(57)【要約】  本発明は、ポリフェノール及び多糖の共処理生成物を含む、抗微生物組成物、並びに組成物及び抗ウイルス剤の調製方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的有効量の有効成分及び薬学的に許容される賦形剤を含有する抗微生物組成物であって、
有効成分が、ポリフェノール「D」の水性及び/又は水性有機溶液、並びに多糖「P」の水性及び/又は水性有機溶液を、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量が元の含有量の99.99〜0%に達するまで、並びに100〜2000原子質量単位(AMU)の分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が0.1〜100%に達するまで、有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で共処理し、
ここで、ポリフェノール「D」の多糖「P」に対する質量比は1000:1〜1:1000であり、
場合により、次いで反応混合物を有機及び/又は無機酸又は塩基で1〜13、好ましくは7〜10のpHに中和し、次いで得られた生成物を分離及び精製した生成物であり、
ポリフェノール「D」は、各々、100〜2000AMUの分子量、2〜40個のフェノール基、及びフェノール基以外の0〜20個の官能基を有する1〜100種の化合物に由来し、これらの化合物は、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が0.1〜100%に達するまで、有機溶媒を0〜100%含有する水性及び/又は水性有機溶液中の有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14のpHで前処理され得、
多糖「P」は、各々、0.4〜3000kDaの質量平均分子量を有し、以下の組成：
[A][B][C]
の共有結合単位からなる、1〜10個の多糖鎖を含有し、
「A」は、以下の一般式：
【化１】
2021524452.tif 000017
(式中、R1、R2及びR3は独立にH、多糖「P」、(R5CH)nCOOR4であり、
R4はH、Li、Na及びKであり、好ましくはR4はH、Naであり、
R5はH、直鎖状又は分岐状C1〜C10アルキルであり、好ましくはR5はHであり、
nは0〜10である)
の多糖構造の単位を表し、
「B」は、15〜500Daの分子量を有し、求核付加反応を起こすことが可能である1〜6個の官能基を含有する、多糖構造の酸化単位であり、
好ましくは「B」は、150〜300Daの分子量を有し、求核付加反応を起こすことが可能である1〜3個の官能基を含有する、多糖構造の酸化単位であり、
「C」は、多糖「P」の水性及び/又は水性有機溶液を、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量がその元の含有量の99.99〜0%に達するまで、有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で処理する条件下で酸化単位を変換した生成物であり、
前記多糖は、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量がその元の含有量の99.99〜0%に達するまで、有機溶媒を0〜100%含有する水性有機媒体中の有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で前処理され、場合により、精製及び/又は脱塩及び/又は分画の追加工程で処理され得る、抗微生物組成物。
【請求項２】
生物学的有効量の有効成分及び薬学的に許容される賦形剤を含有する抗微生物組成物であって、
有効成分が、各々、0.4〜3000kDaの質量平均分子量を有し、以下の構造：
[A][B][C]
の共有結合単位からなる、1〜10個の多糖鎖を含有する、多糖「P」であり、
「A」は、以下の一般式：
【化２】
2021524452.tif 000018
(式中、R1、R2及びR3は独立にH、多糖「P」、(R5CH)nCOOR4であり、
R4はH、Li、Na及びKであり、好ましくはR4はH、Naであり、
R5はH、直鎖状又は分岐状C1〜C10アルキルであり、好ましくはR5はHであり、
nは0〜10である)
の多糖構造の単位を表し、
「B」は、15〜500Daの分子量を有し、求核付加反応を起こすことが可能である1〜6個の官能基を含有する、多糖構造の酸化単位であり、
「C」は、多糖「P」の水性及び/又は水性有機溶液を、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量がその元の含有量の99.99〜0%に達するまで、有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で処理する条件下で酸化単位を変換した生成物であり、
前記多糖は、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量がその元の含有量の99.99〜0%に達するまで、有機溶媒を0〜100%含有する水性有機媒体中の有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で前処理され、場合により、精製及び/又は脱塩及び/又は分画の追加工程で処理され得る、
抗微生物組成物。
【請求項３】
請求項1又は2に記載の組成物及び少なくとも１つの植物材料抽出物を含有する抗微生物性組み合わせであって、組み合わせが、抗酸化活性、抗細菌活性、免疫賦活活性、抗微生物活性、抗腫瘍活性及び抗炎症活性のうちの少なくとも1つを有し、組み合わせ中の抽出物の含有量が0.01〜99.99%、好ましくは1.0〜50.0%、最も好ましくは1.0〜10.0%である、抗微生物性組み合わせ。
【請求項４】
植物抽出物が、以下の植物材料：アストラガルス(根)、アセロラ、アーティチョーク(葉)、アンゼリカ、ブラックエルダーベリー、ホーソン(実、葉及び花)、バーチ(芽)、バレリアン(根及び根茎)、ブドウ種子、ハイビスカス、エレカンパン、オーク、ジンセン、緑茶、ショウガ、イチゴ(葉)、クランベリー、ホワイトウィロー(樹皮)、カレンジュラ、アスペン(樹皮)、グレープフルーツ、ウォータークレス、バードック、ラズベリー(果実)、ジュニパー、ビターメロン、ペパーミント、ブルーベリー、マザーワートハーブ、ミルクシストル、薬用カモミール、サベルニク、ダイズ(豆)、リコリス(根)、シーバックソーン(果実)、フェンネル、ホースラディッシュ、タイム、ニンニク、セージ、エレウテロコッカス、パープルエキナセア又はこれらの組み合わせからの水性、アルコール性、油性又は有機抽出物である、請求項3に記載の抗微生物性組み合わせ。
【請求項５】
抗微生物性組み合わせ中の抗微生物医薬物質の含有量が0.0000001〜99.9999999%、好ましくは0.0000001〜10.0%、最も好ましくは0.0001〜5.0%である、請求項1又は2に記載の組成物及び少なくとも1つの抗微生物医薬物質を含有する抗微生物性組み合わせ。
【請求項６】
アルビドール、オセルタミビル及びリマンタジンを医薬物質として含有する、請求項5に記載の抗微生物性組み合わせ。
【請求項７】
請求項１又は２に記載の組成物を調製する方法であって、
-  ポリフェノール「D」を、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が0.01〜100%に達するまで、有機溶媒を0〜100%含有する水性有機媒体中の有機及び無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14の範囲のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で前処理する工程、
並びに/或いは、多糖「P」を、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量が元の含有量の99.99〜0%に達するまで、有機溶媒を0〜100%含有する水性有機媒体中の有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、1〜14の範囲のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で前処理する工程であって、場合により、精製及び/又は脱塩及び/又は分画の追加の工程を含む、工程と、
-  ポリフェノール「D」の水性及び/若しくは水性有機溶液、並びに多糖「P」の水性及び/若しくは水性有機溶液を、多糖中のカルボニル及び/若しくはヒドロキシル基の含有量が元の含有量の99.99〜0%に達するまで、並びに/又は100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が0.01〜100%に達するまで、有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で処理する工程であって、ポリフェノール対多糖の質量比が1000:1〜0:1000である、工程と、
-  得られた生成物を分離及び精製する、その後の工程と
-  得られた生成物と薬学的に許容される賦形剤とを組み合わせる工程と
-  反応混合物を有機及び/又は無機酸又はアルカリで1〜13、好ましくは7〜10のpHに中和する任意選択の工程と、
-  得られた生成物を分離及び精製するその後の工程と
を含む、方法。
【請求項８】
前処理の工程において、出発ポリフェノールが、各々、2〜6個のフェノール基、フェノール基以外の2〜12個の官能基を含有し、120〜700AMUの分子量を有する、1〜10種の化合物、最も好ましくはアポゴシポール、ゴシポロン、ゴシンダン、アポゴシポロン、1,1',6,6',7,7'-ヘキサヒドロキシ-5,5'-ジイソプロピル-3,3'-ジメチル-2,2'-ビナフタレン-8-カルボアルデヒド、6,6',7,7'-テトラヒドロキシ-5,5'-ジイソプロピル-3,3'-ジメチル-1,1',4,4'-テトラオキソ-1,1',4,4'-テトラヒドロ-2,2'-ビナフタレン-8-カルボアルデヒド、エチル[(8-ホルミル-1,1',6,6',7'-ペンタヒドロキシ-5,5'-ジイソプロピル-3,3'-ジメチル-2,2'-ビナフタレン-7-イル)オキシ]アセテート、ゴシポール、ゴシポール酢酸、没食子酸、エピガロカテキンである、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
