(57)【要約】  抗ＣＤ３８抗体に関する、または抗ＣＤ３８抗体に由来する組成物および方法が開示される。より具体的には、ＣＤ３８に結合する完全ヒト抗体、かかる抗体のＣＤ３８抗体結合性断片および誘導体、ならびにかかる断片を含むＣＤ３８結合性ポリペプチドが開示される。なおさらに、かかる抗体、抗体断片および誘導体ならびにポリペプチドをコードする核酸、かかるポリヌクレオチドを含む細胞、かかる抗体、抗体断片および誘導体ならびにポリペプチドを作製する方法、ならびに疾患を処置する方法を含む、かかる抗体、抗体断片および誘導体ならびにポリペプチドを使用する方法が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；
ｉｉ）膜貫通ドメイン；および
ｉｉｉ）細胞内ドメイン
を含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物。
【請求項２】
前記重鎖可変（ＶＨ）ドメインと前記軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含み、前記ペプチドリンカーが、配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物。
【請求項３】
前記抗原結合性タンパク質が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物。
【請求項４】
前記抗原結合性タンパク質と前記膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含み、前記ヒンジ領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物。
【請求項５】
前記抗原結合性タンパク質と前記膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含み、前記ＣＤ２８細胞外ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物。
【請求項６】
前記膜貫通ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメインである、請求項１に記載の抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物。
【請求項７】
前記細胞内ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインおよび配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインを含む、請求項１に記載の抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物。
【請求項８】
配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物。
【請求項９】
ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；
ｉｉ）膜貫通ドメイン；および
ｉｉｉ）細胞内ドメイン
を含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団であって、
前記宿主細胞または宿主細胞の集団が、前記抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物をコードする核酸に作動可能に連結した発現ベクターで形質導入され、
前記発現ベクターが、前記宿主細胞における前記抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物の発現を指示する、宿主細胞または宿主細胞の集団。
【請求項１０】
ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列で示されるＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列で示されるＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；
ｖ）膜貫通ドメイン；および
ｖｉ）細胞内ドメイン
を含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団であって、
前記宿主細胞または宿主細胞の集団が、前記抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物をコードする核酸に作動可能に連結した発現ベクターで形質導入され、
前記発現ベクターが、前記宿主細胞における前記抗ＣＤ３８キメラＣＡＲ構築物の発現を指示する、宿主細胞または宿主細胞の集団。
【請求項１１】
前記発現ベクターが、レトロウイルス発現ベクターまたはレンチウイルス発現ベクターを含む、請求項９または１０に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。
【請求項１２】
Ｔ宿主細胞（またはその集団）、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）からなる群から選択される、請求項９または１０に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。
【請求項１３】
前記抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物が、前記重鎖可変（ＶＨ）ドメインと前記軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含み、前記ペプチドリンカーが、配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項９または１０に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。
【請求項１４】
前記抗原結合性タンパク質が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。
【請求項１５】
前記抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物が、前記抗原結合性タンパク質と前記膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含み、前記ヒンジ領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域である、請求項９または１０に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。
【請求項１６】
前記抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物が、前記抗原結合性タンパク質と前記膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含み、前記ＣＤ２８細胞外ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。
【請求項１７】
前記膜貫通ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメインである、請求項９または１０に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。
【請求項１８】
前記細胞内ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインおよび配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインを含む、請求項９または１０に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。
【請求項１９】
前記抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物が、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。
【請求項２０】
抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物をコードする単離された核酸であって、前記抗ＣＤ３８構築物が、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、細胞外抗原結合性タンパク質；
ｂ．膜貫通ドメイン；および
ｃ．細胞内ドメイン
を含む、単離された核酸。
【請求項２１】
抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物をコードする単離された核酸であって、前記抗ＣＤ３８構築物が、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列で示されるＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号のアミノ酸配列で示されるＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、細胞外抗原結合性タンパク質；
ｂ．膜貫通ドメイン；および
ｃ．細胞内ドメイン
を含む、単離された核酸。
【請求項２２】
前記抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物が、前記重鎖可変（ＶＨ）ドメインと前記軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含み、前記ペプチドリンカーが、配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項２０または２１に記載の単離された核酸。
【請求項２３】
前記抗原結合性タンパク質が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の単離された核酸。
【請求項２４】
前記抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物が、前記抗原結合性タンパク質と前記膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含み、前記ヒンジ領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域である、請求項２０または２１に記載の単離された核酸。
【請求項２５】
前記抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物が、前記抗原結合性タンパク質と前記膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含み、前記ＣＤ２８細胞外ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項２０または２１に記載の単離された核酸。
【請求項２６】
前記膜貫通ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメインである、請求項２０または２１に記載の単離された核酸。
【請求項２７】
前記細胞内ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインおよび配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインを含む、請求項２０または２１に記載の単離された核酸。
【請求項２８】
配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２０または２１に記載の単離された核酸。
【請求項２９】
前記細胞外抗原結合性タンパク質が、ｓｃＦｖである、請求項２０または２１に記載の単離された核酸。
【請求項３０】
請求項２０または２１に記載の核酸を含む発現ベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国特許法第１１９条の下で、２０１７年１１月３日出願の米国仮特許出願第６２／５８１，４６６号、表題「ＣＤ３８−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ＣＡＲ  Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ」に対する優先権の利益を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本出願を通じて、種々の刊行物、特許および／または特許出願が参照される。これらの刊行物、特許および／または特許出願の開示は、本開示が属する分野の技術水準をより完全に記述するために、本出願中にそれらの全体がこれにより参照により組み込まれる。
配列表
【０００３】
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された、その全体がこれにより参照により組み込まれる配列表を含有する。２０１８年１０月３１日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、名称がＴ１０３０１９＿１２１０ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズが２４，５６０バイトである。
【０００４】
本開示は、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインおよび配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを有するｓｃＦｖ抗体によって方向づけられたＣＡＲ（キメラ抗原受容体）構築物を提供することによって、ＣＤ３８  ＣＡＲ形質導入を行う際のＴ細胞同胞殺し（ｆｒａｔｒｉｃｉｄｅ）の問題に対する解法を提供する。より具体的には、本開示は、より高いＣＤ３８を発現する腫瘍細胞に優先的に結合するが、ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞を含むより低いＣＤ３８を発現する正常Ｔ細胞を標的化しないことによってより高い安全性を実証するＣＤ３８指向性ＣＡＲ構築物を提供する。
【背景技術】
【０００５】
Ｔ細胞における新規特異性は、トランスジェニックＴ細胞受容体またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の遺伝子移入を介して生成されてきた。ＣＡＲは、単一の融合分子中の、１つまたは複数のシグナル伝達ドメインを伴う標的化部分からなる合成受容体である。一般に、ＣＡＲの結合性部分は、可動性リンカーによって連結されたモノクローナル抗体の軽鎖および重鎖可変断片を含む単鎖抗体（ｓｃＦｖ）の抗原結合性ドメインからなる。第１世代ＣＡＲのためのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータまたはＦｃ受容体ガンマ鎖の細胞質内領域に由来する。第１世代ＣＡＲは、Ｔ細胞の細胞傷害性の指向性を首尾よく変更することが示されているが、延長された拡大増殖および抗腫瘍活性をｉｎ  ｖｉｖｏで提供することはできていない。ＣＤ２８、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）および４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）を含む共刺激分子由来のシグナル伝達ドメインが、ＣＡＲ改変されたＴ細胞の生存を増強させ、その増殖を増加させるために、単独で（第２世代）または組み合わせて（第３世代）追加されている。ＣＡＲは、Ｔ細胞の指向性を、リンパ腫および固形腫瘍を含む種々の悪性腫瘍由来の腫瘍細胞の表面で発現される抗原に対するものへと変更することを首尾よく可能にしてきた。
【０００６】
養子免疫療法を使用した患者の処置のための現行のプロトコールは、自家細胞移入に基づく。このアプローチでは、Ｔリンパ球は、患者から回収され、ｅｘ  ｖｉｖｏで遺伝子改変または選択され、必要な場合、細胞の数を増幅するためにｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養され、最終的に患者に注入される。リンパ球注入に加えて、宿主（患者）は、Ｔ細胞の生着または免疫応答におけるそれらの関与を支持する他の方法、例えば、プレコンディショニング（放射線または化学療法による）、およびリンパ球成長因子（例えば、ＩＬ−２）の投与で操作され得る。各患者は、患者自身のリンパ球を使用する、個々に組み立てられた処置（すなわち、自家療法）を受ける。自家療法は、実用的な適用への実質的な技術的およびロジスティック上のハードルに直面しており、それらの生成は、高価な専用施設および専門職員を必要とし、患者の診断後短時間で生成される必要があり、多くの場合には、患者の事前処置が免疫機能の劣化をもたらし、その結果、患者のリンパ球は、あまり機能的でなく、非常に低い数で存在する可能性がある。これらのハードルに起因して、各患者の自家細胞の調製物は事実上、新製品であり、有効性および安全性における実質的なばらつきをもたらす。
【０００７】
ＣＡＲまたはトランスジェニックＴＣＲを発現する操作されたＴ細胞について、標的抗原がＴ細胞自体によって発現される場合、腫瘍を標的にするが腫瘍以外も標的にするために生ずる副作用（ｏｎ−ｔａｒｇｅｔ  ｏｆｆ−ｔｕｍｏｒ  ｓｉｄｅ  ｅｆｆｅｃｔ）には、「Ｔ細胞同胞殺し」もまた含まれ得る。ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔについて、Ｔ細胞同胞殺しがｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養の間に観察された。これは、ＣＡＲ−標的相互作用を遮断する抗ＣＤ３８抗体を使用してある程度まで軽減された。しかし、かかるアプローチは、ｉｎ  ｖｉｖｏでは試験されていない。ｉｎ  ｖｉｖｏでの同胞殺しの抗体媒介性の遮断は、ＣＤ２４４に対するモノクローナル抗体を使用して、マウスモデルにおいてＮＫ細胞についてのみ示されている（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｂｌｏｏｄ  １１０，  ２０２０−２０２３）。
【０００８】
トランスジェニックＴＣＲを発現するＴ細胞について、同胞殺しは、標的化されたＨＬＡ型について陰性の同種Ｔ細胞ドナーが使用される場合、潜在的に回避され得る（Ｌｅｉｓｅｇａｎｇ，  Ｍ．，  Ｗｉｌｄｅ，  Ｓ．，  Ｓｐｒａｎｇｅｒ，  Ｓ．，  Ｍｉｌｏｓｅｖｉｃ，  Ｓ．，  Ｆｒａｎｋｅｎｂｅｒｇｅｒ，  Ｂ．，  Ｕｃｋｅｒｔ，  Ｗ．，  ａｎｄ  Ｓｃｈｅｎｄｅｌ，  Ｄ．  Ｊ．  （２０１０）．  ＭＨＣ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｆｒａｔｒｉｃｉｄｅ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １２０，  ３８６９−３８７７．  Ｓｃｈｅｎｄｅｌ，  Ｄ．  Ｊ．，およびＦｒａｎｋｅｎｂｅｒｇｅｒ，  Ｂ．  （２０１３）．  Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＴＣＲ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｂｙ  ＭＨＣ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｆｒａｔｒｉｃｉｄｅ  ａｎｄ  ＴＣＲ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ．  Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２，  ｅ２２４１０．）。
【０００９】
ＣＤ３８は、長いＣ末端細胞外ドメインおよび短いＮ末端細胞質内ドメインを有する、４５ｋＤのＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８タンパク質は、ＮＡＤ＋のサイクリックＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）への変換を触媒でき、ｃＡＤＰＲをＡＤＰ−リボースへと加水分解することもできる、二機能性エクト酵素である。個体発生の間に、ＣＤ３８は、ＣＤ３４＋前駆細胞（ＣＤ３４＋  ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ）、ならびにリンパ系細胞、赤血球系細胞および骨髄性細胞の系統特異的前駆細胞（ｌｉｎｅａｇｅ−ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）上に出現する。ＣＤ３８発現は、ＴおよびＢ細胞発生の異なる段階において変動する発現レベルで、リンパ系系統において大部分は持続する。
【００１０】
ＣＤ３８は、多くの造血悪性腫瘍、ならびに非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性Ｂリンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）ならびに慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を含む種々の造血悪性腫瘍に由来する細胞系において上方調節される。他方、造血系の最も原始的な多能性幹細胞は、ＣＤ３８−である。造血悪性腫瘍におけるＣＤ３８発現および疾患進行とのその相関は、ＣＤ３８を抗ＣＤ３８抗体療法のための魅力的な標的にしている。
【００１１】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、抗体産生性形質細胞の悪性腫瘍であり、リンパ腫および白血病に次いで世界で３番目に多い血液学的がんである（Ｆｅｒｌａｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  １３６（５）：  Ｅ３５９−３８６．  ２０１５）。２０１６年には、米国で、ＭＭの推定された新たな症例は、３０，３３０例であり、１２，６５０例の推定死亡数である（Ｈｏｗｌａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ”ＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ，  １９７５−２０１３，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ，  ｈｔｔｐ：／／ｓｅｅｒ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｃｓｒ／１９７５＿２０１３／，  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０１５  ＳＥＥＲ  ｄａｔａ  ｓｕｂｍｉｓｓｉｏｎ，  ｐｏｓｔｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＳＥＥＲ  ｗｅｂ  ｓｉｔｅ．”    ２０１６）。新規免疫調節剤、プロテアソーム阻害剤および自家造血幹細胞移植を含む、ＭＭの処置における顕著な進歩にもかかわらず、現在、この疾患について治癒は存在せず、その５年生存率はわずか４５％である（Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １１１（５）：  ２５１６−２５２０，  ２００８；およびＫｈａｒｆａｎ−Ｄａｂａｊａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｈｅｍａｔｏｌ．  Ｏｎｃｏｌ．  ６：２，  ２０１３）。新規かつ有効な治療選択肢の開発は、ＭＭ患者にとって重要な要求であり続けている。本開示は、この要求に対処するために提供される。
【００１２】
Ｔ細胞は、事実上全ての生物学的空間を貫通でき、ウイルス疾患および自己免疫疾患において見られ、がんの稀な自発的寛解においても見られるように、正常細胞または悪性細胞を処理する力を有する。しかし、Ｔ細胞は、自己抗原または腫瘍抗原に対して容易に寛容化され、「免疫監視」は、臨床的に明らかな全てのがんにおいて明らかに失敗している。ＣＡＲによって認識される抗原の発現に基づいて悪性細胞を死滅させるために、抗体により規定された抗悪性細胞マーカー認識を提供することによって、それらの「内因性」Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）レパートリーに関係なく、患者のＴ細胞に特異性および親和性を供給することが、ＣＡＲ−Ｔ研究の目的である。
【００１３】
指向性が変更された殺腫瘍活性が得られるようにＣＡＲで操作されたＴ細胞の注入による養子免疫療法は、転移性がんの処置のために探索されてきた。ＣＡＲは、抗体の抗原認識ドメインを、Ｔ細胞由来の受容体のシグナル伝達ドメインに連結させることによって構築される。ＣＡＲ遺伝子によるＴ細胞の改変は、Ｔ細胞に、標的が変更された、抗体型の抗腫瘍細胞傷害性を備える。死滅化は主要組織適合複合体（ＭＨＣ）拘束されないので、このアプローチは、同じ抗原を有する全ての患者にとって一般的な療法を提供する。抗原特異的ＣＡＲで操作されたＴ細胞は、「Ｔ細胞」、「ＣＡＲ−Ｔ細胞」または「Ｔボディ（Ｔ−ｂｏｄｙ）」と呼ばれる（Ｅｓｈａｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ．  Ａｃａｄ．  ｏｆ  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０（２）：７２０−７２４）。第１世代ＣＡＲである免疫グロブリン−Ｔ細胞受容体（ＩｇＴＣＲ）は、活性化刺激（シグナル１）のみを送達するシグナル伝達ドメインを含有するように操作されたものである（ＴＣＲ−ＣＤ３ζ）（Ｇｒｏｓｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ．  Ａｃａｄ．  ｏｆ  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６（２４）：１００２４−１００２８；Ｅｓｈａｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ．  Ａｃａｄ．  ｏｆ  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０（２）：７２０−７２４；Ｈａｙｎｅｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６６（１）：１８２−１８７）。第１世代ＣＡＲのみがグラフトされたＴ細胞は、最適以下の活性化に起因して、限定的な抗腫瘍有効性を示す。第２世代ＣＡＲである免疫グロブリンＣＤ２８−ＣＤ３ζ−Ｔ細胞受容体（ＩｇＣＤ２８ＴＣＲ）は、第１世代受容体中に共刺激ＣＤ２８（シグナル２）を組み込み、ＣＡＲ−Ｔ細胞に、より高い抗腫瘍能を与えた（Ｆｉｎｎｅｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６１（６）：２７９１−２７９７；Ｈｏｍｂａｃｈ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６７（１１）：６１２３−６１３１；Ｍａｈｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２０（１）：７０−７；Ｅｍｔａｇｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １４（２４）：８１１２−８１２；Ｌｏ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １６（１０）：２７６９−２７８０）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｂｌｏｏｄ  １１０，  ２０２０−２０２３
