(57)【要約】  完全ヒト翻訳後修飾治療用モノクローナル抗体、およびその抗原結合性断片を送達するための方法および組成物が提供される。完全ヒト翻訳後修飾治療用モノクローナル抗体は、遺伝子治療法により、特に、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターとして、適切な組織に送達されると好ましい場合がある。ＡＡＶベクターの製造法、医薬組成物、および処置法も提供される。加えて、「バイオベター」である治療用抗体を完全ヒト翻訳後修飾治療用抗体として作製する方法が提供される。これらの完全ヒト翻訳後修飾治療用抗体は、治療用抗体による処置を必要とする対象に投与することができる。【選択図】図１
2021501196.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とするヒト対象におけるアルツハイマー病、偏頭痛、群発頭痛、または慢性外傷性脳症、進行性核上性麻痺、および前頭側頭型認知症を含むタウオパチーを処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ９カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶｒｈ１０（配列番号８０）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒトＣＮＳ細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗アミロイドベータｍＡｂ、抗タウｍＡｂ、もしくは抗ＣＧＲＰＲ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を有するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象のＣＮＳへの髄腔内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項２】
前記抗アミロイドβ  ｍＡｂが、アデュカヌマブ、クレネズマブ、ＢＡＮ２４０１、またはガンテネルマブであり、前記抗タウｍＡｂが、ａＴＡＵであり、前記抗ＣＧＲＰＲが、エレヌマブ、エプチネズマブ、フレマネズマブ、またはガルカネズマブである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
それを必要とするヒト対象における乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、またはクローン病を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＩＬ１７Ａ  ｍＡｂもしくは抗ＩＬ１２／ＩＬ２３  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項４】
前記抗ＩＬ１７Ａ  ｍＡｂまたは抗ＩＬ１２／ＩＬ２３  ｍＡｂが、イキセキズマブ、セクキヌマブ、またはウステキヌマブである、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
それを必要とするヒト対象における多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、またはクローン病を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）、ＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）、またはＡＡＶｒｈ１０（配列番号８０）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内、ヒト筋細胞内、またはヒトＣＮＳ細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗インテグリンｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために、または前記対象のＣＮＳへの髄腔内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項６】
前記抗インテグリンｍＡｂが、ベドリズマブまたはナタリズマブである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
それを必要とするヒト対象におけるアトピー性皮膚炎を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＩＬ４Ｒ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項８】
前記抗ＩＬ−４Ｒ  ｍＡｂが、デュピルマブである、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
それを必要とするヒト対象における喘息を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＩＬ−５  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項１０】
前記抗ＩＬ−５  ｍＡｂが、メポリズマブである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
それを必要とするヒト対象におけるＨｅＦＨ、ＨｏＦＨ、脂質異常症、アテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＣＤ）を含む心血管疾患、アテローム性動脈硬化性プラーク形成、非ＨＤＬコレステロールおよびＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、または高コレステロール血症を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＰＣＳＫ９  ｍＡｂ、抗ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＡｂ、抗ＯｘＰＬ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項１２】
前記抗ＰＣＳＫ９  ｍＡｂもしくは抗ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＡｂが、アリロクマブ、エボロクマブ、もしくはエビナクマブであるか、または前記抗ＯｘＰＬが、Ｅ０６である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
それを必要とするヒト対象における骨粗鬆症を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＲＡＮＫＬ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項１４】
前記抗ＲＡＮＫＬ  ｍＡｂが、デノスマブである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
それを必要とするヒト対象における転移性黒色腫、リンパ腫、または非小細胞肺癌を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、ＰＤ−１遮断剤ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項１６】
前記ＰＤ−１遮断剤ｍＡｂが、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
それを必要とするヒト対象における全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＢＬｙＳ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項１８】
前記抗ＢＬｙＳ  ｍＡｂが、ベリムマブである、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
それを必要とするヒト対象における加齢黄斑変性を含む眼障害を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト網膜細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ、抗ＭＭＰ９  ｍＡｂ、もしくは抗ｆＤ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の眼への、網膜下投与、硝子体内投与、または脈絡膜上投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項２０】
前記抗ＭＭＰ９が、アンデカリキシマブであり、前記抗ＶＥＧＦが、ラニビズマブ、ベバシズマブ、ブロルシズマブであり、抗ｆＤ  ｍＡｂが、ランパリズマブである、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
それを必要とするヒト対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）、関節リウマチ（ＲＡ）、ＵＣ、ＣＤ、固形腫瘍、膵臓腺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、食道胃腺がん、胃がん、結腸直腸がん、または乳がんを処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＭＭＰ９またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項２２】
前記抗ＭＭＰ９  ｍＡｂが、アンデカリキシマブである、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
それを必要とするヒト対象における遺伝性血管浮腫を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト筋細胞内またはヒト肝細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗カリクレインまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項２４】
前記抗カリクレインｍＡｂが、ラナデルマブである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
それを必要とするヒト対象における関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、尋常性乾癬、または潰瘍性大腸炎を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト筋細胞内またはヒト肝細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＴＮＦ−アルファｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項２６】
前記抗ＴＮＦ−アルファｍＡｂが、アダリムマブまたはインフリキシマブである、請求項２５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
０．配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットにおいて、電子的に提出され、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる配列表を含有する。２０１８年１０月１７日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、２６１１５＿１０５００４＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、４００，１８５バイトのサイズである。
【０００２】
１．序説
完全ヒト翻訳後修飾（ＨｕＰＴＭ）治療用モノクローナル抗体（「ｍＡｂ」）、または治療用ｍＡｂのＨｕＰＴＭ抗原結合性断片（例えば、治療用ｍＡｂの完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）Ｆａｂ）を、治療用ｍＡｂによる処置の適応がある疾患または状態と診断されたヒト対象に送達するための、組成物および方法について記載する。
【背景技術】
【０００３】
２．発明の背景
治療用ｍＡｂは、多数の疾患および状態の処置において、有効であることが示されている。しかし、これらの薬剤が有効であるのはごく短時間であるため、長期間にわたる反復注射が必要とされ、これにより、患者に対する大きな処置負荷をもたらすことが多い。
【発明の概要】
【０００４】
３．発明の概要
ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは治療用ｍＡｂのＨｕＰＴＭ抗原結合性断片（例えば、治療用ｍＡｂの完全ヒトグリコシル化Ｆａｂ（ＨｕＧｌｙＦａｂ））を、治療用ｍＡｂによる処置の適応がある疾患または状態と診断された患者（ヒト対象）に送達するための、組成物および方法について記載する。治療用ｍＡｂの、このような抗原結合性断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖ（単鎖可変断片）（本明細書では、「抗原結合性断片」と総称される）を含む。本明細書で使用される「ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ」は、ｍＡｂの、他の抗原結合性断片を含みうる。代替的な実施形態では、全長ｍＡｂを使用することもできる。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、治療用ｍＡｂまたはその抗原結合性断片（またはいずれかの高グリコシル化誘導体）をコードする、ウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、治療用ｍＡｂによる処置の適応がある状態と診断された患者（ヒト対象）に投与して、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは治療用ｍＡｂの抗原結合性断片、すなわち、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を、ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、その治療効果を及ぼす標的組織に持続的に供給する恒久的デポを、患者の組織内または臓器内に創出することにより達せられると有利でありうる。
【０００５】
トランス遺伝子によりコードされる、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ抗原結合性断片は、
・アルツハイマー病の処置の適応がある、アデュカヌマブ、クレネズマブ、ガンテネルマブ、およびＢＡＮ２４０１（図２Ａ〜２Ｃおよび２Ｆを参照されたい）を含むがこれらに限定されない、アルツハイマー病に関与する、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）に由来する、アミロイドベータ（ＡβまたはＡベータ）ペプチドを含む、神経系標的に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；タウオパチーを処置するための「ａＴＡＵ」（図２Ｄを参照されたい）を含むがこれらに限定されない、アルツハイマー病、進行性核上性麻痺、前頭側頭型認知症、慢性外傷性脳症、ピック複合、原発性年齢関連タウオパチーを含む、タウオパチーに関与する、タウタンパク質に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；ならびに偏頭痛および群発頭痛を処置するための、エレヌマブ（ＡＩＭＯＶＩＧ（商標））（図２Ｅを参照されたい）、エプチネズマブ、フレマネズマブ、およびガルカネズマブを含むがこれらに限定されない、偏頭痛および群発頭痛に関与するＣＧＲＰ受容体に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；
