(57)【要約】  セレンテラジン類似体、当該類似体を作製するための方法、当該類似体を含むキット、及びルシフェラーゼベースのアッセイにおいて当該化合物を発光の検出のために使用する方法が記載される。化合物は、以下の一般構造（Ｉ）及び（ＩＩ）を有し、式中、Ｇは、１、２もしくは３のＲD基により置換されたフラン−２−イル、６員〜１２員のアリール、またはフラン−２−イル以外の５員〜１２員のヘテロアリールであり、アリール及びヘテロアリールは、１、２、３、４または５のＲE基により随意に置換される。2021534211.tif 000340（Ｉ）2021534211.tif 000341（ＩＩ）【選択図】なし
2021534211.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
2021534211.tif 000287
（Ｉ）
またはその互変異性体もしくは塩
［式中、Ｘは、Ｃ1-10アルキル、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ1-4ハロアルキレン−ＯＣ1-4アルキル、Ｃ2-10アルケニル、Ｃ2-10アルキニル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲx1、−ＣＯＮＲx1Ｒx2、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲx1Ｒx2、−ＮＲx3Ｃ（Ｏ）ＯＲx1、−ＯＲx1、−Ｃ1-10アルキレン−ＯＲx1、−ＯＣ（Ｏ）Ｒx1、−ＮＲx1Ｒx2、−Ｃ1-10アルキレン−ＮＲx1Ｒx2；−ＮＲx3Ｃ（Ｏ）Ｒx1、−ＮＲx3Ｃ（Ｏ）ＮＲx1Ｒx2、−ＳＯ2Ｒx1、−ＳＯ2ＮＲx1Ｒx2、−ＮＲx3ＳＯ2Ｒx1、−ＳＯ2ＯＲx1、−ＯＳＯ2Ｒx1、−ＯＳＯ3Ｒx1、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲx1、−ＯＳｉ（Ｃ1-10アルキル）3、−ＯＲx0、−ＯＧE、または−ＮＲx1ＧEであり；
ｍは、０、１、２、３または４であり；
Ｒ1は、各々の出現で、独立してハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA1、−ＮＲB1ＲC1、−ＯＧE、または−ＮＲB1ＧEであり；
２つの隣接するＲ1基、またはＸ及び隣接するＲ1基は、それらが結合されている炭素原子と一緒に、５員〜７員のシクロアルキル、５員〜７員のシクロアルケニル、フェニル、５員〜６員のヘテロアリール、または５員〜７員のヘテロシクリルから選択される縮合環を随意に形成し、前記随意の縮合環は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA1、及び−ＮＲB1ＲC1からなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
ＧEは、各々の出現で、独立して酵素基質を含み、酵素による生物変換は、ＧEをＨへ変換し；
ｎは、０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ2は、各々の出現で、独立してハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA2、または−ＮＲB2ＲC2であり；２つの隣接するＲ2基は、それらが結合されている炭素原子と一緒に、５員〜７員のシクロアルキル、５員〜７員のシクロアルケニル、フェニル、５員〜６員のヘテロアリール、または５員〜７員のヘテロシクリルから選択される縮合環を随意に形成し、前記随意の縮合環は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA2、及び−ＮＲB2ＲC2からなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
ＲA1及びＲA2は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ3-12シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-10アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ3-12シクロアルキル、または−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキルであり、各々のシクロアルキルは、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、及びＣ1-4ハロアルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
ＲB1、ＲB2、ＲC1、及びＲC2は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ3-12シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-10アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ3-12シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキル、−ＳＯ2Ｃ1-10アルキル、−ＳＯ2Ｃ3-12シクロアルキル、または−ＳＯ2Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキルであり、各々のシクロアルキルは、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、及びＣ1-4ハロアルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換されるか；
代替的に、ＲB1及びＲC1及び／またはＲB2及びＲC2は、各々が結合している窒素原子と一緒に、４員〜８員の飽和または部分不飽和のヘテロ環式環を形成し、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、オキソ、−ＯＨ、及び−ＯＣ1-4アルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
Ｇは、１、２もしくは３のＲD基により置換されたフラン−２−イル、６員〜１２員のアリール、またはフラン−２−イル以外の５員〜１２員のヘテロアリールであり、前記アリール及び前記ヘテロアリールは、１、２、３、４または５のＲE基により随意に置換され；
ＲD及びＲEは、各々の出現で、独立してハロゲン、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、または−Ｌ−ＲWであり；
Ｌは、結合、Ｃ1-10アルキレン、または−ＯＣ1-10アルキレン−であり；
ＲWは、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＯＲx4、−ＮＲx4Ｒx5−Ｃ（Ｏ）ＯＲx4、−ＯＣ（Ｏ）Ｒx4、−ＮＲx6Ｃ（Ｏ）Ｒx2、−Ｃ（Ｏ）ＮＲx4Ｒx5、−ＮＲx6Ｃ（Ｏ）ＯＲx4、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲx4Ｒx5、−ＳＯ2Ｒx4、−ＳＯ2ＮＲx4Ｒx5、−ＮＲx6ＳＯ2Ｒx4、−ＯＳＯ2Ｒx4、−ＳＯ2ＯＲx4、−ＯＳＯ3Ｒx4、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲx4、または−ＮＲx6Ｃ（Ｏ）ＮＲx4Ｒx5であり；
Ｒx1、Ｒx2、Ｒx3、Ｒx4、Ｒx5、及びＲx6は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ3-12シクロアルキル、または−Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキルであり、各々のシクロアルキルは、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、及びＣ1-4ハロアルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換されるか；
代替的に、Ｒx1及びＲx2及び／またはＲx4及びＲx5は、各々が結合している窒素原子と一緒に、４員〜８員の飽和または部分不飽和のヘテロ環式環を形成し、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、オキソ、−ＯＨ、及び−ＯＣ1-4アルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
Ｒx0は、糖部分であり；
但し、前記化合物は、
８−ベンジル−２−（４−ヒドロキシベンジル）−６−（３−ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
６−（４−（（８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸；または
６−（４−（（８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸
ではない］。
【請求項２】
Ｇが、１、２または３のＲD基により置換されたフラン−２−イルである、請求項１に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項３】
Ｇが、１、２、３、４または５のＲE基により随意に置換された６員〜１２員のアリールである、請求項１に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項４】
前記アリールが、ハロゲン、−ＯＲx4、Ｃ1-10アルキレン−ＯＲx4、及び−ＯＣ1-10アルキレン−ＳＯ2ＯＲx4からなる群から独立して選択される、１〜３のＲE基により随意に置換されたフェニルである、請求項３に記載の化合物、またはその互変異性体もしくはその塩。
【請求項５】
Ｇが、１、２、３、４または５のＲE基により随意に置換された、フラン−２−イル以外の５員〜１２員のヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物、または互変異性体もしくはその塩。
【請求項６】
Ｇが、
2021534211.tif 000288
、
2021534211.tif 000289
、
2021534211.tif 000290
、または
2021534211.tif 000291
であり、その各々が、１、２または３のＲE基により随意に置換される、請求項１もしくは請求項５に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項７】
Ｇが、
2021534211.tif 000292
、
2021534211.tif 000293
、
2021534211.tif 000294
、
2021534211.tif 000295
、
2021534211.tif 000296
、
2021534211.tif 000297
、
2021534211.tif 000298
、
2021534211.tif 000299
、または
2021534211.tif 000300
である、請求項１に記載の化合物、またはその互変異性体もしく塩。
【請求項８】
Ｘが、ＯＲx1である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項９】
Ｘが、ＮＲx1Ｒx2である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項１０】
Ｒx1及びＲx2が、Ｈである、請求項８もしくは９に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項１１】
Ｘが、−ＯＳｉ（Ｃ1-10アルキル）3である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項１２】
ｍが０である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項１３】
ｍが１であり、Ｒ1がハロゲンである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項１４】
ｎが０である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項１５】
2021534211.tif 000301
、
2021534211.tif 000302
、
2021534211.tif 000303
、
2021534211.tif 000304
、
2021534211.tif 000305
、
2021534211.tif 000306
、
2021534211.tif 000307
、
2021534211.tif 000308
、
2021534211.tif 000309
、
2021534211.tif 000310
、
2021534211.tif 000311
、
2021534211.tif 000312
、
2021534211.tif 000313
、
2021534211.tif 000314
、
2021534211.tif 000315
、及び
2021534211.tif 000316
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項１６】
式（ＩＩ）の化合物
2021534211.tif 000317
（ＩＩ）
またはその互変異性体もしくは塩
［式中、Ｙは、Ｃ1-10アルキル、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ1-4ハロアルキレン−ＯＣ1-4アルキル、Ｃ2-10アルケニル、Ｃ2-10アルキニル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲy1、−ＣＯＮＲy1Ｒy2、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲy1Ｒy2、−ＮＲy3Ｃ（Ｏ）ＯＲy1、−ＯＲy1、−Ｃ1-10アルキレン−ＯＲy1、−ＯＣ（Ｏ）Ｒy1、−ＮＲy1Ｒy2、−Ｃ1-10アルキレン−ＮＲy1Ｒy2；−ＮＲy3Ｃ（Ｏ）Ｒy1、−ＮＲy3Ｃ（Ｏ）ＮＲy1Ｒy2、−ＳＯ2Ｒy1、−ＳＯ2ＮＲy1Ｒy2、−ＮＲy3ＳＯ2Ｒy1、−ＳＯ2ＯＲy1、−ＯＳＯ2Ｒy1、−ＯＳＯ3Ｒy1、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲy1、−ＯＳｉ（Ｃ1-10アルキル）3、−ＯＲy0、−ＯＧE、または−ＮＲy1ＧEであり；
ｐは、０、１、２、３または４であり；
ｑは、０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ3は、各々の出現で、独立してハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA3、−ＮＲB3ＲC3、−ＯＧE、または−ＮＲB3ＧEであり；
２つの隣接するＲ3基、またはＹ及び隣接するＲ3基は、それらが結合されている炭素原子と一緒に、５員〜７員のシクロアルキル、５員〜７員のシクロアルケニル、フェニル、５員〜６員のヘテロアリール、または５員〜７員のヘテロシクリルから選択される縮合環を随意に形成し、前記随意の縮合環は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA3、及び−ＮＲB3ＲC3からなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
ＧEは、各々の出現で、独立して酵素基質を含み、酵素による生物変換は、ＧEをＨへ変換し；
Ｒ4は、各々の出現で、独立してハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA4、または−ＮＲB4ＲC4であり；２つの隣接するＲ4基は、それらが結合されている炭素原子と一緒に、５員〜７員のシクロアルキル、５員〜７員のシクロアルケニル、フェニル、５員〜６員のヘテロアリール、または５員〜７員のヘテロシクリルから選択される縮合環を随意に形成し、前記随意の縮合環は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA4、及び−ＮＲB4ＲC4からなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
ＲA3及びＲA4は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ3-12シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-10アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ3-12シクロアルキル、または−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキルであり、各々のシクロアルキルは、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、及びＣ1-4ハロアルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
ＲB3、ＲB4、ＲC3、及びＲC4は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ3-12シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-10アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ3-12シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキル、−ＳＯ2Ｃ1-10アルキル、−ＳＯ2Ｃ3-12シクロアルキル、または−ＳＯ2Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキルであり、各々のシクロアルキルは、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、及びＣ1-4ハロアルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換されるか；
代替的に、ＲB3及びＲC3及び／またはＲB4及びＲC4は、各々が結合している窒素原子と一緒に、４員〜８員の飽和または部分不飽和のヘテロ環式環を形成し、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、オキソ、−ＯＨ、及び−ＯＣ1-4アルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
Ｒy1、Ｒy2、及びＲy3は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ3-12シクロアルキル、または−Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキルであり、各々のシクロアルキルは、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、及びＣ1-4ハロアルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換されるか；
代替的に、Ｒy1及びＲy2は、各々が結合している窒素原子と一緒に、４員〜８員の飽和または部分不飽和のヘテロ環式環を形成し、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、オキソ、−ＯＨ、及び−ＯＣ1-4アルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
Ｒy0は、糖部分であり；
但し、前記化合物は、
８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（３−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（３−ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
６−（３−アミノフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（ナフタレン−１−イル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（ナフタレン−２−イル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
６−（アントラセン−９−イル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（フェナントレン−９−イル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（キノリン−６−イル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
ｔｅｒｔ−ブチル３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンゾエート；または
３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸
ではない］。
【請求項１７】
２つの隣接するＲ3基、またはＹ及び隣接するＲ3基が、それらが結合されている炭素原子と一緒に、５員〜７員のシクロアルキル、５員〜７員のシクロアルケニル、または５員〜７員のヘテロシクリルから選択される縮合環を随意に形成し、前記随意の縮合環が、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA3、及び−ＮＲB3ＲC3からなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換される、請求項１６に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項１８】
ｐ＋ｑが、０、１、２、３、４、５、６、７、８または９である、請求項１６もしくは１７に記載の化合物、またはその塩の互変異性体。
【請求項１９】
ｐが、１、２、３または４である、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項２０】
ｑが、１、２、３、４または５である、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項２１】
ｑが０である、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項２２】
Ｙが、ニトロ、ＯＲy1、またはＮＲy1Ｒy2である、請求項１６〜２１のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項２３】
Ｙが、ＯＲy1である、請求項１６〜２２のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項２４】
Ｙが、ＮＲy1Ｒy2である、請求項１６〜２２のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項２５】
Ｒy1及びＲy2が、Ｈである、請求項２３または２４に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項２６】
ｐ＋ｑが、０、１または２である、請求項１６〜２５のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項２７】
ｐが１であり、Ｒ3がハロゲンである、請求項１６〜２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項２８】
Ｒ3がフッ素である、請求項１６〜２７のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項２９】
Ｒ4が、各々の出現でハロゲンである、請求項１６〜２８のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項３０】
前記ハロゲンがフッ素である、請求項２９に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項３１】
ｑが１または２、Ｒ4がフッ素である、請求項１６〜３０のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項３２】
ｑが１であり、Ｒ4がＣ1-10アルキルである、請求項１６〜２２８のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項３３】
2021534211.tif 000318
、
2021534211.tif 000319
、
2021534211.tif 000320
、
2021534211.tif 000321
、
2021534211.tif 000322
、
2021534211.tif 000323
、
2021534211.tif 000324
、
2021534211.tif 000325
、
2021534211.tif 000326
、
2021534211.tif 000327
、
2021534211.tif 000328
、
2021534211.tif 000329
、
2021534211.tif 000330
、
2021534211.tif 000331
、
2021534211.tif 000332
、
2021534211.tif 000333
、
2021534211.tif 000334
、
2021534211.tif 000335
、
2021534211.tif 000336
、
2021534211.tif 000337
、
2021534211.tif 000338
、及び
2021534211.tif 000339
からなる群から選択される、請求項１６に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩。
【請求項３４】
請求項１〜３３のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩を含む、キット。
【請求項３５】
ルシフェラーゼをさらに含む、請求項３４に記載のキット。
【請求項３６】
緩衝試薬をさらに含む、請求項３４または３５に記載のキット。
【請求項３７】
サンプルにおける発光を検出する方法であって、
サンプルを、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩と接触させること；
セレンテラジンを利用するルシフェラーゼが前記サンプル中に存在しないならば、前記サンプルを前記ルシフェラーゼと接触させること；及び
発光を検出すること、
を含む、前記方法。
【請求項３８】
前記サンプルが生細胞を含有する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記サンプルが、セレンテラジンを利用するルシフェラーゼを含有する、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
遺伝子導入動物における発光を検出する方法であって、
請求項１〜３３のいずれか１項に記載の化合物、またはその互変異性体もしくは塩を前記遺伝子導入動物へ投与すること；及び
発光を検出すること、を含み；
前記遺伝子導入動物がセレンテラジンを利用するルシフェラーゼを発現する、
前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年８月２３日に出願された米国仮特許出願第６２／７２１，７０８号の優先権を主張するものであり、その内容全体は参照することによって本明細書に完全に援用される。
【０００２】
本開示は、セレンテラジン類似体、セレンテラジン類似体を作製するための方法、及びルシフェラーゼベースのアッセイにおいてセレンテラジン類似体を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
生物発光アッセイは、細胞生理（特に遺伝子発現と関連したプロセス）の調査において広汎に使用される。特に、ルシフェラーゼレポーター酵素は、この分野においてかなり有益なツールであり、今日まで、生物発光アッセイにおいて有用であり得る小さく且つ環境的に非感受性であるルシフェラーゼを得るために、タンパク質操作が熱心になされてきた。全細胞のバイオセンサー測定、ハイスループットスクリーニングを介する薬物探索、及びインビボの画像化（それは生きた細胞中のタンパク質−タンパク質相互作用、アポトーシス、及び細胞生存率の研究も許容する）を可能にする多数の効率的なルシフェラーゼレポーターが存在する。セレンテラジン及びセレンテラジンの類似体を基質として使用するルシフェラーゼは、それらの明るさ及び全細胞適用での採択に起因して、とりわけ最も広く使用される系である。
【発明の概要】
【０００４】
多くの既知のセレンテラジン類似体は、ルシフェラーゼ基質としての有効性及びルシフェラーゼベースのアッセイにおける有用性を限定する欠陥を有している。これらの欠陥としては、細胞毒性、光感受性、熱力学的不安定性、低水溶性、及び低細胞透過性が挙げられる。したがって、改善された特性を備えたセレンテラジン類似体及び当該類似体を合成する方法についての必要性が存在する。
【０００５】
一態様において、式（Ｉ）の化合物、
2021534211.tif 000003
（Ｉ）
またはその互変異性体もしくは塩［式中、
Ｘは、Ｃ1-10アルキル、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ1-4ハロアルキレン−ＯＣ1-4アルキル、Ｃ2-10アルケニル、Ｃ2-10アルキニル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲx1、−ＣＯＮＲx1Ｒx2、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲx1Ｒx2、−ＮＲx3Ｃ（Ｏ）ＯＲx1、−ＯＲx1、−Ｃ1-10アルキレン−ＯＲx1、−ＯＣ（Ｏ）Ｒx1、−ＮＲx1Ｒx2、−Ｃ1-10アルキレン−ＮＲx1Ｒx2；−ＮＲx3Ｃ（Ｏ）Ｒx1、−ＮＲx3Ｃ（Ｏ）ＮＲx1Ｒx2、−ＳＯ2Ｒx1、−ＳＯ2ＮＲx1Ｒx2、−ＮＲx3ＳＯ2Ｒx1、−ＳＯ2ＯＲx1、−ＯＳＯ2Ｒx1、−ＯＳＯ3Ｒx1、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲx1、−ＯＳｉ（Ｃ1-10アルキル）3、−ＯＲx0、−ＯＧE、または−ＮＲx1ＧEであり；
ｍは、０、１、２、３または４であり；
Ｒ1は、各々の出現で、独立してハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA1、−ＮＲB1ＲC1、−ＯＧE、または−ＮＲB1ＧEであり；
２つの隣接するＲ1基、またはＸ及び隣接するＲ1基は、それらが結合されている炭素原子と一緒に、５員〜７員のシクロアルキル、５員〜７員のシクロアルケニル、フェニル、５員〜６員のヘテロアリール、または５員〜７員のヘテロシクリルから選択される縮合環を随意に形成し、随意の縮合環は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA1、及び−ＮＲB1ＲC1からなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
ＧEは、各々の出現で、独立して酵素基質を含み、酵素による生物変換は、ＧEをＨへ変換し；
ｎは、０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ2は、各々の出現で、独立してハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA2、または−ＮＲB2ＲC2であり；２つの隣接するＲ2基は、それらが結合されている炭素原子と一緒に、５員〜７員のシクロアルキル、５員〜７員のシクロアルケニル、フェニル、５員〜６員のヘテロアリール、または５員〜７員のヘテロシクリルから選択される縮合環を随意に形成し、随意の縮合環は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA2、及び−ＮＲB2ＲC2からなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
ＲA1及びＲA2は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ3-12シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-10アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｃ3-12シクロアルキル、または−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキルであり、各々のシクロアルキルは、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、及びＣ1-4ハロアルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
ＲB1、ＲB2、ＲC1、及びＲC2は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ3-12シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-10アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ3-12シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキル、−ＳＯ2Ｃ1-10アルキル、−ＳＯ2Ｃ3-12シクロアルキル、または−ＳＯ2Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキルであり、各々のシクロアルキルは、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、及びＣ1-4ハロアルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換されるか；
代替的に、ＲB1及びＲC1及び／またはＲB2及びＲC2は、各々が結合している窒素原子と一緒に、４員〜８員の飽和または部分不飽和のヘテロ環式環を形成し、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、オキソ、−ＯＨ、及び−ＯＣ1-4アルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
Ｇは、１、２もしくは３のＲD基により置換されたフラン−２−イル、６員〜１２員のアリール、またはフラン−２−イル以外の５員〜１２員のヘテロアリールであり、アリール及びヘテロアリールは、１、２、３、４または５のＲE基により随意に置換され；
ＲD及びＲEは、各々の出現で、独立してハロゲン、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、または−Ｌ−ＲWであり；
Ｌは、結合、Ｃ1-10アルキレン、または−ＯＣ1-10アルキレン−であり；
ＲWは、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＯＲx4、−ＮＲx4Ｒx5−Ｃ（Ｏ）ＯＲx4、−ＯＣ（Ｏ）Ｒx4、−ＮＲx6Ｃ（Ｏ）Ｒx2、−Ｃ（Ｏ）ＮＲx4Ｒx5、−ＮＲx6Ｃ（Ｏ）ＯＲx4、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲx4Ｒx5、−ＳＯ2Ｒx4、−ＳＯ2ＮＲx4Ｒx5、−ＮＲx6ＳＯ2Ｒx4、−ＯＳＯ2Ｒx4、−ＳＯ2ＯＲx4、−ＯＳＯ3Ｒx4、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲx4、または−ＮＲx6Ｃ（Ｏ）ＮＲx4Ｒx5であり；
Ｒx1、Ｒx2、Ｒx3、Ｒx4、Ｒx5、及びＲx6は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ3-12シクロアルキル、または−Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキルであり、各々のシクロアルキルは、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、及びＣ1-4ハロアルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換されるか；
代替的に、Ｒx1及びＲx2及び／またはＲx4及びＲx5は、各々が結合している窒素原子と一緒に、４員〜８員の飽和または部分不飽和のヘテロ環式環を形成し、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、オキソ、−ＯＨ、及び−ＯＣ1-4アルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
Ｒx0は、糖部分であり；
但し、化合物は、
８−ベンジル−２−（４−ヒドロキシベンジル）−６−（３−ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
６−（４−（（８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸；または
６−（４−（（８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル）メチル）−２−クロロフェノキシ）ヘキサン−１−スルホン酸
ではない］
を開示する。
【０００６】
別の態様において、式（ＩＩ）の化合物、
2021534211.tif 000004
（ＩＩ）
またはその互変異性体もしくは塩［式中、
Ｙは、Ｃ1-10アルキル、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ1-4ハロアルキレン−ＯＣ1-4アルキル、Ｃ2-10アルケニル、Ｃ2-10アルキニル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲy1、−ＣＯＮＲy1Ｒy2及び−ＯＣ（Ｏ）ＮＲy1Ｒy2、−ＮＲy3Ｃ（Ｏ）ＯＲy1、−ＯＲy1、−Ｃ1-10アルキレン−ＯＲy1、−ＯＣ（Ｏ）Ｒy1、−ＮＲy1Ｒy2、−Ｃ1-10アルキレン−ＮＲy1Ｒy2；−ＮＲy3Ｃ（Ｏ）Ｒy1、−ＮＲy3Ｃ（Ｏ）ＮＲy1Ｒy2、−ＳＯ2Ｒy1、−ＳＯ2ＮＲy1Ｒy2、−ＮＲy3ＳＯ2Ｒy1、−ＳＯ2ＯＲy1、−ＯＳＯ2Ｒy1、−ＯＳＯ3Ｒy1、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲy1、−ＯＳｉ（Ｃ1-10アルキル）3、−ＯＲy0、−ＯＧE、または−ＮＲy1ＧEであり；
ｐは、０、１、２、３または４であり；
ｑは、０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ3は、各々の出現で、独立してハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA3、−ＮＲB3ＲC3、−ＯＧE、または−ＮＲB3ＧEであり；
２つの隣接するＲ3基、またはＸ及び隣接するＲ3基は、それらが結合されている炭素原子と一緒に、５員〜７員のシクロアルキル、５員〜７員のシクロアルケニル、フェニル、５員〜６員のヘテロアリール、または５員〜７員のヘテロシクリルから選択される縮合環を随意に形成し、随意の縮合環は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA3、及び−ＮＲB3ＲC3からなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
ＧEは、各々の出現で、独立して酵素基質を含み、酵素による生物変換は、ＧEをＨへ変換し；
Ｒ4は、各々の出現で、独立してハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA4、または−ＮＲB4ＲC4であり；２つの隣接するＲ4基は、それらが結合されている炭素原子と一緒に、５員〜７員のシクロアルキル、５員〜７員のシクロアルケニル、フェニル、５員〜６員のヘテロアリール、または５員〜７員のヘテロシクリルから選択される縮合環を随意に形成し、随意の縮合環は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA4、及び−ＮＲB4ＲC4からなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
ＲA3及びＲA4は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ3-12シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-10アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｃ3-12シクロアルキル、または−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキルであり、各々のシクロアルキルは、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、及びＣ1-4ハロアルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
ＲB3、ＲB4、ＲC3、及びＲC4は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ3-12シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-10アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ3-12シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキル、−ＳＯ2Ｃ1-10アルキル、−ＳＯ2Ｃ3-12シクロアルキル、または−ＳＯ2Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキルであり、各々のシクロアルキルは、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、及びＣ1-4ハロアルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換されるか；
代替的に、ＲB3及びＲC3及び／またはＲB4及びＲC4は、各々が結合している窒素原子と一緒に、４員〜８員の飽和または部分不飽和のヘテロ環式環を形成し、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、オキソ、−ＯＨ、及び−ＯＣ1-4アルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
Ｒy1、Ｒy2、及びＲy3は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、Ｃ3-12シクロアルキル、または−Ｃ1-3アルキレン−Ｃ3-12シクロアルキルであり、各々のシクロアルキルは、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、及びＣ1-4ハロアルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換されるか；
