(57)【要約】本開示は、ヒトＢ７−Ｈ４（及び場合により、カニクイザル、マウス、及び／またはラットＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片、ならびにそのような抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を提供する。特定の態様では、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞増殖を増加させ、インターフェロンγ産生を増加させ、及び／またはＡＤＣＣ活性を介してＢ７−Ｈ４発現細胞を枯渇させる。本開示はまた、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を投与することによる、がんなどの障害の治療方法を提供する。【選択図】図１４
2021500853.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）それぞれ配列番号４５８〜４６３；
（ｂ）それぞれ配列番号５〜１０；
（ｃ）それぞれ配列番号１５〜２０；
（ｄ）それぞれ配列番号２５〜３０；
（ｅ）それぞれ配列番号３５〜４０；
（ｆ）それぞれ配列番号４５〜５０；
（ｇ）それぞれ配列番号５５〜６０；
（ｈ）それぞれ配列番号６５〜７０；
（ｉ）それぞれ配列番号７５〜８０；
（ｊ）それぞれ配列番号８５〜９０；
（ｋ）それぞれ配列番号９５〜１００；
（ｌ）それぞれ配列番号１０５〜１１０；
（ｍ）それぞれ配列番号１１５〜１２０；
（ｎ）それぞれ配列番号１２５〜１３０；
（ｏ）それぞれ配列番号１３５〜１４０；
（ｐ）それぞれ配列番号１４５〜１５０；
（ｑ）それぞれ配列番号１５５〜１６０；
（ｒ）それぞれ配列番号１６５〜１７０；
（ｓ）それぞれ配列番号１７５〜１８０；
（ｔ）それぞれ配列番号１８５〜１９０；及び
（ｕ）それぞれ配列番号１９５〜２００から成る群から選択される、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１１、２１、３１、４１、４６４、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１６１、１７１、１８１、１９１、または２０１のアミノ酸配列を有するＶＨを含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、または２０２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、請求項１または請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号１１、２１、３１、４１、４６４、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１６１、１７１、１８１、１９１、または２０１のアミノ酸配列を有する、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体が重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、または２０２のアミノ酸配列を有する、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
（ａ）それぞれ配列番号４６４及び４２；
（ｂ）それぞれ配列番号１１及び１２；
（ｃ）それぞれ配列番号２１及び２２；
（ｄ）それぞれ配列番号３１及び３２；
（ｅ）それぞれ配列番号４１及び４２；
（ｆ）それぞれ配列番号５１及び５２；
（ｇ）それぞれ配列番号６１及び６２；
（ｈ）それぞれ配列番号７１及び７２；
（ｉ）それぞれ配列番号８１及び８２；
（ｊ）それぞれ配列番号９１及び９２；
（ｋ）それぞれ配列番号１０１及び１０２；
（ｌ）それぞれ配列番号１１１及び１１２；
（ｍ）それぞれ配列番号１２１及び１２２；
（ｎ）それぞれ配列番号１３１及び１３２；
（ｏ）それぞれ配列番号１４１及び１４２；
（ｐ）それぞれ配列番号１５１及び１５２；
（ｑ）それぞれ配列番号１６１及び１６２；
（ｒ）それぞれ配列番号１７１及び１７２；
（ｓ）それぞれ配列番号１８１及び１８２；
（ｔ）それぞれ配列番号１９１及び１９２；または
（ｕ）それぞれ配列番号２０１及び２０２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
前記抗体または抗原結合断片が重鎖定常領域をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
前記重鎖定常領域が、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２重鎖定常領域からなる群から選択される、請求項７に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
前記抗体または抗原結合断片が、軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
前記軽鎖定常領域が、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ及びＩｇＧλ軽鎖定常領域からなる群から選択される、請求項９に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
前記抗体または抗原結合断片が、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域をさらに含み、前記重鎖定常領域がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、及び前記軽鎖定常領域がヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１３、２３、３３、４３、４６９、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、１６３、１７３、１８３、１９３、または２０３のアミノ酸配列を有する重鎖を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、または２０４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項１〜６または１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
前記抗体またはその抗原結合断片が：
（ａ）それぞれ配列番号４６９及び４４；
（ｂ）それぞれ配列番号１３及び１４；
（ｃ）それぞれ配列番号２３及び２４；
（ｄ）それぞれ配列番号３３及び３４；
（ｅ）それぞれ配列番号４３及び４４；
（ｆ）それぞれ配列番号５３及び５４；
（ｇ）それぞれ配列番号６３及び６４；
（ｈ）それぞれ配列番号７３及び７４；
（ｉ）それぞれ配列番号８３及び８４；
（ｊ）それぞれ配列番号９３及び９４；
（ｋ）それぞれ配列番号１０３及び１０４；
（ｌ）それぞれ配列番号１１３及び１１４；
（ｍ）それぞれ配列番号１２３及び１２４；
（ｎ）それぞれ配列番号１３３及び１３４；
（ｏ）それぞれ配列番号１４３及び１４４；
（ｐ）それぞれ配列番号１５３及び１５４；
（ｑ）それぞれ配列番号１６３及び１６４；
（ｒ）それぞれ配列番号１７３及び１７４；
（ｓ）それぞれ配列番号１８３及び１８４；
（ｔ）それぞれ配列番号１９３及び１９４；または
（ｕ）それぞれ配列番号２０３及び２０４のアミノ酸配列を有する重鎖及び軽鎖を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、１５４６１、２０５００、２０５０１、２０５０２、２０５０２．１、２２２０８、１５４６２、２２２１３、１５４６５、２０５０６、１５４８３、２０５１３、２２２１６、１５４８９、２０５１６、１５４７２、１５５０３、１５４９５、１５４７８、１５４４１、２０４９６からなる群から選択される抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、またはＡｂＭ定義のＣＤＲである、請求項１５に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、２０５０２．１の、Ｃｈｏｔｈｉａ定義またはＡｂＭ定義のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１８】
それぞれ配列番号４５８〜４６３の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
（ｉ）前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号４６４のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）前記抗体が、配列番号４６９のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項１８に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２０】
それぞれ配列番号３５〜４０の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２１】
（ｉ）前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号４１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）前記抗体が、配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項２０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２２】
それぞれ配列番号６５〜７０の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２３】
（ｉ）前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号７１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域ならびに配列番号７２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）前記抗体が、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項２２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片と同じヒトＢ７−Ｈ４のエピトープに結合する単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒト抗体またはその抗原結合断片である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、マウス、ヒト化、もしくはキメラ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１、１５〜２０、２２、または２４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｔ細胞増殖を誘導する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２８】
前記抗体または抗原結合断片が、Ｔ細胞増殖を、対照抗体による処置に比べて少なくとも２１％増加させる、請求項２７に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２９】
前記抗体または抗原結合断片が、Ｔ細胞増殖を、対照抗体による処置に比べて約５％〜約３５％増加させる、請求項２７に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３０】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を誘導する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３１】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を、対照抗体による処置に比べて少なくとも９％増加させる、請求項３０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３２】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を、対照抗体による処置に比べて約５％〜約１５％増加させる、請求項３０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を誘導する、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３４】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を、対照抗体による処置に比べて少なくとも１１％増加させる、請求項３３に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を、対照抗体による処理に比べて約５％〜約１５％増加させる、請求項３４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）産生を誘導する、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＩＦＮγの産生を、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、及び少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、約２倍〜約１０倍、または約３倍〜約１０倍増加させることができる、請求項３６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｂ７−Ｈ４発現細胞において抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができる、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３９】
前記抗体またはその抗原結合断片が、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、約２０％〜約５０％、または約３０％〜約５０％のＢ７−Ｈ４発現細胞で特異的溶解を誘導する、請求項３８に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４０】
前記抗体またはその抗原結合断片が、マウスＣＴ２６結腸直腸癌モデル、マウス乳癌４Ｔ１モデル、または黒色腫細胞株Ｂ１６−マウスＢ７−Ｈ４／Ｈ３モデルにおける腫瘍成長を阻害する、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４１】
前記抗体またはその抗原結合断片が、腫瘍成長を、対照抗体による処置に比べて、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％減少させる、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４２】
前記Ｔ細胞増殖の誘導、前記ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の誘導、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の誘導、前記ＩＦＮγ産生の誘導、前記ＡＤＣＣ活性、及び／または前記腫瘍成長の阻害が用量依存的である、請求項２７〜４１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、カニクイザルＢ７−Ｈ４に結合する、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４４】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ラットＢ７−Ｈ４に結合する、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、マウスＢ７−Ｈ４に結合する、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＢ７−Ｈ４のＩｇＶドメインに結合する、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４７】
前記抗体またはその抗原結合断片がアフコシル化されている、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４８】
全長抗体である、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４９】
抗原結合断片である、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５０】
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、細胞内抗体、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ−Ｆｃを含む、請求項４９に記載の抗原結合断片。
【請求項５１】
検出可能な標識をさらに含む、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５２】
請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖をコードする核酸分子を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項５３】
前記核酸分子が、配列番号１１、２１、３１、４１、４６４、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１６１、１７１、１８１、１９１、もしくは２０１のＶＨまたは配列番号１３、２３、３３、４３、４６９、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、１６３、１７３、１８３、１９３、もしくは２０３の重鎖をコードする、請求項５２に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項５４】
前記核酸分子が、配列番号２１３、２２３、２３３、２４３、４７０、２５３、２６３、２７３、２８３、２８３、２９３、３０３、３１３、３２３、３３３、３４３、３５３、３６３、３７３、３８３、３９３、または４０３の配列を有する、請求項５２に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項５５】
前記核酸分子が、（ｉ）配列番号２１３、２２３、２３３、２４３、４７０、２５３、２６３、２７３、２８３、２９３、３０３、３１３、３２３、３３３、３４３、３５３、３６３、３７３、３８３、３９３、または４０３の配列、及び（ｉｉ）配列番号４０８の配列を有する、請求項５２に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項５６】
請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸分子を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項５７】
前記核酸分子が、配列番号１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、もしくは２０２のＶＬ、または配列番号１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、もしくは２０４の軽鎖をコードする、請求項５６に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項５８】
前記核酸分子が、配列番号２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、または４０４の配列を有する、請求項５６に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項５９】
前記核酸分子が、（ｉ）配列番号２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、または４０４の配列、及び（ｉｉ）配列番号４０６の配列を有する、請求項５６に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項６０】
請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖、及び請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸分子を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項６１】
請求項５２〜６０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、単離ベクター。
【請求項６２】
請求項５２〜６０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項６１に記載のベクター、または請求項５２〜５５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む第１のベクターと請求項５６〜５９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む第２のベクターとを含む、宿主細胞。
【請求項６３】
Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ−Ｃ６、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＮＩＨ−３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及び組織培養中のヒト細胞からなる群から選択される、請求項６２に記載の宿主細胞。
【請求項６４】
前記宿主細胞が、機能性α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）の遺伝子を欠損している、請求項６２または６３に記載の宿主細胞。
【請求項６５】
請求項６２〜６４のいずれか一項に記載の宿主細胞を培養し、それにより前記核酸分子を発現させ、前記抗体またはその抗原結合断片を産生させることを含む、ヒトＢ７−Ｈ４に結合する抗体またはその抗原結合断片の産生方法。
【請求項６６】
ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、請求項５２〜６０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされる、単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６７】
請求項１〜５１または６６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項６８】
（ｉ）請求項１〜５１または６６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物であって、前記組成物中の抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％がアフコシル化されている、前記医薬組成物。
【請求項６９】
（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号４５８〜４６０の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物であって、前記組成物中の抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％がアフコシル化されている、前記医薬組成物。
【請求項７０】
（ｉ）前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号４６４のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域、及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）前記抗体が、配列番号４６９のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項６９に記載の医薬組成物。
【請求項７１】
（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、配列番号３５〜４０の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物であって、前記組成物中の抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％がアフコシル化されている、前記医薬組成物。
【請求項７２】
（ｉ）前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号４１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域、及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）前記抗体が、配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項７１に記載の医薬組成物。
【請求項７３】
（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号６５〜７０の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物であって、前記組成物中の抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％がアフコシル化されている、前記医薬組成物。
【請求項７４】
（ｉ）前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号７１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域、及び配列番号７２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）前記抗体が、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項７３に記載の医薬組成物。
【請求項７５】
フコシル化が組成物中で検出不可能である、請求項６７〜７４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７６】
抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片をさらに含む、請求項６７〜７５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７７】
前記抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片が、ニボルマブまたはペンブロリズマブである、請求項７６に記載の医薬組成物。
【請求項７８】
前記抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片が、ＡＭＰ−５１４、カムレリズマブ、チスレリズマブ、及びスパルタリズマブである、請求項７６に記載の医薬組成物。
【請求項７９】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片をさらに含む、請求項６７〜７５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８０】
Ｔ細胞を、請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６７〜７９のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させることを含む、Ｔ細胞増殖の誘導方法。
【請求項８１】
Ｔ細胞増殖を、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％減少させる、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
ＣＤ４＋Ｔ細胞を、請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６７〜７９に記載の医薬組成物と接触させることを含む、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の誘導方法。
【請求項８３】
ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％減少させる、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
ＣＤ８＋Ｔ細胞を、請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項６７〜７９のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させることを含む、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の誘導方法。
【請求項８５】
ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％減少させる、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
Ｔ細胞を、請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６７〜７９のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させることを含む、インターフェロンγ産生の誘導方法。
【請求項８７】
インターフェロンγ産生を、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％増加させる、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
Ｂ７−Ｈ４を発現する細胞の殺傷方法であって、前記細胞を、請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６７〜７９のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させることを含む、前記Ｂ７−Ｈ４を発現する細胞の殺傷方法。
【請求項８９】
細胞集団を、請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６７〜７９のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させることを含む、細胞集団からのＢ７−Ｈ４発現細胞の枯渇方法。
【請求項９０】
前記殺傷または枯渇を、ＡＤＣＣを介して行う、請求項８８または８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記Ｔ細胞、前記ＣＤ４＋Ｔ細胞、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞、前記細胞、または前記細胞集団を、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片と接触させることをさらに含む、請求項８０〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６７〜７８のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させること、及び抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片と接触させることを同時に行う、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６７〜７８のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させること、及び抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片と接触させることを連続で行う、請求項９１に記載の方法。
【請求項９４】
前記Ｔ細胞、前記ＣＤ４＋Ｔ細胞、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞、前記細胞、または前記細胞集団を、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片と接触させることをさらに含む、請求項８０〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６７〜７５のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させること、及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片と接触させることを同時に行う、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６７〜７５のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させること、及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片と接触させることを連続で行う、請求項９４に記載の方法。
【請求項９７】
前記接触がｉｎ  ｖｉｔｒｏである、請求項８０〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記接触が被験体内である、請求項８０〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
有効量の請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６７〜７９のいずれか一項に記載の医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体におけるＢ７−Ｈ４を発現するがんの治療方法。
【請求項１００】
前記がんが、乳癌、乳管癌、子宮内膜癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌及び膀胱癌からなる群から選択される、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記乳癌が三種陰性乳癌であるか、または前記非小細胞肺癌が扁平上皮癌である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記非小細胞肺癌が腺癌である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
前記がんが、頭頸部癌、小細胞肺癌、胃癌、及び黒色腫からなる群から選択される、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０４】
前記がんが、卵巣癌であり、漿液性腺癌である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０５】
前記がんが、乳癌であり、乳管癌である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０６】
前記がんが、ＰＤ−１阻害剤に対する応答が不十分である、請求項９９〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記がんが、ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対する応答が不十分である、請求項９９〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記がんが、低レベルのＰＤ−Ｌ１を発現している、請求項９９〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記被験体がヒトである、請求項９９〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
前記被験体に抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片を投与することをさらに含む、請求項９９〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項６７〜７８のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与、及び抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片の投与を同時に行う、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６７〜７８のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与、及び抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片の投与を連続で行う、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１３】
前記抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片の投与を、請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片または請求項６７〜７８のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与後に行う、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片が、ニボルマブまたはペンブロリズマブである、請求項９１〜９３、９７、９８及び１１０〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
前記抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片が、ＡＭＰ−５１４、カムレリズマブ、チスレリズマブ、またはスパルタリズマブである、請求項９１〜９３、９７、９８及び１１０〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
試料中のＢ７−Ｈ４の検出方法であって、前記試料を、請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片と接触させることを含む、前記検出方法。
【請求項１１７】
前記試料を、ヒト被験体のがんから採取する、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
請求項１〜５１もしくは６６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項６７〜７９のいずれか一項に記載の医薬組成物、及びａ）検出試薬、ｂ）Ｂ７−Ｈ４抗原、ｃ）ヒト投与についての使用もしくは販売の承認を反映した通知書、またはｄ）それらの組み合わせを含む、キット。
【請求項１１９】
請求項１〜５１または６６のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｂ７−Ｈ４のＴ細胞チェックポイント遮断活性を阻害する、前記単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２０】
前記Ｔ細胞チェックポイント遮断活性が、対照細胞に比べてＩＬ−２産生が増加することによって測定される、請求項１１９に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２１】
（ｉ）請求項１〜５１または６６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物であって、前記抗体または抗原結合断片が、Ｂ７−Ｈ４のＴ細胞チェックポイント遮断活性を阻害する、前記医薬組成物。
【請求項１２２】
前記Ｔ細胞チェックポイント遮断活性が、対照細胞に比べてＩＬ−２産生が増加することによって測定される、請求項１２１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年８月２５日に出願された米国仮出願第６２／５５０，１７３号、２０１７年１０月３１日に出願された米国仮出願第６２／５７９，７７４号、２０１７年１２月１９日に出願された米国仮出願第６２／６０７，８１０号、及び２０１８年４月１２日に出願された米国仮出願第６２／６５６，７８９号の利益を主張し、それぞれその全体を参照により本明細書に援用する。
【０００２】
ＥＦＳ−ＷＥＢを介して電子的に提出された配列表の参照
電子的に提出された配列表の内容（ファイル名：３９８６．００９０００４＿ＳＬ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：３３１，３５４バイト；作成日：２０１８年８月３日）は、その全体を参照により本明細書に援用する。
【背景技術】
【０００３】
技術分野
本開示は、そのような抗体を含むヒトＢ７−Ｈ４組成物に特異的に結合する抗体、及びＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体の産生及び使用方法に関する。
【０００４】
関連技術の説明
Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７ｘ、Ｂ７−Ｓ１、及びＶＴＣＮ１としても知られる）は、ＰＤ−Ｌ１を含む他のＢ７ファミリーメンバーと相同性を共有する免疫調節分子である。この分子は、ＩｇＶとＩｇＣの両方の外部ドメインを含むＩ型膜貫通タンパク質である。健康な組織内でのタンパク質レベルのＢ７−Ｈ４発現は比較的限定的だが、Ｂ７−Ｈ４は、いくつかの固形腫瘍、例えば、乳房、卵巣、及び子宮内膜などの婦人科癌において発現する。腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現は、予後不良と相関する傾向がある。Ｂ７−Ｈ４の受容体は不明だが、Ｔ細胞に発現していると考えられている。Ｂ７−Ｈ４は、Ｔ細胞の活性を直接阻害すると考えられている。
【０００５】
Ｂ７−Ｈ４の発現及び機能を考慮して、本明細書では、Ｂ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体、及び例えばがんの治療を含む、Ｂ７−Ｈ４活性を調節するこれらの抗体の使用を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本明細書では：それぞれ配列番号５〜１０；それぞれ配列番号１５〜２０；それぞれ配列番号２５〜３０；それぞれ配列番号３５〜４０；それぞれ配列番号４５８〜４６３；それぞれ配列番号４５〜５０；それぞれ配列番号５５〜６０；それぞれ配列番号６５〜７０；それぞれ配列番号７５〜８０；それぞれ配列番号８５〜９０；それぞれ配列番号９５〜１００；それぞれ配列番号１０５〜１１０；それぞれ配列番号１１５〜１２０；配列番号１２５〜１３０；それぞれ配列番号１３５〜１４０；それぞれ配列番号１４５〜１５０；それぞれ配列番号１５５〜１６０；それぞれ配列番号１６５〜１７０；それぞれ配列番号１７５〜１８０；それぞれ配列番号１８５〜１９０；及びそれぞれ配列番号１９５〜２００を含む群から選択される、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０００７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１、２１、３１、４１、４６４、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１６１、１７１、１８１、１９１、または２０１のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。
【０００８】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、または２０２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。
【０００９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号１１、２１、３１、４１、４６４、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１６１、１７１、１８１、１９１、または２０１のアミノ酸配列を有する。
【００１０】
本明細書では、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片も提供し、抗体は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、または２０２のアミノ酸配列を有する。
【００１１】
本明細書ではまた：それぞれ配列番号１１及び１２；それぞれ配列番号２１及び２２；それぞれ配列番号３１及び３２；それぞれ配列番号４１及び４２；それぞれ配列番号４６４及び４２；それぞれ配列番号５１及び５２；それぞれ配列番号６１及び６２；それぞれ配列番号７１及び７２；それぞれ配列番号８１及び８２；それぞれ配列番号９１及び９２；それぞれ配列番号１０１及び１０２；それぞれ配列番号１１１及び１１２；それぞれ配列番号１２１及び１２２；それぞれ配列番号１３１及び１３２；それぞれ配列番号１４１及び１４２；それぞれ配列番号１５１及び１５２；それぞれ配列番号１６１及び１６２；それぞれ配列番号１７１及び１７２；それぞれ配列番号１８１及び１８２；それぞれ配列番号１９１及び１９２；またはそれぞれ配列番号２０１及び２０２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００１２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、重鎖定常領域をさらに含む。一実施形態では、重鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２重鎖定常領域からなる群から選択される。
【００１３】
