(57)【要約】Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体、このような抗体を作製する方法、ならびに治療および診断のためにこのような抗体を使用する方法が本明細書で提供される。一局面において、本発明で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体の抗原結合ドメインは、（ａ）表４のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；（ｂ）表５のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；および（ｃ）表６のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む。
2021500893.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体であって、ここで前記抗体の抗原結合ドメインは、
（ａ）表４のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；
（ｂ）表５のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；および
（ｃ）表６のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列のうちのいずれか１つ、
を含む、抗体。
【請求項２】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体であって、ここで前記抗体の抗原結合ドメインは、
（ａ）表７のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；
（ｂ）表８のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；および
（ｃ）表９のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列のうちのいずれか１つ、
を含む、抗体。
【請求項３】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体であって、ここで前記抗体の抗原結合ドメインは、表４、表５、および表６のＣＤＲ−Ｌアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含み、表７、表８、および表９のＣＤＲ−Ｈアミノ酸配列のいずれか１つを含む、抗体。
【請求項４】
前記抗体の抗原結合ドメインは、
（ａ）配列番号１０または配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号１４または配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、
を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
前記抗体の抗原結合ドメインは、
（ａ）配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２または配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０または配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および
（ｃ）配列番号３６または配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３
を含む、請求項１または請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体であって、ここで前記抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項７】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体であって、ここで前記抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項８】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体であって、ここで前記抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項９】
前記抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体は、キメラであるかまたはヒト化されている、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２】
前記抗体はモノクローナル抗体である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１３】
前記抗体は抗原結合フラグメントである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドが、Ｋ１８０以外のメチル化されている残基を含む場合に、前記Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドへの低減した結合を示す、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１５】
前記抗体は、前記Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドがヒトヒストンＨ１．０タンパク質のＫ１６６、Ｋ１７２、Ｋ１７４、Ｋ１７５、および／またはＫ１７７に相当するリジン残基においてメチル化リジン残基を含む場合に、結合しないか、または最小限にしか結合しない、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体は、標識に結合体化されている、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１７】
前記抗体は、固体表面に付着される、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１８】
前記抗体は、ビーズ、カラム、樹脂、またはマイクロプレートに付着される、請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
前記抗体は薬剤に結合体化される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２０】
前記薬剤は、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫モジュレーター、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、および第２の抗体からなる群より選択される、請求項１９に記載の抗体。
【請求項２１】
個体がアルツハイマー病を有するか、その発症リスクにあるか否かを決定するための方法であって、前記方法は、
（ａ）前記個体の生物学的サンプルと請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体とを接触させる工程；および
（ｂ）前記抗体に結合する前記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度を決定する工程であって、ここでコントロールに対する前記濃度の減少は、前記個体がアルツハイマー病を有するか、その発症リスクにあることを示す工程、
を包含する、方法。
【請求項２２】
前記個体がアルツハイマー病を有するか、その発症リスクにあることを示すことが決定された場合、前記個体を、アルツハイマー病の薬物またはレジメンで処置する工程をさらに包含する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
アルツハイマー病と診断され、前記アルツハイマー病のための処置を受けている個体が、前記処置から利益を受けるか、または前記処置から利益を受け続けるか否かを決定するための方法であって、前記方法は、
（ａ）前記個体の生物学的サンプルと請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体とを接触させる工程；および
（ｂ）前記抗体に結合する前記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度を決定する工程；および
（ｃ）コントロールに対する前記濃度の増大が存在する場合、前記個体が、前記処置から利益を受けるか、または前記処置から利益を受け続けることを決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２４】
前記個体が前記処置から利益を受けるか、または前記処置から利益を受け続けることが決定される場合、前記個体を、アルツハイマー病の薬物またはレジメンで処置する工程をさらに包含する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
アルツハイマー病と診断された個体が、候補処置から利益を受けるか否かを決定するための方法であって、ここで前記個体は前記処置を未だ開始しておらず、前記方法は、
（ａ）前記個体に候補処置を投与する工程；
（ｂ）前記候補処置の投与後の前記個体の生物学的サンプルと、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体とを接触させる工程；ならびに
（ｃ）前記抗体に結合する前記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質もしくはそのペプチドの濃度および／または細胞内局在を決定する工程；ならびに
（ｄ）コントロールに対する前記濃度の増大または細胞質の細胞内局在の減少が存在する場合、前記個体が、前記候補処置から利益を受けることを決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２６】
アルツハイマー病と診断された個体が、候補処置から利益を得られるか否かを決定するための方法であって、ここで前記個体は前記処置を未だ開始しておらず、前記方法は、
（ａ）前記個体の生物学的サンプルと候補処置とを接触させる工程；
（ｂ）前記個体の生物学的サンプルと請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体とを接触させる工程；
（ｃ）前記抗体に結合する前記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質もしくはそのペプチドの濃度および／または細胞内局在を決定する工程；ならびに
（ｄ）コントロールに対する前記濃度の増大またはコントロールに対する細胞質の細胞内局在の減少が存在する場合、前記個体が、前記候補処置から利益を受けることを決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２７】
前記処置は、ＡＰＰ合成インヒビター、β−セクレターゼインヒビター、γ−セクレターゼインヒビターおよびモジュレーター、Ａβ凝集インヒビター、Ａβ免疫療法、コレステロール低下薬、抗タウ薬、コリンエステラーゼインヒビター、Ｎ−メチルＤ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト、非定型抗精神病薬、プロテインＳニトロシル化の遮断薬、グルカゴン様ペプチド−１レセプターアゴニスト、ラパマイシン、ラパログ、エンドカンナビノイド、カンナビノイド、神経保護因子、カルシウム流入を制御する分子、抗酸化剤、抗炎症薬、グルタミン酸ホメオスタシス制御を制御する薬物、オートファジー誘導因子、ホルモン、ホルモン調節因子、スタチン、インスリン、インスリンキャリア、多官能性ナノキャリア、ビタミン、栄養補助剤、小型ＲＮＡ分子、ペプチド、および超音波療法からなる群より選択される、請求項２５〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
個体がＤＮＡ損傷因子に曝されているか否かを決定するための方法であって、前記方法は、
（ａ）前記個体の生物学的サンプルと請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体とを接触させる工程；および
（ｂ）前記抗体に結合する前記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度を決定する工程であって、ここでコントロールに対する前記濃度の増大は、前記個体がＤＮＡ損傷因子に曝されていることを示す工程、
を包含する、方法。
【請求項２９】
前記ＤＮＡ損傷因子は放射線である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
ラパログでの処置を受けている個体が、このような処置に応答するか否かを決定するための方法であって、前記方法は、
（ａ）前記個体の生物学的サンプルと請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体とを接触させる工程；
（ｂ）前記抗体に結合する前記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度を決定する工程；および
（ｃ）前記個体が処置に応答するか否かを決定する工程であって、ここでコントロールに対する前記濃度の減少は、前記個体が応答することを示す工程、
を包含する、方法。
【請求項３１】
前記減少は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値を下回る、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ラパログは、ラパマイシン、シロリムス、ラパミューン、エベロリムス、ＲＡ  ００１、アフィニトール、Ｚｏｒｔｒｅｓｓ、テムシロリムス、ＣＣＩ−７７９、トーリセル、リダフォロリムス、ＡＰ２３５７３、ＭＫ−８６６９、デフォロリムス、ゾタロリムス、ＡＢＴ−５７８、ＡＺＤ８０５５、ＡＺＤ２０１４、ＯＳＩ−０２７、ＭＬＮ０１２８、ＷＹＥ−１３２、Ｔｏｒｉｎ  １、ＰＩ−１０３、Ｐ７１７０、ＰＦ−０４６９１５０２、ＰＦ−０５２１２３８４、ＰＫＩ−５８７、ＧＮＥ４７７、ＰＫＩ−１８０、ＷＪＤ００８、ＸＬ７６５、ＳＡＲ２４５４０９、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、ＢＧＴ２２６、ＳＦ１１２６、ＧＳＫ２１２６４５８、Ｋｕ−００６３７９４、ＷＹＥ−３５４、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、ＰＦ−０５２１２３８４、ＸＬ７６５、Ｔｏｒｉｎ  ２、ＷＹＥ−１２５１３２、およびＯＳＩ−０２７からなる群より選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記濃度の増大または減少は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値を上回るかまたは下回る、請求項２１〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記生物学的サンプルは、全血、血漿、血清、唾液、尿、滑液、脳脊髄液、気管支洗浄物、腹水、骨髄吸引物、胸水、組織、細胞、生検材料、間質液、およびリンパ液からなる群より選択される、請求項２１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
皮下標的分子の濃度を測定するための経皮パッチであって、前記パッチは、
（ａ）請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体を含む基材；および
（ｂ）複数のマイクロニードル
を含む、パッチ。
【請求項３６】
前記パッチは、経皮マイクロニードルアレイパッチである、請求項３５に記載のパッチ。
【請求項３７】
前記基材は弾性的に伸縮性である、請求項３５または３６に記載のパッチ。
【請求項３８】
個体が放射線またはＤＮＡ損傷因子に曝露されているか否かを決定するための携帯式ユニットであって、前記ユニットは、
（ａ）サンプル収集ユニット；
（ｂ）読み取り機；
（ｃ）請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体を含むアッセイモジュール；および
（ｄ）複数のマイクロニードル、
を含む、ユニット。
【請求項３９】
分析物のラテラルフローアッセイに適した試験ストリップであって、前記ストリップは、サンプル受容ゾーンを含み、ここで前記サンプル受容ゾーンは、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体を含む、試験ストリップ。
【請求項４０】
個体においてメチル化Ｈ１．０関連疾患または状態を処置するための方法であって、前記方法は、前記個体に、治療上有効な量の請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体を投与する工程を包含する、方法。
【請求項４１】
前記疾患または状態は、アルツハイマー病、放射線曝露、遺伝毒性ストレッサーへの曝露、老化細胞の蓄積を含む疾患または状態、およびＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドの上昇したレベルが付随する疾患または状態からなる群より選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
個体においてＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を取り除くための方法であって、前記方法は、前記個体に、治療上有効な量の請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体を投与する工程を包含する、方法。
【請求項４３】
前記個体は、アルツハイマー病、放射線曝露、遺伝毒性物質への曝露、ＤＮＡ損傷因子への曝露、および老化細胞の蓄積を含む状態からなる群より選択される疾患または状態に罹患している、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体、および薬学的に受容可能な賦形剤を含む、薬学的組成物。
【請求項４５】
治療上有効な量の請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体のうちのいずれか１つを含むキット。
【請求項４６】
請求項１〜２０、および３５〜４５に記載の組成物のうちのいずれか１つを含む、製造物品。
【請求項４７】
配列番号４の核酸を含む、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体をコードする、ベクター。
【請求項４８】
配列番号５の核酸を含む、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体をコードする、ベクター。
【請求項４９】
請求項４７〜４８のいずれか１項に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項５０】
医薬としての使用のための、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体、または請求項４４に記載の薬学的組成物。
【請求項５１】
メチル化Ｈ１．０関連疾患または状態の処置における使用のための、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体、または請求項４４に記載の薬学的組成物であって、必要に応じて、前記疾患または状態は、アルツハイマー病、放射線曝露、遺伝毒性ストレッサーへの曝露、老化細胞の蓄積を含む疾患または状態、およびＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドの上昇したレベルが付随する疾患または状態からなる群より選択される、抗体または薬学的組成物。
【請求項５２】
処置の方法における使用のための、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体、または請求項４４に記載の薬学的組成物であって、前記方法は、個体においてＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を取り除く工程を包含し；必要に応じて、前記個体は、アルツハイマー病、放射線曝露、遺伝毒性物質への曝露、ＤＮＡ損傷因子への曝露、および老化細胞の蓄積を含む状態からなる群より選択される疾患または状態に罹患している、抗体または薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の引用
本出願は、米国仮特許出願第６２／５７７，０４１号（２０１７年１０月２５日出願。その内容は、その全体において本明細書に参考として援用される）への優先権を主張する。
【０００２】
電子提出されたテキストファイルの説明
本明細書とともに電子提出されたテキストファイルの内容は、それらの全体において本明細書に参考として援用される：配列表のコンピューター読み取り可能なフォーマット（ファイル名：  ＡＬＮＣ＿０１０＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ（作成日：２０１８年１０月２３日、ファイルサイズ：２７キロバイト）。
【背景技術】
【０００３】
背景
細胞クロマチンは、多くの構成が可能な、生理学的に関連する入力を受容するにつれて再モデル化および再構築する傾向にある動的ポリマーである。ヒストンタンパク質は、クロマチンの主要なタンパク質構成要素であり、２本鎖ＤＮＡは、ヒストンタンパク質の周りに巻き付けられている。ヒストンタンパク質の変化は、いくつかの遺伝子への転写機構のアクセスを差次的に変更させ得ると同時に、他の遺伝子へのアクセスをそのままにし得る。ヒストン翻訳後修飾（ＰＴＭ）によって達成される差次的なクロマチン凝縮は、クロマチンのパッケージングの根底にある（Ｌｕｎｙａｋ  ａｎｄ  Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ  ９２００８）  Ｈｕｍ．  Ｍｏｌ．  Ｇｅｎｅｔ．，  １７：  Ｒ２８−３６；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｓ  （２００１）  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２９３：  １０７４−１０８０）。ヒストンＰＴＭ（例えば、メチル化）は、エピジェネティックコード（ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  ｃｏｄｅ）として作用し得、発生、傷害、疾患および加齢に密接に関連した細胞応答の多くの局面において極めて重要な役割を果たし得る。
【０００４】
ヒストンには５つの主要なファミリーが存在する：  Ｈ１、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３およびＨ４。ヒストンＨ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３およびＨ４は、コアヒストンとして公知である一方で、ヒストンＨ１およびＨ５は、リンカーヒストンとして公知である。近年、多数の研究によって同定されたその多数のＨ１．０結合タンパク質は、Ｈ１．０のタンパク質間相互作用の重要な役割を指摘し、クロマチン構成に対するその効果を超えて拡大するＨ１．０構造および機能の新たな枠組みを示唆する。
【０００５】
種々の細胞状況においてＨ１．０メチル化を検出する必要性がある；そして種々のタイプの細胞状況の間を区別する高感度アッセイが必要とされる。なぜならそれらは、疾患の発生、傷害への応答、および治療レジメンへの応答に関するからである、メチル化Ｈ１．０関連疾患および状態に治療上対処する必要性もまた存在する。この目的のための方法および組成物が本明細書で提供される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ＪｅｎｕｗｅｉｎおよびＡｌｌｉｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００１）２９３：１０７４〜１０８０
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
要旨
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに結合する抗体が本明細書で提供され、ここで上記抗体は、治療および診断に有用である。このような抗体を作製するための方法がまた提供される。
【０００８】
よって、一局面において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体が本明細書で提供され、ここで上記抗体の抗原結合ドメインは、
（ａ）表４のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；
（ｂ）表５のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；および
（ｃ）表６のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列のうちのいずれか１つ
を含む。
【０００９】
別の局面において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体が本明細書で提供され、ここで上記抗体の抗原結合ドメインは、
（ａ）表７のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；
（ｂ）表８のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；および
（ｃ）表９のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列のうちのいずれか１つ
を含む。
【００１０】
別の局面において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体が本明細書で提供され、ここで上記抗体の抗原結合ドメインは、表４、表５、および表６のＣＤＲ−Ｌアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含み、表７、表８、および表９のＣＤＲ−Ｈアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む。
【００１１】
別の局面において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体が本明細書で提供され、ここで上記Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体の抗原結合ドメインは、
（ａ）配列番号１０または配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号１４または配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、
を含む。
【００１２】
別の局面において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体が本明細書で提供され、ここで上記Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体の抗原結合ドメインは、
（ａ）配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２または配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０または配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および
（ｃ）配列番号３６または配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、
を含む。
【００１３】
別の局面において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体が本明細書で提供され、ここで上記抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を含む。
【００１４】
別の局面において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体が本明細書で提供され、ここで上記抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含む。
【００１５】
別の局面において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体が本明細書で提供され、ここで上記抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を含む。
【００１６】
別の局面において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体が本明細書で提供され、ここで上記抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。
