(57)【要約】  本発明は、アルコール使用障害を予防、緩和、改善及び／又は治療するためのＰＰＡＲαアゴニスト化合物の使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルコール使用障害の予防、緩和、改善及び／又は治療に使用される少なくとも１つのＰＰＡＲαアゴニスト化合物を含む組成物であって、該組成物は、ＣＢ１受容体アンタゴニスト活性若しくはＰＰＡＲψアゴニスト活性を有する第２の化合物を含むことを特徴とする、又は該組成物は、前記化合物がＰＰＡＲαアゴニスト活性と同時にＣＢ１受容体アンタゴニスト活性若しくはＰＰＡＲψアゴニスト活性を示すことを特徴とする、組成物。
【請求項２】
前記組成物は、少なくとも１つのＰＰＡＲαアゴニスト化合物及びＣＢ１受容体アンタゴニスト活性を有する化合物を含む配合剤である、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
前記組成物は、少なくとも１つのＰＰＡＲαアゴニスト化合物及びＰＰＡＲψアゴニスト活性を有する化合物を含む配合剤である、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
前記組成物は、前記化合物がＰＰＡＲαアゴニスト活性と同時にＣＢ１受容体アンタゴニスト活性を示すことを特徴とする、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
前記組成物は、前記化合物がＰＰＡＲαアゴニスト活性と同時にＰＰＡＲψアゴニスト活性を示すことを特徴とする、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
ａ．前記ＰＰＡＲαアゴニストは、クロフィブラート、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート、エラフィブラノル、プラステロン、シプロフィブラート、オレオイルエタノールアミド、ＣＰ７７５１４６、ＧＷ７６４７、ＷＹ１４６４３又はそれらの任意の薬学的に許容可能な塩からなる群より選択され、
ｂ．前記ＣＢ１受容体アンタゴニストは、アンタゴニストであるＡＶＥ−１６２５、ＣＰ−９４５５９８、ＳＬＶ３１９、Ｖ２４３４３、ＡＭ２５１、ＡＭ４１１３、ＡＭ６５４５、ＣＰ９４５５９８塩酸塩、ＭＪ１５、ＮＩＤＡ４１０２０、ＰＦ５１４２７３、（±）−ＳＬＶ３１９、プロパセタモール、テトラヒドロカンナビバリンから選択されるか、又はＡＭ２８１、ヘモプレッシン、ＬＹ３２０１３５、ＳＲ１４１７１６Ａ、ＴＣ−Ｃ１４Ｇ若しくはそれらの薬学的に許容可能な塩から選択されるインバースアゴニストである、請求項２又は４に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
ａ．前記ＰＰＡＲαアゴニストは、クロフィブラート、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート、エラフィブラノル、プラステロン、シプロフィブラート、オレオイルエタノールアミド、ＣＰ７７５１４６、ＧＷ７６４７、ＷＹ１４６４３又はそれらの任意の薬学的に許容可能な塩からなる群より選択され、
ｂ．前記ＰＰＡＲγアゴニストは、（２Ｓ）−２−（４−クロロフェノキシ）−３−フェニルプロパン酸、（２Ｓ）−２−（ビフェニル−４−イルオキシ）−３−フェニルプロパン酸、（２Ｓ）−２−エトキシ−３−｛４−［２−（１０Ｈ−フェノキサジン−１０−イル）エトキシ］フェニル｝プロパン酸、（Ｓ）−３−（４−（２−カルバゾール−９−イル−エトキシ）−フェニル）−２−エトキシ−プロピオン酸、２−クロロ−５−ニトロ−Ｎ−フェニルベンズアミド、２−｛５−［３−（７−プロピル−３−トリフルオロメチルベンゾ［Ｄ］イソキサゾール−６−イルオキシ）プロポキシ］インドール−１−イル｝エタン酸、３−（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸、３−［５−（２−ニトロペンタ−１−エン−１−イル）フラン−２−イル］安息香酸、３−フルオロ−Ｎ−［１−（４−フルオロフェニル）−３−（２−チエニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］ベンゼンスルホンアミド、バルサラジド、グリピジド、メサラジン、ミチグリニド、ナテグリニド、レパグリニド、スルファサラジン、Ｔ１３１、テルミサルタン、バロキソロン、チアゾリジノン、１５−デオキシ−デルタ１２，１４−プロスタグランジンＪ２、Ｓ２６９４８、ｎＴＺＤｐａ、ＬＧ１００７５４、ＧＷ１９２９塩酸塩、エダグリタゾン、シグリタゾン、イノリタゾン、ＳＲ２５９５、ＧＷ１９２９又はそれらの任意の薬学的に許容可能な塩からなる群より選択される、請求項３又は５に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
前記化合物は、Ｎ−［１−（３，４−ジヒドロキシフェニル）プロパン−２−イル］オレアミド（ＯＬＨＨＡ）又はその任意の薬学的に許容可能な塩である、請求項４に記載の使用のためのＰＰＡＲαアゴニスト活性及びＣＢ１受容体アンタゴニスト活性を同時に示す化合物。
【請求項９】
前記化合物は、化合物３−（（４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）メチル）−Ｎ−（４−（ペンチルカルバモイル）フェニル）ベンズアミド（ＮＦ１０−３６０）又はその任意の薬学的に許容可能な塩である、請求項５に記載の使用のためのＰＰＡＲαアゴニスト活性及びＰＰＡＲγアゴニスト活性を同時に示す化合物。
【請求項１０】
前記組成物は、アルコール使用障害の予防、緩和及び／又は治療に使用される医薬組成物である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物は、アルコール使用障害の予防、緩和及び／又は治療に使用される食品組成物である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学及び薬学の分野に含まれ、少なくとも１つのＣＢ１受容体（カンナビノイド受容体）アンタゴニスト及び／又はＰＰＡＲγ（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ）アゴニストと組み合わせた、ＰＰＡＲα（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アルファ）アゴニスト化合物のアルコール使用障害を予防、緩和、改善及び／又は治療するための使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルコールの消費は社会に広まっている。スペイン国におけるアルコール及びその他の薬物に関する最新の調査（Encuesta Sobre Alcohol y Otras Drogas en Espana）（国家薬品計画（Plan Nacional Sobre Drogas）、EDADES 2015-2016）によると、年齢が１５歳〜６４歳の人口の７７％（男性の８２．９％及び女性の７２．１％）が前年アルコールを消費し、またアルコールはタバコと共に早い年齢（１６．６歳）で消費が始まる薬物の１つである（国家薬品計画、EDADES 2015-2016）。この意味で、年齢が１４歳〜１８歳のスペインの中等教育学校の若い生徒の７５％超がアルコールを消費し、約３２％が過飲又は消費リスクを示し、約２２％が前月に酩酊状態になっていた（国家薬品計画、ESTUDES 2014/2015）。さらに、疫学研究ESEMeD-Espana（Haro et al.2006. Med Clin (Barc.), 126(12):445-51）に基づくと、アルコール依存症又はアルコール使用障害（ＡＵＤ：Alcohol Use Disorder）は、３．６％と推定されスペインで最も蔓延している生涯にわたる障害の１つであり、女性（０．９６％）より男性（６．４７％）でより一般的である。整数と小数を区切るためにピリオドが使用されることに留意されたい。
