず、１０９．９ｇのデキストロース一水和物粉末（または１４２．９ｇの７０ＤＳ  ９５  ＤＥコーンシロップ）を仕込んで、１００ｇの乾燥グルコースを反応に供与した。
【０２９０】
温度制御器を１３０℃に設定し、容器の内容物を攪拌して、均一な熱伝達を促し、糖固体を溶融させた。シロップの温度を周囲圧力（大気圧）下で約１３０℃にした。
【０２９１】
反応容器にデキストロース一水和物を仕込んだ場合には、シロップが約１３０℃の温度になったら、冷却還流系を蒸留構成に切り替えた。反応容器に７０ＤＳコーンデキストロースシロップを仕込んだ場合には、シロップが１３０℃に達したら、冷却還流系を蒸留構成で維持した。
【０２９２】
次に、容器に７グラム（乾燥固体基準）のオリゴマー化触媒（Ｄｏｗｅｘ（登録商標）Ｍａｒａｔｈｏｎ（登録商標）Ｃ）を仕込んで反応混合物を生成させた。幾つかの場合には、該触媒を、湿潤形態で、例えば、４５〜５０  ｗｔ％  Ｈ２Ｏの名目含水率で取り扱った。厳密な触媒含水量は、一般に、例えば水分分析天びん（例えば、Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ  ＭＪ−３３）を使用して、実験ごとに決定された。
【０２９３】
触媒を添加したら、系を連続的混合下、約１３０℃で約４時間（ＨＰＬＣによって反応を追跡することにより決定される）維持した。次に、一定の攪拌を維持しながら、加熱を停止した。
【０２９４】
ついで、生成物混合物が溶解固体約７０重量％の最終濃度になるまで、約６０ｍｌの熱い（約８０℃）脱イオン（ＤＩ）水をゆっくり加えて生成物混合物を希釈し冷却することにより、反応をクエンチした。一般に、オリゴ糖組成物が冷却され希釈される際に混合物の粘度が制御されるように、生成物混合物に水を加える速度を調節した。
【０２９５】
希釈後、オリゴ糖組成物を約６０℃に冷却した。ついで１００ミクロンメッシュスクリーンまたはフリットガラスフィルターによる真空濾過により触媒を除去して、最終的なオリゴ糖組成物を得た。
【０２９６】
実施例６：デキストロース一水和物からの１０ｋｇスケールでのオリゴ糖組成物の製造
本実施例は、２２Ｌの水平混合反応器における１０ｋｇスケールでの、実施例１〜４に記載されている選択されたオリゴ糖組成物の合成を示す。
【０２９７】
約１０ｋｇの食品等級デキストロース一水和物を、熱油ジャケットを備えた２２Ｌの水平プラウミキサー（Ｌｉｔｔｌｅｆｏｒｄ−Ｄａｙ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＫＹ）内に仕込んだ。３０ＲＰＭで連続的に混合しながら、約１２０℃の温度に徐々に加熱することにより、デキストロースを溶融させた。ついで１．２７ｋｇ（乾燥固体基準で０．７０ｋｇ）の固体酸触媒［例えば、スルホン酸部分を含むスチレン−ジビニルベンゼン、例えば、Ｄｏｗｅｘ（登録商標）Ｍａｒａｔｈｏｎ（登録商標）Ｃ樹脂］を反応混合物に加えて、混合懸濁液を生成させた。連続的な混合を３０ＲＰＭに維持しながら、反応温度を大気圧で約１３０℃まで３時間かけて徐々に上昇させた。反応を１３０℃の温度で７時間維持した。ついで熱脱イオン水を反応混合物に徐々に添加した。この場合、該添加は、反応器内容物の温度が１２０℃に低下するまでは６ｍＬ／分の速度で、ついで反応器内容物の温度が１１０℃に下がるまでは１５０ｍＬ／分で、ついで合計６ｋｇの水が添加され反応器内容物の温度が１００℃未満に低下するまでは４８０ｍＬ／分で行った。反応器内容物を更に８５℃未満に冷却し、ついで１００メッシュスクリーンに通過させることにより反応器を空にして、オリゴ糖組成物から固体酸触媒を除去した。約１２ｋｇの生成物が回収された。
【０２９８】
オリゴ糖組成物を脱イオン水中で約３５重量％の濃度に更に希釈し、ついで、カチオン交換樹脂［Ｄｏｗｅｘ（登録商標）Ｍｏｎｏｓｐｈｅｒｅ  ８８Ｈ］カラム、アニオン交換樹脂［Ｄｏｗｅｘ（登録商標）Ｍｏｎｏｓｐｈｅｒｅ  ７７ＷＢＡ］カラム、脱色ポリマー樹脂［Ｄｏｗｅｘ（登録商標）ＯｐｔｉＰｏｒｅ  ＳＤ−２］およびアニオン交換樹脂［Ｄｏｗｅｘ（登録商標）Ｍｏｎｏｓｐｈｅｒｅ  ７７ＷＢＡ］カラム内に流すことにより精製した。ついで、得られた精製物質を真空回転蒸発により固体約７５重量％の最終濃度まで濃縮して、精製オリゴ糖組成物を得た。
【０２９９】
実施例７：過メチル化分析を用いるグリコシド結合分布の決定
実施例１〜４に記載されている選択されたオリゴ糖組成物のサンプルのグリコシド結合分布の決定を、後記プロトコルに従う過メチル化分析を用いて行った。実施例５、６および１４の製造方法を用いて製造された選択されたオリゴ糖組成物のサンプルを、この方法を用いて分析した。
【０３００】
この方法で使用した試薬には、メタノール、酢酸、重水素化ホウ素ナトリウム、炭酸ナトリウム、ジクロロメタン、イソプロパノール、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）および無水酢酸が含まれる。この方法で使用した装置には、加熱ブロック、乾燥装置、キャピラリーカラムおよびＲＩＤ／ＭＳＤ検出器を備えたガスクロマトグラフならびに３０メートルのＲＴＸ（登録商標）−２３３０（ＲＥＳＴＥＫ）が含まれる。全ての誘導体化方法はドラフト内で行った。
【０３０１】
アルジトールアセタートの調製
Ａ．標準物の調製
以下の標準物アナライトの１ｍｇ／ｍｌ溶液を調製した：アラビノース、ラムノース、フコース、キシロース、マンノース、ガラクトース、グルコースおよびイノシトール。５０μＬのアラビノース、キシロース、フコース、グルコース、マンノースまたはガラクトースを２０μＬのイノシトールとバイアル内で混合することにより、各標準物を調製した。ついで標準物を凍結乾燥した。
【０３０２】
Ｂ．サンプルの調製
１００〜５００μｇの選択されたオリゴ糖組成物（化学天秤で秤量されたもの）を２０μｇ（２０μＬ）のイノシトールとバイアル内で混合することにより、各オリゴ糖サンプルを調製した。
【０３０３】
Ｃ．加水分解