【００１７】
別の局面において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体が本明細書で提供され、ここで上記抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、上記抗体は、キメラであるかまたはヒト化されている。いくつかの実施形態において、上記抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、上記抗体は、抗原結合フラグメントである。
【００１９】
いくつかの実施形態において、上記抗体は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドが、Ｋ１８０以外のメチル化されている残基を含む場合に、上記Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドへの低減した結合を示す。いくつかの実施形態において、上記抗体は、上記Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドが、ヒトヒストンＨ１．０タンパク質のＫ１６６、Ｋ１７２、Ｋ１７４、Ｋ１７５、および／またはＫ１７７に相当するリジン残基においてメチル化リジン残基を含む場合に、結合しないか、または最小限にしか結合しない。
【００２０】
いくつかの実施形態において、上記抗体は、標識に結合体化されている。いくつかの実施形態において、上記抗体は、固体表面に付着される。いくつかの実施形態において、上記抗体は、ビーズ、カラム、樹脂、またはマイクロプレートに付着される。いくつかの実施形態において、上記抗体は薬剤に結合体化される。いくつかの実施形態において、上記薬剤は、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫モジュレーター、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、および第２の抗体からなる群より選択される。
【００２１】
別の局面において、本明細書で提供される抗体のうちのいずれか１つをコードするベクターが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、上記ベクターは、配列番号４の核酸または配列番号５の核酸を含む。関連する局面において、これらベクターのうちの１種またはこれより多くを含む細胞が、本明細書で提供される。
【００２２】
別の局面において、個体が、アルツハイマー病を有するか、その発症リスクにあるか否かを決定するための方法が本明細書で提供され、上記方法は、
（ａ）上記個体の生物学的サンプルと本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つとを接触させる工程；および
（ｂ）上記抗体に結合する上記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度を決定する工程であって、ここでコントロールに対する上記濃度の減少は、上記個体がアルツハイマー病を有するか、その発症リスクにあることを示す工程、
を包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記個体が、アルツハイマー病を有するか、その発症リスクにあることが決定された場合、上記個体を、アルツハイマー病の薬物またはレジメンで処置する工程をさらに包含する。
【００２３】
別の局面において、アルツハイマー病と診断され、上記アルツハイマー病のための処置を受けている個体が、上記処置から利益を受けるか、または該処置から利益を受け続けるか否かを決定するための方法が本明細書で提供され、上記方法は、
（ａ）上記個体の生物学的サンプルと本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つとを接触させる工程；および
（ｂ）上記抗体に結合する上記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度を決定する工程；および
（ｃ）コントロールに対する上記濃度の増大が存在する場合、上記個体が、上記処置から利益を受けるか、または上記処置から利益を受け続けることを決定する工程、
を包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記個体が上記処置から利益を受けるか、または上記処置から利益を受け続けることが決定される場合、上記個体を、アルツハイマー病の薬物またはレジメンで処置する工程をさらに包含する。
【００２４】
別の局面において、アルツハイマー病と診断された個体が、候補処置から利益を受けるか否かを決定するための方法が本明細書で提供され、ここで上記個体は上記処置を未だ開始しておらず、上記方法は、
（ａ）上記個体に候補処置を投与する工程；
（ｂ）上記候補処置の投与後の上記個体の生物学的サンプルと、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つとを接触させる工程；ならびに
（ｃ）上記抗体に結合する上記サンプル中の上記Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質もしくはそのペプチドの濃度および／または細胞内局在（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）を決定する工程；ならびに
（ｄ）コントロールに対する上記濃度の増大または細胞質の細胞内局在の減少が存在する場合、上記個体が、上記候補処置から利益を受けることを決定する工程、
を包含する。いくつかの実施形態において、上記処置は、ＡＰＰ合成インヒビター、β−セクレターゼインヒビター、γ−セクレターゼインヒビターおよびモジュレーター、Ａβ凝集インヒビター、Ａβ免疫療法、コレステロール低下薬、抗タウ薬、コリンエステラーゼインヒビター、Ｎ−メチルＤ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト、非定型抗精神病薬、プロテインＳニトロシル化の遮断薬、グルカゴン様ペプチド−１レセプターアゴニスト、ラパマイシン、ラパログ、エンドカンナビノイド、カンナビノイド（ｃａｎｎａｂｉｏｎｏｉｄ）、神経保護因子（ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｏｒ）、カルシウム流入を制御する分子、抗酸化剤、抗炎症薬、グルタミン酸ホメオスタシス制御を制御する薬物（ｄｒｕｇ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ）、オートファジー誘導因子、ホルモン、ホルモン調節因子、スタチン、インスリン、インスリンキャリア、多官能性ナノキャリア、ビタミン、栄養補助剤（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、小型ＲＮＡ分子、ペプチド、および超音波療法からなる群より選択される。
【００２５】
別の局面において、アルツハイマー病と診断された個体が、候補処置から利益を受けるか否かを決定するための方法が本明細書で提供され、上記方法は、
（ａ）上記候補処置の投与後に上記個体から得られる生物学的サンプルを提供する工程；
（ｂ）上記個体の生物学的サンプルと本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つとを接触させる工程；および
（ｃ）上記抗体に結合する上記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度および／または細胞内局在を決定する工程；ならびに
（ｄ）コントロールに対する上記濃度の増大または細胞質の細胞内局在の減少が存在する場合、上記個体が、上記候補処置から利益を受けることを決定する工程、
を包含する。いくつかの実施形態において、上記処置は、ＡＰＰ合成インヒビター、β−セクレターゼインヒビター、γ−セクレターゼインヒビターおよびモジュレーター、Ａβ凝集インヒビター、Ａβ免疫療法、コレステロール低下薬、抗タウ薬、コリンエステラーゼインヒビター、Ｎ−メチルＤ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト、非定型抗精神病薬、プロテインＳニトロシル化の遮断薬、グルカゴン様ペプチド−１レセプターアゴニスト、ラパマイシン、ラパログ、エンドカンナビノイド、カンナビノイド、神経保護因子、カルシウム流入を制御する分子、抗酸化剤、抗炎症薬、グルタミン酸ホメオスタシス制御を制御する薬物、オートファジー誘導因子、ホルモン、ホルモン調節因子、スタチン、インスリン、インスリンキャリア、多官能性ナノキャリア、ビタミン、栄養補助剤、小型ＲＮＡ分子、ペプチド、および超音波療法からなる群より選択される。
【００２６】
別の局面において、アルツハイマー病と診断された個体が、候補処置から利益を受けるか否かを決定するための方法が本明細書で提供され、ここで上記個体は上記処置を未だ開始しておらず、上記方法は、
（ａ）上記個体の生物学的サンプルと候補処置とを接触させる工程；
（ｂ）上記個体の生物学的サンプルと本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つとを接触させる工程；
（ｃ）上記抗体に結合する上記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度および／または細胞内局在を決定する工程；ならびに
（ｄ）コントロールに対する上記濃度の増大またはコントロールに対する細胞質の細胞内局在の減少が存在する場合、上記個体が、上記候補処置から利益を受けることを決定する工程、
を包含する。いくつかの実施形態において、上記処置は、ＡＰＰ合成インヒビター、β−セクレターゼインヒビター、γ−セクレターゼインヒビターおよびモジュレーター、Ａβ凝集インヒビター、Ａβ免疫療法、コレステロール低下薬、抗タウ薬、コリンエステラーゼインヒビター、Ｎ−メチルＤ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト、非定型抗精神病薬、プロテインＳニトロシル化の遮断薬、グルカゴン様ペプチド−１レセプターアゴニスト、ラパマイシン、ラパログ、エンドカンナビノイド、カンナビノイド、神経保護因子、カルシウム流入を制御する分子、抗酸化剤、抗炎症薬、グルタミン酸ホメオスタシス制御を制御する薬物、オートファジー誘導因子、ホルモン、ホルモン調節因子、スタチン、インスリン、インスリンキャリア、多官能性ナノキャリア、ビタミン、栄養補助剤、小型ＲＮＡ分子、ペプチド、および超音波療法からなる群より選択される。
【００２７】
別の局面において、個体がＤＮＡ損傷因子に曝されているか否かを決定するための方法が本明細書で提供され、上記方法は、
（ａ）上記個体の生物学的サンプルと本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つとを接触させる工程；および
（ｂ）上記抗体に結合する上記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度を決定する工程であって、ここでコントロールに対する上記濃度の増大は、上記個体がＤＮＡ損傷因子に曝されていることを示す工程、
を包含する。いくつかの実施形態において、上記ＤＮＡ損傷因子は放射線である。
【００２８】
別の局面において、ラパログでの処置を受けている個体が、このような処置に応答するか否かを決定するための方法が本明細書で提供され、上記方法は、
（ａ）上記個体の生物学的サンプルと本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つとを接触させる工程；
（ｂ）上記抗体に結合する上記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度を決定する工程；および
（ｃ）上記個体が処置に応答するか否かを決定する工程であって、ここでコントロールに対する上記濃度の減少は、上記個体が応答することを示す工程、
を包含する。
【００２９】
いくつかの実施形態において、上記ラパログは、ラパマイシン、シロリムス、ラパミューン、エベロリムス、ＲＡ  ００１、アフィニトール、Ｚｏｒｔｒｅｓｓ、テムシロリムス、ＣＣＩ−７７９、トーリセル、リダフォロリムス、ＡＰ２３５７３、ＭＫ−８６６９、デフォロリムス、ゾタロリムス、ＡＢＴ−５７８、ＡＺＤ８０５５、ＡＺＤ２０１４、ＯＳＩ−０２７、ＭＬＮ０１２８、ＷＹＥ−１３２、Ｔｏｒｉｎ１、ＰＩ−１０３、Ｐ７１７０、ＰＦ−０４６９１５０２、ＰＦ−０５２１２３８４、ＰＫＩ−５８７、ＧＮＥ４７７、ＰＫＩ−１８０、ＷＪＤ００８、ＸＬ７６５、ＳＡＲ２４５４０９、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、ＢＧＴ２２６、ＳＦ１１２６、ＧＳＫ２１２６４５８、Ｋｕ−００６３７９４、ＷＹＥ−３５４、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、ＰＦ−０５２１２３８４、ＸＬ７６５、Ｔｏｒｉｎ  ２、ＷＹＥ−１２５１３２、およびＯＳＩ−０２７からなる群より選択される。
【００３０】
本明細書で提供される診断方法のうちのいずれか１つのいくつかの実施形態において、上記濃度の増大または減少は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値を上回るかまたは下回る。いくつかの実施形態において、上記生物学的サンプルは、全血、血漿、血清、唾液、尿、滑液、脳脊髄液、気管支洗浄物、腹水、骨髄吸引物、胸水、組織、細胞、生検材料、間質液、およびリンパ液からなる群より選択される。
【００３１】
別の局面において、個体においてメチル化Ｈ１．０関連疾患または状態を処置するための方法が本明細書で提供され、上記方法は、上記個体に、治療上有効な量の本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つを投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記疾患または状態は、アルツハイマー病、放射線曝露、遺伝毒性ストレッサーへの曝露、老化細胞の蓄積を含む疾患または状態、およびＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドの上昇したレベルが付随する疾患または状態からなる群より選択される。
【００３２】
別の局面において、個体においてＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を取り除くための方法が本明細書で提供され、上記方法は、上記個体に、治療上有効な量の本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つを投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記個体は、アルツハイマー病、放射線曝露、遺伝毒性物質への曝露、ＤＮＡ損傷因子への曝露、および老化細胞の蓄積を含む状態からなる群より選択される疾患または状態に罹患している。
【００３３】
別の局面において、皮下標的分子の濃度を測定するための経皮パッチが本明細書で提供され、上記パッチは、
（ａ）本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つを含む基材；および
（ｂ）複数のマイクロニードル、
を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態において、上記パッチは、経皮マイクロニードルアレイパッチである。いくつかの実施形態において、上記基材は弾性的に伸縮性である．
【００３５】
別の局面において、個体が放射線またはＤＮＡ損傷因子に曝露されているか否かを決定するための携帯式ユニットが提供され、上記ユニットは、
（ａ）サンプル収集ユニット；
（ｂ）読み取り機；
（ｃ）本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つを含むアッセイモジュール；および
（ｄ）複数のマイクロニードル、
を含む。
【００３６】
別の局面において、分析物のラテラルフローアッセイに適した試験ストリップが本明細書で提供され、上記ストリップは、サンプル受容ゾーンを含み、ここで上記サンプル受容ゾーンは、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つを含む。
【００３７】
別の局面において、本明細書で提供される抗体のうちのいずれかを含む薬学的組成物が本明細書で提供される。上記薬学的組成物は、薬学的に受容可能な賦形剤をさらに含み得る。
【００３８】
別の局面において、治療上有効な量の本明細書で提供される抗体のうちのいずれか１つを含むキットが本明細書で提供される。
【００３９】
別の局面において、本明細書で提供される抗体または組成物のうちのいずれか１つを含む製造物品が本明細書で提供される。
【００４０】
別の局面において、医薬としての使用のための、本明細書で提供される抗体または組成物のうちのいずれか１つが本明細書で提供される。
【００４１】
別の局面において、メチル化Ｈ１．０関連疾患または状態の処置における使用のための、本明細書で提供される抗体または組成物のうちのいずれか１つが本明細書で提供され；必要に応じて、ここで上記疾患または状態は、アルツハイマー病、放射線曝露、遺伝毒性ストレッサーへの曝露、老化細胞の蓄積を含む疾患または状態、およびＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドの上昇したレベルが付随する疾患または状態からなる群より選択される。
【００４２】
別の局面において、処置の方法における使用のための、本明細書で提供される抗体または組成物のうちのいずれか１つが本明細書で提供され；ここで上記方法は、個体においてＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を取り除く工程を包含し；必要に応じてここで上記個体は、アルツハイマー病、放射線曝露、遺伝毒性物質への曝露、ＤＮＡ損傷因子への曝露、および老化細胞の蓄積を含む状態からなる群より選択される疾患または状態に罹患している。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１は、モノクローナル抗体を生成する例示的プロセスを図示する。
【００４４】
【図２−１】図２Ａは、Ｈ１．０Ｋｍｅ２ペプチド（ヒトＨ１．０タンパク質のＫ１８０に相当する残基でメチル化されている）への抗体クローンの結合効率を示す。図２Ｂは、非改変Ｈ１．０ペプチド（メチル化されていない）への抗体クローンの結合効率を示す。図２Ｃは、Ｈ１．０Ｋｍｅ２またはＨ１．０ペプチドへの抗体クローンの結合に関する生データを提供する。
【図２−２】図２Ａは、Ｈ１．０Ｋｍｅ２ペプチド（ヒトＨ１．０タンパク質のＫ１８０に相当する残基でメチル化されている）への抗体クローンの結合効率を示す。図２Ｂは、非改変Ｈ１．０ペプチド（メチル化されていない）への抗体クローンの結合効率を示す。図２Ｃは、Ｈ１．０Ｋｍｅ２またはＨ１．０ペプチドへの抗体クローンの結合に関する生データを提供する。
【図２−３】図２Ａは、Ｈ１．０Ｋｍｅ２ペプチド（ヒトＨ１．０タンパク質のＫ１８０に相当する残基でメチル化されている）への抗体クローンの結合効率を示す。図２Ｂは、非改変Ｈ１．０ペプチド（メチル化されていない）への抗体クローンの結合効率を示す。図２Ｃは、Ｈ１．０Ｋｍｅ２またはＨ１．０ペプチドへの抗体クローンの結合に関する生データを提供する。
【００４５】
【図３】図３は、Ｋ１８０上に０個、１個、または２個のメチル改変を有するＨ１．０ペプチドに対する抗体クローンの特異性を示す。
【００４６】
【図４−１】図４Ａは、Ｇ９Ａメチルトランスフェラーゼによる特異的インビトロＨ１．０Ｋ１８０メチル化を図示する。図４Ｂは、ＬＣ／ＭＳによって決定されたＧ９ＡによるＨ１．０上のメチル化部位を示す。図４Ｃは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体によるＨ１．０Ｋ１８０のメチル化の検出を示す。図４Ｄは、インビトロメチル化Ｈ１．０に対する抗体クローン特異性の分析である。
【図４−２】図４Ａは、Ｇ９Ａメチルトランスフェラーゼによる特異的インビトロＨ１．０Ｋ１８０メチル化を図示する。図４Ｂは、ＬＣ／ＭＳによって決定されたＧ９ＡによるＨ１．０上のメチル化部位を示す。図４Ｃは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体によるＨ１．０Ｋ１８０のメチル化の検出を示す。図４Ｄは、インビトロメチル化Ｈ１．０に対する抗体クローン特異性の分析である。
【図４−３】図４Ａは、Ｇ９Ａメチルトランスフェラーゼによる特異的インビトロＨ１．０Ｋ１８０メチル化を図示する。図４Ｂは、ＬＣ／ＭＳによって決定されたＧ９ＡによるＨ１．０上のメチル化部位を示す。図４Ｃは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体によるＨ１．０Ｋ１８０のメチル化の検出を示す。図４Ｄは、インビトロメチル化Ｈ１．０に対する抗体クローン特異性の分析である。
【図４−４】図４Ａは、Ｇ９Ａメチルトランスフェラーゼによる特異的インビトロＨ１．０Ｋ１８０メチル化を図示する。図４Ｂは、ＬＣ／ＭＳによって決定されたＧ９ＡによるＨ１．０上のメチル化部位を示す。図４Ｃは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体によるＨ１．０Ｋ１８０のメチル化の検出を示す。図４Ｄは、インビトロメチル化Ｈ１．０に対する抗体クローン特異性の分析である。
【００４７】
【図５−１】図５Ａは、クローンＡ（配列番号６）およびクローンＢ（配列番号７）の抗体重鎖間のタンパク質配列アラインメントを示す。図５Ｂは、クローンＡ（配列番号８）およびクローンＢ（配列番号９）の抗体軽鎖間のタンパク質配列アラインメントを示す。図５Ｃは、抗体クローンＡのＤＮＡ（配列番号４および５）およびタンパク質配列（配列番号６および８）を示す。図５Ｄは、抗体の組換え発現のための例示的方法を図示する。
【図５−２】図５Ａは、クローンＡ（配列番号６）およびクローンＢ（配列番号７）の抗体重鎖間のタンパク質配列アラインメントを示す。図５Ｂは、クローンＡ（配列番号８）およびクローンＢ（配列番号９）の抗体軽鎖間のタンパク質配列アラインメントを示す。図５Ｃは、抗体クローンＡのＤＮＡ（配列番号４および５）およびタンパク質配列（配列番号６および８）を示す。図５Ｄは、抗体の組換え発現のための例示的方法を図示する。
【図５−３】図５Ａは、クローンＡ（配列番号６）およびクローンＢ（配列番号７）の抗体重鎖間のタンパク質配列アラインメントを示す。図５Ｂは、クローンＡ（配列番号８）およびクローンＢ（配列番号９）の抗体軽鎖間のタンパク質配列アラインメントを示す。図５Ｃは、抗体クローンＡのＤＮＡ（配列番号４および５）およびタンパク質配列（配列番号６および８）を示す。図５Ｄは、抗体の組換え発現のための例示的方法を図示する。
【図５−４】図５Ａは、クローンＡ（配列番号６）およびクローンＢ（配列番号７）の抗体重鎖間のタンパク質配列アラインメントを示す。図５Ｂは、クローンＡ（配列番号８）およびクローンＢ（配列番号９）の抗体軽鎖間のタンパク質配列アラインメントを示す。図５Ｃは、抗体クローンＡのＤＮＡ（配列番号４および５）およびタンパク質配列（配列番号６および８）を示す。図５Ｄは、抗体の組換え発現のための例示的方法を図示する。
【００４８】
【図６】図６は、機能を増強し得る、抗体に対する種々の考えられる改変を図示する。
【００４９】
【図７−１】図７Ａは、抗体クローンＡ重鎖の配列（配列番号６）を示し、構造情報とともに註釈を付けられる。図７Ｂは、抗体クローンＡ軽鎖の配列（配列番号８）を示し、構造情報とともに註釈を付けられる。図７Ｃは、抗体クローンＡの予測軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク（ＦＷ）領域を示す（配列番号１０、１１、１４、１５、１８および３８〜４３）。図７Ｄは、抗体クローンＡの予測重鎖ＣＤＲおよびＦＷ領域を示す（配列番号２０〜２３、２８〜３１、３６、３７および４４〜５６）。
【図７−２】図７Ａは、抗体クローンＡ重鎖の配列（配列番号６）を示し、構造情報とともに註釈を付けられる。図７Ｂは、抗体クローンＡ軽鎖の配列（配列番号８）を示し、構造情報とともに註釈を付けられる。図７Ｃは、抗体クローンＡの予測軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク（ＦＷ）領域を示す（配列番号１０、１１、１４、１５、１８および３８〜４３）。図７Ｄは、抗体クローンＡの予測重鎖ＣＤＲおよびＦＷ領域を示す（配列番号２０〜２３、２８〜３１、３６、３７および４４〜５６）。
【図７−３】図７Ａは、抗体クローンＡ重鎖の配列（配列番号６）を示し、構造情報とともに註釈を付けられる。図７Ｂは、抗体クローンＡ軽鎖の配列（配列番号８）を示し、構造情報とともに註釈を付けられる。図７Ｃは、抗体クローンＡの予測軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク（ＦＷ）領域を示す（配列番号１０、１１、１４、１５、１８および３８〜４３）。図７Ｄは、抗体クローンＡの予測重鎖ＣＤＲおよびＦＷ領域を示す（配列番号２０〜２３、２８〜３１、３６、３７および４４〜５６）。
【図７−４】図７Ａは、抗体クローンＡ重鎖の配列（配列番号６）を示し、構造情報とともに註釈を付けられる。図７Ｂは、抗体クローンＡ軽鎖の配列（配列番号８）を示し、構造情報とともに註釈を付けられる。図７Ｃは、抗体クローンＡの予測軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク（ＦＷ）領域を示す（配列番号１０、１１、１４、１５、１８および３８〜４３）。図７Ｄは、抗体クローンＡの予測重鎖ＣＤＲおよびＦＷ領域を示す（配列番号２０〜２３、２８〜３１、３６、３７および４４〜５６）。
【００５０】
【図８】図８は、体液のサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープの直接検出のためのＥＬＩＳＡの例示的使用を示す。
【００５１】
【図９−１】図９Ａ〜９Ｃは、脳組織および血清中の循環Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の加齢性蓄積を示す。マウス（図９Ａ）およびヒト（図９Ｂ）の脳組織中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２のウェスタンブロット分析が示され、これは、その存在量が生物年齢（ｏｒｇａｎｉｓｍａｌ  ａｇｅ）とともに増大することを明らかにする。図９Ｃは、全ＩｇＧ血清レベルによって正規化したヒト血清サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルを示す。記号「α」は、この図中および全体にわたって抗体を表す。
【図９−２】図９Ａ〜９Ｃは、脳組織および血清中の循環Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の加齢性蓄積を示す。マウス（図９Ａ）およびヒト（図９Ｂ）の脳組織中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２のウェスタンブロット分析が示され、これは、その存在量が生物年齢（ｏｒｇａｎｉｓｍａｌ  ａｇｅ）とともに増大することを明らかにする。図９Ｃは、全ＩｇＧ血清レベルによって正規化したヒト血清サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルを示す。記号「α」は、この図中および全体にわたって抗体を表す。
【００５２】
【図１０−１】図１０Ａ〜１０Ｃは、アルツハイマー病の生体マーカーとしての血清Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の測定の有用性を示す。図１０Ａは、血清Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２が、年齢を合わせたコントロール（血清容積によって正規化）と比較した場合に、アルツハイマー病を有する個体において減少されることを示す。図１０Ｂは、血清Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２が、年齢を合わせたコントロール（全血清ＩｇＧレベルによって正規化）と比較した場合に、アルツハイマー病を有する個体において減少されることを示す。図１０Ｃは、血清Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２が、年齢を合わせたコントロール（全血清タンパク質濃度によって正規化）と比較した場合に、アルツハイマー病を有する個体において減少されることを示す。
【図１０−２】図１０Ａ〜１０Ｃは、アルツハイマー病の生体マーカーとしての血清Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の測定の有用性を示す。図１０Ａは、血清Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２が、年齢を合わせたコントロール（血清容積によって正規化）と比較した場合に、アルツハイマー病を有する個体において減少されることを示す。図１０Ｂは、血清Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２が、年齢を合わせたコントロール（全血清ＩｇＧレベルによって正規化）と比較した場合に、アルツハイマー病を有する個体において減少されることを示す。図１０Ｃは、血清Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２が、年齢を合わせたコントロール（全血清タンパク質濃度によって正規化）と比較した場合に、アルツハイマー病を有する個体において減少されることを示す。
