(57)【要約】  本発明は、ＣＣＬ１４抗体を提供する。【選択図】図１
2021509120.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＣＬ１４に特異的に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ｉ）
配列番号１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、または
配列番号１９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列
を含む重鎖可変領域と、
（ｉｉ）
配列番号２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、または
配列番号２０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列
を含む軽鎖可変領域と
を含む、
モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
前記抗体が、
配列番号１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（２Ｈ３／２Ｋ１）、
配列番号３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（３Ｈ１／３Ｋ１）、
配列番号５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（４Ｈ１／４Ｋ３）、
配列番号７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１０Ｈ３／１０Ｋ１）、
配列番号９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１２Ｈ２／１２Ｋ１）、
配列番号１１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１７Ｈ２／１７Ｋ１）、
配列番号１３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１８Ｈ１／１８Ｋ１）、
配列番号１５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１９Ｈ２／１９Ｋ３）、
配列番号１７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（２５Ｈ２／２５Ｋ１）、または
配列番号１９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（３１Ｈ１／３１Ｋ１）
を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３】
前記抗体が、
配列番号１の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号２の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（２Ｈ３／２Ｋ１）、
配列番号３の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（３Ｈ１／３Ｋ１）、
配列番号５の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号６の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（４Ｈ１／４Ｋ３）、
配列番号７の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号８の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１０Ｈ３／１０Ｋ１）、
配列番号９の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１０の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１２Ｈ２／１２Ｋ１）、
配列番号１１の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１２の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１７Ｈ２／１７Ｋ１）、
配列番号１３の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１４の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１８Ｈ１／１８Ｋ１）、
配列番号１５の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１６の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１９Ｈ２／１９Ｋ３）、
配列番号１７の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１８の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域（２５Ｈ２／２５Ｋ１）、または
配列番号１９の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号２０の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（３１Ｈ１／３１Ｋ１）
を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４】
前記抗体が、シグナル発生エレメントにコンジュゲートされる、請求項１〜３のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項５】
前記抗体が、固体の担体に固定される、請求項１〜３のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項６】
Ｆ（ａｂ）およびＦ（ａｂ’）２のフラグメントである、請求項１〜５のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の第１のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントと、ヒトＣＣＬ１４に特異的に結合する第２のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントとを含むキットであって、
前記第１の抗体または抗原結合フラグメントおよび第２の抗体または抗原結合フラグメントが、ヒトＣＣＬ１４とサンドイッチ複合体を形成する、
キット。
【請求項８】
前記第２の抗体または抗原結合フラグメントが、前記第１のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントとは異なる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離されているモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントである、請求項７に記載のキット。
【請求項９】
生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連する検出可能なシグナルをもたらすように構成されている使い捨て可能な試験装置をさらに含み、前記第１の抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは前記第２の抗体もしくは抗原結合フラグメントが、前記使い捨て可能な試験装置の中の表面に固定される、請求項７または８のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１０】
前記使い捨て可能な試験装置が、ラテラルフローの試験装置である、請求項９に記載のキット。
【請求項１１】
前記第１の抗体または抗原結合フラグメントが、前記使い捨て可能な試験装置の中の表面に固定され、前記第２の抗体または抗原結合フラグメントが、検出可能な標識にコンジュゲートされる、請求項９または１０のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１２】
前記第１の抗体または抗原結合フラグメントが、前記使い捨て可能な試験装置の中の表面に固定され、前記第２の抗体または抗原結合フラグメントが、検出可能な標識にコンジュゲートされ、前記使い捨て可能な試験装置とは別の容器に提供されている、請求項７または８に記載のキット。
【請求項１３】
前記キットが、前記検出可能なシグナルをＣＣＬ１４の濃度に関連づけるための較正をさらに含む、請求項７〜１０のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１４】
前記較正が、電子記憶装置に提供される較正曲線である較正曲線である、請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
前記キットが、生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連するシグナルを提供するアッセイ方法を行うように構成されており、前記アッセイ方法におけるＣＣＬ１４の最小検出可能濃度が１０ｎｇ／ｍＬ以下である、請求項７〜１４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１６】
前記キットにおける第１および第２のモノクローナル抗体またはそれらの抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、１０Ｈ３／１０Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、１８Ｈ１／１８Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、および１８Ｈ１／１８Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、または各事例におけるそれらの対応する抗原結合フラグメントからなる群から選択される対である、請求項７〜１５のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１７】
前記第１または第２のうちの１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合し、もう一方の前記第１または第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）、またはＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合する、請求項７〜１６のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１８】
前記第１または第２のうちの１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１またはその抗原結合フラグメントであり、もう一方の前記第１または第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、３１Ｈ１／３１Ｋ１もしくは２Ｈ３／２Ｋ１またはその抗原結合フラグメントである、請求項６〜１７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１９】
前記第１または第２のうちの１つまたは両方のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ｆ（ａｂ）およびＦ（ａｂ’）２のフラグメントである、請求項６〜１８のいずれか１項に記載のキット。
【請求項２０】
前記第１または第２のうちの１つまたは両方のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、ウサギ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項６〜１９のいずれか１項に記載のキット。
【請求項２１】
前記モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントが、ウサギ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１〜６のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２２】
生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量を決定するための方法であって、
ヒトＣＣＬ１４とサンドイッチ複合体を共に形成する第１のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントおよび第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを用いて、生体サンプル上でイムノアッセイを行うステップであって、前記イムノアッセイが、前記サンドイッチ複合体で結合された前記生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連する検出可能なシグナルを提供する、ステップと、
前記検出可能なシグナルを、前記生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連づけるステップであって、前記第１のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントおよび任意選択で前記第２のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントが、請求項１〜６または２１のいずれか１項に記載の抗体である、ステップと
を含む、方法。
【請求項２３】
前記イムノアッセイにおけるＣＣＬ１４の最小検出可能濃度が、１０ｎｇ／ｍＬ以下である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記イムノアッセイが、ラテラルフロー形式で行われる、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記イムノアッセイが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの診断形態である、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記イムノアッセイが、前記ヒト患者のサンプルを使い捨て可能な試験装置に適用することにより行われ、前記検出可能なシグナルが、前記使い捨て可能な試験装置を分析機器に挿入することにより得られ、前記第１および第２の抗体または抗原結合フラグメントを含むサンドイッチ複合体が、前記使い捨て可能な試験装置の所定の領域での検出のため固定され、前記分析機器が、前記固定されたサンドイッチ複合体を検出して前記検出可能なシグナルを提供する、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記第１の抗体または抗原結合フラグメントが、シグナル発生エレメントにコンジュゲートされる、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記第１の抗体または抗原結合フラグメントが、前記ヒト患者のサンプルと反応混合物を形成し、前記ヒト患者のサンプルが、前記反応混合物を前記使い捨て可能な試験装置に適用することにより前記使い捨て可能な試験装置に適用される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記第２の抗体または抗原結合フラグメントが、固体の担体の所定の領域に固定される、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記第１および第２の抗体または抗原結合フラグメントが、それぞれ、ウサギ、マウス、ニワトリ、ヤギ、ヒツジ、ロバ、ヒト、ラマ、もしくはラクダ類の抗体、またはその抗原結合フラグメントである、請求項２２〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記第１および第２の抗体または抗原結合フラグメントの少なくとも１つが、ウサギの抗体または抗体フラグメントである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記第１または第２のうちの１つまたは両方のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ｆ（ａｂ）およびＦ（ａｂ’）２のフラグメントである、請求項２２〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記第１のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）、ＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）、ＤＫＷＶＱＤＹＩＫＤＭＫ（配列番号２５）、ＭＤＹＹＥＴＮＳＱＣＳＫ（配列番号２６）、ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）、またはＥＴＮＳＱＣＳＫＰ（配列番号２９）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合し、前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）、ＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）、ＤＫＷＶＱＤＹＩＫＤＭＫ（配列番号２５）、ＭＤＹＹＥＴＮＳＱＣＳＫ（配列番号２６）、ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）、またはＥＴＮＳＱＣＳＫＰ（配列番号２９）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合し、ＣＣＬ１４および前記第１のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントとサンドイッチ複合体を形成する、請求項２２〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記第１のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合し、前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）またはＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合する、請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記第１および第２のモノクローナル抗体またはそれらの抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、１０Ｈ３／１０Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、１８Ｈ１／１８Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、および１８Ｈ１／１８Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、または各事例におけるそれらの対応する抗原結合フラグメントからなる群から選択される対である、請求項２２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記第１または第２のうちの１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１またはその抗原結合フラグメントであり、もう一方の前記第１または第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、３１Ｈ１／３１Ｋ１もしくはその抗原結合フラグメントまたは２Ｈ３／２Ｋ１もしくはその抗原結合フラグメントである、請求項２２〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量を決定するための方法であって、
ヒトＣＣＬ１４に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを用いて前記生体サンプル上でイムノアッセイを行うステップであって、前記イムノアッセイが、前記生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連する検出可能なシグナルを提供する、ステップと、
前記検出可能なシグナルを、前記生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連づけるステップであって、前記アッセイが、競合アッセイであり、前記モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントが、請求項１〜６または２１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントである、ステップと
を含む、方法。
【請求項３８】
配列番号１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（２Ｈ３／２Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号２のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３９】
配列番号３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（３Ｈ１／３Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号３のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号４のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４０】
配列番号５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（４Ｈ１／４Ｋ３）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号５のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号６のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４１】
配列番号７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１０Ｈ３／１０Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号７のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号８のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４２】
配列番号９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１２Ｈ２／１２Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号９のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１０のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４３】
配列番号１１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１７Ｈ２／１７Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１１のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１２のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４４】
配列番号１３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１８Ｈ１／１８Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１３のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１４のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４５】
配列番号１５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１９Ｈ２／１９Ｋ３）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１５のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１６のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４６】
配列番号１７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（２５Ｈ２／２５Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１７のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１８のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４７】
配列番号１９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（３１Ｈ１／３１Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１９のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号２０のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４８】
請求項３８〜４７のいずれか１項に記載の第１のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントと、前記第１のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントと異なる請求項３８〜４７のいずれか１項に記載の第２のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントとを含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントの対。
【請求項４９】
１０Ｈ３／１０Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、１０Ｈ３／１０Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、１８Ｈ１／１８Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、および１８Ｈ１／１８Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、または各事例におけるそれらの対応する抗原結合フラグメントからなる群から選択される、モノクローナル抗体の対。
【請求項５０】
ヒトＣＣＬ１４に特異的に結合し、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合する、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項５１】
前記モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントが、配列番号７の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域と、配列番号８の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１０Ｈ３／１０Ｋ１）とを含む、請求項５０に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項５２】
前記モノクローナル抗体が、１０Ｈ３／１０Ｋ１、その抗原結合フラグメント、そのＦ（ａｂ）フラグメント、またはそのＦ（ａｂ’）２フラグメントである、請求項５１に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項５３】
請求項５０〜５２のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントと、ヒトＣＣＬ１４に特異的に結合し、配列ＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）、ＤＫＷＶＱＤＹＩＫＤＭＫ（配列番号２５）、ＭＤＹＹＥＴＮＳＱＣＳＫ（配列番号２６）、ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）、またはＥＴＮＳＱＣＳＫＰ（配列番号２９）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合する第２のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントとを含むキットであって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントおよび前記第２の抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒトＣＣＬ１４とサンドイッチ複合体を形成する、キット。
【請求項５４】
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合し、前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）またはＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合する、請求項５０〜５３のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５５】
前記第１および第２のモノクローナル抗体またはそれらの抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、１０Ｈ３／１０Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、１８Ｈ１／１８Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、および１８Ｈ１／１８Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、または各事例におけるそれらの対応する抗原結合フラグメントからなる群から選択される抗体の対である、請求項５０〜５４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５６】
前記第１または第２のうちの１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１またはその抗原結合フラグメントであり、もう一方の前記第１または第２のモノクローナル抗体が、３１Ｈ１／３１Ｋ１もしくは２Ｈ３／２Ｋ１またはその抗原結合フラグメントである、請求項５５に記載のキット。
【請求項５７】
前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１９の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号２０の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（３１Ｈ１／３１Ｋ１）を含む、請求項５３に記載のキット。
【請求項５８】
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１またはその抗原結合フラグメントであり、前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、３１Ｈ１／３１Ｋ１またはその抗原結合フラグメントである、請求項５８に記載のキット。
【請求項５９】
前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号２の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（２Ｈ３／２Ｋ１）を含む、請求項５３に記載のキット。
【請求項６０】
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１またはその抗原結合フラグメントであり、前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、２Ｈ３／２Ｋ１またはその抗原結合フラグメントである、請求項５９に記載のキット。
【請求項６１】
前記第１または第２のうちの１つまたは両方のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ｆ（ａｂ）またはＦ（ａｂ’）２のフラグメントである、請求項５３〜６０のいずれか１項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優先権が主張され、全ての表、図面、および特許請求の範囲を含む全体が参照により本明細書に組み込まれている、２０１７年１２月２８日に出願の米国特許仮出願番号第６２／６１１，５１０号の利益を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
以下の本発明の背景の論述は、単に読み手に本発明の理解を支援するために提供されており、本発明に対する従来技術を説明または構成することは承認されていない。
【０００３】
Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１４（ＣＣＬ１４；ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ  Ｅｎｔｒｙ  Ｑ１６６２７、ＨＣＣ−１、ＮＣＣ−２、およびＳＣＹＡ１４としても知られている）は、ＣＣケモカインファミリーに属する小さなケモカインである。これはまた、ＨＣＣ−１としても知られている。ＣＣＬ１４は、アミノ酸組成においてＣＣＬ３およびＣＣＬ４と４６％同一であり、７４のアミノ酸（残基２０〜９３）を含む成熟した活性タンパク質をもたらすように処理される９３残基のタンパク質前駆体として産生される。このケモカインは、脾臓、骨髄、肝臓、筋肉、および腸を含む様々な組織で発現する。ＣＣＬ１４は、単球を活性化するが、それらの走化性を誘導しない。ヒトＣＣＬ１４は、染色体１７上の、ＣＣファミリーに属する他のケモカインのクラスターの中に位置している。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の目的は、ＣＣＬ１４に結合する抗体を提供することである。このような抗体は、特にＣＣＬ１４の結合が望ましい腎損傷の評価および治療方法で使用される場合の、臨床成績の改善を伴うイムノアッセイでの使用を見出すことができる。
