(57)【要約】本開示は、ウイルスゲノムおよびタンパク質をコードする外因性核酸における改変を含有し得る改変された腫瘍溶解性ウイルスを提供する。改変された腫瘍溶解性ウイルスは、全身送達のためのプラットフォームベクターとして利用され得る。本発明は、例えばケモカイン受容体をコードする外因性核酸、ヒアルロナンを分解することができる膜結合タンパク質、ヒアルロナンを分解することができる微生物タンパク質、またはそれらの任意の組み合わせを含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスを提供する。
2021500932.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ケモカイン受容体をコードする外因性核酸、ヒアルロナンを分解することができる膜結合タンパク質、ヒアルロナンを分解することができる微生物タンパク質、またはそれらの任意の組み合わせを含む、改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２】
ケモカイン受容体をコードする前記外因性核酸を含み、前記ケモカイン受容体が、ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３】
前記膜結合タンパク質をコードする前記外因性核酸を含む、請求項１または２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４】
前記膜結合タンパク質が膜結合ヒアルロニダーゼを含む、請求項３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５】
前記膜結合ヒアルロニダーゼがＰＨ−２０を含む、請求項４に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項６】
前記ＰＨ−２０がＧＰＩアンカー型である、請求項５に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項７】
前記微生物タンパク質をコードする前記外因性核酸を含み、前記微生物タンパク質が、分泌型ヒアルロニダーゼを含む、請求項１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項８】
前記分泌型ヒアルロニダーゼが、ＨｙｓＡ、ｌｉｎ、ｓｋｏ、およびｒｖのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項７に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項９】
前記微生物タンパク質をコードする前記外因性核酸を含む、請求項１または２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１０】
前記微生物タンパク質がＨｙｓＡを含む、請求項９に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１１】
前記ウイルスのゲノムに改変をさらに含み、前記改変がエンベロープ細胞外型（ＥＥＶ）の前記ウイルスの産生を増強する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１２】
前記ウイルスのゲノムに前記改変を含み、前記改変が、Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失を含む、請求項９に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１３】
前記ウイルスのゲノムに前記改変を含み、前記改変が、Ｂ５Ｒ遺伝子のＳＣＲ領域に変異または欠失を含み、前記ＳＣＲ領域が、ＳＣＲ１、ＳＣＲ３、ＳＣＲ４、またはそれらの任意の組み合わせを含み、前記ＳＣＲ領域がＳＣＲ２を含まない、請求項９に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１４】
前記Ｂ５Ｒ遺伝子の前記欠失を含み、前記欠失が、前記Ｂ５Ｒ遺伝子の部分的欠失である、請求項１２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１５】
前記ウイルスのゲノムに改変をさらに含み、前記改変が、前記ウイルスの複製を増強し、前記ウイルスの腫瘍細胞殺滅能力を増加させ、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１から１４のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１６】
前記ウイルスのゲノムに前記改変を含み、前記改変が、Ａ５２Ｒ遺伝子の変異または欠失を含む、請求項１５に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１７】
前記Ａ５２Ｒ遺伝子の前記欠失を含む、請求項１６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１８】
前記ウイルスのゲノムに少なくとも１つの追加の改変をさらに含み、前記追加の改変が、さらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１９】
前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失を含み、前記さらなるウイルス遺伝子が、Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、およびＮ１Ｌ、ならびにその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１８に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２０】
少なくとも１つの追加の外因性核酸をさらに含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２１】
前記少なくとも１つの追加の外因性核酸が、ＮＦκＢシグナル伝達をモジュレートし、腫瘍において間質液圧（ＩＦＰ）の低下を促進し、ＳＴＡＴ３媒介性遺伝子活性化をモジュレートし、Ｔ細胞活性化を促進し、ウイルス感染細胞へのＮＫ細胞の誘引を促進し、ウイルス感染細胞の代謝プログラムをモジュレートし、ウイルス感染細胞による脂肪酸の取り込みをモジュレートし、ＭＤＳＣの治療標的化を促進し、またはそれらの任意の組み合わせである、タンパク質またはその断片をコードする核酸配列を含む、請求項２０に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２２】
前記少なくとも１つの追加の外因性核酸が、ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする核酸を含む、請求項２０または２１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２３】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸
を含む、請求項２から２２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２４】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項１２から２２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２５】
（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、および
（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項１２から２２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２６】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項１２から２２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２７】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｂ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項１９から２２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２８】
（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｂ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項１９から２２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２９】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｃ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、もしくはＮ１Ｌ、その機能的ドメインのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項２２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３０】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、ならびに
（ｃ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項１９から２２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３１】
（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、ならびに
（ｃ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、もしくはＮ１Ｌ、その機能的ドメインのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項１９から２２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３２】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、
（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、ならびに
（ｄ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項１９から２２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３３】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｂ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項２２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３４】
（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｂ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項２２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３５】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｃ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項２２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３６】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、ならびに
（ｃ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項２２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３７】
（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、ならびに
（ｃ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項２２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３８】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、
（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、ならびに
（ｄ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、その機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項２２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３９】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、
（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、
（ｄ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、もしくはＮ１Ｌ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失、ならびに
（ｅ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、その機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項２２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４０】
前記ヒアルロニダーゼがＰＨ−２０を含む、請求項２３から３９のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４１】
前記ヒアルロニダーゼがＨｙｓＡを含む、請求項２３から３９のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４２】
Ａ５２Ｒの前記変異または欠失を含む、請求項２３から４１のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４３】
ウイルスＶＨ１タンパク質をコードする外因性核酸をさらに含む、請求項１から４２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４４】
前記ウイルスＶＨ１タンパク質をコードする前記外因性核酸を含み、前記外因性核酸がポックスウイルスのゲノム由来であり、前記ポックスウイルスはワクシニアウイルスではない、請求項４３に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４５】
前記ポックスウイルスが、麻疹ウイルス、ポリオウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、レオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、セネカウイルス、レンチウイルス、メンゴウイルス、または粘液腫ウイルスを含む、請求項４４に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４６】
前記ウイルスゲノムがチミジンキナーゼ遺伝子を含む、請求項１から４５のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４７】
チミジンキナーゼ遺伝子が前記ウイルスゲノムから欠失している、請求項１から４５のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４８】
前記ウイルスゲノムが単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼ遺伝子を含む、請求項１から４７のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４９】
請求項１から４８のいずれか一項に記載の改変を含まない腫瘍溶解性ウイルスであって、他の点では同一である腫瘍溶解性ウイルスと比較して、前記ウイルスが、腫瘍内および腫瘍間の拡散の増強、免疫回避の増強、腫瘍特異的複製の増強、腫瘍標的送達の増強を示す、請求項１から４８のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５０】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス、アデノウイルス、レオウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、メンゴウイルス、または粘液腫ウイルスを含む、請求項１から４９のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５１】
前記腫瘍溶解性ウイルスが前記ポックスウイルスである、請求項５０に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５２】
前記ポックスウイルスがワクシニアウイルスである、請求項５０に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５３】
腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、以下：
（ａ）前記ウイルスの腫瘍内および腫瘍間の拡散を増強する改変、
（ｂ）前記ウイルスの全身送達を増強する改変、
（ｃ）前記ウイルスの腫瘍特異的複製を増強する改変、ならびに
（ｄ）前記ウイルスの免疫回避を増強する改変
のうちの少なくとも２つを含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５４】
腫瘍の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の分解を増強するタンパク質またはその断片をコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５５】
前記ＥＣＭの分解を増強する前記タンパク質またはその前記断片がヒアルロニダーゼである、請求項５４に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５６】
前記ヒアルロニダーゼが膜結合ヒアルロニダーゼまたは微生物ヒアルロニダーゼを含み、前記膜結合ヒアルロニダーゼがＰＨ−２０である、請求項５５に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５７】
前記ＰＨ−２０がＧＰＩアンカー型である、請求項５６に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５８】
前記ヒアルロニダーゼが微生物ヒアルロニダーゼを含み、前記微生物ヒアルロニダーゼがＨｙｓＡである、請求項５５に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項５９】
以下：
（ａ）前記ウイルスの腫瘍内および腫瘍間の拡散を増強する改変、
（ｂ）前記ウイルスの全身送達を増強する改変、
（ｃ）前記ウイルスの腫瘍特異的複製を増強する改変、ならびに
（ｄ）前記ウイルスの免疫回避を増強する改変
のうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項５４から５８のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項６０】
ケモカイン受容体をコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、前記ウイルスからの前記ケモカイン受容体の発現が前記ウイルスの全身送達を増強する、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項６１】
前記ケモカイン受容体が、ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つを含む、請求項６０に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項６２】
前記ケモカイン受容体をコードする前記外因性核酸を含み、以下：
（ａ）腫瘍のＥＣＭの分解を増強する改変、および
（ｂ）ＥＥＶ型の前記ウイルスの産生を増強する改変
のうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項６０または６１に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項６３】
腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、
ＥＥＶ型の前記ウイルスの産生を増強する前記ウイルスのゲノムにおける第１の改変、ならびに以下のさらなる改変：
（ａ）前記ウイルスの腫瘍内および腫瘍間の拡散を増強する改変、
（ｂ）前記ウイルスの全身送達を増強する改変、
（ｃ）前記ウイルスの腫瘍特異的複製を増強する改変、ならびに
（ｄ）前記ウイルスの免疫回避を増強する改変
のうちの少なくとも１つを含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項６４】
前記第１の改変が、Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失を含み、前記欠失が、完全または部分的な欠失を含み、前記Ｂ５Ｒ遺伝子のＳＣＲ領域における前記変異または欠失、前記ＳＣＲ領域がＳＣＲ１、ＳＣＲ３、ＳＣＲ４、またはそれらの任意の組み合わせを含み、前記ＳＣＲ領域がＳＣＲ２を含まない、請求項６３に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項６５】
さらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含み、前記さらなるウイルス遺伝子が、Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびＡ５２Ｒ、ならびにその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５３から６４のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項６６】
ＮＦκＢシグナル伝達をモジュレートし、間質液圧（ＩＦＰ）の低下を促進し、ＳＴＡＴ３媒介性遺伝子活性化をモジュレートし、Ｔ細胞活性化を促進し、ウイルス感染細胞へのＮＫ細胞の誘引を促進し、ウイルス感染細胞の代謝プログラムをモジュレートし、ウイルス感染細胞による脂肪酸の取り込みをモジュレートし、ＭＤＳＣの治療標的化を促進し、またはそれらの任意の組み合わせである、タンパク質またはその断片をコードする核酸配列をさらに含む、請求項５３から６５のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項６７】
少なくとも１つの追加の外因性核酸が、ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする核酸を含む、請求項６６に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項６８】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項６９】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項７０】
（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、および
（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項７１】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項７２】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｂ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項７３】
（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｂ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項７４】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｃ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項７５】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、ならびに
（ｃ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項７６】
（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、ならびに
（ｃ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項７７】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、
（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、ならびに
（ｄ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルス遺伝子の前記変異または前記欠失
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項７８】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｂ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒ、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項７９】
（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｂ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的断片もしくはドメインもしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項８０】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、ならびに
（ｃ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、その機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項８１】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、ならびに
（ｃ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項８２】
（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、および
（ｃ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、その機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項８３】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、
（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、ならびに
（ｄ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項８４】
（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする前記外因性核酸、
（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸、
（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の前記変異または前記欠失、
（ｄ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む前記さらなるウイルスゲノムの前記変異または前記欠失、ならびに
（ｅ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする前記少なくとも１つの追加の外因性核酸
を含む、請求項５３から６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項８５】
ケモカイン受容体、ヒアルロナンを分解することができるタンパク質、またはそれらの任意の組み合わせをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項８６】
ヒアルロナンを分解することができる前記タンパク質を含み、前記タンパク質がＰＨ−２０またはＨｙｓＡを含む、請求項８５に記載の改変された腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項８７】
Ａ５２Ｒ遺伝子の変異または欠失を含む改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項８８】
Ａ５２Ｒ遺伝子の前記欠失を含む、請求項８７に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項８９】
ケモカイン受容体、ヒアルロナンを分解することができるタンパク質、またはそれらの任意の組み合わせをコードする外因性核酸をさらに含む、請求項８７または８８に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項９０】
前記ケモカイン受容体をコードする前記外因性核酸を含み、前記ケモカイン受容体が、ＣＸＣＲ４またはＣＣＲ２を含む、請求項８９に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項９１】
ヒアルロナンを分解することができる前記タンパク質をコードする前記外因性核酸を含み、前記タンパク質が、膜結合ヒアルロニダーゼまたは分泌型ヒアルロニダーゼを含む、請求項８９または９０に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項９２】
前記膜結合ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸を含み、前記膜結合ヒアルロニダーゼがＰＨ−２０である、請求項９１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項９３】
前記ＰＨ−２０がＧＰＩアンカー型である、請求項９２に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項９４】
前記分泌型ヒアルロニダーゼをコードする前記外因性核酸を含み、前記分泌型ヒアルロニダーゼがＨｙｓＡである、請求項９１に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項９５】
Ｋ７Ｒ遺伝子の変異または欠失を含む改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項９６】
前記Ｋ７Ｒ遺伝子の前記欠失を含む、請求項９５に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項９７】
サイトカインをコードする外因性核酸、サイトカイン受容体をコードする外因性核酸、およびケモカインをコードする外因性核酸のうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項９５または９６に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項９８】
前記サイトカインをコードする前記外因性核酸を含み、前記サイトカインがＩＬ１５を含む、請求項９７に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項９９】
前記サイトカイン受容体をコードする前記外因性核酸を含み、前記サイトカイン受容体がＩＬ１５−Ｒαを含む、請求項９７または９８に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１００】
前記ケモカインをコードする前記外因性核酸を含み、前記ケモカインがＣＣＬ５を含む、請求項９７から９９のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１０１】
ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする外因性核酸をさらに含む、請求項９７から１００のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１０２】
Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失をさらに含む、請求項９７から１０１のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１０３】
ＩＬ１５およびＩＬ１５−Ｒαをコードする外因性核酸を含む改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１０４】
ＩＬ１５およびＣＣＬ５をコードする外因性核酸を含む改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１０５】
ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする外因性核酸を含む改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１０６】
前記ウイルスが、ナチュラルキラー細胞の活性化および誘引の増強を示す、請求項９５から１０５のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１０７】
前記ウイルスが、請求項１から５２および８７から１０６のいずれか一項に記載の改変を含まないワクシニアウイルスであって、他の点では同一であるワクシニアウイルスと比較して、腫瘍内および腫瘍間の拡散の増強、免疫回避の増強、腫瘍特異的複製の増強、腫瘍標的送達の増強のうちの少なくとも１つを示す、請求項１から５２および８７から１０６のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１０８】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス、アデノウイルス、レオウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、メンゴウイルス、または粘液腫ウイルスを含む、請求項１から５２および８７から１０７のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１０９】
前記腫瘍溶解性ウイルスが前記ポックスウイルスである、請求項１０８に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１１０】
前記ポックスウイルスがワクシニアウイルスである、請求項１０９に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１１１】
前記ウイルスが、請求項１０８から１１０のいずれか一項に記載の改変を含まないワクシニアウイルスであって、他の点では同一であるワクシニアウイルスと比較して、腫瘍内および腫瘍間の拡散の増強、免疫回避の増強、腫瘍特異的複製の増強、腫瘍標的送達の増強のうちの少なくとも１つを示す、請求項１０８から１１０のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１１２】
前記ウイルスが全身送達に適している、請求項１から５２および８７から１１１のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１１３】
前記ウイルスが、請求項５３から８６のいずれか一項に記載の改変を含まないワクシニアウイルスであって、他の点では同一であるワクシニアウイルスと比較して、腫瘍内および腫瘍間の拡散の増強、免疫回避の増強、腫瘍特異的複製の増強、腫瘍標的送達の増強のうちの少なくとも１つを示す、請求項５３から８４のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１１４】
前記ウイルスが全身送達に適している、請求項５３から８５のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１１５】
前記ウイルスが免疫回避を行うことができる、請求項５３から８５のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１１６】
全身送達が、経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、舌下投与、直腸投与、経皮投与、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１１４または１１５に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１１７】
前記非経口投与が静脈内注射を含む、請求項１１６に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１１８】
前記ウイルスが腫瘍内送達に適している、請求項５３から８５のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１１９】
ウイルスＶＨ１タンパク質をコードする外因性核酸をさらに含む、請求項５３から８５および１１３から１１８のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１２０】
前記ウイルスＶＨ１タンパク質をコードする前記外因性核酸を含み、前記外因性核酸がポックスウイルスのゲノム由来であり、前記ポックスウイルスはワクシニアウイルスではない、請求項１１９のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１２１】
前記ポックスウイルスが、ベータエントモポックスウイルス、ヤタポックスウイルス、セルビドポックスウイルス、ガンマエントモポックスウイルス、レポリポックスウイルス、スイポックスウイルス、モルシポックスウイルス、クロコジリドポックスウイルス、アルファエントモポックスウイルス、カプリポックスウイルス、アビポックスウイルス、パラポックスウイルスを含む、請求項１２０に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１２２】
前記ウイルスゲノムがチミジンキナーゼ遺伝子を含む、請求項５３から８５および１１３から１２１のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１２３】
チミジンキナーゼ遺伝子が前記ウイルスゲノムから欠失している、請求項１２２に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１２４】
単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼ遺伝子をさらに含む、請求項５３から８５および１１３から１２３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
【請求項１２５】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項で定義されている改変された腫瘍溶解性ウイルス、または請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含む医薬組成物。
【請求項１２６】
可溶化剤および賦形剤をさらに含む、請求項１２５に記載の医薬組成物。
【請求項１２７】
前記賦形剤が、緩衝剤、安定剤、抗酸化剤、結合剤、希釈剤、分散剤、速度制御剤、滑沢剤、流動促進剤、崩壊剤、可塑剤、防腐剤のうちの１つもしくは複数、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１２６に記載の医薬組成物。
【請求項１２８】
前記賦形剤が、リン酸水素二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、ミオイノシトール、ソルビトール、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１２７に記載の医薬組成物。
【請求項１２９】
防腐剤を含まない、請求項１２５から１２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３０】
防腐剤、希釈剤、および担体のうちの１つまたは複数をさらに含む、請求項１２５から１２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３１】
追加の活性成分またはその塩をさらに含む、請求項１２５から１３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３２】
前記可溶化剤が滅菌水である、請求項１２５から１３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３３】
追加の活性成分を含み、前記追加の活性成分が、さらなる腫瘍溶解性ウイルスである、請求項１２５から１３３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３４】
対象に腫瘍溶解性ウイルスを全身送達させた場合に前記ウイルスの治療効果を増強する方法であって、請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項で定義されている改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の全身投与を含む、方法。
【請求項１３５】
前記全身投与が、経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、舌下投与、直腸投与、経皮投与、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３６】
前記非経口投与が静脈内注射を含む、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
改変された腫瘍溶解性ウイルスを操作するプロセスであって、
（ｉ）請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項で定義されている１つまたは複数の改変を含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスＤＮＡ骨格ベクターを得るステップ、（ｉｉ）前記改変された腫瘍溶解性ウイルスＤＮＡベクターをさらに改変して、操作されたＤＮＡベクターを産生するステップ、（ｉｉｉ）哺乳動物細胞に前記操作されたＤＮＡベクターをトランスフェクトするステップ、（ｉｖ）ウイルス複製に適した条件下で前記哺乳動物細胞を培養するステップ、ならびに（ｖ）ウイルス粒子を採取するステップを含む、プロセス。
【請求項１３８】
腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを操作するプロセスであって、
（ｉ）請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている１つまたは複数の改変を含む、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスＤＮＡ骨格ベクターを得るステップ、（ｉｉ）前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスＤＮＡベクターをさらに改変して、操作されたＤＮＡベクターを産生するステップ、（ｉｉｉ）哺乳動物細胞に前記操作されたＤＮＡベクターをトランスフェクトするステップ、（ｉｖ）ウイルス複製に適した条件下で前記哺乳動物細胞を培養するステップ、ならびに（ｖ）ウイルス粒子を採取するステップを含む、プロセス。
【請求項１３９】
（ｉ）請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変を含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスＤＮＡベクターを生成するステップ、（ｉｉ）哺乳動物細胞に前記改変された腫瘍溶解性ウイルスＤＮＡベクターをトランスフェクトするステップ、（ｉｉｉ）ウイルス複製に適した条件下で前記哺乳動物細胞を培養するステップ、ならびに（ｉｖ）ウイルス粒子を採取するステップを含む、請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項で定義されている改変された腫瘍溶解性ウイルスを産生するプロセス。
【請求項１４０】
（ｉ）請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項に記載の改変を含む、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスＤＮＡベクターを生成するステップ、（ｉｉ）哺乳動物細胞に前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスＤＮＡベクターをトランスフェクトするステップ、（ｉｉｉ）ウイルス複製に適した条件下で前記哺乳動物細胞を培養するステップ、ならびに（ｉｖ）ウイルス粒子を採取するステップを含む、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ウイルスを産生するプロセス。
【請求項１４１】
前記哺乳動物細胞が、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、またはＶｅｒｏ細胞を含む、請求項１３７から１４０のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１４２】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物と、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物を投与するための指示と、病的血管新生に関連する障害を処置するために前記医薬組成物を対象に投与するための指示とを含むキット。
【請求項１４３】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物と、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物を投与するための指示と、容器と、病的血管新生に関連する障害を処置するために前記医薬組成物を対象に投与するための指示とを含むキット。
【請求項１４４】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物と、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物を投与するための指示と、病的血管新生に関連する障害を処置するために前記医薬組成物を対象に投与するための指示とを含む、がんを処置するためのキット。
【請求項１４５】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物と、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物を投与するための指示と、容器と、病的血管新生に関連する障害を処置するために前記医薬組成物を対象に投与するための指示とを含む、がんを処置するためのキット。
【請求項１４６】
前記がんが、固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫である、請求項１４２から１４５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１４７】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物と、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物を投与するための指示と、病的血管新生に関連する障害を処置するために前記医薬組成物を対象に投与するための指示とを含む、腫瘍を処置するためのキット。
【請求項１４８】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物と、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物を投与するための指示と、容器と、病的血管新生に関連する障害を処置するために前記医薬組成物を対象に投与するための指示とを含む、腫瘍を処置するためのキット。