【図１０−３】図１０Ａ〜１０Ｃは、アルツハイマー病の生体マーカーとしての血清Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の測定の有用性を示す。図１０Ａは、血清Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２が、年齢を合わせたコントロール（血清容積によって正規化）と比較した場合に、アルツハイマー病を有する個体において減少されることを示す。図１０Ｂは、血清Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２が、年齢を合わせたコントロール（全血清ＩｇＧレベルによって正規化）と比較した場合に、アルツハイマー病を有する個体において減少されることを示す。図１０Ｃは、血清Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２が、年齢を合わせたコントロール（全血清タンパク質濃度によって正規化）と比較した場合に、アルツハイマー病を有する個体において減少されることを示す。
【００５３】
【図１１−１】図１１Ａは、ウェスタンブロット分析によって、ＤＮＡ損傷直後のクロマチン上のＨ１．０Ｋ１８０のジメチル化（Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２）を示す。図１１Ｂは、ＤＮＡ損傷後からのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の分泌を示す。
【図１１−２】図１１Ａは、ウェスタンブロット分析によって、ＤＮＡ損傷直後のクロマチン上のＨ１．０Ｋ１８０のジメチル化（Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２）を示す。図１１Ｂは、ＤＮＡ損傷後からのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の分泌を示す。
【００５４】
【図１２】図１２Ａおよび１２Ｂは、ＳＲ、急性ＤＮＡ損傷、および遺伝毒性ストレス誘導性老化のｈＡＤＳＣに対するＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析（図１２Ａ）およびスロットブロット分析（図１２Ｂ）を示し、これは、ジメチル化Ｈ１．０Ｋ１８０（Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２）が、遺伝毒性ストレス誘導性老化に際してクロマチンから放出されること（図１２Ａ）および細胞から、細胞外マトリクス／細胞培地へと分泌されること（図１２Ｂ）を明らかにする。
【００５５】
【図１３−１】図１３Ａ〜１３Ｃは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルに対する電離放射線の効果を示す。図１３Ａは、電離放射線への曝露が、マウス血清において循環Ｈ１．０  Ｋ１８０ｍｅ２の増大したレベルを誘導することを示す。図１３Ａおよび図１３Ｂは、血清中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープに対して特異的な抗体を使用して、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の存在（図１３Ａ）および定量化（図１３Ｂ）のスロットブロット分析を示す。図１３Ｃは、Ｘ線照射（７Ｇｙ）後のマウス血清において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープに対して特異的な抗体を使用する、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープレベルの存在のウェスタンブロット分析を示す。
【図１３−２】図１３Ａ〜１３Ｃは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルに対する電離放射線の効果を示す。図１３Ａは、電離放射線への曝露が、マウス血清において循環Ｈ１．０  Ｋ１８０ｍｅ２の増大したレベルを誘導することを示す。図１３Ａおよび図１３Ｂは、血清中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープに対して特異的な抗体を使用して、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の存在（図１３Ａ）および定量化（図１３Ｂ）のスロットブロット分析を示す。図１３Ｃは、Ｘ線照射（７Ｇｙ）後のマウス血清において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープに対して特異的な抗体を使用する、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープレベルの存在のウェスタンブロット分析を示す。
【００５６】
【図１４】図１４は、ブレオマイシン処理後のＳＲ  ｈＡＤＳＣ（自己再生するヒト脂肪由来幹細胞）におけるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２のウェスタンブロット分析を示し、これは、エベロリムス（ラパマイシンの誘導体）が、ＤＮＡ損傷に際して、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２出現を遮断するように作用し得ることを明らかにする。
【発明を実施するための形態】
【００５７】
詳細な説明
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が、本明細書で提供される。これらの抗体は、治療および診断での使用に有用である。これらのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、個体におけるメチル化Ｈ１．０関連疾患または状態の処置において使用され得る。これらのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体はまた、複製老化、ＤＮＡ損傷、遺伝毒性ストレス、放射線曝露、アルツハイマー病を検出するために、治療レジメン、患者層化、薬物スクリーニングをモニターするために、使用され得、システムにおいて生物学的加齢のマーカーとして働き得る。これらの組成物および方法は、以下でより詳細に記載される。
【００５８】
ＷＯ  ２０１７／１８４８９５は、Ｈ１．０ジメチル化タンパク質に関する組成物および方法を記載する；ＷＯ  ２０１７／１８４８７３は、Ｈ１．０タンパク質のメチル化に関する組成物および方法を記載する。これら公報の内容は、それらの全体において本明細書に参考として援用される。
【００５９】
Ｉ．  ヒストンＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質およびペプチドに結合するＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体
Ａ．  Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体
ジメチル化ヒストンＨ１．０抗原に特異的に結合する抗体が本明細書で提供され、ここでそのジメチル化ヒストンＨ１．０抗原は、ジメチル化リジン残基を含む、ヒストンＨ１．０タンパク質またはそのペプチドであり、そのリジン残基は、全長ヒトヒストンＨ１．０タンパク質（配列番号１）Ｋ１８０に相当し、そのジメチル化Ｋ１８０残基は、結合のために要求される。Ｋ１８０は、以下の表１の配列番号１においてＫ＊で表される。
【表１】
2021500893.tif 000003
【００６０】
そのジメチル化Ｈ１．０抗原は、全体を通して、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原またはＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープとして交換可能に言及される。そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２含有タンパク質およびペプチドは、全体を通して、「Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質」および「Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチド」といわれる。用語「抗Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２」または「Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体」または「抗Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体」は、これらの抗体に交換可能に言及する。
【００６１】
上記のように、本明細書での用語「Ｋ１８０」の使用は、ヒトＨ１．０タンパク質（配列番号１）のＫ１８０に相当する残基に言及する。同様に、用語「Ｋ１７２」とは、そのヒトＨ１．０タンパク質のＫ１７２に相当する残基をいい、用語「Ｋ１９０」とは、そのヒトＨ１．０タンパク質のＫ１９０に相当する残基をいう；など。
【００６２】
本開示のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、ヒトおよび非ヒト哺乳動物のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原に結合する。
【００６３】
用語「抗体」とは、本明細書全体で使用される場合、その最も広い意味にあり、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、非ヒト抗体、キメラ抗体、二重特異的抗体、抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’２フラグメント、ＣＤＲまたはＳｃＦｖ）、およびＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原に対する特異性を保持する他の抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態において、その抗体は、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原に対する特異性を保持する単鎖抗体である。１つの例示的実施形態において、その抗体は、ヒト×マウスのキメラ抗体である。１つの例示的実施形態において、その抗体は、ヒト×ウサギのキメラ抗体である。１つの例示的実施形態において、その抗体は、ヒト化マウス抗体である。１つの例示的実施形態において、その抗体は、ヒト化ウサギ抗体である。
【００６４】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、診断用抗体である。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、治療用抗体である。
【００６５】
いくつかの実施形態において、上記Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、アフィニティー精製抗体である。
【００６６】
いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、単離された抗体である。
【００６７】
本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、検出、診断、可視化、定量化、選別、治療が挙げられるが、これらに限定されない種々の目的で、および生物学的アッセイにおける使用のために、薬剤と結合体化され得る。
【００６８】
いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、標識（例えば、検出可能な標識、スピン標識、比色標識、放射性標識、酵素標識、蛍光標識、または磁性標識）に結合体化される。
【００６９】
いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、固体表面、例えば、ビーズ（例えば、磁性ビーズ、ガラスビーズまたはプラスチックビーズ）、カラム、樹脂またはマイクロプレートに付着される。いくつかの実施形態において、抗体は、マイクロプレートに被覆される。いくつかの実施形態において、その固体表面に付着された抗体は、標識に結合体化される；いくつかの実施形態において、その固体表面に付着された抗体は、抗原結合フラグメントである。
【００７０】
いくつかの実施形態において、抗体は、エフェクター分子（放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫モジュレーター、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、および第２の抗体が挙げられるが、これらに限定されない）に結合体化される。
【００７１】
本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、細胞外Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２および／または細胞内Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に結合し得る。
【００７２】
本明細書で提供される抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはＩｇＭのような任意の免疫グロブリンタイプのものであり得る。いくつかの実施形態において、その抗体は、ＩｇＧサブタイプのものであり、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、またはＩｇＧ４抗体であってもよい。
【００７３】
任意の種に由来するＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原に対して特異的な抗体が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、ヒトＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に対して特異的である。いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、他の種に由来するＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２と交差反応性である。
【００７４】
本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原に対して選択的である。例えば、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、残基Ｋ１８０でのジメチル化に対して選択的である。
【００７５】
本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原に対して特異的である。例えば、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、残基Ｋ１８０でのジメチル化に対して選択的であり、Ｈ１．０Ｋ１８０エピトープ（Ｋ１８０において非メチル化）、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ１エピトープ（Ｋ１８０においてモノメチル化）、またはＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ３エピトープ（Ｋ１８０においてトリメチル化）の結合をほとんどまたは全く示さない。いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、非メチル化Ｋ１８０残基を含む抗原に結合しないかまたは最小限にしか結合しない（図４Ｄ）。
【００７６】
本明細書で提供される抗体は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２含有抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２含有抗原は、メチル化されたいかなる他のリジン残基をも含まない。
【００７７】
いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、標的Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原がさらなるメチル化リジン残基を含む場合（例えば、ここでそのリジン残基は、ヒトヒストンＨ１．０タンパク質のＫ１６６、Ｋ１７２、Ｋ１７４、Ｋ１７５、および／またはＫ１７７に相当する）、結合しないかまたは最小限にしか結合しない。
【００７８】
いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、以下の残基のうちの１またはこれより多くを含む抗原に結合しないかまたは最小限にしか結合しない：  Ｋ１７２ｍｅ１、Ｋ１７２ｍｅ２、Ｋ１７２ｍｅ３、Ｋ１７４ｍｅ１、Ｋ１７４ｍｅ２、Ｋ１７４ｍｅ３、Ｋ１７５ｍｅ１、Ｋ１７５ｍｅ２、Ｋ１７５ｍｅ３、Ｋ１７７ｍｅ１、Ｋ１７７ｍｅ２、Ｋ１７７ｍｅ３、Ｋ１６６ｍｅ１、Ｋ１６６ｍｅ２、Ｋ１６６ｍｅ３、Ｋ１８０ｍｅ１、および／またはＫ１８０ｍｅ３。
【００７９】
いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、ジメチル化Ｋ１８０残基を含むが、以下の残基のうちの１またはこれより多くをも含む抗原に結合しないかまたは最小限にしか結合しない：  Ｋ１７２ｍｅ１、Ｋ１７２ｍｅ２、Ｋ１７２ｍｅ３、Ｋ１７４ｍｅ１、Ｋ１７４ｍｅ２、Ｋ１７４ｍｅ３、Ｋ１７５ｍｅ１、Ｋ１７５ｍｅ２、Ｋ１７５ｍｅ３、Ｋ１７７ｍｅ１、Ｋ１７７ｍｅ２、Ｋ１７７ｍｅ３、Ｋ１６６ｍｅ１、Ｋ１６６ｍｅ２、Ｋ１６６ｍｅ３、Ｋ１８０ｍｅ１、および／またはＫ１８０ｍｅ３。
【００８０】
いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が、メチル化されたいかなる他のリジン残基をも含まないＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２含有抗原に対してより、ある抗原に対して多くても１／１．５、１／２、１／２．５、１／２．７、１／５、またはさらに１／１０の特異性（結合優先性、親和性）を示す場合に、その抗原に結合しないかまたは最小限にしか結合しない。
【００８１】
本開示のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、任意の媒体においてＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープに結合し得る。
【００８２】
いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、Ｋ１８０での非メチル化抗原（Ｈ１．０Ｋ１８０抗原）より、Ｋ１８０でのジメチル化抗原（Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原）に対して少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、２．７倍、５倍、またはさらには１０倍より高い特異性（結合優先性、親和性）を示す（図２Ａ〜２Ｂ）。いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原に対する特異性は、概して、非特異的標的分子（例えば、特異的に認識される部位を欠く無作為に生成した分子）を超えて、非メチル化Ｋ１８０残基を超えて、トリメチル化Ｋ１８０残基を超えて、または任意の他の残基でメチル化されたＨ１．０タンパク質を超えて、少なくとも約２倍、約５倍、または少なくとも約１０倍、２０倍、５０倍、１０＾２倍、１０＾３倍、１０＾４倍、１０＾５倍、または１０＾６倍である。
【００８３】
いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、Ｋ１８０でのモノメチル化抗原（Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ１抗原）より、Ｋ１８０でのジメチル化抗原（Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原）に対して少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、２．７倍、５倍、またはさらには１０倍高い特異性（結合優先性、親和性）を示す（図３）。いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原に対する特異性は、概して、非特異的標的分子（例えば、その特異的に認識される部位を欠く無作為に生成した分子）を超えて、モノメチル化Ｋ１８０残基を超えて、トリメチル化Ｋ１８０残基を超えて、または任意の他の残基でメチル化されたＨ１．０タンパク質を超えて、少なくとも約２倍、約５倍、または少なくとも約１０倍、２０倍、５０倍、１０＾２倍、１０＾３倍、１０＾４倍、１０＾５倍、または１０＾６倍である。
【００８４】
ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、０．０００１ｎＭ〜１μＭの範囲の解離定数（Ｋｄ）を有する。例えば、その抗体のＫｄは、約１μＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約５ｎＭ、約１ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．０５ｎＭ、約０．０１ｎＭ、約０．００５ｎＭ、約０．００１ｎＭ、約０．０００５ｎＭ、またはさらには約０．０００１ｎＭであり得る。
【００８５】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体（例えば、モノクローナルＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体、ｍＡｂ）の構造は、望ましい状況、図６に示される例示的実施形態において機能するように改変され得る。
【００８６】
図６、パートａ．は、ＩｇＧ  Ｆｃレセプター（ＦｃγＲ）に対する増強された結合および増大されたＡＤＣＣを示す、糖修飾されてフコシル化されていないｍＡｂを示す。フコシル化酵素を欠く細胞株におけるｍＡｂの発現は、フコシル化されていないｍＡｂを生成するために使用され得る。本明細書に記載されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体のうちのいずれかは、この様式で改変され得る。
【００８７】
図６、パートｂ．    ｍＡｂのアミノ酸配列は、定常領域で改変され得る。このような改変は、ＦｃγＲへのそのｍＡｂの結合を増大させ得、ＡＤＣＣをも増大させ得る。本明細書に記載されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体のうちのいずれかは、この様式で改変され得る。
【００８８】
図６、パートｃ．  ＡＤＣＣが所望される機構でない場合、異なるアイソタイプがとって代わり得る。ＩｇＧ４は、ＩｇＧ１が誘導するのと同程度にはＡＤＣＣを誘導しない。本明細書に記載されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体のうちのいずれかは、この様式で改変され得る。
【００８９】
図６、パートｄ．  放射性免疫結合体は、放射性同位体をｍＡｂリンカーに結合体化することによって生成され得る。安定なリンカーの使用は、遊離放射性同位体の漏出を防止する。本明細書に記載されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体のうちのいずれかは、この様式で改変され得る。
【００９０】
図６、パートｅ．  抗体薬物結合体は、リンカーでｍＡｂへと薬物を結合体化することによって作製され得る。切断可能なリンカーまたはｐＨ感受性リンカーは、その薬物が、そのｍＡｂとは別個に作用することを可能にするために使用され得る。このような結合体化は、その抗体によって特定される細胞または組織へのその薬物の標的化を可能にし、自由に循環しないことによって毒性を制限する。本明細書に記載されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体のうちのいずれかは、この様式で改変され得る。
【００９１】
図６，  パートｆ．  ｍＡｂの特異性は、キメラ抗原レセプターＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）の生成において利用され得る。これらは、ｍＡｂ可変領域をコードするＤＮＡを、Ｔ細胞レセプターの内部シグナル伝達部分のＤＮＡ配列に融合することによって生成され得る。このキメラレセプターは、養子療法における使用のためのＴ細胞へと導入するために有用である。本明細書に記載される任意のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体の抗原結合ドメインは、生成されたＣＡＲ−Ｔ細胞に使用され得る。
【００９２】
図６、パートｇ．  二重特異的抗体は、１つの抗体から定常領域を除去し、その残りの可変領域を別の抗体の単離された可変領域に架橋することによって作製される。定常領域の除去は、低減した半減期を生じ得、望ましい曝露レベルを達成するために、このような架橋された抗体の連続輸液を必要とし得る。本明細書に記載されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体のうちのいずれかは、この様式で改変され得る。
【００９３】
いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、クローンＡの可変ドメイン、相補的結合領域、フレームワーク領域（以下で考察される）を含む。いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、クローンＡのＣＤＲ（以下で考察される）を含む、モノクローナルヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、クローンＢの可変ドメイン、相補性結合領域、フレームワーク領域（以下で考察される）を含む。いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、クローンＢのＣＤＲ（以下で考察される）を含む、モノクローナルヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【００９４】
Ｂ．  Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体の生成
種々のイムノアッセイフォーマットが、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２と特異的に免疫反応性の抗体を選択するために使用され得る。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に特異的なモノクローナル抗体を選択するために使用され得る（特異的免疫反応性を決定するために使用され得るイムノアッセイフォーマットおよび条件の説明に関しては、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと）。
【００９５】
本明細書で提供される抗体の生成は、当業者に公知の任意の方法によるものであり得る。例えば、いくつかの実施形態において、その抗体は、望ましい抗体の所望の可変重鎖（ＶＨ）および改変軽鎖（ＶＬ）ならびに定常ドメインを発現するように操作された組換え細胞によって生成される（例えば、図５Ｄ）。いくつかの実施形態において、その抗体は、ハイブリドーマによって生成される。
【００９６】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含む、免疫原性キャリアに必要に応じて連結された任意のペプチドは、標準的なプロトコルを使用して免疫化するために使用される。例示的な実施形態において、ＣＡＫＰＶＫＡＳＫＰＫＫＡＫＰＶＫ（ｍｅ２）ＰＫ（配列番号３）を含む、必要に応じて、免疫原性キャリアに連結されたペプチドは、標準的なプロトコルを使用して免疫化するために使用される（図１）。生成される抗体の品質および力価は、当業者に公知の技術を使用して評価され得る。
【００９７】