各オリゴ糖サンプルに２００μＬの２Ｍ  トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を加えた。サンプルを含有するバイアルを蓋で密閉し、加熱ブロック上で１２１℃で２時間インキュベートした。２時間後、サンプルを加熱ブロックから取り出し、室温に冷却した。ついでサンプルをＮ２／空気で乾燥させた。２００μＬのイソプロパノール（ＩＰＡ）を加え、Ｎ２／空気で再び乾燥させた。この加水分解工程（１２１℃で２時間のＴＦＡの添加；イソプロパノールでの洗浄）を２回繰り返した。
【０３０４】
標準物を、サンプルに関して記載されているのと同様に、ＴＦＡを使用する加水分解に付した。
【０３０５】
Ｄ．還元およびアセチル化
重水素化ホウ素ナトリウムの１０ｍｇ／ｍＬ溶液を１Ｍ  水酸化アンモニウム中で調製した。この溶液２００μＬを各オリゴ糖サンプルに加えた。ついでサンプルを室温で少なくとも１時間または一晩インキュベートした。重水素化ホウ素ナトリウム溶液とのインキュベーションの後、５滴の氷酢酸をサンプルに加え、ついで５滴のメタノールを加えた。ついでサンプルを乾燥させた。５００μＬの９：１  ＭｅＯＨ：ＨＯＡｃをサンプルに加え、ついで乾燥させた（２回反復）。ついで５００μＬのＭｅＯＨをサンプルに加え、ついで乾燥させた（１回反復）。これは、表面が硬い白色残渣をサンプルバイアルの側面に生成させた。
【０３０６】
ついで２５０μＬの無水酢酸を各サンプルバイアルに加え、サンプルをボルテックスして溶解させた。２３０μＬの濃縮ＴＦＡを各サンプルに加え、サンプルを５０℃で２０分間インキュベートした。サンプルの加熱を止め、サンプルを室温に冷却した。約１ｍＬのイソプロパノールを加え、サンプルを乾燥させた。ついで約２００μＬのイソプロパノールを加え、サンプルを再び乾燥させた。ついで約１ｍＬの０．２Ｍ  炭酸ナトリウムを各サンプルに加え、それを穏やかに混合した。最後に約２ｍＬのジクロロメタンを各サンプルに加え、ついでそれをボルテックスし、短時間遠心分離した。水性上層を廃棄した。１ｍＬの水を加え、サンプルをボルテックスし、短時間遠心分離した。この工程を繰り返した後、有機層（下層）を取り出し、別のバイアルに移した。Ｎ２／空気を使用して、各サンプルを約１００μＬの最終体積まで濃縮した。ついで１μＬの最終サンプルをＧＣ−ＭＳに注入した。
【０３０７】
ＧＣ温度プログラムＳＰ２３３０をＧＣ−ＭＳ分析に利用した。初期温度は８０℃であり、初期時間は２．０分であった。最初の勾配は３０℃／分の速度であり、最終温度は１７０℃であり、最終時間は０．０分であった。第２の勾配は４℃／分の速度であり、最終温度は２４０℃であり、最終時間は２０．０分であった。
【０３０８】
箱守メチル化による多糖およびオリゴ糖のグリコシル結合分析
Ａ．ＮａＯＨ塩基の調製
ガラス・スクリュー・トップ・チューブ（ｇｌａｓｓ  ｓｃｒｅｗ  ｔｏｐ  ｔｕｂｅ）内で、１００μＬの５０／５０  ＮａＯＨ溶液と２００μＬの乾燥ＭｅＯＨとを混合した。ＮａＯＨにはプラスチックピペットを使用し、ＭｅＯＨにはガラスピペットを使用した。溶液を短時間ボルテックスし、約４ｍＬの乾燥ＤＭＳＯを加え、溶液を再びボルテックスした。チューブを遠心分離して溶液を濃縮し、ＤＭＳＯおよび塩をペレットからピペットで取り除いた。ペレットから全ての水を除去するために、前の２つの工程を約４回繰り返した。チューブの側面から全ての白色残渣を除去した。全ての残渣が除去され、ペレットが透明になったら、約１ｍＬの乾燥ＤＭＳＯを加え、溶液をボルテックスした。これで塩基を使用する準備が整った。塩基は、それが必要になるたびに、新たに調製された。
【０３０９】
Ｂ．過メチル化
６００〜１０００μｇの選択されたオリゴ糖組成物（化学天秤で秤量されたもの）を２００μＬのＤＭＳＯと混合することにより、各サンプルを調製した。オリゴ糖組成物が溶解するまで、サンプルを一晩撹拌した。
【０３１０】
等量のＮａＯＨ塩基（４００μＬ）をサンプルに加え、ついでサンプルを攪拌装置に戻し、１０分間良く混合した。１００μＬのヨードメタン（ＣＨ３Ｉ）をサンプルに加えた。サンプルを攪拌装置で２０分間混合し、ついで前工程（ＮａＯＨ塩基およびヨードメタンの添加）を繰り返した。
【０３１１】
約２ｍｌの超純水をサンプルに加え、サンプルを、それが濁るように十分に混合した。ピペットの先端をチューブの底のサンプル溶液内に入れ、非常に低い空気流でＣＨ３Ｉを起泡除去した。ＣＨ３Ｉが起泡除去されるにつれて、サンプルが透明になった。全てのＣＨ３Ｉが消失したことを確認するために、ピペットを溶液周囲に移動させた。ついで約２ｍＬの塩化メチレンを加え、溶液をボルテックスにより３０秒間良く混合した。ついでサンプルを遠心分離し、上部水層を除去した。約２ｍＬの水を加え、サンプルを混合し、ついで短時間遠心分離し、ついで上部水層を除去した。塩化メチレンおよび水の添加を繰り返した。有機下層を取り出し、別のチューブに移し、Ｎ２を使用して乾燥させた。アルジトールアセタートの分析を続けた。
【０３１２】
Ｃ．加水分解
各オリゴ糖サンプルに２００μＬの２Ｍ  トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を加えた。サンプルを含有するバイアルを蓋で密閉し、加熱ブロック上で１２１℃で２時間インキュベートした。２時間後、サンプルを加熱ブロックから取り出し、室温に冷却した。ついでサンプルをＮ２／空気で乾燥させた。２００μＬのイソプロパノール（ＩＰＡ）を加え、Ｎ２／空気で再び乾燥させた。この加水分解工程（１２１℃で２時間のＴＦＡの添加；イソプロパノールでの洗浄）を２回繰り返した。
【０３１３】
Ｄ．還元およびアセチル化