【請求項１４９】
前記腫瘍が、固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫である、請求項１４７または１４８に記載のキット。
【請求項１５０】
前記対象が前記処置を必要としている、請求項１４２から１４９のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１５１】
前記対象がヒトである、請求項１４２から１５０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１５２】
投与するための前記指示が、全身投与のための指示を含む、請求項１４２から１５１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１５３】
前記全身投与が、経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、舌下投与、直腸投与、経皮投与、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１５２に記載のキット。
【請求項１５４】
前記非経口投与が静脈内注射を含む、請求項１５３に記載のキット。
【請求項１５５】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含む、腫瘍を処置する方法。
【請求項１５６】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３で定義されている医薬組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含み、前記腫瘍が、固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫である、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含む、がんを処置する方法。
【請求項１５８】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含み、前記がんが、固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫である、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含み、さらなる療法の投与をさらに含む、請求項１５５から１５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６０】
前記さらなる療法が、化学療法、放射線、追加のウイルスによる腫瘍溶解性ウイルス療法、免疫調節タンパク質による処置、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法、抗がん剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１５９に記載の方法。
【請求項１６１】
前記さらなる療法が、抗ＣＤ３３抗体およびその可変領域、抗ＣＤ１１ｂ抗体およびその可変領域、ＣＯＸ２阻害剤、サイトカイン、ケモカイン、抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、またはＴＬＲアゴニストを含む、免疫調節剤の投与を含む、請求項１５９に記載の方法。
【請求項１６２】
前記さらなる療法の投与を含み、前記さらなる療法が、前記抗がん剤の投与を含み、前記抗がん剤が化学療法剤である、請求項１５９に記載の方法。
【請求項１６３】
前記化学療法剤がプロドラッグである、請求項１６２に記載の方法。
【請求項１６４】
前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、改変されたワクシニアウイルス、またはそれを含む前記医薬組成物と組み合わせて前記プロドラッグを投与すると、前記プロドラッグが活性型に変換される、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６５】
前記プロドラッグがガンシクロビルを含む、請求項１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
前記さらなる療法の投与を含み、前記さらなる療法が、併せてまたは逐次的に投与される、請求項１５９から１６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６７】
前記さらなる療法の逐次的投与を含み、前記さらなる療法が、請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物を投与する前に投与される、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
前記さらなる療法の逐次的投与を含み、前記さらなる療法が、請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物を投与した後に投与される、請求項１６７に記載の方法。
【請求項１６９】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の治療有効量をがん細胞に投与するステップを含む、がん細胞において毒性作用を生じさせる方法。
【請求項１７０】
前記がん細胞が対象に存在する、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
前記対象が、前記がん細胞に前記毒性作用をもたらす方法を必要とする、請求項１７０に記載の方法。
【請求項１７２】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の治療有効量をがん細胞に投与することによって、対象に存在する前記がん細胞において毒性作用を生じさせるステップを含む、前記対象を処置する方法。
【請求項１７３】
前記対象が前記処置を必要としている、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７４】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の治療有効量を投与することによって、対象のがん細胞に感染させるステップを含み、前記投与が全身投与である、前記対象におけるがんを処置する方法。
【請求項１７５】
前記全身投与が、経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、舌下投与、直腸投与、経皮投与、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
前記非経口投与が静脈内注射を含む、請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７７】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、または請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染した細胞を投与するステップを含む、対象におけるがんを処置する方法。
【請求項１７８】
前記がんが、黒色腫、肝細胞癌、乳がん、肺がん、腹膜がん、前立腺がん、膀胱がん、卵巣がん、白血病、リンパ腫、腎癌、膵臓がん、上皮癌、胃がん、結腸癌、十二指腸がん、膵臓腺癌、中皮腫、多形性神経膠芽腫、星細胞腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、肝細胞癌、胆管肉腫、膵臓腺癌、頭頚部扁平上皮癌、結腸直腸がん、腸型胃腺癌、子宮頚部扁平上皮癌、骨肉腫、上皮性卵巣癌、急性リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性新生物、または肉腫を含む、請求項１５５から１７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７９】
がん細胞が、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、結腸、食道、胃腸、歯肉、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頚部、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌、または子宮からなる群から選択される、前記対象の臓器に存在する、請求項１５５から１７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８０】
がんが転移性である、請求項１５５から１７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８１】
請求項４８に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、またはそれを含む医薬組成物を化学療法プロドラッグと組み合わせて投与するステップを含む、対象におけるがんを処置する方法。
【請求項１８２】
請求項１２４に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、またはそれを含む医薬組成物を化学療法プロドラッグと組み合わせて投与するステップを含む、対象におけるがんを処置する方法。
【請求項１８３】
（ｉ）請求項４８に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、またはそれを含む医薬組成物を投与するステップ、（ｉｉ）対象から単離された第１および第２の生体試料中のウイルス力価をアッセイするステップであって、前記第１の生体試料ががん細胞を含み、前記第２の生体試料が非がん細胞を含む、ステップ、ならびに（ｉｉｉ）前記ウイルス力価が前記第２の試料において前記第１の試料と等しいかまたはそれよりも高い場合、化学療法プロドラッグを投与するステップであって、前記化学療法プロドラッグの投与が、前記対象における前記改変された腫瘍溶解性ウイルスの複製の阻害をもたらす、ステップを含む、前記対象におけるがんを処置する方法。
【請求項１８４】
（ｉ）請求項１２４に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含む医薬組成物を投与するステップ、（ｉｉ）対象から単離された第１および第２の生体試料中のウイルス力価をアッセイするステップであって、前記第１の生体試料ががん細胞を含み、前記第２の生体試料が非がん細胞を含む、ステップ、ならびに（ｉｉｉ）前記ウイルス力価が前記第２の試料において前記第１の試料と等しいかまたはそれよりも高い場合、化学療法プロドラッグを投与するステップであって、前記化学療法プロドラッグの投与が、前記対象における前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの複製の阻害をもたらす、ステップを含む、前記対象におけるがんを処置する方法。
【請求項１８５】
腫瘍溶解性ウイルスに基づくがん療法の有効性を増加させる、請求項１５５から１８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８６】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の投与を含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物が、約１０６ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１０ＰＦＵ／ｍＬの前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含む投与量で投与される、請求項１５５から１８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８７】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の投与を含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物が、約５×１０９ＰＦＵ／ｍＬの前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含む投与量で投与される、請求項１５５から１８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８８】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の投与を含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物が、独立して、第１の期間に初期用量で、第２の期間に中間用量で、第３の期間に高用量で投与される、請求項１５５から１８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８９】
前記初期、前記中間、および前記高用量の投与を独立して含み、前記初期用量が前記中間用量よりも低く、前記中間用量が前記高用量よりも低い、請求項１８８に記載の方法。
【請求項１９０】
前記第１、第２、および第３の期間が各々、約１週間〜約３週間である、請求項１８８または１８９に記載の方法。
【請求項１９１】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物を投与するステップを含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、および前記医薬組成物が、独立して、約１ｍＬ〜約５ｍＬ、約５ｍＬ〜１０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約２０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約１００ｍＬ〜１５０ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約４５０ｍＬ〜５００ｍＬ、約５００ｍＬ〜７５０ｍＬ、または約７５０ｍＬ〜１０００ｍＬの体積で投与される液体剤形を含む、請求項１５５から１９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９２】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物を投与するステップを含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物が、液体剤形、固体剤形、吸入可能な剤形、鼻腔内剤形、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、微粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはそれらの任意の組み合わせで投与される、請求項１５５から１９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９３】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物を投与するステップを含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物が、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、または約１２週間の期間、投与される、請求項１５５から１９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９４】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物を投与するステップを含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物が、毎日１回、毎日２回、１週間毎に１回、２週間毎に１回、または３週間毎に１回投与される、請求項１５５から１９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９５】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物を投与するステップを含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物が、静脈内、腹腔内、または腫瘍内注射によって投与される、請求項１５５から１９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９６】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物を投与するステップを含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物が、ボーラス注射または緩徐注入として投与される、請求項１５５から１９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９７】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物を投与するステップを含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物の前記投与が、第１の用量の投与から約１時間〜約３日後に第１のピークウイルス量、および約３日〜約１０日後に第２のピークウイルス量をもたらす、請求項１５５から１９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９８】
前記さらなる療法の投与を含み、前記さらなる療法が、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、または約１２週間の期間、投与される、請求項１５５から１９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９９】
前記さらなる療法の投与を含み、前記さらなる療法が、毎日１回、１週間毎に１回、２週間毎に１回、または３週間毎に１回投与される、請求項１５５から１９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２００】
前記さらなる療法の投与を含み、前記さらなる療法が、液体剤形、固体剤形、吸入可能な剤形、鼻腔内剤形、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、微粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはそれらの任意の組み合わせで投与される、請求項１５５から１９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０１】
前記さらなる療法の投与を含み、前記さらなる療法は、経口、静脈内、腫瘍内注射により、または放射線により投与される、請求項１５５から２００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０２】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の、それを必要とする対象への投与を含み、前記対象がヒトである、請求項１５５から２０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０３】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の、それを必要とする前記対象への投与を含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物を投与する前に、前記対象ががんと診断されている、請求項１５５から２０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０４】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の、それを必要とする前記対象への、前記さらなる療法と組み合わせた投与を含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、もしくは前記医薬組成物または前記さらなる療法を投与する前に、前記対象ががんと診断されている、請求項１５５から２０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０５】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の、それを必要とする前記対象への投与を含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または前記医薬組成物を投与する前に、前記対象が腫瘍と診断されている、請求項１５５から２０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０６】
請求項１から５２および８７から１１２のいずれか一項に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、請求項５３から８６および１１３から１２４のいずれか一項で定義されている腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項１２５から１３３のいずれか一項で定義されている医薬組成物の、それを必要とする前記対象への、前記さらなる療法と組み合わせた投与を含み、前記改変された腫瘍溶解性ウイルス、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、もしくは前記医薬組成物または前記さらなる療法を投与する前に、前記対象ががんと診断されている、請求項１５５から２０２および２０５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１７年１０月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／５７９，５１７号の利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
参照による組み込み
【０００２】
本明細書において言及されるすべての刊行物、特許、特許出願、およびＮＣＢＩ受託番号は、あたかも各個々の刊行物、特許、または特許出願が参照により組み込まれることが具体的であり、個別に示されているのと同程度に、およびあたかもそれらの全体が記載されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で使用される場合の用語と、組み込まれた参照において定義されている用語との間に矛盾がある場合、本開示の定義が支配する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本開示の一態様は、ケモカイン受容体をコードする外因性核酸、ヒアルロナンを分解することができる膜結合タンパク質、ヒアルロナンを分解することができる微生物タンパク質、またはそれらの任意の組み合わせを含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスを提供する。
【０００４】
一部の実施形態では、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つを含むことができる。
【０００５】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、膜結合タンパク質をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、膜結合タンパク質をコードする外因性核酸は、ヒアルロニダーゼをコードすることができる。一部の実施形態では、ヒアルロニダーゼは、ＰＨ−２０であり得る。一部の実施形態では、ＰＨ−２０は、ＧＰＩアンカー型であり得る。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、微生物タンパク質をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、微生物タンパク質は、分泌型ヒアルロニダーゼを含む。一部の実施形態では、分泌型ヒアルロニダーゼは、ＨｙｓＡ、ｌｉｎ、ｓｋｏ、ｒｖのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。一部の実施形態では、微生物タンパク質は、ＨｙｓＡを含む。
【０００６】
一部の実施形態では、改変は、エンベロープ細胞外型（ＥＥＶ）のウイルスの産生を増強することができる。
【０００７】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスのゲノムに改変を含み得る。一部の実施形態では、改変は、Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、前記欠失は部分的欠失である。一部の実施形態では、改変は、Ｂ５Ｒ遺伝子のＳＣＲ領域に変異または欠失を含み、上記ＳＣＲ領域は、ＳＣＲ１、ＳＣＲ３、ＳＣＲ４、またはそれらの任意の組み合わせを含み、ＳＣＲ領域はＳＣＲ２を含まない。
【０００８】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｂ５Ｒ遺伝子の欠失を含むことができ、欠失は、Ｂ５Ｒ遺伝子の部分的欠失であり得る。
【０００９】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスのゲノムに改変を含むことができ、改変は、Ａ５２Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができる。一部の実施形態では、改変は、Ａ５２Ｒ遺伝子の欠失を含むことができる。
【００１０】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスのゲノムに少なくとも１つの追加の改変をさらに含むことができ、追加の改変は、さらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００１１】
一部の実施形態では、さらなるウイルス遺伝子は、Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、およびＮ１Ｌ、ならびにその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができる。
【００１２】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、少なくとも１つの追加の外因性核酸をさらに含むことができる。
【００１３】
一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の外因性核酸は、ＮＦκＢ（ＮＦ−カッパＢ）シグナル伝達をモジュレートし、腫瘍において間質液圧（ＩＦＰ）の低下を促進し、ＳＴＡＴ３媒介性遺伝子活性化をモジュレートし、Ｔ細胞活性化を促進し、ウイルス感染細胞へのＮＫ細胞の誘引を促進し、ウイルス感染細胞の代謝プログラムをモジュレートし、ウイルス感染細胞による脂肪酸の取り込みをモジュレートし、ＭＤＳＣの治療標的化を促進し、またはそれらの任意の組み合わせである、タンパク質またはその断片をコードする核酸配列を含むことができる。
【００１４】
一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の外因性核酸は、ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする核酸を含むことができる。
【００１５】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、ならびに（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸を含むことができる。
【００１６】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、ならびに（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００１７】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、および（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００１８】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、ならびに（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００１９】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、ならびに（ｂ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００２０】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、ならびに（ｂ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００２１】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、ならびに（ｃ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００２２】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｃ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００２３】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｃ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００２４】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｄ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００２５】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、ならびに（ｂ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００２６】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、ならびに（ｂ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００２７】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、ならびに（ｃ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００２８】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｃ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００２９】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｃ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００３０】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｄ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００３１】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、（ｄ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｅ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００３２】
一部の実施形態では、ヒアルロニダーゼは、ＰＨ−２０を含む。一部の実施形態では、ヒアルロニダーゼは、ＨｙｓＡを含む。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスＶＨ１タンパク質をコードする外因性核酸をさらに含むことができる。
【００３３】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスＶＨ１タンパク質をコードする外因性核酸を含むことができ、外因性核酸はポックスウイルスのゲノム由来であり得、ポックスウイルスはワクシニアウイルスではない可能性がある。一部の実施形態では、ポックスウイルスは、麻疹ウイルス、ポリオウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、レオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、セネカウイルス、レンチウイルス、メンゴウイルス、または粘液腫ウイルス（myxomavir）を含むことができる。
【００３４】
一部の実施形態では、ウイルスゲノムは、チミジンキナーゼ遺伝子を含むことができる。一部の実施形態では、チミジンキナーゼ遺伝子は、ウイルスゲノムから欠失している可能性がある。
【００３５】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼ遺伝子をさらに含むことができる。
【００３６】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、本明細書に開示される改変を含まない腫瘍溶解性ウイルスであって、他の点では同一である腫瘍溶解性ウイルスと比較して、腫瘍内および腫瘍間の拡散の増強、免疫回避の増強、腫瘍特異的複製の増強、腫瘍標的送達の増強を示す。
【００３７】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、アデノウイルス、レオウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、メンゴウイルス、または粘液腫ウイルスを含み得る。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ワクシニアウイルスであり得る。
【００３８】
本開示の別の局面は、以下：（ａ）ウイルスの腫瘍内および腫瘍間の拡散を増強する改変、（ｂ）ウイルスの全身送達を増強する改変、（ｃ）ウイルスの腫瘍特異的複製を増強する改変、ならびに（ｄ）ウイルスの免疫回避を増強する改変のうちの少なくとも２つを含み得る腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。
【００３９】
本開示のさらに別の態様は、腫瘍の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の分解を増強するタンパク質またはその断片をコードする外因性核酸を含み得る腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。
【００４０】
腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの一部の実施形態では、ＥＣＭの分解を増強するタンパク質またはその断片は、ヒアルロニダーゼであり得る。一部の実施形態では、ヒアルロニダーゼは、ＰＨ−２０などの膜結合ヒアルロニダーゼであり得る。一部の実施形態では、ＰＨ−２０は、ＧＰＩアンカー型であり得る。一部の実施形態では、ヒアルロニダーゼは、ＨｙｓＡなどの微生物ヒアルロニダーゼであり得る。
【００４１】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、以下：（ａ）ウイルスの腫瘍内および腫瘍間の拡散を増強する改変、（ｂ）ウイルスの全身送達を増強する改変、（ｃ）ウイルスの腫瘍特異的複製を増強する改変、ならびに（ｄ）ウイルスの免疫回避を増強する改変のうちの少なくとも１つを含むことができる。
【００４２】
本開示のさらに別の態様は、ケモカイン受容体をコードする外因性核酸を含むことができる腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、ウイルスからのケモカイン受容体の発現が、ウイルスの全身送達を増強する、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。
【００４３】
一部の実施形態では、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つを含むことができる。
【００４４】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ケモカイン受容体をコードする外因性核酸を含むことができ、以下：（ａ）腫瘍のＥＣＭの分解を増強する改変、および（ｂ）ＥＥＶ型のウイルスの産生を増強する改変のうちの少なくとも１つをさらに含むことができる。
【００４５】
本開示のさらに別の態様は、ＥＥＶ型のウイルスの産生を増強するウイルスのゲノムにおける第１の改変、ならびに以下のさらなる改変：（ａ）ウイルスの腫瘍内および腫瘍間の拡散を増強する改変、（ｂ）ウイルスの全身送達を増強する改変、（ｃ）ウイルスの腫瘍特異的複製を増強する改変、ならびに（ｄ）ウイルスの免疫回避を増強する改変のうちの少なくとも１つを含み得る腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。
【００４６】
一部の実施形態では、第１の改変は、Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失を含み得る。
【００４７】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、さらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含み得、さらなるウイルス遺伝子は、Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、およびＡ５２Ｒ、ならびにその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができる。
【００４８】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＮＦκＢシグナル伝達をモジュレートし、間質液圧（ＩＦＰ）の低下を促進し、ＳＴＡＴ３媒介性遺伝子活性化をモジュレートし、Ｔ細胞活性化を促進し、ウイルス感染細胞へのＮＫ細胞の誘引を促進し、ウイルス感染細胞の代謝プログラムをモジュレートし、ウイルス感染細胞による脂肪酸の取り込みをモジュレートし、ＭＤＳＣの治療標的化を促進し、またはそれらの任意の組み合わせである、タンパク質またはその断片をコードする核酸配列をさらに含むことができる。
【００４９】
一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の外因性核酸は、ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする核酸を含むことができる。
【００５０】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、以下（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、ならびに（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸を含むことができる。
【００５１】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、ならびに（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００５２】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、および（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００５３】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、ならびに（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００５４】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、ならびに（ｂ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００５５】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、ならびに（ｂ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００５６】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、ならびに（ｃ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００５７】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｃ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００５８】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｃ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００５９】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｄ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含むことができる。
【００６０】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、ならびに（ｂ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒ、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００６１】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、ならびに（ｂ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒ、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくはその断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外来性核酸を含むことができる。
【００６２】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、ならびに（ｃ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒ、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれら任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００６３】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｃ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒ、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００６４】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、（ｂ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｃ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒ、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００６５】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｄ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒ、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００６６】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、（ａ）ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２のうちの少なくとも１つをコードする外因性核酸、（ｂ）ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸、（ｃ）Ｂ５Ｒ遺伝子の変異または欠失、（ｄ）Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができるさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失、ならびに（ｅ）ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、ＣＣＬ５、およびその機能的断片もしくはドメインもしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする少なくとも１つの追加の外因性核酸を含むことができる。
【００６７】
一態様は、ケモカイン受容体、ヒアルロナンを分解することができるタンパク質、またはそれらの任意の組み合わせをコードすることができる外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。一部の実施形態では、タンパク質は、ヒアルロナンを分解することができ、タンパク質はＰＨ−２０またはＨｙｓＡを含む。
【００６８】
一態様は、Ａ５２Ｒ遺伝子の変異または欠失を含み得る改変された腫瘍溶解性ウイルスを提供する。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の欠失を含み得る。
【００６９】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ケモカイン受容体、ヒアルロナンを分解することができるタンパク質、またはそれらの任意の組み合わせをコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ケモカイン受容体をコードすることができる外因性核酸を含むことができ、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ４またはＣＣＲ２を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ヒアルロナンを分解することができるタンパク質をコードする外因性核酸を含むことができ、タンパク質は、膜結合ヒアルロニダーゼまたは分泌型ヒアルロニダーゼを含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、膜結合ヒアルロニダーゼをコードすることができる外因性核酸を含むことができ、膜結合ヒアルロニダーゼは、ＰＨ−２０であり得る。一部の実施形態では、ＰＨ−２０は、ＧＰＩアンカー型であり得る。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、分泌型ヒアルロニダーゼをコードすることができる外因性核酸を含むことができ、分泌型ヒアルロニダーゼは、ＨｙｓＡであり得る。
【００７０】
一態様は、Ｋ７Ｒ遺伝子の変異または欠失を含み得る改変された腫瘍溶解性ウイルスを提供する。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の欠失を含み得る。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、サイトカインをコードすることができる外因性核酸、サイトカイン受容体をコードすることができる外因性核酸、およびケモカインをコードすることができる外因性核酸のうちの少なくとも１つをさらに含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、サイトカインをコードすることができる外因性核酸を含み、サイトカインは、ＩＬ１５を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、サイトカイン受容体をコードすることができる外因性核酸を含むことができ、サイトカイン受容体は、ＩＬ１５−Ｒαを含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ケモカインをコードすることができる外因性核酸を含むことができ、ケモカインは、ＣＣＬ５を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＬＩＧＨＴ、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードする外因性核酸をさらに含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ａ５２Ｒ、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含むさらなるウイルス遺伝子の変異または欠失をさらに含むことができる。
【００７１】