モノクローナル抗体を開発するための例示的方法は、４つの異なる段階として図１に図示される。図面が説明するように、段階Ｉは、キーホールリンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合体化したＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチドに対してウサギを免疫化する工程を包含する。その免疫化の力価は、免疫化前と免疫化後の血液間で比較される。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は単離され、次いで、フローサイトメトリーによって陽性の抗原結合細胞に関して選別された。段階ＩＩでは、全ＲＮＡが、段階Ｉで単離された細胞から抽出される。その抗体の重鎖および軽鎖可変ドメインのＲＴ−ＰＣＲが行われ、そのｓｃＦｖアンプリコンがベクターに挿入される。これらのｓｃＦｖベクターは、次いで、細胞表面ディスプレイライブラリーを生成するために使用される。段階ＩＩＩでは、その細胞表面ディスプレイライブラリーは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチドで少なくとも１回パニングされる。この工程はさらに、非メチル化Ｈ１．０Ｋペプチド結合を選択しないようにする。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に結合するクローンは、フローサイトメトリーによってさらに選択され、後に配列決定され得る。段階ＩＶでは、全長の重鎖および軽鎖が、完全組換え抗体を生成するために作製される。これらの抗体は、発現および精製され得る。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質へのこれらの抗体の結合は、次いで、ＥＬＩＳＡ、スロットブロット、およびウェスタンブロットによって検証され得る。これは、実施例２〜４においてさらに詳細に説明される。非メチル化およびメチル化Ｈ１．０タンパク質の例示的なアミノ酸配列は、図４Ｂおよび上記の表１に提供される（メチル化リジン残基は、ｍｅ１／２／３（モノメチル化、ジメチル化、およびトリメチル化の可能性を示す）として表示される）。
【００９８】
本明細書に記載される本発明の組成物はまた、本明細書に開示される抗体のうちのいずれかをコードする核酸、その抗体をコードする核酸のうちのいずれかを含むベクター、および任意のこのようなベクターを含む宿主細胞を含む。表２は、本明細書で提供される抗体の抗原結合フラグメントの例示的な核酸配列を提供する。その抗体をコードするヌクレオチドおよびベクターを含む細胞がまた、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、その抗体は分泌される。
【表２】
2021500893.tif 000004
【００９９】
当業者は、抗体が、例えば、その配列の提供の際に、多くの商用サービスのうちのいずれかによっても調製され得ることを理解する。
【０１００】
表３〜９は、いくつかの例示的なＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体の抗原結合フラグメントのアミノ酸配列を提供する。
【０１０１】
表３は、例示的な重鎖可変（ＶＨ）および軽鎖可変（ＶＬ）配列を提供する。少なくとも８５％を有するＶＨおよびＶＬ配列がまた、本明細書で提供される。
【表３】
2021500893.tif 000005
【０１０２】
表４〜９は、軽鎖の抗原結合ドメインの（ＣＤＲ−Ｌ）および重鎖の抗原結合ドメインの（ＣＤＲ−Ｈ）の例示的な相補性決定領域（ＣＤＲ）配列（領域１、２、および３）を提供する。以下で言及されるように、ＶＬ  ＣＤＲ１領域は、ＣＤＲ−Ｌ１といわれる；ＶＬ  ＣＤＲ２領域は、ＣＤＲ−Ｌ２といわれる；ＶＬ  ＣＤＲ３領域は、ＣＤＲ−Ｌ３といわれる；ＶＨ  ＣＤＲ１領域は、ＣＤＲ−Ｈ１といわれる；ＶＨ  ＣＤＲ２領域は、ＣＤＲ−Ｈ２といわれる；そしてＶＨ  ＣＤＲ３領域は、ＣＤＲ−Ｈ３といわれる。
【表４】
2021500893.tif 000006
【表５】
2021500893.tif 000007
【表６】
2021500893.tif 000008
【表７】
2021500893.tif 000009
【表８】
2021500893.tif 000010
【表９】
2021500893.tif 000011
【０１０３】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体は、配列番号６または配列番号７の重鎖可変ドメインを含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体は、配列番号８または配列番号９の軽鎖可変ドメインを含む。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体は、配列番号６または配列番号７の重鎖可変ドメインおよび配列番号８または配列番号９の軽鎖可変ドメインを含む。
【０１０６】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体は、配列番号６の重鎖可変ドメインを含み、配列番号８の軽鎖可変ドメインを含む。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体は、配列番号６の重鎖可変ドメインを含み、配列番号９の軽鎖可変ドメインを含む。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体は、配列番号７の重鎖可変ドメインを含み、配列番号８の軽鎖可変ドメインを含む。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体は、配列番号７の重鎖可変ドメインを含み、配列番号９の軽鎖可変ドメインを含む。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の抗原結合領域は、
（ａ）表４のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；
（ｂ）表５のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；および
（ｃ）表６のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列のうちのいずれか１つ、
を含む。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の抗原結合領域は、
（ａ）表７のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；
（ｂ）表８のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；および
（ｃ）表９のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列のうちのいずれか１つ、
を含む。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の抗原結合領域は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原またはそのペプチドを含み、その抗体の抗原結合ドメインは、表４、表５、および表６のＣＤＲ−Ｌアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含み、表７、表８、および表９のＣＤＲ−Ｈアミノ酸配列のいずれか１つを含む。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、または配列番号１７のＣＤＲ−Ｌ２を含む。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１８または配列番号１９のＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３のＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、または配列番号１７のＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号１８または配列番号１９のＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１０もしくは配列番号１１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４もしくは配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ２、または配列番号１８のＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１２もしくは配列番号１３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１６もしくは配列番号１７のＣＤＲ−Ｌ２、または配列番号１９のＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、もしくは配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ１；配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、もしくは配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ２；または配列番号３６もしくは配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１８のＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１８のＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１８のＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１８のＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１８のＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１８のＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１８のＣＤＲ−Ｌ３を含む。．
【０１２７】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１８のＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の軽鎖は、配列番号１３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号１８のＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、または配列番号２７のＣＤＲ−Ｈ１を含む。
【０１３０】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、または配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号３６または配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、または配列番号２７のＣＤＲ−Ｈ１を含み；配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、または配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ２を含み；配列番号３６または配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ２を含み、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３２のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３３のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３４のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２５のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３２のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２５のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３３のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２５のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３４のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２５のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２６のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３２のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２６のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３３のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２６のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３４のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２６のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２７のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３２のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１７８】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２７のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３３のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２７のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３４のＣＤＲ−Ｈ２を含む。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供され、ここでその抗体の重鎖は、配列番号２７のＣＤＲ−Ｈ１を含み、配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ２を含む。  
【０１８１】
表１０は、例示的な抗体フレームワーク（ＦＷ）配列を提供する。以下に言及されるように、ＶＬフレームワーク領域は、ＬＲＦ１、ＬＲＦ２、およびＬＲＦ３といわれる。同様に、ＶＨフレームワーク領域は、ＨＲＦ１、ＨＲＦ２、ＨＲＦ３、およびＨＲＦ４といわれる。
【表１０−１】
2021500893.tif 000012
【表１０−２】
2021500893.tif 000013
【表１０−３】
2021500893.tif 000014
【０１８２】
ＩＩ．  Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体の治療的使用
Ａ．  メチル化Ｈ１．０関連疾患および状態の処置
メチル化Ｈ１．０関連疾患または状態の処置のための治療用Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が提供される。
【０１８３】
本明細書で使用される場合、「メチル化Ｈ１．０関連疾患または状態」とは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２のレベルの増大、Ｋ１８０でのＨ１．０タンパク質／ペプチド基質の内因性ジメチル化の増大、クロマチンからのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の放出の増大、核から細胞質へのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の放出の増大、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の細胞質沈着の増大、細胞外空間におけるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２のレベルの増大、体液（例えば、血清、尿、唾液、脳脊髄液など）中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の循環レベルの増大、および／またはＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に対して特異的な自己抗体のレベルの増大が存在する疾患または状態である。
【０１８４】
メチル化Ｈ１．０関連疾患および状態としては、老化細胞の増大と関連する加齢性の病理、アルツハイマー病、放射線曝露、遺伝毒性ストレッサーへの曝露、外部ストレッサーおよび内部ストレッサーと関連する老化細胞の蓄積を含む状態、ならびにＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に対する高レベルの自己抗体と関連する自己免疫の疾患および状態群が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８５】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に結合し、取り除くことによって、個体においてメチル化Ｈ１．０関連疾患または状態を処置するための方法が本明細書で提供され、その方法は、その個体に、治療上有効な量の治療用Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を投与する工程を包含する。
【０１８６】
本明細書で使用される場合、個体とは、哺乳動物として分類される任意の動物（ヒト、飼い慣らされた動物および家畜、ならびに動物園、競技用、または愛玩用の動物が挙げられる）をいう（例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、スナネズミ（ｇｅｒｂｉｌ）、マウス、フェレット、ラット、ネコなど）。個体は、雄性であっても雌性であっても良い。
【０１８７】
その個体は、任意の年齢の個体であり得る。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、例えば、アルツハイマー病の処置に関しては、その個体は、５０歳を超えている。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、その個体は、５０歳未満である。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、その個体は、少なくとも５０歳であるか、少なくとも５５歳であるか、少なくとも６０歳であるか、少なくとも６５歳であるか、少なくとも７０歳であるか、少なくとも７５歳であるか、または少なくとも８０歳である。例示的な実施形態において、その個体は、少なくとも６０歳である。
【０１８８】
そのメチル化Ｈ１．０関連疾患および状態へとより具体的に注意を向けると、例示的な適応症は、以下に示される。
【０１８９】
アルツハイマー病
加齢する間に、ヒトの脳組織には細胞質Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の蓄積の増大が存在する（図９Ｂ）。これらの所見は、血清学的検査において観察される循環Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原の加齢性の増大と相関する（図９Ｃ）。さらに、１ヶ月齢（若齢）および２４ヶ月齢（老齢）のマウスに由来するマウス脳サンプルの全細胞溶解物を、抗Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２、抗Ｈ１．０、抗γＨ２Ａ．Ｘおよび抗β−アクチン抗体でのウェスタンブロット分析によって比較した場合、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルは、その２４ヶ月齢のマウスにおいて増大し、γＨ２Ａ．Ｘの増大したレベルと相関した（図９Ａ）。
【０１９０】
しかし、アルツハイマー病と診断された個体において、コントロール集団（アルツハイマー病病理なし）と参照コントロール（診断されたアルツハイマー病患者）とを比較した場合に、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原の循環レベルの低下が血清学的ＥＬＩＳＡ試験において観察される（図１０Ａ〜１０Ｃ）。図１０Ａは、アルツハイマー病患者および年齢を合わせたコントロールにおけるスロットブロット分析によって決定されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルの定量化を示す。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルの定量化を、アルツハイマー病患者および年齢を合わせたコントロールにおけるスロットブロット分析によって決定した。図１０Ｂは、全ＩｇＧ血清レベルによって正規化したヒト血清中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルを示す。図１０Ｃは、全タンパク質レベルによって正規化したヒト血清中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルを示す。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の血清濃度は、アルツハイマー病患者の同定に十分であるが、全ＩｇＧ（図１０Ｂ）または全タンパク質（図１０Ｃ）による血清サンプル正規化の使用は、全体的な血清濃度を変更させ得る変数（例えば、血清を得るために使用されるプロトコル、操作者変動性（ｏｐｅｒａｔｏｒ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ）、患者の水分補給状態および患者の活動状態）にも関わらず、個体間での直接比較を可能にする。
【０１９１】
従って、アルツハイマー病の状況において、治療上有効な量のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体（例えば、細胞に透過する抗体または細胞を取り除く抗体）での処置が提供される。
【０１９２】
ＤＮＡ損傷および遺伝毒性ストレス
ＤＮＡ損傷因子の状況において、Ｈ１．０Ｋ１８０のジメチル化（Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２）は、ブレオマイシン、化学療法剤での急性のＤＮＡ損傷後にクロマチンで観察される（図１１Ａ）。Ｈ１．０Ｋ１８０メチル化とＤＮＡ損傷との関係性を評価するために、ＤＮＡ損傷因子であるブレオマイシンで２時間処理したＳＲ  ｈＡＤＳＣ（自己再生するヒト脂肪由来幹細胞）およびｈＡＤＳＣを溶解し、分画して、クロマチン結合画分を得た。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体でのウェスタンブロット分析は、ＤＮＡ損傷の際にクロマチン上のＨ１．０Ｋ１８０のメチル化を示す（図１１Ａ）。ＤＮＡ二本鎖切断を誘導するためにＳＲ  ｈＡＤＳＣをブレオマイシンで処理すると、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２は、細胞質に局在した。
【０１９３】
スロットブロットイムノアッセイによって、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の存在が、ブレオマイシンによって課された遺伝毒性損傷後に、時間経過依存性様式でｈＡＤＳＣの馴化培地中で検出され、最大Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２分泌が４８時間内に検出されることが見出された（図１１Ｂ）。これは、その細胞からの分泌を表す。ＧＳＩ−ＳＥＮに際したＤＮＡフラグメント化因子（ＤＦＦＢ／ＤＦＦ４０／ＣＡＤ）分泌の増大は、処理後４８時間で開始するＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２とともに、類似の様式で認められた（図１１Ｂ）。そのタンパク質はいずれも、急性のＤＮＡ損傷（ＡＤＤ）の開始の際に、測定可能な量で分泌されなかった。
【０１９４】
遺伝毒性ストレスの状況では、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２は、遺伝毒性ストレス誘導性老化に際して（ＤＮＡ損傷因子での処理後の数日で）クロマチンから放出され（図１２Ａ）、その細胞から細胞外空間へと分泌される（図１２Ｂ）。図１２Ａで示されるように、クロマチンに結合したＨ１．０は、ＳＲおよび急性のＤＮＡ損傷において全体の約６０％から、遺伝毒性ストレス誘導性老化に際して全体の約３０％へと減少した。ブレオマイシンで処理したＳＲ  ｈＡＤＳＣからの培養培地を、α−Ｈ１．０およびα−Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体でのスロットブロット分析のために集めて、細胞外マトリクス（ＥＣＭ）へのＨ１．０の分泌を評価した。分泌されたＨ１．０は、その細胞培養培地中で検出可能であり、ブレオマイシン処理の２４時間後には、分泌されたＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２がまた、容易に検出された（図１２Ｂ）。これらの結果から、メチル化Ｈ１．０Ｋ１８０が、遺伝毒性ストレス誘導性老化に際してクロマチンから放出され、ＥＣＭへと分泌されることが確認された。
【０１９５】
従って、ＤＮＡ損傷および遺伝毒性ストレスの状況では、治療上有効な量のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体（例えば、細胞に透過する抗体、または細胞を取り除く抗体）での処置が提供される。
【０１９６】
放射線曝露
放射線曝露の状況では、電離放射線への曝露は、血清中の循環Ｈ１．０  Ｋ１８０ｍｅ２の増大したレベルを誘導する（図１３Ａおよび図１３Ｂ）。血清中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルに対する電離放射線の効果を、試験した。血清を、７Ｇｙの電離放射線に曝露する前、および曝露の２時間後または４８時間後のいずれかに、野生型マウスから集めた。照射の２時間後（マウス１）または４８時間後（マウス２）のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２血清レベルを、α−Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体でのスロットブロットおよびイムノブロッティングを使用して、処置前の最初のレベルと比較した（図１３Ａ）。各血清サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度を、各分析に含まれるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチドの標準曲線を使用して計算した。マウス血清アルブミンを、ローディングコントロールとして使用した。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ドットブロットバンドを定量化し、血清アルブミンによって正規化した。照射後のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の相対的増大を示す（図１３Ｂ）。α−Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体での等容積のマウス血清のウェスタンブロット分析も、照射後に増大したＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を示した（図１３Ｃ）。
【０１９７】
従って、放射線曝露の状況では、治療上有効な量のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体（例えば、細胞に透過する抗体または細胞を取り除く抗体）での処置が提供される。
【０１９８】
Ｂ．  治療用Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体
上記の節（Ｉ）（Ａ）で考察されるように、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープを認識しかつ選択的におよび／または特異的に結合し、治療のために使用され得る抗体が、本明細書で提供される。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、その治療用抗体は、中和抗体であり、その抗体は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の１またはこれより多くの生物学的活性を中和する。例えば、その抗体は、細胞外Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に結合し得、細胞外Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２が有し得る任意の結合またはシグナル伝達活性を中和し得る。いくつかの実施形態において、その抗体は、細胞、またはサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を取り除き得るかまたは遮断し得る。いくつかの実施形態において、その抗体は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を含む細胞を取り除き得る。