【０００３】
アルコール依存症又はアルコール使用障害は罹患率及び死亡率の主な原因の１つであり、この壊滅的な慢性障害に対処するのに役立つ医薬品はほとんど市場に出回っていない。ドーパミン、セロトニン、ノルアドレナリン、グルタメート、オピオイドペプチド、ノシセプチン又はコルチコトロピン放出因子を含む複数のシグナル伝達系がアルコール使用に関連している（非特許文献１）。慢性的なアルコール乱用はこれらの神経伝達物質系の不均衡をもたらし、今日利用可能な治療法はそれらを修正しようとするものである。実際には、これは、オピエートのアンタゴニストであるナルトレキソン及びナルメフェン、又はＮＭＤＡグルタミン酸受容体のアンタゴニストであるアカンプロセートの場合である。しかしながら、現在承認されている医薬品は、これらの薬物に反応する患者の亜集団のみを標的としており、アルコール使用障害に罹る全ての患者の一部を包含しているに過ぎない。ＡＵＤの患者の治療ニーズをカバーするための代替療法が不足している。
【０００４】
アルコールの影響を受ける複数のシグナル伝達系の中で、エンドカンナビノイドに関連する脂質（アナンダミド、２−ＡＧ、アシルエタノールアミド及びその他のアラキドン酸誘導体）は、中毒、アルコール探索行動及び禁酒期間後の消費の再発を含むアルコール依存症サイクルの様々な段階に関与していることが分かっている。それらはまた、アルコール依存症、アルコール誘発性神経炎症又はアルコール関連肝疾患に関連する不安及び感情障害にも関与している（非特許文献２）。さらに、遺伝学的研究により、アルコール使用障害に関連する内因性カンナビノイドシグナル伝達に関与するタンパク質をコードする遺伝子の遺伝的変異が特定されている。この知見により、アルコール使用の開始及び維持におけるこのシグナル伝達系の重要な役割が確認される。
【０００５】
これらの発見に基づいて、複数の医薬品化学プログラムが、アルコール使用障害の前臨床モデルで使用されてきた、内因性カンナビノイド系に関連する特定の薬物を生み出した。特定の薬物としては以下が挙げられる：
ａ）カンナビノイドＣＢ１受容体アゴニスト及びアンタゴニスト、
ｂ）カンナビノイドＣＢ２受容体アゴニスト及びアンタゴニスト、
ｃ）ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アルファ（ＰＰＡＲα）アゴニスト、
ｄ）ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）アゴニスト、
ｅ）脂肪酸アミド加水分解酵素（ＦＡＡＨ、主要な内因性カンナビノイド分解酵素の１つ）阻害剤、又は、
ｆ）内因性カンナビノイド再取り込み阻害剤（ＡＭ４０４等）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Koob GF. 2014. Handb Clin Neurol. 125:33-54
【非特許文献２】Serrano et al. Neuropsychopharmacology. 43, pages 1840-1850 (2018)
【発明の概要】
【０００７】
しかしながら、おそらく２つの独立した化学物質の使用から生じる可能性のある望ましくない副作用が、単一の薬物の使用から生じる可能性のある望ましくない副作用よりも大きい場合があるという事実のために、併用治療を使用する戦略はこれまで試験されていない。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ＯＬＨＨＡの急性投与後のラットにおけるアルコール自己投与の用量依存的阻害の図である。結果は、対照群の自己投与の応答のパーセンテージ対Ｌｏｇ［ＯＬＨＨＡ用量、ｍｇ／ｋｇ単位］として表される。ＥＣ５０値を、非線形回帰によって計算した。Ａ．ＰＰＡＲγアゴニストであるシグリタゾン；Ｂ．内因性ＰＰＡＲαリガンドであるオレオイルエタノールアミド；Ｃ．合成ＰＰＡＲγアゴニストであるＷＹ１４６４３；Ｄ．カンナビノイドＣＢ１受容体アンタゴニスト／インバースアゴニストであるリモナバンの効果。
【図２】Ａ．ウィスターラットにおける２ボトル選択パラダイムでの使用に対する１ｍｇ／ｋｇのＮＦ１０−３６０の効果の図である。Ｂ．ウィスターラットのアルコール自己投与に対する１ｍｇ／ｋｇのＮＦ１０−３６０の効果の図である。データは平均±ＳＥＭを表す。＊ビヒクルに対してＰ＜０．０５。
【図３】Ａ．図３Ａ〜図３Ｂは、成体雄性ウィスターラットにおけるエタノール自己投与（図３Ａ及び図３Ｂ）に対するＰＰＡＲαアゴニスト及びＣＢ１受容体アンタゴニストＯＬＨＨＡの効果を示す図である。図３Ｃ〜図３Ｆは、投与の２時間、８時間及び２４時間後の５ｍｇ／ｋｇのＯＬＨＨＡの毎日の投与の効果を示す。ＯＬＨＨＡは、注射の２時間後にアルコール消費量を減らした（Ｆ（１．１４）＝３９．５、Ｐ＜０．０００１（図３Ｃ））。この効果は、ＯＬＨＨＡの投与後８時間でも観察され（Ｆ（１．１４）＝２３．９、Ｐ＜０．００１（図３Ｄ））、２４時間後にほとんど消失した（Ｆ（１．１４）＝４．７、Ｐ＝０．０４７（図３Ｅ））。ＯＬＨＨＡによる処理中の総アルコール摂取量は、いずれの場合も有意に減少した（Ｆ（１．１４）＝５．１、Ｐ＜０．０５（図３Ｆ））。最後に、図３Ｇは、ロング−エバンス（Long-Evans）ラットにおけるオピエートオキシコドンの自己投与に対するＯＬＨＨＡの効果を示す。ＥＣ５０値を、非線形回帰を使用して測定した。データは平均±ＳＥＭを表す。＊ビヒクルに対してＰ＜０．０５。
【図４】ビヒクル又はＯＬＨＨＡ  ５ｍｇ／ｋｇで毎日処理したｍｓＰラット又は２０％水中のグルコース（Ａ）、トリグリセリド（Ｂ）、コレステロール（Ｃ）、尿酸（Ｄ）、尿素（Ｅ）及びクレアチニン（Ｆ）の血漿レベル。同じ動物におけるトランスアミナーゼ活性（パネルＧ及びパネルＨ）、並びにサイトカインＩＬ−６（Ｉ）及びＴＮＦα（Ｊ）の血漿レベル。パネルＫ〜パネルＯ、ＯＬＨＨＡで処理した後の主要な脂質生成酵素の肝臓におけるｍＲＮＡ発現（アセチル補酵素Ａカルボキシラーゼ（ＡＣＡＣａ、パネルＫ）、ステアロイル補酵素Ａデサチュラーゼ１（ＳＣＤ−１、パネルＬ）及び脂肪酸シンターゼ（Ｆａｓｎ、パネルＭ））、チトクロームＣオキシダーゼ４（Ｎ）及び核内受容体ＰＰＡＲα（Ｏ）。データは平均±ＳＥＭを表す。それぞれの対照に対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の著者らは、実施例に示されるように、２つの薬理学的プロファイルを併せ持つ薬物が相加的／相乗的な薬理学的効果を有し、アルコール摂取を減少させることを実証した。
【００１０】
発明の化合物の医学的使用
したがって、本発明の第１の態様は、アルコール使用障害の予防、緩和、改善及び／又は治療に使用される、少なくとも１つのＰＰＡＲαアゴニスト及び少なくとも１つのＣＢ１受容体アンタゴニストを含む配合剤（以下、本発明の第１の配合剤）に関する。
【００１１】
本発明では、アルコール使用障害は、使用の影響及び乱用消費の影響の両方を含む。
【００１２】
本明細書では、「配合剤」という用語、又は「並列（juxtaposition）」とも呼ばれる用語は、配合剤の成分が、それらの組み合わせた、別個の又は時系列の適用に利用可能となるように、例えば真の組成物においてブレンドとして存在する必要がないことを意味する。したがって、「並列した（juxtaposed）」という表現は、成分の物理的な分離を考慮すると、必ずしも真の組み合わせではないことを意味する。
【００１３】
