(57)【要約】  ＣＤ４７抗原結合分子が開示される。ＣＤ４７抗原結合分子をコードする核酸および発現ベクター、ＣＤ４７抗原結合分子を含む組成物、ならびにＣＤ４７抗原結合分子を使用する方法もまた開示される。【選択図】図１
2021500926.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞外領域１においてＣＤ４７に結合することができる、任意選択的に単離された、抗原結合分子。
【請求項２】
前記抗原結合分子がＣＤ４７のＶ型Ｉｇ様ドメインに結合することができる、請求項１に記載の抗原結合分子。
【請求項３】
前記抗原結合分子が、配列番号９に示すアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドに結合することができる、請求項１または請求項２に記載の抗原結合分子。
【請求項４】
前記抗原結合分子が、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害することができる、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項５】
前記抗原結合分子が、ＣＤ４７発現細胞の食作用を増加させることができる、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項６】
前記抗原結合分子が、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、またはからなるペプチドまたはポリペプチドに結合することができる、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項７】
前記抗原結合分子が、ＣＤ４７に結合することができる抗原結合ドメインを含み、前記抗原結合ドメインが、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント
を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項８】
前記抗原結合分子が、
（ａ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｂ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｃ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｄ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｅ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｆ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７アミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｇ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｈ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１４２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント
を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項９】
前記抗原結合分子が、
（ａ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｂ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｃ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｄ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｅ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｆ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｇ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｈ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１４２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項１０】
前記抗原結合分子が、
配列番号２３、３９、１７８、１２７、１２９、１３０、１３１または１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号３１、４４、１７９、１２８、１３３、１３４、１３５または１３６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項１１】
前記抗原結合分子が、
（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｉｉｉ）配列番号１７８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１７９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｉｖ）配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｖ）配列番号１２９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｖｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｖｉｉ）配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｖｉｉｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｉｘ）配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１３３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｘ）配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１３３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｘｉ）配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１３４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｘｉｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１３４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｘｉｉｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１３５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｘｉｖ）配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１３６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項１２】
前記抗原結合分子が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、またはからなるペプチドまたはポリペプチドに結合することができる、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項１３】
前記抗原結合分子が、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号５０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号５８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号５９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント
を含む、請求項１から５または１２のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項１４】
前記抗原結合分子が、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号５０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号５８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号５９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、請求項１から５、１２または１３のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項１５】
前記抗原結合分子が、
配列番号４９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む、請求項１から５または１２から１４のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項１６】
前記抗原結合分子が、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号６６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号６７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号７４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号７５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント
を含む、請求項１から５または１２のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項１７】
前記抗原結合分子が、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号６６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号６７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号７４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号７５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、請求項１から５、１２または１６のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項１８】
前記抗原結合分子が、
配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む、請求項１から５、１２、１６または１７のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項１９】
（ｉ）請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗原結合分子、および（ｉｉ）ＣＤ４７以外の抗原に結合することができる抗原結合分子を含む、任意選択的に単離された、抗原結合分子。
【請求項２０】
前記抗原結合分子が、細胞表面においてＣＤ４７を発現する細胞に結合することができる、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項２１】
前記抗原結合分子が、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害することができる、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項２２】
前記抗原結合分子が、ＣＤ４７発現細胞の食作用を増加させることができる、請求項１から２１のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項２３】
請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項２４】
請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子または請求項２３に記載のＣＡＲをコードする、任意選択的に単離された、核酸、または複数の核酸。
【請求項２５】
請求項２４に記載の核酸または複数の核酸を含む、発現ベクター、または複数の発現ベクター。
【請求項２６】
請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子、請求項２３に記載のＣＡＲ、請求項２４に記載の核酸もしくは複数の核酸、または請求項２５に記載の発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む、細胞。
【請求項２７】
請求項２４に記載の核酸もしくは複数の核酸、または請求項２５に記載の発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞を、前記核酸または発現ベクターからの前記抗原結合分子またはＣＡＲの発現のために好適な条件下で培養するステップを含む、方法。
【請求項２８】
請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子、請求項２３に記載のＣＡＲ、請求項２４に記載の核酸もしくは複数の核酸、請求項２５に記載の発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、または請求項２６に記載の細胞を含む、組成物。
【請求項２９】
医学的治療または予防方法において使用するための、請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子、請求項２３に記載のＣＡＲ、請求項２４に記載の核酸もしくは複数の核酸、請求項２５に記載の発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、請求項２６に記載の細胞、または請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
がんの治療または予防方法において使用するための、請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子、請求項２３に記載のＣＡＲ、請求項２４に記載の核酸もしくは複数の核酸、請求項２５に記載の発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、請求項２６に記載の細胞、または請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
がんの治療または予防方法において使用するための医薬の製造における、請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子、請求項２３に記載のＣＡＲ、請求項２４に記載の核酸もしくは複数の核酸、請求項２５に記載の発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、請求項２６に記載の細胞、または請求項２８に記載の組成物の使用。
【請求項３２】
対象に治療または予防有効量の請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子、請求項２３に記載のＣＡＲ、請求項２４に記載の核酸もしくは複数の核酸、請求項２５に記載の発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、請求項２６に記載の細胞、または請求項２８に記載の組成物を投与するステップを含む、がんを治療または予防する方法。
【請求項３３】
前記がんが、血液学的悪性腫瘍、骨髄血液学的悪性腫瘍、リンパ芽球性血液学的悪性腫瘍、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱がん、脳のがん、膠芽腫、卵巣がん、乳がん、結腸がん、肝臓がん、肝細胞癌、前立腺がん、肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、皮膚がんおよび黒色腫から選択される、請求項３０に記載の使用のための抗原結合分子、核酸もしくは複数の核酸、発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞もしくは組成物、請求項３１に記載の使用、または請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ＣＤ４７発現細胞を請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子と接触させるステップを含む、ＣＤ４７発現細胞の食作用を増加させる方法。
【請求項３５】
ＣＤ４７に結合した請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子を含む、任意選択的に単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体。
【請求項３６】
ＣＤ４７を含有する、または含有することが疑われる試料を請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子と接触させるステップ、およびＣＤ４７との前記抗原結合分子の複合体の形成を検出するステップを含む、方法。
【請求項３７】
ＣＤ４７標的化剤を用いた治療のための対象を選択または層化する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、前記対象からの試料を請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子と接触させるステップ、およびＣＤ４７との前記抗原結合分子の複合体の形成を検出するステップを含む、方法。
【請求項３８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ診断または予後診断剤としての、請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子の使用。
【請求項３９】
がんを検出し、局在決定しまたはイメージングするための方法における請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子の使用であって、任意選択的に、前記がんが、血液学的悪性腫瘍、骨髄血液学的悪性腫瘍、リンパ芽球性血液学的悪性腫瘍、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱がん、脳のがん、膠芽腫、卵巣がん、乳がん、結腸がん、肝臓がん、肝細胞癌、前立腺がん、肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、皮膚がんおよび黒色腫から選択される、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１７年１１月１日に出願されたＧＢ１７１８１０１．７、２０１７年１２月７日に出願されたＧＢ１７２０４２５．６および２０１７年１２月７日に出願されたＧＢ１７２０４２６．４の優先権を主張し、各出願の内容および要素は参照により全ての目的のために本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、分子生物学、より詳細には抗体技術の分野に関する。本発明はまた、医学的治療および予防方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＣＤ４７は、「私を食べるな」（ｄｏｎ’ｔ−ｅａｔ−ｍｅ）シグナルであり、正常細胞上に遍在的に発現され、マクロファージ上のＳＩＲＰαへの結合は食作用を阻害する。ＣＤ４７は、腫瘍中で一般的に過剰発現され、免疫回避および予後不良と相関する。ＣＤ４７−ＳＩＲＰアルファ相互作用の遮断は、腫瘍細胞のマクロファージ食作用を回復させ、抗ＣＤ４７  ｍＡｂは、固形腫瘍および血液学的悪性腫瘍のマウスモデルにおいて抗腫瘍有効性を示している。
【０００４】
ＷＯ２０１４／０８７２４８Ａ２は、約２３．６ｎＭ程度の高さのヒトＣＤ４７に対する親和性を有する単一特異性抗ＣＤ４７抗体を開示する。そこに開示される高親和性ＣＤ４７抗体は実質的な赤血球凝集を誘導する（例えば、ＷＯ２０１４／０８７２４８Ａ２の実施例８を参照）。
【発明の概要】
【０００５】
第１の態様では、本発明は、ＣＤ４７に結合することができる、任意選択的に単離された、抗原結合分子を提供する。
【０００６】
細胞外領域１においてＣＤ４７に結合することができる、任意選択的に単離された、抗原結合分子もまた提供される。
【０００７】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７のＶ型Ｉｇ様ドメインに結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号９に示すアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドに結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害することができる。一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７発現細胞の食作用を増加させることができる。
【０００８】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、またはからなるペプチドまたはポリペプチドに結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント
を含む。
【０００９】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ａ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｂ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｃ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｄ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｅ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｆ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｇ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号：１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、
または
（ｈ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、もしくはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１４２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、もしくはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント
を含む。
【００１０】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ａ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｂ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｃ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｄ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｅ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｆ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号：３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｇ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、
または
（ｈ）
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１４２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む。
【００１１】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
配列番号２３、３９、１７８、１２７、１２９、１３０、１３１または１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号３１、４４、１７９、１２８、１３３、１３４、１３５または１３６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む。
【００１２】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｉｉｉ）配列番号１７８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１７９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｉｖ）配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｖ）配列番号１２９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｖｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｖｉｉ）配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｖｉｉｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｉｘ）配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１３３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｘ）配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１３３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｘｉ）配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１３４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｘｉｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１３４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｘｉｉｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１３５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
または
（ｘｉｖ）配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号１３６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む。
【００１３】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、またはからなるペプチドまたはポリペプチドに結合することができる。
【００１４】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号５０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号５８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号５９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント
を含む。
【００１５】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号５０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号５８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号５９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む。
【００１６】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
配列番号４９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む。
【００１７】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号６６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号６７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号７４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号７５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント
を含む。
【００１８】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号６６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号６７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込む重鎖可変（ＶＨ）領域、および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号７４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号７５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込む軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む。
【００１９】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および
配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む。
【００２０】
別の態様では、本発明は、（ｉ）本発明による抗原結合分子、および（ｉｉ）ＣＤ４７以外の抗原に結合することができる抗原結合分子を含む、任意選択的に単離された、抗原結合分子を提供する。
【００２１】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、細胞表面においてＣＤ４７を発現する細胞に結合することができる。
【００２２】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害することができる。
【００２３】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７発現細胞の食作用を増加させることができる。
【００２４】
別の態様では、本発明は、本発明による抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
【００２５】
別の態様では、本発明は、本発明による抗原結合分子またはＣＡＲをコードする、任意選択的に単離された、核酸、または複数の核酸を提供する。
【００２６】
別の態様では、本発明は、本発明による核酸または複数の核酸を含む、発現ベクター、または複数の発現ベクターを提供する。
【００２７】
別の態様では、本発明は、本発明による抗原結合分子、ＣＡＲ、核酸もしくは複数の核酸、または発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む、細胞を提供する。
【００２８】
別の態様では、本発明は、本発明による核酸もしくは複数の核酸、または発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞を、核酸または発現ベクターからの抗原結合分子またはＣＡＲの発現のために好適な条件下で培養するステップを含む、方法を提供する。
【００２９】
別の態様では、本発明は、本発明による抗原結合分子、ＣＡＲ、核酸もしくは複数の核酸、発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、または細胞を含む、組成物を提供する。
【００３０】
別の態様では、本発明は、医学的治療または予防方法において使用するための、本発明による抗原結合分子、ＣＡＲ、核酸もしくは複数の核酸、発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物を提供する。
【００３１】
別の態様では、本発明は、がんの治療または予防方法において使用するための、本発明による抗原結合分子、ＣＡＲ、核酸もしくは複数の核酸、発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物を提供する。
【００３２】
別の態様では、本発明は、がんの治療または予防方法において使用するための医薬の製造における、本発明による抗原結合分子、ＣＡＲ、核酸もしくは複数の核酸、発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物の使用を提供する。
【００３３】
別の態様では、本発明は、がんを治療または予防する方法であって、対象に治療または予防有効量の本発明による抗原結合分子、ＣＡＲ、核酸もしくは複数の核酸、発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
【００３４】
別の態様では、本発明は、ＣＤ４７発現細胞の食作用を増加させる方法であって、ＣＤ４７発現細胞を本発明による抗原結合分子と接触させるステップを含む、方法を提供する。
【００３５】
別の態様では、本発明は、ＣＤ４７に結合した本発明による抗原結合分子を含む、任意選択的に単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体を提供する。
【００３６】
別の態様では、本発明は、ＣＤ４７を含有する、または含有することが疑われる試料を本発明による抗原結合分子と接触させるステップ、およびＣＤ４７との抗原結合分子の複合体の形成を検出するステップを含む、方法を提供する。
【００３７】
別の態様では、本発明は、ＣＤ４７標的化剤を用いた治療のための対象であって、方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、対象からの試料を本発明による抗原結合分子と接触させるステップ、およびＣＤ４７との抗原結合分子の複合体の形成を検出するステップを含む、対象を提供する。
【００３８】
別の態様では、本発明は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ診断または予後診断剤としての本発明による抗原結合分子の使用を提供する。
【００３９】
一部の実施形態では、本発明の様々な態様と関連して、がんは、血液学的悪性腫瘍、骨髄血液学的悪性腫瘍、リンパ芽球性血液学的悪性腫瘍、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱がん、脳のがん、膠芽腫、卵巣がん、乳がん、結腸がん、肝臓がん、肝細胞癌、前立腺がん、肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、皮膚がんおよび黒色腫から選択される。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本発明は、先行技術において開示される抗原結合分子と比較して望ましい生物物理学的および／または機能的特性の組合せを有する抗原結合分子を提供する。