前処理の工程で、多糖が、セルロース、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ジアルデヒドカルボキシメチルセルロース、ジアルデヒドデキストラン、ジアルデヒドセルロース、ジアルデヒドカルボキシメチルデキストラン、並びに水性及び/又は水性有機溶液中0.1〜14のpHにおけるこれらの変換生成物である、請求項7又は8に記載の方法。
【請求項１０】
前処理が10〜60℃の温度で行われる、請求項7〜9のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前処理の工程において、有機溶媒が、アセトン、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、1,4-ジオキサン、テトラヒドロフラン、好ましくはアセトン、エチルアルコール、イソプロピルアルコールである、請求項7〜10のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
処理の工程が、10〜60℃の温度で行われる、請求項7〜11のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
処理の工程において、有機溶媒が、アセトン、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、1,4-ジオキサン、テトラヒドロフラン、好ましくはアセトン、エチルアルコール、イソプロピルアルコールである、請求項7〜12のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ポリフェノール「D」及び多糖「P」の前処理の工程が、同じ反応器で同時に行われる、請求項7〜13のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項1又は2に記載の組成物を含有する、抗微生物剤。
【請求項１６】
抗微生物剤が、インフルエンザ、ヘルペス、肝炎及びHIVウイルス、呼吸器ウイルス感染症、並びに細菌感染症に対して有効である、請求項15に記載の抗微生物剤。
【請求項１７】
抗酸化、抗細菌、免疫賦活、抗微生物、抗腫瘍及び抗炎症作用のうちの1つ又は複数を提供し、請求項3〜6のいずれか一項に記載の組み合わせを含有する、栄養補助食品。
【請求項１８】
請求項3〜6のいずれか一項に記載の組み合わせを含有する抗微生物剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有機化学及び医薬品の分野に関し、ポリフェノール/多糖の共処理生成物を含む抗ウイルス及び抗微生物組成物、本組成物及び抗ウイルス剤を調製する方法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
天然ポリフェノールは、広範なその薬理活性及び構造多様性により製薬業界において関心が高まっている対象である(J. Agric. Food Chem.、58、10016〜10019(2010))。
【０００３】
特に、これらは、抗腫瘍活性(Cancer Res.、49、3754〜3758 (1989))、抗ウイルス活性(Contraception、39、579〜587 (1989))、抗寄生虫活性(Science 218、288〜289 (1982))及び抗酸化活性(J. Biol. Chem.、156、633〜642 (1944))を有する。
【０００４】
しかし、生殖器系、心臓及び肝臓に対するポリフェノールの毒性(Yin Juanjuan、A Dissertation for the Degree of Doctor of Philosophy The Graduate School of Clemson University (2010))及びその水難溶性は、ポリフェノールの欠点であり、薬剤としてのその広範な使用を妨げている。
【０００５】
これらの欠点を克服するための様々な手法が存在する。
【０００６】
最も一般的な手法は、芳香環の置換基の変化を伴わない場合(Chem. Nat. Comp.、33、545〜547 (1998))及びそれを伴う場合(J. Pharm. Sci.、64、6、1073〜1075(1975))の両方、又は芳香核の変化を伴う場合(Chem. Nat. Comp.、30、1、42〜48 (1994))のポリフェノールの構造的修飾である。しかし、得られた新しい低分子量化合物は、毒性が低減されたにもかかわらず、水難溶性であり、いずれの場合にも、反応生成物を調製及び分離する方法の開発が必要とされる。
【０００７】
溶解性を改善し、ポリフェノールの毒性を低減する別の手法は、オリゴマー及びポリマー担体:ポリビニルピロリドン(Chem. Nat. Comp.、32、2、177〜179 (1996))、グリチルリジン酸(Chem. Nat. Comp.、32、2、177〜179 (1996))、シクロデキストリン(Spectrochimica Acta、Part A、61、1025〜1028 (2005))を含む非共有結合組成物の調製、並びにポリマーミセルへのそのカプセル化(米国特許第8945627号)である。この場合、出発化合物は、構造的に変化しない形態で生成物中に存在する。この手法の可能性は、ポリフェノール及びその誘導体の構造多様性によって制限される。
【０００８】
天然ポリフェノールの欠点を克服できる第3の手法は、ポリマー担体への共有結合によるポリフェノールの構造の変化であり、この一例としては、抗ウイルス薬Kagocel(登録商標)があり、ここで、必要な物理化学的及び生物学的特性は、多糖及びポリフェノール中の幾つかのアルデヒド基の同時還元により得られる(ロシア特許第22700708号)。しかし、互いに共有結合できるポリフェノール及び高分子量の担体の官能基の限られた構造多様性は、この手法の適用を大幅に制限する。更に、場合によっては、得られた化合物は、溶解性の低下を示す。
【０００９】
上記を考慮すると、プロセス条件に応じて所望の特性を有する生成物を得るために、出発成分と比較して改善された物理化学的及び生物学的特性を有するポリフェノール及び多糖の組成物を調製するための制御された方法を開発する問題、並びに出発化合物の低い構造多様性から生じる問題が残されている。これまでに、文献においてこの種の前例はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第8945627号
【特許文献２】ロシア特許第22700708号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】J. Agric. Food Chem.、58、10016〜10019(2010)
【非特許文献２】Cancer Res.、49、3754〜3758 (1989)
【非特許文献３】Contraception、39、579〜587 (1989)
【非特許文献４】Science 218、288〜289 (1982)
【非特許文献５】J. Biol. Chem.、156、633〜642 (1944)
【非特許文献６】Yin Juanjuan、A Dissertation for the Degree of Doctor of Philosophy The Graduate School of Clemson University (2010)
【非特許文献７】Chem. Nat. Comp.、33、545〜547 (1998)
【非特許文献８】J. Pharm. Sci.、64、6、1073〜1075(1975)
【非特許文献９】Chem. Nat. Comp.、30、1、42〜48 (1994)
【非特許文献１０】Chem. Nat. Comp.、32、2、177〜179 (1996)
【非特許文献１１】Spectrochimica Acta、Part A、61、1025〜1028 (2005)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、ポリフェノール及び多糖ベースの新しい組成物、並びにその調製方法の開発である。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、生物学的有効量の有効成分及び薬学的に許容される賦形剤を含む抗微生物組成物、好ましくは抗ウイルス組成物であって、有効成分が、ポリフェノール「D」の水性及び/又は水性有機溶液、並びに多糖「P」の水性及び/又は水性有機溶液を、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量が元の含有量の99.99〜0%に達するまで、並びに100〜2000の原子質量単位(AMU)の分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が0.1〜100%に達するまで、有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で共処理し、ここで、ポリフェノール「D」の多糖「P」に対する質量比は1000:1〜1:1000であり、場合により、次いで任意で反応混合物を有機及び/又は無機酸又は塩基で1〜13、好ましくは7〜10のpHに中和し、次いで得られた生成物を分離及び精製した生成物であり、
ポリフェノール「D」は、各々、100〜2000AMUの分子量、2〜40個のフェノール基及びフェノール基以外の0〜20個の官能基を有する1〜100種の化合物に由来し、これらの化合物は、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が0.1〜100%に達するまで、有機溶媒を0〜100%含有する水性及び/又は水性有機溶液中の有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14のpHで前処理され得、
