(57)【要約】  本発明は、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を処置するための組成物及び方法を提供する。本発明は、ＢＣＭＡターゲティングキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法及び追加的な療法剤を投与する方法にも関する。
2021509009.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の奏効性を判定又は予測する方法であって、前記対象は、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有し、前記方法は、
（ｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）例えば、９日目までの集団倍加数（ＰＤＬ９）によって測定されるとおりの、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての値を取得することであって、
（ａ）参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての前記値の増加は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の増加した奏効性を指示又は予測するものであるか；又は
（ｂ）参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての前記値の減少は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の減少した奏効性を指示又は予測するものである、取得すること
を含み、それにより前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の奏効性を判定又は予測する、方法。
【請求項２】
参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての前記値の前記増加は、
（ａ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の増加した奏効性；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であること；
（ｃ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であること；又は
（ｄ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大
の１、２、３つ又は全てを指示又は予測するものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての前記値の前記減少は、
（ａ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の減少した奏効性；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であること；又は
（ｃ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大
の１、２つ又は全てを指示又は予測するものである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記比が、
（１）１以上（例えば、１〜５、例えば１〜３．５）；又は
（２）１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）
であることは、
（ａ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の増加した奏効性；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であること；
（ｃ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であること；又は
（ｄ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大
の１、２、３つ又は全てを指示又は予測するものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記比が１未満（例えば、０．００１〜１）であることは、
（ａ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の減少した奏効性；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であること；又は
（ｃ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大
の１、２つ又は全てを指示又は予測するものである、請求項４又は５に記載の方法。
【請求項７】
ＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）の比率を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の前記比率が２５％以上（例えば、３０％〜９０％、例えば３５％〜８５％、例えば４０％〜８０％、例えば４５％〜７５％、例えば５０％〜７５％）であることは、
（ａ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の増加した奏効性；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であること；
（ｃ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であること；又は
（ｄ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大
の１、２、３つ又は全てを指示又は予測するものである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の前記比率が２５％未満（例えば、０．１％〜２５％、例えば０．１％〜２２％、例えば０．１％〜２０％、例えば０．１％〜１８％、例えば０．１％〜１５％））であることは、
（ａ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の減少した奏効性；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であること；又は
（ｃ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大
の１、２つ又は全てを指示又は予測するものである、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の前記比率が２０％以上（例えば、２０％〜９０％、例えば２０％〜８０％、例えば２０％〜７０％、例えば２０％〜６０％）であることは、
（ａ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の増加した奏効性；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であること；
（ｃ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であること；又は
（ｄ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大
の１、２、３つ又は全てを指示又は予測するものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の前記比率が２０％未満（例えば、０．１％〜２０％、例えば０．１％〜１８％、例えば０．１％〜１５％、例えば０．１％〜１２％、例えば０．１％〜１０％）であることは、
（ａ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の減少した奏効性；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であること；又は
（ｃ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大
の１、２つ又は全てを指示又は予測するものである、請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の前記比率が１５％以上（例えば、１５％〜９０％、例えば１５％〜８０％、例えば１５％〜７０％、例えば１５％〜６０％、例えば１５％〜５０％）であることは、
（ａ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の増加した奏効性；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であること；
（ｃ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であること；又は
（ｄ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大
の１、２、３つ又は全てを指示又は予測するものである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の前記比率が１５％未満（例えば、０．１％〜１５％、例えば０．１％〜１２％、例えば０．１％〜１０％、例えば０．１％〜８％）であることは、
（ａ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する前記対象の減少した奏効性；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であること；又は
（ｃ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大
の１、２つ又は全てを指示又は予測するものである、請求項１４又は１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えば細胞カウントによって測定されるとおりの、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の拡大倍数（例えば、製造の開始時と比べた製造の終了時の総細胞数）を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
（ａ）前記対象が、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する増加した奏効性を有すると指示又は予測されたとき；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であると指示又は予測されたとき；
（ｃ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であると指示又は予測されたとき；又は
（ｄ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法が、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおり、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおり、前記対象において増加した拡大を有すると指示又は予測されたとき、
前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象に前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを更に含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
（ａ）前記対象が、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する減少した奏効性を有すると指示又は予測されたとき；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であると指示又は予測されたとき；又は
（ｃ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法が、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおり、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおり、前記対象において減少した拡大を有すると指示又は予測されたとき、
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を前記対象に投与すること；
第２の療法（例えば、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を前記対象に投与すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を前記対象に投与すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正すること、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象に前処置を投与することであって、前記前処置は、前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前記前処置は、前記比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを更に含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの、
（ｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての増加した値に応答して、
前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象にＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを含み、それによりＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を有する前記対象を処置する、方法。
【請求項２１】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの、
（ｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての減少した値に応答して、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を前記対象に投与すること；
第２の療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象に前処置を投与することであって、前記前処置は、前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前記前処置は、前記比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを含み、それによりＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を有する前記対象を処置する、方法。
【請求項２２】
（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全てについての増加した値に応答して、
（ａ）前記対象が、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する増加した奏効性を有すること；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であること；
（ｃ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であること；又は
（ｄ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法が、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における増加した拡大を有すること
の１、２、３つ又は全てを同定又は予測することを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全てについての減少した値に応答して、
（ａ）前記対象が、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する減少した奏効性を有すること；
（ｂ）前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であること；又は
（ｃ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法が、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における減少した拡大を有すること
の１、２つ又は全てを同定又は予測することを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
ＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を含む、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記比が、
（１）１以上（例えば、１〜５、例えば１〜３．５）；又は
（２）１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）
であることに応答して、
前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象にＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記比が１未満（例えば、０．００１〜１）であることに応答して、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を前記対象に投与すること；
第２の療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象に前処置を投与することであって、前記前処置は、前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前記前処置は、前記比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを含む、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
ＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）の比率を含む、請求項２０〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の前記比率が２５％以上（例えば、３０％〜９０％、例えば３５％〜８５％、例えば４０％〜８０％、例えば４５％〜７５％、例えば５０％〜７５％）であることに応答して、
前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象にＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の前記比率が２５％未満（例えば、０．１％〜２５％、例えば０．１％〜２２％、例えば０．１％〜２０％、例えば０．１％〜１８％、例えば０．１％〜１５％）であることに応答して、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を前記対象に投与すること；
第２の療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象に前処置を投与することであって、前記前処置は、前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前記前処置は、前記比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを含む、請求項２８又は２９に記載の方法。
【請求項３１】
ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む、請求項２０〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の前記比率が２０％以上（例えば、２０％〜９０％、例えば２０％〜８０％、例えば２０％〜７０％、例えば２０％〜６０％）であることに応答して、
前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象にＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の前記比率が２０％未満（例えば、０．１％〜２０％、例えば０．１％〜１８％、例えば０．１％〜１５％、例えば０．１％〜１２％、例えば０．１％〜１０％）であることに応答して、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を前記対象に投与すること；
第２の療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象に前処置を投与することであって、前記前処置は、前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前記前処置は、前記比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを含む、請求項３１又は３２に記載の方法。
【請求項３４】
ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む、請求項２０〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の前記比率が１５％以上（例えば、１５％〜９０％、例えば１５％〜８０％、例えば１５％〜７０％、例えば１５％〜６０％、例えば１５％〜５０％）であることに応答して、
前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象にＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の前記比率が１５％未満（例えば、０．１％〜１５％、例えば０．１％〜１２％、例えば０．１％〜１０％、例えば０．１％〜８％）であることに応答して、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を前記対象に投与すること；
第２の療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象に前処置を投与することであって、前記前処置は、前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前記前処置は、前記比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを含む、請求項３４又は３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えば細胞カウントによって測定されるとおりの、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の拡大倍数（例えば、製造の開始時と比べた製造の終了時の総細胞数）を含む、請求項２０〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の効力を判定又は予測する方法であって、前記対象は、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有し、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して製造され、前記方法は、
（ｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）例えば、９日目までの集団倍加数（ＰＤＬ９）によって測定されるとおりの、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての値を取得することであって、
（ａ）参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての前記値の増加は、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した効力を指示又は予測するものであるか；又は
（ｂ）参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての前記値の減少は、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した効力を指示又は予測するものである、取得すること
を含み、それにより前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の効力を判定又は予測する、方法。
【請求項３９】
参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての前記値の前記増加は、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大を指示又は予測するものである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての前記値の前記減少は、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、前記対象における前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大を指示又は予測するものである、請求項３８又は３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造する方法であって、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して製造され、前記方法は、
（ｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）例えば、９日目までの集団倍加数（ＰＤＬ９）によって測定されるとおりの、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての値を取得することを含み、
参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての前記値の増加に応答して、前記対象からの細胞を使用して前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造する、方法。
【請求項４２】
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造する方法であって、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して製造され、前記方法は、
（ｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）例えば、９日目までの集団倍加数（ＰＤＬ９）によって測定されるとおりの、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての値を取得することを含み、
参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての前記値の減少に応答して、
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正すること、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正すること、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正すること、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖を増加させること；又は
前記対象に前処置を投与することであって、前記前処置は、前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前記前処置は、前記比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、且つ前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造すること
の１、２、３つ又は全てを実施する、方法。
【請求項４３】
ＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を含む、請求項３８〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
ＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）の比率を含む、請求項３８〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む、請求項３８〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む、請求項３８〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む、請求項３８〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖についての前記値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えば細胞カウントによって測定されるとおりの、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の拡大倍数（例えば、製造の開始時と比べた製造の終了時の総細胞数）を含む、請求項３８〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を、
（１）前記ＣＡＲ核酸又はＣＡＲポリペプチドを含む前記細胞の有効性を増加させる薬剤；
（２）前記ＣＡＲ核酸又はＣＡＲポリペプチドを含む前記細胞の投与に関連する１つ以上の副作用を改善する薬剤；
（３）ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を処置する薬剤
の１、２つ又は全てと併用して前記対象に投与することを含む、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を式（Ｉ）の化合物（ＣＯＦ１）と併用して前記対象に投与することを含み、前記ＣＯＦ１は、
【化１】
2021509009.tif 000185
（式中、
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり、これらの各々は、任意選択で１つ以上のＲ４によって置換されており；
Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は、独立に、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであるか；又はＲ２ａ及びＲ２ｂは、それらが結合される炭素原子と一緒になってカルボニル基又はチオカルボニル基を形成し；
Ｒ３の各々は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＢ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥであり、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル及びヘテロアルキルは、独立に及び任意選択で、１つ以上のＲ６で置換されており；
各Ｒ４は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、オキソ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＢ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール及びヘテロアリールは、独立に及び任意選択で、１つ以上のＲ７で置換されており；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ及びＲＥの各々は、独立に、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ６は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、オキソ、シアノ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、アリール又はヘテロアリールであり、ここで、各アリール及びヘテロアリールは、独立に及び任意選択で、１つ以上のＲ８で置換されており；
各Ｒ７は、独立に、ハロ、オキソ、シアノ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡであり；
各Ｒ８は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シアノ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡであり；
ｎは、０、１、２、３又は４であり；及び
ｘは、０、１又は２であり、任意選択で、
（１）前記ＣＯＦ１は、免疫調節性イミド薬（ＩＭｉＤ）又はその薬学的に許容可能な塩であるか；
（２）前記ＣＯＦ１は、レナリドマイド、ポマリドミド、サリドマイド及び２−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）アセトアミドからなる群から選択されるか又はその薬学的に許容可能な塩であるか；
（３）前記ＣＯＦ１は、
【化２】
2021509009.tif 000186
からなる群から選択されるか又はその薬学的に許容可能な塩であるか；又は
（４）前記ＣＯＦ１は、レナリドマイド又はその薬学的に許容可能な塩である）
又はその薬学的に許容可能な塩、エステル、水和物、溶媒和物若しくは互変異性体である、請求項１〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をキナーゼ阻害剤、例えばＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブと併用して前記対象に投与することを含む、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を第２のＣＡＲ発現細胞療法と併用して前記対象に投与することを含み、任意選択で、前記第２のＣＡＲ発現細胞療法は、
（１）ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９であって、任意選択で、前記ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＣＤ１９発現が増加された後に投与される、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９；
（２）ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法であって、任意選択で、前記ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＣＤ２０発現が増加された後に投与される、ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法；
（３）ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法であって、任意選択で、前記ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＣＤ２２発現が増加された後に投与される、ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法；
（４）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、任意選択で、前記第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）及びＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）からなる群から選択される、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（５）第１の抗原及び第２の抗原に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１の抗原は、ＢＣＭＡであり、任意選択で、前記第２の抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０及びＣＤ２２からなる群から選択される、ＣＡＲ発現細胞療法
である、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をＣＤ１９阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９阻害剤と併用して前記対象に投与することを含み、任意選択で、前記ＣＤ１９阻害剤は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＣＤ１９発現が増加された後に投与される、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をＣＤ２０阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０阻害剤と併用して前記対象に投与することを含み、任意選択で、前記ＣＤ２０阻害剤は、ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＴＨＧ３３８であり、任意選択で、前記ＣＤ２０阻害剤は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＣＤ２０発現が増加された後に投与される、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をＣＤ２２阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２阻害剤と併用して前記対象に投与することを含み、任意選択で、前記ＣＤ２２阻害剤は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＣＤ２２発現が増加された後に投与される、請求項１〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を、Ｆｃ受容体様２（ＦＣＲＬ２）又はＦｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）に結合する分子と併用して前記対象に投与することを含み、任意選択で、前記分子は、
（１）ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５に結合するＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法；又は
（２）第１の抗原及び第２の抗原に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子
であり、ここで、前記第１の抗原は、ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５であり、任意選択で、前記第２の抗原は、ＣＤ３である、請求項１〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒａポリペプチドとの両方の組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ−１５と併用して前記対象に投与することを含む、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をＴＧＦβの阻害剤と併用して前記対象に投与することを含む、請求項１〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をＥＧＦＲｍｕｔ−チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）、例えばＥＧＦ８１６と併用して前記対象に投与することを含む、請求項１〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をアデノシンＡ２ＡＲ拮抗薬と併用して前記対象に投与することを含み、任意選択で、
（１）前記アデノシンＡ２ＡＲ拮抗薬は、ＰＢＦ５０９、ＣＰＩ４４４、ＡＺＤ４６３５、ビパデナント、ＧＢＶ−２０３４及びＡＢ９２８からなる群から選択されるか；又は
（２）前記アデノシンＡ２ＡＲ拮抗薬は、５−ブロモ−２，６−ジ−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリミジン−４−アミン；（Ｓ）−７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン；（Ｒ）−７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン又はそのラセミ化合物；７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン；及び６−（２−クロロ−６−メチルピリジン−４−イル）−５−（４−フルオロフェニル）−１，２，４−トリアジン−３−アミンからなる群から選択される、請求項１〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を抗ＣＤ７３抗体分子、例えば本明細書に開示される抗ＣＤ７３抗体分子と併用して前記対象に投与することを含む、請求項１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をチェックポイント阻害剤と併用して前記対象に投与することを含み、任意選択で、前記チェックポイント阻害剤は、
（１）ＰＤ−１阻害剤であって、任意選択でＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１及びＡＭＰ−２２４からなる群から選択され、任意選択で前記対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞の拡大を増加させる、ＰＤ−１阻害剤；
（２）ＰＤ−Ｌ１阻害剤であって、任意選択でＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ及びＢＭＳ−９３６５５９からなる群から選択され、任意選択で前記対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞の拡大を増加させる、ＰＤ−Ｌ１阻害剤；
（３）ＬＡＧ−３阻害剤であって、任意選択でＬＡＧ５２５、ＢＭＳ−９８６０１６、ＴＳＲ−０３３、ＭＫ−４２８０及びＲＥＧＮ３７６７からなる群から選択される、ＬＡＧ−３阻害剤；又は
（４）ＴＩＭ−３阻害剤であって、任意選択でＭＧＢ４５３、ＴＳＲ−０２２及びＬＹ３３２１３６７からなる群から選択される、ＴＩＭ−３阻害剤
である、請求項１〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を、ＣＤ３２Ｂに結合する抗体分子と併用して前記対象に投与することを含む、請求項１〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を、ＩＬ−１７に結合する抗体分子、例えばＩＬ−１７に結合するアンタゴニスト抗体分子、例えばＣＪＭ１１２と併用して前記対象に投与することを含む、請求項１〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を、ＩＬ−１βに結合する抗体分子と併用して前記対象に投与することを含む、請求項１〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）及び／又はトリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）の阻害剤、例えばＩＤＯ１阻害剤と併用して前記対象に投与することを含み、任意選択で、前記ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、
（１）ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ９１９、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９又はＦ００１２８７；又は
（２）（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン、１−メチル−Ｄ−トリプトファン、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール又は１−メチル−トリプトファンのＤ異性体
から選択される、請求項１〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与することを含み、前記第２の療法は、
（１）ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９であって、任意選択で、前記ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＣＤ１９発現が増加された後に投与される、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９；
（２）ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法であって、任意選択で、前記ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＣＤ２０発現が増加された後に投与される、ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法；
（３）ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法であって、任意選択で、前記ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＣＤ２２発現が増加された後に投与される、ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法；
（４）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、任意選択で、前記第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）及びＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）からなる群から選択される、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（５）第１の抗原及び第２の抗原に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１の抗原は、ＢＣＭＡであり、任意選択で、前記第２の抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０及びＣＤ２２からなる群から選択される、ＣＡＲ発現細胞療法
である、方法。
【請求項６８】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与することを含み、前記第２の療法は、
（１）ＣＤ１９阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９阻害剤であって、任意選択で、前記ＣＤ１９阻害剤は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＣＤ１９発現が増加された後に投与される、ＣＤ１９阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９阻害剤；
（２）ＣＤ２０阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０阻害剤であって、任意選択で、前記ＣＤ２０阻害剤は、ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＴＨＧ３３８であり、任意選択で、前記ＣＤ２０阻害剤は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＣＤ２０発現が増加された後に投与される、ＣＤ２０阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０阻害剤；又は
（３）ＣＤ２２阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２阻害剤であって、任意選択で、前記ＣＤ２２阻害剤は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＣＤ２２発現が増加された後に投与される、ＣＤ２２阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２阻害剤
である、方法。
【請求項６９】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与することを含み、前記第２の療法は、Ｆｃ受容体様２（ＦＣＲＬ２）又はＦｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）に結合する分子であり、任意選択で、前記分子は、
（１）ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５に結合するＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法；又は
（２）第１の抗原及び第２の抗原に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子であって、前記第１の抗原は、ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５であり、任意選択で、前記第２の抗原は、ＣＤ３である、多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子
である、方法。
【請求項７０】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与することを含み、前記第２の療法は、ＴＧＦβの阻害剤である、方法。
【請求項７１】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与することを含み、前記第２の療法は、ＥＧＦＲｍｕｔ−チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）、例えばＥＧＦ８１６である、方法。
【請求項７２】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与することを含み、前記第２の療法は、アデノシンＡ２ＡＲ拮抗薬であり、任意選択で、
（１）前記アデノシンＡ２ＡＲ拮抗薬は、ＰＢＦ５０９、ＣＰＩ４４４、ＡＺＤ４６３５、ビパデナント、ＧＢＶ−２０３４及びＡＢ９２８からなる群から選択されるか；又は
（２）前記アデノシンＡ２ＡＲ拮抗薬は、５−ブロモ−２，６−ジ−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリミジン−４−アミン；（Ｓ）−７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン；（Ｒ）−７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン又はそのラセミ化合物；７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン；及び６−（２−クロロ−６−メチルピリジン−４−イル）−５−（４−フルオロフェニル）−１，２，４−トリアジン−３−アミンからなる群から選択される、方法。
【請求項７３】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与することを含み、前記第２の療法は、抗ＣＤ７３抗体分子、例えば本明細書に開示される抗ＣＤ７３抗体分子である、方法。
【請求項７４】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与することを含み、前記第２の療法は、チェックポイント阻害剤であり、任意選択で、前記チェックポイント阻害剤は、
（１）ＰＤ−１阻害剤であって、任意選択でＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１及びＡＭＰ−２２４からなる群から選択され、任意選択で、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１の発現が増加された後に投与され、任意選択で前記対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞の拡大を増加させる、ＰＤ−１阻害剤；
（２）ＰＤ−Ｌ１阻害剤であって、任意選択でＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ及びＢＭＳ−９３６５５９からなる群から選択され、任意選択で、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１の発現が増加された後に投与され、任意選択で前記対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞の拡大を増加させる、ＰＤ−Ｌ１阻害剤；
（３）ＬＡＧ−３阻害剤であって、任意選択でＬＡＧ５２５、ＢＭＳ−９８６０１６、ＴＳＲ−０３３、ＭＫ−４２８０及びＲＥＧＮ３７６７からなる群から選択され、任意選択で、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＬＡＧ−３の発現が増加された後に投与される、ＬＡＧ−３阻害剤；又は
（４）ＴＩＭ−３阻害剤であって、任意選択でＭＧＢ４５３、ＴＳＲ−０２２及びＬＹ３３２１３６７からなる群から選択され、任意選択で、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＴＩＭ−３の発現が増加された後に投与される、ＴＩＭ−３阻害剤
である、方法。
【請求項７５】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与することを含み、前記第２の療法は、ＣＤ３２Ｂに結合する抗体分子である、方法。
【請求項７６】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与することを含み、前記第２の療法は、ＩＬ−１７に結合する抗体分子、例えばＩＬ−１７に結合するアンタゴニスト抗体分子、例えばＣＪＭ１１２である、方法。
【請求項７７】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与することを含み、前記第２の療法は、ＩＬ−１βに結合する抗体分子である、方法。
【請求項７８】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与することを含み、前記第２の療法は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）及び／又はトリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）の阻害剤、例えばＩＤＯ１阻害剤であり、任意選択で、前記ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、
（１）ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ９１９、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９又はＦ００１２８７；又は
（２）（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン、１−メチル−Ｄ−トリプトファン、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール又は１−メチル−トリプトファンのＤ異性体
から選択され、任意選択で、
前記ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて前記対象のＩＤＯ及び／又はＴＤＯ発現が増加された後に投与される、方法。
【請求項７９】
前記第２の療法は、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前、それと同時又はその後に投与される、請求項６７〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、前記対象は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受けたことがあるか又は受けており、前記方法は、
前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後の少なくとも１つの時点での前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原のレベル又は活性の値の、参照値と比べた増加であって、前記参照値は、
（ｉ）前記少なくとも１つの時点より前の前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における前記抗原のレベル又は活性（例えば、前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始める前の前記対象における前記抗原のレベル若しくは活性又は前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後であるが、前記少なくとも１つの時点より前の前記対象における前記抗原のレベル若しくは活性）；
（ｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を有する異なる対象における前記抗原のレベル又は活性；又は
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を有する対象の集団における前記抗原の平均レベル又は活性
である、増加に応答して、前記抗原の阻害剤を前記対象に投与すること
を含み、
（１）前記抗原は、ＣＤ１９であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＣＤ１９阻害剤であり、任意選択で、前記ＣＤ１９阻害剤は、
（ａ）ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９；
（ｂ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び前記第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｃ）ＢＣＭＡ及びＣＤ１９に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（２）前記抗原は、ＣＤ２０であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＣＤ２０阻害剤であり、任意選択で、前記ＣＤ２０阻害剤は、
（ｄ）ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｅ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び前記第２のＣＡＲは、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｆ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２０に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｇ）ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＴＨＧ３３８
であるか、
（３）前記抗原は、ＣＤ２２であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＣＤ２２阻害剤であり、任意選択で、前記ＣＤ２２阻害剤は、
（ｈ）ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｉ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び前記第２のＣＡＲは、ＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｊ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２２に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（４）前記抗原は、ＰＤ１又はＰＤ−Ｌ１であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、抗ＰＤ１抗体分子又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子であり、任意選択で、前記抗原の前記阻害剤は、
（ｋ）ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１又はＡＭＰ−２２４；又は
（ｌ）ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ又はＢＭＳ−９３６５５９
であるか、
（５）前記抗原は、ＩＤＯ又はＴＤＯであり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤であり、任意選択で、前記ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、
（ｍ）ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ９１９、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９又はＦ００１２８７；又は
（ｎ）（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン、１−メチル−Ｄ−トリプトファン、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール又は１−メチル−トリプトファンのＤ異性体
であるか、又は
（６）前記抗原は、ＴＧＦ−βであり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＴＧＦβ阻害剤である、方法。
【請求項８１】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、前記対象は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受けたことがあるか又は受けており、前記方法は、
前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後の少なくとも１つの時点での前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原のレベル又は活性の値を取得すること、
参照値と比べた前記値の増加であって、前記参照値は、
（ｉ）前記少なくとも１つの時点より前の前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における前記抗原のレベル又は活性（例えば、前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始める前の前記対象における前記抗原のレベル若しくは活性又は前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後であるが、前記少なくとも１つの時点より前の前記対象における前記抗原のレベル若しくは活性）；
（ｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を有する異なる対象における前記抗原のレベル又は活性；又は
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を有する対象の集団における前記抗原の平均レベル又は活性
である、増加に応答して、前記抗原の阻害剤を前記対象に投与すること
を含み、
（１）前記抗原は、ＣＤ１９であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＣＤ１９阻害剤であり、任意選択で、前記ＣＤ１９阻害剤は、
（ａ）ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９；
（ｂ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び前記第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｃ）ＢＣＭＡ及びＣＤ１９に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（２）前記抗原は、ＣＤ２０であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＣＤ２０阻害剤であり、任意選択で、前記ＣＤ２０阻害剤は、
（ｄ）ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｅ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び前記第２のＣＡＲは、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｆ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２０に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｇ）ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＴＨＧ３３８
であるか、
（３）前記抗原は、ＣＤ２２であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＣＤ２２阻害剤であり、任意選択で、前記ＣＤ２２阻害剤は、
（ｈ）ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｉ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び前記第２のＣＡＲは、ＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｊ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２２に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（４）前記抗原は、ＰＤ１又はＰＤ−Ｌ１であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、抗ＰＤ１抗体分子又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子であり、任意選択で、前記抗原の前記阻害剤は、
（ｋ）ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１又はＡＭＰ−２２４；又は
（ｌ）ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ又はＢＭＳ−９３６５５９
であるか、
（５）前記抗原は、ＩＤＯ又はＴＤＯであり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤であり、任意選択で、前記ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、
（ｍ）ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ９１９、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９又はＦ００１２８７；又は
（ｎ）（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン、１−メチル−Ｄ−トリプトファン、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール又は１−メチル−トリプトファンのＤ異性体
であるか、又は
（６）前記抗原は、ＴＧＦ−βであり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＴＧＦβ阻害剤である、方法。
【請求項８２】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること、
前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後の少なくとも１つの時点での前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原のレベル又は活性の値の、参照値と比べた増加であって、前記参照値は、
（ｉ）前記少なくとも１つの時点より前の前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における前記抗原のレベル又は活性（例えば、前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始める前の前記対象における前記抗原のレベル若しくは活性又は前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後であるが、前記少なくとも１つの時点より前の前記対象における前記抗原のレベル若しくは活性）；
（ｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を有する異なる対象における前記抗原のレベル又は活性；又は
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を有する対象の集団における前記抗原の平均レベル又は活性
である、増加に応答して、前記抗原の阻害剤を前記対象に投与すること
を含み、
（１）前記抗原は、ＣＤ１９であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＣＤ１９阻害剤であり、任意選択で、前記ＣＤ１９阻害剤は、
（ａ）ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９；
（ｂ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び前記第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｃ）ＢＣＭＡ及びＣＤ１９に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（２）前記抗原は、ＣＤ２０であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＣＤ２０阻害剤であり、任意選択で、前記ＣＤ２０阻害剤は、
（ｄ）ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｅ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び前記第２のＣＡＲは、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｆ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２０に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｇ）ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＴＨＧ３３８
であるか、
（３）前記抗原は、ＣＤ２２であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＣＤ２２阻害剤であり、任意選択で、前記ＣＤ２２阻害剤は、
（ｈ）ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｉ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び前記第２のＣＡＲは、ＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｊ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２２に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（４）前記抗原は、ＰＤ１又はＰＤ−Ｌ１であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、抗ＰＤ１抗体分子又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子であり、任意選択で、前記抗原の前記阻害剤は、
（ｋ）ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１又はＡＭＰ−２２４；又は
（ｌ）ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ又はＢＭＳ−９３６５５９
であるか、
（５）前記抗原は、ＩＤＯ又はＴＤＯであり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤であり、任意選択で、前記ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、
（ｍ）ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ９１９、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９又はＦ００１２８７；又は
（ｎ）（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン、１−メチル−Ｄ−トリプトファン、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール又は１−メチル−トリプトファンのＤ異性体
であるか、又は
（６）前記抗原は、ＴＧＦ−βであり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＴＧＦβ阻害剤である、方法。
【請求項８３】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること、
前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後の少なくとも１つの時点での前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原のレベル又は活性の値を取得すること
参照値と比べた前記値の増加であって、前記参照値は、
（ｉ）前記少なくとも１つの時点より前の前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における前記抗原のレベル又は活性（例えば、前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始める前の前記対象における前記抗原のレベル若しくは活性又は前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後であるが、前記少なくとも１つの時点より前の前記対象における前記抗原のレベル若しくは活性）；
（ｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を有する異なる対象における前記抗原のレベル又は活性；又は
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を有する対象の集団における前記抗原の平均レベル又は活性
である、増加に応答して、前記抗原の阻害剤を前記対象に投与すること
を含み、
（１）前記抗原は、ＣＤ１９であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＣＤ１９阻害剤であり、任意選択で、前記ＣＤ１９阻害剤は、
（ａ）ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９；
（ｂ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び前記第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｃ）ＢＣＭＡ及びＣＤ１９に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（２）前記抗原は、ＣＤ２０であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＣＤ２０阻害剤であり、任意選択で、前記ＣＤ２０阻害剤は、
（ｄ）ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｅ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び前記第２のＣＡＲは、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｆ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２０に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｇ）ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＴＨＧ３３８
であるか、
（３）前記抗原は、ＣＤ２２であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＣＤ２２阻害剤であり、任意選択で、前記ＣＤ２２阻害剤は、
（ｈ）ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｉ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、前記第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び前記第２のＣＡＲは、ＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｊ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２２に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（４）前記抗原は、ＰＤ１又はＰＤ−Ｌ１であり、及び前記抗原の前記阻害剤は、抗ＰＤ１抗体分子又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子であり、任意選択で、前記抗原の前記阻害剤は、
（ｋ）ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１又はＡＭＰ−２２４；又は
（ｌ）ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ又はＢＭＳ−９３６５５９
であるか、
（５）前記抗原は、ＩＤＯ又はＴＤＯであり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤であり、任意選択で、前記ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、
（ｍ）ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ９１９、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９又はＦ００１２８７；又は
（ｎ）（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン、１−メチル−Ｄ−トリプトファン、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール又は１−メチル−トリプトファンのＤ異性体
であるか、又は
（６）前記抗原は、ＴＧＦ−βであり、及び前記抗原の前記阻害剤は、ＴＧＦβ阻害剤である、方法。
【請求項８４】
前記抗原のレベル又は活性の前記値は、本明細書に記載されるアッセイ、例えば免疫組織化学によって測定されるとおりの、前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における前記抗原の発現レベルを含む、請求項８０〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記少なくとも１つの時点は、前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めてから５、１０、１５、２０、２５、２８、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０又は９０日後である、請求項８０〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記対象は、前記対象が前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後、ＢＣＭＡ発現の減少を経験する、請求項８０〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＢＣＡＭ  ＣＡＲを発現する細胞を含み、
（ｉ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、表３若しくは５に掲載される重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３の１つ以上（例えば、その３つ全て）並びに／又は表４若しくは５に掲載される軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３の１つ以上（例えば、その３つ全て）或いはその９５〜９９％の同一性を有する配列を含むか；
（ｉｉ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、表２若しくは５に掲載される重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は表２若しくは表５に掲載される軽鎖可変領域（ＶＬ）或いはその９５〜９９％の同一性を有する配列を含むか；
（ｉｉｉ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、表２若しくは５に掲載されるＢＣＭＡ  ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列（例えば、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８及び配列番号１４９）又はその９５〜９９％の同一性を有する配列を含むか；
（ｉｖ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、表２若しくは５に掲載される完全長ＢＣＭＡ  ＣＡＲアミノ酸配列（例えば、配列番号１０９の残基２２〜４８３、配列番号９９の残基２２〜４９０、配列番号１００の残基２２〜４８８、配列番号１０１の残基２２〜４８７、配列番号１０２の残基２２〜４９３、配列番号１０３の残基２２〜４９０、配列番号１０４の残基２２〜４９１、配列番号１０５の残基２２〜４８２、配列番号１０６の残基２２〜４８３、配列番号１０７の残基２２〜４８５、配列番号１０８の残基２２〜４８３、配列番号１１０の残基２２〜４９０、配列番号１１１の残基２２〜４８３、配列番号１１２の残基２２〜４８４、配列番号１１３の残基２２〜４８５、配列番号２１３の残基２２〜４８７、配列番号２１４の残基２３〜４８９、配列番号２１５の残基２２〜４９０、配列番号２１６の残基２２〜４８４、配列番号２１７の残基２２〜４８５、配列番号２１８の残基２２〜４８９、配列番号２１９の残基２２〜４９７、配列番号２２０の残基２２〜４９２、配列番号２２１の残基２２〜４９０、配列番号２２２の残基２２〜４８５、配列番号２２３の残基２２〜４９２、配列番号２２４の残基２２〜４９２、配列番号２２５の残基２２〜４８３、配列番号２２６の残基２２〜４９０、配列番号２２７の残基２２〜４８５、配列番号２２８の残基２２〜４８６、配列番号２２９の残基２２〜４９２、配列番号２３０の残基２２〜４８８、配列番号２３１の残基２２〜４８８、配列番号２３２の残基２２〜４９５、配列番号２３３の残基２２〜４９０）又はその９５〜９９％の同一性を有する配列を含むか；又は
（ｖ）前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、表２若しくは５に掲載される核酸配列（例えば、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７０）又はその９５〜９９％の同一性を有する配列によってコードされる、請求項１〜８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患は、癌であり、任意選択で、前記癌は、血液癌である、請求項１〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患は、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）の１つ以上から選択される急性白血病；慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵癌、肺癌；又は形質細胞増殖性障害（例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス及びＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる））又はこれらの組み合わせである、請求項１〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患は、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＤＬＢＣＬ又は多発性骨髄腫である、請求項１〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記対象は、ヒト患者である、請求項１〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象の処置の方法に用いられるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法であって、前記方法は、
参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの、
（ｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての増加した値に応答して、
前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象にＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを含み、それによりＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を有する前記対象を処置する、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法。
【請求項９３】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象の処置の方法に用いられるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法であって、前記方法は、
参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの、
（ｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）前記対象における、例えば前記対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての減少した値に応答して、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を前記対象に投与すること；
第２の療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；
前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えば前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の前記対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ前記修正された製造工程によって作成された前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること；又は
前記対象に前処置を投与することであって、前記前処置は、前記対象における、例えば前記対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又は前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の前記対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前記前処置は、前記比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、前記対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つ前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を前記対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを含み、それによりＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患を有する前記対象を処置する、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１７年１１月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／５９３，０４３号明細書及び２０１８年１０月２９日に出願された米国仮特許出願第６２／７５２，０１０号明細書に対する優先権を主張するものであり、これらの各々の内容は、全体として参照により本明細書に援用される。
【０００２】
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０１８年１１月２８日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｎ２０６７−７１３７ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、且つサイズが１，４１１，５１８バイトである。
【０００３】
本発明は、概して、Ｂ細胞成熟抗原タンパク質（ＢＣＭＡ）の発現に関連する疾患を処置するための、任意選択で追加的な療法剤と併用した、ＢＣＭＡを標的とするキメラ抗原受容体を発現するように操作された細胞の使用に関する。本発明は、ＢＣＭＡターゲット療法のための予後判定バイオマーカーについて更に記載する。
【背景技術】
【０００４】
ＢＣＭＡは、Ｂ細胞系統の細胞に発現する腫瘍壊死ファミリー受容体（ＴＮＦＲ）メンバーである。ＢＣＭＡ発現は、形質細胞、形質芽球並びにサブ集団である活性化Ｂ細胞及びメモリーＢ細胞を含め、長命の形質細胞運命を有する終末分化Ｂ細胞上で最も高い。ＢＣＭＡは、形質細胞の生存を媒介することによる長期体液性免疫の維持に関わる。最近ＢＣＭＡの発現は、幾つもの癌、自己免疫障害及び感染性疾患と関連付けられている。ＢＣＭＡ発現の増加を伴う癌には、ある種の血液癌、例えば多発性骨髄腫（ＭＭ）、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、様々な白血病（例えば、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ））及び膠芽腫が含まれる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
癌などの疾患のターゲティング戦略の改良が継続的に必要とされていることを所与とすれば、ＢＣＭＡを標的とする療法剤、例えば抗ＢＣＭＡキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法を改良するための新規組成物及び方法が極めて望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示は、少なくとも一部には、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ、別名ＴＮＦＲＳＦ１７、ＢＣＭ又はＣＤ２６９）の発現に関連する疾患又は障害を処置する方法を特徴とする。特定の実施形態において、この障害は、癌、例えば血液癌である。一部の実施形態において、本開示は、例えば、単剤療法としての又は追加的な療法剤との併用療法でのＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を特徴とする。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＢＣＭＡに結合するＣＡＲ分子を発現する細胞（例えば、細胞集団）である。一部の実施形態において、併用療法は、いずれか一方の療法単独と比較したとき、より良好な臨床効果を維持するか又はそれを有する。一実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び追加的な療法剤は、単一用量形態において又は２つ以上の用量形態として存在する。一実施形態において、本明細書には、医薬として用いられるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法と追加的な療法剤とを含む組成物が提供される。一実施形態において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患の処置において用いられるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法と追加的な療法剤とを含む組成物が提供される。一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法と追加的な療法剤とを含むキットが提供される。一部の実施形態において、本開示は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の奏効性を判定若しくは予測する方法又は対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の効力を判定若しくは予測する方法を更に特徴とする。一部の実施形態において、ＢＣＭＡターゲティングＣＡＲ療法は、患者試料からのバイオマーカーレベルの取得に基づいて製造又は投与される。
【０００７】
一態様において、本発明は、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のインビボ拡大を予測する方法を特徴とする。別の態様において、本明細書では、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞に対する対象の奏効性を予測する方法が特徴とされる。一部の実施形態では、対象から単離された白血球アフェレーシス産物におけるより高いＣＤ４＋：ＣＤ８＋  Ｔ細胞比を用いて、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のより大きいインビボ拡大及び／又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞に対する対象のより高い臨床奏効を予測することができる。一部の実施形態では、対象から単離された白血球アフェレーシス産物におけるより低いＣＤ４＋：ＣＤ８＋  Ｔ細胞比を用いて、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のより弱いインビボ拡大及び／又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞に対する対象のより弱い臨床奏効を予測することができる。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の製造の開始時の種培養物（例えば、単球が除去された後の白血球アフェレーシス産物）におけるより高いＣＤ４＋：ＣＤ８＋  Ｔ細胞比を用いて、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のより大きいインビボ拡大及び／又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞に対する対象のより高い臨床奏効を予測することができる。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の製造の開始時の種培養物（例えば、単球が除去された後の白血球アフェレーシス産物）におけるより低いＣＤ４＋：ＣＤ８＋  Ｔ細胞比を用いて、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のより弱いインビボ拡大及び／又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞に対する対象のより弱い臨床奏効を予測することができる。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与前の対象の末梢血及び／又は骨髄におけるより高いＣＤ４＋：ＣＤ８＋  Ｔ細胞比を用いて、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のより大きいインビボ拡大を予測することができる。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与前の対象の末梢血及び／又は骨髄におけるより低いＣＤ４＋：ＣＤ８＋  Ｔ細胞比を用いて、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のより弱いインビボ拡大を予測することができる。
【０００８】
一部の実施形態では、対象から単離された白血球アフェレーシス産物における「初期メモリー」表現型を有するＣＤ８＋  Ｔ細胞のより高い頻度（例えば、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞のより高い頻度）を用いて、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のより大きいインビボ拡大及び／又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞に対する対象のより高い臨床奏効を予測することができる。一部の実施形態では、対象から単離された白血球アフェレーシス産物における「初期メモリー」表現型を有するＣＤ８＋  Ｔ細胞のより低い頻度（例えば、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞のより低い頻度）を用いて、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のより弱いインビボ拡大及び／又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞に対する対象のより弱い臨床奏効を予測することができる。
【０００９】
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の製造中の対象からの播種細胞のより大きいインビトロ拡大を用いて、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のより大きいインビボ拡大を予測することができる。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の製造中の対象からの播種細胞のより弱いインビトロ拡大を用いて、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のより弱いインビボ拡大を予測することができる。
【００１０】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の奏効性を判定又は予測する方法が提供され、ここで、対象は、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有し、この方法は、
（ｉ）対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）例えば、９日目までの集団倍加数（ＰＤＬ９）によって測定されるとおりの、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての値を取得することであって、
（ａ）参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の増加は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の増加した奏効性を指示又は予測するものであるか；又は
（ｂ）参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の減少は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の減少した奏効性を指示又は予測するものである、取得すること
を含み、それによりＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の奏効性を判定又は予測する。
【００１１】
一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖についての値、例えば９日目までの集団倍加数（ＰＤＬ９）を取得することを含む。
【００１２】
一部の実施形態において、参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の増加は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の増加した奏効性を指示又は予測するものである。一部の実施形態において、参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の減少は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の減少した奏効性を指示又は予測するものである。
【００１３】
一部の実施形態において、参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の増加は、
（ａ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の増加した奏効性；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であること；
（ｃ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であること；又は
（ｄ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大
の１、２、３つ又は全てを指示又は予測するものである。
【００１４】
一部の実施形態において、参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の増加は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の増加した奏効性を指示又は予測するものである。一部の実施形態において、参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の増加は、対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であることを指示又は予測するものである。一部の実施形態において、参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の増加は、対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であることを指示又は予測するものである。一部の実施形態において、参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の増加は、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大を指示又は予測するものである。
【００１５】
一部の実施形態において、参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の減少は、
（ａ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の減少した奏効性；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であること；又は
（ｃ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大
の１、２つ又は全てを指示又は予測するものである。
【００１６】
一部の実施形態において、参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の減少は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の減少した奏効性を指示又は予測するものである。一部の実施形態において、参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の減少は、対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であることを指示又は予測するものである。一部の実施形態において、参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の減少は、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大を指示又は予測するものである。
【００１７】
一部の実施形態において、ＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を含む。一部の実施形態において、一部の実施形態において、比が、
（１）１以上（例えば、１〜５、例えば１〜３．５）；又は
（２）１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）
であることは、
（ａ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の増加した奏効性；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であること；
（ｃ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であること；又は
（ｄ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大
の１、２、３つ又は全てを指示又は予測するものである。
【００１８】
一部の実施形態において、比が１未満（例えば、０．００１〜１）であることは、
（ａ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の減少した奏効性；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であること；又は
（ｃ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大
の１、２つ又は全てを指示又は予測するものである。
【００１９】
一部の実施形態において、ＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）の比率を含む。
【００２０】
一部の実施形態において、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む。
【００２１】
一部の実施形態において、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率が２５％以上（例えば、３０％〜９０％、例えば３５％〜８５％、例えば４０％〜８０％、例えば４５％〜７５％、例えば５０％〜７５％）であることは、
（ａ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の増加した奏効性；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であること；
（ｃ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であること；又は
（ｄ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大
の１、２、３つ又は全てを指示又は予測するものである。
【００２２】
一部の実施形態において、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率が２５％未満（例えば、０．１％〜２５％、例えば０．１％〜２２％、例えば０．１％〜２０％、例えば０．１％〜１８％、例えば０．１％〜１５％））であることは、
（ａ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の減少した奏効性；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であること；又は
（ｃ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大
の１、２つ又は全てを指示又は予測するものである。
【００２３】
一部の実施形態において、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む。
【００２４】
一部の実施形態において、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率が２０％以上（例えば、２０％〜９０％、例えば２０％〜８０％、例えば２０％〜７０％、例えば２０％〜６０％）であることは、
（ａ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の増加した奏効性；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であること；
（ｃ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であること；又は
（ｄ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大
の１、２、３つ又は全てを指示又は予測するものである。
【００２５】
一部の実施形態において、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率が２０％未満（例えば、０．１％〜２０％、例えば０．１％〜１８％、例えば０．１％〜１５％、例えば０．１％〜１２％、例えば０．１％〜１０％）であることは、
（ａ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の減少した奏効性；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であること；又は
（ｃ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大
の１、２つ又は全てを指示又は予測するものである。
【００２６】
一部の実施形態において、ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む。
【００２７】
一部の実施形態において、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率が１５％以上（例えば、１５％〜９０％、例えば１５％〜８０％、例えば１５％〜７０％、例えば１５％〜６０％、例えば１５％〜５０％）であることは、
（ａ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の増加した奏効性；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であること；
（ｃ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であること；又は
（ｄ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大
の１、２、３つ又は全てを指示又は予測するものである。
【００２８】
一部の実施形態において、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率が１５％未満（例えば、０．１％〜１５％、例えば０．１％〜１２％、例えば０．１％〜１０％、例えば０．１％〜８％）であることは、
（ａ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する対象の減少した奏効性；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であること；又は
（ｃ）例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大
の１、２つ又は全てを指示又は予測するものである。
【００２９】
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えば細胞カウントによって測定されるとおりの、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の拡大倍数（例えば、製造の開始時と比べた製造の終了時の総細胞数）を含む。
【００３０】
一部の実施形態において、本方法は、
（ａ）対象が、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する増加した奏効性を有すると指示又は予測されたとき；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であると指示又は予測されたとき；
（ｃ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であると指示又は予測されたとき；又は
（ｄ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法が、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおり、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおり、対象において増加した拡大を有すると指示又は予測されたとき、
対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；又は
対象にＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを更に含む。
【００３１】
一部の実施形態において、本方法は、
（ａ）対象が、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する減少した奏効性を有すると指示又は予測されたとき；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であると指示又は予測されたとき；又は
（ｃ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法が、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおり、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおり、対象において減少した拡大を有すると指示又は予測されたとき、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を対象に投与すること；
第２の療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；又は
対象に前処置を投与することであって、前処置は、対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前処置は、比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを更に含む。
【００３２】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの、
（ｉ）対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての増加した値に応答して、
対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；又は
対象にＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを含み、それによりＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する。
【００３３】
一部の実施形態において、本方法は、（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全てについての増加した値に応答して、
（ａ）対象が、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する増加した奏効性を有すること；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の奏効例であること；
（ｃ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に好適であること；又は
（ｄ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法が、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象における増加した拡大を有すること
の１、２、３つ又は全てを同定又は予測することを含む。
【００３４】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの、
（ｉ）対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての減少した値に応答して、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を対象に投与すること；