重水素化ホウ素ナトリウムの１０ｍｇ／ｍＬ溶液を１Ｍ  水酸化アンモニウム中で調製した。この溶液２００μＬを各オリゴ糖サンプルに加えた。ついでサンプルを室温で少なくとも１時間または一晩インキュベートした。重水素化ホウ素ナトリウム溶液とのインキュベーションの後、５滴の氷酢酸をサンプルに加え、ついで５滴のメタノールを加えた。ついでサンプルを乾燥させた。５００μＬの９：１  ＭｅＯＨ：ＨＯＡｃをサンプルに加え、ついで乾燥させた（２回反復）。ついで５００μＬのＭｅＯＨをサンプルに加え、ついで乾燥させた（１回反復）。これは、表面が硬い白色残渣をサンプルバイアルの側面に生成させた。
【０３１４】
ついで２５０μＬの無水酢酸を各サンプルバイアルに加え、サンプルをボルテックスして溶解させた。２３０μＬの濃縮ＴＦＡをサンプルに加え、サンプルを５０℃で２０分間インキュベートした。サンプルの加熱を止め、サンプルを室温に冷却した。約１ｍＬのイソプロパノールを加え、サンプルを乾燥させた。ついで約２００μＬのイソプロパノールを加え、サンプルを再び乾燥させた。ついで約１ｍＬの０．２Ｍ  炭酸ナトリウムをサンプルに加え、それを穏やかに混合した。最後に約２ｍＬのジクロロメタンをサンプルに加え、ついでそれをボルテックスし、短時間遠心分離した。水性上層を廃棄した。１ｍＬの水を加え、サンプルをボルテックスし、短時間遠心分離した。この工程を繰り返した後、有機層（下層）を取り出し、別のバイアルに移した。Ｎ２／空気を使用して、各サンプルを約１００μＬの最終体積まで濃縮した。ついで１μＬの最終サンプルをＧＣ−ＭＳに注入した。
【０３１５】
ＧＣ温度プログラムＳＰ２３３０をＧＣ−ＭＳ分析に利用した。初期温度は８０℃であり、初期時間は２．０分であった。最初の勾配は３０℃／分の速度であり、最終温度は１７０℃であり、最終時間は０．０分であった。第２の勾配は４℃／分の速度であり、最終温度は２４０℃であり、最終時間は２０．０分であった。
【０３１６】
実施例８：過メチル化分析を用いるグリコシド結合分布の確立方法
脱単量体化オリゴ糖組成物の１０バッチに関して実施例７に示されている方法を用いて、過メチル化データを収集した（ここで、オリゴ糖組成物は、実施例５に記載されている方法により製造された）。これらのバッチは、実施例９に記載されている方法に従い脱単量体化された。この分析の結果を表４に示す。
【０３１７】
各過メチル化データセットに関して、表４に列挙されている全ピークのＡＵＣの合計値を測定した。
【０３１８】
表４に列挙されている各ピークに関して、ピークのＡＵＣを全ピークのＡＵＣの合計値により割り算し、有効数字３桁の百分率に変換し、記録した。
【０３１９】
与えられたデータセットにおける記録された百分率値の合計は１００％であると確認された。
【０３２０】
標準的な式を用いて全データセットにわたって決定された各ピークに関する平均値が表４に示されている。
【０３２１】
標準的な式を用いて全データセットにわたって決定された各ピークに関する標準偏差（ＳＴＤ）が表４に示されている。
【０３２２】
（平均 Ｐ１＋５＊ＳＴＤ Ｐ１）より小さく、（平均 Ｐ１−５＊ＳＴＤ Ｐ１）より大きいと決定された、選択されたオリゴ糖組成物の各ピークの許容範囲が表４に示されている。
【表４２】
2021534193.tif 000059
【０３２３】
また、実施例１４に記載されている方法により製造されたオリゴ糖組成物の５バッチに関して実施例７に示されている方法を用いて、過メチル化データを収集した。この分析の結果を表６に示す。
【表４３】
2021534193.tif 000060
【０３２４】
実施例９：脱単量体化方法
実施例５の方法を用いて製造された精製オリゴ糖組成物の個々のバッチをブリックス（Ｂｒｉｘ）屈折計による測定で約５０Ｂｘまでロータリーエバポレーターで濃縮した。得られた濃縮シロップ（２００ｍｇ）を、ルアー・チップ・シリンジを使用して、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ  ＲｅｄｉＳｅｐ  Ｒｆ  Ｇｏｌｄアミンカラム（１１グラムの固定相）上にローディングした。Ｂｉｏｔａｇｅ  ＳＮＡＰ  ＫＰ−ＮＨカートリッジのような他の類似カラムも使用可能である。ついで、５５カラム体積にわたって２０／８０〜５０／５０（ｖ／ｖ）の脱イオン水／ＡＣＮ移動相勾配を用いて、ＥＬＳＤ検出器を備えたＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａで濃縮シロップを精製した。Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ  Ｒｆのような他のフラッシュクロマトグラフィー系も使用可能である。カラムおよび系に関する製造業者の仕様に従い流量を設定した。単量体画分が約２０カラム体積で完全に溶出した後、残りのオリゴ糖組成物が溶出し収集されるまで、移動相を１００％水に設定した。非単量体含有画分をロータリーエバポレーターにより濃縮して、脱単量体化生成物を得た。未修飾および脱単量体化組成物のＳＥＣ−ＨＰＬＣを図４に示す。
【０３２５】
実施例１０：バリアン・ユニティ・イノバＮＭＲ装置を使用するＨＳＱＣ分析方法
実施例１〜４に記載されている選択されたオリゴ糖組成物のサンプルのＨＳＱＣ  ＮＭＲスペクトルの決定を、後記プロトコルに従いバリアン・ユニティ・イノバ（Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ  Ｉｎｏｖａ）ＮＭＲを用いて行った。選択されたオリゴ糖組成物の１５８個の調製物を、本明細書に記載されているＮＭＲ法を用いて分析した。これらの調製物のうちの１４８個は２２リットルの反応において製造し（実施例６に記載されているとおり）、５個の調製物は１８９リットル（５０ガロン）の反応において製造し、５個の調製物は２，８４０リットル（７５０ガロン）の反応において製造した（実施例１４に記載されているとおり）。大きほうのスケール（１８９リットルおよび２，８４０リットル）で製造されたオリゴ糖バッチは脱単量体化されなかった。実施例９に記載されているとおり、２２リットルで製造されたオリゴ糖調製物の一部は脱単量体化された。
【０３２６】
方法
サンプルの調製：