一実施形態では、抗体または抗原結合断片は、軽鎖定常領域をさらに含む。一実施形態では、軽鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ及びＩｇＧλ軽鎖定常領域からなる群から選択される。
【００１４】
一実施形態では、抗体または抗原結合断片は、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域をさらに含み、重鎖定常領域はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域であり、軽鎖定常領域は、ヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である。
【００１５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３、２３、３３、４３、４６９、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、１６３、１７３、１８３、１９３、または２０３のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。
【００１６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、または２０４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００１７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は：それぞれ配列番号１３及び１４；それぞれ配列番号２３及び２４；それぞれ配列番号３３及び３４；それぞれ配列番号４３及び４４；それぞれ配列番号４６９及び４４；それぞれ配列番号５３及び５４；それぞれ配列番号６３及び６４；それぞれ配列番号７３及び７４；それぞれ配列番号８３及び８４；それぞれ配列番号９３及び９４；それぞれ配列番号１０３及び１０４；それぞれ配列番号１１３及び１１４；それぞれ配列番号１２３及び１２４；それぞれ配列番号１３３及び１３４；それぞれ配列番号１４３及び１４４；それぞれ配列番号１５３及び１５４；それぞれ配列番号１６３及び１６４；それぞれ配列番号１７３及び１７４；それぞれ配列番号１８３及び１８４；それぞれ配列番号１９３及び１９４；またはそれぞれ配列番号２０３及び２０４のアミノ酸配列を有する重鎖及び軽鎖を含む。
【００１８】
本明細書では、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片も提供し、抗体またはその抗原結合断片は、１５４６１、２０５００、２０５０１、２０５０２、２０５０２．１、２２２０８、１５４６２、２２２１３、１５４６５、２０５０６、１５４８３、２０５１３、２２２１６、１５４８９、２０５１６、１５４７２、１５５０３、１５４９５、１５４７８、１５４４１、及び２０４９６からなる群から選択される抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、またはＡｂＭ定義のＣＤＲである。
【００１９】
また、本明細書では、それぞれ配列番号４５８〜４６３の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態では、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４６４のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域、及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号４６９のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００２０】
本明細書ではまた、それぞれ配列番号３５〜４０の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態では、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域、及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００２１】
本明細書ではまた、それぞれ配列番号６５〜７０の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態では、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域、及び配列番号７２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００２２】
本明細書ではまた、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片と同一のヒトＢ７−Ｈ４エピトープに結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＳＰＲで決定される同一のヒトＢ７−Ｈ４エピトープに結合する。
【００２３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト抗体またはその抗原結合断片である。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、マウス、ヒト化、もしくはキメラ抗体またはその抗原結合断片である。
【００２４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞増殖を誘導する。一実施形態では、抗体または抗原結合断片は、対照抗体での処置に比べて、Ｔ細胞増殖を少なくとも２１％増加させる。一実施形態では、抗体または抗原結合断片は、対照抗体での処置に比べて、Ｔ細胞増殖を約５％〜約３５％増加させる。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を誘導する。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、対照抗体での処置に比べて、ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を少なくとも９％増加させる。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、対照抗体での処置に比べて、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を約５％〜約１５％増加させる。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を誘導する。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、対照抗体での処置に比べて、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも１１％増加させる。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、対照抗体での処置に比べてＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を約５％〜約１５％増加させる。
【００２５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）産生を誘導する。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩＦＮγの産生を、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、及び少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、約２倍〜約１０倍、または約３倍〜約１０倍増加させることができる。
【００２６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ７−Ｈ４発現細胞において抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができる。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、約２０％〜約５０％、または約３０％〜約５０％のＢ７−Ｈ４発現細胞で特異的溶解を誘導する。
【００２７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、マウスＣＴ２６結腸直腸癌モデル、マウス乳癌４Ｔ１モデル、または黒色腫細胞株Ｂ１６−マウスＢ７−Ｈ４／Ｈ３モデルにおける腫瘍成長を阻害する。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、対照抗体での処置に比べて、腫瘍成長を、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％減少させる。
【００２８】
一実施形態では、Ｔ細胞増殖の誘導、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の誘導、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の誘導、ＩＦＮγ産生の誘導、ＡＤＣＣ活性、及び／または腫瘍成長の阻害は用量依存的である。
【００２９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、カニクイザルＢ７−Ｈ４に結合する。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ラットＢ７−Ｈ４に結合する。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、マウスＢ７−Ｈ４に結合する。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４、カニクイザルＢ７−Ｈ４、ラットＢ７−Ｈ４及びマウスＢ７−Ｈ４に結合する。
【００３０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４のＩｇＶドメインに結合する。
【００３１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、アフコシル化されている。
【００３２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は全長抗体である。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は抗原結合断片である。一実施形態では、抗原結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、細胞内抗体、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ−Ｆｃが含まれる。
【００３３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、検出可能な標識をさらに有する。
【００３４】
本明細書ではまた、本明細書において提供する抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖をコードする核酸分子を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１１、２１、３１、４１、４６４、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１６１、１７１、１８１、１９１、もしくは２０１のＶＨ、または配列番号１３、２３、３３、４３、４６９、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、１６３、１７３、１８３、１９３、もしくは２０３の重鎖をコードする。一実施形態では、核酸分子は、配列番号２１３、２２３、２３３、２４３、４７０、２５３、２６３、２７３、２８３、２９３、３０３、３１３、３２３、３３３、３４３、３５３、３６３、３７３、３８３、３９３、または４０３の配列を有する。一実施形態では、核酸分子は、（ｉ）配列番号２１３、２２３、２３３、２４３、４７０、２５３、２６３、２７３、２８３、２９３、３０３、３１３、３２３、３３３、３４３、３５３、３６３、３７３、３８３、３９３、または４０３の配列、及び（ｉｉ）配列番号４０８の配列を有する。
【００３５】
本明細書ではまた、本明細書において提供する抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸分子を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。一実施形態では、核酸分子は、配列番号１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、もしくは２０２のＶＬ、または配列番号１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、もしくは２０４の軽鎖をコードする。一実施形態では、核酸分子は、配列番号２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、または４０４の配列を有する。一実施形態では、核酸分子は、（ｉ）配列番号２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、または４０４の配列、及び（ｉｉ）配列番号４０６の配列を有する。
【００３６】
本明細書ではまた、本明細書において提供する抗体または抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖、及び抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸分子を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。
【００３７】
本明細書ではまた、本明細書において提供するポリヌクレオチドを含む単離されたベクターを提供する。
【００３８】
本明細書ではまた、本明細書において提供するポリヌクレオチド、本明細書において提供するベクター、本明細書において提供する１つのポリヌクレオチド（例えば、可変重鎖または重鎖をコードする核酸を含むポリヌクレオチド）を有する第１のベクター及び本明細書において提供する別のポリヌクレオチド（例えば、可変軽鎖または軽鎖をコードする核酸を含むポリヌクレオチド）を有する第２のベクターを含む宿主細胞を提供する。一実施形態では、宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ−Ｃ６、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＮＩＨ−３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及び組織培養中のヒト細胞からなる群から選択される細胞である。一実施形態では、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。一実施形態では、宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞などの哺乳類宿主細胞）は、機能性α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）遺伝子を欠いている。
【００３９】
本明細書ではまた、本明細書において提供する宿主細胞を培養し、それにより核酸分子を発現させ、抗体またはその抗原結合断片を産生させることを含む、ヒトＢ７−Ｈ４に結合する抗体またはその抗原結合断片の産生方法（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ法）を提供する。
【００４０】
本明細書ではまた、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、本明細書において提供するポリヌクレオチドによってコードされる単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００４１】
本明細書ではまた、本明細書において提供する抗体またはその抗原結合断片、本明細書において提供するポリヌクレオチド、本明細書において提供するベクター、または本明細書において提供する宿主細胞を含む医薬組成物；及び薬学的に許容される賦形剤を提供する。
【００４２】
本明細書ではまた、（ｉ）本明細書において提供する抗体または抗原結合断片、及び（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供し、その場合、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％は、アフコシル化されている。
【００４３】
本明細書ではまた、（ｉ）本明細書において提供する抗体または抗原結合断片及び（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供し、その場合、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％がアフコシル化されている。
【００４４】
本明細書ではまた、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号４５８〜４６３の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する抗体またはその抗原結合断片、ならびに（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供し、その場合、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％は、アフコシル化されている。一実施形態では、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４６４のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域、及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号４６９のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００４５】
本明細書ではまた、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号４５８〜４６３の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する抗体またはその抗原結合断片、及び（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供し、その場合、組成物中の少なくとも９５％の抗体またはその抗原結合断片はアフコシル化されている。一実施形態では、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４６４のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域、及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号４６９のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００４６】
本明細書ではまた、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号３５〜４０の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する抗体またはその抗原結合断片、及び（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物も提供し、その場合、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％は、アフコシル化されている。一実施形態では、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域、及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００４７】
本明細書ではまた、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号３５〜４０の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する抗体またはその抗原結合断片、及び（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供し、その場合、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％はアフコシル化されている。一実施形態では、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域、及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００４８】
本明細書ではまた、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号６５〜７０の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する抗体またはその抗原結合断片、及び（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供し、その場合、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％は、アフコシル化されている。一実施形態では、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域、及び配列番号７２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００４９】
本明細書ではまた、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号６５〜７０の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を有する抗体またはその抗原結合断片、及び（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供し、その場合、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％はアフコシル化されている。一実施形態では、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域、及び配列番号７２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００５０】
一実施形態では、フコシル化は組成物中で検出不可能である。
【００５１】
本明細書中ではまた、Ｔ細胞を、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書において提供するポリヌクレオチド、本明細書において提供するベクター、本明細書において提供する宿主細胞、または本明細書において提供する医薬組成物と接触させることを含む、Ｔ細胞増殖の誘導方法を提供する。一実施形態では、Ｔ細胞増殖は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％低下する（例えば、対照抗体での処置に比べて）。
【００５２】
本明細書ではまた、ＣＤ４＋Ｔ細胞を、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書において提供するポリヌクレオチド、本明細書において提供するベクター、本明細書において提供する宿主細胞、または本明細書において提供する医薬組成物と接触させることを含む、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の誘導方法を提供する。一実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％低下する（例えば、対照抗体での処置に比べて）。
【００５３】
本明細書ではまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞を、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書において提供するポリヌクレオチド、本明細書において提供するベクター、本明細書において提供する宿主細胞、または本明細書において提供する医薬組成物と接触させることを含む、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の誘導方法を提供する。一実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％低下する（例えば、対照抗体での処置に比べて）。
【００５４】
本明細書ではまた、Ｔ細胞を、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書において提供するポリヌクレオチド、本明細書において提供するベクター、本明細書において提供する宿主細胞、または本明細書において提供する医薬組成物と接触させることを含む、インターフェロンγ産生の誘導方法を提供する。一実施形態では、インターフェロンγ産生は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％増加する（例えば、対照抗体での処置に比べて）。
【００５５】
本明細書ではまた、Ｂ７−Ｈ４発現細胞を、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書において提供するポリヌクレオチド、本明細書において提供するベクター、本明細書において提供する宿主細胞、または本明細書において提供する医薬組成物と接触させることを含む、Ｂ７−Ｈ４発現細胞の殺傷方法を提供する。
【００５６】
本明細書ではまた、細胞集団を、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書において提供するポリヌクレオチド、本明細書において提供するベクター、本明細書において提供する宿主細胞、または本明細書において提供する医薬組成物と接触させることを含む、細胞集団からのＢ７−Ｈ４発現細胞の枯渇方法を提供する。
【００５７】
一実施形態では、殺傷または枯渇はＡＤＣＣを介して生じる。
【００５８】
一実施形態では、接触はｉｎ  ｖｉｔｒｏである。一実施形態では、接触は被験体内である。
【００５９】
本明細書ではまた、被験体のがんの治療方法を提供し、方法は、治療有効量の、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書において提供するポリヌクレオチド、本明細書において提供するベクター、本明細書において提供する宿主細胞、または本明細書において提供する医薬組成物を被験体に投与することを含む。一実施形態では、がんは、三種陰性乳癌または浸潤性乳管癌などの乳癌、子宮内膜癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌及び膀胱癌からなる群から選択される。一実施形態では、乳癌は三種陰性乳癌であるか、または非小細胞肺癌は扁平上皮癌である。一実施形態では、非小細胞肺癌は腺癌である。一実施形態では、がんは、頭頸部癌、小細胞肺癌、胃癌、及び黒色腫からなる群から選択される。一実施形態では、卵巣癌は漿液性腺癌である。一実施形態では、乳癌は管腺癌である。
【００６０】
一実施形態では、がんは、ＰＤ−１阻害剤の不十分な応答者及び／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤の不十分な応答者である。一実施形態では、がんは低レベルのＰＤ−Ｌ１を発現する。
【００６１】
一実施形態では、被験体はヒトである。
【００６２】
本明細書ではまた、試料を、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片と接触させることを含む、前記試料中のＢ７−Ｈ４の検出方法を提供する。一実施形態では、試料は、ヒト被験体内のがんから取得する。
【００６３】
本明細書ではまた、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書において提供するポリヌクレオチド、本明細書において提供するベクター、本明細書において提供する宿主細胞、または本明細書において提供する医薬組成物、及びａ）検出試薬、ｂ）Ｂ７−Ｈ４抗原、ｃ）ヒト投与の使用または販売の承認を反映した通知書、またはｄ）それらの組み合わせを含むキットを提供する。
【００６４】
本明細書ではまた、単離された抗体または抗原結合断片も提供し、抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ７−Ｈ４のＴ細胞チェックポイント遮断活性を阻害する。一実施形態では、Ｔ細胞チェックポイント遮断活性を、対照細胞と比較したＩＬ−２産生の増加により測定する。
【００６５】
本明細書ではまた、（ｉ）抗体または抗原結合断片及び（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供し、抗体または抗原結合断片は、Ｂ７−Ｈ４のＴ細胞チェックポイント遮断活性を阻害する。一実施形態では、Ｔ細胞チェックポイント遮断活性を、対照細胞と比較したＩＬ−２産生の増加により測定する。
【図面の簡単な説明】
【００６６】
【図１Ａ】様々な腫瘍組織におけるＢ７−Ｈ４発現を示す。（実施例１参照）。
【図１Ｂ】ＩＨＣによる様々な腫瘍タイプにおけるＢ７−Ｈ４分布率を示す。（実施例１参照）。
【図２Ａ】ヒト、カニクイザル、またはマウスＢ７−Ｈ４を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞へのＢ７−Ｈ４抗体の結合を示す。（実施例６参照）。
【図２Ｂ】マウス、カニクイザル、またはラットＢ７−Ｈ４を発現するＳＫ−ＢＲ−３細胞及びＨＥＫ２９３Ｔ細胞へのＢ７−Ｈ４抗体の結合を示す。（実施例６参照）。
【図３Ａ】ＣＤ４＋、ＣＤ８＋または全Ｔ細胞増殖に対するＢ７−Ｈ４抗体の効果を示す。（実施例７参照）。
【図３Ｂ】インターフェロンγ（ＩＦＮγ）産生に対するＢ７−Ｈ４抗体の効果を示す。（実施例７参照）。
【図３Ｃ】ＣＤ４＋、ＣＤ８＋または全Ｔ細胞増殖及びインターフェロンγ（ＩＦＮγ）産生に対するＢ７−Ｈ４抗体の効果を示す。（実施例７参照）。
【図３Ｄ】インターフェロンγ（ＩＦＮγ）産生に対する様々な濃度のＢ７−Ｈ４抗体の効果を示す。（実施例７参照）。
【図４】（図４Ａ）ＳＫ−ＢＲ−３細胞上のＢ７−Ｈ４へのフコシル化及びアフコシル化抗体の結合を示す。（実施例９参照）。（図４Ｂ）マウスＢ７−Ｈ４を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞へのフコシル化及びアフコシル化抗体の結合を示す。（実施例９参照）。（図４Ｃ）カニクイザルＢ７−Ｈ４を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞へのフコシル化及びアフコシル化抗体の結合を示す。（実施例９参照）。（図４Ｄ）ラットＢ７−Ｈ４を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞へのフコシル化及びアフコシル化抗体の結合を示す。（実施例９参照）。
【図５】（図５Ａ）ヒトＦｃγ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）Ｖ１５８対立遺伝子へのアフコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体の結合を示す。（実施例１０参照）。（図５Ｂ）ヒトＦｃγ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）Ｖ１５８対立遺伝子へのフコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体の結合を示す。（実施例１０参照）。
【図６Ａ】フコシル化及びアフコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体のＴ細胞チェックポイント遮断活性を示す。（実施例１１参照）。
【図６Ｂ】ＩＬ−２産生の測定による、アイソタイプ対照処置細胞と比較したアフコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体のＴ細胞チェックポイントリガンド活性を示す。（実施例１１参照）。
【図７】Ｂ７−Ｈ４発現細胞株に対するフコシル化及びアフコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体のＡＤＣＣ活性を示す。（実施例１２参照）。
【図８】様々なＢ７−Ｈ４発現レベルを有する細胞に対するフコシル化及びアフコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体のＡＤＣＣ活性を示す。（実施例１３参照）。
【図９Ａ】Ｂ７−Ｈ４抗体２０５０２のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効力を示す（実施例１４参照）。
【図９Ｂ】Ｂ７−Ｈ４抗体２２２１３のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効力を示す（実施例１４参照）。
【図１０】４Ｔ１（乳癌）及びＢ１６（黒色腫）細胞移植マウスにおけるＢ７−Ｈ４抗体２０５０２のマウスバージョンのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効力を示す。（実施例１４参照）。
【図１１】ＭＸ−１ヒト乳癌異種移植モデルにおけるアフコシル化２０５０２のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効力を示す。画像は、ＭＸ−１異種移植腫瘍におけるヒトＢ７−Ｈ４発現（左）と４Ｔ１腫瘍におけるマウスＢ７−Ｈ４発現（右）を示す。（実施例１４参照）。
【図１２】（図１２Ａ）抗ＰＤ−１抗体と同じ日に投与した２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効力を示す。（実施例１５参照）。＊はｐ＜０．０５を示し；＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を示す。（図１２Ｂ）抗ＰＤ−１抗体と同じ日に投与した２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効力を示す。（実施例１５参照）。＊はｐ＜０．０５を示し；＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を示す。（図１２Ｃ）抗ＰＤ−１抗体と同じ日に投与した２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効力を示す。（実施例１５参照）。＊はｐ＜０．０５を示し；＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を示す。
【図１３】アフコシル化２０５０２（下部パネル）での処置が、対照抗体での処置（上部パネル）と比較して、ＮＫ細胞浸潤（左パネル）、Ｔ細胞浸潤（中央パネル）、及びＰＤ−Ｌ１上方制御（右パネル）をもたらすことを示す。（実施例１６参照）。
【図１４】（図１４Ａ）２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体が用量依存的に４Ｔ１乳癌細胞の腫瘍成長を有意に低下させることを示す。（実施例１７参照）。（図１４Ｂ）３０日目における一元配置分散分析での評価により、２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体が３０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．０００３）、２０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．０１０３）、１０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．０４１９）、３ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．０２７７）、及び１ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．０３３３）で腫瘍成長を有意に阻害することを示す。（実施例１７参照）。
【図１５】（図１５Ａ）２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体が、Ｂ７−Ｈ４／Ｈ３を発現するＢ１６の増殖を有意に減少させることを示す。（実施例１７参照）。（図１５Ｂ）２３日目における一元配置分散分析での評価により、２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体が、３０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．００８５）、２０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．００４１）、１０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．００１７）、及び３ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．０４２０）で腫瘍成長を有意に阻害することを示す（実施例１７参照）。
【発明を実施するための形態】
【００６７】
本明細書では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体）及びその抗原結合断片を提供する。抗Ｂ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片は、例えば、Ｔ細胞チェックポイント遮断活性（例えば、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）の増加、ＣＤ４  Ｔ細胞増殖、ＣＤ８  Ｔ細胞増殖、及び／または全Ｔ細胞増殖での測定による）及び／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ活性）をもたらし得る。
【００６８】
また、そのような抗体及びその抗原結合断片をコードする相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）などの単離された核酸（ポリヌクレオチド）も提供する。さらに、そのような抗体及びその抗原結合断片をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を含むベクター（例えば、発現ベクター）及び細胞（例えば、宿主細胞）を提供する。そのような抗体及びその抗原結合断片の作製方法も提供する。他の態様では、本明細書において、がんなどの特定の病態の治療方法を提供する。関連する組成物（例えば、医薬組成物）、キット、及び検出方法も提供する。
【００６９】
１．１  用語
本明細書中で使用する場合、用語「Ｂ７−Ｈ４」とは、天然のＢ７−Ｈ４ポリペプチド及びＢ７−Ｈ４ポリペプチドのアイソフォームを含むがこれらに限定されない哺乳類Ｂ７−Ｈ４ポリペプチドを指す。「Ｂ７−Ｈ４」は、全長の未プロセシングＢ７−Ｈ４ポリペプチド、及び細胞内でのプロセシングから生じるＢ７−Ｈ４ポリペプチドの形態を包含する。本明細書中で使用する場合、用語「ヒトＢ７−Ｈ４」とは、配列番号１のアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。「Ｂ７−Ｈ４ポリヌクレオチド」、「Ｂ７−Ｈ４ヌクレオチド」、または「Ｂ７−Ｈ４核酸」は、Ｂ７−Ｈ４をコードするポリヌクレオチドを指す。
【００７０】
本明細書中で使用する用語「ＰＤ−１」とは、天然ＰＤ−１ポリペプチド及びＰＤ−１ポリペプチドのアイソフォームを含むがこれらに限定されない哺乳類ＰＤ−１ポリペプチドを指す。ＰＤ−１は、プログラム死タンパク質１またはプログラム細胞死タンパク質１とも呼ばれる。「ＰＤ−１」には、全長の未プロセシングＰＤ−１ポリペプチド、及び細胞内でのプロセシングから生じるＰＤ−１ポリペプチドの形態を包含する。本明細書中で使用する場合、用語「ヒトＰＤ−１」とは、配列番号４３９のアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す：
ＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲ  ＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡ  ＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡ  ＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳ  ＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭ  ＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡ  ＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧ  ＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬ  ＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶ  ＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴ  ＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰ  ＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡ  ＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥ  ＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰ  ＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶ  ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳ  ＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶ  ＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩ  ＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫ  ＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳ  ＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷ  ＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰ  ＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴ  ＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳ  ＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧ  ＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥ  ＤＧＨＣＳＷＰＬ（配列番号４３９）（シグナル配列を有さない成熟ヒトＰＤ−１）。「ＰＤ−１ポリヌクレオチド」、「ＰＤ−１ヌクレオチド」または「ＰＤ−１核酸」は、ＰＤ−１をコードするポリヌクレオチドを指す。
【００７１】
用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または上記の組み合わせなどの標的を認識し、特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書中で使用する場合、用語「抗体」は、その抗体が所望の生物活性を示す限り、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質、及び他の任意の修飾免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれα、δ、ε、γ、μと呼ばれるその重鎖定常ドメインの同一性に基づいて、免疫グロブリンの５つの主要クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のいずれかであり得る。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なるよく知られたサブユニット構造と三次元配置を有している。抗体は、裸のままとするか、または毒素、放射性同位元素などの他の分子と結合させることができる。
【００７２】
用語「抗体断片」とは、インタクトな抗体の部分を指す。「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」、または「抗原結合領域」とは、抗原に結合するインタクトな抗体の部分を指す。抗原結合断片には、インタクトな抗体の抗原決定領域（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含ませることができる。抗体の抗原結合断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、直鎖状抗体、及び一本鎖抗体が挙げられるが、これらに限定されない。抗体の抗原結合断片は、げっ歯類（マウス、ラット、ハムスターなど）やヒトなどの動物種に由来するものとするか、または人工的に産生することができる。
【００７３】
用語「抗Ｂ７−Ｈ４抗体」、「Ｂ７−Ｈ４抗体」及び「Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体」とは、十分な親和性でＢ７−Ｈ４に結合することができ、その結果、Ｂ７−Ｈ４を標的とする診断薬及び／または治療薬として有用である抗体を指す。無関係な非Ｂ７−Ｈ４タンパク質への抗Ｂ７−Ｈ４抗体の結合の程度は、例えば放射免疫測定法（ＲＩＡ）による測定で、Ｂ７−Ｈ４への抗体の結合の約１０％未満であり得る。
【００７４】