第２の療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；又は
対象に前処置を投与することであって、前処置は、対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前処置は、比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを含み、それによりＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する。
【００３５】
一部の実施形態において、本方法は、（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全てについての減少した値に応答して、
（ａ）対象が、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法に対する減少した奏効性を有すること；
（ｂ）対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の非奏効例であること；又は
（ｃ）ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法が、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象における減少した拡大を有すること
の１、２つ又は全てを同定又は予測することを含む。
【００３６】
一部の実施形態において、ＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を含む。
【００３７】
一部の実施形態において、本方法は、比が、
（１）１以上（例えば、１〜５、例えば１〜３．５）；又は
（２）１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）
であることに応答して、
対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；又は
対象にＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを含む。
【００３８】
一部の実施形態において、本方法は、比が１未満（例えば、０．００１〜１）であることに応答して、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を対象に投与すること；
第２の療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；又は
対象に前処置を投与することであって、前処置は、対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前処置は、比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを含む。
【００３９】
一部の実施形態において、ＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）の比率を含む。
【００４０】
一部の実施形態において、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む。
【００４１】
一部の実施形態において、本方法は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率が２５％以上（例えば、３０％〜９０％、例えば３５％〜８５％、例えば４０％〜８０％、例えば４５％〜７５％、例えば５０％〜７５％）であることに応答して、
対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；又は
対象にＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを含む。
【００４２】
一部の実施形態において、本方法は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率が２５％未満（例えば、０．１％〜２５％、例えば０．１％〜２２％、例えば０．１％〜２０％、例えば０．１％〜１８％、例えば０．１％〜１５％）であることに応答して、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を対象に投与すること；
第２の療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；又は
対象に前処置を投与することであって、前処置は、対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前処置は、比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを含む。
【００４３】
一部の実施形態において、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む。
【００４４】
一部の実施形態において、本方法は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率が２０％以上（例えば、２０％〜９０％、例えば２０％〜８０％、例えば２０％〜７０％、例えば２０％〜６０％）であることに応答して、
対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；又は
対象にＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを含む。
【００４５】
一部の実施形態において、本方法は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率が２０％未満（例えば、０．１％〜２０％、例えば０．１％〜１８％、例えば０．１％〜１５％、例えば０．１％〜１２％、例えば０．１％〜１０％）であることに応答して、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を対象に投与すること；
第２の療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；又は
対象に前処置を投与することであって、前処置は、対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前処置は、比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを含む。
【００４６】
一部の実施形態において、ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む。
【００４７】
一部の実施形態において、本方法は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率が１５％以上（例えば、１５％〜９０％、例えば１５％〜８０％、例えば１５％〜７０％、例えば１５％〜６０％、例えば１５％〜５０％）であることに応答して、
対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；又は
対象にＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、例えば投与することを開始するか又は投与することを継続すること
を実施することを含む。
【００４８】
一部の実施形態において、本方法は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率が１５％未満（例えば、０．１％〜１５％、例えば０．１％〜１２％、例えば０．１％〜１０％、例えば０．１％〜８％）であることに応答して、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与レジメン（例えば、参照投与レジメンより高用量及び／又は高頻度の投与による投与レジメン）を対象に投与すること；
第２の療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法でない第２の療法）を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を中止し、且つ任意選択で第２の療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮し、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮し、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正し、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖を増加させ、且つ修正された製造工程によって作成されたＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること；又は
対象に前処置を投与することであって、前処置は、対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前処置は、比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造し、且つＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること
の１、２、３、４、５、６、７つ又は全てを実施することを含む。
【００４９】
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えば細胞カウントによって測定されるとおりの、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の拡大倍数（例えば、製造の開始時と比べた製造の終了時の総細胞数）を含む。
【００５０】
一態様において、本明細書には、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の効力を判定又は予測する方法が提供され、ここで、対象は、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有し、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して製造され、この方法は、
（ｉ）対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）例えば、９日目までの集団倍加数（ＰＤＬ９）によって測定されるとおりの、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての値を取得することであって、
（ａ）参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の増加は、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した効力を指示又は予測するものであるか；又は
（ｂ）参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の減少は、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した効力を指示又は予測するものである、取得すること
を含み、それによりＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の効力を判定又は予測する。
【００５１】
一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖についての値、例えば９日目までの集団倍加数（ＰＤＬ９）を取得することを含む。
【００５２】
一部の実施形態において、参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の増加は、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の増加した拡大を指示又は予測するものである。
【００５３】
一部の実施形態において、参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の減少は、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えばｑＰＣＲを用いた１μｇ  ＤＮＡ当たりのＣＡＲトランス遺伝子のコピー数によって測定されるとおりの、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の減少した拡大を指示又は予測するものである。
【００５４】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造する方法が開示され、ここで、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して製造され、この方法は、
（ｉ）対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）例えば、９日目までの集団倍加数（ＰＤＬ９）によって測定されるとおりの、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての値を取得することを含み、
参照値、例えば非奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の増加に応答して、対象からの細胞を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造する。
【００５５】
一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖についての値、例えば９日目までの集団倍加数（ＰＤＬ９）を取得することを含む。
【００５６】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造する方法が提供され、ここで、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用して製造され、この方法は、
（ｉ）対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性、
（ｉｉｉ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｉｖ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、
（ｖ）対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性、又は
（ｖｉ）例えば、９日目までの集団倍加数（ＰＤＬ９）によって測定されるとおりの、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖
の１、２、３、４、５つ又は全てについての値を取得することを含み、
参照値、例えば奏効例参照値と比較したときの（ｉ）〜（ｖｉ）の１、２、３、４、５つ又は全ての値の減少に応答して、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正すること、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）と比べてＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）を濃縮すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正すること、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を導入する前にＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（例えば、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞）を濃縮すること；
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造工程を修正すること、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖を増加させること；又は
対象に前処置を投与することであって、前処置は、対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を増加させ、例えば、前処置は、比を１．６以上（例えば、１．６〜５、例えば１．６〜３．５）に増加させる、投与することを行い、且つ対象からの細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を製造すること
の１、２、３つ又は全てを実施する。
【００５７】
一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料における（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料）における）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前の対象の末梢血及び／若しくは骨髄におけるＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、アフェレーシス試料（例えば、白血球アフェレーシス試料）又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造の開始時の種培養物（例えば、エルトリエーションを用いて単球が除去された後の白血球アフェレーシス試料））におけるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値を取得することを含む。一部の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖についての値、例えば９日目までの集団倍加数（ＰＤＬ９）を取得することを含む。
【００５８】
一部の実施形態において、ＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性と比べたＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の量に対するＣＤ４＋免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞）の量の比を含む。
【００５９】
一部の実施形態において、ＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ８＋  Ｔｓｃｍ（幹細胞メモリーＴ細胞）の比率を含む。
【００６０】
一部の実施形態において、ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む。
【００６１】
一部の実施形態において、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む。
【００６２】
一部の実施形態において、ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞のレベル又は活性についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定されるとおりの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋細胞の比率を含む。
【００６３】
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の増殖についての値は、例えば、本明細書に開示されるアッセイによって測定されるとおりの、例えば細胞カウントによって測定されるとおりの、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の製造中の対象からの播種細胞の拡大倍数（例えば、製造の開始時と比べた製造の終了時の総細胞数）を含む。
【００６４】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を、
（１）ＣＡＲ核酸又はＣＡＲポリペプチドを含む細胞の有効性を増加させる薬剤；
（２）ＣＡＲ核酸又はＣＡＲポリペプチドを含む細胞の投与に関連する１つ以上の副作用を改善する薬剤；
（３）ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を処置する薬剤
の１、２つ又は全てと併用して対象に投与することを含む。
【００６５】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を式（Ｉ）の化合物（ＣＯＦ１）と併用して対象に投与することを含み、ここで、ＣＯＦ１は、
【化１】
2021509009.tif 000003
（式中、
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり、これらの各々は、任意選択で１つ以上のＲ４によって置換されており；
Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は、独立に、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであるか；又はＲ２ａ及びＲ２ｂは、それらが結合される炭素原子と一緒になってカルボニル基又はチオカルボニル基を形成し；
Ｒ３の各々は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＢ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥであり、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル及びヘテロアルキルは、独立に及び任意選択で、１つ以上のＲ６で置換されており；
各Ｒ４は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、オキソ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＢ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール及びヘテロアリールは、独立に及び任意選択で、１つ以上のＲ７で置換されており；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ及びＲＥの各々は、独立に、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ６は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、オキソ、シアノ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、アリール又はヘテロアリールであり、ここで、各アリール及びヘテロアリールは、独立に及び任意選択で、１つ以上のＲ８で置換されており；
各Ｒ７は、独立に、ハロ、オキソ、シアノ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡであり；
各Ｒ８は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シアノ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡであり；
ｎは、０、１、２、３又は４であり；及び
ｘは、０、１又は２であり、任意選択で、
（１）ＣＯＦ１は、免疫調節性イミド薬（ＩＭｉＤ）又はその薬学的に許容可能な塩であるか；
（２）ＣＯＦ１は、レナリドマイド、ポマリドミド、サリドマイド及び２−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）アセトアミドからなる群から選択されるか又はその薬学的に許容可能な塩であるか；
（３）ＣＯＦ１は、
【化２】
2021509009.tif 000004
からなる群から選択されるか又はその薬学的に許容可能な塩であるか；又は
（４）ＣＯＦ１は、レナリドマイド又はその薬学的に許容可能な塩である）
又はその薬学的に許容可能な塩、エステル、水和物、溶媒和物若しくは互変異性体である。
【００６６】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をキナーゼ阻害剤、例えばＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブと併用して対象に投与することを含む。
【００６７】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を第２のＣＡＲ発現細胞療法と併用して対象に投与することを含む。
【００６８】
一部の実施形態において、第２のＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９である。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＣＤ１９発現が増加された後に投与される。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ１９  ＣＡＲを発現する細胞（例えば、細胞集団）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、表８、９又は１０に開示されるアミノ酸配列（例えば、表８、９又は１０に開示されるＣＤＲ、ｓｃＦｖ又は完全長アミノ酸配列）或いはそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれを超えて同一の及び／又は１、２、３個若しくはそれを超える置換、挿入若しくは欠失、例えば保存的置換を有する配列を含む。
【００６９】
一部の実施形態において、第２のＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法である。一部の実施形態において、ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＣＤ２０発現が増加された後に投与される。一部の実施形態において、ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ２０  ＣＡＲを発現する細胞（例えば、細胞集団）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ２０  ＣＡＲは、表１１、１２又は１３に開示されるアミノ酸配列（例えば、表１１、１２又は１３に開示されるＣＤＲ、ｓｃＦｖ又は完全長アミノ酸配列）或いはそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれを超えて同一の及び／又は１、２、３個若しくはそれを超える置換、挿入若しくは欠失、例えば保存的置換を有する配列を含む。
【００７０】
一部の実施形態において、第２のＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法である。一部の実施形態において、ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＣＤ２２発現が増加された後に投与される。一部の実施形態において、ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ２２  ＣＡＲを発現する細胞（例えば、細胞集団）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ２２  ＣＡＲは、表１４又は１５に開示されるアミノ酸配列（例えば、表１４又は１５に開示されるＣＤＲ、ｓｃＦｖ又は完全長アミノ酸配列）或いはそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれを超えて同一の及び／又は１、２、３個若しくはそれを超える置換、挿入若しくは欠失、例えば保存的置換を有する配列を含む。
【００７１】
一部の実施形態において、第２のＣＡＲ発現細胞療法は、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であり、ここで、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）である。一部の実施形態において、第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）及びＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）からなる群から選択される。一部の実施形態において、第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）である。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ１９  ＣＡＲを発現する細胞（例えば、細胞集団）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、表８、９又は１０に開示されるアミノ酸配列（例えば、表８、９又は１０に開示されるＣＤＲ、ｓｃＦｖ又は完全長アミノ酸配列）或いはそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれを超えて同一の及び／又は１、２、３個若しくはそれを超える置換、挿入若しくは欠失、例えば保存的置換を有する配列を含む。一部の実施形態において、第２のＣＡＲは、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）である。一部の実施形態において、ＣＤ２０  ＣＡＲは、表１１、１２又は１３に開示されるアミノ酸配列（例えば、表１１、１２又は１３に開示されるＣＤＲ、ｓｃＦｖ又は完全長アミノ酸配列）或いはそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれを超えて同一の及び／又は１、２、３個若しくはそれを超える置換、挿入若しくは欠失、例えば保存的置換を有する配列を含む。一部の実施形態において、第２のＣＡＲは、ＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）である。一部の実施形態において、ＣＤ２２  ＣＡＲは、表１４又は１５に開示されるアミノ酸配列（例えば、表１４又は１５に開示されるＣＤＲ、ｓｃＦｖ又は完全長アミノ酸配列）或いはそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれを超えて同一の及び／又は１、２、３個若しくはそれを超える置換、挿入若しくは欠失、例えば保存的置換を有する配列を含む。
【００７２】
一部の実施形態において、第２のＣＡＲ発現細胞療法は、第１の抗原及び第２の抗原に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であり、ここで、第１の抗原は、ＢＣＭＡである。一部の実施形態において、第２の抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０及びＣＤ２２からなる群から選択される。一部の実施形態において、第２の抗原は、ＣＤ１９である。一部の実施形態において、第２の抗原は、ＣＤ２０である。一部の実施形態において、第２の抗原は、ＣＤ２２である。
【００７３】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をＣＤ１９阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９阻害剤と併用して対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ＣＤ１９阻害剤は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＣＤ１９発現が増加された後に投与される。
【００７４】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をＣＤ２０阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０阻害剤と併用して対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ＣＤ２０阻害剤は、ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＴＨＧ３３８である。一部の実施形態において、ＣＤ２０阻害剤は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＣＤ２０発現が増加された後に投与される。
【００７５】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をＣＤ２２阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２阻害剤と併用して対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ＣＤ２２阻害剤は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＣＤ２２発現が増加された後に投与される。
【００７６】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を、Ｆｃ受容体様２（ＦＣＲＬ２）又はＦｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）に結合する分子と併用して対象に投与することを含む。一部の実施形態において、分子は、ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５に結合するＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法である。一部の実施形態において、分子は、第１の抗原及び第２の抗原に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子であり、ここで、第１の抗原は、ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５であり、任意選択で、第２の抗原は、ＣＤ３である。
【００７７】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒａポリペプチドとの両方の組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ−１５と併用して対象に投与することを含む。
【００７８】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をＴＧＦβの阻害剤と併用して対象に投与することを含む。
【００７９】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をＥＧＦＲ阻害剤、例えばＥＧＦＲｍｕｔ−チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）と併用して対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦ８１６である。一部の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミドである。一部の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、表２７に開示される化合物Ａ４０である。
【００８０】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をアデノシンＡ２ＡＲ拮抗薬と併用して対象に投与することを含む。一部の実施形態において、アデノシンＡ２ＡＲ拮抗薬は、ＰＢＦ５０９、ＣＰＩ４４４、ＡＺＤ４６３５、ビパデナント、ＧＢＶ−２０３４及びＡＢ９２８からなる群から選択される。一部の実施形態において、アデノシンＡ２ＡＲ拮抗薬は、５−ブロモ−２，６−ジ−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリミジン−４−アミン；（Ｓ）−７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン；（Ｒ）−７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン又はそのラセミ化合物；７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン；及び６−（２−クロロ−６−メチルピリジン−４−イル）−５−（４−フルオロフェニル）−１，２，４−トリアジン−３−アミンからなる群から選択される。
【００８１】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を抗ＣＤ７３抗体分子、例えば本明細書に開示される抗ＣＤ７３抗体分子と併用して対象に投与することを含む。
【００８２】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をチェックポイント阻害剤と併用して対象に投与することを含む。一部の実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１阻害剤である。一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１及びＡＭＰ−２２４からなる群から選択される。一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞の拡大を例えば少なくとも１、２、３、４又は５週間にわたって例えば少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５又は３０倍増加させる。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞は、ＰＤ−１阻害剤の投与前に対象に投与される。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞は、ＰＤ−１阻害剤の投与時点で対象において拡大しないか、又は最小限の拡大（例えば、１、２、３、４、５又は１０倍以下の拡大）のみを伴う。一部の実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤である。一部の実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ及びＢＭＳ−９３６５５９からなる群から選択される。一部の実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞の拡大を例えば少なくとも１、２、３、４又は５週間にわたって例えば少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５又は３０倍増加させる。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤の投与前に対象に投与される。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤の投与時点で対象において拡大しないか、又は最小限の拡大（例えば、１、２、３、４、５又は１０倍以下の拡大）のみを伴う。一部の実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ−３阻害剤である。一部の実施形態において、ＬＡＧ−３阻害剤は、ＬＡＧ５２５、ＢＭＳ−９８６０１６、ＴＳＲ−０３３、ＭＫ−４２８０及びＲＥＧＮ３７６７からなる群から選択される。一部の実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ−３阻害剤である。一部の実施形態において、ＴＩＭ−３阻害剤は、ＭＧＢ４５３、ＴＳＲ−０２２及びＬＹ３３２１３６７からなる群から選択される。
【００８３】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を、ＣＤ３２Ｂに結合する抗体分子と併用して対象に投与することを含む。
【００８４】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を、ＩＬ−１７に結合する抗体分子、例えばＩＬ−１７に結合するアンタゴニスト抗体分子、例えばＣＪＭ１１２と併用して対象に投与することを含む。
【００８５】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を、ＩＬ−１βに結合する抗体分子と併用して対象に投与することを含む。
【００８６】
前述の態様の特定の実施形態において、本方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法をインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）及び／又はトリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）の阻害剤、例えばＩＤＯ１阻害剤と併用して対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ９１９、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９又はＦ００１２８７である。一部の実施形態において、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン、１−メチル−Ｄ−トリプトファン、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール又は１−メチル−トリプトファンのＤ異性体である。
【００８７】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与することを含む。一部の実施形態において、第２の療法は、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９である。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＣＤ１９発現が増加された後に投与される。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ１９  ＣＡＲを発現する細胞（例えば、細胞集団）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、表８、９又は１０に開示されるアミノ酸配列（例えば、表８、９又は１０に開示されるＣＤＲ、ｓｃＦｖ又は完全長アミノ酸配列）或いはそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれを超えて同一の及び／又は１、２、３個若しくはそれを超える置換、挿入若しくは欠失、例えば保存的置換を有する配列を含む。
【００８８】
一部の実施形態において、第２の療法は、ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法である。一部の実施形態において、ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＣＤ２０発現が増加された後に投与される。一部の実施形態において、ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ２０  ＣＡＲを発現する細胞（例えば、細胞集団）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ２０  ＣＡＲは、表１１、１２又は１３に開示されるアミノ酸配列（例えば、表１１、１２又は１３に開示されるＣＤＲ、ｓｃＦｖ又は完全長アミノ酸配列）或いはそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれを超えて同一の及び／又は１、２、３個若しくはそれを超える置換、挿入若しくは欠失、例えば保存的置換を有する配列を含む。
【００８９】
一部の実施形態において、第２の療法は、ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法である。一部の実施形態において、ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＣＤ２２発現が増加された後に投与される。一部の実施形態において、ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ２２  ＣＡＲを発現する細胞（例えば、細胞集団）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ２２  ＣＡＲは、表１４又は１５に開示されるアミノ酸配列（例えば、表１４又は１５に開示されるＣＤＲ、ｓｃＦｖ又は完全長アミノ酸配列）或いはそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれを超えて同一の及び／又は１、２、３個若しくはそれを超える置換、挿入若しくは欠失、例えば保存的置換を有する配列を含む。
【００９０】
一部の実施形態において、第２の療法は、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であり、ここで、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）である。一部の実施形態において、第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）及びＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）からなる群から選択される。一部の実施形態において、第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）である。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ１９  ＣＡＲを発現する細胞（例えば、細胞集団）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、表８、９又は１０に開示されるアミノ酸配列（例えば、表８、９又は１０に開示されるＣＤＲ、ｓｃＦｖ又は完全長アミノ酸配列）或いはそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれを超えて同一の及び／又は１、２、３個若しくはそれを超える置換、挿入若しくは欠失、例えば保存的置換を有する配列を含む。一部の実施形態において、第２のＣＡＲは、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）である。一部の実施形態において、ＣＤ２０  ＣＡＲは、表１１、１２又は１３に開示されるアミノ酸配列（例えば、表１１、１２又は１３に開示されるＣＤＲ、ｓｃＦｖ又は完全長アミノ酸配列）或いはそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれを超えて同一の及び／又は１、２、３個若しくはそれを超える置換、挿入若しくは欠失、例えば保存的置換を有する配列を含む。一部の実施形態において、第２のＣＡＲは、ＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）である。一部の実施形態において、ＣＤ２２  ＣＡＲは、表１４又は１５に開示されるアミノ酸配列（例えば、表１４又は１５に開示されるＣＤＲ、ｓｃＦｖ又は完全長アミノ酸配列）或いはそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれを超えて同一の及び／又は１、２、３個若しくはそれを超える置換、挿入若しくは欠失、例えば保存的置換を有する配列を含む。
【００９１】
一部の実施形態において、第２の療法は、第１の抗原及び第２の抗原に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であり、ここで、第１の抗原は、ＢＣＭＡである。一部の実施形態において、第２の抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０及びＣＤ２２からなる群から選択される。一部の実施形態において、第２の抗原は、ＣＤ１９である。一部の実施形態において、第２の抗原は、ＣＤ２０である。一部の実施形態において、第２の抗原は、ＣＤ２２である。
【００９２】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与することを含む。一部の実施形態において、第２の療法は、ＣＤ１９阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９阻害剤である。一部の実施形態において、ＣＤ１９阻害剤は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＣＤ１９発現が増加された後に投与される。
【００９３】
一部の実施形態において、第２の療法は、ＣＤ２０阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０阻害剤である。一部の実施形態において、ＣＤ２０阻害剤は、ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＴＨＧ３３８である。一部の実施形態において、ＣＤ２０阻害剤は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＣＤ２０発現が増加された後に投与される。
【００９４】
一部の実施形態において、第２の療法は、ＣＤ２２阻害剤、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２阻害剤である。一部の実施形態において、ＣＤ２２阻害剤は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＣＤ２２発現が増加された後に投与される。
【００９５】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与することを含み、ここで、第２の療法は、Ｆｃ受容体様２（ＦＣＲＬ２）又はＦｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）に結合する分子である。一部の実施形態において、この分子は、ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５に結合するＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法である。一部の実施形態において、この分子は、第１の抗原及び第２の抗原に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子であり、ここで、第１の抗原は、ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５であり、任意選択、で第２の抗原は、ＣＤ３である。
【００９６】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与することを含み、ここで、第２の療法は、ＴＧＦβの阻害剤である。
【００９７】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与することを含み、ここで、第２の療法は、ＥＧＦＲ阻害剤、例えばＥＧＦＲｍｕｔ−チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である。一部の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦ８１６である。一部の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミドである。一部の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、表２７に開示される化合物Ａ４０である。
【００９８】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与することを含み、ここで、第２の療法は、アデノシンＡ２ＡＲ拮抗薬である。一部の実施形態において、アデノシンＡ２ＡＲ拮抗薬は、ＰＢＦ５０９、ＣＰＩ４４４、ＡＺＤ４６３５、ビパデナント、ＧＢＶ−２０３４及びＡＢ９２８からなる群から選択される。一部の実施形態において、アデノシンＡ２ＡＲ拮抗薬は、５−ブロモ−２，６−ジ−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリミジン−４−アミン；（Ｓ）−７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン；（Ｒ）−７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン又はそのラセミ化合物；７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン；及び６−（２−クロロ−６−メチルピリジン−４−イル）−５−（４−フルオロフェニル）−１，２，４−トリアジン−３−アミンからなる群から選択される。
【００９９】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与することを含み、ここで、第２の療法は、抗ＣＤ７３抗体分子、例えば本明細書に開示される抗ＣＤ７３抗体分子である。
【０１００】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与することを含み、ここで、第２の療法は、チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１阻害剤である。一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１及びＡＭＰ−２２４からなる群から選択される。一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１の発現が増加された後に投与される。一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞の拡大を例えば少なくとも１、２、３、４又は５週間にわたって例えば少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５又は３０倍増加させる。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞は、ＰＤ−１阻害剤の投与前に対象に投与される。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞は、ＰＤ−１阻害剤の投与時点で対象において拡大しないか、又は最小限の拡大（例えば、１、２、３、４、５又は１０倍以下の拡大）のみを伴う。一部の実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤である。一部の実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ及びＢＭＳ−９３６５５９からなる群から選択される。一部の実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１の発現が増加された後に投与される。一部の実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、対象におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞の拡大を例えば少なくとも１、２、３、４又は５週間にわたって例えば少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５又は３０倍増加させる。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤の投与前に対象に投与される。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤の投与時点で対象において拡大しないか、又は最小限の拡大（例えば、１、２、３、４、５又は１０倍以下の拡大）のみを伴う。一部の実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ−３阻害剤である。一部の実施形態において、ＬＡＧ−３阻害剤は、ＬＡＧ５２５、ＢＭＳ−９８６０１６、ＴＳＲ−０３３、ＭＫ−４２８０及びＲＥＧＮ３７６７からなる群から選択される。一部の実施形態において、ＬＡＧ−３阻害剤は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＬＡＧ−３の発現が増加された後に投与される。一部の実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ−３阻害剤である。一部の実施形態において、ＴＩＭ−３阻害剤は、ＭＧＢ４５３、ＴＳＲ−０２２及びＬＹ３３２１３６７からなる群から選択される。一部の実施形態にお���て、ＴＩＭ−３阻害剤は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＴＩＭ−３の発現が増加された後に投与される。
【０１０１】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与することを含み、ここで、第２の療法は、ＣＤ３２Ｂに結合する抗体分子である。
【０１０２】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与することを含み、ここで、第２の療法は、ＩＬ−１７に結合する抗体分子、例えばＩＬ−１７に結合するアンタゴニスト抗体分子、例えばＣＪＭ１１２である。
【０１０３】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与することを含み、ここで、第２の療法は、ＩＬ−１βに結合する抗体分子である。
【０１０４】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法を対象に投与することを含み、ここで、第２の療法は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）及び／又はトリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）の阻害剤、例えばＩＤＯ１阻害剤である。一部の実施形態において、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ９１９、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９又はＦ００１２８７である。一部の実施形態において、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン、１−メチル−Ｄ−トリプトファン、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール又は１−メチル−トリプトファンのＤ異性体である。一部の実施形態において、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与後、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与を受けて対象のＩＤＯ及び／又はＴＤＯ発現が増加された後に投与される。
【０１０５】
前述の態様についての特定の実施形態において、第２の療法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法の投与前、それと同時又はその後に投与される。
【０１０６】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、ここで、対象は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受けたことがあるか又は受けており、この方法は、
対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後の少なくとも１つの時点での対象における、例えば対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原のレベル又は活性の値の、参照値と比べた増加であって、参照値は、
（ｉ）その少なくとも１つの時点より前の対象における、例えば対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原のレベル又は活性（例えば、対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始める前の対象における抗原のレベル若しくは活性又は対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後であるが、その少なくとも１つの時点より前の対象における抗原のレベル若しくは活性）；
（ｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する異なる対象における抗原のレベル又は活性；又は
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象の集団における抗原の平均レベル又は活性
である、増加に応答して、抗原の阻害剤を対象に投与すること
を含み、
（１）抗原は、ＣＤ１９であり、及び抗原の阻害剤は、ＣＤ１９阻害剤であり、任意選択で、ＣＤ１９阻害剤は、
（ａ）ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９；
（ｂ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｃ）ＢＣＭＡ及びＣＤ１９に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（２）抗原は、ＣＤ２０であり、及び抗原の阻害剤は、ＣＤ２０阻害剤であり、任意選択で、ＣＤ２０阻害剤は、
（ｄ）ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｅ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び第２のＣＡＲは、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｆ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２０に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｇ）ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＴＨＧ３３８
であるか、
（３）抗原は、ＣＤ２２であり、及び抗原の阻害剤は、ＣＤ２２阻害剤であり、任意選択で、ＣＤ２２阻害剤は、
（ｈ）ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｉ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び第２のＣＡＲは、ＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｊ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２２に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（４）抗原は、ＰＤ１又はＰＤ−Ｌ１であり、及び抗原の阻害剤は、抗ＰＤ１抗体分子又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子であり、任意選択で、抗原の阻害剤は、
（ｋ）ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１又はＡＭＰ−２２４；又は
（ｌ）ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ又はＢＭＳ−９３６５５９
であるか、
（５）抗原は、ＩＤＯ又はＴＤＯであり、及び抗原の阻害剤は、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤であり、任意選択で、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、
（ｍ）ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ９１９、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９又はＦ００１２８７；又は
（ｎ）（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン、１−メチル−Ｄ−トリプトファン、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール又は１−メチル−トリプトファンのＤ異性体
であるか、又は
（６）抗原は、ＴＧＦ−βであり、及び抗原の阻害剤は、ＴＧＦβ阻害剤である。
【０１０７】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、ここで、対象は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受けたことがあるか又は受けており、この方法は、
対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後の少なくとも１つの時点での対象における、例えば対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原のレベル又は活性の値を取得すること、
参照値と比べた値の増加であって、参照値は、
（ｉ）その少なくとも１つの時点より前の対象における、例えば対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原のレベル又は活性（例えば、対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始める前の対象における抗原のレベル若しくは活性又は対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後であるが、その少なくとも１つの時点より前の対象における抗原のレベル若しくは活性）；
（ｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する異なる対象における抗原のレベル又は活性；又は
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象の集団における抗原の平均レベル又は活性
である、増加に応答して、抗原の阻害剤を対象に投与すること
を含み、
（１）抗原は、ＣＤ１９であり、及び抗原の阻害剤は、ＣＤ１９阻害剤であり、任意選択で、ＣＤ１９阻害剤は、
（ａ）ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９；
（ｂ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｃ）ＢＣＭＡ及びＣＤ１９に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（２）抗原は、ＣＤ２０であり、及び抗原の阻害剤は、ＣＤ２０阻害剤であり、任意選択で、ＣＤ２０阻害剤は、
（ｄ）ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｅ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び第２のＣＡＲは、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｆ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２０に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｇ）ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＴＨＧ３３８
であるか、
（３）抗原は、ＣＤ２２であり、及び抗原の阻害剤は、ＣＤ２２阻害剤であり、任意選択で、ＣＤ２２阻害剤は、
（ｈ）ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｉ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び第２のＣＡＲは、ＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｊ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２２に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（４）抗原は、ＰＤ１又はＰＤ−Ｌ１であり、及び抗原の阻害剤は、抗ＰＤ１抗体分子又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子であり、任意選択で、抗原の阻害剤は、
（ｋ）ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１又はＡＭＰ−２２４；又は
（ｌ）ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ又はＢＭＳ−９３６５５９
であるか、
（５）抗原は、ＩＤＯ又はＴＤＯであり、及び抗原の阻害剤は、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤であり、任意選択で、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、
（ｍ）ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ９１９、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９又はＦ００１２８７；又は
（ｎ）（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン、１−メチル−Ｄ−トリプトファン、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール又は１−メチル−トリプトファンのＤ異性体
であるか、又は
（６）抗原は、ＴＧＦ−βであり、及び抗原の阻害剤は、ＴＧＦβ阻害剤である。
【０１０８】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること、
対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後の少なくとも１つの時点での対象における、例えば対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原のレベル又は活性の値の、参照値と比べた増加であって、参照値は、
（ｉ）その少なくとも１つの時点より前の対象における、例えば対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原のレベル又は活性（例えば、対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始める前の対象における抗原のレベル若しくは活性又は対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後であるが、その少なくとも１つの時点より前の対象における抗原のレベル若しくは活性）；
（ｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する異なる対象における抗原のレベル又は活性；又は
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象の集団における抗原の平均レベル又は活性
である、増加に応答して、抗原の阻害剤を対象に投与すること
を含み、
（１）抗原は、ＣＤ１９であり、及び抗原の阻害剤は、ＣＤ１９阻害剤であり、任意選択で、ＣＤ１９阻害剤は、
（ａ）ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９；
（ｂ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｃ）ＢＣＭＡ及びＣＤ１９に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（２）抗原は、ＣＤ２０であり、及び抗原の阻害剤は、ＣＤ２０阻害剤であり、任意選択で、ＣＤ２０阻害剤は、
（ｄ）ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｅ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び第２のＣＡＲは、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｆ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２０に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｇ）ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＴＨＧ３３８
であるか、
（３）抗原は、ＣＤ２２であり、及び抗原の阻害剤は、ＣＤ２２阻害剤であり、任意選択で、ＣＤ２２阻害剤は、
（ｈ）ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｉ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び第２のＣＡＲは、ＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｊ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２２に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（４）抗原は、ＰＤ１又はＰＤ−Ｌ１であり、及び抗原の阻害剤は、抗ＰＤ１抗体分子又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子であり、任意選択で、抗原の阻害剤は、
（ｋ）ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１又はＡＭＰ−２２４；又は
（ｌ）ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ又はＢＭＳ−９３６５５９
であるか、
（５）抗原は、ＩＤＯ又はＴＤＯであり、及び抗原の阻害剤は、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤であり、任意選択で、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、
（ｍ）ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ９１９、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９又はＦ００１２８７；又は
（ｎ）（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン、１−メチル−Ｄ−トリプトファン、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール又は１−メチル−トリプトファンのＤ異性体
であるか、又は
（６）抗原は、ＴＧＦ−βであり、及び抗原の阻害剤は、ＴＧＦβ阻害剤である。
【０１０９】
一態様において、本明細書には、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が開示され、この方法は、
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を対象に投与すること、
対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後の少なくとも１つの時点での対象における、例えば対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原のレベル又は活性の値を取得すること、
参照値と比べた値の増加であって、参照値は、
（ｉ）その少なくとも１つの時点より前の対象における、例えば対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原のレベル又は活性（例えば、対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始める前の対象における抗原のレベル若しくは活性又は対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後であるが、その少なくとも１つの時点より前の対象における抗原のレベル若しくは活性）；
（ｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する異なる対象における抗原のレベル又は活性；又は
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象の集団における抗原の平均レベル又は活性
である、増加に応答して、抗原の阻害剤を対象に投与すること
を含み、
（１）抗原は、ＣＤ１９であり、及び抗原の阻害剤は、ＣＤ１９阻害剤であり、任意選択で、ＣＤ１９阻害剤は、
（ａ）ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ１１９又はＣＴＬ０１９；
（ｂ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び第２のＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ１９  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｃ）ＢＣＭＡ及びＣＤ１９に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（２）抗原は、ＣＤ２０であり、及び抗原の阻害剤は、ＣＤ２０阻害剤であり、任意選択で、ＣＤ２０阻害剤は、
（ｄ）ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｅ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び第２のＣＡＲは、ＣＤ２０  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２０  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｆ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２０に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｇ）ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＴＨＧ３３８
であるか、
（３）抗原は、ＣＤ２２であり、及び抗原の阻害剤は、ＣＤ２２阻害剤であり、任意選択で、ＣＤ２２阻害剤は、
（ｈ）ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法、例えば本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法；
（ｉ）第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法であって、第１のＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ）であり、及び第２のＣＡＲは、ＣＤ２２  ＣＡＲ（例えば、本明細書に開示されるＣＤ２２  ＣＡＲ）である、ＣＡＲ発現細胞療法；又は
（ｊ）ＢＣＭＡ及びＣＤ２２に結合する多重特異性ＣＡＲ、例えば二重特異性ＣＡＲを発現する細胞を含むＣＡＲ発現細胞療法
であるか、
（４）抗原は、ＰＤ１又はＰＤ−Ｌ１であり、及び抗原の阻害剤は、抗ＰＤ１抗体分子又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子であり、任意選択で、抗原の阻害剤は、
（ｋ）ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１又はＡＭＰ−２２４；又は
（ｌ）ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ又はＢＭＳ−９３６５５９
であるか、
（５）抗原は、ＩＤＯ又はＴＤＯであり、及び抗原の阻害剤は、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤であり、任意選択で、ＩＤＯ及び／又はＴＤＯの阻害剤は、
（ｍ）ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ９１９、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９又はＦ００１２８７；又は
（ｎ）（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン、１−メチル−Ｄ−トリプトファン、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール又は１−メチル−トリプトファンのＤ異性体
であるか、又は
（６）抗原は、ＴＧＦ−βであり、及び抗原の阻害剤は、ＴＧＦβ阻害剤である。
【０１１０】
前述の態様の特定の実施形態において、抗原のレベル又は活性の値は、本明細書に記載されるアッセイ、例えば免疫組織化学によって測定されるとおりの、対象における、例えば対象からの試料（例えば、生検試料、例えば骨髄生検試料）における抗原の発現レベルを含む。
【０１１１】
一部の実施形態において、少なくとも１つの時点は、対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めてから５、１０、１５、２０、２５、２８、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０又は９０日後である。
【０１１２】
一部の実施形態において、対象は、対象がＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法を受け始めた後、ＢＣＭＡ発現の減少を経験する。
【０１１３】
前述の態様の特定の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＢＣＡＭ  ＣＡＲを発現する細胞を含む。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、表３若しくは５に掲載される重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３の１つ以上（例えば、その３つ全て）及び／又は表４若しくは５に掲載される軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３の１つ以上（例えば、その３つ全て）或いはその９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、表２若しくは５に掲載される重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は表２若しくは５に掲載される軽鎖可変領域（ＶＬ）或いはその９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、表２若しくは５に掲載されるＢＣＭＡ  ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列（例えば、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８及び配列番号１４９）又はその９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、表２若しくは５に掲載される完全長ＢＣＭＡ  ＣＡＲアミノ酸配列（例えば、配列番号１０９の残基２２〜４８３、配列番号９９の残基２２〜４９０、配列番号１００の残基２２〜４８８、配列番号１０１の残基２２〜４８７、配列番号１０２の残基２２〜４９３、配列番号１０３の残基２２〜４９０、配列番号１０４の残基２２〜４９１、配列番号１０５の残基２２〜４８２、配列番号１０６の残基２２〜４８３、配列番号１０７の残基２２〜４８５、配列番号１０８の残基２２〜４８３、配列番号１１０の残基２２〜４９０、配列番号１１１の残基２２〜４８３、配列番号１１２の残基２２〜４８４、配列番号１１３の残基２２〜４８５、配列番号２１３の残基２２〜４８７、配列番号２１４の残基２３〜４８９、配列番号２１５の残基２２〜４９０、配列番号２１６の残基２２〜４８４、配列番号２１７の残基２２〜４８５、配列番号２１８の残基２２〜４８９、配列番号２１９の残基２２〜４９７、配列番号２２０の残基２２〜４９２、配列番号２２１の残基２２〜４９０、配列番号２２２の残基２２〜４８５、配列番号２２３の残基２２〜４９２、配列番号２２４の残基２２〜４９２、配列番号２２５の残基２２〜４８３、配列番号２２６の残基２２〜４９０、配列番号２２７の残基２２〜４８５、配列番号２２８の残基２２〜４８６、配列番号２２９の残基２２〜４９２、配列番号２３０の残基２２〜４８８、配列番号２３１の残基２２〜４８８、配列番号２３２の残基２２〜４９５、配列番号２３３の残基２２〜４９０）又はその９５〜９９％の同一性を有する配��を含む。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、表２若しくは５に掲載される核酸配列（例えば、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７０）又はその９５〜９９％の同一性を有する配列によってコードされる。
【０１１４】
前述の態様の特定の実施形態において、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患は、癌であり、任意選択で、癌は、血液癌である。一部の実施形態において、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患は、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）の１つ以上から選択される急性白血病；慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵癌、肺癌；又は形質細胞増殖性障害（例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス及びＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる））又はこれらの組み合わせである。一部の実施形態において、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患は、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＤＬＢＣＬ又は多発性骨髄腫である。一部の実施形態において、対象は、ヒト患者である。
【０１１５】
材料、方法及び例は、例示的なものに過ぎず、限定することを意図するものではない。
【０１１６】
見出し、下位見出し又は番号若しくは文字が付された要素、例えば（ａ）、（ｂ）、（ｉ）等は、単に読み易くなるように提示されるに過ぎない。本明細書における見出し又は番号若しくは文字が付された要素の使用は、ステップ若しくは要素がアルファベット順に実施されること又はステップ若しくは要素が必ず互いに異なることを要求するものではない。
【０１１７】
本明細書において言及される刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献の全ては、全体として参照により援用される。
【０１１８】
本発明の他の特徴、目的及び利点は、説明及び図面並びに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【０１１９】
本特許又は出願ファイルには、カラーで作成された図面が少なくとも１つ含まれる。カラー図面を含む本特許又は特許出願公開の複写は、請求に応じて、必要な費用の支払いをもって当局により提供されることになる。
【図面の簡単な説明】
【０１２０】
【図１Ａ−１Ｂ】後にＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入による処置に対して奏効例（Ｒ、ＮＲ＝３）又は非奏効例（ＮＲ、ＮＮＲ＝５）であると決定された多発性骨髄腫患者から取得されたアフェレーシス試料におけるＣＤ３＋  Ｔ細胞中のＣＤ４＋又はＣＤ８＋  Ｔ細胞の比率（図１Ａ）及びＣＤ４：ＣＤ８  Ｔ細胞比（図１Ｂ）を示すグラフの対である。これらのデータは、奏効例では、そのアフェレーシス試料において非奏効例と比べてＣＤ４＋  Ｔ細胞の比率がより高く、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の比率がより低い（従ってＣＤ４：ＣＤ８比がより高い）ことを実証している。約１．６より高いＣＤ４：ＣＤ８比が、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡに対する奏効を予測するものであることが分かった。
【図２Ａ−２Ｃ】後にＣＡＲＴ−ＢＣＭＡに対する奏効例（Ｒ、ＮＲ＝３）であると決定された多発性骨髄腫患者から取得されたアフェレーシス試料において、ＣＤ８＋  Ｔ細胞中のＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞（図２Ａ）、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞（図２Ｂ）又はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞（図２Ｃ）の比率が非奏効例（ＮＲ、ＮＮＲ＝５）と比較したとき高いことを示すグラフである。各グラフについてＰ値を示す。
【図３】患者１３、患者１４、患者１５、患者１６及び患者１７から投与前（「Ｐｒｅ」）並びにＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後２８日目及び９０日目（「３ヵ月」）に取得した骨髄コア生検において免疫組織化学（ＩＨＣ）により決定したときのＣＤ１３８＋細胞局在を示す一連の画像である。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡによる処置に対する患者アウトカムは、実施例に提供し、本明細書では以下のとおり称する：病勢進行（ＰＤ）；病勢安定（ＳＤ）；微小奏効（ＭＲ）；部分退縮（ＰＲ）；及び最良部分退縮（ＶＧＰＲ）。患者１３から取得した処置前、２８日目及び９０日目試料は、それぞれ１％、０％及び０％のＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞浸潤を有した。患者１４から取得した処置前及び２８日目試料は、それぞれ８０％及び９０％のＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞浸潤を有した。患者１５から取得した処置前、２８日目及び９０日目試料は、それぞれ９５％、５％及び１０％のＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞浸潤を有した。患者１６から取得した処置前、２８日目及び９０日目試料は、それぞれ５０％、５％及び７５％のＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞浸潤を有した。患者１７から処置前、２８日目及び９０日目取得した試料は、それぞれ５０％、５％及び７５％のＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞浸潤を有した。
【図４】患者１３、患者１４、患者１５、患者１６及び患者１７から投与前（「Ｐｒｅ」）並びにＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後２８日目及び９０日目（「３ヵ月」）に取得した骨髄コア生検においてＩＨＣにより決定したときのＢＣＭＡタンパク質発現を示す一連の画像である。
【図５】患者１３、患者１４、患者１５、患者１６及び患者１７からＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの投与前に取得した骨髄コア生検においてＩＨＣにより決定したときのＢＣＭＡタンパク質発現とインサイチュハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）により決定したときのＢＣＭＡ  ｍＲＮＡレベルとの間の比較を示す一連の画像である。
【図６Ａ−６Ｃ】投与前（「Ｐｒｅ」）並びにＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後２８日目及び９０日目（「３ヵ月」）に患者１５（図６Ａ）、患者１６（図６Ｂ）及び患者１７（図６Ｃ）から取得した骨髄コア生検においてＩＨＣにより決定したときのＢＣＭＡタンパク質発現、ＩＳＨにより決定したときのＢＣＭＡ  ｍＲＮＡレベル及びＩＳＨにより決定したときのＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ  ｍＲＮＡレベルを示す一連の画像である。
【図７Ａ−７Ｅ】図７Ａ、７Ｂ及び７Ｃは、投与前（「Ｐｒｅ」）並びにＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後２８日目及び９０日目（「３ヵ月」）に患者１５（図７Ａ）、患者１６（図７Ｂ）及び患者１７（図７Ｃ）から取得した骨髄コア生検においてＩＳＨにより決定したときのＩＤＯ１、ＩＦＮ−γ及びＴＧＦβ  ｍＲＮＡレベルを示す一連の画像である。図７Ｄ及び７Ｅは、投与前（「Ｐｒｅ」）並びにＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後１０日目及び２８日目に患者１９（図７Ｄ）及び患者２０（図７Ｅ）から取得した生検においてＩＳＨにより決定したときのＣＡＲ、ＩＦＮ−γ及びＩＤＯ１  ｍＲＮＡレベルを示す一連の画像である。
【図８Ａ−８Ｅ】図８Ａ、８Ｂ及び８Ｃは、投与前（「Ｐｒｅ」）並びにＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後２８日目及び９０日目（「３ヵ月」）に患者１５（図８Ａ）、患者１６（図８Ｂ）及び患者１７（図８Ｃ）から取得した骨髄コア生検においてＩＨＣにより決定したときのＰＤ−Ｌ１、ＰＤ１、ＣＤ３及びＦｏｘＰ３タンパク質発現を示す一連の画像である。図８Ｄ及び８Ｅは、投与前（「Ｐｒｅ」）並びにＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後１０日目及び２８日目に患者１９（図８Ｄ）及び患者２０（図８Ｅ）から取得した生検においてＩＨＣにより決定したときのＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１及びＦｏｘＰ３タンパク質発現を示す一連の画像である。
【図９】患者１３、患者１４、患者１５、患者１６及び患者１７から投与前（「Ｐｒｅ」）並びにＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後２８日目及び９０日目（「３ヵ月」）に取得した骨髄コア生検においてＩＨＣにより決定したときのＣＤ１９タンパク質発現を示す一連の画像である。
【図１０】患者１３、患者１４、患者１５、患者１６及び患者１７から投与前（「Ｐｒｅ」）並びにＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後２８日目及び９０日目（「３ヵ月」）に取得した骨髄コア生検においてＩＨＣにより決定したときのＣＤ２０タンパク質発現を示す一連の画像である。
【図１１Ａ−１１Ｂ】投与前（「ｐｒｅ」）及びＣＡＲ−ＢＣＭＡの注入後９０日目（「３Ｍ」）に患者１５から取得した骨髄コア生検においてＢＣＭＡ陽性細胞とＣＤ１９陽性細胞とが別個の集団であることを示す一連のスペクトル分離擬似蛍光顕微鏡像である。
【図１２Ａ−１２Ｂ】それぞれ患者１５及び患者１７から取得した処置前骨髄コア生検においてＣＤ１９＋  ＣＤ３４ｄｉｍ細胞集団が存在したことを示す一連のスペクトル分離擬似蛍光顕微鏡像である。
【図１３】患者１５から取得した処置前骨髄コア生検においてＣＤ１９集団にＣＤ１３８＋及びＣＤ１３８−のばらつきがあったことを示す一連のスペクトル分離擬似蛍光顕微鏡像である。
【図１４】ＰＢＳ、非形質導入Ｔ細胞（「ＵＴＤ」）又はツールＣＡＲ（「Ｊ６ＭＯ」）、ＢＣＭＡ−４、ＢＣＭＡ−９、ＢＣＭＡ−１０（「ＭＣＭ９９８」）、ＢＣＭＡ−１３若しくはＢＣＭＡ−１５のいずれかを形質導入したＴ細胞の移植及び投与後のＫＭＳ１１腫瘍モデルにおける腫瘍負荷レベルを比較するグラフである。ＢＣＭＡ−１０が最も強力な抗腫瘍活性を実証した。
【図１５】多発性骨髄腫成人患者におけるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡを発現する自家Ｔ細胞の注入の安全性及び実現可能性を評価するための臨床試験（ＮＣＴ番号：ＮＣＴ０２５４６１６７；ＵＰＣＣ  １４４１５）のデザインを示す図である。
【図１６Ａ−１６Ｂ】図１６Ａは、ＭＭ患者疾患特徴を示す表である。図１６Ｂは、ＭＭ患者における疾患及び前療法歴に起因するベースラインリンパ球減少症の存在を示す表である。
【図１７Ａ−１７Ｃ】それぞれコホート１、コホート２及びコホート３について患者の奏効を示すグラフである。
【図１８Ａ−１８Ｂ】それぞれコホート１患者及びコホート２／３患者においてフローサイトメトリーにより判定したＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの拡大を示す一連のグラフである。
【図１９Ａ−１９Ｂ】それぞれコホート１患者及びコホート２／３患者においてＰＣＲにより判定したＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの拡大を示す一連のグラフである。プロットは、それぞれのＣＡＲＴ注入後日数（ｘ軸）の時点で患者の血液から単離したＤＮＡ  １μｇ当たりの検出されたＣＡＲＴ遺伝子の数（ｙ軸）を示す。
【図２０Ａ−２０Ｂ】ＢＣＭＡ拡大が臨床アウトカムと相関し得ることを示すグラフである。
【図２１Ａ−２１Ｄ】奏効例と非奏効例との比較における注入後様々な時点でのＣＡＲ陽性（ＣＡＲ＋）ＣＤ４／ＣＤ８細胞比を示すグラフである。
【図２２】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後様々な時点でのサイトカイン発現レベルの変化を示す一連のグラフである。各グラフのｙ軸は、０日目からの変化倍数を示す。各グラフのｘ軸は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入後の日数を示す。
【図２３Ａ−２３Ｂ】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後様々な時点でのＩＬ−６発現の変化を示すグラフである。各グラフのｙ軸は、０日目からの変化倍数を示す。各グラフのｘ軸は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入後の日数を示す。
【図２４Ａ−２４Ｂ】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後様々な時点でのＩＦＮ−γ発現の変化を示すグラフである。各グラフのｙ軸は、０日目からの変化倍数を示す。各グラフのｘ軸は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入後の日数を示す。
【図２５Ａ−２５Ｂ】１４例の健常ドナー（図２５Ａ）及び１２例の骨髄腫患者（図２５Ｂ）の血清ＢＣＭＡレベルを示すグラフである。
【図２６Ａ−２６Ｄ】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後様々な時点での血清ＢＣＭＡレベルを示すグラフである。図２６Ａ及び２６Ｂのｙ軸は、末梢血（ＰＢ）血清ＢＣＭＡレベルを示す。図２６Ｃ及び２６Ｄのｙ軸は、ベースラインからのＰＢ血清ＢＣＭＡレベル変化倍数を示す。各グラフのｘ軸は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入後の日数を示す。
【図２７Ａ−２７Ｃ】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ処置を受けた３例の多発性骨髄腫患者から収集したデータを示すグラフである。左側のｙ軸は、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋  ＣＡＲＴ細胞の比率を示す。右側のｙ軸は、血清ＢＣＭＡレベル（ｎｇ／ｍＬ）又はｑＰＣＲにより判定したときのＤＮＡ  １μｇ当たりのＣＡＲＴコピー数（ＢＢｚ）を示す。
【図２８Ａ−２８Ｆ】図２８Ａ及び２８Ｂは、健常ドナー（図２８Ａ）及び多発性骨髄腫（ＭＭ）患者（図２８Ｂ）のＣＤ４＋  Ｔ細胞サブセットを示すグラフである。図２８Ｃ及び２８Ｄは、健常ドナー（図２８Ｃ）及びＭＭ患者（図２８Ｄ）のＣＤ８＋  Ｔ細胞サブセットを示すグラフである。図２８Ｅ及び２８Ｆは、ＭＭ患者から取得したアフェレーシス試料におけるそれぞれＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞サブセットを示すグラフである（斜線で網掛けされた丸は、非奏効例を表し、白抜きの丸は、奏効例を表す）。
【図２９】ＭＭ患者から取得したアフェレーシス試料におけるＴ細胞分化を示す一連のグラフである。ｘ軸は、ＣＤ４５ＲＯ発現を示し、ｙ軸は、ＣＣＲ７発現を示す。左上象限のシグナルは、ナイーブ細胞表現型を示し；右上象限のシグナルは、セントラルメモリー（ＴＣＭ）表現型を示し；右下象限のシグナルは、エフェクターメモリー（ＴＥＭ）表現型を示し；及び左下象限のシグナルは、ＴＥＭＲＡを示す。ＣＲは、完全奏効を表す。ＰＤは、病勢進行を表す。ＶＧＰＲは、最良部分奏効を表す。
【図３０Ａ−３０Ｂ】ＭＭ患者から取得したアフェレーシス試料におけるＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞サブセットを示すグラフの対である（斜線で網掛けされた丸は、非奏効例を表し、白抜きの丸は、奏効例を表す）。
【図３１】処置スキーマを示すグラフである。
【図３２Ａ−３２Ｃ】臨床アウトカムを示すグラフの組である。図３２Ａは、各対象についての最良の奏効及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）を示すスイマープロットである。矢印は、継続中の奏効を示す。図３２Ｂは、処置後の髄外疾患及び悪性胸水の消失を示す対象０３のＰＥＴ／ＣＴスキャン像の対である。図３２Ｃは、コホート１の全生存を示すカプラン・マイヤープロットである。ＭＲ＝最小奏効；ＭＲＤ＝微小残存病変；ＰＲ＝部分奏効；ＰＤ＝病勢進行；ｓＣＲ＝厳密完全奏効；ＳＤ＝病勢安定。
【図３３Ａ−３３Ｃ】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大及び持続性を示すグラフの組である。図３３Ａは、フローサイトメトリー（ＣＤ３＋  Ｔ細胞中の％ＣＡＲ＋、▲、左軸）及びＣＡＲ配列についての定量的ＰＣＲ（■、右軸）により測定したときの各対象についての末梢血中の経時的ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞レベルを示すグラフの組である。代表的なフローサイトメトリープロットについては、図３８を参照されたい。図３３Ｂは、ｑＰＣＲによるピークＣＡＲＴ−ＢＣＭＡレベルが奏効と相関することを示すグラフである：それぞれ≧ＰＲ対＜ＰＲについて、中央値１０２５０７対４１８７コピー／μｇ  ＤＮＡ（ｐ＝０．０１６、マン−ホイットニー）。図３３Ｃは、ＡＵＣ−２８（注入後最初の２８日間におけるｑＰＣＲによるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡレベルについての曲線下面積）が奏効と相関することを示すグラフである：それぞれ≧ＰＲ対＜ＰＲについて中央値８８５１８１対２６１８３（コピー）×（日）／μｇ  ＤＮＡ（ｐ＝０．０１６、マン−ホイットニー）。
【図３４】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入後の可溶性ＢＣＭＡ（ｓＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、ＡＰＲＩＬレベル及びＢ細胞頻度を示すグラフの組である。上に指示されるとおりの各対象について、ｓＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬの末梢血血清レベル（ｎｇ／ｍｌ、左軸）をＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入前及び注入後にＥＬＩＳＡにより測定した。最も深い臨床奏効の対象（０１（ｓＣＲ）、０３（ＶＧＰＲ）、１５（ＶＧＰＲ））で最も大きいＢＣＭＡの減少並びに相反的なＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬの増加があった。末梢血Ｂ細胞頻度（ＣＤ４５＋ＣＤ１４−ゲートの％ＣＤ１９＋、右軸）は、指示される時点においてフローサイトメトリーにより評価した。
【図３５】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入前及び注入後の各対象についての骨髄穿刺液におけるゲーティングされたＭＭ細胞上でのフローサイトメトリーによるＢＣＭＡ発現を示すヒストグラムの組である。網掛けされたヒストグラムは、ＢＣＭＡを示し；塗り潰されたヒストグラムは、ＦＭＯ（蛍光マイナス１）対照を示す。注入後の時点は、指定がない限り２８日目である。各対象についてのＢＣＭＡを発現する細胞の比率並びに平均ＢＣＭＡ蛍光強度（ＭＦＩ）を表３７に掲載する。対象０３の再発時（１６４日目）におけるＢＣＭＡ発現の減少に留意されたい。代表的なゲーティングについては、図４２を参照されたい。
【図３６Ａ−３６Ｄ】インビボＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大の予測因子を示すグラフの組である。採取直後のアフェレーシス産物中（図３６Ａ）及び製造の開始時（即ち単球夾雑物を減少させるためのエルトリエーションステップ後）の種培養中（図３６Ｂ）におけるＣＤ８＋に対するＣＤ４＋  Ｔ細胞の比（ＣＤ４／ＣＤ８比）をフローサイトメトリーにより決定した。製造の開始時及び終了時の総細胞数からインビトロ拡大倍数（図３６Ｃ）を計算した。ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋表現型を有するアフェレーシス産物中におけるＣＤ８＋  Ｔ細胞の割合をフローサイトメトリーにより評価した（図３６Ｄ）。製造前のＣＤ４／ＣＤ８比及びＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞頻度並びにインビトロ拡大の程度は、注入後のピークインビボＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大と関連性があった（スピアマンの相関ｒ及びｐ値を示す）。
【図３７】対象の登録を示すＣＯＮＳＯＲＴ図である。
【図３８】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の代表的なゲーティング及び染色を示すグラフの組である。１回目のＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入後＋７日目の対象０１からの末梢血について染色が示される。細胞は、前方及び側方散乱、次にシングレット、次にＣＤ４５＋ＣＤ１４−白血球、次にＴ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ１９−）によってゲーティングされる。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ＋細胞は、ビオチン化組換えヒトＢＣＭＡ−Ｆｃ及びストレプトアビジン−ＰＥを使用して同定した。陰性対照は、ストレプトアビジン−ＰＥを含むＦＭＯ（蛍光マイナス１）チューブ（ビオチン化ＢＣＭＡ−Ｆｃを欠いている）であった。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡを発現するＣＤ３＋  Ｔ細胞のパーセントは、ビオチン化ＢＣＭＡ−ＦＣのチューブ内にあるＣＡＲ＋細胞からＦＭＯチューブ内にあるＣＡＲ＋細胞を差し引くことにより計算した（即ちこの例では３４．７−０．９＝３３．８）。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ＋細胞の活性化状態は、ＨＬＡ−ＤＲ染色によって特定した（右下のパネル）。各時点で活性化したＣＡＲ＋細胞のパーセントは、％ＨＬＡ−ＤＲ＋を（％ＨＬＡ−ＤＲ＋プラス％ＨＬＡ−ＤＲ−）で除すことにより計算した（即ちこの例では３２．９／（３２．９＋１．５）＝９５．６％）。
【図３９】各対象についてＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ＋  Ｔ細胞の絶対数を示すグラフの組である。血液１μｌ当たりのＣＤ３＋ＣＡＲ＋細胞の絶対数は、リンパ球絶対数（ＡＬＣ、臨床的全血球計算（ＣＢＣ）分画から報告される）及びＣＡＲＴ−ＢＣＭＡフローサイトメトリー結果（図３８）から、以下の式を用いて推定した：（ＡＬＣ）（％ＣＤ４５＋ＣＤ１４−）（％ＣＤ３＋ＣＤ１９−）（％ＣＡＲ＋）／１００００。例えば、＋７日目における対象０１について、ＡＬＣは、０．０８×１０３細胞／μｌであった。この時点での推定循環ＣＡＲ＋  Ｔ細胞絶対数は、（０．０８）（４８．３）（７２．１）（３３．８）／１００００＝０．０１９×１０３細胞／μｌである。
【図４０】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ処置後の血清サイトカイン変化を示すグラフの組である。複数の時点でＬｕｍｉｎｅｘアッセイによって３０種の末梢血サイトカインレベルを評価した。最初の２８日間における選択のサイトカインの変化を示す。最も深い奏効の対象（０１、０３、１５）は、サイトカインの増加倍数が典型的にはピークＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大時又はその直前に最も大きかった。
【図４１Ａ−４１Ｂ】ベースライン可溶性ＢＣＭＡ（ｓＢＣＭＡ）レベル、ピーク拡大及び奏効を示すグラフの対である。処置前に末梢血血清ｓＢＣＭＡレベルをＥＬＩＳＡにより測定した。図４１Ａは、ベースラインｓＢＣＭＡレベルにｑＰＣＲによるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡのピーク拡大との有意な相関がなかったことを示すグラフである（スピアマンの相関ｒ＝０．４３、ｐ＝０．２５）。図４１Ｂは、ｓＢＣＭＡのベースラインレベルに奏効との有意な関連性がなかったことを示すグラフである（ｐ＝０．５６、マン−ホイットニー検定）。
【図４２】骨髄腫細胞の代表的なゲーティング及びＢＣＭＡ染色を示すグラフの組である。骨髄穿刺液細胞を前方及び側方散乱により、次にシングレットにより、次にＣＤ３−ＣＤ１４−細胞でゲーティングした。初めにＣＤ３８ｈｉ細胞をゲーティングし、次にＣＤ１９、ＣＤ５６及びκ／λ染色を用いてクローン形質細胞でゲーティングすることにより、骨髄腫細胞を同定した。この例では、骨髄腫細胞は、ＣＤ１９−ＣＤ５６＋κ＋である。抗ＢＣＭＡ抗体を含まないＦＭＯチューブを使用して％ＢＣＭＡ＋を決定した。
【図４３Ａ−４３Ｂ】ＭＭ細胞上でのベースラインＢＣＭＡ発現、ピーク拡大及び奏効を示すグラフの対である。処置前の骨髄腫細胞上でのＢＣＭＡ平均蛍光強度（ＭＦＩ）は、ｑＰＣＲによるピークＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大と相関がなく（スピアマンの相関ｒ＝０．４５、ｐ＝０．２７）（図４３Ａ）、奏効との有意な関連性もなかった（ｐ＝０．２５、マン−ホイットニー検定）（図４３Ｂ）。１例の対象（０７）は、利用可能な処置前試料がなかった。
【図４４Ａ−４４Ｂ】Ｂ細胞悪性腫瘍細胞株上でのＢＣＭＡ発現を示すグラフの組である。図４４Ａは、各細胞株上でのＢＣＭＡ表面発現を示すヒストグラムの組である。網掛けされたヒストグラムは、ＰＥ標識抗ＢＣＭＡ抗体による染色を示し、塗り潰されたヒストグラムは、それぞれのアイソタイプ対照染色を示す。図４４Ｂでは、発現を定量化し、試験した各細胞株について抗体結合能（ＡＢＣ）をプロットした。
【図４５Ａ−４５Ｃ】図４５Ａは、誘導後コホート及び再発性／難治性コホートの％ＣＤ２７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ８＋細胞を示すグラフである。図４５Ｂは、誘導後コホート及び再発性／難治性コホートのＣＤ４／ＣＤ８比を示すグラフである。図４５Ｃは、誘導後コホート及び再発性／難治性コホートの９日目までのインビトロ集団倍加数を示すグラフである。
【図４６】処置スキーマを示すグラフである。ＢＭ  ａｓｐ／Ｂｘ＝骨髄穿刺液及び生検；シトキサン＝シクロホスファミド；Ｄ＝日数；Ｌｅｎｔｉ＝レンチウイルス；Ｗｋ＝週。
【図４７Ａ−４７Ｄ】図４７Ａ〜図４７Ｃは、コホート１（１〜５×１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞単独）（図４７Ａ）、コホート２（シクロホスファミド（Ｃｙ）＋１〜５×１０７  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞）（図４７Ｂ）及びコホート３（Ｃｙ＋１〜５×１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞）（図４７Ｃ）の各対象について最良の奏効及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）を示すスイマープロットのパネルである。矢印は継続中の奏効を示す。図４７Ｄは、コホートに基づく全生存（ＯＳ）を示すグラフ、カプラン・マイヤープロットである。ＭＲ＝最小奏効；ＭＲＤ＝微小残存病変；ＰＲ＝部分奏効；ＰＤ＝病勢進行；ｓＣＲ＝厳密完全奏効；ＳＤ＝病勢安定。
【図４８Ａ−４８Ｄ】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大及び持続性を示すグラフである。図４８Ａ〜図４８Ｃは、ＣＡＲ配列についての定量的ＰＣＲにより測定したときの各コホートの末梢血中の経時的ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞レベルを示すグラフである。図４８Ｄは、各対象のｑＰＣＲによるピークＣＡＲＴ−ＢＣＭＡレベルを示すグラフである（対象３４を除く、この対象に関してピークデータが利用可能でない）。ピークＣＡＲＴ−ＢＣＭＡレベル中央値（灰色のバー）についてコホート間で有意差はなかった（マン−ホイットニー）。
【図４９Ａ−４９Ｉ】血清サイトカインとＣＲＳ重症度及び神経毒性との関連性を示すグラフである。２８日目までの血清サイトカイン濃度（ｐｇ／ｍｌ単位）をＬｕｍｉｎｅｘアッセイにより測定した。図４９Ａ〜図４９Ｅ：各サイトカインについてベースラインと比べたピーク増加倍数中央値を、サイトカイン放出症候群を有しない対象（ＣＲＳ）、グレード１  ＣＲＳ又はグレード２  ＣＲＳでトシリズマブの投与を受けていない対象（ＣＲＳ群０〜２）及びグレード３〜４  ＣＲＳ又はグレード２  ＣＲＳでトシリズマブの投与を受けている対象（ＣＲＳ群３〜４又は群２＋ｔｏｃｉ）間で比較した。ＣＲＳ重症度と最も有意な関連性のあったサイトカインは、ＩＬ−６（図４９Ａ）、ＩＦＮ−γ（図４９Ｂ）、ＩＬ−２Ｒα（図４９Ｃ）、ＭＩＰ−１α（図４９Ｄ）及びＩＬ−１５（図４９Ｅ）であった。図４９Ｆ〜図４９Ｉ：各サイトカインについてベースラインと比べたピーク増加倍数中央値を、神経毒性を有しない対象（Ｎｔｘなし）及び任意のグレードの神経毒性を有する対象（任意のＮｔｘ）間で比較した。神経毒性と最も有意な関連性のあったサイトカインは、ＩＬ−６（図４９Ｆ）、ＩＦＮ−γ（図４９Ｇ）、ＩＬ−１ＲＡ（図４９Ｈ）及びＭＩＰ−１α（図４９Ｉ）であった。星印は、グレード３〜４神経毒性の対象を示す。マン−ホイットニー検定による正確確率検定ｐ値を示す。横線は、中央値を示す。ＩＦＮ−γ＝インターフェロンγ；ＩＬ−１ＲＡ＝インターロイキン１受容体拮抗薬；ＩＬ−２Ｒα＝インターロイキン２受容体α；ＩＬ−６＝インターロイキン６；ＩＬ−１５＝インターロイキン１５。ＭＩＰ−１α＝マクロファージ炎症性タンパク質１α。
【図５０Ａ−５０Ｄ】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入前及び注入後のＭＭ細胞における可溶性ＢＣＭＡ（ｓＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬ濃度及びＢＣＭＡ発現を示すグラフである。図５０Ａ：対象（ｓｕｂ）のベースラインｓＢＣＭＡ及びＡＰＲＩＬ末梢血清濃度は、健常ドナーのパネル（ＨＤ、ｎ＝６）と比較して、それぞれ有意に増加及び減少した（それぞれｐ＝０．０１７及び＜０．００１、マン−ホイットニー）。ベースラインＢＡＦＦ濃度に有意差はなかった。濃度中央値を示す。図５０Ｂ：連続ｓＢＣＭＡ濃度は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入後に非奏効例（ＭＲ／ＳＤ／ＰＤ）と比べて血液学的奏効例（ＰＲ／ＶＧＰＲ／ＣＲ／ｓＣＲ）でより有意に減少する。平均濃度（ｎｇ／ｍｌ）＋ＳＥＭを示す。＊ｐ＜０．０５、対応のないｔ検定による。図５０Ｃ：フローサイトメトリーによるＭＭ細胞上でのＢＣＭＡ発現の代表例。ゲーティング戦略については、図４２を参照されたい。ＦＭＯ＝蛍光マイナス１。図５０Ｄ：判定可能な連続骨髄穿刺液を有する１８例の対象におけるＭＭ細胞上での経時的ＢＣＭＡ平均蛍光強度（ＭＦＩ）。奏効例について処置前（ｐｒｅ−ｔｘ）と２８日目（Ｄ２８）との間でＭＦＩ中央値に有意差があったが（４０００対９４４、ｐ＝０．０２、対応のあるｔ検定）、非奏効例についてはなかった（２７０４対２１４０、ｐ＝０．１９）。奏効例についてｐｒｅ−ｔｘと９０日目（Ｄ９０）との間でＭＦＩ中央値に有意差はなかった（４０００対２０２２、ｐ＝０．２６）。＊対象１５は、Ｄ２８に検出可能なＭＭ細胞を有しなかった。＃対象０３は、Ｄ４５に検出可能なＭＭ細胞がなく（Ｄ２８は行われなかった）、９０日目にはＭＭ細胞が少な過ぎるために特徴付けることができなかった。Ｄ１６４の骨髄をＤ９０の時点に示す。
【図５１Ａ−５１Ｉ】インビボＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大及び奏効の予測因子を示すグラフである。ｑＰＣＲにより測定したときのピーク血液ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大（図５１Ａ）並びに最初の２８日間にわたる総ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大（曲線下面積（ＡＵＣ）として計算される）（図５１Ｂ）は、両方とも臨床奏効と関連性があった。より大きいピークＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大（図５１Ｃ）及び奏効（図５１Ｄ）は、グレード３／４又はトシリズマブを必要とするグレード２として定義されるより重症度の高いＣＲＳとも関連性があった。フローサイトメトリーにより決定したときの白血球フェレーシス産物中のＣＤ８＋に対するＣＤ４＋  Ｔ細胞の比（ＣＤ４／ＣＤ８比）がより高いこともピーク拡大（図５１Ｅ）及び奏効（図５１Ｆ）の両方と相関した一方、製造中の播種細胞の増加倍数として測定したインビトロ増殖は、ピーク拡大（図５１Ｇ）とのみ相関し、奏効と相関しなかった（ｐ＝０．５４、マン−ホイットニー検定、データは示さず）。図５１Ｈ〜図５１Ｉ：ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋表現型を有する白血球フェレーシス産物中のＣＤ８＋  Ｔ細胞集団が高率であることは、ピークＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大（図５１Ｈ）と有意な関連性があり、それより程度は低いが奏効と関連性があった（図５１Ｉ）。図５１Ａ、５１Ｂ、５１Ｃ、５１Ｆ及び５１Ｉについて、分析は、マン−ホイットニー検定によるものであり；線は、中央値を表す。図５１Ｄについて、分析は、フィッシャーの正確確率検定によった。図５１Ｅ、５１Ｇ及び５１Ｈについて、分析は、スピアマンの相関によった。