好ましくは、ポリフェノール「D」は、各々、2〜6個のフェノール基、及びフェノール基以外の1〜12個の官能基を含有し、120〜700AMUの分子量を有する、1〜50種の化合物であり、
最も好ましくは、ポリフェノール「D」は、各々、2〜6個のフェノール基、及びフェノール基以外の1〜8個の官能基を含有し、300〜550AMUの分子量を有する、1〜40種の化合物であり、
多糖「P」は、各々、0.4〜3000kDa、好ましくは1〜500kDa、最も好ましくは1〜50kDaの質量平均分子量を有し、以下の組成：
[A][B][C]
の共有結合単位からなる、1〜10個の多糖鎖、好ましくは1個の多糖鎖を含有し
「A」は、以下の一般式：
【００１４】
【化１】
2021524452.tif 000002
【００１５】
(式中、R1、R2及びR3は独立にH、多糖「P」、(R5CH)nCOOR4であり、
R4はH、Li、Na及びKであり、好ましくはR4はH、Naであり、
R5はH、直鎖状又は分岐状C1〜C10アルキルであり、好ましくはR5はHであり、
nは0〜10であり、好ましくはnは1〜2である)
の多糖構造の単位を表し、
「B」は、15〜500Daの分子量を有し、求核付加反応を起こすことが可能である1〜6個の官能基を含有する、多糖構造の酸化単位であり、
好ましくは「B」は、150〜300Daの分子量を有し、求核付加反応を起こすことが可能である1〜3個の官能基を含有する、多糖構造の酸化単位であり、
「C」は、多糖「P」の水性及び/又は水性有機溶液を、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量が元の含有量の99.99〜0%に達するまで、有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で処理する条件下で酸化単位を変換した生成物であり、
好ましくは、「C」は、多糖「P」の水性及び/又は水性有機溶液を、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量が元の含有量の95〜20%に達するまで、有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で処理する条件下で酸化単位を変換した生成物であり、
前記多糖は、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量が元の含有量の99.99〜0%に達するまで、有機溶媒を0〜100%含有する水性有機媒体中の有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で前処理され、場合により、精製及び/又は脱塩及び/又は分画の追加の工程で処理され得る、抗微生物組成物、好ましくは抗ウイルス組成物に関する。
【００１６】
別の態様において、本発明は、
生物学的有効量の有効成分及び薬学的に許容される賦形剤を含む抗ウイルス及び抗微生物組成物であって、有効成分が、各々、0.4〜3000kDa、好ましくは1〜500kDa、最も好ましくは1〜50kDaの質量平均分子量を有し、以下の構造：
[A][B][C]
の共有結合単位からなる、1〜10個の多糖鎖、好ましくは1個の多糖鎖を含有する、多糖「P」であり、
「A」は、以下の一般式
【００１７】
【化２】
2021524452.tif 000003
【００１８】
(式中、R1、R2及びR3は独立にH、多糖「P」、(R5CH)nCOOR4であり、
R4はH、Li、Na及びKであり、好ましくはR4はH、Naであり、
R5はH、直鎖状又は分岐状C1〜C10アルキルであり、好ましくはR5はHであり、
nは0〜10であり、好ましくはnは1〜2である)
の多糖構造の単位を表し、
「B」は、15〜500Daの分子量を有し、求核付加反応を起こすことが可能である1〜6個の官能基を含有する、多糖構造の酸化単位であり、
好ましくは「B」は、150〜300Daの分子量を有し、求核付加反応を起こすことが可能である1〜3個の官能基を含有する、多糖構造の酸化単位であり、
「C」は、多糖「P」の水性及び/又は水性有機溶液を、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量が元の含有量の99.99〜0%に達するまで、有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で処理する条件下で酸化単位を変換した生成物であり、
好ましくは、「C」は、多糖「P」の水性及び/又は水性有機溶液を、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量が元の含有量の95〜20%に達するまで、有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で処理する条件下で酸化単位を変換した生成物であり、
前記多糖は、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量が元の含有量の99.99〜0%に達するまで、有機溶媒を0〜100%含有する水性有機媒体中の有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で前処理され、場合により、精製及び/又は脱塩及び/又は分画の追加の工程で処理され得る、抗ウイルス組成物及び抗微生物組成物に関する。
【００１９】
本発明の別の目的は、抗微生物性組み合わせが、抗酸化活性、抗細菌活性、免疫賦活活性、抗微生物活性、抗腫瘍活性及び抗炎症活性のうちの少なくとも1つを有し、該組み合わせ中の抽出物の含有量は0.01〜99.99%、好ましくは1.0〜50.0%、最も好ましくは1.0〜10.0%である、上記の組成物のうちの1つ及び少なくとも1つの植物材料抽出物を含む、抗微生物性組み合わせである。
【００２０】
好ましい実施形態において、植物抽出物は、以下の植物材料:アストラガルス(根)(astragalus)、アセロラ(acerola)、アーティチョーク(葉)(artichoke)、アンゼリカ(angelica)、ブラックエルダーベリー(black elderberry)、ホーソン(実、葉及び花)(hawthorn)、バーチ(芽)(birch)、バレリアン(根及び根茎)(valerian)、ブドウ種子(grape seed)、ハイビスカス(hibiscus)、エレカンパン(elecampane)、オーク(oak)、ジンセン(ginseng)、緑茶(green tea)、ショウガ(ginger)、イチゴ(葉)(strawberry)、クランベリー(cranberry)、ホワイトウィロー(樹皮)(white willow)、カレンジュラ(calendula)、アスペン(樹皮)(aspen)、グレープフルーツ(grapefruit)、ウォータークレス)watercress)、バードック(burdock)、ラズベリー(果実)(raspberry)、ジュニパー(juniper)、ビターメロン(bitter melon)、ペパーミント(peppermint)、ブルーベリー(blueberry)、マザーワートハーブ(motherwort herb)、ミルクシストル(milk thistle)、薬用カモミール(pharmaceutical chamomile)、サベルニク(sabelnik)、ダイズ(豆)(soybean)、リコリス(根)(licorice)、シーバックソーン(果実)(sea buckthorn)、フェンネル(fennel)、ホースラディッシュ(horseradish)、タイム(thyme)、ニンニク(garlic)、セージ(sage)、エレウテロコッカス(eleutherococcus)、パープルエキナセア(purple echinacea)又はこれらの組み合わせからの水性、アルコール性、油性又は有機抽出物である。
【００２１】
本発明の別の目的は、抗微生物性組み合わせ中の物質の含有量が0.0000001〜99.9999999%、好ましくは0.0000001〜10.0%、最も好ましくは0.0001〜5.0%である、上記の組成物のうちの1つ及び少なくとも1つの抗微生物性医薬物質を含む抗微生物性組み合わせである。
【００２２】
好ましくは、アルビドール、オセルタミビル及びリマンタジンが医薬物質として用いられる。
【００２３】
本発明の別の目的は、上記組成物を調製する方法であって、
-  ポリフェノール「D」を、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が0.01〜100%に達するまで、有機溶媒を0〜100%含有する水性有機媒体中の有機及び無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14の範囲のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で前処理する工程、
並びに/或いは、多糖「P」を、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量が元の含有量の99.99〜0%に達するまで、有機溶媒を0〜100%含有する水性有機媒体中の有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、1〜14の範囲のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で前処理する工程であって、場合により、精製及び/又は脱塩及び/又は分画の追加の工程を含む、工程と、
-  ポリフェノール「D」の水性及び/若しくは水性有機溶液、並びに多糖「P」の水性及び/若しくは水性有機溶液を、多糖中のカルボニル及び/若しくはヒドロキシル基の含有量が元の含有量の99.99〜0%に達するまで、並びに/又は100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が0.01〜100%に達するまで、有機及び/若しくは無機酸若しくは塩基、並びに/又は有機及び/若しくは無機塩で、0.1〜14のpH及び溶媒の氷点から溶媒の沸点までの温度で処理する工程であって、ポリフェノール対多糖の質量比が1000:1〜0:1000である、工程と、
