(57)【要約】  本開示は、可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を患者に投与することにより、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状を治療するため、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療するため、または骨癒合を誘導するための方法を特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における神経線維腫症１型（ＮＦ１）の少なくとも１つの症状を治療する方法であって、
ＮＦ１の患者における少なくとも１つの外科的介入と、
前記外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週〜約１２ｍｇ／ｋｇ／週をもたらす投薬量で、前記患者に可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を投与することと、
を含み、前記ｓＡＬＰの前記投与が、次の：
（ｉ）前記患者の基準点で、前記治療前の前記患者の前記基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または
（ｉｉ）前記治療前の前記患者の基準点の骨塩密度と比較して、前記ｓＡＬＰの前記投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、前記基準点の前記骨塩密度における平均変化、
のうちの１つ以上をもたらす、方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つの症状が、脊椎湾曲症、後弯症、骨粗鬆症、椎骨の脆弱、肋骨の薄化、椎骨の回転、楔状椎、椎骨の侵食、回転または角度のある脊椎変形、硬膜拡張症、不完全な骨石灰化、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）の血液および／または尿中レベルの上昇、石灰化減少、高カルシウム尿症、低身長、骨格変形、あひる歩行、骨痛、骨折、脱力感、ならびにピロリン酸カルシウム二水和物結晶沈着のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
患者におけるジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する方法であって、
ジストロフィー脊椎側弯症の患者への少なくとも１つの外科的介入と、
前記外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週〜約１２ｍｇ／ｋｇ／週をもたらす投薬量で、前記患者にｓＡＬＰを投与することと、
を含み、前記ｓＡＬＰの前記投与が、次の：
（ｉ）前記患者の基準点で、前記治療前の前記患者の前記基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または
（ｉｉ）前記治療前の前記患者の基準点の骨塩密度と比較して、前記ｓＡＬＰの前記投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、前記基準点の前記骨塩密度における平均変化、
のうちの１つ以上をもたらす、方法。
【請求項４】
少なくとも１つの症状が、非ジストロフィー脊椎側弯症と比較してより短いおよび／またはより鋭い角度のある湾曲、骨異常、肋骨の薄化、椎骨の脆弱、椎骨の回転、楔状椎、ならびに椎骨の侵食のうちの１つ以上を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ジストロフィー脊椎側弯症が、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症である、請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
患者において骨癒合を誘導する方法であって、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週〜約１２ｍｇ／ｋｇ／週をもたらす投薬量で、前記患者にｓＡＬＰを投与することを含み、前記ｓＡＬＰの前記投与が、外科的介入と併用され、前記ｓＡＬＰの前記投与が、次の：
（ｉ）前記患者の基準点で、前記治療前の前記患者の前記基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または
（ｉｉ）前記治療前の前記患者の基準点の骨塩密度と比較して、前記ｓＡＬＰの前記投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、前記基準点の前記骨塩密度における平均変化、
のうちの１つ以上をもたらす、方法。
【請求項７】
前記骨癒合の増加が、関節固定によって結合された２つの骨間の増加である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記骨癒合の増加が、骨折により分離されている骨の２つの部分間の増加である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記骨癒合の増加が、骨周囲器具類（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ）における増加である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記骨癒合の増加が、陰影度の増加である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記陰影度の増加が、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記外科的介入が、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、および器具類の挿入のうちの１つ以上を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記器具類が、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記外科的介入が、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記患者に１つ以上の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を投与することをさらに含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＢＭＰが、前記外科的介入中に投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記患者に１つ以上のビスホスホネート（複数可）を投与することをさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ビスホスホネートが、前記外科的介入後に投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ビスホスホネートが、前記外科的介入の約３ヶ月後に投与される、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｓＡＬＰが、前記外科的介入の約７ヶ月後に投与される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記患者が、約１２歳である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記患者が、約１２歳より上である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記患者が、約１８歳である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記患者が、約１８歳より上である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記患者が、前記ｓＡＬＰを以前に投与されていない、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ｓＡＬＰが、毎日または毎週の投与用に製剤化される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ｓＡＬＰが、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化される、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ｓＡＬＰが、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ｓＡＬＰが、毎日１回の投与用に製剤化される、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ｓＡＬＰが、連日または隔日での投与用に製剤化される、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記ｓＡＬＰが、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ｓＡＬＰが、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する、または骨癒合を誘導するのに治療的に有効な量で投与される、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記患者が、前記ｓＡＬＰの投与に忍容性を呈する、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記忍容性が、注射部位紅斑、ヘモグロビンの減少、発熱、肺炎、上気道感染、中耳炎、嘔吐、便秘、下痢、歯牙喪失、上咽頭炎、発疹、う蝕、および易刺激性からなる群から選択される有害事象の発生の欠如または減少を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ｓＡＬＰが、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、生理食塩水である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記医薬組成物が、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、および皮内のうちの少なくとも１つの投与用に製剤化される、請求項３５〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記医薬組成物が、皮下投与用に製剤化される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記ｓＡＬＰが、約６ｍｇ／ｋｇ／週〜約９ｍｇ／ｋｇ／週の投薬量で投与される、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列からなる、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
本明細書に記載の特徴のうちの１つ以上を含む、方法。
【請求項４７】
患者における少なくとも１つの骨関連障害を治療する方法であって、
前記患者における少なくとも１つの外科的介入を含み、前記方法が、前記外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週〜約１２ｍｇ／ｋｇ／週をもたらす投薬量で、前記患者に可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を投与することを含み、前記ｓＡＬＰの投与により、前記患者の基準点で、前記治療前の前記患者の前記基準点と比較して、新たな骨形成をもたらす骨癒合が増加する、方法。
【請求項４８】
前記骨癒合の増加が、関節固定により結合された２つの骨間の増加である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記骨癒合の増加が、骨折により分離されている骨の２つの部分間の増加である、請求項４７または４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記骨癒合の増加が、金具と接触している骨における増加である、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、金属ケージ、釘、ピン、またはナットである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記骨癒合の増加が、陰影度の増加である、請求項４７〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記陰影度の増加が、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記外科的介入が、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、および金具の挿入のうちの１つ以上を含む、請求項４７〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記外科的介入が、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む、請求項４７〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記患者に１つ以上の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を投与することをさらに含む、請求項４７〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記ＢＭＰが、前記外科的介入中に投与される、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記患者に１つ以上のビスホスホネート（複数可）を投与することをさらに含む、請求項４７〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記ビスホスホネートが、前記外科的介入後に投与される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ビスホスホネートが、前記外科的介入の約３ヶ月後に投与される、請求項５９または６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記ｓＡＬＰが、前記外科的介入の約７ヶ月後に投与される、請求項４７〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ｓＡＬＰが、毎日または毎週の投与用に製剤化される、請求項４７〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記ｓＡＬＰが、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化される、請求項４７〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ｓＡＬＰが、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される、請求項４７〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記ｓＡＬＰが、毎日１回の投与用に製剤化される、請求項６４または６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記ｓＡＬＰが、連日または隔日での投与用に製剤化される、請求項６４または６５に記載の方法。
【請求項６８】
前記ｓＡＬＰが、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される、請求項４７〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記ｓＡＬＰが、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される、請求項４７〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、生理食塩水である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記医薬組成物が、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、および皮内のうちの少なくとも１つの投与用に製剤化される、請求項６９〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記医薬組成物が、皮下投与用に製剤化される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、請求項４７〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記ｓＡＬＰが、約６ｍｇ／ｋｇ／週〜約９ｍｇ／ｋｇ／週の投薬量で投与される、請求項４７〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４７〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列からなる、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記少なくとも１つの外科的介入が、膝、肩、臀部、足首、肘、もしくは手首の関節鏡検査および半月板切除、肩の関節鏡検査および除圧、手根管開放、膝の関節鏡検査および軟骨形成、支持インプラントの除去、膝の関節鏡検査および前十字靱帯再建、膝置換、大腿骨頸部骨折の修復、転子部骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリードマン、膝の関節鏡検査、片方または両方の半月板の修復、臀部置換、肩の関節鏡検査／鎖骨遠位端切除、回旋腱板の腱の修復、橈骨または尺骨の修復骨折、椎弓切除、足首骨折の修復（２踝型）、肩の関節鏡検査およびデブリードマン、腰部脊椎固定、橈骨の遠位部の修復骨折、下背部椎間板手術、指の腱鞘の切開、足首骨折（腓骨）の修復、大腿骨骨幹部骨折の修復、ならびに転子部骨折の修復からなる群から選択される、請求項４７〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記骨癒合の増加が、関節固定により結合された２つの骨間の増加である、請求項１に記載の方法。
【請求項８２】
前記骨癒合の増加が、骨折により分離されている骨の２つの部分間の増加である、請求項１に記載の方法。
【請求項８３】
前記骨癒合の増加が、骨周囲の金具における増加である、請求項１に記載の方法。
【請求項８４】
前記骨癒合の増加が、陰影度の増加である、請求項１に記載の方法。
【請求項８５】
前記陰影度の増加が、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される、請求項８３に記載の方法。
【請求項８６】
前記外科的介入が、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、および金具の挿入のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８７】
前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記外科的介入が、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８９】
前記患者に１つ以上の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９０】
前記ＢＭＰが、前記外科的介入中に投与される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記患者に１つ以上のビスホスホネート（複数可）を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９２】