・アトピー性皮膚炎の処置の適応がある、デュピルマブ（図３Ａを参照されたい）など、ＩＬ４Ｒを含むがこれらに限定されない、インターロイキンまたはインターロイキン受容体に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；尋常性乾癬、乾癬性関節炎、および強直性脊椎炎の処置の適応がある、イキセキズマブ（ＴＡＬＴＺ（登録商標））、またはセクキヌマブ（ＣＯＳＥＮＴＹＸ（登録商標））（図３Ｂおよび３Ｃを参照されたい）など、ＩＬ１７Ａに結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；喘息の処置の適応がある、メポリズマブ（ＮＵＣＡＬＡ（登録商標））（図３Ｄを参照されたい）など、ＩＬ−５に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；ならびに乾癬およびクローン病の処置の適応がある、ウステキヌマブ（ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標））（図３Ｅを参照されたい）など、ＩＬ１２／ＩＬ２３に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；
・潰瘍性大腸炎およびクローン病の処置の適応がある、ベドリズマブ（ＥＮＴＹＶＩＯ（登録商標））（図４Ａを参照されたい）、ならびに多発性硬化症およびクローン病を処置するための、ナタリズマブ（抗インテグリンアルファ４）（図４Ｂを参照されたい）を含むがこれらに限定されない、インテグリンに結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；
・ＨｅＦＨおよびＨｏＦＨの処置の適応がある、アリロクマブ（ＰＲＡＬＵＥＮＴ（登録商標））およびエボロクマブ（ＲＥＰＡＴＨＡ（登録商標））（図５Ａおよび５Ｂを参照されたい）を含むがこれらに限定されない、ＰＣＳＫ９など、高コレステロール血症および心血管疾患の標的に結合する、全長治療用抗体もしくはその抗原結合性断片；またはＨｏＦＨおよび脂質異常症の重度形態の処置の適応がある、エビナクマブ（図５Ｃを参照されたい）を含むがこれらに限定されない、ＡＮＧＰＴＬ３に結合する、全長治療用抗体もしくはその抗原結合性断片；ならびにアテローム性動脈硬化を含む、心血管疾患を処置するための、Ｅ０６−ｓｃＦｖ（図５Ｄを参照されたい）を含むがこれらに限定されない、炎症促進性／アテローム発生促進性リン脂質に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；
・骨粗鬆症の処置、乳がん患者および前立腺がん患者における骨量を増大させること、および骨転移に起因する骨格関連事象を阻止することの適応がある、デノスマブ（ＸＧＥＶＡ（登録商標）およびＰＲＯＬＩＡ（登録商標））（図６を参照されたい）を含むがこれらに限定されない、ＲＡＮＫＬに結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；
・転移性黒色腫、リンパ腫、および非小細胞肺癌の処置の適応がある、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））およびペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））（図７Ａおよび７Ｂを参照されたい）を含むがこれらに限定されない、ＰＤ−１、またはＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２（本明細書では、場合によって、これらの抗体を、ＰＤ−１遮断剤と称する）に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；
・全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の処置の適応がある、ベリムマブ（ＢＥＮＬＹＳＴＡ（登録商標））（図８Ｅを参照されたい）を含むがこれらに限定されない、ＢＬｙＳ（Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）としてもまた公知の、Ｂリンパ球刺激因子）に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；
・新生血管加齢黄斑変性（例えば、「湿性ＡＭＤ」）の処置の適応がある、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、およびブロルシズマブ（図８Ａ、８Ｂ、および８Ｄを参照されたい）を含むがこれらに限定されない、ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）を含むがこれらに限定されない眼標的に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；乾性ＡＭＤを処置するための、ランパリズマブ（図８Ｃを参照されたい）を含むがこれらに限定されない、因子Ｄに結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；ならびに乾性ＡＭＤを処置するための、アンデカリキシマブ（図８Ｇ）を含むがこれらに限定されない、マトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ９）に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；
・関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、尋常性乾癬、および潰瘍性大腸炎の処置の適応がある、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））およびインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））（アダリムマブについての図９Ａ、およびインフリキシマブについての図９Ｂ）を含むがこれらに限定されない、ＴＮＦ−アルファに結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；ならびに
・発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）を有する患者に対する、溶血を軽減する処置、または非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）を有する患者に対する、補体媒介性血栓性微小血管症を阻害する処置のための、エクリズマブ（ＳＯＬＩＲＩＳ（登録商標））などの、抗Ｃ５補体タンパク質および抗Ｃ５ａ補体タンパク質（図８Ｆ）を含むがこれらに限定されない、ヒト補体タンパク質などの血漿タンパク質標的に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；ならびに遺伝性血管浮腫を処置するための、ラナデルマブ（図８Ｈを参照されたい）を含むがこれらに限定されない、血漿カリクレインに結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片；
・あるいはＦａｂドメイン上に、さらなるグリコシル化部位を含有するように操作された、ｍＡｂまたは抗原結合性断片（例えば、全長抗体のＦａｂドメイン上で高グリコシル化させた抗体の誘導体についてのその記載については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112を参照されたい）
を含みうるがこれらに限定されない。
【０００６】
トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターは、非複製型組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含む。しかし、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、または「ネイキッドＤＮＡ」構築物と称する、非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに限定されない、他のウイルスベクターも使用することができる。トランス遺伝子の発現は、構成的発現制御エレメントまたは組織特異的発現制御エレメントにより制御することができる。
【０００７】
重鎖および軽鎖の両方を発現させるように、遺伝子治療構築物をデザインする。重鎖および軽鎖のコード配列は、個別の重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドを発現させるように、重鎖および軽鎖を、切断型リンカーまたはＩＲＥＳで隔てられた、単一の構築物内で操作することができる。ある特定の実施形態では、コード配列は、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖをコードする。他の実施形態では、構築物は、重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとを、可撓性の非切断型リンカーを介して接続したｓｃＦｖを発現させる。ある特定の実施形態では、構築物は、Ｎ末端から、ＮＨ２−ＶＬ−リンカー−ＶＨ−ＣＯＯＨまたはＮＨ２−ＶＨ−リンカー−ＶＬ−ＣＯＯＨを発現させる。
【０００８】
遺伝子治療により送達される治療用抗体は、経過時間にわたり散逸する結果として、ピークレベルおよびトラフレベルをもたらす、注射または注入される治療用抗体を上回る、いくつかの利点を有する。抗体を繰り返し注射することとは対照的に、トランス遺伝子産物である抗体の持続的な発現は、より一貫したレベルの抗体が、作用部位に存在することを可能とし、注射を施す必要回数が少ないので、患者に対する危険性が小さく、便宜が大きい。さらに、トランス遺伝子から発現させられる抗体は、翻訳時および翻訳後に存在する、異なる微小環境のために、直接注射される抗体とは異なる形で翻訳後修飾される。いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、これは、作用部位に送達される抗体が、直接注射される抗体と比較して、「バイオベター」であるように、異なる拡散特徴、生体活性特徴、分布特徴、アフィニティー特徴、薬物動態特徴、および免疫原性特徴を有する抗体を結果としてもたらす。
【０００９】
加えて、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、トランス遺伝子から発現させられる抗体は、タンパク質の凝集およびタンパク質の酸化など、組換え技術により作製された抗体と関連する分解産物を含有する可能性が低い。凝集は、高タンパク質濃度、製造用装置および容器との表面相互作用、ならびにある特定の緩衝液系を伴う精製に起因する、タンパク質の作製および保管と関連する問題である。凝集を促進する、これらの条件は、遺伝子治療におけるトランス遺伝子の発現では存在しない。メチオニン、トリプトファン、およびヒスチジンの酸化などの酸化もまた、タンパク質の作製および保管と関連し、細胞培養のストレス条件、金属および空気との接触、ならびに緩衝剤中および賦形剤中の不純物により引き起こされる。ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、トランス遺伝子から発現させられるタンパク質もまた、ストレス条件下で酸化しうる。しかし、ヒト、および他の多くの生物は、抗酸化性防御系を備えている。酸化ストレスを低減するだけではなく、場合によって、また、酸化の修復および／または逆転も行う。したがって、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて産生されるタンパク質は、酸化形態にある可能性が低い。凝集および酸化のいずれも、有効性、薬物動態（クリアランス）、および免疫原性に影響を及ぼしうる。
【００１０】
ヒト対象への投与に適する医薬組成物は、生理学的に適合性の水性緩衝液、界面活性剤、および任意選択の賦形剤を含む製剤緩衝液中の、組換えベクターの懸濁液を含む。
【００１１】
本発明は、部分的に、以下の原理に基づく：
（ｉ）現在市販されているｍＡｂ治療剤は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４など、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）アイソタイプであり、これらは、一般に、クリアランスの緩徐化、半減期の延長、および組織分布の限定などの薬物動態（ＰＫ）特徴を有する。静脈内投与の後、典型的なｍＡｂの血清中ＰＫプロファイルは、急速な分布相と、緩徐な消失相とを有する二相性であるので、慢性状態を処置するのに必要とされる用量を維持するために、反復投与が必要とされる。さらに、ｍＡｂの分布は、一般に、それらの大きなサイズおよび親水性のために、血管内腔および間質腔に限定される。ｍＡｂの、循環から、大半の組織への分配の程度は、極めて低度である脳を除き、一般に、約５〜１５％の範囲である（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Kamath, 2016, Drug Discovery Today: Technologies 21-22: 75-83を参照されたい）。ｉｎ  ｓｉｔｕにおける、ＨｕＰＴＭｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの持続的産生は、反復投与を回避し、他の方式では有効性を達成するのに短すぎる全身半減期を有する、Ｆａｂの使用を可能とし；記載される投与法は、このような組織への高用量の送達が達成されうる、脳など、標的組織への直接的なアクセスを可能とする。
（ｉｉ）多数の治療用ｍＡｂのＦａｂ領域は、グリコシル化部位を保有する。例えば、ある特定の治療用ｍＡｂのＦａｂ領域内の、コンセンサスおよび非コンセンサスのアスパラギニル（「Ｎ」）グリコシル化部位、ならびにグリコシル化部位である、グルタミン（「Ｑ」）残基を、同定し、それぞれ青色および緑色で強調する、図２Ａ〜２Ｆ、３Ａ〜３Ｅ、４Ａ〜４Ｂ、５Ａ〜５Ｄ、６、７Ａ〜７Ｂ、８Ａ〜８Ｈ、および９Ａ〜９Ｂを参照されたい（例えば、抗体内の、Ｎ結合型グリコシル化部位の同定について、各々が、参照によりその全体において組み込まれる、Valliere-Douglass et al., 2009, J. Biol. Chem. 284: 32493-32506；およびValliere-Douglass et al., 2010, J. Biol. Chem. 285: 16012-16022を参照されたい）。加えて、Ｏ−グリコシル化は、酵素による、セリン残基またはトレオニン残基への、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンの付加を含む。抗体のヒンジ領域内に存在するアミノ酸残基は、Ｏ−グリコシル化されうることが裏付けられている。ここでも、大腸菌（E. coli）は、天然では、ヒトＯ−グリコシル化において使用される機構と同等の機構を含有しないため（代わりに、大腸菌（E. coli）内のＯ−グリコシル化は、細菌が、特異的Ｏ−グリコシル化機構を含有するように修飾される場合に限られることが裏付けられている。例えば、Farid-Moayer et al., 2007, J. Bacteriol. 189:8088-8098を参照されたい）、Ｏ−グリコシル化の可能性は、本明細書で提示される治療用抗体に、例えば、大腸菌（E. coli）内で産生される抗原結合性断片と比較して、別の利点を付与する。さらに、高グリコシル化変異体を操作するように、Ｆａｂアミノ酸配列を修飾することができる（例えば、図１１Ａおよび１１Ｂに示される、治療用抗体の高グリコシル化Ｆａｂ領域を操作するように施されうるアミノ酸置換；ならびに全長抗体のＦａｂドメイン上で高グリコシル化させた抗体の誘導体についてのその記載については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112を参照されたい）。