本発明のこの態様の好ましい実施形態では、本発明の第１の配合剤は、好ましくは有効成分として、少なくとも１つのＰＰＡＲαアゴニスト及び少なくとも１つのＣＢ１受容体アンタゴニストだけを含むが、該配合剤は、薬理学的に許容可能な賦形剤及びビヒクルを更に含み得る。
【００１４】
本発明のこの態様の別の好ましい実施形態では、本発明の第１の配合剤のＰＰＡＲαアゴニストは、クロフィブラート、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート、エラフィブラノル、プラステロン、シプロフィブラート、オレオイルエタノールアミド、ＣＰ７７５１４６、ＧＷ７６４７、ＷＹ１４６４３又は任意の塩、好ましくは任意の薬学的に許容可能な塩、又は薬学的に許容可能なエステル、互変異性体、多形体若しくは水和物、又は異性体、プロドラッグ、溶媒和物若しくはそれらの類縁体、又はそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【００１５】
本発明のこの態様の別の好ましい実施形態では、本発明の第１の配合剤のＣＢ１受容体アンタゴニストは、アンタゴニストであるＡＶＥ−１６２５、ＣＰ−９４５５９８、ＳＬＶ３１９、Ｖ２４３４３、ＡＭ２５１、ＡＭ４１１３、ＡＭ６５４５、ＣＰ９４５５９８塩酸塩、ＭＪ１５、ＮＩＤＡ４１０２０、ＰＦ５１４２７３、（±）−ＳＬＶ３１９、プロパセタモール、テトラヒドロカンナビバリン、又はＡＭ２８１、ヘモプレッシン、ＬＹ３２０１３５、ＳＲ１４１７１６Ａ、ＴＣ−Ｃ１４Ｇから選択されるインバースアゴニスト、又は任意の塩、好ましくは任意の薬学的に許容可能な塩、薬学的に許容可能なエステル、互変異性体、多形体、水和物、又はそれらの異性体、プロドラッグ、誘導体、溶媒和物若しくは類縁体、又はそれらの任意の組み合わせから選択される。
【００１６】
２つの薬物の併用（combinatorial use）は相加的／相乗的作用を提供する可能性があるが、２つの独立した化学物質の使用から生じる可能性のある望ましくない副作用は、二重プロファイルを持つ単一の薬物の使用から生じる可能性のある望ましくない副作用よりも大きい場合がある。二重リガンド、すなわち、２つの異なる薬理学的標的に作用する個々の分子の同定及び使用は、安全性及び有効性の点で利点を提供し得る。
【００１７】
したがって、本発明の第１の態様のより好ましい実施形態は、アルコール使用障害の予防、緩和、改善及び／又は治療に使用される、ＰＰＡＲαアゴニスト活性及びＣＢ１受容体アンタゴニスト活性を同時に示す化合物（以下、本発明の第１の化合物）に関する。より好ましくは、化合物は、式（Ｉ）の化合物又は任意の塩、好ましくは任意の薬学的に許容可能な塩、又は薬学的に許容可能なエステル、互変異性体、多形体若しくは水和物、又はそれらの異性体、プロドラッグ、溶媒和物若しくは類縁体、又はそれらの任意の組み合わせである。
【化１】
2021534141.tif 000002
式（Ｉ）Ｎ−［１−（３，４−ジヒドロキシフェニル）プロパン−２−イル］オレアミド（ＯＬＨＨＡ）
【００１８】
ＰＰＡＲαアゴニスト活性及びＣＢ１受容体アンタゴニスト活性を同時に示す他の化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化２】
2021534141.tif 000003
（式中、
Ｘ及びＹは、独立して同一でも異なってもよく、Ｈ、ハロゲン及びメチルから選択され、
ｎは、１〜４の整数であり、
Ｒ１及びＲ２は、独立して同一又は異なってもよく、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから選択されるか、又はそれらは２つの酸素原子間の単結合により結合して新たな環を形成することができ、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及びＣ１〜Ｃ４アルケニルから選択され、
Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン及びＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され、
Ｒ５は、一般式（ＩＶ）の化合物であり、
【化３】
2021534141.tif 000004
式中、
Ｒ６は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され、
Ｒ７は、Ｃ８〜Ｃ３０アルキル及びＣ８〜Ｃ３０アルケニルから選択される）、
又は任意の塩、好ましくは任意の薬学的に許容可能な塩、又は薬学的に許容可能なエステル、互変異性体、多形体若しくは水和物、又はそれらの異性体、プロドラッグ、溶媒和物若しくは類縁体、又はそれらの任意の組み合わせに含まれる。
【００１９】
さらに、以前に記載されたこととは独立して、本発明の著者らは、ＰＰＡＲα及びＰＰＡＲγの受容体の同時活性化が、アルコール探索行動の低減に対する相加的／相乗的効果をもたらすことを実証している。
【００２０】
したがって、本発明の第２の態様は、アルコール使用障害の予防、緩和、改善及び／又は治療に使用される、少なくとも１つのＰＰＡＲαアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲγアゴニストを含む配合剤（以下、本発明の第２の配合剤）に関する。
【００２１】
本発明のこの態様の好ましい実施形態では、本発明の第２の配合剤は、好ましくは有効成分として、少なくとも１つのＰＰＡＲαアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲγアゴニストだけを含むが、該配合剤は更に薬理学的に許容可能な賦形剤及びビヒクルを含み得る。
【００２２】
本発明のこの態様の別の好ましい実施形態では、本発明の第２の配合剤のＰＰＡＲαアゴニストは、クロフィブラート、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート、エラフィブラノル、プラステロン、シプロフィブラート、オレオイルエタノールアミド、ＣＰ７７５１４６、ＧＷ７６４７、ＷＹ１４６４３、又は任意の塩、好ましくは任意の薬学的に許容可能な塩、又は薬学的に許容可能なエステル、互変異性体、多形体若しくは水和物、又はそれらの異性体、プロドラッグ、溶媒和物若しくは類縁体、又はそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【００２３】
本発明のこの態様の別の好ましい実施形態では、本発明の第２の配合剤のＰＰＡＲγアゴニストは、（２Ｓ）−２−（４−クロロフェノキシ）−３−フェニルプロパン酸、（２Ｓ）−２−（ビフェニル−４−イルオキシ）−３−フェニルプロパン酸、（２Ｓ）−２−エトキシ−３−｛４−［２−（１０Ｈ−フェノキサジン−１０−イル）エトキシ］フェニル｝プロパン酸、（Ｓ）−３−（４−（２−カルバゾール−９−イル−エトキシ）−フェニル）−２−エトキシ−プロピオン酸、２−クロロ−５−ニトロ−Ｎ−フェニルベンズアミド、２−｛５−［３−（７−プロピル−３−トリフルオロメチルベンゾ［Ｄ］イソキサゾール−６−イルオキシ）プロポキシ］インドール−１−イル｝エタン酸、３−（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸、３−［５−（２−ニトロペンタ−１−エン−１−イル）フラン−２−イル］安息香酸、３−フルオロ−Ｎ−［１−（４−フルオロフェニル）−３−（２−チエニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］ベンゼンスルホンアミド、バルサラジド、グリピジド、メサラジン、ミチグリニド、ナテグリニド、レパグリニド、スルファサラジン、Ｔ１３１、テルミサルタン、バロキソロン（baroxolone）、チアゾリジノン、１５−デオキシ−デルタ１２，１４−プロスタグランジンＪ２、Ｓ２６９４８、ｎＴＺＤｐａ、ＬＧ１００７５４、ＧＷ１９２９塩酸塩、エダグリタゾン、シグリタゾン、イノリタゾン（inolitazone）、ＳＲ２５９５、ＧＷ１９２９、又は任意の塩、好ましくは任意の薬学的に許容可能な塩、又は薬学的に許容可能なエステル、互変異性体、多形体若しくは水和物、又はそれらの異性体、プロドラッグ、溶媒和物若しくは類縁体、又はそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【００２４】
