(57)【要約】  本発明は、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を用いる癌の処置方法を提供し、ここで、該抗体は、約８０％未満の受容体占拠率、例えば約２０％から約８０％の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量および／または頻度で投与される。また、そのようなアゴニスト抗体のヒト用量を決定する方法、および例えばヒト患者において有効な抗体レベルを維持するためにアゴニスト抗体の受容体占拠率をモニタリングする方法も提供する。
2021501801.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む癌の処置法であって、該アゴニスト抗体が、約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される、処置方法。
【請求項２】
免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を対象に投与することを含む癌を有する該対象の腫瘍における制御性Ｔ細胞の数を減少または枯渇させる方法であって、該アゴニスト抗体が、約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される、方法。
【請求項３】
免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を対象に投与することを含む癌を有する該対象においてＴ細胞におけるＩＬ−２および／またはＩＦＮ−γ産生を増加させる方法であって、該アゴニスト抗体が、約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される、方法。
【請求項４】
免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を対象に投与することを含む癌を有する該対象において免疫応答を刺激する方法であって、該アゴニスト抗体が、約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される、方法。
【請求項５】
免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を対象に投与することを含む癌を有する該対象において腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、該アゴニスト抗体が、約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される、方法。
【請求項６】
アゴニスト抗体が、約２０％〜約８０％の範囲の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
アゴニスト抗体が、約２０％〜約７０％の範囲の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量で投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
アゴニスト抗体が、約２０％〜約６０％の範囲の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量で投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
アゴニスト抗体が、約２０％〜約５０％の範囲の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量で投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
アゴニスト抗体が、約２０％〜約４０％の範囲の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量で投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
受容体占拠率および／または受容体占拠率の範囲が、アゴニスト抗体を用いる処置レジメンのサイクル１後の１日目に測定される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
免疫刺激受容体が、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ１６０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７およびＮＫｐ８０からなる群より選択される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
免疫刺激受容体が共刺激受容体である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
共刺激受容体が、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
アゴニスト抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらの変異体からなる群より選択される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
アゴニスト抗体がＩｇＧ１抗体である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
アゴニスト抗体が、活性化ＦｃγＲに対する増強された結合を有するＦｃを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
アゴニスト抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
アゴニスト抗体が二重特異性抗体である、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
癌が、膀胱癌、乳癌、子宮／子宮頚癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、食道癌、消化器腫瘍、膵臓癌、結腸直腸癌、直腸癌、腎癌、頭頚部癌、肺癌、胃癌、生殖細胞癌、骨腫瘍、肝臓癌、甲状腺癌、皮膚癌、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫、非小細胞肺癌およびウイルス関連の癌からなる群より選択される、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
癌が、転移性癌、難治性癌または再発性癌である、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
１以上のさらなる療法剤を投与することをさらに含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
１以上のさらなる療法剤が、抗体または小分子を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
１以上のさらなる療法剤が、抗ＰＤ１抗体、ＬＡＧ−３抗体、ＣＴＬＡ−４抗体、ＰＤ−Ｌ１抗体または抗ＴＧＦβ抗体を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
アゴニスト抗体が、１以上のさらなる療法剤の投与前に投与される、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
アゴニスト抗体が、１以上のさらなる療法剤の投与後に投与される、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
アゴニスト抗体が、１以上のさらなる療法剤と同時に投与される、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
アゴニスト抗体が医薬組成物として製剤される、請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
癌を有する対象の処置のための免疫刺激受容体に特異的に結合する治療用アゴニスト抗体の抗体投与の有効用量またはスケジュールを選択する方法であって、
（ａ）該アゴニスト抗体を動物モデルに投与し；
（ｂ）該動物モデルからサンプルを得て；
（ｃ）サンプル中のアゴニスト抗体の受容体占拠率または受容体占拠率の範囲を決定し；
（ｄ）工程（ｃ）で得られた受容体占拠率または受容体占拠率の範囲を用いて、対象における期待される受容体占拠率または受容体占拠率の範囲を予測または推定し；そして、
（ｅ）工程（ｄ）で得られた期待される受容体占拠率に基づいて、対象において約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な該アゴニスト抗体の抗体投与の用量またはスケジュールを選択すること
を含む、方法。
【請求項３０】
約２０％〜約８０％の範囲の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分なアゴニスト抗体の量が選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
約２０％〜約７０％の範囲の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分なアゴニスト抗体の量が選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
約２０％〜約６０％の範囲の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分なアゴニスト抗体の量が選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
約２０％〜約５０％の範囲の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分なアゴニスト抗体の量が選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
約２０％〜約４０％の範囲の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分なアゴニスト抗体の量が選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３５】
免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体または該抗体を含む医薬組成物の有効量を投与することを含む、対象における癌の処置方法であって、該アゴニスト抗体の投与すべき量が請求項２９から３４のいずれか一項に記載の方法により選択されている、方法。
【請求項３６】
癌の処置を受けている対象において免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体のレベルをモニタリングする方法であって、
（ａ）対象からサンプルを得て；
（ｂ）サンプル中のアゴニスト抗体の受容体占拠率を決定し；
（ｃ）受容体占拠率が約８０％より大きい場合、対象に投与されるアゴニスト抗体の量または頻度を減少させるか、または受容体占拠率が約２０％未満である場合、該アゴニスト抗体の量または頻度を増加させ；
（ｄ）要すれば、約２０％〜約８０％の受容体占拠率が達成および／または維持されるまで工程（ａ）−（ｃ）を繰り返すこと
を含む、方法。
【請求項３７】
工程（ｃ）において、受容体占拠率が約７０％よりも大きい場合、アゴニスト抗体の量または頻度を減らす、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
工程（ｃ）において、受容体占拠率が約６０％よりも大きい場合、アゴニスト抗体の量または頻度を減らす、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
工程（ｃ）において、受容体占拠率が約５０％よりも大きい場合、アゴニスト抗体の量または頻度を減らす、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
工程（ｃ）において、受容体占拠率が約４０％よりも大きい場合、アゴニスト抗体の量または頻度を減らす、請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
工程（ｃ）において、受容体占拠率が約３０％よりも大きい場合、アゴニスト抗体の量または頻度を減らす、請求項３６に記載の方法。
【請求項４２】
工程（ｃ）において、受容体占拠率が約４０％未満である場合、アゴニスト抗体の量または頻度を増やす、請求項３６に記載の方法。
【請求項４３】
工程（ｃ）において、受容体占拠率が約５０％未満である場合、アゴニスト抗体の量または頻度を増やす、請求項３６に記載の方法。
【請求項４４】
工程（ｃ）において、受容体占拠率が約６０％未満である場合、アゴニスト抗体の量または頻度を増やす、請求項３６に記載の方法。
【請求項４５】
工程（ｄ）において、約２０％〜約７０％の受容体占拠率が達成および／または維持されるまで、アゴニスト抗体の量または頻度を調整する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４６】
工程（ｄ）において、約２０％〜約６０％の受容体占拠率が達成および／または維持されるまで、アゴニスト抗体の量または頻度を調整する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４７】
工程（ｄ）において、約２０％〜約５０％の受容体占拠率が達成および／または維持されるまで、アゴニスト抗体の量または頻度を調整する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４８】
工程（ｄ）において、約２０％〜約４０％の受容体占拠率が達成および／または維持されるまで、アゴニスト抗体の量または頻度を調整する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４９】
免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体およびさらなる療法剤を、それを必要とする対象に投与することを含む癌を処置する方法であって、該さらなる療法剤が一定の頻度で投与され、かつ該アゴニスト抗体が、約８０％未満の受容体占拠率が達成および／または維持されるのに十分な量および頻度で投与される、方法。
【請求項５０】
アゴニスト抗体の量および頻度が、請求項２９に記載の方法を用いて決定される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
免疫刺激受容体が共刺激受容体である、請求項２９から５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
共刺激受容体が、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
対象において可溶性ＯＸ４０のレベルを測定することを含む、免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体を投与された該対象における癌の処置の有効性を判定する方法。
【請求項５４】
可溶性ＯＸ４０のレベルが、総可溶性ＯＸ４０バイオマーカーアッセイにより、例えばメソスケールディスカバリー・プラットフォーム上で測定される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
対象における癌の処置方法であって、該対象に、以下：
（ａ）配列番号１１に記載の配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインならびに配列番号１２に記載の配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む抗ＯＸ４０抗体、および
（ｂ）配列番号１８に記載の配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインならびに配列番号１９に記載の配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む抗ＰＤ−１抗体、
のそれぞれの有効量を投与することを含み、ここで、該方法は、少なくとも１回の投与サイクルを含み、該サイクルは１２週間の期間であり、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、１用量の抗ＯＸ４０抗体が２０、４０または８０ｍｇ用量で投与され、３用量の抗ＰＤ−１抗体が４８０ｍｇ用量で投与される、方法。
【請求項５６】
抗ＯＸ４０抗体および抗ＰＤ−１抗体が、以下の用量で投与される、請求項５５に記載の方法：
（ａ）２０ｍｇの抗ＯＸ４０抗体および４８０ｍｇの抗ＰＤ−１抗体；
（ｂ）４０ｍｇの抗ＯＸ４０抗体および４８０ｍｇの抗ＰＤ−１抗体；または
（ｃ）８０ｍｇの抗ＯＸ４０抗体および４８０ｍｇの抗ＰＤ−１抗体。
【請求項５７】
抗ＰＤ−１抗体および抗ＯＸ４０抗体が、静脈内投与用に製剤される、請求項５５または５６に記載の方法。
【請求項５８】
抗ＰＤ−１抗体および抗ＯＸ４０抗体が、共に製剤される、請求項５５から５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
抗ＰＤ−１抗体および抗ＯＸ４０抗体が、別個に製剤される、請求項５５から５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
抗ＯＸ４０抗体が、抗ＰＤ−１抗体の投与前に投与される、請求項５５から５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
抗ＯＸ４０抗体が、抗ＰＤ−１抗体の投与前の約３０分以内に投与される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
抗ＯＸ４０抗体が、抗ＰＤ−１抗体の投与後に投与される、請求項５５から５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
抗ＯＸ４０抗体が、抗ＰＤ−１抗体と同時に投与される、請求項５５から５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
処置が９サイクルまでからなる、請求項５５から６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
抗ＯＸ４０抗体が、各サイクルの１日目に投与される、請求項５５から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
抗ＰＤ−１抗体が、各サイクルの１日目、２９日目および５７日目に投与される、請求項５５から６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
処置が、腫瘍サイズの減少、経時的な転移病変数の減少、完全な応答、部分的な応答および疾患の安定から選択される少なくとも１つの治療効果をもたらす、請求項５５から６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
癌が、膀胱癌、子宮頚癌、腎細胞癌、精巣癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頚部癌および卵巣癌から選択される、請求項５５から６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
癌が膀胱癌である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
抗ＯＸ４０抗体が、
（ａ）配列番号５に記載の配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６に記載の配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７に記載の配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号８に記載の配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号９に記載の配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１０に記載の配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項５５から６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
抗ＯＸ４０抗体が、それぞれ配列番号１１および１２に記載の配列を含む重鎖および軽鎖可変領域を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
抗ＯＸ４０抗体が、それぞれ配列番号１３および１４に記載の配列を含む重鎖および軽鎖を含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
抗ＰＤ−１抗体が、
（ａ）配列番号２０に記載の配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２１に記載の配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号２２に記載の配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２３に記載の配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２４に記載の配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号２５に記載の配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項５５から７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
抗ＰＤ−１抗体が、それぞれ配列番号１８および１９に記載の配列を含む重鎖および軽鎖可変領域を含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
抗ＰＤ−１抗体が、それぞれ配列番号１６および１７に記載の配列を含む重鎖および軽鎖を含む、請求項７４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
このＰＣＴ出願は、２０１７年１１月１日出願の米国仮特許出願第６２／５８０，３４６号；２０１７年１１月３日出願の同第６２／５８１，４４１号；２０１７年１１月６日出願の同第６２／５８１，９０５号；２０１７年１１月９日出願の同第６２／５８３，８０８号；２０１８年２月８日出願の同第６２／６８２，２０７号；および、２０１８年４月１３日出願の同第６２／６５７，６１６号に基づく優先権の利益を主張し、各々それらの内容全体を引用により本明細書中に包含させる。
【０００２】
電子的に提出された配列表への参照
本願出願と共にＡＳＣＩＩ形式のテキストファイル（名称：3338.115PC06_ST25.txt；サイズ： ３０，５８９バイト；および、データ作成日：２０１８年１０月３０日）で電子的に提出された配列表の内容は、その内容全体を引用により本明細書中に包含させる。
【背景技術】
【０００３】
背景
多くの免疫抑制受容体が癌治療において成功裏に標的にされてきたが、制御性Ｔ細胞、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）および抗原提示細胞などの免疫細胞で発現される刺激受容体と抑制受容体との間の複雑な相互作用により、特定の免疫受容体を標的とする抗体が有効かどうかの予測は困難である。免疫抑制受容体を標的とするアンタゴニスト抗体（例えば、ニボルマブ、イピリムマブ）の最近の成功に比べて、例えば、有効性がないおよび／または毒性等の理由で、臨床治験で成功している免疫刺激受容体を標的とするアゴニスト抗体はほとんどない。これらの抗体は、潜在的な可能性を示し、有効性の欠如／毒性の根本的な理由に対処でき、その使用を最適化できれば、腫瘍徴候の処置に利用できる治療剤を大幅に増やせる可能性がある。例えば、Ｔ細胞応答などの免疫応答を増強することにより、癌などの疾患を処置するための改善された戦略の継続的な必要性を考えると、免疫刺激受容体を活性化する方法を最適化することは治療的に有益であり得る。
【発明の概要】
【０００４】
概要
一面において、本発明は、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、癌を処置する方法を提供し、ここで、該抗体は約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。
【０００５】
別の面では、本発明は、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を対象に投与することを含む、癌を有する対象の腫瘍における制御性Ｔ細胞の数を減少または枯渇させる方法を提供し、ここで、該抗体は約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な頻度で投与される。
【０００６】
別の面では、本発明は、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を対象に投与することを含む、癌を有する対象のＴ細胞におけるＩＬ−２および／またはＩＦＮ−γ産生を増加させる方法を提供し、ここで、該抗体は、約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。
【０００７】
別の面では、本発明は、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を対象に投与することを含む、癌を有する対象における免疫応答を刺激する方法を提供し、ここで、該抗体は、約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。
【０００８】
別の面では、本発明は、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を対象に投与することを含む、癌を有する対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法を提供し、ここで、該抗体は、約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。
【０００９】
別の面では、本発明は、癌を有する対象の治療のための免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体の抗体投与の有効用量またはスケジュールを選択する方法を提供し、該方法は、
（ａ）動物モデルに該アゴニスト抗体を投与すること；
（ｂ）該動物モデルからサンプルを得ること；
（ｃ)該サンプル中のアゴニスト抗体の受容体占拠率または受容体占拠率の範囲を決定すること;
（ｄ）工程（ｃ）で得られた受容体占拠率または受容体占拠率の範囲を用いて、対象における期待される受容体占拠率または受容体占拠率の範囲を予測し；そして、
（ｅ）工程（ｄ）で得られた期待される受容体占拠率に基づいて、対象において約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な該アゴニスト抗体の抗体投与の用量またはスケジュールを選択すること
を含む。
【００１０】
別の面において、本発明は、有効量の免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体または該抗体を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、対象における癌を処置する方法を提供し、ここで、投与のための抗体の有効量は、本明細書に記載の方法に従って選択されている。
【００１１】
別の面において、本発明は、癌の処置を受けている対象において、免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体のレベルをモニタリングする方法を提供し、該方法は、
（ａ）対象からサンプルを得て；
（ｂ）サンプル中のアゴニスト抗体の受容体占拠率を決定し；
（ｃ）受容体占拠率が約８０％（例えば、７０％、６０％、５０％）より大きい場合、対象に投与されるアゴニスト抗体の量または頻度を減少させるか、または受容体占拠率が約２０％（例えば、３０％、４０％、５０％または６０％）未満である場合、該抗体の量または頻度を増加させ；
（ｄ）要すれば、約２０％〜約８０％（例えば、約２０％〜約７０％、約２０％〜約６０％、約２０％〜約５０％、約２０％〜約４０％）の受容体占拠率が達成および／または維持されるまで工程（ａ）−（ｃ）を繰り返すこと
を含む。
【００１２】
別の面において、本発明は、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体およびさらなる療法剤を、それを必要とする対象に投与することを含む癌の処置方法を提供し、ここで、該さらなる療法剤は一定の頻度で投与され、アゴニスト抗体は約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な用量および頻度で投与される。
【００１３】
別の面において、本発明は、対象（例えば、対象からのサンプル）における可溶性ＯＸ４０のレベルを測定することを含む、免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体が投与された対象における癌の処置の有効性を判定する方法を提供する。
【００１４】
本明細書に記載の方法のいくつかの態様において、アゴニスト抗体は、約２０％〜約８０％、約２０％〜約７０％、約２０％〜約６０％、約２０％〜約５０％、約２０％〜約４０％の受容体占拠率の範囲を達成および／または維持するのに十分な用量または頻度で投与される。ある態様において、受容体占拠率および／または受容体占拠率の範囲は、処置レジメンのサイクル１後の１日目に測定される。
【００１５】
本明細書に記載の方法の特定の態様において、アゴニスト抗体は、共刺激（co-stimulatory）受容体等の免疫刺激受容体に結合する抗体である。ある態様において、抗体は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバー、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ１６０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７およびＮＫｐ８０に結合する。一態様において、アゴニスト抗体はＯＸ４０に結合する。
【００１６】
本明細書に記載の方法のいくつかの態様において、アゴニスト抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらの変異体からなる群より選択される。ある態様において、アゴニスト抗体は、活性化ＦｃγＲへの増強された結合を有するＦｃを含む。ある態様において、アゴニスト抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である。ある態様において、アゴニスト抗体は二重特異性抗体である。
【００１７】
本明細書に記載の方法のいくつかの態様において、処置される癌は、膀胱癌、乳癌、子宮／子宮頚癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、食道癌、消化器腫瘍、膵臓癌、結腸直腸癌、直腸癌、腎癌、頭頚部癌、肺癌、胃癌、生殖細胞癌、骨腫瘍、肝臓癌、甲状腺癌、皮膚癌、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫、非小細胞肺癌およびウイルス関連癌からなる群より選択される。ある態様において、癌は、転移性、難治性または再発性である。
【００１８】
本明細書に記載の方法のいくつかの態様において、１以上のさらなる療法剤（例えば、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＴＧＦβ抗体）がさらに対象（例えば、ヒト患者）に投与される。かかる１以上のさらなる療法剤は、アゴニスト抗体の投与前、投与後または同時に投与されてよい。
【００１９】
ある態様において、アゴニスト抗体および要すれば１以上のさらなる療法剤は、医薬組成物として製剤される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１Ａおよび１Ｂは、示された用量（ｍｇ／ｋｇ）のＩｇＧおよびリガンド遮断薬ＯＸ４０．２３（図１Ａ）およびリガンド非遮断薬ＯＸ４０．３（図１Ｂ）で処置されたＣＴ２６マウス腫瘍モデルの腫瘍増殖曲線である。
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、それぞれ示された用量（ｍｇ／ｋｇ）でのＯＸ４０．３処置マウスの腫瘍体積平均値および中央値を示す。図２Ｃおよび２Ｄは、それぞれ示された用量（ｍｇ／ｋｇ）でのＯＸ４０．２３処置マウスの腫瘍体積平均値および中央値を示す。
【図３】図３Ａは、ＯＸ４０．２３＋抗ＰＤ１抗体の組合せで処置されたＣＴ２６マウス腫瘍モデルの一連の腫瘍増殖曲線を示す。図３Ｂは、ＯＸ４０．２３抗体の種々の用量での併用処置の腫瘍増殖阻害パーセントを示すグラフである。
【図４】図４は、ＯＸ４０．３＋抗ＰＤ１抗体の組合せで処置されたＣＴ２６マウス腫瘍モデルの一連の腫瘍増殖曲線を示す。
【図５】図５は、抗ＰＤ−１抗体と同時にまたは逐次（遅延）に示された濃度で腫瘍移植後、５日目および１２日目にＯＸ４０．２３で処置されたＣＴ２６マウス腫瘍モデルの一連の腫瘍増殖曲線である。同時投与の場合、抗ＰＤ１抗体は、５日目、９日目および１３日目に投与された。遅延投与の場合、抗ＰＤ１抗体は、１０日目、１４日目および１８日目に投与された。
【図６】図６Ａは、単剤療法または抗ＰＤ１抗体との併用療法としてＯＸ４０．２３の投与スケジュールおよびサンプリングスケジュールの概略図である。図６Ｂは、血液および腫瘍サンプルにおいてＩｇＧ、ＰＤ１、ＯＸ４０．２３（０．３、３および１０ｍｇ／ｋｇ）ならびに抗ＰＤ１抗体＋ＯＸ４０．２３（０．０３、０．３、３および１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したマウスにおけるＯＸ４０受容体占拠率（ＲＯ）のグラフを示す。図６Ｃは、８日目および１３日目の腫瘍におけるＯＸ４０受容体の総レベルおよび占拠レベルのグラフを示す。図６Ｄは、ＯＸ４０ ＲＯの関数としての腫瘍増殖阻害パーセントを示すグラフである。
【図７】図７Ａは、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１６０ｍｇおよび３２０ｍｇでＯＸ４０．２１を投与されたヒト患者からの末梢ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＴｒｅｇ細胞における％ＯＸ４０ ＲＯを示す一連のグラフである。ＲＯは、２週間サイクルでＣ１Ｄ１、Ｃ１Ｄ８およびＣ２Ｄ１を測定した。ＣＤ４＋ Ｔｒｅｇで観察された末梢ＯＸ４０ ＲＯは、２０ｍｇで８０％であり、４０ｍｇ以上の用量で飽和した。図７Ｂは、２０ｍｇから３２０ｍｇの範囲のＯＸ４０．２１用量におけるニボルマブと組み合わせたＯＸ４０．２１の曝露を示すグラフである。