代替的に、Ｒy1及びＲy2は、各々が結合している窒素原子と一緒に、４員〜８員の飽和または部分不飽和のヘテロ環式環を形成し、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、オキソ、−ＯＨ、及び−ＯＣ1-4アルキルからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換され；
Ｒy0は、糖部分であり；
但し、化合物は、
８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（３−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（３−ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
６−（３−アミノフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（ナフタレン−１−イル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（ナフタレン−２−イル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
６−（アントラセン−９−イル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（フェナントレン−９−イル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（キノリン−６−イル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン；
ｔｅｒｔ−ブチル３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンゾエート；または
３−（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−３−オキソ−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸
ではない］
を開示する。
【０００７】
化合物を作製する方法、化合物を含むキット、及びルシフェラーゼベースのアッセイにおいてルシフェラーゼ基質として化合物を使用する方法も開示する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】濾過前（上清）及び濾過後（濾液）の、エタノール／プロピレングリコール／ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン／ＰＥＧ４００／水（１０：１０：１０：３５：３５）中の８．７ｍＭのＪＷ−１０４０についてのＵＶ吸光度スペクトルを示す。
【図２】濾過前（上清）及び濾過後（濾液）の、エタノール／プロピレングリコール／ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン／ＰＥＧ４００／水（１０：１０：１０：３５：３５）中の８．７ｍＭのフリマジンについてのＵＶ吸光度スペクトルを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本明細書において開示されるのは、セレンテラジン類似体である。セレンテラジン類似体は、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物であり得、発光を産生するためにセレンテラジンを利用するタンパク質（「セレンテラジンを利用する酵素」）のための有用な基質であり得、ルシフェラーゼ、及び刺胞動物（例えばＲｅｎｉｌｌａ属のルシフェラーゼ）、クラゲ（例えばＡｅｑｕｏｒｅａ属のクラゲからのエクオリン）、及び十脚類のルシフェラーゼ（例えばＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ  ｇｒａｃｉｌｉｒｏｓｔｒｉｓのルシフェラーゼ複合体）等の様々な海洋生物において見出される発光タンパク質が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１０】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、フリマジンに比較して、改善された水溶性を提示する。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、６−フェニル基のパラ位において類似した置換を備えたセレンテラジン化合物に比較して、改善された生物発光シグナル動態を提示する。したがって、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、インビボの発光画像化適用だけでなく、生物発光を利用する他の適用に有用であり得る。
【００１１】
１．定義
別段定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語及び科学用語は、当業者によって共通して理解されるものと同じ意味を有する。矛盾する事例において、定義を含めて本文書が優先されるだろう。好ましい方法及び材料が以下に記載されるが、本明細書において記載されるものに類似または等価の方法及び材料が本発明の実践または試験において使用され得る。本明細書において言及されるすべての出版物、特許出願、特許、及び他の参照文献は、それらの全体を参照することによって援用される。本明細書において開示される材料、方法、及び実施例は、単に例示的なものであり、限定することは意図されない。
【００１２】
本明細書において使用される時、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ））」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「し得る（ｃａｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ（ｓ））」という用語、及びその変形は、追加の動作または構造の可能性を除外しないオープンエンドの移行句、用語、または単語であることが意図される。単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈による明確な別段の定めがない限り、複数の参照物を包含する。本開示は、明示的に説明されているか否かにかかわらず、本明細書において提示される実施形態または要素「を含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」、他の実施形態も企図する。
【００１３】
量と関連して使用される「約」という修飾語は、規定値を包含し、文脈によって定められる意味を有する（例えばそれは、特定の量の測定と関連する誤差の程度を少なくとも包含する）。「約」という修飾語は、２つのエンドポイントの絶対値によって定義される範囲の開示としても判断されるべきである。例えば、「約２〜約４」という表現は、「２〜４」範囲も開示する。「約」という用語は、示された数のプラスまたはマイナス１０％を指し得る。例えば、「約１０％」は９％〜１１％の範囲を示し、「約１」は０．９〜１．１を意味し得る。「約」の他の意味は、四捨五入等の文脈から明らかになり得るため、例えば「約１」は、０．５〜１．４の意味を有し得る。
【００１４】
具体的な官能基及び化学用語の定義は、以下でより詳細に記載される。本開示の目的のために、化学元素は、Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈ  Ｅｄ．の内表紙に従って同定され、具体的な官能基は、概してその中で記載される通りに定義される。追加で、有機化学の一般的な原理だけでなく、具体的な官能基及び反応性は、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，１９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７中で記載され、その各々の内容全体は参照として本明細書に援用される。
【００１５】
「アルキル」という用語は、本明細書において使用される時、直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素鎖を意味する。「低級アルキル」または「Ｃ1-6アルキル」という用語は、１〜６の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の炭化水素を意味する。「Ｃ1-4アルキル」という用語は、１〜４の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素を意味する。アルキルの代表的な例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、３−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、及びｎ−デシルが挙げられるがこれらに限定されない。
【００１６】
「アルケニル」という用語は、本明細書において使用される時、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する直鎖または分岐鎖の炭化水素鎖を意味する。
【００１７】
「アルキニル」という用語は、本明細書において使用される時、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含有する炭化水素鎖を意味する。
【００１８】
「アルキレン」という用語は、本明細書において使用される時、例えば１〜６の炭素原子の、直鎖または分岐鎖の飽和鎖炭化水素に由来する二価の基を指す。アルキレンの代表的な例としては、−ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、及び−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１９】
「アリール」という用語は、本明細書において使用される時、フェニル、または親分子部分へ付加され、且つシクロアルキル基へ縮合されたフェニル（例えばインダニル）、フェニル基へ縮合されたフェニル（すなわちナフチル）、もしくは非芳香族ヘテロ環へ縮合されたフェニル（例えばベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）を指す。
【００２０】
「シクロアルキル」という用語は、本明細書において使用される時、ヘテロ原子及び二重結合を含有しない炭素環系を指す。シクロアルキルの代表的な例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、アダマンチル、及びビシクロ［１．１．１］ペンタニルが挙げられるがこれらに限定されない。
【００２１】
「シクロアルケニル」という用語は、本明細書において使用される時、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有し、好ましくは１つの環あたり５〜１０の炭素原子を有する、非芳香族の単環式または多環式の全炭素環系を意味する。例示的な単環式シクロアルケニル環としては、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、またはシクロヘプテニルが挙げられる。
【００２２】
「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、本明細書において使用される時、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、またはＦを意味する。
【００２３】
「ハロアルキル」という用語は、本明細書において使用される時、１、２、３、４、５、６、７、または８の水素原子が、ハロゲンによって置き換えられた、本明細書において定義されるアルキル基を意味する。
【００２４】
「ヘテロアリール」という用語は、本明細書において使用される時、芳香族単環式ヘテロ原子含有環（単環式ヘテロアリール）、または少なくとも１つの単環式ヘテロアリールを含有する二環式環系（二環式ヘテロアリール）を指す。単環式ヘテロアリールは、Ｎ、Ｏ及びＳからなる群から独立して選択される少なくとも１つのヘテロ原子（例えばＯ、Ｓ及びＮから独立して選択される１、２、３、または４のヘテロ原子）を含有する、５員環または６員環である。５員の芳香族単環式環は２つの二重結合を有し、６員の芳香族単環式環は３つの二重結合を有する。二環式ヘテロアリールは、単環式芳香族の、飽和の、もしくは部分飽和の炭素環、単環式ヘテロアリール、または単環式ヘテロ環へ縮合された、単環式ヘテロアリール環を有する８員〜１２員の環系である。二環式ヘテロアリールは、芳香族環原子で親分子部分へ結合される。ヘテロアリールの代表的な例としては、インドリル（例えばインドール−１−イル、インドール−２−イル、インドール−４−イル）、ピリジニル（ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イルが挙げられる）、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル（例えばピラゾール−４−イル）、ピロリル、ベンゾピラゾリル、１，２，３−トリアゾリル（例えばトリアゾール−４−イル）、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、イミダゾリル、チアゾリル（例えばチアゾール−４−イル）、イソチアゾリル、チエニル、ベンズイミダゾリル（例えばベンズイミダゾール−５−イル）、ベンゾチアゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンズオキサジアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、フラニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、プリニル、イソインドリル、キノキサリニル、インダゾリル（例えばインダゾール−４−イル、インダゾール−５−イル）、キナゾリニル、１，２，４−トリアジニル、１，３，５−トリアジニル、イソキノリニル、キノリニル、６，７−ジヒドロ−１，３−ベンゾチアゾリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル（例えばイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−６−イル）、ナフチリジニル、ピリドイミダゾリル、チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル、チアゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン−２−イルが挙げられるがこれらに限定されない。
【００２５】
「ヘテロ環」または「ヘテロ環式」という用語は、本明細書において使用される時、単環式ヘテロ環、二環式ヘテロ環、または三環式ヘテロ環を意味する。単環式ヘテロ環は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から独立して選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含有する、３員、４員、５員、６員、７員、または８員の環である。３員または４員の環は、０または１つの二重結合、ならびにＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１つのヘテロ原子を含有する。５員環は、０または１つの二重結合、ならびに１、２または３のＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択されるヘテロ原子を含有する。６員環は、０、１または２の二重結合、ならび１、２または３のＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択されるヘテロ原子を含有する。７員及び８員の環は、０、１、２または３の二重結合、ならびにＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１、２または３のヘテロ原子を含有する。単環式ヘテロ環の代表的な例としては、アゼチジニル、アゼパニル、アジリジニル、ジアゼパニル、１，３−ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、１，３−ジチオラニル、１，３−ジチアニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、２−オキソ−３−ピペリジニル、２−オキソアゼパン−３−イル、オキサジアゾリニル、オキサジアゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、オキセタニル、オキセパニル、オキソカニル（ｏｘｏｃａｎｙｌ）、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピロリニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロチエニル、チアジアゾリニル、チアジアゾリジニル、１，２−チアジナニル、１，３−チアジナニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、チオモルホリニル、１，１−ジオキシドチオモルホリニル（チオモルホリンスルホン）、チオピラニル、及びトリチアニルが挙げられるがこれらに限定されない。二環式ヘテロ環は、フェニル基へ縮合された単環式ヘテロ環、または単環式シクロアルキルへ縮合された単環式ヘテロ環、または単環式シクロアルケニルへ縮合された単環式ヘテロ環、または単環式ヘテロ環へ縮合された単環式ヘテロ環、単環式ヘテロアリールへ縮合された単環式ヘテロ環、またはスピロヘテロ環基、あるいは１、２、３もしくは４の炭素原子のアルキレン架橋または２、３もしくは４の炭素原子のアルケニレン架橋によって、環の２つの隣接しない原子が連結された架橋単環式ヘテロ環系である。二環式ヘテロ環は、非芳香族環原子で親分子部分へ結合される（例えば２−オキサスピロ［３．３］ヘプタン−６−イル、インドリン−１−イル、ヘキサヒドロシクロペンタ［ｂ］ピロール−１（２Ｈ）−イル）。二環式ヘテロ環の代表的な例としては、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、クロマニル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、２，３−ジヒドロベンゾチエニル、２，３−ジヒドロイソキノリン、２−アザスピロ［３．３］ヘプタン−２−イル、２−オキサ−６−アザスピロ［３．３］ヘプタン−６−イル、アザビシクロ［２．２．１］ヘプチル（２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−イルが挙げられる）、アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル（３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イルが挙げられる）、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドリル、イソインドリニル、オクタヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロリル、オクタヒドロピロロピリジニル、及びテトラヒドロイソキノリニルが挙げられるがこれらに限定されない。三環式ヘテロ環は、フェニル基へ縮合された二環式ヘテロ環、または単環式シクロアルキルへ縮合された二環式ヘテロ環、または単環式シクロアルケニルへ縮合された二環式ヘテロ環、または単環式ヘテロ環へ縮合された二環式ヘテロ環、あるいは１、２、３もしくは４の炭素原子のアルキレン架橋または２、３もしくは４の炭素原子のアルケニレン架橋によって、二環式環の２つの隣接しない原子が連結される二環式ヘテロ環によって例示される。三環式ヘテロ環の例としては、オクタヒドロ−２，５−エポキシペンタレン、ヘキサヒドロ−２Ｈ−２，５−メタノシクロペンタ［ｂ］フラン、ヘキサヒドロ−１Ｈ−１，４−メタノシクロペンタ［ｃ］フラン、アザ−アダマンタン（１−アザトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカン）、及びオキサ−アダマンタン（２−オキサトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカン）が挙げられるがこれらに限定されない。単環式、二環式、及び三環式のヘテロ環は、非芳香族環原子で親分子部分へ接続される。
【００２６】
特定の事例における基中に存在する原子の数を指摘する名称は、「アルキル」、「シクロアルキル」及び「アルキレン」など等という用語に先行し得る（例えば「Ｃ1-4アルキル」、「Ｃ3-6シクロアルキル」、「Ｃ1-4アルキレン」）。これらの名称は、概して当業者によって理解されるように使用される。例えば、「Ｃ」に続く下付き添え字の数字の表現は、続く基中に存在する炭素原子数を示す。したがって、「Ｃ3アルキル」は、３つの炭素原子を備えたアルキル基（すなわちｎ−プロピル、イソプロピル）である。「Ｃ1-4」として範囲が与えられる場合、続く基のメンバーは列挙された範囲内に収まる任意の炭素原子数を有し得る。「Ｃ1-4アルキル」は、例えば１〜４の炭素原子を有するが、アレンジされた（すなわち直鎖または分岐した）アルキル基である。
【００２７】
「動物」は、本明細書において使用される時、任意の脊椎動物を指し、哺乳動物、両生動物、鳥類、魚類、昆虫、爬虫類動物などが挙げられるがこれらに限定されない。哺乳動物としては、ヒト及び非ヒト霊長動物（例えばゴリラ、サル、ヒヒ、及びチンパンジーなど）、イヌ、ネコ、ヤギ、ウマ、ブタ、ウシ、ヒツジ、及び同種のもの、ならびに実験用動物（例えばラット、モルモット、マウス、アレチネズミ、ハムスター、及び同種のもの）が挙げられ得るがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、動物は、ヒトまたは非ヒトであり得る。好適な動物としては、オス及びメスの両方、ならびに任意の年齢の動物（胚（例えば子宮内または卵内）包含、新生仔、幼若体、青年期、成体、及び高齢の動物を包含する）が挙げられる。
【００２８】
「融合タンパク質」及び「融合ポリペプチド」は、本明細書において使用される時、アミノ酸の単一の連続的な鎖（その鎖は天然に存在しない）の一部分として、異種の関心のタンパク質（蛍光タンパク質等）と組み合わせて少なくとも１つの生物発光タンパク質を含む融合物を指す。
【００２９】
「作動可能に連結された」は、本明細書において使用される時、遺伝子の発現が、遺伝子が空間的に接続されるプロモーターの制御下にあることを意味する。プロモーターは、その制御下の遺伝子の５’（上流）または３’（下流）に位置し得る。プロモーターと遺伝子との間の距離は、そのプロモーターとプロモーターが由来する遺伝子においてプロモーターが制御する遺伝子との間の距離に、およそ同じであり得る。当技術分野において公知であるように、この距離における変動は、プロモーター機能の損失無しに適合させることができる。
【００３０】
「導入遺伝子」は、本明細書において使用される時、１つの生物体から単離及び／または操作され、異なる生物体の中へ導入される、遺伝子配列を含有する遺伝子または遺伝物質を指す。導入遺伝子は、導入遺伝子配列または天然もしくは野生型のＤＮＡ配列を含有し得る。ＤＮＡのこの非天然のセグメントは、遺伝子導入生物においてＲＮＡまたはタンパク質を産生する能力を保持し得る。例えば、導入遺伝子は、融合タンパク質（ルシフェラーゼを含む融合タンパク質）をコードし得る。導入遺伝子配列は、部分的にまたは完全に異種であり得る（すなわち導入遺伝子配列またはその一部はそれが導入される細胞とは異なる種からであり得る）。
【００３１】
「遺伝子導入動物」は、遺伝子操作動物または遺伝子操作動物の子孫を指す。遺伝子導入動物は、通常少なくとも１つの関連しない生物体からの（ウイルス、植物、または他の動物からの等）遺伝物質を含有する。
【００３２】
「形質転換」、「トランスフェクション」、及び「形質導入」という用語は、本明細書において互換的に使用される時、異種核酸分子（遺伝物質等）の細胞の中への導入を指す。細胞の中へのかかる導入は、安定的または一過性であり得る。したがって、いくつかの実施形態において、宿主細胞または宿主生物は、異種核酸分子（遺伝物質等）により安定的に形質転換される。他の実施形態において、宿主細胞または宿主生物は、異種核酸分子（遺伝物質等）により一過性に形質転換される。ポリヌクレオチドの文脈における「一過性形質転換」は、ポリヌクレオチドが細胞の中へ導入され、細胞のゲノムの中へ組み込まれないことを意味する。細胞の中へ導入されたポリヌクレオチドの文脈における「安定的に導入すること」または「安定的に導入された」によって、導入されたポリヌクレオチドが細胞のゲノムの中へ安定的に取り込まれ、したがって細胞がポリヌクレオチドにより安定的に形質転換されることが意図される。「安定的な形質転換」または「安定的に形質転換された」は、本明細書において使用される時、核酸分子が細胞の中へ導入され、細胞のゲノムの中へ組み込まれることを意味する。それゆえ、組み込まれた核酸分子は、その子孫によって、より詳細には複数の続く世代の子孫によって受け継がれることが可能である。「ゲノム」は、本明細書において使用される時、核、プラスミド及びプラスチドのゲノムも包含し、したがって、例えば葉緑体またはミトコンドリアのゲノムの中への核酸コンストラクトの組込みを包含する。安定的な形質転換は、本明細書において使用される時、例えばミニ染色体またはプラスミドとして染色体外に維持される導入遺伝子も指し得る。いくつかの実施形態において、ヌクレオチド配列、コンストラクト、発現カセットは一過性に発現され得る、及び／または、それらは、宿主生物のゲノムの中へ安定的に取り込まれ得る。
【００３３】
本明細書において記載される化合物について、基及びその置換基は、原子及び置換基の許容される原子価に従って選択され、当該選択及び置換が、安定的な化合物をもたらす（例えば再構成、環化、脱離など等による変換を自発的に受けない）ようにされ得る。
【００３４】
本明細書における数値範囲の列挙のために、同程度の精度を備えたその間に介在する各々の数が明示的に企図される。例えば、６〜９の範囲については、数７及び８が、６及び９に加えて企図され、６．０〜７．０の範囲については、数６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９及び７．０が明示的に企図される。
【００３５】
２．化合物
本発明の第１の態様は、式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｘ、Ｇ、ｍ、及びｎは、本明細書において定義される通りである。本明細書において提供される式（Ｉ）の実施形態は、可変基が本明細書において記載される時、下位可変基（Ｒx1、Ｒx2、ＲDなど等）を含めて、これらの可変基Ｒ1、Ｒ2、Ｘ、Ｇ、ｍ、及びｎの任意の組み合わせを包含する。
【００３６】
いくつかの実施形態において、Ｇは、１、２または３のＲD基により置換されたフラン−２−イルであり、式中、ＲDは、本明細書において定義される通りである。いくつかの実施形態において、フラン−２−イルは、単一のＲD基により置換される（例えば
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、
2021534211.tif 000006
、
2021534211.tif 000007
）。さらなる実施形態において、ＲDは、Ｃ1-4アルキル（例えばＣＨ3）またはＣ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）である。
【００３７】
いくつかの実施形態において、Ｇは、１、２、３、４または５のＲE基により随意に置換された、６員〜１２員のアリールであり、式中、ＲEは、本明細書において定義される通りである。さらなる実施形態において、６員〜１２員のアリールは、フェニルである。他の実施形態において、６員〜１２員のアリールは、１〜２の酸素原子を含有する５員〜７員のヘテロ環式環へ縮合されたフェニル（例えばベンゾジオキソール）である。さらなる実施形態において、アリール（例えばフェニル）は、１〜３のＲE（ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、−ＯＣ1-4アルキル、及び−Ｃ1-10アルキレン−ＯＣ1-4アルキル等）により随意に置換される（例えば
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、
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、
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、
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）。さらなる実施形態において、フェニルは、ハロゲン、−ＯＲx4、Ｃ1-10アルキレン−ＯＲx4、及び−ＯＣ1-10アルキレン−ＳＯ2ＯＲx4（例えば−ＯＣ6アルキレン−ＳＯ3Ｈ）からなる群から独立して選択される、１〜３のＲE基により随意に置換される。
【００３８】
他の実施形態において、Ｇは、１、２、３、４または５のＲE基により随意に置換された、フラン−２−イル以外の５員〜１２員のヘテロアリールである。さらなる実施形態において、ヘテロアリールは、チエニル、イミダゾリル、ピリジニルまたはチアゾリル（例
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ＲE基により随意に置換される。
【００３９】
さらなる実施形態において、Ｇは、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、及び
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からなる群から選択される。
【００４０】
いくつかの実施形態において、Ｘは、ＯＲx1またはＮＲx1Ｒx2であり、式中、Ｒx1及びＲx2は、本明細書において定義される通りである。さらなる実施形態において、Ｘは、ＯＲx1である。他のさらなる実施形態において、Ｘは、ＮＲx1Ｒx2である。これらの実施形態において、なおさらなる実施形態は、Ｒx1及びＲx2が水素である。他の実施形態において、Ｘは、−ＯＳｉ（Ｃ1-10アルキル）3（例えば−ＯＳｉ（ｔ−Ｂｕ）（Ｍｅ）2）である。
【００４１】
いくつかの実施形態において、Ｒ1は、各々の出現で、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA1、または−ＮＲB1ＲC1であり、式中、ＲA1、ＲB1、及びＲC1は、本明細書において定義される通りである。さらなる実施形態において、Ｒ1は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-4アルキル（例えばメチル、エチル）、Ｃ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）、−ＯＲA1、または−ＮＲB1ＲC1であり、式中、ＲA1、ＲB1、及びＲC1は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-4アルキル（例えばメチル、エチル）、Ｃ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）、またはＣ3-6シクロアルキル（例えばシクロプロピル）である。
【００４２】
いくつかの実施形態において、Ｒ2は、各々の出現で、独立してハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA2、または−ＮＲB2ＲC2であり、式中、ＲA2、ＲB2、及びＲC2は、本明細書において定義される通りである。さらなる実施形態において、Ｒ2は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-4アルキル（例えばメチル、エチル）、Ｃ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）、−ＯＲA2、または−ＮＲB2ＲC2であり、式中、ＲA2、ＲB2、及びＲC2は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-4アルキル（例えばメチル、エチル）、Ｃ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）、またはＣ3-6シクロアルキル（例えばシクロプロピル）である。
【００４３】
本明細書において記載される式（Ｉ）の実施形態において、実施形態は、ｍが０であり、Ｒ2、Ｘ、Ｇ、及びｎが、本明細書において定義される通りである。本明細書において記載される式（Ｉ）の実施形態において、実施形態は、ｎが０であり、Ｒ1、Ｘ、Ｇ、及びｍが、本明細書において定義される通りである。例えば、式（Ｉ）のいくつかの実施形態において、ｍは０であり、ｎは０であり、Ｘ及びＧは、本明細書において定義される通りである。
【００４４】
例示的な組み合わせにおいて、ｍは０であり、ｎは０であり、ＸはＯＨまたはＮＨ2であり、Ｇは、本明細書において定義される通りである。さらなる例示的な組み合わせにおいて、Ｇは、単一のＲD基により置換されたフラン−２−イル；
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、
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、
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、もしくは
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であり、各々は、１〜３のＲE基により随意に置換されるか；または１〜３のＲE基により随意に置換されたアリールであり、式中、アリールは、フェニル、もしくは１〜２の酸素原子を含有する５員〜７員のヘテロ環式環へ縮合されたフェニル（例えばベンゾジオキソール）である。ＲD及びＲEの置換基の数字及び同一性は、本明細書の他の箇所で記載される通りである。
【００４５】
本明細書において記載される式（Ｉ）の実施形態において、実施形態は、ｍが１であり、Ｒ1がハロゲンであり、Ｒ2、Ｘ、Ｇ、及びｎが、本明細書において定義される通りである。例えば、式（Ｉ）のいくつかの実施形態において、ｍは１であり、ｎは０であり、Ｘ及びＧは、本明細書において定義される通りである。例示的な実施形態において、ｍは１であり、Ｒ1はフッ素であり、ｎは０であり、Ｘは、ＯＨまたはＮＨ2であり、Ｇは、本明細書において定義される通りである。
【００４６】
代表的な式（Ｉ）の化合物は、
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、
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、
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、
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、
2021534211.tif 000030
、
2021534211.tif 000031
、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、及び
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を包含する。
【００４７】
本発明の別の態様は、式（ＩＩ）の化合物を提供し、式中、Ｒ3、Ｒ4、Ｙ、ｐ、及びｑは、本明細書において定義される通りである。本明細書において提供される式（ＩＩ）の実施形態は、可変基が本明細書において記載される時、下位可変基（Ｒy1、Ｒy2、ＲA3など等）を含めて、これらの可変基Ｒ3、Ｒ4、Ｙ、ｐ、及びｑの任意の組み合わせを包含する。
【００４８】
いくつかの実施形態において、２つの隣接するＲ3基、またはＹ及び隣接するＲ3基は、それらが結合されている炭素原子と一緒に、５員〜７員のシクロアルキル、５員〜７員のシクロアルケニル、または５員〜７員のヘテロシクリルから選択される縮合環を随意に形成し、随意の縮合環は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA3、及び−ＮＲB3ＲC3からなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に置換される。
【００４９】
いくつかの実施形態において、ｐ＋ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８または９である。いくつかの実施形態において、ｐ＋ｑは、１、２、３、４、５、６、７、８または９である。いくつかの実施形態において、ｐは、１、２、３または４である。いくつかの実施形態において、ｑは、１、２、３、４または５である。いくつかの実施形態において、ｐは、０である。いくつかの実施形態において、ｑは、０である。いくつかの実施形態において、ｐ＋ｑは、０、１または２である。いくつかの実施形態において、ｐ＋ｑは、１または２である。いくつかの実施形態において、ｐ＋ｑは、１である。いくつかの実施形態において、ｐ＋ｑは、２である。いくつかの実施形態において、ｐ＋ｑは、３である。
【００５０】
いくつかの実施形態において、Ｙは、ニトロ、ＯＲy1、またはＮＲy1Ｒy2であり、式中、Ｒy1及びＲy2は、本明細書において定義される通りである。いくつかの実施形態において、Ｙは、ＯＲy1またはＮＲy1Ｒy2であり、式中、Ｒy1及びＲy2は、本明細書において定義される通りである。さらなる実施形態において、Ｙは、ニトロである。さらなる実施形態において、Ｙは、ＯＲy1である。他のさらなる実施形態において、Ｙは、ＮＲy1Ｒy2である。これらの実施形態において、なおさらなる実施形態は、Ｒy1及びＲy2が水素である。
【００５１】
いくつかの実施形態において、Ｒ3は、各々の出現で、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA3、または−ＮＲB3ＲC3であり、式中、ＲA3、ＲB3、及びＲC3は、本明細書において定義される通りである。さらなる実施形態において、Ｒ3は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-4アルキル（例えばメチル、エチル）、Ｃ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）、−ＯＲA3、または−ＮＲB3ＲC3であり、式中、ＲA3、ＲB3、及びＲC3は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-4アルキル（例えばメチル、エチル）、Ｃ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）、またはＣ3-6シクロアルキル（例えばシクロプロピル）である。いくつかの実施形態において、ｐは１であり、Ｒ3は、ハロゲンまたはＣ1-4アルキル（例えばメチル）である。いくつかの実施形態において、ｐは１であり、Ｒ3はハロゲンである。例示的な実施形態において、ｐは１であり、Ｒ3は、フッ素または塩素である。他の例示的な実施形態において、ｐは１であり、Ｒ3はフッ素である。他の例示的な実施形態において、ｐは１であり、Ｒ3は塩素である。さらなる例示的な実施形態において、ｐは１であり、Ｒ3はＣ1-4アルキルである。他の例示的な実施形態において、ｐは１であり、Ｒ3はメチルである。
【００５２】
いくつかの実施形態において、Ｒ4は、各々の出現で、独立してハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、−ＯＲA4、または−ＮＲB4ＲC4であり、式中、ＲA4、ＲB4、及びＲC4は、本明細書において定義される通りである。さらなる実施形態において、Ｒ4は、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-4アルキル（例えばメチル、エチル）、Ｃ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）、−ＯＲA4、または−ＮＲB4ＲC4であり、式中、ＲA4、ＲB4、及びＲC4は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-4アルキル（例えばメチル、エチル）、Ｃ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）、またはＣ3-6シクロアルキル（例えばシクロプロピル）である。いくつかの実施形態において、ｑは、１または２であり、各々のＲ4は、独立してハロゲンまたはＣ1-4アルキルである。いくつかの実施形態において、ｑは１であり、Ｒ4はＣ1-4アルキルである。
【００５３】
いくつかの実施形態において、Ｒ4は、各々の出現で、ハロゲンである。いくつかの実施形態において、Ｒ4は、フッ素である。例示的な実施形態において、ｑは１または２であり、Ｒ4はフッ素である。いくつかの実施形態において、ｑは１であり、Ｒ4はフッ素である。他の実施形態において、ｑは２であり、各々のＲ4はフッ素である。
【００５４】
本明細書において記載される式（ＩＩ）の実施形態において、実施形態は、ｐが１、２、３または４であり、Ｒ3、Ｒ4、Ｙ、及びｑが、本明細書において定義される通りである。さらなる実施形態において、ｐは１または２であり、Ｒ3、Ｒ4、Ｙ、及びｑは、本明細書において定義される通りである。なおさらなる実施形態において、ｐは１であり、Ｒ3、Ｒ4、Ｙ、及びｑは、本明細書において定義される通りである。
【００５５】
本明細書において記載される式（ＩＩ）の実施形態において、実施形態は、ｑが０、１、２、３、４または５であり、Ｒ3、Ｒ4、Ｙ、及びｐが、本明細書において定義される通りである。本明細書において記載される式（ＩＩ）の実施形態において、実施形態は、ｑが１、２、３、４または５であり、Ｒ3、Ｒ4、Ｙ、及びｐが、本明細書において定義される通りである。さらなる実施形態において、ｑは１または２であり、Ｒ3、Ｒ4、Ｙ、及びｐは、本明細書において定義される通りである。なおさらなる実施形態において、ｑは０であり、Ｒ3、Ｙ、及びｐは、本明細書において定義される通りである。なおさらなる実施形態において、ｑは１であり、Ｒ3、Ｒ4、Ｙ、及びｐは、本明細書において定義される通りである。
【００５６】
式（ＩＩ）のいくつかの実施形態において、ｐは１であり、ｑは１であり、Ｒ3、Ｒ4、及びＹは、本明細書において定義される通りである。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態において、ｐは１であり、ｑは２であり、Ｒ3、Ｒ4、及びＹは、本明細書において定義される通りである。式（ＩＩ）のいくつかの実施形態において、ｐは１であり、ｑは０であり、Ｒ3、Ｒ4、及びＹは、本明細書において定義される通りである。
【００５７】
例示的な組み合わせにおいて、ｐは０または１であり、ｑは０または１であり、Ｙは、ニトロ、ＯＨ、またはＮＨ2であり、Ｒ3及びＲ4は、独立してハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-4アルキル（例えばメチル、エチル）、Ｃ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）、−ＯＲA4、または−ＮＲB4ＲC4であり、式中、ＲA4、ＲB4、及びＲC4は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-4アルキル（例えばメチル、エチル）、Ｃ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）、またはＣ3-6シクロアルキル（例えばシクロプロピル）である。
【００５８】
