(57)【要約】  ある特定の実施形態によれば、本開示は、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、補体成分に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む二重特異性抗原結合分子を提供する。ある特定の実施形態では、本開示の二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合し得、および／または約１０ｎＭのＥＣ５０でスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種への補体の沈着を促進し得る。本開示の抗体は、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種の増殖の阻害もしくは低減が望ましい疾患を処置するのに有用であり、および／または、例えば、皮膚感染、蜂窩織炎、肺炎、髄膜炎、尿路感染、毒素性ショック症候群、心内膜炎、骨髄炎、菌血症、もしくは敗血症を含むスタフィロコッカス感染を処置するのに治療上有益であるか、または外科的処置の結果として生じるスタフィロコッカス感染を予防するかもしくは処置するのに治療上有益である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された二重特異性抗原結合分子であって、
ａ）スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する第１の抗原結合ドメイン；
および
ｂ）補体成分に結合する第２の抗原結合ドメイン
を含む前記単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項２】
二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する、請求項１に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項３】
二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種へのヒトＣ１ｑの沈着を促進する、請求項１または２に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項４】
第１の抗原結合ドメインはスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）標的抗原に結合する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項５】
第１の抗原結合ドメインはスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＩｓｄＢ抗原に結合する、請求項４に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項６】
スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＩｓｄＢタンパク質は配列番号１６９のアミノ酸３〜５７４のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項７】
第２の抗原結合ドメインは補体成分Ｃ１ｑに結合する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項８】
補体成分Ｃ１ｑはヒトＣ１ｑである、請求項７に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項９】
第１の抗原結合ドメインは、表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、約１ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、または約０．０５ｐＭ未満のＫＤでスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＩｓｄＢに結合する、請求項５〜８のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項１０】
第２の抗原結合ドメインは、表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、約１ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、または約０．０５ｐＭ未満のＫＤで補体成分Ｃ１ｑに結合する、請求項７〜９のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項１１】
第１の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号１３８のアミノ酸配列または配列番号１５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）；
および
ｂ）配列番号１４６のアミノ酸配列または配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）に含まれる３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）
を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項１２】
ＨＣＤＲは、
ａ）配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、および配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）；
または
ｂ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３
を含む、請求項１１に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項１３】
ＬＣＤＲは、
ａ）配列番号１４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、および配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）；
または
ｂ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
を含む、請求項１２に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項１４】
第１の抗原結合ドメインは、
ａ）ＨＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）であって、配列番号１４０、１４２、１４４のアミノ酸配列を含む該セット、およびＬＣＤＲのセット（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）であって、配列番号１４８、１５０、１５２のアミノ酸配列を含む該セット；
または
ｂ）ＨＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）であって、配列番号１５６、１５８、１６０のアミノ酸配列を含む該セット、およびＬＣＤＲのセット（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）であって、配列番号１６４、１６６、１６８のアミノ酸配列を含む該セット
を含む、請求項１３に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項１５】
第１の抗原結合ドメインは、配列番号１３８／１４６または配列番号１５４／１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項１６】
第２の抗原結合ドメインはＣ１ｑに結合し、Ｃ１ｑは配列番号１７０、１７１、および１７２のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項１７】
二重特異性抗原結合分子は約１０ｎＭ以下のＩＣ５０でヒトＩｇＧ１−ｋへのヒトＣ１ｑの結合をブロックする、請求項１６に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項１８】
二重特異性抗原結合分子は約５０ｎＭ以下のＩＣ５０でヒトＩｇＭへのヒトＣ１ｑの結合をブロックする、請求項１７に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項１９】
第２の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号２、１０、１８、２６、３４、４２、５０、５８、６６、７４、８２、９０、９８、１０６、１１４、１２２、または１３０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲに含まれる３つのＨＣＤＲ；
および
ｂ）配列番号１４６のアミノ酸配列または配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲに含まれる３つのＬＣＤＲ
を含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項２０】
第２の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号４、１２、２０、２８、３６、４４、５２、６０、６８、７６、８４、９２、１００、１０８、１１６、１２４、または１３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；
ｂ）配列番号６、１４、２２、３０、３８、４６、５４、６２、７０、７８、８６、９４、１０２、１１０、１１８、１２６、または１３４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；
および
ｃ）配列番号８、１６、２４、３２、４０、４８、５６、６４、７２、８０、８８、９６、１０４、１１２、１２０、１２８、または１３６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３
を含む、請求項１９に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項２１】
第２の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
または
ｂ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む、請求項２０に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項２２】
第２の抗原結合ドメインは、
ａ）ＨＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）であって、配列番号４、６、８；配列番号１２、１４、１６；配列番号９２、９４、９６；配列番号１００、１０２、１０４；もしくは配列番号１０８、１１０、１１２のアミノ酸配列を含む該セット、およびＬＣＤＲのセット（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）であって、配列番号１４８、１５０、１５２のアミノ酸配列を含む該セット；
または
ｂ）ＨＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）であって、配列番号２０、２２、２４；配列番号２８、３０、３２；配列番号３６、３８、４０；配列番号４４、４６、４８；配列番号５２、５４、５６；配列番号６０、６２、６４；配列番号６８、７０、７２；配列番号７６、７８、８０；配列番号８４、８６、８８；配列番号１１６、１１８、１２０；配列番号１２４、１２６、１２８；もしくは配列番号１３２、１３４、１３６のアミノ酸配列を含む該セット、およびＬＣＤＲのセット（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）であって、配列番号１６４、１６６、１６８のアミノ酸配列を含む該セット
を含む、請求項２０に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項２３】
ａ）配列番号１４０、１４２、１４４のアミノ酸配列を含む３つのＨＣＤＲと、配列番号１４８、１５０、１５２のアミノ酸配列を含む３つのＬＣＤＲとを含む第１の抗原結合ドメイン；
および
ｂ）配列番号４、６、８のアミノ酸配列を含む３つのＨＣＤＲと、配列番号１４８、１５０、１５２のアミノ酸配列を含む３つのＬＣＤＲとを含む第２の抗原結合ドメイン
を含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項２４】
ａ）配列番号１４０、１４２、１４４のアミノ酸配列を含む３つのＨＣＤＲと、配列番号１４８、１５０、１５２のアミノ酸配列を含む３つのＬＣＤＲとを含む第１の抗原結合ドメイン；
および
ｂ）配列番号１０８、１１０、１１２のアミノ酸配列を含む３つのＨＣＤＲと、配列番号１４８、１５０、１５２のアミノ酸配列を含む３つのＬＣＤＲとを含む第２の抗原結合ドメイン
を含む、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項２５】
ａ）配列番号１３８／１４６または配列番号１５４／１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第１の抗原結合ドメイン；
および
ｂ）配列番号２／１４６、１０／１４６、９０／１４６、９８／１４６、１０６／１４６、６６／１６２、７４／１６２、８２／１６２、１８／１６２、２６／１６２、３４／１６２、４２／１６２、５０／１６２、５８／１６２、１１４／１６２、１２２／１６２、または１３０／１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第２の抗原結合ドメイン
を含む、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項２６】
ａ）第１の抗原結合ドメインは、配列番号１３８／１４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含み；
かつ
ｂ）第２の抗原結合ドメインは、配列番号２／１４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む、
請求項２５に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項２７】
ａ）第１の抗原結合ドメインは、配列番号１３８／１４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含み；
かつ
ｂ）第２の抗原結合ドメインは、配列番号１０６／１４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む、
請求項２５に記載の単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項２８】
配列番号１３８／１４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む参照抗体と同一のＩｓｄＢ上のエピトープに結合する単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項２９】
配列番号２／１４６または配列番号１０６／１４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む参照抗体と同一のヒトＣ１ｑ上のエピトープに結合する単離された二重特異性抗原結合分子。
【請求項３０】
請求項１〜２９のいずれか１項に記載の二重特異性抗原結合分子と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項３１】
請求項１〜２９のいずれか１項に記載の二重特異性抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項３２】
請求項３１に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項３３】
請求項３２に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項３４】
対象中でのスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種の増殖を阻害する方法であって、対象に請求項１〜２９のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗体または請求項３０に記載の医薬組成物を投与することを含む前記方法。
【請求項３５】
スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種はスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種はメチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
対象中でのスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種による感染を処置するかまたは予防する方法であって、対象に請求項１〜２９のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗体または請求項３０に記載の医薬組成物を投与することを含む前記方法。
【請求項３８】
スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種はスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種はメチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
第２の治療薬を投与することをさらに含む、請求項３４〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
第２の治療薬は、抗生物質、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）抗原に結合する抗体、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）毒素に結合する抗体、ヒトＣ１ｑまたはカニクイザルＣ１ｑに結合する抗体、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種に特異的なワクチン、抗体薬物コンジュゲート、抗生物質とコンジュゲートした二重特異性抗体、またはこれらの組み合わせを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
対象は、皮膚感染、蜂窩織炎、肺炎、髄膜炎、尿路感染、毒素性ショック症候群、心内膜炎、心膜炎、骨髄炎、菌血症、または敗血症を含む疾患または障害を有する、請求項３４〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
対象は外科的処置を受けているか、または受ける予定である、請求項３４〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
外科的処置はプロテーゼの移植を伴う、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
プロテーゼは義肢または人工関節である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
プロテーゼは義手または義足である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
プロテーゼは美容プロテーゼである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
美容プロテーゼは、義眼、またはシリコン製の手、指、乳房、足、つま先、または顔面インプラントである、請求項４７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、ＰＣＴ国際特許出願として２０１８年９月２７日に出願されており、２０１７年９月２９に出願された米国仮特許出願第６２／５６５，５６９号および２０１８年４月９日に出願された米国仮特許出願第６２／６５４，５７６号に対する優先権の利益を主張しており、それぞれの開示はその全体を参照によって本明細書に組み入れる。
【０００２】
本開示は、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原および補体成分に結合する二重特異性抗原結合分子ならびにその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）（特にメチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ））によるヒト感染は、流行状態に近づいている。２００５年において、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）による感染の死亡率は、米国では１００，０００人当たり６．３例であった。結果として、ワクチンの開発に関する重要な研究が行なわれている。ワクチン戦略は、莢膜多糖、鉄捕捉タンパク質ＩｓｄＢ、クランピング因子ａ、およびリポテイコ酸を標的としている。（非特許文献１）。しかしながら、このワクチンは臨床試験ではあまり有効ではなく、このことは、ワクチン戦略が複数の抗原および／または免疫反応の刺激の組み合わせを必要とする可能性があることを示唆する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｄａｕｍ他、Ｃｌｉｎ  Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．５４：５６０（２０１２年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）は、宿主の免疫反応を回避することに長けている。スタフィロコッカス感染に対する宿主の免疫反応の一側面は、細胞表面をオプソニン化して、補体により媒介される溶解および／または食作用をもたらす抗体を産生することである。スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種の莢膜多糖は、食作用から保護する。細胞表面タンパク質Ａは、食作用を阻害する抗体のＦｃ部分にも結合することにより、抗体を隔離する。一部の種は、補体機能および補体により媒介される溶解を阻害する分子を産生する。この特性により、特に生物が抗生物質耐性である場合には、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）感染を処置することが困難になる。そのため、スタフィロコッカス感染を阻害し得る、より有効な治療薬が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
第１の態様によれば、本開示は、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する第１の抗原結合ドメイン（Ｄ１）；および補体成分に結合する第２の抗原結合ドメイン（Ｄ２）を含む二重特異性抗原結合分子を提供する。古典的な補体成分は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、またはそれらの任意の断片（例えば、補体カスケードにより生成されるタンパク質分解断片）を含む。実施形態では、この二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する。さらなる実施形態では、この二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種への補体成分の沈着を促進する。実施形態では、この補体成分はＣ１ｑである。さらに他の実施形態では、Ｃ１ｑはヒトＣ１ｑである。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種は、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）またはスタフィロコッカス・エピデルミデス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）である。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原は下記を含む：５型莢膜多糖、８型莢膜多糖、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＨ、リポテイコ酸、細胞壁テイコ酸（ｗａｌｌ  ｔｅｉｃｈｏｉｃ  ａｃｉｄ）、リパーゼ、Ｖ８リパーゼ、脂肪酸修飾酵素、付着性マトリックス分子を認識する微生物表面成分（例えば、アドヘシン、フィブリノゲン結合分子、フィブロネクチン結合タンパク質Ａ、フィブロネクチン結合タンパク質Ｂ）、クランピング因子Ａ（ｃｌｆＡ）、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）、またはこれらの組み合わせ。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原は、鉄制御型表面決定因子（ｉｒｏｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ）Ｂ（ＩｓｄＢ）である。
【０００７】
ある特定の例示的な実施形態によれば、二重特異性抗原結合分子は、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原の鉄制御型表面決定因子Ｂ（ＩｓｄＢ）とヒトＣ１ｑとに結合し、そのような二重特異性抗原結合分子はまた、本明細書では「抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子」とも称される。この抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子の抗ＩｓｄＢ抗原結合ドメインは、ＩｓｄＢを発現する微生物（例えばスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ））のターゲティングに有用であり、この二重特異性分子の抗Ｃ１ｑ抗原結合ドメインは、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種へのＣ１ｑの沈着の促進に有用である。微生物上の標的抗原（例えばＩｓｄＢ）とヒトＣ１ｑとへの抗原結合分子の同時結合は、標的とされた微生物に向けられる死滅（細胞溶解）を促進する。従って、本開示の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子は、特に、微生物に関連するかまたは微生物により引き起こされる疾患および障害（例えば、感染、敗血症、および同類のもの）の処置に有用である。
【０００８】
本開示のこの態様に係る二重特異性抗原結合分子は、ＩｓｄＢに特異的に結合する第１の抗原結合ドメイン（Ｄ１）、およびヒトＣ１ｑに特異的に結合する第２の抗原結合ドメイン（Ｄ２）を含む。本開示は、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子（例えば二重特異性抗体）であって、各抗原結合ドメインは、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と対を形成している重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子を含む。本開示のある特定の例示的な実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗原結合ドメイン（Ｄ２）および抗ＩｓｄＢ（Ｄ１）抗原結合ドメインはそれぞれ、同一のまたは異なるＬＣＶＲと対を形成している様々な別個のＨＣＶＲを含む。例えば、本明細書の実施例３で説明されているように、抗ＩｓｄＢ抗体に由来するＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第１の抗原結合ドメイン；および抗Ｃ１ｑ抗体に由来するＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第２の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体を構築した。本明細書で開示されている例示的な分子では、抗ＩｓｄＢ抗体由来のＨＣＶＲと本明細書の表３で説明されている配列を有するＬＣＶＲとの対形成により、ＩｓｄＢに特異的に結合する（しかしＣ１ｑには結合しない）抗原結合ドメインが作成される。本明細書で開示されている例示的な分子では、抗Ｃ１ｑ抗体由来のＨＣＶＲと本明細書の表１で説明されている配列を有するＬＣＶＲとの対形成により、Ｃ１ｑに特異的に結合する（しかしＩｓｄＢには結合しない）抗原結合ドメインが作成される。
【０００９】
抗原結合分子は、本開示に関連して使用される場合、表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、約１ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、または約０．０５ｐＭ未満のＫＤで特定の抗原（例えば標的分子［Ｔ］またはその一部）に結合するポリペプチドを含む。
【００１０】
抗原結合ドメインは、表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、約１ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、または約０．０５ｐＭ未満のＫＤでスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原（例えばＩｓｄＢ（例えば標的分子［Ｔ］またはその一部）に結合するポリペプチドを含む。
【００１１】
抗原結合ドメインは、表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、約１ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、または約０．０５ｐＭ未満のＫＤで補体成分（例えばＣ１ｑ）に結合するポリペプチドを含む。
【００１２】
本開示は、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子であって、ＩｓｄＢに特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６９のアミノ酸３〜５７４のアミノ酸配列を含むＩｓｄＢに結合する、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子を提供する。スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）の種は、ＩｓｄＢの様々なアミノ酸配列を有し得る。そのようなアミノ酸配列は容易に得られる。
【００１３】
実施形態では、第１の抗原結合ドメインＤ１は、配列番号１３８のアミノ酸配列または配列番号１５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）に含まれるＨＣＶＲ  ＣＤＲ；および配列番号１４６のアミノ酸配列または配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）に含まれるＬＣＶＲ  ＣＤＲを含む。第１の抗原結合ドメインＤ１は、表３または表６に記載されたＨＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかを含む。第１の抗原結合ドメインＤ１は、表３または表６に記載されたＬＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかも含み得る。ある特定の実施形態によれば、第１の抗原結合ドメインＤ１は、配列番号１３８／１４６または配列番号１５４／１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。本開示はまた、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子であって、第１の抗原結合ドメインＤ１は、表３もしくは表６に記載された重鎖ＣＤＲ１−ＣＤＲ２−ＣＤＲ３アミノ酸配列の内のいずれか、および／または表３もしくは表６に記載された軽鎖ＣＤＲ１−ＣＤＲ２−ＣＤＲ３アミノ酸配列の内のいずれかを含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子も提供する。
【００１４】
ある特定の実施形態によれば、本開示は、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子であって、第１の抗原結合ドメインＤ１は、配列番号１３８、配列番号１５４のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子を提供する。
【００１５】
本開示はまた、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子であって、第１の抗原結合ドメインＤ１は、配列番号１４６、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子も提供する。
【００１６】
本開示はまた、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子であって、第１の抗原結合ドメインＤ１は、配列番号１４４、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）；および配列番号１５２、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子も提供する。ある特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインＤ１は、配列番号１４４／１５２、１４４／１６８、１６０／１５２、または１６０／１６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３対を含む。
【００１７】
本開示はまた、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子であって、第１の抗原結合ドメインＤ１は、配列番号１４０、配列番号１５６のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）；配列番号１４２、配列番号１５８のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）；および配列番号１４４、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子も提供する。実施形態では、第１の抗原結合ドメインＤ１は、配列番号１４８、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）；配列番号１５０、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）；および配列番号１５２、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む。
【００１８】
本開示のある特定の非限定的で例示的な抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子はそれぞれ、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３  ＣＤＲのセットを含む第１の抗原結合ドメインＤ１を含み、このＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３  ＣＤＲのセットは、配列番号１４０、１４２、１４４、１４８、１５０、１５２；１４０、１４２、１４４、１６４、１６６、１６８；１５６、１５８、１６０、１４８、１５０、１５２；または１５６、１５８、１６０、１６４、１６６、１６８のアミノ酸配列を含む。
【００１９】
本開示はまた、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子であって、Ｃ１ｑに特異的に結合する第２の抗原結合ドメインＤ２は、配列番号１７０、配列番号１７１、および配列番号１７２のアミノ酸配列を含むヒトＣ１ｑに結合する、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子も提供する。実施形態では、この二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＩＣ５０でヒトＩｇＧ１−ｋへのヒトＣ１ｑの結合をブロックする。他の実施形態では、この二重特異性抗原結合分子は、約５０ｎＭ以下のＩＣ５０でヒトＩｇＭへのヒトＣ１ｑの結合をブロックする。実施形態では、この二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でＣ１ｑの沈着をもたらす。
【００２０】
実施形態では、第２の抗原結合ドメインＤ２は、配列番号２、１０、１８、２６、３４、４２、５０、５８、６６、７４、８２、９０、９８、１０６、１１４、１２２、１３０のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＶＲ内に含まれるＨＣＶＲ  ＣＤＲを含む。
【００２１】
本開示はまた、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子であって、第２の抗原結合ドメインＤ２は、配列番号１４６、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＶＲ内に含まれるＬＣＶＲ  ＣＤＲを含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子を提供する。