前記ビスホスホネートが、前記外科的介入後に投与される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記ビスホスホネートが、前記外科的介入の約３ヶ月後に投与される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９４】
前記ｓＡＬＰが、前記外科的介入の約７ヶ月後に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項９５】
前記患者が、約１２歳である、請求項１に記載の方法。
【請求項９６】
前記患者が、約１２歳より上である、請求項１に記載の方法。
【請求項９７】
前記患者が、約１８歳である、請求項１に記載の方法。
【請求項９８】
前記患者が、約１８歳より上である、請求項１に記載の方法。
【請求項９９】
前記患者が、前記ｓＡＬＰを以前に投与されていない、請求項１に記載の方法。
【請求項１００】
前記ｓＡＬＰが、毎日または毎週の投与用に製剤化される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ｓＡＬＰが、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０２】
前記ｓＡＬＰが、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記ｓＡＬＰが、毎日１回の投与用に製剤化される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記ｓＡＬＰが、連日または隔日での投与用に製剤化される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０５】
前記ｓＡＬＰが、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０６】
前記ｓＡＬＰが、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する、または骨癒合を誘導するのに治療的に有効な量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０７】
前記患者が、前記ｓＡＬＰの投与に忍容性を呈する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０８】
前記忍容性が、注射部位紅斑、ヘモグロビンの減少、発熱、肺炎、上気道感染、中耳炎、嘔吐、便秘、下痢、歯牙喪失、上咽頭炎、発疹、う蝕、および易刺激性からなる群から選択される有害事象の発生の欠如または減少を含む、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記ｓＡＬＰが、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１０】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、生理食塩水である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを含む、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１２】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記医薬組成物が、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、および皮内のうちの少なくとも１つの投与用に製剤化される、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１４】
前記医薬組成物が、皮下投与用に製剤化される、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１６】
前記ｓＡＬＰが、約６ｍｇ／ｋｇ／週〜約９ｍｇ／ｋｇ／週の投薬量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１７】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１８】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列からなる、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記骨癒合の増加が、金具と接触している骨における増加である、請求項４７に記載の方法。
【請求項１２１】
前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、金属ケージ、釘、ピン、またはナットである、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記骨癒合の増加が、陰影度の増加である、請求項４７に記載の方法。
【請求項１２３】
前記陰影度の増加が、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
前記外科的介入が、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、および器具類の挿入のうちの１つ以上を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項１２５】
前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記外科的介入が、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項１２７】
前記患者に１つ以上の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を投与することをさらに含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項１２８】
前記ＢＭＰが、前記外科的介入中に投与される、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
前記患者に１つ以上のビスホスホネート（複数可）を投与することをさらに含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項１３０】
前記ビスホスホネートが、前記外科的介入後に投与される、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３１】
前記ビスホスホネートが、外科的介入の約３ヶ月後に投与される、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３２】
前記ｓＡＬＰが、前記外科的介入の約７ヶ月後に投与される、請求項４７に記載の方法。
【請求項１３３】
前記ｓＡＬＰが、毎日または毎週の投与用に製剤化される、請求項４７に記載の方法。
【請求項１３４】
前記ｓＡＬＰが、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化される、請求項４７に記載の方法。
【請求項１３５】
前記ｓＡＬＰが、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される、請求項４７に記載の方法。
【請求項１３６】
前記ｓＡＬＰが、毎日１回の投与用に製剤化される、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３７】
前記ｓＡＬＰが、連日または隔日での投与用に製剤化される、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３８】
前記ｓＡＬＰが、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される、請求項４７に記載の方法。
【請求項１３９】
前記ｓＡＬＰが、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される、請求項４７に記載の方法。
【請求項１４０】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、生理食塩水である、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを含む、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４２】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記医薬組成物が、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、および皮内のうちの少なくとも１つの投与用に製剤化される、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４４】
前記医薬組成物が、皮下投与用に製剤化される、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、請求項４７に記載の方法。
【請求項１４６】
前記ｓＡＬＰが、約６ｍｇ／ｋｇ／週〜約９ｍｇ／ｋｇ／週の投薬量で投与される、請求項４７に記載の方法。
【請求項１４７】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項１４８】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を含む、請求項１４７に記載の方法。
【請求項１４９】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列からなる、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
前記少なくとも１つの外科的介入が、膝、肩、臀部、足首、肘、もしくは手首の関節鏡検査および半月板切除、肩の関節鏡検査および除圧、手根管開放、膝の関節鏡検査および軟骨形成、支持インプラントの除去、膝の関節鏡検査および前十字靱帯再建、膝置換、大腿骨頸部骨折の修復、転子部骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリードマン、膝の関節鏡検査、片方または両方の半月板の修復、臀部置換、肩の関節鏡検査／鎖骨遠位端切除、回旋腱板の腱の修復、橈骨または尺骨の修復骨折、椎弓切除、足首骨折の修復（２踝型）、肩の関節鏡検査およびデブリードマン、腰部脊椎固定、橈骨の遠位部の修復骨折、下背部椎間板手術、指の腱鞘の切開、足首骨折（腓骨）の修復、大腿骨骨幹部骨折の修復、ならびに転子部骨折の修復からなる群から選択される、請求項４７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
多くの疾患および状態は骨もしくは軟骨の異常な骨格機能、構造、または成長を伴う。そのような疾患の例は、神経線維腫症１型（ＮＦ１またはフォンレックリングハウゼン病）である。ＮＦ１は、およそ３，５００人の出生数に１人の発生率の常染色体性優性遺伝障害である。遺伝子ＮＦ１は、Ｒａｓキナーゼを抑制することが知られているＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質（ＧＡＰ）ファミリーのメンバーであるニューロフィブロミンをコードする。ニューロフィブロミンはｐ２１−ＲＡＳの特異的な抑制因子であり、ＮＦ１遺伝子における突然変異は異常な細胞成長および分化につながるＲＡＳの抑制されない活性化を引き起こす。ＮＦ１の一般的な臨床的特徴には、神経皮膚性神経線維腫および視覚路腫瘍などの様々な発癌性形質転換、ならびに認知障害および骨格異常などの他の非癌兆候が含まれる。
【０００２】
神経線維腫症１型は、脊椎の発達を妨げる可能性がある。この疾患は、硬膜と呼ばれる脊椎の保護被覆に影響を与える場合がある。脊髄神経の神経線維腫による髄液の圧力の増加は、脳脊髄液を含む嚢の膨張である硬膜拡張症をもたらす可能性がある。この状態は、背中および肢の疼痛、膀胱制御問題、ならびに重度の場合、痺れをもたらす場合がある。神経線維腫症は、脊髄におよびその周囲に腫瘍を引き起こす場合もある。この領域において良性腫瘍であっても、最も重度の場合では、疼痛および脱力感を引き起こす可能性がある。骨粗鬆症は神経線維腫症１型の罹患者の間で一般的であり、罹患者は一般的に、年齢別の健康な個体よりも骨密度が低い。
【０００３】
神経線維腫症１型の小児は、ジストロフィー脊椎側弯症、非ジストロフィー脊椎側弯症、および／または後湾症を発症し得る。左から右への脊椎の不規則な側弯の脊椎側弯症、および丸まったまたは前角度のある背中の後湾症は、一緒にまたは別個に、神経線維腫症１型の５人に約１人において生じる。非ジストロフィー脊椎側弯症は、神経線維腫症の小児でも、青年期特発性脊椎側弯症．として知られる「典型的な」脊椎側弯症とかなり似ている。しかしながら、ジストロフィー脊椎側弯症は、脊椎に影響を与える神経線維腫に関連する骨性変化により生じる脊椎側弯症のより重度な形態である。これには、異常に薄い肋骨、椎骨の脆弱、および重度な脊椎彎曲が伴い得る。
【０００４】
ジストロフィー脊椎側弯症は、稀だが、衰弱性神経学的障害（不全対麻痺、対麻痺）に関連し得るＮＦ１の患者において深刻な骨格兆候である。これは、いくつかの椎骨を伴う鋭い角度形成、椎骨回転、椎骨貝状陥凹（ｖｅｒｔｅｂｒａｌ  ｓｃａｌｌｏｐｉｎｇ）、楔状椎、および他のＸ線所見を特徴とする（Ｄｕｒｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。ＮＦ１と診断されたわずか１４歳の患者でも、前後脊椎Ｘ線写真は、わずか３つの椎骨にわたって４９度の湾曲を伴う胸腰部ジストロフィー脊椎側弯症を示す（Ｐｅｔｒｙｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０００５】
ジストロフィー湾曲は、急速な進行の前兆であり、早期固定を必要とし、これは顕著な罹患率に関連する。術後経過は、ＮＦ１患者において本質的に不十分な骨癒合により複雑になり、脊椎後方固定を受けるＮＦ−１の患者の６０〜１００％において偽関節（固定の欠如）をもたらす（Ｄｅｌｕｃｉａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。例えば、治療された脊椎側弯症の３人のＮＦ１患者のうち３人が、青年期特発性脊椎側弯症の１／１００人の患者と比較して、脊椎後方固定後に偽関節を有した。
【０００６】
脊椎側弯症に対する治療は常に困難であるが、ジストロフィー脊椎側弯症が存在する場合、特に困難である。理学療法は脊椎の小さな構造的問題を軽減することができるが、決定的な治療は整形外科手術を必要とすることが多い。例えば、手術による骨の骨化を誘導するための方法である関節固定を用いて、罹患した患者の脊椎固定をもたらすことができる。関節固定は、天然の骨移植片（例えば、自家移植片または同種移植片）の使用、または合成骨代用材の患部への導入を伴い得る。合成骨代用材の例としては、ヒドロキシアパタイトまたはリン酸三カルシウムに基づく顆粒、ならびに骨形成タンパク質（ＢＭＰ）が挙げられる。別の選択肢は、骨の成長に有利に働く位置に金属インプラントを骨に取り付けて、それらを一緒に保持することである。関節固定は一般的に、例えば、脊椎、手、足首、足、臀部、または膝の結合部のまたはその付近の骨折の癒合を促進するために使用され、骨折は、事故、損傷、または進行性劣化により引き起こされる。関節固定は、ＮＦ１関連脊椎側弯症および後湾症を治療するためにも用いることができる。最終結果は、典型的には、互いに対する骨の移動が制限されるような、２つの隣接している骨の固定である。
【０００７】
動物およびインビトロ研究に基づいて、ＮＦ１における不十分な骨癒合は、骨形成の低減、骨吸収の増加、および不十分な骨石灰化の組み合わせによるものであると考えられており、主要なプロセスが正常な骨の恒常性および骨の修復に関与する。前臨床研究は、ＮＦ１における骨病理がかなりＲａｓ経路の過剰活性化およびピロリン酸（ＰＰｉ）蓄積によるものであることを示す（ｄｅ  ｌａ  Ｃｒｏｉｘ  Ｎｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ニューロフィブロミンは、活性Ｒａｓの変換、ＧＴＰのその不活性形態への結合、ＧＤＰへの結合を加速する。これはＰＰｉ合成および細胞外輸送を促進する遺伝子の発現の上方制御にもつながり、ＰＰｉ蓄積および石灰化の阻害につながる。ＮＦ１の喪失も、間葉系前駆細胞からの傷害性骨芽細胞分化およびアルカリホスファターゼ発現（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）、ならびに破骨細胞形成および骨吸収の顕著な増加（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）にもつながる。
【０００８】
ＮＦ１におけるジストロフィー脊椎側弯症の手術後に確実な関節固定を達成する難しさを考えると、単剤療法は一見適切なまたは効果的な治療戦略ではなかった。骨形成を誘導するための組換え骨形成タンパク質（ＢＭＰ）の使用は、脊椎固定手術において確立されているが、ＮＦ１におけるＢＭＰ治療単独に対する骨細胞前駆細胞の応答は、限られているように思え（ｄｅ  ｌａ  Ｃｒｏｉｘ  Ｎｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４、Ｈｅｅｒｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）、この患者集団における臨床的転帰を不十分なものにさせる。
【０００９】
後の研究では、ＢＭＰとビスホスホネートとの組み合わせ使用が脛骨の偽関節を伴うＮＦ１欠損マウス（Ｓｃｈｉｎｄｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）およびＮＦ１患者（Ｂｉｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）においてＢＭＰ療法単独よりも優れているように思えることが示された。脊椎後方固定の前臨床モデルにおいて、ｒｈＢＭＰ２およびゾレドロン酸で治療されたＮＦ１欠損マウスも固定において顕著な改善を示したが、ＮＦ１欠損マウスは依然として野生型対照よりも少ない骨を生成した（Ｂｏｂｙｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。他の研究は、これらの薬剤を組み合わせた（Ｐｅｔｒｙｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【００１０】
しかしながら、今までに試みてきた治療である、骨形成を強化するための骨形成タンパク質（ＢＭＰ）および骨吸収を阻害するためのビスホスホネート（パミドロネートおよびゾレドロン酸）は、石灰化障害である、ＮＦ１の患者において病原経路の第３の主要な構成要素に対処することができなかった。Ｓｅｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）および手術経験は、おそらくＰＰｉの局在的な蓄積、ならびにロッドが周囲の軟組織およびさらには硬膜へ変位して深刻な神経学的合併症をもたらす、手術用金具が骨においてその元の位置に残存することの難しさにより、ＮＦ１患者における骨軟化症（石灰化の低減）の証拠を提供する（Ｓｅｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【００１１】
ＮＦ１を含む多くの骨格疾患は、１つ以上のタンパク質の機能の喪失から生じる。上述のように、ＮＦ１は、ニューロフィブロミンの喪失を特徴とする。別の骨格疾患の例は、組織非特異的アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＬＰまたは肝臓／骨／腎臓型ＡＬＰ）をコードする遺伝子ＡＬＰＬにおける１つ異常の機能喪失突然変異によって引き起こされる稀な遺伝性疾患である低ホスファターゼ症（ＨＰＰ）である。骨芽細胞および軟骨細胞におけるアルカリホスファターゼ欠損は、クル病または骨軟化症から子宮内でのほぼ完全な骨石灰化の不在まで、様々な重症度の症状につながる骨格石灰化を損なう。しかしながら、未修飾のアルカリホスファターゼを用いた酵素補充療法（例えば、天然アルカリホスファターゼの注入）は、大部分は成功していない。また別の例は、低身長症を引き起こし、後湾症などの脊椎合併症を伴い得る軟骨無形成症である。