【図５２】対象の登録を示すＣＯＮＳＯＲＴ図である。ＡＬＣ＝リンパ球絶対数。
【図５３Ａ−５３Ｄ】処置した対象の追加的な臨床アウトカムを示すグラフである。図５３Ａ：部分奏効（ＰＲ）以上の全ての対象の奏効期間（ＤＯＲ）。図５３Ｂ：全ての対象の全生存（ＯＳ）。図５３Ｃ：コホート別の無増悪生存期間（ＰＦＳ）。図５３Ｄ：全ての対象のＰＦＳ。曲線は、カプラン・マイヤー法により導出した。
【図５４Ａ−５４Ｃ】コホート１（図５４Ａ）、コホート２（図５４Ｂ）又はコホート３（図５４Ｃ）のＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の拡大を示すグラフである。フローサイトメトリーにより測定したときの全末梢血ＣＤ３＋  Ｔ細胞中におけるＣＡＲ＋  Ｔ細胞頻度を対象毎に示す。
【図５５】ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ処置後の血清サイトカイン変化を示すグラフのパネルである。複数の時点でＬｕｍｉｎｅｘアッセイにより末梢血サイトカイン濃度（ｐｇ／ｍｌ）を評価した。注入後最初の２８日間に最も高頻度に上昇したサイトカインについて、ベースラインと比べたピーク増加倍数をコホート基準で示す。
【図５６Ａ−５６Ｌ】ピークＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大がベースライン臨床特性、ベースラインＢＣＭＡ発現又はｓＢＣＭＡ濃度と関連性がないことを示すグラフである。ｑＰＣＲによるピークＣＡＲＴ−ＢＣＭＡレベル（コピー／μｇゲノムＤＮＡ）には、登録時年齢（中央値より上又は下）（図５６Ａ）；診断からの年数（中央値より上又は下）（図５６Ｂ）；ＦＩＳＨによるｄｅｌ１７ｐ又はシーケンシングによるＴＰ５３突然変異の存在（図５６Ｃ）；療法ライン数（＃）（中央値より上又は下）（図５６Ｄ）；２つのプロテアソーム阻害剤（ＰＩ）、２つの免疫調節薬（ＩＭｉＤ）及びダラツムマブ（ｄａｒａ）に対して五重難治性であること（図５６Ｅ）；白血球アフェレーシスの直前に、ＩＭｉＤ（図５６Ｆ）、ＰＩ（図５６Ｇ）、ｄａｒａ（図５６Ｈ）又はシクロホスファミド（シトキサン）（図５６Ｉ）を含む療法を受けていること；処置前骨髄形質細胞の比率（％ＢＭ  ＰＣ）（図５６Ｊ）；ＢＭ  ＰＣにおけるベースラインＢＣＭＡ平均蛍光強度（ＭＦＩ）（図５６Ｋ）；又はベースライン血清可溶性ＢＣＭＡ（ｓＢＣＭＡ）濃度（図５６Ｌ）との有意な関連性はなかった。図５６Ａ〜図５６Ｉについては、マン−ホイットニー検定による分析であり；線は、中央値を表す。図５６Ｊ〜図５６Ｌについては、スピアマンの相関による分析である。
【図５７Ａ−５７Ｌ】奏効がベースライン臨床特性、ベースラインＢＣＭＡ発現又はｓＢＣＭＡ濃度と関連性がないことを示すグラフである。臨床奏効（≧部分奏効（ＰＲ））には、登録時年齢（図５７Ａ）；診断からの年数（図５７Ｂ）；ＦＩＳＨによるｄｅｌ１７ｐ又はシーケンシングによるＴＰ５３突然変異の存在（図５７Ｃ）；療法ライン数（＃）（図５７Ｄ）；２つのプロテアソーム阻害剤（ＰＩ）、２つの免疫調節薬（ＩＭｉＤ）及びダラツムマブ（ｄａｒａ）に対して五重難治性であること（図５７Ｅ）；白血球アフェレーシスの直前に、ＩＭｉＤ、ＰＩ、ｄａｒａ又はシクロホスファミド（シトキサン）を含むレジメンを受けていること（図５７Ｆ〜図５７Ｉ）；処置前骨髄形質細胞の比率（％ＢＭ  ＰＣ）（図５７Ｊ）；ＢＭ  ＰＣにおけるベースラインＢＣＭＡ平均蛍光強度（ＭＦＩ）（図５７Ｋ）；又はベースライン血清可溶性ＢＣＭＡ（ｓＢＣＭＡ）濃度（図５７Ｌ）との有意な関連性はなかった。図５７Ｃ、図５７Ｅ〜図５７Ｉについては、フィッシャーの正確確率検定による分析である。図５７Ａ、図５７Ｂ、図５７Ｄ、図５７Ｊ〜図５７Ｌについては、マン−ホイットニー検定による分析であり；線は、中央値を表す。
【発明を実施するための形態】
【０１２１】
定義
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が関係する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。
【０１２２】
本明細書で使用されるとき、用語「ＢＣＭＡ」は、Ｂ細胞成熟抗原を指す。ＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７、ＢＣＭ又はＣＤ２６９としても知られる）は、腫瘍壊死受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーのメンバーであり、主に終末分化Ｂ細胞、例えばメモリーＢ細胞及び形質細胞に発現する。そのリガンドは、ＴＮＦファミリーＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）及び増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）と呼ばれる。ＢＣＭＡは、形質細胞の生存を媒介することによる長期体液性免疫の維持に関わる。ＢＣＭＡの遺伝子は１６番染色体にコードされ、１８４アミノ酸のタンパク質（ＮＰ＿００１１８３．２）をコードする９９４ヌクレオチド長の一次ｍＲＮＡ転写物（ＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿００１１９２．２）を産生する。ＢＣＭＡ遺伝子座に由来する第２のアンチセンス転写物が記載されており、これはＢＣＭＡ発現の調節において役割を果たし得る（Ｌａａｂｉ  Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９４，２２：１１４７−１１５４）。更なる転写物変異体について記載されているが、意義は不明である（Ｓｍｉｒｎｏｖａ  ＡＳ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００８，４５（４）：１１７９−１１８３。ＴＶ４としても知られる第２のアイソフォームが同定されている（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｑ０２２２３−２）。本明細書で使用されるとき、「ＢＣＭＡ」には、完全長野生型ＢＣＭＡの突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入、欠失及びスプライス変異体を含むタンパク質が含まれる。
【０１２３】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＤ１９」は分化クラスター１９タンパク質を指し、これは、白血病前駆細胞に検出可能な抗原決定基である。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔなどの公開データベースを参照することができる。例えば、ヒトＣＤ１９のアミノ酸配列はＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ１５３９１として参照することができ、ヒトＣＤ１９をコードするヌクレオチド配列は受託番号ＮＭ＿００１１７８０９８として参照することができる。本明細書で使用されるとき、「ＣＤ１９」には、完全長野生型ＣＤ１９の突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入、欠失及びスプライス変異体を含むタンパク質が含まれる。ＣＤ１９は、例えば、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病及び非ホジキンリンパ腫を含めたほとんどのＢ細胞系統癌で発現する。ＣＤ１９を発現する他の細胞を、以下の「ＣＤ１９の発現に関連する疾患」の定義に提供する。これは、Ｂ細胞前駆体の初期マーカーでもある。例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６−１７）：１１５７−１１６５（１９９７）を参照されたい。一態様においてＣＡＲＴの抗原結合部分は、ＣＤ１９タンパク質の細胞外ドメイン内にある抗原を認識し、それに結合する。一態様において、ＣＤ１９タンパク質は癌細胞に発現する。
【０１２４】
用語「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、その冠詞の文法上の指示対象の１つ又は１つより多い（即ち少なくとも１つ）を指す。例として、「要素」は、１つの要素又は１つより多い要素を意味する。
【０１２５】
用語「約」は、量、時間的な継続期間などの計測可能な値を参照するとき、指定される値から±２０％又は一部の例では±１０％、又は一部の例では±５％、又は一部の例では±１％、又は一部の例では±０．１％の変動が、かかる変動が本開示の方法の実施に適切であるものとして包含されることを意味する。
【０１２６】
用語「キメラ抗原受容体」又はそれに代えて「ＣＡＲ」は、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、以下に定義するとおりの刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）とを少なくとも含む組換えポリペプチド構築物を指す。一部の実施形態において、ＣＡＲポリペプチド構築物中のこれらのドメインは同じポリペプチド鎖にあり、例えばキメラ融合タンパク質を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲポリペプチド構築物中のこれらのドメインは互いに隣接しておらず、例えば本明細書に記載されるとおりのＲＣＡＲに提供されるとおり、例えば異なるポリペプチド鎖にある。
【０１２７】
一態様において、ＣＡＲの刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体に関連するζ鎖である。一態様において、細胞質シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３−ζの一次シグナル伝達ドメイン）を含む。一態様において、細胞質シグナル伝達ドメインは、以下に定義するとおりの少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能性シグナル伝達ドメインを更に含む。一態様において、共刺激分子は、４  １ＢＢ（即ちＣＤ１３７）、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ及び／又はＣＤ２８から選択される。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する少なくとも２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ−ｔｅｒ）に任意選択のリーダー配列を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインのＮ末端にリーダー配列を更に含み、リーダー配列は、任意選択で、細胞プロセシング及びＣＡＲの細胞膜局在化中に抗原認識ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から切断される。
【０１２８】
特異的腫瘍マーカーＸ（ここで、Ｘは、本明細書に記載されるとおりの腫瘍マーカーであり得る）を標的とする抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、シングルドメイン抗体又はＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα結合ドメイン又はＴＣＲβ結合ドメイン））を含むＣＡＲは、ＸＣＡＲとも称される。例えば、ＢＣＭＡを標的とする抗原結合ドメインを含むＣＡＲは、ＢＣＭＡＣＡＲと称される。ＣＡＲは、任意の細胞、例えば本明細書に記載されるとおりの免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）で発現させることができる。
【０１２９】
用語「シグナル伝達ドメイン」は、二次メッセンジャーを生成するか又はかかるメッセンジャーに応答してエフェクターとして機能することにより定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するように細胞内で情報を伝えることにより機能するタンパク質の機能性の一部分を指す。
【０１３０】
用語「抗体」は、本明細書で使用されるとき、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質又はポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル、多重鎖又は単鎖又はインタクトな免疫グロブリンであり得、且つ天然の供給源又は組換え供給源に由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。
【０１３１】
用語「抗体断片」は、インタクトな抗体又はその組換え変異体の少なくとも１つの部分を指し、抗原などの標的に対する抗体断片の認識及び特異的結合を付与するのに十分な、インタクトな抗体の抗原結合ドメイン、例えば抗原決定可変領域を指す。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、線形抗体、ｓｄＡｂなどの単一ドメイン抗体（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダ科ＶＨＨドメイン並びにヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結した２個以上、例えば２個のＦａｂ断片若しくは２個以上、例えば２個の単離ＣＤＲを含む二価断片などの抗体断片から形成される多特異性分子又は結合された抗体の他のエピトープ結合断片を含むが、これらに限定されない。抗体は、シングルドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ及びビス−ｓｃＦｖにも取り込まれ得る（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６，２００５を参照されたい）。抗体は、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドをベースとする足場にもグラフトされ得る（フィブロネクチンポリペプチドミニボディについて記載している米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照されたい）。
【０１３２】
用語「ｓｃＦｖ」は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片と、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片とを含む融合タンパク質を指し、軽鎖及び重鎖可変領域は、例えば、短い可動性ポリペプチドリンカーによって近接して連結されており、単鎖ポリペプチドとして発現することが可能であり、及びｓｃＦｖは、その由来であるインタクトな抗体の特異性を保持している。指定されない限り、本明細書で使用されるとき、ｓｃＦｖは、ＶＬ及びＶＨ可変領域を例えばポリペプチドのＮ端側及びＣ端側末端に対していずれの順序でも有し得、ｓｃＦｖは、ＶＬ−リンカー−ＶＨを含み得るか又はＶＨ−リンカー−ＶＬを含み得る。
【０１３３】
用語「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」は、本明細書で使用されるとき、抗原特異性及び結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸配列を指す。例えば、一般に、各重鎖可変領域に３つのＣＤＲがあり（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）、且つ各軽鎖可変領域に３つのＣＤＲがある（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤによって記載されるもの（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ  ２７３，９２７−９４８によって記載されるもの（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番スキーム）又はこれらの組み合わせを含め、幾つもの周知のスキームのいずれかを用いて決定することができる。Ｋａｂａｔ付番スキーム下では、一部の実施形態において、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のＣＤＲアミノ酸残基は３１〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）及び９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され；及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＣＤＲアミノ酸残基は、２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）及び８９〜９７（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｃｈｏｔｈｉａ付番スキーム下では、一部の実施形態において、ＶＨのＣＤＲアミノ酸は２６〜３２（ＨＣＤＲ１）、５２〜５６（ＨＣＤＲ２）及び９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され；及びＶＬのＣＤＲアミノ酸残基は２６〜３２（ＬＣＤＲ１）、５０〜５２（ＬＣＤＲ２）及び９１〜９６（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａを組み合わせた付番スキームでは、一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ又は両方の一部であるアミノ酸残基に対応する。例えば、一部の実施形態において、ＣＤＲは、ＶＨ、例えば哺乳類ＶＨ、例えばヒトＶＨのアミノ酸残基２６〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）及び９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）；及びＶＬ、例えば哺乳類ＶＬ、例えばヒトＶＬのアミノ酸残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）及び８９〜９７（ＬＣＤＲ３）に対応する。
【０１３４】
抗体又はその抗体断片を含む本発明のＣＡＲ組成物の一部分は、種々の形態で存在し得、例えば、抗原結合ドメインは、例えば、シングルドメイン抗体断片（ｓｄＡｂ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）又は例えばヒト化抗体を含め、ポリペプチド鎖の一部として発現する（Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６）。一態様において、本発明のＣＡＲ組成物の抗原結合ドメインは、抗体断片を含む。更なる態様において、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体断片を含む。
【０１３５】
本明細書で使用されるとき、用語「結合ドメイン」又は「抗体分子」（本明細書では「抗標的（例えば、ＢＣＭＡ）結合ドメイン」とも呼ばれる）は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質、例えば免疫グロブリン鎖又はその断片を指す。用語「結合ドメイン」又は「抗体分子」は、抗体及び抗体断片を包含する。ある実施形態において、抗体分子は、多重特異性抗体分子であり、例えば、これは、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対して特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列及び第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列によって特徴付けられる。用語「抗体重鎖」は、その天然に存在するコンホメーションをとる抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の大きい方を指し、通常、これが抗体の属するクラスを決定する。
【０１３６】
用語「抗体軽鎖」は、その天然に存在するコンホメーションをとる抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の小さい方を指す。カッパ（κ）及びラムダ（λ）軽鎖が２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
【０１３７】
用語「組換え抗体」は、例えば、バクテリオファージ又は酵母発現システムによって発現される抗体など、組換えＤＮＡ技術を用いて作成される抗体を指す。この用語は、抗体をコードするＤＮＡ分子であって、抗体タンパク質を発現するＤＮＡ分子又はその抗体を指定するアミノ酸配列の合成によって作成された抗体を意味するとも解釈されるべきであり、ＤＮＡ又はアミノ酸配列は、当技術分野において利用可能な周知の組換えＤＮＡ又はアミノ酸配列技術を用いて得られたものである。
【０１３８】
用語「抗原」又は「Ａｇ」は、免疫応答を引き起こす分子を指す。この免疫応答には、抗体産生又は特異的免疫適格細胞の活性化のいずれか又は両方が含まれ得る。当業者は、任意の巨大分子が、事実上あらゆるタンパク質又はペプチドを含め、抗原となり得ることを理解するであろう。更に、抗原は、組換えＤＮＡ又はゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者は、従って、免疫応答を生じさせるタンパク質をコードするヌクレオチド配列又は部分的ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、その用語が本明細書において使用されるとおりの「抗原」をコードすることを理解するであろう。更に、当業者は、抗原がある遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はないことを理解するであろう。本発明には、限定されないが、２つ以上の遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用が含まれること及びそれらのヌクレオチド配列が所望の免疫応答を生じさせるポリペプチドをコードするように様々な組み合わせで配列されることが容易に明らかである。更に、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要は全くないことを理解するであろう。抗原は、合成して作成され得るか、又は生体試料から得られ得るか、又はポリペプチド以外の巨大分子である可能性もあることが容易に明らかである。かかる生体試料には、限定されないが、組織試料、腫瘍試料、細胞又は体液が他の生物学的成分と共に含まれ得る。
【０１３９】
用語「抗腫瘍効果」は、限定はされないが、例えば腫瘍容積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加、腫瘍細胞増殖の減少、腫瘍細胞生存の減少又は癌性病態に関連する様々な生理学的症状の改善を含め、様々な手段に現れ得る生物学的効果を指す。「抗腫瘍効果」は、そもそも腫瘍の発生の予防における本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞及び抗体の能力にも現れ得る。
【０１４０】
用語「抗癌効果」は、限定されないが、例えば腫瘍容積の減少、癌細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加、癌細胞増殖の減少、癌細胞生存の減少又は癌性病態に関連する様々な生理学的症状の改善を含め、様々な手段によって明らかになり得る生物学的効果を指す。「抗癌効果」は、そもそも癌の発生を防ぐことにおけるペプチド、ポリヌクレオチド、細胞及び抗体の能力によっても明らかになり得る。用語「抗腫瘍効果」は、例えば、腫瘍体積減少、腫瘍細胞数減少、腫瘍細胞増殖減少又は腫瘍細胞生存減少を含むが、これらに限定されない種々の手段により顕在化され得る生物学的効果を指す。用語「自己」は、同じ個体に由来する任意の材料であって、後にその個体に再導入されることになる材料を指す。
【０１４１】
用語「同種異系」は、材料が導入される個体と同じ種の異なる動物に由来する任意の材料を指す。２つ以上の個体は、１つ以上の遺伝子座の遺伝子が同一でないとき、互いに同種異系であると言われる。一部の態様において、同じ種の個体からの同種異系材料は、抗原的に相互作用するのに十分に遺伝的に異なり得る。
【０１４２】
用語「異種」は、異なる種の動物に由来する移植片を指す。
【０１４３】
用語「アフェレーシス」は、本明細書で使用されるとき、ドナー又は患者の血液がドナー又は患者から取り出され、機器に通されて選択された特定の１つ又は複数の構成成分が選り分けられ、残りがドナー又は患者の循環に例えば返血法によって戻される、当技術分野で認められている体外プロセスを指す。従って、「アフェレーシス試料」に関連して、アフェレーシスを用いて採取された試料を指す。
【０１４４】
用語「併用」は、１つの投薬量単位形態における固定併用又は本発明の化合物及び併用パートナー（例えば、「療法剤」又は「共薬剤（ｃｏ−ａｇｅｎｔ）」とも称される以下に説明するとおりの別の薬物）が独立に同時に又は時間間隔内で個別に投与され得る、特にこれらの時間間隔によって併用パートナーが協同効果、例えば相乗効果を示すことが可能になる併用投与のいずれも指す。単一の成分がキットに又は個別に包装され得る。成分の一方又は両方（例えば、粉末又は液体）が投与前に所望の用量に再構成又は希釈され得る。用語「共投与」又は「併用投与」などは、本明細書において利用されるとき、それを必要としている単一の対象（例えば、患者）への選択された併用パートナーの投与を包含することが意味され、且つ薬剤が必ずしも同じ投与経路によって又は同じ時点で投与されるとは限らない治療レジメンを含むことが意図される。用語「医薬併用」は、本明細書で使用されるとき、２つ以上の活性成分を混合し又は組み合わせることにより生じる産物を意味し、活性成分の固定併用及び非固定併用の両方が含まれる。用語「固定併用」は、活性成分、例えば本発明の化合物と併用パートナーとが両方とも単一の実体又は投薬量の形態で同時に患者に投与されることを意味する。用語「非固定併用」は、活性成分、例えば本発明の化合物と併用パートナーとが両方とも別個の実体として患者に同時投与されるか、並行投与されるか又は具体的な制限時間なしに逐次投与されるかのいずれかであり、かかる投与が患者の体内にそれらの２つの化合物の治療上有効なレベルをもたらすことを意味する。後者は、カクテル療法、例えば３つ以上の活性成分の投与にも適用される。
【０１４５】
用語「癌」は、異常細胞の急速且つ無制御の成長によって特徴付けられる疾患を指す。癌細胞は、局所的に又は血流及びリンパ系を通じて体の他の部位に広がり得る。様々な癌の例が本明細書に記載され、限定されないが、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、皮膚癌、膵癌、結腸直腸癌、腎癌、肝癌、脳癌、リンパ腫、白血病、肺癌などが挙げられる。本明細書に記載される方法によって処置される好ましい癌には、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫又は非ホジキンリンパ腫が含まれる。
【０１４６】
用語「腫瘍」及び「癌」は、本明細書では同義的に使用され、例えば両方の用語とも固形及び液性、例えばびまん性又は循環性腫瘍を包含する。本明細書で使用されるとき、用語「癌」又は「腫瘍」は、前癌性並びに悪性の癌及び腫瘍を含む。
【０１４７】
「由来する」は、この用語が本明細書で使用される場合、第１の分子と第２の分子との間の関係を指す。これは、概して、第１の分子と第２の分子との間の構造的類似性に言及するものであり、第２の分子に由来する第１の分子に関する方法又は供給源を限定することを含意又は包含しない。例えば、ＣＤ３ζ分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインの場合、細胞内シグナル伝達ドメインは、求められる機能、即ち適切な条件下でシグナルを生成する能力を有するような十分なＣＤ３ζ構造を保持している。これは、細胞内シグナル伝達ドメインの特定の作製方法に限定することを含意又は包含せず、例えば細胞内シグナル伝達ドメインを提供するためにＣＤ３ζ配列で開始して不要な配列を欠失させるか、又は変異を付与して細胞内シグナル伝達ドメインに至らせなければならないことを意味しない。
【０１４８】
語句「ＢＣＭＡの発現に関連する疾患」には、限定はされないが、例えば癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌病態を含めた、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する疾患又はＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する病態；又はＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する非癌関連適応が含まれる。誤解を避けるために言えば、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患には、例えばＢＣＭＡを標的とする分子、例えば本明細書に記載されるＢＣＭＡ阻害薬による治療によって例えばＢＣＭＡ発現が下方制御されているため現在はＢＣＭＡを発現しないが、かつてはＢＣＭＡを発現した細胞に関連する病態が含まれ得る。一態様において、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌は白血病又はリンパ腫である。一態様において、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌は、分化型プラズマＢ細胞の悪性腫瘍である。一態様において、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌には、限定はされないが、例えばＢ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の急性白血病；慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の慢性白血病を含め、癌及び悪性腫瘍が含まれる。ＢＭＣＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する更なる癌又は血液学的病態は、限定はされないが、例えばＢ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症及び骨髄性血球細胞の無効な産生（又は異形成）によってまとめられる多様な血液学的病態の群である「前白血病」などを含む。一部の実施形態において、癌は、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫又は膠芽腫である。実施形態において、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患には、形質細胞増殖性障害、例えば無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス及びＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる）が含まれる。更にＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）発現の発現に関連する疾患には、限定はされないが、例えばＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する非定型及び／又は非古典的癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患、例えば本明細書に記載される癌、例えば前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵癌又は肺癌が含まれる。
【０１４９】
ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）に関連する非癌関連病態には、ウイルス感染症；例えば、ＨＩＶ、真菌感染症、例えばＣ．ネオフォルマンス（Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）；自己免疫疾患；例えば関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ又はループス）、尋常性天疱瘡及びシェーグレン症候群；炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎；粘膜免疫に関連する移植関連アロ特異的免疫障害；及び体液性免疫が重要な場合の生体物質（例えば、第ＶＩＩＩ因子）に対する望ましくない免疫応答が含まれる。実施形態において、ＢＣＭＡの発現に関連する非癌関連適応には、限定はされないが、例えば自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギー及び喘息）及び移植が含まれる。一部の実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、一時的に検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、続いて検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなくなった。
【０１５０】
用語「保存的配列改変」は、そのアミノ酸配列を含む抗体又は抗体断片の結合特性が大きい影響又は変化を被ることのないアミノ酸改変を指す。かかる保存的改変には、アミノ酸置換、付加及び欠失が含まれる。改変は、部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介性突然変異誘発など、当技術分野において公知の標準技法によって本発明の抗体又は抗体断片に導入することができる。保存的置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。従って、本発明のＣＡＲ内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基に置き換えることができ、及び変化したＣＡＲは、本明細書に記載される機能アッセイを用いて試験することができる。
【０１５１】
用語「刺激」は、刺激分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）がそのコグネイトリガンドに結合することによって誘導される、それにより、限定はされないがＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介したシグナル伝達など、シグナル伝達イベントを媒介する一次応答を指す。刺激は、ＴＧＦ−βの下方制御及び／又は細胞骨格構造の再編成など、特定の分子の発現の変化を媒介することができる。
【０１５２】
用語「刺激分子」は、Ｔ細胞シグナル伝達経路の少なくとも一部の側面に関して刺激する形でＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する１つ又は複数の一次細胞質シグナル伝達配列を提供するＴ細胞が発現する分子を指す。一部の実施形態において、ＣＡＲ内のＩＴＡＭ含有ドメインが、内因性ＴＣＲ複合体とは独立に一次ＴＣＲのシグナル伝達を再現する。一態様において、一次シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体がペプチドの負荷を有するＭＨＣ分子に結合することにより惹起され、それが、限定はされないが、増殖、活性化、分化などのＴ細胞応答の媒介につながる。刺激する様式で機能する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも称される）は、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含有し得る。本発明に特に有用なＩＴＡＭを含有する一次細胞質シグナル伝達配列の例には、限定はされないが、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ及びＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２に由来するものが含まれる。本発明の具体的なＣＡＲでは、本発明の任意の１つ以上のＣＡＲにおける細胞内シグナル伝達ドメインが、細胞内シグナル伝達配列、例えばＣＤ３−ζの一次シグナル伝達配列を含む。用語「抗原提示細胞」又は「ＡＰＣ」は、その表面上に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）と複合体化した外来抗原を提示するアクセサリー細胞などの免疫系細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞など）を指す。Ｔ細胞は、そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこうした複合体を認識し得る。ＡＰＣは、抗原をプロセシングしてそれをＴ細胞に提示する。
【０１５３】
「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、この用語が本明細書において使用されるとき、分子の細胞内部分を指す。実施形態において、細胞内シグナルドメインはエフェクター機能シグナルを伝達し、細胞が特化した機能を果たすように導く。細胞内シグナル伝達ドメイン全体が用いられ得るが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインのトランケートされた一部分が使用される範囲で、かかるトランケートされた一部分がエフェクター機能シグナルを伝達する限り、それがインタクトな鎖の代わりに使用され得る。従って用語の細胞内シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意のトランケートされた一部分を含むことが意図される。
【０１５４】
細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞、例えばＣＡＲＴ細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えば、ＣＡＲＴ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性及びサイトカインの分泌を含めたヘルパー活性が挙げられる。
【０１５５】
ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例示的一次細胞内シグナル伝達ドメインには、一次刺激又は抗原依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的共刺激細胞内シグナル伝達ドメインには、共刺激シグナル又は抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。例えば、ＣＡＲＴの場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインがＴ細胞受容体の細胞質配列を含むことができ、且つ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが共受容体又は共刺激分子からの細胞質配列を含むことができる。
【０１５６】
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含むことができる。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例には、限定はされないが、ＣＤ３ζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２に由来するものが含まれる。
【０１５７】
用語「ζ」又はそれに代えて「ζ鎖」、「ＣＤ３−ζ」又は「ＴＣＲ−ζ」は、ＣＤ２４７を指す。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ２０９６３が、例示的ヒトＣＤ３ζアミノ酸配列を提供する。「ζ刺激ドメイン」又はそれに代えて「ＣＤ３−ζ刺激ドメイン」又は「ＴＣＲ−ζ刺激ドメイン」は、ＣＤ３−ζの刺激ドメイン又はその変異体（例えば、突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入又は欠失を有する分子）を指す。一実施形態において、ζの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２〜１６４又はその変異体（例えば、突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入又は欠失を有する分子）を含む。一実施形態において、「ζ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３−ζ刺激ドメイン」は、配列番号１０２７又は１０３０として提供される配列又はその変異体（例えば、突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入又は欠失を有する分子）である。
【０１５８】
用語「共刺激分子」は、共刺激リガンドに特異的に結合して、それにより、限定はされないが増殖など、Ｔ細胞による共刺激応答を媒介するＴ細胞上のコグネイト結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に必要な、抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子には、限定はされないが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが含まれる。
【０１５９】
共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分を指す。
【０１６０】
細胞内シグナル伝達ドメインは、その由来である分子の細胞内部分全体若しくは天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体又はその機能性断片を含み得る。
【０１６１】
用語「４−１ＢＢ」は、ＣＤ１３７又は腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９を指す。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ２０９６３が例示的ヒト４−１ＢＢアミノ酸配列を提供する。「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、４−１ＢＢの共刺激ドメイン又はその変異体（例えば、突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入又は欠失を有する分子）を指す。一実施形態において、「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、配列番号１０２２として提供される配列又はその変異体（例えば、突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入又は欠失を有する分子）である。
【０１６２】
「免疫エフェクター細胞」は、この用語が本明細書で使用されるとき、免疫応答、例えば免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例としては、Ｔ細胞、例えばα／β  Ｔ細胞及びγ／δ  Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、肥満細胞及び骨髄由来食細胞が挙げられる。
【０１６３】
「免疫エフェクター機能又は免疫エフェクター応答」は、この用語が本明細書で使用されるとき、標的細胞の免疫攻撃を亢進させる又は促進する例えば免疫エフェクター細胞の機能又は応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能又は応答は、標的細胞の死滅又は成長若しくは増殖阻害を促進するＴ細胞又はＮＫ細胞の特性を指す。Ｔ細胞の場合、一次刺激及び共刺激が免疫エフェクター機能又は応答の例である。
【０１６４】
用語「エフェクター機能」は、細胞の特殊化した機能を指す。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性又はサイトカインの分泌を含めたヘルパー活性であり得る。
【０１６５】
用語「コードする」は、定義付けられたヌクレオチド配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）又は定義付けられたアミノ酸配列のいずれかを有する生物学的過程における他のポリマー及び巨大分子の合成の鋳型としての役割を果たす、遺伝子、ｃＤＮＡ又はｍＲＮＡなど、ポリヌクレオチド内の特異的ヌクレオチド配列の固有の特性及びそれによってもたらされる生物学的特性を指す。従って、遺伝子、ｃＤＮＡ又はＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳によって細胞又は他の生体系のタンパク質が産生される場合にタンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一の且つ通常配列表に提供されるものであるコード鎖及び遺伝子又はｃＤＮＡの転写鋳型として使用される非コード鎖の両方は、その遺伝子のｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードすると称することができる。
【０１６６】
特記されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の全てを含む。タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という語句には、そのタンパク質をコードするヌクレオチド配列が何らかのバージョンで１つ又は複数のイントロンを含み得る限りにおいて、イントロンも含まれ得る。
【０１６７】
用語「有効量」又は「治療有効量」は、本明細書では同義的に使用され、本明細書に記載されるとおりの化合物、製剤、材料又は組成物が特定の生物学的結果を達成するのに有効な量を指す。
【０１６８】
用語「内因性」は、生物、細胞、組織又は系由来の又はその内部で産生される任意の材料を指す。
【０１６９】
用語「外因性」は、生物、細胞、組織又は系の外側から導入されるか又はその外側で産生される任意の材料を指す。
【０１７０】
用語「発現」は、プロモーターによってドライブされる特定のヌクレオチド配列の転写及び／又は翻訳を指す。
【０１７１】
用語「トランスファーベクター」は、単離核酸を含む組成物であって、細胞内部への単離核酸の送達に使用し得る組成物を指す。当技術分野では、限定されないが、線状ポリヌクレオチド、イオン性又は両親媒性化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミド及びウイルスを含め、多くのベクターが公知である。従って、用語「トランスファーベクター」には自己複製プラスミド又はウイルスが含まれる。この用語は、例えば、ポリリジン化合物、リポソームなど、細胞への核酸のトランスファーを促進する非プラスミド及び非ウイルス化合物も更に含むものと解釈されなければならない。ウイルストランスファーベクターの例としては、限定されないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどが挙げられる。
【０１７２】
用語「発現ベクター」は、発現させるヌクレオチド配列に作動可能に連結した発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、他の発現用エレメントは、宿主細胞によって供給されるか又はインビトロ発現系に供給され得る。発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、ネイキッド又はリポソームに含まれる）及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）を含め、当技術分野において公知のもの全てが含まれる。
【０１７３】
用語「レンチウイルス」は、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞を感染させることができる点でレトロウイルスの中でユニークであり、レンチウイルスは、宿主細胞のＤＮＡに多量の遺伝情報を送達することができ、そのため、遺伝子デリバリーベクターの最も効率的な方法の１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ及びＦＩＶは、全てレンチウイルスの例である。
【０１７４】
用語「レンチウイルスベクター」は、特に、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９）に提供されるとおりの自己不活性化レンチウイルスベクターを含め、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。臨床で使用し得るレンチウイルスベクターの他の例としては、限定されないが、例えばＯｘｆｏｒｄ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａからのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子デリバリー技術、ＬｅｎｔｉｇｅｎからのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステムなどが挙げられる。非臨床タイプのレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者に公知であろう。
【０１７５】
用語「相同」又は「同一性」は、２つのポリマー分子間、例えば２つのＤＮＡ分子又は２つのＲＮＡ分子など、２つの核酸分子間又は２つのポリペプチド分子間におけるサブユニット配列同一性を指す。２つの分子の両方におけるサブユニット位置が同じ単量体サブユニットによって占有されるとき、例えば２つのＤＮＡ分子の各々の位置がアデニンによって占有される場合、それらは、その位置で相同又は同一である。２つの配列間の相同性は、一致する位置又は相同な位置の数の直接の関数である。例えば、２つの配列における位置の半分（例えば、１０サブユニット長のポリマーにおける５個の位置）が相同である場合、それらの２つの配列は、５０％相同である。位置の９０％（例えば、１０個中９個）が一致するか又は相同である場合、それらの２つの配列は、９０％相同である。
【０１７６】
「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はその断片（抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は他の抗原結合部分配列など）である。ほとんどの場合、ヒト化抗体及びその抗体断片は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体又は抗体断片）においてレシピエントの相補決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基に置き換えられているものである。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基に置き換えられる。更に、ヒト化抗体／抗体断片は、レシピエント抗体にも、移入されるＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見られない残基を含むことができる。これらの改変は抗体又は抗体断片の性能を更に精緻化及び最適化し得る。一般に、ヒト化抗体又はその抗体断片は、少なくとも１つ及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、且つＦＲ領域の全て又は大部分がヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体又は抗体断片は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含むことができる。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５，１９８６；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９，１９８８；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６，１９９２を参照されたい。
【０１７７】
「完全にヒト」は、分子全体がヒト起源であるか、又はヒト形態の抗体又は免疫グロブリンと同一のアミノ酸配列からなる抗体又は抗体断片などの免疫グロブリンを指す。
【０１７８】
用語「単離されている」は、自然状態から改変されているか又は取り出されていることを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸又はペプチドは、「単離されている」のではないが、その自然状態の共存する材料から部分的又は完全に分離された同じ核酸又はペプチドは、「単離されている」。単離核酸又はタンパク質は、実質的に精製された形態で存在することができるか、又は例えば宿主細胞など、非天然環境中に存在することができる。
【０１７９】
本発明との関連において、一般的に存在する核酸塩基に関して以下の略称が使用される。「Ａ」は、アデノシンを指し、「Ｃ」は、シトシンを指し、「Ｇ」は、グアノシンを指し、「Ｔ」は、チミジンを指し、及び「Ｕ」は、ウリジンを指す。
【０１８０】
用語「作動可能に連結された」又は「転写制御」は、調節配列と異種核酸配列との間における後者の発現をもたらす機能的な連結を指す。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的に関係した状態に置かれているとき、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を及ぼす場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されるＤＮＡ配列は、互いに連続し得、例えば２つのタンパク質コード領域をつなぎ合わせる必要がある場合、同じリーディングフレーム内にある。
【０１８１】
免疫原性組成物の「非経口」投与という用語は、例えば、皮下（ｓ．ｃ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、又は胸骨内注射、腫瘍内、又は輸注技法を含む。
【０１８２】
用語「核酸」又は「ポリヌクレオチド」は、一本鎖又は二本鎖の形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）及びそれらのポリマーを指す。具体的に限定しない限り、この用語には、参照核酸と同様の結合特性を有し、且つ天然に存在するヌクレオチドと同じように代謝される、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸が包含される。特に指示されない限り、ある詳細な核酸配列は、黙示的に、その保存的に改変された変異体（例えば、縮重コドン置換、例えば保存的置換）、アレル、オルソログ、ＳＮＰ及び相補配列並びに明示的に指示される配列も包含する。具体的には、縮重コドン置換、例えば保存的置換は、１つ以上の選択の（又は全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換されている配列を作成することによって達成し得る（Ｂａｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８（１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８（１９９４））。
【０１８３】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、同義的に使用され、ペプチド結合によって共有結合的に連結したアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質の配列又はペプチドの配列を含むことのできるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、互いにペプチド結合によってつなぎ合わされた２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用されるとき、この用語は、当技術分野では一般に例えばペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーとも称される短鎖と、当技術分野では概してタンパク質と称される、多数の種類があるより長い鎖との両方を指す。「ポリペプチド」には、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が特に含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組換えペプチド又はこれらの組み合わせが含まれる。
【０１８４】
用語「プロモーター」は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始させるのに必要である、細胞の合成機構又は導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。
【０１８５】
用語「プロモーター／調節配列」は、そのプロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を指す。一部の例では、この配列は、コアプロモーター配列であり得、他の例では、この配列は、エンハンサー配列及び遺伝子産物の発現に必要な他の調節エレメントも含み得る。プロモーター／調節配列は、例えば、遺伝子産物を組織特異的に発現するものであり得る。
【０１８６】
用語「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、細胞のほとんど又は全ての生理条件下で細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０１８７】
用語「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、実質的にプロモーターに対応する誘発物質が細胞に存在する場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０１８８】
用語「組織特異的」プロモーターは、遺伝子をコードするか又はそれによって指定されるポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、実質的に細胞がプロモーターに対応する組織型の細胞である場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０１８９】
用語「癌関連抗原」又は「腫瘍抗原」は、同義的に、癌細胞の表面上に完全に又は代わりに断片（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）として発現する分子（典型的にはタンパク質、炭水化物又は脂質）であって、癌細胞への薬理学的薬剤の優先的なターゲティングに有用な分子を指す。幾つかの実施形態において、腫瘍抗原は、正常細胞及び癌細胞の両方が発現するマーカー、例えば系列マーカー、例えばＢ細胞上のＣＤ１９である。幾つかの実施形態において、腫瘍抗原は、正常細胞と比較して癌細胞で過剰発現する（例えば、正常細胞と比較して１倍の過剰発現、２倍の過剰発現、３倍の過剰発現又はそれを超える）細胞表面分子である。幾つかの実施形態において、腫瘍抗原は、癌細胞で不適切に合成される細胞表面分子、例えば正常細胞に発現する分子と比較して欠失、付加又は変異を含む分子である。幾つかの実施形態において、腫瘍抗原は癌細胞の細胞表面にのみ、完全に又は代わりに断片（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）として発現することになり、正常細胞の表面に合成されないか又は発現しない。幾つかの実施形態において、本発明のＣＡＲは、ＭＨＣ提示ペプチドに結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体又は抗体断片）を含むＣＡＲを含む。通常、内因性タンパク質に由来するペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子のポケットに嵌まり、ＣＤ８＋Ｔリンパ球上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）によって認識される。ＭＨＣクラスＩ複合体は、あらゆる有核細胞によって構成的に発現される。癌では、ウイルス特異的及び／又は腫瘍特異的ペプチド／ＭＨＣ複合体が免疫療法用のユニークなクラスの細胞表面標的となる。ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−Ａ１又はＨＬＡ−Ａ２のコンテクストでウイルス又は腫瘍抗原由来のペプチドを標的とするＴＣＲ様抗体が記載されている（例えば、Ｓａｓｔｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．２０１１  ８５（５）：１９３５−１９４２；Ｓｅｒｇｅｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１  １１７（１６）：４２６２−４２７２；Ｖｅｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１０  １８４（４）：２１５６−２１６５；Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００１  ８（２１）：１６０１−１６０８；Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１３  ５（１７６）：１７６ｒａ３３；Ｔａｓｓｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２０１２  １９（２）：８４−１００を参照されたい）。例えば、ＴＣＲ様抗体は、ヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリなど、ライブラリのスクリーニングによって同定することができる。
【０１９０】
用語「腫瘍支持抗原」又は「癌支持抗原」は、互換的に、それ自体癌性ではないが、例えば増殖又は生存、例えば免疫細胞に対する抵抗性を促進することにより、癌細胞を支持する、細胞の表面に発現される分子（典型的には、タンパク質、炭水化物又は脂質）を指す。この型の例示的な細胞は、間質細胞及び骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を含む。腫瘍支持抗原自体は、抗原が癌細胞を支持する細胞上に存在する限り、腫瘍細胞を支持する役割を果たさなくてもよい。
【０１９１】
用語「可動性ポリペプチドリンカー」又は「リンカー」は、ｓｃＦｖとの関連で使用されるとき、可変重鎖領域と可変軽鎖領域とを共に連結するために単独又は組み合わせで使用されるグリシン及び／又はセリン残基などのアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。一実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎ（配列番号１０３８）（式中、ｎは、１つ以上の正の整数、例えばｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０である）を含む。一実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーには、限定されないが、（Ｇｌｙ４  Ｓｅｒ）４（配列番号１０３９）又は（Ｇｌｙ４  Ｓｅｒ）３（配列番号１０４０）が含まれる。別の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）、（ＧｌｙＳｅｒ）又は（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）（配列番号１０４１）の複数の繰り返しを含む。また、国際公開第２０１２／１３８４７５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されるリンカーも本発明の範囲内に含まれる。
【０１９２】
本明細書で使用されるとき、５’キャップ（ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ７−メチルグアノシンキャップ又はＲＮＡ  ｍ７Ｇキャップとも称される）は、転写開始直後に真核生物メッセンジャーＲＮＡの「前」又は５’末端に付加された修飾グアニンヌクレオチドである。５’キャップは、１番目の転写ヌクレオチドに連結される末端基からなる。その存在は、リボソームによる認識及びＲＮアーゼからの保護に重要である。キャップ付加は転写と結び付いており、それぞれが他方に影響を与えるようにして同時転写的に起こる。転写開始直後、合成されているｍＲＮＡの５’末端に、ＲＮＡポリメラーゼに関連するキャップ合成複合体が結合する。この酵素複合体は、ｍＲＮＡキャッピングに必要な化学反応を触媒する。合成は、多段階生化学反応として進行する。キャッピング部分は、ｍＲＮＡのその安定性又は翻訳効率などの機能を調整するために改変することができる。
【０１９３】
本明細書で使用されるとき、「インビトロ転写ＲＮＡ」は、インビトロ合成されたＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡを指す。概して、インビトロ転写ＲＮＡは、インビトロ転写ベクターから作成される。インビトロ転写ベクターは、インビトロ転写ＲＮＡの作成に使用される鋳型を含む。
【０１９４】
本明細書で使用されるとき、「ポリ（Ａ）」は、ポリアデニル化によってｍＲＮＡに付加される一連のアデノシンである。一過性発現のためのコンストラクトの好ましい実施形態において、ポリＡは、５０〜５０００（配列番号１０４３）、好ましくは６４より多く、より好ましくは１００より多く、最も好ましくは３００又は４００より多い（配列番号２０２４）。ポリ（Ａ）配列は、局在性、安定性又は翻訳効率などのｍＲＮＡ機能を調整するために化学的又は酵素的に改変することができる。
【０１９５】
本明細書で使用されるとき、「ポリアデニル化」は、メッセンジャーＲＮＡ分子へのポリアデニリル部分又はその改変変異体の共有結合を指す。真核生物では、ほとんどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子が３’末端でポリアデニル化される。３’ポリ（Ａ）テールは、酵素、ポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によってｍＲＮＡ前駆体に付加されるアデニンヌクレオチドの長い配列（多くの場合に数百個）である。高等真核生物では、ポリ（Ａ）テールは、特異的配列、ポリアデニル化シグナルを含む転写物に付加される。ポリ（Ａ）テール及びそれに結合したタンパク質は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼによる分解から保護するのに役立つ。ポリアデニル化は、転写終結、ｍＲＮＡの核外移行及び翻訳にも重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡからＲＮＡへの転写直後に核内で起こるが、更に後に細胞質でも起こり得る。転写が終結した後、ＲＮＡポリメラーゼに関連するエンドヌクレアーゼ複合体の作用によってｍＲＮＡ鎖が切断される。切断部位は、通常、切断部位近傍の塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在によって特徴付けられる。ｍＲＮＡが切断された後、切断部位の遊離３’末端にアデノシン残基が付加される。
【０１９６】
本明細書で使用されるとき、「一過性」は、数時間、数日間又は数週間の期間にわたる組み込まれないトランス遺伝子の発現を指し、この発現期間は、宿主細胞においてゲノムに組み込まれた場合又は安定プラスミドレプリコン中に含まれている場合の遺伝子の発現期間よりも短い。
【０１９７】
本明細書で使用される場合、用語「処置する」、「処置」及び「処置している」は、１つ以上の療法（例えば、本発明のＣＡＲなどの１つ以上の療法剤）の投与によってもたらされる増殖性障害の進行、重症度及び／若しくは持続期間の低減若しくは改善又は増殖性障害の１つ以上の症状（好ましくは１つ以上の認識し得る症状）の改善を指す。具体的な実施形態において、用語「処置する」、「処置」及び「処置している」は、患者には必ずしも認識できない、腫瘍の成長などの増殖性障害の少なくとも１つの計測可能な理学的パラメータの改善を指す。他の実施形態において、用語「処置する」、「処置」及び「処置している」は、増殖性障害の進行の物理的な、例えば認識し得る症状の安定化による阻害、生理学的な、例えば理学的パラメータの安定化による阻害のいずれか又は両方を指す。他の実施形態において、用語「処置する」、「処置」及び「処置している」は、腫瘍サイズ又は癌性細胞数の低減又は安定化を指す。
【０１９８】
用語「シグナル伝達経路」は、細胞のある部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達において役割を果たす種々のシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。語句「細胞表面受容体」は、シグナルを受け取り、且つ細胞の膜を越えてシグナルを伝える能力を有する分子及び分子複合体を含む。
【０１９９】
用語「対象」は、免疫応答を生じさせることのできる生きている生物（例えば、哺乳類、ヒト）を含むことが意図される。
【０２００】
用語の「実質的に精製された」細胞は、他の細胞型を本質的に含まない細胞を指す。実質的に精製された細胞とは、その天然に存在する状態でそれが通常結び付いている他の細胞型と分離されている細胞も指す。一部の例では、実質的に精製された細胞集団とは、均質な細胞集団を指す。他の例では、この用語は、単に、その自然状態でそれが天然に結び付いている細胞から分離されている細胞を指す。一部の態様において、これらの細胞は、インビトロで培養される。他の態様において、これら細胞は、インビトロで培養されない。
【０２０１】
用語「療法的」とは、本明細書で使用されるとき、治療を意味する。療法的効果は疾患状態の低減、抑制、寛解又は根絶によって達成される。
【０２０２】
用語「予防」は、本明細書で使用されるとき、疾患又は疾患状態の予防又はそれに対する予防的治療を意味する。
【０２０３】
本発明との関連において、「腫瘍抗原」又は「過剰増殖性障害抗原」又は「過剰増殖性障害に関連する抗原」は、特異的な過剰増殖性障害に共通する抗原を指す。特定の態様において、本発明の過剰増殖性障害抗原は、限定はされないが、原発性又は転移性黒色腫、胸腺腫、リンパ腫、肉腫、肺癌、肝癌、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、子宮癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎癌及び腺癌、例えば乳癌、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、卵巣癌、膵癌などを含めた癌又は形質細胞増殖性障害、例えば無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス及びＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる）に由来する。
【０２０４】
用語「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」は、外因性核酸を宿主細胞に移入させるか又は導入するプロセスを指す。「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」細胞は、外因性核酸をトランスフェクト、形質転換又は形質導入されたものである。細胞には初代対象細胞及びその子孫が含まれる。
【０２０５】
用語「特異的に結合する」は、試料中に存在するコグネイト結合パートナー（例えば、Ｔ細胞上に存在する刺激及び／又は共刺激分子）タンパク質を認識してそれに結合する抗体又はリガンドであって、しかし試料中の他の分子は実質的に認識又は結合しない抗体又はリガンドを指す。
【０２０６】
本明細書で使用されるとおりの「調節可能なキメラ抗原受容体（ＲＣＡＲ）」は、免疫エフェクター細胞内にあるとき、標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性及び細胞内シグナル生成をその細胞に付与するポリペプチドの組、最も単純な実施形態では典型的に２つのポリペプチドを指す。一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、本明細書にＣＡＲ分子に関連して定義されるとおりの刺激分子及び／又は共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）とを少なくとも含む。一部の実施形態において、ＲＣＡＲのポリペプチドの組は、互いに連続しておらず、例えば異なるポリペプチド鎖にある。一部の実施形態において、ＲＣＡＲは二量化スイッチを含み、このスイッチは二量化分子の存在を受けてポリペプチドを互いにカップリングすることができ、例えば抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインにカップリングすることができる。一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、本明細書に記載されるとおりの細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）、例えばＲＣＡＲ発現細胞（本明細書では「ＲＣＡＲＸ細胞」とも称される）に発現する。ある実施形態において、ＲＣＡＲＸ細胞はＴ細胞であり、ＲＣＡＲＴ細胞と称される。ある実施形態において、ＲＣＡＲＸ細胞はＮＫ細胞であり、ＲＣＡＲＮ細胞と称される。ＲＣＡＲは、ＲＣＡＲ発現細胞に標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性及び調節可能な細胞内シグナル生成又は増殖を付与することができ、これがＲＣＡＲ発現細胞の免疫エフェクター特性を最適化し得る。実施形態において、ＲＣＡＲ細胞は、少なくとも一部には抗原結合ドメインに頼ることにより、その抗原結合ドメインが結合する抗原を含む標的細胞に対する特異性を付与する。
【０２０７】
「膜アンカー」又は「膜繋留ドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、細胞外又は細胞内ドメインを細胞膜にアンカリングするのに十分なポリペプチド又は部分、例えばミリストイル基を指す。
【０２０８】
「スイッチドメイン」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲに言及する場合に使用されるとき、二量化分子の存在下で別のスイッチドメインと会合する実体、典型的にはポリペプチドベースの実体を指す。この会合の結果、第１のスイッチドメインに連結、例えば融合した第１の実体と、第２のスイッチドメインに連結、例えば融合した第２の実体との機能的カップリングが生じる。第１及び第２のスイッチドメインは、まとめて二量化スイッチと称される。実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに同じであり、例えば、これらは、同じ一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、まとめてホモ二量化スイッチと称される。実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに異なり、例えば、これらは、異なる一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、まとめてヘテロ二量化スイッチと称される。実施形態において、スイッチは、細胞内である。実施形態において、スイッチは、細胞外である。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばＦＫＢＰ又はＦＲＢベースであり、二量化分子は、小分子、例えばラパログである。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃペプチドに結合するｓｃＦｖであり、二量化分子は、ポリペプチド、その断片又はポリペプチドの多量体、例えば１つ以上のｍｙｃ  ｓｃＦｖに結合するｍｙｃリガンド又はｍｙｃリガンドの多量体である。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃ受容体であり、二量化分子は、抗体又はその断片、例えばｍｙｃ抗体である。
【０２０９】
「二量化分子」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲに言及する場合に使用されるとき、第１のスイッチドメインと第２のスイッチドメインとの会合を促進する分子を指す。実施形態において、二量化分子は、対象に天然に存在しないか、又は有意な二量化をもたらし得る濃度で存在しない。実施形態において、二量化分子は、小分子、例えばラパマイシン又はラパログ、例えばＲＡＤ００１である。
【０２１０】
用語「生物学的に均等」は、参照用量又は参照量の参照化合物（例えば、ＲＡＤ００１）によって生じる効果と均等な効果を生じさせるのに必要な量の参照化合物（例えば、ＲＡＤ００１）以外の薬剤を指す。一実施形態において、効果は、例えば、Ｐ７０  Ｓ６キナーゼ阻害によって測定したときの、例えばインビボ又はインビトロアッセイで評価したときの、例えば本明細書に記載されるアッセイ、例えばブーレイ（Ｂｏｕｌａｙ）アッセイ又はウェスタンブロットによるリン酸化Ｓ６レベルの測定によって測定したときのｍＴＯＲ阻害レベルである。一実施形態において、効果は、細胞選別によって測定したときのＰＤ−１陽性／ＰＤ−１陰性Ｔ細胞の比の変化である。一実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤の生物学的に均等な量又は用量は、参照用量又は参照量の参照化合物と同じレベルのＰ７０  Ｓ６キナーゼ阻害を達成する量又は用量である。一実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤の生物学的に均等な量又は用量は、参照用量又は参照量の参照化合物と同じレベルのＰＤ−１陽性／ＰＤ−１陰性Ｔ細胞の比の変化を達成する量又は用量である。
【０２１１】
用語「低免疫増強用量」は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばアロステリックｍＴＯＲ阻害剤、例えばＲＡＤ００１又はラパマイシン又は触媒ｍＴＯＲ阻害剤と併せて使用されるとき、例えばＰ７０  Ｓ６キナーゼ活性の阻害によって測定したときのｍＴＯＲ活性を、完全ではないが、部分的に阻害するｍＴＯＲ阻害剤の用量を指す。ｍＴＯＲ活性の、例えばＰ７０  Ｓ６キナーゼの阻害による評価方法は、本明細書で考察される。用量は、完全な免疫抑制をもたらすには不十分であるが、免疫応答を増強するには十分である。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の低免疫増強用量は、ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の数の減少及び／又はＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の数の増加又はＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の比の増加をもたらす。
【０２１２】
一実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤の低免疫増強用量は、ナイーブＴ細胞の数の増加をもたらす。一実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤の低免疫増強用量は、以下の１つ以上をもたらす：
例えばメモリーＴ細胞上、例えばメモリーＴ細胞前駆体上の以下のマーカー：ＣＤ６２Ｌｈｉｇｈ、ＣＤ１２７ｈｉｇｈ、ＣＤ２７＋及びＢＣＬ２の１つ以上の発現の増加；
例えばメモリーＴ細胞上、例えばメモリーＴ細胞前駆体上のＫＬＲＧ１の発現の減少；及び
メモリーＴ細胞前駆体、例えば以下の特性：ＣＤ６２Ｌｈｉｇｈの増加、ＣＤ１２７ｈｉｇｈの増加、ＣＤ２７＋の増加、ＫＬＲＧ１の減少及びＢＣＬ２の増加のいずれか１つ又は組み合わせを有する細胞の数の増加。
ここで、上記に記載される変化のいずれも、例えば未処置対象と比較した場合、例えば少なくとも一過性に起こる。
【０２１３】
「難治性」は、本明細書で使用される場合、処置に応答しない疾患、例えば癌を指す。実施形態において、難治性癌は、処置の開始前又は開始時点で処置に抵抗性であり得る。他の実施形態において、難治性癌は、処置中に抵抗性になり得る。難治性癌は、抵抗性癌とも称される。
【０２１４】
「再発した」又は「再発する」は、本明細書で使用されるとき、改善又は奏効期間後、例えば療法、例えば癌療法の先行する処置後における疾患（例えば、癌）又は癌などの疾患の徴候及び症状の再出現を指す。例えば、奏効期間は、特定の閾値を下回る、例えば２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％又は１％を下回るレベルの癌細胞を含み得る。再出現は、特定の閾値を上回る、例えば２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％又は１％を上回るレベルの癌細胞を含み得る。
【０２１５】
一態様において、療法の「奏効例」は、療法を受けた後に完全奏効、最良部分奏効又は部分奏効を得ている対象であり得る。一態様において、療法の「非奏効例」は、療法を受けた後に微小奏効、病勢安定又は病勢進行を得ている対象であり得る。一部の実施形態において、対象は、多発性骨髄腫を有し、多発性骨髄腫療法に対する対象の奏効は、例えば、表７に記載されるとおりの、例えばＫｕｍａｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．１７，ｅ３２８−３４６（２０１６）（本明細書によって全体として参照により本明細書に援用される）に開示されるとおりの２０１６年版ＩＭＷＧ基準に基づいて決定される。
【０２１６】
範囲：本開示全体を通じて、本発明の様々な態様が範囲の形式で提示され得る。範囲の形式での記載は、単に便宜上及び簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する確固たる限定と解釈されてはならないことが理解されるべきである。従って、範囲の記載は、具体的に開示される全ての可能な部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値を有すると考えられなければならない。例えば、１〜６などの範囲の記載は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などの具体的に開示される部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値、例えば１、２、２．７、３、４、５、５．３及び６を有すると考えられなければならない。別の例として、９５〜９９％の同一性などの範囲は、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するものを含み、且つ９６〜９９％、９６〜９８％、９６〜９７％、９７〜９９％、９７〜９８％及び９８〜９９％の同一性などの部分範囲を含む。これは、範囲の幅に関わらず適用される。
【０２１７】
本明細書で使用される用語「遺伝子編集系」は、前記系により標的とされる遺伝子ＤＮＡの部位又はその近辺の１つ以上の核酸の改変、例えば欠失を導き及び実施する、系、例えば１つ以上の分子を指す。遺伝子編集系は当技術分野において公知であり、以下により詳細に記載する。
【０２１８】
具体的な官能基及び化学用語の定義について以下に更に詳細に記載する。化学元素は、ＣＡＳ方式元素周期表（ｔｈｅ  Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ），Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈ  Ｅｄ．，内表紙に従って特定され、及び具体的な官能基は概してそこに記載されるとおり定義される。加えて、有機化学の一般的原理並びに具体的な官能部分及び反応性について、Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，１９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；及びＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７に記載される。
【０２１９】
用語「アルキル」は、本明細書で使用されるとき、本明細書においてそれぞれＣ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル及びＣ１〜Ｃ６アルキルと称される１〜１２、１〜１０又は１〜６個の炭素原子の直鎖基又は分枝状基など、一価飽和直鎖又は分枝鎖炭化水素を指す。アルキル基の例としては、限定はされないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｓｅｃ−ペンチル、イソ−ペンチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ｓｅｃ−ヘキシルなどが挙げられる。
【０２２０】
用語「アルケニル」及び「アルキニル」は、本明細書で使用されるとき、上記に記載されるアルキルと長さ及び可能な置換が類似しているが、それぞれ二重又は三重結合を少なくとも１つ含む不飽和脂肪族基を指す。例示的アルケニル基としては、限定はされないが、−ＣＨ＝ＣＨ２及び−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２が挙げられる。
【０２２１】
用語「アリール」は、本明細書で使用されるとき、単環式、二環式又は多環式炭化水素環系を指し、ここで、少なくとも１つの環が芳香族である。代表的なアリール基としては、フェニル（例えば、（Ｃ６）アリール）、ナフチル（例えば、（Ｃ１０）アリール）及びアントラセニル（例えば、（Ｃ１４）アリール）など、完全に芳香族性の環系並びにインダニル、フタルイミジル、ナフトイミジル（ｎａｐｈｔｈｉｍｉｄｙｌ）又はテトラヒドロナフチルなど、芳香族炭素環が１つ以上の非芳香族炭素環に縮合している環系が挙げられる。
【０２２２】
用語「カルボシクリル」は、本明細書で使用されるとき、３〜１８個の炭素原子を含有する単環式又は縮合、スピロ縮合及び／又は架橋二環式又は多環式炭化水素環系を指し、ここで、各環が完全に飽和しているか、又は１つ以上の不飽和単位を含有するが、芳香族である環はないかのいずれかである。代表的なカルボシクリル基としては、シクロアルキル基（例えば、シクロペンチル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなど）及びシクロアルケニル基（例えば、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロペンタジエニルなど）が挙げられる。
【０２２３】
用語「カルボニル」は、本明細書で使用されるとき、−Ｃ＝Ｏを指す。
【０２２４】
用語「シアノ」は、本明細書で使用されるとき、−ＣＮを指す。
【０２２５】
用語「ハロ」又は「ハロゲン」は、本明細書で使用されるとき、フッ素（フルオロ、−Ｆ）、塩素（クロロ、−Ｃｌ）、臭素（ブロモ、−Ｂｒ）又はヨウ素（ヨード、−Ｉ）を指す。
【０２２６】
用語「ヘテロアルキル」は、本明細書で使用されるとき、一価飽和直鎖又は分枝状アルキル鎖を指し、ここで、鎖中の少なくとも１個の炭素原子がＯ、Ｓ又はＮなどのヘテロ原子に置き換えられており、但し置換後に鎖は少なくとも１個の炭素原子を含むものとする。一部の実施形態において、ヘテロアルキル基は、例えば、１〜１２、１〜１０又は１〜６個の炭素原子を含み得、本明細書においてＣ１〜Ｃ１２ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキル及びＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルと称される。特定の例では、ヘテロアルキル基は、アルキル鎖中に１、２、３又は４個の個々の炭素原子の代わりに１、２、３又は４個の独立に選択されるヘテロ原子を含む。代表的なヘテロアルキル基としては、−ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ３などが挙げられる。
【０２２７】
用語「ヘテロアリール」は、本明細書で使用されるとき、単環式、二環式又は多環式環系を指し、ここで、少なくとも１つの環が芳香族であるとともにヘテロ原子を含み；及びヘテロシクリル（以下に定義するとおり）である環は、他にない。代表的なヘテロアリール基としては、（ｉ）各環がヘテロ原子を含み、且つ芳香族である環系、例えばイミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、トリアゾリル、ピロリル、フラニル、チオフェニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、インドリジニル、プリニル、ナフチリジニル及びプテリジニル；（ｉｉ）各環が芳香族又はカルボシクリルであり、少なくとも１つの芳香環がヘテロ原子を含み、且つ少なくとも１つの他の環が炭化水素環である環系又は例えば、インドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、ピリド［２，３−ｂ］−１，４−オキサジン−３（４Ｈ）−オン、チアゾロ−［４，５−ｃ］−ピリジニル、４，５，６，７−テトラヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピリジニル、５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロリル、４，５，６，７，８−テトラヒドロキノリニル及び５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニル；及び（ｉｉｉ）各環が芳香族又はカルボシクリルであり、且つ少なくとも１つの芳香環が別の芳香環と橋頭ヘテロ原子を共有する環系、例えば４Ｈ−キノリジニルが挙げられる。特定の実施形態において、ヘテロアリールは単環式又は二環式環であり、ここで、前記環の各々は、５又は６個の環原子を含有し、前記環原子の１、２、３又は４個は、Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択されるヘテロ原子である。
【０２２８】
用語「ヘテロシクリル」は、本明細書で使用されるとき、単環式又は縮合、スピロ縮合及び／又は架橋二環式及び多環式環系を指し、ここで、少なくとも１つの環は、飽和又は部分不飽和であり（しかし芳香族ではない）、且つヘテロ原子を含む。ヘテロシクリルは、任意のヘテロ原子又は炭素原子でそのペンダント基に結合して、それにより安定構造をもたらすものであり得、且つ環原子のいずれかが任意選択で置換され得る。代表的なヘテロシクリルとしては、（ｉ）全ての環が非芳香族であり、且つ少なくとも１つの環がヘテロ原子を含む環系、例えばテトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピロリジニル、ピロリドニル、ピペリジニル、ピロリニル、デカヒドロキノリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ジアゼピニル、オキサゼピニル、チアゼピニル、モルホリニル及びキヌクリジニル；（ｉｉ）少なくとも１つの環が非芳香族であり、且つヘテロ原子を含み、少なくとも１つの他の環が芳香族炭素環である環系、例えば１，２，３，４−テトラヒドロキノリニル；及び（ｉｉｉ）少なくとも１つの環が非芳香族であり、且つヘテロ原子を含み、少なくとも１つの他の環が芳香族であり、且つヘテロ原子を含む環系、例えば３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４，３−ｃ］ピリジニル及び１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリジニルが挙げられる。特定の実施形態において、ヘテロシクリルは単環式又は二環式環であり、ここで、前記環の各々は、３〜７個の環原子を含有し、前記環原子の１、２、３又は４個は、Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択されるヘテロ原子である。
【０２２９】
本明細書に記載されるとおり、本発明の化合物は、「任意選択で置換されている」部分を含み得る。一般に、用語「置換されている」は、その前に用語「任意選択で」が付くか否かに関わらず、指示部分の１つ以上の水素が好適な置換基に置き換えられていることを意味する。特に指示されない限り、「任意選択で置換されている」基は、その基の各置換可能な位置に好適な置換基を有し得、所与の構造における２つ以上の位置が指定の群から選択される２つ以上の置換基に置換され得るとき、置換基は各位置で同じであるか又は異なるかのいずれでもあり得る。本発明下で想定される置換基の組み合わせは、好ましくは、安定した又は化学的に実現可能な化合物の形成をもたらすものである。用語「安定した」は、本明細書で使用されるとき、本明細書に開示される目的の１つ以上のため、その生成、検出及び特定の実施形態では、その回収、精製及び使用を可能にする条件に供されたときに実質的に変わらない化合物を指す。
【０２３０】
用語「オキソ」は、本明細書で使用されるとき、＝Ｏを指す。
【０２３１】
用語「チオカルボニル」は、本明細書で使用されるとき、Ｃ＝Ｓを指す。
【０２３２】
本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容可能な塩」は、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応などを伴うことなくヒト及び下等動物の組織との接触における使用に好適な、且つ合理的なリスク対効果比に相応の塩を指す。薬学的に許容可能な塩は、当技術分野において周知である。例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．が、薬学的に許容可能な塩について、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６，１−１９（参照により本明細書に援用される）に詳細に記載している。本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩としては、好適な無機及び有機酸及び塩基から誘導されるものが挙げられる。薬学的に許容可能な非毒性の酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸及び過塩素酸などの無機酸又は酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸若しくはマロン酸などの有機酸と共に形成されるか、又はイオン交換など、当技術分野において公知の他の方法を用いることにより形成されるアミノ基の塩である。他の薬学的に許容可能な塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。適切な塩基から誘導される塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩及びＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４−塩が挙げられる。代表的なアルカリ又はアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。更なる薬学的に許容可能な塩としては、適切な場合、非毒性アンモニウム、第４級アンモニウム並びにハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級スルホン酸アルキル及びアリールスルホン酸塩などの対イオンを使用して形成されるアミンカチオンが挙げられる。
【０２３３】
用語「溶媒和物」は、通常は加溶媒分解反応によって溶媒と会合している形態の化合物を指す。この物理的会合には、水素結合が含まれ得る。従来の溶媒としては、水、メタノール、エタノール、酢酸、ＤＭＳＯ、ＴＨＦ、ジエチルエーテルなどが挙げられる。式（Ｉ）、式（Ｉ−ａ）及び／又は式（ＩＩ）の化合物は、例えば結晶形態で調製及び溶媒和され得る。好適な溶媒和物には、薬学的に許容可能な溶媒和物が含まれ、更に化学量論的溶媒和物及び非化学量論的溶媒和物の両方が含まれる。特定の例では、溶媒和物は、例えば１つ以上の溶媒分子が結晶性固体の結晶格子に取り込まれるとき、分離が可能なものであり得る。「溶媒和物」は、溶相の溶媒和物及び分離可能な溶媒和物の両方を包含する。代表的な溶媒和物としては、水和物、エタノール和物及びメタノール和物が挙げられる。
【０２３４】
用語「水和物」は、水と会合している化合物を指す。典型的には、化合物の水和物中に含まれる水分子の数は、水和物中の化合物分子の数と一定の比である。従って、化合物の水和物は、例えば一般式Ｒ・ｘ  Ｈ２Ｏによって表され得、式中、Ｒは化合物であり、及び式中、ｘは０より大きい数である。所与の化合物が、例えば、一水和物（ｘが１である）、低級水和物（ｘが０より大きく１より小さい数である、例えば半水和物（Ｒ・０．５  Ｈ２Ｏ））及び多水和物（ｘが１より大きい数である、例えば二水和物（Ｒ・２  Ｈ２Ｏ）及び六水和物（Ｒ・６  Ｈ２Ｏ））を含め、２種類以上の水和物を形成し得る。
【０２３５】
同じ分子式を有するが、性質又はその原子の結合順序若しくはその原子の空間配置が異なる化合物は、「異性体」と称されることが理解されるべきである。その原子の空間配置が異なる異性体は、「立体異性体」と称される。
【０２３６】
互いに鏡像でない立体異性体は「ジアステレオマー」と称され、互いに重ね合わせることができない鏡像である立体異性体は「エナンチオマー」と称される。例えば、化合物が不斉中心を有するとき、それは４つの異なる基に結合しており、エナンチオマーの対が可能である。エナンチオマーはその不斉中心の絶対配置によって特徴付けることができ、カーン−プレローグのＲ，Ｓ順位則によって記述されるか、又は分子による偏光面の回転の仕方によって記述され、右旋性又は左旋性（即ちそれぞれ（＋）又は（−）異性体）と指定される。キラル化合物は、個々のエナンチオマー又はその混合物のいずれとして存在し得る。等しい割合のエナンチオマーを含有する混合物は、「ラセミ混合物」と呼ばれる。
【０２３７】
用語「互変異性体」は、互換性のある特定の化合物構造形態であって、水素原子及び電子の置換の点で異なる化合物を指す。従って、２つの構造はπ電子及び原子（通常はＨ）の移動を通じて平衡になり得る。例えば、エノール類とケトン類とは、酸性又は塩基のいずれかで処理することによりそれらが迅速に相互変換されるため、互変異性体である。互変異性の別の例は、同様に酸又は塩基で処理することにより形成される酸形態及びニトロ形態のフェニルニトロメタンである。
【０２３８】
互変異性型は、目的の化合物の最適な化学反応性及び生物学的活性の達成に関連性があり得る。
【０２３９】
特に指定されない限り、本明細書に示される構造には、あらゆる異性体（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー及び幾何（又は配座））型の構造；例えば、各不斉中心についてのＲ及びＳ配座、Ｚ及びＥ二重結合異性体並びにＺ及びＥ配座異性体も含まれることが意図される。従って、本化合物の単一の立体化学異性体並びにエナンチオマー、ジアステレオマー及び幾何（又は配座）混合物が本発明の範囲内にある。特に指定されない限り、本発明の化合物のあらゆる互変異性型が本発明の範囲内にある。加えて、特に指定されない限り、本明細書に示される構造には、１つ以上の同位体が濃縮された原子が存在する点のみが異なる化合物も含まれることが意図される。例えば、水素からの重水素又はトリチウムによる置換又は炭素からの１３Ｃ濃縮又は１４Ｃ濃縮炭素による置換を含む本構造を有する化合物は、本発明の範囲内にある。かかる化合物は、例えば、分析ツールとして、生物学的アッセイのプローブとして又は本発明における療法剤として有用である。
【０２４０】
特定のエナンチオマーが好ましい場合、それは、一部の実施形態では、対応するエナンチオマーを実質的に含まずに提供され得、「光学的に濃縮された」とも称され得る。「光学的に濃縮された」は、本明細書で使用されるとき、その化合物の著しく大きい割合が１つのエナンチオマーで構成されていることを意味する。特定の実施形態において、化合物は少なくとも約９０重量％が好ましいエナンチオマーで構成されている。他の実施形態において、化合物は少なくとも約９５重量％、９８重量％又は９９重量％が好ましいエナンチオマーで構成されている。好ましいエナンチオマーは、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）並びにキラル塩の形成及び結晶化を含めた、当業者に公知の任意の方法によってラセミ混合物から分離され得るか又は不斉合成によって調製され得る。例えば、Ｊａｃｑｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８１）；Ｗｉｌｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３３：２７２５（１９７７）；Ｅｌｉｅｌ，Ｅ．Ｌ．Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，ＮＹ，１９６２）；Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．Ｈ．Ｔａｂｌｅｓ  ｏｆ  Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｐ．２６８（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ，Ｅｄ．，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ，ＩＮ  １９７２）を参照されたい。
【０２４１】
本明細書における組成物及び方法の様々な態様を以下に更に詳細に記載する。本明細書全体を通じて追加的な定義が示される。
【０２４２】
詳細な説明
本発明は、少なくとも一部には、ＢＣＭＡ発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法を提供し、この方法は、ＢＣＭＡに結合するＣＡＲ分子を発現する細胞（例えば、細胞集団）（「ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞」）の有効量を対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患は、血液癌、例えばＡＬＬ、ＣＬＬ、ＤＬＢＣＬ又は多発性骨髄腫である。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、患者試料からのバイオマーカーレベルの取得に基づいて投与される。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、第２の療法と併用して対象に投与される。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法及び第２の療法は同時投与又は逐次投与される。
【０２４３】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
一態様において、本明細書には、ＣＡＲ分子を発現する細胞（例えば、細胞集団）を使用する方法が開示される。一態様において、例示的ＣＡＲ構築物は、任意選択のリーダー配列（例えば、本明細書に記載されるリーダー配列）、抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される抗原結合ドメイン）、ヒンジ（例えば、本明細書に記載されるヒンジ領域）、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載される膜貫通ドメイン）及び細胞内刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載される細胞内刺激ドメイン）を含む。一態様において、例示的ＣＡＲ構築物は、任意選択のリーダー配列（例えば、本明細書に記載されるリーダー配列）、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される抗原結合ドメイン）、ヒンジ（例えば、本明細書に記載されるヒンジ領域）、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載される膜貫通ドメイン）、細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載される共刺激シグナル伝達ドメイン）及び／又は細胞内一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載される一次シグナル伝達ドメイン）を含む。
【０２４４】
本明細書に記載されるＣＡＲ分子の一部となり得る様々な成分の非限定的な例の配列を表１に掲載し、ここで、「ａａ」は、アミノ酸を表し、「ｎａ」は、対応するペプチドをコードする核酸を表す。
【０２４５】
【表１】
2021509009.tif 000005
【０２４６】
【表２】
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【０２４７】
【表３】
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【０２４８】
【表４】
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【０２４９】
【表５】
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【０２５０】
【表６】
2021509009.tif 000010
【０２５１】
ＣＡＲ抗原結合ドメイン
一態様において、抗原結合ドメインを含むＣＡＲの一部分は、腫瘍抗原、例えば本明細書に記載される腫瘍抗原を標的とする抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ−１；Ｃ型レクチン様分子−１、ＣＤ３３；上皮成長因子受容体変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバー；Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（ＴｎＡｇ）又は（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットα−２；メソテリン；インターロイキン１１受容体α（ＩＬ−１１Ｒａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ−β）；ステージ特異的胎児抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体α；受容体チロシンプロテインキナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１、細胞表面結合（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニット、ベータ型、９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐ１００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）及びエーベルソンマウス白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ１（Ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質（ｂｃｒ−ａｂｌ）；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体β；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；グロボＨグリコセラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレノセプターβ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ  ９���ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；メラノーマ関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座変異体遺伝子６、染色体１２ｐに位置する（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリー、メンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンギオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；メラノーマ癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；メラノーマ癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；サーバイビング；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１、Ｔ細胞によって認識されるメラノーマ抗原１；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；サルコーマ転座切断点；メラノーマアポトーシス阻害因子（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通型プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳ１）；リンパ球特異的プロテインチロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫、Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；後期糖化最終産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓遍在性１（ＲＵ１）；腎臓遍在性２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒトパピローマウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ヒトパピローマウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲ又はＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；又は免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）に結合する。
【０２５２】
抗原結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体及びその機能性断片、例えば、限定されないが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及びラクダ科動物由来ナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）などのシングルドメイン抗体及び組換えフィブロネクチンドメイン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）又はその断片、例えば単鎖ＴＣＲなど、抗原結合ドメインとして機能することが当技術分野において公知の代替的足場を含め、抗原に結合する任意のドメインであり得る。一部の例では、抗原結合ドメインは、ＣＡＲが最終的に使用されることになる同じ種に由来することが有益である。例えば、ヒトでの使用には、ＣＡＲの抗原結合ドメインが抗体又は抗体断片の抗原結合ドメインにヒト又はヒト化残基を含むことが有益であり得る。
【０２５３】
ＣＡＲ膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、種々の実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに結合する膜貫通ドメインを含むように設計できる。膜貫通ドメインは、膜貫通領域に隣接した１つ以上の更なるアミノ酸、例えば膜貫通が由来するタンパク質の細胞外領域と関係する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０〜最大で１５のアミノ酸）及び／又は膜貫通タンパク質が由来するタンパク質の細胞内領域と関係する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０〜最大で１５のアミノ酸）を含み得る。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの他のドメインの１つと関連するものである。ある例において、膜貫通ドメインは、このようなドメインが、同一又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインと結合するのを避けるように、例えば受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するように選択され又はアミノ酸置換による改変ができる。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ発現細胞の細胞表面上の別のＣＡＲとホモ二量体化できる。異なる態様において、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、同じＣＡＲＴに存在する天然結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小化するように改変又は置換され得る。
【０２５４】
膜貫通ドメインは、天然由来又は組み換え源由来であり得る。源が天然であるとき、ドメインは、あらゆる膜結合又は膜貫通タンパク質由来であり得る。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲが標的に結合したときは常に細胞内ドメインにシグナル伝達できる。本発明において特に有用な膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の少なくとも膜貫通領域を含み得る。一実施形態において、膜貫通ドメインは、例えば、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃの少なくとも膜貫通領域を含み得る。
【０２５５】
ある例において、膜貫通ドメインは、ヒンジ、例えばヒトタンパク質からのヒンジを介して、ＣＡＲの細胞外領域、例えばＣＡＲの抗原結合ドメインに結合できる。例えば、一実施形態において、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ、例えばＩｇＧ４ヒンジ又はＣＤ８ａヒンジであり得る。一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号１０１１のアミノ酸配列を含む（例えば、これからなる）。一態様において、膜貫通ドメインは、配列番号１０１９の膜貫通ドメインを含む（例えば、これからなる）。
【０２５６】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーはＩｇＧ４ヒンジを含む。例えば、一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号１０１３のアミノ酸配列のヒンジを含む。一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号１０１４のヌクレオチド配列によってコードされるヒンジを含む。
【０２５７】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーはＩｇＤヒンジを含む。例えば、一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号１０１５のアミノ酸配列のヒンジを含む。一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号１０１６のヌクレオチド配列によってコードされるヒンジを含む。
【０２５８】
一態様において、膜貫通ドメインは組み換えであり得、その場合、ロイシン及びバリンなどの疎水性残基を優勢に含む。一態様において、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンのトリプレットを、組み換え膜貫通ドメインの各末端に見ることができる。
【０２５９】
任意選択で、２〜１０アミノ酸長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーが、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質領域との間に結合を形成し得る。グリシン−セリンダブレットは特に適当なリンカーを提供する。例えば、一態様において、リンカーは、配列番号１０１７のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、リンカーは、配列番号１０１８のヌクレオチド配列によりコードされる。
【０２６０】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジを含む。
【０２６１】
細胞質ドメイン
本ＣＡＲの細胞質ドメイン又は領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、一般的に、ＣＡＲが導入されている免疫細胞の正常エフェクター機能の少なくとも１つの活性化を担う。
【０２６２】
本明細書に記載のＣＡＲにおいて使用する細胞内シグナル伝達ドメインの例は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び抗原受容体結合後にシグナル伝達を開始するために協調して機能する共受容体の細胞質配列並びにこれらのあらゆる誘導体又はバリアント及び同じ機能的能力を有するあらゆる組み換え配列を含む。
【０２６３】
ＴＣＲ単独により産生されたシグナルはＴ細胞の完全活性化には不十分であり、二次及び／又は共刺激性シグナルも必要であることが知られている。そのため、Ｔ細胞活性化は、２つの異なるクラスの細胞質シグナル伝達配列が介在するということができる：ＴＣＲ（初代細胞内シグナル伝達ドメイン）を介して抗原依存性一次活性化を開始するもの及び二次又は共刺激性シグナル（二次細胞質ドメイン、例えば共刺激ドメイン）を提供するように抗原非依存的方法で作用するもの。
【０２６４】
一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激性方向又は阻害性方向のいずれかで制御する。刺激性方向で作用する初代細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。