【００２２】
本開示はまた、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子であって、第２の抗原結合ドメインＤ２は、配列番号２／１４６、１０／１４６、９０／１４６、９８／１４６、１０６／１４６、６６／１６２、７４／１６２、８２／１６２、１８／１６２、２６／１６２、３４／１６２、４２／１６２、５０／１６２、５８／１６２、１１４／１６２、１２２／１６２、または１３０／１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）対を含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子も提供する。
【００２３】
本開示はまた、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子であって、第２の抗原結合ドメインＤ２は、配列番号８、１６、２４、３２、４０、４８、５６、６４、７２、８０、８８、９６、１０４、１１２、１２０、１２８、１３６のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列に実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）；および配列番号１５２、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性分子も提供する。
【００２４】
ある特定の実施形態では、第２の抗原結合ドメインＤ２は、配列番号８／１５２、８／１６８、１６／１５２、１６／１６８、２４／１５２、２４／１６８、３２／１５２、３２／１６８、４０／１５２、４０／１６８、４８／１５２、４８／１６８、５６／１５２、５６／１６８、６４／１５２、６４／１６８、７２／１５２、７２／１６８、８０／１５２、８０／１６８、８８／１５２、８８／１６８、９６／１５２、９６／１６８、１０４／１５２、１０４／１６８、１１２／１５２、１１２／１６８、１２０／１５２、１２０／１６８、１２８／１５２、１２８／１６８、１３６／１５２、または１３６／１６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３対を含む。
【００２５】
本開示はまた、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子であって、第２の抗原結合ドメインＤ２は、配列番号４、１２、２０、２８、３６、４４、５２、６０、６８、７６、８４、９２、１００、１０８、１１６、１２４、もしくは１３２のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）；配列番号６、１４、２２、３０、３８、４６、５４、６２、７０、７８、８６、９４、１０２、１１０、１１８、１２６、もしくは１３４のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）；および配列番号８、１６、２４、３２、４０、４８、５６、６４、７２、８０、８８、９６、１０４、１１２、１２０、１２８、または１３６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子も提供する。実施形態では、第２の抗原結合ドメインＤ２は、配列番号１４８、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）；配列番号１５０、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）；および配列番号１５２、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む。
【００２６】
本開示のある特定の非限定的で例示的な抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子はそれぞれ、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３  ＣＤＲのセットを含む第２の抗原結合ドメインＤ２を含み、このＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３  ＣＤＲのセットは、配列番号４、６、８、１４８、１５０、１５２；１２、１４、１６、１４８、１５０、１５２；９２、９４、９６、１４８、１５０、１５２；１００、１０２、１０４、１４８、１５０、１５２；１０８、１１０、１１２、１４８、１５０、１５２；２０、２２、２４、１４８、１５０、１５２；２８、３０、３２、１４８、１５０、１５２；３６、３８、４０、１４８、１５０、１５２；４４、４６、４８、１４８、１５０、１５２；５２、５４、５６、１４８、１５０、１５２；６０、６２、６４、１４８、１５０、１５２；６８、７０、７２、１４８、１５０、１５２；７６、７８、８０、１４８、１５０、１５２；８４、８６、８８、１４８、１５０、１５２；１１６、１１８、１２０、１４８、１５０、１５２；１２４、１２６、１２８、１４８、１５０、１５２；１３２、１３４、１３６、１４８、１５０、１５２；４、６、８、１６４、１６６、１６８；１２、１４、１６、１６４、１６６、１６８；９２、９４、９６、１６４、１６６、１６８；１００、１０２、１０４、１６４、１６６、１６８；１０８、１１０、１１２、１６４、１６６、１６８；２０、２２、２４、１６４、１６６、１６８；２８、３０、３２、１６４、１６６、１６８；３６、３８、４０、１６４、１６６、１６８；４４、４６、４８、１６４、１６６、１６８；５２、５４、５６、１６４、１６６、１６８；６０、６２、６４、１６４、１６６、１６８；６８、７０、７２、１６４、１６６、１６８；７６、７８、８０、１６４、１６６、１６８；８４、８６、８８、１６４、１６６、１６８；１１６、１１８、１２０、１６４、１６６、１６８；１２４、１２６、１２８、１６４、１６６、１６８；または１３２、１３４、１３６、１６４、１６６、１６８のアミノ酸配列を含む。
【００２７】
関連する実施形態では、本開示は、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子であって、第２の抗原結合ドメインＤ２は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）の配列の対に含まれる重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含み、このＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対は、配列番号２／１４６、１０／１４６、９０／１４６、９８／１４６、１０６／１４６、６６／１６２、７４／１６２、８２／１６２、１８／１６２、２６／１６２、３４／１６２、４２／１６２、５０／１６２、５８／１６２、１１４／１６２、１２２／１６２、または１３０／１６２のアミノ酸配列を含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を含む。
【００２８】
実施形態では、単離された二重特異性抗原結合分子は、配列番号１４０、１４２、１４４のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ  ＣＤＲと、配列番号１４８、１５０、１５２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ  ＣＤＲとを含む第１の抗原結合ドメインＤ１；および配列番号４、６、８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ  ＣＤＲと、配列番号１４８、１５０、１５２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ  ＣＤＲとを含む第２の抗原結合ドメインＤ２を含む。他の実施形態では、単離された二重特異性抗原結合分子は、配列番号１４０、１４２、１４４のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ  ＣＤＲと、配列番号１４８、１５０、１５２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ  ＣＤＲとを含む第１の抗原結合ドメインＤ１；および配列番号１０８、１１０、１１２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ  ＣＤＲと、配列番号１４８、１５０、１５２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ  ＣＤＲとを含む第２の抗原結合ドメインＤ２を含む。さらなる実施形態では、単離された二重特異性抗原結合分子は、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対であって、配列番号１３８／１４６または配列番号１５４／１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第１の抗原結合ドメイン；およびＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対であって、配列番号２／１４６、１０／１４６、９０／１４６、９８／１４６、１０６／１４６、６６／１６２、７４／１６２、８２／１６２、１８／１６２、２６／１６２、３４／１６２、４２／１６２、５０／１６２、５８／１６２、１１４／１６２、１２２／１６２、または１３０／１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第２の抗原結合ドメインを含む。
【００２９】
別の態様では、本開示は、本明細書で開示されている抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子のＨＣＶＲ配列、ＬＣＶＲ配列、またはＣＤＲ配列の内のいずれかをコードする核酸分子（例えば、本明細書の表２および表４に記載されたポリヌクレオチド配列を含む核酸分子、ならびに任意の機能的組み合わせまたは配置で表２および表４に記載されたポリヌクレオチド配列の内の２つ以上を含む核酸分子）を提供する。本開示の核酸を保有する組み換え発現ベクター、およびそのようなベクターが導入されている宿主細胞も、抗体の産生を可能にする条件下でこの宿主細胞を培養し、産生された抗体を回収することにより抗体を製造する方法と同様に本開示に包含される。
【００３０】
本開示は、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子であって、Ｃ１ｑに特異的に結合する上述の抗原結合ドメインの内のいずれかが、ＩｓｄＢに特異的に結合する上述の抗原結合ドメインの内のいずれかと結合しているか、接続されているか、または別の方法で会合していて、Ｃ１ｑおよびＩｓｄＢに結合する二重特異性抗原結合分子が形成されている、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を含む。これらの抗原結合ドメインを、多数の異なる方法（例えば、本明細書で説明されている単鎖Ｆｖ、二重親和性再標的化タンパク質、タンデムダイアボディ、ノブおよびホールの対形成、電荷対形成、クロスＭａｂ、二重可変ドメインＩｇ、ｓ−Ｆａｂ、およびＦｖ−Ｆｃ）で結合し得る。
【００３１】
本開示は、グリコシル化パターンが変更されている抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を含む。いくつかの用途では、望ましくないグリコシル化部位を除去するための変更が有用であり得るか、または例えば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を高めるためにオリゴ糖鎖上に存在するフコース部分を欠く抗体が有用であり得る（Ｓｈｉｅｌｄ他（２００２年）ＪＢＣ  ２７７：２６７３３頁を参照されたい）。他の用途では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を変更するために、ガラクトシル化の変更を行ない得る（例えば、末端ガラクトースの付加によりＡＤＣＣが増強される）。
【００３２】
別の態様では、本開示は、本明細書で開示されている抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。関連する態様では、本開示は、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子と第２の治療薬との組み合わせである組成物を特徴とする。一実施形態では、この第２の治療薬は、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子と有利に組み合わされるあらゆる薬剤である。抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子と有利に組み合わせ得る例示的な薬剤として、抗生物質、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）抗原に結合する抗体、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）毒素に結合する抗体、ヒトＣ１ｑまたはカニクイザルＣ１ｑに結合する抗体、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種に特異的なワクチン、抗体薬物コンジュゲート（例えば、抗生物質と組み合わせた二重特異性抗体）が挙げられる。
【００３３】
さらに別の態様では、本開示は、対象中でのスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種の増殖を阻害する治療方法であって、この対象に、本明細書で説明されている単離された二重特異性抗原結合分子またはこの二重特異性抗原結合分子を含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。実施形態では、この方法は、対象中でのスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種による感染を処置する方法である。いくつかの実施形態では、この方法は、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種により引き起こされる疾患または障害を有する対象を処置するためであり、この疾患または障害は、皮膚感染、蜂窩織炎、肺炎、髄膜炎、尿路感染、毒素性ショック症候群、心内膜炎、心膜炎、骨髄炎、菌血症、または敗血症である。いくつかの実施形態では、この方法は、外科的処置を受けているかまたは受ける計画である対象を処置するためであり、この対象はスタフィロコッカス感染するリスクがある。いくつかの実施形態では、この外科的処置は、人工装具（例えば、腕もしくは足等の義肢、または股関節交換品）の移植を伴う。いくつかの実施形態では、この人工装具は美容人工装具（例えば、義眼、またはシリコン製の手、指、つま先、乳房、または顔面インプラント）である。
【００３４】
実施形態では、方法は、本開示の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を使用して、ＩｓｄＢ等の標的抗原を発現するスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）細胞を標的化する／死滅させる方法であって、この治療方法は、必要とする対象に、本開示の抗ＩｓｄＢ／抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を含む医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含む、方法である。
【００３５】
本開示はまた、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）に関連するかまたはスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）により引き起こされる疾患または障害の処置のための薬物の製造における本開示の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子の使用も含む。
【００３６】
他の実施形態は、下記の詳細な説明の検討から明らかになるだろう。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本開示を説明する前に、この開示は、説明されている特定の方法および実験条件には限定されず、そのような方法および条件は変化し得ることを理解すべきである。本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることから、本明細書で使用されている用語法は特定の実施形態を説明することをのみを目的としており、限定することは意図されていないことも理解すべきである。
【００３８】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者により一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、用語「約」は、特定の列挙された数値に関して使用される場合には、値が、列挙された値から１％以下変動する場合があることを意味する。例えば、本明細書で使用される場合、表現「約１００」には、９９および１０１と、それらの間の全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４等）とが含まれる。
【００３９】
本開示の実施または試験では、本明細書で説明されているものと類似のまたは等価のあらゆる方法および材料を使用し得るが、ここでは好ましい方法および材料を説明する。
【００４０】
定義
本明細書で使用される場合、「補体成分に結合する抗体」または「抗補体成分抗体」には、補体成分を特異的に認識する抗体およびその抗原結合断片が含まれる。一実施形態では、本開示の抗原結合分子は補体成分Ｃ１ｑに結合する。例示的なＣ１ｑタンパク質は、配列番号１７０、配列番号１７１、および配列番号１７２のアミノ酸配列を有する。
【００４１】
本明細書で使用される場合、表現「補体成分に結合する抗体」、「抗補体成分抗体」、または「抗Ｃ１ｑ抗体」には、単一の特異性を有する一価抗体、およびＩｓｄＢに結合する第１のアームとＣ１ｑに結合する第２のアームとを含む二重特異性抗体であって、抗Ｃ１ｑアームは、本明細書の表１または表６に記載されたＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列またはＣＤＲ配列の内のいずれかを含む、二重特異性抗体の両方が含まれる。抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の例は、本明細書の他の箇所で説明されている。
【００４２】
表現「Ｃ１ｑ」は、本明細書で使用される場合、補体カスケードのメンバーである補体成分Ｃ１ｑを指す。ヒト補体Ｃ１ｑは、３つの特有のサブユニット：Ａ（２９ｋＤａ）；Ｂ（２６ｋＤａ）；およびＣ（２２ｋＤａ）を含む六量体である。サブユニットＡの例示的な配列は、アクセッション番号ＮＰ＿０５７０７５のアミノ酸１〜２４５で見られ、且つ配列番号１７０に示されている。サブユニットＢの例示的な配列は、アクセッション番号ＮＰ＿０００４８２のアミノ酸１〜２５３で見られ、且つ配列番号１７１に示されている。サブユニットＣの例示的な配列は、アクセッション番号ＮＰ＿７５８９５７のアミノ酸１〜２４５で見られ、且つ配列番号１７２に示されている。実施形態では、Ｃ１ｑはヒトＣ１ｑである。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「Ｃ１ｑに結合する抗体」または「抗Ｃ１ｑ抗体」には、単一のＣ１ｑサブユニット（例えば、成分Ａ、Ｂ、またはＣ）を特異的に認識する抗体およびその抗原結合断片、ならびに三量体または六量体等の多量体を特異的に認識する抗体およびその抗原結合断片が含まれる。Ｃ１ｑには、天然のＣ１ｑタンパク質、および組み換えＣ１ｑタンパク質またはそのバリアントが含まれる。
【００４４】
本明細書で使用される場合、表現「Ｃ１ｑに結合する抗体」または「抗Ｃ１ｑ抗体」には、単一の特異性を有する一価抗体、およびスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する第１のアームとＣ１ｑに結合する第２のアームとを含む二重特異性抗体であって、抗Ｃ１ｑアームは、本明細書の表１または表６に記載されたＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列またはＣＤＲ配列の内のいずれかを含む、二重特異性抗体の両方が含まれる。抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の例は、本明細書の他の箇所で説明されている。
【００４５】
本明細書で使用される場合、表現「抗原結合分子」は、単独でまたは１つもしくはそれ以上の追加のＣＤＲおよび／もしくはフレームワーク領域（ＦＲ）との組み合わせで特定の抗原に特異的に結合する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むかまたはこの相補性決定領域（ＣＤＲ）からなるタンパク質、ポリペプチド、または分子複合体を意味する。実施形態では、抗原結合分子は、１つまたはそれ以上の抗原結合ドメインを含む。用語「抗原結合分子」には抗体および抗体の抗原結合断片が含まれ、例えば二重特異性抗体が含まれる。
【００４６】
表現「スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種」は、本明細書で使用される場合、微生物スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）の種を指す。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種は、スタフィロコッカス・エピデルミデス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・ルグドゥネンシス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ）、および／またはスタフィロコッカス・サプロフィティカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｉｔｉｃｕｓ）等のヒトでの感染と関連する種である。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「標的抗原」は、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種中でまたはスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種上で見出される抗原を指す。標的抗原として、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種の細胞表面上で見出される抗原が挙げられる。例示的な標的抗原として、５型莢膜多糖、８型莢膜多糖、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＨ、リポテイコ酸、細胞壁テイコ酸、クランピング因子Ａ（ｃｌｆＡ）、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）、リパーゼ、Ｖ８リパーゼ、脂肪酸修飾酵素、付着性マトリックス分子を認識する微生物表面成分（例えば、アドヘシン、フィブリノゲン結合分子、フィブロネクチン結合タンパク質Ａ、フィブロネクチン結合タンパク質Ｂ）、またはこれらの組み合わせが挙げられる。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する抗体」または「抗スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗体」には、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種の細胞表面上のまたはスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種中の標的抗原を特異的に認識する抗体およびその抗原結合断片が含まれる。一実施形態では、本開示の抗原結合分子は、「鉄制御型表面タンパク質（ｉｒｏｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）Ｂ」または「ＩｓｄＢ」と称される標的抗原に結合する。例示的なＩｓｄＢタンパク質は、配列番号１６９のアミノ酸３〜５７４のアミノ酸配列を有する。
【００４９】
本明細書で使用される場合、表現「スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する抗体」、「抗スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗体」または「抗ＩｓｄＢ抗体」には、単一の特異性を有する一価抗体、およびＩｓｄＢに結合する第１のアームとＣ１ｑに結合する第２のアームとを含む二重特異性抗体であって、抗ＩｓｄＢアームは、本明細書の表３または表６に記載されたＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列またはＣＤＲ配列の内のいずれかを含む、二重特異性抗体の両方が含まれる。抗ＩｓｄＢ二重特異性抗体の例は、本明細書の別の箇所で説明されている。一実施形態では、ＩｓｄＢに結合する１つのアームとＣ１ｑに結合する１つのアームとを含む二重特異性抗体は、下記の完全長アミノ酸配列を含む：Ｃ１ｑに結合する抗体の重鎖（ＨＣ）の完全長アミノ酸配列を含む配列番号１７３；ＩｓｄＢに結合する抗体の重鎖の完全長アミノ酸配列を含む配列番号１７４；ならびにＩｓｄＢおよびＣ１ｑに結合する二重特異性抗体の軽鎖（ＬＣ）の完全長アミノ酸配列を含む配列番号１７５。一実施形態では、これらの完全長配列を有する抗体はＨ１Ｈ２０６３１Ｄと命名されている。
【００５０】
用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、特定の抗原（例えばＣ１ｑ）に特異的に結合するかまたは相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むあらゆる抗原結合分子または分子複合体を意味する。用語「抗体」には、ジスルフィド結合により相互接続された４本のポリペプチド鎖（２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖）を含む免疫グロブリン分子、ならびにその多量体（例えばＩｇＭ）が含まれる。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ領域およびＶＬ領域を、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分化し得る。各ＶＨおよび各ＶＬは３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成されており、下記の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置されている。本開示の様々な実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体（またはその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよいし、天然にまたは人工的に変更されていてもよい。本開示の様々な実施形態では、抗ＩｓｄＢ抗体（またはその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよいし、天然にまたは人工的に変更されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列を、２つ以上のＣＤＲの並列分析に基づいて定義し得る。
【００５１】
用語「抗体」には、本明細書で使用される場合、完全抗体分子の抗原結合断片も含まれる。用語抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合ドメイン」、抗体の「抗原結合断片」、および同類のものには、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、あらゆる天然に存在する、酵素的に入手可能な、合成の、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質が含まれる。抗体の抗原結合断片は、任意の適切な標準技術（例えば、タンパク質分解消化、または抗体の可変ドメインおよび場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴う組み換え遺伝子操作技術）を使用して、例えば完全抗体分子から得られる。そのようなＤＮＡは既知であり、および／または例えば商業的供給源、ＤＮＡライブラリ（例えばファージ−抗体ライブラリ）から容易に入手可能であり、または合成される。ＤＮＡを配列決定し得、且つ化学的に操作し得るか、または分子生物学的技術を使用して、例えば、１つもしくはそれ以上の可変ドメインおよび／もしくは定常ドメインを適切な配置に配列するか、またはコドンを導入するか、システイン残基を作成するか、アミノ酸を改変するか、追加するか、もしくは欠失させることにより操作し得る。
【００５２】
本明細書で使用される場合、表現「抗原結合ドメイン」は、目的の特定の抗原（例えば、補体成分またはスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原）に特異的に結合し得るあらゆるペプチド、ポリペプチド、核酸分子、足場型分子、ペプチドディスプレイ分子、またはポリペプチド含有構築物を意味する。
【００５３】
用語「特異的に結合する」または同類のものは、本明細書で使用される場合、抗原結合ドメインが、２５ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）を特徴とする特定の抗原と複合体を形成することを意味する。本開示に関連して使用される抗原結合ドメインの例示的なカテゴリーとして下記が挙げられる：抗体、抗体の抗原結合部分、特定の抗原（例えばペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ））と特異的に相互作用するペプチド、特定の抗原と特異的に相互作用するレセプター分子、特定の抗原に特異的に結合するレセプターのリガンド結合部分を含むタンパク質、抗原結合足場（例えば、ＤＡＲＰｉｎ、ＨＥＡＴ反復タンパク質、ＡＲＭ反復タンパク質、テトラトリコペプチド反復配列、および天然に存在する反復タンパク質をベースとする他の足場等［例えば、Ｂｏｅｒｓｍａ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、２０１１年、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：８４９〜８５７頁、およびこの文献で引用されている参考文献を参照されたい］）、ならびにこれらのアプタマーまたは部分。
【００５４】
２つ分子が互いに特異的に結合するかどうかを決定する方法は当分野で公知であり、この方法として、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴、および同類のものが挙げられる。例えば、抗原結合分子として、本開示に関連して使用される場合、表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、約１ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、または約０．０５ｐＭ未満のＫＤで特定の抗原（例えば、標的分子［Ｔ］またはその一部）に結合するポリペプチドが挙げられる。
【００５５】
抗原結合断片の非限定的な例として下記が挙げられる：（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；（ｖｉｉ）抗原結合ドメイン、および（ｖｉｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、ＣＤＲ３ペプチド等の単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））、または拘束性ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチド。他の操作された分子、例えば、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディ等）、小モジュラー免疫薬（ｓｍａｌｌ  ｍｏｄｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインも、本明細書で使用される場合には表現「抗原結合断片」に含まれる。
【００５６】
抗体の抗原結合断片は概して、少なくとも１つの可変ドメインを含む。この可変ドメインは任意のサイズまたはアミノ酸組成であり得、一般に、１つまたはそれ以上のフレームワーク配列に隣接するかまたはこのフレームワーク配列のフレーム内である少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインと会合するＶＨドメインを有する抗原結合断片では、このＶＨドメインおよびＶＬドメインは、任意の適切な配置で互いに相対して位置する。例えば、可変領域は二量体であり得、ＶＨ−ＶＨ二量体、ＶＨ−ＶＬ二量体、またはＶＬ−ＶＬ二量体を含み得る。あるいは、抗体の抗原結合ドメインは、単量体ＶＨドメインまたは単量体ＶＬドメインを含み得る。
【００５７】
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合的に連結された少なくとも１つの可変ドメインを含み得る。本開示の抗体の抗原結合断片内に見出し得る可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的で例示的な配置として下記が挙げられる：（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬ。上記に列挙した例示的な配置の内のいずれかの、可変ドメインおよび定常ドメインの任意の配置において、この可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接連結されているか、または完全なもしくは部分的なヒンジ領域もしくはリンカー領域により連結されている。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子中の隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメインの間に柔軟なまたは半柔軟な連結を生じる少なくとも２つ（例えば、５個、１０個、１５個、２０個、４０個、６０個、またはより多く）のアミノ酸を含み得るか、またはこれらのアミノ酸からなり得る。さらに、本開示の抗体の抗原結合断片は、（例えばジスルフィド結合により）互いにおよび／または１つもしくはそれ以上の単量体ＶＨドメインもしくは単量体ＶＬドメインと非共有結合的に会合した、上記に列挙した可変ドメインおよび定常ドメインの配置の内のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含み得る。
【００５８】
完全な抗体分子と同様に、抗原結合断片は、単一特異性であってもよいし、多重特異性（例えば二重特異性）であってもよい。抗体の多重特異性抗原結合断片は概して、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別々の抗原に特異的に結合し得るか、または同一抗原上の異なるエピトープに結合し得る。本明細書で開示されている例示的な二重特異性抗体フォーマット等の任意の多重特異性抗体フォーマットは、当分野で利用可能な日常的な技術を使用して、本開示の抗体の抗原結合断片に関連する使用に適合される。
【００５９】
本開示の抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して機能し得る。「補体依存性細胞傷害」（ＣＤＣ）は、補体の存在下での本開示の抗体による抗原発現細胞の溶解を指す。「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」（ＡＤＣＣ）は、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上で結合した抗体を認識し、それにより標的細胞の溶解をもたらす、細胞媒介性反応を指す。ＣＤＣおよびＡＤＣＣを、当分野で公知であり且つ利用可能であるアッセイを使用して測定し得る（例えば、米国特許第５，５００，３６２号および同第５，８２１，３３７号、ならびにＣｌｙｎｅｓ他（１９９８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２〜６５６頁を参照されたい）。
【００６０】
本開示のある特定の実施形態では、本開示の抗Ｃ１ｑ抗体および／または抗ＩｓｄＢ抗体（単一特異性または二重特異性）はヒト抗体である。用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むことが意図されている。本開示のヒト抗体は、例えばＣＤＲ（特にＣＤＲ３）において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされていないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発により導入された変異、またはインビボでの体細胞変異により導入された変異）を含み得る。しかしながら、用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、マウス等の別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことは意図されていない。この用語には、非ヒト哺乳動物中でまたは非ヒト哺乳動物の細胞中で組み換えにより産生された抗体が含まれる。この用語は、ヒト対象から単離されたかまたはヒト対象中で生成された抗体を含むことは意図されていない。