用語「抗ＰＤ−１抗体」、「ＰＤ−１抗体」及び「ＰＤ−１に結合する抗体」とは、十分な親和性でＰＤ−１に結合することができ、その結果、ＰＤ−１を標的とする診断薬及び／または治療薬として有用である抗体を指す。無関係な非ＰＤ−１タンパク質への抗ＰＤ−１抗体の結合の程度は、例えば放射免疫測定法（ＲＩＡ）による測定で、ＰＤ−１への抗体の結合の約１０％未満であり得る。
【００７５】
「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片は、単一の抗原決定基またはエピトープの高度に特異的な認識及び結合に関与する均一な抗体または抗原結合断片集団を指す。これは、一般的に、異なる抗原決定基に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的である。用語「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片には、インタクト及び完全モノクローナル抗体の両方ならびに抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含むその他の修飾免疫グロブリン分子が含まれる。さらに、「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片とは、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、及びトランスジェニック動物を含むがこれらに限定されない多くの方法で作製されるそのような抗体及びその抗原結合断片を指す。
【００７６】
本明細書中で使用する場合、用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、同じ意味で使用し、当技術分野で一般的である。可変領域は、通常、抗体の部分、一般的には軽鎖または重鎖の部分、通常、成熟重鎖のアミノ末端約１１０〜１２０アミノ酸または１１０〜１２５アミノ酸及び成熟軽鎖の約９０〜１１５アミノ酸を指し、これらは抗体間で配列が大幅に異なり、特定の抗原に対する特定の抗体の結合及び特異性に用いられる。配列の可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中しているが、可変ドメイン内のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。特定のメカニズムまたは理論に拘泥することを望むものではないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲが抗体と抗原との相互作用及び特異性を主に担っていると考えられている。特定の実施形態では、可変領域はヒト可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲ及びヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、可変領域は霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲ及び霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
【００７７】
用語「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」は、同じ意味で用いられ、抗体の軽鎖可変領域を指す。
【００７８】
用語「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」は、同じ意味で用いられ、抗体の重鎖可変領域を指す。
【００７９】
用語「Ｋａｂａｔナンバリング」及び同様の用語は、当技術分野で認知されており、抗体またはその抗原結合断片の重鎖及び軽鎖可変領域内のアミノ酸残基の番号付けシステムを指す。特定の態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って決定することができる（例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ＆  Ｗｕ  ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １９０：３８２−３９１及びＫａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２参照）。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、通常、アミノ酸３１〜３５位（場合により３５位に続いて１つまたは２つの追加のアミノ酸を含み得る（Ｋａｂａｔナンバリングスキームでは３５Ａ及び３５Ｂと呼ばれる））（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０〜６５位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸９５〜１０２位（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、通常、アミノ酸２４〜３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０〜５６位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸８９〜９７位（ＣＤＲ３）に存在する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＣＤＲを、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って決定している。
【００８０】
代わりに、Ｃｈｏｔｈｉａは、構造ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔナンバリング規則を使用して番号付けするＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２〜Ｈ３４で様々に異なる（これは、ＫａｂａｔナンバリングスキームがＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を配置するためであり；３５Ａと３５Ｂのいずれも存在しない場合、ループは３２で終了し；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し；３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループ間の折衷を表しており、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用される。
【表Ａ】
2021500853.tif 000003
【００８１】
本明細書中で使用する場合、用語「定常領域」または「定常ドメイン」は、同じ意味で用いられ、当技術分野で周知である。定常領域は、抗体部分、例えば、軽鎖及び／または重鎖のカルボキシル末端部分であり、この領域は、抗原への抗体の結合には直接関与しないが、様々なエフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体との相互作用を示すことができる。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般的に、免疫グロブリン可変ドメインに比べて、より保存されたアミノ酸配列を有する。特定の態様では、抗体または抗原結合断片は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に十分な定常領域またはその部分を含む。
【００８２】
本明細書中で使用する場合、抗体に関して用いる場合の用語「重鎖」は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の別個の型、例えば、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭクラス（ＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む）の抗体を生じる、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指し得る。重鎖アミノ酸配列は、当技術分野で周知である。特定の実施形態では、重鎖はヒト重鎖である。
【００８３】
本明細書中で使用する場合、抗体に関して用いる場合の用語「軽鎖」は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の別個の型、例えばカッパ（κ）またはラムダ（λ）を指し得る。軽鎖アミノ酸配列は、当技術分野で周知である。特定の実施形態では、軽鎖はヒト軽鎖である。
【００８４】
用語「キメラ」抗体またはその抗原結合断片は、アミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体またはその抗原結合断片を指す。通常、軽鎖と重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性、及び能力を備えた哺乳類の一種（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体またはその抗原結合断片の可変領域に対応し、一方、定常領域は、別種（通常はヒト）に由来する抗体またはその抗原結合断片の配列と相同であり、その種における免疫応答の誘発が回避される。
【００８５】
用語「ヒト化」抗体またはその抗原結合断片とは、最小非ヒト（例えば、マウス）配列を含む特定の免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはその断片である非ヒト（例えば、マウス）抗体または抗原結合断片の形態を指す。通常、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基を非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲ由来の残基で置き換えた（「ＣＤＲグラフト」）、望ましい特異性、親和性、及び能力を有するヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６（１９８８））。いくつかの場合では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基を、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種由来の抗体または断片の対応する残基で置き換える。ヒト化抗体またはその抗原結合断片を、Ｆｖフレームワーク領域内及び／または置換した非ヒト残基内の追加の残基の置換によりさらに改変し、抗体またはその抗原結合断片の特異性、親和性、及び／または機能を精密化及び最適化することができる。一般的に、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、非ヒト免疫グロブリンに対応するすべてまたは実質的にすべてのＣＤＲ領域を含む、実質的に少なくとも１つ、通常は２つまたは３つすべての可変ドメインを含み、一方、すべてまたは実質的にすべてのＦＲ領域は、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である。ヒト化抗体またはその抗原結合断片にはまた、免疫グロブリン、通常はヒト免疫グロブリンの定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも部分を含ませることができる。ヒト化抗体を生成するために使用する方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９１（３）：９６９−９７３（１９９４）、及びＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．９（１０）：８９５−９０４（１９９６）に記載されている。いくつかの実施形態では、「ヒト化抗体」は、再表面形成された抗体である。
【００８６】
用語「ヒト」抗体またはその抗原結合断片とは、ヒト免疫グロブリン遺伝子座に由来するアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合断片を意味し、そのような抗体または抗原結合断片は、当技術分野で公知の任意の技術を使用して作製される。ヒト抗体またはその抗原結合断片のこの定義には、インタクトまたは全長の抗体及びその断片が含まれる。
【００８７】
「アフコシル化」抗体もしくはその抗原結合断片または「フコース欠損」抗体もしくはその抗原結合断片とは、その定常領域グリコシル化にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプ抗体またはその抗原結合断片を指す。ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３のグリコシル化は、Ａｓｎ２９７において、最大２つのＧａｌ残基で終結するコアフコシル化二分岐複合オリゴ糖グリコシル化として生じる。いくつかの実施形態では、アフコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７においてフコースを欠損している。これらの構造は、末端Ｇａｌ残基の量に応じて、Ｇ０、Ｇ１（１、６または１、３）、またはＧ２グリカン残基として言及される。例えば、Ｒａｊｕ，Ｔ．Ｓ．，ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ  Ｉｎｔ．１：４４−５３（２００３）参照。抗体ＦｃのＣＨＯ型グリコシル化は、例えば、Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｆ．ＦＬ，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｊ．１４：２０１−２０７（１９９７）に記載されている。
【００８８】
フコースを測定する方法には、当技術分野で公知の任意の方法が含まれる。本明細書の目的のために、フコースを、その全体を参照により本明細書に援用するＷＯ２０１５／０１７６００の実施例１に記載されている方法によって検出する。簡潔に述べると、抗体からグリカンを放出し（例えば、酵素放出により）、アントラニル酸（２−ＡＡ）でグリカンを標識し、標識グリカンを精製することにより、グリカン分析を実施する。蛍光検出を備えた順相ＨＰＬＣを用いてグリカンを分離し、抗体中の各グリカンの相対量を測定する。質量分析により、グリカンがフコースを欠いているかまたは含んでいると明確に識別してもよい。いくつかの実施形態では、フコースは、複数のアフコシル化抗体またはその抗原結合断片を含む組成物では検出不能である。いくつかの実施形態では、アフコシル化抗体またはその抗原結合断片は、本明細書の実施例１２で提供するアッセイによって測定され得る増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施形態では、アフコシル化抗体またはその抗原結合断片は、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性が向上している。いくつかの実施形態では、アフコシル化抗体またはその抗原結合断片は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する親和性が向上している。いくつかの実施形態では、アフコシル化抗体またはその抗原結合断片は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する親和性が向上している。ＦｃγＲＩＩＩＡまたはその対立遺伝子に対する親和性は、本明細書の実施例１０で提供するアッセイにより測定してもよい。
【００８９】
「結合親和性」とは、一般的に、分子の単一結合部位（例えば、抗体またはその抗原結合断片）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。特に明記しない限り、本明細書中で使用する場合、「結合親和性」とは、結合ペア（例えば、抗体またはその抗原結合断片と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、通常、解離定数（ＫＤ）で表すことができる。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）、及び平衡会合定数（ＫＡ）を含むがこれらに限定されない、当技術分野で公知の多くの方法で測定及び／または表現することができる。ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算され、一方、ＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば、抗原に対する抗体またはその抗原結合断片の会合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば、抗原からの抗体またはその抗原結合断片の解離を指す。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡなどの当業者に公知の技術によって決定することができる。
【００９０】
本明細書中で使用する場合、「エピトープ」は、当技術分野における用語であり、抗体またはその抗原結合断片が特異的に結合することができる抗原の局在領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの連続アミノ酸（線形または隣接エピトープ）であり得るか、またはエピトープは、例えば、ポリペプチドの２つ以上の非隣接領域（立体配座、非線形、不連続、または非連続エピトープ）が一緒になったものであり得る。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学試験、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と組み合わせた水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイベースのオリゴペプチドスキャンアッセイ、及び／または変異マッピング（例えば、部位特異的変異マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学の場合、結晶化は、当技術分野で公知の方法のいずれかを使用して達成してもよい（例えば、Ｇｉｅｇｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５０（Ｐｔ  ４）：３３９−３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９９０）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １８９：１−２３；Ｃｈａｙｅｎ  ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：１２６９−１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９７６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５１：６３００−６３０３）。抗体／その抗原結合断片：抗原結晶は、周知のＸ線回折技術を使用して試験することができ、Ｘ−ＰＬＯＲなどのコンピュータソフトウェアを使用して精密化することができる（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．により配布；例えば、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ  １１４  ＆  １１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．，；Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ４９（Ｐｔ  １）：３７−６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５６（Ｐｔ  １０）：１３１６−１３２３参照）。突然変異誘発マッピング試験は、当業者に公知の任意の方法を使用して達成することができる。アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む突然変異誘発技術の説明については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７０：１３８８−１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＢＣ  ＆  Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５参照。
【００９１】
参照Ｂ７−Ｈ４抗体と「同じエピトープに結合する」Ｂ７−Ｈ４抗体とは、参照Ｂ７−Ｈ４抗体と同じＢ７−Ｈ４アミノ酸残基に結合する抗体を指す。参照Ｂ７−４抗体と同じエピトープに結合するＢ７−４抗体の能力は、水素／重水素交換アッセイによって測定される（Ｃｏａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｍｍｕｎ．Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２００９；２３：６３９−６４７参照）。
【００９２】
本明細書中で使用する場合、用語「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」、及び「特異的に認識する」とは、抗体またはその抗原結合断片の文脈における類似の用語である。これらの用語は、抗体またはその抗原結合断片がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合し、結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間にある程度の相補性を伴うことを示す。したがって、ヒトＢ７−Ｈ４（配列番号１）に「特異的に結合する」抗体は、他の種由来のＢ７−Ｈ４（例えば、カニクイザル、マウス、及び／またはラットＢ７−Ｈ４）及び／または他のヒト対立遺伝子から生成されるＢ７−Ｈ４タンパク質にも結合し得るが、無関係の非Ｂ７−Ｈ４タンパク質（例えば、ＰＤ−Ｌ１などの他のＢ７タンパク質ファミリーメンバー）への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）での測定によるＢ７−Ｈ４への抗体の結合の約１０％未満である。
【００９３】
特定の実施形態では、本明細書において、ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットＢ７−Ｈ４に結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００９４】
抗体は、それがエピトープへの参照抗体の結合をある程度遮断する程度までそのエピトープまたは重複エピトープに優先的に結合する場合、所与のエピトープへの参照抗体の結合を「競合的に阻害する」と言われる。競合的阻害は、例えば競合ＥＬＩＳＡアッセイなどの当技術分野で公知の任意の方法によって測定してもよい。抗体は、参照抗体の所与のエピトープへの結合を少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害すると言われ得る。
【００９５】
「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、自然界では見出されない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞または組成物には、それらがもはや自然に見出される形態にならない程度まで精製されたものが含まれる。いくつかの実施形態では、単離される抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は実質的に純粋である。本明細書中で使用する場合、「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち、汚染物質を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％純粋な物質を指す。
【００９６】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、本明細書中では同じ意味で用いられ、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは直鎖または分岐鎖とすることができ、修飾アミノ酸を含み得、そして非アミノ酸を介在させることができる。この用語には、自然にまたは介入；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分との結合などのその他の操作または修飾によって修飾されたアミノ酸ポリマーも含まれる。また、例えば、アミノ酸の１つ以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）を含むポリペプチド、及び当技術分野で公知の他の修飾も定義に含まれる。本発明のポリペプチドは抗体に基づいているため、特定の実施形態では、ポリペプチドは一本鎖または関連鎖として生じ得ることが理解される。
【００９７】
「同一性の割合」とは、２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の同一性の程度を指す。同一性の割合は、２つの配列を並べ、ギャップを導入して配列間の同一性を最大化することにより決定する。アライメントは、当技術分野で公知のプログラムを使用して生成することができる。本明細書の目的のために、ヌクレオチド配列のアライメントはデフォルトパラメーターで設定されたｂｌａｓｔｎプログラムで実行することができ、アミノ酸配列のアライメントはデフォルトパラメーターで設定されたｂｌａｓｔｐプログラムで実行することができる（ワールドワイドウェブｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）参照）。
【００９８】
本明細書中で使用する場合、用語「宿主細胞」とは、任意のタイプの細胞、例えば、初代細胞、培養中の細胞、または細胞株由来の任意の細胞とすることができる。特定の実施形態では、用語「宿主細胞」とは、核酸分子を形質移入した細胞及びそのような細胞の子孫または潜在的な子孫を指す。そのような細胞の子孫は、例えば、後続世代で生じ得る変異もしくは環境の影響、または核酸分子の宿主細胞ゲノムへの組込みにより、核酸分子を形質移入した親細胞とは同一ではない場合がある。
【００９９】
用語「医薬製剤」とは、有効成分の生物学的活性を有効にするような形態であり、製剤を投与するであろう被験体にとって許容不可能な毒性を有する追加の成分を含まない製剤を指す。製剤は無菌であり得る。
【０１００】
本明細書中で使用する場合、用語「投与する」、「投与すること」、「投与」などは、所望の生物学的作用部位への薬物、例えば抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の送達を可能にするために使用してもよい方法を指す（例えば、静脈内投与）。本明細書に記載の薬剤及び方法とともに使用することができる投与技術は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａに見出される。
【０１０１】
１つ以上のさらなる治療薬との「併用」投与には、同時（同時的）投与または任意の順序での連続投与が含まれる。
【０１０２】
併用療法は、「相乗効果」、すなわち、活性薬剤を一緒に使用する場合の効果が、活性薬剤を別々に使用することから生じる効果の合計よりも大きいことを提供することができる。相乗効果は、活性薬剤を：（１）組み合わせて単位用量製剤で共製剤化し、同時に投与もしくは送達するか；（２）別々の製剤として、逐次、交互、もしくは並行して；または（３）いくつかの他のレジメンにより送達する場合に得られる。交互療法で送達する場合、例えば別々の注射器での異なる注射により、活性薬剤を連続的に投与または送達すると、相乗効果が達成され得る。「相乗的組み合わせ」は、組み合わせの活性薬剤の個々の効果の合計よりも大きい効果を生成する。
【０１０３】
併用療法は、「相加的」効果、すなわち、活性薬剤を一緒に使用する場合の効果が、活性薬剤を別々に使用することから生じる効果の合計に等しいことを提供することができる。
【０１０４】
本明細書中で使用する場合、用語「被験体」及び「患者」は同じ意味で用いられる。被験体は動物とすることができる。いくつかの実施形態では、被験体は、非ヒト動物などの哺乳類である（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サルまたは他の霊長類など）。いくつかの実施形態では、被験体はカニクイザルである。いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。
【０１０５】
用語「治療有効量」とは、被験体の疾患または障害を治療するのに有効なある量の薬物、例えば、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を指す。がんの場合、治療有効量の薬物は、がん細胞の数を減少させ；腫瘍のサイズまたは負担を縮小させ；末梢器官へのがん細胞の浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅延させ、特定の実施形態では停止させ）；腫瘍の転移を阻害し（すなわち、ある程度遅延させ、特定の実施形態では停止させ）；腫瘍の成長をある程度抑制し；がんに関連する１つ以上の症状をある程度緩和し；及び／または無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、もしくは全生存期間（ＯＳ）の増加、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、またはいくつかの場合では、安定疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、腫瘍増殖停止時間（ＴＴＰ）の減少、またはそれらの任意の組み合わせなどの好ましい応答をもたらすことができる。薬物が既存のがん細胞の増殖を予防し、及び／または殺傷することができる限り、その薬物は、細胞増殖抑制性及び／または細胞傷害性であり得る。
【０１０６】
用語「治療すること」または「治療」または「治療する」または「軽減すること」または「軽減する」などは、診断された病理学的状態または障害の治癒、減速、症状の軽減、及び／または進行の停止を行う治療手段を指す。したがって、治療を必要とする人々には、障害を有するとすでに診断されているか、またはその疑いがある人々が含まれる。特定の実施形態では、患者が：がん細胞の数の減少または完全な消失；腫瘍サイズの縮小；例えば、軟部組織及び骨へのがんの拡散を含む、末梢器官へのがん細胞浸潤の阻害または停止；腫瘍転移の阻害または停止；腫瘍成長の阻害または停止；特定のがんに関連する１つ以上の症状の緩和；罹患率及び死亡率の減少；生活の質の向上；腫瘍の腫瘍形成性、腫瘍形成頻度、または腫瘍形成能力の低下；腫瘍内のがん幹細胞の数または頻度の減少；腫瘍形成性細胞の非腫瘍形成性状態への分化；無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、もしくは全生存期間（ＯＳ）の増加、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、安定疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、腫瘍増殖停止時間（ＴＴＰ）の減少、またはそれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上を示す場合、被験体は本発明の方法に従って首尾よくがんを「治療される」。
【０１０７】
用語「がん」及び「がんの」とは、その細胞集団が無秩序な細胞増殖を特徴とする、哺乳類の生理学的状態を指すかまたは表す。がんの例として、婦人科癌（例えば、乳癌（三種陰性乳癌、乳管癌を含む）、卵巣癌、及び子宮内膜癌）、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎癌（例えば、腎細胞癌）、膀胱癌（例えば、尿路上皮癌）が挙げられるが、これらに限定されない。非小細胞肺癌は、例えば、腺癌であり得る。がんのさらなる例として、例えば、頭頸部癌、小細胞肺癌、胃癌、黒色腫、胆管細胞癌、神経膠芽腫または多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）、及びメルケル細胞癌が挙げられる。一実施形態では、卵巣癌は漿液性腺癌である。一実施形態では、乳癌は乳管癌である。がんは、「Ｂ７−Ｈ４を発現するがん」または「Ｂ７−Ｈ４発現がん」であり得る。そのような用語は、Ｂ７−Ｈ４を発現する細胞を含むがんを指す。がんは原発性腫瘍であるか、または進行性がんもしくは転移性がんであってもよい。
【０１０８】
「難治性」がんは、化学療法などの抗腫瘍治療をがん患者に投与しても進行するがんである。
【０１０９】
「再発性」がんは、初期治療に対する応答後、初期部位または遠隔部位のいずれかで再成長したがんである。
【０１１０】
「再発」患者は、寛解後にがんの徴候または症状を有する患者である。場合により、患者は、アジュバント療法またはネオアジュバント療法後に再発している。
【０１１１】
「Ｔ細胞チェックポイント遮断活性」とは、Ｔ細胞チェックポイント活性または応答の遮断または阻害を指す。Ｔ細胞チェックポイント遮断活性は、ＩＦＮγ産生の変化に基づいた人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）アッセイで測定することができる。初代ヒトＴ細胞は、Ｔ細胞濃縮キット（ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＴ細胞濃縮キットまたは類似のキット）を使用してＰＢＭＣから濃縮することができる。濃縮したＴ細胞をビーズ（例えば、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズ）存在下でインキュベートする。一定時間後、ビーズを磁気的に除去し、Ｔ細胞を洗浄し、インキュベートする。次いで、Ｔ細胞を洗浄し、用量漸増のＢ７−Ｈ４抗体存在下で人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）とともにインキュベートする。ａＡＰＣを、Ｔ細胞共培養に加える前にマイトマイシンＣで処理し、次いで徹底的に洗浄することができる。Ｔ細胞、ａＡＰＣ、及びＢ７−Ｈ４抗体の共培養後、プレートを遠心分離し、上清を採取してＥＬＩＳＡによりＩＦＮγ産生を評価することができる。ＩＦＮγ産生を抗体濃度に対してプロットすることができ、非線形回帰曲線近似法を用いてＥＣ５０効力を計算することができる。結果は、ｎＭでのＥＣ５０±標準偏差として測定することができる。Ｂ７−Ｈ４抗体によるＴ細胞チェックポイント遮断活性は、ＩＦＮγ産生の増加によって示すことができる。「Ｔ細胞チェックポイント遮断活性」は、Ｂ７−Ｈ４を内在的に発現する細胞を使用したアッセイでも測定することができる。Ｔ細胞分離キット（例えば、Ｈｕｍａｎ  Ｐａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ）を使用して、初代ヒトＴ細胞をＨＬＡ−Ａ２＋ドナーＰＢＭＣから濃縮することができる。濃縮した汎Ｔ細胞をビーズ（例えば、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ）、ＩＬ−２及びＩＬ−７で最初に４８時間活性化することにより、ＭＡＲＴ−Ｉ  ＴＣＲ発現Ｔ細胞を生成することができる。次いで、活性化されたＴ細胞に、ＩＬ−２、ＩＬ−７及びポリブレンの存在下で、ＭＡＲＴ−Ｉ  ＴＣＲレンチウイルス粒子を形質導入することができる。形質導入後、ＩＬ−２及びＩＬ−７の存在下でＭＡＲＴ−Ｉ  ＴＣＲ＋汎Ｔ細胞を一定期間増殖させることができる。ＨＬＡ−Ａ２を発現する標的細胞株を生成するために、内在性Ｂ７−Ｈ４を発現するがん細胞株に、一定期間（例えば、４８時間）ＨＬＡ−Ａ２レンチウイルス粒子を形質導入することができる。さらに、ＨＬＡ−Ａ２＋細胞株からＢ７−Ｈ４をノックアウトすることができる。次いで、ＭＡＲＴ−Ｉ  ＴＣＲ＋汎Ｔ細胞を、１：１のＥ：Ｔ比の様々な標的細胞株、ＭＡＲＴ−Ｉペプチド、及びＢ７−Ｈ４抗体またはヒトアイソタイプ対照の存在下で共培養することができる。共インキュベーション後、プレートを遠心分離し、上清を採取してＩＬ−２産生を評価することができる。ＩＬ−２産生は、標準の免疫測定キット（ＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイまたは同様のアッセイなど）で測定することができる。
【０１１２】
本開示及び特許請求の範囲において使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に指示しない限り、複数形を含む。
【０１１３】
本明細書中で実施形態が「含む」という文言で説明される場合は常に、用語「からなる」及び／または「から本質的になる」で説明される他の類似の実施形態も提供される。本開示において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」などは、米国特許法においてそれらに帰属する意味を有することができ、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味することができ；「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」または「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」は、同様に米国特許法に定められた意味を有し、この用語は非制限的であり、記載するものよりも多くのものが存在することによって記載するものの基本的または新規な特徴が変化しない限り、記載するものよりも多くのものが存在することを許容するが、ただし、先行技術の実施形態は除外される。
【０１１４】
本明細書中で使用する場合、具体的に述べられているか、または文脈から明らかでない限り、用語「または」は包括的であると理解される。本明細書中の「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用する用語「及び／または」とは、「Ａ及びＢ」の両方、「ＡまたはＢ」、「Ａ」及び「Ｂ」を含むものとする。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される用語「及び／または」とは、以下の各実施形態を包含するものとする：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。
【０１１５】
本明細書中で使用する場合、用語「約」及び「およそ」とは、記載する値または範囲が意図する意味の範囲内で、数値または数値範囲を修飾するために使用する場合、値または範囲から５％〜１０％の上方への偏差及び５％〜１０％の下方への偏差が残っていることを示す。
【０１１６】
本明細書中で提供する任意の組成物または方法は、本明細書中で提供する他の組成物及び方法のいずれかの１つ以上と組み合わせることができる。
【０１１７】
１．２  抗体
特定の態様では、本明細書において、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する抗体（例えば、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体などのモノクローナル抗体）及びその抗原結合断片を提供する。ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットＢ７−Ｈ４のアミノ酸配列は、当技術分野で公知であり、本明細書においてもそれぞれ配列番号１〜４で表されるように提供される。
ヒトＢ７−Ｈ４：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＬＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＶＮＶＤＹＮＡＳＳＥＴＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＶＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＥＳＥＩＫＲＲＳＨＬＱＬＬＮＳＫＡＳＬＣＶＳＳＦＦＡＩＳＷＡＬＬＰＬＳＰＹＬＭＬＫ（配列番号１）
カニクイザルＢ７−Ｈ４：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＦＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＩＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＶＮＶＤＹＮＡＳＳＥＴＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＶＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＥＳＥＩＫＲＲＳＨＬＱＬＬＮＳＫＡＳＬＣＶＳＳＦＬＡＩＳＷＡＬＬＰＬＡＰＹＬＭＬＫ（配列番号２）
マウスＢ７−Ｈ４：
ＭＡＳＬＧＱＩＩＦＷＳＩＩＮＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＫＨＦＩＴＶＴＴＦＴＳＡＧＮＩＧＥＤＧＴＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＮＧＩＶＩＱＷＬＫＥＧＩＫＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＤＬＳＱＱＨＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＶＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＴＣＹＩＲＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＩＮＶＤＹＮＡＳＳＥＳＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＡＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＤＳＥＶＫＲＲＳＱＬＱＬＬＮＳＧＰＳＰＣＶＦＳＳＡＦＶＡＧＷＡＬＬＳＬＳＣＣＬＭＬＲ（配列番号３）
ラットＢ７−Ｈ４：
ＭＡＳＬＧＱＩＩＦＷＳＩＩＮＶＩＩＩＬＡＧＡＩＶＬＩＩＧＦＧＩＳＧＫＨＦＩＴＶＴＴＦＴＳＡＧＮＩＧＥＤＧＴＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＮＧＩＶＩＱＷＬＫＥＧＩＫＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＤＬＳＱＱＨＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＶＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＴＣＹＩＨＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＩＮＶＤＹＮＡＳＳＥＳＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＡＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＤＳＥＶＫＲＲＳＱＬＥＬＬＮＳＧＰＳＰＣＶＳＳＶＳＡＡＧＷＡＬＬＳＬＳＣＣＬＭＬＲ（配列番号４）
【０１１８】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト及びカニクイザルＢ７−Ｈ４に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト、マウス、及びラットＢ７−Ｈ４に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットＢ７−Ｈ４に結合する。
【０１１９】
Ｂ７−Ｈ４は、ＩｇＣ外部ドメイン（配列番号１のアミノ酸１５３〜２４１）及びＩｇＶドメイン（配列番号１のアミノ酸３５〜１４６）を含む。
【０１２０】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４のＩｇＶドメインに結合する。したがって、本明細書では、配列番号１のアミノ酸３５〜１４６からなるポリペプチドに結合する抗体及びその抗原結合断片を提供する。
【０１２１】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含む。
【表１−１】
2021500853.tif 000004
【表１−２】
2021500853.tif 000005
【表２−１】
2021500853.tif 000006
【表２−２】
2021500853.tif 000007
【０１２２】
２表２のＶＬ  ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って決定する。
【０１２３】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表３に記載の抗体のＶＨを含む。
【表３−１】
2021500853.tif 000008
【表３−２】
2021500853.tif 000009
【表３−３】
2021500853.tif 000010
【０１２４】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表４に記載の抗体のＶＬを含む。
【表４−１】
2021500853.tif 000011
【表４−２】
2021500853.tif 000012
【０１２５】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表３及び４に記載の抗体のＶＨ及びＶＬ（すなわち、表３に記載の抗体のＶＨと表４に記載の同じ抗体のＶＬ）を含む。
【０１２６】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表５に記載の抗体のＶＨフレームワーク領域を含む。
【表５−１】
2021500853.tif 000013
【表５−２】
2021500853.tif 000014
【表５−３】
2021500853.tif 000015
【０１２７】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表６に記載の抗体のＶＬフレームワーク領域を含む。
【表６−１】
2021500853.tif 000016
【表６−２】
2021500853.tif 000017
【表６−３】
2021500853.tif 000018