例示的な組み合わせにおいて、ｐは０または１であり、ｑは１であり、Ｙは、ＯＨまたはＮＨ2であり、Ｒ3及びＲ4は、独立してハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ1-4アルキル（例えばメチル、エチル）、Ｃ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）、−ＯＲA4、または−ＮＲB4ＲC4であり、式中、ＲA4、ＲB4、及びＲC4は、各々の出現で、独立してＨ、Ｃ1-4アルキル（例えばメチル、エチル）、Ｃ1-4ハロアルキル（例えばＣＦ3）、またはＣ3-6シクロアルキル（例えばシクロプロピル）である。
【００５９】
例示的な組み合わせにおいて、ｐは１であり、ｑは１または２であり、Ｙは、ＯＨまたはＮＨ2であり、Ｒ3及びＲ4は、ハロゲンである。
【００６０】
代表的な式（ＩＩ）の化合物は、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、及び
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を包含する。
【００６１】
他の実施形態において、式（Ｉ）の化合物または（ＩＩ）は、ルシフェラーゼのためのプロ基質（すなわちルシフェラーゼと組み合わせた場合に、発光を直接的に支援しないが、生物変換によって（例えば２番目の酵素により）ルシフェラーゼ基質に変換され得る化合物）であり得る。プロ基質としては、例えば−ＯＧE、−ＮＲx1ＧE、−ＮＲy1ＧE、−ＮＲB1ＧE、または−ＮＲB3ＧEにより置換された、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物が挙げられる。
【００６２】
ＧEは酵素基質を含み、酵素による酵素基質の生物変換は、ＧEをＨへ変換する。いくつかの実施形態において、ＧEは、ＧE1−Ｌ1−であり；ＧE1は酵素基質であり、Ｌ1は、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の残りの部分（すなわち親分子部分）へＧE1を接続するリンカーである。
【００６３】
いくつかの実施形態において、Ｌ1は、中性の周囲条件下で安定的な原子のアレンジから構成される結合または二価の基であり、原子は、炭素、水素、窒素、酸素、硫黄、リン、及びケイ素から選択される。二価の基は、単結合（例えばＣＨ2−ＣＨ2、ＣＨ2−Ｏ）、二重結合（例えばＣ＝Ｏ）、または三重結合（例えばＣ≡Ｃ）を含み、環構造（例えばシクロアルキル）を含有または含み得る。いくつかの実施形態において、二価の基は、−Ｃ1-10アルキレン−、−Ｃ2-10アルキレン−Ｏ−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ1-4アルキル）−、−Ｎ（ＣＯＣ1-4アルキル）−、アミノ酸部分、保護されたアミノ酸部分、及びフェニレンのうちの１つまたは複数のアレンジであり、式中、Ｃ3-8シクロアルキレン及びフェニレンは、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ハロ、シアノ、またはヒドロキシからなる群から独立して選択される１〜４の置換基により随意に独立して置換される。いくつかの実施形態において、Ｌ1は、Ｃ1−Ｃ10アルキレン（例えばＣ2−Ｃ3アルキレン）である。
【００６４】
リンカーＬ1は、ＷＯ２００６／１３０５５１、ＷＯ２０１４／１５９０４４、ＵＳ２００７／００１５７９０、またはＵＳ２０１４／０３０４８４２（それらの全体は参照により本明細書に援用される）中で開示されるような、プロ基質と酵素基質との間のリンカーであり得る。例えば、Ｌ1は、トレースレスリンカー（スキーム１中で示されるような、トリメチルロックリンカー、キノンメチドリンカー、ジペプチジルリンカー、パラ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカー、またはアルキルエンジアミノカルボニルリンカー等）であり得る。ＧE1の酵素的生物変換は、ＧE1が結合されているヘテロ原子への結合を切断してリンカーの遊離をもたらし、これは、自発的にベンゾチアゾールルシフェリン類似体を自己犠牲的に遊離し得る。ＷＯ２００６／１３０５５１中で記載されるように、いくつかのトレースレスリンカー（例えばアルキレンリンカー）はβ−脱離によって自発的に離脱され得る。
スキーム１
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【００６５】
酵素基質ＧE1の代表的な例としては、ＷＯ２００６／１３０５５１またはＵＳ２００７／００１５７９０（それらの全体は参照により本明細書に援用される）中で記載されるような、プロテアーゼ、シトクロム（ＣＹＰ）Ｐ４５０レダクターゼ、モノアミン酸化酵素（ＭＡＯ）、フラビンモノオキシゲナーゼ（ＦＭＯ）、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、デアルキラーゼ（例えば脱メチル化酵素）、脱アセチル化酵素、脱ホルミル酵素、スルファターゼ、ホスファターゼ（例えばアルカリホスファターゼ（ＡＰ））、β−ラクタマーゼ、及びアルコール脱水素酵素についての基質が挙げられる。
【００６６】
代表的なプロテアーゼ基質としては、Ｃｏｓｂｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  Ｎｏｔｅｓ（２００７）１８，ｐｐ．９−１１（その全体は参照により本明細書に援用される）によって記載されるようなペプチド、Ｚ−ＤＥＶＤ−、Ｚ−ＬＥＴＤ−、ＧＰ−、Ｓｕｃ−ＬＬＶＹ−、Ｚ−ＬＲＲ−、Ｚ−ｎＬＰｎＬＤ−、Ｚ−ＱＥＶＹ−、ＶＰ−、Ｚ−ＶＤＶＡＤ−、Ｚ−ＶＥＩＤ−、Ｚ−ＡＴＡＤ−、Ｚ−ＩＥＰＤ−、Ｚ−ＩＥＴＤ−、Ｚ−ＴＳＡＶＬＱ−、及びＺ−ＶＮＳＴＬＱ−が挙げられるがこれらに限定されない。これらのプロテアーゼ基質の事例において、酵素基質が、ＸまたはＹで、ＯまたはＮへ直接的に結合され、直接的に切断されるので、Ｌ1は結合である。
【００６７】
トレースレスリンカーを備えたＧEの代表的な例は、スキーム２中で示される。
スキーム２
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【００６８】
化合物の名称は、ＣＨＥＭＤＲＡＷ（登録商標）ＵＬＴＲＡの一部分としてのＳｔｒｕｃｔ＝Ｎａｍｅ命名アルゴリズムを使用することによって割り当てられる。
【００６９】
化合物は、不斉中心またはキラル中心が存在する立体異性体として存在し得る。立体異性体は、不斉炭素原子の周囲の置換基の立体配置に依存して、「Ｒ」または「Ｓ」である。本明細書において使用される「Ｒ」及び「Ｓ」という用語は、ＩＵＰＡＣ  １９７４  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｅ，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．，１９７６，４５：１３−３０中で定義されるような立体配置である。本開示は様々な立体異性体及びその混合物を企図し、これらは本発明の範囲内に具体的に含まれる。立体異性体としては、エナンチオマー及びジアステレオマー、ならびにエナンチオマーまたはジアステレオマーの混合物が挙げられる。化合物の個別の立体異性体は、不斉中心もしくはキラル中心を含有する商業的に入手可能な出発材料から合成的に調製され得るか、またはラセミ混合物を調製し、続いて当業者に周知の分割方法によって調製され得る。これらの分割方法は、（１）エナンチオマーの混合物をキラル補助剤へ結合させ、生じたジアステレオマーの混合物を再結晶化またはクロマトグラフィーによって分離し、随意に、光学的に純粋な生成物を補助剤から遊離させる方法（Ｆｕｒｎｉｓｓ，Ｈａｎｎａｆｏｒｄ，Ｓｍｉｔｈ，ａｎｄ  Ｔａｔｃｈｅｌｌ，“Ｖｏｇｅｌ’ｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９），Ｌｏｎｇｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＆  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ，Ｅｓｓｅｘ  ＣＭ２０  ２ＪＥ，Ｅｎｇｌａｎｄ中で記載されるように）、または（２）キラルクロマトカラムで光学的エナンチオマーの混合物を直接的に分離する方法、または（３）分別結晶方法によって例示される。
【００７０】
化合物は、幾何異性体だけでなく互変異性体を有することができ、これらも本発明の態様を構成することを理解されたい。本発明の化合物またはその互変異性体もしくは塩としては、化合物、化合物の塩、化合物の互変異性体、及び化合物の塩の互変異性体が挙げられる。
【００７１】
本開示は、１つまたは複数の原子が、通常天然で見出される原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられるということを除けば、式（Ｉ）において列挙されたものに同一である、同位体標識化合物も包含する。本発明の化合物中に組み入れるのに好適な同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、及び塩素であり、それぞれ、2Ｈ、3Ｈ、13Ｃ、14Ｃ、15Ｎ、18Ｏ、17Ｏ、31Ｐ、32Ｐ、35Ｓ、18Ｆ、及び36Ｃｌ等であるがこれらに限定されない。より重い同位体（重水素、すなわち2Ｈ等）による置換は、より高い代謝安定性からもたらされる特定の治療上の利点（例えばインビボの半減期の増加または投薬量要求性の低減）を与えることができ、したがっていくつかの状況においては好ましいだろう。化合物は、医療画像、及び受容体の分布の決定のための陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）研究のために、陽電子放出同位体を取り込むことができる。式（Ｉ）の化合物中に取り込まれ得る好適な陽電子放出同位体は、11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、及び18Ｆである。同位体標識式（Ｉ）の化合物は概して、当業者に公知の従来の技法、または、適切な同位体標識試薬を非同位体標識試薬の代わりに使用して、添付の実施例において記載されているものに類似したプロセスによって、調製され得る。
【００７２】
本明細書において記載される化合物は、塩形態であり得る。塩の選択は、ヒト及び下等動物の組織と接触させる使用に好適であり、妥当な医学的判断の範囲内で、不必要な毒性、刺激、アレルギー反応、及び同種のものが無く、合理的なベネフィット／リスク比と釣り合うものある。薬学的に許容される塩は、当技術分野において周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．は、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６，１−１９（参照することによって本明細書に援用される）中で薬学的に許容される塩を詳細に記載する。本発明の化合物の許容可能な塩は、好適な無機酸及び有機酸ならびに無機塩基及び有機塩基に由来するものを包含する。許容可能な非毒性の酸付加塩の例は、無機酸（塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、及び過塩素酸等）により、もしくは有機酸（酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、またはマロン酸等）により、または当技術分野において使用される他の方法（イオン交換等）の使用によって形成される、アミノ基の塩である。他の許容可能な塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、蟻酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩、及び同種のものが挙げられる。塩基付加塩は、開示される化合物の最終的な単離及び精製の間に、カルボキシル基と、金属カチオン（リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、またはアルミニウム等）の好適な塩基（水酸化物、炭酸塩、または重炭酸塩等）、または有機第一級、第二級、もしくは第三級アミンとの反応によって、調製され得る。メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルフェネチルアミン、１−エフェナミン及びＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、ピペラジン、ならびに同種のものに由来するもの等の第四級アミン塩が、調製され得る。
【００７３】
Ａ．化合物の特性
式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、発光を産生するルシフェラーゼの基質であり得る。化合物は、水溶性の増加、安定性の改善、細胞透過性の改善、細胞との生体適合性の増加、自己発光の低減、及び／または毒性の低減を有し得る。
【００７４】
「発光」は、適切な条件下の、例えば好適な基質（セレンテラジン類似体等）の存在下における、ルシフェラーゼの光出力を指す。光出力は、発光反応（セレンテラジン基質の添加に際して開始され得る）の開始時の即時またはほぼ即時の光出力の測定値（「Ｔ＝０」の発光または「閃光」と称される場合もある）として測定され得る。様々な実施形態における発光反応は、溶液中で実行される。他の実施形態において、発光反応は、固体支持体上で実行される。溶液は、例えば原核生物または真核生物の発現系における細胞からの溶解物を含有し得る。他の実施形態において、発現が無細胞系中で起こるか、またはルシフェラーゼタンパク質が細胞外の培地の中へ分泌され、後者の事例において溶解物を産生することは必要でない。いくつかの実施形態において、反応は、発光タンパク質を含有する反応チャンバー（例えば９６ウェルプレート等のマルチウェルプレートのウェル）の中へ適切な材料（例えばセレンテラジン類似体及び緩衝液など）を注入することによって開始される。さらに他の実施形態において、ルシフェラーゼ及び／またはセレンテラジン類似体（例えば式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物）が宿主の中へ導入され、発光の測定は、宿主またはその一部（生物体全体、またはその細胞、組織、外植片もしくは抽出物が挙げられ得る）で行われる。反応チャンバーは、例えばルミノメーターまたは光電子増倍管を使用して光出力を測定することができる、読み取りデバイス中に配置され得る。光出力または発光は、例えば同じ反応チャンバー中で、数秒、数分、数時間などの期間にわたっても測定され得る。光出力または発光は、一定期間の平均値、シグナル減衰の半減期、一定期間にわたるシグナルの合計、またはピーク出力として報告され得る。発光は、相対発光単位（ＲＬＵ）で測定され得る。
【００７５】
式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、セレンテラジンまたは既知のセレンテラジン類似体（フリマジン等）に比べて、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、１０以上、２０以上、３０以上、４０以上、５０以上、または１００以上のＲＬＵを有し得る。
【００７６】
式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、４５０〜７００ナノメーター、４６０〜６００ナノメーター、４７０〜６００ナノメーター、４８０〜６００ナノメーター、４９０〜６００ナノメーター、５００〜６００ナノメーター、５１０〜６００ナノメーター、５２０〜６００ナノメーター、５３０〜６００ナノメーター、５４０〜６００ナノメーター、５５０〜６００ナノメーター、５６０〜６００ナノメーター、５７０〜６００ナノメーター、５８０〜６００ナノメーター、５９０〜６００ナノメーター、４７０〜５９０ナノメーター、４８０〜５８０ナノメーター、４９０〜５７０ナノメーター、５００〜５６０ナノメーター、または５１０〜５５０ナノメーターのλｍａｘを有し得る。式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、４５０ナノメーター以上、４６０ナノメーター以上、４７０ナノメーター以上、４８０ナノメーター以上、４９０ナノメーター以上、５００ナノメーター以上、５１０ナノメーター以上、５２０ナノメーター以上、５３０ナノメーター以上、５４０ナノメーター以上、５５０ナノメーター以上、５６０ナノメーター以上、５７０ナノメーター以上、５８０ナノメーター以上、５９０ナノメーター以上、６００ナノメーター以上、６１０ナノメーター以上、６２０ナノメーター以上、６３０ナノメーター以上、６４０ナノメーター以上、６５０ナノメーター以上、６６０ナノメーター以上、６７０ナノメーター以上、６８０ナノメーター以上、６９０ナノメーター以上、または７００ナノメーター以上のλｍａｘを有し得る。
【００７７】
「生体適合性」は、セレンテラジン類似体（例えば式（Ｉ）の化合物）への細胞（例えば原核生物または真核生物の）の耐性を指す。セレンテラジン類似体の生体適合性は、セレンテラジン類似体が宿主細胞に対して引き起こすストレスに関するものである。
【００７８】
セレンテラジン類似体（例えば式（Ｉ）の化合物）の生体適合性の促進は、細胞生存率及び／または細胞増殖率の測定によって決定され得る。例えば、セレンテラジン類似体の生体適合性の促進は、セレンテラジン類似体へ曝露された細胞のルシフェラーゼ発現の非存在下における細胞生存率を測定して、天然または既知のセレンテラジンに比較して、セレンテラジン類似体が細胞にどのくらい適合するか及び／または毒性があるかを決定することによって決定され得る。
【００７９】
特に、生体適合性の促進は、細胞生存率分析（例えばＣＥＬＬＴＩＴＥＲ−ＧＬＯ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙアッセイを使用して）、アポトーシスアッセイ（例えばＣＡＳＰＡＳＥ−ＧＬＯ（登録商標）技術を使用して）、または当技術分野において公知の別の方法を使用して、決定され得る。細胞生存率またはアポトーシスに対する、開示される化合物の効果は、細胞生存率またはアポトーシスに対する天然または既知のセレンテラジン類似体の効果に比較され得る。
【００８０】
生体適合性の促進は、細胞増殖または遺伝子発現に対するセレンテラジン類似体（例えば式（Ｉ）の化合物）の効果を測定することによっても決定され得る。例えば、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物の生体適合性の促進は、天然もしくは既知のセレンテラジンへ曝露された細胞またはセレンテラジン無しの細胞に比較して、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物へ曝露された細胞のサンプルにおいて、期間後の細胞数を測定することによって、またはストレス応答遺伝子の発現を決定することによって、決定され得る。細胞増殖または遺伝子発現に対する、開示される化合物の効果は、天然または既知のセレンテラジンに比較され得る。
【００８１】
Ｂ．合成方法
式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物は、合成プロセスによって、または代謝プロセスによって調製され得る。代謝プロセスによる化合物の調製としては、ヒトもしくは動物体（インビボ）において起こるものまたはインビトロで起こるプロセスが挙げられる。
【００８２】
式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物の群は、スキーム１〜３において示されるように合成され得る。好適な合成方法は、例えば２０１６年２月１５日に出願されたＳｈａｋｈｍｉｎ  ｅｔ  ａｌ．に帰属する米国特許出願第６２／２９５，３６３号「ＣＯＥＬＥＮＴＥＲＡＺＩＮＥ  ＡＮＡＬＯＧＵＥＳ」（代理人整理番号０１６０２６−９５７４）（その全体を参照することによって本明細書に援用される）中で開示されたものも包含し得る。
【００８３】
以下のスキームの記載において使用される略語は、アセトニトリルについてはＡＣＮ；カルボニルジイミダゾールについてはＣＤＩ；ジクロロメタンについてはＤＣＭ；ジメチルホルムアミドについてはＤＭＦ；当量についてはｅｑ；エタノールについてはＥｔＯＨ；時間（複数可）についてはｈまたはｈｒ；Ｈｏｒｎｅｒ−Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ−ＥｍｍｏｎｓについてはＨＷＥ；メタノールについてはＭｅＯＨ；分間についてはｍｉｎ．；室温についてはＲＴ／ｒｔ／ｒ．ｔ．；ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルについてはＴＢＤＭＳ；１，１，３，３−テトラメチルグアニジンについてはＴＭＧ；トリフルオロ酢酸についてはＴＦＡ；テトラヒドロフランについてはＴＨＦ；１，１，３，３−テトラメチルグアニジンについてはＴＭＧである。
スキーム３
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【００８４】
スキーム３は、式（Ｉ）のフェノール含有セレンテラジンに向けた一般的な合成経路を示す。
スキーム４
2021534211.tif 000067
【００８５】
スキーム４は、式（Ｉ）の置換されたフラン含有化合物の一般的な合成を示す。
スキーム５
2021534211.tif 000068
【００８６】
スキーム５は、式（ＩＩ）のフラン含有化合物の一般的な合成を示す。
【００８７】
一般手順
一般手順Ａ（カルベン挿入）：クロロベンゼン中の２−アミノ−ピラジン（１ｅｑ）の溶液へ、メチル（またはｔｅｒｔ−ブチル）２−ジアゾ−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（２〜３ｅｑ）及び酢酸ロジウム二量体（５ｍｏｌ％）を添加した。混合物を、通気口付きフラスコ中で１００℃へ２４〜４８時間加熱した。反応物を冷却し、酢酸エチルにより希釈し、セライトを添加し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
【００８８】
一般手順Ｂ（ＨＷＥ反応物）：メタノール中のアルデヒド（１ｅｑ）及びメチル（またはｔｅｒｔ−ブチル）ホスホン酸エステル誘導体（１ｅｑ）の溶液へ、１，１，３，３−テトラメチルグアニジン（３ｅｑ）を添加した。溶液を、室温で０．５〜２時間撹拌した。混合物をジクロロメタン及び約０．１ＭのＨＣｌにより希釈し、水層をジクロロメタンにより抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
【００８９】
一般手順Ｃ（鈴木カップリング）：ブロミド（１ｅｑ）の溶液へ、ボロネート（１．２〜１．５ｅｑ）を添加した。溶液を窒素によりパージしながら、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．１ｅｑ）及び１Ｍの炭酸セシウム水溶液（３ｅｑ）を添加した。反応物を６０〜８５℃で２〜１８時間撹拌した。混合物を酢酸エチル及び水により希釈し、水層を酢酸エチルにより抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
【００９０】
一般手順Ｄ（ＴＦＡ脱保護）：ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のセレンテラジン類似体の溶液へ、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を添加した。溶液を、室温で２〜６時間撹拌した。混合物をトルエンにより希釈し、濃縮し、トルエン中で再懸濁し、濃縮した。これを２回反復して、粗生成物を得た。
【００９１】
一般手順Ｅ（ＣＤＩの環化）：ジクロロメタン中のカルボキシレート（１ｅｑ）の溶液へ、カルボニルジイミダゾール（２ｅｑ）を添加した。混合物を室温で０．５〜１時間撹拌した。混合物をジクロロメタン及び約０．１ＭのＨＣｌにより希釈し、水層をジクロロメタンにより抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗生成物を得た。
【００９２】
一般手順Ｆ（還元）：ジクロロメタン及びメタノール（１：１）中のデヒドロ−セレンテラジン（１ｅｑ）の懸濁物を、氷浴により冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（５ｅｑ）を添加し、混合物を０．５〜２時間撹拌した。混合物をジクロロメタン及び約０．１ＭのＨＣｌにより希釈し、水層をジクロロメタンにより抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
【００９３】
一般手順Ｇ（ＨＣｌ脱保護）：メタノール（１０ｍＬ）中のセレンテラジン類似体の溶液へ、ＨＣｌ水溶液（６Ｍ、１ｍＬ）を添加した。溶液を、室温で２〜６時間撹拌した。混合物をジクロロメタン及び水により希釈し、水層をジクロロメタンにより抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
【００９４】
一般手順Ｈ（ニトロ還元）：エタノール中のニトロのセレンテラジンの溶液へ、触媒性の炭素担持パラジウム（１０％）を添加した。溶液を窒素によりパージした。水素（１ａｔｍ）を添加し、懸濁物を室温で２〜８時間撹拌した。溶液を窒素によりパージし、セライトにわたって濾過した。濾液を収集し、セライトを添加し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
【００９５】
個別のステップに最適な反応条件及び反応時間は、用いられた特定の反応物及び使用される反応物中に存在する置換基に依存して変動し得る。具体的な手順は、実施例のセクション中で提供される。反応は、従来の様式で（例えば残渣から溶媒を取り除くことによって）完成され、当技術分野において一般的に公知の方法論（結晶化、蒸留、抽出、粉砕、及びクロマトグラフィー等であるがこれらに限定されない）に従って、さらに精製され得る。別段の記載のない限り、出発材料及び試薬は、商業的に入手可能であるか、または化学文献中で記載される方法を使用して、商業的に入手可能な材料から当業者によって調製され得る、のいずれかである。出発材料は、商業的に入手可能でないならば、標準的な有機化学技法、公知の合成に類似した技法、構造的に類似する化合物、または上記のスキームもしくは合成の実施例セクション中で記載される手順に類似した技法から選択される手順によって調製され得る。
【００９６】
常用の実験（反応条件、試薬及び合成経路の順序の適切な操作、反応条件と適合できない任意の化学官能基の保護、ならびに方法の反応順序における好適な時点での脱保護が挙げられる）は、本発明の範囲内に含まれる。好適な保護基、ならびにかかる好適な保護基を使用して異なる置換基を保護及び脱保護する方法は、当業者に周知であり、それらの例は、ＰＧＭ  Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  ＴＷ  ＧｒｅｅｎｅによるＧｒｅｅｎｅ’ｓ  ｂｏｏｋ  ｔｉｔｌｅｄ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（４ｔｈ  ｅｄ．），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（２００６）（その全体は参照により本明細書に援用される）中で見出すことができる。本発明の化合物の合成は、上記の合成スキーム及び具体的な例において記載されるものに類似した方法によって達成され得る。
【００９７】
開示される化合物の光学活性体が要求される場合に、化合物の光学活性体は、光学活性のある出発材料（例えば不斉誘導の好適な反応ステップによって調製された）を使用して、本明細書において記載される手順のうちの１つを実行することによって、または標準的な手順（クロマトグラフ分離、再結晶、または酵素的分割等）を使用して、化合物もしくは中間体の立体異性体の混合物を分割することによって、得ることができる。
【００９８】
同様に、化合物の純粋な幾何異性体が要求される場合に、純粋な幾何異性体は、出発材料としての純粋な幾何異性体を使用して、上記の手順のうちの１つを実行することによって、または標準的な手順（クロマトグラフ分離等）を使用して、化合物もしくは中間体の幾何異性体の混合物を分割することによって、得ることができる。
【００９９】
記載されるような合成スキーム及び具体的な例が例示的であることが認識され、本発明の範囲は添付の請求項において定義されるので、この範囲を限定するものとして解釈されるべきではきない。合成方法及び具体的な例のすべての代替物、修飾物、及び均等物は、請求の範囲内に含まれる。
【０１００】
３．使用方法及びキット
本開示の化合物は、ルシフェラーゼ基質（例えばセレンテラジン類似体）が使用される任意の手法において使用され得る。例えば、本開示の化合物は、サンプル中の１つまたは複数の分子（例えば酵素、酵素反応のためのコファクター、酵素基質、酵素抑制物質、酵素活性化物質、またはＯＨラジカル）、または１つまたは複数の条件（例えば酸化還元条件）を検出するために、セレンテラジンの類似体を用いる生物発光性の方法において使用され得る。サンプルとしては、動物（例えば脊椎動物）、植物、真菌、生理的液体（例えば血液、血漿、尿、粘液分泌）、細胞、細胞溶解物、細胞上清、または細胞の精製画分（例えば細胞下分画）が挙げられ得る。かかる分子の存在、量、スペクトル分布、放出動態、または特異的活性は、検出または定量化され得る。分子は、多相溶液（例えばエマルションまたは懸濁物）を含む溶液中で、または固体支持体（例えば粒子、毛細管、またはアッセイ容器）上で、検出または定量化され得る。
【０１０１】
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物は、関心の分子を定量化するために使用され得る。いくつかの実施形態において、セレンテラジン類似体（例えば天然もしくは既知のセレンテラジン、または式（Ｉ）もしくは式（ＩＩ）の化合物）は、特異的な生化学的活性（例えばアポトーシスまたは薬物代謝）のプローブとして使用され得る。
【０１０２】
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ属由来のルシフェラーゼ及び／またはＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ属のルシフェラーゼ由来の生物発光複合体の阻害物質と共に使用され得る。Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ属由来のルシフェラーゼ及び／またはＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ属のルシフェラーゼ由来の生物発光複合体の例示的な阻害物質は、例えば国際公開第ＷＯ２０１６／２１０２９４号及び同第ＷＯ２０１８／１２５９９２号、ならびに２０１８年６月１日に出願された米国特許出願第６２／６７９，２０５号、ならびに２０１８年５月１日に出願された米国特許出願第６２／６６５，３４６号（それらのすべては、全体が参照により本明細書に援用される）中で記載される。
【０１０３】
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物は、生細胞（例えばインビボ）における発光の検出のために使用され得る。いくつかの実施形態において、ルシフェラーゼは、細胞内で（レポーターとして、または他の方法で）発現され、細胞は、セレンテラジン類似体（例えば式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物）により処理され、セレンテラジン類似体は、培養における細胞を透過し、ルシフェラーゼと反応し、発光を生成するだろう。式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物は、細胞透過性であることに加えて、細胞生存率の点から天然のセレンテラジンに匹敵する生体適合性を示す。いくつかの実施形態において、培地中の天然のセレンテラジンの安定性を増加させることが既知である化学修飾を含有する式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物が合成され、よりロバストな生細胞のルシフェラーゼベースのレポーターアッセイのために使用され得る。さらに他の実施形態において、ルシフェラーゼ及び式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物を含有するサンプル（細胞、組織、動物などが挙げられる）は、様々な顕微鏡法及び画像化技法（例えばインビボの画像化）を使用して、アッセイされ得る。さらに他の実施形態において、分泌可能ルシフェラーゼは、生細胞レポーター系の一部分として細胞において発現される。
【０１０４】
ある特定の実施形態において、本明細書において開示される式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物は、キットの一部分として提供され得る。いくつかの実施形態において、キットは、好適な試薬、及びユーザーが本明細書において開示されるもの等のアッセイを遂行することを可能にする指示書と一緒に、１つまたは複数のルシフェラーゼ（ポリペプチド、ポリヌクレオチド、または両方の形態で）及び式（Ｉ）または式（ＩＩ）のセレンテラジン類似体を含み得る。キットは、本明細書において開示されるもの等の１つまたは複数の緩衝液も含み得る。いくつかの実施形態において、キットは、上記のようなＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ属由来のルシフェラーゼ及び／またはＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ属のルシフェラーゼ由来の生物発光複合体の阻害物質をさらに含み得る。
【０１０５】
緩衝液は、クエン酸もしくはクエン酸塩緩衝液、ＭＥＳ、１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸、またはＨＥＰＥＳ；無機リン酸塩（例えばピロリン酸塩またはリン酸カリウムの形態で）；キレーター（ＥＤＴＡ、ＣＤＴＡ、または１，２−ジアミノシクロヘキサンテトラ酢酸等）；塩（フッ化ナトリウム、硫酸マグネシウム等）；界面活性物質またはデタージェント（ＴＥＲＧＩＴＯＬ（登録商標）（例えば非イオン性ノニルフェノールエトキシレート）、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド（ＤＴＡＢ）、またはＴＨＥＳＩＴ（登録商標）（ヒドロキシポリエトキシドデカン）等）；消泡剤（ＩＮＤＵＳＴＲＯＬ（登録商標）ＤＦ２０４（有機系消泡剤）、またはＭＡＺＵ（登録商標）ＤＦ（シリコーン消泡剤）等）；タンパク質安定化剤（ゼラチン、ＰＲＩＯＮＥＸ（登録商標）１０％（ゼラチン、Ａ型）、またはアルブミン（例えばＢＳＡ、ＨＳＡ）、またはグリセロール等）；アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、またはアデノシン一リン酸（ＡＭＰ）を含む。他の構成成分としては、ポリエチレングリコール、ポリビニルピリジン、クラウンエーテル、またはシクロデキストリンが挙げられ得る。
【０１０６】
Ａ．インビボ画像化
本開示の化合物は、生細胞の画像化（インビボ及びエクスビボの生物発光画像化等）のために使用され得る。例えば、本開示の化合物は、組織切片または生きている動物中の細胞の生物発光による画像化のためにルシフェラーゼを利用するセレンテラジンと共に使用され得る。インビボの生物発光画像化は、細胞または組織から放出される光の検出に基づく、多用性があり高感度のツールである。生物発光は、腫瘍細胞、細菌及びウイルスの感染、遺伝子発現、ならびに治療応答を非侵襲性様式で追跡するために使用されてきた。生物発光画像化は、同じ動物における疾患経過の縦断的なモニタリングを提供し、これは、疾患の経過の間に多くの時間点で多数の動物を分析することに対する所望される代替物である。いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、生物学的プロセス（様々な動物モデルにおける、細胞運動、腫瘍進行、遺伝子発現、及びウイルス感染等）をモニターするためにインビボで使用され得る。いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、遺伝子導入動物（遺伝子導入マウス等）において画像化するために使用され得る。遺伝子導入動物（細胞または組織を包含する）は、ヒトにおける細胞機能及び疾患のモデルを表し得る。したがって、これらの動物は、細胞機能及び関連する事象の背後にあるメカニズムを研究することにおいて、産物（例えば抗体、小分子など）を生成及び試験することにおいて、ならびに関連するヒト疾患（がん及び自己免疫性病態が挙げられる）を治療及び診断することにおいて、有用である。いくつかの実施形態において、遺伝子導入動物は、ヒトへの投与のための特定の薬剤の安全性の指標をさらに提供し得る。薬剤の有効性は、特定の薬剤及び本開示の化合物を特異的な細胞または体全体へ投与し、生物発光画像化を遂行して特異的な有効性を探すことによって、研究され得る。動物及び細胞ベースのモデルならびに本開示の化合物は、疾患の治療において有効であり得る薬物、医薬品、治療法、及び介入を同定するために使用され得る。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、形質転換されて融合タンパク質（ルシフェラーゼを含む融合タンパク質等）を発現する細胞または動物の生物発光による画像化のために使用され得る。いくつかの実施形態において、遺伝子導入された動物または細胞は、ルシフェラーゼを含む融合タンパク質を発現し得る。いくつかの実施形態において、ルシフェラーゼは、セレンテラジンを利用するルシフェラーゼであり得、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ属またはＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ属由来のルシフェラーゼ、Ｒｅｎｉｌｌａ属のルシフェラーゼ、Ｇａｕｓｓｉａ属のルシフェラーゼ（Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓのルシフェラーゼ等）、Ｍｅｔｒｉｄｉａ属のルシフェラーゼ（Ｍｅｔｒｉｄｉａ  ｌｏｎｇａ及びＭｅｔｒｉｄｉａ  ｐａｃｉｆｉｃａのルシフェラーゼ等）、Ｖａｒｇｕｌａ属のルシフェラーゼ（Ｖａｒｇｕｌａ  ｈｉｌｇｅｎｄｏｒｆｉｉのルシフェラーゼ等）、Ｐｌｅｕｒｏｍａｍｍａ  ｘｉｐｈｉａｓのルシフェラーゼ、ならびにそのバリアント、組み換え体、及び突然変異等である。いくつかの実施形態において、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、プロモーターへ作動可能に連結される。いくつかの実施形態において、プロモーターは、構成的プロモーター、誘導可能プロモーター、抑制可能プロモーター、または調節可能プロモーターであり得る。いくつかの実施形態において、プロモーターは、組織特異的プロモーターであり得る。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、生物発光タンパク質及び異種の関心のタンパク質（蛍光タンパク質等）の融合タンパク質は、ペプチド結合によって互いに直接接続され得るか、または介在するアミノ酸配列によって分離され得る。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、生物発光タンパク質及び異種の関心のタンパク質（蛍光タンパク質等）に対して外来性の配列も含有し得る。例えば、融合タンパク質は、標的化配列もしくは局在化配列、タグ配列、他の蛍光タンパク質もしくは生物発光タンパク質の配列、または他の発色団を含み得る。いくつかの実施形態において、標的化配列は、特異的な組織、細胞タイプ（例えば筋肉細胞、心臓細胞、または神経細胞）、細胞内コンパートメント（例えばミトコンドリア、他の細胞内小器官、核、細胞質、または原形質膜）、またはタンパク質へ、融合タンパク質の局在を指向させ得る。さらに、融合物は、複数の蛍光タンパク質もしくは生物発光タンパク質、またはそのバリアント、及び／または他の選択されたタンパク質からの配列を含有し得る。いくつかの実施形態において、ルシフェラーゼは、ＨＡＬＯＴＡＧ（登録商標）タンパク質、または蛍光タンパク質（緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、または橙色−赤色蛍光タンパク質等）へ融合される。
【０１０９】
細胞内（遺伝子導入動物の細胞中等）で産生された生物発光は、当技術分野において周知の様々な手段によって画像化または検出され得る。例えば、遺伝子導入動物においてそれらの意図された部位へ局在化される融合タンパク質及び本開示の化合物は、多数の手法で画像化され得る。局所化を達成する時間の合理的な推定値は、当業者によって行われ得る。さらに、時間の関数としての局所化の状態は、融合タンパク質及び本開示の化合物から生成される生物発光を画像化することによって追跡され得る。画像化、または対象からの光子放出の測定は、何十分間も続き得るので、遺伝子導入動物は画像化プロセスの間に固定化され得る。
【０１１０】
インビボの画像化は、肉眼または任意の種類のカメラ（静止画またはビデオ）を使用して遂行され得る。生物発光の画像化は、例えば非常に低レベルの光（典型的には単一光子事象）を検出し、画像が構築され得るまで光子放出を集積することが可能な光検出器の使用を伴う。かかる高感度光検出器の例としては、事象がカメラによって検出される前に単一光子事象を強化するデバイス、及び検出システムに固有のバックグラウンドノイズを超えて単一光子を検出することが可能なカメラ（例えば液体窒素により冷却される）が挙げられる。使用される「光検出器デバイス」は、合理的な時間の量で哺乳動物の内部からの微弱な光の画像化を可能にし、かかるデバイスからのシグナルを使用して画像を構築するのに十分な高い感度を有するべきである。
【０１１１】
生物発光シグナルは、非常に高感度のインテンシファイア電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラにより検出され得る。ある特定の実施形態において、生物発光シグナルを検出するのに十分感度が高く、蛍光シグナルも検出するのに十分幅広いダイナミックレンジを備えた、インテンシファイアＣＣＤカメラが、画像化のために使用される。好適なカメラは当技術分野において公知であり、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＬＶ２００  Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ、ＬｉｖｉｎｇＩｍａｇｅ（商標）ソフトウェア（Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して制御される一体型画像化システム（ＩＶＩＳ（商標）Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ、Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、または注文製の２光子蛍光寿命画像化顕微鏡（Ｙａｓｕｄａ  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２００６；１６：５５１−５６１）が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、カメラは、麻酔、動物（マウス等）のためのプラットフォーム、及び内部の照明を提供する、耐光性の容器中に取り付けられる。
【０１１２】