【０２６５】
本発明において特に有用なＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメインの例には、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２及びＣＤ６６ｄのものが含まれる。一実施形態において、本発明のＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３−ζの一次シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載されるＣＤ３−ζ配列を含む。
【０２６６】
一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、天然ＩＴＡＭドメインと比較して改変された（例えば、増加又は減少した）活性を有する、修飾ＩＴＡＭドメイン、例えば変異ＩＴＡＭドメインを含む。一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば最適化及び／又は切断されたＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。
【０２６７】
共刺激シグナル伝達ドメイン
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインをそれ自体で含むことができ又は本発明のＣＡＲに関連して、有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わせ得る。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ鎖部分及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含み得る。共刺激性シグナル伝達ドメインは、共刺激性分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。一実施形態において、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ζのシグナル伝達ドメインとＣＤ２８のシグナル伝達ドメインとを含むように設計される。一態様において、細胞内ドメインは、ＣＤ３−ζのシグナル伝達ドメインとＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインとを含むように設計される。
【０２６８】
共刺激性分子は、リンパ球の抗原に対する効率的応答に必要である、抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子であり得る。そのような分子の例には、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンド等が含まれる。例えば、ＣＤ２７共刺激は、インビトロでヒトＣＡＲＴ細胞の増殖、エフェクター機能及び生存を増強し、インビボでヒトＴ細胞残留性及び抗腫瘍活性を増強することが示されている（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９（３）：６９６−７０６）。更なるこのような共刺激性分子の例は、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ及びＰＡＧ／Ｃｂｐを含む。
【０２６９】
ＣＡＲの細胞質部分内の細胞内シグナル伝達配列は、互いに無作為に又は特定の順序で連結し得る。任意選択で、例えば、２〜１０アミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０アミノ酸）長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーは、細胞内シグナル伝達配列間に結合を形成し得る。一実施形態において、グリシン−セリンダブレットを適当なリンカーとして使用できる。一実施形態において、単一アミノ酸、例えばアラニン、グリシンを適当なリンカーとして使用できる。
【０２７０】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、５つ又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインを含むように設計される。一実施形態において、２つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、５つ又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインは、リンカー分子、例えば本明細書に記載のリンカー分子により分けられる。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、リンカー分子はグリシン残基である。一実施形態において、リンカー分子はアラニン残基である。
【０２７１】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及び４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインは、配列番号１０２２のシグナル伝達ドメインである。一態様において、ＣＤ３−ζのシグナル伝達ドメインは、配列番号１０２７のシグナル伝達ドメインである。
【０２７２】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２７のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、配列番号１０２５のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、配列番号１０２６の核酸配列によりコードされる。
【０２７３】
一態様において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、第２のＣＡＲ、例えば同じ標的又は異なる標的（例えば、本明細書に記載の癌関連抗原以外の標的又は本明細書に記載の異なる癌関連抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＬＬ−１、ＣＤ３４、ＦＬＴ３又は葉酸受容体β）に対する、例えば異なる抗原結合ドメインを含む第２のＣＡＲの更に含み得る。一実施形態において、第２のＣＡＲは、癌関連抗原と同じ癌細胞型を発現する標的に対する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、第１の抗原を標的とし、共刺激シグナル伝達ドメインを有するが、一次シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ及び第２の異なる抗原を標的とし、一次シグナル伝達ドメインを有するが、共刺激シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。理論に拘束されることを望まないが、第１のＣＡＲへの共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば４−１ＢＢ、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７又はＯＸ−４０及び一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζの第２のＣＡＲへの配置は、両標的が発現される細胞に対してＣＡＲ活性を制限する。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載の標的抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激ドメインを含む第１の癌関連抗原ＣＡＲ及び異なる標的抗原（例えば、第１の標的抗原と同一の癌細胞型に発現される抗原）を標的とし、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。別の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載の標的抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ及び第１の標的抗原以外の抗原（例えば、第１の標的抗原と同一の癌細胞型に発現される抗原）を標的とし、抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。
【０２７４】
別の態様において、本開示は、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴ細胞の集団を特徴とする。幾つかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、種々のＣＡＲを発現する細胞の混合物を含む。例えば、一実施形態では、ＣＡＲＴ細胞の集団は、本明細書に記載の癌関連抗原に対する抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第１の細胞及び異なる抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載の異なる癌関連抗原に対する抗原結合ドメイン、例えば第１の細胞によって発現されるＣＡＲの抗原結合ドメインによって結合された癌関連抗原と異なる、本明細書に記載の癌関連抗原に対する抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第２の細胞を含み得る。別の例として、ＣＡＲ発現細胞の集団は、本明細書に記載の癌関連抗原に対する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞及び本明細書に記載の癌関連抗原以外の標的に対する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞を含み得る。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、例えば、初代細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞及び二次シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞を含む。
【０２７５】
他の態様において、本開示は、細胞の集団を特徴とし、ここで、集団内の少なくとも１つの細胞は、本明細書に記載の癌関連抗原に対する抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現し、第２の細胞は、他の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を発現する。例えば、一実施形態において、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。阻害分子、例えばＰＤ−１は、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を減少させ得る。阻害分子の例は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４若しくはＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦ（例えば、ＴＧＦβ）を含む。一実施形態において、阻害分子を阻害する薬剤は、例えば、細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチド、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインに結合した第１のポリペプチド、例えば阻害分子を含む。一実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦβ又はこれらのいずれかの断片などの阻害分子の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインである第２のポリペプチド（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載のような例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７、ＯＸ４０又はＣＤ２８）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む）である第２のポリペプチドを含む。一実施形態において、薬剤は、ＰＤ−１又はその断片の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインの第２のポリペプチド（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）を含む。
【０２７６】
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ
一態様において、本明細書に開示されるＣＡＲは、ＢＣＭＡに結合する。例示的ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表１又は１６に開示される配列を含み得る。ＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物は、任意選択のリーダー配列；任意選択のヒンジドメイン、例えばＣＤ８ヒンジドメイン；膜貫通ドメイン、例えばＣＤ８膜貫通ドメイン；細胞内ドメイン、例えば４−１ＢＢ細胞内ドメイン；及び機能性シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζドメインを含み得る。特定の実施形態において、これらのドメインは隣接しており、同じリーディングフレームにあって、単一の融合タンパク質を形成する。他の実施形態において、これらのドメインは、例えば本明細書に記載されるとおりのＲＣＡＲ分子の場合のように、個別のポリペプチドにある。
【０２７７】
例示的ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子又はその断片の配列は表２〜５に開示される。特定の実施形態において、完全長ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子は、表２〜５に開示されるとおりの、ＢＣＭＡ−１、ＢＣＭＡ−２、ＢＣＭＡ−３、ＢＣＭＡ−４、ＢＣＭＡ−５、ＢＣＭＡ−６、ＢＣＭＡ−７、ＢＣＭＡ−８、ＢＣＭＡ−９、ＢＣＭＡ−１０、ＢＣＭＡ−１１、ＢＣＭＡ−１２、ＢＣＭＡ−１３、ＢＣＭＡ−１４、ＢＣＭＡ−１５、１４９３６２、１４９３６３、１４９３６４、１４９３６５、１４９３６６、１４９３６７、１４９３６８、１４９３６９、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｃ７、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｇ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｄ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ａ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８１−Ｃ３、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ４、Ａ７Ｄ１２．２、Ｃ１１Ｄ５．３、Ｃ１２Ａ３．２又はＣ１３Ｆ１２．１の１つ以上のＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ若しくは完全長配列又はそれと実質的に（例えば、９５〜９９％）同一の配列を含む。
【０２７８】
抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物に使用することのできる更なる例示的ＢＣＭＡターゲティング配列は、国際公開第２０１７／０２１４５０号パンフレット、国際公開第２０１７／０１１８０４号パンフレット、国際公開第２０１７／０２５０３８号パンフレット、国際公開第２０１６／０９０３２７号パンフレット、国際公開第２０１６／１３０５９８号パンフレット、国際公開第２０１６／２１０２９３号パンフレット、国際公開第２０１６／０９０３２０号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４７８９号パンフレット、国際公開第２０１６／０９４３０４号パンフレット、国際公開第２０１６／１５４０５５号パンフレット、国際公開第２０１５／１６６０７３号パンフレット、国際公開第２０１５／１８８１１９号パンフレット、国際公開第２０１５／１５８６７１号パンフレット、米国特許第９，２４３，０５８号明細書、米国特許第８，９２０，７７６号明細書、米国特許第９，２７３，１４１号明細書、米国特許第７，０８３，７８５号明細書、米国特許第９，０３４，３２４号明細書、米国特許出願公開第２００７／００４９７３５号明細書、米国特許出願公開第２０１５／０２８４４６７号明細書、米国特許出願公開第２０１５／００５１２６６号明細書、米国特許出願公開第２０１５／０３４４８４４号明細書、米国特許出願公開第２０１６／０１３１６５５号明細書、米国特許出願公開第２０１６／０２９７８８４号明細書、米国特許出願公開第２０１６／０２９７８８５号明細書、米国特許出願公開第２０１７／００５１３０８号明細書、米国特許出願公開第２０１７／００５１２５２号明細書、米国特許出願公開第２０１７／００５１２５２号明細書、国際公開第２０１６／０２０３３２号パンフレット、国際公開第２０１６／０８７５３１号パンフレット、国際公開第２０１６／０７９１７７号パンフレット、国際公開第２０１５／１７２８００号パンフレット、国際公開第２０１７／００８１６９号パンフレット、米国特許第９，３４０，６２１号明細書、米国特許出願公開第２０１３／０２７３０５５号明細書、米国特許出願公開第２０１６／０１７６９７３号明細書、米国特許出願公開第２０１５／０３６８３５１号明細書、米国特許出願公開第２０１７／００５１０６８号明細書、米国特許出願公開第２０１６／０３６８９８８号明細書及び米国特許出願公開第２０１５／０２３２５５７号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に開示されている。一部の実施形態において、更なる例示的ＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物は、国際公開第２０１２／０１６３８０５号パンフレット（この内容は、本明細書によって全体として参照により援用される）からのＶＨ及びＶＬ配列を使用して作成される。
【０２７９】
【表７】
2021509009.tif 000011
【０２８０】
【表８】
2021509009.tif 000012
【０２８１】
【表９】
2021509009.tif 000013
【０２８２】
【表１０】
2021509009.tif 000014
【０２８３】
【表１１】
2021509009.tif 000015
【０２８４】
【表１２】
2021509009.tif 000016
【０２８５】
【表１３】
2021509009.tif 000017
【０２８６】
【表１４】
2021509009.tif 000018
【０２８７】
【表１５】
2021509009.tif 000019
【０２８８】
【表１６】
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【０２８９】
【表１７】
2021509009.tif 000021
【０２９０】
【表１８】
2021509009.tif 000022
【０２９１】
【表１９】
2021509009.tif 000023
【０２９２】
【表２０】
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【０２９３】
【表２１】
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【０２９４】
【表２２】
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【０２９５】
【表２３】
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【０２９６】
【表２４】
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【０２９７】
【表２５】
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【０２９８】
【表２６】
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【０２９９】
【表２７】
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【０３００】
【表２８】
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【０３０１】
【表２９】
2021509009.tif 000033
【０３０２】
【表３０】
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【０３０３】
【表３１】
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【０３０４】
【表３２】
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【０３０５】
【表３３】
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【０３０６】
【表３４】
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【０３０７】
【表３５】
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【０３０８】
【表３６】
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【０３０９】
【表３７】
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【０３１０】
【表３８】
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【０３１１】
【表３９】
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【０３１２】
【表４０】
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【０３１３】
【表４１】
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【０３１４】
【表４２】
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【０３１５】
【表４３】
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【０３１６】
【表４４】
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【０３１７】
【表４５】
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【０３１８】
【表４６】
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【０３１９】
【表４７】
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【０３２０】
【表４８】
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【０３２１】
【表４９】
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【０３２２】
【表５０】
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【０３２３】
【表５１】
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【０３２４】
【表５２】
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【０３２５】
【表５３】
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【０３２６】
【表５４】
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【０３２７】
【表５５】
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【０３２８】
【表５６】
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【０３２９】
【表５７】
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【０３３０】
【表５８】
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【０３３１】
【表５９】
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【０３３２】
【表６０】
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【０３３３】
【表６１】
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【０３３４】
【表６２】
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【０３３５】
ＲＮＡトランスフェクション
インビトロで転写されたＲＮＡ  ＣＡＲの製造方法が本明細書に開示される。本発明は、細胞に直接遺伝子導入できるＲＮＡ構築物をコードするＣＡＲも含む。トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡを産生する方法は、特異的に設計したプライマーを用いる鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）、続くポリＡ付加を含み、３’及び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）、５’キャップ及び／又は配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、発現させる核酸及びポリＡテールを含む構築物、典型的には５０〜２０００塩基長（配列番号２０２５）を産生し得る。このように産生されたＲＮＡは、異なる種の細胞において効率的に翻訳され得る。一態様において、鋳型は、ＣＡＲの配列を含む。
【０３３６】
一態様において、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）によってコードされている。一態様において、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードするｍＲＮＡは、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の産生のために免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に導入される。
【０３３７】
一実施形態において、インビトロ転写ＲＮＡ  ＣＡＲを一過性トランスフェクションの形態として細胞に導入できる。ＲＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）産生鋳型を使用するインビトロ転写により産生される。任意の供給源からの目的のＤＮＡを、適切なプライマー及びＲＮＡポリメラーゼを使用してインビトロｍＲＮＡ合成のための鋳型にＰＣＲにより直接変換できる。ＤＮＡの供給源は、例えば、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列又はＤＮＡのあらゆる他の適切な供給源であり得る。インビトロ転写のための所望の鋳型は本発明のＣＡＲである。例えば、ＲＮＡ  ＣＡＲの鋳型は、抗腫瘍抗体の単鎖可変ドメインを含む細胞外領域、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ８ａの膜貫通ドメイン）；及び細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３−ζのシグナル伝達ドメイン及び４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むものを含む細胞質領域を含む。
【０３３８】
一実施形態において、ＰＣＲに使用するＤＮＡは、オープンリーディングフレームを含む。ＤＮＡは、生物のゲノムからの天然に存在するＤＮＡ配列由来であり得る。一実施形態において、核酸は、５’及び／又は３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の幾らか又は全てを含み得る。核酸は、エクソン及びイントロンを含み得る。一実施形態において、ＰＣＲに使用するＤＮＡは、ヒト核酸配列である。別の実施形態において、ＰＣＲに使用するＤＮＡは、５’及び３’ＵＴＲを含むヒト核酸配列である。ＤＮＡは、代わりに、天然に存在する生物で通常発現されない人工ＤＮＡ配列であり得る。例示的な人工ＤＮＡ配列は、融合タンパク質をコードするオープンリーディングフレームを形成するようにライゲートされた遺伝子の部分を含むものである。ライゲートされたＤＮＡの部分は、単一生物由来又は１つを超える生物由来であり得る。
【０３３９】
ＰＣＲを使用して、トランスフェクションに使用するｍＲＮＡのインビトロ転写のための鋳型を産生する。ＰＣＲを実施する方法は、当技術分野で周知である。ＰＣＲにおいて使用するプライマーは、ＰＣＲのための鋳型として使用するＤＮＡの領域に実質的に相補的である領域を有するように設計する。本明細書で使用する「実質的に相補的」は、プライマー配列の残基の大部分又は全てが相補的であるか又は１つ以上の塩基が非相補的又はミスマッチである、ヌクレオチドの配列を指す。実質的に相補的な配列は、ＰＣＲに使用するアニーリング条件下においてＤＮＡ標的とアニール又はハイブリダイズできる。プライマーは、ＤＮＡ鋳型の任意の部分と実質的に相補的であるように設計できる。例えば、プライマーは、５’及び３’ＵＴＲを含む、細胞において通常転写される（オープンリーディングフレーム）核酸の部分を増幅するように設計できる。プライマーは、目的の特定のドメインをコードする核酸の部分を増幅するようにも設計できる。一実施形態において、プライマーは、５’及び３’ＵＴＲの全て又は一部を含む、ヒトｃＤＮＡのコーディング領域を増幅するように設計される。ＰＣＲに有用なプライマーは、当技術分野で周知の合成法により産生できる。「順方向プライマー」は、増幅するＤＮＡ配列の上流であるＤＮＡ鋳型上にヌクレオチドに対して実質的に相補的であるヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「上流」は、コード鎖に対して、増幅するＤＮＡ配列に対する５位を指すために本明細書で使用する。「逆方向プライマー」は、増幅するＤＮＡ配列の下流である、二本鎖ＤＮＡ鋳型に対して実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「下流」は、コード鎖に対して、増幅するＤＮＡ配列に対する３’位を指すために本明細書で使用する。
【０３４０】
ＰＣＲに有用なあらゆるＤＮＡポリメラーゼを本明細書に開示する方法で使用できる。試薬及びポリメラーゼは、多数の供給元から市販されている。
【０３４１】
安定性及び／又は翻訳効率を促進する能力を有する化学構造も使用し得る。ＲＮＡは、好ましくは、５’及び３’ＵＴＲを有する。一実施形態において、５’ＵＴＲは、１〜３０００ヌクレオチド長である。コーディング領域に付加する５’及び３’ＵＴＲ配列の長さは、ＵＴＲの異なる領域をアニールするＰＣＲのためのプライマーの設計を含むが、これに限定されない異なる方法により変わり得る。このアプローチを使用して、当業者は、転写ＲＮＡのトランスフェクション後、最適翻訳効率を達成するのに必要な５’及び３’ＵＴＲ長を修飾できる。
【０３４２】
５’及び３’ＵＴＲは、目的の核酸のための天然に存在する内在性５’及び３’ＵＴＲであり得る。代わりに、目的の核酸に対して内在性ではないＵＴＲ配列を順方向及び逆方向プライマーへのＵＴＲ配列の取り込みにより又は鋳型の任意の他の修飾により付加できる。目的の核酸に対して内在性ではないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性及び／又は翻訳効率の修飾のために有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列のＡＵリッチ要素は、ｍＲＮＡの安定性を低下させ得ることが知られる。従って、３’ＵＴＲを、当技術分野で周知であるＵＴＲの特性に基づいて、転写されたＲＮＡの安定性を増加するように選択及び設計できる。
【０３４３】
一実施形態において、５’ＵＴＲは、内在性核酸のＫｏｚａｋ配列を含み得る。代わりに、目的の核酸に対して内在性ではない５’ＵＴＲを上記のようにＰＣＲにより付加するとき、コンセンサスＫｏｚａｋ配列を５’ＵＴＲ配列の付加により再設計できる。Ｋｏｚａｋ配列は、あるＲＮＡ転写物の翻訳効率を上げることができるが、効率的翻訳を可能とするために全ＲＮＡで必要であるように見えない。多くのｍＲＮＡについてのＫｏｚａｋ配列に対する必要性は、当技術分野で公知である。他の実施形態において、５’ＵＴＲは、ＲＮＡゲノムが細胞で安定であるＲＮＡウイルスの５’ＵＴＲであり得る。他の実施形態において、種々のヌクレオチドアナログを、ｍＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨害するために３’又は５’ＵＴＲにおいて使用できる。
【０３４４】
遺伝子クローニングの必要性なしにＤＮＡ鋳型からのＲＮＡの合成を可能にするために、転写のプロモーターは、転写する配列の上流のＤＮＡ鋳型に結合すべきである。ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターとして機能する配列が順方向プライマーの５’末端に追加されるとき、ＲＮＡポリメラーゼプロモーターは、転写されるオープンリーディングフレームの上流のＰＣＲ産物に取り込まれる。好ましい一実施形態において、プロモーターは、本明細書の他の箇所に記載するような、Ｔ７ポリメラーゼプロモーターである。他の有用なプロモーターは、Ｔ３及びＳＰ６  ＲＮＡポリメラーゼプロモーターを含むが、これらに限定されない。Ｔ７、Ｔ３及びＳＰ６プロモーターのコンセンサスヌクレオチド配列が当技術分野で公知である。
【０３４５】
好ましい一実施形態において、ｍＲＮＡは、リボソーム結合、翻訳開始及び細胞におけるｍＲＮＡの安定性を決定する、５’末端及び３’ポリ（Ａ）テールの両者にキャップを有する。環状ＤＮＡ鋳型、例えばプラスミドＤＮＡ上において、ＲＮＡポリメラーゼは、真核細胞における発現に適しない長いコンカテマー産物を産生する。３’ＵＴＲの末端で直線化されたプラスミドＤＮＡの転写は、転写後ポリアデニル化されても、真核トランスフェクションに有効ではない正常サイズのｍＲＮＡを生じる。
【０３４６】
直鎖状ＤＮＡ鋳型で、ファージＴ７  ＲＮＡポリメラーゼは、鋳型の最後の塩基を越えて転写物の３’末端を伸長できる（Ｓｃｈｅｎｂｏｒｎ  ａｎｄ  Ｍｉｅｒｅｎｄｏｒｆ，Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１３：６２２３−３６（１９８５）；Ｎａｃｈｅｖａ  ａｎｄ  Ｂｅｒｚａｌ−Ｈｅｒｒａｎｚ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：１４８５−６５（２００３））。
【０３４７】
ＤＮＡ鋳型に伸びるポリＡ／Ｔの組込みの慣用法は、分子クローニングである。しかしながら、プラスミドＤＮＡに統合されたポリＡ／Ｔ配列は、プラスミド不安定性を生じ得、これは、細菌細胞から得たプラスミドＤＮＡ鋳型が多くの場合に欠失及び他の異常で高度に汚染されている理由である。これにより、クローニング工程は、困難で時間がかかるだけでなく、多くの場合に信頼できないものとなる。これが、クローニングを伴わないポリＡ／Ｔ  ３’ストレッチを有するＤＮＡ鋳型の産生を可能にする方法が非常に望ましい理由である。
【０３４８】
転写ＤＮＡ鋳型のポリＡ／Ｔセグメントは、１００ＴテールなどのポリＴテールを含む逆方向プライマーを使用するＰＣＲ中（配列番号２０２６）（サイズは、５０〜５０００Ｔであり得る（配列番号２０２７））又はＤＮＡライゲーション若しくはインビトロ組み換えを含むが、これらに限定されない任意の他の方法によりＰＣＲ後に産生できる。ポリ（Ａ）テールはまた、ＲＮＡに安定性を提供し、その分解を減らす。一般に、ポリ（Ａ）テールの長さは、転写されたＲＮＡの安定性と正に相関する。一実施形態において、ポリ（Ａ）テールは、１００〜５０００アデノシンである（配列番号２０２８）。
【０３４９】
ＲＮＡのポリ（Ａ）テールは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ポリＡポリメラーゼ（Ｅ−ＰＡＰ）のなどのポリ（Ａ）ポリメラーゼの使用により、インビトロ転写後更に伸長できる。一実施形態において、ポリ（Ａ）テールの１００ヌクレオチドから３００〜４００ヌクレオチド（配列番号２０２４）への長さの延長は、ＲＮＡの翻訳効率の約２倍増加を生じる。更に、３’末端への異なる化学基の付加は、ｍＲＮＡ安定性を増加させ得る。このような結合は、修飾／人工ヌクレオチド、アプタマー及び他の化合物を含み得る。例えば、ＡＴＰアナログは、ポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用してポリ（Ａ）テールに取り込まれ得る。ＡＴＰアナログは、ＲＮＡの安定性を更に高め得る。
【０３５０】
５’キャップもＲＮＡ分子に安定性を提供する。好ましい一実施形態において、本明細書に開示する方法により産生されたＲＮＡは、５’キャップを含む。５’キャップは、当技術分野で公知であり、本明細書に記載の技術を使用して提供される（Ｃｏｕｇｏｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，２９：４３６−４４４（２００１）；Ｓｔｅｐｉｎｓｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，ＲＮＡ，７：１４６８−９５（２００１）；Ｅｌａｎｇｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，３３０：９５８−９６６（２００５））。
【０３５１】
本明細書に開示する方法により産生されたＲＮＡは、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列も含み得る。ＩＲＥＳ配列は、ｍＲＮＡへのキャップ非依存的リボソーム結合を開始し、翻訳開始を促進するあらゆるイルス、染色体又は人工設計配列であり得る。糖、ペプチド、脂質、タンパク質、抗酸化剤及び界面活性剤などの細胞透過性及び生存能を促進する因子を含有し得る、細胞電気穿孔に適した任意の溶質が含まれ得る。
【０３５２】
ＲＮＡを、多数の異なる方法、例えば商業的に利用可能な方法のいずれかを使用して標的細胞に導入でき、これは、電気穿孔（Ａｍａｘａ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ−ＩＩ（Ａｍａｘａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ））、（ＥＣＭ  ８３０（ＢＴＸ）（Ｈａｒｖａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）又はＧｅｎｅ  Ｐｕｌｓｅｒ  ＩＩ（ＢｉｏＲａｄ，Ｄｅｎｖｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、Ｍｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｔ，Ｈａｍｂｕｒｇ  Ｇｅｒｍａｎｙ）、リポフェクションを使用するカチオン性リポソーム介在トランスフェクション、ポリマー封入、ペプチド介在トランスフェクション又は「遺伝子銃」などの微粒子銃粒子送達系（例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１２（８）：８６１−７０（２００１）を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。
【０３５３】
非ウイルス送達方法
幾つかの態様において、非ウイルス方法を使用して、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を細胞又は組織又は対象に送達できる。
【０３５４】
幾つかの実施形態において、非ウイルス方法は、トランスポゾン（転位因子とも呼ばれる）の使用を含む。幾つかの実施形態において、トランスポゾンは、ゲノムの位置にそれ自体挿入できるＤＮＡの断片、例えば自己複製性であり、そのコピーをゲノムに挿入することができるＤＮＡの断片又は長い核酸の外にスプライシングされ、ゲノムの別の場所に挿入されることができるＤＮＡの断片である。例えば、トランスポゾンは、転位のための逆位反復フランキング遺伝子からなるＤＮＡ配列を含む。
【０３５５】
例示的なトランスポゾンを使用する核酸送達法は、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン系（ＳＢＴＳ）及びｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）トランスポゾン系を含む。例えば、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．２０．Ｒ１（２０１１）：Ｒ１４−２０；Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５（２００８）：２９６１−２９７１；Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６（２００８）：５８０−５８９；Ｇｒａｂｕｎｄｚｉｊａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８（２０１０）：１２００−１２０９；Ｋｅｂｒｉａｅｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１２２．２１（２０１３）：１６６；Ｗｉｌｌｉａｍｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １６．９（２００８）：１５１５−１６；Ｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２．１２（２００７）：３１５３−６５；及びＤｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ．１２２．３（２００５）：４７３−８３（これらの全ては、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０３５６】
ＳＢＴＳは２つの成分：１）導入遺伝子を含むトランスポゾン、及び２）トランスポサーゼ酵素の供給源を含む。トランスポサーゼは、担体プラスミド（又は他のドナーＤＮＡ）から、宿主細胞染色体／ゲノムなどの標的ＤＮＡにトランスポゾンを転位できる。例えば、トランスポサーゼは、担体プラスミド／ドナーＤＮＡに結合し、トランスポゾン（導入遺伝子含有）をプラスミドの外に切り出し、宿主細胞のゲノムに入れる。例えば、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．上掲を参照されたい。
【０３５７】
例示的なトランスポゾンは、ｐＴ２ベースのトランスポゾンを含む。例えば、全て参照により本明細書に組み込まれるＧｒａｂｕｎｄｚｉｊａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．４１．３（２０１３）：１８２９−４７；及びＳｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６８．８（２００８）：２９６１−２９７１を参照されたい。例示的なトランスポサーゼは、Ｔｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型トランスポサーゼ、例えばＳＢ１０トランスポサーゼ又はＳＢ１１トランスポサーゼを含む（例えば、サイトメガロウイルスプロモーターから発現できる機能亢進トランスポサーゼ）。例えば、全て参照により本明細書に組み込まれるＡｒｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．；Ｋｅｂｒｉａｅｉ  ｅｔ  ａｌ．；及びＧｒａｂｕｎｄｚｉｊａ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。
【０３５８】
ＳＢＴＳの使用は、導入遺伝子、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸の効率的組込み及び発現を可能にする。例えば、ＳＢＴＳなどのトランスポゾン系を使用する、本明細書に記載のＣＡＲを安定に発現する細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を産生する方法が本明細書に提供される。
【０３５９】
本明細書に記載の方法により、幾つかの実施形態において、ＳＢＴＳ成分を含む１つ以上の核酸、例えばプラスミドが細胞に送達される（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）。例えば、核酸は、核酸（例えば、プラスミドＤＮＡ）送達の標準法、例えば本明細書に記載の方法、例えば電気穿孔、トランスフェクション又はリポフェクションにより送達される。幾つかの実施形態において、核酸は、導入遺伝子、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を含むトランスポゾンを含む。幾つかの実施形態において、核酸は、導入遺伝子（例えば、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸）を含むトランスポゾン並びにトランスポサーゼ酵素をコードする核酸配列を含む。他の実施形態において、例えばデュアルプラスミド系、例えば第１のプラスミドが導入遺伝子を含むトランスポゾンを含み、第２のプラスミドがトランスポサーゼ酵素をコードする核酸配列を含む、２核酸の系が提供される。例えば、第１及び第２の核酸は、宿主細胞に共送達される。
【０３６０】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、ヌクレアーゼ（例えば、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系又は操作されたメガヌクレアーゼ再操作ホーミングエンドヌクレアーゼ）を使用するＳＢＴＳ及び遺伝子編集の遺伝子挿入の組み合わせを使用して産生される。
【０３６１】
幾つかの実施形態において、非ウイルス送達方法の使用は、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の再プログラミング及び対照への細胞の直接注入を可能にする。非ウイルスベクターの利点は、患者集団に見合うために必要な十分量の産生が容易且つ比較的安価であること、保存中の安定性及び免疫原性の欠如を含むが、これらに限定されない。
【０３６２】
ＣＡＲをコードする核酸構築物
本発明は、本明細書に記載の１つ以上のＣＡＲ構築物をコードする核酸分子も提供する。一態様において、核酸分子は、メッセンジャーＲＮＡ転写物として提供される。一態様において、核酸分子は、ＤＮＡ構築物として提供される。
【０３６３】
従って、一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離核酸分子に関し、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン並びに刺激ドメイン、例えば共刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメイン、例えばζ鎖を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０３６４】
所望の分子をコードする核酸配列は、標準技術を使用して、例えば遺伝子を発現する細胞からのライブラリのスクリーニングにより、それを含むことが知られるベクターからの遺伝子を誘導化することにより又はそれを含むことが知られる細胞及び組織から直接単離することによるような、組み換え当技術分野で知られる方法を使用して得ることができる。代わりに、目的の遺伝子をクローン化ではなく合成により産生できる。
【０３６５】
本発明は、本発明のＤＮＡが挿入されているベクターも提供する。レンチウイルスなどのレトロウイルス由来のベクターは、それらが導入遺伝子の長期の安定した組み込み及び娘細胞への伝播を可能にするため、長期遺伝子導入を達成するのに適するツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入できる点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコ−レトロウイルス由来のベクターを超える更なる利点を有する。それらは、低免疫原性であるという更なる利点も更に有する。レトロウイルスベクターは、例えば、γレトロウイルスベクターでもあり得る。γレトロウイルスベクターは、例えば、プロモーター、パッケージングシグナル（ψ）、プライマー結合部位（ＰＢＳ）、１つ以上の（例えば、２）末端反復配列（ＬＴＲ）及び目的の導入遺伝子、例えばＣＡＲをコードする遺伝子を含み得る。γレトロウイルスベクターは、ｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖなどのウイルス構造的遺伝子を欠き得る。例示的なγレトロウイルスベクターは、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）及び骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）及びそれら由来のベクターを含む。他のγレトロウイルスベクターは、例えば、Ｔｏｂｉａｓ  Ｍａｅｔｚｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｇａｍｍａｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０１１  Ｊｕｎ；３（６）：６７７−７１３に記載される。
【０３６６】
別の実施形態において、所望の本発明のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターは、アデノウイルスベクター（Ａ５／３５）である。別の実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸の発現は、ｓｌｅｅｐｉｎｇ  ｂｅａｕｔｙ、ＣＲＩＳＰＥＲ、ＣＡＳ９及びジンクフィンガーヌクレアーゼなどのトランスポゾンを使用して達成できる。参照により本明細書に包含される下記のＪｕｎｅ  ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９．１０：７０４−７１６を参照されたい。
【０３６７】
概説すると、ＣＡＲをコードする天然又は合成核酸の発現は、典型的には、ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸又はその一部をプロモーターに操作可能に連結させ、その構築物を発現ベクターに取り込むことにより達成される。ベクターは、真核生物での複製及び組み込みに適し得る。典型的クローニングベクターは、所望の核酸配列の発現の制御に有用な転写及び翻訳ターミネーター、開始配列及びプロモーターを含む。
【０３６８】
本発明の構築物の発現は、標準遺伝子送達プロトコルを使用する核酸免疫化及び遺伝子治療にも使用し得る。遺伝子送達のための方法が当技術分野で知られている。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，３９９，３４６号明細書、同第５，５８０，８５９号明細書、同第５，５８９，４６６号明細書を参照されたい。別の実施形態において、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。
【０３６９】
核酸は、多数のタイプのベクターにクローン化できる。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス及びコスミドを含むが、これらに限定されないベクターにクローン化できる。特に興味深いベクターは、発現ベクター、複製ベクター、プローブ産生ベクター及びシーケンシングベクターを含む。
【０３７０】
更に、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルスベクター技術は、当技術分野で周知であり、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ  １  −４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ及び他のウイルス学及び分子生物学マニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス及びレンチウイルスを含むが、これらに限定されない。一般に、適当なベクターは、少なくとも１生物で機能的な複製起点、プロモーター配列、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位及び１つ以上の選択可能マーカーを含む（例えば、国際公開第０１／９６５８４号パンフレット；国際公開第０１／２９０５８号パンフレット；及び米国特許第６，３２６，１９３号明細書）。
【０３７１】
多数のウイルスベースの系が哺乳動物細胞への遺伝子移入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系のための簡便なプラットフォームを提供する。選択した遺伝子を、当技術分野で知られる技術を使用して、ベクターに挿入し、レトロウイルス粒子に包装できる。次いで、組み換えウイルスが単離され、対象の細胞にインビボ又はエクスビボで送達され得る。多数のレトロウイルス系が当技術分野で知られている。幾つかの実施形態において、アデノウイルスベクターを使用する。多数のアデノウイルスベクターが当技術分野で知られている。一実施形態において、レンチウイルスベクターを使用する。
【０３７２】
更なるプロモーター要素、例えばエンハンサーは、転写開始の頻度を制御する。典型的には、これらは、開始部位の上流３０〜１１０ｂｐの領域に位置するが、多数のプロモーターが同様に開始部位の下流に機能的要素を含むことが示されている。プロモーター要素間の空間は、多くの場合、可動性であり、そのため、要素が互いに逆になったとき又は移動したときにプロモーター機能が保持される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターにおいて、プロモーター要素間の空間は、活性が落ち始める前、５０ｂｐ離れるまで増加し得る。プロモーターにより、個々の要素は、転写を活性化するために協調的又は独立的に機能できるように見える。
【０３７３】
哺乳動物Ｔ細胞においてＣＡＲトランス遺伝子を発現することができるプロモーターの例は、ＥＦ１ａプロモーターである。天然ＥＦ１ａプロモーターは、アミノアシルｔＲＮＡのリボソームへの酵素送達を担う伸長因子−１複合体のαサブユニットの発現を駆動する。ＥＦ１ａプロモーターは、哺乳動物発現プラスミドで広く使用されており、レンチウイルスベクターにクローン化されたトランス遺伝子からＣＡＲ発現を駆動するのに有効であることが示されている。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。
【０３７４】
プロモーターの別の例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに操作可能に連結したあらゆるポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動できる強い構成的プロモーター配列である。しかしながら、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーターを含むが、これらに限定されない他の構成的プロモーター配列並びにアクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子−１αプロモーター、ヘモグロビンプロモーター及びクレアチンキナーゼプロモーターなど、しかし、これらに限定されないヒト遺伝子プロモーターも使用し得る。更に、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定すべきではない。誘導性プロモーターも本発明の一部であるとして意図される。誘導性プロモーターの使用は、操作可能に連結したポリヌクレオチド配列の発現を、発現が望まれるときに活性化し、発現が望まれないときに遮断することができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例は、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター及びテトラサイクリンプロモーターを含むが、これらに限定されない。
【０３７５】
プロモーターの別の例は、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである。実施形態において、トランケート型ＰＧＫプロモーター（例えば、野生型ＰＧＫプロモーター配列と比較したとき１ヌクレオチド以上、例えば１、２、５、１０、１００、２００、３００又は４００ヌクレオチドの欠失を有するＰＧＫプロモーター）が望ましいこともある。例示的ＰＧＫプロモーターのヌクレオチド配列を以下に提供する。
【０３７６】
野生型ＰＧＫプロモーター
【化３】
2021509009.tif 000067
【０３７７】
例示的トランケート型ＰＧＫプロモーター：
ＰＧＫ１００：
【化４】
2021509009.tif 000068
ＰＧＫ２００：
【化５】
2021509009.tif 000069
ＰＧＫ３００：
【化６】
2021509009.tif 000070
ＰＧＫ４００：
【化７】
2021509009.tif 000071
【０３７８】
ベクターは、例えば、分泌を促進するためのシグナル配列、ポリアデニル化シグナル及び転写ターミネーター（例えば、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）遺伝子から）、エピソーム複製及び原核生物における複製を可能にする要素（例えば、ＳＶ４０起源及びＣｏｌＥ１又は当技術分野で知られる他のもの）及び／又は選択を可能にする要素（例えば、アンピシリン耐性遺伝子及び／又はゼオシンマーカー）も含み得る。
【０３７９】
ＣＡＲポリペプチド又はその一部の発現を評価するために、細胞に導入する発現ベクター遺伝子導入又はウイルスベクターによる感染が探求される細胞集団から発現細胞から発現細胞の同定及び選択を容易にするために、選択可能マーカー遺伝子又はレポーター遺伝子又は両方を含み得る。他の態様において、選択可能マーカーは、ＤＮＡの別の断面に担持され、共トランスフェクション法において使用され得る。選択可能マーカー及びレポーター遺伝子のいずれも、宿主細胞における発現が可能であるように適切な制御配列が隣接し得る。有用な選択可能マーカーは、例えば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子を含む。
【０３８０】
レポーター遺伝子は、恐らく遺伝子導入されている細胞を同定し、制御配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物又は組織に存在又は発現されず、発現がある容易に検出可能な特性、例えば酵素活性により顕在化されるポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現を、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入されてから適当な時間後にアッセイする。適当なレポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ又は緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を含み得る（例えば、Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４７９：７９−８２）。適当な発現系は、周知であり、既知技術により製造できるか又は商業的に入手できる。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小５’フランキング領域を有する構築物をプロモーターとして同定する。このようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結し、プロモーター駆動転写を調節する能力について薬剤を評価するのに使用され得る。
【０３８１】
一実施形態において、ベクターは、第２のＣＡＲをコードする核酸を更に含み得る。一実施形態において、第２のＣＡＲは、急性骨髄性白血病細胞に発現する標的、例えばＣＤ１２３、ＣＤ３４、ＣＬＬ−１、葉酸受容体β又はＦＬＴ３；又はＢ細胞に発現する標的、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ又はＣＤ７９ａに対する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、ベクターは、第１の抗原に特異的に結合する、且つ共刺激シグナル伝達ドメインを有するが一次シグナル伝達ドメインは有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲをコードする核酸配列と、第２の異なる抗原に特異的に結合する、且つ一次シグナル伝達ドメインを有するが共刺激シグナル伝達ドメインは有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをコードする核酸とを含む。一実施形態において、ベクターは、ＢＣＭＡ結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激ドメインを含む第１のＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸と、ＢＣＭＡ以外の抗原（例えば、ＡＭＬ細胞に発現する抗原、例えばＣＤ１２３、ＣＤ３４、ＣＬＬ−１、葉酸受容体β又はＦＬＴ３；又はＢ細胞に発現する抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ又はＣＤ７９ａ）を標的とする、且つ抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをコードする核酸とを含む。別の実施形態において、ベクターは、ＢＣＭＡ結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第１のＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸と、ＢＣＭＡ以外の抗原（例えば、ＡＭＬ細胞に発現する抗原、例えばＣＤ１２３、ＣＤ３４、ＣＬＬ−１、葉酸受容体β又はＦＬＴ３；又はＢ細胞に発現する抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ又はＣＤ７９ａ）に特異的に結合する、且つその抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをコードする核酸とを含む。
【０３８２】
一実施形態において、ベクターは、本明細書に記載されるＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸と、阻害性ＣＡＲをコードする核酸とを含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、癌細胞には見られない、正常細胞、例えば同様にＢＣＭＡを発現する正常細胞に見られる抗原に結合する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び抑制性分子の細胞内ドメインを含む。例えば、阻害性ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβの細胞内ドメインであり得る。
【０３８３】
実施形態において、ベクターは、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載されるＢＣＭＡ  ＣＡＲと、第２のＣＡＲ、例えば阻害性ＣＡＲ又はＢＣＭＡ以外の抗原（例えば、ＡＭＬ細胞に発現する抗原、例えばＣＤ１２３、ＣＬＬ−１、ＣＤ３４、ＦＬＴ３又は葉酸受容体β；又はＢ細胞に発現する抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ又はＣＤ７９ａ）に特異的に結合するＣＡＲとをコードする２つ以上の核酸配列を含み得る。かかる実施形態において、ＣＡＲをコードする２つ以上の核酸配列は、同じフレーム内の単一の核分子によって単一のポリペプチド鎖としてコードされる。この態様において、２つ以上のＣＡＲは、例えば、１つ以上のペプチド切断部位（例えば、自己切断部位又は細胞内プロテアーゼに対する基質）によって隔てられ得る。ペプチド切断部位の例としては以下が挙げられ、ここで、ＧＳＧ残基は、任意選択である。
Ｔ２Ａ：（ＧＳＧ）Ｅ  Ｇ  Ｒ  Ｇ  Ｓ  Ｌ  Ｌ  Ｔ  Ｃ  Ｇ  Ｄ  Ｖ  Ｅ  Ｅ  Ｎ  Ｐ  Ｇ  Ｐ（配列番号１２９６）
Ｐ２Ａ：（ＧＳＧ）Ａ  Ｔ  Ｎ  Ｆ  Ｓ  Ｌ  Ｌ  Ｋ  Ｑ  Ａ  Ｇ  Ｄ  Ｖ  Ｅ  Ｅ  Ｎ  Ｐ  Ｇ  Ｐ（配列番号１２９７）
Ｅ２Ａ：（ＧＳＧ）Ｑ  Ｃ  Ｔ  Ｎ  Ｙ  Ａ  Ｌ  Ｌ  Ｋ  Ｌ  Ａ  Ｇ  Ｄ  Ｖ  Ｅ  Ｓ  Ｎ  Ｐ  Ｇ  Ｐ（配列番号１２９８）
Ｆ２Ａ：（ＧＳＧ）Ｖ  Ｋ  Ｑ  Ｔ  Ｌ  Ｎ  Ｆ  Ｄ  Ｌ  Ｌ  Ｋ  Ｌ  Ａ  Ｇ  Ｄ  Ｖ  Ｅ  Ｓ  Ｎ  Ｐ  Ｇ  Ｐ（配列番号１２９９）
【０３８４】
細胞に遺伝子を導入し、発現させる方法は、当技術分野で知られている。発現ベクターに関連して、ベクターは、当技術分野の任意の方法により、宿主細胞、例えば哺乳動物、細菌、酵母又は昆虫細胞に容易に導入できる。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的又は生物学的手段により、宿主細胞に移入され得る。
【０３８５】
宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための物理的方法は、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、微量注入、エレクトロポレーションなどを含む。ベクター及び／又は外来性核酸を含む細胞を産生する方法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照されたい）。宿主細胞へのポリヌクレオチドの導入に好ましい方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションである。
【０３８６】
宿主細胞に目的のポリヌクレオチドを導入するための生物学的方法は、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターの使用を含む。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えばヒト細胞への遺伝子挿入に最も広く使用される方法となってきている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルス及びアデノ関連ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号明細書及び同第５，５８５，３６２号明細書を参照されたい。
【０３８７】
宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための化学的手段は、巨大分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズ及び水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル及びリポソームを含む脂質ベースの系などのコロイド分散体系を含む。インビトロ及びインビボで送達媒体として使用するための代表的コロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。標的化ナノ粒子又は他の適当なサブミクロンサイズの送達系を用いるポリヌクレオチドの送達など、最新式の核酸の標的化送達の他の方法が利用可能である。
【０３８８】
非ウイルス送達系を利用する場合、代表的送達媒体は、リポソームである。脂質製剤の使用は、宿主細胞への核酸の導入のために意図される（インビトロ、エクスビボ又はインビボ）。別の態様において、核酸は、脂質と結合され得る。脂質と結合した核酸は、リポソームの水性内部への被包、リポソームの脂質二重層内への分散、リポソームとオリゴヌクレオチドの両方と結合する連結分子を介するリポソームへの結合、リポソームへの封入、リポソームとの複合体化、脂質含有溶液への分散、脂質との混合、脂質との組み合わせ、脂質中の懸濁液としての包含、ミセル内への包含又は複合体化又は他の方法で脂質と結合する。脂質、脂質／ＤＮＡ又は脂質／発現ベクター結合組成物は、溶液中の何らかの特定の構造に限定されない。例えば、それらは、二重層構造において、ミセルとして又は「崩壊」構造を有して存在し得る。それらは、単に溶液に分散され、恐らくサイズ又は形状が均一ではない凝集体も形成し得る。脂質は、天然に存在する又は合成脂質であり得る脂肪物質である。例えば、脂質は、細胞質に天然に生じる脂肪滴並びに脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール及びアルデヒドなどの長鎖脂肪族炭化水素を含む化合物群及びその誘導体を含む。
【０３８９】
使用に適する脂質は、商業的供給源から得ることができる。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯから得ることができ、リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ＆Ｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ）から得ることができ；コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｅｈｒｉｎｇから得ることができ、ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）及び他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ．）から得ることができる。クロロホルム又はクロロホルム／メタノール中の脂質の原液を約−２０℃で保存できる。クロロホルムを、メタノールよりも容易に揮発するために唯一の溶媒として使用する。「リポソーム」は、封入された脂質二重層又は凝集体の産生により形成される多様な単及び多層状脂質媒体を包含する一般的用語である。リポソームは、リン脂質二重層膜及び内部水性媒体を伴う小胞構造を有することにより特徴付けられ得る。多層状リポソームは、水性媒体により分離された、複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁されたときに自然に形成される。脂質要素は、閉構造形成前に自己凝集し、水及び溶解した溶質を脂質二重層間に封入する（Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５：５０５−１０）。しかしながら、通常の小胞構造と異なる構造を溶液で有する組成物も包含される。例えば、脂質は、ミセル構造であるか又は単に脂質分子の不均一凝集体として存在すると考えられ得る。リポフェクタミン−核酸複合体も考慮される。
【０３９０】
外来性核酸を宿主細胞に導入するか又はそうでなければ細胞を本発明の阻害剤に曝露する方法に関係なく、宿主細胞における組み換えＤＮＡ配列の存在を確認するために多様なアッセイを行い得る。このようなアッセイは、例えば、サザン及びノーザンブロッティング、ＲＴ−ＰＣＲ及びＰＣＲなどの当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ、薬剤の同定に使用するための、例えば免疫学的手段（ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット）により、特定のペプチドの存在又は不在を検出するような「生化学的」アッセイ又は本発明の範囲内に入る本明細書に記載のアッセイを含む。
【０３９１】
本発明は、ＣＡＲコード化核酸分子を含むベクターを更に提供する。一態様において、ＣＡＲベクターを細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に直接形質導入することができる。一態様において、ベクターは、クローニング又は発現ベクター、例えば１つ以上のプラスミド（例えば、発現プラスミド、クローニングベクター、ミニサークル、ミニベクター、二重微小染色体）、レトロウイルス及びレンチウイルスベクター構築物を含むが、これらに限定されないベクターである。一態様において、ベクターは、哺乳動物Ｔ細胞又はＮＫ細胞においてＣＡＲ構築物の発現ができる。一態様において、哺乳動物Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞である。一態様において、哺乳動物ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
【０３９２】
細胞の供給源
増殖及び遺伝的改変前に細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の供給源が対象から得られる。用語「対象」は、免疫応答が惹起できる生存生物（例えば、哺乳動物）を含むことを意図する。対象の例は、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット及びそれらのトランスジェニック種を含む。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍を含む多数の供給源から得ることができる。
【０３９３】
本発明の特定の態様において、当技術分野で利用可能な幾つもの免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）株を使用し得る。本発明の特定の態様において、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離など、当業者に公知の幾つもの技法を用いて対象から収集された血液ユニットから入手することができる。ある好ましい態様において、個体の循環血液からの細胞をアフェレーシスにより得る。アフェレーシス産物は、典型的にはＴ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球を含むリンパ球、赤血球及び血小板を含む。一態様において、アフェレーシスにより採取した細胞は、血漿画分を除去し、且つ細胞を続くプロセシング過程のために適切な緩衝液又は媒体に入れるためにするために洗浄され得る。本発明の一態様において、細胞をリン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。別の態様において、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得るか、又は全てではないにしても多くの二価カチオンを欠き得る。
【０３９４】
カルシウム非存在下の初期活性化過程は、活性化の増強に至り得る。当業者に容易に認識されるように、洗浄工程は、製造業者の指示に従う半自動化「フロースルー」遠心分離（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ又はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）により達成され得る。洗浄後、細胞を、例えば無Ｃａ、無ＭｇＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ又は他の緩衝剤を含む又は含まない食塩水溶液など、多様な生体適合性緩衝液に再懸濁し得る。代わりに、アフェレーシス試料の望ましくない要素を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁し得る。
【０３９５】
本願の方法は、５％以下、例えば２％の、ヒトＡＢ血清を含む培養培地条件を利用でき、既知培養培地条件及び組成物、例えばＳｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  Ｘｅｎｏ−ｆｒｅｅ  ＣＴＳ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｅｒｕｍ  Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１５）４，ｅ３１；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｉ．２０１４．３１に記載のものを用い得ることが認識される。
【０３９６】
一態様において、Ｔ細胞は末梢血リンパ球から、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配での遠心又は向流遠心エルトリエーションにより、赤血球を溶解させて単球を枯渇させることにより単離される。ポジティブ又はネガティブ選択技法により、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及び／又はＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞など、特定のＴ細胞サブ集団を更に単離することができる。例えば、一態様において、Ｔ細胞は、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（例えば、３ｘ２８）コンジュゲートビーズと共に、所望のＴ細胞のポジティブ選択に十分な時間にわたってインキュベートすることにより単離される。一態様において、この時間は約３０分である。更なる態様において、時間は３０分〜３６時間又はそれより長い範囲及びその間にあるあらゆる整数値である。更なる態様において、時間は少なくとも１、２、３、４、５又は６時間である。更に別の好ましい態様において、時間は１０〜２４時間である。一態様において、インキュベーション時間は２４時間である。腫瘍組織から又は免疫無防備状態の個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離するなど、他の細胞型と比較したときＴ細胞が少ない任意の状況では、Ｔ細胞の単離に一層長いインキュベーション時間が用いられ得る。更に、より長いインキュベーション時間を用いると、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉効率が増加し得る。従って、単純に時間を増減させることにより、Ｔ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させることが可能であり、且つ／又はＴ細胞に対するビーズの比率（本明細書に更に記載されるとおり）を増減させることにより、培養開始時又はプロセス中の他の時点でＴ細胞のサブ集団を優先的に選択又は除外選択することができる。加えて、ビーズ又は他の表面上の抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体の比率を増減させることにより、培養開始時又は他の所望の時点でＴ細胞のサブ集団を優先的に選択又は除外選択することができる。当業者であれば、本発明のコンテクストにおいて複数回の選択ラウンドも用い得ることを認識するであろう。特定の態様では、選択手順を実施し、活性化及び拡大プロセスに「選択されなかった」細胞を使用することが望ましい場合もある。「選択されなかった」細胞がまた、更なる選択ラウンドに供され得る。
【０３９７】
ネガティブ選択によるＴ細胞集団の濃縮は、ネガティブ選択される細胞にユニークな表面マーカーに対する抗体の組み合わせを用いて達成することができる。一つの方法は、ネガティブ選択される細胞に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用するネガティブ磁気免疫付着又はフローサイトメトリーによる細胞分取及び／又は選択である。例えば、ネガティブ選択によりＣＤ４＋細胞を濃縮するため、モノクローナル抗体カクテルは典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含む。特定の態様では、典型的にＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋及びＦｏｘＰ３＋を発現する調節性Ｔ細胞を濃縮するか又はポジティブ選択することが望ましい場合もある。特定の態様では、ＣＤ１２７低の細胞を濃縮することが望ましい場合もある。代わりに、特定の態様では、調節性Ｔ細胞を抗Ｃ２５コンジュゲートビーズ又は他の同様の選択方法によって枯渇させる。
【０３９８】
本明細書に記載の方法は、例えば、本明細書に記載の、例えば陰性選択技術を使用する、例えばＴ制御性細胞枯渇集団、ＣＤ２５＋枯渇細胞である、免疫エフェクター細胞の特異的亜集団、例えばＴ細胞の選択を含み得る。好ましくは、Ｔ制御性枯渇細胞集団は、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％未満のＣＤ２５＋細胞を含む。
【０３９９】
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ２５抗体又はその断片又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ−２を使用して集団から除去する。一実施形態において、抗ＣＤ２５抗体又はその断片又はＣＤ２５結合リガンドを基質、例えばビーズにコンジュゲートするか又は他に基質、例えばビーズ上に被覆させる。一実施形態において、抗ＣＤ２５抗体又はその断片を本明細書に記載の基質にコンジュゲートさせる。
【０４００】
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ（商標）からのＣＤ２５枯渇剤を使用して集団から除去する。一実施形態において、細胞対ＣＤ２５枯渇剤の比は、１ｅ７細胞対２０μＬ、又は１ｅ７細胞対１５μＬ、又は１ｅ７細胞対１０μＬ、又は１ｅ７細胞対５μＬ、又は１ｅ７細胞対２．５μＬ、又は１ｅ７細胞対１．２５μＬである。一実施形態において、例えばＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋枯渇のために５億細胞／ｍｌを使用する。更なる態様において、６億、７億、８億又は９億細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。
【０４０１】
一実施形態において、枯渇すべき免疫エフェクター細胞集団は、約６×１０９ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。他の態様において、枯渇すべき免疫エフェクター細胞集団は、約１×１０９〜１×１０１０（及びその間の任意の整数値）ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。一実施形態において、得られたＴ制御性枯渇細胞集団は、２×１０９Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞又はそれ未満（例えば、１×１０９、５×１０８、１×１０８、５×１０７、１×１０７又はそれ未満のＣＤ２５＋細胞）を含む。
【０４０２】
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞を、例えばチュービング１６２−０１など、枯渇チュービングセットと共にＣｌｉｎｉＭＡＣ系を使用して集団から除去する。一実施形態において、ＣｌｉｎｉＭＡＣ系を例えばＤＥＰＬＥＴＩＯＮ２．１などの枯渇設定において動かす。
【０４０３】
特定の理論に拘束されることを望まないが、アフェレーシス前又はＣＡＲ発現細胞産物の製造中の対象における免疫細胞の負のレギュレーターのレベルの減少（例えば、望まない免疫細胞、例えばＴＲＥＧ細胞の数の減少）は、対象の再発リスクを減らし得る。例えば、ＴＲＥＧ細胞を枯渇する方法は、当技術分野で知られている。例えば、ＴＲＥＧ細胞を減少させる方法は、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体（抗ＧＩＴＲ本明細書に記載の抗体）、ＣＤ２５枯渇及びそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【０４０４】
一部の実施形態において、製造法は、ＣＡＲ発現細胞製造前のＴＲＥＧ細胞の数の減少（例えば、枯渇）を含む。例えば、製造法は、例えば、試料、例えばアフェレーシス試料を抗ＧＩＴＲ抗体及び／又は抗ＣＤ２５抗体（又はその断片又はＣＤ２５結合リガンド）と接触させ、ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）産物の製造前にＴＲＥＧ細胞を枯渇させることを含む。
【０４０５】
一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞採取前にＴＲＥＧ細胞を減らす１つ以上の治療で前処置されており、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再び必要とするリスクを軽減する。一実施形態において、ＴＲＥＧ細胞を低減する方法は、対象へのシクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせの１つ以上の投与を含むが、これらに限定されない。シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせの１つ以上の投与は、ＣＡＲ発現細胞産物注入前、注入中又は注入後に行われ得る。
【０４０６】
ある実施形態において、ＣＡＲ発現細胞製剤の製造のために細胞を採取する前に対象がシクロホスファミドで前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置に対して再発するリスクが低減される。ある実施形態において、ＣＡＲ発現細胞製剤の製造のために細胞を採取する前に対象が抗ＧＩＴＲ抗体で前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置に対して再発するリスクが低減される。
【０４０７】
一実施形態において、除去すべき細胞集団は、制御性Ｔ細胞又は腫瘍細胞ではなく、ＣＡＲＴ細胞の増殖及び／又は機能に他に負に影響する細胞、例えばＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ１５又は潜在的免疫抑制性細胞により発現される他のマーカーを発現する細胞である。一実施形態において、このような細胞は、制御性Ｔ細胞及び／又は腫瘍細胞と同時に、又は前記枯渇後に、又は別の順番で除去することが意図される。
【０４０８】
本明細書に記載の方法は、２つ以上の選択工程、例えば２つ以上の枯渇工程を含み得る。陰性選択によるＴ細胞集団の富化は、例えば、陰性に選択される細胞に独特な表面マーカーを指向する抗体の組み合わせにより達成できる。１つの方法は、陰性に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫粘着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含み得る。
【０４０９】
本明細書に記載の方法は、腫瘍抗原、例えばＣＤ２５を含まない腫瘍抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２０、ＣＤ１４又はＣＤ１１ｂを発現する細胞集団からの除去を更に含み、それによりＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲの発現に適するＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇及び腫瘍抗原枯渇細胞集団を提供する。一実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はその断片及び抗腫瘍抗原抗体又はその断片を同じ基質、例えばビーズに結合でき、これを細胞の除去に使用できるか、又は抗ＣＤ２５抗体又はその断片及び抗腫瘍抗原抗体又はその断片を別のビーズに結合でき、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞の除去及び腫瘍抗原発現細胞の除去は、逐次的であり、例えばいずれの順番でも生じ得る。
【０４１０】
チェックポイント阻害剤、例えば本明細書に記載のチェックポイント阻害剤を発現する細胞、例えばＰＤ１＋細胞、ＬＡＧ３＋細胞及びＴＩＭ３＋細胞の１つ以上の集団からの除去を含み、それによりＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇細胞及びチェックポイント阻害剤枯渇細胞、例えばＰＤ１＋、ＬＡＧ３＋及び／又はＴＩＭ３＋枯渇細胞集団を提供する方法も提供される。例示的チェックポイント阻害剤としては、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβが挙げられる。実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ１又はＰＤ−Ｌ１である。一実施形態において、チェックポイント阻害剤発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はその断片及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はその断片を同じビーズに結合でき、それを細胞の除去に使用できるか、又は抗ＣＤ２５抗体又はその断片及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はその断片を別のビーズに結合でき、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞の除去及びチェックポイント阻害剤発現細胞の除去は、逐次的であり、例えばいずれ順序の順番でも生じ得る。
【０４１１】
一実施形態において、Ｔ細胞ＩＦＮ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、グランザイムＢ及びパーフォリン又は他の適切な分子、例えば他のサイトカインの１つ以上を発現するＴ細胞集団を選択できる。細胞発現についてスクリーニングする方法は、例えば、国際公開第２０１３／１２６７１２号パンフレットに記載する方法により決定できる。
【０４１２】
陽性又は陰性選択により所望の細胞集団を単離するために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度は、変わり得る。一態様において、細胞とビーズとの最大接触を確実にするために、ビーズと細胞とを一緒に混合する体積を有意に低下させる（例えば、細胞濃度を増加させる）ことが望まれ得る。例えば、一態様において、２０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一態様において、１０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。更なる態様において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用して細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞の、又は多くの腫瘍細胞が存在する試料（例えば、白血病性血液、腫瘍組織など）からのより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、取得することが望ましい。例えば、高濃度細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０４１３】
関連する態様において、低濃度の細胞を使用することが望ましいことがある。Ｔ細胞と表面（例えば、ビーズなどの粒子）との混合物を有意に希釈することにより、粒子と細胞との相互作用が最小化される。これは、粒子に結合する所望の抗原を高量で発現する細胞で選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、高レベルのＣＤ２８を発現し、希釈濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕獲される。一態様において、使用する細胞の濃度は５×１０６／ｍｌである。他の態様において、使用する濃度は約１×１０５／ｍｌ〜１×１０６／ｍｌ及びその間の任意の整数値であり得る。
【０４１４】
他の態様において、細胞を、種々の長さの時間、種々の速度で２〜１０℃又は室温においてローテータでインキュベートし得る。
【０４１５】
刺激のためのＴ細胞は、洗浄工程後にも凍結され得る。理論に拘束されることを望まないが、凍結と続く解凍工程は、細胞集団から顆粒球及びある程度単球を除去することにより、より均一な産物を提供する。血漿及び血小板を除去する洗浄工程後、細胞を凍結溶液に懸濁し得る。多くの凍結溶液及びパラメータが当技術分野で知られ、これに関連して有用であるが、ある方法は、２０％ＤＭＳＯ及び８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ又は１０％Ｄｅｘｔｒａｎ  ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯ又は３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ−Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０％Ｄｅｘｔｒａｎ  ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯを含む培養培地又は例えばＨｅｓｐａｎ及びＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａを含む他の適当な細胞凍結媒体を使用し、次いで細胞を１°／分の速度で−８０℃に凍結し、気相の液体窒素貯蔵タンクに保存する。制御凍結の他の方法並びに直接−２０℃又は液体窒素の非制御凍結も使用できる。
【０４１６】
一態様において、凍結保存細胞を本明細書に記載のように解凍し、洗浄し、本発明の方法を使用する活性化前に室温で１時間休息させる。
【０４１７】
本発明に関連して、本明細書に記載の増殖細胞が必要となり得る時点の前の期間における対象からの血液試料又はアフェレーシス産物の収集も企図されている。従って、増殖する細胞の供給源を必要な任意の時点で採取でき、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞などの所望の細胞を、本明細書に記載のものなどの細胞療法、例えばＴ細胞療法からの利益があるであろう任意の数の疾患及び状態について、細胞療法、例えばＴ細胞療法におけるその後の使用のために単離及び凍結できる。一態様において、血液試料又はアフェレーシスを一般に健常対象から採取する。一態様において、血液試料又はアフェレーシスを、一般に、疾患を発症するリスクにあるが、依然として疾患を発症していない健常対象から採取し、目的の細胞をその後の使用のために単離及び凍結する。一態様において、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）をその後の時点で増殖、凍結及び使用し得る。一態様において、試料を、本明細書に記載の特定の疾患の診断の直後に、しかし、何らかの処置前に患者から採取する。更なる態様において、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法剤、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノレート及びＦＫ５０６などの免疫抑制剤、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８及び照射などの抗体又は他の免疫除去剤による処置を含むが、これらに限定されない、任意の数の関連する処置モダリティの前に対象からの血液試料又はアフェレーシスから細胞を単離する。
【０４１８】
本発明の更なる態様において、Ｔ細胞を、対象に機能的Ｔ細胞を残す処置後、患者から直接得る。ある癌処置、特に免疫系を損傷させる薬物での処置後、処置の直後、患者が、通常、その処置から回復するまでの間、得られるＴ細胞の品質がエクスビボで増殖する能力について最適であり得るか又は改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載の方法を使用するエクスビボ操作後、これらの細胞は、生着及びインビボ増殖増強について好ましい状態であり得る。そのため、本発明に関連して、Ｔ細胞、樹状細胞又は造血細胞系統の他の細胞を含む血液細胞をこの回復期に採取することが企図される。更に、一態様において、可動化（例えば、ＧＭ−ＣＳＦでの可動化）及びコンディショニングレジメンを使用して、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生及び／又は増殖に好都合である条件を、特に治療後の定められた時間枠中に対象に形成できる。細胞型の例は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞及び免疫系の他の細胞を含む。
【０４１９】
一実施形態において、免疫エフェクターＣＡＲ分子を発現する細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子は、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤を受けた対象から得る。一実施形態において、ＣＡＲを発現するように操作される免疫エフェクター細胞集団、例えばＴ細胞を、対象又は対象から採取したＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞のレベル又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比が少なくとも一過性に増加するように、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投薬から十分な時間後又は十分な用量の後に採取する。
【０４２０】
他の実施形態において、ＣＡＲを発現するように操作されているか又は操作する免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞集団を、ＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の数を増やすか又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比を増やす量のｍＴＯＲ阻害剤と接触させることにより、エクスビボで処理できる。
【０４２１】
一実施形態において、Ｔ細胞集団は、ジアシルグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）欠損である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ  ＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はＤＧＫ活性が低下した又は阻害された細胞である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ発現を低減又は阻止するための遺伝的方法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与により産生できる。代わりに、ＤＧＫ欠損細胞は、本明細書に記載のＤＧＫ阻害剤での処置により産生できる。
【０４２２】
一実施形態において、Ｔ細胞集団は、イカロス欠損である。イカロス欠損細胞は、イカロスＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はイカロス活性が低下した又は阻害された細胞を含み、イカロス欠損細胞は、イカロス発現を低減又は阻止するための遺伝的方法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与により産生できる。代わりに、イカロス欠損細胞は、イカロス阻害剤、例えばレナリドマイドでの処置により産生できる。
【０４２３】
実施形態において、Ｔ細胞集団は、ＤＧＫ欠損及びイカロス欠損であり、例えばＤＧＫ及びイカロスを発現しないか、又はＤＧＫ及びイカロス活性が低下又は阻害されている。このようなＤＧＫ及びイカロス欠損細胞は、本明細書に記載の方法のいずれかにより産生できる。
【０４２４】
一実施形態において、ＮＫ細胞を対象から得る。別の実施形態において、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞株、例えばＮＫ−９２細胞株（Ｃｏｎｋｗｅｓｔ）である。
【０４２５】
同種異系ＣＡＲ細胞を含めた、ＣＡＲ細胞の修飾
本明細書に記載される実施形態において、免疫エフェクター細胞は同種異系免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞であり得る。例えば、細胞は、同種異系Ｔ細胞、例えば機能性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び／又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩ及び／又はβ−２ミクログロブリン（β２ｍ）の発現を欠いている同種異系Ｔ細胞であり得る。同種異系ＣＡＲの組成物及びその方法については、例えば、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレット（全体として参照により本明細書に援用される）の２２７〜２３７頁に記載されている。
【０４２６】
一部の実施形態において、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、ＴＣＲ、及び／又はＨＬＡ、及び／又はβ２ｍ、及び／又は本明細書に記載される抑制性分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβ）の発現が低下するように、例えば本明細書に記載される方法、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又はジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を用いて修飾される。
【０４２７】
一部の実施形態において、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、テロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴを発現するように操作される。一実施形態において、かかる修飾は患者における細胞の持続性を改善する。
【０４２８】
Ｔ細胞の活性化及び増殖
Ｔ細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；同第６，５３４，０５５号明細書；同第６，９０５，６８０号明細書；同第６，６９２，９６４号明細書；同第５，８５８，３５８号明細書；同第６，８８７，４６６号明細書；同第６，９０５，６８１号明細書；同第７，１４４，５７５号明細書；同第７，０６７，３１８号明細書；同第７，１７２，８６９号明細書；同第７，２３２，５６６号明細書；同第７，１７５，８４３号明細書；同第５，８８３，２２３号明細書；同第６，９０５，８７４号明細書；同第６，７９７，５１４号明細書；同第６，８６７，０４１号明細書；及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号明細書に記載する方法を使用して、一般的に活性化及び増殖できる。
【０４２９】
一般に、本発明のＴ細胞を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体結合シグナルを刺激する薬剤が結合したその表面と、Ｔ細胞の表面上の共刺激性分子を刺激するリガンドを接触させることにより増殖できる。特に、Ｔ細胞集団は、表面上に固定された抗ＣＤ３抗体若しくはその抗原結合断片又は抗ＣＤ２抗体との接触又はカルシウムイオノフォアと組み合わせたタンパク質キナーゼＣアクティベータ（例えば、ブリオスタチン）との接触により、本明細書に記載のように刺激し得る。Ｔ細胞表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子と結合するリガンドである。例えば、Ｔ細胞集団を、Ｔ細胞の増殖刺激に適する条件下で抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させ得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体を使用できる。抗ＣＤ２８抗体の例は、９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８を含み（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）、当技術分野で一般に知られる他の方法のように使用できる（Ｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５−３９７７，１９９８；Ｈａａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８，１９９９；Ｇａｒｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ．２２７（１−２）：５３−６３，１９９９）。
【０４３０】
一態様において、Ｔ細胞のための一次刺激シグナル及び共刺激シグナルは、異なるプロトコルにより提供され得る。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液中でも表面と結合し得る。表面に結合しているとき、薬剤は、同じ表面（即ち「シス」形態）又は別の表面（即ち「トランス」形態）に結合し得る。代わりに、一方の薬剤が表面に結合し、他方が溶液にあり得る。一態様において、共刺激シグナルを提供する薬剤は、細胞表面に結合し、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、溶液中であるか又は表面と結合する。一態様において、両剤は、溶液中にあり得る。一態様において、薬剤は、不溶性形態であり、Ｆｃ受容体又は抗体又は薬剤と結合する他の結合剤を発現する細胞などの表面に架橋され得る。この点に関して、例えば本発明におけるＴ細胞の活性化及び増殖のために意図される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）について、米国特許出願公開第２００４０１０１５１９号明細書及び同第２００６００３４８１０号明細書を参照されたい。
【０４３１】
一態様において、２剤は、ビーズに、同じビーズ、即ち「シス」又は別のビーズ、即ち「トランス」で固定化される。例として、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片であり、共刺激シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体又はその抗原結合断片であり、両剤は、均等な分子量で同じビーズに共固定化される。一態様において、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖及びＴ細胞増殖のためのビーズに結合した１：１比の各抗体を使用する。本発明の一態様において、１：１比を使用して観察された増殖と比較して、Ｔ細胞増殖の増殖が観察されるように、ビーズに結合した抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比を使用する。特定の一態様において、１：１比を使用して観察された増殖と比較して約１〜約３倍増加が観察される。一態様において、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体比は、１００：１〜１：１００及びその間の全ての整数値の範囲である。本発明の一態様において、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合しており、即ちＣＤ３：ＣＤ２８比が１未満である。本発明の一態様において、ビーズに結合した抗ＣＤ２８抗体対抗ＣＤ３抗体比は、２：１より大きい。特定の一態様において、ビーズに結合した１：１００  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：７５  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。更なる態様において、ビーズに結合した１：５０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：３０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。ある好ましい態様において、ビーズに結合した１：１０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：３  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。更なる態様において、ビーズに結合した３：１  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。
【０４３２】
１：５００〜５００：１及びその間の任意の整数値の粒子対細胞比をＴ細胞又は他の標的細胞の刺激のために使用し得る。当業者に容易に認識され得るように、粒子対細胞比は、標的細胞に対する粒子径に依存し得る。例えば、小さいサイズのビーズは、少ない細胞にのみ結合でき、大きいビーズは、多く結合できる。一態様において、細胞対粒子比は、１：１００〜１００：１及びその間の任意の整数値の範囲であり、更なる態様において１：９〜９：１及びその間の任意の整数値からなる比をＴ細胞刺激に使用し得る。Ｔ細胞刺激をもたらす抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８結合粒子対Ｔ細胞の比は、上記のように変わり得るが、しかしながら、ある好ましい値は、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１及び１５：１を含み、１つの好ましい比は少なくとも１：１粒子対Ｔ細胞である。一態様において、１：１以下の粒子対細胞比を使用する。特定の一態様において、好ましい粒子：細胞比は、１：５である。更なる態様において、粒子対細胞比は、刺激の日により変わり得る。例えば、一態様において、粒子対細胞比は、１日目は１：１〜１０：１であり、更なる粒子をその後１０日目まで連日又は隔日で細胞に添加し、最終比１：１〜１：１０である（添加の比の細胞数に基づく）。特定の一態様において、粒子対細胞比は、刺激１日目に１：１であり、刺激３日目及び５日目に１：５に調節する。一態様において、粒子を、１日目の１：１及び刺激３日目及び５日目の１：５の最終比に基づいて、連日又は隔日で添加する。一態様において、粒子対細胞比は、刺激１日目は２：１であり、刺激３日目及び５日目に１：１０に調節する。一態様において、粒子を、１日目の１：１及び３日目及び５日目の１：１０の最終比に基づいて、連日又は隔日で添加する。当業者は、多様な他の比が本発明における使用に適し得ることを認識する。特に、比は、粒子径並びに細胞サイズ及びタイプによる。一態様において、使用するための最も典型的な比は、１日目の１：１、２：１及び３：１付近である。
【０４３３】
本発明の更なる態様において、Ｔ細胞などの細胞を薬剤被覆ビーズと組み合わせ、ビーズ及び細胞をその後分離し、次いで細胞を培養する。異なる態様において、培養前に薬剤被覆ビーズ及び細胞を分離するが、一緒に培養する。更なる態様において、ビーズ及び細胞を磁気力などの力の適用によりまず濃縮し、細胞表面マーカーのライゲーションを増加させ、それにより細胞刺激を誘導する。
【０４３４】
例として、細胞表面タンパク質を、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８が結合した常磁性ビーズ（３ｘ２８ビーズ）とＴ細胞を接触させることにより、ライゲートし得る。一態様において、細胞（例えば、１０４〜１０９Ｔ細胞）及びビーズ（例えば、ＤＹＮＡビーズＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ常磁性ビーズを１：１比）を緩衝液、例えばＰＢＳ（カルシウム及びマグネシウムなどの二価カチオンなし）中で合わせる。再び、任意の細胞濃度を使用し得ることが当業者に容易に認識され得る。例えば、標的細胞は、試料中で極めて稀であり、試料の０．０１％のみが含まれるか又は試料全体（即ち１００％）が目的の標的細胞で構成され得る。従って、あらゆる細胞数が本発明に関連して一体となる。一態様において、細胞と粒子との最大接触を確実にするために、粒子及び細胞を混合する体積を有意に減少させる（即ち細胞の濃度を高める）ことが望ましいことがある。例えば、一態様において、約１００億細胞／ｍｌ、９０億細胞／ｍｌ、８０億細胞／ｍｌ、７０億細胞／ｍｌ、６０億細胞／ｍｌ、５０億細胞／ｍｌ又は２０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一態様において、１億細胞／ｍｌ超を使用する。更なる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。更なる態様において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用して、細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞のより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、且つ特定の態様では得ることが望ましいであろう。例えば、高濃度細胞の使用は、通常、ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０４３５】
一実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸が形質導入された細胞を例えば本明細書に記載の方法により増殖する。一実施形態において、細胞を数時間（例えば、約２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１５時間、１８時間、２１時間）〜約１４日（例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日又は１４日）の期間の培養により増殖する。一実施形態において、細胞は、４〜９日の期間増殖される。一実施形態において、細胞は、８日以下、例えば７日、６日又は５日の期間増殖される。一実施形態において、細胞、例えば本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件において９日間培養で増殖された同じ細胞よりも強力である。効力は、例えば、多様なＴ細胞機能、例えば増殖、標的細胞死、サイトカイン産生、活性化、遊走又はそれらの組み合わせにより規定され得る。一実施形態において、５日増殖された細胞、例えば本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、抗原刺激による細胞倍加の少なくとも１倍、２倍、３倍又は４倍増加を示す。一実施形態において、細胞、例えば本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞を発現する細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、高い炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ−γ及び／又はＧＭ−ＣＳＦレベルを示す。一実施形態において、５日増殖された細胞、例えば本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ−γ及び／又はＧＭ−ＣＳＦレベルのｐｇ／ｍｌで少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍又はそれを超えて増加する。
【０４３６】
本発明の一態様において、混合物は、数時間（約３時間）〜約１４日間又は間にある任意の１時間毎の整数値にわたって培養され得る。一態様において、混合物は２１日間培養され得る。本発明の一態様において、ビーズとＴ細胞とは一緒に約８日間培養される。一態様において、ビーズとＴ細胞とは一緒に２〜３日間培養される。Ｔ細胞の培養期間が６０日以上となり得るような数サイクルの刺激も望まれ得る。Ｔ細胞培養に適する条件は、血清（例えば、胎児ウシ又はヒト血清）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβ及びＴＮＦ−α又は当業者に知られる細胞増殖のための任意の他の添加剤を含む、増殖及び生存能に必要な因子を含み得る、適切な培地（例えば、最小必須培地又はＲＰＭＩ培地１６４０又はＸ−ｖｉｖｏ  １５（Ｌｏｎｚａ））を含む。細胞の増殖のための他の添加剤は、界面活性剤、プラスマネート、及びＮ−アセチル−システイン、及び２−メルカプトエタノールなどの還元剤を含むが、これらに限定されない。培地は、無血清又は適切な量の血清（又は血漿）が添加されたか、又は規定されたセットのホルモン及び／又はＴ細胞の増殖及び拡大に十分な量のサイトカインが添加されたＲＰＭＩ  １６４０、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α−ＭＥＭ、Ｆ−１２、Ｘ−Ｖｉｖｏ１５及びＸ−Ｖｉｖｏ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒを含み得る。抗生物質、例えばペニシリン及びストレプトマイシンは、実験的培養においてのみ包含され、対象に注入すべき細胞の培養に含まれない。標的細胞は、増殖を支持するのに必要な条件、例えば適切な温度（例えば、３７℃）及び雰囲気（例えば、空気＋５％ＣＯ２）で維持される。
【０４３７】
一実施形態において、細胞は、例えば、フローサイトメトリーなどの本明細書に記載の方法により測定して、１４日の増殖期間にわたり、細胞の少なくとも２００倍（例えば、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍）増加をもたらす１つ以上のインターロイキンを含む適切な培地（例えば、本明細書に記載の培地）で増殖させる。一実施形態において、細胞は、ＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７（例えば、ＩＬ−１５及びＩＬ−７）の存在下で増殖させる。
【０４３８】
実施形態において、本明細書に記載の方法、例えばＣＡＲ発現細胞製造法は、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、例えば抗ＣＤ２５抗体又はその断片又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ−２を使用して細胞集団から除去することを含む。細胞集団からＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を除去する方法は、本明細書に記載される。実施形態において、方法、例えば製造法は、細胞集団（例えば、ＣＤ２５＋Ｔ細胞などのＴ制御性細胞が枯渇されている細胞集団；又は抗ＣＤ２５抗体、その断片又はＣＤ２５結合リガンドと前に接触された細胞集団）とＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７との接触を更に含む。例えば、細胞集団（例えば、抗ＣＤ２５抗体、その断片又はＣＤ２５結合リガンドと先に接触されている）をＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７の存在下で増殖させる。