【０１２８】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表５及び６に記載の抗体の４つのＶＨフレームワーク領域及び４つのＶＬフレームワーク領域（すなわち、表５に記載の抗体の４つのＶＨフレームワーク領域と表６に記載の同じ抗体の４つのＶＬフレームワーク領域）を含む。
【０１２９】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表７に記載の抗体の重鎖配列を含む。
【表７−１】
2021500853.tif 000019
【表７−２】
2021500853.tif 000020
【表７−３】
2021500853.tif 000021
【表７−４】
2021500853.tif 000022
【表７−５】
2021500853.tif 000023
【０１３０】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表８に記載の抗体の軽鎖配列を含む。
【表８−１】
2021500853.tif 000024
【表８−２】
2021500853.tif 000025
【表８−３】
2021500853.tif 000026
【０１３１】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表７及び８に記載の抗体の重鎖配列及び軽鎖配列（すなわち、表７に記載の抗体の重鎖配列と表８に記載の同じ抗体の軽鎖配列）を含む。
【０１３２】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８０％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８０％同一の配列を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８５％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８５％同一の配列を有するＶＬを含む。
【０１３３】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９０％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９０％同一の配列を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９５％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９５％同一の配列を有するＶＬを含む。
【０１３４】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９６％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９６％同一の配列を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９７％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９７％同一の配列を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９８％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９８％同一の配列を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９９％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９９％同一の配列を有するＶＬを含む。
【０１３５】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８０％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８０％同一の配列を有するＶＬを含み、ヒト、カニクイザル、ラット、及び／またはマウスＢ７−Ｈ４に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８５％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８５％同一の配列を有するＶＬを含み、ヒト、カニクイザル、ラット、及び／またはマウスＢ７−Ｈ４に結合する。
【０１３６】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９０％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９０％同一の配列を有するＶＬを含み、ヒト、カニクイザル、ラット、及び／またはマウスＢ７−Ｈ４に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９５％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９５％同一の配列を有するＶＬを含み、ヒト、カニクイザル、ラット、及び／またはマウスＢ７−Ｈ４に結合する。
【０１３７】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９６％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９６％同一の配列を有するＶＬを含み、ヒト、カニクイザル、ラット、及び／またはマウスＢ７−Ｈ４に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９７％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９７％同一の配列を有するＶＬを含み、ヒト、カニクイザル、ラット、及び／またはマウスＢ７−Ｈ４に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９８％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９８％同一の配列を有するＶＬを含み、ヒト、カニクイザル、ラット、及び／またはマウスＢ７−Ｈ４に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９９％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９９％同一の配列を有するＶＬを含み、ヒト、カニクイザル、ラット、及び／またはマウスＢ７−Ｈ４に結合する。
【０１３８】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８０％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８０％同一の配列を有するＶＬを含み、Ｔ細胞増殖を増加させ、ＩＦＮγ産生を増加させ、及びＢ７−Ｈ４発現細胞に対するＡＤＣＣ活性を媒介する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８５％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８５％同一の配列を有するＶＬを含み、Ｔ細胞増殖を増加させ、ＩＦＮγ産生を増加させ、及びＢ７−Ｈ４発現細胞に対するＡＤＣＣ活性を媒介する。
【０１３９】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９０％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９０％同一の配列を有するＶＬを含み、Ｔ細胞増殖を増加させ、ＩＦＮγ産生を増加させ、及びＢ７−Ｈ４発現細胞に対するＡＤＣＣ活性を媒介する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９５％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９５％同一の配列を有するＶＬを含み、Ｔ細胞増殖を増加させ、ＩＦＮγ産生を増加させ、及びＢ７−Ｈ４発現細胞に対するＡＤＣＣ活性を媒介する。
【０１４０】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９６％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９６％同一の配列を有するＶＬを含み、Ｔ細胞増殖を増加させ、ＩＦＮγ産生を増加させ、及びＢ７−Ｈ４発現細胞に対するＡＤＣＣ活性を媒介する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９７％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９７％同一の配列を有するＶＬを含み、Ｔ細胞増殖を増加させ、ＩＦＮγ産生を増加させ、及びＢ７−Ｈ４発現細胞に対するＡＤＣＣ活性を媒介する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９８％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９８％同一の配列を有するＶＬを含み、Ｔ細胞増殖を増加させ、ＩＦＮγ産生を増加させ、及びＢ７−Ｈ４発現細胞に対するＡＤＣＣ活性を媒介する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ  ＣＤＲと表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、また、表３の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９９％同一の配列を有するＶＨ、及び表４の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９９％同一の配列を有するＶＬを含み、Ｔ細胞増殖を増加させ、ＩＦＮγ産生を増加させ、及びＢ７−Ｈ４発現細胞に対するＡＤＣＣ活性を媒介する。
【０１４１】
特定の態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、そのＶＬドメイン単独、もしくはそのＶＨドメイン単独により、またはその３つのＶＬ  ＣＤＲ単独、もしくはその３つのＶＨ  ＣＤＲ単独により記載され得る。例えば、その全体を参照により本明細書に援用するＲａｄｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ  ９５：８９１０−８９１５を参照されたく、この文献には、それぞれ、ヒト軽鎖または重鎖ライブラリから得られる相補的軽鎖または重鎖を同定し、元の抗体の親和性と同程度またはそれ以上の親和性を有するヒト化抗体変異体をもたらすことによるマウス抗αｖβ３抗体のヒト化が記載されている。その全体を参照により本明細書に援用するＣｌａｃｋｓｏｎ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８も参照されたく、この文献には、特定のＶＬドメイン（またはＶＨドメイン）を使用して特定の抗原に結合する抗体を産生し、相補的可変ドメインに対してライブラリをスクリーニングする方法が記載されている。このスクリーニングにより、特定のＶＨドメインに対する１４の新規パートナーと特定のＶＬドメインに対する１３の新規パートナーが生成されたが、これらはＥＬＩＳＡ測定によると強力なバインダーであった。その全体を参照により本明細書に援用するＫｉｍ  ＳＪ  ＆  Ｈｏｎｇ  ＨＪ，（２００７）Ｊ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ４５：５７２−５７７も参照されたく、この文献には、特定のＶＨドメインを使用して特定の抗原に結合する抗体を産生し、相補的ＶＬドメインに対するライブラリ（例えば、ヒトＶＬライブラリ）をスクリーニングする方法が記載されており；選択されたＶＬドメインは、次に、追加の相補的（例えば、ヒト）ＶＨドメインの選択をガイドするために使用することができる。
【０１４２】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲを、免疫グロブリン構造ループの位置を指すＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従って決定することができる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ  ＆  Ｌｅｓｋ  ＡＭ，（１９８７），Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１−９１７；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２７３：９２７−９４８；Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２７：７９９−８１７；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５（１）：１７５−８２；及び米国特許第７，７０９，２２６号参照）。通常、Ｋａｂａｔナンバリング規則を用いる場合、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループは重鎖アミノ酸２６〜３２、３３、または３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２ループは重鎖アミノ酸５２〜５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３ループは重鎖アミノ酸９５〜１０２に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ１ループは軽鎖アミノ酸２４〜３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ２ループは軽鎖アミノ酸５０〜５６に存在し、及びＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ３ループは軽鎖のアミノ酸８９〜９７に存在する。Ｋａｂａｔナンバリング規則を用いて付番したＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２〜Ｈ３４の間で様々に異なる（これはＫａｂａｔナンバリングスキームではＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入が配置されるためであり；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終了し；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し；３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。
【０１４３】
特定の態様では、本明細書において、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、表３及び４に記載の抗体のＣｈｏｔｈｉａ  ＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片を提供する。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、１つ以上のＣＤＲを含み、その場合、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔ  ＣＤＲは同じアミノ酸配列を有する。特定の実施形態では、本明細書において、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲの組み合わせを含む抗体及びその抗原結合断片を提供する。
【０１４４】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ  ７：１３２−１３６及びＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２７：２０９−２１２に記載されているＩＭＧＴナンバリングシステムに従って決定することができる。ＩＭＧＴナンバリングスキームによれば、ＶＨ−ＣＤＲ１は２６〜３５位、ＶＨ−ＣＤＲ２は５１〜５７位、ＶＨ−ＣＤＲ３は９３〜１０２位、ＶＬ−ＣＤＲ１は２７〜３２位、ＶＬ−ＣＤＲ２は５０〜５２位、及びＶＬ−ＣＤＲ３は８９〜９７位に存在する。特定の実施形態では、例えば、上記のＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ（１９９９）及び上記のＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）に記載されているように、本明細書において、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、表３及び４に記載の抗体のＩＭＧＴ  ＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片を提供する。
【０１４５】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ＲＭ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２６２：７３２−７４５に従って決定することができる。例えば、Ｍａｒｔｉｎ  Ａ．“Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ，”ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３１，ｐｐ．４２２−４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ  （２００１）も参照されたい。特定の実施形態では、本明細書において、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ＲＭらの方法により決定された表３及び４に記載の抗体のＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０１４６】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングスキームに従って決定することができ、これは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループの折衷を表すＡｂＭ超可変領域を指し、これはＯｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）で使用される。特定の実施形態では、本明細書において、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、ＡｂＭナンバリングスキームによって決定される表３及び４に記載の抗体のＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０１４７】
特定の態様では、本明細書において、重鎖及び軽鎖を含む抗体を提供する。重鎖に関して、特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）またはミュー（μ）重鎖であり得る。別の特定の実施形態では、記載の抗体の重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）またはミュー（μ）重鎖を含み得る。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は重鎖を含み、その場合、ＶＨドメインのアミノ酸配列は表３に記載のアミノ酸配列を有し、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を有する。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、重鎖を含み、その場合、ＶＨドメインのアミノ酸配列は表３に記載の配列を有し、重鎖の定常領域は、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知のヒト重鎖のアミノ酸を有する。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当技術分野で記載されており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号及び上記のＫａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）を参照されたい。
【０１４８】
軽鎖に関して、特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体の軽鎖はκ軽鎖である。ヒトκ軽鎖の定常領域は、以下のアミノ酸配列を有し得る：
【０１４９】
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４０５）。
【０１５０】
ヒトκ軽鎖の定常領域は、以下のヌクレオチド配列によりコードされ得る：
【０１５１】
ＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ（配列番号４０６）
【０１５２】
別の特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体の軽鎖はλ軽鎖である。さらに別の特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、ヒトκ軽鎖またはヒトλ軽鎖である。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４ポリペプチド（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は軽鎖を含み、その場合、ＶＬドメインのアミノ酸配列は表４に記載の配列を有し、軽鎖の定常領域は、ヒトκ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を有する。別の特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は軽鎖を有し、その場合、ＶＬドメインのアミノ酸配列は表４に記載の配列を有し、軽鎖の定常領域は、ヒトλ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を有する。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は軽鎖を含み、その場合、ＶＬドメインのアミノ酸配列は表４に記載の配列を有し、軽鎖の定常領域は、ヒトκまたはλ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を有する。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当技術分野で記載されており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号及び上記のＫａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）を参照されたい。
【０１５３】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、その場合、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、またはヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を有する。別の特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、その場合、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）の定常領域のアミノ酸を有する。特定の実施形態では、定常領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）の定常領域のアミノ酸を有する。
【０１５４】
ヒトＩｇＧ１重鎖の定常領域は、以下のアミノ酸配列を有し得る：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４０７）。
【０１５５】
ヒトＩｇＧ１重鎖の定常領域は、以下のヌクレオチド配列によりコード化され得る：
ＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡ  （配列番号４０８）
【０１５６】
ヒト定常領域の非限定的な例は、当技術分野で記載されており、例えば、上記のＫａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）を参照されたい。
【０１５７】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片のＦｃ領域（例えば、Ｋａｂａｔナンバリングシステム（例えば、ＫａｂａｔのＥＵインデックス）によるナンバリングで、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）及び／またはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１〜４４７）及び／またはヒンジ領域）に、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）を導入して、抗体またはその抗原結合断片の１つ以上の機能特性、例えば、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、及び／または抗原依存性細胞傷害性を変化させる。
【０１５８】
特定の実施形態では、例えば、米国特許第５，６７７，４２５号に記載されているように、Ｆｃ領域（ＣＨ１ドメイン）のヒンジ領域に、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）を導入し、それによりヒンジ領域のシステイン残基数を変化させる（例えば、増加または減少させる）。例えば、軽鎖及び重鎖の組立てを促進するか、または抗体もしくはその抗原結合断片の安定性を変化させる（例えば、増加または減少させる）ために、ＣＨ１ドメインのヒンジ領域のシステイン残基数を変化させてもよい。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片のＦｃ領域（例えば、Ｋａｂａｔナンバリングシステム（例えば、ＫａｂａｔのＥＵインデックス）によるナンバリングで、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）及び／またはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の３４１〜４４７残基）及び／またはヒンジ領域）に、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）を導入し、エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（例えば、活性化Ｆｃ受容体）に対する抗体またはその抗原結合断片の親和性を増加または減少させる。Ｆｃ受容体に対する親和性を減少または増加させるＦｃ領域内の変異、及びそのような変異をＦｃ受容体またはその断片に導入する技術は、当業者に公知である。Ｆｃ受容体に対する抗体またはその抗原結合断片の親和性を変化させることができるＦｃ受容体の変異の例は、例えば、Ｓｍｉｔｈ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）ＰＮＡＳ  １０９：６１８１−６１８６、米国特許第６，７３７，０５６号、ならびに国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号；第ＷＯ９８／２３２８９号；及び第ＷＯ９７／３４６３１号に記載されており、これらは参照により本明細書に援用される。
【０１６０】
特定の実施形態では、ＩｇＧ定常ドメイン、またはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃまたはヒンジＦｃドメイン断片）に、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（すなわち、置換、挿入または欠失）を導入し、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体またはその抗原結合断片の半減期を変化させる（例えば、減少または増加させる）。ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体またはその抗原結合断片の半減期を変化させる（例えば、減少または増加させる）変異の例については、例えば、国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号；第ＷＯ９８／２３２８９号；及び第ＷＯ９７／３４６３１号、ならびに米国特許第５，８６９，０４６号、第６，１２１，０２２号、第６，２７７，３７５号及び第６，１６５，７４５号参照。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインまたはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃまたはヒンジ−Ｆｃドメイン断片）に、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（すなわち、置換、挿入、または欠失）を導入し、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体またはその抗原結合断片の半減期を減少させる。他の実施形態では、ＩｇＧ定常ドメイン、またはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃまたはヒンジ−Ｆｃドメイン断片）に、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（すなわち、置換、挿入または欠失）を導入し、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体またはその抗原結合断片の半減期を増加させる。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリング（上記のＫａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１））で、第２定常（ＣＨ２）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）及び／または第３定常（ＣＨ３）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１〜４４７）に１つ以上のアミノ酸変異（例えば、置換）を有し得る。特定の実施形態では、ＩｇＧ１の定常領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリングで、２５２位にメチオニン（Ｍ）からチロシン（Ｙ）への置換、２５４位にセリン（Ｓ）からトレオニン（Ｔ）への置換、及び２５６位にスレオニン（Ｔ）からグルタミン酸（Ｅ）への置換を有する。参照により本明細書に援用する米国特許第７，６５８，９２１号参照。「ＹＴＥ変異体」と呼ばれるこのタイプの変異型ＩｇＧは、同じ抗体の野生型バージョンに比べて４倍の半減期を示すことが示されている（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ＷＦ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１：２３５１４−２４参照）。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリングで、２５１〜２５７位、２８５〜２９０位、３０８〜３１４位、３８５〜３８９位及び４２８〜４３６位のアミノ酸残基の１、２、３またはそれ以上のアミノ酸置換を含むＩｇＧ定常ドメインを含む。
【０１６１】
さらなる実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインＦｃ領域に、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸置換を導入して、抗体またはその抗原結合断片のエフェクター機能（複数可）を変化させる。例えば、抗体またはその抗原結合断片が、エフェクターリガンドに対する親和性を変化させるが親抗体の抗原結合能力は保持するように、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリングで、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、及び３２２から選択される１つ以上のアミノ酸を、異なるアミノ酸残基で置き換えることができる。親和性を変化させるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、米国特許第５，６２４，８２１号及び第５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載されている。いくつかの実施形態では、定常領域ドメインの欠失または不活性化（点突然変異または他の手段による）は、循環抗体またはその抗原結合断片のＦｃ受容体結合を低下させ、それにより腫瘍局在化を増加させる。定常ドメインを欠失または不活性化し、それにより腫瘍の局在化を増加させる変異の説明については、例えば、米国特許第５，５８５，０９７号及び第８，５９１，８８６号を参照されたい。特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換をＦｃ領域に導入して、Ｆｃ領域上の潜在的なグリコシル化部位を除去し、Ｆｃ受容体結合を低下させてもよい（例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６：６５９１−６０４参照）。
【０１６２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片が、Ｃ１ｑ結合を変化させ、及び／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を低下または解消するように、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリングで、定常領域のアミノ酸残基３２９、３３１、及び３２２から選択される１つ以上のアミノ酸を、異なるアミノ酸残基で置き換えることができる。このアプローチは、米国特許第６，１９４，５５１号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ）にさらに詳細に記載されている。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインのＮ末端領域のアミノ酸２３１〜２３８位の１つ以上のアミノ酸残基を変化させ、それにより、補体を結合する抗体の能力を変化させる。このアプローチは、国際公開第ＷＯ９４／２９３５１号にさらに記載されている。特定の実施形態では、以下の位置で１つ以上のアミノ酸を変異させる（例えば、アミノ酸置換を導入する）ことにより、Ｆｃ領域を改変して、抗体またはその抗原結合断片が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する能力を高め、及び／またはＦｃγ受容体に対する抗体またはその抗原結合断片の親和性を高める：ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリングで、２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８、または４３９。このアプローチは、国際公開第ＷＯ００／４２０７２号にさらに記載されている。
【０１６３】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリングで、２６７、３２８位、またはその組み合わせにおいて変異（例えば、置換）を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、及びその組み合わせからなる群から選択される変異（例えば、置換）を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異（例えば、置換）を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。特定の実施形態では、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異（例えば、置換）を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、またはＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＢに対して高い結合親和性を有する。
【０１６４】
フコース含量を低下させた抗体は、例えば、ＦｃγＲＩＩＩＡなどのＦｃ受容体に対する親和性が高まることが報告されている。したがって、特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、フコース含量が低いか、またはフコースを欠損している（すなわち、「アフコシル化」されている）。そのような抗体またはその抗原結合断片は、当業者に公知技術を用いて産生することができる。例えば、それらは、フコシル化能力が不全であるかまたは欠損している細胞において発現し得る。特定の例では、α１，６−フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子をノックアウトした細胞株を使用して、フコース含量を低下させた抗体またはその抗原結合断片を産生することができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、フコース含量を低下させた抗体及びその抗原結合断片を産生するために使用することができるシステムの例である。あるいは、フコース含量を低下させるか、またはまったく有さない抗体またはその抗原結合断片は、例えば：（ｉ）フコシル化を防止または低下させる条件下での細胞培養；（ｉｉ）フコースの翻訳後除去（例えば、フコシダーゼ酵素による）；（ｉｉｉ）例えば、非グリコシル化糖タンパク質の組換え発現後の、所望の炭水化物の翻訳後付加；または（ｉｖ）フコシル化されていない抗体またはその抗原結合断片を選択するための糖タンパク質の精製により産生することができる。フコース含量のない、またはフコース含量を低下させた抗体の産生方法については、例えば、Ｌｏｎｇｍｏｒｅ  ＧＤ  ＆  Ｓｃｈａｃｈｔｅｒ  Ｈ（１９８２）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ  Ｒｅｓ  １００：３６５−９２及びＩｍａｉ−Ｎｉｓｈｉｙａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７：８４参照。アフコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体の産生を記載する本明細書の実施例８も参照されたい。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片に比べて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＡＤＣＣ活性が高い。いくつかの実施形態では、アフコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、フコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体による特異的溶解に比べて、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５パーセントポイント高い特異的溶解を引き起こす。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片に比べて、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性が高い。いくつかの実施形態では、アフコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、フコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片に比べて、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも７倍、少なくとも１０倍、少なくとも１２倍、少なくとも１５倍、少なくとも１７倍、または少なくとも２０倍高い親和性でＦｃγＲＩＩＩＡに結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性を、表面プラズモン共鳴を用いて決定する。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩＡは、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）及びＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）から選択される。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩＡはＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）である。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、フコースの存在は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、キャピラリー電気泳動、またはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析を含む方法により判定することができる。
【０１６８】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）２０５０２のＣＤＲ配列（例えば、配列番号４５８〜４６３のアミノ酸配列）、２０５０２のＶＨ及びＶＬ配列（それぞれ配列番号４６４及び４２のアミノ酸配列）、または２０５０２の重鎖及び軽鎖配列（それぞれ配列番号４６９及び４４のアミノ酸配列）を有し、ならびに（ｉｉ）アフコシル化されている。
【０１６９】
特定の実施形態では、組成物は、（ｉ）２０５０２のＣＤＲ配列（例えば、配列番号４５８〜４６３のアミノ酸配列）、２０５０２のＶＨ及びＶＬ配列（それぞれ配列番号４６４及び４２のアミノ酸配列）、または２０５０２の重鎖及び軽鎖配列（それぞれ配列番号４６９及び４４のアミノ酸配列）を有し、ならびに（ｉｉ）アフコシル化された抗体またはその抗原結合断片を含み、その場合、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９５％はアフコシル化されているか、またはフコシル化が組成物中で検出できない。
【０１７０】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）２０５０２．１のＣＤＲ配列（例えば、配列番号３５〜４０のアミノ酸配列）、２０５０２．１のＶＨ及びＶＬ配列（それぞれ配列番号４１及び４２のアミノ酸配列）、または２０５０２．１の重鎖及び軽鎖配列（それぞれ配列番号４３及び４４のアミノ酸配列）を有し、ならびに（ｉｉ）アフコシル化されている。
【０１７１】
特定の実施形態では、組成物は、（ｉ）２０５０２．１のＣＤＲ配列（例えば、配列番号３５〜４０のアミノ酸配列）、２０５０２．１のＶＨ及びＶＬ配列（それぞれ配列番号４１及び４２のアミノ酸配列）、または２０５０２．１の重鎖及び軽鎖配列（それぞれ配列番号４３及び４４のアミノ酸配列）を有し、ならびに（ｉｉ）アフコシル化されている抗体またはその抗原結合断片を含み、その場合、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９５％はアフコシル化されているか、またはフコシル化が組成物中で検出できない。
【０１７２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）２２２１３のＣＤＲ配列（例えば、配列番号６５〜７０のアミノ酸配列）、２２２１３のＶＨ及びＶＬ配列（それぞれ配列番号７１及び７２のアミノ酸配列）、または２２２１３の重鎖及び軽鎖配列（それぞれ配列番号７３及び７４のアミノ酸配列）を有し、ならびに（ｉｉ）アフコシル化されている。
【０１７３】
特定の実施形態では、組成物は、（ｉ）２２２１３のＣＤＲ配列（例えば、配列番号６５〜７０のアミノ酸配列）、２２２１３のＶＨ及びＶＬ配列（それぞれ配列番号７１及び７２のアミノ酸配列）、または２２２１３の重鎖及び軽鎖配列（それぞれ配列番号７３及び７４のアミノ酸配列）を有し、ならびに（ｉｉ）アフコシル化されている抗体またはその抗原結合断片を含み、その場合、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９５％はアフコシル化されているか、またはフコシル化が組成物中で検出できない。
【０１７４】
改変型グリコフォームは、エフェクター機能の増強または低減を含むがこれらに限定されない、様々な目的に有用であり得る。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片中に改変型グリコフォームを生成する方法として、例えば、Ｕｍａｎａ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７：１７６−１８０；Ｄａｖｉｅｓ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ７４：２８８−２９４；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３−２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：３４６６−３４７３；Ｎｉｗａ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １：６２４８−６２５５；Ｐｒｅｓｔａ  ＬＧ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ３０：４８７−４９０；Ｋａｎｄａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  １７：１０４−１１８；米国特許第６，６０２，６８４号；第６，９４６，２９２号；及び第７，２１４，７７５号；米国特許公開第ＵＳ２００７／０２４８６００号；第２００７／０１７８５５１号；第２００８／００６００９２号；及び第２００６／０２５３９２８号；国際公開第ＷＯ００／６１７３９号；第ＷＯ０１／２９２２４６号；第ＷＯ０２／３１１１４０号；及び第ＷＯ０２／３０９５４号；Ｐｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔ（商標）テクノロジー（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．  プリンストン，Ｎ．Ｊ．）；ならびにＧｌｙｃｏＭＡｂ（登録商標）グリコシル化エンジニアリングテクノロジー（Ｇｌｙｃａｒｔ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡＧ、チューリッヒ、スイス）に開示されている方法が挙げられるが、これらに限定されない。また、例えば、Ｆｅｒｒａｒａ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ９３：８５１−８６１；国際公開第ＷＯ０７／０３９８１８号；第ＷＯ１２／１３０８３１号；第ＷＯ９９／０５４３４２号；第ＷＯ０３／０１１８７８号；及び第ＷＯ０４／０６５５４０号も参照されたい。