【０２００】
いくつかの実施形態において、その治療用抗体は、老化細胞を取り除き得る。いくつかの実施形態において、その抗体は、アルツハイマー病の症状を生じる細胞／組織またはタンパク質生成物を取り除き得る。いくつかの実施形態において、その抗体は、放射線損傷、ＤＮＡ損傷因子、および他の遺伝毒性物質によって損傷を受けた細胞を取り除き得る。いくつかの実施形態において、その抗体は、細胞に透過する抗体である。他の実施形態において、その影響を受けた細胞の膜が含まれ、本明細書で提供される治療用Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体の進入を可能にする。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される治療用抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。Ｆｃγレセプター（ＦｃγＲまたはＦＣＧＲ）を細胞表面に有するエフェクター細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、樹状細胞、または単球が挙げられる）は、その標的細胞に結合した抗体のＦｃ領域を認識しかつ結合する。このような結合は、細胞死をもたらす細胞内シグナル伝達経路の活性化を誘発し得る。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、その治療用抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する。抗体誘導性ＣＤＣは、古典的補体カスケードのタンパク質を通じて媒介され、その抗体への補体タンパク質Ｃｌｑの結合によって誘発される。Ｃｌｑに結合する抗体Ｆｃ領域は、その補体カスケードの活性化を誘導し得る。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、その治療用抗体は、抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）活性を有する。Ｆｃレセプターを細胞表面に有する貪食細胞（単球およびマクロファージが挙げられる）は、標的細胞に結合した抗体のＦｃ領域を認識しかつ結合する。その抗体が結合した標的細胞へのＦｃレセプターの結合の際に、標的細胞のファゴサイトーシスは、開始され得る。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、その治療用抗体は、免疫複合体を形成し得る。例えば、免疫複合体は、抗体によって覆われた、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を発現するかまたは突出している細胞であり得る。
【０２０５】
Ｃ．併用療法
本明細書で提供される治療用Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体のうちのいずれかの投与は、Ｈ１．０メチル化において症状発現する疾患のための他の公知の薬物／処置と組み合わせて投与され得る。
【０２０６】
アルツハイマー病防止の状況において、その治療用Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体のうちのいずれかは、ＡＰＰ合成インヒビター、β−セクレターゼインヒビター、γ−セクレターゼインヒビターおよびモジュレーター、Ａβ凝集インヒビター、Ａβ免疫療法、コレステロール低下薬、抗タウ薬、コリンエステラーゼインヒビター、Ｎ−メチルＤ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト、非定型抗精神病薬、プロテインＳニトロシル化の遮断薬、グルカゴン様ペプチド−１レセプターアゴニスト、ラパマイシン、ラパログ、エンドカンナビノイド、カンナビノイド、神経保護因子、カルシウム流入を制御する分子、抗酸化剤、抗炎症薬、グルタミン酸ホメオスタシス制御を制御する薬物、オートファジー誘導因子、ホルモン、ホルモン調節因子、スタチン、インスリン、インスリンキャリア、多官能性ナノキャリア、ビタミン、栄養補助剤、小型ＲＮＡ分子、ペプチド、および超音波療法が挙げられるが、これらに限定されないアルツハイマー病防止薬物またはレジメンの投与と組み合わせて投与され得る。
【０２０７】
Ｅ．治療用Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体の投与
本明細書に記載される治療用Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体のインビボ投与は、静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所に、経口的に、経皮的に、腹腔内に、眼窩内に、移植によって、吸入によって、髄腔内に、脳室内に、または鼻内に行われ得る。その治療剤の有効量は、Ｈ１．０メチル化において症状発現する疾患または状態の処置のために投与され得る。その治療剤の適切な投与量は、処置されるべき疾患または障害のタイプ、その治療用抗体のタイプ、その疾患または状態の重篤度および経過、個体の臨床状態、その個体の病歴および処置に対する応答、ならびに主治医の裁量に基づいて決定され得る。例示的な実施形態において、本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体のうちのいずれか１つは、静脈内投与される。
【０２０８】
本明細書に記載される治療用Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体のインビボ投与に関して、通常の投与量は、投与経路に依存して、１日あたり個体の体重１ｋｇあたり約１ｎｇから約１０００ｍｇまたはこれより多くまで、変動し得る。数日間にわたってまたはそれより長い反復投与に関しては、処置されるべきメチル化Ｈ１．０関連疾患または状態の重篤度に依存して、その処置は、症状の所望の抑制が達成されるまで持続され得る。投与量レジメンは、医師が達成しようと望む薬物動態上の減衰パターンに依存して、有用であり得る。例えば、個体に、１週間に１回から２１回投薬することが、本明細書で提供される。ある種の実施形態において、投薬頻度は、１日あたり３回、１日あたり２回、１日あたり１回、２日に１回、１週間に１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、もしくは１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回であるか、またはより長い。その治療の進捗は、従来の技術およびアッセイによってモニターされ得る。その投薬レジメンは、使用される用量とは独立して経時的に変動し得る。
【０２０９】
Ｅ．  薬学的組成物
本出願は、治療用Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を含む組成物（本明細書に記載される治療用抗体のうちのいずれか１またはこれより多くを含む薬学的組成物を含む）を提供する。その薬学的組成物は、１またはこれより多くの薬学的に受容可能な賦形剤をさらに含み得る。いくつかの実施形態において、その組成物は無菌である。
【０２１０】
Ｆ．治療用キットおよび製造物品
本出願は、本明細書に記載される治療用Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体組成物を含むキットを提供する。いくつかの実施形態において、そのキットは、二次抗体、免疫組織化学分析のための試薬、薬学的に受容可能な賦形剤および取扱説明書およびこれらの任意の組み合わせのうちのいずれかから選択される構成要素をさらに含む。いくつかの実施形態において、そのキットは、１またはこれより多くの薬学的に受容可能な賦形剤とともに、本明細書に記載される治療用組成物のうちのいずれか１つまたはこれより多くを含む。
【０２１１】
本出願はまた、本明細書に記載される治療用組成物またはキットのうちのいずれか１つを含む製造物品を提供する。製造物品の例としては、バイアル（例えば、密閉されたバイアル）が挙げられる。
【０２１２】
ＩＩＩ．  Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体の診断的使用
Ａ．  Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原の検出
診断に有用な、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原に特異的に結合する抗体が、本明細書で提供される。本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、結合のためにＫ１８０残基のジメチル化を要する。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、先のＩ（Ａ）節においてより詳細に考察される。
【０２１３】
図８は、体液サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープの直接検出のためのＥＬＩＳＡの例示的な使用を示す。この例示的なスキームでは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープに特異的な抗体が提供され、マイクロプレート上に固定化（被覆）される。定量化のためのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープを含む臨床サンプルが提供される。そのサンプルは、マイクロプレートに添加され、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープは、その固定化した抗体に結合する。結合していない物資は洗い流される。次いで、検出抗体が添加される（例えば、ＨＲＰまたは任意の他の標識された抗体）。これらの検出抗体は、捕捉エピトープに結合する。結合していない検出抗体は洗い流される。検出基質溶液が添加され、フルオロフォアまたは色の変化が測定される。次いで、これは、その臨床サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２エピトープのレベルを報告するために、標準曲線に対して定量化される。
【０２１４】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の検出および濃度の定量化のためのアッセイが、本明細書で提供される。このような定量化は、複製老化、ＤＮＡ損傷、遺伝毒性ストレス、放射線曝露、アルツハイマー病、および生物学的加齢を検出するために有用であり得る。その定量化はまた、治療レジメン、薬物スクリーニング、ならびに細胞生存度を回復させる、ＤＮＡ損傷を防止する、細胞の代謝およびオートファジーを増大させる、細胞老化を阻害する、そして細胞質での不溶性タンパク質老廃物蓄積をブロックすることを目的とした薬物処置に対する応答者または非応答者としての患者の層化をモニターするために有用である。その適用に依存して、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２は、インビボで、インビトロで、エキソビボで、インサイチュで、または無細胞系で検出および定量化され得る。例えば、定量化は、生物学的サンプルと、インビトロで、本明細書に開示されるとおりの抗体とを接触させること、ならびにその抗体に結合するそのサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度および／または細胞内局在を決定することを包含し得る。
【０２１５】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２は、当業者に周知の任意の数の方法によって検出され得る。本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、種々のイムノアッセイにおいて容易に使用され得る。これらのイムノアッセイとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、フローサイトメトリー、ラテラルフローイムノアッセイ、スロットブロット、磁性イムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、間接的免疫蛍光アッセイ、直接的免疫蛍光アッセイ、周囲光ファイバーイムノアッセイ（ｓｕｒｒｏｕｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｆｉｂｅｒ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）（ＳＯＦＩＡ）、分光光度法、ラジオグラフィー、電気泳動、免疫電気泳動、キャピラリー電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高拡散クロマトグラフィー（ｈｙｐｅｒｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、流体またはゲル沈殿反応、免疫拡散、分光測定、質量分析、定量的質量分析、多重アッセイのうちのいずれかのタイプ、および微小流体アッセイのうちのいずれかのタイプ。
【０２１６】
本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、標識に結合体化（例えば、検出可能な標識、スピン標識、比色標識、放射性標識、酵素標識、蛍光標識、または磁性標識に結合体化）され得る。
【０２１７】
本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、検出可能な標識に結合体化され得る。その検出可能な基は、検出可能な物理的または化学的な特性（例えば、分光法、光化学的方法、生化学的方法、免疫化学的方法、蛍光法、電気的方法、光学的方法または化学的方法によって検出可能）を有する任意の物質であり得る。本開示における有用な標識としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：磁性ビーズ（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標））、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、赤色の（ｒｅｄ）、ローダミンなど）、放射性標識（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐ）、マーカー遺伝子生成物として、またＥＬＩＳＡにおいていずれかで検出可能な酵素として一般に使用される酵素（例えば、ＬａｃＺ、ＣＡＴ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼなど）、ビオチン、アビジン、またはストレプトアビジンおよび比色標識（例えば、コロイド金着色ガラスまたはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）ビーズ、ならびにナノ粒子。例示的な実施形態において、その標識はビオチンである。
【０２１８】
本明細書で提供される標識は、当該分野で周知の方法に従うアッセイの所望の構成要素に直接的にまたは間接的に連結され得る。上記で示されるように、広く種々の標識が使用され得、標識の選択は、必要とされる感度、化合物の結合体化の容易さ、安定性要件、利用可能な機器および廃棄規定に依存する。標識は、しばしば間接的な方法によって付着され得る。概して、リガンド分子（例えば、ビオチン）は、その分子に共有結合される。そのリガンドは、次いで、本質的に検出可能であるか、またはシグナルシステム（例えば、検出可能な酵素、蛍光化合物、または化学発光化合物）に共有結合した、抗リガンド（例えば、ストレプトアビジン）分子に結合する。多くのリガンドおよび抗リガンドが使用され得る。リガンドが天然の抗リガンド（例えば、ビオチン）を有する場合、そのリガンドは、その標識された天然に存在する抗リガンドとともに使用され得る。あるいは、任意のハプテンまたは抗原性化合物が、抗体と組み合わせて使用され得る。シグナル生成化合物に直接的に、例えば、酵素またはフルオロフォアとの結合体化によって、構成要素がまた結合体化され得る。標識としての目的の酵素としては、ヒドロラーゼ、ホスファターゼ、エステラーゼ、グリコシダーゼ、またはオキシトランスクリプションファクトリダクターゼ（ｏｘｉｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ）、およびペルオキシダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。蛍光化合物としては、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロンなどが挙げられる。化学発光化合物としては、ルシフェリン、および２，３−ジヒドロフタラジンジオン、例えば、ルミノールが挙げられる。
【０２１９】
標識を検出する方法は、当業者に周知である。従って、例えば、その標識が放射性標識である場合、検出のための方法としては、シンチレーションカウンターまたはオートラジオグラフィーにおけるような写真フィルムが挙げられる。その標識が蛍光標識である場合、それは、その蛍光色素を適切な波長の光で励起させ、例えば、顕微鏡、視覚的検査によって、写真フィルムを介して、電荷結合素子（ＣＣＤ）または光電子倍増管などのような電子検出器の使用によって、その得られる蛍光を検出することによって検出され得る。同様に、酵素標識は、その酵素の適切な基質を提供し、その得られる反応生成物を検出することによって検出され得る。最後に、単純な比色標識は、単に、その標識と関連する色を観察することによって検出され得る。従って、種々のディップスティックアッセイにおいて、結合体化された金はしばしば、ピンク色として出現する一方で、種々の結合体化されたビーズは、そのビーズの色として出現する。
【０２２０】
検出の際に、特定の画分におけるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度が定量化され得る（例えば、細胞内画分における、可溶性およびクロマチン結合画分における、または細胞質画分におけるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の定量化）。例えば、細胞質画分におけるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度の増大は、細胞の老化状態を示す。いくつかの実施形態において、無傷の細胞、培養物中の細胞、またはスライス培養中の細胞が、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の局在を可視化するために画像化される。例えば、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の非核の細胞内局在（ｓｕｂ−ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）の増大は、老化状態を示す。いくつかの実施形態において、サイトゾルまたは細胞外マトリクスへのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の放出は、老化状態を示す。
【０２２１】
検出は、任意の生物学的サンプルで行われ得る。生物学的サンプルとしては、個体から得られる全血、血漿、血清、唾液、尿、糞便、滑液、脳脊髄液、気管支洗浄物、腹水、骨髄吸引物、胸水、組織、細胞、生検材料、間質液、リンパ液、またはこれらの画分が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、その生物学的サンプルは細胞を含み、その細胞は、培養物中、懸濁物中、スライド上、無傷の組織中、またはＦＡＣｓ分析の準備ができた調製物中にある。
【０２２２】
生物学的サンプルは、個体から得られる。本明細書で使用される場合、個体とは、哺乳動物として分類される任意の動物（ヒト、飼い慣らされた動物および家畜、ならびに動物園、競技用または愛玩用の動物（例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、スナネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなど）が挙げられる）をいう。個体は、雄性または雌性であり得る。いくつかの実施形態において、その個体は雌性である。いくつかの実施形態において、その個体は雄性である。
【０２２３】
本明細書で提供される診断法において、その個体は、任意の年齢の個体であり得る。アルツハイマー病の検出が行われるいくつかの実施形態において、その個体は、５０歳を超えている可能性がある。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、その個体は、５０歳未満である。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、その個体は、少なくとも５０歳であるか、少なくとも５５歳であるか、少なくとも６０歳であるか、少なくとも６５歳であるか、少なくとも７０歳であるか、少なくとも７５歳であるか、または少なくとも８０歳である。例示的な実施形態において、その個体は、少なくとも６０歳である。
【０２２４】
生物学的サンプルは、当業者に周知の標準的な方法に従って得られる。そのサンプルは、必要に応じて、適切な緩衝溶液中での希釈によって必要な場合に予め処理されるか、または望ましい場合には濃縮される。生理学的ｐＨの種々の緩衝液のうちの１つ（例えば、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液など）を使用する、多くの標準的な水性緩衝溶液のうちのいずれかが、使用され得る。
【０２２５】
本明細書に記載される直接的な検出法は、その生物学的サンプル中でＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度を定量化するために使用され得る。いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドは、直列に、例えば、陽性コントロールとして、または競合的イムノアッセイにおいて競合物質として、使用され得、行われるべきアッセイのフォーマットに依存して、標識されても標識されなくてもよい。
【０２２６】
当業者は、いくつかの実施形態において、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原の決定された濃度とコントロール（すなわち、参照コントロール）とを比較する必要があり得ることを認識する。その相対的な比較は、例えば、個体が、疾患（例えば、アルツハイマー病）を有するかもしくはこの疾患を発生させるリスクにあるか否か、またはその個体が特定の処置（例えば、アルツハイマー病処置；またはラパログでの処置）に応答するか、もしくは応答し得るか否かの決定を可能にし得る。コントロールは、年齢を合わせたコントロール；性別を合わせたコントロール；年齢および性別を合わせたコントロール；健康なコントロール；操作されていないコントロール；または複数の参照標準の編集を代表する参照標準であり得る。その比較はまた、処置（例えば、アルツハイマー病処置またはラパログ処置での）前の、または例えば、遺伝毒性物質、ＤＮＡ損傷因子、もしくは放射線への曝露の前の、同じ個体に由来するサンプルに対して行われ得る。その比較はまた、同じ個体に由来する、非罹患領域に、例えば、非罹患組織に由来するサンプルに対して行われ得る。
【０２２７】
当業者は、イムノアッセイにおけるおよび分析物検出の間の非特異的結合を低減することがしばしば望ましいことを認識する。そのアッセイが、固体基材に固定化されたＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を伴う場合、その基材への非特異的結合の量を最小化することは望ましいことであり得る。このような非特異的結合を低減する方法は、当業者に公知である。代表的には、これは、その基材をタンパク質性組成物で被覆することを伴う。いくつかの実施形態において、タンパク質組成物（例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、無脂肪粉乳およびゼラチン）が利用され得る。
【０２２８】
感度、特異度、陽性および陰性的中度（ＰＰＶおよびＮＰＶ）、ならびに陽性および陰性の尤度比（ＰＬＲおよびＮＬＲ））は、各診断検査デザインについて計算され得る。その統計的方法は、患者における疾患の存在および非存在を予測する助けになる。
【０２２９】
感度は概して、検査結果が、疾患が存在する場合に陽性である確率（真の陽性率）である。
【０２３０】
特異度は概して、検査結果が、その疾患が存在しない場合に陰性である確率（真の陰性率）である。
【０２３１】
陽性的中度（ＰＰＶ）は概して、その検査が陽性である場合にその疾患が存在する確率であり、その疾患の検査前有病率を説明する（例えば、アルツハイマー病の検査前有病率は１０％である）。
【０２３２】
陰性的中度（ＮＰＶ）は概して、その検査が陰性である場合にその疾患が存在しない確率であり、ＡＤの検査前有病率は１０％として説明される（Ｐｒｉｎｃｅ，  Ｍ．  Ｊ．，  Ａｍ  Ｊ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ，  １９９６）。
【０２３３】
陽性尤度比（ＬＲ＋またはＰＬＲ）は概して、その疾患結果陽性を有する人の確率を、その疾患検査陽性を有しない人の確率によって除算したものである。陽性尤度比（ＰＬＲ）は概して、その検査が陽性である場合には、その疾患の確率をどの程度増大させるかを示す。ＰＬＲ＞１は、その標的障害が存在する確率の増大を示し、ＰＬＲ＜１は、その標的障害が存在する確率の減少を示し、ＰＬＲ＝１は、検査がその疾患の確率を変化させないことを意味する。
【０２３４】
陰性尤度比（ＬＲ−またはＮＬＲ）は概して、その疾患検査陰性を有する人の確率、その疾患検査陰性を有しない人の確率によって除算したものである。陰性尤度比（ＮＬＲ）は概して、その検査が陰性である場合には、その疾患の確率をどの程度減少させるかを示す。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、その比較は、最適な特異度および感度のために受診者動作特性曲線分析によって確立された閾値レベルに対して行われる。そのＲＯＣ曲線、閾値およびその曲線下面積（ＡＵＣ）は、本明細書で提供される検査のデザインの各々に関して示される。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される診断法は、例えば、個体が疾患（例えば、アルツハイマー病）を有することを最終的に確認するために、確定検査に使用され得る。
【０２３７】
他の実施形態において、本明細書で提供される診断法は、それらの的中度のために（検査、スクリーニングのために）、例えば、個体が疾患（例えば、アルツハイマー病）を発生させる可能性を決定するために、使用され得る。このような実施形態において、診断は、尤度比の計算を伴い得る。
【０２３８】
他の実施形態において、本明細書で提供される診断法は、コンパニオン診断として使用され得る。このような実施形態において、その診断は、陽性的中度（ＰＰＶ）および陰性的中度（ＮＰＶ）の計算を伴い得る。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される診断法は、診断オッズ比（ＯＲ）を確立するために使用され得る。このような実施形態において、その診断は、感度および特異度の計算を伴い得、診断検査の有効性の尺度である。
【０２４０】
本明細書で提供されるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体は、以下で考察される種々の診断目的で有用である。
【０２４１】
Ｂ．アルツハイマー病の検出
アルツハイマー病に関して個体をスクリーニングすることにおける使用のための、個体がアルツハイマー病を発生させるリスクにあるか否かを同定することにおける使用のための、個体がアルツハイマー病を発生させるか否かの可能性を推定することにおける使用のための、アルツハイマー病の診断における使用のための、アルツハイマー病の早期検出における使用のための、アルツハイマー病の予後予測における使用のための、処置選択における使用のためにアルツハイマー病薬物もしくはレジメンでのアルツハイマー病処置に応答し得る個体を選択する／アルツハイマー病と診断された個体に関する処置選択肢を決定するための、アルツハイマー病と診断された個体の処置をモニターし、アルツハイマー病薬物もしくはレジメンでの進行中の処置を受けることにおける使用のための、またはアルツハイマー病薬物およびレジメンに関するスクリーニングにおける使用のための、（Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルを決定するために）Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供される。