【００６１】
本開示の抗体は、いくつかの実施形態では、組み換えヒト抗体であり得る。用語「組み換えヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、組み換え手段により製造されたか、発現されたか、作成されたか、または単離された全てのヒト抗体を含むことが意図されており、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組み換え発現ベクターを使用して発現された抗体（下記でさらに説明する）、組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体（下記でさらに説明する）、ヒト免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニックである動物（例えばマウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ他（１９９２年）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７〜６２９５頁を参照されたい）、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴うあらゆる他の手段により製造されたか、発現されたか、作成されたか、または単離された抗体を含むことが意図されている。そのような組み換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかしながら、ある特定の実施形態では、そのような組み換えヒト抗体は、インビトロでの変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に対してトランスジェニックな動物が使用される場合にはインビボでの体細胞変異誘発）を受けており、そのため、この組み換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列のＶＨ配列およびＶＬ配列に由来しかつ関連しているが、インビボでのヒト抗体生殖系列レパートリー内には天然には存在し得ない配列である。
【００６２】
ヒト抗体は、ヒンジの不均一性と関連する２つ形態で存在し得る。１つの形態では、免疫グロブリン分子は、鎖間重鎖ジスルフィド結合により二量体が一緒に保持されている約１５０〜１６０ｋＤａの安定した４本鎖構築物を含む。第２の形態では、二量体は鎖間ジスルフィド結合を介して連結されておらず、共有結合的に連結された軽鎖および重鎖から構成される約７５〜８０ｋＤａの分子が形成されている（半抗体）。これらの形態は、アフィニティ精製後であっても分離することが非常に困難であった。
【００６３】
様々な無傷のＩｇＧアイソタイプにおける第２の形態の出現頻度は、抗体のヒンジ領域のアイソタイプと関連する構造の差異に起因するがこれに限定されない。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域における単一アミノ酸置換により、第２の形態の出現を、ヒトＩｇＧ１ヒンジを使用して概して観察されるレベルまで有意に減少させ得る（Ａｎｇａｌ他（１９９３年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３０：１０５頁）。本開示は、例えば、製造において所望の抗体の形態の収率を改善するために望ましいヒンジ領域、ＣＨ２領域、またはＣＨ３領域での１つまたはそれ以上の変異を有する抗体を包含する。
【００６４】
本開示の抗体は単離抗体であり得る。「単離抗体」は、本明細書で使用される場合、抗体であって、この抗体の天然環境の少なくとも１つの成分から単離されており、かつ分離されている、および／または回収されている抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも１つの成分から分離されているかもしくは取り出されている抗体、または抗体であって、この抗体が天然に存在する組織もしくは細胞から分離されているかもしくは取り出されている抗体、または天然に産生されている抗体は、本開示の目的のための「単離抗体」である。単離抗体にはまた、組み換え細胞内のインサイチュの抗体も含まれる。単離抗体は、少なくとも１つの精製工程または単離工程に供された抗体である。ある特定の実施形態によれば、単離抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まない。
【００６５】
本開示はまた、Ｃ１ｑまたはＩｓｄＢに結合するワンアーム抗体（ｏｎｅ−ａｒｍ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）も含む。本明細書で使用される場合、「ワンアーム抗体」は、単一の抗体重鎖および単一の抗体軽鎖を含む抗原結合分子を意味する。本開示のワンアーム抗体は、本明細書の表１または表３に記載されたＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列またはＣＤＲアミノ酸配列の内のいずれかを含み得る。
【００６６】
本明細書で開示されている抗Ｃ１ｑ、抗ＩｓｄＢ、または二重特異性抗原結合分子は、抗体が由来した対応する生殖系列配列と比較して、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインのフレームワーク領域および／またはＣＤＲ領域に１つまたはそれ以上のアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を含み得る。そのような変異を、本明細書で開示されているアミノ酸配列を例えば公共の抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することにより、容易に確認し得る。本開示は、本明細書で開示されているアミノ酸配列の内のいずれかに由来する抗原結合分子、抗体、およびそれらの抗原結合断片を含み、１つまたはそれ以上のフレームワーク領域内のおよび／またはＣＤＲ領域内の１つまたはそれ以上のアミノ酸は、抗体が由来した生殖系列配列の対応する残基へと変異しているか、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基へと変異しているか、または対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換へと変異している（そのような配列の変化は、本明細書ではまとめて「生殖系列変異」と称される）。当業者は、本明細書で開示されている重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列から出発して、１つまたはそれ以上の個々の生殖系列変異またはこれらの組み合わせを含む多数の抗原結合分子、抗体、および抗原結合断片を容易に製造し得る。ある特定の実施形態では、ＶＨドメイン内のおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワーク残基および／またはＣＤＲ残基の全てが、抗体が由来した元々の生殖系列配列で見出される残基へと変異により戻されている。他の実施形態では、ある特定の残基のみが、元々の生殖系列配列へと変異により戻されており、例えば、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内でもしくはＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内で見出される変異残基のみが、またはＣＤＲ１内で、ＣＤＲ２内で、もしくはＣＤＲ３内で見出される変異残基のみが、元々の生殖系列配列へと変異により戻されている。他の実施形態では、フレームワーク残基および／またはＣＤＲ残基の内の１つまたはそれ以上が、異なる生殖系列配列（即ち、抗体が元々由来した生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の対応する残基へと変異されている。さらに、本開示の抗原結合分子、抗体、および抗原結合断片は、フレームワーク領域内におよび／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖系列変異の任意の組み合わせを含み得、例えば、ある特定の個々の残基が、特定の生殖系列配列の対応する残基へと変異されているが、元々の生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基は、維持されているか、または異なる生殖系列配列の対応する残基へと変異されている。得られると、１つまたはそれ以上の生殖系列変異を含む抗原結合分子、抗体、および抗原結合断片を、１つまたはそれ以上の所望の特性（例えば、結合特異性の改善、結合親和性の増加、アンタゴニストまたはアゴニストの生物学的特性の改善または増強（場合による）、免疫原性の低下等）に関して容易に試験し得る。この一般的な方法で得られた抗原結合分子、抗体、および抗原結合断片は、本開示に包含される。
【００６７】
本開示はまた、１つまたはそれ以上の保存的置換を有する、本明細書で開示されているＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列の内のいずれかのバリアントを含む、抗Ｃ１ｑ、抗ＩｓｄＢ、または二重特異性抗原結合分子も含む。例えば、本開示は、本明細書の表１または表３に記載されたＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列の内のいずれかに対して例えば１０個以下、８個以下、６個以下、４個以下等の保存的アミノ酸置換を有する、ＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗Ｃ１ｑ、抗ＩｓｄＢ、または二重特異性抗原結合分子を含む。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、化学的特性（例えば、電荷または疎水性）が類似する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基に置換されているものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。化学的特性が類似する側鎖を有するアミノ酸の基の例として、下記が挙げられる：（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン；（２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン；（３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、およびヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸；ならびに（７）硫黄含有側鎖はシステインおよびメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置き換えは、Ｇｏｎｎｅｔ他（１９９２年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３〜１４４５頁で開示されているＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有するあらゆる変化である。「適度に保存的な」置き換えは、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において非負の値を有するあらゆる変化である。
【００６８】
用語「エピトープ」は、パラトープとして既知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は複数のエピトープを有し得る。そのため、異なる抗体は、抗原上の異なる領域に結合し得、かつ異なる生物学的効果を有し得る。エピトープは、高次構造であってもよいし直鎖状であってもよい。高次構造のエピトープは、直鎖状のポリペプチド鎖の異なるセグメントからの空間的に並置されたアミノ酸により生じる。直鎖状のエピトープは、ポリペプチド鎖中の隣接するアミノ酸残基により生じるものである。ある特定の状況下では、エピトープは、抗原上の糖類、ホスホリル基、またはスルホニル基の部分を含み得る。
【００６９】
用語「実質的な同一性」または「実質的に同一の」は、核酸またはその断片に言及する場合には、別の核酸（またはその相補鎖）での適切なヌクレオチドの挿入または欠失と最適に整列させた際に、下記で考察するように、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、またはＧａｐ等の配列同一性の任意の公知のアルゴリズムにより測定した場合にヌクレオチド塩基の少なくとも約９５％、より好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％でヌクレオチド配列同一性が存在することを示す。参照核酸分子に対する実質的な同一性を有する核酸分子は、ある特定の場合には、参照核酸分子によりコードされるポリペプチドと同一のまたは実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。
【００７０】
ポリペプチドに適用される場合、用語「実質的な類似性」または「実質的に類似の」は、２つペプチド配列が、例えばデフォルトのギャップ重みを使用するプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴにより最適に整列された際に、少なくとも９５％の配列同一性を共有し、さらにより好ましくは少なくとも９８％または９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基位置は保存的アミノ酸置換だけ異なる。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換だけ互いに異なる場合には、配列同一性の割合または類似性の程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整される。この調整を行なうための手段は当業者に公知である。例えばＰｅａｒｓｏｎ（１９９４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７〜３３１頁を参照されたい。配列同一性とも称されるポリペプチドに関する配列類似性は概して、配列解析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換等の様々な置換、欠失、および他の改変に割り当てられた類似性の測定値を使用して、類似の配列を一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、密接に関連するポリペプチド（例えば、異なる種の生物由来の相同ポリペプチド）の間のまたは野生型タンパク質とその変異タンパク質との間の配列相同性または配列同一性を決定するためにデフォルトパラメータと共に使用されるプログラム（例えばＧａｐおよびＢｅｓｔｆｉｔ）を含む。例えばＧＣＧ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．１を参照されたい。ポリペプチド配列を、ＧＣＧ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．１でのプログラムである、デフォルトのまたは推奨されるパラメータを使用するＦＡＳＴＡを使用しても比較し得る。ＦＡＳＴＡ（例えばＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、クエリーの配列とサーチの配列との間の最良の重複の領域の整列および配列同一性の割合を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００年）上述）。本開示の配列と異なる種由来の多数の配列を含むデータベースとを比較する際の別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトのパラメータを使用するコンピュータプログラムＢＬＡＳＴであり、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ他（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０頁、およびＡｌｔｓｃｈｕｌ他（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９〜４０２頁を参照されたい。
【００７１】
抗補体成分抗体またはその抗原結合断片
本開示の一態様によれば、抗補体成分抗体が提供される。補体成分は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、またはそれらのあらゆる断片（例えば、補体カスケードにより生成されるタンパク質分解断片）を含む。実施形態では、Ｃ１ｑに結合する抗体（例えば、単一特異性抗Ｃ１ｑ抗体）が提供される。実施形態では、Ｃ１ｑはヒトＣ１ｑである。ヒトＣ１ｑは、配列番号１７０、配列番号１７１、および／または配列番号１７２のアミノ酸配列を含む。本開示のこの態様に係る抗体は、特に、Ｃ１ｑの標的化および特定の標的に対する補体活性化に有用である。本開示の抗Ｃ１ｑ抗体またはその抗原結合部分は、Ｃ１ｑにより媒介される補体活性化をスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種等の特定の標的細胞型へと向ける二重特異性抗原結合分子に含まれる。
【００７２】
実施形態では、Ｃ１ｑの免疫グロブリン分子への結合を阻害し、溶血および／または補体依存性細胞傷害性を阻害する抗Ｃ１ｑ抗体が選択される。実施形態では、二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＩＣ５０でヒトＣ１ｑのヒトＩｇＧ１−ｋへの結合をブロックする。他の実施形態では、二重特異性抗原結合分子は、約５０ｎＭ以下のＩＣ５０でヒトＣ１ｑのヒトＩｇＭへの結合をブロックする。実施形態では、二重特異性抗原結合分子は、約１００ｎＭ以下のＩＣ５０で補体依存性細胞傷害性を阻害する。さらに他の実施形態では、二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトＣ１ｑの沈着をもたらす。ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合分子は、本明細書で説明されているように、ＩｇＧ結合、または溶血、または補体依存性細胞傷害性のブロックまたは阻害の内の１つまたはそれ以上を示し得ないが、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）感染の予防または対象の既存の感染の処置に依然として有効であり得る。
【００７３】
本開示の例示的な抗Ｃ１ｑ抗体が本明細書の表１および表２に列挙されている。表１には、例示的な抗Ｃ１ｑ抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）ならびに重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）ならびに軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列同一性が記載されている。表２には、例示的な抗Ｃ１ｑ抗体のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３をコードする核酸分子の配列同一性が記載されている。
【００７４】
本開示は、表１に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列またはこのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＶＲに含まれる重鎖可変領域ＣＤＲを含む、ヒトＣ１ｑに結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００７５】
本開示はまた、表１に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列またはこのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＶＲに含まれる軽鎖可変領域ＣＤＲを含む抗Ｃ１ｑ抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００７６】
本開示はまた、表１に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかと対を形成している表１に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかを含むＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む抗Ｃ１ｑ抗体またはその抗原結合断片も提供する。ある特定の実施形態によれば、本開示は、表１に列挙された例示的な抗Ｃ１ｑ抗体の内のいずれかに含まれるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。ある特定の実施形態では、抗Ｃ１ｑ抗体はＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含み、このＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対は、配列番号２／１４６（例えばＨ１ｘＨ１７７３６Ｐ２）；配列番号１０／１４６（例えばＨ１ｘＨ１７７３８Ｐ２）、配列番号１８／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７５１Ｐ２）、配列番号３４／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７５８Ｐ２）、配列番号６６／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７７３Ｐ２）、９０／１４６（例えばＨ１ｘＨ１８３９２Ｐ２）；９８／１４６（例えばＨ１ｘＨ１８３９４Ｐ２）；１０６／１４６（例えばＨ１ｘＨ１８３９５Ｐ２）；７４／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７７９Ｐ２）；８２／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７８１Ｐ２）；２６／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７５６Ｐ２）；４２／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７６０Ｐ２）；５０／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７６３Ｐ２）；５８／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７６９Ｐ２）；１１４／１６２（例えばＨ１ｘＨ１８４００Ｐ２）；１２２／１６２（例えばＨ１ｘＨ１８４１１Ｐ２）；または１３０／１６２（例えばＨ１ｘＨ１８４１２Ｐ２）のアミノ酸配列を含む。
【００７７】
本開示はまた、表１に列挙された重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＤＲ１を含む、ヒトＣ１ｑに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００７８】
本開示はまた、表１に列挙された重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＤＲ２を含む、ヒトＣ１ｑに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００７９】
本開示はまた、表１に列挙された重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＤＲ３を含む、ヒトＣ１ｑに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００８０】
本開示はまた、表１に列挙された軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＤＲ１を含む、ヒトＣ１ｑに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００８１】
本開示はまた、表１に列挙された軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＤＲ２を含む、ヒトＣ１ｑに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００８２】
本開示はまた、表１に列挙された軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、ヒトＣ１ｑに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００８３】
本開示はまた、表１に列挙されたＬＣＤＲ３アミノ酸配列の内のいずれかと対を形成している表１に列挙されたＨＣＤＲ３アミノ酸配列の内のいずれかを含むＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ３対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む、ヒトＣ１ｑに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。ある特定の実施形態によれば、本開示は、表１に列挙された例示的な抗Ｃ１ｑ抗体の内のいずれかに含まれるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３対を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。ある特定の実施形態では、このＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３対は、配列番号１６／１５２（例えばＨ１ｘＨ１７７３８Ｐ２）、配列番号２４／１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７５１Ｐ２）、配列番号４０／１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７５８Ｐ２）、配列番号７２／１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７７３Ｐ２）、配列番号８／１５２（例えばＨ１ｘＨ１７７３６Ｐ２）；９６／１５２（例えばＨ１ｘＨ１８３９２Ｐ２）；１０４／１５２（例えばＨ１ｘＨ１８３９４Ｐ２）；１１２／１５２（例えばＨ１ｘＨ１８３９５Ｐ２）；８０／１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７７９Ｐ２）；８８／１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７８１Ｐ２）；３２／１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７５６Ｐ２）；４８／１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７６０Ｐ２）；５６／１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７６３Ｐ２）；６４／１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７６９Ｐ２）；１２０／１６８（例えばＨ１ｘＨ１８４００Ｐ２）；１２８／１６８（例えばＨ１ｘＨ１８４１１Ｐ２）；または１３６／１６８（例えばＨ１ｘＨ１８４１２Ｐ２）のアミノ酸配列を含む。
【００８４】
本開示はまた、表１に列挙された例示的な抗Ｃ１ｑ抗体の内のいずれかに含まれる６つのＣＤＲのセット（即ちＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含む、ヒトＣ１ｑに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。ある特定の実施形態では、このＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３セットは、配列番号４、６、８、１４８、１５０、１５２（例えばＨ１ｘＨ１７７３６Ｐ２）；９２、９４、９６、１４８、１５０、１５２（例えばＨ１ｘＨ１８３９２Ｐ２）；１００、１０２、１０４、１４８、１５０、１５２（例えばＨ１ｘＨ１８３９４Ｐ２）；１０８、１１０、１１２、１４８、１５０、１５２（例えばＨ１ｘＨ１８３９５Ｐ２）；７６、７８、８０、１６４、１６６、１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７７９Ｐ２）；８４、８６、８８、１６４、１６６、１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７８１Ｐ２）；２８、３０、３２、１６４、１６６、１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７５６Ｐ２）；４４、４６、４８、１６４、１６６、１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７６０Ｐ２）；５２、５４、５６、１６４、１６６、１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７６３Ｐ２）；６０、６２、６４、１６４、１６６、１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７６９Ｐ２）；１１６、１１８、１２０、１６４、１６６、１６８（例えばＨ１ｘＨ１８４００Ｐ２）；１２４、１２６、１２８、１６４、１６６、１６８（例えばＨ１ｘＨ１８４１１Ｐ２）；）；配列番号１２、１４、１６、１８、１５０、１５２（例えばＨ１ｘＨ１７７３８Ｐ２）、配列番号２０、２２、２４、１６４、１６６、１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７５１Ｐ２）、配列番号３６、３８、４０、１６４、１６６、１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７５８Ｐ２）、配列番号６８、７０、７２、１６４、１６６、１６８（例えばＨ１ｘＨ１７７７３Ｐ２）、または１３２、１３４、１３６、１６４、１６６、１６８（例えばＨ１ｘＨ１８４１２Ｐ２）のアミノ酸配列を含む。
【００８５】
関連する実施形態では、本開示は、表１に列挙された例示的な抗Ｃ１ｑ抗体の内のいずれかにより定義されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対に含まれる６つのＣＤＲのセット（即ちＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含む、ヒトＣ１ｑに結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。例えば、本開示は、配列番号２／１４６（例えばＨ１ｘＨ１７７３６Ｐ２）；配列番号１０／１４６（例えばＨ１ｘＨ１７７３８Ｐ２）、配列番号１８／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７５１Ｐ２）、配列番号３４／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７５８Ｐ２）、配列番号６６／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７７３Ｐ２）、９０／１４６（例えばＨ１Ｈ２０６３３Ｄ；９８／１４６（例えばＨ１ｘＨ１８３９２Ｐ２）；１０６／１４６（例えばＨ１ｘＨ１８３９５Ｐ２）；７４／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７７９Ｐ２）；８２／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７８１Ｐ２）；２６／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７５６Ｐ２）；４２／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７６０Ｐ２）；５０／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７６３Ｐ２）；５８／１６２（例えばＨ１ｘＨ１７７６９Ｐ２）；１１４／１６２（例えばＨ１ｘＨ１８４００Ｐ２）；１２２／１６２（例えばＨ１ｘＨ１８４１１Ｐ２）；または１３０／１６２（例えばＨ１ｘＨ１８４１２Ｐ２）のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対に含まれるＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３セットを含む抗体またはその抗原結合断片を含む。ＨＣＶＲアミノ酸配列内のおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを特定するための方法および技術は当分野で公知であり、本明細書で開示されている特定のＨＣＶＲアミノ酸配列内のおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを特定するために使用される。ＣＤＲの境界を特定するために使用される例示的な慣習として、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義が挙げられる。一般的に、Ｋａｂａｔ定義は配列の可変性に基づいており、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造上のループ領域の位置に基づいており、ＡｂＭ定義はＫａｂａｔのアプローチとＣｈｏｔｈｉａのアプローチとの妥協である。例えば、Ｋａｂａｔ，”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１年）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７〜９４８頁（１９９７年）；およびＭａｒｔｉｎ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：９２６８〜９２７２頁（１９８９年）を参照されたい。抗体内のＣＤＲ配列を特定するために公的なデータベースも利用可能である。
【００８６】
本開示はまた、抗Ｃ１ｑ抗体またはその一部をコードする核酸分子も提供する。例えば、本開示は、表１に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子を提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＶＲ核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００８７】
本開示はまた、表１に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表２に列挙されたＬＣＶＲ核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００８８】
本開示はまた、表１に列挙されたＨＣＤＲ１アミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＤＲ１核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００８９】
本開示はまた、表１に列挙されたＨＣＤＲ２アミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＤＲ２核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００９０】
本開示はまた、表１に列挙されたＨＣＤＲ３アミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＤＲ３核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００９１】
本開示はまた、表１に列挙されたＬＣＤＲ１アミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表２に列挙されたＬＣＤＲ１核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００９２】
本開示はまた、表１に列挙されたＬＣＤＲ２アミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表２に列挙されたＬＣＤＲ２核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００９３】
本開示はまた、表１に列挙されたＬＣＤＲ３アミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表２に列挙されたＬＣＤＲ３核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００９４】
本開示はまた、ＨＣＶＲをコードする核酸分子も提供し、このＨＣＶＲは、３つのＣＤＲのセット（即ちＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３）を含み、このＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３セットは、表１に列挙された例示的な抗Ｃ１ｑ抗体の内のいずれかにより定義されている通りである。