（ｉｉｉ）グリコシル化部位に加えて、Ｆａｂ領域は、ＣＤＲ内またはこの近傍に、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位を含有しうる。黄色で強調された、ある特定の治療用ｍＡｂのＦａｂ領域内の、チロシン−Ｏ−硫酸化部位を同定する、図２Ａ〜２Ｆ、３Ａ〜３Ｅ、４Ａ〜４Ｂ、５Ａ〜５Ｄ、６、７Ａ〜７Ｂ、８Ａ〜８Ｈ、および９Ａ〜９Ｂを参照されたい。（例えば、タンパク質のチロシン硫酸化下されるチロシン残基の周囲のアミノ酸の解析については、参照によりその全体において組み込まれる、Yang et al., 2015, Molecules 20:2138-2164（特に、２１５４頁）を参照されたい）。「規則」は以下の通りにまとめられうる：Ｙから＋５〜−５内の位置にＥまたはＤがある、Ｙ残基であり、この場合、Ｙから−１の位置は、中性または酸性の帯電アミノ酸であり、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を消失させる、Ｒ、Ｋ、またはＨではない。
（ｉｖ）ヒト細胞による、図２Ａ〜２Ｆ、３Ａ〜３Ｅ、４Ａ〜４Ｂ、５Ａ〜５Ｄ、６、７Ａ〜７Ｂ、８Ａ〜８Ｈ、および９Ａ〜９Ｂに示されるグリコシル化など、Ｆａｂ領域のグリコシル化は、トランス遺伝子産物の、安定性、半減期を改善し、望ましくない凝集および／または免疫原性を低減しうる、グリカンの付加を結果としてもたらすであろう（例えば、Ｆａｂグリコシル化の新たな重要性の総説についての、Bovenkamp et al., 2016, J. Immunol. 196: 1435-1441；ならびにＨｕＧｌｙＦａｂに接合させられうるグリカンを同定する図１０（Bondt et al., 2014, Mol & Cell Proteomics 13.1: 3029-3039から転載）を参照されたい）。抗体のＦａｂと、Ｆｃ部分とは、Ｆａｂグリカンのガラクトシル化、シアル化、および分岐（例えば、分岐型ＧｌｃＮＡｃを有する）が高度であり、Ｆｃグリカンに関しては、フコシル化が低度である、顕著に異なるグリコシル化パターンを有することが示されている（例えば、その、Ｆａｂに会合させたＮ−グリカンの開示については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Bondt et al., 2014, Mol. & Cell. Proteomics 13.11:3029-3039を参照されたい）。
（ｖ）本発明のＨｕＧｌｙＦａｂに付加されるグリカンが、２，６−シアル酸を含有する、高度にプロセシングされた複合型Ｎ−グリカンであることは意義深い。このようなグリカンは、（ａ）大腸菌（E. coli）内で産生される治療用ｍＡｂ（全く、グリコシル化されていない）内；（ｂ）グリコシル化時に、２，６−シアル酸を付加するのに必要とされる、２，６−シアリルトランスフェラーゼを有さない、ＣＨＯ細胞内で産生される治療用抗体内；または（ｃ）主要なヒトシアル酸である、Ｎ−アセチルノイラミン酸（「Ｎｅｕ５Ａｃ」）ではなく、ヒトに天然ではない（かつ、潜在的に、免疫原性である）、Ｎ−グリコシルノイラミン酸（「Ｎｅｕ５Ｇｃ」または「ＮｅｕＧｃ」）を付加する、ＣＨＯ細胞株内またはマウス細胞株内で産生される治療用抗体内には存在しない。例えば、各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Dumont et al., 2015, Crit. Rev. Biotechnol. 36(6):1110-1122；Huang et al., 2006, Anal. Biochem. 349:197-207（ＮｅｕＧｃは、ＳＰ２／０およびＮＳ０など、マウス細胞株内の、主要なシアル酸である）；およびSong et al., 2014, Anal. Chem. 86:5661-5666を参照されたい。
（ｖｉ）本発明のＨｕＧｌｙＦａｂのヒトグリコシル化パターンは、トランス遺伝子産物の免疫原性を低減し、有効性を改善するべきである。本明細書で記載される方法に従い使用される抗原結合性断片を、ヒト標的細胞内で発現させる場合、原核宿主細胞（例えば、大腸菌（E. coli））内、または真核宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞またはマウスのＮＳ０細胞もしくはＳＰ２／０細胞）内の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける産生に対する必要が回避されることは、重要である。それよりも、本明細書で記載される方法（例えば、抗原結合性断片を発現させる、ヒト標的細胞の使用）の結果として、抗原結合性断片のＮ−グリコシル化部位は、ヒトの処置に関与性であり、かつ、有益なグリカンで装飾すると有利である。例えば、（ａ）ＣＨＯ細胞は、ある特定のグリカン（例えば、２，６シアル酸および分岐型ＧｌｃＮＡｃ）の付加に必要とされる構成要素を欠き；（ｂ）ＣＨＯ細胞およびマウス細胞（ＮＳ０細胞およびＳＰ２／０細胞）は、Ｎｅｕ５Ａｃではなく、ヒトに典型的ではない、Ｎｅｕ５Ｇｃを、シアル酸として付加し；（ｃ）ＣＨＯ細胞は、大半の個体において存在する、抗α−Ｇａｌ抗体と反応し、高濃度の場合、アナフィラキシーを誘発しうる免疫原性グリカンである、α−Ｇａｌ抗原もまた産生し（例えば、Bosques, 2010, Nat. Biotech. 28:1153-1156を参照されたい）；かつ、（ｄ）大腸菌（E. coli）は、天然では、Ｎ−グリコシル化に必要とされる構成要素を含有しないため、このような利点は、ＣＨＯ細胞、マウス細胞、または大腸菌（E. coli）を、抗体／抗原結合性断片の産生において活用する場合には、達成されない。
（ｖｉｉ）図２Ａ〜２Ｆ、３Ａ〜３Ｅ、４Ａ〜４Ｂ、５Ａ〜５Ｄ、６、７Ａ〜７Ｂ、８Ａ〜８Ｈ、および９Ａ〜９Ｂに示されたチロシン硫酸化（多くのヒト細胞内の、頑健な翻訳後過程）など、Ｆａｂ領域のチロシン硫酸化は、それらの分子標的に対するアビディティーを増大させたトランス遺伝子産物を結果としてもたらすべきである。実際、抗体のＦａｂのチロシン硫酸化は、抗原に対するアビディティーおよび活性を、劇的に増大させることが示されている（例えば、Loos et al., 2015, PNAS 112: 12675-12680；およびChoe et al., 2003, Cell 114: 161-170を参照されたい）。このような翻訳後修飾は、大腸菌（E. coli）（チロシン硫酸化に必要とされる酵素を有さない宿主）内で作られる治療用抗体上には存在せず、ＣＨＯ細胞内で作られる治療用ｍＡｂ内でも、高々、過小に存在するに過ぎない。ＣＨＯ細胞は、分泌性細胞ではなく、翻訳後のチロシン硫酸化能が限定されている（例えば、Mikkelsen & Ezban, 1991, Biochemistry 30: 1533-1537、とりわけ、１５３７頁における議論を参照されたい）。
【００１２】
前出の理由で、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、治療用ｍＡｂの、全長またはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードする、ウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、このｍＡｂの適応がある疾患と診断された患者（ヒト対象）に投与して、対象において、対象の形質導入細胞により産生される、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達せられる疾患の処置のための「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。ＨｕＰＴＭｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  ＦａｂのためのｃＤＮＡ構築物は、形質導入されたヒト細胞による、適正な共プロセシングおよび翻訳後プロセシング（グリコシル化およびタンパク質の硫酸化）を確保するシグナルペプチドを含むべきである。
【００１３】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、全長またはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをヒト細胞株内で組換えＤＮＡ技術により作製し、糖タンパク質を患者に投与することができる。
【００１４】
本発明の方法は、全長またはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの患者への送達に、他の利用可能な処置の投与が伴う組合せ療法を包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。このような、さらなる処置は、治療用ｍＡｂによる併用療法を含みうるがこれらに限定されない。
【００１５】
また、ウイルスベクター、特に、ＡＡＶベースのウイルスベクターを製造する方法も提供される。具体的な実施形態では、組換えＡＡＶを作製する方法であって、ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれたシス発現カセットを含み、シス発現カセットが、ヒト細胞内の、トランス遺伝子の発現を制御する発現制御エレメントに作動可能に連結された、治療用抗体をコードするトランス遺伝子を含む人工ゲノムと；ＡＡＶ  ＩＴＲを欠くトランス発現カセットであり、培養中の宿主細胞内の、ＡＡＶ  ｒｅｐタンパク質およびＡＡＶカプシドタンパク質の発現を駆動し、発現制御エレメントに作動可能に連結され、ｒｅｐタンパク質およびｃａｐタンパク質を、トランスにおいて供給するＡＡＶ  ｒｅｐタンパク質およびＡＡＶカプシドタンパク質をコードするトランス発現カセットと；ＡＡＶカプシドタンパク質による、人工ゲノムの複製およびパッケージングを可能とするのに十分な、アデノウイルスのヘルパー機能とを含有する宿主細胞を培養するステップ；ならびに細胞培養物に由来する人工ゲノムを、カプシドで包む組換えＡＡＶを回収するステップを含む方法が提供される。
３．１  例示的な実施形態
組成物
１．それを必要とするヒト対象におけるアルツハイマー病、偏頭痛、群発頭痛、または慢性外傷性脳症、進行性核上性麻痺、および前頭側頭型認知症を含むタウオパチーを処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）またはＡＡＶｒｈ１０カプシド（配列番号８０）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒトＣＮＳ細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗アミロイドベータｍＡｂ、抗タウｍＡｂ、もしくは抗ＣＧＲＰＲ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を有するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象のＣＮＳへの髄腔内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
２．抗アミロイドβ  ｍＡｂが、アデュカヌマブ、クレネズマブ、ガンテネルマブ、またはＢＡＮ２４０１であり、抗タウｍＡｂが、ａＴＡＵであり、抗ＣＧＲＰＲが、エレヌマブ、エプチネズマブ、フレマネズマブ、またはガルカネズマブである、項目１に記載の医薬組成物。
３．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、または単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）である、項目１または２に記載の医薬組成物。
４．抗原結合性断片が、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号５４のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号５５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号５６のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号５７のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号５８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１から３のいずれかに記載の医薬組成物。
５．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１０１のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１０２のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１０３のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１０４のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１０５のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１０６のヌクレオチド配列；または配列番号１５３のヌクレオチド配列を有する重鎖、および配列番号１５４のヌクレオチド配列を有する軽鎖；配列番号１５５のヌクレオチド配列を有する重鎖、および配列番号１５６のヌクレオチド配列を有する軽鎖；または配列番号１５７のヌクレオチド配列を有する重鎖、および配列番号１５８のヌクレオチド配列を有する軽鎖を含む、項目４に記載の医薬組成物。
６．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目１から４のいずれかに記載の医薬組成物。
７．トランス遺伝子が、前記ヒトＣＮＳ細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目１から６のいずれかに記載の医薬組成物。
８．前記シグナル配列が、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）、または表１によるシグナル配列である、項目７に記載の医薬組成物。
９．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ９である、項目１から８のいずれかに記載の医薬組成物。
１０．それを必要とするヒト対象におけるアトピー性皮膚炎を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＩＬ４Ｒ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