【図８】図８Ａは、観察されたＯＸ４０．２１濃度データを説明するための母集団ＰＫ（ＰＰＫ）モデルである。図８Ｂは、ＯＸ４０．２１で処置されたヒト患者からのＣ２Ｄ１におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の薬物濃度（Ｃｍｉｎ１：最初の投与後のトラフ濃度）と末梢血ＲＯとの関係を表す数学的ＰＫ−ＰＤモデルであり、ＲＯの中央値（線）および９５％信頼区間（影付き領域）を示す。
【図９】図９は、種々のＯＸ４０．２１用量および頻度でのＣＤ４＋ Ｔ細胞における予測された血中ＲＯを示す（中央値および９０％予測間隔）。
【図１０】図１０Ａおよび１０Ｂは、種々の投与レジメンについて予測されたヒト腫瘍ＲＯを示す。図１０Ａは、平均腫瘍浸透率および平均目標負荷率を提供する。図１０Ｂは、低い腫瘍浸透率および高い目標負荷率を提供する。
【００２１】
【図１１】図１１Ａは、ＯＸ４０の表面発現（ＯＸ４０．２１（全体））に対する異なる濃度のＯＸ４０．２１の受容体占拠率（ＯＸ４０．２１（結合））の効果を示すグラフである。図１１Ｂは、ＯＸ４０の総表面発現に対する％ＯＸ４０ ＲＯの影響をまとめたグラフである。
【図１２】図１２Ａおよび１２Ｂは、それぞれ示された濃度のアイソタイプおよびＯＸ４０．２１抗体での、様々な日（１日目、２日目、３日目および４日目）でのＯＸ４０表面発現のタイムコースを示すグラフである。
【図１３】図１３Ａおよび１３Ｂは、総表面ＯＸ４０発現に対するＯＸ４０．２１（図１３Ａ）またはＣＤ２８（図１３Ｂ）濃度の効果を示すグラフである。
【図１４】図１４は、ＩＦＮ−γレベルによって反映される、ＯＸ４０ ＲＯ（ｙ軸）およびＯＸ４０．２１濃度（ｘ軸）の関数としてのＴ細胞の活性化を示すグラフである。
【図１５】図１５Ａは、３［Ｈ］−チミジン取り込みにより反映される、ＯＸ４０ ＲＯ（ｙ軸）およびＯＸ４０．２１濃度（ｘ軸）の関数としてのＴ細胞の増殖を示すグラフである。図１５Ｂおよび１５Ｃは、それぞれ％ＯＸ４０ ＲＯの尺度として、ＣＤ２５＋ Ｔ細胞数および増殖性Ｔ細胞数を示すグラフである。
【図１６】図１６は、可溶性ＯＸ４０（ｓＯＸ４０）レベルを測定するためのＥＬＩＳＡの概略図である。
【図１７】図１７は、細胞が示される濃度のＯＸ４０．２１で処理されたとき、該細胞上の表面ＯＸ４０発現のレベルを示すグラフである。
【図１８】図１８は、細胞が示された濃度のＯＸ４０．２１で処理されたとき、可溶性ＯＸ４０のレベルを示すグラフである。
【図１９】図１９は、ヒト患者が、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１６０ｍｇおよび３２０ｍｇのＯＸ４０．２１投与と共に、ＯＸ４０．２１単剤療法またはＯＸ４０．２１＋ニボルマブ併用療法で処置されたとき、Ｃ１Ｄ１を超えるｓＯＸ４０の増加倍数(fold increase)を示す一連のグラフである。
【図２０】図２０Ａは、細胞をアイソタイプ抗体、ＯＸ４０．２１または抗ＣＤ２８抗体で処理したとき、１日目、２日目、３日目および４日目のｓＯＸ４０の総レベルを示すグラフである。図２０Ｂは、細胞をアイソタイプ抗体、ＯＸ４０．２１または抗ＣＤ２８抗体で処理したとき、１日目、２日目、３日目および４日目の結合ｓＯＸ４０のレベルを示すグラフである。
【図２１】図２１Ａは、細胞をＯＸ４０．２１および抗ＣＤ２８抗体で同時刺激したときのｓＯＸ４０レベルに対する相加効果を示すグラフである。図２１Ｂは、培養中、３日目にＯＸ４０．２１がＣＤ２８に添加された後の４日目のｓＯＸ４０レベルに対する効果を示すグラフである。
【図２２】図２２は、ＯＸ４０内在化アッセイを示す図である。
【図２３】図２３は、ＣＤ３／ＣＤ２８で活性化し、その後ＩｇＧ１、ＤＴ、ＯＸ４０．２１（リガンド遮断抗体）またはＯＸ４０．８（リガンド非遮断抗体）で処理したＴｒｅｇにおけるＯＸ４０の内在化を示すグラフである。
【図２４】図２４は、ＯＸ４０．２１のアゴニスト活性に対するＦｃγＲ介在性架橋の効果を示す一連のグラフである。
【図２５】図２５は、末梢薬力学マーカーの評価のために、単剤療法として、または抗ＰＤ−１抗体との組合せで、ＯＸ４０．２３でのＣＴ２６マウス腫瘍モデルの処置のための投薬スケジュールおよびサンプリングスケジュールを示す概略図である。
【００２２】
【図２６】図２６Ａは、ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞における、ＩＣＯＳ、Ｋｉ６７およびＣＤ４４のレベルに対するＯＸ４０．２３単剤療法または抗ＰＤ１抗体との併用療法の効果を示す一連のグラフである。ＯＸ４０単剤療法パネルでは、ｘ軸のラベルは、左から右に、ＩｇＧ、９０ｍｐｋ、３０ｍｐｋ、１０ｍｐｋ、３ｍｐｋ、１ｍｐｋ、０．３ｍｐｋ、０．１ｍｐｋおよび０．０３ｍｐｋである。ＯＸ４０／ＰＤ−１の併用パネルでは、ｘ軸ラベルは、左から右に、ＩｇＧ、ＰＤ１、ＰＤ１＋９０ｍｐｋ、ＰＤ１＋３０ｍｐｋ、ＰＤ１＋１０ｍｐｋ、ＰＤ１＋３ｍｐｋ、ＰＤ１＋１ｍｐｋ、ＰＤ１＋０．３ｍｐｋ、ＰＤ１＋０．１ｍｐｋ、ＰＤ１＋０．０３ｍｐｋおよびＰＤ１＋０．０１ｍｐｋである。図２６Ｂは、ＯＸ４０．２１（２０、４０、８０、１６０または３２０ｍｇ）＋ニボルマブの併用療法で処置されたヒト患者の腫瘍間質におけるＫｉ６７＋であるＣＤ８＋細胞の割合を示す。図２６Ｃは、ＯＸ４０．２１（２０、４０、８０、１６０または３２０ｍｇ）＋ニボルマブで処置されたヒト患者の腫瘍間質におけるＦＯＸＰ３＋細胞の割合を示す。図２６Ｄは、ＯＸ４０．２１（３２０ｍｇ）＋ニボルマブ（２４０ｍｇ）で処置された子宮内膜癌を有するヒト患者の腫瘍サンプルからのＫｉ６７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の免疫組織化学分析を示す。図２６Ｅは、卵巣漿液性腫瘍（上パネル）および卵巣腺癌（下パネル）を有するヒト患者の腫瘍サンプルからのＦＯＸＰ３＋細胞の免疫組織化学分析を示す。
【図２７】図２７Ａおよび２７Ｂは、非応答者（腫瘍体積＞１００ｍｍ３）または応答者（腫瘍体積≦１００ｍｍ３）ステータスに基づく、ＣＤ４４（図２７Ａ）およびＫｉ６７（図２７Ｂ）について陽性であるＣＤ８＋ Ｔ細胞の割合のグラフを示す。図２７Ｃは、抗腫瘍活性によるＫｉ６７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合（％）の絶対変化（腫瘍負荷の最大減少率）を示すグラフである。図２７Ｄは、抗腫瘍活性によるＫｉ６７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の変化（腫瘍負荷の減少率）を示すグラフである。ＰＲ：部分奏効、ＰＤ：進行性疾患、ＳＤ：安定した疾患。
【図２８】図２８は、マウスモデルにおける腫瘍増殖阻害に対する抗ＩＣＯＳ＋抗ＰＤ１併用療法における抗ＩＣＯＳ抗体の漸増用量の効果を示すグラフである。
【図２９】図２９は、マウスＭＣ３８腫瘍モデルにおけるｍＩｇＧ１およびｍＩｇＧ２ａモノクローナル抗ＯＸ４０抗体の曝露−応答関係を示す一連のグラフである。
【図３０】図３０は、ＯＸ−４０に対するＯＸ−４０アゴニスト抗体（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）の作用機序を示す。ＦＣγＲ＝のＦｃγ受容体。ＦｏｘＰ３＝フォークヘッドボックスタンパク質Ｐ３；ＮＫ＝ナチュラルキラー；ＢＭＳ−９８６１７８：ＯＸ４０モノクローナル抗体。
【図３１】図３１は、ＯＸ−４０アゴニスト抗体（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）またはアイソタイプ抗体で処置されたＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ２５の幾何平均蛍光強度［ＧＭＦＩ］によって測定されるＴ細胞活性化を示す。
【図３２】図３２Ａおよび３２Ｂは、アイソタイプ抗体対照と比較して、ＣＤ１３７モノクローナル抗体（図３２Ａ）またはＣＤ２８モノクローナル抗体（図３２Ｂ）でＣＨＯ細胞を処置後のＯＸ４０の総表面発現に対するＯＸ４０ ＲＯの割合（％）への影響をまとめたグラフである。
【図３３】図３３Ａ−３３Ｉは、ＣＨＯ細胞がＯＸ−４０アゴニスト抗体で処置されたとき、Ｔｒｅｇ抑制アッセイにおけるフック効果および用量依存性を示す。図３３Ａは、Ｔｒｅｇ抑制アッセイの概略図である。図３３Ｂは、Ｔｒｅｇの存在下でのＣＤ４＋における様々な濃度のＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）の処置にわたるＩＬ−２発現を示す。図３３Ｃは、Ｔｒｅｇの不存在下でのＣＤ４＋における様々な濃度のＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）の処置にわたるＩＬ−２発現を示す。図３３Ｄは、Ｔｒｅｇの存在下でのＣＤ４＋における様々な濃度のＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）の処置にわたる対応する培養物からのＴｒｅｇ上のＯＸ４０発現を示す。図３３Ｅは、Ｔｒｅｇの不存在下でのＣＤ４＋における様々な濃度のＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）の処置にわたる対応する培養物からのＴｒｅｇ上のＯＸ４０発現を示す。図３３Ｆは、Ｔｒｅｇの存在下でのＣＤ８＋における様々な濃度のＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）の処置にわたるＩＬ−２発現を示す。図３３Ｇは、Ｔｒｅｇの不存在下でのＣＤ８＋における様々な濃度のＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）の処置にわたるＩＬ−２発現を示す。図３３Ｈは、Ｔｒｅｇの存在下でのＣＤ８＋における様々な濃度のＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）の処置にわたる対応する培養物からのＴｒｅｇ上のＯＸ４０発現を示す。図３３Ｉは、Ｔｒｅｇの不存在下でのＣＤ８＋における様々な濃度のＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）の処置にわたる対応する培養物からのＴｒｅｇ上のＯＸ４０発現を示す。
【００２３】
【図３４】図３４Ａは、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇのＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）または対照ＩｇＧでの処置の７日後の腫瘍Ｔｒｅｇ上のＯＸ４０ ＲＯ発現である。図３４Ｂは、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇのＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）または対照ＩｇＧでの処置の７日後の腫瘍Ｔｒｅｇ上の平均蛍光強度で測定した総ＯＸ４０ ＲＯ発現である。図３４Ｃは、０．５ｍｇ／ｋｇのＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）、５ｍｇ／ｋｇ ＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス）または対照ＰＤ−１モノクローナル抗体での処置の１０日後、１７日後および２２日後の腫瘍Ｔｒｅｇ上のＯＸ４０ ＲＯ発現である。図３４Ｄは、０．５ｍｇ／ｋｇのＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）、５ｍｇ／ｋｇのＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）または対照ＰＤ−１モノクローナル抗体による処置の１０日後、１７日後および２２日後での腫瘍Ｔｒｅｇの平均蛍光強度によって測定された総ＯＸ４０ ＲＯ発現である。
【図３５】図３５Ａは、細胞が示された濃度のＣＤ２８モノクローナル抗体またはアイソタイプ抗体対照で処置されたときの、可溶性ＯＸ４０のレベルを示すグラフである。図３５Ｂは、細胞が示される濃度のＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）で処置されたときの、合計および薬物結合可溶性ＯＸ４０のレベルを示すグラフである。
【図３６】図３６は、細胞が０．０１ｎＭおよび１００ｎＭのＢＭＳ−９８６１７８で処置されたときの、ＴｒｅｇおよびＣＤ４＋ Ｔ細胞に内在化されたＯＸ４０結合ＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）の内在化を示す。
【図３７】図３７は、ＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）の用量よ、ＯＸ４０ ＲＯ、ＯＸ４０発現とＰＤモジュレーションとの間の関係の概略モデルである。
【図３８】図３８は、対照モノクローナル抗体（ｍＩｇＧ１）、ＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）、抗ＰＤ−１、抗ＣＴＬＡ−４、ＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）と抗ＰＤ−１の組合せ、またはＢＭＳ−９８６１７８（ＢＭＳ−９８６１７８サロゲートマウス抗体）と抗ＣＴＬＡ−４の組合せで処置されたＣＴ２６マウス腫瘍モデルにおいて腫瘍のないマウスの腫瘍体積およびマウス数を示す。ｍＩｇＧｇ＝マウス免疫グロブリンＧ；ＴＦ＝腫瘍なし；抗ＰＤ−１＝４Ｈ２ ｍＩｇＧ１ Ｄ２６５Ａ、抗ＣＴＬＡ−４＝９Ｄ９ ｍＩｇＧ２ｂ腫瘍体積±標準偏差は、移植後６日目（処置開始）から週２回測定した。
【００２４】
【図３９】図３９は、単剤療法の用量漸増（ＢＭＳ−９８６１７８のみ）と併用療法（ＢＭＳ−９８６１７８とニボルマブまたはイピリムマブのいずれか）の用量漸増の治験デザインを示す。ＤＬＴ＝用量規制毒性；ＥＣＯＧ ＰＳ＝東部協力腫瘍学グループのパフォーマンスステータス。ＩＶ＝静脈内投与；ＭＴＤ＝最大耐用量。用量；Ｑ２Ｗ＝２週間毎。Ｑ３Ｗ＝３週間毎。ＲＥＣＩＳＴ＝固形腫瘍における効果判定基準。ＲＰ２Ｄ＝第ＩＩ相の推奨用量。
【図４０】図４０は、ＢＭＳ−９８６１７８±ニボルマブまたはイピリムマブにおける薬物動態を示す。
【図４１】図４１は、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１６０ｍｇまたは３２０ｍｇのＯＸ−４０．２１で処置した後の、表面マーカーＣ１Ｄ１、Ｃ１Ｄ８、Ｃ２Ｄ１またはＣ５Ｄ１を用いた末梢Ｔｒｅｇ上の末梢ＯＸ４０ ＲＯを示す。
【図４２】図４２は、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１６０ｍｇまたは３２０ｍｇのＯＸ−４０．２１で処置した後、表面マーカーＣ１Ｄ１、Ｃ１Ｄ８、Ｃ２Ｄ１またはＣ５Ｄ１を用いて末梢Ｔｒｅｇの平均蛍光強度で測定した総ＯＸ４０発現である。
【図４３】図４３Ａは、種々の用量での個々の患者サンプルにおける経時的なｓＯＸ４０の倍数変化を示す。図４３Ｂは、種々の用量でのｓＯＸ４０の正規化されたＡＵＣを示す。ｓＯＸ４０の正規化されたＡＵＣを、（ＡＵＣ０− Ｔlast／Ｔlast）を用いて計算した。ＡＵＣ0-T last ＝時間０から最後のフォローアップまでの曲線下面積。Ｔlast ＝最後のフォローアップ時間。
【図４４】図４４Ａおよび４４Ｂは、ＢＭＳ−９８６１７８±ニボルマブまたはイピリムマブが刺激したＩＦＮ−γ（図４４Ａ）およびＩＰ−１０（図４４Ｂ）の産生を示す。
【図４５】図４５Ａおよび４５Ｂは、ＢＭＳ−９８６１７８±ニボルマブまたはイピリムマブによる、増殖性（Ｋｉ６７＋）ＣＤ４＋（図４５Ａ）およびＣＤ８＋（図４５Ｂ）エフェクターメモリーＴ細胞のレベルの増加を示す。
【図４６】図４６Ａから４６Ｈは、ヒト血清中の総可溶性ＯＸ４０レベルを測定するために開発されたヒト総可溶性ＯＸ４０バイオマーカーアッセイの検証結果を示す。図４６Ａは、ＢＭＳ−９８６１７８と２つの異なるＯＸ４０タンパク質（ＯＸ４０−Ｈｉｓ＿ＳｉｎｏおよびＯＸ４０−Ｆｃ＿Ｒ＆Ｄ）との間の較正曲線を示す。図４６Ｂは、２つの抗体対間の血清ＯＸ４０相関を示す。図４６Ｃおよび４６Ｄは、それぞれ希釈の平行性および直線性を示す。図４６ＥはＢＭＳ−９８６１７８の選択性を示す。図４６Ｆおよび４６Ｇは薬物相互干渉データを示す。図４６Ｈは、５つの異なる条件でのＢＭＳ−９８６１７８の保管と凍結融解の安定性を示す。
【図４７】図４７は、正常な健康な個体および３つの異なる癌対象（頭／首、卵巣および子宮頸部）における、ヒト総可溶性ＯＸ４０バイオマーカーアッセイを用いて測定された可溶性ＯＸ４０レベルを示す。
【図４８】図４８は、ＯＸ４０．８抗体の薬物相互干渉データを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
詳細な説明
本発明は、約８０％未満の受容体占拠率を達成および／または維持するのに十分な量で免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を用いて免疫応答を増強する方法を提供し、ここで、該抗体は単独でまたは他の免疫刺激剤および／またはがん療法剤と組み合わせて投与される。本明細書に記載の方法は、例えば、癌を治療するため、または腫瘍増殖を阻害するために、多様な腫瘍処置用途で用いられ得る。
【００２６】
定義
本明細書の記載をより容易に理解できるように、いくつかの用語を先ず定義する。さらなる定義は、詳細な説明の全体にわたって記載されている。
【００２７】
本明細書で用いる“免疫刺激受容体”は、免疫応答の刺激に関与する受容体を意味する。そのような受容体としては、例えば、共刺激受容体が挙げられる。
【００２８】
本明細書で用いる“共刺激受容体”は、共刺激シグナルを免疫細胞に伝達する受容体を意味する。共刺激受容体の例としては、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）のメンバー、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＤ２８、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ２２６、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１８）、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ３０、ＣＤ５４、ＣＤ９７、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７およびＮＫｐ８０が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
本明細書で用いる“アゴニスト抗体”または“アゴニスト性抗体”は、免疫刺激受容体のアゴニストである抗体、例えば、あるタンパク質の活性を刺激することにより免疫細胞を刺激し、対象の免疫系（または免疫応答）の活性を高める（boosting）ことができる抗体を意味する。
【００３０】
本明細書で用いる“免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体”または同義の表現は、免疫刺激受容体（例えば、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーなどの共刺激受容体）に特異的に結合し、該受容体および／またはその下流のシグナル伝達経路(複数可）を活性化する抗体を意味する。
【００３１】
本明細書で用いる“腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー”または“ＴＮＦＲＳＦ”は、同族リガンドに結合する細胞外ドメイン中にシステインリッチドメインを有するサイトカイン受容体のタンパク質スーパーファミリーを意味し、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＦＡＳ、ＤＣＲ３、ＣＤ３０、４−１ＢＢ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＦＮ１４、ＴＡＣＩ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＧＩＴＲ、ＴＲＯＹ、ＤＲ３（細胞死受容体３）、ＤＲ６（細胞死受容体６）、ＸＥＤＡＲ（エクトディスプラシンＡ２受容体）およびＮＧＦＲ（例えば、Croft et al., Nat Rev Drug Discov 2013;12:147-168参照）などのメンバーが含まれる。
【００３２】
本明細書で用いる用語“ＯＸ４０”は、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０−Ｌ）に結合するＴＮＦＲＳＦのメンバーである受容体を意味する。ＯＸ４０はまた、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー４（ＴＮＦＲＳＦ４）、ＡＣＴ３５、ＩＭＤ１６、ＴＸＧＰ１ＬおよびＣＤ１３４とも称される。用語“ＯＸ４０”は、細胞によって天然に発現されるＯＸ４０の変異体またはアイソフォームを含む。
【００３３】
ヒトＯＸ４０前駆体（受託番号ＮＰ_００３３１８．１）のアミノ酸配列は、配列番号１に示されている。成熟ヒトＯＸ４０の細胞外ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２に示されている。カニクイザルＯＸ４０のアミノ酸配列は、配列番号３に示されている。ヒトＯＸ４０−Ｌのアミノ酸配列は、配列番号４に示されている。
【００３４】
用語“プログラムされた死１（Programmed Death 1）”、“プログラムされた細胞死１（Programmed Cell Death 1）”、“タンパク質ＰＤ−１”、“ＰＤ−１”、“ＰＤ１”、“ＰＤＣＤ１”、“ｈＰＤ−１”および“ｈＰＤ−Ｉ”は、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫抑制受容体を意味する。ＰＤ−１は、インビボで以前に活性化されたＴ細胞に主に発現され、２つのリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２に結合する。本明細書で用いる用語“ＰＤ−１”は、ヒトＰＤ−１（ｈＰＤ−１）、ｈＰＤ−１の変異体、アイソフォームおよび種ホモログ、ならびにｈＰＤ−１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類縁体を含む。完全なｈＰＤ−１配列はＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｕ６４８６３に見出され得る。
【００３５】
“プログラムされた死リガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）”は、ＰＤ−１に結合するとＴ細胞の活性化およびサイトカイン分泌を下方制御するＰＤ−１の２つの細胞表面糖タンパク質リガンドの１つである（もう１つはＰＤ−Ｌ２）。本明細書で用いる用語“ＰＤ−Ｌ１”は、ヒトＰＤ−Ｌ１（ｈＰＤ−Ｌ１）、ｈＰＤ−Ｌ１の変異体、アイソフォームおよび種ホモログ、ならびにｈＰＤ−Ｌ１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類縁体を含む。完全なｈＰＤ−Ｌ１配列はＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｑ９ＮＺＱ７に見いだされ得る。
【００３６】
用語“細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原−４”、“ＣＴＬＡ−４”、“ＣＴＬＡ４”、“ＣＴＬＡ−４抗原”および“ＣＤ１５２”（例えば、Murata (1999) Am. J. Pathol. 155:453-460参照）は互換的に用いられ、ヒトＣＴＬＡ−４の変異体、アイソフォーム、種ホモログならびにＣＴＬＡ−４と少なくとも１つの共通エピトープを有する類縁体を含む（例えば、Balzano (1992) Int. J. Cancer Suppl. 7:28-32参照）。ヒトＣＴＬＡ−４の完全な配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｌ１ ５００６に示されている。
【００３７】
本明細書で用いる用語“抗体”は、抗体全体および任意の抗原結合フラグメント（すなわち、“抗原結合部分”）またはその一本鎖を含み得る。一態様では、“抗体”は、ジスルフィド結合によって相互に結合された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を意味する。重鎖はそれぞれ、重鎖可変領域（本明細書中、ＶＨと略される）および重鎖定常領域で構成される。特定の天然ＩｇＧ、ＩｇＤおよびＩｇＡ抗体では、重鎖定常領域は３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成されている。特定の天然抗体において、軽鎖はそれぞれ、軽鎖可変領域（本明細書中、ＶＬと略される）および軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、ＣＬという１つのドメインで構成されている。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分化できる。各ＶＨおよびＶＬは、３個のＣＤＲおよび４個のＦＲから構成され、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと並べられている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。上記抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織もしくは宿主因子への免疫グロブリンの結合に介在し得る。
【００３８】
抗体は、一般的に、１０−７から１０−１１Ｍまたはそれ以下の解離定数（ＫＤ）で示される高親和性でそれらの同族抗原に特異的に結合する。約１０−６Ｍを超えるＫＤは、一般的に、非特異的結合を示すと考えられる。本明細書で用いるとき、抗原に“特異的に結合する”抗体とは、高い親和性で抗原および実質的に同一の複数の抗原に結合する抗体を意味し、高い親和性とは、１０−７Ｍ以下のＫＤ、好ましくは１０−８Ｍ以下のＫＤ、さらにより好ましくは５ｘ１０−９Ｍ以下のＫＤ、最も好ましくは１０−８Ｍ以下および１０−１０Ｍ以下のＫＤを有するが、無関係な抗原に対しては高親和性で結合しないことを意味する。抗原が所定の抗原に対して高度の配列同一性を示す場合、例えば、抗原が、所定の抗原の配列と少なくとも８０％、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、またはさらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す場合、抗原は該所定の抗原と“実質的に同一”である。一例として、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、特定の非ヒト霊長動物種（例えば、カニクイザル）由来のＯＸ４０と交差反応し得るが、他の種由来のＯＸ４０（例えば、マウスＯＸ４０）、またはＯＸ４０以外の抗原とは交差反応し得ない。
【００３９】
免疫グロブリンは、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＭを含むが、これらに限定されない、一般的に公知のアイソタイプのいずれか由来であり得る。ＩｇＧアイソタイプは、特定の種のサブクラスに分けられる：ヒトではＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４、マウスではＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３。特定の態様では、本明細書に記載の抗ＯＸ４０抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２サブタイプのものである。免疫グロブリン、例えばＩｇＧ１には、せいぜい数個のアミノ酸が互いに異なる幾つかのアロタイプが存在する。“抗体”には、一例として、天然抗体および非天然抗体の両者；モノクローナルおよびポリクローナル抗体；キメラおよびヒト化抗体；ヒトおよび非ヒト抗体；完全合成抗体；および一本鎖抗体が含まれ得る。
【００４０】
本明細書で用いる用語、抗体の“抗原結合部分”または“抗原結合フラグメント”とは、抗原（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１以上のフラグメントを意味する。抗体の抗原結合機能は全長抗体のフラグメントによって実行され得ることが示されている。用語、抗体の“抗原結合部分”に包含される結合フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２個のＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ward et al., (1989) Nature 341:544-546）；および、（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）または（ｖｉｉ）所望により合成リンカーで連結されていてよい、２以上の単離ＣＤＲの組合せを含む。さらに、Ｆｖフラグメント、ＶＬおよびＶＨの２個のドメインは別の遺伝子によりコードされるが、それらは、組み換え法を用いて、ＶＬおよびＶＨ領域が単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる一価分子を形成するように対形成する、単タンパク質鎖として製造されることを可能とする合成リンカーにより、連結され得る（例えば、Bird et al. (1988) Science 242:423-426；および、Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883）。かかる一本鎖抗体はまた、抗体の“抗原結合部分”なる用語に包含されることも意図する。これらおよび他の可能性のある構築物は、Chan & Carter (2010) Nat. Rev. Immunol. 10:301に記載されている。これらの抗体フラグメントは、当業者に知られる常套技術を用いて得られ、フラグメントは、インタクト（無傷）抗体と同様の方法で有用性についてスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術により、またはインタクト免疫グロブリンの酵素もしくは化学開裂により産生され得る。
【００４１】
“二重特異性抗体”または“二機能性抗体”とは、２つの異なる重鎖／軽鎖対および２つの異なる結合部位を有する人工的ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメント連結を含む、種々の方法により産生できる。例えば、Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)を参照のこと。
【００４２】
本明細書で用いる用語“モノクローナル抗体”は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す抗体または抗体の組成物であって、その中の全抗体が特定のエピトープに単一の結合特異性および親和性を示す組成物を意味する。一般的にこのようなモノクローナル抗体は、単一細胞または核酸コード化抗体に由来し、何らかの配列変更を意図的に導入することなく増殖される。従って、用語“ヒトモノクローナル抗体”は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域および所望により定常領域を有する、モノクローナル抗体を意味する。一態様において、ヒトモノクローナル抗体は、例えば、トランスジェニックまたは染色体導入非ヒト動物（例えば、ヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニックマウス）から得たＢ細胞を、不死化細胞に融合することにより得たハイブリドーマにより産生する。
【００４３】
本明細書で用いる用語“組換えヒト抗体”は、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子またはそれから製造したハイブリドーマに関してトランスジェニックまたは染色体導入である動物（例えば、マウス）から単離した抗体、（ｂ）抗体を発現するように形質転換した宿主細胞、例えば、トランスフェクトーマから単離した抗体、（ｃ）組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離した抗体および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含むあらゆる他の手段により製造、発現、作製または単離された抗体のような、組換え手段により製造、発現、作製または単離された全てのヒト抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、特定のヒト生殖系列免疫グロブリン配列を利用し、生殖系列遺伝子によりコードされるが、例えば、抗体成熟中に生じるその後の再配列および変異を含む、可変領域および定常領域を含む。当技術分野で知られるように(例えば、Lonberg (2005) Nature Biotech, 23(9):1117-1125参照)、可変領域は抗原結合ドメインを含み、これは、外来抗原に特異的な抗体を形成するように再配列される種々の遺伝子によりコードされる。再配列に加えて、可変領域は、複数の単一アミノ酸変異（体細胞変異または超変異と称する）によりさらに修飾されて、抗体の外来抗原に対する親和性が増加され得る。定常領域は、抗原に対するさらなる応答において変化し得る（すなわち、アイソタイプスイッチ）。それ故に、抗原への応答において軽鎖および重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする、再配列され、かつ体細胞的に変異した核酸配列は、元の生殖系列配列と同一ではないかもしれないが、それでも実質的に同一であるか、または類似している（すなわち、少なくとも８０％同一性を有する）。
【００４４】
“ヒト”抗体（ＨｕＭＡｂ）は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来である可変領域を有する抗体を意味する。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域もヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する。本明細書に記載の抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロで無作為もしくは部位特異的変異誘発により、またはインビボで体細胞性変異により導入した変異）。しかしながら、本明細書で用いる用語“ヒト抗体”は、マウスのような他の哺乳動物種の生殖系列由来のＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図しない。用語“ヒト”抗体および“完全ヒト”抗体は、同義的に用いられる。