２つの薬物の併用は相加的／相乗的作用を提供する可能性があるが、２つの独立した化学物質の使用から生じる可能性のある望ましくない副作用は、二重プロファイルを持つ単一の薬物の使用から生じる可能性のある望ましくない副作用よりも大きい場合がある。二重リガンド（dual ligands）、すなわち、２つの異なる薬理学的標的に作用する個々の分子の同定及び使用は、安全性及び有効性の点で利点を提供し得る。
【００２５】
したがって、本発明の第２の態様のより好ましい実施形態は、アルコール使用障害の予防、緩和、改善及び／又は治療に使用される、ＰＰＡＲαアゴニスト活性及びＰＰＡＲγアゴニスト活性を同時に示す化合物（以下、本発明の第２の化合物）に関する。より好ましくは、本発明の第２の化合物は、インデグリタザル、ソデルグリタザル、アレグリタザル、フェノフィブラート、エラフィブラノル、インドメタシン、レグリキサン（reglixane）、ベザフィブラート、イブプロフェン、イコサペント、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、ムラグリタザル、ＢＭＳ６８７４５３、ＷＹ−１４６４３（ピリニクス酸）、ＬＴ１７５、又は任意の塩、好ましくは任意の薬学的に許容可能な塩、又は薬学的に許容可能なエステル、互変異性体、多形体若しくは水和物、又はそれらの異性体、プロドラッグ、溶媒和物若しくは類縁体、又はそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【００２６】
更に好ましくは、本発明の第２の化合物は、式（ＩＩ）の化合物又は任意の塩、好ましくは任意の薬学的に許容可能な塩、又は薬学的に許容可能なエステル、互変異性体、多形体若しくは水和物、又はそれらの異性体、プロドラッグ、溶媒和物若しくは類縁体、又はそれらの任意の組み合わせである。
【化４】
2021534141.tif 000005
【００２７】
式（ＩＩ）の化合物の名称は、３−（（４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）メチル）−Ｎ−（４−（ペンチルカルバモイル）フェニル）ベンズアミド（ＮＦ１０−３６０）である。
【００２８】
ＰＰＡＲαアゴニスト活性及びＰＰＡＲγアゴニスト活性を同時に示す他の化合物は、式（Ｖ）に含まれる：
【化５】
2021534141.tif 000006
ここで、
Ｘは、Ｘ１及びＸ２の２つの異なる位置にあり得る２級アミド基であり、
【化６】
2021534141.tif 000007
Ｒは、１〜９から選択される構造（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８及びＲ９）である。
【００２９】
Ｘ１及びＸ２について上記の２つの符号（Ｐｈ）は、式（Ｖ）で識別され、基Ｘで区切られた芳香環を指していることに留意されたい。
【００３０】
【表１】
2021534141.tif 000008
【００３１】
Ｒ’は、１〜４から選択される構造（Ｒ’１、Ｒ’２、Ｒ’３及びＲ’４）である。
【００３２】
【表２】
2021534141.tif 000009
【００３３】
この態様のより好ましい実施形態では、化合物は、Ｒ−Ｐｈ−Ｘ−Ｐｈ−Ｒ’の組み合わせによって形成され、ここで：
Ｘ１及びＲ’１の場合、Ｒは好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７となり、
Ｘ１及びＲ’２の場合、Ｒは好ましくはＲ２、Ｒ３及びＲ４となり、
Ｘ２及びＲ’３の場合、Ｒは好ましくはＲ８及びＲ９となり、
Ｘ２及びＲ’４の場合、Ｒは好ましくはＲ８及びＲ９となる。
【００３４】
示されるように、本発明の化合物のいずれも、多重結合の存在に応じて異性体を含む（キラル中心の存在に応じて光学異性体又は鏡像異性体を含む）ことができる。個々の異性体、鏡像異性体又はジアステレオ異性体、及びそれらの混合物は、本発明の範囲内にあり、すなわち、異性体という用語は、それらの光学活性異性体又は種々の比率のそれらの混合物を含めて、ジアステレオマー、ラセミ異性体等の異性体の任意の混合物も指す。個々の鏡像異性体又はジアステレオ異性体と並んで、それらの混合物を、従来の技術によって分離することができる。
【００３５】
本発明の化合物のいずれかのプロドラッグもまた、本発明の範囲内にある。本明細書で使用される場合、「プロドラッグ」という用語は、本発明の化合物の任意の誘導体、例えば、式（Ｉ）のそれらの化合物の誘導体等を含み、非限定的な例には、エステル（金属塩のカルボン酸エステル、アミノ酸エステル、リン酸エステル、スルホン酸エステル等を含む）、カルバメート、アミド等が含まれ、これらは、個体に投与されると、直接又は間接的に、言及された個体において上記の本発明の化合物に変換され得る。有利には、上記誘導体は、それが個体に投与されたときに本発明の化合物のバイオアベイラビリティを増加させるか、又は生物学的区画における本発明の化合物の放出を増強する化合物である。上記誘導体の性質は、それが個体に投与され、個体の生物学的区画に本発明の化合物を提供することができるならば、重要ではない。上記プロドラッグの調製は、当業者に知られている従来の方法によって実施することができる。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「類縁体」という用語は、薬学的に許容可能な化合物、すなわち、医薬品又は食品組成物の調製に使用することができる本発明の化合物の類縁体と、薬学的に許容可能ではない誘導体（これらの誘導体が薬学的に許容可能な誘導体の調製に有用となり得るため）の両方を含む。
【００３７】
本発明の化合物は、遊離化合物又は溶媒和物として結晶形態であり得る。この意味で、本明細書で使用される場合、「溶媒和物」という用語は、薬学的に許容可能な溶媒和物、すなわち、医薬品の調製に使用することができる本発明の化合物の溶媒和物と、薬学的に許容可能な溶媒和物又は塩の調製に有用となり得る薬学的に許容可能ではない溶媒和物の両方を含む。薬学的に許容可能な溶媒和物の性質は、それが薬学的に許容可能であれば、重要ではない。特定の実施形態では、溶媒和物は水和物である。溶媒和物は、当業者に知られている従来の溶媒和方法によって得ることができる。
【００３８】
治療法におけるそれらの適用のため、本発明の化合物、その塩、プロドラッグ又は溶媒和物は、好ましくは薬学的に許容可能な又は実質的に純粋な形態であり、すなわち、それらは、希釈剤及び担体等の通常の薬学的な添加剤を除き、通常の投与量レベルで有毒と見なされる物質は含まずに、薬学的に許容可能なレベルの純度を有する。有効成分の純度レベルは、好ましくは５０％超、より好ましくは７０％超、更により好ましくは９０％超である。好ましい実施形態では、純度レベルは、９５％超の本発明の化合物、又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグである。
【００３９】
本発明の医薬組成物及び剤形
本発明の第３の態様は、アルコール使用障害の予防、緩和、及び／又は治療に使用するための、本発明の少なくとも１つの配合剤若しくは化合物、又はその互変異性体、薬学的に許容可能な塩、類縁体若しくはプロドラッグを、好ましくは薬学的に許容可能な担体若しくはビヒクル及び／又は１つ以上の賦形剤と一緒に含む医薬組成物（以下、本発明の医薬組成物）の使用に関する。