１１．抗ＩＬ４Ｒ  ｍＡｂが、デュピルマブである、項目１０に記載の医薬組成物。
１２．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目１０または１１に記載の医薬組成物。
１３．抗原結合性断片が、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１０から１２のいずれかに記載の医薬組成物。
１４．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１０７のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１０８のヌクレオチド配列を含む、項目１３に記載の医薬組成物。
１５．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目１０から１３のいずれかに記載の医薬組成物。
１６．トランス遺伝子が、前記ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目１０から１５のいずれかに記載の医薬組成物。
１７．前記シグナル配列が、表２または３におけるシグナル配列から選択される、項目１６に記載の医薬組成物。
１８．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ８である、項目１０から１７のいずれかに記載の医薬組成物。
１９．それを必要とするヒト対象における乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、またはクローン病を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＩＬ１７Ａ  ｍＡｂもしくは抗ＩＬ１２／ＩＬ２３  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
２０．抗ＩＬ１７Ａ  ｍＡｂまたは抗ＩＬ１２／ＩＬ２３  ｍＡｂが、イキセキズマブ、セクキヌマブ、またはウステキヌマブである、項目１９に記載の医薬組成物。
２１．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目１９または２０に記載の医薬組成物。
２２．抗原結合性断片が、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１２のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１９から２１のいずれかに記載の医薬組成物。
２３．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１０９のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１１０のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１１１のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１１２のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１１３のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１１４のヌクレオチド配列を含む、項目２２に記載の医薬組成物。
２４．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目１９から２２のいずれかに記載の医薬組成物。
２５．トランス遺伝子が、前記ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目１９から２４のいずれかに記載の医薬組成物。
２６．前記シグナル配列が、表２または３におけるシグナル配列から選択される、項目２５に記載の医薬組成物。
２７．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ８である、項目１９から２６のいずれかに記載の医薬組成物。
２８．それを必要とするヒト対象における喘息を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＩＬ−５  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
２９．抗ＩＬ−５  ｍＡｂが、メポリズマブである、項目２８に記載の医薬組成物。
３０．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目２８または２９に記載の医薬組成物。
３１．抗原結合性断片が、配列番号１５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目２８から３０のいずれかに記載の医薬組成物。
３２．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１１５のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１１６のヌクレオチド配列を含む、項目３１に記載の医薬組成物。
３３．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目２８から３１のいずれかに記載の医薬組成物。
３４．トランス遺伝子が、前記ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目２８から３３のいずれかに記載の医薬組成物。
３５．前記シグナル配列が、表２または３におけるシグナル配列から選択される、項目３４に記載の医薬組成物。
３６．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ８である、項目２８から３５のいずれかに記載の医薬組成物。
３７．それを必要とするヒト対象における多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、またはクローン病を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）、ＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）、またはＡＡＶｒｈ１０カプシド（配列番号８０）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内、またはヒト筋細胞内、またはヒトＣＮＳ細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗インテグリンｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために、または前記対象のＣＮＳへの髄腔内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
３８．抗インテグリンｍＡｂが、ベドリズマブまたはナタリズマブである、項目３７に記載の医薬組成物。
３９．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目３７または３８に記載の医薬組成物。
４０．抗原結合性断片が、配列番号１７のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号１９のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目３７から３９のいずれかに記載の医薬組成物。
４１．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１１７のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１１８のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１１９のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１２０のヌクレオチド配列を含む、項目４０に記載の医薬組成物。
４２．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目３７から４１のいずれかに記載の医薬組成物。
４３．トランス遺伝子が、前記ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目３７から４２のいずれかに記載の医薬組成物。
４４．前記シグナル配列が、表１、２、または３におけるシグナル配列から選択される、項目４３に記載の医薬組成物。
４５．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ８である、項目３７から４４のいずれかに記載の医薬組成物。
４６．それを必要とするヒト対象におけるＨｅＦＨ、ＨｏＦＨ、脂質異常症、アテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＣＤ）を含む心血管疾患、アテローム性動脈硬化性プラーク形成、非ＨＤＬコレステロールおよびＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、または高コレステロール血症を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＰＣＳＫ９  ｍＡｂ、抗ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＡｂ、もしくは抗ＯｘＰＬ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
４７．抗ＰＣＳＫ９  ｍＡｂもしくは抗ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＡｂが、アリロクマブ、エボロクマブ、もしくはエビナクマブであるか、または抗ＯｘＰＬが、Ｅ０６である、項目４６に記載の医薬組成物。
４８．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目４６または４７に記載の医薬組成物。
４９．抗原結合性断片が、配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号２３のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号２５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号５９のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号６０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目４６から４８のいずれかに記載の医薬組成物。
５０．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１２１のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１２２のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１２３のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１２４のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１２５のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１２６のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１５９のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１６０のヌクレオチド配列を含む、項目４９に記載の医薬組成物。
５１．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目４４から５０のいずれかに記載の医薬組成物。
５２．トランス遺伝子が、前記ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目４４から５１のいずれかに記載の医薬組成物。
５３．前記シグナル配列が、表２または３におけるシグナル配列から選択される、項目５２に記載の医薬組成物。
５４．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ８である、項目４４から５３のいずれかに記載の医薬組成物。
５５．それを必要とするヒト対象における骨粗鬆症を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＲＡＮＫＬ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
５６．抗ＲＡＮＬＫ  ｍＡｂが、デノスマブである、項目５５に記載の医薬組成物。
５７．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目５５または５６に記載の医薬組成物。
５８．抗原結合性断片が、配列番号２７のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目５５から５７のいずれかに記載の医薬組成物。
５９．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１２７のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１２８のヌクレオチド配列を含む、項目５８に記載の医薬組成物。
６０．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目５５から５９のいずれかに記載の医薬組成物。
６１．トランス遺伝子が、前記ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目５５から６０のいずれかに記載の医薬組成物。
６２．前記シグナル配列が、表２または３におけるシグナル配列から選択される、項目６１に記載の医薬組成物。
６３．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ８である、項目５５から６２のいずれかに記載の医薬組成物。
６４．それを必要とするヒト対象における転移性黒色腫、リンパ腫、または非小細胞肺癌を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、ＰＤ−１遮断剤ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
６５．ＰＤ−１遮断剤ｍＡｂが、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、項目６４に記載の医薬組成物。
６６．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目６４または６５に記載の医薬組成物。
６７．抗原結合性断片が、配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号３０のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号３１のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目６４から６６のいずれかに記載の医薬組成物。