【００４５】
“ヒト化”抗体は、非ヒト抗体のＣＤＲドメイン外のアミノ酸のいくつか、大部分またはすべてが、ヒト免疫グロブリン由来の対応するアミノ酸で置き換えられる抗体を意味する。抗体のヒト化形態の一態様において、ＣＤＲドメイン外のアミノ酸のいくつか、大部分またはすべては、ヒト免疫グロブリンからのアミノ酸で置き換えられ、一方、１以上のＣＤＲ領域内のいくつか、大部分またはすべてのアミノ酸は変化していない。アミノ酸の小さな付加、欠失、挿入、置換または修飾は、それらが抗体の特定の抗原に結合する能力を消失させない限り、許容される。“ヒト化”抗体は、元の抗体に類似する抗原特異性を保持する。
【００４６】
“キメラ抗体”とは、可変領域がマウス抗体由来であり、定常領域がヒト抗体由来である抗体のような、可変領域がある種由来であり、定常領域が別の種由来である抗体を意味する。
【００４７】
本明細書で用いる“アイソタイプ”は、重鎖定常領域遺伝子によりコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥ抗体）を意味する。
【００４８】
語句“抗原を認識する抗体”および“抗原に特異的な抗体”は、本明細書中、用語“抗原に特異的に結合する抗体”と互換的に用いられる。
【００４９】
本明細書で用いる“単離抗体”は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を意味することを意図する。
【００５０】
本明細書で用いる、“ＯＸ４０−ＬのＯＸ４０への結合を阻害する”抗体とは、ＯＸ４０−ＬのＯＸ４０への結合を阻害する抗体を意味することが意図される。
【００５１】
“エフェクター機能”は、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体もしくはリガンドの相互作用またはそれ由来の生化学的事象を意味する。“エフェクター機能”の例としては、Ｃｌｑ結合、補体依存性細胞傷害(ＣＤＣ)、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣおよび抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）のようなＦｃγＲ介在エフェクター機能、ならびに細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御が挙げられる。このようなエフェクター機能は、一般的に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と合わさることを必要とする。
【００５２】
“Ｆｃ受容体”または“ＦｃＲ”は、免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する受容体である。ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲは、対立遺伝子バリアントを含むＦｃγＲファミリーの受容体およびこれらの受容体の選択的スプライシング型を含む。ＦｃγＲファミリーは、３個の活性化型（マウスにおけるＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃγＲＩＶ；ヒトにおけるＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡおよびＦｃγＲＩＩＩＡ）および１個の阻害型（ＦｃγＲＩＩＢ）受容体からなる。ヒトＦｃγＲの種々の性質を表１にまとめる。生来の（innate）エフェクター細胞タイプの大部分は、１以上の活性化ＦｃγＲおよび阻害型ＦｃγＲＩＩＢを共発現し、一方、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、マウスおよびヒトにおいて１つの活性化Ｆｃ受容体（マウスにおいてＦｃγＲＩＩＩおよびヒトにおいてＦｃγＲＩＩＩＡ）を選択的に発現するが、阻害性ＦｃγＲＩＩＢを発現しない。ヒトＩｇＧ１は大部分のヒトＦｃ受容体に結合し、それが結合する活性化Ｆｃ受容体のタイプに関して、マウスＩｇＧ２ａに対応すると考えられる。
【００５３】
【表１】
2021501801.tif 000003
【００５４】
“Ｆｃ領域”（結晶化可能フラグメント領域）または“Ｆｃドメイン”または“Ｆｃ”は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）上に位置するＦｃ受容体への結合または古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）への結合を含む、免疫グロブリンの宿主組織または因子への結合に介在する抗体の重鎖のＣ末端領域を意味する。従って、Ｆｃ領域は、第１の定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１またはＣＬ）を除いた抗体の定常領域を含む。ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤ抗体アイソタイプでは、Ｆｃ領域は抗体の２つの重鎖のそれぞれにＣＨ２およびＣＨ３定常ドメインを含む。ＩｇＭおよびＩｇＥ Ｆｃ領域は、各ポリペプチド鎖に３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨドメイン２−４）を含む。ＩｇＧの場合、Ｆｃ領域は免疫グロブリンドメインＣγ２およびＣγ３ならびにＣγ１とＣγ２間のヒンジを含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は異なる場合があるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、位置Ｃ２２６またはＰ２３０のアミノ酸残基（またはこれら２つのアミノ酸間のアミノ酸）から重鎖のカルボキシ末端までであると定義されおり、ここで、番号付けは、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従う。Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, MD；また、米国特許出願公開第２００８／０２４８０２８号の図３Ｃ−３Ｆも参照のこと。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、約アミノ酸２３１から約アミノ酸３４０までの長さであり、一方、ＣＨ３ドメインは、Ｆｃ領域内のＣＨ２ドメインのＣ末端側に位置し、すなわち、それはＩｇＧの約アミノ酸３４１から約アミノ酸４４７までの長さである。本明細書で用いるＦｃ領域は、任意の異型変異体または変異体Ｆｃ（例えば、天然に存在しないＦｃ）を含む、天然配列Ｆｃであり得る。Ｆｃはまた、この領域を単独で、または“Ｆｃ融合タンパク質”とも称される“Ｆｃ領域を含む結合タンパク質”（例えば、抗体またはイムノアドヘシン）などのＦｃ含有タンパク質ポリペプチドとの関連で意味し得る。
【００５５】
本明細書で用いる用語“特異的結合”、“選択的結合”、“選択的に結合する”および“特異的に結合する”は、所定の抗原上のエピトープに結合するが、他の抗原には結合しない抗体を意味する。一般に、抗体は、（ｉ）例えば、所定の抗原をアナライトとして、かつ抗体をリガンドとして用いるＢＩＡＣＯＲ２０００表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）装置における表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）テクノロジーにより決定されるとき、約１０−７Ｍ未満、例えば、約１０−８Ｍ、１０−９Ｍまたは１０−１０Ｍ未満またはそれより小さい平衡解離定数（ＫＤ）で結合し、（ｉｉ）所定の抗原に、所定の抗原または密接に関係する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合についてその親和性より少なくとも２倍大きい親和性で結合する。
【００５６】
本明細書で用いる用語“ｋａｓｓｏｃ”または“ｋａ”は、特定の抗体−抗原相互作用の結合速度定数を意味することを意図し、一方、本明細書で用いる用語“ｋｄｉｓ”または“ｋｄ”は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度定数を意味することを意図する。本明細書で用いる用語“ＫＤ”は、平衡解離定数を意味することを意図し、これはｋｄ対ｋａ比（すなわちｋｄ／ｋａ)から得られ、モル濃度（Ｍ）により表される。抗体のＫＤ値は、当技術分野で十分に確立されている方法を用いて決定できる。抗体のＫＤを決定するための好ましい方法は、好ましくはＢｉａｃｏｒｅ(登録商標)表面プラズモン共鳴システムまたはフローサイトメトリーのようなバイオセンサーシステムを用いる表面プラズモン共鳴およびスキャッチャード分析による。
【００５７】
本明細書で用いる用語、ＩｇＧ抗体に対する“高親和性”は、標的抗原に対して１０−８Ｍ以下のＫＤ、より好ましくは１０−９Ｍ以下のＫＤ、さらにより好ましくは１０−１０Ｍ以下のＫＤ を有する抗体を意味する。しかしながら、“高親和性”結合は、他の抗体アイソタイプに対して変わり得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプに対する“高親和性”結合は、１０−７Ｍ以下のＫＤ、より好ましくは１０−８Ｍ以下のＫＤを有する抗体を意味する。
【００５８】
抗体を用いるインビトロまたはインビボアッセイの文脈における用語“ＥＣ５０”は、最大応答の５０％、すなわち、最大応答とベースラインの真ん中の応答を誘発する、抗体の濃度を意味する。
【００５９】
本明細書で用いる“受容体占拠率”または“受容体の占有率”は、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体の量を意味する。“％受容体占拠率”または“％受容体の占有率”は、次の式を用いて計算することができる：（［試験のΔＭＦＩ］／［合計のΔＭＦＩ］）×１００。ΔＭＦＩは、結合したアゴニスト抗体からのＭＦＩからアイソタイプ対照抗体でのバックグラウンド染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を差し引くことによって計算される。全受容体レベルは、特定の免疫刺激受容体の最大発現、従ってＭＦＩを決定するために、飽和量のアゴニスト抗体を添加することにより決定される。全受容体発現を計算する別の手段は、受容体占拠率が計算されているアゴニスト抗体と競合しない同じ免疫刺激受容体に対する抗体を用いることである。
【００６０】
“免疫応答”は、外来因子に対する脊椎動物内の生物学的応答を意味し、該応答は、これらの因子およびそれらによって引き起こされる疾患から生物を保護する。免疫応答は、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、樹状細胞または好中球）およびこれらの細胞のいずれかまたは肝臓により産生される可溶性巨大分子（抗体、サイトカインおよび補体を含む)の作用が介在し、その結果、侵入病原体、病原体に感染された細胞または組織、癌性のまたは他の異常細胞、あるいは、自己免疫または病理学的炎症の場合、正常ヒト細胞または組織を選択的標的化し、結合し、損傷し、破壊しおよび／または脊椎動物体内から排除する。免疫応答には、例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋ Ｔ細胞のようなエフェクターＴ細胞またはＴｈ細胞の活性化または阻害、あるいはＴｒｅｇ細胞の阻害が含まれる。
【００６１】
“免疫療法”とは、免疫応答を誘発、増強、抑制またはその他の方法で改変することを含む方法による、疾患に罹患している、または疾患の発症もしくは再発のリスクがある対象の処置を意味する。
【００６２】
“Ｔエフェクター”（“Ｔｅｆｆ”）細胞は、細胞溶解性活性を伴うＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞）、ならびにサイトカインを分泌し、他の免疫細胞を活性化および指向するＴヘルパー（Ｔｈ）細胞を意味するが、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）は含まない。
【００６３】
免疫応答または免疫系を刺激する能力の増加は、Ｔ細胞共刺激性受容体のアゴニスト活性増強および／または阻害性受容体のアンタゴニスト活性増強に由来し得る。免疫応答または免疫系を刺激する能力の増加は、免疫応答を測定するアッセイ、例えば、サイトカインまたはケモカイン放出、細胞溶解性活性（標的細胞で直接的にまたはＣＤ１０７ａもしくはグランザイムの検出により間接的に決定される）および増殖の変化を測定するアッセイにおける、ＥＣ５０または最大レベルの活性の増加倍率により反映され得る。免疫応答または免疫系活性を刺激する能力は、少なくとも１０％、３０％、５０％、７５％、２倍、３倍、５倍以上増強され得る。
【００６４】
本明細書で用いる“投与する”は、当業者に知られる種々の方法および送達系のいずれかを用いる、療法剤を含む組成物の対象への物理的導入を意味する。本明細書に記載の抗体のための好ましい投与経路は、例えば注射または点滴による、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊髄または他の非経腸投与経路を含む。本明細書で用いる用語“非経腸投与”は、経腸および局所投与以外の、通常注射による、投与方法を意味し、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および点滴、ならびにインビボエレクトロポレーションを含むが、これらに限定されない。あるいは、本明細書に記載の抗体は、局所、上皮または粘膜投与経路のような非経腸ではない経路、例えば、鼻腔内、経口、膣内、直腸内、舌下にまたは局所的に投与され得る。投与はまた、例えば、１回、複数回および／または１回以上の長期にわたり実施してもよい。
【００６５】
本明細書で用いる用語“Ｔ細胞介在応答”は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞）およびヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞）を含む、Ｔ細胞が介在する応答を意味する。Ｔ細胞介在応答は、例えば、Ｔ細胞細胞毒性および増殖を含む。
【００６６】
本明細書で用いる用語“細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答”は、細胞毒性Ｔ細胞により誘発される免疫応答を意味する。ＣＴＬ応答は、主にＣＤ８＋ Ｔ細胞により介在される。
【００６７】
本明細書で用いる用語“阻害”または“阻止”（例えば、ＯＸ４０−Ｌの細胞上のＯＸ４０への結合の阻害／阻止）は、互換的に用いられ、部分的および完全阻害／阻止の両方を含む。同様に、“阻止抗体”は、その受容体へのリガンドの結合を阻止する抗体を意味し、例えば、ＯＸ４０．２１は、そのリガンドへのＯＸ４０の結合を阻害し、従ってブロッキング抗体と呼ばれる。逆に、その受容体へのリガンドの結合を阻止しない抗体、例えば、ＯＸ４０．８は、“非ブロッキング抗体”と呼ばれる。
【００６８】
本明細書で用いる用語、腫瘍の“増殖を阻害する”とは、腫瘍の増殖の測定可能なあらゆる減少、例えば、腫瘍の増殖の少なくとも約１０％、例えば、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９９％または１００％の阻害を含む。
【００６９】
本明細書で用いる“癌”は、体内の異常細胞の無制御の増殖により特徴付けられる広い疾患群を意味する。無制御の細胞分裂は、隣接組織に浸潤し、リンパ系または血流を介して体の離れた部分に転移することができる、悪性の腫瘍または細胞の形成を引き起こし得る。
【００７０】
本明細書で用いる用語“処置（treat）”、“処置する（treating）”および“処置（treatment）”は、症状、合併症、病状または疾患と関係する生化学的兆候の進行、進展、重症度または再発を逆転させる、軽減する、寛解させる、阻止するまたは減速させるあるいは予防する目的で、対象に実施されるあらゆるタイプの介入または過程あるいは活性剤の投与を意味する。予防は、疾患が生じるのを予防する、または生じてもその影響を最小限にするための、疾患を有していない対象への投与を意味する。
【００７１】
“造血器腫瘍”は、リンパ腫、白血病、骨髄腫またはリンパ系悪性腫瘍ならびに脾臓およびリンパ節の癌を含む。リンパ腫の例は、Ｂ細胞リンパ腫（Ｂ細胞血液癌）およびＴ細胞リンパ腫の両方を含む。Ｂ細胞リンパ腫は、ホジキンリンパ腫および大部分非ホジキンリンパ腫の両方を含む。Ｂ細胞リンパ腫の限定されない例は、汎発性大Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞リンパ性リンパ腫（慢性リンパ性白血病と重複）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、縦隔大Ｂ細胞リンパ腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症を含む。Ｔ細胞リンパ腫の限定されない例は、節外性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫および血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫を含む。血液系腫瘍は、また、二次性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病および急性リンパ芽球性白血病などの白血病を含むが、これに限定されない。血液系腫瘍は、さらに、多発性骨髄腫および無症候性（smoldering）多発性骨髄腫などの骨髄腫を含むが、これに限定されない。他の血液学的および／またはＢ細胞またはＴ細胞関連癌は、用語造血器腫瘍に包含される。
【００７２】
用語“有効用量”または“有効投与量”は、所望の効果を達成するまたは少なくとも部分的に達成するのに十分な薬剤（例えば、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体）の量として定義される。薬物または療法剤の“治療的有効用量”または“治療的有効投与量”は、単独でまたは他の療法剤と組み合わせて用いたとき、疾患症状の重症度の軽減、無疾患症状期間の頻度および期間の増大、または疾患罹患による機能障害もしくは身体障害の予防により証明される疾患緩解を促す、薬物の量である。
【００７３】
固形腫瘍に関して、有効量は、腫瘍を収縮させるおよび／または腫瘍の増殖速度を低下させる（例えば、腫瘍増殖を抑制する）か、または他の望ましくない細胞増殖を防止もしくは遅延させるのに十分な量を含む。特定の態様では、有効量は、腫瘍発生を遅延させるのに十分な量である。いくつかの態様では、有効量は、腫瘍の再発を防止または遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与することができる。薬物または組成物の有効量は、以下を含み得る：（ｉ）癌細胞の数を減少させる；（ｉｉ）腫瘍サイズを縮小する；（ｉｉｉ）癌細胞の末梢臓器への浸潤を阻害、遅延、ある程度減速し、停止させる；（ｉｖ）腫瘍転移を阻害する、すなわちある程度遅らせ、停止させることができる；（ｖ）腫瘍の増殖を阻害する；（ｖｉ）腫瘍の発生および／または再発を予防または遅延させる；および／または、（ｖｉｉ）癌に関連する１以上の症状をある程度緩和する。
【００７４】
本明細書で用いる用語“固定用量”、“一定用量”および“一定の固定用量”は、互換的に用いられ、患者の体重または体表面積（ＢＳＡ）に関係なく患者に投与される用量を意味する。従って、固定用量または一定用量は、ｍｇ／ｋｇ用量としてではなく、薬物の絶対量として提供される。
【００７５】
薬物の“予防的有効量”または“予防的有効投与量”は、疾患を発症するまたは疾患を再発するリスクのある対象に単独でまたは他の療法剤と組み合わせて投与したとき、疾患の発症または再発を阻止する、薬物の量である。療法剤または予防剤が疾患退縮を促すまたは疾患の発症もしくは再発を阻止する能力は、臨床治験中ヒト対象において、ヒトでの有効性を予測する動物モデルシステムにおいてまたはインビトロアッセイにおける薬剤の活性のアッセイによるような、当業者に公知の種々の方法を用いて評価できる。
【００７６】
例として、抗癌剤は、対象における癌進行を遅延させるまたは癌退縮を促す薬物である。好ましい態様において、薬物の治療有効量は、癌を排除するところまで、癌退縮を促す。“癌退縮を促す”は、薬物有効量の、単独または抗新生物剤と組み合わせた投与が、患者において、腫瘍増殖またはサイズの低減、腫瘍の壊死、少なくとも１つの疾患症状の重症度の低減、無疾患症状期間の頻度および期間の増大、疾患罹患による機能障害もしくは身体障害の予防または疾患症状の他の改善をもたらすことを意味する。薬理学的有効性は、薬物が患者における癌退縮を促す能力である。生理学的安全性は、薬物投与に起因する、細胞、臓器および／または生物レベルでの容認できる低レベルの毒性または他の有害生理作用(有害作用)を意味する。
【００７７】
腫瘍処置に関する例として、薬物の治療的有効量または投与量は、好ましくは細胞増殖または腫瘍増殖を、未処置対象と比較して少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、なおさらにより好ましくは少なくとも約８０％阻害する。最も好ましい態様において、薬物の治療的有効量または投与量は、細胞増殖または腫瘍増殖を完全に阻害する、すなわち、好ましくは細胞増殖または腫瘍増殖を１００％阻害する。化合物が腫瘍増殖を阻害する能力は、下記アッセイを用いて評価できる。あるいは、組成物のこの性質を、化合物が細胞増殖を阻害する能力を試験することにより評価でき、このような阻害は、当業者に公知のアッセイによりインビトロで測定できる。本明細書に記載の他の好ましい態様において、腫瘍退縮が観察でき、少なくとも約２０日、より好ましくは少なくとも約４０日またはよりさらに好ましくは少なくとも約６０日の期間継続し得る。
【００７８】
用語“患者”および“対象”は、予防的または治療的処置を受けるあらゆるヒトまたは非ヒト動物を意味する。例えば、本明細書に記載の方法および組成物を、進行した固形腫瘍などの癌を有する対象または患者の処置に用い得る。
【００７９】
代替語（例えば、“または”）の使用は、代替物の一方、両方、またはそれらの組合せの何れかを意味すると理解されるべきである。
【００８０】
本明細書で用いる不定冠詞“１つ（ａ）”または“１つ（ａｎ）”は、“１以上”の任意の記載または列挙された構成要素を意味することが理解されるべきである。
【００８１】
本明細書で用いる、数値または範囲における用語“約”は、該数値または範囲の平均±１０％を意味する。
【００８２】
本明細書に記載の任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲または整数範囲は、他にこれと異なる記載がない限り、列挙された範囲内の全ての整数の値を、そして適当な場合には、それらの分数（例えば、ある整数の１０分の１および１００分の１）も含むことが理解されるべきである。
【００８３】
本明細書に記載の種々の面を、以下のサブセクションにおいてさらに詳細に記載する。
【００８４】
Ｉ．使用方法
本発明は、非飽和受容体占拠率（ＲＯ）を達成および／または維持するのに十分な量（用量）または頻度（抗体投与のスケジュール）で免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体を用いて癌を処置する方法を提供する。実施例に示すように、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体の飽和またはほぼ飽和の用量（８０％以上のＲＯをもたらす用量）は、非飽和用量（ＲＯが約８０％未満になる用量）と比べて、Ｔ細胞の活性化および増殖のマーカーに反映されるように、抗腫瘍効果の低下をもたらす。これは、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体の飽和用量以下の用量を投与することにより癌を有する対象を処置することは、抗体が飽和用量で投与される場合よりも大きな治療上の利益を提供し得ることを示唆する。
【００８５】
従って、本発明は、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体をそれを必要とする対象（例えば、ヒト患者）に投与することを含む、癌を処置する方法を提供し、ここで、該抗体は、約８０％未満のＲＯを達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。
【００８６】
本発明は、対象（例えば、ヒト患者）に対して約８０％未満のＲＯを達成および／または維持するのに十分な免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体の量または頻度が決定された該対象における癌の処置方法であって、十分な量の抗体を対象に投与することを含む方法も提供する。
【００８７】
本発明はまた、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体を対象に投与することを含む、癌を有する対象の腫瘍における制御性Ｔ細胞の数を減少または枯渇させる方法も提供し、ここで、該抗体は約８０％未満のＲＯを達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。
【００８８】
また、本発明は、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体を対象に投与することを含む、癌を有する対象のＴ細胞におけるＩＬ−２および／またはＩＦＮ−γ産生を増加させる方法を提供し、ここで、該抗体は、約８０％未満のＲＯを達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。
【００８９】
本発明はまた、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体を対象に投与することを含む、癌を有する対象の免疫応答を刺激する方法を提供し、ここで、該抗体は、約８０％未満のＲＯを達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。
【００９０】
本発明はまた、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体を対象に投与することを含む、癌を有する対象において腫瘍または腫瘍細胞の増殖を阻害する方法を提供し、ここで、該抗体は、約８０％未満のＲＯを達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。
【００９１】
ある態様において、アゴニスト抗体は、約７０％未満、例えば、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満または約３０％未満のＲＯを達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。ある態様において、アゴニスト抗体は、約２０％から約８０％、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％、約２０％から約３０％、約３０％から約７０％、約４０％から約７０％、約５０％から約７０％、約６０％から約７０％、約３０％から約６０％または約３０％から約５０％のＲＯ範囲を達成および／または維持するのに十分な量で投与される。
【００９２】
本明細書に記載の方法の特定の態様において、アゴニスト抗体は、約２０％未満、例えば、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約５％から約２０％、約１０％から約２０％、または約１５％から約２０％のＲＯを達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。ある態様において、２０％以下のＲＯが、対象（例えば、ヒト患者）の断続的またはパルス投与で達成および／または維持される。例えば、パルス投与は、アゴニスト抗体とさらなる薬剤の併用療法を伴ってよく、ここで、アゴニスト抗体は８週間または１２週間ごとに投与され、さらなる薬剤（例えば、抗ＰＤ１抗体）は４週間ごとに投与される。
【００９３】
ある態様において、ＲＯは、抗体療法レジメンにおけるサイクル１後の１日目に測定される。ある態様では、ＲＯは、抗体療法レジメンの中間サイクルで測定される。ある態様では、ＲＯは、抗体療法レジメンのサイクルの開始時に測定される。ある態様では、ＲＯは、抗体療法レジメンの１つまたは複数のサイクルの複数の日に測定される。例えば、一態様では、ＲＯは、１４日サイクルの１日目、７日目および／または１４日目、ならびにその後の設定された間隔（例えば、２週間毎）に測定される。特定の態様では、ＲＯは、抗体濃度がＣmax、Ｃminおよび／またはＣtroughに近いとき、および／または免疫刺激受容体の発現が最も高いと予測されるとき（例えば、投与の７日から１４日後）に測定される。
【００９４】
ＲＯを測定する方法は、当技術分野で周知である。例えば、ＲＯは、例えば、実施例７Ａに記載のように、目的の抗体の蛍光標識バージョンを用いたフローサイトメトリーを使用して、生物学的サンプル（例えば、血液）において測定され得る。受容体占拠率を測定する方法は、例えば、Liang et al., Cytometry B Clin Cytom 2016;90:117-27、Ciccimaro et al. Anal Chem 2017;89:5115-512に詳細に記載されている。アフィニティ抽出液体クロマトグラフィー−質量分析（ＡＥ ＬＣ−ＭＳ）もまた、これらの複合体のレベルを評価することにより、末梢血ならびに組織中のＲＯを測定するために用いられる。
【００９５】
ある態様では、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体のＲＯを用いて、ヒトの用量選択を知らせることができる。例えば、本発明は、（ａ）免疫刺激受容体に特異的に結合する抗体をそれを必要とする対象に投与すること、（ｂ）対象からのサンプル中のＲＯを測定すること、および（ｃ）測定されたＲＯおよび／またはＲＯ範囲に基づいて、対象に投与する抗体の量または抗体投与のスケジュールを決定すること、を含む癌の処置法を提供する。
【００９６】
ある態様では、本発明は、癌を有する対象の処置のための免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体の有効量またはその抗体投与のスケジュールを選択する方法であって、
（ａ）抗体を対象に投与すること；
（ｂ）対象からサンプル（例えば、血液）を得ること；
（ｃ）サンプル中の細胞のＲＯを決定すること；および、
（ｄ）約８０％未満（または約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％、または約２０％から約３０％）のＲＯまたはＲＯ範囲を達成および／または維持するのに十分な抗体の量または抗体投与のスケジュールを選択すること、
を含む方法を提供する。
【００９７】
アゴニスト抗体のＲＯは、最初に前臨床動物モデルで決定して、他の哺乳動物、例えばヒトにおける投薬を知ることができる。例えば、ある態様において、本発明は、癌を有する対象の処置のための免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体の抗体投与の有効量またはそのスケジュールを選択する方法であって、
（ａ）抗体を動物モデル（例えば、マウス腫瘍モデル、サル腫瘍モデル）に投与すること；
（ｂ）動物モデルからサンプル（例えば、血液）を得ること；
（ｃ）サンプル中の抗体のＲＯを決定すること；
（ｄ）工程（ｃ）から得たＲＯを用いて、対象において期待されるＲＯを推定／予測（project/predict）すること；および
（ｅ）対象に投与するために約８０％未満のＲＯまたはＲＯ範囲（または約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％、または約２０％から約３０％のＲＯ）を達成および／または維持するのに十分な抗体の量または抗体投与スケジュールを選択すること、
を含む方法を提供する。
【００９８】
特定の態様では、抗体の有効量は、抗体が治療効果（例えば、抗腫瘍活性）を示すＲＯ範囲に基づいて定義される。したがって、本発明は、抗体が治療効果、例えば、抗腫瘍活性を達成する免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体の有効ＲＯ範囲を決定するための方法であって、
（ａ）抗体を、例えば、動物モデル（例えば、マウス腫瘍モデル）に異なる量または異なる頻度で投与すること；
（ｂ）動物からサンプル（例えば、血液）を得ること；
（ｃ）サンプル中の抗体のＲＯを測定して、用量応答ＲＯ曲線を得ること；
（ｄ）治療効果（例えば、抗腫瘍活性）をもたらす抗体の投与量および投与頻度を決定し、それをＲＯの範囲と相関させること
を含む方法を提供する。
【００９９】
ある態様において、方法は、工程（ｄ）で決定されたＲＯ範囲に基づいて、対象（例えば、ヒト患者）にアゴニスト抗体の期待されるＲＯを予測／推定する工程をさらに含む。
【０１００】
ある態様において、本発明は、癌を有する対象の処置のための免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体の有効量または抗体投与のスケジュールを選択する方法であって、
（ａ）抗体で処置された患者からサンプル（例えば、腫瘍生検サンプル）を得ること；
（ｂ）サンプル中の抗体のＲＯを決定すること；
（ｃ）工程（ｂ）から得たＲＯを用いて、対象において期待されるＲＯを決定すること；および、
（ｄ）対象に投与するために約８０％未満のＲＯ（または約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％、または約２０％から約３０％のＲＯ）を達成および／または維持するのに十分な抗体の量または抗体投与スケジュールを選択すること、
を含む方法を提供する。
【０１０１】
ある態様において、ヒト患者における期待されるＲＯおよび／またはＲＯ範囲は、前臨床データからまたは遡及分析によって、治療効果（例えば、抗腫瘍活性）に関連するＲＯおよび／またはＲＯ範囲に基づいて推定／予測（projected/predicted）できる。
【０１０２】