【００４１】
本発明の態様は、ＣＤ４７に結合することができる抗原結合分子に関する。
【００４２】
本明細書に記載の態様では、高親和性でヒトＣＤ４７に結合し、非ヒト霊長動物ＣＤ４７と交差反応性であり、かつＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用の強力な阻害を示す、抗原結合分子が提供される。
【００４３】
特に、本明細書に記載の抗原結合分子は、先行技術の抗ＣＤ４７抗体より高い親和性でＣＤ４７に結合し、かつＣＤ４７標的化治療剤としてより強力である。
【００４４】
また、本明細書に記載の抗原結合分子は、先行技術の抗ＣＤ４７抗体と比較してＣＤ４７とＳＩＰＲαとの間の相互作用のより効果的な阻害を提供するＣＤ４７の特定のエピトープに結合する。本明細書に記載の抗原結合分子は、したがって、ＣＤ４７を発現する細胞の食作用の増進において先行技術の抗ＣＤ４７抗体より効果的である。
【００４５】
ＣＤ４７
ヒトＣＤ４７（ＩＡＰ、ＭＥＲ６およびＯＡ３としても公知）は、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ０８７２２により同定されるタンパク質である。ヒトＣＤ４７遺伝子によりコードされるｍＲＮＡの選択的スプライシングは、Ｃ末端細胞質テイル領域の配列において異なる４つのアイソフォームをもたらす：アイソフォームＯＡ３−３２３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ０８７２２−１、ｖ１；配列番号１）；配列番号１の位置２９３〜３２３に対応するアミノ酸配列を欠いたアイソフォームＯＡ３−２９３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ０８７２２−２；配列番号２）；配列番号１と比べて置換Ｋ３０４ＮおよびＡ３０５Ｎを含み、かつ配列番号１の位置３０６〜３２３に対応するアミノ酸配列を欠いたアイソフォームＯＡ３−３０５（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ０８７２２−３；配列番号３）；ならびに配列番号１の位置３１２〜３２３に対応するアミノ酸配列を欠いたアイソフォームＯＡ３−３１２（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ０８７２２−４；配列番号４）。
【００４６】
配列番号１〜４のＮ末端の１８アミノ酸はシグナルペプチドを構成するため、アイソフォームＯＡ３−３２３、ＯＡ３−２９３、ＯＡ３−３０５およびＯＡ３−３１２の成熟形態（すなわち、シグナルペプチドを除去するプロセシング後）は、それぞれ配列番号５〜８に示すアミノ酸配列を有する。
【００４７】
ＣＤ４７の構造および機能は、例えば、Ｓｉｃｋら、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２０１２年）１６７（７）：１４１５〜１４３０頁およびＷｉｌｌｉｎｇｈａｍら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．（２０１２年）１０９（１７）：６６６２〜６６６７頁（これらの両方は、参照により全体が本明細書に組み込まれる）において総説されている。ＣＤ４７は、遍在的に発現される約５０ｋＤａの複数回貫通膜受容体であり、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、Ｖ型Ｉｇ様ドメイン（配列番号９）を有するＮ末端の細胞外領域（配列番号１０）、５つの膜貫通ドメイン（配列番号１１、１３、１５、１７および１９）、ならびに短いＣ末端の細胞内テイル（配列番号２０）を含む。
【００４８】
ＣＤ４７は、膜貫通シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）ＳＩＲＰαおよびＳＩＲＰγならびにインテグリン（例えば、αｖβ３インテグリン）へのライゲーションを通じて細胞間通信に関与し、そしてまたトロンボスポンジン−１（ＴＳＰ−１）への結合を通じて細胞−細胞外マトリックス相互作用を媒介する。ＣＤ４７は、接着、遊走、増殖およびアポトーシスといった広範な細胞プロセスに関与し、かつ免疫プロセスおよび血管新生において鍵となる役割を果たす。
【００４９】
ＣＤ４７は、マクロファージおよび樹状細胞上に発現されるＳＩＲＰαのリガンドである。食細胞の表面上のＳＩＲＰαへのＣＤ４７の結合はＳＩＲＰα  ＩＴＩＭシグナル伝達を誘発して、ＣＤ４７発現細胞の食作用を阻害する。ＣＤ４７は複数回貫通膜貫通タンパク質である一方、ＳＩＲＰαは４つの細胞外ドメインおよび細胞内ＩＴＩＭドメインからなる。ＳＩＲＰαの末端ＶセットドメインはＣＤ４７のＩｇ  Ｖ様ドメインと相互作用する。
【００５０】
ＣＤ４７に結合すると、ＳＩＲＰαはシグナル伝達カスケードを開始させ、これがＣＤ４７発現細胞の食作用の阻害を結果としてもたらす。この「私を食べるな」シグナルは、ＳＩＲＰαの細胞質ドメイン中の免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）のＳｒｃキナーゼによるリン酸化により伝達される。Ｓｒｃ相同性−２（ＳＨ２）ドメイン含有チロシンホスファターゼＳＨＰ−１およびＳＨＰ−２のその後の結合および活性化は、潜在的には貪食シナプスにおけるミオシン−ＩＩＡの蓄積の防止を通じて、食作用を遮断する。ＣＤ４７の逆平行ベータシートに沿った相互作用の破壊は、下流のＩＴＩＭ媒介性シグナル伝達を防止して、食細胞ががん細胞を「食べ」て破壊することを可能とする。
【００５１】
異常なＣＤ４７の発現／活性は多くのがんの発生および進行に関与し、蓄積しつつある証拠は、ＣＤ４７の細胞表面発現は、がん細胞が自身を食作用から保護する一般的な機序であることを示唆する。
【００５２】
本明細書では、「ＣＤ４７」は任意の種からのＣＤ４７を指し、任意の種からのＣＤ４７アイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログを含む。
【００５３】
本明細書において使用される場合、タンパク質の「断片」、「バリアント」または「ホモログ」は、任意選択的に、参照タンパク質（例えば、参照アイソフォーム）のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するとして特徴付けられてもよい。一部の実施形態では、参照タンパク質の断片、バリアント、アイソフォームおよびホモログは、参照タンパク質により行われる機能を行う能力により特徴付けられてもよい。
【００５４】
「断片」は、概しては、参照タンパク質の断片を指す。「バリアント」は、概しては、参照タンパク質のアミノ酸配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸置換、挿入、欠失または他の修飾を含むが、参照タンパク質のアミノ酸配列に対してかなりの程度の配列同一性（例えば、少なくとも６０％）を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を指す。「アイソフォーム」は、概しては、参照タンパク質の種と同じ種により発現される参照タンパク質のバリアントを指す（例えば、ＯＡ３−３２３、ＯＡ３−２９３、ＯＡ３−３０５およびＯＡ３−３１２は全て互いにアイソフォームである）。「ホモログ」は、概しては、参照タンパク質の種と比較して異なる種により産生される参照タンパク質のバリアントを指す。例えば、ヒトＣＤ４７アイソフォームＯＡ３−３２３（Ｑ０８７２２−１、ｖ１；配列番号１）およびアカゲザルＣＤ４７（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｆ７Ｆ５Ｙ９−１、ｖ２；配列番号１１７）は互いのホモログである。ホモログはオルソログを含む。
【００５５】
参照タンパク質の「断片」は任意の長さ（アミノ酸の数による）であってもよいが、任意選択的に、参照タンパク質（すなわち、断片の由来となるタンパク質）の長さの少なくとも２５％であってもよく、かつ参照タンパク質の長さの５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のうちの１つの最大長さを有してもよい。
【００５６】
ＣＤ４７の断片は、１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０または３００アミノ酸のうちの１つの最小長さを有してもよく、かつ２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０または３００アミノ酸のうちの１つの最大長さを有してもよい。
【００５７】
一部の実施形態では、ＣＤ４７は、哺乳動物からのＣＤ４７（例えば、霊長動物（アカゲザル、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ）、非ヒト霊長動物もしくはヒト）および／または齧歯動物（例えば、ラットもしくはマウス）ＣＤ４７）である。ＣＤ４７のアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログは、任意選択的に、所与の種、例えばヒトからの未熟または成熟ＣＤ４７アイソフォームのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するとして特徴付けられてもよい。
【００５８】
アイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログは、任意選択的に、機能的特性／活性のための好適なアッセイによる解析により決定されるような、例えば、参照ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７アイソフォームＯＡ３−３２３）の機能的特性／活性を有する、機能的なアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログであってもよい。例えば、ＣＤ４７のアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログは、ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰγ、ＴＳＰ−１およびαｖβ３インテグリンのうちの１つまたは複数との会合を示してもよい。
【００５９】
一部の実施形態では、ＣＤ４７は、配列番号１〜８のうちの１つに対して少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる。
【００６０】
一部の実施形態では、ＣＤ４７の断片は、配列番号９または１０のうちの１つに対して少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる。
【００６１】
ＣＤ４７は魅力的な治療標的である。ＣＤ４７は、通常、正常な健常細胞および遊走造血幹細胞の表面上に発現されて食作用を防止し、かつ全てに近い血液および固形腫瘍において上方調節されて、免疫サーベイランスを回避させ、食作用を免れさせる。ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用の破壊は、食細胞ががん細胞を「食べ」て破壊することを可能とする。ＣＤ４７の遮断は、腫瘍関連マクロファージを炎症促進性の抗腫瘍状態に再極性化させ、かつ食細胞による悪性細胞のクリアランスは、適応免疫系へのネオ抗原提示のための追加の経路を与える。
【００６２】
抗原結合分子
本発明は、ＣＤ４７に結合することができる抗原結合分子を提供する。
【００６３】
「抗原結合分子」は、標的抗原に結合することができる分子を指し、関連する標的分子への結合を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性および多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ならびに抗体断片（例えば、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ２、ダイアボディ、トリアボディ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ミニボディ、単一ドメイン抗体（例えば、ＶｈＨ）など）を包含する。
【００６４】
本発明の抗原結合分子は、標的抗原に結合することができる１つまたは複数の部分を含む。一部の実施形態では、標的抗原に結合することができる部分は、標的抗原への特異的結合が可能な抗体の抗体重鎖可変領域（ＶＨ）および抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、標的抗原に結合することができる部分は、標的抗原に結合することができるアプタマー、例えば、核酸アプタマーを含む、またはからなる（例えば、ＺｈｏｕおよびＲｏｓｓｉ  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．２０１７年  １６（３）：１８１〜２０２頁において総説されている）。一部の実施形態では、標的抗原に結合することができる部分は、抗原結合ペプチド／ポリペプチド、例えば、ペプチドアプタマー、チオレドキシン、モノボディ、アンチカリン、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、アビマー、ノッティン、フィノマー、アトリマー、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディ、ナノボディ（すなわち、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ））  アフィリン、アルマジロリピートタンパク質（ＡｒｍＲＰ）、ＯＢｏｄｙまたはフィブロネクチンを含む、またはからなる（例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれるＲｅｖｅｒｄａｔｔｏら、Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２０１５年；１５（１２）：１０８２〜１１０１頁において総説されている；例えば、Ｂｏｅｒｓｍａら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（２０１１年）２８６：４１２７３〜８５頁およびＥｍａｎｕｅｌら、Ｍａｂｓ（２０１１年）３：３８〜４８頁も参照）。
【００６５】
本発明の抗原結合分子は、概しては、標的抗原への特異的結合が可能な抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗原結合ドメインを含む。ＶＨおよびＶＬにより形成される抗原結合ドメインは、本明細書においてＦｖ領域と称されることもある。
【００６６】
抗原結合分子は、抗原結合ポリペプチド、または抗原結合ポリペプチド複合体であってもよい、またはそれを含んでもよい。抗原結合分子は、一緒になって抗原結合ドメインを形成する１つより多くのポリペプチドを含んでもよい。ポリペプチドは、共有結合または非共有結合により会合してもよい。一部の実施形態では、ポリペプチドは、該ポリペプチドを含むより大きいポリペプチドの部分を形成する（例えば、ＶＨおよびＶＬを含むｓｃＦｖの場合、またはＶＨ−ＣＨ１およびＶＬ−ＣＬを含むｓｃＦａｂの場合）。
【００６７】
抗原結合分子は、１つより多くのポリペプチド（例えば、２、３、４、６、または８つのポリペプチド）の非共有結合または共有結合複合体、例えば、２つの重鎖ポリペプチドおよび２つの軽鎖ポリペプチドを含むＩｇＧ様抗原結合分子を指すことができる。
【００６８】
本発明の抗原結合分子は、ＣＤ４７に結合することができるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の配列を使用して設計および調製されてもよい。単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片などの抗体の抗原結合領域もまた使用／提供されてもよい。「抗原結合領域」は、所与の抗体が特異的である標的に結合することができる抗体の任意の断片である。
【００６９】
抗体は、概しては、６つの相補性決定領域ＣＤＲを含み、これらは、重鎖可変（ＶＨ）領域中の３つ：ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２およびＨＣ−ＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変（ＶＬ）領域中の３つ：ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、およびＬＣ−ＣＤＲ３である。６つのＣＤＲは、一緒になって抗体のパラトープを定義し、パラトープは、標的抗原に結合する抗体の部分である。
【００７０】
ＶＨ領域およびＶＬ領域は、各ＣＤＲの両側にフレームワーク領域（ＦＲ）を含み、ＦＲはＣＤＲのためのスキャフォールドを提供する。Ｎ末端からＣ末端へ、ＶＨ領域は以下の構造：Ｎ末端−［ＨＣ−ＦＲ１］−［ＨＣ−ＣＤＲ１］−［ＨＣ−ＦＲ２］−［ＨＣ−ＣＤＲ２］−［ＨＣ−ＦＲ３］−［ＨＣ−ＣＤＲ３］−［ＨＣ−ＦＲ４］−Ｃ末端を含み、ＶＬ領域は以下の構造：Ｎ末端−［ＬＣ−ＦＲ１］−［ＬＣ−ＣＤＲ１］−［ＬＣ−ＦＲ２］−［ＬＣ−ＣＤＲ２］−［ＬＣ−ＦＲ３］−［ＬＣ−ＣＤＲ３］−［ＬＣ−ＦＲ４］−Ｃ末端を含む。
【００７１】
抗体ＣＤＲおよびＦＲを定義するためのいくつかの異なる慣習があり、これは例えば、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１年）、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７頁（１９８７年）に記載されるもの、およびＲｅｔｔｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（２００５年）３３（ｓｕｐｐｌ  １）：Ｄ６７１〜Ｄ６７４に記載されるようなＶＢＡＳＥ２である。本明細書に記載の抗体クローンのＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲおよびＦＲは、ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（ＬｅＦｒａｎｃら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（２０１５年）４３（Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ）：Ｄ４１３〜２２）によって定義され、これは、Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３年）２７：５５〜７７頁に記載されるようなＩＭＧＴ  Ｖ−ＤＯＭＡＩＮナンバリング規則を使用する。
【００７２】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７に結合することができる抗原結合分子のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７に結合することができる抗原結合分子のＦＲを含む。一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７に結合することができる抗原結合分子のＣＤＲおよびＦＲを含む。すなわち、一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７に結合することができる抗原結合分子のＶＨ領域およびＶＬ領域を含む。
【００７３】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、本明細書に記載のＣＤ４７結合抗体クローン（すなわち、抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ、１−１−Ａ１、５−４８−Ａ６、５−４８−Ｄ２、１１Ａ１Ｈ１、１１Ａ１Ｈ２、１１Ａ１Ｈ３、１１Ａ１Ｈ４、１１Ａ１Ｈ５、１１Ａ１Ｈ６、１１Ａ１Ｈ７、１１Ａ１Ｈ８、１１Ａ１Ｈ９、１１Ａ１Ｈ１０または１１Ａ１Ｈ１１）のＶＨ／ＶＬ領域である、またはそれに由来するＶＨ領域およびＶＬ領域を含む。
【００７４】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、以下の（１）〜（４）のうちの１つによるＶＨ領域を含む：
（１）以下のＣＤＲ：
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（２）以下のＣＤＲ：
配列番号５０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（３）以下のＣＤＲ：
配列番号６６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号６７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（４）以下のＣＤＲ：
配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（５）以下のＣＤＲ：
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
【００７５】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、以下の（６）〜（１５）のうちの１つによるＶＨ領域を含む：
（６）以下のＦＲ：
配列番号２７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号２８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号２９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号３０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（７）以下のＦＲ：
配列番号４０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号４２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号４３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（８）以下のＦＲ：
配列番号５３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号５５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（９）以下のＦＲ：
配列番号６９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号７０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号７１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（１０）以下のＦＲ：
配列番号１４３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（１１）以下のＦＲ：
配列番号１４３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号１４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号１４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号１５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（１２）以下のＦＲ：
配列番号１４３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号１４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号１４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号１５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（１３）以下のＦＲ：
配列番号１４３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号１４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号１４９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号１５３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（１４）以下のＦＲ：
配列番号１４３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号１５０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号１５３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（１５）以下のＦＲ：
配列番号１４３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号１５１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号１５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４
を組み込むＶＨ領域、またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
【００７６】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、上記の（１）、（２）、（３）、（４）または（５）のうちの１つによるＣＤＲ、および上記の（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）、（１２）、（１３）、（１４）または（１５）のうちの１つによるＦＲを含むＶＨ領域を含む。
【００７７】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、以下の（１６）〜（２５）のうちの１つによるＶＨ領域を含む：
（１６）（１）によるＣＤＲおよび（６）によるＦＲを含むＶＨ領域。
（１７）（１）によるＣＤＲおよび（７）によるＦＲを含むＶＨ領域。
（１８）（２）によるＣＤＲおよび（８）によるＦＲを含むＶＨ領域。
（１９）（３）によるＣＤＲおよび（９）によるＦＲを含むＶＨ領域。
（２０）（４）によるＣＤＲおよび（１０）によるＦＲを含むＶＨ領域。
（２１）（１）によるＣＤＲおよび（１１）によるＦＲを含むＶＨ領域。
（２２）（１）によるＣＤＲおよび（１２）によるＦＲを含むＶＨ領域。
（２３）（１）によるＣＤＲおよび（１３）によるＦＲを含むＶＨ領域。
（２４）（１）によるＣＤＲおよび（１４）によるＦＲを含むＶＨ領域。
（２５）（５）によるＣＤＲおよび（１５）によるＦＲを含むＶＨ領域。
【００７８】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、以下の（２６）〜（３４）のうちの１つによるＶＨ領域を含む：
（２６）配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
（２７）配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
（２８）配列番号４９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
（２９）配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
（３１）配列番号１７８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
（３１）配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
（３２）配列番号１２９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
（３３）配列番号１３０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
（３４）配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
（３５）配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【００７９】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、以下の（３６）〜（４３）のうちの１つによるＶＬ領域を含む：
（３６）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を含むＶＬ領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（３７）以下のＣＤＲ：
配列番号５８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号５９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（３８）以下のＣＤＲ：
配列番号７４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号７５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号７６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（３９）以下のＣＤＲ：
配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（４０）以下のＣＤＲ：
配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（４１）以下のＣＤＲ：
配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（４２）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（４３）以下のＣＤＲ：
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１４２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
【００８０】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、以下の（４４）〜（５０）のうちの１つによるＶＬ領域を含む：
（４４）以下のＦＲ：
配列番号３５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号３６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号３７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号３８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
を含むＶＬ領域、またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、もしくはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（４５）以下のＦＲ：
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号４６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、もしくはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（４６）以下のＦＲ：
配列番号６１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号６２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号６３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、もしくはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（４７）以下のＦＲ：
配列番号７７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号７８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号７９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号８０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、もしくはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（４８）以下のＦＲ：
配列番号１５４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１５５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１５８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、もしくはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（４９）以下のＦＲ：
配列番号１５４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１５５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１５６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１５８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、もしくはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
（５０）以下のＦＲ：
配列番号１５４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１５５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１５７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１５８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
を組み込むＶＬ領域、またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、もしくはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数において１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換されたそのバリアント。
【００８１】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、上記の（３６）、（３７）、（３８）、（３９）、（４０）、（４１）、（４２）または（４３）のうちの１つによるＣＤＲ、および上記の（４４）、（４５）、（４６）、（４７）、（４８）、（４９）または（５０）のうちの１つによるＦＲを含むＶＬ領域を含む。
【００８２】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、以下の（５１）〜（６０）のうちの１つによるＶＬ領域を含む：
（５１）（３６）によるＣＤＲおよび（４３）によるＦＲを含むＶＬ領域。
（５２）（３６）によるＣＤＲおよび（４４）によるＦＲを含むＶＬ領域。
（５３）（３７）によるＣＤＲおよび（４５）によるＦＲを含むＶＬ領域。
（５４）（３８）によるＣＤＲおよび（４６）によるＦＲを含むＶＬ領域。
（５５）（３９）によるＣＤＲおよび（４８）によるＦＲを含むＶＬ領域。
（５６）（３６）によるＣＤＲおよび（４９）によるＦＲを含むＶＬ領域。
（５７）（４０）によるＣＤＲおよび（５０）によるＦＲを含むＶＬ領域。