【０２４２】
アルツハイマー病患者は、健康な年齢を合わせた健康なコントロールより低い濃度のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を示した。これは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２濃度が、アルツハイマー病を有する患者を健康な個体から有効に分離し得ることを示す（図１０Ａ）。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の血清濃度は、アルツハイマー病患者の同定のために十分であったが、全ＩｇＧ（図１０Ｂ）または全タンパク質（図１０Ｃ）による血清サンプル正規化を使用すると、全体的な血清濃度を変更させ得る変数（例えば、血清を得るために使用されるプロトコル、操作者変動性、患者の水分補給状態および患者の活動状態）にも関わらず、個体間での直接的比較が可能になった。例えば、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２血清レベルが、健康なより若い個体と比較して健康な加齢した個体において上昇している一方で、アルツハイマー病を有する患者が、健康な加齢した個体（＞６０歳）と比較して、有意に低いＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の正規化血清レベルを示すことを観察した（図１０Ｂ、１０Ｃ）。
【０２４３】
例示的な方法、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベル：  より具体的には、いくつかの実施形態において、アルツハイマー病に関して個体をスクリーニングするために、個体がアルツハイマー病を発生させるリスクにあることを同定するために、個体がアルツハイマー病を発生させるか否かの可能性を推定するために、個体がアルツハイマー病を有するか否かを決定するために、個体におけるアルツハイマー病の初期の徴候を検出するために、および個体におけるアルツハイマー病の予後予測における使用のために、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を使用してＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルを決定する方法が本明細書で提供され、上記方法は、（ａ）その個体の生物学的サンプルとＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体とを接触させる工程；ならびに（ｂ）その抗体に結合するそのサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度を決定する工程を包含し、ここでコントロールに対するその濃度の減少は、その個体が、アルツハイマー病を有するか、アルツハイマー病を発生させるリスクにあるか、またはアルツハイマー病を発生させるより高い可能性を有することを示し、コントロールに対するその濃度の増大または変化なしは、その個体がアルツハイマー病を有しないか、アルツハイマー病を発生させるリスクにないか、またはアルツハイマー病を発生させるより高い確率を有しないことを示し得る。コントロールは、健康なコントロール（例えば、年齢を合わせた、性別を合わせた）、健康なコントロールの編集を代表する参照標準、または時間においてより早期に単離された同じ個体に由来するコントロールサンプルが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、循環Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度が決定される。いくつかの実施形態において、その濃度における変化は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値に対して相対的である。いくつかの実施形態において、その方法は、その個体が、アルツハイマー病を有するか、またはこれを発生させるリスクにあることが決定される場合、その個体をアルツハイマー病薬物またはレジメンで処置する工程をさらに包含する。
【０２４４】
関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、観察研究において使用される。観察研究の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ａ）横断的デザイン（単一時点デザイン、または遅延横断（ｄｅｌａｙｅｄ  ｃｒｏｓｓ−ｓｅｃｔｉｏｎａｌ））  −  単一時点で集められる患者１名につき１または数個の検体／サンプルの検査；（ｂ）縦断的デザイン  −  長期間（例えば、数週間、数ヶ月、数年）にわたって集められる患者１名あたりの多数の検体／サンプルの検査；（ｃ）後向きデザイン  −  研究を開始する前に、分析物の状態およびその患者の臨床状態が知られる以前に集めた検体（特徴づけられた検体）の検査；（ｄ）前向きデザイン  −  その分析物状態およびその患者の臨床状態の両方がその研究の間に確立されることを除いて、その研究の前または研究の間に集められる検体の検査；ならびに（ｅ）前向き−後向きデザイン  −  その臨床状態が知られているが、その分析物状態は未知でありかつその研究の間に確立される以前に集めた検体の検査。
【０２４５】
関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、アルツハイマー病の診断に関して意図され、ここでその方法は、唯一の決定因子として患者の臨床状態を決定、検証または確認するために使用され得る。これらの実施形態において、この検査タイプはまた、唯一の確認アッセイ（以前の検査の結果を検証するため）および唯一の排除アッセイ（特定の条件を除外するため）を含む。
【０２４６】
関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、アルツハイマー病の「診断支援（ａｉｄ−ｔｏ−ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ）」を提供することが意図され、ここでその方法は、患者の臨床状態の決定または検証を支援するさらなる情報を提供するために使用され得る。この検査は、必ずしも唯一の決定因子ではないが、患者の現在の状態を評価するために使用され得る。
【０２４７】
関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、アルツハイマー病のスクリーニングに関して意図され、ここでその方法は、無症状個体の疾患、障害の状態または他の生理学的状態を決定するために使用され得る。その状態の性質および標的とした患者集団に依存して、そのスクリーニング方法は、慣用的に使用されてもよいし、「リスクにある」患者に制限されてもよい。この状況において、本明細書に記載される方法は、患者の現在の状態を評価するために使用され得る。
【０２４８】
関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、アルツハイマー病に対する素因を決定することが意図され、ここで本明細書に記載される方法は、症状が現れる前の患者において疾患開始の可能性を決定する（例えば、将来的にその疾患を発生させるリスクを評価する）ために使用され得、ここで十分なリスク（検査結果によって決定される場合）にある患者に関しては、防止的介入がとられ得る。
【０２４９】
関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、アルツハイマー病の予後予測に関して意図され、ここで本明細書に記載される方法は、処置とは無関係に、臨床転帰に関連付けられる因子を測定するために使用され得る。本明細書に記載される方法は、疾患の自然の進行（例えば、処置の非存在下での転帰）を推定するために使用され得るか、または本明細書に記載される方法は、患者の将来の状態を評価するためにデザインされる。
【０２５０】
関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、加齢集団の生理学的状態（「年齢時計（ａｇｉｎｇ  ｃｌｏｃｋ））の決定に関して意図され、ここで本明細書に記載される方法は、ヒトの状態または加齢の特徴または加齢に伴うアルツハイマー病のリスクを同定する目的で、個体の生理学的状態を評価するために使用され得る。
【０２５１】
関連の実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原の定量化および／またはＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２自己抗体の定量化は、アルツハイマー病スクリーニング、診断、または検出における信頼度を増大させるために使用され得る。
【０２５２】
関連の実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原の定量化および／またはＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２自己抗体の定量化は、Ａβ４２、Ｔ−ｔａｕ、ｐ−ｔａｕ、Ａβ４２／Ｔ−ｔａｕ比、およびＡβ４２／ｐ−ｔａｕの測定が挙げられるが、これらに限定されない他の脳脊髄液（ＣＳＦ）検査とともに使用され得る。
【０２５３】
関連の実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原の定量化および／またはＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２自己抗体の定量化は、認知状態検査、例えば、ＭＭＳＥ（ミニメンタルステート検査）、ＧＤＳ（グローバル悪化率（ｇｌｏｂａｌ  ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ））、およびＣＤＲ（臨床認知症尺度（ｃｌｉｎｉｃａｌ，  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｒａｔｉｎｇ））検査の評価とともに使用され得る。
【０２５４】
関連の実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原の定量化および／またはＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２自己抗体の定量化は、ニューロイメージングとともに使用され得る。
【０２５５】
本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２のレベルは、生物学的サンプル中の全ＩｇＧに対して正規化され得るか、またはその生物学的サンプル中の全タンパク質に対して正規化され得る。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度は、メチル化されていない標識された合成Ｈ１．０ペプチドに対する相対比として決定され得る。
【０２５６】
本明細書に記載される方法の実施形態において、その個体は、５０歳を超えている。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、その個体は、５０歳未満である。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、その個体は、少なくとも５０歳であるか、少なくとも５５歳であるか、少なくとも６０歳であるか、少なくとも６５歳であるか、少なくとも７０歳であるか、少なくとも７５歳であるか、または少なくとも８０歳である。例示的な実施形態において、その個体は、少なくとも６０歳である。
【０２５７】
Ｃ．  アルツハイマー病のコンパニオン診断
アルツハイマー病薬物またはレジメンでのアルツハイマー病処置に応答し得る個体を選択するための方法における使用のための、アルツハイマー病と診断された個体のための処置選択における／処置選択肢を決定することにおける使用ための、アルツハイマー病と診断された個体の処置をモニターし、アルツハイマー病薬物もしくはレジメンでの進行中の処置を受けることにおける使用のための、またはアルツハイマー病薬物およびレジメンに関するスクリーニングにおける使用のための、（Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルを決定するための）Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体がまた、本明細書で提供される。
【０２５８】
これらの実施形態において、これらのアルツハイマー病薬物およびレジメン／処置としては、ＡＰＰ合成インヒビター、β−セクレターゼインヒビター、γ−セクレターゼインヒビターおよびモジュレーター、Ａβ凝集インヒビター、Ａβ免疫療法、コレステロール低下薬、抗タウ薬、コリンエステラーゼインヒビター、Ｎ−メチルＤ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト、非定型抗精神病薬、プロテインＳニトロシル化の遮断薬、グルカゴン様ペプチド−１レセプターアゴニスト、ラパマイシン、ラパログ、エンドカンナビノイド、カンナビノイド、神経保護因子、カルシウム流入を制御する分子、抗酸化剤、抗炎症薬、グルタミン酸ホメオスタシス制御を制御する薬物、オートファジー誘導因子、ホルモン、ホルモン調節因子、スタチン、インスリン、インスリンキャリア、多官能性ナノキャリア、ビタミン、栄養補助剤、小型ＲＮＡ分子、ペプチド、または超音波療法での処置が挙げられるが、これらに限定されない。より具体的には、ＡＰＰ合成インヒビター（＋フェンセリン）、β−セクレターゼインヒビター（ＭＫ−８９３１、Ｅ２６０９、ＬＹ２８１１３７６、ＬＹ２８８６７２１、ＰＦ−０５２９７９０９）、γ−セクレターゼインヒビターおよびモジュレーター（セマガセスタット（ｓｅｍｅｇａｃｅｓｔａｔ）ＬＹ４５０１３９、アバガセスタット（ａｖａｇａｃｅｓｔａｔ）ＢＭＳ−７０８１６３、ＰＦ−３０８４０１４、ＥＬＮＤ００６、タレンフルルビル、ＣＨＦ５０７４）、Ａβ凝集インヒビター（トラミプロサート（ｔｒａｍｉｐｒｏｓａｔｅ）（３ＡＰＳ）、クリオキノール（ＰＢＴ１）、ＰＢＴ２、ＥＬＮＤ００５（ｓｃｙｌｌｏ−イノシトール）、ＰＱ９１２）、Ａβ免疫療法（ＧＳＫ９３３７７６、ＡＮ１８０２＋ＱＳ２１、ＡＣＣ−００１、アルツハイマー病−１０６、バピニューズマブ、ソラネズマブ、ガンテネルマブ（ＲＯ４９０９８３２）、ポネズマブ（ＰＦ−０４３６０３６５）、ＭＡＢＴ５１０２Ａ（クレネズマブ）、ＢＡＮ２４０１、静脈内免疫グロブリン、ガンテネルマブ（Ｒ１４５０またはＲＯ４９０９８３２））、抗タウ薬（リチウム、チデグルシブ（ＮＰ０３１１１２）、ＬＭＴＸ（メチレンブルー））、コリンエステラーゼインヒビター（Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標）（ガランタミン）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）（リバスチグミン）、およびＡｒｉｃｅｐｔ（登録商標）（ドネペジル））、Ｎ−メチルＤ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト（Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）およびＮａｍｚａｒｉｃ（登録商標）、Ｎａｍｅｎｄａ（登録商標）とドネペジルとの組み合わせ）、非定型抗精神病薬（オランザピン、クエチアピン、リスペリドン）、プロテインＳニトロシル化の遮断薬、グルカゴン様ペプチド−１レセプターのアゴニスト、ラパマイシンおよびラパログ、エンドカンナビノイドおよびカンナビノイド、神経保護因子、カルシウム流入を制御する分子，抗酸化剤（ビタミンＥ、ビタミンＣ、α−リポ酸、コエンザイムＱ）、抗炎症分子および薬物、グルタミン酸ホメオスタシス制御を制御する薬物、オートファジー誘導因子、ホルモンおよびホルモン調節因子、スタチン、インスリンおよびインスリンキャリア（鼻内インスリン、長時間作用性インスリンおよびサリドマイドが挙げられる）、ラミプリル、レスベラトール、多官能性ナノキャリア、ビタミン、および栄養補助剤、小型ＲＮＡ分子、ペプチド、ならびに超音波療法。いくつかの実施形態において、そのアルツハイマー病薬物およびレジメンは、ＦＤＡ承認が未決定であり、米国食品医薬品局のワールドワードウェブアドレスで得られ得る薬物承認のためのＦＤＡに登録された臨床試験のリストから選択される。
【０２５９】
例示的な方法、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベル：いくつかの実施形態において、進行中の処置を受けているアルツハイマー病と診断された個体が、その進行中の処置から利益を受けるかまたは利益を受け続けるか否かを決定するためにＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を使用する方法が本明細書で提供され、その方法は、（ａ）進行中の処置を受けている個体の生物学的サンプルを提供する工程；（ｂ）その生物学的サンプルとＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体とを接触させる工程；（ｃ）その抗体に結合するそのサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度を決定する工程；および（ｄ）処置から利益を受けるかまたは利益を受け続ける個体を選択する工程を包含し、ここでコントロールに対するその濃度の増大は、その個体が処置から利益を受けるかまたは利益を受け続けることを示し、コントロールに対するその濃度の減少または変化なしは、その個体が処置から利益を受ける可能性が低いか、または利益を受け続けることはないか、または処置に対して応答性ではないことを示し得る。コントロールとしては、処置を受けていないアルツハイマー病を有する個体に由来するサンプル、または処置開始前のより早期の時点で単離された同じ個体に由来するコントロールサンプルが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、循環Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度が決定される。いくつかの実施形態において、その濃度の変化は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値に対して相対的である。
【０２６０】
アルツハイマー病と診断された個体に対する処置選択において使用するための、アルツハイマー病と診断された個体に対する処置選択肢を決定するための、およびどの個体が特定の処置から利益を受け得るかを決定するための、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を使用する方法がまた、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、その方法は、（ａ）個体がアルツハイマー病に関して処置される前に、その個体の生物学的サンプルを提供する工程；（ｂ）その生物学的サンプルと候補処置とを接触させる工程；（ｃ）その生物学的サンプルとＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体とを接触させる工程；（ｄ）その抗体に結合するそのサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度および／または細胞内局在を決定する工程；ならびに（ｅ）その処置から利益を受け得る個体を選択する工程を包含し、ここでコントロールに対するその濃度の増大または細胞質の細胞内局在の減少は、その個体が処置から利益を受け得ることを示し、コントロールに対するその濃度の減少もしくは変化なし、または細胞質の細胞内局在の増大もしくは変化なしは、その個体が処置から利益を受けないことを示し得る。別の実施形態において、その方法は、（ａ）その個体にその候補処置を投与する工程；（ｂ）その処置の投与後に、その個体の生物学的サンプルを提供する工程；（ｃ）その生物学的サンプルとＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体とを接触させる工程；（ｄ）その抗体に結合するそのサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度および／または細胞内局在を決定する工程；ならびに（ｅ）その処置から利益を受け得る個体を選択する工程を包含し、ここでコントロールに対するその濃度の増大または細胞質の細胞内局在の減少は、その個体が処置から利益を受け得ることを示し、コントロールに対するその濃度の減少もしくは変化なし、または細胞質の細胞内局在の増大もしくは変化なしは、その個体が処置から利益を受けないことを示し得る。コントロールとしては、健康な個体に由来するサンプル、またはその生物学的サンプルとプラシーボ処置とを接触させることが挙げられ得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、循環Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度が決定される。いくつかの実施形態において、その濃度の変化は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値に対して相対的である。
【０２６１】
関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルが、生理学的レベルの範囲内のままであるか、または確立された治療薬物範囲内のままであることを担保するために有用である。
【０２６２】
関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、アルツハイマー病をモニターするために有用であり、ここでその記載される方法は、必要とされる場合の処置／介入を調節する目的で、そのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルを測定するために使用され得る。関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、このような処置を受けている個体においてアルツハイマー病薬物もしくは栄養レジメンまたは生活様式の調整の効果をモニターするために有用である。
【０２６３】
関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、アルツハイマー病に関する任意の観察研究または介入臨床研究における臨床成績をモニターするために有用であり、ここで（ａ）観察研究は、研究の間に得られた試験結果が患者の管理に使用されず、処置の決定に影響を与えない研究をいう；および（ｂ）介入研究は、研究の間に得られた試験結果が患者の管理の決定に影響を及ぼしてもよく、処置を導くのに使用されてもよい研究である。
【０２６４】
関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、一連の測定に有用であり、それによって、複数の決定が経時的に得られる。これらのタイプのモニタリング方法は、疾患進行／退行、疾患の再発、最小残存疾患、処置への応答／抵抗性、および／または処置による有害作用の検出／評価に対して使用され得る。これらのタイプのモニタリング方法は、個体の状態の変化を評価するためにデザインされ得る。
【０２６５】
関連の実施形態において、本明細書で提供される方法は、アルツハイマー病処置への応答または反応の予測に有用であり、ここで本明細書に記載される方法を使用して、特定の療法に対する患者の応答または有害反応の可能性を決定する因子を測定し得る。コンパニオン診断として使用するために具体的に設計された予測方法が本明細書に記載される。
【０２６６】
本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２のレベルは、その生物学的サンプル中の全ＩｇＧに対して正規化され得るか、またはその生物学的サンプル中の全タンパク質に対して正規化され得る。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度は、メチル化されていない標識された合成Ｈ１．０ペプチドに対する相対比として決定され得る。
【０２６７】
本明細書に記載される方法の実施形態において、その個体は、５０歳を超えている。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、その個体は、５０歳未満である。本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態において、その個体は、少なくとも５０歳であるか、少なくとも５５歳であるか、少なくとも６０歳であるか、少なくとも６５歳であるか、少なくとも７０歳であるか、少なくとも７５歳であるか、または少なくとも８０歳である。例示的な実施形態において、その個体は、少なくとも６０歳である。
【０２６８】
関連の実施形態において、その方法は、新たなアルツハイマー病薬物およびレジメンのスクリーニングに使用され得る。
【０２６９】
Ｄ．  老化の検出
老化を検出することにおいて使用するための、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供される。本明細書で提供される場合、老化は、複製老化（ＲＥＰ−ＳＥＮ）、遺伝毒性ストレス誘導性老化および放射線誘導性老化と関連する。
【０２７０】
一般に、老化を検出するための方法は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の直接的検出を伴う。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の直接的検出に関して、その方法は概して、（ａ）その個体の生物学的サンプルとＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体とを接触させる工程；および（ｂ）その抗体に結合するそのサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原の濃度を決定する工程を包含し、ここでコントロールに対するその濃度の増大は、その生物学的サンプルが老化細胞を含むことを示す。いくつかの実施形態において、その濃度における変化は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値に対して相対的である。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、その方法は、遺伝毒性物質によって誘導される老化を受けている個体を同定するために使用され得る。いくつかの実施形態において、その遺伝毒性ストレス誘導性老化は、ＤＮＡ損傷因子、薬物または毒素、例えば、放射線、ＵＶ光、ブレオマイシンおよび任意の他の遺伝毒性薬物（トラゾドン、エトチフェン（Ｅｔｏｔｉｆｅｎ）、セファレキシン、ニソルジピン（Ｎｉｓｏｌｄｉｐｍｅ）、ＣＧＳ  １５９４３、クロトリマゾール、５−ノニルトリプタミン（Ｎｏｎｙｌｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ）、ドキセピン、ペルゴリド、パロキセチン、レスベラトロール、ケルセチン、ホノキオール、７−ニトロインダゾール、メゲストロール、フルボキサミン、エトポシド、ベリパリブ、ルカパリブ、オラパリブ、カンプトテシン、またはテルビナフィンおよび一般的な化学療法薬が挙げられるが、これらに限定されない）への個体の曝露の結果である。
【０２７２】
いくつかの実施形態において、その方法は、化学療法処置を受けている個体において老化を同定して、その化学療法が有効であることを担保するために有用である。これらの実施形態における化学療法剤は、以下からなる群より選択され得る：アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、アリトレチノイン（Ｐａｎｒｅｔｉｎ）、アロプリノール（Ｚｙｌｏｐｒｉｍ）、アルトレタミン（Ｈｅｘａｌｅｎ）、アミホスチン（Ｅｔｈｙｏｌ）、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ）、三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ）、アスパラギナーゼ（Ｅｌｓｐａｒ）、ＢＣＧ生（ＴＩＣＥ  ＢＣＧ）、ベキサロテン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ）、ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ）、ブスルファン静脈内（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ）、ブスルファン経口（Ｍｙｌｅｒａｎ）、カルステロン（Ｍｅｔｈｏｓａｒｂ）、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ）、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ）、タルク（Ｔａｌｅ）（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ）、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ）、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ）、テニポシド、ＶＭ−２６（Ｖｕｍｏｎ）、テストラクトン（Ｔｅｓｌａｃ）、チオグアニン、６−ＴＧ（チオグアニン）、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ）、およびトポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ）。