選択されたオリゴ糖組成物のサンプルの２５ｍｇを、内部標準として０．１％  アセトンを含有する３００μＬのＤ２Ｏ中に溶解した。ついで溶液を３ｍｍのＮＭＲチューブ内に入れた。
【０３２７】
ＮＭＲ実験：
１３Ｃに調整されたＺ軸勾配を有するＸＤＢ広帯域プローブを備えた４９９．８３ＭＨｚ（１２５．６９ＭＨｚ  １３Ｃ）で運転され２５℃で運転されるバリアン・ユニティ・イノバ（Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ  Ｉｎｏｖａ）において、各サンプルを分析した。コヒーレンス選択のためにエコー−アンチエコースキームを用いる多重編集勾配増強１Ｈ−１３Ｃ異核種単一量子コヒーレンス（ＨＳＱＣ）実験に各サンプルを付した。以下のパルスシーケンス図ならびに取得および処理パラメータを用いて、各サンプルのＮＭＲスペクトルを得た。
【０３２８】
パルスシーケンス図
【化１５】
2021534193.tif 000061
【０３２９】
取得パラメータ
・１Ｈキャリア周波数＝４ｐｐｍ
・１３Ｃキャリア周波数＝６５ｐｐｍ
・取得次元のポイント数＝５９６
・取得次元のスペクトル範囲＝６．００ｐｐｍ〜２．０３ｐｐｍ
・間接次元のポイント数＝３００個の複合ポイント
・間接次元のスペクトル範囲＝１２０ｐｐｍ〜１０ｐｐｍ
・リサイクル遅延＝１秒
・１結合１Ｈ−１３Ｃ結合定数＝ＪＣＨ＝１４６Ｈｚ
・スキャン数＝８
・温度＝２９８Ｋ
・溶媒＝Ｄ２Ｏ
処理パラメータ
・直接次元における窓関数＝ガウシアン・ブロードニング、７．６６Ｈｚ
・間接次元における窓関数＝ガウシアン・ブロードニング、２６．４８Ｈｚ
処理＝直接次元における５１２個の複合ポイント、間接次元における１０２４個の複合ポイント
スペクトル分析：
得られたスペクトルを、Ｍｅｓｔｒｅｌａｂ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓａｎｔｉａｇｏ  ｄｅ  Ｃｏｍｐｏｓｔｅｌａ，Ｓｐａｉｎ）のＭＮｏｖａソフトウェアパッケージを使用して分析した。スペクトルを内部アセトンシグナル（１Ｈ−２．２２ｐｐｍ；１３Ｃ−３０．８ｐｐｍ）に対して参照し、Ｆ２およびＦ１の両次元でリージョンズ（Ｒｅｇｉｏｎｓ）２Ｄ法を用いて位相調整した。Ｆ２およびＦ１の両次元において、９０度ずらした正弦を用いるアポダイゼーションを適用した。各スペクトルに関して、個々のシグナル（Ｃ−Ｈ相関）を、楕円形の積分形状を有する「予め定義された積分領域」を用いて、それらのそれぞれのピークの積分により定量した。得られた各スペクトルの積分領域および値の表を、値が合計に対する百分率を表すように、合計１００に対して正規化した。単量体に関連したピークを回避するようにピーク積分領域を選択した。
【０３３０】
結果
選択されたオリゴ糖組成物の１５８個の調製物［１４８個の調製物は、実施例６の方法を用いて、２２Ｌのスケールで製造された；選択されたオリゴ糖組成物の５個のバッチは１８９Ｌ（５０ガロン）のスケールで製造された；そして選択されたオリゴ糖組成物の５個のバッチは、実施例１４の方法を用いて、２，８４０Ｌ（７５０ガロン）のスケールで製造された］を、前記のＮＭＲ法を用いて分析した。総合すると、これらのバッチは以下のＮＭＲピークシグナルを含んでいた。
【表４４】
2021534193.tif 000062
【０３３１】
シグナル１〜１４の各個のシグナルの曲線下面積（ＡＵＣ）を全シグナル１〜１４の合計ＡＵＣに対して決定した。シグナル１〜１４のそれぞれのＡＵＣを、２２Ｌスケールで製造された選択されたオリゴ糖組成物の１４８個の調製物に関して決定した。１４８個の調製物のＨＳＱＣ  ＮＭＲ分析の集計結果を要約した統計を表７に示す。
【表４５】
2021534193.tif 000063
【０３３２】
積分領域のピーク（ＡＵＣ）の各々の相対サイズを、５０ガロンおよび７５０ガロンのスケール（実施例１４に記載されているとおり）で製造された選択オリゴ糖組成物の１０個の調製物に関して決定した。１０個の全調製物のＨＳＱＣ  ＮＭＲ分析の集計結果を要約した統計を表８に示す。
【表４６】
2021534193.tif 000064
【０３３３】
実施例１１．サイズ排除クロマトグラフィー
実施例１〜４に記載されている選択されたオリゴ糖組成物のバッチおよびサンプルの重量平均分子量（ＭＷｗ）、数平均分子量（ＭＷｎ）および多分散指数（ＰＤＩ）をＳＥＣ  ＨＰＬＣにより決定した。
【０３３４】
方法
これらの方法は、２つのＡｇｉｌｅｎｔ  ＰＬ  Ａｑｕａｇｅｌ−ＯＨ  ２０（７．５×３００ｍｍ、５μｍ）直列カラムを備えた屈折率（ＲＩ）検出器を有するＡｇｉｌｅｎｔ  １１００を使用した。
【０３３５】
３４ｇのＮａＮＯ３（ＡＣＳ等級試薬）を秤量し、２０００ｍＬの脱イオン（ＤＩ）水（ＭｉｌｉＱ水フィルターからのもの）に溶解することにより、移動相（０．２Ｍ  ＮａＮＯ３）を調製した。溶液を０．２μｍフィルターで濾過した。
【０３３６】
Ｄ−（＋）グルコース（分析標準物、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、カタログ番号４７８２９）、ＰＰＳ−ｐｕｌ３４２（ＭＰ：３４２）、ＰＰＳ−ｐｕｌ１．３ｋ（ＭＰ：１０８０）、ＰＰＳ−ｐｕｌ６ｋ（Ｍｐ：６１００）、ＰＰＳ−ｐｕｌ１０ｋ（Ｍｐ：９６００）およびＰＰＳ−ｐｕｌ２２ｋ（Ｍｐ：２２０００）のそれぞれのポリマー標準溶液（１０．０ｍｇ／ｍｌ）を、２０ｍｇの標準物を別の２０ｍＬシンチレーションバイアル内に量り取り各バイアルに２．０ｍＬのＤＩ水を加えることにより調製した。
【０３３７】
サンプルＡを二重に調製した。約３００ｍｇのオリゴ糖サンプルを２０ｍＬシンチレーションバイアル内に量り取り、１０ｍＬのＤＩ水を加えた。溶液を混合し、０．２μｍポリエーテルスルホン膜を備えたＡｃｒｏｄｉｓｃ  ２５ｍｍシリンジフィルターで濾過した。
【０３３８】
サンプルＢを二重に調製した。約２１０ｍｇのオリゴ糖サンプルを２０ｍＬのシンチレーションバイアル内に量り取り、１０ｍＬのＤＩ水を加えた。溶液を混合し、０．２μｍポリエーテルスルホン膜を備えたＡｃｒｏｄｉｓｃ２５ｍｍシリンジフィルターで濾過した。