-  得られた生成物を分離及び精製する、その後の工程と
-  得られた生成物と薬学的に許容される賦形剤とを組み合わせる工程と
を含む方法である。
【００２４】
上記組成物を調製する方法は、反応混合物を有機及び/又は無機酸又は塩基で1〜13、好ましくは7〜10のpHに中和する任意選択の工程を含み得る。
【００２５】
ポリフェノールは、各々、2〜6個のフェノール基、フェノール基以外の2〜12個の官能基を含有し、120〜700AMUの分子量を有する、好ましくは1〜10種の化合物、最も好ましくはアポゴシポール、ゴシポロン、ゴシンダン(Gossindan)、アポゴシポロン、1,1',6,6',7,7'-ヘキサヒドロキシ-5,5'-ジイソプロピル-3,3'-ジメチル-2,2'-ビナフタレン-8-カルボアルデヒド、6,6',7,7'-テトラヒドロキシ-5,5'-ジイソプロピル-3,3'-ジメチル-1,1',4,4'-テトラオキソ-1,1',4,4'-テトラヒドロ-2,2'-ビナフタレン-8-カルボアルデヒド、エチル[(8-ホルミル-1,1',6,6',7'-ペンタヒドロキシ-5,5'-ジイソプロピル-3,3'-ジメチル-2,2'-ビナフタレン-7-イル)オキシ]アセテート、ゴシポール、ゴシポール酢酸である。
【００２６】
前処理の工程で、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換は、好ましくは50〜100%、最も好ましくは80〜100%である。
【００２７】
多糖は、好ましくはセルロース、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ジアルデヒドカルボキシメチルセルロース、ジアルデヒドデキストラン、ジアルデヒドセルロース、ジアルデヒドカルボキシメチルデキストラン、デンプン、ジアルデヒドデンプン、デキストリン、ジアルデヒドデキストリン、並びに水性及び/又は水性有機溶液中0.1〜14のpHにおけるこれらの変換の生成物である。
【００２８】
多糖の前処理の工程において、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量は好ましくは元の含有量の95.0%〜20.0%である。
【００２９】
前処理の工程は、好ましくは7〜14、最も好ましくは10〜14のpHで行われる。
【００３０】
前処理は、好ましくは10〜60℃の温度で行われる。
【００３１】
前処理の工程において、有機溶媒は、好ましくはアセトン、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、1,4-ジオキサン、テトラヒドロフランである。
【００３２】
処理の工程において、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換は、好ましくは50〜100%、最も好ましくは80〜100%である。
【００３３】
処理の工程において、多糖中のカルボニル及び/又はヒドロキシル基の含有量は、好ましくは元の含有量の95.0%〜20.0%である。
【００３４】
処理の工程は、好ましくは7〜14、最も好ましくは10〜14のpHで行われる。
【００３５】
処理の工程は、好ましくは10〜60℃、最も好ましくは18〜55℃の温度で行われる。
【００３６】
処理の工程において、有機溶媒は、好ましくはアセトン、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、1,4-ジオキサン、テトラヒドロフランである。
【００３７】
ポリフェノール「D」及び多糖「P」の前処理の工程は、好ましくは同じ反応器で同時に行われる。
【００３８】
本発明の別の目的は、上記の組成物のうちの1つを含有する抗微生物剤である。本発明による抗微生物剤は、インフルエンザ、ヘルペス、肝炎及びHIVウイルス、呼吸器ウイルス感染症、並びに細菌感染症に対して有効である。
【００３９】
本発明の別の目的は、1つ又は複数の作用、好ましくは抗酸化、抗細菌、免疫賦活、抗微生物、抗腫瘍、抗炎症作用を提供し、本発明による組み合わせを含有する栄養補助食品である。
【００４０】
本発明の別の目的は、本発明による組み合わせを含有する抗微生物剤である。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】導入されたポリフェノールを修飾することにより調製される組成物のクロマトグラムを示す図である。検出は254nmで行った。
【図２】ポリフェノールを導入せずに調製した組成物のクロマトグラムを示す図である。検出は254nmで行った。
【図３】実施例9の試料のDOSYスペクトルを示す図である。
【図４】ATR法で調製される、出発ポリマーと比較した組成物(実施例8)のIRスペクトルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本発明の文脈において、
用語「共処理」は、反応終了まで、1つの反応混合物中に2つ以上の出発化合物が同時に存在することを意味する;
用語「前処理」は、第2の化合物(ポリフェノール又は多糖)を導入する前に、所望の構造変化が得られるまで、1つの出発化合物(多糖又はポリフェノール)が示された物理化学的条件下で存在することを意味する;
用語「ポリフェノール」は、1個超のフェノール基、好ましくは2〜6個のフェノール基が存在し、100〜2000AMU、好ましくは100〜700AMUの分子量を有し、フェノール基以外の0〜20個の官能基、好ましくはフェノール基以外の0〜8個の官能基を含有することを特徴とする、化学化合物のクラス、特に、ゴシポール、アポゴシポール、ゴシポロン、ゴシンダン、アポゴシポロン、1,1',6,6',7,7'-ヘキサヒドロキシ-5,5'-ジイソプロピル-3,3'-ジメチル-2,2'-ビナフタレン-8-カルボアルデヒド、6,6',7,7'-テトラヒドロキシ-5,5'-ジイソプロピル-3,3'-ジメチル-1,1',4,4'-テトラオキソ-1,1',4,4'-テトラヒドロ-2,2'-ビナフタレン-8-カルボアルデヒド、没食子酸、エピガロカテキン、ガロールを意味する;
用語「水溶液」は、溶媒が水である、0.00001〜99.999質量%の溶質濃度を有する溶液を意味する;
用語「水性有機溶液」は、溶媒が100:0〜0:100の質量比の水と有機溶媒との均質混合物、特に水とエタノールとの混合物、水とアセトンとの混合物、水とイソプロパノールとの混合物、水とジオキサンとの混合物である、0.00001〜99.999質量%の溶質濃度を有する溶液を意味する;
用語「有機酸」は、酸性を示す有機化合物、特に、ギ酸、酢酸、シュウ酸、p-トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸を意味する;
用語「無機酸」は、酸性を示す無機化合物、特に、塩酸、硫酸、リン酸、過塩素酸、炭酸、硝酸を意味する;
用語「有機塩基」は、正電荷イオンを取り込むことが可能な任意の有機化合物、特にトリエチルアミン、4-メチルモルホリン、N-エチルジイソプロピルアミン、tert-酪酸カリウム、エチル酸ナトリウムを意味する;
用語「無機塩基」は、正電荷イオンを取り込むことが可能な任意の無機化合物、特に、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、酢酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸セシウム、炭酸カリウムを意味する;
用語「有機塩」は、水溶液中で有機酸残基の陽イオン及び陰イオンに解離する任意の有機化合物、特に、シュウ酸塩、カルボン酸塩、アルコール酸塩、酢酸塩、フェノール酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、ピリジニウム塩を意味する;
用語「無機塩」は、水溶液中で酸残基の陽イオン及び陰イオンに解離する任意の無機化合物、特に、塩化物、硫酸塩、炭酸塩を意味する;
用語「有機溶媒」は、様々な物質を溶解することが可能な任意の有機化合物、特に、脂肪族及び芳香族炭化水素及びそのハロゲン誘導体、アルコール、エーテル及びエステル、ケトンを意味する;
用語「官能基」は、所与のクラスの化合物の特徴的な化学的性質を決定する原子の組み合わせ、特に、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、アルキル、アリール及び他の基を意味する;
用語「フェノール基」は、芳香環又は芳香族複素環の炭素原子に結合したヒドロキシル基を意味する;
用語「多糖」は、任意の酸素原子を介して互いに結合した単糖単位を含む、単糖の重縮合生成物、又は炭水化物の合成修飾の生成物、特にセルロース、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ジアルデヒドカルボキシメチルセルロース、ジアルデヒドデキストラン、ジアルデヒドセルロース、ジアルデヒドカルボキシメチルデキストラン、デンプン、ジアルデヒドデンプン、デキストリン、ジアルデヒドデキストリン、並びに水性及び/又は水性有機溶液中0.1〜14のpHでのこれらの変換の生成物を意味する;
用語「共有結合単位」は、別の単位のいずれかの官能基、特にヒドロキシル、カルボニル、ヘミアセタール、カルボキシル等の関与を伴う、1つの結合のいずれかの原子を介した共有結合により、互いに結合した1つ又は複数の多糖鎖の単位を意味する;
用語「多糖鎖」は、任意の酸素原子を介して互いに結合した単糖単位を含有する、単糖の重縮合生成物、又は炭水化物の合成修飾の生成物であって、単位の数及び分子量分布が異なる1つのタイプの構造的に関連する多糖画分を含有する生成物、特にセルロース、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ジアルデヒドカルボキシメチルセルロース、ジアルデヒドデキストラン、ジアルデヒドセルロース、ジアルデヒドカルボキシメチルデキストラン、デンプン、ジアルデヒドデンプン、デキストリン、デンプン、ジアルデヒドデキストリン、並びに水性及び/又は水性有機溶液中0.1〜14のpHでのこれらの変換の生成物を意味する;