前臨床の設定では、例えば、表面プラズモン共鳴から決定された解離定数Ｋｄまたはインビトロでヒト細胞株から得られた結合ＥＣ５０を用いて、ヒトＲＯを計算できる（Muller PY and Brennan FR, Clin Pharmacol Ther. 2009;85:247-58; Saber H et al., Regul Toxicol Pharmacol. 2016;81:448-56）。しかしながら、種々のインビトロ系の制限（例えば、競合するリガンドの欠如）により、動物種のインビトロＲＯがその種で観察されたインビボＲＯとどの程度相関するかを評価することで、ヒトＲＯ予測を実証できる（Yang Z et al., J Pharmacol Exp Ther. 2015;355:506-515）。臨床的には、薬物濃度とＲＯデータの関係を決定するために、集団薬物動態−薬力学（ＰＫ−ＰＤ）モデリングを実行でき、それから異なる投与レジメンでヒトＲＯデータを予測することができる。次いで、予測（predicted/projected）ＲＯを用いて、癌を有するヒト患者において、アゴニスト治療抗体の抗体投与の有効なヒト用量またはスケジュール、例えば、約８０％未満のＲＯまたはＲＯ範囲（または約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％、または約２０％から約３０％）を達成および／または維持するのに十分な用量または頻度を決定することができる。
【０１０３】
免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体の期待されるＲＯおよび／またはＲＯ範囲の予測に使用するのに適した前臨床動物モデルとしては、マウス腫瘍モデル（例えば、ＣＴ26マウス同系腫瘍モデル）、マウスワクチン接種モデル、サルワクチン接種モデルおよび初代ヒト白血球集団を利用するインビトロ刺激モデル系が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０４】
遡及分析では、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体で処置された患者から得られたサンプルのＲＯを測定できる。患者からのサンプルは、例えば、腫瘍生検、血液および単離された末梢血単核細胞であり得る。次に、遡及分析から得られたＲＯを用いて、癌のヒト患者に投与するための用量または投与スケジュール（例えば、約80％未満のＲＯを達成および／または維持するのに十分な用量または頻度）を通知できる。
【０１０５】
いくつかの態様において、本発明は、免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体の有効量または抗体投与スケジュールを、それを必要とする対象に投与することを含む、癌を処置する方法を提供し、ここで、抗体の投与量または抗体投与スケジュールは、上記の用量選択方法に従って選択されている。
【０１０６】
いくつかの態様において、本発明は、本明細書に記載の方法を用いて約８０％未満のＲＯおよび／またはＲＯ範囲（または約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％または約２０％から約３０％）の達成および／または維持に十分な治療用アゴニスト抗体の量または抗体投与スケジュールが決定されている対象（例えば、ヒト患者）における癌を処置する方法であって、該治療アゴニスト抗体の十分量または投与スケジュールを対象に投与することを含む方法を提供する。
【０１０７】
また、本発明は、癌の処置を受けている対象の免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体のレベルをモニタリングする方法であって、
（ａ）対象からサンプル（例えば、血液）を得ること；
（ｂ）サンプル中のＲＯ（すなわち、抗体による受容体占拠率）を決定すること；
（ｃ）ＲＯが約８０％より大きい場合、抗体の投与量または頻度を減少させるか、またはＲＯが約２０％未満である場合、抗体の投与量または頻度を増加させること；
（ｄ）要すれば、約２０％から約８０％、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％または約２０％から約３０％のＲＯを達成および／または維持するのに十分な抗体の用量または抗体投与スケジュールが達成されるまで、工程（ａ）から（ｃ）を繰り返すこと
を含む方法を提供する。
【０１０８】
別の態様では、本発明は、癌の処置を受けている対象において免疫刺激受容体に特異的に結合する治療アゴニスト抗体のレベルをモニタリングする方法であって、
（ａ）対象からサンプル（例えば、血液）を得ること；
（ｂ）サンプル中のＲＯ（すなわち、抗体による受容体占拠率）を決定すること；
（ｃ）投与レジメンおよび／または投与頻度のＲＯを予測するための抗体濃度とＲＯとの間のＰＫ−ＰＤ関係を確立すること；
（ｄ）約２０％から約８０％、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％または約２０％から約３０％のＲＯおよび／またはＲＯ範囲を達成および／または維持し得る抗体の用量および／または抗体投与スケジュールを選択すること
を含む方法を提供する。
【０１０９】
また、本発明は、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体およびさらなる療法剤をそれを必要とする対象に投与することを含む癌の処置方法を提供し、ここで、該さらなる療法剤は、一定の頻度で投与され、アゴニスト抗体は約８０％未満（または約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％、または約２０％から約３０％）のＲＯおよび／またはＲＯ範囲を達成および／または維持するのに十分な一定の頻度で投与される。ある態様では、アゴニスト抗体の投薬頻度は、上記の用量選択法を用いて決定される。
【０１１０】
本明細書に記載の方法のある態様において、免疫刺激受容体は、共刺激受容体、例えば、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）のメンバー、ＩＣＯＳ （ＣＤ２７８）、ＣＤ２８、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ２２６、ＬＦＡ−１ （ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１８）、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ３０、ＣＤ５４、ＣＤ９７、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７およびＮＫｐ８０からなる群より選択される受容体である。
【０１１１】
ある態様において、共刺激受容体は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）のメンバーである。従って、ある態様において、本明細書に記載の方法で用いるアゴニスト抗体は、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＦＡＳ、ＤＣＲ３、ＣＤ３０、４−１ＢＢ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＦＮ１４、ＴＡＣＩ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＧＩＴＲ、ＴＲＯＹ、ＤＲ３（死受容体３）、ＤＲ６（死受容体６）、ＸＥＤＡＲ（エクトディスプラシンＡ２受容体）またはＮＧＦＲに結合する。
ＸＥＤＡＲ（エクトディスプラシンＡ２受容体）およびＮＧＦＲ（例えば、Croft et al., Nat Rev Drug Discov 2013;12:147-168参照）などのメンバーが含まれる。
【０１１２】
特定の態様において、免疫刺激受容体はＯＸ４０である。従って、本発明は、ＯＸ４０（例えば、ＯＸ４０．２１）に特異的に結合するアゴニスト抗体をそれを必要とする対象に投与することを含む癌の処置方法を提供し、ここで、該アゴニスト抗体は、対象に約８０％未満（または約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％、または約２０％から約３０％）のＲＯおよび／またはＲＯ範囲を達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。
【０１１３】
ある態様において、本明細書に記載の癌の処置方法は、抗ＯＸ４０抗体および抗ＰＤ−１抗体のそれぞれの有効量をそれを必要とする対象に投与することを含み、ここで、該抗ＯＸ４０抗体および抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも１回の投与サイクルで投与され、該サイクルは１２週間の期間であり、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、少なくとも１用量の抗ＯＸ４０抗体が、約１、３、１０、２０、４０、５０、８０、１００、１３０、１５０、１８０、２００、２４０または２８０ｍｇの固定用量で投与され、少なくとも３用量の抗ＰＤ−１抗体が、約５０、８０、１００、１２０、１５０、１８０、２００、２４０、４８０、７２０、または９６０ｍｇの固定用量で投与される。一態様では、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、抗ＯＸ４０抗体の１用量が、約２０、４０または８０ｍｇの固定用量で投与され、抗ＰＤ−１抗体の３用量が、約４８０ｍｇの固定用量で投与される。一態様では、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、抗ＯＸ４０抗体の１用量が約２０ｍｇの固定用量で投与され、抗ＰＤ−１抗体の３用量が約４８０ｍｇの固定用量で投与される。一態様では、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、抗ＯＸ４０抗体の１用量が約４０ｍｇの固定用量で投与され、抗ＰＤ−１抗体の３用量が約４８０ｍｇの固定用量で投与される。一態様では、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、抗ＯＸ４０抗体の１用量が約８０ｍｇの固定用量で投与され、抗ＰＤ−１抗体の３用量が約４８０ｍｇの固定用量で投与される。一態様では、抗ＰＤ−１抗体は、各サイクルの１日目、２９日目および５７日目に投与される。一態様では、抗ＯＸ４０抗体は、各サイクルの１日目に投与される。一態様では、抗ＰＤ−１抗体は、各サイクルの１日目、２９日目および５７日目に投与され、抗ＯＸ４０抗体は、各サイクルの１日目に投与される。一態様では、必要に応じて、１２週間の投与サイクルを繰り返すことができる。一態様では、投与は最大９サイクルからなる。一態様では、投与は、１、２、３、４、５、６、７、８または９サイクルからなる。一態様では、ＯＸ−４０抗体はＯＸ４０．２１を含む。一態様では、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブを含む。一態様では、癌は、膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸部癌および卵巣癌から選択される。一態様では、癌は膀胱癌である。一態様では、対象はヒト対象である。
【０１１４】
免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体とさらなる薬剤との併用療法も提供される。そのような態様において、アゴニスト抗体（例えば、抗ＯＸ４０抗体）の有効量は、アゴニスト抗体が単独で（すなわち、単剤療法で）用いられるときよりも実質的に低くなり得る。
【０１１５】
したがって、本発明は、ＯＸ４０に特異的に結合するアゴニスト抗体（例えば、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ０５６２、ＰＦ−０４５１８６００、ＭＯＸＲ０９１６、ＧＳＫ３１７４９９８、およびＷＯ２０１６／１９６２２８に記載の抗体（例えば、ＯＸ４０．２１））およびさらなる療法剤（非限定的な例としては、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体および抗ＴＧＦβ抗体が含まれる）をそれを必要とする対象に投与することを含む、癌の処置方法を提供し、ここで、該アゴニスト抗体は、対象において約８０％未満（または約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％、または約２０％から約３０％）のＲＯおよび／またはＲＯ範囲を達成および／または維持するのに十分な量または頻度で投与される。
【０１１６】
いくつかの態様では、抗ＯＸ４０抗体は、さらなる療法剤とは異なる頻度で投与される。例えば、さらなる療法剤は一定の頻度で投与され、抗ＯＸ４０抗体は、約８０％未満（または約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％、または約２０％から約３０％）のＲＯおよび／またはＲＯ範囲を達成するのに十分な用量および／または頻度で投与される。
【０１１７】
いくつかの態様では、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体（例えば、ＯＸ４０．２１などの抗ＯＸ４０抗体）は、さらなる療法剤（例えば、ニボルマブ）と組み合わせて用いられるとき、パルス投与される。いくつかの態様では、アゴニスト抗体は、約８０％未満（または約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％から約７０％、約２０％から約６０％、約２０％から約５０％、約２０％から約４０％、または約２０％から約３０％）のＲＯを達成および／または維持するためにパルス投与される。例えば、一態様では、パルス投与は、アゴニスト抗体およびさらなる薬剤の併用療法を伴ってよく、ここで、該アゴニスト抗体は、８週間または１２週間毎に投与され、さらなる薬剤（例えば、抗ＰＤ１抗体）は４週間毎に投与される。
【０１１８】
Ｔ細胞活性化のマーカーは、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体で処置されている対象においてモニターされ、該アゴニスト抗体の有効量または頻度が投与されていることを確認することができる。モニターすることができる（および、“フック効果”を示す）Ｔ細胞活性化のさらなるマーカーの例としては、免疫刺激受容体（例えば、ＯＸ４０）、ＩＣＯＳ、ＣＤ４４およびＫｉ６７の表面発現、ならびに免疫応答中に情報制御されることが知られているサイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２）が挙げられるが、これらに限定されない。上記のマーカーのレベルを測定する方法は、当技術分野で周知である（例えば、ＥＬＩＳＡ）。Ｔ細胞増殖は、例えば、３［Ｈ］−チミジン取り込みアッセイによりモニターすることができる。
【０１１９】
本明細書に記載の方法で対象とする免疫刺激受容体がＯＸ４０であるとき、可溶性ＯＸ４０（ｓＯＸ４０）は高ＲＯレベルでいわゆる“フック効果”を示すため、ｓＯＸ４０をアゴニスト抗体処置の治療効果を監視するマーカーとして用い得る（たとえば、実施例８を参照のこと）。ｓＯＸ４０レベルを決定するための例示的な方法（ＥＬＩＳＡ）は、実施例８に供される。
【０１２０】
本明細書に記載の方法で処置またはモニターされ得る増殖を有する癌としては、一般に免疫療法に応答性の癌および一般に免疫療法に応答性ではない癌が挙げられる。癌は、固形腫瘍または血液悪性腫瘍（液性腫瘍）を伴う癌であり得る。処置のための癌の非限定的例は、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞性肺癌、扁平上皮非小細胞性肺癌(ＮＳＣＬＣ)、非ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、消化器癌、腎癌（例えば、明細胞癌）、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ））、前立腺癌（例えば、ホルモン難治性前立腺腺癌）、甲状腺癌、神経芽腫、膵臓癌、神経膠芽腫（多形神経膠芽腫）、子宮頸癌、胃癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、直腸癌腫および頭頸部癌（または癌腫）、胃癌、胚細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫（例えば、皮膚または眼内悪性黒色腫のような転移悪性黒色腫）、骨腫瘍、皮膚癌、子宮癌、肛門周辺癌、精巣癌、ファロピウス管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、輸尿管癌、腎盂癌、中枢神経系の腫瘍（ＣＮＳ）、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管形成、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストにより誘発されるものを含む環境誘発癌、ウイルス関連癌またはウイルス源の癌（例えば、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ関連もしくは起源の腫瘍）)および２つの主要な血液細胞系統、すなわち、骨髄細胞株（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージおよび肥満細胞を産生する）またはリンパ系細胞株（Ｂ、Ｔ、ＮＫおよび血漿細胞を産生する）のいずれか由来の血液系腫瘍、例えば、全タイプの白血病、リンパ腫および骨髄腫、例えば、急性、慢性、リンパ性および／または骨髄性白血病、例えば急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ（Ｍ０）、骨髄芽球性白血病（Ｍ１）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２；細胞成熟を伴う）、前骨髄球性白血病（Ｍ３またはＭ３バリアント［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（Ｍ４または好酸球増加症を伴うＭ４バリアント［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、孤立性顆粒球性肉腫および緑色腫；リンパ腫、例えばホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞血液悪性腫瘍、例えばＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ系組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化（例えば、Ｋｉ １＋）大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性；およびリンパ腫／白血病(Ｔ−Ｌｂｌｙ／Ｔ−ＡＬＬ)、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ系造血性腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、汎発性大Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、汎発性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚性Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉症またはセザリー症候群とも呼ばれる）およびワルデンシュトレーム高ガンマグロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、例えば、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌型骨髄腫、無症候性（smoldering）骨髄腫（緩徐進行性骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫および多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリー細胞リンパ腫；骨髄系造血性腫瘍、線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉性起源の腫瘍；星状細胞腫、シュワン腫を含む、精上皮腫、奇形癌、中枢および末梢神経腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫および骨肉腫を含む、間葉性起源の腫瘍；ならびに、小細胞および大脳様細胞型を含むＴ前リンパ性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）のようなＴ細胞障害を含むが、これに限定されない、黒色腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫、甲状腺濾胞性癌および奇形癌、リンパ系造血性腫瘍、例えばＴ細胞およびＢ細胞腫瘍を含む、他の腫瘍；好ましくはＴ細胞型の大顆粒リンパ球白血病（ＬＧＬ）；ａ／ｄ Ｔ−ＮＨＬ肝脾リンパ腫；末梢／胸腺後Ｔ細胞リンパ腫（多形性および免疫芽球性サブタイプ）；血管中心性(鼻)Ｔ細胞リンパ腫；頭頚部癌、腎臓癌、直腸癌、甲状腺癌；急性骨髄リンパ腫、ならびに該癌のあらゆる組合せを含む。
【０１２１】
本明細書に記載の方法は、転移癌、切除不能癌および／または難治性癌（例えば、遮断ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１抗体での先の免疫療法に難治性の癌）および再発性癌の処置にも使用し得る。
【０１２２】
ある態様において、本明細書に記載の方法で処置される患者は、進行した固形腫瘍を有する。例えば、一態様において、患者は子宮頚癌を有する。別の態様において、患者は結腸直腸（ＣＲＣ）癌を有する。別の態様において、患者は膀胱癌（例えば、切除不能な局所進行性または転移性膀胱癌）を有する。別の態様では、患者は卵巣癌（例えば、切除不能な局所進行性または転移性卵巣癌）を有する。
【０１２３】
一態様において、本明細書に記載の方法で処置される患者は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する。別の態様において、患者は頭頸部の扁平細胞癌腫（ＳＣＣＨＮ）を有する。別の態様において、患者は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（Ｂ−ＮＨＬ）を有する。別の態様において、患者は骨髄腫を有する。別の態様において、患者は黒色腫を有する。別の態様において、患者は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を有する。
【０１２４】
一態様において、本明細書に記載の方法で処置される患者は、子宮頚癌を有する。一態様において、子宮頚癌は、裏付けられた（documented)疾患進行を伴う切除不能、転移性または再発性である。
【０１２５】
一態様において、本明細書に記載の方法で処置される患者は腎細胞癌腫を有する。一態様において、腎細胞癌腫は転移性腎細胞癌腫である。一態様において、腎細胞癌腫は明細胞成分を有する腎細胞癌腫である。
【０１２６】
一態様において、本明細書に記載の方法で処置される患者は精巣癌を有する。
【０１２７】
一態様において、本明細書に記載の方法で処置される患者は結腸直腸癌を有する。一態様において、結腸直腸癌はマイクロサテライト不安定性高（ＭＳＩ−Ｈ）結腸直腸癌である。一態様において、結腸直腸癌は、マイクロサテライト安定性結腸直腸癌である。一態様において、結腸直腸癌は、ミスマッチ修復欠損結腸直腸癌である。
【０１２８】
一態様において、本明細書に記載の方法で処置される患者は肺癌を有する。
【０１２９】
一態様において、本明細書に記載の方法で処置される患者は頭頚部癌を有する。一態様において、頭頚部癌は扁平細胞癌腫である。
【０１３０】
一態様において、本明細書に記載の方法で処置される患者は卵巣癌を有する。一態様において、卵巣癌は、切除不能な局所進行性卵巣癌である。一態様において、卵巣癌は、転移性卵巣癌である。一態様において、卵巣癌は、再発性白金感受性卵巣癌である。
【０１３１】
ある態様において、本明細書に記載の方法で処置される患者は、以前の処置、例えば免疫腫瘍薬による以前の処置に対して不十分な応答を示した癌を有する、または難治性もしくは抵抗性の、本質的に難治性もしくは抵抗性のいずれかの癌を有するか、またはここで、抵抗性もしくは難治性病状が獲得された癌を有する。いくつかの態様では、患者は、免疫腫瘍薬、例えば、ＰＤ−１経路拮抗薬を以前に受けたことがない（すなわち、治療を受けていない）。
【０１３２】
いくつかの態様では、本明細書に記載の方法は、標準的なケア治療（例えば、外科手術、放射線および化学療法）をさらに含み得る。他の態様では、方法は、維持療法、例えば、腫瘍の発生または再発を防止することを目的とする療法として実施することができる。
【０１３３】
いくつかの態様では、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体は、補助療法として対象に与えられる。いくつかの態様では、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体は、一次、二次または三次療法として用いられる。
【０１３４】
いくつかの態様では、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体は、単剤療法として、または唯一の免疫刺激療法として投与することができる。
【０１３５】
他の態様では、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体は、以下に記載のように、併用療法の一部として投与され得る。
【０１３６】
ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、免疫腫瘍薬、例えば、（ｉ）免疫刺激性（例えば、共刺激性）分子のアゴニスト（例えば、受容体またはリガンド）および／または（ｉｉ）Ｔ細胞などの免疫細胞上の免疫阻害分子のアンタゴニスト（例えば、受容体またはリガンド）、これらは両方とも抗原特異的Ｔ細胞応答などの免疫応答の増幅をもたらす、と併用され得る。特定の面では、免疫腫瘍薬は、自然免疫に関与する細胞、例えばＮＫ細胞上に存在する、（ｉ）免疫刺激性（共刺激を含む）分子のアゴニスト（例えば、受容体またはリガンド）、または（ｉｉ）免疫抑制性（共抑制を含む）分子のアンタゴニスト（例えば、受容体またはリガンド）である。このような免疫腫瘍薬は、免疫チェックポイント調節剤、例えば免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント刺激剤と呼ばれることが多い。
【０１３７】
ある態様において、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）のメンバーである刺激性または阻害性分子を標的とする薬剤と共に投与される。ある態様において、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ１（ＰＤ−Ｌ１）、Ｂ７−ＤＣ（ＰＤ−Ｌ２）、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳ−Ｌ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５（ＶＩＳＴＡ）およびＢ７−Ｈ６を含む膜結合リガンドのＢ７ファミリーのメンバー、またはＢ７ファミリーメンバーに特異的に結合する共刺激もしくは共阻害受容体を標的とする薬剤と共に投与され得る。
【０１３８】
ある態様において、ＴＮＦおよび ファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲ−Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ１３７、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２−Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡ１、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンホトキシンα／ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、ＬＴβＲ、リンホトキシンα１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹおよびＮＧＦＲ（例えば、Tansey (2009) Drug Discovery Today 00:1）などの分子のＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリーのメンバー（リガンドまたは受容体）を標的とする薬剤と共に投与することもできる。
【０１３９】
ある態様において、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、以下の薬剤の１以上と共に投与される：
（１）上記のようなＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２およびＬＡＧ−３ならびに次のタンパク質のいずれか：ＴＩＭ−３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン−１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＣＤ７３、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ−１およびＴＩＭ−４のような、Ｔ細胞活性化）を阻害するタンパク質（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）のアンタゴニスト（阻害剤または遮断剤）；および／または
（２）Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲ−Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３およびＣＤ２８ＨのようなＴ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニスト。
【０１４０】
癌の処置のために上記タンパク質の一つを調節する薬剤の例としては、ヤーボイ（商標）（イピリムマブ）またはトレメリムマブ（ＣＴＬＡ−４に対する）、ガリキシマブ（Ｂ７．１に対する）、ＢＭＳ−９３６５５８（ＰＤ−１に対する）、ＭＫ−３４７５（ＰＤ−１に対する）、ＡＭＰ２２４（Ｂ７ＤＣに対する）、ＢＭＳ−９３６５５９（Ｂ７−Ｈ１に対する）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｂ７−Ｈ１に対する）、ＭＥＤＩ−５７０（ＩＣＯＳに対する）、ＡＭＧ５５７（Ｂ７Ｈ２に対する）、ＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対する）、ＩＭＰ３２１（ＬＡＧ−３に対する）、ＢＭＳ−６６３５１３（ＣＤ１３７に対する）、ＰＦ−０５０８２５６６（ＣＤ１３７に対する）、ＣＤＸ−１１２７（ＣＤ２７に対する）、アタシセプト（ＴＡＣＩに対する）、ＣＰ−８７０８９３（ＣＤ４０に対する）、ルカツムマブ（ＣＤ４０に対する）、ダセツズマブ（ＣＤ４０に対する）、ムロモナブ−ＣＤ３（ＣＤ３に対する）、イピリムマブ（ＣＴＬＡ−４に対する）が挙げられる。ある態様において、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）と共に投与される。
【０１４１】
癌の処置のために、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体と組み合わせ得る他の分子は、ＮＫ細胞上の阻害性受容体のアンタゴニストまたはＮＫ細胞上の活性化受容体のアゴニスト、例えば、ＫＩＲのアンタゴニスト（例えば、リリルマブ）を含む。
【０１４２】
ある態様において、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカインのアンタゴニストまたはＴ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニストと共に投与し得る。
【０１４３】
任意の態様において、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、例えば、癌のような増殖性疾患の処置のために、免疫応答を刺激するために、（ｉ）Ｔ細胞活性化を阻害するＩｇＳＦファミリーまたはＢ７ファミリーまたはＴＮＦファミリーのタンパク質のアンタゴニスト（または阻害剤もしくは遮断剤）あるいはＴ細胞活性化を阻害するサイトカインのアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ；“免疫抑制性サイトカイン”）、ならびに／あるいは（ｉｉ）ＩｇＳＦファミリー、Ｂ７ファミリーまたはＴＮＦファミリーの刺激受容体またはＴ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニストと組み合わせて用い得る。
【０１４４】
併用療法のためのさらに他の薬剤は、ＲＧ７１５５（ＷＯ１１／７００２４、ＷＯ１１／１０７５５３、ＷＯ１１／１３１４０７、ＷＯ１３／８７６９９、ＷＯ１３／１１９７１６、ＷＯ１３／１３２０４４）またはＦＰＡ−００８（ＷＯ１１／１４０２４９；ＷＯ１３１６９２６４；ＷＯ１４／０３６３５７）を含むＣＳＦ−１Ｒアンタゴニスト抗体のようなＣＳＦ−１Ｒアンタゴニスト抗体を含むが、これらに限定されない、マクロファージまたは単球を阻害または枯渇する薬剤を含む。
【０１４５】
ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）のような免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、ＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害する薬剤と共に投与されてよい。
【０１４６】
併用療法のためのさらなる薬剤には、腫瘍抗原提示を増強する薬剤、例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ分泌性細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよびイミキモドまたは腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法剤（例えば、アントラサイクリン）が含まれる。
【０１４７】
併用療法に用いるための他の療法剤は、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇または遮断する治療、例えば、ＣＤ２５に特異的に結合する薬剤を含む。
【０１４８】
ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）のような免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体と組み合わせて用いられ得るさらなる療法剤は、インドールアミンジオキシゲナーゼ(ＩＤＯ)、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼまたは一酸化窒素合成酵素のような代謝酵素を阻害する治療である。