【０３３９】
サンプルを実施に付す少なくとも２時間前に流速を０．９ｍＬ／分に設定し、カラム温度およびＲＩ検出器をそれぞれ４０℃に設定し、ＲＩ検出器パージをオンにした。
【０３４０】
検出器のパージを停止させ、サンプルの実施前に許容ベースラインが得られるまでポンプを０．９ｍＬ／分で作動させた。各サンプルの注入体積は１０μＬであり、実施時間は２８分であった。
【０３４１】
ＤＩ水からなるブランクサンプルを実施に付した。各標準のサンプルを実施に付した。サンプルＡを実施に付した。サンプルＢを実施に付した。
【０３４２】
１５〜２２分のピークを積分した。サンプルクロマトグラムに示されているとおり、単量体およびブロードピーク（生成物）を積分した。Ｅｍｐｏｗｅｒ３ソフトウェアにおける検量線フィットタイプを３次に設定した。ブロードピークに関してＥｍｐｏｗｅｒ３ソフトウェアを使用して、分子量分布および多分散度を計算した。生成物ピーク（ＤＰ２＋）のＭｗ、Ｍｎおよび多分散度を記録した。
【０３４３】
結果
実施例６に記載されている方法を用いて（２２Ｌのスケールで）製造された選択されたオリゴ糖組成物の８個のバッチ、５０ガロンのスケールで製造された選択されたオリゴ糖組成物の５個のバッチ、および実施例１４に記載されている方法を用いて（７５０ガロンのスケールで）製造された選択されたオリゴ糖組成物の４個のバッチを、前記のＳＥＣ法を用いて分析した。実施例６の方法を用いて製造された選択されたオリゴ糖バッチは、実施例９の方法を用いて脱単量体化された。これらのバッチに関して収集されたＳＥＣデータを表８、９および１０に示す。
【表４７】
2021534193.tif 000065
【０３４４】
総合すると、表８、９および１０における選択されたオリゴ糖バッチ（２２リットル、１８９リットルおよび２，８４０リットルのバッチ）の平均ＭＷｗは１１５０であり、これらのバッチの平均ＭＷｎは７５５であり、平均多分散度は１．５であった。ＭＷｗは８６９〜１４１１（＋／−３標準偏差で６７１〜１６３０）の範囲であり、ＭＷｎは６２６〜８６３（＋／−３標準偏差で５４４〜９６６）の範囲であり、多分散度は１．４〜１．６の範囲であった。
【０３４５】
実施例１４の方法に従い製造された選択されたオリゴ糖バッチ（表Ｚの２，８４０リットルのバッチ）の平均ＭＷｗは９６３であり、これらのバッチの平均ＭＷｎは６６７であり、平均多分散度は１．４であった。ＭＷｗは８６９〜１０３８（＋／−３標準偏差で４８３〜１４４２）の範囲であり、ＭＷｎは６２６〜６９７（＋／−３標準偏差で４５６〜８７８）の範囲であり、多分散度は１．４〜１．５の範囲であった。
【０３４６】
実施例１２．不純物を測定するためのＳＥＣ  ＨＰＬＣ法
実施例１〜４に記載されている選択されたオリゴ糖組成物のバッチおよびサンプルにおける残留有機酸不純物および関連物質の存在を測定するために、ＳＥＣ  ＨＰＬＣを用いた。
【０３４７】
方法
これらの方法は、ガードカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＭｉｃｒｏＧｕａｒｄカチオンＨ＋カートリッジ，ＰＩＮ  １２５−０１２９または等価体）およびＢｉｏ−Ｒａｄ  Ａｍｉｎｅｘ  ＨＰＸ−８７Ｈ，３００×７．８ｍｍ，９μμｍ，ＰＩＮ  １２５−０１４０を備えた屈折率（ＲＩ）検出器を有するＡｇｉｌｅｎｔ  １１００を使用した。
【０３４８】
ボトルに２０００ｍＬのＤＩ水を充填し、２．７ｍＬのＨ２ＳＯ４をゆっくり加えることにより、移動相（水中の２５ｍＭ  Ｈ２ＳＯ４）を調製した。溶液を０．２μｍフィルターで濾過した。
【０３４９】
５０±２ｍｇの参照標準を１００ｍＬメスフラスコ内で測定し、移動相を１００ｍＬのマークまで加え、よく混合することにより、標準溶液を調製した。
【０３５０】
選択されたオリゴ糖組成物（サンプルＡ）のサンプルを二重に調製した。約１０００ｍｇのオリゴ糖サンプルを１０ｍＬメスフラスコ内で量り取り、移動相をマークまで加えた。溶液を混合し、０．２μｍポリエーテルスルホン膜を備えたＰＥＳシリンジフィルターで濾過した。
【０３５１】
選択されたオリゴ糖組成物（サンプルＢ）のサンプルを二重に調製した。約７００ｍｇのオリゴ糖サンプルを１０ｍＬメスフラスコ内で量り取り、移動相をマークまで加えた。溶液を混合し、０．２μｍポリエーテルスルホン膜を備えたＰＥＳシリンジフィルターで濾過した。
【０３５２】
サンプルを実施に付す少なくとも２時間前に流速を０．６５ｍＬ／分に設定し、カラム温度を５０℃に設定し、ＲＩ検出器温度を５０℃に設定し、ＲＩ検出器パージをオンにした。
【０３５３】
検出器のパージを停止させ、サンプルの実施前に許容ベースラインが得られるまでポンプを０．６５ｍＬ／分で作動させた。各サンプルの注入体積は５０μＬであり、実施時間は４０分であった。
【０３５４】
ＤＩ水からなるブランクサンプルを実施に付した。標準物、サンプルおよびサンプルＢを、それぞれ独立して、実施に付した。
【０３５５】
７．５分（グルクロン酸）、１１．３分（レボグルコサン）、１１．９分（乳酸）、１３．１分（ギ酸）、１４．２分（酢酸）、３１．８分（ＨＭＦ）および８．３分（グルコース）におけるピークを積分した。Ｅｍｐｏｗｅｒ３ソフトウェアにおける検量線フィットタイプを３次に設定した。
【０３５６】
データ
実施例１〜４に記載されており、実施例１４に記載されている方法により製造された選択されたオリゴ糖の４つのバッチを、前記のＨＰＬＣ法を用いて試験した。実施例１４に記載されているとおり、選択されたオリゴ糖組成物（バッチ１〜５）は、それぞれ、１４％、１８％、１７％、１５％および１３％の単量体百分率を有していた。
【表４８】
2021534193.tif 000066
【０３５７】