【００９５】
本開示はまた、ＬＣＶＲをコードする核酸分子も提供し、このＬＣＶＲは、３つのＣＤＲのセット（即ちＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含み、このＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３セットは、表１に列挙された例示的な抗Ｃ１ｑ抗体の内のいずれかにより定義されている通りである。
【００９６】
本開示はまた、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの両方をコードする核酸分子も提供し、ＨＣＶＲは、表１に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかのアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲは、表１に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＶＲ核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列と、表２に列挙されたＬＣＶＲ核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列とを含む。本開示のこの態様に係るある特定の実施形態では、この核酸分子はＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードし、このＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは両方とも、表１に列挙された同一の抗Ｃ１ｑ抗体に由来する。
【００９７】
本開示はまた、抗Ｃ１ｑ抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現し得る組み換え発現ベクターも提供する。例えば、本開示は、上述した核酸分子（即ち、表１に記載されたＨＣＶＲ配列、ＬＣＶＲ配列、および／またはＣＤＲ配列の内のいずれかをコードする核酸分子）の内のいずれかを含む組み換え発現ベクターを含む。同様に本開示の範囲に含まれるのは、そのようなベクターが導入されている宿主細胞と、抗体または抗体断片の産生を可能にする条件下でこの宿主細胞を培養し、そのように産生された抗体および抗体断片を回収することにより抗体またはその一部を製造する方法とである。
【００９８】
本開示は、グリコシル化パターンが変更されている抗Ｃ１ｑ抗体を含む。いくつかの実施形態では、望ましくないグリコシル化部位を除去するための変更が有用であり得るか、または例えば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を高めるためにオリゴ糖鎖上に存在するフコース部分を欠く抗体が有用であり得る（Ｓｈｉｅｌｄ他（２００２年）ＪＢＣ  ２７７：２６７３３頁を参照されたい）。他の用途では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を変更するために、ガラクトシル化の変更を行ない得る。
【００９９】
抗スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原抗体またはその抗原結合断片
別の態様では、本開示は、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する抗体およびその抗原結合断片（例えば、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に対する単一特異性抗体）を提供する。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種は、ヒトで感染を引き起こす種である。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種は、スタフィロコッカス・エピデルミデス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・ルグドゥネンシス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ）、および／またはスタフィロコッカス・サプロフィティカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｉｔｉｃｕｓ）を含む。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原は、５型莢膜多糖、８型莢膜多糖、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＨ、リポテイコ酸、細胞壁テイコ酸、クランピング因子Ａ（ｃｌｆＡ）、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）、リパーゼ、Ｖ８リパーゼ、脂肪酸修飾酵素、付着性マトリックス分子を認識する微生物表面成分（例えば、アドヘシン、フィブリノゲン結合分子、フィブロネクチン結合タンパク質Ａ、フィブロネクチン結合タンパク質Ｂ）、プロテインＡ、またはこれらの組み合わせを含む。
【０１００】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＩｓｄＢに特異的に結合する。一実施形態では、ＩｓｄＢに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６９のアミノ酸３〜５７４のアミノ酸配列を含むＩｓｄＢに結合する。本開示の抗ＩｓｄＢ抗体またはその抗原結合部分は、感染因子等の特定の標的細胞型に結合する二重特異性抗原結合分子に含まれる。実施形態では、この二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＩＣ５０でスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種に結合する。
【０１０１】
本開示の例示的な抗ＩｓｄＢ抗体が表３および表４に列挙されている。表３には、例示的な抗ＩｓｄＢ抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）ならびに重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）ならびに軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列同一性が記載されている。表４には、例示的な抗ＩｓｄＢ抗体のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３をコードする核酸分子の配列同一性が記載されている。
【０１０２】
本開示は、配列番号１３８のアミノ酸配列、配列番号１５４のアミノ酸配列またはこれらのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、これらのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）に含まれるＨＣＶＲ  ＣＤＲ；および配列番号１４６のアミノ酸配列、配列番号１６２のアミノ酸配列またはこれらのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、これらのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）に含まれるＬＣＶＲ  ＣＤＲを含む、ＩｓｄＢに結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０１０３】
本開示はまた、表３に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかと対を形成している表３に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかを含むＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。ある特定の実施形態によれば、本開示は、表３に列挙された例示的な抗ＩｓｄＢ抗体の内のいずれかに含まれるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。ある特定の実施形態では、このＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対は、配列番号１３８／１４６または配列番号１５４／１６２のアミノ酸配列を含む。
【０１０４】
本開示はまた、表３に列挙された重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＤＲ１を含む、ＩｓｄＢに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【０１０５】
本開示はまた、表３に列挙された重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＤＲ２を含む、ヒトＩｓｄＢに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【０１０６】
本開示はまた、表３に列挙された重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＤＲ３を含む、ＩｓｄＢに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【０１０７】
本開示はまた、表３に列挙された軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＤＲ１を含む、ＩｓｄＢに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【０１０８】
本開示はまた、表３に列挙された軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＤＲ２を含む、ＩｓｄＢに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【０１０９】
本開示はまた、表３に列挙された軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、ＩｓｄＢに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【０１１０】
本開示はまた、表３に列挙されたＬＣＤＲ３アミノ酸配列の内のいずれかと対を形成している表３に列挙されたＨＣＤＲ３アミノ酸配列の内のいずれかを含むＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ３の対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む、ＩｓｄＢに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。ある特定の実施形態によれば、本開示は、表３に列挙された例示的なＩｓｄＢ抗体の内のいずれかに含まれるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３対を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。ある特定の実施形態では、ＩｓｄＢに特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１４４／１５２、１４４／１６８、１６０／１５２、または１６０／１６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３対を含む。
【０１１１】
本開示はまた、配列番号１４０、配列番号１５６、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、これらの実質的に類似の配列のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）；配列番号１４２、配列番号１５８、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、これらの実質的に類似の配列のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）；および配列番号１４４、配列番号１６０、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、これらの実質的に類似の配列のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む、ＩｓｄＢに結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。実施形態では、ＩｓｄＢに特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１４８、配列番号１６４、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、これらの実質的に類似の配列のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）；配列番号１５０、配列番号１６６、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、これらの実質的に類似の配列のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）；および配列番号１５２、配列番号１６８、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、これらの実質的に類似の配列のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む。
【０１１２】
ＩｓｄＢに結合するある特定の非限定的で例示的な抗体またはその抗原結合断片は、６つのＣＤＲのセットＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３をそれぞれ含み、このセットは、配列番号１４０、１４２、１４４、１４８、１５０、１５２；１４０、１４２、１４４、１６４、１６６、１６８；１５６、１５８、１６０、１４８、１５０、１５２；または１５６、１５８、１６０、１６４、１６６、１６８のアミノ酸配列を含む。
【０１１３】
別の態様では、本開示は、ＩｓｄＢに結合する抗体またはその抗原結合断片のＨＣＶＲ配列、ＬＣＶＲ配列、またはＣＤＲ配列の内のいずれかをコードする核酸分子（例えば、本明細書の表４に記載されたポリヌクレオチド配列を含む核酸分子、ならびに任意の機能的組み合わせまたは配置で表２および表４に記載されたポリヌクレオチド配列の内の２つ以上を含む核酸分子）を提供する。本開示の核酸を保有する組み換え発現ベクター、およびそのようなベクターが導入されている宿主細胞も、抗体の産生を可能にする条件下でこの宿主細胞を培養し、産生された抗体を回収することにより抗体を製造する方法と同様に本開示に包含される。
【０１１４】
本開示はまた、抗ＩｓｄＢ抗体またはその一部をコードする核酸分子も提供する。例えば、本開示は、表３に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子を提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表４に列挙されたＨＣＶＲ核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【０１１５】
本開示はまた、表３に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表４に列挙されたＬＣＶＲ核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【０１１６】
本開示はまた、表３に列挙されたＨＣＤＲ１アミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表４に列挙されたＨＣＤＲ１核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【０１１７】
本開示はまた、表３に列挙されたＨＣＤＲ２アミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表４に列挙されたＨＣＤＲ２核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【０１１８】
本開示はまた、表３に列挙されたＨＣＤＲ３アミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表４に列挙されたＨＣＤＲ３核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【０１１９】
本開示はまた、表３に列挙されたＬＣＤＲ１アミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表４に列挙されたＬＣＤＲ１核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【０１２０】
本開示はまた、表３に列挙されたＬＣＤＲ２アミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表４に列挙されたＬＣＤＲ２核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【０１２１】
本開示はまた、表３に列挙されたＬＣＤＲ３アミノ酸配列の内のいずれかをコードする核酸分子も提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表４に列挙されたＬＣＤＲ３核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【０１２２】
本開示はまた、ＨＣＶＲをコードする核酸分子であって、このＨＣＶＲは、３つのＣＤＲのセット（即ちＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３）を含み、このＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３セットは、表３に列挙された例示的な抗ＩｓｄＢ抗体の内のいずれかにより定義されている通りである、核酸分子も提供する。
【０１２３】
本開示はまた、ＬＣＶＲをコードする核酸分子であって、このＬＣＶＲは、３つのＣＤＲのセット（即ちＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含み、このＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３セットは、表３に列挙された例示的な抗ＩｓｄＢ抗体の内のいずれかにより定義されている通りである、核酸分子も提供する。
【０１２４】
本開示はまた、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの両方をコードする核酸分子であって、ＨＣＶＲは、表３に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかのアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲは、表３に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかのアミノ酸配列を含む、核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表４に列挙されたＨＣＶＲ核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列と、表４に列挙されたＬＣＶＲ核酸配列の内のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはこのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列とを含む。本開示のこの態様に係るある特定の実施形態では、この核酸分子はＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードし、このＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは両方とも、表３に列挙された同一の抗ＩｓｄＢ抗体に由来する。
【０１２５】
本開示はまた、抗ＩｓｄＢ抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現し得る組み換え発現ベクターも提供する。例えば、本開示は、上述した核酸分子（即ち、表３に記載されたＨＣＶＲ配列、ＬＣＶＲ配列、および／またはＣＤＲ配列の内のいずれかをコードする核酸分子）の内のいずれかを含む組み換え発現ベクターを含む。同様に本開示の範囲に含まれるのは、そのようなベクターが導入されている宿主細胞と、抗体または抗体断片の産生を可能にする条件下でこの宿主細胞を培養し、そのように産生された抗体および抗体断片を回収することにより抗体またはその一部を製造する方法とである。
【０１２６】
本開示は、グリコシル化パターンが変更されている抗ＩｓｄＢ抗体を含む。いくつかの実施形態では、望ましくないグリコシル化部位を除去するための変更が有用であり得るか、または例えば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を高めるためにオリゴ糖鎖上に存在するフコース部分を欠く抗体が有用であり得る（Ｓｈｉｅｌｄ他（２００２年）ＪＢＣ  ２７７：２６７３３頁を参照されたい）。他の用途では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を変更するために、ガラクトシル化の変更を行ない得る。
【０１２７】
二重特異性抗原結合分子
本開示の二重特異性抗原結合分子は、２つの別々の抗原結合ドメイン（Ｄ１およびＤ２）を含む。１つの抗原結合ドメイン（Ｄ１）はスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原（例えばＩｓｄＢ）に特異的に結合し、第２の抗原結合ドメイン（Ｄ２）は補体成分（例えばＣ１ｑ）に結合する。
【０１２８】
実施形態では、第１の抗原結合ドメインはスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する（例えば、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に対する単一特異性抗体）。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種は、ヒトで感染を引き起こす種である。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種は、スタフィロコッカス・エピデルミデス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・ルグドゥネンシス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ）、および／またはスタフィロコッカス・サプロフィティカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｉｔｉｃｕｓ）を含む。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原は、５型莢膜多糖、８型莢膜多糖、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＨ、リポテイコ酸、細胞壁テイコ酸、クランピング因子Ａ（ｃｌｆＡ）、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）、リパーゼ、Ｖ８リパーゼ、脂肪酸修飾酵素、付着性マトリックス分子を認識する微生物表面成分（例えば、アドヘシン、フィブリノゲン結合分子、フィブロネクチン結合タンパク質Ａ、フィブロネクチン結合タンパク質Ｂ）、プロテインＡ、またはこれらの組み合わせを含む。ある特定の実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原はＩｓｄＢである。
【０１２９】
実施形態では、第２の抗原結合ドメイン（Ｄ２）は、補体成分の内のいずれか１つに結合する。補体成分として、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、またはこれらの任意の断片（例えば、補体カスケードにより生成されるタンパク質分解断片）が挙げられる。ある特定の実施形態では、この補体成分はＣ１ｑである。補体は、下記の３つの主要な経路により活性化される一連のタンパク質分解工程を通じて活性化される：典型的には免疫複合体により活性化される古典的経路（ＣＰ）、保護されていない細胞表面により誘発される代替経路（ＡＰ）、およびマンノース結合レクチン（ＭＢＬ）経路。この古典的経路は、ＩｇＭおよびＩｇＧのＦｃ領域へのＣ１ｑ／ｒ２／ｓ２結合により開始されるか、または病原体表面への直接的なＣ１ｑ／ｒ２／ｓ２結合により開始され、セリンプロテアーゼＣ１ｓを活性化するセリンプロテアーゼＣ１ｒの自己活性化が引き起こされ、次いでＣ２およびＣ４が切断され／活性化され、次いでＣ３およびＣ５の切断が引き起こされ、Ｃ５ｂは、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、およびＣ９と結合して、細胞溶解を引き起こす膜侵襲複合体（ＭＡＣ）を形成する。
【０１３０】
抗原結合ドメインとして、表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、約１ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、または約０．０５ｐＭ未満のＫＤでスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原（例えばＩｓｄＢ）（例えば、標的分子［Ｔ］またはその一部）に結合するポリペプチドが挙げられる。実施形態では、抗原結合ドメインとして、表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、約１ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、または約０．０５ｐＭ未満のＫＤでＩｓｄＢに結合するポリペプチドが挙げられる。
【０１３１】
抗原結合ドメインとして、表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、約１ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、または約０．０５ｐＭ未満のＫＤで補体成分（例えばＣ１ｑ）に結合するポリペプチドが挙げられる。実施形態では、抗原結合ドメインとして、表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、約１ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、または約０．０５ｐＭ未満のＫＤでＣ１ｑに結合するポリペプチドが挙げられる。
【０１３２】
用語「表面プラズモン共鳴」は、本明細書で使用される場合、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）システム（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用する、バイオセンサマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出により、リアルタイムの相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。
【０１３３】
用語「ＫＤ」は、本明細書で使用される場合、特定のタンパク質−タンパク質相互作用（例えば抗体−抗原相互作用）の平衡解離定数を意味する。別途示さない限り、本明細書で開示されているＫＤ値は、２５℃および／または３７℃で表面プラズモン共鳴アッセイにより決定したＫＤ値を指す。
【０１３４】
本開示は、二重特異性抗原結合分子であって、免疫グロブリンの一方のアームがスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合し（例えば、第１の抗原結合ドメイン、Ｄ１）、この免疫グロブリンの他方のアームが補体成分（例えばＣ１ｑ）に対して特異的である（例えば、第２の抗原結合ドメイン、Ｄ２）、二重特異性抗原結合分子を含むが、この標的抗原は、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種中でまたはこの種上で発現される任意の抗原であって、この抗原に対する標的の免疫反応が望まれる、抗原であり得る。実施形態では、この補体成分は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、またはそれらの任意の断片（例えば、補体カスケードにより生成されるタンパク質分解断片）を含み得る。ある特定の実施形態では、この補体成分はＣ１ｑである。本開示の二重特異性抗原結合分子のＤ１成分および／またはＤ２成分は、完全な抗体分子の抗原結合断片を含み得るか、またはこの抗原結合断片からなり得る。
【０１３５】
抗体の一方のアームがＣ１ｑに結合し、他方のアームがスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する、本開示の二重特異性抗原結合分子に関連して、この標的抗原は細胞表面抗原であり得る。特異性標的抗原の非限定的な例として、５型莢膜多糖、８型莢膜多糖、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＨ、リポテイコ酸、細胞壁テイコ酸、クランピング因子Ａ（ｃｌｆＡ）、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）、リパーゼ、Ｖ８リパーゼ、脂肪酸修飾酵素、付着性マトリックス分子を認識する微生物表面成分（例えば、アドヘシン、フィブリノゲン結合分子、フィブロネクチン結合タンパク質Ａ、フィブロネクチン結合タンパク質Ｂ）、プロテインＡ、またはこれらの組み合わせが挙げられる。
【０１３６】
抗体の一方のアームがＣ１ｑに結合し、他方のアームがスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する、本開示の二重特異性抗原結合分子に関連して、この二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する。実施形態では、このスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種は、スタフィロコッカス・エピデルミデス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・ルグドゥネンシス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ）、またはスタフィロコッカス・サプロフィティカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｉｔｉｃｕｓ）を含む。抗体の一方のアームがＣ１ｑに結合し、他方のアームがスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する、本開示の二重特異性抗原結合分子に関連して、この二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種へのヒトＣ１ｑの沈着を促進する。
【０１３７】
ある特定の例示的な実施形態によれば、本開示は、Ｃ１ｑおよびＩｓｄＢに特異的に結合する二重特異性抗原結合分子を含む。そのような分子は、本明細書では、例えば、「抗ＩｓｄＢ／抗Ｃ１ｑ」、または「抗ＩｓｄＢ×Ｃ１ｑ」、または「抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ」もしくは「ＩｓｄＢ×Ｃ１ｑ」二重特異性分子、または他の類似の用語法で称される。
【０１３８】
本明細書で使用される場合、表現「二重特異性抗原結合分子」は、第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインを少なくとも含むタンパク質、ポリペプチド、または分子複合体を意味する。この二重特異性抗原結合分子内の各抗原結合ドメインは、単独でまたは１つもしくはそれ以上の追加のＣＤＲおよび／もしくはＦＲとの組み合わせで特定の抗原に特異的に結合する少なくとも１つのＣＤＲを含む。本開示に関連して、第１の抗原結合ドメインは第１の抗原（例えばスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原）に特異的に結合し、第２の抗原結合ドメインは第２の別個の抗原（例えばＣ１ｑ）に特異的に結合する。
【０１３９】
本開示のある特定の例示的な実施形態では、二重特異性抗原結合分子は二重特異性抗体である。二重特異性抗体の各抗原結合ドメインは、重鎖可変ドメイン（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変ドメイン（ＬＣＶＲ）を含む。
【０１４０】
本開示のある特定の例示的な実施形態では、二重特異性抗原結合分子は、第１の抗原結合ドメイン（Ｄ１）および第２の抗原結合ドメイン（Ｄ２）を含む。第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインは、互いに直接的にまたは感染的に接続されて本開示の二重特異性抗原結合分子を形成する。あるいは、第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインはそれぞれ、別々の多量体化ドメインに接続される。ある多量体化ドメインと別の多量体化ドメインとの結合により、２つの抗原ドメイン間の結合が容易になり、それにより二重特異性抗原結合分子が形成される。本明細書で使用される場合、「多量体化ドメイン」とは、同一のまたは類似の構造または構成の第２の多量体化ドメインと結合する能力を有するあらゆる高分子、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、またはアミノ酸のことである。例えば、多量体化ドメインは、免疫グロブリンＣＨ３ドメインを含むポリペプチドであり得る。多量体化成分の非限定的な例は、免疫グロブリンのＦｃ部分（ＣＨ２−ＣＨ３ドメインを含む）であり、例えば、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４ならびに各アイソタイプ群内の任意のアロタイプから選択されるＩｇＧのＦｃドメインである。
【０１４１】
本開示の二重特異性抗原結合分子は概して２つの多量体化ドメインを含み、例えば、別々の抗体重鎖の各個々の部分である２つのＦｃドメインを含む。第１の多量体化ドメインおよび第２の多量体化ドメインは同一のＩｇＧアイソタイプであり得、例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４であり得る。あるいは、第１の多量体化ドメインおよび第２の多量体化ドメインは異なるＩｇＧアイソタイプであり得、例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４等であり得る。
【０１４２】
ある特定の実施形態では、多量体化ドメインは、少なくとも１つのシステイン残基を含む１〜約２００個のアミノ酸の長さのＦｃ断片またはアミノ酸配列である。他の実施形態では、多量体化ドメインは、システイン残基、または短いシステイン含有ペプチドである。他の多量体化ドメインとして、ロイシンジッパー、ヘリックス−ループモチーフ、またはコイルドコイルモチーフを含むかまたはこれからなるペプチドまたはポリペプチドが挙げられる。実施形態では、多量体化ドメインは、ある多量体化ドメインにノブを形成するＣＨ３領域中のアミノ酸変更と、多量体化ドメインの対形成をもたらす、別の多量体化ドメインに対応するホールを形成するＣＨ３領域中のアミノ酸変更とを含み得る。実施形態では、アミノ酸変更は、２つの多量体化ドメインの電荷対形成をもたらし得る。
【０１４３】
任意の二重特異性抗原結合分子フォーマットまたは技術を使用して、本開示の二重特異性抗原結合分子を作製し得る。例えば、第１の抗原結合特異性を有する抗体またはその断片は、１つまたはそれ以上の他の分子実体（例えば、第２の抗原結合特異性を有する別の抗体または抗体断片）に（例えば、化学的連結、遺伝子融合、非共有結合、または別の方法により）機能的に連結されて、二重特異性抗原結合分子が生成される。本開示に関連して使用される特定の例示的な二重特異性フォーマットとして、例えば、ｓｃＦｖベースの二重特異性フォーマットまたはダイアボディ二重特異性フォーマット、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ、Ｑｕａｄｒｏｍａ、ノブ・イントゥ・ホール、共通の軽鎖（例えば、ノブ・イントゥ・ホールを有する共通の軽鎖等）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用性Ｆａｂ（ＤＡＦ）−ＩｇＧ、およびＭａｂ２二重特異性フォーマットが挙げられるがこれらに限定されない（上述のフォーマットの概説のために、例えば、Ｋｌｅｉｎ他、２０１２年、ｍＡｂｓ  ４：６、１〜１１頁、およびこの文献で引用された参考文献を参照されたい）。
【０１４４】