【０００５】
第１の態様では、本発明は、ヒトＣＣＬ１４に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ｉ）
配列番号１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、または
配列番号１９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列
を含む重鎖可変領域と、
（ｉｉ）
配列番号２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、または
配列番号２０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列
を含む軽鎖可変領域と
を含む、
抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
【０００６】
特定の実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、以下の重鎖ＣＤＲ／軽鎖ＣＤＲの対：
配列番号１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（２Ｈ３／２Ｋ１）、
配列番号３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（３Ｈ１／３Ｋ１）、
配列番号５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（４Ｈ１／４Ｋ３）、
配列番号７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１０Ｈ３／１０Ｋ１）、
配列番号９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１２Ｈ２／１２Ｋ１）、
配列番号１１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１７Ｈ２／１７Ｋ１）、
配列番号１３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１８Ｈ１／１８Ｋ１）、
配列番号１５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１９Ｈ２／１９Ｋ３）、
配列番号１７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（２５Ｈ２／２５Ｋ１）、または
配列番号１９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（３１Ｈ１／３１Ｋ１）
のうちの１つを含む。
【０００７】
特定の実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、
（ｉ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、および１９からなる群から選択される重鎖可変領域、またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域と、
（ｉｉ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、および２０からなる群から選択される軽鎖可変領域、またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域と
を含む。
【０００８】
特定の実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、以下の重鎖／軽鎖の対：
配列番号１の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号２の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（２Ｈ３／２Ｋ１）、
配列番号３の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（３Ｈ１／３Ｋ１）、
配列番号５の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号６の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（４Ｈ１／４Ｋ３）、
配列番号７の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号８の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１０Ｈ３／１０Ｋ１）、
配列番号９の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１０の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１２Ｈ２／１２Ｋ１）、
配列番号１１の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１２の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１７Ｈ２／１７Ｋ１）、
配列番号１３の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１４の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１８Ｈ１／１８Ｋ１）、
配列番号１５の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１６の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１９Ｈ２／１９Ｋ３）、
配列番号１７の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１８の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域（２５Ｈ２／２５Ｋ１）、または
配列番号１９の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号２０の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（３１Ｈ１／３１Ｋ１）
のうちの１つを含む。
【０００９】
本発明の説明の中で、少なくとも９０％の配列類似性は、少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９９％の配列類似性を含むことを理解されたい。この文脈での「配列類似性」は、保存的な変化（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ  ｃｈａｎｇｅ）の度合と組み合わせられた同一性の度合いに基づく。「配列類似性」のパーセンテージは、同一であるかまたは保存的に変化しているアミノ酸またはヌクレオチドのパーセンテージであり、すなわち、「配列類似性」＝配列同一性（パーセント）＋保存的な変化（パーセント）である。よって、本発明の目的では、「保存的な変化」および「同一性」は、より範囲の広い用語「類似性」の種であるとみなされる。よって、配列「類似性」との用語が使用される場合、これは配列の「同一性」および「保存的な変化」を常に包含する。特定の実施形態では、保存的な変化は無視され、配列類似性（パーセント）は、配列同一性（パーセント）を表す。特定の実施形態では、言及される配列同一性（パーセント）により許容される配列の変化は、全てまたはほぼ全て保存的な変化であり；すなわち、配列が９０％同一である場合、残りの１０％は、全てまたはほぼ全てが保存的な変化である。この文脈での用語「ほぼ全て」は、許容される配列の変化の少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８５％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％が保存的な変化であることを表す。
【００１０】
請求される方法で使用される抗体は、様々な種から入手され得る。たとえば、本発明の抗体は、ウサギ、マウス、ラット、モルモット、ニワトリ、ヤギ、ヒツジ、ロバ、ヒト、ラマ、またはラクダ類の配列であるイムノグロブリン配列、または当該配列の組み合わせ（いわゆるキメラ抗体）を含み得る。また、このような抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。本発明に使用するための抗体は、イムノアッセイにおいてそれらの性質により同定され得、その後、この性質に関連するエピトープを理解するためのエピトープマッピングによってさらに性質決定され得る。ウサギ抗体またはウサギ抗体由来のヒト化のバージョンが好ましい。
【００１１】
このような抗体は、シグナル発生エレメント（ｓｉｇｎａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｅｌｅｍｅｎｔ）にコンジュゲートされてもよく、または固体の担体に固定されてもよい。さらにこのような抗体は、多くの競合アッセイ形式およびサンドイッチアッセイ形式で使用され得る。サンドイッチアッセイの一例では、第１の抗体（検出可能に標識）および第２の抗体（試験装置の所定の領域に固定）は、試験装置の所定の領域で、サンプルにおけるＣＣＬ１４とサンドイッチ複合体を形成する。サンドイッチアッセイでは、第１および第２の抗体は、同一であってもよく（特にポリクローナル抗体が使用される場合）、または異なるものであってもよい。よって、本発明の抗体は、サンドイッチ対で使用されてもよく、またはポリクローナル抗体もしくはアプタマーなどのモノクローナル抗体ではない別の結合実体で個別に使用されてもよい。
【００１２】
本発明の抗体は、生体サンプルにおけるＣＣＬ１４を検出するための試験キットの試薬として使用され得る。このような試験キットは、たとえば、生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連する検出可能なシグナルをもたらすように構成されている使い捨て可能な試験装置を含み得る。あるいは、このような試験キットは、使い捨て可能な試験装置を利用しない臨床分析器でアッセイを行うために策定され得る。好ましくは、試験キットは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの診断形態（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ）である。用語「ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの診断形態」は、本明細書中使用される場合、単独で使用されるかまたは併用されるかどうかに関わらず、単独でまたは主に生理的状態もしくは病理的な状態に関する情報、もしくは先天異常に関する情報を提供する目的のため、または安全性および見込みのあるレシピエントとの適合性を決定するため、または治療測定をモニタリングするための、ヒトの身体由来の血液および組織の提供を含む検体の試験のため、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで使用されることが製造社により意図されている、試薬、試薬製品、標準物質、対照物質、キット、機器、装置、器具、またはシステムである医療機器を表す。
【００１３】
特定の実施形態では、イムノアッセイは、ラテラルフロー形式で行われる。ラテラルフロー試験は、試験サンプルが、高吸収性または低吸収性の多孔質の固体の基質に沿ってクロマトグラフィーの形式で流れるイムノアッセイの形態である。ラテラルフロー試験は、競合形式のアッセイまたはサンドイッチ形式のアッセイのいずれかとして作用し得る。好ましいラテラルフロー装置は、単回使用の使い捨て可能な試験装置である。サンプルは、試験装置のアプリケーション領域にアプライされ、基質を通過し、ここで抗体または抗原で前処理されているラインまたは領域に遭遇する。用語「試験領域」は、本明細書中使用される場合、目的の分析物の存在または量に関連するシグナルをもたらすために調べられるラテラルフロー試験ストリップ上にある別々の位置を表す。検出可能なシグナルは、視覚的に読み取られてもよく、または反射率計、蛍光光度計、または透過光度計などの分析機器に使い捨て可能な試験装置を挿入することにより得られてもよい。この列挙は、限定を意味するものではない。サンプルは、アプリケーション領域に前処理を行うことなくアプライされてもよく、またはアプリケーションの前に１つ以上のアッセイ試薬とあらかじめ混合されていてもよい。後者の場合、抗体は、使い捨て可能な試験装置とは別の容器に提供され得る。
【００１４】
本発明の抗体は、サンプルがその表面に接触する際にサンプルに溶解するように、使い捨て可能な試験装置の中の表面に拡散して固定され得る。サンドイッチアッセイ形式では、この拡散して結合した抗体は、サンプル中の同族の抗原に結合し、その後、抗原が、検出領域で拡散した状態ではなく結合されている第２の抗体により結合される際に、検出領域に固定され得る。競合形式では、サンプル中の同族の抗原は、アッセイ試薬として提供されている標識された抗原と非拡散的に結合した抗体への結合に関して競合し得る。
【００１５】
さらに本発明のキットは、検出可能なシグナルをＣＣＬ１４の濃度に関連づけるための較正を含み得る。例として、較正曲線が、ＲＯＭチップ、フラッシュドライブ、ＲＦＩＤタグなどの、使い捨て可能な試験装置を受領する分析機器により読み取られる電子記憶装置上に提供され得る。あるいは較正曲線は、２Ｄバーコードなどにより光学的に読み取られるコードされたラベル上にて提供され得るか、またはネットワーク接続を介して伝達され得る。次に、分析機器は、この較正曲線を使用して、アッセイからの検出可能なシグナルをＣＣＬ１４の濃度に関連づけることができる。
【００１６】
特定の実施形態では、本発明の１つ以上の抗体を使用して行われるアッセイ方法は、生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連するシグナルを提供し、ここで、アッセイ方法におけるＣＣＬ１４の最小検出可能濃度は、１０ｎｇ／ｍＬ以下であり、より好ましくは１ｎｇ／ｍＬ以下、最も好ましくは０．１ｎｇ／ｍＬ以下である。
【００１７】
関連する態様では、本発明は、生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量を決定するための方法であって、
ヒトＣＣＬ１４とサンドイッチ複合体を共に形成する第１のモノクローナル抗体および第２のモノクローナル抗体を用いて、生体サンプル上でイムノアッセイを行うステップであって、前記イムノアッセイが、前記サンドイッチ複合体で結合された前記生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連する検出可能なシグナルを提供する、ステップと、
前記検出可能なシグナルを、前記生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連づけるステップと
を含む、方法を提供する。好ましくは、イムノアッセイにおけるＣＣＬ１４の最小検出可能濃度は、１０ｎｇ／ｍＬ以下であり、より好ましくは１ｎｇ／ｍＬ以下、最も好ましくは０．１ｎｇ／ｍＬ以下である。
【００１８】
特に好ましい実施形態では、イムノアッセイは、第１の抗体および第２の抗体がそれぞれ本発明の抗体（抗原結合フラグメントであり得る）である、サンドイッチイムノアッセイである。例として、サンドイッチ対の第１の抗体は、以下の重鎖ＣＤＲ／軽鎖ＣＤＲの対のうちの１つであり、サンドイッチ対の第２の抗体は、以下の、上記と異なる重鎖ＣＤＲ／軽鎖ＣＤＲの対のうちの１つである：
配列番号１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（２Ｈ３／２Ｋ１）、
配列番号３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（３Ｈ１／３Ｋ１）、
配列番号５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（４Ｈ１／４Ｋ３）、
配列番号７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１０Ｈ３／１０Ｋ１）、
配列番号９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１２Ｈ２／１２Ｋ１）、
配列番号１１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１７Ｈ２／１７Ｋ１）、
配列番号１３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１８Ｈ１／１８Ｋ１）、
配列番号１５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１９Ｈ２／１９Ｋ３）、
配列番号１７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（２５Ｈ２／２５Ｋ１）、または
配列番号１９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（３１Ｈ１／３１Ｋ１）。
【００１９】
特定の実施形態では、サンドイッチ対の第１の抗体は、以下の重鎖ＣＤＲ／軽鎖ＣＤＲの対のうちの１つであり、サンドイッチ対の第２の抗体は、以下の、上記と異なる重鎖ＣＤＲ／軽鎖ＣＤＲの対のうちの１つである：
配列番号１の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号２の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（２Ｈ３／２Ｋ１）、
配列番号３の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（３Ｈ１／３Ｋ１）、
配列番号５の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号６の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（４Ｈ１／４Ｋ３）、
配列番号７の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号８の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１０Ｈ３／１０Ｋ１）、
配列番号９の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１０の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１２Ｈ２／１２Ｋ１）、
配列番号１１の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１２の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１７Ｈ２／１７Ｋ１）、
配列番号１３の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１４の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１８Ｈ１／１８Ｋ１）、
配列番号１５の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１６の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１９Ｈ２／１９Ｋ３）、
配列番号１７の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１８の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域（２５Ｈ２／２５Ｋ１）、または
配列番号１９の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号２０の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（３１Ｈ１／３１Ｋ１）。
【００２０】
好ましいサンドイッチ対の例として、２Ｈ３／２Ｋ１と３１Ｈ１／３１Ｋ１との対；２Ｈ３／２Ｋ１と１０Ｈ３／１０Ｋ１との対；および３１Ｈ１／３１Ｋ１と１０Ｈ３／１０Ｋ１との対が挙げられる。この列挙は単なる例示である。
【００２１】
関連する態様では、本発明は、本発明の抗体のエピトープに結合する抗体、または本発明の抗体とＣＣＬ１４への結合に関して競合する抗体に関する。本明細書中記載されるように、このような抗体は、キット、抗体の対、方法、およびアッセイ装置での使用を見出し得る。
【００２２】
好ましい実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）、ＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）、ＤＫＷＶＱＤＹＩＫＤＭＫ（配列番号２５）、ＭＤＹＹＥＴＮＳＱＣＳＫ（配列番号２６）、ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）、またはＥＴＮＳＱＣＳＫＰ（配列番号２９）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合し、最も好ましくはウサギのモノクローナル抗体である。
【００２３】
特定の実施形態では、本発明の抗体はさらに、ヒトＣＣＬ１４に特異的に結合し、配列ＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）、ＤＫＷＶＱＤＹＩＫＤＭＫ（配列番号２５）、ＭＤＹＹＥＴＮＳＱＣＳＫ（配列番号２６）、ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）、またはＥＴＮＳＱＣＳＫＰ（配列番号２９）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合する第２のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントを含み、ここでモノクローナル抗体および第２の抗体は、ヒトＣＣＬ１４とサンドイッチ複合体を形成する。
【００２４】
好ましいアッセイ方法は、ヒトＣＣＬ１４を検出するイムノアッセイを行うことを含む。このようなイムノアッセイは、上記体液サンプルを、マーカーを検出する抗体と接触させるステップと、当該抗体に対する結合性を検出するステップとを含み得る。本発明は、全般的にイムノアッセイの観点で記載されているが、イムノグロブリンスキャフォールドに基づくものではない他の結合実体（たとえばアプタマー）が、このような方法において抗体の代わりに使用され得る。好ましくは、体液サンプルは、尿、唾液、血液、血清、および血漿からなる群から選択され、最も好ましくは尿である。
【００２５】
本開示の１つ以上の実施形態の詳細は、添付の図面および以下の説明に記載されている。本開示の他の特性、目的、および利点は、この説明および図面、ならびに特許請求の範囲から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、本発明の２Ｈ３、３Ｈ１、４Ｈ１、１０Ｈ３、１２Ｈ２、１７Ｈ２、１８Ｈ１、１９Ｈ２、２５Ｈ２、および３１Ｈ１のウサギのＩｇＧ重鎖のタンパク質配列の可変領域のアライメントを示す。３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）が示されている。
【図２】図２は、２Ｋ１、３Ｋ１、４Ｋ３、１０Ｋ１、１２Ｋ１、１７Ｋ１、１８Ｋ１、１９Ｋ３、２５Ｋ１、および３１Ｋ１のウサギの軽鎖のタンパク質配列の可変領域のアライメントを示す。３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）が示されている。
【図３】図３は、２Ｈ３／２Ｋ１、３１Ｈ１／３１Ｋ１、１８Ｈ１／１８Ｋ１、および１０Ｈ３／１０Ｋ１の抗体を使用したサンドイッチアッセイの結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
定義
【００２８】
以下は、本明細書において言及される配列のリストである（表１）。
【表１】
2021509120.tif 000003
2021509120.tif 000004
2021509120.tif 000005
【００２９】
本明細書中使用される場合、用語「Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１４」および「ＣＣＬ１４」は、ＣＣＬ１４前駆体（ヒト前駆体：Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｑ１６６２７（配列番号２１））に由来する生体サンプルに存在する１つ以上のポリペプチドを表す。
【化１】
2021509120.tif 000006
【００３０】
以下のドメインが、ＣＣＬ１４で同定されている。
【表２】
2021509120.tif 000007
【００３１】
本明細書中特段他の記載がない限り、使用される用語の定義は、薬科学の分野で使用される標準的な定義である。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が他の意味を明記しない限り、複数形を含む。よって、たとえば、「ａ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃａｒｒｉｅｒ（薬学的な担体）」に対する言及は、当該担体の２つ以上の混合物などを含む。
【００３２】
用語「対象」は、本明細書中使用される場合、ヒトまたは非ヒトの生物を表す。よって、本明細書中記載される方法および組成物は、ヒトの疾患および獣医学的疾患の両方に適用可能である。さらに、対象は好ましくは生きている生物であるが、本明細書中記載の発明は、死後の解析において同様に使用され得る。好ましい対象はヒトであり、最も好ましくは、本明細書中使用される場合は疾患または病態に関して医療を受けている生きたヒトを表す「患者」である。これは、病態の兆候に関して調査されている規定の疾病を有さない人物を含む。
【００３３】
好ましくは、分析物は、サンプルにおいて測定される。このようなサンプルは、対象から得られてもよく、または対象に提供されることが意図されている生体物質から得られてもよい。たとえば、サンプルは、対象への移殖の可能性に関して評価された腎臓から得られてもよく、既存の損傷に関して腎臓を評価するために使用される分析物の測定から得られてもよい。好ましいサンプルは、体液サンプルである。
【００３４】
用語「体液サンプル」は、本明細書中使用される場合、患者または移植ドナーなどの目的の対象の診断、予後診断、分類、または評価の目的のために得られる体液のサンプルを表す。特定の実施形態では、このようなサンプルは、進行中の病態のアウトカムまたは病態に及ぼす処置レジメンの作用を決定する目的のため、入手され得る。好ましい体液サンプルとして、血液、血清、血漿、脳脊髄液、尿、唾液、痰、および胸水が挙げられる。さらに、当業者は、特定の体液サンプルが、分画または精製の手法、たとえば全血を血清または血漿の成分に分離した後に、より容易に解析されることを理解している。
【００３５】
用語「診断」は、本明細書中使用される場合、当業者が、患者が所定の疾患または病態を罹患しているかどうかの確率（尤度）を推定および／または決定し得る方法を表す。本発明の場合、「診断」は、サンプルを入手し、アッセイした対象の急性腎損傷またはＡＲＦの診断（すなわち発症の有無）に達するために、任意選択で他の臨床特徴と共に、本発明の腎損傷マーカーでのアッセイ、最も好ましくはイムノアッセイの結果を使用することを含む。このような診断の「決定」は、診断が１００％正確であることを暗示することを意味しない。多くのバイオマーカーが、複数の病態を表す。当業者は、情報の空白にバイオマーカーの結果を使用せず、むしろ試験結果は、診断に達する他の臨床的な兆候と共に使用される。よって、所定の診断の閾値の一つの側面で測定されたバイオマーカーレベルは、所定の診断の閾値の他の側面で測定されたレベルと比較して大きな、対象の疾患の発症の尤度を示す。
【００３６】
同様に、予後リスクは、所定の過程またはアウトカムが起こる確率（尤度）を伝える。次に罹患率の確率の増加に関連する予後指標（たとえば腎機能の悪化、将来的なＡＲＦまたは死亡）のレベルまたはレベルの変化は、患者の有害なアウトカムの「尤度の増加の指標」と呼ばれる。
【００３７】
用語「ラテラルフロー」は、本明細書中使用される場合、実質的に平坦な多孔質の物質を介した長手方向での試薬の流れを表す。このような多孔質の物質は、物質の厚さが１０％以下の長さおよび幅の次元である場合「実質的に平坦」である。
【００３８】
用語「下流領域」は、装置の第１の領域と比較して本明細書中使用される場合、流体がすでに第１の領域に達した後に流体の流れを受領する領域を表す。
【００３９】
用語「サンプルアプリケーション領域」は、本明細書中使用される場合、目的の流体サンプルがその組成を決定するために導入されるアッセイ装置の一部を表す。
【００４０】
マーカーアッセイ
【００４１】
一般的に、イムノアッセイは、目的のバイオマーカーを含むかまたは含む疑いのあるサンプルを、バイオマーカーに特異的に結合する少なくとも１つの抗体と接触させることを含む。次に、サンプル中のポリペプチドが抗体に結合することにより形成される複合体の存在または量を表すシグナルが生成される。次にこのシグナルを、サンプル中のバイオマーカーの存在または量に関連づける。バイオマーカーの検出および解析に関する多くの方法および装置が、当業者によく知られている。たとえば、全ての表、図面、および特許請求の範囲を含むそれぞれの全体が参照により本明細書中に組み込まれている、米国特許第６，１４３，５７６号；同第６，１１３，８５５号；同第６，０１９，９４４号；同第５，９８５，５７９号；同第５，９４７，１２４号；同第５，９３９，２７２号；同第５，９２２，６１５号；同第５，８８５，５２７号；同第５，８５１，７７６号；同第５，８２４，７９９号；同第５，６７９，５２６号；同第５，５２５，５２４号；および同第５，４８０，７９２号、ならびにＴｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，  Ｄａｖｉｄ  Ｗｉｌｄ，  ｅｄ．  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９４を参照されたい。
【００４２】
当該分野で知られているアッセイ装置および方法は、目的のバイオマーカーの存在または量に関連するシグナルを生成するために、様々なサンドイッチアッセイ形式、競合アッセイ形式、または非競合的なアッセイ形式において標識した分子を利用できる。また適切なアッセイ形式として、クロマトグラフィー、質量分析（ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｇｒａｐｈｉｃ）、およびタンパク質の「ブロッティング」の方法が挙げられる。あるいは、バイオセンサーおよび光学的なイムノアッセイなどの特定の方法および装置が、標識した分子を必要とすることなく分析物の存在または量を決定するために使用され得る。たとえば、全ての表、図面、および特許請求の範囲を含むそれぞれの全体が参照により本明細書中に組み込まれている、米国特許第５，６３１，１７１号；および同第５，９５５，３７７号を参照されたい。また当業者は、限定するものではないが、Ｂｅｃｋｍａｎ  ＡＣＣＥＳＳ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  ＡＸＳＹＭ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ  ＥＬＥＣＳＹＳ（登録商標）、Ｄａｄｅ  Ｂｅｈｒｉｎｇ  ＳＴＲＡＴＵＳ（登録商標）のシステムを含むロボット器具の使用が、イムノアッセイを行うことのできるイムノアッセイ分析器の中にあることを認識している。しかしながら、たとえば酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、競合結合アッセイなどのいずれかの適切なイムノアッセイが利用され得る。
【００４３】
抗体または他のポリペプチドが、アッセイで使用するための様々な固体の担体に固定され得る。特定の結合メンバーを固定するために使用され得る固相として、固相結合アッセイの固相として開発および／または使用されているものが挙げられる。適切な固相の例として、膜フィルター、セルロースベースの紙、ビーズ（ポリマー状、ラテックス、および常磁性の粒子を含む）、ガラス、シリコンウェハ、マイクロ粒子、ナノ粒子、ＴｅｎｔａＧｅｌ、ＡｇｒｏＧｅｌ、ＰＥＧＡ  ｇｅｌ、ＳＰＯＣＣ  ｇｅｌ、および複数のウェルプレートが挙げられる。アッセイストリップは、固体の担体上のアレイに抗体または複数の抗体をコーティングすることにより調製され得る。次にこのストリップを、試験サンプルに浸漬し、次に洗浄ステップおよび検出ステップを介して迅速に処理することにより、色のついたスポットなどの測定可能なシグナルをもたらし得る。抗体または他のポリペプチドは、アッセイ装置の表面に直接コンジュゲートするかまたは間接的な結合のいずれかにより、アッセイ装置の特定の領域に結合され得る。後者の場合の例では、抗体または他のポリペプチドは、粒子または他の固体の担体に固定され得、この固体の担体は、装置の表面に固定され得る。
【００４４】
生物学的なアッセイは、検出のための方法を必要とし、結果の定量化にとって最も一般的な方法の１つに、試験される生体系の成分の１つに対して親和性を有するタンパク質または核酸に検出可能な標識をコンジュゲートすることがある。検出可能な標識は、自身が検出可能である分子（たとえば蛍光部分、電気化学的標識、金属キレートなど）、および検出可能な反応産物（たとえば西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼなどの酵素）の産生によるかまたは自身が検出可能であり得る特異的な結合分子（たとえばビオチン、ジゴキシゲニン、マルトース、オリゴヒスチジン、２，４−ジニトロベンゼン（ｄｉｎｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅ）、フェニルアルセナート、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡなど）により間接的に検出され得る分子が挙げられる。
【００４５】