（５８）（４１）によるＣＤＲおよび（５０）によるＦＲを含むＶＬ領域。
（５９）（４２）によるＣＤＲおよび（５０）によるＦＲを含むＶＬ領域。
（６０）（４３）によるＣＤＲおよび（４９）によるＦＲを含むＶＬ領域。
【００８３】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、以下の（６１）〜（７０）のうちの１つによるＶＬ領域を含む：
（６１）配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
（６２）配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
（６３）配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
（６４）配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
（６５）配列番号１７９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
（６６）配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
（６７）配列番号１３３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
（６８）配列番号１３４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
（６９）配列番号１３５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
（７０）配列番号１３６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【００８４】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、上記の（１）〜（３５）のうちのいずれか１つによるＶＨ領域、および上記の（３６）〜（７０）のうちのいずれか１つによるＶＬ領域を含む。
【００８５】
１つまたは複数のアミノ酸が別のアミノ酸により置換された本発明にしたがう実施形態では、置換は保存的置換であってもよく、保存的置換は、例えば以下の表によるものであってもよい。一部の実施形態では、中央列の同じブロックにおけるアミノ酸が置換される。一部の実施形態では、一番右の列の同じ行におけるアミノ酸が置換される。
【００８６】
【表１】
2021500926.tif 000003
【００８７】
一部の実施形態では、置換は、機能的に保存的であってもよい。すなわち、一部の実施形態では、置換は、等価の非置換の分子と比較して置換を含む抗原結合分子の１つまたは複数の機能的特性（例えば、標的結合）に影響しないものであってもよい（または実質的に影響しないものであってもよい）。
【００８８】
抗体の抗原結合領域のＶＨおよびＶＬ領域は、一緒になってＦｖ領域を構成する。一部の実施形態では、本発明による抗原結合分子は、ＣＤ４７に結合するＦｖ領域を含む、またはからなる。一部の実施形態では、ＦｖのＶＨおよびＶＬ領域は、リンカー領域により連結された単一のポリペプチド、すなわち、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として提供される。
【００８９】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、免疫グロブリン重鎖定常配列の１つまたは複数の領域を含む。一部の実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常配列は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭの重鎖定常配列である、またはそれに由来する。
【００９０】
一部の実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常配列は、ヒト免疫グロブリンＧ１定常配列（ＩＧＨＧ１；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８５７−１、ｖ１；配列番号１１８）である。配列番号１１８の位置１〜９８はＣＨ１領域（配列番号１１９）を形成する。配列番号１１８の位置９９〜１１０は、ＣＨ１領域とＣＨ２領域との間のヒンジ領域（配列番号１２０）を形成する。配列番号１１８の位置１１１〜２２３はＣＨ２領域（配列番号１２１）を形成する。配列番号１１８の位置２２４〜３３０はＣＨ３領域（配列番号１２２）を形成する。
【００９１】
例示される抗原結合分子を、配列番号１１８と比べてＣＨ３領域において置換Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ（ＥＵナンバリングによりナンバリングされた位置）を含むｐＦＵＳＥ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１を使用して調製した。ｐＦＵＳＥ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１によりコードされるＣＨ３領域のアミノ酸配列を配列番号１２３に示す。ＣＨ３領域は、本明細書に記載されるような抗原結合分子のＦｃ領域への修飾にしたがってさらなる置換と共に提供されてもよいことが理解されるであろう。
【００９２】
一部の実施形態では、ＣＨ１領域は、配列番号１１９の配列、または配列番号１１９のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有する配列を含む、またはからなる。一部の実施形態では、ＣＨ１−ＣＨ２ヒンジ領域は、配列番号１２０の配列、または配列番号１２０のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有する配列を含む、またはからなる。一部の実施形態では、ＣＨ２領域は、配列番号１２１の配列、または配列番号１２１のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有する配列を含む、またはからなる。一部の実施形態では、ＣＨ３領域は、配列番号１２２もしくは１２３の配列、または配列番号１２２もしくは１２３のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有する配列を含む、またはからなる。
【００９３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、免疫グロブリン軽鎖定常配列の１つまたは複数の領域を含む。一部の実施形態では、免疫グロブリン軽鎖定常配列は、ヒト免疫グロブリンカッパ定常配列（ＩＧＫＣ；Ｃκ；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８３４−１、ｖ２；配列番号１２４）である。一部の実施形態では、免疫グロブリン軽鎖定常配列は、ヒト免疫グロブリンラムダ定常配列（ＩＧＬＣ；Ｃλ）、例えば、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６またはＩＧＬＣ７である。一部の実施形態では、ＣＬ領域は、配列番号１２４の配列、または配列番号１２４のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有する配列を含む、またはからなる。
【００９４】
抗体の抗原結合領域のＶＬおよび軽鎖定常（ＣＬ）領域、ならびにＶＨ領域および重鎖定常１（ＣＨ１）領域は、一緒になってＦａｂ領域を構成する。一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬおよびＣＬ（例えば、ＣκまたはＣλ）を含むＦａｂ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆａｂ領域は、ＶＨおよびＣＨ１を含むポリペプチド（例えば、ＶＨ−ＣＨ１融合ポリペプチド）、ならびにＶＬおよびＣＬを含むポリペプチド（例えば、ＶＬ−ＣＬ融合ポリペプチド）を含む。一部の実施形態では、Ｆａｂ領域は、ＶＨおよびＣＬを含むポリペプチド（例えば、ＶＨ−ＣＬ融合ポリペプチド）ならびにＶＬおよびＣＨを含むポリペプチド（例えば、ＶＬ−ＣＨ１融合ポリペプチド）を含み、すなわち、一部の実施形態では、Ｆａｂ領域はＣｒｏｓｓＦａｂ領域である。一部の実施形態では、ＦａｂまたはＣｒｏｓｓＦａｂのＶＨ、ＣＨ１、ＶＬおよびＣＬ領域は、リンカー領域により連結された単一のポリペプチド、すなわち、単鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）または単鎖ＣｒｏｓｓＦａｂ（ｓｃＣｒｏｓｓＦａｂ）として提供される。
【００９５】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、ＣＤ４７に結合するＦａｂ領域を含む、またはからなる。
【００９６】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原結合分子は、ＣＤ４７に結合する全体抗体を含む、またはからなる。本明細書において使用される場合、「全体抗体」は、免疫グロブリン（Ｉｇ）の構造と実質的に類似の構造を有する抗体を指す。免疫グロブリンの異なる種類およびそれらの構造は、ＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＣａｖａｃｉｎｉ  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１０年）１２５（２０２）：Ｓ４１〜Ｓ５２（参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【００９７】
Ｇ型の免疫グロブリン（すなわち、ＩｇＧ）は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む約１５０ｋＤａの糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端へ、重鎖は、ＶＨおよびそれに続く３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を含む重鎖定常領域を含み、同様に軽鎖は、ＶＬおよびそれに続くＣＬを含む。重鎖に依存して、免疫グロブリンは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭとして分類されてもよい。軽鎖は、カッパ（κ）またはラムダ（λ）であってもよい。
【００９８】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原結合分子は、ＣＤ４７に結合するＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭを含む、またはからなる。
【００９９】
本発明の態様は、多重特異性抗原結合分子に関する。「多重特異性」は、抗原結合分子が１つより多くの標的に対して特異的結合を示すことを意味する。一部の実施形態では、抗原結合分子は二重特異性抗原結合分子である。一部の実施形態では、抗原結合分子は、少なくとも２つの異なる抗原結合ドメイン（すなわち、例えば非同一のＶＨおよびＶＬを含む、少なくとも２つの抗原結合ドメイン）を含む。
【０１００】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７およびＣＤ４７以外の抗原に結合し、したがって少なくとも二重特異性である。「二重特異性」という用語は、抗原結合分子が少なくとも２つの別個の抗原決定基に特異的に結合できることを意味する。
【０１０１】
本発明による抗原結合分子（例えば、多重特異性抗原結合分子）は、抗原結合分子が特異的である標的に結合することができる抗原結合分子を含んでもよいことが理解されるであろう。例えば、ＣＤ４７およびＣＤ４７以外の抗原に結合することができる抗原結合分子は、（ｉ）ＣＤ４７に結合することができる抗原結合分子、および（ｉｉ）ＣＤ４７以外の抗原に結合することができる抗原結合分子を含んでもよい。実例として、ＣＤ４７およびＣＤ４７以外の抗原に結合することができる抗原結合分子は、（ｉ）ＣＤ４７に結合することができる抗原結合分子、（例えば、ＣＤ４７結合性ＦａｂまたはｓｃＦｖ）、および（ｉｉ）ＣＤ４７以外の抗原に結合することができる抗原結合分子（例えば、ＣＤ４７以外の抗原に特異的なＦａｂまたはｓｃＦｖ）を含んでもよい。
【０１０２】
本発明による抗原結合分子（例えば、多重特異性抗原結合分子）は、抗原結合分子が特異的である標的に結合することができる抗原結合ポリペプチドまたは抗原結合ポリペプチド複合体を含んでもよいことも理解されるであろう。
【０１０３】
一部の実施形態では、より大きい抗原結合分子（例えば、多重特異性抗原結合分子）の成分となる抗原結合分子は、例えば、より大きい抗原結合分子の「抗原結合ドメイン」または「抗原結合領域」と称されてもよい。
【０１０４】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７に結合することができる抗原結合分子、およびＣＤ４７以外の抗原に結合することができる抗原結合分子を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４７以外の抗原は免疫細胞表面分子である。一部の実施形態では、ＣＤ４７以外の抗原はがん細胞抗原である。一部の実施形態では、ＣＤ４７以外の抗原は受容体分子、例えば、細胞表面受容体である。一部の実施形態では、ＣＤ４７以外の抗原は細胞シグナル伝達分子、例えば、サイトカイン、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキンまたはリンホカインである。一部の実施形態では、ＣＤ４７以外の抗原は成長因子またはホルモンである。
【０１０５】
がん細胞抗原は、がん細胞により発現または過剰発現される抗原である。がん細胞抗原は、任意のペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、グリカン、糖脂質、脂質、またはその断片であってもよい。がん細胞抗原の発現は、がんと関連付けられるものであってもよい。がん細胞抗原は、がん細胞により異常に発現されるものであってもよく（例えば、がん細胞抗原は異常な局在化を有して発現されるものであってもよい）、またはがん細胞により異常な構造を有して発現されるものであってもよい。がん細胞抗原は、免疫応答を誘発することができるものであってもよい。一部の実施形態では、抗原は、がん細胞の細胞表面において発現される（すなわち、がん細胞抗原はがん細胞表面抗原である）。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原結合分子が結合する抗原の部分は、がん細胞の外部表面上に提示される（すなわち、細胞外である）。がん細胞抗原はがん関連抗原であってもよい。一部の実施形態では、がん細胞抗原は、その発現ががんの発生、進行または症状の重篤度と関連付けられる抗原である。がん関連抗原は、がんの原因もしくは病理と関連付けられるものであってもよく、またはがんの帰結として異常に発現されるものであってもよい。一部の実施形態では、がん細胞抗原は、その発現が、例えば、同等の非がん性細胞（例えば、同じ組織／細胞種に由来する非がん性細胞）による発現のレベルと比較して、がんの細胞により（例えば、ＲＮＡおよび／またはタンパク質レベルにおいて）上方調節されている抗原である。一部の実施形態では、がん関連抗原は、がん性細胞により優先的に発現され、かつ同等の非がん性細胞（例えば、同じ組織／細胞種に由来する非がん性細胞）により発現されないものであってもよい。一部の実施形態では、がん関連抗原は、突然変異したがん遺伝子または突然変異した腫瘍抑制因子遺伝子の産物であってもよい。一部の実施形態では、がん関連抗原は、過剰発現される細胞タンパク質の産物、発がん性ウイルスにより産生されるがん抗原、がん胎児性抗原、または細胞表面糖脂質もしくは糖タンパク質であってもよい。
【０１０６】
免疫細胞表面分子は、免疫細胞の細胞表面においてまたは該細胞表面上に発現される任意のペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、グリカン、糖脂質、脂質、またはその断片であってもよい。一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子が結合する免疫細胞表面分子の部分は、免疫細胞の外部表面上にある（すなわち、細胞外である）。免疫細胞表面分子は、任意の免疫細胞の細胞表面において発現されるものであってもよい。一部の実施形態では、免疫細胞は、造血起源の細胞、例えば、好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球であってもよい。リンパ球は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞または自然リンパ細胞（ＩＬＣ）、またはその前駆体（例えば、胸腺細胞もしくはプレＢ細胞）であってもよい。
【０１０７】
一部の実施形態では、ＣＤ４７以外の抗原は、血液学的悪性腫瘍、骨髄血液学的悪性腫瘍、リンパ芽球性血液学的悪性腫瘍、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、膀胱がんまたは脳のがんの細胞により発現される抗原である。
【０１０８】
一部の実施形態では、ＣＤ４７以外の抗原は、例えば、ＨｏｓｅｉｎｉおよびＣｈｅｕｎｇ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．（２０１７年）７（２）：ｅ５２２（参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるようなＡＭＬの細胞により発現される抗原である。一部の実施形態では、ＣＤ４７以外の抗原は、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、ＣＤ１３、ＣＤ１５、ＣＤ３０、ＣＤ４５、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ１）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ−３）、ＶＥＧＦおよびアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）から選択される。一部の実施形態では、ＣＤ４７以外の抗原はＣＤ３３である。
【０１０９】
本明細書に記載の多重特異性抗原結合分子は、ＣＤ４７に関して少なくとも一価の結合を示し、かつＣＤ４７以外の抗原に関して少なくとも一価の結合を示す。
【０１１０】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７に結合することができる抗原結合領域（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂまたは抗体）、およびＣＤ４７以外の抗原に結合することができる抗原結合領域（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂまたは抗体）を含む。一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７に結合することができる抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびにＣＤ４７以外の抗原に結合することができる抗体のＶＨおよびＶＬを含む。
【０１１１】
結合の価数は、所与の抗原決定基についての抗原結合分子中の結合部位の数を指す。例えば、本明細書に記載のＩｇＧ１フォーマットにおいて、抗ＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７への結合に関して二価である。
【０１１２】
本発明による多重特異性抗原結合分子は、ＢｒｉｎｋｍａｎｎおよびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ（２０１７年）９（２）：１８２〜２１２頁（参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているフォーマットなどの任意の好適なフォーマットにおいて提供されてもよい。好適なフォーマットとしては、ＢｒｉｎｋｍａｎｎおよびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ（２０１７年）９（２）：１８２〜２１２頁の図２において示されるもの：抗体コンジュゲート、例えば、ＩｇＧ２、Ｆ（ａｂ’）２またはＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ；ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子、例えば、ＩｇＧ、キメラＩｇＧ、κλ−ｂｏｄｙ共通ＨＣ；ＣＨ１／ＣＬ融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ２−ＣＨ１／ＣＬ、ＶＨＨ２−ＣＨ１／ＣＬ；「可変ドメイン単独」二重特異性抗原結合分子、例えば、タンデムｓｃＦｖ（ｔａＦＶ）、トリプルボディ、ダイアボディ（Ｄｂ）、ｄｓＤｂ、Ｄｂ（ｋｉｈ）、ＤＡＲＴ、ｓｃＤＢ、ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ、ｔａｎｄＡｂ、トリプルヘッド、タンデムｄＡｂ／ＶＨＨ、四価（ｔｅｒｔｒａｖａｌｅｎｔ）ｄＡｂ．ＶＨＨ；非Ｉｇ融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ２−アルブミン、ｓｃＤｂ−アルブミン、ｔａＦｖ−アルブミン、ｔａＦｖ−毒素、ミニ抗体、ＤＮＬ−Ｆａｂ２、ＤＮＬ−Ｆａｂ２−ｓｃＦｖ、ＤＮＬ−Ｆａｂ２−ＩｇＧ−サイトカイン２、ＩｍｍＴＡＣ（ＴＣＲ−ｓｃＦｖ）；修飾ＦｃおよびＣＨ３融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＣＨ３電荷対）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＥＷ−ＲＶＴ）、ｓｃＦｖ−ｆｃ（ＨＡ−ＴＦ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）、ｔａＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−Ｆｖ、Ｆａｂ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−ｓｃＦｖ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＢＥＡＴ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）、ＤＡＲＴ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３（ｋｉｈ）、ＴｒｉＦａｂ；Ｆｃ融合物、例えば、ジダイアボディ（Ｄｉ−ｄｉａｂｏｄｙ）、ｓｃＤｂ−Ｆｃ、ｔａＦｖ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ＨＣＡｂ−ＶＨＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ｓｃＦｖ２−Ｆｃａｂ；ＣＨ３融合物、例えば、ダイアダイアボディ（Ｄｉａ−ｄｉａｂｏｄｙ）、ｓｃＤｂ−ＣＨ３；ＩｇＥ／ＩｇＭ  ＣＨ２融合物、例えば、ｓｃＦｖ−ＥＨＤ２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖＭＨＤ２−ｓｃＦｖ；Ｆａｂ融合タンパク質、例えば、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ（ビボディ（ｂｉｂｏｄｙ））、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ２（トリボディ）、Ｆａｂ−Ｆｖ、Ｆａｂ−ｄｓＦｖ、Ｆａｂ−ＶＨＨ、オルソゴナルＦａｂ−Ｆａｂ；非Ｉｇ融合タンパク質、例えば、ＤＮＬ−Ｆａｂ３、ＤＮＬ−Ｆａｂ２−ｓｃＦｖ、ＤＮＬ−Ｆａｂ２−ＩｇＧ−サイトカイン２；非対称ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子、例えば、ＩｇＧ（ｋｉｈ）、ＩｇＧ（ｋｉｈ）共通ＬＣ、ＺＷ１  ＩｇＧ共通ＬＣ、Ｂｉｃｌｏｎｉｃｓ共通ＬＣ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＭａｂ（ｋｉｈ）、ｓｃＦａｂ−ＩｇＧ（ｋｉｈ）、Ｆａｂ−ｓｃＦａｂ−ＩｇＧ（ｋｉｈ）、オルソゴナルＦａｂ  ＩｇＧ（ｋｉｈ）、ＤｕｅｔＭａｂ、ＣＨ３電荷対＋ＣＨ１／ＣＬ電荷対、ヒンジ／ＣＨ３電荷対、ＳＥＥＤボディ、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ｆｏｕ���−ｉｎ−ｏｎｅ−ＣｒｏｓｓＭａｂ（ｋｉｈ）、ＬＵＺ−Ｙ共通ＬＣ；ＬＵＺ−Ｙ  ｓｃＦａｂ−ＩｇＧ、ＦｃＦｃ＊；付属およびＦｃ修飾ＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ（ｋｉｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ  ＨＡ−ＴＦ−Ｆｖ、ＩｇＧ（ｋｉｈ）ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−ｓｃＦｖ２、ｓｃＦａｂ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−ｓｃＦｖ、ｈａｌｆ  ＤＶＤ−Ｉｇ、ＤＶＩ−Ｉｇ（ｆｏｕｒ−ｉｎ−ｏｎｅ）、ＣｒｏｓｓＭａｂ−Ｆａｂ；修飾ＦｃおよびＣＨ３融合タンパク質、例えば、Ｆａｂ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−ｓｃＦｖ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＢＥＡＴ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ＳＥＥＤボディ、ＴｒｉＦａｂ；付属型ＩｇＧ−ＨＣ融合物、例えば、ＩｇＧ−ＨＣ、ｓｃＦｖ、ＩｇＧ−ｄＡｂ、ＩｇＧ−ｔａＦＶ、ＩｇＧ−ＣｒｏｓｓＦａｂ、ＩｇＧ−オルソゴナルＦａｂ、ＩｇＧ−（ＣαＣβ）Ｆａｂ、ｓｃＦｖ−ＨＣ−ＩｇＧ、タンデムＦａｂ−ＩｇＧ（オルソゴナルＦａｂ）Ｆａｂ−ＩｇＧ（ＣαＣβ  Ｆａｂ）、Ｆａｂ−ＩｇＧ（ＣＲ３）、Ｆａｂ−ヒンジ−ＩｇＧ（ＣＲ３）；付属型ＩｇＧ−ＬＣ融合物、例えば、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＬＣ）、ｓｃＦｖ（ＬＣ）−ＩｇＧ、ｄＡｂ−ＩｇＧ；付属型ＩｇＧ−ＨＣおよびＬＣ融合物、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＴＶＤ−Ｉｇ、ＣＯＤＶ−Ｉｇ、ｓｃＦｖ４−ＩｇＧ、Ｚｙｂｏｄｙ；Ｆｃ融合物、例えば、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ；Ｆ（ａｂ’）２融合物、例えば、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ２；ＣＨ１／ＣＬ融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ２−ＣＨ１−ヒンジ／ＣＬ；修飾ＩｇＧ、例えば、ＤＡＦ（ｔｗｏ−ｉｎ  ｏｎｅ−ＩｇＧ）、ＤｕｔａＭａｂ、Ｍａｂ２；ならびに非Ｉｇ融合物、例えば、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧが挙げられる。
【０１１３】
当業者は、二重特異性抗原結合分子を設計および調製することができる。二重特異性抗原結合分子を製造する方法としては、例えば、ＳｅｇａｌおよびＢａｓｔ、２００１年  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１〜２．１３．１６（参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるように、例えば、還元可能なジスルフィド結合または還元不可能なチオエーテル結合を用いて、抗原結合分子または抗体断片を化学的に架橋することが挙げられる。例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）は、例えば、ヒンジ領域ＳＨ基を介してＦａｂ断片を化学的に架橋して、ジスルフィド連結二重特異性Ｆ（ａｂ）２ヘテロ二量体を作製するために使用され得る。
【０１１４】
二重特異性抗原結合分子を製造するための他の方法としては、例えば、Ｄ．Ｍ．およびＢａｓｔ，Ｂ．  Ｊ．  ２００１年  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１〜２．１３．１６に記載されるように、抗体産生性ハイブリドーマを例えばポリエチレングリコールと融合させて、二重特異性抗体を分泌することができるクアドローマ細胞を製造することが挙げられる。
【０１１５】
本発明による二重特異性抗原結合分子はまた、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、第２版（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、２０１２年）の４０章：Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：  Ｄｉａｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ（Ｈｏｒｎｉｇ  ａｎｄ  Ｆａｒｂｅｒ−Ｓｃｈｗａｒｚ）、またはＦｒｅｎｃｈ、Ｈｏｗ  ｔｏ  ｍａｋｅ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２０００年；４０：３３３〜３３９頁に記載されるように、例えば、抗原結合分子のポリペプチドをコードする核酸構築物からの発現により、組換えにより製造することができ、これらの両方の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１６】
例えば、２つの抗原結合断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン（すなわち、ＣＤ４７に結合することができる抗原結合断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン、ならびに別の標的タンパク質に結合することができる抗原結合断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン）をコードし、かつ抗原結合断片の間の好適なリンカーまたは二量体化ドメインをコードする配列を含むＤＮＡ構築物は、分子クローニング技術により調製され得る。組換え二重特異性抗体はその後、好適な宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）中での構築物の（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）発現により製造され得、発現された組換え二重特異性抗体は次に、任意選択的に精製され得る。
【０１１７】
Ｆｃ領域
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子はＦｃ領域を含む。
【０１１８】
Ｆｃ領域は、１つのポリペプチドからのＣＨ２およびＣＨ３領域、ならびに別のポリペプチドからのＣＨ２およびＣＨ３領域から構成される。２つのポリペプチドからのＣＨ２およびＣＨ３領域は、一緒になってＦｃ領域を形成する。
【０１１９】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、Ｆｃ領域の会合を促進するＣＨ２およびＣＨ３領域のうちの１つまたは複数における修飾を含むＦｃ領域を含む。抗原結合分子の構成ポリペプチドの組換え共発現およびその後の会合は、いくつかの可能な組合せに繋がる。組換え製造における抗原結合分子中のポリペプチドの所望の組合せの収率を向上させるために、重鎖ポリペプチドの所望の組合せの会合を促進する修飾をＦｃ領域中に導入することが有利である。修飾は、例えば、異なるポリペプチド鎖のＣＨ２および／またはＣＨ３領域の間の疎水性および／または静電相互作用を促進してもよい。好適な修飾は、例えば、Ｈａら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｎｏｌ（２０１６年）７：３９４（参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１２０】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、Ｈａら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｎｏｌ（２０１６年）７：３９４の表１に示されるように、以下のフォーマット：ＫｉＨ、ＫｉＨｓ−ｓ、ＨＡ−ＴＦ、ＺＷ１、７．８．６０、ＤＤ−ＫＫ、ＥＷ−ＲＶＴ、ＥＷ−ＲＶＴｓ−ｓ、ＳＥＥＤまたはＡ１０７のうちの１つによるＦｃ領域のＣＨ３領域中の対になる置換を含むＦｃ領域を含む。
【０１２１】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、例えば、例えばＵＳ７，６９５，９３６およびＣａｒｔｅｒ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  ２４８、７〜１５頁（２００１年）に記載されるような、「ノブ−イントゥー−ホール」または「ＫｉＨ」修飾を含む。そのような実施形態では、Ｆｃ領域のＣＨ３領域の１つは「ノブ」修飾を含み、かつ他のＣＨ３領域は「ホール」修飾を含む。ポリペプチドのヘテロ二量体化を促進するため（およびホモ二量体化を阻害するため）ならびに／またはヘテロ二量体を安定化するために、「ノブ」および「ホール」修飾は、「ノブ」が「ホール」中に位置することができるように各々のＣＨ３領域内に位置する。ノブは、小さい鎖を有するアミノ酸をより大きい側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシンまたはトリプトファン）により置換することにより構築される。ホールは、大きい側鎖を有するアミノ酸をより小さい側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニンまたはトレオニン）により置換することにより作製される。
【０１２２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子のＦｃ領域のＣＨ３領域の１つは置換（本明細書におけるＦｃ、ＣＨ２およびＣＨ３領域中の位置／置換のナンバリングはＫａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９９１年に記載されるようなＥＵナンバリングシステムによる）Ｔ３６６Ｗを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｙ４０７Ｖを含む。一部の実施形態では、抗原結合分子のＦｃ領域のＣＨ３領域の１つは置換Ｔ３６６Ｗを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｔ３６６ＳおよびＬ３６８Ａを含む。一部の実施形態では、抗原結合分子のＦｃ領域のＣＨ３領域の１つは置換Ｔ３６６Ｗを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６ＳおよびＬ３６８Ａを含む。
【０１２３】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、例えばＷＯ２０１４／１３１６９４Ａ１に記載されるような、「ＤＤ−ＫＫ」修飾を含む。一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは置換Ｋ３９２ＤおよびＫ４０９Ｄを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｅ３５６ＫおよびＤ３９９Ｋを含む。修飾は、ＣＨ３領域の間の静電相互作用を促進する。
【０１２４】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、「デュオボディ」（Ｄｕｏｂｏｄｙ）フォーマットと称される、Ｌａｂｒｉｊｎら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．（２０１３年）１１０（１３）：５１４５〜５０頁に記載されるように修飾されたＦｃ領域を含む。一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは置換Ｋ４０９Ｒを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｋ４０５Ｌを含む。