【０１７５】
特定の実施形態では、本明細書に記載の定常領域の変異または修飾のいずれかを、２つの重鎖定常領域を有する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の一方または両方の重鎖定常領域に導入することができる。
【０１７６】
別の特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、重鎖及び軽鎖を含み、その場合、（ｉ）重鎖は、表１に記載の抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３アミノ酸配列（例えば、配列番号４５８〜４６０、３５〜３７、または６５〜６７）を有するＶＨドメインを含み；（ｉｉ）軽鎖は、表２に記載の同じ抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３アミノ酸配列（例えば、配列番号４６１〜４６３、３８〜４０、または６８〜７０）を有するＶＬドメインを含み；（ｉｉｉ）；また、重鎖はさらに、ヒトＩｇＧ１重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を有する定常重鎖ドメインを含み（ｉｖ）；軽鎖はさらに、ヒトκ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を有する定常軽鎖ドメインを含む。
【０１７７】
別の特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、重鎖及び軽鎖を含み、その場合、（ｉ）重鎖は、表３に記載の抗体のアミノ酸配列（例えば、配列番号４６４、４１、または７１）を有するＶＨドメインを含み；（ｉｉ）軽鎖は、表４に記載の同じ抗体のアミノ酸配列（例えば、配列番号４２または７３）を有するＶＬドメインを含み；（ｉｉｉ）；また、重鎖はさらに、ヒトＩｇＧ１重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を有する定常重鎖ドメインを含み（ｉｖ）；軽鎖はさらに、ヒトκ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を有する定常軽鎖ドメインを含む。
【０１７８】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞チェックポイント遮断活性を示す。Ｔ細胞チェックポイント遮断活性を測定する例示的な方法を、本明細書の実施例７及び１１に示す。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞におけるインターフェロンγ（ＩＦＮγ）産生を増加させる。ＩＦＮγ産生を測定する例示的な方法を、本明細書の実施例７及び１１に示す。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞増殖を増加させる。Ｔ細胞増殖を測定する例示的な方法を、本明細書の実施例７に示す。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させる。ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を測定する例示的な方法を、本明細書の実施例７に示す。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ８＋Ｔ細胞を増加させる。ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を測定する例示的な方法を、本明細書の実施例７に示す。
【０１７９】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも３００，０００個の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を有する細胞株（例えば、ＳＫ−ＢＲ−３細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１００，０００個の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を有する細胞株（例えば、ＨＣＣ１５６９細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも５０，０００個の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子（例えば、ＺＲ−７５−１細胞）を有する細胞株に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも３０，０００個の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を有する細胞株（例えば、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１５，０００個の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を有する細胞株（例えば、ＨＣＣ１９６４細胞）で抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。ＡＤＣＣ活性を測定する例示的な方法を、本明細書の実施例１３に示す。
【０１８０】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトフレームワーク領域であるか、またはヒトフレームワーク領域に由来するフレームワーク領域（例えば、ＶＨドメイン及び／またはＶＬドメインのフレームワーク領域）を含む。ヒトフレームワーク領域の非限定的な例は、当技術分野において記載されており、例えば、上記のＫａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）参照）。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域であるか、または霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域に由来するフレームワーク領域（例えば、ＶＨドメイン及び／またはＶＬドメインのフレームワーク領域）を含む。
【０１８１】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、上記の表５に記載の抗体について本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、配列番号４６５、４６６、４６７、及び／または４６９；配列番号２３５、２３６、２３７及び／または２３８；または配列番号２６５、２６６、２６７、及び／または２６８）を有する１つ、２つ、またはそれ以上のＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、上記の表６に記載の抗体について本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、配列番号２３９、２４０、２４１、及び／または２４２、または配列番号２６９、２７０、２７１、及び／または２７２）を有する１つ、２つ、またはそれ以上のＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、上記の表５に記載の抗体について本明細書に記載のアミノ酸配列を有する１つ、２つ、またはそれ以上のＶＨフレームワーク領域を含み、また、上記の表６に記載の同じ抗体について本明細書に記載のアミノ酸配列を有する１つ、２つ、またはそれ以上のＶＬフレームワーク領域を含む（例えば、（ｉ）配列番号４６５、４６６、４６７、及び／または４６９、ならびに配列番号２３９、２４０、２４１、及び／または２４２；（ｉｉ）配列番号２３５、２３６、２３７及び／または２３８、ならびに配列番号２３９、２４０、２４１、及び／または２４２、または（ｉｉｉ）配列番号２６５、２６６、２６７、及び／または２６８、ならびに配列番号２６９、２７０、２７１、及び／または２７２）。
【０１８２】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、本明細書の上記の表５に記載のＶＨフレームワーク領域に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、本明細書の上記の表６に記載のＶＬフレームワーク領域に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、本明細書の上記の表５に記載のＶＨフレームワーク領域に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）、及び本明細書の上記の表６に記載のＶＬフレームワーク領域に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
【０１８３】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、２０５０２または２２２１３のＶＨドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４６４または７１）に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメインを含み、その場合、抗体は、２０５０２または２２２１３のＶＨ  ＣＤＲ（例えば、配列番号４５８〜４６０または６５〜６７）と同一のＶＨ  ＣＤＲを含む。
【０１８４】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、２０５０２または２２２１３のＶＬドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４２または７２）に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み、その場合、抗体またはその抗原結合断片は、２０５０２または２２２１３のＶＬ  ＣＤＲ（例えば、配列番号４６１〜４６３または６８〜７０）と同一のＶＬ  ＣＤＲを含む。
【０１８５】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は：（ｉ）２０５０２または２２２１３のＶＨドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４６４または７１）に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメイン；及び（ｉｉ）２０５０２または２２２１３のＶＬドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４２または７２）に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み、その場合、抗体は、２０５０２または２２２１３のＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＣＤＲ（例えば、配列番号４５８〜４６３または配列番号６５〜７０）と同一のＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＣＤＲを含む。
【０１８６】
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２または２２２１３）と同じＢ７−Ｈ４エピトープ（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４エピトープ）に結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０１８７】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、２０５０２．１または２２２１３のＶＨドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４１または７１）に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメインを含み、その場合、抗体は、２０５０２．１または２２２１３のＶＨ  ＣＤＲ（例えば、配列番号３５〜３７または６５〜６７）と同一のＶＨ  ＣＤＲを含む。
【０１８８】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、２０５０２．１または２２２１３のＶＬドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４２または７２）に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み、その場合、抗体またはその抗原結合断片は、２０５０２．１または２２２１３のＶＬ  ＣＤＲ（例えば、配列番号３８〜４０または６８〜７０）と同一のＶＬ  ＣＤＲを含む。
【０１８９】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）２０５０２．１または２２２１３のＶＨドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４１または７１）に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメイン；及び（ｉｉ）２０５０２．１または２２２１３のＶＬドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号４２または７２）に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み、その場合、抗体は、２０５０２．１または２２２１３のＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＣＤＲ（例えば、配列番号３５〜４０または配列番号６５〜７０）と同一のＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＣＤＲを含む。
【０１９０】
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２．１または２２２１３）と同じＢ７−Ｈ４エピトープ（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４エピトープ）に結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０１９１】
競合結合アッセイを使用して、２つの抗体が重複エピトープに結合するかどうかを判定することができる。競合的結合は、試験中の免疫グロブリンがＢ７−Ｈ４などの共通抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにおいて測定することができる。多くのタイプの競合結合アッセイが知られており、例えば：固相直接または間接放射免疫測定法（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ９：２４２−２５３参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ＴＮ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３７：３６１４−９参照）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ参照）；Ｉ−１２５標識を使用した固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ  ＧＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２５（１）：７−１５参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ  ＲＣ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：５４６−５２）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：７７−８２）である。通常、そのようなアッセイには、これら非標識被験免疫グロブリン及び標識参照免疫グロブリンのいずれかを保持する固体表面または細胞に結合させた精製抗原（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４などのＢ７−Ｈ４）の使用が含まれる。競合阻害は、被験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合させた標識の量を決定することにより測定することができる。通常、被験免疫グロブリンは過剰に存在させる。通常、競合する抗体が過剰に存在する場合、参照抗体の共通抗原への特異的結合は、少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％またはそれ以上阻害される。競合結合アッセイは、標識抗原または標識抗体のいずれかを使用して、多数の異なる形式で構成することができる。このアッセイの一般的なバージョンでは、抗原を９６ウェルプレートに固定化する。次いで、放射能標識または酵素標識を使用して、標識抗体の抗原への結合をブロックする非標識抗体の能力を測定する。詳細については、例えば、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３０：２３０８−２３１５；Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６８：２６９−２７４；Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５０：４８７２−４８７９；Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２１：５２３−５３８；Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １１：３９１−４０７及びＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ  ｅｄｉｔｏｒｓ  ｓｕｐｒａ，ｐｐ．３８６−３８９参照。
【０１９２】
一実施形態では、例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ  ＹＮ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３８６：１７２−１８０により記載されるような「タンデムアプローチ」により、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））を使用して競合アッセイを実施し、これにより、Ｂ７−Ｈ４抗原を、チップ、例えばＣＭ５センサーチップの表面に固定化し、次いで抗Ｂ７−Ｈ４抗体をチップ上に流す。抗体またはその抗原結合断片が本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体と競合するかどうかを判定するには、まず抗Ｂ７−Ｈ４抗体をチップ表面に流して飽和を達成し、次いで潜在的な競合抗体を加える。次いで、競合する抗体またはその抗原結合断片の結合を、競合しない対照と比較して測定し、定量化することができる。
【０１９３】
一実施形態では、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ競合結合（例えば、以下の実施例２に記載）を使用して、Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、別のＢ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片のＢ７−Ｈ４への結合を競合的に阻害することを判定する。
【０１９４】
別の態様では、本明細書において、当業者に公知の、または本明細書に記載のアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイ、またはサスペンションアレイもしくは表面プラズモン共鳴アッセイ）を用いた測定による、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２、２０５０２．１または２２２１３）のＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合的に阻害する（例えば、用量依存的に）抗体を提供する。
【０１９５】
特定の態様では、本明細書において、配列番号４６４に示すアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号４２に示すアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体の、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合的に阻害する（例えば、用量依存的に）抗体または抗原結合断片を提供する。
【０１９６】
特定の態様では、本明細書において、配列番号４１に示すアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号４２に示すアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体の、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合的に阻害する（例えば、用量依存的に）抗体または抗原結合断片を提供する。
【０１９７】
特定の態様では、本明細書において、配列番号７１に示すアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号７２に示すアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体の、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合的に阻害する（例えば、用量依存的に）抗体または抗原結合断片を提供する。
【０１９８】
特定の態様では、本明細書において、（ｉ）表１に記載のＶＨ  ＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン；ならびに（ｉｉ）表２に記載のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含む抗体を用いて、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合的に阻害する（例えば、用量依存的に）抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０１９９】
特定の態様では、本明細書において、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３と同じＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）エピトープに免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０２００】
別の特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）表１に記載のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン、ならびに（ｉｉ）表２に記載のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含む抗体エピトープと同じＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）エピトープに免疫特異的に結合する。
【０２０１】
特定の態様では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びｓｃＦｖからなる群から選択され、その場合、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、本明細書に記載するように、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を有する。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、下記の５．３節で論じる技術を含むがこれらに限定されない、当業者に公知の任意の技術によって生成することができる。特定の実施形態では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体の半減期を延長させる部分をさらに含む。この部分は、「半減期延長部分」とも呼ばれる。ｉｎ  ｖｉｖｏでＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖの半減期を延長するための当業者に公知の任意の部分を使用することができる。例えば、半減期延長部分は、Ｆｃ領域、ポリマー、アルブミン、またはアルブミン結合タンパク質もしくはアルブミン結合化合物を含み得る。ポリマーには、天然または合成の、必要に応じて置換された直鎖または分岐鎖ポリアルキレン、ポリアルケニレン、ポリオキシアルキレン、多糖類、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン、またはそれらの誘導体が含まれ得る。置換基には、１つ以上のヒドロキシ、メチル、またはメトキシ基が含まれ得る。特定の実施形態では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖを、半減期延長部分を付着させるための１つ以上のＣ末端アミノ酸の付加により、修飾することができる。特定の実施形態では、半減期延長部分は、ポリエチレングリコールまたはヒト血清アルブミンである。特定の実施形態では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖを、Ｆｃ領域に融合させる。
【０２０２】
抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、検出可能な標識または物質に融合または結合させる（例えば、共有結合または非共有結合で連結する）ことができる。検出可能な標識または物質の例として、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識；ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）などの放射性同位体；ルミノールなどの発光標識；及びフルオレセインやローダミンなどの蛍光標識、ならびにビオチンが挙げられる。そのような標識抗体またはその抗原結合断片を用いて、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）タンパク質を検出することができる。例えば、下記の５．５．２節参照。
【０２０３】
抗体産生
【０２０４】
Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片は、化学合成または組換え発現技術による、抗体及びその抗原結合断片の合成のための当技術分野で公知の任意の方法によって産生することができる。本明細書に記載の方法は、特に明記しない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子解析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び修飾、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに当技術分野の関連分野における従来技術を使用する。これらの技術は、例えば、本明細書中で引用する参考文献に記載されており、それらの文献において十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７年及び年報）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７年及び年報）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｒｒｅｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ参照。
【０２０５】
特定の態様では、本明細書において、本明細書に記載の細胞または宿主細胞を培養することを含む、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体または抗原結合断片の作製方法を提供する。特定の態様では、本明細書において、本明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を使用して、抗体または抗原結合断片を発現させる（例えば、組換え発現させる）ことを含む、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片の作製方法を提供する。特定の実施形態では、細胞は単離された細胞である。特定の実施形態では、外来性ポリヌクレオチドを細胞に導入する。特定の実施形態では、この方法は、細胞または宿主細胞から得られた抗体または抗原結合断片を精製する工程をさらに含む。
【０２０６】
ポリクローナル抗体を産生する方法は、当技術分野で公知である（例えば：Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの第１１章参照）。
【０２０７】
モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ハイブリドーマ、組換え、及びファージディスプレイ技術、酵母ベースの提示技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当技術分野で公知の多種多様な技術を使用して調製することができる。例えば、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、当技術分野で公知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ＧＪ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３  ６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）に示されるか、またはＫｏｈｌｅｒ  Ｇ  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５に記載されている方法を含む、ハイブリドーマ技術を用いて産生することができる。本明細書に記載の抗体を選択及び生成するために用いることができる酵母ベースの提示方法の例として、例えば、ＷＯ２００９／０３６３７９Ａ２；ＷＯ２０１０／１０５２５６；及びＷＯ２０１２／００９５６８に開示されている方法が挙げられ、これらの各文献は、その全体を参照により本明細書に援用する。
【０２０８】
特定の実施形態では、モノクローナル抗体または抗原結合断片は、クローン細胞によって産生される抗体または抗原結合断片（例えば、組換え抗体または抗原結合断片を産生するハイブリドーマまたは宿主細胞）であり、その場合、抗体または抗原結合断片は、例えば、ＥＬＩＳＡまたは当技術分野で公知のまたは本明細書において提供する実施例の他の抗原結合アッセイにより測定されるように、Ｂ７−Ｈ４（たとえばヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する。特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、キメラまたはヒト化抗体またはその抗原結合断片であり得る。特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＦａｂフラグメントまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントであり得る。本明細書に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  Ｇ  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５に記載のハイブリドーマ法により作製することができ、または例えば、本明細書に記載の技術を用いてファージライブラリから単離することができる。クローン細胞株ならびにそれが発現するモノクローナル抗体及びその抗原結合断片を調製するための他の方法は、当技術分野で周知である（例えば、上記のＳｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．の第11章参照）。
【０２０９】
本明細書に記載の抗体の抗原結合断片は、当業者に公知の任意の技術によって生成することができる。例えば、本明細書に記載のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントは、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生する）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを産生する）などの酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって産生することができる。Ｆａｂフラグメントは、四量体抗体分子の２つの同一アームの一方に対応し、重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメインと対になった完全な軽鎖を含む。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ヒンジ領域内のジスルフィド結合で連結された四量体抗体分子の２つの抗原結合アームを含む。
【０２１０】
さらに、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片はまた、当技術分野で公知の様々なファージディスプレイ及び／または酵母ベースの提示方法を使用して生成することができる。ファージディスプレイ法では、タンパク質を、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面に提示させる。特に、ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物のｃＤＮＡライブラリ（例えば、罹患組織のヒトまたはマウスのｃＤＮＡライブラリ）から増幅させる。ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡを、ＰＣＲによりｓｃＦｖリンカーとともに組み換え、ファージミドベクターにクローニングする。ベクターをＥ．ｃｏｌｉにエレクトロポレーションし、Ｅ．ｃｏｌｉにヘルパーファージを感染させる。これらの方法で使用するファージは、通常、ｆｄ及びＭ１３などの繊維状ファージであり、通常、組換えにより、ＶＨ及びＶＬドメインをファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに融合させる。特定の抗原に結合する抗体またはその抗原結合断片を発現するファージは、例えば、固体表面またはビーズに結合または捕捉した標識抗原または抗原を使用して、抗原により選択または同定することができる。本明細書に記載の抗体または断片を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例として、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８２：４１−５０；Ａｍｅｓ  ＲＳ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７−１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ＣＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２４：９５２−９５８；Ｐｅｒｓｉｃ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ  １８７：９−１８；Ｂｕｒｔｏｎ  ＤＲ  ＆  Ｂａｒｂａｓ  ＣＦ（１９９４）Ａｄｖａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５７：１９１−２８０；ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４号；国際公開第ＷＯ９０／０２８０９号、第ＷＯ９１／１０７３７号、第ＷＯ９２／０１０４７号、第ＷＯ９２／１８６１９号、第ＷＯ９３／１１２３６号、第ＷＯ９５／１５９８２号、第ＷＯ９５／２０４０１号、及び第ＷＯ９７／１３８４４号；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、第５，２２３，４０９号、第５，４０３，４８４号、第５，５８０，７１７号、第５，４２７，９０８号、第５，７５０，７５３号、第５，８２１，０４７号、第５，５７１，６９８号、第５，４２７，９０８号、第５，５１６，６３７号、第５，７８０，２２５号、第５，６５８，７２７号、第５，７３３，７４３号、及び第５，９６９，１０８に開示されている方法が挙げられる。
【０２１１】
ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択することができる。
【０２１２】
１．２．１  ポリヌクレオチド
特定の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、可変軽鎖領域及び／または可変重鎖領域）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであり、免疫特異的に結合するＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）抗原、及びベクター、例えば、宿主細胞（例えば、大腸菌及び哺乳動物細胞）における組換え発現のためのそのようなポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
【０２１３】
特定の態様では、本明細書において、Ｂ７−Ｈ４ポリペプチド（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合し、本明細書に記載のアミノ酸配列を有する、抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、ならびに、Ｂ７−Ｈ４ポリペプチドへの結合について（例えば用量依存的に）そのような抗体または抗原結合断片と競合する、またはそのような抗体または抗原結合断片と同じエピトープに結合する抗体または抗原結合断片を提供する。
【０２１４】
本明細書ではまた、配列番号１１、１２、２１、２２、３１、３２、４１、４６４、４２、５１、５２、６１、６２、７１、７２、８１、８２、９１、９２、１０１、１０２、１１１、１１２、１２１、１２２、１３１、１３２、１４１、１４２、１５１、１５２、１６１、１６２、１７１、１７２、１８１、１８２、１９１、１９２、２０１、及び２０２からなる群から選択される配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、そのポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する。
【０２１５】
本明細書ではまた、配列番号１３、１４、２３、２４、３３、３４、４３、４６９、４４、５３、５４、６３、６４、７３、７４、８３、８４、９３、９４、１０３、１０４、１１３、１１４、１２３、１２４、１３３、１３４、１４３、１４４、１５３、１５４、１６３、１６４、１７３、１７４、１８３、１８４、１９３、１９４、２０３、及び２０４からなる群から選択される配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、そのポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する。
【０２１６】
本明細書ではまた、表９に示す可変重鎖をコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供し、その場合、例えば、コードされた可変重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ７−Ｈ４に結合する。
【表９−１】
2021500853.tif 000027
【表９−２】
2021500853.tif 000028
【表９−３】
2021500853.tif 000029
【表９−４】
2021500853.tif 000030
【０２１７】
本明細書ではまた、表１０に示す可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供し、その場合、例えば、コードされた可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片はＢ７−Ｈ４に結合する。
【表１０−１】
2021500853.tif 000031
【表１０−２】
2021500853.tif 000032
【表１０−３】
2021500853.tif 000033
【表１０−４】
2021500853.tif 000034
【０２１８】
本明細書ではまた、配列番号２１３、２１４、２２３、２２４、２３３、２３４、２４３、４７０、２４４、２５３、２５４、２６３、２６４、２７３、２７４、２８３、２８４、２９３、２９４、３０３、３０４、３１３、３１４、３２３、３２４、３３３、３３４、３４３、３４４、３５３、３５４、３６３、３６４、３７３、３７４、３８３、３８４、３９３、３９４、４０３、または４０４のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。本明細書ではまた、（ｉ）配列番号２１３、２１４、２２３、２２４、２３３、２３４、２４３、４７０、２４４、２５３、２５４、２６３、２６４、２７３、２７４、２８３、２８４、２９３、２９４、３０３、３０４、３１３、３１４、３２３、３２４、３３３、３３４、３４３、３４４、３５３、３５４、３６３、３６４、３７３、３７４、３８３、３８４、３９３、３９４、４０３、または４０４のヌクレオチド配列、及び（ｉｉ）配列番号４０８または４０６のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。
【０２１９】
本明細書ではまた、配列番号１１、１２、２１、２２、３１、３２、４１、４６４、４２、５１、５２、６１、６２、７１、７２、８１、８２、９１、９２、１０１、１０２、１１１、１１２、１２１、１２２、１３１、１３２、１４１、１４２、１５１、１５２、１６１、１６２、１７１、１７２、１８１、１８２、１９１、１９２、２０１、または２０２をコードし、また、配列番号２１３、２１４、２２３、２２４、２３３、２３４、２４３、４７０、２４４、２５３、２５４、２６３、２６４、２７３、２７４、２８３、２８４、２９３、２９４、３０３、３０４、３１３、３１４、３２３、３２４、３３３、３３４、３４３、３４４、３５３、３５４、３６３、３６４、３７３、３７４、３８３、３８４、３９３、３９４、４０３、または４０４に対して、少なくとも約８０％、８５％、または９０％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。
【０２２０】
本明細書ではまた、配列番号１１、１２、２１、２２、３１、３２、４１、４６４、４２、５１、５２、６１、６２、７１、７２、８１、８２、９１、９２、１０１、１０２、１１１、１１２、１２１、１２２、１３１、１３２、１４１、１４２、１５１、１５２、１６１、１６２、１７１、１７２、１８１、１８２、１９１、１９２、２０１、または２０２をコードし、また、配列番号２１３、２１４、２２３、２２４、２３３、２３４、２４３、４７０、２４４、２５３、２５４、２６３、２６４、２７３、２７４、２８３、２８４、２９３、２９４、３０３、３０４、３１３、３１４、３２３、３２４、３３３、３３４、３４３、３４４、３５３、３５４、３６３、３６４、３７３、３７４、３８３、３８４、３９３、３９４、４０３、または４０４に対して、少なくとも約９５％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。
【０２２１】
本明細書ではまた、配列番号１１、１２、２１、２２、３１、３２、４１、４６４、４２、５１、５２、６１、６２、７１、７２、８１、８２、９１、９２、１０１、１０２、１１１、１１２、１２１、１２２、１３１、１３２、１４１、１４２、１５１、１５２、１６１、１６２、１７１、１７２、１８１、１８２、１９１、１９２、２０１、または２０２をコードし、また、配列番号２１３、２１４、２２３、２２４、２３３、２３４、２４３、４７０、２４４、２５３、２５４、２６３、２６４、２７３、２７４、２８３、２８４、２９３、２９４、３０３、３０４、３１３、３１４、３２３、３２４、３３３、３３４、３４３、３４４、３５３、３５４、３６３、３６４、３７３、３７４、３８３、３８４、３９３、３９４、４０３、または４０４に対して、少なくとも約９６％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。
【０２２２】