用語「酸化単位」は、酸化剤の作用下での多糖単位の変換の1つ又は複数の生成物であって、変換が、多糖単位の構造の変化、及び遊離カルボニル、ヘミアルダール、ヘミアセタール、アセタールの形態で提示される新しい官能基の出現を伴う、生成物、特に
【００４３】
【化３】
2021524452.tif 000004
【００４４】
を意味する;
用語「遊離カルボニル形態」は、酸化剤の作用下での多糖単位の変換の生成物であって、1個超のカルボニル基を含有する、生成物、特に
【００４５】
【化４】
2021524452.tif 000005
【００４６】
を意味する;
用語「ヘミアルダール形態」は、酸化剤の作用下での多糖単位の変換の生成物であって、生成物中のアルデヒド基が、1個又は複数の水分子と結合した状態である、生成物、特に
【００４７】
【化５】
2021524452.tif 000006
【００４８】
を意味する;
用語「ヘミアセタール形態」は、多糖単位の変換の生成物であって、少なくとも1個のアルデヒド基が、多糖単位又は他の化合物の置換酸素原子に結合している、生成物、特に
【００４９】
【化６】
2021524452.tif 000007
【００５０】
を意味する;
用語「アセタール形態」は、多糖単位の変換の生成物であって、少なくとも1個のアルデヒド基が、多糖単位又は他の化合物の2個の置換酸素原子に結合している、生成物を意味する;
用語「置換酸素原子」は、置換基Rが水素又は酸素でない、任意のROHの構造を意味する;
用語「薬学的に許容される賦形剤」は、最終剤形を調製するための製薬業界での使用が承認されており、有効成分ではないが、有効成分の生物学的効率と最終剤形の物性の両方に影響を与えることができる、化合物を意味する;
用語「組み合わせ」は、その成分の相加作用と異なる生物学的作用を有する、成分が均質又はほぼ均質な混合物を意味する;
用語「植物材料抽出物」は、植物起源の基材を抽出及び濃縮することにより得られる物質を意味する。
【００５１】
試験方法
核磁気共鳴(NMR)分光法
該方法を使用して、物質の分子構造を決定した。
【００５２】
スペクトルデータを得るために、正確に秤量した試料(15〜30mg)を、D2O50mgに10〜11のpHで溶解し(Na2CO3又はNaOHで調整)、1mg/mlの濃度のD2O中のTSP溶液50μl(添加したTSPの量は50μgであった)を溶液に添加した。溶液をNMRバイアル(d=5mm)に移し、NMR分光計に入れた。磁場均一度を調整した。スペクトルを記録した。0ppmと等しいTSP化学シフトに従って又は溶媒シグナルの残留プロトンに従ってシグナルを設定した。
【００５３】
DOSYスペクトルを以下の条件下で記録した:1スペクトルあたりのポイント数は32Kであった;パルス間の遅延は15秒であった;パルス角度は90°であった。スペクトル蓄積の数は64であり、16ポイントを含有する勾配は3mT/m〜0.4T/mであり、拡散時間は0.1秒であった。
【００５４】
UV分光光度検出及び質量分析検出を含む高速液体クロマトグラフィー(HPLC-UV-MS)
該方法を使用して、組成物の質的及び定量的含有量を決定した。ダイオードアレイ検出器及び質量選択検出器での順次検出と共に、Aglient社1260液体クロマトグラフィーシステムで分析を行った。水中の0.1%ギ酸溶液及び勾配溶出モードのアセトニトリルを溶出液として使用して、Zorbax Eclipse Plus C18クロマトグラフカラム(Agilent社)での分離を行った。中古のシングル四重極質量分析検出器でのイオン化を、エレクトロスプレー法で行った。検出を陰イオンリフレクトロンモードで行った。ダイオードマトリックス検出器での検出を254nmの波長で行い、UVスペクトルを200〜400nmの範囲で記録した。
【００５５】
フーリエ変換赤外線分光法(IR)
IR分光法を使用して、得られた化合物の構造を確認した。スペクトルを、臭化カリウムディスク中、4000〜400cm-1の範囲でSpectrum65分光計(Perkin Elmer社)に、及び4000〜650cm-1の範囲でATR法により記録した。
【００５６】
紫外可視スペクトル領域における分光光度法(UV-Vis)
分光光度法を使用して、得られた化合物のアイデンティティを確認した。スペクトルを、厚さ1cmの石英セル中、220〜700cm-1の範囲でLambda25分光光度計(Perkin Elmer社)に記録した。
【００５７】
電位差酸塩基滴定
電位差酸塩基滴定方法を使用して、試料中のカルボニル基の数を決定した。
【００５８】
決定は、水酸化ナトリウム溶液で滴定される塩酸の形成をもたらす、アルデヒド基とヒドロキシルアミン塩酸塩との反応に基づくオキシム法で行った。
【００５９】
ゲル浸透クロマトグラフィー(GPC)
ゲル浸透クロマトグラフィー法を使用して、ポリマー組成物及び原料の分子量及び分子量特性を決定した。屈折計及びダイオードアレイ検出器での順次検出と共に、Waters社液体クロマトグラフィーシステムで分析を行った。均一濃度溶出モードにおいて、溶離液として0.05Mリン酸緩衝液(pH=7.0)を用いて、連続配置し、ヒドロキシル化ポリメタクリレートゲルを充填した、各々1000及び120Åの孔径のUltrahydrogel 1000及びUltrahydrogel 120カラム(300×7.8mm)(Waters社)で分離を行った。
【００６０】
9900、16230、41100、60300、129000、214800、456800の質量平均分子量(Mw)を有するデキストラン標準品を用いてカラムを較正した。
【００６１】
較正曲線を3次多項式で近似した。ユニバーサル較正及びソフトウェア「Breeze 2」を用いて、ポリマーの分子質量特性を算出した。
【実施例１】
【００６２】
200mlビーカーに水27.6gを充填し、次いでNaOH溶液(34.8%)60gをそこに添加した。その後、温度を58℃以下に維持しながら、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するジアルデヒドカルボキシメチルセルロース(以後、DACMCと称する)60gを撹拌しながら添加した。反応塊を室温で3時間撹拌した後、撹拌を停止し、カルボニル基の含有量が元のポリマーの81.4%に達するまで、反応塊を18時間熟成させた。翌日、反応塊を炭酸水素ナトリウム10gで酸性化し、30分間撹拌し、アセトンから沈殿させて、乾燥した。得られた組成物の収率は76.8gであった。
【実施例２】
【００６３】
200mlビーカーにNaOH溶液(20%)70gを充填した。その後、2.3mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC7gを撹拌しながら添加し、多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の26.5%に達するまで、反応塊を25℃で60分間撹拌し、その後、炭酸水素ナトリウム23gを反応塊に添加し、30分間撹拌した。更に、反応塊をアセトンから沈殿させ、乾熱オーブンで乾燥した。得られた組成物の収率は39.2gであった。
【実施例３】
【００６４】
200mlビーカーにNa2CO3溶液(20%)70gを充填した。その後、2.3mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC7gを撹拌しながら添加し、多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の62.2%に達するまで、反応塊を25℃で180分間撹拌した。更に、反応塊をアセトンから沈殿させ、乾熱オーブンで乾燥した。得られた組成物の収率は18.8gであった。
【実施例４】
【００６５】
200mlビーカーに水20gを充填し、次いでNaOH溶液(10%)1gをそこに添加した。その後、温度を58℃以下に維持しながら、1.60mmol/gのカルボニル基含有量を有するジアルデヒドデキストラン(以後、DADと称する)1gを撹拌しながら添加した。反応塊を室温で3時間撹拌した後、撹拌を停止し、カルボニル基の含有量が元のポリマーの46.9%に達するまで、反応塊を18時間熟成させた。翌日、反応塊を炭酸水素ナトリウム0.12gで酸性化し、30分間撹拌し、凍結乾燥し、乾燥した。得られた組成物の収率は1.0gであった。
【実施例５】
【００６６】
200mlビーカーに水20gを充填し、次いでNaOH溶液(34.8%)1gをそこに添加した。その後、温度を58℃以下で維持しながら、1.60mmol/gのカルボニル基含有量を有するDAD1gを撹拌しながら添加した。反応塊を室温で3時間撹拌した後、撹拌を停止し、カルボニル基の含有量が元のポリマーの66.2%に達するまで、反応塊を18時間熟成させた。翌日、反応塊を炭酸水素ナトリウム0.12gで酸性化し、30分間撹拌し、凍結乾燥し、乾燥した。得られた組成物の収率は1.4gであった。
【実施例６】
【００６７】
200mlビーカーに水9.2g及びNaOH溶液(34.8%)20gを充填した。その後、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC20gを撹拌しながら添加し、多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の81.4%に達するまで、反応塊を25℃で20分間撹拌した。その後、アセトン2ml中のヘミゴシポール0.02gを反応塊に添加した。更に、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が100%に達し、多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の81.4%に達するまで、反応塊を25℃で20分間撹拌した。次いで、反応塊を凍結乾燥した。得られた組成物の収率は20.2gであった。
【実施例７】
【００６８】