６８．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１２９のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１３０のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１３１のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１３２のヌクレオチド配列を含む、項目６７に記載の医薬組成物。
６９．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目６４から６８のいずれかに記載の医薬組成物。
７０．トランス遺伝子が、前記ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目６４から６９のいずれかに記載の医薬組成物。
７１．前記シグナル配列が、表２または３におけるシグナル配列から選択される、項目７０に記載の医薬組成物。
７２．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ８である、項目６４から７１のいずれかに記載の医薬組成物。
７３．それを必要とするヒト対象における全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＢＬｙＳ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の肝臓または筋肉への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
７４．前記抗ＢＬｙＳ  ｍＡｂが、ベリムマブである、項目７３に記載の医薬組成物。
７５．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目７３または７４に記載の医薬組成物。
７６．抗原結合性断片が、配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目７３から７５のいずれかに記載の医薬組成物。
７７．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１４１のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１４２のヌクレオチド配列を含む、項目７６に記載の医薬組成物。
７８．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目７３から７７のいずれかに記載の医薬組成物。
７９．トランス遺伝子が、前記ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目７３から７８のいずれかに記載の医薬組成物。
８０．前記シグナル配列が、表２または３におけるシグナル配列から選択される、項目７９に記載の医薬組成物。
８１．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ８である、項目７３から８０のいずれかに記載の医薬組成物。
８２．それを必要とするヒト対象における加齢黄斑変性を含む眼障害を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、前記発現カセットがトランス遺伝子を含み、前記トランス遺伝子が、ヒト網膜細胞内の前記トランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＭＭＰ９  ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ、もしくは抗ｆＤ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象の眼への網膜下投与、硝子体内投与、または脈絡膜上投与のために製剤化されている、医薬組成物。
８３．抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂが、ラニビズマブ、ベバシズマブ、もしくはブロルシズマブであるか、前記抗Ｆｄ  ｍＡｂが、ランパリズマブであるか、または前記抗ＭＭＰ９  ｍＡｂが、アンデカリキシマブである、項目８２に記載の医薬組成物。
８４．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目８２または８３に記載の医薬組成物。
８５．抗原結合性断片が、配列番号３３のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号３５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号３６のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号３７のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目８２から８４のいずれかに記載の医薬組成物。
８６．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１３３のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１３４のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１３５のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１３６のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１３７のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１３８のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１３９のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１４０のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１４５のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１４６のヌクレオチド配列を含む、項目８５に記載の医薬組成物。
８７．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目８２から８５のいずれかに記載の医薬組成物。
８８．トランス遺伝子が、前記ヒト網膜細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目８２から８７のいずれかに記載の医薬組成物。
８９．前記シグナル配列が、表１におけるシグナル配列から選択される、項目８８に記載の医薬組成物。
９０．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ８である、項目８２から８９のいずれかに記載の医薬組成物。
９１．それを必要とするヒト対象における関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、尋常性乾癬、または潰瘍性大腸炎を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＴＮＦ抗体またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
９２．抗ＴＮＦ−アルファｍＡｂが、アダリムマブまたはインフリキシマブである、項目９１に記載の医薬組成物。
９３．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目９１または９２に記載の医薬組成物。
９４．抗原結合性断片が、配列番号４９のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号５０のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号５１のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号５２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目９１から９３のいずれかに記載の医薬組成物。
９５．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１４９のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１５０のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１５１のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１５２のヌクレオチド配列を含む、項目９４に記載の医薬組成物。
９６．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目９１から９４のいずれかに記載の医薬組成物。
９７．トランス遺伝子が、前記ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目９１から９６のいずれかに記載の医薬組成物。
９８．前記シグナル配列が、表２または３におけるシグナル配列から選択される、項目９７に記載の医薬組成物。
９９．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ８である、項目９１から９８のいずれかに記載の医薬組成物。
１００．それを必要とするヒト対象における発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）または非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗Ｃ５補体タンパク質ｍＡｂもしくは抗Ｃ５ａ補体タンパク質ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
１０１．抗Ｃ５補体タンパク質ｍＡｂまたは抗Ｃ５ａ補体タンパク質ｍＡｂが、エクリズマブである、項目１００に記載の医薬組成物。
１０２．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目１００または１０１に記載の医薬組成物。
１０３．抗原結合性断片が、配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１００から１０２のいずれかに記載の医薬組成物。
１０４．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１４３のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１４４のヌクレオチド配列を含む、項目１０３に記載の医薬組成物。
１０５．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目１０１から１０４のいずれかに記載の医薬組成物。
１０６．トランス遺伝子が、前記ヒト肝細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目１００から１０５のいずれかに記載の医薬組成物。
１０７．前記シグナル配列が、表３におけるシグナル配列から選択される、項目１０６に記載の医薬組成物。
１０８．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ８である、項目１０１から１０７のいずれかに記載の医薬組成物。
１０９．それを必要とするヒト対象における遺伝性血管浮腫を処置するための医薬組成物であって、
（ａ）ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）またはＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；
（ｂ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗血漿カリクレインｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムと
を含むＡＡＶベクターを含み、
前記ＡＡＶベクターが、前記対象への静脈内投与のために製剤化されている、医薬組成物。
１１０．抗血漿カリクレインｍＡｂが、ラナデルマブである、項目１０９に記載の医薬組成物。
１１１．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目１０９または１１１に記載の医薬組成物。
１１２．抗原結合性断片が、配列番号４７のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１０９から１１１のいずれかに記載の医薬組成物。
１１３．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１４７のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１４８のヌクレオチド配列を含む、項目１１２に記載の医薬組成物。
１１４．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目１１０から１１３のいずれかに記載の医薬組成物。
１１５．トランス遺伝子が、前記ヒト肝細胞内の、分泌および翻訳後修飾を方向付ける、前記抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のＮ末端におけるシグナル配列をコードする、項目１０９から１１４のいずれかに記載の医薬組成物。
１１６．前記シグナル配列が、表３におけるシグナル配列から選択される、項目１１５に記載の医薬組成物。
１１７．ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ８である、項目１１０から１１６のいずれかに記載の医薬組成物。
処置法
１１８．それを必要とするヒト対象におけるアルツハイマー病、偏頭痛、群発頭痛、または慢性外傷性脳症、進行性核上性麻痺、および前頭側頭型認知症を含むタウオパチーを処置する方法であって、前記ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト中枢神経系（ＣＮＳ）細胞により産生される、治療有効量の、抗アミロイドベータｍＡｂ、抗タウｍＡｂ、もしくは抗ＣＧＲＰＲ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
１１９．それを必要とするヒト対象におけるアルツハイマー病、偏頭痛、群発頭痛、または慢性外傷性脳症、進行性核上性麻痺、および前頭側頭型認知症を含むタウオパチーを処置する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のヒト翻訳後修飾（ＨｕＰＴＭ）形態を放出するデポが形成されるように、前記対象の大槽に、ヒトＣＮＳ細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗アミロイドベータｍＡｂ、抗タウｍＡｂ、もしくは抗ＣＧＲＰＲ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