本開示の二重特異性抗原結合分子に関連して、多重体化ドメイン（例えばＦｃドメイン）は、Ｆｃドメインの野生型の天然に存在するバージョンと比較して、１つまたはそれ以上のアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、または置換）を含み得る。例えば、本開示は、ＦｃとＦｃＲｎとの間の結合相互作用が変更されている（例えば増強しているかまたは減少している）改変Ｆｃドメインを生じるＦｃドメイン中の１つまたはそれ以上の改変を含む二重特異性抗原結合分子を含む。別の実施形態では、本開示は、プロテインＡとの結合相互作用が変更されている（例えば減少している）改変Ｆｃドメインを生じるＦｃドメイン中の１つまたはそれ以上の改変を含む二重特異性抗原結合分子を含む。
【０１４５】
一実施形態では、二重特異性抗原結合分子はＣＨ２領域中にまたはＣＨ３領域中に改変を含み、この改変は、酸性環境下で（例えば、ｐＨが約５．５〜約６．０の範囲であるエンドソーム中で）ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増加させる。そのような改変は、動物に投与された場合に抗体の血清半減期を増加させ得る。そのようなＦｃ改変の非限定的な例として、例えば下記が挙げられる：２５０位での改変（例えば、ＥもしくはＱ）；２５０位および４２８位での改変（例えばＬもしくはＦ）；２５２位（例えばＬ／Ｙ／Ｆ／ＷもしくはＴ），２５４位（例えばＳもしくはＴ）、および２５６位での改変（例えばＳ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤもしくはＴ）；または４２８位および／もしくは４３３位（例えばＬ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱもしくはＫ）、ならびに／または４３４位での改変（例えばＨ／ＦもしくはＹ）；または２５０位および／もしくは４２８位での改変；または３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位での改変。一実施形態では、この改変は下記を含む：４２８Ｌ（例えばＭ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えばＮ４３４Ｓ）改変；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えばＶ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えばＶ３０８Ｆ）改変；４３３Ｋ（例えばＨ４３３Ｋ）および４３４（例えば４３４Ｙ）改変；２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）改変；２５０Ｑおよび４２８Ｌ改変（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）；ならびに３０７および／または３０８改変（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）。
【０１４６】
例えば、本開示は、下記の群：２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えばＴ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えばＭ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）；ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えばＨ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）から選択される変異の１つまたはそれ以上の対または群を含むＦｃドメインを含む抗Ｃ１ｑ抗体、抗ＩｓｄＢ抗体、および／または抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を含む。上述のＦｃドメイン変異、および本明細書で開示されている抗体可変ドメイン内の他の変異の全ての可能な組み合わせは、本開示の範囲内で企図される。
【０１４７】
本開示はまた、第１のＣＨ３ドメインおよび第２のＩＧ  ＣＨ３ドメインを含む二重特異性抗原結合分子も含み、第１のおよび第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは少なくとも１つのアミノ酸が互いに異なり、少なくとも１つのアミノ酸の差異により、アミノ酸の差異を欠く二重特異性抗原結合分子と比較して、プロテインＡへの二重特異性抗原結合分子の結合が減少する。一実施形態では、第１のＩｇ  ＣＨ３ドメインはプロテインＡに結合し、第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、プロテインＡ結合を減少させるかまたは消失させる変異（例えばＨ９５Ｒ変異（ＩＭＧＴエクソンナンバリングによる；ＥＵナンバリングによるＨ４３５Ｒ））を含む。第２のＣＨ３はＹ９６Ｆ改変（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＹ４３６Ｆ）をさらに含み得る。第２のＣＨ３内に見出されるさらなる改変として下記が挙げられる：ＩｇＧ１抗体の場合にはＤ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合にはＮ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵによるＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）；ならびにＩｇＧ４抗体の場合にはＱ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、２つ以上の免疫グロブリンアイソタイプに由来するＦｃ配列を組み合わせたキメラであってもよい。例えば、キメラＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４のＣＨ２領域に由来するＣＨ２配列の一部または全てと、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４に由来するＣＨ３配列の一部または全てとを含み得る。キメラＦｃドメインはまた、キメラヒンジ領域も含み得る。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４のヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列と組み合わされた、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４のヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」配列を含み得る。本明細書に記載された抗原結合分子の内のいずれかに含まれるキメラＦｃドメインの特定の例は、Ｎ末端からＣ末端へと、［ＩｇＧ４  ＣＨ１］−［ＩｇＧ４上部ヒンジ］−［ＩｇＧ２下部ヒンジ］−［ＩｇＧ４  ＣＨ２］−［ＩｇＧ４  ＣＨ３］を含む。本明細書に記載された抗原結合分子の内のいずれかに含まれるキメラＦｃドメインの別の例は、Ｎ末端からＣ末端へと、［ＩｇＧ１  ＣＨ１］−［ＩｇＧ１上部ヒンジ］−［ＩｇＧ２下部ヒンジ］−［ＩｇＧ４  ＣＨ２］−［ＩｇＧ１  ＣＨ３］を含む。本開示の抗原結合分子の内のいずれかに含まれるキメラＦｃドメインのこれらのおよび他の例は、２０１４年１月３１日に出願された米国特許第９，３５９，４３７号で説明されている。これらの一般的な構造配置を有するキメラＦｃドメインおよびそのバリアントはＦｃ受容体結合が変化し得、次いでＦｃエフェクター機能が影響を受ける。
【０１４９】
本開示の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子に含まれる例示的な抗原結合ドメイン（Ｄ１およびＤ２）は、本明細書で開示されている抗ＩｓｄＢ（Ｄ１）抗体および抗Ｃ１ｑ（Ｄ２）抗体の内のいずれかに由来する抗原結合ドメインを含む。例えば、本開示は、表３に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含むＤ１抗原結合ドメインと、表１に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列またはこのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＶＲを含むＤ２抗原結合ドメインとを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を含む。
【０１５０】
本開示はまた、表３に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含むＤ１抗原結合ドメインと、表１に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列またはこのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＶＲを含むＤ２抗原結合ドメインとを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子も提供する。
【０１５１】
本開示はまた、表３または表１に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかと対を形成している表３または表１に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列の内のいずれかを含むＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含むＤ１およびＤ２抗原結合ドメインを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子も提供する。
【０１５２】
ある特定の実施形態によれば、本開示は、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含むＤ１抗原結合ドメインおよびＤ２抗原結合ドメインを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子であって、この二重特異性抗原結合分子のＤ１は、表３中のＨＣＶＲ配列の内のいずれかから選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列を含み、この二重特異性抗原結合分子のＤ２は、表１中のＨＣＶＲ配列の内のいずれかから選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列を含み、この二重特異性抗原結合分子のＬＣＶＲアミノ酸配列は、表１または表３に示されたＬＣＶＲアミノ酸配列のうちのいずれかを含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を提供する。
【０１５３】
明確さのために、本開示の二重特異性抗体を表６にまとめており、この表６は、第１の抗原結合ドメイン（Ｄ１、抗ＩｓｄＢ）に割り当てられたＨＣＶＲおよびＨＣＤＲの特定のアミノ酸配列識別子、第２の抗原結合ドメイン（Ｄ２、抗Ｃ１ｑ）に割り当てられたＨＣＶＲおよびＨＣＤＲのアミノ酸配列識別子、ならびにＬＣＶＲおよびＬＣＤＲに割り当てられたアミノ酸配列識別子を示す。各抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体には、左側の最初の列に示される新規の抗体識別番号（ＰＩＤ）を割り当てた。
【０１５４】
本開示はまた、表３に列挙された重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＤＲ１を含むＤ１抗原結合ドメインと、表１に列挙された重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＤＲ１を含むＤ２抗原結合ドメインとを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子も提供する。
【０１５５】
本開示はまた、表３に列挙された重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＤＲ２を含むＤ１抗原結合ドメインと、表１に列挙された重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＤＲ２を含むＤ２抗原結合ドメインとを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子も提供する。
【０１５６】
本開示はまた、表３に列挙された重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＤＲ３を含むＤ１抗原結合ドメインと、表１に列挙された重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＨＣＤＲ３を含むＤ２抗原結合ドメインとを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子も提供する。
【０１５７】
本開示はまた、表３に列挙された軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＤＲ１を含むＤ１抗原結合ドメインと、表１に列挙された軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＤＲ１を含むＤ２抗原結合ドメインとを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子も提供する。
【０１５８】
本開示はまた、表３に列挙された軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＤＲ２を含むＤ１抗原結合ドメインと、表１に列挙された軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＤＲ２を含むＤ２抗原結合ドメインとを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子も提供する。
【０１５９】
本開示はまた、表３に列挙された軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＤＲ３を含むＤ１抗原結合ドメインと、表１に列挙された軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列の内のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、このアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含むＬＣＤＲ３を含むＤ２抗原結合ドメインとを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子も提供する。
【０１６０】
本開示はまた、表１または表３に列挙されたＬＣＤＲ３アミノ酸配列の内のいずれかと対を形成している表１または表３に列挙されたＨＣＤＲ３アミノ酸配列の内のいずれかを含むＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ３の対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含むＤ１および／またはＤ２抗原結合ドメインを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子も提供する。
【０１６１】
本開示はまた、表１または表３に列挙された例示的な抗ＩｓｄＢ抗体または抗Ｃ１ｑ抗体の内のいずれかに含まれる６つのＣＤＲのセット（即ちＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含むＤ１および／またはＤ２抗原結合ドメインを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子も提供する。
【０１６２】
関連する実施形態では、本開示は、表１または表３に列挙された例示的な抗ＩｓｄＢ抗体または抗Ｃ１ｑ抗体の内のいずれかにより定義されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対に含まれる６つのＣＤＲのセット（即ちＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含むＤ１および／またはＤ２抗原結合ドメインを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を提供する。
【０１６３】
本開示の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子は、表３の抗ＩｓｄＢ抗体の内のいずれかに由来するＤ１抗原結合ドメインと、表１の抗Ｃ１ｑ抗体の内のいずれかに由来するＤ２抗原結合ドメインとを含み得る。本開示の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の非限定的な例を表６に示す。
【０１６４】
非限定的な実例として、本開示は、Ｄ１抗原結合ドメインおよびＤ２抗原結合ドメインを含む抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子であって、Ｄ１抗原結合ドメインは、配列番号１３８／１４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対、または重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）であり、配列番号１４０−１４２−１４４−１４８−１５０−１５２のアミノ酸配列を含むセットを含み、Ｄ２抗原結合ドメインは、配列番号２／１４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対、または重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）であり、配列番号４−６−８−１４８−１５０−１５２のアミノ酸配列を含むセットを含む、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を含む。これらの配列の特徴を有する例示的な抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体は、Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄと命名した二重特異性抗体であり、この二重特異性抗体は、Ｈ１Ｈ２０２９５Ｐ２に由来するＤ１と、Ｈ１  Ｘ  Ｈ１７７３６Ｐ２に由来するＤ２とを含む（本明細書の表６を参照されたい）。
【０１６５】
配列バリアント
本開示の抗体および二重特異性抗原結合分子は、個々の抗原結合ドメインが本明細書で説明されているように由来する対応する生殖系列配列と比較して、重鎖および軽鎖の可変ドメインのフレームワーク領域中におよび／またはＣＤＲ領域中に１つまたはそれ以上のアミノ酸の置換、挿入および／または欠失を含み得る。本開示はまた、一方または両方の抗原結合ドメインが、１つまたはそれ以上の保存的置換を有する、本明細書で開示されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲのアミノ酸配列の内のいずれかのバリアントを含む抗原結合分子も含む。例えば、本開示は、本明細書で開示されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲのアミノ酸配列の内のいずれかと比較して、例えば、１０個以下、８個以下、６個以下、４個以下等の保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲのアミノ酸配列を有する抗原結合ドメインを含む抗原結合分子を含む。保存的アミノ酸置換は本明細書の他の箇所で説明されている。
【０１６６】
本開示はまた、本明細書で開示されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲのアミノ酸配列の内のいずれかと実質的に同一であるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲのアミノ酸配列を有する抗原結合ドメインを含む抗原結合分子も含む。
【０１６７】
ｐＨ依存性結合
本開示は、ｐＨ依存性結合特性を有する抗Ｃ１ｑ抗体、抗ＩｓｄＢ抗体、および／または抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を含む。例えば、本開示の二重特異性抗原結合分子は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＣ１ｑまたはＩｓｄＢへの結合の低下を示す場合がある。あるいは、本開示の二重特異性抗原結合分子は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＣ１ｑまたはＩｓｄＢへの結合の増強を示す場合がある。表現「酸性ｐＨ」には約６．２未満のｐＨ値が含まれ、例えば、約６．０、５．９５、５．９、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０、またはより小さい値が含まれる。本明細書で使用される場合、表現「中性ｐＨ」は約７．０〜約７．４のｐＨを意味する。表現「中性ｐＨ」には、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、および７．４．のｐＨ値が含まれる。
【０１６８】
ある特定の場合では、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで．．．結合の低下」は、中性ｐＨでの抗体のその抗原への結合のＫＤ値に対する酸性ｐＨでの抗体のその抗原への結合のＫＤ値の比（またはその逆）で表される。例えば、抗体またはその抗原結合断片は、この抗体またはその抗原結合断片が約３．０以上の酸性／中性ＫＤ比を示す場合には、本開示の目的のために「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでの結合の低下」を示すと見なされる。ある特定の例示的な実施形態では、本開示の抗体または抗原結合断片に関する酸性／中性ＫＤ比は、約３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、４０．０、５０．０、６０．０、７０．０、１００．０、またはより高い。
【０１６９】
ｐＨ依存性結合特性を有する抗体を、例えば、中性ｐＨと比較した酸性ｐＨでの特定の抗原への結合の低下（または増強）に関して抗体の集団をスクリーニングすることにより得ることができる。加えて、アミノ酸レベルでの抗原結合ドメインの改変により、ｐＨ依存性特性を有する抗体を得ることができる。例えば、（例えばＣＤＲ内の）抗原結合ドメインの１つまたはそれ以上のアミノ酸をヒスチジン残基で置換することにより、中性ｐＨと比べて酸性ｐＨでの抗原結合が低下している抗体を得ることができる。
【０１７０】
抗体および二重特異性抗原結合分子の生物学的特性
本開示は、補体成分（例えばＣ１ｑ）に結合する抗体、その抗原結合断片、および二重特異性抗原結合分子を含む。実施形態では、この二重特異性抗原結合分子は、免疫グロブリン分子へのＣ１ｑ結合を阻害し、溶血および／または補体依存性細胞傷害を阻害する。実施形態では、この二重特異性抗原分子は、約１０ｎＭ以下のＩＣ５０でヒトＩｇＧ１−ｋへのヒトＣ１ｑの結合をブロックする。他の実施形態では、この二重特異性抗原結合分子は、約５０ｎＭ以下のＩＣ５０でヒトＩｇＭへのヒトＣ１ｑの結合をブロックする。実施形態では、この二重特異性抗原結合分子は、約１００ｎＭ以下のＩＣ５０で補体依存性細胞傷害を阻害する。さらなる実施形態では、この二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でＣ１ｑの沈着をもたらす。
【０１７１】
本開示は、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する抗体、その抗原結合断片、および二重特異性抗原結合分子を含む。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種は、スタフィロコッカス・エピデルミデス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・ルグドゥネンシス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ）、および／またはスタフィロコッカス・サプロフィティカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｉｔｉｃｕｓ）を含む。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種は、メチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）等の抗生物質耐性種である。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原は、５型莢膜多糖、８型莢膜多糖、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＨ、リポテイコ酸、細胞壁テイコ酸、クランピング因子Ａ（ｃｌｆＡ）、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）、リパーゼ、Ｖ８リパーゼ、脂肪酸修飾酵素、付着性マトリックス分子を認識する微生物表面成分（例えば、アドヘシン、フィブリノゲン結合分子、フィブロネクチン結合タンパク質Ａ、フィブロネクチン結合タンパク質Ｂ）、プロテインＡ、またはこれらの組み合わせを含む。
【０１７２】
実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する第１の抗原結合ドメイン（Ｄ１）；およびヒトＣ１ｑに結合する第２の抗原結合ドメイン（Ｄ２）を含む単離された二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に結合する。実施形態では、第１の抗原結合ドメインＤ１；および第２の抗原結合ドメインＤ１を含む単離された二重特異性抗原結合分子は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種へのヒトＣ１ｑの沈着を促進する。
【０１７３】
本開示は、高親和性（例えば約１ｎＭ以下）でヒトＣ１ｑに結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。本開示はまた、治療状況および望ましい特定のターゲティング特性に応じて中程度または低度の親和性（例えば約２ｎＭ以下）でヒトＣ１ｑに結合する抗体およびその抗原結合断片も含む。本開示は、高親和性（例えば約５ｎＭ以下）でＩｓｄＢに結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。本開示はまた、治療状況および望ましい特定のターゲティング特性に応じて中程度または低度の親和性（例えば約１０ｎＭ以下）でＩｓｄＢに結合する抗体およびその抗原結合断片も含む。
【０１７４】
本開示は、対象中でのスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種の増殖またはスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種による感染を阻害し得る抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を含む（例えば、実施例８、実施例９を参照されたい）。例えば、ある特定の実施形態によれば、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子が提供され、（例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ  約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、またはより少ない用量での）対象へのこの二重特異性抗原結合分子の単回投与により、対象中における（例えば、この対象から採取した血液サンプル中における）スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種のコロニー形成単位（ＣＦＵ）の減少が引き起こされる。ある特定の実施形態では、約０．１ｍｇ／ｋｇの用量でのこの抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子の単回投与により、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）に感染した動物の生存が、この対象へのこの二重特異性抗原結合分子の投与から約２１日、約１８日、約１４日、約１０日、約７日、約５日、約２日、または約１日増加する。
【０１７５】
エピトープマッピングおよび関連する技術
本開示の二重特異性抗原結合分子が結合するＣ１ｑ上のまたはＩｓｄＢ上のエピトープは、Ｃ１ｑタンパク質またはＩｓｄＢタンパク質の３つ以上（例えば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、またはより多くの）アミノ酸の単一の連続した配列を含むか、またはからなる。あるいは、このエピトープは、Ｃ１ｑまたはＩｓｄＢの複数の非連続のアミノ酸（またはアミノ酸配列）を含むか、またはからなる。本開示の抗体は、単一のＣ１ｑ鎖（例えば、成分ａ、ｂ、またはｓ）内に含まれるアミノ酸と相互作用し得るか、２つ以上の異なるＣ１ｑ鎖上のアミノ酸と相互作用し得るか、三量体と相互作用し得えるか、または六量体と相互作用し得る。当業者に既知の様々な技術を使用して、抗体の抗原結合ドメインがポリペプチド内のまたはタンパク質内の「１つまたはそれ以上のアミノ酸と相互作用する」かどうかを決定し得る。例示的な技術として、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．，ＮＹ）で説明されているもの等の日常的なクロスブロッキングアッセイ、アラニンスキャニング変異分析、ペプチドブロット分析（Ｒｅｉｎｅｋｅ、２００４年、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４８：４４３〜４６３頁）、およびペプチド切断分析が挙げられる。加えて、エピトープ切除、エピトープ抽出、および抗原の化学的修飾等の方法を利用し得る（Ｔｏｍｅｒ、２０００年、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ９：４８７〜４９６頁）。抗体の抗原結合ドメインと相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用される別の方法は、質量分析により検出される水素／重水素交換である。一般的には、この水素／重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素で標識すること、続いて重水素標識タンパク質に抗体を結合させることを含む。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移して、抗体で保護された残基（重水素で標識されたままである）を除く全ての残基で水素−重水素交換が起こるようにする。抗体の解離後、標的タンパク質をプロテアーゼ切断および質量分析に供し、それにより抗体が相互作用する特定のアミノ酸に対応する重水素標識残基が明らかになる。例えばＥｈｒｉｎｇ（１９９９年）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６７（２）：２５２〜２５９頁；Ｅｎｇｅｎ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ（２００１年）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ〜２６５Ａ頁を参照されたい。抗原／抗体複合体のＸ線結晶構造解析もエピトープマッピング目的に使用される。
【０１７６】
本開示はまた、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメイン（Ｄ１）、および補体成分に特異的に結合する第２の抗原結合ドメイン（Ｄ２）を含む二重特異性抗原結合分子であって、第１の抗原結合ドメインは、本明細書で説明されている特定の例示的なスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原結合ドメインの内のいずれか上の同一のエピトープに結合し、および／または第２の抗原結合ドメインは、本明細書で説明されている特定の例示的なＣ１ｑ特異的抗原結合ドメインの内のいずれかと同一の補体成分上のエピトープに結合する、二重特異性抗原結合分子も含む。例示的な実施形態は、配列番号２／１４６または配列番号１０６／１４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む参照抗体と同一のヒトＣ１ｑ上のエピトープに結合する単離された二重特異性抗原結合分子を含む。例示的な実施形態は、配列番号１３８／１４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む参照配列と同一のＩｓｄＢ上のエピトープに結合する単離された二重特異性抗原結合分子を含む。
【０１７７】
同様に、本開示はまた、ＩｓｄＢに特異的に結合する第１の抗原結合ドメイン（Ｄ１）、およびヒトＣ１ｑに特異的に結合する第２の抗原結合ドメイン（Ｄ２）を含む二重特異性抗原結合分子であって、第１の抗原結合ドメインは、本明細書で説明されている特定の例示的なＩｓｄＢ特異的抗原結合ドメインの内のいずれか（例えば、配列番号１３８／１４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む参照抗体）とＩｓｄＢへの結合に関して競合し、および／または第２の抗原結合ドメインは、本明細書で説明されている特定の例示的なＣ１ｑ特異的抗原結合ドメインの内のいずれか（例えば、配列番号２／１４６もしくは配列番号１０６／１４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む参照抗体）とヒトＣ１ｑへの結合に関して競合する、二重特異性抗原結合分子も含む。
【０１７８】
当分野で既知の日常的な方法を使用することにより、特定の抗原結合分子（例えば抗体）またはその抗原結合ドメインが、本開示の参照抗原結合分子と同一のエピトープに結合するかどうか、または本開示の参照抗原結合分子と結合に関して競合するかどうかを容易に決定し得る。例えば、試験抗体が、本開示の参照二重特異性抗原結合分子と同一のＣ１ｑ上の（またはＩｓｄＢ上の）エピトープに結合するかどうかを決定するために、この参照二重特異性分子をＣ１ｑタンパク質（またはＩｓｄＢタンパク質）に最初に結合させる。次に、試験抗体のＣ１ｑ（またはＩｓｄＢ）分子に結合する能力を評価する。この試験抗体が、参照二重特異性抗原結合分子との飽和結合後にＣ１ｑ（またはＩｓｄＢ）に結合し得る場合には、この試験抗体は参照二重特異性抗原結合分子と異なるＣ１ｑ（またはＩｓｄＢ）のエピトープに結合すると結論付け得る。その一方で、試験抗体が、参照二重特異性抗原結合分子との飽和結合後にＣ１ｑ（またはＩｓｄＢ）分子に結合し得ない場合には、この試験抗体は、本開示の参照二重特異性抗原結合分子が結合するエピトープと同一のＣ１ｑ（またはＩｓｄＢ）のエピトープに結合し得る。次いで、追加の日常的な実験（例えば、ペプチド変異分析およびペプチド結合分析）を実行して、試験抗体の結合の観察された欠如が実際には参照二重特異性抗原結合分子と同一のエピトープへの結合に起因するかどうか、または立体的ブロッキング（もしくは別の現象）が、観察された結合の欠如の原因であるかどうかを確認し得る。この種の実験を、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、フローサイトメトリー、または当分野で利用可能な任意の他の定量的なもしくは定性的な抗原結合アッセイを使用して実施し得る。本開示のある特定の実施形態によれば、２種の抗原結合タンパク質は、競合結合アッセイで測定した場合に例えば１倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍過剰の一方の抗原結合タンパク質が他方の結合を少なくとも５０％、好ましくは７０％、９０％、またはさらには９９％阻害する場合には、同一の（または重複する）エピトープに結合する（例えばＪｕｎｇｈａｎｓ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９０：５０：１４９５〜１５０２頁を参照されたい）。あるいは、２種の抗原結合タンパク質は、一方の抗原結合タンパク質の結合を低下させるかまたは排除する抗原中の本質的に全てのアミノ酸変異が他方の結合を低下させるかまたは排除する場合には、同一のエピトープに結合すると見なされる。２種の抗原結合タンパク質は、一方の抗原結合タンパク質の結合を低下させるかまたは排除するアミノ酸変異のサブセットのみが他方の結合を低下させるかまたは排除する場合には、「重複エピトープ」を有すると見なされる。
【０１７９】
抗体またはその抗原結合ドメインが参照抗原結合分子と結合に関して競合するかどうかを決定するために、上記で説明されている結合方法を下記の２つの方向で実施する：第１の方向では、この参照抗原結合分子を飽和条件下でＣ１ｑタンパク質（またはＩｓｄＢタンパク質）と結合させ、続いてこのＣ１ｑ（またはＩｓｄＢ）分子への試験抗体の結合を評価する。第２の方向では、この試験抗体を飽和条件下でＣ１ｑ（またはＩｓｄＢ）分子と結合させ、続いてこのＣ１ｑ（またはＩｓｄＢ）分子への参照抗原結合分子の結合を評価する。両方の方向において、最初の（飽和）抗原結合分子のみがＣ１ｑ（またはＩｓｄＢ）分子に結合し得る場合には、試験抗体および参照抗原結合分子はＣ１ｑ（またはＩｓｄＢ）への結合に関して競合すると結論付けられる。当業者に理解されるように、参照抗原結合分子と結合に関して競合する抗体は、必ずしもこの参照抗体と同一のエピトープに結合するとは限らず、重複するかまたは隣接するエピトープに結合することにより、この参照抗体の結合を立体的にブロックする場合がある。