【００１２】
ＮＦ１関連骨症状を含む神経線維腫症、ならびに脊椎側弯症、ジストロフィー脊椎側弯症、後湾症、骨折、脱灰などの他の形態の治療の改善が必要である。
【発明の概要】
【００１３】
概して、本開示は、任意選択的に外科的介入などの物理的介入と組み合わせて、可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ、例えば、配列番号１に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するｓＡＬＰ、例えば、アスホターゼアルファ）の投与による、神経線維腫症１型、特にジストロフィー脊椎側弯症および骨折を含む様々な疾患および状態の治療に関する。一実施形態では、開示される方法は、治療後の安定性、例えば、確実な関節固定、治療方法中に挿入された金具の安定性、治療方法前に患者に存在する金具の安定性の増加、および安定した脊椎側弯症（例えば、湾曲の増加なし）をもたらし得る。
【００１４】
患者における神経線維腫症１型（ＮＦ１）の少なくとも１つの症状を治療する方法が本明細書で提供される。一実施形態では、本方法は、ＮＦ１の患者における少なくとも１つの外科的介入と、外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週〜約１２ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週〜約９ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週、約７ｍｇ／ｋｇ／週、約８ｍｇ／ｋｇ／週、または約９ｍｇ／ｋｇ／週）のｓＡＬＰをもたらす投薬量で、患者にｓＡＬＰ（例えば、配列番号１に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するｓＡＬＰ、例えば、アスホターゼアルファ）を投与することと、を含む。一実施形態では、ｓＡＬＰは、配列番号１の配列に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、ｓＡＬＰは配列番号１の配列を有する。一実施形態では、ｓＡＬＰの投与は、（ｉ）患者の基準点で、治療前の患者の基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または（ｉｉ）治療前の患者の基準点の骨塩密度と比較して、ｓＡＬＰの投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、基準点の骨塩密度における平均変化、のうちの１つ以上をもたらす。一実施形態では、少なくとも１つの症状が、脊椎湾曲症、後弯症、骨粗鬆症、椎骨の脆弱、肋骨の薄化、椎骨の回転、楔状椎、椎骨の侵食、回転または角度のある脊椎変形、硬膜拡張症、不完全な骨石灰化、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）の血液および／または尿中レベルの上昇、石灰化減少、高カルシウム尿症、低身長、骨格変形、あひる歩行、骨痛、骨折、脱力感、ならびにピロリン酸カルシウム二水和物結晶沈着のうちの１つ以上を含む。
【００１５】
患者におけるジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する方法も本明細書で提供される。一実施形態では、本方法は、ジストロフィー脊椎側弯症の患者に対する少なくとも１つの外科的介入と、外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週〜約１２ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週〜約９ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週、約７ｍｇ／ｋｇ／週、約８ｍｇ／ｋｇ／週、または約９ｍｇ／ｋｇ／週）のｓＡＬＰをもたらす投薬量で、患者にｓＡＬＰ（例えば、配列番号１に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するｓＡＬＰ、例えば、アスホターゼアルファ）を投与することと、を含む。一実施形態では、ｓＡＬＰは、配列番号１の配列に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、ｓＡＬＰは配列番号１の配列を有する。一実施形態では、ｓＡＬＰの投与は、（ｉ）患者の基準点で、治療前の患者の基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または（ｉｉ）治療前の患者の基準点の骨塩密度と比較して、ｓＡＬＰの投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、基準点の骨塩密度における平均変化、のうちの１つ以上をもたらす。一実施形態では、少なくとも１つの症状は、非ジストロフィー脊椎側弯症と比較してより短いおよび／またはより鋭い角度のある湾曲、骨異常、肋骨の薄化、椎骨の脆弱、椎骨の回転、楔状椎、および椎骨の侵食のうちの１つ以上を含む。一実施形態では、ジストロフィー脊椎側弯症には、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症が含まれる。
【００１６】
患者において骨癒合を誘導する方法が本明細書でさらに提供される。一実施形態では、本方法は、約６ｍｇ／ｋｇ／週のｓＡＬＰをもたらす投薬量で、患者にｓＡＬＰを投与することを含む。一実施形態では、本方法は、約９ｍｇ／ｋｇ／週のｓＡＬＰをもたらす投薬量で、患者にｓＡＬＰを投与することを含む。あるいは、本方法は、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週〜約１２ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週〜約９ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週、約７ｍｇ／ｋｇ／週、約８ｍｇ／ｋｇ／週、または約９ｍｇ／ｋｇ／週）のｓＡＬＰをもたらす投薬量を投与することを含む。一実施形態では、ｓＡＬＰは、配列番号１の配列に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、ｓＡＬＰは配列番号１の配列を有する。一実施形態では、ｓＡＬＰの投与は、外科的介入と併用される。一実施形態では、ｓＡＬＰの投与は、（ｉ）患者の基準点で、治療前の患者の基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または（ｉｉ）治療前の患者の基準点の骨塩密度と比較して、ｓＡＬＰの投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、基準点の骨塩密度における平均変化、のうちの１つ以上をもたらす。
【００１７】
患者における少なくとも１つの骨関連障害を治療する方法が本明細書でさらに提供される。患者は、骨石灰化障害（例えば、ＨＰＰ、ＮＦ１、または頭蓋骨癒合症）を有しない患者であり得る。一実施形態では、本方法は、患者における少なくとも１つの外科的介入を含む。本方法は、外科的介入前、介入中、および／または介入後に、例えば、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週〜約１２ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週〜約９ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週、約７ｍｇ／ｋｇ／週、約８ｍｇ／ｋｇ／週、または約９ｍｇ／ｋｇ／週）をもたらす投薬量で、患者にｓＡＬＰを投与することを含み得る。ｓＡＬＰの投与は、患者の基準点で、治療前の患者の基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加をもたらし得る。いくつかの実施形態では、患者は、治療前の患者の基準点の骨塩密度と比較して、ｓＡＬＰの投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、基準点の骨塩密度における平均変化を有する。他の実施形態では、患者は、治療前の患者の基準点の骨塩密度と比較して、ｓＡＬＰの投与の８ヶ月後に少なくとも０．０１％である、基準点の骨塩密度における平均変化を有する。少なくとも１つの外科的介入は、膝、肩、臀部、足首、肘、もしくは手首の関節鏡検査および半月板切除、肩の関節鏡検査および除圧、手根管開放、膝の関節鏡検査および軟骨形成、支持インプラントの除去、膝の関節鏡検査および前十字靱帯再建、膝置換、大腿骨頸部骨折の修復、転子部骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリードマン、膝の関節鏡検査、片方または両方の半月板の修復、臀部置換、肩の関節鏡検査／鎖骨遠位端切除、回旋腱板の腱の修復、橈骨または尺骨の修復骨折、椎弓切除、足首骨折の修復（２踝型）、肩の関節鏡検査およびデブリードマン、腰部脊椎固定、橈骨の遠位部の修復骨折、下背部椎間板手術、指の腱鞘の切開、足首骨折（腓骨）の修復、大腿骨骨幹部骨折の修復、ならびに転子部骨折の修復からなる群から選択され得る。金具は、ネジ、ロッド、プレート、金属ケージ、釘、ピン、およびナットのうちの１つ以上であり得る。
【００１８】
一実施形態では、骨癒合の増加は、関節固定によって結合された２つの骨間の増加であり、別の実施形態では、骨癒合の増加は、骨折により分離された骨の２つの部分間の増加である。一実施形態では、骨癒合の増加は、骨周囲器具類（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ）における増加である。一実施形態では、骨癒合の増加は、陰影度の増加である。一実施形態では、陰影度の増加は、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される。
【００１９】
一実施形態では、外科的介入は、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、または器具類の挿入のうちの１つ以上を含む。一実施形態では、器具類は、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む。一実施形態では、外科的介入は、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む。一実施形態では、ｓＡＬＰは、外科的介入の約７ヶ月後（例えば、外科的介入の約７〜約１２ヶ月後以上）に投与される。
【００２０】
本方法は、１つ以上の骨形成タンパク質（複数可）（ＢＭＰ）を患者に投与することをさらに含み得る。一実施形態では、ＢＭＰは、外科的介入中に投与される。
【００２１】
本方法は、１つ以上のビスホスホネート（複数可）を患者に投与することをさらに含み得る。一実施形態では、ビスホスホネートは、外科的介入後に投与される。一実施形態では、ビスホスホネートは、外科的介入の約３ヶ月後（例えば、外科的介入の約３〜１２ヶ月後）に投与される。
【００２２】
一実施形態では、患者は、約１２歳、または約１２歳より上である。一実施形態では、患者は、約１８歳、または約１８歳より上である。一実施形態では、患者は、ｓＡＬＰを以前に投与されていない。
【００２３】
一実施形態では、ｓＡＬＰは、毎日または毎週の投与用に製剤化される。例えば、ｓＡＬＰは、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化され得る。一実施形態では、ｓＡＬＰは、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される。一実施形態では、ｓＡＬＰは、毎日１回の投与用に製剤化され、別の実施形態では、連日または隔日での投与用に製剤化される。一実施形態では、ｓＡＬＰは、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される。
【００２４】
一実施形態では、ｓＡＬＰは、配列番号１のアミノ酸配列を含み、別の実施形態では、配列番号１のアミノ酸配列からなる。一実施形態では、ｓＡＬＰは、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである。
【００２５】
一実施形態では、ｓＡＬＰは、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する、または骨癒合を誘導するのに治療的に有効な量で投与される。
【００２６】
一実施形態では、患者は、ｓＡＬＰの投与に忍容性を呈する。忍容性は、例えば、注射部位紅斑、ヘモグロビンの減少、発熱、肺炎、上気道感染、中耳炎、嘔吐、便秘、下痢、歯牙喪失、上咽頭炎、発疹、う蝕、および易刺激性からなる群から選択される有害事象の発生の欠如または減少を含み得る。
【００２７】
一実施形態では、ｓＡＬＰは、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される。一実施形態では、少なくとも１つの薬学的に許容される担体は、生理食塩水であり、別の実施形態では、塩化ナトリウム（例えば、１５０ｍＭ塩化ナトリウム）およびリン酸ナトリウム（例えば、２５ｍＭリン酸ナトリウム）を含む。一実施形態では、医薬組成物は、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、もしくは皮内投与、またはそれらの組み合わせ用に製剤化される。
【００２８】
本明細書に記載の特徴のうちの１つ以上を含む方法も本明細書で提供される。
【００２９】
「アスホターゼアルファ」とは、本明細書に開示される方法のために製剤化されたヒトＴＮＡＬＰ（ｈＴＮＡＬＰ）融合タンパク質を意味する。アスホターゼアルファ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標）、Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）は、２つの同一のポリペプチド鎖の可溶性糖タンパク質を含む融合タンパク質であり、各ポリペプチド鎖は、配列番号１のアミノ酸残基１〜７２６を含む（例えば、ＷＯ２０１７／１７１８７１および米国特許出願公開第２０１３／０３２３２４４号を参照されたい）。各ポリペプチド鎖の構造は、ｈＴＮＡＬＰの触媒ドメイン、ヒト免疫グロブリンＧ１  Ｆｃドメイン、および骨標的化ドメインとして使用されるデカ−アスパルテートペプチドを含む（構造  ｈＴＮＡＬＰ−Ｆｃ−Ｄ１０）。２つのポリペプチド鎖は、２つのジスルフィド結合によって共有結合される。アスホターゼアルファは、米国、欧州、日本、カナダ、イスラエル、オーストラリア、および韓国を含む多くの国で、商品名ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標）で認可されている。
【００３０】
本明細書で使用される場合、「平均」は、データセットの平均（ｍｅａｎ）または中央値を表す数値を指す。データセットの平均は、セットにおける値の合計をその数で割ることによって計算される。データセットの中央値は、奇数リストの中央の値を決定することにより、または偶数リスト中央の２つのデータ値の平均を決定することにより計算される。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「骨標的化部分」という用語は、骨標的化部分が、単独で、骨基質に対して約１０−６Ｍ〜約１０−１５Ｍ（例えば、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、１０−１２Ｍ、１０−１３Ｍ、１０−１４Ｍ、または１０−１５Ｍ）のインビボ結合親和性を有するように、骨基質に対して十分な親和性を有する長さの、１〜５０のアミノ酸残基（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２２、２４、２５、２６、２８、３０、３２、３４、３５、３６、３８、４０、４２、４４、４５、４６、４８、または５０のアミノ酸残基など）のアミノ酸配列を指す。例えば、骨標的化部分は、一連の連続したアスパルテート（Ｄ）および／またはグルタメート（Ｅ）残基を含み得、ｎ＝１〜５０、例えば、ｎ＝３〜３０、例えば、５〜１５、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３６、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０である。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「触媒的に適格性のある」という用語は、骨石灰化阻害剤の無機ピロリン酸（ＰＰｉ）を加水分解して、無機リン酸（Ｐｉ）を得、それにより、ＰＰｉの細胞外濃度を減少させるｓＡＬＰを指す。したがって、触媒的に適格性のあるｓＡＬＰは、ＰＰｉの濃度を調節することによって骨の骨格石灰化を改善する。
【００３３】
「細胞外ドメイン」とは、天然タンパク質の任意の機能的細胞外部分、例えば、アルカリホスファターゼを意味する。特に、細胞外ドメインは、シグナルペプチドを欠く。
【００３４】
「Ｆｃ」とは、免疫グロブリンの断片の結晶化可能領域、例えば、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３、ＩｇＧ−３、またはＩｇＧ−４（免疫グロブリン重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む）を意味する。Ｆｃは、ＦａｂおよびＦｃ領域を結合するヒンジ領域の任意の部分も含み得る。Ｆｃは、ヒトを含む任意の哺乳動物のものであり得、翻訳後修飾され得る（例えば、グリコシル化により）。非限定的な例では、Ｆｃは、配列番号２０のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ−１の断片の結晶化可能領域であり得る。
【００３５】
「断片」とは、好ましくは、参照核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上を含むポリペプチドまたは核酸分子の一部を意味する。断片は、最大ポリペプチドの全長の、例えば、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、４００、５００、６００、７００以上のアミノ酸残基を含み得る。例示的なｓＡＬＰ断片は、ＡＬＰのアミノ酸残基１８〜４９８、１８〜４９９、１８〜５００、１８〜５０１、１８〜５０２、１８〜５０３、１８〜５０４、１８〜５０５、１８〜５０６、１８〜５０７、１８〜５０８、１８〜５０９、１８〜５１０、１８〜５１１、または１８〜５１２（例えば、配列番号２〜６）を有し、追加のＣ末端および／またはＮ末端部分を含み得る。そのような断片の生物学的活性は、当該技術分野で既知の標準的なアッセイ、例えば、ｓＡＬＰ断片の薬物動態パラメータを計算するための非コンパートメント分析（ＮＣＡ）により試験される。
【００３６】
「ナイーブ患者」とは、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状を有するか、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を有するか、またはｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を用いた治療を全く受けたことがない骨癒合を必要とする患者を意味する。
【００３７】
「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」という用語は、交換可能に使用され、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化またはリン酸化）にかかわらず、２つ以上の天然または非天然アミノ酸残基の任意の鎖を指し、本明細書に記載されるように、天然に生じるまたは天然に生じないポリペプチドまたはペプチドの全てまたは一部を構成する。
【００３８】