１２０．抗アミロイドベータｍＡｂが、アデュカヌマブ、クレネズマブ、ガンテネルマブ、もしくはＢＡＮ２４０１であるか、または抗タウｍＡｂが、ａＴＡＵであるか、または抗ＣＧＲＰＲが、エレヌマブ、エプチネズマブ、フレマネズマブ、もしくはガルカネズマブである、項目１１８または１１９に記載の方法。
１２１．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目１１８から１２０のいずれかに記載の方法。
１２２．抗原結合性断片が、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号５４のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号５５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号５６のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号５７のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号５８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１１８から１２１のいずれかに記載の方法。
１２３．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１０１のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１０２のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１０３のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１０４のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１０５のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１０６のヌクレオチド配列；または配列番号１５３のヌクレオチド配列を有する重鎖、および配列番号１５４のヌクレオチド配列を有する軽鎖；配列番号１５５のヌクレオチド配列を有する重鎖、および配列番号１５６のヌクレオチド配列を有する軽鎖；または配列番号１５７のヌクレオチド配列を有する重鎖、および配列番号１５８のヌクレオチド配列を有する軽鎖を含む、項目１２２に記載の方法。
１２４．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目１１８から１２２のいずれかに記載の方法。
１２５．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目１１８から１２４のいずれかに記載の方法。
１２６．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃおよび／またはα−Ｇａｌを含有しない、項目１１８から１２５のいずれかに記載の方法。
１２７．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目１１８から１２６のいずれかに記載の方法。
１２８．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０である、項目１１９から１２７のいずれかに記載の方法。
１２９．前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、前記ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒトＣＮＳ細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目１１９から１２８のいずれかに記載の方法。
１３０．それを必要とするヒト対象における乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、またはクローン病を処置する方法であって、前記ヒト対象の循環に、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞により産生される、治療有効量の、抗ＩＬ１７Ａ  ｍＡｂもしくは抗ＩＬ１２／ＩＬ２３  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
１３１．それを必要とするヒト対象における乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、またはクローン病を処置する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記対象の肝臓または筋肉に、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＩＬ１７Ａ  ｍＡｂもしくは抗ＩＬ１２／ＩＬ２３  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
１３２．抗ＩＬ１７Ａ  ｍＡｂまたは抗ＩＬ１２／ＩＬ２３  ｍＡｂが、イキセキズマブ、セクキヌマブ、またはウステキヌマブである、項目１３０または１３１に記載の方法。
１３３．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目１３０から１３２のいずれかに記載の方法。
１３４．抗原結合性断片が、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１２のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１３０から１３３のいずれかに記載の方法。
１３５．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１０９のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１１０のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１１１のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１１２のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１１３のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１１４のヌクレオチド配列を含む、項目１３４に記載の医薬組成物。
１３６．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目１３２から１３４のいずれかに記載の方法。
１３７．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目１３２から１３６のいずれかに記載の方法。
１３８．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目１３２から１３７のいずれかに記載の方法。
１３９．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目１３２から１３８のいずれかに記載の方法。
１４０．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９である、項目１３３から１３９のいずれかに記載の方法。
１４１．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、前記ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒト肝細胞または筋肉細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目１３３から１４０のいずれかに記載の方法。
１４２．それを必要とするヒト対象における多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、またはクローン病を処置する方法であって、前記ヒト対象のＣＳＦまたは循環に、ヒトＣＮＳ細胞、ヒト肝細胞内、またはヒト筋細胞により産生される、治療有効量の、抗インテグリンｍＡｂまたはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
１４３．それを必要とするヒト対象における多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、またはクローン病を処置する方法であって、
ｍＡｂまたは抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記ヒト対象のＣＮＳ、肝臓、または筋肉に、ヒトＣＮＳ細胞内、ヒト肝細胞内、またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗インテグリンｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
１４４．抗インテグリンｍＡｂが、ナタリズマブまたはベドリズマブである、項目１４２または１４３に記載の方法。
１４５．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目１４２から１４４のいずれかに記載の方法。
１４６．抗原結合性断片が、配列番号１７のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号１９のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１４２から１４５のいずれかに記載の方法。
１４７．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１１７のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１１８のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１１９のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１２０のヌクレオチド配列を含む、項目１４６に記載の方法。
１４８．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目１４２から１４５のいずれかに記載の方法。
１４９．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目１４２から１４８のいずれかに記載の方法。
１５０．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目１４２から１４９のいずれかに記載の方法。
１５１．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目１４２から１５０のいずれかに記載の方法。
１５２．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０である、項目１４３から１５１のいずれかに記載の方法。
１５３．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒトＣＮＳ細胞、ヒト肝細胞、または筋肉細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目１４３から１５２のいずれかに記載の方法。
１５４．それを必要とするヒト対象におけるアトピー性皮膚炎を処置する方法であって、前記ヒト対象の循環に、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞により産生される、治療有効量の、抗ＩＬ４Ｒ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
１５５．それを必要とするヒト対象におけるアトピー性皮膚炎を処置する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記ヒト対象の肝臓または筋肉に、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＩＬ４Ｒ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
１５６．抗ＩＬ−４Ｒ  ｍＡｂが、デュピルマブである、項目１５４または１５５に記載の方法。
１５７．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目１５４から１５６のいずれかに記載の方法。
１５８．抗原結合性断片が、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１５４から１５７のいずれかに記載の方法。
１５９．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１０７のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１０８のヌクレオチド配列を含む、項目１５８に記載の方法。
１６０．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目１５４から１５８のいずれかに記載の方法。
１６１．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目１５４から１６０のいずれかに記載の方法。
１６２．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目１５４から１６１のいずれかに記載の方法。
１６３．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目１５４から１６２のいずれかに記載の方法。
１６４．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９である、項目１５５から１６３のいずれかに記載の方法。
１６５．前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒト肝細胞または筋肉細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目１５５から１６４のいずれかに記載の方法。
１６６．それを必要とするヒト対象における喘息を処置する方法であって、前記ヒト対象の循環に、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞により産生される、治療有効量の、抗ＩＬ−５  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
１６７．それを必要とするヒト対象における喘息を処置する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記ヒト対象の肝臓または筋肉に、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＩＬ−５  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
１６８．抗ＩＬ−５  ｍＡｂが、メポリズマブである、項目１６６または１６７に記載の方法。
１６９．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目１６６から１６８のいずれかに記載の方法。
１７０．抗原結合性断片が、配列番号１５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１６６から１６９のいずれかに記載の方法。