固相および検出可能な標識のコンジュゲートの調製は、多くの場合、化学的な架橋剤の使用を含む。架橋試薬は、少なくとも２つの反応基を含み、全般に、ホモ官能性架橋剤（同一の反応基を含む）およびヘテロ官能性架橋剤（非同一の反応基を含む）に分けられる。アミン、スルフヒドリルを介して結合するかまたは非特異的に反応するホモ二官能性架橋剤は、多くの市販の供給源から入手可能である。マレイミド、アルキルおよびアリールのハロゲン化物、α−ハロアシル、ならびにピリジルジスルフィドは、チオール反応基である。マレイミド、アルキルおよびアリールのハロゲン化物、ならびにα−ハロアシルは、スルフヒドリルと反応してチオールエーテル結合を形成し、ピリジルジスルフィドは、スルフヒドリルと反応して混合したジスルフィドを生成する。ピリジルジスルフィド生成物は、切断可能である。またイミドエステルは、タンパク質間の架橋に非常に有用である。それぞれがコンジュゲーションの成功のために異なる性質を組み合わせている、様々なヘテロ二官能性架橋剤が、市販されている。
【００４６】
特定の態様では、本発明は、記載されるマーカーの分析のためのキットを提供する。このキットは、マーカーに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を含む少なくとも１つの試験サンプルの分析のための試薬を含む。またこのキットは、本明細書中記載される診断および／または予後診断の相関のうちの１つ以上を行うための装置および説明書をも含み得る。好ましいキットは、分析物に関して、サンドイッチアッセイを行うための抗体の対または競合アッセイを行うための標識された種を含む。好ましくは、抗体の対は、固相にコンジュゲートされる第１の抗体と、検出可能な標識にコンジュゲートされる第２の抗体とを含み、ここで第１の抗体および第２の抗体は、それぞれ腎損傷マーカーに結合する。最も好ましくは、各抗体はモノクローナル抗体である。キットを使用し、相関を行うための説明書は、添付されているいずれかの記載または記録された材料を表すラベル（ｌａｂｅｌｉｎｇ）の形態であり得るか、または製造、輸送、販売、もしくは使用の間のいずれかの時間でキットに付随し得る。たとえば、用語ラベルは、広告のチラシおよびパンフレット、パッケージング材料、説明書、音声カセットまたはビデオカセット、コンピュータディスク、ならびにキットに直接プリントされた記載を包有する。
【００４７】
特定の実施形態では、マーカーアッセイは、単回使用の使い捨て可能な試験装置を使用して行われる。このような試験装置は、多くの場合、店頭市場の妊娠試験の一般的な使用に由来する現在よく知られているラテラルフロー装置の形態をとる。全般的に、これらアッセイ装置は、サンプル添加領域と評価領域との間で区別がなされ得る延在した基盤層を有する。典型的な使用では、サンプルは、サンプル添加領域にアプライされ、基盤層と並行に展開する液体輸送経路に沿って流れた後、評価領域内に流れこむ。捕捉試薬（ｃａｐｔｕｒｅ  ｒｅａｇｅｎｔ）が評価領域に存在し、捕捉された分析物は、捕捉された分析物に関連する視覚可能な部分を検出するように様々なプロトコルにより検出され得る。たとえばアッセイは、生体サンプルにおける分析物の存在の有無を表す場合、色の変化、蛍光、発光などの視覚的なシグナルを生成し得る。
【００４８】
サンプル添加領域は、たとえば、筐体における開口チャンバーの形態；吸収性パッドの形態；などで提供され得る。サンプル添加領域は、様々な構成、すなわち円形、長方形、四角形などの出入口（ｐｏｒｔ）であり得るか、またはこの領域は、装置の溝（ｔｒｏｕｇｈ）であり得る。
【００４９】
サンプルから微粒子をろ過するため、たとえば血漿が装置を介してさらに移動し得るように血液から血液細胞を除去または抑制（ｒｅｔａｒｄ）するために、フィルター部分が、サンプル添加領域上かまたはサンプル添加領域に隣接して配置され得る。よってろ過物は、フィルターに流体接続された多孔質の膜へと移動し得る。血液に存在する細胞の物質を除去または抑制するために適切なフィルターは、当該分野でよく知られている。たとえば、それぞれの全体が参照により本明細書中に組み込まれている、米国特許第４，４７７，５７５号；同第５，１６６，０５１号；同第６，３９１，２６５号；および同第７，１２５，４９３号を参照されたい。多くの適切な材料は、当業者に知られており、ガラス繊維、合成樹脂繊維、孔の大きさが約６５〜約１５μｍまで幅のある非対称的な膜を含む様々な種類の膜、およびこのような材料の組み合わせを含み得る。さらに、フィルター部分は、血漿からの赤血球細胞の分離を促進するための１つ以上の化学的な物質を含み得る。このような化学的な物質の例として、トロンビン、レクチン、陽イオン性ポリマー、１つ以上の赤血球細胞表面の抗原に対する抗体などがある。このような、血漿からの赤血球細胞の分離を促進させる化学的な物質は、共有結合手段、非特異的な吸着などによりフィルター部分に提供され得る。
【００５０】
特定の実施形態では、標識領域は、サンプル受領領域の下流に位置しており、目的の分析物に結合するかまたは結合種への結合に関して目的の分析物と競合する、拡散して配置され標識されている試薬を含む。あるいは、標識領域は、標識された試薬がサンプル受領領域へのアプリケーション前にサンプルとあらかじめ混合されている場合、除外され得る。検出領域は、標識領域の下流に配置され、目的の分析物に結合する固定された捕捉試薬を含む。
【００５１】
本発明で使用するために膜にとって最適な孔の直径は、約１０〜約５０μｍである。この膜の厚さは、概して約１ミル〜約１５ミル、典型的には５〜１０ミルの範囲であるが、最大２００ミルおよびそれ以上でもあり得る。この膜は、Ｍｙｌａｒ（登録商標）ポリエステルフィルム（ＤｕＰｏｎｔ  Ｔｅｉｊｉｎ  Ｆｉｌｍｓ）などの一般的に水を通さない層により裏張りされ得る。使用される場合、この裏張りは、一般的に、３Ｍ  ４４４の両面接着テープなどの接着剤により、膜に固定される。通常、水を通さない裏張りは、薄い膜に使用される。幅広い様々なポリマーが使用され得るが、ただしこれらは、アッセイ成分と非特異的に結合せず、サンプルのフローに干渉しない。例示的なポリマーとして、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレンなどが挙げられる。あるいは、膜は、自立し得る。他の低吸収性の膜、たとえばポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、酢酸ビニルおよび塩化ビニルのコポリマー、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリスチレンなどもまた使用され得る。様々な実施形態では、標識領域の材料は、ブロッキング剤および安定化剤を含む溶液で前処理され得る。ブロッキング剤として、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、メチル化ＢＳＡ、カゼイン、非脂肪ドライミルクが挙げられる。この装置はまた、たとえば、緩衝剤、ＨＡＭＡ阻害剤、界面活性剤、塩（たとえば、カルシウム、マグネシウム、カリウムの塩化物および／または硫酸塩など）、ならびにタンパク質性の成分（たとえば血清アルブミン、ゼラチン、乳タンパク質など）を含むさらなる成分を含み得る。この列挙は限定を意味するものではない。
【００５２】
装置は、試験装置が適切に作動していることを決定するために読み取られる様々な対照の配置（ｃｏｎｔｒｏｌ  ｌｏｃａｔｉｏｎ）をさらに含み得る。例として、手法対照領域は、サンプルの流れが予測される通りであることを検証するためにアッセイ検出領域とは別に提供され得る。対照領域は、好ましくは、試薬の適切な流れを表すシグナルが生成され得る空間的に異なる領域である。手法対照領域は、分析物アッセイで使用される過剰な標識されている抗体が結合し得る、目的の分析物またはそのフラグメントを含み得る。作動中、標識された試薬は、目的の分析物が試験サンプルに存在しない場合であっても、対照領域に結合する。対照ラインの使用は、対照ラインのシグナルの存在が、負の結果であっても試験結果を読み取ることができる時間を表す点で有用である。よって、予測されるシグナルが対照ラインに現れる場合、捕捉領域でのシグナルの存在の有無が留意され得る。この装置はさらに、陰性対照領域を含み得る。この対照領域の目的は、試験装置が適切に作用していないことを使用者に警告することである。適切に作動している場合は、陰性対照領域においてシグナルまたはマークは視覚可能とはならない。
【００５３】
このようなアッセイ装置の外箱または筐体は、様々な形態をとり得る。これは通常細長い箱を含み、複数の内部に適合する部分（ｉｎｔｅｒｆｉｔｔｉｎｇ  ｐａｒｔ）を有し得る。特に好ましい実施形態では、筐体は、上部のカバーおよび底部の支持体を含む。上部のカバーは、アプリケーション開口部および観察ポートを含む。好ましい実施形態では、筐体は、水分を通さない固体の物質、たとえばプラスチックの物質から作製される。限定するものではないが、ビニル、ナイロン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリスルファン、ポリエステル、ウレタン、およびエポキシを含む様々な市販のプラスチックが筐体を構成するために使用され得ることが企図されている。筐体は、当該分野でよく知られており、使用されている標準的な成形技術などの従来の方法により、調製され得る。筐体は、限定するものではないが、射出成形、圧縮成形、トランスファー成形、ブロー成形、押出し成形、フォーム成形、および熱成形を含む成形技術により、生成され得る。上述の成形技術は、当該分野でよく知られており、本明細書中詳細に論述されてはいない。たとえば、Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  Ａｎｄ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｏｆ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ，  Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｒ．  Ａ．  Ｌｉｎｄｓｂｅｒｇ  （１９８３）  Ａｌｌｙｎ  ａｎｄ  Ｂａｒｏｎ  ｐｐ．  ３９３−４３１を参照されたい。
【００５４】
次に、必要に応じて、使用される検出可能な標識の比色分析、発光、または蛍光の強度が、標識に適した器具で評価され得る。例として、蛍光標識を検出するためには、蛍光光度計を使用することができ；光を吸収する標識を検出するために反射率計を使用することなどができる。サンプルにおける目的の分析物の濃度は、サンプル液中の分析物の量に測定された応答を相関させることにより決定され得る。
【００５５】
アッセイ相関
【００５６】
用語「相関している（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｎｇ）」および「関連している（ｒｅｌａｔｉｎｇ）」は、アッセイにおけるバイオマーカーの測定に関連して本明細書中使用される場合、アッセイから得られるシグナルに基づき、サンプル中のバイオマーカーの存在、またはより好ましくは量を決定することを表す。多くの場合、これは、シグナルをバイオマーカーの濃度または閾値に変換するために使用され得る所定の標準曲線と、アッセイに参加した１種の検出可能な標識から生成されたシグナルを比較する形式をとる。
【００５７】
用語「相関している（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｎｇ）」および「関連している（ｒｅｌａｔｉｎｇ）」は、診断または予後診断のためのバイオマーカーの使用に関連して本明細書中使用される場合、患者におけるバイオマーカーの存在または量を、所定の病態を罹患していることが知られているかもしくは所定の病態のリスクがあると知られている人物；または所定の病態を有していないことが知られている人物におけるその存在または量と比較することを表す。多くの場合、これは、疾患の発症の有無またはいくつかの将来的なアウトカムの尤度を表すように選択された所定の閾値と、バイオマーカーの濃度の形態のアッセイ結果を比較する形態をとる。
【００５８】
診断上の閾値を選択することは、特に、疾患の確率、異なる試験閾値での真および偽の診断の分布、ならびに診断に基づく処置の結果（または処置に対する失敗）の推定を考慮することを含む。たとえば、著しく有効であり低レベルのリスクを有する特定の治療を行うことを考慮する場合、臨床医は実質的な診断の不確実性を容認できるため、ほとんどの試験は必要とされない。他方で、処置選択の有効性が低くリスクが高い状況では、多くの場合臨床医は、上記よりも高い度合いの診断の確実性を必要とする。よって、費用対効果分析は、診断上の閾値の選択に関与している。
【００５９】
適切な閾値は、様々な方法で決定され得る。たとえば、心筋トロポニンを使用する急性心筋梗塞の診断で推奨される１つの診断上の閾値は、正常な集団で見られる濃度の９７．５パーセンタイルである。別の方法は、同じ患者由来の段階的なサンプルを見ることであり得、ここで以前の「ベースライン」の結果を使用してバイオマーカーレベルの時間的な変化をモニタリングする。
【００６０】
また集団試験が、識別閾値を選択するために使用され得る。受信者操作特性（ＲＯＣ）は、レーダー画像の分析で第２次世界大戦中に開発されたシグナル検出理論の分野から生じたものであり、ＲＯＣ解析は、多くの場合、「非疾患状態の（ｎｏｎｄｉｓｅａｓｅｄ）」下位集団と「疾患状態の（ｄｉｓｅａｓｅｄ）」下位集団を最良に区別できる閾値を選択するために使用される。この場合の偽陽性は、陽性と試験されるが、実際には疾患を有していない場合に起こる。他方で、偽陰性は、陰性と試験され、健常であることが示唆されるが、実際は疾患を有する場合に起こる。ＲＯＣ曲線を作成するために、真陽性率（ＴＰＲ）および偽陽性率（ＦＰＲ）が、識別閾値が連続して変動するように決定される。ＴＰＲは感度と同等でありＦＰＲは１−特異度に相当するため、ＲＯＣグラフは、場合により、感度ｖｓ（１−特異度）プロットと呼ばれる。完全な試験は、１．０のＲＯＣ曲線下面積を有し；無作為な試験は、０．５の面積を有する。閾値は、許容可能なレベルの特異度および感度を提供するように選択される。
【００６１】
この文脈では、「疾患状態の」は、１つの特徴（疾患もしくは病態の存在、またはいくつかのアウトカムの発生）を有する集団を表し、「非疾患状態の」は、この特徴を欠いている集団を表すことを意味する。単一の識別閾値はこのような方法の最も単純な適用であるが、複数の識別閾値が使用され得る。たとえば、第１の閾値未満では、疾患の非存在が、比較的高い信頼性で割り当てられてもよく、第２の閾値を超える場合は、疾患の存在が比較的高い信頼性で割り当てられてもよい。２つの閾値の間は、中間と割り当てられ得る。これは、実際には、単なる例示を意味する。
【００６２】
閾値の比較に加え、アッセイ結果を患者の分類（疾患の発症または不発症、アウトカムの尤度など）に相関させるための他の方法は、決定木、設定された規則、ベイズ法、およびニューラルネットワーク法を含む。これら方法は、対象が複数の分類のうちの１つの分類に属する度合いを表す確率の値をもたらし得る。
【００６３】
試験の正確性の測定は、Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．  ２９：  １０４３−５１，  ２００３に記載されるように得られてもよく、所定のバイオマーカーの有効性を決定するために使用されてもよい。これら測定は、感度および特異度、予測値、尤度比、診断オッズ比（ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｏｄｄｓ  ｒａｔｉｏ：ＤＯＲ）、ならびにＲＯＣ曲線面積を含む。ＲＯＣプロットの曲線下面積（「ＡＵＣ」）は、分類者が無作為に選択した１つの負の例よりも高い無作為に選択された正の例をランク付けする確率に相当する。ＲＯＣ曲線下面積は、グループが連続したデータである場合に企図される２つのグループで得られるスコア間の差の中央値を試験するマン・ホイットニーのＵ検定またはＷｉｌｃｏｘｏｎの順位検定に相当すると考えられ得る。
【００６４】
上述のように、適切な検定は、これら様々な測定で以下の結果のうちの１つ以上を呈し得る：０．２超、好ましくは０．３超、より好ましくは０．４超、さらにより好ましくは少なくとも０．５、さらにより好ましくは０．６、さらにより好ましくは０．７超、さらにより好ましくは０．８超、より好ましくは０．９超、および最も好ましくは０．９５超の対応する感度を伴う、０．５超、好ましくは少なくとも０．６、より好ましくは少なくとも０．７、さらにより好ましくは少なくとも０．８、さらにより好ましくは少なくとも０．９、および最も好ましくは少なくとも０．９５の特異度；０．２超、好ましくは０．３超、より好ましくは０．４超、さらにより好ましくは少なくとも０．５、さらにより好ましくは０．６、さらにより好ましくは０．７超、さらにより好ましくは０．８超、より好ましくは０．９超、および最も好ましくは０．９５超の対応する特異度を伴う、０．５超、好ましくは少なくとも０．６、より好ましくは少なくとも０．７、さらにより好ましくは少なくとも０．８、さらにより好ましくは少なくとも０．９、および最も好ましくは少なくとも０．９５の感度；少なくとも７５％の特異度と組み合わせた少なくとも７５％の感度；０．５超、好ましくは少なくとも０．６、より好ましくは０．７、さらにより好ましくは少なくとも０．８、さらにより好ましくは少なくとも０．９、および最も好ましくは少なくとも０．９５のＲＯＣ曲線面積；１とは異なる、好ましくは少なくとも約２以上または約０．５以下、より好ましくは少なくとも約３以上または約０．３３以下、さらにより好ましくは少なくとも約４以上または約０．２５以下、さらにより好ましくは少なくとも約５以上または約０．２以下、および最も好ましくは少なくとも約１０以上または約０．１以下のオッズ比；１超、少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、さらにより好ましくは少なくとも５、および最も好ましくは少なくとも１０の正の尤度比（感度／（１−特異度）として計算）；ならびにまたは、１未満、０．５以下、より好ましくは０．３以下、および最も好ましくは０．１以下の負の尤度比（（１−感度）／特異度として計算）。
【００６５】
抗体
【００６６】
用語「抗体」は、本明細書中使用される場合、抗原またはエピトープに特異的に結合できる、イムノグロブリン遺伝子（複数可）由来であるかこれをモデルとするか、またはこれにより実質的にコードされている、ペプチドまたはポリペプチド、またはそのフラグメントを表す。たとえば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｗ．Ｅ．  Ｐａｕｌ，  ｅｄ．，  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎ．Ｙ．  （１９９３）；  Ｗｉｌｓｏｎ  （１９９４；  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １７５：２６７−２７３；  Ｙａｒｍｕｓｈ  （１９９２）  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５：８５−９７を参照されたい。用語抗体は、抗原結合部分、すなわち、抗原に結合する能力を保持する「抗原結合部位」（たとえばフラグメント、下位配列、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含み、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨｌのドメインからなる１価のフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により結合した２つのＦａｂフラグメントを含む２価のフラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨｌドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一のアームであるＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；ならびに（ｖｉ）単離されている相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。また、一本鎖抗体も、参照により用語「抗体」に含まれている。
【００６７】
好ましい治療用抗体として、ＩｇＧ抗体がある。用語「ＩｇＧ」は、本明細書中使用される場合、認識されているイムノグロブリンのガンマ遺伝子が実質的にコードする抗体のクラスに属するポリペプチドを意味する。ヒトでは、このクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む。マウスでは、このクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３を含む。ＩｇＧクラスの抗体で知られているＩｇドメインは、ＶＨ、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、ＶＬ、およびＣＬである。ＩｇＧは、いくつかの実務的な理由のため治療用抗体にとって好ましいクラスである。ＩｇＧ抗体は、安定しており、容易に精製され、薬学的なサプライチェーンにとって実用的である条件下で保存することができる。ｉｎ  ｖｉｖｏでは、これらは、単なるそれらの大きさの関数であるだけでなくいわゆるＦｃ受容体（またはＦｃＲｎ）との相互作用の結果でもある長い生物学的な半減期を有する。この受容体は、細胞の中の異化からＩｇＧを保護するように思われ、これを血漿に戻し再利用する。
【００６８】
抗体は、特異的な抗原に結合する免疫学的なタンパク質である。ヒトおよびマウスを含む大部分の哺乳類では、抗体は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの対から構築されている。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗体間に著しい配列の多様性を示し、標的抗原の結合に寄与している。各鎖は、個別のイムノグロブリン（Ｉｇ）ドメインから作製されており、よって、このようなタンパク質では、総称のイムノグロブリンが使用される。
【００６９】
用語「特異的に結合する」は、上述のように、抗体が結合するエピトープを提示するいずれのポリペプチドにも結合するため、当該抗体がその意図される標的に排他的に結合することを表すことは意図されていない。むしろ抗体は、その意図される標的に対する親和性が、適切なエピトープを提示しない非標的分子に対する親和性と比較する際に約５倍超である場合に、「特異的に結合する」。好ましくは、非標的分子に対する親和性と比較して、標的分子に対する抗体の親和性は、少なくとも約５倍、好ましくは１０倍、より好ましくは２５倍、さらにより好ましくは５０倍、および最も好ましくは１００倍以上、高い。好ましい実施形態では、好ましい抗体は、少なくとも約１０７Ｍ−１、好ましくは約１０８Ｍ−１〜約１０９Ｍ−１、約１０９Ｍ−１〜約１０１０Ｍ−１、または約１０１０Ｍ−１〜約１０１２Ｍ−１の親和性で結合する。
【００７０】
親和性は、Ｋｄ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ（ｋｏｆｆは解離速度定数であり、Ｋｏｎは、結合速度定数であり、Ｋｄは、平衡定数である）として計算される。親和性は、様々な濃度（ｃ）の標識されたリガンドの結合したフラクション（ｒ）を測定することにより、平衡時に決定され得る。このデータは、スキャッチャードの方程式：ｒ／ｃ＝Ｋ（ｎ−ｒ）（式中、ｒ＝平衡時の結合したリガンドのモル／受容体のモル；ｃ＝平衡時の遊離しているリガンドの濃度；Ｋ＝平衡結合定数；およびｎ＝受容体分子あたりのリガンド結合部位の数）を使用してグラフ化される。グラフ分析により、Ｘ軸のｒに対してｒ／ｃがＹ軸にプロットされることにより、スキャッチャードプロットを生成する。スキャッチャード分析による抗体親和性の測定は、当該分野でよく知られている。たとえばｖａｎ  Ｅｒｐ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  １２：  ４２５−４３，  １９９１；  Ｎｅｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｇｒｉｓｗｏｌｄ，  Ｃｏｍｐｕｔ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  Ｂｉｏｍｅｄ．  ２７：  ６５−８，  １９８８．を参照されたい。
【００７１】
さらに本発明の抗体は、本明細書中記載のイムノアッセイで最も高い臨床上の有用性を有する抗体およびエピトープが選択され得るように、エピトープマッピングにより性質決定され得る。用語「エピトープ」は、抗体に特異的に結合できる抗原決定因子を表す。通常、エピトープは、アミノ酸または糖鎖の側鎖などの化学的に活性な表面のグループの分子からなり、通常、特異的な３次元の構造上の特徴および特異的な電荷の特徴を有する。立体構造的エピトープおよび非立体構造的エピトープは、変性溶媒の存在下で前者に対する結合が失われるが後者は失われないという点で、区別される。好ましくは、標的分子に存在するが、非標的分子には部分的にまたは完全に存在しないエピトープが標的とされる。
【００７２】
一部の実施形態では、抗体のスキャフォールドは、異なる種由来の配列の混合物であり得る。よって、本抗体が１つの抗体である場合、当該抗体は、キメラ抗体および／またはヒト化抗体であり得る。全般的に、「キメラ抗体」および「ヒト化抗体」は両方とも、１超の種由来の領域を組み合わせた抗体を表す。たとえば、「キメラ抗体」は、伝統的に、マウス（または場合によりラット）由来の可変領域と、ヒト由来の定常領域とを含む。「ヒト化抗体」は、全般的に、可変ドメインのフレームワーク領域がヒト抗体で見出される配列と交換されている非ヒト抗体を表す。一般的に、ヒト化抗体では、ＣＤＲを除く抗体全体は、ヒト由来のポリヌクレオチドによりコードされているか、またはそのＣＤＲの中を除き当該抗体と同一である。一部または全てが非ヒトの生物に由来する核酸によりコードされているＣＤＲは、ヒト抗体の可変領域のβシートフレームワーク領域へと移植されることにより、その特異度が移植されたＣＤＲにより決定される抗体を作製する。このような抗体の作製は、たとえば国際特許公開公報第９２／１１０１８号、Ｊｏｎｅｓ，  １９８６，  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５，  Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６に記載されている。選択されたアクセプターフレームワーク残基から対応するドナー残基への「復帰突然変異（Ｂａｃｋｍｕｔａｔｉｏｎ）」は、多くの場合、最初のグラフトされたコンストラクトで失われている親和性を取り戻すために必要とされている（米国特許第５，５３０，１０１号；米国特許第５，５８５，０８９号；米国特許第５，６９３，７６１号；米国特許第５，６９３，７６２号；米国特許第６，１８０，３７０号；米国特許第５，８５９，２０５号；米国特許第５，８２１，３３７号；米国特許第６，０５４，２９７号；米国特許第６，４０７，２１３号）。また好ましくは、ヒト化抗体は、イムノグロブリン定常領域、典型的にはヒトイムノグロブリンの定常領域の少なくとも一部を含み、よって通常ヒトのＦｃ領域を含む。またヒト化抗体は、遺伝子操作された免疫系を有するマウスを使用して作製され得る。Ｒｏｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｐｒｏｇ．  ２０：６３９−６５４。非ヒト抗体をヒト化し再形成するための様々な技術および方法は、当該分野でよく知られている（Ｔｓｕｒｕｓｈｉｔａ  ＆  Ｖａｓｑｕｅｚ，  ２００４，  Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂ  Ｃｅｌｌｓ，  ５３３−５４５，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （ＵＳＡ），およびその中の参照文献を参照）。ヒト化方法として限定するものではないが、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６，  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８；  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；  Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２３９：１５３４−１５３６；  Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，  ＵＳＡ  ８６：１００２９−３３；  Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６０：  １０２９−１０３５；  Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：４２８５−９，  Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７（２０）：４５９３−９；  Ｇｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８８：４１８１−４１８５；  Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  １１：３２１−８に記載の方法が挙げられる。非ヒト抗体の可変領域の免疫原性を低減するヒト化または他の方法は、たとえば、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：９６９−９７３に記載される再表面処理方法を含み得る。一実施形態では、親抗体は、当該分野で知られているように親和性が成熟している。たとえば米国特許出願番号第１１／００４，５９０号に記載されるような構造ベースの方法が、ヒト化および親和性の成熟に使用され得る。限定するものではないが、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２９４：１５１−１６２；  Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２（１６）：１０６７８−１０６８４；  Ｒｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７１（３７）：  ２２６１１−２２６１８；  Ｒａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９５：  ８９１０−８９１５；  Ｋｒａｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １６（１０）：７５３−７５９に記載される方法を含む選択ベースの方法が、抗体の可変領域をヒト化しおよび／または親和性を成熟させるために使用され得る。限定するものではないが、米国特許出願番号第０９／８１０，５０２号；Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６９：１１１９−１１２５；  Ｄｅ  Ｐａｓｃａｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６９：３０７６−３０８４に記載される方法を含む他のヒト化方法は、ＣＤＲの一部のみを移植することを含み得る。
【００７３】
一実施形態では、本抗体は、完全にヒトの抗体である。「完全にヒトの抗体」または「完全なヒトの抗体」は、ヒトの染色体に由来する抗体の遺伝子配列を有するヒトの抗体を表す。完全にヒトの抗体は、たとえばトランスジェニックマウス（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ８：４５５−４５８）または選択方法と一体化したヒト抗体ライブラリー（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ９：１０２−１０８）を使用することにより、得ることができる。
【００７４】
抗体の生成
【００７５】
モノクローナル抗体の調製物は、ハイブリドーマ、組み換え、およびファージディスプレイの技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む当該分野で知られている幅広い様々な技術を使用して、生成され得る。たとえば、モノクローナル抗体は、当該分野で知られているもの、およびたとえばＨａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．  １９８８）；  Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ：  ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  Ｔ−ＣＥＬＬ  ＨＹＢＲＩＤＯＭＡＳ，  ｐｐ．  ５６３−６８１  （Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  Ｎ．Ｙ．，  １９８１）（両方とも、全体が参照により組み込まれている）で教示されるものを含むハイブリドーマ技術を使用して、生成され得る。用語「モノクローナル抗体」は、本明細書中使用される場合、ハイブリドーマ技術を介して生成された抗体に限定されてはいない。用語「モノクローナル抗体」は、生成される方法に関わらず、いずれかの真核細胞、原核細胞、またはファージのクローンを含む単一のクローンに由来する抗体を表す。
【００７６】
ラットおよびマウス以外の動物に由来するモノクローナル抗体は、固有の利点を提供する。シグナル変換および疾患に関連する多くのタンパク質の標的が、マウス、ラット、およびヒトの間で著しく保存されており、よって、マウスまたはラットの宿主による自己抗原として認識されることにより、免疫原性を少なくさせ得る。この問題は、宿主動物としてウサギを使用する場合には回避され得る。たとえばＲｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  １２４，  ２９５−３０２，  ２００５を参照されたい。
【００７７】
ハイブリドーマ技術を使用して特異的な抗体を生成およびスクリーニングするための方法は、規定されており、当該分野でよく知られている。非限定的な例では、マウスは、目的の抗原または当該抗原を発現する細胞で免疫化され得る。免疫応答が検出される、たとえば抗原に特異的な抗体がマウスの血清で検出されると、マウスの脾臓が回収され、脾細胞が単離される。次に脾細胞を、よく知られている技術によりいずれかの適切な骨髄腫細胞に融合させる。ハイブリドーマを、選択し、限界希釈によりクローニングする。次に、ハイブリドーマのクローンを、抗原に結合できる抗体を分泌する細胞に関して、当該分野で知られている方法によりアッセイする。正のハイブリドーマのクローンでマウスの腹腔内に播種することにより、一般に高レベルの抗体を含む腹水がもたらされ得る。
【００７８】