【非特許文献２】Ｌｅｉｓｅｇａｎｇ，  Ｍ．，  Ｗｉｌｄｅ，  Ｓ．，  Ｓｐｒａｎｇｅｒ，  Ｓ．，  Ｍｉｌｏｓｅｖｉｃ，  Ｓ．，  Ｆｒａｎｋｅｎｂｅｒｇｅｒ，  Ｂ．，  Ｕｃｋｅｒｔ，  Ｗ．，  ａｎｄ  Ｓｃｈｅｎｄｅｌ，  Ｄ．  Ｊ．  （２０１０）．  ＭＨＣ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｆｒａｔｒｉｃｉｄｅ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １２０，  ３８６９−３８７７．
【非特許文献３】Ｓｃｈｅｎｄｅｌ，  Ｄ．  Ｊ．，およびＦｒａｎｋｅｎｂｅｒｇｅｒ，  Ｂ．  （２０１３）．  Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＴＣＲ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｂｙ  ＭＨＣ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｆｒａｔｒｉｃｉｄｅ  ａｎｄ  ＴＣＲ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ．  Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２，  ｅ２２４１０．
【非特許文献４】Ｆｅｒｌａｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  １３６（５）：  Ｅ３５９−３８６．  ２０１５
【非特許文献５】Ｈｏｗｌａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ”ＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ，  １９７５−２０１３，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ，  ｈｔｔｐ：／／ｓｅｅｒ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｃｓｒ／１９７５＿２０１３／，  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０１５  ＳＥＥＲ  ｄａｔａ  ｓｕｂｍｉｓｓｉｏｎ，  ｐｏｓｔｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＳＥＥＲ  ｗｅｂ  ｓｉｔｅ．”    ２０１６
【非特許文献６】Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １１１（５）：  ２５１６−２５２０，  ２００８
【非特許文献７】Ｋｈａｒｆａｎ−Ｄａｂａｊａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｈｅｍａｔｏｌ．  Ｏｎｃｏｌ．  ６：２，  ２０１３
【非特許文献８】Ｇｒｏｓｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ．  Ａｃａｄ．  ｏｆ  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６（２４）：１００２４−１００２８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本開示は、より低いＣＤ３８発現細胞を回避しつつ、ＣＤ３８の高い発現体である腫瘍細胞を優先的に標的化することが可能なＣＤ３８結合キネティクスを提供する、抗ＣＤ３８抗体を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を提供する。より具体的には、本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物Ａ２をコードする核酸配列であって、ＣＡＲ構築物が、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインおよび配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを有するｓｃＦｖ抗体；膜貫通ドメイン；および細胞内シグナル伝達ドメインを含む、核酸配列を提供する。好ましくは、ｓｃＦｖ抗体は、ＶＨとＶＬとの間に、配列番号５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドリンカーをさらに含む。抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖ抗体領域を有し得る。好ましくは、ＣＡＲ構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間に、配列番号６のＣＤ８ヒンジ領域を含むヒンジ領域をさらに含む。好ましくは、ＣＡＲ構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間に、配列番号７のＣＤ２８細胞外ドメインを含むＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含む。好ましくは、膜貫通ドメインは、配列番号８のＣＤ２８膜貫通ドメインである。好ましくは、２つのシグナル伝達ドメインが存在する。より好ましくは、第１のシグナル伝達ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤ２８シグナル伝達ドメインである。より好ましくは、第２のシグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤ３−ζシグナル伝達ドメインである。好ましくは、ＣＡＲ構築物は、Ｎ末端にシグナルペプチドをさらに含む。
【００１６】
別の具体的な実施形態では、核酸配列は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物Ｄ８をコードし、このＣＡＲ構築物は、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインおよび配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを有するｓｃＦｖ抗体；膜貫通ドメイン；および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。好ましくは、ｓｃＦｖ抗体は、ＶＨとＶＬとの間に、配列番号５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドリンカーをさらに含む。抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖ抗体領域を有し得る。好ましくは、ＣＡＲ構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間に、配列番号６のＣＤ８ヒンジ領域を含むヒンジ領域をさらに含む。好ましくは、ＣＡＲ構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間に、配列番号７のＣＤ２８細胞外ドメインを含むＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含む。好ましくは、膜貫通ドメインは、配列番号８のＣＤ２８膜貫通ドメインである。好ましくは、２つのシグナル伝達ドメインが存在する。より好ましくは、第１のシグナル伝達ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤ２８シグナル伝達ドメインである。より好ましくは、第２のシグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤ３−ζシグナル伝達ドメインである。好ましくは、ＣＡＲ構築物は、Ｎ末端にシグナルペプチドをさらに含む。
【００１７】
本開示は、抗原結合性タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する単鎖抗体；膜貫通ドメイン；および細胞内ドメインを含む、抗ＣＤ３８  ＣＡＲをコードする核酸配列をさらに提供する。
【００１８】
本開示は、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；膜貫通ドメイン；および細胞内ドメインを含む、抗ＣＤ３８  ＣＡＲをコードする核酸配列を提供する。
【００１９】
本開示は、対象に、提供される抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物を発現する遺伝子操作された細胞を投与することによる、養子細胞療法を実施するための方法をさらに提供する。
【００２０】
本開示は、有害なＣＤ３８発現に関連する障害を有するヒト対象を処置する方法をさらに提供する。かかる方法は、例えば、ヒト対象に、本明細書に記載される抗ＣＤ３８  ＣＡＲを発現する宿主細胞（または本明細書に記載される抗ＣＤ３８  ＣＡＲをコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞）を投与するステップを含む。好ましくは、障害は、血液学的乳房がん、卵巣がん、前立腺がん、頭頸部がん、肺がん、膀胱がん、黒色腫、結腸直腸がん、膵がん、肺がん、肝臓がん、腎がん、食道がん、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫および神経膠芽腫が含まれるがこれらに限定されないがんである。
【００２１】
好ましくは、がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、慢性Ｂリンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）ならびに慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）からなる群から選択される血液学的がんである。最も好ましくは、がんは、多発性骨髄腫（ＭＭ）である。
【００２２】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列であって、コードされた構築物が、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、核酸配列を提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸は、単離された核酸である。
【００２３】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列であって、コードされた構築物が、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、核酸配列を提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸は、単離された核酸である。
【００２４】
本開示は、重鎖可変（ＶＨ）ドメインと軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含み、ペプチドリンカーが、配列番号５のアミノ酸配列を含む、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。
【００２５】
本開示は、抗原結合性タンパク質が、配列番号１２または１６のアミノ酸配列を含む、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。
【００２６】
本開示は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含み、ヒンジ領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域またはその機能的部分である、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。
【００２７】
本開示は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含み、ＣＤ２８細胞外ドメインが配列番号７のアミノ酸配列またはその機能的部分を含む、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。
【００２８】
本開示は、膜貫通ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメインまたはその機能的部分を含む、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。
【００２９】
本開示は、細胞内ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。一実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）由来の細胞内ドメイン（複数可）または共刺激ドメインのいずれか１つまたは任意の組合せをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０および／または４−１ＢＢのいずれか１つまたは任意の組合せを含む。一実施形態では、核酸は、第１世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータを含む。一実施形態では、核酸は、第２世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメインまたは４−１ＢＢを含む。一実施形態では、核酸は、第３世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメイン、および４−１ＢＢまたはＯＸ−４０を含む。
【００３０】
本開示は、配列番号２０または２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列をさらに提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸は、単離された核酸である。
【００３１】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列に作動可能に連結した発現ベクターであって、コードされた構築物が、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、発現ベクターをさらに提供する。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する。一実施形態では、発現ベクターは、レトロウイルス発現ベクターまたはレンチウイルス発現ベクターを含む。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞形質導入および／またはパッケージングのための１つまたは複数のさらなるベクターを有する発現ベクター系の一部である。
【００３２】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列に作動可能に連結した発現ベクターであって、コードされた構築物が、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、発現ベクターをさらに提供する。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する。一実施形態では、発現ベクターは、レトロウイルス発現ベクターまたはレンチウイルス発現ベクターを含む。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞形質導入および／またはパッケージングのための１つまたは複数のさらなるベクターを有する発現ベクター系の一部である。
【００３３】
一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する。一実施形態では、発現ベクターは、レトロウイルスまたはレンチウイルスに由来する核酸骨格配列を含む。一実施形態では、発現ベクターは、１つまたは複数のパッケージングベクターおよび／またはエンベロープベクターを含むウイルス形質導入系の一部であり、これらのベクターは、一緒になって、宿主細胞における導入遺伝子の発現を指示する。
【００３４】
本開示は、第１または第２世代のレトロウイルス発現ベクター系の一部である発現ベクターをさらに提供する。一実施形態では、第１世代発現ベクター系は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸に作動可能に連結したレトロウイルス発現ベクター（移入ベクター）、レトロウイルスｅｎｖ配列を保有するエンベロープベクター、ならびにレトロウイルスｇａｇおよびｐｏｌ配列を保有するパッケージングベクターを含む。一実施形態では、第２世代発現ベクター系は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸に作動可能に連結した発現ベクター、ならびにパッケージング細胞系において安定に発現されるレトロウイルスｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ配列を含む。
【００３５】
本開示は、第１、第２または第３世代のレンチウイルス発現ベクター系の一部である発現ベクターをさらに提供する。一実施形態では、第１世代発現ベクター系は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸に作動可能に連結したレンチウイルス発現ベクター（移入ベクター）、レンチウイルスｅｎｖ配列を保有するエンベロープベクター、ならびにｇａｇ、ｐｏｌ、ｔａｔおよびｒｅｖ配列を保有するレンチウイルスパッケージングベクターを含む。一実施形態では、第２世代発現ベクター系は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸に作動可能に連結したレンチウイルス発現ベクター、非レンチウイルスｅｎｖ配列（異種ｅｎｖ配列）を保有するエンベロープベクター、ならびにレンチウイルスｇａｇ、ｐｏｌ、ｔａｔおよびｒｅｖ配列を保有するパッケージングベクターを含む。一実施形態では、第３世代発現ベクター系は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、レンチウイルスｔａｔ配列が３’ＬＴＲから除去された核酸に作動可能に連結したレンチウイルス発現ベクター、第１のパッケージングプラスミド（ｇａｇおよびｐｏｌ）、第２のパッケージングプラスミド（ｒｅｖ）、およびエンベローププラスミド（異種ｅｎｖ配列を保有する）を含む。
【００３６】
本開示は、宿主細胞中への導入遺伝子の一過的導入または宿主細胞のゲノム中への導入遺伝子の安定な挿入を指示できる、発現ベクター、および１つまたは複数のパッケージングベクターをさらに提供する。発現ベクター、および１つまたは複数のパッケージングベクターは、宿主細胞における導入遺伝子の転写および／または翻訳を指示できる。抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸に作動可能に連結した発現ベクターは、１つまたは複数のパッケージングベクターと一緒に、形質導入された宿主細胞の表面上にディスプレイされ得る抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の産生を指示できる。
【００３７】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列に作動可能に連結した発現ベクターであって、ＣＡＲ構築物が、重鎖可変（ＶＨ）ドメインと軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含み、ペプチドリンカーが、配列番号５のアミノ酸配列を含む、発現ベクターをさらに提供する。
【００３８】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列に作動可能に連結した発現ベクターであって、抗原結合性タンパク質が、配列番号１２または１６のアミノ酸配列を含む、発現ベクターをさらに提供する。
【００３９】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列に作動可能に連結した発現ベクターであって、ＣＡＲ構築物が、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含み、ヒンジ領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域、またはその機能的部分である、発現ベクターをさらに提供する。
【００４０】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列に作動可能に連結した発現ベクターであって、ＣＡＲ構築物が、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含み、ＣＤ２８細胞外ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列、またはその機能的部分を含む、発現ベクターをさらに提供する。
【００４１】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列に作動可能に連結した発現ベクターであって、膜貫通ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはその機能的部分を含む、発現ベクターをさらに提供する。
【００４２】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列に作動可能に連結した発現ベクターであって、細胞内ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む、発現ベクターをさらに提供する。一実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）由来の細胞内ドメイン（複数可）または共刺激ドメインのいずれか１つまたは任意の組合せをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０および／または４−１ＢＢのいずれか１つまたは任意の組合せを含む。一実施形態では、核酸は、第１世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータを含む。一実施形態では、核酸は、第２世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメインまたは４−１ＢＢを含む。一実施形態では、核酸は、第３世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメイン、および４−１ＢＢまたはＯＸ−４０を含む。
【００４３】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列に作動可能に連結した発現ベクターであって、ＣＡＲ構築物が、配列番号２０または２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、発現ベクターをさらに提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸は、単離された核酸である。
【００４４】
本開示は、より低いＣＤ３８発現を示す細胞と比較して、ＣＤ３８の高い発現を示す細胞（例えば、標的細胞）に優先的に結合する抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。
【００４５】
本開示は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、単離されたポリペプチドである。
【００４６】
本開示は、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、単離されたポリペプチドである。
【００４７】
本開示は、重鎖可変（ＶＨ）ドメインと軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含む抗原結合性タンパク質であって、ペプチドリンカーが、配列番号５のアミノ酸配列を含む、抗原結合性タンパク質をさらに提供する。
【００４８】
本開示は、抗原結合性タンパク質が配列番号１２または１６のアミノ酸配列を含む、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。
【００４９】
本開示は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物であって、ヒンジ領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域、またはその機能的部分である、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。
【００５０】
本開示は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物であって、ＣＤ２８細胞外ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列、またはその機能的部分を含む、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。