「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」とは、それぞれ、治療された患者に生理学的許容され、同時に投与される化合物の治療特性を維持する、少なくとも１つの担体または賦形剤を意味する。１つの例示的な薬学的に許容される担体の物質は、生理学的生理食塩水である。例えば、薬学的に許容される担体は、塩化ナトリウム（例えば、１５０ｍＭ塩化ナトリウム）およびリン酸ナトリウム（例えば、２５ｍＭリン酸ナトリウム）を含み得る。他の生理学的に許容される担体およびそれらの製剤は、当業者に既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ），Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，２０００，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡに記載されている。
【００３９】
「医薬組成物」とは、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と共に製剤化された、本明細書に記載されるポリペプチドまたは核酸分子を含む組成物を意味する。医薬組成物は、患者における疾患または事象の治療または予防のための治療レジメンの一部として政府の規制機関の認可を得て製造または販売され得る。医薬組成物は、例えば、皮下投与用、静脈内投与用（例えば、粒状塞栓物（ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ  ｅｍｂｏｌｉ）不含の減菌溶液として、および静脈内使用に好適な溶媒系で）、経口投与用（例えば、錠剤、カプセル、カプレット、ゲルキャップ、またはシロップ）、または例えば、単位剤形の、本明細書に記載の任意の他の製剤に製剤化され得る。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「生理学的に活性」という用語は、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）、無機ピロリン酸（ＰＰｉ）、およびピリドキサール５’−リン酸（ＰＬＰ）を加水分解して、Ｐｉを得、それにより、ＰＥＡ、ＰＰｉ、およびＰＬＰの細胞外濃度を減少させるｓＡＬＰを指す。
【００４１】
「ｓＡＬＰ」、「可溶性アルカリホスファターゼ」、および「アルカリホスファターゼの細胞外ドメイン」という用語は、交換可能に使用され、可溶性の非膜結合性アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、または可溶性の非膜結合性ＡＬＰのドメインもしくはその生物学的活性断片を指す。ｓＡＬＰは、例えば、Ｃ末端糖脂質アンカー（ＧＰＩシグナル配列、例えば、ヒトＴＮＡＬＰのアミノ酸残基１８〜５０２（配列番号２、３、４、５、または６）を含むか、またはそれからなるポリペプチド）を欠くアルカリホスファターゼを含む。特に、ＴＮＡＬＰは、例えば、アスホターゼアルファなどの、配列番号１のアミノ酸残基１〜４８５を含むか、もしくはそれからなるポリペプチド、または配列番号１のアミノ酸残基１〜４８５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型を含み得る。ｓＡＬＰは、例えば、ヒトＴＮＡＬＰの哺乳類オルソログ、例えば、アカゲザルＴＮＡＬＰ（配列番号７）、ラットＴＮＡＬＰ（配列番号８）、イヌＴＮＡＬＰ（配列番号９）、ブタＴＮＡＬＰ（配列番号１０）、マウスＴＮＡＬＰ（配列番号１１）、ウシＴＮＡＬＰ（配列番号１２〜１４）、またはネコＴＮＡＬＰ（配列番号１５）をさらに含む。ｓＡＬＰは、ヒトＰＡＬＰ（例えば、配列番号１６または１７のアミノ酸残基１８〜５０２を含むか、またはそれからなるポリペプチド）、：ＧＣＡＬＰ（例えば、配列番号１８のアミノ酸残基１８〜５０２を含むか、またはそれからなるポリペプチド）、およびＩＡＬＰ（例えば、配列番号１９のアミノ酸残基１８〜５０２を含むか、またはそれからなるポリペプチド）の可溶性の非膜結合形態、ならびにアルカリホスファターゼ活性、例えば、ＰＰｉを加水分解する能力を維持するそれらの追加の変異型および類似体も含む。ｓＡＬＰは、特に、Ｎ末端シグナルペプチド（例えば、配列番号２〜６、８、１１〜１３、もしくは１５のａａ１〜１７、または配列番号７のａａ１〜２５）を欠く。
【００４２】
「ｓＡＬＰ融合ポリペプチ」とは、構造Ｚ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｘ−Ｗｎ−Ｖ、Ｚ−Ｗｎ−Ｘ−スペーサー−Ｙ−ｓＡＬＰ−Ｖ、Ｚ−ｓＡＬＰ−Ｙ−Ｗｎ−Ｘ−スペーサー−Ｖ、およびＺ−Ｗｎ−Ｘ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｖを有するポリペプチドを意味する。特に、ｓＡＬＰ融合ポリペプチドは、Ｚ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｘ−Ｗｎ−ＶまたはＺ−Ｗｎ−Ｘ−スペーサー−Ｙ−ｓＡＬＰ−Ｖ、例えば、ｈＴＮＡＬＰ−Ｆｃ−Ｄ１０（例えば、アスホターゼアルファ；アミノ酸配列の配列番号１）であり得る。Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｖ、スペーサー、および／またはＷｎのうちの任意の１つは、不在であるか、または少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸配列であり得る。例えば、Ｘ、Ｙ、Ｚ、およびＶは、Ｙ位置の２残基リンカー（例えば、ロイシン−リジン）およびＸ位置の２残基リンカー（例えば、アスパラギン酸−イソロイシン）などのジペプチド配列（例えば、ロイシン−リジンまたはアスパラギン酸−イソロイシン）であり得る。スペーサーは、例えば、配列番号２０のアミノ酸配列などの免疫グロブリンのＦｃ領域を含む。Ｗｎは、例えば、一連の連続したアスパルテート（Ｄ）および／またはグルタメート（Ｅ）残基を有する、本明細書に定義される骨標的化部分であり得、ｎ＝１〜５０、例えば、ｎ＝３〜３０、例えば、５〜１５、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３６、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０である。
【００４３】
「シグナルペプチド」とは、ポリペプチドを分泌経路（例えば、細胞外空間）へ指向するポリペプチドのＮ末端における短いペプチド（５〜３０のアミノ酸長）を意味する。シグナルペプチドは、典型的には、ポリペプチドの分泌中に切断される。シグナル配列は、ポリペプチドを細胞内コンパートメントまたは小器官、例えば、ゴルジ体に指向し得る。シグナル配列は、ポリペプチドを細胞の特定の領域に標的化する既知の機能を有するペプチドに対する相同性、または生物学的活性により特定され得る。当業者は、容易に利用可能なソフトウェア（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｅｎｔｅｒ，１７１０  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用することによりシグナルペプチドを特定することができる。シグナルペプチドは、例えば、配列番号２〜６のアミノ酸残基１〜１７、または配列番号７のアミノ酸残基１〜２５に対して実質的に同一であるものであり得る。
【００４４】
本明細書で使用される場合、ポリペプチドまたは核酸配列が参照配列に対して「少なくともＸ％の配列同一性」を有すると称される場合（「Ｘ」は実数である）、配列が最適にアライメントされるとき、少なくともＸパーセントのアミノ酸残基またはポリペプチドもしくは核酸におけるヌクレオチドが参照配列に対して同一であることを意味する。配列の最適なアライメントは、当該技術分野の技術内である様々な方法、例えば、Ｓｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアライメントアルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５−７，１９８１）およびＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０，１９９０）において決定され得る。これらおよび他のアライメントアルゴリズムは、ＧｅｎｅＭａｔｃｈｅｒ  Ｐｌｕｓ（Ｓｃｈｗａｒｚ  ａｎｄ  Ｄａｙｈｏｆｆ，Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，Ｅｄ  ｐｐ  ３５３−３５８，１９７９）、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＢＬＡＳＴ−Ｐ、ＢＬＡＳＴ−Ｎ、ＢＬＡＳＴ−Ｘ、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２、ＣＬＵＳＴＡＬ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）に組み込まれている「Ｂｅｓｔ  Ｆｉｔ」（Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ，４８２−４８９，１９８１）、またはアライメント用の他のソフトウェア／ハードウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して利用可能である。加えて、当業者であれば、比較される配列の長さにわたって最適なアライメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するのに適切なパラメータを決定することができる。
【００４５】
「患者」または「対象」という用語は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物、例えば、ウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、またはネコを含むがこれらに限定されない哺乳動物を指す。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「非経口投与」、「非経口的に投与される」、および他の文法的に同等の句は、通常注射による、腸内および局所投与以外の投与モードを指し、限定されないが、皮下、皮内、静脈内、鼻腔内、眼内、肺、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、肺内、腹腔内、経気管、表皮下、関節内、嚢下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内、ならびに胸骨内注射および注入を含む。
【００４７】
「治療有効量」とは、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を実質的に改善する、治療する、予防する、遅延する、抑制する、もしくは停止させるか、または骨癒合を誘導するのに十分である、本明細書に記載のポリペプチドまたは核酸分子の量を意味する。本明細書に記載の組成物の治療有効量は、治療される障害および状態の重症度、患者の体重および全身状態に依存し、そのような要因を考慮して、当業者により決定され得る。本明細書に記載の組成物の治療有効量は、単回用量、または一定期間にわたって投与される複数回用量で患者に投与され得る。
【００４８】
「治療すること」、「治療する」、または「治療」とは、例えば、医薬組成物を投与することにより、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、もしくはジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治癒する、寛解させる、安定させる、その可能性を低減する、もしくは予防する目的での患者の医療管理、および／または神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状もしくはジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を呈する、もしくは有する可能性がある患者の管理を意味する。この用語は、例えば、医薬組成物を投与することにより、骨癒合を必要とする状態を治癒する、寛解させる、もしくは安定させる目的での患者の医療管理、および／または骨癒合を必要とする状態を呈する、もしくは有する可能性がある患者の管理も意味する。この用語は、積極的な治療、つまり、疾患、病的状態、障害、または事象の改善に具体的に指向された、またはその治癒に関連する治療を含み、また原因治療、つまり、関連疾患、病的状態、障害、または事象の原因の排除に指向された治療も含む。加えて、この用語は、緩和治療、つまり、疾患、病的状態、障害、または事象の治癒ではなく、少なくとも１つの症状の軽減または改善のために設計された治療；対症療法、つまり、関連疾患、病的状態、障害、または事象の体質症状に指向された治療；予防的治療、つまり、例えば、まだ病気ではないが、特定の疾患、病的状態、障害、または事象にかかりやすい、またはさもなければそのリスクにある患者において、関連疾患、病的状態、障害、または事象の発症を最小限にする、または部分的もしくは完全に阻害するように指向された治療；ならびに支持治療、つまり、関連疾患、病的状態、障害、または事象の改善に指向された別の具体的な療法を補うために用いられる治療を含む。
【００４９】
「好ましい」および「好ましくは」という用語は、ある特定の状況下である特定の利益を提供し得る本開示の実施形態を指す。しかしながら、同じまたは他の状況下で、他の実施形態も好ましい場合がある。さらに、１つ以上の好ましい実施形態の記述は、他の実施形態が有用ではないことを暗示するものではなく、本開示の範囲から他の実施形態を除外することを意図していない。
【００５０】
「含む」という用語およびその変形は、これらの用語が説明および特許請求の範囲に現れる場合、意味を限定しない。
【００５１】
特に指定のない限り、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、および「ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ（少なくとも１つ）」は、交換可能に使用され、１つまたは２つ以上を意味する。
【００５２】
また本明細書において、エンドポイントによる数値範囲の記述は、その範囲内に包含される全ての数値を含む（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８、４、５などを含む）。
【００５３】
個別のステップを含む本明細書に開示される任意の方法に関して、ステップは任意の実現可能な順序で行われ得る。また、必要に応じて、２つ以上のステップの任意の組み合わせが同時に行われてもよい。
【００５４】
本開示の上記の概要は、開示された各実施形態または本開示の全ての実施を説明することを意図していない。以下の説明は、より具体的に例示的な実施形態を実証する。本出願を通していくつかの箇所に、例のリストによりガイダンスが提供され得、この例は、様々な組み合わせで使用することができる。各場合において、記述のリストは代表的な群としてのみ機能し、排他的なリストとして解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】４７歳の患者の重度のジストロフィー腰部脊椎側弯症を示すＸ線写真である。矢印は、Ｌ３で尖部を有する胸腰椎の著しく左凸状のジストロフィー脊椎側弯症を指し示す。このＸ線写真は、短い鋭角、硬膜拡張症、椎体の貝状陥凹、楔状椎、および狭い椎弓根のため、ジストロフィー湾曲を示す。
【図２】図１で特定された同じ４７歳の患者の腰椎のコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンである。ＣＴスキャンは、腰部全体を通して重度の硬膜拡張症を示すが、矢印によって示されるＬ２およびＬ３で最も顕著であり、際立った後方椎体貝状陥凹がある。
【図３Ａ】４７歳の患者の４回目の脊椎手術の６ヶ月前に行ったＣＴスキャンである。図３Ａは、矢印によって示される左後腸骨棘ネジの周囲の透過性（ｌｕｃｅｎｃｙ）を示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、矢印によって示される左Ｌ４椎弓根ネジの下の左側の垂直な連結ロッドの骨折を示す。
【図４】両側腸骨ネジによるＴ１１から仙骨までの脊椎固定器具類、および顕著に改善したジストロフィー脊椎側弯症変形．を示す術後の単純フィルムのＸ線写真である。
【図５Ａ】脊椎手術の２日後に行われた術後のＣＴスキャンである。図５Ａは、矢印によって示される左後腸骨ネジの周囲の安定した透過性を示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、矢印によって示される左後腸骨ネジの先端の骨の外皮質の骨折を示す。
【図６】脊椎手術の１３ヶ月後、およびアスホターゼアルファを用いた治療の６ヶ月後に行われたＣＴスキャンである。ＣＴスキャンは、緩みの証拠がない（上の矢印）ネジの周囲の周辺の透過性、および左後腸骨ネジ（下の矢印）の先端での治癒した骨折を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
我々は、アスホターゼアルファ（配列番号１、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標）、Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）のいくつかの新たなおよび予想外の使い方を発見した。骨形成タンパク質（ＢＭＰ）およびビスホスホネート療法を組み合わせたとき、アスホターゼアルファは、ＢＭＰ療法のみと組み合わせた手術が以前失敗した、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症の患者の脊椎手術後に確実な関節固定をもたらした。患者は組織非特異的アルカリホスファターゼが不足していなかったが、組織非特異的アルカリホスファターゼのアスホターゼアルファの投与が確実な関節固定をもたらしたため、この結果は予想外であった。したがって、アスホターゼアルファが外科的介入と組み合わされた場合、例えば、術後の骨癒合および／または石灰化の改善をもたらす相乗効果があった。一実施形態では、アスホターゼアルファは、神経線維腫症１型の１つ以上の症状を有する患者を治療するために使用され得る。一実施形態では、アスホターゼアルファは、ジストロフィー脊椎側弯症の患者を治療するために使用され得る。一実施形態では、アスホターゼアルファは、骨癒合を促進するために使用され得る。アスホターゼアルファの使用は、外科的介入などの物理的介入と併用して生じ得る。任意選択的に、アスホターゼアルファの使用は、１つ以上の骨形成タンパク質、１つ以上のビスホスホネート、またはそれらの組み合わせの投与と併用して生じる。 
【００５７】
治療方法
本方法のいくつかの実施形態では、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する変異型など、本明細書に記載のポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、例えば、脊椎湾曲症、後湾症、骨粗鬆症、椎骨の脆弱、肋骨の薄化、椎骨の回転、楔状椎、椎骨の侵食、回転もしくは角度のある脊椎変形、硬膜拡張症、不完全な骨石灰化、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）の血液および／もしくは尿中レベルの上昇、石灰化減少、高カルシウム尿症、低身長、骨格変形、あひる歩行、骨痛、骨折、脱力感、ならびにピロリン酸カルシウム二水和物結晶沈着を治療するのに治療的に有効な量で患者に投与される。
【００５８】
本方法のいくつかの実施形態では、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチ変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状、例えば、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症、例えば、非ジストロフィー脊椎側弯症で見られるよりも短く、より鋭い角度のある湾曲、肋骨の薄化を含む骨異常、椎骨の脆弱、椎骨の顕著な回転、楔状椎、および髄液による椎骨の侵食を治療するために治療的に有効な量で患者に投与される。
【００５９】