インビボの画像化は、非侵襲性の動物全体の画像化であり得、それは１９９７年７月２２日のＣｏｎｔａｇ，Ｃ．、米国特許第５，６５０，１３５号；Ｃｏｎｔａｇ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ４（２）：２４５−２４７，１９９８；Ｃｏｎｔａｇ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ，ＯＳＡ  ＴＯＰＳ  ｏｎ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ａｎｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ３：２２０−２２４，１９９６；Ｃｏｎｔａｇ，Ｃ．Ｈ．，Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ  ６６（４）：５２３−５３１，１９９７；Ｃｏｎｔａｇ，Ｃ．Ｈ．，ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  １８（４）：５９３−６０３，１９９５（参照することによって本明細書に援用される）に記載されている。内部器官から放出される検出光の感度は、ルシフェラーゼ発現のレベル、身体内の標識細胞の深さ（光子が組織を介して移動しなければならない距離）、及び検出システムの感度を含む、複数の因子に依存する。
【０１１３】
「光子増幅デバイス」は、検出スクリーンにヒットする前に光子を増幅する。このクラスのものは、インテンシファイア（マイクロチャンネル増強管等）を備えたＣＣＤカメラを含む。マイクロチャンネルインテンシファイアは、典型的にはカメラの検出スクリーンに対して垂直であり、同一空間に広がるチャンネルの金属アレイを含有する。マイクロチャンネルアレイは、画像化されるサンプル、対象、または動物とカメラとの間に置かれる。アレイのチャンネルに侵入する大部分の光子は、出る前にチャンネルの側面に接触する。アレイを横切って印加された電圧は、各々の光子衝突から多くの電子の遊離をもたらす。かかる衝突からの電子は、「ショットガン」パターンでそれらのチャンネルの起点を出て、カメラによって検出される。
【０１１４】
画像プロセッサは、光子をカウントする光検出器デバイスによって生成されたシグナルを処理して、例えばモニター上に表示され得るか、またはビデオプリンターで印刷され得る画像を構築する。かかる画像プロセッサは、典型的には、上で記載される高感度光子計数カメラを含むシステムの一部分として販売され、したがって、同じ供給源から利用可能である。画像プロセッサは、パーソナルコンピューター（ＩＢＭ互換性のＰＣ、またはＡｐｐｌｅ  Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ（Ａｐｐｌｅ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ、Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ、Ｃａｌｉｆ．）等）へ通常接続され、それは購入された画像化システムの一部分として含まれても含まれなくてもよい。一旦画像がデジタルファイルの形式となったならば、それらは様々な画像処理プログラム（「ＡＤＯＢＥ  ＰＨＯＴＯＳＨＯＰ」、Ａｄｏｂｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｄｏｂｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｔ．Ｖｉｅｗ、Ｃａｌｉｆ．等）によって操作及び印刷され得る。
【０１１５】
動物または対象の全体が、必ずしも光検出デバイスの検出視野にある必要がないことが理解されよう。例えば、対象の特定の領域へ標的化される融合タンパク質を測定しているならば、所望される情報を得るために、その領域からの光及び十分な周囲の「暗い」ゾーンのみが測定される必要がある。
【０１１６】
一旦光子放出画像が生成されたならば、光子放出画像は、典型的には、対象の「通常の」反射光画像に重ね合わせられて、放出された光子の出所についての基準フレームを提供する（すなわち、対象に関して融合タンパク質を局在化させる）。次いで反射光画像上での光子放出画像の重ね合わせによって形成された「合成」画像を分析して、対象における標的の所在位置及び／または量を決定する。
【０１１７】
Ｂ．生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）
開示される化合物は、リガンド−タンパク質及び／またはタンパク質−タンパク質の相互作用を検出するための任意の方法において使用され得る。いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、インビボまたはインビトロの生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムにおいて使用され得る。ＢＲＥＴに関しては、生物発光ドナーから蛍光アクセプターへのエネルギー移動は、光の放出のスペクトル分布におけるシフトをもたらす。このエネルギー移動は、インビトロまたはインビボでのタンパク質−タンパク質またはリガンド−タンパク質の相互作用（パートナーの相互作用及び解離等）のリアルタイムモニタリングを可能にし得る。ＢＲＥＴシステム（ＮａｎｏＢＲＥＴ（商標）システム等）の例は、例えば米国特許第１０，０２４，８６２号、米国特許公開第２０１４／０１９４３０７号、米国特許第１０，０６７，１４９号、及び米国特許公開第２０１４／０１９４３２５号中で記載される。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、ＢＲＥＴ分析において使用される発光酵素を使用して、２つの分子が互いに結合することが可能であるか、または細胞中で共局在するかどうかを決定することができる。例えば、発光酵素を生物発光ドナー分子として使用し、それを関心の分子またはタンパク質と組み合わせて、第１の融合タンパク質を生成することができる。いくつかの実施形態において、蛍光酵素は、抗体、タンパク質、受容体、薬物、薬物担体、ペプチド、糖、脂肪酸、ナノ粒子、または他の生体分子とコンジュゲートされ得る。様々な実施形態において、第１の融合タンパク質は、発光酵素及び関心のタンパク質を含有する。様々な実施形態において、蛍光酵素を含有する第１の融合タンパク質は、細胞溶解物、インタクトな細胞、及び生きた動物が挙げられるがこれらに限定されないシステムにおけるタンパク質／タンパク質相互作用を検出するために、ＢＲＥＴ分析において使用され得る。いくつかの実施形態において、ＢＲＥＴ分析は、上記のようなＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ属由来のルシフェラーゼ及び／またはＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ属のルシフェラーゼ由来の生物発光複合体の阻害物質も含み得る。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、蛍光アクセプターは、フルオロフォア（蛍光タンパク質、蛍光分子、蛍光標識、または蛍光トレーサー等）であり得る。いくつかの実施形態において、蛍光トレーサーは、フルオロフォアへタグ付けされた小分子であり得る。いくつかの実施形態において、蛍光アクセプターは、第２の融合タンパク質（抗体、タンパク質、受容体、薬物、薬物担体、ペプチド、糖、脂肪酸、ナノ粒子、または他の生体分子へコンジュゲートされた蛍光アクセプターが挙げられる）であり得る。
【０１２０】
様々な実施形態において、ＨＡＬＯＴＡＧ（登録商標）は、蛍光アクセプター分子として使用され得る。いくつかの実施形態において、ＨＡＬＯＴＡＧ（登録商標）は、第２の関心のタンパク質へ、または発光酵素へ、融合され得る。例えば、発光酵素は、ＨＡＬＯＴＡＧ（登録商標）へ融合され、細胞または動物において発現され、蛍光ＨＡＬＯＴＡＧ（登録商標）リガンド（ＨＡＬＯＴＡＧ（登録商標）ＴＭＲリガンド等）により標識され得る。別の例において、発光酵素は、蛍光タンパク質へ融合され、細胞または動物において発現され得る。いくつかの実施形態において、ＢＲＥＴは、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＲＦＰ、橙色−赤色蛍光タンパク質が挙げられるがこれらに限定されない）または蛍光標識（非限定例としていくつか挙げると、フルオレセイン、ローダミングリーン、Ｏｒｅｇｏｎグリーン、またはＡｌｅｘａ  ４８８）と組み合わせて、発光酵素を使用して、遂行され得る。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、開示される化合物は、インタクトな細胞における選択された標的タンパク質の化合物結合（薬物：標的相互作用等）をリアルタイムで測定するために、標的係合アッセイ（ＮＡＮＯＢＲＥＴ（商標）Ｔａｒｇｅｔ  Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ（ＴＥ）Ａｓｓａｙ等）において使用され得る。例えば、ＮＡＮＯＢＲＥＴ（商標）ＴＥ  Ａｓｓａｙは、４つの構成成分：ブライトＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）ルシフェラーゼへ融合された、細胞発現される標的タンパク質；標的タンパク質へ特異的に結合する、細胞透過性蛍光トレーサー；基質としてＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）ルシフェラーゼのために使用される、開示される化合物のうちの１つまたは複数；及びＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）ルシフェラーゼのための細胞非透過性阻害物質を含み得る。当該アッセイは、ＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）ルシフェラーゼから、標的タンパク質−ＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）融合物へ結合される蛍光トレーサーへ、蛍光エネルギーを移動させることによって達成される、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）を使用する。このエネルギー移動は、化合物−標的の滞留時間だけでなく、化合物の結合親和性を直接測定することを可能にする。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、細胞へ適用された化合物は、細胞内標的タンパク質−ＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）融合物を特異的に係合することができ、ＢＲＥＴの減少をもたらすだろう。いくつかの実施形態において、細胞内標的係合の正確な査定を保証するために、ＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）阻害物質を使用して、健康な生きた細胞内で発現されるＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）ルシフェラーゼを悪影響を与えずに、取り扱いの間に損なわれた細胞から生じ得る任意の細胞外ＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）シグナルを軽減することができる。
【０１２３】
ＢＲＥＴシステムは、生物発光融合タンパク質から放出される検出光のための光検出器または画像化デバイス（光学顕微鏡、デジタル顕微鏡、ルミノメーター、電荷結合素子（ＣＣＤ）画像センサー、相補型金属酸化膜半導体（ＣＭＯＳ）画像センサー、またはデジタルカメラ等であるがこれらに限定されない）をさらに含み得る。
【０１２４】
Ｃ．製剤化及び投与
動物全体の研究のために、開示される画像化プローブは、非経口投与のために好ましく製剤化される。非経口製剤は、当技術分野において公知の技法を使用して、水性組成物として調製され得る。典型的には、かかる組成物は、溶液または懸濁物；再構成培地の添加に際して溶液または懸濁物を調製するのに好適な固体形態；エマルション（油中水型（ｗ／ｏ）エマルション、水中油型（ｏ／ｗ）エマルション及びそのマイクロエマルション等）、リポソーム、またはエマルソームとして調製される。
【０１２５】
本明細書において使用される時「非経口的」という用語は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下及び関節内の注射、及び点滴を包含する、投与モードを指す。
【０１２６】
担体は、例えば水、エタノール、１つまたは複数のポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、植物油（例えば落花生油、トウモロコシ油、ゴマ油など）等の油、及びその組み合わせを含有する、溶媒または分散媒であり得る。
【０１２７】
その遊離酸もしくは遊離塩基または薬理学的に許容可能な塩としての活性化合物の溶液及び分散物は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤（界面活性物質、分散媒、乳化剤、ｐＨ修飾剤、及びその組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない）と好適に混合されて、水または別の溶媒もしくは分散媒質中で調製され得る。
【０１２８】
好適な界面活性物質は、陰イオン性、陽イオン性、両性、または非イオン性の界面活性剤であり得る。好適な陰イオン性界面活性物質としては、カルボン酸イオン、スルホン酸イオン、及び硫酸イオンを含有するものが挙げられるがこれらに限定されない。陰イオン性界面活性物質の例としては、長鎖のアルキルスルホン酸及びアルキルアリールスルホン酸のナトリウム、カリウム、アンモニウムの塩（ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム等）；ジアルキルスルホコハク酸ナトリウム（ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム等）；ジアルキルスルホコハク酸ナトリウム（ビス−（２−エチルチオキシル（ｅｔｈｙｌｔｈｉｏｘｙｌ））スルホコハク酸ナトリウム等）；及びアルキル硫酸塩（ラウリル硫酸ナトリウム等）が挙げられる。陽イオン性界面活性物質としては、第四級アンモニウム化合物（塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、臭化セトリモニウム、ステアリルジメチルベンジル塩化アンモニウム等）、ポリオキシエチレン、及びココナッツアミンが挙げられるがこれらに限定されない。非イオン性界面活性物質の例としては、エチレングリコールモノステアレート、プロピレングリコールミリステート、グリセリルモノステアレート、グリセリルステアレート、ポリグリセリル−４−オレアート、ソルビタンアシレート、スクロースアシレート、ＰＥＧ−１５０ラウレート、ＰＥＧ−４００モノラウレート、ポリオキシエチレンモノラウレート、ポリソルベート、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ＰＥＧ−１０００セチルエーテル、ポリオキシエチレントリデシルエーテル、ポリプロピレングリコールブチルエーテル、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）４０１、ステアロイルモノイソプロパノールアミド、及びポリオキシエチレン水素化牛脂アミドが挙げられる。両性界面活性物質の例としては、ナトリウムＮ−ドデシル−β−アラニン、ナトリウムＮ−ラウリル−β−イミノジプロピオネート、ミリストアンホアセテート（ｍｙｒｉｓｔｏａｍｐｈｏａｃｅｔａｔｅ）、ラウリルベタイン、及びラウリルスルホベタインが挙げられる。
【０１２９】
製剤は、防腐物質を含有して微生物の増殖を防止することができる。好適な防腐物質としては、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、及びチメロサールが挙げられるがこれらに限定されない。製剤は、抗酸化剤も含有して活性薬剤の分解を防止することができる。
【０１３０】
製剤は、再構成に際して非経口投与のために典型的には３〜８のｐＨへ緩衝される。好適な緩衝液としては、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、及びクエン酸緩衝液が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１３１】
水溶性ポリマーは、非経口投与のために製剤中でしばしば使用される。好適な水溶性ポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、デキストラン、カルボキシメチルセルロース、及びポリエチレングリコールが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１３２】
滅菌済み注射可能溶液は、上でリストされた賦形剤のうちの１つまたは複数と共に、要求される量の活性化合物を適切な溶媒または分散媒中に取り込み、要求に応じて、続いて濾過滅菌することによって調製され得る。概して、分散物は、滅菌された様々な活性成分を、基本的な分散媒及び上でリストされたものからの必要される他の成分を含有する滅菌ビヒクルの中へ取り込むことによって調製される。滅菌済み注射可能溶液の調製のための滅菌粉末の事例において、調製の好ましい方法は、真空乾燥及び凍結乾燥の技法であり、それは、事前に濾過滅菌されたその溶液からの、活性成分と任意の追加の所望される成分との粉末をもたらす。粉末は、粒子が本質的に多孔性であり、粒子の溶解を増加させることができるようなやり方で、調製され得る。多孔質粒子を作製する方法は、当技術分野において周知である。
【０１３３】
４．実施例
実施例１。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（３−（メトキシメチル）ベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０３７２）
2021534211.tif 000069
ステップ１。３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−アミン（ＪＲＷ−０２１８）
2021534211.tif 000070
【０１３４】
ジオキサン（５ｍＬ）中の３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−アミン（３００ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）の溶液へ、（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ボロン酸（４３０ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を窒素によりパージしながら、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（９３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（３．４ｍＬ、１Ｍ、３．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６０℃で３０分間撹拌した。混合物を酢酸エチル及び水により希釈し、水層を酢酸エチルにより抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、茶色の固体として粗生成物（４９０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３９２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１３５】
ステップ２。メチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（ＪＲＷ−０２２６）
2021534211.tif 000071
【０１３６】
一般手順Ａに従って、３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−アミン（４５０ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を、メチル２−ジアゾ−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（８１４ｍｇ、３．４５ｍｍｏｌ）と反応させて、茶色の固体として所望される生成物（５００ｍｇ、７２％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６００ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１３７】
ステップ３。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（３−（メトキシメチル）ベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０３７０）
2021534211.tif 000072
【０１３８】
一般手順Ｂに従って、メチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（２７５ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を、３−（メトキシメチル）ベンズアルデヒド（７５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）と反応させて、黒紫色の固体として生成物及び脱シリル化生成物の混合物（１５７ｍｇ）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５６４， ４５０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１３９】
ステップ４。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（３−（メトキシメチル）ベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０３７２）
2021534211.tif 000073
【０１４０】
一般手順Ｆに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（３−（メトキシメチル）ベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（１５５ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（５２ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（８１ｍｇ、５２％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５６６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１４１】
実施例２。８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−２−（３−（メトキシメチル）ベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０３７３）
2021534211.tif 000074
一般手順Ｄに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（３−（メトキシメチル）ベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（７０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１ｍＬ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（２３ｍｇ、４２％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４５２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１４２】
実施例３。２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチル）−８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０７７７）
2021534211.tif 000075
ステップ１。２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチレン）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０７７５）
2021534211.tif 000076
【０１４３】
一般手順Ｂに従って、メチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（７２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルバルデヒド（２０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）と反応させて、赤黒色の固体として生成物及び脱シリル化生成物の混合物（２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５６４， ４５０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１４４】
ステップ２。２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチル）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０７７６）
2021534211.tif 000077
【０１４５】
一般手順Ｆに従って、２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチレン）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（２０ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色のガラスとして粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５６６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１４６】
ステップ３。２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチル）−８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０７７７）
2021534211.tif 000078
【０１４７】
一般手順Ｄに従って、２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチル）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．０３５ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１ｍＬ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（５ｍｇ、３ステップにわたって９％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４５２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１４８】
実施例４。８−ベンジル−２−（４−フルオロベンジル）−６−（３−ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０７８６）
2021534211.tif 000079
ステップ１。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（４−フルオロベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０７８４）
2021534211.tif 000080
【０１４９】
一般手順Ｂに従って、メチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（１３０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、４−フルオロベンズアルデヒド（３２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）と反応させて、赤黒色の固体として生成物及び脱シリル化生成物の混合物（１１０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５３８， ４２４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１５０】
ステップ２。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（４−フルオロベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０７８５）
2021534211.tif 000081
【０１５１】
一般手順Ｆに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（４−フルオロベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（１１０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（３９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の泡として粗生成物（９８ｍｇ）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１５２】
ステップ３。８−ベンジル−２−（４−フルオロベンジル）−６−（３−ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−０７８６）
2021534211.tif 000082
【０１５３】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（４−フルオロベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（９８ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（５０ｍｇ、３ステップにわたって５４％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１５４】
実施例５。８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−２−（チオフェン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０４０）
2021534211.tif 000083
ステップ１。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（チオフェン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０３８）
2021534211.tif 000084
【０１５５】
一般手順Ｂに従って、メチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（１１０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、チオフェン−２−カルバルデヒド（２５ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）と反応させて、赤黒色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１５６】
ステップ２。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（チオフェン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０３９）
2021534211.tif 000085
【０１５７】
一般手順Ｆに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（チオフェン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．１８ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（２０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の泡として所望される生成物（２０ｍｇ、２１％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１５８】
ステップ３。８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−２−（チオフェン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０４０）
2021534211.tif 000086
【０１５９】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（チオフェン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（２０ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、黄色の固体として所望される生成物（９ｍｇ、６０％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１６０】
実施例６。２，８−ジベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０４３）
2021534211.tif 000087
ステップ１。８−ベンジル−２−ベンジリデン−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０４１）
2021534211.tif 000088
【０１６１】
一般手順Ｂに従って、メチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（１００ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を、ベンズアルデヒド（２１ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として生成物及び脱シリル化生成物の混合物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２０， ４０６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１６２】
ステップ２。２，８−ジベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０４２）
2021534211.tif 000089
【０１６３】
一般手順Ｆに従って、８−ベンジル−２−ベンジリデン−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．１６ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（３１ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の泡として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１６４】
ステップ３。２，８−ジベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０４３）
2021534211.tif 000090
【０１６５】
一般手順Ｇに従って、２，８−ジベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（４０ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、黄橙色の固体として所望される生成物（４１ｍｇ、３ステップにわたって６１％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４０８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１６６】
実施例７。８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−２−（３−メトキシベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０４７）
2021534211.tif 000091
ステップ１。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（３−メトキシベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０４５）
2021534211.tif 000092
【０１６７】
一般手順Ｂに従って、メチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（１２５ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を、３−メトキシベンズアルデヒド（３４ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として生成物及び脱シリル化生成物の混合物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５５０， ４３６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１６８】
ステップ２。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（３−メトキシベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０４６）
2021534211.tif 000093
【０１６９】
一般手順Ｆに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（３−メトキシベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．２１ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（３８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の泡として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５５２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１７０】
ステップ３。８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−２−（３−メトキシベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０４７）
2021534211.tif 000094
【０１７１】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（３−メトキシベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．２１ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（５８ｍｇ、３ステップにわたって６３％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１７２】
実施例８。８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−２−（４−メトキシベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０５２）
2021534211.tif 000095
ステップ１。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（４−メトキシベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０４９）
2021534211.tif 000096
【０１７３】
一般手順Ｂに従って、メチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（１００ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を、４−メトキシベンズアルデヒド（２７ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として生成物及び脱シリル化生成物の混合物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５５０， ４３６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１７４】
ステップ２。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（４−メトキシベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０５１）
2021534211.tif 000097
【０１７５】
一般手順Ｆに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（４−メトキシベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．１６ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（３１ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５５２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１７６】
ステップ３。８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−２−（４−メトキシベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０５２）
2021534211.tif 000098
【０１７７】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（４−メトキシベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．１６ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（４１ｍｇ、３ステップにわたって５７％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１７８】
実施例９。８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−２−（（５−メチルフラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０５６）
2021534211.tif 000099