200mlビーカーに水9.2g及びNaOH溶液(34.8%)20gを充填した。その後、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC20gを撹拌しながら添加し、多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の81.4%に達するまで、反応塊を25℃で20分間撹拌した。その後、アセトン5ml中のヘミゴシポール0.1gをそこに添加した。更に、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が86.4%に達し、多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の81.4%に達するまで、反応塊を25℃で20分間撹拌した。次いで、反応塊を凍結乾燥した。得られた組成物の収率は20.5gであった。
【実施例８】
【００６９】
200mlビーカーに水10.0g及びNaOH溶液(34.8%)24gを充填した。その後、温度を58℃以下で維持しながら、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC24gを撹拌しながら添加し、多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の89.36%に達するまで、反応塊を20分間撹拌した。ゴシポール酢酸0.4gをアセトン25ml、NaOH溶液(34.8%)2.4ml及び水10.0mlに25℃で10分間溶解することにより、ゴシポール溶液を同時に調製した。次いで、ポリフェノール溶液をポリマー溶液に添加した。更に、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が100%に達し、多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の89.36%に達するまで、反応塊を37℃で10分、次いで20℃で60分間撹拌した。次いで、NaHCO3を添加することにより反応混合物のpHを11に調整し、生成物をアセトンから沈殿させた。得られた組成物の収率は28.7gであった。
【実施例９】
【００７０】
200mlビーカーに水10.0g及びNaOH溶液(34.8%)24gを充填した。その後、温度を58℃以下で維持しながら、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC24gを撹拌しながら添加し、多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の93.61%に達するまで、反応塊を20分間撹拌した。ゴシポール酢酸1.6gをアセトン25ml、NaOH溶液(34.8%)2.4ml及び水10.0mlに25℃で10分間溶解することにより、ゴシポール溶液を同時に調製した。次いで、ポリフェノール溶液をポリマー溶液に添加した。更に、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が100%に達し、多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の93.61%に達するまで、反応塊を37℃で10分、次いで20℃で60分間撹拌した。次いで、NaHCO3を添加することにより反応混合物のpHを11に調整し、生成物をアセトンから沈殿させた。得られた組成物の収率は28.7gであった。
【実施例１０】
【００７１】
500mlビーカーにNaOH溶液(20%)200gを充填した。その後、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC20g及びゴシポール0.2gを撹拌しながら添加した。多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の24.5%に達し、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が100%に達するまで、反応塊を25℃で72時間撹拌した。その後、炭酸水素ナトリウム75gを反応塊に添加し、30分間撹拌した。次いで、反応塊を凍結乾燥した。得られた組成物の収率は45.4gであった。
【実施例１１】
【００７２】
500mlビーカーにNaOH溶液(20%)200gを充填した。次いで、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC20g及びゴシポール0.6gを撹拌しながら添加した。多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の34.0%に達し、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が100%に達するまで、反応塊を25℃で72時間撹拌した。その後、炭酸水素ナトリウム75gを反応塊に添加し、30分間撹拌した。次いで、反応塊を凍結乾燥した。得られた組成物の収率は49.5gであった。
【実施例１２】
【００７３】
500mlビーカーにNaOH溶液(20%)200gを充填した。その後、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC20g及びゴシポール1gを撹拌しながら添加した。多糖中のカルボニル基の含有量が元の含有量の34.0%に達し、100〜2000AMUの分子量を有するポリフェノールへの出発ポリフェノールの変換が100%に達するまで、反応塊を25℃で72時間撹拌した。その後、炭酸水素ナトリウム75gを反応塊に添加し、30分間撹拌した。次いで、反応塊を凍結乾燥した。得られた組み合わせの収率は39.5gであった。
【実施例１３】
【００７４】
200mlビーカーに水27.6gを充填し、次いでNaOH溶液(34.8%)60gをそこに添加した。その後、温度を58℃以下で維持しながら、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC60gを撹拌しながら添加した。反応塊を室温で3時間撹拌した後、撹拌を停止し、カルボニル基の含有量が元のポリマーの81.4%に達するまで、反応塊を18時間熟成させた。翌日、反応塊を炭酸水素ナトリウム10gで酸性化し、30分間撹拌し、アセトンに分離し、乾燥した。得られた物質を限外ろ過装置に充填し、限外ろ過を10kDa膜上で行い、0.85mmol/gのカルボニル基含有量を有するポリマー中間体を得た。
【００７５】
50mlビーカーに水20gを充填した。次いで0.85mmol/gのカルボニル基含有量を有するポリマー中間体0.5gを撹拌しながら添加し、反応塊を25℃で10分間撹拌した。その後、水中で25℃で5分間予備熟成させたリン酸オセルタミビル溶液(10-3g)1mlをそこに添加した。反応塊を25℃で30分間撹拌した。次いで、反応塊を凍結乾燥した。得られた組み合わせの収率は0.5gであった。
【実施例１４】
【００７６】
200mlビーカーに水27.6gを充填し、次いでNaOH溶液(34.8%)60gをそこに添加した。その後、温度を58℃以下で維持しながら、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC60gを撹拌しながら添加した。反応塊を室温で3時間撹拌した後、撹拌を停止し、カルボニル基の含有量が元のポリマーの81.4%に達するまで、反応塊を18時間熟成させた。翌日、反応塊を炭酸水素ナトリウム10gで酸性化し、30分間撹拌し、アセトンに分離し、乾燥した。0.79mmol/gのカルボニル基含有量を有するポリマー中間体を得た。
【００７７】
100mlビーカーにアセトン50mlを充填した。次いで0.79mmol/gのカルボニル基含有量を有するポリマー中間体10gを撹拌しながら添加し、反応塊を25℃で5分間撹拌した。その後、アセトン3ml中のエキナセア抽出物0.3gを反応塊に添加した。反応塊を25℃で30分間撹拌した。反応塊を回転式蒸発器で乾燥するまで蒸発し、40℃の乾熱オーブンで乾燥した。得られた組み合わせの収率は10gであった。
【実施例１５】
【００７８】
200mlビーカーに水27.6gを充填し、次いでNaOH溶液(34.8%)60gをそこに添加した。その後、温度を58℃以下で維持しながら、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC60gを撹拌しながら添加した。反応塊を室温で3時間撹拌した後、撹拌を停止し、カルボニル基の含有量が元のポリマーの81.4%に達するまで、反応塊を18時間熟成させた。翌日、反応塊を炭酸水素ナトリウム10gで酸性化し、30分間撹拌し、アセトンに分離し、乾燥した。0.79mmol/gのカルボニル基含有量を有するポリマー中間体を得た。
【００７９】
100mlビーカーにアセトン50mlを充填した。次いで0.79mmol/gのカルボニル基含有量を有するポリマー中間体10gを撹拌しながら添加し、反応塊を25℃で5分間撹拌した。その後、アセトン3ml中のリコリス抽出物0.3gを反応塊に添加した。反応塊を25℃で30分間撹拌した。反応塊を回転式蒸発器で乾燥するまで蒸発し、40℃の乾熱オーブンで乾燥した。得られた組み合わせの収率は10gであった。
【実施例１６】
【００８０】
200mlビーカーに水27.6gを充填し、次いでNaOH溶液(34.8%)60gをそこに添加した。その後、温度を58℃以下に維持しながら、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC60gを撹拌しながら添加した。反応塊を室温で3時間撹拌した後、撹拌を停止し、カルボニル基の含有量が元のポリマーの81.4%に達するまで、反応塊を18時間熟成させた。翌日、反応塊を炭酸水素ナトリウム10gで酸性化し、30分間撹拌し、アセトンに分離し、乾燥した。0.79mmol/gのカルボニル基含有量を有するポリマー中間体を得た。
【００８１】