【０２７３】
Ｅ．  ＤＮＡ損傷の検出
ＤＮＡ損傷、例えば、急性のＤＮＡ損傷を検出することにおいて使用するためのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供される。
【０２７４】
上記で記載されるように、ＤＮＡ損傷因子の状況において、Ｈ１．０Ｋ１８０のジメチル化（Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２）は、ブレオマイシン、化学療法剤での急性のＤＮＡ損傷後にクロマチンで観察される（図１１Ａ）。上記でまた記載されるように、遺伝毒性ストレスの状況において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２は、遺伝毒性ストレス誘導性老化に際して（ＤＮＡ損傷因子での処置後数日で）クロマチンから放出され（図１２Ａ）、その細胞から細胞外空間へと分泌される（図１２Ｂ）。
【０２７５】
概して、ＤＮＡ損傷を検出するための方法は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の直接的検出を伴う。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の直接的検出に関して、その方法は概して、（ａ）その個体の生物学的サンプルとＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体とを接触させる工程；および（ｂ）その抗体に結合するそのサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原の濃度を決定する工程を包含し、ここでコントロールに対するその濃度の増大は、その生物学的サンプルがＤＮＡ損傷を受けていることを示す。いくつかの実施形態において、その濃度における変化は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値に対して相対的である。
【０２７６】
いくつかの実施形態において、そのＤＮＡ損傷は、ＤＮＡ損傷因子、薬物または毒素、例えば、放射線、ブレオマイシンまたは他のＤＮＡ損傷因子（例えば、上記で考察される化学療法薬）への細胞または個体の曝露の結果である。
【０２７７】
いくつかの実施形態において、その方法は、遺伝毒性物質またはＤＮＡ損傷因子へのこのような曝露から５分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、２時間、３時間、４時間、５時間、２４時間、４８時間、３日、４日、または最長５日以内にＤＮＡ損傷を決定するために有用である。
【０２７８】
いくつかの実施形態において、ＤＮＡ損傷の検出のための携帯式ユニットが、本明細書で提供される。そのユニットは、サンプル収集ユニット、読み取り機、およびＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を含むアッセイモジュールを含み得る。
【０２７９】
Ｆ．  放射線曝露の検出
放射線曝露を検出することにおける使用のための、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書で提供される。
【０２８０】
放射線曝露の状況において、電離放射線への曝露は、血清中の循環Ｈ１．０  Ｋ１８０ｍｅ２の増大したレベルを誘導する（図１３Ａおよび図１３Ｂ）。血清中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２レベルに対する電離放射線の効果を試験した。血清を、７Ｇｙの電離放射線に曝露する前、および曝露の２時間後または４８時間後のいずれかに、野生型マウスから集めた。照射の２時間後（マウス１）または４８時間後（マウス２）のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２血清レベルを、α−Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体でのスロットブロットおよびイムノブロッティングを使用して、処置前の最初のレベルと比較した（図１３Ａ）。各血清サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度を、各分析に含まれるＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチドの標準曲線を使用して計算した。マウス血清アルブミンを、ローディングコントロールとして使用した。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ドットブロットバンドを定量化し、血清アルブミンによって正規化した。照射後のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の相対的増大を示す（図１３Ｂ）。α−Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体での等容積のマウス血清のウェスタンブロット分析も、照射後に増大したＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を示した（図１３Ｃ）。
【０２８１】
概して、放射線曝露の検出のための方法は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の直接的検出を伴う。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の直接的検出に関しては、その方法は概して、（ａ）個体の生物学的サンプルとＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体とを接触させる工程；および（ｂ）その抗体に結合するそのサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原の濃度を決定する工程を包含し、ここでコントロールに対するその濃度の増大は、放射線曝露が起こったことを示す。いくつかの実施形態において、その濃度における変化は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値に対して相対的である。１つの例示的実施形態において、７Ｇｙ  Ｘ線曝露の２時間後のＨ１．０  Ｋ１７０ｍｅ２抗原濃度における変化は、１２μｍｏｌ／Ｌ〜２１μｍｏｌ／Ｌであり、４８時間後に２６μｍｏｌ／Ｌ〜３５μｍｏｌ／Ｌである。
【０２８２】
いくつかの実施形態において、その方法は、このような曝露から５分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、２時間、３時間、４時間、５時間、２４時間、４８時間、３日、４日、または最長５日以内に放射線曝露を決定するために有用である。
【０２８３】
いくつかの実施形態において、その方法は、野外の状況下、例えば戦闘区域で、軍人が、このような曝露を決定するのに有用である。
【０２８４】
いくつかの実施形態において、放射線損傷の検出のための携帯式ユニットが本明細書で提供される。そのユニットは、サンプル収集ユニット、読み取り機、およびＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を含むアッセイモジュールを含み得る。
【０２８５】
Ｇ．  Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２およびラパログ
哺乳動物ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）は、有望な治療標的として出現した。ラパマイシンおよびいくつかのラパマイシン誘導体、ラパマイシンアナログ、および他のｍＴＯＲインヒビターは、ある種の疾患状態の処置のためにＦＤＡに承認された薬物である。
【０２８６】
本発明者らは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の検出が、「ラパログ（ｒａｐａｌｏｇｕｅ）」と総称されるラパマイシン、ラパマイシン誘導体、ラパマイシンアナログ、および他のｍＴＯＲインヒビターに対する個体の応答性のスクリーニングに有用であり得、ラパログベースの治療レジメンをモニターするために有用であり得ることを見出した。本発明者らは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の検出が、薬物スクリーニングを目的として、さらなるラパログのスクリーニングに有用であり得ることも見出した。具体的には、ラパマイシン誘導体および免疫抑制剤、エベロリムスは、ＤＮＡ損傷の際のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の出現を遮断することが、ここで示される（図１４）。遺伝毒性ストレスへの曝露に先立つ、またはそれと並行したラパログによる処置が、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度および／または細胞内局在の変化によって証明されるように、遺伝毒性ストレッサーの影響を低減させ得ることも観察された。
【０２８７】
本明細書で使用される場合、ラパログは、ＦＤＡに承認されたラパログおよび現在臨床試験が進行中のラパログを含む。ＦＤＡに承認されたラパログとしては、ラパマイシン、シロリムス、ラパミューン、エベロリムス、ＲＡＤ００１、アフィニトール、Ｚｏｒｔｒｅｓｓ、テムシロリムス、ＣＣＩ−７７９、トーリセル、リダフォロリムス、ＡＰ２３５７３、ＭＫ−８６６９、デフォロリムス、ゾタロリムス、およびＡＢＴ−５７８が挙げられる。他のラパログとしては、ＡＺＤ８０５５、ＡＺＤ２０１４、ＯＳＩ−０２７、ＭＬＮ０１２８、ＷＹＥ−１３２、Ｔｏｒｉｎ１、ＰＩ−１０３、Ｐ７１７０、ＰＦ−０４６９１５０２、ＰＦ−０５２１２３８４、ＰＫＩ−５８７、ＧＮＥ４７７、ＰＫＩ−１８０、ＷＪＤ００８、ＸＬ７６５、ＳＡＲ２４５４０９、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、ＢＧＴ２２６、ＳＦ１１２６、ＧＳＫ２１２６４５８、Ｋｕ−００６３７９４、ＷＹＥ−３５４、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、ＰＦ−０５２１２３８４、ＸＬ７６５、Ｔｏｒｉｎ  ２、ＷＹＥ−１２５１３２、およびＯＳＩ−０２７が挙げられる。
【０２８８】
一般に、がん、免疫不全、糖尿病、関節炎、アルツハイマー病および他の神経変性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、および他の加齢性の病理と診断された個体において進行中のラパログベースの処置の効果をモニターするための方法が本明細書において提供される。
【０２８９】
従って、いくつかの実施形態において、ラパログでの処置を受けている個体がこのような処置に応答するか否かを決定する方法が本明細書で提供され、その方法は、（ａ）その個体の生物学的サンプルとＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体とを接触させる工程；（ｂ）その抗体に結合するそのサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度および／または局在を決定する工程；ならびに（ｃ）その個体が処置に応答するか否かを決定する工程を包含し、ここでそのコントロールに対して確立された濃度の減少またはその局在の変化は、その個体が、そのラパログに応答することを示す。いくつかの実施形態において、コントロールに対するＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の細胞外濃度の上昇が存在する場合、そのラパログ処置は有効でないか、または改変される必要があることが決定される。いくつかの実施形態において、コントロールに対するＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の細胞質局在の増加が存在する場合、そのラパログ処置は有効でないか、または改変される必要があることが決定される。いくつかの実施形態において、その減少は、そのラパログが投与されている関連疾患と診断されていない、年齢を合わせたコントロールに対して相対的である。いくつかの実施形態において、コントロールに対するＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質の細胞外または細胞質濃度の減少が存在する場合、処置は有効であり、継続されるべきであることが決定される。いくつかの実施形態において、その方法は、処置のタイプ、過程、継続期間、および／または投与量を改変する情報を使用する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、循環Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度が決定される。いくつかの実施形態において、その濃度における変化は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値に対して相対的である。
【０２９０】
いくつかの実施形態において、がん、免疫不全、糖尿病、アルツハイマー病または他の神経変性疾患、心血管疾患、自己免疫疾患、関節炎、および他の加齢性の病理と診断されたか、またはこれらを有すると疑われ、ラパログ処置から利益を受け得る個体を選択するため、すなわち、個体がラパログでの処置に応答し得るか否かを決定するための方法が本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、この方法は、個体の生物学的サンプルを提供する工程；そのサンプルを、インビトロで、エキソビボで、スライス培養において、または組織培養において、ラパログで処理する工程；およびそのサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度および／または細胞内局在を決定する工程を包含する。いくつかの実施形態において、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を使用してそのサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の濃度を測定することによって決定される。いくつかの実施形態において、コントロールに対するＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の細胞質または細胞外濃度の増大が存在する場合、そのラパログ処理が、有効でない可能性があることが決定される。いくつかの実施形態において、コントロールに対するＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の細胞質局在の増大が存在する場合、そのラパログ処理が有効でない可能性があることが決定される。いくつかの実施形態において、その減少は、その個体がラパログ処置を受け得る疾患と診断されていない、年齢を合わせたコントロールに対して相対的である。いくつかの実施形態において、コントロールに対するＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質の細胞質または細胞外濃度の減少が存在する場合、処置は有効であり得ることが決定される。いくつかの実施形態において、その濃度における変化は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値に対して相対的である。
【０２９１】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される方法は、処置タイプ、過程、継続期間、および／または投与量を改変する情報を使用する工程をさらに包含する。
【０２９２】
他の実施形態において、新たなラパログを同定する能力（薬物スクリーニング適用）をモニターするための、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に検出の使用が本明細書で提供される。
【０２９３】
Ｈ．  生物学的加齢の検出
生物学的加齢を検出することにおける使用のためのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体が本明細書において提供される。本明細書において提供される場合、加齢は大部分の生物の基本的性質であることから、生物学的加齢マーカーまたは加齢の生体マーカーは、生物学的研究において多くの使用を見出すことが予測される。
【０２９４】
暦年齢と生物学的年齢の間には差が存在し得る。いくらかの個体はより急速に老化するが、他の個体は、良い習慣、遺伝子および／または環境的ストレッサーの欠如に起因して、よりゆっくり老化し、より長く健康的にかつ「若々しく」する。その生物学的年齢を追跡することができることにより、生活様式を改変するのに役立つか（ボディーマス指数を追跡することに類似する）、またはアンチエイジングの手順を展開するのに役立つ場合がある。
【０２９５】
加齢マーカーによる生物学的年齢の正確な測定は、（ｉ）種々の年齢に関連する疾患を診断すること、およびがんのサブタイプを定義するために、（ｉｉ）種々の疾患の開始を予測すること／予後予測すること、ならびに（ｉｉｉ）若返りのアプローチを含む治療介入を評価するための代用マーカーとしての役割を果たすことなどの、生物学的加齢についての加齢性の疾患の理論を試験するのに有用である。
【０２９６】
一般に、生物学的加齢の検出のための方法は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の直接的検出を伴う。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の直接的検出に関しては、その方法は概して、（ａ）その個体の生物学的サンプルとＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体とを接触させる工程；および（ｂ）その抗体に結合するそのサンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原の濃度を決定する工程を包含し、ここでコントロールに対するその濃度の増大は、その生物学的サンプルが、生物学的加齢を経験した個体に由来することを示す。いくつかの実施形態において、その濃度における変化は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値に対して相対的である。
【０２９７】
Ｉ．  診断用キットおよび製造物品
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２の検出に有用なキットが本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、そのキットは、本明細書に記載される１種またはこれより多くのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を含む。ある種の実施形態において、抗体。さらに、そのキットは、必要に応じて、本明細書に記載される方法のうちのいずれかを実施するための説明資料を含み得る。その説明資料は、代表的には、書面によるまたは印刷された資料を含むが、このようなものに限定されない。このような説明書を保存し、これらをエンドユーザーに伝えることができる任意の媒体が本明細書において企図される。このような媒体としては、電子保存媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ  ＲＯＭ）などが挙げられるが、これらに限定されない。このような媒体は、このような説明資料を提供するインターネットサイトへのアドレスを含み得る。
【０２９８】
そのキットは、そのキットがデザインされる特定の適用を容易にするために、さらなる構成要素をも含んでいてもよい。したがって、例えば、キットが標識されている抗Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を含む場合、そのキットは、標識を検出するための試薬（例えば、酵素標識のための酵素基質、蛍光標識を検出するためのフィルターセット、適切な二次標識など）をさらに含んでいてもよい。そのキットは、特定の方法の実施のために慣用的に使用される緩衝液および他の試薬をさらに含んでもよい。
【０２９９】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を検出するイムノアッセイにおいて有用な例示的なキットは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドを含み得る。このペプチドは、例えば、陽性コントロールとしてまたは競合的イムノアッセイにおいて競合物質として使用され得、そのアッセイが行われるフォーマットに依存して、標識されてもよいし、標識されなくてもよい。
【０３００】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を検出するイムノアッセイにおいて有用な別の例示的なキットは、抗Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチドに加えて、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を含み得る。この抗体は、例えば、陽性コントロールとしてまたは競合的イムノアッセイにおいて競合物質として使用され得、そのアッセイが行われるフォーマットに依存して、標識されてもよいし、標識されなくてもよい。
【０３０１】
皮下の標的Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質およびペプチドの濃度を測定するための経皮パッチがまた、本明細書で提供され、そのパッチは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を含む基材、および複数のマイクロニードルを含む。いくつかの実施形態において、そのパッチは、経皮マイクロニードルアレイパッチである。いくつかの実施形態において、そのパッチの基材は、弾性的に伸縮性である。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体またはペプチドを含むパッチ、および必要に応じて使用についての指示を含むキットが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、そのパッチは、複製老化、ＤＮＡ損傷、遺伝毒性ストレス、放射線曝露、およびアルツハイマー病を検出する目的で、生物学的サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を検出およびその濃度を測定するために有用であり、治療レジメンをモニターするために有用であり、薬物スクリーニングに有用である。
【０３０２】
検出のための、例えば、ＤＮＡ損傷または放射線曝露の検出のための携帯式ユニットがまた、本明細書で提供される。そのユニットは、サンプル収集ユニット、読み取り機、およびＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を含むアッセイモジュールを含み得る。
【０３０３】
分析物のラテラルフローアッセイに適したラテラルフローストリップまたは試験ストリップがまた、本明細書で提供され、そのストリップは、サンプル受容ゾーンを含み、ここでそのサンプル受容ゾーンは、いずれかのＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、標識に結合体化される。
【０３０４】
挙げられる実施形態
本発明は、以下の挙げられる例示的な実施形態への言及によって規定され得る。
【０３０５】
実施形態１．  Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体であって、ここで上記抗体の抗原結合ドメインは、
−表４のＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；
−表５のＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；および
−表６のＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列のうちのいずれか１つ
を含む、抗体。
【０３０６】
実施形態２．  Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体であって、ここで上記抗体の抗原結合ドメインは、
−表７のＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；
−表８のＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つ；および
−表９のＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列のうちのいずれか１つ、
を含む、抗体。
【０３０７】
実施形態３．  Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体であって、ここで上記抗体の抗原結合ドメインは、表４、表５、および表６のＣＤＲ−Ｌアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含み、表７、表８、および表９のＣＤＲ−Ｈアミノ酸配列のいずれか１つを含む、抗体。
【０３０８】
実施形態４．  上記抗体の抗原結合ドメインは、
−配列番号１０または配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
−配列番号１４または配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；および
−配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、
を含む、実施形態１に記載の抗体。
【０３０９】
実施形態５．  上記抗体の抗原結合ドメインは、
−配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２または配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
−配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０または配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；および
−配列番号３６または配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、
を含む、実施形態１に記載の抗体。
【０３１０】
実施形態６．  Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体であって、ここで上記抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を含む、抗体。
【０３１１】
実施形態７．  Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体であって、ここで上記抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含む、抗体。
【０３１２】
実施形態８．  Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体であって、ここで上記抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を含む、抗体。
【０３１３】
実施形態９．  上記抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態８に記載の抗体。
【０３１４】
実施形態１０．  上記抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む、実施形態８に記載の抗体。
【０３１５】
実施形態１１．  上記抗体は、キメラであるかまたはヒト化されている、実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の抗体。
【０３１６】
実施形態１２．  上記抗体はモノクローナル抗体である、実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の抗体。
【０３１７】
実施形態１３．  上記抗体は抗原結合フラグメントである、実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の抗体。
【０３１８】