抗体作製の方法で使用され得るアジュバントとして、限定するものではないが、タンパク質のアジュバント；細菌性のアジュバント、たとえば細菌全体（ＢＣＧ、コリネバクテリウム・パルバム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）、サルモネラ・ミネソタ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｍｉｎｎｅｓｏｔａ））、および細胞壁骨格、トレハロースジミコール酸、モノホスホリルリピドＡ、結核菌のメタノール抽出可能残渣（ＭＥＲ）、完全または不完全なフロイントアジュバントを含む細菌性の成分；ウイルス性アジュバント；化学的アジュバント、たとえば水酸化アルミニウム、ヨード酢酸、およびコレステリルヘミスクシナート（ｈｅｍｉｓｕｃｃｉｎａｔｅｏｒ）；ネイキッドＤＮＡアジュバントが挙げられる。本発明の方法で使用され得る他のアジュバントとして、コレラ毒素、パロポクスタンパク質（ｐａｒｏｐｏｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、ＭＦ−５９（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；また、参照により本明細書中に組み込まれているＢｉｅｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  “ＧＡＤ６５  Ａｎｄ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｂ  Ｃｈａｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  （９−２３）  Ａｒｅ  Ｎｏｔ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｔｙｐｅ  １  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  ＢＢ  Ｒａｔ，”  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，  ３１（１）：１５−２４を参照）、ＭＰＬ（登録商標）（Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；また、全てが参照により本明細書中に組み込まれているＬｏｄｍｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  “ＤＮＡ  Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍｉｃｅ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｒａｂｉｅｓ  Ｖｉｒｕｓ：  Ｅｆｆｅｃｔｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｒｏｕｔｅ  Ｏｆ  Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ  Ｌｉｐｉｄ  Ａ  （ＭＰＬ），”  Ｖａｃｃｉｎｅ，  １８：  １０５９−１０６６；  Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  “３−Ｏ−Ｄｅｓａｃｙｌ  Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ  Ｌｉｐｉｄ  Ａ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ：  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｎｔ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，”  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ４２：  ４６４０−４６４９；  Ｂａｌｄｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  “Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ  Ｌｉｐｉｄ  Ａ  （ＭＰＬ）  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｎｅｘｔ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，”  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  １９：  １０３−１０７，参照）、ＲＣ−５２９アジュバント（Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｃｏｒｉｘａのアミノアルキルグルコサミニド４−ホスフェート（ＡＧＰ）の化学物質ライブラリー由来のリード化合物、またｗｗｗ．ｃｏｒｉｘａ．ｃｏｍを参照）、およびＤＥＴＯＸ（商標）アジュバント（Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；ＤＥＴＯＸ（商標）アジュバントは、ＭＰＬ（登録商標）アジュバント（モノホスホリルリピドＡ）およびマイコバクテリウム属の細胞壁骨格を含む；また、両方とも参照により組み込まれているＥｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  “Ａｃｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐ��  Ｗｉｔｈ  Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  Ｂ−Ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ  Ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  Ｗｈｏｌｅ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｃｅｌｌｓ  Ｐｌｕｓ  ＤＥＴＯＸ  Ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｍｅｌａｎｏｍａ，”  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４（３）：６１９−６２７；およびＧｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  “Ａｄｊｕｖａｎｔｓ  Ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ−Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｓｔａｔｕｓ，  Ｐｒｏｂｌｅｍｓ  Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ，”  Ｖａｃｃｉｎｅ，  １３（１４）：  １２６３−１２７６を参照されたい）が挙げられる。
【００７９】
多くの刊行物が、選択された分析物への結合に関するポリペプチドのライブラリーを生成および選別するためのファージディスプレイ技術の使用を論述している。たとえば、Ｃｗｉｒｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８７，  ６３７８−８２，  １９９０；  Ｄｅｖｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９，  ４０４−６，  １９９０，  Ｓｃｏｔｔ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９，  ３８６−８８，  １９９０；およびＬａｄｎｅｒらの米国特許第５，５７１，６９８号を参照されたい。ファージディスプレイ法の基本的な概念は、スクリーニングされるポリペプチドをコードするＤＮＡとそのポリペプチドとの間の物理的な結合の確立である。この物理的な結合は、ポリペプチドをコードするファージゲノムを含むカプシドの一部として当該ポリペプチドをディスプレイするファージ粒子により提供される。ポリペプチドとその遺伝子物質との間の物理的な結合の確立は、非常に多くの、異なるポリペプチドを有するファージを同時にマススクリーニングすることを可能にする。標的に親和性を有するポリペプチドをディスプレイするファージは標的に結合し、これらファージは、標的に対する親和性のスクリーニングにより濃縮される。これらファージからディスプレイされるポリペプチドの識別は、それらのゲノムから決定され得る。次に、これら方法を使用して所望の標的に対する結合親和性を有すると同定されるポリペプチドが、従来の手段により大量に合成され得る。たとえば、全ての表、図面、および特許請求の範囲を含む全体が本明細書に組み込まれている米国特許第６，０５７，０９８号を参照されたい。
【００８０】
これら方法により生成される抗体は、次に、目的の精製されたポリペプチドとの親和性および特異度に関する第１のスクリーニングにより、および必要に応じて抗体の親和性および特異度に対する結果を結合から排除されることが望ましいポリペプチドと比較することにより、選択され得る。スクリーニングの手法は、マイクロタイタープレートの別々のウェルでの精製されたポリペプチドの固定化を含み得る。次に、見込みのある抗体または抗体のグループを含む溶液を、各マイクロタイターウェルに入れ、約３０分〜２時間インキュベートする。次にマイクロタイターウェルを洗浄し、標識した二次抗体（たとえば、産生された抗体がマウスの抗体である場合、アルカリホスファターゼにコンジュゲートした抗マウス抗体）をウェルに添加し、約３０分間インキュベートした後、洗浄する。基質がウェルに添加されると、着色反応が起こり、ここに固定されたポリペプチドに対する抗体が存在している。
【００８１】
次に、これにより同定された抗体は、選択されたアッセイ設計における親和性および特異度に関してさらに分析され得る。標的タンパク質のためのイムノアッセイの開発において、精製された標的タンパク質は、選択されている抗体を使用するイムノアッセイの感度および特異度を判断する標準物質として作用する。様々な抗体の結合親和性は異なり得；（たとえばサンドイッチアッセイにおける）特定の抗体の対は互いに立体的に緩衝し得るなどの理由のため、抗体のアッセイの成績は、抗体の絶対的な親和性および特異度よりも重要な測定であり得る。
【００８２】
また抗体は、機能的な内在性イムノグロブリンを発現できないが、ヒトのイムノグロブリン遺伝子を発現できるトランスジェニックマウスを使用して生成され得る。たとえば、ヒトの重鎖および軽鎖のイムノグロブリン遺伝子複合体が、無作為に、または相同組み換えによりマウスの胚性幹細胞へと導入され得る。あるいは、ヒトの可変領域、定常領域、および多様性領域（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｒｅｇｉｏｎ）が、ヒトの重鎖および軽鎖の遺伝子に加え、マウスの胚性幹細胞に導入され得る。マウスの重鎖および軽鎖のイムノグロブリン遺伝子は、相同組み換えによるヒトのイムノグロブリンの遺伝子座の導入と別に、または導入と同時に、機能しなくなる場合がある。特に、ＪＨ領域のホモ接合性の欠失は、内在性の抗体の産生を妨げる。改変された胚性幹細胞は、増殖され、キメラマウスを作製するために胚盤胞にマイクロ注入される。次に、キメラマウスを繁殖させ、ヒト抗体を発現するホモ接合性の子孫を作製する。このトランスジェニックマウスを、選択された抗原、たとえば本発明のポリペプチドの全てまたは一部を用いて、従来の方法により免疫化する。この抗原に対するモノクローナル抗体を、従来のハイブリドーマ技術を使用して、免疫化したトランスジェニックマウスから入手することができる。トランスジェニックマウスが宿すヒトのイムノグロブリンの導入遺伝子は、Ｂ細胞の分化の間に再編成し、その後、クラススイッチおよび体細胞変異を経る。よって、このような技術を使用して、治療上有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＥの抗体を生成することが可能である。この、ヒト抗体を生成するための技術の概要として、全体が本明細書中参照により組み込まれているＬｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  “Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｒｏｍ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｍｉｃｅ，”  Ｉｎｔ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３：６５−９３を参照されたい。ヒト抗体およびヒトのモノクローナル抗体を生成するためのこの技術ならびにこのような抗体を生成するためのプロトコルの詳細な論述に関しては、たとえば、全体が本明細書中参照により組み込まれている、国際特許公開公報第９８／２４８９３号、同第９６／３４０９６号、および同第９６／３３７３５；ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、および同第５，９３９，５９８号を参照されたい。さらに、Ａｂｇｅｎｉｘ，  Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，  Ｃａｌｉｆ．）およびＭｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，  Ｎ．Ｊ．）などの企業は、上述のものと同様の技術を使用して選択された抗原に対するヒト抗体を提供することに従事し得る。
【００８３】
抗体の組み換え発現
【００８４】
本発明の抗体をコードする核酸配列が得られた後、この抗体を生成するためのベクターが、当該分野でよく知られている技術を使用する組み換えＤＮＡ技術により作製され得る。当業者によく知られている方法を使用して、抗体をコードする配列と、適切な転写および翻訳の制御シグナルとを含む発現ベクターを構築することができる。これら方法として、たとえばｉｎ  ｖｉｔｒｏでの組み換えＤＮＡ技術、合成技術、およびｉｎ  ｖｉｖｏでの遺伝的組み換えが挙げられる（たとえば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ，  １９９０，  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ，  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，  ２ｄ  Ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．  ａｎｄ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ．，  １９９８，  ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ＮＹに記載されている技術を参照）。
【００８５】
抗体のヌクレオチド配列を含む発現ベクターは、従来の技術（たとえばエレクトロポレーション、リポソームトランスフェクション、およびリン酸カルシウム沈殿法）により、宿主細胞に導入することができ、次に導入された細胞は、本発明の抗体を生成するために従来の方法により培養される。特定の実施形態では、抗体の発現は、構成的であるか、誘導可能であるか、または組織に特異的なプロモーターにより制御される。
【００８６】
本明細書中開示される抗ＣＣＬ１４抗体はまた、組み換え技術により（たとえばＥ．ｃｏｌｉ／Ｔ７発現系、哺乳類細胞発現系、または低次の真核生物の発現系において）生成され得る。この実施形態では、本発明の抗体イムノグロブリン分子（たとえばＶＨまたはＶＬ）をコードする核酸は、ｐＥＴベースのプラスミドに挿入され、Ｅ．ｃｏｌｉ／Ｔ７系で発現され得る。たとえば、本発明は、Ｔ７プロモーターに作動可能に結合しているイムノグロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドをも含む細胞においてＴ７  ＲＮＡポリメラーゼを発現することを含む、宿主細胞（たとえばＢＬ２１またはＢＬ２１ＤＥ３などの大腸菌といった、細菌の宿主細胞）において抗体またはその抗原結合フラグメントまたはそのイムノグロブリン鎖を発現するための方法を含む。たとえば、本発明の一実施形態では、大腸菌などの細菌の宿主細胞は、ｌａｃプロモーターに作動可能に結合しているＴ７  ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含み、このポリメラーゼおよび鎖の発現は、ＩＰＴＧ（イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド）と宿主細胞のインキュベーションにより誘導される。
【００８７】
よって、本発明は、本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメント、またはそれらのイムノグロブリン鎖を作製するための組み換え方法であって、抗体またはフラグメントの１つ以上のイムノグロブリン鎖（たとえば重鎖および／または軽鎖のイムノグロブリン）をコードするポリヌクレオチドを導入するステップと；当該発現に好ましい条件下で宿主細胞（たとえばＣＨＯまたはピチアまたはピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ））を培養するステップと、任意選択で、宿主細胞および／または宿主細胞を増殖させる培地から抗体またはフラグメントまたは鎖を単離するステップとを含む、組み換え方法を含む。
【００８８】
また抗ＣＣＬ１４抗体は、米国特許第６，３３１，４１５号に記載の方法のいずれかにより、合成され得る。
【００８９】
本明細書中開示される抗体またはフラグメントまたはイムノグロブリン鎖の発現のための宿主としての、哺乳類細胞を含む真核生物および原核生物の宿主細胞は、当該分野でよく知られており、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から入手可能な多くの不死化細胞株を含む。これらは、特に、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ヒーラ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、ＣＯＳ（サル腎臓細胞：ｍｏｎｋｅｙ  ｋｉｄｎｅｙ  ｃｅｌｌ）、ヒト肝細胞癌細胞（たとえばＨｅｐ  Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ＨＥＫ−２９３細胞、ならびに多くの他の細胞株を含む。哺乳類宿主細胞は、ヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、およびハムスターの細胞を含む。特定の優先度の細胞株は、どの細胞株が高い発現レベルを有するかを決定することを介して選択される。使用され得る他の細胞株は、昆虫細胞株、たとえばＳｆ９細胞、両生類の細胞、細菌の細胞、植物細胞、および真菌細胞である。真菌細胞は、たとえば、ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピチア・フィンランディカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ）、ピチア・トレハロフィラ（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ）、ピチア・コクラメ（Ｐｉｃｈｉａ  ｋｏｃｌａｍａｅ）、ピチア・メンブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピチア・ミヌタ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｉｎｕｔａ）（オガタエア・ミヌタ（Ｏｇａｔａｅａ  ｍｉｎｕｔａ）、ピチア・リンドネリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｌｉｎｄｎｅｒｉ））、ピチア・オプンチエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｏｐｕｎｔｉａｅ）、ピチア・テルモトレランス（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ピチア・サリクタリア（Ｐｉｃｈｉａ  ｓａｌｉｃｔａｒｉａ）、ピチア・グエルクウム（Ｐｉｃｈｉａ  ｇｕｅｒｃｕｕｍ）、ピチア・ピエペリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｐｉｊｐｅｒｉ）、ピチア・スチプティス（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｔｉｐｔｉｓ）、ピチア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピチア属種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロミセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クライベロミセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、クライベロミセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ルックノウエンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、フザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、フザリウム・グラミネウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、フザリウム・ベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕ��  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フィスコミトレラ・パテンス（Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ  ｐａｔｅｎｓ）、およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、ピチア属種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、いずれかのサッカロミセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、いずれかのクライベロミセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、いずれかのアスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ルックノウエンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、いずれかのフザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、ヤロウイア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、を含む酵母および糸状菌の細胞を含む。重鎖またはその抗原結合部分もしくはフラグメント、軽鎖および／またはその抗原結合フラグメントをコードする組み換え発現ベクターが哺乳類宿主細胞に導入される場合、抗体は、宿主細胞または宿主細胞を増殖させる培養培地の中の分泌物において抗体またはフラグメントまたは鎖の発現を可能にするために十分な時間の間、宿主細胞を培養することにより、生成される。
【００９０】
様々な宿主発現ベクター系が、本発明の抗体を発現するために利用され得る。このような宿主発現系は、抗体のコード配列が生成されその後精製され得るビヒクルを表すが、同様に、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトされる際にｉｎ  ｓｉｔｕで本発明の抗体を発現し得る細胞をも表す。これらは、限定するものではないが、イムノグロブリンコード配列を含む組み換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡの発現ベクターで形質転換された細菌（たとえばＥ．ｃｏｌｉおよび枯草菌）などの微生物；イムノグロブリンコード配列を含む組み換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（たとえばサッカロミセス・ピキア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｉｃｈｉａ））；イムノグロブリンコード配列を含む組み換えウイルス発現ベクター（たとえばバキュロウイルス）に感染させた昆虫細胞系；組み換えウイルス発現ベクター（たとえばカリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）およびタバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））に感染させたかもしくはイムノグロブリンコード配列を含む組み換えプラスミド発現ベクター（たとえばＴｉプラスミド）で形質転換した植物細胞系；または哺乳類細胞由来のゲノムに由来するプロモーター（たとえばメタロチオネインプロモーター）もしくは哺乳類のウイルス由来のプロモーター（たとえばアデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組み換え発現コンストラクトを有する哺乳類細胞系（たとえばＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、３Ｔ３細胞、リンパ管（ｌｙｍｐｈｏｔｉｃ）細胞（米国特許第５，８０７，７１５号参照）、Ｐｅｒ  Ｃ．６細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌにより開発されたラットの網膜細胞））を含む。
【００９１】
細菌系では、多くの発現ベクターが、好適には、発現される抗体の意図される使用に応じて選択され得る。たとえば大量の当該タンパク質が抗体の医薬組成物の作製のため生成される場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を目的とするベクターが望ましいとされ得る。このようなベクターは、限定するものではないが、大腸菌発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８３）  “Ｅａｓｙ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  ｃＤＮＡ  Ｃｌｏｎｅｓ，”  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ２：１７９１−１７９４）（ここで抗体コード配列は、融合タンパク質が産生されるようにｌａｃ  Ｚコード領域を有するフレーム内のベクターに個別にライゲートされ得る）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８５）  “Ｕｐ−Ｐｒｏｍｏｔｅｒ  Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｌｐｐ  Ｇｅｎｅ  Ｏｆ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，”  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １３：３１０１−３１１０；  Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  “Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ａｓｐａｒａｇｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  Ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，”  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２４：５５０３−５５０９）；などを含む。またｐＧＥＸベクターも、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来のポリペプチドを発現するために使用され得る。全般的に、このような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオン−アガロースビーズに吸着および結合させた後に、遊離するグルタチオンの存在下で溶出することにより、溶解した細胞から容易に精製され得る。ｐＧＥＸベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るようにトロンビンまたはＸａ因子のプロテアーゼ切断部位を含むように設計される。
【００９２】
昆虫系では、ＡｃＮＰＶ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ  ｖｉｒｕｓ）が、外来遺伝子を発現するためのベクターとして使用される。このウイルスは、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞で増殖する。抗体コード配列は、ウイルスの非本質的な領域（たとえばポリヘドリン遺伝子）の中に個別にクローニングされ、ＡｃＮＰＶプロモーター（たとえばポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれ得る。
【００９３】
哺乳類宿主細胞では、多くのウイルスベースの発現系が利用され得る。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、目的の抗体コード配列は、アデノウイルスの転写／翻訳制御複合体、たとえば後期プロモーターおよび三要素リーダー配列（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  ｌｅａｄｅｒ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）にライゲートされ得る。次に、このキメラ遺伝子は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでの組み換えによりアデノウイルスゲノムに挿入され得る。ウイルスゲノムの非本質的な領域（たとえばＥ１領域またはＥ３領域）における挿入は、生きており、感染させた宿主において生存可能であり、イムノグロブリン分子を発現できる組み換えウイルスをもたらす（たとえばＬｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８４）  “Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  Ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  Ｌｅａｄｅｒ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  ｍＲＮＡｓ  Ｌａｔｅ  Ａｆｔｅｒ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ８１：３６５５−３６５９を参照）。また、特定の開始シグナルが、挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳に必要とされ得る。これらシグナルは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接する配列を含む。さらに、開始コドンは、挿入物全体の翻訳を確保するために、所望のコード配列のリーディングフレームを有する相にあるべきである。これら外因性の翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然および合成の両方の、様々な起源由来であり得る。発現の効率は、適切な転写エンハーサーエレメント、転写ターミネーターなどの包有により高められ得る（Ｂｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  “Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｆｏｒ  Ｙｅａｓｔ，”  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １５３：５１６−５４４を参照）。
【００９４】
さらに、挿入された配列の発現を調節するかまたは所望の特定の形式で遺伝子産物を修飾および処理する宿主細胞株が選択され得る。このようなタンパク質産物の修飾（たとえばグリコシル化）および処理（たとえば切断）は、タンパク質の機能に重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後のプロセシングおよび修飾に特徴があり特有の機構を有する。適切な細胞株または宿主系は、発現される外来性タンパク質の正確な修飾およびプロセシングを確保するために選択され得る。この目的のため、一次転写物の適切なプロセシング、グリコシル化、および遺伝子産物のリン酸化に関する細胞機構を有する真核生物の宿主細胞が使用され得る。このような哺乳類宿主細胞として、限定するものではないが、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、２９３Ｔ、３Ｔ３、ＷＩ３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０およびＴ４７Ｄ、ＣＲＬ７０３０、ならびにＨｓ５７８Ｂｓｔが挙げられる。
【００９５】
長期間高い収率で組み換えタンパク質を生成するためには、安定した発現が好ましい。たとえば、本発明の抗体を安定して発現する細胞株が、操作され得る。ウイルス由来の複製物を含む発現ベクターを使用するよりも、適切な発現制御エレメント（たとえばプロモーター、エンハーサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）と、選択可能なマーカーとにより制御されるＤＮＡを用いて、宿主細胞が形質転換され得る。外来性ＤＮＡの導入の後に、操作された細胞を、濃縮した媒体において１〜２日間増殖させることが可能であり、その後、選択的な培地に切り替えられる。組み換えプラスミドにおける選択可能なマーカーは、選択に対する抵抗性を提供し、細胞の染色体内にプラスミドを安定して組み込ませ、増殖させることにより、クローニングさせ細胞株に増殖させ得る焦点（ｆｏｃｉ）を形成させることができる。この方法は、好適には、本発明の抗体を発現する細胞株を操作するために使用され得る。このような操作された細胞株は、本発明の抗体と直接的または間接的に相互作用する化合物のスクリーニングおよび評価に特に有用であり得る。
【００９６】