【０１２５】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、Ｓｔｒｏｐら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．（２０１２年）４２０（３）：２０４〜１９頁に記載されるような「ＥＥＥ−ＲＲＲ」修飾を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは置換Ｄ２２１Ｅ、Ｐ２２８ＥおよびＬ３６８Ｅを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｄ２２１Ｒ、Ｐ２２８ＲおよびＫ４０９Ｒを含む。
【０１２６】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、Ｃｈｏｉら、Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ（２０１３年）１２（１２）：２７４８〜５９頁に記載される「ＥＷ−ＲＶＴ」修飾を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは置換Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む。
【０１２７】
一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは置換Ｓ３５４Ｃを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｙ３４９Ｃを含む。これらのシステイン残基の導入は、Ｆｃ領域の２つのＣＨ３領域の間のジスルフィド架橋の形成を結果としてもたらして、ヘテロ二量体をさらに安定化させる（Ｃａｒｔｅｒ（２００１年）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８、７〜１５頁）。
【０１２８】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は「ＫｉＨＳ−Ｓ」修飾を含む。一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは置換Ｔ３６６ＷおよびＳ３５４Ｃを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７ＶおよびＹ３４９Ｃを含む。
【０１２９】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、ヒトＩｇＧ１  ＣＨ３およびＩｇＡ  ＣＨ３のβ鎖セグメントが交換された、Ｄａｖｉｓら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ（２０１０年）２３（４）：１９５〜２０２頁に記載されるような「ＳＥＥＤ」修飾を含むＦｃ領域を含む。
【０１３０】
一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは置換Ｓ３６４ＨおよびＦ４０５Ａを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｙ３４９ＴおよびＴ３９４Ｆを含む（例えば、Ｍｏｏｒｅら、ＭＡｂｓ（２０１１年）３（６）：５４６〜５７頁を参照）。
【０１３１】
一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは置換Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを含む（例えば、Ｖｏｎ  Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎら、ＭＡｂｓ（２０１３年）５（５）：６４６〜５４頁を参照）。
【０１３２】
一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは置換Ｋ３６０Ｄ、Ｄ３９９ＭおよびＹ４０７Ａを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｅ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６ＶおよびＫ４０９Ｖを含む（例えば、Ｌｅａｖｅｒ−Ｆａｙら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（２０１６年）２４（４）：６４１〜５１頁を参照）。
【０１３３】
一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは置換Ｋ３７０ＥおよびＫ４０９Ｗを含み、かつ、Ｆｃ領域の他のＣＨ３領域は置換Ｅ３５７Ｎ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む（例えば、Ｃｈｏｉら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ（２０１５年）１０（１２）：ｅ０１４５３４９を参照）。
【０１３４】
ポリペプチド
本発明はまた、抗原結合分子のポリペプチド構成要素を提供する。ポリペプチドは、単離または実質的に精製された形態において提供されてもよい。
【０１３５】
本発明の抗原結合分子は、ポリペプチドの複合体であってもよい、またはそれを含んでもよい。
【０１３６】
本明細書において、ポリペプチドが１つより多くのドメインまたは領域を含む場合、複数のドメイン／領域は好ましくは同じポリペプチド鎖中に存在することが理解されるであろう。すなわち、ポリペプチドは１つより多くのドメインまたは領域を含み、融合ポリペプチドは複数のドメイン／領域を含む。
【０１３７】
一部の実施形態では、本発明によるポリペプチドは、本明細書に記載されるようなＶＨを含む、またはからなる。一部の実施形態では、本発明によるポリペプチドは、本明細書に記載されるようなＶＬを含む、またはからなる。
【０１３８】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、１つまたは複数の抗体重鎖定常領域（ＣＨ）をさらに含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、１つまたは複数の抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）をさらに含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、免疫グロブリン（Ｉｇ）のＣＨ１、ＣＨ２領域および／またはＣＨ３領域を含む。
【０１３９】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、免疫グロブリン重鎖定常配列の１つまたは複数の領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に記載されるようなＣＨ１領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に記載されるようなＣＨ１−ＣＨ２ヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に記載されるようなＣＨ２領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に記載されるようなＣＨ３領域を含む。
【０１４０】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、以下のアミノ酸置換／アミノ酸置換の組合せ（例えば、上記において参照により本明細書に組み込まれるＨａら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｎｏｌ（２０１６年）７：３９４のＴａｂｌｅ１に示される）：Ｔ３６６Ｗ；Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ；Ｔ３６６ＷおよびＳ３５４Ｃ；Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７ＶおよびＹ３４９Ｃ；Ｓ３６４ＨおよびＦ４０５Ａ；Ｙ３４９ＴおよびＴ３９４Ｆ；Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖ；Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗ；Ｋ３６０Ｄ、Ｄ３９９ＭおよびＹ４０７Ａ；Ｅ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６ＶおよびＫ４０９Ｖ；Ｋ４０９ＤおよびＫ３９２Ｄ；Ｄ３９９ＫおよびＥ３５６Ｋ；Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗ；Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔ；Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９ＷおよびＹ３４９Ｃ；Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５ＴおよびＳ３５４Ｃ；Ｋ３７０ＥおよびＫ４０９Ｗ；ならびにＥ３５７Ｎ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔのうちのいずれか１つを含むＣＨ３領域を含む。
【０１４１】
一部の実施形態では、ポリペプチドのＣＨ２および／またはＣＨ３領域は、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域を含む別のポリペプチドとのポリペプチドの会合を促進するための１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。
【０１４２】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、免疫グロブリン軽鎖定常配列の１つまたは複数の領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に記載されるようなＣＬ領域を含む。
【０１４３】
一部の実施形態では、本発明によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端へ、以下：
（ｉ）ＶＨ
（ｉｉ）ＶＬ
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ１
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＬ
（ｖ）ＶＬ−ＣＨ１
（ｖｉ）ＶＨ−ＣＬ
（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３
（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３
（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３
（ｘ）ＶＨ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３
のうちの１つによる構造を含む。
【０１４４】
本発明のポリペプチドから構成される抗原結合分子もまた本発明により提供される。一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、以下のポリペプチドの組合せ：
（Ａ）ＶＨ＋ＶＬ
（Ｂ）ＶＨ−ＣＨ１＋ＶＬ−ＣＬ
（Ｃ）ＶＬ−ＣＨ１＋ＶＨ−ＣＬ
（Ｄ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ−ＣＬ
（Ｅ）ＶＨ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ−ＣＨ１
（Ｆ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＨ−ＣＬ
（Ｇ）ＶＬ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＨ−ＣＨ１
（Ｈ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３
（Ｉ）ＶＨ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３
のうちの１つを含む。
【０１４５】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、上記の（Ａ）〜（Ｉ）に示す組合せのポリペプチドのうちの１つより多くを含む。例として、上記の（Ｄ）に関して、一部の実施形態では、抗原結合分子は、構造ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３を含む２つのポリペプチド、および構造ＶＬ−ＣＬを含む２つのポリペプチドを含む。
【０１４６】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、以下のポリペプチドの組合せ：
（Ｊ）ＶＨ（抗ＣＤ４７）＋ＶＬ（抗ＣＤ４７）
（Ｋ）ＶＨ（抗ＣＤ４７）−ＣＨ１＋ＶＬ（抗ＣＤ４７）−ＣＬ
（Ｌ）ＶＬ（抗ＣＤ４７）−ＣＨ１＋ＶＨ（抗ＣＤ４７）−ＣＬ
（Ｍ）ＶＨ（抗ＣＤ４７）−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ（抗ＣＤ４７）−ＣＬ
（Ｎ）ＶＨ（抗ＣＤ４７）−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ（抗ＣＤ４７）−ＣＨ１
（Ｏ）ＶＬ（抗ＣＤ４７）−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＨ（抗ＣＤ４７）−ＣＬ
（Ｐ）ＶＬ（抗ＣＤ４７）−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＨ（抗ＣＤ４７）−ＣＨ１
（Ｑ）ＶＨ（抗ＣＤ４７）−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ（抗ＣＤ４７）−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３
（Ｒ）ＶＨ（抗ＣＤ４７）−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ（抗ＣＤ４７）−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３
のうちの１つを含む。
「ＶＨ（抗ＣＤ４７）」は、例えば、（１）〜（３５）のうちの１つにおいて定義されるような、本明細書に記載されるようなＣＤ４７に結合することができる抗原結合分子のＶＨを指し、「ＶＬ（抗ＣＤ４７）」は、例えば、（３６）〜（７０）のうちの１つにおいて定義されるような、本明細書に記載されるようなＣＤ４７に結合することができる抗原結合分子のＶＬを指す。
【０１４７】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２３、３１、３９、４４、４９、５７、６５、７３、１７８、１７９、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５または１３６のうちの１つのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる。
【０１４８】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７または１６８のうちの１つのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる。
【０１４９】
リンカーおよび追加の配列
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子およびポリペプチドはヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＨ１領域とＣＨ２領域との間に提供される。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＬ領域とＣＨ２領域との間に提供される。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号１２０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる。
【０１５０】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子およびポリペプチドは、アミノ酸配列の間の１つまたは複数のリンカー配列を含む。リンカー配列は、抗原結合分子／ポリペプチドのＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１−ＣＨ２ヒンジ領域、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域のうちの１つまたは複数の１つまたは両方の末端において提供されてもよい。
【０１５１】
リンカー配列は当業者に公知であり、例えば、Ｃｈｅｎら、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ（２０１３年）６５（１０）：１３５７〜１３６９頁（参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。一部の実施形態では、リンカー配列は柔軟性リンカー配列であってもよい。柔軟性リンカー配列は、リンカー配列により連結されたアミノ酸配列の相対的な運動を可能とする。柔軟性リンカーは当業者に公知であり、いくつかがＣｈｅｎら、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ（２０１３年）６５（１０）：１３５７〜１３６９頁において同定されている。柔軟性リンカー配列は、多くの場合、高い割合のグリシンおよび／またはセリン残基を含む。
【０１５２】
一部の実施形態では、リンカー配列は、少なくとも１つのグリシン残基および／または少なくとも１つのセリン残基を含む。一部の実施形態では、リンカー配列は、グリシンおよびセリン残基からなる。一部の実施形態では、リンカー配列は、１〜２、１〜３、１〜４、１〜５または１〜１０アミノ酸の長さを有する。
【０１５３】
本発明の抗原結合分子およびポリペプチドは、さらなるアミノ酸またはアミノ酸の配列をさらに含んでもよい。例えば、抗原結合分子およびポリペプチドは、抗原結合分子／ポリペプチドの発現、フォールディング、トラフィッキング、プロセシング、精製または検出を促進するためのアミノ酸配列を含んでもよい。例えば、抗原結合分子／ポリペプチドは、任意選択的に抗原結合分子／ポリペプチドのＮまたはＣ末端において、Ｈｉｓ（例えば、６ＸＨｉｓ）、Ｍｙｃ、ＧＳＴ、ＭＢＰ、ＦＬＡＧ、ＨＡ、Ｅ、またはビオチンタグをコードする配列を含んでもよい。一部の実施形態では、抗原結合分子／ポリペプチドは、検出可能部分、例えば、蛍光、発光（ｌｕｎｍｉｎｅｓｃｅｎｔ）、免疫検出可能、放射性、化学、核酸または酵素標識を含む。
【０１５４】
本発明の抗原結合分子およびポリペプチドは、シグナルペプチド（リーダー配列またはシグナル配列としても公知）をさらに含んでもよい。シグナルペプチドは、通常、単一のアルファヘリックスを形成する５〜３０の疎水性アミノ酸の配列からなる。分泌されるタンパク質および細胞表面において発現されるタンパク質は、多くの場合、シグナルペプチドを含む。
【０１５５】
シグナルペプチドは、抗原結合分子／ポリペプチドのＮ末端において存在してもよく、新たに合成された抗原結合分子／ポリペプチド中に存在してもよい。シグナルペプチドは、抗原結合分子／ポリペプチドの効率的なトラフィッキングおよび分泌を提供する。シグナルペプチドは、多くの場合、切断により除去され、したがって、抗原結合分子／ポリペプチドを発現する細胞から分泌される成熟した抗原結合分子／ポリペプチド中に含まれない。
【０１５６】
多くのタンパク質のためのシグナルペプチドが公知であり、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、ＴｒＥＭＢＬ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ、Ｅｎｓｅｍｂｌ、およびＩｎｔｅｒＰｒｏなどのデータベース中に記録されており、かつ／または、例えば、ＳｉｇｎａｌＰ（Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、２０１１年  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ８：７８５〜７８６頁）もしくはＳｉｇｎａｌ−ＢＬＡＳＴ（ＦｒａｎｋおよびＳｉｐｐｌ、２００８年  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２４：２１７２〜２１７６頁）などのアミノ酸配列解析ツールを使用して、同定／予測され得る。
【０１５７】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子／ポリペプチドのシグナルペプチドは、配列番号８１〜８６のうちの１つのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％  ８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはからなる。
【０１５８】
標識およびコンジュゲート
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、検出可能部分をさらに含む。
【０１５９】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、検出可能部分、例えば、蛍光標識、リン光標識、発光標識、免疫検出可能標識（例えば、エピトープタグ）、放射性標識、化学、核酸または酵素標識を含む。抗原結合分子は、検出可能部分を用いて共有結合または非共有結合により標識されてもよい。
【０１６０】
蛍光標識としては、例えば、フルオレセイン、ローダミン、アロフィコシアニン、エオシンおよびＮＤＢ、ユウロピウム（Ｅｕ）、テルビウム（Ｔｂ）およびサマリウム（Ｓｍ）などの希少土類の緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）キレート、テトラメチルローダミン、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、４−メチルウンベリフェロン、７−アミノ−４−メチルクマリン、Ｃｙ３、およびＣｙ５が挙げられる。放射性標識としては、放射性同位体、例えば、ヨウ素１２３、ヨウ素１２５、ヨウ素１２６、ヨウ素１３１、ヨウ素１３３、臭素７７、テクネチウム９９ｍ、インジウム１１１、インジウム１１３ｍ、ガリウム６７、ガリウム６８、ルテニウム９５、ルテニウム９７、ルテニウム１０３、ルテニウム１０５、水銀２０７、水銀２０３、レニウム９９ｍ、レニウム１０１、レニウム１０５、スカンジウム４７、テルル１２１ｍ、テルル１２２ｍ、テルル１２５ｍ、ツリウム１６５、ツリウムｌ１６７、ツリウム１６８、銅６７、フッ素１８、イットリウム９０、パラジウム１００、ビスマス２１７およびアンチモン２１１が挙げられる。発光標識としては、放射性発光、化学発光（例えば、アクリジニウムエステル、ルミノール、イソルミノール）および生物発光標識が挙げられる。免疫検出可能標識としては、ハプテン、ペプチド／ポリペプチド、抗体、受容体およびリガンド、例えば、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンまたはジゴキシゲニンが挙げられる。核酸標識としては、アプタマーが挙げられる。酵素標識としては、例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼが挙げられる。
【０１６１】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、化学的部分に共役されている。化学的部分は、治療効果を提供するための部分であってもよい。抗体−薬物コンジュゲートは、例えば、Ｐａｒｓｌｏｗら、Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ．２０１６年９月；４（３）：１４において総説されている。一部の実施形態では、化学的部分は薬物部分（例えば、細胞傷害剤）であってもよい。一部の実施形態では、薬物部分は化学療法剤であってもよい。一部の実施形態では、薬物部分は、カリケアマイシン、ＤＭ１、ＤＭ４、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、ＳＮ−３８、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、Ｄ６．５およびＰＢＤから選択される。
【０１６２】
抗原結合分子の特定の例示的な実施形態
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１６３】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１０９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１１０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１６４】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１１１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１６５】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１６６】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１５９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１６７】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１６１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１６８】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１６２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１６９】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１７０】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１７１】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１６５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１７２】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１６５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１７３】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１７４】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１７５】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
【０１７６】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、
（ｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド、および
（ｉｉ）配列番号１６８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはからなる２つのポリペプチド
を含む、またはからなる。
抗原結合分子の機能的特性
本明細書に記載の抗原結合分子は、ある特定の機能的特性に言及することにより特徴付けられてもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原結合分子は、以下の特性の１つまたは複数を有してもよい：
ＣＤ４７に結合する、
ＣＤ４７発現細胞に結合する、
ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する、
ＳＩＲＰα媒介性シグナル伝達を阻害する、
食細胞（例えば、マクロファージ）によるＣＤ４７発現細胞の食作用を増加させる、
がん抗原特異的な免疫細胞の数／割合を増加させる
実質的な赤血球凝集を引き起こさない、
参照抗ＣＤ４７抗体と比較してより低い赤血球凝集を引き起こす、
がん細胞の殺傷を増加させる、
がんの発生／進行を阻害する。
【０１７７】
本明細書に記載の抗原結合分子および抗原結合ドメインは、好ましくは、関連する標的抗原（例えば、ＣＤ４７）への特異的結合を示す。本明細書において使用される場合、「特異的結合」は、抗原に選択的であり、かつ非標的抗原への非特異的結合から識別できる結合を指す。標的分子に特異的に結合する抗原結合分子／ドメインは、好ましくは、それが他の非標的分子に結合するよりも高い親和性、および／または長い継続期間で標的に結合する。
【０１７８】
所与の分子に特異的に結合する所与のポリペプチドの能力は、当該技術分野において公知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えば、Ｈｅａｒｔｙら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（２０１２年）９０７：４１１〜４４２頁を参照）、バイオレイヤー干渉法（例えば、Ｌａｄら、（２０１５年）Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ  ２０（４）：４９８〜５０７頁を参照）、フローサイトメトリー、または放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）酵素結合免疫吸着アッセイによる解析により決定され得る。そのような解析を通じて、所与の分子への結合は測定および定量化され得る。一部の実施形態では、結合は、所与のアッセイにおいて検出される応答であってもよい。
【０１７９】
一部の実施形態では、非標的分子への抗原結合分子の結合の程度は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、バイオレイヤー干渉法またはＲＩＡにより測定されるような標的分子への抗体の結合の約１０％未満である。代替的に、結合特異性は、抗原結合分子が、非標的分子への抗原結合分子の解離定数（ＫＤ）より少なくとも０．１の大きさのオーダー（すなわち、０．１×１０ｎであって、ｎは大きさのオーダーを表す整数）だけ大きいＫＤで結合する、結合親和性の点で表されてもよい。これは、任意選択的に、少なくとも０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、または２．０のうちの１つであってもよい。
【０１８０】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原結合分子は、１０μＭまたはそれ未満、好ましくは、≦５μＭ、≦２μＭ、≦１μＭ、≦５００ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦７５ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦４０ｎＭ、≦３０ｎＭ、≦２０ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１２．５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦９ｎＭ、≦８ｎＭ、≦７ｎＭ、≦６ｎＭ、≦５ｎＭ、≦４ｎＭ  ≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭまたは≦５００ｐＭのうちの１つのＫＤでＣＤ４７に結合する。一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＫＤ＝≦１０ｎＭ、≦９ｎＭ、≦８ｎＭ、≦７ｎＭまたは≦６ｎＭ、例えば、約５ｎＭの親和性でＣＤ４７に結合する。
【０１８１】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＥＣ５０＝１００μｇ／ｍｌまたはそれ未満、好ましくは、≦９０μｇ／ｍｌ、≦８０μｇ／ｍｌ、≦７０μｇ／ｍｌ、≦６０μｇ／ｍｌ、≦５０μｇ／ｍｌ、≦４０μｇ／ｍｌ、≦３０μｇ／ｍｌ、≦２０μｇ／ｍｌ、≦１０μｇ／ｍｌ、≦９μｇ／ｍｌ、≦８μｇ／ｍｌ、≦７μｇ／ｍｌ、≦６μｇ／ｍｌ、≦５μｇ／ｍｌ、≦４μｇ／ｍｌ、≦３μｇ／ｍｌ、≦２μｇ／ｍｌ、≦１．５μｇ／ｍｌ、≦１μｇ／ｍｌ、≦０．５μｇ／ｍｌ、≦０．２５μｇ／ｍｌ、または≦０．１μｇ／ｍｌのうちの１つの結合親和性（例えば、ＥＬＩＳＡにより決定される）でＣＤ４７に結合する。
【０１８２】
本発明の抗原結合分子は、標的抗原の特定の目的の領域に結合してもよい。本発明のドメインによる抗原結合分子の抗原結合領域は、連続するアミノ酸の配列（すなわち、アミノ酸一次配列）からなる標的抗原（例えば、ＣＤ４７）のリニアエピトープに結合してもよい。一部の実施形態では、抗原結合領域分子は、アミノ酸配列の不連続アミノ酸配列からなる標的抗原（すなわち、ＣＤ４７）のコンホメーショナルエピトープに結合してもよい。
【０１８３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子はＣＤ４７に結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７の細胞外領域においてＣＤ４７に結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７の細胞外領域１（例えば、配列番号１０に示す領域）においてＣＤ４７に結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合分子はＣＤ４７のＶ型Ｉｇ様ドメイン（例えば、配列番号９に示す領域）に結合することができる。
【０１８４】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１０に示すアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドに結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号９に示すアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドに結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号９に示すアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドに結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号２１に示すアミノ酸配列を含む、またはからなるペプチドまたはポリペプチドに結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号２２に示すアミノ酸配列を含む、またはからなるペプチドまたはポリペプチドに結合することができる。
【０１８５】
本明細書において使用される場合、「ペプチド」は、ペプチド結合により連結された２つまたはそれより多くのアミノ酸単量体の鎖を指す。ペプチドは、典型的には、約２〜５０アミノ酸の領域において長さを有する。「ポリペプチド」は、２つまたはそれより多くのペプチドのポリマー鎖である。ポリペプチドは、典型的には、約５０アミノ酸より大きい長さを有する。
【０１８６】
所与のペプチド／ポリペプチドに結合する抗原結合分子の能力は、当業者に周知の方法により解析することができ、該方法としては、ＥＬＩＳＡ、イムノブロット（例えば、ウエスタンブロット）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴およびバイオレイヤー干渉法による解析が挙げられる。
【０１８７】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７の同じ領域、またはＣＤ４７の重なり合う領域、クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ、１−１−Ａ１、５−４８−Ａ６、５−４８−Ｄ２、１１Ａ１Ｈ１、１１Ａ１Ｈ２、１１Ａ１Ｈ３、１１Ａ１Ｈ４、１１Ａ１Ｈ５、１１Ａ１Ｈ６、１１Ａ１Ｈ７、１１Ａ１Ｈ８、１１Ａ１Ｈ９、１１Ａ１Ｈ１０または１１Ａ１Ｈ１１のうちの１つのＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体が結合するＣＤ４７の領域に結合することができる。