実施形態１４．  上記抗体は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドが、Ｋ１８０以外のメチル化されている残基を含む場合に、上記Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドへの低減した結合を示す、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の抗体。
【０３１９】
実施形態１５．  上記Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドが、ヒトヒストンＨ１．０タンパク質のＫ１６６、Ｋ１７２、Ｋ１７４、Ｋ１７５、および／またはＫ１７７に相当するリジン残基においてメチル化リジン残基を含む場合に、上記抗体は、結合しないか、または最小限にしか結合しない、実施形態１〜１４のいずれか１つに記載の抗体。
【０３２０】
実施形態１６．  上記抗体は、標識に結合体化されている、実施形態１〜１５のいずれか１つに記載の抗体。
【０３２１】
実施形態１７．  上記抗体は、固体表面に付着される、実施形態１６に記載の抗体。
【０３２２】
実施形態１８．  上記抗体は、ビーズ、カラム、樹脂、またはマイクロプレートに付着される、実施形態１７に記載の抗体。
【０３２３】
実施形態１９．  上記抗体は薬剤に結合体化される、実施形態１〜１５のいずれか１つに記載の抗体。
【０３２４】
実施形態２０．  上記薬剤は、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫モジュレーター、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、および第２の抗体からなる群より選択される、実施形態１９に記載の抗体。
【０３２５】
実施形態２１．  個体がアルツハイマー病を有するか、その発症リスクにあるか否かを決定するための方法であって、上記方法は、
−上記個体の生物学的サンプルと実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の抗体とを接触させる工程；および
−上記抗体に結合する上記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度を決定する工程であって、ここでコントロールに対する上記濃度の減少は、上記個体がアルツハイマー病を有するか、その発症リスクにあることを示す工程、
を包含する、方法。
【０３２６】
実施形態２２．  上記個体がアルツハイマー病を有するか、その発症リスクにあることが決定された場合、上記個体を、アルツハイマー病の薬物またはレジメンで処置する工程をさらに包含する、実施形態２１に記載の方法。
【０３２７】
実施形態２３．  アルツハイマー病と診断され、上記アルツハイマー病のための処置を受けている個体が、上記処置から利益を受けるか、または上記処置から利益を受け続けるか否かを決定するための方法であって、上記方法は、
−上記個体の生物学的サンプルと実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の抗体とを接触させる工程；および
−上記抗体に結合する上記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度を決定する工程；および
−コントロールに対する上記濃度の増大が存在する場合、上記個体が、上記処置から利益を受けるか、または上記処置から利益を受け続けることを決定する工程、
を包含する、方法。
【０３２８】
実施形態２４．  上記個体が上記処置から利益を受けるか、または上記処置から利益を受け続けることが決定される場合、上記個体を、アルツハイマー病の薬物またはレジメンで処置する工程をさらに包含する、実施形態２３に記載の方法。
【０３２９】
実施形態２５．  アルツハイマー病と診断された個体が、候補処置から利益を受けるか否かを決定するための方法であって、ここで上記個体は上記処置を未だ開始しておらず、上記方法は、
−上記個体に候補処置を投与する工程；
−上記候補処置の投与後の上記個体の生物学的サンプルと、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の抗体とを接触させる工程；および
−上記抗体に結合する上記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度および／または細胞内局在を決定する工程；ならびに
−コントロールに対する上記濃度の増大または細胞質の細胞内局在の減少が存在する場合、上記個体が、上記候補処置から利益を受けることを決定する工程、
を包含する、方法。
【０３３０】
実施形態２６．  アルツハイマー病と診断された個体が、候補処置から利益を得られるか否かを決定するための方法であって、ここで上記個体は上記処置を未だ開始しておらず、上記方法は、
−上記個体の生物学的サンプルと候補処置とを接触させる工程；
−上記個体の生物学的サンプルと実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の抗体とを接触させる工程；
−上記抗体に結合する上記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度および／または細胞内局在を決定する工程；ならびに
−コントロールに対する上記濃度の増大またはコントロールに対する細胞質の細胞内局在の減少が存在する場合、上記個体が、上記候補処置から利益を受けることを決定する工程、
を包含する、方法。
【０３３１】
実施形態２７．  上記処置は、ＡＰＰ合成インヒビター、β−セクレターゼインヒビター、γ−セクレターゼインヒビターおよびモジュレーター、Ａβ凝集インヒビター、Ａβ免疫療法、コレステロール低下薬、抗タウ薬、コリンエステラーゼインヒビター、Ｎ−メチルＤ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト、非定型抗精神病薬、プロテインＳニトロシル化の遮断薬、グルカゴン様ペプチド−１レセプターアゴニスト、ラパマイシン、ラパログ、エンドカンナビノイド、カンナビノイド、神経保護因子、カルシウム流入を制御する分子、抗酸化剤、抗炎症薬、グルタミン酸ホメオスタシス制御を制御する薬物、オートファジー誘導因子、ホルモン、ホルモン調節因子、スタチン、インスリン、インスリンキャリア、多官能性ナノキャリア、ビタミン、栄養補助剤、小型ＲＮＡ分子、ペプチド、および超音波療法からなる群より選択される、実施形態２５〜２６のいずれか１つに記載の方法。
【０３３２】
実施形態２８．  個体がＤＮＡ損傷因子に曝されているか否かを決定するための方法であって、上記方法は、
−上記個体の生物学的サンプルと実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の抗体とを接触させる工程；および
−上記抗体に結合する上記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度を決定する工程であって、ここでコントロールに対する上記濃度の増大は、上記個体がＤＮＡ損傷因子に曝されていることを示す工程、
を包含する、方法。
【０３３３】
実施形態２９．  上記ＤＮＡ損傷因子は放射線である、実施形態２８に記載の方法。
【０３３４】
実施形態３０．  ラパログでの処置を受けている個体が、このような処置に応答するか否かを決定するための方法であって、上記方法は、
−上記個体の生物学的サンプルと、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の抗体とを接触させる工程；
−上記抗体に結合する上記サンプル中のＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドの濃度を決定する工程；および
−上記個体が処置に応答するか否かを決定する工程であって、ここでコントロールに対する上記濃度の減少は、上記個体が応答することを示す工程、
を包含する、方法。
【０３３５】
実施形態３１．  上記減少は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値を下回る、実施形態３０に記載の方法。
【０３３６】
実施形態３２．  上記ラパログは、ラパマイシン、シロリムス、ラパミューン、エベロリムス、ＲＡ  ００１、アフィニトール、Ｚｏｒｔｒｅｓｓ、テムシロリムス、ＣＣＩ−７７９、トーリセル、リダフォロリムス、ＡＰ２３５７３、ＭＫ−８６６９、デフォロリムス、ゾタロリムス、ＡＢＴ−５７８、ＡＺＤ８０５５、ＡＺＤ２０１４、ＯＳＩ−０２７、ＭＬＮ０１２８、ＷＹＥ−１３２、Ｔｏｒｉｎ１、ＰＩ−１０３、Ｐ７１７０、ＰＦ−０４６９１５０２、ＰＦ−０５２１２３８４、ＰＫＩ−５８７、ＧＮＥ４７７、ＰＫＩ−１８０、ＷＪＤ００８、ＸＬ７６５、ＳＡＲ２４５４０９、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、ＢＧＴ２２６、ＳＦ１１２６、ＧＳＫ２１２６４５８、Ｋｕ−００６３７９４、ＷＹＥ−３５４、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、ＰＦ−０５２１２３８４、ＸＬ７６５、Ｔｏｒｉｎ  ２、ＷＹＥ−１２５１３２、およびＯＳＩ−０２７からなる群より選択される、実施形態３０に記載の方法。
【０３３７】
実施形態３３．  上記濃度の増大または減少は、最適な特異度および感度に関する受診者動作特性曲線分析によって確立される閾値を上回るかまたは下回る、実施形態２１〜３２のいずれか１つに記載の方法。
【０３３８】
実施形態３４．  上記生物学的サンプルは、全血、血漿、血清、唾液、尿、滑液、脳脊髄液、気管支洗浄物、腹水、骨髄吸引物、胸水、組織、細胞、生検材料、間質液、およびリンパ液からなる群より選択される、実施形態２１〜３３のいずれか１つに記載の方法。
【０３３９】
実施形態３５．  皮下標的分子の濃度を測定するための経皮パッチであって、上記パッチは、
−実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の抗体を含む基材；および
−複数のマイクロニードル、
を含む、パッチ。
【０３４０】
実施形態３６．  上記パッチは、経皮マイクロニードルアレイパッチである、実施形態３５に記載のパッチ。
【０３４１】
実施形態３７．  上記基材は弾性的に伸縮性である、実施形態３５に記載のパッチ。
【０３４２】
実施形態３８．  個体が放射線またはＤＮＡ損傷因子に曝露されているか否かを決定するための携帯式ユニットであって、上記ユニットは、
−サンプル収集ユニット；
−読み取り機；
−実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の抗体を含むアッセイモジュール；および
−複数のマイクロニードル、
を含む、ユニット。
【０３４３】
実施形態３９．  分析物のラテラルフローアッセイに適した試験ストリップであって、上記ストリップは、サンプル受容ゾーンを含み、ここで上記該サンプル受容ゾーンは、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の抗体を含む、試験ストリップ。
【０３４４】
実施形態４０．  個体においてメチル化Ｈ１．０関連疾患または状態を処置するための方法であって、上記方法は、上記個体に、治療上有効な量の実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の抗体を投与する工程を包含する、方法。
【０３４５】
実施形態４１．  上記疾患または状態は、アルツハイマー病、放射線曝露、遺伝毒性ストレッサーへの曝露、老化細胞の蓄積を含む疾患または状態、およびＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２タンパク質またはペプチドの上昇したレベルが付随する疾患または状態からなる群より選択される、実施形態４０に記載の方法。
【０３４６】
実施形態４２．  個体においてＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を取り除くための方法であって、上記方法は、上記個体に、治療上有効な量の実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の抗体を投与する工程を包含する、方法。
【０３４７】
実施形態４３．  上記個体は、アルツハイマー病、放射線曝露、遺伝毒性物質への曝露、ＤＮＡ損傷因子への曝露、および老化細胞の蓄積を含む状態からなる群より選択される疾患または状態に罹患している、実施形態４２に記載の方法。
【０３４８】
実施形態４４．  実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の抗体、および薬学的に受容可能な賦形剤を含む、薬学的組成物。
【０３４９】
実施形態４５．  治療上有効な量の実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の抗体のうちのいずれか１つを含むキット。
【０３５０】
実施形態４６．  実施形態１〜２０、および３５〜４５に記載の組成物のうちのいずれか１つを含む、製造物品。
【０３５１】
実施形態４７．  配列番号４の核酸を含む、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体をコードする、ベクター。
【０３５２】
実施形態４８．  配列番号５の核酸を含む、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原を含むタンパク質またはそのペプチドに特異的に結合する抗体をコードする、ベクター。
【０３５３】
実施形態４９．  実施形態４７〜４８のいずれか１つに記載のベクターを含む、細胞。
【０３５４】
以下の実施例は、例証目的で含まれ、本発明の範囲を限定することは意図されない。
【実施例】
【０３５５】
実施例１：  組換え抗体開発パイプライン
図１に示される抗体開発パイプラインを、４つの段階（段階Ｉ〜ＩＶ）に分けた。段階Ｉでは、２羽のＮｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄウサギを、抗体生成のために免疫化した。完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）または不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中で、キーホールリンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）結合体化Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチド（ＫＬＨ−ＣＡＫＰＶＫＡＳＫＰＫＫＡＫＰＶＫ（ｍｅ２）ＰＫ（配列番号７２））のエマルジョンとして、注射を皮下投与した（ＳＱ）。初回免疫化を、１０箇所のＳＱ部位において、ＣＦＡ中の０．５ｍｇの抗原（（ＫＬＨ）結合体化Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチド）で行った。６回のその後のブースター免疫化を、１０〜１１週間の期間にわたる慣用的な間隔で行った。ブースターは、４箇所のＳＱ部位におけるＩＦＡ中の０．２５ｍｇ抗原からなった。ウサギから、６週間目および８週間目に採血した。その免疫化の力価を、免疫化前および免疫化後の採血を比較することによってＥＬＩＳＡを使用して評価した。その免疫化した抗原に対して適切なＥＬＩＳＡ陽性力価が一旦記録されたら、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、一方または両方のウサギから集めた。Ｂ細胞を、その後、ウサギｌｇＧのみを確実にする二重スクリーニングプロトコルを使用するフローサイトメトリー選別によって単離し、抗原特異的Ｂ細胞を単離した。
【０３５６】
段階ＩＩの間に、全ＲＮＡを、その選別した抗原陽性Ｂ細胞から単離した。これに続いて、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）によって１本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）表面ディスプレイライブラリーを作製した。このｓｃＦｖライブラリーは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２抗原に結合し得るウサギＩｇＧ抗体の可変ドメイン領域全てを示す。
【０３５７】
段階ＩＩＩは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に対するライブラリーの特異性を増大させる多数回のライブラリースクリーニングからなった。これを、パニングおよびフローサイトメトリーによって行って、非メチル化Ｈ１．０ペプチド（ビオチン−ＣＡＫＰＶＫＡＳＫＰＫＫＡＫＰＶＫＰＫ（配列番号７４））に対して特異性を示すｓｃＦｖドメインを選択しないようにすると同時に、ビオチン結合体化Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチド（ビオチン−ＣＡＫＰＶＫＡＳＫＰＫＫＡＫＰＶＫ（ｍｅ２）ＰＫ（配列番号７３））に対して最高の特異性を示すｓｃＦｖドメインを単離した。
【０３５８】
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に対して最高の特異性を有するｓｃＦｖドメインを、段階ＩＶに移行する前に、サンガー配列決定法によって配列決定した。段階ＩＶの間に、全長ＩｇＧ重鎖および軽鎖クローンを、そのｓｃＦｖドメインを組み込んで生成し、続いて、競合する全長組換えウサギモノクローナルＩｇＧ抗体を発現させた。次いで、これらの抗体を、ＥＬＩＳＡ、スロットブロットイムノアッセイ、およびウェスタンブロットを使用して、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に対する特異性に関して検証した。合計で、５つの別個の抗体クローンを作製し、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に対するそれらの特異性の順に、以下のＡ〜Ｆまで選別した：
クローンＡ（ＲＷ２４）
クローンＢ（ＲＷ６）
クローンＣ（ＲＷ３７）
クローンＤ（ＲＷ２８）
クローンＥ（ＲＷ３６）
【０３５９】
段階Ｉ〜ＩＶを、以下の表１１にまとめる。
【表１１】
2021500893.tif 000015
【０３６０】
実施例２：  ＥＬＩＳＡによるウサギ抗体クローンの抗体力価の分析
Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチドに対するその組換えウサギ抗Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２モノクローナルＩｇＧ抗体クローンの特異性を、図２ＡにおいてＥＬＩＳＡを使用して決定した。ウェルを、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチドで被覆した；５０μｌのペプチド溶液（５ｕｇ／ｍｌ）を使用して、各ウェルを被覆した。１００μｌの各クローン抗体を、２×希釈系列においてウェルに添加した。各ペプチドの曲線を、４５０ｎｍで測定されたＯ．Ｄに対して抗体濃度をプロットすることによって生成した。その種々のクローンの結合効率を直接比較するために、クローン力価測定曲線（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ  ｃｕｒｖｅ）の各々の直線範囲で交わる閾値カットオフを選択した（Ｏ．Ｄ．  １．５での水平の破線）。その閾値Ｏ．Ｄに交わるために必要とされる抗体の濃度を、各クローンについて比較し、図の凡例で示した。クローンＡ（ＲＷ２４）は、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチドに対して最高の結合親和性を有する。
【０３６１】
非改変Ｈ１．０ペプチドに対するその抗体クローンの非特異的結合も、図２Ｂに示されるようにＥＬＩＳＡによって決定した。クローンＤ（ＲＷ２８）およびＥ（ＲＷ３６）はともに、非改変Ｈ１．０ペプチドに高い親和性で結合した。上記で計算した閾値濃度では、クローンＡ（ＲＷ２４）は、非改変Ｈ１．０ペプチドよりＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ペプチドの結合において、２０×効率が高かった。クローンＢ（ＲＷ６）：  ２３×、クローンＣ（ＲＷ３７）：  ２２×、クローンＤ（ＲＷ２８）：  ２×、クローンＥ（ＲＷ３６）：  ５×。
【０３６２】
図２Ｃは、図２Ａおよび２ＢのＥＬＩＳＡプロット生成のための生データを提供する。
【０３６３】
実施例３：  スロットブロットによるウサギ抗体クローンの特異性の分析
上記で生成した組換えウサギ抗Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２モノクローナルＩｇＧ抗体クローンの特異性を、図３に示されるようにスロットブロット分析を使用して決定した。ヒストンＨ１．０ペプチド（非改変、Ｋ１８０ｍｅ１、Ｋ１８０ｍｅ２）を、希釈系列（１００ｐｍｏｌ、５０ｐｍｏｌ、２５ｐｍｏｌ）において真空マニホールドスロットブロットを使用して、膜へ転写した。次いで、その膜を、その抗体クローンを使用して免疫ブロットして、非改変またはモノメチル化Ｈ１．０ペプチドとの潜在的な交差反応性を同定した。クローンＡ、ＢおよびＣは、低濃度であってもＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に対して特異性が高かった。非改変またはＨ１．０Ｋ１８０ｍｅ１ペプチドのいずれに対しても、これらのクローンについては、交差反応性は認められなかった。クローンＤおよびＥはともに、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に加えて、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ１ペプチドを検出できた。これは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２に対する抗体特異性の欠如を示唆する。
【０３６４】
実施例４：  インビトロでのメチル化Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２による抗体クローンの特異性の分析
図４Ａは、インビトロメチル化アプローチの概観を示す。そのメチル化反応は、組換えＧ９Ａ（メチルトランスフェラーゼ）、非標識メチルドナー（Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン）、および組換えヒトＨ１．０タンパク質を含み、これらを、３７℃で１時間インキュベートした。このインキュベーションの間に、Ｇ９Ａは、Ｋ１８０ｍｅ２の追加を含め、全長Ｈ１．０タンパク質をメチル化し得る。Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２をその後、抗Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ウサギポリクローナル抗体を使用して同定して、メチル化を確認し得る。
【０３６５】
全長Ｈ１．０タンパク質上でのＧ９Ａによるメチル化の正確な位置を同定するために、上記の反応をその後、ＬＣ−ＭＳによって分析し、メチル化部位を同定した。図４Ｂは、全長Ｈ１．０タンパク質の配列を示し、「ｍｅ」の丸の数は、リジン残基のメチル化状態（モノメチル化またはジメチル化）を表す。組換え全長Ｈ１．０の存在下では、Ｇ９Ａは、Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２を含め、いくつかのＣ末端リジン残基を特異的にメチル化する。
【０３６６】
図４Ｃは、漸増量のＧ９Ａでの組換え全長ヒストンＨ１．０のインビトロメチル化アッセイ、およびウサギ抗Ｈ１．０Ｋ１８０ｍｅ２ポリクローナル抗体での検出を示す。上のパネルは、Ｇ９Ａ濃度の増大とともに増大したＨ１．０Ｋ１８０メチル化を示す。
【０３６７】
図４Ｄは、インビトロメチル化Ｈ１．０に対するクローン特異性の分析を示す。クローンＡは、Ｇ９Ａタンパク質の非存在下で非メチル化全長Ｈ１．０への最小限の非特異的結合で、インビトロメチル化Ｈ１．０を認識し得る。全ての他のクローンは、非メチル化Ｈ１．０を認識し、メチル化全長Ｈ１．０に対して特異性を示さない。
【０３６８】
実施例５：  クローンＡ（ＲＷ２４）およびＢ（ＲＷ６）の配列分析
目的のクローンを配列決定した。
【０３６９】
図５Ａは、クローンＡおよびＢの重鎖可変ドメインタンパク質配列のＥＭＢＯＳＳ  ＮＥＥＤＬＥ（Ｌｉ  Ｗ．  Ｔｈｅ  ＥＭＢＬ−ＥＢＩ  ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ｗｅｂ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒａｍｍａｔｉｃ  ｔｏｏｌｓ  ｆｒａｍｅｗｏｒｋ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ［０６  Ａｐｒ  ２０１５，  ４３（Ｗ１）：Ｗ５８０−４）ペアワイズ配列アラインメントである。その重鎖配列は、６１％同一性および７０％類似性を共有する。
【０３７０】
図５Ｂは、クローンＡおよびＢの軽鎖可変ドメインタンパク質配列のＥＭＢＯＳＳ  ＮＥＥＤＬＥのペアワイズ配列アラインメントである。その軽鎖配列は、８３％同一性および８８％類似性を共有する。
【０３７１】
図５Ｃは、クローンＡ（ＲＷ２４）に関する軽鎖および重鎖可変ドメインのＤＮＡおよびタンパク質の配列を提供する。
【０３７２】
図５Ｄは、全長組換えＩｇＧ抗体を作製するために可変ドメインＤＮＡ配列を組み込む全長軽鎖および重鎖の発現ベクターの構築の１つの方法の模式図である。
【０３７３】
実施例６：  Ｃｈｏｔｈｉａ予測ソフトウェアを用いたクローンＡ重鎖のフレームワークおよびＣＤＲ領域のマッピング
Ｃｈｏｔｈｉａ（抗体の構成を予測するプログラム）を用いたクローンＡ重鎖およびクローンＡ軽鎖の分析が、図７Ａおよび７Ｂ（左パネル）に示される。その重鎖または軽鎖の各残基を、上のボックスの中に示し、残基番号を、各々の相当する残基の下のボックスの中にＣｈｏｔｈｉａによって割り当てる。クローンＡ重鎖または軽鎖の予測フレームワーク領域が、薄い灰色で示される。予測ＣＤＲが濃い灰色で示される。星は、予測ＣＫ２リン酸化部位を示す。矢印は、各位置の通常でない残基を示す。
【０３７４】
図７Ｂ（右パネル）は、行われた全てのＣｈｏｔｈｉａ予測に関して位置Ｌ１にあると推測された残基分布を示す。クローンＡ軽鎖の例では、Ｌ１位置はアスパラギン酸である。これは、位置Ｌ１にあると推測される全てのアミノ酸に関して最高の相対的頻度を有する。
【０３７５】
図７Ｃは、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、およびＣｏｎｔａｃｔアルゴリズム／番号付けスキームを使用する、抗体クローンＡの予測軽鎖相補性決定領域およびフレームワーク領域を示す。
【０３７６】
図７Ｄは、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、およびＣｏｎｔａｃｔアルゴリズム／番号付けスキームを使用する、抗体クローンＡの予測重鎖相補性決定領域およびフレームワーク領域を示す。
【図１】
2021500893.tif 000016
【図２−１】
2021500893.tif 000017
【図２−２】
2021500893.tif 000018
【図２−３】
2021500893.tif 000019
【図３】
2021500893.tif 000020
【図４−１】
2021500893.tif 000021
【図４−２】
2021500893.tif 000022
【図４−３】
2021500893.tif 000023
【図４−４】
2021500893.tif 000024
【図５−１】
2021500893.tif 000025
【図５−２】
2021500893.tif 000026
【図５−３】
2021500893.tif 000027
【図５−４】
2021500893.tif 000028
【図６】
2021500893.tif 000029
【図７−１】
2021500893.tif 000030
【図７−２】
2021500893.tif 000031
【図７−３】
2021500893.tif 000032
【図７−４】
2021500893.tif 000033
【図８】
2021500893.tif 000034
【図９−１】
2021500893.tif 000035
【図９−２】
2021500893.tif 000036
【図１０−１】
2021500893.tif 000037
【図１０−２】
2021500893.tif 000038
【図１０−３】
2021500893.tif 000039
【図１１−１】
2021500893.tif 000040
【図１１−２】
2021500893.tif 000041
【図１２】
2021500893.tif 000042
【図１３−１】
2021500893.tif 000043
【図１３−２】
2021500893.tif 000044
【図１４】
2021500893.tif 000045
【配列表】
2021500893000001.app
【国際調査報告】
2021500893.tif 000046
2021500893.tif 000047
2021500893.tif 000048
2021500893.tif 000049
2021500893.tif 000050