一態様は、ＩＬ１５およびＩＬ１５−Ｒαをコードすることができる外因性核酸を含み得る改変された腫瘍溶解性ウイルスを提供する。一態様は、ＩＬ１５およびＣＣＬ５をコードすることができる外因性核酸を含み得る改変された腫瘍溶解性ウイルスを提供する。一態様は、ＩＬ１５、ＩＬ１５−Ｒα、ＩＴＡＣ、フラクタルカイン、およびその機能的ドメインもしくは断片もしくはバリアントのうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードすることができる外因性核酸を含み得る改変された腫瘍溶解性ウイルスを提供する。一部の実施形態では、ウイルスは、ナチュラルキラー細胞の活性化および誘引の増強を示すことができる。
【００７２】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、本明細書に開示される改変を含まない腫瘍溶解性ウイルスであって、他の点では同一である腫瘍溶解性ウイルスと比較して、腫瘍内および腫瘍間の拡散の増強、免疫回避の増強、腫瘍特異的複製の増強、腫瘍標的送達の増強を示し得る。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス、アデノウイルス、レオウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、メンゴウイルス、または粘液腫ウイルスを含み得る。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ポックスウイルスを含み得る。一部の実施形態では、ポックスウイルスは、ワクシニアウイルスであり得る。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、全身送達に適している場合がある。
【００７３】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、本明細書に開示される改変を含まないワクシニアウイルスであって、他の点では同一であるワクシニアウイルスと比較して、腫瘍内および腫瘍間の拡散の増強、免疫回避の増強、腫瘍特異的複製の増強、腫瘍標的送達の増強を示し得る。
【００７４】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、全身送達に適している場合がある。
【００７５】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、免疫回避を行うことができる場合がある。
【００７６】
一部の実施形態では、全身送達は、経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、舌下投与、直腸投与、経皮投与、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
【００７７】
一部の実施形態では、非経口送達は、静脈内注射を含むことができる。
【００７８】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、腫瘍内送達に適している場合がある。
【００７９】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ウイルスＶＨ１タンパク質をコードする外因性核酸を含み得る。
【００８０】
一部の実施形態では、外因性核酸は、ポックスウイルスのゲノム由来であり得、ポックスウイルスはワクシニアウイルスでなくてよい。一部の実施形態では、ポックスウイルスは、ベータエントモポックスウイルス、ヤタポックスウイルス、セルビドポックスウイルス、ガンマエントモポックスウイルス、レポリポックスウイルス、スイポックスウイルス、モルシポックスウイルス、クロコジリドポックスウイルス（crocodylidpoxvirus）、アルファエントモポックスウイルス、カプリポックスウイルス、アビポックスウイルス、パラポックスウイルスを含み得る。
【００８１】
一部の実施形態では、ウイルスゲノムは、チミジンキナーゼ遺伝子を含み得る。一部の実施形態では、チミジンキナーゼ遺伝子は、ウイルスゲノムから欠失している可能性がある。
【００８２】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼ遺伝子を含み得る。
【００８３】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、または本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含み得る医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、医薬組成物は、可溶化剤および賦形剤を含み得る。一部の実施形態では、賦形剤は、緩衝剤、安定剤、抗酸化剤、結合剤、希釈剤、分散剤、速度制御剤、滑沢剤、流動促進剤、崩壊剤、可塑剤、防腐剤のうちの１つもしくは複数、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。一部の実施形態では、賦形剤は、リン酸水素二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、ミオイノシトール、ソルビトール、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、防腐剤を含まない。一部の実施形態では、医薬組成物は、防腐剤、希釈剤、および担体のうちの１つまたは複数を含み得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、追加の活性成分またはその塩を含み得る。一部の実施形態では、可溶化剤は、滅菌水であり得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、追加の活性成分を含み得、追加の活性成分は、さらなる腫瘍溶解性ウイルスであり得る。本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の全身投与を含む、対象にウイルスを全身送達させた場合に腫瘍溶解性ウイルスの治療効果を増強する方法を提供する。
【００８４】
一部の実施形態では、全身投与は、経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、舌下投与、直腸投与、経皮投与、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。一部の実施形態では、非経口投与は、静脈内注射を含み得る。
【００８５】
本開示のさらに別の態様は、（ｉ）本明細書に開示される１つまたは複数の改変を含み得る、改変された腫瘍溶解性ウイルスＤＮＡ骨格ベクターを得るステップ、（ｉｉ）改変された腫瘍溶解性ウイルスＤＮＡベクターをさらに改変して、操作されたＤＮＡベクターを産生するステップ、（ｉｉｉ）哺乳動物細胞に操作されたＤＮＡベクターをトランスフェクトするステップ、（ｉｖ）ウイルス複製に適した条件下で哺乳動物細胞を培養するステップ、および（ｖ）ウイルス粒子を採取するステップを含み得る、改変された腫瘍溶解性ウイルスを操作するプロセスを提供する。
【００８６】
本開示のさらに別の態様は、（ｉ）本明細書に開示される１つまたは複数の改変を含み得る、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスＤＮＡ骨格ベクターを得るステップ、（ｉｉ）腫瘍溶解性ワクシニアウイルスＤＮＡベクターをさらに改変して、操作されたＤＮＡベクターを産生するステップ、（ｉｉｉ）哺乳動物細胞に操作されたＤＮＡベクターをトランスフェクトするステップ、（ｉｖ）ウイルス複製に適した条件下で哺乳動物細胞を培養するステップ、および（ｖ）ウイルス粒子を採取するステップを含み得る、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを操作するプロセスを提供する。
【００８７】
本開示のさらに別の態様は、（ｉ）本明細書に開示される改変を含み得る、改変された腫瘍溶解性ウイルスＤＮＡベクターを生成するステップ、（ｉｉ）哺乳動物細胞に改変された腫瘍溶解性ウイルスＤＮＡベクターをトランスフェクトするステップ、（ｉｉｉ）ウイルス複製に適した条件下で哺乳動物細胞を培養するステップ、および（ｉｖ）ウイルス粒子を採取するステップを含む、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルスを産生するプロセスを提供する。
【００８８】
本開示のさらに別の態様は、（ｉ）本明細書に開示される改変を含み得る、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスＤＮＡベクターを生成するステップ、（ｉｉ）哺乳動物細胞に腫瘍溶解性ワクシニアウイルスＤＮＡベクターをトランスフェクトするステップ、（ｉｉｉ）ウイルス複製に適した条件下で哺乳動物細胞を培養するステップ、および（ｉｖ）ウイルス粒子を採取するステップを含む、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを産生するプロセスを提供する。一部の実施形態では、哺乳動物細胞は、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、またはＶｅｒｏ細胞を含む。
【００８９】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物と、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物を投与するための指示と、病的血管新生に関連する障害を処置するために前記医薬組成物を対象に投与するための指示とを含み得るキットを提供する。
【００９０】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物と、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物を投与するための指示と、容器と、病的血管新生に関連する障害を処置するために前記医薬組成物を対象に投与するための指示とを含むキットを提供する。
【００９１】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物と、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物を投与するための指示と、病的血管新生に関連する障害を処置するために前記医薬組成物を対象に投与するための指示とを含む、がんを処置するためのキットを提供する。
【００９２】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物と、改変される腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物を投与するための指示と、容器と、病的血管新生に関連する障害を処置するために前記医薬組成物を対象に投与するための指示とを含む、がんを処置するためのキットを提供する。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫であり得る。
【００９３】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物と、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物を投与するための指示と、病的血管新生に関連する障害を処置するために前記医薬組成物を対象に投与するための指示とを含む、腫瘍を処置するためのキットを提供する。
【００９４】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物と、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物を投与するための指示と、容器と、病的血管新生に関連する障害を処置するために前記医薬組成物を対象に投与するための指示とを含む、腫瘍を処置するためのキットを提供する。一部の実施形態では、腫瘍は、固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫であり得る。一部の実施形態では、対象は、処置を必要としている場合がある。一部の実施形態では、対象は、ヒトであり得る。一部の実施形態では、投与するための指示は、全身投与のための指示を含むことができる。一部の実施形態では、全身投与は、経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、舌下投与、直腸投与、経皮投与、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができる。一部の実施形態では、非経口投与は、静脈内注射を含むことができる。
【００９５】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含む、腫瘍を処置する方法を提供する。
【００９６】
一部の実施形態では、腫瘍を処置する方法は、本明細書に開示される改変腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含み得、腫瘍は、固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫であり得る。
【００９７】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含む、がんを処置する方法を提供する。
【００９８】
一部の実施形態では、がんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含み得、がんは、固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫であり得る。
【００９９】
一部の実施形態では、がんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含み得、本方法は、さらなる療法の投与をさらに含み得る。
【０１００】
一部の実施形態では、さらなる療法は、化学療法、放射線、追加のウイルスによる腫瘍溶解性ウイルス療法、免疫調節タンパク質による処置、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法（キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法）、抗がん剤、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
【０１０１】
一部の実施形態では、さらなる療法は、抗ＣＤ３３抗体およびその可変領域、抗ＣＤ１１ｂ抗体およびその可変領域、ＣＯＸ２阻害剤、サイトカイン、ケモカイン、抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、またはＴＬＲアゴニストを含むことができる、免疫調節剤の投与を含むことができる。
【０１０２】
一部の実施形態では、がんを処置する方法は、さらなる療法の投与を含み得、さらなる療法は、抗がん剤の投与を含み得、抗がん剤は、化学療法剤であり得る。一部の実施形態では、化学療法剤は、プロドラッグであり得る。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、改変されたワクシニアウイルス、またはそれを含むことができる医薬組成物と組み合わせてプロドラッグを投与すると、プロドラッグは活性型に変換され得る。一部の実施形態では、プロドラッグは、ガンシクロビルを含むことができる。一部の実施形態では、がんを処置する方法は、さらなる療法の投与を含むことができ、さらなる療法は、併せてまたは逐次的に投与され得る。一部の実施形態では、がんを処置する方法は、さらなる療法の逐次的投与を含むことができ、さらなる療法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物を投与する前に投与され得る。一部の実施形態では、がんを処置する方法は、さらなる療法の逐次的投与を含むことができ、さらなる療法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物を投与した後に投与され得る。
【０１０３】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の治療有効量をがん細胞に投与するステップを含む、がん細胞において毒性作用を生じさせる方法を提供する。一部の実施形態では、がん細胞は対象に存在し得る。一部の実施形態では、対象は、がん細胞において毒性作用を生じさせる方法を必要としている場合がある。
【０１０４】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の治療有効量をがん細胞に投与することによって、対象に存在し得るがん細胞において毒性作用を生じさせるステップを含む、対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、対象は、処置を必要としている場合がある。
【０１０５】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の治療有効量を投与することによって、対象のがん細胞に感染させるステップを含み、投与は全身投与であり得る、対象におけるがんを処置する方法を提供する。
【０１０６】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルスまたは本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染した細胞を投与するステップを含む、対象におけるがんを処置する方法を提供する。
【０１０７】
一部の実施形態では、がんは、黒色腫、肝細胞癌、乳がん、肺がん、腹膜がん、前立腺がん、膀胱がん、卵巣がん、白血病、リンパ腫、腎癌、膵臓がん、上皮癌、胃がん、結腸癌、十二指腸がん、膵臓腺癌、中皮腫、多形性神経膠芽腫、星細胞腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、肝細胞癌、胆管肉腫、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸がん、腸型胃腺癌、子宮頸部扁平上皮癌、骨肉腫、上皮性卵巣癌、急性リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性新生物、または肉腫を含み得る。
【０１０８】
一部の実施形態では、がん細胞は、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、結腸、食道、胃腸、歯肉、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頚部、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌、または子宮からなる群から選択される、対象の臓器に存在し得る。一部の実施形態では、がんは、転移性であり得る。
【０１０９】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、またはそれを含み得る医薬組成物を化学療法プロドラッグと組み合わせて投与するステップを含む、対象におけるがんを処置する方法を提供する。
【０１１０】
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、またはそれを含み得る医薬組成物を化学療法プロドラッグと組み合わせて投与することを含む、対象におけるがんを処置する方法を提供する。
【０１１１】
本開示のさらに別の態様は、（ｉ）本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、またはそれを含み得る医薬組成物を投与するステップ、（ｉｉ）対象から単離された第１および第２の生体試料中のウイルス力価をアッセイするステップであって、第１の生体試料はがん細胞を含み得、第２の生体試料は非がん細胞を含み得る、ステップ、ならびに（ｉｉｉ）ウイルス力価が第２の試料において第１の試料と等しいかまたはそれよりも高い場合、化学療法プロドラッグを投与するステップであって、化学療法プロドラッグの投与は、対象における改変された腫瘍溶解性ウイルスの複製の阻害をもたらす、ステップを含む、対象におけるがんを処置する方法を提供する。
【０１１２】
本開示のさらに別の態様は、（ｉ）本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含み得る医薬組成物を投与するステップ、（ｉｉ）対象から単離された第１および第２の生体試料中のウイルス力価をアッセイするステップであって、第１の生体試料はがん細胞を含み得、第２の生体試料は非がん細胞を含み得る、ステップ、ならびに（ｉｉｉ）ウイルス力価が第２の試料において第１の試料と等しいかまたはそれよりも高い場合、化学療法プロドラッグを投与するステップであって、化学療法プロドラッグの投与は、対象における腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの複製の阻害をもたらす、ステップを含む、対象におけるがんを処置する方法を提供する。
【０１１３】
一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、腫瘍溶解性ウイルスに基づくがん療法の有効性を増加させることができる。一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の投与を含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物は、約１０６ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１０ＰＦＵ／ｍＬの腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含むことができる投与量で投与され得る。
【０１１４】
一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の投与を含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物は、約５×１０９ＰＦＵ／ｍＬの腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含むことができる投与量で投与され得る。
【０１１５】
一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の投与を含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物は、独立して、第１の期間に初期用量で、第２の期間に中間用量で、第３の期間に高用量で投与され得る。一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、初期、中間、および高用量の投与を独立して含み得、初期用量は中間用量よりも低く、中間用量は高用量よりも低い。
【０１１６】
一部の実施形態では、第１、第２、および第３の期間は各々、約１週間〜約３週間であり得る。一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物を投与するステップを含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、および医薬組成物は、独立して、約１ｍＬ〜約５ｍＬ、約５ｍＬ〜１０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約２０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約１００ｍＬ〜１５０ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約４５０ｍＬ〜５００ｍＬ、約５００ｍＬ〜７５０ｍＬ、または約７５０ｍＬ〜１０００ｍＬの体積で投与され得る液体剤形を含み得る。
【０１１７】
一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物を投与するステップを含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物は、液体剤形、固体剤形、吸入可能な剤形、鼻腔内剤形、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、微粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはそれらの任意の組み合わせで投与され得る。
【０１１８】
一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物を投与するステップを含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物は、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、または約１２週間の期間、投与され得る。
【０１１９】
一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物を投与するステップを含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物は、毎日１回、毎日２回、１週間毎に１回、２週間毎に１回、または３週間毎に１回投与され得る。
【０１２０】
一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物を投与するステップを含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物は、静脈内、腹腔内、または腫瘍内注射によって投与され得る。
【０１２１】
一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物を投与するステップを含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物は、ボーラス注射または緩徐注入として投与され得る。
【０１２２】
一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物を投与するステップを含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物の投与は、第１の用量の投与から約１時間〜約３日後に第１のピークウイルス量、および約３日〜約１０日後に第２のピークウイルス量をもたらす。
【０１２３】
一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、さらなる療法の投与を含み得、さらなる療法は、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、または約１２週間の期間、投与され得る。一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、さらなる療法の投与を含み得、さらなる療法は、毎日１回、１週間毎に１回、２週間毎に１回、または３週間毎に１回投与され得る。一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、さらなる療法の投与を含み得、さらなる療法は、液体剤形、固体剤形、吸入可能な剤形、鼻腔内剤形、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、微粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはそれらの任意の組み合わせで投与され得る。一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、さらなる療法の投与を含み得、さらなる療法は、経口、静脈内、腫瘍内注射により、または放射線により投与され得る。一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の、それを必要とする対象への投与を含み得、対象はヒトであり得る。一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の、それを必要とする対象への投与を含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物を投与する前に、対象はがんと診断されている。一部の実施形態では、対象を処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の、それを必要とする対象への投与を含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物を投与する前に、対象は腫瘍と診断されている。一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の、それを必要とする対象への、さらなる療法と組み合わせた投与を含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物を投与する前に、対象はがんまたは腫瘍と診断されている。一部の実施形態では、対象を処置する方法は、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルス、本明細書に開示される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に開示される医薬組成物の、それを必要とする対象への、さらなる療法と組み合わせた投与を含み得、改変された腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または医薬組成物を投与する前に、対象は腫瘍と診断されている。
【０１２４】
本開示の新規の特徴（feature）は、添付した特許請求の範囲に詳細に示されている。本開示の特徴および利点についてのより一層の理解は、本開示の原理が利用される例示的な実施形態を示す以下の詳細な記載、およびその添付の図面を参照することによって得られる。
【図面の簡単な説明】
【０１２５】
【図１】図１は、Ｂ５Ｒ遺伝子に例示的な変異を含有する本開示の例示的な改変されたワクシニアウイルスの腫瘍成長に対する効果を示す図である。グラフは、静脈内注射される対照ワクシニアウイルス（対照（ＩＶ））、腫瘍内注射されるＴＫ遺伝子が欠失され、ＧＭＣＳＦをコードする外因性核酸が付加された改変されたＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦワクシニアウイルス（ＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦ（ＩＴ））、または、静脈内注射される（ＷＲ．Ｂ５Ｒｍｕｔ．ＴＫ−（ＩＶ））もしくは腫瘍内注射される（ＷＲ．Ｂ５Ｒｍｕｔ．ＴＫ−（ＩＴ））、ＴＫ遺伝子が欠失され、変異がＢ５Ｒ遺伝子に導入された例示的な改変されたワクシニアウイルス（ＷＲ．Ｂ５Ｒｍｕｔ．ＴＫ−）の単回用量で処置された、ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスにおける移植後の日数の間の相対的腫瘍サイズを定量したものである。
【０１２６】
【図２】図２Ａ〜２Ｂは、腫瘍における例示的な改変されたワクシニアウイルス（ＷＲ．Ｂ５ＲｍｕｔＴＫウイルス）（図２Ａおよび２ＢではＢ５Ｒと称する）の送達および拡散に対するＢ５Ｒ遺伝子中の例示的な変異の効果を示す図である。図２Ａおよび図２Ｂは、それぞれ、Ｂ１６腫瘍を担持する非免疫および免疫Ｃ５７／ＢＬ６マウスから収集された腫瘍１グラムあたりのウイルスゲノムの定量を示すグラフである。ＷＲ．Ｂ５ＲｍｕｔＴＫ−ウイルスの単回注射で処置したマウスを、ＴＫが欠失され、ウイルスＡ３４Ｒ遺伝子がアミノ酸変化（Ｋ１５１からＥ）で変異された別の改変されたワクシニアウイルスＷＲ．ＴＫ−Ａ３４Ｒ  Ｋ１５１Ｅ（図２Ａおよび図２ＢではＷＩと称する）で処置したマウスと比較した。
【０１２７】
【図３】図３Ａ〜３Ｂは、腫瘍における例示的な改変されたワクシニアウイルス（ＷＲ．Ｂ５ＲｍｕｔＴＫ−ウイルス）（図３Ａおよび３ＢではＢ５Ｒと称する）の複製に対するＢ５Ｒ遺伝子中の例示的な変異の効果を示す図である。図３Ａおよび図３Ｂは、ＴＫが欠失され、ウイルスＡ３４Ｒ遺伝子がアミノ酸変化Ｋ１５１からＥによって変異された、ウイルスＷＲ．ＴＫ−Ａ３４Ｒ  Ｋ１５１Ｅ（図３Ａおよび３ＢではＷＩと称する）、およびＢ５Ｒの、ｉｎ  ｖｉｔｒｏプラークアッセイにおける収集された腫瘍１グラムあたりのプラーク形成能力（ＰＦＵ／ｇ）を定量したグラフである。
【０１２８】
【図４】図４は、ＣＸＣＲ４またはＣＣＲ５をコードする外因性核酸を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの、腫瘍におけるルシフェラーゼのウイルス発現に対する効果を示す図である。グラフは、同所性の（乳房脂肪パッド）４Ｔ１腫瘍を担持するマウスにおける生物発光イメージングにより、腫瘍におけるルシフェラーゼ媒介型光子強度を定量したものである。ＴＫ遺伝子が欠失され、ＣＣＲ５をコードする外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルス）、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス）、またはＴＫ遺伝子が欠失されたＴＫ−ウイルスの単回用量でマウスを処置した。すべてのウイルスは、ルシフェラーゼを発現するように操作した。
【０１２９】
【図５Ａ】図５Ａ〜５Ｂは、ＣＸＣＲ４またはＣＣＲ５をコードする外因性核酸を含有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの腫瘍成長および動物生存に対する効果を示す図である。図５Ａは、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＣＲ５をコードする外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ＣＣＲ５−ウイルス）、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ＣＸＣＲ４−ウイルス）、またはＴＫ遺伝子が欠失されたＴＫ−ウイルスの単回用量でマウスを処置した、同所性の（乳房脂肪パッド）４Ｔ１腫瘍を担持するマウスにおける移植後の日数の間の相対的腫瘍サイズを示すグラフである。また図５Ａは、比較の各ペアについて統計的差異を列挙するチャートも含む。図５Ｂは、これらのマウスの生存曲線を示す。
【図５Ｂ】図５Ａ〜５Ｂは、ＣＸＣＲ４またはＣＣＲ５をコードする外因性核酸を含有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの腫瘍成長および動物生存に対する効果を示す図である。図５Ａは、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＣＲ５をコードする外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ＣＣＲ５−ウイルス）、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ＣＸＣＲ４−ウイルス）、またはＴＫ遺伝子が欠失されたＴＫ−ウイルスの単回用量でマウスを処置した、同所性の（乳房脂肪パッド）４Ｔ１腫瘍を担持するマウスにおける移植後の日数の間の相対的腫瘍サイズを示すグラフである。また図５Ａは、比較の各ペアについて統計的差異を列挙するチャートも含む。図５Ｂは、これらのマウスの生存曲線を示す。
【０１３０】
【図６Ａ】図６Ａ〜６Ｂは、腫瘍におけるルシフェラーゼのウイルス発現に対するＣＸＣＲ４またはＣＣＲ５をコードする例示的な外因性核酸の発現の効果を示す図である。図６Ａは、Ｂ１６腫瘍を担持するＣ５７／ＢＬ６マウスにおける生物発光イメージングの間の腫瘍におけるルシフェラーゼ媒介型光子強度を定量したグラフである。マウスは、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＣＲ５をコードする外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルス）、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス）、またはＴＫ遺伝子が欠失されたＴＫ−ウイルスの単回用量で処置した。図６Ｂは、注射後１日目のウイルスで処置されたマウスの生物発光イメージングからの発光シグナルを示す代表的な写真である。すべてのウイルスは、ルシフェラーゼを発現するように操作した。
【図６Ｂ】図６Ａ〜６Ｂは、腫瘍におけるルシフェラーゼのウイルス発現に対するＣＸＣＲ４またはＣＣＲ５をコードする例示的な外因性核酸の発現の効果を示す図である。図６Ａは、Ｂ１６腫瘍を担持するＣ５７／ＢＬ６マウスにおける生物発光イメージングの間の腫瘍におけるルシフェラーゼ媒介型光子強度を定量したグラフである。マウスは、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＣＲ５をコードする外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルス）、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス）、またはＴＫ遺伝子が欠失されたＴＫ−ウイルスの単回用量で処置した。図６Ｂは、注射後１日目のウイルスで処置されたマウスの生物発光イメージングからの発光シグナルを示す代表的な写真である。すべてのウイルスは、ルシフェラーゼを発現するように操作した。
【０１３１】
【図７】図７は、腫瘍成長に対するＣＸＣＲ４またはＣＣＲ５をコードする例示的な外因性核酸の発現の効果を示す図である。グラフは、ワクシニアウイルス処置後の日数に対して、Ｂ１６腫瘍を皮下に担持するＣ５７／ＢＬ６マウスの腫瘍体積を定量したものである。マウスは、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＣＲ５をコードする外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルス）、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス）、またはＴＫ遺伝子が欠失されたＴＫ−ウイルスまたはＰＢＳの単回用量で処置した。
【０１３２】
【図８Ａ−Ｂ】図８Ａ〜８Ｄは、腫瘍におけるウイルス複製に対するＣＣＲ５をコードする例示的な外因性核酸の発現の効果を示す図である。図８Ａおよび図８Ｂは、腫瘍細胞株４Ｔ１における３つの異なるウイルス（ｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルス、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス、およびＴＫ−ウイルス）のプラーク形成能力の定量を示すグラフであり、それぞれ、０．１（４Ｔ１−ＭＯＩ０．１）および１（４Ｔ１−ＭＯＩ１）の感染多重度から開始する。図８Ｃおよび図８Ｄは、腫瘍細胞株Ｂ１６における３つの異なるウイルス（ｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルス、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス、およびＴＫ−ウイルス）のプラーク形成能力の定量を示す同様のグラフであり、それぞれ０．１（Ｂ１６−ＭＯＩ０．１）および１（Ｂ１６−ＭＯＩ１）のＭＯＩから開始する。
【図８Ｃ−Ｄ】図８Ａ〜８Ｄは、腫瘍におけるウイルス複製に対するＣＣＲ５をコードする例示的な外因性核酸の発現の効果を示す図である。図８Ａおよび図８Ｂは、腫瘍細胞株４Ｔ１における３つの異なるウイルス（ｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルス、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス、およびＴＫ−ウイルス）のプラーク形成能力の定量を示すグラフであり、それぞれ、０．１（４Ｔ１−ＭＯＩ０．１）および１（４Ｔ１−ＭＯＩ１）の感染多重度から開始する。図８Ｃおよび図８Ｄは、腫瘍細胞株Ｂ１６における３つの異なるウイルス（ｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルス、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス、およびＴＫ−ウイルス）のプラーク形成能力の定量を示す同様のグラフであり、それぞれ０．１（Ｂ１６−ＭＯＩ０．１）および１（Ｂ１６−ＭＯＩ１）のＭＯＩから開始する。
【０１３３】
【図９】図９Ａ〜９Ｃは、ＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスで処置した腫瘍におけるルシフェラーゼのウイルス発現の増加に対するＢ細胞枯渇の効果を示す図である。図９Ａ、図９Ｂおよび図９Ｃは、それぞれ、ウイルス注射の２４時間後、４８時間後および７２時間後に測定された腫瘍におけるルシフェラーゼ媒介型光子強度を定量したグラフである。Ｂａｌｂ／ＣマウスはＢ細胞を有する野生型マウスであり、ＪＨマウスはＢ細胞が枯渇したマウスである。マウスは、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＣＲ５をコードする外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルス）、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス）、またはＴＫ遺伝子が欠失されたＴＫ−ウイルスの単回用量で注射した。
【０１３４】
【図１０Ａ】図１０Ａ〜１０Ｃは、腫瘍におけるＢ細胞の蓄積に対するＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの効果を示す図である。図１０Ａ、図１０Ｂ、および図１０Ｃは、皮下に４Ｔ１腫瘍を担持するＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓、リンパ節（ＬＮ）、および腫瘍からそれぞれ収集したリンパ球中のＢ細胞のパーセンテージを定量したグラフである。マウスを、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス）、またはＴＫ遺伝子が欠失されたＴＫ−ウイルス、またはＰＢＳの単回用量で処置した。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜１０Ｃは、腫瘍におけるＢ細胞の蓄積に対するＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの効果を示す図である。図１０Ａ、図１０Ｂ、および図１０Ｃは、皮下に４Ｔ１腫瘍を担持するＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓、リンパ節（ＬＮ）、および腫瘍からそれぞれ収集したリンパ球中のＢ細胞のパーセンテージを定量したグラフである。マウスを、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス）、またはＴＫ遺伝子が欠失されたＴＫ−ウイルス、またはＰＢＳの単回用量で処置した。
【図１０Ｃ】図１０Ａ〜１０Ｃは、腫瘍におけるＢ細胞の蓄積に対するＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの効果を示す図である。図１０Ａ、図１０Ｂ、および図１０Ｃは、皮下に４Ｔ１腫瘍を担持するＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓、リンパ節（ＬＮ）、および腫瘍からそれぞれ収集したリンパ球中のＢ細胞のパーセンテージを定量したグラフである。マウスを、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス）、またはＴＫ遺伝子が欠失されたＴＫ−ウイルス、またはＰＢＳの単回用量で処置した。
【０１３５】
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｂは、Ｔ細胞活性化に対するＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの効果を示す図である。図１１Ａおよび図１１Ｂは、腫瘍細胞４Ｔ１溶解物および腫瘍細胞４Ｔ１溶解物と混合した不活性化ワクシニアウイルス（ＶＶ）にそれぞれ応答したＴ細胞によるＩＦＮガンマ放出を定量したグラフである。Ｔ細胞は、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする例示的な外因性核酸が付加された改変されたワクシニアウイルス（ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス）、またはＴＫ遺伝子が欠失されたＴＫ−ウイルス、またはＰＢＳの単回用量で処置した、４Ｔ１腫瘍を担持するマウスから収集した。Ｔ細胞は、１４日後に脾臓から回収した。
【０１３６】
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｂは、腫瘍におけるルシフェラーゼのウイルス発現に対する、ヒアルロニダーゼＰＨ−２０またはマトリックスメタロプロテアーゼＭＭＰ８をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの効果を示す図である。図１２Ａは、改変されていないワクシニアウイルス（ＷＲ）、ＭＭＰ８をコードする例示的な外因性核酸を有する改変されたワクシニアウイルス（ＷＲ  ＭＭＰ８）、またはＰＨ−２０をコードする例示的な外因性核酸を有する改変されたワクシニアウイルス（ＷＲ  ＰＨ２０ウイルス）をそれぞれ単回用量で処置した、ＲＥＮＣＡ腫瘍を担持する３匹のＢＡＬＢ／ｃマウスにおける発光シグナルを示す代表的な写真である。図１２Ｂは、ウイルス注射後２日目のマウスにおける光子強度の定量したグラフである。
【０１３７】
【図１３Ａ】図１３Ａ〜１３Ｃは、ヒアルロニダーゼＰＨ−２０をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの治療効果を示す図である。図１３Ａは、ＴＫ遺伝子が欠失された改変されたワクシニアウイルス（ＴＫ−）、またはＴＫ遺伝子が欠失され、ＰＨ−２０をコードする例示的な外因性核酸を有する改変されたワクシニアウイルスのＴＫ−ＰＨ２０ＤＣＫウイルスのいずれかで処置した、４Ｔ１腫瘍を担持するＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるウイルス注射後の日数の間のルシフェラーゼ媒介型光子強度を定量したグラフである。図１３Ｂは、ＰＢＳ、ゲムシタビン単独、ＴＫ−ＰＨ２０  ＤＣＫウイルス単独、ＴＫ−ウイルス単独、ゲムシタビンと組み合わせたＴＫ−ウイルス、またはゲムシタビンと組み合わせたＴＫ−ＰＨ２０  ＤＣＫウイルスで処置したマウスにおけるウイルス注射後の日数の間の相対的腫瘍体積を定量したグラフであり、図１３Ｃは、これらのマウスについての生存曲線を示す。
【図１３Ｂ】図１３Ａ〜１３Ｃは、ヒアルロニダーゼＰＨ−２０をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの治療効果を示す図である。図１３Ａは、ＴＫ遺伝子が欠失された改変されたワクシニアウイルス（ＴＫ−）、またはＴＫ遺伝子が欠失され、ＰＨ−２０をコードする例示的な外因性核酸を有する改変されたワクシニアウイルスのＴＫ−ＰＨ２０ＤＣＫウイルスのいずれかで処置した、４Ｔ１腫瘍を担持するＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるウイルス注射後の日数の間のルシフェラーゼ媒介型光子強度を定量したグラフである。図１３Ｂは、ＰＢＳ、ゲムシタビン単独、ＴＫ−ＰＨ２０  ＤＣＫウイルス単独、ＴＫ−ウイルス単独、ゲムシタビンと組み合わせたＴＫ−ウイルス、またはゲムシタビンと組み合わせたＴＫ−ＰＨ２０  ＤＣＫウイルスで処置したマウスにおけるウイルス注射後の日数の間の相対的腫瘍体積を定量したグラフであり、図１３Ｃは、これらのマウスについての生存曲線を示す。
【図１３Ｃ】図１３Ａ〜１３Ｃは、ヒアルロニダーゼＰＨ−２０をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの治療効果を示す図である。図１３Ａは、ＴＫ遺伝子が欠失された改変されたワクシニアウイルス（ＴＫ−）、またはＴＫ遺伝子が欠失され、ＰＨ−２０をコードする例示的な外因性核酸を有する改変されたワクシニアウイルスのＴＫ−ＰＨ２０ＤＣＫウイルスのいずれかで処置した、４Ｔ１腫瘍を担持するＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるウイルス注射後の日数の間のルシフェラーゼ媒介型光子強度を定量したグラフである。図１３Ｂは、ＰＢＳ、ゲムシタビン単独、ＴＫ−ＰＨ２０  ＤＣＫウイルス単独、ＴＫ−ウイルス単独、ゲムシタビンと組み合わせたＴＫ−ウイルス、またはゲムシタビンと組み合わせたＴＫ−ＰＨ２０  ＤＣＫウイルスで処置したマウスにおけるウイルス注射後の日数の間の相対的腫瘍体積を定量したグラフであり、図１３Ｃは、これらのマウスについての生存曲線を示す。
【０１３８】
【図１４】図１４は、様々な組み合わせで、または個別に、ヒアルロニダーゼＰＨ−２０およびＧＭＣＳＦをコードする例示的な外因性核酸を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスのウイルス注射後４５日の治療効果を示す図である。グラフは、腫瘍内（ＩＴ）または静脈内（ＩＶ）のいずれかにより、シャム対照（control sham）、ＴＫ遺伝子が欠失され、ＧＰＩアンカーの有無にかかわらずＰＨ−２０をコードする例示的な外因性核酸を有する改変されたワクシニアウイルス（ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０ウイルス）、ＴＫ遺伝子が欠失され、ＧＭＣＳＦをコードする例示的な外因性核酸を有する改変されたワクシニアウイルス（ＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦ）で処置されたマウスにおける腫瘍体積を、ウイルス注射後の４５日に定量したものである。