【００４０】
上記組成物に使用することができる薬学的に許容可能なアジュバント及びビヒクルは、当業者に知られており、治療用組成物の調製に一般的に使用されるアジュバント及びビヒクルである。
【００４１】
本明細書で使用される意味で、「治療有効量」という表現は、その薬理学的特性によって決定される治療作用を発現することができる作用物質又は化合物の量を指し、所望の効果を生み出すように計算され、一般にとりわけ、患者の年齢及び状態、妨害（disturbance）又は障害の重症度、並びに投与経路及び頻度を含む、化合物に典型的な特徴によって決定される。
【００４２】
本発明に記載の化合物、それらの塩、プロドラッグ及び／又は溶媒和物と並んで、それらを含む医薬組成物を、他の追加の薬物又は有効成分と一緒に使用して、併用療法を提供することができる。上記追加の薬物は、同じ医薬組成物の一部であってもよく、或いは、本発明の化合物、又はその塩、プロドラッグ若しくは溶媒和物を含む医薬組成物の投与に関して、その同時又は非同時投与用の別個の組成物の形態で提供されてもよい。
【００４３】
したがって、好ましい実施形態では、医薬組成物は、別の有効成分を更に含む。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「有効成分」、「薬学的に有効な成分」、「活性物質」又は「薬学的に活性な物質」という用語は、疾患の診断、治癒、軽減、治療若しくは予防に対して異なる薬理学的活性若しくは別の異なる効果を潜在的に提供するか、又はヒト若しくは他の動物の体の構造若しくは機能に影響を与える任意の成分を意味する。この用語は、薬物の調製における化学変化を促進し、特定の活性又は効果を提供することが期待される改変された形態でその中に存在するそれらの成分を含む。
【００４５】
別の好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、好ましくは、有効成分として、ＰＰＡＲαアゴニスト及びＣＢ１受容体アンタゴニスト、又はＰＰＡＲαアゴニスト及びＰＰＡＲγアゴニスト、又は本明細書全体を通して記載される二重活性を有するいずれかの化合物だけを含むが、上記医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤及び／又はビヒクルを更に含み得る。したがって、本発明の医薬組成物は、好ましくは、本発明の調製剤又は化合物のいずれかを含む。
【００４６】
本発明の別の態様は、本発明の調製剤又は化合物のいずれかを含む、剤形（以下、本発明の剤形）に関する。
【００４７】
「剤形」は、本明細書では、その適切な投薬、貯蔵、投与及びバイオアベイラビリティのための物理的特性を示す添加剤を含む又は含まない１つ以上の有効成分の混合物を意味すると理解される。
【００４８】
本発明の別の好ましい実施形態では、本発明の組成物及び剤形は、固体又は液体の形態での経口投与に適している。経口投与が可能な形態は、錠剤、カプセル剤、シロップ剤又は液剤であり、結合剤（例えば、シロップ、アカシアガム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント又はポリビニルピロリドン）、充填剤（例えば、ラクトース、糖、コーンスターチ、リン酸カルシウム、ソルビトール又はグリシン）、崩壊剤（例えば、デンプン、ポリビニルピロリドン又は微結晶性セルロース）、又はラウリル硫酸ナトリウム等の薬学的に許容可能な界面活性剤等の製薬分野で知られている従来の賦形剤を含み得る。他の剤形はコロイド系であり得て、その中にはポリマーナノエマルジョン、ナノカプセル及びナノ粒子が含まれる。
【００４９】
経口投与用の組成物を、混合物及び分散物等の従来の製剤学の方法によって調製することができる。錠剤を、製薬業界で知られている方法に従ってコーティングすることができる。
【００５０】
組成物及び剤形を、適切な用量を使用して、本発明の製品の無菌の溶液、懸濁液又は凍結乾燥物等のように非経口投与に適合させることができる。ｐＨ緩衝剤又は界面活性剤等の適切な賦形剤を使用することができる。
【００５１】
上述の製剤を、様々な国の薬局方及び他の参考文献に記載されているような従来の方法を使用して調製することができる。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「医薬品」という用語は、ヒト及び動物において疾患を予防、診断、緩和、治療又は治癒するために使用される任意の物質を指す。
【００５３】
本発明の化合物、組成物又は剤形の投与は、静脈内注入、及び経口、局所又は非経口経路等の任意の適切な方法によって実施することができる。経口投与は、患者にとっての利便性及び治療される疾患の慢性的な性質のために好ましい。
【００５４】
本発明の化合物の投与量は、選択された化合物の相対的有効性、治療される疾患の重症度及び患者の体重に依存する。しかしながら、本発明の化合物は、１日１回以上、例えば、１日１回、２回、３回又は４回、総用量が０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日で投与される。患者の年齢及び状態に応じた用量の変動と並んで、投与経路の変更を導入する必要があるかもしれないことを考慮することが重要である。
【００５５】
本発明の化合物及び組成物を、併用療法において他の医薬品と一緒に使用することができる。他の薬物は、それらを同時に又は異なる時間に投与するために、同じ組成物又は別の異なる組成物の一部であり得る。
【００５６】
本発明の別の態様は、ヒトを含む哺乳動物におけるアルコール使用障害の予防、緩和及び／又は治療に有効な量で本発明の化合物の少なくとも１つを含む栄養補助食品組成物、又は医療用食品若しくは機能性食品タイプの組成物等の食品組成物（以下、本発明の食品組成物）に関する。
【００５７】
好ましい食品組成物は、飲料、乳、ヨーグルト、チーズ、発酵乳、フレーバー乳飲料、豆乳、調理済み穀物、パン、ペストリー、バター、マーガリン、ソース、揚げ物に使用される油、植物油、トウモロコシ油、オリーブ油、大豆油、パーム油、ヒマワリ油、綿実油、調味料、サラダ用ドレッシング、フルーツジュース、シロップ、デザート、グレーズ及びフィラー、半冷凍製品（soft frozen products）、キャンディー、ガム、及び中間食品からなる群より選択される。本発明の食品組成物は、栄養補助食品又は健康補助食品であり得る。別の好ましい実施形態では、栄養補助食品又は健康補助食品は、本発明の化合物を含有する無菌組成物を含み、好ましくは胃酸耐性コーティングを備え、遅延放出組成物である。別の好ましい実施形態では、本発明の化合物及び／又は栄養補助食品若しくは健康補助食品を含む食品組成物は、本発明の化合物と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤又はビヒクル等の適切な「担体」を含む。適切な賦形剤としては、限定されるものではないが、デンプン、グルコース、フルクトース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、硫酸カルシウム、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、スキムミルク粉末、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等が挙げられる。かかる栄養補助食品は、肝臓の問題に対処するために使用することができ、哺乳類、好ましくはヒトの健康又は健康的なライフスタイルを維持するのに役立つ。
【００５８】
本明細書で理解されるように、「治療」という用語は、被験体（好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒト）の対象の病的状態又は疾患の結果として引き起こされる影響に対処することを指し、これには、