１７１．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１１５のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１１６のヌクレオチド配列を含む、項目１７０に記載の方法。
１７２．抗体またはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目１６６から１７０のいずれかに記載の方法。
１７３．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目１６６から１７２のいずれかに記載の方法。
１７４．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目１６６から１７３のいずれかに記載の方法。
１７５．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目１６６から１７４のいずれかに記載の方法。
１７６．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９である、項目１６７から１７５のいずれかに記載の方法。
１７７．前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、前記ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒト肝細胞または筋肉細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目１６７から１７６のいずれかに記載の方法。
１７８．それを必要とするヒト対象におけるＨｅＦＨ、ＨｏＦＨ、脂質異常症、アテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＣＤ）を含む心血管疾患、アテローム性動脈硬化性プラーク形成、非ＨＤＬコレステロールおよびＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、高コレステロール血症、または脂質異常症を処置する方法であって、前記ヒト対象の循環に、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞により産生される、治療有効量の、抗ＰＣＳＫ９  ｍＡｂ、抗ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＡｂ、抗ＯｘＰＬ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
１７９．それを必要とするヒト対象におけるＨｅＦＨ、ＨｏＦＨ、脂質異常症、アテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＣＤ）を含む心血管疾患、アテローム性動脈硬化性プラーク形成、非ＨＤＬコレステロールおよびＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、または高コレステロール血症を処置する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記ヒト対象の肝臓または筋肉に、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＰＣＳＫ９  ｍＡｂ、抗ＯｘＰＬ  ｍＡｂ、もしくは抗ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
１８０．抗ＰＣＳＫ９が、アリロクマブもしくはエボロクマブであるか、または抗ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＡｂが、エビナクマブであるか、または抗ＯｘＰＬが、Ｅ０６である、項目１７８または１７９に記載の方法。
１８１．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目１７８から１８０のいずれかに記載の方法。
１８２．抗原結合性断片が、配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号２３のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号２５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号５９のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号６０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１７８から１８１のいずれかに記載の方法。
１８３．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１２１のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１２２のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１２３のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１２４のヌクレオチド配列；重鎖をコードする、配列番号１２５のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１２６のヌクレオチド配列；または配列番号１５９のヌクレオチド配列を有する重鎖、および配列番号１６０のヌクレオチド配列を有する軽鎖を含む、項目１８２に記載の方法。
１８４．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目１７８から１８２のいずれかに記載の方法。
１８５．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目１７８から１８４のいずれかに記載の方法。
１８６．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目１７８から１８５のいずれかに記載の方法。
１８７．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目１７８から１８６のいずれかに記載の方法。
１８８．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９である、項目１７９から１８７のいずれかに記載の方法。
１８９．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、前記ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒト肝細胞またはヒト筋肉細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目１７９から１８８のいずれかに記載の方法。
１９０．それを必要とするヒト対象における骨粗鬆症を処置するか、乳がん患者もしくは前立腺がん患者における骨量を増大させるか、または骨転移に起因する骨格関連事象を阻止する方法であって、前記ヒト対象の循環に、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞により産生される、治療有効量の、抗ＲＡＮＫＬ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
１９１．それを必要とするヒト対象における骨粗鬆症を処置するか、乳がん患者もしくは前立腺がん患者における骨量を増大させるか、または骨転移に起因する骨格関連事象を阻止する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記ヒト対象の肝臓または筋肉に、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＲＡＮＫＬ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
１９２．抗ＲＡＮＫＬ  ｍＡｂが、デノスマブである、項目１９０または１９１に記載の方法。
１９３．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目１９０から１９２のいずれかに記載の方法。
１９４．抗原結合性断片が、配列番号２７のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１９０から１９３のいずれかに記載の方法。
１９５．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１２８のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１２７のヌクレオチド配列を含む、項目１９４に記載の方法。
１９６．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目１９０から１９４のいずれかに記載の方法。
１９７．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目１９０から１９６のいずれかに記載の方法。
１９８．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目１９０から１９７のいずれかに記載の方法。
１９９．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目１９０から１９８のいずれかに記載の方法。
２００．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９である、項目１９１から１９９のいずれかに記載の方法。
２０１．前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、前記ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒト肝細胞または筋肉細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目１９１から２００のいずれかに記載の方法。
２０２．それを必要とするヒト対象における転移性黒色腫、リンパ腫、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮癌、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、胃がん、腎細胞癌、ミスマッチ修復欠損転移性結腸がん、または肝細胞癌を処置する方法であって、前記ヒト対象の循環に、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞により産生される、治療有効量の、ＰＤ−１遮断剤ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
２０３．それを必要とするヒト対象における転移性黒色腫、リンパ腫、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮癌、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、胃がん、腎細胞癌、ミスマッチ修復欠損転移性結腸がん、または肝細胞癌を処置する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記ヒト対象の肝臓または筋肉に、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、ＰＤ−１遮断剤ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
２０４．ＰＤ−１遮断剤ｍＡｂが、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、項目２０２または２０３に記載の方法。
２０５．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目２０２から２０４のいずれかに記載の方法。
２０６．抗原結合性断片が、配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号３０のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号３１のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目２０２から２０５のいずれかに記載の方法。
２０７．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１２９のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１３０のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１３１のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１３２のヌクレオチド配列を含む、項目２０６に記載の方法。
２０８．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目２０２から２０６のいずれかに記載の方法。
２０９．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目２０２から２０８のいずれかに記載の方法。
２１０．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目２０２から２０９のいずれかに記載の方法。
２１１．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目２０２から２１０のいずれかに記載の方法。
２１２．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９である、項目２０３から２１１のいずれかに記載の方法。
２１３．前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、前記ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒト肝細胞または筋肉細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目２０３から２１２のいずれかに記載の方法。
２１４．それを必要とするヒト対象における全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を処置する方法であって、前記ヒト対象の循環に、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞により産生される、治療有効量の、抗ＢＬｙＳ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
２１５．それを必要とするヒト対象における、ＳＬＥを処置する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記対象の肝臓または筋肉に、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＢＬｙＳ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
２１６．抗ＢＬｙＳ  ｍＡｂが、ベリムマブである、項目２１４または２１５に記載の方法。