【０１４９】
ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）のような免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体と共に用いられ得る別のクラスの薬剤は、アデノシンの形成を阻害するまたはアデノシンＡ２Ａ受容体を阻害する薬剤を含む。
【０１５０】
併用療法に用いるための他の療法剤は、Ｔ細胞アネルギーまたは消耗を回復／予防する療法剤および腫瘍部位の自然免疫活性化および／または炎症を誘発する療法剤を含む。
【０１５１】
ある態様において、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、２以上の免疫腫瘍学的薬剤と組み合わせてよく、例えば、次の１以上のような免疫経路の複数の要素を標的とするコンビナトリアルアプローチと組み合わせ得る：腫瘍抗原提示を増強する療法剤（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ分泌性細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）；例えば、ＣＴＬＡ−４および／もしくはＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２経路を阻害によりおよび／またはＴregもしくは他の免疫抑制細胞の枯渇または遮断により、負の免疫制御を阻害する療法剤；例えば、ＣＤ−１３７および／またはＧＩＴＲ経路を刺激するおよび／またはＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストでの、正の免疫制御を刺激する療法剤；抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身性に高める療法剤；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えば、ダクリズマブ）またはエクスビボ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇を用いる、腫瘍におけるＴregのようなＴregを枯渇または阻害する療法剤；腫瘍におけるサプレッサー骨髄細胞の機能に影響する療法剤；腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法剤（例えば、アントラサイクリン）；例えば、キメラ抗原受容体による細胞修飾のような、遺伝子修飾された細胞を含む、養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞導入（ＣＡＲ−Ｔ療法剤）；インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼまたは一酸化窒素合成酵素のような代謝酵素を阻害する療法剤；Ｔ細胞アネルギーまたは消耗を回復／予防する療法剤；腫瘍部位の自然免疫活性化および／または炎症を誘発する療法剤；免疫刺激性サイトカインの投与；あるいは免疫抑制性サイトカインの遮断。
【０１５２】
ある態様において、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、陽性共刺激性受容体を連結するアゴニスト薬剤、阻害性受容体を介するシグナル伝達を減弱する遮断剤、アンタゴニストおよび抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身性に高める１以上の薬剤、腫瘍微小環境内の多様な免疫抑制経路に克服する薬剤（例えば、阻害性受容体結合遮断（例えば、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用）、Ｔreg枯渇または阻害（例えば、抗ＣＤ２５モノクローナル抗体（例えば、ダクリズマブ）またはエクスビボ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇の使用）、ＩＤＯのような代謝酵素阻害またはＴ細胞アネルギーまたは消耗の回復／予防）および腫瘍部位で自然免疫活性化および／または炎症を誘発する薬剤の１以上と共に用いられ得る。
【０１５３】
特定の態様において、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、対象がＢＲＡＦ  Ｖ６００変異陽性であれば、ＢＲＡＦ阻害剤と共に対象に投与される。
【０１５４】
特定の態様において、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、アンタゴニスト抗ＰＤ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤＬ１抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ４抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ３抗体などの別の免疫刺激性抗体と共に投与され、抗ＯＸ４０抗体は、別の免疫刺激性抗体と共に投与される。特定の態様において、併用療法剤は、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体およびアンタゴニスト抗ＰＤ１抗体を含む。
【０１５５】
本明細書に記載の方法に用いるための好適なＰＤ−１アンタゴニストとしては、リガンド、抗体（例えば、モノクローナル抗体および二重特異性抗体）および多価薬剤が挙げられるが、これに限定されない。一態様において、ＰＤ−１アンタゴニストは、融合タンパク質、例えば、ＡＭＰ−２４４のようなＦｃ融合タンパク質である。一態様において、ＰＤ−１アンタゴニストは、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。抗ＰＤ−１抗体の例は、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）またはＷＯ２００６／１２１１６８に記載する抗体１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４、７Ｄ３、５Ｆ４および４Ａ１１のＣＤＲまたは可変領域を含む抗体である。特定の態様において、抗ＰＤ１抗体は、ＷＯ２０１２／１４５４９３に記載のＭＫ−３４７５(ランブロリズマブ)；およびＷＯ２０１２／１４５４９３に記載のＡＭＰ−５１４である。さらに既知ＰＤ−１抗体および他のＰＤ−１阻害剤は、ＷＯ２００９／０１４７０８、ＷＯ０３／０９９１９６、ＷＯ２００９／１１４３３５、ＷＯ２０１１／０６６３８９、ＷＯ２０１１／１６１６９９、ＷＯ２０１２／１４５４９３、米国特許第７,６３５,７５７号および同第８,２１７,１４９号および米国特許公報第２００９／０３１７３６８号に記載のものを含む。ＷＯ２０１３／１７３２２３に記載の抗ＰＤ−１抗体のいずれも使用し得る。これらの抗体のいずれかと、ＰＤ−１と結合について競合するおよび／またはＰＤ−１上の同じエピトープに結合する抗ＰＤ−１抗体も併用療法に使用し得る。ＰＤ−１受容体を標的とする別のアプローチは、ＡＭＰ−２２４と呼ばれる、ＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）の細胞外ドメインで構成される組換えタンパク質である。特定の態様において、抗体は、上記の抗体と少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列同一性を有する。
【０１５６】
特定の態様において、ＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリー分子（例えば、ＯＸ４０）などの免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体を、それぞれ配列番号１６および１７に示す配列を含む重鎖および軽鎖、またはその抗原結合フラグメントおよび変異体を含む、ニボルマブと併用して用いられる。特定の態様において、抗体は、ニボルマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたはその変異体を有する。従って、一態様において、抗体は、配列番号１８に記載の配列を有するニボルマブのＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１９に記載の配列を有するニボルマブのＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。特定の態様において、抗体は、それぞれ配列番号２０−２２に記載の配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれぞれ配列番号２３−２５に記載の配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。特定の態様において、抗体は、それぞれ配列番号１８および／または配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨおよび／またはＶＬ領域を含む。特定の態様において、抗体は、配列番号１８および／または配列番号１９と少なくとも約９０％、例えば少なくとも約９０％、９５％または９９％の可変領域同一性を有する。
【０１５７】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の例としては、ＢＭＳ−９３６５５９（ＷＯ２００７／００５８７４および米国特許第７，９４３，７４３号で１２Ａ４と称される）またはＰＣＴ公開ＷＯ０７／００５８７４およびＵＳ特許７,９４３,７４３に記載される、３Ｇ１０、１２Ａ４、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７および１３Ｇ４のＣＤＲまたは可変領域を含む抗体が挙げられる。特定の態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６（抗Ｂ７−Ｈ１としても公知）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６としても公知）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（ＷＯ２０１３/７９１７４）またはｒＨｉｇＭ１２Ｂ７である。ＷＯ２０１３／１７３２２３、ＷＯ２０１１／０６６３８９、ＷＯ２０１２／１４５４９３、米国特許第７,６３５,７５７号および同第８,２１７,１４９号および米国公報第２００９／１４５４９３号に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれも使用し得る。
【０１５８】
抗ＣＴＬＡ−４抗体の例としては、ヤーボイ（商標）（イピリムマブまたはＰＣＴ公開ＷＯ０１／１４４２４に記載の抗体１０Ｄ１）、トレメリムマブ（以前はチシリムマブ、ＣＰ−６７５,２０６）または次の文献：ＷＯ９８／４２７５２；ＷＯ００／３７５０４；米国特許第６,２０７,１５６号；Hurwitz et al., (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95(17):10067-10071; Camacho et al., (2004) J. Clin. Oncology 22(145): Abstract No. 2505（抗体ＣＰ−６７５２０６）；および、Mokyr et al., (1998) Cancer Res. 58:5301-5304のいずれかに記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体が挙げられる。ＷＯ２０１３／１７３２２３に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体のいずれも使用し得る。
【０１５９】
特定の態様において、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、イピリムマブと組み合わせて用いられる。特定の態様において、抗体は、イピリムマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を有する。従って、一態様において、抗体は、配列番号２６に記載の配列を有するイピリムマブのＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号２７に記載の配列を有するイピリムマブのＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。特定の態様において、抗体は、配列番号２８−３０のそれぞれに記載の配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号３１−３３のそれぞれに記載の配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。特定の態様において、抗体は、配列番号２６および／または配列番号２７のそれぞれに記載のアミノ酸配列を含むＶＨおよび／またはＶＬ領域を含む。特定の態様において、抗体は、配列番号２６または配列番号２７と少なくとも約９０％、例えば少なくとも約９０％、９５％または９９％の可変領域同一性を有する。
【０１６０】
抗ＬＡＧ３抗体の例としては、米国特許公開ＵＳ２０１１／０１５０８９２、ＷＯ１０/１９５７０およびＷＯ２０１４/００８２１８に記載の、抗体２５Ｆ７、２６Ｈ１０、２５Ｅ３、８Ｂ７、１１Ｆ２または１７Ｅ５のＣＤＲまたは可変領域を含む抗体が挙げられる。一態様において、抗ＬＡＧ−３抗体はＢＭＳ−９８６０１６である。使用できる他の当技術分野で認識される抗ＬＡＧ−３抗体としては、ＵＳ ２０１１／００７０２３、ＷＯ０８／１３２６０１およびＷＯ０９/４４２７３に記載のＩＭＰ７３１およびＩＭＰ−３２１が挙げられる。
【０１６１】
特定の態様において、本明細書に記載の治療抗体の組合せを、薬学的に許容される担体中の単一組成物として同時に、または薬学的に許容される担体中の各抗体を用いる別々の組成物として逐次的に投与してよい。別の態様において、治療抗体の組合せを逐次的に投与し得る。さらに、併用療法の２以上の用量を逐次的に投与する場合、逐次投与の順番は、各投与時に逆でも同じ順番のままでもよく、逐次投与を、同時投与または任意のこれらの組合せと組み合わせ得る。
【０１６２】
特定の態様において、免疫系の刺激により利益を受け得る疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象を、該対象に免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体および免疫腫瘍学的薬剤を投与することにより処置する。免疫腫瘍学的薬剤の例としては、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）アゴニスト（例えば、ウレルマブまたはＰＦ−０５０８２５６６（ＷＯ１２／３２４３３）などのアゴニストＣＤ１３７抗体）；ＧＩＴＲアゴニスト（例えば、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体）、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、アゴニストＣＤ４０抗体）；ＣＤ４０アンタゴニスト（例えば、ルカツムマブ（ＨＣＤ１２２）などのアンタゴニストＣＤ４０抗体、ダセツズマブ（ＳＧＮ−４０）、ＣＰ−８７０，８９３またはＣｈｉ Ｌｏｂ ７/４）；ＣＤ２７アゴニスト（例えば、バルリルマブ（ＣＤＸ−１１２７）などのアゴニストＣＤ２７抗体）、ＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対して）（ＷＯ１１/１０９４００））；ＫＩＲアンタゴニスト（例えば、リリルマブ）；ＩＤＯアンタゴニスト（例えば、ＩＮＣＢ−０２４３６０（ＷＯ２００６／１２２１５０、ＷＯ０７／７５５９８、ＷＯ０８／３６６５３、ＷＯ０８／３６６４２）、インドキシモド、ＮＬＧ−９１９（ＷＯ０９／７３６２０、ＷＯ０９／１１５６６５２、ＷＯ１１／５６６５２、ＷＯ１２／１４２２３７）またはＦ００１２８７）；トール様受容体アゴニスト（例えば、ＴＬＲ２／４アゴニスト（例えば、カルメット・ゲラン桿菌）；ＴＬＲ７アゴニスト（例えば、Hiltonol またはイミキモド）；ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えば、レシキモド）；あるいはＴＬＲ９アゴニスト（例えば、ＣｐＧ７９０９））；および、ＴＧＦ−β阻害剤（例えば、ＧＣ１００８、ＬＹ２１５７２９９、ＴＥＷ７１９７またはＩＭＣ−ＴＲ１）が挙げられる。
【０１６３】
要すれば、唯一の免疫療法剤としての免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体、または該アゴニスト抗体と１以上のさらなる免疫治療抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＬＡＧ−３遮断）の組合せを、癌性細胞、精製腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチドおよび炭水化物分子を含む）、細胞および免疫刺激サイトカインをコードする遺伝子を遺伝子導入された細胞のような免疫原性剤とさらに組み合わせ得る（He et al. (2004) J. Immunol. 173:4919-28)。使用できる腫瘍ワクチンの非限定的例としては、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ−２、ＭＡＲＴ１および／またはチロシナーゼのペプチドのような黒色腫抗原のペプチドまたはサイトカインＧＭ−ＣＳＦを発現するように遺伝子導入された腫瘍細胞（以下にさらに記載）が挙げられる。免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体および１以上のさらなる抗体（例えば、ＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１および／またはＬＡＧ−３遮断）の組合せを、さらに標準癌処置と組み合わせてもよい。例えば、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体および１以上のさらなる抗体（例えば、ＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１および／またはＬＡＧ−３遮断）の組合せを、化学療法レジメンと効率的に組み合わせ得る。これらの例において、本組合せと共に投与する他の化学療法剤の用量を低減することができる（Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304)。例えば、このような組合せは、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体と、さらなる抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体および／または抗ＰＤ−１抗体および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体および／または抗ＬＡＧ−３抗体）を伴うかまたは伴わず、さらに黒色腫の処置のためのダカルバジンまたはインターロイキン−２（ＩＬ−２）との組合せを含み得る。免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体とＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１および／またはＬＡＧ−３との併用が依拠すう科学的根拠は、大部分の化学療法化合物の細胞毒性作用の結果である細胞死が、抗原提示経路における腫瘍抗原レベルを増加させることにある。細胞死により免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体とＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１および／またはＬＡＧ−３遮断を伴いまたは伴わない組合せとの相乗性をもたらし得る他の併用療法は、放射線、手術またはホルモン遮断を含む。これらのプロトコールの各々は、宿主における腫瘍抗原の源を創出する。血管形成阻害剤も、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体とＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１および／またはＬＡＧ−３遮断との組合せと組み合わせ得る。血管形成の阻害は腫瘍細胞死をもたらし、これが宿主抗原提示経路に腫瘍抗原の元を供給し得る。
【０１６４】
特定の態様において、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、唯一の免疫療法剤として使用できるか、または抗ＯＸ４０抗体とＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１および／またはＬＡＧ−３遮断抗体との組合せも、ＦｃαまたはＦｃγ受容体発現エフェクター細胞を腫瘍細胞に標的化させる二重特異性抗体とも組み合わせて使用できる（例えば、米国特許第５,９２２,８４５号および同第５,８３７,２４３号参照）。二重特異性抗体を、２個の別々の抗原を標的化するために用い得る。これらの応答のＴ細胞アームは、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体とＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１および／またはＬＡＧ−３遮断薬の組合せの使用により増強され得る。
【０１６５】
別の例において、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体は、唯一の免疫療法剤として使用できるか、または免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体とさらなる免疫刺激剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体および／またはアンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体および／またはアンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体および／またはアンタゴニストＬＡＧ−３剤（例えば、抗体）との組合せは、リツキサン(登録商標)(リツキシマブ)、ハーセプチン(登録商標)(トラスツズマブ)、ベキサール(登録商標)(トシツモマブ)、ゼヴァリン(登録商標)(イブリツモマブ)、キャンパス(登録商標)(アレムツズマブ)、Lymphocide(登録商標)(エプラツズマブ)、アバスチン(登録商標)(ベバシズマブ)およびタルセバ(登録商標)(エルロチニブ)などのような抗新生物抗体と組み合わせて使用できる。例として、理論に縛られることを望まないが、抗癌抗体または毒素にコンジュゲートした抗癌抗体での処置は癌細胞死（例えば、腫瘍細胞）を起こすことができ、これが、免疫刺激剤（例えば、アンタゴニストＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＬＡＧ−３剤、例えば、抗体）が介在する免疫応答を増強し得る。例示的態様において、過増殖性疾患（例えば、癌腫瘍）の処置は、同時または逐次的または任意のこれらの組み合わせでの、抗癌剤（例えば、抗体）と、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体と所望によりさらなる免疫刺激剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＬＡＧ−３剤（例えば、抗体）との組合せを含んでよく、これは、宿主による抗腫瘍免疫応答を増強する。
【０１６６】
腫瘍は、多様な機序により宿主免疫監視を逃れる。これらの機序の多くが、腫瘍により発現され、免疫抑制性であるタンパク質の不活性化により克服され得る。これらは、とりわけＴＧＦ−β（Kehrl et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050）、ＩＬ−１０（Howard & O'Garra (1992) Immunology Today 13: 198-200）およびＦａｓリガンド（Hahne et al. (1996) Science 274: 1363-1365）を含む。これらの各々に対する抗体を、抗体のようなさらなる免疫刺激剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＬＡＧ−３剤を伴いまたは伴わずに、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体とさらに組み合わせて使用して、免疫抑制剤の作用を逆転し、宿主による腫瘍免疫応答を支持し得る。
【０１６７】
宿主免疫応答性を活性化するために用い得る他の薬剤（例えば、抗体）を、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＬＡＧ−３抗体のようなさらなる免疫刺激剤を伴いまたは伴わずに、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体と組み合わせて使用できる。これらは、ＤＣ機能および抗原提示を活性化する樹状細胞の表面上の分子を含む。抗ＣＤ４０抗体（Ridge et al., supra）を、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体および所望によりさらなる免疫刺激剤、例えば、抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＬＡＧ−３剤、例えば、抗体と共に使用できる。Ｔ細胞共刺激性分子に対する他の活性化抗体（Weinberg et al., supra, Melero et al., supra, Hutloff et al., supra）もまた、Ｔ細胞活性化のレベルを高めるために提供し得る。
【０１６８】
上記のように、骨髄移植が、造血起源の多様な腫瘍の処置に現在使用されている。免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体単独またはＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１および／またはＬＡＧ−３遮断との組合せを、ドナーに移植した腫瘍特異的Ｔ細胞の有効性を高めるために使用できる。
【０１６９】
いくつかの実験的処置プロトコールは、腫瘍に対する抗原特異的Ｔ細胞のために、エクスビボ活性化および抗原特異的Ｔ細胞の増殖およびこれらの細胞のレシピエントへの養子移入を伴う（Greenberg & Riddell, supra）。これらの方法はまた、ＣＭＶのような感染因子に対するＴ細胞応答の活性化にも使用できる。さらなる免疫刺激療法剤、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＬＡＧ−３抗体を伴うまたは伴わない、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体の存在下のエクスビボ活性化は、養子移入Ｔ細胞の頻度および活性を増加することが期待され得る。
【０１７０】
本明細書に記載の免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体および組み合わせ抗体療法剤を、照射、化学療法剤（例えば、カンプトテシン(ＣＰＴ−１１)、５−フルオロウラシル(５−ＦＵ)、シスプラチン、ドキソルビシン、イリノテカン、パクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラチン、パクリタキセル、カルボプラチン−パクリタキセル(タキソール)、ドキソルビシン、５−ｆｕまたはカンプトテシン＋ａｐｏ２ｌ／ＴＲＡＩＬ(６Ｘコンボ)を使用）、１以上のプロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブまたはＭＧ１３２）、１以上のＢｃｌ−２阻害剤（例えば、ＢＨ３Ｉ−２’(ｂｃｌ−ｘｌ阻害剤)、インドールアミンジオキシゲナーゼ−１阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ−９１９またはＦ００１２８７）、ＡＴ−１０１（Ｒ−(−)−ゴシポール誘導体）、ＡＢＴ−２６３（小分子）、ＧＸ−１５−０７０(オバトクラックス)またはＭＣＬ−１(骨髄白血病細胞分化タンパク質−１)アンタゴニスト)、ｉＡＰ(アポトーシスタンパク質阻害因子)アンタゴニスト(例えば、ｓｍａｃ７、ｓｍａｃ４、小分子ｓｍａｃ模倣剤、合成ｓｍａｃペプチド(Fulda et al., Nat Med 2002;8:808-15参照)、ＩＳＩＳ２３７２２(ＬＹ２１８１３０８)またはＡＥＧ−３５１５６(ＧＥＭ−６４０))、ＨＤＡＣ(ヒストンデアセチラーゼ)阻害剤、抗ＣＤ２０抗体(例えば、リツキシマブ)、血管形成阻害剤(例えば、ベバシズマブ)、抗血管形成因子ターゲティングＶＥＧＦおよびＶＥＧＦＲ(例えば、アバスチン)、合成トリテルペノイド(Hyer et al., Cancer Research 2005;65:4799-808参照)、ｃ−ＦＬＩＰ(細胞ＦＬＩＣＥ−阻害性タンパク質)モジュレーター(例えば、ＰＰＡＲγ(ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体γ)の天然および合成リガンド、５８０９３５４または５５６９１００)、キナーゼ阻害剤(例えば、ソラフェニブ)、トラスツズマブ、セツキシマブ、テムシロリムス、ラパマイシンおよびテムシロリムスのようなｍＴＯＲ阻害剤、ボルテゾミブ、ＪＡＫ２阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＰＩ３Ｋ−ＡＫＴ阻害剤、レナリドミド、ＧＳＫ３β阻害剤、ＩＡＰ阻害剤および／または遺伝毒性薬物のようなさらなる療法剤と組み合わせて（例えば、同時にまたは別々に）使用できる。
【０１７１】
本明細書に記載の免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体および組み合わせ抗体療法剤を、１以上の抗増殖性細胞毒性薬剤と組み合わせてさらに使用できる。抗増殖性細胞毒性薬剤として用い得る化合物クラスは、次のものを含むが、これらに限定されない：
アルキル化剤(窒素マスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレア類およびトリアゼンを含むが、これらに限定されない)：ウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド(シトキサン（商標）)、フォスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホｒアミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジンおよびテモゾロミド。
代謝拮抗剤(葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類縁体、プリンアナログおよびアデノシンデアミナーゼ阻害剤を含むが、これらに限定されない)：メトトレキサート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、フルダラビンホスフェート、ペントスタチンおよびゲムシタビン。
【０１７２】
タキサン類、パクリタキセル(パクリタキセルはタキソール（商標）として市販)、ドセタキセル、ディスコデルモライド(ＤＤＭ)、ジクチオスタチン(ＤＣＴ)、ペロルシドＡ、エポチロン類、エポチロンＡ、エポチロンＢ、エポチロンＣ、エポチロンＤ、エポチロンＥ、エポチロンＦ、フラノエポチロンＤ、デスオキシエポチロンＢｌ、[１７]−デヒドロデスオキシエポチロンＢ、[１８]デヒドロデスオキシエポチロンＢ、Ｃ１２,１３−シクロプロピル−エポチロンＡ、Ｃ６−Ｃ８架橋エポチロンＡ、ｔｒａｎｓ−９,１０−デヒドロエポチロンＤ、ｃｉｓ−９,１０−デヒドロエポチロンＤ、１６−デスメチルエポチロンＢ、エポチロンＢ１０、ディスコデルモライド、パツピロン(ＥＰＯ−９０６)、ＫＯＳ−８６２、ＫＯＳ−１５８４、ＺＫ−ＥＰＯ、ＡＢＪ−７８９、ＸＡＡ２９６Ａ(ディスコデルモライド)、ＴＺＴ−１０２７(ソブリドチン)、ＩＬＸ−６５１(塩酸タシドチン)、ハリコンドリンＢ、メシル酸エリブリン(Ｅ−７３８９)、ヘミアステリン(ＨＴＩ−２８６)、Ｅ−７９７４、クリプトフィシン、ＬＹ−３５５７０３、マイタンシノイド免疫複合体(ＤＭ−１)、ＭＫＣ−１、ＡＢＴ−７５１、Ｔ１−３８０６７、Ｔ−９００６０７、ＳＢ−７１５９９２(イスピネシブ)、ＳＢ−７４３９２１、ＭＫ−０７３１、ＳＴＡ−５３１２、エリュテロビン、１７ベータ−アセトキシ−２−エトキシ−６−オキソ−Ｂ−ホモ−エストラ−１,３,５(１０)−トリエン−３−オール、シクロストレプチン、イソラウリマライド、ラウリマライド、４−エピ−７−デヒドロキシ−１４,１６−ジデメチル−(＋)−ディスコデルモライドおよびクリプトチロン１と、さらに当技術分野で公知の他の微小管安定化剤を含むが、これらに限定されない、抗増殖剤。
【０１７３】
免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体と組み合わせてまたはその前に異常に増殖性の細胞を静止状態にすることが望ましい場合、１７ａ−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、メチルプレドニゾロン、メチル−テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、リュープロリド、フルタミド、トレミフェン、ゾラデックス（商標）のようなホルモン剤およびステロイド剤（合成類縁体を含む）も患者に投与し得る。本明細書に記載の方法または組成物を用いるとき、抗模倣薬(antimimetics)のような臨床現場で腫瘍増殖または転移の制御に使用される他の薬剤も、所望により投与してよい。
【０１７４】
特定の態様において、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体（例えば、ＯＸ４０．２１などの抗ＯＸ４０抗体）は、癌、例えば結腸直腸癌または膀胱癌を有する患者にニボルマブと組み合わせて（同時にまたは別個に）投与される。
【０１７５】
特定の態様において、免疫刺激受容体に特異的に結合するアゴニスト抗体（例えば、ＯＸ４０．２１などの抗ＯＸ４０抗体）は、癌、例えば卵巣癌、膀胱癌または前立腺癌を有する患者にイピリムマブと組み合わせて（同時にまたは別個に）投与される。
【０１７６】