【００５１】
本開示は、膜貫通ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはその機能的部分を含む、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。
【００５２】
本開示は、細胞内ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。一実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）由来の細胞内ドメインまたは共刺激ドメインのいずれか１つまたは任意の組合せをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０および／または４−１ＢＢのいずれか１つまたは任意の組合せを含む。一実施形態では、核酸は、第１世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータを含む。一実施形態では、核酸は、第２世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメインまたは４−１ＢＢを含む。一実施形態では、核酸は、第３世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメイン、および４−１ＢＢまたはＯＸ−４０を含む。
【００５３】
本開示は、配列番号２０または２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をさらに提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、単離されたポリペプチドである。
【００５４】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団であって、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物が、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。一実施形態では、宿主細胞または宿主細胞の集団は、Ｔ宿主細胞、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）からなる群から選択される。一実施形態では、形質導入された宿主細胞または形質導入された細胞の集団において、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列は、宿主細胞または宿主細胞の集団において抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する発現ベクターに作動可能に連結される。
【００５５】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団であって、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物が、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。一実施形態では、宿主細胞または宿主細胞の集団は、Ｔ宿主細胞、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）からなる群から選択される。一実施形態では、形質導入された宿主細胞または形質導入された細胞の集団において、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列は、宿主細胞または宿主細胞の集団において抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する発現ベクターに作動可能に連結される。
【００５６】
本開示は、重鎖可変（ＶＨ）ドメインと軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団であって、ペプチドリンカーが、配列番号５のアミノ酸配列を含む、宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。
【００５７】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団であって、抗原結合性タンパク質が、配列番号１２または１６のアミノ酸配列を含む、宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。
【００５８】
本開示は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団であって、ヒンジ領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域、またはその機能的部分である、宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。
【００５９】
本開示は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団であって、ＣＤ２８細胞外ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列、またはその機能的部分を含む、宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。
【００６０】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団であって、膜貫通ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはその機能的部分を含む、宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。
【００６１】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団であって、細胞内ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む、宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。一実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）由来の細胞内ドメインまたは共刺激ドメインのいずれか１つまたは任意の組合せをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０および／または４−１ＢＢのいずれか１つまたは任意の組合せを含む。一実施形態では、核酸は、第１世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータを含む。一実施形態では、核酸は、第２世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメインまたは４−１ＢＢを含む。一実施形態では、核酸は、第３世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメイン、および４−１ＢＢまたはＯＸ−４０を含む。
【００６２】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団であって、コードされた構築物が、配列番号２０または２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。
【００６３】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団であって、核酸配列が、宿主細胞における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を指示する発現ベクターに作動可能に連結される、宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。
【００６４】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団であって、宿主細胞または宿主細胞の集団上の発現された抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物が、より低いＣＤ３８発現を示す細胞と比較して、ＣＤ３８の高い発現を示す細胞（例えば、標的細胞）に優先的に結合する、宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。
【００６５】
本開示は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。一実施形態では、宿主細胞または宿主細胞の集団は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸に作動可能に連結した発現ベクターで形質導入される。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する。一実施形態では、発現ベクターは、レトロウイルス発現ベクターまたはレンチウイルス発現ベクターを含む。一実施形態では、宿主細胞または宿主細胞の集団は、Ｔ宿主細胞、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）からなる群から選択される。
【００６６】
本開示は、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団をさらに提供する。一実施形態では、宿主細胞または宿主細胞の集団は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸に作動可能に連結した発現ベクターで形質導入される。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する。一実施形態では、発現ベクターは、レトロウイルス発現ベクターまたはレンチウイルス発現ベクターを含む。一実施形態では、宿主細胞または宿主細胞の集団は、Ｔ宿主細胞、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）からなる群から選択される。
【００６７】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、Ｔ宿主細胞（またはその集団）、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）からなる群から選択される。
【００６８】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団において、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、重鎖可変（ＶＨ）ドメインと軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含み、ペプチドリンカーは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。
【００６９】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団において、抗原結合性タンパク質は、配列番号１２または１６のアミノ酸配列を含む。
【００７０】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団において、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含み、ヒンジ領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域である。
【００７１】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団において、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含み、ＣＤ２８細胞外ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。
【００７２】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団において、膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメインである。
【００７３】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団において、細胞内ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）由来の細胞内ドメインまたは共刺激ドメインのいずれか１つまたは任意の組合せをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０および／または４−１ＢＢのいずれか１つまたは任意の組合せを含む。一実施形態では、核酸は、第１世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータを含む。一実施形態では、核酸は、第２世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメインまたは４−１ＢＢを含む。一実施形態では、核酸は、第３世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメイン、および４−１ＢＢまたはＯＸ−４０を含む。
【００７４】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団において、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、配列番号２０または２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００７５】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団において、発現ベクターは、本開示の抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物のいずれかをコードする核酸配列に作動可能に連結される。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する発現ベクターを含む。一実施形態では、発現ベクターは、レトロウイルスまたはレンチウイルスに由来する核酸骨格配列を含む。一実施形態では、発現ベクターは、１つまたは複数のパッケージングベクターを含むウイルス形質導入系の一部であり、発現ベクターおよびパッケージングベクターは、一緒になって、宿主細胞における導入遺伝子の発現を指示する。発現ベクター、および１つまたは複数のパッケージングベクターは、宿主細胞中への導入遺伝子の一過的導入または宿主細胞のゲノム中への導入遺伝子の安定な挿入を指示できる。発現ベクター、および１つまたは複数のパッケージングベクターは、宿主細胞における導入遺伝子の転写および／または翻訳を指示できる。抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸に作動可能に連結した発現ベクターは、１つまたは複数のパッケージングベクターと一緒に、形質導入された宿主細胞の表面上にディスプレイされ得る抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の産生を指示できる。
【００７６】
本開示は、形質導入された宿主細胞または形質導入された細胞の集団を調製するための方法であって、適切な条件下で、宿主細胞または宿主細胞の集団を、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入するステップを含み、コードされた構築物が、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、方法をさらに提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列は、宿主細胞または宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する発現ベクターに作動可能に連結される。一実施形態では、宿主細胞または宿主細胞の集団は、Ｔ宿主細胞、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）からなる群から選択される。
【００７７】
本開示は、形質導入された宿主細胞または形質導入された細胞の集団を調製するための方法であって、適切な条件下で、宿主細胞または宿主細胞の集団を、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入するステップを含み、コードされた構築物が、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、方法をさらに提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列は、宿主細胞または宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する発現ベクターに作動可能に連結される。一実施形態では、宿主細胞または宿主細胞の集団は、Ｔ宿主細胞、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）からなる群から選択される。
【００７８】
一実施形態では、形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団を調製するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、重鎖可変（ＶＨ）ドメインと軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含み、ペプチドリンカーは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。
【００７９】
一実施形態では、形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団を調製するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、配列番号１２または１６のアミノ酸配列を含む抗原結合性タンパク質を含む。
【００８０】
一実施形態では、形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団を調製するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含み、ヒンジ領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域、またはその機能的部分である。
【００８１】
一実施形態では、形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団を調製するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含み、ＣＤ２８細胞外ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列、またはその機能的部分を含む。
【００８２】
一実施形態では、形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団を調製するための方法において、膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはその機能的部分を含む。
【００８３】
一実施形態では、形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団を調製するための方法において、細胞内ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）由来の細胞内ドメインまたは共刺激ドメインのいずれか１つまたは任意の組合せをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０および／または４−１ＢＢのいずれか１つまたは任意の組合せを含む。一実施形態では、核酸は、第１世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータを含む。一実施形態では、核酸は、第２世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメインまたは４−１ＢＢを含む。一実施形態では、核酸は、第３世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメイン、および４−１ＢＢまたはＯＸ−４０を含む。
【００８４】
本開示は、形質導入された宿主細胞または形質導入された細胞の集団を調製するための方法であって、適切な条件下で、宿主細胞または宿主細胞の集団を、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入するステップを含み、コードされた構築物が、配列番号２１または２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一である、方法をさらに提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列は、宿主細胞または宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する発現ベクターに作動可能に連結される。一実施形態では、宿主細胞または宿主細胞の集団は、Ｔ宿主細胞、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞（またはその集団）からなる群から選択される。
【００８５】
一実施形態では、形質導入された宿主細胞または宿主細胞の集団を調製するための方法において、発現ベクターは、本開示の抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物のいずれかをコードする核酸配列に作動可能に連結される。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する発現ベクターを含む。一実施形態では、発現ベクターは、レトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターを含むウイルス科であるＲｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅに由来する核酸骨格配列を含む。一実施形態では、発現ベクターは、１つまたは複数のパッケージングベクターを含むウイルス形質導入系の一部であり、発現ベクターおよびパッケージングベクターは、一緒になって、宿主細胞における導入遺伝子の発現を指示する。発現ベクター、および１つまたは複数のパッケージングベクターは、宿主細胞中への導入遺伝子の一過的導入または宿主細胞のゲノム中への導入遺伝子の安定な挿入を指示できる。発現ベクター、および１つまたは複数のパッケージングベクターは、宿主細胞における導入遺伝子の転写および／または翻訳を指示できる。抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸に作動可能に連結した発現ベクターは、１つまたは複数のパッケージングベクターと一緒に、形質導入された宿主細胞の表面上にディスプレイされ得る抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の産生を指示できる。
【００８６】
本開示は、宿主細胞の集団を長期間安定して培養するための方法であって、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞の集団を、この核酸配列を保有する宿主細胞の数を拡大増殖させるのに適切な条件下で培養するステップを含み、培養された宿主細胞が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで低減されたＴ細胞同胞殺しを示し、宿主細胞が、より低いＣＤ３８発現を示す細胞と比較して、ＣＤ３８の高い発現を示す細胞に優先的に結合し、それを死滅させる、方法をさらに提供する。
【００８７】
本開示は、宿主細胞の集団を培養するための方法であって、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞の集団を、この核酸配列を保有する宿主細胞の数を拡大増殖させるのに適切な条件下で培養するステップを含み、コードされた構築物が、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、方法をさらに提供する。
【００８８】
本開示は、宿主細胞の集団を培養するための方法であって、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞の集団を、この核酸配列を保有する宿主細胞の数を拡大増殖させるのに適切な条件下で培養するステップを含み、コードされた構築物が、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、方法をさらに提供する。
【００８９】
一実施形態では、宿主細胞の集団を培養するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、重鎖可変（ＶＨ）ドメインと軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含み、ペプチドリンカーは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。
【００９０】
一実施形態では、宿主細胞の集団を培養するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、配列番号１２または１６のアミノ酸配列を含む抗原結合性タンパク質を含む。
【００９１】
一実施形態では、宿主細胞の集団を培養するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含み、ヒンジ領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域、またはその機能的部分である。
【００９２】