選択されたオリゴ糖組成物のバッチ１（表１２）を噴霧乾燥し、本明細書に記載されているとおりに不純物に関してアッセイした。該噴霧乾燥調製物は以下の不純物プロファイルを有することが判明した：＜ＬＯＱ  乳酸；０．２０％  ギ酸；＜ＬＯＱ  酢酸；０．５３％  レブリン酸；０．４３％  レボグルコサン；０．２２％  レボグルコサン異性体；および＜ＬＯＱ  ＨＭＦ。このオリゴ糖調製物は１．５％の全不純物（単量体を除く）を含有していた。
【０３５８】
実施例１３．ＤＰ１〜ＤＰ７を測定するためのＳＥＣ  ＨＰＬＣ
実施例１〜４に記載されている選択されたオリゴ糖組成物のバッチおよびサンプルにおける１、２および３＋の重合度（ＤＰ）を有するオリゴ糖の相対量をＳＥＣ  ＨＰＬＣにより決定した。
【０３５９】
方法
これらの方法は、ガードカラム（Ｓｈｏｄｅｘ  ＳＵＧＡＲ  ＳＰ−Ｇ  ６Ｂガードカラム６×５０ｍｍ，１０μｍ，Ｐ／Ｎ  Ｆ６７０００８１または等価体）およびクロマトグラフィーカラム（Ｓｈｏｄｅｘ  Ｓｕｇａｒ  ＳＰ０８１０，８．０×３００ｍｍ，８μｍ，Ｐ／Ｎ  Ｆ６３７８１０５または等価体）を備えた屈折率（ＲＩ）検出器を有するＡｇｉｌｅｎｔ  １１００を使用した。
【０３６０】
４２．５ｇのＮａＮＯ３（ＡＣＳ等級試薬）を秤量し、５０００ｍＬの脱イオン（ＤＩ）水（ＭｉｌｉＱ水フィルターからのもの）に溶解することにより、移動相（０．１Ｍ  ＮａＮＯ３）を調製した。溶液を０．２μｍフィルターで濾過した。
【０３６１】
それぞれのポリマー標準溶液（１０．０ｍｇ／ｍｌ）Ｄ−（＋）グルコースＭｐ  １８０，Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｔｄ標準物（Ｓｔａｎｄａｒｄ）または等価体（ＣＡＳ＃５０−９９−７）（ＤＰ１）；マルトースＭｐ  ３４２，Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｔｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄまたは等価体（ＣＡＳ＃６９−７９−４）（ＤＰ２）；マルトトリオースＭｐ  ５０４，Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｔｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄまたは等価体（ＣＡＳ＃１１０９−２８−０）（ＤＰ３）；マルトテトラオースＭｐ  ６６７，Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｔｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄまたは等価体（ＣＡＳ＃３４６１２−３８−９）（ＤＰ４）；マルトペンタオースＭｐ  ８２８，Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｔｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄまたは等価体（ＣＡＳ＃３４６２０−７６−３）（ＤＰ５）；マルトヘキサースＭｐ  ９９０，Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｔｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄまたは等価体（ＣＡＳ＃３４６２０−７７−４）（ＤＰ６）；マルトヘプタオースＭｐ  １１５３，Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｔｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄまたは等価体（ＣＡＳ＃３４６２０−７８−５）（ＤＰ７）；およびマルトオクタオースＭｐ  １３１５，Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｔｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄまたは等価体（ＣＡＳ＃６１５６−８４−９）（ＤＰ８）を、１０ｍｇの各標準物を個別の１．５ｍＬ遠心分離管内に量り取り、ＤＩ水を加えて１０ｍｇ／ｍＬ溶液にすることにより調製した。
【０３６２】
選択されたオリゴ糖組成物のサンプルを１０ｍｇ／ｍＬの濃縮サンプルまたは２．５〜３．５ブリックス（Ｂｒｉｘ）までの希釈水性サンプルとして調製した。
【０３６３】
サンプルを実施に付す少なくとも２時間前に流速を１．０ｍＬ／分に設定し、カラム温度を７０℃に設定し、ＲＩ検出器温度を４０℃に設定し、ＲＩ検出器パージをオンにした。
【０３６４】
検出器のパージを停止させ、サンプルの実施前に許容ベースラインが得られるまでポンプを１．０ｍＬ／分で作動させた。各サンプルの注入体積は５μＬであり、実施時間は１５分であった。
【０３６５】
ＤＩ水からなるブランクサンプル、個々の標準物およびサンプルを独立して実施に付した。
【０３６６】
サンプル実施における４〜９．２分における各ピーク（ここの標準物に対応する）を積分した。それらの標準物の重ね合わせを図５に示す。Ｅｍｐｏｗｅｒ３ソフトウェアにおける検量線フィットタイプを３次に設定した。選択されたオリゴ糖組成物のサンプルのＤＰ１、ＤＰ２およびＤＰ３＋値を、これらの方法を用いて決定した。
【０３６７】
結果
２２Ｌのスケール（７個バッチ、実施例６）、５０ガロンのスケール（３個のバッチ）および７５０ガロンのスケール（３個のバッチ、実施例１４）で製造された選択されたオリゴ糖組成物のサンプルを前記のとおりにアッセイした。表１３はこれらの分析の結果を示す。
【表４９】
2021534193.tif 000067
【０３６８】
総合すると、選択されたオリゴ糖組成物のサンプルは１４．４１％（±２．９３％）の平均単量体（ＤＰ１）比率および８．３８％（±１．３１％）の平均二糖（ＤＰ２）比率を示した。実施例１４の製造方法に従い製造された選択されたオリゴ糖バッチは１６．８７％（±１．５１％）の平均単量体（ＤＰ１）比率および９．４１％（±０．８１％）の平均二糖（ＤＰ２）比率を示した。