【０４３９】
一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物とＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで接触させることを含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ−１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物と接触させる。
【０４４０】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物と接触させる。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ−１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方を含む組成物と接触させる。一実施形態において、接触は、リンパ球亜集団、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞の生存及び増殖をもたらす。
【０４４１】
種々の刺激時間に曝されているＴ細胞は、異なる特徴を示し得る。例えば、典型的な血液又はアフェレーシスした末梢血単核細胞産物は、細胞毒性又はサプレッサーＴ細胞集団より大きいヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３及びＣＤ２８受容体での刺激によるＴ細胞のエクスビボ増殖は、約８〜９日目前まで主にＴＨ細胞からなるＴ細胞集団を産生するが、約８〜９日目後、Ｔ細胞集団は、徐々に大きくなるＴＣ細胞集団を含む。従って、処置の目的により、主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することは有利であり得る。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的サブセットが単離されている場合、このサブセットを大きい程度まで増殖させることが有利であり得る。
【０４４２】
更に、ＣＤ４及びＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは、細胞増殖過程の経過中、有意に、しかし、主に再現性よく変化する。そうして、このような再現性は、特定の目的のために活性化Ｔ細胞産物をもたらす能力を可能とする。
【０４４３】
ＢＣＭＡ  ＣＡＲが構築されると、適切なインビトロ及び動物モデルにおける抗原刺激後にＴ細胞を増殖させる能力、再刺激の非存在下でのＴ細胞増殖の持続及び抗癌活性など、しかし、これらに限定されない分子の活性を評価するために種々のアッセイが使用され得る。ＢＣＭＡ  ＣＡＲの効果を評価するためのアッセイは、以下に更に詳細に記載される。
【０４４４】
初代Ｔ細胞におけるＣＡＲ発現のウェスタンブロット分析を、単量体及び二量体の存在を検出するために使用できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。極めて簡潔には、ＣＡＲを発現するＴ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の１：１混合物）をインビトロで１０日超増殖させ、続いて溶解及び還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥを行う。全長ＴＣＲ−ζ細胞質ドメイン及び内因性ＴＣＲ−ζ鎖を含むＣＡＲを、ＴＣＲ−ζ鎖に対する抗体を使用するウェスタンブロッティングにより検出する。同じＴ細胞サブセットを、共有結合性二量体形成の評価を可能とするために非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析に使用する。
【０４４５】
抗原刺激後のＣＡＲ＋Ｔ細胞のインビトロ増殖をフローサイトメトリーにより測定できる。例えば、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の混合物をαＣＤ３／αＣＤ２８  ａＡＰＣで刺激し、続いて分析すべきプロモーターの制御下において、ＧＦＰを発現するレンチウイルスベクターで形質導入する。代表的プロモーターは、ＣＭＶ  ＩＥ遺伝子、ＥＦ−１α、ユビキチンＣ又はホスホグリセロキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターを含む。ＧＦＰ蛍光を、ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットの培養６日目にフローサイトメトリーにより評価する。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。代わりに、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の混合物を０日目にαＣＤ３／αＣＤ２８被覆磁気ビーズで刺激し、２Ａリボソームスキッピング配列を使用するＣＡＲとｅＧＦＰを発現するバイシストロニックレンチウイルスベクターを使用して、１日目にＣＡＲを形質導入する。培養物をＢＣＭＡ発現細胞、例えば多発性骨髄腫細胞株又はＫ５６２−ＢＣＭＡで再刺激し、続いて洗浄する。外来性ＩＬ−２を１００ＩＵ／ｍｌにおいて隔日で培養物に添加する。ＧＦＰ＋Ｔ細胞を、ビーズベースの計数を使用するフローサイトメトリーにより数える。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。
【０４４６】
再刺激非存在下の持続するＣＡＲ＋Ｔ細胞増殖も測定できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。簡潔には、平均Ｔ細胞体積（ｆｌ）を、０日目のαＣＤ３／αＣＤ２８被覆磁気ビーズでの刺激及び１日目の記載するＣＡＲの形質導入後、培養８日目にＣｏｕｌｔｅｒ  Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ  ＩＩＩ粒子カウンター、Ｎｅｘｃｅｌｏｍ  Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ  Ｖｉｓｉｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｃｅｐｔｅｒを使用して測定する。
【０４４７】
動物モデルもＣＡＲＴ活性の測定に使用することができる。例えば、ヒトＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ＋Ｔ細胞を使用して免疫不全マウスの原発性ヒト多発性骨髄腫を処置する異種移植モデルを使用することができる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。極めて簡潔に言えば、ＭＭの樹立後、マウスを治療群に関して無作為化する。ＭＭを担持する免疫不全マウスに種々の数のＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞を注射することができる。疾患の進行及び腫瘍量に関して動物を１週間間隔で評価する。ログ・ランク検定を使用して、群の生存曲線を比較する。更に、免疫不全マウスへのＴ細胞注射４週間後の絶対的末梢血ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞数も分析し得る。マウスに多発性骨髄腫細胞を注射し、３週間後、例えばｅＧＦＰに連結したＣＡＲをコードするバイシストロニックレンチウイルスベクターによりＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞を注射する。Ｔ細胞を、注入ＧＦＰ＋Ｔ細胞の４５〜５０％に、注射前に偽形質導入細胞と混合することにより標準化し、フローサイトメトリーにより確認する。動物を１週間間隔で白血病について評価する。ＣＡＲ＋Ｔ細胞群の生存曲線を、ログ・ランク検定を使用して比較する。
【０４４８】
細胞増殖及びサイトカイン産生の評価は、例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）に以前に記載されている。簡潔には、ＣＡＲ媒介増殖の評価を、洗浄したＴ細胞と、ＢＣＭＡを発現するＫ５６２細胞とを最終Ｔ細胞：Ｋ５６２比２：１で混合することによりマイクロタイタープレートにおいて実施するか、又は他のＢＣＭＡ発現骨髄腫細胞を使用前にγ線で照射する。抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８（クローン９．３）モノクローナル抗体を、これらのシグナルがエクスビボでの長期ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を支持するため、刺激Ｔ細胞増殖について陽性対照として役立つＫＴ３２−ＢＢＬ細胞の培養物に添加する。Ｔ細胞を、製造者により記載のとおりＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ（商標）蛍光ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）及びフローサイトメトリーを使用して培養において数える。ＣＡＲ＋Ｔ細胞を、ｅＧＦＰ−２Ａ連結ＣＡＲ発現レンチウイルスベクターで操作されたＴ細胞を使用するＧＦＰ発現により同定する。ＧＦＰを発現しないＣＡＲ＋Ｔ細胞について、ＣＡＲ＋Ｔ細胞をビオチニル化組み換えＢＣＭＡタンパク質及び二次アビジン−ＰＥコンジュゲートにより検出する。Ｔ細胞のＣＤ４＋及びＣＤ８＋発現も、特異的モノクローナル抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して同時に検出する。サイトカイン測定を、製造業者の指示に従ってヒトＴＨ１／ＴＨ２サイトカイン細胞数測定ビーズアレイキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して再刺激２４時間後に回収した上清で実施する。ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーターを使用して蛍光を評価し、データを製造業者の指示に従って分析する。
【０４４９】
細胞毒性を標準的５１Ｃｒ放出アッセイにより評価できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。簡潔には、標的細胞（例えば、ＢＣＭＡを発現するＫ５６２株及び初代多発性骨髄腫細胞）に５１Ｃｒ（ＮａＣｒＯ４として、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を３７℃で２時間、頻繁に撹拌しながら充填し、完全ＲＰＭＩで２回洗浄し、マイクロタイタープレートに播種する。エフェクターＴ細胞をウェル中で完全ＲＰＭＩ中に標的細胞と種々のエフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）比で混合する。更なる培地のみ（自発的放出、ＳＲ）又はｔｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００洗剤１％溶液（全放出、ＴＲ）を含むウェルも調製する。３７℃で４時間のインキュベーション後、各ウェルから上清を回収する。放出された５１Ｃｒを、次いでγ粒子カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して測定する。各条件を少なくとも３回行い、溶解のパーセントを式：溶解％＝（ＥＲ−ＳＲ）／（ＴＲ−ＳＲ）（式中、ＥＲは、各実験条件で放出された平均５１Ｃｒを示す）を使用して計算する。代わりに、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイを用いても細胞毒性を評価することができる。
【０４５０】
造影技術を使用して、腫瘍担持動物モデルにおけるＣＡＲの特異的輸送及び増殖を評価できる。このようなアッセイは、例えば、Ｂａｒｒｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２２：１５７５−１５８６（２０１１）に記載されている。簡潔には、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−（ＮＳＧ）マウス又は他の免疫不全のものに多発性骨髄腫細胞をＩＶ注射し、７日後、ＣＡＲ構築物でエレクトロポレーションから４時間後にＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞を注射する。Ｔ細胞は、ホタルルシフェラーゼを発現するようにレンチウイルス構築物で安定にトランスフェクトされ、マウスをバイオルミネセンスについて造影する。代わりに、多発性骨髄腫異種移植モデルにおけるＣＡＲ＋Ｔ細胞の単回注射の治療有効性及び特異性を次のように測定できる。ＮＳＧマウスに、ホタルルシフェラーゼを安定に発現するように形質導入した多発性骨髄腫細胞を注射し、続いて後日にＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物で電気穿孔したＴ細胞を１回尾静脈注射する。動物を注射後の種々の時点で造影する。例えば、５日目（処置２日前）及び８日目（ＣＡＲ＋ＰＢＬ後２４時間）に代表的マウスにおけるホタルルシフェラーゼ陽性腫瘍の光子密度ヒートマップを作成できる。
【０４５１】
本明細書に開示される方法に代えて又は組み合わせて、ＣＡＲリガンドの使用が関わる、ＣＡＲ発現細胞の検出及び／又は定量化（例えば、インビトロ又はインビボ（例えば、臨床モニタリング））；免疫細胞拡大及び／又は活性化；及び／又はＣＡＲ特異的選択の１つ以上のための方法及び組成物が開示される。一例示的実施形態において、ＣＡＲリガンドは、ＣＡＲ分子に結合する、例えばＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインに結合する抗体（例えば、抗原結合ドメインに結合する抗体、例えば抗イディオタイプ抗体；又は細胞外結合ドメインの定常領域に結合する抗体）である。他の実施形態において、ＣＡＲリガンドはＣＡＲ抗原分子（例えば、本明細書に記載されるとおりのＣＡＲ抗原分子）である。
【０４５２】
一態様において、ＣＡＲ発現細胞の検出及び／又は定量化方法が開示される。例えば、ＣＡＲリガンドを使用してＣＡＲ発現細胞をインビトロ又はインビボで検出及び／又は定量化することができる（例えば、患者のＣＡＲ発現細胞の臨床モニタリング又は患者への投与）。この方法は、
ＣＡＲリガンド（任意選択で、標識されたＣＡＲリガンド、例えばタグ、ビーズ、放射性又は蛍光標識を含むＣＡＲリガンド）を提供すること；
ＣＡＲ発現細胞を取得すること（例えば、製造用試料又は臨床試料など、ＣＡＲ発現細胞を含有する試料を取得すること）；
結合が起こる条件下でＣＡＲ発現細胞をＣＡＲリガンドと接触させることであって、それにより存在するＣＡＲ発現細胞のレベル（例えば、量）を検出すること
を含む。ＣＡＲ発現細胞とＣＡＲリガンドの結合は、ＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡなど、標準技法を用いて検出することができる。
【０４５３】
別の態様において、細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）を拡大し及び／又は活性化させる方法が開示される。この方法は、
ＣＡＲ発現細胞（例えば、第１のＣＡＲ発現細胞又は一過性に発現するＣＡＲ細胞）を提供すること；
免疫細胞拡大及び／又は増殖が起こる条件下で前記ＣＡＲ発現細胞をＣＡＲリガンド、例えば本明細書に記載されるとおりのＣＡＲリガンド）と接触させることであって、それにより活性化された及び／又は拡大した細胞集団を作製すること
を含む。
【０４５４】
特定の実施形態において、ＣＡＲリガンドは、上に存在する（例えば、基質、例えば天然に存在しない基質に固定化されているか又は取り付けられている）。一部の実施形態において、基質は非細胞性基質である。非細胞性基質は、例えば、プレート（例えば、マイクロタイタープレート）、膜（例えば、ニトロセルロース膜）、マトリックス、チップ又はビーズから選択される固体支持体であり得る。実施形態において、ＣＡＲリガンドは基質に（例えば、基質表面上に）存在する。ＣＡＲリガンドは、基質に固定化されるか、取り付けられるか、又は共有結合的若しくは非共有結合的に会合（例えば、架橋）され得る。一実施形態において、ＣＡＲリガンドはビーズに取り付けられる（例えば、共有結合的に取り付けられる）。上記の実施形態において、免疫細胞集団はインビトロ又はエキソビボで拡大することができる。本方法は、ＣＡＲ分子のリガンドの存在下で、例えば本明細書に記載される方法のいずれかを用いて免疫細胞集団を培養することを更に含み得る。
【０４５５】
他の実施形態において、細胞を拡大し及び／又は活性化させる方法は、第２の刺激分子、例えばＣＤ２８の追加を更に含む。例えば、ＣＡＲリガンド及び第２の刺激分子が基質、例えば１つ以上のビーズに固定化され得、それにより細胞拡大及び／又は活性化の増加がもたらされる。
【０４５６】
更に別の態様において、ＣＡＲ発現細胞の選択又は濃縮方法が提供される。この方法は、ＣＡＲ発現細胞を本明細書に記載されるとおりのＣＡＲリガンドと接触させること；及びＣＡＲリガンドの結合に基づいて細胞を選択することを含む。
【０４５７】
更に他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞を枯渇、減少及び／又は死滅させる方法が提供される。この方法は、ＣＡＲ発現細胞を本明細書に記載されるとおりのＣＡＲリガンドと接触させること；及びＣＡＲリガンドの結合に基づいて細胞を標的化することを含み、それによりＣＡＲ発現細胞の数が減少し、且つ／又はそれが死滅する。一実施形態において、ＣＡＲリガンドは毒性薬剤（例えば、毒素又は細胞除去薬物）にカップリングされる。別の実施形態において、抗イディオタイプ抗体がエフェクター細胞活性、例えばＡＤＣＣ又はＡＤＣ活性を生じさせることができる。
【０４５８】
本明細書に開示される方法に使用することのできる例示的抗ＣＡＲ抗体については、例えば、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに、且つＪｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＣＡＲ）−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  Ｄｅｔｅｃｔ  ＣＤ１９−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ”，ＰＬＯＳ  Ｍａｒｃｈ  ２０１３  ８：３  ｅ５７８３８により（これらの内容は参照によって援用される）記載されている。一実施形態において、抗イディオタイプ抗体分子は、抗ＣＤ１９抗体分子、例えば抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを認識する。例えば、抗イディオタイプ抗体分子は、Ｊｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬＯＳ  Ｍａｒｃｈ  ２０１３  ８：３  ｅ５７８３８に記載されるＣＤ１９特異的ＣＡＲ  ｍＡｂクローン番号１３６．２０．１と結合に関して競合することができ；ＣＤ１９特異的ＣＡＲ  ｍＡｂクローン番号１３６．２０．１と同じＣＤＲ（例えば、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＣＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３の１つ以上、例えばその全て、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義又はＫａｂａｔ定義及びＣｈｏｔｈｉａ定義の組み合わせを用いる）を有し得；ＣＤ１９特異的ＣＡＲ  ｍＡｂクローン番号１３６．２０．１のとおりの１つ以上（例えば、２つ）の可変領域を有し得るか、又はＣＤ１９特異的ＣＡＲ  ｍＡｂクローン番号１３６．２０．１を含み得る。一部の実施形態において、抗イディオタイプ抗体は、Ｊｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．に記載される方法により作られた。別の実施形態において、抗イディオタイプ抗体分子は、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載される抗イディオタイプ抗体分子である。一部の実施形態において、抗イディオタイプ抗体分子は、１３６．２０．１など、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットの抗体分子と同じＣＤＲ（例えば、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＣＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３の１つ以上、例えばその全て）を有し；国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットの抗体分子の１つ以上（例えば、２つ）の可変領域を有し得るか、又は１３６．２０．１など、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットの抗体分子を含み得る。他の実施形態において、抗ＣＡＲ抗体は、例えば、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載されるとおりの、ＣＡＲ分子の細胞外結合ドメインの定常領域に結合する。一部の実施形態において、抗ＣＡＲ抗体は、ＣＡＲ分子の細胞外結合ドメインの定常領域、例えば重鎖定常領域（例えば、ＣＨ２−ＣＨ３ヒンジ領域）又は軽鎖定常領域に結合する。例えば、一部の実施形態において抗ＣＡＲ抗体は、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載される２Ｄ３モノクローナル抗体と結合に関して競合し、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載されるとおりの２Ｄ３と同じＣＤＲ（例えば、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＣＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３の１つ以上、例えばその全て）を有するか、又は２Ｄ３���１つ以上（例えば、２つ）の可変領域を有するか、又は２Ｄ３を含む。
【０４５９】
一部の態様及び実施形態において、本明細書における組成物及び方法は、例えば、２０１４年７月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／０３１，６９９号明細書（この内容は全体として参照により本明細書に援用される）に記載されるとおり、特定のＴ細胞サブセットに最適化される。一部の実施形態において、最適化されたＴ細胞サブセットは、対照Ｔ細胞、例えば同じ構築物を発現する異なる種類（例えば、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋）のＴ細胞と比較して持続性の亢進を呈する。
【０４６０】
一部の実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、本明細書に記載されるＣＡＲを含み、このＣＡＲは、ＣＤ４＋Ｔ細胞に好適な（例えば、それに最適化された、例えばその持続性の亢進につながる）細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＩＣＯＳドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、本明細書に記載されるＣＡＲを含み、このＣＡＲは、ＣＤ８＋Ｔ細胞に好適な（例えば、それに最適化された、例えばその持続性の亢進につながる）細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば４−１ＢＢドメイン、ＣＤ２８ドメイン又は別のＩＣＯＳドメイン以外の共刺激ドメインを含む。一部の実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲは、本明細書に記載される抗原結合ドメインを含み、例えばＢＣＭＡを標的とする抗原結合ドメインを含むＣＡＲ）。
【０４６１】
ある態様において、本明細書には、対象、例えば癌を有する対象を処置する方法が記載される。この方法は、有効量の、
１）ＣＡＲを含むＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＡＲＣＤ４＋）であって、
抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載される抗原結合ドメイン、例えばＢＣＭＡを標的とする抗原結合ドメインと；
膜貫通ドメインと；
細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば第１の共刺激ドメイン、例えばＩＣＯＳドメインと
を含むＣＡＲＣＤ４＋；及び
２）ＣＡＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＡＲＣＤ８＋）であって、
抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載される抗原結合ドメイン、例えばＢＣＭＡを標的とする抗原結合ドメインと；
膜貫通ドメインと；
細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば第２の共刺激ドメイン、例えば４−１ＢＢドメイン、ＣＤ２８ドメイン又は別のＩＣＯＳドメイン以外の共刺激ドメインと
を含むＣＡＲＣＤ８＋
を前記対象に投与することを含み；
ＣＡＲＣＤ４＋とＣＡＲＣＤ８＋とは互いに異なる。
【０４６２】
任意選択で、本方法は、
３）ＣＡＲを含む第２のＣＤ８＋Ｔ細胞（第２のＣＡＲＣＤ８＋）であって、
抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載される抗原結合ドメイン、例えばＢＣＭＡに特異的に結合する抗原結合ドメインと；
膜貫通ドメインと；
細胞内シグナル伝達ドメインと
を含む第２のＣＡＲＣＤ８＋を投与することを更に含み、第２のＣＡＲＣＤ８＋は、ＣＡＲＣＤ８＋に存在しない細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば共刺激シグナル伝達ドメインを含み、且つ任意選択でＩＣＯＳシグナル伝達ドメインを含まない。
【０４６３】
他のアッセイも、当技術分野において公知のものを含め、本発明のＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物の評価に使用することができる。
【０４６４】
治療上の適用
ＢＣＭＡ関連疾患及び／又は障害
一態様において、本発明は、ＢＣＭＡ発現に関連する疾患の処置方法を提供する。一態様において、本発明は、腫瘍の一部がＢＣＭＡ陰性であり、且つ及び腫瘍の一部がＢＣＭＡ陽性である疾患の処置方法を提供する。例えば、本発明のＣＡＲは、ＢＣＭＡ発現の上昇に関連する疾患に対する処置を受けたことがある対象の処置に有用であり、ＢＣＭＡレベルの上昇に対する処置を受けたことがある対象は、ＢＣＭＡレベルの上昇に関連する疾患を呈する。実施形態において、本発明のＣＡＲは、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患に対する処置を受けたことがある対象の処置に有用であり、ＢＣＭＡの発現に関して処置を受けたことがある対象は、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を呈する。
【０４６５】
一実施形態において、本発明は、疾患の処置方法を提供し、ＢＣＭＡは、正常細胞及び癌細胞の両方に発現するが、正常細胞では低いレベルで発現する。一実施形態において、方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲが、ＢＣＭＡを発現する癌細胞に結合して死滅させることができる親和性で結合する本発明のＣＡＲを選択することを更に含むが、ＢＣＭＡを発現している正常細胞の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％未満（例えば、本明細書に記載のアッセイにより測定される）が死滅する。例えば、Ｃｒ５１  ＣＴＬに基づくフローサイトメトリーなどの死滅アッセイを使用することができる。一実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、標的抗原について、１０−４Ｍ〜１０−８Ｍ、例えば１０−５Ｍ〜１０−７Ｍ、例えば１０−６Ｍ又は１０−７Ｍの結合親和性ＫＤを有する抗原結合ドメインを有する。一実施形態において、ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、参照抗体、例えば本明細書に記載の抗体より少なくとも５倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍又は１０００倍小さい結合親和性を有する。
【０４６６】
一態様において、本発明は、哺乳類免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞での発現のためのプロモーターに作動可能に連結されたＢＣＭＡ  ＣＡＲを含むベクターに関する。一態様において、本発明は、ＢＣＭＡ発現腫瘍の処置に用いられるＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現する組換え免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を提供し、ＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現する組換え免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と称される。一態様において、本発明のＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）が腫瘍細胞を標的とし、腫瘍の成長が阻害されるように、その表面に発現する本発明の少なくとも１つのＢＣＭＡ  ＣＡＲを腫瘍細胞に接触させる能力を有する。
【０４６７】
一態様において、本発明は、ＢＣＭＡ発現腫瘍細胞の成長を阻害する方法に関し、この方法は、抗原に応答してＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）が活性化し、癌細胞を標的とするように、本発明のＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を腫瘍細胞に接触させることを含み、腫瘍の成長が阻害される。
【０４６８】
一態様において、本発明は、対象の癌を処置する方法に関する。この方法は、対象において癌が処置されるように、本発明のＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を対象に投与することを含む。本発明のＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）によって治療可能な癌の例は、ＢＣＭＡの発現に関連する癌である。
【０４６９】
本発明は、ある種の細胞療法を含み、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝的に修飾され、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）が、それを必要とするレシピエントに注入される。注入された細胞は、レシピエントで腫瘍細胞を殺傷することができる。抗体療法と異なり、ＣＡＲ修飾細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、インビボで複製でき、持続した腫瘍制御をもたらし得る長期残留性をもたらす。種々の態様において、患者に投与された細胞（例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞）又はその子孫は、患者において、患者に細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を投与した後に少なくとも４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年又は５年持続する。
【０４７０】
本発明は、ある種の細胞療法も含み、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を一過性に発現するように例えばインビトロ転写ＲＮＡにより改変され、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、それを必要とするレシピエントに注入される。注入された細胞は、レシピエントで腫瘍細胞を殺傷することができる。そのため、種々の態様において、患者に投与した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、患者に免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の投与後、１ヶ月、例えば３週間、２週間、１週間未満存在する。
【０４７１】
何らかの特定の理論に拘束されないが、ＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）により惹起される抗腫瘍免疫応答は、能動的又は受動的免疫応答であり得るか又は代わりに直接的対間接的免疫応答によるものであり得る。一態様において、ＣＡＲ形質導入免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、ＢＣＭＡを発現するヒト癌細胞に応答して特定の炎症誘発性サイトカイン分泌及び強力な細胞溶解性活性を示し、可溶性ＢＣＭＡ阻害に抵抗し、バイスタンダー死滅を媒介し、確立されたヒト腫瘍の退縮を媒介する。例えば、ＢＣＭＡ発現腫瘍の不均一な場における抗原低腫瘍細胞は、近辺の抗原陽性癌細胞に対して先に反応しているＢＣＭＡにリダイレクトされた免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）による間接的破壊を受け得る。
【０４７２】
一態様において、本発明の完全ヒトＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、哺乳動物におけるエクスビボ免疫化及び／又はインビボ治療のための一種のワクチンである。一態様において、哺乳動物は、ヒトである。
【０４７３】
エクスビボ免疫化に関して、ｉ）細胞の増殖、ｉｉ）細胞へのＣＡＲをコードする核酸の導入又はｉｉｉ）細胞の凍結保存の少なくとも１つが、哺乳動物に細胞を投与する前にインビトロで起こる。
【０４７４】
エクスビボ過程は、当技術分野で周知であり、下により詳細に記載する。簡潔には、細胞を哺乳動物（例えば、ヒト）から単離し、本明細書に記載するＣＡＲを発現するベクターで遺伝的に改変（即ちインビトロで形質導入又はトランスフェクト）される。ＣＡＲ修飾細胞を哺乳動物レシピエントに投与して、治療効果を提供できる。哺乳動物レシピエントは、ヒトであり得、ＣＡＲ修飾細胞は、レシピエントに対して自己であり得る。代わりに、細胞は、レシピエントに対して同種、同系又は異種であり得る。
【０４７５】
造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボ増殖のための方法は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載され、本発明の細胞に適用され得る。他の適当な方法は、当技術分野で知られ、従って、本発明は、細胞のエクスビボ増殖の特定の方法に限定されない。簡潔には、Ｔ細胞のエクスビボ培養及び増殖は、（１）哺乳動物からの採取した末梢血又は髄外植体からのＣＤ３４＋造血幹細胞及び前駆細胞回収、及び（２）エクスビボでのこのような細胞の増殖を含む。米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載される細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ−３Ｌ、ＩＬ−１、ＩＬ−３及びｃ−ｋｉｔリガンドなどの他の因子を細胞の培養及び増殖に使用できる。
【０４７６】
エクスビボ免疫化の点で細胞ベースのワクチンを使用するのに加えて、本発明は、患者における抗原に対する免疫応答を惹起するための、インビボ免疫化のための組成物及び方法も提供する。
【０４７７】
一般に、本明細書に記載の細胞活性化及び増殖は、免疫不全状態である個体で惹起する疾患の処置及び予防に利用し得る。特に、本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を、ＢＣＭＡの発現と関連する疾患、障害及び状態の処置に使用する。特定の態様において、本発明の細胞を、ＢＣＭＡの発現と関連する疾患、障害及び状態を発症するリスクのある患者の処置に使用する。従って、本発明は、処置を必要とする対象に、本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の治療有効量を投与することを含む、ＢＣＭＡの発現と関連する疾患、障害及び状態の処置又は予防のための方法を提供する。
【０４７８】
一態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を、癌又は悪性腫瘍などの増殖性疾患又は脊髄形成異常症、骨髄異形成症候群又は前白血病状態などの前癌状態の処置に使用し得る。一態様において、癌は、血液癌である。血液癌病態は、血液、骨髄及びリンパ系を冒す白血病及び悪性リンパ球増殖性病態などの癌の種類である。一態様において、血液癌は白血病又は血液学的なものである。ＢＣＭＡに関連する疾患又は障害の例は、多発性骨髄腫（ＭＭとしても知られる）である（Ｃｌａｕｄｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００２，１００（６）：２１７５−８６；及びＮｏｖａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００４，１０３（２）：６８９−９４を参照されたい）。多発性骨髄腫は、形質細胞性骨髄腫又はカーラー病としても知られ、骨髄における異常な又は悪性のプラズマＢ細胞の蓄積によって特徴付けられる癌である。高頻度に、癌細胞は隣接骨に浸潤して骨格構造を破壊し、骨痛及び骨折を引き起こす。骨髄腫症例のほとんどは、悪性形質細胞のクローン増殖によって過剰に産生される異常な免疫グロブリンであるパラプロテイン（Ｍタンパク質又は骨髄腫タンパク質としても知られる）の産生も特徴とする。国際骨髄腫ワーキンググループ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ：ＩＭＷＧ）の診断基準によれば、３０ｇ／Ｌを超える血清パラプロテインレベルが多発性骨髄腫の診断指標となる（Ｋｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００９），Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２３：３−９を参照されたい）。多発性骨髄腫の他の症状又は徴候には、腎機能の低下又は腎不全、骨病変、貧血、高カルシウム血症及び神経学的症状が含まれる。
【０４７９】
多発性骨髄腫を他の形質細胞増殖性障害と識別する判定基準が国際骨髄腫ワーキンググループ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ）により確立されている（Ｋｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００９），Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２３：３−９を参照されたい）。以下の判定基準の３つ全てを満たさなければならない：
−  クローン骨髄形質細胞≧１０％
−  血清及び／又は尿中モノクローナルタンパク質の存在（真性非分泌性多発性骨髄腫患者を除く）
−  基礎にある形質細胞増殖性障害に帰することのできる終末臓器障害のエビデンス、具体的には、
〇高カルシウム血症：血清カルシウム≧１１．５ｍｇ／１００ｍｌ
〇腎不全：血清クレアチニン＞１．７３ｍｍｏｌ／ｌ
〇貧血：正色素性、正球性で、正常下限を２ｇ／１００ｍｌ以上下回るヘモグロビン値又はヘモグロビン値＜１０ｇ／１００ｍｌ
〇骨病変：溶解性病変、重度のオステオペニア又は病的骨折。
【０４８０】
本明細書に記載される組成物及び方法によって処置することのできる他の形質細胞増殖性障害としては、限定はされないが、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス及びＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる）が挙げられる。
【０４８１】
多発性骨髄腫の病期分類には２つの病期分類システム：国際病期分類システム（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ：ＩＳＳ）（Ｇｒｅｉｐｐ  ｅｔ  ａｌ．（２００５），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３（１５）：３４１２−３４２０（本明細書において全体として参照により援用される）を参照されたい）及びデューリー・サーモンの病期分類システム（Ｄｕｒｉｅ−Ｓａｌｍｏｎ  Ｓｔａｇｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ：ＤＳＳ）（Ｄｕｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５），Ｃａｎｃｅｒ  ３６（３）：８４２−８５４（本明細書において全体として参照により援用される）を参照されたい）が用いられている。これらの２つの病期分類システムについて、以下の表に要約する。
【０４８２】
【表６３】
2021509009.tif 000072
【０４８３】
多発性骨髄腫の第３の病期分類システムは、改訂国際病期分類システム（Ｒ−ＩＳＳ）と称される（Ｐａｌｕｍｂｏ  Ａ，Ａｖｅｔ−Ｌｏｉｓｅａｕ  Ｈ，Ｏｌｉｖａ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ：米国臨床腫瘍学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）の学会誌  ２０１５；３３：２８６３−９（本明細書において全体として参照により援用される）を参照されたい）。Ｒ−ＩＳＳステージＩは、ＩＳＳステージＩ（血清β２−ミクログロブリンレベル＜３．５ｍｇ／Ｌ及び血清アルブミンレベル≧３．５ｇ／ｄＬ）、高リスクＣＡ［ｄｅｌ（１７ｐ）及び／又はｔ（４；１４）及び／又はｔ（１４；１６）］なし及び正常ＬＤＨレベル（正常範囲上限未満）を含む。Ｒ−ＩＳＳステージＩＩＩは、ＩＳＳステージＩＩＩ（血清β２−ミクログロブリンレベル＞５．５ｍｇ／Ｌ）及び高リスクＣＡ又は高ＬＤＨレベルを含む。Ｒ−ＩＳＳステージＩＩは、可能な他のあらゆる組み合わせを含む。
【０４８４】
患者の奏効は、Ｋｕｍａｒ  Ｓ，Ｐａｉｖａ  Ｂ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＫＣ，ｅｔ  ａｌ．“Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｎｄ  ｍｉｎｉｍａｌ  ｒｅｓｉｄｕａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ”．Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ；１７（８）：ｅ３２８−ｅ３４６（２０１６）（本明細書において全体として参照により援用される）に開示されるとおりの２０１６年版ＩＭＷＧ基準に基づいて決定することができる。表７に２０１６年版ＩＭＷＧ奏効評価基準を提供する。
【０４８５】
【表６４】
2021509009.tif 000073
【０４８６】
【表６５】
2021509009.tif 000074
【０４８７】
【表６６】
2021509009.tif 000075
【０４８８】
【表６７】
2021509009.tif 000076
【０４８９】
多発性骨髄腫及び関連疾患の標準処置には、化学療法、幹細胞移植（自家又は同種）、放射線療法及び他の薬物療法が含まれる。高頻度で用いられる抗骨髄腫薬物としては、アルキル化剤（例えば、ベンダムスチン、シクロホスファミド及びメルファラン）、プロテアソーム阻害薬（例えば、ボルテゾミブ）、コルチコステロイド系（例えば、デキサメタゾン及びプレドニゾン）及び免疫調節薬（例えば、サリドマイド及びレナリドマイド又はＲｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））又はこれらの任意の併用が挙げられる。ビスホスホネート薬も、骨量減少の予防に標準抗ＭＭ処置と併用して高頻度で投与されている。６５〜７０歳を超える患者は幹細胞移植が候補になる可能性は低い。ある場合には、二重自家幹細胞移植が、初回移植に対する奏効が準最適な６０歳未満の患者にとって選択肢である。本発明の組成物及び方法は、現在処方されている多発性骨髄腫処置のいずれかと併用して投与され得る。
【０４９０】
多発性骨髄腫処置の第１段階は、導入療法である。導入療法の目標は、骨髄中の形質細胞及び形質細胞によって産生される分子（例えば、タンパク質）の数を減少させることである。導入療法は、通常、以下の種類の薬物：ターゲット療法、化学療法又はコルチコステロイド系の２つ又は３つの併用を含む。
【０４９１】
幹細胞移植を受けることのできる患者に対する導入療法
幹細胞移植に向く患者は、通常７０歳以下であり、全般的に良好な健康状態である。患者は導入療法を受け、続いて高用量化学療法及び幹細胞移植を受けることができる。導入療法は、通常は数サイクルにわたって与えられ、以下の薬物の１つ以上を挙げることができる：ＣｙＢｏｒＤレジメン−シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ）、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）及びデキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ、Ｄｅｘａｓｏｎｅ）；ＶＲＤレジメン−ボルテゾミブ、レナリドマイド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ）及びデキサメタゾン；サリドマイド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ）及びデキサメタゾン；レナリドマイド及び低用量デキサメタゾン；ボルテゾミブ及びデキサメタゾン；ＶＴＤレジメン−ボルテゾミブ、サリドマイド及びデキサメタゾン；ボルテゾミブ、シクロホスファミド及びプレドニゾン；ボルテゾミブ、ドキソルビシン（アドリアマイシン）及びデキサメタゾン；デキサメタゾン；又はリポソームドキソルビシン（Ｃａｅｌｙｘ、Ｄｏｘｉｌ）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ）及びデキサメタゾン。
【０４９２】
幹細胞移植を受けることができない患者に対する導入療法
幹細胞移植を受けることができない患者は、以下の薬物の１つ以上を使用した導入療法を受け得る：ＣｙＢｏｒＤレジメン−シクロホスファミド、ボルテゾミブ及びデキサメタゾン；レナリドマイド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ）及び低用量デキサメタゾン；ＭＰＴレジメン−メルファラン、プレドニゾン及びサリドマイド；ＶＭＰレジメン−ボルテゾミブ、メルファラン及びプレドニゾン；ＭＰＬレジメン−メルファラン、プレドニゾン及びレナリドマイド；メルファラン及びプレドニゾン；ボルテゾミブ及びデキサメタゾン；デキサメタゾン；リポソームドキソルビシン、ビンクリスチン及びデキサメタゾン；サリドマイド及びデキサメタゾン；ＶＡＤレジメン−ビンクリスチン、ドキソルビシン及びデキサメタゾン；又はＶＲＤレジメン−ボルテゾミブ、レナリドマイド及びデキサメタゾン。
【０４９３】
ＢＣＭＡに関連する疾患又は障害の別の例は、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫である（Ｃｈｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００７，１０９（２）：７２９−３９；Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４，１７２（５）：３２６８−７９を参照されたい）。
【０４９４】
ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、別名ホジキン病は、白血球又はリンパ球に由来するリンパ系の癌である。リンパ腫を含む異常細胞は、リード・シュテルンベルク細胞と呼ばれる。ホジキンリンパ腫では、癌は一つのリンパ節群から別のリンパ節群へと広がる。ホジキンリンパ腫は、リード・シュテルンベルク細胞形態及びリード・シュテルンベルク細胞周囲の細胞組成（リンパ節生検を通じて決定されるとおり）に基づいて４つの病理サブタイプ：結節硬化型ＨＬ、混合細胞型サブタイプ、リンパ球豊富型又はリンパ球優位型、リンパ球減少型に細分類することができる。一部のホジキンリンパ腫は、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫でもあり得るか又は分類不能であり得る。ホジキンリンパ腫の症状及び徴候には、頸部、腋窩若しくは鼠径部のリンパ節の無痛性腫脹、発熱、寝汗、体重減少、疲労、そう痒感又は腹痛が含まれる。
【０４９５】
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は、ホジキンリンパ腫以外のあらゆる種類のリンパ腫が含まれる多様な血液癌の群を含む。非ホジキンリンパ腫のサブタイプは、主に細胞形態、染色体異常及び表面マーカーによって分類される。ＮＨＬサブタイプ（又はＮＨＬ関連癌）には、Ｂ細胞リンパ腫、例えば、限定はされないが、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病（Ｂ−ＰＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）（例えば、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫及び原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫）、濾胞性リンパ腫（例えば、濾胞中心リンパ腫、濾胞性小切れ込み核細胞型）、有毛細胞白血病、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫（バーキット様）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（例えば、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫又は粘膜関連リンパ系組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫及び脾性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫）、形質細胞腫／骨髄腫、前駆Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫（ＰＢ−ＬＢＬ／Ｌ）、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、原発性眼内リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）；及びＴ細胞リンパ腫、例えば、限定はされないが、未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（例えば、くすぶり型、慢性、急性及びリンパ腫性）、血管中心性リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（例えば、菌状息肉症、セザリー症候群等）、節外性ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫（鼻型）、腸症型腸管Ｔ細胞リンパ腫、大型顆粒リンパ球白血病、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病（Ｔ−ＬＢＬ／Ｌ）、Ｔ細胞性慢性リンパ性白血病／前リンパ球性白血病（Ｔ−ＣＬＬ／ＰＬＬ）及び分類不能末梢性Ｔ細胞リンパ腫が含まれる。ホジキンリンパ腫の症状及び徴候には、頸部、腋窩若しくは鼠径部のリンパ節の無痛性腫脹、発熱、寝汗、体重減少、疲労、そう痒感、腹痛、咳嗽又は胸痛が含まれる。
【０４９６】
病期分類は、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫のいずれについても同じであり、体内での癌細胞の広がりの程度を指す。ステージＩでは、リンパ腫細胞は１つのリンパ節群にある。ステージＩＩでは、リンパ腫細胞は少なくとも２つのリンパ節群に存在し、但し両群とも横隔膜の同じ側にあるか、又は組織若しくは臓器の１つの部分及び横隔膜の同じ側にあるその臓器近傍のリンパ節にある。ステージＩＩＩでは、リンパ腫細胞は横隔膜の両側のリンパ節にあるか、又はそのリンパ節群近傍の組織若しくは臓器の１つの部分にあるか、又は脾臓にある。ステージＩＶでは、リンパ腫細胞は少なくとも１つの臓器若しくは組織の幾つかの部分に認められるか、又はリンパ腫細胞は横隔膜の他方の側の臓器及びリンパ節にある。ローマ数字によるステージ表記に加え、ステージは、文字Ａ、Ｂ、Ｅ及びＳによっても記述することができ、ここで、Ａは、無症状の患者を指し、Ｂは症状のある患者を指し、Ｅはリンパ系外の組織にリンパ腫が認められる患者を指し、及びＳは脾臓にリンパ腫が認められる患者を指す。
【０４９７】
ホジキンリンパ腫は、一般的には、放射線療法、化学療法又は造血幹細胞移植で処置される。非ホジキンリンパ腫の最も一般的な療法はＲ−ＣＨＯＰであり、これは、４つの異なる化学療法（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾロン）及びリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））からなる。ＮＨＬの処置に一般的に用いられる他の療法には、他の化学療法剤、放射線療法、幹細胞移植（自家又は同種骨髄移植）又は生物学的療法、例えば免疫療法が含まれる。生物学的療法剤の他の例としては、限定はされないが、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、エプラツズマブ（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（登録商標））及びアレムツズマブ（ＭａｂＣａｍｐａｔｈ（登録商標））が挙げられる。本発明の組成物及び方法は、現在処方されているホジキンリンパ腫又は非ホジキンリンパ腫処置と併用して投与され得る。
【０４９８】
ＢＣＭＡ発現は、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）としても知られるワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）とも関連付けられている（Ｅｌｓａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００６，１０７（７）：２８８２−８を参照されたい）。ワルデンシュトレームマクログロブリン血症は、以前は多発性骨髄腫に関係するものと考えられていたが、近年では、非ホジキンリンパ腫のサブタイプに分類されるようになっている。ＷＭは無制御のＢ細胞リンパ球増殖によって特徴付けられ、貧血及び過剰量のパラプロテイン又は免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）の産生を引き起こし、それにより血液粘度が高まり、過粘稠度症候群が引き起こされる。ＷＭの他の症状又は徴候には、発熱、寝汗、疲労、貧血、体重減少、リンパ節症又は脾腫、霧視、眩暈、鼻出血、歯肉の出血、異常な青あざ、腎機能障害若しくは腎不全、アミロイドーシス又は末梢性ニューロパチーが含まれる。
【０４９９】
ＷＭの標準処置は、化学療法、具体的にはリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））による化学療法からなる。クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｎｅｏｓａｒ（登録商標））、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、ビンクリスチン及び／又はサリドマイドなど、他の化学療法薬が併用して用いられ得る。プレドニゾンなどのコルチコステロイド系も化学療法と併用して投与され得る。患者の処置全体を通じて、血液からパラプロテインを取り除くことにより一部の症状を緩和するため、プラスマフェレーシス又は血漿交換法が一般的に用いられる。ある場合には、幹細胞移植が一部の患者についての選択肢となる。
【０５００】
ＢＣＭＡに関連する疾患又は障害の別の例は、脳癌である。具体的には、ＢＣＭＡの発現が星状細胞腫又は膠芽腫と関連付けられている（Ｄｅｓｈａｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００４，２３（１７）：３００５−１２、Ｐｅｌｅｋａｎｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１３，８（１２）：ｅ８３２５０を参照されたい）。星状細胞腫は、脳内のグリア細胞の一種であるアストロサイトから生じる腫瘍である。膠芽腫（多形性膠芽腫又はＧＢＭとしても知られる）は最も悪性型の星状細胞腫であり、脳癌の最も進行したステージ（ステージＩＶ）と考えられている。膠芽腫には２つのバリアント：巨細胞膠芽腫及び神経膠肉腫がある。他の星状細胞腫には、若年性毛様細胞性星状細胞腫（ＪＰＡ）、線維性星状細胞腫、多形黄色星状細胞腫（ＰＸＡ）、胚芽異形成性神経上皮腫瘍（ＤＮＥＴ）及び未分化星状細胞腫（ＡＡ）が含まれる。
【０５０１】
膠芽腫又は星状細胞腫に関連する症状又は徴候には、脳圧の上昇、頭痛、発作、記憶喪失、行動の変化、体の片側の運動又は感覚喪失、言語機能障害、認知障害、視力障害、悪心、嘔吐及び腕又は脚の脱力が含まれる。
【０５０２】
腫瘍の外科的除去（又は切除）は、損傷を与えることなく又は正常な周囲脳の損傷を最小限としながら、可能な限り多くの神経膠腫を除去するための標準処置である。放射線療法及び／又は化学療法は、多くの場合に外科手術後、任意の残留癌細胞又は衛星病変からの再発疾患を抑制し及び減速させるために用いられる。放射線療法には、全脳放射線療法（従来の外部ビーム放射線）、標的三次元原体照射療法及び標的放射性核種が含まれる。膠芽腫の処置に一般的に用いられる化学療法剤には、テモゾロミド、ゲフィチニブ又はエルロチニブ及びシスプラチンが含まれる。ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））などの血管新生阻害薬も化学療法及び／又は放射線療法と併用して一般的に用いられる。
【０５０３】
支持処置も神経学的症状の軽減及び神経機能の改善のため高頻度で用いられ、本明細書に記載される癌療法と併用して投与される。一次支持薬剤には、抗痙攣薬及びコルチコステロイド系が含まれる。従って、本発明の組成物及び方法は、膠芽腫又は星状細胞腫の処置に標準又は支持処置のいずれかと併用して用いられ得る。
【０５０４】
ＢＣＭＡ発現に関連する非癌関連疾患及び障害も、本明細書に開示される組成物及び方法によって処置することができる。ＢＣＭＡ発現に関連する非癌関連疾患及び障害の例としては、限定はされないが、ウイルス感染症；例えば、ＨＩＶ、真菌感染症、例えばＣ．ネオフォルマンス（Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）；過敏性腸疾患；潰瘍性大腸炎及び粘膜免疫に関係する障害が挙げられる。
【０５０５】
本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞、（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を、単独で又は希釈剤及び／又はＩＬ−２又は他のサイトカイン又は細胞集団などの他の成分と組み合わせて医薬組成物として投与し得る。
【０５０６】
本発明は、癌を処置するための組成物及び方法を提供する。一態様において、癌は、血液癌であり、血液癌が白血病又はリンパ腫であるものを含むが、これらに限定されない。一態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を使用して、これらに限定されないが、例えば、これらに限定されないが、例えばＢ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を含む、１つ以上の急性白血病；これらに限定されないが、例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含む、１つ以上の慢性白血病；これらに限定されないが、例えば、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞の新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性のリンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞の新生物、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症及び骨髄の血液細胞の無効な産生（又は異形成）を併せ持つ血液学的な状態の多様な集合体である「前白血病状態」などを含む、更なる血液癌又は血液学的状態などの癌及び悪性腫瘍を処置し得る。更に、ＢＣＭＡに関連する疾患としては、これらに限定されないが、例えば、ＢＣＭＡを発現する非定型的及び／又は非典型的な癌、悪性腫瘍、前癌状態又は増殖性疾患が挙げられる。
【０５０７】
実施形態において、本明細書に記載される組成物は、限定はされないが、形質細胞増殖性障害、例えば無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス及びＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる）を含めた疾患の処置に使用することができる。
【０５０８】
実施形態において、本明細書に記載される組成物は、限定はされないが、癌、例えば本明細書に記載される癌、例えば前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵癌又は肺癌を含めた疾患の処置に使用することができる。
【０５０９】
本発明は、ＢＣＭＡ発現細胞集団の増殖を阻害する方法又はそれを減少させる方法も提供し、本方法は、ＢＭＣＡ発現細胞を含む細胞集団に、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を接触させることを含む。ある具体的な態様において、本発明は、ＢＣＭＡを発現する癌細胞の増殖を阻害する方法又はその集団を減少させる方法を提供し、この方法は、ＢＣＭＡ発現癌細胞集団に、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を接触させることを含む。一態様において、本発明は、ＢＣＭＡを発現する癌細胞の増殖を阻害する方法又はその集団を減少させる方法を提供し、この方法は、ＢＭＣＡ発現癌細胞集団に、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を接触させることを含む。特定の態様において、本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、骨髄性白血病又はＢＣＭＡ発現細胞に関連する別の癌を有する対象又はそれの動物モデルにおいて細胞及び／又は癌細胞の分量、数、量又は割合を陰性対照と比べて少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％減少させる。一態様において、対象は、ヒトである。
【０５１０】
本発明は、ＢＣＭＡ発現細胞に関連する疾患（例えば、ＢＣＭＡを発現する血液癌又は非定型癌）を予防、処置及び／又は管理する方法も提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を必要としている対象に投与することを含む。一態様において、対象は、ヒトである。ＢＣＭＡ発現細胞に関連する障害の非限定的な例としては、ウイルス又は真菌感染症及び粘膜免疫に関係する障害が挙げられる。
【０５１１】
本発明は、ＢＣＭＡ発現細胞に関連する疾患を予防、処置及び／又は管理する方法も提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を必要としている対象に投与することを含む。一態様において、対象は、ヒトである。
【０５１２】
本発明は、ＢＣＭＡ発現細胞に関連する癌の再発を予防する方法を提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を、それを必要としている対象に投与することを含む。一態様において、本方法は、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本明細書に記載される抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の有効量を別の療法の有効量と併用してそれを必要としている対象に投与することを含む。
【０５１３】
ＣＡＲ有効性、対象適合性又は試料適合性を判定するためのバイオマーカーを使用した方法
別の態様において、本発明は、対象（例えば、癌、例えば血液癌を有する対象）におけるＣＡＲ発現細胞療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ療法）の有効性又はＣＡＲ療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ療法）に対する試料（例えば、アフェレーシス試料）の適合性を判定又はモニタする方法を特徴とする。本方法は、ＣＡＲ療法に対する有効性、対象適合性又は試料適合性の値を取得することを含み、前記値は、ＣＡＲ発現細胞療法の有効性又は適合性の指標となる。
【０５１４】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞療法は、複数（例えば、集団）のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞、例えば複数（例えば、集団）のＴ細胞又はＮＫ細胞又はこれらの組み合わせを含む。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞療法はＢＣＭＡＣＡＲ療法である。
【０５１５】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞療法を受ける前、その最中又はそれを受けた後に判定される。
【０５１６】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、奏効例（例えば、完全奏効例）は、非奏効例と比較したとき、ＧＺＭＫ、ＰＰＦ１ＢＰ２又はナイーブＴ細胞の１、２つ又はそれを超えるもの（全て）のより高いレベル又は活性を有するか又は有すると同定される。
【０５１７】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、非奏効例は、奏効例と比較したとき、ＩＬ２２、ＩＬ−２ＲＡ、ＩＬ−２１、ＩＲＦ８、ＩＬ８、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２２、エフェクターＴ細胞又は調節性Ｔ細胞の１、２、３、４、５、６、７又はそれを超えるもの（例えば、全て）のより高いレベル又は活性を有するか又は有すると同定される。
【０５１８】
ある実施形態において、再発例は、非再発例と比較して以下の遺伝子：ＭＩＲ１９９Ａ１、ＭＩＲ１２０３、ｕｃ０２１ｏｖｐ、ＩＴＭ２Ｃ及びＨＬＡ−ＤＱＢ１の１つ以上（例えば、そのうちの２、３、４又は全て）の発現レベルの増加及び／又は非再発例と比較して以下の遺伝子：ＰＰＩＡＬ４Ｄ、ＴＴＴＹ１０、ＴＸＬＮＧ２Ｐ、ＭＩＲ４６５０−１、ＫＤＭ５Ｄ、ＵＳＰ９Ｙ、ＰＲＫＹ、ＲＰＳ４Ｙ２、ＲＰＳ４Ｙ１、ＮＣＲＮＡ００１８５、ＳＵＬＴ１Ｅ１及びＥＩＦ１ＡＹの１つ以上（例えば、そのうちの２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は全て）の発現レベルの低下を有するか又は有すると同定される患者である。
【０５１９】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、非奏効例は、免疫細胞消耗マーカー、例えば１、２つ又はそれを超える免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３及び／又はＬＡＧ−３）をより大きい割合で有するか又は有すると同定される。一実施形態において、非奏効例は、奏効例からのＰＤ−１又はＬＡＧ−３発現免疫エフェクター細胞の割合と比較して、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１又はＬＡＧ−３発現免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）（例えば、ＣＡＲ発現ＣＤ４＋細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）をより大きい割合で有するか又は有すると同定される。
【０５２０】
一実施形態において、非奏効例は、消耗表現型を有する免疫細胞、例えば少なくとも２つの消耗マーカーを共発現する、例えばＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＴＩＭ−３を共発現する免疫細胞をより大きい割合で有するか又は有すると同定される。他の実施形態において、非奏効例は、消耗表現型を有する免疫細胞、例えば少なくとも２つの消耗マーカーを共発現する、例えばＰＤ−１及びＬＡＧ−３を共発現する免疫細胞をより大きい割合で有するか又は有すると同定される。
【０５２１】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、非奏効例は、ＣＡＲ発現細胞療法に対する奏効例（例えば、完全奏効例）と比較してＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋細胞集団）中にＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１＋／ＬＡＧ−３＋細胞をより大きい割合で有するか又は有すると同定される。
【０５２２】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、部分奏効例は、奏効例と比べて、ＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋細胞集団）中にＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１＋／ＬＡＧ−３＋細胞をより高い割合で有するか又は有すると同定される。
【０５２３】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、非奏効例は、ＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋細胞集団）中にＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１＋ＣＡＲ＋の消耗表現型及びＬＡＧ３の共発現を有するか又は有すると同定される。
【０５２４】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、非奏効例は、奏効例（例えば、完全奏効例）と比較してＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋細胞集団）中にＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１＋／ＴＩＭ−３＋細胞をより大きい割合で有するか又は有すると同定される。
【０５２５】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、部分奏効例は、奏効例と比べてＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋細胞集団）中にＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１＋／ＴＩＭ−３＋細胞をより高い割合で有するか又は有すると同定される。
【０５２６】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、アフェレーシス試料中におけるＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ４５ＲＯ−Ｔ細胞の存在は、ＣＡＲ発現細胞療法（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ療法）に対する対象の奏効についての正の予測指標である。
【０５２７】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、アフェレーシス試料中における高い割合のＰＤ１＋ＣＡＲ＋及びＬＡＧ３＋又はＴＩＭ３＋  Ｔ細胞は、ＣＡＲ発現細胞療法（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ療法）に対する対象の奏効についての予後不良の予測指標である。
【０５２８】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、奏効例（例えば、完全又は部分奏効例）は、以下のプロファイルの１、２、３つ又はそれを超えるもの（又は全て）を有する：
（ｉ）ＣＤ２７＋免疫エフェクター細胞数が、参照値、例えば非奏効例のＣＤ２７＋免疫エフェクター細胞数と比較して多い；
（ｉｉ）（ｉ）ＣＤ８＋Ｔ細胞数が、参照値、例えば非奏効例のＣＤ８＋  Ｔ細胞数と比較して多い；
（ｉｉｉ）１つ以上のチェックポイント阻害剤、例えばＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３又はＫＬＲＧ−１から選択されるチェックポイント阻害剤又は組み合わせを発現する免疫細胞数が、参照値、例えば非奏効例における１つ以上のチェックポイント阻害剤を発現する細胞数と比較して少ない；又は
（ｉｖ）静止ＴＥＦＦ細胞、静止ＴＲＥＧ細胞、ナイーブＣＤ４細胞、非刺激メモリー細胞又は初期メモリーＴ細胞の１、２、３、４つ若しくはそれを超えるもの（全て）又はこれらの組み合わせの数が、参照値、例えば非奏効例における静止ＴＥＦＦ細胞、静止ＴＲＥＧ細胞、ナイーブＣＤ４細胞、非刺激メモリー細胞又は初期メモリーＴ細胞の数と比較して多い。
【０５２９】
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、（ｖｉ）のサイトカインレベル又は活性は、サイトカインＣＣＬ２０／ＭＩＰ３ａ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＬ２、ＩＬ２１、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ９又はＴＮＦαの１、２、３、４、５、６、７、８若しくはそれを超えるもの（又は全て）又はこれらの組み合わせから選択される。このサイトカインは、ＩＬ−１７ａ、ＣＣＬ２０、ＩＬ２、ＩＬ６又はＴＮＦａの１、２、３、４つ又はそれを超えるもの（又は全て）から選択され得る。一実施形態において、サイトカインのレベル又は活性の増加は、ＩＬ−１７ａ及びＣＣＬ２０の一方又は両方から選択され、奏効性の増加又は再発の低下の指標となる。
【０５３０】
実施形態において、本明細書の方法によって同定される奏効例、非奏効例、再発例又は非再発例は、更に臨床基準により判定され得る。例えば、完全奏効例は、疾患、例えば癌を有する対象であって、処置に対して完全奏効、例えば完全寛解を呈する対象を有するか又はそれと同定される。完全奏効は、本明細書に記載されるとおり、例えばＮＣＣＮ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（登録商標）又はＣｈｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １７：１２４４（１９９９）及びＣｈｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ”，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２５：５７９−５８６（２００７）（両方とも全体として参照により本明細書に援用される）を用いて同定し得る。部分奏効例は、疾患、例えば癌を有する対象であって、処置に対して部分奏効、例えば部分寛解を呈する対象を有するか又はそれと同定される。部分奏効は、例えば、ＮＣＣＮ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（登録商標）又は本明細書に記載されるとおりのＣｈｅｓｏｎの判定基準を用いて同定され得る。非奏効例は、疾患、例えば癌を有する対象であって、処置に対して奏効を呈しない対象を有するか又はそれと同定され、例えば、患者は、病勢安定又は病勢進行を有する。非奏効例は、例えば、ＮＣＣＮ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（登録商標）又は本明細書に記載されるとおりのＣｈｅｓｏｎの判定基準を用いて同定され得る。
【０５３１】
本明細書に開示される方法に代えて又は組み合わせて、前記値に応じて、以下の１、２、３、４つ又はそれを超えるものを実施すること：
例えば奏効例又は非再発例に対して、ＣＡＲ発現細胞療法を投与すること；
変更した用量設定のＣＡＲ発現細胞療法を投与すること；
ＣＡＲ発現細胞療法のスケジュール又はタイムコースを変更すること；
例えば非奏効例又は部分奏効例に対して、追加の薬剤、例えばチェックポイント阻害剤、例えば本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤をＣＡＲ発現細胞療法と併用して投与すること；
非奏効例又は部分奏効例に対してＣＡＲ発現細胞療法による処置前に対象の若齢Ｔ細胞数を増加させる療法を投与すること；
例えば非奏効例又は部分奏効例と同定される対象について、ＣＡＲ発現細胞療法の製造プロセスを修正すること、例えばＣＡＲをコードする核酸の導入前に若齢Ｔ細胞を濃縮すること又は形質導入効率を増加させること；
例えば非奏効例又は部分奏効例又は再発例について、代替療法を投与すること；又は
対象が非奏効例又は再発例であるか又はそれと同定される場合、例えばＣＤ２５枯渇、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体又はこれらの組み合わせの投与の１つ以上により、ＴＲＥＧ細胞集団及び／又はＴＲＥＧ遺伝子シグネチャを低下させること。
【０５３２】
特定の実施形態において、対象は、抗ＧＩＴＲ抗体で前処置される。特定の実施形態において、対象は注入前又は再注入前に抗ＧＩＴＲ抗体で処置される。
【０５３３】
組み合わせ治療
本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、他の公知の薬剤及び治療と組み合わせて使用され得る。本明細書で使用する「組み合わせて」投与するとは、２つの（又はそれを超える）異なる処置を、対象が障害を患っている過程中に対象に送達することを意味し、例えば２つ以上の処置を、対象が障害と診断された後に且つ障害が治癒又は撲滅される前に、又は処置が他の理由で中止される前に送達される。一実施形態において、投与期間の重複があるように、一方の処置の送達は、第２の処置の送達開始時に依然として行われている。これは、本明細書では「同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）」又は「同時（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）送達」ということがある。他の実施形態において、一方の処置の送達は、他の処置の送達が始まる前に終わる。いずれかの場合の一実施形態において、処置は、組み合わせ投与のためにより有効である。例えば、第２の処置剤は、より有効である、例えば等しい効果が少ない第２の処置剤で見られるか、又は第２の処置剤は、第２の処置剤を第１の処置剤の非存在下で投与したときに見られるよりも大きい程度で症状を軽減するか又は第１の処置剤で同様の状況が見られる。一実施形態において、送達、障害と関係する症状又は他のパラメータの減少は、他方の処置剤の非存在下において一方の処置剤の送達で観察されるより大きい。２つの処置の効果は、一部相加的、完全相加的又は相加的より大きいものであり得る。送達は、送達した第１の処置の効果が第２の薬剤の送達時になお検出可能であるようなものであり得る。
【０５３４】
本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及び少なくとも１つの更なる治療剤を同時に、同じ又は別の組成物で又は逐次的に投与できる。逐次投与について、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をまず投与し得るか、更なる薬剤を次に投与し得るか、又は投与の順番が逆であり得る。
【０５３５】
ＣＡＲ治療及び／又は他の治療剤、方法又はモダリティを活動性障害の期間又は寛解又は低活動性疾患の期間に投与できる。ＣＡＲ治療を他の処置の処置前、処置と同時に、処置後又は障害の寛解中に投与できる。
【０５３６】
組み合わせて投与するとき、ＣＡＲ治療及び更なる薬剤（例えば、第２又は第３の薬剤）又は全てを、個々に、例えば単剤療法として使用する各薬剤の量又は投与より高い、低い又は同じ量又は用量で投与できる。一実施形態において、ＣＡＲ治療、更なる薬剤（例えば、第２又は第３の薬剤）又は全ての投与される量又は用量は、個々に、例えば単剤療法として使用する各薬剤の量又は用量より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％又は少なくとも５０％）。他の実施形態において、所望の効果（例えば、癌の処置）を生じるＣＡＲ治療、更なる薬剤（例えば、第２又は第３の薬剤）又は全ての投与される量又は用量は、同じ治療効果を達成するのに必要である、個々に、例えば単剤療法として使用する各薬剤の量又は用量より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％又は少なくとも５０％低い）。
【０５３７】
サリドマイドクラスの化合物
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、サリドマイドクラスの化合物のメンバーと併用して投与される。一部の実施形態において、サリドマイドクラスの化合物のメンバーとしては、限定はされないが、レナリドマイド（ＣＣ−５０１３）、ポマリドミド（ＣＣ−４０４７又はＡＣＴＩＭＩＤ）、サリドマイド又はその塩若しくは誘導体が挙げられる。一部の実施形態において、化合物は、サリドマイドクラスの化合物の１、２、３つ又はそれを超えるメンバーの混合物であり得る。サリドマイド類似体及びサリドマイド類似体の免疫調節特性について、Ｂｏｄｅｒａ  ａｎｄ  Ｓｔａｎｋｉｅｗｉｃｚ，Ｒｅｃｅｎｔ  Ｐａｔ  Ｅｎｄｏｃｒ  Ｍｅｔａｂ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．２０１１  Ｓｅｐ；５（３）：１９２−６（本明細書によって全体として参照により援用される）に記載されている。サリドマイド類似体とＥ３ユビキチンとの構造複合体について、Ｇａｎｄｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．２０１４  Ｍａｒ；１６４（６）：８１１−２１（本明細書によって全体として参照により援用される）に記載されている。サリドマイド類似体によるＥ３ユビキチンリガーゼの調節について、Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２０１４  Ａｕｇ  ７；５１２（７５１２）：４９−５３（本明細書によって全体として参照により援用される）に記載されている。
【０５３８】
一部の実施形態において、本化合物は、式（Ｉ）：
【化８】
2021509009.tif 000077
（式中、
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり、これらの各々は、任意選択で１つ以上のＲ４によって置換されており；
Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は、独立に、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであるか；又はＲ２ａ及びＲ２ｂは、それらが結合される炭素原子と一緒になってカルボニル基又はチオカルボニル基を形成し；
Ｒ３の各々は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＢ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥであり、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル及びヘテロアルキルは、独立に及び任意選択で、１つ以上のＲ６で置換されており；
各Ｒ４は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、オキソ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＢ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール及びヘテロアリールは、独立に及び任意選択で、１つ以上のＲ７で置換されており；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ及びＲＥの各々は、独立に、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ６は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、オキソ、シアノ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、アリール又はヘテロアリールであり、ここで、各アリール及びヘテロアリールは、独立に及び任意選択で、１つ以上のＲ８で置換されており；
各Ｒ７は、独立に、ハロ、オキソ、シアノ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡであり；
各Ｒ８は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シアノ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡであり；
ｎは、０、１、２、３又は４であり；及び
ｘは、０、１又は２である）
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩、エステル、水和物、溶媒和物若しくは互変異性体を含む。
【０５３９】
一部の実施形態において、Ｘは、Ｏである。
【０５４０】
一部の実施形態において、Ｒ１は、ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、６員環ヘテロシクリル又は５員環ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、窒素含有ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、ピペリジニル（例えば、ピペリジン−２，６−ジオニル）である。
【０５４１】
一部の実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は、独立に水素である。一部の実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂは、それらが結合される炭素と一緒になってカルボニル基を形成する。
【０５４２】
一部の実施形態において、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡである。一部の実施形態において、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル（例えば、ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２−フェニル−ｔ−ブチル）、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）（例えば、ＮＨ２）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ（例えば、ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３）である。
【０５４３】
ある実施形態において、Ｘは、Ｏである。ある実施形態において、Ｒ１は、ヘテロシクリル（例えば、ピペリジン−２，６−ジオニル）である。ある実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は、独立に水素である。ある実施形態において、ｎは、１である。ある実施形態において、Ｒ３は、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）（例えば、−ＮＨ２）である。ある実施形態において、本化合物は、レナリドマイド、例えば３−（４−アミノ−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン又はその薬学的に許容可能な塩を含む。ある実施形態において、本化合物は、例えば、以下の式：
【化９】
2021509009.tif 000078
に係るレナリドマイドである。
【０５４４】
ある実施形態において、Ｘは、Ｏである。ある実施形態において、Ｒ１は、ヘテロシクリル（例えば、ピペリジニル−２，６−ジオニル）である。一部の実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂは、それらが結合される炭素と一緒になってカルボニル基を形成する。ある実施形態において、ｎは、１である。ある実施形態において、Ｒ３は、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）（例えば、−ＮＨ２）である。ある実施形態において、本化合物は、ポマリドミド、例えば４−アミノ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン又はその薬学的に許容可能な塩を含む。ある実施形態において、本化合物は、例えば、以下の式：
【化１０】
2021509009.tif 000079
に係るポマリドミドである。
【０５４５】
ある実施形態において、Ｘは、Ｏである。ある実施形態において、Ｒ１は、ヘテロシクリル（例えば、ピペリジニル−２，６−ジオニル）である。ある実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂは、それらが結合される炭素と一緒になってカルボニル基を形成する。ある実施形態において、ｎは、０である。ある実施形態において、本化合物は、サリドマイド、例えば２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン又はその薬学的に許容可能な塩を含む。ある実施形態において、本生成物は、例えば、以下の式：
【化１１】
2021509009.tif 000080
に係るサリドマイドである。
【０５４６】
ある実施形態において、Ｘは、Ｏである。ある実施形態において、Ｒ１は、ヘテロシクリル（例えば、ピペリジン−２，６−ジオニル）である。ある実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は、独立に水素である。ある実施形態において、ｎは、１である。ある実施形態において、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル（例えば、ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２−フェニル−ｔ−ブチル）である。ある実施形態において、本化合物は、２−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）アセトアミド又はその薬学的に許容可能な塩を含む。ある実施形態において、本化合物は、以下の式：
【化１２】
2021509009.tif 000081
に示されるとおりの構造を有する。
【０５４７】
一部の実施形態において、化合物は、式（Ｉ−ａ）：
【化１３】
2021509009.tif 000082
（式中、
環Ａは、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり、これらの各々は、任意選択で１つ以上のＲ４によって置換されており；
Ｍは、存在しないか、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル又はＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルであり、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル及びヘテロアルキルは、任意選択で１つ以上のＲ４によって置換されており；
Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は、独立に、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであるか；又はＲ２ａ及びＲ２ｂは、それらが結合される炭素原子と一緒になってカルボニル基又はチオカルボニル基を形成し；
Ｒ３ａは、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＢ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥであり、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル及びヘテロアルキルは、任意選択で１つ以上のＲ６で置換されており；
Ｒ３の各々は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＢ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥであり、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル及びヘテロアルキルは、独立に及び任意選択で、１つ以上のＲ６で置換されており；
各Ｒ４は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、オキソ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＢ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールは、独立に及び任意選択で、１つ以上のＲ７で置換されており；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ及びＲＥの各々は、独立に、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ６は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、オキソ、シアノ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、アリール又はヘテロアリールであり、ここで、各アリール又はヘテロアリールは、独立に及び任意選択で、１つ以上のＲ８で置換されており；
各Ｒ７は、独立に、ハロ、オキソ、シアノ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡであり；
各Ｒ８は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シアノ、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡであり；
ｎは、０、１、２又は３であり；
ｏは、０、１、２、３、４又は５であり；及び
ｘは、０、１又は２である）
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩、エステル、水和物若しくは互変異性体である。
【０５４８】
一部の実施形態において、Ｘは、Ｏである。
【０５４９】
一部の実施形態において、Ｍは、存在しない。
【０５５０】
一部の実施形態において、環Ａは、ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、環Ａは、ヘテロシクリル、例えば６員環ヘテロシクリル又は５員環ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、環Ａは、窒素含有ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、環Ａは、ピペリジニル（例えば、ピペリジン−２，６−ジオニル）である。
【０５５１】
一部の実施形態において、Ｍは、存在せず、及び環Ａは、ヘテロシクリル（例えば、ピペリジニル、例えばピペリジン−２，６−ジオニル）である。
【０５５２】
一部の実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は、独立に水素である。一部の実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂは、それらが結合される炭素と一緒になってカルボニル基を形成する。
【０５５３】
一部の実施形態において、Ｒ３ａは、水素、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡである。一部の実施形態において、Ｒ３ａは、水素である。一部の実施形態において、Ｒ３ａは、−Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）（例えば、−ＮＨ２）である。一部の実施形態において、Ｒ３ａは、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ（例えば、ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３）である。
【０５５４】
一部の実施形態において、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル（例えば、ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２−フェニル−ｔ−ブチル）である。一部の実施形態において、ｎは、０又は１である。一部の実施形態において、ｎは、０である。一部の実施形態において、ｎは、１である。
【０５５５】
本化合物は、１つ以上のキラル中心を含み得るか、又は１つ以上の立体異性体として存在し得る。一部の実施形態において、本化合物は、単一のキラル中心を含み、立体異性体の混合物、例えばＲ立体異性体とＳ立体異性体との混合物である。一部の実施形態において、この混合物は、あるＲ立体異性体対Ｓ立体異性体比、例えば約１：１のＲ立体異性体対Ｓ立体異性体比（即ちラセミ混合物）を含む。一部の実施形態において、この混合物は、約５１：４９、約５２：４８、約５３：４７、約５４：４６、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、約９５：５又は約９９：１のＲ立体異性体対Ｓ立体異性体比を含む。一部の実施形態において、この混合物は、約５１：４９、約５２：４８、約５３：４７、約５４：４６、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、約９５：５又は約９９：１のＳ立体異性体対Ｒ立体異性体比を含む。一部の実施形態において、本化合物は、式（Ｉ）又は式（Ｉ−ａ）の単一の立体異性体、例えば単一のＲ立体異性体又は単一のＳ立体異性体である。
【０５５６】
キナーゼ阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、キナーゼ阻害剤と併用して投与される。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、例えば本明細書に記載されるＣＤＫ４阻害剤、例えばＣＤＫ４／６阻害剤、例えば６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（５−ピペラジン−１−イル−ピリジン−２−イルアミノ）−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン塩酸塩（パルボシクリブ又はＰＤ０３３２９９１とも称される）などである。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えば本明細書に記載されるＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブなどである。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えば本明細書に記載されるｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、ラパマイシン類似体、ＯＳＩ−０２７などである。ｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、ｍＴＯＲＣ１阻害剤及び／又はｍＴＯＲＣ２阻害剤、例えば本明細書に記載されるｍＴＯＲＣ１阻害剤及び／又はｍＴＯＲＣ２阻害剤であり得る。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＭＮＫ阻害剤、例えば本明細書に記載されるＭＮＫ阻害剤、例えば４−アミノ−５−（４−フルオロアニリノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンなどである。ＭＮＫ阻害剤は、例えば、ＭＮＫ１ａ、ＭＮＫ１ｂ、ＭＮＫ２ａ及び／又はＭＮＫ２ｂ阻害剤であり得る。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、本明細書に記載される二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、例えばＰＦ−０４６９５１０２などである。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＤＧＫ阻害剤、例えば本明細書に記載されるＤＧＫ阻害剤、例えばＤＧＫｉｎｈ１（Ｄ５９１９）又はＤＧＫｉｎｈ２（Ｄ５７９４）などである。
【０５５７】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、イブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５）；ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；及びＬＦＭ−Ａ１３から選択されるＢＴＫ阻害剤である。好ましい実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、インターロイキン−２−誘導性キナーゼ（ＩＴＫ）のキナーゼ活性を低下させない又は阻害しないものであり、ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；及びＬＦＭ−Ａ１３から選択される。
【０５５８】
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５）である。実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞は、ＢＴＫ阻害剤（例えば、イブルチニブ）と併用して対象に投与される。実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞は、イブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５とも称される）と併用して対象に投与される。イブルチニブ（１−［（３Ｒ）−３−［４−アミノ−３−（４−フェノキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル］ピペリジン−１−イル］プロパ−２−エン−１−オン）の構造を以下に示す。
【化１４】
2021509009.tif 000083
【０５５９】
実施形態において、対象は、ＣＬＬ、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）又は小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する。例えば、対象は、１７番染色体の短腕に欠失を有する（ｄｅｌ（１７ｐ）、例えば白血病細胞において）。他の例では、対象はｄｅｌ（１７ｐ）を有しない。実施形態において、対象は、再発性ＣＬＬ又はＳＬＬを有し、例えば、対象は、過去に癌療法を投与されたことがある（例えば、過去に１、２、３又は４つの前癌療法を投与されたことがある）。実施形態において、対象は、難治性ＣＬＬ又はＳＬＬを有する。他の実施形態において、対象は、濾胞性リンパ腫、例えば再発性又は難治性濾胞性リンパ腫を有する。一部の実施形態において、イブルチニブは、約３００〜６００ｍｇ／日（例えば、約３００〜３５０、３５０〜４００、４００〜４５０、４５０〜５００、５００〜５５０又は５５０〜６００ｍｇ／日、例えば約４２０ｍｇ／日又は約５６０ｍｇ／日）の投薬量で例えば経口的に投与される。実施形態において、イブルチニブは、約２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４２０ｍｇ、４４０ｍｇ、４６０ｍｇ、４８０ｍｇ、５００ｍｇ、５２０ｍｇ、５４０ｍｇ、５６０ｍｇ、５８０ｍｇ、６００ｍｇ（例えば、２５０ｍｇ、４２０ｍｇ又は５６０ｍｇ）の用量である期間にわたって連日、例えば２１日サイクルにわたって連日又は２８サイクルにわたって連日投与される。一実施形態において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２サイクル又はそれを超えるイブルチニブが投与される。一部の実施形態において、イブルチニブは、リツキシマブと併用して投与される。例えば、Ｂｕｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）“Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ  Ｉｎ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｗｉｔｈ  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（ｉＲ）Ｉｓ  Ｗｅｌｌ  Ｔｏｌｅｒａｔｅｄ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｃｅｓ  ａ  Ｈｉｇｈ  Ｒａｔｅ  Ｏｆ  Ｄｕｒａｂｌｅ  Ｒｅｍｉｓｓｉｏｎｓ  Ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｈｉｇｈ−Ｒｉｓｋ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ（ＣＬＬ）：Ｎｅｗ，Ｕｐｄａｔｅｄ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｏｆ  ａ  Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｎ  ４０  Ｐａｔｉｅｎｔｓ”，Ａｂｓｔｒａｃｔ  ６７５  ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ  ａｔ  ５５ｔｈ  ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｏｒｌｅａｎｓ，ＬＡ  ７−１０  Ｄｅｃを参照されたい。理論によって拘束されるものではないが、イブルチニブを加えることによりＴ細胞増殖応答が亢進し、Ｔ細胞がＴヘルパー２（Ｔｈ２）からＴヘルパー１（Ｔｈ１）表現型へとシフトし得ると考えられる。Ｔｈ１及びＴｈ２は、ヘルパーＴ細胞の表現型であり、Ｔｈ１とＴｈ２とは、異なる免疫応答経路を導く。Ｔｈ１表現型は、炎症誘発性反応に関連し、例えば細胞内病原体／ウイルス又は癌性細胞などの細胞を死滅させるか又は自己免疫応答を永続させる。Ｔｈ２表現型は、好酸球蓄積及び抗炎症反応に関連する。
【０５６０】
ＥＧＦＲ阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤と併用して投与される。
【０５６１】
一部の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ４０）又は国際公開第２０１３／１８４７５７号パンフレットに開示される化合物である。
【０５６２】
一部の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ４０）又は国際公開第２０１３／１８４７５７号パンフレットに開示される化合物は、共有結合性の不可逆性チロシンキナーゼ阻害剤である。特定の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ４０）又は国際公開第２０１３／１８４７５７号パンフレットに開示される化合物は、ＥＧＦＲ活性型突然変異（Ｌ８５８Ｒ、ｅｘ１９ｄｅｌ）を阻害する。他の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ４０）又は国際公開第２０１３／１８４７５７号パンフレットに開示される化合物は、野生型（ｗｔ）ＥＧＦＲを阻害しないか又は実質的に阻害しない。化合物Ａ４０は、ＥＧＦＲ突然変異ＮＳＣＬＣ患者において有効性を示している。一部の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ４０）又は国際公開第２０１３／１８４７５７号パンフレットに開示される化合物は、ＴＥＣキナーゼファミリーの１つ以上のキナーゼも阻害する。Ｔｅｃファミリーキナーゼとしては、例えば、ＩＴＫ、ＢＭＸ、ＴＥＣ、ＲＬＫ及びＢＴＫが挙げられ、Ｔ細胞受容体及びケモカイン受容体シグナル伝達の伝播の中心にある（Ｓｃｈｗａｒｔｚｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｐ．２８４−９５）。例えば、化合物Ａ４０は、１．３ｎＭの生化学的ＩＣ５０でＩＴＫを阻害することができる。ＩＴＫは、Ｔｈ２細胞の生存に決定的に重要な酵素であり、これを阻害すると、Ｔｈ２細胞とＴｈ１細胞との間の平衡にシフトが起こる。
【０５６３】
一部の実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、エルロチニブ、ゲフィチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ネシツムマブ、ＰＦ−００２９９８０４、ニモツズマブ又はＲＯ５０８３９４５の１つ以上から選択される。
【０５６４】
アデノシンＡ２Ａ受容体阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）拮抗薬（例えば、Ａ２ａＲ経路の阻害剤、例えばアデノシン阻害剤、例えばＡ２ａＲ又はＣＤ−７３の阻害剤）と併用して投与される。一部の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、ＰＢＦ５０９（Ｐａｌｏｂｉｏｆａｒｍａ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＣＰＩ４４４／Ｖ８１４４４（Ｃｏｒｖｕｓ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＡＺＤ４６３５／ＨＴＬ−１０７１（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ／Ｈｅｐｔａｒｅｓ）、ビパデナント（Ｒｅｄｏｘ／Ｊｕｎｏ）、ＧＢＶ−２０３４（Ｇｌｏｂａｖｉｒ）、ＡＢ９２８（Ａｒｃｕｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、テオフィリン、イストラデフィリン（協和発酵工業）、トザデナント／ＳＹＮ−１１５（Ａｃｏｒｄａ）、ＫＷ−６３５６（協和発酵工業）、ＳＴ−４２０６（Ｌｅａｄｉａｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）又はプレラデナント／ＳＣＨ  ４２０８１４（Ｍｅｒｃｋ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）から選択される。
【０５６５】
一部の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、ＰＢＦ５０９又は米国特許第８，７９６，２８４号明細書若しくは国際公開第２０１７／０２５９１８号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される化合物を含む。
【０５６６】
一部の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、式（Ｉ）：
【化１５】
2021509009.tif 000084
（式中、
Ｒ１は、１個若しくは２個のハロゲン原子又は１個若しくは２個のメチル基によって任意選択で置換されている、ピラゾール、チアゾール及びトリアゾール環からなる群から選択される５員環ヘテロアリール環を表し；
Ｒ２は、水素原子を表し；
Ｒ３は、臭素又は塩素原子を表し；
Ｒ４は、独立に、
ａ）１個以上のハロゲン原子又はアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アミノ、モノアルキルアミノ若しくはジアルキルアミノからなる群から選択される１つ以上の基によって任意選択で置換されている５員環ヘテロアリール基、
ｂ）基−Ｎ（Ｒ５）（Ｒ６）
（式中、Ｒ５及びＲ６は、独立に、
水素原子；
直鎖状又は分枝状の、１個以上のハロゲン原子又はシクロアルキル（３〜８個の炭素原子）、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、モノアルキルアミノ及びジアルキルアミノ（１〜８個の炭素原子）からなる群から選択される１つ以上の基によって任意選択で置換されている、３〜６個の炭素原子のアルキル又はシクロアルキル基
を表すか；又は
Ｒ５及びＲ６は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、１個以上のハロゲン原子又は１つ以上のアルキル基（１〜８個の炭素原子）、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、モノアルキルアミノ若しくはジアルキルアミノによって任意選択で置換されている、更なるヘテロ原子が挿入され得る４〜６員環の飽和ヘテロ環式基を形成する）、又は
ｃ）基−ＯＲ７又は−ＳＲ７
（式中、Ｒ７は、独立に、
直鎖状又は分枝状の、１個以上のハロゲン原子又はアルキル（１〜８個の炭素原子）、アルコキシ（１〜８個の炭素原子）、アミノ、モノアルキルアミノ若しくはジアルキルアミノ（１〜８個の炭素原子）からなる群から選択される１つ以上の基によって任意選択で置換されているアルキル（１〜８個の炭素原子）又はシクロアルキル（３〜８個の炭素原子）基；又は
１個以上のハロゲン原子によって任意選択で置換されているフェニル環
を表す）
を表す）
の化合物を含む。
【０５６７】
特定の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、５−ブロモ−２，６−ジ−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリミジン−４−アミンを含む。
【０５６８】
特定の実施形態において、Ａ２ＡＲ拮抗薬は、ＣＰＩ４４４／Ｖ８１４４４を含む。ＣＰＩ−４４４及び他のＡ２ａＲ拮抗薬が国際公開第２００９／１５６７３７号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示されている。特定の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、（Ｓ）−７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミンである。特定の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、（Ｒ）−７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミン又はそのラセミ化合物である。特定の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、７−（５−メチルフラン−２−イル）−３−（（６−（（（テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）メチル）ピリジン−２−イル）メチル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミンである。
【０５６９】
特定の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、ＡＺＤ４６３５／ＨＴＬ−１０７１である。Ａ２ａＲ拮抗薬について、国際公開第２０１１／０９５６２５号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示されている。特定の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、６−（２−クロロ−６−メチルピリジン−４−イル）−５−（４−フルオロフェニル）−１，２，４−トリアジン−３−アミンである。
【０５７０】
特定の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、ＳＴ−４２０６（Ｌｅａｄｉａｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）である。特定の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、米国特許第９，１３３，１９７号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に開示されているＡ２ａＲ拮抗薬である。
【０５７１】
特定の実施形態において、Ａ２ＡＲ拮抗薬は、米国特許第８，１１４，８４５号明細書及び同第９，０２９，３９３号明細書、米国特許出願公開第２０１７／００１５７５８号明細書及び同第２０１６／０１２９１０８号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に開示されているＡ２ａＲ拮抗薬である。
【０５７２】