化学療法剤の安全かつ有効な投与の方法は当業者に公知である。さらに、それらの投与は、標準的文献に記載されている。例えば、化学療法剤の多くの投与は、Physicians' Desk Reference(PDR)、例えば、１９９６年版(Medical Economics Company, Montvale, N.J. 07645-1742, USA)に記載されており、その開示内容を引用により本明細書に包含させる。
【０１７７】
化学療法剤（複数可）および／または放射線治療を、当技術分野で周知の治療プロトコールに従って適用できる。化学療法剤（複数可）および／または放射線治療の投与が、処置すべき疾患および該疾患に対する化学療法剤および／または放射線治療の既知効果により変わり得ることは当業者には明らかである。また、熟練した臨床医の知識により、治療プロトコール（例えば、投与量および投与回数）は、患者に投与された療法剤で観察される効果の観点および投与された療法剤に対する疾患の観察される応答の観点により変わり得る。
【０１７８】
ＩＩ．免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体
本明細書に記載の方法における使用に適する免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体（併用療法剤を含む）としては、新たに開発されたアゴニスト抗体、ならびに当技術分野で公知のアゴニスト抗体（該抗体と競合または該抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む）が挙げられる。免疫刺激受容体を標的とする新しいアゴニスト抗体は、標準的な抗体産生およびスクリーニング技術を用いて取得でき、当分野で認められたアッセイを用いてアゴニスト活性を試験できる。
【０１７９】
特定の態様において、本明細書に記載の方法における使用に適するアゴニスト抗体は、免疫刺激受容体およびそれらの下流シグナル伝達経路に結合して活性化し、それにより免疫応答を刺激する。ある態様では、本明細書に記載の方法で使用するための免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体は、“フック効果”を示し、ここで、抗体のほぼ飽和の濃度または飽和濃度（例えば、８０％を超えるＲＯをもたらす濃度）は、機能的インビトロ（例えば、サイトカイン産生、増殖アッセイ、受容体の表面発現）および/またはインビボアッセイ（例えば、抗腫瘍効果）でＲＯが80％未満になる濃度と比較して効力が低下した。
【０１８０】
ある態様において、アゴニスト抗体は、共刺激受容体、例えば腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）のメンバー、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＤ２８、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ２２６、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１８）、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ３０、ＣＤ５４、ＣＤ９７、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０およびＴＧＦ−βからなる群より選択される共刺激受容体に結合する。ある態様において、本明細書に記載の方法において使用するための共刺激受容体に結合するアゴニスト抗体は、“フック効果”を示す。
【０１８１】
ある態様において、アゴニスト抗体は、ＴＮＦＲＳＦのメンバー、例えば、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、ＯＸ４０（ＣＤ１３４／ＴＮＦＲＳＦ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ４０、ＦＡＳ、ＤＣＲ３、ＣＤ３０、４−１ＢＢ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＦＮ１４、ＴＡＣＩ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＧＩＴＲ、ＴＲＯＹ、ＤＲ３（死受容体３）、ＤＲ６（死受容体６）、ＸＥＤＡＲ（エクトジスプラシンＡ２受容体）およびＮＧＦＲからなる群より選択される受容体に結合する。ある態様において、本明細書に記載の方法に使用するためのＴＮＦＲＳＦのメンバーに結合するアゴニスト抗体は、“フック効果”を示す。
【０１８２】
ある態様、アゴニスト抗体は、ＯＸ４０、例えば、“フック効果”を示すアゴニスト抗ＯＸ４０抗体に特異的に結合する。アゴニスト抗ＯＸ４０抗体の例は、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ０５６２、ＰＦ−０４５１８６００、ＭＯＸＲ０９１６、ＧＳＫ３１７４９９８、ＲＧ−７８８８（ｖｏｎｌｅｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ＩＮＣＡＧＮ−１９４９およびＷＯ２０１６／１９６２２８（例えば、ＯＸ４０．２１）；ＷＯ／１９９５／０１２６７３；ＷＯ１９９９４２５８５；ＷＯ／２０１４／１４８８９５；ＷＯ１５１５３５１３；ＷＯ１５１５３５１４；ＷＯ／２０１３／０３８１９１；ＷＯ２０１６０５７６６７；ＷＯ０３１０６４９８；ＷＯ１２０２７３２８；ＷＯ１３０２８２３１；ＷＯ２０１６２００８３６；ＷＯ１７０６３１６２；ＷＯ１７１３４２９２；ＷＯ１７０９６１７９；ＷＯ１７０９６２８１；ＷＯ１７０９６１８２に記載の抗体（各々の内容は引用によりその全体を本明細書に包含される）である。ある態様において、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、以下の特徴を示す：
（ａ）例えばＦＡＣＳにより測定して、例えば１ｎＭ以下（例えば、０．０１ｎＭ〜１ｎＭ）のＥＣ５０で膜結合ヒトＯＸ４０に結合する；
（ｂ）例えばＦＡＣＳにより測定して、例えば１０ｎＭ以下（例えば、０．０１ｎＭ〜１０ｎＭ）のＥＣ５０でカニクイザルＯＸ４０、例えば、膜結合カニクイザルＯＸ４０に結合する；
（ｃ）例えばＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ＳＰＲ分析により測定して、例えば１０ｎＭ以下（例えば、０．０１ｎＭ〜１０ｎＭ）のＫＤで可溶性ヒトＯＸ４０に結合する；
（ｄ）（ｉ）ＯＸ４０発現Ｔ細胞におけるＩＬ−２および／またはＩＦＮ−γ産生の増加および／または（ｉｉ）Ｔ細胞増殖の増強によって証明されるように、Ｔ細胞活性化を誘導または増強する；ならびに
（ｅ）例えば、ｈＯＸ４０−２９３細胞を用いたアッセイにおいて、例えばＦＡＣＳにより測定される１ｎＭ以下のＥＣ５０でＯＸ４０リガンドのＯＸ４０への結合を阻害する。
【０１８３】
ある態様において、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、Ｆｃ受容体、例えばＦｃγ受容体に結合する。
【０１８４】
ある態様において、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、多価架橋を介してＴ細胞活性化を誘導または増強する。
【０１８５】
ある態様において、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、例えば腫瘍において、例えば、Ｔｅｆｆ細胞を活性化し、Ｔｒｅｇ細胞によるＴエフェクター細胞の抑制を制限し、腫瘍Ｔｒｅｇ細胞を枯渇および／または阻害し、ならびに／あるいはＮＫ細胞を活性化することにより、免疫応答を刺激または増強し得る。例えば、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、例えば、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２およびＩＦＮ−γ）分泌の増強および／または増殖の増強により証明されるように、Ｔｅｆｆ細胞を活性化または共刺激し得る。特定の態様において、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、例えば、初代ヒトＴ細胞またはヒトＯＸ４０を発現するＴ細胞で測定して、ＩＬ−２分泌を５０％、１００％（すなわち、２倍）、３倍、４倍、５倍以上、場合により最大１０倍、最大３０倍、最大１００倍まで増加させる。特定の態様において、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、例えば、初代ヒトＴ細胞またはヒトＯＸ４０を発現するＴ細胞で測定して、ＩＦＮ−γ分泌を５０％、１００％（すなわち、２倍）、３倍、４倍、５倍以上、場合により最大１０倍、最大３０倍、最大１００倍まで増加させる。
【０１８６】
ある態様において、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、ヒト補体のＣ１ｑ成分に結合する。いくつかの態様では、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、活性化されたＣＤ４＋ Ｔ細胞のＮＫ細胞介在性溶解を誘導する。いくつかの態様において、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、ＯＸ４０発現細胞のマクロファージ介在性食作用を促進する。いくつかの態様において、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、調節性Ｔ細胞介在性のＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖の抑制を阻害する。
【０１８７】
ある態様において、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、ヒトおよびカニクイザルＯＸ４０の両方に結合する。
【０１８８】
ある態様において、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体は、ヒトＯＸ４０において、配列ＤＶＶＳＳＫＰＣＫＰＣＴＷＣＮＬＲ（配列番号１５）の全部または一部に結合する。
【０１８９】
特定の態様において、本明細書に記載の方法で用いられるアゴニスト抗ＯＸ４０抗体はＯＸ４０．２１である。ＯＸ４０．２１の重鎖および軽鎖配列、可変領域配列およびＣＤＲ配列をいかに示す。
【０１９０】
【表２】
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【０１９１】
従って、ある態様において、抗ＯＸ４０抗体は、それぞれ配列番号１１および１２の可変重鎖および可変軽鎖にある３つの可変重鎖ＣＤＲおよび３つの可変軽鎖ＣＤＲを含む。
【０１９２】
ある態様において、抗ＯＸ４０抗体は、それぞれ配列番号５〜７を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ配列番号８〜１０を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。
【０１９３】
ある態様において、抗ＯＸ４０抗体は、それぞれ配列番号５〜７からなる重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ配列番号８〜１０からなる軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。
【０１９４】
ある態様において、抗ＯＸ４０抗体は、それぞれ配列番号１１および１２に記載の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む。
【０１９５】
ある態様において、抗ＯＸ４０抗体は、それぞれ配列番号１３および１４に記載の重鎖配列および軽鎖配列を含む。
【０１９６】
免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体の例としては、抗４−１ＢＢ抗体（例えば、ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）およびＰＦ−０５０８２５６６）、抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、ＴＲＸ５１８、ＭＫ−４１６６、ＭＫ−１２４８、ＧＷＮ３２３およびＷＯ２０１７０８７６７８に記載の抗体、その内容全体は引用により本明細書中に包含される）、抗ＣＤ２７抗体（例えば、バルリルマブ（ＣＤＸ−１１２７））、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＭＥＤＩ−５７０、ＧＳＫ３３５９６０９、ＪＴＸ−２０１１）、抗ＤＲ３抗体（例えば、ＰＴＸ−２５）、および抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＰ−８７０，８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ Ｌｏｂ ７/４、ルカツムマブ、ＡＰＸ００５Ｍ、ＡＤＣ−１０１３、ＪＮＪ−６４４５７１０７、ＳＥＡ−ＣＤ４０）、ならびにこれらの抗体と同じエピトープと競合および／または結合する抗体が挙げられる。
【０１９７】
好ましくは、アゴニスト抗体は、高親和性で、例えば、with a KD of １０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、１０−１０Ｍ以下、１０−１１Ｍ以下、１０−１２Ｍ以下、１０−１２Ｍから１０−７Ｍ、１０−１１Ｍから１０−７Ｍ、１０−１０Ｍから１０−７Ｍ、または１０−９Ｍから１０−７ＭのＫＤで免疫刺激受容体に結合する。
【０１９８】
ある態様において、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらの変異体からなる群より選択される抗体である。特定の態様において、抗体はＩｇＧ１ 抗ＯＸ４０抗体、例えばＯＸ４０．２１である。
【０１９９】
特定の態様において、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体は、抗体の特性を変化させる修飾重鎖定常領域を含む。例えば、アゴニスト抗体は、非修飾重鎖定常領域を有する抗体と比較して抗体の活性を変化させる修飾重鎖定常領域を含み得る。したがって、いくつかの態様において、アゴニスト抗体は、エフェクター機能を増強する重鎖定常領域に修飾を有する。他の態様において、アゴニスト抗体は、エフェクター機能を低下させる重鎖定常領域に修飾を有する。Ｆｃ領域の変更は、例えば、（ａ）抗体依存性細胞介在性細胞毒性（ＡＤＣＣ）の増加または減少、（ｂ）補体介在性細胞毒性（ＣＤＣ）の増加または減少、（ｃ）Ｃ１ｑに対する親和性の増加または減少、および／または（ｄ）親Ｆｃと比較してＦｃ受容体に対する親和性を増加または減少させる。これらの特徴を有する変異体Ｆｃ領域を作製するために行うことができる特定の修飾（例えば、アミノ酸置換（複数可））は、当技術分野で周知であり、例えば、ＷＯ２０１６／１９６２２８にまとめられている。
【０２００】
ある態様において、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である。
【０２０１】
ある態様において、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体は二重特異性抗体である。
【０２０２】
ある態様において、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体は、検出可能ラベル（例えば、放射性同位元素、蛍光標識、酵素および他の好適な抗体タグ）または抗癌剤（例えば、代謝拮抗剤、アルキル化剤、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ架橋剤、ヒストン脱アセチラーゼ阻害剤、核輸出阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼＩまたはＩＩ阻害剤、ヒートショックタンパク質阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗生物質および抗有糸分裂剤）などの部分にコンジュゲートする免疫複合体である。ある態様において、免疫複合体は抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。
【０２０３】
ＩＩＩ．組成物
本発明はまた、本明細書に記載の方法において用いるための、薬学的に許容される担体と共に製剤された、組成物、例えば、免疫刺激受容体（例えば、ＯＸ４０）に結合するアゴニスト抗体を含む医薬組成物も提供する。
【０２０４】
本明細書に記載の医薬組成物は、単剤療法としてまたは併用療法として、例えば、本明細書に記載の併用療法として投与することができる。例えば、併用療法は、少なくとも１つの他の抗癌剤および／またはＴ細胞刺激（例えば、活性化）剤と組み合わせた免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体の投与を含み得る。併用療法で用い得る治療薬の例は、上記で詳細に説明されている。
【０２０５】
本明細書で用いる“薬学的に許容される担体”は、生理学的に適合性である、任意かつ全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗細菌薬および抗真菌薬、等張化剤ならびに吸収遅延剤などを含む。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経腸、脊髄または上皮投与（例えば、注射または点滴による）に適する。投与経路により、活性化合物、すなわち、抗体、免疫複合体または二重特異性分子を、該化合物を不活化し得る酸および他の天然条件から該化合物を保護する物質でコーティングし得る。
【０２０６】
本明細書に記載の医薬組成物は、１以上の薬学的に許容される塩を含み得る。“薬学的に許容される塩”は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない毒性効果を何ら付与しない塩を意味する（例えば、Berge、S.M., et al。(1977) J。Pharm。Sci。66:1-19）。このような塩の例は、酸付加塩および塩基付加塩を含む。酸付加塩は、塩酸塩、硝酸塩、リン酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、亜リン酸塩などのような非毒性無機酸ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などのような非毒性有機酸由来のものを含む。塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのようなアルカリ土類金属ならびにＮ,Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどのような非毒性有機アミン由来のものを含む。
【０２０７】
本明細書に記載の医薬組成物は、薬学的に許容される抗酸化剤も含み得る。薬学的に許容される抗酸化剤の例は、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなどの油溶性抗酸化剤；および、（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤を含み得る。
【０２０８】
本明細書に記載の医薬組成物に用い得る好適な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）およびそれらの好適な混合物、オリーブ油のような植物油、ならびにオレイン酸エチルのような注射用有機エステルを含む。適切な流動性を、例えば、レシチンのようなコーティング物質の使用により、分散製剤の場合必要な粒子径の維持により、そして界面活性剤の使用により維持できる。
【０２０９】
これらの組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤のようなアジュバントも含み得る。微生物の存在の予防は、上記の滅菌法および種々の抗細菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含ませることの両者により確実にできる。組成物に糖、塩化ナトリウムなどのような等張剤を含ませることも望ましいことがある。さらに、注射用医薬形態の持続吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンのような吸収を遅延させる薬剤を含ませることにより達成し得る。
【０２１０】
薬学的に許容される担体は、滅菌水溶液または分散液および滅菌注射用溶液または分散液の即座の調製のための無菌粉末を含む。薬学的に活性物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は当分野で知られる。ある常用の媒体または薬剤が活性化合物と非適合性ではない限り、本明細書に記載の医薬組成物におけるその使用が意図される。医薬組成物は防腐剤を含み得るか、または防腐剤を含まなくてよい。補足的活性化合物を組成物に包含させることができる。
【０２１１】
治療組成物は、一般的に製造および貯蔵条件下で、無菌かつ安定でなければならない。組成物を溶液、マイクロエマルジョン、リポソームまたは他の高薬物濃度に適する秩序構造として製剤できる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの好適な混合物を含む、溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性を、例えば、レシチンのようなコーティング物質の使用により、分散製剤の場合必要な粒子径の維持によりおよび界面活性剤の使用により維持できる。多くの場合、組成物に等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールのようなポリアルコールまたは塩化ナトリウムを包含させることが好ましい。注射用組成物の持続吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンの包含により達成し得る。
【０２１２】
滅菌注射用溶液を、必要な量の活性化合物を、適切な溶媒に、必要に応じて上記成分の１個または組合せと共に包含して、次いで滅菌濾過して滅菌することにより製造できる。一般的に、分散剤は、活性化合物を、塩基性分散媒体および上記のものからの必要な他の成分を含む、滅菌媒体に包含させることにより製造する。滅菌注射用溶液を製造するための滅菌粉末の場合、好ましい製造法は、予め滅菌濾過した溶液からの活性成分とさらなる所望の成分の粉末を生産する、真空乾燥およびフリーズドライ(凍結乾燥)である。
【０２１３】
単一投与量形態を産生するために担体物質と組み合わせ得る活性成分の量は、処置すべき対象および特定の投与方法により変わる。単一投与量形態を産生するために担体物質と組み合わせ得る活性成分の量は、一般的に治療効果を生じる組成物の量である。一般的に、１００％中、この量は、薬学的に許容される担体と組み合わせた約０.０１パーセント〜約９９パーセントの活性成分、好ましくは約０.１パーセント〜約７０パーセント、最も好ましくは約１パーセント〜約３０パーセントの活性成分の範囲である。
【０２１４】
投与量レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）が提供されるように調節する。例えば、１回ボーラスを投与してよく、数分割用量を長い時間をかけて投与してよくまたは治療状況の緊急度に従って、用量を徐々に減らし、または増やしてもよい。とりわけ、投与の容易さおよび投与量の均一さのために、非経腸組成物を投与量単位形態に製剤するのが有利である。本発明で用いる投与量単位形態は、処置すべき対象のための単位投与量として適する物理的に分割された単位であり、各単位は、必要な医薬担体と共に、所望の治療効果を生じるように計算された所定の量の活性化合物を含む。本明細書に記載の投与量単位形態の仕様は、（ａ）活性化合物独自の特徴および達成すべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）個々の感受性に対するこのような活性化合物の調製における当技術分野に固有の制限、によって定められ、それらに直接的に依存する。免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体（例えば、抗ＯＸ４０抗体）の好適な投与量は、本明細書に記載の方法を用いて決定され得る。
【０２１５】
抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＯＸ４０．２１）投与用の投与量は、約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ宿主体重、約０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ宿主体重、約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ宿主体重、約０．１〜１ｍｇ／ｋｇ宿主体重、約０．１〜０．５ｍｇ／ｋｇ宿主体重、または約０．０５〜０．８ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲である。例えば投与量は、０．２ｍｇ／ｋｇ体重、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、０．５ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重または１０ｍｇ／ｋｇ体重であるか、または１−１０ｍｇ／体重ｋｇの範囲であり得る。特定の態様において、投与量は０．２ｍｇ／ｋｇである。ある態様において、投与量は、０．２５ｍｇ／ｋｇである。他の態様において、投与量は、０．５ｍｇ／ｋｇである。
【０２１６】
特定の態様において、抗ＯＸ４０抗体および抗ＰＤ−１抗体または抗ＣＴＬＡ−４抗体との併用療法のために、抗体は、固定用量で投与され得る。従って、ある態様において、抗ＯＸ４０抗体は、約２５〜約３２０ｍｇ、例えば約２５〜約１６０ｍｇ、約２５〜約８０ｍｇ、約２５〜約４０ｍｇ、約４０〜約３２０ｍｇ、約４０〜約１６０ｍｇ、約４０〜約８０ｍｇ、約８０〜約３２０ｍｇ、約３０〜約１６０ｍｇ、または約１６０〜約３２０ｍｇの固定用量で投与される。一態様において、抗ＯＸ４０抗体は、２０ｍｇまたは約２０ｍｇの用量で投与される。別の態様において、抗ＯＸ４０抗体は、４０ｍｇまたは約４０ｍｇの用量で投与される。別の態様において、抗ＯＸ４０抗体は、８０ｍｇまたは約８０ｍｇの用量で投与される。別の態様において、抗ＯＸ４０抗体は、１６０ｍｇまたは約１６０ｍｇの用量で投与される。別の態様において、抗ＯＸ４０抗体は、３２０ｍｇまたは約３２０ｍｇの用量で投与される。例示的処置レジメンは、週１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月１回、３ヶ月に１回、４カ月に１回または３〜６ヶ月に１回の投与を必要とする。
【０２１７】
ある態様において、抗ＰＤ−１抗体は、約１００〜３００ｍｇの固定用量で投与される。例えば、免疫腫瘍薬の投与量は、２４０ｍｇまたは約２４０ｍｇ、３６０ｍｇまたは約３６０ｍｇ、あるいは４８０ｍｇまたは約４８０ｍｇであり得る。特定の態様において、抗ＰＤ１抗体の用量は、約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲、より通常には、０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲である。例えば、投与量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重または約０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重または約１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重または約３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重または約５ｍｇ／ｋｇ体重、１０ｍｇ／ｋｇ体重または約１０ｍｇ／ｋｇ体重あるいは１−１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。ある態様において、抗ＰＤ−１抗体の投与量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される２４０ｍｇまたは約２４０ｍｇである。この投与量は、比例して（１週間あたり１２０ｍｇ）長くまたは短く調整でき、例えば、３６０ｍｇを３週間に１回（Ｑ３Ｗ）または４８０ｍｇを４週間に１回（Ｑ４Ｗ）投与し得る。
【０２１８】
ある態様において、抗ＯＸ４０抗体および抗ＰＤ−１抗体での併用用法のために、抗体は、固定用量で投与され得る。一態様において、抗ＯＸ４０抗体および抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも１回の投与サイクルで投与され、ここで、該サイクルは、１２週間の期間であり、ここで、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、抗ＯＸ４０抗体の少なくとも１用量は、約１、３、１０、２０、４０、５０、８０、１００、１３０、１５０、１８０、２００、２４０または２８０ｍｇの固定用量で投与され、抗ＰＤ−１抗体の少なくとも３用量は、約５０、８０、１００、１２０、１５０、１８０、２００、２４０、４８０、７２０または９６０ｍｇの固定用量で投与される。一態様において、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、抗ＯＸ４０抗体の１用量は、約２０、４０または８０ｍｇの固定用量で投与され、抗ＰＤ−１抗体の少なくとも３用量は、約４８０ｍｇの固定用量で投与される。一態様において、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、抗ＯＸ４０抗体の１用量は、約２０ｍｇの固定用量で投与され、抗ＰＤ−１抗体の少なくとも３用量は、約４８０ｍｇの固定用量で投与される。一態様において、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、抗ＯＸ４０抗体の１用量は、約４０ｍｇの固定用量で投与され、抗ＰＤ−１抗体の３用量は、約４８０ｍｇの固定用量で投与される。一態様において、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、抗ＯＸ４０抗体の１用量は、約８０ｍｇの固定用量で投与され、抗ＰＤ−１抗体の３用量は、約４８０ｍｇの固定用量で投与される。一態様において、抗ＰＤ−１抗体は、各サイクルの１日目、２９日目および５７日目に投与される。一態様において、抗ＯＸ４０抗体は、各サイクルの１日目に投与される。一態様において、抗ＰＤ−１抗体は、各サイクルの１日目、２９日目および５７日目に投与され、抗ＯＸ４０抗体は、各サイクルの１日目に投与される。一態様において、必要に応じて、１２週間の投与サイクルを繰り返してよい。一態様において、投与は最大９サイクルからなる。一態様において、投与は、１、２、３、４、５、６、７、８または９サイクルからなる。一態様において、抗ＯＸ４０抗体は、それぞれ配列番号５〜７を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号８〜１０を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。一態様において、抗ＯＸ４０抗体はＯＸ４０．２１を含む。一態様において、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブを含む。
【０２１９】
ある態様において、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。例えば、投与量は、１ｍｇ／宿主体重ｋｇまたは約１ｍｇ／宿主体重ｋｇあるいは３ｍｇ／ｋｇ宿主体重または約３ｍｇ／ｋｇ宿主体重であり得る。
【０２２０】
特定の態様において、同日に投与されるとき、抗ＯＸ４０抗体は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＣＴＬＡ−４抗体の前に投与される。特定の態様において、同日に投与されるとき、抗ＯＸ４０抗体は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＣＴＬＡ−４抗体の後に投与される。特定の態様において、同日に投与されるとき、抗ＯＸ４０抗体は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＣＴＬＡ−４抗体と同時に投与される。
【０２２１】
ある場合において、投与される各抗体の投与量が上記の範囲内に入るように、異なる結合特異性を有する２以上のモノクローナル抗体が同時に投与される。さらに、抗体は、通常、複数回投与される。一用量の間の間隔は、例えば、週、月、３ヶ月または年であり得る。患者における標的抗原に対する抗体の血中レベルの測定により指示されるように、間隔は不規則でもよい。ある方法において、投与量を、約１〜１０００μg／ml、ある方法において約２５〜３００μg／mlの血漿抗体濃度となるよう調節する。
【０２２２】
抗体を、持続放出製剤として投与でき、この場合、必要な投与頻度は少ない。投与量および頻度は、患者における抗体の半減期により変わる。一般に、ヒト抗体は、最長半減期を示し、続いてヒト化抗体、キメラ抗体および非ヒト抗体である。投与量および投与頻度は、処置が予防的であるかまたは治療的であるかにより変わり得る。予防適用において、長期間にわたり、比較的低用量を、比較的低頻度の間隔で投与する。ある患者は、死ぬまで処置を受け続ける。治療適用において、比較的短い間隔で比較的高用量が、疾患の進行が低減するか停止するまで、好ましくは患者が疾患の症状の部分的なまたは完全な改善を示すまで、必要とされる。その後、患者に予防レジメンで投与され得る。
【０２２３】
本明細書に記載の医薬組成物における活性成分の実際の投与量レベルは、患者に毒性ではなく、特定の患者、組成物および投与方法で所望の治療応答を達成するのに有効であるBBB活性成分の量を得るように、変えてよい。選択された投与量レベルは、用いる本明細書に記載の特定の組成物またはそのエステル、塩またはアミドの活性、投与経路、投与時間、用いる特定の化合物の排出速度、処置期間、他の薬物、用いる特定の組成物と組み合わせて用いる他の薬物、化合物および／または物質、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、全般的体調および既往歴ならびに医薬分野で周知の同様の因子を含む、多様な薬物動態因子により変わり得る。
【０２２４】