【０１８８】
抗体が結合するペプチド／ポリペプチドの領域は、当該技術分野において周知の様々な方法を使用して当業者により決定され得、該方法としては、抗体−抗原複合体のＸ線共結晶解析、ペプチドスキャニング、突然変異誘発マッピング、質量分析による水素−重水素交換解析、ファージディスプレイ、競合ＥＬＩＳＡおよびタンパク質加水分解ベースの「保護」法が挙げられる。そのような方法は、例えば、Ｇｅｒｓｈｏｎｉら、ＢｉｏＤｒｕｇｓ、２００７年、２１（３）：１４５〜１５６頁（参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１８９】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、非ヒト霊長動物のＣＤ４７と交差反応性を示す。すなわち、一部の実施形態では、抗原結合分子は、ヒトＣＤ４７および非ヒト霊長動物からのＣＤ４７の両方に結合する。一部の実施形態では、非ヒト霊長動物はアカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）である。
【０１９０】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、ＣＤ４７が細胞表面において（すなわち、細胞膜中または細胞膜において）発現された場合に抗原結合分子（すなわち、細胞外抗原結合分子）に接近可能な領域においてＣＤ４７に結合する。一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７を発現する細胞の細胞表面において発現されるＣＤ４７に結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７発現細胞（例えば、骨髄細胞、骨髄性白血病細胞、ＨＬ−６０細胞、ＨＭＣ−１細胞、ＨＥＬ細胞またはＲａｊｉ細胞）に結合することができる。
【０１９１】
所与の細胞種に結合する抗原結合分子の能力は、細胞を抗原結合分子と接触させ、かつ、例えば、未結合の抗原結合分子を除去するための洗浄ステップの後に、細胞に結合した抗原結合分子を検出することにより解析することができる。免疫細胞表面分子発現細胞および／またはがん細胞抗原発現細胞に結合する抗原結合分子の能力は、フローサイトメトリーおよび免疫蛍光顕微鏡法などの方法により解析することができる。
【０１９２】
本発明の抗原結合分子は、ＣＤ４７のアンタゴニストであってもよい。一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＣＤ４７により媒介される機能またはプロセス（例えば、相互作用、シグナル伝達または他の活性）を阻害することができる。本明細書において、「阻害」は、対照条件と比べた低減、減少または軽減を指す。
【０１９３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、ＣＤ４７とＣＤ４７のリガンドとの間の相互作用を阻害することができる。一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害することができる。
【０１９４】
２つの因子の間の相互作用を阻害する抗原結合分子の能力は、例えば、抗体／断片の存在下での、または抗体／断片との相互作用パートナーの１つもしくは両方のインキュベーション後の、相互作用の解析により決定することができる。所与の抗原結合分子が２つの相互作用パートナーの間の相互作用を阻害することができるかどうかを決定するための好適なアッセイの例は競合ＥＬＩＳＡアッセイである。
【０１９５】
所与の相互作用（例えば、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用）を阻害することができる抗原結合分子は、抗原結合分子の非存在下（または適切な対照抗原結合分子の存在下）での相互作用のレベルと比較した、抗原結合分子の存在下での、または抗原結合分子との相互作用パートナーの１つもしくは両方のインキュベーション後の、相互作用パートナーの間の相互作用のレベルの低減／減少の観察により同定される。好適な解析は、例えば、組換え相互作用パートナーを使用してまたは相互作用パートナーを発現する細胞を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行うことができる。相互作用パートナーを発現する細胞は、内因性に相互作用パートナーを発現してもよく、または細胞中に導入された核酸から相互作用パートナーを発現してもよい。そのようなアッセイの目的のために、相互作用パートナーの１つもしくは両方および／または抗原結合分子は、相互作用を検出しかつ／またはそのレベルを測定する目的のために検出可能な実体を用いて標識されてもよく、またはそれと組み合わせて使用されてもよい。
【０１９６】
２つの結合パートナーの間の相互作用を阻害する抗原結合分子の能力はまた、そのような相互作用の下流の機能的な帰結の解析により決定することができる。例えば、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用の下流の機能的な帰結は、ＳＩＲＰα媒介性シグナル伝達を含んでもよい。例えば、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する抗原結合分子の能力は、ＳＩＲＰα  ＩＴＩＭリン酸化の解析、またはＳＩＲＰα発現細胞によるＣＤ４７発現細胞の食作用の解析により決定されてもよい。
【０１９７】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、抗原結合分子の非存在下（または適切な対照抗原結合分子の存在下）でのＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用のレベルの１倍未満まで、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍、≦０．０５倍、または≦０．０１倍までＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害することができる。
【０１９８】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、１００μｇ／ｍｌまたはそれ未満、好ましくは、≦９０μｇ／ｍｌ、≦８０μｇ／ｍｌ、≦７０μｇ／ｍｌ、≦６０μｇ／ｍｌ、≦５０μｇ／ｍｌ、≦４０μｇ／ｍｌ、≦３０μｇ／ｍｌ、≦２０μｇ／ｍｌ、≦１０μｇ／ｍｌ、≦９μｇ／ｍｌ、≦８μｇ／ｍｌ、≦７μｇ／ｍｌ、≦６μｇ／ｍｌ、≦５μｇ／ｍｌ、≦４μｇ／ｍｌ、≦３μｇ／ｍｌ、≦２μｇ／ｍｌ、≦１．５μｇ／ｍｌ、≦１μｇ／ｍｌ、≦０．５μｇ／ｍｌ、≦０．２５μｇ／ｍｌ、または≦０．１μｇ／ｍｌのうちの１つのＩＣ５０（例えば、ＥＬＩＳＡにより決定される）でＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。
【０１９９】
一部の実施形態では、抗原結合分子は、ＳＩＲＰα媒介性シグナル伝達を阻害する。ＳＩＲＰα媒介性シグナル伝達は、ＳＩＲＰα発現細胞を使用して、例えば、ＳＩＲＰα  ＩＴＩＭリン酸化を検出および／もしくは定量化するためのアッセイを使用して、またはＳＩＲＰα発現細胞（例えば、マクロファージ）によるＣＤ４７発現細胞（例えば、Ｒａｊｉ細胞）の食作用のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを使用して、解析することができる。例えば、ＳＩＲＰα発現細胞によるＣＤ４７発現細胞の食作用のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、Ｆｅｎｇら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．（２０１５年）１１２（７）：２１４５〜２１５０頁（参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるように、または本明細書の実施例に記載されるように行われてもよい。
【０２００】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、抗原結合分子の非存在下（または適切な対照抗原結合分子の存在下）でのＳＩＲＰα媒介性シグナル伝達のレベルの１倍未満まで、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍、≦０．０５倍、または≦０．０１倍未満までＳＩＲＰα媒介性シグナル伝達を阻害することができる。
【０２０１】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、ＣＤ４７発現細胞の食作用を増加させることができる。一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、ＳＩＲＰα発現細胞（例えば、マクロファージ）によるＣＤ４７発現細胞（例えば、Ｒａｊｉ細胞）の食作用を増加させることができる。
【０２０２】
ＳＩＲＰα発現細胞によるＣＤ４７発現細胞の食作用を増加させることができる抗原結合分子は、抗原結合分子の非存在下（または適切な対照抗原結合分子の存在下）で検出される食作用のレベルと比較して、抗原結合分子の存在下での、または抗原結合分子とのＣＤ４７発現細胞のインキュベーション後の、ＳＩＲＰα発現細胞によるＣＤ４７発現細胞の食作用の増加したレベルの観察により同定される。
【０２０３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、抗原結合分子の非存在下（または適切な対照抗原結合分子の存在下）でのＳＩＲＰα発現細胞によるＣＤ４７発現細胞の食作用のレベルの１倍より高くまで、例えば、≧１．０１倍、≧１．０２倍、≧１．０３倍、≧１．０４倍、≧１．０５倍、≧１．１倍、≧１．２倍、≧１．３倍、≧１．４倍、≧１．５倍、≧１．６倍、≧１．７倍、≧１．８倍、≧１．９倍、≧２倍、≧３倍、≧４倍、≧５倍、≧６倍、≧７倍、≧８倍、≧９倍または≧１０倍までＳＩＲＰα発現細胞（例えば、マクロファージ）によるＣＤ４７発現細胞（例えば、Ｒａｊｉ細胞）の食作用を増加させることができる。
【０２０４】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、例えば、適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、またはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、陰性対照条件と比べてがん抗原特異的な免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞またはＣＤ８＋  ＣＴＬ）の数／割合を増加させることができる。Ｔｓｅｎｇら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．（２０１３年）１１０（２７）：１１１０３〜１１１０８頁（参照により全体が本明細書に組み込まれる）は、抗ＣＤ４７抗体の存在下でのマクロファージによるＣＤ４７発現がん細胞の食作用の増加は、がん抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞のプライミングの増加と関連付けられることを実証した。がん抗原特異的な免疫細胞の数／割合の増加を引き起こすことができる抗原結合分子は、例えば、Ｔｓｅｎｇら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．（２０１３年）１１０（２７）：１１１０３〜１１１０８頁に記載されるようなＴ細胞プライミングアッセイを使用して同定することができる。
【０２０５】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、実質的な赤血球凝集を引き起こさない（例えば、最大４００μｇ／ｍｌの濃度において）。赤血球凝集は、赤血球細胞（赤血球）の凝集を指す。
【０２０６】
赤血球凝集を引き起こす薬剤は、ヘマグルチニンと称されることがある。一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子はヘマグルチニンではない。
【０２０７】
赤血球凝集を引き起こす抗体の能力は、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ赤血球凝集アッセイを使用して、解析することができる。そのような解析の目的のための赤血球凝集の好適なアッセイは、例えば、ＷＯ２０１３／１１９７１４Ａ１（参照により全体が本明細書に組み込まれる）の実施例５に記載されており、または本明細書の実施例に記載される赤血球凝集のアッセイである。「実質的な」赤血球凝集は、抗原結合分子の非存在下（または赤血球凝集を引き起こさない適切な対照抗原結合分子の存在下）で検出される赤血球凝集のレベルの２倍より高い、例えば、３、４、５、６、７、８、９または１０倍より高い赤血球凝集のレベルであってもよい。
【０２０８】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、参照抗ＣＤ４７抗体（例えば、先行技術の抗ＣＤ４７抗体）と比較してより低い赤血球凝集を引き起こす。一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、例えば、例えば赤血球凝集のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを使用して決定されるような、参照抗ＣＤ４７抗体（例えば、先行技術の抗ＣＤ４７抗体）と比較して１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍、≦０．０５倍、または≦０．０１倍のレベルの赤血球凝集を引き起こす。
【０２０９】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、がん細胞の殺傷を増加させる。一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、例えば、適切な対照条件と比較して、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてがん細胞の数の低減を引き起こす。がんは、ＣＤ４７を発現するがんであってもよく、またはＣＤ４７を発現する細胞（例えば、ＣＤ４７＋  ＡＭＬ細胞株、ＨＬ−６０）を含んでもよい。本発明の抗原結合分子は、適切なｉｎ  ｖｉｖｏモデル、例えば、ＡＭＬ細胞株由来異種移植モデルにおいて、抗がん活性について解析されてもよい。
【０２１０】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、参照抗ＣＤ４７抗体（例えば、先行技術の抗ＣＤ４７抗体）と比較してＡＭＬ細胞株由来異種移植モデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏでのがん細胞の数のより大きい低減を引き起こす。
【０２１１】
一部の実施形態では、本発明による抗原結合分子の投与は、以下の１つまたは複数を引き起こしてもよい：がんの発生／進行の阻害、がんの発症の遅延／予防、腫瘍成長の低減／遅延／予防、転移の低減／遅延／予防、がんの症状の重篤度の低減、がん細胞数の低減、腫瘍サイズ／体積の低減、および／または、例えばＡＭＬ細胞株由来異種移植モデルにおいて決定されるような、生存（例えば、無増悪生存）の増加。
【０２１２】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本発明はまた、本発明の抗原結合ポリペプチドまたはポリペプチドを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
【０２１３】
ＣＡＲは、抗原結合およびＴ細胞活性化機能の両方を提供する組換え受容体である。ＣＡＲの構造および操作は、例えば、Ｄｏｔｔｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ（２０１４年）２５７（１）（参照により全体が本明細書に組み込まれる）において総説されている。ＣＡＲは、細胞膜アンカー領域に連結された抗原結合領域およびシグナル伝達領域を含む。任意選択のヒンジ領域が抗原結合領域と細胞膜アンカー領域との間の分離を提供してもよく、柔軟性リンカーとして作用してもよい。
【０２１４】
本発明のＣＡＲは、本発明の抗原結合分子を含むもしくはからなる、または本発明によるポリペプチドを含むもしくはからなる抗原結合領域を含む。
【０２１５】
細胞膜アンカー領域は、ＣＡＲの抗原結合領域とシグナル伝達領域との間に提供され、ＣＡＲを発現する細胞の細胞膜へのＣＡＲのアンカリングを提供し、抗原結合領域は細胞外空間にあり、かつシグナル伝達領域は細胞の内側にある。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３−ζ、ＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ２８のうちの１つの膜貫通領域アミノ酸配列を含む、からなる、または由来するアミノ酸配列を含む、またはからなる細胞膜アンカー領域を含む。本明細書において使用される場合、参照アミノ酸配列に「由来する」領域は、参照配列に対して少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む。
【０２１６】
ＣＡＲのシグナル伝達領域は、Ｔ細胞の活性化を可能とする。ＣＡＲのシグナル伝達領域は、ＣＤ３−ζの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含んでもよく、該ドメインは、ＣＡＲ発現Ｔ細胞のリン酸化および活性化のための免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を提供する。ＦｃγＲＩなどの他のＩＴＡＭ含有タンパク質の配列を含むシグナル伝達領域もまたＣＡＲにおいて用いられてきた（Ｈａｙｎｅｓら、２００１年  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１）：１８２−１８７）。ＣＡＲのシグナル伝達領域はまた、標的タンパク質に結合するとＣＡＲ発現Ｔ細胞の活性化を促進するための共刺激分子のシグナル伝達領域に由来する共刺激配列を含んでもよい。好適な共刺激分子としては、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳおよびＣＤ２７が挙げられる。一部の場合には、ＣＡＲは、異なる細胞内シグナル伝達経路の共刺激を提供するように操作される。例えば、ＣＤ２８共刺激と関連付けられるシグナル伝達はホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（Ｐ１３Ｋ）経路を優先的に活性化させる一方、４−１ＢＢ媒介性シグナル伝達は、ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）アダプタータンパク質を介する。ＣＡＲのシグナル伝達領域は、したがって、１つより多くの共刺激分子のシグナル伝達領域に由来する共刺激配列を含有することがある。一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳおよびＣＤ２７のうちの１つまたは複数の細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む、からなる、または由来するアミノ酸配列を含む、またはからなる１つまたは複数の共刺激配列を含む。
【０２１７】
任意選択のヒンジ領域が抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間の分離を提供してもよく、柔軟性リンカーとして作用してもよい。ヒンジ領域はＩｇＧ１に由来してもよい。一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩｇＧ１のヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、からなる、または由来するアミノ酸配列を含む、またはからなるヒンジ領域を含む。
【０２１８】
本発明によるＣＡＲを含む細胞もまた提供される。本発明によるＣＡＲは、ＣＡＲ発現免疫細胞、例えば、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ細胞を生成するために使用されてもよい。免疫細胞へのＣＡＲの操作は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養の間に行われてもよい。
【０２１９】
本発明のＣＡＲの抗原結合領域は、任意の好適なフォーマット、例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂなどで提供されてもよい。
【０２２０】
核酸およびベクター
本発明は、本発明による抗原結合分子、ポリペプチドまたはＣＡＲをコードする核酸、または複数の核酸を提供する。
【０２２１】
一部の実施形態では、核酸は、例えば、他の核酸、または天然に存在する生物学的材料から精製または単離される。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡを含む、またはからなる。
【０２２２】
本発明はまた、本発明による核酸または複数の核酸を含むベクター、または複数のベクターを提供する。
【０２２３】
ヌクレオチド配列は、ベクター、例えば、発現ベクター中に含有されてもよい。本明細書において使用される「ベクター」は、外因性核酸を細胞中に移入するための運搬媒体として使用される核酸分子である。ベクターは、細胞中での核酸の発現用のベクターであってもよい。そのようなベクターは、発現される配列をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーター配列を含んでもよい。ベクターはまた、終止コドンおよび発現エンハンサーを含んでもよい。当該技術分野において公知の任意の好適なベクター、プロモーター、エンハンサーおよび終止コドンが、本発明によるベクターからペプチドまたはポリペプチドを発現するために使用されてもよい。
【０２２４】
「作動可能に連結された」という用語は、選択された核酸配列および調節核酸配列（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）が、核酸配列の発現を調節配列の影響または制御下に置くように共有結合により連結された状況（それにより発現カセットを形成する）を含むことができる。したがって、調節配列が核酸配列の転写をもたらすことができる場合に、調節配列は選択された核酸配列に作動可能に連結されている。結果として生じる転写物は次に、所望のペプチド／ポリペプチドに翻訳されてもよい。
【０２２５】
好適なベクターとしては、プラスミド、バイナリーベクター、ＤＮＡベクター、ｍＲＮＡベクター、ウイルスベクター（例えば、ガンマレトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクター）、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクターおよびヘルペスウイルスベクター）、トランスポゾンベースのベクター、ならびに人工染色体（例えば、酵母人工染色体）が挙げられる。
【０２２６】
一部の実施形態では、ベクターは、真核性ベクター、例えば、真核細胞中でのベクターからのタンパク質の発現のために必要なエレメントを含むベクターであってもよい。一部の実施形態では、ベクターは、哺乳動物ベクター、例えば、タンパク質発現を推進するためにサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）またはＳＶ４０プロモーターを含む哺乳動物ベクターであってもよい。
【０２２７】
本発明による抗原結合分子の構成ポリペプチドは、複数の核酸の異なる核酸、または複数のベクターの異なるベクターによりコードされてもよい。
【０２２８】
抗原結合分子およびポリペプチドを含む／発現する細胞
本発明はまた、本発明による抗原結合分子、ポリペプチドまたはＣＡＲを含むまたは発現する細胞を提供する。本発明による核酸、複数の核酸、ベクターまたは複数のベクターを含むまたは発現する細胞もまた提供される。
【０２２９】
細胞は、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞であってもよい。哺乳動物は、霊長動物（アカゲザル、カニクイザル、非ヒト霊長動物もしくはヒト）または非ヒト哺乳動物（例えば、ウサギ、モルモット、ラット、マウスもしくは他の齧歯動物（齧歯目の任意の動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ（ウシ、例えば、乳牛、もしくはウシ目の任意の動物を含む）、ウマ（ウマ目の任意の動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長動物）であってもよい。
【０２３０】
本発明はまた、本発明による核酸またはベクターを含む細胞を製造する方法であって、本発明による核酸、複数の核酸、ベクターまたは複数のベクターを細胞に導入することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、本発明による単離された核酸またはベクターを細胞に導入することは、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーションまたは形質導入（例えば、レトロウイルス形質導入）を含む。
【０２３１】
本発明はまた、本発明による抗原結合分子、ポリペプチドまたはＣＡＲを発現する／含む細胞を製造する方法であって、本発明による核酸、複数の核酸、ベクターまたは複数のベクターを細胞に導入することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、細胞による核酸またはベクターの発現のために好適な条件下で細胞を培養することをさらに含む。一部の実施形態では、方法はｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。
【０２３２】
本発明はまた、本発明による方法により得られたまたは得られ得る細胞を提供する。
【０２３３】
抗原結合分子およびポリペプチドの製造
本発明による抗原結合分子およびポリペプチドは、当業者に公知のポリペプチドの製造方法にしたがって調製されてもよい。
【０２３４】
ポリペプチドは、化学合成、例えば、液相または固相合成により調製されてもよい。例えば、ペプチド／ポリペプチドは、例えば、Ｃｈａｎｄｒｕｄｕら、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（２０１３年）、１８：４３７３〜４３８８頁（参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載される方法を使用して合成することができる。
【０２３５】
代替的に、抗原結合分子およびポリペプチドは、組換え発現により製造されてもよい。ポリペプチドの組換え製造のために好適な分子生物学技術は当該技術分野において周知であり、例えば、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （第４版）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、２０１２年、ならびにＮａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．（２００８年）；５（２）：１３５〜１４６頁（これらの両方は、参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。抗原結合分子の組換え製造の方法はまた、Ｆｒｅｎｚｅｌら、Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１３年）；４：２１７ならびにＫｕｎｅｒｔおよびＲｅｉｎｈａｒｔ、Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０１６年）１００：３４５１〜３４６１頁（これらの両方は、参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２３６】
一部の場合には、本発明の抗原結合分子は、１つより多くのポリペプチド鎖を含む。そのような場合、抗原結合分子の製造は、１つより多くのポリペプチドの転写および翻訳、ならびに抗原結合分子を形成するためのポリペプチド鎖のその後の会合を含んでもよい。
【０２３７】
本発明による組換え製造のために、ポリペプチドの発現のために好適な任意の細胞を使用することができる。細胞は、原核生物または真核生物であってもよい。一部の実施形態では、細胞は、原核細胞、例えば、古細菌または細菌の細胞である。一部の実施形態では、細菌は、グラム陰性細菌、例えば、腸内細菌科（ｆａｍｉｌｙ  Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）の細菌、例えば大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）であってもよい。一部の実施形態では、細胞は、真核細胞、例えば、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ、ＨＥＫ（例えば、ＨＥＫ２９３）、ＨｅＬａまたはＣＯＳ細胞である。
【０２３８】
一部の場合には、細胞は原核細胞ではなく、その理由は、一部の原核細胞は、真核細胞と同じフォールディングまたは翻訳後修飾を可能としないためである。加えて、非常に高い発現レベルが真核生物において可能であり、かつ、タンパク質は、適切なタグを使用して真核生物からより容易に精製され得る。培地へのタンパク質の分泌を増進する特定のプラスミドもまた利用されてもよい。
【０２３９】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、無細胞タンパク質合成（ＣＦＰＳ）により、例えば、Ｚｅｍｅｌｌａら、Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ（２０１５年）１６（１７）：２４２０〜２４３１頁（参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているシステムを使用して、調製されてもよい。
【０２４０】
製造は、目的のポリペプチドを発現するように修飾された真核細胞の培養または発酵を伴ってもよい。培養または発酵は、栄養分、空気／酸素および／または成長因子の適切な供給を備えたバイオリアクター中で行われてもよい。分泌されたタンパク質は、培養培地／発酵ブロスを細胞から分けること、タンパク質内容物を抽出すること、および個々のタンパク質を分離して、分泌されたポリペプチドを単離することにより回収され得る。培養、発酵および分離技術は当業者に周知であり、例えば、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第４版；上記で参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２４１】
バイオリアクターは、細胞が培養され得る１つまたは複数の容器を含む。バイオリアクター中での培養は、反応器への反応物の連続的な流れ、および反応器からの培養された細胞の連続的な流れを用いて、連続的に行われてもよい。代替的に、培養は、バッチで行われてもよい。バイオリアクターは、培養されている細胞のために最適条件が提供されるように、環境条件、例えば、ｐＨ、酸素、容器へのおよび容器からの流速、ならびに容器内の撹拌をモニターおよび制御する。
【０２４２】
抗原結合分子／ポリペプチドを発現する細胞の培養後、目的のポリペプチドは単離されてもよい。当該技術分野において公知の細胞からタンパク質を分離する任意の好適な方法を使用することができる。ポリペプチドを単離するために、栄養培地から細胞を分離することが必要なことがある。ポリペプチドが細胞から分泌される場合、細胞は、分泌された目的のポリペプチドを含有する培養培地から遠心分離により分離されてもよい。目的のポリペプチドが細胞内で回収される場合、タンパク質の単離は、細胞培養培地から細胞を分離するための遠心分離、溶解緩衝液を用いた細胞ペレットの処理、および、例えば、超音波処理、急速凍結解凍または浸透圧溶解による細胞破壊を含んでもよい。
【０２４３】
他のタンパク質および非タンパク質成分を含有してもよい上清または培養培地から目的のポリペプチドを単離することが望ましいことがある。上清または培養培地からタンパク質成分を分離する一般的なアプローチは沈殿による。異なる溶解度のタンパク質は、異なる濃度の沈殿剤、例えば硫酸アンモニウムにおいて沈殿する。例えば、低い濃度の沈殿剤において、水溶性タンパク質が抽出される。したがって、異なる増加濃度の沈殿剤を加えることにより、異なる溶解度のタンパク質を区別することができる。その後に透析を使用して、分離されたタンパク質から硫酸アンモニウムを除去してもよい。
【０２４４】
異なるタンパク質を区別するための他の方法は当該技術分野において公知であり、例えば、イオン交換クロマトグラフィーおよびサイズクロマトグラフィーである。これらは、沈殿の代替として使用されてもよく、または沈殿の後に行われてもよい。
【０２４５】
目的のポリペプチドが培養物から単離されたら、ポリペプチドを濃縮することが所望されるまたは必要なことがある。タンパク質を濃縮する多数の方法が当該技術分野において公知であり、例えば、限外濾過または凍結乾燥である。
【０２４６】
組成物
本発明はまた、本明細書に記載の抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクターおよび細胞を含む、組成物を提供する。
【０２４７】
本明細書に記載の抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクターおよび細胞は、医薬組成物または臨床使用のための医薬として配合されてもよく、薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでもよい。組成物は、局所、非経口、全身、腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、髄腔内、眼内、結膜内、腫瘍内、皮下、皮内、髄腔内、経口または経皮投与経路のために配合されてもよく、該投与経路は、注射または注入を含んでもよい。
【０２４８】
好適な配合物は、無菌または等張媒体中の抗原結合分子を含んでもよい。医薬および医薬組成物は、ゲル形態といった液体形態中に配合されてもよい。液体配合物は、ヒトまたは動物身体の選択された領域への注射または注入（例えば、カテーテルを介して）による投与のために配合されてもよい。
【０２４９】
一部の実施形態では、組成物は、例えば血管または腫瘍中への、注射または注入のために配合される。
【０２５０】
本明細書に記載の発明にしたがって、薬学的に有用な組成物の製造方法もまた提供され、そのような製造方法は、本明細書に記載の抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（もしくは複数の核酸）、発現ベクター（もしくは複数の発現ベクター）もしくは細胞を製造すること；本明細書に記載の抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（もしくは複数の核酸）、発現ベクター（もしくは複数の発現ベクター）もしくは細胞を単離すること；および／または本明細書に記載の抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（もしくは複数の核酸）、発現ベクター（もしくは複数の発現ベクター）もしくは細胞を薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤もしくは希釈剤と混合することから選択される１つまたは複数のステップを含んでもよい。
【０２５１】
例えば、本明細書に記載の発明のさらなる態様は、疾患／状態（例えば、がん）の治療において使用するための医薬または医薬組成物を配合または製造する方法であって、本明細書に記載の抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（もしくは複数の核酸）、発現ベクター（もしくは複数の発現ベクター）または細胞を薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合することにより医薬組成物または医薬を配合することを含む、方法に関する。
【０２５２】
治療的および予防的応用
本明細書に記載の抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクター、細胞および組成物は、治療および予防方法における用途を有する。