一部の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、イストラデフィリン（ＣＡＳ登録番号：１５５２７０−９９−８）である。イストラデフィリンは、ＫＷ−６００２又は８−［（Ｅ）−２−（３，４−ジメトキシフェニル）ビニル］−１，３−ジエチル−７−メチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオンとしても知られる。イストラデフィリンについては、例えば、ＬｅＷｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ６３（３）：２９５−３０２）に開示されている。
【０５７３】
一部の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、トザデナント（Ｂｉｏｔｉｅ）である。トザデナントは、ＳＹＮ１１５又は４−ヒドロキシ−Ｎ−（４−メトキシ−７−モルホリン−４−イル−１，３−ベンゾチアゾール−２−イル）−４−メチルピペリジン−１−カルボキサミドとしても知られる。トザデナントは、Ａ２ａ受容体における内因性アデノシンの効果を遮断し、それによりＤ２受容体におけるドーパミンの効果の増強及びｍＧｌｕＲ５受容体におけるグルタミン酸の効果の阻害をもたらす。一部の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、プレラデナント（ＣＡＳ登録番号：３７７７２７−８７−２）である。プレラデナントは、ＳＣＨ  ４２０８１４又は２−（２−フラニル）−７−［２−［４−［４−（２−メトキシエトキシ）フェニル］−１−ピペラジニル］エチル］７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−アミンとしても知られる。プレラデナントは、アデノシンＡ２Ａ受容体における強力且つ選択的な拮抗薬としての役割を果たす薬物として開発された。
【０５７４】
一部の実施形態において、Ａ２ａＲ拮抗薬は、ビパデナントである。ビパデナントは、ＢＩＩＢ０１４、Ｖ２００６又は３−［（４−アミノ−３−メチルフェニル）メチル］−７−（フラン−２−イル）トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−５−アミンとしても知られる。
【０５７５】
他の例示的Ａ２ａＲ拮抗薬としては、例えば、ＡＴＬ−４４４、ＭＳＸ−３、ＳＣＨ−５８２６１、ＳＣＨ−４１２，３４８、ＳＣＨ−４４２，４１６、ＶＥＲ−６６２３、ＶＥＲ−６９４７、ＶＥＲ−７８３５、ＣＧＳ−１５９４３又はＺＭ−２４１，３８５が挙げられる。
【０５７６】
ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）及び／又はトリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）の阻害剤と併用して投与される。一部の実施形態において、ＩＤＯ阻害剤は、（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン（別名エパカドスタット又はＩＮＣＢ２４３６０）、インドキシモド（ＮＬＧ８１８９）、（１−メチル−Ｄ−トリプトファン）、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール（別名ＮＬＧ９１９）、インドキシモド、ＢＭＳ−９８６２０５（旧Ｆ００１２８７）から選択される。
【０５７７】
一部の実施形態において、ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤は、インドキシモド（Ｎｅｗ  Ｌｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）である。インドキシモド、１−メチル−トリプトファンのＤ異性体は、腫瘍が免疫介在性の破壊を逃れる機構を破壊する経口投与型小分子インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）経路阻害剤である。
【０５７８】
一部の実施形態において、ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤は、ＮＬＧ９１９（Ｎｅｗ  Ｌｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）である。ＮＬＧ９１９は、無細胞アッセイで７ｎＭ／７５ｎＭのＫｉ／ＥＣ５０の強力なＩＤＯ（インドールアミン−（２，３）−ジオキシゲナーゼ）経路阻害剤である。
【０５７９】
一部の実施形態において、ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤は、エパカドスタット（ＣＡＳ登録番号：１２０４６６９−５８−８）である。エパカドスタットは、ＩＮＣＢ２４３６０又はＩＮＣＢ０２４３６０（Ｉｎｃｙｔｅ）としても知られる。エパカドスタットは、ＩＤＯ２又はトリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）などの他の関連する酵素と比べて高度に選択的である、１０ｎＭのＩＣ５０の強力且つ選択的なインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ１）阻害剤である。
【０５８０】
一部の実施形態において、ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤は、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ／ＢＭＳ）である。Ｆ００１２８７は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ１（ＩＤＯ１）の小分子阻害剤である。
【０５８１】
ＣＤ１９  ＣＡＲ
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞療法と併用して投与される。
【０５８２】
一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６−１７）：１１５７−１１６５（１９９７）に記載されるＦＭＣ６３  ｓｃＦｖ断片と同じ又は同程度の結合特異性を有する。一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６−１７）：１１５７−１１６５（１９９７）に記載されるｓｃＦｖ断片を含む。
【０５８３】
一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表３に係る抗原結合ドメイン（例えば、ヒト化抗原結合ドメイン）を含む。国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットは、様々なＣＡＲ構築物の結合及び有効性をアッセイする方法も記載している。
【０５８４】
一態様において、親マウスｓｃＦｖ配列は、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に提供されるＣＡＲ１９構築物である。一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載されるｓｃＦｖである。
【０５８５】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに配列番号１２として提供される融合ポリペプチド配列を含み、これはヒトＣＤ１９に特異的に結合するマウス由来のｓｃＦｖ断片を提供する。
【０５８６】
一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに配列番号１２として提供されるアミノ酸配列を含む。実施形態では、アミノ酸配列は、
【化１６】
2021509009.tif 000085
又はそれと実質的に相同な配列である。任意選択のシグナルペプチド配列は大文字及び括弧で示す。
【０５８７】
一実施形態において、アミノ酸配列は、
【化１７】
2021509009.tif 000086
又はそれと実質的に相同な配列である。
【０５８８】
一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲはＵＳＡＮ名ＴＩＳＡＧＥＮＬＥＣＬＥＵＣＥＬ−Ｔを有する。実施形態において、ＣＴＬ０１９はＴ細胞の遺伝子修飾によって作られ、これは、ＥＦ−１αプロモーターの制御下にＣＴＬ０１９トランス遺伝子を含有する自己不活性化複製欠損レンチウイルス（ＬＶ）ベクターの形質導入を用いた安定挿入によって媒介される。ＣＴＬ０１９は、トランス遺伝子陽性Ｔ細胞率に基づいて対象に送達されるトランス遺伝子陽性及び陰性Ｔ細胞の混合物であり得る。
【０５８９】
他の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表３に係る抗原結合ドメイン（例えば、ヒト化抗原結合ドメイン）を含む。
【０５９０】
臨床セッティングでは、ＣＡＲＴ１９処置、即ちＣＡＲ１９構築物が形質導入されたＴ細胞による処置を受ける患者においてマウス特異的残基がヒト抗マウス抗原（ｈｕｍａｎ−ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉｇｅｎ）（ＨＡＭＡ）反応を誘発する可能性があり、マウスＣＤ１９抗体のヒト化が望ましい。ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ配列の作製、特徴付け及び有効性については、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（全体として参照により本明細書に援用される）に、実施例１〜５（１１５〜１５９頁）を含め、記載されている。
【０５９１】
一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物は国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載され、マウスＣＤ１９  ＣＡＲ及びｓｃＦｖ構築物のアミノ酸配列は以下の表８に示されるか、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、本明細書に記載される配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一の）配列である。
【０５９２】
【表６８】
2021509009.tif 000087
【０５９３】
【表６９】
2021509009.tif 000088
【０５９４】
【表７０】
2021509009.tif 000089
【０５９５】
ヒト化抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖドメインを含有するＣＤ１９  ＣＡＲ構築物が国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されている。
【０５９６】
抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖドメインのマウス及びヒト化ＣＤＲ配列の配列を、重鎖可変ドメインについて表９に且つ軽鎖可変ドメインについて表１０に示す。配列番号は、表８に掲載されるものを参照する。
【０５９７】
【表７１】
2021509009.tif 000090
【０５９８】
【表７２】
2021509009.tif 000091
【０５９９】
本開示では、当技術分野における任意の公知のＣＤ１９  ＣＡＲ、例えば任意の公知のＣＤ１９  ＣＡＲのＣＤ１９抗原結合ドメインを使用することができる。例えば、ＬＧ−７４０；米国特許第８，３９９，６４５号明細書；米国特許第７，４４６，１９０号明細書；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．２０１３  ５４（２）：２５５−２６０（２０１２）；Ｃｒｕｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２２（１７）：２９６５−２９７３（２０１３）；Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１１８（１８）：４８１７−４８２８（２０１１）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１６（２０）：４０９９−１０２（２０１０）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２２（２５）：４１２９−３９（２０１３）；及び１６ｔｈ  Ａｎｎｕ  Ｍｅｅｔ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｇｅｎ  Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒ（ＡＳＧＣＴ）（Ｍａｙ  １５−１８，Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ）２０１３，Ａｂｓｔ  １０に記載されるＣＤ１９  ＣＡＲ。
【０６００】
例示的ＣＤ１９  ＣＡＲとしては、本明細書に記載される、例えば本明細書に記載される１つ以上の表にあるＣＤ１９  ＣＡＲ又はＸｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １２３．２４（２０１４）：３７５０−９；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １２２．２５（２０１３）：４１２９−３９、Ｃｒｕｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １２２．１７（２０１３）：２９６５−７３、ＮＣＴ００５８６３９１、ＮＣＴ０１０８７２９４、ＮＣＴ０２４５６３５０、ＮＣＴ００８４０８５３、ＮＣＴ０２６５９９４３、ＮＣＴ０２６５０９９９、ＮＣＴ０２６４０２０９、ＮＣＴ０１７４７４８６、ＮＣＴ０２５４６７３９、ＮＣＴ０２６５６１４７、ＮＣＴ０２７７２１９８、ＮＣＴ００７０９０３３、ＮＣＴ０２０８１９３７、ＮＣＴ００９２４３２６、ＮＣＴ０２７３５０８３、ＮＣＴ０２７９４２４６、ＮＣＴ０２７４６９５２、ＮＣＴ０１５９３６９６、ＮＣＴ０２１３４２６２、ＮＣＴ０１８５３６３１、ＮＣＴ０２４４３８３１、ＮＣＴ０２２７７５２２、ＮＣＴ０２３４８２１６、ＮＣＴ０２６１４０６６、ＮＣＴ０２０３０８３４、ＮＣＴ０２６２４２５８、ＮＣＴ０２６２５４８０、ＮＣＴ０２０３０８４７、ＮＣＴ０２６４４６５５、ＮＣＴ０２３４９６９８、ＮＣＴ０２８１３８３７、ＮＣＴ０２０５０３４７、ＮＣＴ０１６８３２７９、ＮＣＴ０２５２９８１３、ＮＣＴ０２５３７９７７、ＮＣＴ０２７９９５５０、ＮＣＴ０２６７２５０１、ＮＣＴ０２８１９５８３、ＮＣＴ０２０２８４５５、ＮＣＴ０１８４０５６６、ＮＣＴ０１３１８３１７、ＮＣＴ０１８６４８８９、ＮＣＴ０２７０６４０５、ＮＣＴ０１４７５０５８、ＮＣＴ０１４３０３９０、ＮＣＴ０２１４６９２４、ＮＣＴ０２０５１２５７、ＮＣＴ０２４３１９８８、ＮＣＴ０１８１５７４９、ＮＣＴ０２１５３５８０、ＮＣＴ０１８６５６１７、ＮＣＴ０２２０８３６２、ＮＣＴ０２６８５６７０、ＮＣＴ０２５３５３６４、ＮＣＴ０２６３１０４４、ＮＣＴ０２７２８８８２、ＮＣＴ０２７３５２９１、ＮＣＴ０１８６０９３７、ＮＣＴ０２８２２３２６、ＮＣＴ０２７３７０８５、ＮＣＴ０２４６５９８３、ＮＣＴ０２１３２６２４、ＮＣＴ０２７８２３５１、ＮＣＴ０１４９３４５３、ＮＣＴ０２６５２９１０、ＮＣＴ０２２４７６０９、ＮＣＴ０１０２９３６６、ＮＣＴ０１６２６４９５、ＮＣＴ０２７２１４０７、ＮＣＴ０１０４４０６９、ＮＣＴ００４２２３８３、ＮＣＴ０１６８０９９１、ＮＣＴ０２７９４９６１又はＮＣＴ０２４５６２０７（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される抗ＣＤ１９  ＣＡＲが挙げられる。
【０６０１】
ＣＤ２０  ＣＡＲ
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞療法と併用して投与される。
【０６０２】
一実施形態において、ＣＤ２０  ＣＡＲは、表１１、表１２、表１３の構築物のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、ＬＣ  ＣＤＲ３、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ又は完全長配列、例えばＣＡＲ２０−１、ＣＡＲ２０−２、ＣＡＲ２０−３、ＣＡＲ２０−４、ＣＡＲ２０−５、ＣＡＲ２０−６、ＣＡＲ２０−７、ＣＡＲ２０−８、ＣＡＲ２０−９、ＣＡＲ２０−１０、ＣＡＲ２０−１１、ＣＡＲ２０−１２、ＣＡＲ２０−１３、ＣＡＲ２０−１４、ＣＡＲ２０−１５若しくはＣＡＲ２０−１６又はそれと実質的に同一の配列（例えば、それと８０％、８５％、９０％若しくは９５％の同一性を共有する配列）の１つ以上を含む。表１１の各完全ＣＤ２０  ＣＡＲアミノ酸配列は、アミノ酸配列：ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号２０３１）に対応する２１アミノ酸の任意選択のシグナルペプチド配列を含む。表１１の各完全ＣＡＲヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列：
【化１８】
2021509009.tif 000092
に対応する最初の６３ヌクレオチドに対応する任意選択のヌクレオチドシグナルペプチド配列を含む。
【０６０３】
【表７３】
2021509009.tif 000093
【０６０４】
【表７４】
2021509009.tif 000094
【０６０５】
【表７５】
2021509009.tif 000095
【０６０６】
【表７６】
2021509009.tif 000096
【０６０７】
【表７７】
2021509009.tif 000097
【０６０８】
【表７８】
2021509009.tif 000098
【０６０９】
【表７９】
2021509009.tif 000099
【０６１０】
【表８０】
2021509009.tif 000100
【０６１１】
【表８１】
2021509009.tif 000101
【０６１２】
【表８２】
2021509009.tif 000102
【０６１３】
【表８３】
2021509009.tif 000103
【０６１４】
【表８４】
2021509009.tif 000104
【０６１５】
【表８５】
2021509009.tif 000105
【０６１６】
【表８６】
2021509009.tif 000106
【０６１７】
表１１のＣＤ２０  ｓｃＦｖドメインのＣＤＲ（Ｋａｂａｔ）配列の配列識別番号の概要を、重鎖可変ドメインについて表１２に且つ軽鎖可変ドメインについて表１３に示す。配列番号は、表１１に掲載されるものを参照する。
【０６１８】
【表８７】
2021509009.tif 000107
【０６１９】
【表８８】
2021509009.tif 000108
【０６２０】
更なるＣＤ２０阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ２０阻害剤と併用して投与される。
【０６２１】
一実施形態において、ＣＤ２０阻害剤は、抗ＣＤ２０抗体又はその断片である。ある実施形態において、抗体は、単一特異性抗体であり、別の実施形態において、抗体は、二重特異性抗体である。ある実施形態において、ＣＤ２０阻害剤は、キメラマウス／ヒトモノクローナル抗体、例えばリツキシマブである。ある実施形態において、ＣＤ２０阻害剤は、オファツムマブなどのヒトモノクローナル抗体である。ある実施形態において、ＣＤ２０阻害剤は、オクレリズマブ、ベルツズマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ又はＰＲＯ１３１９２１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）などのヒト化抗体である。ある実施形態において、ＣＤ２０阻害剤は、ＴＲＵ−０１５（Ｔｒｕｂｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）など、抗ＣＤ２０抗体の一部分を含む融合タンパク質である。
【０６２２】
ＣＤ２２  ＣＡＲ
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法（例えば、ヒトＣＤ２２に結合するＣＡＲを発現する細胞）と併用して投与される。
【０６２３】
一部の実施形態において、ＣＤ２２  ＣＡＲ発現細胞療法には、国際公開第２０１６／１６４７３１号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に係る抗原結合ドメインが含まれる。
【０６２４】
ＣＤ２２  ＣＡＲの配列を以下に提供する。一部の実施形態において、ＣＤ２２  ＣＡＲは、ＣＤ２２−６５である。一部の実施形態において、ＣＤ２２  ＣＡＲは、ＣＤ２２−６５ｓである。一部の実施形態において、ＣＤ２２  ＣＡＲは、ＣＤ２２−６５ｓｓである。
ヒトＣＤ２２  ＣＡＲ  ＣＤ２２−６５  ｓｃＦｖ配列
【化１９】
2021509009.tif 000109
ヒトＣＤ２２  ＣＡＲ  ＣＤ２２−６５ｓ  ｓｃＦｃ配列（リンカーは、斜体及び下線で示す）
【化２０】
2021509009.tif 000110
ヒトＣＤ２２  ＣＡＲ  ＣＤ２２−６５ｓｓ  ｓｃＦｃ配列
【化２１】
2021509009.tif 000111
ヒトＣＤ２２  ＣＡＲ重鎖可変領域
【化２２】
2021509009.tif 000112
ヒトＣＤ２２  ＣＡＲ軽鎖可変領域
【化２３】
2021509009.tif 000113
【０６２５】
【表８９】
2021509009.tif 000114
【０６２６】
【表９０】
2021509009.tif 000115
【０６２７】
一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、表１４に掲載される任意の重鎖結合ドメインアミノ酸配列のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３を含む。実施形態において、抗原結合ドメインは、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を更に含む。実施形態において、抗原結合ドメインは、表１５に掲載されるＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
【０６２８】
一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、表１５に掲載される任意の軽鎖結合ドメインアミノ酸配列のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３の１つ、２つ又は全て並びに表１４に掲載される任意の重鎖結合ドメインアミノ酸配列のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３の１つ、２つ又は全てを含む。
【０６２９】
一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ付番スキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ付番スキーム又はこれらの組み合わせに従って定義される。
【０６３０】
ｓｃＦｖ中にＶＬ及びＶＨドメインが現れる順番は、様々であり得（即ちＶＬ−ＶＨ又はＶＨ−ＶＬの向き）、ここで、各サブユニットが配列ＧＧＧＧＳ（配列番号１０３２）を含む「Ｇ４Ｓ」（配列番号１０３２）サブユニットの１、２、３又は４つのコピーのいずれか（例えば、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号１０４０）又は（Ｇ４Ｓ）４（配列番号１０３９））が可変ドメインをつないでｓｃＦｖドメイン全体を作り出すことができる。代わりに、ＣＡＲ構築物は、例えば、配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１９８５）を含むリンカーを含み得る。代わりに、ＣＡＲ構築物は、例えば、配列ＬＡＥＡＡＡＫ（配列番号２０３３）を含むリンカーを含み得る。ある実施形態において、ＣＡＲ構築物は、ＶＬドメインとＶＨドメインとの間にリンカーを含まない。
【０６３１】
これらのクローンは、全てＣＤ３ζ鎖に由来する共刺激ドメインのシグナルドメインにＱ／Ｋ残基変化を含んだ。
【０６３２】
更なるＣＤ２２阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ２０阻害剤と併用して投与される。一部の実施形態において、ＣＤ２０阻害剤は、小分子又は抗ＣＤ２０抗体分子である。
【０６３３】
ある実施形態において、抗体は、任意選択で化学療法剤などの第２の薬剤にコンジュゲートした単一特異性抗体である。例えば、ある実施形態において、抗体は、抗ＣＤ２２モノクローナル抗体−ＭＭＡＥコンジュゲート（例えば、ＤＣＤＴ２９８０Ｓ）である。ある実施形態において、抗体は、抗ＣＤ２２抗体のｓｃＦｖ、例えば抗体ＲＦＢ４のｓｃＦｖである。このｓｃＦｖは、緑膿菌外毒素Ａの全て又は断片に融合することができる（例えば、ＢＬ２２）。ある実施形態において、抗体は、ヒト化抗ＣＤ２２モノクローナル抗体（例えば、エプラツズマブ）である。ある実施形態において、抗体又は、その断片は抗ＣＤ２２抗体のＦｖ部分を含み、これは、任意選択で、緑膿菌外毒素Ａの全て又は断片又は（例えば、その３８ＫＤａ断片）に共有結合的に融合している（例えば、モキセツモマブパスドトクス）。ある実施形態において、抗ＣＤ２２抗体は、任意選択で毒素にコンジュゲートした抗ＣＤ１９／ＣＤ２２二重特異性抗体である。例えば、一実施形態において、抗ＣＤ２２抗体は、任意選択でジフテリア毒素（ＤＴ）の全て又は一部分、例えばジフテリア毒素（ＤＴ）の最初の３８９アミノ酸、ＤＴ  ３９０、例えばＤＴ２２１９ＡＲＬなどのリガンド特異的毒素に連結した抗ＣＤ１９／ＣＤ２２二重特異性部分（例えば、ヒトＣＤ１９及びＣＤ２２を認識する２つのｓｃＦｖリガンド）を含む）。別の実施形態において、二重特異性部分（例えば、抗ＣＤ１９／抗ＣＤ２２）は、脱グリコシル化リシンＡ鎖などの毒素に連結している（例えば、Ｃｏｍｂｏｔｏｘ）。
【０６３４】
一部の実施形態において、ＣＤ２２阻害剤は、多重特異性抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＣＤ２０及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体分子である。ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する例示的二重特異性抗体分子は、国際公開第２０１６０８６１８９号パンフレット及び国際公開第２０１６１８２７５１号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示されている。一部の実施形態において、ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体分子は、国際公開第２０１６０８６１８９号パンフレットの図７４、配列番号３２３、３２４及び３２５に開示されるとおりのＸＥＮＰ１３６７６である。
【０６３５】
多重特異性ＣＡＲ
一部の実施形態において、本明細書に開示されるＣＡＲ分子は、１、２つ又はそれを超える結合特異性、例えば第１の抗原、例えばＢ細胞エピトープに対する第１の結合特異性と、同じ又は異なる抗原、例えばＢ細胞エピトープに対する第２の結合特異性とを含む多重特異性、例えば二重特異性ＣＡＲ分子である。
【０６３６】
一実施形態において、第１及び第２の結合特異性は、抗体分子、例えば抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。二重特異性ＣＡＲ分子の各抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）の範囲内において、ＶＨは、ＶＬの上流又は下流にあり得る。一部の実施形態において、上流の抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ１）がそのＶＬ（ＶＬ１）の上流にあるように配置され、下流の抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ２）がそのＶＨ（ＶＨ２）の上流にあるように配置され、そのため、二重特異性ＣＡＲ分子全体は、Ｎ末端からＣ末端の向きに配置ＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２を有することになる。
【０６３７】
一部の実施形態において、上流の抗体又は抗体断片又は抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ１）がそのＶＨ（ＶＨ１）の上流にあるように配置され、下流の抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ２）がそのＶＬ（ＶＬ２）の上流にあるように配置され、そのため、二重特異性ＣＡＲ分子全体は、Ｎ末端からＣ末端の向きに配置ＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２を有することになる。
【０６３８】
一部の実施形態において、上流の抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ１）がそのＶＨ（ＶＨ１）の上流にあるように配置され、下流の抗体又は抗体断片又は抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ２）がそのＶＨ（ＶＨ２）の上流にあるように配置され、そのため、二重特異性ＣＡＲ分子全体は、Ｎ末端からＣ末端の向きに配置ＶＬ１−ＶＨ１−ＶＬ２−ＶＨ２を有することになる。
【０６３９】
一部の実施形態において、上流の抗体又は抗体断片又は抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ１）がそのＶＬ（ＶＬ１）の上流にあるように配置され、下流の抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ２）がそのＶＬ（ＶＬ２）の上流にあるように配置され、そのため、二重特異性ＣＡＲ分子全体は、Ｎ末端からＣ末端の向きに配置ＶＨ１−ＶＬ１−ＶＨ２−ＶＬ２を有することになる。
【０６４０】
前記構成のいずれかにおいて、任意選択で、２つの抗体又は抗体断片又は抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間、例えば構築物がＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２と配置される場合にはＶＬ１とＶＬ２との間；構築物がＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２と配置される場合にはＶＨ１とＶＨ２との間；構築物がＶＬ１−ＶＨ１−ＶＬ２−ＶＨ２と配置される場合にはＶＨ１とＶＬ２との間；又は構築物がＶＨ１−ＶＬ１−ＶＨ２−ＶＬ２と配置される場合にはＶＬ１とＶＨ２との間にリンカーが置かれる。一般に、２つの抗体断片又は抗原結合ドメイン、例えばｓｃＦｖ間のリンカーは、２つのｓｃＦｖのドメイン間の誤対合を回避するのに十分な長さでなければならない。リンカーは、本明細書に記載されるとおりのリンカーであり得る。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２０３４）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６である）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝１）（配列番号１０３２）であり、例えば、リンカーは、アミノ酸配列Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ（配列番号１０３２）を有する。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝３）（配列番号１０４０）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝４）（配列番号１０３９）である。一部の実施形態において、リンカーは、アミノ酸配列：ＬＡＥＡＡＡＫ（配列番号２０３３）を含む、例えばそれからなる。
【０６４１】
前記構成のいずれかにおいて、任意選択で、第１の抗原結合ドメイン、例えばｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間にリンカーが置かれる。任意選択で、第２の抗原結合ドメイン、例えばｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間にリンカーが置かれる。複数のリンカーを有する構築物では、リンカーの任意の２つ以上が同じであるか又は異なり得る。従って、一部の実施形態において、二重特異性ＣＡＲは、ＶＬと、ＶＨと、任意選択で１つ以上のリンカーとを、本明細書に記載されるとおりの配置で含む。
【０６４２】
一部の実施形態において、各抗体分子、例えば各抗原結合ドメイン（例えば、各ｓｃＦｖ）は、ＶＨ領域とＶＬ領域との間にリンカーを含む。一部の実施形態において、ＶＨ領域とＶＬ領域との間のリンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２０３４）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６である）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝１）（配列番号１０３２）であり、例えば、リンカーは、アミノ酸配列Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ（配列番号１０３２）を有する。他の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝３）（配列番号１０４０）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝４）（配列番号１０３９）である。一部の実施形態において、ＶＨ及びＶＬ領域は、リンカーなしにつながっている。
【０６４３】
特定の実施形態において、ＣＡＲ分子は、第１のＢ細胞エピトープに対する第１の結合特異性と、同じ又は異なるＢ細胞抗原に対する第２の結合特異性とを有する二重特異性ＣＡＲ分子である。例えば、一部の実施形態において、二重特異性ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する第１の結合特異性と、ＢＣＭＡ、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ又はＣＤ７９ａの１つ以上に対する第２の結合特異性とを有する。一部の実施形態において、二重特異性ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する第１の結合特異性とＣＤ１９に対する第２の結合特異性とを有する。一部の実施形態において、二重特異性ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する第１の結合特異性とＣＤ２０に対する第２の結合特異性とを有する。一部の実施形態において、二重特異性ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する第１の結合特異性とＣＤ２２に対する第２の結合特異性とを有する。
【０６４４】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０及び／又はＣＤ２２に対して結合特異性、例えば第１及び／又は第２の結合特異性を有する二重特異性ＣＡＲ分子である。一実施形態において、結合特異性は、そのＶＬ（ＶＬ１）がそのＶＨ（ＶＨ１）の上流にあるように構成され、下流の抗体又は抗体断片又は抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はそのＶＬ（ＶＬ２）がそのＶＨ（ＶＨ２）の上流にあるように配置され、そのため、二重特異性ＣＡＲ分子全体は、Ｎ末端からＣ末端の向きに配置ＶＬ１−ＶＨ１−ＶＬ２−ＶＨ２を有することになる。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０及び／又はＣＤ２２に対する第１及び／又は第２の結合特異性（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０及び／又はＣＤ２２に対する第１及び／又は第２のｓｃＦｖ）は、ＶＨ領域とＶＬ領域との間にリンカーを含む。一部の実施形態において、ＶＨ領域とＶＬ領域との間のリンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２０３４）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６である）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝１）（配列番号１０３２）であり、例えば、リンカーは、アミノ酸配列Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ（配列番号１０３２）を有する。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝３）（配列番号１０４０）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝４）（配列番号１０３９）である。一部の実施形態において、ＶＨ及びＶＬ領域は、リンカーなしにつながっている。
【０６４５】
別の実施形態において、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０及び／又はＣＤ２２に対する結合特異性、例えば第１及び／又は第２の結合特異性は、そのＶＬ（ＶＬ１）がそのＶＨ（ＶＨ１）の上流にあるように構成され、下流の抗体又は抗体断片又は抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ２）がそのＶＬ（ＶＬ２）の上流にあるように配置され、そのため、二重特異性ＣＡＲ分子全体は、Ｎ末端からＣ末端の向きに配置ＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２を有することになる。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０及び／又はＣＤ２２に対する第１及び／又は第２の結合特異性（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０及び／又はＣＤ２２に対する第１及び／又は第２のｓｃＦｖ）は、ＶＨ領域とＶＬ領域との間にリンカーを含む。一部の実施形態において、ＶＨ領域とＶＬ領域との間のリンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２０３４）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６である）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝１）（配列番号１０３２）であり、例えば、リンカーは、アミノ酸配列Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ（配列番号１０３２）を有する。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝３）（配列番号１０４０）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝４）（配列番号１０３９）である。一部の実施形態において、ＶＨ及びＶＬ領域は、リンカーなしにつながっている。
【０６４６】
別の実施形態において、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０及び／又はＣＤ２２に対する結合特異性、例えば第１及び／又は第２の結合特異性は、そのＶＨ（ＶＨ１）がそのＶＬ（ＶＬ１）の上流にあるように構成され、下流の抗体又は抗体断片又は抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ２）がそのＶＨ（ＶＨ２）の上流にあるように配置され、そのため、二重特異性ＣＡＲ分子全体は、Ｎ末端からＣ末端の向きに配置ＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２を有することになる。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０及び／又はＣＤ２２に対する第１及び／又は第２の結合特異性（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０及び／又はＣＤ２２に対する第１及び／又は第２のｓｃＦｖ）は、ＶＨ領域とＶＬ領域との間にリンカーを含む。一部の実施形態において、ＶＨ領域とＶＬ領域との間のリンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２０３４）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６である）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝１）（配列番号１０３２）であり、例えば、リンカーは、アミノ酸配列Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ（配列番号１０３２）を有する。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝３）（配列番号１０４０）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝４）（配列番号１０３９）である。一部の実施形態において、ＶＨ及びＶＬ領域は、リンカーなしにつながっている。
【０６４７】
別の実施形態において、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０及び／又はＣＤ２２に対する結合特異性、例えば第１及び／又は第２の結合特異性は、そのＶＨ（ＶＨ１）がそのＶＬ（ＶＬ１）の上流にあるように構成され、下流の抗体又は抗体断片又は抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ２）がそのＶＬ（ＶＬ２）の上流にあるように配置され、そのため、二重特異性ＣＡＲ分子全体は、Ｎ末端からＣ末端の向きに配置ＶＨ１−ＶＬ１−ＶＨ２−ＶＬ２を有することになる。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０及び／又はＣＤ２２に対する第１及び／又は第２の結合特異性（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０及び／又はＣＤ２２に対する第１及び／又は第２のｓｃＦｖ）は、ＶＨ領域とＶＬ領域との間にリンカーを含む。一部の実施形態において、ＶＨ領域とＶＬ領域との間のリンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２０３４）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６である）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝１）（配列番号１０３２）であり、例えば、リンカーは、アミノ酸配列Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ（配列番号１０３２）を有する。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝３）（配列番号１０４０）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝４）（配列番号１０３９）である。一部の実施形態において、ＶＨ及びＶＬ領域は、リンカーなしにつながっている。
【０６４８】
一部の実施形態において、二重特異性ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する第１の結合特異性、例えば本明細書に記載されるＢＣＭＡに対する結合特異性のいずれかと、ＣＤ１９に対する第２の結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＣＤ１９に対する結合特異性のいずれかとを含む。一部の実施形態において、二重特異性ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する第１の結合特異性、例えば本明細書に記載されるＢＣＭＡに対する結合特異性のいずれかと、ＣＤ２０に対する第２の結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＣＤ２０に対する結合特異性のいずれかとを含む。一部の実施形態において、二重特異性ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する第１の結合特異性、例えば本明細書に記載されるＢＣＭＡに対する結合特異性のいずれかと、ＣＤ２２に対する第２の結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＣＤ２２に対する結合特異性のいずれかとを含む。一実施形態において、第１及び第２の結合特異性は、連続ポリペプチド鎖、例えば単鎖にある。一部の実施形態において、第１及び第２の結合特異性は、任意選択で、本明細書に記載されるとおりのリンカーを含む。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２０３４）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６である）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝１）（配列番号１０３２）であり、例えば、リンカーは、アミノ酸配列Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ（配列番号１０３２）を有する。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝３）（配列番号１０４０）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝４）（配列番号１０３９）である。一部の実施形態において、リンカーは、アミノ酸配列：ＬＡＥＡＡＡＫ（配列番号２０３３）を含む、例えばそれからなる。
【０６４９】
一部の実施形態において、本明細書に開示されるＣＡＲ分子は、第１及び第２の結合特異性を含む二重特異性ＣＡＲ、例えば本明細書に記載されるとおりのもの（例えば、２つの抗体分子、例えば本明細書に記載されるとおりの２つのｓｃＦｖ）を含む。一部の実施形態において、二重特異性ＣＡＲは、２つの抗体分子を含み、第１の結合特異性、例えば第１の抗体分子（例えば、第１の抗原結合ドメイン、例えば第１のｓｃＦｖ）は、膜貫通ドメインに近く、本明細書では近位抗体分子（例えば、近位抗原結合ドメイン）とも称され、第２の結合特異性、例えば第２の抗体分子（例えば、第２の抗原結合ドメイン、例えば第２のｓｃＦｖ）は、膜から離れており、本明細書では遠位抗体分子（例えば、遠位抗原結合ドメイン）とも称される。従って、Ｎ末端からＣ末端に、このＣＡＲ分子は、例えば、本明細書に記載されるとおりの、遠位結合特異性、例えば遠位抗体分子（例えば、遠位抗原結合ドメイン、例えば遠位ｓｃＦＶ又はｓｃＦｖ２）、任意選択でリンカー、続いて近位結合特異性、例えば近位抗体分子（例えば、近位抗原結合ドメイン、例えば近位ｓｃＦｖ又はｓｃＦｖ１）を含み、任意選択でリンカーを介して、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインに至る。一部の実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する近位又は遠位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＢＣＭＡ結合特異性を含む。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する近位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＢＣＭＡ結合特異性と、ＣＤ１９に対する遠位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＣＤ１９結合特異性とを含む。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する近位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＢＣＭＡ結合特異性と、ＣＤ２０に対する遠位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＣＤ２０結合特異性とを含む。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する近位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＢＣＭＡ結合特異性と、ＣＤ２２に対する遠位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＣＤ２２結合特異性とを含む。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する遠位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＢＣＭＡ結合特異性と、ＣＤ１９に対する近位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＣＤ１９結合特異性とを含む。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する遠位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＢＣＭＡ結合特異性と、ＣＤ２０に対する近位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＣＤ２０結合特異性とを含む。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する遠位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＢＣＭＡ結合特異性と、ＣＤ２２に対する近位結合特異性、例えば本明細書に記載されるとおりのＣＤ２２結合特異性とを含む。
【０６５０】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する膜から遠位の結合特異性、例えばＢＣＭＡに対するＶＬ１−ＶＨ１結合特異性と、ＣＤ１９、ＣＤ２０又はＣＤ２２に対する膜から近位の結合特異性、例えばＣＤ１９に対するＶＬ２−ＶＨ２又はＶＨ２−ＶＬ１結合特異性とを含む。一実施形態において、第１及び第２の結合特異性は、連続ポリペプチド鎖、例えば単鎖にある。一部の実施形態において、第１及び第２の結合特異性は、任意選択で、本明細書に記載されるとおりのリンカーを含む。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２０３４）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６である）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝１）（配列番号１０３２）であり、例えば、リンカーは、アミノ酸配列Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ（配列番号１０３２）を有する。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝３）（配列番号１０４０）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝４）（配列番号１０３９）である。一部の実施形態において、リンカーは、アミノ酸配列：ＬＡＥＡＡＡＫ（配列番号２０３３）を含む、例えばそれからなる。
【０６５１】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡに対する膜から近位の結合特異性、例えばＢＣＭＡに対するＶＬ１−ＶＨ１結合特異性と、ＣＤ１９、ＣＤ２０又はＣＤ２２に対する膜から遠位の結合特異性、例えばＣＤ１９、ＣＤ２０又はＣＤ２２に対するＶＬ２−ＶＨ２又はＶＨ２−ＶＬ１結合特異性とを含む。一実施形態において、第１及び第２の結合特異性は、連続ポリペプチド鎖、例えば単鎖にある。一部の実施形態において、第１及び第２の結合特異性は、任意選択で、本明細書に記載されるとおりのリンカーを含む。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２０３４）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６である）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝１）（配列番号１０３２）であり、例えば、リンカーは、アミノ酸配列Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ（配列番号１０３２）を有する。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝３）（配列番号１０４０）である。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎ＝４）（配列番号１０３９）である。一部の実施形態において、リンカーは、アミノ酸配列：ＬＡＥＡＡＡＫ（配列番号２０３３）を含む、例えばそれからなる。
【０６５２】
ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５阻害剤と併用して投与される。一部の実施形態において、ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５阻害剤は、抗ＦＣＲＬ２抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＦＣＲＬ２及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体である。一部の実施形態において、ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５阻害剤は、抗ＦＣＲＬ５抗体分子、例えば二重特異性抗体分子、例えばＦＣＲＬ５及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体である。一部の実施形態において、ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５阻害剤は、ＦＣＲＬ２ＣＡＲ発現細胞療法である。一部の実施形態において、ＦＣＲＬ２又はＦＣＲＬ５阻害剤は、ＦＣＲＬ５  ＣＡＲ発現細胞療法である。
【０６５３】
例示的抗ＦＣＲＬ５抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５００９８９００号明細書、米国特許出願公開第２０１６０３６８９８５号明細書、国際公開第２０１７０９６１２０号パンフレット（例えば、国際公開第２０１７０９６１２０号パンフレットに開示される抗体ＥＴ２００−００１、ＥＴ２００−００２、ＥＴ２００−００３、ＥＴ２００−００６、ＥＴ２００−００７、ＥＴ２００−００８、ＥＴ２００−００９、ＥＴ２００−０１０、ＥＴ２００−０１１、ＥＴ２００−０１２、ＥＴ２００−０１３、ＥＴ２００−０１４、ＥＴ２００−０１５、ＥＴ２００−０１６、ＥＴ２００−０１７、ＥＴ２００−０１８、ＥＴ２００−０１９、ＥＴ２００−０２０、ＥＴ２００−０２１、ＥＴ２００−０２２、ＥＴ２００−０２３、ＥＴ２００−０２４、ＥＴ２００−０２５、ＥＴ２００−０２６、ＥＴ２００−０２７、ＥＴ２００−０２８、ＥＴ２００−０２９、ＥＴ２００−０３０、ＥＴ２００−０３１、ＥＴ２００−０３２、ＥＴ２００−０３３、ＥＴ２００−０３４、ＥＴ２００−０３５、ＥＴ２００−０３７、ＥＴ２００−０３８、ＥＴ２００−０３９、ＥＴ２００−０４０、ＥＴ２００−０４１、ＥＴ２００−０４２、ＥＴ２００−０４３、ＥＴ２００−０４４、ＥＴ２００−０４５、ＥＴ２００−０６９、ＥＴ２００−０７８、ＥＴ２００−０７９、ＥＴ２００−０８１、ＥＴ２００−０９７、ＥＴ２００−０９８、ＥＴ２００−０９９、ＥＴ２００−１００、ＥＴ２００−１０１、ＥＴ２００−１０２、ＥＴ２００−１０３、ＥＴ２００−１０４、ＥＴ２００−１０５、ＥＴ２００−１０６、ＥＴ２００−１０７、ＥＴ２００−１０８、ＥＴ２００−１０９、ＥＴ２００−１１０、ＥＴ２００−１１１、ＥＴ２００−１１２、ＥＴ２００−１１３、ＥＴ２００−１１４、ＥＴ２００−１１５、ＥＴ２００−１１６、ＥＴ２００−１１７、ＥＴ２００−１１８、ＥＴ２００−１１９、ＥＴ２００−１２０、ＥＴ２００−１２１、ＥＴ２００−１２２、ＥＴ２００−１２３、ＥＴ２００−１２５、ＥＴ２００−００５及びＥＴ２００−１２４）（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される。
【０６５４】
例示的ＦＣＲＬ５  ＣＡＲ分子は、国際公開第２０１６０９０３３７号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される。
【０６５５】
ＩＬ−１５及び／又はＩＬ−１５Ｒａ
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＩＬ−１５と併用して投与される。一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＩＬ１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体と併用して投与される。一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＮＩＺ９８５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＴＬ−８０３（Ａｌｔｏｒ）又はＣＹＰ０１５０（Ｃｙｔｕｎｅ）から選択される。
【０６５６】
例示的ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体
一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、可溶性形態のヒトＩＬ−１５Ｒａと複合体化したヒトＩＬ−１５を含む。この複合体は、可溶性形態のＩＬ−１５Ｒａに共有結合的又は非共有結合的に結合したＩＬ−１５を含み得る。詳細な実施形態において、ヒトＩＬ−１５は、可溶性形態のＩＬ−１５Ｒａに非共有結合的に結合している。詳細な実施形態において、国際公開第２０１４／０６６５２７号パンフレット（全体として参照により援用される）に記載されるとおり、本組成物のヒトＩＬ−１５は、表１６の配列番号１００１のアミノ酸配列を含み、可溶性形態のヒトＩＬ−１５Ｒａは表１６の配列番号１００２のアミノ酸配列を含む。本明細書に記載される分子は、国際公開第２００７／０８４３４２号パンフレット（全体として参照により援用される）に記載されるベクター、宿主細胞及び方法によって作製することができる。
【０６５７】
【表９１】
2021509009.tif 000116
【０６５８】
他の例示的ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体
一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ  Ｆｃ融合タンパク質（ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ：ＩＬ−１５ＲａＳｕ／Ｆｃ可溶性複合体）であるＡＬＴ−８０３である。ＡＬＴ−８０３については、国際公開第２００８／１４３７９４号パンフレット（全体として参照により援用される）に開示されている。一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ  Ｆｃ融合タンパク質は、表１７に開示されるとおりの配列を含む。
【０６５９】
一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメインに融合したＩＬ−１５（ＣＹＰ０１５０、Ｃｙｔｕｎｅ）を含む。ＩＬ−１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメインは、ＩＬ−１５Ｒａのシグナルペプチド後の１番目のシステイン残基で始まり、前記シグナルペプチドの後の４番目のシステイン残基で終わるドメインを指す。ＩＬ−１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメインに融合したＩＬ−１５の複合体については、国際公開第２００７／０４６０６号パンフレット及び国際公開第２０１２／１７５２２２号パンフレット（全体として参照により援用される）に開示されている。一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ  ｓｕｓｈｉドメイン融合体は、表１７に開示されるとおりの配列を含む。
【０６６０】
【表９２】
2021509009.tif 000117
【０６６１】
ＰＤ−１阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＰＤ−１阻害剤と併用して投与される。一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ）、ピジリズマブ（ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＥＤＩ０６８０（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、ＴＳＲ−０４２（Ｔｅｓａｒｏ）、ＰＦ−０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＢＧＢ−Ａ３１７（Ｂｅｉｇｅｎｅ）、ＢＧＢ−１０８（Ｂｅｉｇｅｎｅ）、ＩＮＣＳＨＲ１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ）又はＡＭＰ−２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）から選択される。
【０６６２】
例示的ＰＤ−１阻害剤
一実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体分子である。一実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、２０１５年７月３０日に公開された、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＰＤ−１  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書（全体として参照により援用される）に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体分子である。
【０６６３】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表１８に示されるか、又は表１８に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域からの（例えば、表１８に開示されるＢＡＰ０４９−クローン−Ｅ又はＢＡＰ０４９−クローン−Ｂの重鎖及び軽鎖可変領域配列からの）、少なくとも１、２、３、４、５又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（又はまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義による（例えば、表１８に示されるとおり）。一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ定義による（例えば、表１８に示されるとおり）。一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両方の組み合わせのＣＤＲ定義による（例えば、表１８に示されるとおり）。一実施形態において、ＶＨ  ＣＤＲ１のＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲの組み合わせは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨ（配列番号５４１）を含む。一実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ）は、表１８に示されるか、又は表１８に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と比べて１、２、３、４、５、６つ又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）又は欠失を有する。
【０６６４】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、各々表１８に開示される、配列番号５０１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５０２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号５０３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号５１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号５１２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０６６５】
一実施形態において、抗体分子は、各々表１８に開示される、配列番号５２４のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ１、配列番号５２５のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ２及び配列番号５２６のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ；及び配列番号５２９のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ１、配列番号５３０のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ２及び配列番号５３１のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０６６６】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号５０６のアミノ酸配列又は配列番号５０６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号５２０のアミノ酸配列又は配列番号５２０と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号５１６のアミノ酸配列又は配列番号５１６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号５０６のアミノ酸配列を含むＶＨと配列番号５２０のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号５０６のアミノ酸配列を含むＶＨと配列番号５１６のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
【０６６７】
一実施形態において、抗体分子は、配列番号５０７のヌクレオチド配列又は配列番号５０７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号５２１又は５１７のヌクレオチド配列又は配列番号５２１又は５１７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号５０７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨと配列番号５２１又は５１７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬとを含む。
【０６６８】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号５０８のアミノ酸配列又は配列番号５０８と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号５２２のアミノ酸配列又は配列番号５２２と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号５１８のアミノ酸配列又は配列番号５１８と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号５０８のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号５２２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号５０８のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号５１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０６６９】
一実施形態において、抗体分子は、配列番号５０９のヌクレオチド配列又は配列番号５０９と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号５２３又は５１９のヌクレオチド配列又は配列番号５２３又は５１９と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号５０９のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖と配列番号５２３又は５１９のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖とを含む。
【０６７０】
本明細書に記載される抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書（全体として参照により援用される）に記載されるベクター、宿主細胞及び方法によって作製することができる。
【０６７１】
【表９３】
2021509009.tif 000118
【０６７２】
【表９４】
2021509009.tif 000119
【０６７３】
他の例示的ＰＤ−１阻害剤
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＭＤＸ−１１０６、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８又はＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても知られるニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）である。ニボルマブ（クローン５Ｃ４）及び他の抗ＰＤ−１抗体については、米国特許第８，００８，４４９号明細書及び国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレット（全体として参照により援用される）に開示されている。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１９に開示されるとおりのニボルマブのＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０６７４】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ランブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＭＫ０３４７５、ＳＣＨ−９００４７５又はＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）としても知られるペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ）である。ペンブロリズマブ及び他の抗ＰＤ−１抗体については、Ｈａｍｉｄ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３６９（２）：１３４−４４、米国特許第８，３５４，５０９号明細書及び国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレット（全体として参照により援用される）に開示されている。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１９に開示されるとおりのペンブロリズマブのＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０６７５】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＣＴ−０１１としても知られるピジリズマブ（ＣｕｒｅＴｅｃｈ）である。ピジリズマブ及び他の抗ＰＤ−１抗体については、Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ３４（５）：４０９−１８、米国特許第７，６９５，７１５号明細書、米国特許第７，３３２，５８２号明細書及び米国特許第８，６８６，１１９号明細書（全体として参照により援用される）に開示されている。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１９に開示されるとおりのピジリズマブのＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０６７６】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＡＭＰ−５１４としても知られるＭＥＤＩ０６８０（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）である。ＭＥＤＩ０６８０及び他の抗ＰＤ−１抗体については、米国特許第９，２０５，１４８号明細書及び国際公開第２０１２／１４５４９３号パンフレット（全体として参照により援用される）に開示されている。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＭＥＤＩ０６８０のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０６７７】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）である。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＲＥＧＮ２８１０のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０６７８】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＰＦ−０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）である。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＰＦ−０６８０１５９１のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０６７９】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＧＢ−Ａ３１７又はＢＧＢ−１０８（Ｂｅｉｇｅｎｅ）である。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＧＢ−Ａ３１７又はＢＧＢ−１０８のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０６８０】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩＮＣＳＨＲ０１２１０又はＳＨＲ−１２１０としても知られるＩＮＣＳＨＲ１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ）である。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩＮＣＳＨＲ１２１０のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０６８１】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＡＮＢ０１１としても知られるＴＳＲ−０４２（Ｔｅｓａｒｏ）である。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＴＳＲ−０４２のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０６８２】
更なる公知の抗ＰＤ−１抗体としては、例えば、国際公開第２０１５／１１２８００号パンフレット、国際公開第２０１６／０９２４１９号パンフレット、国際公開第２０１５／０８５８４７号パンフレット、国際公開第２０１４／１７９６６４号パンフレット、国際公開第２０１４／１９４３０２号パンフレット、国際公開第２０１４／２０９８０４号パンフレット、国際公開第２０１５／２００１１９号パンフレット、米国特許第８，７３５，５５３号明細書、米国特許第７，４８８，８０２号明細書、米国特許第８，９２７，６９７号明細書、米国特許第８，９９３，７３１号明細書及び米国特許第９，１０２，７２７号明細書（全体として参照により援用される）に記載されるものが挙げられる。
【０６８３】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体の１つと結合に関して競合し、且つ／又はそれとＰＤ−１上の同じエピトープに結合する抗体である。
【０６８４】
一実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、例えば、米国特許第８，９０７，０５３号明細書（全体として参照により援用される）に記載されるとおりの、ＰＤ−１シグナル伝達経路を阻害するペプチドである。一実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２の細胞外部分又はＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシンである。一実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、ＡＭＰ−２２４（例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレット及び国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレット（全体として参照により援用される）に開示されるＢ７−ＤＣＩｇ（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ））である。
【０６８５】
【表９５】
2021509009.tif 000120
【０６８６】
ＰＤ−Ｌ１阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤と併用して投与される。一部の実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＦＡＺ０５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、アテゾリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、アベルマブ（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ及びＰｆｉｚｅｒ）、デュルバルマブ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）又はＢＭＳ−９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）から選択される。
【０６８７】
例示的ＰＤ−Ｌ１阻害剤
一実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子である。一実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、２０１６年４月２１日に公開された、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＰＤ−Ｌ１  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第２０１６／０１０８１２３号明細書（全体として参照により援用される）に開示されるとおりの抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子である。
【０６８８】
一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、表２０に示されるか、又は表２０に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域からの（例えば、表２０に開示されるＢＡＰ０５８−クローンＯ又はＢＡＰ０５８−クローンＮの重鎖及び軽鎖可変領域配列からの）少なくとも１、２、３、４、５又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（又はまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義による（例えば、表２０に示されるとおり）。一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ定義による（例えば、表２０に示されるとおり）。一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両方の組み合わせのＣＤＲ定義による（例えば、表２０に示されるとおり）。一実施形態において、ＶＨ  ＣＤＲ１のＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲの組み合わせは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹ（配列番号６４７）を含む。一実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ）は、表２０に示されるか、又は表２０に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と比べて１、２、３、４、５、６つ又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）又は欠失を有する。
【０６８９】
一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、各々表２０に開示される、配列番号６０１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号６０２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号６０３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号６０９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号６１０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号６１１のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０６９０】
一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、各々表２０に開示される、配列番号６２８のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ１、配列番号６２９のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ２及び配列番号６３０のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ；及び配列番号６３３のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ１、配列番号６３４のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ２及び配列番号６３５のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０６９１】
一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号６０６のアミノ酸配列又は配列番号６０６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号６１６のアミノ酸配列又は配列番号６１６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号６２０のアミノ酸配列又は配列番号６２０と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号６２４のアミノ酸配列又は配列番号６２４と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号６０６のアミノ酸配列を含むＶＨと配列番号６１６のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号６２０のアミノ酸配列を含むＶＨと配列番号６２４のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
【０６９２】
一実施形態において、抗体分子は、配列番号６０７のヌクレオチド配列又は配列番号６０７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号６１７のヌクレオチド配列又は配列番号６１７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号６２１のヌクレオチド配列又は配列番号６２１と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号６２５のヌクレオチド配列又は配列番号６２５と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号６０７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨと配列番号６１７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬとを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号６２１のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨと配列番号６２５のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬとを含む。
【０６９３】
一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号６０８のアミノ酸配列又は配列番号６０８と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号６１８のアミノ酸配列又は配列番号６１８と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号６２２のアミノ酸配列又は配列番号６２２と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号６２６のアミノ酸配列又は配列番号６２６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号６０８のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号６１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号６２２のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号６２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０６９４】
一実施形態において、抗体分子は、配列番号６１５のヌクレオチド配列又は配列番号６１５と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号６１９のヌクレオチド配列又は配列番号６１９と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号６２３のヌクレオチド配列又は配列番号６２３と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号６２７のヌクレオチド配列又は配列番号６２７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号６１５のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖と配列番号６１９のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖とを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号６２３のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖と配列番号６２７のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖とを含む。
【０６９５】
本明細書に記載される抗体分子は、米国特許出願公開第２０１６／０１０８１２３号明細書（全体として参照により援用される）に記載されるベクター、宿主細胞及び方法によって作製することができる。
【０６９６】
【表９６】
2021509009.tif 000121
【０６９７】
【表９７】
2021509009.tif 000122
【０６９８】
【表９８】
2021509009.tif 000123
【０６９９】
他の例示的ＰＤ−Ｌ１阻害剤
一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６、ＲＯ５５４１２６７、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０又はＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標）としても知られるアテゾリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）である。アテゾリズマブ及び他の抗ＰＤ−Ｌ１抗体については、米国特許第８，２１７，１４９号明細書（全体として参照により援用される）に開示されている。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、例えば、表２１に開示されるとおりのアテゾリズマブのＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０７００】
一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られるアベルマブ（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ及びＰｆｉｚｅｒ）である。アベルマブ及び他の抗ＰＤ−Ｌ１抗体については、国際公開第２０１３／０７９１７４号パンフレット（全体として参照により援用される）に開示されている。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、例えば、表２１に開示されるとおりのアベルマブのＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０７０１】
一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、ＭＥＤＩ４７３６としても知られるデュルバルマブ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）である。デュルバルマブ及び他の抗ＰＤ−Ｌ１抗体については、米国特許第８，７７９，１０８号明細書（全体として参照により援用される）に開示されている。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、例えば、表２１に開示されるとおりのデュルバルマブのＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０７０２】
一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、ＭＤＸ−１１０５又は１２Ａ４としても知られるＢＭＳ−９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）である。ＢＭＳ−９３６５５９及び他の抗ＰＤ−Ｌ１抗体については、米国特許第７，９４３，７４３号明細書及び国際公開第２０１５／０８１１５８号パンフレット（全体として参照により援用される）に開示されている。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、例えば、表２１に開示されるとおりのＢＭＳ−９３６５５９のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０７０３】
更に公知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体としては、例えば、国際公開第２０１５／１８１３４２号パンフレット、国際公開第２０１４／１０００７９号パンフレット、国際公開第２０１６／０００６１９号パンフレット、国際公開第２０１４／０２２７５８号パンフレット、国際公開第２０１４／０５５８９７号パンフレット、国際公開第２０１５／０６１６６８号パンフレット、国際公開第２０１３／０７９１７４号パンフレット、国際公開第２０１２／１４５４９３号パンフレット、国際公開第２０１５／１１２８０５号パンフレット、国際公開第２０１５／１０９１２４号パンフレット、国際公開第２０１５／１９５１６３号パンフレット、米国特許第８，１６８，１７９号明細書、米国特許第８，５５２，１５４号明細書、米国特許第８，４６０，９２７号明細書及び米国特許第９，１７５，０８２号明細書（全体として参照により援用される）に記載されるものが挙げられる。
【０７０４】
一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体の１つと結合に関して競合し、且つ／又はそれとＰＤ−Ｌ１上の同じエピトープに結合する抗体である。
【０７０５】
【表９９】
2021509009.tif 000124
【０７０６】
ＬＡＧ−３阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＬＡＧ−３阻害剤と併用して投与される。一部の実施形態において、ＬＡＧ−３阻害剤は、ＬＡＧ５２５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＭＳ−９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）又はＴＳＲ−０３３（Ｔｅｓａｒｏ）から選択される。
【０７０７】
例示的ＬＡＧ−３阻害剤
一実施形態において、ＬＡＧ−３阻害剤は、抗ＬＡＧ−３抗体分子である。一実施形態において、ＬＡＧ−３阻害剤は、２０１５年９月１７日に公開された、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＬＡＧ−３  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号明細書（全体として参照により援用される）に開示されるとおりの抗ＬＡＧ−３抗体分子である。
【０７０８】
一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、表２２に示されるか、又は表２２に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域からの（例えば、表２２に開示されるＢＡＰ０５０−クローンＩ又はＢＡＰ０５０−クローンＪの重鎖及び軽鎖可変領域配列からの）少なくとも１、２、３、４、５又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（又はまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義による（例えば、表２２に示されるとおり）。一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ定義による（例えば、表２２に示されるとおり）。一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両方の組み合わせのＣＤＲ定義による（例えば、表２２に示されるとおり）。一実施形態において、ＶＨ  ＣＤＲ１のＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲの組み合わせは、アミノ酸配列ＧＦＴＬＴＮＹＧＭＮ（配列番号７６６）を含む。一実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ）は、表２２に示されるか、又は表２２に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と比べて１、２、３、４、５、６つ又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）又は欠失を有する。
【０７０９】
一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、各々表２２に開示される、配列番号７０１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７０２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号７０３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号７１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号７１２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０７１０】
一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、各々表２２に開示される、配列番号７３６又は７３７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ１、配列番号７３８又は７３９のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ２及び配列番号７４０又は７４１のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ；及び配列番号７４６又は７４７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ１、配列番号７４８又は７４９のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ２及び配列番号７５０又は７５１のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、各々表２２に開示される、配列番号７５８又は７３７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ１、配列番号７５９又は７３９のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ２及び配列番号７６０又は７４１のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ；及び配列番号７４６又は７４７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ１、配列番号７４８又は７４９のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ２及び配列番号７５０又は７５１のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０７１１】
一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号７０６のアミノ酸配列又は配列番号７０６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号７１８のアミノ酸配列又は配列番号７１８と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号７２４のアミノ酸配列又は配列番号７２４と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号７３０のアミノ酸配列又は配列番号７３０と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号７０６のアミノ酸配列を含むＶＨと配列番号７１８のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号７２４のアミノ酸配列を含むＶＨと配列番号７３０のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
【０７１２】
一実施形態において、抗体分子は、配列番号７０７又は７０８のヌクレオチド配列又は配列番号７０７又は７０８と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号７１９又は７２０のヌクレオチド配列又は配列番号７１９又は７２０と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号７２５又は７２６のヌクレオチド配列又は配列番号７２５又は７２６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号７３１又は７３２のヌクレオチド配列又は配列番号７３１又は７３２と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号７０７又は７０８のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨと配列番号７１９又は７２０のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬとを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号７２５又は７２６のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨと配列番号７３１又は７３２のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬとを含む。
【０７１３】
一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号７０９のアミノ酸配列又は配列番号７０９と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号７２１のアミノ酸配列又は配列番号７２１と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号７２７のアミノ酸配列又は配列番号７２７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号７３３のアミノ酸配列又は配列番号７３３と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号７０９のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号７２１のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号７２７のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号７３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７１４】
一実施形態において、抗体分子は、配列番号７１６又は７１７のヌクレオチド配列又は配列番号７１６又は７１７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号７２２又は７２３のヌクレオチド配列又は配列番号７２２又は７２３と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号７２８又は７２９のヌクレオチド配列又は配列番号７２８又は７２９と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号７３４又は７３５のヌクレオチド配列又は配列番号７３４又は７３５と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号７１６又は７１７のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖と配列番号７２２又は７２３のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖とを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号７２８又は７２９のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖と配列番号７３４又は７３５のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖とを含む。
【０７１５】
本明細書に記載される抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号明細書（全体として参照により援用される）に記載されるベクター、宿主細胞及び方法によって作製することができる。
【０７１６】
【表１００】
2021509009.tif 000125
【０７１７】
【表１０１】
2021509009.tif 000126
【０７１８】
【表１０２】
2021509009.tif 000127
【０７１９】
他の例示的ＬＡＧ−３阻害剤
一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、ＢＭＳ９８６０１６としても知られるＢＭＳ−９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）である。ＢＭＳ−９８６０１６及び他の抗ＬＡＧ−３抗体については、国際公開第２０１５／１１６５３９号パンフレット及び米国特許第９，５０５，８３９号明細書（全体として参照により援用される）に開示されている。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、例えば、表２３に開示されるとおりのＢＭＳ−９８６０１６のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０７２０】
一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、ＴＳＲ−０３３（Ｔｅｓａｒｏ）である。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、ＴＳＲ−０３３のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０７２１】
一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、ＩＭＰ７３１又はＧＳＫ２８３１７８１（ＧＳＫ及びＰｒｉｍａ  ＢｉｏＭｅｄ）である。ＩＭＰ７３１及び他の抗ＬＡＧ−３抗体については、国際公開第２００８／１３２６０１号パンフレット及び米国特許第９，２４４，０５９号明細書（全体として参照により援用される）に開示されている。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、例えば、表２３に開示されるとおりのＩＭＰ７３１のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、ＧＳＫ２８３１７８１のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０７２２】
一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、ＩＭＰ７６１（Ｐｒｉｍａ  ＢｉｏＭｅｄ）である。一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、ＩＭＰ７６１のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０７２３】
更に公知の抗ＬＡＧ−３抗体としては、例えば、国際公開第２００８／１３２６０１号パンフレット、国際公開第２０１０／０１９５７０号パンフレット、国際公開第２０１４／１４０１８０号パンフレット、国際公開第２０１５／１１６５３９号パンフレット、国際公開第２０１５／２００１１９号パンフレット、国際公開第２０１６／０２８６７２号パンフレット、米国特許第９，２４４，０５９号明細書、米国特許第９，５０５，８３９号明細書（全体として参照により援用される）に記載されるものが挙げられる。
【０７２４】
一実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体は、本明細書に記載される抗ＬＡＧ−３抗体の１つと結合に関して競合し、且つ／又はそれとＬＡＧ−３上の同じエピトープに結合する抗体である。
【０７２５】
一実施形態において、抗ＬＡＧ−３阻害剤は、可溶性ＬＡＧ−３タンパク質、例えば国際公開第２００９／０４４２７３号パンフレット（全体として参照により援用される）に例えば開示されるとおりのＩＭＰ３２１（Ｐｒｉｍａ  ＢｉｏＭｅｄ）である。
【０７２６】
【表１０３】
2021509009.tif 000128
【０７２７】
ＴＩＭ−３阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＴＩＭ−３阻害剤と併用して投与される。一部の実施形態において、ＴＩＭ−３阻害剤は、ＭＧＢ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）又はＴＳＲ−０２２（Ｔｅｓａｒｏ）である。
【０７２８】
例示的ＴＩＭ−３阻害剤
一実施形態において、ＴＩＭ−３阻害剤は、抗ＴＩＭ−３抗体分子である。一実施形態において、ＴＩＭ−３阻害剤は、２０１５年８月６日に公開された、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＴＩＭ−３  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号明細書（全体として参照により援用される）に開示されるとおりの抗ＴＩＭ−３抗体分子である。
【０７２９】
一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、表２４に示されるか、又は表２４に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域からの（例えば、表２４に開示されるＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１１又はＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０３の重鎖及び軽鎖可変領域配列からの）少なくとも１、２、３、４、５又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（又はまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義による（例えば、表２４に示されるとおり）。一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ定義による（例えば、表２４に示されるとおり）。一実施形態において、ＣＤＲの１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ）は、表２４に示されるか、又は表２４に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列と比べて１、２、３、４、５、６つ又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）又は欠失を有する。
【０７３０】
一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、各々表２４に開示される、配列番号８０１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８０２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号８０３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号８１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号８１２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、各々表２４に開示される、配列番号８０１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８２０のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号８０３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号８１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号８１２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０７３１】
一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、配列番号８０６のアミノ酸配列又は配列番号８０６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、配列番号８１６のアミノ酸配列又は配列番号８１６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、配列番号８２２のアミノ酸配列又は配列番号８２２と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、配列番号８２６のアミノ酸配列又は配列番号８２６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、配列番号８０６のアミノ酸配列を含むＶＨと配列番号８１６のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、配列番号８２２のアミノ酸配列を含むＶＨと配列番号８２６のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
【０７３２】
一実施形態において、抗体分子は、配列番号８０７のヌクレオチド配列又は配列番号８０７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号８１７のヌクレオチド配列又は配列番号８１７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号８２３のヌクレオチド配列又は配列番号８２３と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号８２７のヌクレオチド配列又は配列番号８２７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号８０７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨと配列番号８１７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬとを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号８２３のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨと配列番号８２７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬとを含む。
【０７３３】
一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、配列番号８０８のアミノ酸配列又は配列番号８０８と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、配列番号８１８のアミノ酸配列又は配列番号８１８と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、配列番号８２４のアミノ酸配列又は配列番号８２４と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、配列番号８２８のアミノ酸配列又は配列番号８２８と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、配列番号８０８のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号８１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、配列番号８２４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号８２８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０７３４】
一実施形態において、抗体分子は、配列番号８０９のヌクレオチド配列又は配列番号８０９と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号８１９のヌクレオチド配列又は配列番号８１９と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号８２５のヌクレオチド配列又は配列番号８２５と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号８２９のヌクレオチド配列又は配列番号８２９と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号８０９のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖と配列番号８１９のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖とを含む。一実施形態において、抗体分子は、配列番号８２５のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖と配列番号８２９のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖とを含む。
【０７３５】
本明細書に記載される抗体分子は、米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号明細書（全体として参照により援用される）に記載されるベクター、宿主細胞及び方法によって作製することができる。
【０７３６】
【表１０４】
2021509009.tif 000129
【０７３７】
他の例示的ＴＩＭ−３阻害剤
一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、ＴＳＲ−０２２（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ）である。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、ＴＳＲ−０２２のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、例えば、表２５に開示されるとおりのＡＰＥ５１３７又はＡＰＥ５１２１のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。ＡＰＥ５１３７、ＡＰＥ５１２１及び他の抗ＴＩＭ−３抗体については、国際公開第２０１６／１６１２７０号パンフレット（全体として参照により援用される）に開示されている。
【０７３８】
一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、抗体クローンＦ３８−２Ｅ２である。一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、Ｆ３８−２Ｅ２のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
【０７３９】
更に公知の抗ＴＩＭ−３抗体としては、例えば、国際公開第２０１６／１１１９４７号パンフレット、国際公開第２０１６／０７１４４８号パンフレット、国際公開第２０１６／１４４８０３号パンフレット、米国特許第８，５５２，１５６号明細書、米国特許第８，８４１，４１８号明細書及び米国特許第９，１６３，０８７号明細書（全体として参照により援用される）に記載されるものが挙げられる。
【０７４０】
一実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体は、本明細書に記載される抗ＴＩＭ−３抗体の１つと結合に関して競合し、且つ／又はそれとＴＩＭ−３上の同じエピトープに結合する抗体である。
【０７４１】
【表１０５】
2021509009.tif 000130
【０７４２】
ＴＧＦ−β阻害剤
特定の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、形質転換成長因子β（ＴＧＦ−β、ＴＧＦβ、ＴＧＦｂ又はＴＧＦ−βとしても知られ、本明細書では同義的に使用される）阻害剤と併用して投与される。
【０７４３】
ＴＧＦ−βは、例えば、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、成長分化因子、アクチビン及びインヒビンを含む、構造的に関連性のあるサイトカインの大型ファミリーに属する。一部の実施形態において、本明細書に記載されるＴＧＦ−β阻害剤は、ＴＧＦ−βの１つ以上のアイソフォーム（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２又はＴＧＦ−β３の１、２つ又は全て）に結合し、且つ／又はそれを阻害することができる。
【０７４４】
一部の実施形態において、ＴＧＦ−β阻害剤は、ＸＯＭＡ  ０８９又は国際公開第２０１２／１６７１４３号パンフレット（その全体が参照により援用される）に開示される化合物を含む。
【０７４５】
ＸＯＭＡ  ０８９は、ＸＰＡ．４２．０８９としても知られる。ＸＯＭＡ  ０８９は、ＴＧＦ−β１及び２リガンドに特異的に結合してそれを中和する完全ヒトモノクローナル抗体である。
【０７４６】
ＸＯＭＡ  ０８９の重鎖可変領域は、以下のアミノ酸配列を有する：
【化２４】
2021509009.tif 000131
（国際公開第２０１２／１６７１４３号パンフレットに配列番号６として開示される）。ＸＯＭＡ  ０８９の軽鎖可変領域は、以下のアミノ酸配列を有する：
【化２５】
2021509009.tif 000132
（国際公開第２０１２／１６７１４３号パンフレットに配列番号８として開示される）。
【０７４７】
ＸＯＭＡ  ０８９は、ヒトＴＧＦ−βアイソフォームに高親和性で結合する。概して、ＸＯＭＡ  ０８９は、ＴＧＦ−β１及びＴＧＦ−β２に高親和性で結合し、それより程度は低いがＴＧＦ−β３に結合する。Ｂｉａｃｏｒｅアッセイでは、ヒトＴＧＦ−βに対するＸＯＭＡ  ０８９のＫＤは、ＴＧＦ−β１について１４．６ｐＭ、ＴＧＦ−β２について６７．３ｐＭ及びＴＧＦ−β３について９４８ｐＭである。３つのＴＧＦ−βアイソフォーム全てに対する高親和性結合を所与とすれば、特定の実施形態において、ＸＯＭＡ  ０８９は、本明細書に記載されるとおりのある用量のＸＯＭＡ  ０８９でＴＧＦ−β１、２及び３に結合するものと予想される。ＸＯＭＡ  ０８９は、げっ歯類及びカニクイザルＴＧＦ−βと交差反応し、インビトロ及びインビボで機能的活性を示すため、げっ歯類及びカニクイザルは、毒性研究に妥当な種である。
【０７４８】
一部の実施形態において、ＴＧＦ−β阻害剤は、フレソリムマブ（ＣＡＳ登録番号：９４８５６４−７３−６）を含む。フレソリムマブは、ＧＣ１００８としても知られる。フレソリムマブは、ＴＧＦ−βアイソフォーム１、２及び３に結合してそれを阻害するヒトモノクローナル抗体である。
【０７４９】
フレソリムマブの重鎖は、以下のアミノ酸配列を有する。
【化２６】
2021509009.tif 000133
【０７５０】
フレソリムマブの軽鎖は、以下のアミノ酸配列を有する。
【化２７】
2021509009.tif 000134
【０７５１】
フレソリムマブについては、例えば、国際公開第２００６／０８６４６９号パンフレット並びに米国特許第８，３８３，７８０号明細書及び同第８，５９１，９０１号明細書（これらは全体として参照により援用される）に開示されている。
【０７５２】
抗ＣＤ７３抗体分子
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、抗ＣＤ７３抗体分子と併用して投与される。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、完全抗体分子又はその抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、表２６に掲載される抗体分子のいずれかから選択される。他の実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、表２６に開示されるとおりの重鎖可変ドメイン配列、軽鎖可変ドメイン配列又は両方を含む。特定の実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、ＣＤ７３タンパク質に結合し、ＣＤ７３、例えばヒトＣＤ７３の活性を低下させる、例えばそれを阻害するか又はそれに拮抗する。
【０７５３】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１６／０７５０９９号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば、国際公開第２０１６／０７５０９９号パンフレットに開示されるとおりのＭＥＤＩ  ９４４７である。ＭＥＤＩ  ９４４７の別名としては、クローン１０．３又は７３ｃｏｍｂｏ３が挙げられる。ＭＥＤＩ  ９４４７は、ＣＤ７３の活性を阻害し、例えばそれに拮抗するＩｇＧ１抗体である。ＭＥＤＩ  ９４４７及び他の抗ＣＤ７３抗体分子については、国際公開第２０１６／０７５１７６号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１６／０１２９１０８号明細書（これらの内容全体が本明細書において全体として参照により援用される）にも開示されている。
【０７５４】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、ＭＥＤＩ  ９４７７の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。ＭＥＤＩ  ９４７７の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号１９９０として開示される（表２６を参照されたい）。ＭＥＤＩ  ９４７７の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号１９９１として開示される（表２６を参照されたい）。
【０７５５】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１６／０８１７４８号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば、国際公開第２０１６／０８１７４８号パンフレットに開示されるとおりの１１Ｆ１１である。１１Ｆ１１は、ＣＤ７３の活性を阻害し、例えばそれに拮抗するＩｇＧ２抗体である。１１Ｆ１１に由来する抗体、例えばＣＤ７３．４及びＣＤ７３．１０；１１Ｆ１１のクローン、例えば１１Ｆ１１−１及び１１Ｆ１１−２；及び他の抗ＣＤ７３抗体分子が国際公開第２０１６／０８１７４８号パンフレット及び米国特許第９，６０５，０８０号明細書（これらの内容全体が本明細書において全体として参照により援用される）に開示されている。
【０７５６】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、１１Ｆ１１−１又は１１Ｆ１１−２の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。１１Ｆ１１−１の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号１９９８として開示される（表２６を参照されたい）。１１Ｆ１１−１の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号１９９９として開示される（表２６を参照されたい）。１１Ｆ１１−２の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号１９９４として開示される（表２６を参照されたい）。１１Ｆ１１−２の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号１９９５として開示される（表２６を参照されたい）。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、１１Ｆ１１−１又は１１Ｆ１１−２の重鎖、軽鎖又は両方を含む。１１Ｆ１１−１の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列は、それぞれ配列番号１９９６及び配列番号１９９７として開示される（表２６を参照されたい）。１１Ｆ１１−２の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列は、それぞれ配列番号１９９２及び配列番号１９９３として開示される（表２６を参照されたい）。
【０７５７】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば、米国特許第９，６０５，０８０号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。
【０７５８】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば、米国特許第９，６０５，０８０号明細書に開示されるとおりのＣＤ７３．４である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、ＣＤ７３．４の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。ＣＤ７３．４の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２０００として開示される（表２６を参照されたい）。１１Ｆ１１−２の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２００１として開示される（表２６を参照されたい）。
【０７５９】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば、米国特許第９，６０５，０８０号明細書に開示されるとおりのＣＤ７３．１０である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、ＣＤ７３．１０の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。ＣＤ７３．１０の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２００２として開示される（表２６を参照されたい）。１１Ｆ１１−２の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２００３として開示される（表２６を参照されたい）。
【０７６０】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２００９／０２０３５３８号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば、国際公開第２００９／０２０３５３８号パンフレットに開示されるとおりの０６７−２１３である。
【０７６１】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、０６７−２１３の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。０６７−２１３の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２００４として開示される（表２６を参照されたい）。０６７−２１３の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２００５として開示される（表２６を参照されたい）。
【０７６２】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、米国特許第９，０９０，６９７号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば、米国特許第９，０９０，６９７号明細書に開示されるとおりのＴＹ／２３である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、ＴＹ／２３の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
【０７６３】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレットに開示される抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
【０７６４】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１６／１４６８１８号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１６／１４６８１８号パンフレットに開示される抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
【０７６５】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２００４／０７９０１３号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２００４／０７９０１３号パンフレットに開示される抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
【０７６６】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１２／１２５８５０号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１２／１２５８５０号パンフレットに開示される抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
【０７６７】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１５／００４４００号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１５／００４４００号パンフレットに開示される抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
【０７６８】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２００７／１４６９６８号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２００７１４６９６８号パンフレットに開示される抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
【０７６９】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、米国特許出願公開第２００７／００４２３９２号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、米国特許出願公開第２００７／００４２３９２号明細書に開示される抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
【０７７０】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、米国特許出願公開第２００９／０１３８９７７号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、米国特許出願公開第２００９／０１３８９７７号明細書に開示される抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
【０７７１】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、Ｆｌｏｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９２  Ｊｕｎ；５８（１）：６２−７０（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、Ｆｌｏｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９２  Ｊｕｎ；５８（１）：６２−７０に開示される抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
【０７７２】
一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、Ｓｔａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ．２０１０  Ｊａｎ  １０７（４）：１５４７−１５５２（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される抗ＣＤ７３抗体である。一部の実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、Ｓｔａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．に開示されるとおりのＴＹ／２３又はＴＹ１１．８である。一実施形態において、抗ＣＤ７３抗体分子は、Ｓｔａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．に開示される抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
【０７７３】
【表１０６】
2021509009.tif 000135
【０７７４】
本明細書に開示される併用療法に使用される抗ＣＤ７３抗体分子は、表２６に開示されるＶＨ／ＶＬ配列のいずれか又はそれと実質的に同一の（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列を含むことができる。ＣＤ７３抗体の例示的配列としては、以下が挙げられる：
（ｉ）ＭＥＤＩ  ９４４７のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、それぞれ配列番号１９９０〜１９９１又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号１９９０〜１９９１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；
（ｉｉ）１１Ｆ１１−２のＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、それぞれ配列番号１９９２〜１９９３又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号１９９２〜１９９３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；
（ｉｉｉ）１１Ｆ１１−２のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、それぞれ配列番号１９９４〜１９９５又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号１９９４〜１９９５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；
（ｉｖ）１１Ｆ１１−１のＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、それぞれ配列番号１９９６及び１９９７又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号１９９６及び１９９７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；
（ｖ）１１Ｆ１１−１のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、それぞれ配列番号１９９８〜１９９９又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号１９９８〜１９９９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；
（ｖｉ）ＣＤ７３．４のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、それぞれ配列番号２０００〜２００１又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号２０００〜２００１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；
（ｖｉｉ）ＣＤ７３．１０のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、それぞれ配列番号２００２〜２００３又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号２００２〜２００３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；又は
（ｖｉｉｉ）０６７−２１３のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、それぞれ配列番号２００４〜２００５又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号２００４〜２００５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列。
【０７７５】
ＩＬ−１７阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）阻害剤と併用して投与される。
【０７７６】
一部の実施形態において、ＩＬ−１７阻害剤は、セクキヌマブ（ＣＡＳ登録番号：８７５３５６−４３−７（重鎖）及び８７５３５６−４４−８（軽鎖））である。セクキヌマブは、ＡＩＮ４５７及びＣＯＳＥＮＴＹＸ（登録商標）としても知られる。セクキヌマブは、ＩＬ−１７Ａに特異的に結合する組換えヒトモノクローナルＩｇＧ１／κ抗体である。これは、組換えチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株で発現する。
【０７７７】
セクキヌマブについては、例えば、国際公開第２００６／０１３１０７号パンフレット、米国特許第７，８０７，１５５号明細書、米国特許第８，１１９，１３１号明細書、米国特許第８，６１７，５５２号明細書及び欧州特許第１７７６１４２号明細書に記載されている。セクキヌマブの重鎖可変領域は、以下のアミノ酸配列を有する：
【化２８】
2021509009.tif 000136
（国際公開第２００６／０１３１０７号パンフレットに配列番号８として開示される）。セクキヌマブの軽鎖可変領域は、以下のアミノ酸配列を有する：
【化２９】
2021509009.tif 000137
（国際公開第２００６／０１３１０７号パンフレットに配列番号１０として開示される）。セクキヌマブの重鎖ＣＤＲ１は、ＮＹＷＭＮ（配列番号２００８）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２００６／０１３１０７号パンフレットに配列番号１として開示される）。セクキヌマブの重鎖ＣＤＲ２は、ＡＩＮＱＤＧＳＥＫＹＹＶＧＳＶＫＧ（配列番号２００９）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２００６／０１３１０７号パンフレットに配列番号２として開示される）。セクキヌマブの重鎖ＣＤＲ３は、ＤＹＹＤＩＬＴＤＹＹＩＨＹＷＹＦＤＬ（配列番号２０１０）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２００６／０１３１０７号パンフレットに配列番号３として開示される）。セクキヌマブの軽鎖ＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号２０１１）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２００６／０１３１０７号パンフレットに配列番号４として開示される）。セクキヌマブの軽鎖ＣＤＲ２は、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号２０１２）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２００６／０１３１０７号パンフレットに配列番号５として開示される）。セクキヌマブの軽鎖ＣＤＲ３は、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号２０１３）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２００６／０１３１０７号パンフレットに配列番号６として開示される）。
【０７７８】
一部の実施形態において、ＩＬ−１７阻害剤は、ＣＪＭ１１２である。ＣＪＭ１１２は、ＸＡＢ４としても知られる。ＣＪＭ１１２は、ＩＬ−１７Ａを標的とする（例えば、ＩｇＧ１／κアイソタイプの）完全ヒトモノクローナル抗体である。
【０７７９】
ＣＪＭ１１２については、例えば、国際公開第２０１４／１２２６１３号パンフレットに開示されている。ＣＪＭ１１２の重鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
【化３０】
2021509009.tif 000138
（国際公開第２０１４／１２２６１３号パンフレットに配列番号１４として開示される）。ＣＪＭ１１２の軽鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
【化３１】
2021509009.tif 000139
（国際公開第２０１４／１２２６１３号パンフレットに配列番号４４として開示される）。
【０７８０】
ＣＪＭ１１２は、インビトロ及びインビボでヒト、カニクイザル、マウス及びラットＩＬ−１７Ａに結合し、これらのサイトカインの生物活性を中和することができる。ＩＬ−１７ファミリーのメンバーであるＩＬ−１７Ａは、乾癬及び癌など、多くの免疫介在条件下で重要な役割を果たすことが示されている主要な炎症誘発性サイトカインである（Ｗｉｔｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．ｐ．５６７−７９；Ｍｉｏｓｓｅｃ  ａｎｄ  Ｋｏｌｌｓ（２０１２）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．ｐ．７６３−７６）。
【０７８１】
一部の実施形態において、ＩＬ−１７阻害剤は、イキセキズマブ（ＣＡＳ登録番号：１１４３５０３−６９−８）である。イキセキズマブは、ＬＹ２４３９８２１としても知られる。イキセキズマブは、ＩＬ−１７Ａを標的とするヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。
【０７８２】
イキセキズマブについては、例えば、国際公開第２００７／０７０７５０号パンフレット、米国特許第７，８３８，６３８号明細書及び米国特許第８，１１０，１９１号明細書に記載されている。イキセキズマブの重鎖可変領域は、以下のアミノ酸配列を有する：
【化３２】
2021509009.tif 000140
（国際公開第２００７／０７０７５０号パンフレットに配列番号１１８として開示される）。イキセキズマブの軽鎖可変領域は、以下のアミノ酸配列を有する：
【化３３】
2021509009.tif 000141
（国際公開第２００７／０７０７５０号パンフレットに配列番号２４１として開示される）。
【０７８３】
一部の実施形態において、ＩＬ−１７阻害剤は、ブロダルマブ（ＣＡＳ登録番号：１１７４３９５−１９−７）である。ブロダルマブは、ＡＭＧ  ８２７又はＡＭ−１４としても知られる。ブロダルマブは、インターロイキン−１７受容体Ａ（ＩＬ−１７ＲＡ）に結合し、ＩＬ−１７による受容体の活性化を妨げる。
【０７８４】
ブロダルマブについては、例えば、国際公開第２００８／０５４６０３号パンフレット、米国特許第７，７６７，２０６号明細書、米国特許第７，７８６，２８４号明細書、米国特許第７，８３３，５２７号明細書、米国特許第７，９３９，０７０号明細書、米国特許第８，４３５，５１８号明細書、米国特許第８，５４５，８４２号明細書、米国特許第８，７９０，６４８号明細書及び米国特許第９，０７３，９９９号明細書に開示されている。ブロダルマブの重鎖ＣＤＲ１は、ＲＹＧＩＳ（配列番号２０１８）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２００８／０５４６０３号パンフレットに配列番号１４６として開示されるとおり）。ブロダルマブの重鎖ＣＤＲ２は、ＷＩＳＴＹＳＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ（配列番号２０１９）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２００８／０５４６０３号パンフレットに配列番号１４７として開示されるとおり）。ブロダルマブの重鎖ＣＤＲ３は、ＲＱＬＹＦＤＹ（配列番号２０２０）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２００８／０５４６０３号パンフレットに配列番号１４８として開示されるとおり）。ブロダルマブの軽鎖ＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号２０２１）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２００８／０５４６０３号パンフレットに配列番号２２４として開示されるとおり）。ブロダルマブの重鎖ＣＤＲ２は、ＤＡＳＴＲＡＴ（配列番号２０２２）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２００８／０５４６０３号パンフレットに配列番号２２５として開示されるとおり）。ブロダルマブの重鎖ＣＤＲ３は、ＱＱＹＤＮＷＰＬＴ（配列番号２０２３）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２００８／０５４６０３号パンフレットに配列番号２２６として開示されるとおり）。
【０７８５】
ＩＬ−１β阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）阻害剤と併用して投与される。
【０７８６】
サイトカインのインターロイキン−１（ＩＬ−１）ファミリーは、炎症及び免疫応答において中心的役割を持つ分泌型多面発現性サイトカインの群である。癌を含めた複数の臨床セッティングでＩＬ−１の増加が観察される（Ａｐｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．ｐ．３８７−４０８；Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（２０１０）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｐ．５９９−６０６）。ＩＬ−１ファミリーは、とりわけ、ＩＬ−１β（ＩＬ−１β）及びＩＬ−１α（ＩＬ−１ａ）を含む。ＩＬ−１βは、肺癌、乳癌及び結腸直腸癌で上昇し（Ｖｏｒｏｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｆｒｏｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．ｐ．１１４）、予後不良に関連する（Ａｐｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．ｐ．２７７−８８）。理論によって拘束されることを望むものではないが、一部の実施形態において、腫瘍微小環境から及び悪性細胞によって生じる分泌型ＩＬ−１βは、腫瘍細胞増殖を促進し、侵襲性を高め、且つ一部には抑制性好中球を動員することにより、抗腫瘍免疫応答を弱めると考えられている（Ａｐｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．ｐ．３８７−４０８；Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｐ．６９３３−４２）。実験データは、ＩＬ−１βを阻害すると腫瘍負荷及び転移が減少することを示している（Ｖｏｒｏｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．ｐ．２６４５−５０）。
【０７８７】
一部の実施形態において、ＩＬ−１β阻害剤は、アナキンラ又はリロナセプトから選択される。
【０７８８】
一部の実施形態において、ＩＬ−１β阻害剤は、キネレット（Ｋｉｎｅｒｅｔ）としても知られるアナキンラ（Ａｍｇｅｎ）である。アナキンラは、細胞表面受容体への結合に関してＩＬ−１βと競合するＩＬ−１Ｒａ拮抗薬である。
【０７８９】
一部の実施形態において、ＩＬ−１β阻害剤は、アルカリスト（Ａｒｃａｌｙｓｔ）としても知られるリロナセプト（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）である。リロナセプトは、ヒトインターロイキン−１受容体成分（ＩＬ−１Ｒ１）及びＩＬ−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）の細胞外部分のリガンド結合ドメインがヒトＩｇＧ１の断片−結晶化可能部分（Ｆｃ領域）に連結したものからなる融合タンパク質である。リロナセプトは、例えば、ＩＬ−１に結合してそれを中和するＩＬ−１β阻害剤である。
【０７９０】
ＣＤ３２Ｂ阻害剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ３２Ｂ阻害剤と併用して投与される。
【０７９１】
一部の実施形態において、ＣＤ３２Ｂ阻害剤は、抗ＣＤ３２Ｂ抗体分子である。例示的抗ＣＤ３２Ｂ抗体分子については、米国特許第８１８７５９３号明細書、米国特許第８７７８３３９号明細書、米国特許第８８０２０８９号明細書、米国特許出願公開第２００６００７３１４２号明細書、米国特許出願公開第２０１７０１９８０４０号明細書、米国特許出願公開第２０１３０２５１７０６号明細書及び国際公開第２００９０８３００９号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示されている。一部の実施形態において、抗ＣＤ３２Ｂ抗体分子は、米国特許出願公開第２０１７０１９８０４０号明細書に開示される抗体分子である。
【０７９２】
化学療法剤
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞療法は、化学療法剤と併用して投与される。例示的な化学療法剤は、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（例えば、リポソームドキソルビシン））、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、ダカルバジン、メルファラン、イホスファミド、テモゾロミド）、免疫細胞抗体（例えば、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、フルダラビン））、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲグルココルチコイド誘発ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラシノマイシンＡ、グリオトキシン又はボルテゾミブ）、サリドマイド又はサリドマイド誘導体（例えば、レナリドマイド）などの免疫調節剤を含む。
【０７９３】
併用療法における使用が企図される一般的化学療法剤は、アナストロゾール（アリミデックス（登録商標））、ビカルタミド（カソデックス（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（マイレラン（登録商標））、ブスルファン注（ブスルフェクス（登録商標））、カペシタビン（ゼローダ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（リューケラン（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（ロイスタチン（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）又はＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメサゾン、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（ベプシド（登録商標））、リン酸フルダラビン（フルダラ（登録商標））、５−フルオロウラシル（アドルシル（登録商標）、エフデックス（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（ハイドレア（登録商標））、イダルビシン（イダマイシン（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（アルケラン（登録商標））、６−メルカプトプリン（ピュリネソール（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（ノバントロン（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、ｐｈｏｅｎｉｘ（イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロザン２０とカルムスチンインプラント（グリアデル（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用塩酸トポテカン（ハイカムチン（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））及びビノレルビン（ナベルビン（登録商標））を含む。
【０７９４】
例示的なアルキル化剤は、窒素マスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレア類及びトリアゼン）：ウラシルマスタード（アミノウラシルマスタード（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、ウラムスチン（登録商標）、ウラムスチン（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、エンドキサン（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、イホスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（アルケラン（登録商標））、クロラムブシル（リューケラン（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（ヘメル（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスホロアミン、テモゾロミド（テモダール（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、マイレラン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））及びダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））を含むが、これらに限定されない。アルキル化剤の更なる例は、オキサリプラチン（エロキサチン（登録商標））；テモゾロミド（テモダール（登録商標）及びテモダール（登録商標））；ダクチノマイシン（別名アクチノマイシン−Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；メルファラン（別名Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン及びフェニルアラニンマスタード、アルケラン（登録商標））；アルトレタミン（別名ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））；ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ブスルファン（ブスルフェクス（登録商標）及びマイレラン（登録商標））；カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））；ロムスチン（別名ＣＣＮＵ、ＣｅｅＮＵ（登録商標））；シスプラチン（別名ＣＤＤＰ、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）及びＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）−ＡＱ）；クロラムブシル（リューケラン（登録商標））；シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）及びＮｅｏｓａｒ（登録商標））；ダカルバジン（別名ＤＴＩＣ、ＤＩＣ及びイミダゾールカルボキサミド、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））；アルトレタミン（別名ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））；Ｐｒｅｄｎｕｍｕｓｔｉｎｅ；プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；メクロレタミン（別名窒素マスタード、ムスチン及び塩酸メクロロエタミン、Ｍｕｓｔ��ｒｇｅｎ（登録商標））；ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；チオテパ（別名チオホスホアミド、ＴＥＳＰＡ及びＴＳＰＡ、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；シクロホスファミド（エンドキサン（登録商標）、シトキサン（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））；及びベンダムスチンＨＣｌ（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））を含むが、これらに限定されない。
【０７９５】
例示的なｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、テムシロリムス；リダフォロリムス（以前はデフェロリムスとして既知、（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、ＡＰ２３５７３及びＭＫ８６６９としても知られ、国際公開第０３／０６４３８３号パンフレットに記載）；エベロリムス（アフィニトール（登録商標）又はＲＡＤ００１）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９、シロリムス（登録商標））；シマピモド（ＣＡＳ  １６４３０１−５１−３）；エムシロリムス、（５−｛２，４−ビス［（３Ｓ）−３−メチルモルホリン−４−イル］ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−２−メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２−アミノ−８−［トランス−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ０４６９１５０２、ＣＡＳ  １０１３１０１−３６−４）；及びＮ２−［１，４−ジオキソ−４−［［４−（４−オキソ−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル）モルホリニウム−４−イル］メトキシ］ブチル］−Ｌ−アルギニルグリシル−Ｌ−α−アスパルチルＬ−セリン−（配列番号２０３５）、分子内塩（ＳＦ１１２６、ＣＡＳ  ９３６４８７−６７−１）及びＸＬ７６５を含む。
【０７９６】
例示的な免疫調節剤は、例えば、アフツズマブ（Ｒｏｃｈｅ（登録商標）から入手可能）；ペグフィルグラスチム（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；レナリドマイド（ＣＣ−５０１３、レブリミド（登録商標））；サリドマイド（サロミド（登録商標））、アクチミド（ＣＣ４０４７）；及びＩＲＸ−２（インターロイキン１、インターロイキン２及びインターフェロンγを含むヒトサイトカイン混合物、ＣＡＳ  ９５１２０９−７１−５、ＩＲＸ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓから入手可能）を含む。
【０７９７】
例示的なアントラサイクリンは、例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）及びＲｕｂｅｘ（登録商標））；ブレオマイシン（ｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ダウノルビシン（塩酸ダウノルビシン、ダウノマイシン及び塩酸ルビドマイシン、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム（クエン酸ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））；ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、ノバントロン（登録商標））；エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標））；イダルビシン（イダマイシン（登録商標）、イダマイシンＰＦＳ（登録商標））；マイトマイシンＣ（ムタマイシン（登録商標））；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；ラビドマイシン；及びデスアセチルラビドマイシンを含む。
【０７９８】
例示的なビンカアルカロイドは、例えば、酒石酸ビノレルビン（ナベルビン（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））及びビンデシン（Ｅｌｄｉｓｉｎｅ（登録商標）））；ビンブラスチン（別名硫酸ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチン及びＶＬＢ、Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）及びＶｅｌｂａｎ（登録商標））；及びビノレルビン（ナベルビン（登録商標））を含む。
【０７９９】
例示的なプロテオソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標））；カーフィルゾミブ（ＰＸ−１７１−００７、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）−ペンタンアミド）；マリゾミブ（ＮＰＩ−００５２）；イキサゾミブクエン酸エステル（ＭＬＮ−９７０８）；デランゾミブ（ＣＥＰ−１８７７０）；及びＯ−メチル−Ｎ−［（２−メチル−５−チアゾリル）カルボニル］−Ｌ−セリル−Ｏ−メチル−Ｎ−［（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−２−メチル−２−オキシラニル］−２−オキソ−１−（フェニルメチル）エチル］−Ｌ−セリンアミド（ＯＮＸ−０９１２）を含む。
【０８００】
併用のための更なる薬剤
【０８０１】
【表１０７】
2021509009.tif 000142
【０８０２】
【表１０８】
2021509009.tif 000143
【０８０３】
【表１０９】
2021509009.tif 000144
【０８０４】
【表１１０】
2021509009.tif 000145
【０８０５】
【表１１１】
2021509009.tif 000146
【０８０６】
【表１１２】
2021509009.tif 000147
【０８０７】
【表１１３】
2021509009.tif 000148
【０８０８】
【表１１４】
2021509009.tif 000149
【０８０９】
【表１１５】
2021509009.tif 000150
【０８１０】
【表１１６】
2021509009.tif 000151
【０８１１】
【表１１７】
2021509009.tif 000152
【０８１２】
【表１１８】
2021509009.tif 000153
【０８１３】
【表１１９】
2021509009.tif 000154
【０８１４】
【表１２０】
2021509009.tif 000155
【０８１５】
バイオポリマー送達方法
幾つかの実施形態において、本明細書に開示する１つ以上のＣＡＲ発現細胞をバイオポリマー足場、例えばバイオポリマーインプラントにより対象に投与又は送達し得る。バイオポリマー足場は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の送達、増殖及び／又は分散を支持又は増強することができる。バイオポリマー足場は、生体適合性（例えば、炎症性若しくは免疫応答を実質的に誘発しない）及び／又は天然に存在し得るか若しくは合成であり得る生分解性ポリマーを含む。
【０８１６】
適当なバイオポリマーの例は、寒天、アガロース、アルギン酸、アルギン酸／リン酸カルシウムセメント（ＣＰＣ）、β−ガラクトシダーゼ（β−ＧＡＬ）、（１，２，３，４，６−ペンタアセチルａ−Ｄ−ガラクトース）、セルロース、キチン、キトサン、コラーゲン、エラスチン、ゼラチン、ヒアルロン酸コラーゲン、ヒドロキシアパタイト、ポリ（３−ヒドロキシブチレート−コ−３−ヒドロキシ−ヘキサノエート）（ＰＨＢＨＨｘ）、ポリ（ラクチド）、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）、ポリビニルアルコール）（ＰＶＡ）、絹、大豆タンパク質及び大豆タンパク質単離体の、単独で又は任意の他のポリマー組成物とのあらゆる濃度及びあらゆる比での混合物を含むが、これらに限定されない。バイオポリマーは、接着又は遊走促進分子、例えばリンパ球のコラーゲン受容体に結合するコラーゲン模倣ペプチド及び／又は送達する細胞の送達、増殖又は機能、例えば抗癌活性を増強する刺激分子で増強又は改変され得る。バイオポリマー足場は、注射可能な例えばゲル又は半固体又は固体組成物であり得る。
【０８１７】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、対象への送達前にバイオポリマー足場上に播種する。実施形態において、バイオポリマー足場は、例えば、足場のバイオポリマーに取り込まれた又はコンジュゲートされた、更に本明細書に記載の１つ以上の更なる治療剤（例えば、別のＣＡＲ発現細胞、抗体又は小分子）又はＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を含む。実施形態において、バイオポリマー足場を例えば腫瘍内に注射するか、又は腫瘍若しくは抗腫瘍効果を媒介するのに十分に腫瘍に近位に外科的にインプラントする。バイオポリマー組成物及びその送達のための方法の更なる例は、Ｓｔｅｐｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３３：９７−１０１；及び国際公開第２０１４／１１０５９１号パンフレットに記載される。
【０８１８】
医薬組成物及び処置
本発明の医薬組成物は、本明細書に記載のように、ＣＡＲ発現細胞、例えば複数のＣＡＲ発現細胞を１つ以上の薬学的に又は生理学的に許容される担体、希釈剤又は添加物と組み合わせて含む。このような組成物は、中性緩衝化食塩水、リン酸緩衝化食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；グリシンなどのポリペプチド又はアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；及び防腐剤を含み得る。本発明の組成物は、１つの態様において静脈内投与のために製剤される。
【０８１９】
本発明の医薬組成物を、処置する（又は予防する）疾患に適する方法で投与し得る。投与の量及び頻度は、患者の状態及び患者の疾患のタイプ及び重症度などの因子により決定されるが、適切な用量は、臨床試験により決定され得る。
【０８２０】
一実施形態において、医薬組成物は、例えば、エンドトキシン、マイコプラズマ、複製可能レンチウイルス（ＲＣＬ）、ｐ２４、ＶＳＶ−Ｇ核酸、ＨＩＶ  ｇａｇ、残留抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８被覆ビーズ、マウス抗体、貯留ヒト血清、ウシ血清アルブミン、ウシ血清、培養培地要素、ベクターパッケージング細胞又はプラスミド成分、細菌及び真菌からなる群から選択される汚染物が実質的になく、例えば検出可能なレベルで存在しない。一実施形態において、細菌は、アルガリゲネス・フェカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）及びストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ａ群からなる群から選択される少なくとも１つである。
【０８２１】
「免疫学的に有効量」、「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」又は「治療量」が示されるとき、本発明の組成物の投与すべき正確な量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染の程度又は転移及び患者（対象）の状態の個体差を考慮して医師が決定できる。本明細書に記載のＴ細胞を含む医薬組成物を、１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、幾つかの例において１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重の範囲の用量（これらの範囲内の全整数値を含む）で投与し得ると一般に述べることができる。Ｔ細胞組成物をまたこの用量で複数回投与し得る。細胞を、免疫療法において一般に知られる注入技術を使用して投与できる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照されたい）。
【０８２２】
一態様において、活性化Ｔ細胞を対象に投与し、続いて血液を採り（又はアフェレーシスを実施し）、本発明に従ってそれからのＴ細胞を活性化し、これらの活性化し、且つ増殖させたＴ細胞を患者に再注入することが望ましいことがある。この過程を数週間毎に複数回実施できる。一態様において、Ｔ細胞を、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採血した血液から活性化できる。一態様において、Ｔ細胞を、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ又は１００ｃｃの採血した血液から活性化する。
【０８２３】
対象組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸注、留置又は移植を含む任意の簡便な方法により実施し得る。本明細書に記載の組成物を患者に経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により又は腹腔内に投与し得る。１つの態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）組成物を患者に皮内又は皮下注射により投与する。１つの態様において、本発明のＴ細胞組成物をｉ．ｖ．注射により投与する。ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の組成物を腫瘍、リンパ節又は感染部位に直接注射し得る。
【０８２４】
詳細な例示的態様において、対象は、白血球アフェレーシスを受け得、白血球が採取されるか、エキソビボで濃縮されるか又は枯渇されることにより、目的の細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）が選択及び／又は単離される。これらの免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）単離物は、当技術分野において公知の方法により拡大され、本発明の１つ以上のＣＡＲ構築物が導入されるように処理され、それにより本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）が作り出される。それを必要としている対象は、続いて高用量化学療法による標準処置と、続く末梢血幹細胞移植を受け得る。特定の態様において、対象は移植後又は移植と同時に、本発明の拡大されたＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の注入を受ける。更なる態様において、拡大された細胞が手術前又は手術後に投与される。
【０８２５】
実施形態において、例えば本明細書に記載されるＣＡＲ、例えば本明細書に記載されるＢＣＭＡに結合するＣＡＲを発現する１つ以上の細胞の投与前に、対象に対してリンパ球枯渇が行われる。実施形態において、リンパ球枯渇は、メルファラン、シトキサン、シクロホスファミド及びフルダラビンの１つ以上を投与することを含む。
【０８２６】
患者に投与すべき上記処置の用量は、処置する状態の正確な性質及び処置のレシピエントにより変わる。ヒト投与のためのスケーリングは、当技術分野で認識されている習慣に従って実施できる。ＣＡＭＰＡＴＨの用量は、例えば、概して成人患者に１〜約１００ｍｇの範囲であり、通常、連日で１〜３０日の期間にわたって投与する。好ましい１日用量は、１〜１０ｍｇ／日であるが、幾つかの例において最大４０ｍｇ／日までの高用量を使用し得る（米国特許６，１２０，７６６号明細書に記載）。
【０８２７】
一実施形態において、ＣＡＲを、例えばインビトロ転写を使用して免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に導入し、対象（例えば、ヒト）は、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の初期投与及びその後の本発明の免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の１回以上の投与を受け、ここで、その後の１回以上の投与は、先の投与後、１５日、例えば１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日又は２日未満で行う。一実施形態において、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の１回を超える投与を対象（例えば、ヒト）に１週間当たりに行い、例えば本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の２、３又は４投与を１週間当たりに投与する。一実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の１週間当たり１回を超える投与を受け（例えば、１週間当たり２回、３回又は４回投与）（本明細書ではサイクルとも称される）、続いて１週間、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を投与されず、その後、更にＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の１回以上の更なる投与（例えば、１週間当たりでＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の１回を超える投与）を対象に投与する。別の実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、ＣＡＲ免疫エフェクター発現細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の１回を超えるサイクルの投与を受け、各サイクル間の期間は、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日又は３日より短い。一実施形態において、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を隔日で１週間３回投与する。一実施形態において、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間又はそれを超えて投与する。
【０８２８】
一態様において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、レンチウイルスなど、レンチウイルスのウイルスベクターを使用して作成される。そのように作成されたＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、安定したＣＡＲ発現を有することになる。
【０８２９】
一態様において、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴは、γレトロウイルスベクター、例えば本明細書に記載されるγレトロウイルスベクターなどのウイルスベクターを使用して作成される。このようなベクターを使用して作成されたＣＡＲＴは、安定したＣＡＲ発現を有する。
【０８３０】
一態様において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、形質導入後４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５日間にわたってＣＡＲベクターを一過性に発現する。ＣＡＲの一過性発現は、ＲＮＡ  ＣＡＲベクター送達によって達成することができる。一態様において、ＣＡＲ  ＲＮＡは、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に電気穿孔によって形質導入される。
【０８３１】
一過性に発現するＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を使用して（特にマウスｓｃＦｖを担持するＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）で）処置されている患者に生じ得る潜在的課題は、複数回の処置後のアナフィラキシーである。
【０８３２】
この理論に拘束されることを望まないが、このようなアナフィラキシー応答は、液性抗ＣＡＲ応答を発達させる患者、即ち抗ＩｇＥアイソタイプを有する抗ＣＡＲ抗体が原因であると考えられる。細胞を産生する患者の抗体は、抗原への暴露の１０〜１４日の中断があるとき、ＩｇＧアイソタイプ（これはアナフィラキシーを生じない）からＩｇＥアイソタイプへのクラススイッチを受けると考えられる。
【０８３３】
患者が一過性ＣＡＲ治療（例えば、ＲＮＡ形質導入により完成されたものなど）中に抗ＣＡＲ抗体応答を産生する高リスクにある場合、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）注入中断は、１０〜１４日を超えて継続してはならない。
【実施例】
【０８３４】
本発明を、次の実験的実施例を参照して更に詳細に記載する。これらの実施例は、説明のみを目的として提供し、特に断らない限り限定を意図しない。従って、本発明は、決して次の実施例に限定されると解釈してはならず、むしろ本明細書に提供する教示の結果として明らかとなる任意且つ全ての変形形態を含むと解釈すべきである。
【０８３５】
更に記載しなくとも、当業者は、前の記載及び次の説明的実施例を使用して、本発明の組成物を製造及び利用し、特許請求される方法を実施できると考える。次の作業実施例は、本発明の多様な態様を特に示すものであり、本開示を限定するものと解釈されるべきでない。
【０８３６】
実施例１：多発性骨髄腫におけるＢＣＭＡ−ＣＡＲＴ
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ（ＭＣＭ９９８）は、インビボで強力な抗腫瘍活性を実証する
ＰＢＳ、非形質導入Ｔ細胞（「ＵＴＤ」）又はツールＣＡＲ（「Ｊ６ＭＯ」）、ＢＣＭＡ−４、ＢＣＭＡ−９、ＢＣＭＡ−１０（「ＭＣＭ９９８」）、ＢＣＭＡ−１３若しくはＢＣＭＡ−１５のいずれかを形質導入したＴ細胞の注入後のＫＭＳ１１腫瘍モデルにおける腫瘍負荷レベルを判定した。ＢＣＭＡ−１０が最も強力な抗腫瘍活性を実証した（図１４）。
【０８３７】
多発性骨髄腫臨床試験（ＮＣＴ番号：ＮＣＴ０２５４６１６７；ＵＰＣＣ  １４４１５）におけるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ
多発性骨髄腫（ＭＭ）を有する成人患者におけるタンデム４−１ＢＢ及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有するＢＣＭＡ特異的キメラ抗原受容体（本明細書において「ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ」と称される）を発現する自家Ｔ細胞の注入の安全性及び実現可能性を評価するための非盲検単一施設パイロットスタディを設計した（図１５）。
【０８３８】
患者は３群に分けた（図１５）。コホート１患者は、分割用量注入として３日間にわたって与えられる１〜５×１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の投与を受けた。コホート２患者は、シクロホスファミド注入を受けた後、分割用量注入として３日間にわたって与えられる１〜５×１０７  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の投与を受けた。コホート３患者は、シクロホスファミド注入を受けた後、分割用量注入として３日間にわたって与えられる１〜５×１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の投与を受けた。図１６Ａは患者疾患特性を提供する。図１６Ｂは、疾患及び前療法に起因するベースラインリンパ球減少症の存在に関する情報を提供する。
【０８３９】
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ（ＭＣＭ９９８）の製造及び投与
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ製剤は、全て最低目標閾値用量で成功裏に製造された。製造された製剤は、形質導入効率中央値が２２．５％（９．６〜３３．３％）；拡大倍数中央値が２０．７（７．９〜６０．４）；集団倍加数中央値が４．４（２．９８〜５．９２）；フェレーシスＣＤ４／ＣＤ８比中央値が１．０３（０．６１〜３．２）；及び製剤ＣＤ４／ＣＤ８比中央値が１．７２（０．８４〜３．９）であった。１４例中１３例の患者が５×１０８又は５×１０７の最大目標用量を達成した。コホート１の患者２は、製剤中に６９％Ｔ細胞が含まれ、１．９×１０８細胞の投与を受けた。１４例中１２例の患者は、計画された用量の１００％の投与を受けた。コホート１の患者１及び患者３は、２日目に発熱があったため、最初の２回の注入（４０％）のみを受けた。これらのデータは、多数の前処置を受けた多発性骨髄腫患者においてＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの製造が実現可能であることを実証している。
【０８４０】
臨床アウトカム
コホート１、２及び３についての臨床活性をそれぞれ図１７Ａ、１７Ｂ及び１７Ｃに示す。
【０８４１】
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの拡大をフローサイトメトリー（図１８Ａ及び１８Ｂ）及びＰＣＲ（図１９Ａ及び１９Ｂ）により判定した。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡのインビボ拡大は、療法に対する奏効と相関し、それを予測し得る（図２０Ａ及び２０Ｂ）。フローサイトメトリーにより決定したときの多発性骨髄腫細胞上のＢＣＭＡ表面発現と臨床アウトカムとの間に相関は認められなかった（データは図示せず）。
【０８４２】
実施例２：臨床試験データのコレラティブ分析
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ処置に対する患者の奏効の予測因子となるバイオマーカーを同定するため、表２８に挙げるパラメータを分析した。
【０８４３】
【表１２１】
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【０８４４】
奏効例（完全奏効（ＣＲ）、最良部分奏効（ＶＧＰＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示す患者）及び非奏効例（微小奏効（ＭＲ）、病勢安定（ＳＤ）又は病勢進行（ＰＤ）を示す患者）について、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入後様々な時点で患者試料中のＣＡＲ＋  ＣＤ４／ＣＤ８細胞比を取得した（図２１Ａ、図２１Ｂ、図２１Ｃ及び２１Ｄ）。これらのデータは、非奏効例と比較したとき、奏効例において時間の経過に伴うＣＡＲ＋  ＣＤ４／ＣＤ８細胞集団の持続性がより高いことを実証している。
【０８４５】
サイトカインレベルの判定
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後様々な時点でのサイトカイン発現レベルの変化を判定した（図２２）。これらのデータは、ＩＬ−６（図２３Ａ及び２３Ｂ）、ＩＬ−１０、γインターフェロンによって誘導されるモノカイン（ＭＩＧ）及びＩＦＮ−γ（図２４Ａ及び２４Ｂ）のレベルに最も大きいベースライン（０日目）からの変化が起こったことを実証している。重要なことに、ＩＦＮ−γはＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ処置に対する奏効例を非奏効例と区別し得る。
【０８４６】
血清中ＢＣＭＡレベルの判定
１４例の健常ドナー及び１２例の骨髄腫患者において血清ＢＣＭＡレベルを判定した（図２５Ａ及び２５Ｂ）。ベースライン時にＢＣＭＡは健常ドナーでは約４０ｎｇ／ｍＬの血清濃度で存在し、骨髄腫患者では１７６ｎｇ／ｍＬの血清濃度中央値で存在した。血清ＢＣＭＡレベルは、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後様々な時点でも取得した（図２６Ａ、２６Ｂ、２６Ｃ及び２６Ｄ）。これらのデータは、高いベースライン血清ＢＣＭＡレベルを有する一部の患者でＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ処置が良好に奏効したことを実証している（図２６Ａ）。加えて、血清ＢＣＭＡレベルは、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ処置に対する奏効のマーカーとしての役割を果たすことができた（図２６Ｃ及び２６Ｄ）。
【０８４７】
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋  ＣＡＲＴ細胞率の判定
３例の患者においてＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの注入後様々な時点でＣＤ４＋及びＣＤ８＋  ＣＡＲＴ細胞比率を取得した（図２７Ａ、２７Ｂ及び２７Ｃ）。図２７Ａ及び２７Ｃに示されるとおりの奏効例では、高いＢＢｚコピー数に見られるとおり、ＣＡＲ  Ｔ細胞の劇的な拡大があった。拡大はＣＤ８＋  ＣＡＲＴによって主導された。非奏効例にも高いＢＣＭＡレベルがあったが、拡大は見られなかった（図２７Ｂ）。
【０８４８】
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞サブセットの判定
健常ドナー及び多発性骨髄腫（ＭＭ）患者のＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞サブセットレベルを比較した（図２８Ａ、２８Ｂ、２８Ｃ及び２８Ｄ）。ＭＭ患者は健常ドナーと比較してＴｎｌ細胞比率が低かった。Ｔｓｃｍ及びＴｅ細胞レベルは健常ドナーとＭＭ患者とで同程度であった。ＭＭ患者はＴｅｍ細胞比率中央値が高かった。ＭＭ患者からは、アフェレーシス試料中におけるＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞サブセットレベルも取得した（図２８Ｅ及び２８Ｆ）。
【０８４９】
ＭＭ患者からアフェレーシス試料におけるＴ細胞分化を取得した（図２９）。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞サブセット（例えば、ＰＤ１、ＣＤ２７及び／又はＧｚＢの発現に基づくＣＤ４＋又はＣＤ８＋細胞）のレベルもＭＭ患者で決定した（図３０Ａ及び３０Ｂ）。
【０８５０】
実施例３：多発性骨髄腫患者におけるＢＣＭＡキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法に対する奏効の予測力のある相関
本例は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの製造前にＣＡＲＴ−ＢＣＭＡによる処置に対する対象の臨床奏効を予測することのできるバイオマーカーを発見することを目的とする研究について記載する。
【０８５１】
合計８例の多発性骨髄腫（ＭＭ）ヒト患者から末梢血試料を採取し、１４パラメータフローサイトメトリーパネルで染色してフローサイトメトリー機器で分析した。
【０８５２】
これらのＭＭ患者が、実施例１に記載されるとおりのＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ処置を受けた。注入２８日後の臨床奏効に基づいて、患者試料を奏効例（Ｒ、定義はＣＲ、ＶＧＰＲ又はＰＲを示す患者とする、ＮＲ＝３）又は非奏効例（ＮＲ、定義はＭＲ、ＳＤ又はＰＤを示す患者とする、ＮＮＲ＝５）に分類した。
【０８５３】
臨床奏効と相関したバイオマーカーシグネチャを同定するため、プレゲーティングを実施して、分析をシングレットの生存リンパ球に限定した。続いて、プレゲーティングしたデータを使用して、Ｒ＋（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／ａｂｏｕｔ．ｈｔｍｌ）をベースとするバイオ統計学自動化アルゴリズムｆｌｏｗＴｙｐｅ（Ａｇｈａｅｅｐｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２８（７）：１００９−１０１６，２０１２）を用いたデータマイニング及びバイオマーカー同定を行った。ＦｌｏｗＴｙｐｅは、マーカーの発現がオン又はオフのいずれかである（即ち２つの異なる集団がある）という仮定に基づいて、単純な閾値又はクラスタリングアルゴリズムを用いて各チャンネル／マーカー密度を陽性及び陰性細胞集団に区分する。この区分が次には組み合わされて、多次元表現型の組が生成される。加えて且つサブセット同定からのマーカーの除外を可能にするため、各マーカーは、「中性」値を割り当てることもできた（即ち、そのマーカーは、表現型から除外される）。このアルゴリズムにより、３Ｎ（ここで、Ｎは、マーカー数である（本実験ではＮ＝１４））の可能な表現型の総数が生成される。
【０８５４】
マーカーが多過ぎると、解釈が困難であろう極めて少ない細胞数の表現型の生成につながり得ることに伴い、生物学的に意味のある表現型の同定を可能にするため、表現型の長さは最大４マーカーに限定した。この処理では、１，６９７個の可能な表現型のセットが生成された。これらの探索的表現型以外に、ＣＤ４：ＣＤ８比、生存Ｔ細胞（％）、％単球及び％Ｂ細胞など、上記の表現型の組み合わせのサブセットも考慮した。
【０８５５】
各表現型の予測力を測定するため、奏効例（Ｒ）及び非奏効例（ＮＲ）の中での測定された表現型の細胞頻度（その表現型の細胞数を親集団中の細胞総数で除したもの）間の差を、Ｔ検定を用いて判定した。ＦｌｏｗＪｏを用いた手動での確認用に、最も統計的に有意な表現型を選択した。
【０８５６】
ＣＤ４：ＣＤ８比は、臨床奏効の点で、アフェレーシス試料における明確な識別因子であることが分かった（図１Ａ及び１Ｂ）。奏効例を非奏効例と分ける可能性が最も高い領域は１〜１．６のＣＤ４：ＣＤ８比範囲に対応し、そのアフェレーシス試料におけるＣＤ４集団レベルが高い（例えば、１．６以上のＣＤ４：ＣＤ８比）患者は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ処置が奏効する可能性が高いことが示唆される（図１Ｂ）。
【０８５７】
奏効例では、非奏効例と比較したとき、より高いレベルのＣＤ８＋ステムメモリーＴ細胞（ＴＳＣＭ）集団ＨＬＡＤＲ−ＣＤ９５＋ＣＤ２７＋（図２Ａ）、ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋（図２Ｂ）及びＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋（図２Ｃ）も観察されたことから、そのアフェレーシス試料においてこれらのＴＳＣＭ集団レベルが高い患者は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ処置が奏効する可能性が高いことが示唆される。
【０８５８】
多発性骨髄腫患者からのＢＣＭＡ製造前アフェレーシス試料におけるＴ細胞の上記に記載される分析により、後にＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ療法が奏効した患者における高いＣＤ４：ＣＤ８比及び非奏効例における低いＣＤ４：ＣＤ８比が実証された。従って、そのアフェレーシス材料におけるＣＤ４：ＣＤ８比が高い患者を選択すると、より効果的な処置アウトカムの増強となり得る。加えて、これらのデータ及びバイオインフォマティクスツールは、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ療法が奏効する可能性が最も高いのはどの患者かを同定する手段として免疫学的バイオマーカーを組込み可能であり、理想的な個別化された細胞療法手法につながり得ることを示唆している。
【０８５９】
実施例４：多発性骨髄腫腫瘍生検の分析
“Ｐｉｌｏｔ  Ｓｔｕｄｙ  Ｏｆ  Ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｔｏ  Ｃｏｎｔａｉｎ  ａｎ  Ａｎｔｉ−ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖ  Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｔｏ  ＴＣＲζ  Ａｎｄ  ４−１ＢＢ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｄｏｍａｉｎｓ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ／ｏｒ  Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ”（ＮＣＴ番号：ＮＣＴ０２５４６１６７；ＵＰＣＣ  １４４１５）という名称のペンシルベニア大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）臨床試験に登録した患者から、分析のため骨髄コア生検試料を取得した。骨髄コア生検試料は、投与前（「処置前」又は「Ｐｒｅ」）又は注入後２８日目、４３日目若しくは９０日目に採取した。生検試料はＩｍｍｕｎｏｃａｌ（商標）脱灰を伴いホルマリン固定し、パラフィン包埋した；及び試料処理品質をハウスキーピング遺伝子ＰＰＩＢ  ＲＮＡに対するインサイチュハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）によって確認した。
【０８６０】
ＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞局在及びＢＣＭＡ発現の分析
投与前（「処置前」又は「Ｐｒｅ」）並びに注入後２８日目及び９０日目（「３ヵ月」）に、患者１３、患者１４、患者１５、患者１６及び患者１７の骨髄コア生検試料からＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞局在データを取得した（図３）。患者１３は、その処置前、２８日目及び９０日目試料において最小のＣＤ１３８発現であった（図３）。患者１４は、その２８日目試料においてその処置前試料と比較してＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞数が増加した（図３）。患者１５、患者１６及び患者１７は、各々がベースライン時にＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞の広範な浸潤を有し、続いて２８日目試料で低下し、３ヵ月試料で増加した（図３）。
【０８６１】
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡによる処置に対する患者アウトカム及び推定％ＣＤ１３８浸潤を表２９に提供する。
【０８６２】
【表１２２】
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【０８６３】
骨髄コア生検試料からのＢＣＭＡ発現データを同様に取得及び分析した（図４）。
【０８６４】
患者１３及び患者１４では、ＩＨＣにより測定したときのＢＣＭＡタンパク質発現とＩＳＨにより測定したときのＢＣＭＡ  ｍＲＮＡ発現との間に不一致が認められた（図５）。
【０８６５】
患者１５では、処置前試料において高いＢＣＭＡタンパク質及びｍＲＮＡレベルが認められ、続いて２８日目試料において顕著に減少し、９０日目試料において再発した（図６Ａ）。２８日目及び９０日目試料には、まれなＣＡＲＬｏ陽性細胞が認められた（図６Ａ）。患者１６では、２８日目にＢＣＭＡタンパク質及びｍＲＮＡシグナルの顕著な減少が認められ、続いて９０日目に増加した（図６Ｂ）。２８日目及び９０日目に、まれなＣＡＲＬｏ陽性細胞が認められた（図６Ｂ）。患者１７では、２８日目にＢＣＭＡ陽性細胞数の減少及びＢＣＭＡ  ｍＲＮＡシグナル／細胞の減少が認められた（図６Ｃ）。ＢＣＭＡ  ｍＲＮＡシグナル／細胞は９０日目にベースラインレベルに戻った（図６Ｃ）。９０日目に境界域のＣＡＲＬｏｍＲＮＡシグナルが検出された（図６Ｃ）。
【０８６６】
要約すれば、ベースライン時にＢＣＭＡタンパク質及びｍＲＮＡ発現のばらつきが認められ、これは調査下の試料セットにおける奏効と相関するように見えた。５例中３例の患者で２８日にＣＤ１３８陽性細胞浸潤が認められ、これはＢＣＭＡタンパク質及びｍＲＮＡ発現の減少と関連した。３ヵ月時にこれらの同じ患者でＣＤ１３８陽性細胞浸潤の増加が認められ、これはＢＣＭＡ発現の戻りと関連した。
【０８６７】
ＩＤＯ１、ＩＦＮ−γ及びＴＧＦβ  ｍＲＮＡレベルの分析
患者１５（図７Ａ）、患者１６（図７Ｂ）及び患者１７（図７Ｃ）から取得した処置前、２８日目及び９０日目の骨髄コア生検試料において、ＩＤＯ１、ＩＦＮ−γ及びＴＧＦβ  ｍＲＮＡレベルの発現をＩＳＨにより決定した。
【０８６８】
患者１５では、２８日目及び９０日目試料に処置前試料と比較してＩＤＯ１  ｍＲＮＡレベルの増加が認められた（図７Ａ）。試験した全ての試料でＩＦＮ−γ  ｍＲＮＡレベルの微小変化が認められた（図７Ａ）。２８日目及び９０日目試料に処置前試料と比較してＴＧＦβ  ｍＲＮＡレベルの低下が認められたが、この変化はＭＭ細胞レベルの低下に起因し得る（図７Ａ）。
【０８６９】
患者１６では、持続性ＭＭ細胞の部位にＩＤＯ１  ｍＲＮＡレベルの増加が認められた（図７Ｂ）。２８日目及び９０日目試料にまれなＩＦＮ−γ  ｍＲＮＡ陽性細胞が認められた一方、９０日目試料にベースラインと比べたＭＭ細胞でのＴＧＦβ  ｍＲＮＡレベルの顕著な増加が認められた（図７Ｂ）。
【０８７０】
患者１７では、２８日目試料に処置前試料と比較してＩＤＯ１  ｍＲＮＡレベルの増加が認められた（図７Ｃ）。全ての時点で低レベルのＩＦＮ−γ  ｍＲＮＡが認められた（図７Ｃ）。２８日目試料にＰｒｅ試料と比較してＴＧＦβ  ｍＲＮＡレベルの低下が認められたが、この変化はＭＭ細胞レベルの低下に起因し得る（図７Ｃ）。
【０８７１】
これらのデータは、２８日目に骨髄にＩＤＯ１  ｍＲＮＡ発現の僅かな増加が認められたことを示している。
【０８７２】
患者１９（図７Ｄ）及び患者２０（図７Ｅ）から取得した処置前、１０日目及び２８日目生検試料において同様のＩＳＨ分析を行った。１０日目にＩＦＮ−γ及びＩＤＯ１  ｍＲＮＡ発現の増加が認められた。
【０８７３】
ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ１、ＣＤ３及びＦｏｘＰ３タンパク質発現レベルの分析
患者１５（図８Ａ）、患者１６（図８Ｂ）及び患者１７（図８Ｃ）から取得した処置前、２８日目及び９０日目骨髄コア生検において、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ１、ＣＤ３及びＦｏｘＰ３タンパク質発現レベルをＩＨＣにより決定した。
【０８７４】
患者１５では、９０日目にＰＤ−Ｌ１間質細胞発現の増加が認められた（図８Ａ）。試験した試料にＰＤ１、ＣＤ３又はＦｏｘＰ３発現の変化は認められなかった（図８Ａ）。
【０８７５】
患者１６では、９０日目にＰＤ−Ｌ１間質細胞発現の増加が認められた（図８Ｂ）。ＰＤ１＋細胞浸潤は検出されなかった（図８Ｂ）。ＣＤ３＋又はＦｏｘＰ３＋細胞数の変化は検出されなかった（図８Ｂ）。
【０８７６】
患者１７では、全ての時点でＰＤ−Ｌ１間質細胞発現が認められた（図８Ｃ）。試験した試料にＰＤ１＋細胞浸潤は検出されず、ＣＤ３又はＦｏｘＰ３発現の変化は認められなかった（図８Ｃ）。
【０８７７】
患者１９（図８Ｄ）及び患者２０（図８Ｅ）から取得した処置前、１０日目及び２８日目生検試料において同様のＩＨＣ分析を行った。これらの２患者は１０日目試料にＰＤ１又はＰＤ−Ｌ１の増加を示した。
【０８７８】
これらのデータは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ１、ＣＤ３及びＦｏｘＰ３の一貫した変化が認められなかった一方、一部の患者のＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ１の上方制御が潜在的なエスケープ機構に相当し得ることを示している。
【０８７９】
ＣＤ１９タンパク質発現レベルの分析
患者１３、患者１４、患者１５、患者１６及び患者１７から取得した処置前、２８日目及び９０日目骨髄コア生検において、ＣＤ１９タンパク質発現をＩＨＣにより決定した（図９）。患者１５及び患者１７において２８日及び３ヵ月時点でＣＤ１９陽性ＭＭ細胞の相対的比率の増加が認められた（図９）。
【０８８０】
患者１５から取得した処置前及び９０日目骨髄コア生検において、ＢＣＭＡ陽性細胞及びＣＤ１９陽性細胞は別個の集団であると決定された（図１１Ａ及び１１Ｂ）。
【０８８１】
患者１５（図１２Ａ）及び患者１７（図１２Ｂ）から取得した処置前骨髄コア生検には、ＣＤ１９＋  ＣＤ３４ｄｉｍ細胞集団が存在した。
【０８８２】
患者１５から取得した処置前試料においてＣＤ１９集団にはＣＤ１３８＋及びＣＤ１３８−のばらつきがあった（図１３）。
【０８８３】
これらのデータは、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡとＣＤ１９ターゲット療法とを含む併用療法がＭＭ患者の処置において有益であり得ることを示唆している。
【０８８４】
ＣＤ２０タンパク質発現レベルの分析
患者１３、患者１４、患者１５、患者１６及び患者１７からのＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの投与前並びに注入後２８日目及び９０日目に取得した骨髄コア生検において、ＣＤ２０タンパク質発現をＩＨＣにより決定した（図１０）。患者１４から取得した試料に既存のＣＤ２０陽性ＭＭ細胞が認められた（図１０）。患者１５及び患者１７においてＣＤ２０陽性ＭＭ細胞の出現が認められた（図１０）。
【０８８５】
これらのデータは、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡとＣＤ２０ターゲット療法とを含む併用療法がＭＭ患者の処置において有益であり得ることを示唆している。
【０８８６】
実施例５：難治性多発性骨髄腫におけるＢ細胞成熟抗原特異的キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ）の臨床活性及び生物活性
概要
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、血液学的悪性腫瘍における有望な新規療法として現れつつある。Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、発現が主として形質細胞に限定されているため、多発性骨髄腫（ＭＭ）療法の合理的な標的となる細胞表面受容体である。３ライン以上の前療法後に再発性／難治性ＭＭを有する対象において、ＣＤ３ζ及び４−１ＢＢシグナル伝達ドメインを含有する新規の完全ヒトＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ（ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ）を形質導入した自家Ｔ細胞の第Ｉ相研究を行った。ここには、事前の化学療法コンディショニングなしに投与する１〜５×１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の用量を用いた、この研究のコホート１からの期間満了後の結果を報告する。中央値９ラインの前療法歴のある９例の対象を処置した；全例が高リスク細胞遺伝学的因子を有した。ＣＡＲ  Ｔ細胞は成功裏に製造され、いずれの場合にも注入後に検出可能であった。４例の対象（４４％）が客観的奏効を有し（ＰＲ１例、ＶＧＰＲ２例、ｓＣＲ１例）、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ処置の２１ヵ月後に厳密完全奏効が継続中の１例の対象を含め、奏効期間中央値は４ヵ月であった。非奏効例と比較して、奏効例ではインビボＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大の程度が大きく、ひいてはそれが製造前ＣＤ４：ＣＤ８比及び製造中の拡大の程度に関連した。サイトカイン放出症候群が最も高頻度の治療関連有害事象であり、９例中８例の対象に起こった（３例がグレード３／４）。２例の対象にグレード４の脳症が認められた。全生存中央値は５５１日と推定される。リンパ球枯渇化学療法なしに与えるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入は、多数の前処置を受けたＭＭ患者において臨床的に活性であり、新規ＭＭ療法手法に相当する。
【０８８７】
結果
プロトコルデザイン及び登録
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の製造及び再発性／難治性骨髄腫患者への投与の実現可能性、安全性、臨床活性及び生物活性を判定するため、第Ｉ相研究（ＮＣＴ０２５４６１６７）を開始した。骨髄腫細胞上のＢＣＭＡ発現をフローサイトメトリーによって評価したが、登録に予め指定されたレベルが要求されるわけではなかった。療法から２週間のウォッシュアウト後、対象は定常状態白血球アフェレーシスを受け、典型的には３〜４週間プロセスであるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ製造用のＴ細胞が回収された。初回ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入の２週間前までは、製造中に抗骨髄腫療法を再開することができた。先行する成人ＣＴＬ０１９試験（Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．７，３０３ｒａ１３９（２０１５））のとおり、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞を外来患者リサーチユニットにおいて３日間にわたり分割用量静脈内注入として（０日目に用量の１０％を投与；１日目に３０％及び２日目に６０％）投与した。コホート２及び３（以下に記載する）では、リンパ球枯渇のため初回ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入の３日前にシクロホスファミド（Ｃｙ）を投与した（図３１）。
【０８８８】
当初、標準的な３＋３用量漸増デザインを用いて３連続コホート：１）１〜５×１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞単独；２）Ｃｙ  １．５ｇ／ｍ２＋１〜５×１０７  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞；及び３）Ｃｙ  １．５ｇ／ｍ２＋１〜５×１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞を探索した。このプロトコルは後に、リンパ球枯渇コンディショニング（即ちＣｙ）あり及びなしの両方の並びに高用量（１〜５×１０８）及び低用量（１〜５×１０７）でのＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の安全性及び有効性に関してより多くの情報を得るため、各コホートにおいて更なる対象の処置が可能となるように修正された。ここには、現時点でフォローアップが期間満了となっている、コホート１でＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞単独によって処置した９例の対象のアウトカムを報告する。コホート２及び３の登録及びフォローアップは継続中である。
【０８８９】
コホート１の登録時、１２例の対象が同意した；２例は一度もＴ細胞が採取されなかった（１例は重症拘束性肺疾患のため不適格；１例は急速な疾患進行／臨床的減退）。１０例がＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の製造に成功した；１例は急速な進行／臨床的減退のため一度も注入されず、９例が２０１５年１１月〜２０１６年９月に注入された（図３７）。
【０８９０】
対象及びＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ製剤特性
対象の人口統計学、前療法ライン数及び疾患特性を表３０に要約し、表３２に個人の詳細を示す。処置を受けた対象の年齢中央値は５７歳で、６７％が男性であった。これらの対象は中央値９ラインの前療法歴があり、８／９例（８９％）が少なくとも１つのプロテアソーム阻害剤及び免疫調節剤に対して二重難治性であった。全例が少なくとも１つの高リスク細胞遺伝学的異常を有し；６７％が欠失１７ｐ又はＴＰ５３突然変異のいずれかを有した。ベースライン腫瘍負荷は高く（処置前骨髄生検で中央値８０％の骨髄腫細胞）、２／９例（２２％）が髄外疾患を有した。白血球アフェレーシス前のリンパ球絶対数（ＡＬＣ）中央値及び総ＣＤ３数は、それぞれ８３０及び３２５細胞／μＬであったものが、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入時までにそれぞれ５００及び２５８細胞／μＬに下がり、これはこのコホートにおける進行した疾患及び多量の前処置を反映したものであった。
【０８９１】
９例全ての対象が最低目標のＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞（１×１０８）の製造に成功し、但し１例の対象は白血球アフェレーシス／製造を２回試みる必要があった。形質導入効率中央値は２２．２％（範囲９．６〜３３．３％）であり、製造中の播種細胞の拡大倍数中央値は１２．７倍であった。最終製剤は中央値９６％のＣＤ３＋  Ｔ細胞を含み、ＣＤ４／ＣＤ８比中央値は１．６であった。６例の対象が３回の計画されたＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入全ての投与を受け、３例（対象０１、０３及び１５）は計画された用量の４０％のみの投与を受けた（３回目の注入は発熱及びＣＲＳ徴候のため保留された）。各対象についての製造、製剤特性及び投与の更なる詳細を表３３に示す。
【０８９２】
臨床アウトカム
９例中４例の対象（４４％）が、１例のＰＲ、２例の最良部分奏効（ＶＧＰＲ）及び１例の厳密完全奏効（ｓＣＲ）を含め、部分奏効（ＰＲ）以上を達成した。２例の更なる対象が最小奏効（ＭＲ）を示し、３例は奏効を示さなかった（図３２Ａ）。最初に奏効するまでの時間の中央値は１４日であった。カプラン・マイヤー推定に基づけば、奏効期間中央値（ＰＲ以上の対象についての）は１２０日（範囲２９〜６６５＋）であり；及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）中央値は６５日（範囲１３〜６７９＋）であった。３例の対象は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入後２８日目（対象０１、１５）又は４５日目（対象０３）に実施した骨髄穿刺液からフローサイトメトリー（推定感度１０−５）により検出可能な骨髄腫を有しなかった。対象０３及び１５はＶＧＰＲを達成したが、それぞれ５ヵ月及び４ヵ月の時点で進行した。対象０１は１１ラインの前療法歴があり、ボルテゾミブ、レナリドマイド、カルフィルゾミブ及びポマリドミドに対して難治性であり、ＴＰ５３及びＮＲＡＳの突然変異と共に欠失１７ｐを有し、これは極めて高リスクの疾患を反映するものであった。この対象はＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ療法前に急速に進行している状態であり、７０％の骨髄形質細胞、２．０ｇ／ｄＬの血清Ｍスパイク、３９００ｍｇの２４時間尿Ｍスパイク、６７９４ｍｇ／Ｌの血清遊離κ、高カルシウム血症及び急性腎不全（血清クレアチニン１．８２ｍｇ／ｄＬ）を伴った。この対象はＰＲ（１４日目）からＶＧＰＲ（３ヵ月）、ＣＲ（６ヵ月）へ、次にｓＣＲ（９ヵ月）へと徐々にその奏効が展開し、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入２１ヵ月後にｓＣＲを保っている。傍脊柱筋群及び胸膜の髄外浸潤を有する１例の対象（０３）は、悪性胸水の消失を含め、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入の５週間後にＰＥＴ／ＣＴで完全代謝奏効が得られ（図３２Ｂ）、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞が血液及び骨髄コンパートメントの外部に輸送される能力が実証された。髄外疾患を有する他の対象（０８）は奏効を示さなかった。データカットオフ時点（９／１１／１７）で５例の対象が死亡しており、推定全生存中央値（図３２Ｃ）は５５１日（範囲２４〜６７９＋）であった。
【０８９３】
安全性
８／９例（８８％）の対象にグレード３以上の有害事象が見られており、表３１に要約し、対象毎の全ての有害事象を表３４に掲載する。ＣＡＲ  Ｔ細胞療法の十分に記載のある合併症であるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）が８例の対象に認められた：１例は、グレード１、４例は、グレード２、３例は、グレード３、及び１例は、グレード４であった。ＣＲＳ発症時間の中央値は初回注入後３．５日（範囲１〜８）であり、持続期間中央値は８日（範囲３〜１２）及び入院期間中央値は９日（範囲３〜４０）であった。ＣＲＳはフェリチン及びＣ反応性タンパク質の上昇を伴った。４例の対象が抗ＩＬ６受容体抗体であるトシリズマブの投与を受け、３例は２回目の投与を必要とし（対象０１、０３、０８）及び２例は集中治療室でのケアを必要とした。
【０８９４】
神経毒性は、軽度の錯乱又は集中欠陥から局所神経障害、全脳症、失語症、発作及び／又は鈍麻にまで及ぶＣＡＲ  Ｔ細胞療法後の一般的な有害事象である。対象０１はグレード３  ＣＲＳのセッティングにおいてグレード１の錯乱があったが、これは介入なしに消失した。２例の対象（０３及び０８）はＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入後に重度の（グレード４）神経毒性を発症した。両例とも、処置時点で髄外疾患を伴う高い腫瘍負荷及び急速な進行を有し、両例とも重度ＣＲＳに対してトシリズマブの投与を受けた。対象０３は、急速なＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ増殖が示唆される末梢リンパ球数が上昇するセッティングで、挿管を必要とする鈍麻及び反復発作を発症した。１５日目における脳のＭＲＩは、最も顕著には後葉に、初期脳浮腫が示唆される溝の消失を伴うびまん性白質の増大を示した。当時は脳浮腫がまだＣＡＲ  Ｔ細胞療法の結果として記載されておらず（Ａｂｂａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＭＡ  ３１７，２２７１（２０１７））、この対象の臨床像及びＸ線像は後部可逆性脳症症候群（ＰＲＥＳ）に最も整合すると感じられた。この対象は高用量静脈内ステロイド（メチルプレドニゾロン１ｇ／日×３日）の投与を受けたが改善せず、次に１７日目にシクロホスファミド１．５ｇ／ｍ２の投与を受けたところ、４８時間以内に急速な神経学的改善が得られ、２３日目にはＭＲＩで異常な増大はほぼ完全に消失し、残留神経性障害はなかった。更なる詳細は別途記載する（Ｇａｒｆａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２８，５７０２−５７０２（２０１６）、全体として参照により援用される）。
【０８９５】
対象０８は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入時点で急速進行性骨髄腫を有し、８０％の骨髄形質細胞並びに皮膚、リンパ節、肝臓、副腎及び腎臓の髄外浸潤を伴い、加えて進行性腎機能不全（Ｃｒ２．８７ｇ／ｄＬ）があった。この対象は１５日目に、悪化する腎傷害、心房細動、低酸素症、低血圧症、凝血異常、譫妄及び高トランスアミナーゼ血症を伴うグレード４  ＣＲＳを発症した。この対象はトシリズマブ後に血行動態が安定したが、１７日目に挿管を必要とする進行性のグレード４脳症／鈍麻を有した。脳のＭＲＩはこれといった特徴のないもので、脳浮腫のエビデンスはなかったが、頭蓋の基底に進行性骨髄腫が認められた。この対象はステロイドの投与を受けたところ、精神状態の改善があり、２０日目に抜管した。２２日目、この対象は、挿管を必要とする再発性ショック及び低酸素症を発症した；続いて血液培養はカンジダ血症を示した。ここで、末梢血は、１３％の循環形質細胞を示し、検査所見により進行性骨髄腫が確認された；この状況で、対象の家族は緩和ケアのみとすることを選び、この対象は２４日目に息を引き取った。試験中、他に死亡は起こらなかった。
【０８９６】
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ生着及び持続性の動態
注入を受けた全ての対象が、末梢血中にｑＰＣＲ分析により検出可能なＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞を有し、８／９例の対象にフローサイトメトリーによりＣＡＲ＋  Ｔ細胞が検出可能であった（図３３Ａ；代表的な染色について図３８）。多くの対象について拡大のピークは１０日目であり、拡大が最も大きかった２例の対象（０１、０３）では、拡大ピーク時に全循環ＣＤ３＋  Ｔ細胞の７５％超をＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞が占め、これは血液１μＬ当たりそれぞれ５３００及び８７００個の循環ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞に相当した（図３９）。注入前はＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ製剤中でＣＤ４＋  Ｔ細胞が優勢であるにも関わらず、血中を循環するＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞は優勢にはＣＤ８＋であって、高度に活性化されており、ピーク拡大時にＣＡＲ＋ＣＤ３＋細胞の中央値９４％（範囲３３〜９８％）がＨＬＡ−ＤＲを発現した（表３５）。骨髄穿刺液中のＣＡＲＴ−ＢＣＭＡレベルは概して末梢血中のものを映し出し、対象０３については胸水及び脳脊髄液中でも上昇した（表３６）。ほとんどの対象において、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞は血中で限られた検出期間を示した。２例（０１、０３）を除く全ての対象において、２８日目の後にＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞はもはやフローサイトメトリーにより検出することができなかったが、ｑＰＣＲによれば、試験した７／８例で６０日目まで依然として検出可能で、これには２１ヵ月時点でも引き続き検出可能な細胞を有している（図３３Ａ）対象０１（厳密ＣＲ）が含まれた。奏効は、ｑＰＣＲによるピーク拡大（≧ＰＲについて中央値１０２５０７コピー／μｇ  ＤＮＡ対＜ＰＲについて４１８７コピー／μｇ、ｐ＝０．０１６）並びに最初の２８日間における曲線下面積（ＡＵＣ０−２８ｄ）により測定したときの持続性（≧ＰＲについて中央値８８５１８１コピー×日数／μｇ  ＤＮＡ対＜ＰＲについて２６１８３コピー×日数／μｇ  ＤＮＡ、ｐ＝０．０１６）と有意に関連した（図３３Ｂ）。
【０８９７】
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ後の可溶性因子の変化
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入前及び注入後に末梢血清中の合計３０種のサイトカインを定量化した。ＩＬ−６、ＩＬ−１０、インターフェロン−γによって誘導されるモノカイン（ＭＩＧ、ＣＸＣＬ９）、ＩＰ１０及びＩＬ−１受容体αについて、ベースラインからの最も一貫性のある変化（５倍を超える増加）が見られた（図４０）。サイトカインの増加は、拡大及び奏効が最も高い対象において最も顕著で、ピーク拡大時点でピークに達するとともにサイトカイン放出症候群の臨床症状を伴い、これは以前ＣＤ１９特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞で記載されたパターンと類似した（Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．７，３０３ｒａ１３９（２０１５）；Ｔｅａｃｈｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．６，６６４−６７９（２０１６））。最も深い奏効の対象（０１、０３、１５）は、全例がベースラインを５０倍超上回るピークＩＬ−６、ＩＬ−１０及びＭＩＧ濃度であった。ＣＲＳのタイミングも奏効に関連し、ＰＲ以上の対象において発症中央値は初回注入後２日（範囲１〜３）であり、比較してＰＲのない対象では４．５日（範囲４〜８）であった（ｐ＝０．０２９、マン−ホイットニー検定）。
【０８９８】
ＢＣＭＡはγ−セクレターゼ媒介性切断によって形質細胞の表面からシェディングされ（Ｌａｕｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ  ６，７３３３（２０１５））、これが循環中に検出可能な可溶性形態（ｓＢＣＭＡ）につながる。骨髄腫患者にはｓＢＣＭＡレベルの上昇が見られ、高濃度のｓＢＣＭＡほど不良の臨床アウトカムに関連する（Ｓａｎｃｈｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１５８，７２７−７３８（２０１２））。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡがｓＢＣＭＡ並びにそのリガンドＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬの血清濃度に及ぼす影響を連続的に評価した。健常ドナーのパネル（ＨＤ、ｎ＝６、ｓＢＣＭＡ中央値４１．６ｎｇ／ｍｌ、範囲２５．２〜８４．４）と比較して、対象のほとんどはベースライン時に血中ｓＢＣＭＡ濃度が上昇しており（中央値１５３２ｎｇ／ｍｌ、範囲７８．２〜６１０１．３）、加えてＡＰＲＩＬの抑制が付随した（中央値０．０４ｎｇ／ｍｌ、範囲０．０１〜０．９６、ＨＤ、中央値５．６９ｎｇ／ｍｌ、範囲３．０７〜６．２４との比較）。ＢＡＦＦ濃度（中央値０．８４ｎｇ／ｍｌ、範囲０．５１〜４．９８）にＨＤ（中央値０．９３ｎｇ／ｍｌ、範囲０．５８〜１．２４）との有意差はなかった。ベースラインｓＢＣＭＡ濃度は奏効と相関しなかったが（図４１）、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ後のｓＢＣＭＡ濃度の低下は、最も深い奏効の対象（０１、０３、１５）において最も顕著であった。対象０３、０７、１５についてｓＢＣＭＡは、進行時点でも再び上昇し始めたことから（図３４）、血中ｓＢＣＭＡ濃度が骨髄腫疾患負荷の評価に有用なバイオマーカーであり得ることが示唆される。
【０８９９】
対象は、全てベースライン時に血中ＣＤ１９＋  Ｂ細胞頻度が低下しており（中央値１．９％のＣＤ４５＋ＣＤ１４−ゲート、範囲０．１％〜４．５％）、これは進行性骨髄腫及び多量の前療法からの免疫抑制に起因する可能性が高い。しかしながら、長期Ｂ細胞形成不全を生じさせるＣＤ１９特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞で処置した患者と対照的に（Ｍａｕｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７１，１５０７−１５１７（２０１４））、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞で処置した９例中６例の対象が、典型的には注入後２〜３ヵ月で、Ｂ細胞の回復を示した。Ｂ細胞回復は、最も深い奏効の対象（０１、０３、１５）において最も顕著であり、常にとは限らないが、概して血清ＢＡＦＦ及び／又はＡＰＲＩＬ（正常なＢ細胞発生、増殖及び生存を促進することが公知のリガンド（Ｒｉｃｋｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２４４，１１５−１３３（２０１１）））の濃度の増加と関連した（図３４）。重要なことに、対象０１において循環ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の長期残存にも関わらずＢ細胞頻度は正常なままであり、これは大多数の循環Ｂ細胞にＢＣＭＡ発現が存在しないという既報告と一致する（Ｓｅｃｋｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ３１，３９６−４１０（２０１７）；Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９，９１−９８（２００４））。
【０９００】
骨髄腫細胞上のＢＣＭＡ発現
８例の対象を処置前の骨髄腫細胞に対するフローサイトメトリーによりＢＣＭＡ発現に関して判定し、全例が検出可能なＢＣＭＡ発現を有した（図３５）（代表的なゲーティングについては、図４２を参照されたい）。ベースラインＢＣＭＡ強度は対象毎に異なり、この小さいコホートではＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大の程度又は奏効と相関はないように見えた（図４３）。処置後、７例の対象が、ＢＣＭＡ発現に関して判定可能な骨髄腫細胞を有した。１例の対象（０３）は、処置前と比較して進行時点で（１６４日目）、蛍光マイナス１（ＦＭＯ）対照と比べたＢＣＭＡ染色強度が有意に低下したことから、表面発現の下方制御、ＢＣＭＡ−ｄｉｍ／陰性変異体の免疫選択及び／又は細胞表面からのシェディングの増加のいずれかが示唆される。
【０９０１】
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大の予測因子
上記に記載されるとおり、且つＣＡＲ  Ｔ細胞の先行研究と一致して（Ｔｕｒｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．８，３５５ｒａ１１６（２０１６）；Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．７，３０３ｒａ１３９（２０１５）；Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２８，１６８８−１７００（２０１６））、奏効を示す対象は非奏効例と比べてＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の拡大及び持続性がより高く、サイトカイン放出がより深刻であった。強力な拡大と関連性がある可能性のある処置前特性を探索するため、製造前、製造中及び製造の終了時におけるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ製剤の特徴を分析した。白血球アフェレーシス産物並びに製造の開始時（即ち単球を除去するためのエルトリエーションステップ後）の種培養物のＣＤ４／ＣＤ８比が高いほど、対象におけるより大きいＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大に関連する（図３６Ａ及び３６Ｂ）一方、白血球アフェレーシス産物又は種培養物中の総ＣＤ３  Ｔ細胞数又は製造の終了時における最終産物のＣＤ４／ＣＤ８比は関連性がない（データは示さず）ことが分かった。製造中の播種細胞の拡大倍数もインビボＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大と相関した（図３６Ｃ）ことから、インビトロ増殖能がインビボ活性を予測し得ることが示唆される。最後に、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与を受けるＣＬＬ患者における過去の分析において、ＣＡＲ  Ｔ細胞拡大及び臨床奏効が良好であるほど、ＣＤ２７＋ＣＤ４５ＲＯ−表現型を発現する白血球アフェレーシス標本内のＣＤ８＋  Ｔ細胞の高い比率に関連したことが実証済みであった（２４）。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞単独で処置した９例の対象の白血球アフェレーシス産物中のＣＤ８＋  Ｔ細胞を調べ、ＣＤ２７＋ＣＤ４５ＲＯ−細胞の頻度とインビボでのＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大との間に同様の相関が見出された（図３６Ｄ）。
【０９０２】
考察
ＣＡＲ  Ｔ細胞療法は、それを反復及び／又は継続投与が必要な他の療法と区別する、単回処置後に持続性のある疾患制御をもたらす潜在能力のある、Ｂ細胞悪性腫瘍に対する有望な治療選択肢として現れつつある。本報告では、４／９例の対象が、注入２１ヵ月後に継続中の厳密完全寛解を含め、部分奏効以上を達成しているとともに、２例の更なる対象が微小奏効であることに伴い、進行した難治性の骨髄腫におけるＣＡＲ  Ｔ細胞療法の潜在能力が実証される。高腫瘍負荷、急速進行性疾患及び高リスク遺伝学的因子を含めた、登録した対象の骨髄腫の高度に有害な生物学的特徴を所与とすれば、これは注目に値する。全ての対象について、ベースラインＴ細胞リンパ球減少症にも関わらずＣＡＲ  Ｔ細胞製剤の製造が成功し、ＣＡＲ  Ｔ細胞のピークレベル及び持続性は対象間で大きく異なったものの、同様に全ての対象で生着が見られた。
【０９０３】
骨髄腫は、長い間、特により進行した難治性の疾患において、逆転したＣＤ４／ＣＤ８  Ｔ細胞比、エキソビボ抗腫瘍活性の低下及び消耗又は老化表現型の獲得と共に、Ｔ細胞の定量的及び機能的障害と関連付けられてきた（Ｋａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９８，２３−２８（２００１）；Ｄｈｏｄａｐｋａｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９８，１７５３−１７５７（２００３）；Ｓｕｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ３０，１７１６−１７２４（２０１６））。本研究では、奏効はインビボ拡大の程度と相関し、ひいてはインビボ拡大が、より高い製造前ＣＤ４／ＣＤ８  Ｔ細胞比、製造前ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞頻度及び製造中のインビトロ増殖の大きさに関連した。これは、以前ＣＤ１９特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞を使用したＣＬＬ試験で観察されたとおり、有効性の高いＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ製剤が、分化度の低い、より「ナイーブ様の」Ｔ細胞コンパートメントを有する対象に由来し得ることを示唆している（Ｆｒａｉｅｔｔａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２８，５７−５７（２０１６））。これらの知見は、処置前のＴ細胞表現型及び／又は機能特性が、最終的には、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ療法が奏効する又は奏効しない可能性のある対象を予測する助けとなり得ることを示唆している。これらの知見は、患者をその疾患経過の早期に、Ｔ細胞が本質的に「適合型」であり得るときに処置するほど、有効性が高くなり得ることも示唆している。
【０９０４】