ステップ１。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（（５−メチルフラン−２−イル）メチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０５４）
2021534211.tif 000100
【０１７９】
一般手順Ｂに従って、メチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（１００ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を、５−メチルフラン−２−カルバルデヒド（２２ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として生成物及び脱シリル化生成物の混合物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２４， ４１０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１８０】
ステップ２。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（（５−メチルフラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０５５）
2021534211.tif 000101
【０１８１】
一般手順Ｆに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（（５−メチルフラン−２−イル）メチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．１６ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（３１ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１８２】
ステップ３。８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−２−（（５−メチルフラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１０５６）
2021534211.tif 000102
【０１８３】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（（５−メチルフラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．１６ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（１７ｍｇ、３ステップにわたって２５％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１８４】
実施例１０。８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１１８０）
2021534211.tif 000103
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（ＪＲＷ−１１６５）
2021534211.tif 000104
【０１８５】
一般手順Ａに従って、３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−アミン（４１０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル２−ジアゾ−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（５８２ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）と反応させて、茶色の固体として所望される生成物（５８０ｍｇ、８６％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６４２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１８６】
ステップ２。ｔｅｒｔ−ブチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１１６８）
2021534211.tif 000105
【０１８７】
一般手順Ｂに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（２５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を、５−トリフルオロメチルフラン−２−カルバルデヒド（７０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）と反応させて、紫色の泡として所望される生成物（１８０ｍｇ、７１％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６５２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１８８】
ステップ３。ｔｅｒｔ−ブチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）プロパノエート（ＪＲＷ−１１７０）
2021534211.tif 000106
【０１８９】
エタノール（２５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリレート（１８０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の溶液へ、ウィルキンソン触媒［クロリドトリス（ｃｈｌｏｒｉｄｏｔｒｉｓ）（トリフェニルホスファン）ロジウム（Ｉ）］（２５ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を鉄鋼製の反応容器中に置き、８０ｐｓｉの水素気体をチャージした。反応物を室温で４８時間撹拌した。次いで混合物をセライトを介して濾過し、エタノールにより洗浄し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、橙色の油として所望される生成物（１２３ｍｇ、６８％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６５４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１９０】
ステップ４。２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）プロパン酸（ＪＲＷ−１１７６）
2021534211.tif 000107
【０１９１】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）プロパノエート（１２３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１ｍＬ）と反応させて、橙色のゲルとして粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５９８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１９２】
ステップ５。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１１７８）
2021534211.tif 000108
【０１９３】
一般手順Ｅに従って、２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）プロパン酸（０．１８ｍｍｏｌ）を、ＣＤＩ（５８ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の泡として所望される生成物（７０ｍｇ、６７％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５７９ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１９４】
ステップ６。８−ベンジル−６−（３−ヒドロキシフェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１１８０）
2021534211.tif 000109
【０１９５】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（７０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（４６ｍｇ、８２％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４６５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１９６】
実施例１１。２−（フラン−２−イルメチル）−６−（３−ヒドロキシフェニル）−８−（３−メチルベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１３６８）
2021534211.tif 000110
ステップ１。５−ブロモ−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−アミン（ＪＲＷ−１３４１）
2021534211.tif 000111
【０１９７】
ＤＭＦ／ＴＨＦ（１：１、４０ｍＬ）中の３，５−ジブロモピラジン−２−アミン（２．５ｇ、９．９ｍｍｏｌ）の溶液へ、窒素によりパージしながら、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロライド（３４６ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を添加した。（３−メチルベンジル）亜鉛（ＩＩ）クロリド（４５ｍＬ、ＴＨＦ中で０．５Ｍ）を添加し、反応物を５０℃へ１時間加熱した。混合物を酢酸エチル及び水により希釈し、水層を酢酸エチルにより抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、黄色の油として所望される生成物（２．４５ｇ、８９％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２７９ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０１９８】
ステップ２。ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−ブロモ−３−（３−メチルベンキシル（ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｘｙｌ））ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（ＪＲＷ−１３４８）
2021534211.tif 000112
【０１９９】
一般手順Ａに従って、５−ブロモ−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−アミン（２．４５ｇ、８．８ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル２−ジアゾ−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（３．６８ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の油として所望される生成物（３．３８ｇ、７２％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２９ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２００】
ステップ３。ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−ブロモ−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１３４９）
2021534211.tif 000113
【０２０１】
一般手順Ｂに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−ブロモ−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（３．３８ｇ、６．４ｍｍｏｌ）を、フルフラール（７３７ｍｇ、７．７ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の油として所望される生成物（２．８ｇ、９３％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２０２】
ステップ４。ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１３５２）
2021534211.tif 000114
【０２０３】
ジオキサン（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−ブロモ−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（２３０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液へ、（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ボロン酸（１８５ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を窒素によりパージしながら、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（３９ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（０．９８ｍＬ、１Ｍ、０．９８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６０℃で１８時間撹拌した。混合物を酢酸エチル及び水により希釈し、水層を酢酸エチルにより抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、黄色の油として粗生成物（２４１ｍｇ）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５９８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２０４】
ステップ５。２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１３５８）
2021534211.tif 000115
【０２０５】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（２４０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１ｍＬ）と反応させて、橙茶色のゲルとして粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２０６】
ステップ６。６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）−８−（３−メチルベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１３６４）
2021534211.tif 000116
【０２０７】
一般手順Ｅに従って、２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．４０ｍｍｏｌ）を、ＣＤＩ（１３０ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）と反応させて、赤黒色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２０８】
ステップ７。６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）−８−（３−メチルベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１３６６）
2021534211.tif 000117
【０２０９】
一般手順Ｆに従って、６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）−８−（３−メチルベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．４０ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（４５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（１６０ｍｇ、２ステップにわたって７５％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２１０】
ステップ８。２−（フラン−２−イルメチル）−６−（３−ヒドロキシフェニル）−８−（３−メチルベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１３６８）
2021534211.tif 000118
【０２１１】
一般手順Ｇに従って、６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）−８−（３−メチルベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（１６０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（８３ｍｇ、６６％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２１２】
実施例１２。６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）−８−（３−メチルベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１３７０）
2021534211.tif 000119
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１３５３）
2021534211.tif 000120
【０２１３】
ジオキサン（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−ブロモ−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（２００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）の溶液へ、（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ボロン酸（１７２ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を窒素によりパージしながら、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（３４ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（０．８５ｍＬ、１Ｍ、０．８５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６０℃で１８時間撹拌した。混合物を酢酸エチル及び水により希釈し、水層を酢酸エチルにより抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、黄色の泡として粗生成物（２１０ｍｇ、８０％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６１６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２１４】
ステップ２。２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１３５９）
2021534211.tif 000121
【０２１５】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（２１０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１ｍＬ）と反応させて、茶色の油として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５６０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２１６】
ステップ３。６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）−８−（３−メチルベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１３６７）
2021534211.tif 000122
【０２１７】
一般手順Ｅに従って、２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．３４ｍｍｏｌ）を、ＣＤＩ（１１０ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）と反応させて、赤黒色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２１８】
ステップ４。６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）−８−（３−メチルベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１３６９）
2021534211.tif 000123
【０２１９】
一般手順Ｆに従って、６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）−８−（３−メチルベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．３４ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（３８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２２０】
ステップ５。６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）−８−（３−メチルベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１３７０）
2021534211.tif 000124
【０２２１】
一般手順Ｇに従って、６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）−８−（３−メチルベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．３４ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（８８ｍｇ、４ステップにわたって６０％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２２２】
実施例１３。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４０４）
2021534211.tif 000125
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（ＪＲＷ−１３５０）
2021534211.tif 000126
【０２２３】
一般手順Ａに従って、５−ブロモ−３−（３−メチルベンジル）ピラジン−２−アミン（１．０ｇ、３．８ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル２−ジアゾ−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（１．２６ｇ、４．５ｍｍｏｌ）と反応させて、茶色の油として所望される生成物（１．７ｇ、８７％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５１４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２２４】
ステップ２。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１３７２）
2021534211.tif 000127
【０２２５】
一般手順Ｂに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（１．１ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を、フルフラール（０．４７ｇ、５．０ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の油として所望される生成物（１．３ｇ、７４％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４５６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２２６】
ステップ３。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１３９４）
2021534211.tif 000128
【０２２７】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ボロン酸（０．１８ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の泡として所望される生成物（０．１６ｇ、５９％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６０２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２２８】
ステップ４。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１３９８）
2021534211.tif 000129
【０２２９】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．１６ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、茶色の油として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２３０】
ステップ５。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４００）
2021534211.tif 000130
【０２３１】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．２６ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０８４ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）と反応させて、赤茶色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２３２】
ステップ６。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４０２）
2021534211.tif 000131
【０２３３】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．２６ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０４９ｇ、１．３ｍｍｏｌ）と反応させて、茶色の泡として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５３０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２３４】
ステップ７。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４０４）
2021534211.tif 000132
【０２３５】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．２６ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、橙茶色の泡として所望される生成物（０．０７１ｍｇ、４ステップにわたって６５％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．７２ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ − ７．３８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３６ − ７．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２９ − ７．２２ （ｍ， １Ｈ）， ７．１６ − ７．０１ （ｍ， ３Ｈ）， ６．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２２ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２３６】
実施例１４。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４０５）
2021534211.tif 000133
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（５−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１３９５）
2021534211.tif 000134
【０２３７】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、（５−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ボロン酸（０．１８ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の泡として所望される生成物（０．１８ｇ、６７％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６０２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２３８】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（５−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１３９９）
2021534211.tif 000135
【０２３９】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（５−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．１８ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、茶色の油として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２４０】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（５−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４０１）
2021534211.tif 000136
【０２４１】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（５−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．２９ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０９４ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）と反応させて、黒紫色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２４２】
ステップ４。８−ベンジル−６−（５−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４０３）
2021534211.tif 000137
【０２４３】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（５−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．２９ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０５４ｇ、１．４ｍｍｏｌ）と反応させて、橙茶色の泡として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５３０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２４４】
ステップ５。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４０５）
2021534211.tif 000138
【０２４５】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（５−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．２９ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、橙茶色の泡として所望される生成物（０．０８３ｇ、４ステップにわたって６９％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．４９ − ７．３７ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３７ − ７．２１ （ｍ， ３Ｈ）， ７．１６ − ６．９９ （ｍ， ２Ｈ）， ６．９４ − ６．８５ （ｍ， １Ｈ）， ６．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１９ − ６．０６ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２１ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２４６】
実施例１５。６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４１１）
2021534211.tif 000139
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１４０６）
2021534211.tif 000140
【０２４７】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２５ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を、（５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−フルオロフェニル）ボロン酸（０．２１ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）と反応させて、薄黄色の泡として所望される生成物（０．３０ｇ、９４％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５８７ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２４８】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（５−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−３−ベンジルピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１４０８）
2021534211.tif 000141
【０２４９】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．３０ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、黒緑色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２５０】
ステップ３。（Ｚ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４１０）
2021534211.tif 000142
【０２５１】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（５−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−３−ベンジルピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．５１ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．２５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）と反応させて、赤黒色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２５２】
ステップ４。６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４１１）
2021534211.tif 000143
【０２５３】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．５１ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０５８ｇ、１．５ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（０．００６ｇ、３ステップにわたって２％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．７０ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ − ７．３６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３６ − ７．１９ （ｍ， ４Ｈ）， ７．０７ − ６．８７ （ｍ， ２Ｈ）， ６．８４ − ６．７７ （ｍ， １Ｈ）， ６．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２１ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２５４】
実施例１６。８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（３−ニトロフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４２４）
2021534211.tif 000144
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１４１７）
2021534211.tif 000145
【０２５５】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．３４ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を、（３−ニトロフェニル）ボロン酸（０．１９ｇ、１．１ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（０．３７ｇ、９９％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４９９ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２５６】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１４２１）
2021534211.tif 000146
【０２５７】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２６ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、茶色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２５８】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）−６−（３−ニトロフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４２３）
2021534211.tif 000147
【０２５９】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．５２ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．１７ｇ、１．０ｍｍｏｌ）と反応させて、赤黒色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２６０】
ステップ４。８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（３−ニトロフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４２４）
2021534211.tif 000148
【０２６１】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）−６−（３−ニトロフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．５２ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０９８ｇ、２．６ｍｍｏｌ）と反応させて、暗橙色の固体として所望される生成物（０．１３ｇ、３ステップにわたって６０％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ８．７５ （ｓ， １Ｈ）， ８．３５ − ８．１２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．７４ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４９ − ７．３８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３７ − ７．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２９ − ７．２０ （ｍ， １Ｈ）， ６．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２２ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２７ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２６２】