【０１３９】
【図１５】図１５は、腫瘍成長に対する改変ＶＨ１遺伝子を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの効果を示す図である。グラフは、シャム対照を静脈内（ＩＶ）により、ＴＫ遺伝子が欠失され、ＧＭＣＳＦをコードする例示的な外因性核酸を有する改変されたワクシニアウイルス（ＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦ）を腫瘍内（ＩＴ）により、またはＴＫ遺伝子が欠失され、改変ＶＨ１遺伝子を有する改変されたワクシニアウイルス（ＷＲ．ＴＫ−．ＶＨ１ｍｕｔ）を腫瘍内により処置したマウスにおける相対的腫瘍体積を、腫瘍移植後の日数に対して定量したものである。
【０１４０】
【図１６】図１６は、改変されたワクシニアウイルスの腫瘍への送達に対する、Ａ５２Ｒの欠失およびマウスＣＸＣＲ４をコードする外因性核酸の挿入の効果を示す図である。ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、４つの改変ウイルスのうちの１つを単回静脈内注射（１×１０７ＰＦＵ）で処置した。腫瘍を２４時間後に採取し、組織１ミリグラムあたりのウイルスゲノムの数をｑＰＣＲにより定量した。
【０１４１】
【図１７】図１７は、腫瘍成長に対する、Ａ５２Ｒの欠失およびマウスＣＸＣＲ４をコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスの効果を示す図である。ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、１日目および４日目に同じ４つの改変ウイルスのうちの１つの静脈内注射（１×１０７ＰＦＵ）で処置し、腫瘍体積をモニタリングした。
【０１４２】
【図１８Ａ】図１８Ａ〜１８Ｄは、ＴＫの欠失およびＨｙｓＡまたはＭＭＰ８のいずれかをコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスは、ＭＣ３８がん細胞の培養物に感染し、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止することを示す図である。ＭＣ３８細胞は、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞に、ＭＯＩ０．００２の異なるＧＦＰ発現ウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（phase confluence）（図１８Ａ）、ＧＦＰエリア（図１８Ｂ）、ＧＦＰ強度（図１８Ｃ）、およびウイルス感染力（図１８Ｄ）を測定した。
【図１８Ｂ】図１８Ａ〜１８Ｄは、ＴＫの欠失およびＨｙｓＡまたはＭＭＰ８のいずれかをコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスは、ＭＣ３８がん細胞の培養物に感染し、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止することを示す図である。ＭＣ３８細胞は、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞に、ＭＯＩ０．００２の異なるＧＦＰ発現ウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（phase confluence）（図１８Ａ）、ＧＦＰエリア（図１８Ｂ）、ＧＦＰ強度（図１８Ｃ）、およびウイルス感染力（図１８Ｄ）を測定した。
【図１８Ｃ】図１８Ａ〜１８Ｄは、ＴＫの欠失およびＨｙｓＡまたはＭＭＰ８のいずれかをコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスは、ＭＣ３８がん細胞の培養物に感染し、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止することを示す図である。ＭＣ３８細胞は、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞に、ＭＯＩ０．００２の異なるＧＦＰ発現ウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（phase confluence）（図１８Ａ）、ＧＦＰエリア（図１８Ｂ）、ＧＦＰ強度（図１８Ｃ）、およびウイルス感染力（図１８Ｄ）を測定した。
【図１８Ｄ】図１８Ａ〜１８Ｄは、ＴＫの欠失およびＨｙｓＡまたはＭＭＰ８のいずれかをコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスは、ＭＣ３８がん細胞の培養物に感染し、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止することを示す図である。ＭＣ３８細胞は、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞に、ＭＯＩ０．００２の異なるＧＦＰ発現ウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（phase confluence）（図１８Ａ）、ＧＦＰエリア（図１８Ｂ）、ＧＦＰ強度（図１８Ｃ）、およびウイルス感染力（図１８Ｄ）を測定した。
【０１４３】
【図１９Ａ】図１９Ａ〜１９Ｄは、ＴＫの欠失およびＨｙｓＡまたはＭＭＰ８のいずれかをコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスは、ＨＣＴ１１６がん細胞の培養物に感染し、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止することを示す図である。ＨＣＴ１１６細胞を、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞に、ＭＯＩ０．００２の異なるＧＦＰ発現ウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（図１９Ａ）、ＧＦＰエリア（図１９Ｂ）、ＧＦＰ強度（図１９Ｃ）、およびウイルス感染力（図１９Ｄ）を測定した。
【図１９Ｂ】図１９Ａ〜１９Ｄは、ＴＫの欠失およびＨｙｓＡまたはＭＭＰ８のいずれかをコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスは、ＨＣＴ１１６がん細胞の培養物に感染し、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止することを示す図である。ＨＣＴ１１６細胞を、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞に、ＭＯＩ０．００２の異なるＧＦＰ発現ウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（図１９Ａ）、ＧＦＰエリア（図１９Ｂ）、ＧＦＰ強度（図１９Ｃ）、およびウイルス感染力（図１９Ｄ）を測定した。
【図１９Ｃ】図１９Ａ〜１９Ｄは、ＴＫの欠失およびＨｙｓＡまたはＭＭＰ８のいずれかをコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスは、ＨＣＴ１１６がん細胞の培養物に感染し、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止することを示す図である。ＨＣＴ１１６細胞を、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞に、ＭＯＩ０．００２の異なるＧＦＰ発現ウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（図１９Ａ）、ＧＦＰエリア（図１９Ｂ）、ＧＦＰ強度（図１９Ｃ）、およびウイルス感染力（図１９Ｄ）を測定した。
【図１９Ｄ】図１９Ａ〜１９Ｄは、ＴＫの欠失およびＨｙｓＡまたはＭＭＰ８のいずれかをコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスは、ＨＣＴ１１６がん細胞の培養物に感染し、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止することを示す図である。ＨＣＴ１１６細胞を、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞に、ＭＯＩ０．００２の異なるＧＦＰ発現ウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（図１９Ａ）、ＧＦＰエリア（図１９Ｂ）、ＧＦＰ強度（図１９Ｃ）、およびウイルス感染力（図１９Ｄ）を測定した。
【０１４４】
【図２０】図２０は、改変されたワクシニアウイルスの腫瘍への送達に対するＨｙｓＡの発現の効果を示す図である。使用したウイルスは次の通りであった：（ｉ）ＴＫ−ＨｙｓＡ改変ウイルス、（ｉｉ）ＴＫ−ＭＭＰ８改変ウイルス、（ｉｉｉ）ＴＫ−ＰＨ２０−発現改変ウイルス、（ｉｖ）外因性酵素が付加されていないＴＫ−改変ウイルス、および、（ｖ）ビヒクル処方緩衝液（vehicle formulated buffer）（ＶＦＢ）。ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、ウイルスのうちの１つの単回静脈内注射（１×１０７ＰＦＵ）で処置した。腫瘍を２４時間後に採取し、組織１ミリグラムあたりのウイルスゲノムの数をｑＰＣＲにより定量した。
【０１４５】
【図２１】図２１は、腫瘍成長に対する、ＴＫ−の欠失およびＨｙｓＡ、ＭＭＰ８、またはＰＨ２０をコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルス（図２１ではＳＰＡＭ１と表示）の効果を示す図である。ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスをＴＫ−ＨｙｓＡ、ＴＫ−ＭＭＰ８、ＴＫ−ＰＨ２０またはＴＫ−改変ウイルスの１回の腫瘍内注射（１×１０７ＰＦＵ）で処置し、腫瘍体積をモニタリングした。
【０１４６】
【図２２Ａ】図２２Ａ〜２２Ｄは、ＴＫまたはＡ５２Ｒの欠失およびＨｙｓＡをコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスは、ＭＣ３８およびＬＬＣがん細胞の培養物に感染し、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止することを示す図である。ＬＬＣまたはＭＣ３８細胞を、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞に、ＭＯＩ１の異なるＧＦＰ発現ウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（図２２Ａおよび図２２Ｃ）、ならびにＧＦＰエリア（図２２Ｂおよび図２２Ｄ）を測定した。
【図２２Ｂ】図２２Ａ〜２２Ｄは、ＴＫまたはＡ５２Ｒの欠失およびＨｙｓＡをコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスは、ＭＣ３８およびＬＬＣがん細胞の培養物に感染し、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止することを示す図である。ＬＬＣまたはＭＣ３８細胞を、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞に、ＭＯＩ１の異なるＧＦＰ発現ウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（図２２Ａおよび図２２Ｃ）、ならびにＧＦＰエリア（図２２Ｂおよび図２２Ｄ）を測定した。
【図２２Ｃ】図２２Ａ〜２２Ｄは、ＴＫまたはＡ５２Ｒの欠失およびＨｙｓＡをコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスは、ＭＣ３８およびＬＬＣがん細胞の培養物に感染し、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止することを示す図である。ＬＬＣまたはＭＣ３８細胞を、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞に、ＭＯＩ１の異なるＧＦＰ発現ウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（図２２Ａおよび図２２Ｃ）、ならびにＧＦＰエリア（図２２Ｂおよび図２２Ｄ）を測定した。
【図２２Ｄ】図２２Ａ〜２２Ｄは、ＴＫまたはＡ５２Ｒの欠失およびＨｙｓＡをコードする外因性核酸の挿入を有する改変されたワクシニアウイルスは、ＭＣ３８およびＬＬＣがん細胞の培養物に感染し、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止することを示す図である。ＬＬＣまたはＭＣ３８細胞を、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞に、ＭＯＩ１の異なるＧＦＰ発現ウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（図２２Ａおよび図２２Ｃ）、ならびにＧＦＰエリア（図２２Ｂおよび図２２Ｄ）を測定した。
【０１４７】
【図２３】図２３は、ＮＫ細胞活性を促進する例示的な変異を有する例示的なワクシニアウイルスがマウス腫瘍モデルにおいて治療効果を増強したことを示す図である。ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、Ｋ７Ｒ−ＩＬ１５＋ＣＣＬ５＋、ＴＫ−ＬＩＧＨＴ＋、またはＴＫ−ＧＭＣＳＦ＋の単回腫瘍内注射（１×１０８ＰＦＵ）で処置した。腫瘍体積を処置後３４日目に定量した。
【０１４８】
【図２４】図２４は、ＮＫ細胞活性を促進する例示的な変異を有する例示的なワクシニアウイルスがマウス腫瘍モデルにおいて治療効果を増強したことを示す図である。別の実験では、ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、ＴＫ−ＬＩＧＨＴ＋、ＴＫ−ＧＭＣＳＦ＋、ＴＫ−ＩＴＡＣ＋フラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）＋、Ａ５２Ｒ−ＩＬ１５＋ＩＬ１５Ａ＋、ＴＫ−ＩＴＡＣ＋ＬＩＧＨＴ＋Ａ５２Ｒ−ＩＬ１５＋ＩＬ１５Ａ＋、またはＶＦＢと称するビヒクル処方緩衝液の単回腫瘍内注射（１×１０７ＰＦＵ）で処置し、腫瘍体積は経時的にモニタリングした。
【０１４９】
【図２５Ａ】図２５Ａ〜２５Ｂは、ケモカイン受容体および細胞外マトリックス分解酵素をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的なワクシニアウイルスががん細胞間に拡散し、がん細胞を死滅させることを示す図である。ＬＬＣ細胞を９６ウェルプレートに１ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞にＭＯＩ１の異なるウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（図２５Ａ）およびＧＦＰエリア（図２５Ｂ）を測定した。
【図２５Ｂ】図２５Ａ〜２５Ｂは、ケモカイン受容体および細胞外マトリックス分解酵素をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的なワクシニアウイルスががん細胞間に拡散し、がん細胞を死滅させることを示す図である。ＬＬＣ細胞を９６ウェルプレートに１ウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞にＭＯＩ１の異なるウイルスを感染させ、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンス（図２５Ａ）およびＧＦＰエリア（図２５Ｂ）を測定した。
【０１５０】
【図２６Ａ】図２６Ａ〜２６Ｄは、ＳＣＲ１の例示的な欠失を有する例示的な改変高ＥＥＶ産生ワクシニアウイルスががん細胞間に拡散し、がん細胞を死滅させることを示す図である。ＥＥＶ（Ｂ５Ｒ  ＳＣＲ１）の表面の中和抗体結合部位が欠失された改変ＩＨＤＪウイルスが開発された（ＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１）。ＭＣ３８細胞またはＨＣＴ１１６細胞を９６ウェルプレートにウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞にＭＯＩ０．００２の異なるウイルスを感染させ、図２６Ａ（ＭＣ３８細胞）および図２６Ｂ（ＨＣＴ１１６細胞）に示すように、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンスを測定した。ＩＨＤＪおよびＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１ウイルスのがん細胞間の拡散、およびがん細胞の殺滅の能力を実証するプラークアッセイの結果を図２６Ｃに示す。ＷＲ  ＩＨＤＪおよびＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１ウイルスのがん細胞間の拡散、およびがん細胞の殺滅能力を実証するコメットテールアッセイの結果を図２６Ｄに示す。
【図２６Ｂ】図２６Ａ〜２６Ｄは、ＳＣＲ１の例示的な欠失を有する例示的な改変高ＥＥＶ産生ワクシニアウイルスががん細胞間に拡散し、がん細胞を死滅させることを示す図である。ＥＥＶ（Ｂ５Ｒ  ＳＣＲ１）の表面の中和抗体結合部位が欠失された改変ＩＨＤＪウイルスが開発された（ＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１）。ＭＣ３８細胞またはＨＣＴ１１６細胞を９６ウェルプレートにウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞にＭＯＩ０．００２の異なるウイルスを感染させ、図２６Ａ（ＭＣ３８細胞）および図２６Ｂ（ＨＣＴ１１６細胞）に示すように、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンスを測定した。ＩＨＤＪおよびＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１ウイルスのがん細胞間の拡散、およびがん細胞の殺滅の能力を実証するプラークアッセイの結果を図２６Ｃに示す。ＷＲ  ＩＨＤＪおよびＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１ウイルスのがん細胞間の拡散、およびがん細胞の殺滅能力を実証するコメットテールアッセイの結果を図２６Ｄに示す。
【図２６Ｃ−Ｄ】図２６Ａ〜２６Ｄは、ＳＣＲ１の例示的な欠失を有する例示的な改変高ＥＥＶ産生ワクシニアウイルスががん細胞間に拡散し、がん細胞を死滅させることを示す図である。ＥＥＶ（Ｂ５Ｒ  ＳＣＲ１）の表面の中和抗体結合部位が欠失された改変ＩＨＤＪウイルスが開発された（ＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１）。ＭＣ３８細胞またはＨＣＴ１１６細胞を９６ウェルプレートにウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、細胞にＭＯＩ０．００２の異なるウイルスを感染させ、図２６Ａ（ＭＣ３８細胞）および図２６Ｂ（ＨＣＴ１１６細胞）に示すように、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用してイメージングし、フェーズコンフルエンスを測定した。ＩＨＤＪおよびＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１ウイルスのがん細胞間の拡散、およびがん細胞の殺滅の能力を実証するプラークアッセイの結果を図２６Ｃに示す。ＷＲ  ＩＨＤＪおよびＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１ウイルスのがん細胞間の拡散、およびがん細胞の殺滅能力を実証するコメットテールアッセイの結果を図２６Ｄに示す。
【発明を実施するための形態】
【０１５１】
本開示の好ましい実施形態が本明細書に示され、説明されているが、このような実施形態が例としてのみ提供されていることは当業者に明らかである。本開示から逸脱することなく、多数の変形形態、変更、および置換が当業者に想到される。本明細書に記載されている本開示の実施形態に対する様々な代替物が、本開示の実施において採用され得ることが理解されるべきである。以下の特許請求の範囲は、本開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法および構造、ならびにそれらの同等物がそれによってカバーされることが意図される。
特定の定義
【０１５２】
本明細書で使用される用語は、特定の場合のみを説明することを目的とし、限定することを意図するものではない。本明細書で使用される場合、単数形「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに他を示していない限り、複数形もまた含むことができる。さらに、用語「含有する（contains）」、「含有している（containing）」、「含んでいる（including）」、「含む（includes）」、「有している（having）」、「有する（has）」、「を備える（with）」、またはそれらの変形は、詳細な説明および／または特許請求の範囲のいずれかに使用される限りにおいて、このような用語は、「含んでいる（comprising）」という用語と同様のやり方で包括的であることが意図される。
【０１５３】
「約」または「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味し得、これは、その値がどのように測定または決定されるか、例えば、測定システムの限界に一部依存する。例えば、「約」は、所定の値において、慣行に従って１以内または１より大きい標準偏差を意味する場合がある。特定の値が本明細書および特許請求の範囲に記載されている場合、特に明記しない限り、「約」という用語は、「約」という用語によって変更された値の±１０％などの、特定の値の許容誤差範囲を意味することが想定されるべきである。
【０１５４】
「個体」、「患者」、または「対象」という用語は、互換的に使用することができる。いずれの用語も、医療従事者（例えば、医師、登録看護師、診療看護師、医師の助手、用務員、またはホスピス職員）の（例えば、一定のまたは断続的な）監督によって特徴付けられる状況を必要とせず、その状況に限定されない。一部の実施形態では、患者、対象、または個体は、医療従事者の監督下にあり得る。
【０１５５】
特定のウイルスに関して本明細書で使用される場合、「異種核酸配列」または「外因性核酸配列」または「導入遺伝子」という用語は、特定のウイルス以外の起源に由来する核酸配列を指すことができる。
【０１５６】
本明細書で使用される場合、「変異」という用語は、当該技術分野において一般に理解されるように、オープンリーディングフレームを除去する変異を含む、欠失、異種核酸の挿入、逆位または置換を指すことができる。
【０１５７】
本明細書で使用される場合、「遺伝子」という用語は、必要に応じて関連する調節領域、例えば、プロモーター、オペレーター、ターミネーターなどとともに、個々のタンパク質またはＲＮＡをコードする核酸のセグメント（「コード配列」または「コード領域」とも呼ばれる）を指すことができ、これらは、コード配列の上流または下流に位置することができる。
【０１５８】
本明細書で交換可能に使用される場合、「変異ウイルス」および「改変されたウイルス」という用語は、欠失、異種核酸の挿入、逆位、置換またはそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない、そのゲノムに１つまたは複数の変異を含むウイルスを指すことができる。
【０１５９】
ウイルスに関して本明細書で使用される場合、「天然に存在する」という用語は、ウイルスが自然界で見出され得ること、すなわち、自然界の起源から単離され得、意図的に改変されていないことを示し得る。
【０１６０】
本明細書に言及される「阻害する」、「低下させる」もしくは「防止する」という用語、またはこれらの用語の任意の変形は、所望の結果を達成するために測定可能な減少または完全な阻害を含み得る。
【０１６１】
本明細書で使用される場合、「プロモーター」は、転写の開始および速度が制御される核酸配列の領域である、制御配列であり得る。ある特定の実施形態では、プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼおよび他の転写因子などの調節タンパク質および分子が結合し得る遺伝的エレメントを含み得る。「作動的に配置された」、「作動的に連結された」、「制御下」および「転写制御下」という用語は、プロモーターが、転写開始および／またはその配列の発現を制御するために核酸配列に関して正しい機能的位置および／または配向にあることを意味し得る。ある特定の実施形態では、プロモーターは、核酸配列の転写活性化に関与するシス作用調節配列を指す「エンハンサー」と併せて使用されても使用されなくてもよい。
【０１６２】
本明細書で使用される場合、「相同性」という用語は、最適な比較目的のために配列を整列させることによって決定することができる２つまたはそれより多いヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の「相同性」または「相同性パーセント」を計算することであり得る（例えば、ギャップは、第１の配列の配列に導入することができる）。次に、対応する位置のヌクレオチドを比較し得、２つの配列間の同一性パーセントは、配列によって共有される同一の位置の数の関数であり得る（すなわち、相同性％＝同一の位置の数／位置の合計数×１００）。例えば、第１の配列における位置は、第２の配列における対応する位置と同じヌクレオチドによって占有され得るので、分子はその位置で同一である。２つの配列間の相同性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入すること必要であるギャップの数と各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一の位置の数の関数であり得る。一部の実施形態では、比較目的のために整列された配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９５％であり得る。ＢＬＡＳＴ（登録商標）検索は、２つの配列間の相同性を決定し得る。相同性は、２つの配列の全長の間、または２つの配列の全長の小部分の間であり得る。２つの配列は、遺伝子、ヌクレオチド配列、タンパク質配列、ペプチド配列、アミノ酸配列、またはそれらの断片であり得る。２つの配列の実際の比較は、周知の方法によって、例えば、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。このような数学的アルゴリズムの非限定的な例は、Karlin, S. and Altschul, S., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90-5873-5877 (1993)に記載され得る。このようなアルゴリズムは、Altschul, S. et al., Nucleic Acids Res.,25:3389-3402 (1997)に記載されているように、ＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込むことができる。ＢＬＡＳＴおよびギャップ付きＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＮＢＬＡＳＴ）の任意の関連パラメーターを使用することができる。例えば、配列比較のパラメーターは、スコア＝１００、ワード長＝１２に設定することができるが、変化させることもできる（例えば、Ｗ＝５またはＷ＝２０）。他の例としては、MyersおよびMiller、CABIOS(1989)、ＡＤＶＡＮＣＥ、ＡＤＡＭ、ＢＬＡＴ、ＦＡＳＴＡのアルゴリズムが挙げられる。別の実施形態では、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、例えば、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）のＧＡＰプログラムを使用して達成することができる。
【０１６３】
「対象」という用語は、動物を指し、限定されないが、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、またはマウスが含まれる。「対象」および「患者」という用語は、例えば、ヒト対象などの哺乳動物対象を参照して、本明細書では互換的に使用される。
【０１６４】
「処置する」、「処置すること」、および「処置」という用語は、障害、疾患、もしくは状態、または、障害、疾患、もしくは状態に関連する１つもしくは複数の症状を緩和または抑止すること、あるいは障害、疾患、または状態自体の原因（複数可）を緩和または根絶することを含むことが意味され得る。処置の望ましい効果には、限定されないが、疾患の発生もしくは再発の防止、症状の緩和、疾患の直接的もしくは間接的な病理学的結果の軽減、転移の防止、疾患進行速度の減少、疾患状態の改善または一時的緩和、および寛解または予後の改善が含まれ得る。
【０１６５】
「治療有効量」という用語は、投与された場合、処置される障害、疾患、または状態の１つまたは複数の症状の発症を防止するか、またはある程度緩和するのに十分であり得る化合物の量を指すことができる。また、「治療有効量」という用語は、研究者、獣医、医師、臨床医が求めている細胞、組織、系、動物、またはヒトの生物学的または医学的応答を引き出すのに十分な化合物の量を指すことができる。
【０１６６】
「薬学的に許容される担体」、「薬学的に許容される賦形剤」、「生理学的に許容される担体」、または「生理学的に許容される賦形剤」という用語は、薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクル、例えば、液体もしくは固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、またはカプセル化材料を指すことができる。成分は、医薬製剤の他の成分と適合性があるという意味で「薬学的に許容され」得る。また、合理的な利益／リスク比に見合った、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、免疫原性、または他の問題もしくは合併症がないヒトまたは動物の組織または臓器との接触における使用に適し得る。Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition;Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook ofPharmaceutical Excipients, 5th Edition; Rowe et al., Eds., The PharmaceuticalPress and the American Pharmaceutical Association: 2005; およびHandbook ofPharmaceutical Additives, 3rd Edition; Ash and Ash Eds., Gower PublishingCompany: 2007; Pharmaceutical Preformulation and Formulation, Gibson Ed., CRCPress LLC: Boca Raton, FL, 2004を参照されたい。
【０１６７】
「医薬組成物」という用語は、本明細書に開示される化合物と、希釈剤または担体などの他の化学成分との混合物を指すことができる。医薬組成物は、生物への化合物の投与を促進することができる。化合物を投与する複数の技術が当該技術分野において存在し、限定されないが、経口、注射、エアロゾル、非経口、および局所投与が含まれる。医薬組成物はまた、化合物を、無機酸または有機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などと反応させることにより得ることができる。
【０１６８】
本明細書で使用される場合、「抗がん剤」は、例えば、がん細胞を死滅させ、がん細胞にアポトーシスを誘導し、がん細胞の成長速度を低下させ、転移の発生率もしくは数を低下させ、腫瘍サイズを低下させ、腫瘍成長を阻害し、腫瘍もしくはがん細胞への血液供給を低下させ、がん細胞もしくは腫瘍に対する免疫応答を促進し、がんの進行を防止もしくは阻害し、またはがんを有する対象の寿命を増加させることによって、対象におけるがんに悪影響を及ぼすことができる薬剤または療法を指すことができる。抗がん剤の非限定的な例としては、生物剤（biological agent）（生物療法）、化学療法剤、および放射線療法剤が挙げられ得る。
【０１６９】
本明細書で使用される場合、「腫瘍溶解性」という用語は、例えば、がんまたは腫瘍細胞の直接溶解を介して、腫瘍溶解性ポックスウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの作用物質（agent）によって、前記細胞に対する免疫応答、アポトーシス、毒性タンパク質の発現、オートファジーおよびタンパク質合成の停止、抗腫瘍免疫の誘導、またはそれらの任意の組み合わせを刺激することによって、前記細胞の殺滅を指すことができる。腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの作用物質によって感染したがんまたは腫瘍細胞の直接溶解は、前記細胞内でのウイルスの複製の結果であり得る。ある特定の例では、「腫瘍溶解性」という用語は、がんまたは腫瘍細胞を溶解することなく前記細胞を死滅させることを指すことができる。
【０１７０】
本明細書で使用される場合、「腫瘍溶解性ウイルス」という用語は、腫瘍細胞に優先的に感染してそれらを死滅させるウイルスを指すことができる。ある特定の非限定的な状況下では、腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍細胞の選択的殺滅だけでなく、宿主の抗腫瘍免疫応答の刺激にも依存する二重のメカニズムを通じて、抗腫瘍応答を促進し得ることが理解される。
【０１７１】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスには、限定されないが、（ｉ）がん細胞において優先的に自然に複製し、しばしば生来の抗ウイルスシグナル伝達に対する感度の上昇、または発がん性シグナル伝達経路への依存により、ヒトにおいて非病原性であるウイルス、および（ｉｉ）使用のために遺伝子操作されたウイルスが含まれ得る。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、麻疹ウイルス、ポリオウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、レオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、セネカウイルス、レンチウイルス、メンゴウイルス、または粘液腫ウイルスであり得る。ある特定の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、ポックスウイルスであり得る。ある特定の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、ワクシニアウイルスであり得る。
【０１７２】
本明細書で使用される場合、「改変された腫瘍溶解性ウイルス」という用語は、限定されないが、ウイルス遺伝子の変異または欠失のようなウイルスの天然ゲノム（「骨格」）における改変、外因性核酸の導入、ウイルス核酸またはウイルスタンパク質の化学的改変、ならびに外因性タンパク質または改変されたウイルスタンパク質のウイルスキャプシドへの導入などのその構成要素への改変を含む腫瘍溶解性ウイルスを指すことができる。一般的に、腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍細胞に対する改善された治療効果を得るために、改変され得る（「操作される」としても公知である）。ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、改変されたポックスウイルスであり得る。ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、改変されたポックスウイルスであり得る。
【０１７３】
本明細書において互換的に使用される「全身送達」および「全身投与」という用語は、いくつかの場合では、循環系への医薬、腫瘍溶解性ウイルスまたは他の物質の投与経路を指すことができる。全身投与は、経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、舌下投与、直腸投与、経皮投与、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
改変された腫瘍溶解性ウイルス
【０１７４】
本明細書において、一部の実施形態では、改変を含まないウイルスであって、他の点では同一であるウイルスと比較して、腫瘍細胞に対してより大きな治療効果をもたらし得る１つまたは複数の改変を有し得る、改変された腫瘍溶解ウイルスが提供される。より大きな治療効果のいくつかの非限定的な例としては、ウイルスの免疫回避の増強、ウイルスの腫瘍標的全身送達の増強、ウイルスの腫瘍内および腫瘍間の拡散の増強、ならびにウイルスの腫瘍特異的複製の増強の各々または任意の組み合わせが挙げられ得る。本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスは、一部の例において、全身送達のためのプラットフォームベクターとして利用され得る。
【０１７５】
本明細書において、一部の実施形態では、ウイルスの免疫回避の増強、ウイルスの腫瘍標的全身送達の増強、ウイルスの腫瘍内および腫瘍間の拡散の増強、ならびにウイルスの腫瘍特異的複製の増強をもたらし得る１つまたは複数の改変を有する、改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。
【０１７６】
本開示の一部の実施形態では、ウイルスの免疫回避を増強することができる改変を含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。ウイルス感染は、非常に頻繁に、ウイルスの侵入に対する宿主体からの免疫応答を誘導することができ、その結果、接種されたウイルスを枯渇させ、または治療環境で腫瘍細胞に対してウイルスが産生することが予想される毒性作用を軽減させることができる。したがって、適切な免疫回避は、腫瘍溶解性ウイルスの治療応用の有効性を有意に増加させることができる。
【０１７７】
本開示の一部の実施形態では、ウイルスの腫瘍標的全身送達を増強し得る改変を含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。典型的には、腫瘍溶解性ウイルスは、（ａ）全身投与されるか、または（ｂ）腫瘍全体に局所的に接種されるか、もしくは多くの場合、腫瘍に直接注入（「腫瘍内送達」）され得る。腫瘍溶解性ウイルスの全身送達は、原発腫瘍と任意の明白なまたは診断されていない転移性沈着の両方を同時に処置する機会を与えることができると考えられる。結果として、この送達方法は、進行性／転移性疾患を有する患者、または、例えば、血液脳関門などの生理学的障壁により接近が困難である、膵臓がんもしくは脳がんなどの接近しにくい疾患を有する患者の処置に非常に魅力的な選択肢になり得る。しかしながら、多くの腫瘍溶解性ウイルスの全身送達を成功させるための障壁が存在し得る。例えば、いくつかの場合では、上記のように、宿主防御は、全身投与後に腫瘍に感染するほとんどの腫瘍溶解性ウイルスの能力を限定する。血液細胞、補体、抗体、および抗ウイルス性サイトカイン、ならびに肺、肝臓および脾臓などの他の組織による非特異的取り込み、組織内に存在するマクロファージ、さらに血管区画からの不十分なウイルスの脱出は、腫瘍溶解性ウイルスの全身送達への主要な障壁の一部である。効果的な全身投与を行うために、多くの場合、腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍細胞に選択的に感染しながら、枯渇または分解することなく循環中に持続する必要があり得る。本開示の一部の実施形態では、開示されている腫瘍溶解性ウイルスは、少なくとも上記のように免疫回避の増強を通じて、循環系におけるウイルスの持続的な存在を促進し得る改変を含み得る。一方、ウイルスの腫瘍標的送達の増強はまた、がんに対する治療効果を増加させ得るだけでなく、ウイルス媒介性の腫瘍治療に関する安全性の懸念も緩和し得るため、ある特定の状況下でも望ましい場合があり、これは、非腫瘍感染が制限され、ウイルス感染の望ましくない副作用を避けることができるためである。本明細書のある特定の実施形態は、ウイルスの腫瘍標的送達を促進することができる改変を含む、腫瘍溶解性ウイルスに関する。
【０１７８】
本開示の一部の実施形態では、ウイルスの腫瘍内および腫瘍間の拡散を増強することができる改変を含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。腫瘍内および腫瘍間での腫瘍溶解性ウイルスの拡散の増強は、ウイルスに感染したがん細胞の数を増加させることによって治療効果を高める効果的なやり方であり得る。
【０１７９】
本開示の一部の実施形態では、ウイルスの腫瘍特異的複製を増強することができる改変を含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。腫瘍細胞における腫瘍溶解性ウイルスの選択的複製を増強することにより、腫瘍溶解性ウイルスの治療応用の安全性と有効性の両方を改善することになり得る。
【０１８０】
本明細書において、一部の実施形態では、外因性核酸を含むことができる、改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。本明細書において、一部の実施形態では、ウイルスのゲノムに改変を含むことができる、改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。本明細書において、一部の実施形態では、外因性核酸およびウイルスのゲノムに改変を含むことができる、改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。
外因性核酸
【０１８１】
一部の実施形態では、本明細書において、ケモカイン受容体をコードすることができる、本明細書において導入遺伝子とも呼ばれる外因性核酸を含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。一部の場合において、外因性核酸は、治療用導入遺伝子であり得る。一部の実施形態では、本明細書において、ヒアルロニダーゼなどのヒアルロナンを分解することができる膜結合タンパク質をコードすることができる外因性核酸を含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。一部の実施形態では、本明細書では、ケモカイン受容体とヒアルロニダーゼの両方をコードすることができる外因性核酸を含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供される。
【０１８２】
ケモカインは、７回膜貫通型ケモカイン受容体を活性化することにより、細胞の輸送および配置を調節する走化性サイトカインである。一部の場合では、ＣＣ、ＣＸＣ、ＣＸ３Ｃ、およびＸＣサブファミリーを含む最初の２つのＮ末端システイン残基の位置に基づいて、ケモカインを４つのサブファミリーに分類することができる。白血球上のケモカイン受容体の差次的発現は、特定の条件下で特定の細胞型の選択的動員をもたらし、感染病原体または外来損傷に合わせた適切で効率的な免疫応答を提供ことができる。炎症部位への免疫細胞の協調遊走におけるそれらの中心的な役割を超えて、多くの場合、ケモカインはまた、リンパ組織の発生、免疫細胞の成熟、ならびに適応免疫応答の生成および送達において重要な役割を果たすことができる。
【０１８３】
腫瘍は、複雑なシグナル伝達ネットワークにおいて共生し、互いに連絡をとる多くの様々な細胞型から構成される複雑な微小環境として次第に認識されている。ケモカインは、細胞遊走および細胞間相互作用の必須のコーディネーターであり、したがって、腫瘍発生に大きな影響を与える。腫瘍微小環境では、腫瘍関連の宿主細胞およびがん細胞が、一連の異なるケモカインを放出し、その結果、抗腫瘍応答と腫瘍促進応答（pro-tumor response）との間のバランスを媒介する様々な細胞型の動員および活性化をもたらす。化学誘引物質としての主要な役割に加えて、ケモカインはまた、多くの場合、腫瘍細胞の成長、血管新生および転移などの他の腫瘍関連プロセスに関与する。
【０１８４】
腫瘍細胞は、成長促進ケモカインを産生する能力を獲得することが示されている。例えば、黒色腫は、腫瘍の成長および進行に関与しているＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ８、ＣＣＬ２、およびＣＣＬ５を含む多数のケモカインを発現することが見出されている。ＣＣＬ２レベルは、神経芽細胞腫細胞株、およびヒト患者から分離された原発腫瘍細胞において増加することが見出され得る。免疫染色研究はまた、乳がん、カルチノイド、子宮頸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃がんを含む様々ながんにおけるＣＸＣＬ１２の発現レベルの上昇を示唆している。
【０１８５】
ケモカイン受容体は、ケモカインと相互作用するある特定の細胞の表面に見出されるサイトカイン受容体である。ヒトにおいて発見された２０種の異なるケモカイン受容体がある。各々は７回膜貫通構造を有し、細胞内のシグナル伝達のためにＧタンパク質にカップリングし、Ｇタンパク質共役受容体の大きなタンパク質ファミリーのメンバーにする。それらの特定のケモカインリガンドとの相互作用に続いて、ケモカイン受容体は、細胞内カルシウム（Ｃａ２＋）イオン（カルシウムシグナル伝達）の流出を誘発し得る。これは、細胞を生物内の所望の場所に輸送する走化性として公知であるプロセスの開始を含む、細胞応答を引き起こし得る。一般的に、本明細書で使用される場合、「ケモカイン受容体」という用語は、ケモカインリガンドに選択的に結合し、ケモカインリガンドへの走化性を誘導する膜結合タンパク質を指すことができる。
【０１８６】
本明細書に開示されるケモカイン受容体は、一部の場合では、人体において同定された天然に存在するケモカイン受容体を指すだけでなく、限定されないが、（１）ブタ、イヌ、ウシ、ヒツジなどの動物において同定された天然に存在するケモカイン受容体、（２）変異体タンパク質、キメラ受容体、ある特定のタイプ（複数可）のケモカインに結合親和性を有する設計タンパク質のような天然に存在しないケモカイン受容体などの、他の供給源からのケモカイン受容体も含むことができることを理解されたい。一部の例では、対応するケモカインに結合して応答し、細胞の走化性を方向付ける機能が断片に保持されている場合、天然に存在するケモカイン受容体の断片はまた、ケモカイン受容体であると考えることができる。本明細書で提供されるように、一部の実施形態では、ケモカイン受容体をコードする外因性核酸を含むウイルスは、ウイルスが宿主細胞の遺伝子発現機構を乗っ取るときに、ウイルス感染細胞にケモカイン受容体を発現させることができる。
【０１８７】
一部の場合では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、同族のサイトカインが腫瘍微小環境において発現され得るサイトカイン受容体をコードすることができる外因性核酸を含み得る（例えば、ＩＬ１５−Ｒは、腫瘍微小環境において発現される同族サイトカインＩＬ１５を有し得る）。一部の場合では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、その同族のケモカインが腫瘍に発現される可能性がある選択されたケモカイン受容体を発現することができ（例えば、ＣＸＣＲ４は腫瘍に発現される同族のケモカインＣＸＣＬ１２を有することができ、ＣＣＲ２は腫瘍に発現される標的ＣＣＬ２を有することができる）、裸のウイルスとして全身に送達することができる。全身送達によって、改変された腫瘍溶解性ウイルスが血流に侵入した後、ウイルスは、Ｂ細胞などのリンパ球に感染し、感染したＢ細胞を腫瘍に再び向けることができ、腫瘍におけるウイルス量の有意な増加をもたらすことができる。ある特定の実施形態では、腫瘍におけるウイルス量の増加は、全身送達の直後に達成することができる。本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルスを全身的に送達する能力は、腫瘍溶解性ウイルスのための従来の腫瘍内送達方法と比較して利点を提供することができる。腫瘍内送達は、容易にアクセスできる腫瘍の処置に役立ち得るが、一部の場合では、疾患による主な死因であるとされている、アクセスできないかまたは転移性のがんを処置することが重要である。この文脈では、遠隔部位への投与後に全身への播種（dissemination）が必要となるため、腫瘍内に送達された腫瘍溶解性ウイルスに依存することは効果的でない場合がある。しかしながら、この播種は、ウイルス感染に対する免疫応答の発生によって、少なくとも部分的には、一時的であり、効果がない場合がある。
【０１８８】