本明細書ではまた、配列番号１１、１２、２１、２２、３１、３２、４１、４６４、４２、５１、５２、６１、６２、７１、７２、８１、８２、９１、９２、１０１、１０２、１１１、１１２、１２１、１２２、１３１、１３２、１４１、１４２、１５１、１５２、１６１、１６２、１７１、１７２、１８１、１８２、１９１、１９２、２０１、または２０２をコードし、また、配列番号２１３、２１４、２２３、２２４、２３３、２３４、２４３、４７０、２４４、２５３、２５４、２６３、２６４、２７３、２７４、２８３、２８４、２９３、２９４、３０３、３０４、３１３、３１４、３２３、３２４、３３３、３３４、３４３、３４４、３５３、３５４、３６３、３６４、３７３、３７４、３８３、３８４、３９３、３９４、４０３、または４０４に対して、少なくとも約９７％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。
【０２２３】
本明細書ではまた、配列番号１１、１２、２１、２２、３１、３２、４１、４６４、４２、５１、５２、６１、６２、７１、７２、８１、８２、９１、９２、１０１、１０２、１１１、１１２、１２１、１２２、１３１、１３２、１４１、１４２、１５１、１５２、１６１、１６２、１７１、１７２、１８１、１８２、１９１、１９２、２０１、または２０２をコードし、また、配列番号２１３、２１４、２２３、２２４、２３３、２３４、２４３、４７０、２４４、２５３、２５４、２６３、２６４、２７３、２７４、２８３、２８４、２９３、２９４、３０３、３０４、３１３、３１４、３２３、３２４、３３３、３３４、３４３、３４４、３５３、３５４、３６３、３６４、３７３、３７４、３８３、３８４、３９３、３９４、４０３、または４０４に対して、少なくとも約９８％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。
【０２２４】
本明細書ではまた、配列番号１１、１２、２１、２２、３１、３２、４１、４６４、４２、５１、５２、６１、６２、７１、７２、８１、８２、９１、９２、１０１、１０２、１１１、１１２、１２１、１２２、１３１、１３２、１４１、１４２、１５１、１５２、１６１、１６２、１７１、１７２、１８１、１８２、１９１、１９２、２０１、または２０２をコードし、また、配列番号２１３、２１４、２２３、２２４、２３３、２３４、２４３、４７０、２４４、２５３、２５４、２６３、２６４、２７３、２７４、２８３、２８４、２９３、２９４、３０３、３０４、３１３、３１４、３２３、３２４、３３３、３３４、３４３、３４４、３５３、３５４、３６３、３６４、３７３、３７４、３８３、３８４、３９３、３９４、４０３、または４０４に対して、少なくとも約９９％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。
【０２２５】
特定の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体または抗原結合断片の軽鎖または重鎖をコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗体のＶＨ  ＦＲ及びＣＤＲを含む重鎖をコードするヌクレオチド配列を有し得る（例えば、表１及び５参照）。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗体のＶＬ  ＦＲ及びＣＤＲを含む軽鎖をコードするヌクレオチド配列を有し得る（例えば、表２及び６参照）。
【０２２６】
特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号４６４に記載のアミノ酸配列を有するＶＨドメインをコードする。特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号４２に記載のアミノ酸配列を有するＶＬドメインをコードする。
【０２２７】
特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有するＶＨドメインをコードする。特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号４２に記載のアミノ酸配列を有するＶＬドメインをコードする。
【０２２８】
特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号７１に記載のアミノ酸配列を有するＶＨドメインをコードする。特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を有するＶＬドメインをコードする。
【０２２９】
特定の実施形態では、本明細書において、例えば、本明細書に記載のいずれかの抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＶＬ  ＣＤＲ３を含む、３つのＶＨ鎖ＣＤＲを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体をコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する（例えば、表１参照）。特定の実施形態では、本明細書において、本明細書に記載の抗体のいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む３つのＶＬ鎖ＣＤＲを含むポリヌクレオチドを提供する（例えば、表２参照）。特定の実施形態では、本明細書において、例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む３つのＶＨ鎖ＣＤＲを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体をコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド（例えば、表１参照）ならびに、例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む３つのＶＬ鎖ＣＤＲ（例えば、表２参照）を提供する。
【０２３０】
特定の実施形態では、本明細書において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、または例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、表１及び５参照、例えば、表中の名称によって特定される特定の抗体のＶＨ  ＣＤＲ及びＶＨ  ＦＲ）を有するＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４を含むＶＨドメインを含むその断片を提供する。特定の実施形態では、本明細書において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、または例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、表２及び６参照、例えば、表中の名称によって特定される特定の抗体のＶＬ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＦＲ）を有するＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４を含むＶＬドメインを含むその断片を提供する。
【０２３１】
特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、配列番号４６４、４１、または７１）を有し、その場合、重鎖可変領域を含む抗体は、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書において提供する重鎖可変領域をコードする配列（例えば、配列番号４７０、２４３、または２７３の可変領域をコードする部分）を有し、重鎖可変領域を含む抗体は、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する。
【０２３２】
特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、配列番号４２または７２）を有し、その場合、軽鎖可変領域を含む抗体は、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書において提供する軽鎖可変領域をコードする配列（例えば、配列番号２４４または２７４の可変領域をコードする部分）を有し、重鎖可変領域を含む抗体は、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する。
【０２３３】
特定の実施形態では、本明細書において提供するポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの組み合わせは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列またはヌクレオチド配列の組み合わせを有し、その場合、抗体またはその抗原結合断片は重鎖を含み、重鎖は表３に示すアミノ酸配列（例えば、配列番号４６４、４１、または７１）を有する重鎖可変ドメイン及びヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を有する定常領域を含む。
【０２３４】
特定の実施形態では、本明細書において提供するポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの組み合わせは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列またはヌクレオチド配列の組み合わせを有し、その場合、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖を含み、軽鎖は表４に示すアミノ酸配列（例えば、配列番号４２または７２）を有する軽鎖可変ドメイン及びヒトλ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を有する定常領域を含む。
【０２３５】
特定の実施形態では、本明細書において提供するポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの組み合わせは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列またはヌクレオチド配列の組み合わせを有し、その場合、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）重鎖を含み、重鎖は表３に示すアミノ酸配列（例えば、配列番号４６４、４１、または７１）を有する重鎖可変ドメイン及びヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を有する定常領域を含み、ならびに（ｉｉ）軽鎖を含み、軽鎖は表４に示すアミノ酸配列（例えば、配列番号４２または７２）を有する軽鎖可変ドメイン及びヒトλ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を有する定常領域を含む。
【０２３６】
一実施形態では、本明細書において提供するポリヌクレオチドの組み合わせは、配列番号４７０のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド及び配列番号２４４のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む。
【０２３７】
一実施形態では、本明細書において提供するポリヌクレオチドの組み合わせは、配列番号２４３のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド及び配列番号２４４のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む。
【０２３８】
一実施形態では、本明細書において提供するポリヌクレオチドの組み合わせは、配列番号２７３のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド及び配列番号２７４のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む。
【０２３９】
特定の実施形態では、本明細書において、本明細書中で指定する、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド提供し、例えば、表１〜８を参照されたい。
【０２４０】
本明細書ではまた、例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列による置換、及びｍＲＮＡ不安定化エレメントの除去により最適化させる本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするポリヌクレオチドを提供する。したがって、コドン変化（例えば、遺伝子コードの縮重による同じアミノ酸をコードするコドン変化）の導入による、組換え発現用に最適化した抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、重鎖、軽鎖、ＶＨドメイン、またはＶＬドメイン）をコードする核酸の生成方法、及び／またはｍＲＮＡの阻害領域の除去方法は、例えば米国特許第５，９６５，７２６号；第６，１７４，６６６号；第６，２９１，６６４号；第６，４１４，１３２号；及び第６，７９４，４９８号に記載されている最適化方法を適合させることにより実施することができる。
【０２４１】
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするポリヌクレオチドは、当技術分野で周知の方法（例えば、ＰＣＲ及び他の分子クローニング法）を使用して、適切な供給源（例えば、ハイブリドーマ）由来の核酸から生成することができる。例えば、既知の配列の３’及び５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅は、目的の抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られたゲノムＤＮＡを使用して実行することができる。そのようなＰＣＲ増幅法を使用して、抗体またはその抗原結合断片の軽鎖及び／または重鎖をコードする配列を有する核酸を得ることができる。そのようなＰＣＲ増幅法を使用して、抗体またはその抗原結合断片の可変軽鎖領域及び／または可変重鎖領域をコードする配列を有する核酸を得ることができる。増幅させた核酸を、宿主細胞での発現及びさらなるクローニングのためにベクターにクローニングし、例えばキメラ及びヒト化抗体またはその抗原結合断片を生成することができる。
【０２４２】
本明細書において提供するポリヌクレオチドは、例えば、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡが含まれ、ＤＮＡは二本鎖または一本鎖であり得る。一本鎖の場合、ＤＮＡは、コーディング鎖または非コーディング（アンチセンス）鎖であり得る。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡまたは１つ以上の内在性イントロンを欠くＤＮＡである。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、非天然のポリヌクレオチドである。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドを組換え産生する。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは単離されている。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは実質的に純粋である。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドを天然成分から精製する。
【０２４３】
１．２．２  細胞及びベクター
特定の態様では、本明細書において、宿主細胞、好ましくは哺乳類細胞内での組換え発現のための抗Ｂ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片またはそのドメインをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含むベクター（例えば発現ベクター）を提供する。本明細書ではまた、本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、ヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合断片）を組換え発現するためのそのようなベクターを含む細胞、例えば宿主細胞を提供する。特定の態様では、本明細書において、宿主細胞内でそのような抗体またはその抗原結合断片を発現させることを含む、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の産生方法を提供する。
【０２４４】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば本明細書に記載の重鎖または軽鎖）の組換え発現には、抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築が含まれる。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、重鎖または軽鎖可変ドメイン）をコードするポリヌクレオチドを取得した後、抗体またはその抗原結合断片を産生するためのベクターを、当技術分野で周知の技術を用いた組換えＤＮＡ技術により産生することができる。したがって、ヌクレオチド配列をコードする抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、軽鎖または重鎖）を含むポリヌクレオチドを発現させることによるタンパク質の調製方法を本明細書に記載する。当業者に周知の方法を使用して、抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、軽鎖または重鎖）をコードする配列ならびに適切な転写及び翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ技術、合成技術、及びｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子組換えが含まれる。また、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列、重鎖もしくは軽鎖、重鎖もしくは軽鎖可変ドメイン、またはプロモーターに作動可能に連結した重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲを含む複製可能なベクターも提供する。そのようなベクターは、例えば、抗体またはその抗原結合断片の定常領域をコードするヌクレオチド配列を有し得（例えば、国際公開第ＷＯ８６／０５８０７号及び第ＷＯ８９／０１０３６号；ならびに米国特許第５，１２２，４６４号参照）、抗体またはその抗原結合断片の可変ドメインを、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖全体及び軽鎖全体の両方の発現のために、そのようなベクターにクローニングすることができる。
【０２４５】
従来技術により発現ベクターを細胞（例えば、宿主細胞）に移入することができ、次いで、得られた細胞を、従来技術によって培養し、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２、２０５０２．１、もしくは２２２１３の６つのＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、重鎖、軽鎖、または重鎖及び軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片）またはそのドメイン（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３のＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、重鎖または軽鎖）を産生することができる。したがって、本明細書において、そのような配列の発現のためのプロモーターに作動可能に連結した、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３の６つのＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、重鎖、軽鎖、または重鎖及び軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片）またはそのドメイン（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３のＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、重鎖、軽鎖、または重鎖もしくは軽鎖）をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。特定の実施形態では、二本鎖抗体またはその抗原結合断片の発現のために、以下に詳述するように、免疫グロブリン全体の発現のために、重鎖と軽鎖の両方を個別にコードするベクターを宿主細胞で共発現させることができる。特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載の抗体の重鎖及び軽鎖（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３の重鎖及び軽鎖）の両方またはそのドメイン（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３のＶＨ及びＶＬ）をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを有する。特定の実施形態では、宿主細胞は、２つの異なるベクター、すなわち、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター、及び本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３の６つのＣＤＲを含む抗体）、またはそのドメインの軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを有する。他の実施形態では、第１の宿主細胞は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、第２の宿主細胞は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３の６つのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）。特定の実施形態では、第１の細胞が発現する重鎖／重鎖可変領域を、第２の細胞の軽鎖／軽鎖可変領域に会合させ、本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３の６つのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）を形成する。特定の実施形態では、本明細書において、そのような第１の宿主細胞及びそのような第２の宿主細胞を含む宿主細胞集団を提供する。
【０２４６】
特定の実施形態では、本明細書において、本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の軽鎖／軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター、及び本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の重鎖／重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクター（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）を含むベクター集団を提供する。あるいは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現することができる単一のベクターを使用することができる。
【０２４７】
様々な宿主発現ベクター系を利用して、本明細書に記載の抗体及びその抗原結合断片（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）を発現させることができる（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号参照）。そのような宿主発現系は、目的のコード配列を産生し、その後精製することができるビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換または形質移入するとｉｎ  ｓｉｔｕで本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を発現することができる細胞も表す。これらには、抗体コード配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡの発現ベクターで形質転換した細菌（例えばＥ．ｃｏｌｉ及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）；抗体コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換した酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  Ｐｉｃｈｉａ）；抗体コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）を感染させた昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（カリフラワーモザイクウイルスＣａＭＶ；タバコモザイクウイルスＴＭＶ）を感染させるか、または抗体コード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換した植物細胞系（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻）；または哺乳類細胞ゲノム由来プロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳類ウイルス由来プロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築物を有する哺乳類細胞系（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、及びＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０及びＢＭＴ１０細胞）などの微生物が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体及びその抗原結合断片（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）を発現するための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えばＣＨＯ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）由来のＣＨＯ細胞である。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体を発現するための細胞は、ヒト細胞、例えばヒト細胞株である。特定の実施形態では、哺乳類発現ベクターはｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。特定の実施形態では、特に組換え抗体分子全体の発現のために、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどの細菌細胞、または真核細胞（例えば、哺乳類細胞）を組換え抗体分子の発現に使用する。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中初期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと組み合わせたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳類細胞は、抗体の効果的な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ＭＫ  ＆  Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ  Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ  ４５：１０１−１０５；及びＣｏｃｋｅｔｔ  ＭＩ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０��Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８：６６２−６６７）。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞によって産生する。
【０２４８】
さらに、所望の特定の様式で、挿入した配列の発現を調節するか、または遺伝子産物を修飾及びプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）及びプロセシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能に寄与し得る。この目的のために、遺伝子産物の一次転写産物の適切なプロセシング、グリコシル化、及びリン酸化のための細胞機構を保有する真核生物宿主細胞を使用することができる。そのような哺乳類宿主細胞として、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０（免疫グロブリン鎖を内在的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）を、ＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞で産生する。
【０２４９】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体（例えば、２０５０２、２０５０２．１、または２２２１３のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）を、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞で産生する。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含む宿主細胞を提供し、その場合、宿主細胞は、機能性α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）遺伝子を欠損している。いくつかの実施形態では、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。
【０２５１】
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片が組換え発現により産生した後、免疫グロブリン分子の精製のための当技術分野で公知の任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にプロテインＡ後の特定の抗原に対する親和性、及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度の違い、またはタンパク質精製のための他の標準的な手法により、精製することができる。さらに、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を、本明細書に記載または当技術分野で公知の異種ポリペプチド配列に融合させて、精製を促進することができる。
【０２５２】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を、単離または精製する。一般的に、単離された抗体またはその抗原結合断片は、単離された抗体またはその抗原結合断片とは異なる抗原特異性を有する他の抗体またはその抗原結合断片を実質的に含まないものである。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の調製物は、細胞物質及び／または化学前駆体を実質的に含まない。
【０２５３】
１．３  医薬組成物
本明細書において、生理学的に許容される担体、賦形剤または安定剤中に所望の純度を有する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を提供する（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いる用量及び濃度においてレシピエントに対して無害である。
【０２５４】
様々な実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を、薬学的に許容される担体を含む製剤中で提供する（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ｗｉｔｈ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ）：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ  Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ  ｅｄ．（２００３）；Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、７ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（２０００）参照）。
【０２５５】
本明細書に記載の医薬組成物は、Ｔ細胞に対するＢ７−Ｈ４の阻害活性の遮断及び／またはＢ７−Ｈ４発現細胞のＡＤＣＣ依存性枯渇に有用であり得る。本明細書に記載の医薬組成物は、がんなどの病態の治療に有用であり得る。本明細書に記載の方法によって治療することができるがんの例として、乳癌（例えば、三種陰性乳癌、乳管癌）、子宮内膜癌、卵巣癌、及び非小細胞肺癌（例えば、扁平上皮癌）、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌）、及び膀胱癌（例えば、尿路上皮癌）が挙げられるが、これらに限定されない。非小細胞肺癌は、例えば、腺癌であり得る。本明細書に記載の方法によって治療することができるがんのさらなる例として、頭頸部癌、小細胞肺癌、胃癌、黒色腫、及び胆管癌が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、卵巣癌は漿液性腺癌である。一実施形態では、乳癌は乳管癌である。
【０２５６】
本明細書に記載の医薬組成物は、一実施形態では、薬剤として使用するための組成物である。本明細書に記載の医薬組成物は、一実施形態では、例えば、患者（例えば、ヒト患者）から得られた試料中のＢ７−Ｈ４の存在を検出するための診断薬として使用するための組成物である。
【０２５７】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に用いる組成物は無菌であり得る。これは、例えば滅菌濾過膜を通して濾過することにより容易に達成される。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、医薬組成物を提供し、その場合、医薬組成物は、本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片及び医薬的に許容される担体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物を提供し、その場合、医薬組成物は、本明細書に記載のアフコシル化抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片及び医薬的に許容される担体を含む。特定の実施形態では、そのような医薬組成物は、例えば、組成物中の抗体の少なくとも８０％がアフコシル化されている、アフコシル化抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、そのような医薬組成物は、例えば、組成物中の抗体の少なくとも８５％がアフコシル化されている、アフコシル化抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、そのような医薬組成物は、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９０％がアフコシル化されている、アフコシル化抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、そのような医薬組成物は、例えば組成物中の抗体の少なくとも９５％がアフコシル化されている、アフコシル化抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、そのような医薬組成物は、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９６％がアフコシル化されている、アフコシル化抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、そのような医薬組成物は、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９７％がアフコシル化されている、アフコシル化抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、そのような医薬組成物は、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９８％がアフコシル化されている、アフコシル化抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、そのような医薬組成物は、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９９％がアフコシル化されている、アフコシル化抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、そのような医薬組成物は、組成物中にフコースを検出することができないアフコシル化抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含む。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、（ｉ）（ａ）それぞれ配列番号４５８〜４６３の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、（ｂ）配列番号４６４のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域、または（ｃ）配列番号４６９のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０２６０】
本明細書ではまた、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号４５８〜４６３の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、その場合、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％はアフコシル化されている。一実施形態では、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４６４のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域と、配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号４６９のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、（ｉ）（ａ）それぞれ配列番号３５〜４０の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域及び配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域、または（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０２６２】
本明細書ではまた、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号３５〜４０の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、その場合、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％はアフコシル化されている。一実施形態では、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域と、配列番号４２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、（ｉ）（ａ）それぞれ配列番号６５〜７０の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と、（ｂ）配列番号７１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域及び配列番号７２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域、または（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０２６４】
本明細書ではまた、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号６５〜７０の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、その場合、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％はアフコシル化されている。一実施形態では、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７１のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域と、配列番号７２のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域とを含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【０２６５】
１．４  使用及び方法
１．４．１  治療上の使用及び方法
一態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、またはその医薬組成物を、上記及び本明細書に記載のように、それを必要とする被験体に投与することを含む、被験体の１つ以上の免疫機能の調節方法を示す。
【０２６６】
別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物を、患者（例えば、ヒト患者）に投与して、患者のＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を増加させる。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物を、患者（例えば、ヒト患者）に投与して、患者のインターフェロンγ（ＩＦＮγ）産生を増加させる。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物を、患者（例えば、ヒト患者）に投与して、患者のＴ細胞に対するＢ７−Ｈ４の阻害活性を遮断する。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物を、患者（例えば、ヒト患者）に投与して、Ｂ７−Ｈ４を発現する患者のがん細胞を枯渇させる。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物を、上記の効果のうちの２つ以上を達成するために投与する。
【０２６７】
特定の実施形態では、本明細書において、がん、例えばＢ７−Ｈ４を発現するがんの治療方法を提供する。がんの治療方法は、本明細書において提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書において提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、それを必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与することを含み得る。
【０２６８】
特定の実施形態では、本明細書において：乳癌（例えば、三種陰性乳癌、乳管癌）、子宮内膜癌、卵巣癌、非小細胞肺癌（例えば、扁平上皮癌）、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌）、及び膀胱癌（例えば、尿路上皮癌）からなる群から選択されるがんの治療方法を提供する。特定の実施形態では、本明細書において、腺癌である非小細胞肺癌の治療方法を提供する。特定の実施形態では、本明細書において、頭頸部癌、小細胞肺癌、胃癌、黒色腫、及び胆管癌からなる群から選択されるがんの治療方法を提供する。一実施形態では、卵巣癌は漿液性腺癌である。一実施形態では、乳癌は乳管癌である。いくつかの実施形態では、そのような方法は、本明細書において提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書において提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、それを必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与することを含む。いくつかの実施形態では、がんはＢ７−Ｈ４を発現するがんである。
【０２６９】