一実施形態では、宿主細胞の集団を培養するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含み、ＣＤ２８細胞外ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列、またはその機能的部分を含む。
【００９３】
一実施形態では、宿主細胞の集団を培養するための方法において、膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはその機能的部分を含む。
【００９４】
一実施形態では、宿主細胞の集団を培養するための方法において、細胞内ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）由来の細胞内ドメイン（複数可）または共刺激ドメインのいずれか１つまたは任意の組合せをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０および／または４−１ＢＢのいずれか１つまたは任意の組合せを含む。一実施形態では、核酸は、第１世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータを含む。一実施形態では、核酸は、第２世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメインまたは４−１ＢＢを含む。一実施形態では、核酸は、第３世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメイン、および４−１ＢＢまたはＯＸ−４０を含む。
【００９５】
本開示は、宿主細胞の集団を培養するための方法であって、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入された宿主細胞の集団を、この核酸配列を保有する宿主細胞の数を拡大増殖させるのに適切な条件下で培養するステップを含み、コードされた構築物が、配列番号２１または２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一である、方法をさらに提供する。
【００９６】
一実施形態では、宿主細胞の集団を培養するための方法において、宿主細胞の集団は、宿主Ｔ細胞の集団、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞の集団および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞の集団からなる群から選択される。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列は、発現ベクターに作動可能に連結される。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する。
【００９７】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるための方法であって、宿主細胞の集団を、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるのに適切な条件に供するステップを含み、宿主細胞の集団が、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列を含む発現ベクターで形質導入され、コードされた構築物が、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、方法をさらに提供する。一実施形態では、発現ベクターは、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列に作動可能に連結され、発現ベクターは、宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞の集団は、より低いＣＤ３８発現を示す細胞と比較して、ＣＤ３８の高い発現を示す細胞（例えば、標的細胞）に優先的に結合する。
【００９８】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるための方法であって、宿主細胞の集団を、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるのに適切な条件に供するステップを含み、宿主細胞の集団が、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列を含む発現ベクターで形質導入され、コードされた構築物が、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、方法をさらに提供する。一実施形態では、発現ベクターは、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列に作動可能に連結され、発現ベクターは、宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞の集団は、より低いＣＤ３８発現を示す細胞と比較して、ＣＤ３８の高い発現を示す細胞（例えば、標的細胞）に優先的に結合する。
【００９９】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、重鎖可変（ＶＨ）ドメインと軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含み、ペプチドリンカーは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。
【０１００】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、配列番号１２または１６のアミノ酸配列を含む抗原結合性タンパク質を含む。
【０１０１】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含み、ヒンジ領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域、またはその機能的部分である。
【０１０２】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含み、ＣＤ２８細胞外ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列、またはその機能的部分を含む。
【０１０３】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるための方法において、膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはその機能的部分を含む。
【０１０４】
一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるための方法において、細胞内ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）由来の細胞内ドメイン（複数可）または共刺激ドメインのいずれか１つまたは任意の組合せをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０および／または４−１ＢＢのいずれか１つまたは任意の組合せを含む。一実施形態では、核酸は、第１世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータを含む。一実施形態では、核酸は、第２世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメインまたは４−１ＢＢを含む。一実施形態では、核酸は、第３世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメイン、および４−１ＢＢまたはＯＸ−４０を含む。
【０１０５】
本開示は、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるための方法であって、宿主細胞の集団を、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるのに適切な条件に供するステップを含み、宿主細胞の集団が、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列を含む発現ベクターで形質導入され、コードされた構築物が、配列番号２１または２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一である、方法をさらに提供する。
【０１０６】
一実施形態では、宿主細胞の集団において抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるための方法において、宿主細胞の集団は、宿主Ｔ細胞の集団、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞の集団および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞の集団からなる群から選択される。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列は、発現ベクターに作動可能に連結される。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する。
【０１０７】
一実施形態では、宿主細胞の集団において抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現させるための方法において、発現ベクターは、本開示の抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物のいずれかをコードする核酸配列に作動可能に連結される。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団における抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の発現を指示する発現ベクターを含む。一実施形態では、発現ベクターは、レトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターを含むウイルス科であるＲｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅに由来する核酸骨格配列を含む。一実施形態では、発現ベクターは、１つまたは複数のパッケージングベクターを含むウイルス形質導入系の一部であり、発現ベクターおよびパッケージングベクターは、一緒になって、宿主細胞における導入遺伝子の発現を指示する。発現ベクター、および１つまたは複数のパッケージングベクターは、宿主細胞中への導入遺伝子の一過的導入または宿主細胞のゲノム中への導入遺伝子の安定な挿入を指示できる。発現ベクター、および１つまたは複数のパッケージングベクターは、宿主細胞における導入遺伝子の転写および／または翻訳を指示できる。抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸に作動可能に連結した発現ベクターは、１つまたは複数のパッケージングベクターと一緒に、形質導入された宿主細胞の表面上にディスプレイされ得る抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の産生を指示できる。
【０１０８】
本開示は、サイトカイン放出を誘導するための方法であって、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞の集団を、サイトカイン放出を誘導するのに適切な条件下で、ＣＤ３８を発現する標的細胞と接触させるステップを含み、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物が、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、方法をさらに提供する。一実施形態では、サイトカインは、インターフェロン−γまたはＩＬ−２を含む。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞は、より低いＣＤ３８発現を示す細胞と比較して、ＣＤ３８の高い発現を示す細胞（例えば、標的細胞）に優先的に結合する。
【０１０９】
本開示は、サイトカイン放出を誘導するための方法であって、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞の集団を、サイトカイン放出を誘導するのに適切な条件下で、ＣＤ３８を発現する標的細胞と接触させるステップを含み、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物が、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、方法をさらに提供する。一実施形態では、サイトカインは、インターフェロン−γまたはＩＬ−２を含む。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞は、より低いＣＤ３８発現を示す細胞と比較して、ＣＤ３８の高い発現を示す細胞（例えば、標的細胞）に優先的に結合する。
【０１１０】
一実施形態では、サイトカイン放出を誘導するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、重鎖可変（ＶＨ）ドメインと軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含み、ペプチドリンカーは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。
【０１１１】
一実施形態では、サイトカイン放出を誘導するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、配列番号１２または１６のアミノ酸配列を含む抗原結合性タンパク質を含む。
【０１１２】
一実施形態では、サイトカイン放出を誘導するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含み、ヒンジ領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域、またはその機能的部分である。
【０１１３】
一実施形態では、サイトカイン放出を誘導するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含み、ＣＤ２８細胞外ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列、またはその機能的部分を含む。
【０１１４】
一実施形態では、サイトカイン放出を誘導するための方法において、膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはその機能的部分を含む。
【０１１５】
一実施形態では、サイトカイン放出を誘導するための方法において、細胞内ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）由来の細胞内ドメイン（複数可）または共刺激ドメインのいずれか１つまたは任意の組合せをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０および／または４−１ＢＢのいずれか１つまたは任意の組合せを含む。一実施形態では、核酸は、第１世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータを含む。一実施形態では、核酸は、第２世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメインまたは４−１ＢＢを含む。一実施形態では、核酸は、第３世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメイン、および４−１ＢＢまたはＯＸ−４０を含む。
【０１１６】
本開示は、サイトカイン放出を誘導するための方法であって、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現するＴ宿主細胞の集団を、サイトカイン放出を誘導するのに適切な条件下で、ＣＤ３８を発現する標的細胞と接触させるステップを含み、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物が、配列番号２１または２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一である、方法をさらに提供する。一実施形態では、サイトカインは、インターフェロン−γまたはＩＬ−２を含む。
【０１１７】
一実施形態では、サイトカイン放出を誘導するための方法において、宿主細胞の集団は、宿主Ｔ細胞の集団、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞の集団および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞の集団からなる群から選択される。
【０１１８】
本開示は、Ｔ細胞の細胞傷害性を誘導するための方法であって、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現するＴ宿主細胞の集団を、標的細胞死滅化を誘導するのに適切な条件下で、ＣＤ３８を発現する標的細胞と接触させるステップを含み、Ｔ宿主細胞の集団が、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入され、コードされた構築物が、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、方法をさらに提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞の集団は、より低いＣＤ３８発現を示す細胞と比較して、ＣＤ３８の高い発現を示す細胞（例えば、標的細胞）に優先的に結合する。
【０１１９】
本開示は、Ｔ細胞の細胞傷害性を誘導するための方法であって、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現するＴ宿主細胞の集団を、標的細胞死滅化を誘導するのに適切な条件下で、ＣＤ３８を発現する標的細胞と接触させるステップを含み、Ｔ宿主細胞の集団が、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入され、コードされた構築物が、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、方法をさらに提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞の集団は、より低いＣＤ３８発現を示す細胞と比較して、ＣＤ３８の高い発現を示す細胞（例えば、標的細胞）に優先的に結合する。
【０１２０】
一実施形態では、Ｔ細胞の細胞傷害性を誘導するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、重鎖可変（ＶＨ）ドメインと軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含み、ペプチドリンカーは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。
【０１２１】
一実施形態では、Ｔ細胞の細胞傷害性を誘導するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、配列番号１２または１６のアミノ酸配列を含む抗原結合性タンパク質を含む。
【０１２２】
一実施形態では、Ｔ細胞の細胞傷害性を誘導するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含み、ヒンジ領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域、またはその機能的部分である。
【０１２３】
一実施形態では、Ｔ細胞の細胞傷害性を誘導するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含み、ＣＤ２８細胞外ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列、またはその機能的部分を含む。
【０１２４】
一実施形態では、Ｔ細胞の細胞傷害性を誘導するための方法において、膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはその機能的部分を含む。
【０１２５】
一実施形態では、Ｔ細胞の細胞傷害性を誘導するための方法において、細胞内ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）由来の細胞内ドメイン（複数可）または共刺激ドメインのいずれか１つまたは任意の組合せをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０および／または４−１ＢＢのいずれか１つまたは任意の組合せを含む。一実施形態では、核酸は、第１世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータを含む。一実施形態では、核酸は、第２世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメインまたは４−１ＢＢを含む。一実施形態では、核酸は、第３世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメイン、および４−１ＢＢまたはＯＸ−４０を含む。
【０１２６】
本開示は、Ｔ細胞の細胞傷害性を誘導するための方法であって、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現するＴ宿主細胞の集団を、標的細胞死滅化を誘導するのに適切な条件下で、ＣＤ３８を発現する標的細胞と接触させるステップを含み、Ｔ宿主細胞の集団が、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする核酸配列で形質導入され、コードされた構築物が、配列番号２１または２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一である、方法をさらに提供する。
【０１２７】
一実施形態では、Ｔ細胞の細胞傷害性を誘導するための方法において、標的細胞は、ＣＤ３８を発現するがん標的細胞を含む。
【０１２８】
本開示は、処置を必要とする対象においてがんを処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法であって、対象に、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現するＴ宿主細胞の集団を投与するステップを含み、構築物が、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、方法をさらに提供する。一実施形態では、対象におけるがんまたは腫瘍成長は、上方調節されたＣＤ３８発現を示す。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現するＴ宿主細胞の集団は、より低いＣＤ３８発現を示す細胞と比較して、ＣＤ３８の高い発現を示す細胞（例えば、標的腫瘍細胞）に優先的に結合する。
【０１２９】
本開示は、処置を必要とする対象においてがんを処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法であって、対象に、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現するＴ宿主細胞の集団を投与するステップを含み、構築物が、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含む、方法をさらに提供する。一実施形態では、対象におけるがんまたは腫瘍成長は、上方調節されたＣＤ３８発現を示す。一実施形態では、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する宿主細胞の集団は、より低いＣＤ３８発現を示す細胞と比較して、ＣＤ３８の高い発現を示す細胞（例えば、標的腫瘍細胞）に優先的に結合する。
【０１３０】
一実施形態では、処置を必要とする対象においてがんを処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、重鎖可変（ＶＨ）ドメインと軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間にペプチドリンカーをさらに含み、ペプチドリンカーは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。
【０１３１】
一実施形態では、処置を必要とする対象においてがんを処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、配列番号１２または１６のアミノ酸配列を含む抗原結合性タンパク質を含む。
【０１３２】
一実施形態では、処置を必要とする対象においてがんを処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含み、ヒンジ領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域、またはその機能的部分である。
【０１３３】
一実施形態では、処置を必要とする対象においてがんを処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法において、コードされた抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、抗原結合性タンパク質と膜貫通ドメインとの間にＣＤ２８細胞外ドメインをさらに含み、ＣＤ２８細胞外ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列、またはその機能的部分を含む。
【０１３４】
一実施形態では、処置を必要とする対象においてがんを処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法において、膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはその機能的部分を含む。
【０１３５】