実施例１７。８−ベンジル−６−（３−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４７９）
2021534211.tif 000149
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−５−クロロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１４７０）
2021534211.tif 000150
【０２６３】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−５−クロロフェニル）ボロン酸（０．２５ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）と反応させて、薄茶色の泡として所望される生成物（０．２４ｇ、８８％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６１８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２６４】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−５−クロロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１４７４）
2021534211.tif 000151
【０２６５】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−５−クロロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２４ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、茶色の油として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５６２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２６６】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−５−クロロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４７６）
2021534211.tif 000152
【０２６７】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−５−クロロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．３９ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．１３ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２６８】
ステップ４。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−５−クロロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４７７）
2021534211.tif 000153
【０２６９】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−５−クロロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．３９ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０４４ｇ、１．２ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２７０】
ステップ５。８−ベンジル−６−（３−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４７９）
2021534211.tif 000154
【０２７１】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−５−クロロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．３９ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、橙色の泡として所望される生成物（０．１２ｇ、４ステップにわたって７１％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．８５ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ − ７．３６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３６ − ７．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２９ − ７．１７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．０８ （ｓ， １Ｈ）， ６．９０ （ｔ， Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２１ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２７２】
実施例１８。６−（３−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４８２）
2021534211.tif 000155
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１４６９）
2021534211.tif 000156
【０２７３】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ボロン酸（０．１２ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の固体として所望される生成物（０．２２ｇ、９７％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５１７ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２７４】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１４７１）
2021534211.tif 000157
【０２７５】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２２ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、橙色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４６１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２７６】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４７３）
2021534211.tif 000158
【０２７７】
一般手順Ｅに従って、Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．４３ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．１４ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２７８】
ステップ４。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４７５）
2021534211.tif 000159
【０２７９】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．４２ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０４８ｇ、１．３ｍｍｏｌ）と反応させて、所望される生成物（０．１７ｇ、３ステップにわたって９０％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２８０】
ステップ５。６−（３−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４８２）
2021534211.tif 000160
【０２８１】
一般手順Ｈに従って、８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．１７ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を、水素（１ａｔｍ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（０．０５８ｇ、３７％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．６７ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ − ７．３８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３７ − ７．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２９ − ７．１９ （ｍ， １Ｈ）， ７．０７ − ６．９９ （ｍ， １Ｈ）， ６．９６ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８３ （ｓ， １Ｈ）， ６．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２２ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２８２】
実施例１９。８−ベンジル−６−（４−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４８３）
2021534211.tif 000161
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−４−クロロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１４７２）
2021534211.tif 000162
【０２８３】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−４−クロロフェニル）ボロン酸（０．２５ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（０．２３ｇ、８４％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６１８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２８４】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−４−クロロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１４７８）
2021534211.tif 000163
【０２８５】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−４−クロロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２３ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５６２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２８６】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−４−クロロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４８０）
2021534211.tif 000164
【０２８７】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−４−クロロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．３７ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．１２ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）と反応させて、黒色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２８８】
ステップ４。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−４−クロロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４８１）
2021534211.tif 000165
【０２８９】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−４−クロロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．３７ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０７０ｇ、１．８ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２９０】
ステップ５。８−ベンジル−６−（４−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４８３）
2021534211.tif 000166
【０２９１】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−４−クロロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．３７ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、暗橙色の固体として所望される生成物（０．１１ｇ、４ステップにわたって６６％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．４９ − ７．３６ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３６ − ７．２１ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１８ （ｓ， １Ｈ）， ６．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１６ − ６．０９ （ｍ， １Ｈ）， ４．４４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２１ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２９２】
実施例２０。８−ベンジル−６−（２−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４８８）
2021534211.tif 000167
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−クロロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１４８４）
2021534211.tif 000168
【０２９３】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル（２−クロロ−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェノキシ）ジメチルシラン（０．２４ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の固体として所望される生成物（０．１９ｇ、６９％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６１８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２９４】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１４８５）
2021534211.tif 000169
【０２９５】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−クロロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．１８ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２９６】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（２−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４８７）
2021534211.tif 000170
【０２９７】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．２９ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０９４ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０２９８】
ステップ４。８−ベンジル−６−（２−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４８８）
2021534211.tif 000171
【０２９９】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（２−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．２９ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０５５ｇ、１．４ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（０．０７６ｇ、３ステップにわたって６０％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．５０ （ｓ， １Ｈ）， ７．４５ − ７．３８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３６ − ７．２２ （ｍ， ４Ｈ）， ７．０９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．５， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２３ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３００】
実施例２１。８−（４−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（３−ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４９８）
2021534211.tif 000172
ステップ１。５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−アミン（ＪＲＷ−１４０７）
2021534211.tif 000173
【０３０１】
一般手順Ｃに従って、５−ブロモピラジン−２−アミン（１．０ｇ、５．７ｍｍｏｌ）を、（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ボロン酸（１．７ｇ、６．９ｍｍｏｌ）と反応させて、白色の固体として所望される生成物（１．５６ｇ、９０％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３０２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３０２】
ステップ２。３−ブロモ−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−アミン（ＪＲＷ−１４０９）
2021534211.tif 000174
【０３０３】
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中で５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−アミン（１．５６ｇ、５．２ｍｍｏｌ）の溶液を調製し氷浴により冷却し、Ｎ−ブロモスクシンアミド（１．０ｇ、５．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を３０分間撹拌した。混合物を酢酸エチル及び水により希釈し、水層を酢酸エチルにより抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、茶色の固体として所望される生成物（１．５ｇ、７６％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３８０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３０４】
ステップ３。５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−（４−フルオロベンジル）ピラジン−２−アミン（ＪＲＷ−１４１２）
2021534211.tif 000175
【０３０５】
一般手順Ｃに従って、３−ブロモ−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ピラジン−２−アミン（０．５０ｇ、１．３ｍｍｏｌ）を、２−（４−フルオロベンジル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（０．４７ｇ、２．０ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（０．２８ｇ、５２％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３０６】
ステップ４。ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−（４−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（ＪＲＷ−１４８９）
2021534211.tif 000176
【０３０７】
一般手順Ａに従って、５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−（４−フルオロベンジル）ピラジン−２−アミン（０．２８ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル２−ジアゾ−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（０．２８ｇ、１．０ｍｍｏｌ）と反応させて、茶色の油として所望される生成物（０．２８ｇ、６２％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６６０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３０８】
ステップ５。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−（４−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１４９０）
2021534211.tif 000177
【０３０９】
一般手順Ｂに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−（４−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（０．２８ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を、フルフラール（０．０８１ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）と反応させて、所望される生成物（０．１５ｇ、５９％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６０２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３１０】
ステップ６。（Ｚ）−２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−（４−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１４９３）
2021534211.tif 000178
【０３１１】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−（４−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．１５ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３１２】
ステップ７。（Ｚ）−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−８−（４−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４９５）
2021534211.tif 000179
【０３１３】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−３−（４−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．２５ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０８１ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３１４】
ステップ８。６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−８−（４−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４９７）
2021534211.tif 000180
【０３１５】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−８−（４−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．２５ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０４７ｇ、１．２ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の橙色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５３０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３１６】
ステップ９。８−（４−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（３−ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１４９８）
2021534211.tif 000181
【０３１７】
一般手順Ｇに従って、６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−８−（４−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．２５ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、橙茶色の泡として所望される生成物（０．０８３ｇ、４ステップにわたって７７％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．７４ （ｓ， １Ｈ）， ７．５０ − ７．３７ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２０ − ７．００ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９３ − ６．８８ （ｍ， １Ｈ）， ６．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２１ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３１８】
実施例２２。８−ベンジル−６−（２−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５２５）
2021534211.tif 000182
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１５１５）
2021534211.tif 000183
【０３１９】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、（２−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（０．１５ｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の泡として所望される生成物（０．２２ｇ、９９％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５０４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３２０】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１５１９）
2021534211.tif 000184
【０３２１】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２２ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３２２】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（２−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５２３）
2021534211.tif 000185
【０３２３】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．４４ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．１４ｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）と反応させて、赤黒色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３２４】
ステップ４。８−ベンジル−６−（２−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５２５）
2021534211.tif 000186
【０３２５】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（２−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．４４ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０５１ｇ、１．３ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（０．１２ｇ、３ステップにわたって６４％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．８４ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ − ７．３７ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３６ − ７．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２９ − ７．２１ （ｍ， １Ｈ）， ７．０３ − ６．８８ （ｍ， ２Ｈ）， ６．６２ （ｄｔ， Ｊ ＝ １０．５， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２１ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３２６】
実施例２３。８−ベンジル−６−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５２６）
2021534211.tif 000187
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１５１６）
2021534211.tif 000188
【０３２７】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（０．１４ｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の泡として所望される生成物（０．２０ｇ、９４％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４８８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３２８】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１５２０）
2021534211.tif 000189
【０３２９】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３３０】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５２４）
2021534211.tif 000190
【０３３１】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．４１ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．１３ｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）と反応させて、黒紫色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３３２】
ステップ４。８−ベンジル−６−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５２６）
2021534211.tif 000191
【０３３３】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．４１ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０４７ｇ、１．２ｍｍｏｌ）と反応させて、橙茶色の泡として所望される生成物（０．１３ｇ、３ステップにわたって７６％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．５０ （ｓ， １Ｈ）， ７．４５ − ７．３７ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３７ − ７．１８ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１４ （ｄｔ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２２ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３３４】
実施例２４。６−（３−アミノ−５−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５３５）
2021534211.tif 000192
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−フルオロ−５−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１５２７）
2021534211.tif 000193
【０３３５】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、２−（３−フルオロ−５−ニトロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（０．２３ｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の橙色の泡として所望される生成物（０．２１ｇ、９２％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５１７ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３３６】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−フルオロ−５−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１５２９）
2021534211.tif 000194
【０３３７】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−フルオロ−５−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２１ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４６１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３３８】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−フルオロ−５−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５３１）
2021534211.tif 000195
【０３３９】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−フルオロ−５−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．４１ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．１３ｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３４０】
ステップ４。８−ベンジル−６−（３−フルオロ−５−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５３３）
2021534211.tif 000196
【０３４１】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−フルオロ−５−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．４１ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０７６ｇ、２．０ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３４２】
ステップ５。６−（３−アミノ−５−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５３５）
2021534211.tif 000197
【０３４３】
一般手順Ｈに従って、８−ベンジル−６−（３−フルオロ−５−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．４１ｍｍｏｌ）を、水素（１ｔｍ）と反応させて、橙茶色の泡として所望される生成物（０．０３７ｇ、４ステップにわたって２２％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．７４ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ − ７．３６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３６ − ７．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２８ − ７．１８ （ｍ， １Ｈ）， ６．８５ − ６．７０ （ｍ， １Ｈ）， ６．７０ − ６．５７ （ｍ， １Ｈ）， ６．４８ （ｄｔ， Ｊ ＝ １１．０， ２．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２１ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３４４】
実施例２５。６−（３−アミノ−４−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５３６）
2021534211.tif 000198
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（４−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１５２８）
2021534211.tif 000199
【０３４５】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、（４−フルオロ−３−ニトロフェニル）ボロン酸（０．１６ｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の泡として所望される生成物（０．２０ｇ、８８％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５１７ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３４６】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（４−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１５３０）
2021534211.tif 000200
【０３４７】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（４−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４６１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３４８】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（４−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５３２）