【０２５３】
本発明は、医学的治療または予防方法において使用するための、本明細書に記載の抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（もしくは複数の核酸）、発現ベクター（もしくは複数の発現ベクター）、細胞または組成物を提供する。疾患または状態を治療または予防するための医薬の製造における、本明細書に記載の抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（もしくは複数の核酸）、発現ベクター（もしくは複数の発現ベクター）、細胞または組成物の使用もまた提供される。疾患または状態を治療または予防する方法であって、対象に治療または予防有効量の本明細書に記載の抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（もしくは複数の核酸）、発現ベクター（もしくは複数の発現ベクター）、細胞または組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
【０２５４】
方法は、疾患／状態の発生もしくは進行の低減、疾患／状態の症状の軽減または疾患／状態の病理の低減のために効果的であってもよい。方法は、疾患／状態の進行を予防するため、例えば、疾患／状態の悪化を予防するため、または疾患／状態の発生速度を緩慢化させるために効果的であってもよい。一部の実施形態では、方法は、疾患／状態の改善、例えば、疾患／状態の症状の低減または疾患／状態の重篤度／活性の何らかの他の相関現象の低減に繋がってもよい。一部の実施形態では、方法は、疾患／状態の後期ステージ（例えば、慢性ステージまたは転移）の発生を予防してもよい。
【０２５５】
本発明の物品は、ＣＤ４７を発現する細胞の数および／または活性の低減から治療的または予防的利益を得るであろう任意の疾患／状態の治療／予防のために使用されてもよいことが理解されるであろう。例えば、疾患／状態は、ＣＤ４７を発現する細胞が病理学的に関与する疾患／状態、例えば、ＣＤ４７を発現する細胞の増加した数／割合が、疾患／状態の発症、発生もしくは進行、および／もしくは疾患／状態の１つもしくは複数の症状の重篤度と正に関連付けられる、またはＣＤ４７を発現する細胞の増加した数／割合が、疾患／状態の発症、発生もしくは進行のリスク因子である、疾患／状態であってもよい。
【０２５６】
一部の実施形態では、本発明にしたがって治療／予防される疾患／状態は、例えば、疾患／状態の非存在下でのＣＤ４７を発現する細胞の数／割合／活性と比較した、ＣＤ４７を発現する細胞の数／割合／活性の増加により特徴付けられる疾患／状態である。
【０２５７】
一部の実施形態では、治療／予防される疾患／状態はがんである。ＣＤ４７は、全てのヒトがんにより発現される細胞表面マーカーであることが提唱されている（Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．（２０１２年）１０９（１７）：６６６２〜６６６７頁）。
【０２５８】
がんは、任意の望ましくない細胞増殖（もしくは望ましくない細胞増殖により出現する任意の疾患）、新生物または腫瘍であってもよい。がんは、良性または悪性であってもよく、原発性または二次性（転移性）であってもよい。新生物または腫瘍は、細胞の任意の異常な成長または増殖であってもよく、任意の組織中に位置してもよい。がんは、例えば、副腎、副腎髄質、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含むまたは除外する）  小脳、子宮頸部、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（例えば、腎臓上皮）、胆嚢、食道、グリア細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺（ｌａｃｒｉｍａｌ  ｇｌａｄ）、喉頭、肝臓、肺、リンパ、リンパ節、リンパ芽球、上顎、縦隔、腸間膜、子宮筋層、鼻咽頭、網、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ状結腸、皮膚、小腸、軟組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃、気管、子宮、外陰部、白血球に由来する組織／細胞のがんであってもよい。
【０２５９】
治療される腫瘍は、神経系または非神経系腫瘍であってもよい。神経系腫瘍は、中枢神経系または末梢神経系のいずれかを起源とするものであってもよく、例えば、神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経線維腫、上衣腫、神経鞘腫、神経線維肉腫、星状細胞腫および乏突起膠腫であってもよい。非神経系がん／腫瘍は、任意の他の非神経組織を起源とするものであってもよく、例としては、黒色腫、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ヘパトーマ、類表皮癌、前立腺癌、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、膵臓がん、胸腺癌、ＮＳＣＬＣ、血液がんおよび肉腫が挙げられる。
【０２６０】
治療／予防は、がんの症状の発症／進行の遅延／予防、がんの症状の重篤度の低減、がん細胞の生存／増殖／浸潤／転移の低減、がん細胞の数の低減および／または対象の生存の増加のうちの１つまたは複数を目的とするものであってもよい。
【０２６１】
一部の実施形態では、治療／予防されるがんは、ＣＤ４７を発現する細胞を含む。一部の実施形態では、治療／予防されるがんは、ＣＤ４７について陽性のがんである。一部の実施形態では、がんはＣＤ４７を過剰発現する。ＣＤ４７の過剰発現は、等価の非がん性細胞／非腫瘍組織による発現のレベルより高いＣＤ４７の発現のレベルの検出により決定され得る。
【０２６２】
ＣＤ４７の発現は、任意の好適な手段により決定されてもよい。発現は、遺伝子発現またはタンパク質発現であってもよい。遺伝子発現は、例えば、例えば定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）により、ＣＤ４７をコードするｍＲＮＡの検出により決定され得る。タンパク質発現は、例えば、例えば抗体ベースの方法、例えば、ウエスタンブロット、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、またはＥＬＩＳＡによる、ＣＤ４７の検出により決定され得る。
【０２６３】
一部の実施形態では、患者は、例えば、対象から得られた試料中の、ＣＤ４７を発現するまたはＣＤ４７を過剰発現するがんの検出に基づいて本明細書に記載の治療のために選択されてもよい。
【０２６４】
様々ながんの発生および進行におけるＣＤ４７の役割は、例えば、Ｓｉｃｋら、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２０１２年）１６７（７）：１４１５〜１４３０頁およびＣｈａｏら、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２年４月；２４（２）：２２５〜２３２頁（参照により全体が本明細書に組み込まれる）において総説されている。ＣＤ４７の発現の上昇は、いくつかのがんについて負の予後指標であり、がん細胞の殺傷を低減することによりならびにがん細胞の増殖、遊走および／または浸潤を増加させることによりがんの発生／進行に寄与することがある。ＣＤ４７は、先天的なマクロファージおよびＮＫ細胞媒介性抗がん応答を抑制することが示されている（Ｓｏｔｏ−Ｐａｎｔｏｊａら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ．（２０１３年）１７（１）：８９〜１０３頁；参照により全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２６５】
ＣＤ４７は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱がん、脳のがんおよび卵巣がんの細胞により発現される。Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．（２０１２年）１０９（１７）：６６６２〜６６６７頁は、卵巣、乳房、結腸、膀胱、膠芽腫、肝細胞癌、および前立腺腫瘍の細胞上のＣＤ４７の発現を報告しており、ＣＤ４７は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ；Ｚｈａｏら、Ｓｃｉ  Ｒｅｐ．（２０１６年）６：２９７１９頁）および黒色腫（Ｎｇｏら、Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１６年）１６、１７０１〜１７１６頁）における腫瘍浸潤および転移を促進することが最近示された。
【０２６６】
したがって、一部の実施形態では、本発明にしたがって治療／予防されるがんは、血液学的悪性腫瘍、骨髄血液学的悪性腫瘍、リンパ芽球性血液学的悪性腫瘍、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱がん、脳のがん、膠芽腫、卵巣がん、乳がん、結腸がん、肝臓がん、肝細胞癌、前立腺がん、肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、皮膚がんおよび黒色腫から選択される。
【０２６７】
ＣＤ４７は、全ての特徴付けられたＡＭＬ細胞株において高発現され、かつ機能的役割を果たし、したがって抗原消失のリスクを低減するので、ＡＭＬについての特に魅力的な治療標的である。肝臓中の組織内在性マクロファージ（クッパー細胞）の大集団は、血液学的悪性腫瘍についての魅力的な治療機序を表し、悪性細胞のマクロファージ推進性クリアランスは、適応免疫系へのネオ抗原提示のためのさらなる経路を与える。
【０２６８】
ＣＤ４７はまた、自己免疫疾患、炎症性疾患、虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）および心臓血管疾患の病理発生に関与する（例えば、Ｓｏｔｏ−Ｐａｎｔｏｊａら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ．（２０１３年）１７（１）：８９〜１０３頁を参照）。ＣＤ４７−ＳＩＲＰαアクシスはＩ型糖尿病（Ｄｕｇａｓら、Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．（２０１０年）３５（１）：２３〜３２頁）に関係があるとされてきた。トロンボスポンジン−１は、ＣＤ４７を介して作用して、血管系を通じた一酸化窒素シグナル伝達を阻害して、ＴＳＰ１−ＣＤ４７相互作用を遮断することで組織虚血を軽減し（Ｉｓｅｎｂｅｒｇら、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．（２００８年）２８（４）：６１５〜６２１頁）、かつ虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）を低減すること（Ｘｉａｏら、Ｌｉｖｅｒ  Ｔｒａｎｓｐｌ．（２０１５年）２１（４）：４６８〜４７７頁）が示されている。
【０２６９】
したがって、一部の実施形態では、治療／予防される疾患／障害は、がん、自己免疫疾患（例えば、Ｉ型糖尿病）、炎症性疾患、虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）または心臓血管疾患である。
【０２７０】
本発明の物品の投与は、好ましくは、「治療有効」量または「予防有効」量で為され、これは、対象に対して治療的または予防的利益を示すために充分である。投与される実際の量、ならびに投与の速度および時間経過は、疾患／状態の性質および重篤度ならびに投与される特定の物品に依存する。例えば、投与量の決定などの治療の処方は、一般の臨床医および他の医師の責任の範囲内であり、典型的には、治療される疾患／障害、個々の対象の状態、送達の部位、投与方法および臨床医に既知の他の要因を考慮に入れる。上記の技術およびプロトコールの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２０版、２０００年、ｐｕｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓにおいて見出すことができる。
【０２７１】
投与は、単独でまたは他の治療と組み合わせて、治療される状態に依存して同時にまたは逐次的であってもよい。本明細書に記載の抗原結合分子または組成物および治療剤は、同時にまたは逐次的に投与されてもよい。
【０２７２】
一部の実施形態では、方法は、例えばがんの治療／予防のための、追加の治療的または予防的介入を含む。一部の実施形態では、治療的または予防的介入は、化学療法、免疫療法、放射線療法、手術、ワクチン接種および／またはホルモン療法から選択される。一部の実施形態では、治療的または予防的介入は白血球アフェレーシスを含む。一部の実施形態では、治療的または予防的介入は幹細胞移植を含む。
【０２７３】
本発明の抗原結合分子は、放射線療法と組み合わせて使用するために特に好適である。ＣＤ４７のアンタゴニズムは、腫瘍の放射線感受性を増加させながら、照射後の正常組織の生存能力の維持を助けることが以前に示されている（（Ｍａｘｈｉｍｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００９年）１（３）：３ｒａ７）。
【０２７４】
同時投与は、例えば両方の薬剤を含有する医薬組成物（組合せ調製物）としての、または、互いの直後の、かつ任意選択的に、例えば、同じ動脈、静脈もしくは他の血管への、同じ投与経路を介した、抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（もしくは複数の核酸）、発現ベクター（もしくは複数の発現ベクター）、細胞または組成物および治療剤の投与を指す。逐次投与は、抗原結合分子／組成物または治療剤のうちの１つの投与、および所与の時間間隔後の他の薬剤の別々の投与を指す。２つの薬剤が同じ経路により投与されることは必要とされないが、一部の実施形態ではこれが当てはまる。時間間隔は任意の時間間隔であってもよい。
【０２７５】
化学療法および放射線療法はそれぞれ、薬物または電離放射線（例えば、Ｘ線もしくはγ線を使用する放射線療法）を用いるがんの治療を指す。薬物は、化学的実体、例えば、小分子薬剤、抗生物質、ＤＮＡインターカレーター、タンパク質阻害剤（例えば、キナーゼ阻害剤）、または生物学的薬剤、例えば、抗体、抗体断片、アプタマー、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、もしくはタンパク質であってもよい。薬物は、医薬組成物または医薬として配合されてもよい。配合物は、１つまたは複数の薬学的に許容される希釈剤、賦形剤または担体と共に１つまたは複数の薬物（例えば、１つまたは複数の活性剤）を含んでもよい。
【０２７６】
治療は、１つより多くの薬物の投与を伴ってもよい。薬物は、単独でまたは他の治療と組み合わせて、治療される状態に依存して同時にまたは逐次的に、投与されてもよい。例えば、化学療法は、２つの薬物の投与を伴う併用療法であってもよく、該薬物の１つまたは複数は、がんを治療することを意図したものであってもよい。
【０２７７】
化学療法は、１つまたは複数の投与経路、例えば、非経口、静脈注射、経口、皮下、皮内または腫瘍内の投与経路により投与されてもよい。
【０２７８】
化学療法は、治療レジームにしたがって投与されてもよい。治療レジームは、化学療法投与の予め決定された時間表、計画、スキームまたはスケジュールであってもよく、これは医師または医療従事者により用意されてもよく、かつ、治療を必要とする患者に適するように調整されてもよい。治療レジームは、患者に投与される化学療法の種類；各薬物または放射線の用量；投与の間の時間間隔；各治療の長さ；それがある場合には任意の治療休暇の回数および性質などのうちの１つまたは複数を指し示してもよい。併用療法のために、各薬物が投与される方法を指し示す単一の治療レジームが提供されてもよい。
【０２７９】
化学療法薬は以下から選択されてもよい：アベマシクリブ、アビラテロン酢酸塩、アビトレキサート（Ａｂｉｔｒｅｘａｔｅ）（メトトレキサート）、アブラキサン（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子配合物）、ＡＢＶＤ、ＡＢＶＥ、ＡＢＶＥ−ＰＣ、ＡＣ、アカラブルチニブ、ＡＣ−Ｔ、アドセトリス（ブレンツキシマブベドチン）、ＡＤＥ、アドトラスツズマブエムタンシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン塩酸塩）、アファチニブジマレイン酸塩、アフィニトール（エベロリムス）、アキンゼオ（ネツピタントおよびパロノセトロン塩酸塩）、アルダラ（イミキモド）、アルデスロイキン、アレセンサ（アレクチニブ）、アレクチニブ、アレムツズマブ、アリムタ（ペメトレキセド二ナトリウム）、アリコパ（コパンリシブ塩酸塩）、注射用アルケラン（メルファラン塩酸塩）、アルケラン錠剤（メルファラン）、アロキシ（パロノセトロン塩酸塩）、アルンブリグ（ブリガチニブ）、アンボクロリン（Ａｍｂｏｃｈｌｏｒｉｎ）（クロラムブシル）、アンボクロリン（Ａｍｂｏｃｌｏｒｉｎ）（クロラムブシル）、アミホスチン、アミノレブリン酸、アナストロゾール、アプレピタント、アレジア（パミドロン酸二ナトリウム）、アリミデックス（アナストロゾール）、アロマシン（エキセメスタン）、アラノン（ネララビン）、三酸化ヒ素、アーゼラ（オファツムマブ）、アスパラギナーゼ・エルウィニア・クリサンテミ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ  Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、アテゾリズマブ、アバスチン（ベバシズマブ）、アベルマブ、アキシカブタジン・シロルーセル、アキシチニブ、アザシチジン、バベンチオ（アベルマブ）、ＢＥＡＣＯＰＰ、ベセナム（Ｂｅｃｅｎｕｍ）（カルムスチン）、ベレオダク（ベリノスタット）、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ＢＥＰ、ベスポンサ（イノツズマブ・オゾガマイシン）、ベバシズマブ、ベキサロテン、ベキサール（トシツモマブおよびヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ（カルムスチン）、ブレオマイシン、ブリナツモマブ、ブリンサイト（ブリナツモマブ）、ボルテゾミブ、ボシュリフ（ボスチニブ）、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリガチニブ、ＢｕＭｅｌ、ブスルファン、ブスルフェクス（ブスルファン）、カバジタキセル、カボメティクス（カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩）、カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩、ＣＡＦ、カルクエンス（アカラブルチニブ）、キャンパス（アレムツズマブ）、カンプトサール（イリノテカン塩酸塩）、カペシタビン、ＣＡＰＯＸ、カラック（Ｃａｒａｃ）（フルオロウラシル−局所）、カルボプラチン、カルボプラチン−タキソール、カルフィルゾミブ、カルムブリス（Ｃａｒｍｕｂｒｉｓ）（カルムスチン）、カルムスチン、カルムスチンインプラント、カソデックス（ビカルタミド）、ＣＥＭ、セリチニブ、セルビジン（ダウノルビシン塩酸塩）、サーバリックス（組換えＨＰＶ二価ワクチン）、セツキシマブ、ＣＥＶ、クロラムブシル、クロラムブシル−プレドニゾン、ＣＨＯＰ、シスプラチン、クラドリビン、クラフェン（Ｃｌａｆｅｎ）（シクロホスファミド）、クロファラビン、クロファレックス（Ｃｌｏｆａｒｅｘ）（クロ��ァラビン）、クロラール（クロファラビン）、ＣＭＦ、コビメチニブ、コメトリク（カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩）、コパンリシブ塩酸塩、ＣＯＰＤＡＣ、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ−ＡＢＶ、コスメゲン（ダクチノマイシン）、コテリク（Ｃｏｔｅｌｌｉｃ）（コビメチニブ）、クリゾチニブ、ＣＶＰ、シクロホスファミド、サイフォス（Ｃｙｆｏｓ）（イホスファミド）、サイラムザ（ラムシルマブ）、シタラビン、シタラビンリポソーム、サイトサール−Ｕ（シタラビン）、シトキサン（シクロホスファミド）、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダコゲン（デシタビン）、ダクチノマイシン、ダラツムマブ、ダラザレックス（ダラツムマブ）、ダサチニブ、ダウノルビシン塩酸塩、ダウノルビシン塩酸塩およびシタラビンリポソーム、デシタビン、デフィブロチドナトリウム、デファイテリオ（デフィブロチドナトリウム）、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デノスマブ、デポサイト（シタラビンリポソーム）、デキサメタゾン、デクスラゾキサン塩酸塩、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、ドキシル（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ドキソルビシン塩酸塩、ドキソルビシン塩酸塩リポソーム、Ｄｏｘ−ＳＬ（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（ダカルバジン）、デュルバルマブ、エフデックス（フルオロウラシル−局所）、エリテック（Ｅｌｉｔｅｋ）（ラスブリカーゼ）、エレンセ（Ｅｌｌｅｎｃｅ）（エピルビシン塩酸塩）、エロツズマブ、エロキサチン（オキサリプラチン）、エルトロンボパグオラミン、エメンド（アプレピタント）、エムプリシティ（エロツズマブ）、エナシデニブメシル酸塩、エンザルタミド、エピルビシン塩酸塩、ＥＰＯＣＨ、アービタックス（セツキシマブ）、エリブリンメシル酸塩、エリベッジ（ビスモデギブ）、エルロチニブ塩酸塩、エルウィナーゼ（アスパラギナーゼ・エルウィニア・クリサンテミ）、エチオール（アミホスチン）、エトポフォス（エトポシドリン酸塩）、エトポシド、エトポシドリン酸塩、エバセト（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、エベロリムス、エビスタ（ラロキシフェン塩酸塩）、エボメラ（Ｅｖｏｍｅｌａ）（メルファラン塩酸塩）、エキセメスタン、５−ＦＵ（フルオロウラシル注射）、５−ＦＵ（フルオロウラシル−局所）、フェアストン（トレミフェン）、ファリダク（Ｆａｒｙｄａｋ）（パノビノスタット）、フェソロデックス（フルベストラント）、ＦＥＣ、フェマーラ（レトロゾール）、フィルグラスチム、フルダラ（フルダラビンリン酸塩）、フルダラビンリン酸塩、フルオロプレックス（フルオロウラシル−局所）、フルオロウラシル注射、フルオロウラシル−局所、フルタミド、フォレックス（Ｆｏｌｅｘ）（メトトレキサート）、フォレックスＰＦＳ（メトトレキサート）、フォルフィリ、フォルフィリ−ベバシズマブ、フォルフィリ−セツキシマブ、フォルフィリノックス、フォルフォックス、フォロチン（プララトレキサート）、ＦＵ−ＬＶ、フルベストラント、ガーダシル（組換えＨＰＶ四価ワクチン）、ガーダシル９（組換えＨＰＶ非価ワクチン）、ガザイバ（オビヌツズマブ）、ゲフィチニブ、ゲムシタビン塩酸塩、ゲムシタビン−シスプラチン、ゲムシタビン−オキサリプラチ��、ゲムツズマブオゾガマイシン、ジェムザール（ゲムシタビン塩酸塩）、ジオトリフ（アファチニブジマレイン酸塩）、グリベック（イマチニブメシル酸塩）、ギリアデル（カルムスチンインプラント）、ギリアデルウェハー（Ｇｌｉａｄｅｌ  ｗａｆｅｒ）（カルムスチンインプラント）、グルカルピダーゼ、ゴセレリン酢酸塩、ハラヴェン（エリブリンメシル酸塩）、ヘマンジオル（プロプラノロール塩酸塩）、ハーセプチン（トラスツズマブ）、ＨＰＶ二価ワクチン、組換え、ＨＰＶ非価ワクチン、組換え、ＨＰＶ四価ワクチン、組換え、ハイカムチン（トポテカン塩酸塩）、ハイドレア（ヒドロキシウレア）、ヒドロキシウレア、ハイパーＣＶＡＤ、イブランス（パルボシクリブ）、イブリツモマブチウキセタン、イブルチニブ、ＩＣＥ、アイクルシグ（ポナチニブ塩酸塩）、イダマイシン（イダルビシン塩酸塩）、イダルビシン塩酸塩、イデラリシブ、イディファ（Ｉｄｈｉｆａ）（エナシデニブメシル酸塩）、イフェクス（Ｉｆｅｘ）（イホスファミド）、イホスファミド、イホスファミズム（Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｕｍ）（イホスファミド）、ＩＬ−２（アルデスロイキン）、イマチニブメシル酸塩、イムブルビカ（イブルチニブ）、イミフィンジ（デュルバルマブ）、イミキモド、イムリジック（タリモジーン・ラハーパレプベック）、インリタ（Ｉｎｌｙｔａ）（アキシチニブ）、イノツズマブ・オゾガマイシン、組換えインターフェロンアルファ−２ｂ、インターロイキン−２（アルデスロイキン）、イントロンＡ（組換えインターフェロンアルファ−２ｂ）、ヨウ素Ｉ１３１トシツモマブおよびトシツモマブ、イピリムマブ、イレッサ（ゲフィチニブ）、イリノテカン塩酸塩、イリノテカン塩酸塩リポソーム、イストダックス（ロミデプシン）、イキサベピロン、イキサゾミブクエン酸塩、イクセンプラ（イキサベピロン）、ジャカフィ（ルキソリチニブリン酸塩）、ＪＥＢ、ジェブタナ（カバジタキセル）、カドサイラ（アドトラスツズマブエムタンシン）、ケオキシフェン（ラロキシフェン塩酸塩）、ケピバンス（パリフェルミン）、キイトルーダ（ペムブロリズマブ）、キスカリ（リボシクリブ）、キムリア（チサゲンレクルユーセル）、カイプロリス（カルフィルゾミブ）、ランレオチド酢酸塩、ラパチニブ二トシル酸塩、ラルトルボ（オララツマブ）、レナリドミド、レンバチニブメシル酸塩、レンビマ（レンバチニブメシル酸塩）、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、リューケラン（クロラムブシル）、ロイプロリド酢酸塩、ロイスタチン（クラドリビン）、レブラン（Ｌｅｖｕｌａｎ）（アミノレブリン酸）、リンホリジン（Ｌｉｎｆｏｌｉｚｉｎ）（クロラムブシル）、リポドックス（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ロムスチン、ロンサーフ（トリフルリジンおよびチピラシル塩酸塩）、ルプロン（ロイプロリド酢酸塩）、ルプロンデポー（Ｌｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ）（ロイプロリド酢酸塩）、ルプロンデポー−Ｐｅｄ（ロイプロリド酢酸塩）、リンパルザ（オラパリブ）、マルキボ（Ｍａｒｑｉｂｏ）（ビンクリスチン硫酸塩リポソーム）、マツラン（Ｍａｔｕｌａｎｅ）（プロカルバジン塩酸塩）、メクロレタミン塩酸塩、メゲストロール酢酸塩、メキニスト（トラメチニブ���、メルファラン、メルファラン塩酸塩、メルカプトプリン、メスナ、メスネックス（メスナ）、メタゾラストン（テモゾロミド）、メトトレキサート、メトトレキサートＬＰＦ（メトトレキサート）、メチルナルトレキソン臭化物、メキサート（Ｍｅｘａｔｅ）（メトトレキサート）、メキサート−ＡＱ（メトトレキサート）、ミドスタウリン、ミトマイシンＣ、ミトキサントロン塩酸塩、ミトジトレックス（Ｍｉｔｏｚｙｔｒｅｘ）（ミトマイシンＣ）、ＭＯＰＰ、モゾビル（プレリキサホル）、ムスタルゲン（メクロレタミン塩酸塩）、ムタマイシン（ミトマイシンＣ）、ミレラン（ブスルファン）、マイロサール（Ｍｙｌｏｓａｒ）（アザシチジン）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ナノ粒子パクリタキセル（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子配合物）、ナベルビン（ビノレルビン酒石酸塩）、ネシツムマブ、ネララビン、ネオサール（Ｎｅｏｓａｒ）（シクロホスファミド）、ネラチニブマレイン酸塩、ネルリンクス（ネラチニブマレイン酸塩）、ネツピタントおよびパロノセトロン塩酸塩、ニューラスタ（ペグフィルグラスチム）、ニューポジェン（フィルグラスチム）、ネクサバール（ソラフェニブトシル酸塩）、ニランドロン（ニルタミド）、ニロチニブ、ニルタミド、ニンラーロ（イキサゾミブクエン酸塩）、ニラパリブトシル酸塩一水和物、ニボルマブ、ノルバデックス（タモキシフェンクエン酸塩）、エヌプレート（Ｎｐｌａｔｅ）（ロミプロスチム）、オビヌツズマブ、オドムゾ（Ｏｄｏｍｚｏ）（ソニデギブ）、ＯＥＰＡ、オファツムマブ、ＯＦＦ、オラパリブ、オララツマブ、オマセタキシンメぺコハク酸塩（Ｏｍａｃｅｔａｘｉｎｅ  Ｍｅｐｅｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、オンカスパル（Ｏｎｃａｓｐａｒ）（ペガスパルガーゼ）、オンダンセトロン塩酸塩、オニバイド（イリノテカン塩酸塩リポソーム）、オンタク（Ｏｎｔａｋ）（デニロイキンジフチトクス）、オプジーボ（ニボルマブ）、ＯＰＰＡ、オシメルチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子配合物、ＰＡＤ、パルボシクリブ、パリフェルミン、パロノセトロン塩酸塩、パロノセトロン塩酸塩およびネツピタント、パミドロン酸二ナトリウム、パニツムマブ、パノビノスタット、パラプラット（Ｐａｒａｐｌａｔ）（カルボプラチン）、パラプラチン（カルボプラチン）、パゾパニブ塩酸塩、ＰＣＶ、ＰＥＢ、
ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ、ＰＥＧ−イントロン（ペグインターフェロンアルファ−２ｂ）、ペムブロリズマブ、ペメトレキセド二ナトリウム、パージェタ（ペルツズマブ）、ペルツズマブ、プラチノール（シスプラチン）、プラチノール−ＡＱ（シスプラチン）、プレリキサホル、ポマリドミド、ポマリスト（ポマリドミド）、ポナチニブ塩酸塩、ポルトラザ（Ｐｏｒｔｒａｚｚａ）（ネシツムマブ）、プララトレキサート、プレドニゾン、プロカルバジン塩酸塩、プロロイキン（アルデスロイキン）、プロリア（デノスマブ）、プロマクタ（エルトロンボパグオラミン）、プロプラノロール塩酸塩、プロベンジ（シプリューセル−Ｔ）、プリネトール（メルカプトプリン）、プリキサン（Ｐｕｒｉｘａｎ）（メルカプトプリン）、［エントリーなし］、ラジウム２２３二塩化物、ラロキシフェン塩酸塩、ラムシルマブ、ラスブリカーゼ、Ｒ−ＣＨＯＰ、Ｒ−ＣＶＰ、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）二価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）非価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）四価ワクチン、組換えインターフェロンアルファ−２ｂ、レゴラフェニブ、レリストール（メチルナルトレキソン臭化物）、Ｒ−ＥＰＯＣＨ、レブラミド（レナリドミド）、リウマトレックス（メトトレキサート）、リボシクリブ、Ｒ−ＩＣＥ、リツキサン（リツキシマブ）、リツキサンハイセラ（Ｒｉｔｕｘａｎ  Ｈｙｃｅｌａ）（リツキシマブおよびヒアルロニダーゼヒト）、リツキシマブ、リツキシマブおよびヒアルロニダーゼヒト、ロラピタント塩酸塩、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルビドマイシン（ダウノルビシン塩酸塩）、ルブラカ（ルカパリブカンシル酸塩）、ルカパリブカンシル酸塩、ルキソリチニブリン酸塩、ライダプト（ミドスタウリン）、スクレロゾル（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ）胸膜内エアロゾル（タルク）、シルツキシマブ、シプリューセル−Ｔ、ソマチュリンデポー（Ｓｏｍａｔｕｌｉｎｅ  Ｄｅｐｏｔ）（ランレオチド酢酸塩）、ソニデギブ、ソラフェニブトシル酸塩、スプリセル（ダサチニブ）、スタンフォードＶ、無菌タルク粉末（タルク）、ステリタルク（タルク）、スティバルガ（レゴラフェニブ）、スニチニブリンゴ酸塩、スーテント（スニチニブリンゴ酸塩）、シラトロン（ペグインターフェロンアルファ−２ｂ）、シルバント（Ｓｙｌｖａｎｔ）（シルツキシマブ）、シンリボ（オマセタキシンメぺコハク酸塩（Ｏｍａｃｅｔａｘｉｎｅ  Ｍｅｐｅｓｕｃｃｉｎａｔｅ））、タブロイド（チオグアニン）、ＴＡＣ、タフィンラー（ダブラフェニブ）、タグリッソ（オシメルチニブ）、タルク、タリモジーン・ラハーパレプベック、タモキシフェンクエン酸塩、タラビンＰＦＳ（シタラビン）、タルセバ（エルロチニブ塩酸塩）、タルグレチン（ベキサロテン）、タシグナ（ニロチニブ）、タキソール（パクリタキセル）、タキソテール（ドセタキセル）、テセントリク（アテゾリズマブ）、テモダール（テモゾロミド）、テモゾロミド、テムシロリムス、サリドマイド、サロミド（サリドマイド）、チオグアニン、チオテパ、チサゲンレクルユーセル、トラック（Ｔｏｌａｋ）（フルオロウラシル−局所）、トポテカン塩酸塩、トレミフェン、トーリセル（テムシロリムス）、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ、トテクト（Ｔｏｔｅｃｔ）（デクスラゾキサン塩酸塩）、ＴＰＦ、トラベクテジン、トラメチニブ、トラスツズマブ、トレアンダ（Ｔｒｅａｎｄａ）（ベンダムスチン塩酸塩）、トリフルリジンおよびチピラシル塩酸塩、トリセノックス（三酸化ヒ素）、タイケルブ（ラパチニブ二トシル酸塩）、ユニツキシン（Ｕｎｉｔｕｘｉｎ）（ジヌツキシマブ）、ウリジントリアセテート、ＶＡＣ、バルルビシン、バルスター（Ｖａｌｓｔａｒ）（バルルビシン）、バンデタニブ、ＶＡＭＰ、バルビ（Ｖａｒｕｂｉ）（ロラピタント塩酸塩）、ベクティビックス（パニツムマブ）、ＶｅＩＰ、ベルバン（Ｖｅｌｂａｎ）（ビンブラスチン硫酸塩）、ベルケイド（ボルテゾミブ）、ベルサール（Ｖｅｌｓａｒ）（ビンブラスチン硫酸塩）、ベムラフェニブ、ベネクレクスタ（ベネトクラクス）、ベネトクラクス、ベージニオ（アベマシクリブ）、ビアデュール（Ｖｉａｄｕｒ）（ロイプロリド酢酸塩）、ビダーザ（アザシチジン）、ビンブラスチン硫酸塩、ビンカサールＰＦＳ（Ｖｉｎｃａｓａｒ  ＰＦＳ）（ビンクリスチン硫酸塩）、ビンクリスチン硫酸塩、ビンクリスチン硫酸塩リポソーム、ビノレルビン酒石酸塩、ＶＩＰ、ビスモデギブ、ビストガード（ウリジントリアセテート）、ボラキサゼ（Ｖｏｒａｘａｚｅ）（グルカルピダーゼ）、ボリノスタット、ヴォトリエント（パゾパニブ塩酸塩）、ヴィキセオス（ダウノルビシン塩酸塩およびシタラビンリポソーム）、ウェルコボリン（ロイコボリンカルシウム）、キサルコリ（Ｘａｌｋｏｒｉ）（クリゾチニブ）、ゼローダ（カペシタビン）、ゼリリ（ＸＥＬＩＲＩ）、ゼロックス（ＸＥＬＯＸ）、イクスゲバ（Ｘｇｅｖａ）（デノスマブ）、ゾーフィゴ（ラジウム２２３二塩化物）、イクスタンジ（エンザルタミド）、ヤーボイ（イピリムマブ）、イエスカルタ（アキシカブタジン・シロルーセル）、ヨンデリス（トラベクテジン）、ザルトラップ（ジブ−アフリベルセプト）、ザルキシオ（Ｚａｒｘｉｏ）（フィルグラスチム）、ゼジュラ（Ｚｅｊｕｌａ）（ニラパリブトシル酸塩一水和物）、ゼルボラフ（ベムラフェニブ）、ゼヴァリン（イブリツモマブチウキセタン）、ジネカルド（Ｚｉｎｅｃａｒｄ）（デクスラゾキサン塩酸塩）、ジブ−アフリベルセプト、ゾフラン（オンダンセトロン塩酸塩）、ゾラデックス（ゴセレリン酢酸塩）、ゾレドロン酸、ゾリンザ（ボリノスタット）、ゾメタ（ゾレドロン酸）、ザイデリグ（イデラリシブ）、ザイカディア（セリチニブ）およびザイティガ（アビラテロン酢酸塩）。
【０２８０】
一部の実施形態では、化学療法剤は、シタラビン、５−アザシチジン（５−ＡＺＡ）、バルプロ酸（ＶＰＡ）、オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）、デシタビン、フェニル酪酸ナトリウム、ヒドロキシウレア（ｈｙｄｒｏｚｙｕｒｅａ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、６−チオグアニン（６−ＴＧ）、モセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）、パノビノスタット（ＬＢＨ−５８９）、ロミデプシン、アントラサイクリン（ａｎｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、ダウノルビシン、ダウノマイシン、イダルビシン、クラドリビン（ロイスタチン、２−ＣｄＡ）、ミドスタウリン、フルダラビン（フルダラ）およびトポテカンのうちの１つまたは複数から選択される。
【０２８１】
一部の実施形態では、化学療法剤は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、例えば、Ｆｒｅｄｌｙら、Ｃｌｉｎ  Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ．（２０１３年）５（１）：１２（参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているＨＤＡＣ阻害剤である。一部の実施形態では、化学療法剤はシタラビンである。