限定するものではないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７７）  “Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｏｆ  Ｐｕｒｉｆｉｅｄ  Ｈｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｇｅｎｅ  Ｔｏ  Ｃｕｌｔｕｒｅｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｃｅｌｌｓ，”  Ｃｅｌｌ  １１：２２３−２３２）、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９６２）  “Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｅｓｓ  Ｌｉｎｅ．  ＩＶ．  ＤＮＡ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｈｅｒｉｔａｂｌｅ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｒａｉｔ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ４８：２０２６−２０３４），およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８０）  “Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ＤＮＡ：  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｈｅ  Ｈａｍｓｔｅｒ  Ａｐｒｔ  Ｇｅｎｅ，”  Ｃｅｌｌ  ２２：８１７−８２３）（遺伝子が、それぞれｔｋ細胞、ｈｇｐｒｔ細胞、またはａｐｒｔ細胞で使用され得る）を含む、多くの選択系が使用され得る。また代謝拮抗薬の抵抗性が、以下の遺伝子：ｄｈｆｒ（メトトレキサートに対する抵抗性を提供する）（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８０）  “Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ  Ｗｉｔｈ  Ａｎ  Ａｍｐｌｆｉａｂｌｅ  Ｄｏｍｉｎａｎｔ−Ａｃｔｉｎｇ  Ｇｅｎｅ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ７７：３５６７−３５７０；  Ｏ’Ｈａｒｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８１）  “Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍｏｕｓｅ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｂｙ  Ａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  Ａ  Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ  Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ７８：１５２７−１５３１）；ｇｐｔ（ミコフェノール酸に対する抵抗性を提供する）（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８１）  “Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  Ｆｏｒ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ  Ｔｈａｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｔｈｅ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｇｅｎｅ  Ｃｏｄｉｎｇ  Ｆｏｒ  Ｘａｎｔｈｉｎｅ−Ｇｕａｎｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ７８：２０７２−２０７６）；ｎｅｏ（アミノグリコシドＧ−４１８に対する抵抗性を提供する）（Ｔａｃｈｉｂａｎａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  “Ａｌｔｅｒｅｄ  Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｔｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｅｄ  Ｂｙ  Ｈｕｍａｎ−Ｈｕｍａｎ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ｃｅｌｌｓ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ  Ｂｙ  ｐＳＶ２−Ｎｅｏ  Ｇｅｎｅ，”  Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６（３）：２１９−２２６；  Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ  （１９９３）  “Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｒｉａｌｓ  Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｄｉｒｅｃｔｉ���ｎｓ，”  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  ３２：５７３−５９６；  Ｍｕｌｌｉｇａｎ  （１９９３）  “Ｔｈｅ  Ｂａｓｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２；およびＭｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  “Ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ，”  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ６２：１９１−２１７）に対する選択の基準として使用され得る。使用され得る組み換えＤＮＡ技術の当該分野で一般に知られている方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  １９９３，  ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ＮＹ；  Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，  １９９０，  ＧＥＮＥ  ＴＲＡＮＳＦＥＲ  ＡＮＤ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ；  ａｎｄ  ｉｎ  Ｃｈａｐｔｅｒｓ  １２  ａｎｄ  １３，  Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ），  １９９４，  ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＨＵＭＡＮ  ＧＥＮＥＴＩＣＳ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ＮＹ．；  Ｃｏｌｂｅｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８１）  “Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｏｍｉｎａｎｔ  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｍａｒｋｅｒ  Ｆｏｒ  Ｈｉｇｈｅｒ  Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ，”  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １５０：１−１４；およびｈｙｇｒｏ（ハイグロマイシンに対する抵抗性を提供する）（Ｓａｎｔｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８４）  “Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｇｅｎｅｓ  Ｆｏｒ  Ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ  Ｂ  Ａｎｄ  Ｇ４１８  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ａｓ  Ｄｏｍｉｎａｎｔ−Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  Ｍａｒｋｅｒｓ  Ｉｎ  Ｍｏｕｓｅ  Ｌ  Ｃｅｌｌｓ，”  Ｇｅｎｅ  ３０：１４７−１５６）に記載されている。
【００９７】
本発明の抗体の発現レベルは、ベクターの増幅により増大させることができる（レビューとして、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ，  “Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｂａｓｅｄ  Ｏｎ  Ｇｅｎｅ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ｃｌｏｎｅｄ  Ｇｅｎｅｓ  Ｉｎ  Ｍａｍｍａｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ，”  ｉｎ  ＤＮＡ  ＣＬＯＮＩＮＧ，  Ｖｏｌ．  ３．  （Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８７）を参照）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物に存在する阻害剤のレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅した領域は、抗体のヌクレオチド配列に関連しているため、抗体の産生も同様に増大する（Ｃｒｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８３）  “Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ  Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  Ｍｉｎｉｇｅｎｅｓ，”  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３：２５７−２６６）。
【００９８】
宿主細胞は、本発明の２つの発現ベクターである、重鎖由来のポリペプチドをコードする第１のベクターおよび軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２のベクターで、同時にトランスフェクトされ得る。この２つのベクターは、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同一の選択可能なマーカーを含み得る。あるいは、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方をコードする単一のベクターが使用され得る。このような状況では、軽鎖は、毒性のある過剰な遊離する重鎖を回避するために、重鎖より前に配置されるべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ  （１９８６）  “Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ  Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  Ｍｉｎｉｇｅｎｅｓ，”  Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：５６２−５６５；  Ｋｏｈｌｅｒ  （１９８０）  “Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｃｈａｉｎ  Ｌｏｓｓ  Ｉｎ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ｌｉｎｅｓ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ７７：２１９７−２１９９）。重鎖および軽鎖のコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る。
【００９９】
全般的に、特定の細胞株またはトランスジェニック動物で産生される糖タンパク質は、細胞株またはトランスジェニック動物で産生される糖タンパク質に特徴的なグリコシル化のパターンを有する。よって、抗体の特定のグリコシル化のパターンは、抗体を生成するために使用される特定の細胞株またはトランスジェニック動物に応じて変化する。しかしながら、本明細書中提供される核酸分子によりコードされるかまたは本明細書中提供されるアミノ酸配列を含む全ての抗体は、抗体が有し得るグリコシル化のパターンとは無関係に、本発明に含まれる。同様に、特定の実施形態では、非フコシル化Ｎ−グリカンを含むグリコシル化のみを含むグリコシル化のパターンを有する抗体が、これら抗体がｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方においてそれらのフコシル化対応物よりも強力な効力を通常呈することが示されているため、好ましいとされ得る（たとえばＳｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７８：  ３４６６−３４７３  （２００３）；米国特許第６，９４６，２９２号および同第７，２１４，７７５号を参照）。これらの非フコシル化Ｎ−グリカンを有する抗体は、それらの炭水化物の構造がヒトの血清ＩｇＧに存在する集団の通常の成分であるため、免疫原性となる可能性は低い。
【０１００】
本発明の抗体は、組み換え技術により発現された後、たとえばクロマトグラフィー（たとえばイオン交換クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、特にプロテインＡを対象とする特異的な抗原の親和性によるアフィニティクロマトグラフィー、およびサイズカラムクロマトグラフィー（ｓｉｚｉｎｇ  ｃｏｌｕｍｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ））、遠心分離、差次的な溶解度といった抗体の精製の分野で知られているいずれかの方法、または他のいずれかのタンパク質の精製に関する標準的な技術により、精製され得る。
【０１０１】
抗体のコンジュゲート
【０１０２】
本明細書中開示される抗ＣＣＬ１４抗体およびその抗原結合フラグメントはまた、化学的な部分にコンジュゲートされ得る。この化学的な部分は、特に、ポリマー、放射性核種、または細胞傷害性因子であり得る。特定の実施形態では、化学的な部分は、対象の身体で抗体またはフラグメントの半減期を増大させるポリマーである。限定するものではないが、適切なポリマーとして、限定するものではないがポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（たとえば２ｋＤａ、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１２ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａ、または４０ｋＤａの分子量を有するＰＥＧ）、デキストランおよびモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）を含む親水性ポリマーが挙げられる。Ｌｅｅら（１９９９）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．  Ｃｈｅｍ．  １０：９７３−９８１）は、ＰＥＧがコンジュゲートした一本鎖抗体を開示している。Ｗｅｎら（２００１）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．  Ｃｈｅｍ．  １２：５４５−５５３）は、放射性金属キレーター（ジエチレントリアミン五酢酸（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ：ＤＴＰＡ）に結合しているＰＥＧとコンジュゲートしている抗体を開示している。
【０１０３】
本明細書中開示される抗体およびその抗原結合フラグメントはまた、９９Ｔｃ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、１３１Ｉ、１１Ｃ、１５Ｏ、１３Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓ、５１Ｃｒ、５７Ｔｏ、２２６Ｒａ、６０Ｃｏ、５９Ｆｅ、５７Ｓｅ、１５２Ｅｕ、６７ＣＵ、２１７Ｃｉ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、４７Ｓｃ、１０９Ｐｄ、２３４Ｔｈ、および４０Ｋ、１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、５２Ｔｒ、および５６Ｆｅなどの標識とコンジュゲートされ得る。
【０１０４】
本明細書中開示される抗体およびその抗原結合フラグメントはまた、たとえば生物学的な（たとえば血清）半減期を増大させるために、ＰＥＧ化され得る。抗体またはフラグメントをＰＥＧ化するために、抗体またはフラグメントを、通常、１つ以上のＰＥＧ基が抗体または抗体フラグメントに結合する条件下で、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の反応型と反応させる。特定の実施形態では、ＰＥＧ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類縁体である反応性のある水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して行われる。本明細書中使用される場合、用語「ポリエチレングリコール」は、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシまたはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドなどの、他のタンパク質を誘導体化させるために使用されているＰＥＧの形態のいずれかを包有するように意図されている。特定の実施形態では、ＰＥＧ化される抗体またはフラグメントは、非グリコシル化抗体またはフラグメントである。タンパク質をＰＥＧ化するための方法は、当該分野で知られており、本発明の抗体に適用され得る。たとえば、欧州特許第０  １５４  ３１６号および同第０  ４０１  ３８４号を参照されたい。
【０１０５】
また本明細書中開示される抗体および抗原結合フラグメントは、希土類のキレート、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、イソチオシアネート、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒド（ｐｈｔｈａｌａｄｅｈｙｄｅ）、フルオレサミン、１５２Ｅｕ、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェリン、ルミナール標識（ｌｕｍｉｎａｌ  ｌａｂｅｌ）、イソルミナール標識（ｉｓｏｌｕｍｉｎａｌ  ｌａｂｅｌ）、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジミウム塩標識（ａｃｒｉｄｉｍｉｕｍ  ｓａｌｔ  ｌａｂｅｌ）、シュウ酸エステル標識、エクオリン標識、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、ビオチン／アビジン、スピン標識、および安定した遊離ラジカルなどのフルオロフォアを含む蛍光標識または化学発光標識とコンジュゲートされ得る。
【０１０６】
また本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントは、ジフテリア毒素、緑膿菌外毒素のＡ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデッシンＡ鎖、αサルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）のタンパク質および化合物（たとえば脂肪酸）、ジアンチンタンパク質、フィットイアッカ・アメリカナ（Ｐｈｙｔｏｉａｃｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）のタンパク質ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サポナリア・オフィキナリス（ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびエノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）などの細胞傷害性因子にコンジュゲートされ得る。
【０１０７】
本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントを様々な部分にコンジュゲートするための当該分野で知られているいずれかの方法が、使用されてもよく、これにはＨｕｎｔｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９６２）  Ｎａｔｕｒｅ  １４４：９４５；  Ｄａｖｉｄ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９７４）  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １３：１０１４；  Ｐａｉｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８１）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈ．  ４０：２１９；およびＮｙｇｒｅｎ，  Ｊ．，  （１９８２）  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．  ３０：４０７により記載される方法が含まれる。抗体およびフラグメントをコンジュゲートするための方法は、ありふれたものであり、当該分野で非常によく知られている。
【０１０８】
抗ＣＣＬ１４抗体の治療上の使用
【０１０９】
さらに、本明細書中開示される単離された抗体または抗原結合フラグメントでの処置を必要とするヒト対象を含む対象を処置する方法が提供される。
【０１１０】
本発明の抗ＣＣＬ１４抗体および抗原結合フラグメント（たとえば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）の医薬組成物または無菌性組成物を調製するために、抗体またはその抗原結合フラグメントは、薬学的に許容される担体または賦形剤と混合される。たとえばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｕ．Ｓ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：    Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ  （１９８４）を参照されたい。
【０１１１】
治療および診断用作用物質の製剤は、たとえば凍結乾燥した粉末、スラリー、水溶液または懸濁物の形態で、許容される担体、賦形剤、または安定化剤と混合することにより調製され得る（たとえば、Ｈａｒｄｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｇｅｎｎａｒｏ  （２０００）  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ａｖｉｓ，  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  （１９９３）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ；  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  （１９９０）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｔａｂｌｅｔｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ；  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  （１９９０）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ；  Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ  （２０００）  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹを参照）。
【０１１２】
単独でかまたは別の治療用作用物質と併用して投与される本発明の抗体の毒性および治療効果は、たとえばＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療上有効な用量）を決定するための、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手法により決定され得る。毒性効果および治療効果の間の用量比は治療指数（ＬＤ５０／ＥＤ５０）である。これら細胞培養物のアッセイおよび動物試験から得られたデータは、ヒトに使用するための用量の範囲の定式化に使用され得る。このような化合物の用量は、好ましくは、ほとんどまたは全く毒性のないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。用量は、使用される剤形および投与経路に応じて、この範囲の中で変動し得る。
【０１１３】
さらなる実施形態では、ＰＤＲ（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）  ２００３（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；  ５７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １，  ２００２））にしたがい、本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメント（たとえば抗体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）と関連づけて対象に投与されるさらなる治療用作用物質が提供され得る。
【０１１４】
投与形式は変動し得る。投与経路として、経口投与、直腸投与、経粘膜投与、腸内投与、非経口投与；筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、髄内投与、髄腔内投与、直接的な脳室内投与、静脈内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、眼内投与、吸入投与、吹送法、局所投与、皮膚投与、経皮投与、または動脈内投与が挙げられる。
【０１１５】
特定の実施形態では、本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメント（たとえば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、注射などの侵襲的な経路により投与され得る。本発明のさらなる実施形態では、抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、動脈内投与、腫瘍内投与、または吸入、エアロゾル送達により、投与される。非侵襲的な投与（たとえば丸剤、カプセル剤、または錠剤での経口投与）もまた本発明の範囲内にある。
【０１１６】
本発明は、本発明の抗体または抗原結合フラグメント（たとえば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）またはその医薬組成物のいずれかを含む容器（たとえばプラスチックまたはガラスのバイアル、たとえばキャップまたはクロマトグラフィーカラム、空洞の内径のニードルまたはシリンジシリンダーを伴う）を提供する。また本発明は、本発明の抗体または抗原結合フラグメント（たとえば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）またはその医薬組成物のいずれかを含む注射装置を提供する。注射装置は、非経口経路、たとえば筋肉内経路、皮下経路、または静脈内経路を介して患者の身体の中へ物質を導入する装置である。たとえば注射装置は、たとえば注射される流体（たとえば抗体またはそのフラグメントまたは医薬組成物）を保持するためのシリンダーまたはバレル（ｂａｒｒｅｌ）を含むシリンジ（たとえば、自動注射器などの医薬組成物であらかじめ充填されているシリンジ）、流体の注射のために皮膚および／または血管に穴をあける（ｐｉｅｃｉｎｇ）ためのニードル；およびシリンダーからニードルの穴を介して流体を押し出すためのプランジャーであり得る。本発明の一実施形態では、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物を含む注射装置は、静脈内（ＩＶ）注射装置である。このような装置は、カニューレまたはトロカール／ニードルを介して患者の身体の中へ導入される流体（たとえば生理食塩水；またはＮａＣｌ、乳酸ナトリウム、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２を含み、任意選択でグルコースを含む乳酸リンゲル溶液）を保持するためのバッグまたはリザーバーに結合し得るチューブに結合し得るカニューレまたはトロカール／ニードルに、抗体またはそのフラグメントもしくは医薬組成物を含む。抗体またはそのフラグメントもしくは医薬組成物は、本発明の一実施形態において、トロカールおよびカニューレが対象の静脈に挿入されると装置に導入され得、トロカールは、挿入されたカニューレから取り外される。ＩＶ装置は、たとえば、末梢静脈（たとえば手または腕の静脈）；上大静脈もしくは下大静脈、もしくは心臓の右心房の中（たとえば中心ＩＶ）；または鎖骨下静脈、内頸静脈、もしくは大腿静脈に挿入されてもよく、たとえば、この装置が上大静脈または右心房（たとえば中心静脈ライン）に達するまで心臓に向かって進行させてもよい。本発明の一実施形態では、注射装置は、自動注射器；ジェット注射器、または外部の注入ポンプである。ジェット注射器は、抗体またはそのフラグメントもしくは医薬組成物を患者の身体に導入するために皮膚を透過する液体の高圧の細いジェットを使用する。外部の注入ポンプは、制御された量で患者の身体の中へ抗体またはそのフラグメントもしくは医薬組成物を送達する医療機器である。外部の注入ポンプは、電気または機械により動力供給され得る。異なるポンプが異なる方法で作動し、たとえばシリンジポンプは、シリンジのリザーバー中の流体を保持し、移動可能なピストンは流体の送達を制御し、エラストマーのポンプは、伸縮可能なバルーンのリザーバーにおける流体を保持し、バルーンの弾性のある壁からの圧力は流体送達を駆動する。蠕動ポンプでは、ローラーのセットが、ある長さの可撓性チューブ（ｆｌｅｘｉｂｌｅ  ｔｕｂｉｎｇ）を挟み、流体を前に押し出す。複数のチャネルポンプでは、流体は、複数の速度で複数のリザーバーから送達され得る。
【０１１７】
また、本明細書中開示される医薬組成物は、米国特許第６，６２０，１３５号；同第６，０９６，００２号；同第５，３９９，１６３号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３１２，３３５号；同第５，０６４，４１３号；同第４，９４１，８８０号；同第４，７９０，８２４号または同第４，５９６，５５６号に開示される装置などの針のない皮下注射装置で投与され得る。このような本医薬組成物を含む無針装置もまた本発明の一部である。本明細書中開示される医薬組成物はまた、注入により投与され得る。医薬組成物を投与するためによく知られているインプラントおよびモジュールの例として、制御された速度で医薬を分配するための移植可能なマイクロ注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号；正確な注入速度で医薬を送達するための医薬注入ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２３３号；連続的な薬物送達のための変動可能な流量を移植可能な注入装置を開示する米国特許第４，４４７，２２４号；複数のチャンバー区画を有する浸透性薬物送達を開示する米国特許第４，４３９，１９６号に開示されるものが挙げられる。このような他の多くのインプラント、送達システム、およびモジュールが当業者によく知られており、本発明の医薬組成物を含むこれらは、本発明の範囲内にある。
【０１１８】
あるいは、全身的な方法よりもむしろ局所的な方法で本発明の抗ＣＣＬ１４抗体または抗原結合フラグメント（たとえば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）が投与されてもよく、たとえば注射を介して、腫瘍、たとえばＣＣＬ１４＋腫瘍に直接抗体またはフラグメントが投与されてもよい。さらに、標的薬物送達システム、たとえば腫瘍、例として免疫病理により性質決定されたＣＣＬ１４＋腫瘍を標的とする組織に特異的な抗体でコーティングされたリポソームにおいて、本抗体またはフラグメントが投与され得る。このリポソームは、罹患した組織により選択的に標的化され取り込まれる。このような方法およびリポソームは、本発明の一部である。
【０１１９】
投与レジメンは、血清または組織の治療用抗体または抗原結合フラグメントの代謝回転速度、症状のレベル、治療用抗体の免疫原性、および生物学的なマトリックスにおける標的細胞のアクセス可能性を含むいくつかの要因に応じて変化する。好ましくは、投与レジメンは、標的の疾患状態の改善に影響を与えるために十分な治療用抗体またはフラグメントを送達し、同時に望ましくない副作用を最小限にする。よって、送達される生体物質の量は、特定の治療用抗体および処置される病態の重症度に部分的に依存する。治療用抗体またはフラグメントの適切な用量を選択する際のガイダンスが入手可能である（たとえば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ  （１９９６）  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．  Ｌｔｄ，  Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，  ＵＫ；  Ｋｒｅｓｉｎａ  （ｅｄ．）  （１９９１）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｂａｃｈ  （ｅｄ．）  （１９９３）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｂａｅｒｔ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４８：６０１−６０８；  Ｍｉｌｇｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４１：１９６６−１９７３；  Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４４：７８３−７９２；  Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４２：６１３−６１９；  Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４８：２４−３２；  Ｌｉｐｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４３：１５９４−１６０２を参照）。