【０３６９】
実施例１４．デキストロース一水和物からの７８０ｋｇスケールでのオリゴ糖組成物の製造
実施例１〜４に記載されている選択されたオリゴ糖組成物を、オーバーヘッド攪拌を伴う２，８４０Ｌ（７５０ガロン）の反応器において７８０ｋｇのスケールで合成した。
【０３７０】
製造を開始するために、約７８０ｋｇの食品等級デキストロース一水和物粉末および約１００ｋｇの固体酸触媒（例えば、スルホン酸部分を含むスチレン−ジビニルベンゼン、例えば、Ｄｏｗｅｘ  ＦＰＣ１６  ＵＰＳ  Ｈイオン交換樹脂）を室温で反応器に加え、１３０℃の内部温度に達するように、連続的に攪拌しながら加熱した。この内部温度を２時間維持した。留出物を凝縮液収集タンク内に凝縮させた。水凝縮物と飼料糖（デキストロース）とのモル比は一般に０．４〜０．９であった。ついで反応器内のオリゴ糖混合物を熱精製水で固体濃度約５０％まで希釈し、１００μｍフィルターで濾過し、ドラムに移した。
【０３７１】
粗製物質を精製水と共に反応器内に戻し、２５℃で１０分間攪拌した。得られた溶液を、微量金属イオン、色素および有機酸を減少させるため、以下のイオン交換樹脂で順次処理した：Ｄｏｗｅｘ  ８８（Ｈ）樹脂（６０分間の処理）、Ｄｏｗｅｘ  Ｏｐｔｉｐｏｒｅ  ＳＤ−２吸着樹脂（２４０分間の処理）およびＤｏｗｅｘ  Ｍｏｎｏｓｐｈｅｒｅ  ７７樹脂（６０分間の処理）。各樹脂と共に攪拌した後、該物質をフィルターバッグに通過させて処理し、または遠心分離して、樹脂を除去し、ついで該物質を反応器に戻した。
【０３７２】
ついで最終溶液を６５℃で真空下、７０〜７４°Ｂｘ（すなわち、約７０％の固体濃度；ここで１°Ｂｘは１００グラムの水性溶液中の１グラムのスクロースである）に濃縮した。真空を解除し、サンプルを取り出して濃度を確認した後、サンプルを排出させた。精製オリゴ糖組成物を５５℃に冷却し、得られた溶液を２０μｍフィルターで濾過し、容器内に集めた。容器を周囲温度で保存した。表１４は、２，８４０リットルのスケールで製造された選択されたオリゴ糖の４個のバッチの或る特性を要約している。
【表５０】
2021534193.tif 000068
【０３７３】
ついで精製オリゴ糖組成物を、固体濃度５０％で完全溶解するまで該精製組成物と米国薬局方（ＵＳＰ）等級の水とを容器内で混合することにより固体粉末に変換した。ついで溶液を噴霧乾燥し、得られた粉末を低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）バッグ内に移した。この物質を、例えば、２つのＬＤＰＥバッグの間に約２８０ｇの乾燥剤が配置された捻じり結束ＬＤＰＥバッグ内にパッケージング（包装）し、例えば、３０ガロンの高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）容器内に、制御された室温で保存した。
【０３７４】
実施例１５．可溶性、不溶性および全食物繊維の測定
実施例１〜４に記載されている選択されたオリゴ糖組成物のバッチの食物繊維の量をＡＯＡＣ  ２０１１．２５（ＡＯＡＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＡＯＡＣ  Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄ  ２０１１．２５，Ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ，Ｓｏｌｕｂｌｅ，ａｎｄ  Ｔｏｔａｌ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｆｉｂｅｒ  ｉｎ  Ｆｏｏｄｓ）の方法に従い測定した。また、これらのオリゴ糖バッチのデキストロース当量（ＤＥ）（乾燥量基準）の比率をＦｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏｄｅｘ（ＦＣＣ）に従い測定した。異なるＤＰ１単量体レベルをそれぞれが有する５個のオリゴ糖バッチを分析した。それらのバッチの１つからは単量体は除去されなかった。それらのオリゴ糖バッチの４つからは単量体が除去されて、それらは１０％の単量体、５％の単量体、３％の単量体または１％未満の単量体を含有していた。この分析の結果を表１５に示す。
【表５１】
2021534193.tif 000069
【０３７５】
実施例１６．ＵＣＤを有するヒト対象における選択されたオリゴ糖組成物の研究
実施例１〜４に記載されている選択されたオリゴ糖組成物の安全性およびＧＩ忍容性を、十分に制御された尿素サイクル異常症（ＵＣＤ）を有する４名の成人対象において、非盲検単一施設臨床研究で評価した。この研究は、ＵＣＤ患者における窒素代謝に対するオリゴ糖組成物の効果を評価することも目的としていた。対象は少なくとも１４歳であり、Ｎ−アセチルグルタミン酸シンテターゼ（ＮＡＧＳ）欠損症、肝移植、または高アンモニア血症（ＨＡ）を引き起こしうる他の病歴を有していなかった。対象は最初に馴化期間（第−７日〜第−１日）を経て、ついで、腸内細菌由来アンモニアを定量するために、安定同位体トレーサーであるラクトース−［１５Ｎ］−ウレイド（５．７ｍｇ／ｋｇ）の投与を第０日〜第３日に受けた。この同位体トレーサー（５．７ｍｇ／ｋｇ）を第２１日〜第２４日にも再び投与した。ラクトース−［１５Ｎ］−ウレイドは窒素代謝のマーカーとして使用される。この安定同位体トレーサーはヒトの酵素によっては消化不能であるが、尿素とラクトース部分とを分離し次いで尿素をアンモニアへと加水分解する結腸細菌産生酵素の基質である。トレーサー消費後の１５Ｎ−アンモニアの産生は結腸細菌（ウレアーゼ）酵素活性の指標となる。忍容性を最大にするために４つの期間［期間１（第４日〜第８日）、期間２（第９日〜第１３日）、期間３（第１４日〜第１８日）および期間４（第１９日〜第２４日）］にわたってオリゴ糖組成物の漸増用量（１人の対象の場合には１日当たり４２グラムまで、そして３人の対象の場合には１日当たり７２グラムまでの最大用量）を対象に投与した。最終投与後、第２５日から第３２日までを洗い出し（ウォッシュアウト）および安全性フォローアップ期間とした。安全性評価のために、および腸窒素代謝のバイオマーカーを評価するために、研究中の種々の時点で対象から血液、尿および糞便を採取した。有害事象（ＡＥ）報告および胃腸忍容性質問票（ＧＩＴＱ）により、安全性評価を第２５日に対象から収集した。