【０２８２】
抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（もしくは複数の核酸）、発現ベクター（もしくは複数の発現ベクター）、細胞または組成物の製造の複数回用量が提供されてもよい。用量の１つもしくは複数、またはそれぞれは、別の治療剤の同時または逐次的な投与を伴ってもよい。
【０２８３】
複数回用量は、予め決定された時間間隔により分離されてもよく、該時間間隔は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、もしくは３１日、または１、２、３、４、５、もしくは６か月のうちの１つであるように選択されてもよい。例として、用量は、７、１４、２１または２８日（プラスまたはマイナス３、２、または１日）毎に１回与えられてもよい。
【０２８４】
検出方法
本発明はまた、ＣＤ４７、またはＣＤ４７を発現する細胞を検出し、局在決定しまたはイメージングする方法において使用するための本発明の物品を提供する。
【０２８５】
本明細書に記載の抗原結合分子は、ＣＤ４７に対する抗原結合分子を伴う方法において使用されてもよい。そのような方法は、抗原結合分子およびＣＤ４７の結合した複合体の検出を伴ってもよい。
【０２８６】
そのため、ＣＤ４７を含有する、または含有することが疑われる試料を接触させること、および抗原結合分子とＣＤ４７との複合体の形成を検出することを含む方法が提供される。ＣＤ４７を発現する細胞を含有する、または含有することが疑われる試料を接触させること、および抗原結合分子とＣＤ４７を発現する細胞との複合体の形成を検出することを含む方法もまた提供される。
【０２８７】
好適な方法フォーマットは当該技術分野において周知であり、サンドイッチアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡなどのイムノアッセイが挙げられる。方法は、本明細書に記載されるような検出可能部分、例えば、蛍光標識、リン光標識、発光標識、免疫検出可能標識、放射性標識、化学、核酸または酵素標識を用いて、抗原結合分子、または標的、または両方を標識することを伴ってもよい。検出技術は当業者に周知であり、標識化剤と対応するように選択され得る。
【０２８８】
この種類の方法は、疾患または状態、例えばがんの診断および／または予後評価方法の基礎を提供することができる。そのような方法は、患者試料に対してｉｎ  ｖｉｔｒｏで、または患者試料の加工後に行われてもよい。試料が収集された場合、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法を行うために患者が存在する必要はなく、したがって、方法は、ヒトまたは動物身体に対して実施されないものであってもよい。一部の実施形態では、方法はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて行われる。
【０２８９】
試料中の検出は、疾患／状態（例えば、がん）、疾患／状態の素因の診断の目的のため、または疾患／状態、例えば、本明細書に記載の疾患／状態の予後診断（予後評価）を提供するために使用されてもよい。診断または予後診断は、既存の（以前に診断された）疾患／状態に関するものであってもよい。
【０２９０】
そのような方法は、例えば患者試料中の、ＣＤ４７またはＣＤ４７を発現する細胞のうちの１つまたは複数を検出または定量化することを伴ってもよい。方法が関連因子を定量化することを含む場合、方法は、診断または予後評価の部分として、決定された量を標準または参照値に対して比較することをさらに含んでもよい。他の診断／予後試験を本明細書に記載の試験と組み合わせて使用して、診断もしくは予後診断の正確性を増進し、または本明細書に記載の試験を使用することにより得られた結果を確認してもよい。
【０２９１】
試料は、任意の組織または体液から採取されてもよい。試料は、ある量の血液；フィブリンクロットおよび血液細胞の除去後に得られた血液の液体部分を含んでもよい個体の血液に由来するある量の血清；組織試料もしくは生検；胸膜液；脳脊髄液（ＣＳＦ）；または前記個体から単離された細胞を含んでもよいまたはそれに由来してもよい。一部の実施形態では、試料は、疾患／状態に罹患した１つまたは複数の組織（例えば、疾患の症状が発現する、または疾患／状態の病理発生に関与する１つまたは複数の組織）から得られてもよいまたはそれに由来してもよい。
【０２９２】
本発明はまた、ＣＤ４７標的化剤を用いる治療のために対象を選択／層化する方法を提供する。一部の実施形態では、対象は、例えば個体から得られた試料中の、ＣＤ４７、またはＣＤ４７を発現する細胞の検出／定量化に基づいて、本発明による治療／予防のために選択され、またはそのような治療／予防から利益を得るであろう対象として同定される。
【０２９３】
対象
本明細書に記載の発明の態様による対象は、任意の動物またはヒトであってもよい。対象は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。対象は非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。対象は、男性（雄）または女性（雌）であってもよい。対象は患者であってもよい。対象は、治療を必要とする疾患もしくは状態（例えば、がん）を有すると診断されていてもよく、そのような疾患／状態を有することが疑われる対象であってもよく、またはそのような疾患／状態を発生／罹患するリスクがある対象であってもよい。
【０２９４】
本発明による実施形態では、対象は好ましくはヒト対象である。一部の実施形態では、本発明の治療または予防方法にしたがって治療される対象は、がんを有する、またはがんを発生するリスクがある対象である。本発明による実施形態では、対象は、そのような疾患／状態のある特定のマーカーについての特徴付けに基づいて、方法による治療のために選択されてもよい。
【０２９５】
キット
本明細書に記載の発明の一部の態様では、部品のキットが提供される。一部の実施形態では、キットは、予め決定された量の本明細書に記載の抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（もしくは複数の核酸）、発現ベクター（もしくは複数の発現ベクター）、細胞または組成物を有する少なくとも１つの容器を有してもよい。
【０２９６】
一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載の抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（もしくは複数の核酸）、発現ベクター（もしくは複数の発現ベクター）、細胞または組成物を製造するための材料を含んでもよい。
【０２９７】
キットは、抗原結合分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（もしくは複数の核酸）、発現ベクター（もしくは複数の発現ベクター）、細胞または組成物を、特定の疾患／状態を治療するために患者に投与するための指示と共に提供してもよい。
【０２９８】
一部の実施形態では、キットは、予め決定された量の別の治療剤（例えば、抗感染症剤または化学療法剤）を有する少なくとも１つの容器をさらに含んでもよい。そのような実施形態では、キットはまた、特定の疾患または状態のための併用治療を提供するように同時にまたは別々に２つの医薬または医薬組成物が投与され得るように第２の医薬または医薬組成物を含んでもよい。治療剤はまた、腫瘍または血液への注射または注入のために好適であるように配合されてもよい。
【０２９９】
配列同一性
本明細書において使用される場合、「配列同一性」は、配列のアライメント、および必要な場合にはギャップの導入により配列間の最大配列同一性パーセントを達成した後の、参照配列中のヌクレオチド／アミノ酸残基と同一の対象配列中のヌクレオチド／アミノ酸残基のパーセントを指す。２つまたはそれより多くのアミノ酸または核酸配列の間の配列同一性パーセントを決定する目的のためのペアワイズおよび複数配列アライメントは、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Ｓｏｄｉｎｇ、Ｊ．２００５年、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２１、９５１〜９６０頁）、Ｔ−ｃｏｆｆｅｅ（Ｎｏｔｒｅｄａｍｅら、２０００年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０００年）３０２、２０５〜２１７頁）、Ｋａｌｉｇｎ（ＬａｓｓｍａｎｎおよびＳｏｎｎｈａｍｍｅｒ  ２００５年、ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、６（２９８））ならびにＭＡＦＦＴ（ＫａｔｏｈおよびＳｔａｎｄｌｅｙ  ２０１３年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ、３０（４）７７２〜７８０頁）ソフトウェアなどの公開されているコンピューターソフトウェアを使用して、当業者に公知の様々な方法で達成することができる。そのようなソフトウェアを使用する場合、例えばギャップペナルティおよび伸長ペナルティのための、デフォルトのパラメーターが好ましくは使用される。
【０３００】
配列
【０３０１】
【表２−１】
2021500926.tif 000004
【０３０２】
【表２−２】
2021500926.tif 000005
【０３０３】
【表２−３】
2021500926.tif 000006
【０３０４】
【表２−４】
2021500926.tif 000007
【０３０５】
【表２−５】
2021500926.tif 000008
【０３０６】
【表２−６】
2021500926.tif 000009
【０３０７】
【表２−７】
2021500926.tif 000010
【０３０８】
【表２−８】
2021500926.tif 000011
【０３０９】
【表２−９】
2021500926.tif 000012
【０３１０】
【表２−１０】
2021500926.tif 000013
【０３１１】
本発明は、そのような組合せが明確に許容不可であるかまたは明示的に回避される場合を除いて、記載される態様および好ましい特徴の組合せを含む。
【０３１２】
本明細書において使用されるセクションの見出しは、文書組織化の目的のものに過ぎず、記載される主題を限定するものとして解されるべきではない。
【０３１３】
添付の図面を参照して、実施例により、本発明の態様および実施形態をこれより説明する。さらなる態様および実施形態は当業者に明らかであろう。この文書中で言及される全ての文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３１４】
後述の特許請求の範囲を含めて、本明細書の全体を通じて、そうでないことを文脈が必要としなければ、「含む」（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）という語、ならびに「含む」（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）および「含む」（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）などの変形は、記載された整数またはステップまたは整数もしくはステップの群を含むが、任意の他の整数またはステップまたは整数もしくはステップの群を排除しないことが意図されると理解される。
【０３１５】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ（１つの）」、「ａｎ（１つの）」、および「ｔｈｅ（その）」は、文脈が明らかにそうでないことを規定しなければ、複数の指示対象を含むことが留意されなければならない。範囲は、「約」１つの特定の値から、および／または「約」別の特定の値までとして本明細書において表現されることがある。そのような範囲が表現される場合、別の実施形態は、１つの特定の値からおよび／または他の特定の値までを含む。同様に、値がおおよそのものとして表現される場合、「約」という先行詞の使用により、特定の値が別の実施形態を形成することが理解されるであろう。
【０３１６】
核酸配列が本明細書において開示される場合、その逆相補鎖もまた明示的に想定される。
【０３１７】
本明細書に記載される方法は、好ましくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われてもよい。「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」という用語は、培養状態の細胞を用いて行われる手順を包含することが意図される一方、「ｉｎ  ｖｉｖｏ」という用語は、インタクトな多細胞生物を用いて／に対して為される手順を包含することが意図される。
【０３１８】
本発明の原理を説明する実施形態および実験を添付の図面を参照してこれより議論する。
【図面の簡単な説明】
【０３１９】
【図１】相互作用するＳＩＰＲＰαおよびＣＤ４７ドメインの３Ｄ構造を示すリボン図であり、抗ＣＤ４７抗体を産生させるための免疫原として使用される領域を球を用いて重ね合わせている。
【図２Ａ】ヒトＣＤ４７への抗ＣＤ４７抗体の結合の親和性を示すセンサーグラムである。（２Ａ）１−１−Ａ１についてのセンサーグラム。（２Ｂ）１−１−Ａ１＿ＢＭについてのセンサーグラム。
【図２Ｂ】ヒトＣＤ４７への抗ＣＤ４７抗体の結合の親和性を示すセンサーグラムである。（２Ａ）１−１−Ａ１についてのセンサーグラム。（２Ｂ）１−１−Ａ１＿ＢＭについてのセンサーグラム。
【図３Ａ】フローサイトメトリーにより決定された抗ＣＤ４７抗体によるＣＤ４７発現細胞の染色を示すヒストグラムである。（３Ａ）抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１またはアイソタイプ対照抗体による、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＣＤ４７を発現する）、またはＨＥＫ２９３Ｔ由来ＣＤ４７ノックアウト細胞の染色を示すヒストグラム。（３Ｂ）抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１＿ＢＭまたはアイソタイプ対照抗体による、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、またはＨＥＫ２９３Ｔ由来ＣＤ４７ノックアウト細胞の染色を示すヒストグラム。（３Ｃ）抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２またはアイソタイプ対照抗体による、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、またはＨＥＫ２９３Ｔ由来ＣＤ４７ノックアウト細胞の染色を示すヒストグラム。（３Ｄ）抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２による、ＭＭ．１Ｓ細胞、Ｈ９２９細胞、Ｕ２２６細胞、８２２６細胞およびＲＡＪＩ細胞の染色を示すヒストグラム。
【図３Ｂ】フローサイトメトリーにより決定された抗ＣＤ４７抗体によるＣＤ４７発現細胞の染色を示すヒストグラムである。（３Ａ）抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１またはアイソタイプ対照抗体による、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＣＤ４７を発現する）、またはＨＥＫ２９３Ｔ由来ＣＤ４７ノックアウト細胞の染色を示すヒストグラム。（３Ｂ）抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１＿ＢＭまたはアイソタイプ対照抗体による、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、またはＨＥＫ２９３Ｔ由来ＣＤ４７ノックアウト細胞の染色を示すヒストグラム。（３Ｃ）抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２またはアイソタイプ対照抗体による、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、またはＨＥＫ２９３Ｔ由来ＣＤ４７ノックアウト細胞の染色を示すヒストグラム。（３Ｄ）抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２による、ＭＭ．１Ｓ細胞、Ｈ９２９細胞、Ｕ２２６細胞、８２２６細胞およびＲＡＪＩ細胞の染色を示すヒストグラム。
【図３Ｃ】フローサイトメトリーにより決定された抗ＣＤ４７抗体によるＣＤ４７発現細胞の染色を示すヒストグラムである。（３Ａ）抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１またはアイソタイプ対照抗体による、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＣＤ４７を発現する）、またはＨＥＫ２９３Ｔ由来ＣＤ４７ノックアウト細胞の染色を示すヒストグラム。（３Ｂ）抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１＿ＢＭまたはアイソタイプ対照抗体による、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、またはＨＥＫ２９３Ｔ由来ＣＤ４７ノックアウト細胞の染色を示すヒストグラム。（３Ｃ）抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２またはアイソタイプ対照抗体による、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、またはＨＥＫ２９３Ｔ由来ＣＤ４７ノックアウト細胞の染色を示すヒストグラム。（３Ｄ）抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２による、ＭＭ．１Ｓ細胞、Ｈ９２９細胞、Ｕ２２６細胞、８２２６細胞およびＲＡＪＩ細胞の染色を示すヒストグラム。
【図３Ｄ】フローサイトメトリーにより決定された抗ＣＤ４７抗体によるＣＤ４７発現細胞の染色を示すヒストグラムである。（３Ａ）抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１またはアイソタイプ対照抗体による、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＣＤ４７を発現する）、またはＨＥＫ２９３Ｔ由来ＣＤ４７ノックアウト細胞の染色を示すヒストグラム。（３Ｂ）抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１＿ＢＭまたはアイソタイプ対照抗体による、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、またはＨＥＫ２９３Ｔ由来ＣＤ４７ノックアウト細胞の染色を示すヒストグラム。（３Ｃ）抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２またはアイソタイプ対照抗体による、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、またはＨＥＫ２９３Ｔ由来ＣＤ４７ノックアウト細胞の染色を示すヒストグラム。（３Ｄ）抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２による、ＭＭ．１Ｓ細胞、Ｈ９２９細胞、Ｕ２２６細胞、８２２６細胞およびＲＡＪＩ細胞の染色を示すヒストグラム。
【図４】ＥＬＩＳＡにより決定された抗原結合分子によるヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用の阻害を示す棒グラフである。
【図５】ＥＬＩＳＡにより決定された、指し示される抗原結合分子によるヒトＣＤ４７（ｈＣＤ４７）およびアカゲザルＣＤ４７（ＲｈＣＤ４７）への結合を示すグラフである。
【図６】フローサイトメトリーにより決定された、指し示す抗原結合分子またはＰＢＳの存在下でのマクロファージによるＣＦＳＥ標識Ｒａｊｉ細胞の食作用を示すヒストグラムである。
【図７Ａ】指し示す抗原結合分子の存在下でのマクロファージによるＣＦＳＥ標識ＨＬ−６０細胞の食作用を示す蛍光顕微鏡画像および棒グラフである。（７Ａおよび７Ｂ）（７Ａ）アイソタイプ対照抗体（陰性対照）、（７Ｂ）抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ  ＩｇＧ１の存在下での結合食作用を示す画像、（７Ｃ）指し示す抗原結合分子の存在下でのマクロファージによるＣＦＳＥ標識ＨＬ−６０細胞についての貪食指数を要約する棒グラフ。
【図７Ｂ】指し示す抗原結合分子の存在下でのマクロファージによるＣＦＳＥ標識ＨＬ−６０細胞の食作用を示す蛍光顕微鏡画像および棒グラフである。（７Ａおよび７Ｂ）（７Ａ）アイソタイプ対照抗体（陰性対照）、（７Ｂ）抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ  ＩｇＧ１の存在下での結合食作用を示す画像、（７Ｃ）指し示す抗原結合分子の存在下でのマクロファージによるＣＦＳＥ標識ＨＬ−６０細胞についての貪食指数を要約する棒グラフ。
【図７Ｃ】指し示す抗原結合分子の存在下でのマクロファージによるＣＦＳＥ標識ＨＬ−６０細胞の食作用を示す蛍光顕微鏡画像および棒グラフである。（７Ａおよび７Ｂ）（７Ａ）アイソタイプ対照抗体（陰性対照）、（７Ｂ）抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ  ＩｇＧ１の存在下での結合食作用を示す画像、（７Ｃ）指し示す抗原結合分子の存在下でのマクロファージによるＣＦＳＥ標識ＨＬ−６０細胞についての貪食指数を要約する棒グラフ。
【図８】ヒトＣＤ４７への抗ＣＤ４７抗体１−１−Ａ１＿ＢＭの結合の親和性を示すセンサーグラムである。
【図９】ＥＬＩＳＡにより決定された、指し示す抗原結合分子によるヒトＣＤ４７への結合を示すグラフである。
【図１０】ＥＬＩＳＡにより決定された、指し示す抗原結合分子によるヒトＶＩＳＴＡへの結合を示すグラフである。
【図１１Ａ】ヒトＣＤ４７への抗ＣＤ４７抗体の結合の親和性を示すセンサーグラムである。（１１Ａ）１１Ａ１ＢＭについてのセンサーグラム。（１１Ｂ）１１Ａ１Ｈ３についてのセンサーグラム。（１１Ｃ）１１Ａ１Ｈ５についてのセンサーグラム。（１１Ｄ）１１Ａ１Ｈ６についてのセンサーグラム。（１１Ｅ）１１Ａ１Ｈ７についてのセンサーグラム。（１１Ｆ）１１Ａ１Ｈ９についてのセンサーグラム。（１１Ｇ）１１Ａ１Ｈ１０についてのセンサーグラム。（１１Ｈ）１１Ａ１Ｈ１１についてのセンサーグラム。
【図１１Ｂ】ヒトＣＤ４７への抗ＣＤ４７抗体の結合の親和性を示すセンサーグラムである。（１１Ａ）１１Ａ１ＢＭについてのセンサーグラム。（１１Ｂ）１１Ａ１Ｈ３についてのセンサーグラム。（１１Ｃ）１１Ａ１Ｈ５についてのセンサーグラム。（１１Ｄ）１１Ａ１Ｈ６についてのセンサーグラム。（１１Ｅ）１１Ａ１Ｈ７についてのセンサーグラム。（１１Ｆ）１１Ａ１Ｈ９についてのセンサーグラム。（１１Ｇ）１１Ａ１Ｈ１０についてのセンサーグラム。（１１Ｈ）１１Ａ１Ｈ１１についてのセンサーグラム。
【図１１Ｃ】ヒトＣＤ４７への抗ＣＤ４７抗体の結合の親和性を示すセンサーグラムである。（１１Ａ）１１Ａ１ＢＭについてのセンサーグラム。（１１Ｂ）１１Ａ１Ｈ３についてのセンサーグラム。（１１Ｃ）１１Ａ１Ｈ５についてのセンサーグラム。（１１Ｄ）１１Ａ１Ｈ６についてのセンサーグラム。（１１Ｅ）１１Ａ１Ｈ７についてのセンサーグラム。（１１Ｆ）１１Ａ１Ｈ９についてのセンサーグラム。（１１Ｇ）１１Ａ１Ｈ１０についてのセンサーグラム。（１１Ｈ）１１Ａ１Ｈ１１についてのセンサーグラム。
【図１１Ｄ】ヒトＣＤ４７への抗ＣＤ４７抗体の結合の親和性を示すセンサーグラムである。（１１Ａ）１１Ａ１ＢＭについてのセンサーグラム。（１１Ｂ）１１Ａ１Ｈ３についてのセンサーグラム。（１１Ｃ）１１Ａ１Ｈ５についてのセンサーグラム。（１１Ｄ）１１Ａ１Ｈ６についてのセンサーグラム。（１１Ｅ）１１Ａ１Ｈ７についてのセンサーグラム。（１１Ｆ）１１Ａ１Ｈ９についてのセンサーグラム。（１１Ｇ）１１Ａ１Ｈ１０についてのセンサーグラム。（１１Ｈ）１１Ａ１Ｈ１１についてのセンサーグラム。
【図１１Ｅ】ヒトＣＤ４７への抗ＣＤ４７抗体の結合の親和性を示すセンサーグラムである。（１１Ａ）１１Ａ１ＢＭについてのセンサーグラム。（１１Ｂ）１１Ａ１Ｈ３についてのセンサーグラム。（１１Ｃ）１１Ａ１Ｈ５についてのセンサーグラム。（１１Ｄ）１１Ａ１Ｈ６についてのセンサーグラム。（１１Ｅ）１１Ａ１Ｈ７についてのセンサーグラム。（１１Ｆ）１１Ａ１Ｈ９についてのセンサーグラム。（１１Ｇ）１１Ａ１Ｈ１０についてのセンサーグラム。（１１Ｈ）１１Ａ１Ｈ１１についてのセンサーグラム。
【図１１Ｆ】ヒトＣＤ４７への抗ＣＤ４７抗体の結合の親和性を示すセンサーグラムである。（１１Ａ）１１Ａ１ＢＭについてのセンサーグラム。（１１Ｂ）１１Ａ１Ｈ３についてのセンサーグラム。（１１Ｃ）１１Ａ１Ｈ５についてのセンサーグラム。（１１Ｄ）１１Ａ１Ｈ６についてのセンサーグラム。（１１Ｅ）１１Ａ１Ｈ７についてのセンサーグラム。（１１Ｆ）１１Ａ１Ｈ９についてのセンサーグラム。（１１Ｇ）１１Ａ１Ｈ１０についてのセンサーグラム。（１１Ｈ）１１Ａ１Ｈ１１についてのセンサーグラム。
【図１１Ｇ】ヒトＣＤ４７への抗ＣＤ４７抗体の結合の親和性を示すセンサーグラムである。（１１Ａ）１１Ａ１ＢＭについてのセンサーグラム。（１１Ｂ）１１Ａ１Ｈ３についてのセンサーグラム。（１１Ｃ）１１Ａ１Ｈ５についてのセンサーグラム。（１１Ｄ）１１Ａ１Ｈ６についてのセンサーグラム。（１１Ｅ）１１Ａ１Ｈ７についてのセンサーグラム。（１１Ｆ）１１Ａ１Ｈ９についてのセンサーグラム。（１１Ｇ）１１Ａ１Ｈ１０についてのセンサーグラム。（１１Ｈ）１１Ａ１Ｈ１１についてのセンサーグラム。
【図１１Ｈ】ヒトＣＤ４７への抗ＣＤ４７抗体の結合の親和性を示すセンサーグラムである。（１１Ａ）１１Ａ１ＢＭについてのセンサーグラム。（１１Ｂ）１１Ａ１Ｈ３についてのセンサーグラム。（１１Ｃ）１１Ａ１Ｈ５についてのセンサーグラム。（１１Ｄ）１１Ａ１Ｈ６についてのセンサーグラム。（１１Ｅ）１１Ａ１Ｈ７についてのセンサーグラム。（１１Ｆ）１１Ａ１Ｈ９についてのセンサーグラム。（１１Ｇ）１１Ａ１Ｈ１０についてのセンサーグラム。（１１Ｈ）１１Ａ１Ｈ１１についてのセンサーグラム。
【図１２】ＥＬＩＳＡにより決定された、指し示す抗原結合分子によるヒトＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用の阻害を示すグラフである。
【図１３】指し示す抗原結合分子による赤血球凝集の解析の結果を示す画像である。陽性対照＝抗赤血球細胞抗体（抗ＲＢＣ）、陰性対照＝関連しない標的抗原（関連しないＡｇ）に特異的なアイソタイプマッチの抗体、および緩衝液のみ（緩衝液）。
【実施例】
【０３２０】
以下の実施例において、本発明者らは、ＣＤ４７分子中の特定の目的の領域に標的化される新規のＣＤ４７特異的抗体クローンの生成、これらの抗原結合分子の生物物理学的および機能的特徴付けならびに治療的評価を記載する。
【０３２１】
実施例１：ＣＤ４７標的の設計および抗ＣＤ４７抗体のハイブリドーマ製造
本発明者らは、ＣＤ４７結合モノクローナル抗体を産生させるためにヒトＣＤ４７（配列番号１０）の細胞外領域１のＩｇ様Ｖ領域（配列番号９）中の２つの領域を選択した。本発明者らは、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用に関与することが公知のＣＤ４７の領域に焦点を当てた（図１）。
【０３２２】
１．１  ハイブリドーマ製造
約６週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスをＩｎＶｉｖｏｓ（Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）から得た。動物を特定の病原体が存在しない条件下で飼育し、動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）ガイドラインにしたがって処置した。
【０３２３】
ハイブリドーマ製造のために、各注射の間に２週の間隔を用いる計４回の腹腔内注射のために所有する抗原ペプチド混合物を用いてマウスを免疫化した。免疫化用の抗原は以下のうちの１つを含んだ：
ｉ）ＫＬＨと共役した最大５０μｇの合成ペプチド（Ｃｈｉｎａ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｃｏ．Ｌｔｄ、Ｃｈｉｎａ）
ｉｉ）最大５０μｇの市販の組換えＦｃタグ化ヒトＣＤ４７（Ｓｉｎｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ、Ｃｈｉｎａ）
ｉｉｉ）ヒトＣＤ４７を過剰発現する最大２０×１０６個の同系細胞。
【０３２４】
融合のために脾臓を回収する前に、３連続の日にわたり抗原混合物を用いてマウスをブーストした。最終ブーストの２４時間後、全脾臓細胞を単離し、製造者の指示（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｎａｄａ）にしたがって、ＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔを使用してＰＥＧを用いて、骨髄腫細胞株Ｐ３Ｘ６３．Ａｇ８．６５３（ＡＴＣＣ、ＵＳＡ）と融合させた。
【０３２５】
融合した細胞をＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｃ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｎａｄａ）中で終夜、５％のＣＯ２インキュベーター中３７℃で培養した。翌日、融合した細胞を遠心分離し、１０ｍＬのＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｃ中に再懸濁した後、ハイブリドーマの選択およびクローニングを１ステップに統合する、ＨＡＴ成分を含有する９０ｍＬの半固形メチルセルロースベースＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｄ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｎａｄａ）と穏やかに混合した。
【０３２６】
融合した細胞を次に９６ウェルプレートにプレーティングし、５％のＣＯ２インキュベーター中３７℃で生育させた。７〜１０日後、単一のハイブリドーマクローンを単離し、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣｓ）により上清をスクリーニングすることにより抗体産生ハイブリドーマを選択した。
【０３２７】
１．２  抗体可変領域の増幅およびシークエンシング
製造者のプロトコールを使用してＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＵＳＡ）を使用してハイブリドーマ細胞からトータルＲＮＡを抽出した。製造者の指示にしたがってＳＭＡＲＴｅｒ  ＲＡＣＥ  ５’／３’  Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（商標）、ＵＳＡ）を使用して二本鎖ｃＤＮＡを合成した。簡潔に述べれば、５’−ＲＡＣＥ  ＣＤＳプライマー（キット中に提供される）を使用して１μｇのトータルＲＮＡを使用して全長ｃＤＮＡを生成した後、製造者の指示にしたがって５’アダプター（ＳＭＡＲＴｅｒ  ＩＩ  Ａプライマー）を各ｃＤＮＡに組み込んだ。ｃＤＮＡ合成反応は以下を含有した：５Ｘ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  緩衝液、ＤＴＴ（２０ｍＭ）、ｄＮＴＰミックス（１０ｍＭ）、リボヌクレアーゼ阻害剤（４０Ｕ／μｌ）およびＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ逆転写酵素（１００Ｕ／μｌ）。
【０３２８】
ＳｅｑＡｍｐ  ＤＮＡ  ポリメラーゼ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（商標）、ＵＳＡ）を使用してｒａｃｅ−ｒｅａｄｙ  ｃＤＮＡを増幅した。増幅反応は、ＳｅｑＡｍｐ  ＤＮＡポリメラーゼ、２Ｘ  Ｓｅｑ  ＡＭＰ緩衝液、アダプター配列に相補的な、５’  ＳＭＡＲＴｅｒ  Ｒａｃｅ  ｋｉｔ中に提供される５’ユニバーサルプライマー、および各々の重鎖または軽鎖定常領域プライマーにアニールする３’プライマーを含有した。５’定常領域は、Ｋｒｅｂｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １９９７年；２０１：３５〜５５頁、Ｗａｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０００年、２３３；１６７〜１７７頁またはＴｉｌｌｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２００９年；３５０：１８３〜１９３頁のいずれかにより以前に報告されたプライマーミックスに基づいて設計した。以下の熱プロトコールを使用した：９４℃で１分間の予備変性サイクル；９４℃で３０秒、５５℃で３０秒および７２℃で４５秒の３５サイクル；７２℃で３分間の最終伸長。
【０３２９】
ＣｌｏｎｅＪＥＴ  ＰＣＲ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を使用して、結果として生じた約５５０ｂｐのＶＨおよびＶＬ  ＰＣＲ生成物をｐＪＥＴ１．２／ｂｌｕｎｔ  ｖｅｃｔｏｒにクローニングし、高度コンピテントＥ．ｃｏｌｉ  ＤＨ５αを形質転換するために使用した。結果として生じた形質転換体から、Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用してプラスミドＤＮＡを調製し、シークエンシングした。ＤＮＡシークエンシングはＡＩＴｂｉｏｔｅｃｈにより実行した。ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（ＬｅＦｒａｎｃら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（２０１５年）４３（Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ）：Ｄ４１３−２２）を使用してこれらのシークエンシングデータを解析して、個々のＣＤＲおよびフレームワーク配列を特徴付けた。ＶＨおよびＶＬの５’末端におけるシグナルペプチドをＳｉｇｎａｌＰ（ｖ４．１；Ｎｉｅｌｓｅｎ、Ｋｉｈａｒａ，Ｄ（編）：Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１６１１）５９〜７３頁、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  ２０１７年）により同定した。
【０３３０】
さらなる開発のために３つのモノクローナル抗ＣＤ４７抗体クローンを選択した：１−１−Ａ１、５−４８−Ａ６および５−４８−Ｄ２。
【０３３１】
ヒト抗体フレームワーク領域を含むＶＨおよびＶＬ中に抗体クローン１−１−Ａ１のＣＤＲをクローニングすることによる標準的な方法にしたがってヒト化型の抗体クローン１−１−Ａ１もまた調製した。この抗体クローンを抗体クローン１−１−Ａ１＿ＢＭと称した。
【０３３２】
【表３】
2021500926.tif 000014
【０３３３】
実施例２：抗体の製造および精製
２．１  発現ベクターへのＶＨおよびＶＬのクローニング：
抗ＣＤ４７抗体クローンの重鎖および軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列をヒト−マウスキメラ抗体の構築のためにｐＦＵＳＥ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１およびｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＵＳＡ）真核発現ベクター中にサブクローニングした。ｐＦＵＳＥ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１によりコードされるヒトＩｇＧ１定常領域は、ヒトＩｇＧ１定常領域（ＩＧＨＧ１；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８５７−１、ｖ１）と比べてＣＨ３領域中に置換Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ（ＥＵナンバリングによりナンバリングされた位置）を含む。ｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋはヒトＩｇＧ１軽鎖カッパ定常領域（ＩＧＣＫ；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８３４−１、ｖ２）をコードする。