【０１２０】
適切な用量の決定は、たとえば処置に影響を与えることが当該分野で知られているかまたは疑われているパラメータまたは要因を使用して、臨床医によりなされる。全般的に、投与は、至適用量よりもいくらか少ない量で開始し、それ以降は、いずれかの負の副作用と比較して所望のまたは最適な効果が達成されるまで、わずかずつ増加する。重要な診断測定は、たとえば炎症または炎症性サイトカインの産生レベルの症状の測定を含む。一般に、使用される生体物質は、処置のために標的化される動物と同じ種に由来しており、これにより試薬に対するいずれの免疫応答をも最小限にすることが望ましい。ヒト対象の場合、たとえばヒト化抗体および完全にヒトの抗体が望ましいとされ得る。
【０１２１】
本明細書中開示される抗体またはその抗原結合フラグメント（たとえば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、連続注入により提供されてもよく、またはたとえば毎日、１週間あたり１〜７回、毎週、隔週、毎月、隔月、年４回、半年ごと、１年ごとなどで投与される用量により提供されてもよい。用量は、たとえば静脈内投与、皮下投与、局所投与、経口投与、経鼻投与、直腸投与、筋肉内投与、脳内投与、脊髄内投与、または吸入により提供され得る。１週間の総用量は、全般に、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重、より一般的には少なくとも０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上である（たとえばＹａｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４９：４２７−４３４；  Ｈｅｒｏｌｄ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４６：１６９２−１６９８；  Ｌｉｕ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  Ｐｓｙｃｈ．  ６７：４５１−４５６；  Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０００３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ５２：１５１−１４４を参照）。また用量は、０．１、０．３、１、３、１０、３０、１００、３００μｇ／ｍｌまたはそれ以上などの、対象の血清における抗ＣＣＬ１４抗体の所定の標的濃度を達成するために提供され得る。他の実施形態では、本発明の抗ＣＣＬ１４抗体は、たとえば毎週、隔週、「４週間ごと」、毎月、隔月、または年４回の基準で、１０、２０、５０、８０、１００、２００、５００、１０００、または２５００ｍｇ／対象で、たとえば皮下投与または静脈内投与により投与される。
【０１２２】
本明細書中使用される場合、用語「有効量」は、細胞、組織、または対象へ単独でかまたはさらなる治療用作用物質と併用して投与される際に、疾患、たとえば癌または癌の進行のうちの１つ以上の症状の測定可能な改善をもたらすために有効である、本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメント（たとえば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）の量を表す。有効用量はさらに、症状の少なくとも部分的な寛解、たとえば腫瘍の縮小または排除、腫瘍成長がないこと、生存期間の増大をもたらすために十分な本抗体またはフラグメントの量を表す。単独で投与される個別の有効成分に適用される場合、有効用量は、単独の成分の用量を表す。併用に適用される場合、有効用量は、併用において段階的または同時に投与されるかどうかにかかわらず、治療効果をもたらす複数の有効成分の組み合わせた量を表す。治療用物質の有効な量は、少なくとも１０％、通常は少なくとも２０％；好ましくは少なくとも３０％；より好ましくは少なくとも４０％、および最も好ましくは少なくとも５０％、診断の測定値またはパラメータの改善をもたらす。また有効量は、疾患の重症度を評価するために主観的な測定を使用する場合の主観的な測定の改善をももたらし得る。
【０１２３】
実験および診断での使用
【０１２４】
本明細書中開示される抗ＣＣＬ１４抗体およびその抗原結合フラグメントは、アフィニティ精製剤として使用され得る。このプロセスでは、抗ＣＣＬ１４抗体およびその抗原結合フラグメントは、当該分野でよく知られている方法を使用して、Ｓｅｐｈａｄｅｘ、ガラス、またはアガロース樹脂、またはフィルター紙などの固相に固定される。固定された抗体またはフラグメントは、ＣＣＬ１４タンパク質（またはそのフラグメント）を含むサンプルと接触させて精製され、その後この担体（ｓｕｐｐｏｒｔ）を、固定した抗体またはフラグメントに結合するＣＣＬ１４タンパク質を除くサンプル中の実質的に全ての物質を除去する適切な溶媒で洗浄する。最後に、この担体を、結合したＣＣＬ１４（たとえばプロテインＡ）を溶出する溶媒で洗浄する。このように固定された抗体およびフラグメントは、本発明の一部を形成する。
【０１２５】
さらに、たとえばウェスタンブロットおよび本明細書中論述される他のイムノアッセイに有用である二次抗体を作製するための抗原が提供される。
【０１２６】
抗ＣＣＬ１４抗体（たとえばヒト化抗体）およびその抗原結合フラグメントはまた、たとえば特定の細胞、組織、または血清、たとえばメラノーマ細胞などの腫瘍細胞でその発現を検出する、ＣＣＬ１４タンパク質に関する診断アッセイにも有用であり得る。このような診断方法は、様々な疾患の診断に有用であり得る。
【０１２７】
本発明は、本明細書中開示される抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメント（たとえば抗体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）の使用を組み込むＥＬＩＳＡアッセイ（酵素結合免疫吸着測定法）を含む。
【０１２８】
たとえば、このような方法は、以下のステップ：
（ａ）抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメントで基質（たとえばマイクロタイタープレートのウェル、たとえばプラスティックプレートの表面）をコーティングするステップと、
（ｂ）ＣＣＬ１４の存在について試験されるサンプルを基質にアプライするステップと、
（ｃ）サンプル中の結合していない物質が除去されるようにプレートを洗浄するステップと、
（ｄ）ＣＣＬ１４抗原にも特異的である、検出可能なように標識された抗体（たとえば酵素結合した抗体）をアプライするステップと、
（ｅ）結合していない標識した抗体が除去されるように基質を洗浄するステップと、
（ｆ）標識した抗体が酵素結合している場合に、酵素により蛍光シグナルに変換される化学物質をアプライするステップと、
（ｇ）標識した抗体の存在を検出するステップと
を含む。
基質と結合した標識の検出は、ＣＣＬ１４タンパク質の存在を表す。
【０１２９】
さらなる実施形態では、標識された抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＢＴＳ（たとえば２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸））または３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンと反応して検出可能な色の変化をもたらすペルオキシダーゼで標識される。あるいは標識された抗体またはフラグメントは、光（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）の存在下でのシンチレーションカウンターにより検出され得る検出可能な放射性同位体（たとえば３Ｈ）で標識される。
【０１３０】
本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメントは、ウェスタンブロットまたは免疫−タンパク質ブロットの手法に使用され得る。このような手法は、本発明の一部を形成し、たとえば任意選択で、ＣＣＬ１４の存在について試験されるサンプルから（たとえば試料中のタンパク質のＰＡＧＥまたはＳＤＳ−ＰＡＧＥの電気泳動分離から）当該分野で知られている方法（例えばセミドライ型のブロッティングまたはタンクブロッティング）を使用して膜または他の固体の基板の上にタンパク質を移動させるステップと、結合したＣＣＬ１４またはそのフラグメントの存在に関して試験される膜または他の固体の基板を、本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させるステップと；結合していない抗ＣＣＬ１４抗体またはフラグメントおよび他の結合していない物質を除去するために、上記膜を１回以上洗浄するステップと；結合した抗ＣＣＬ１４抗体またはフラグメントを検出するステップとを含む。
【０１３１】
このような膜は、未変性のＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）ゲルまたはＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）ゲルにおいてＣＣＬ１４の存在について試験されるタンパク質が（たとえばゲルにおける電気泳動分離の後に）移動したニトロセルロースまたはビニルベースの（たとえばポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ））の膜の形態をとり得る。膜を抗ＣＣＬ１４抗体またはフラグメントと接触させる前に、膜は、任意選択で、たとえば膜上の非特異的なタンパク質結合部位を結合するために非脂肪のドライミルクなどでブロッキングされる。
【０１３２】
結合した抗体またはフラグメントの検出は、ＣＣＬ１４タンパク質が、膜または基質の上、およびサンプルに存在することを表す。結合した抗体またはフラグメントの検出は、抗体またはフラグメントを、検出可能なように標識される二次抗体（抗イムノグロブリン抗体）と結合させたのち、二次抗体の存在を検出することによるものであり得る。
【０１３３】
本明細書中開示される抗ＣＣＬ１４抗体およびその抗原結合フラグメントはまた、免疫組織化学検査に使用され得る。このような方法は、本発明の一部を形成し、たとえば、ＣＣＬ１４タンパク質の存在について試験される細胞（たとえばメラノーマ細胞などの腫瘍細胞）を、本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させるステップと；細胞の表面または内部において抗体またはフラグメントを検出するステップとを含む。
【０１３４】
抗体またはフラグメント自体が検出可能なように標識される場合、これは直接検出され得る。あるいは抗体またはフラグメントは、検出可能なように標識されて検出される二次抗体により結合され得る。
【０１３５】
本明細書中開示される特定の抗ＣＣＬ１４抗体およびその抗原結合フラグメントはまた、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍のイメージングに使用され得る。このような方法は、放射標識した抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメントを、ＣＣＬ１４の発現に関連する腫瘍（たとえば腫瘍細胞表面上でＣＣＬ１４を発現する腫瘍）の存在について試験される患者の身体に注射した後、たとえば、腫瘍に結合している高濃度の抗体またはフラグメントを含む部位（ｌｏｃｉ）といった、標識した抗体またはフラグメントの存在を検出するために、患者の身体の放射性イメージングを行うことを含み得る。部位の検出は、ＣＣＬ１４＋腫瘍および腫瘍細胞の存在を表す。
【０１３６】
イメージング技術は、ＳＰＥＣＴによるイメージング（単一光子放射断層撮影）またはＰＥＴによるイメージング（ポジトロン断層撮影）を含む。標識は、例として、たとえばＳＰＥＣＴによるイメージングと組み合わせたヨウ素１２３（１２３Ｉ）およびテクネチウム９９ｍ（９９ｍＴｃ）、またはたとえばＰＥＴによるイメージングと組み合わせた１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、もしくは１８Ｆ、またはインジウム１１１（たとえばＧｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００５）  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖ．  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．  ６７：３８５−４４０を参照）を含む。
【０１３７】
医薬組成物および投与
【０１３８】
本発明の抗ＣＣＬ１４抗体およびその抗原結合フラグメントの医薬組成物または無菌性組成物を調製するために、抗体またはその抗原結合フラグメントは、薬学的に許容される担体または賦形剤と混合される。たとえばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｕ．Ｓ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ  （１９８４）を参照されたい。
【０１３９】
治療および診断用作用物質の製剤は、たとえば凍結乾燥した粉末、スラリー、水溶液または懸濁物の形態で、許容される担体、賦形剤、または安定化剤と混合することにより調製され得る（たとえば、Ｈａｒｄｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｇｅｎｎａｒｏ  （２０００）  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ａｖｉｓ，  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  （１９９３）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ；  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  （１９９０）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｔａｂｌｅｔｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ；  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  （１９９０）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ；  Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ  （２０００）  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹを参照）。
【０１４０】
単独でかまたは別の治療用作用物質と併用して投与される本発明の抗体の毒性および治療効果は、たとえばＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療上有効な用量）を決定するための、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手法により決定され得る。毒性効果および治療効果の間の用量比は治療指数（ＬＤ５０／ＥＤ５０）である。これら細胞培養物のアッセイおよび動物試験から得られたデータは、ヒトに使用するための用量の範囲の定式化に使用され得る。このような化合物の用量は、好ましくは、ほとんどまたは全く毒性のないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。用量は、使用される剤形および投与経路に応じて、この範囲の中で変動し得る。
【０１４１】
さらなる実施形態では、ＰＤＲ（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）  ２００３（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；  ５７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １，  ２００２））にしたがい、本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメントと関連づけて対象に投与されるさらなる治療用作用物質が提供され得る。
【０１４２】
投与形式は変動し得る。投与経路として、経口投与、直腸投与、経粘膜投与、腸内投与、非経口投与；筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、髄内投与、髄腔内投与、直接的な脳室内投与、静脈内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、眼内投与、吸入投与、吹送法、局所投与、皮膚投与、経皮投与、腫瘍内投与、または動脈内投与が挙げられる。
【０１４３】
特定の実施形態では、本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメントは、注射などの侵襲的な経路により投与され得る。本発明のさらなる実施形態では、抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、動脈内投与、腫瘍内投与、または吸入、エアロゾル送達により、投与される。非侵襲的な投与（たとえば丸剤、カプセル剤、または錠剤での経口投与）もまた本発明の範囲内にある。
【０１４４】
本発明は、本発明の抗体または抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物のいずれかを含む容器（たとえばプラスチックまたはガラスのバイアル、たとえばキャップまたはクロマトグラフィーカラム、空洞の内径のニードルまたはシリンジシリンダーを伴う）を提供する。また本発明は、本発明の抗体または抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物のいずれかを含む注射装置を提供する。注射装置は、非経口経路、たとえば筋肉内経路、皮下経路、または静脈内経路を介して患者の身体の中へ物質を導入する装置である。たとえば注射装置は、たとえば注射される流体（たとえば抗体またはそのフラグメントもしくは医薬組成物）を保持するためのシリンダーまたはバレル（ｂａｒｒｅｌ）を含むシリンジ（たとえば、自動注射器などの医薬組成物であらかじめ充填されているシリンジ）、流体の注射のために皮膚および／または血管に穴をあける（ｐｉｅｃｉｎｇ）ためのニードル；およびシリンダーからニードルの穴を介して流体を押し出すためのプランジャーであり得る。本発明の一実施形態では、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物を含む注射装置は、静脈内（ＩＶ）注射装置である。このような装置は、カニューレまたはトロカール／ニードルを介して患者の身体の中へ導入される流体（たとえば生理食塩水；またはＮａＣｌ、乳酸ナトリウム、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２を含み、任意選択でグルコースを含む乳酸リンゲル溶液）を保持するためのバッグまたはリザーバーに結合し得るチューブに結合し得るカニューレまたはトロカール／ニードルに、抗体またはそのフラグメントもしくは医薬組成物を含む。抗体またはそのフラグメントもしくは医薬組成物は、本発明の一実施形態において、トロカールおよびカニューレが対象の静脈に挿入されると装置に導入され得、トロカールは、挿入されたカニューレから取り外される。ＩＶ装置は、たとえば、末梢静脈（たとえば手または腕の静脈）；上大静脈もしくは下大静脈、または心臓の右心房の中（たとえば中心ＩＶ）；または鎖骨下静脈、内頸静脈、もしくは大腿静脈に挿入されてもよく、たとえば、この装置が上大静脈または右心房（たとえば中心静脈ライン）に達するまで心臓に向かって進行させてもよい。本発明の一実施形態では、注射装置は、自動注射器；ジェット注射器、または外部の注入ポンプである。ジェット注射器は、抗体またはそのフラグメントもしくは医薬組成物を患者の身体に導入するために皮膚を透過する液体の高圧の細いジェットを使用する。外部の注入ポンプは、制御された量で患者の身体の中へ抗体またはそのフラグメントもしくは医薬組成物を送達する医療機器である。外部の注入ポンプは、電気または機械により動力供給され得る。異なるポンプが異なる方法で作動し、たとえばシリンジポンプは、シリンジのリザーバー中の流体を保持し、移動可能なピストンは流体の送達を制御し、エラストマーのポンプは、伸縮可能なバルーンのリザーバーにおける流体を保持し、バルーンの弾性のある壁からの圧力は流体送達を駆動する。蠕動ポンプでは、ローラーのセットが、ある長さの可撓性チューブを挟み、流体を前に押し出す。複数のチャネルポンプでは、流体は、複数の速度で複数のリザーバーから送達され得る。
【０１４５】
また、本明細書中開示される医薬組成物は、米国特許第６，６２０，１３５号；同第６，０９６，００２号；同第５，３９９，１６３号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３１２，３３５号；同第５，０６４，４１３号；同第４，９４１，８８０号；同第４，７９０，８２４号または同第４，５９６，５５６号に開示される装置などの針のない皮下注射装置で投与され得る。このような本医薬組成物を含む無針装置もまた本発明の一部である。本明細書中開示される医薬組成物はまた、注入により投与され得る。医薬組成物を投与するためによく知られているインプラントおよびモジュールの例として、制御された速度で医薬を分配するための移植可能なマイクロ注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号；正確な注入速度で医薬を送達するための医薬注入ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２３３号；連続的な薬物送達のための変動可能な流量を移植可能な注入装置を開示する米国特許第４，４４７，２２４号；複数のチャンバー区画を有する浸透性薬物送達を開示する米国特許第４，４３９，１９６号に開示されるものが挙げられる。このような他の多くのインプラント、送達システム、およびモジュールが当業者によく知られており、本発明の医薬組成物を含むこれらは、本発明の範囲内にある。
【０１４６】
あるいは、全身的な方法よりもむしろ局所的な方法で本発明の抗ＣＣＬ１４抗体または抗原結合フラグメントが投与されてもよく、たとえば注射を介して、腫瘍、たとえばＣＣＬ１４＋腫瘍に抗体またはフラグメントが直接投与されてもよい。さらに、標的薬物送達システム、たとえば腫瘍、例として免疫病理により性質決定されたＣＣＬ１４＋腫瘍を標的とする組織に特異的な抗体でコーティングされたリポソームにおいて、本抗体またはフラグメントが投与され得る。このリポソームは、罹患した組織により選択的に標的化され取り込まれる。このような方法およびリポソームは、本発明の一部である。
【０１４７】
投与レジメンは、血清または組織の治療用抗体または抗原結合フラグメントの代謝回転速度、症状のレベル、治療用抗体の免疫原性、および生物学的なマトリックスにおける標的細胞のアクセス可能性を含むいくつかの要因に応じて変化する。好ましくは、投与レジメンは、標的の疾患状態の改善に影響を与えるために十分な治療用抗体またはフラグメントを送達し、同時に望ましくない副作用を最小限にする。よって、送達される生体物質の量は、特定の治療用抗体および処置される病態の重症度に部分的に依存する。治療用抗体またはフラグメントの適切な用量を選択する際のガイダンスが入手可能である（たとえば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ  （１９９６）  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．  Ｌｔｄ，  Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，  ＵＫ；  Ｋｒｅｓｉｎａ  （ｅｄ．）  （１９９１）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｂａｃｈ  （ｅｄ．）  （１９９３）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｂａｅｒｔ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４８：６０１−６０８；  Ｍｉｌｇｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４１：１９６６−１９７３；  Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４４：７８３−７９２；  Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４２：６１３−６１９；  Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４８：２４−３２；  Ｌｉｐｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４３：１５９４−１６０２を参照）。
【０１４８】
適切な用量の決定は、たとえば処置に影響を与えることが当該分野で知られているかまたは疑われているパラメータまたは要因を使用して、臨床医によりなされる。全般的に、投与は、至適用量よりもいくらか少ない量で開始し、それ以降は、いずれかの負の副作用と比較して所望のまたは最適な効果が達成されるまで、わずかずつ増加する。重要な診断測定は、たとえば炎症または炎症性サイトカインの産生レベルの症状の測定を含む。一般に、使用される生体物質は、処置のために標的化される動物と同じ種に由来しており、これにより試薬に対するいずれの免疫応答をも最小限にすることが望ましい。ヒト対象の場合、たとえばヒト化抗体および完全にヒトの抗体が望ましいとされ得る。
【０１４９】
本明細書中開示される抗体またはその抗原結合フラグメントは、連続注入により提供されてもよいか、またはたとえば毎日、１週間あたり１〜７回、毎週、隔週、毎月、隔月、年４回、半年ごと、１年ごとなどで投与される用量により提供されてもよい。用量は、たとえば静脈内投与、皮下投与、局所投与、経口投与、経鼻投与、直腸投与、筋肉内投与、脳内投与、脊髄内投与、または吸入により提供され得る。１週間の総用量は、全般に、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重、より一般的には少なくとも０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上である（たとえばＹａｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４９：４２７−４３４；  Ｈｅｒｏｌｄ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４６：１６９２−１６９８；  Ｌｉｕ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  Ｐｓｙｃｈ．  ６７：４５１−４５６；  Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０００３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ５２：１５１−１４４を参照）。また用量は、０．１、０．３、１、３、１０、３０、１００、３００μｇ／ｍｌまたはそれ以上などの、対象の血清における抗ＣＣＬ１４抗体の所定の標的濃度を達成するために提供され得る。他の実施形態では、本発明の抗ＣＣＬ１４抗体は、たとえば毎週、隔週、「４週間ごと」、毎月、隔月、または年４回の基準で、１０、２０、５０、８０、１００、２００、５００、１０００、または２５００ｍｇ／対象で、たとえば皮下投与または静脈内投与により投与される。
【０１５０】
本明細書中使用される場合、用語「有効量」は、細胞、組織、または対象へ、単独でかまたはさらなる治療用作用物質と併用して投与される際に、疾患、たとえば癌または癌の進行のうちの１つ以上の症状の測定可能な改善をもたらすために有効である、本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメントの量を表す。有効用量はさらに、症状の少なくとも部分的な寛解、たとえば腫瘍の縮小または排除、腫瘍成長がないこと、生存期間の増大をもたらすために十分な本抗体またはフラグメントの量を表す。単独で投与される個別の有効成分に適用される場合、有効用量は、単独の成分の用量を表す。併用に適用される場合、有効用量は、併用において段階的または同時に投与されるかどうかにかかわらず、治療効果をもたらす複数の有効成分の組み合わせた量を表す。治療用物質の有効な量は、少なくとも１０％、通常は少なくとも２０％；好ましくは少なくとも３０％；より好ましくは少なくとも４０％、および最も好ましくは少なくとも５０％、診断の測定値またはパラメータの改善をもたらす。有効量はまた、疾患の重症度を評価するために主観的な測定を使用する場合の主観的な測定の改善をももたらし得る。
【０１５１】
キット
【０１５２】
さらに、限定するものではないが本明細書中論述される薬学的に許容される担体および／または治療用作用物質を含む１つ以上の追加的な成分と協同した、限定するものではないが本明細書中論述される抗ＣＣＬ１４抗体または抗原結合フラグメントを含む１つ以上の成分を含むキットが提供される。抗体またはフラグメントおよび／または治療用作用物質は、純粋な組成物として製剤化され得るか、または医薬組成物において薬学的に許容される担体と組み合わせて製剤化され得る。
【０１５３】
一実施形態では、本キットは、１つの容器（たとえば無菌性のガラスまたはプラスチックのバイアル）における本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物と、別の容器（たとえば無菌性のガラスまたはプラスチックのバイアル）におけるその医薬組成物および／または治療用作用物質とを含む。
【０１５４】
別の実施形態では、本キットは、単一の一般的な容器において、任意選択で医薬組成物において、共に製剤化された１つ以上の治療用作用物質と任意選択で併用した、薬学的に許容される担体と本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメントとを含む本発明の組み合わせを含む。
【０１５５】
本キットが対象への非経口投与用の医薬組成物を含む場合、本キットは、当該投与を行うための装置を含み得る。たとえば本キットは、上述のような１つ以上の皮下用ニードルまたは他の注射装置を含み得る。
【０１５６】
本キットは、本キットに本医薬組成物および剤形に関する情報を含む添付文書を含み得る。全般的に、このような情報は、含まれている医薬組成物および剤形を有効かつ安全に使用するように患者および医師を支援する。たとえば本発明の併用に関する以下の情報：薬物動態、薬力学、臨床試験、効力のパラメータ、効能および使用、禁忌、警告、事前注意、有害反応、過量、適切な用量および投与、どのように供給されるか、適切な保存条件、参照文献、製造社／代理店の情報、ならびに特許の情報が、この添付文書に供給され得る。
【０１５７】
便宜上、本発明の抗ＣＣＬ１４抗体またはその抗原結合フラグメントは、キット、すなわち診断アッセイまたは検出アッセイを行うための説明書を伴う、所定の量の試薬の組み合わせのパッケージに提供され得る。抗体またはフラグメントが酵素で標識される場合、本キットは、酵素が必要とする基質および補因子（たとえば検出可能な発色団またはフルオロフォアを提供する基質前駆体）を含む。さらに、他の添加剤、たとえば安定化剤、バッファー（たとえばブロッキングバッファーまたは溶解バッファー）などが含まれていてもよい。様々な試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液における濃度を提供するために幅広く変動し得る。特に、溶解が適切な濃度を有する試薬溶液を提供する賦形剤を含む試薬が、乾燥した粉末、通常凍結乾燥した粉末として提供され得る。
【０１５８】
また、たとえばＥＬＩＳＡ（サンドイッチ型または競合形式）などのイムノアッセイを含む様々な検出アッセイで使用するための診断または検出試薬および１つ以上のこのような試薬を含むキットが提供される。キットの成分は、固体の担体にあらかじめ結合されていてもよく、キットを使用する際に固体の担体の表面に適用されてもよい。本発明の一部の実施形態では、シグナル生成手段は、本発明の抗体またはフラグメントとあらかじめ結合していてもよく、または使用する前に、１つ以上の成分、たとえばバッファー、抗体−酵素コンジュゲート、酵素基質などと組み合わせることを必要とし得る。またキットは、たとえば固相表面に対する非特異的な結合を低減するためのブロッキング試薬、洗浄試薬、酵素基質などの追加的な試薬を含み得る。固相表面は、チューブ、ビーズ、マイクロタイタープレート、マイクロスフィア、またはタンパク質、ペプチド、もしくはポリペプチドの固定に適した他の物質の形態であり得る。特定の態様では、化学発光するか（ｃｈｅｍｉｌｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ）もしくは色を生じる生成物の形成、または化学発光するかもしくは色を生じる基質の低減を触媒する酵素は、シグナル生成手段の構成要素である。このような酵素は、当該分野でよく知られている。キットは、本明細書中記載される捕捉試薬および検出試薬のいずれかを含み得る。任意選択で、本キットはまた、本発明の方法を行うための説明書を含み得る。
【０１５９】
また、バイアスまたはビンなどの容器にパッケージングされている抗ＣＣＬ１４抗体（たとえばヒト化抗体）またはその抗原結合フラグメントを含み、さらに、容器に添付されているか容器と共にパッケージングされているラベルであって、容器の中身を説明し、効能および／または本明細書中記載の１つ以上の疾患状態を処置するための容器の中身の使用に関する説明書を提供するラベルを含むキットが提供される。
【０１６０】