ケモカイン受容体は、異なるファミリーに分けることができる。本明細書に記載されるケモカイン受容体の非限定的な例としては、それらが結合するケモカインの４つの異なるサブファミリーに対応するＣＸＣケモカイン受容体、ＣＣケモカイン受容体、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体およびＸＣケモカイン受容体が挙げられ得る。ＣＸＣケモカイン受容体のうち、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２は密接に関連し、一方、ＣＸＣＲ１はＣＸＣＬ８およびＣＸＣＬ６に結合し、ＣＸＣＲ２はＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ７に結合し、ＣＸＣＲ３はＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびＣＸＣＬ１１に結合し、ＣＸＣＲ４はＣＸＣＬ１２（またはＳＤＦ−１）に結合し、ＣＸＣＲ５はＣＸＣＬ１３に結合し、ＣＸＣＲ６はＣＸＣＬ１６に結合する。ＣＣケモカイン受容体のうち、ＣＣＲ１のリガンドには、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ２３が含まれ、ＣＣＲ２のリガンドには、ＣＣＬ２、ＣＣＬ８、およびＣＣＬ１６が含まれ、ＣＣＲ３のリガンドには、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２８、およびＣＣＬ１８が含まれ、ＣＣＲ４のリガンドには、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１７、およびＣＣＬ２２が含まれ、ＣＣＲ５のリガンドには、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、およびＣＣＬ１６が含まれ、ＣＣＲ６のリガンドには、ＣＣＬ２０が含まれ、ＣＣＲ７のリガンドには、ＣＣＬ１９およびＣＣＬ２１が含まれる。ＣＸ３Ｃケモカイン受容体ＣＸ３ＣＲ１には、リガンドＣＸＣＬ１がある。ＸＣケモカイン受容体ＸＣＲ１は、ＸＣＬ１とＸＣＬ２の両方に結合する。
【０１８９】
本開示の非限定的な実施形態は、ケモカイン受容体をコードすることができる外因性核酸を含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスを提供する。一部の実施形態では、ケモカイン受容体は、ＣＸＣケモカイン受容体、ＣＣケモカイン受容体、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体、ＸＣケモカイン受容体、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。一部の実施形態では、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。
【０１９０】
ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、外因性ＣＸＣＲ４発現核酸を含む。ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、外因性ＣＣＲ２発現核酸を含む。ある特定の実施形態は、ＣＸＣＲ４とＣＣＲ２の両方をコードする外因性核酸を含む改変された腫瘍溶解性ウイルスを開示し、両方のケモカインは同じウイルスから発現される。ある特定の状況下では、典型的には、腫瘍微小環境において発現されるＣＸＣＬ１２および／またはＣＣＬ２は、ＣＸＣＲ４および／またはＣＣＲ２を発現するリンパ球、または改変された腫瘍溶解性ウイルスに感染した他の遊走細胞を誘引し、それにより改変された腫瘍溶解性ウイルスの腫瘍標的送達を増強することができる。
【０１９１】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスの改変は、改変を含まない腫瘍溶解性ウイルスであって、他の点では同一である腫瘍溶解性ウイルスと比較して、ウイルスの腫瘍標的全身送達の有効性において、少なくとも約１．１、１．２、１．５、１．８、２、２．２、２．５、２．８、３、３．２、３．５、３．８、４、４．２、４．５、４．８、５、５．２、５．５、５．８、６、６．２、６．５、６．８、７、７．２、７．５、７．８、８、８．２、８．５、８．８、９、９．２、９．５、９．８、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、５００、８００、１０００、２５００、５０００、１０４、２．５×１０４、５×１０４、７．５×１０４、２．５×１０５、５×１０５、７．５×１０５、１０６、２．５×１０６、５×１０６、７．５×１０６、１０７、２．５×１０７、５×１０７、７．５×１０７、１０８、２．５×１０８、５×１０８、７．５×１０８、１０９、２．５×１０９、５×１０９、７．５×１０９、１０１０倍またはさらにより高い倍率の増加をもたらすことができる。ある特定の実施形態では、ウイルスの腫瘍標的全身送達の有効性は、腫瘍細胞に感染するウイルスを定量することにより、および必要に応じて、生体内の非腫瘍細胞に感染するウイルスと対比して測定することができる。例えば、一部の場合では、ウイルスの定量は、組織切片、または白血病、リンパ腫、もしくは骨髄腫の場合には血液塗抹標本のウイルス粒子を染色することによって行うことができる。一部の場合では、このような定量は、ウイルスによって発現されるように操作されたレポーター分子（複数可）、例えば、ルシフェラーゼ、および蛍光タンパク質によって行うことができる。一部の場合では、このような定量は、腫瘍内のウイルスゲノムを定量することによって行うことができる。限定されないが、ウイルス感染またはリンパ球の蓄積に応答して、サイトカインのような、腫瘍細胞におけるウイルス感染のある特定の下流効果（複数可）を定量することによって、ウイルスの腫瘍標的全身送達を測定することもまた可能である。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２、またはその両方をコードすることができる外因性核酸を含み、外因性核酸の存在は、外因性核酸を含まない腫瘍溶解性ウイルスであって、他の点では同一である腫瘍溶解性ウイルスと比較した場合、ウイルスの腫瘍標的全身送達の有効性において約５〜１０倍の増加をもたらし得る。
【０１９２】
一部の実施形態では、ケモカイン受容体をコードすることができる外因性核酸を含む改変された腫瘍溶解性ウイルスが、本明細書において提供され、改変された腫瘍溶解性ウイルスによるケモカイン受容体の強制発現は、感染した腫瘍に対する免疫応答の急増（boosted immune response）をもたらし得る。腫瘍に感染した後、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍細胞において複製され、腫瘍細胞の表面上にケモカイン受容体の発現をもたらすことができる。これらの膜受容体は、おとり受容体として機能し、腫瘍内の免疫抑制ケモカイン（例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＣＬ２）を結合および隔離し得る。その結果、腫瘍における免疫抑制性微小環境が変化し、ケモカイン受容体をコードする核酸を含むウイルスであって、他の点では同一であるウイルスと比較して、改変された腫瘍溶解性ウイルスの免疫療法活性の増強をもたらし得る。一部の実施形態では、免疫療法活性の増加は、少なくとも約１．１、１．１、１．２、１．５、１．８、２、２．２、２．５、２．８、３、３．２、３．５、３．８、４、４．２、４．５、４．８、５、５．２、５．５、５．８、６、６．２、６．５、６．８、７、７．２、７．５、７．８、８、８．２、８．５、８．８、９、９．２、９．５、９．８、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、５００、８００、１０００、２５００、５０００、１０４、２．５×１０４、５×１０４、７．５×１０４、２．５×１０５、５×１０５、１０６倍またはさらにより高い倍率であり得る。限定されないが、免疫療法活性の増加は、腫瘍におけるＢ細胞蓄積の増加、腫瘍関連免疫原に対するＴ細胞応答の増加、またはその両方によって反映され得る。Ｂ細胞の蓄積は、例えば、腫瘍におけるＢ細胞を定量することにより測定することができ、Ｔ細胞の免疫活性は、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイにおけるインターフェロン−γ（インターフェロン−ガンマ）分泌により測定することができる。
【０１９３】
一部の実施形態では、本明細書において、ケモカイン受容体をコードすることができる外因性核酸を含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供され、改変された腫瘍溶解性ウイルスによるケモカイン受容体の強制発現は、ケモカイン受容体をコードする核酸を含まないウイルスであって、他の点では同一であるウイルスと比較して、腫瘍細胞におけるウイルスの複製の増加をもたらすことができる。ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスの腫瘍特異的複製を増加させることができる、外因性ＣＣＲ２発現核酸を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスの腫瘍特異的複製を増加させることができる、外因性ＣＣＲ５発現核酸を含むことができる。一部の実施形態では、腫瘍特異的複製の増加は、少なくとも約１．１、１．１、１．２、１．５、１．８、２、２．２、２．５、２．８、３、３．２、３．５、３．８、４、４．２、４．５、４．８、５、５．２、５．５、５．８、６、６．２、６．５、６．８、７、７．２、７．５、７．８、８、８．２、８．５、８．８、９、９．２、９．５、９．８、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、５００、８００、１０００、２５００、５０００、１０４、２．５×１０４、５×１０４、７．５×１０４、２．５×１０５、５×１０５、１０６倍またはさらにより高い倍率であり得る。ウイルス送達および腫瘍への拡散の増加を測定するための例示的な方法には、限定されないが、レポーター遺伝子の発現の蛍光もしくは生物発光に基づくイメージング、ウイルスゲノムの腫瘍濃度を検出するための定量的ＰＣＲ、またはプラーク形成単位のプラーク決定、またはウイルスタンパク質の免疫組織化学が含まれ得る。
【０１９４】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、キメラタンパク質であるケモカイン受容体をコードすることができる外因性核酸を含む。その細胞外ドメインの少なくとも一部は、ウイルスの腫瘍標的送達を促進するケモカイン受容体由来であり得、その細胞内ドメインの少なくとも一部は、腫瘍特異的複製を促進し、免疫抑制活性を阻害し、もしくはいくつかの他の有益な効果を伝えるケモカイン受容体由来であり得、またはその逆である。例えば、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＣＣＲ５の細胞内ＧＴＰａｓｅドメイン、およびＣＸＣＲ４またはＣＣＲ２の細胞外ケモカイン結合ドメインを有するタンパク質をコードする核酸を含み得る。一部の場合では、ドメインを異なる機能性と組み合わせることにより、改変された腫瘍溶解性ウイルスの治療性能をさらに改善することができる。改変された腫瘍溶解性ウイルスが、少なくとも１つのケモカイン受容体をコードすることができる外因性核酸を含むことができるのが、本開示の一実施形態である。一部の場合では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスによって同時に発現され得る２つまたはそれより多くの異なるケモカイン受容体をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。本明細書に記載される改変された腫瘍溶解性ウイルスから同時に発現され得る例示的なケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ２を含み得る。１を超えるケモカイン受容体を発現する改変された腫瘍溶解性ウイルスにおいて、腫瘍溶解性ウイルスの治療応用に関して、腫瘍細胞に対する組み合わせ効果または相乗効果が達成され得る。
【０１９５】
腫瘍溶解性ウイルスの治療効果は、少なくとも部分的には、腫瘍に存在する大量の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）および高い間質液圧（ＩＦＰ）に起因して、しばしば、固形腫瘍内および固形腫瘍間への有効でない拡散によって制限され得る。本開示のある特定の実施形態は、腫瘍のＥＣＭを分解するタンパク質をコードすることができる外因性核酸を含む、改変された腫瘍溶解性ウイルスに関する。ＥＣＭを分解することができる例示的なタンパク質は、膜結合タンパク質であり得る。いくつかの場合では、膜結合タンパク質は、グリコシルホスファチジルイノシトール（glycosylphosphatidylinisotol）（ＧＰＩ）アンカーを含み得る。
【０１９６】
ヒアルロナン（ＨＡ）は、ＥＣＭの重要な構造エレメントであり、繰り返し二糖単位からなる高分子量の線状グリコサミノグリカンである。それは、結合組織、上皮組織、神経組織全体に広く分布し得、その発現レベルは、多くのタイプの腫瘍で有意に上昇し得る。ヒアルロニダーゼは、ＨＡの分解を触媒する酵素のファミリーである。これまでにヒトにおいて同定された機能性ヒアルロニダーゼは、少なくとも５つ：ＨＹＡＬ１、ＨＹＡＬ２、ＨＹＡＬ３、ＨＹＡＬ４およびＨＹＡＬ５（ＰＨ−２０またはＳＰＡＭ１としても公知である）あり、そのうち、ＰＨ−２０は、これまでに比較的中性のｐＨで機能的あることが公知である唯一のものである。本開示の一部の実施形態では、ヒアルロニダーゼを他の腫瘍標的治療剤（導入遺伝子など、本明細書において外因性核酸とも呼ばれる）と組み合わせることにより、少なくとも、ＥＣＭを減らし、腫瘍内および腫瘍間の治療剤の輸送を増強することによって、改変された腫瘍溶解性ウイルスの治療効果を促進させることができる。
【０１９７】
本明細書における一部の実施形態は、ヒアルロニダーゼなどの、ヒアルロナンを分解することができる膜結合タンパク質をコードする外因性核酸を含むことができる、改変された腫瘍溶解性ウイルスを開示する。本明細書で使用される場合、「ヒアルロニダーゼ」という用語は、限定されないが、ＰＨ−２０および他の種由来のそのホモログ、ならびに同様の酵素機能を有する他の操作された／設計タンパク質を含む、腫瘍におけるＨＡの分解を触媒する任意の酵素またはその断片を指し得ることに留意されたい。本明細書で使用される場合、ヒアルロニダーゼは、ヒアルロナン分解酵素のクラスを指し得る。ヒアルロニダーゼには、細菌ヒアルロニダーゼ（ＥＣ４．２．２．１またはＥＣ４．２．９９．１）、ヒル、他の寄生虫、甲殻類由来のヒアルロニダーゼ（ＥＣ３．２．１．３６）、および哺乳動物型ヒアルロニダーゼ（ＥＣ３．２．１．３５）が含まれる。ヒアルロニダーゼは、限定されないが、マウス、イヌ、ネコ、ウサギ、トリ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、魚類、カエル、細菌を含む任意の非ヒト起源のもの、ならびにヒル、他の寄生虫、および甲殻類由来の任意のものであり得る。例示的な非ヒトヒアルロニダーゼには、ウシ、イエロージャケットハチ（yellow jacket wasp）、ミツバチ、ホワイトフェーススズメバチ（white-face hornet）、アシナガバチ、マウス、ブタ、ラット、ウサギ、ヒツジ、チンパンジー、アカゲザル、オランウータン、カニクイザル、モルモット、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．（ＦＢ２４株）、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ  ｂａｃｔｅｒｉｏｖｏｒｕｓ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ＭＲＳＡ２５２株、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｆｉｓｃｈｅｒｉ由来のヒアルロニダーゼ、およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙａｌｕｒｏｎｏｌｙｔｉｃｕｓヒアルロニダーゼ酵素が含まれ、ヒアルロン酸に特異的であるが、コンドロイチンまたはコンドロイチン硫酸を切断しない。
【０１９８】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＰＨ−２０をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＰＨ−２０をコードすることができる外因性核酸を含むことができ、ＰＨ−２０は、ＧＰＩアンカーを含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＰＨ−２０をコードすることができる外因性核酸を含むことができ、ＰＨ−２０は、ＧＰＩアンカーを欠いている場合がある。ＧＰＩは、タンパク質の細胞膜へのアンカーとして機能することができ、したがって、一般的に、ＧＰＩを含有するＰＨ−２０は細胞膜に固定され得、ＧＰＩを有しないＰＨ−２０は分泌型であり得る。
【０１９９】
一部の実施形態では、ＰＨ−２０の例示的なアミノ酸配列は、配列番号３６、配列番号１３０であり得るか、または配列番号３６もしくは配列番号１３０と約７０％、約７５％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一であり得る配列であり得る。
【０２００】
本開示は、Ｃ末端ＧＰＩアンカーの保持が、予想外に、腫瘍微小環境内での、ＰＨ−２０を含有するＧＰＩアンカーを発現する腫瘍溶解性ウイルスの拡散を改善することを同定する。一部の例では、ＧＰＩアンカー型ＰＨ−２０をコードすることができる外因性核酸を含む改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＧＰＩアンカーを欠くＰＨ−２０をコードし得る外因性核酸を含むことができる、他には同一であるウイルスと比較して、予想外に、腫瘍ＥＣＭを分解し、ウイルスの拡散をより大きな程度にまで促進することができる。一部の他の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＧＰＩアンカー型ＰＨ−２０とＧＰＩアンカーを含まない分泌型ＰＨ−２０の両方をコードすることができる核酸を含むことができる。
【０２０１】
一部の場合では、改変された腫瘍溶解性ワクシニアウイルスからのＧＰＩアンカー型ＰＨ−２０の発現は、以下の効果の少なくとも１つを有することができる：（ｉ）ＰＨ−２０は、ＥＥＶ外側エンベロープに組み込むことができ、それにより、ＥＥＶをより効果的に拡散させることができる、（ｉｉ）ウイルス感染は、感染細胞の移動をもたらし得、それらの表面上でＰＨ２０を発現している場合は、増強され得る。本開示の一部の実施形態では、ＧＰＩアンカーのない分泌型のＰＨ−２０は、ウイルスのＥＥＶ型の産生を促進することにおいてより活性が低くなり得ることが同定される。
【０２０２】
一部の実施形態では、ヒアルロニダーゼをコードする核酸の少なくとも一部は、ヒト以外の他の供給源由来であり得る。様々な種のヒアルロニダーゼは、様々なやり方で、様々な効率で、それらの組み合わせで腫瘍ＨＡを加水分解することができる。本明細書における一部の実施形態は、異なる種由来の複数のヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸を含み得る、改変された腫瘍溶解性ウイルスに関する。この組み合わせは、より優れたＥＣＭ分解能力を提供し、その後、治療効果の増強をもたらし得る。
【０２０３】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、微生物起源のヒアルロニダーゼをコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の例では、微生物起源のヒアルロニダーゼは、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ由来のＨｙｓＡ、Ｌｏｘｏｓｃｅｌｅｓ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ由来のｌｉｎ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｋｏｇａｎｅｉｅｎｓｉｓ由来のｓｋｏ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のｒｖであり得る。一部の例では、微生物起源のヒアルロニダーゼは、分泌されたヒアルロニダーゼであり得る。一部の例では、外因性核酸ｈｙｓＡは、ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＰ０２００２０．１、（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ｓｕｂｓｐ．  ａｕｒｅｕｓ株ＡＴＣＣ６５３８染色体、完全ゲノム）の範囲のヌクレオチド：２２４８６０２〜２２５０８９９に記載される配列を含むことができる。一部の場合では、外因性核酸ｈｙｓＡは、配列番号１２２に記載されるアミノ酸配列を含むタンパク質をコードすることができる。一部の場合では、外因性核酸ｈｙｓＡは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ５９８０１（ＨＹＡＳ＿ＳＴＡＡ８）（配列番号１２３）に記載されるアミノ酸配列を含むタンパク質をコードすることができる。一部の実施形態では、ＨｙｓＡなどの分泌型ヒアルロニダーゼの発現は、本明細書に記載される改変された腫瘍溶解性ウイルスの複製、拡散、治療活性（例えば、がん細胞殺滅能力）を増強する。一部の場合では、外因性核酸ｌｉｎは、配列番号１２４または配列番号１２７に記載されるアミノ酸配列を含むタンパク質をコードすることができる。一部の場合では、外因性核酸ｒｖは、配列番号１２５または配列番号１２８に記載されるアミノ酸配列を含むタンパク質をコードすることができる。一部の場合では、外因性核酸ｓｋｏは、配列番号１２６または配列番号１２９に記載されるアミノ酸配列を含むタンパク質をコードすることができる。一部の実施形態では、微生物ヒアルロニダーゼの例示的なアミノ酸配列は、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、もしくは配列番号１２９であり得、または配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、もしくは配列番号１２９と約７０％、約７５％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは約１００％同一であり得る配列であり得る。
【０２０４】
さらに、一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ヒアルロニダーゼとマトリックスメタロプロテアーゼの両方をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。集合的に、マトリックスメタロプロテアーゼは、あらゆる種類のＥＣＭタンパク質を分解することができる。マトリックスメタロプロテアーゼの追加は、ＥＣＭ分解効果をさらに増強し、ウイルスの拡散を促進することができる。マトリックスメタロプロテアーゼの一例は、ＭＭＰ８であり得る。他の例としては、限定されないが、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１８、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２１、ＭＭＰ２３Ａ、ＭＭＰ２３Ｂ、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２５、ＭＭＰ２６、ＭＭＰ２７、およびＭＭＰ２８が挙げられ得る。
【０２０５】
一部の実施形態では、ヒアルロニダーゼをコードすることができる核酸を含む改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ヒアルロニダーゼをコードする核酸を含まないウイルスであって、他の点では同一であるウイルスと比較して、腫瘍内および腫瘍間でのウイルス拡散が増加し得る。一部の実施形態では、このような増加は、少なくとも約１．１、１．１、１．２、１．５、１．８、２、２．２、２．５、２．８、３、３．２、３．５、３．８、４、４．２、４．５、４．８、５、５．２、５．５、５．８、６、６．２、６．５、６．８、７、７．２、７．５、７．８、８、８．２、８．５、８．８、９、９．２、９．５、９．８、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、５００、８００、１０００、２５００、５０００、１０４、２．５×１０４、５×１０４、７．５×１０４、２．５×１０５、５×１０５、１０６倍またはさらにより高い倍率であり得る。ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＰＨ−２０をコードする外因性核酸を含み、腫瘍内のウイルス拡散は、ＰＨ−２０をコードする核酸を含まないウイルスであって、他の点では同一であるウイルスと比較して、少なくとも約１００倍増加し得る。ウイルスの拡散の増加を測定するための例示的な方法としては、限定されないが、レポーター遺伝子の発現の蛍光もしくは生物発光に基づくイメージング、ウイルスゲノムの腫瘍濃度を検出するための定量的ＰＣＲ、またはプラーク形成単位のプラーク決定、またはウイルスタンパク質の免疫組織化学が含まれ得る。
【０２０６】
ＶＨ１は、ウイルスタンパク質であり、ホスホセリンとホスホチロシン含有基質の両方に対する二重特異性ホスファターゼとして同定されている。特に、ＶＨ１は、インターフェロンアルファまたはインターフェロンガンマなどの多数の免疫因子に応答する転写因子であるＳＴＡＴ１のリン酸化および核移行を阻害し、少なくとも部分的には抗原提示の低下を通じて、ウイルス感染細胞に対する免疫応答を抑制することができる。ウイルスによって発現されたより活性なＶＨ１は、ウイルス感染細胞に関してより良好な免疫抑制効果を有し得る。
【０２０７】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスＶＨ１タンパク質をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、ウイルスＶＨ１タンパク質をコードする外因性核酸は、改変された腫瘍溶解性ウイルスとは異なる種であるポックスウイルスのゲノム由来であり得る。一部の実施形態では、ポックスウイルスは、ベータエントモポックスウイルス、ヤタポックスウイルス、セルビドポックスウイルス、ガンマエントモポックスウイルス、レポリポックスウイルス、スイポックスウイルス、モルシポックスウイルス、クロコジリドポックスウイルス、アルファエントモポックスウイルス、カプリポックスウイルス、アビポックスウイルス、またはパラポックスウイルスを含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、天然のＶＨ１遺伝子の部分的または完全な欠失を含み得、外因性のＶＨ１をコードする核酸を含み得る。ＶＨ１タンパク質はまた、人工的に設計／操作された様々な種のコンポーネントを有するキメラ／融合タンパク質、またはホスファターゼ活性を保持することができる天然に存在するＶＨ１タンパク質の機能的断片のみであり得る。外因性核酸によってコードされるＶＨ１タンパク質は、骨格腫瘍溶解性ウイルス（backbone oncolytic virus）の天然のＶＨ１タンパク質よりも活性であり得る。
【０２０８】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ワクシニアウイルスを含むことができ、その天然のＶＨ１遺伝子は、ゲノムから削除することができ、他のポックスウイルス由来のＶＨ１遺伝子は、そのゲノムに挿入することができる。この場合、より活性なＶＨ１タンパク質は、ウイルスの毒性の低下をもたらし得る。あるいはまたは加えて、それは、少なくとも部分的には適応免疫応答が腫瘍抗原をより積極的に標的とし、ウイルス抗原をあまり強力に標的としないことに起因して、より大きな治療利益をもたらし得る。
【０２０９】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、治療用タンパク質をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。本明細書に記載される改変された腫瘍溶解性ワクシニアウイルスとともに含有される外因性核酸によってコードされ得る治療用タンパク質の例としては、限定されないが、抗体またはその抗原結合断片、サイトカイン、成長因子、ペプチドホルモン、サイトカイン、凝固因子、血漿タンパク質、融合タンパク質が挙げられ得る。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、免疫チェックポイントインヒビター、Ｔ細胞活性化因子、治療用ナノボディ、ケモカインおよび免疫活性化因子、プロドラッグ変換酵素、直接細胞毒性化合物、またはそれらの任意の組み合わせであるタンパク質またはその断片をコードする外因性核酸を含み得る。これらのタンパク質の各々または任意の組み合わせは、骨格腫瘍溶解性ウイルスのより大きな治療利益に貢献し得る。
【０２１０】
外因性核酸は、一部の場合では、ヒト化抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（例えば、Ｇａｚｙｖａ）、ＶＥＧＦＲ  Ｆｃ融合体（例えば、Ｅｙｌｅａ）、ＣＴＬＡ−４  Ｆｃ融合体（例えば、Ｎｕｌｏｊｉｘ）、グルカゴン様ペプチド−１受容体アゴニストＦｃ融合体（例えば、Ｔｒｕｌｉｃｉｔｙ）、ＶＥＧＦＲ  Ｆｃ融合体（例えば、Ｚａｌｔｒａｐ）、組換え第ＩＸ因子Ｆｃ融合体（例えば、Ａｌｐｒｏｌｉｘ）、組換え第ＶＩＩＩ因子Ｆｃ融合体（例えば、Ｅｌｏｃｔａｔｅ）、ＧＬＰ−１受容体アゴニスト−アルブミン融合体（例えば、Ｔａｎｚｅｕｍ）、組換え第ＩＸ因子アルブミン融合体（例えば、Ｉｄｅｌｖｉｏｎ）、ＰＥＧ化ＩＦＮβ−１ａ（例えば、Ｐｌｅｇｒｉｄｙ）、ＰＥＧ化組換え第ＶＩＩＩ因子（例えば、Ａｄｙｎｏｖａｔｅ）、エムタンシンにコンジュゲートさせたヒト化抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（例えば、Ｋａｄｃｙｌａ）、マウス／ヒトキメラ抗ＣＤ３０（例えば、Ａｄｃｅｔｒｉｓ）、抗ヒト上皮細胞成長因子受容体２（ＨＥＲ２）（例えば、Ｐｅｒｊｅｔａ）、抗ＩＬ−６受容体（Ａｃｔｅｍｒａ）、抗ＣＤ２０（例えば、オビヌツズマブ、Ｇａｚｙｖａ）、抗インテグリンａ４ｂ７（ＬＰＡＭ−１）（例えば、Ｅｎｔｙｖｉｏ）、抗ＰＤ−１（例えば、Ｋｅｙｔｒｕｄａ）、抗ダビガトラン（例えば、Ｐｒａｘｂｉｎｄ）、抗ＩＬ−５（例えば、Ｎｕｃａｌａ）、抗ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）（例えば、Ｅｍｐｌｉｃｉｔｉ）、抗ＩＬ−１７ａ（例えば、Ｔａｌｔｚ）、抗ＩＬ−５（例えば、Ｃｉｎｑａｉｒ）、抗ＰＤ−Ｌ１（例えば、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ）、抗ＣＤ２５（例えば、Ｚｉｎｂｒｙｔａ）、抗ＣＤ３０（例えば、Ａｄｃｅｔｒｉｓ）、抗ＩＬ−６（例えば、Ｓｙｌｖａｎｔ）、抗ＧＤ２（例えば、Ｕｎｉｔｕｘｉｎ）、抗Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ（例えば、Ａｎｔｈｉｍ）、抗ＴＮＦα（例えば、Ｉｎｆｌｅｃｔｒａ）、ヒト抗Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）（例えば、ベリムマブ）、ヒト抗ＣＴＬＡ−４（例えば、イピリムマブ）、ＣＴＬＡ−４  Ｆｃ融合体（例えば、ベラタセプト）、ヒト化抗ヒト上皮細胞成長因子受容体２（ＨＥＲ２）（例えば、ペルツズマブ）、ＶＥＧＦＲ  Ｆｃ融合体（例えば、ｚｉｖ−アフィルベルセプト）、Ｇ−ＣＳＦ（例えば、ｔｂｏ−フィルグラスチム）、ヒト抗ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ）（例えば、ラムシルマブ）、マウス／ヒトキメラ抗ＩＬ−６（例えば、シルツキシマブ）、ペンブロリズマブ、マウス二重特異性抗ＣＤ１９／抗ＣＤ３（例えば、ブリナツモマブ（blintumomab））、ニボルマブ、副甲状腺ホルモン、マウス／ヒトキメラ抗ＧＤ２（例えば、ジヌツキシマブ）、ヒト抗ＣＤ３８（例えば、ダラツムマブ）、ヒト抗上皮細胞成長因子受容体（ＥＧＦＲ）（例えば、ネシツムマブ）、ヒト化抗ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）（例えば、エロツズマブ）、アテゾリズマブを含む導入遺伝子をコードすることができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、タンパク質またはその断片をコードする外因性核酸を含み得、ＮＦκＢシグナル伝達をモジュレートし得、腫瘍において間質液圧（ＩＦＰ）の低下を促進し得、ＳＴＡＴ３媒介性遺伝子活性化をモジュレートし得、Ｔ細胞活性化を促進し得、ウイルス感���細胞へのＮＫ細胞の誘引を促進し得、ウイルス感染細胞の代謝プログラムをモジュレートし得、ウイルス感染細胞による脂肪酸の取り込みをモジュレートし得、ＭＤＳＣの治療標的化を促進し得、またはそれらの任意の組み合わせである。
【０２１１】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＨＭＧＢ１、ＰＩＡＳ３、ＩＬ１５、ＣＣＬ５、それらの断片のうちの少なくとも１つ、またはそれらの任意の組み合わせをコードすることができる外因性核酸を含み得る。これらのタンパク質の各々または任意の組み合わせは、骨格腫瘍溶解性ウイルスのより大きな治療利益に貢献し得る。
【０２１２】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、フラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１など）、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１など）、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４、またはＴＮＦＳＦ１４など）、それらの断片、またはそれらの任意の組み合わせをコードすることができる外因性核酸を含み得る。これらのタンパク質の各々または任意の組み合わせは、骨格腫瘍溶解性ウイルスのより大きな治療利益に貢献し得る。
【０２１３】
一部の実施形態では、免疫チェックポイントインヒビターは、限定されないが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦＲ−ベータ、およびそれらの任意の組み合わせなどの免疫チェックポイント分子のインヒビターを指すことができる。
【０２１４】
一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化因子は、限定されないが、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、インターロイキン−１３、インターロイキン−１５（ＩＬ１５／ＩＬ−１５）、ＩＬ１５−α（ＩＬ１５−アルファ）、ＩＬ１５−受容体（ＩＬ１５−Ｒ）、ＩＬ１５−Ｒα（ＩＬ１５−受容体アルファ）、インターフェロン−アルファ、インターフェロン−ガンマ、腫瘍壊死因子、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＴＧＦ−ベータ抗体、抗４−１ＢＢ抗体、細胞ベースのワクチン、ペプチドワクチン、ＤＮＡワクチン、成長因子、フィトヘマグルチニン、コンカナバリン−Ａ、ホルボールエステル、およびそれらの任意の組み合わせを含むことができる。
【０２１５】
一部の実施形態では、治療用ナノボディは、単一の単量体可変抗体ドメインからなり、腫瘍細胞または腫瘍に対して治療効果を有する抗体断片を指すことができる。
【０２１６】
一部の実施形態では、他のサイトカイン、ケモカイン、および免疫活性化因子は、腫瘍細胞または腫瘍に対して治療効果を有し得る、対応するカテゴリーに属する任意の他のタンパク質を指すことができる。
【０２１７】
一部の実施形態では、プロドラッグ変換酵素は、標的に対する活性が低い分子を、標的に対する活性が高い分子に変換する酵素を指すことができる。一部の場合では、標的は、腫瘍細胞または腫瘍であり得る。プロドラッグ変換酵素は、限定されないが、シトシンデアミナーゼ、ウラシルホスホリボシルトランスフェラーゼ、チミジンキナーゼ、およびそれらの任意の組み合わせを含み得る。
【０２１８】
一部の実施形態では、直接細胞毒性化合物は、他の細胞または化合物を介して影響を与えることなく、腫瘍細胞に対して直接細胞毒性である任意の分子を指すことができる。一部の実施形態では、直接細胞毒性化合物は、限定されないが、改変された腫瘍溶解性ウイルスに加えられる外因性核酸から発現され得るタンパク質、ペプチド、ｍＲＮＡ、またはオリゴマーを含み得る。
【０２１９】
様々な例において、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、上記のタンパク質をコードすることができる、上記の外因性核酸のうちの１つまたは複数を含むことができ、タンパク質は、完全長タンパク質、完全長タンパク質の切断型バージョン、完全長タンパク質の機能的ドメイン、完全長タンパク質の断片、または完全長タンパク質のバリアント、切断型バージョン、機能的ドメイン、もしくは断片であり得る。バリアントは、一部の例では、アミノ酸置換（保存的または非保存的）、欠失、付加、改変、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
ウイルスゲノムの改変
【０２２０】
この開示の一部の実施形態は、ウイルスのゲノムに改変を含み得る改変された腫瘍溶解性ウイルスを含み得る。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスのゲノムに少なくとも１つの改変を含み得る。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスのゲノムに少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０個、またはさらに多くの改変を含むことができる。ウイルスゲノムの改変は、ウイルス遺伝子の変異、欠失、またはその両方を含み得る。ウイルス遺伝子の欠失は、ウイルス遺伝子の部分的または完全な欠失を含み得る。本明細書で使用される場合、「部分的欠失」または「変異」は、それぞれ、内因性ウイルス遺伝子のインサイチュの部分的欠失または変異を指し得ることに留意されたい。あるいは、それらは、内因性ウイルス遺伝子を、遺伝子の一部を欠く（「部分的欠失」）または遺伝子に１つまたは複数のヌクレオチド変化（「変異」）を有する外因性核酸であって、他の点では同一である外因性核酸で置換することを指し得る。
【０２２１】
ポックスウイルスを含む多くのウイルスの複製は、様々な段階で異なる形態を伴ういくつかの段階を含む。非限定的な一例は、ワクシニアウイルスであり得、これは、感染した細胞の細胞質内で完全に複製し得る大きなＤＮＡウイルスである。一般的に、ワクシニアウイルスは、異なる数の膜に囲まれた２つの区別される感染性ビリオンの形成に至る複雑な形態形成経路を有する。細胞内成熟ウイルス（ＩＭＶ）と呼ばれる最初に産生されるビリオンは、単一の膜に囲まれ、細胞が溶解するまで細胞内に留まる。他のビリオンは、第２の膜に囲まれ、細胞死の前に細胞から排出される。ビリオンは、細胞表面に保持されている場合は細胞関連エンベロープウイルス（ＣＥＶ）と呼ばれ、細胞表面から放出される場合は細胞外エンベロープウイルス（ＥＥＶ）と呼ばれる。
【０２２２】
腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの治療応用において、そのＥＥＶ型のビリオンの第２の膜は、単一の膜につつまれたＩＭＶと比較して、循環系および他の組織環境に存在する中和抗体および補体に対するウイルスの感受性を有意に低下し得る。さらに、ＥＥＶは放出形態であるため、ＥＥＶを投与すると、ウイルスが腫瘍内および腫瘍間で拡散し易くなり得るので、腫瘍細胞に感染する機会が増加する。したがって、ＥＥＶの産生を増加させると、腫瘍溶解性ウイルス、例えば、ポックスウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、他の腫瘍溶解性ポックスウイルス、または他の同様のウイルスが臨床設定で使用される場合、より大きな治療利益をもたらすことができる。本明細書における一部の実施形態は、ＥＥＶ型のウイルスの産生を増強し、それにより腫瘍内および腫瘍間でのウイルスの拡散を増強し得るウイルスゲノムに改変を含み得る、改変された腫瘍溶解ウイルスを開示する。Ｂ５Ｒ、Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒは、ＥＥＶ特異的膜タンパク質の例である。
【０２２３】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、前記改変がＳＣＲ２ドメインにないことを条件に、ウイルスＢ５Ｒ遺伝子に改変を含むことができる。Ｂ５Ｒタンパク質には、次の領域：（シグナルペプチド）−（短鎖コンセンサスリピート（ＳＣＲ）領域１〜４（膜貫通ドメイン）−（細胞質尾部）が含まれる。ＳＣＲ１ドメインには、ＥＥＶに見出される中和抗体エピトープを含有することができる。ＳＣＲ３には、ＥＥＶ放出の増加をもたらすことができるＰ１８９Ｓ変異部位を含有することができる。
【０２２４】
本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスは、一部の例では、Ｂ５Ｒ遺伝子のＳＣＲ１、ＳＣＲ３およびＳＣＲ４ドメインのうちの少なくとも１つに改変を含み得る。例えば、改変は、Ｂ５Ｒ遺伝子の部分的欠失であり得る。一部の場合では、Ｂ５Ｒ遺伝子の改変、例えば、ＳＣＲ３およびＳＣＲ４ドメインにおける欠失は、中和抗体のＢ５Ｒへの結合を少なくとも部分的に妨害することができる。したがって、本開示による改変された腫瘍溶解性ウイルスは、中和に対して少なくとも部分的に耐性であり得る。
【０２２５】
Ｂ５Ｒ  ＳＣＲ領域におけるさらなる改変はまた、本開示に含まれ、その結果、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＥＥＶの放出、複製および抗体回避のために最適化され得る。Ｂ５Ｒ変異、例えば、Ｂ５Ｒ  ＳＣＲ１の抗体結合部位の除去は、他のＥＥＶ増強変異、例えば、Ａ３４Ｒのランダム変異誘発と組み合わせることができる。一部の場合では、このような改変の組み合わせにより、ＥＥＶ産生の増加をもたらすことができる。
【０２２６】
一部の実施形態では、改変は、Ｂ５Ｒにおける欠失または変異を含む。欠失は、完全または部分的な欠失であり得る。
【０２２７】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス遺伝子Ｂ５Ｒ、Ｆ１３Ｌ、Ａ３６Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ａ３３Ｒ、またはＥＥＶの産生を増加させるそれらの任意の組み合わせにおける改変を含み得る。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、以下の変異：Ａ３３Ｒ、Ａ３４Ｒ、Ｌｙｓ１５１のＧｌｕへの部分的欠失（Ｋ１５１Ｅ）、Ｂ５Ｒの完全もしくは部分的な欠失、および／またはＡ３６Ｒの変異／欠失のうちの１つまたは複数を含み得る。
【０２２８】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、さらなるウイルス遺伝子の変異または欠失を含み得る。さらなるウイルス遺伝子は、ある特定の分泌型サイトカイン結合タンパク質、例えば、Ｂ８ＲまたはＢ１８Ｒをコードする遺伝子を含み得る。または、それは、免疫抑制活性に関与し得る遺伝子、例えば、Ｎ１ＬまたはＡ４１Ｌを含むことができる。それはまた、ＮＦκＢ（ＮＦ−カッパＢ）阻害機能を有するタンパク質をコードする遺伝子、例えば、Ｋ７Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ａ５２Ｒを含み得る。あるいは、改変された腫瘍溶解性ウイルスが、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、ＳＰＩ−１、ＳＰＩ−２、Ｂ１５Ｒ、ＶＧＦ、Ｅ３Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ａ４１Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｎ１Ｌ、またはＡ５２Ｒをコードすることができる遺伝子のいずれか１つまたはそれらの組み合わせの変異または欠失を含むことも可能である。タンパク質Ｂ８Ｒは、一部の実施形態では、ＩＦＮ−ガンマ受容体と相同である分泌型ウイルスタンパク質を指し、一部の場合では、宿主ＩＦＮ−ガンマとその受容体の間の相互作用を阻害し、それによって宿主ＩＦＮγの抗ウイルス作用を打ち消すことができる。タンパク質Ｂ１８Ｒは、一部の実施形態では、分泌され、一部の場合では１型インターフェロンに結合することができる、ウイルス性アンキリン様タンパク質を指すことができる。タンパク質ＳＰＩ−１は、一部の実施形態では、ウイルスセリンプロテイナーゼインヒビター１を指すことができ、ＳＰＩ−２は、ウイルスセリンプロテイナーゼインヒビター２を指すことができる。タンパク質Ｂ１５Ｒ（ワクシニアウイルス株コペンハーゲン（Copenhagen）ではＢ１４Ｒとも呼ばれる）は、一部の実施形態では、一部の場合において、ＩＫＫ複合体のＩＫＢＫＢサブユニットに結合することができ、それによりＴＮＦ−アルファまたはＩＬ１Ｂなどの炎症誘発性刺激に応答して宿主ＮＦ−カッパ−Ｂ活性化を防止することができるウイルスタンパク質を指すことができる。タンパク質ＶＧＦは、一部の実施形態では、感染細胞の周りで細胞増殖を刺激することができるプロワクシニア成長因子を指すことができる。タンパク質Ｅ３Ｌは、一部の実施形態では、ウイルス感染中に合成された二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）に結合して隔離し、それによってＥＩＦ２ＡＫ２／ＰＫＲのその後の活性化によるｄｓＲＮＡの認識を防止するウイルスタンパク質を指すことができる。タンパク質Ｋ３Ｌは、一部の実施形態では、ＥＩＦ２ＡＫ２／ＰＫＲの偽基質として機能し、それによってＰＫＲキナーゼによるｅＩＦ２α活性化を阻害し、宿主細胞における翻訳の遮断を防止することができるウイルスタンパク質を指すことができる。タンパク質Ａ４１Ｌは、一部の実施形態では、ある特定の細胞ケモカインと相互作用して、細胞表面でのケモカイン−グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）相互作用を妨害し、近傍の応答性細胞の走化性を変化させる、分泌型ウイルスケモカイン結合タンパク質を指すことができる。タンパク質Ｋ７Ｒは、一部の実施形態では、Ｔｏｌｌ様受容体アダプタータンパク質およびＤＥＡＤボックスＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ３に結合し、それによってＮＦκＢおよびインターフェロン調節因子３の活性化を阻害するウイルスＢｃｌ−２様タンパク質を指すことができる。タンパク質Ｎ１Ｌは、一部の実施形態では、一部の場合において、プロアポトーシスＢｃｌ−２ファミリータンパク質のＢＨ３ペプチドに結合することができる別のウイルスＢｃｌ−２様タンパク質を指すことができる。一部の場合では、Ｎ１Ｌは、ＮＦκＢの活性化および宿主細胞のアポトーシスを阻害することができる。タンパク質Ａ５２Ｒは、一部の実施形態では、別のウイルスＢｃｌ−２様タンパク質を指すことができ、これは、一部の場合では、宿主のｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達複合体を標的として、先天性免疫応答を抑制することができ、一部の場合では、宿主のＴＲＡＦ６と相互作用して、ｐ３８を活性化し、その後、ＩＬ−１０などのいくつかのサイトカインの発現を誘導することができ、一部の場合では、宿主ＩＲＡＫ２と相互作用して、ＮＦ−カッパ−Ｂシグナル伝達を阻害することができる。一部の場合では、Ｎ１Ｌ遺伝子の欠失は、一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスを投与すると、記憶Ｔ細胞応答の増加をもたらし得る。追加の作用は、一部の実施形態では、以下のうちの１つまたは複数を含むことができる：Ａ４１Ｌの欠失は、一部の実施形態では、ＣＴＬ応答の増加をもたらすことができる、Ｋ７Ｒの欠失は、一部の実施形態では、ナチュラルキラーとＴ細胞応答の増加に至ることができ、改変されたＢ１５Ｒは、一部の実施形態では、ＮＦκＢ活性化を低下させ、Ｂ１５Ｒ遺伝子の欠失は、一部の実施形態では、免疫応答を増強し、改変されたＡ５２Ｒは、一部の実施形態では、ＮＦκＢ活性化を低下させ、およびＡ５２Ｒ遺伝子の欠失は、一部の実施形態では、免疫応答を増強することができる。
【０２２９】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＬＩＧＨＴをコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＩＬ１５をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＩＬ１５をコードすることができる外因性核酸、およびＣＣＬ５をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＩＬ１５をコードすることができる外因性核酸、およびＩＬ１５−Ｒαをコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）をコードすることができる外因性核酸、およびフラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）をコードすることができる外因性核酸、フラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）をコードすることができる外因性核酸、ＩＬ１５をコードすることができる外因性核酸、およびＩＬ１５−Ｒαをコードすることができる外因性核酸を含むことができる。