【０３３４】
製造者のプロトコールにしたがってＳｅｑＡｍｐ酵素（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（商標）、ＵＳＡ）を使用してシグナルペプチドと共に可変領域をクローニングベクターから増幅した。ＶＨまたはＶＬ内の適切な領域と重なり合う１５〜２０ｂｐおよび制限部位としての５’末端の６ｂｐを有するフォワードおよびリバースプライマーを使用した。フレームシフトが導入されないことを確実にするために製造者により推奨される制限酵素（例えば、ＶＨについてＥｃｏＲＩおよびＮｈｅＩ、ＶＬについてＡｇｅＩおよびＢｓｉＷＩ）を用いてＤＮＡインサートおよびｐＦｕｓｅベクターを消化し、Ｔ４リガーゼ酵素（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を使用してその各々のプラスミド中にライゲートした。ＤＮＡインサート対ベクターの３：１のモル比をライゲーションのために使用した。
【０３３５】
２．２  哺乳動物細胞中の抗体の発現
製造者の指示にしたがって１）Ｅｘｐｉ２９３  Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）、または２）ＨＥＫ２９３−６Ｅ  Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＣＮＲＣ−ＮＲＣ、Ｃａｎａｄａ）のいずれかを使用して抗体を発現させた。
【０３３６】
１）Ｅｘｐｉ２９３  Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ：
細胞株の維持：
ＨＥＫ２９３Ｆ細胞（Ｅｘｐｉ２９３Ｆ）をＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ（ＵＳＡ）から得た。５０ＩＵ／ｍｌのペニシリンおよび５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎｅ）（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）を添加した無血清のタンパク質非含有化学限定培地（Ｅｘｐｉ２９３  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、ＵＳＡ）中、振盪プラットフォームを用いて８％のＣＯ２および８０％湿度のインキュベーター中３７℃で細胞を培養した。
【０３３７】
トランスフェクション：
製造者のプロトコールにしたがってＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ  ２９３  Ｒｅａｇｅｎｔ  ｋｉｔ（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）を使用してＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞に発現プラスミドをトランスフェクトした。簡潔に述べれば、維持した細胞を培地交換に供して、培養物をスピンダウンすることにより抗生物質を除去し、トランスフェクションの１日前に抗生物質を含まない新鮮な培地中に細胞ペレットを再懸濁した。トランスフェクションの日に、各トランスフェクション用のシェーカーフラスコ中に２．５×１０６個／ｍＬの生存細胞を播種した。ＤＮＡ−ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ複合体を血清低減培地Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）中、室温で２５分間形成させた後に、細胞に加えた。トランスフェクションの１６〜１８時間前に、トランスフェクトされた細胞にエンハンサーを加えた。トランスフェクションの４日前に等量の培地をトランスフェクタントに補充して細胞凝集を防止した。４０００×ｇで１５分間の遠心分離により７日目にトランスフェクタントを回収し、０．２２μｍの無菌フィルター装置に通して濾過した。
【０３３８】
２）ＨＥＫ２９３−６Ｅ  Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ
細胞株の維持：
ＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞をＮａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  Ｃａｎａｄａから得た。０．１％のＫｏｌｌｉｐｈｏｒ−Ｐ１８８および４ｍＭのＬ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）および２５μｇ／ｍｌのＧ−４１８を添加した無血清のタンパク質非含有化学限定Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ  Ｆ１７  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）中、振盪プラットフォームを用いて５％のＣＯ２および８０％湿度のインキュベーター中３７℃で細胞を培養した。
【０３３９】
トランスフェクション：
製造者のプロトコールにしたがってＰＥＩｐｒｏＴＭ（Ｐｏｌｙｐｌｕｓ、ＵＳＡ）を使用してＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞に発現プラスミドをトランスフェクトした。簡潔に述べれば、維持した細胞を培地交換に供して、遠心分離により抗生物質を除去し、トランスフェクションの１日前に抗生物質を含まない新鮮な培地を用いて細胞ペレットを再懸濁した。トランスフェクションの日に、各トランスフェクション用のシェーカーフラスコ中に１．５〜２×１０６個／ｍＬの生存細胞を播種した。ＤＮＡおよびＰＥＩｐｒｏＴＭを１：１の比に混合し、複合体をＦ１７培地中ＲＴで５分間形成させた後に、細胞に加えた。トランスフェクションの２４〜４８時間前に、トランスフェクタントに０．５％（ｗ／ｖ）のＴｒｙｐｔｏｎｅ  Ｎ１を供給した。４０００×ｇで１５分間の遠心分離により６〜７日目にトランスフェクタントを回収し、０．２２μｍの無菌フィルター装置に通して上清を濾過した。
【０３４０】
ポリペプチドの以下の組合せをコードするベクターを細胞にトランスフェクトした：
【０３４１】
【表４】
2021500926.tif 000015
【０３４２】
２．３  抗体の精製
アフィニティー精製、緩衝液交換および貯蔵：
液体クロマトグラフィーシステムＡＫＴＡ  Ｓｔａｒｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）を使用して、トランスフェクトされた細胞により培養上清中に分泌された抗体を精製した。詳細には、上清を５ｍｌ／分の結合速度でＨｉＴｒａｐ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）にロードした後、１０カラム体積の洗浄緩衝液（２０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）を用いてカラムを洗浄した。結合したｍＡｂを溶出緩衝液（０．１Ｍのグリシン、ｐＨ２．７）を用いて溶出し、適切な量の中和緩衝液（１Ｍのトリス、ｐＨ９）を含有する回収チューブに溶出液を分別した。精製されたｍＡｂを含有する中和された溶出緩衝液を、３０Ｋ  ＭＷＣＯのタンパク質濃縮装置（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、ＵＳＡ）または３．５Ｋ  ＭＷＣＯの透析カセット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、ＵＳＡ）を使用してＰＢＳ中に交換した。０．２２μｍのフィルターを通過させることによりモノクローナル抗体を滅菌し、アリコート化し、貯蔵のために−８０℃においてスナップ冷却した。
【０３４３】
２．４  抗体純度解析
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）：
ＡＫＴＡ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ液体クロマトグラフィーシステム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）上でＨｉＬｏａｄ  １６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００ｐｇカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）を使用するサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により抗体純度を解析した。タンパク質試料を０．２〜１．５ｍｇ／ｍｌの範囲内の濃度でＳＥＣカラムに注入し、１×ＰＢＳを１ｍｌ／分の流速でカラムにポンプ注入した。タンパク質を分子量にしたがって溶出させた。
【０３４４】
ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）：
標準的な方法にしたがって還元および非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによっても抗体純度を解析した。簡潔に述べれば、Ｍｉｎｉ−Ｐｒｏｔｅａｎ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＵＳＡ）を使用してタンパク質を分けるために、４％〜２０％のＴＧＸタンパク質ゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＵＳＡ）を使用した。非還元条件のために、２ｘのＬａｅｍｍｌｉ試料緩衝液（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＵＳＡ）との混合によりタンパク質試料を変性させ、ゲルにロードする前に５〜１０分間９５℃で煮沸した。還元条件のために、５％のβ−メルカプトエタノール（βＭＥ）、または４０ｍＭのＤＴＴ（ジチオトレイトール）を含有する２ｘの試料緩衝液を使用した。ＳＤＳランニングバッファー（２５ｍＭのトリス、１９２ｍＭのグリシン、１％のＳＤＳ、ｐＨ８．３）中１５０Ｖの定電圧で１時間、電気泳動を実行した。
【０３４５】
実施例３：生物物理学的特徴付け
３．１  ＢＬＩＴｚシステムを使用する大域的な親和性研究
ヒトＩｇＧを捕捉するための抗ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）Ｆｃ（ＡＨＣ）をコーティングしたバイオセンサーチップ（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ）を使用して単一チャネルＢＬＩｔｚシステム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ）を使用してバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）実験を行った。バイオセンサーを最初に少なくとも１０分間アッセイ緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水）中で含水させた後、３０秒間の緩衝液ベースラインを行い、２５〜５０ｎＭの範囲内の濃度で１２０秒間バイオセンサーチップにヒトＩｇＧのロードを行った。次に先端を、アッセイ緩衝液を用いて３０秒間簡単に洗浄して、第２の緩衝液ベースラインを得るために非特異的に結合したタンパク質または未結合のＩｇＧを除去した。抗原（５００ｎＭ〜０ｎＭ）とのＩｇＧの会合相を１２０秒に設定し、その後に１２０秒間の解離相（アッセイ緩衝液単独）とした。全てのＢＬＩＴｚランを１０００ｒｐｍの撹拌速度において室温で測定し、アッセイ後に１０ｍＭのグリシン（ｐＨ２．７）を使用してＡＨＣバイオセンサーを再生した。ＡＨＣセンサー上に固定化された抗体とヒトＣＤ４７との結合親和性を、ソフトウェアＢＬＩｔｚ  Ｐｒｏを使用して結合動力学的曲線を解析することにより決定した。全てのセンサーグラムから参照を差し引き、抗原の異なる濃度において結合曲線を解析した１：１モデルに大域的にフィッティングし、大域的にフィッティングされたデータについて速度定数（ＫＤ／Ｋａ／Ｋｄ）を生成した。全ての結合曲線を、会合ステップと解離ステップとのミスアライメントを補正するステップ補正に供し、０．９より大きいＲ２値を有する曲線のみを解析のために使用した。
【０３４６】
ＩｇＧ１フォーマットの抗ＣＤ４７抗体クローンをヒトＣＤ４７への結合親和性について解析した。
【０３４７】
解析についての代表的なセンサーグラムを図２Ａおよび図２Ｂに示す。クローン１−１−Ａ１は９ｎＭのＫＤを有することが見出され、１−１−Ａ１＿ＢＭは１６．１ｎＭのＫＤを有することが見出された。
【０３４８】
別々の実験において、ａｎｔｉ−Ｐｅｎｔａ−ＨＩＳ（ＨＩＳ１Ｋ）Ｏｃｔｅｔセンサーを使用してＢＬＩによりヒトＣＤ４７についての１−１−Ａ１＿ＢＭ（実施例２．２の［１］）の親和性を解析した。緩衝液ベースラインを３０秒間得た後、センサーにｈｉｓタグ化ヒトＣＤ４７（１．２μＭ）を１２０秒間ロードした。第２の緩衝液ベースラインを６０秒間得た後、１５．６Ｍ〜５００ｎＭの範囲内の濃度で１２０秒間１−１−Ａ１＿ＢＭとの会合相、および緩衝液中の１２０秒間の解離相を行った。
【０３４９】
結果を図８に示す。１−１−Ａ１＿ＢＭは、このアッセイにおいてＫＤ＝１０．４ｎＭでヒトＣＤ４７に結合することが見出された。
【０３５０】
３．２  フローサイトメトリーによる細胞表面抗原結合の解析
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（高レベルのＣＤ４７を発現する）およびＨＥＫ２９３Ｔ細胞由来ＣＤ４７ノックアウト細胞株の細胞を２０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ４７抗体またはアイソタイプ対照抗体と４℃で１時間インキュベートした。抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号ｓｃ−１２７３０）を陽性対照として解析に含めた。
【０３５１】
細胞をＦＡＣＳ緩衝液（５ｍＭのＥＤＴＡおよび０．５％のＢＳＡを含むＰＢＳ）で３回洗浄し、ＦＩＴＣ共役抗ＦＣ抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）中に２〜８℃で４０分間再懸濁した。細胞を再び洗浄し、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ  １０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用するフローサイトメトリー解析のために２００μＬのＦＡＣＳフロー緩衝液（５ｍＭのＥＤＴＡを含むＰＢＳ）中に再懸濁した。取得後、Ｆｌｏｗｌｏｇｉｃソフトウェアを使用して全ての未加工データを解析した。前方および側方散乱プロファイルを使用して細胞をゲーティングし、天然および過剰発現細胞集団について蛍光強度のメジアン値（ＭＦＩ）を決定した。
【０３５２】
抗ＣＤ４７抗体は、高い特異性でヒトＣＤ４７に結合することが示された。図３Ａおよび図３Ｂはクローン１−１−Ａ１および１−１−Ａ１＿ＢＭを使用して得られた結果を示し、図３Ｃは市販の抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２（陽性対照）を使用して得られた結果を示す。
【０３５３】
抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２を使用するフローサイトメトリーにより多発性骨髄腫およびバーキットリンパ腫細胞株をＣＤ４７の発現について解析した。簡潔に述べれば、０．５×１０６個の細胞を室温で１０分間の４％のパラホルムアルデヒドを用いた処理により固定した後、４℃で３０分間、１：１１の希釈においてＡＰＣ共役抗ＣＤ４７抗体を用いて染色した。解析の結果を図３Ｄおよび以下の表に示す。
【０３５４】
【表５】
2021500926.tif 000016
【０３５５】
３．３  抗体特異性を決定するためのＥＬＩＳＡ
ＥＬＩＳＡを使用して抗体の結合特異性を決定した。抗体を標的ペプチドおよびタンパク質の他に、各々のマウス、ラットおよびサルホモログ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．、Ｃｈｉｎａ）に対して試験した。
【０３５６】
標準的なプロトコールにしたがってＥＬＩＳＡを実行した。簡潔に述べれば、９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ、Ｄｅｎｍａｒｋ）をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の１μｇ／ｍＬのＦｃタグ化ヒトＣＤ４７を用いて４℃で１６時間コーティングした。室温でトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）中の１％のＢＳＡを用いた１時間のブロッキング後、最大濃度を１０μｇ／ｍｌとして候補抗原結合分子を段階希釈し、プレートに加えた。ＲＴでの１時間のインキュベーション後、０．０５％のＴｗｅｅｎ  ２０を含有するＴＢＳ（ＴＢＳ−Ｔ）を用いてプレートを３回洗浄した後、ＨＲＰ共役抗Ｈｉｓ抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＵＳＡ）と室温で１時間インキュベートした。洗浄後、比色検出基質３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（Ｔｕｒｂｏ−ＴＭＢ；Ｐｉｅｒｃｅ、ＵＳＡ）を用いてプレートを顕色した。２ＭのＨ２ＳＯ４を用いて反応を停止させ、４５０ｎＭにおいてＯＤを測定した。
【０３５７】
アカゲザルＣＤ４７（ＲｈＣＤ４７）への抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ  ＩｇＧ１（実施例２．２の［１］）の結合をヒトＣＤ４７（ｈＣＤ４７）への結合と比較した。
【０３５８】
結果を図５に示す。
【０３５９】
実施例４：機能的特徴付け
４．１  ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を遮断する能力の解析
４℃で１６時間１×ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬの非タグ化ヒトＣＤ４７タンパク質（Ｓｉｎｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ、Ｃｈｉｎａ）を用いて９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ、Ｄｅｎｍａｒｋ）をコーティングした。室温でのＴＢＳ中の１％のＢＳＡを用いた１時間のブロッキング後、１μｇ／ｍＬのＳＩＲＰα／ヒトＨｉｓタグ化融合タンパク質（Ｓｉｎｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ、Ｃｈｉｎａ）を抗体の非存在下、または増加濃度の抗ＣＤ４７抗体の存在下のいずれかで室温で１時間加えた。その後、ＴＢＳ−Ｔを用いてプレートを３回洗浄し、ＨＲＰ共役抗ｈｉｓ二次抗体（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）と室温で１時間インキュベートした。洗浄後、比色検出基質Ｔｕｒｂｏ−ＴＭＢ（Ｐｉｅｒｃｅ、ＵＳＡ）を用いてプレートを顕色した。２ＭのＨ２ＳＯ４を用いて反応を停止させ、４５０ｎＭにおいてＯＤを測定した。
【０３６０】
ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用の阻害パーセントをＳＩＲＰαの非存在下でのシグナル（１００％）と比べて算出した。
【０３６１】
第１の実験において、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用の阻害を以下の抗原結合分子について評価した：
・抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１  ＩｇＧ１（実施例２．２の［２］）
・抗ＣＤ４７クローン５−４８−Ａ６  ＩｇＧ１（実施例２．２の［３］）
・抗ＣＤ４７クローン５−４８−Ｄ２  ＩｇＧ１（実施例２．２の［４］）
結果を図４に示す。抗ＣＤ４７結合抗体のいくつかはＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用の強力な阻害剤であることが見出された。
【０３６２】
４．２  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ食作用アッセイ
標準的なプロトコールにしたがってｉｎ  ｖｉｔｒｏ食作用アッセイを行った。簡潔に述べれば、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）および１％のＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐを添加したＲＰＭＩ−１６４０中、３７℃で５％のＣＯ２インキュベーター中でＲａｊｉまたはＨＬ６０細胞を培養した。ＨＬ−６０またはＲａｊｉ細胞を次に回収し、製造者のプロトコールにしたがってＣｅｌｌＴｒａｃｅ  ＣＦＳＥ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を使用してＣＦＳＥ標識した。標識した細胞を次に２０μｇ／ｍＬの抗ＣＤ４７抗体、またはアイソタイプ対照抗体の存在下３７℃で２時間ヒト末梢血由来マクロファージ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｎａｄａ）とインキュベートした。１ＸのＰＢＳを用いて細胞を３回洗浄して、全ての捕食されなかった標識された細胞を除去し、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ  １０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用するフローサイトメトリー解析のために２００μＬのＦＡＣＳフロー緩衝液（５ｍＭのＥＤＴＡを含むＰＢＳ）中に再懸濁した。取得後、Ｆｌｏｗｌｏｇｉｃソフトウェアを使用して全ての未加工データを解析した。前方および側方散乱プロファイルを使用して細胞をゲーティングし、取り込まれたエフェクター細胞のパーセンテージを算出した。
【０３６３】
第１の実験において、抗体の代わりにＰＢＳを加えた陰性対照条件と比較して、マクロファージによるＣＳＦＥ標識化Ｒａｊｉ細胞の食作用を促進する能力について抗原結合分子を解析した。
【０３６４】
以下の抗原結合分子を実験において解析した：
・抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ  ＩｇＧ１（実施例２．２の［１］）
抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号ｓｃ−１２７３０）を陽性対照条件として含めた。
【０３６５】
結果を図６に示す。抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ  ＩｇＧ１は、マクロファージによるＲａｊｉ細胞の食作用の促進において極めて強力であることが見出された。
【０３６６】
別々の実験において、蛍光顕微鏡法により決定されるような、マクロファージによるＣＳＦＥ標識化ＨＬ−６０細胞の食作用を促進する能力について抗原結合分子を解析した。蛍光顕微鏡を使用して、２００細胞について食細胞当たりの取り込まれたＣＦＳＥ標識ＨＬ−６０細胞の数として貪食指数を算出した。
【０３６７】
抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ  ＩｇＧ１（実施例２．２の［１］）を実験において解析し、アイソタイプ対照条件を陰性対照として含めた。
【０３６８】
結果を図７Ａ〜７Ｃに示す。抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ  ＩｇＧ１は、マクロファージによるＨＬ−６０細胞の食作用の誘導において強力であることが示された。
【０３６９】
実施例５：ヒト化型の抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１の製造
実施例２に記載されるようにヒト化型の抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１を製造および精製した。
【０３７０】
【表６】
2021500926.tif 000017
【０３７１】
ヒト化型の抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１のＣＤＲを以下に示す：
【０３７２】
【表７】
2021500926.tif 000018
【０３７３】
ヒト化型の抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１のＦＲを以下に示す：
【０３７４】
【表８】
2021500926.tif 000019
【０３７５】
【表９】
2021500926.tif 000020
【０３７６】
実施例６：ヒト化型の抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１の生物物理学的特徴付け
６．１  抗体特異性を決定するためのＥＬＩＳＡ
ヒト化型の抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１の結合特異性をＥＬＩＳＡにより解析した。
【０３７７】
９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ、Ｄｅｎｍａｒｋ）をＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌのヒトＣＤ４７またはＶＩＳＴＡタンパク質を用いて室温で１時間コーティングした。０．０５％のＴｗｅｅｎ  ２０（ＴＢＳ−Ｔ）を含有するトリス緩衝生理食塩水中の１％のＢＳＡを用いて室温で１時間プレートをブロッキングした。試験抗原結合分子を０．００２ｐｇ／ｍｌ〜２００μｇ／ｍｌの範囲内の濃度で加え、プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを次にＴＢＳ−Ｔを用いて３回洗浄した後、ＨＲＰ共役二次抗体と室温で１時間インキュベートした。洗浄後、比色検出基質３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（Ｔｕｒｂｏ−ＴＭＢ；Ｐｉｅｒｃｅ、ＵＳＡ）を用いてプレートを顕色した。２ＭのＨ２ＳＯ４を用いて３．５分後に反応を停止させ、４５０ｎＭにおいてＯＤを測定した。
【０３７８】
以下の抗原結合分子を実験において解析した：
・１１Ａ１Ｈ３−ＩｇＧ１（実施例５の［８］）。
・１１Ａ１Ｈ４−ＩｇＧ１（実施例５の［９］）。
・１１Ａ１Ｈ５−ＩｇＧ１（実施例５の［１０］）。
・１１Ａ１Ｈ６−ＩｇＧ１（実施例５の［１１］）。
・１１Ａ１Ｈ７−ＩｇＧ１（実施例５の［１２］）。
・１１Ａ１Ｈ９−ＩｇＧ１（実施例５の［１４］）。
・１１Ａ１Ｈ１０−ＩｇＧ１（実施例５の［１５］）。
・１１Ａ１Ｈ１１−ＩｇＧ１（実施例５の［１６］）。
・抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ  ＩｇＧ１（実施例２．２の［１］）。
・図９において「Ｍ１９５」と称される抗ＣＤ３３  ＩｇＧ１（実施例２．２の［５］）（陰性対照）。
【０３７９】
結果を図９に示す。ヒト化抗体はヒトＣＤ４７への結合を示した。ＥＣ５０値を算出し、１−１−Ａ１＿ＢＭについてのＥＣ５０と比べたＥＣ５０値の倍数変化を以下に示す。
【０３８０】
【表１０】
2021500926.tif 000021
【０３８１】
別々のＥＬＩＳＡにおいて、ヒトＶＩＳＴＡへの結合について抗原結合分子を評価した。抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体ＶＳＴＢ１１２（例えば、ＷＯ２０１５／０９７５３６に記載される）を陽性対照として含めた。
【０３８２】
結果を図１０に示す。ヒト化抗体は、ヒトＶＩＳＴＡと交差反応しないことが見出された。
【０３８３】
６．２  ＢＬＩＴｚシステムを使用する大域的な親和性研究
ヒトＩｇＧを捕捉するための抗ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）Ｆｃ（ＡＨＣ）をコーティングしたバイオセンサーチップ（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ）を使用して単一チャネルＢＬＩｔｚシステム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ）を使用してＢＬＩ実験においてヒトＣＤ４７へのヒト化型の抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１の結合の親和性を行った。バイオセンサーを最初に少なくとも１０分間アッセイ緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水）中で含水させた後、６０秒間の緩衝液ベースラインおよび２５ｎＭでの１２０秒間のバイオセンサーチップへのヒトＩｇＧのロードを行った。次に先端をアッセイ緩衝液を用いて６０秒間簡単に洗浄して、第２の緩衝液ベースラインを得るために非特異的に結合したタンパク質または未結合のＩｇＧを除去した。抗原（２５０ｎＭ〜６２．５ｎＭ）とのＩｇＧの会合相を１２０秒に設定し、その後に１２０秒間の解離相（アッセイ緩衝液単独）とした。全てのＢＬＩＴｚランを１０００ｒｐｍの撹拌速度において室温で測定し、アッセイ後に１０ｍＭのグリシン（ｐＨ２．７）を使用してＡＨＣバイオセンサーを再生した。ＡＨＣセンサー上に固定化された抗体とヒトＣＤ４７との結合親和性を、ソフトウェアＢＬＩｔｚ  Ｐｒｏを使用して結合動力学的曲線を解析することにより決定した。全てのセンサーグラムから参照を差し引き、抗原の異なる濃度において結合曲線を解析した１：１モデルに大域的にフィッティングし、大域的にフィッティングされたデータについて速度定数（ＫＤ／Ｋａ／Ｋｄ）を生成した。全ての結合曲線を、会合ステップと解離ステップとのミスアライメントを補正するステップ補正に供し、０．９より大きいＲ２値を有する曲線のみを解析のために使用した。
【０３８４】
代表的なセンサーグラムを図１１Ａ〜１１Ｈに示し、算出された速度論的および熱力学的定数を以下に示す。
【０３８５】
【表１１】
2021500926.tif 000022
【０３８６】
実施例７：ヒト化型の抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１の機能的特徴付け
７．１  ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を遮断する能力の解析
ヒトＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害するヒト化型の抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１の能力を実施例４．１に記載されるようにＥＬＩＳＡにより調べた。
【０３８７】
以下の抗原結合分子を実験において解析した：
・１１Ａ１Ｈ４−ＩｇＧ１（実施例５の［９］）。
・１１Ａ１Ｈ５−ＩｇＧ１（実施例５の［１０］）。
・１１Ａ１Ｈ６−ＩｇＧ１（実施例５の［１１］）。
・１１Ａ１Ｈ７−ＩｇＧ１（実施例５の［１２］）。
・１１Ａ１Ｈ９−ＩｇＧ１（実施例５の［１４］）。
・１１Ａ１Ｈ１０−ＩｇＧ１（実施例５の［１５］）。
・１１Ａ１Ｈ１１−ＩｇＧ１（実施例５の［１６］）。
・抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ  ＩｇＧ１（実施例２．２の［１］）。
・図１２において「Ｍ１９５」と称される抗ＣＤ３３  ＩｇＧ１（実施例２．２の［５］）（陰性対照）。
・Ｊ６Ｍ０−ＩｇＧ１（以下の［１７］）（陰性対照）。
・アイソタイプ対照ｈＩｇＧ（陰性対照）。
【０３８８】
【表１２】
2021500926.tif 000023
【０３８９】
結果を図１２に示す。ＩＣ５０値を算出し、１−１−Ａ１＿ＢＭについてのＩＣ５０と比べたＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用の阻害についてのＩＣ５０値の倍数増加を以下に示す。
【０３９０】
【表１３】
2021500926.tif 000024
【０３９１】
７．２  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ赤血球凝集アッセイ
ヒト化型の抗ＣＤ４７抗体クローン１−１−Ａ１の赤血球凝集能力をｉｎ  ｖｉｔｒｏ赤血球凝集アッセイを使用して調べた。
【０３９２】
試験抗原結合分子の赤血球凝集能力を評価するために、透明な上清が観察されるまで、１ＸのＰＢＳを用いて血液を大規模に洗浄し、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離することによりヒトＲＢＣを調製した。アッセイのために、丸底の９６ウェルプレート中、増加濃度の試験抗原結合分子の存在または非存在下においてＲＴで１時間１％のヒトＲＢＣをインキュベートした。非赤血球凝集ＲＢＣの区切られた赤色ドットと比較してぼやけたものとして現れる、非沈降ＲＢＣの存在により赤血球凝集の存在を評価した。
【０３９３】
抗赤血球細胞抗体（ＡｂＣａｍ、カタログ番号ａｂ３４８５８）条件を赤血球凝集についての陽性対照として含め、アイソタイプ対照抗体条件を陰性対照として含めた。
【０３９４】
以下の抗原結合分子を実験において解析した：
・１１Ａ１Ｈ１−ＩｇＧ１（実施例５の［６］）。
・１１Ａ１Ｈ２−ＩｇＧ１（実施例５の［７］）。
・１１Ａ１Ｈ３−ＩｇＧ１（実施例５の［７］）。
・１１Ａ１Ｈ４−ＩｇＧ１（実施例５の［８］）。
・１１Ａ１Ｈ５−ＩｇＧ１（実施例５の［１０］）。
・１１Ａ１Ｈ６−ＩｇＧ１（実施例５の［１１］）。
・１１Ａ１Ｈ７−ＩｇＧ１（実施例５の［１２］）。
・１１Ａ１Ｈ９−ＩｇＧ１（実施例５の［１４］）。
・１１Ａ１Ｈ１０−ＩｇＧ１（実施例５の［１５］）。
・１１Ａ１Ｈ１１−ＩｇＧ１（実施例５の［１６］）。
・抗ＣＤ４７クローン１−１−Ａ１＿ＢＭ  ＩｇＧ１（実施例２．２の［１］）。
・図１３において「Ｍ１９５」と称される抗ＣＤ３３  ＩｇＧ１（実施例２．２の［５］）（陰性対照）。
・図１３において「関連しないＡｇ」と称されるＪ６Ｍ０−ＩｇＧ１（実施例７．１の［１７］）（陰性対照）。
・図１３において「抗ＲＢＣ」と称される抗赤血球細胞抗体（ＡｂＣａｍ、カタログ番号ａｂ３４８５８）。
【０３９５】
結果を図１３に示す。
【図１】
2021500926.tif 000025
【図２Ａ】
2021500926.tif 000026
【図２Ｂ】
2021500926.tif 000027
【図３Ａ】
2021500926.tif 000028
【図３Ｂ】
2021500926.tif 000029
【図３Ｃ】
2021500926.tif 000030
【図３Ｄ】
2021500926.tif 000031
【図４】
2021500926.tif 000032
【図５】
2021500926.tif 000033
【図６】
2021500926.tif 000034
【図７Ａ】
2021500926.tif 000035
【図７Ｂ】
2021500926.tif 000036
【図７Ｃ】
2021500926.tif 000037
【図８】
2021500926.tif 000038
【図９】
2021500926.tif 000039
【図１０】
2021500926.tif 000040
【図１１Ａ】
2021500926.tif 000041
【図１１Ｂ】
2021500926.tif 000042
【図１１Ｃ】
2021500926.tif 000043
【図１１Ｄ】
2021500926.tif 000044
【図１１Ｅ】
2021500926.tif 000045
【図１１Ｆ】
2021500926.tif 000046
【図１１Ｇ】
2021500926.tif 000047
【図１１Ｈ】
2021500926.tif 000048
【図１２】
2021500926.tif 000049
【図１３】
2021500926.tif 000050
【配列表】
2021500926000001.app
【国際調査報告】
2021500926.tif 000051
2021500926.tif 000052
2021500926.tif 000053