（ｉ）病的状態又は疾患を阻害する、すなわちその進行を停止すること、
（ｉｉ）病的状態又は疾患を軽減する、すなわち、病的状態若しくは疾患又はその総体症状の退行を引き起こすこと、
（ｉｉｉ）病的状態又は疾患を安定させること、
が含まれる。
【００５９】
本明細書で理解されるように、「予防」という用語は、疾患の発症を予防すること、すなわち、特に上記被験体がその病的状態に関する素因を有する場合に、被験体（好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒト）において病的状態又は疾患が発生するのを防止することからなる。
【００６０】
明細書及び特許請求の範囲を通して、「含む」という言葉及びその変化形は、他の技術的特徴、添加剤、成分又は工程の除外を意図するものではない。当業者にとって、本発明の他の目的、利点及び特徴は、一部は明細書の記載から、一部は本発明を実施することから推測されるであろう。以下の実施例及び図面は、実例として提供されており、本発明を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【００６１】
材料及び方法
動物
アルコール自己投与研究では、実験開始時に体重３７５ｇ〜４２５ｇの４８匹の成体雄性ウィスターラット（１群あたり８匹）（スペイン国バルセロナのHarlan）を一定温度（２３±１℃）の部屋で１２時間の明暗サイクル（午後１２時に消灯）で個別に飼育した。飼育ケージの中では、標準的な餌及び水道水を自由に摂取させた。アルコール自己投与プロトコルの開始の２週間前に、動物を飼育施設に順応させた。オキシコドンの自己投与には、雄性ロング−エバンスラット（２７５ｇ〜３２５ｇ）（ノースカロライナ州ローリーのCharles-River Laboratories）をこの研究を通して使用した。到着したら、動物を動物施設に個別に収容し、逆転した１２時間の明暗サイクル（午後７時に点灯）のもと、餌及び水を自由に摂取させた。研究開始前の少なくとも７日間、動物を新しい環境に順応させた。２ボトル選択パラダイムでのアルコール消費には、実験開始時に体重２５０ｇの雄性ウィスターラット、又はアルコールを好む遺伝的に選択されたマルキジアンサルディニアン（Marchigian Sardinian）（ｍｓＰ）雄性ラットを使用した。
【００６２】
動物を使用する全ての実験方法は、科学的目的で使用される動物の保護に関する欧州指令２０１０／６３／ＥＵ及びスペイン国の規制（ＲＤ５３／２０１３及びＲＤ１７８／２００４）に従って実施された。全てのプロトコルは、マドリード・コンプルテンセ大学（ウィスターラットにおけるアルコール研究）又はカメリーノ大学（ｍｓＰラット）の倫理委員会によって承認された。オキシコドン研究は、米国国立薬物乱用研究所（ＮＩＤＡ）によって承認され、全米研究評議会の実験動物の管理及び使用に関する指針と一致していた。本研究目的を達成するため、苦痛及び動物の数を最小限に抑えるように特別な注意を払った。
【００６３】
薬物
ＮＦ１０−３６０は、Fresno et al., 2015 (J Med Chem. 58(16):6639-52)に記載されているように、マドリードの高等科学研究院（Consejo Superior de Investigaciones Cientificas）の医化学研究所（the Instituto de Quimica Medica）によって合成された。Ｎ−［１−（３，４−ジヒドロキシフェニル）プロパン−２−イル］オレアミド（ＯＬＨＨＡ）は、Almeida et al., 2010. ChemMedChem. 5(10): 1781-7に記載されているように合成された。オキシコドンＨＣｌ、スクロース及び２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンをSigma/RBI（米国ミズーリ州セントルイス）から入手した。オキシコドンを生理食塩水の溶液に溶解した。２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを蒸留水中の２５％２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンに溶解した。蘇生薬（resuscitation drugs）（シグリタゾン、ＷＹ１４６４３、オレオイルエタノールアミド（ＯＥＡ）及びリモナバン）をTocris-Bioscience（スペイン国マドリードのBiogen Cientifica）から入手した。ビヒクルの溶液（０．９％生理食塩水の溶液中の１％Ｔｗｅｅｎ  ８０）に薬物を溶解することにより、（注射前に）毎日新たな溶液を調製した。全ての医薬品を２ｍｌ／ｋｇの量で注射した。ＯＬＨＨＡ及びＮＦ１０−３６０の用量を、研究グループの以前の刊行物（24, Fresno et al., 2015. J Med Chem. 27 58(16):6639-52）に基づいて選択した。
【００６４】
アルコール自己投与モデル
以前に記載されたように（Cippitelli et al., 2005. Eur J Neurosci. 21 (8):2243-51）、音響減衰ケージに囲まれ、排気ファンが備わっている部屋（Ｌｅｔｉｃａ、モデルＬＥ  ８５０、スペイン国バルセロナのPanlab）でアルコール自己投与のため動物を訓練した。チャンバーには、ウォーターパンの両側に１つずつ、２つの格納式レバーが備わっていた。
【００６５】
場所嗜好性（location preferences）が発生することを防ぐため、アクティブレバー側はセッション間で均等に分配されている。０．１ｍｌの溶液のアクティブレバーを押すと、動物に提示された後に２．５秒の待機時間が続くが、非アクティブレバーを押しても何の結果も得られなかった。全てのオペラントアルコールセッションは、５日／週（月曜日から金曜日）、１日あたり３０分間続いた。応答量及び浸漬プレゼンテーション（immersion presentations）を、コンピューターソフトウェアによって自動的に記録した。アルコール自己投与セッションの前に、動物を毎日計量した。Alen et al., 2009 (Nicotine Tob Res. 11 (11): 1304-11)に記載される従来のサッカリンフェイディング法（Samson et al., 1999）の変法を使用して、訓練を行った。訓練の最初の３日間、動物はレバー圧力レベルの取得を容易にするためにディッパー（dipper）に０．２％サッカリン溶液を受けた。その後、固定比率１で次のシーケンスを使用した：０．１６％サッカリン及び２％アルコールを３セッション、０．１２％サッカリン及び４％アルコールを３セッション、０．０８％サッカリン及び６％アルコールを４セッション、０．０４％サッカリン及び８％アルコールを４セッション、０．０２％サッカリン及び１０％アルコール、最後に、残りのセッションは１０％アルコールのみ。最初の調査は比較的類似しており、その後、アルコール（１０％重量／体積）、シグリタゾン（０．０１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇ）、ＯＥＡ（０．１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇ）、ＷＹ１４６４３（０．１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ及び４０ｍｇ／ｋｇ）、リモナバン（０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇ）、ＯＬＨＨＡ（０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ）、及びＮＦ１０−３６０（１ｍｇ／ｋｇ）にアクセスできる期間は少なくとも６週間継続した。医薬品を、自己投与セッションの３０分前に注射した。次いで動物を２４時間、そして毎日３０分間放置した。ＥｔＯＨ自己投与セッションを再開し、監視した。