一態様では、本キットは癌を処置するためのものであり、抗ＣＣＬ１４抗体（たとえばヒト化抗体）またはその抗原結合フラグメントと、さらなる治療用作用物質またはワクチンとを含む。本キットは、任意選択で、たとえば静脈内投与といった非経口投与用のシリンジをさらに含み得る。別の態様では、本キットは、抗ＣＣＬ１４抗体（たとえばヒト化抗体）またはその抗原結合フラグメントと、ワクチンまたはさらなる治療用作用物質と抗体またはフラグメントの使用を記載する容器に添付されているかまたは容器と共にパッケージングされているラベルとを含む。さらなる別の態様では、本キットは、ワクチンまたはさらなる治療用作用物質と、抗ＣＣＬ１４抗体またはフラグメントとワクチンまたはさらなる治療用作用物質の使用を説明する容器に添付されているかまたは容器と共にパッケージングされているラベルとを含む。特定の実施形態では、抗ＣＣＬ１４抗体およびワクチンまたはさらなる治療用作用物質は、別のバイアルにあるか、または同じ医薬組成物にまとめて組み合わせられている。
【０１６１】
併用療法のセクションで上述されているように、２つの治療用作用物質の同時投与は、複数の作用物質が、これら作用物質が治療効果を発揮している間の期間が重複している限り、同時であるかまたは同じ経路により投与されることを必要としない。同時または連続的な投与は、異なる日数または週数で投与される場合が企図されている。
【０１６２】
また、本明細書中開示される抗体、ペプチド、抗原結合フラグメント、またはポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つと、検出試薬または治療用作用物質として組成物を使用するための説明書とを含む本明細書中開示される治療キットおよび検出キットが調製され得る。このようなキットで使用するための容器は、通常、検出用組成物および／または治療用組成物のうちの１つ以上が載置され、好ましくは適切にアリコートされる少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ビン、シリンジ、または他の適切な容器を含み得る。第２の治療用作用物質が同様に提供される場合、本キットはまた、この第２の検出用および／または治療用組成物が載置され得る第２の別の容器を含み得る。あるいは、複数の化合物が、単一の医薬組成物において調製されてもよく、バイアル、フラスコ、シリンジ、ビン、または他の適切な単一の容器などの単一の容器の手段にパッケージングされ得る。また本明細書中開示されるキットは、通常、所望のバイアルが保たれる射出成形またはブロー成型されたプラスチック容器など、市販するためにバイアルを密閉して収容するための手段を含む。放射標識、発色性標識、蛍光発生標識、または他の種類の検出可能な標識または検出手段が本キットに含まれる場合、標識化剤が、検出用組成物もしくは治療用組成物自体と同じ容器に提供されてもよいか、またはあるいはこの第２の組成物が載置かつ適宜アリコートされ得る第２の別の容器の手段に載置されていてもよい。あるいは、検出試薬および標識は、単一の容器の手段で調製されてもよく、大部分の場合、本キットはまた、通常、市販および／または簡便なパッケージングおよび送達のためにバイアルを密閉させて収容するための手段を含む。
【０１６３】
本明細書中記載の検出方法またはモニタリング方法を行うための装置（ｄｅｖｉｃｅまたはａｐｐａｒａｔｕｓ）もまた提供される。このような装置は、サンプルが投入され得るチャンバーまたはチューブ、任意選択で装置を介してサンプルの流れを配向するためのバルブまたはポンプを含む流体操作システム、任意選択で血液から血漿または血清を分離するためのフィルター、捕捉試薬または検出試薬の添加のための混合チャンバー、ならびに任意選択で、捕捉試薬のイムノ複合体に結合される検出可能な標識の量を検出するための検出装置を含み得る。サンプルの流れは、受動的（たとえば、サンプルが適用されると装置のさらなる操作を必要としない、毛細管、静水学的な力もしくは他の力による）、または能動的（たとえば機械的なポンプ、電気浸透性ポンプ、遠心力、もしくは空気圧の増大を介してもたらされる力の適用による）、または能動的な力および受動的な力の組み合わせによるものであり得る。
【０１６４】
また、さらなる実施形態では、本明細書中記載の方法のいずれかを行うための、プロセッサ、コンピュータ可読メモリ、およびコンピュータ可読メモリに保存されておりプロセッサでの実施に適したルーティンが提供される。適切なコンピュータシステム、環境、および／または構成の例として、パーソナルコンピュータ、サーバコンピュータ、ハンドヘルドデバイスまたはラップトップデバイス、マルチプロセッサシステム、マイクロプロセッサベースのシステム、セットトップボックス、プログラム可能な家電、ネットワークＰＣ、ミニコンピュータ、メインフレームコンピュータ、上記システムもしくはデバイスのいずれかを含むＤＣＥ（ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ  ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ）、または当該分野で知られている他のいずれかのシステムが挙げられる。
【０１６５】
一般的な方法
【０１６６】
分子生物学における標準的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ  （１９８２  ＆  １９８９  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  ２００１  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ；  Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ  （２００１）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  ３ｒｄ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ；  Ｗｕ  （１９９３）  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ，  Ｖｏｌ．  ２１７，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）に記載されている。また標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌｓ．１−４，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹでも出現しており、ここでは、細菌細胞のクローニングおよびＤＮＡの変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳類細胞および酵母のクローニング（Ｖｏｌ．２）、グリココンジュゲートおよびタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。
【０１６７】
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、および結晶化を含むタンパク質精製のための方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｖｏｌ．  １，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の作製、タンパク質のグリコシル化が記載されている（たとえばＣｏｌｉｇａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｖｏｌ．  ２，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；  Ａｕｓｕｂｅｌ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  ３，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．，  ＮＹ，  ＮＹ，  ｐｐ．  １６．０．５−１６．２２．１７；  Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｃｏ．  （２００１）  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ；  ｐｐ．  ４５−８９；  Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  （２００１）  ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，  Ｎ．Ｊ．，  ｐｐ．  ３８４−３９１を参照）。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の生成、精製、および断片化が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  １，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （１９９９）  Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ；  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  上記参照）。リガンド／受容体の相互作用を性質決定するための標準的な技術が利用可能である（たとえばＣｏｌｉｇａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  ４，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ参照）。
【０１６８】
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、およびヒト化抗体が調製され得る（たとえばＳｈｅｐｅｒｄ  ａｎｄ  Ｄｅａｎ  （ｅｄｓ．）  （２０００）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  （ｅｄｓ．）  （２００１）  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ，  ｐｐ．  １３９−２４３；  Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６５：６２０５；  Ｈｅ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６０：１０２９；  Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７４：２７３７１−２７３７８；  Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２：１０６７８−１０６８４；  Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３；  Ｆｏｏｔｅ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ  （１９９２）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２４：４８７−４９９；米国特許第６，３２９，５１１号参照）。
【０１６９】
ヒト化に対する代替例は、ファージ上にディスプレイされたヒト抗体ライブラリーまたはトランスジェニックマウスのヒト抗体ライブラリーを使用することである（Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １４：３０９−３１４；  Ｂａｒｂａｓ  （１９９５）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １：８３７−８３９；  Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６；  Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｃｈａｍｅｓ  （２０００）  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７７；  Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；  Ｋａｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ；  ｄｅ  Ｂｒｕｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １７：３９７−３９９）。
【０１７０】
一本鎖抗体およびジアボディが記載されている（たとえばＭａｌｅｃｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９９：２１３−２１８；  Ｃｏｎｒａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６：７３４６−７３５０；  Ｄｅｓｍｙｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６：２６２８５−２６２９０；  Ｈｕｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｋｏｒｔｔ  （１９９９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１７７−１８９；および米国特許第４，９４６，７７８号を参照）。二官能性抗体が提供されている（たとえば、Ｍａｃｋ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９２：７０２１−７０２５；  Ｃａｒｔｅｒ  （２００１）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：７−１５；  Ｖｏｌｋｅｌ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １４：８１５−８２３；  Ｓｅｇａｌ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：１−６；  Ｂｒｅｎｎａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３；  Ｒａｓｏ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２：２７６２３；  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  （１９８５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７；  Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １０：３６５５−３６５９；ならびに米国特許第５，９３２，４４８号、同第５，５３２，２１０号、および同第６，１２９，９１４号を参照）。
【０１７１】
また多重特異性抗体が提供されている（たとえば、Ａｚｚｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６１：３４９３；  Ｋｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６２：６９０１；  Ｍｅｒｃｈａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ７４：９１１５；  Ｐａｎｄｅｙ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７５：３８６３３；  Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２７６：１２９９９；  Ｐｒｏｐｓｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６５：２２１４；  Ｌｏｎｇ  （１９９９）  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７：８７５）；  Ｌａｂｒｉｊｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １１０：  ５１４５−５０，  ２０１３；  ｄｅ  Ｊｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＬＯＳ  Ｂｉｏｌ  １４（１）：  ｅ１００２３４４，  ２０１６  （ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｂｉｏ．１００２３４４を参照）。
抗原の精製は、抗体の作製に必要ではない。動物は、目的の抗原を有する細胞で免疫化され得る。次に、脾細胞を、免疫化した動物から単離することができ、この脾細胞を骨髄腫細胞株と融合してハイブリドーマを作製することができる（たとえば、Ｍｅｙａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：２８３−２９０；  Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：２３３−２４２；  Ｐｒｅｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ｓｕｐｒａ；  Ｋａｉｔｈａｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６３：５１５７−５１６４を参照）。
【０１７２】
抗体は、たとえば小さな薬物分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲートされ得る。抗体は、治療、診断、キット、または他の目的に有用であり、たとえば色素、放射性同位体、酵素、または金属、たとえばコロイド状の金に結合した抗体を含む（たとえばＬｅ  Ｄｏｕｓｓａｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４６：１６９−１７５；  Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６０：３８９１−３８９８；  Ｈｓｉｎｇ  ａｎｄ  Ｂｉｓｈｏｐ  （１９９９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６２：２８０４−２８１１；  Ｅｖｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６８：８８３−８８９を参照）。
【０１７３】
蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）を含むフローサイトメトリーのための方法が利用可能である（たとえばＯｗｅｎｓ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｈｏｂｏｋｅｎ，  ＮＪ；  Ｇｉｖａｎ  （２００１）  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，  ２ｎｄ  ｅｄ．；  Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，  Ｈｏｂｏｋｅｎ，  ＮＪ；  Ｓｈａｐｉｒｏ  （２００３）  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｈｏｂｏｋｅｎ，  ＮＪを参照）。たとえば診断試薬として使用するための、核酸のプライマーおよびプローブ、ポリペプチド、ならびに抗体を含む核酸の修飾に適切な蛍光試薬が利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  （２００３）  Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｅｕｇｅｎｅ，  ＯＲ；  Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  （２００３）  Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）。
【０１７４】
免疫系の組織検査の標準的な方法が記載されている（たとえば、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ  （ｅｄ．）  （１９８６）  Ｈｕｍａｎ  Ｔｈｙｍｕｓ：  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｈｉａｔｔ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｃｏｌｏｒ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｐｈｉｌａ，  ＰＡ；  Ｌｏｕｉｓ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｂａｓｉｃ  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：  Ｔｅｘｔ  ａｎｄ  Ａｔｌａｓ，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹを参照）。
【０１７５】
たとえば抗原性フラグメント、リーダー配列、タンパク質のフォールディング、機能的なドメイン、グリコシル化部位、および配列アライメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースが、利用可能である（たとえば、ＧｅｎＢａｎｋ，  Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（登録商標）  Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，  Ｉｎｃ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ）；ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ  Ｃｏｒｐ．，  Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｂａｙ，  Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １６：  ７４１−７４２；Ｍｅｎｎｅ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｎｏｔｅ  １６：７４１−７４２；Ｗｒｅｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｃｏｍｐｕｔ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  Ｂｉｏｍｅｄ．  ６８：１７７−１８１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ  （１９８３）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １３３：１７−２１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ  （１９８６）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １４：４６８３−４６９０を参照）。
【０１７６】
以下は、本発明の好ましい実施形態である。
１．ヒトＣＣＬ１４に特異的に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ｉ）
配列番号１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、または
配列番号１９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列
を含む重鎖可変領域と、
（ｉｉ）
配列番号２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、
配列番号１８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列、または
配列番号２０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列
を含む軽鎖可変領域と
を含む、
モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
２．前記抗体が、
配列番号１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（２Ｈ３／２Ｋ１）、
配列番号３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（３Ｈ１／３Ｋ１）、
配列番号５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（４Ｈ１／４Ｋ３）、
配列番号７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１０Ｈ３／１０Ｋ１）、
配列番号９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１２Ｈ２／１２Ｋ１）、
配列番号１１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１７Ｈ２／１７Ｋ１）、
配列番号１３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１８Ｈ１／１８Ｋ１）、
配列番号１５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１９Ｈ２／１９Ｋ３）、
配列番号１７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（２５Ｈ２／２５Ｋ１）、または
配列番号１９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（３１Ｈ１／３１Ｋ１）
を含む、実施形態１に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
３．前記抗体が、
配列番号１の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号２の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（２Ｈ３／２Ｋ１）、
配列番号３の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（３Ｈ１／３Ｋ１）、
配列番号５の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号６の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（４Ｈ１／４Ｋ３）、
配列番号７の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号８の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１０Ｈ３／１０Ｋ１）、
配列番号９の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１０の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１２Ｈ２／１２Ｋ１）、
配列番号１１の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１２の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１７Ｈ２／１７Ｋ１）、
配列番号１３の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１４の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１８Ｈ１／１８Ｋ１）、
配列番号１５の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１６の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１９Ｈ２／１９Ｋ３）、
配列番号１７の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号１８の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域（２５Ｈ２／２５Ｋ１）、または
配列番号１９の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号２０の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（３１Ｈ１／３１Ｋ１）
を含む、実施形態１に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
４．前記抗体が、シグナル発生エレメントにコンジュゲートされる、実施形態１〜３のうちの１項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
５．前記抗体が、固体の担体に固定される、実施形態１〜３のうちの１項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
６．Ｆ（ａｂ）およびＦ（ａｂ’）２のフラグメントである、実施形態１〜５のうちの１項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
７．実施形態１〜５のうちの１項に記載の第１のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントと、ヒトＣＣＬ１４に特異的に結合する第２のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントとを含むキットであって、
前記第１の抗体または抗原結合フラグメントおよび第２の抗体または抗原結合フラグメントが、ヒトＣＣＬ１４とサンドイッチ複合体を形成する、
キット。
８．前記第２の抗体または抗原結合フラグメントが、前記第１のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントとは異なる、実施形態１〜５のうちの１項に記載の単離されているモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントである、実施形態７に記載のキット。
９．生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連する検出可能なシグナルをもたらすように構成されている使い捨て可能な試験装置をさらに含み、前記第１の抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは前記第２の抗体もしくは抗原結合フラグメントが、前記使い捨て可能な試験装置の中の表面に固定される、実施形態７または８のうちの１項に記載のキット。
１０．前記使い捨て可能な試験装置が、ラテラルフローの試験装置である、実施形態９に記載のキット。
１１．前記第１の抗体または抗原結合フラグメントが、前記使い捨て可能な試験装置の中の表面に固定され、前記第２の抗体または抗原結合フラグメントが、検出可能な標識にコンジュゲートされる、実施形態９または１０のうちの１項に記載のキット。
１２．前記第１の抗体または抗原結合フラグメントが、前記使い捨て可能な試験装置の中の表面に固定され、前記第２の抗体または抗原結合フラグメントが、検出可能な標識にコンジュゲートされ、前記使い捨て可能な試験装置とは別の容器に提供されている、実施形態７または８のうちの１項に記載のキット。
１３．前記キットが、前記検出可能なシグナルをＣＣＬ１４の濃度に関連づけるための較正をさらに含む、実施形態７〜１０のうちの１項に記載のキット。
１４．前記較正が、電子記憶装置に提供される較正曲線である較正曲線である、実施形態１３に記載のキット。
１５．前記キットが、生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連するシグナルを提供するアッセイ方法を行うように構成されており、前記アッセイ方法におけるＣＣＬ１４の最小検出可能濃度が１０ｎｇ／ｍＬ以下である、実施形態７〜１４のうちの１項に記載のキット。
１６．前記キットにおける第１および第２のモノクローナル抗体またはそれらの抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、１０Ｈ３／１０Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、１８Ｈ１／１８Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、および１８Ｈ１／１８Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、または各事例におけるそれらの対応する抗原結合フラグメントからなる群から選択される対である、実施形態７〜１５のうちの１項に記載のキット。
１７．前記第１または第２のうちの１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合し、もう一方の前記第１または第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）、またはＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合する、実施形態７〜１６のうちの１項に記載のキット。
１８．前記第１または第２のうちの１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１またはその抗原結合フラグメントであり、もう一方の前記第１または第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、３１Ｈ１／３１Ｋ１もしくは２Ｈ３／２Ｋ１またはその抗原結合フラグメントである、実施形態６〜１７のうちの１項に記載のキット。
１９．前記第１または第２のうちの１つまたは両方のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ｆ（ａｂ）およびＦ（ａｂ’）２のフラグメントである、実施形態６〜１８のうちの１項に記載のキット。
２０．前記第１または第２のうちの１つまたは両方のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、ウサギ抗体またはその抗原結合フラグメントである、実施形態６〜１９のうちの１項に記載のキット。
２１．前記モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントが、ウサギ抗体またはその抗原結合フラグメントである、実施形態１〜６のうちの１項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
２２．生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量を決定するための方法であって、