一実施形態では、処置を必要とする対象においてがんを処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法において、細胞内ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤ３−ゼータ細胞内ドメインをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）由来の細胞内ドメイン（複数可）または共刺激ドメインのいずれか１つまたは任意の組合せをさらに含む。一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン、ＣＤ３−ゼータ、ＯＸ−４０および／または４−１ＢＢのいずれか１つまたは任意の組合せを含む。一実施形態では、核酸は、第１世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータを含む。一実施形態では、核酸は、第２世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメインまたは４−１ＢＢを含む。一実施形態では、核酸は、第３世代抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードし、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ゼータ、およびＣＤ２８細胞内ドメイン、および４−１ＢＢまたはＯＸ−４０を含む。
【０１３６】
本開示は、処置を必要とする対象においてがんを処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法であって、対象に、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現するＴ宿主細胞の集団を投与するステップを含み、構築物が、配列番号２１または２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一である、方法をさらに提供する。
【０１３７】
一実施形態では、対象においてがんを処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法において、処置を必要とする対象は、ＣＤ３８の過剰発現または有害な発現に関連する障害を有する。
【０１３８】
本開示は、処置を必要とする対象においてがんを処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法であって、がんが、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、慢性Ｂリンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）ならびに慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）からなる群から選択される血液学的がんを含む、方法をさらに提供する。
【図面の簡単な説明】
【０１３９】
【図１】図１は、開示される「抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ」およびレトロウイルスベクターの構造である。
【０１４０】
図１Ａは、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲの概略図である。
【０１４１】
図１Ｂは、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲを発現するレトロウイルスベクターの概略図である。抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲは、ＣＤ８αのヒンジ部分に由来する介在性スペーサーを伴って、抗ＣＤ３８抗体クローンＡ２のｓｃＦｖを、ＣＤ２８膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）および細胞内シグナル伝達ドメインならびにＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインに連結させることによって作製した。ヒト抗体重鎖由来のシグナルペプチドおよびＣＡＲの発現を同定するためのｍｙｃタグを、Ｎ末端に付加した。
【０１４２】
【図２】図２Ａは、形質導入後にフローサイトメトリーによって分析した、形質導入されていない対照Ｔ細胞および抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞のデータを示す。このデータは、形質導入されたＴ細胞が抗ＣＤ３８  Ａ２構築物を発現することを検証する。
【０１４３】
図２Ｂは、ＣＡＲ−Ｔ細胞におけるＣＡＲ２−抗ＣＤ３８Ａ２  ＣＡＲのホモダイマー形成を示すウエスタンブロットである。非還元条件および還元条件下での、形質導入されていない対照およびＣＡＲ２−抗ＣＤ３８Ａ２  ＣＡＲ形質導入された活性化されたＴ細胞の膜画分を、ＣＤ３ζ抗体を使用するウエスタンブロットによって検出した。ＣＡＲおよびＴＣＲζのモノマーおよびダイマーの位置は、右側に示される。分子質量マーカー（ｋＤａ）は、左側に示される。ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８Ａ２  ＣＡＲは、還元条件下で約７０ｋＤａの分子量を有するモノマーとして、非還元条件下で１４０ｋＤａの分子量を有するホモダイマーとして、検出された。これらの結果は、ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８Ａ２  ＣＡＲが、ＣＡＲ−Ｔ細胞表面上でホモダイマーを形成することを示している。
【０１４４】
【図３】図３は、結合データを示す。形質導入されていない対照および抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞を、２μｇ／ｍｌのＣＤ３８−Ｆｃ融合タンパク質と共にインキュベートし、ＰＥコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧを用いたフローサイトメトリーによって分析して、ＣＤ３８−Ｆｃ結合を検出し、ＦＩＴＣコンジュゲートヤギ抗Ｍｙｃ抗体を用いたフローサイトメトリーによって分析して、Ｔ細胞上のＣＡＲ発現を検出した。これらのデータは、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ  Ｔ細胞が、それらの標的化された抗原ＣＤ３８に結合できることを確認する。
【０１４５】
【図４】図４は、種々の細胞型上の相対的ＣＤ３８発現を示す。形質導入されていない対照および抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞を、マウス抗ヒトＣＤ３８  ｍＡｂで染色し、その後ＡＰＣコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ抗体で染色するフローサイトメトリーによって分析した。抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞上のＣＤ３８発現を評価して、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔの同胞殺し活性を調査した（図５に示される）。
【０１４６】
【図５】図５は、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞による同胞殺しの低減を示す、培養された抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞の安定性および生存度データを示す。形質導入されていない対照および抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞を、（Ａ）ＰＥコンジュゲート抗ｍｙｃ抗体による染色によるＣＡＲ−Ｔ細胞の安定性、ならびに（Ｂ）前方散乱光（ＦＳＣ）および側方散乱光（ＳＳＣ）を用いて生存細胞をゲーティングすることによるＴ細胞の生存度について、形質導入後１５日目に、フローサイトメトリーによって分析した。
【０１４７】
図５Ａは、１５日間の培養後の、形質導入されていない対照および抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞の安定性を示し、形質導入されたＴ細胞中のＣＡＲ陽性細胞のパーセンテージは、形質導入後４日目の７４％（図５Ａ）から１５日目の６５％まで、わずかに低下したに過ぎない。
【０１４８】
図５Ｂは、形質導入されたＴ細胞の生存度（８５％）が、対照Ｔ細胞（９１％）に匹敵したことを示す。類似の結果が、他のドナーから得られた。
【０１４９】
【図６】図６は、抗ＣＤ３８  ＣＡＲ  Ａ２形質導入されたＴ細胞からのサイトカイン産生を示す。形質導入されていない対照Ｔ細胞および抗ＣＤ３８  ＣＡＲ  Ａ２形質導入されたＴ細胞を、対照ＣＤ３８陰性Ｋ５６２細胞（対照Ｔ）またはＣＤ３８発現ＲＰＭＩ  ８２２６腫瘍細胞（ＣＡＲ−Ｔ）と共に、２４時間インキュベートした。ヒストグラム中に示される棒は、（左から右に）腫瘍細胞なし、Ｋ５６２細胞またはＲＰＭＩ  ８２２６細胞を示す。上清を収集し、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮγ（図６、左）およびＩＬ２（図６、右）産生についてアッセイした。それらの標的化されたＣＤ３８陽性ＭＭ腫瘍細胞ＲＭＰＩ８６２２との結合の際に、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、大量のサイトカインＩＦＮγおよびＩＬ２を産生したが、ＣＤ３８陰性対照腫瘍細胞Ｋ５６２とではそれは起きなかった。これは、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、標的化された腫瘍細胞の結合の際に特異的に活性化され得ることを示している。
【０１５０】
【図７】図７は、抗ＣＤ３８  ＣＡＲ  Ａ２形質導入されたＴ細胞からの細胞傷害性データを示す。形質導入されていない対照および抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞（Ｅ）を、蛍光増強リガンド標識ＣＤ３８陰性Ｋ５６２（図７、左）またはＣＤ３８発現ＲＰＭＩ８２２６（図７、右）腫瘍細胞（Ｔ）と共に、示された比で２時間インキュベートし、ＤＥＬＦＩＡ細胞傷害性アッセイによって処理および分析した。これらのデータは、開示される抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞のＣＤ３８特異的細胞傷害性を示す。
【０１５１】
【図８】図８は、異種移植片動物モデルにおいて評価した抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞の殺腫瘍活性を示す。免疫低下状態のＮＳＧマウスに、１×１０７のＬｕｃ−ＧＦＰ標識したＣＤ３８発現ＲＰＭＩ８２２６  ＭＭ腫瘍細胞を静脈内接種した。３週間後、ＩＶＩＳ測定可能な全身腫瘍が、全ての接種したマウスにおいて形成した。マウスを、異なる用量の抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞で静脈内処置し、未処置マウスは、対照として機能した。腫瘍負荷を、生物発光イメージング（ＩＶＩＳ）によって毎週評価した。結論として、これらのデータは、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＭＨＣ非拘束様式でＣＤ３８高発現細胞を認識できる抗体型の特異性を示し、Ｔ細胞活性化、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの標的細胞溶解およびｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＭ腫瘍の根絶をもたらすことを実証している。
【発明を実施するための形態】
【０１５２】
開示されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物は、より低いＣＤ３８発現レベルを示す正常細胞ではなく、ＣＤ３８の高い発現を有する腫瘍細胞に優先的に結合する。自己消化（ａｕｔｏ−ｌｙｓｉｓ）の問題に取り組むのは、この示差的結合である。理論によって束縛されないが、開示されるＣＡＲ構築物は、形質導入されると、より高いＣＤ３８発現を有する細胞を溶解させる一方、より低いＣＤ３８発現および中程度のＣＤ３８発現を有する細胞において自己消化を回避するようであるので、開示されるＣＡＲは、優れた副作用プロファイルを示し、培養物中で成長できる。言い換えれば、ＣＡＲ構築物の抗体成分の結合特徴は、ＣＤ３８へのより低くかつより好ましい結合特徴を達成する。
定義
【０１５３】
用語「単離された」は、他の細胞性材料を実質的に含まないタンパク質（例えば、抗体）またはポリヌクレオチドを指す。タンパク質は、当該分野で周知のタンパク質精製技術を使用して、単離によって、天然に関連する成分（または抗体を産生するために使用される細胞発現系に関連する成分）を実質的に含まないようにされ得る。一実施形態では、本開示の抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体、抗体または抗原結合性断片は、単離される。
【０１５４】
用語「核酸」、「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」は、相互交換可能に使用され、ヌクレオチドのポリマーを指す。核酸には、天然に存在する形態および組換え形態が含まれる。核酸には、ＤＮＡ分子（ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチドアナログ（例えば、ペプチド核酸および天然に存在しないヌクレオチドアナログ）を使用して生成されたＤＮＡまたはＲＮＡのアナログ、およびそれらのハイブリッドが含まれる。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であり得る。一実施形態では、本開示の核酸分子は、抗体、または断片もしくはｓｃＦｖ、誘導体、ムテイン、あるいはそれらのバリアントをコードする、連続するオープンリーディングフレームを含む。
【０１５５】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、相互交換可能に使用され、アミノ酸のポリマーを指し、任意の特定の長さに限定されない。ポリペプチドは、天然および非天然のアミノ酸を含む。ポリペプチドは、天然に存在する形態または組換え形態であり得る。これらの用語は、ネイティブおよび人工のタンパク質、タンパク質断片、およびタンパク質配列のポリペプチドアナログ（例えば、ムテイン、バリアント、キメラタンパク質および融合タンパク質）、ならびに翻訳後に改変された、または共有結合的にもしくは非共有結合的に他の方法で改変されたタンパク質を包含する。ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質は、モノマーまたはポリマーであり得る。ポリペプチドには、抗体、抗体鎖、ｓｃＦｖおよびキメラ抗原受容体構築物が含まれる。
【０１５６】
「パーセント同一性」または「パーセント相同性」は、２つのポリペプチド配列間または２つのポリヌクレオチド配列間の類似性の定量的測定を指す。２つのポリペプチド配列間のパーセント同一性は、２つのポリペプチド配列のアラインメントを最適化するために導入される必要があり得るギャップの数および各ギャップの長さを考慮した、２つのポリペプチド配列間で共有されるアラインされた位置における同一のアミノ酸の数の関数である。類似の様式で、２つのポリヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、２つのポリヌクレオチド配列のアラインメントを最適化するために導入される必要があり得るギャップの数および各ギャップの長さを考慮した、２つのポリヌクレオチド配列間で共有されるアラインされた位置における同一のヌクレオチドの数の関数である。２つのポリペプチド配列間または２つのポリヌクレオチド配列間での配列の比較およびパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成できる。例えば、２つのポリペプチドまたは２つのポリヌクレオチド配列の「パーセント同一性」または「パーセント相同性」は、そのデフォルトパラメーターを使用して、ＧＡＰコンピュータープログラム（ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ、バージョン１０．３（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）の一部）を使用して配列を比較することによって、決定され得る。
【０１５７】
用語「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、免疫細胞を活性化または刺激することが可能な細胞内シグナル伝達ドメインに融合された細胞外抗原結合性タンパク質、好ましくは、モノクローナル抗体の可変重鎖および軽鎖領域を融合させることに由来する単鎖可変断片（ｓｃＦｖまたはｓＦｖ）を含む融合タンパク質を記述する。あるいは、Ｆａｂに由来する（抗体に由来する代わりに、例えば、Ｆａｂライブラリーから得られた）ｓｃＦｖが使用され得る。
【０１５８】
用語「抗体」は、４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖から構成される免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、またはＩｇ分子の本質的なエピトープ結合特性を保持する、それらの任意の機能的断片、変異体、バリアントもしくは誘導体（ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ）を記述する。
【０１５９】
用語「抗ＣＤ３８抗体」および「ＣＤ３８に結合する抗体」は、ＣＤ３８に結合することが可能な抗体を指す。
【０１６０】
Ｆａｂ断片は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインを有する一価断片である；Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を有する二価断片である；Ｆｄ断片は、ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有する；Ｆｖ断片は、抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインを有する；およびｄＡｂ断片は、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＶＨもしくはＶＬドメインの抗原結合性断片を有する（米国特許第６，８４６，６３４号および同第６，６９６，２４５号）。
【０１６１】
「ベクター」は、外来遺伝子材料（例えば、核酸導入遺伝子）に作動可能に連結され得る核酸分子（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を指す。ベクターは、一本鎖または二本鎖の核酸分子であり得る。ベクターは、直鎖状または環状の核酸分子であり得る。ベクターは、外来遺伝子材料を細胞（例えば、宿主細胞）中に導入するためのビヒクルとして使用され得る。ベクターの１つの型は、「プラスミド」であり、これは、導入遺伝子に連結され得る直鎖状または環状の二本鎖染色体外ＤＮＡ分子を指し、宿主細胞において複製することが可能であり、導入遺伝子を転写および翻訳することが可能である。ウイルスベクターは、典型的には、導入遺伝子に連結され得るウイルスＲＮＡまたはＤＮＡ骨格配列を含有する。ウイルス骨格配列は、感染できないが、宿主細胞ゲノム中へのウイルス骨格および共に連結された導入遺伝子の挿入を保持するように改変され得る。ウイルスベクターの例には、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターおよびアデノウイルスベクターが含まれる。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞中において自律的複製が可能である（例えば、細菌複製起点を含む細菌ベクター、およびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞中への導入の際に宿主細胞のゲノム中に組み込まれ、それによって、宿主ゲノムと一緒に複製される。「発現ベクター」は、宿主細胞中に形質導入される発現ベクターに連結された導入遺伝子の転写、または転写および翻訳を指示する、１つまたは複数の調節配列、例えば、誘導性および／もしくは構成的プロモーター、またはリボソーム結合部位を含有し得る、ベクターの１つの型である。
【０１６２】
導入遺伝子は、導入遺伝子とベクターとの間に連結が存在する場合、ベクター中に含有されるベクター配列の機能または発現を可能にするように、ベクターに「作動可能に連結」される。ベクター配列は、複製元の配列（ｏｒｉｇｉｎａｌ−ｏｆ−ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）、誘導性または構成的プロモーターまたはエンハンサー配列、少なくとも１つの選択可能なマーカー配列、５’および３’ＬＴＲ配列、ならびに必要に応じてウイルスｅｎｖ、ｐｏｌおよび／またはｇａｇ配列のいずれか１つまたは任意の組合せを含み得る。
【０１６３】
導入遺伝子は、調節配列が導入遺伝子の発現（例えば、発現のレベル、タイミングまたは場所）に影響を与える場合、調節配列に「作動可能に連結」される。「調節配列」は、それが作動可能に連結される導入遺伝子の発現（例えば、発現のレベル、タイミングまたは場所）に影響を与える核酸配列である。調節配列は、例えば、調節される核酸に対して直接的に、または１つもしくは複数の他の分子（例えば、調節配列および／または核酸に結合するポリペプチド）の作用を介して、その効果を発揮し得る。調節配列は、ベクターの一部であり得る。調節配列の例には、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位および他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）が含まれる。調節配列のさらなる例は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，  １９９０，  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  Ｃａｌｉｆ．およびＢａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２３：３６０５−３６０６に記載されている。
【０１６４】
「宿主細胞」または「または宿主細胞の集団」は、外来（外因性）核酸が導入された細胞（またはその集団）を指す。外来核酸には、導入遺伝子に作動可能に連結した発現ベクターもまた含まれ得、宿主細胞は、外来核酸（導入遺伝子）を発現させるために使用され得る。一例では、宿主細胞（またはその集団）には、本明細書に記載されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸に作動可能に連結した発現ベクターが導入され得る。宿主細胞（またはその集団）は、培養された細胞であり得、または対象から抽出され得る。宿主細胞（またはその集団）には、初代対象細胞、および継代数にかかわらずその子孫が含まれる。子孫細胞は、親細胞と比較して、同一の遺伝子材料を有していてもいなくてもよい。宿主細胞は、子孫細胞を包含する。
【０１６５】
宿主細胞は、原核生物細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉであり得る、または真核生物細胞、例えば、単細胞真核生物（例えば、酵母または他の真菌）、植物細胞（例えば、タバコまたはトマト植物細胞）、動物細胞（例えば、ヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞または昆虫細胞）もしくはハイブリドーマであり得る。宿主細胞の例には、ＲＰＭＩ８２２６（Ｇｅｎｔｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４  Ｌｅｕｋ．  Ｒｅｓ．  ２８（３）：３０７−３１３）およびヒト慢性骨髄性白血病細胞系Ｋ５６２が含まれる。他の例には、ＣＯＳ−７系のサル腎臓細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）（Ｇｌｕｚｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８１，  Ｃｅｌｌ  ２３：１７５）、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １６３）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞もしくはそれらの誘導体、例えば、無血清培地中で成長するＶｅｇｇｉｅ  ＣＨＯおよび関連の細胞系（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２８：３１）もしくはＤＨＦＲが欠損したＣＨＯ株ＤＸ−Ｂ１１（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８０，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：４２１６−２０）、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０）細胞系、アフリカミドリザル腎臓細胞系ＣＶ１に由来するＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞系（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）（ＭｃＭａｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １０：２８２１）、ヒト胎児腎臓細胞、例えば、２９３、２９３  ＥＢＮＡもしくはＭＳＲ  ２９３、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、他の形質転換された霊長類細胞系、正常二倍体細胞、初代組織のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養物に由来する細胞株、初代外植片、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫまたはＪｕｒｋａｔ細胞が含まれる。一実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞、例えば、ヒト宿主細胞である。典型的には、宿主細胞は、宿主細胞において次いで発現され得る外因性ポリペプチドコード核酸が導入され得る、初代細胞または培養された細胞である。宿主細胞という用語は、特定の対象細胞を指し、かかる細胞の子孫または潜在的子孫もまた指すと理解される。ある特定の改変が、例えば、変異または環境的影響に起因して、続く世代において生じ得るので、かかる子孫は、実際には親細胞と同一でない場合があるが、本明細書で使用される場合のこの用語の範囲内になおも含まれる。