100mlビーカーにアセトン50mlを充填した。次いで0.79mmol/gのカルボニル基含有量を有するポリマー中間体10gを撹拌しながら添加し、反応塊を25℃で5分間撹拌した。その後、アセトン3ml中のショウガ抽出物0.3gを反応塊に添加した。反応塊を25℃で30分間撹拌した。反応塊を回転式蒸発器で乾燥するまで蒸発し、40℃の乾熱オーブンで乾燥した。得られた組み合わせの収率は10gであった。
【実施例１７】
【００８２】
200mlビーカーに水27.6gを充填し、次いでNaOH溶液(34.8%)60gをそこに添加した。その後、温度を58℃以下に維持しながら、0.94mmol/gのカルボニル基含有量を有するDACMC60gを撹拌しながら添加した。反応塊を室温で3時間撹拌した後、撹拌を停止し、カルボニル基の含有量が元のポリマーの81.4%に達するまで、反応塊を18時間熟成させた。翌日、反応塊を炭酸水素ナトリウム10gで酸性化し、30分間撹拌し、アセトンから沈殿させ、乾燥した。0.79mmol/gのカルボニル基含有量を有するポリマー中間体を得た。
【００８３】
100mlビーカーにアセトン50mlを充填した。次いで0.79mmol/gのカルボニル基含有量を有するポリマー中間体10gを撹拌しながら添加し、反応塊を25℃で5分間撹拌した。その後、アセトン3ml中のエレカンパン抽出物0.3gを反応塊に添加した。反応塊を25℃で30分間撹拌した。反応塊を回転式蒸発器で乾燥するまで蒸発し、40℃の乾熱オーブンで乾燥した。得られた組み合わせの収率は10gであった。
【００８４】
【表１】
2021524452.tif 000008
【００８５】
【表２】
2021524452.tif 000009
【００８６】
医薬製剤の実施例
錠剤を、伝統的な方法、即ち、成分を混合し、打錠機で直接圧縮することにより打錠して製造した。錠剤の質的及び定量的組成をTable 3(表3)に示す。
【００８７】
【表３】
2021524452.tif 000010
【００８８】
溶解性を試験すると、100rpmでミキサーを用いて撹拌しながら、錠剤を水500mlに溶解すると、100%の活性物質が45分で溶液になることが見出された。
【００８９】
組成物を調製するために開発された方法では、明確に定義された制御点を有する追加の工程により、出発ポリフェノールと比較して物理化学的及び生物学的特性が改善された生成物が得られ、限られた数の出発化合物にもかかわらず、生成物の構造多様性を大幅に拡大できる。
【００９０】
Table 4(表4)に示す例は、同じ出発成分を使用して、条件に応じて、得られたポリフェノール(実施例8及び9)及びポリマー成分(実施例4及び5)の質的及び定量的含有量が異なる組成物が得られることを示している。
【００９１】
特に、方法が、強アルカリ条件下で行われる場合、アルカリ条件下で不安定なポリフェノールは、その構造類似体に変換される。導入されたポリフェノールの修飾を含む組成物のクロマトグラムを図1に示す。
【００９２】
【表４】
2021524452.tif 000011
【００９３】
開発された方法の更なる利点は、補助物質(例えば、炭酸ナトリウム)を最終医薬物質にその後添加するのではなく、合成中に組成物に導入する可能性である。更に、上記の方法は、他の医薬物質(実施例13)と薬用植物抽出物(実施例14〜17)の両方との組み合わせを調製することにより、生物学的特性を調整することを可能にする。
【００９４】
得られた組成物の構造及び定量的含有量を、HPLC-UV-MS、NMR、GPC、IR分光法及び電位差滴定の方法により試験した。
【００９５】
ポリマーに導入された芳香族成分を、対応するポリフェノールの基準に従って、又は保持時間、質量及びUVスペクトルにより同定した。得られた組成物中の未同定ポリフェノールの含有量をHPLCで決定し、各個々の物質の基準の欠如により外部基準として利用するゴシポールに従って算出した。
【００９６】
組成物である生成物のHPLCクロマトグラムが、個々のポリフェノールのピークの存在によってのみ、空試料(導入されたポリフェノールなしの生成物)の対応するクロマトグラムと異なるため、組成物の成分間の共有結合がないと言える。
【００９７】
ポリフェノールを導入せずに得られる組成物のクロマトグラムを図2に示す(検出は254nmで行った)。
【００９８】
ポリマーとポリフェノールとの間の共有結合の不在の更なる確認は、図3に示す組成物のNMR分析である。実施例9の試料について、DOSYスペクトルを記録した。このスペクトルは、ポリマー(3〜5ppmの範囲のシグナルの群)とポリフェノール(6〜11ppmの範囲の芳香族シグナル及び2.5〜0.5ppmの範囲の脂肪族シグナル)との間の自己拡散係数の違いを示す。
【００９９】
組成物の調製中、ポリマー部分の構造は、カルボニル基に関連している場合のみ大きく変化した。Table 5(表5)は、ポリマー部分が様々な程度で修飾されるように条件が選択された組成物の例を示しており、これは出発ポリマーと比較したアルデヒド基の含有量に反映される。
【０１００】
【表５】
2021524452.tif 000012
【０１０１】
図4は出発ポリマーと比較した組成物(実施例8)のIRスペクトルを示している。組成物のIRスペクトルの形態がポリマー成分によりほぼ完全に決定されることが分かる。出発DACMCのIRスペクトルと比較すると、カルボニル基の振動に対応する1727cm-1の特性バンドを除いて、吸収バンドの位置及び強度の有意な変化はない。
【０１０２】
アルデヒド基の含有量の変化はまた、カルボニル基の振動に対応する1727cm-1のバンドが完全に消失したIRスペクトルに反映される。
【０１０３】
得られた組成物の質量平均分子量は、3530〜39100Daの範囲内にあり、導入されたポリマーのタイプ及びプロセス条件により決定される(Table 6(表6))。
【０１０４】
【表６】
2021524452.tif 000013
【０１０５】
合成物に導入された塩成分の量を電位差滴定により決定した。組成物中の塩の量は、導入されたものと完全に相関している。
【０１０６】
MDCK細胞培養下の物質の細胞毒性作用の決定
実験研究において、67〜70回継代培養したMDCK ECACC細胞株(Sigma社、cat. No.85011435)を使用した。細胞株を10%胎児血清(HyClone社)、300μg/ml L-グルタミン及び0.1mg/mlノルモシンを含有するイーグルMEM(PanEco社)で増殖した。
【０１０７】
MDCK ECACC細胞を、10%胎児血清(HyClone社)、300μg/ml L-グルタミン及び0.1mg/mlノルモシンを含有するイーグルMEM(PanEco社)中の96ウェルプレートに18000細胞/ウェルの速度で添加し、24時間培養し、物質を導入する前に血清を含まない培地で1回洗浄した。
【０１０８】
試験物質の希釈のために、以下の組成の支持培地を使用した:2%胎児血清(HyClone社)、300μg/ml L-グルタミン、12μg/mlキモプシン-トリプシン及び0.1mg/mlノルモシンを含有するイーグルMEM(PanEco社)。
【０１０９】
各実験条件を4つの平行ウェルで試験した。最終希釈物を4つのウェルのうちの最初の2つに置き、支持培地を4つのウェルのうちの残りの2つ(細胞対照)に添加した。
【０１１０】
細胞を、試験物質と共に37℃のCO2インキュベーターで48時間インキュベートした後、培養培地を除去し、支持培地100μl及びMTS溶液20μl(Promega社、cat. No. G3581)を各ウェルに添加した。37℃で3時間のインキュベーション後、BIO-RADマイクロプレート吸光分光光度計を用いて、光学密度を492nmの波長及び620nmの参照波長で決定した。対照細胞と比較して光学密度値を50%低下させる試験物質の濃度を50%細胞毒性用量(CC50)とした。
【０１１１】
MDCK細胞培養下のインフルエンザウイルスの感染力価に対する物質の作用の試験
MDCK株に適合したインフルエンザA/Puerto-Rico/8/34(H1N1)ウイルスを試験に使用した。ウイルスの感染及び赤血球凝集活性を、WHOにより推奨される方法により決定した。
【０１１２】
2%胎児血清(HyClone社)、300μg/ml L-グルタミン、12μg/mlキモプシン-トリプシン及び0.1mg/mlノルモシンを含有するイーグルMEM(PanEco社)を用いて、試験物質のウイルス特異的作用をMDCK ECACC細胞中のインフルエンザウイルスのA/Puerto-Rico/8/34(H1N1)株に対して試験した。試験した物質の細胞毒性作用の決定に関する実験と同様の方法で、MDCK ECACC細胞培養物を調製した。ウイルスの感染前に、MDCK細胞を、血清を含まないイーグルMEMで1回洗浄し、次いで支持培地中で予備調製された物質の希釈物(単一濃度)100μlをウェルに添加し、37℃で1時間インキュベートした。その後、予備調製されたウイルスの10倍希釈物10μlを添加した。細胞及びウイルスを、同じ培地を用いて同様に管理した。48時間後、CPE及び赤血球凝集反応(HAR)に従って結果を評価した。HARでは、生理食塩水中のヒト赤血球(血液型O)の0.75%懸濁液を使用した。
【０１１３】
各試験した化合物の50%細胞毒性濃度(CC50)及び50%阻害濃度(IC50)をExcel及びGraphPad社Prism 6.01ソフトウェアパッケージを用いて算出した。4パラメーターロジスティク曲線方程式を、CC50の分析の作業モデルとした(メニュー項目「非線形回帰」-「シグモイド用量応答(可変スロープ)」)。IC50の分析に、同様の4パラメーターロジスティック曲線方程式(メニュー項目「非線形回帰」-「ログ(阻害)対応答(可変スロープ)」)を利用した。試験した物質(ΔlgTCID50)のウイルス阻害作用を、対照ウェルと比較した実験ウェルにおけるウイルス感染力価の低下で評価し、Reed and Muench法により算出した。結果をTable 7(表7)に示す。
【０１１４】
【表７】
2021524452.tif 000014
【０１１５】
公知のポリフェノール(ゴシポール及びアポゴシポール)と比較して、試験した試料は全て、活性値が同程度であるか又はより高く、細胞毒性値が顕著に低い。
【０１１６】
黄色ブドウ球菌に対する物質の抗微生物活性の試験