本方法の一実施形態では、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチ変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、骨癒合を誘導するのに治療的に有効な量で患者に投与される。骨癒合を誘導する例としては、骨折の治療、および２つの関節の外科的固定である関節固定が挙げられる。例えば、本方法は、脊椎固定を促進するのに有用である。脊椎固定手術は、骨と骨との摩擦を排除し、かつ／または疼痛および他の症状を引き起こす神経圧迫を軽減するために使用され得る。外科的骨固定は、例えば、指、足首、および足にも使用され得る。
【００６０】
本方法のいくつかの実施形態では、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する変異型など、本明細書に記載のポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、整形外科手術を受けた患者に投与される。手術には、少なくとも１つのインプラントまたは金具を手術中に挿入することを含み得る。患者は、神経線維腫症１型（ＮＦ１）、ＨＰＰ、または頭蓋骨癒合症を有しない患者であり得る。患者は、脊椎湾曲症、後湾症、骨粗鬆症、椎骨の脆弱、肋骨の薄化、椎骨の回転、楔状椎、椎骨の侵食、回転もしくは角度のある脊椎変形、硬膜拡張症、不完全な骨石灰化、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）の血液および／もしくは尿中レベルの上昇、石灰化減少、高カルシウム尿症、低身長、骨格変形、あひる歩行、骨痛、骨折、脱力感、ならびにピロリン酸カルシウム二水和物結晶沈着などの、疾患または障害を有し得るか、または１つ以上の骨関連状態を有し得る。いくつかの実施形態では、患者は、機能しない骨に挿入された金具を有する。患者は、インプラントの固定が失敗した１つ以上の整形外科手術（例えば、再置換手術）を受けている場合がある。例えば、患者は、頭蓋顔面インプラント、歯科インプラント、脊椎インプラント、臀部、膝、肩、脊椎、肘、もしくは手首の関節置換部品、または釘、ネジ、ピン、ナット、ロッド、およびプレートなどの骨固定材を有し得るか、またはそれらを必要としている可能性がある。患者は、再置換手術を必要としている可能性もあり、頭蓋顔面インプラント、歯科インプラント、脊椎インプラント、臀部、膝、肩、脊椎、肘、もしくは手首の関節置換部品、または釘、ネジ、ピン、ナット、ロッド、およびプレートなどの骨固定材が機能していない。
【００６１】
インプラントまたは金具を含み得る整形外科手術には、例えば、手または上肢、肩、肘、関節（例えば、全関節再建、例えば、関節形成）、足、足首、脊椎の手術、筋骨格腫瘍学関連手術、スポーツ損傷関連手術、外傷などが含まれる。金具またはインプラントの使用を含み得る他の一般的な整形外科手術には、例えば、膝、肩、臀部、足首、肘、もしくは手首の関節鏡検査および半月板切除、肩の関節鏡検査および除圧、手根管開放、膝の関節鏡検査および軟骨形成、支持インプラントの除去、膝の関節鏡検査および前十字靱帯再建、膝置換、大腿骨頸部骨折の修復、転子部骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリードマン、膝の関節鏡検査、片方または両方の半月板の修復、臀部置換、肩の関節鏡検査／鎖骨遠位端切除、回旋腱板の腱の修復、橈骨（骨）／尺骨の修復骨折、椎弓切除、足首骨折の修復（２踝型）、肩の関節鏡検査およびデブリードマン、腰部脊椎固定、橈骨の遠位部の修復骨折、下背部椎間板手術、指の腱鞘の切開、足首骨折（腓骨）の修復、大腿骨骨幹部骨折の修復、ならびに転子部骨折の修復が含まれる。前述の整形外科処置のいずれかを受けた患者は、骨の修復を改善するため、またはインプラントもしくは金具の固定を改善するために、本明細書に記載の方法によりｓＡＬＰで治療され得る。
【００６２】
ｓＡＬＰは、手術または疾患によって生じた骨外傷または骨欠損の修復のために使用され得る。損傷したまたは分裂した骨組織は、インプラントまたは金具を使用して再構築され、欠損を修復するために、手術前、手術中、または手術後にｓＡＬＰの投与が補われ得る。ｓＡＬＰ投与と組み合わせて、インプラントまたは金具は、損傷部位の骨断片の残りの小片に必要な機械的支持をさらに提供し、同時に、隣接組織からの血液および骨形成細胞が治癒の改善のためにインプラントに浸透することを可能にする。例えば、本明細書に記載の方法は、骨性眼窩底および顎骨の再構築において、脳神経外科手術および外傷後の頭蓋冠骨欠損を修復するために使用され得る。本明細書に記載の方法は、整形外科および脊椎手術、ならびに骨の分裂した小片の固定および美容整形手術においても使用され得る。疾患により脆弱化した長骨が存在する場合、または皮質骨部が失われた場合、インプラントを使用して長骨を補強し、皮質骨が失われた開口部を被覆することができる。
【００６３】
本明細書に記載の方法は、質が低下した骨（例えば、骨粗鬆症の骨）でまたは再置換手術（例えば、それらは以前に挿入されたインプラントを置換するために使用され得る）においても使用することができる。ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する変異型など、本明細書に記載のポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、金属プレート、ピン、ロッド、もしくはワイヤなどの機械的な安定デバイスと併用して、または個別に、のいずれかで、例えば骨、例えば骨折した（折れた）骨を内部で安定させる、および／または結合するための骨接合において使用され得る。
【００６４】
本明細書に記載の方法は、圧迫を必要とする骨折を有する患者における骨欠損を治療するためにも使用され得る。特に、ｓＡＬＰは、患者に圧迫固定を提供するために使用され得るインプラントと併用して投与することができる。
【００６５】
本明細書に記載の方法により治療することができる骨には、例えば、関節下骨折、脊椎もしくは椎骨の欠損、または橈骨、尺骨、腓骨、鎖骨、上腕骨、骨盤、大腿骨、膝蓋骨、脛骨、距骨、踵骨、舟状骨、楔状骨（ｃｕｎｅｉｆｏｒｍｓ）、中足骨、中手骨、指骨、肩甲骨、足首、上顎骨、または下顎骨の欠損が含まれる。インプラントまたは金具は、骨欠損に近接して位置付けられ得る（例えば、骨の骨内空間と接するようにインプラントを位置付ける）。ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する変異型など、本明細書に記載のポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、インプラントまたは金具の施工前、施工中、または施工後のいつでも投与することができる。ｓＡＬＰは、インプラントまたは金具上にコーティングされてもよい。
【００６６】
本発明の治療方法には、上下顎または頭蓋顔面固定、段階的な再構築で骨欠損を修復するための一時的な固定、関節窩もしくは上腕骨固定、膝蓋骨固定、または脊椎固定も含まれる。例えば、脊椎手術において、インプラントは、椎弓根内に設置されるか、体間デバイスを固定するために使用されるか、脊椎固定プレートおよびスペーサー置換を固定するために使用されるか、骨粗鬆症の椎骨において使用されるか、または隣接する椎骨の棘突起に近接して位置付けられ得る。本方法には、骨欠損に近接してロッド、ピン、釘、またはメッシュもしくは骨プレートを挿入することも含まれる。ｓＡＬＰは、手術前、手術中、または手術後のいつでも投与することができる。ｓＡＬＰは、任意のインプラントまたは金具上にコーティングされてもよい。
【００６７】
本明細書に記載の方法を使用して治療することができる特定の骨欠損には、例えば、骨の空隙、隙間、陥凹部、または他の断絶などの任意の骨の欠損領域が含まれる。骨欠損は、例えば、疾患または外傷によるものであり得る。本明細書に記載のインプラントまたは金具は、例えば、歯周欠損の修復、頭蓋顔面または顎顔面の手術または再構築、美容整形手術、手の手術、関節の再構築、骨折修復、整形外科手技、および脊椎固定において適用され得る。インプラントは、ワッシャ（例えば、本発明のワッシャ）、金属プレート、ピン、ロッド、もしくはワイヤなどの他の機械的デバイスと併用して、または個別に、のいずれかで、例えば骨、例えば骨折した（折れた）骨を内部で安定させる、および／または結合するための骨接合においても使用され得る。例えば、インプラントは、骨欠損および骨折の圧迫固定を提供するためにワッシャと共に使用され得る。特に、本方法は、大きい骨の欠損または骨折の治療に有用である。骨折の非限定的な例としては、例えば、安定骨折、横骨折、斜骨折、らせん骨折、粉砕骨折、ならびに開放および変位骨折が挙げられる。骨折固定を必要とし得る例示的な大きい骨としては、例えば、大腿骨、脛骨、腓骨、上腕骨、尺骨、橈骨、肋骨、寛骨（寛骨（ｈｉｐ  ｂｏｎｅ））、および胸骨が挙げられる。これらの手術のそれぞれにおいて、ｓＡＬＰは、手術前、手術中、または手術後のいつでも投与することができる。
【００６８】
外科的介入
開示される方法のいずれかにおけるｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の投与は、例えば、外科的介入などの物理的介入と併用して生じ得る。外科的介入は、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、または骨折した骨の固定に使用され得る。外科的介入は、骨固定役立つ器具類（例えば、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージなどの金具の移植）を含み得る。外科的介入には、開首または開背手術（ｏｐｅｎ  ｎｅｃｋ  ｏｒ  ｏｐｅｎ  ｂａｃｋ  ｓｕｒｇｅｒｙ）、低侵襲手術、またはそれらの組み合わせなどの従来の観血的手術が含まれ得る。
【００６９】
骨形成タンパク質
開示される方法のいずれかにおけるｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）の投与と併用して生じ得る。骨形成および骨癒合（例えば、関節固定または骨折の治療）を誘導するためのＢＭＰの使用が既知である。一実施形態では、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状の治療、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状の治療、または骨癒合の誘導は、ＢＭＰの投与と併用して生じる。ＢＭＰは、患部、例えば、骨折に直接、または皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、もしくは皮内投与により投与することができる。一実施形態では、ＢＭＰは、物理的介入、例えば、外科的介入中に投与される。ＢＭＰは、骨形成を誘導するのに有効な任意のＢＭＰであり得る。有用なＢＭＰの例は、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、およびＢＭＰ−７である。ＢＭＰの遺伝子配列、タンパク質配列、ならびに組換えおよび天然に由来するＢＭＰを産生するための方法が当該技術分野で既知である。ＢＭＰは、凍結乾燥した粉砕した海綿状の同種移植片骨と混合したコラーゲン吸収性海綿上に投与され得る。
【００７０】
ビスホスホネート
開示される方法のいずれかにおけるｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、少なくとも１つのビスホスホネーの投与と併用して生じ得る。一実施形態では、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状の治療、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状の治療、または骨癒合の誘導は、少なくとも１つのビスホスホネートの投与と併用して生じる。骨密度の減少を防止するための少なくとも１つのビスホスホネートの使用は、当該技術分野で既知であり、通例である。ビスホスホネートの例としては、ゾレドロン酸およびパミドロネートが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７１】
一実施形態では、少なくとも１つのビスホスホネートは、物理的介入、例えば、外科的介入中または介入後に投与される。例えば、少なくとも１つのビスホスホネートは、単回または複数回投薬量レジメンのいずれかにおいて提供され得る。１回以上の用量が、例えば、毎時間、１時間おき、毎日、隔日、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、毎週、隔週、毎月、隔月、または毎年投与され得る。あるいは、用量は、例えば、１日１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、または１２回投与され得る。一実施形態では、投与レジメンは単回投与である。投与レジメンの継続期間は、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０日間（複数可）、週間（複数可）、または月間（複数可）であり得る。一実施形態では、投与は、物理的介入、例えば、外科的介入の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）後に始まり得る。少なくとも１つのビスホスホネートは、例えば、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２、２．５、５、１０、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、２００、２５０、もしくは５００ｍｇ／ｋｇ、または１、２、２．５、５、１０、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、２００、２５０、５００、７５０、９００、もしくは１，０００ｍｇ／ｋｇの投薬量で送達され得る。少なくとも１つのビスホスホネートは、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、または皮内投与により投与され得る。一実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与用に製剤化される。投薬量の量、頻度、および継続期間は、神経線維腫症１型、ジストロフィー脊椎側弯症の症状、骨癒合／石灰化の必要性、および患者からの異なるパラメータなどの患者によって提示される従来の要因により、臨床医によって適応される。
【００７２】
治療有効性の評価
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰ、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を使用した治療の有効性を評価するのに有用な例示的な測定基準には、（１）骨癒合、（２）骨石灰化、（３）骨塩密度、ならびに（４）血漿ＰＰｉおよびＰＬＰ濃度が含まれる。本方法は、治療有効性を評価するために、単独でまたは組み合わせて、記載の測定基準（例えば、骨癒合、石灰化、骨塩密度、または血漿ＰＰｉおよびＰＬＰ濃度）のうちの１つ以上を使用することをさらに含み得、本明細書に記載される改善は、ｓＡＬＰが治療される状態に有効な治療であることを示す。加えて、本方法は、ｓＡＬＰの有効量を決定して、それを必要とする患者に投与するために、ｓＡＬＰ（例えば、配列番号１、例えば、アスホターゼアルファ）投与の投薬量および／または頻度を変更することをさらに含み得る。
【００７３】
骨癒合および石灰化
場合によっては、本開示によるｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する変異型など、本明細書に記載のポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の投与は、治療後、患者の骨癒合を増加させる。骨癒合の増加は、新しい骨をもたらし、２つ以上の骨の融合（例えば、２つの通常は分離している骨の固定、または骨折により分離された骨の２つの部分の融合）をもたらす石灰化の増加、または器具類付近の骨癒合の増加を含む。骨癒合および石灰化の増加を特定するための方法は、通例であり、Ｘ線撮影およびコンピュータ断層撮影（ＣＴ）などの非侵襲技法を含む。典型的には、患者の関連領域の画像は、治療方法の前および治療方法後の１つ以上の時点で撮影され、画像が比較される。骨癒合および／または石灰化の増加は、陰影度の増加として特定される。したがって、良好な関節固定は、固定を標的とする２つの骨間の治療後の陰影度の増加として特定され得る。骨中の金具、例えば、ネジの緩みの低減は、器具類を囲む、例えば、固定する骨の陰影度の増加として特定され得る。治療前の画像は、治療方法が始まる前の任意の時間に撮影され得、治療が開始される１、２、３、４、５、または６日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）前であるように調整され得る。治療前の画像は、治療が開始された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）後に撮影され得る。患者における骨癒合および／または石灰化の増加は、治療期間の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）後に検出可能となり得る。患者における骨癒合および／または石灰化の増加は、場合によっては、治療期間後の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）にわたって維持され得る。参照骨は、１つ以上の特定の骨であり得る。一実施形態では、基準点は、開示の方法による、固定される１つ以上の特定の骨（例えば、脛骨、橈骨、尺骨、および脊椎の骨、例えば椎骨、例えば、頚椎Ｃ１〜Ｃ７、胸椎Ｔ１〜Ｔ１２、腰椎Ｌ１〜Ｌ５、仙骨Ｓ１〜Ｓ５、および尾骨）である。一実施形態では、基準点は、開示の方法によって治療される骨折がある特定の骨である。一実施形態では、基準点は、器具類を囲む骨である。
【００７４】
骨塩密度（ＢＭＤ）
場合によっては、本開示によるｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の投与は、治療後、患者のＢＭＤの変化を限定する。ＢＭＤを測定する方法は、既知であり、例えば、骨生検、二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＸＡまたはＤＥＸＡ）、末梢骨定量的ＣＴ（ｐＱＣＴ）、高解像度ｐＱＣＴ（ＨＲ−ｐＱＣＴ）、および定量的超音波（ＱＵＳ）を含む。測定は、ＣＴハウンスフィールド測定を含む任意の方法によるものであってよく、結果と規範的データベースまたは対照患者との比較に使用され得る。ＢＭＤは、典型的には、ＺスコアまたはＴスコアとして報告される。治療前のＢＭＤ値は、治療方法が始まる前の任意の時間に測定され得、治療が開始される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）前であるように調整され得る。治療前のＢＭＤ値は、治療が開始された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）後に測定影され得る。一実施形態では、治療後の基準点のＢＭＤ値は、０．０１％、０．０５％、０．１％、０．５％、１％以下減少する。一実施形態では、治療後の基準点のＢＭＤ値は、少なくとも０．０１％、０．０５％、０．１％、０．５％、または１％増加する。一実施形態では、治療後の基準点のＢＭＤ値の変化は未変化であるか、または変化が検出不可能である。患者のＢＭＤの変化は、場合によっては、治療期間後、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２日間（複数可）、週間（複数可）、または月間（複数可）以上維持され得る。基準点は、例えば、１つ以上の特定の骨であり得る。一実施形態では、基準点は、開示の方法によって治療される１つ以上の特定の骨（複数可）である。
【００７５】
ＰＰｉおよびＰＬＰ濃度
ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰポリペプチド（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ  ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）が本開示により投与される患者からの血漿試料における平均ＰＰｉ濃度減少は、ｓＡＬＰの投与前の患者からの血漿試料のＰＰｉ濃度に対して、約２５％以上（例えば、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、または６０％超）であり得る。患者からの血漿試料における平均ＰＰｉ濃度減少は、場合によっては、少なくとも１週間、６ヶ月間、または最大１年間以上の治療期間の間維持され得る。典型的には、減少は、アスホターゼアルファでの治療期間の継続期間にわたって維持される。
【００７６】
ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰポリペプチド（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）が投与される患者からの血漿試料における平均ＰＬＰ濃度減少は、ｓＡＬＰの投与前の患者からの血漿試料のＰＬＰ濃度に対して、約５０％以上（例えば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９５％超）であり得る。患者からの血漿試料における平均ＰＬＰ濃度減少は、場合によっては、少なくとも１週間および最大１年間以上の治療期間の間維持され得る。典型的には、減少は、アスホターゼアルファでの治療期間の継続期間にわたって維持される。
【００７７】
アルカリホスファターゼ
アスホターゼアルファは、ＴＮＡＬＰ（ｈＴＮＡＬＰ、配列番号１）融合ポリペプチドである。特に、アスホターゼアルファ（配列番号１）は、効率的に、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状を治療するため、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療するため、または骨癒合を誘導するため、およびそれらに関連する身体障害に使用され得る。
【００７８】
本明細書に記載の結果を考えると、治療方法は、特定のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）またはＡＬＰをコードする核酸配列の投与に限定されない。アルカリホスファターゼは、リン酸部分の切断（例えば、ピロリン酸の加水分解、ＰＰｉ）を触媒する酵素群を包含する。４つの既知の哺乳類アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）アイソザイムが存在する：組織非特異的アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＬＰ、以下にさらに説明される）、胎盤アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＬＰ）（例えば、受入番号Ｐ０５１８７，ＮＰ＿１１２６０３およびＮＰ＿００１６２３）、胚細胞アルカリホスファターゼ（ＧＡＬＰ）（例えば、受入番号Ｐ１０６９６、および腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＬＰ）（例えば、受入番号Ｐ０９９２３およびＮＰ＿００１６２２）。本明細書に論じられる例示的なＡＬＰに加えて、ＡＬＰの同一または同様の触媒部位構造および／または酵素的活性を有するあらゆるポリペプチド（例えば、本明細書で定義されるｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド）が本明細書に開示される方法において使用され得る。ｓＡＬＰを含む骨送達コンジュゲートは、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／１０３２６３号および第ＷＯ２００８／１３８１３１号にさらに記載されている。
【００７９】
本明細書に記載の方法により使用され得るＴＮＡＬＰには、例えば、ヒトＴＮＡＬＰ（受入番号ＮＰ＿０００４６９、ＡＡＩ１０９１０、ＡＡＨ９０８６１、ＡＡＨ６６１１６、ＡＡＨ２１２８９、およびＡＡＩ２６１６６）、アカゲザルＴＮＡＬＰ（受入番号ＸＰ＿０１１０９７１７）、ラットＴＮＡＬＰ（受入番号ＮＰ＿０３７１９１）、イヌＴＮＡＬＰ（受入番号ＡＡＦ６４５１６）、ブタＴＮＡＬＰ（受入番号ＡＡＮ６４２７３）、マウス（受入番号ＮＰ＿０３１４５７）、ウシＴＮＡＬＰ（受入番号ＮＰ＿７８９８２８、ＮＰ＿７７６４１２、ＡＡＭ  ８２０９、およびＡＡＣ３３８５８）、およびネコＴＮＡＬＰ（受入番号ＮＰ＿００１０３６０２８）が含まれる。特に、ＴＮＡＬＰは、本明細書に開示される方法において使用される組換えヒトＴＮＡＬＰ（例えば、配列番号１、アスホターゼアルファ、米国特許第７，７６３，７１２号および第７，９６０，５２９号を参照されたい）であり得る。ＴＮＡＬＰはまた、上記のＴＮＡＬＰのポリペプチドまたは核酸配列に対して少なくとも約９５％の配列同一性を呈するものであり得る。
【００８０】
可溶性アルカリホスファターゼ
本明細書に記載される方法において使用され得るＡＬＰには、本明細書に記載のアルカリホスファターゼのいずれかの可溶性（例えば、細胞外または非膜結合）形態が含まれる。ｓＡＬＰは、例えば、ヒト組織非特異的アルカリホスファターゼ（ヒトＴＮＡＬＰ（ｈＴＮＡＬＰ））の可溶性形態であり得る。本方法は、特定のｓＡＬＰに限定されず、例えば、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）、無機ピロリン酸（ＰＰｉ）、およびピリドキサール５’−リン酸（ＰＬＰ）に対して生理学的に活性な任意のｓＡＬＰを含み得る。特に、ｓＡＬＰは、骨の骨格石灰化を改善するのに触媒的に適格性のあるものである。本方法は、本明細書に記載の方法において使用され得る、本明細書に記載のｓＡＬＰをコードする核酸をさらに含む。
【００８１】
ＴＮＡＬＰは、Ｃ末端において糖脂質部分によって固定される膜結合タンパク質（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ，Ｐ０５１８６）である。この糖脂質アンカー（ＧＰＩ）は、一時的な膜アンカーおよびＧＰＩ付加のシグナルの両方として機能する、疎水性Ｃ末端の除去の後に翻訳後付加される。ＧＰＩアンカーは細胞膜に位置するが、ＴＮＡＬＰの残りの部分は細胞外に位置する。特に、ＴＮＡＬＰ（例えば、ヒトＴＮＡＬＰ（ｈＴＮＡＬＰ））は、疎水性Ｃ末端配列の第１のアミノ酸（アラニン）を停止コドンに置き換えるように操作され、それにより、ＴＮＡＬＰの天然の固定された形態の全てのアミノ酸残基を含み、ＧＰＩ膜アンカーを欠く操作されたｈＴＮＡＬＰを産生することができる。当業者は、ＧＰＩ膜アンカーの位置が異なるＡＬＰにおいて異なり、例えば、ポリペプチドのＣ末端上に最後の１０、１２、１４、１６、１８、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４５、５０以上のアミノ酸残基を含み得ることを理解する。組換えｓＴＮＡＬＰは、例えば、アミノ酸１〜５０２（分泌された場合、１８〜５０２）、アミノ酸１〜５０１（分泌された場合、１８〜５０１）、アミノ酸１〜５０４（分泌された場合、１８〜５０４）、アミノ酸１〜５０５（分泌された場合、１８〜５０５）、またはアミノ酸１〜５０２を含み得る。したがって、天然ＡＬＰのＣ末端は、ＡＬＰ活性に影響を与えることなく、ある特定のアミノ酸によって切り詰められ得る。
【００８２】
Ｃ末端ＧＰＩアンカーに加えて、ＴＮＡＬＰは、Ｎ末端シグナルペプチド配列も有する。Ｎ末端シグナルペプチドは、合成されたとき、合成されたタンパク質上に存在するが、ＥＲに移行された後、ＴＮＡＬＰから切断される。ｓＡＬＰは、その分泌型（すなわち、Ｎ末端シグナルを欠く）およびその非分泌型（すなわち、Ｎ末端シグナルを有する）の両方を含む。当業者は、Ｎ末端シグナルペプチドの位置が異なるアルカリホスファターゼにおいて異なり、ポリペプチドのＮ末端上に最初の５、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２７、３０以上のアミノ酸残基を含み得ることを理解する。当業者は、例えば、Ｂｅｎｄｔｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（４）：７８３−７９５，２００４）に記載されるような、およびｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ／のウェブで利用可能な適切なコンピュータアルゴリズムにより、シグナル配列切断部位の位置を予測することができる。
【００８３】
本方法は、ＡＬＰアイソザイムの細胞外ドメインに由来するｓＡＬＰコンセンサス配列（例えば、ＴＮＡＬＰ、ＰＡＬＰ、ＧＣＡＬＰ、ＩＡＬＰなど）を使用して行うこともできる。したがって、上で論じられるｓＴＮＡＬＰと同様に、本開示は、他の可溶性ヒトＡＬＰアイソザイムも提供する、すなわち、ペプチドシグナルを含まず、好ましくは、ＡＬＰの細胞外ドメインを含む。ｓＡＬＰは、ヒトＡＬＰアイソザイムおよび哺乳類ＴＮＡＬＰオルソログ（ヒト、マウス、ラット、ウシ、ネコ、およびイヌ）のＡＬＰ細胞外ドメインに由来するコンセンサス配列、または哺乳類ＴＮＡＬＰオルソログ（ヒト、マウス、ラット、ウシ、ネコ、およびイヌ）のみのＡＬＰ細胞外ドメインに由来するコンセンサスを満たすポリペプチ配列も含む。ｓＡＬＰは、これらのＴＮＡＬＰオルソログまたはヒトＡＬＰアイソザイムの様々な組み合わせに由来する同様のコンセンサス配列を満たすものも含む。そのようなコンセンサス配列は、例えば、ＷＯ２００８／１３８１３１において得られる。
【００８４】
本方法のｓＡＬＰは、上述のｓＡＬＰの野生型配列を含むだけでなく、これらのアルカリホスファターゼ（例えば、配列番号１〜１９、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）に対して少なくとも５０％（例えば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の配列同一性を有する任意のポリペプチドも含み得る。ＡＬＰ配列に導入することができる突然変異の例は、米国公開第２０１３／０３２３２４４号に記載されている。ｓＡＬＰは、任意選択的に、任意の適切な１つ以上のアミノ酸残基においてグリコシル化され得る。加えて、ｓＡＬＰは、本明細書に記載のｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）のいずれかに対して少なくとも５０％（例えば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の配列同一性を有し得る。ｓＡＬＰは、本明細書に記載のｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）のいずれかに対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の付加、欠失、または置換を有し得る。
【００８５】
ｓＡＬＰ融合ポリペプチド
本明細書に記載のｓＡＬＰのいずれか（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）、リンカー、スペーサー（例えば、Ｆｃ領域）、骨標的化部分は、構造Ｚ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｘ−Ｗｎ−Ｖ、Ｚ−Ｗｎ−Ｘ−スペーサー−Ｙ−ｓＡＬＰ−Ｖ、Ｚ−ｓＡＬＰ−Ｙ−Ｗｎ−Ｘ−スペーサー−Ｖ、およびＺ−Ｗｎ−Ｘ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｖを含む融合ポリペプチドにおいて組み合わされ得る。特に、ｓＡＬＰ融合ポリペプチドの構造は、Ｚ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｘ−Ｗｎ−ＶまたはＺ−Ｗｎ−Ｘ−スペーサー−Ｙ−ｓＡＬＰ−Ｖであり得る。ｓＡＬＰ融合ポリペプチドのｓＡＬＰは、本明細書に記載されるように、完全長ＡＬＰまたはＡＬＰの機能断片、例えば、ＡＬＰの可溶性細胞外ドメイン（例えば、ＴＮＡＬＰ、ＰＡＬＰ、ＧＣＡＬＰ、およびＩＡＬＰ）であり得る。
【００８６】
Ｘ、Ｙ、Ｚ、およびＶ、ならびに／またはスペーサーのうちの任意の１つは、不在であるか、または少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸配列を含むリンカー領域であり得る。例えば、Ｘ、Ｙ、Ｚ、およびＶは、Ｙ位置の２残基リンカー（例えば、ロイシン−リジン）またはＸ位置の２残基リンカー（例えば、アスパラギン酸−イソロイシン）などのジペプチド配列（例えば、ロイシン−リジンまたはアスパラギン酸−イソロイシン）であり得る。例えば、ｓＡＬＰ融合ポリペプチドは、構造ｈＴＮＡＬＰ−Ｆｃ−Ｄ１０（例えば、配列番号１のアミノ酸配列を含むｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を有し得る。 
【００８７】
リンカー領域は、ｓＡＬＰが生物学的活性を維持することを可能にする、例えば、立体障害のない任意の配列および長さのものであり得る。例示的なリンカーの長さは、１〜２００のアミノ酸残基、例えば、１〜５、６〜１０、１１〜１５、１６〜２０、２１〜２５、２６〜３０、３１〜３５、３６〜４０、４１〜４５、４６〜５０、５１〜５５、５６〜６０、６１〜６５、６６〜７０、７１〜７５、７６〜８０、８１〜８５、８６〜９０、９１〜９５、９６〜１００、１０１〜１１０、１１１〜１２０、１２１〜１３０、１３１〜１４０、１４１〜１５０、１５１〜１６０、１６１〜１７０、１７１〜１８０、１８１〜１９０、または１９１〜２００のアミノ酸残基である。例えば、リンカーは、可動性部分、例えば、顕著に固定された二次または三次構造を含まない領域を含むか、またはそれからなる。例示的な可動性リンカーは、例えば、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはさらには１００％のグリシン残基を含む、グリシン豊富リンカーである。リンカーは、例えば、セリン残基も含み得る。場合によっては、リンカーのアミノ酸配列は、グリシンおよびセリン残基のみからなる。リンカーは、任意選択的に、任意の適切な１つ以上のアミノ酸残基においてグリコシル化され得る。加えて、本明細書に記載されるリンカーは、共有結合または非共有結合された任意の他の配列または部分を含み得る。リンカーはまた、不在であってもよく、スペーサー（例えば、Ｆｃ領域）およびｓＡＬＰが介在残基なしで一緒に直接融合される。
【００８８】
有用なスペーサーは、Ｆｃ領域を含むポリペプチドを含むが、これに限定されない。例えば、ｓＡＬＰは、Ｎ末端またはＣ末端ドメインに免疫グロブリンのＦｃ領域を含む融合ポリペプチドであり得る。免疫グロブリン分子は、当該技術分野で周知の構造を有する。これは、鎖間ジスルフィド結合によって結合された２つの軽鎖（各約２３ｋＤ）および２つの重鎖（各約５０〜７０ｋＤ）を含む。免疫グロブリンは、タンパク質分解により（例えば、パパイン切断により）、Ｆａｂ（軽鎖ならびに重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメインを含む）およびＦｃ（隣接している配列と共に、重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む）に容易に切断される。本明細書に記載される有用なＦｃ断片は、任意の哺乳動物（例えば、ヒト）からの、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ、およびそれらの様々なサブクラス（例えば、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３、ＩｇＧ−４、ＩｇＡ−１、ＩｇＡ−２）を含む、任意の免疫グロブリン分子のＦｃ断片を含む。例えば、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ−１である。Ｆｃ断片は、例えば、重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、ならびにヒンジ領域の任意の部分を含み得る。Ｆｃ領域は、任意選択的に、当業者に既知の任意の適切な１つ以上のアミノ酸残基においてグリコシル化され得る。特に、融合ポリペプチドのＦｃ断片は、配列番号２０のアミノ酸配列を有するか、または配列番号２０に対して少なくとも５０％（例えば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の配列同一性を有する。操作された、例えば、天然に生じないＦｃ領域は、本明細書に記載のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば、ＷＯ２００５／００７８０９に記載のものに組み込まれ得る。本明細書に記載されるＦｃ断片は、本明細書に記載のＦｃ断片のいずれかに対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０以上の付加、欠失、または置換を有し得る。
【００８９】
Ｗｎは、例えば、一連の連続したアスパルテート（Ｄ）および／またはグルタメート（Ｅ）残基を有する、骨標的化部分であり得、ｎ＝１〜５０、例えば、ｎ＝３〜３０、例えば、５〜１５、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３６、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０である。存在する場合、骨標的化部分は、融合ポリペプチドのどこにでも、例えば、Ｎ末端またはＣ末端にもしくはその付近に、および／またはリンカー領域に位置付けられ得る。例えば、骨標的化部分は、ｓＡＬＰ融合ポリペプチドのＣ末端に存在し得る。ｓＡＬＰおよび融合ポリペプチドはまた、骨標的化部分を欠いてもよい。
【００９０】
追加のアミノ酸残基は、融合ポリペプチドを産生するために使用されるクローニング戦略によりポリペプチドに導入され得る。例えば、追加のアミノ酸残基は、可溶性形態のポリペプチドを維持するために、追加のＧＰＩ固定シグナルを提供しない。さらに、任意のそのような追加のアミノ酸残基は、本方法のポリペプチドに組み込まれる場合、宿主細胞のエンドプロテアーゼのための切断部位を提供しない。設計された配列が宿主細胞のエンドプロテアーゼによって切断される可能性は、例えば、Ｉｋｅｚａｗａ（Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２５：４０９−４１７，２００２）により記載されるように予測することができる。
【００９１】
ｓＡＬＰ融合ポリペプチド（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、二量体または三量体に会合し得る。例えば、２つのｓＡＬＰ−Ｆｃ単量体は、Ｆｃ断片のヒンジ領域に位置する２つのジスルフィド結合により共有結合され得る。加えて、ｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド）は、グリコシル化またはＰＥＧ化され得る。
【００９２】
核酸およびポリペプチドの産生
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）をコードする核酸は、当該技術分野で既知の任意の方法により産生され得る。典型的には、所望の融合ポリペプチドをコードする核酸は、分子クローニング方法を使用して生成され、一般的に、プラスミドまたはウイルスなどのベクター内に配置される。ベクターを使用して、核酸を、融合ポリペプチドの発現に適切な宿主細胞に形質転換する。代表的な方法は、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８９）に開示されている。多くの細胞型が、適切な宿主細胞として使用することができるが、哺乳類細胞は、適切な翻訳後修飾を付与することができるため、好ましい。宿主細胞には、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞、ＢＨＫ細胞、ＣＯＳ−７細胞、または当該技術分野で既知の任意の他の好適な宿主細胞が含まれる。例えば、宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ−ＤＧ４４細胞）である。
【００９３】