2021534211.tif 000201
【０３４９】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（４−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．３９ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．１２ｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）と反応させて、赤黒色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３５０】
ステップ４。８−ベンジル−６−（４−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５３４）
2021534211.tif 000202
【０３５１】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（４−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．３９ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０７３ｇ、１．９ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３５２】
ステップ５。６−（３−アミノ−４−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１５３６）
2021534211.tif 000203
【０３５３】
一般手順Ｈに従って、８−ベンジル−６−（４−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．４１ｍｍｏｌ）を、水素（１ａｔｍ）と反応させて、橙茶色の泡として所望される生成物（０．０２８ｇ、４ステップにわたって１７％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．６５ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ − ７．３８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３６ − ７．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２８ − ７．２０ （ｍ， １Ｈ）， ７．１７ − ７．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ６．９５ − ６．８２ （ｍ， １Ｈ）， ６．３３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２１ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３５４】
実施例２６。６−（３−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（３−（メトキシメチル）ベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６０９）
2021534211.tif 000204
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（３−（メトキシメチル）フェニル）アクリレート（ＪＲＷ−１５９８）
2021534211.tif 000205
【０３５５】
一般手順Ｂに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（０．３３ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）を、３−（メトキシメチル）ベンズアルデヒド（０．１２ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）と反応させて、所望される生成物（０．０９４ｇ、２８％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５１１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３５６】
ステップ２。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（３−（メトキシメチル）フェニル）アクリレート（ＪＲＷ−１６００）
2021534211.tif 000206
【０３５７】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（３−（メトキシメチル）フェニル）アクリレート（０．０９ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、２−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（０．０７０ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の固体として所望される生成物（０．０７７ｇ、７７％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５７１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３５８】
ステップ３。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（３−（メトキシメチル）フェニル）アクリル酸（ＪＲＷ−１６０１）
2021534211.tif 000207
【０３５９】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（３−（メトキシメチル）フェニル）アクリレート（０．０７７ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、薄赤色の油として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５１５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３６０】
ステップ４。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（３−（メトキシメチル）ベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６０３）
2021534211.tif 000208
【０３６１】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（３−（メトキシメチル）フェニル）アクリル酸（０．１４ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０４４ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４９７ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３６２】
ステップ５。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（３−（メトキシメチル）ベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６０４）
2021534211.tif 000209
【０３６３】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（３−（メトキシメチル）ベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．１４ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０２５ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（０．０４０ｇ、３ステップにわたって５９％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４９９ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３６４】
ステップ６。６−（３−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（３−（メトキシメチル）ベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６０９）
2021534211.tif 000210
【０３６５】
一般手順Ｈに従って、８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（３−（メトキシメチル）ベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．０４０ｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を、水素（１ａｔｍ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（０．０１８ｇ、４８％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．７３ − ７．５８ （ｍ， １Ｈ）， ７．４５ − ７．３８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３７ − ７．１４ （ｍ， ８Ｈ）， ７．０６ − ６．９９ （ｍ， １Ｈ）， ６．９５ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８８ − ６．７６ （ｍ， １Ｈ）， ４．４３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．４０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２１ （ｓ， ２Ｈ）， ３．３６ （ｓ， ３Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４６７ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３６６】
実施例２７。６−（３−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６１０）
2021534211.tif 000211
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１６０２）
2021534211.tif 000212
【０３６７】
一般手順Ｂに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（０．３８ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を、５−（トリフルオロメチル）フラン−２−カルバルデヒド（０．１５ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の泡として所望される生成物（０．２１ｇ、５４％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３６８】
ステップ２。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１６０５）
2021534211.tif 000213
【０３６９】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリレート（０．０８０ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を、２−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（０．０６１ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）と反応させて、薄茶色の固体として所望される生成物（０．０８０ｇ、８９％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５８５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３７０】
ステップ３。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１６０６）
2021534211.tif 000214
【０３７１】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリレート（０．１０ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、紫色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５２９ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３７２】
ステップ４。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６０７）
2021534211.tif 000215
【０３７３】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリル酸（０．１７ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０５５ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５１１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３７４】
ステップ５。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６０８）
2021534211.tif 000216
【０３７５】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．１７ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０３２ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（０．０７１ｇ、３ステップにわたって８１％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５１３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３７６】
ステップ６。６−（３−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６１０）
2021534211.tif 000217
【０３７７】
一般手順Ｈに従って、８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．０７１ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を、水素（１ａｔｍ）と反応させて、橙茶色の固体として所望される生成物（０．０１２ｇ、１８％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．６８ （ｓ， １Ｈ）， ７．４９ − ７．３７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３５ − ７．２２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０８ − ７．００ （ｍ， １Ｈ）， ６．９６ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９３ − ６．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ６．３３ （ｄ， Ｊ ＝ ３．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２９ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４８３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３７８】
実施例２８。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６１９）
2021534211.tif 000218
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１６１１）
2021534211.tif 000219
【０３７９】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリレート（０．１３０ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル（２−フルオロ−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェノキシ）ジメチルシラン（０．１３ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）と反応させて、薄茶色の泡として所望される生成物（０．１２ｇ、７５％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ７００ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３８０】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１６１２）
2021534211.tif 000220
【０３８１】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリレート（０．１２ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、赤色の油として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６１４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３８２】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６１５）
2021534211.tif 000221
【０３８３】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）アクリル酸（０．１９ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０６０ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）と反応させて、紫色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５９６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３８４】
ステップ４。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６１８）
2021534211.tif 000222
【０３８５】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．１９ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０３５ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５９８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３８６】
ステップ５。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６１９）
2021534211.tif 000223
【０３８７】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（（５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル）メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．１９ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、所望される生成物（０．０５９ｇ、４ステップにわたって６６％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．７１ （ｓ， １Ｈ）， ７．４８ − ７．３９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３６ − ７．２１ （ｍ， ３Ｈ）， ７．１６ − ６．９８ （ｍ， ３Ｈ）， ６．９２ − ６．８８ （ｍ， １Ｈ）， ６．３８ − ６．２８ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２９ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４８４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３８８】
実施例２９。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（チオフェン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６２４）
2021534211.tif 000224
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（チオフェン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１５９５）
2021534211.tif 000225
【０３８９】
一般手順Ｂに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（０．３２ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を、チオフェン−２−カルバルデヒド（０．０８４ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）と反応させて、桃色の固体として所望される生成物（０．２４ｇ、８３％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３９０】
ステップ２。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（チオフェン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１６１３）
2021534211.tif 000226
【０３９１】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（チオフェン−２−イル）アクリレート（０．１０ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル（２−フルオロ−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェノキシ）ジメチルシラン（０．１１ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の油として所望される生成物（０．１０ｇ、７７％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６１８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３９２】
ステップ３。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（チオフェン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１６１６）
2021534211.tif 000227
【０３９３】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（チオフェン−２−イル）アクリレート（０．１０ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、橙色のガラスとして粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５６２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３９４】
ステップ４。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（チオフェン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６２０）
2021534211.tif 000228
【０３９５】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（チオフェン−２−イル）アクリル酸（０．１６ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０５２ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３９６】
ステップ５。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（チオフェン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６２２）
2021534211.tif 000229
【０３９７】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（チオフェン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．１６ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０３０ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０３９８】
ステップ６。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（チオフェン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６２４）
2021534211.tif 000230
【０３９９】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（チオフェン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．１６ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、所望される生成物（０．０４２ｇ、４ステップにわたって６１％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．６９ （ｓ， １Ｈ）， ７．４８ − ７．３９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３６ − ７．２０ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１５ − ７．００ （ｍ， ３Ｈ）， ７．００ − ６．９０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．３９ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４００】
実施例３０。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（４−フルオロベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６３４）
2021534211.tif 000231
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（４−フルオロフェニル）アクリレート（ＪＲＷ−１５９６）
2021534211.tif 000232
【０４０１】
一般手順Ｂに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（０．３２ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を、４−フルオロベンズアルデヒド（０．０９３ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）と反応させて、薄赤色の固体として所望される生成物（０．２２ｇ、７３％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４８５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４０２】
ステップ２。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（４−フルオロフェニル）アクリレート（ＪＲＷ−１６２６）
2021534211.tif 000233
【０４０３】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（４−フルオロフェニル）アクリレート（０．１０ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル（２−フルオロ−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェノキシ）ジメチルシラン（０．１１ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）と反応させて、白色の泡として所望される生成物（０．０８０ｇ、６１％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６３０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４０４】
ステップ３。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（４−フルオロフェニル）アクリル酸（ＪＲＷ−１６２８）
2021534211.tif 000234
【０４０５】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（４−フルオロフェニル）アクリレート（０．０８０ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、橙色のゲルとして粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５７４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４０６】
ステップ４。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（４−フルオロベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６３０）
2021534211.tif 000235
【０４０７】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（４−フルオロフェニル）アクリル酸（０．１３ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０４１ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５５６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４０８】
ステップ５。８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（４−フルオロベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６３２）
2021534211.tif 000236
【０４０９】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（４−フルオロベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．１３ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０２４ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の油として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５５８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４１０】
ステップ６。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（４−フルオロベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６３４）
2021534211.tif 000237
【０４１１】
一般手順Ｇに従って、８−ベンジル−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−２−（４−フルオロベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．１３ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、所望される生成物（０．０４０ｇ、４ステップにわたって７１％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．６８ （ｓ， １Ｈ）， ７．４４ − ７．２０ （ｍ， ７Ｈ）， ７．１６ − ６．９５ （ｍ， ５Ｈ）， ４．４０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１８ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４１２】
実施例３１。６−（３−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（４−フルオロベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６３５）
2021534211.tif 000238
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（４−フルオロフェニル）アクリレート（ＪＲＷ−１６２７）
2021534211.tif 000239
【０４１３】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（４−フルオロフェニル）アクリレート（０．１１ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を、２−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（０．０９１ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）と反応させて、薄茶色の固体として所望される生成物（０．１０ｇ、８１％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４１４】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（４−フルオロフェニル）アクリル酸（ＪＲＷ−１６２９）
2021534211.tif 000240
【０４１５】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（４−フルオロフェニル）アクリレート（０．１０ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、橙色の油として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４８９ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４１６】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（４−フルオロベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６３１）
2021534211.tif 000241
【０４１７】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（４−フルオロフェニル）アクリル酸（０．１９ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０６０ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４１８】
ステップ４。８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（４−フルオロベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６３３）
2021534211.tif 000242
【０４１９】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（４−フルオロベンジリデン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．１９ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０３５ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４２０】
ステップ５。６−（３−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−ベンジル−２−（４−フルオロベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６３５）
2021534211.tif 000243
一般手順Ｈに従って、８−ベンジル−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（４−フルオロベンジル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．１９ｍｍｏｌ）を、水素（１ａｔｍ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（０．０２９ｇ、４ステップにわたって３５％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．６４ （ｓ， １Ｈ）， ７．４５ − ７．３４ （ｍ， ４Ｈ）， ７．３４ − ７．２０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０７ − ６．９１ （ｍ， ４Ｈ）， ６．８８ − ６．７７ （ｍ， １Ｈ）， ４．４０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１８ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４２１】
実施例３２。６−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６４２）
2021534211.tif 000244
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−メチル−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１６３７）
2021534211.tif 000245
【０４２２】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．１３ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を、４，４，５，５−テトラメチル−２−（２−メチル−３−ニトロフェニル）−１，３，２−ジオキサボロラン（０．１１ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）と反応させて、薄橙色の固体として所望される生成物（０．１４ｇ、９８％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５１３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４２３】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−メチル−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１６３９）
2021534211.tif 000246
【０４２４】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−メチル−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．１４ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、橙色の油として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４５７ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４２５】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）−６−（２−メチル−３−ニトロフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６４０）
2021534211.tif 000247
【０４２６】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（２−メチル−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．２７ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０８７ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３９ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４２７】
ステップ４。８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（２−メチル−３−ニトロフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６４１）
2021534211.tif 000248