【００６６】
２ボトル選択モデルでのアルコール消費
自発的なアルコール摂取を、以前に説明されているように（Stopponi et al., 2011. Biol Psychiatry. 69(7):642-）、２ボトル選択試験で評価した。ウィスターラット又はアルコールを嗜好するため選択されたラット（ｍｓＰ）を、安定したアルコール摂取ベースラインに達するまで、水、１０％アルコール（体積／体積）（ウィスター）又は２０％アルコール（ｍｓＰ）を１日２４時間飲むように訓練した。この時点で、ラットを異なる群（ｎ＝９〜１０／群）に分けて、ビヒクル、ＮＦ１０−３６０（０ｍｇ／ｋｇ又は１ｍｇ／ｋｇ）、又はＯＬＨＨＡ（５ｍｇ／ｋｇ）で処理した。ｍｓＰラットの場合、ＯＬＨＨＡによる処理を１４日間連続して続け、薬物又はビヒクルを、明暗サイクルの暗期の開始前に１日１回投与した。摂取量を、ＯＬＨＨＡ投与の２時間、８時間及び２４時間後に毎日記録した。アルコール、水及び食物の摂取量を毎日監視した。ＯＬＨＨＡの最後の投与から２時間後、１４日目に動物を屠殺した。
【００６７】
オキシコドン自己投与
オキシコドン自己投与研究を以前に記載されているように行った（You et al., 2017. Neuropharmacology. 126:190-199）。静脈内（ｉ．ｖ．）カテーテル（米国マサチューセッツ州ブレインツリーのBraintree Scientific, Inc.）を、オキシコドン自己投与実験で使用したラットに留置した。各ラットを最初に抱水クロラール（１４０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を添加したペントバルビタール（３０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）で麻酔し、次に首の正中線の右側に小さな切開を作り、外頸静脈を露出させた。カテーテルの一端は、右心房に到達するカテーテルの側面にあった。次に、カテーテルを絹の縫合糸で静脈に固定し、その後、もう一方の端を皮下経路で首の後部に送り、頭蓋後部に近づけて、模擬カニューレを備えた曲がった２４ゲージのステンレス鋼カニューレ（米国バージニア州ロアノークのPlastics One Inc.）、及び実験中は注入ラインに接続した。カテーテル及びガイドカニューレを、４本のステンレス鋼のネジ及びボルトで頭蓋に固定した。次いで、切開部を縫合した。手術後、カテーテルの閉塞及び感染に対する予防措置として、ゲンタマイシン−ヘパリン−生理食塩水（ゲンタマイシン０．１ｍｇ／ｍｌ及びヘパリン３０ＩＵ／ｍｌ、米国オハイオ州クリーブランドのICN Biochemicals）の溶液でカテーテルを毎日洗浄した。行動訓練を開始する前に、動物を少なくとも５日間回復させた。
【００６８】
オキシコドンの自己投与を、２つの応答レバー及び１５Ｗの室内灯（米国バーモント州ジョージアのMed Associates Inc.）を備えたオペラントチャンバー内で行った。２つのレバーはチャンバーの床から６．４ｃｍ上に配置され、１つはアクティブで、もう１つは非アクティブであった。それらはアクティブデイブレイク（active daybreak）の１２ｃｍ上にあった（Xi and Gardner, 2007）。手術から完全に回復した後、オキシコドンを自己投与するようにラットを訓練した。そのために、ラットを訓練の各日に試験室に運び、ポリエチレンチューブ（スチールコイルスプリングで保護されている）及びマイクロプロセッサによって制御される回転液体チャネルを備えたシリンジポンプ（米国コネチカット州スタンフォードのRazel Sci.）で接続し、チャンバー内に入れた。各訓練セッションは、チャンバーに対する応答の呈示及び室内灯の点灯で始まり、室内灯は各訓練セッションの終了時に維持された。固定比率１（ＦＲ−１）強化スキームでオキシコドン注入を探索するアクティブなラットに対して、３時間のセッションで各ラットを毎日訓練した。アクティブレバーに対する応答により、明るい色調及び０．０８ｍｌのオキシコドン溶液の４．６秒間の注入からなるシグナルがアクティブになる。この時間は待機時間でもあり、この間に動物の応答において明るい色調が維持される。各動物の応答を、訓練及び試験のプロセス全体を通して記録した。
【００６９】
血漿及び肝臓のサンプリング
最後の投薬の２時間後にラットを屠殺した。処理した動物及びＯＬＨＨＡで処理した動物をペントバルビタールナトリウム（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）で麻酔し、血液及び肝臓のサンプルを採取した。血液を遠心分離し（２１００ｇで８分間、４℃）、血漿を後の分析のために保持した。肝臓サンプルを迅速に液体Ｎ２中で凍結し、分析まで−８０℃で保存した。
【００７０】
血漿代謝産物及びサイトカインの測定
血漿中において、次の代謝産物、代謝ホルモン及びサイトカイン、すなわち代謝産物グルコース、トリグリセリド、コレステロール、尿酸、尿素、クレアチニン、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＧＯＴ）、アラニントランスアミナーゼ（ＧＰＴ）、インターロイキン−６、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−ａ）を測定した。それらを、自動Ｈｉｔａｃｈｉ  ７３７分析装置（日本国東京の株式会社日立製作所）で製造業者の指示書に従って分析した。レプチン、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αのレベルを、市販のラット酵素結合免疫吸着測定キット（英国ケンブリッジのAbcam）を使用して測定した。
【００７１】
ＲＮＡの分離及びＲＴ  ｑＰＣＲ分析
リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ  ｑＰＣＲ）を使用して、ＯＬＨＨＡを用いた以前の研究で説明されているように（Decara et al., 2015. Dis Model Mech. 8(10): 1213-25）、手の脂質生成脂肪酸の酸化に関連する酵素及びタンパク質のｍＲＮＡレベルの相対的な定量を測定した。全ｍＲＮＡを、製造業者（米国メリーランド州ボルチモアのGibco BRL Life Technologies）の指示書に従ってＴｒｉｚｏｌ（商標）法を使用して単離した。得られたｃＤＮＡを、Ｑｕａｎｔｉ−Ｔｅｓｔ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲキット（ドイツ国ヒルデンのQiagen）を使用するｉＣｙｃｌｅｒシステム（BioRad）のＲＴ  ｑＰＣＲのテンプレートとして使用した。著者らにはＳｉｇｍａ−Ｐｒｏｌｉｇｏ（フランス国パリのProligo France SAS）が提供された。定量を次の基準（Decara et al., 2015. Dis Model Mech. 8(10): 1213-25）に従って実施した。各サンプルの絶対値を正規化して、標準参照として使用したβ−アクチンｍＲＮＡ（構成遺伝子）を観察した。
【００７２】
データ解析
ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ５．０４（米国カリフォルニア州サンディエゴのGraphPad Software）。データを平均±ＳＥＭで表す。アルコール、コカイン又はオキシコドンの自己投与の阻害に関するＥＣ５０値は、組み込み非線形回帰方程式を使用して計算した。アルコールの補給及び反復測定による変動性の影響の分析（ＡＮＯＶＡ）（因子：処理及び処理）。循環発現に起因する血漿代謝パラメーター、サイトカイン及び肝臓ｍＲＮＡを二元配置分散分析（因子：処理（ビヒクル／ＯＬＨＨＡ）及び飲料へのアクセス（オクタノール／水））によって分析し、多重事後比較検定（ボンフェローニ）を行った。０．０５未満のｐ値を統計的に有意であると見なした。