【０１６６】
宿主細胞は、本明細書で開示される抗ＣＤ３８−ＣＡＲ構築物を発現するように任意の方法で改変された、トランスフェクトされた、形質導入された、形質転換されたおよび／または操作された、任意の細胞（その子孫を含む）を記述する。好ましくは、宿主細胞は、ヒトＴ細胞、胎盤細胞またはＮＫ細胞である。
【０１６７】
用語「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」は、外因性核酸（例えば、導入遺伝子）が宿主細胞中に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」宿主細胞は、外因性核酸でトランスフェクトされた、形質転換されたまたは形質導入された宿主細胞である。宿主細胞には、初代対象細胞およびその子孫が含まれる。
【０１６８】
導入遺伝子、例えば、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物をコードする開示される核酸配列は、導入遺伝子を宿主細胞中に導入するためのビヒクルとして使用されるウイルスベクターを含むベクターに作動可能に連結され得る。宿主細胞中に（例えば、形質導入、トランスフェクションまたは形質転換を介して）導入される導入遺伝子は、一過的に導入され得る、または好ましくは、宿主細胞のゲノム中に安定に組み込まれ得る。宿主細胞中に導入された導入遺伝子は、子孫細胞において増やされ得る。ベクターは、一本鎖または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡベクターであり得る。ベクターには、宿主細胞における導入遺伝子の発現を指示する発現ベクターが含まれる。適切なベクターには、複製元の配列、誘導性または構成的プロモーター配列、および少なくとも１つの選択可能なマーカー配列を含み得る発現ベクターが含まれ、これらの配列は、パッケージング細胞および／または宿主細胞において機能的である。導入遺伝子を宿主細胞中に導入するために使用されるウイルスベクターには、レトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターを含むウイルス科であるＲｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅに由来するベクターが含まれる。レトロウイルスベクターは、分裂している宿主細胞を形質導入するために使用され得、レンチウイルスベクターは、分裂していない宿主細胞を形質導入するために使用され得る。発現ベクターに連結された所望の導入遺伝子で形質導入された宿主細胞には、Ｔ細胞、胎盤由来ナチュラルキラー宿主細胞および臍帯血由来ナチュラルキラー宿主細胞が含まれる。
【０１６９】
レトロウイルスベクターは、任意のトリまたは哺乳動物供給源に由来し得る。レトロウイルスベクターは、マウス、ラットおよびヒトを含むいくつかの異なる種の宿主細胞に感染することが可能であり得（例えば、両種指向性）、または限定的な宿主範囲を有し得る（例えば、狭宿主性）。レトロウイルスベクターは、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）、骨髄増殖性肉腫ウイルス（ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｓａｒｃｏｍａ  ｖｉｒｕｓ）（ＭＰＳＶ）、マウス胚性幹細胞ウイルス（ＭＥＳＶ）、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、脾臓病巣形成ウイルス（ＳＦＦＶ）に由来し得る。
【０１７０】
典型的な第１世代レトロウイルス移入ベクター（例えば、ガンマレトロウイルスベクター）系では、レトロウイルスｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖをコードする配列は、所望の導入遺伝子で置き換えられ得、導入遺伝子には、ｃｉｓ作用性の長い末端反復配列（ＬＴＲ）配列が両側に隣接し得る。ｇａｇおよびｐｏｌ配列は、パッケージングプラスミド上に保有され得、ｅｎｖ配列は、エンベローププラスミド上に別々に保有され得、これら３つのウイルス配列の発現は、ｔｒａｎｓで作用する。移入ベクター（導入遺伝子を含有する）は、パッケージングプラスミドおよびエンベローププラスミドと一緒に、パッケージング細胞中にベクターおよびプラスミドを形質導入するためのトランスフェクション試薬の存在下で、パッケージング細胞と反応させられる。形質導入されたパッケージング細胞は、導入遺伝子を保有する移入ベクターを有する感染性ビリオンを含有する細胞培養上清を生成する。形質導入された宿主細胞は、宿主細胞をビリオン上清と反応させることによって生成される。形質導入の際に、レトロウイルス移入ベクター（導入遺伝子を保有する）は、宿主細胞のゲノム中に組み込まれる（ＭｏｒｇａｎおよびＢｏｙｅｒｉｎａｓ  ２０１６  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  ４（２）：９  ”Ｒｅｖｉｅｗ：  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ”）。レトロウイルス移入ベクターは、導入遺伝子の誘導性または構成的転写を指示するプロモーターもまた含有し得る。第２世代レトロウイルスベクター系は、典型的には、パッケージング細胞系において安定に発現されるｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ配列を含み、別のパッケージングプラスミドおよびエンベローププラスミドの必要性を取り除く。パッケージング細胞系は、形質導入されたパッケージング細胞およびビリオン上清を生成するために、パッケージングベクター（導入遺伝子を保有する）と反応させられる。Ｐｈｏｅｎｉｘヘルパーを含まないレトロウイルスパッケージング細胞系は、第２世代レトロウイルス系の一例である。レトロウイルスベクターは、宿主細胞形質導入に使用される（ＷＯ２０１４／０５５６６８）。
【０１７１】
ＨＩＶ、ＳＩＶまたはＦＩＶに由来するレンチウイルスベクターは、導入遺伝子を宿主細胞中に導入するために使用され得る。数世代のレンチウイルスベクターが開発されている。第１世代レンチウイルス系は、移入ベクター（導入遺伝子を保有する）、パッケージングプラスミド（ｇａｇ、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｒｅｖおよびアクセサリー配列を保有する）およびエンベローププラスミド（異種ｅｎｖ配列を保有する）を用いるという点で、第１世代レトロウイルス系と類似している。第２世代レンチウイルス系は、移入ベクター（導入遺伝子）、パッケージングプラスミド（ｇａｇ、ｐｏｌ、ｔａｔおよびｒｅｖ、ならびにアクセサリー配列は除去されている）およびエンベローププラスミド（異種ｅｎｖ配列を保有する）を用いる。第３世代レンチウイルス系は、自己不活性化（ＳＩＮ）系と呼ばれる場合もあり、移入ベクター（導入遺伝子およびｔａｔが除去された３’ＬＴＲ）、第１のパッケージングプラスミド（ｇａｇおよびｐｏｌ）、第２のパッケージングプラスミド（ｒｅｖ）およびエンベローププラスミド（異種ｅｎｖ配列を保有する）を用いる。レトロウイルス系と同様に、これらのレンチウイルス系のいずれも、ベクター／プラスミドをパッケージング細胞および形質導入試薬と反応させてビリオンを含有する細胞培養上清を生成し、これを次に使用して宿主細胞を形質導入することを含む。レンチウイルスベクターは、宿主細胞を形質導入するために使用される（ＷＯ２０１２／０３１７４４；米国特許第８，８０２，３７４号；および米国特許出願公開第２０１６／０１５２７２３号）。
【０１７２】
導入遺伝子を宿主細胞中に導入するために使用される他のウイルスベクターには、サルウイルス４０（ＳＶ４０）、単純ヘルペスウイルス１、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）が含まれる（Ｇｒｏｓｓ  １９８９  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：１００２４−１００２８）。
【０１７３】
発現ベクターは、典型的には、導入遺伝子が導入されるパッケージング細胞および／または宿主細胞における誘導性または構成的発現（例えば、転写）を指示するプロモーターおよび／またはエンハンサー配列を含む。構成的プロモーターには、レトロウイルスＬＴＲ、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、伸長成長因子１アルファ（ＥＦ−１α）、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長い末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）プロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ＰＧＫ（ホスホグリセリン酸キナーゼ）、ＵｂＣ（ユビキチンＣ）、ＭＬＶ（モロニー白血病ウイルス）およびＣＡＧ（サイトメガロウイルス初期エンハンサーエレメント、ニワトリベータ−アクチンの第１のエクソンおよびイントロン由来のプロモーター、ならびにウサギベータ−グロビンのスプライスアクセプター）エンハンサー配列が含まれる。誘導性プロモーター配列には、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のテトラサイクリンオペレーター（ＴｅｔＯ）部位（Ｓａｋｅｍｕｒａ  ２０１６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４（８）：６５８−６６８）およびｌａｃリプレッサー系が含まれる。レンチウイルスベクターからの高い発現に適切なプロモーターには、ヒトユビキチン、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩおよびβ２ミクログロブリンのプロモーターが含まれる（ＷＯ２０１６／０１２６２３）。レトロウイルスおよびレンチウイルス発現ベクターは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ（ＡＢＭ）（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｃａｎａｄａ）およびＡｄｄｇｅｎｅ（Ｗａｔｅｒｔｏｗｎ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を含むいくつかの供給源から市販されている。
【０１７４】
用語「標的細胞」は、かかる細胞を、抗体または抗体誘導体によって認識可能なものにする、１つまたは複数の標的ポリペプチドを発現する細胞である。一実施形態では、標的細胞には、本開示のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物による結合で認識されるＣＤ３８ポリペプチドを発現するがん標的細胞が含まれる。
【０１７５】
用語「約」または「およそ」は、値がどのように測定または決定されるかに一部依存する、当業者によって決定される特定の値についての許容できる誤差を意味する。例えば、用語「約」または「およそ」は、所与の値または範囲の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％または０．０５％内を意味する。
抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
【０１７６】
本開示は、第２世代ＣＡＲ構築物足場上に公知の抗ＣＤ３８完全ヒト抗体Ａ２（米国特許出願公開第２０１６／０２９７８８８に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる）を含み、異なる成分の膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを一般に有する新たなＣＡＲ構築物を記載する。上述の成分を開示されるＣＡＲ構築物へとまとめることで、「Ｔ細胞同胞殺し」をエレガントな方法で回避することにより、驚くべき結果が得られた。より具体的には、開示されるＣＤ３８指向性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、ＣＤ３８標的のＴ細胞ディスプレイに起因する自己溶解（ｓｅｌｆ−ｌｙｓｉｓ）を回避できる。より具体的には、本開示は、Ｔ細胞、培養されたＮＫ細胞または胎盤由来ＮＫ細胞中への形質導入のための、抗ＣＤ３８  ＣＡＲをコードする核酸配列を提供し、このＣＡＲは、いくらかより低い結合親和性の抗体結合領域によって方向づけられている。このより低い結合親和性は、開示されるＣＡＲ形質導入された宿主細胞が、表面ＣＤ３８の中程度のまたはより低いディスプレイを有するＴまたはＮＫ細胞の実質的な溶解を回避することを可能にする。従って、開示される標的化抗体を用いた開示されるＣＡＲ構築物は、優れた安全性プロファイルを達成し、改善された特徴的ＣＡＲ構築物と同様、自己溶解なしに成長できる。
【０１７７】
ＣＡＲ構築物は一般に、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ３８）を認識する抗体の細胞外領域、例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ならびに細胞内領域、例えば、Ｔ細胞受容体、例えば、ＴＣＲ活性化を模倣する（ＴＣＲ）ゼータ鎖、および共刺激を模倣するためのＣＤ２８または４−ＡＢＢに由来するシグナル伝達ドメインを含む。ＣＡＲは一般に、抗体の抗原認識ドメインを、Ｔ細胞由来の受容体のシグナル伝達ドメインに連結させることによって構築される。ＣＡＲをコードする核酸配列によるＴ細胞の改変は、Ｔ細胞に、標的が変更された、抗体型の抗腫瘍細胞傷害性を備える。死滅化はＭＨＣ拘束されないので、このアプローチは、同じ抗原を有する全ての患者にとって一般的な療法を提供する。ＣＡＲで操作されたこれらのＴ細胞は、「デザイナーＴ細胞」、「ＣＡＲ−Ｔ細胞」または「Ｔボディ」と呼ばれる場合が多い（Ｅｓｈｈａｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０（２）：  ７２０−７２４，１９９３；Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｂｉｏ．  ｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆ．  ２０：  ３１５−３４１，  ２００２）。
【０１７８】
具体的には、抗ＣＤ３８  Ａ２抗体重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。抗ＣＤ３８  ｓｃＦｖ  Ａ２抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
【０１７９】
あるいは、抗ＣＤ３８  ＣＡＲの抗原結合性領域は、抗ＣＤ３８抗体Ｄ８の軽鎖および重鎖可変領域に対応するＣＤＲ配列を含むｓｃＦｖを含む。抗ＣＤ３８  Ｄ８抗体重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。抗ＣＤ３８  ｓｃＦｖは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
【０１８０】
開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲは、ヒンジ領域、好ましくは、ＣＤ８ヒンジ領域（配列番号６または１７）、またはその機能的断片をさらに含む。開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲは、細胞外ドメイン、好ましくは、ＣＤ２８細胞外ドメイン（配列番号７）、またはその機能的断片をさらに含む。開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲは、膜貫通ドメイン、好ましくは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、Ｔ細胞受容体のベータ鎖、Ｔ細胞受容体のゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＬＦＡ−１  Ｔ細胞共受容体、ＣＤ２  Ｔ細胞共受容体／接着分子、ＣＤ８アルファ、およびそれらの組合せからなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメイン由来の膜貫通ドメインをさらに含む。好ましくは、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン（配列番号８）、またはその機能的断片由来である。
【０１８１】
開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲは、ＣＤ３−ゼータ鎖、４−１ＢＢ、ＣＤ２８、およびそれらの組合せからなる群からのシグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。２つのシグナル伝達ドメインが存在する場合、第２のシグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインと呼ばれる。好ましくは、共刺激シグナル伝達ドメインは、以下であるがこれらに限定されないタンパク質の細胞内ドメインまたはその断片を含む：ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３リガンド、およびそれらの任意の組合せ。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８シグナル伝達ドメインを含む。さらなる実施形態では、ＣＤ２８シグナル伝達ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列、またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３−ζシグナル伝達ドメインを含む。さらなる実施形態では、ＣＤ３−ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列、またはその機能的断片を含む。
【０１８２】
従って、本開示は、開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物をコードする配列を含む単離された核酸分子を包含する。アミノ酸配列が記載される場合、このアミノ酸配列をコードする核酸配列もまた含まれることに留意すべきである。
【０１８３】
１．細胞外抗ＣＤ３８結合性タンパク質
【０１８４】
本開示は、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質を含む抗ＣＤ３８  ＣＡＲであって、抗原結合性タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む、抗ＣＤ３８  ＣＡＲを提供する。好ましくは、ＶＨドメインは、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％相同であるアミノ酸配列を含み、またはＶＨドメインは、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含み、またはＶＨドメインは、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み、またはＶＨドメインは、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０１８５】
さらに、本開示は、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質を含むＣＡＲであって、抗原結合性タンパク質が、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、またはＶＬドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含み、またはＶＬドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含み、またはＶＬドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み、またはＶＬドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
【０１８６】
好ましくは、開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲは、配列番号３のアミノ酸配列を含む可変ドメインを有する軽鎖および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変ドメインを有する重鎖を含むｓｃＦｖを含む。
【０１８７】
本開示は、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質を含む抗ＣＤ３８  ＣＡＲであって、抗原結合性タンパク質が、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む、抗ＣＤ３８  ＣＡＲを提供する。好ましくは、ＶＨドメインは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％相同であるアミノ酸配列を含み、またはＶＨドメインは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含み、またはＶＨドメインは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み、またはＶＨドメインは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０１８８】
さらに、本開示は、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質を含むＣＡＲであって、抗原結合性タンパク質が、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、またはＶＬドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含み、またはＶＬドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含み、またはＶＬドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み、またはＶＬドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
【０１８９】
本開示は、バリアントＣＡＲ構築物が、配列番号２０または２１に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む限り、本明細書に記載されるＣＡＲ構築物のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換、欠失および／または挿入を含む１つまたは複数のバリエーションを有する、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を提供する。
【０１９０】
好ましくは、開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲは、配列番号４のアミノ酸配列を含む可変ドメインを有する軽鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変ドメインを有する重鎖を含むｓｃＦｖを含む。
【０１９１】
単鎖抗体は、アミノ酸架橋（短いペプチドリンカー）を介して重鎖および軽鎖可変ドメイン（Ｆｖ領域）断片を連結して、単一のポリペプチド鎖を生じることによって形成され得る。かかる単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、２つの可変ドメインポリペプチド（ＶＬおよびＶＨ）をコードするＤＮＡ間に、ペプチドリンカーをコードするＤＮＡを融合させることによって調製されてきた。得られたポリペプチドは、折り畳まって抗原結合性モノマーを形成し得、または２つの可変ドメイン間の可動性リンカーの長さに依存して、マルチマー（例えば、ダイマー、トリマーまたはテトラマー）を形成し得る（Ｋｏｒｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｐｒｏｔ．  Ｅｎｇ．  １０：４２３；Ｋｏｒｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｅｎｇ．  １８：９５−１０８）。異なるＶＬ含有ポリペプチドおよびＶＨ含有ポリペプチドを組み合わせることによって、異なるエピトープに結合するマルチマーｓｃＦｖを形成することができる（Ｋｒｉａｎｇｋｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｅｎｇ．  １８：３１−４０）。単鎖抗体の産生のために開発された技術には、米国特許第４，９４６，７７８号；Ｂｉｒｄ，  １９８８，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９；Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４およびｄｅ  Ｇｒａａｆ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １７８：３７９−８７に記載される技術が含まれる。
【０１９２】
２．膜貫通ドメイン
【０１９３】
開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物の膜貫通ドメインは、細胞膜、好ましくは、哺乳動物細胞膜中で熱力学的に安定な任意のポリペプチド構造を記述する。開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物における使用のために適合性の膜貫通ドメインは、任意の天然の膜貫通タンパク質、またはその断片から得られ得る。あるいは、膜貫通ドメインは、合成の天然に存在しない膜貫通タンパク質、またはその断片、例えば、細胞膜（例えば、哺乳動物細胞膜）中で熱力学的に安定な疎水性タンパク質セグメントであり得る。