本明細書に記載の抗体の“治療的有効投与量”は、好ましくは疾患症状の重症度の軽減、無疾患症状期間の頻度および期間の増大または疾患罹患による機能障害もしくは身体障害の予防をもたらす。癌の状況において、治療的有効用量は、生存を延長させる、および／または癌と関連する身体的症状のさらなる悪化を予防する。癌の症状は当分野で周知であり、例えば、異常な黒子特徴（unusual mole feature）、非対称、境界、色および／または直径を含む黒子の見かけの変化、新たに着色された皮膚領域、異常黒子、爪の下の黒ずんだ領域、乳房腫瘤、乳頭変化、乳房嚢胞、乳房痛、死亡、体重減少、弱化、過度の疲労、摂食困難、食欲減退、慢性咳嗽、息切れ悪化、喀血、血尿、血便、悪心、嘔吐、肝臓転移、肺転移、骨転移、腹部膨満、鼓腸、腹水、膣出血、便秘、腹部膨張、結腸穿孔、急性腹膜炎(感染、発熱、疼痛)、疼痛、吐血、重度発汗、発熱、高血圧、貧血、下痢、黄疸、めまい、悪寒、筋肉痙攣、結腸転移、肺転移、膀胱転移、肝臓転移、骨転移、腎臓転移および膵臓転移、嚥下困難などを含む。
【０２２５】
治療的有効用量は、癌の発症を、該疾患の早期または先行徴候が存在するときに望まれ得るように、予防または遅延し得る。癌の診断に利用する臨床検査は、化学、血液学、血清学および放射線学を含む。従って、前記のいずれかをモニターするあらゆる臨床的または生化学的アッセイを、特定の処置が、癌処置に治療的有効用量であるか否かを決定するために使用し得る。当業者は、対象の体格、対象の症状の重症度および選択した特定の組成物または投与経路のような因子に基づき、このような量を決定できる。
【０２２６】
本明細書に記載の抗体および組成物を、当技術分野で知られる１以上の多様な方法を用いて、１以上の投与経路で投与できる。当業者には明らかなとおり、投与経路および／または投与方法は、所望の結果によって変わる。本明細書に記載の抗体の好ましい投与経路としては、例えば注射または点滴による、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄または他の非経腸投与経路が挙げられる。本明細書で用いる用語“非経腸投与”は、通常注射による、経腸および局所投与以外の投与方法を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および点滴を含むが、これらに限定されない。
【０２２７】
あるいは、抗体を、局所、上皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣内、直腸内、舌下または局所的のような非経腸ではない経路で投与できる。
【０２２８】
活性化合物を、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含む、制御放出製剤のような、急速な放出から化合物を保護し得る担体と製造できる。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸のような生分解性、生体適合性ポリマーを用い得る。このような製剤の製造のための多くの方法が特許されまたは当業者に一般に知られる。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978参照。
【０２２９】
抗体組成物を、当技術分野で公知の医療器具を用いて投与できる。例えば、一態様において、該組成物を、米国特許第５，３９９，１６３号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３１２，３３５号；同第５，０６４，４１３号；同第４，９４１，８８０号；同第４，７９０，８２４号；または、同第４，５９６，５５６号に記載の機器のような無針皮下組織注射器で投与できる。抗体の投与において使用するための周知のインプラントおよびモジュールの例としては、米国特許第４，４８７，６０３号３（制御された速度で薬を分配するためのインプラント可能微量注入ポンプを記載）；米国特許第４,４８６,１９４号（皮膚から薬を投与するための治療機器を記載）；米国特許第４,４４７,２３３号（正確な注入速度で薬物を送達するための投薬注入ポンプを記載）；米国特許第４,４４７,２２４号（連続的薬物送達のための可変流動インプラント可能注入装置を記載）；米国特許第４,４３９,１９６号（多チャンバー区画を有する浸透圧性薬物送達系を記載）；および米国特許第４,４７５,１９６号（浸透圧性薬物送達系を記載）が挙げられる。これらの特許は引用により本明細書中に包含させる。多くの他のこのようなインプラント、送達系およびモジュールが当業者に知られている。
【０２３０】
特定の態様において、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体は、インビボで適切な分布を確実にするために製剤される。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高度に親水性の化合物を排除する。抗体がＢＢＢを通過することを確実にするために（望ましくは、例えば脳腫瘍）、例えば、リポソームに製剤できる。リポソームを製造する方法について、例えば、米国特許第４,５２２,８１１号；同第５,３７４,５４８号；および同第５,３９９,３３１号を参照のこと。リポソームは、特定の細胞または臓器に選択的に輸送され、そうして標的化薬物送達を増強する１以上の成分を含み得る（例えば、V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685参照）。例示的ターゲティング成分は、葉酸またはビオチン(例えば、米国特許第５,４１６,０１６号（Low et al.）参照）；マンノシド（Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038）；抗体（P.G. Bloeman et al., (1995) FEBS Lett. 357:140； M. Owais et al., (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180）；界面活性剤プロテインＡ受容体（Briscoe et al., (1995) Am. J. Physiol. 1233:134）；ｐ１２０（Schreier et al., (1994) J. Biol. Chem. 269:9090）を含む；K. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; J.J. Killion; I.J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273も参照のこと。
【０２３１】
ＩＶ．キットおよび単位投与量形態
本発明はまた、例えば、癌の処置に用いるために本明細書に記載の方法を用いて決定される量で、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体（例えば、抗ＯＸ４０抗体）および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を含むキットも提供する。キットは、少なくとも１つのさらなる薬剤（例えば、別の治療薬などの、本明細書に記載の併用療法に適した薬剤）をさらに含み得る。キットはまた、施術者（例えば、医師、看護師または患者）がそこに含まれる組成物を投与して癌を有する患者（例えば、固形腫瘍）に投与することを可能にするために、例えば、投与スケジュールを含む指示を含むこともできる。キットはまた、注射器を含み得る。
【０２３２】
要すれば、キットは、上記の方法に従って単回投与するための有効量の抗体をそれぞれ含む単回用量医薬組成物の複数のパッケージを含む。医薬組成物（複数可）を投与するために必要な装置または機器もまたキットに含まれ得る。例えば、キットは、ある量の抗体を含む１以上の充填済シリンジを提供することができる。
【０２３３】
キットは、一般的に、キットの内容の使用目的を示すラベルが含まれる。ラベルという用語には、キット上またはキットとともに提供されたか、またはキットに付属している書面または記録された資料が含まれる。
【実施例】
【０２３４】
実施例
ＯＸ−４０は、Ｔ細胞の活性化により上方制御される共刺激受容体である。Ｔ細胞（Treg）抑制を阻害しながら、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋エフェクターＴ細胞（Teff）の活性化、増殖および生存を増加させる。ＯＸ−４０に高親和性で結合し、Ｔｅｆｆ増殖を増強し、Ｔreg抑制を阻害する完全ヒトＩｇＧ１アゴニストモノクローナル抗体の例を本明細書に記載する。図３０は、ＯＸ−４０を有するアゴニスト性モノクローナル抗体による作用機序の描写を提供する。
【０２３５】
実施例１：種々の用量のリガンド遮断およびリガンド非遮断抗ＯＸ４０抗体の抗腫瘍活性
この実施例は、ＣＴ２６マウス腫瘍モデルにおける種々の用量でＯＸ４０．２３−ｍＩｇＧ１（リガンド遮断アゴニスト抗体）およびＯＸ４０．３−ｍＩｇＧ１（リガンド非遮断薬）の効果を記載する。
【０２３６】
ＢａｌｂＣマウスに１ｘ１０６ ＣＴ２６細胞を移植した。移植後６日目に、確立されたＣＴ２６腫瘍（７５−１５０ ｍｍ３）を有するマウスを、０．０３、０．１、０．３、１、３および１０ｍｇ／ｋｇの用量でＯＸ４０．２３ ｍＩｇＧ１またはＯＸ４０．３ ｍＩｇＧ１で処理した（Ｑ７Ｄ ｘ ２、ｄ６）。
【０２３７】
処置群あたりの腫瘍増殖曲線の平均値および中央値を図１Ａ（ＩｇＧ対照およびＯＸ４０．２３）および図１Ｂ（ＯＸ４０．３）に示し、ＯＸ４０．２３−ｍＩｇＧ１およびＯＸ４０．３−ｍＩｇＧ１で処置されたマウスの平均および中央腫瘍体積を図２Ａ−２Ｄに示す。処置群毎の試験終了時の腫瘍体積（ＴＶ）の平均値および中央値、ＴＧＩならびに腫瘍のないマウス数を表３にまとめる。
【０２３８】
【表３】
2021501801.tif 000005
【０２３９】
１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの用量のＯＸ４０．３は、２０日目に有意な腫瘍抑制を示し、アイソタイプ対照処置群と比較して、それぞれ中央値ＴＧＩが７６％、９３％および９８％であり、ならびに試験終了時（６６日目）の腫瘍のないマウスはそれぞれ１／１０、２／１０および６／１０であった。０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの用量のＯＸ４０．２３は、２０日目に有意な腫瘍抑制を示し、アイソタイプ対照処置群と比較して、ＴＧＩの中央値は５９％、９１％、８８％および７３％であり、ならびに試験終了時（６６日目）に、それぞれ２／１０、１／１０、３／１０および６／１０の腫瘍のないマウスであった。０．３ｍｇ／ｋｇ以上の用量のＯＸ４０．２３を投与された全ての群で腫瘍体積が減少したが、１０ｍｇ／ｋｇでの処置は、１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇでの処置に比べて活性が低かった。高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）での抗腫瘍活性の低下（“フック”効果）は、ＯＸ４０．３で処置された群では観察されず、最高用量で最大ＴＧＩと最大数の腫瘍のないマウスが示された。ＯＸ４０．３ではなくＯＸ４０．２３がＯＸ４０−ＯＸ４０Ｌ相互作用を阻止するため、これらのデータは、ＯＸ４０Ｌの関与が、高用量でのＯＸ４０．２３による抗腫瘍効果の低下に寄与し得ることを示唆した。
【０２４０】
実施例２：抗ＯＸ４０抗体＋抗ＰＤ１抗体の併用療法による抗腫瘍効果の変化
この実施例は、抗ＰＤ１抗体と組み合わせたＯＸ４０．２３−ｍＩｇＧ１の種々の用量の効果を記載する。
【０２４１】
実験条件は、実施例１に記載のものと実質的に同じであった。ＯＸ４０．２３（Ｑ７Ｄ ｘ ２）＋抗ＰＤ１抗体（ＩｇＧ１ Ｄ２６５Ａ；Ｑ４Ｄ ｘ ３）で処置されたマウスの個々の腫瘍増殖曲線を図３Ａおよび３Ｂに示し、ＯＸ４０．３＋抗ＰＤ１抗体処置マウスの曲線を図４に示す。ＯＸ４０．２３ ＋ 抗ＰＤ１処置マウスの処置群当たりの試験終了時の腫瘍体積の平均値および中央値、ＴＧＩおよび腫瘍のない（ＴＦ）マウスの数を、表４にまとめ、ＯＸ４０．３ ＋ 抗ＰＤ１処置マウスについては表５にまとめる。
【０２４２】
【表４】
2021501801.tif 000006
【０２４３】
【表５】
2021501801.tif 000007
【０２４４】
表４に示すように、抗ＰＤ１抗体と組み合わせると、０．１ｍｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇの用量のＯＸ４０．２３は、試験終了時に腫瘍のないマウスが８０％以上であり、抗ＰＤ−１抗体単剤療法の場合には腫瘍のないマウスが１/１０であったのに比較して、抗腫瘍効果の有意な改善を示した。しかしながら、ＯＸ４０．２３（１０ｍｇ／ｋｇ）の最高用量では、腫瘍体積の平均および中央値の両方が低用量群よりも高く、試験終了時に腫瘍のないマウスは１０匹中６匹だけで、実施例１のＯＸ４０．２３単剤療法で観察された現象（“フック”効果）と同様の、高用量での抗腫瘍活性の減少が示唆された。
【０２４５】
抗ＰＤ１抗体と組み合わせたＯＸ４０．２３−ｍＩｇＧ１の有効用量は、０．１−０．３ｍｇ／ｋｇであり、これはＯＸ４０．２３−ｍＩｇＧ１単剤療法の有効用量（１−３ｍｇ／ｋｇ）の約１０分の１である。
【０２４６】
表５に示すように、抗ＰＤ１抗体と組み合わせた３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの用量のＯＸ４０．３では、試験終了時（１２４日目）に８／１０および７／１０ ＴＦマウスが得られ、１９日目にＴＧＩの中央値が７０％を超えるＣＴ２６腫瘍の増殖阻害示しし、抗ＰＤ１抗体単剤療法による、１２４日目に４／１０ ＴＦマウスを与え、１９日目のＴＧＩの中央値が３２％と比較してより強力な阻害作用を示した。ＯＸ４０．２３で見られるように、抗ＰＤ１抗体と組み合わせたとき、より低用量での効力に同様の倍数シフト(fold shift)が、ＯＸ４０．３でも観察された（図４）。
【０２４７】
実施例３：抗ＯＸ４０抗体および抗ＰＤ１抗体の同時または連続投与による抗腫瘍活性
この実施例は、抗腫瘍活性に対する抗ＯＸ４０抗体および抗ＰＤ１抗体の同時投与と逐次投与の比較を記載する。
【０２４８】
この試験で用いたマウス腫瘍モデルは、基本的に実施例１および２に記載の通りである。ＯＸ４０．２３は、腫瘍移植後５日目および１２日目に０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇでマウスに投与され、次いで、５日目、９日目および１３日目に抗ＰＤ−１を同時に投与するか、または１０日目、１４日目および１８日目に抗ＰＤ−１を遅延投与して、時間差処置を行った。
【０２４９】
図５に示すように、ＣＴ２６腫瘍の進行が速いため、１０日目に開始された抗ＰＤ−１抗体のみの遅延処置は、５日目に開始された処置と比較して、腫瘍が減少せず、腫瘍のないマウス１０匹中３匹で活性が低かった。ＯＸ４０．２３と抗ＰＤ−１抗体の同時処置により、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇのＯＸ４０．２３のそれぞれで、８／１０、６／１０および１０／１０の腫瘍のないマウスで得られた抗腫瘍活性が大幅に改善された。ＯＸ４０．２３と抗ＰＤ−１の遅延処置により、並行治療と匹敵する抗腫瘍活性が得られ、０．３ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇのＯＸ４０．２３で６／１０および７／１０の腫瘍のないマウスが得られた。０．０３ｍｇ／ｋｇのＯＸ４０．２３と抗ＰＤ−１処置の遅延の組み合わせは、対応するＯＸ４０．２３または抗ＰＤ−１単剤療法と比較して、優れた抗腫瘍活性を示さなかった。これらの結果は、抗腫瘍活性に関して、同時投与が逐次投与と類似していたことを示唆している。
【０２５０】
加えて、抗ＰＤ−１または抗ＣＴＬＡ−４と組み合わせた抗ＯＸ４０アゴニストは、この試験で用いたのと同じマウス腫瘍モデルで試験したところ、基本的に実施例１および２で記載の通りであった。ＢＭＳ−９８６１７８を単独でまたは抗ＰＤ１もしくは抗ＣＴＬＡと同時にマウスに投与した。
【０２５１】
図３８に示すように、抗ＰＤ−１または抗ＣＴＬＡ−４と組み合わせた抗ＯＸ４０アゴニストは、抗腫瘍活性の増強を示した。抗ＰＤ−１およびＢＭＳ−９８６１７８で処置した１０匹中１０匹のマウスに、腫瘍がなく、抗ＣＴＬＡ−４およびＢＭＳ−９８６１７８で処置した１０匹中８匹のマウスに腫瘍がなかった。
【０２５２】
まとめると、実施例１−３は、ＯＸ４０．２３（リガンド遮断薬アゴニスト抗体）の最大活性が、単剤療法では３ｍｇ／ｋｇ、抗ＰＤ１抗体との併用療法では０．３ｍｇ／ｋｇで達成されたことを示している。有効性の低用量への同様の倍数シフトが、リガンド非遮断抗体ＯＸ４０．３を用いたとき観察され、最大活性が単剤療法では１０ｍｇ／ｋｇで達成され、抗ＰＤ１抗体との併用療法では３ｍｇ／ｋｇで達成された。単剤療法と併用療法の両方でＯＸ４０．２３を１０ｍｇ／ｋｇで投与すると、“フック”効果（活性の低下）が観察された。しかしながら、この“フック”効果は、ＯＸ４０．３を単独または抗ＰＤ−１抗体との併用処置のいずれでもマウスでは観察されなかった。これは、ＯＸ４０．２３で観察された高用量での効果の低下がＯＸ４０Ｌ−ＯＸ４０相互作用に依存したことを示した。さらに、併用処置では、同時投与により、時差的な（staggered）レジメンに匹敵する抗腫瘍活性が得られた。
【０２５３】
実施例４：単剤として、または抗ＰＤ１抗体と組み合わせて投与されるＯＸ４０．２３の受容体占拠率
高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）の抗ＯＸ４０抗体を単剤療法または抗ＰＤ１抗体との併用療法で投与されたマウスで観察された抗腫瘍効果における“フック”効果の根底にある可能性のある機序をよりよく理解するために、ＯＸ４０受容体占拠率（ＲＯ）ならびに血液および腫瘍の微小環境におけるＣＤ４＋ Ｔ細胞上のＯＸ４０の発現を評価した。
【０２５４】
投与およびサンプリングのスケジュールを図６Ａに示す。端的には、ＢａｌｂＣマウスに１ ｘ １０６ ＣＴ２６細胞を移植した。移植後６日目に、確立されたＣＴ２６腫瘍（７５−１５０ｍｍ３）を有するマウスを、示された用量の示された単剤療法または１０ｍｇ／ｋｇで投与された抗ＰＤ１抗体との併用療法で処置した。
【０２５５】
移植後８日目および１３日目に腫瘍および血液における受容体占拠率を評価して、ＯＸ４０．２３単剤療法および抗ＰＤ−１抗体との併用による、ＣＤ４サブセットにおけるＯＸ４０受容体占拠率およびＯＸ４０表面発現の動態変化を評価した。エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）を含む注射器での心臓穿刺によって採血した。生存白血球細胞を、Histopaque（登録商標）−１０８３（Sigma−Aldrich）勾配分離により回収した。２ｍｌのHistopaque−1083を１５ｍｌのコニカル遠心チューブに加え、抗凝固処理した全血をヒストパック（histopaque）培地上に注意深く添加した。遠心分離中に、赤血球および好中球はポリスクロースによって凝集し、急速に沈殿した。ＰＢＭＣは、血漿−ヒストパック 1083の界面に残っていた。ほとんどの無関係の血小板は、洗浄工程中に低速遠心分離により除去された。腫瘍を取りだし、計量し、gentleMACSオクト解離剤（商標）(Miltenyi社)で処理し；腫瘍処理にはマウス腫瘍解離キット（Miltenyi社）を用いた。解離後、細胞懸濁液を洗浄し、濾過し、計数した。
【０２５６】
個々のマウスの血液および腫瘍からの単一細胞懸濁液を２つのプレートにデュプリケートに分けて、受容体占拠率および総受容体を別個に試験した。総受容体を試験するために、ＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳおよびＰＢＳ中、２ｍＭ ＥＤＴＡ）中で調製した過剰のＯＸ４０．２３−ビオチン抗体を終濃度１０μｇ／ｍｌで添加し、４℃にて３０分間染色した。次いで、サンプルをＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、その後０．５μｇ／ｍｌのＰＥ−ストレプトアビジンで３０分間染色した。占拠された受容体を試験するために、ＰＥ−ストレプトアビジンのみを添加し、０.５μｇ／ｍｌで３０分間染色した。その後、総サンプルおよび占拠サンプルを３回洗浄し、フローサイトメトリー抗体を用いて免疫細胞マーカーを染色した。フローサイトメトリーを行う前に、生細胞と死細胞を区別するために１μｇ／ｍｌのＤＡＰＩを加えた。抗体蛍光を、Fortessa (BD Biosciences)のフローサイトメトリーで検出し、結果をFlowJo ソフトウェア(FlowJo、LLC)を用いて分析した。受容体占拠率を、以下の式により各動物について計算した：％ ＲＯ ＝（［ＴｅｓｔのΔＭＦＩ］／［ＴｏｔａｌのΔＭＦＩ］）ｘ１００ （式中、testは、エクスビボで直接評価したときのＯＸ４０．２３が占拠する受容体の量であり、totalは、そのサンプルに追加された過剰なＯＸ４０．２３−ビオチンの添加から決定された存在する受容体の総量である）。
【０２５７】
図６Ｂに示すように、受容体占拠率は、抗体用量依存性であり、腫瘍および末梢血においてより高用量で同様の占拠率が観察された。受容体占拠率プロファイルは、単剤療法と併用療法の間で類似していた。さらに、８日目と比較して、ＯＸ４０受容体占拠率は末梢血で減少したが、腫瘍で増加し、とりわけ１３日目に３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの用量では、血中の抗ＯＸ４０抗体のクリアランスおよび腫瘍中の抗ＯＸ４０抗体の蓄積が示唆された。
【０２５８】
ＯＸ４０受容体占拠率の調節をさらに調べるために、ＯＸ４０受容体の総レベルおよび占拠レベルを個別に評価した。用量漸増全体にわたって、細胞表面上の占拠されたＯＸ４０受容体の割合は増加し続け、８日目と１３日目との間に明確な差を示さなかった（図６Ｃ）。しかしながら、細胞表面上に存在するＯＸ４０受容体の総量は、８日目（投与後２日）に０．３ｍｇ／ｋｇ用量以上で急速な下方制御を示し（０．３ｍｇ／ｋｇで約４０％の受容体占有率）、試験の１３日目まで低いままだった。これらのデータは、ＯＸ４０．２３の３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ用量で観察された高い計算された受容体占有率は、占拠されている受容体数の増加とは対照的に、総ＯＸ４０受容体の下方制御によって引き起こされている可能性が高いことを示唆している。
【０２５９】
腫瘍成長阻害割合とＯＸ４０受容体占拠率の関係は、ＯＸ４０．２３＋抗ＰＤ１の組合せで最大腫瘍成長阻害が２０〜８０％の受容体占拠率で達成されることを示すが、ＯＸ４０受容体占拠率が８０％を超えるとき、腫瘍増殖阻害の低下が観察された（図６Ｄ）。
【０２６０】
同様の実験で、ＣＴ２６腫瘍を有するマウスをＢＭＳ−９８６１７８またはアイソタイプ抗体ＩｇＧ対照で処置した。ＯＸ４０ ＲＯおよび総表面ＯＸ４０を、腫瘍サンプルのフローサイトメトリーにより、処置後の示された時点で評価した。
【０２６１】
図３４Ａ−３４Ｄに示すように、ＢＭＳ−９８６１７８処置の７日後のＣＴ２６腫瘍を有するマウスからの腫瘍サンプルは、腫瘍Ｔｒｅｇ上のＯＸ４０ ＲＯがＢＭＳ−９８６１７８の用量と相関することを示したが（図３４Ａ）、一方、腫瘍Ｔｒｅｇ上の総ＯＸ４０発現は、０．３ｍｇ／ｋｇ用量以上のＢＭＳ−９８６１７８で減少した（図３４Ｂ）。そして、ｍＡｂ占拠ＯＸ４０は経時的に（ＢＭＳ−９８６１７８処置後１０日目以降；図３４Ｃ）減少したので、ＯＸ４０表面発現が回復した（図３４Ｄ）。従って、腫瘍Ｔreg上のＯＸ４０発現は、ＣＴ２６マウスモデルにおいて高用量の抗ＢＭＳ−９８６１７８で減少した。
【０２６２】
まとめると、これらのデータは、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体と抗ＰＤ１抗体の組合せにより、抗ＰＤ−１抗体単独療法よりも治療効果が顕著に向上し、該組合せの最大抗腫瘍活性が１００％をはるかに下回るＯＸ４０受容体占拠率で達成されたことを示している。受容体占拠率が約４０％に近づいたとき、表面ＯＸ４０の大幅な下方制御が抗体投与後２日目に観察され、投与後少なくとも７日間維持された。このＯＸ４０の下方制御は、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＯＸ４０用量での組み合わせの治療活性の低下を説明している可能性がある。従って、高用量のアゴニスト抗ＯＸ４０抗体（例えば、１０ｍｇ／ｋｇ）での抗腫瘍活性の低下を最小化または防止するために、抗体用量および適用頻度の適切な選択が必要である。
【０２６３】
実施例５：ＯＸ４０．２１を投与されたヒト患者における、受容体占拠率、ＯＸ４０の表面発現および薬物暴露
この実施例は、ヒト患者において受容体占拠率が増加するときの、ＯＸ４０の表面発現の喪失との相関を示す。
【０２６４】
ＣＤ４＋ Ｔ細胞またはＴｒｅｇにおける受容体占拠率および表面ＯＸ４０発現を、ＯＸ４０．２１（アゴニスト抗ＯＸ４０抗体）を２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１６０ｍｇまたは３２０ｍｇで投与されたヒト患者において、実施例４に記載の方法（ＲＯを決定するための試験対合計ベースの式は実施例４と同じであるが、ヒト患者のＯＸ４０．２１ ＲＯの計算に適合されている）を用いて決定した。受容体占拠率は、サイクル１の８日目およびサイクル２の１日目の各用量コホートのＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＴｒｅｇで８０〜１００％であった。図７Ａに示すように、実施例４からの結果と一致して、ＯＸ４０．２１の受容体占拠率がヒト患者で増加するにつれて、ＯＸ４０の表面発現は減少する傾向があった。ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＴｒｅｇと同様の受容体占拠率がコホート全体の末梢血で観察され、２０ｍｇを超える用量で８０％を超える受容体占拠率が観察され、第２のサイクルの最初の投与（Ｃ２Ｄ１）後にプラトー（頭打ち）が観察された。
【０２６５】
薬物曝露に関しては、図７Ｂに示すように、ニボルマブと組み合わせたＯＸ４０．２１は、２０〜３２０ｍｇの範囲で曝露の用量関連増加を伴う薬物動態（ＰＫ）の線形性を示した。
【０２６６】
実施例６：個別投与スケジュール(Alternative dosing schedules)での受容体占拠率を予測するためのＰＫ−ＰＤモデル
この実施例では、ヒト患者の受容体占拠率を予測するためのＰＫ−ＰＤモデルについて記述する。薬剤濃度−時間プロファイルは、母集団ＰＫ分析を用いた線形２コンパートメントＰＫモデルによって説明された。図８Ａおよび４０に示すように、ＰＰＫモデルは、観察された濃度データの合理的な説明を提供することが明らかである。個別投与スケジュールでの個々の薬剤暴露（Cmin1：最初の投与後のトラフ濃度）は、その後のＰＫ−ＰＤモデルの開発で用いられたＰＰＫモデルに基づいて予測された。２０〜３２０ｍｇの用量範囲でＯＸ４０．２１を投与された１６名の癌患者のＲＯデータに基づいて、Ｅｍａｘモデル（以下に示す式）を用いて、薬剤濃度（Cmin1：最初の投与後のトラフ濃度）とＣ２Ｄ１での血中ＲＯとの関係を説明した。
【数１】
2021501801.tif 000008
式中、薬剤濃度はCmin1、最初の投与後のトラフ濃度であり、ＲＯｍａｘは血中ＲＯの最大割合であり、ＥＣ５０はＲＯｍａｘの５０％に対応する薬剤濃度である。この分析から、薬剤のＥＣ５０は０．０９４μｇ／ｍｌであると推定された（図８Ｂ）。試験刺激が、確立されたＰＫ−ＰＤ関係（Ｅｍａｘモデル）を用いて、ＰＫおよびＰＤの対象間変動を考慮することにより、個別投与スケジュールで血中ＲＯを予測するために行われた（図９）。
【０２６７】
種々の癌種（頭頸部癌、子宮頸癌、尿路上皮癌、結腸直腸癌）にわたるヒト腫瘍生検サンプル（Ｎ＝５）から作製されたデータに基づいて、腫瘍ＲＯも予測された（図１０Ａおよび１０Ｂ）。ここで、腫瘍ホモジネート中の総薬剤濃度および総ＯＸ４０濃度は、２０〜３２０ｍｇのＯＸ４０．２１用量で測定された。様々な用量および投与レジメンでの腫瘍ＲＯを予測するために、以下の推定(assumption)がなされた：１）腫瘍ＲＯ ＥＣ５０は血清中のものと同じである；２）腫瘍薬剤レベルは血清中のレベルと平衡している；３）観察された腫瘍−対−血清の濃度比の平均は０．２０（範囲＝０．０７−０．４７）である；そして、４）観察された平均ＯＸ４０レベルは０．１５ｎＭ（範囲＝０．０２−０．４７ｎＭ）である。予測された腫瘍ＲＯ（図１０Ａ）は、用いられたシナリオの下での血中ＲＯと一致した。しかしながら、腫瘍ＲＯは、０．４７ｎＭの高いＯＸ４０レベル、および０．０７の低い腫瘍薬剤浸透比が腫瘍ＲＯ予測に用いられたとき、血液ＲＯから逸脱した（図１０Ｂ）。
【０２６８】
モデルベースのシミュレーションは、４０ｍｇ ｑ４ｗ、４０ｍｇ ｑ８ｗ、４０ｍｇ ｑ１２ｗおよび８０ｍｇ ｑ１２ｗのＯＸ４０．２１用量から形成された曝露が、血液（例えば、約２０％〜約９０％のＲＯ、図９）および腫瘍（例えば、０．１５ｎＭの平均標的レベルおよび０．２０の平均腫瘍浸透率下で、約１０％〜約９０％のＲＯ、図１０Ａおよび１０Ｂ）の両方で広範囲の受容体占拠率をもたらす可能性があることを示し、従って、より少ない頻度の投与で同等または優れたＰＤ応答が達成されるかどうかを理解する機会を提供した。
【０２６９】
実施例７：ＯＸ４０．２１濃度と受容体占拠率との相関関係のインビトロ評価
この実施例は、Ｔ細胞におけるインビトロでの異なる濃度のＯＸ４０．２１に基づく受容体占拠率の評価を記載する。
【０２７０】
簡潔には、フィコール勾配遠心分離を用いて、全Ｔ細胞をヒト全血から精製した。Miltenyi CD4+分離キットを用いて、ＰＢＭＣからＣＤ４＋ Ｔ細胞を分離した。分離したＴ細胞を、放射線照射したＣＨＯ−ＯＫＴ３−ＣＤ３２Ａ（人工抗原提示細胞）の存在下、およびＯＸ４０．２１またはアイソタイプ対照の連続希釈液の存在下で培養した。受容体占拠率は、フローサイトメトリーを用いて、結合したＯＸ４０抗体と全表面ＯＸ４０との比率として決定された。結合した抗体は、Ｔ細胞を洗浄した後、蛍光標識抗ヒトＦｃを加えることによって評価した。総ＯＸ４０は、飽和量のＯＸ４０抗体をＴ細胞に加えることにより決定した。インキュベーション後、細胞を洗浄し、蛍光標識抗ヒトＦＣを添加して染色した。
【０２７１】
図１１Ａおよび１１Ｂに示すように、完全な受容体占拠率は、“フック”効果を反映して、（１ｎＭを超えるＯＸ４０．２１での）総表面ＯＸ４０の下方制御と相関した。漸増濃度のＯＸ４０．２１も、ＣＤ４＋ Ｔ細胞の表面にＯＸ４０を誘導し、より高濃度はＯＸ４０を下方制御した。経時的なＯＸ４０表面発現は、ＯＸ４０．２１によって誘導された“フック”効果が４日目の最高レベルのＯＸ４０発現と相関することを示した（（図１２Ａ（アイソタイプ対照）および図１２Ｂ（ＯＸ４０．２１））。
【０２７２】
効果がＯＸ４０．２１に特異的であったかどうかを決定するために、表面ＯＸ４０のレベルに対するＣＤ２８抗体の効果も評価した。簡潔には、フィコール勾配遠心分離を用いて、全Ｔ細胞をヒト全血から精製した。Miltenyi CD4+分離キットを用いて、ＣＤ４ Ｔ細胞をＰＢＭＣから分離した。分離したＴ細胞を、照射したＣＨＯ−ＯＫＴ３−ＣＤ３２Ａ（人工抗原提示細胞）の存在下、およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アイソタイプ対照または抗ＣＤ２８抗体（クローンＣＤ２８．２）の連続希釈液の存在下で、培養した。受容体占拠率は、フローサイトメトリーにより、結合したＯＸ４０抗体に対する全表面ＯＸ４０によって決定された。結合した抗体は、Ｔ細胞を洗浄した後、蛍光標識抗ヒトＦｃを加えることによって評価した。総ＯＸ４０は、飽和量の抗ＯＸ４０抗体をＴ細胞に加えることにより決定した。インキュベーション後、細胞を洗浄し、蛍光標識抗ヒトＦＣを添加して染色した。
【０２７３】
図１３Ａ、１３Ｂ、３２Ａおよび３２Ｂに示すように、抗ＣＤ２８抗体によるＴ細胞の共刺激が、より高い濃度で失われない、高レベルのＯＸ４０発現を誘導するため、ＯＸ４０．２１の全表面ＯＸ４０発現への影響はＯＸ４０．２１に特異的であった。ここで、ＣＤ１３７（図１３Ａおよび３２Ａ）およびＣＤ２８（図１３Ｂおよび３２Ｂ）に対するモノクローナル抗体は、“フック”効果に関連する全表面ＯＸ４０の下方制御を示さなかった。ここで、ＣＤ４＋ Ｔ細胞を他の共刺激アゴニスト抗体で処理したとき、ＯＸ４０表面発現の損失は観察されなかった。
【０２７４】
インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）分泌（Ｔ細胞活性化の読み出し）と受容体占有率との関係を評価するために、さらなる実験を行った。実験条件は上記と同じであるが、細胞を４日間培養した後、上清を回収した。ＩＦＮ−γの分泌を、標準的なＥＬＩＳＡ（BD Biosciences）または均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）（Cisbios）を用いて定量化した。
【０２７５】
図１４に示すように、ＯＸ４０．２１はＩＦＮ−γの分泌により反映されるようにＴ細胞活性化を誘導した。最大のＩＦＮ−γは約２０％の受容体占拠率で得られた。“フック”効果と一致して、ＩＦＮ−γ分泌は１００％受容体占拠率で減少した。
【０２７６】
Ｔ細胞増殖と受容体占拠率の関係も評価した。実験条件は上記と同じであるが、細胞を４日間培養した後、３［Ｈ］−チミジンの取り込みを細胞に１６時間加えることにより細胞増殖を試験し、シンチレーションをカウントした。
【０２７７】
図１５Ａ−１５Ｃに示すように、ＯＸ４０．２１はＴ細胞増殖を誘発し、最大増殖が２０−５０％の受容体占拠率で得られた。Ｔ細胞活性化（ＣＤ４＋ Ｔ細胞上のＣＤ２５の幾何平均蛍光強度［ＧＭＦＩ］で測定）は、ＢＭＳ−９８６１７８の最低用量で達成され、４０％ＯＸ４０ ＲＯでプラトーに達した（図３１）。まとめると、これらのデータは、ＯＸ４０表面発現、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン産生の点からのＯＸ４０．２１の最大活性が、約２０％の受容体占拠率から得られることを示唆している。１００％の受容体占拠率では、Ｔ細胞の機能性／活性化が低下する“フック”効果が観察される。
【０２７８】
ＢＭＳ−９８６１７８で処理したＴ細胞におけるＴｒｅｇの抑制を評価するために、さらなる実験を行った。ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞をＴｒｅｇに分化させ、Dynabeads（αＣＤ３／αＣＤ２８； Thermo Fisher Scientific）、ラパマイシンおよびインターロイキン（ＩＬ）−２を用いて増殖させた。図３３Ａは、Ｔｒｅｇ抑制アッセイを示す。Ｔｒｅｇ表現型を、本明細書に記載のフローサイトメトリーによって確認した。精製したＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞を、±Ｔｒｅｇ（５：１）＋ＢＭＳ−９８６１７８で培養した。次に、ＩＬ−２分泌をサイトメトリービーズアレイアッセイで測定した。
【０２７９】
図３３Ｂおよび３３Ｆに示すように、ＢＭＳ−９８６１７８で処理したＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞は、Ｔregの存在下でＩＬ−２を産生し、ＢＭＳ−９８６１７８を介したＯＸ４０アゴニストがＴｒｅｇ抑制を緩和したことを示している。Ｔｒｅｇの存在下でのＣＤ４＋Ｔ細胞（図３３Ｂ）またはＣＤ８＋Ｔ細胞（図３３Ｆ）によるＩＬ−２産生は、フック効果を示した。一方、対応する培養物からのＴregにおけるＯＸ４０発現（図３３Ｄおよび３３Ｈ）は、約１μｇ／ｍｌのＢＭＳ−９８６１７８および１μｇ／ｍｌ以上のＢＭＳ−９８６１７８で最大に達し、ＯＸ４０表面発現が減少した。