特定の実施形態では、本明細書において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対する応答が不十分ながんの治療方法を提供する。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対する応答が不十分ながんは、以前にはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に応答した可能性があるがＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対してあまり応答しなくなっているか、またはそのがんはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤にまったく反応したことがない場合もある。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対する応答が不十分とは、標準用量のＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤の投与後に改善すると予想されるがんの態様が改善せず、及び／または標準用量を超えた投与の場合にのみ改善が生じることを意味する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対する応答が不十分ながんを有する被験体は、少なくとも標準用量の投与後、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも６週間、または少なくとも１２週間、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対する不十分な応答を経験したか、または経験している。「標準」用量は医療専門家によって決定され、被験体の年齢、体重、病歴、疾患の重症度、投与頻度などに応じたものであり得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対する応答が不十分ながんを有する被験体は、抗ＰＤ−１抗体及び／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体に対する不十分な応答を経験したか、または経験している。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対する応答が不十分ながんを有する被験体は、ＡＭＰ−２２４に対する不十分な応答を経験したか、または経験している。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対する応答が不十分ながんを有する被験体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、及びアテゾリズマブから選択されるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対して、不十分な応答を経験したか、または経験している。
【０２７０】
特定の実施形態では、本明細書において、低レベルのＰＤ−Ｌ１を発現するがんの治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、「低レベルのＰＤ−Ｌ１」を発現するがんまたは「低レベルのＰＤ−Ｌ１」を発現するがんとは、ＰＤ−Ｌ１のレベルが、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アンタゴニストによる治療用に示されるがんの発現レベル未満であることを示し、その場合、治療用に患者をＰＤ−Ｌ１発現レベルに基づいて選択する。いくつかの実施形態では、「低レベルのＰＤ−Ｌ１」は、腫瘍内の細胞の１％未満が膜染色されるものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１に関する「低レベル」は、１％未満の染色、例えば、腫瘍細胞の０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１％または０％が染色される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１発現レベルは、発色性ＩＨＣまたは免疫蛍光ＩＨＣ（Ａｑｕａ  ｓｃｏｒｉｎｇ）により測定することができる。特定の実施形態では、５％以下のＰＤ−Ｌ１染色（腫瘍及び／または免疫細胞を含む）は、試料が「低レベルのＰＤ−Ｌ１」を発現することを示し得る。特定の実施形態では、１０％以下のＰＤ−Ｌ１染色（腫瘍及び／または免疫細胞を含む）は、試料が「低レベルのＰＤ−Ｌ１」を発現することを示し得る。本明細書中で特に明記しない限り、本明細書では５％の閾値を使用する（すなわち、５％以下は「低レベルのＰＤ−Ｌ１」を示す）。
【０２７１】
別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物を、がんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与して、患者のＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を増加させる。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物を、がんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与して、患者のインターフェロンγ（ＩＦＮγ）産生を増加させる。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物を、がんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与して、患者のＴ細胞に対するＢ７−Ｈ４の阻害活性を遮断する。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物を、がんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与して、Ｂ７−Ｈ４を発現する患者のがん細胞を枯渇させる。
【０２７２】
さらなる実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物を、上記に示すように患者に投与し、さらに追加の治療薬、例えば化学療法薬または免疫刺激薬、例えば、Ｔ細胞チェックポイント阻害剤と併用して投与する。
【０２７３】
例示的な実施形態では、追加の治療薬は、拮抗性ＰＤ−１抗体などのＰＤ−１拮抗薬である。適切なＰＤ−１抗体として、例えば、ＯＰＤＩＶＯ（ニボルマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（ペンブロリズマブ）、またはＭＥＤＩ−０６８０（ＡＭＰ−５１４、ＷＯ２０１２／１４５４９３）が挙げられる。適切なＰＤ−１抗体としてはまた、例えば、カムレリズマブ（ＳＨＲ−１２１０）、チスレリズマブ（ＢＧＢ−Ａ３１７）、またはスパルタリズマブ（ＮＰＶＰＤＲ００１、ＮＶＳ２４０１１８、ＰＤＲ００１）も挙げられる。追加の治療薬には、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）も含まれる場合がある。ＡＭＰ−２２４と呼ばれる、ＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）の細胞外ドメインを含む組換えタンパク質も、ＰＤ−１受容体に拮抗させるために使用することができる。
【０２７４】
別の例示的な実施形態では、追加の治療薬は、拮抗性ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−Ｌ１拮抗薬である。適切なＰＤ−Ｌ１抗体として、例えば、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（アテゾリズマブ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ−９３６５５９（ＷＯ２００７／００５８７４）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（ＷＯ２０１３／７９１７４）またはｒＨｉｇＭ１２Ｂ７が挙げられる。
【０２７５】
さらに別の例示的な実施形態では、追加の治療薬は、拮抗性ＧＩＴＲ抗体などのＧＩＴＲアゴニストである。適切なＧＩＴＲ抗体として、例えば、ＴＲＸ−５１８（ＷＯ０６／１０５０２１、ＷＯ０９／００９１１６）、ＭＫ−４１６６（ＷＯ１１／０２８６８３）、またはＷＯ２０１５／０３１６６７に開示されているＧＩＴＲ抗体が挙げられる。別の実施形態では、追加の治療薬は、ＷＯ２０１７／０１５６２３に開示されているＧＩＴＲ抗体である。特定の実施形態では、ＧＩＴＲ抗体は以下から選択される：ａ）配列番号４１１の配列を有するＣＤＲ１、配列番号４１２の配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号４１３の配列を有するＣＤＲ３を含むＧＩＴＲ結合ドメイン（ＧＩＴＲ−ＢＤ）を含む抗体；ｂ）配列番号４１４の配列を有するＧＩＴＲ−ＢＤを含む抗体；ｃ）構造（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃを有するポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子で、（ｉ）ＧＩＴＲ−ＢＤは、配列番号４１１の配列を有するＣＤＲ１、配列番号４１２の配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号４１３の配列を有するＣＤＲ３を含み、（ｉｉ）リンカーはポリペプチドであり、（ｉｉｉ）ヒンジは免疫グロブリンヒンジ領域由来のポリペプチドであり、及び（ｉｖ）Ｆｃは免疫グロブリンＦｃポリペプチドである；ｄ）構造（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−（ＧＩＴＲ−ＢＤ）−リンカー−ヒンジ−Ｆｃを有するポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子で、（ｉ）ＧＩＴＲ−ＢＤは、配列番号４１４のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）リンカーはポリペプチドであり、（ｉｉｉ）ヒンジは免疫グロブリンヒンジ領域由来のポリペプチドであり、（ｉｖ）Ｆｃは免疫グロブリンＦｃポリペプチドである；ならびにｅ）配列番号４１５の配列を有するポリペプチドの２つのコピーを含む四価分子。四価分子の上記の実施形態のいずれかにおいて、ヒンジは、配列番号４１６、４１７または４１８の配列を有し得る。四価分子の上記の実施形態のいずれかにおいて、リンカーは、ＧＧ、ＧＧＧ、及び配列番号４１９〜４２５から選択されるアミノ酸配列を有し得る。特定の実施形態では、ヒンジは、配列番号４１７を有し、リンカーは配列番号４１９〜４２３のいずれか１つを有する。
【０２７６】
さらに別の例示的な実施形態では、追加の治療薬は、ＣＤ８０細胞外ドメイン（ＣＤ８０  ＥＣＤ）、例えば配列番号４２６；またはＷＯ２０１７／０７９１１７に開示されているＣＤ８０  ＥＣＤ及び融合パートナーを含むＣＤ８０  ＥＣＤ融合分子である。特定の実施形態では、ＣＤ８０  ＥＣＤ融合分子は、ＣＤ８０  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質である。特定の実施形態では、ＣＤ８０  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４２７または４２８の配列を有する。
【０２７７】
さらに別の例示的な実施形態では、追加の治療薬は、ＵＳ８，１８２，８１３、ＵＳ８，２０６，７１５、ＵＳ８，２６３，０７９、ＵＳ８，５１３，１９９またはＵＳ９，２２１，９１０に開示されている抗ＣＳＦ１Ｒ抗体である。特定の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は：ａ）配列番号４２９の配列を有する重鎖及び配列番号４３０の配列を有する軽鎖を含む抗体；ｂ）配列番号４３１の配列を有する重鎖（ＨＣ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号４３２の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ２、及び配列番号４３３の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ３を含む重鎖、ならびに配列番号４３４の配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、配列番号４３５の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ２、及び配列番号４３６の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ３を含む軽鎖を含む抗体；ならびにｃ）配列番号４３７の配列を有する重鎖及び配列番号４３８の配列を有する軽鎖を含む抗体から選択される。
【０２７８】
通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳類を含む非ヒト哺乳類も治療することができる。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、本発明は、医薬として使用するための、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物に関する。いくつかの態様では、本発明は、がんの治療方法で使用するための、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物に関する。いくつかの態様では、本発明は、本明細書において提供する有効量の抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体のがんの治療方法で使用するための、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物に関する。
【０２８０】
１．４．１．１  投与経路及び用量
本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または組成物は、非経口、皮下、静脈内、皮内、経皮、鼻腔内、腫瘍内、及び腫瘍流入領域リンパ節への投与などの様々な経路によって被験体に送達することができる。一実施形態では、抗体もしくはその抗原結合断片または組成物を、静脈内経路により投与する。
【０２８１】
病態の治療に有効な抗体もしくはその抗原結合断片または組成物の量は、疾患の性質に依存するであろう。組成物に使用する正確な用量もまた、投与経路、及び疾患の重症度に依存するであろう。
【０２８２】
１．４．２  検出及び診断の使用
本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、５．２節参照）を使用して、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降法、ウェスタンブロット法などの免疫測定法を含む当業者に公知の古典的な方法を用いて生体試料中のＢ７−Ｈ４タンパク質レベルを分析することができる。適切な抗体アッセイ標識は当技術分野で公知であり、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識；ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）などの放射性同位体；ルミノールなどの発光標識；及びフルオレセインやローダミンなどの蛍光標識、ならびにビオチンが挙げられる。そのような標識を使用して、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を標識することができる。あるいは、本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を認識する二次抗体またはその抗原結合断片を標識し、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と併用して、Ｂ７−Ｈ４タンパク質レベルを検出する。
【０２８３】
Ｂ７−Ｈ４タンパク質の発現レベルのアッセイは、第１の生体試料中のＢ７−Ｈ４タンパク質のレベルを、直接的に（例えば、絶対タンパク質レベルを測定または推定することにより）または相対的に（例えば、第２の生体試料中の疾患関連タンパク質レベルと比較することにより）、定性的または定量的に測定または推定することを含むことを企図している。第１の生体試料中のＢ７−Ｈ４ポリペプチド発現レベルを測定または推定し、障害を有していない個体の集団から採取した第２の生体試料から取得するか、または障害を有していない個体の集団のレベルを平均して決定する標準的なＢ７−Ｈ４タンパク質レベルと比較することができる。当技術分野で理解されているように、一度「標準的な」Ｂ７−Ｈ４ポリペプチドレベルが判明したら、これを比較用の標準として繰り返し使用することができる。
【０２８４】
本明細書中で使用する場合、用語「生体試料」とは、被験体、細胞株、組織、またはＢ７−Ｈ４を潜在的に発現する他の細胞供給源から得られる生体試料を指す。動物（例えば、ヒト）から組織生検及び体液を採取する方法は、当技術分野で周知である。生体試料には、末梢単核血液細胞が含まれる。生体試料はまた、血液試料であってもよく、その場合、循環腫瘍細胞（すなわち「ＣＴＣ」）は、Ｂ７−Ｈ４を発現し、検出され得る。
【０２８５】
本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、当業者に周知かつ標準的であり、また、本明細書に基づいた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏ用途を含む、予後、診断、モニタリング及びスクリーニング用途に使用することができる。免疫系の状態及び／または免疫応答のｉｎ  ｖｉｔｒｏアセスメント及び評価のための予後、診断、モニタリング及びスクリーニングアッセイ及びキットを利用して、予測、診断及びモニタリングし、免疫系の機能不全またはがんを有することがわかっているかまたは疑われる患者の試料を含む患者の試料を評価してもよい。このタイプの予後及び診断のモニタリング及び評価は、乳癌のＨＥＲ２タンパク質に対する抗体を利用して既に実践されており（ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔＴＭ，Ｄａｋｏ）、このアッセイはＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）を使用した抗体療法の患者の評価にも使用される。ｉｎ  ｖｉｖｏ用途には、指向性細胞療法、免疫系修飾、免疫応答の放射線造影法が含まれる。
【０２８６】
本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片には、検出可能なまたは機能的な標識を保有させることができる。蛍光標識を使用する場合、当技術分野で公知の現在利用可能な顕微鏡法及び蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）または両方の方法手順の組み合わせを利用して、特異的結合メンバーを同定及び定量してもよい。本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片には、蛍光標識を保有させることができる。例示的な蛍光標識として、例えば、反応性及び共役プローブ、例えば、アミノクマリン、フルオレセイン及びテキサスレッド、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ色素、Ｃｙ色素及びＤｙＬｉｇｈｔ色素が挙げられる。抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、同位体３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１７Ｌｕ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１９８Ａｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、及び１８６Ｒｅなどの放射性標識を保有することができる。放射性標識を使用する場合、当技術分野で公知の現在利用可能な計数手順を利用して、抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片のＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への特異的結合を同定及び定量することができる。標識が酵素である場合、当技術分野で公知の現在利用されている比色法、分光測光法、蛍光分光光度法、電流測定法またはガス測定法のいずれかによって検出を達成してもよい。これは、抗体またはその抗原結合断片とＢ７−Ｈ４の間の複合体の形成を可能にする条件下で、試料または対照試料を抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と接触させることにより達成することができる。抗体またはその抗原結合断片とＢ７−Ｈ４の間に形成されるすべての複合体を検出し、試料及び対照中で比較する。Ｂ７−Ｈ４に対する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の特異的結合に基づいて、抗体またはその抗原結合断片を用いて細胞表面上のＢ７−Ｈ４発現を特異的に検出することができる。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片はまた、免疫親和性精製を介してＢ７−Ｈ４を精製するために使用することができる。
【０２８７】
本明細書にはまた、例えば、Ｂ７−Ｈ４の存在の程度の定量的分析のための試験キットの形態で調製し得るアッセイ系が含まれる。系すなわち試験キットは、標識成分、例えば標識抗体または抗原結合断片、及び１つ以上の追加の免疫化学試薬を含み得る。キットの詳細については、以下の５．６節を参照されたい。
【０２８８】
いくつかの態様では、本明細書において、試料を抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、試料中のＢ７−Ｈ４のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの検出方法を提供する。いくつかの態様では、本明細書において、試料中のＢ７−Ｈ４をｉｎ  ｖｉｔｒｏで検出するための、本明細書において提供する抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。一態様では、本明細書において、被験体内または被験体から採取した試料中のＢ７−Ｈ４の検出において使用するための、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物を提供する。一態様では、本明細書において、診断薬として使用するための、本明細書において提供する抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物を提供する。好ましい一実施形態では、抗体は、検出可能な標識を含む。好ましい一実施形態では、Ｂ７−Ｈ４はヒトＢ７−Ｈ４である。好ましい一実施形態では、被験体はヒトである。
【０２８９】
１．５  キット
本明細書において、本明細書に記載の１つ以上の抗体もしくはその抗原結合断片またはその複合体を含むキットを提供する。特定の実施形態では、本明細書において、本明細書において提供する１つ以上の抗体またはその抗原結合断片などの、本明細書に記載する医薬組成物の１つ以上の成分で満たされた１つ以上の容器を含む医薬パックまたはキットを提供する。そのような容器（複数可）には、場合により、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関により規定される形式の通知書を添付することができ、その通知書は、ヒトへの投与についての製造、使用、または販売に関する機関による承認を反映したものである。
【０２９０】
本明細書ではまた、診断法に用い得るキットを提供する。一実施形態では、キットは、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片、好ましくは精製した抗体またはその抗原結合断片を、１つ以上の容器内に含む。特定の実施形態では、本明細書に記載のキットは、対照として使用することができる実質的に単離されたＢ７−Ｈ４抗原（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に記載のキットは、Ｂ７−Ｈ４抗原と反応しない対照抗体またはその抗原結合断片をさらに含む。別の特定の実施形態では、本明細書に記載のキットは、抗体またはその抗原結合断片のＢ７−Ｈ４抗原への結合を検出するための１つ以上の要素を含む（例えば、抗体またはその抗原結合断片は、検出可能な基質、例えば、蛍光化合物、酵素基質、放射性化合物または発光化合物に結合させることができるか、または第１の抗体またはその抗原結合断片を認識する第２の抗体またはその抗原結合断片を検出可能な基質に結合させることができる）。特定の実施形態では、本明細書において提供するキットは、組換え産生するかまたは化学合成したＢ７−Ｈ４抗原を含み得る。キットにおいて提供するＢ７−Ｈ４抗原は、固体支持体に付着させることもできる。より具体的な実施形態では、上記キットの検出手段には、Ｂ７−Ｈ４抗原が付着する固体支持体が含まれる。そのようなキットにはまた、非付着レポーター標識抗ヒト抗体もしくはその抗原結合断片、または抗マウス／ラット抗体もしくはその抗原結合断片が含まれ得る。この実施形態では、抗体またはその抗原結合断片のＢ７−Ｈ４抗原への結合を、前記レポーター標識抗体またはその抗原結合断片の結合によって検出することができる。
【０２９１】
以下の実施例は、限定するものではなく、例示として提供する。
【実施例】
【０２９２】
本節（すなわち、第６節）の実施例は、限定するものではなく、例示として提供する。
【０２９３】
実施例１：複数の適応症におけるＢ７−Ｈ４発現の出現率の評価
Ｂ７−Ｈ４マウスモノクローナル抗体Ａ５７．１（ＡＴＣＣカタログ番号ＰＴＡ−５１８０）を使用して、保存試料、切片全体の混合物、及び腫瘍マイクロアレイ上のＢ７−Ｈ４の存在を検出した。試料を一次抗体で処理し、ＤＡＢ（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に接続したポリマー検出系を用いて検出した。
【０２９４】
Ｂ７−Ｈ４は、浸潤性乳管癌、三種陰性乳癌、卵巣癌、非小細胞肺癌及び子宮内膜癌を含む様々ながん患者から採取した腫瘍組織の膜及びサイトゾルにおいて容易に検出された（図１）。さらに、表１１に記載の適応症においても発現頻度が高かった。
【表１１】
2021500853.tif 000035
【０２９５】
Ｂ７−Ｈ４は、他のがん、例えば、腎臓癌（例えば腎細胞癌）、膀胱癌（例えば尿路上皮細胞癌）、膵臓癌、及び甲状腺癌で発現する。例えば、Ｚｈｕ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｓｉａｎ  Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｅｖ．１４：３０１１−３０１５（２０１１），Ｋｒａｍｂｅｃｋ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  １０３：１０３９１−１０３９６（２００６），Ｆａｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ．７：６７６８−６７７５（２０１４），Ｘｕ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １１：１８４１−１８４６（２０１６）、及びＬｉｕ，Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ８：２５２７−２５３４（２０１４）参照。
【０２９６】
その後の実験では、様々な腫瘍タイプにおけるＢ７−Ｈ４出現率を免疫組織化学（ＩＨＣ）により評価した（図１Ｂ）。以下の腫瘍タイプ及び疾患段階を検査した：子宮内膜、浸潤性乳管癌（ＩＤＣ）、三種陰性乳癌（ＴＮ）、三種陰性乳癌（後期）、卵巣癌、膀胱癌（初期）、非小細胞肺癌（ｓｑ（扁平上皮）、早期）、非小細胞肺癌（ｓｑ、後期）、頭頸部癌、膀胱癌（後期）、小細胞肺癌、胆管癌、非小細胞肺癌（ａｄ（腺癌））、甲状腺癌、膵臓癌、胃癌、黒色腫、神経膠芽腫または多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）、及びメルケル細胞癌。腫瘍細胞上のＢ７−Ｈ４表面タンパク質発現は、入手可能な様々な腫瘍タイプ及び疾患段階（初期（Ｉ／ＩＩ）、後期（ＩＩＩ／ＩＶ））から獲得した腫瘍試料で評価した。抗体Ａ５７．１を使用したＩＨＣ強度を、カテゴリ０〜３で評価し、試料は、切片全体ですべての腫瘍細胞の最小１０％で観察された最高強度によって単一のＩＨＣスコアに帰属させた。腫瘍タイプごとに合計５０〜１００個の試料を評価した。
【０２９７】
実施例２：ヒトＢ７−Ｈ４に対する新規抗体の生成
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ酵母ディスプレイ系を使用して、全長ヒトＩｇＧ１ナイーブ抗体ライブラリからＢ７−Ｈ４特異的抗体を単離した。ライブラリは、免疫系を模倣するように設計されており；それらは定義済みの重鎖と軽鎖のペアを含んでいない。Ｂ７−Ｈ４タンパク質を使用してライブラリを複数ラウンドの陽性及び陰性選択戦略に供し、ヒト、カニクイザル、及びマウスのＢ７−Ｈ４標的と交差反応するＩｇＧを濃縮した。４ラウンドの選択後、得られたＩｇＧの配列を決定し、ユニークな抗体を産生させ、エピトープビニングについて、及び標的特異的細胞結合について、組換えＢ７−Ｈ４エクトドメインへの強い結合親和性及び単量体結合親和性の両方を評価した。
【０２９８】
Ｂ７−Ｈ４抗体を生成及び特徴付けるために使用した選択、親和性成熟、及び分析方法のより詳細な説明を以下に提供する。
【０２９９】
材料及び方法
ＰｉｅｒｃｅのＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎキットを使用して抗原をビオチン化した。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトκ−ＦＩＴＣ（ＬＣ−ＦＩＴＣ）、ＥｘｔｒＡｖｉｄｉｎ−ＰＥ（ＥＡ−ＰＥ）及びＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＡＦ６３３（ＳＡ−６３３）は、それぞれＳｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｓｉｇｍａ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓから入手した。Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ及びＭＡＣＳ  ＬＣ分離カラムは、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃから購入した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ（Ｈｕｍａｎ−ＰＥ）はＳｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈから入手した。
【０３００】
ナイーブディスカバリー
それぞれ約１０９個の多様性の８つのナイーブなヒト合成酵母ライブラリを、以前に記載されたように増殖させた（Ｙ．Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ，Ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ  ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｙｅａｓｔ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ａ  ＦＡＣＳ−ｂａｓｅｄ，ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｔｏｏｌ．ＰＥＤＳ  ２６．１０，６６３−７０（２０１３）；ＷＯ２００９０３６３７９；ＷＯ２０１０１０５２５６；及びＷＯ２０１２００９５６８参照）。最初の２ラウンドの選択では、以前に記載されたように、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＭＡＣＳ系を利用した磁気ビーズ選別技術を実施した（Ｓｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｈｉｇｈ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  ｅｐｉｔｏｐｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｏｒｔｉｎｇ  ｏｆ  ａｎ  ｓｃＦｖ  ｙｅａｓｔ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｌｉｂｒａｒｙ．“Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８６（１−２），１４１−１５３（２００４）参照）。簡潔に述べると、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリ）を洗浄緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）／０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））中で３０℃、３０分間、１０ｎＭビオチン化Ｆｃ融合抗原１０ｍｌの存在下でインキュベートした。４０ｍｌの氷冷洗浄緩衝液で１回洗浄した後、細胞ペレットを２０ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁し、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（５００μｌ）を酵母に加え、４℃で１５分間インキュベートした。次いで、酵母をペレット化し、２０ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＬＳカラムにロードした。２０ｍＬをロードした後、カラムを３ｍｌの洗浄緩衝液で３回洗浄した。次いで、カラムを磁場から除去し、酵母を５ｍＬの増殖培地で溶出し、一晩増殖させた。次のラウンドの選択は、フローサイトメトリーを使用して実行した。約２×１０７個の酵母をペレット化し、洗浄緩衝液で３回洗浄し、平衡条件下で濃度を低下させたビオチン化Ｆｃ融合抗原（１０〜１ｎＭ）とともに、交差反応性を得るために異なる種の１０ｎＭビオチン化Ｆｃ融合抗原とともに、または選択から非特異的抗体を除去するために多重特異性除去試薬（ＰＳＲ）とともに、３０℃でインキュベートした。ＰＳＲによる除去については、ライブラリを以前に記載されたようにビオチン化ＰＳＲ試薬の１：１０希釈液とともにインキュベートした（Ｙ．Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ  ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｙｅａｓｔ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ａ  ＦＡＣＳ−ｂａｓｅｄ，ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｔｏｏｌ．ＰＥＤＳ  ２６．１０，６６３−７０（２０１３）参照）。次いで、酵母を洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＬＣ−ＦＩＴＣ（１：１００希釈）及びＳＡ−６３３（１：５００希釈）またはＥＡＰＥ（１：５０希釈）二次試薬で４℃、１５分間染色した。洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞ペレットを０．３ｍＬの洗浄緩衝液に��懸濁し、ストレーナーでキャップしたソートチューブに移した。ソーティングは、ＦＡＣＳ  ＡＲＩＡソーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して行い、ソートゲートを決定して、所望の特性を有する抗体を選択した。望ましい特性をすべて備えた母集団が得られるまで、選択ラウンドを繰り返した。ソーティングの最終ラウンドの後、酵母をプレーティングし、特徴決定のために個々のコロニーをピックアップした。
【０３０１】
抗体の最適化
抗体の最適化を、軽鎖バッチシャッフル法を介して、その後、以下に記載するように重鎖及び軽鎖可変領域に多様性を導入することにより実施した。これらのアプローチのいくつかの組み合わせを各抗体に用いた。
【０３０２】
軽鎖バッチシャッフル：ナイーブ選択出力由来の重鎖プラスミドを、スマッシュ・アンド・グラブ法により酵母から抽出し、増殖させ、続いてＥ．ｃｏｌｉから精製し、多様性５×１０６の軽鎖ライブラリに形質転換した。選択は、ナイーブディスカバリーと同じ条件を用いて、１ラウンドのＭＡＣＳ及び４ラウンドのＦＡＣＳにより実行した。
【０３０３】
ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２の選択：単一抗体のＣＤＲＨ３を、１×１０８の多様性のＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２変異体を有する既製のライブラリに組み換え、ナイーブディスカバリーに記載するように、１ラウンドのＭＡＣＳ及び４ラウンドのＦＡＣＳにより選択を行った。各ＦＡＣＳラウンドにおいて、ライブラリのＰＳＲ結合、種の交差反応性、及び親和性の圧力を調べ、目的の特性を有する集団を得るためにソーティングを実行した。これらの選択では、３０℃の平衡条件下で、濃度を低下させたビオチン化ＨＩＳ−Ｂ７−Ｈ４抗原（１００〜１ｎＭ）を使用して、親和性圧力をかけた。
【０３０４】
ＶＨ  Ｍｕｔ選択：エラープローンＰＣＲにより、重鎖可変領域（ＶＨ）に変異導入した。次いで、この変異導入ＶＨ及び重鎖発現ベクターを、すでに親の軽鎖プラスミドを有する酵母に形質転換することにより、ライブラリを作成した。２ラウンドのＦＡＣＳソーティングを使用して、以前のサイクルと同様に選択を実行した。各ＦＡＣＳラウンドで、ライブラリのＰＳＲ結合及び親和性の圧力を調べ、目的の特性を有する母集団を取得するためにソーティングを実行した。ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２の選択において、前述のように、これらの選択に関する親和性の圧力を実行した。
【０３０５】
ＣＤＲＬ１及びＣＤＲＬ２の選択：単一抗体のＣＤＲＬ３を、約５×１０５の多様性のＣＤＲＬ１及びＣＤＲＬ２変異体を有する既製のライブラリに組み換え、３ラウンドのＦＡＣＳソーティングを使用して、以前のサイクルと同様に選択を実行した。各ＦＡＣＳラウンドで、ライブラリのＰＳＲ結合及び親和性の圧力を調べ、目的の特性を有する母集団を取得するためにソーティングを実行した。ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２の選択において、前述のように、これらの選択の親和性の圧力を実行した。
【０３０６】
抗体の産生及び精製
酵母クローンを飽和するまで増殖させ、その後、振盪しながら３０℃で４８時間、発現誘導した。発現誘導後、酵母細胞をペレット化し、上清を精製のために回収した。プロテインＡカラムを使用してＩｇＧを精製し、ｐＨ２．０の酢酸で溶出した。パパイン消化によってＦａｂフラグメントを生成させ、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）で精製した。
【０３０７】
ＦｏｒｔｅＢｉｏ  ＫＤ測定
ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定は、Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ３８４上で一般的に以前に記載されたように実施した（Ｅｓｔｅｐ  ｅｔ  ａｌ，Ｈｉｇｈ  ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｂｉｎｎｉｎｇ．  Ｍａｂｓ  ５（２），２７０−２７８（２０１３）参照）。簡潔に述べると、ＡＨＱセンサーにＩｇＧをオンラインでロードすることによってＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を実施した。センサーを、アッセイ緩衝液中、３０分間オフラインで平衡化し、ベースラインを確立するために６０秒間オンラインでモニタリングした。ＩｇＧをロードしたセンサーを１００ｎＭ抗原に３分間曝露し、その後、解離速度測定のために３分間アッセイ緩衝液に移した。一価の親和性評価では、ＩｇＧの代わりにＦａｂを使用した。この評価では、ビオチン化していないＦｃ融合抗原をＡＨＱセンサーにオンラインでロードした。センサーを、アッセイ緩衝液中、３０分間オフラインで平衡化し、ベースラインを確立するために６０秒間オンラインでモニタリングした。抗原をロードしたセンサーを１００ｎＭ  Ｆａｂに３分間曝露し、その後、解離速度測定のためにアッセイ緩衝液に３分間移した。１：１結合モデルを使用して、すべての反応速度を分析した。
【０３０８】
ＦｏｒｔｅＢｉｏエピトープビニング／リガンドブロッキング
エピトープビニング／リガンドブロッキングは、標準的なサンドイッチ形式のクロスブロッキングアッセイを用いて実施した。対照の抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサーにロードし、センサー上の非占有Ｆｃ結合部位を無関係なヒトＩｇＧ１抗体でブロックした。次いで、センサーを１００ｎＭの標的抗原に曝露し、続いて第２の抗標的抗体またはリガンドに曝露した。抗原結合後の二次抗体またはリガンドによる追加の結合は、非占有エピトープ（非競合）を示し、一方、結合がないことは、エピトープブロッキング（競合またはリガンドブロッキング）を示す。
【０３０９】
４つの非競合抗体（「ビニング抗体」１、２、３、及び４）を使用して、ＳＰＲによりＢ７−Ｈ４外部ドメインの４つの別個の部分を同定した。このキャンペーン中に生成されたすべての抗体を、Ｂ７−Ｈ４外部ドメインに対するこれら４つのビニング抗体との競合的結合について評価した。Ｂ７−Ｈ４抗体が４つのビニング抗体の１つ（例えば、ビニング抗体１）と競合する場合、Ｂ７−Ｈ４抗体はそのＢＩＮ（例えば、ＢＩＮ１）にあると判定した。Ｂ７−Ｈ４抗体が４つのビニング抗体のうちの２つ（例えば、ビニング抗体２及び３）と競合する場合、Ｂ７−Ｈ４抗体はそれらの両方のＢＩＮ（例えば、ＢＩＮ２／３）にあると判定した。
【０３１０】
ＩｇＧ抗体は少なくとも４つの結合ビンに分類され、＞９０％の抗体が、親和性応答の範囲＞０．１ｎｍ〜＜１００ｎＭで、ヒト／カニクイザルまたはマウスＢ７−Ｈ４に結合した。組換えタンパク質結合分子のおよそ７５％は、細胞上のＢ７−Ｈ４にも結合する。
【０３１１】
細胞結合分析
抗原を過剰発現する１００，０００個の細胞を洗浄緩衝液で洗浄し、１００μｌの１００ｎＭ  ＩｇＧとともに室温で５分間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄し、氷上で１５分間、１００ｕｌの１：１００抗ヒトＩｇＧＰＥとともにインキュベートした。次いで、細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩアナライザー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。
【０３１２】
ＰＳＲ結合アッセイ
ＰＳＲアッセイは、以前に記載されたように実施した（Ｘｕ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ  ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｙｅａｓｔ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ：Ａ  ＦＡＣＳ−ｂａｓｅｄ，ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｔｏｏｌ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ  ２６（１０）：６６３−６７０参照）。簡潔に述べると、ＣＨＯ細胞から可溶性膜タンパク質を調製した。濃縮した膜画分を、ＮＨＳ−ＬＣＢｉｏｔｉｎ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を使用してビオチン化した。この多重特異性試薬をＩｇＧ提示酵母とともにインキュベートし、その後洗浄した。次に、二次標識ミックス（Ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ−Ｒ−ＰＥ、抗ヒトＬＣ−ＦＩＴＣ、及びヨウ化プロピジウム）を混合物に加えた。ＨＴＳサンプルインジェクターを使用して、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩアナライザー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で試料を分析した。フローサイトメトリーデータをＲ−ＰＥチャネルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）について分析し、非特異的結合を評価した。低、中、及び高ＰＳＲ  ＭＦＩ値を示す３つの参照抗体に基づいて、ＭＦＩ値を０〜１に正規化した。
【０３１３】
動的走査型蛍光分析
１０ｕＬの２０×Ｓｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅを、２０ｕＬの０．２〜１ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂまたはＦａｂ溶液に添加する。ＲＴ−ＰＣＲ機器（ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６  ＲＴ  ＰＣＲ）を使用して、試料プレートの温度を０．５Ｃ刻みで４０〜９５Ｃに上げ、各温度で２分間平衡化する。生データの負の１次導関数を用いて、Ｔｍを抽出する。
【０３１４】
ＡＣ−ＳＩＮＳ
ＡＣ−ＳＩＮＳアッセイは、以前に記載されたように実施した（Ｌｉｕ  Ｙ，  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｆｏｒ  ｄｅｖｅｌｏｐａｂｉｌｉｔｙ  ｄｕｒｉｎｇ  ｅａｒｌｙ−ｓｔａｇｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｓｅｌｆ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ．  ＭＡｂｓ  ６（２）：４８３−４９２参照）。簡潔に述べると、金ナノ粒子（Ｔｅｄ  Ｐｅｌｌａ  Ｉｎｃ．）を、８０％の捕捉用抗ヒトヤギＩｇＧ  Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）、及び２０％のポリクローナルヤギ非特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）でコーティングした。次いで、目的の抗体を粒子とともに２時間インキュベートし、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ２及びＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ６ソフトウェアを使用して波長のシフトを測定した。自己相互作用クローンは、ＰＢＳ試料に比べて、大きな波長シフトを示す。