【０２３０】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、サイトカイン、例えばＩＬ１５をコードすることができる外因性核酸をさらに含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、ケモカイン、例えばＩＬ１５をコードすることができる外因性核酸、およびケモカイン、例えばＣＣＬ５をコードすることができる外因性核酸をさらに含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、サイトカイン、例えばＩＬ１５をコードすることができる外因性核酸、およびサイトカインに対する受容体、例えばＩＬ１５Ｒαをコードすることができる外因性核酸をさらに含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、ＬＩＧＨＴをコードすることができる外因性核酸をさらに含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）をコードすることができる外因性核酸をさらに含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、フラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ｋ７Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）をコードすることができる外因性核酸、およびフラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）をコードすることができる外因性核酸をさらに含むことができる。
【０２３１】
一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、さらに、サイトカイン、例えば、ＩＬ１５をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、ケモカイン、例えば、ＩＬ１５をコードすることができる外因性核酸、およびケモカイン、例えば、ＣＣＬ５をコードすることができる外因性核酸をさらに含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、サイトカイン、例えば、ＩＬ１５をコードすることができる外因性核酸、およびサイトカインの受容体、例えば、ＩＬ１５Ｒαをコードすることができる外因性核酸をさらに含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、ＬＩＧＨＴをコードすることができる外因性核酸をさらに含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）をコードすることができる外因性核酸をさらに含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、フラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。一部の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、Ａ５２Ｒ遺伝子の変異または欠失を含むことができ、さらに、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）をコードすることができる外因性核酸、およびフラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１）をコードすることができる外因性核酸を含むことができる。
【０２３２】
一部の例では、改変された腫瘍溶解性ウイルスからのサイトカイン（例えば、ＩＬ１５）およびその受容体（例えば、ＩＬ１５−Ｒα）の共発現は、一部の場合では、例えば、ＩＬ１５およびＩＬ１５−Ｒαによって形成された複合体（ＩＬ１５：ＩＬ１５−Ｒ複合体）がナチュラルキラー細胞を活性化し、Ｔ細胞応答を促進する能力が改善したため、腫瘍溶解ウイルスの免疫調節効果の増強をもたらし得る。特定の理論に縛られることなく、ＩＬ１５：ＩＬ１５−Ｒα複合体のＩＬ１５は、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の表面に提示されるＩＬ１５−Ｒβγ（ＩＬ１５−受容体ベータガンマ複合体）に示されて、それによりＮＫ細胞およびＴ細胞に強力な免疫調節効果を付与し得ることが企図される。
【０２３３】
ある特定の実施形態では、Ａ５２Ｒ遺伝子が変異または欠失され得る改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供され、さらに、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＨｙｓＡなどの分泌型ヒアルロニダーゼをコードし得る外因性核酸を含み得る。ある特定の実施形態では、Ａ５２Ｒ遺伝子が変異または欠失され得る改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供され、さらに、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＣＸＣＲ４などのケモカイン受容体をコードし得る外因性核酸を含み得る。ある特定の実施形態では、Ａ５２Ｒ遺伝子が変異または欠失され得る改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供され、さらに、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＣＸＣＲ４などのケモカイン受容体をコードし得る外因性核酸、およびＨｙｓＡなどの分泌型ヒアルロニダーゼをコードし得る外因性核酸を含み得る。
【０２３４】
ある特定の実施形態では、Ａ５２Ｒ遺伝子が変異または欠失され得る改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供され、さらに、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＰＨ−２０（ＳＰＡＭ−１としても公知である）などの膜結合ヒアルロニダーゼをコードし得る外因性核酸を含み得る。ある特定の実施形態では、Ａ５２Ｒ遺伝子が変異または欠失され得る改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供され、さらに、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＣＸＣＲ４などのケモカイン受容体をコードし得る外因性核酸を含み得る。ある特定の実施形態では、Ａ５２Ｒ遺伝子が変異または欠失され得る改変された腫瘍溶解性ウイルスが提供され、さらに、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ＣＸＣＲ４などのケモカイン受容体をコードし得る外因性核酸、およびＰＨ−２０（またはＳＰＡＭ−１）などの膜結合ヒアルロニダーゼをコードし得る外因性核酸を含み得る。
【０２３５】
ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスチミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子の完全または部分的欠失を含み得る。ある特定の実施形態によれば、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルスのゲノムにおいて、１つまたは複数の外因性核酸が、欠失されたＴＫ遺伝子の遺伝子座に挿入される。本明細書に開示されるウイルス遺伝子の例示的な核酸配列、および前記遺伝子によってコードされるタンパク質のアミノ酸配列は、表３に提供される。
【０２３６】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変された腫瘍溶解性ウイルスにおいて、ウイルスＴＫ遺伝子は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−ＴＫ）由来のＴＫ遺伝子で置換され得る。ＨＳＶ  ＴＫは、欠失されたＴＫの代用として機能し得、多面的な利点を有し得る。例えば、（ｉ）ＨＳＶ  ＴＫは、ガンシクロビル（ＧＣＶ）を腫瘍においてその細胞毒性代謝物に変換するための追加の治療用プロドラッグ変換酵素として使用することができる。追加された治療効果に加えて、この改変はまた自殺遺伝子として機能し、例えば、ワクシニア発現細胞は、ＧＣＶの添加を介して効率的に殺滅され、それによって、有害事象または制御不能な複製の場合にウイルスをシャットダウンし得る。したがって、一部の例では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスは、安全スイッチとして機能することができる。追加の例では、ＨＳＶ  ＴＫの変異バージョンを使用して、標識された基質のＰＥＴイメージングを大きく増加した感度で行うことができる。したがって、一部の場合では、ＰＥＴイメージングにおいて使用することができるＨＳＶ  ＴＫを含む改変された腫瘍溶解性ウイルスは、ｉｎ  ｖｉｖｏでウイルス複製のレポーターとして機能し、処置後の早期に治療活性を決定することができる。
【０２３７】
一部の場合では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、上記の全長ウイルス骨格遺伝子もしくはウイルス骨格タンパク質、またはその切断型バージョン、またはその機能的ドメイン、またはその断片、またはそのバリアントを含み得る。様々な例では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、上記のように、ウイルス骨格遺伝子またはウイルス骨格タンパク質のうちの１つまたは複数の変異または欠失を含み得る。ウイルス骨格遺伝子およびウイルス骨格タンパク質の変異は、核酸配列のヌクレオチドおよびタンパク質配列のアミノ酸の挿入、欠失、置換、または改変を含み得る。欠失は、一部の例では、ウイルス骨格遺伝子またはタンパク質の完全または部分的欠失を含み得る。
がん標的
【０２３８】
この開示のある実施形態では、本明細書に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変された腫瘍溶解性ウイルスの送達によって、がんまたは腫瘍などの過剰増殖性疾患を処置する方法が企図される。本明細書に記載されるように、改変された腫瘍溶解性ウイルスによって処置され得るがんは、限定されないが、黒色腫、肝細胞癌、乳がん、肺がん、腹膜がん、前立腺がん、膀胱がん、卵巣がん、白血病、リンパ腫、腎癌、膵臓がん、上皮癌、胃がん、結腸癌、十二指腸がん、膵臓腺癌、中皮腫、多形性神経膠芽腫、星細胞腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、肝細胞癌、胆管肉腫、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸がん、腸型胃腺癌、子宮頸部扁平上皮癌、骨肉腫、上皮性卵巣癌、急性リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性新生物、および肉腫を含み得る。
【０２３９】
本開示の方法によって処置することができるがん細胞には、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、結腸、食道、胃腸、歯肉、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頚部、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌、または子宮由来の細胞が含まれる。さらに、がんは、限定されないが、特に、以下の組織型のものであり得る：新生物、悪性腫瘍；癌腫；未分化癌；巨大および紡錘細胞癌；小細胞癌；乳頭癌；扁平上皮癌；リンパ上皮癌；基底細胞癌；毛母癌；移行上皮癌；乳頭状移行上皮癌；腺癌；悪性ガストリノーマ；胆管癌；肝細胞癌；胆管癌合併肝細胞癌；小柱腺癌；腺様嚢胞癌；腺腫性ポリープの腺癌；家族性大腸ポリポーシス腺癌；固形癌；悪性カルチノイド腫瘍；細気管支肺胞腺癌（branchiolo-alveolar adenocarcinoma）；乳頭腺癌；嫌色素性癌；好酸球癌；好酸性腺癌（oxyphilicadenocarcinoma）；好塩基球癌；明細胞腺癌；顆粒細胞癌；濾胞状腺癌；乳頭状および濾胞状腺癌；非被包性硬化性癌；副腎皮質癌；子宮内膜癌（endometroidcarcinoma）；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；皮脂腺腺癌；耳垢腺癌；粘表皮癌；嚢胞腺癌；乳頭状嚢胞腺癌；乳頭状漿液性嚢胞腺癌；粘液性嚢胞腺癌；粘液性腺癌；印環細胞癌；浸潤性腺管癌；髄様癌；小葉癌；炎症性癌；乳房パジェット病；腺房細胞癌；腺扁平上皮癌；扁平上皮化生を伴う腺癌；悪性胸腺腫；悪性卵巣間質腫瘍；悪性莢膜細胞腫；悪性顆粒膜細胞腫瘍；悪性アンドロブラストーマ；セルトリ細胞癌；悪性ライディッヒ細胞腫瘍；悪性脂質細胞腫瘍；悪性傍神経節腫；悪性乳房外傍神経節腫；褐色細胞腫；糸球体肉腫；悪性黒色腫；メラニン欠乏性黒色腫；表在性黒色腫；巨大な色素性母斑の悪性黒色腫；類上皮細胞黒色腫；悪性青色母斑；肉腫；線維肉腫；悪性線維性組織球腫；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；肺胞横紋筋肉腫；間質肉腫；混合腫瘍、悪性；ミュラー混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；癌肉腫；悪性間葉腫；悪性ブレナー腫瘍；悪性葉状腫瘍；滑膜肉腫；悪性中皮腫；胚盤腫；胎児性癌種；悪性奇形腫；悪性卵巣甲状腺腫；絨毛癌；悪性中腎腫；血管肉腫；悪性血管内皮腫；カポジ肉腫；悪性血管周囲細胞腫；リンパ管肉腫；骨肉腫；皮質傍骨肉腫；軟骨肉腫；悪性軟骨芽細胞腫；間葉性軟骨肉腫；骨巨細胞腫；ユーイング肉腫；悪性歯原性腫瘍；エナメル上皮性歯肉腫；悪性エナメル上皮腫；エナメル上皮性線維肉腫；悪性松果体腫；脊索腫；悪性神経膠腫；上衣腫；星細胞腫；原形質星細胞腫；原線維性星細胞腫；星状芽細胞腫；神経膠芽腫；乏突起神経膠腫；乏突起膠芽腫；原始神経外胚葉；小脳肉腫；神経節芽細胞腫；神経芽細胞腫；網膜芽細胞腫；嗅覚神経性腫瘍；悪性髄膜腫；神経線維肉腫；悪性神経鞘腫；悪性顆粒細胞腫瘍；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキン；傍肉芽腫；小リンパ球性悪性リンパ腫；びまん性大細胞型悪性リンパ腫；濾胞性悪性リンパ腫；菌状息肉腫；他の特定の非ホジキンリンパ腫；悪性組織球症；多発性骨髄腫；マスト細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病；リンパ性白血病；形質細胞白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞白血病；骨髄性白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；マスト細胞白血病；巨核芽球性白血病；骨髄性肉腫；および有毛細胞白血病。一部の場合では、転移性であ���固形がんは、全身送達に有利である改変された腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスを使用して処置され得る。一部の場合では、治療剤の腫瘍内送達を目的とするなど、到達しがたいかまたは到達することが困難である固形がんは、全身送達に有利な改変された腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスを使用して処置され得る。遊離脂肪酸の発現の増加に関連するがんは、一部の例では、全身送達に有利であり、増加量のＥＥＶを形成する改変された腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスを使用して処置され得る。
【０２４０】
この開示はまた、任意のタイプの原発性がんの局所浸潤性もしくは転移、またはその両方を阻害または防止するための方法を企図する。例えば、原発性がんは、黒色腫、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺がん、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、星細胞腫、神経膠芽腫、歯肉がん、舌がん、白血病、神経芽細胞腫、頭部がん、頚部がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、腎臓がん、骨がん、精巣がん、卵巣がん、中皮腫、子宮頸がん、消化器がん、リンパ腫、脳がん、結腸がん、または膀胱がんであり得る。ある特定の実施形態では、原発性がんは、肺がんであり得る。例えば、肺がんは、非小細胞肺癌であり得る。さらに、この開示は、がんを防止するため、または化生、異形成、および過形成を含む前がんまたは前悪性細胞を処置するために使用することができる。それはまた、扁平上皮化生、異形成、良性前立腺過形成細胞、過形成病変などのような望ましくないが良性の細胞を阻害するために使用され得る。一部の実施形態では、がんまたはより重篤な形態のがんへの進行は、本明細書において考察されるような改変された腫瘍溶解性ウイルスを含む本開示の方法によって、停止、破壊、または遅延され得る。
【０２４１】
さらに、本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍微小環境における遊離脂肪酸の高い生物学的利用能を有する腫瘍の処置のために投与することができる。一部の場合では、肥満患者の腫瘍における脂肪細胞によって放出される遊離脂肪酸は、腫瘍内の改変された腫瘍溶解性ウイルスの複製およびＥＥＶ型のウイルスの形成を供給し、増強することができる。この利点はまた、非肥満患者、特に腹膜がんを有する患者において実現することができる。例えば、いくつかの腹膜がんは、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスを使用した治療の標的となり得る。これは、これらが大網壁において成長する傾向にあり、脂肪細胞によって供給され、上述のように、腫瘍において脂肪細胞によって放出された遊離脂肪酸が、腫瘍内で改変された腫瘍溶解性ウイルスを供給し、およびその複製を増強することができるためである。本明細書に開示される改変された腫瘍溶解性ウイルスは、遊離脂肪酸の高い生物学的利用能を有する腫瘍において細胞外エンベロープウイルス（ＥＥＶ）の力価の増加を形成することができる。
処置方法および有効性と薬物動態をアッセイする方法
【０２４２】
この開示は、本明細書に開示されるように、１つまたは複数の改変された腫瘍溶解性ウイルスの投与によって対象を処置する方法を提供する。本明細書で互換的に使用される場合、「個体」または「対象」は、ヒトまたは非ヒト対象を指す。非ヒト対象の非限定的な例としては、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ブタ、家禽、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、クジラなどが挙げられる。一部の実施形態では、対象はヒトである。
【０２４３】
上記の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変されたウイルス、またはそれを含有する医薬組成物の治療有効量をがん細胞に投与するステップを含む、がん細胞において毒性作用を生じさせる方法が提供される。本開示は、第１のがん細胞が改変された腫瘍溶解性ウイルスに感染するように、上に記載したとおり前記ウイルスを第１のがん細胞に投与するステップを含む、第２のがん細胞の成長および増殖のうちの少なくとも１つを阻害する方法をさらに提供する。したがって、本明細書に開示される方法の一部の実施形態では、本明細書に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、またはそれを含有する医薬組成物の治療有効量を投与すると、すべてのがんや腫瘍細胞が感染するわけではなく、非感染細胞の成長が直接感染することなく阻害される得ることが企図される。
【０２４４】
一部の例では、本開示の方法および組成物を使用して、腫瘍溶解を誘導し、細胞を死滅させ、成長を阻害し、転移を阻害し、腫瘍サイズを減少させ、および他の方法で腫瘍細胞の悪性表現型を逆転または低下させるために、がん細胞または腫瘍は、本明細書に記載される例示的な腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、またはそれを含有する医薬組成物の治療的有効量と接触させることができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはその医薬組成物などの本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスの有効量は、がん細胞の腫瘍溶解、破壊もしくは溶解、またはがん細胞の成長もしくはサイズの阻害もしくは低下を誘導するのに十分な量を含むことができる。がん細胞の成長の低下は、例えば、細胞死、または細胞を含む腫瘍のより遅い複製速度もしくは低下した成長速度、またはがん細胞を含有する対象の延長された生存によって明らかにされ得る。
【０２４５】
一部の実施形態では、がんまたは腫瘍を有する対象を処置する方法であって、上記のように、対象に有効量の改変されたウイルスを投与するステップを含む、方法が提供される。このような方法における有効量は、がんの成長速度もしくは拡散を低下させるか、または対象における生存を延長する量を含み得る。本開示は、腫瘍の成長を低下させる方法を提供し、この方法は、腫瘍に、上記の改変された腫瘍溶解性ウイルスの有効量を投与するステップを含み得る。ある特定の実施形態では、有効量の改変されたウイルスまたはその医薬組成物は、腫瘍の成長またはサイズの遅延、阻害または低下を誘導するのに十分な量を含むことができ、腫瘍の根絶を含むことができる。腫瘍成長の低下は、例えば、腫瘍の成長速度の低下または腫瘍を含有する対象の生存の延長によって明らかにされ得る。
【０２４６】
本開示はまた、本明細書に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの感染力もしくは抗腫瘍活性、または腫瘍特異的ウイルス複製の量を決定する方法を提供し、この方法は、（ｉ）ルシフェラーゼレポーター遺伝子をさらに発現する本開示による腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物の治療的有効量を、単独でまたはさらなる療法と組み合わせて対象に投与するステップ、（ｉｉ）ウイルスを投与した直後に対象から第１の生体試料を収集し、第１の生体試料中のルシフェラーゼレポーターのレベルを決定するステップ、（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）における投与後、対象から第２の生体試料を収集するステップ、ならびに（ｉｉｉ）第２の生体試料中のルシフェラーゼレポーターのレベルを検出するステップを含むことができ、ルシフェラーゼのレベルがステップ（ｉｉ）よりもステップ（ｉｉｉ）において高い場合、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスが感染性であり、抗腫瘍活性を実証し、腫瘍特異的ウイルス複製を示すと決定される。第２の生体試料は、ステップ（ｉ）における投与の約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１５時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約７２時間、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１か月から約２か月後に収集される。一部の実施形態では、上述される方法は、ステップ（ｉ）および（ｉｉｉ）において、例えば、本明細書に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含む医薬組成物などの、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスの治療有効量を対象に投与した後に前記対象から収集された血漿試料中のアッセイするサイトカイン、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３のうちの１つまたは複数のレベルを検出することをさらに含み得る。本開示の一部の実施形態では、上述されるステップ（ｉｉ）と（ｉｖ）との間のルシフェラーゼ生物発光の増加は、改変された腫瘍溶解性ウイルスにおいて改変を含まないウイルスであって、他の点では同一であるウイルスのものと比較して、本明細書に記載される改変された腫瘍溶解性ウイルスについてより高い。改変された腫瘍溶解性ウイルスの投与後のウイルス量を検出およびモニタリングするための他の例示的な技術には、リアルタイム定量的ＰＣＲが含まれる。
【０２４７】
本明細書に記載されるように、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそのワクシニアウイルスを含有する医薬組成物などの、本開示による治療有効量の改変された腫瘍溶解性ウイルスの投与後の薬物動態をモニタリングする方法がさらに提供される。薬物動態をモニタリングするための例示的な方法は、以下：（ｉ）腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含む医薬組成物の治療有効量を、単独でまたはさらなる療法と組み合わせて対象に投与するステップ、（ｉｉ）ステップ（ｉ）における投与後の約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、約７５分、約９０分、約１２０分、約１８０分、および約２４０分、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１５時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約７２時間、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１か月から約２か月までの選択された１つまたは複数の時点で対象から生体試料を収集するステップ、および（ｉｉｉ）上述された時点で収集された生体試料中のウイルスゲノム（またはルシフェラーゼなどのウイルスゲノム内に挿入されたレポーター遺伝子）の量を検出するステップを含むことができる。一部の場合では、ウイルスゲノムのコピー／ｍＬは、１５分の時点で収集された試料において最も高いものであり得、さらに、２４０分の時点で収集された試料は、検出可能な量のウイルスゲノムを含有しない場合がある。したがって、一部の場合では、ウイルスピークは、投与後の約１５分で観察され、ウイルスの大部分は、約２４０分（または４時間）後に対象の系から取り除かれ得る。一部の場合では、投与した後の約１５分後に第１のウイルスピークが観察され、第２のウイルスピークは、その後の時点、例えば、約３０分、約４５分、約６０分、または約９０分で収集された生体試料において観察することができる。生体試料は、例示的な実施形態では、血液であり得、ウイルスゲノム／ｍＬの量は、定量的ＰＣＲまたは他の適切な技術によって決定され得る。一部の例では、第１のウイルスピークは、投与した後の約１５分後に観察することができ、第２のウイルスピークは、本明細書に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスを投与した後の約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間後、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１５時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約７２時間、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１か月後から約２か月後に観察することができる。
【０２４８】
一部の場合では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変されたウイルスの腫瘍選択的複製は、ルシフェラーゼ遺伝子などのレポーター遺伝子の使用を介して測定することができる。一部の実施形態では、ルシフェラーゼ遺伝子をウイルスのゲノムに挿入することができ、腫瘍細胞をウイルスに感染させることができる。感染した腫瘍細胞の生物発光を測定して、腫瘍選択的複製をモニタリングすることができる。一部の例は、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスにおけるルシフェラーゼレポーター生物発光の増加を、改変された腫瘍溶解性ウイルスにおいて改変を含まない腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、他の点では同一である腫瘍溶解性ワクシニアウイルスにおけるものと比較して示す。
改変された腫瘍溶解性ウイルスの送達
【０２４９】
一部の実施形態では、対象に投与される本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの量は、約１０３〜１０１２の感染性ウイルス粒子もしくはプラーク形成単位（ＰＦＵ）、または約１０５〜１０１０ＰＦＵ、または約１０５〜１０８ＰＦＵ、または約１０８〜１０１０ＰＦＵであり得る。一部の実施形態では、対象に投与される本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの量は、約１０３〜１０１２のウイルス粒子もしくはプラーク形成単位（ＰＦＵ）、または約１０５〜１０１０ＰＦＵ、または約１０５〜１０８ＰＦＵ、または約１０８〜１０１０ＰＦＵであり得る。一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、約１０３ＰＦＵ／用量〜約１０４ＰＦＵ／用量、約１０４ＰＦＵ／用量〜約１０５ＰＦＵ／用量、約１０５ＰＦＵ／用量〜約１０６ＰＦＵ／用量、約１０７ＰＦＵ／用量〜約１０８ＰＦＵ／用量、約１０９ＰＦＵ／用量〜約１０１０ＰＦＵ／用量、約１０１０ＰＦＵ／用量〜約１０１１ＰＦＵ／用量、約１０１１ＰＦＵ／用量〜約１０１２ＰＦＵ／用量、約１０１２ＰＦＵ／用量〜約１０１３ＰＦＵ／用量、約１０１３ＰＦＵ／用量〜約１０１４ＰＦＵ／用量、または約１０１４ＰＦＵ／用量〜約１０１５ＰＦＵ／用量を含み得る用量で投与することができる。一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、約２×１０３ＰＦＵ／用量、３×１０３ＰＦＵ／用量、４×１０３ＰＦＵ／用量、５×１０３ＰＦＵ／用量、６×１０３ＰＦＵ／用量、７×１０３ＰＦＵ／用量、８×１０３ＰＦＵ／用量、９×１０３ＰＦＵ／用量、約１０４ＰＦＵ／用量、約２×１０４ＰＦＵ／用量、約３×１０４ＰＦＵ／用量、約４×１０４ＰＦＵ／用量、約５×１０４ＰＦＵ／用量、約６×１０４ＰＦＵ／用量、約７×１０４ＰＦＵ／用量、約８×１０４ＰＦＵ／用量、約９×１０４ＰＦＵ／用量、約１０５ＰＦＵ／用量、２×１０５ＰＦＵ／用量、３×１０５ＰＦＵ／用量、４×１０５ＰＦＵ／用量、５×１０５ＰＦＵ／用量、６×１０５ＰＦＵ／用量、７×１０５ＰＦＵ／用量、８×１０５ＰＦＵ／用量、９×１０５ＰＦＵ／用量、約１０６ＰＦＵ／用量、約２×１０６ＰＦＵ／用量、約３×１０６ＰＦＵ／用量、約４×１０６ＰＦＵ／用量、約５×１０６ＰＦＵ／用量、約６×１０６ＰＦＵ／用量、約７×１０６ＰＦＵ／用量、約８×１０６ＰＦＵ／用量、約９×１０６ＰＦＵ／用量、約１０７ＰＦＵ／用量、約２×１０７ＰＦＵ／用量、約３×１０７ＰＦＵ／用量、約４×１０７ＰＦＵ／用量、約５×１０７ＰＦＵ／用量、約６×１０７ＰＦＵ／用量、約７×１０７ＰＦＵ／用量、約８×１０７ＰＦＵ／用量、約９×１０７ＰＦＵ／用量、約１０８ＰＦＵ／用量、約２×１０８ＰＦＵ／用量、約３×１０８ＰＦＵ／用量、約４×１０８ＰＦＵ／用量、約５×１０８ＰＦＵ／用量、約６×１０８ＰＦＵ／用量、約７×１０８ＰＦＵ／用量、約８×１０８ＰＦＵ／用量、約９×１０８ＰＦＵ／用量、約１０９ＰＦＵ／用量、約２×１０９ＰＦＵ／用量、約３×１０９ＰＦＵ／用量、約４×１０９ＰＦＵ／用量、約５×１０９ＰＦＵ／用量、約６×１０９ＰＦＵ／用量、約７×１０９ＰＦＵ／用量、約８×１０９ＰＦＵ／用量、約９×１０９ＰＦＵ／用量、約１０１０ＰＦＵ／用量、約２×１０１０ＰＦＵ／用量、約３×１０１０ＰＦＵ／用量、約４×１０１０ＰＦＵ／用量、約５×１０１０ＰＦＵ／用量、約６×１０１０ＰＦＵ／用量、約７×１０１０ＰＦＵ／用量、約８×１０１０ＰＦＵ／用量、約９×１０１０ＰＦＵ／用量、約１０１０ＰＦＵ／用量、約２×１０１０ＰＦＵ／用量、約３×１０１０ＰＦＵ／用量、約４×１０１０ＰＦＵ／用量、約５×１０１０ＰＦＵ／用量、約６×１０１０ＰＦＵ／用量、約７×１０１０ＰＦＵ／用量、約８×１０１０ＰＦＵ／用量、約９×１０１０ＰＦＵ／用量、約１０１１ＰＦＵ／用量、約２×１０１１ＰＦＵ／用量、約３×１０１１ＰＦＵ／用量、約４×１０１１ＰＦＵ／用量、約５×１０１１ＰＦＵ／用量、約６×１０１１ＰＦＵ／用量、約７×１０１１ＰＦＵ／用量、約８×１０１１ＰＦＵ／用量、約９×１０１１ＰＦＵ／用量、または約１０１２ＰＦＵ／用量、約１０１２ＰＦＵ／用量〜約１０１３ＰＦＵ／用量、約１０１３ＰＦＵ／用量〜約１０１４ＰＦＵ／用量、または約１０１４ＰＦＵ／用量〜約１０１５ＰＦＵ／用量を含み得る用量で投与することができる。一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、５×１０９ＰＦＵ／用量を含み得る用量で投与することができる。一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、最大５×１０９ＰＦＵ／用量を含み得る用量で投与することができる。
【０２５０】
一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、約１０３ウイルス粒子／用量〜約１０４ウイルス粒子／用量、約１０４ウイルス粒子／用量〜約１０５ウイルス粒子／用量、約１０５ウイルス粒子／用量〜約１０６ウイルス粒子／用量、約１０７ウイルス粒子／用量〜約１０８ウイルス粒子／用量、約１０９ウイルス粒子／用量〜約１０１０ウイルス粒子／用量、約１０１０ウイルス粒子／用量〜約１０１１ウイルス粒子／用量、約１０１１ウイルス粒子／用量〜約１０１２ウイルス粒子／用量、約１０１２ウイルス粒子／用量〜約１０１３ウイルス粒子／用量、約１０１３ウイルス粒子／用量〜約１０１４ウイルス粒子／用量、または約１０１４ウイルス粒子／用量〜約１０１５ウイルス粒子／用量を含み得る用量で投与することができる。
【０２５１】
一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスは、約１０３ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約１０４ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０５ＰＦＵ／ｋｇ、約１０５ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約１０７ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約１０９ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１０ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１１ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１２ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１２ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１３ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１３ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１４ＰＦＵ／ｋｇ、または約１０１４ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１５ＰＦＵ／ｋｇを含み得る用量で投与することができる。一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、約２×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、約１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約１０５ＰＦＵ／ｋｇ、２×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、約１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０１��ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、または約１０１２ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１２ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１３ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１３ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１４ＰＦＵ／ｋｇ、または約１０１４ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１５ＰＦＵ／ｋｇを含み得る用量で投与することができる。一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、５×１０９ＰＦＵ／ｋｇを含み得る用量で投与することができる。一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、最大５×１０９ＰＦＵ／ｋｇを含み得る用量で投与することができる。
【０２５２】
一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスは、約１０３ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０４ウイルス粒子／ｋｇ、約１０４ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０５ウイルス粒子／ｋｇ、約１０５ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０６ウイルス粒子／ｋｇ、約１０７ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０８ウイルス粒子／ｋｇ、約１０９ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０１０ウイルス粒子／ｋｇ、約１０１０ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０１１ウイルス粒子／ｋｇ、約１０１１ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０１２ウイルス粒子／ｋｇ、約１０１２ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０１３ウイルス粒子／ｋｇ、約１０１３ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０１４ウイルス粒子／ｋｇ、または約１０１４ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０１５ウイルス粒子／ｋｇを含み得る用量で投与することができる。
【０２５３】
本明細書に記載した腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの液体剤形は、ある特定の実施形態では、約１０３ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約１０４ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０５ＰＦＵ／ｍＬ、約１０５ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約１０７ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約１０９ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１０ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１１ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１２ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１２ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１３ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１３ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１４ＰＦＵ／ｍＬ、または約１０１４ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１５ＰＦＵ／ｍＬのウイルス用量を含むことができる。一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、約２×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、約１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約１０５ＰＦＵ／ｍＬ、２×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、約１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０１１ＰＦＵ���ｍＬ、約３×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、または約１０１２ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１２ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１３ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１３ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１４ＰＦＵ／ｍＬ、または約１０１４ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１５ＰＦＵ／ｍＬを含み得る用量で投与することができる。一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、５×１０９ＰＦＵ／ｍＬを含み得る用量で投与することができる。一部の実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、最大５×１０９ＰＦＵ／ｍＬを含み得る用量で投与することができる。
【０２５４】
一部の例では、改変された腫瘍溶解性ウイルスが注射によって投与される場合、投与量は、注射あたり約１０３ウイルス粒子、注射あたり１０４ウイルス粒子、注射あたり１０５ウイルス粒子、注射あたり１０６ウイルス粒子、注射あたり１０７ウイルス粒子、注射あたり１０８ウイルス粒子、注射あたり１０９ウイルス粒子、注射あたり１０１０ウイルス粒子、注射あたり１０１１ウイルス粒子、注射あたり１０１２ウイルス粒子、注射あたりの２×１０１２ウイルス粒子、注射あたり１０１３ウイルス粒子、注射あたり１０１４ウイルス粒子または注射あたり１０１５ウイルス粒子を含むことができる。さらなる例では、改変された腫瘍溶解性ウイルスが注射によって投与される場合、用量は、注射あたり約１０３感染性ウイルス粒子、注射あたり１０４感染性ウイルス粒子、注射あたり１０５感染性ウイルス粒子、注射あたり１０６感染性ウイルス粒子、注射あたり１０７感染性ウイルス粒子、注射あたり１０８感染性ウイルス粒子、注射あたり１０９感染性ウイルス粒子、注射あたり１０１０感染性ウイルス粒子、注射あたり１０１１感染性ウイルス粒子、注射あたり１０１２感染性ウイルス粒子、注射あたり２×１０１２感染性ウイルス粒子、注射あたり１０１３感染性ウイルス粒子、注射あたり１０１４感染性ウイルス粒子または注射あたり１０１５感染性ウイルス粒子を含むことができる。さらなる実施形態では、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスは、約１０３５０％組織培養感染量（Tissue Culture Inhibitor Dose 50%）（ＴＣＩＤ５０）／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、３×１０８ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、４×１０８ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、５×１０８ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、３×１０９ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、４×１０９ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、５×１０９ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、３×１０１０ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、４×１０１０ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、または４×１０１０ＴＣＩＤ５０／ｋｇであり得る用量で投与することができる。本明細書では、１０ｘが１ｅＸと代替的に表されていることに留意されたい。ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、１または複数の用量で投与することができる。ある特定の実施形態では、ウイルスは、腫瘍中の少なくとも約２０％の細胞で、腫瘍中の少なくとも約３０％の細胞で、腫瘍中の少なくとも約４０％の細胞で、腫瘍中の少なくとも約５０％の細胞で、腫瘍中の少なくとも約６０％の細胞で、腫瘍中の少なくとも約７０％の細胞で、腫瘍中の少なくとも約８０％の細胞で、または腫瘍中の少なくとも約９０％の細胞で腫瘍崩壊を誘導するのに十分な量で投与することができる。ある特定の実施形態では、ウイルスの単回用量は、１、２、５、１０、１５、２０、または２４時間の期間にわたり対象または腫瘍に投与される量を指すことができる。ある特定の実施形態では、用量は、長い時間をかけて、または別々に注射により拡散させることがで��る。ある特定の実施形態では、例えば、第２の処置を第１の処置の１、２、３、４、５、６、７日または数週間以内に行うことができる場合、ワクシニアウイルスの複数回用量（例えば２、３、４、５、６またはそれより多い用量）を対象に投与することができる。ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスの複数回用量は、１、２、３、４、５、６、７日もしくはそれより多い日数、または数週間の期間にわたり対象に投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物は、約１週間〜約２週間、約２週間〜約３週間、約３週間〜約４週間、約４週間〜約５週間、約６週間〜約７週間、約７週間〜約８週間、約８週間〜約９週間、約９週間〜約１０週間、約１０週間〜約１１週間、約１１週間〜約１２週間、約１２週間〜約２４週間、約２４週間〜約４８週間、約４８週間または約５２週間、あるいはそれより長い期間投与することができる。本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物の投与頻度は、ある特定の例では、毎日１回、毎日２回、１週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回（または月に１回）、８週間毎に１回（または２か月毎に１回）、１２週間毎に１回（または３か月毎に１回）、または２４週間毎に１回（６か月毎に１回）であり得る。本明細書に開示した方法の一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物は、独立して、第１の期間の初期用量、第２の期間の中間用量、および第３の期間の高用量で投与することができる。一部の実施形態では、初期用量は中間用量より低く、中間用量は高用量より低い。一部の実施形態では、第１の期間、第２の期間および第３の期間は、独立して、約１週間〜約２週間、約２週間〜約３週間、約３週間〜約４週間、約４週間〜約５週間、約６週間〜約７週間、約７週間〜約８週間、約８週間〜約９週間、約９週間〜約１０週間、約１０週間〜約１１週間、約１１週間〜約１２週間、約１２週間〜約２４週間、約２４週間〜約４８週間、約４８週間もしくは約５２週間、またはそれより長い期間である。