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、宿主細胞において、ｓＡＬＰポリペプチドの発現をもたらすのに好適な任意の条件下で産生され得る。そのような条件は、緩衝液、炭酸水素および／またはＨＥＰＥＳ、塩化物のようなイオン、リン酸、カルシウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、鉄、単糖のような炭素源、アミノ酸、潜在的な脂質、ヌクレオチド、ビタミン、ならびにインスリンのような成長因子；アルファ−ＭＥＭ、ＤＭＥＭ、ハムのｓ−Ｆ１２、ならびに２〜４ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび５％ウシ胎仔血清を補充したＩＭＤＭのような通常の市販の培地；２〜４ｍＭ  Ｌ−グルタミンを補充した、Ｈｙｃｌｏｎｅ（商標）ＳＦＭ４ＣＨＯ、Ｓｉｇｍａ  ＣＨＯ  ＤＨＦＲ−、Ｃａｍｂｒｅｘ  ＰＯＷＥＲ（商標）ＣＨＯ  ＣＤのような通常の市販の動物タンパク質不含培地などの構成要素を用いて調製された培地の適切な選択を含む。これらの培地は、望ましくは、選択圧を維持するために、チミジン、ヒポキサンチン、およびＬ−グリシンなしで調製され、安定したタンパク質産生発現を可能にする。
【００９４】
本方法により治療された患者
ｓＡＬＰが投与される患者は、任意の年齢の患者であってもよいが、特に、青年期、例えば、約１２〜１８歳の者、または約１８歳より上の成人であってもよい。患者は、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状に苦しんでいる可能性がある。患者は、ジストロフィー脊椎側弯症に苦しんでいる可能性がある。患者は、骨癒合および／または石灰化の誘導を必要としている場合がある。例えば、患者は、脊椎の骨、例えば、椎骨の骨折など、１つ以上の骨折に苦しんでいる可能性がある。患者は、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症を含む、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を有し得る。
【００９５】
投与および投薬量
開示の方法のいずれかにおいて、医薬組成物（例えば、ＴＮＡＬＰなどのｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有する変異型など、本明細書に記載のポリペプチ変異型、例えば、アスホターゼアルファを含む）の任意の量が患者に投与され得る。投薬量は、投与モードおよび患者の年齢を含む多くの要因に依存する。典型的には、単回用量に含まれる組成物（例えば、ＴＮＡＬＰなどのｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の量は、顕著な毒性を誘導することなく、本明細書に記載の患者を治療するのに有効な量である。
【００９６】
例えば、開示の方法のいずれかにおいて、本明細書に記載のｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０５ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、または２．０ｍｇ／ｋｇ〜３．０ｍｇ／ｋｇ）、または１μｇ／ｋｇ〜１，０００μｇ／ｋｇ（例えば、５μｇ／ｋｇ〜１，０００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜７５０μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ〜７５０μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜７５０μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜５００μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ〜５００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜５００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜５０μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ〜５０μｇ／ｋｇ、または１０μｇ／ｋｇ〜５０μｇ／ｋｇ）の範囲の個々の用量で患者に投与され得る。
【００９７】
ｓＡＬＰの例示的な用量は、例えば、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２、２．５、５、１０、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、２００、２５０、もしくは５００ｍｇ／ｋｇ、または１、２、２．５、５、１０、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、２００、２５０、５００、７５０、９００、または１，０００μｇ／ｋｇを含む。本明細書に記述される全ての投薬量または範囲は、これらの投薬量を、記述される値または範囲のエンドポイントを±１０％修正するために使用され得る。特に、本開示による組成物（例えば、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む）は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５００ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日、または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で患者に投与され得る。例えば、ｓＡＬＰ組成物（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、約０．５ｍｇ／ｋｇ週〜約１４０ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約０．８ｍｇ／ｋｇ／週〜約５０ｍｇ／ｋｇ／週、または約１ｍｇ／ｋｇ／週〜約１０ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約３または約６または約９ｍｇ／ｋｇ／週）の範囲の毎週投薬量で患者に投与され得る。特に、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、２ｍｇ／ｋｇを週３回（合計約６ｍｇ／ｋｇ／週）、１ｍｇ／ｋｇを週６回（合計約６ｍｇ／ｋｇ／週）、３ｍｇ／ｋｇを週３（合計約９ｍｇ／ｋｇ／週）、０．５ｍｇ／ｋｇを週３回（合計約１．５ｍｇ／ｋｇ／週）、または９．３ｍｇ／ｋｇを週３回（合計約２８ｍｇ／ｋｇ／週）の投薬量で投与され得る。投薬量は、例えば、神経線維腫症１型、ジストロフィー脊椎側弯症の程度、骨癒合の必要性、および患者からの異なるパラメータなどの従来の要因により臨床医によって適応される。
【００９８】
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む医薬組成物の投薬量は、単回または複数回投薬量レジメンのいずれかにおいて提供され得る。用量は、例えば、毎時間、２時間おき、毎日、１日２回（ｂｉｄａｉｌｙ）、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、毎週、隔週、毎月、隔月、または毎年投与され得る。あるいは、用量は、例えば、１日１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、または１２回投与され得る。特に、投与レジメンは、週３回である。投与レジメンの継続期間は、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０日間（複数可）、週間（複数可）、または月間（複数可）であり得る。投与レジメンは、外科的介入などの物理的介入前、介入中、または介入後に始まり得る。投薬量の量、頻度、および継続期間は、神経線維腫症１型、ジストロフィー脊椎側弯症、骨折、または骨石灰化の程度、および患者からの異なるパラメータなどの従来の要因により、臨床医によって適応される。
【００９９】
例えば、ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、透明の無色からわずかに黄色の水溶液、ｐＨ  ７．４である注射用溶液として製剤化され得る。ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、例えば、１２ｍｇ／０．３ｍＬ、１８ｍｇ／０．４５ｍＬ、２８ｍｇ／０．７ｍＬ、４０ｍｇ／１ｍｌ、または８０ｍｇ／０．８ｍＬの濃度で製剤化され得る。特に、本組成物は注射用の４０ｍｇ／ｍｌの溶液として製剤化され得、溶液の各ｍｌは、４０ｍｇのｓＡＬＰを含む（例えば、各バイアルは、０．３ｍｌの溶液、および１２ｍｇのｓＡＬＰ（４０ｍｇ／ｍｌ）を含むか、各バイアルは、０．４５ｍｌの溶液および１８ｍｇのｓＡＬＰ（４０  ｍｇ／ｍｌ）を含むか、各バイアルは、０．７ｍｌの溶液および２８ｍｇのｓＡＬＰ（４０ｍｇ／ｍｌ）を含むか、または各バイアルは、１．０ｍｌの溶液および４０ｍｇのアスホターゼアルファ（４０ｍｇ／ｍｌ）を含む）。ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、１００ｍｇ／ｍｌの濃度で注射用の溶液として製剤化され得、各１ｍｌの溶液は、１００ｍｇのｓＡＬＰまたはｓＡＬＰポリペプチドを含む（例えば、各バイアルは、０．８ｍｌの溶液および８０ｍｇのアスホターゼアルファ（１００ｍｇ／ｍｌ）を含む）。
【０１００】
例えば、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の推奨投薬量は、週３回皮下投与される２ｍｇ／体重ｋｇ、または週６回皮下投与される１ｍｇ／体重ｋｇの投薬量レジメンである。さらなる投薬量の情報は以下に提供される（表１）。
【表１】
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【０１０１】
場合によっては、本開示によるｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の投与は、（ｉ）患者における骨癒合の増加、および／または（ｉｉ）検出不可能な、もしくは増加した骨塩密度の変化、のうちの１つ以上をもたらし得る。
【０１０２】
本明細書に開示される態様のいずれかにおいて、患者は、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の投与に対する忍容性、例えば、注射部位紅斑、ヘモグロビンの減少、発熱、肺炎，、上気道感染、中耳炎、嘔吐、便秘、下痢、歯牙喪失、上咽頭炎、発疹、う蝕、および易刺激性からなる群から選択される有害事象の発生の欠如または減少を呈する。
【０１０３】
本明細書に開示される態様のいずれかにおいて、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、例えば、生理食塩水（例えば、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウム）と共に医薬組成物に製剤化される。例えば、少なくとも１つの薬学的に許容される担体は、１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよび２５ｍＭリン酸ナトリウムを含み得る。
【０１０４】
上記の態様のいずれかにおいて、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、ＰＥＡ、ＰＰｉ、およびＰＬＰに対して生理学的に活性であり、骨における骨格石灰化を改善するのに触媒的に適格性があり、かつ／またはアルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである。
【０１０５】
製剤
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む医薬組成物は、標準的な方法により製剤化され得る。医薬製剤は、十分に確立された技術分野であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）、Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）、およびＫｉｂｂｅ（２０００）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）においてさらに記載されている。例えば、ｓＡＬＰ組成物（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、例えば、好適な濃度および２〜８℃（例えば、４℃）での保管に好適な緩衝溶液として製剤化され得る。組成物はまた、０℃を下回る温度（例えば、−２０℃または−８０℃）で保管するために製剤化され得る。組成物はさらに、２〜８℃（例えば、４℃）で最大２年間（例えば、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１年間、１  １／２年間、または２年間）保管するために製剤化され得る。したがって、本明細書に記載の組成物は、２〜８℃（例えば、４℃）で少なくとも１年間の保管において安定していてもよい。
【０１０６】
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む医薬組成物は、様々な形態であり得る。これらの形態には、液体、半固体および固体剤形、例えば、液状溶液（例えば、注射液および注入液）、分散液または懸濁液、錠剤、ピル、粉末、リポソーム、および坐剤が含まれる。好ましい形態は、部分的に、意図される投与モードおよび治療用途に依存する。
【０１０７】
例えば、全身または局所送達用に意図された組成物は、注射液または注入液の形態であり得る。したがって、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む組成物は、非経口モード（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、または筋肉内注射）による投与用に製剤化され得る。
【０１０８】
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む医薬組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、または高濃度で安定した保存に好適な他の規則構造として製剤化され得る。滅菌注射液は、本明細書に記載の組成物を、必要に応じて、上記で列挙された成分のうちの１つまたは組み合わせと共に必要な量で適切な溶媒に組み込み、続いて濾過滅菌することにより調製され得る。一般的に、分散液は、本明細書に記載の組成物を、基本的な分散媒体および上記に列挙された成分から必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに組み込むことにより調製される。減菌注射液の調製のための減菌粉末の場合、調製方法は、本明細書に記載の組成物の粉末に加えて、その前の減菌濾過溶液からの任意の追加の所望の成分（本明細書を参照されたい）が得られる真空乾燥および凍結乾燥を含む。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散の場合に必要な粒径の維持、および界面活性剤の使用により維持され得る。注射可能な組成物の吸収の延長は、吸収を遅延させる試薬、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによりもたらされ得る。
【０１０９】
本明細書に記載の医薬組成物はまた、イムノリポソーム組成物に製剤化され得る。そのような製剤は、例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８２：３６８８、Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７７：４０３０；、ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載の方法など、当該技術分野で既知の方法により調製され得る。循環時間が強化されたリポソームは、例えば、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
【０１１０】
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む医薬組成物はまた、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系を含む徐放性製剤などの迅速な放出に対して組成物（例えば、ｓＡＬＰポリペプチドまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド）を保護する担体と共に製剤化され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーが使用され得る。そのような製剤を調製するための多くの方法が当該技術分野で既知である。例えば、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（１９７８）Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【０１１１】
組成物が第２の活性剤と組み合わせて使用される場合、組成物は、第２の薬剤と共製剤化され得るか、または組成物は、第２の薬剤の製剤とは別個に製剤化され得る。例えば、それぞれの医薬組成物が、例えば、投与直前に混合され、一緒に投与され得るか、または例えば、同時もしくは異なる時間に別個に投与され得る。
【０１１２】
担体／ビヒクル
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む調製物は、薬学的に許容される減菌の水性もしくは非水性溶媒、懸濁液、またはエマルジョンと組み合わせて、患者、例えば、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を有する、または骨癒合を必要とする患者に提供され得る。非水性溶媒の例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、魚油、および注射可能な有機エステルである。水性担体には、生理食塩水および医療用緩衝非経口ビヒクル（塩化ナトリウム溶液、リンゲルのデキストロース溶液、デキストロース＋塩化ナトリウム溶液、ラクトースを含むリンゲル溶液、または固定油を含む）を含む、水、水−アルコール溶液、エマルジョン、または懸濁液が挙げられる。例えば、薬学的に許容される担体は、塩化ナトリウムおよび／またはリン酸ナトリウムを含むことができ、組成物は、例えば、約１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよび／または約２５ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．４を含む。
【０１１３】
静脈内ビヒクルは、流動および栄養補給物、電解質補給物、例えば、リンゲルのデキストロースなどに基づくものを含み得る。薬学的に許容される塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などの鉱酸塩、および酢酸、プロピオン酸、マロン酸、安息香酸などの有機酸の塩がその中に含まれ得る。加えて、湿潤剤または乳化剤などの補助物質、ｐＨ緩衝物質などがそのようなビヒクル中に存在し得る。薬学的に許容される担体の完全な考察は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｎ．Ｊ．１９９１）において利用可能である。
【実施例】
【０１１４】
以下の実施例は、本開示を限定するのではなく、例示することを意図している。特定の実施例、材料、量、および手順は、本明細書に記載される開示の範囲および趣旨により広義に解釈されることを理解されたい。
【０１１５】
実施例１．神経線維腫症１型（ＮＦ１）の患者におけるジストロフィー脊椎側弯症のために脊椎固定後に石灰化を促進するためのアスホターゼアルファの使用