【０１８０】
抗原結合ドメインの製造および二重特異性分子の構築
特定の抗原に特異的な抗原結合ドメインを、当分野で既知の任意の抗体生成技術により製造し得る。得られると、２種の異なる抗原（例えばＣ１ｑおよびＩｓｄＢ）に特異的な２種の異なる抗原結合ドメインを、日常的な方法を使用して互いに対して適切に配置して、本開示の二重特異性抗原結合分子を製造し得る。（本開示の二重特異性抗原結合分子を構築するために使用される例示的な二重特異性抗体フォーマットの考察を本明細書の他の箇所に記載する）。ある特定の実施形態では、本開示の多重特異性抗原結合分子の個々の成分（例えば重鎖および軽鎖）の内の１つまたはそれ以上は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト抗体に由来する。
【０１８１】
そのような抗体を製造する方法は当分野で公知である。例えば、本開示の二重特異性抗原結合分子の重鎖および／または軽鎖の内の１つまたはそれ以上を、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術を使用して製造し得る。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術（または任意の他のヒト抗体生成技術）を使用して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、特定の抗原（例えばＣ１ｑまたはＩｓｄＢ）に対する高親和性キメラ抗体が最初に単離される。この抗体を、親和性、選択性、エピトープ等の望ましい特性に関する特徴を明らかにして、この特性に関して選択する。このマウス定常領域を所望のヒト定常領域に置き換えて、本開示の二重特異性抗原結合分子に組み入れられる完全ヒト重鎖および／または完全ヒト軽鎖を生成する。
【０１８２】
遺伝子操作された動物を使用して、ヒト二重特異性抗原結合分子を製造し得る。例えば、内因性マウス免疫グロブリン軽鎖可変配列を再配列して発現することができない遺伝子改変マウスを使用し得、このマウスは、内因性マウスカッパ遺伝子座でマウスカッパ定常遺伝子に作動可能に連結されたヒト免疫グロブリン配列によりコードされる１つまたは２つのヒト軽鎖可変ドメインのみを発現する。そのような遺伝子改変マウスを使用して、２種の異なるヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントの内の１つに由来する可変領域を含む同一の軽鎖と結合する２種の異なる重鎖を含む完全ヒト二重特異性抗原結合分子を製造し得る。（そのように操作されたマウス、および二重特異性抗原結合分子を製造するためのこのマウスの使用の詳細な考察に関して、例えば米国特許出願公開第２０１１／０１９５４５４号を参照されたい）。
【０１８３】
生物学的等価物
本開示は、本明細書で開示されている例示的な分子のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有するが、Ｃ１ｑおよび／またはＩｓｄＢに結合する能力を保持する抗原結合分子を包含する。そのようなバリアント分子は、親配列と比較した場合にアミノ酸の１つまたはそれ以上の付加、欠失、または置換を含み得るが、説明されている二重特異性抗原結合分子の生物活性と本質的に等価である生物活性を示す。
【０１８４】
本開示は、本明細書に記載されている例示的な抗原結合分子の内のいずれかと生物学的に等価である抗原結合分子を含む。２種の抗原結合タンパク質または抗体は、例えば、単回用量または複数回用量のいずれかで類似の実験条件下にて同一のモル用量で投与した場合に吸収の速度および程度が有意差を示さない医薬等価物または医薬代替物である場合には、生物学的に等価と見なされる。いくつかの抗原結合タンパク質は、それらの吸収の程度が等価であるが吸収速度が等価ではない場合には等価物または医薬代替物と見なされ、さらに生物学に等価と見なされる場合があり、なぜならば、吸収速度のそのような差異は意図的であり、ラベリングに反映されており、例えば慢性的な使用での有効な体内薬物濃度の達成に必須ではなく、かつ研究される特定の医薬品に関して医学的に重要ではないと見なされるからである。
【０１８５】
一実施形態では、２種の抗原結合タンパク質は、それらの安全性、純度、および効力に臨床的に意味がある差異がない場合には、生物学的に等価である。
【０１８６】
一実施形態では、２種の抗原結合タンパク質は、参照製剤と生物学的製剤との間の１回またはそれ以上の切り替えなしに治療を継続した場合と比較して副作用（例えば、免疫原性の臨床的に有意な変化、または有効性の低下）のリスクの予想される増加なしに、患者がそのような切り替えをし得る場合には、生物学的に等価である。
【０１８７】
一実施形態では、２種の抗原結合タンパク質は、これらが両方とも、条件または使用条件に対して共通のメカニズムまたは作用機序により、そのようなメカニズムが知られている範囲で作用する場合には、生物学的に等価である。
【０１８８】
生物学的等価性を、インビボの方法およびインビトロの方法により実証し得る。生物学的等価性の測定として、例えば下記が挙げられる：（ａ）抗体またはその代謝産物の濃度を時間の関数として血液、血漿、血清、または他の体液中で測定する、ヒトまたは他の動物でのインビボ試験；（ｂ）ヒトのインビボでのバイオアベイラビリティデータと相関関係があり、かつこのデータを合理的に予測するインビトロ試験；（ｃ）抗体（またはその標的）の適切な急性薬理効果を時間の関数として測定する、ヒトまたは動物でのインビボ試験；および（ｄ）抗原結合タンパク質の安全性、有効性、またはバイオアベイラビリティ、または生物学的等価性を確立する、十分に制御された臨床試験。
【０１８９】
本明細書に記載されている例示的な二重特異性抗原結合分子の生物学的に等価なバリアントを、例えば、残基もしくは配列を様々に置換することにより、または生物活性に必要とされない末端のもしくは内部の残基もしくは配列を欠失させることにより、構築し得る。例えば、生物活性に必須ではないシステイン残基を欠失させるか、または他のアミノ酸に置き換えることにより、再生時に不必要なまたは不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止し得る。他の状況では、生物学的に等価な抗原結合タンパク質として、本明細書に記載されている例示的な二重特異性抗原結合分子のバリアントであって、この分子のグリコシル化特性を改変するアミノ酸変化（例えば、グリコシル化を排除するかまたは除去する変異）を含むバリアントが挙げられる。
【０１９０】
免疫コンジュゲート
本開示は、細胞毒素、化学療法剤、免疫抑制剤、または放射性同位体等の治療部位（免疫コンジュゲート）にコンジュゲートした抗原結合分子を包含する。細胞毒性剤として、細胞にとって有害なあらゆる薬剤が挙げられる。免疫コンジュゲートの形成に適した細胞毒性剤および化学療法剤の例は当分野で既知である（例えば、国際公開第０５／１０３０８１号パンフレットを参照されたい）。
【０１９１】
治療製剤および投与
本開示は、本開示の抗原結合分子を含む医薬組成物を提供する。本開示の医薬組成物は、改善された導入、送達、耐性、および同類のものを付与する好適な担体、添加剤、および他の薬剤により製剤化される。多数の適切な製剤を、全ての薬剤師に既知の下記処方集に見出し得る：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ。この製剤として例えば下記が挙げられる：粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型エマルションおよび油中水型エマルション、エマルションカルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固形ゲル、およびカルボワックスを含有する半固形混合物。Ｐｏｗｅｌｌ他”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８年）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２：２３８〜３１１頁も参照されたい。
【０１９２】
患者に投与する抗原結合分子の用量は、患者の年齢および体格、標的疾患、状態、投与経路、および同類のものに応じて異なる場合がある。好ましい用量は概して、体重または体表面積に応じて算出される。本開示の二重特異性抗原結合分子を成人患者において治療目的で使用する場合には、通常は約０．０１〜約２０ｍｇ／体重ｋｇの単回用量で、より好ましくは約０．０２〜約７、約０．０３〜約５、または約０．０５〜約３ｍｇ／体重ｋｇの単回用量で、本開示の二重特異性抗原結合分子を静脈内投与することが有利であり得る。状態の重症度に応じて、処置の頻度および継続時間を調整し得る。二重特異性抗原結合分子の投与に有効な投与量およびスケジュールを経験的に決定し得、例えば、定期的な評価により患者の進行をモニタリングして、それに基づいて用量を調整し得る。さらに、投与量の種間スケーリングを、当分野で公知の方法（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ他、１９９１年、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．８：１３５１頁）を使用して実施し得る。
【０１９３】
様々な送達システム（例えば、リポソーム中でのカプセル化、マイクロ粒子、マイクロカプセル、変異ウイルスを発現し得る組み換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス）が既知であり、本開示の医薬組成物を投与するために使用される（例えばＷｕ他、１９８７年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９〜４４３２頁を参照されたい）。導入方法として、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路、硬膜外経路、および経口経路が挙げられるがこれらに限定されない。組成物を、任意の好都合な経路により投与し得、例えば、点滴またはボーラス注射により投与し得、上皮または皮膚粘膜の裏層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸管粘膜等）を介した吸収により投与し得、かつ他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与し得る。投与は全身または局所であり得る。
【０１９４】
本開示の医薬組成物を、標準的な針およびシリンジにより皮下または静脈内に送達し得る。加えて、皮下送達に関して、本開示の医薬組成物の送達にペン送達デバイスが容易に適用される。そのようなペン送達デバイスは、再利用可能であり得るか、または使い捨てであり得る。再利用可能なペン送達デバイスは一般に、医薬組成物を含む交換可能なカートリッジを利用する。このカートリッジ内の医薬組成物の全てが投与されて、このカートリッジが空になると、この空のカートリッジが容易に廃棄されて、医薬組成物を含む新規のカートリッジに交換される。次いで、このペン送達デバイスを再利用し得る。使い捨てペン送達デバイスでは、交換可能なカートリッジは存在しない。むしろ、この使い捨てペン送達デバイスは、このデバイス内のリザーバに保持された医薬組成物が予め充填されている。このリザーバ内の医薬組成物が空になると、このデバイス全体が廃棄される。
【０１９５】
多数の再使用可能なペンおよび自己注射器送達デバイスが本開示の医薬組成物の皮下送達に適用される。例として、ほんのわずかではあるが、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．，Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ，ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｅｒｇｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ  ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、ならびにＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ，  Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられるがこれらに限定されない。本開示の医薬組成物の皮下送達に適用される使い捨てペン送達デバイスの例として、ほんのわずかではあるが、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）、およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ  ＩＬ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１９６】
ある特定の状況では、本医薬組成物を制御放出システムで送達し得る。一実施形態では、ポンプを使用し得る（Ｌａｎｇｅｒ、上記参照；Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７年、ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１頁を参照されたい）。別の実施形態ではポリマー材料を使用し得、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（編）、１９７４年、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａを参照されたい。さらに別の実施形態では、制御放出システムをこの組成物の標的の近くに配置し得、そのため全身用量の一部しか必要としない（例えばＧｏｏｄｓｏｎ、１９８４年、ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、上記参照、第２巻、１１５〜１３８頁を参照されたい）。他の制御放出システムが、Ｌａｎｇｅｒ、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７〜１５３３による概説で考察されている。
【０１９７】
注射用調製物として、静脈内注射、皮下注射、皮内注射、および筋肉内注射、点滴等のための剤形が挙げられる。この注射用調製物を公知の方法により製造し得る。例えば、注射用調製物を、例えば、無菌水性培地または注射に従来使用されている油性培地に、上記で説明した抗体またはその塩を溶解させるか、懸濁させるか、または乳化させることにより製造し得る。注射用の水性培地として、例えば、生理食塩水、グルコースおよび他の補助剤等を含む等張液が存在し、アルコール（例えばエタノール）、多価アルコール（例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、水添ヒマシ油のＨＣＯ−５０（ポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物］等の適切な可溶化剤と組み合わせて使用される。油性培地として、例えば、可溶化剤（例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等）と組み合わせて使用されるゴマ油、大豆油等が採用される。そのように製造された注射液は、好ましくは適切なアンプルに充填される。
【０１９８】
有利には、上記で説明した経口用または非経口用の医薬組成物を、有効成分の用量を適合させるのに適した単位用量の剤形に製造する。そのような単位用量の剤形として、例えば、錠剤、丸剤、カプセル、注射液（アンプル）、座薬等が挙げられる。含まれる上述の抗体の量は一般に、単位用量の１つの剤形当たり約５〜約５００ｍｇであり、特に注射液の形態では、上述の抗体は約５〜約１００ｍｇで含まれ、他の剤形の場合には約１０〜約２５０ｍｇで含まれることが好ましい。
【０１９９】
抗原結合分子の治療上での使用
本開示は、対象中でのスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種の増殖を阻害する方法であって、必要とする対象に、補体成分（例えばＣ１ｑ）およびスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種標的抗原（例えばＩｓｄＢ）に特異的に結合する二重特異性抗原結合分子を含む治療用組成物を投与することを含む方法を含む。この治療用組成物は、本明細書で開示されている抗体またはその断片または二重特異性抗原結合分子の内のいずれかと、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含み得る。本明細書で使用される場合、表現「必要とする対象」は、感染の１種もしくはそれ以上の症状もしくは兆候を示すヒトもしくは非ヒト動物を意味するか、または通常であればスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種の阻害もしくは減少から利益を得るであろうヒトもしくは非ヒト動物を意味する。
【０２００】
本開示の抗体および二重特異性抗原結合分子（ならびにそれらを含む治療用組成物）は、特に、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種の増殖の阻害、減少が有益であるだろうあらゆる疾患または障害を処置するのに有用である。特に、本開示の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗原結合分子を、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種に関連するかまたはスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種により媒介されるあらゆる疾患または障害の処置、予防、および／または寛解に使用し得る。本開示の治療方法が達成される作用機序は、例えばＣＤＣ、アポトーシス、ＡＤＣＣ、食作用によるか、またはこれらの機序の内の２つ以上の組み合わせによる、エフェクター細胞の存在下での、ＩｓｄＢを発現する細胞の死滅を含む。本開示の二重特異性抗原結合分子を使用して阻害し得るかまたは死滅させ得る、ＩｓｄＢまたは他の標的抗原を発現する細胞として、例えば、スタフィロコッカス・エピデルミデス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・ルグドゥネンシス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ）、および／またはスタフィロコッカス・サプロフィティカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｉｔｉｃｕｓ）が挙げられる。実施形態では、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種は、メチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）等の抗生物質耐性種である。
【０２０１】
本開示の抗原結合分子を使用して、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種（特に抗生物質耐性種）の感染と関連する疾患または障害（例えば、皮膚感染、蜂窩織炎、肺炎、髄膜炎、尿路感染、毒素性ショック症候群、心内膜炎、心膜炎、骨髄炎、菌血症、または敗血症）を処置し得る。本開示の抗原結合分子を使用して、外科手術（例えば、人工装具の移植を伴う手術）の最中にまたは後に生じる場合があるスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種の感染も予防し得る。ある特定の実施形態では、この人工装具は義肢（例えば義手または義足）であり得る。ある特定の実施形態では、この人工装具は股関節交換品であり得る。ある特定の実施形態では、この人工装具は、美容人工装具（例えば、限定されないが、義眼、またはシリコン製の手、指、乳房、足、足指、または顔面インプラント）であり得る。
【０２０２】
併用療法および製剤
本開示は、１種またはそれ以上の追加の治療薬との組み合わせで、本明細書で説明されている例示的な抗体および二重特異性抗原結合分子の内のいずれかを含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。本開示の抗原結合分子と組み合わされるかまたは組み合わせて投与される例示的な追加の治療薬は、抗生物質、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）抗原に結合する抗体、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）毒素に結合する抗体、ヒトＣ１ｑまたはカニクイザルＣ１ｑに結合する抗体、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種に特異的なワクチン、抗体薬物コンジュゲート（例えば、抗生物質にコンジュゲートした二重特異性抗体）、またはこれらの組み合わせを含む。
【０２０３】
追加の治療上活性な成分を、本開示の抗原結合分子の投与の直前、同時、または直後に投与し得る（本開示の目的のために、そのような投与レジメンは、追加の治療上活性な成分と「組み合わされた」抗原結合分子の投与と見なされる）。
【０２０４】
本開示は、本開示の抗原結合分子が本明細書の他の箇所で説明されている追加の治療上活性な成分の内の１つまたはそれ以上と共製剤化されている医薬組成物を含む。
【０２０５】
投与レジメン
本開示のある特定の実施形態によれば、抗原結合分子（例えば、ＩｓｄＢおよびＣ１ｑに特異的に結合する二重特異性抗原結合分子）の複数回の用量を、定義された時間経過にわたり対象に投与し得る。本開示のこの態様に係る方法は、本開示の抗原結合分子の複数回の用量を対象に順次投与することを含む。本明細書で使用される場合、「順次投与する」は、抗原結合分子の各用量を異なる時点で（例えば、所定の間隔（例えば、時間、日、週、または月）で離れている異なる日に）対象に投与することを意味する。本開示は、抗原結合分子の単一の初回用量を、続いてこの抗原結合分子の１つまたはそれ以上の２次用量を、場合により続いてこの抗原結合分子の１つまたはそれ以上の３次用量を、患者に順次投与することを含む方法を含む。
【０２０６】
用語「初回用量」、「２次用量」、および「３次用量」は、本開示の抗原結合分子の投与の時間的な順序を指す。そのため、「初回用量」とは、処置レジメンの開始時に投与される用量のことであり（「ベースライン用量」とも称される）、「２次用量」とは、初回用量の後に投与される用量のことであり、「３次用量」とは、２次用量の後に投与される用量のことである。初回用量、２次用量、および３次用量は全て、同一量の本抗原結合分子を含み得るが、一般に、投与の頻度の点では互いに異なり得る。しかしながら、ある特定の実施形態では、初回用量、２次用量、および／または３次用量に含まれる抗原結合分子の量は、処置の経過中に互いに異なる（例えば、必要に応じて上下に調整される）。ある特定の実施形態では、２回以上（例えば、２回、３回、４回、または５回）の用量を「負荷用量」として処置レジメンの開始時に投与し、続いて後続の用量をより低い頻度で投与する（例えば「維持用量」）。
【０２０７】
本開示の例示的な一実施形態では、各２次用量および／または３次用量を、直前の用量の１〜２６（例えば、１、１１／２、２、２１／２、３、３１／２、４、４１／２、５、５１／２、６、６１／２、７、７１／２、８、８１／２、９、９１／２、１０、１０１／２、１１、１１１／２、１２、１２１／２、１３、１３１／２、１４、１４１／２、１５、１５１／２、１６、１６１／２、１７、１７１／２、１８、１８１／２、１９、１９１／２、２０、２０１／２、２１、２１１／２、２２、２２１／２、２３、２３１／２、２４、２４１／２、２５、２５１／２、２６、２６１／２、またはより多くの）日後に投与する。語句「直前の用量」は、本明細書で使用される場合、一連の複数回の投与において、間の用量が存在することなく、この一連における直後の用量の投与前に患者に投与される抗原結合分子の用量を意味する。
【０２０８】
本開示のこの態様に係る方法は、抗原結合分子（例えば、ＩｓｄＢおよびＣ１ｑに特異的に結合する二重特異性抗原結合分子）の任意の回数の２次および／または３次用量を患者に投与することを含み得る。例えば、ある特定の実施形態では、単回の２次用量のみを患者に投与する。他の実施形態では、２回以上（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、またはより多く）の２次用量を患者に投与する。同様に、ある特定の実施形態では、単回の３次用量のみを患者に投与する。他の実施形態では、２回以上（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、またはより多くの）３次用量を患者に投与する。
【０２０９】
複数回の２次用量を伴う実施形態では、各２次用量を他の２次用量と同一頻度で投与し得る。例えば、各２次用量を、直前の用量の１〜２週間後に患者に投与し得る。同様に、複数回の３次用量を伴う実施形態では、各３次用量を他の３次用量と同一頻度で投与し得る。例えば、各３次用量を、直前の用量の２〜４週間後に患者に投与し得る。あるいは、２次および／または３次用量が患者に投与される頻度は、処置レジメンの経過の内に変化し得る。投与の頻度はまた、臨床検査後の個々の患者のニーズに応じて、医師により処置の経過中に調節される。
【実施例】
【０２１０】
下記の実施例は、本開示の方法および組成物を製造して使用する方法の完全な開示および説明を当業者に提供するために記載されており、本発明者らが彼らの開示と見なすものの範囲を限定することを意図されていない。使用される数（例えば、量、温度等）に関しては正確さを確保する努力が払われているが、多少の実験的な誤差および偏差が考慮されるべきである。別途示さない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、圧力は大気圧であるかまたは大気圧付近である。
【０２１１】
実施例１．抗Ｃ１ｑ抗体の製造
ヒト補体成分１ｑ（Ｃ１ｑ）でＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス（即ち、ヒト免疫グロブリンの重鎖およびカッパ軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを含む操作マウス；米国特許第６，５９６，５４１号を参照されたい）に免疫付与することにより、抗Ｃ１ｑ抗体を得た。ヒト補体Ｃ１ｑは、３つの特有のサブユニット：Ａ（２９ｋＤａ）；Ｂ（２６ｋＤａ）；およびＣ（２２ｋＤａ）を含む六量体である。サブユニットＡの例示的な配列は、アクセッション番号ＮＰ＿０５７０７５のアミノ酸１〜２４５（配列番号１７０）で見られる。サブユニットＢの例示的な配列は、アクセッション番号ＮＰ＿０００４８２のアミノ酸１〜２５３（配列番号１７１）で見られる。サブユニットＣの例示的な配列は、アクセッション番号ＮＰ＿７５８９５７のアミノ酸１〜２４５（配列番号１７２）で見られる。ヒトＣ１ｑはまた、Ｑｕｉｄｅｌ等の供給源からも市販されている。実施形態では、Ｑｕｉｄｅｌからの市販のヒトＣ１ｑを免疫源として使用した。抗体免疫反応を、Ｃ１ｑ特異的イムノアッセイによりモニタリングした。
【０２１２】
いくつかの完全ヒト抗Ｃ１ｑ抗体を、米国特許第７，５８２，２９８号で説明されているように、骨髄腫細胞に融合させることなくＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス由来の抗原陽性Ｂ細胞から直接単離した。本明細書では、抗体を概して下記の命名法に従って称する：Ｆｃ接頭辞（例えば、「Ｈ１Ｈ」、「Ｈ１×Ｈ」等）、続いて数値識別子「例えば、表１に示すように「２７１２」、「２６９２」等）、続いて「Ｐ」または「Ｄ」接尾辞。名称「Ｈ１×Ｈ」は、プロテインＡへの結合を排除するようにＦｃが改変されている／変異している抗体を指す。プロテインＡに結合しない抗体を提供するＦｃドメインの例示的な改変を、本明細書の他の箇所で説明する。本明細書で使用される抗体名称のＨ１Ｈ接頭辞およびＨ１×Ｈ接頭辞は、この抗体の特定のＦｃ領域のアイソタイプを示す。例えば、「Ｈ１Ｈ」抗体はヒトＩｇＧ１  Ｆｃを有し、「Ｈ１×Ｈ」抗体は変異Ｆｃを有する（米国特許第８，５８６，７１３号を参照されたい）。全ての可変領域は、抗体名称における最初の「Ｈ」で示されるように完全ヒトである。当分野の当業者に理解されるように、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体を、Ｆｃアイソタイプが異なる抗体へと変換し得る（例えば、マウスＩｇＧ１  Ｆｃを有する抗体を、ヒトＩｇＧ４を有する抗体等へと変換し得る）が、いずれにしても、表１で示されている数値識別子により示されている可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は同一のままであり、結合特性は、Ｆｃドメインの性質にもかかわらず同一であるかまたは実質的に類似すると予想される。
【０２１３】
抗体を単離すると、核酸配列およびアミノ酸配列を得た。抗Ｃ１ｑ抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列識別子を下記の表１に示す。核酸配列識別子を表２に示す。
【０２１４】
【表１】
2021500865.tif 000002
【０２１５】
【表２】
2021500865.tif 000003
【０２１６】
実施例２．抗ＩｓｄＢ抗体の製造
スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）由来のヘム取り込みタンパク質ＩｓｄＢに由来する抗原（ＩｓｄＢ）でＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス（即ち、ヒト免疫グロブリンの重鎖およびカッパ軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを含む操作マウス；米国特許第６，５９６，５４１号を参照されたい）に免疫付与することにより、抗ＩｓｄＢ抗体を得た。この抗原の一例は、アクセッション番号ＷＰ＿＿０６３５５７４１６のアミノ酸４１〜６１３を含む。ＩｓｄＢ抗原のアミノ酸配列の一例は、配列番号１６９のアミノ酸３〜５７４である。抗体免疫反応を、ＩｓｄＢ特異的イムノアッセイによりモニタリングした。
【０２１７】
いくつかの完全ヒト抗ＩｓｄＢ抗体を、米国特許第７，５８２，２９８号で説明されているように、骨髄腫細胞に融合させることなくＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス由来の抗原陽性Ｂ細胞から直接単離した。抗体を単離すると、核酸配列およびアミノ酸配列を得た。抗ＩｓｄＢ抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列識別子を下記の表３に示す。核酸配列識別子を表４に示す。
【０２１８】
【表３】
2021500865.tif 000004
【０２１９】
【表４】
2021500865.tif 000005
【０２２０】
実施例３．二重特異性抗Ｃ１ｑおよび抗ＩｓｄＢ二重特異性抗体の製造
抗Ｃ１ｑ特異性結合ドメインおよび抗ＩｓｄＢ特異性結合ドメインを含む二重特異性抗体を、抗Ｃ１ｑ抗体由来の重鎖および軽鎖を抗ＩｓｄＢ抗体由来の重鎖および軽鎖と組み合わせる標準的な方法論を使用して構築した。本実施例の二重特異性抗体を構築するために使用する抗Ｃ１ｑ抗体を、実施例１で説明されているようにＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）マウスに免疫付与することにより得た。本実施例の二重特異性抗体を構築するために使用する抗ＩｓｄＢ抗体を、実施例２で説明されているように得た。
【０２２１】
本実施例に従って作成された二重特異性抗体は、２つの別個の抗原結合ドメイン（即ち結合アーム）Ｄ１およびＤ２を含む。実施形態では、第１の抗原結合ドメイン（Ｄ１）は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と対を形成する、抗ＩｓｄＢ抗体に由来する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）（「ＩｓｄＢ−ＶＨ」）を含み、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＩｓｄＢタンパク質を特異的に認識する抗原結合ドメインを作成する。実施形態では、第２の抗原結合ドメイン（Ｄ２）は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と対を形成する、抗Ｃ１ｑに由来する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）（「Ｃ１ｑ−ＶＨ」）を含み、ヒトＣ１ｑを特異的に認識する抗原結合ドメインを作成する。二重特異性抗体が多くの他の形態（例えば、単鎖Ｆｖ、二重親和性再標的化タンパク質、タンデムダイアボディ、ノブおよびホールの対形成、電荷対形成、クロスＭａｂ、二重可変ドメインＩｇ、ｓ−Ｆａｂ、およびＦｖ−Ｆｃ）で構築されることを当業者は理解する。アームおよび二重特異性抗体のそれぞれの識別子のリストを表５に記載する。二重特異性抗体の各アームの重鎖可変ドメインおよびＣＤＲのアミノ酸配列識別子を表６に示す。
【０２２２】
【表５】
2021500865.tif 000006
【０２２３】
【表６】
2021500865.tif 000007
【表７】
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【０２２４】
実施例４：２５℃および３７℃での抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体へのヒトＣ１ｑおよびＩｓｄＢ−６×Ｈｉｓの結合の速度論
精製済の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体のそれぞれのＣ１ｑアームおよびＩｓｄＢアームへのヒトＣ１ｑ（Ｑｕｉｄｅｌ）およびＩｓｄＢ−６×Ｈｉｓ（ＲＥＧＮ２６５５；配列番号１６９も参照されたい）の結合の平衡解離定数（ＫＤ値）を、リアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサ（Ｂｉａｃｏｒｅ  ４０００）を使用して決定した。ＣＭ５  Ｂｉａｃｏｒｅセンサの表面を、精製済の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体を捕捉するために、モノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，＃ＢＲ−１００８−３９）とのアミンカップリングで誘導体化した。全てのＢｉａｃｏｒｅ結合研究を、０．０１ＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５体積／体積％のＳｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０（ランニング緩衝液）で構成される緩衝液で実施した。ヒト血清から精製されている天然のヒト補体成分Ｃ１ｑタンパク質をＱｕｉｄｅｌから購入し（ここではｈＣ１ｑと称する）、０．６ｎＭ〜２０ｎＭの範囲の濃度で試験した。ヘキサヒスチジンタグ（ＩｓｄＢ−６×Ｈｉｓ；ＲＥＧＮ２６５５；配列番号１６９；ＷＰ＿０６３５５７４１６．１）と共に発現された組み換え細菌ＩｓｄＢ（ここではＩｓｄＢ−６×Ｈｉｓと称される）を０．３７ｎＭ〜９０ｎＭの範囲の濃度で試験し、３０μＬ／分の流量で、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体が捕捉された表面上に注入した。抗体−試薬結合を３分にわたりモニタリングし、解離を５分にわたりモニタリングした。全ての結合速度論実験を２５℃または３７℃で実施した。速度論的な結合（ｋａ）速度定数および解離（ｋｄ）速度定数を、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ  ２．０ｃ曲線フィッテイングソフトウェアを使用して１：１結合モデルにリアルタイムセンサグラム（ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ｓｅｎｓｏｒｇｒａｍ）をフィッティングさせることにより決定した。結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を、速度論的速度定数から下記：
【数１】
2021500865.tif 000009
として算出した。ＮＢは、実験条件下では結合を観測しないことを指す。
【０２２５】
結果および結論
表７で示すように、２５℃では、本開示の１７種の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体の全てが、１１．４ｐＭ〜２．１２ｎＭの範囲のＫＤ値でｈＣ１ｑに結合した。表８で示すように、２５℃では、本開示の１７種の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体の全てが、１．７０ｎＭ〜１２．３ｎＭの範囲のＫＤ値でＩｓｄＢ−６×Ｈｉｓに結合した。表９で示すように、３７℃では、本開示の１７種の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体の全てが、５０．１ｐＭ〜５．０１ｎＭの範囲のＫＤ値でｈＣ１ｑに結合した。表１０で示すように、３７℃では、本開示の１７種の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体の全てが、３．３３ｎＭ〜２１．５ｎＭの範囲のＫＤ値でＩｓｄＢ−６×Ｈｉｓに結合した。上記で説明した実験条件下では、アイソタイプ（陰性）コントロール抗体（ＲＥＧＮ１９３２）へのｈＣ１ｑおよびＩｓｄＢ−６×Ｈｉｓの結合を観測しなかった。
【０２２６】
【表８】
2021500865.tif 000010
【０２２７】
【表９】
2021500865.tif 000011
【０２２８】
【表１０】