【０１９４】
好ましくは、ＣＡＲにおいて使用される膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＬＦＡ−１  Ｔ細胞共受容体、ＣＤ２  Ｔ細胞共受容体／接着分子、ＣＤ４０、ＣＤ４ＯＬ／ＣＤ１５４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳおよびＦＧＦＲ２Ｂからなる群から選択される膜タンパク質に由来する。好ましくは、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８またはＣＤ３４に由来する。
【０１９５】
好ましくは、抗ＣＤ３８  ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、または膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含み、または膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含み、または膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み、または膜貫通ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０１９６】
３．細胞内ドメイン
【０１９７】
本明細書で開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。シグナル伝達ドメインは一般に、細胞の正常なエフェクター機能のうち少なくとも１つの活性化を担う。用語「エフェクター機能」は、細胞の特殊化した機能を記述する。例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞のエフェクター機能には、細胞溶解活性またはヘルパー活性が含まれる。「シグナル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを伝達し、その特殊化した機能を果たすように細胞に指示するタンパク質の部分を記述する。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を用いることができるが、多くの場合、鎖またはドメインの全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの短縮された部分が使用される限りにおいて、かかる短縮された部分は、それがエフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクトなドメインの代わりに使用され得る。
【０１９８】
一次シグナル伝達ドメインは、刺激性の方法または阻害性の方法のいずれかで、ＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激性の様式で作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）として公知のシグナル伝達モチーフを含み得る。抗ＣＤ３８  ＣＡＲにおける使用のためのＩＴＡＭを含有する一次シグナル伝達ドメインには、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ６６ｄのシグナル伝達ドメインが含まれる。好ましくは、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζまたはＣＤ２８である。
【０１９９】
好ましくは、抗ＣＤ３８  ＣＡＲの一次シグナル伝達ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、または一次シグナル伝達ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含み、または一次シグナル伝達ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含み、または一次シグナル伝達ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み、または一次シグナル伝達ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２００】
好ましくは、抗ＣＤ３８  ＣＡＲの一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、または一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含み、または一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含み、または一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み、または一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２０１】
さらに、開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物は、共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む。キメラ受容体における使用のための共刺激シグナル伝達ドメインの例は、Ｂ７／ＣＤ２８ファミリーのメンバー（Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣおよびＰＤＣＤ６）；ＴＮＦスーパーファミリーのメンバー（４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、リンホトキシン−アルファ／ＴＮＦ−ベータ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）；インターロイキン−１受容体／ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）スーパーファミリーのメンバー（ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９およびＴＬＲ１０）；ＳＬＡＭファミリーのメンバー（２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６およびＳＬＡＭ／ＣＤ１５０）；ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ５３、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＣＤ２００、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、イカロス、インテグリンアルファ４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンアルファ４ベータ１、インテグリンアルファ４ベータ７／ＬＰＡＭ−１、ＬＡＧ−３、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＭＹＤ８８、ＴＲＩＦ、ＴＩＲＡＰ、ＴＲＡＦ、デクチン−１（Ｄｅｃｔｉｎ−１）／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）およびＮＫＧ２Ｃからなる群から選択される共刺激タンパク質の細胞質内シグナル伝達ドメインである。好ましくは、共刺激ドメインは、α４β１インテグリン、β２インテグリン（ＣＤ１１ａ−ＣＤ１８、ＣＤ１１ｂ−ＣＤ１８、ＣＤ１１ｂ−ＣＤ１８）、ＣＤ２２６、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ２７、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ８０、ＮＫＧ２Ｄ、ＫＩＲ−Ｓ、ＣＤ１００、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＰＥＮ��、ＣＥＡＣＡＭ１、ＢＹ５５、ＣＲＡＣＣ、Ｌｙ９、ＣＤ８４、ＮＴＢＡ、２Ｂ４、ＳＡＰ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＥＡＴ２、ＦｃＲγ、ＣＤ３ζおよびＥＲＴからなる群から選択される活性化性受容体タンパク質の細胞内ドメインを含む。好ましくは、共刺激ドメインは、ＫＩＲ−Ｌ、ＬＩＬＲＢ１、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＫＬＲＧ−１、ＮＫＲ−Ｐ１Ａ、ＴＩＧＩＴ、ＣＥＡＣＡＭ、ＳＩＧＬＥＣ  ３、ＳＩＧＬＥＣ  ７、ＳＩＧＬＥＣ９およびＬＡＩＲ−１からなる群から選択される阻害性受容体タンパク質の細胞内ドメインを含む。好ましくは、共刺激ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドからなる群から選択されるタンパク質の細胞内ドメインを含む。
【０２０２】
４．ヒンジ領域
【０２０３】
抗ＣＤ３８  ＣＡＲは、ヒンジ領域をさらに含む。ヒンジ領域は、ｓｃＦｖ抗体領域と膜貫通ドメインとの間に位置する。ヒンジ領域は、タンパク質の２つのドメイン間に一般に見出され、抗ＣＤ３８  ＣＡＲの可動性、およびドメインの一方または両方の、互いに対する動きを可能にする、アミノ酸セグメントである。好ましくは、ヒンジ領域は、約１０〜約１００アミノ酸、例えば、約１５〜約７５アミノ酸、約２０〜約５０アミノ酸または約３０〜約６０アミノ酸を含む。または、ヒンジ領域は、天然に存在するタンパク質のヒンジ領域である。好ましくは、ヒンジ領域は、ＣＤ８ヒンジ領域およびＣＤ８αヒンジ領域からなる群から選択されるＣＤ８ａヒンジ領域である。好ましくは、ヒンジ領域は、ＣＡＲのｓｃＦｖのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に配置される。
【０２０４】
好ましくは、抗ＣＤ３８  ＣＡＲのヒンジ領域は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、またはヒンジ領域は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含み、またはヒンジ領域は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含み、またはヒンジ領域は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み、またはヒンジ領域は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２０５】
好ましくは、抗ＣＤ３８  ＣＡＲのヒンジ領域は、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、またはヒンジ領域は、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含み、またはヒンジ領域は、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含み、またはヒンジ領域は、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み、またはヒンジ領域は、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２０６】
５．シグナルペプチド
【０２０７】
シグナル配列は、細胞中の所望の部位、例えば、細胞の分泌経路にポリペプチドを標的化するペプチド配列であり、細胞膜の脂質二重層中への抗ＣＤ３８  ＣＡＲの組込みおよびアンカリングを可能にする。好ましくは、シグナルは、ＣＤ８α、ＣＤ２８およびＣＤ１６からなる群からのシグナル配列である。
【０２０８】
好ましくは、抗ＣＤ３８  ＣＡＲのシグナル配列は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、またはシグナル配列は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含み、またはシグナル配列は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含み、またはシグナル配列は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み、またはシグナル配列は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
宿主細胞
【０２０９】
単離された宿主細胞または宿主細胞の集団は、抗ＣＤ３８  ＣＡＲを発現するように、開示される抗ＣＤ３８構築物で形質導入される。２つの別個の群の宿主細胞が存在する。第１の群は、自家Ｔ細胞とも呼ばれる、患者由来の単離されたＴ細胞である。自家Ｔ細胞のかかる集団は、患者から得られ、単離され、拡大増殖される。次いで、拡大増殖されたＴ細胞は、拡大増殖され個々の患者に戻される（投与される）形質導入されたＴ細胞の可能な限り高い集団を達成するために、開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物で形質導入される。開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲ構築物は、高ＣＤ３８発現腫瘍細胞、主に多発性骨髄腫（ＭＭ）腫瘍細胞でのみ、細胞溶解を達成できた。
【０２１０】
宿主細胞の第２の群は、胎児起源の、好ましくは、妊娠後の胎盤または臍帯組織に由来する、培養されたＴまたはＮＫ細胞である。この第２の群の宿主細胞は、自家ではないが、培養され、全てのヒト患者にわたって普遍的に使用される。
【０２１１】
本開示は、Ｔ細胞、培養されたＮＫ細胞または胎盤由来ＮＫ細胞を形質導入でき、表面ＣＤ３８の中程度のまたはより低いディスプレイを有するＴまたはＮＫ細胞の溶解を回避することが可能な、ＣＡＲ構築物を提供する。
治療方法および抗ＣＤ３８  ＣＡＲの使用
【０２１２】
本開示は、がんを処置するまたは腫瘍成長を阻害することを必要とする対象においてがんを処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法であって、対象に、抗ＣＤ３８  ＣＡＲを含む単離された宿主細胞、または形質導入された宿主細胞の集団を投与するステップを含む、方法を提供する。血液学的がんが、本明細書で開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲを使用して処置され得る。本開示の方法を使用して処置され得る血液学的がんの例には、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、慢性Ｂリンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）ならびに慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が含まれる。好ましくは、血液学的がんは、多発性骨髄腫（ＭＭ）である。
【０２１３】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、形質細胞の悪性腫瘍であり、世界で２番目に多い血液学的がんである。現在、この疾患について治癒は存在せず、その５年生存率はわずか４５％である。過去１０年間にわたって、新規免疫調節剤、プロテアソーム阻害剤および自家造血幹細胞移植を含む、ＭＭの処置における顕著な進歩があった（Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｌｏｏｄ  １１１（５）：  ２５１６−２５２０，  ２００８；Ｂａｒｏｓｉ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｎ．  Ｈｅｍａｔｏｌ．  ９１（６）：  ８７５−８８８，  ２０１２；Ｋｈａｒｆａｎ−Ｄａｂａｊａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｈｅｍａｔｏｌ．  Ｏｎｃｏｌ．  ６：  ２，  ２０１３）。
【０２１４】
本開示は、がん関連抗原を発現する腫瘍の成長を阻害する方法であって、腫瘍のがん細胞を、抗ＣＤ３８  ＣＡＲを含む形質導入された宿主細胞または形質導入された宿主細胞の集団と接触させるステップを含み、宿主細胞が、ＮＫ細胞、例えば胎盤ＮＫ細胞である、方法を提供する。
【０２１５】
形質導入された宿主細胞は、約１０１〜約１０９細胞／ｋｇ体重の投薬量で投与され得る。上に列挙した投薬量の中間の範囲、例えば、約１０２〜約１０８細胞／ｋｇ体重、約１０４〜約１０７細胞／ｋｇ体重、約１０５〜約１０６細胞／ｋｇ体重もまた、本開示の一部であることが意図される。
【０２１６】
形質導入された宿主細胞は、毎日、または好ましくはより低い頻度で投与され得る。
抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲを発現するレトロウイルスベクターの構築
【０２１７】
第２世代抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲを、所有権のあるヒト単鎖可変領域（ｓｃＦｖ）抗体ライブラリーからスクリーニングしたヒト抗ＣＤ３８抗体を使用することによって生成した。ヒトｃｍｙｃ遺伝子由来の１０アミノ酸のｍｙｃタグ（アミノ酸：ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号１２）、ＤＮＡ：ＧＡＧＣＡＧＡＡＧＣＴＴＡＴＣＴＣＣＧＡＧＧＡＡＧＡＴＣＴＧ（配列番号２２））を、ＣＡＲ発現の検出のために、ｓｃＦｖのＮ末端領域に付加した。
【０２１８】
この開示される構築された抗ＣＤ３８  ＣＡＲを、「抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ」と命名する。これは、１９アミノ酸残基のマウス抗体重鎖由来のシグナルペプチドとその後の２つのさらなるアミノ酸残基ＡｓｐおよびＩｌｅ、１０アミノ酸残基のヒトｍｙｃタグ、１１８アミノ酸残基の抗ＣＤ３８抗体のＶＨ、１５アミノ酸残基の（（Ｇ４）Ｓ）３の形態のリンカー、１１０アミノ酸残基の抗ＣＤ３８抗体のＶＬ、４６アミノ酸残基のＣＤ８αヒンジ、４０アミノ酸残基のＣＤ２８細胞外ドメイン（スペーサーとして機能する）、２７アミノ酸残基のＣＤ２８膜貫通ドメイン、４１アミノ酸残基のＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびに１１２アミノ酸残基のＴＣＲζ細胞内ドメインを含む５４２アミノ酸残基を含む第２世代ＩｇＣＤ２８ＴＣＲ  ＣＡＲである（図１）。成熟した開示される抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲは、約５７ｋＤａの予測されたモノマータンパク質重量を有する５２３アミノ酸残基を含む。
【０２１９】
抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、抗ＣＤ３８  ＣＡＲ発現レトロウイルスベクターによる、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）活性化されたＴ細胞の形質導入によって生成した（図２Ａ）。ウエスタンブロッティングによって分析した場合、抗ＣＤ３８  ＣＡＲは、還元条件下で約７０ｋＤの分子量に、非還元条件下で約１４０ｋＤの分子量に移動し（図２Ｂ）、Ｔ細胞表面上でのホモダイマー形成が確認された。より緩徐に移動するバンドは、その分子のグリコシル化形態を示し得る。ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８Ａ２  ＣＡＲは、還元条件下で約７０ｋＤａの分子量を有するモノマーとして、非還元条件下で１４０ｋＤａの分子量を有するホモダイマーとして検出された。これらの結果は、ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８Ａ２  ＣＡＲが、ＣＡＲ−Ｔ細胞表面上でホモダイマーを形成することを示唆している。
【０２２０】
ＣＤ３８−Ｆｃ融合タンパク質と共にインキュベートすると、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＡＲ発現と相関する強いＣＤ３８結合活性を示した（図３Ａおよび３Ｂ）。これらの結果は、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、発現されたＣＡＲを介して、ＣＤ３８に特異的かつ効率的に結合できることを確認する。抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ  Ｔ細胞が、それらの標的化された抗原ＣＤ３８に結合できることを確認するために、形質導入されていない対照および抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞を、２μｇ／ｍｌのＣＤ３８−Ｆｃ融合タンパク質と共にインキュベートし、ＰＥコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧを用いたフローサイトメトリーによって分析して、ＣＤ３８−Ｆｃ結合を検出し、ＦＩＴＣコンジュゲートヤギ抗Ｍｙｃ抗体を用いたフローサイトメトリーによって分析して、Ｔ細胞上のＣＡＲ発現を検出した（図３）。
【０２２１】
抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ３８が上方調節された細胞を選択的に死滅させる。ＣＤ３８は、活性化されたＴ細胞上で発現されることが見出され、Ｔ細胞活性化マーカーとみなされた（Ｄｅａｇｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６０（１）：３９５−４０２，  １９９８およびＳａｎｄｏｖａｌ−Ｍｏｎｔｅｓ  ａｎｄ  Ｓａｎｔｏｓ−Ａｒｇｕｍｅｄｏ，  Ｊ．  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．  ７７（４）：  ５１３−５２１，  ２００５）。本発明者らは、ＣＤ３８発現集団を抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞において試験し、ＣＤ３８が上方調節された集団のみが、抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞において排除されることを見出した（図３）。残りのＣＤ３８陰性および低発現ＣＡＲ−Ｔ細胞集団は、長期細胞培養の間に、対照Ｔ細胞と匹敵する生存度で安定であった。抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞のこの特徴により、ＣＡＲ−Ｔ細胞が、培養物中で良好に生存し、自己溶解を回避し、ＣＡＲ−Ｔ細胞に関連する、腫瘍を標的にするが腫瘍以外も標的にするために生ずる副作用が限定的であるという臨床的利点を提供することが可能になるが、それは、抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＣＤ３８が上方調節されたＭＭ細胞を選択的に死滅させるが、ＣＤ３８正常発現細胞は死滅させないからである。
【０２２２】
抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔの同胞殺し活性を調査するために、抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞上のＣＤ３８発現を評価した（図４）。形質導入されていない対照および抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞を、マウス抗ヒトＣＤ３８  ｍＡｂで染色し、その後ＡＰＣコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ抗体で染色するフローサイトメトリーによって分析した。
【０２２３】
同胞殺しを回避する能力を、長期細胞培養における、Ａ２抗体を有する開示される抗ＣＤ３８  ＣＡＲ細胞の安定性および生存度によって示した。形質導入されていない対照および抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞を、（図５Ａ）ＰＥコンジュゲート抗ｍｙｃ抗体による染色によるＣＡＲ−Ｔ細胞の安定性、ならびに（図５Ｂ）前方散乱光（ＦＳＣ）および側方散乱光（ＳＳＣ）を用いて生存細胞をゲーティングすることによるＴ細胞の生存度について、形質導入後１５日目に、フローサイトメトリーによって分析した。１５日間の培養後に、形質導入されたＴ細胞中のＣＡＲ陽性細胞のパーセンテージは、形質導入後４日目の７４％（図５Ａ）から１５日目の６５％まで、わずかに低下したに過ぎず、生存度は、対照Ｔ細胞に匹敵した（８５％対９１％）。類似の結果が、他のドナーから得られた。
【０２２４】
抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、サイトカイン産生についてＣＤ３８発現腫瘍細胞によって活性化され得るかどうかを試験するために、形質導入されていない対照Ｔ細胞および抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞を、対照ＣＤ３８陰性Ｋ５６２細胞（対照Ｔ）またはＣＤ３８発現ＲＰＭＩ  ８２２６腫瘍細胞（ＣＡＲ−Ｔ）と共に、２４時間インキュベートした。それらの標的化されたＣＤ３８陽性ＭＭ腫瘍細胞ＲＭＰＩ８６２２との結合の際に、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、大量のサイトカインＩＦＮγおよびＩＬ２を産生したが、ＣＤ３８陰性対照腫瘍細胞Ｋ５６２とではそれは起きなかった。これは、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、標的化された腫瘍細胞結合の際に特異的に活性化され得ることを示している（図６）。形質導入されていない対照Ｔ細胞および抗ＣＤ３８  ＣＡＲ  Ａ２形質導入されたＴ細胞を、対照ＣＤ３８陰性Ｋ５６２細胞（対照Ｔ）またはＣＤ３８発現ＲＰＭＩ  ８２２６腫瘍細胞（ＣＡＲ−Ｔ）と共に、２４時間インキュベートした。上清を収集し、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮγおよびＩＬ２産生についてアッセイした。
【０２２５】