ジストロフィー脊柱側弯症は、稀だが、神経線維腫症１型（ＮＦ１）の患者において深刻な骨格兆候であり、衰弱性神経学的障害に関連し得る。ジストロフィー型湾曲は迅速に進行し、早期固定を必要とし、不十分な骨癒合および偽関節を合併することが多い。ＮＦ１における不十分な骨癒合は、骨癒合の低減、骨吸収の増加、および不十分な骨石灰化の組み合わせによるものと考えられている。ニューロフィブロミンの喪失はピロリン酸（ＰＰｉ）の合成を促進する遺伝子を上方制御することができ、ＰＰｉの蓄積および石灰化の阻害、アルカリホスファターゼ発現の低減による骨芽細胞分化障害、ならびに骨吸収の増加につながる。
【０１１６】
ＮＦ１のマウスノックアウトモデルにおける前臨床研究は、ＰＰｉの恒常性を制御する２つの主な遺伝子であるＥｎｐｐ１およびＡｎｋの発現の減少を示した。しかしながら、この結果は、接着性骨髄細胞における報告されたヒト細胞アッセイと矛盾した（Ｄｅ  ｌａ  Ｃｒｏｉｘ  Ｎｄｏｎｇ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；２０：９０４−９１０，２０１４）。
【０１１７】
この研究において、重度のＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症および骨粗鬆症の５４歳の閉経後の女性は、事前のＴ１１から骨盤の脊椎固定を含む、７年の期間にわたって事前の背中手術を３回受けた（図１）。脊椎固定は、進行性硬膜拡張症（図２）、偽関節、および生命を脅かす出血を合併した。前方アプローチが試されたが、左腸骨静脈合併症により中断された。患者は、後方器具類および骨形成タンパク質（ＢＭＰ）による増強再置換も受けたが、斬進的なネジの緩み、大腿前部の感覚異常、および難治性の背痛が継続的にあった。彼女は、Ｌ４椎弓根のロッドの変位を発展させ、修復手術を必要とした。患者は、難治性の背痛を助けるために５ｍｇのモルヒネも受けた。患者は、モルヒネ治療で保存的に管理されたが、背痛は持続し、視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）の疼痛スコアは９、オスウェストリー下背部障害スコア（Ｏｓｗｅｓｔｒｙ  ｌｏｗ  ｂａｃｋ  ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ  ｓｃｏｒｅ）は５２％であった。ＣＴスキャンにより、緩みを示す左後腸骨ネジの進行した周囲透過性（図３Ａ）、およびＬ４椎弓根ネジ連結部の左垂直ロッドの骨折（図３Ｂ）が明らかになり、４回目の脊椎手術を必要とした。
【０１１８】
高確率のインプラント失敗および手術後の確実な関節固定を達成する難しさを考えると、外科的介入と、骨癒合を強化するための骨形成タンパク質（組換えヒトＢＭＰ−２）、骨吸収を阻害するためのビスホスホネート（例えばゾレドロン酸）、および確実な関節固定．を達成するために骨石灰化を改善するためのアスホターゼアルファ（組換えヒトアルカリホスファターゼ）を含む追加の利用可能な医療介入との組み合わせが決定された。
【０１１９】
研究の開始時に、患者は、胸椎Ｔ１１から仙骨の脊椎器具類の再挿入、骨盤固定の再挿入、およびＴ１１から骨盤の脊椎後方固定を含む腰部固定の再置換を受けた（図４）。これは４回目の脊椎手術であった。反復手術中または手術後の医療介入には、骨癒合を強化するために、手術される骨に直接適用される術内ＢＭＰが含まれた。
【０１２０】
手術のおよそ３ヶ月後に、骨吸収を阻害するために、患者は、副作用なく、単一の５ｍｇのゾレドロン酸の静脈内注入として、ビスホスホネート療法を受けた。
【０１２１】
手術のおよそ７ヶ月後および６ヶ月間の間継続して、骨石灰化を改善するために、アスホターゼアルファ（組換えヒトアルカリホスファターゼ、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標）、Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）を、２ｍｇ／ｋｇの用量で３ｘ／週皮下投与した。アスホターゼアルファの投与は、６ヶ月の終わりに（すなわち、手術の１３ヶ月後）に中止した。患者は、治療中、深刻な有害事象を経験しなかった。 
【０１２２】
確実な関節固定が、４回目の手術の１３ヶ月後に良好に得られた。安定した器具類装着された（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｅｄ）脊椎固定は、ＣＴスキャン（脊椎Ｘ線写真）により判断されるように、１３ヶ月で観察された。ハウンスフィールド単位スケール測定を使用して、基準点としてＴ１０椎体を用いた、全体的な骨塩密度における実質的な変化はその時点では見られなかった。
【０１２３】
ＢＭＰ単独（骨形成を強化するために使用された）では、初期の手術中、この患者において良好な脊椎固定はもたらされなかった。それらは、患者の手術中にも再度使用されたが、今回は、ビスホスホネートおよびアスホターゼアルファを用いた組み合わせ療法と共に使用された。ＢＭＰ（例えば、ｒｈＢＭＰ−２）およびビスホスホネートと組み合わせたアスホターゼアルファが、ＢＭＰ療法単独が以前に失敗した、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症の患者の脊椎手術後に確実な関節固定をもたらしたことがわかった。
【０１２４】
骨吸収のマーカーが手術後に増加したことが認められた。手術の３ヶ月後のビスホスホネートゾレドロン酸（ＺＯＬ）の投与後、骨吸収マーカー（ＮＴＸおよびＣＴＸ）は減少したが、骨形成マーカー（ＯＣＮおよびＰ１ＮＰ）も減少した。理論に拘束されるものではないが、これらのマーカーの減少は、ＺＯＬ後の骨代謝回転の低減による可能性がある。したがって、患者は、基底疾患およびＺＯＬの使用の両方により骨石灰化の阻害を経験し得る（さもなければ、骨吸収阻害の有益な効果を有する）。
【０１２５】
しかしながら、同時に、骨特異的アルカリホスファターゼ（ＢＳＡＰ）および総ＡＬＰレベルの両方がアスホターゼアルファの投与後に大幅に増加した。この研究は、ＺＯＬなどのビスホスホネートの投与後のアスホターゼアルファの投与が、幾分「救援」療法のような、骨石灰化を改善し得ることを示唆する。アスホターゼアルファの投与は、骨折治癒が生じ、ネジの緩みが分解能の兆候を示した、ＺＯＬの投与の潜在的な交絡効果が生じたことにもかかわらず、骨石灰化を改善することが示された。これらの結果は、ビスホスホネート療法の補助としてアスホターゼアルファを用いる、より一般的な治療プロトコルを示唆する。より具体的には、骨吸収を阻害するためのＺＯＬなどのビスホスホネートの投与の後に、ビスホスホネートの骨石灰化に対する有害効果の可能性を弱めるために、アスホターゼアルファの投与が続き得る。これは、ビスホスホネート治療がアスホターゼアルファ治療中は禁忌であることを示唆する、一般に広まっている標準治療とは異なる（Ｋｉｓｈｎａｎｉ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｍｅｔａｂ．１２２：４−１７，２０１７）。
【０１２６】
研究の詳細
表２は、参照範囲を含む、研究期間中に行われた室内および放射能調査を要約する。全ての手順のタイミングはおおよそであり、患者の臨床的進行に基づき、そして患者のスケジュールに対応するために、特定の日時に柔軟性を許容した。
【表２−１】
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【表２−２】
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【表２−３】
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【０１２７】
アスホターゼアルファ治療前調査
手術の４ヶ月後の腎臓超音波の報告
右腎９．７ｃｍ、正常なエコー像および皮質。腫瘤、結石、または水腎なし
左腎１０．４ｃｍ、正常なエコー像および皮質。腫瘤、結石、または水腎なし
【０１２８】
手術の５ヶ月後の総合的な眼検査により、一時的な眼瞼異常からわかるように、特に左眼の乾性角結膜炎と報告された。正常な動眼神経。正常な黄斑。 
【０１２９】
ベースラインのＤＸＡスキャンにより、左大腿骨頸部ＢＭＤが−２．８のＴスコアに相当する０．６４３であることが明らかとなった。右大腿骨頸部ＢＭＤは、−３．０のＴスコアに相当する０．６２７であった。平均総臀部ＢＭＤは、−２．９のＴスコアに相当する０．６３５であった。８年前のＢＭＤと比較して、骨密度は、８．１％減少し、これは有意であった。左３３％前腕ＢＭＤは、−３．０のＴスコアに相当する０．６２１であった。 
【０１３０】
Ｘ線データ、ＣＴ腰椎
手術の７ヶ月前に得た手術前ＣＴおよび脊椎Ｘ線写真は、左Ｌ４椎弓根ネジの下の垂直な連結ロッドの骨折および左後腸骨棘ネジの周辺の透過性を示した（図３Ａ〜３Ｂ）。腰椎、特に右Ｌ２〜Ｌ４の進行した硬膜拡張症、および両側仙腸関節ネジでのＴ  １１から骨盤の脊椎骨盤固定器具類の手術後の変化が認められた。
【０１３１】
手術日に、胸椎Ｔ１１から仙骨の脊椎器具類の再挿入、骨盤固定の再挿入、およびＴ１１から骨盤の脊椎後方固定を含む腰部固定の再置換が行われた（図４）。
【０１３２】
手術直後のＣＴ、および脱力感がない両側足首のストッキングのような感覚異常の突然の発症のため手術の２日後に得た脊椎Ｘ線写真は、両側で内側腸骨に延在する追加のネジで再置換器具類装着された（ｒｅｖｉｓｉｏｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｅｄ）脊椎固定Ｔ１１−骨盤の術後変化を示した。Ｔ１１、Ｔ１２、Ｌ１、Ｓ１の両側椎弓根ネジ、Ｌ２およびＬ４の左椎弓根ネジ、Ｌ５の右椎弓根ネジ、ならびに両側腸骨ネジが認められた。左後腸骨ネジの周囲の安定した透過性は、ネジの先端の皮質外層に新たな骨欠損と共にみられた（図５Ａ〜５Ｂ）。両側足首の感覚異常は徐々に２日後に改善され、患者は自宅退院前に安全に歩けた。患者の重度のジストロフィー脊椎側弯症、および機械的失敗の過去の手術歴を所与として以前の高確率の失敗を考えると、患者は、骨吸収を阻害するために、骨吸収を阻害するためのゾレドロン酸（手術の３ヶ月後に１回、５ｍｇ  ＩＶ）、および骨石灰化を改善するために、骨石灰化を改善するためのアスホターゼアルファ（手術の７〜１３ヶ月後に（２ｍｇ／ｋｇ  ３ｘ／週の皮下注射）も受けた。
【０１３３】
手術の３ヶ月および７ヶ月後に得た脊椎Ｘ線写真は、無傷の器具類が後方にＴ１１から仙骨まで認められ、ネジが両仙腸関節にわたって延在する、脊椎固定の安定した術後変化を示した、すなわち、確実な両側背外側関節強直を伴う安定した器具類装着された脊椎固定Ｔ１１−骨盤が観察された。左後腸骨ネジの先端に関連する以前に見られた骨欠損の治癒および硬化が、手術観察の２日後以降に観察された。 
【０１３４】
アスホターゼアルファ治療後調査
Ｘ線写真
アスホターゼアルファ開始からおよそ７ヶ月後に得たＣＴおよび脊椎Ｘ線写真は、確実な両側背外側関節強直を伴う安定した器具類装着された脊椎固定Ｔ１１−骨盤を示した。左ネジ周辺腸骨骨折の間隔治癒が手術の５日後以降に観察された。両側仙腸関節ネジの周囲の最小限の周辺の透過性が緩みの確証的な証拠なく観察された。安定した凸状の右脊椎側弯症および非対照の右側の硬膜拡張症が観察された。
【０１３５】
再腎臓超音波、再眼検査、および再ＤＸＡスキャンが手術の１．２年後に計画された。アスホターゼアルファ治療前後の臓超音波および総合的な眼検査では、異所性石灰化は示されなかった。手術の１３ヶ月後の経過観察訪問時に、患者は、ＶＡＳ疼痛スコア７およびオスウェストリー下背部障害スコア４２％の背痛の改善を報告した。患者は、モルヒネ治療を停止することができた。
【０１３６】
追加観察
結論として、安定した器具類装着された脊椎固定は、脊椎のＸ線写真により判断された手術後に観察された。ネジの先端に新たな骨欠損を伴う（ネジ周辺の骨折を示す）左後腸骨ネジの周囲に透過性を示した（ネジの緩みを示唆する）手術直後のＣＴ腰椎（手術の２日後に得た）と比較して、アスホターゼアルファ開始からおよそ６ヶ月後のＣＴ腰椎は、緩みの証拠なく左後腸骨ネジの先端の骨折が治癒したことを示した（図６）。しかしながら、これら２つのＣＴスキャンを比較したとき、外科的変化がなかった基準点としてのＴ１０椎体において認められた、ＣＴハウンスフィールド測定を使用した骨塩密度に有意な変化はなかった。再置換手術の前に提示された肉眼的な骨架橋の程度（骨形成を示す）ならびに脊椎後方（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｅｌｅｍｅｎｔ）骨架橋部位での客観的測定（ハウンスフィールド測定）は、実質的な間隔変化を示さなかった。
【０１３７】
実施例２．大腿骨頸部骨折の治療
本明細書に開示の方法によると、当該技術分野の整形外科医は、大腿骨が骨折した患者を治療する場合がある。例えば、患者は、自転車から落ちた後に大腿骨を骨折する可能性があるか、または特発骨折する可能性がある。変位のない骨折は激痛を引き起こす場合があり、医者は、プレートおよび４本のネジを骨折上に配置し、続いて３ヶ月間患者の脚をギブスに固定する整形外科手術を行い得る。３ヶ月後、骨がＸ線およびＣＴスキャンで見たときに適切な治癒を表さない場合、またはネジが緩んだ場合、整形外科医は、２ヶ月間、６ｍｇ／ｋｇ／週で皮下投与されるアスホターゼアルファのレジメンで患者を治療し得る。アスホターゼアルファ治療の後、医師または外科医は、さらなるＸ線およびＣＴスキャンを行い、治癒プロセスを視覚化してもよい。医師または外科医は、アスホターゼアルファ治療が治癒プロセスを補助したこと、および２本のネジがこれ以上緩まないことを判断することができる。十分な治癒後、外科医は、プレートおよび４本のネジを含む金具が大腿骨から除去されてもよいことを判断し得る。
【０１３８】
実施例３．外傷性顔面骨折の治療
複数の顔面の頬骨を骨折した患者は、顔の原形および特徴を復元するために顔面骨の再建により口腔顎顔面外科医または形成外科医によって治療され得る。骨折の複雑度により、外科医は、顔面骨の再形成に役立つように複数のネジおよびプレートを利用することを決めてもよい。ネジおよびプレートは、顔に永久に残存するように設計され得る。医師は、最初に、手術の２週間前に、２ｍｇ／ｋｇ／週で局所投与されるアスホターゼアルファのレジメンを開始してもよい。医師は、手術を行い、プレートおよびネジを頬骨の骨折部分上に配置する。回復時間の３ヶ月後、医師は、Ｘ線およびＣＴスキャンにより治癒プロセスを視覚化してもよい。医師は、ネジの１本が緩いと判断する場合があり、アスホターゼアルファの投薬量を６ｍｇ／ｋｇ／週に増加することができる。回復時間のさらに１ヶ月後、医師は、Ｘ線およびＣＴスキャンにより治癒プロセスを再度視覚化してもよく、ネジがもはや緩くないと判断し得、その時点で、アスホターゼアルファ治療を終了してもよい。
【０１３９】
参照文献
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１１）Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍｉｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒａｓ  ａｒｅ  ｐｒｅｒｅｑｕｉｓｉｔｅｓ  ｆｏｒ  ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ．Ｂｏｎｅ  ３６，７９３−８０２
１２）Ｈｅｅｒｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ  １（ＮＦ１）ｄｉｓｐｌａｙ  ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．Ｂｏｎｅ  ５０，７９８−８０３
１３）Ｓｃｈｉｎｄｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ  ａｎｄ  Ｎｆ１  ｈａｐｌｏｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  ｒｅｓｅａｒｃｈ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ２６，６５−７４
１４）Ｂｉｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｐｓｅｕｄａｒｔｈｒｏｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｉｂｉａ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ  ４，５０７−５１７
１５）Ｂｏｂｙｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｍａｘｉｍｉｚｉｎｇ  ｂｏｎｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｓｐｉｎｅ  ｆｕｓｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｒｈＢＭＰ−２  ａｎｄ  ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎ  ｗｉｌｄ  ｔｙｐｅ  ａｎｄ  ＮＦ１  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  ｒｅｓｅａｒｃｈ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ３２，１０９０−１０９４
１６）Ｓｅｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｈｉｇｈ  ｂｏｎｅ  ｔｕｒｎｏｖｅｒ  ａｎｄ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏｉｄ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ  １．Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ：ａ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ  ａｓ  ｒｅｓｕｌｔ  ｏｆ  ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＵＳＡ  ２１，１１９−１２７
【０１４０】
前述の発明を実施するための形態および実施例は、単に理解を明確にするために記載されてきた。不必要な制限がそれから理解されるべきではない。本開示は、示され、記載される正確な詳細に限定されず、当業者に明らかな変形に関しては、特許請求の範囲により定義される本開示内に含まれる。
【０１４１】
特に示されない限り、本明細書および特許請求の範囲に使用される構成要素、分子量などの量を表す全ての数字は、全ての場合において、「約」という用語により修飾されると理解されるべきである。したがって、特に反対が示されない限り、本明細書および特許請求の範囲に記載される数値のパラメータは、本開示によって得えられることが求められる所望の特性により異なり得る近似である。少なくとも、および特許請求の範囲の範囲と同等の原理を制限しようとするのではなく、各数値パラメータは、少なくとも、報告される有効桁数の観点から、および適切な通常の丸め技法により解釈されるべきである。
【０１４２】
本開示の広範囲を記載する数値範囲およびパラメータは近似であるが、特定の実施例に記載される数値は、可能な限り正確に報告される。しかしながら、全ての数値は、それぞれの試験測定において見られる標準偏差に必然的に起因する範囲を本質的に含む。
【０１４３】
全ての見出しは、読者の利便性のためであり、特にそのように特定されない限り、見出しに続く文脈の意味を限定するように使用されるべきではない。
【０１４４】
本明細書に引用される全ての特許、仮特許出願を含む特許出願、特許公開および非特許公開を含む刊行物、ならびに電子的に利用な能な材料（例えばＧｅｎＢａｎｋ  ａｎｄ  ＲｅｆＳｅｑの、例えばヌクレオチド配列提出、ならびに例えばＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、ＰＩＲ、ＰＲＦ、ＰＤＢのアミノ酸配列提出、およびＧｅｎＢａｎｋ  ａｎｄ  ＲｅｆＳｅｑの注釈付きコード領域からの翻訳を含む）は参照により組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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