【０３７６】
結果は、選択されたオリゴ糖組成物が安全であり、胃腸忍容性質問票（ＧＩＴＱ）を用いた評価では概ね十分に忍容性であることを示した。対象は軽度鼓腸および胃腸音を報告したが、臨床的に重要な安全性徴候を何ら報告しなかった。治療により生じた有害事象も有害事象による治療中断もなかった。
【０３７７】
データは、オリゴ糖組成物がＵＣＤヒト対象におけるアンモニアを減少させうることを示唆している。糞便中に排泄されるトレーサーの増加および／または尿中に排泄されるトレーサーの量の減少が認められる場合、アンモニアの減少が示唆される。対象の糞便中の１５Ｎトレーサーの全般的増加（ベースラインに対する％）および対象の尿中の１５Ｎトレーサーの減少（ベースラインに対する％）が認められた。標識窒素の尿中排泄は評価可能な患者（すなわち、必要なサンプルを提出した患者）３名のうち２名で減少した。尿中標識１５Ｎ排泄の平均減少は対象全体で１５．２７％（ＳＤ２３．６６）であった。標識窒素の量は４名中３名の対象の糞便において増加した。対象の糞便中の標識１５Ｎ排泄の平均変化は３９．３９％（ＳＤ２６．７９）であった。血漿ＮＨ３レベルは対象において制御され、研究全体を通して正常（ベースライン）レベルのままであった。
【０３７８】
これらのデータは、選択されたオリゴ糖組成物が、ＵＣＤを有する対象および高アンモニア血症に関連した症状を有する他の対象を治療するために使用されうることを示唆している。
【０３７９】
均等物および用語
本明細書に例示的に記載されている開示は、本明細書に具体的に開示されていない任意の１以上の要素または限定の非存在下で適切に実施されうる。したがって、例えば、本明細書における各場合において、「含む」、「から本質的になる」および「からなる」なる語はいずれも、その他の２つの用語のいずれかと置換されうる。使用されている用語および表現は、限定ではなく説明の用語として使用され、そのような用語および表現の使用においては、示され説明されている特徴またはその一部のいずれの均等物をも除外する意図はなく、本開示の範囲内で種々の修飾が可能であると認識される。したがって、本開示は、好ましい実施形態によって具体的に開示されているが、本明細書に開示されている概念の随意的な（すなわち、所望により適用されてもよい）特徴、修飾および変形が当業者によって適用されることが可能であり、そのような修飾および変形は本開示の範囲内であるとみなされると理解されるべきである。
【０３８０】
また、本開示の特徴または態様がマーカッシュ群または他の代替物群として記載されている場合、該開示は、該マーカッシュ群または他の群の任意の個々のメンバーまたはメンバー亜群に関しても、それによって記載される、と当業者は認識するであろう。
【０３８１】
本発明を記載する文脈（特に以下の特許請求の範囲の文脈）における単数形表現および「該」なる語の使用ならびに類似指示対象は、本明細書に特に示されていない限り又は文脈に明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を含むと解釈されるべきである。「含む」、「有する」、「包含する」および「含有する」なる語は、特に示されていない限り、非限定的（オープンエンド）用語（すなわち、「〜を含むが、〜に限定されるものではない」を意味する）と解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書に特に示されていない限り、単に該範囲内の各々の個々の値を個別に指し示す略記法として働くことを意図しているに過ぎず、各々の個々の値は、それが本明細書中に個別に列挙されているかのように本明細書中に組み入れられる。本明細書に記載されている全ての方法は、本明細書に示されていない限り又は文脈に明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施されうる。本明細書中に示されている全ての例または例示的表現（例えば、「のような」）の使用は単に本発明をより一層明らかにすることを意図しているに過ぎず、特許請求の範囲に特に示されていない限り本発明の範囲を限定するものではない。本明細書におけるいかなる文言も、特許請求の範囲に記載されていない要素が本発明の実施に必須であることを示すと解釈されるべきではない。
【０３８２】
本発明の実施形態は本明細書に記載されている。それらの実施形態の変形は、前記説明を読めば当業者に明らかとなるであろう。
【０３８３】
本発明者らは、当業者がそのような変形を適宜用いることを想定しており、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されている以外の方法で本発明が実施されることを意図している。したがって、本発明は、適用可能な法律により許容されるとおり、本明細書に添付された特許請求の範囲に記載されている本発明の全ての修飾および均等物を含む。更に、本明細書に特に示されていない限り又は文脈に明らかに矛盾しない限り、その全ての可能な変形における前記要素の任意の組合せが本発明に含まれる。当業者は、本明細書に記載されている本発明の具体的な実施形態に対する多数の均等物を認識し、または単なる通常の実験を用いて該均等物を確認しうるであろう。そのような均等物は以下の特許請求の範囲に含まれると意図される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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