【０２８０】
さらに、刺激されたＣＤ４＋ Ｔ細胞のみによるＩＬ−２産生（図３３Ｃ）もフック効果を示した。また、単独で培養したＣＤ４＋ Ｔ細胞（図３３Ｅ）およびＣＤ８＋ Ｔ細胞（図３３Ｉ）は、０．３７μｇ／ｍＬのＢＭＳ−９８６１７８で最大ＯＸ４０表面発現を示し、１μｇ／ｍＬ以上のＢＭＳ−９８６１７８で減少したＯＸ４０発現を示した。一方で、刺激されたＣＤ８＋ Ｔ細胞は、ＢＭＳ−９８６１７８の用量に関係なく最大のＩＬ−２産生を示した（図３３Ｇ）。
【０２８１】
これらのデータは、ＢＭＳ−９８６１７８がＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞のＴｒｅｇ抑制を緩和し、用量に対してフック効果があることを示す。
【０２８２】
実施例８：可溶性ＯＸ４０と受容体占拠率との相関関係のインビトロ評価
可溶性ＯＸ４０（ｓＯＸ４０）に特異的なＥＬＩＳＡが開発された（図１６）。簡潔には、アッセイでは、非遮断ＯＸ４０モノクローナル抗体（ＯＸ４０．８）を最初にメソスケールディスカバリー（ＭＳＤ）プレートに固定する。０．５％ＢＳＡを含むＰＢＳでプレートをブロッキングした後、培養上清をプレートに適用し、インキュベートした。洗浄後、捕捉されたｓＯＸ４０を、予め最適化された濃度の羊ポリクローナル抗体ビオチンをＯＸ４０（R&D System）に結合させて検出される。インキュベーションおよび洗浄後、Sulfo-tagストレプトアビジンを添加して、電気化学発光によってプレート上に固定されたｓＯＸ４０−抗体複合体を検出する。このアッセイを用いて、ｓＯＸ４０レベルと受容体占拠率の関係を評価した。細胞を、実施例７に記載の条件と同じ条件下で培養したが、培養の４日後、上清を収集し、アッセイを用いてｓＯＸ４０を定量した。
【０２８３】
図１７および１８に示すように、ＯＸ４０．２１の濃度を増加させると、ＣＤ４＋ Ｔ細胞の表面上でのＯＸ４０発現および上清中のｓＯＸ４０が誘導された。ｓＯＸ４０の喪失は、１００％受容体占拠率（“フック”効果）での細胞表面ＯＸ４０の喪失と相関した。このデータは、ｓＯＸ４０がＯＸ４０アゴニストおよび／またはＴ細胞活性化の読み出しとして用い得ることを示している。ヒト患者においても、ｓＯＸ４０レベルは、ＯＸ４０．２１単剤療法およびＯＸ４０．２１＋ニボルマブでの処置により増加した（図１９）。
【０２８４】
抗ＣＤ２８処理されたＣＤ４＋ Ｔ細胞によって放出された可溶性ＯＸ４０（ｓＯＸ４０）を、上記のカスタム開発されたＥＬＩＳＡを用いて測定した。図３５Ａに示すように、ＢＭＳ−９８６１７８で処置された細胞で観察されたこのフック効果はユニークであり、抗ＣＤ２８は高用量で最大に達した後に用量依存的にｓＯＸ４０放出を誘発した。さらに、図３５Ｂに示すように、ＣＤ４＋ Ｔ細胞により放出されたｓＯＸ４０の大部分はＢＭＳ−９８６１７８に結合した。従って、ＢＭＳ−９８６１７８を介したＴ細胞の活性化はｓＯＸ４０の放出を誘導し、ＯＸ４０ ＲＯが１００％に近づくにつれて減少した。
【０２８５】
総ｓＯＸ４０およびＯＸ４０．２１によって結合されたｓＯＸ４０も決定した。簡潔には、フィコール勾配遠心分離を用いて、全Ｔ細胞をヒト全血から精製した。ＣＤ４＋ Ｔ細胞を、Miltenyi ＣＤ４＋分離キットを用いてＰＢＭＣから分離した。分離したＴ細胞を、照射したＣＨＯ−ＯＫＴ３−ＣＤ３２Ａ（人工抗原提示細胞）の存在下で培養し、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アイソタイプ対照または抗ＣＤ２８（クローン２８．２）の連続希釈で試験した。予め規定された時点で、上清を収集した。上記のＥＬＩＳＡを用いて、可溶性ＯＸ４０を定量化した。
【０２８６】
図２０Ａおよび２０Ｂに示すように、ｓＯＸ４０のレベルはＯＸ４０の細胞表面発現と相関し、ＯＸ４０の切断は細胞活性化依存性であるがＯＸ４０アゴニストに特異的ではなく、ＯＸ４０．２１に結合した完全なｓＯＸ４０は総可溶性ＯＸ４０のレベルの低下と相関している（すなわち、ｓＯＸ４０に対する“フック”効果が検出されたときにｓＯＸ４０が１００％結合している）。
【０２８７】
次に、抗ＣＤ２８抗体がｓＯＸ４０レベルに対するＯＸ４０．２１を介した“フック”効果を救済する能力を試験した。フィコール勾配遠心分離を用いて、全Ｔ細胞をヒト全血から精製した。ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、Miltenyi ＣＤ４＋分離キットを用いてＰＢＭＣから分離した。分離されたＴ細胞を、照射されたＣＨＯ−ＯＫＴ３−ＣＤ３２Ａの存在下およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体の連続希釈、アイソタイプ対照単独または抗ＣＤ２８抗体（クローンＣＤ２８．２）と一定濃度の組合せの存在下で培養した。別の例では、一定濃度の抗ＣＤ２８抗体を単独で用い、ＯＸ４０．２１の連続希釈またはアイソタイプ対照を７２時間（３Ｄ）後に１８時間加えた。上清は、予め定義された時間（Ｄ４）に収集した。上記のＭＳＤ ＥＬＩＳＡを用いて、可溶性ＯＸ４０を定量化した。
【０２８８】
図２１Ａおよび２１Ｂに示すように、ＯＸ４０．２１および抗ＣＤ２８抗体による細胞の共刺激は、ｓＯＸ４０レベルに対して相加効果を有した。しかしながら、ＣＤ２８共刺激は、ｓＯＸ４０に対するＯＸ４０．２１誘発の“フック”効果を救わなかった。ＯＸ４０．２１での抗ＣＤ２８抗体によって予め活性化された細胞の処理は、ｓＯＸ４０放出を誘発し、ｓＯＸ４０レベルに対する“フック”効果を観察するのに十分であった。まとめると、このデータは、ｓＯＸ４０が、インビトロでおよびチェックポイント遮断剤と組み合わせた免疫刺激性アゴニストで処置された患者の両方で、初代ヒトＴ細胞活性化のバイオマーカーとして用い得ることを示す。ｓＯＸ４０の測定は、免疫刺激受容体に結合するアゴニスト抗体を単剤療法として、またはチェックポイント遮断と組み合わせて受ける患者の最適な用量およびスケジュールを決定するための臨床バイオマーカーとして用い得る。さらに、ｓＯＸ４０は最適な２０−８０％の範囲を超えるＲＯにつながる濃度でも失われるため、ｓＯＸ４０の産生は、ＯＸ４０．２１の２０−４０％ ＲＯを超える細胞表面からのＯＸ４０の損失を説明できる機序ではない。これは、細胞表面およびｓＯＸ４０が同様の方法で調節されていることを示す。
【０２８９】
実施例９：ＯＸ４０内在化のインビトロ評価
この実施例は、遮断抗体（ＯＸ４０．２１）および非遮断抗体（ＯＸ４０．８）による処置後のＯＸ４０の内在化を評価した。アッセイの一般的な概略図を図２２に示す。
【０２９０】
より具体的には、インビトロで生成されたＣＤ４＋ Ｔregを、ＣＤ３／ＣＤ２８ダイナビーズで４８時間活性化した。ＯＸ４０．２１の連続希釈、非遮断ＯＸ４０．８およびアイソタイプ対照を、細胞と共に氷上で２時間インキュベートし、その後、ｐＨ感受性共役抗ヒトＦｃを、３７℃で２時間添加した。固定後、細胞を内在化についてArrayScanで分析した。
【０２９１】
図２３に示すように、ＯＸ４０．２１およびＯＸ４０．８は、Ｔｒｅｇでの架橋により内在化した。
【０２９２】
さらに、ＢＭＳ−９８６１７８の２つの異なる用量（０．０１ｎＭおよび１００ｎＭ）に応じたＯＸ４０の内在化を測定した。このアッセイでは、活性化されたＴｒｅｇまたはＣＤ４＋ Ｔ細胞をアイソタイプ対照ｍＡｂまたはＢＭＳ−９８６１７８と共にインキュベートした。次いで、ｐＨ感受性色素（pHrodo）共役抗Ｆｃを添加した。その後、ArrayScan VTI（Thermo Fisher Scientific）での読み取り用に細胞を固定した。
【０２９３】
図３６に示すように、ＴｒｅｇまたはＣＤ４＋ Ｔ細胞を、０．０１または１００ｎＭのＢＭＳ−９８６１７８内在化薬物結合ＯＸ４０で処理した。
【０２９４】
実施例１０：ＯＸ４０．２１のアゴニスト活性に対するＦｃγＲ介在架橋の効果
この実施例は、ＯＸ４０．２１のアゴニスト活性に対するＦｃγＲ介在性架橋の効果を示す。簡潔には、ＣＨＯ細胞を、それぞれＯＫＴ３ｓｃＦｖおよびｈＦｃγＲと記載される、ヒトＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２ａ−Ｈ１３１）のＨ１３１アレルあり（＋ＦｃγＲ）またはなし（−ＦｃγＲ）のいずれかで抗ヒトアゴニストＣＤ３クローンであるＯＫＴ３の細胞膜結合ｓｃＦｖバージョンを発現するように設計されている。ＣＨＯ細胞を放射線照射して増殖を制限し、種々の量のＯＸ４０．２１を含む初代ヒトＣＤ４ Ｔ細胞と共に培養した。Ｔ細胞増殖および初代ヒトＣＤ４ Ｔ細胞によるＩＦＮ−γの分泌を４日間にわたって評価した。
【０２９５】
図２４に示すように、ＢＭＳ−９８６１７８での処理は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖およびＩＦＮ−γ産生を用量依存的かつ架橋依存的に誘導した。ＦｃγＲを介した架橋は、ＩＦＮ−γ分泌およびＴ細胞増殖の両方におけるＢＭＳ−９８６１７８を介した増加を促進した。しかしながら、ＣＨＯ細胞がＣＤ３２ａ（ＣＤ３２ａ−Ｈ１３１）を欠くとき、増殖およびＩＦＮ−γはなく、ＢＭＳ−９８６１７８活性にはＦｃγＲを介した架橋が必要であることを示している。
【０２９６】
実施例１１：抗ＯＸ４０抗体単剤療法および抗ＰＤ１併用療法により誘発される末梢薬力学マーカーの特徴付け
この実施例は、ＯＸ４０．２３単剤療法またはＯＸ４０．２３と抗ＰＤ１抗体との併用によるマウスにおける、ならびに抗ＰＤ１抗体（ニボルマブ）と組み合わせたＯＸ４０．２１で処置されたヒト患者における、特定の薬力学マーカーの誘導を示している。
【０２９７】
確立されたＣＴ２６腫瘍を有するマウスを、ＯＸ４０．２３単剤療法または抗ＰＤ−１抗体との併用のいずれかによって処置した。ＯＸ４０．２３は０．０１ｍｇ／ｋｇから開始され、９０ｍｇ／ｋｇまで３倍増加させた。抗ＰＤ−１抗体を、１０ｍｇ／ｋｇ（または２００ｕｇ／マウスの均一用量）で投与した。ＯＸ４０．２３および抗ＰＤ１抗体を、６日目、１３日目および２０日目に同じスケジュールで投与した。５０ｕｌの全血を、８日目、１２日目、１５日目および１９日目に個々のマウスから採血した。フロー分析を行って、ＯＸ４０．２３−ｍＩｇＧ１±抗ＰＤ−１による処置後のＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞における末梢薬力学的マーカー（ＩＣＯＳ、ＦＯＸＰ３、Ｋｉ６７およびＣＤ４４）の誘導を決定した。図２５は、投薬スケジュールの概略を示す。
【０２９８】
図２６Ａに示すように、ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞の両方が、ＣＤ４エフェクターＴ細胞（Ｆｏｘｐ３−）とＣＤ８＋ Ｔ細胞の両方で活性化マーカー（ＩＣＯＳ、ＣＤ４４、Ｋｉ６７）の用量依存的な上方制御を示し、高用量で下方制御を示した（“フック”効果）。
【０２９９】
同様に、ＯＸ４０．２１＋抗ＰＤ１抗体（ニボルマブ）で処置されたヒト患者では、併用療法により増殖（Ｋｉ６７＋）ＣＤ８＋ Ｔ細胞が増加し（図２６Ｂ）、腫瘍間質のＦＯＸＰ３＋細胞が減少した（図２６Ｃ）。
【０３００】
患者の腫瘍サンプルの免疫組織化学分析の結果は一貫していた。例えば、図２６Ｄに示すように、３種類の前治療（メドロキシプロゲステロン、レトロゾール、カルボプラチンおよびパクリタキセル）を受け、ＯＸ４０．２１（３２０ｍｇ）＋ニボルマブ（２４０ｍｇ）で部分奏効を示した６８歳の子宮内膜癌の女性患者のサンプルは、Ｋｉ６７＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞数の増加を示した。併用療法はまた、安定した疾患を達成した卵巣癌患者からの腫瘍サンプル中のＦｏｘＰ３＋細胞を減少させた。図２６Ｅに示すように、ＦｏｘＰ３＋細胞の減少は、以前に手術と化学療法（カルボプラチンおよびパクリタキセル）を受けた卵巣漿液性癌の５９歳の女性患者（上パネル）と、以前に手術と化学療法（カルボプラチンおよびパクリタキセル）を受けた卵巣腺癌の７２歳の患者（下パネル）で観察された。
【０３０１】
実施例１２：初期Ｔ細胞活性化マーカーと抗ＯＸ４０および抗ＰＤ１併用療法に対する腫瘍応答との相関関係
この実施例は、初期Ｔ細胞活性化マーカーと抗ＯＸ４０（ＯＸ４０．２３）および抗ＰＤ１併用療法に対する腫瘍応答との間の相関を評価した。
【０３０２】
マウスを、２０日目の腫瘍進行状態に基づいて２つのグループに分けた。腫瘍体積が１００ｍｍ３を超えるマウスは非応答者と見なし、腫瘍体積が１００ｍｍ３以下のマウスは応答と見なした。
【０３０３】
図２７Ａおよび２７Ｂに示すように、腫瘍体積の明確な分離がなかったとき、１２日目のＣＤ４４＋ＣＤ８＋およびＫｉ６７＋ ＣＤ８＋ Ｔ細胞の割合は、後続の腫瘍応答と正の相関があり、併用療法の最適な用量およびスケジュールを定義し得る。腫瘍負荷の最大％減少による％Ｋｉ６７＋ ＣＤ８＋ Ｔ細胞の絶対変化としてプロットされたデータもまた、腫瘍負荷の減少と増殖性ＣＤ８＋ Ｔ細胞との間の正の相関を示した（図２７Ｃ）。同様に、ＯＸ４０．２１＋抗ＰＤ１抗体（ニボルマブ）で処置したヒト患者では、抗腫瘍活性は増殖性Ｋｉ６７＋ ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増加と相関していた（図２７Ｄ）。
【０３０４】
実施例１３：抗ＩＣＯＳ抗体の漸増用量の腫瘍増殖に対する効果
本実施例は、抗ＩＣＯＳ＋抗ＰＤ１併用療法において、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体が高用量で有効性の低下（すなわち、“フック効果”）を示すことを実証している。
【０３０５】
簡潔には、確立されたＣＴ２６腫瘍を有するマウス（平均体重約２０ｍｇ）を、抗ＰＤ−１単剤療法または抗ＩＣＯＳ抗体との併用療法のいずれかによって処置した。抗ＩＣＯＳの用量漸増は、０．１ｍｇ／ｋｇから開始し、１０ｍｇ／ｋｇ（または約２００μｇ／マウスの均一用量の最大用量）まで３倍で増加させた。抗ＰＤ−１抗体を１０ｍｇ／ｋｇ（または約２００μｇ／マウスの均一用量の最大用量）で投与した。抗ＩＣＯＳおよび抗ＰＤ１抗体を、腫瘍移植後に同じスケジュールで（すなわち、７日目から開始して４日毎に）投与した。
【０３０６】
図２８に示すように、抗ＩＣＯＳ＋抗ＰＤ１併用療法における最大腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を、試験された最大用量（１０ｍｇ／ｋｇ）よりも低用量の抗ＩＣＯＳ抗体（３ｍｇ／ｋｇ）で観察し、３ｍｇ／ｋｇを超える用量でのＴＧＩの減少を示した。これは、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体と同様に、ＩＣＯＳなどの他の免疫刺激受容体を標的とするアゴニスト抗体が“フック効果”を示し、飽和以下の用量で最大の効果を達成することを示唆している。
【０３０７】
実施例１４：薬物動態学的／薬力学的（ＰＫ／ＰＤ）ベースの方法を用いてＯＸ４０．２１のヒトでの最初の開始用量の選択
腫瘍性薬剤のヒトへの初回投与（ＦＩＨ）の用量は、慣習的に国際調和会議ガイドラインに基づいており、適切なＦＩＨ開始用量は非げっ歯動物からの最高の非重篤毒性用量（ＨＮＳＴＤ）の１／６であることが推奨されているか、または免疫アゴニスト特性を備えたバイオ医薬品の推定最小薬理作用量（ＭＡＢＥＬ）であることが推奨されている。しかしながら、ＭＡＢＥＬベースのアプローチでは、患者に臨床上の利点を提供できない。本実施例は、抗腫瘍効果、すなわち、意図された薬理効果に基づいて、ＦＩＨ開始用量を選択するためのＰＫ／ＰＤベースのアプローチを記載する。
【０３０８】
簡潔には、フローサイトメトリーを用いて、ヒトおよびマウスの活性化Ｔ細胞におけるインビトロ結合最大有効濃度の半値（ＥＣ５０）を決定した。マウスでのＰＫ／ＰＤ決定には、ＯＸ４０．２１がマウスＯＸ４０に結合しないため、マウスサロゲート抗体（マウスＩｇＧ１（ｍＩｇＧ１）およびＩｇＧ２ａ（ｍＩｇＧ２ａ）アイソタイプとして再フォーマットされたハムスター抗マウスＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体）を用いた。抗腫瘍効果について、腫瘍成長阻害割合（％ＴＧＩ）は、マウスＭＣ３８およびＣＴ２６結腸腺癌モデルを用いて、処置群と対照群の腫瘍増殖曲線下の面積の中央値から決定した。ＰＫ試験を、サロゲート抗体およびＯＸ４０．２１を用いてカニクイザルで行った。ヒトＰＫを単純なアロメトリーを用いてサルのデータから予測し、クリアランスおよび分布の定常状態体積（Ｖｓｓ）の指数はそれぞれ０．８５および１であった。インビトロでのサイトカイン放出を乾燥コートフォーマットを用いて評価した（例えば、Finco et al. Cytokine 2014;66:143-55参照）。アデノウイルス血清型５サル免疫不全ウイルス（Ａｄ５−ＳＩＶ）ワクチン接種試験を、カニクイザルでＯＸ４０．２１を用いて、１日目およい２８日目に投与した。１か月の反復投与毒性試験を、カニクイザルで実施し、該サルは、ＯＸ４０．２１を３０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇおよび１２０ｍｇ／ｋｇで３０分間の静脈内（ｉｖ）注射で週１回、５週間投与した。
【０３０９】
表６に示すように、マウスサロゲート抗体は、ＯＸ４０．２１のＥＣ５０値と同様の値の結合を示した。
【０３１０】
【表６】
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【０３１１】
次に、ＰＫ／ＰＤ分析を行って、最初の週の最大薬物濃度（Ｃmax（最初の週））または曲線下面積（ＡＵＣ０−最初の週）と抗腫瘍効果を相関させた。ＣＴ２６モデルと比較して抗ＯＸ４０処置に対する感度が低いため、ヒト有効用量予測を目的とし、幅広い患者カバレッジに対してより保守的になるように、分析はＭＣ３８モデルの抗腫瘍効果に集中した。マウスサロゲートのＰＫは、ハムスター由来のため、第２週に免疫原性の影響を大きく受けたため、第１週のＣmaxおよびＡＵＣデータを、アゴニストの薬理作用がＣmaxまたは初期の薬物曝露によって駆動されると仮定して、有効性試験に用いる種々のレジメン下でシミュレーションした。マウスＭＣ３８腫瘍モデルにおけるｍＩｇＧ１およびｍＩｇＧ２モノクローナル抗体の曝露応答関係を図２９に示す。
【０３１２】
対応するＰＫ試験もカニクイザルで行い、その結果を表７にまとめた。
【０３１３】
【表７】
2021501801.tif 000010
【０３１４】
上記のマウスおよびサルのデータに基づいて、予測されるヒトＴ１／２ は９日であった。ヒトとマウスで同じＡＵＣ０−最初の週およびＣｍａｘ（最初の週）を達成することにより、ＯＸ４０．２１のヒト有効用量は１ｍｇ／ｋｇと予測された。ヒト開始用量を、臨床的に適切な投与量をより効果的に達成するために、予測される有効用量の４倍（すなわち、０．２５ｍｇ／ｋｇまたは体重が８０ｋｇの場合は２０ｍｇ）になるように選択した。
【０３１５】
以下ように、ＦＩＨ開始用量の選択を通知するさらなるサポートデータを取得した：
・ＯＸ４０．２１によるＡｄ５−ＳＩＶワクチン接種試験は、１日目および２８日目にサルに投与された場合、４ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与量でワクチン誘発性Ｔ細胞応答の最小限の増強を示した。
・ＯＸ４０．２１は、試験された最高濃度（１０μｇ／ウェルまたは０．３ｍＬのインキュベーション容量を用いて概算すると３３μｇ／ｍＬ）のドライコートフォーマットを用いて、サイトカイン放出を誘発するか、またはヒト末梢血単核細胞の発現マーカーの活性化を増加させなかった。
・サルでの１か月の反復投与毒性試験のＨＮＳＴＤまたは非有害事象レベルを、１２０ｍｇ／ｋｇ／週であると決定し、６分の１のＨＮＳＴＤ用量は１７ｍｇ／ｋｇ（曝露ベース）または２０ｍｇ／ｋｇ（体重ベース）と計算した。
・文献で報告されている別のマウス抗ヒトＯＸ４０アゴニストｍＡｂの臨床経験は、試験された最高用量（２ｍｇ／ｋｇ）のヒトの薬物濃度（約４０μｇ／ｍＬ）が投与の最初の週を通して十分に維持されたにもかかわらず、癌患者に急性毒性を示さなかった(Curti et al., cancer Res 2013;73:7189-98参照)。２ｍｇ／ｋｇで、ヒトＣｍａｘは、約８０μｇ／ｍＬ、または報告されているインビトロ結合ＥＣ５０ （４８ｎｇ／ｍＬまたは０．３ｎＭ）の１，５００倍を超えていた。
【０３１６】
表８は、ＰＫ／ＰＤｂ−スのＦＩＨ開始用量でのＣｍａｘマージンおよび上記のさらなるサポートデータをまとめる。
【０３１７】
【表８】
2021501801.tif 000011
【０３１８】
まとめると、意図した薬理効果としての抗腫瘍効果に焦点を当てたＰＫ／ＰＤベースのアプローチを、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体ＯＸ４０．２１のＦＩＨ開始用量を選択し、正当化するために成功裏に用いた。選択したＦＩＨ開始用量（８０ｋｇの体重を想定して２０ｍｇ）は、前臨床のインビトロおよびインビボ毒性学データによってサポートされていた。ＦＩＨ開始用量選択のＰＫ／ＰＤベースの戦略は、インビトロおよびインビボ毒性学の結果とともに、治療用量以下の投与を受けるがん患者の数を最小限に抑えながら、適切な安全性を確保する意図を有する。
【０３１９】
実施例１５：ＯＸ４０．２１単剤療法およびＯＸ４０．２１＋ニボルマブの用量漸増治験における患者の特徴および処置関連の有害事象
本実施例は、用量漸増試験における、ＯＸ４０．２１単剤療法（ｎ＝２０）Ｑ２ＷおよびＯＸ４０．２１＋ニボルマブ併用療法（ｎ＝３９）Ｑ２Ｗを投与中の患者のベースライン人口統計、以前の治療、腫瘍の種類および有害事象をまとめている。患者の特徴を表９にまとめ、有害事象を表１０にまとめる。
【０３２０】
【表９】
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【０３２１】
【表１０】
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【０３２２】
最大耐量に達せず、処置関連の死亡はなかった。ＯＸ４０．２１＋ニボルマブの安全性プロファイルは、ニボルマブ単剤療法のものと同様であった。
【０３２３】
ＯＸ４０共刺激の第１／２ａ相治験におけるＯＸ４０受容体調節
進行性固形腫瘍患者におけるアゴニストＢＭＳ−９８６１７８ ± ニボルマブ(NIVO)またはイピリムマブ(IPI)
【０３２４】
実施例１６：併用療法と比較した単剤療法の薬物動態
以下の実施例は、図３９に示される試験設計の概略図に従う。ヒトに、ＢＭＳ−９８６１７８の単剤療法用量、２４０ｍｇでのＢＭＳ−９８６１７８およびニボルマブ（IV Q2W）の併用用量漸増、または１ｍｇ／ｋｇでのＢＭＳ−９８６１７８およびイピリムマブ（IV Q3W）の併用用量漸増が与えた。図３９の基準を満たした患者が治験に適格であった。
【０３２５】
併用療法と比較した単剤療法の薬物動態を評価するために、Cyto-Chex BCT（Streck）で患者の血液サンプルを集めた。赤血球溶解後、表面マーカーに特異的な蛍光標識抗体を用いて細胞を染色した。表面染色後、サンプルを固定、透過処理し、次いで細胞内マーカーに対する抗体で染色した。染色されたサンプルをBeckman Coulter CytoFlex Sフローサイトメーターで取得し、得られたデータをFlowJoソフトウェアを用いて分析した。
【０３２６】
この治験では、９０名の患者が処置された（ＢＭＳ−９８６１７８単剤療法、ｎ＝２０、ＢＭＳ−９８６１７８＋ＮＩＶＯ、ｎ＝３８、ＢＭＳ−９８６１７８＋ＩＰＩ、ｎ＝３２）。図４０に示すように、ＢＭＳ−９８６１７８単独またはニボルマブもしくはイピリムマブとの併用のＰＫは、２０〜３２０ｍｇのＢＭＳ−９８６１７８用量で直線的であった。従って、ＢＭＳ−９８６１７８の濃度時間プロファイルは、線形２コンパートメントゼロ次ＩＶ注射モデルによって一次除去でよく説明された。
【０３２７】
実施例１７：単剤療法および併用療法（アゴニストＢＭＳ−９８６１７８±ニボルマブ（ＮＩＶＯ）またはイピリムマブ（ＩＰＩ））の全血ＯＸ４０受容体占拠率（ＲＯ）評価
全血ＯＸ４０受容体占拠率（ＲＯ）を評価するために、患者の血液サンプルを飽和用量のＢＭＳ−９８６１７８とインキュベートして総ＯＸ４０発現を測定するか、またはＢＭＳ−９８６１７８とのインキュベーションなしで結合した薬物を測定し、その後表面マーカーＣ１Ｄ１、Ｃ１Ｄ８、Ｃ２Ｄ１またはＣ５Ｄ１を染色し、フローサイトメトリー分析を行った。
【０３２８】
図４１に示すように、ＢＭＳ−９８６１７８ ２０ｍｇで処置された患者では、Ｔｒｅｇの末梢ＯＸ４０ ＲＯが飽和に近づき、４０ｍｇ以上の用量で飽和した。
【０３２９】
次に、４０ｍｇ以上のＢＭＳ−９８６１７８で処置された患者に末梢Ｔｒｅｇの下方制御があったかどうかを評価した。末梢Ｔｒｅｇの総ＯＸ４０を試験するために、メソスケールディスカバリー（ＭＳＤ）プラットフォームを用いて、患者の血清の総ｓＯＸ４０を測定するアッセイを開発および検証（目的に適合）した。ＭＳＤゴールド９６ウェルストレプトアビジンプレートをビオチニル化捕捉抗体でコーティングし、次いで患者の血清をインキュベートした。ルテニル化検出抗体を用いて、捕捉されたｓＯＸ４０を検出し、電気化学発光をＭＳＤ ＳＥＣＴＯＲ機器で測定した。
【０３３０】
図４２に示すように、Ｔｒｅｇの表面上のＯＸ４０発現の下方制御は、ＲＯが飽和に近づいた４０ｍｇ以上のＢＭＳ−９８６１７８で処置された患者で観察された。
【０３３１】
次に、この傾向がＢＭＳ−９８６１７８単剤療法またはＢＭＳ−９８６１７８とニボルマブもしくはイピリムマブの併用療法で処置された個々の患者でも観察されたかどうかが判断された。図４３Ａおよび４３Ｂに示すように、Ｔ細胞活性化のマーカーであるｓＯＸ４０は、ＢＭＳ−９８６１７８±ニボルマブまたはイピリムマブで処置された患者に時間−および用量−依存的な変化を示し、ＢＭＳ−９８６１７８によるＯＸ４０標的結合が確認された。１６０ｍｇ以上のＢＭＳ−９８６１７８で処置された患者のｓＯＸ４０レベルはほぼ飽和状態になり、ＲＯ結果（図４２）および前臨床観察（データ示さず）と一致した。
【０３３２】
実施例１８：単剤療法および併用療法（アゴニスト ＢＭＳ−９８６１７８ ± ニボルマブ(ＮＩＶＯ)またはイピリムマブ(ＩＰＩ))の血清サイトカイン発現
インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）およびＩＰ−１０を、ＢＭＳ−９８６１７８単剤療法および併用療法で処置された患者において測定した。簡潔には、患者血清中のＩＦＮ−γおよびＩＰ−１０を、Luminexベースの技術を用いて測定した（カスタマイズされた多重分析物プロファイル［ＭＡＰ］パネルといくつかのヒト炎症ＭＡＰパネル［無数のＲＢＭ］の組合せ）。図４４Ａおよび４４Ｂに示すように、ＢＭＳ−９８６１７８±ＮＩＶＯまたはＩＰＩは、Ｔｈ１関連サイトカインＩＦＮ−γ（図４４Ａ）および炎症誘発性サイトカイン１０ｋＤａのＩＦＮ−γ誘導されたタンパク質ＩＰ−１０（図４４Ｂ）の産生を刺激し、末梢Ｔ細胞活性化を示唆している。さらに、ＢＭＳ−９８６１７８＋ＮＩＶＯまたはＩＰＩを投与された患者の大部分は、ＩＦＮ−γおよびＩＰ−１０産生の大幅な増加を示した。
【０３３３】
また、ＢＭＳ−９８６１７８±ＮＩＶＯまたはＩＰＩは、増殖（Ｋｉ６７＋）ＣＤ４＋およびＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞のレベルを増加させることも観察された。図４５Ａおよび４５Ｂに示すように、ＢＭＳ−９８６１７８±ＮＩＶＯまたはＩＰＩで処置された患者は、増殖性（Ｋｉ６７＋）ＣＤ４＋エフェクターメモリーＴ細胞（図４５Ａ）およびＣＤ８＋ ＰＤ−１ ＋ターミナルエフェクターメモリーＴ細胞（図４５Ｂ）の増加を示した。したがって、ＢＭＳ−９８６１７８ ＋ ＮＩＶＯまたはＩＰＩは、ＢＭＳ−９８６１７８単独でよりも多くの患者で、増殖ＣＤ４＋およびＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞の大幅な増加を示した。
【０３３４】
上記に提示されたデータに基づいて、特定のメカニズムに限定されることなく、ＢＭＳ−９８６１７８用量、ＯＸ４０ ＲＯ、ＯＸ４０発現およびＰＤ調節の間の関係の概略モデルを図３７に示す。
【０３３５】
実施例１９：ヒト総可溶性ＯＸ４０バイオマーカーアッセイの開発および検証
実施例１７に記載されるように、患者の血清中の総ｓＯＸ４０を測定するためのアッセイを開発し、そしてメソスケールディスカバリー（ＭＳＤ）プラットフォームを用いて検証した。精度と正確性、希釈の直線性／並列性、特異性（マトリックス効果および薬物相互干渉）、安定性、選択性を含む、目的に合ったバイオマーカー検証を用いてアッセイを検証した。
【０３３６】
検証結果は、図４６Ａから４６Ｈおよび表１１−１２に示される。示されているように、ヒト血清総ｓＯＸ４０のアッセイ範囲は、２５−２０，０００ｐｇ／ｍＬであった。７つの標準曲線ポイント（ｎ＝２０）の精度は、９８〜１０３％内であり、ＣＶは８％以下であった。ＱＣパフォーマンスは許容範囲内であった。ＣＶはＬＱＣ、ＭＱＣ、ＨＱＣおよびＵＬＯＱで１４％未満であった（ＬＬＯＱで２６％のＣＶ）。表１１および１２。アッセイキャリブレーターは、ＢＭＳ−９８６１７８と市販のキャリブレーター（すなわち、ＯＸ４０−Ｈｉｓ_ＳｉｎｏおよびＯＸ４０−Ｆｃ_Ｒ＆Ｄ）との間の並列性を示した（図４６Ａ）。２つの異なる抗体ペア間には、良好な血清ＯＸ４０の相関があった（図４６Ｂ）。希釈直線性／平行性、特異性、安定性および選択性はすべて、予想される濃度の±２５％以内に回復した（図４６Ｃから４６Ｅ）。ＯＸ４０の貯蔵安定性および凍結融解安定性もまた、パフォーマンスの予想の範囲内であった（図４６Ｈ）。最後に、抗ＯＸ４０抗体、ＯＸ４０Ｌ融合タンパク質、ニボルマブおよびイピリムマブからの最小限の干渉が観察された（図４６Ｆ、４６Ｇおよび４８）。これらの結果は、臨床サンプルの分析に対するアッセイの高精度、感度および適合性を示している。
【０３３７】
【表１１】
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【０３３８】
【表１２】
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【０３３９】
検証された上で、このアッセイを用いて、正常な健康なボランティアおよび癌対象の血清ｓＯＸ４０レベルを測定した。図４７に示すように、ｓＯＸ４０レベルは正常な健康な個体と比較して癌患者（頭／首、卵巣または子宮頸部）で有意に上昇した。この結果は、癌を治療するための、抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＢＭＳ−９８６１７８）の単独使用またはニボルマブやイピリムマブなどの他の治療薬との併用を裏付けている。
【０３４０】
【表１３】
2021501801.tif 000016
【表１４】
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【表１５】
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【０３４１】
均等物：
当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の態様の多くの均等物を認識するか、または常套の実験を用いて確認することができる。そのような均等物は、特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【図１】
2021501801.tif 000019
【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４】
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【図５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図６−３】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６−１】
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【図２６−２】
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【図２６−３】
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【図２６−４】
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【図２７−１】
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【図２７−２】
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【図２７−３】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３−１】
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【図３３−２】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３−１】
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【図４３−２】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６−１】
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【図４６−２】
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【図４６−３】
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【図４６−４】
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【図４６−５】
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【図４６−６】
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【図４６−７】
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【図４６−８】
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【図４７】
2021501801.tif 000086
【図４８】
2021501801.tif 000087
【配列表】
2021501801000001.app
【国際調査報告】
2021501801.tif 000088
2021501801.tif 000089
2021501801.tif 000090
2021501801.tif 000091
2021501801.tif 000092