【０２５５】
一部の実施例では、対象には、本明細書に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含む医薬組成物を投与する前に、それと併せて、およびその後に、本明細書に記載した処置方法のうちのいずれかに従って、炭水化物低減食、例えばケトジェニック食を与えることができる。ある特定の実施形態では、対象には、１日あたり５００グラム未満の炭水化物、１日あたり４５０グラム未満の炭水化物、１日あたり４５０グラム未満の炭水化物、１日あたり４００グラム未満の炭水化物、１日あたり３５０グラム未満の炭水化物、１日あたり３００グラム未満の炭水化物、１日あたり２５０グラム未満の炭水化物、１日あたり２００グラム未満の炭水化物、１日あたり１５０グラム未満の炭水化物、１日あたり１００グラム未満の炭水化物、１日あたり９０グラム未満の炭水化物、１日あたりの８０グラム未満の炭水化物、１日あたり７０グラム未満の炭水化物、１日あたり６０グラム未満の炭水化物、１日あたり５０グラム未満の炭水化物、１日あたり４０グラム未満の炭水化物、１日あたり３０グラム未満の炭水化物、１日あたり２０グラム未満の炭水化物、１日あたり１０グラム未満の炭水化物を消費することを含むことができる食事を与える。
【０２５６】
本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含む医薬組成物を、がんまたは腫瘍細胞に送達するための例示的な方法は、腫瘍内注射によることができる。しかし、投与の代替方法、例えば、静脈内、注入により、非経口、静脈内、皮内、筋肉内、経皮、直腸、尿道内、膣内、鼻腔内、髄腔内、または腹腔内も使用することができる。投与経路は、腫瘍の位置および性質に応じて変わり得る。ある特定の実施形態では、投与経路は、歯内（intradental）、経皮、非経口、静脈内、筋肉内、鼻腔内、皮下、局所的（例えば、腫瘍の近傍、特に腫瘍の脈管構造または腫瘍に隣接した脈管構造）、経皮的、髄腔内、気管内、腹腔内、動脈内、膀胱内、腫瘍内、吸入、灌流、洗浄（lavage）により、または経口であり得る。腫瘍溶解性ウイルスの注射可能な用量は、ボーラス注射または緩徐注入として投与することができる。ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、患者に埋め込まれた供給源から患者に投与することができる。ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスの投与は、選択された期間にわたって持続注入によって行うことができる。一部の例では、本明細書に記載した腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、またはそれを含有する医薬組成物は、約１５分、約３０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約７５分、約９０分、約１００分、もしくは約１２０分またはそれより長い期間にわたる注入により治療有効用量で投与することができる。本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物は、液体剤形として投与することができ、投与の総体積は、約１ｍＬ〜約５ｍＬ、約５ｍＬ〜１０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約２０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約１００ｍＬ〜１５０ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約４５０ｍＬ〜５００ｍＬ、約５００ｍＬ〜７５０ｍＬ、または約７５０ｍＬ〜１０００ｍＬである。
医薬組成物
【０２５７】
本明細書に記載の改変ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含有する医薬組成物は、液剤、グリセロール、液体ポリエチレングリコール中の分散剤、および油中のそれらの任意の組み合わせとして、固体剤形に、吸入可能な剤形として、鼻腔内剤形として、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、微粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはその任意の組み合わせとして調製することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、安定化剤およびバッファを含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、可溶化剤、例えば滅菌水、トリスバッファを含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤を含むことができる。賦形剤は、Handbook of Pharmaceutical Excipients, American PharmaceuticalAssociation (1986)に記載されている賦形剤であり得る。適切な賦形剤の非限定的な例としては、緩衝剤、防腐剤、安定化剤、結合剤、圧縮剤、滑沢剤、キレート剤、分散促進剤、崩壊剤、着香剤、甘味剤、着色剤を挙げることができる。
【０２５８】
一部の実施形態では、賦形剤は緩衝剤であり得る。適切な緩衝剤の非限定的な例としては、クエン酸ナトリウム、炭酸マグネシウム、重炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、および重炭酸カルシウムを挙げることができる。緩衝剤として、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、水酸化マグネシウム、乳酸マグネシウム、グルコン酸マグネシウム、水酸化アルミニウム、クエン酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、ポリリン酸カリウム、ピロリン酸ナトリウム、ピロリン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸三カリウム、メタリン酸カリウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、酢酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、塩化カルシウム、水酸化カルシウム、および他のカルシウム塩またはこれらの組み合わせを医薬製剤において使用することができる。
【０２５９】
一部の実施形態では、賦形剤は防腐剤を含むことができる。適切な防腐剤の非限定的な例としては、抗酸化剤、例えばアルファ−トコフェロールおよびアスコルベート、ならびに抗菌剤、例えばパラベン、クロロブタノールおよびフェノールを挙げることができる。抗酸化剤としては、限定するものではないが、ＥＤＴＡ、クエン酸、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、亜硫酸ナトリウム、ｐ−アミノ安息香酸、グルタチオン、没食子酸プロピル、システイン、メチオニン、エタノールおよびＮ−アセチルシステインをさらに挙げることができる。一部の例では、防腐剤は、バリダマイシンＡ、ＴＬ−３、オルトバナジン酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、Ｎ−ａ−トシル−Ｐｈｅ−クロロメチルケトン、Ｎ−ａ−トシル−Ｌｙｓ−クロロメチルケトン、アプロチニン、フェニルメチルスルホニルフルオリド、ジイソプロピルフルオロホスフェート、キナーゼ阻害剤、ホスファターゼ阻害剤、カスパーゼ阻害剤、グランザイム阻害剤、細胞接着阻害剤、細胞分裂阻害剤、細胞周期阻害剤、脂質シグナル伝達阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、還元剤、アルキル化剤、抗菌剤、オキシダーゼ阻害剤、または他の阻害剤を含むことができる。
【０２６０】
一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤として結合剤を含むことができる。適切な結合剤の非限定的な例としては、デンプン、アルファ化デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、ポリアクリルアミド、ポリビニルオキソアゾリドン（polyvinyloxoazolidone）、ポリビニルアルコール、Ｃ１２〜Ｃ１８脂肪酸アルコール、ポリエチレングリコール、ポリオール、サッカライド、オリゴサッカライド、およびこれらの組み合わせを挙げることができる。医薬製剤において使用することができる結合剤は、デンプン、例えばジャガイモデンプン、トウモロコシデンプン、小麦デンプン；糖、例えばスクロース、グルコース、デキストロース、ラクトース、マルトデキストリン；天然ガムおよび合成ガム；ゼラチン；セルロース誘導体、例えば微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース；ポリビニルピロリドン（ポビドン）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ワックス；炭酸カルシウム；リン酸カルシウム；アルコール、例えばソルビトール、キシリトール、マンニトール、および水、またはこれらの組み合わせから選択することができる。
【０２６１】
一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤として滑沢剤を含むことができる。適切な滑沢剤の非限定的な例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、硬化植物油、ステロテックス、ポリオキシエチレンモノステアレート、タルク、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、および軽質鉱物油を挙げることができる。医薬製剤において使用することができる滑沢剤は、ステアリン酸金属塩（例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム）、脂肪酸エステル（例えばフマル酸ステアリルナトリウム）、脂肪酸（例えばステアリン酸）、脂肪族アルコール、ベヘン酸グリセリル、鉱物油、パラフィン、硬化植物油、ロイシン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、金属ラウリル硫酸塩（例えばラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム）、塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、およびタルク、またはこれらの組み合わせから選択することができる。一部の実施形態では、医薬製剤は、分散促進剤を賦形剤として含むことができる。適切な分散剤の非限定的な例としては、デンプン、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、グアーガム、カオリン、ベントナイト、精製木材セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、イソアモルファスシリケート、および微結晶性セルロースが高ＨＬＢ乳化剤界面活性剤として挙げることができる。
【０２６２】
一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、崩壊剤を賦形剤として含むことができる。一部の実施形態では、崩壊剤は非発泡性崩壊剤であり得る。適切な非発泡性崩壊剤の非限定的な例には、デンプン、例えばトウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、これらのアルファ化デンプンおよび加工デンプン、甘味剤、クレー、例えばベントナイト、微結晶性セルロース、アルギネート、デンプングリコール酸ナトリウム、ガム、例えば寒天、グアー、ローカストビーン、カラヤ、ペクチン、およびトラガカントを挙げることができる。一部の実施形態では、崩壊剤は、発泡性崩壊剤であり得る。適切な発泡性崩壊剤の非限定的な例としては、クエン酸と組み合わせた重炭酸ナトリウム、および酒石酸と組み合わせた重炭酸ナトリウムを挙げることができる。
【０２６３】
一部の実施形態では、賦形剤は、着香剤を含むことができる。外側層に組み込まれる着香剤は、香味油および香味芳香剤；天然油；植物、葉、花および果物からの抽出物；およびこれらの組み合わせから選択することができる。一部の実施形態では、着香剤は、桂皮油；ウインターグリーン油；ハッカ油；クローバー油；ヘイオイル（hay oil）；アニス油；ユーカリ；バニラ；レモン油、オレンジ油、ブドウおよびグレープフルーツ油などの柑橘油；ならびにリンゴ、モモ、洋ナシ、イチゴ、ラズベリー、チェリー、プラム、パイナップル、およびアプリコットなどのフルーツエッセンスからなる群から選択することができる。
【０２６４】
一部の実施形態では、賦形剤は甘味剤を含むことができる。適切な甘味剤の非限定的な例としては、グルコース（コーンシロップ）、デキストロース、転化糖、果糖、およびこれらの混合物（担体として使用されない場合）；サッカリンおよびナトリウム塩などのその各種塩；アスパルテームなどのジペプチド甘味剤；ジヒドロカルコン化合物、グリチルリチン（glycyrrhizin）；Ｓｔｅｖｉａ  Ｒｅｂａｕｄｉａｎａ（ステビオシド）；スクラロースなどのスクロースのクロロ誘導体；ならびにソルビトール、マンニトール、キシリトール（sylitol）などの糖アルコールを挙げることができる。
【０２６５】
一部の例では、本明細書に記載の医薬組成物は着色剤を含むことができる。適切な着色剤の非限定的な例としては、食品、薬物および化粧品の着色剤（ＦＤ＆Ｃ）、薬物および化粧品の着色剤（Ｄ＆Ｃ）、および外部薬物および化粧品の着色剤（Ｅｘｔ．  Ｄ＆Ｃ）を挙げることができる。着色剤は、色素またはこれらの対応するレーキとして使用することができる。
【０２６６】
一部の例では、本明細書に記載の医薬組成物はキレート剤を含むことができる。一部の事例では、キレート剤は殺真菌性キレート剤であり得る。例としては、限定するものではないが、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＤＴＡ）；ＥＤＴＡの二ナトリウム、三ナトリウム、四ナトリウム、二カリウム、三カリウム、二リチウムおよび二アンモニウム塩；ＥＤＴＡのバリウム、カルシウム、コバルト、銅、ジスプロシウム、ユーロピウム、鉄、インジウム、ランタン、マグネシウム、マンガン、ニッケル、サマリウム、ストロンチウム、または亜鉛キレート；トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸一水和物；Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン；１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；１，３−ジアミノプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二酢酸；エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジプロピオン酸二塩酸塩；エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（メチレンホスホン酸）半水和物；Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸；エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（メチレンホスホン酸）；Ｏ，Ｏ’−ビス（２−アミノエチル）エチレングリコール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ−二酢酸；１，６−ヘキサメチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸；イミノ二酢酸；１，２−ジアミノプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；ニトリロ三酢酸；ニトリロトリプロピオン酸；ニトリロトリス（メチレンホスホン酸（methylenephosphoric acid））の三ナトリウム塩；７，１９，３０−トリオキサ−１，４，１０，１３，１６，２２，２７，３３−オクタアザビシクロ［１１，１１，１１］ペンタトリアコンタンヘキサヒドロブロミド；またはトリエチレンテトラミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’，Ｎ’’’−六酢酸を挙げることができる。
【０２６７】
また、本明細書に開示した１つまたは複数の改変された腫瘍溶解性ウイルスおよび１つまたは複数の他の抗菌剤または抗真菌剤、例えばアムホテリシンＢおよびアムホテリシンＢ脂質複合体（ＡＢＣＤ）、リポソーム性アムホテリシンＢ（Ｌ−ＡＭＢ）などのポリエン、ならびにリポソームナイスタチン、アゾールおよびトリアゾール、例えばボリコナゾール、フルコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、ポザコナゾールなど；カスポファンギン、ミカファンギン（ＦＫ４６３）、およびＶ−エキノカンジンなどのグルカンシンターゼ阻害剤（ＬＹ３０３３６６）；グリセオフルビン；テルビナフィンなどのアリルアミン；フルシトシンまたは本明細書に記載されたものを含む他の抗真菌剤を含む組み合わせ製品も企図される。さらに、ペプチドを局所抗真菌剤、例えばシクロピロクスオラミン、ハロプロギン、トルナフテート、ウンデシレン酸塩、局所ナイスタチン、アモロルフィン、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィン、および他の局所剤と組み合わせることができると企図される。一部の例では、医薬組成物は追加の薬剤を含むことができる。一部の事例では、追加の薬剤は医薬組成物に治療有効量で存在することができる。
【０２６８】
通常の保存条件および使用条件下では、本明細書に記載の医薬組成物は、微生物の成長を防止するために防腐剤を含むことができる。ある特定の例では、本明細書に記載の医薬組成物は、防腐剤を含まなくてもよい。注射可能な使用に適している医薬形態は、無菌の注射用液剤または分散剤をすぐに調製するための無菌の水溶液または分散液および無菌の粉末を含むことができる。医薬組成物は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、ならびに／あるいは植物油、またはこれらの任意の組み合わせを含有する溶媒または分散媒である担体を含むことができる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散剤の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらされ得る。多くの事例では、等張剤、例えば糖、塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射可能な組成物の持続型吸収は、吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを配合して使用することによってもたらされ得る。
【０２６９】
水溶液における非経口投与については、例えば、液体剤形は、必要な場合適切に緩衝化することができ、液体希釈剤は、十分な食塩水またはグルコースで等張にされる。液体剤形は、静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内、および腹腔内投与に特に適している。この点について、使用することができる滅菌水性溶媒は、本開示に照らして当業者には公知である。例えば、一投与量は１ｍＬ〜２０ｍＬの等張ＮａＣｌ溶液に溶解し、１００ｍＬ〜１０００ｍＬの液体、例えば重炭酸ナトリウム緩衝食塩水に添加するか、または提案した注入部位で注射することができる。
【０２７０】
ある特定の実施形態では、滅菌注射用液剤は、本開示による改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含有する医薬組成物を、上記で列挙した様々な他の成分を含む適切な溶媒中に必要とされる量で組み込み、要求に応じて、その後濾過滅菌することにより調製することができる。一般に、分散剤は、様々な滅菌活性成分を、基本の分散媒および上記で列挙したものからの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに組み込むことにより調製される。本明細書に開示の組成物は、中性または塩の形態で製剤化され得る。薬学的に許容される塩としては、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基で形成される）を挙げることができ、これは、例えば塩酸もしくはリン酸（phosphoric acid）などの無機酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸と形成される。遊離カルボキシル基と形成される塩はまた、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄などの無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基から誘導することができる。製剤化されると、医薬組成物は、投与製剤と適合する方式で、また治療的に有効である量で投与することができる。
【０２７１】
ある特定の実施形態では、本開示の医薬組成物は、薬学的に許容される担体と組み合わされた、本明細書に開示した有効量の改変ウイルスを含むことができる。「薬学的に許容される」は、本明細書で使用される場合、活性成分の生物活性の有効性を妨げず、および／またはそれが投与される患者に対して毒性がない任意の担体を含む。適切な医薬担体の非限定的な例としては、リン酸緩衝食塩溶液、水、油／水乳剤などの乳剤、様々なタイプの湿潤剤および無菌溶液が挙げられる。薬学的に適合される担体のさらなる非限定的な例としては、ゲル、生体吸着性マトリックス材料、改変された腫瘍溶解性ウイルスまたは他の任意の適切なビヒクルを含有する移植エレメント、送達または分配の手段または材料を挙げることができる。そのような担体は従来の方法によって製剤化することができ、対象に有効量で投与することができる。
産生方法
【０２７２】
本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスは、当業者に公知の方法によって産生することができる。ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスは、適切な宿主細胞、例えば宿主細胞から単離されたＨｅＬａ細胞、２９３細胞、またはＶｅｒｏ細胞で繁殖させることができ、感染力の経時的な損失が最小限となるように、ウイルスの安定性および完全性を促進する条件下で保存され得る。ある特定の例示的な方法では、改変された腫瘍溶解性ウイルスを、セルスタック、ローラーボトル、または灌流バイオリアクターを使用して宿主細胞で繁殖させる。一部の例では、改変された腫瘍溶解性ウイルスを精製するための下流の方法は、濾過（例えば、深層濾過、接線流濾過、もしくはこれらの組み合わせ）、超遠心分離、またはクロマトグラフィー的捕捉を含むことができる。改変された腫瘍溶解性ウイルスは、例えば、凍結乾燥による凍結または乾燥により保存することができる。ある特定の実施形態では、投与前に、保存した改変された腫瘍溶解性ウイルスは、投与のための薬学的に許容される担体中で再構成し（保存用に乾燥させた場合）、希釈することができる。
【０２７３】
一部の実施形態は、本明細書に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルスが、改変された腫瘍溶解性ウイルスに改変を含まないウイルスであって、他の点では同一のウイルスと比較して、ＨｅＬａ細胞および２９３細胞においてより高い力価を示すことを提示する。ある特定の例では、ＨｅＬａ細胞および２９３細胞における高い力価は、改変された腫瘍溶解性ウイルスで見られる。
組み合わせ療法
【０２７４】
ある特定の実施形態では、本開示の方法は、本明細書に開示した改変された腫瘍溶解性ウイルスまたはそれを含有する医薬組成物を、１つまたは複数のさらなる療法に続いて、およびそれに先行して、またはそれと組み合わせて、投与することを含む。さらなる療法の例としては、限定するものではないが、化学療法、放射線療法、追加のウイルスを用いる腫瘍溶解性ウイルス療法、免疫調節タンパク質による処置、抗がん剤、またはこれらの任意の組み合わせを挙げることができる。さらなる療法は、改変ウイルス、例えば腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの投与に関して、併せてまたは逐次的に投与することができる。ある特定の実施形態では、本開示の方法は、本明細書に開示した改変された腫瘍溶解性ウイルスを投与し、それに続いて１つまたは複数の抗がん剤またはがん療法を投与するか、それに先行して１つまたは複数の抗がん剤またはがん療法を投与するか、または１つまたは複数の抗がん剤またはがん療法と組み合わせて投与することを含むことができる。抗がん剤としては、限定するものではないが、化学療法剤、放射線療法剤、サイトカイン、免疫チェックポイント阻害剤、抗血管新生剤、アポトーシス誘導剤、抗がん抗体および／または抗サイクリン依存性キナーゼ剤を挙げることができる。ある特定の実施形態では、がん療法は、化学療法、生物学的療法、放射線療法、免疫療法、ホルモン療法、抗血管療法、寒冷療法、毒素療法および／または手術、あるいはこれらの組み合わせを含むことができる。ある特定の実施形態では、本開示の方法は、本明細書に開示した改変ウイルスを投与し、それに続いて本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスを投与するか、それに先行して本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスを投与するか、または本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせて投与することを含むことができる。改変された腫瘍溶解性ワクシニアウイルスと化学療法との組み合わせは、改変された腫瘍溶解性ウイルスにおける改変を含まない改変された腫瘍溶解性ウイルスにおいては見られない相乗効果を達成する。上記組み合わせの相乗効果を有利に使用して、Ｔａｘｏｌ（登録商標）などの化学療法の用量を減らすことができる。したがって、改変ウイルスによる本明細書で開示した処置方法は、例えば、化学療法には応答するが治療用量で副作用を受ける患者の化学療法に関連する毒性を低減することができる。相乗効果により、ある特定の事例では、化学療法単独または腫瘍溶解性ワクシニアウイルス単独と比べて、腫瘍成長が減少し得る。腫瘍成長における例示的な減少は、約２％〜約５０％、例えば約５％、約１０％、約２０％、約２５％、約３５％、約４５％、または約５０％であり得る。
【０２７５】
ある特定の実施形態では、改変された腫瘍溶解性ウイルスを使用する処置は、単独で、または１つもしくは複数の免疫調節剤と組み合わせて使用することができる。免疫調節剤としては、腫瘍またはがんに関連する抗ウイルス免疫を抑制することができる任意の化合物、分子または物質を挙げることができる。ある特定の実施形態では、免疫調節剤は、改変ウイルスへの先天免疫または適応免疫を抑制することができる場合がある。免疫調節剤の非限定的な例としては、抗ＣＤ３３抗体またはその可変領域、抗ＣＤ１１ｂ抗体またはその可変領域、ＣＯＸ２阻害剤、例えばセレコキシブ、サイトカイン、例えばＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＦＮ３およびＩＦＮγ、ならびにケモカイン、例えばＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、ＩＬ−８が挙げられる。ある特定の実施形態では、免疫調節剤は、免疫チェックポイントモジュレーター、例えば限定するものではないが、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ−１、および抗ＰＤ−Ｌ１およびＴＬＲアゴニスト（例えばポリＩ：Ｃ）を挙げることができる。一部の例では、免疫調節剤は、免疫チェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１のアンタゴニスト（例えば、ＰＤ−１に結合するアンタゴニスト抗体）、ＰＤ−Ｌ１のアンタゴニスト（例えば、ＰＤ−Ｌ１に結合するアンタゴニスト抗体）、ＣＴＬＡ−４のアンタゴニスト（例えば、ＣＴＬＡ−４に結合するアンタゴニスト抗体）、Ａ２ＡＲのアンタゴニスト（例えば、Ａ２ＡＲに結合するアンタゴニスト抗体）、Ｂ７−Ｈ３のアンタゴニスト（例えば、Ｂ７−Ｈ３に結合するアンタゴニスト抗体）、Ｂ７−Ｈ４のアンタゴニスト（例えば、Ｂ７−Ｈ４に結合するアンタゴニスト抗体）、ＢＴＬＡのアンタゴニスト（例えば、ＢＴＬＡに結合するアンタゴニスト抗体）、ＩＤＯのアンタゴニスト（例えば、ＩＤＯに結合するアンタゴニスト抗体）、ＫＩＲのアンタゴニスト（例えば、ＫＩＲに結合するアンタゴニスト抗体）、ＬＡＧ３のアンタゴニスト（例えば、ＬＡＧ３に結合するアンタゴニスト抗体）、ＴＩＭ−３のアンタゴニスト（例えば、ＴＩＭ３に結合するアンタゴニスト抗体）を挙げることができる。一部の実施形態では、さらなる療法は、免疫チェックポイントレギュレーターを投与することを含むことができる。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＴＧＮ１４１２であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＮＫＴＲ−２１４であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＭＥＤＩ０５６２であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＭＥＤＩ６４６９であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＭＥＤＩ６３８３であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＪＴＸ−２０１１であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（ペンブロリズマブ）であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、Ｏｐｄｉｖｏ（ニボルマブ）であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ）であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、トレメリムマブであり得る。一例では、免疫チェックポ���ントレギュレーターは、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（アテゾリズマブ）であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＭＧＡ２７１であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、インドキシモドであり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、Ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔであり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、リリルマブであり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＢＭＳ−９８６０１６であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＭＰＤＬ３２８０Ａであり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、アベルマブであり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、デュルバルマブであり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＭＥＤＩ４７３６であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＭＥＤＩ４７３７であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＴＲＸ５１８であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＭＫ−４１６６であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）であり得る。一例では、免疫チェックポイントレギュレーターは、ＰＦ−０５０８２５６６（ＰＦ−２５６６）であり得る。
【０２７６】
さらなる療法が放射線である、ある特定の例では、例示的な線量は、５，０００Ｒａｄ（５０Ｇｙ）〜１００，０００Ｒａｄ（１０００Ｇｙ）、もしくは５０，０００Ｒａｄ（５００Ｇｙ）であるか、または列挙した範囲内の他の適切な線量であり得る。あるいは、放射線線量は、約３０〜６０Ｇｙ、約４０〜約５０Ｇｙ、約４０〜４８Ｇｙ、もしくは約４４Ｇｙ、または列挙された範囲内の他の適切な線量であり、その線量は、例えば上記の線量測定研究により決定することができる。本明細書で使用される場合の「Ｇｙ」とは、１００Ｒａｄに等しい放射線の特定の吸収線量に関する単位を指し得る。Ｇｙは「Ｇｒａｙ」の略語である。
【０２７７】
さらなる療法が化学療法である特定の例では、例示的な化学療法剤としては、限定するものではないが、アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード誘導体、エチレンイミン、アルキルスルホネート、ヒドラジンおよびトリアジン、ニトロソ尿素、および金属塩）、植物アルカロイド（例えば、ビンカアルカロイド、タキサン、ポドフィロトキシン、およびカンプトテシン（camptothecan）類似体）、抗腫瘍抗生物質（例えば、アントラサイクリン、クロモマイシンなど）、代謝拮抗物質（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアンタゴニスト、プリンアンタゴニスト、およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤）、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、および種々の抗腫瘍薬（例えば、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤、副腎皮質ステロイド阻害剤、酵素、抗微小管剤およびレチノイド）を挙げることができる。例示的な化学療法剤としては、限定するものではないが、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射剤（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射剤（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射剤（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、フェニックス（イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロザン２０カルムスチンインプラント（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用塩酸トポテカン（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））およびビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、イブルチニブ、イデラリシブ、およびブレンツキシマブベドチンを挙げることができる。
【０２７８】
例示的なアルキル化剤としては、限定するものではないが、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソ尿素およびトリアゼン：ウラシルマスタード（Ａｍｉｎｏｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、イホスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（Ｈｅｍｅｌ（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスホルアミン、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））、およびダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））を挙げることができる。さらなる例示的なアルキル化剤としては、限定するものではないが、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））；テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）およびＴｅｍｏｄａｌ（登録商標））；ダクチノマイシン（アクチノマイシン−Ｄとしても公知である、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；メルファラン（Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシンおよびフェニルアラニンマスタードとしても公知である、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても公知である、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））；ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）およびＭｙｌｅｒａｎ（登録商標））；カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））；ロムスチン（ＣＣＮＵとしても公知である、ＣｅｅＮＵ（登録商標））；シスプラチン（ＣＤＤＰとしても公知である、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）およびＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）−ＡＱ）；クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）およびＮｅｏｓａｒ（登録商標））；ダカルバジン（ＤＴＩＣ、ＤＩＣおよびイミダゾールカルボキサミドとしても公知である、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても公知である、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））；プレドニムスチン（Prednumustine）；プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード、ムスチンおよび塩酸メクロレタミン（mechloroethaminehydrochloride）としても公知である、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））；ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；チオテパ（チオホスホアミド、ＴＥＳＰＡおよびＴＳＰＡとしても公知である、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））；およびベンダムスチンＨＣｌ（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））が挙げられる。
【０２７９】
例示的なアントラサイクリンは、限定するものではないが、例えばドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）およびＲｕｂｅｘ（登録商標））；ブレオマイシン（Ｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ダウノルビシン（塩酸ダウノルビシン（dauorubicin hydrochloride）、ダウノマイシン、および塩酸ルビドマイシン、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム（クエン酸ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））；ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））；エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標））；イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｉｄａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ（登録商標））；マイトマイシンＣ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；ラビドマイシン；およびデスアセチルラビドマイシンを挙げることができる。
【０２８０】
例示的なビンカアルカロイドとしては、限定するものではないが、酒石酸ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、およびビンデシン（Ｅｌｄｉｓｉｎｅ（登録商標））；ビンブラスチン（硫酸ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチンおよびＶＬＢとしても公知である、Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）およびＶｅｌｂａｎ（登録商標）；ならびにビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））を挙げることができる。
【０２８１】
例示的なプロテアソーム阻害剤としては、限定するものではないが、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））；カルフィルゾミブ（ＰＸ−１７１−００７、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）−ペンタンアミド）；マリゾミブ（ＮＰＩ−００５２）；イクサゾミブクエン酸塩（ＭＬＮ−９７０８）；デランゾミブ（ＣＥＰ−１８７７０）；およびＯ−メチル−Ｎ−［（２−メチル−５−チアゾリル）カルボニル］−Ｌ−セリル−Ｏ−メチル−Ｎ−［（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−２−メチル−２−オキシラニル］−２−オキソ−１−（フェニルメチル）エチル］−Ｌ−セリンアミド（ＯＮＸ−０９１２）を挙げることができる。
【０２８２】
「と組み合わせて」とは、本明細書で使用される場合、改変ウイルス、例えば本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、またはそれを含む医薬組成物、およびさらなる療法、例えば１つまたは複数の薬剤を含むさらなる療法を処置レジメンまたは計画の一部として対象に投与することを意味する。ある特定の実施形態では、組み合わせて使用されることは、改変された腫瘍溶解性ウイルスおよび１つもしくは複数の薬剤が投与前に物理的に組み合わされること、またはそれらが同じ時間枠にわたり投与されることを必要としない。例えば、また限定としてではなく、改変された腫瘍溶解性ウイルスおよび１つもしくは複数の薬剤は、処置される対象に併せて投与することができるか、または、任意の順序でもしくは異なる時点で、同時にもしくは逐次的に投与することができる。
【０２８３】
さらなる療法は、様々な実施形態では、液体剤形、固体剤形、坐剤、吸入可能な剤形、鼻腔内剤形で、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、微粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはこれらの任意の組み合わせで投与することができる。ある特定の実施形態では、さらなる療法は、約１週間〜約２週間、約２週間〜約３週間、約３週間〜約４週間、約４週間〜約５週間、約６週間〜約７週間、約７週間〜約８週間、約８週間〜約９週間、約９週間〜約１０週間、約１０週間〜約１１週間、約１１週間〜約１２週間、約１２週間〜約２４週間、約２４週間〜約４８週間、約４８週間または約５２週間、またはそれより長い期間にわたって投与される。さらなる療法の投与頻度は、ある特定の例では、毎日１回、毎日２回、１週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回（もしくは月に１回）、８週間毎に１回（もしくは２か月毎に１回）、１２週間毎に１回（もしくは３か月毎に１回）、または２４週間毎に１回（６か月毎に１回）であることができる。ある特定の実施形態では、がんを有する対象を処置する方法は、有効量の本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルス、例えば、改変されたワクシニアウイルスを対象に投与することを含み得る。ある特定の実施形態では、本開示の方法は、有効量の１つまたは複数の薬剤を対象に投与することをさらに含み得る。例えば、また限定としてではなく、薬剤は、上記のように、抗がん剤、免疫調節剤、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。
キット
【０２８４】
実施形態では、本開示は、本明細書に記載の改変された腫瘍溶解性ウイルスを投与するためのキットを提供する。ある特定の実施形態では、本開示のキットは、改変された腫瘍溶解性ウイルス、または上記のような改変された腫瘍溶解性ウイルスを含む医薬組成物を含み得る。ある特定の実施形態では、本開示のキットは、使用のための指示、デバイスおよび追加の試薬などの１つまたは複数の構成要素、ならびに上記で開示した方法を実施するためのチューブ、容器およびシリンジなどの構成要素をさらに含むことができる。ある特定の実施形態では、本開示のキットは、１つまたは複数の薬剤、例えば抗がん剤、免疫調節剤またはその任意の組み合わせの少なくとも１つをさらに含むことができ、それは改変ウイルスと組み合わせて投与することができる。
【０２８５】
ある特定の実施形態では、本開示のキットは、本明細書に開示した改変ウイルスを含有する１つまたは複数の容器を含むことができる。例えば、また限定としてではなく、本開示のキットは、本開示の改変された腫瘍溶解性ウイルスを含有する１つまたは複数の容器を含むことができる。
【０２８６】
ある特定の実施形態では、本開示のキットは、使用のための指示、改変された腫瘍溶解性ウイルスを対象に投与するためのデバイス、または追加の薬剤もしくは化合物を対象に投与するためのデバイスを含むことができる。例えば、また限定としてではなく、指示は、改変された腫瘍溶解性ウイルス、および必要に応じて、キットに含まれる他の構成要素、ならびに対象の適切な状態を決定するための方法、改変ウイルスを投与するための適切な投与量および適切な投与方法を含めた、投与のための方法の説明を含むことができる。また指示は、処置時間の期間にわたり対象をモニタリングするためのガイダンスも含み得る。
【０２８７】
ある特定の実施形態では、本開示のキットは、改変された腫瘍溶解性ウイルスを対象に投与するためのデバイスを含み得る。医薬および医薬組成物を投与するための当分野において公知の任意の様々なデバイスを、本明細書で提供されるキットに含めることができる。例えば、また限定としてではなく、そのようなデバイスとしては、皮下注射針、静脈内注射針、カテーテル、無針注射デバイス、吸入器、および液体ディスペンサー、例えば点眼器が挙げられる。ある特定の実施形態では、例えば静脈内注射、腫瘍内注射、腹腔内注射により全身送達される改変された腫瘍溶解性ウイルスを、皮下注射針およびシリンジを備えたキットに含めることができる。
【実施例】
【０２８８】
下記の実施例は、この開示の範囲を限定することなく、記載した実施形態をさらに説明する。
【０２８９】
（実施例１）
Ｂ５Ｒ遺伝子に変異を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスは、マウス腫瘍モデルにおいて治療効果の増強を示す
【０２９０】
この研究の意図は、例示的な変異がウイルスＢ５Ｒ遺伝子のＳＣＲ３およびＳＣＲ４領域に導入され、ウイルスチミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子が欠失された、本開示による例示的な改変されたワクシニアウイルス（本明細書ではＷＲ．Ｂ５ＲｍｕｔＴＫ−と称する）の効果を、マウス腫瘍モデルにおいて、例示的なＢ５Ｒ変異を有さないワクシニアウイルスと比較して調べることであった。
【０２９１】