ＣＡＲ−Ｔ細胞についての重要な機能的基準は、標的抗原発現腫瘍細胞を特異的に死滅させるその能力である。抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞のＣＤ３８特異的細胞傷害性を確認するために、細胞傷害性アッセイを実施した。形質導入されていない対照およびＣＡＲ形質導入されたＴ細胞（Ｅ）を、ＣＤ３８陰性Ｋ５６２またはＣＤ３８発現ＲＰＭＩ８２２６腫瘍細胞（Ｔ）と共に２時間インキュベートした。ＣＤ３８陰性Ｋ５６２腫瘍細胞に対しては、形質導入されていない対照Ｔおよび形質導入されたＣＡＲ−Ｔ細胞の両方の細胞傷害性が存在しなかった（図７、左）。対照的に、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、細胞用量依存的に、ＣＤ３８発現ＲＰＭＩ８２２６  ＭＭ腫瘍細胞を効果的に溶解させたが、形質導入されていない対照Ｔ細胞はそのような溶解を生じさせなかった（図７右）。これらの結果は、抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞の細胞溶解活性が、高度に強力であり、ＣＤ３８発現ＭＭ腫瘍細胞に対して特異的であったことを確認する。図７は、形質導入されていない対照および抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞（Ｅ）を、蛍光増強リガンド標識ＣＤ３８陰性Ｋ５６２腫瘍細胞またはＣＤ３８発現ＲＰＭＩ８２２６腫瘍細胞（Ｔ）と共に、示された比で２時間インキュベートし、ＤＥＬＦＩＡ細胞傷害性アッセイによって処理および分析したことを示す。これらのデータは、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞のＣＤ３８特異的細胞傷害性を示す。
【０２２６】
図８は、異種移植片動物モデルにおいて評価した抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞の殺腫瘍活性を示す。免疫低下状態のＮＳＧマウスに、１×１０７のＬｕｃ−ＧＦＰ標識ＣＤ３８発現ＲＰＭＩ８２２６  ＭＭ腫瘍細胞を静脈内接種した。３週間後、ＩＶＩＳ測定可能な全身腫瘍が、全ての接種したマウスにおいて形成した。マウスを、異なる用量の抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞で静脈内処置し、未処置マウスは、対照として機能した。腫瘍負荷を、生物発光イメージング（ＩＶＩＳ）によって毎週評価した。結論として、これらのデータは、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＭＨＣ非拘束様式でＣＤ３８高発現細胞を認識できる抗体型の特異性を示し、Ｔ細胞活性化、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの標的細胞溶解およびｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＭ腫瘍の根絶を生じることを実証している。このｉｎ  ｖｉｖｏ研究は、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞によるＣＤ３８発現ＭＭ腫瘍の用量依存的根絶を確認した。この研究の目的は、ＣＤ３８高発現ＭＭの養子免疫療法のための、異なる用量でのＣＤ３８特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞を開発することである。ＣＤ３８が上方調節されたＭＭ患者における用量依存的抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞の潜在的な治療適用を模倣する、異種移植片動物モデルにおける抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞の殺腫瘍活性を試験した。抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、確立された全身異種移植片ヒトＲＰＭＩ８２２６  ＭＭ腫瘍を有する免疫不全ＮＳＧマウスに、異なる用量で静脈内投与した。図８は、この実験の結果を示す。ＣＡＲ−Ｔ細胞処置の１週間後、全ての確立されたＲＰＭＩ８２２６  ＭＭ腫瘍が、１×１０７のＣＡＲ−Ｔ細胞で処置したマウスから根絶され、１０匹全てのマウスが、１２週間（現在）で腫瘍を含まなくなった。１×１０６のＣＡＲ−Ｔ細胞では、平均腫瘍負荷は、ＣＡＲ−Ｔ細胞処置後の１週間に８５％低減し（社内データ）；２週間後、腫瘍負荷の９４％が低減された。しかし、腫瘍は、徐々に成長して３週目には開始時に戻り、これは、不完全な処置からの腫瘍再発を示す。対照的に、ＲＰＭＩ８２２６  ＭＭ腫瘍は、未処置マウスおよび１×１０５のＣＡＲ−Ｔ細胞で処置したマウスの全てにおいて次第に成長し、全てのマウスが、８１±２．７日で、腫瘍によって死亡した。これらの結果は、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＣＤ３８上方調節を有するＭＭ腫瘍をｉｎ  ｖｉｖｏで効果的に根絶できることを実証している。
【０２２７】
結論として、上述の結果は、抗ＣＤ３８  Ａ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＭＨＣ非拘束様式でＣＤ３８高発現細胞を認識できる抗体型の特異性を示し、Ｔ細胞活性化、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの標的細胞溶解およびｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＭ腫瘍の根絶を生じることを実証している。
【０２２８】
ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞の可能な同胞殺し活性を調査するために、２つのアッセイを実施した。第１のアッセイでは、ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞上のＣＤ３８発現をモニタリングした。ＣＤ３８発現レベルに従って、Ｋ５６２およびＲＰＭＩ８２２６を、それぞれＣＤ３８陰性対照および高発現対照として使用することによって、活性化されたＴ細胞を、３つの集団に分けることができた：ＣＤ３８陰性集団、ＣＤ３８低発現集団およびＣＤ３８高発現集団。ドナーのうち１つでは、Ｔ細胞集団は、対照の形質導入されていないＴ細胞では、それぞれ１２％、７７％および１１％であり、ＣＡＲ−Ｔ細胞では、それぞれ１７％、８２％および１％であった（図４）。類似の結果が、他のドナーから得られた。ＣＡＲ−Ｔ細胞からのＣＤ３８高発現集団の消失は、同胞殺し活性を表し、ＣＡＲ−Ｔ細胞におけるＣＤ３８陰性集団および低発現集団の保持は、ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞がＣＤ３８高発現細胞を選択的に溶解させることを意味する。
【０２２９】
第２のアッセイでは、長期細胞培養におけるＣＡＲ−Ｔ細胞の安定性および生存度をモニタリングした（図５ＡおよびＢ）。１５日間の培養後に、形質導入されたＴ細胞中のＣＡＲ陽性細胞のパーセンテージは、形質導入後４日目の７４％から１５日目の６５％まで、わずかに低下したに過ぎず、生存度は、対照細胞と匹敵した（８５％対９１％）。類似の結果が、他のドナーから得られた。これらの結果は、ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、限定的な同胞殺し活性を示し、長期細胞培養後に比較的安定なままで生存し続けることをさらに確認する。
【０２３０】
ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞の第２の独自の特性は、ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＣＤ３８高発現細胞を選択的に溶解させ、ＣＤ３８低発現細胞をインタクトなままにすることである。この特徴により、ＣＡＲ−Ｔ細胞が、限定的な同胞殺し活性を伴って、培養物中で良好に生存し、ＣＡＲ−Ｔ細胞に関連する、腫瘍を標的にするが腫瘍以外も標的にするために生ずる副作用が限定的であるという臨床的利点を提供することが可能になるが、それは、ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＣＤ３８高発現ＭＭ細胞を選択的に死滅させるが、ＣＤ３８低発現正常細胞は死滅させないからである。
【０２３１】
マウス抗ＣＤ３８  ｍＡｂであるＴＨＢ−７に基づく抗ＣＤ３８  ＣＡＲの生成（Ｍｉｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３２（７）：  ７３７−７４３，  ２００９；Ｍｉｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｈａｅｍａｔｏｌ．  １５１（１）：  ３７−４６，  ２０１０；およびＢｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．  ２（６）：  ｅ７５，  ２０１２）は、抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞がそれ自体で生存できないことを示した。これは、抗ＣＤ３８  ＣＡＲと、活性化されたＴ細胞表面上で発現される固有のＣＤ３８との会合によって引き起こされる高い同胞殺し活性に恐らくは起因する。Ｄｒｅｎｔらは、ＣＤ３８陰性抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞のみが培養物中で生存した、ヒト抗ＣＤ３８抗体に基づく抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ研究を報告した（Ｄｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  １０１（５）：  ６１６−６２５，  ２０１６）。しかし、現在の上記データは、開示されるＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞（Ａ２抗体およびＤ８抗体に基づく）が、ごく一部のＣＤ３８高発現Ｔ細胞のみを溶解させ、ＣＤ３８低または陰性のいずれかであった大部分のＴ細胞をインタクトなままにして、非常に限定的な同胞殺し活性を生じること、および形質導入されたＴ細胞の生存度が長期細胞培養において高いままであったことを示した。理論によって束縛されないが、この優先傾向は、使用したヒト抗体Ａ２の比較的低い親和性に起因し得る。理論によって束縛されないが、低親和性のヒト抗ＣＤ３８抗体は、ＣＡＲ−Ｔ細胞が、効率的でロバストな標的細胞溶解活性をｉｎ  ｖｉｔｒｏで示すために、およびＣＤ３８高発現ＭＭ腫瘍をｉｎ  ｖｉｖｏで根絶するために、有効である。ＭＭにおいて試験した、ＣＤ３８陰性であり、腫瘍成長を一時的にのみ抑制した他の抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞（上記Ｄｒｅｎｔら）とは異なり、上述のＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、動物モデルにおいて、再発なしにＣＤ３８発現腫瘍細胞を根絶した。上述のＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、低ＣＤ３８発現細胞と高ＣＤ３８発現細胞との間を識別する能力、すなわち、ＣＤ３８低発現正常細胞ではなくＣＤ３８高発現腫瘍細胞を選択的に死滅させる能力は、重要な臨床的利点を提供する。
【実施例】
【０２３２】
以下の実施例は、例示を意味し、本開示の実施形態をさらに理解するために使用され得、本教示の範囲を限定すると決して解釈すべきではない。
（実施例１）
細胞系、抗体およびＣＤ３８−Ｆｃ融合タンパク質
【０２３３】
比較的高いレベルでＣＤ３８を発現する（Ｇｅｎｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ  ２８（３）：  ３０７−３１３  ２００４）ヒト形質細胞腫／多発性骨髄腫細胞系ＲＰＭＩ８２２６（Ｄａｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４６：５１２５−５１３０）、およびＣＤ３８陰性であるヒト慢性骨髄性白血病細胞系Ｋ５６２（Ｇｒｅｇｏｒｉｎｉ，  Ｔｏｍａｓｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ３０（９）：７２７−７３２）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）から購入した。ルシフェラーゼおよび緑色蛍光タンパク質融合タンパク質（Ｌｕｃ−ＧＦＰ）を発現するＲＰＭＩ８２２６細胞は、本発明者らが作製したＬｕｃ−ＧＦＰ発現レトロウイルスベクターを用いたレトロウイルス媒介性形質導入によって作製した。全ての細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地中で成長させた。
【０２３４】
Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ）コンジュゲートマウス抗ｍｙｃタグモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）から購入した。ＦＩＴＣコンジュゲートヤギ抗Ｍｙｃタグポリクローナル抗体は、Ａｂｃａｍ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）から購入した。マウス抗ヒトＣＤ３８  ｍＡｂは、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から購入した。ＰＥコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体は、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）から購入した。ＡＰＣコンジュゲートマウス抗ヒトＣＤ３は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から購入した。
【０２３５】
アミノ酸１９〜２３８のヒトＣＤ３８細胞外ドメインおよびＮ末端のヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域からなるＣＤ３８−Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃｒｅａｔｉｖｅ  ＢｉｏＭａｒｔ（Ｓｈｉｒｌｅｙ、ＮＹ）から購入した。
（実施例２）
ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲによるＴ細胞のレトロウイルス媒介性形質導入
【０２３６】
ＣＡＲによるＴ細胞のレトロウイルス媒介性形質導入を、Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４  Ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ６１：１２−２５；およびＭａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ７４（３）：２８６−２９６，  ２０１４（その開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように実施した。簡潔に述べると、レトロウイルスベクターＤＮＡを、ＦｕＧｅｎｅ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用してＰｈｏｅｎｉｘ  Ｅｃｏｔｒｏｐｉｃ  ２９３細胞中にトランスフェクトし、一過的ウイルス上清を使用して、ＰＧ１３パッケージング細胞を形質導入した。ＰＧ１３細胞由来のウイルス上清を使用して、ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲの安定な発現のために、活性化されたＴ細胞を形質導入した。５×１０６の活性化されたヒトＴ細胞を、１０μｇ／ｍｌのｒｅｔｒｏｎｅｃｔｉｎ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）で事前コーティングした６ウェルプレート中で、３ｍｌのウイルス上清で形質導入し、１０００ｇ、３２℃で１時間遠心分離した。形質導入手順を、必要に応じて反復した。活性化されたヒトＴ細胞を、５％のＦＢＳを補充したＡＩＭ−Ｖ成長培地（ＧＩＢＣＯ−Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）中１００ｎｇ／ｍｌのマウス抗ヒトＣＤ３抗体ＯＫＴ３（Ｏｒｔｈ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｒａｒｔｉａｎ、ＮＪ）および３００〜１０００Ｕ／ｍｌのＩＬ２で、正常な健康ドナー末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を２日間活性化することによって、調製した。形質導入後、形質導入されたＴ細胞を、５％のＦＢＳおよび３００〜１０００Ｕ／ｍｌのＩＬ２を補充したＡＩＭ−Ｖ成長培地中で拡大増殖させた。
（実施例３）
ウエスタンブロット
【０２３７】
形質導入されていないＴ細胞およびＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞の膜画分を、Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｅｘｔｒａｃｔキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を使用して抽出した。試料を、１０％の２−メルカプトエタノール（β−ＭＥ）あり（還元条件）またはなし（非還元条件）で、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）試料緩衝液中で変性させ、４〜１２％のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動ゲル上で分離させ、その後、二フッ化ポリビニリデン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ  Ｄｅｎｅ  ｄｉｆｌｕｏｒｉｄｅ）（ＰＶＤＦ）メンブレン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）上に電気泳動転写した。メンブレンを、トリス緩衝食塩水（２０ｍＭ  トリス／５００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．５）中５％の脱脂粉乳で、１〜２時間ブロッキングした。メンブレンを、ＴＢＳＴ（０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するトリス緩衝食塩水）で洗浄し、次いで、１：１０００に希釈した抗ＣＤ３ζ抗体（ＢＤ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）と共に１時間インキュベートし、その後、１：５０００に希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）と共に１時間インキュベートし、全てＴＢＳＴ中５％の脱脂粉乳中で行った。メンブレンを、ＥＣＬ化学発光基質（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を用いて発色させ、化学発光シグナルを、ＣｈｅｍｉＤｏｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）によって検出した（図２）。
（実施例４）
フローサイトメトリー分析
【０２３８】
細胞表面上のＣＤ３８の発現を検出するために、フローサイトメトリーアッセイを実施した。細胞を、５０μｌの結合緩衝液（１０％のウマ血清を含有するＲＰＭＩ  １６４０）中のマウス抗ヒトＣＤ３８  ｍＡｂと共に、混合しながら３０分間インキュベートした。次いで、細胞を、ＰＢＳで洗浄し、ＡＰＣコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ抗体と共に、同じ条件下でインキュベートした。ＰＢＳによる洗浄後に、試料を、Ａｔｔｕｎｅ  ＮｘＴ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）で分析した。形質導入されたＴ細胞上のＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲを検出するために、細胞を、ＰＥコンジュゲートマウス抗ｍｙｃタグｍＡｂで３０分間染色し、フローサイトメーターによって分析した。ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗原結合活性の分析のために、１×１０６の形質導入されていない対照Ｔ細胞または形質導入されたＣＡＲ−Ｔ細胞を、ＣＤ３８−Ｆｃ融合タンパク質と共にインキュベートし、その後、ＰＥコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体およびＦＩＴＣコンジュゲートヤギ抗ｍｙｃ抗体で染色し、試料を、フローサイトメーターで分析した。
（実施例５）
Ｔ細胞活性化アッセイ
【０２３９】
形質導入されていない対照Ｔ細胞およびＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞を、マイクロタイタープレート中でＫ５６２またはＲＰＭＩ８２２６腫瘍細胞で刺激した。サイトカイン産生アッセイのために、１×１０５個細胞／ウェルの形質導入されていない対照Ｔ細胞またはＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞を、成長培地中で、１×１０５個細胞／ウェルのＫ５６２またはＲＰＭＩ８２２６と混合した。２４時間培養した後、培養上清を収集し、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）製のＥＬＩＳＡアッセイキットを用いて、ＩＬ２およびＩＦＮγについて測定した。ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗原特異的クローン性拡大増殖アッセイのために、Ｋ５６２およびＲＰＭＩ８２２６腫瘍細胞を、５０ｕＭのマイトマイシンＣ（ＭＭＣ、Ｒ＆Ｄ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）で３７℃、１．５時間最初に処理して、細胞を増殖停止させ、次いで、２．５×１０５個細胞／ウェルで４８ウェルプレート中に播種した。１×１０６個細胞／ウェルの形質導入されたＣＡＲ−Ｔ細胞を、腫瘍細胞に添加し、３００Ｕ／ｍｌのＩＬ２と共に３７℃で７日間共培養した。細胞を収集し、ＡＰＣコンジュゲート抗ＣＤ３抗体およびＦＩＴＣコンジュゲート抗ｍｙｃ抗体で染色し、抗原特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞クローン性拡大増殖について、フローサイトメーターによって分析した。全ての実験を三連で実施した。
（実施例６）
Ｔ細胞の細胞傷害性アッセイ
【０２４０】
ＣＡＲ２−抗ＣＤ３８  ＣＡＲ−Ｔ細胞の細胞傷害性を、ＤＥＬＦＩＡ細胞傷害性アッセイ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）によって測定した。Ｋ５６２およびＲＭＰＩ８６２２腫瘍細胞に、蛍光増強リガンドを、３７℃で２５分間、最初にロードした。次いで、２．５×１０３個細胞／ウェルのＫ５６２または５×１０３個細胞／ウェルのＲＰＭＩ８２２６腫瘍細胞を、異なるエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で、形質導入されていない対照または形質導入されたＴ細胞と混合し、２時間インキュベートした。２０μｌ／ウェルの上清を収集し、蛍光キレートを形成するためにユーロピウム溶液を添加することによって、放出されたリガンドについて分析した。時間分解蛍光（ＴＲＦ）を、ＴＲＦが可能なプレートリーダーＣｙｔａｔｉｏｎ  ５（ＢｉｏＴｅｋ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）で測定した。細胞傷害性を、以下の式を使用することによって計算した：％特異的溶解＝（実験的−自発的）／（最大−自発的）×１００。
（実施例７）
ＮＳＧマウスにおけるＭＭ異種移植片の処置
【０２４１】
全ての動物実験を、実験動物の管理および使用のためのガイドラインに従って実施した。Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から購入した８週齢の雌性ＮＳＧ免疫不全マウスに、尾静脈を介して、１×１０７のＬｕｃ−ＧＦＰ標識したＲＰＭＩ８２２６細胞を静脈内（ｉ．ｖ．）接種した。腫瘍負荷を、ＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を使用する生物発光イメージングによって毎週測定した。２３日目にＩＶＩＳ測定可能な全身腫瘍が形成した後に、マウスに、１×１０７の形質導入されていない対照Ｔ細胞または形質導入されたＣＡＲ−Ｔ細胞をｉ．ｖ．注射した。１μｇのヒトＩＬ１５を、Ｔ細胞注射の前日から連続する５日間にわたって腹腔内注射を介して毎日投与して、Ｔ細胞生着を増強した。腫瘍負荷を毎週測定した。末梢血試料を、Ｔ細胞注射の後、３時間目、１日目、２日目、次いで毎週、尾静脈出血によって採取し、群毎に一緒にプールした。Ｔ細胞の生着および拡大増殖を、ＡＰＣコンジュゲートマウス抗ヒトＣＤ３抗体およびＰＥコンジュゲートマウス抗ｍｙｃ抗体を用いたフローサイトメトリーアッセイによって測定した。ヒトサイトカインＩＦＮγ、ＩＬ２およびＴＮＦαの血中レベルを、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ａｓｓａｙｓ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）を使用することによって測定した。動物を、疾患進行および明白な毒性の徴候、例えば、＞１５％の体重減少、脱毛（ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｆｕｒ）および瀕死によって証明される、ＧＶＨＤについてモニタリングした。生存研究のエンドポイントは、マウスが１５％よりも多くの体重を失った日、または瀕死になった日であった。
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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