【０３１５】
実施例３：Ｂ７−Ｈ４に対するヒトモノクローナル抗体の構造的特徴決定
Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒトＩｇＧ１／κアイソタイプである。可変重鎖（ＶＨ）領域は、生殖系列遺伝子ＶＨ１、ＶＨ３、及びＶＨ４の対立遺伝子と、Ｖｋ１及びＶｋ３を含む生殖系列遺伝子の対立遺伝子の可変軽鎖（ＶＬ）を含む。抗体のいくつかのサブセットは、ＶＨ及びＶＬのそれぞれのＣＤＲ領域内で７２〜１００％の範囲の高い同一性を共有している。同じ生殖系列対立遺伝子を共有する抗体は、ＶＨ及びＶＬフレームワーク（ＦＲ）領域で８８〜１００％の範囲の高い同一性を有している。Ｂ７−Ｈ４抗体の配列を表１〜１０に示す。
【０３１６】
実施例４：Ｂ７−Ｈ４タンパク質に結合するモノクローナル抗体の特徴決定
抗Ｂ７−Ｈ４抗体のＢ７−Ｈ４−細胞外ドメイン（ＥＣＤ）への結合親和性を、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により測定した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性アッセイの詳細は、上記の実施例２に記載されている。簡潔に述べると、プロテインＡのチップ上に、組換えヒトＢ７−Ｈ４−ヒトＩｇＧ１（配列番号４０９）タンパク質を、続いて、捕捉用チップ上の残存する結合部位を飽和させるために、アイソタイプ対照ｈＩｇＧ１を固定化した。次いで、抗Ｂ７−Ｈ４抗体の結合を評価した。さらに、カニクイザル（配列番号２）及びマウスＢ７−Ｈ４（配列番号３）への抗体結合も同じプロトコールを使用して評価した。結果を表１２にまとめる。
Ｂ７−Ｈ４−ヒトＩｇＧ１：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＬＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＶＮＶＤＹＮＡＳＳＥＴＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＶＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＥＳＥＩＫＲＲＳＨＬＱＬＬＮＳＫＡＳＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ  （配列番号４０９）
【表１２−１】
2021500853.tif 000036
【表１２−２】
2021500853.tif 000037
【０３１７】
さらに、選択された抗Ｂ７−Ｈ４抗体の、ヒトＢ７−Ｈ４のＮ末端ドメイン（Ｂ７−Ｈ４  ＩｇＶ−ヒトＩｇＧ１；配列番号４１０）に対する結合親和性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定した。簡潔に述べると、抗ヒトＦａｂ抗体をカルボキシル誘導体化ＳＰＲチップ表面に固定化し、得られた表面に抗Ｂ７−Ｈ４抗体を５ｕｇ／ｍｌで３０秒間、捕捉した。次いで、様々な濃度のＢ７−Ｈ４  ＩｇＶ−ヒトＩｇＧ１（０ｎＭ、３．７ｎＭ、１１．１ｎＭ、３３．３ｎＭ、１００ｎＭ、及び３００ｎＭ）を表面上に流し、結合フェーズ中に抗Ｂ７−Ｈ４抗体に結合させ、続いて解離フェーズ中に緩衝液で洗浄した。１：１結合モデルを使用してデータをフィッティングし、結果を表１３にまとめた。
Ｂ７−Ｈ４  ＩｇＶ−ヒトＩｇＧ１：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＬＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ  （配列番号４１０）
【表１３】
2021500853.tif 000038
【０３１８】
したがって、複数のアッセイは、抗体がＢ７−Ｈ４に結合することを示している。
【０３１９】
実施例５：エピトープマッピング
抗Ｂ７−Ｈ４抗体の結合ビンを、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により測定した。エピトープマッピングアッセイについては、上記の実施例２に詳細に記載されている。簡潔に述べると、プロテインＡチップ上に、第１の抗Ｂ７−Ｈ４抗体を、続いて対照ヒトＩｇＧ１抗体を捕捉し、チップ上の追加の結合部位を飽和させた。次いで、センサーチップを抗原（Ｂ７−Ｈ４−ヒトＩｇＧ１）（配列番号４０９）に曝露し、続いて第２の抗Ｂ７−Ｈ４抗体を曝露し、その結合について評価した。非Ｂ７−Ｈ４抗体を第１の抗体として使用した後の結合との比較により、エピトープビンを決定した。結果を表１２にまとめる。
【０３２０】
実施例６：細胞の表面に発現したＢ７−Ｈ４に結合するモノクローナル抗体の特徴決定
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株に形質移入して、全長ヒト、カニクイザル、マウス、またはラットＢ７−Ｈ４を発現させた。さらに、内在性ヒトＢ７−Ｈ４を発現するＳＫ−ＢＲ−３乳癌細胞株を使用して、細胞表面に発現したＢ７−Ｈ４に結合する抗体の能力を評価した。１×１０５個の親ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株または形質移入ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株を１００ｎＭのＢ７−Ｈ４抗体とともにインキュベートした。インキュベーション後、細胞をペレット化し、洗浄し、二次標識抗体とともにインキュベートし、フローサイトメーターでサンプルを取得した。親細胞株に対する結合倍率（ＦＯＰ）を、以下のように計算した：ＭＦＩ形質移入ＨＫＥ２９３Ｔ細胞／ＭＦＩ親ＨＥＫ２９３Ｔ細胞。１０を超えるＦＯＰ値は、特異的結合を示すものとみなした。
【０３２１】
Ｂ７−Ｈ４抗体の細胞結合能を評価するために、カニクイザル、マウスまたはラットＢ７−Ｈ４を発現するように形質移入した１×１０５  ＳＫ−ＢＲ−３細胞または２９３細胞を滴定用量のＢ７−Ｈ４抗体とともにインキュベートした。インキュベーション後、細胞をペレット化し、洗浄し、二次標識抗体とともにインキュベートし、フローサイトメーターでサンプルを取得した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを分析し、ＭＦＩを抗体濃度に対してプロットした。ＥＣ５０細胞結合能を、非線形回帰曲線近似法（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を使用して計算した。
【０３２２】
すべてのＢ７−Ｈ４抗体は、ヒトＢ７−Ｈ４、カニクイザルＢ７−Ｈ４、またはマウスＢ７−Ｈ４を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞への結合を示した。抗体はまた、細胞表面にヒトＢ７−Ｈ４を内在的に発現するＳＫ−ＢＲ−３細胞、または細胞表面にカニクイザル、マウス、またはラットＢ７−Ｈ４を発現するように形質移入したＨＥＫ２９３Ｔ細胞株への強力な用量依存的結合を示した。これらのデータは、Ｂ７−Ｈ４抗体の大部分が、カニクイザル、マウス、及びラットＢ７−Ｈ４と完全に交差反応することを示している（図２Ａ及び２Ｂ、表１４）。
【０３２３】
【表１４−１】
2021500853.tif 000039
【表１４−２】
2021500853.tif 000040
【０３２４】
実施例７：モノクローナル抗体Ｔ細胞チェックポイント遮断活性の特徴決定
Ｂ７−Ｈ４抗体のＴ細胞チェックポイント遮断活性を特徴決定するために、製造元の指示に基づいてＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＴ細胞濃縮キットを使用して、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から初代ヒトＴ細胞を濃縮した。濃縮したＴ細胞を、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓの存在下、２×１０５細胞／ｍＬで、細胞あたり１ビーズの比率で、３７℃でインキュベートした。６日後、ビーズを磁気的に除去し、Ｔ細胞を洗浄し、３７℃で１０Ｕ／ｍＬ  ＩＬ−２の存在下、１×１０６細胞／ｍＬでインキュベートした。４日後、Ｔ細胞を洗浄し、１×１０６細胞／ｍＬを、１０ｕｇ／ｍＬの抗体または抗体の用量漸増の存在下、２×１０６細胞／ｍＬの人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）とともに３７℃でインキュベートした。ａＡＰＣは、細胞表面で抗ヒトＣＤ３クローンＯＫＴ３のｓｃＦｖ形式と全長ヒトＢ７−Ｈ４を共発現するように形質移入したＨＥＫ２９３Ｔ細胞株である。ａＡＰＣをマイトマイシンＣで３７℃、１時間処理し、Ｔ細胞共培養に加える前に徹底的に洗浄した。Ｔ細胞、ａＡＰＣ及びＢ７−Ｈ４抗体の共培養の７２時間後、プレートを遠心分離し、上清を採取してＥＬＩＳＡによりＩＦＮγ産生を評価し、細胞を採取し、染色してＦＡＣＳにより増殖を評価した（具体的には、ＣＤ４及びＣＤ８に対する抗体の存在下で各ウェルの細胞をインキュベートした）。次いで、製造元の指示に従って、細胞を洗浄し、固定化し、透過処理し、Ｅｄｕ−Ｃｌｉｃｋ試薬の存在下でインキュベートした。細胞を洗浄し、増殖中のＣＤ４＋、ＣＤ８＋または全Ｔ細胞の数を、フローサイトメトリーを用いて測定した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを分析した。単一濃度の抗体のみで処理した試料については、データを計算し、対照のヒトＩｇＧ処置試料に対する増加倍率として報告した。用量漸増の抗体で処置した試料について、ＩＦＮγ産生を抗体濃度に対してプロットし、非線形回帰曲線近似法（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を使用してＥＣ５０効力を計算した。
【０３２５】
すべてのＢＩＮ２／３及びＢＩＮ３抗体は、ＩＦＮγ産生及び／またはＣＤ４＋、ＣＤ８＋または全Ｔ細胞増殖の増加により測定されるように、Ｔ細胞チェックポイント遮断活性を再現可能にもたらした。図３Ａは、抗体１５４４１がＴ細胞増殖を少なくとも３％増加させ、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも２％増加させることを示している。図３Ａはまた、抗体１５４６１がＴ細胞増殖を少なくとも２１％増加させ、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも９％増加させ、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも１１％増加させることを示している。図３Ｂ〜３Ｄは、他の用量依存性Ｔ細胞チェックポイント遮断活性を示す。
【表１５】
2021500853.tif 000041
【表１６−１】
2021500853.tif 000042
【表１６−２】
2021500853.tif 000043
【０３２６】
実施例８：アフコシル化及びフコシル化モノクローナル抗体の生成
グリカン部分のフコース含量が減少したＦｃ領域を有する抗体は、完全にフコシル化された抗体に比べて高いＡＤＣＣ活性を示す場合がある（Ｎｉｗａ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １１（６）：２３２７−３６（２００５））。Ｂ７−Ｈ４抗体を、通常のフコシル化抗体を産生するためにＣＨＯ−ｘ細胞（Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ８７（５）：６１４−２２（２００４））において、及びアフコシル化抗体を産生するためにＣＨＯ細胞株（ＣＨＯ−ｙ細胞）（同上）において、生成した。
【０３２７】
実施例９：アフコシル化及びフコシル化モノクローナル抗体の結合の特徴決定
実施例４に記載のプロトコールに従って、フコシル化及びアフコシル化抗Ｂ７−Ｈ４抗体をＳＰＲにより特徴決定した。抗体は、ヒトＢ７−Ｈ４タンパク質への同様の結合を示し、したがって結合に対するグリコシル化の影響はなかった（表１７）。
【表１７】
2021500853.tif 000044
【０３２８】
フコシル化及びアフコシル化抗Ｂ７−Ｈ４抗体はまた、フローサイトメトリーによっても特徴決定した。これらの実験では、全長のカニクイザル、マウス、またはラットＢ７−Ｈ４を発現するように、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株を形質移入した。さらに、ＳＫ−ＢＲ−３乳癌細胞株を発現する内在性ヒトＢ７−Ｈ４を使用して、Ｂ７−Ｈ４抗体の細胞結合能を評価した。全長ヒト、カニクイザル、マウス、またはラットＢ７−Ｈ４を発現するように形質移入した１×１０５個のＳＫ−ＢＲ−３細胞または２９３細胞を、滴定用量のＢ７−Ｈ４抗体の存在下でインキュベートした。インキュベーション後、細胞をペレット化し、洗浄し、二次標識抗体の存在下でインキュベートし、フローサイトメーターで測定した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを分析した。ＭＦＩを抗体濃度に対してプロットし、非線形回帰曲線近似法（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を使用してＥＣ５０細胞結合能を計算した。
【０３２９】
Ｂ７−Ｈ４抗体は、細胞表面上にＢ７−Ｈ４を内在的に発現するＳＫ−ＢＲ−３細胞、または細胞表面上にカニクイザル、マウス、またはラットＢ７−Ｈ４を発現するように形質移入した２９３細胞株に対して、強力な用量依存的結合を示した。結合能及び種間交差反応性は、抗体がフコシル化されているかアフコシル化されているかによって影響を受けなかった（図４Ａ〜４Ｄ及び表１７）。
【０３３０】
実施例１０：ヒトＦｃγ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）Ｖ１５８対立遺伝子へのアフコシル化及びフコシル化モノクローナル抗体の結合
抗体２０５０２は、フコシル化（Ａｂ−Ｆ）及びアフコシル化（Ａｂ−Ａ）の両方として産生し、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によりＦｃｇＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）に対するＦｃ領域の結合親和性について試験した。簡潔に述べると、ブロッキング試薬としてｐＨ８．０の１００ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液中の１００ｍＭエチレンジアミンを含むアミンカップリングキットを使用して、プロテインＡをデキストランチップに共有結合させた。Ａｂ−ＡまたはＡｂ−Ｆを別々のフローセルで２つの密度で捕捉し、プロテインＡ誘導体化フローを基準対照として用いた。ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）をＨＢＳ−Ｐ＋ランニングバッファーで希釈し、６つの濃度（０ｎＭ、１．３７ｎＭ、１２．３ｎＭ、３７ｎＭ、１１１ｎＭ、３３３ｎＭ、及び１０００ｎＭ）で、２連で注入した。Ａｂ−Ａ結合の結合定数、解離定数、及び親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  １：１結合モデルを使用して計算した。Ａｂ−Ａ及びＡｂ−Ｆ結合の親和性定数は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ定常状態親和性モデルを使用して測定した。アフコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体（Ａｂ−Ａ）は、フコシル化Ｆｃを有する同じ抗体（Ａｂ−Ｆ）よりも、Ｆｃγ受容体ＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対して１４０倍高い親和性を示す（図５Ａ及び５Ｂ、表１８）。
【表１８】
2021500853.tif 000045
【０３３１】
実施例１１：アフコシル化及びフコシル化モノクローナル抗体のＴ細胞チェックポイント遮断活性
製造元の指示に基づいて、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＴ細胞濃縮キットを使用して、初代ヒトＴ細胞をＰＢＭＣから濃縮した。濃縮したＴ細胞を２×１０５細胞／ｍＬで、細胞あたり１ビーズの比率の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓの存在下、３７℃でインキュベートした。６日後、ビーズを磁気的に除去し、Ｔ細胞を洗浄し、１×１０６細／ｍＬで、１０Ｕ／ｍＬ  ＩＬ−２の存在下、３７℃でインキュベートした。４日後、Ｔ細胞を洗浄し、２×１０６細胞／ｍＬの濃度の人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）とともに、１×１０６細胞／ｍＬを、Ｂ７−Ｈ４抗体の用量漸増の存在下、３７℃でインキュベートした。マイトマイシンＣを用いてａＡＰＣを３７℃、１時間処置し、徹底的に洗浄した後、Ｔ細胞との共培養に加えた。Ｔ細胞、ａＡＰＣ、及びＢ７−Ｈ４抗体の共培養の７２時間後、プレートを遠心分離し、上清を採取し、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮγ産生について評価した。抗体濃度に対してＩＦＮγ産生をプロットし、非線形回帰曲線近似法（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を使用してＥＣ５０効力を計算した。
【０３３２】
Ｂ７−Ｈ４抗体は、ＩＦＮγ産生の増加による測定で、強力なＴ細胞チェックポイント遮断活性を示した。さらに、アフコシル化抗体とフコシル化抗体の間に効力の明らかな差異はなかった（図６Ａ及び表１９）。
【表１９】
2021500853.tif 000046
【０３３３】
次いで、製造元の指示に従って、ヒト汎Ｔ細胞単離キットを使用して、ＨＬＡ−Ａ２＋ドナーＰＢＭＣから初代ヒトＴ細胞を濃縮した。最初に、５×１０６の濃縮汎Ｔ細胞を、１．５×１０７の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ、１００ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−２及び１５ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−７の存在下、４８時間活性化することにより、ＭＡＲＴ−１  ＴＣＲを発現するＴ細胞を生成した。次いで、２００ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−２、３０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−７、及び１０ｕｇ／ｍＬポリブレンの存在下で、５×１０６の活性化Ｔ細胞にＭＡＲＴ−１  ＴＣＲレンチウイルス粒子を形質導入した。形質導入の２４時間後、ＭＡＲＴ−１  ＴＣＲ＋汎Ｔ細胞を３３．３ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−２及び５ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−７の存在下で１５日間にわたって増殖させた。ＨＬＡ−Ａ２を発現する標的細胞株を生成するために、内在性Ｂ７−Ｈ４を発現するヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−４６８及びＳＫ−ＢＲ−３に、４８時間、ＨＬＡ−Ａ２レンチウイルス粒子を形質導入した。さらに、ＨＬＡ−Ａ２＋ＳＫ−ＢＲ−３細胞株のＢ７−Ｈ４をノックアウトした。ＭＡＲＴ−１  ＴＣＲ＋汎Ｔ細胞を、１：１のＥ：Ｔ比で様々な標的細胞株、５００μｇ／ｍＬのＭＡＲＴ−１ペプチド及び６７ｎＭのＢ７−Ｈ４抗体２０５０２（アフコシル化）またはヒトアイソタイプ対照の存在下で共培養した。共インキュベーションの２４時間後、プレートを遠心分離し、上清を採取し、ＡｌｐｈａＬｉｓａにより、製造元の指示に従ってＩＬ−２産生について評価した。
【０３３４】
図６Ｂに示すように、ＳＫ−ＢＲ−３  Ｂ７−Ｈ４＋細胞を含むウェルでは、ＳＫ−ＢＲ−３  ＫＯ細胞に比べてＩＬ−２産生が減少したことから、このアッセイにおいてＢ７−Ｈ４は、生理学的レベルで内在的に発現した場合に、Ｔ細胞チェックポイントリガンド活性を示した。さらに、Ｂ７−Ｈ４抗体は、アイソタイプ対照処置細胞に比べてＩＬ−２産生の増加が測定されたように、Ｔ細胞チェックポイント遮断活性も示した（図６Ｂ）。したがって、このデータは、Ｂ７−Ｈ４抗体２０５０２（アフコシル化）のＴ細胞チェックポイント遮断活性を確認するとともに、Ｂ７−Ｈ４抗体２０５０２がＢ７−Ｈ４を内在的に発現する細胞においてＴ細胞チェックポイント遮断活性を示すことも示している。
【０３３５】
実施例１２：アフコシル化及びフコシル化モノクローナル抗体ＡＤＣＣ活性
Ｂ７−Ｈ４発現標的細胞株に対するＡＤＣＣ活性について、Ｂ７−Ｈ４抗体を評価した。具体的には、初代ヒトＰＢＭＣ細胞を、１×１０６細胞／ｍＬで、２００ＩＵ／ｍＬ  ＩＬ−２により３７℃でサイトカイン活性化した。翌日、細胞を洗浄し、カルセイン−ＡＭで標識したＳＫ−ＢＲ−３標的細胞とともにエフェクター：標的比４０：１でインキュベートした。インキュベーションの４時間後、蛍光光度計を使用して標的細胞の溶解を定量化した。Ｔｒｉｔｏｎ／Ｘ処置試料を最大溶解対照試料として利用し、一方、培地のみを処置した試料をバックグラウンド溶解対照試料として利用した。特異的溶解の割合（％）は、以下のように計算した：［１−（（試料−培地対照）／（最大溶解−培地対照））］×１００。特異的溶解の割合（％）を抗体濃度に対してプロットし、非線形回帰曲線近似法（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を使用してＥＣ５０の効力を計算した。
【０３３６】
Ｂ７−Ｈ４抗体は、内在性Ｂ７−Ｈ４を発現する乳房細胞株ＳＫ−ＢＲ−３に対する強力な用量依存的ＡＤＣＣ活性を示した。さらに、アフコシル化抗体は、フコシル化抗体に比べて有意に強力なＡＤＣＣ活性を示した（図７及び表２０）。
【表２０】
2021500853.tif 000047
【０３３７】
実施例１３：ＡＤＣＣ活性と受容体密度との相関
Ｂ７−Ｈ４の密度を、製造元の仕様に従ってＦＡＣＳにより、ＳＫ−ＢＲ−３、ＨＣＣ１５６９、ＺＲ−７５−１、ＭＤＡ−ＭＢ−４８、及びＨＣＣ１９６４細胞の表面で定量化した。具体的には、１×１０５個の細胞を、１５ｕｇ／ｍＬ  Ｂ７−Ｈ４抗体の存在下で氷上、２５分間インキュベートした。並行して、１滴のＱｕａｎｔｕｍ（商標）Ｓｉｍｐｌｙ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ（ＱＳＣ）ミクロスフェア（高濃度の抗マウスＩｇＧ捕捉抗体が予めコーティングされている）も、１５ｕｇ／ｍＬ  Ｂ７−Ｈ４抗体の存在下で氷上、２５分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞とＱＳＣミクロスフェアをペレット化して洗浄し、フローサイトメーター上で試料を取得した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを分析した。平均蛍光強度（ＭＦＩ）を計算し、ＱｕｉｃｋＣａｌ（登録商標）スプレッドシートに入力した。事前に割り当てられた抗体結合容量（ＡＢＣ）値に各ビーズの蛍光チャネル値を関連付ける回帰が自動的に計算される。標識した細胞のＭＦＩ値もテンプレートに追加されると、ＡＢＣ値が割り当てられる。
【０３３８】
異なるレベルのＢ７−Ｈ４細胞表面密度を有するＢ７−Ｈ４発現標的細胞株に対するＡＤＣＣ活性について、Ｂ７−Ｈ４抗体を評価した。具体的には、１×１０４個のＳＫ−ＢＲ−３、ＨＣＣ１５６９、ＺＲ−７５−１、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、またはＨＣＣ１９６４標的細胞を、４℃でＢ７−Ｈ４抗体を用量漸増させながら共インキュベートした。２５分後、ＰｒｏｍｅｇａのＪｕｒｋａｔ−ヒトＣＤ１６レポーター細胞の単回使用バイアルを解凍し、７．５×１０４個の細胞を標的細胞／Ｂ７−Ｈ４抗体混合物に加え、３７℃でインキュベートした。２４時間後、試料を室温（ＲＴ）にし、Ｂｉｏ−Ｇｌｏ緩衝液の存在下でインキュベートした。ＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルリーダーで基質と発光を定量した。抗体濃度に対する発光としてデータをプロットし、非線形回帰曲線近似法（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を使用してＥＣ５０の効力を計算した。
【０３３９】
Ｂ７−Ｈ４抗体のＡＤＣＣ活性は、Ｂ７−Ｈ４細胞表面密度に依存していた：細胞表面分子の数が減少するにつれて、最大ＡＤＣＣ活性の量も減少した。さらに、アフコシル化抗体は、フコシル化抗体に比べて、特に低レベルのＢ７−Ｈ４細胞表面密度を有する標的細胞に対して高いＡＤＣＣ活性を示した（図８）。
【０３４０】
実施例１４：ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍効果
７週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ホリスター、ＣＡ）から購入し、試験開始前に最大３週間順化させた。マウス結腸直腸癌細胞株ＣＴ２６を、マウスＢ７Ｈ３の膜貫通ドメインを有するマウスＢ７−Ｈ４細胞外ドメインからなるキメラタンパク質を発現するように改変した。これらの腫瘍細胞を、マウスの右脇腹の皮下に１．０×１０６細胞／２００μｌ／マウスで移植した。接種の前に、細胞を１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地中で３回以上継代培養した。細胞を、５％ＣＯ２の加湿雰囲気下、３７℃で増殖させた。８０〜８５％のコンフルーエンスに達したところで細胞を回収し、ミリリットルあたり５×１０６細胞で、無血清ＲＰＭＩ１６４０とマトリゲルの１：１混合物中に再懸濁した。
【０３４１】
腫瘍成長のための細胞移植後、マウスを週２回モニタリングした。腫瘍測定では、各腫瘍の長さ及び幅を、キャリパーを使用して測定し、式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ２）／２に従って体積を計算した。処置開始日に、すべての腫瘍を測定し、外れ値を除外し、マウスを処置群に無作為に割り当てた。抗Ｂ７−Ｈ４処置には、２０５０２（図９Ａ）及び２２２１３（図９Ｂ）を含む抗体を使用した。対照として、マウスにポリクローナルヒトＩｇＧ（Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ，ＢＥ００９２）またはマウスＩｇＧ２ａ（Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ，ＢＥ００８５）を投与した。接種後４日目または５日目から週２回、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により抗体を４回投与した。
【０３４２】
腫瘍体積が動物の体重の１０％、またはおよそ２０００ｍｍ３を超えるまで、腫瘍を少なくとも週２回、測定し続けた。腫瘍サイズの変化を、動物にＣＴ２６細胞を接種した日と比較した個々の腫瘍をグラフ化することによって示す。Ｐ値は、試験の各日に計算した腫瘍体積の独立２群両側ｔ検定分析を使用して計算した。２０５０２または２２２１３での処置は、１０〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した場合、ヒトＩｇＧ対照に比べて腫瘍成長を有意に減少させた（ｐ＜０．０５）（図９Ａ及び９Ｂ）。
【０３４３】
４Ｔ１細胞（マウス乳癌細胞株）またはＢ１６（マウス黒色腫細胞株）を移植したマウスを使用して、同様の実験を実施した。これらのマウスに、フコシル化マウスＩｇＧ２ａに融合した２０５０２可変領域を含む２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆと呼ばれる２０ｍｇ／ｋｇの２０５０２のマウス代用物、またはマウスＩｇＧ対照抗体を処置した。２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆで処置すると、４Ｔ１乳癌モデルとＢ１６黒色腫モデルの両方において、マウスＩｇＧ対照に比べて腫瘍成長が有意に減少した（図１０）。
【０３４４】
ＭＸ−１ヒト乳癌異種移植片モデルにおいてアフコシル化２０５０２を使用して、追加の実験も実施した。雌のＮＳＧ（ＮＯＤ−ｓｃｉｄ，ＩＬ２Ｒ  ｇａｍｍａｎｕｌｌ）マウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（バーハーバー、ＭＥ）から購入し、試験開始の１週間前に順応させた。ヒト乳癌細胞株ＭＸ−１は、細胞表面Ｂ７Ｈ４タンパク質を内在的に発現することが以前に示されている。これらの腫瘍細胞を、無血清ＲＰＭＩ１６４０と１ミリリットルあたり５×１０６細胞のマトリゲルの１：１混合物中、１．０×１０６細胞／１００μｌ／マウスで、マウスの右脇腹の皮下に移植した。
【０３４５】
腫瘍成長のための細胞移植後、マウスを週２回モニタリングした。腫瘍の測定では、ノギスを使用して各腫瘍の長さ及び幅を測定し、式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ）２）／２に従って体積を計算した。接種後７日目に、すべての腫瘍を測定し、外れ値を除外し、マウスを処置群に無作為に割り当てた。すべての動物に、残りの試験のために循環器内に構成的ヒトＩＬ−１５発現を誘導するＤＮＡ構築物を投与した。９日目に、半数のマウスに、ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（タクウィラ、ＷＡ）から入手した２０×１０６のヒト末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）の静脈内（ｉ．ｖ．）注射を行った。１１日目から、マウスにアフコシル化２０５０２（２０ｍｇ／ｋｇ）または陰性対照として生理食塩水を投与した。治療薬を、週２回、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により４回投与した。
【０３４６】
腫瘍体積が動物の体重の１０％を超えるまで、または動物が初期体重の１５％以上の減少を示すまで、腫瘍を少なくとも週２回測定し続けた。Ｐ値は、一元配置分散分析を使用して２８日目のすべての処置群の平均腫瘍体積を比較して計算した。図１１に示すように、アフコシル化２０５０２による処置は、事前にマウスにヒトＰＢＭＣを注射した場合にのみ、生理食塩水対照に比べて腫瘍成長を有意に減少させた（ｐ＜０．０５）。
【０３４７】
実施例１５：抗ＰＤ−１抗体と組み合わせたｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効力
方法
８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ホリスター、ＣＡ）から購入し、試験開始前に最大２週間順化させた。マウス乳癌細胞株４Ｔ１を、マウスＢ７−Ｈ４の細胞外ドメインとマウスＢ７Ｈ３の膜貫通ドメインを有するキメラタンパク質を発現するように改変した。腫瘍細胞を、０．５×１０５細胞／５０μｌ／マウスで、マウスの乳腺脂肪パッドに同所的に移植した。接種の前に、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地中で細胞を３回以上継代培養した。細胞を、５％ＣＯ２の加湿雰囲気下、３７□Ｃで増殖させた。８０〜８５％のコンフルーエンスに達したところで細胞を回収し、無血清ＲＰＭＩ１６４０中に再懸濁し、各マウスの腹側腹部の乳腺脂肪パッド内へ接種した。
【０３４８】
腫瘍成長のための細胞移植後、マウスを週２回モニタリングした。キャリパーを使用して各腫瘍の長さ及び幅を測定し、式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ）２）／２に従って体積を計算した。処置開始日に、すべての腫瘍を測定し、外れ値を除外し、マウスを処置群に無作為に割り当てた。抗Ｂ７−Ｈ４処置には、フコシル化マウスＩｇＧ２ａに融合した２０５０２可変領域を含む２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆと呼ばれる２０５０２のマウス代用物を利用した。対照として、マウスにマウスＩｇＧ２ａ（抗ＨＥＬ）を投与した。２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−ＦまたはマウスＩｇＧ２ａを、接種後１１日目から週２回、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により４回投与した。抗ＰＤ−１（ＦｃサイレントマウスＩｇＧ２ａドメインを含むＲＭＰ１−１４（Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ）の改変版）を、接種後１１日目から週２回腹腔内（ｉ．ｐ．）注射で３回投与した。腫瘍の体積が動物の体重の１０％、またはおよそ２０００ｍｍ３を超えるまで、腫瘍を少なくとも週２回、測定し続けた。
【０３４９】
結果
腫瘍サイズの変化、平均腫瘍体積の変化、及び生存率を、それぞれ図１２Ａ、１２Ｂ及び１２Ｃに示す。２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆまたは抗ＰＤ−１のいずれかによる処置は、マウスＩｇＧ２ａ対照に比べて腫瘍成長を有意に減少させた（ｐ＜０．０５）。２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆと抗ＰＤ−１の同時投与は、いずれかの単剤療法に比べて腫瘍成長阻害を有意に増強した（ｐ＜０．０５）。さらに、併用療法は、１２匹中５匹のマウスで完全な腫瘍退縮をもたらした。Ｐ値は、各群間での複数の比較により、試験の各日に計算した腫瘍体積の一元配置分散分析を使用して計算した。
【０３５０】
実施例１６：抗Ｂ７−Ｈ４抗体はＮＫ細胞及びＴ細胞浸潤を増加させ、ＰＤ−Ｌ１を上方制御する
８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ホリスター、ＣＡ）から購入し、４Ｔ１＋マウスＢ７−Ｈ４／Ｈ３細胞を０．５×１０５細胞／５０μｌ／マウスで、乳房脂肪パッドに同所的に移植した。処置開始日に、すべての腫瘍を測定し、外れ値を除外し、マウスを処置群に無作為に割り当てた。マウスに、ヒトＩｇＧ１（抗ＨＥＬ）またはアフコシル化２０５０２を２０ｍｇ／ｋｇで、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により２回（接種後１１日目及び１４日目に）投与した。
【０３５１】
２回目の投与の２４時間後、マウスを安楽死させ、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で灌流した。次いで腫瘍を抽出し、１０％ホルマリンで５時間固定化し、ＰＢＳでリンスし、３０％スクロース溶液中に少なくとも２４時間供した。−１５℃チャンバー（クリオスタット）内で、腫瘍をＴｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ（登録商標）Ｏ．Ｃ．Ｔ．化合物に埋め込み、２０μｍに切片化した。組織をマウントしたスライドをＰＢＳ中の０．３％Ｔｒｉｔｏｎでリンスし、５％正常ヤギ血清でブロッキングし、一次抗体（抗ＮＫｐ４６、抗ＣＤ３、または抗ＰＤ−Ｌ１；１：５００）で一晩染色した。各腫瘍の２つの連続切片を染色した。
【０３５２】
一晩のインキュベーションに続いて、スライドを０．３％Ｔｒｉｔｏｎでリンスし、次いで、暗い湿性チャンバー内で二次抗体（１：４００）の存在下、３時間インキュベートし、リンスした。次いで、組織を１％パラホルムアルデヒドで固定化し、ＰＢＳでリンスした。ＤＡＰＩを含むＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ（登録商標）を使用してカバースリップをマウントし、Ｃｙｔｏｓｅａｌ（商標）で密封し、暗いチャンバー内で乾燥させた。蛍光顕微鏡とカメラを使用して手動で画像を取得した。図１３に示すように、アフコシル化２０５０２で処置すると、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が増加し（抗ＮＫｐ４６抗体での測定による）、腫瘍辺縁部でＣＤ３＋Ｔ細胞が増加し、腫瘍中心部でＣＤ３＋Ｔ細胞がやや増加した。ＰＤ−Ｌ１発現の増加も観察された。
【０３５３】
実施例１７：抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、用量依存的に４Ｔ１−及びＢ１６−マウスＢ７−Ｈ４／Ｈ３モデルのｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍成長を有意に低下させる
６〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７Ｂｌ／６マウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ホリスター、ＣＡ）から購入し、試験開始の最大３週間前まで順化させた。マウス乳癌細胞株４Ｔ１及びメラノーマ細胞株Ｂ１６−Ｆ１０を、マウスＢ７−Ｈ４の細胞外ドメインとマウスＢ７−Ｈ３の膜貫通ドメインからなるキメラタンパク質を発現するように改変した。これらの腫瘍細胞は、４Ｔ１＋マウスＢ７−Ｈ４／Ｈ３については０．０５×１０６細胞／５０μｌ／マウスで乳腺脂肪パッドに同所的に、またはＢ１６＋マウスＢ７−Ｈ４／Ｈ３については０．５×１０６細胞／１００μｌ／マウスでマウスの右脇腹の皮下に移植した。接種の前に、細胞を１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ−１６４０またはＤＭＥＭ培地中で３回以上継代培養した。細胞は、５％ＣＯ２の加湿雰囲気下、３７℃で増殖させた。
【０３５４】
腫瘍成長のために細胞移植後、マウスを週２回モニタリングした。腫瘍の測定では、ノギスを使用して各腫瘍の長さ及び幅を測定し、式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ）２）／２に従って体積を計算した。処置開始日に、すべての腫瘍を測定し、外れ値を除外し、マウスを処置群に無作為に割り当てた。マウスに、２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体（抗Ｂ７−Ｈ４、マウスＩｇＧ２ａ、フコシル化（「ｃｍＦＰＡ１５０−Ｆ」とも呼ばれる）またはマウスＩｇＧ２ａ対照抗体を、接種後１１日目（４Ｔ１＋マウスＢ７−Ｈ４／Ｈ３）または６日目（Ｂ１６＋マウスＢ７−Ｈ４／Ｈ３）に静脈内（ｉ．ｖ．）注射により４回投与したが、ただし、２０ｍｇ／ｋｇの群は除き、これらについては試験終了まで週２回連続投与した。
【０３５５】
腫瘍体積が動物の体重の１０％、またはおよそ２０００ｍｍ３を超えるまで、少なくとも週２回、腫瘍を測定し続けた。腫瘍サイズの変化は、動物に接種した日に対する平均腫瘍体積をグラフ化することによって示す。２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆによる処置は、４Ｔ１＋マウスＢ７−Ｈ４／Ｈ３モデルでは１ｍｇ／ｋｇ以上の用量で（図１４Ａ及び１４Ｂ参照）、Ｂ１６＋マウスＢ７−Ｈ４／Ｈ３モデルでは３ｍｇ／ｋｇ以上の用量で（図１５Ａ及び１５Ｂ）投与した場合に、マウスＩｇＧ２ａ対照に比べて腫瘍成長を有意に減少させた（ｐ＜０．０５）。統計的有意性は、すべての処置群をマウスＩｇＧ２ａと比較する一元配置分散分析を使用して計算した。
【０３５６】
図１４Ａ及び１４Ｂは、２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体がＢ７−Ｈ４／Ｈ３を発現する４Ｔ１の増殖を有意に低下させることを示している。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、Ｂ７−Ｈ３  ＴＭに融合したマウスＢ７−Ｈ４  ＥＣＤを発現するように改変した４Ｔ１乳癌細胞を同所性に接種した。接種後１１日目から週２回、マウスに２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体（抗Ｂ７−Ｈ４、マウスＩｇＧ２ａ、フコシル化）を投与した。２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体は、用量依存的な腫瘍成長の減少を示し、３０日目の一元配置分散分析による評価で、３０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．０００３）、２０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．０１０３）、１０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．０４１９）、３ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．０２７７）、及び１ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．０３３３）において有意な腫瘍成長の阻害をもたらした。
【０３５７】
図１５Ａ及び１５Ｂは、２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体がＢ７−Ｈ４／Ｈ３を発現するＢ１６の増殖を有意に低下させることを示している。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに、Ｂ７−Ｈ３  ＴＭに融合したマウスＢ７−Ｈ４  ＥＣＤを発現するように改変したＢ１６−Ｆ１０メラノーマ細胞を皮下接種した。接種後６日目から週２回、マウスに２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体（抗Ｂ７−Ｈ４、マウスＩｇＧ２ａ、フコシル化）を投与した。２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体は、用量依存的な腫瘍成長の減少を示し（図１５Ａ）、２３日目の一元配置分散分析による評価で、３０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．００８５）、２０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．００４１）、１０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．００１７）、及び３ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．０４２０）において有意な腫瘍成長の阻害をもたらした（図１５Ｂ）。
【０３５８】
したがって、２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体は、２つの異なるがんモデルにおいて用量依存的に腫瘍サイズを有意に減少させた。乳癌及びメラノーマ細胞株におけるこのデータは、２０５０２−マウスＩｇＧ２ａ−Ｆ抗体をがん患者の治療に使用することができることを示している。
配列表
【表２１−１】
2021500853.tif 000048
【表２１−２】
2021500853.tif 000049
【表２１−３】
2021500853.tif 000050
【表２１−４】
2021500853.tif 000051
【０３５９】
本発明は、本明細書に記載する特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。実際、記載したものに加えて本発明の様々な改変が、前述の説明及び添付の図面から当業者には明らかとなろう。そのような改変は、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。
【０３６０】
本明細書中に引用するすべての参考文献（例えば、刊行物または特許もしくは特許出願）は、あたかも個々の参考文献（例えば、刊行物または特許もしくは特許出願）があらゆる目的のためにその全体が具体的かつ個別に参照により援用されることを示すことと同様に、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に援用される。
【０３６１】
他の実施形態は、添付の特許請求の範囲内にある。
【図１Ａ】
2021500853.tif 000052
【図１Ｂ】
2021500853.tif 000053
【図２Ａ】
2021500853.tif 000054
【図２Ｂ】
2021500853.tif 000055
【図３Ａ】
2021500853.tif 000056
【図３Ｂ】
2021500853.tif 000057
【図３Ｃ】
2021500853.tif 000058
【図３Ｄ】
2021500853.tif 000059
【図４】
2021500853.tif 000060
【図５】
2021500853.tif 000061
【図６Ａ】
2021500853.tif 000062
【図６Ｂ】
2021500853.tif 000063
【図７】
2021500853.tif 000064
【図８】
2021500853.tif 000065
【図９Ａ】
2021500853.tif 000066
【図９Ｂ】
2021500853.tif 000067
【図１０】
2021500853.tif 000068
【図１１】
2021500853.tif 000069
【図１２】
2021500853.tif 000070
【図１３】
2021500853.tif 000071
【図１４】
2021500853.tif 000072
【図１５】
2021500853.tif 000073
【配列表】
2021500853000001.app
【国際調査報告】
2021500853.tif 000074
2021500853.tif 000075
2021500853.tif 000076
2021500853.tif 000077
2021500853.tif 000078
2021500853.tif 000079
2021500853.tif 000080
2021500853.tif 000081