2021500865.tif 000012
【０２２９】
【表１１】
2021500865.tif 000013
【０２３０】
実施例５  ブロッキングＥＬＩＳＡ
補体成分Ｃ１ｑは、抗原と複合体化した免疫グロブリンを認識して結合し、補体カスケードを開始する循環六量体である。抗Ｃ１ｑ抗体を単離しており、その後、ヒトＣ１ｑと、ヘモグロビンから鉄を除去するために進化したスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）の鉄制御型表面決定因子タンパク質ＢであるＩｓｄＢとに二重に結合する二重特異性抗体として設計している。天然ヒト補体成分Ｃ１ｑのその天然リガンド（ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、およびヒトＩｇＭ）への結合をブロックする抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の能力を、競合サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定した。
【０２３１】
方法
ヒト血清から精製されている天然のヒト補体成分Ｃ１ｑタンパク質をＱｕｉｄｅｌから購入し、ビオチンで標識した（ｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑ）。ヒトＩｇＧ１カッパ（ｈＩｇＧ１−ｋ，Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、ヒトＩｇＧ２カッパ（ｈＩｇＧ２−ｋ，ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、ヒトＩｇＧ３カッパ（ｈＩｇＧ３−ｋ，ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、およびヒトＩｇＭ全分子（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を、ヒトの血漿または尿から精製した。抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の陰性アイソタイプコントロールとして、抗Ｆｅｌ  ｄ  １ヒトＩｇＧ１抗体（ＲＥＧＮ  １９３２）を、コーティングされた免疫グロブリンへのバックグランド結合のために含めた。試験する抗体を表６で示す。
【０２３２】
下記の手順を使用して実験を実行した。ヒト免疫グロブリンを、４℃にて一晩９６ウェルマイクロタイタープレート上で、ｈＩｇＧ１−ｋ、ｈＩｇＧ２−ｋ、ｈＩｇＧ３−ｋの場合にはＰＢＳ中に２μｇ／ｍＬの濃度で、またはｈＩｇＭの場合にはＰＢＳ中に５μｇ／ｍＬの濃度で別々にコーティングした。その後、非特異的結合部位を、ＢＳＡの０．５％（重量／体積）ＰＢＳ溶液を使用してブロックした。別のマイクロタイタープレート上で、一定量のｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑタンパク質（ｈＩｇＧ１−ｋ、ｈＩｇＧ３−ｋブロッキングの場合には３０ｐＭ、またはｈＩｇＧ２−ｋ、ｈＩｇＭブロッキングの場合には６ｎＭ）を、濃度（ｈＩｇＧ１−ｋ、ｈＩｇＧ３−ｋブロッキングの場合には５０８ｆＭ〜３０ｎＭ、またはｈＩｇＧ２−ｋ、ｈＩｇＭブロッキングの場合には１０ｐＭ〜６００ｎＭ）の範囲で抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体またはアイソタイプコントロール抗体と混合した。抗体阻害アッセイのためのｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑの一定濃度を、プレートにコーティングされたｈＩｇＧ１−ｋ、ｈＩｇＧ２−ｋ、ｈＩｇＧ３−ｋ、またはｈＩｇＭに対するｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑの個々の結合曲線の直性部分内のおおよその中間点から選択した。
【０２３３】
バックグラウンドシグナルを決定するために、ｈＣ１ｑが一定ではないサンプルを含め、抗体を含まないが３０ｐＭまたは６ｎＭのｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑタンパク質を含む溶液も試験して、一定のみの結合シグナルを測定した。３０ｐＭの一定濃度のｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑタンパク質を有する抗体タンパク質複合体を、ｈＩｇＧ１−ｋまたはｈＩｇＧ３でコーティングされたマイクロタイタープレートに移し、６ｎＭの一定濃度のｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑを有する抗体タンパク質複合体を、ｈＩｇＧ２−ｋまたはｈＩｇＭがコーティングされたプレートに移した。室温での１時間のインキュベーションの後、ウェルを洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）とコンジュゲートしたストレプトアビジンにより、プレートに結合したｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑを検出した。次いで、製造業者の推奨に従ってＴＭＢ基質溶液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してプレートを現像し、４５０ｎｍでの吸光度をＶｉｃｔｏｒ  Ｘ４プレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で測定した。
【０２３４】
データ解析を、Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）内のシグモイド用量反応モデルを使用して実施した。算出したＩＣ５０値（免疫グロブリンへのＣ１ｑ結合を５０％減少させるのに必要な抗体の濃度として定義される）を、ブロッキング効力の指標として使用した。各アッセイで試験した抗体の最大濃度での遮断率を算出した。この算出では、抗体が存在しない３０ｐＭまたは６ｎＭのｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑのサンプルの結合シグナルを１００％結合または０％ブロッキングとして参照し、ｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑまたは抗体が存在しない緩衝液のサンプルのバックグラウンドシグナルを０％結合または１００％ブロッキングとして参照した。
【０２３５】
結果および結論
ブロッキング結果を表１１にまとめて、抗体を、個々のまたは複数のコーティング表面へのＣ１ｑ結合をブロックする能力に基づいて３つの群にまとめている。遮断％を全ての抗体に関して報告し、列のタイトルに示されているように、各アッセイで試験した最高濃度で算出する。マイナスの最大ブロッキング％は、抗体の存在下で検出されたｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑ結合の増加を示す。ＩＣ５０値を、ｈＩｇＧ１−ｋ、ｈＩｇＧ２−ｋ、ＩｇＧ３−ｋ、またはＩｇＭへのＣ１ｑ結合を＞５０％ブロックする抗体に関してのみ示し、マイナス記号は、最高の試験濃度で＜５０％ブロックする抗体を示す。阻害曲線がＰｒｉｓｍ（商標）ソフトウェア４パラメータロジスティック方程式に適合し得ない抗体の場合には、ＩＣ５０値を不確定（ＩＮＣ）として報告する。試験した本開示の１７種の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の内の９種がｈＩｇＧ１−ｋリガンド、ｈＩｇＧ２−ｋリガンド、ｈＩｇＧ３−ｋリガンド、およびｈＩｇＭリガンドへのｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑタンパク質結合を＞５０％ブロックすることを確認した。これらの抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体は、１１０ｐＭ〜８３ｎＭの範囲のＩＣ５０値および５３％〜９９％の範囲の遮断％で、ｈＩｇＧ１−ｋおよびｈＩｇＧ３−ｋへの３０ｐＭのｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑの結合、ならびにｈＩｇＧ２−ｋおよびｈＩｇＭへの６ｎＭのｂｉｏｔ−Ｃ１ｑの結合をブロックした。
【０２３６】
【表１２】
2021500865.tif 000014
【０２３７】
試験した抗体の最高濃度では、１７種の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の内の５種が、試験したｈＣ１ｑリガンドの内の一部のみへのｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑ結合を＞５０％ブロックした。これらの抗体の内の１つ（Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄ）は、８．８ｎＭ〜２１ｎＭの範囲のＩＣ５０値および５１％〜７８％の遮断％で、ｈＩｇＧ１−ｋおよびｈＩｇＧ３−ｋへの３０ｐＭのｂｉｏｔ−ｈＣ１Ｑの結合、ならびにｈＩｇＧ２−ｋへの６ｎＭのｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑの結合をブロックした。２００ｎＭの濃度でのこの抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体は、６７％の遮断％でｈＩｇＭへの６ｎＭのｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑの結合をブロックしたが、６００ｎＭの最高試験濃度では、３８％の遮断％でｈＩｇＭへのｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑの結合をブロックした。３種の抗体（Ｈ１Ｈ２０６３９Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４３Ｄ、およびＨ１Ｈ２０６４４Ｄ）は、２４ｎＭ〜７１ｎＭの範囲のＩＣ５０値および６４％〜９５％の遮断％で、ｈＩｇＧ１−ｋへの３０ｐＭのｂｉｏｔ−Ｃ１ｑの結合、ならびにｈＩｇＧ２−ｋおよびｈＩｇＭへの６ｎＭのｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑの結合のみを＞５０％ブロックした。別の抗体（Ｈ１Ｈ２０６３７Ｄ）は、７１ｎＭ〜１００ｎＭの範囲のＩＣ５０値および７０％〜８８％の遮断％で、ｈＩｇＧ２−ｋおよびｈＩｇＭへの６ｎＭのｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑの結合のみを＞５０％ブロックした。
【０２３８】
１７種の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の内の３種（Ｈ１Ｈ２０６３６Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３８Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４１Ｄ）、および不適切なアイソタイプコントロール抗体は、ｈＩｇＧ１−ｋ、ｈＩｇＧ２−ｋ、ｈＩｇＧ３−ｋ、およびｈＩｇＭへのｂｉｏｔ−ｈＣ１ｑの結合を＜５０％ブロックした。
【０２３９】
二重特異性抗体による抗体へのヒトＣ１ｑの結合のブロッキングは、ほとんどの二重特異性抗体が免疫グロブリン分子上の部位へのＣ１ｑの結合を少なくとも部分的にブロックすることを示す。
【０２４０】
実施例６  古典的経路溶血アッセイ
補体系は、活性化された場合に標的細胞を溶解させ、かつオプソニン化を通して食作用を促進するタンパク質の一群である。補体成分Ｃ１ｑは、１個の茎（ｓｔａｌｋ）および６個の茎（ｓｔｅｍ）／頭を含む六量体を形成する４１０ｋＤａのタンパク質である。各茎／頭は、３種のポリペプチド（Ａ、Ｂ、Ｃ）を含む。Ｃ１ｑのＡタンパク質、Ｂタンパク質、Ｃタンパク質はそれぞれ、２４５ａａ、２５３ａａ、および２４５ａａの長さである。各鎖は、システイン残基を含むＮ末端領域、続いてコラーゲン様領域（ＣＬＲ）およびＣ末端（球状頭部領域）を有する。Ｃ１ｑは、Ｃ１ｒの２つ分子およびＣ１ｓの２つ分子と複合体を形成し、Ｃ１複合体と称される。
【０２４１】
補体は、下記の３つの主要な経路により活性化される一連のタンパク質分解工程を介して活性化される：典型的には免疫複合体により活性化される古典的経路（ＣＰ）、保護されていない細胞表面により誘発される代替経路（ＡＰ）、およびマンノース結合レクチン（ＭＢＬ）経路。古典的経路は、ＩｇＭおよびＩｇＧのＦｃ領域へのＣ１ｑ／ｒ２／ｓ２結合または病原体表面への直接的なＣ１ｑ／ｒ２／ｓ２結合により開始され、セリンプロテアーゼＣ１ｓを活性化するセリンプロテアーゼＣ１ｒの自己活性化をもたらされ、次いでＣ２およびＣ４が切断され／活性化し、次いでＣ３およびＣ５の切断がもたらされ、最終的には膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の生成および細胞溶解がもたらされる。
【０２４２】
古典的経路（ＣＰ）アッセイは、古典的補体経路の活性化のためのスクリーニングアッセイであり、この経路の任意の成分の減少、非存在、および／または不活性に対して敏感である。ＣＰアッセイは、ウサギ抗ヒツジ赤血球抗体（溶血素）で予めコーティングされたヒツジ赤血球細胞（ＳＲＢＣ）を溶解する古典的経路の血清補体成分の機能的能力を試験する。抗体でコーティングされたＳＲＢＣを試験血清と共にインキュベートした場合には、補体の古典的経路が活性化されて溶血が起こる。補体成分（例えばＣ１ｑ）が存在しない場合には、溶血活性のパーセントはゼロになり、古典的経路の１つまたはそれ以上の成分が減少した場合には、ＣＰ活性は減少する（Ｇｉｃｌａｓ  ＰＣ  １９９４）。このアッセイを、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体のキャラクタリゼーションおよびスクリーニングに使用した。
【０２４３】
方法
所望の数のヒツジＳＲＢＣをＧＶＢ＋＋緩衝液（ＣｏｍｐＴｅｃｈの、ＣａおよびＭｇを含むＧｅｌａｔｉｎ  Ｖｅｒｏｎａｌ  Ｂｕｆｆｅｒ）で洗浄し、１×１０９個の細胞／ｍＬで再懸濁した。ＳＲＢＣを感作するために、合計１×１０９個／ｍＬのＳＲＢＣ細胞を、２０分にわたり３７℃で１：５０希釈ウサギ抗ヒツジ溶血素（１．５ｍｇ／ｍＬ）の等量と混合した（ＳＲＢＣの最終細胞濃度；５×１０８個の細胞／ｍＬ、および０．７５ｍｇ／ｍＬでの溶血素）。感作したＳＲＢＣをＧＶＢ＋＋緩衝液で２×１０８個の細胞／ｍＬに希釈した後、溶血アッセイで使用した。Ｃ１ｑ枯渇ヒト血清を、ＧＶＢ＋＋緩衝液で１００％〜４％に希釈した。ヒトＣ１ｑを、ＧＶＢ＋＋緩衝液で３１２ｐＭまで希釈した。試験抗体を、ＧＶＢ＋＋緩衝液中の範囲８３．３３ｎＭ〜０．０４１ｎＭで製造した。
【０２４４】
合計７５ｕＬの各試験抗体を、ヒトＣ１ｑ  ５ｕＬと組み合わせて総量８０ｕＬにし、最終的な抗体濃度範囲は７８．１３ｎＭ〜０．０３８ｎＭになり、Ｃ１ｑは１９．５ｐＭの固定濃度であった。試験抗体は、二重特異性抗体Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３２Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３３Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３４Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３５Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３６Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３７Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３８Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３９Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４０Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４１Ｄ、およびＨ１Ｈ２０６４２Ｄであった。次いで、この８０ｕＬの混合物から、５０ｕＬを新たな９６ウェルプレートに移し、４％のＣ１ｑ枯渇ヒト血清５０ｕＬと混合した。１００ｕＬの総量において、最終抗体濃度は３９．１ｎＭ〜０．０１９ｎＭの範囲であり、Ｃ１ｑは９．７５ｐＭの固定濃度であり、Ｃ１ｑ欠乏血清は２％濃度であった。即時に、感作したＳＲＢＣ  １００ｕＬ（２×１０８個の細胞／ｍＬ）を添加して総量を２００ｕＬにし、３７℃で１時間にわたりインキュベートした。このインキュベーション時間の後、細胞を４℃での１２５０×ｇの遠心分離により沈降させた。総量１００ｕＬの上清を新たな９６ウェル平底プレートに移し、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｍ５マイクロプレートリーダーおよびＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏソフトウェアで４１２ｎｍにて読み取った。
【０２４５】
加えて、Ｃ１ｑ枯渇ヒト血清中でのヒトＣ１ｑ用量反応を下記のように決定した。Ｃ１ｑ枯渇ヒト血清の２×ストックを、ＧＶＢ＋＋緩衝液で１００％〜４％に血清を希釈することにより作製した。ヒトＣ１ｑタンパク質の２×ストックを、ＧＶＢ＋＋緩衝液で６．１×１０−８Ｍ〜７．２×１０−１５Ｍに希釈した。Ｃ１ｑ枯渇血清の２×ストックの総量５０ｕＬを、希釈の範囲にわたり作製したＣ１ｑの２×ストック５０ｕＬに添加して合計１００ｕＬにし、最終のＣ１ｑ枯渇ヒト血清濃度は２％であり、最終のＣ１ｑ濃度は３．０５×１０−８Ｍ〜３．６×１０−１５Ｍの範囲であった。即時に、感作したＳＲＢＣ  １００ｕＬ（２×１０８個の細胞／ｍＬ）を添加して総量を２００ｕＬにし、３７℃で１時間にわたりインキュベートした。このインキュベーション時間の後、細胞を４℃での１２５０×ｇの遠心分離により沈降させ、上清を上記で説明したように４１２ｎｍで読み取った。
【０２４６】
溶血活性を、下記のように２％の最終血清濃度で算出した：最初に、ＧＶＢ＋＋希釈剤のみ（ＳＲＢＣなし）のＯＤ４１２を全てのデータから減算し、次いでバックグラウンド細胞溶解（即ち、あらゆる血清なしでＧＶＢ＋＋緩衝液のみ中でインキュベートされた細胞）のＯＤ４１２を全てのデータから減算した。次いで、全ての実験サンプルのＯＤ４１２を最大細胞溶解（水１００ｕＬで処理した細胞）でのＯＤ４１２で除算し、次いで１００を乗算した。
【０２４７】
まとめると、溶血の割合を下記の方程式：
【数２】
2021500865.tif 000015
により算出した。溶血％で表される結果を、Ｐｒｉｓｍ  ６ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）による非線形回帰（４パラメータロジスティック）を使用して解析して、ＩＣ５０値を得た。二重特異性抗体またはアイソタイプコントロールによる溶血の０〜１００％阻害は、最低抗体濃度とＣ１ｑ用量反応の底との間の溶血％の差異で除算して１００を乗算した最低抗体濃度と最高抗体濃度との間の溶血％の差異に基づく。表されているデータは単一点である（重複を実行していない）。
【０２４８】
本開示の１１種の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体を、古典的経路（ＣＰ）溶血アッセイで試験した。７種の二重特異性抗体：Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３２Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３３Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３４Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３５Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４０Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４２Ｄは、ＣＰ溶血活性の強力なブロッカーである。１種の二重特異性抗体Ｈ１Ｈ２０６３７Ｄは（４０ｎＭの最高試験濃度で）中程度のブロッカーであり、３種の二重特異性抗体Ｈ１Ｈ２０６３６Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３８Ｄ、およびＨ１Ｈ２０６４１ＤはＣＰ溶血活性のブロッカーではない（下記の表１２を参照されたい）。
【０２４９】
結論として、本開示の１１種の抗体の内の７種は、古典的補体経路の活性化をブロックする。
【０２５０】
【表１３】
2021500865.tif 000016
【０２５１】
実施例７  補体依存性細胞傷害アッセイ
古典的補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）アッセイを、本開示の二重特異性抗体の、ヒト補体成分Ｃ１ｑ（ｈＣ１ｑ）により媒介されるＣＤＣをブロックする能力を評価するために開発した。補体成分の供給源として、Ｄａｕｄｉ細胞、ＣＤ２０を発現するヒトＢ細胞系列、抗ＣＤ２０抗体、および正常ヒト血清を使用した。Ｂ細胞特異的細胞表面抗原ＣＤ２０に対する治療用抗ＣＤ２０抗体はＢ細胞のＣＤＣを引き起こすことが分かっており（Ｇｌｅｎｎｉｅ他、Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｋｉｌｌｉｎｇ  ｂｙ  ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４４巻、第１６号、２００７年９月、３８２３〜３８３７頁）、ＣＤ２０を発現する細胞系統を使用するＣＤＣアッセイが既に説明されている（Ｆｌｉｅｇｅｒ他、Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｍｏｕｓｅ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８  ｉｎ  ＣＤ２０−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第２０４巻、第１号、２０００年８月２５日、５５〜６３頁）。
【０２５２】
方法
バイオアッセイのために、Ｄａｕｄｉ細胞を、１０％の加熱不活性化されたＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイシン、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、および非必須アミノ酸を含むＲＰＭＩ（ＲＰＭＩ完全培地）中の１０，０００個の細胞／ウェルにて９６ウェルアッセイプレート上に播種した。ＣＤＣを測定するために、抗ＣＤ２０抗体を１００ｎＭ〜２ｐＭに１：３で希釈し（抗体を含まないコントロールサンプルを含む）、２５℃で１０分にわたり細胞と共にインキュベートし、続いて１．６７％の補体を保持したヒト血清（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ）を追加した。ＣＤＣの阻害を試験するために、抗ＩｓｄＢ×抗ｈＣ１ｑ二重特異性抗体、通常の抗ＩｓｄＢ抗体、抗Ｃ１ｑ抗体、またはアイソタイプコントロール抗体を、７５０ｎＭ〜１３ｐＭまたは６１１ｎＭ〜１０ｐＭに１：３で希釈し（抗体を含まないコントロールサンプルを含む）、３０分にあたり１．６７％の血清と共にインキュベートした。細胞への抗体および血清の添加の１０分前に、抗ＣＤ２０抗体を２ｎＭで細胞に添加した。抗ＣＤ２０抗体とのインキュベーションの終了時に、抗体と血清との混合物を細胞に添加した。３７℃および５％ＣＯ２での３．５時間のインキュベーション、続いて２５℃での１５分間のインキュベーション、およびその後のＣｙｔｏＴｏｘ−Ｇｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，＃Ｇ９２９２）の追加後に細胞傷害を測定した。ＣｙｔｏＴｏｘ−Ｇｌｏ（商標）は、細胞傷害の増加（相対光単位（ＲＬＵ）で測定する）と共に発光の増加が観察されるような細胞死を測定する発光ベースの試薬である。コントロールウェル中の未処理細胞を、ＣｙｔｏＴｏｘ−Ｇｌｏ（商標）試薬の追加直後に１６６．７ｕｇ／ｍＬのジギトニンによる処理により溶解させて、細胞の最大死滅を決定した。ＣｙｔｏＴｏｘ−Ｇｌｏ（商標）の追加の１５分後に、Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ機器（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）により、プレートを発光に関して読み取った。
【０２５３】
細胞傷害の割合を、下記の方程式：
【数３】
2021500865.tif 000017
を使用することによりＲＵＬ値で算出した。この方程式では、「バックグラウンド細胞溶解」は、いかなる抗ＣＤ２０抗体も使用することなく培地および血清のみで処理した細胞からの発光であり、「最大細胞溶解」は、１６６．７ｕｇ／ｍＬのジギトニンで処理した細胞からの発光である。細胞傷害％で表される結果を、Ｐｒｉｓｍ  ５ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）による非線形回帰（４パラメータロジスティック）を使用して解析して、ＥＣ５０値およびＩＣ５０値を得た。抗体の阻害％を、下記の方程式：
【数４】
2021500865.tif 000018
を使用して算出した。この方程式では、「細胞傷害ベースライン」は、２ｎＭの抗ＣＤ２０抗体のみで処理した細胞からの細胞傷害％であり、「細胞傷害阻害」は、２ｎＭの抗ＣＤ２０抗体による特定の阻害抗体の用量反応からの最小の細胞傷害％値であり、「細胞傷害バックグラウンド」は、いかなる抗体も使用しない細胞からの細胞傷害％である。上記の方程式では、全ての条件は１．６７％の血清を含む。
【０２５４】
本開示の１７種の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体を、１．６７％のヒト血清および２ｎＭの抗ＣＤ２０抗体と共にＤａｕｄｉ細胞を使用するＣＤＣアッセイにおいてＣ１ｑを阻害する能力に関して試験した。表１３に示すように、１７種の二重特異性抗体の内の１１種は、１０ｎＭ〜１００ｎＭ超の範囲のＩＣ５０値で、Ｃ１ｑにより媒介されるＣＤＣの少なくとも９４％の阻害を示した。残りの二重特異性抗体の内の５種は、ＩＣ５０値が１００ｎＭ超であり、かつ（７５０ｎＭの抗体での）最大阻害は３３％〜８８％の範囲であるブロッカーであった。二重特異性抗体の内の１つ（Ｈ１Ｈ２０６３６Ｄ）は、二重特異性抗体の抗ＩｓｄＢ結合領域を含む従来の抗ＩｓｄＢ抗体と共に、ｈＣ１ｑにより媒介されるＣＤＣの阻害を示さなかった。ヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロール抗体であるコントロールｍＡｂ１も、ＣＤＣのいかなる有意な阻害も示さなかった。市販の抗Ｃ１ｑモノクローナル抗体（Ｑｕｉｄｅｌ，Ａ２０１）は、３．０ｎＭのＩＣ５０値でＣＤＣの＞９９％阻害を示した。抗ＣＤ２０抗体は、８９２ｐＭのＥＣ５０値および６２％の１００ｎＭでの最大細胞傷害％で、１．６７％のヒト血清によるＤａｕｄｉ細胞のＣＤＣを示した。
【０２５５】
【表１４】
2021500865.tif 000019
【０２５６】
実施例８Ａ：Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｗｏｏｄ  ４６への抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の結合
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の表面上で発現されたＩｓｄＢへの抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の結合を、ＥＬＩＳＡベースのフォーマットで決定した。ＩｓｄＢへの結合を、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）により発現されるプロテインＡへの抗体の非特異的結合（Ｌｉｎｄｍａｒｋ他、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９８３年８月１２日；６２（１）：１〜１３頁）と区別するために、このアッセイでは、細菌のプロテインＡ欠失株Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｗｏｏｄ  ４６を使用した。
【０２５７】
方法
本発明の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体（Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３２Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３３Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３４Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３５Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３６Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３７Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３８Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３９Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４０Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４１Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４２Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４３Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４４Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４５Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４６Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４７Ｄ）を、ＥＬＩＳＡによりＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｗｏｏｄ  ４６への結合に関して試験した。簡潔に説明すると、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｗｏｏｄ  ４６を一晩ＲＰＭＩ中で増殖させ、ＰＢＳで洗浄し、０．２５のＯＤ６００まで調整した。ＭａｘｉＳｏｒｐ  ９６ウェルマイクロタイタープレートを、１つのウェル当たりＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の培養物１００μｌで一晩コーティングした。プレートを洗浄し、３％のＢＳＡでブロックした。抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体、コントロールＩ、コントロールＩＩ、コントロールＩＩＩ、および陰性アイソタイプコントロ−ル抗体の１：３希釈の０．１４ｎＭ〜０．１μＭの範囲の滴定液（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）をＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）含有ウェルに添加し、２５℃で１時間にわたりインキュベートした。洗浄したプレートに、抗ヒトＨＲＰコンジュゲート二次抗体を添加した。次いで、このウェルに発光試薬（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｐｉｃｏ）を添加し、直ちにプレートリーダー（Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ３プレートリーダー、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）でシグナルを検出した。発光値を、７点反応曲線（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）全体で４パラメータロジスティック方程式により解析して、抗体の結合ＥＣ５０を決定した。
【０２５８】
この研究（実施例８Ａおよび８Ｂ）で使用するコントロール抗体として下記が挙げられる：コントロールＩは、米国特許出願２０１０／０１６６７７２号で説明されており、ＣＳ−Ｄ７（米国特許出願２０１０／０１６６７７２号の配列番号１および配列番号２も参照されたい）と命名されている抗ＩｓｄＢ  ｈＩｇＧ１抗体である。コントロールＩＩは、本明細書（実施例２、表３）で説明されているように製造された、ＩｓｄＢに特異的な二価抗体：配列番号１３８／１４６のアミノ酸配列を有する抗体Ｈ１Ｈ２０２９５Ｐ２およびＨＣＶＲ／ＬＣＶＲの対である。コントロールＩＩＩは、本明細書（実施例２、表３）で説明されているように製造された、ＩｓｄＢに特異的な二価抗体：配列番号１５４／１６２のアミノ酸配列を有するＨ１Ｈ２０３１８Ｐ２およびＨＣＶＲ／ＬＣＶＲの対である。コントロールＩＩ抗体およびコントロールＩＩＩ抗体は、Ｃ１ｑに結合する抗原結合ドメインを有しない。ＲＥＧＮ１９３２は、ＩｓｄＢまたはＣ１ｑ以外の抗原に特異的な陰性アイソタイプコントロール抗体である。
【０２５９】
結果：
ＥＬＩＳＡによりＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｗｏｏｄ  ４６に結合する能力に関してアッセイした場合に、本発明で説明されている抗体は１．０４×１０−９Ｍ〜１．８×１０−８Ｍの範囲の結合親和性を示し、コントロールＩ〜ＩＩＩは９．１３×１０−１１Ｍ〜３．６×１０−９Ｍの範囲の結合親和性を示した。陰性アイソタイプコントロール抗体は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｗｏｏｄ  ４６に結合しなかった（表１４）。
【０２６０】
実施例８Ｂ：Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃｏｗａｎ  Ｉへの抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体依存性Ｃ１ｑ補体沈着
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃｏｗａｎ  Ｉ株の表面上での抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体により増強されたＣ１ｑ沈着を、この二重特異性抗体により媒介される病原体表面へのヒト血清からのＣ１ｑ沈着を直接測定することにより、ＥＬＩＳＡをベースとするフォーマットで決定した。
【０２６１】
方法
本発明の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体（Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３２Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３３Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３４Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３５Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３６Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３７Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３８Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３９Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４０Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４１Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４２Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４３Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４４Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４５Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４６Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４７Ｄ）を、ＥＬＩＳＡをベースとするアッセイフォーマットで、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃｏｗａｎ  Ｉへの補体沈着に関して試験した。簡潔に説明すると、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃｏｗａｎ  Ｉを一晩ＲＰＭＩ中で増殖させ、ＰＢＳで洗浄し、０．２５のＯＤ６００まで調整した。ＭａｘｉＳｏｒｐ  ９６ウェルマイクロタイタープレートを、１つのウェル当たりＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の培養物１００μｌで一晩コーティングした。プレートを２％のパラホルムアルデヒドで固定し、３％のＢＳＡでブロックした後、２５℃で１時間にわたり抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体、コントロールＩ、コントロールＩＩ、コントロールＩＩＩ、およびアイソタイプコントロール抗体の１：３希釈で０．１４ｎＭ〜０．１μＭの範囲の滴定液を添加した。洗浄後、６０μｇ／ｍＬの精製済ヒトＣ１ｑを補充した５％のプロテインＡ／Ｇ吸着Ｃ１ｑ枯渇血清を、３７℃で１．５時間にわたり添加した。ヤギ抗Ｃ１ｑ抗体を添加してＣ１ｑ沈着を検出し、続いてロバ抗ヤギＨＲＰ二次抗体を添加した。各工程の間に、プレート洗浄液で洗浄した。次いで、各ウェルに発光試薬（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｐｉｃｏ）を添加し、プレートリーダー（Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ３プレートリーダー、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）でシグナルを検出した。発光値を、７点反応曲線（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）全体で４パラメータロジスティック方程式により解析して、抗体の結合ＥＣ５０を算出した。