【０４２８】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）−６−（２−メチル−３−ニトロフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．２７ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０５１ｇ、１．３ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４２９】
ステップ５。６−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６４２）
2021534211.tif 000249
【０４３０】
一般手順Ｈに従って、８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（２−メチル−３−ニトロフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．２７ｍｍｏｌ）を、水素（１ａｔｍ）と反応させて、橙茶色の固体として所望される生成物（０．０６１ｇ、４ステップにわたって５５％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．４５ − ７．３５ （ｍ， ４Ｈ）， ７．３５ − ７．２０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．８， １．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．４， １．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３７ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２３ （ｓ， ２Ｈ）， １．９７ （ｓ， ３Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４３１】
実施例３３。８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（３−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６４５）
2021534211.tif 000250
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１６３６）
2021534211.tif 000251
【０４３２】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−ブロモピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．１９ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を、２−メチル−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェノール（０．１４ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）と反応させて、薄赤色の泡として所望される生成物（０．１７ｇ、８４％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４８４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４３３】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１６４３）
2021534211.tif 000252
【０４３４】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．３５ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、橙茶色の油として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４３５】
ステップ３。（Ｚ）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）−６−（３−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６４４）
2021534211.tif 000253
【０４３６】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−ベンジル−５−（３−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．３５ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０５６ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４３７】
ステップ４。８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−（３−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６４５）
2021534211.tif 000254
【０４３８】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチレン）−６−（３−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．３５ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０６６ｇ、１．７ｍｍｏｌ）と反応させて、所望される生成物（０．１０ｇ、３ステップにわたって７１％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．４５ − ７．３５ （ｍ， ４Ｈ）， ７．３５ − ７．２０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．１２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９４ − ６．８３ （ｍ， ２Ｈ）， ６．３５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３７ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２３ （ｓ， ２Ｈ）， ２．０３ （ｓ， ３Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４３９】
実施例３４。６−（３−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−（２−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６６７）
2021534211.tif 000255
ステップ１。５−ブロモ−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−アミン（ＪＲＷ−１６４８）
2021534211.tif 000256
【０４４０】
ＨＣｌ（２０ｍＬ、１Ｍ）中の亜鉛末（５．２ｇ、７９．４ｍｍｏｌ）の懸濁物を、１０分間撹拌した。固体を濾過し、メタノール及びＴＨＦにより洗浄し、フラスコへ移動し、真空下で１８時間乾燥させた。ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の１−（ブロモメチル）−２−フルオロベンゼン（５．０ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）の溶液を、亜鉛末へ添加した。混合物を２時間加熱還流し、次いで冷却し、沈降させた。上清を、ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の３，５−ジブロモピラジン−２−アミン（３．０ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）及びビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロライド（０．４２ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）の溶液へ添加した。懸濁物を５０℃へ１８時間加熱した。混合物を酢酸エチル及び水により希釈し、水層を酢酸エチルにより抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、薄黄色の固体として所望される生成物（１．３ｇ、３８％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２８３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４４１】
ステップ２。ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−ブロモ−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（ＪＲＷ−１６５２）
2021534211.tif 000257
【０４４２】
一般手順Ａに従って、５−ブロモ−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−アミン（１．３ｇ、４．６ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル２−ジアゾ−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（１．９ｇ、６．９ｍｍｏｌ）と反応させて、茶色の固体として所望される生成物（２．２ｇ、８７％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５３３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４４３】
ステップ３。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−ブロモ−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＴＵ−１３０１）
2021534211.tif 000258
【０４４４】
一般手順Ｂに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−ブロモ−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（１．１ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を、フルフラール（０．２５ｇ、２．６ｍｍｏｌ）と反応させて、黄色の油として所望される生成物（０．６１ｇ、６１％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４４５】
ステップ４。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１６５７）
2021534211.tif 000259
【０４４６】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−ブロモ−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を、２−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（０．１７ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の泡として所望される生成物（０．１４ｇ、６２％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５３５ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４４７】
ステップ５。（Ｚ）−２−（（５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１６５９）
2021534211.tif 000260
【０４４８】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．１４ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、茶色の油として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７９ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４４９】
ステップ６。（Ｚ）−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−８−（２−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６６１）
2021534211.tif 000261
【０４５０】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．２６ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０８４ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４６１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４５１】
ステップ７。６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−８−（２−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６６３）
2021534211.tif 000262
【０４５２】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−８−（２−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．２６ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０４９ｇ、１．３ｍｍｏｌ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４６３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４５３】
ステップ８。６−（３−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−（２−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６６７）
2021534211.tif 000263
【０４５４】
一般手順Ｈに従って、６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−８−（２−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．２６ｍｍｏｌ）を、水素（１ａｔｍ）と反応させて、橙茶色の泡として所望される生成物（０．０２３ｇ、４ステップにわたって２０％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．８１ （ｓ， １Ｈ）， ７．３９ （ｄ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３６ − ７．２５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１９ − ７．０８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．０６ − ６．８１ （ｍ， ３Ｈ）， ６．３３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２０ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４５５】
実施例３５。６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−８−（２−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６６８）
2021534211.tif 000264
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１６５８）
2021534211.tif 000265
【０４５６】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−ブロモ−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル（２−フルオロ−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェノキシ）ジメチルシラン（０．２２ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の油として所望される生成物（０．２１ｇ、８０％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６２０ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４５７】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１６６０）
2021534211.tif 000266
【０４５８】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２１ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、赤色の油として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５６４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４５９】
ステップ３。（Ｚ）−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−８−（２−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６６２）
2021534211.tif 000267
【０４６０】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−３−（２−フルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．３４ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．１１ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４６１】
ステップ４。６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−８−（２−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６６４）
2021534211.tif 000268
【０４６２】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−８−（２−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．３４ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０６４ｇ、１．７ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５４８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４６３】
ステップ５。６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−８−（２−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１６６８）
2021534211.tif 000269
【０４６４】
一般手順Ｇに従って、６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−８−（２−フルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．３４ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、所望される生成物（０．０５０ｇ、４ステップにわたって３４％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ７．８８ （ｓ， １Ｈ）， ７．４０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３６ − ７．２６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１９ − ６．９７ （ｍ， ５Ｈ）， ６．３３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２０ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４６５】
実施例３６。６−（３−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−（２，６−ジフルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１７４７）
2021534211.tif 000270
ステップ１。５−ブロモ−３−（２，６−ジフルオロベンジル）ピラジン−２−アミン（ＪＲＷ−１７２７）
2021534211.tif 000271
【０４６６】
ＨＣｌ（２０ｍＬ、１Ｍ）中の亜鉛末（９．５ｇ、１４５ｍｍｏｌ）の懸濁物を、１０分間撹拌した。固体を濾過し、メタノール及びＴＨＦにより洗浄し、フラスコへ移動し、真空下で１８時間乾燥させた。ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の２−（ブロモメチル）−１，３−ジフルオロベンゼン（１０．０ｇ、４８．３ｍｍｏｌ）の溶液を、亜鉛末へ添加した。混合物を２時間加熱還流し、次いで冷却し、沈降させた。上清を、ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の３，５−ジブロモピラジン−２−アミン（５．６ｇ、２２．０ｍｍｏｌ）及びビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロライド（０．７７ｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液へ添加した。懸濁物を５０℃へ１８時間加熱した。混合物を酢酸エチル及び水により希釈し、水層を酢酸エチルにより抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、薄黄色の固体として所望される生成物（４．２ｇ、６３％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３０１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４６７】
ステップ２。ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−ブロモ−３−（２，６−ジフルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（ＪＲＷ−１７３０）
2021534211.tif 000272
【０４６８】
一般手順Ａに従って、５−ブロモ−３−（２，６−ジフルオロベンジル）ピラジン−２−アミン（１．０ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル２−ジアゾ−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（１．４ｇ、５．０ｍｍｏｌ）と反応させて、茶色の固体として所望される生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５５１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４６９】
ステップ３。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−ブロモ−３−（２，６−ジフルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１７３３）
2021534211.tif 000273
【０４７０】
一般手順Ｂに従って、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（５−ブロモ−３−（２，６−ジフルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−２−（ジエトキシホスホリル）アセテート（３．３ｍｍｏｌ）を、フルフラール（０．３８ｇ、４．０ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の泡として所望される生成物（１．０ｇ、２ステップにわたって６５％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４９３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４７１】
ステップ４。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−（２，６−ジフルオロベンジル）−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１７４０）
2021534211.tif 000274
【０４７２】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−ブロモ−３−（２，６−ジフルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２１ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を、２−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（０．１７ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の油として所望される生成物（０．０８７ｇ、３７％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５５３ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４７３】
ステップ５。（Ｚ）−２−（（３−（２，６−ジフルオロベンジル）−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１７４２）
2021534211.tif 000275
【０４７４】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（３−（２，６−ジフルオロベンジル）−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．０８７ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４９７ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４７５】
ステップ６。（Ｚ）−８−（２，６−ジフルオロベンジル）−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１７４５）
2021534211.tif 000276
【０４７６】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（３−（２，６−ジフルオロベンジル）−５−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．１６ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０５１ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７９ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４７７】
ステップ７。８−（２，６−ジフルオロベンジル）−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１７４６）
2021534211.tif 000277
【０４７８】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−８−（２，６−ジフルオロベンジル）−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．１６ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０１８ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４８１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４７９】
ステップ８。６−（３−アミノ−２−フルオロフェニル）−８−（２，６−ジフルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１７４７）
2021534211.tif 000278
【０４８０】
一般手順Ｈに従って、８−（２，６−ジフルオロベンジル）−６−（２−フルオロ−３−ニトロフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．１６ｍｍｏｌ）を、水素（１ａｔｍ）と反応させて、橙色の固体として所望される生成物（０．０１４ｇ、４ステップにわたって２０％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ８．４５ − ７．７８ （ｍ， １Ｈ）， ７．４５ − ７．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．０７ − ６．８４ （ｍ， ５Ｈ）， ６．３４ （ｔ， Ｊ ＝ ２．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１１ （ｄ， Ｊ ＝ ３．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１９ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４５１ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４８１】
実施例３７。８−（２，６−ジフルオロベンジル）−６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１７５９）
2021534211.tif 000279
ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−３−（２，６−ジフルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（ＪＲＷ−１７５２）
2021534211.tif 000280
【０４８２】
一般手順Ｃに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−ブロモ−３−（２，６−ジフルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．２０ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル（２−フルオロ−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェノキシ）ジメチルシラン（０．２１ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）と反応させて、泡として所望される生成物（０．０９５ｇ、３６％）を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６３８ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４８３】
ステップ２。（Ｚ）−２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−３−（２，６−ジフルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（ＪＲＷ−１７５４）
2021534211.tif 000281
【０４８４】
一般手順Ｄに従って、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−３−（２，６−ジフルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリレート（０．０９５ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）と反応させて、赤色の泡として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５８２ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４８５】
ステップ３。（Ｚ）−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−８−（２，６−ジフルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１７５７）
2021534211.tif 000282
【０４８６】
一般手順Ｅに従って、（Ｚ）−２−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−３−（２，６−ジフルオロベンジル）ピラジン−２−イル）アミノ）−３−（フラン−２−イル）アクリル酸（０．１５ｍｍｏｌ）を、ジ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン（０．０４８ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）と反応させて、赤色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５６４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４８７】
ステップ４。６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−８−（２，６−ジフルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１７５８）
2021534211.tif 000283
【０４８８】
一般手順Ｆに従って、（Ｚ）−６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−８−（２，６−ジフルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチレン）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（２Ｈ）−オン（０．１５ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０１７ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）と反応させて、橙色の固体として粗生成物を得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５６６ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４８９】
ステップ５。８−（２，６−ジフルオロベンジル）−６−（２−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（ＪＲＷ−１７５９）
2021534211.tif 000284
一般手順Ｇに従って、６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フルオロフェニル）−８−（２，６−ジフルオロベンジル）−２−（フラン−２−イルメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（０．１５ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（１ｍＬ、６Ｍ）と反応させて、所望される生成物（０．０３０ｇ、４ステップにわたって４５％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ４） δ ８．２１ （ｓ， １Ｈ）， ７．４４ − ７．３１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２３ − ７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ７．０７ − ６．９３ （ｍ， ４Ｈ）， ６．３４ （ｔ， Ｊ ＝ ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１１ （ｄ， Ｊ ＝ ３．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２０ （ｓ， ２Ｈ）； ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３４ ［Ｍ ＋ Ｈ］+．
【０４９０】
実施例３８。発光特性
発光アッセイ手順：スクリーニングされる各々の化合物を、ＤＭＳＯ（５ｍＭ）中で溶解し、ＮＡＮＯ−ＧＬＯ（登録商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒ中で１００μＭへさらに希釈した。５００μｌの基質溶液を５００μｌのＮＡＮＯ−ＧＬＯ（登録商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒで連続的に希釈することによって、各々の基質について２倍希釈シリーズを調製した。次いで各々の希釈された基質タイトレーションを、ＣＯ2非依存性培地＋１０％のＦＢＳで希釈された精製ＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）ルシフェラーゼと、等体積で組み合わせた。各々の基質についての初期の光出力を、基質添加の３分後にＧＬＯＭＡＸ（登録商標）−Ｍｕｌｔｉ＋ルミノメーター中で測定し、次いでシグナル半減期を決定する手段として５分間の間隔で測定した。シグナル半減期をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｏｎｅ  Ｐｈａｓｅ  Ｄｅｃａｙ回帰を使用して計算し、Ｋｍ及びＶｍａｘをＭｉｃｈａｅｌｉｓ−Ｍｅｎｔｅｎ回帰を使用してＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して計算した。
【０４９１】
合成されたセレンテラジン類似体（式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物）を、ルシフェラーゼ基質としてのそれらの適性について評価した。ＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）ルシフェラーゼは、小さく（１９ｋＤａ）安定的であり、特に明るい酵素であるので、スクリーニングのために用いた。表１から、合成された化合物が、既知のセレンテラジン類似体（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン（フリマジン）、それはルシフェラーゼ基質としてセレンテラジンより優れていることが公知である）に匹敵する相対発光単位（ＲＬＵ）及び半減期データを保持することが実証される。フリマジンについてのＲＬＵ、半減期、及びＫｍ値を１．０へ設定する。
表１．セレンテラジン類似体についてのＲＬＵ、半減期、及び動態データの要約。
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【０４９２】
実施例３９。半減期の改善
セレンテラジンコアの６位フェニルのパラ位またはメタ位のいずれかでヒドロキシルを有する化合物について、シグナル減衰を比較した。ヒドロキシル基（またはアミノ基など）のパラ位からメタ位への移動は、シグナル動態における１０倍超の増加をもたらし、それによって、これらの基質はより幅広い使用が可能になった。代表的な実施例についての構造及び半減期値を、１へ設定されたフリマジンに比べて、以下で比較する。
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【０４９３】
実施例４０。可溶性試験
可溶性を査定するために、試験化合物を、４３ｍＭでエタノール／プロピレングリコール（１：１）の混合物中に溶解した。次いでこの５×ストック溶液をヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン／水／ＰＥＧ４００の溶液へ添加して、エタノール／プロピレングリコール／ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン／ＰＥＧ４００／水（１０：１０：１０：３５：３５）中の８．７ｍＭの製剤混合物を得た。混合物をボルテックス撹拌し、遠心分離した。上清をサンプリングし、紫外線−可視光線分光計で測定した。混合物を０．２ミクロンのシリンジフィルターを介して濾過し、濾液を測定し、上清に比較した。
【０４９４】
上清と濾液を比較した製剤中のＪＲＷ−１０４０のＵＶスペクトルを、図１中で示す。２つのＵＶスペクトルが重ね合わせられ、製剤中のＪＲＷ−１０４０が完全に可溶性であることが示される。フリマジンによる同じ実験を図２中に示す。スペクトルにおける差は、フリマジンが製剤中で完全に可溶性でないことを示す。これは、フリマジンに比較して可溶性が改善されることを示す例である。
【０４９５】
前述の詳細な記載及び付随する実施例は単に例示的であり、本発明の範囲に対する限定として見なすことはできず、もっぱら添付される請求項及びそれらの均等物によって定義されることが理解される。
【０４９６】
開示される実施形態への様々な変化及び修飾は当業者に明らかである。かかる変化及び修飾（本発明の使用のための化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、組成物、製剤、または方法に関係するものが挙げられるがこれらに限定されない）は、その趣旨及び範囲から逸脱せずに行われ得る。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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