【００７３】
結果
１．アルコール自己投与におけるＰＰＡＲα、ＰＰＡＲγ及びＣＢ１の受容体の参照リガンドの作用（図１）
アルコール自己投与におけるＰＰＡＲα、ＰＰＡＲγ及びＣＢ１の受容体に対する参照アゴニスト、並びにカンナビノイド受容体に対するアンタゴニストの有効性の比較概要について、シグリタゾン（ＰＰＡＲγアゴニスト参照）、ＯＥＡ（ＰＰＡＲα受容体の内因性リガンド）、ＷＹ１４６４３（ＰＰＡＲαリガンド受容体の参照標準）及びリモナバン（ＳＲ１４１７１６Ａ、参照カンナビノイド受容体アンタゴニスト／インバースアゴニスト、いずれもコードされている）のＥＣ５０及び最大阻害を計算した。これらの化合物のうち、リモナバンが最大の阻害を達成し、次にＯＥＡ、シグリタゾン及びＷＹ１４６４３が続いた。目的の選択的なＰＰＡＲα及びＰＰＡＲαの受容体アゴニストは、アルコール自己投与の阻害効果の点で限定されるようであり、２０ｍｇ／ｋｇの最大用量の効果を達成する。それらの化合物の効果のＥＣ５０値（ＩＣ５０）：シグリタゾン（図１Ａ）：ＥＣ５０＝５．９（ＩＣ＝２．７〜１５．７）；ＯＥＡ（図１Ｂ）：ＥＣ５０＝６．５（ＩＣ＝３．２〜１３．２）；ＷＹ１４６４３（図１Ｃ）：ＥＣ５０＝２３．６（ＩＣ＝１１．３〜６０．９）；リモナバン（図１Ｄ）：ＥＣ５０＝０．５（ＩＣ＝０．５〜１．１）。
【００７４】
２  二重ＰＰＡＲα／γアゴニストＮＦ１０−３６０のアルコール摂取及びアルコール自己投与に対する効果（図２）
１ｍｇ／ｋｇの用量の化合物ＮＦ１０−３６０を使用して、自発的なアルコール摂取（図２Ａ）及び自己投与（図２Ｂ）に対するこの化合物の効果を分析する。データは、この化合物がアルコール摂取量を減少させたことを示している（Ｆ（１．８４）＝４．３３、Ｐ＜０．０５）。この化合物はアルコール自己投与研究でも減少させ、ＮＦ１０−３６０は１０％エタノール溶液に対するオペラント応答を減少させた（ｔ＝３．２６、ｄｆ＝１０、ペア数＝１１、Ｐ＜０．０１）。
【００７５】
３  ＰＰＡＲα／ＣＢ１受容体の二重リガンドＯＬＨＨＡのアルコール自己投与に対する効果（図３Ａ及び図３Ｂ）
成体雄性ウィスターラットにおけるエタノール自己投与（図３Ａ及び図３Ｂ）に対するＰＰＡＲαアゴニストＣＢ１受容体アンタゴニストＯＬＨＨＡの効果を研究した。これは、最大用量５ｍｇ／ｋｇの場合の用量依存的奏効率の低下である（図３Ｂ）。ＥＣ５０＝０．２ｍｇ／ｋｇ（ＩＣ＝０．０８〜０．４）。この効果は、投与の２４時間後に分析した場合、アルコールの自己投与に影響を与えなかった（図３Ｂ）。
【００７６】
４  ＰＰＡＲα／ＣＢ１受容体の二重リガンドＯＬＨＨＡのアルコールを好むｍｓＰラットの自発的アルコール摂取に対する効果（図３Ｃ〜図３Ｆ）
この研究では、２ボトル選択パラダイムに対するＯＬＨＨＡの効果が報告され、投与の２時間、８時間及び２４時間後の５ｍｇ／ｋｇの毎日の投与の効果が研究されている（図３Ｃ〜図３Ｆ）。ＯＬＨＨＡは、注射の２時間後にアルコール摂取量を減少させた（Ｆ（１．１４）＝３９．５、Ｐ＜０．０００１）（図３Ｃ）。この効果は、ＯＬＨＨＡの投与から８時間後でも観察され（Ｆ（１．１４）＝２３．９、Ｐ＜０．００１）（図３Ｄ）、２４時間後に事実上消失し（Ｆ（１．１４）＝４．７、Ｐ＝０．０４７）（図３Ｅ）、ＯＬＨＨＡの薬理学的効果には時間制限があることを示唆している。この観察結果は、この行動を投与の２４時間後に試験した場合、アルコールの自己投与に対するＯＬＨＨＡの影響がないことによるものである（図４）。ＯＬＨＨＡによる処理を通して記録された総アルコール摂取量は、いずれの場合も有意に減少し（Ｆ（１．１４）＝５．１、Ｐ＜０．０５）（図３Ｆ）、エタノールを継続的に得ることができる場合のＯＬＨＨＡによる毎日の処理の結果としてアルコール摂取量の長期的な減少を示す。
【００７７】
５  ＰＰＡＲα／ＣＢ１受容体の二重リガンドＯＬＨＨＡのオキシコドンの自己投与に対する効果（図３Ｇ）
オピオイド自己投与に対するカンナビノイドＣＢ１受容体の投与の既知の阻害作用により、ＯＬＨＨＡがロング−エバンスラットのオキシコドン自己投与を減らすことができるかどうかを試験した。ＯＬＨＨＡは、オキシコドンの自己投与を減らし、最大阻害はこのオピオイドの対照反応の４５％に達した。計算されたＥＣ５０は１１．３ｍｇ／ｋｇ（ＩＣ＝５．１〜２５．１）であった。このデータは、酸化を低減するＯＬＨＨＡの効力がアルコールで観察されたものより少なくとも５０％低いことを示唆している。ＰＰＡＲαアゴニスト作用が、ＣＢ１受容体アンタゴニスト作用のドーパミン作動性回路におけるオピオイドの作用に影響を与えることが証明されていることを指摘しておかなければならない。
【００７８】
６  アルコールを飲むｍｓＰラットにおける血漿及び肝臓の代謝パラメーターに対するＰＰＡＲα／ＣＢ１受容体の二重リガンドＯＬＨＨＡの反復投与の効果（図４）
アルコールの投与は肝臓の代謝に悪影響を与える可能性があり、ＯＬＨＨＡはレプチンが欠乏した肥満（fatty）ラットの肝臓で脂質代謝を生じさせ、改善することが報告されていることから、ＯＬＨＨＡの投与が肝臓の代謝に影響を与え、最終的にはエタノール毒性を改善又は損なう可能性があるかどうかを試験した（図４を参照されたい）。得られた結果は、レプチンが欠乏した肥満ラットで以前に記載されたように、ＯＬＨＨＡによる処理が循環トリグリセリド（Ｆ（１．２８）＝２５．６、Ｐ＜０．００１）（図４Ｂ）、コレステロール（Ｆ（１．２８）＝２５．４、Ｐ＜０．００１）（図４Ｃ）及び尿酸（Ｆ（１．２８）＝１７．４、Ｐ＜０．０１）（図４Ｄ）を減少させたことを示し、アルコールに曝露されたラットのグルコースレベル（図４Ａ）をわずかに低下させる（Ｆ（１．２８）＝５．６、Ｐ＜０．０２）ことを示している。ＯＬＨＨＡは、毒性（トランスアミナーゼ（図４Ｇ及び図４Ｈ）又はクレアチニン（図４Ｆ）に対する影響はない）又は炎症（ＩＬ−６の血漿濃度（図４Ｉ）及びＴＮＦの血漿濃度（図Ｊ）の両方に対する影響はない）を誘導しなかった。さらに、ほとんどのＰＰＡＲアゴニスト及びＣＢ１アンタゴニストについて説明されているように、ＯＬＨＨＡは、Ｆａｓｎ（Ｆ（１．２８）＝２５．５、Ｐ＜０．００１）（図４Ｍ）及びＳＣＤ１（Ｆ（１．２８）＝１３．１、Ｐ＜０．０１）（図Ｌ）等の脂質生成酵素のｍＲＮＡの発現を阻害し、シトクロムｃオキシダーゼ４（Ｆ（１．２８）＝１０．３、Ｐ＜０．０１）（図４Ｎ）及びＰＰＡＲ受容体（Ｆ（１．２８）＝２３．６、Ｐ＜０．００１）（図４Ｏ）の発現を増加させ、酸化的代謝の促進を示唆している。
【図１】
2021534141.tif 000010
【図２】
2021534141.tif 000011
【図３−１】
2021534141.tif 000012
【図３−２】
2021534141.tif 000013
【図４−１】
2021534141.tif 000014
【図４−２】
2021534141.tif 000015
【国際調査報告】
2021534141.tif 000016
2021534141.tif 000017
2021534141.tif 000018
2021534141.tif 000019
2021534141.tif 000020
2021534141.tif 000021
2021534141.tif 000022
2021534141.tif 000023
2021534141.tif 000024
2021534141.tif 000025
2021534141.tif 000026
2021534141.tif 000027
2021534141.tif 000028
2021534141.tif 000029