ヒトＣＣＬ１４とサンドイッチ複合体を共に形成する第１のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントおよび第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを用いて、生体サンプル上でイムノアッセイを行うステップであって、前記イムノアッセイが、前記サンドイッチ複合体で結合された前記生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連する検出可能なシグナルを提供する、ステップと、
前記検出可能なシグナルを、前記生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連づけるステップであって、前記第１のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントおよび任意選択で前記第２のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントが、実施形態１〜６または２１のうちの１項に記載の抗体である、ステップと
を含む、方法。
２３．前記イムノアッセイにおけるＣＣＬ１４の最小検出可能濃度が、１０ｎｇ／ｍＬ以下である、実施形態２２に記載の方法。
２４．前記イムノアッセイが、ラテラルフロー形式で行われる、実施形態２２または２３のうちの１項に記載の方法。
２５．前記イムノアッセイが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの診断形態である、実施形態２２〜２４のうちの１項に記載の方法。
２６．前記イムノアッセイが、前記ヒト患者のサンプルを使い捨て可能な試験装置に適用することにより行われ、前記検出可能なシグナルが、前記使い捨て可能な試験装置を分析機器に挿入することにより得られ、前記第１および第２の抗体または抗原結合フラグメントを含むサンドイッチ複合体が、前記使い捨て可能な試験装置の所定の領域での検出のため固定され、前記分析機器が、前記固定されたサンドイッチ複合体を検出して前記検出可能なシグナルを提供する、実施形態２２〜２５のうちの１項に記載の方法。
２７．前記第１の抗体または抗原結合フラグメントが、シグナル発生エレメントにコンジュゲートされる、実施形態２２〜２６のうちの１項に記載の方法。
２８．前記第１の抗体または抗原結合フラグメントが、前記ヒト患者のサンプルと反応混合物を形成し、前記ヒト患者のサンプルが、前記反応混合物を前記使い捨て可能な試験装置に適用することにより前記使い捨て可能な試験装置に適用される、実施形態２７に記載の方法。
２９．前記第２の抗体または抗原結合フラグメントが、固体の担体の所定の領域に固定される、実施形態２７または２８に記載の方法。
３０．前記第１および第２の抗体または抗原結合フラグメントが、それぞれ、ウサギ、マウス、ニワトリ、ヤギ、ヒツジ、ロバ、ヒト、ラマ、もしくはラクダ類の抗体、またはその抗原結合フラグメントである、実施形態２２〜２９のうちの１項に記載の方法。
３１．前記第１および第２の抗体または抗原結合フラグメントの少なくとも１つが、ウサギの抗体または抗体フラグメントである、実施形態３０に記載の方法。
３２．前記第１または第２のうちの１つまたは両方のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ｆ（ａｂ）およびＦ（ａｂ’）２のフラグメントである、実施形態２２〜３１のうちの１項に記載の方法。
３３．前記第１のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）、ＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）、ＤＫＷＶＱＤＹＩＫＤＭＫ（配列番号２５）、ＭＤＹＹＥＴＮＳＱＣＳＫ（配列番号２６）、ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）、またはＥＴＮＳＱＣＳＫＰ（配列番号２９）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合し、前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）、ＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）、ＤＫＷＶＱＤＹＩＫＤＭＫ（配列番号２５）、ＭＤＹＹＥＴＮＳＱＣＳＫ（配列番号２６）、ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）、またはＥＴＮＳＱＣＳＫＰ（配列番号２９）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合し、ＣＣＬ１４および前記第１のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントとサンドイッチ複合体を形成する、実施形態２２〜３２のうちの１項に記載の方法。
３４．前記第１のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合し、前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）またはＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合する、実施形態２２〜３３のうちの１項に記載の方法。
３５．前記第１および第２のモノクローナル抗体またはそれらの抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、１０Ｈ３／１０Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、１８Ｈ１／１８Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、および１８Ｈ１／１８Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、または各事例におけるそれらの対応する抗原結合フラグメントからなる群から選択される対である、実施形態２２〜３４のうちの１項に記載の方法。
３６．前記第１または第２のうちの１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１またはその抗原結合フラグメントであり、もう一方の前記第１または第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、３１Ｈ１／３１Ｋ１もしくはその抗原結合フラグメントまたは２Ｈ３／２Ｋ１もしくはその抗原結合フラグメントである、実施形態２２〜３５のうちの１項に記載の方法。
３７．生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量を決定するための方法であって、
ヒトＣＣＬ１４に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを用いて前記生体サンプル上でイムノアッセイを行うステップであって、前記イムノアッセイが、前記生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連する検出可能なシグナルを提供する、ステップと、
前記検出可能なシグナルを、前記生体サンプルにおけるヒトＣＣＬ１４の存在または量に関連づけるステップであって、前記アッセイが、競合アッセイであり、前記モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントが、実施形態１〜６または２１のうちの１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントである、ステップと
を含む、方法。
３８．配列番号１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（２Ｈ３／２Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号２のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
３９．配列番号３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（３Ｈ１／３Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号３のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号４のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
４０．配列番号５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（４Ｈ１／４Ｋ３）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号５のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号６のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
４１．配列番号７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１０Ｈ３／１０Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号７のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号８のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
４２．配列番号９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１２Ｈ２／１２Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号９のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１０のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
４３．配列番号１１由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１７Ｈ２／１７Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１１のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１２のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
４４．配列番号１３由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１８Ｈ１／１８Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１３のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１４のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
４５．配列番号１５由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１６由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（１９Ｈ２／１９Ｋ３）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１５のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１６のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
４６．配列番号１７由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（２５Ｈ２／２５Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１７のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１８のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
４７．配列番号１９由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変領域（３１Ｈ１／３１Ｋ１）であって、前記重鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号１９のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有し、前記軽鎖可変領域が、フレームワーク配列の中で、配列番号２０のフレームワーク配列と少なくとも９０％の配列類似性を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
４８．実施形態３８〜４７のうちの１項に記載の第１のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントと、前記第１のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントと異なる実施形態３８〜４７のうちの１項に記載の第２のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントとを含む、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントの対。
４９．１０Ｈ３／１０Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、１０Ｈ３／１０Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、１８Ｈ１／１８Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、および１８Ｈ１／１８Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、または各事例におけるそれらの対応する抗原結合フラグメントからなる群から選択される、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントの対。
５０．ヒトＣＣＬ１４に特異的に結合し、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合する、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
５１．前記モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントが、配列番号７の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域と、配列番号８の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（１０Ｈ３／１０Ｋ１）とを含む、実施形態５０に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
５２．前記モノクローナル抗体が、１０Ｈ３／１０Ｋ１、その抗原結合フラグメント、そのＦ（ａｂ）フラグメント、またはそのＦ（ａｂ’）２フラグメントである、実施形態５１に記載のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。
５３．実施形態５０〜５２のうちの１項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントと、ヒトＣＣＬ１４に特異的に結合し、配列ＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）、ＤＫＷＶＱＤＹＩＫＤＭＫ（配列番号２５）、ＭＤＹＹＥＴＮＳＱＣＳＫ（配列番号２６）、ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）、またはＥＴＮＳＱＣＳＫＰ（配列番号２９）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合する第２のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントとを含むキットであって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントおよび前記第２の抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒトＣＣＬ１４とサンドイッチ複合体を形成する、キット。
５４．前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＨＳＶＣＴＮＰＳＤＫＷＶＱＤＹＩ（配列番号２３）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合し、前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列ＥＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲ（配列番号２７）、ＴＮＳＱＣＳＫＰＧ（配列番号２８）またはＣＣＦＴＹＴＴＹＫＩＰＲＱＲ（配列番号２４）の全てまたは一部を含むヒトＣＣＬ１４上のエピトープに結合する、実施形態５０〜５３のうちの１項に記載のキット。
５５．前記第１および第２のモノクローナル抗体またはそれらの抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、１０Ｈ３／１０Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、１８Ｈ１／１８Ｋ１−３１Ｈ１／３１Ｋ１の対、および１８Ｈ１／１８Ｋ１−２Ｈ３／２Ｋ１の対、または各事例におけるそれらの対応する抗原結合フラグメントからなる群から選択される抗体の対である、実施形態５０〜５４のうちの１項に記載のキット。
５６．前記第１または第２のうちの１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１またはその抗原結合フラグメントであり、もう一方の前記第１または第２のモノクローナル抗体が、３１Ｈ１／３１Ｋ１もしくは２Ｈ３／２Ｋ１またはその抗原結合フラグメントである、実施形態５５に記載のキット。
５７．前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１９の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号２０の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（３１Ｈ１／３１Ｋ１）を含む、実施形態５３に記載のキット。
５８．前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１またはその抗原結合フラグメントであり、前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、３１Ｈ１／３１Ｋ１またはその抗原結合フラグメントである、実施形態５８に記載のキット。
５９．前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１の重鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する重鎖可変領域および配列番号２の軽鎖可変領域またはそのフレームワーク領域と少なくとも９０％の配列類似性を有する対応する軽鎖可変領域（２Ｈ３／２Ｋ１）を含む、実施形態５３に記載のキット。
６０．前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、１０Ｈ３／１０Ｋ１またはその抗原結合フラグメントであり、前記第２のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、２Ｈ３／２Ｋ１またはその抗原結合フラグメントである、実施形態５９に記載のキット。
６１．前記第１または第２のうちの１つまたは両方のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ｆ（ａｂ）またはＦ（ａｂ’）２のフラグメントである、実施形態５３〜６０のうちの１項に記載のキット。
【０１７７】
実施例
実施例１：ウサギでのモノクローナル抗体の開発
【０１７８】
ニュージーランド種の雌性のウサギを、抗原／アジュバントのエマルジョンを皮下注射（ＳＱ）することにより免疫化した。一次免疫は、完全フロイントアジュバントを用いて行い、その後の全てのブーストでは、不完全フロイントアジュバントを使用した。ウサギに、３週間ごとに、ウサギあたり２５０μｇのＣＣＬ１４抗原をＳＱ注射した（２つの部位、臀部および肩甲骨に交互に行う）。試験出血（ｔｅｓｔ  ｂｌｅｅｄ）を、第２のブーストから７日後に辺縁耳静脈から採取した。この試験出血（免疫血清）を、間接的なＥＬＩＳＡアッセイにより試験し、ウサギの免疫応答がモノクローナル抗体の開発に適切であるかどうかを決定した。応答したウサギに、最終的なＳＱブーストを提供し、４日後に放血を介して安楽死させた。心穿刺を介して全血を回収した。目的の抗体を産生するＢ細胞を、標的抗原での間接的なＥＬＩＳＡにより同定し、イムノグロブリン遺伝子を単離した。重鎖および軽鎖を、別の哺乳類発現ベクターにクローニングし、ＨＥＫ細胞にトランスフェクトし（一過性トランスフェクション）、ウサギのモノクローナル抗体を含む組織培養物の上清を回収した。重鎖および軽鎖の配列は、ＤＮＡシーケンシングにより入手した。
【０１７９】
実施例２：モノクローナル抗体のＣＣＬ１４に対するエピトープマッピング
【０１８０】
本発明の様々なモノクローナル抗体ならびに市販の抗体ＡＦ３２４およびＭＡＢ３２４１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）のエピトープを、線形マッピング法、コンフォメーショナルマッピング法、および不連続なマッピング法を使用してマッピングした。ＡＦ３２４はヤギのポリクローナル抗体であり、ＭＡＢ３２４１は、マウスのモノクローナル抗体である。
【０１８１】
重複する合成ペプチドのライブラリーを使用して線形のエピトープをマッピングする概念は、ＧｅｙｓｅｎおよびＭｅｌｏｅｎ（ＰＮＡＳ  ８１：  ３９９８−４００２，  １９８４）が先駆けであった。線形ペプチドは、専売のハイドロゲル製剤でカバーされた固体の担体上で直接合成した。
【０１８２】
第１のペプチドライブラリーを生成するために、最初に、ＣＣＬ１４タンパク質のアミノ酸配列を、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで、１残基のオフセットで重複する１５残基のフラグメントに分け、その後固体の担体上で合成した。
【０１８３】
第１のライブラリーに由来する第２のペプチドライブラリーでは、１０位および１１位のフラグメントの各残基を、アラニンと置き換えた（ネイティブな残基がアラニンではない限り。（アラニンである場合はグリシンと置き換える））。
【０１８４】
第１のライブラリーに由来する第３のペプチドライブラリーでは、各システインを、Ｃｙｓ−アセトアミドメチル残基と置き換えた。
【０１８５】
第４のペプチドライブラリーでは、最初に、ＣＣＬ１４タンパク質のアミノ酸配列を、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで、１残基のオフセットで重複する２５残基のフラグメントに分け、その後固体の担体上で合成した。
【０１８６】
第５のライブラリーでは、長さ１７の制約されたペプチドを作製した。２〜１６位上に、１残基のオフセットでのＣＣＬ１４の標的配列に由来する１５ｍｅｒのペプチドがある。Ｃｙｓ残基を、１位および１７位に挿入し、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳにより結合させて、ループ状の模倣物を作製した。ネイティブなＣｙｓは、Ｃｙｓ−アセトアミドメチル残基と置き換えた。
【０１８７】
第６のライブラリーでは、長さ２１の制約されたペプチドを作製した。２〜１６位上に、１残基のオフセットでのＣＣＬ１４の標的配列に由来する１９ｍｅｒのペプチドがある。Ｃｙｓ残基を、１位および２１位に挿入し、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳにより結合させて、ループ状の模倣物を作製した。ネイティブなＣｙｓは、Ｃｙｓ−アセトアミドメチル残基と置き換えた。
【０１８８】
第７のライブラリーでは、長さ２７の制約されたペプチドを作製した。２〜２６位上に、１残基のオフセットでのＣＣＬ１４の標的配列に由来する２５ｍｅｒのペプチドがある。Ｃｙｓ残基を、１位および２７位に挿入し、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳにより結合させて、ループ状の模倣物を作製した。ネイティブなＣｙｓは、Ｃｙｓ−アセトアミドメチル残基と置き換えた。
【０１８９】
第８のライブラリーでは、長さ２２のβターンのエピトープ模倣物を作製した。２〜２１上に、１残基のオフセットでのＣＣＬ１４の標的配列に由来する２０ｍｅｒのペプチドがある。１１位および１２位の残基を、「ＰＧ」モチーフに置き換えることにより、β−ターンの形成を誘導した。Ｃｙｓ残基を、１位および２２位に挿入し、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳにより結合させて、模倣物を安定させた。ネイティブなＣｙｓは、Ｃｙｓ−アセトアミドメチル残基と置き換えた。
【０１９０】
第９のライブラリーでは、長さ２２のαヘリックスのエピトープ模倣物を作製した。Ｃｙｓ残基を、１位および５位に挿入し、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳを使用してαヘリックスターンを核とした。Ｃｙｓ残基を、１位および２２位に挿入し、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳにより結合させて、模倣物を安定させた。ネイティブなＣｙｓは、Ｃｙｓ−アセトアミドメチル残基と置き換えた。
【０１９１】
第１０のライブラリーでは、ＣＣＬ１４に由来する長さ２５の複数のペプチドを作製した。２５ｍｅｒのペプチドは、それぞれ、ＣＣＬ１４の翻訳後修飾に関してＵｎｉＰｒｏｔの情報にしたがいジスルフィド架橋を形成することが同定されているシステイン残基の対を含む。ジスルフィド架橋形成に関与していないＣｙｓ残基は、Ｃｙｓ−アセトアミドメチル残基と置き換えた。
【０１９２】
第１１のライブラリーでは、ＣＣＬ１４に由来する長さ２７の複数のペプチドを作製した。２７ｍｅｒのペプチドは、それぞれ、「ＧＧＳＧＧ」リンカーを介して結合している２つの１１ｍｅｒのペプチドから構成されている。２つの組み合わされた１１ｍｅｒは、ＣＣＬ１４の翻訳後修飾に関してＵｎｉＰｒｏｔの情報にしたがいジスルフィド架橋を形成することが同定されているシステイン残基の対を含む。ジスルフィド架橋形成に関与していないＣｙｓ残基は、Ｃｙｓ−アセトアミドメチル残基と置き換えた。
【０１９３】
第１２のライブラリーでは、長さ２７の二環式のペプチドを作製した。２〜１３位および１５〜２６位上に、ＣＣＬ１４の配列に由来する１２ｍｅｒのペプチドがある。Ｃｙｓ残基を、１位、１４位、および２７位に挿入して、Ｔ３  ＣＬＩＰＳにより不連続な模倣物を作製した。ネイティブなＣｙｓは、Ｃｙｓ−アセトアミドメチル残基と置き換えた。
【０１９４】
第１３のライブラリーでは、長さ３３の二環式のペプチドを作製した。２〜１６位および１８〜３２位上に、ＣＣＬ１４の配列に由来する１５ｍｅｒのペプチドがある。Ｃｙｓ残基を、１位、１７位、および３３位に挿入して、Ｔ３  ＣＬＩＰＳにより不連続な模倣物を作製した。ネイティブなＣｙｓは、Ｃｙｓ−アセトアミドメチル残基と置き換えた。
【０１９５】
抗体は、バッファーに希釈し、ペプチドライブラリーのアレイにアプライした。試験される各抗体は、異なるブロッキング条件およびサンプル濃度を試験するために、アレイごとに最適化した。結果を分析し、結合イベントを、少なくとも３回の中央値で記録した。エピトープマッピングは、アレイ全体にわたり高い結合シグナルを示す抗体の場合に排除された。
【０１９６】
アレイに対する結合性に基づき、以下のＣＣＬ１４エピトープを、本発明の抗体に関して同定した。
【表３】
2021509120.tif 000008
【０１９７】
実施例３．抗体の対形成
【０１９８】
本発明の様々な抗体を、ラテラルフロー形式でサンドイッチ複合体を形成する特性に関して試験した。尿を、ＣＣＬ１４抗原の標準物質のサンプルマトリックスとして使用した。抗体の対のうちの１つのメンバー（「ストリップ」抗体）を、ニトロセルロースの膜の上に固定し、抗体の対のもう一方のメンバーを、試験ストリップで読み取るためのＡＳＴＵＴＥ  １４０（登録商標）ｍｅｔｅｒ  ｓｙｓｔｅｍにより検出可能な標識で標識されたコンジュゲートとして調製した。
【０１９９】
ＣＣＬ１４標準物質は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓのカタログ番号３２４−ＨＣを使用して、以下の標的濃度（全てｎｇ／ｍＬ）：２０、５、２、０．５、および０．２に調製した。試験される抗体は、２Ｈ３／２Ｋ１、３１Ｈ１／３１Ｋ１、１８Ｈ１／１８Ｋ１、および１０Ｈ３／１０Ｋ１であった。対形成の結果は、図３に示されている。
【０２００】
対形成するための本発明の抗体の特性をさらに理解するために、様々な抗体のマトリックスを、１００μＬのサンプル体積において単一の５ｎｇ／ｍＬのＣＣＬ１４濃度で解析した。固相の「ストリップ」抗体を、０．２５μｇ／ｍＬの溶液３μＬにおいてニトロセルロースにアプライした。このコンジュゲートを、上記サンプル体積を用いて、１０μｇ／ｍＬの濃度まで混合した。以下の対形成が観察された：
【表４】
2021509120.tif 000009
【０２０１】
本発明を、この分野の当業者がこれを作製および使用するために十分詳細に説明かつ例示してきたが、様々な代替例、修正、および改善は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく明らかである。本明細書中提供される実施例は、好ましい実施形態を代表するものであり、例示であり、本発明の範囲に関する限定として意図されてはいない。この修正および他の使用は、当業者が想定するであろう。これら修正は、本発明の趣旨の中に包有されており、特許請求の範囲により定義されている。
【０２０２】
本明細書中の「または（ｏｒ）」の使用は、他の意味が記載されない限り「および／または」を意味する。同様に、「含む（「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｅ」、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」、および「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」）」は、互換可能であり、限定すると意図されてはいない。
【０２０３】
さらに、様々な実施形態の説明は用語「〜を含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を使用しているが、一部の特定の例で、一実施形態は、代わりに用語「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）または「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」を使用して説明され得ることを当業者が理解していることを理解されたい。
【０２０４】
他の意味で定義されていない限り、本明細書中使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者が一般に理解する意味と同じ意味を有する。ここでは例示的な方法および物質が記載されているが、本明細書記載の方法および試薬と類似または同等のいずれかの方法および試薬が、開示される方法および組成物の実務で使用され得る。
【０２０５】
本明細書中言及される全ての刊行物は、当該刊行物に記載されている方法を説明および開示するために参照により本明細書中に完全に組み込まれており、本明細書中の記載と組み合わせて使用され得る。本明細書で言及されている全ての特許および刊行物は、本開示の出願日より前の時点での、本発明が関連する分野の当業者のレベルを表す。本明細書において、本発明者らは、従来の開示の性質により当該開示に先行する権利がないとの承認として解釈すべきではない。
【０２０６】
本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、本発明中開示される発明に対する様々な置き換えおよび修正がなされ得ることは、すぐに当業者に明らかとなるであろう。
【０２０７】
本明細書中例示的に記載される発明は、本明細書中具体的に開示されていないいずれかの要素、限定の非存在下で適切に行われ得る。よって、たとえば、本明細書中の各例における、「〜を含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」、および「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」のうちのいずれかの用語は、他方の２つの用語のいずれかと置き換わり得る。使用されている用語および表現は、説明の観点として使用されており、限定の観点としては使用されておらず、当該用語および表現の使用において、示され記載されている特性またはその一部のいずれかの均等物を排除する意図はないが、様々な修正が請求される発明の範囲内に恐らくは存在することが認識されている。よって、本発明は好ましい実施形態および任意選択の特性により具体的に開示されているが、開示される本明細書中の概念の修正および変更が当業者により行われてもよいこと、ならびに当該修正および変更が添付の特許請求の範囲により定義される限り本発明の範囲内にあるとみなされることを理解されたい。
【０２０８】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲の中に記載されている。
【図１】
2021509120.tif 000010
【図２】
2021509120.tif 000011
【図３】
2021509120.tif 000012
【手続補正書】
【提出日】令和2年8月28日(2020.8.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021509120000001.app
【国際調査報告】
2021509120.tif 000013
2021509120.tif 000014
2021509120.tif 000015
2021509120.tif 000016