一実験では、ＷＲ．Ｂ５ＲｍｕｔＴＫ−ウイルスをビヒクル（緩衝食塩水）対照、およびＴＫ遺伝子が欠失され、ＧＭＣＳＦをコードする外因性核酸が付加された別の改変されたワクシニアウイルス（本明細書ではＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦと称する）と比較した。３つのウイルスのいずれか１つの単回用量（１×１０７ＰＦＵ）を投与し、予め確立したＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に移植したＢＡＬＢ／ｃマウスを処置した（図１）。腫瘍体積は、図１に示すようにノギス測定によってモニタリングした（ｎ＝１群あたり１０〜１５）。一定の用量で腫瘍内（「ＩＴ」）に投与されたＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦウイルスは、予想通りに、静脈内（「ＩＶ」）投与された対照ウイルスと比較して、経時的な腫瘍体積増加を遅らせることはなかったことが注目された。しかし、腫瘍内送達または静脈内送達を介した同じ用量のＷＲ．Ｂ５ＲｍｕｔＴＫ−ウイルスの処置は両方とも、腫瘍体積成長の有意な遅延をもたらし、例示的なＢ５Ｒ変異を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスの治療効果の増強を証明した。
【０２９２】
別の実験では、異なるマウス腫瘍モデルの皮下Ｂ１６腫瘍を担持するＣ５７／ＢＬ６マウスを使用して、例示的なＢ５Ｒ変異を有する例示的なワクシニアウイルスの効果を試験した（図２Ａ〜２Ｂ）。マウスを２群に分け、１つの群は、ＷＲの１回の注射を介してワクシニアウイルスの免疫を受けた。ＴＫ−ウイルス（ＴＫ遺伝子がゲノムから欠失された）は腫瘍移植の３週間前に免疫し（「免疫マウス」）（図２Ｂ）、他の群は免疫しなかった（「非免疫マウス」）（図２Ａ）。ＷＲ．Ｂ５ＲｍｕｔＴＫ−ウイルス（図中でＢ５Ｒと称する）は、ＴＫが欠失されており、ウイルスＡ３４Ｒ遺伝子がアミノ酸変化（Ｋ１５１からＥ）で変異された、別の改変されたワクシニアウイルスＷＲ．ＴＫ−Ａ３４Ｒ  Ｋ１５１Ｅ（図中でＷＩと称する）と比較して試験した。腫瘍移植の９６時間後にいずれかのウイルスの単回静脈内注射をマウスに投与し（１×１０８ＰＦＵ／マウス、ｎ＝５／群／時点）、次いで、マウスを注射の１日後または２日後に屠殺した。腫瘍を、Ｑ−ＰＣＲによる腫瘍１グラムあたりのウイルスゲノムの数を定量するために収集した。ＷＲ．Ｂ５ＲｍｕｔＴＫ−ウイルスは、免疫マウスおよび非免疫マウスの両方で腫瘍における蓄積が有意に増強されたことを示し、例示的なＢ５Ｒ変異が腫瘍における改変されたワクシニアウイルスの送達および拡散を促進し得ることを示唆していることが観察された。また腫瘍におけるウイルス複製の増加も、収集した腫瘍中のウイルスのプラーク形成能力を定量したプラークアッセイで観察され（図３Ａ〜３Ｂ）、例示的なＢ５Ｒ変異が腫瘍における改変されたワクシニアウイルスの複製を促進することができることを示唆している。
【０２９３】
（実施例２）
ケモカイン受容体をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的な改変されたワクシニアウイルスは、がん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果の増強を示す
【０２９４】
この研究の意図は、ケモカイン受容体をコードする例示的な外因性核酸がそれぞれ付加された、本開示によるいくつかの例示的な改変されたワクシニアウイルスの効果を、がん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおいて、例示的な外因性核酸を有していないワクシニアウイルスと比較して調べることであった。
【０２９５】
一実験では、３つの異なる改変されたワクシニアウイルスを同所性の（乳房脂肪パッド）４Ｔ１腫瘍を皮下に担持するマウスにおいて試験した。本明細書でｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルスと称する一ワクシニアウイルスでは、ＴＫ遺伝子がゲノムから欠失され、マウスＣＣＲ５をコードする外因性核酸が付加された。本明細書でｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルスと称する別のワクシニアウイルスでは、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする外因性核酸が付加された。本明細書でＴＫ−ウイルスと称する第３のワクシニアウイルスでは、ＴＫ遺伝子が欠失された。また３つのすべてのウイルスは、レポーターとしてルシフェラーゼを発現するように操作された。各マウスは、１×１０８ＰＦＵの用量で、３つのウイルスのいずれか１つの単回注射により処置した。腫瘍中のウイルスの数は、３日間注射した後に毎日、生物発光イメージングおよびｉｎ  ｖｉｖｏでのルシフェラーゼ活性の測定によって定量した（図４）。ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルスを投与するマウスは、ｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルスまたはＴＫ−ウイルスを投与するマウスと比較して、腫瘍において、有意により多くの光子強度を示すことが観察され、ＣＸＣＲ４の発現が腫瘍へのウイルス送達を促進し得ることを示唆している。反対に、ＣＣＲ５／ＴＫ−は、３日間のすべての測定に対し、３つのうちで比較的低い光子強度を示し、ＣＣＲ５の発現が腫瘍へのウイルス送達を低下させ得ることを示唆している。
【０２９６】
またウイルスの治療効果も試験した。腫瘍体積を上記のようにモニタリングし（図５Ａ）、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルスが他の２つのウイルスおよびＰＢＳシャム対照と比較して、腫瘍体積成長を有意に遅延させることを示した。さらに図５Ｂに示したように、マウス生存パーセンテージもまた、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルスの投与によって有意に改善された（図５ＢでＣＸＣＲ４として同定される）。
【０２９７】
別の実験では、同じ３つのウイルスを、異なる腫瘍モデルのＢ１６腫瘍を皮下に担持するＣ５７／ＢＬ６マウスにおいて試験した。光子強度の増加は、図６Ａの定量プロットおよび図６Ｂの生物発光イメージングの代表的な写真の両方で確かめることができるように、ＴＫ−ウイルスまたはｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルスで処置したマウスと比較して、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルスで処置したマウスにおいて観察された。同様に、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルス投与は、腫瘍体積成長を有意に遅延させた（図７）。これらの結果、ならびに上記の結果は、ＣＸＣＲ４をコードする外因性核酸のワクシニアウイルスへの付加が腫瘍に対する治療効果の増強をもたらしたことを示唆している。
【０２９８】
次に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの異なるがん細胞株における３つのウイルスに対するウイルス複製能力をプラークアッセイで試験した。プラーク形成は、ウイルスを細胞株に添加した後２４時間ごとに定量した。図８Ａ〜８Ｄに示すように、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルスではなくｍＣＣＲ５／ＴＫ−ウイルスは、試験した両方のがん細胞株（４Ｔ１およびＢ１６）において、２つの異なる感染多重度（図８Ａおよび８Ｃの場合ＭＯＩ  ０．１、図８Ｂおよび８Ｄの場合ＭＯＩ  １）で複製の増加を示し、ＣＸＣＲ４ではなくＣＣＲ５の発現ががん細胞におけるウイルス複製を促進することができることを示唆している。これはさらに、ＣＸＣＲ４が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの複製が増加しないにもかかわらず、ｉｎ  ｖｉｖｏでの効果の増強を示すことができ、また、例示的な改変された腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの効果の増強が、例えば全身送達の改善などの送達に起因し得ることを示唆することができる。
【０２９９】
ＣＸＣＲ４発現によって付与される治療効果の増強を裏付けするメカニズムを理解しようとして、Ｂ細胞を枯渇させたトランスジェニックマウス（本明細書でＪＨと称する）を使用して実験を行った。上記のウイルスは、両方とも予め確立された４Ｔ１腫瘍が皮下移植されている、Ｂ細胞を有するＢａｌｂ／ＣマウスおよびＢ細胞を有さないＪＨマウスに投与された。図９Ａ〜９Ｃに示すように、上記のデータと一致して、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおいて、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルスは、生物発光イメージング放射輝度により測定した場合、腫瘍中の蓄積の増加を示した。しかし、そのような増加はＪＨマウスにおいては観察されず、腫瘍中のｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−の蓄積の強化は、Ｂ細胞に少なくとも部分的に依存していたことを示唆している。一方、フローサイトメトリー実験は、４Ｔ１腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルスの投与が腫瘍へのＢ細胞の侵入を増加させたが、脾臓またはリンパ節（ＬＮ）などの他の臓器では増加しなかったことを示した（図１０Ａ〜１０Ｃ）。これらのデータは、Ｂ細胞が、ｉｎ  ｖｉｖｏでワクシニアウイルスを腫瘍に送達するビヒクルとして役立ち得ることを示している。
【０３００】
さらに、Ｔ細胞機能の増強もまた、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルスで処置したマウスにおいて観察された。図１１Ａ〜１１Ｂにおいて示すように、Ｔ細胞は、４Ｔ１腫瘍を皮下移植され、続いて上記のように処置されたマウスから収集し、これらの免疫活性を、異なる免疫原に応答してこれらのインターフェロン−γ（ＩＦＮガンマ）放出を試験するＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって試験した。試験したＴ細胞は、ウイルス注射の１４日後に脾臓から回収された。ＴＫ−ウイルスで処置したマウスのＴ細胞は、ＰＢＳ処置したマウスからのＴ細胞と比較して、腫瘍免疫原（４Ｔ１細胞溶解物）に対していくらかの免疫応答を示したが、ｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルスで処置したマウスからのＴ細胞は、免疫応答の増強を示した（図１１Ａ）。反対に、腫瘍細胞４Ｔ１溶解物と混合した不活性化ワクシニアウイルス（ＶＶ）に応答したインターフェロン−γ放出は、ＴＫ−ウイルスで処置したマウスおよびｍＣＸＣＲ４／ＴＫ−ウイルスで処置したマウスからのＴ細胞間で有意に異なっていなかったことを図１１Ｂが示すように、ＣＸＣＲ４発現は、ワクシニアウイルスに対するＴ細胞機能を増強するようではなかった。これらのデータは、ＣＸＣＲ４発現が腫瘍に対する免疫応答の増強をもたらし、それにより、例示的な改変されたワクシニアウイルスの治療利益の増強に、少なくとも部分的に寄与し得ることを示している。
【０３０１】
追加の実験は、ＣＸＣＲ４をコードする別の例示的な改変されたワクシニアウイルスを使用して行った。これらの実験では、使用したワクシニアウイルスは以下の通りであった：（ｉ）Ａ５２Ｒ−ＣＸＣＲ４＋と称する、Ａ５２Ｒ遺伝子が欠失され、マウスＣＸＣＲ４をコードする外因性核酸が付加された改変ウイルス；（ｉｉ）ＴＫ−ＧＭＣＳＦ＋と称する、ＴＫ遺伝子が欠失され、マウスＧＭＣＳＦをコードする外因性核酸が付加された改変ウイルス；（ｉｉｉ）ＴＫ−と称する、ＴＫ遺伝子が欠失され、外因性核酸が付加されていない改変ウイルス、および（ｉｖ）ＶＦＢと称する、ビヒクル処方緩衝液。一実験では、ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、４つの改変ウイルスのうちの１つの単回静脈内注射（１×１０７ＰＦＵ）で処置した。腫瘍を２４時間後に採取し、組織１ミリグラムあたりのウイルスゲノムの数をｑＰＣＲにより定量した（図１６）。より多い数のＡ５２Ｒ−ＣＸＣＲ４＋ゲノムが他の改変ウイルスと比較して腫瘍において見出され、ウイルスＣＸＣＲ４発現が腫瘍へのウイルス送達を増強することができるという上記の結論を裏付けている。
【０３０２】
別の実験では、ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、１日目および４日目に同じ４つの改変ウイルスのうちの１つの静脈内注射（１×１０７ＰＦＵ）で処置し、腫瘍体積を上記のようにモニタリングした。静脈内送達したＡ５２Ｒ−ＣＸＣＲ４＋ウイルスは腫瘍体積成長を有意に遅延させ（図１７）、ＣＸＣＲ４をコードする外因性核酸の付加が抗がん治療効果の増強をもたらすことができるという概念をさらに裏付けている。
【０３０３】
（実施例３）
細胞外マトリックス分解酵素をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的なワクシニアウイルスはマウス腫瘍モデルにおいて治療効果の増強を示す
【０３０４】
この研究の意図は、細胞外マトリックス分解酵素（例えばヒアルロニダーゼ）をコードする例示的な外因性核酸が付加された、本開示による例示的な改変されたワクシニアウイルスの効果を、マウス腫瘍モデルにおいて、例示的な外因性核酸を有していないワクシニアウイルスと比較して調べることであった。
【０３０５】
一実験では、ヒアルロニダーゼＰＨ−２０をコードする外因性核酸を有しており、ＴＫ遺伝子が欠失された例示的な改変されたワクシニアウイルス（本明細書でＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０と称する）を、ＭＭＰ８をコードする外因性核酸を有しており、ＴＫ遺伝子が欠失された別の例示的なワクシニアウイルス（本明細書でＷＲ．ＴＫ−ｍｍｐ８と称する）と共に、ＴＫ遺伝子の欠失のみがあるがＰＨ−２０遺伝子の付加はないＷＲ．ＴＫ−単独ウイルスと比較して試験した。また３つのすべてのウイルスは、レポーターとしてルシフェラーゼを発現するように操作された。いずれかのウイルスの単回注射を、ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスに投与した。その後のウイルスの蓄積および拡散は、生物発光イメージングによるウイルスルシフェラーゼ活性の測定を通じて追跡した。図１２Ａ〜１２Ｂに示すように、ＷＲ．ＴＫ−Ｐｈ２０ウイルスは、他の２つのウイルスと比較して、ｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍において有意により多くの蓄積を示したが、ＷＲ．ＴＫ−ｍｍｐ８ウイルスも、ＷＲ．ＴＫ−単独と比較して、比較的高かったことが見出された。これらのデータは、ＰＨ−２０の発現がウイルス送達を増強し、ＥＣＭの分解およびＩＦＰの減少によって腫瘍に拡散することを示している。
【０３０６】
次に、腫瘍に対する治療効果もＰＨ−２０のウイルス発現について試験した。第１の実験では、４Ｔ１腫瘍を皮下移植したＢＡＬＢ／ｃマウスを、ＷＲ．ＴＫ−ウイルス、または、ＴＫ遺伝子が欠失され、ＰＨ２０をコードする外因性核酸およびデオキシシチジンキナーゼ（ＤＣＫ）をコードする外因性核酸の両方が付加された、別の例示的なワクシニアウイルスＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０ＤＣＫで静脈内処置した。両ウイルスはルシフェラーゼを発現し、腫瘍内のウイルスルシフェラーゼ発現を生物発光イメージングで測定した。図１３Ａで示すように、ＲＥＮＣＡモデルにおけるＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０ウイルスと同様に、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０ＤＣＫのウイルスを注射したマウスは、腫瘍内で有意に高いルシフェラーゼ活性を示し（ｎ＝１０）、ＷＲ．ＴＫ−ウイルスと比較して、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０ＤＣＫウイルスの腫瘍におけるウイルスの蓄積の増強を示唆している。
【０３０７】
第２の実験では、組み合わせ療法を、４Ｔ１腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスで試験した。６つの群のマウスを使用した。マウスの各群にＷＲ．ＴＫ−ウイルスもしくはＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０ＤＣＫウイルス、または対照ＰＢＳを単回静脈内注射で投与し、次いで、ウイルス注射後の３日目および７日目に、化学療法薬ゲムシタビンまたは水を腹腔内注射で与えた。図１３Ｂおよび図１３Ｃで示すように、３つのすべての注射に関して水を受けている対照群、ウイルス注射は受けていないがゲムシタビン注射を受けているゲムシタビン群、ＷＲ．ＴＫ−注射を受けているがゲムシタビンの注射は受けていないＴＫ−ｗ群、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０ＤＣＫ注射を受けているがゲムシタビンの注射は受けていないＴＫ−ＰＨ２０ＤＣＫ  ｗ群、ＷＲ．ＴＫ−およびゲムシタビンの両方の注射を受けているＴＫ−＋ｇｅｍ群、ならびにＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０ＣＫおよびゲムシタビンの両方の注射受けているＴＫ−ＰＨ２０ＤＣＫ＋ｇｅｍ群が存在した。腫瘍体積（ｎ＝１０、群で５匹以上のマウスが死亡するまでモニタリングした）および生存曲線（＊、ＰＢＳ群と比較してＰ＜０．０５；＃、ＴＫ−ｖｖ＋ｇｅｍ群と比較してＰ＜０．０５；＊＊、ＴＫ−群と比較してＰ＜０．０５）の継続的なモニタリングは、両方とも、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０ＤＣＫウイルスおよびゲムシタビンの組み合わせ処置により最良の結果が得られたことを示しており、ＰＨ２０媒介性の間質液圧の低下が化学療法送達を増強し、それにより、良好な治療効果が得られ得ることを示唆している。
【０３０８】
第３の実験では、ＧＰＩアンカーを含むＰＨ−２０をコードする外因性核酸を有する例示的なワクシニアウイルス、およびＧＰＩアンカーを含まないＰＨ−２０をコードする外因性核酸を有するワクシニアウイルスを試験し、比較した。ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、腫瘍内（ＩＴ）送達または静脈内（ＩＶ）送達によって１×１０７ＰＦＵのウイルスの単回用量で処置し、これらの腫瘍体積をウイルス注射の４５日後に測定した。マウスの７つの群をこの時点で試験した（図１４）：ウイルスの静脈内注射を受けているがシャム対照ではないマウスの一対照群；ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０＋ウイルスの腫瘍内注射を受けているＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０＋（ＩＴ）群であって、ウイルスにより発現されたＰＨ２０がＧＰＩアンカーを有していた群；ＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦウイルスの腫瘍内注射を受けているＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦ（ＩＴ）群であって、ＰＨ２０は発現されなかったがＧＭＣＳＦは発現された群；ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０＋（ｎｏ−ｇｐｉ）ウイルスの腫瘍内注射を受けているＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０＋（ｎｏ−ｇｐｉ）（ＩＴ）群であって、ウイルスにより発現されたＰＨ２０がＧＰＩを有していなかった群；ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０＋ウイルスの静脈内注射を受けているＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０＋（ＩＶ）群、ＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦウイルスの静脈内注射を受けているＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦ（ＩＶ）群、およびＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０＋（ｎｏ−ｇｐｉ）ウイルスの静脈内注射を受けているＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０＋（ｎｏ−ｇｐｉ）（ＩＶ）群。注目すべきことに、遅い時点で、例えばウイルス注射の４５日後に、ＰＨ−２０を発現するウイルスで処置した動物（ＩＴまたはＩＶ）はすべて、依然として生存していたが、対照マウスおよびＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦウイルスで処置したマウスは、これらの腫瘍が１５００ｍｍ３より大きく成長したので、すべて屠殺した。図１４に示すように、際立ったことには、腫瘍成長に対する阻害効果は、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０＋（ｎｏ−ｇｐｉ）ウイルスの場合のＧＰＩがない場合と比較して、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０＋ウイルスで処置したマウスにおいてはＧＰＩアンカーの存在によってより増強されたように見えた。ＧＰＩがＰＨ−２０を細胞膜に繋留するとすれば、これは予期しない結果であり、ＥＣＭでより自由に存在するＧＰＩアンカーのない分泌型ＰＨ−２０は、ＥＣＭの分解およびＩＦＰの低下により効果的であると考えられる。
【０３０９】
追加の実験を、分泌型ヒアルロニダーゼを発現する例示的な改変されたワクシニアウイルスを使用し、これらの酵素がウイルスの送達、拡散、細胞殺滅および治療の有効性にどのように影響を及ぼすのかを決定するために実施した。
【０３１０】
ＴＫ遺伝子が欠失され、ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸（ＨｙｓＡ、ｌｉｎまたはｓｋｏ）が付加された改変ウイルスが構築された；これらの改変ウイルスは、それぞれ、ＴＫ−ＨｙｓＡ、ＴＫ−ｌｉｎおよびＴＫ−ｓｋｏと称する。
【０３１１】
最初の実験では、ヒアルロニダーゼ活性ＥＬＩＳＡを使用して、上記の改変ウイルスによって発現された分泌型ヒアルロニダーゼの活性を決定した。表３に示すように、ＨｙｓＡが最も高い活性を示した。
【表３】
2021500932.tif 000003
【０３１２】
別の実験では、培養中の細胞を、それぞれがＧＦＰを発現した、ＴＫ−改変ウイルス、ＴＫ−ＨｙｓＡ改変ウイルス、または上記のＴＫ−ＭＭＰ８改変ウイルスのうちの１つに感染させた。ＭＣ３８がん細胞の感染培養物では、ＴＫ−ＨｙｓＡウイルスおよびＴＫ−ＭＭＰ８ウイルスは、ＴＫ−ウイルスよりも、複製、拡散し、がん細胞の増大を阻止し、ＨｙｓＡまたはＭＭＰ８発現が腫瘍溶解性ウイルスの複製、拡散、およびがん細胞殺滅を増強することができることを示唆している（図１８Ａ〜１８Ｄ）。ＨＣＴ１１６がん細胞の感染培養物では、ＴＫ−ＨｙｓＡウイルスおよびＴＫ−ＭＭＰ８ウイルスは、ＴＫ−ウイルスよりも複製および拡散し、ＴＫ−ＨｙｓＡウイルスは、ＴＫ−ウイルスよりもがん細胞の増大を効果的に阻止し、腫瘍溶解性ウイルスの複製、拡散、およびがん細胞殺滅の増強におけるＨｙｓＡの役割を裏付けている（図１９Ａ〜１９Ｄ）。
【０３１３】
追加の実験を、以下のウイルスを使用して実施した：（ｉ）ＴＫ−ＨｙｓＡ改変ウイルス、（ｉｉ）ＴＫ−ＭＭＰ８改変ウイルス、（ｉｉｉ）上記のＴＫ−ＰＨ２０を発現する改変ウイルス（ＴＫ−ＰＨ２０／ＴＫ−ＳＰＡＭ１）、（ｉｖ）外因性酵素の付加のないＴＫ−改変ウイルス、および（ｖ）ビヒクル処方緩衝液（ＶＦＢ）。ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、５つのウイルスのうちの１つの単回静脈内注射（１×１０７ＰＦＵ）で処置した。腫瘍を２４時間後に採取し、組織のミリグラムあたりのウイルスゲノムの数をｑＰＣＲによって定量した（図２０）。他のウイルスと比較して多数のＴＫ−ＨｙｓＡゲノムが腫瘍において見出され、ＨｙｓＡ発現が改変されたワクシニアウイルスの腫瘍への送達が増強され得ることを示唆している。
【０３１４】
別の実験では、ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、ＴＫ−ＨｙｓＡ、ＴＫ−ＭＭＰ８、ＴＫ−ＰＨ２０（図２１でＳＰＡＭ１と表示）、またはＴＫ−改変ウイルスの１回の腫瘍内注射（１×１０７ＰＦＵ）で処置し、腫瘍体積を上記のようにモニタリングした。腫瘍内送達されたＴＫ−ＨｙｓＡ、ＴＫ−ＭＭＰ８およびＴＫ−ＰＨ２０は、ＴＫ−ウイルスよりも腫瘍成長を遅延させており、ＨｙｓＡ、ＭＭＰ８またはＰＨ２０の発現が腫瘍溶解性ウイルスの抗腫瘍効力を増強することができることを示唆している（図２１）。
【０３１５】
腫瘍溶解性ウイルスにおけるＨｙｓＡの潜在的有用性をさらに調査するため、Ａ５２Ｒ遺伝子が欠失され、ＨｙｓＡをコードする外因性核酸がＡ５２Ｒ遺伝子座に挿入された（Ａ５２Ｒ−ＨｙｓＡ）改変ウイルスが作製された（図２２Ａ〜ＤでＷＲ．Ａ５２Ｒ−ＥＬ  ｈｙｓＡ  ＧＦＰ  １ＭＯＩと表示）。ＴＫ−ＨｙｓＡ（図２２Ａ〜ＤでＷＲ．ＴＫ−ＥＬ  ｈｙｓＡ  ＧＦＰ  １ＭＯＩと表示）改変ウイルスと同様に、Ａ５２Ｒ−ＨｙｓＡ改変ウイルスはＬＬＣがん細胞またはＭＣ３８がん細胞の培養物において首尾よく拡散され、がん細胞の増大を制限した（図２２Ａ〜２２Ｄ）。これらの結果は、腫瘍溶解性ウイルスの複製、拡散、およびがん細胞殺滅の増強におけるＨｙｓＡの役割をさらに裏付けており、Ａ５２Ｒが欠失された改変ウイルスは、腫瘍溶解性ウイルス（onclytic viruse）として使用することができることを実証している。
【０３１６】
まとめると、これらのデータは、細胞外マトリックス分解酵素、例えばＰＨ２０、ＨｙｓＡまたはＭＭＰ８の発現が腫瘍溶解性ウイルスの複製、拡散、がん殺滅、および治療の有効性を増強することができることを実証している。
【０３１７】
（実施例４）
例示的な改変ＶＨ１遺伝子を有する例示的なワクシニアウイルスは、マウス腫瘍モデルにおいて治療効果の増強を示す
【０３１８】
この研究の意図は、ワクシニアウイルスＶＨ１遺伝子が異なるポックスウイルス由来の変異ＶＨ１遺伝子で置き換えられた、本開示による例示的な改変されたワクシニアウイルスの効果を、マウス腫瘍モデルにおいて、例示的な改変を有していないワクシニアウイルスと比較して調べることであった。
【０３１９】
一実験では、ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、ＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦウイルス、ＷＲ．ＴＫ−ＶＨ１ｍｕｔウイルス、またはシャム対照の単回腫瘍内注射（１０×１０７ＰＦＵ）で処置した。この場合、ＷＲ．ＴＫ−ＶＨ１ｍｕｔウイルスはＴＫ遺伝子が欠失され、ＶＨ１遺伝子が異なる種のポックスウイルス由来のＶＨ１遺伝子で置き換えられ、これはまた、より活性であるようにある特定の変異により改変された。ＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦウイルスはＴＫ遺伝子が欠失され、ＧＭＣＳＦをコードする外因性核酸を有していたが、ＶＨ１遺伝子の改変はなかった。腫瘍体積成長は、図１５に示すように、ノギス測定によってウイルス注射後に経時的にモニタリングした。ＷＲ．ＴＫ−ＶＨ１ｍｕｔウイルスは、他の両方の２つの群と比較して、腫瘍成長を有意に遅延させており、ウイルスのＶＨ１遺伝子の例示的な改変が腫瘍に対する治療効果の増強をもたらし得ることを示唆している。
【０３２０】
（実施例５）
転移がんの患者における例示的な改変されたワクシニアウイルスの臨床研究
【０３２１】
本明細書に開示した例示的なワクシニアウイルス（ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４）の非盲検のフェーズ１Ｂ／２に関する研究は、転移がんの患者において行われる。
研究デザイン：
【０３２２】
本研究は、転移がんの患者における改変されたワクシニアウイルスＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４を評価する非盲検のフェーズ１Ｂ／２研究である。本研究は２つのフェーズ：用量漸増／確認相（フェーズ１ｂ）および拡大相（フェーズ２）を有し、拡大相では各コホートについてＳｉｍｏｎ  ２−ステージデザインを利用する。
【０３２３】
改変されたワクシニアウイルスＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４は、ＴＫ遺伝子の欠失、ＰＨ２０およびＣＸＣＲ４をコードする外因性核酸を含むＷｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓｅｒｖｅワクシニアウイルスである。動物実験で関係付けられているように、ワクシニアウイルスにおけるＴＫの欠失ならびにＰＨ２０およびＣＸＣＲ４の発現は、がんに対するより大きな治療効果をもたらし得る。
フェーズ１Ｂ（用量漸増相）
目的：
用量
【０３２４】
ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４ウイルスの用量制限毒性（ＤＬＴ）および最大耐用量（ＭＴＤ）または推奨されるフェーズ２用量（ＲＰ２Ｄ）を決定する。
【０３２５】
臨床有害事象（ＡＥ）および実験室パラメーターにより測定した、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４ウイルスの安全性および耐容性を評価する。
【０３２６】
ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４ウイルスの開始用量（用量レベル１）は、静脈内注射１回により最大５×１０９ＰＦＵである。
【０３２７】
用量レベル１が耐容されない場合、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４ウイルスの用量レベル−１は、最大５×１０７ＰＦＵ１回で設定される。
【０３２８】
用量漸増相における各用量レベルは、６〜１２名の評価可能な患者を登録する。
【表１】
2021500932.tif 000004
【０３２９】
安全性
【０３３０】
安全性は、ＡＥ、臨床検査、身体的検査、バイタルサイン測定値、心電図（ＥＣＧ）および他の関連する手順の文書化によって研究中に評価される。
【０３３１】
任意の検出された累積的毒性は、適切な場合には、ＲＰ２Ｄのさらなる改善を含め、用量の低減および／または投薬スケジュールへの他の変更を後で必要とする場合がある。
【０３３２】
最大５×１０９ＰＦＵの用量がＭＴＤを上回る場合、より低用量を評価する。毒性は、米国（ＵＳ）国立がん研究所（ＮＣＩ）の有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）、バージョン４．０３を使用して、研究責任医師が評価する。次の用量レベルに進むかどうかについての決定は、各コホートの安全性評価の大部分が完了した後に、研究責任医師との相談でメディカルモニターによって下される。
【０３３３】
研究の用量漸増／確認相の完了後、ＭＴＤ／ＲＰ２Ｄの同定により、研究のフェーズ２の部分が始まる。
【０３３４】
フェーズ２
【０３３５】
フェーズ２（拡大）：拡大相では、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４ウイルスは、転移がんの患者における用量漸増／確認相で同定されたＲＰ２Ｄを使用して評価する。フェーズ２コンポーネントでは、転移がんの患者を２：１の比で無作為化し、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４ウイルス（ＲＰ２Ｄで）またはプラセボを投与する。この無作為化されたコンポーネントの主要評価項目は、ｉＲＥＣＩＳＴによって評価されるような無増悪生存期間（ＰＦＳ）である。副次的評価項目は、長期寛解率（ＤＲＲ）、無処置期間（ＴＦＩ）、生活の質（ＱｏＬ）、全奏効率（ＯＲＲ）、全生存期間（ＯＳ）および安全性を含む。フェーズ２コンポーネント中のサンプルサイズは１００〜１５０名の患者であり、これは、片側ｐ＝０．１で９０％のパワーをもたらし、約０．５のハザード比（ＨＲ）でＰＦＳ有益性を検出することができる。試験アームの処置期間は６か月、９か月、１２か月または１８か月であり、対照アームの処置期間は４〜６か月である。患者の参加確保（accrual）には１２か月かかると推測され、治験の期間は２〜３年となるように計画される。
【０３３６】
（実施例６）
がん患者における例示的な改変されたワクシニアウイルスの臨床研究
【０３３７】
本明細書に開示した例示的なワクシニアウイルス（ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４）の非盲検のフェーズ１Ｂ／２に関する研究は、がん患者において行われる。
研究デザイン：
【０３３８】
本研究は、がん患者における改変されたワクシニアウイルスＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４を評価する非盲検のフェーズ１Ｂ／２研究である。本研究は２つのフェーズ：用量漸増／確認相（フェーズ１ｂ）および拡大相（フェーズ２）を有し、拡大相では各コホートについてＳｉｍｏｎ  ２−ステージデザインを利用する。
【０３３９】
改変されたワクシニアウイルスＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４は、ＴＫ遺伝子の欠失、ＰＨ２０およびＣＸＣＲ４をコードする外因性核酸を含むＷｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓｅｒｖｅワクシニアウイルスである。動物実験で関係付けられているように、ワクシニアウイルスにおけるＴＫの欠失ならびにＰＨ２０およびＣＸＣＲ４の発現は、がんに対するより大きな治療効果をもたらし得る。
フェーズ１Ｂ（用量漸増相）
目的：
用量
【０３４０】
ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４ウイルスの用量制限毒性（ＤＬＴ）および最大耐用量（ＭＴＤ）または推奨されるフェーズ２用量（ＲＰ２Ｄ）を決定する。
【０３４１】
臨床有害事象（ＡＥ）および実験室パラメーターにより測定した、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４ウイルスの安全性および耐容性を評価する。
【０３４２】
ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４ウイルスの開始用量（用量レベル１）は、静脈内注射１回により最大５×１０９ＰＦＵである。
【０３４３】
用量レベル１が耐容されない場合、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４ウイルスの用量レベル−１は、最大５×１０７ＰＦＵ１回で設定される。
【０３４４】
用量漸増相における各用量レベルは、６〜１２名の評価可能な患者を登録する。
【表２】
2021500932.tif 000005
【０３４５】
安全性
【０３４６】
安全性は、ＡＥ、臨床検査、身体的検査、バイタルサイン測定値、心電図（ＥＣＧ）および他の関連する手順の文書化によって研究中に評価される。
【０３４７】
任意の検出された累積的毒性は、適切な場合には、ＲＰ２Ｄのさらなる改善を含め、用量の低減および／または投薬スケジュールへの他の変更を後で必要とする場合がある。
【０３４８】
最大５×１０９ＰＦＵの用量がＭＴＤを上回る場合、より低用量を評価する。毒性は、米国（ＵＳ）国立がん研究所（ＮＣＩ）の有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）、バージョン４．０３を使用して、研究責任医師が評価する。次の用量レベルに進むかどうかについての決定は、各コホートの安全性評価の大部分が完了した後に、研究責任医師との相談でメディカルモニターによって下される。
【０３４９】
研究の用量漸増／確認相の完了後、ＭＴＤ／ＲＰ２Ｄの同定により、研究のフェーズ２の部分が始まる。
【０３５０】
フェーズ２
【０３５１】
フェーズ２（拡大）：拡大相では、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４ウイルスは、がん患者における用量漸増／確認相で同定されたＲＰ２Ｄを使用して評価する。フェーズ２コンポーネントでは、がん患者を２：１の比で無作為化し、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＣＸＣＲ４ウイルス（ＲＰ２Ｄで）またはプラセボを投与する。この無作為化されたコンポーネントの主要評価項目は、ｉＲＥＣＩＳＴによって評価されるような無増悪生存期間（ＰＦＳ）である。副次的評価項目は、長期寛解率（ＤＲＲ）、無処置期間（ＴＦＩ）、生活の質（ＱｏＬ）、全奏効率（ＯＲＲ）、全生存期間（ＯＳ）および安全性を含む。フェーズ２コンポーネント中のサンプルサイズは１００〜１５０名の患者であり、これは、片側ｐ＝０．１で９０％のパワーをもたらし、約０．５のハザード比（ＨＲ）でＰＦＳ有益性を検出することができる。試験アームの処置期間は６か月、９か月、１２か月または１８か月であり、対照アームの処置期間は４〜６か月である。患者の参加確保には１２か月かかると推測され、治験の期間は２〜３年となるように計画される。
【０３５２】
（実施例７）
ＮＫ細胞活性を促進する例示的な変異を有する例示的なワクシニアウイルスは、マウス腫瘍モデルにおいて治療効果の増強を示す
【０３５３】
ＮＫ細胞活性を促進するように設計された変異を有する腫瘍溶解性ウイルスが抗がん効果を示すかどうか試験するために、以下の改変ウイルスを作製した：（ｉ）Ｋ７Ｒ−ＩＬ１５  ＣＣＬ５と称する、Ｋ７Ｒが欠失され、ＩＬ１５およびＣＣＬ５の両方をコードする外因性核酸が挿入されたウイルス、（ｉｉ）ＴＫ−ＬＩＧＨＴと称する、ＴＫが欠失され、ＬＩＧＨＴをコードする外因性核酸が挿入されたウイルス、（ｉｉｉ）ＴＫ−ＩＴＡＣフラクタルカインと称する、ＴＫが欠失され、ＩＴＡＣおよびフラクタルカイン（ＣＸ３ＣＬ１としても公知）の両方をコードする外因性核酸が挿入されたウイルス、（ｉｖ）Ａ５２Ｒ−ＩＬ１５／ＩＬ１５−Ｒαと称する、Ａ５２Ｒが欠失され、ＩＬ１５およびＩＬ１５−Ｒαの両方をコードする外因性核酸が挿入されたウイルス、ならびに（ｖ）ＴＫ−ＩＴＡＣ  ＬＩＧＨＴ  Ａ５２Ｒ−ＩＬ１５／ＩＬ１５−Ｒαと称する、ＴＫが欠失され、Ａ５２Ｒが欠失され、ＩＴＡＣ、ＬＩＧＨＴ、ＩＬ１５、およびＩＬ１５Ｒαをコードする外因性核酸が挿入されたウイルス。
【０３５４】
一実験では、ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、Ｋ７Ｒ−ＩＬ１５＋ＣＣＬ５＋、ＴＫ−ＬＩＧＨＴ＋、またはＴＫ−ＧＭＣＳＦ＋ウイルスの単回腫瘍内注射（１×１０８ＰＦＵ）で処置した。対照マウスは、対照バッファの静脈内注射を受けた。腫瘍体積は、処置後３４日目に定量した。腫瘍体積は、Ｋ７Ｒ−ＩＬ１５＋ＣＣＬ５＋またはＴＫ−ＬＩＧＨＴ＋改変ウイルスを投与したマウスにおいてより小さかったことより、ＮＫ細胞活性を促進するように設計された腫瘍溶解性ウイルス中の変異は抗がん治療効果の増強をもたらすことができることを示唆している（図２３）。
【０３５５】
別の実験では、ＲＥＮＣＡ腫瘍を皮下に担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、ＴＫ−ＬＩＧＨＴ＋、ＴＫ−ＧＭＣＳＦ＋、ＴＫ−ＩＴＡＣ＋フラクタルカイン＋、Ａ５２Ｒ−ＩＬ１５＋／ＩＬ１５Ｒ−α＋、ＴＫ−ＩＴＡＣ＋ＬＩＧＨＴ＋Ａ５２Ｒ−ＩＬ１５＋／ＩＬ１５−Ｒα、またはＶＦＢと称するビヒクル処方緩衝液の単回腫瘍内注射（１×１０７ＰＦＵ）で処置し、腫瘍体積を上記のように経時的にモニタリングした。腫瘍内送達されたＴＫ−ＬＩＧＨＴ＋、ＴＫ−ＩＴＡＣ＋フラクタルカイン＋、Ａ５２Ｒ−ＩＬ１５＋／ＩＬ１５−Ｒα、およびＴＫ−ＩＴＡＣ＋ＬＩＧＨＴ＋Ａ５２Ｒ−ＩＬ１５＋／ＩＬ１５−Ｒα＋は腫瘍成長を遅延させ、ＮＫ細胞活性を促進するように設計された腫瘍溶解性ウイルスの変異が腫瘍に対する治療効果の増強をもたらしたことを示唆している（図２４）。
【０３５６】
（実施例８）
ケモカイン受容体および細胞外マトリックス分解酵素をコードする例示的な外因性核酸を有する例示的なワクシニアウイルスは、がん細胞間の拡散、およびがん細胞の殺滅を示す
【０３５７】
上記で開示した改変された腫瘍溶解性ウイルスのエレメントを組み合わせる実施可能性を試験するため、Ａ５２Ｒ遺伝子およびＴＫ遺伝子が欠失され、ＨｙｓＡおよびＣＸＣＲ４をコードする外因性核酸が挿入された改変ウイルスを開発した（ＴＫ−ＨｙｓＡ  Ａ５２Ｒ−ＣＸＣＲ４）。培養中のＬＬＣがん細胞を、それぞれがＧＦＰも発現した、ＴＫ−（図２５Ａ〜２５ＢでＷＲ  ＴＫ−ＧＦＰ  １ＭＯＩと表示）、Ａ５２Ｒ−ＨｙｓＡ（図２５Ａ〜２５ＢでＷＲ  Ａ５２Ｒ−ＥＬ  ＨｙｓＡ  ＧＦＰ  １ＭＯＩと表示）、またはＴＫ−ＨｙｓＡ  Ａ５２Ｒ−ＣＸＣＲ４（図２５Ａ〜２５ＢでＷＲ  Ａ５２Ｒ−７．５  ＣＸＣＲ４  ＴＫ−ＥＬ  ＨｙｓＡとして表示）改変ウイルスに感染させた。Ａ５２Ｒ−ＨｙｓＡおよびＴＫ−ＨｙｓＡ  Ａ５２Ｒ−ＣＸＣＲ４ウイルスは、がん細胞間で拡散し、がん細胞の増大を低減させることができた（図２５Ａ〜２５Ｂ）。これらのデータは、本明細書に開示された複数の改変エレメントを含む腫瘍溶解性ウイルスを作製することができ、がん細胞間の拡散、およびがん細胞の殺滅を含む、抗がん活性を有することができることを実証する非限定的な例を提供する。
【０３５８】
（実施例９）
ＳＣＲ１の例示的な欠失を有する例示的な改変高ＥＥＶ発現ワクシニアウイルスはがん細胞間の拡散、およびがん細胞の殺滅を示す
【０３５９】
ＩＨＤＪは、腫瘍溶解性の潜在性について評価される例示的な高ＥＥＶ産生ウイルスとして選択された。ＥＥＶ（Ｂ５Ｒ  ＳＣＲ１）表面の中和抗体結合部位が欠失された改変ＩＨＤＪウイルスが開発された（ＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１）。ＭＣ３８およびＨＣＴ１１６のがん細胞の培養物の感染は、ＩＨＤＪおよびＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１（両方ともＧＦＰを発現）は、がん細胞間の拡散、およびがん細胞の増大の低減することができたことを実証した（図２６Ａ〜２６Ｂ）。プラークアッセイは、ＩＨＤＪウイルスおよびＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１ウイルスががん細胞間に拡散し、がん細胞を死滅させる能力をさらに裏付けた（図２６Ｃ）。別の実験では、がん細胞単層を低い感染多重度で感染させ、液体培地下でインキュベートした、コメットテールアッセイを実施した。このアッセイでは、ウイルスの拡散は、長く伸びた「コメットテイル」の形状のプラークを生じる。ＩＨＤＪウイルスおよびＩＨＤＪ−Ｂ５ＲｃｏΔＳＣＲ１ウイルスは、効果的なＥＥＶ産生と一致して、顕著なコメットテイルを生成した（図２６Ｄ）。これらの実験は、ＥＥＶの表面の中和抗体結合部位が欠失された例示的な改変ウイルスを含む、高ＥＥＶ発現ワクシニアウイルスが、がん細胞間の拡散、およびがん細胞の殺滅を含む抗がん活性を有し得ることを実証している。
【０３６０】
ウイルス骨格遺伝子およびウイルスタンパク質の例示的な配列を表４に提供する。さらに、本明細書に記載した改変された腫瘍溶解性ウイルスに挿入することができる様々な外因性核酸配列によって発現されるタンパク質の例示的な配列を提供する。一部の事例では、本明細書に記載した改変された腫瘍溶解性ウイルスにおける上記のウイルス骨格遺伝子およびウイルスタンパク質は、表４に提供するウイルス骨格遺伝子およびウイルスタンパク質の例示的な配列と約７０％、約７５％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一である配列を含むことができる。一部の事例では、本明細書に記載した改変された腫瘍溶解性ウイルスの外因性核酸配列から発現される上記のタンパク質は、表４に提供するタンパク質の例示的な配列と約７０％、約７５％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一である配列を含むことができる。
【表４−１】
2021500932.tif 000006
【表４−２】
2021500932.tif 000007
【表４−３】
2021500932.tif 000008
【表４−４】
2021500932.tif 000009
【表４−５】
2021500932.tif 000010
【表４−６】
2021500932.tif 000011
【表４−７】
2021500932.tif 000012
【表４−８】
2021500932.tif 000013
【表４−９】
2021500932.tif 000014
【表４−１０】
2021500932.tif 000015
【表４−１１】
2021500932.tif 000016
【表４−１２】
2021500932.tif 000017
【表４−１３】
2021500932.tif 000018
【表４−１４】
2021500932.tif 000019
【表４−１５】
2021500932.tif 000020
【表４−１６】
2021500932.tif 000021
【表４−１７】
2021500932.tif 000022
【表４−１８】
2021500932.tif 000023
【表４−１９】
2021500932.tif 000024
【表４−２０】
2021500932.tif 000025
【表４−２１】
2021500932.tif 000026
【表４−２２】
2021500932.tif 000027
【表４−２３】
2021500932.tif 000028
【表４−２４】
2021500932.tif 000029
【表４−２５】
2021500932.tif 000030
【表４−２６】
2021500932.tif 000031
【表４−２７】
2021500932.tif 000032
【表４−２８】
2021500932.tif 000033
【表４−２９】
2021500932.tif 000034
【表４−３０】
2021500932.tif 000035
【図１】
2021500932.tif 000036
【図２】
2021500932.tif 000037
【図３】
2021500932.tif 000038
【図４】
2021500932.tif 000039
【図５Ａ】
2021500932.tif 000040
【図５Ｂ】
2021500932.tif 000041
【図６Ａ】
2021500932.tif 000042
【図６Ｂ】
2021500932.tif 000043
【図７】
2021500932.tif 000044
【図８Ａ−Ｂ】
2021500932.tif 000045
【図８Ｃ−Ｄ】
2021500932.tif 000046
【図９】
2021500932.tif 000047
【図１０Ａ】
2021500932.tif 000048
【図１０Ｂ】
2021500932.tif 000049
【図１０Ｃ】
2021500932.tif 000050
【図１１】
2021500932.tif 000051
【図１２】
2021500932.tif 000052
【図１３Ａ】
2021500932.tif 000053
【図１３Ｂ】
2021500932.tif 000054
【図１３Ｃ】
2021500932.tif 000055
【図１４】
2021500932.tif 000056
【図１５】
2021500932.tif 000057
【図１６】
2021500932.tif 000058
【図１７】
2021500932.tif 000059
【図１８Ａ】
2021500932.tif 000060
【図１８Ｂ】
2021500932.tif 000061
【図１８Ｃ】
2021500932.tif 000062
【図１８Ｄ】
2021500932.tif 000063
【図１９Ａ】
2021500932.tif 000064
【図１９Ｂ】
2021500932.tif 000065
【図１９Ｃ】
2021500932.tif 000066
【図１９Ｄ】
2021500932.tif 000067
【図２０】
2021500932.tif 000068
【図２１】
2021500932.tif 000069
【図２２Ａ】
2021500932.tif 000070
【図２２Ｂ】
2021500932.tif 000071
【図２２Ｃ】
2021500932.tif 000072
【図２２Ｄ】
2021500932.tif 000073
【図２３】
2021500932.tif 000074
【図２４】
2021500932.tif 000075
【図２５Ａ】
2021500932.tif 000076
【図２５Ｂ】
2021500932.tif 000077
【図２６Ａ】
2021500932.tif 000078
【図２６Ｂ】
2021500932.tif 000079
【図２６Ｃ−Ｄ】
2021500932.tif 000080
【配列表】
2021500932000001.app
【国際調査報告】
2021500932.tif 000081
2021500932.tif 000082
2021500932.tif 000083