認められたＣＡＲ  Ｔ細胞拡大及び臨床活性は、このコホートでは注入前コンディショニングとして与えられるいかなる化学療法もないため、注目に値する。シクロホスファミドなどの化学療法薬は、利用可能なＩＬ−７及びＩＬ−１５の増加につながる細胞「シンク」の減少；調節性Ｔ細胞などの抑制性細胞集団の枯渇；抗原提示細胞の成熟を亢進させるＴｏｌｌ様受容体アゴニストの放出による粘膜損傷の誘導；及び腸内微生物叢の改変を含め、複数の潜在的機構を介してＴ細胞媒介性抗腫瘍免疫を増強することが実証されている（Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６，３８３−３９３（２００６）；Ｖｉａｕｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４２，９７１−９７６（２０１３））。従って、ヒトにおけるＣＡＲ  Ｔ細胞を含めた腫瘍特異的Ｔ細胞の養子移入は、最も一般的には何らかの形態のリンパ球枯渇コンディショニングの後に行われており（Ｐｏｒｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．７，３０３ｒａ１３９（２０１５）；Ｒａｐｏｐｏｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２１，９１４−９２１（２０１５）；Ｎｏｏｎａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．７，２８８ｒａ２７８（２０１５）；Ｍｏｒｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１４，１２６−１２９（２００６））、一部の研究では、コンディショニングの強度を漸増的に増加させることにより、更に良好な生着及び臨床アウトカムにつながることが示されている（Ｔｕｒｔｌｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．８，３５５ｒａ１１６（２０１６）；Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２６，５２３３−５２３９（２００８））。これと一致して、リンパ球枯渇コンディショニングなしに与えられたＣＡＲ  Ｔ細胞療法の初期の研究では、移入されたＴ細胞の低レベルの拡大及び限られた持続性のみが見られており、但しこれらの研究では、共刺激ドメインを欠き且つ免疫原性配列を含む、それが同様に生着不良の一因となった第１世代ＣＡＲ構築物が使用されたことは指摘されて然るべきである（Ｐｕｌｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１５，８２５−８３３（２００７）；Ｐａｒｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１５，８２５−８３３（２００７）；Ｔｉｌｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１２，２２６１−２２７１（２００８））。
【０９０５】
しかしながら、本研究は、少なくとも一部の患者において（例えば、対象０１）、ロバストで持続的なＣＡＲ  Ｔ細胞生着及び臨床的有効性に化学療法コンディショニングが不要であることを明確に実証している。この成功に寄与した可能性のある条件としては、ＣＡＲ構築物中に４−１ＢＢ共刺激ドメインが含まれたこと、抗原を広く利用可能である高い腫瘍負荷及び患者集団における有意なベースラインリンパ球減少症が挙げられる。それにも関わらず、上記に記載されるとおりの化学療法コンディショニングの公知の有益な効果を所与とすれば、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大及び持続性並びに恐らく臨床奏効が成功する対象の割合がリンパ球枯渇によって増加するであろう可能性は依然として高い。この問題は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞前にシクロホスファミドの投与を受けるコホート２及び３で対処されることになる。
【０９０６】
ＮＣＩ（Ａｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２８，１６８８−１７００（２０１６））によって報告される過去のＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞試験と併せて、本研究は、ＢＣＭＡが骨髄腫における極めて魅力的な標的であると確認する。これは、ＢＣＭＡを標的とする二重特異性抗体及び抗体−薬物コンジュゲートで認められた有望な前臨床及び初期臨床活性によって更に強化されている（Ｔａｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２３，３１２８−３１３８（２０１４）；Ｈｉｐｐ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ３１，１７４３−１７５１（２０１７）；Ｃｏｈｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２８，１１４８−１１４８（２０１６））。加えて、リンパ球枯渇化学療法と併せた且つ前処置をそれほど多く受けていない患者集団におけるＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞の２つの他の研究の予備的報告では、尚更高い奏効率が示されており、その幾つかは報告時点で１年を超える持続性があった（Ｆａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３５，ａｂｓｔｒ  ＬＢＡ３００１（２０１７）；Ｂｅｒｄｅｊａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３５，ａｂｓｔｒ  ３０１０（２０１７））。重要なことに、これらの研究のうち、任意の予想外のオフターゲット又はオフ腫瘍毒性を報告したものはなかったことから、ＢＣＭＡの限定的な正常組織発現が確認され、発現がより広範囲にわたる骨髄腫における他の潜在的なＣＡＲ  Ｔ細胞標的（例えば、ＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７）とは区別される（Ｊｉａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．８，２９７−３１０（２０１４）；Ｄｒｅｎｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  １０１，６１６−６２５（２０１６）；Ｃｈｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０，３９８９−４０００（２０１４））。
【０９０７】
ＢＣＭＡ標的化ＣＡＲ  Ｔ細胞の重要な未解決の問題は、最適な認識及び殺傷に必要なＭＭ細胞上でのＢＣＭＡ発現の閾値があるかどうかである。本研究は、適格性要件としていかなる具体的なＢＣＭＡレベルも要求しなかったが、これは、免疫組織化学（ＩＨＣ）又はフローサイトメトリーによるとき少なくとも５０％の骨髄腫細胞がＢＣＭＡを発現することを要件とした３つの他の既報告のＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞研究と対照的である（Ａｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２８，１６８８−１７００（２０１６）；Ｆａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３５，ａｂｓｔｒ  ＬＢＡ３００１（２０１７）；Ｂｅｒｄｅｊａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３５，ａｂｓｔｒ  ３０１０（２０１７））。ＮＣＩ試験では、ＩＨＣによりＢＣＭＡ染色されたプレスクリーニング済みの骨髄生検の僅か５２／８５例（６２％）のみがこの閾値を満たしており、即ち潜在的に適格であるＭＭ患者の３分の１超が除外されたであろうことを意味する（Ａｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２８，１６８８−１７００（２０１６））。この手法によって奏効可能性のより高い患者を集積し得る可能性は依然としてあるが、これは利益を受け得る可能性のある患者も除外し得るものであり、少なくとも本研究のこの初期コホートでは、奏効はフローサイトメトリーによるベースラインＢＣＭＡ発現と相関しなかった（図４３）。この問題に更に十分に対処するには、より大きいデータセットが必要である。別の問題は、現在までのところ、本研究及びＮＣＩ研究の両方において各１例の患者に認められるとおりの、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法後の潜在的なＢＣＭＡ下方制御又はＢＣＭＡ−ｄｉｍ／陰性変異体選択に関する（Ａｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２８，１６８８−１７００（２０１６））。より大規模な研究及びより長期にわたるフォローアップが、この現象の真の頻度を決定する助けとなり得るが、これは、それがＭＭ細胞エスケープ手段であり得ることを示唆している。
【０９０８】
ＣＡＲ  Ｔ細胞の一次毒性は、依然としてサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）及び神経毒性である。このコホートにおけるＣＲＳの頻度及び重症度は、ＣＤ１９標的化ＣＡＲ  Ｔ細胞試験（Ｍａｕｄｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７１，１５０７−１５１７（２０１４）；Ｐｏｒｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．７，３０３ｒａ１３９（２０１５））において報告されたものと同程度であり、幸運にもＩＬ−６受容体遮断療法によって消失した。注入されたＣＡＲ  Ｔ細胞の拡大及び持続性に対するトシリズマブの影響が見かけ上ないことを所与として、現在、諸研究が、ＣＲＳのグレードが低くても、注入後早期にそれを使用して、それにより重度の又は生命を脅かす毒性の発生を抑え得ることを探索中である（例えば、ＮＣＴ０２９０６３７１）。神経毒性は、一部のＣＡＲ  Ｔ細胞試験では最大５０％の対象に報告されており（Ｔｕｒｔｌｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．８，３５５ｒａ１１６（２０１６）；Ｔｕｒｔｌｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２６，２１２３−２１３８（２０１６）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３３，５４０−５４９（２０１５））、依然として一層の難題である。これはＣＲＳと同時に又はそれに続いて起こることもあり、多くの場合にトシリズマブ後にも改善しない（又は悪化し得る）。中枢神経系（ＣＮＳ）内における（脳脊髄液の分析により評価したときの）ＣＡＲ  Ｔ細胞の存在それ自体は、必ずしも神経毒性を予測するわけではないが、神経毒性は、ＣＲＳの早期発症並びに恐らくＣＮＳ血管透過性の増加につながる、血清中及びＣＮＳ内の両方における炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ６、ＩＦＮ−γ）の急激な上昇と関連付けられている（Ｇｕｓｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．，（２０１７））。軽症例は支持的に処置され、より重症例には通常、ステロイドが投与される。幸運にも、大多数の症例が回復可能で自然治癒しているが、脳浮腫を伴う致死的症例も報告されている（Ａｂｂａｓｉ，ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＭＡ  ３１７，２２７１（２０１７）；Ｇｕｓｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．，（２０１７））。シクロホスファミドを使用した対象０３のＰＲＥＳ様症候群の急速な回復を実証する本研究における経験は、これがステロイド難治性症例において、特に同時に起こる広範なＣＡＲ  Ｔ細胞拡大が症状に関連する場合に試みるのに合理的な選択肢であり得ることを示唆している。
【０９０９】
要約すれば、完全ヒトＢＣＭＡ特異的ＣＡＲを発現する自家Ｔ細胞は、難治性ＭＭ患者においてリンパ球枯渇化学療法がなくても拡大し、客観的奏効を生じさせることができた。シクロホスファミドコンディショニングと併せて種々の用量レベルを探索する後続のコホートが、この手法の安全性及び有効性を更に最適化する助けとなるであろう。
【０９１０】
材料及び方法
対象
対象は、少なくとも３ラインの前療法後又はプロテアソーム阻害剤及びＩＭｉＤに対する二重難治性の場合には２ラインの前療法後に再発したか又は難治性である（直近の療法から続く又は６０日以内の進行として定義される）多発性骨髄腫を有した。他の主要な適格性判定基準には、測定可能な疾患；ＥＣＯＧパフォーマンスステータスが０〜２；血清クレアチニン≦２．５ｍｇ／ｄＬ又は推算クレアチニンクリアランス≧３０ｍｌ／分；絶対好中球数≧１０００／μｌ及び血小板数≧５０，０００／μｌ（骨髄形質細胞が５０％以上の細胞充実度の場合には≧３０，０００／μｌ）；ＳＧＯＴ≦正常上限の３倍及び総ビリルビン≦２．０ｍｇ／ｄｌ（高ビリルビン血症がジルベール症候群に起因する患者を除く）；左室駆出率≧４５％；活動性自己免疫疾患がないこと；及び骨髄腫による中枢神経系浸潤がないことが含まれる。全ての対象が脳のベースラインＭＲＩ及び指名された研究神経科医による連続判定を有した。各対象からインフォームドコンセントを取得し、ヘルシンキ宣言に準拠してペンシルベニア大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）ＩＲＢの承認を得て本研究が行われた。
【０９１１】
研究デザイン
本臨床試験は、安全性を主要目的とする第１相非盲検研究であった。毒性グレードは、国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）の有害事象共通用語規準（Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ）第４．０版に従って決定し、但しサイトカイン放出症候群は例外とし、これは、記載されるとおり（Ｐｏｒｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．７，３０３ｒａ１３９（２０１５））、ペンシルベニア大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）ＣＲＳグレード分類システム（表３８）のとおりにグレード分類した。本研究は、組換えＤＮＡ諮問委員会（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）、ＦＤＡ、アブラムソン癌センター臨床試験科学的レビュー委員会（Ａｂｒａｍｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）及びペンシルベニア大学施設内バイオセーフティ委員会及び治験審査委員会（Ｐｅｎｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｓａｆｅｔｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ａｎｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ）によって承認された。本試験はｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖにＮＣＴ０２５４６１６７として登録され、「結果」の節にある「プロトコルデザイン及び登録」及び図３１に記載のとおり行われた。骨髄腫の奏効は、最新の国際骨髄腫ワーキンググループ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ）判定基準（Ｋｕｍａｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．１７，ｅ３２８−３４６（２０１６）、本明細書によって全体として参照により本明細書に援用される）によって評価した。本分析のデータカットオフは９／１１／１７であった。
【０９１２】
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ製造及び注入
ＣＡＲ：ヒンジ及びＣＤ８の膜貫通ドメイン並びにヒト４−１ＢＢ及びＣＤ３ｚ細胞内シグナル伝達ドメインに融合したヒト抗ＢＣＭＡ単鎖可変断片をコードするレンチウイルスベクターによって末梢血Ｔ細胞を刺激し、形質導入した。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞は、ＦＡＣＴの認証を受けている（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆａｃｔｗｅｂｓｉｔｅ．ｏｒｇ）ペンシルベニア大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）の臨床細胞及びワクチン生産施設（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ）において、以前記載されているとおり（Ｐｏｒｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．７，３０３ｒａ１３９（２０１５）；Ｋａｌｏｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．３，９５ｒａ７３（２０１１））製造された。ＣＤ３、ＣＤ４及びＣＤ８細胞頻度をフローサイトメトリーにより、白血球アフェレーシス産物中、製造の開始時（単球を除去するためのエルトリエーション後）（Ｐｏｗｅｌｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ  １１，９２３−９３５（２００９））及び製造の終了時の種培養物において決定した。播種細胞の拡大倍数及び集団倍加数をＣｏｕｌｔｅｒ  Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ（商標）での細胞カウントにより測定した。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞を製剤化し、注入時まで凍結保存し、次に品質管理試験及び品質保証レビューの実施後に各日１０％、３０％及び６０％の用量を与える３日間にわたる静脈内注入によって投与した。
【０９１３】
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大の測定
ペンシルベニア大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）のトランスレーショナル及びコレラティブスタディ研究所（Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ａｎｄ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）において、試料の受領、処理、凍結及び分析に関する確立された標準作業手順（ＳＯＰ）を用いて研究試料の処理、凍結及び検査値分析を実施した。プロトコルに指定された時点で入手した末梢血又は骨髄試料からＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞を定量化した。試料は、薄紫色の蓋（Ｋ２ＥＤＴＡ）又は赤色の蓋（添加剤なし）のバキュテナーチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）に採取した。薄紫色の蓋のチューブは試料採取から２時間以内に検査室に届けた。確立されたＳＯＰに従い、試料は、採取から１６時間以内に処理した。ＰＢＭＣは精製し、処理し、液体窒素気相中に保存した。赤色の蓋のチューブは、凝固時間を含めて採取から２時間以内に処理し、遠心によって血清を分離し、アリコートに分け、−８０℃で保存した。
【０９１４】
細胞をＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ処理後に直接フローサイトメトリーにより判定した。試料中の細胞収率に応じて１条件当たり約２×１０５〜５×１０５の総細胞を用いてＰＢＭＣの免疫表現型タイピングを実施した。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ及びＢＣＭＡ判定には、ＦＭＯ（蛍光マイナス１）二次単独対照を用いた。フローサイトメトリーに使用した試薬及びプロトコルについては、補足方法に記載する。
【０９１５】
全血又は骨髄穿刺液から直接ゲノムＤＮＡを単離し、末梢血及び骨髄試料について１時点当たり２００ｎｇのゲノムＤＮＡのトリプリケートを使用して、記載されるとおり（Ｋａｌｏｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．３，９５ｒａ７３（２０１１））、ＡＢＩ  ＴａｑＭａｎ技術及びバリデートされたアッセイを用いてｑＰＣＲ分析を実施することにより、組み込まれたＣＡＲトランス遺伝子配列を検出した。単位ＤＮＡ当たりのコピー数を決定するため、１００ｎｇの非形質導入対照ゲノムＤＮＡにスパイクした５〜１０６コピーのレンチウイルスプラスミドからなる８ポイント標準曲線を作成した。標準曲線中に存在するプラスミドのコピー数は、同じプライマー／プローブセットによる、且つＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ  ３ＤデジタルＰＣＲ機器（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で実施したデジタルｑＰＣＲを用いて確認した。各データ点（試料及び標準曲線）につきトリプリケートで、レプリケート３例中３例において正のＣｔ値、全ての定量化可能な値について０．９５％未満のパーセント変動係数で判定した。調査下のＤＮＡの品質管理のため、記載されるとおり（Ｋａｌｏｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．３，９５ｒａ７３（２０１１））、２０ｎｇのゲノムＤＮＡ及びＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）遺伝子の上流の非転写ゲノム配列に特異的なプライマー／プローブの組み合わせを使用して、並行した増幅反応を実施した。これらの増幅反応から、ＤＮＡ入力計算値対実測値を調整するための補正係数が生成された。１マイクログラムのＤＮＡ当たりのトランス遺伝子のコピーは、式：１マイクログラムのゲノムＤＮＡ当たりのコピー＝（ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ標準曲線から計算されるコピー）×補正係数／（ナノグラム単位での判定したＤＮＡ量）×１０００ｎｇに従って計算した。
【０９１６】
血清サイトカインの測定
ヒトサイトカイン磁気３０プレックスパネル（ＬＨＣ６００３Ｍ）は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓからのものであった。
【０９１７】
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入の１日前又はベースライン及び注入後２８日までの予定された時点において採取した血清試料を−８０℃で凍結保存した。バッチに分けた試料を解凍し、製造者のプロトコルに従って分析した。ＦｌｅｘＭＡＰ  ３Ｄ機器を使用してアッセイプレートを測定し、ｘＰＯＮＥＮＴソフトウェアを使用してデータ収集及び分析を行った。以下の判定基準に基づいてデータ品質を調べた。ｘＰＯＮＥＮＴソフトウェアを使用して、マイナーフィッティングあり又はなしで各分析物の標準曲線が５Ｐ  Ｒ２値＞０．９５を有する。品質管理に合格するには、インハウス対照血清の結果が、試験分析物の２５超についての歴史的インハウス対照データから導出されるＣＩ（信頼区間）の９５％の範囲内になければならなかった。結果が範囲外低値（＜ＯＯＲ）の試料に関して、それ以上の試験は行わなかった。結果が範囲外高値（＞ＯＯＲ）であったか又は標準曲線最大値（ＳＣ  ｍａｘ）の２倍より大きかった試料は、更に高い希釈度で再試験した。上記の品質管理又は再試験に合格した結果が報告された。
【０９１８】
可溶性ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬの測定
ヒトＢＣＭＡ（ＤＹ１９３）、ＡＰＲＩＬ（ＤＹ８８４Ｂ）及びＢＡＦＦ（ＤＴ１２４−０５）の抗体セットは、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓからのものであった。ＥＬＩＳＡビーズストリップ及び４カラムリザーバ（ＳＯＷ−Ａ１６７３５）は、Ａｓｓａｙ  Ｄｅｐｏｔからのものであった。ＥＬＩＳＡ基質ＡＤＨＰ（１００１０４６９）は、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌからのものであった。アッセイプレート（ＯＸ１２６３）は、Ｅ＆Ｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃからのものであった。全てのＥＬＩＳＡ試薬はＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡのプロトコルに従って調製し、但しカラー試薬Ｂは例外で、１００ｕＭのＡＤＨＰを補足した。血清量が限られており、且つＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦにＬｕｍｉｎｅｘアッセイを利用できなかったため、これらの３つの分析物はＥＬＩＳＡビーズストリップを使用して測定した。捕捉抗体（ｃＡＢ）をＥＬＩＳＡプレートのウェルにコーティングする代わりに、それをマクロスフェアの表面上にコーティングし、これにより１００ｕｌの血清を使用して３つ全ての分析物を測定することが可能になった。アッセイプレート中のビーズストリップを使用して、抗体セットのプロトコルに従ってアッセイマップに基づいてアッセイをセットアップした。アッセイの終了時、１００ｕｌ／ウェルの基質溶液（１：１のカラー試薬Ａ及びＡＤＨＰ）を加えることにより、１２本のビーズストリップ当たり１つの基質プレートを調製した。各ビーズストリップをアッセイマップに従って基質プレートの１つのカラムに置いた。発色は１０〜３０分間であった。プレートをＦＬＵＯ  ＳＴＡＲ  ＯＭＥＧＡ機器で読み取った。Ｌｕｍｉｎｅｘデータについて記載されるとおり、データ品質管理を実施した。
【０９１９】
ＢＣＭＡ発現を含めた、骨髄の骨髄腫細胞の評価
短時間の塩化アンモニウム赤血球溶解ステップの後に、骨髄穿刺液材料のフローサイトメトリー評価を穿刺液で直接実施した。手順は、（Ｆｌｏｒｅｓ−Ｍｏｎｔｅｒｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ３１，２０９４−２１０３（２０１７））に記載されるとおりのＥｕｒｏＦｌｏｗプロトコルを応用した。簡潔に言えば、最大２ｍｌの骨髄穿刺液を４８ｍｌのＰｈａｒｍ  Ｌｙｓｅ溶液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  カタログ番号５５５８９９）で希釈し、振盪機上で室温において１５分間インキュベートした。次に８００ｇで１０分間の遠心によって細胞を回収し、フローサイトメトリー緩衝液（１％ウシ胎仔血清含有ＰＢＳ）で２回洗浄し、Ｌ／Ｄ  Ａｑｕａ生死判別色素（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  カタログ番号Ｌ３４９５７）で染色した。ＣＤ４５、ＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＣＤ１４、ＣＤ５６、ＣＤ２０、ＣＤ３、ＣＤ２６９（ＢＣＭＡ）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）に対する抗体の混合物で表面染色を行った。ＢＣＭＡ判定にはＦＭＯ（蛍光マイナス１）二次単独対照を使用した。並行して対照として健常ドナーＰＢＭＣ細胞のアリコートを染色した。次に細胞を洗浄した後、Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ試薬（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して室温で２０分間透過処理／固定し、洗浄し、κ及びλ免疫グロブリン軽鎖に対する抗体の混合物で染色した。次に試料を洗浄した後、ＰＢＳに再懸濁し、紫色、青色、緑色及び赤色レーザーを備えた１７カラーＬＳＲ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｏｒｄｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔフローサイトメーター（ＢＤ）で捕捉した。ＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）又はＦＣＳ  Ｅｘｐｒｅｓｓのいずれかを使用してリストモードファイルを分析した。
【０９２０】
統計
本研究の統計的分析は、本試験のパイロット的性質及び患者の標本サイズの小ささのため、主に記述的である。奏効期間、無増悪生存期間及び全生存期間並びに関連する生存期間中央値の推定にはカプラン・マイヤー法を用いた。奏効と、ピークＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大、最初の２８日間にわたる拡大の曲線下面積（ＡＵＣ−２８）、ベースライン可溶性ＢＣＭＡレベル及びベースラインのＭＭ細胞上でのＢＣＭＡ発現との間の関連性の有意性の判定にはマン−ホイットニー検定を用いた。２つの連続変数間の相関の測定にはスピアマンの相関を用いた。無相関の帰無仮説に対するスピアマンの相関の有意性は順列に基づいて計算した。分析はＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン６．０を用いて実施した。
【０９２１】
【表１２３】
2021509009.tif 000158
【０９２２】
【表１２４】
2021509009.tif 000159
【０９２３】
補足方法
フローサイトメトリー用の試薬及びプロトコル
Ｔ細胞検出パネルの抗体は、抗ＣＤ４５  Ｖ４５０（クローンＨＩ３０）、抗ＣＤ１４  Ｖ５００（クローンＭ５Ｅ２）、抗ＣＤ５６  Ａｘ４８８（クローンＢ１５９）、抗ＣＤ４  ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（クローンＲＰＡ−Ｔ４）、抗ＣＤ８  ＡＰＣ−Ｈ７（クローンＳＫ１）（全てＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから）であった。また、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄからの抗ＣＤ３  ＢＶ６０５（クローンＯＫＴ３）、抗ＨＬＡ−ＤＲ  ＢＶ７１１（クローンＬ２４３）、抗ＣＤ１９  ＰＥ−Ｃｙ７（クローンＨ１Ｂ１９）も使用した。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ発現は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（カタログ番号５５４０６１）からのビスビオチン化ＢＣＭＡ−Ｆｃ  組換えタンパク質及び二次染色試薬ストレプトアビジン−ＰＥを使用することにより評価した。１％ウシ胎仔血清、０．０２％ナトリウムアジド及びビスビオチン化ＢＣＭＡ−Ｆｃを含有する１００μＬ  ＰＢＳに細胞を再懸濁し、氷上で３０分間インキュベートし、洗浄し、１％ウシ胎仔血清、０．０２％ナトリウムアジド、表面抗体及びＳＡ−ＰＥを含有する１００μＬ  ＰＢＳに再懸濁し、且つ氷上で３０分間インキュベートし、洗浄し、１％ウシ胎仔血清及び０．０２％ナトリウムアジドを含有する２５０ｕｌ  ＰＢＳに再懸濁し、且つ紫色（４０５ｎｍ）、青色（４８８ｎｍ）、緑色（５３２ｎｍ）及び赤色（６２８ｎｍ）レーザーを備えたＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用して捕捉した。データはＦｌｏｗＪｏソフトウェア（バージョン１０、Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用して分析した。ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｅ  ＵｌｔｒａＣｏｍｐ  ｅＢｅａｄｓ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  カタログ番号０１−２２２−４２）及びＤＩＶＡソフトウェアを使用して補償値を作成した。
【０９２４】
【表１２５】
2021509009.tif 000160
【０９２５】
【表１２６】
2021509009.tif 000161
【０９２６】
【表１２７】
2021509009.tif 000162
【０９２７】
【表１２８】
2021509009.tif 000163
【０９２８】
【表１２９】
2021509009.tif 000164
【０９２９】
【表１３０】
2021509009.tif 000165
【０９３０】
【表１３１】
2021509009.tif 000166
【０９３１】
【表１３２】
2021509009.tif 000167
【０９３２】
実施例６：多発性骨髄腫でないＢ細胞悪性腫瘍におけるＢＣＭＡ表面発現
材料及び方法
以下の活性化Ｂ細胞亜型びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）細胞株：ＨＢＬ−１、Ｏｃｉ−Ｌｙ３及びＴＭＤ−８を試験した。加えて、以下の胚中心Ｂ細胞（ＧＣＢ）亜型ＤＬＢＣＬ株：ＳｕＤＨＬ−４、ＳｕＤＨＬ−６及びＳｕＤＨＬ−１０を試験した。多発性骨髄腫（ＭＭ）株Ｕ２６６及びＫＭＳ１１を陽性対照として供し、急性リンパ芽球性白血病株Ｎａｌｍ６並びに慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）株Ｋ５６２を陰性対照として使用した。細胞は１：５０希釈のＰＥ標識抗ＢＣＭＡ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３５７５０４）で染色した。Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｓｉｍｐｌｙ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ定量化キット（Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号８１５）で製造者のプロトコルに従って抗体結合能（ＡＢＣ）を決定した。細胞はＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターで分析し、データはＦｌｏｗＪｏを使用して分析した。
【０９３３】
結果
図４４ＡはＢＣＭＡ発現のヒストグラムを示し、且つ図４４Ｂに、各細胞株の抗体結合能をプロットする。ヒストグラムに見られるとおり、且つ定量化により、両方の陽性対照株とも高いＢＣＭＡ発現を示した（図４４Ａ及び４４Ｂ）。他の株は、全て有意に低いＢＣＭＡ発現を示した。しかしながら、試験した全てのＤＬＢＣＬ株が、Ｏｃｉ−Ｌｙ３を除いて、明らかにＢＣＭＡ陽性であった。ＨＢＬ−１及びＳｕＤＨＬ−６が最も高い発現を示し、抗体結合能が５，０００超であった。
【０９３４】
実施例７：再発性／難治性多発性骨髄腫（ＭＭ）に対するＢ細胞成熟抗原特異的キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法（ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ）後のＴ細胞拡大及び臨床奏効の予測因子
背景：再発性／難治性（ｒｅｌ／ｒｅｆ）ＭＭは、ＣＤ４：ＣＤ８  Ｔ細胞比の逆転及び最終分化Ｔ細胞表現型の獲得を含めた進行性の免疫機能不全に関連する。ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞はＭＭにおいて有望な活性を示すが、ロバストなインビボ拡大及び奏効を予測する因子は不明である。難治性ＭＭ患者（中央値７回の治療歴、９６％の高リスク細胞遺伝学的因子）におけるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ（ＣＤ３ζ／４−１ＢＢシグナル伝達ドメインを有するヒトＢＣＭＡ特異的ＣＡＲを発現する自家Ｔ細胞）の第１相研究では、１２／２５例（４７％）に部分奏効（ＰＲ）以上が認められた（Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ，ＡＳＨ  ２０１７，＃５０５、本明細書において全体として参照により援用される）。最近になって、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与を受けたＣＬＬ患者において、ＣＡＲ  Ｔ製剤の作成前におけるある種のＴ細胞表現型がインビボ拡大及び臨床アウトカムの改善に関連したことが実証された（Ｆｒａｉｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１８、本明細書において全体として参照により援用される）。従って本研究では、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大及び／又は奏効に関連する処置前の臨床的又は免疫学的特徴を同定しようとした。
【０９３５】
方法：３コホートを登録した：１）１〜５×１０８  ＣＡＲＴ細胞単独；２）シクロホスファミド（Ｃｙ）１．５ｇ／ｍ２＋１〜５×１０７  ＣＡＲＴ細胞；及び３）Ｃｙ  １．５ｇ／ｍ２＋１〜５×１０８  ＣＡＲＴ細胞。末梢血（ＰＢ）及び骨髄（ＢＭ）単核球、凍結白血球アフェレーシスアリコートの表現型分析並びに製造中のＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ成長の表現型及びインビトロ動態をフローサイトメトリーにより実施した。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡインビボ拡大はフローサイトメトリー及びｑＰＣＲにより評価した。奏効はＩＭＷＧ判定基準により評価した。
【０９３６】
結果：コホート１では４／９例の患者（４４％、ｓＣＲ１例、ＶＰＧＲ２例、ＰＲ１例）；コホート２では１／５例（２０％、ＰＲ１例）；及びコホート３では７／１１例（６４％、ＣＲ１例、ＶＧＰＲ３例、ＰＲ３例）に奏効（≧ＰＲ）が見られた。７／９／２０１８時点で、３／２５例（１２％）が注入後１１、１４及び３２ヵ月で依然として無進行である。以前記載のとおり、奏効はピークインビボＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大（ｐ＝０．００２）並びに注入後最初の１ヵ月間の拡大（ＡＵＣ−２８、ｐ＝０．００２）の両方と関連性があった。ベースライン臨床特性又はＭＭ関連特性は、年齢、アイソタイプ、診断からの時間、前療法歴数、四重又は五重難治性であること、ｄｅｌ  １７ｐ又はＴＰ５３突然変異の存在、血清ヘモグロビン、ＢＭ  ＭＭ細胞率、ＭＭ細胞ＢＣＭＡ強度又は可溶性ＢＣＭＡ濃度を含め、拡大又は奏効との有意な関連性はなかった。白血球アフェレーシス又はＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入前に与えられる処置レジメンにも予測的価値はなかった。しかしながら、白血球アフェレーシス産物中のＣＤ４：ＣＤ８  Ｔ細胞比が高いほど、より大きいインビボＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大（スピアマンのｒ＝０．５６、ｐ＝０．００５）及び臨床奏効（ＰＲ以上；ｐ＝０．０１４、マン−ホイットニー）に関連したことが分かった。加えて且つＣＬＬデータと同様に、白血球アフェレーシス産物中におけるＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋の「初期メモリー」表現型を有するＣＤ８  Ｔ細胞頻度が高いことも、向上した拡大（スピアマンのｒ＝０．４８、ｐ＝０．０１８）及び奏効（ｐ＝０．０４７）に関連したことが分かった。製造データの分析により、培養開始時にＣＤ４：ＣＤ８比が高いほど、より大きい拡大（ｒ＝０．４１、ｐ＝０．０４４）及びそれより程度は低いが、奏効（ｐ＝０．０７４）に関連した一方、最終ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ製剤中の絶対Ｔ細胞数又はＣＤ４：ＣＤ８比は関連性がなかった（ｐ＝ＮＳ）ことが確認された。製造中のインビトロ拡大は実にインビボ拡大と関連性があったが（ｒ＝０．４８、ｐ＝０．０１７）、しかし奏効を直接予測するものではなかった。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入時点では、ＰＢ又はＢＭ中のＴ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞及びＣＤ３＋ＣＤ５６＋細胞の総頻度は、続くＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大又は臨床奏効と関連性がなかった；より高い注入前ＰＢ及びＢＭ  ＣＤ４：ＣＤ８比は拡大と相関したが（それぞれｒ＝０．５８、ｐ＝０．００４及びｒ＝０．６４、ｐ＝０．００３）、しかし奏効とは相関しなかった。
【０９３７】
結論：本研究では、前処置歴が多数あるＭＭ患者におけるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大及び奏効は腫瘍負荷又は他の臨床特性には関連しないが、Ｔ細胞採取及び製造前のある種の免疫学的特徴、即ち正常なＣＤ４：ＣＤ８比の維持及びＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋表現型のＣＤ８  Ｔ細胞頻度の増加とは実に相関したことが分かった。これは、免疫系の調節不全が軽い患者ほど、ＭＭにおいて有効性がより高いＣＡＲ  Ｔ細胞製剤を生成し得ることを示唆しており、ＭＭ患者におけるこれらの制限を乗り越えようと試みるための患者選択、Ｔ細胞採取のタイミング及び製造技法の最適化に影響を与える。
【０９３８】
実施例８：ＣＡＲ  Ｔ細胞製造へのＴ細胞適合性及び多発性骨髄腫における有効性の臨床予測因子
序論：多発性骨髄腫（ＭＭ）におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法に最適な臨床セッティング及び細胞製剤特性は不確かである。抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞（ＣＡＲＴ１９）で処置されたＣＬＬ患者では、白血球アフェレーシス時点における初期メモリー（ｅａｒｌｙ−ｍｅｍ）Ｔ細胞表現型（ＣＤ２７＋  ＣＤ４５ＲＯ−  ＣＤ８＋）の保有率には、他の患者特異的又は疾患特異的因子とは独立に臨床奏効の予測能力があり、インビトロＴ細胞拡大能力の亢進及びＣＤ１９応答性活性化と関連した（Ｆｒａｉｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１８、本明細書において全体として参照により援用される）。従ってＴ細胞適合性は、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法に対する奏効の主要な決定因子である。この研究では、導入療法の完了時（ｐｏｓｔ−ｉｎｄ）に入手したＭＭ患者からの白血球アフェレーシス試料を、再発性／難治性（ｒｅｌ／ｒｅｆ）患者において入手したものと、ｅａｒｌｙ−ｍｅｍ  Ｔ細胞頻度、ＣＤ４／ＣＤ８比及びインビトロＴ細胞拡大に関して比較した。
【０９３９】
方法：凍結保存された白血球アフェレーシス試料について、フローサイトメトリーによるｅａｒｌｙ−ｍｅｍ  Ｔ細胞比率及びＣＤ４／ＣＤ８比並びに抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズ刺激中のインビトロ拡大動態を分析した。２００７年〜２０１４年に、エキソビボで拡大した自家Ｔ細胞を免疫再構築の促進のためＡＳＣＴ後に注入した既報告のＭＭ試験（ＮＣＴ０１２４５６７３、ＮＣＴ０１４２６８２８、ＮＣＴ０００４６８５２）からｐｏｓｔ−ｉｎｄ試料を入手した；ｒｅｌ／ｒｅｆ試料は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの第１相研究（ＮＣＴ０２５４６１６７）で処置されたＭＭ患者からのものであった。
【０９４０】
結果：ｐｏｓｔ−ｉｎｄコホートには、年齢中央値５５歳（範囲４１〜６８）の、レナリドマイド（２２）、ボルテゾミブ（２１）、デキサメタゾン（３８）、シクロホスファミド（８）、ビンクリスチン（２）、サリドマイド（８）及びドキソルビシン（４）への曝露歴のある３８例の患者が含まれる；初回全身療法から白血球アフェレーシスまでの時間の中央値は１５２日（範囲５３〜１８８６）で、中央値１ラインの前療法歴（範囲１〜４）であった。ｒｅｌ／ｒｅｆコホートには、年齢中央値５８歳（範囲４４〜７５）、中央値７ラインの前療法歴（範囲３〜１３）並びにレナリドマイド（２５）、ボルテゾミブ（２５）、ポマリドミド（２３）、カルフィルゾミブ／オプロゾミブ（２４）、ダラツムマブ（１９）、シクロホスファミド（２５）、自家ＳＣＴ（２３）、同種ＳＣＴ（１）及び抗ＰＤ１（７）への曝露歴のある２５例の患者が含まれた。白血球アフェレーシス時点における骨髄形質細胞含有量の中央値は、ｒｅｌ／ｒｅｆコホート（６５％、範囲０〜９５％）と比較するとｐｏｓｔ−ｉｎｄコホート（１２．５％、範囲０〜８０、＝３７）で低かった。ｅａｒｌｙ−ｍｅｍ  Ｔ細胞比率は、ｐｏｓｔ−ｉｎｄコホートでｒｅｌ／ｒｅｆコホートよりも高かった（中央値４３．９％対２９．０％、ｐ＝０．００１、図４５Ａ）。同様に、ＣＤ４／ＣＤ８比は、ｐｏｓｔ−ｉｎｄでｒｅｌ／ｒｅｆコホートよりも高かった（中央値２．６対０．８７、ｐ＜０．０００１、図４５Ｂ）。ＣＬＬではＣＡＲＴ１９に対する奏効と相関した、製造中のインビトロＴ細胞拡大の程度（９日目までの集団倍加数、即ちＰＤＬ９として測定した）は、ｐｏｓｔ−ｉｎｄでｒｅｌ／ｒｅｆコホートよりも高かった（中央値ＰＤＬ９  ５．３対４．５、＝０．０００８、図４５Ｃ）。両方のコホートからのデータをプールすると、ＰＤＬ９はｅａｒｌｙ−ｍｅｍ  Ｔ細胞比率（スピアマンのｒｈｏ  ０．３８、多重性補正後のｐ＝０．０１）及びＣＤ４／ＣＤ８比（スピアマンのｒｈｏ  ０．４２、多重性補正後のｐ＝０．００５）の両方と相関した。ｐｏｓｔ−ｉｎｄコホートの中では、ｅａｒｌｙ−ｍｅｍ  Ｔ細胞比率とＭＭ診断からの時間、療法継続期間、特定の療法への曝露（シクロホスファミド、ボルテゾミブ又はレナリドマイドが含まれる）又はアフェレーシス時点での骨髄形質細胞含有量との間に有意な関連性はなかった。しかしながら、ｐｏｓｔ−ｉｎｄコホートでは、アフェレーシス前に２ラインより多い療法が必要であった患者（ｎ＝３）間で、このコホートの残りの患者（ｎ＝３５）と比較してｅａｒｌｙ−ｍｅｍ表現型の比率が低く（２９％対４９％、ｐ＝０．０７）、ＣＤ４／ＣＤ８比が低い（中央値１．４対２．７、ｐ＝０．０４）傾向があった。
【０９４１】
結論：ＭＭ患者では、再発性／難治性セッティングと比較して、導入療法後に入手された白血球アフェレーシス産物中において、ＣＡＲ  Ｔ細胞製造への適合性に関する機能的にバリデートされたバイオマーカーであるｅａｒｌｙ−ｍｅｍ  Ｔ細胞表現型の頻度が、ＣＤ４／ＣＤ８比及びインビトロＴ細胞拡大の程度と同様に、有意に高かった。この結果は、ＭＭに対するＣＡＲ  Ｔ細胞が、疾患経過の早い時点、疾患負荷が比較的低い時期及び複数の療法ラインへの曝露前であれば、より良好な臨床奏効をもたらし得ることを示唆している。
【０９４２】
実施例９：ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲＴ細胞後に進行した再発性／難治性多発性骨髄腫（ＭＭ）患者に対するサルベージ療法としてのＰＤ−１阻害剤併用
背景：Ｂ細胞成熟抗原に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する自家Ｔ細胞（ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞）は難治性ＭＭにおいて活性を示すが、依然として再発がよく見られる。抗ＰＤ−１抗体（Ａｂ）は前臨床でＣＡＲＴ細胞活性を増大させるとともに、ＣＤ１９特異的ＣＡＲＴ細胞後に進行したＤＬＢＣＬ患者においてＣＡＲＴ細胞再拡大及び奏効を誘導した（Ｃｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ  ２０１７、本明細書において全体として参照により援用される）。ＩＭｉＤのレナリドマイド（ｌｅｎ）及びポマリドミド（ｐｏｍ）は、ＭＭにおいてＣＡＲＴ細胞及びＰＤ−１阻害剤の両方の有効性を増強し得るが、毒性も増強し得る。エロツズマブ（ｅｌｏ）は、ＩＭｉＤ及びデキサメタゾン（ｄｅｘ）との併用で臨床的抗ＭＭ活性を有し、前臨床モデルで抗ＰＤ−１  Ａｂとの相乗作用を示す。
【０９４３】
方法：再発性／難治性ＭＭにおけるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の第１相研究に登録した２５例の対象のアウトカムについては、以前記載した（Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ，ＡＳＨ  ２０１７，＃５０５、本明細書において全体として参照により援用される）。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ後に進行し、その次の療法としてＰＤ−１阻害剤（ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏ））併用を受けた５例の対象を特定し、後ろ向きにレビューした。奏効はＩＭＷＧ判定基準によって評価した。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡレベルはフローサイトメトリー及びｑＰＣＲにより、処置前、初回ｐｅｍｂｒｏ用量後２〜４週間、次に進行するまで４週間毎に評価した。ｐｅｍｂｒｏ投与は３週間毎に２００ｍｇであった；ｄｅｘ投与は２０〜４０ｍｇ／週であった。
【０９４４】
結果：５例の対象の特性を表３９に示す。前治療ライン数中央値は９であった；全例が高リスク細胞遺伝学的因子を有した。全例がｐｏｍに対して、２例がｐｅｍｂｒｏ／ｐｏｍ／ｄｅｘに対して及び１例がｅｌｏに対して難治性であった。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡに対する最良の奏効は、２例がＰＲ、２例がＭＲ及び１例がＰＤであった。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡからｐｅｍｂｒｏベースの療法までの時間の中央値は１１７日であった。サルベージ療法の開始時点で全ての患者がｑＰＣＲにより検出可能なＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞をなおも有し、２例（患者０７及び２１）はなおもフローにより検出可能であった。１例目の患者（０２）はｐｅｍｂｒｏ／ｐｏｍ／ｄｅｘの投与を受け、ＭＲを得たが、２ヵ月時点で進行し、検出可能なＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ再拡大はなかった。２例目の患者（０７）は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ後２ヵ月で急速進行性κ軽鎖  ＭＭを有し、以前ｐｅｍｂｒｏ／ｐｏｍ／ｄｅｘで進行したことがあった。この患者はｅｌｏ／ｐｅｍｂｒｏ／ｐｏｍ／ｄｅｘを開始し、１２日目にＭＲを得て（遊離κ１４４６から９３７ｍｇ／Ｌ）、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞のロバストな拡大を伴った（ｑＰＣＲにより８７５．６４から２０５０５．０７コピー／μｇ  ＤＮＡ；フローにより０．７％から６．４％の末梢ＣＤ３＋細胞）。再拡大したＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞は主にＣＤ８＋であり、高度に活性化された（８９％ＨＬＡ−ＤＲ＋、１８％前療法から上昇）。しかしながら、この奏効は短命で、１週間後には進行があり、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡレベルは５週目にベースラインに戻った。次に、続く３例の対象がｌｅｎ又はｐｏｍのいずれかと共にｅｌｏ／ｐｅｍｂｒｏ／ｄｅｘの投与を受けた；２例がＭＲ及び１例がＳＤ及び３〜４ヵ月のＰＦＳ。いずれの対象にもＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の再拡大はなかった。非特異的免疫調節が認められ、ＣＤ４：ＣＤ８  Ｔ細胞比の変化（ｎ＝５）、ＮＫ細胞の増加／Ｔ細胞頻度の減少（ｎ＝４）及びＣＡＲ陰性Ｔ細胞上のＨＬＡ−ＤＲ上方制御（ｎ＝２）が含まれた。ＰＤ−１発現を含め、ＣＡＲＴ及び他の免疫細胞のより詳細な表現型タイピングが進行中である。毒性に関して、患者０２がｐｅｍｂｒｏ／ｐｏｍ／ｄｅｘの４週間後に自然治癒性の低グレードの発熱及び筋肉痛を有し、軽度のＣＲＳを示唆するものである軽度のフェリチン／ＣＲＰ上昇を伴った。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ再拡大にも関わらず患者０７を含め、他のＣＲＳは認められなかった。１例の患者（１７）は、ｅｌｏ／ｐｅｍｂｒｏ／ｐｏｍ／ｄｅｘの２ヵ月後から再発性表出性失語症を発症したが、ＣＲＳの徴候はなく、血中又はＣＳＦにＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の拡大は認められなかった。これは療法の中止及び短期間のステロイド漸減によって消失した。
【０９４５】
結論：本研究は、ＰＤ１−阻害剤併用が、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ療法後に進行しているＭＭ患者においてＣＡＲＴ細胞再拡大及び抗ＭＭ応答を誘導し得ることを実証する。この患者は以前ｐｅｍｂｒｏ／ｐｏｍ／ｄｅｘで進行があったため、認められた臨床活性はＣＡＲＴ細胞に関係した可能性が高く、エロツズマブも恐らく寄与した。この原理証明となる観察結果は、一部の患者がＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞療法後にチェックポイント遮断又は他の免疫調節手法に対して奏効し得ることを示唆しており、更に研究するに値する。
【０９４６】
【表１３３】
2021509009.tif 000168
【０９４７】
実施例１０：難治性多発性骨髄腫におけるＢ細胞成熟抗原特異的キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ）の臨床活性及び生物活性：単一施設非盲検第１相試験
要約
背景：キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、血液学的悪性腫瘍に対する有望な新規療法である。Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、発現が主として形質細胞に限定されているため、多発性骨髄腫（ＭＭ）療法の合理的な標的となる細胞表面受容体である。方法：再発性／難治性ＭＭを有する対象において、ＣＤ３ζ及び４−１ＢＢシグナル伝達ドメインを含有する新規完全ヒトＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ（ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ）をレンチウイルスで形質導入した自家Ｔ細胞の第Ｉ相研究を行った。２５例の対象を３つの用量コホートで処置した：１）１〜５×１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞単独；２）シクロホスファミド（Ｃｙ）１．５ｇ／ｍ２＋１〜５×１０７  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞；及び３）Ｃｙ  １．５ｇ／ｍ２＋１〜５×１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞。予め指定されたＢＣＭＡ発現レベルは要件とされなかった。知見：対象は中央値７ラインの前療法歴を有した；９６％がプロテアソーム阻害剤及び免疫調節薬に対して二重難治性であった；９６％が高リスク細胞遺伝学的因子を有した。いずれの場合にも、ＣＡＲ  Ｔ細胞の製造に成功した。毒性にはサイトカイン放出症候群及び神経毒性が含まれ、これはそれぞれ８例（３２％）及び３例（１２％）の対象でグレード３／４であり、回復可能であった。全ての対象でＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞が拡大し、コホート３において最も一貫していた。コホート１の４／９例（４４％）、コホート２の１／５例（２０％）及びコホート３の７／１１例（６３％）に臨床奏効が見られ、これには５例の部分奏効、５例の最良奏効及び２例の完全奏効が含まれた。３例の対象は１１、１４及び３２ヵ月時点で奏効が継続中であった。奏効例では残留ＭＭ細胞におけるＢＣＭＡ発現の低下が認められた；ほとんどで進行時に発現が増加した。奏効はＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大と関連し、拡大は製造前白血球アフェレーシス産物中におけるＣＤ４：ＣＤ８  Ｔ細胞比及びＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞頻度と関連した。解釈：リンパ球枯渇化学療法あり又はなしで与えられたＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入は、前処置歴が多数あるＭＭ患者において臨床的に活性であり、ＭＭ療法の新規手法に相当する。
【０９４８】
本研究は、骨髄腫療法の合理的な標的としてのＢＣＭＡの更なる臨床的バリデーションを提供し、４−１ＢＢ共刺激ドメインを含有する新規完全ヒトＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ構築物の安全性及び有効性を特徴付ける。本研究は、更に、リンパ球枯渇化学療法あり及びなしの両方でのＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞の生物活性及び臨床活性を記述し；特に奏効を示す患者における、注入後の骨髄腫細胞での動的ＢＣＭＡ発現を実証し；及びＣＡＲ  Ｔ細胞拡大及び臨床奏効の潜在的な新規バイオマーカーを同定する。
【０９４９】
方法
研究デザイン及び参加者
適格対象は、少なくとも３つの前レジメン又はプロテアソーム阻害剤（ＰＩ）及び免疫調節薬（ＩＭｉＤ）に対して二重難治性の場合には２つの前レジメンの後に、再発性及び／又は難治性ＭＭを有した。スクリーニング時における他の主要な適格性判定基準には、ＥＣＯＧ（米国東海岸癌臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ））パフォーマンスステータスが０〜２；血清クレアチニン≦２．５ｍｇ／ｄＬ又は推算クレアチニンクリアランス≧３０ｍｌ／分；絶対好中球数≧１０００／μｌ及び血小板数≧５０，０００／μｌ（骨髄形質細胞が５０％以上の細胞充実度の場合には≧３０，０００／μｌ）；ＳＧＯＴ≦正常上限の３倍及び総ビリルビン≦２．０ｍｇ／ｄｌ；左室駆出率≧４５％；活動性自己免疫疾患がないこと；及び骨髄腫による中枢神経系浸潤がないことが含まれた。ＭＭ細胞における予め指定されたＢＣＭＡ発現レベルは要件とされなかった。
【０９５０】
この臨床試験（ＮＣＴ０２５４６１６７）は第１相単一施設非盲検研究であった。当初、標準的な３＋３用量漸増デザインを用いて３つの連続コホートを探索した：１）１〜５×１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞単独；２）シクロホスファミド（Ｃｙ）１．５ｇ／ｍ２＋１〜５×１０７  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞；及び３）Ｃｙ  １．５ｇ／ｍ２＋１〜５×１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞。このプロトコルを修正して各コホートを９例の処置対象に拡大し、リンパ球枯渇コンディショニングあり及びなしでの並びにより高用量（１〜５×１０８）及び低用量（１〜５×１０７）でのＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の安全性及び有効性に関してより多くの情報を得た。続く修正でコホート２における登録を５例の対象後に有効性が準最適であったため中止し、コホート３では最大１３例の対象を受け入れた；しかしながら、資金が限られていたため、１１例の処置されたコホート３対象の後に最終的に登録を終了した（合計ｎ＝２５例が処置された）。
【０９５１】
手順
療法から２週間（モノクローナル抗体については４週間）のウォッシュアウト後、対象は定常状態白血球アフェレーシスを行い、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ用のＴ細胞が採取された。製造中、初回ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入の２週間前までは抗骨髄腫療法を再開することができた。Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１５；７（３０３）：３０３ｒａ１３９に記載されるとおり、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞は３日間にわたって静脈内投与した（０日目に用量の１０％；１日目に３０％及び２日目に６０％）。対象がＣＲＳの徴候を発症した場合、３０％又は６０％用量は保留することができた。Ｃｙは初回ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入の３日前に投与した。図４６のとおり臨床及び検査値評価を実施した。
【０９５２】
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞は、Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１５；７（３０３）：３０３ｒａ１３９；Ｋａｌｏｓ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１１；３（９５）：９５ｒａ７３に記載されるとおり、ペンシルベニア大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）のＦＡＣＴ認証臨床細胞及びワクチン生産施設（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ）において製造した。製造の開始時及び終了時の種培養物において、ＣＤ３、ＣＤ４及びＣＤ８細胞頻度をフローサイトメトリーにより決定した。播種細胞の拡大倍数及び集団倍加数をＣｏｕｌｔｅｒ  Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ（商標）での細胞カウントにより測定した。製造及び品質管理検査後、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞は注入時まで凍結保存した。
【０９５３】
初回ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入時点（又はコホート２及び３についてはＣｙ投与時点）から、有害事象（ＡＥ）に関するデータを収集した。毒性グレードは、国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）の有害事象共通用語規準（Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ）第４．０版に従って決定し、但しサイトカイン放出症候群は例外とし、これはペンシルベニア大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）ＣＲＳグレード分類システム（表３８）（Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１５；７（３０３）：３０３ｒａ１３９）のとおりにグレード分類した。骨髄腫の奏効は、最新の国際骨髄腫ワーキンググループ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ）判定基準（Ｋｕｍａｒ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１６；１７（８）：ｅ３２８−４６）により評価した。
【０９５４】
研究試料の処理、凍結及び検査値分析は、記載されるとおり（Ｍａｕｄｅ  ＳＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１４；３７１（１６）：１５０７−１７；Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１５；７（３０３）：３０３ｒａ１３９；Ｋａｌｏｓ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１１；３（９５）：９５ｒａ７３）、ペンシルベニア大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）のトランスレーショナル及びコレラティブスタディ研究所（Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ａｎｄ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）において実施した。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞は末梢血又は骨髄試料からフローサイトメトリー及び定量的ＰＣＲにより定量化した。フローサイトメトリー用の試薬及びプロトコルについては、補足方法に記載する。ゲノムＤＮＡは全血又は骨髄穿刺液から直接単離し、補足方法のとおりに、且つＫａｌｏｓ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１１；３（９５）：９５ｒａ７３に記載されるとおり、ＡＢＩ  ＴａｑＭａｎ技術及びバリデートされたアッセイを用いてｑＰＣＲ分析を実施することにより、組み込まれたＣＡＲトランス遺伝子配列を検出した。
【０９５５】
Ｍａｕｄｅ  ＳＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１４；３７１（１６）：１５０７−１７に記載されるとおり、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓからのヒトサイトカイン磁気３０プレックスパネル（ＬＨＣ６００３Ｍ）を使用して、バッチに分けられた凍結保存試料で血清サイトカインレベルを評価した。血清中の可溶性ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬ濃度の測定は、Ｒ＆Ｄ  ＳｙｓｔｅｍｓからのヒトＢＣＭＡ（ＤＹ１９３）、ＡＰＲＩＬ（ＤＹ８８４Ｂ）及びＢＡＦＦ（ＤＴ１２４−０５）の抗体セットを使用したＥＬＩＳＡにより実施した。詳細については、補足方法を参照されたい。
【０９５６】
新鮮な骨髄穿刺液材料でのフローサイトメトリーによるＭＭ細胞の評価は、ＢＣＭＡ発現を含め、Ｆｌｏｒｅｓ−Ｍｏｎｔｅｒｏ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２０１７；３１（１０）：２０９４−１０３及び補足方法に記載されるとおりのＥｕｒｏＦｌｏｗプロトコルを応用した。凍結保存された白血球アフェレーシス標本におけるフローサイトメトリーによるＴ細胞表現型の評価は、Ｆｒａｉｅｔｔａ  ＪＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１８；２４（５）：５６３−７１に記載されるとおり実施及び分析した。
【０９５７】
アウトカム
主要目的は、再発性／難治性骨髄腫患者におけるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡの安全性を判定することであった。主要エンドポイントは、用量制限毒性（ＤＬＴ）を含めた、研究に関連するグレード３以上のＡＥの発生であった。ＤＬＴは、プロトコル療法を受けてから４週間以内に起こった、研究療法とのその関係を除外できない重篤な「且つ」予想外のＡＥとして定義した。血液毒性は、基礎疾患の難治性の性質及びシクロホスファミドからの予想される骨髄抑制を理由としてＤＬＴとは見なさなかった。加えて、プロトコル処置に関連する任意の死亡並びに医学的管理にも関わらず発生から４週間以内に消失せず又はグレード２以下に改善しなかった任意の予想されたグレード４臓器毒性又はグレード４神経毒性もＤＬＴと見なした。副次目的は、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の製造の実現可能性及び臨床活性を評価することであった。副次エンドポイントは、製造の成功頻度並びに奏効率、無増悪生存期間及び全生存期間を含めた臨床アウトカムであった。探索的エンドポイントには、インビボでのＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大及び持続性；血清サイトカイン及び可溶性ＢＣＭＡの濃度変化及びＭＭ細胞におけるＢＣＭＡの発現が含まれた。
【０９５８】
統計的分析
本研究の統計的分析は、本試験のパイロット的性質及び各コホートの標本サイズの小ささのため、主に記述的である。奏効期間、無増悪生存期間及び全生存期間並びに関連する生存期間中央値の推定にはカプラン・マイヤー法を用いた。２値的エンドポイント（例えば、奏効）と連続因子（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞数）との間の関連性はマン−ホイットニー検定を用いて判定した。２値的エンドポイントとカテゴリ因子（例えば、欠失１７ｐの存在又は非存在）との間の関連性はフィッシャーの正確確率検定を用いて判定した。２つの連続変数間の相関の測定にはスピアマンの相関を用いた。無相関の帰無仮説に対するスピアマンの相関の有意性は順列に基づいて計算した。ここで、実施した統計的分析は、探索的で仮説生成的性質のものであるため、多重比較についてｐ値の補正は行わなかった。適用可能な場合には正確確率検定ｐ値を報告する。分析はＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン６．０を用いて実施した。
【０９５９】
結果
２０１５年１１月〜２０１７年１２月に、３４例の対象が同意し、２９例が適格で製造を開始し、２５例がＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入を受けた。４例は製造及び橋渡し療法中の急速な病勢進行／臨床的増悪のため処置されなかった（図５２）。ベースライン特性及び前療法ライン数を表４０に要約し、表４２に個人別の詳細を示す。対象は中央値７ラインの前療法歴があり、９６％がプロテアソーム阻害剤（ＰＩ）及び免疫調節薬（ＩＭＩＤ）に対して二重難治性であり、７２％がダラツムマブに対して難治性であり、且つ４４％が２つのＰＩ、２つのＩＭＩＤ及びダラツムマブに対して五重難治性であった。９６％が少なくとも１つの高リスク細胞遺伝学的異常を有し；６８％が欠失１７ｐ又はＴＰ５３突然変異のいずれかを有した。ベースライン腫瘍負荷は高く（骨髄生検上で６５％の骨髄腫細胞中央値）及び２８％が髄外疾患を有した。
【０９６０】
【表１３４】
2021509009.tif 000169
【０９６１】
全ての対象において、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の最低達成目標数を製造することに成功し、但し１例の対象は白血球アフェレーシス及び製造を２回試みる必要があった。最終製剤は中央値９７％のＣＤ３＋  Ｔ細胞を含み、ＣＤ４／ＣＤ８比中央値は１．７であった。２１例の対象が計画された全３回のＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入を受け、４人は計画された用量の４０％を受けた（３回目の注入は初期ＣＲＳのため保留された）。対象毎の製造、製剤特性及び投与の更なる詳細は、表４３に示す。
【０９６２】
属性とは無関係に、２４／２５例の対象（９６％）でグレード３以上の有害事象が見られた。表４１に要約し、対象毎の個人別の有害事象を表４４に掲載する。２２／２５例の対象（８８％）にサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）が認められ、ペンシルベニア大学グレード分類尺度（Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１５；７（３０３）：３０３ｒａ１３９）（表３８）では８例（３２％）はグレード３／４であり、その全てが１〜５×１０８用量で処置された例であった。ＣＲＳ発症までの時間の中央値は４日（範囲１〜１１）であり、継続期間中央値は６日（範囲１〜１８）及び入院期間中央値は７日（範囲０〜４０）であった。過去に記載されているとおり（Ｍａｕｄｅ  ＳＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１４；３７１（１６）：１５０７−１７）、ＣＲＳはフェリチン及びＣ反応性タンパク質の上昇を伴った。７例の対象（２８％）がトシリズマブ（ｎ＝６）又はシルツキシマブ（ｎ＝１）のいずれかによるＩＬ−６遮断を受けた。
【０９６３】
【表１３５】
2021509009.tif 000170
【０９６４】
７／２５例の対象（２８％）に神経毒性が見られ、４例は軽度（グレード１／２）であった（一過性の錯乱及び／又は失語症）。３例（１２％）はグレード３／４脳症を有し、そこに含まれたコホート１の１例の対象（０３）は、重度の鈍麻、反復発作及びＭＲＩ（磁気共鳴画像法）上での軽度の脳浮腫を伴うＰＲＥＳ（後部可逆性脳症症候群）のＤＬＴを有し、これは高用量メチルプレドニゾロン（１ｇ／日×３）及びシクロホスファミド１．５ｇ／ｍ２による処置後に完全に消失した。他の対象には、ＭＲＩ上の客観的変化はなかった。重度の神経毒性を有する３例の対象全てが高腫瘍負荷を有し（２例は髄外疾患を伴った）；５×１０８の用量のＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の投与を受けており；及びグレード３又は４  ＣＲＳを有した。他の唯一のＤＬＴは、対象２７（コホート３）におけるＣＲＳ、凝血異常、血小板減少症及び広範囲骨髄腫性肋骨病変のセッティングでのグレード３心筋症及びグレード４胸腔内出血／自然血胸であった；これらの毒性は、全て完全に消失した。グレード４脳症及びＣＲＳを有した１例の対象（０８）は、当初トシリズマブ及びステロイドによって改善し、次にカンジダ血症及び進行性骨髄腫／進行型形質細胞性白血病を発症した。家族は緩和ケアを選び、この対象は２４日目に息を引き取った。研究中、他に死亡は起こらなかった。予想外のオフターゲット毒性は認められなかった。
【０９６５】
臨床アウトカムに関して、５例のＰＲ、５例の最良部分奏効（ＶＧＰＲ）、１例の完全奏効（ＣＲ）及び１例の厳密完全奏効（ｓＣＲ）を含め、コホート１の４／９例（４４％）、コホート２の１／５例（２０％）及びコホート３の７／１１例（６３％）の対象に客観的奏効（部分奏効（ＰＲ）以上）が確認された（図４７Ａ〜図４７Ｃ）。従って全奏効率は１２／２５例（４８％）であり、１〜５×１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の有効性の高い方の用量では１１／２０例（５５％）であった。５例の別の対象は最小奏効（ＭＲ）を有した。髄外疾患を有した７例中４例の対象が奏効を示した（図３２Ｂ）。４例の対象（０１、０３、１５、１９）は、１及び／又は３ヵ月目に、注入後骨髄穿刺液からのフローサイトメトリー（推定感度１０−５）により検出可能な骨髄腫を有しなかった（即ちＭＲＤ陰性）。最初に奏効するまでの時間の中央値は１４日であった。カプラン・マイヤー推定に基づけば、奏効期間中央値（ＰＲ以上について）は１２４．５日（範囲２９〜９３９＋）であった（図５３Ａ）。データカットオフ時点で３例の対象（０１、１９、３３）が、それぞれ９５３、４２７及び３２２日（約３２、１４及び１１ヵ月）の時点で依然として無増悪であった。他の対象は全て増悪しており、無増悪生存期間（ＰＦＳ）中央値は、コホート１、２及び３について、それぞれ６５、５７及び１２５日である（図５３Ｃ）。データカットオフ時点で１３例の対象が死亡しており、全対象の全生存期間中央値は５０２日（図５３Ｂ）であり、コホート１、２及び３については、それぞれ３５９日、５０２日及び未到達であった（図４７Ｄ）。
【０９６６】
注入を受けた全ての対象が、末梢血中にｑＰＣＲにより検出可能なＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞を有し（図４８Ａ〜図４８Ｃ）、２４／２５例が、フローサイトメトリーにより検出可能なＣＡＲ＋  Ｔ細胞を有した（図５４Ａ〜図５４Ｃ；代表的な染色について図３８）。拡大のピークは概して１０〜１４日目であり、Ｃｙコンディショニングあり且つＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞が高用量のコホート３で最も一様であるように見える一方、コホート１及び２ではより不均一であったが、この差は統計的有意性に達しなかった（図４８Ｄ）。注入された製剤中ではＣＤ４＋  Ｔ細胞が優勢であるにも関わらず、血中を循環するＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞は優勢にはＣＤ８＋であって、高度に活性化しており、ピーク拡大時に中央値９４％（範囲２１〜９４％）のＣＡＲ＋ＣＤ３＋細胞がＨＬＡ−ＤＲを発現した（表４５）。骨髄穿刺液中のＣＡＲＴ−ＢＣＭＡレベルは、概して末梢血中のものを反映し、対象０３については胸水及び脳脊髄液中でも且つ対象２７からの胸水中でも上昇したことから、広範囲に及ぶ輸送が実証される（表４６）。ピーク拡大後、大多数の患者でｑＰＣＲによるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞レベルは対数線形的に低下し（図４８Ａ〜図４８Ｃ）、試験した２０／２０例（１００％）の対象において注入後３ヵ月、試験した１４／１７例（８２％）において６ヵ月の時点でなおも検出可能であった。対象０１（厳密ＣＲ）は、注入後２．５年の時点で最後に試験したときも引き続きｑＰＣＲにより検出可能な細胞を有していた。
【０９６７】
ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入前及び注入後に末梢血清中の３０種のサイトカインを定量化した。これらのうちの１９種は２例以上の対象においてベースラインと比べて５倍超増加し、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、インターフェロン−γによって誘導されるモノカイン（ＭＩＧ、ＣＸＣＬ９）、ＩＰ−１０、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−１受容体拮抗薬（ＩＬ−１ＲＡ）について最も高頻度の増加が認められた（図５５）。重症度の高いＣＲＳ（グレード３／４又はトシリズマブの投与を受けているグレード２）は複数のサイトカインの増加に関連し（表４７）、ＩＬ−６、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２受容体α（ＩＬ２−Ｒα）、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１α）及びＩＬ−１５と最も有意な関連性があった（図４９Ａ〜図４９Ｅ）。神経毒性は、ＩＬ−６、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１ＲＡ及びＭＩＰ−１αの増加と最も強い関連性があった（図４９Ｆ〜図４９Ｉ、完全な分析については表４８を参照されたい）。ピークサイトカイン増加倍数について、同じ用量のＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の投与を受けた、それぞれＣｙコンディショニングあり又はなしのコホート１とコホート３との間に有意差は認められなかった（図５５）。
【０９６８】
ｓＢＣＭＡ並びにそのリガンドＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬの血清濃度も評価した。健常ドナー（ＨＤ）のパネルと比較して、登録された対象はベースライン時に有意なｓＢＣＭＡの上昇及びＡＰＲＩＬレベルの低下があり、対象間で大きいばらつきがあった（図５０Ａ）。対象のＢＡＦＦ濃度には、ＨＤと比べて有意差はなかった。血清ｓＢＣＭＡの連続評価からはＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ注入後の低下が示され、これは非奏効対象と比較して奏効対象でより顕著であり（図５０Ｂ）、これは対象が進行性疾患を発症したことに伴い増加したことから、血清ｓＢＣＭＡ濃度が骨髄腫の疾患負荷の評価に有用な補助的バイオマーカーであり得ることが示唆される。
【０９６９】
２０例の対象が、ＭＭ細胞上のＢＣＭＡ表面発現に関して処置前の新鮮な骨髄穿刺液に対して実施されるフローサイトメトリーにより判定可能であり、全例についてＢＣＭＡ発現を検出可能であったが、但し強度は様々であった（平均蛍光強度（ＭＦＩ）中央値＝３７４１、範囲２０６〜２４８４２；代表的なゲーティングについては、図４２を参照されたい）。１ヵ月（ｎ＝１６）、３ヵ月（ｎ＝８）及び／又は５．５ヵ月（ｎ＝１）のいずれかの時点における判定可能な連続ＢＣＭＡ発現を有した１８例の対象のうち（図５０Ｃ）、１２例（６７％）は、８／９例の奏効例及び４／９例の非奏効例を含め、少なくとも１つの注入後時点においてＢＣＭＡ強度の低下があった（図５０Ｄ）。ＢＣＭＡ強度はＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ後１ヵ月の残留ＭＭ細胞上で最も低く、続く試験で全例ではないがほとんどの対象がベースラインに向かって再び増加した。個人別の対象の詳細を表４９に提供する。
【０９７０】
奏効は、ｑＰＣＲによるピーク拡大（≧ＰＲについて中央値７５３３９コピー／μｇ  ＤＮＡ対＜ＰＲについて６３６８コピー／μｇ、ｐ＝０．０００２）並びに最初の２８日間にわたる、曲線下面積（ＡＵＣ０−２８ｄ）により測定したときの持続性（≧ＰＲについて中央値５６１７９６コピー×日数／μｇ  ＤＮＡ対＜ＰＲについて５２３９１コピー×日数／μｇ  ＤＮＡ、ｐ＝０．０００２）と有意に関連した（図５１Ａ〜図５１Ｂ）。拡大及び奏効の両方が、重症度の高いＣＲＳ（グレード３／４又はトシリズマブを必要とするグレード２）のセッティングにある可能性が高い（図５１Ｃ〜図５１Ｄ）。拡大も奏効も、年齢、診断からの年数、前療法ライン数、ｄｅｌ１７ｐ又はＴＰ５３突然変異の存在、五重難治性であること、フェレーシス前の直近の療法、骨髄ＭＭ細胞比率、ベースライン血清ｓＢＣＭＡ濃度又はＭＭ細胞ＢＣＭＡ強度との有意な関連性はなかった（図５６Ａ〜５６Ｌ及び図５７Ａ〜５７Ｌ）。
【０９７１】
拡大及び／又は奏効と潜在的に関連性のある他の処置前特性を探索するため、製造前、製造中及び製造の終了時におけるＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ製剤の特徴を分析した。製造前の白血球アフェレーシス産物のＣＤ４／ＣＤ８  Ｔ細胞比が高いほど、より大きいインビボＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大（図５１Ｅ）及びそれより程度は低いが奏効（図５１Ｆ）に関連した一方、白血球アフェレーシス産物中のＣＤ３＋、ＣＤ４＋若しくはＣＤ８＋  Ｔ細胞絶対数又は製造の終了時における最終的なＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ製剤中のＣＤ４／ＣＤ８比は関連しなかった（データは示さず）ことが分かった。製造中の播種細胞の拡大倍数もインビボＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ拡大と相関しており（図５１Ｇ）、インビトロ増殖能がインビボ活性を予測し得ることが示唆される。最後に、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞で処置した対象の白血球アフェレーシス産物中のＣＤ８＋  Ｔ細胞を調べ、ＣＤ２７＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ８＋  Ｔ細胞頻度が高い対象ほど、インビボ拡大及び臨床奏効がロバストである可能性が高いことが分かった（図５１Ｈ〜図５１Ｉ）。
【０９７２】
考察
ＣＡＲ  Ｔ細胞療法は、それを反復及び／又は継続投与が必要な他の療法と区別する、単回処置後に持続性のある疾患制御をもたらす潜在能力のある、Ｂ細胞悪性腫瘍に対する有望な治療選択肢として現れつつある。本報告では、リンパ球枯渇化学療法後に至適用量（＞１０８  ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞）で処置された７／１１例（６３％）を含め、１２／２５例の対象（４８％）が部分奏効以上を達成したことに伴い、進行した難治性骨髄腫におけるＣＡＲ  Ｔ細胞療法の潜在的能力が実証された。３例の対象は、２．５年の時点でｓＣＲが継続中の１例を含め、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ療法から１１ヵ月より後にも寛解が継続中であった。高腫瘍負荷、急速進行性疾患及び高リスク遺伝学的因子を含めた、登録された対象の骨髄腫の極めて有害な生物学的特徴を所与とすれば、これは注目に値する。この臨床活性は、ＢＣＭＡが骨髄腫における極めて魅力的な標的であることの更なる確証となる。重要なことに、先行研究と異なり、この研究がＢＣＭＡ低発現又は高腫瘍負荷の患者を除外しなかったとともに、先行研究のＣｙ＋フルダラビンと比較して、リンパ球枯渇なし又はＣｙ単独のいずれかを用いたという事実にも関わらず、この活性は見られた（Ａｌｉ  ＳＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２０１６；１２８（１３）：１６８８−７００；Ｂｒｕｄｎｏ  ＪＮ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１８；３６（２２）：２２６７−８０）。ベースラインＴ細胞リンパ球減少症にも関わらず、全ての対象からＣＡＲ  Ｔ細胞製剤を製造することに成功し、同様に全例で生着が見られたが、但しＣＡＲ  Ｔ細胞のピークレベル及び持続性は対象間で大きく異なった。
【０９７３】
本研究では、奏効はインビボ拡大の程度と相関し、次には拡大が、より高い製造前ＣＤ４／ＣＤ８  Ｔ細胞比、製造前ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ２７＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞頻度及び製造中のインビトロ増殖の大きさと関連した。このことから、有効性の高いＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ製剤は、低分化の、よりナイーブな且つ／又は幹細胞メモリー様のＴ細胞コンパートメントを有する対象に由来し得ることが示唆される。これらのデータは、処置前の表現型上及び／又は機能上のＴ細胞特性がＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ療法に対する奏効の予測に役立ち得ることを示唆している。これらのデータは、その疾患経過のより早期に、Ｔ細胞が本質的に「適合型」であり得るときに患者を処置すること又はより有利な表現型のＣＡＲ＋  Ｔ細胞が生じるように製造技法を修正することが有効性を高め得ることも示唆している。
【０９７４】
ヒトにおけるＣＡＲ  Ｔ細胞を含めた腫瘍特異的Ｔ細胞の養子移入の成功例は、最も一般的には、何らかの形のリンパ球枯渇コンディショニング後に行われており（Ｔｕｒｔｌｅ  ＣＪ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１６；８（３５５）：３５５ｒａ１１６；Ｍａｕｄｅ  ＳＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１４；３７１（１６）：１５０７−１７；Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１５；７（３０３）：３０３ｒａ１３９；Ｄｕｄｌｅｙ  ＭＥ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００８；２６（３２）：５２３３−９）、これは、とりわけ、利用可能な恒常性サイトカインの増加につながる細胞「シンク」の減少及び調節性Ｔ細胞などのサプレッサー細胞集団の枯渇を含め、複数の潜在的機構によってＴ細胞媒介性抗腫瘍免疫を亢進させることが実証されている（Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００６；６（５）：３８３−９３）。本研究は、コホート１の対象０１及び０３で見られるとおり、ロバストで持続的なＣＡＲ  Ｔ細胞拡大及び臨床活性にリンパ球枯渇が絶対必要なわけではないことを実証する。しかしながら、対象がＣｙコンディショニングを受けたコホート３では、コホート１と比較して一貫性の高い短期拡大が認められ（図４８Ａ及び４８Ｃ）、リンパ球枯渇が養子移入後のＣＡＲ−Ｔ細胞動態に及ぼす効果が実証された。リンパ球枯渇を改良すると（例えば、Ｃｙにフルダラビンを加える）、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の活性が更に増大し得る可能性がある。
【０９７５】
ＢＣＭＡ標的化ＣＡＲ  Ｔ細胞の重要な未解決の問題は、最適な認識及び殺傷に必要なＭＭ細胞上でのＢＣＭＡ発現の閾値があるかどうかである。既報告のＮＣＩ試験では、ＩＨＣによりＢＣＭＡ染色されたプレスクリーニング済みの骨髄生検のうち、その予め指定された適格性に関する閾値を満たしたのは５２／８５例（６２％）であり、即ち潜在的に適格であるＭＭ患者の３分の１超が除外されたであろうことを意味する（Ａｌｉ  ＳＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２０１６；１２８（１３）：１６８８−７００）。本研究では、適格性要件としていかなる特定のＢＣＭＡレベルも要求することなく、全ての対象でフローサイトメトリーによりＭＭ細胞ＢＣＭＡ発現が同定されており、これは、この目的上フローサイトメトリーはＩＨＣよりも感度が高いという最近のデータと一致している（Ｓａｌｅｍ  ＤＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ  ２０１８；７１：１０６−１１）。本研究では、フローサイトメトリーによるベースラインＢＣＭＡ強度は、拡大又は奏効のいずれとも相関がなく（図５６Ａ〜５６Ｌ及び図５７Ａ〜５７Ｌ）、ベースラインＢＣＭＡ発現に基づいて患者を除外する必要はない可能性が高いことが示唆された。
【０９７６】
本研究の数例の対象からの残留ＭＭ細胞においてＣＡＲ  Ｔ細胞療法後にＢＣＭＡ強度が有意に減少しており（図５０Ａ〜図５０Ｄ）、ＭＭ細胞上のＢＣＭＡ表面発現について認められたこのダイナミクスから、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ療法に対する抵抗性に関する今後の研究の重要分野が浮かび上がる。ＮＣＩ研究でも、少なくとも１例の対象でＢＣＭＡ発現の下方制御が認められたことから（Ｂｒｕｄｎｏ  ＪＮ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１８；３６（２２）：２２６７−８０）、それがＭＭ細胞によるＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞療法からの一般的なエスケープ手段であり得ることが示唆される。ほとんどの対象で、続いて進行時に表面ＢＣＭＡ発現が増加したことから、細胞表面からのシェディングの増加など、転写又は翻訳後機構が示唆される。代わりに、ＢＣＭＡ−ｄｉｍ／陰性クローナル変異体の免疫選択があって、続いてＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ細胞の喪失時にそれが残留ＢＣＭＡ＋クローンに打ち負かされることがあり得る。これは、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ後に進行するほとんどの患者が依然として追加のＢＣＭＡターゲット療法の候補であり得ることを示唆している。
【０９７７】
ＣＡＲ  Ｔ細胞の一次毒性は、依然としてサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）及び神経毒性である。本研究におけるＣＲＳの頻度及び重症度は、ＣＤ１９標的化ＣＡＲ  Ｔ細胞試験（Ｍａｕｄｅ  ＳＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１４；３７１（１６）：１５０７−１７；Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１５；７（３０３）：３０３ｒａ１３９）において報告されたものと同程度であり、ＩＬ−６受容体遮断療法によって消失した。患者数は少ないが、ＣＡＲ  Ｔ細胞用量を同じままとしたとき、ピーク血清サイトカインの増加についてＣｙリンパ球枯渇あり又はなしで有意差はないように見えた（コホート１対３、図５５）。しかしながら、興味深いことに、本研究におけるＩＬ−６及び幾つかの他のサイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−１７）のピーク増加倍数中央値は、ＮＣＩ  ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞研究（Ｂｒｕｄｎｏ  ＪＮ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１８；３６（２２）：２２６７−８０）で報告されたものと比べて、本研究の方が腫瘍負荷が高かったにも関わらず１〜２桁低かった。ＮＣＩ  ＣＡＲ構築物に使用されたようなＣＤ２８ドメインは、本ＣＡＲ構築物に使用されたとおりの４−１ＢＢドメインと比べてより急速なＣＡＲ  Ｔ細胞増殖及びサイトカイン放出と関連付けられており（Ｍｉｌｏｎｅ  ＭＣ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２００９；１７（８）：１４５３−６４）、そのためこの差の一つの説明は、これらの２つのＣＡＲ構築物中に使用された共刺激ドメインであり得る。しかしながら、患者の少なさ並びに組入れ基準、用量、スケジュール及びリンパ球枯渇レジメンに関するこれらの研究間の複数の違いが妨げとなって、確定的結論を出すことはできない。
【０９７８】
神経毒性は、一部のＣＡＲ  Ｔ細胞試験では最大５０％の対象に報告されており（Ｔｕｒｔｌｅ  ＣＪ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１６；８（３５５）：３５５ｒａ１１６；Ｔｕｒｔｌｅ  ＣＪ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２０１６；１２６（６）：２１２３−３８；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ＪＮ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１５；３３（６）：５４０−９）；ＣＲＳと同時又はその後に起こり得るもので；多くの場合にトシリズマブでは改善せず；及び全てではないが、ほとんどの症例で回復可能である。神経毒性は、ＣＲＳの早期発症並びに恐らくＣＮＳ血管透過性の増加につながる、血清中及びＣＮＳ内の両方における炎症性サイトカインの急激な上昇と関連付けられている（Ｇｕｓｔ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ  ２０１７）。これと一致して、本研究では、本研究における神経毒性と最も高い関連性があるものとして、ＩＬ−６、ＩＦＮ−γ及びＭＩＰ−１αのピーク血清の増加が同定された（図４９Ａ〜図４９Ｉ）。興味深いことに、神経毒性は、ＣＡＲ  Ｔ細胞関連神経毒性に関係があるとされている、ＩＬ−１α及びＩＬ−１βの炎症誘発作用の内因性阻害因子であるＩＬ−１ＲＡのピーク増加倍数とも関連性があった（Ｇｉａｖｒｉｄｉｓ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１８；２４（６）：７３１−８；Ｎｏｒｅｌｌｉ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１８；２４（６）：７３９−４８）。これは恐らく、神経毒性を有する患者における（最終的には無効な）フィードバック機構の誘導を反映しており、前臨床モデルで実証されているとおり（Ｇｉａｖｒｉｄｉｓ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１８；２４（６）：７３１−８；Ｎｏｒｅｌｌｉ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１８；２４（６）：７３９−４８）、このセッティングで組換えＩＬ−１ＲＡアナキンラによるＩＬ−１遮断の増強は治療利益があり得ることを示唆している。対象０３のＰＲＥＳ様症候群の急速な回復を実証する本研究は、ステロイド難治性症例ではシクロホスファミドも選択肢となり得ることを示唆している。
【０９７９】
要約すれば、完全ヒトＢＣＭＡ特異的ＣＡＲを発現する自家Ｔ細胞は、進行した難治性ＭＭの対象において、リンパ球枯渇化学療法あり及びなしの両方で拡大し、客観的奏効を生じさせることができており、有望な新規治療手法に相当する。毒性プロファイルは、Ｂ細胞悪性腫瘍におけるＣＤ１９特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞で見られるものと同程度であるように思われる。課題としては、製造中の疾患進行、ＢＣＭＡ発現の変化に起因する抗原エスケープの可能性及び奏効の持続性が挙げられる。前処置歴が少ない／難治性の患者集団、二重抗原ターゲティングＣＡＲ構築物、新規のリンパ球枯渇レジメン又は製造プロトコル並びに既製品のＣＡＲＴ製剤を探索する続く研究において、この手法の安全性及び長期有効性が更に最適化され得る。
【０９８０】
補足方法
フローサイトメトリー用の試薬及びプロトコル：ＣＡＲ  Ｔ細胞検出パネルの抗体は、抗ＣＤ４５  Ｖ４５０（クローンＨＩ３０）、抗ＣＤ１４  Ｖ５００（クローンＭ５Ｅ２）、抗ＣＤ５６  Ａｘ４８８（クローンＢ１５９）、抗ＣＤ４  ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（クローンＲＰＡ−Ｔ４）、抗ＣＤ８  ＡＰＣ−Ｈ７（クローンＳＫ１）（全てＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから）であった。また、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄからの抗ＣＤ３  ＢＶ６０５（クローンＯＫＴ３）、抗ＨＬＡ−ＤＲ  ＢＶ７１１（クローンＬ２４３）、抗ＣＤ１９  ＰＥ−Ｃｙ７（クローンＨ１Ｂ１９）も使用した。ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ発現は、ビスビオチン化ＢＣＭＡ−Ｆｃ  組換えタンパク質及びＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅからの二次染色試薬ストレプトアビジン−ＰＥ（カタログ番号５５４０６１）を使用することにより評価した。１％ウシ胎仔血清、０．０２％ナトリウムアジド及びビスビオチン化ＢＣＭＡ−Ｆｃを含有する１００μＬ  ＰＢＳに細胞を再懸濁し、氷上で３０分間インキュベートし、洗浄し、１％ウシ胎仔血清、０．０２％ナトリウムアジド、表面抗体及びＳＡ−ＰＥを含有する１００μＬ  ＰＢＳに再懸濁し、且つ氷上で３０分間インキュベートし、洗浄し、１％ウシ胎仔血清及び０．０２％ナトリウムアジドを含有する２５０ｕｌ  ＰＢＳに再懸濁し、紫色（４０５ｎｍ）、青色（４８８ｎｍ）、緑色（５３２ｎｍ）及び赤色（６２８ｎｍ）レーザーを備えたＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用して捕捉した。データはＦｌｏｗＪｏソフトウェア（バージョン１０、Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用して分析した。ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＵｌｔｒａＣｏｍｐ  ｅＢｅａｄｓ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  カタログ番号０１−２２２−４２）及びＤＩＶＡソフトウェアを使用して補償値を作成した。
【０９８１】
定量的ＰＣＲ：全血又は骨髄穿刺液から直接ゲノムＤＮＡを単離し、末梢血及び骨髄試料について１時点当たり２００ｎｇのゲノムＤＮＡのトリプリケートを使用して、Ｋａｌｏｓ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１１；３（９５）：９５ｒａ７３に記載されるとおり、ＡＢＩ  ＴａｑＭａｎ技術及びバリデートされたアッセイを用いてｑＰＣＲ分析を実施することにより、組み込まれたＣＡＲトランス遺伝子配列を検出した。単位ＤＮＡ当たりのコピー数を決定するため、１００ｎｇの非形質導入対照ゲノムＤＮＡにスパイクした５〜１０６コピーのレンチウイルスプラスミドからなる８ポイント標準曲線を作成した。標準曲線中に存在するプラスミドのコピー数は、同じプライマー／プローブセットによる、且つＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ  ３ＤデジタルＰＣＲ機器（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で実施したデジタルｑＰＣＲを用いて確認した。各データ点（試料及び標準曲線）につきトリプリケートで、レプリケート３例中３例において正のＣｔ値、全ての定量化可能な値について０．９５％未満のパーセント変動係数で判定した。調査下のＤＮＡの品質管理のため、Ｋａｌｏｓ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１１；３（９５）：９５ｒａ７３に記載されるとおり、２０ｎｇのゲノムＤＮＡ及びＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）遺伝子の上流の非転写ゲノム配列に特異的なプライマー／プローブの組み合わせを使用して、並行した増幅反応を実施した。これらの増幅反応から、ＤＮＡ入力計算値対実測値を調整するための補正係数が生成された。１マイクログラムのＤＮＡ当たりのトランス遺伝子のコピーは、式：１マイクログラムのゲノムＤＮＡ当たりのコピー＝（ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ標準曲線から計算されるコピー）×補正係数／（ナノグラム単位での判定したＤＮＡ量）×１０００ｎｇに従って計算した。
【０９８２】
血清サイトカインの測定：ヒトサイトカイン磁気３０プレックスパネル（ＬＨＣ６００３Ｍ）は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓからのものであった。ベースライン及び注入後２８日までの予定された時点において採取した血清試料を−８０℃で凍結保存した。バッチに分けた試料を解凍し、製造者のプロトコルに従って分析した。ＦｌｅｘＭＡＰ  ３Ｄ機器を使用してアッセイプレートを測定し、ｘＰＯＮＥＮＴソフトウェアを使用してデータ収集及び分析を行った。以下の判定基準に基づいてデータ品質を調べた。ｘＰＯＮＥＮＴソフトウェアを使用して、マイナーフィッティングあり又はなしで各分析物の標準曲線が５Ｐ  Ｒ２値＞０．９５を有する。品質管理に合格するには、インハウス対照血清の結果が、試験分析物の２５超についての歴史的インハウス対照データから導出されるＣＩ（信頼区間）の９５％の範囲内になければならなかった。結果が範囲外低値（＜ＯＯＲ）の試料に関して、それ以上の試験は行わなかった。結果が範囲外高値（＞ＯＯＲ）であったか又は標準曲線最大値（ＳＣ  ｍａｘ）の２倍より大きかった試料は、更に高い希釈度で再試験した。上記の品質管理又は再試験に合格した結果が報告された。
【０９８３】
可溶性ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬの測定：ヒトＢＣＭＡ（ＤＹ１９３）、ＡＰＲＩＬ（ＤＹ８８４Ｂ）及びＢＡＦＦ（ＤＴ１２４−０５）の抗体セットは、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓからのものであった。ＥＬＩＳＡビーズストリップ及び４カラムリザーバ（ＳＯＷ−Ａ１６７３５）は、Ａｓｓａｙ  Ｄｅｐｏｔからのものであった。ＥＬＩＳＡ基質ＡＤＨＰ（１００１０４６９）は、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌからのものであった。アッセイプレート（ＯＸ１２６３）は、Ｅ＆Ｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃからのものであった。全てのＥＬＩＳＡ試薬はＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡのプロトコルに従って調製し、但しカラー試薬Ｂは例外で、１００ｕＭのＡＤＨＰを補足した。血清量が限られており、且つＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦにＬｕｍｉｎｅｘアッセイを利用できなかったため、これらの３つの分析物はＥＬＩＳＡビーズストリップを使用して測定した。捕捉抗体（ｃＡＢ）をＥＬＩＳＡプレートのウェルにコーティングする代わりに、それをマクロスフェアの表面上にコーティングし、これにより１００ｕｌの血清を使用して３つ全ての分析物を測定することが可能になった。アッセイプレート中のビーズストリップを使用して、抗体セットのプロトコルに従ってアッセイマップに基づいてアッセイをセットアップした。アッセイの終了時、１００ｕｌ／ウェルの基質溶液（１：１のカラー試薬Ａ及びＡＤＨＰ）を加えることにより、１２本のビーズストリップ当たり１つの基質プレートを調製した。各ビーズストリップをアッセイマップに従って基質プレートの１つのカラムに置いた。発色は１０〜３０分間であった。プレートをＦＬＵＯ  ＳＴＡＲ  ＯＭＥＧＡ機器で読み取った。Ｌｕｍｉｎｅｘデータについて記載されるとおり、データ品質管理を実施した。
【０９８４】
ＢＣＭＡ発現を含めた、骨髄の骨髄腫細胞の評価：短時間の塩化アンモニウム赤血球溶解ステップの後に、骨髄穿刺液材料のフローサイトメトリー評価を穿刺液で直接実施した。手順は、Ｆｌｏｒｅｓ−Ｍｏｎｔｅｒｏ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２０１７；３１（１０）：２０９４−１０３に記載されるとおりのＥｕｒｏＦｌｏｗプロトコルを応用した。簡潔に言えば、最大２ｍｌの骨髄穿刺液を４８ｍｌのＰｈａｒｍ  Ｌｙｓｅ溶液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  カタログ番号５５５８９９）で希釈し、振盪機上で室温において１５分間インキュベートした。次に８００ｇで１０分間の遠心によって細胞を回収し、フローサイトメトリー緩衝液（１％ウシ胎仔血清含有ＰＢＳ）で２回洗浄し、Ｌ／Ｄ  Ａｑｕａ生死判別色素（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  カタログ番号Ｌ３４９５７）で染色した。ＣＤ４５、ＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＣＤ１４、ＣＤ５６、ＣＤ２０、ＣＤ３、ＣＤ２６９（ＢＣＭＡ）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）に対する抗体の混合物で表面染色を行った。ＢＣＭＡ判定にはＦＭＯ（蛍光マイナス１）二次単独対照を使用した。並行して対照として健常ドナーＰＢＭＣ細胞のアリコートを染色した。次に細胞を洗浄した後、Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ試薬（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して室温で２０分間透過処理／固定し、洗浄し、κ及びλ免疫グロブリン軽鎖に対する抗体の混合物で染色した。次に試料を洗浄した後、ＰＢＳに再懸濁し、紫色、青色、緑色及び赤色レーザーを備えた１７カラーＬＳＲ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｏｒｄｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔフローサイトメーター（ＢＤ）で捕捉した。ＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）又はＦＣＳ  Ｅｘｐｒｅｓｓのいずれかを使用してリストモードファイルを分析した。
【０９８５】
【表１３６】
2021509009.tif 000171
【０９８６】
【表１３７】
2021509009.tif 000172
【０９８７】
【表１３８】
2021509009.tif 000173
【０９８８】
【表１３９】
2021509009.tif 000174
【０９８９】
【表１４０】
2021509009.tif 000175
【０９９０】
【表１４１】
2021509009.tif 000176
【０９９１】
【表１４２】
2021509009.tif 000177
【０９９２】
【表１４３】
2021509009.tif 000178
【０９９３】
【表１４４】
2021509009.tif 000179
【０９９４】
【表１４５】
2021509009.tif 000180
【０９９５】
【表１４６】
2021509009.tif 000181
【０９９６】
【表１４７】
2021509009.tif 000182
【０９９７】
【表１４８】
2021509009.tif 000183
【０９９８】
【表１４９】
2021509009.tif 000184
【０９９９】
均等物
本明細書に引用されるあらゆる特許、特許出願及び刊行物の開示は、本明細書によって全体として参照により本明細書に援用される。本発明は、具体的な態様を参照して開示されているが、当業者により、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく本発明の他の態様及び変形形態が考案され得ることが明らかである。添付の特許請求の範囲は、かかる態様及び均等な変形形態の全てを包含すると解釈されることが意図される。
【図１Ａ−１Ｂ】
2021509009.tif 000187
【図２Ａ−２Ｃ】
2021509009.tif 000188
【図３】
2021509009.tif 000189
【図４】
2021509009.tif 000190
【図５】
2021509009.tif 000191
【図６Ａ】
2021509009.tif 000192
【図６Ｂ】
2021509009.tif 000193
【図６Ｃ】
2021509009.tif 000194
【図７Ａ】
2021509009.tif 000195
【図７Ｂ】
2021509009.tif 000196
【図７Ｃ】
2021509009.tif 000197
【図７Ｄ】
2021509009.tif 000198
【図７Ｅ】
2021509009.tif 000199
【図８Ａ】
2021509009.tif 000200
【図８Ｂ】
2021509009.tif 000201
【図８Ｃ】
2021509009.tif 000202
【図８Ｄ】
2021509009.tif 000203
【図８Ｅ】
2021509009.tif 000204
【図９】
2021509009.tif 000205
【図１０】
2021509009.tif 000206
【図１１Ａ】
2021509009.tif 000207
【図１１Ｂ】
2021509009.tif 000208
【図１２Ａ】
2021509009.tif 000209
【図１２Ｂ】
2021509009.tif 000210
【図１３】
2021509009.tif 000211
【図１４】
2021509009.tif 000212
【図１５】
2021509009.tif 000213
【図１６Ａ】
2021509009.tif 000214
【図１６Ｂ】
2021509009.tif 000215
【図１７Ａ−１７Ｃ】
2021509009.tif 000216
【図１８Ａ−１−３】
2021509009.tif 000217
【図１８Ａ−４−６】
2021509009.tif 000218
【図１８Ａ−７−９】
2021509009.tif 000219
【図１８Ｂ−１−３】
2021509009.tif 000220
【図１８Ｂ−４−５】
2021509009.tif 000221
【図１９Ａ−１−３】
2021509009.tif 000222
【図１９Ａ−４−６】
2021509009.tif 000223
【図１９Ａ−７−９】
2021509009.tif 000224
【図１９Ｂ−１−３】
2021509009.tif 000225
【図１９Ｂ−４−５】
2021509009.tif 000226
【図２０Ａ−２０Ｂ】
2021509009.tif 000227
【図２１Ａ−２１Ｂ】
2021509009.tif 000228
【図２１Ｃ−２１Ｄ】
2021509009.tif 000229
【図２２−１】
2021509009.tif 000230
【図２２−２】
2021509009.tif 000231
【図２３Ａ−２３Ｂ】
2021509009.tif 000232
【図２４Ａ−２４Ｂ】
2021509009.tif 000233
【図２５Ａ−２５Ｂ】
2021509009.tif 000234
【図２６Ａ−２６Ｂ】
2021509009.tif 000235
【図２６Ｃ−２６Ｄ】
2021509009.tif 000236
【図２７Ａ−２７Ｃ】
2021509009.tif 000237
【図２８Ａ−２８Ｂ】
2021509009.tif 000238
【図２８Ｃ−２８Ｄ】
2021509009.tif 000239
【図２８Ｅ−２８Ｆ】
2021509009.tif 000240
【図２９−１】
2021509009.tif 000241
【図２９−２】
2021509009.tif 000242
【図３０Ａ−３０Ｂ】
2021509009.tif 000243
【図３１】
2021509009.tif 000244
【図３２Ａ−３２Ｃ】
2021509009.tif 000245
【図３３Ａ−１】
2021509009.tif 000246
【図３３Ａ−２】
2021509009.tif 000247
【図３３Ａ−３】
2021509009.tif 000248
【図３３Ｂ−３３Ｃ】
2021509009.tif 000249
【図３４−１】
2021509009.tif 000250
【図３４−２】
2021509009.tif 000251
【図３４−３】
2021509009.tif 000252
【図３５−１】
2021509009.tif 000253
【図３５−２】
2021509009.tif 000254
【図３５−３】
2021509009.tif 000255
【図３６Ａ−３６Ｂ】
2021509009.tif 000256
【図３６Ｃ−３６Ｄ】
2021509009.tif 000257
【図３７】
2021509009.tif 000258
【図３８】
2021509009.tif 000259
【図３９−１】
2021509009.tif 000260
【図３９−２】
2021509009.tif 000261
【図３９−３】
2021509009.tif 000262
【図４０−１】
2021509009.tif 000263
【図４０−２】
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【図４０−３】
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【図４１Ａ−４１Ｂ】
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【図４２】
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【図４３Ａ−４３Ｂ】
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【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
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【図４５Ａ−４５Ｃ】
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【図４６】
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【図４７Ａ−４７Ｄ】
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【図４８Ａ−４８Ｄ】
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【図４９Ａ−４９Ｉ】
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【図５０Ａ−５０Ｂ】
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【図５０Ｃ−５０Ｄ】
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【図５１Ａ−５１Ｉ】
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【図５２】
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【図５３Ａ−５３Ｄ】
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【図５４Ａ】
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【図５４Ｂ】
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【図５４Ｃ】
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【図５５】
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【図５６Ａ−５６Ｆ】
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【図５６Ｇ−５６Ｌ】
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【図５７Ａ−５７Ｆ】
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【図５７Ｇ−５７Ｌ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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