【０２６２】
結果
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃｏｗａｎ  ＩへのＣ１ｑ沈着を促進する能力に関してアッセイした場合に、本発明の全ての抗体は３．７６×１０−１２Ｍ〜８．５４×１０−９Ｍの範囲のＥＣ５０値を示し、コントロールＩ〜ＩＩＩおよび陰性アイソタイプコントロールではＣ１ｑ沈着を測定しなかった（表１４）。
【０２６３】
【表１５】
2021500865.tif 000020
【０２６４】
実施例９Ａ  機能アッセイ：全血細菌生存率：全ヒト血液中でのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の生存率および抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑの効果
全ヒト血液中でのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）生存率をエクスビボアッセイで評価して、細菌の増殖を調節するための補体および免疫エフェクター細胞の役割を調査し得る（Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２００９年１０月２６日；２０６（１１）：２４１７〜２７頁）。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）生存率の調節での抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の活性を、この二重特異性抗体またはコントロール抗体を全血に添加して２４時間後に生存率を評価するこのアッセイで測定した。
【０２６５】
方法
本発明の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体（Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３２Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３３Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３４Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３５Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３６Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３７Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３８Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３９Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４０Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４１Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４２Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４３Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４４Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４５Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４６Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４７Ｄ）を、全血生存率アッセイにおいてＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｎｅｗｍａｎに対する細菌活性に関して評価した。簡潔に説明すると、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｎｅｗｍａｎの培養物を一晩ＲＰＭＩ中で増殖させ、ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳに１×１０８コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍＬの濃度まで再懸濁させた。二重で、１０分にわたり１０ｕｇ／ｍＬの試験抗体およびコントロール抗体と予め混合したＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）懸濁液１０ｕＬを、（血栓形成を防ぐために５００ｎＭのダビガトランが添加された、抗凝固剤としてのクエン酸ナトリウム中の）全ヒト血液１００ｕＬに添加した。このサンプルを、２４時間にわたり振盪させつつ（１００ｒｐｍ）３７℃にて９６ウェルプレート中でインキュベートした。インキュベーション後、このサンプルに、凝集溶解緩衝液（ＰＢＳ  １ｍｌ当たり２００Ｕのストレプトキナーゼ、２ｕｇ／ｍＬのＲＮアーゼ、１０ｕｇ／ｍＬのＤＮアーゼ、０．５％のサポニン、１００ｕｇのトリプシンを補充したＰＢＳ）１００ｕｌを添加し、ペレットが消失するまで激しくボルテックスした。各サンプルからの合計５０ｕＬをＰＢＳで連続的に希釈し、ＣＦＵの計数のためにＬＢ寒天プレート上に蒔いた。
【０２６６】
この研究（実施例９Ａおよび９Ｂ）で使用するコントロール抗体として下記が挙げられる：コントロールＩは、米国特許出願２０１０／０１６６７７２号で説明されておりＣＳ−Ｄ７（米国特許出願２０１０／０１６６７７２号の配列番号１および配列番号２も参照されたい）と命名されている抗ＩｓｄＢ  ｈＩｇＧ１抗体である。コントロールＩＩは、本明細書（実施例２、表３）で説明されているように製造された、ＩｓｄＢに特異的な二価抗体：配列番号１３８／１４６のアミノ酸配列を有する抗体Ｈ１Ｈ２０２９５Ｐ２およびＨＣＶＲ／ＬＣＶＲの対である。コントロールＩＩＩは、本明細書（実施例２、表３）で説明されているように製造された、ＩｓｄＢに特異的な二価抗体：配列番号１５４／１６２のアミノ酸配列を有するＨ１Ｈ２０３１８Ｐ２およびＨＣＶＲ／ＬＣＶＲの対である。コントロールＩＩ抗体およびコントロールＩＩＩ抗体は、Ｃ１ｑに結合する抗原結合ドメインを有しない。ＲＥＧＮ１９３２は、ＩｓｄＢまたはＣ１ｑ以外の抗原に特異的な陰性アイソタイプコントロール抗体である。
【０２６７】
結果
２つの独立した実験からの結果を、本明細書で説明されている二重特異性抗体またはコントロール抗体による処理後のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）生存率として表し、表１５にまとめる。試験抗体の非存在下での全ヒト血液中での全増殖を１００％に正規化した。コントロール抗体および陰性アイソタイプコントロール抗体でのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の生存率は影響を受けず、９６〜１００％の範囲であり、Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄでは生存率が２９〜４２％であり、Ｈ１Ｈ２０６３５Ｄでは生存率が３５〜４２％であった。Ｈ１Ｈ２０６３４Ｄは効果がより控えめであり、生存率は７３〜７６％であった。残りの二重特異性抗体では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の生存率は変化しなかった。
【０２６８】
【表１６】
2021500865.tif 000021
【０２６９】
実施例９Ｂ．Ｃ５ブロッキング抗体およびサイトカラシンＤの存在下での全ヒト血液中でのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の生存率
抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の作用機序を決定するために、上記で説明した全血Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）生存率アッセイを利用した。Ｃ５ブロッキング抗体を使用して、生存率の低下が、免疫エフェクター細胞または膜侵襲複合体（Ｃ５の下流）による取り込みの増加につながるＣ４またはＣ３の分解産物によるオプソニン化の結果であるかどうかを決定した。サイトカラシンＤはアクチン重合を阻害し、従って免疫エフェクター細胞が病原体を貪食することを防ぐ。
【０２７０】
方法
この実験を、下記のように付加して上記で説明したように実施した。血液の一部を、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の添加前に、室温で１０分にわたり４０ｕＭのサイトカラシンＤまたは５ｕＭのＣ５ブロッキングＦａｂまたは５ｕＭのＦａｂコントロールで予め処理した。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）をＰＢＳと共にプレインキュベートしたコントロール（抗体処理なし）条件を除いて、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）を、未処理の全ヒト血液、Ｃ５ブロッキングＦａｂで処理した全ヒト血液、コントロールＦａｂで処理した全ヒト血液、またはサイトカラシンＤで処理した全ヒト血液への添加前に、１０分にわたり１００ｕｇ／ｍＬのＨ１Ｈ２０６３１Ｄと共にプレインキュベートした。上記のように、サンプルを、２４時間にわたり振盪させつつ（１００ｒｐｍ）３７℃にて９６ウェルプレート中でインキュベートした。インキュベーション後、凝集溶解緩衝液１００ｕｌを添加して血餅を溶解させ、生存する細菌をＬＢ寒天プレートに蒔いてＣＦＵを決定した。
【０２７１】
結果
２４時間後、抗体なしコントロールと比較して、細菌のわずか７％がＨ１Ｈ２０６３１Ｄによる処理後に生存した。補体成分タンパク質５；Ｃ５ブロッキングＦａｂの添加により生存率が９１％まで増加し、コントロールＦａｂは、細菌の生存率の低下（５％）でのＨ１Ｈ２０６３１Ｄの活性に干渉しなかった。しかしながら、アクチン重合を阻害することにより、サイトカラシンＤを使用する白血球の食作用活性をブロックしても、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の生存率は認識できるほどには改善されない（１２％）。まとめると、これらのデータは、抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の活性は主にＣ５の下流であり、特に膜侵襲複合体の溶菌活性であることを示唆する。この生存率データを表１６にまとめる。
【０２７２】
【表１７】
2021500865.tif 000022
【０２７３】
実施例１０  Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）菌血症のマウスモデルにおける抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体の生物活性の決定
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）は患者の菌血症の主要な原因であり、この感染は致命的であることが多い。感染動態および潜在的治療薬の効果を研究するために、様々な実験室適合Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）単離株および臨床Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）単離株を使用して、ならびに様々なマウスバックグラウンドで、多くの実験室により菌血症のマウスモデルが開発されている（Ｏ’Ｋｅｅｆｆｅ  ＫＭ他、Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２０１５年９月；８３（９）：３４４５〜５７頁．Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ｉｎ  Ｐｈａｇｏｃｙｔｅｓ  Ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  Ｂｌｏｏｄｓｔｒｅａｍ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．；Ｒａｕｃｈ他、Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２０１２年１０月；８０（１０）：３７２１〜３２頁．Ａｂｓｃｅｓｓ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｌｐｈａ−ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．）。菌血症モデルを確立して、細菌負荷の減少および生存率の改善の両方におけるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に対する抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の活性を評価した。
【０２７４】
方法
ヒト化Ｃ１ｑ（Ｃ１ｑＨｕ／Ｈｕ）マウスを、混合マウス株バックグラウンドでマウスＣ１ｑ配列を置き換える重複マウス配列と一緒に、Ｃ１ＱＡ、Ｃ１ＱＢ、およびＣ１ＱＣのＣ１ｑ球状頭部ドメインのヒト配列を使用して生成した（高分解能発現解析を伴うマウスゲノムのハイスループット操作、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２〜６５９頁）。得られたマウスは、ヒト頭部、マウス幹（ｍｏｕｓｅ  ｓｔｅｍ）、およびマウス柄（ｍｏｕｓｅ  ｓｔａｌｋ）を有するキメラＣ１ｑタンパク質を発現する。Ｃ１ｑＨｕ／Ｈｕマウスに、３７℃でＴＢＳ中において対数期、ＯＤ６００≦１まで増殖させてＰＢＳで３回洗浄したＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｎｅｗｍａｎ株２００ｕｌ体積で１匹のマウス当たり１．７×１０８コロニー形成単位（ＣＦＵ）を腹腔内感染させた。感染直後に、マウスに、１００ｕｌ体積で各個々の抗体、コントロールＩＩまたはアイソタイプ適合抗体１００ｕｇを腹腔内投与した。マウスを感染後３日目まで毎日秤量し、体重の変化を記録した。３日目にマウスを安楽死させ、腎臓を摘出して臓器負荷を決定した。簡潔に説明すると、腎臓を、プログラム−Ｅを使用するｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ  Ｏｃｔｏ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、ＰＢＳ  ５．０ｍＬ中でホモジナイズした。組織ホモジネートをＰＢＳで希釈し、１０倍の倍数の連続希釈液をＬＢ寒天プレート上に蒔き、一晩３７℃でインキュベートした。翌日、個々のコロニーを計数して、感染後のその時点での細菌負荷を決定し、結果をＣＦＵ／組織グラムとして報告した。
【０２７５】
生存率に対する抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の効果を調べるために、マウスにＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｎｅｗｍａｎの１匹のマウス当たり１．５×１０８ＣＦＵを感染させ、上記で説明したように試験抗体で処理した。コントロールは、アイソタイプ（陰性）コントロール、ならびにコントロールＩＩ：本明細書（実施例２、表３）で説明されているように製造された、ＩｓｄＢに特異的な二価抗体：配列番号１３８／１４６のアミノ酸配列を有する抗体Ｈ１Ｈ２０２９５Ｐ２およびＨＣＶＲ／ＬＣＶＲの対であった。３日目にマウスを屠殺する代わりに、１８日目までマウスをモニタリングした。開始時の体重の２０％を失ったマウスを屠殺し、死亡と記録した。生き残っている動物の割合を、この研究の終了時に報告した。
【０２７６】
結果および結論：
二重特異性抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３３Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３５Ｄ、およびＨ１Ｈ２０６３６Ｄを、雌のＣ１ｑＨｕ／Ｈｕマウス（ｎ＝５）での腎臓負荷の減少における有効性に関して、コントロール抗体およびアイソタイプコントロール抗体と共に試験した。９ｌｏｇのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＳＦＵを３日目に腎臓から回収した感染コントロールまたはアイソタイプコントロール抗体のみで処理したマウスと比較して、Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄによる処理後の全ＣＦＵの４ｌｏｇ減少およびＨ１Ｈ２０６３５Ｄによる処理後のＣＦＵの２ｌｏｇ減少を観察した（表１７を参照されたい）。２種の二重特異性抗体Ｈ１Ｈ２０６３３ＤおよびＨ１Ｈ２０６３６Ｄは、腎臓の細菌負荷に対して測定可能な効果を有しなかった。
【０２７７】
【表１８】
2021500865.tif 000023
【０２７８】
表１８で示すように、１日目〜３日目では、Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄで処理したマウスでは８．５％の体重増加を記録し、Ｈ１Ｈ２０６３５Ｄで処理したマウスでは７．９％の体重増加を記録した。他の全ての試験群のマウスは、体重減少を維持するか、または非常に緩やかな増加を示した（陰性アイソタイプコントロールおよびＨ１Ｈ２０６３３Ｄ処理）。
【０２７９】
【表１９】
2021500865.tif 000024
【０２８０】
二重特異性抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄを、Ｃ１ｑＨｕ／Ｈｕ雌マウス（ｎ＝９）での生存率研究における有効性に関して、コントロール抗体および陰性アイソタイプコントロール抗体と共に試験した。表１９で示すように、感染後１８日目のこの研究の終了時に、コントロール処理マウスおよび偽処理マウスの５６％、ならびに陰性アイソタイプコントロール処理マウスの７８％と比較して、Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄで処理したマウスの１００％が生存した。
【０２８１】
まとめると、本開示の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）菌血症のモデルでのヒト化Ｃ１ｑマウス株における腎臓の細菌負荷の減少および生存率の改善で有効である。
【０２８２】
【表２０】
2021500865.tif 000025
【０２８３】
実施例１１．抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性ｍＡｂへのＣ１ｑ交差競合
本明細書で説明されている抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体を、Ｏｃｔｅｔ  ＨＴＸバイオセンサによるリアルタイムラベルフリーバイオレイヤー干渉（ＢＬＩ）アッセイを使用して交差競合に関して試験した。この交差競合アッセイにより、ヒトＣ１ｑへの結合に関して互いに競合する二重特異性抗体が決定される。
【０２８４】
ｈＣ１ｑ（Ｑｕｉｄｅｌ）に対する抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体間の結合競合を、Ｏｃｔｅｔ  ＨＴＸバイオセンサ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ／Ｐａｌｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によるリアルタイムラベルフリーバイオレイヤー干渉（ＢＬＩ）アッセイを使用して決定した。この実験を、プレートを１０００ｒｐｍの速度で振盪させつつ、０．０１ＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５体積／体積％の界面活性剤Ｐ２０、１．０ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ（Ｏｃｔｅｔ  ＨＢＳ−ＥＴ緩衝液）で構成された緩衝液中で２５℃にて実施した。２種の抗体がヒトＣ１ｑ上のそれぞれのエピトープへの結合に関して互いに競合し得るかどうかを評価するために、最初に、３分にわたり抗ＩｓｄＢ×Ｃ１ｑ二重特異性抗体の１０μｇ／ｍＬ溶液を含むウェル中に、抗ｈＦｃ抗体でコーティングされたＯｃｔｅｔバイオセンサ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｉｎｃ，＃１８−５０６０）を浸すことにより、このバイオセンサ上に抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体（ｍＡｂ−１と示す）を捕捉させた。ｍＡＢ−１を捕捉したセンサチップ上の余分なフリー抗ｈＦｃ部位を、４分にわたる２００ｕｇ／ｍｌのブロッキング抗体溶液（ブロッキングｍＡｂと示す）を含むウェル中への浸漬により、Ｈ１Ｈアイソタイプコントロール抗体で飽和させた。続いて、このバイオセンサチップを、１０分にわたり、Ｈｕｍａｎ  Ｃ１ｑ（１０ｕｇ／ｍｌ）Ａと約１０倍モル過剰の別の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性ｍＡｂ（ｍＡｂ−２と示す）との共複合体化溶液を含むウェル中に浸漬した。
【０２８５】
全てのバイオセンサチップを、実験の各工程の間にＯｃｔｅｔ  ＨＢＳ−ＥＴ緩衝液で洗浄した。この実験の経過中に、リアルタイムの結合反応をモニタリングし、工程の終了毎に結合反応を記録した。捕捉されたｍＡｂ−１に結合するｍＡｂ−２と予め複合体を形成したＣ１ｑの反応を、バックグラウンド結合に関して補正し、比較し、１７種全ての抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体に関して競合的／非競合的挙動を決定した。
【０２８６】
結果および結論
表２０は、結合の順序とは無関係に、両方向で競合する抗体の関係を示す。４種の抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体（Ｈ１Ｈ２０６３３Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３５Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６３６Ｄ、Ｈ１Ｈ２０６４１Ｄ）は、この研究で調べた他の抗体のいずれとも交差競合しなかった。抗体Ｈ１Ｈ２０６３１は、インビトロおよびインビボでのアッセイにおいて細菌負荷の減少および生存率の増加に有効な二重特異性抗体であった。抗体Ｈ１Ｈ２０６３１は抗体Ｈ１Ｈ２０６３８Ｄと交差競合した。
【０２８７】
【表２１】
2021500865.tif 000026
【表２２】
2021500865.tif 000027
【０２８８】
実施例１２．Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＭＲＳＡ菌血症のマウスモデルにおける抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体の生物活性の決定
Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染動態および潜在的治療薬の効果を研究するために、メチシリン耐性Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）（ＭＲＳＡ）株による菌血症モデルを開発した。この実験では、２種の異なるＭＲＳＡ株：ＵＳＡ４００  ＭＲＳＡ株、ＭＷ２（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＢＡＡ−１７０７、ロット番号５８９１０６７３）およびＵＳＡ３００  ＭＲＳＡ株、ＣＡ１２７（ＮＡＲＳＡ、カタログ番号ＮＲＳ６４３）を使用した。この研究では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｎｅｗｍａｎ株（メチシリン感受性臨床単離株（ＭＳＳＡ））も使用した。このモデルを使用して、細菌負荷の減少におけるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に対する抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の活性を評価した。
【０２８９】
実験手順：
ヒト化Ｃ１ｑ（Ｃ１ｑＨｕ／Ｈｕ）マウスに、２００ｕｌの体積中にＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｎｅｗｍａｎ株の１匹のマウス当たり１．５×１０８コロニー形成単位（ＣＦＵ）、２００ｕｌの体積中にＭＷ２と命名したＭＲＳＡ株の１匹のマウス当たり１．４×１０８ＣＦＵ、または２００ｕｌの体積中にＣＡ１２７と命名した別のＭＲＳＡ株の１匹のマウス当たり１．４×１０８ＣＦＵを腹腔内感染させた。３種全てのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）株を、３７℃でＴｒｙｐｔｉｃ  Ｓｏｙ  Ｂｒｏｔｈ（ＴＳＢ）中において対数期、ＯＤ６００≦１まで増殖させ、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄し、感染のために所望の密度に調整した。感染の２４時間後（１日目）に、マウスに、Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄと命名した抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体（アミノ酸配列識別子に関しては表６を参照されたい）１００ｕｇ、またはＨ１Ｈ２０２９５Ｐ２と命名したコントロールＩＩ抗体１００ｕｇ、または１００ｕｌの体積のＰＢＳを腹腔内投与した。本明細書で既に述べているように、コントロールＩＩは、実施例２、表３で説明されているように製造された、ＩｓｄＢに特異的な二価抗体であり、配列番号１３８／１４６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列を含む。感染後４日目まで毎日マウスを秤量し、体重の変化を記録した。マウスを４日目に安楽死させ、腎臓を摘出して細菌性臓器負荷を決定した。簡潔に説明すると、腎臓を、プログラム−Ｅを使用するｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ  Ｏｃｔｏ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、ＰＢＳ  ５ｍＬ中でホモジナイズし、次いで、このホモジネートをＰＢＳで希釈し、１０倍の倍数の連続希釈液をＬＢ寒天プレート上に蒔き、一晩３７℃でインキュベートした。翌日、個々のコロニーを計数して細菌負荷を決定し、結果をＣＦＵ／組織グラムとして報告した。
【０２９０】
結果のまとめおよび結論：
ヒト化Ｃ１ｑマウス株（ｎ＝５）での腎臓負荷の改善における有効性に関して、Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄと命名した抗二重特異性抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体を、コントロール抗体と共に試験した。４日目に７ｌｏｇのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＭＲＳＡ（ＭＷ２およびＣＡ１２７）ＣＦＵが腎臓から回収された、アイソタイプコントロール抗体（コントロールＩＩ、上記で説明されている）で処理したマウスと比較して、抗ＩｓｄＢ×Ｃ１ｑ二重特異性抗体Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄによる処理後にＣＦＵ全体で２〜４ｌｏｇの減少を観察した。
【０２９１】
まとめると、この抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＭＳＳＡおよびＭＲＳＡ菌血症を有するヒト化Ｃ１ｑマウス株における腎臓細菌負荷の減少で有効である。
【０２９２】
集計したデータの概要：
下記の表２１は、５ｍｇ／ｋｇの抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体およびコントロール抗体による処理から３日後の腎臓におけるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）負荷を示す。
【０２９３】
【表２３】
2021500865.tif 000028
【０２９４】
実施例１３．Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＭＲＳＡ菌血症のマウスモデルにおけるスタンダードオブケア抗生物質との併用での抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体の生物活性の決定
上記の実施例１２で説明されている菌血症モデルを使用して、スタンダードオブケア抗生物質と併用した場合での細菌負荷の減少におけるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＭＲＳＡ株に対する抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体の活性を評価した
【０２９５】
実験手順：
ヒト化Ｃ１ｑ（Ｃ１ｑＨｕ／Ｈｕ）マウスに、２００ｕｌの体積中にＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＭＷ２の１匹のマウス当たり１．３×１０８コロニー形成単位（ＣＦＵ）を腹腔内感染させた。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＭＷ２を、３７℃でＴＳＢ中において対数期、ＯＤ６００≦１まで増殖させ、ＰＢＳで３回洗浄し、感染のために所望の密度に調整した。感染から１８時間後に始めて、２つの群のマウス（ｎ＝５）を、１日目、２日目、および３日目に１日に２回、経口経管投与（２００ｕｌ体積）で８０ｍｇ／ｋｇのリネゾリドにより処理した。感染の２４時間後に、マウスに、Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄと命名した抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体（表６を参照されたい）の単一１００ｕｇ用量または１００ｕｌの体積のＰＢＳを腹腔内投与した。感染後４日目までマウスを毎日秤量し、体重の変化を記録した。４日目にマウスを安楽死させ、腎臓、肺、および心臓を摘出して臓器負荷を決定した。簡潔に説明すると、臓器を、プログラム−Ｅを使用するｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ  Ｏｃｔｏ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、ＰＢＳ  ５ｍＬ中でホモジナイズした。次いで、組織ホモジネートをＰＢＳで希釈し、１０倍の倍数の連続希釈液をＬＢ寒天プレート上に蒔き、一晩３７℃でインキュベートした。翌日、個々のコロニーを計数して細菌負荷を決定し、結果をＣＦＵ／組織グラムとして報告した。
【０２９６】
結果の概要および結論：
ヒト化Ｃ１ｑマウスの腎臓、肺、および心臓での細菌負荷の減少における有効性に関して、二重特異性抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ抗体Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄを、スタンダードオブケア抗生物質リネゾリドと共に試験した。４日目に８．５ｌｏｇのＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣＦＵが腎臓から回収された感染コントロールマウス（抗生物質または抗体を投与していないマウス）と比較して、リネゾリド処理によるＣＦＵの２ｌｏｇの減少と比べてわずかに低い、Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄによる処理後にＣＦＵ全体で２．５ｌｏｇの減少を観察した。Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄおよびリネゾリドの組み合わせで処理したマウスでは、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣＦＵの３．５ｌｏｇの減少を観察した。肺では、Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄまたはリネゾリドのいずれかの単剤による処理により、ＣＦＵ全体が２ｌｏｇ減少した。Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄおよびリネゾリドの組み合わせで処理したマウスでは、肺においてＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＣＦＵの４ｌｏｇの減少を観察した。同様に、心臓では、Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄによる処理によってＣＦＵが４ｌｏｇ減少し、リネゾリドによりＣＦＵが３ｌｏｇ減少した。Ｈ１Ｈ２０６３１Ｄおよびリネゾリドの組み合わせで処理したマウスでは、本発明者らは、心臓からいかなる細菌も培養し得なかった（表中のデータは、このアッセイの検出限界１０３ＣＦＵである）。
【０２９７】
まとめると、この抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性抗体は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＭＲＳＡ菌血症を有するヒト化Ｃ１ｑマウス株における臓器細菌負荷の減少で、リネゾリドとの相加的な効果を有する。
【０２９８】
集計したデータの概要：
下記の表２２は、リネゾリドおよび５ｍｇ／ｋｇの抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性による処理から３日後の腎臓におけるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）負荷を示す。
【０２９９】
【表２４】
2021500865.tif 000029
【０３００】
下記の表２３は、リネゾリドおよび５ｍｇ／ｋｇの抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性による処理から３日後の肺におけるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）負荷を示す。
【０３０１】
【表２５】
2021500865.tif 000030
【０３０２】
下記の表２４は、リネゾリドおよび５ｍｇ／ｋｇの抗ＩｓｄＢ×抗Ｃ１ｑ二重特異性による処理から３日後の心臓におけるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）負荷を示す。
【０３０３】
【表２６】
2021500865.tif 000031
【０３０４】
本開示は、本明細書で説明されている特定の実施形態により範囲が限定されるものではない。実際には、本明細書で説明されているものに加えて、上述の説明から本開示の様々な改変が当業者に明らかになるであろう。そのような改変は添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。
【配列表】
2021500865000001.app
【国際調査報告】
2021500865.tif 000032
2021500865.tif 000033
2021500865.tif 000034
2021500865.tif 000035
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