実験は、前臨床試験の実施のガイドラインに従って行われた(Mironov、2012編)。
【０１１７】
最小阻止(抑制、静菌)濃度(MIC)及び最小細菌濃度(MBC)を決定した。
【０１１８】
1.黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)(臨床分離株)
105CFU/mlのブドウ球菌の感染用量を使用して、臨床ブドウ球菌株での試験を行った。等体積のDMSO及び注射用水を使用して、実施例1、8及び9の物質を100mg/mlに希釈した。物質の出発溶液をPES膜を有するシリンジフィルターに通した。2つのレプリカを用いて、物質の希釈物及び試験株を液体栄養培地で共培養することにより、96ウェル平底プレートでの連続希釈法でMIC値を決定した。MIC値を、視認できる微生物の増殖を阻害する物質の最小濃度として決定した。MBCを決定するために、インキュベーション後のウェルの内容物を、寒天培地に播種した。結果をTable 8(表8)に示す。
【０１１９】
【表８】
2021524452.tif 000015
【０１２０】
実施例1及び8の物質について、105CFU/mlの濃度でのブドウ球菌との共培養において、MIC値は25mg/mlであり、MBC値は決定されなかった(最初のウェルの物質の濃度より高かった)。実施例9の物質について、MIC値は25mg/mlであり、MBC値は50mg/mlであった。
【０１２１】
2.  黄色ブドウ球菌6538P(参照株)
様々な感染用量のブドウ球菌(103、104、105、106及び107CFU/ml)を用いて、参照黄色ブドウ球菌株(黄色ブドウ球菌6538P)での試験を行った。等体積のDMSO及び注射用水を使用して、実施例1及び9の物質を100mg/mlに希釈し、実施例8の物質を200mg/mlに希釈した。希釈した調製物を撹拌し、37℃の水浴に2時間溶解した。物質の出発溶液をPES膜を有するシリンジフィルターに通した。最初に、実施例1及び9の物質を200mg/mlに希釈したが、濾過できなかったため、溶液を更に2回希釈した。
【０１２２】
2つのレプリカを用いて、物質の希釈物及び試験株を液体栄養培地で共培養することにより、96ウェル平底プレートでの連続希釈法でMIC値を決定した。MIC値を、視認できる微生物の増殖を阻害する物質の最小濃度として決定した。MBCを決定するために、インキュベーション後のウェルの内容物を、ウェルから寒天培地に播種した。結果をTable 9(表9)に示す。
【０１２３】
【表９】
2021524452.tif 000016
【０１２４】
106及び107CFU/mlの濃度のブドウ球菌に対する実施例9の物質の作用を比較すると、物質のMIC及びMBC値が、濾過前後で異なることが見出された。106CFU/mlの濃度でのブドウ球菌に対する物質の影響下で、濾過後のMIC値は4倍低下した(濾過前6.25mg/ml、及び濾過後25mg/ml);濾過後のMBC値は決定されず(>50)、濾過前は50mg/mlであった。107CFU/mlの濃度でのブドウ球菌に対する物質の影響下で、濾過後のMIC値は、2倍低下した(濾過前12.5mg/ml、及び濾過後25mg/ml);濾過後のMBC値は決定されず(>50)、濾過前は50mg/mlであった。
【図１】
2021524452.tif 000019
【図２】
2021524452.tif 000020
【図３】
2021524452.tif 000021
【図４】
2021524452.tif 000022
【手続補正書】
【提出日】令和3年1月19日(2021.1.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的有効量の有効成分及び薬学的に許容される賦形剤を含有する抗微生物組成物であって、
有効成分が、共有結合により結合していない、多糖及びポリフェノールベースの生成物であり、生成物が、
ジアルデヒドカルボキシメチルセルロース及びジアルデヒドデキストランからなる群から選択される最初の多糖を、水性又は水性有機溶媒中、10〜14のpH及び10〜60℃の温度で前処理して、最初の多糖に対してカルボニル基を95〜20%含有する処理された多糖を得る前処理の工程であって、場合により、追加の精製及び/又は酸性化及び/又は脱塩及び/又は分画の工程を含む前処理の工程、及び、
アポゴシポール、ゴシポロン、アポゴシポロン、ゴシポール、ゴシポール酢酸、1,1',6,6',7,7'-ヘキサヒドロキシ-5,5'-ジイソプロピル-3,3'-ジメチル-2,2'-ビナフタレン-8-カルボアルデヒド、6,6',7,7'-テトラヒドロキシ-5,5'-ジイソプロピル-3,3'-ジメチル-1,1',4,4'-テトラオキソ-1,1',4,4'-テトラヒドロ-2,2'-ビナフタレン-8-カルボアルデヒドからなる群から選択される最初のポリフェノールを、水性又は水性有機溶媒中、10〜14の範囲のpH及び10〜60℃の温度で前処理して、300〜550の原子量単位の分子量を有する処理されたポリフェノールを得る前処理の工程であって、場合により、追加の精製及び/又は酸性化及び/又は脱塩及び/又は分画の工程を含む前処理の工程、
次いで、処理されたポリフェノールと処理された多糖とを組み合わせ、これらを水性又は水性有機溶媒中、10〜14のpH及び10〜60℃の温度で共処理する工程と、得られた生成物を酸性化、分離及び精製する工程と
により得られる生成物である、抗微生物組成物。
【請求項２】
生物学的有効量の有効成分及び薬学的に許容される賦形剤を含む抗微生物組成物であって、有効成分が、ジアルデヒドカルボキシメチルセルロース及びジアルデヒドデキストランからなる群から選択される最初の多糖を、水性又は水性有機溶媒中、10〜14のpH及び10〜60℃の温度で処理して、最初の多糖に対してカルボニル基を95〜20%含有する処理された多糖を得る処理の工程であって、場合により、追加の精製及び/又は酸性化及び/又は脱塩及び/又は分画の工程を含む処理の工程により得られる生成物である、抗微生物組成物。
【請求項３】
請求項1又は2に記載の抗微生物組成物、並びにエレカンパン、ショウガ、リコリス(根)、及びパープルエキナセアからなる群から選択される少なくとも1つの植物材料抽出物、並びに薬学的に許容される賦形剤を含有する抗微生物性組み合わせであって、組み合わせ中の抽出物の含有量が0.01〜99.99%である、抗微生物性組み合わせ。
【請求項４】
組み合わせの抽出物の含有量が1.0〜50.0%、好ましくは1.0〜10.0%である、請求項3に記載の抗微生物性組み合わせ。
【請求項５】
組み合わせ中のオセルタミビルの含有量が0.0000001〜99.9999999%である、請求項1又は2に記載の組成物及びオセルタミビルを含有する抗微生物性組み合わせ。
【請求項６】
オセルタミビルの含有量が0.0000001〜10.0%、好ましくは0.0001〜5.0%である、請求項5に記載の抗微生物性組み合わせ。
【請求項７】
請求項1に記載の組成物を調製する方法であって、
-  ジアルデヒドカルボキシメチルセルロース及びジアルデヒドデキストランからなる群から選択される最初の多糖を、水性又は水性有機溶媒中、10〜14のpH及び10〜60℃の温度で前処理して、最初の多糖に対して95〜20%のカルボニル基を含有する処理された多糖を得る工程であって、場合により、追加の精製及び/又は酸性化及び/又は脱塩及び/又は分画の工程を含む、工程と、
-  アポゴシポール、ゴシポロン、アポゴシポロン、ゴシポール、ゴシポール酢酸、1,1',6,6',7,7'-ヘキサヒドロキシ-5,5'-ジイソプロピル-3,3'-ジメチル-2,2'-ビナフタレン-8-カルボアルデヒド、6,6',7,7'-テトラヒドロキシ-5,5'-ジイソプロピル-3,3'-ジメチル-1,1',4,4'-テトラオキソ-1,1',4,4'-テトラヒドロ-2,2'-ビナフタレン-8-カルボアルデヒドからなる群から選択される最初のポリフェノールを、水性又は水性有機溶媒中、10〜14の範囲のpH及び10〜60℃の温度で前処理して、300〜550の原子質量単位の分子量を有する処理されたポリフェノールを得る工程であって、場合により、追加の精製及び/又は酸性化及び/又は脱塩及び/又は分画の工程を含む工程と、
-  処理されたポリフェノールと処理された多糖とを組み合わせ、これらを水性又は水性有機溶媒中、10〜14のpH及び10〜60℃の温度で共処理する工程と、
-  得られた生成物を酸性化、分離及び精製する、その後の工程と、
-  得られた生成物と薬学的に許容される賦形剤とを組み合わせる最終工程と
を含む、方法。
【請求項８】
最初の多糖に対して95〜20%のカルボニル基を含有する処理された多糖を調製する方法であって、
-  ジアルデヒドカルボキシメチルセルロース及びジアルデヒドデキストランからなる群から選択される最初の多糖を、水性又は水性有機溶媒中、10〜14のpH及び10〜60℃の温度で前処理して、最初の多糖に対して95〜20%のカルボニル基を含有する処理された多糖を得る工程であって、任意で追加の精製及び/又は酸性化及び/又は脱塩及び/又は分画の工程を含む、工程と、
-  得られた生成物を酸性化、分離及び精製するその後の段階と、
を含む、方法。
【請求項９】
有機溶媒が、アセトン、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、1,4-ジオキサン、テトラヒドロフラン、好ましくはアセトン、エチルアルコール、イソプロピルアルコールである、請求項7又は8に記載の方法。
【請求項１０】
請求項1又は2に記載の組成物を含有する抗微生物剤。
【請求項１１】
抗微生物剤が、インフルエンザ、ヘルペス、肝炎及びHIVウイルス、呼吸器ウイルス感染症、並びに細菌感染症に対して有効である、請求項10に記載の抗微生物剤。
【請求項１２】
請求項3に記載の組み合わせを含有する、抗微生物剤。
【請求項１３】
抗微生物剤が、インフルエンザ、ヘルペス、肝炎、HIV、呼吸器ウイルス感染症、並びに細菌感染症に対して有効である、請求項12に記載の抗微生物剤。
【国際調査報告】
2021524452.tif 000023
2021524452.tif 000024
2021524452.tif 000025