２１７．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目２１４から２１６のいずれかに記載の方法。
２１８．抗原結合性断片が、配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目２１４から２１７のいずれかに記載の方法。
２１９．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１３９のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１４２のヌクレオチド配列を含む、項目２１８に記載の方法。
２２０．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目２１４から２１８のいずれかに記載の方法。
２２１．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目２１４から２２０のいずれかに記載の方法。
２２２．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目２１４から２２１のいずれかに記載の方法。
２２３．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目２１４から２２２のいずれかに記載の方法。
２２４．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９である、項目２１５から２２３のいずれかに記載の方法。
２２５．前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、前記ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒト肝細胞または筋肉細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目２１５から２２４のいずれかに記載の方法。
２２６．それを必要とするヒト対象における新生血管加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）、乾性ＡＭＤ、糖尿病網膜症、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜中心静脈閉塞症（ＲＶＯ）、病的近視、またはポリープ上脈絡膜血管症を含む眼障害を処置する方法であって、前記ヒト対象の網膜に、ヒト網膜細胞により産生される、治療有効量の、抗ＭＭＰ９  ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ、もしくは抗ｆＤ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
２２７．それを必要とするヒト対象におけるｎＡＭＤ、乾性ＡＭＤ、糖尿病網膜症、ＤＭＥ、ＲＶＯ、病的近視、またはポリープ上脈絡膜血管症を含む眼障害を処置する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記ヒト対象に、ヒト網膜細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＭＭＰ９  ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ、もしくは抗ｆＤ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを、網膜下投与、硝子体内投与、または脈絡膜上投与するステップ
を含む方法。
２２８．抗ＭＭＰ９  ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ、または抗ｆＤ  ｍＡｂが、アンデカリキシマブ、ラニビズマブ、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、またはランパリズマブである、項目２２６または２２７に記載の方法。
２２９．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目２２６から２２８のいずれかに記載の方法。
２３０．抗原結合性断片が、配列番号３３のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号３５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号３６のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号３７のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目２２６から２２９のいずれかに記載の方法。
２３１．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１３３のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１３４のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１３５のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１３６のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１３７のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１３８のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１３９のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１４０のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１４５のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１４６のヌクレオチド配列を含む、項目２３０に記載の方法。
２３２．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目２２６から２３０のいずれかに記載の方法。
２３３．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目２２６から２３２のいずれかに記載の方法。
２３４．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目２２６から２３３のいずれかに記載の方法。
２３５．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目２２６から２３４のいずれかに記載の方法。
２３６．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９である、項目２２７から２３５のいずれかに記載の方法。 
２３７．前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、前記ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒト網膜細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目２２７から２３６のいずれかに記載の方法。
２３８．それを必要とするヒト対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）、関節リウマチ（ＲＡ）、ＵＣ、ＣＤ、固形腫瘍、膵臓腺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、食道胃腺がん、胃がん、結腸直腸がん、または乳がんを処置する方法であって、前記ヒト対象の循環に、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞により産生される、治療有効量の、抗ＭＭＰ９  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
２３９．それを必要とするヒト対象における嚢胞性線維症（ＣＦ）、関節リウマチ（ＲＡ）、ＵＣ、ＣＤ、固形腫瘍、膵臓腺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、食道胃腺がん、胃がん、結腸直腸がん、または乳がんを処置する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記対象の肝臓または筋肉に、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＭＭＰ９  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
２４０．抗ＭＭＰ９  ｍＡｂが、アンデカリキシマブである、項目２３８または２３９に記載の方法。
２４１．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目２３８から２４０のいずれかに記載の方法。
２４２．抗原結合性断片が、配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目２３８から２４１のいずれかに記載の方法。
２４３．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１４５のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１４６のヌクレオチド配列を含む、項目２４２に記載の方法。
２４４．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目２３８から２４２のいずれかに記載の方法。
２４５．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目２３８から２４４のいずれかに記載の方法。
２４６．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目２３８から２４５のいずれかに記載の方法。
２４７．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目２３８から２４６のいずれかに記載の方法。
２４８．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９である、項目２３９から２４７のいずれかに記載の方法。
２４９．前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、前記ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒト肝細胞または筋肉細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目２３９から２４８のいずれかに記載の方法。 
２５０．それを必要とするヒト対象における遺伝性血管浮腫を処置する方法であって、前記ヒト対象の循環に、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞により産生される、治療有効量の、抗カリクレインｍＡｂまたはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
２５１．それを必要とするヒト対象における遺伝性血管浮腫を処置する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記対象の肝臓または筋肉に、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗カリクレインｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
２５２．抗カリクレインｍＡｂが、ラナデルマブである、項目２５０または２５１に記載の方法。
２５３．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目２５０から２５２のいずれかに記載の方法。
２５４．抗原結合性断片が、配列番号４７のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目２５０から２５３のいずれかに記載の方法。
２５５．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１４７のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１４８のヌクレオチド配列を含む、項目２５４に記載の方法。
２５６．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目２５０から２５５のいずれかに記載の方法。
２５７．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目２５０から２５６のいずれかに記載の方法。
２５８．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目２５０から２５７のいずれかに記載の方法。
２５９．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目２５０から２５８のいずれかに記載の方法。
２６０．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９である、項目２５１から２５９のいずれかに記載の方法。
２６１．前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、前記ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒト肝細胞または筋肉細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目２５１から２６０のいずれかに記載の方法。
２６２．それを必要とするヒト対象における関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、尋常性乾癬、または潰瘍性大腸炎を処置する方法であって、前記ヒト対象の循環に、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞により産生される、治療有効量の、抗ＴＮＦ−アルファｍＡｂまたはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
２６３．それを必要とするヒト対象における関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、尋常性乾癬、または潰瘍性大腸炎を処置する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記対象の肝臓または筋肉に、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＴＮＦ−アルファｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
２６４．抗ＴＮＦ−アルファｍＡｂが、アダリムマブまたはインフリキシマブである、項目２６２または２６３に記載の方法。
２６５．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目２６２から２６４のいずれかに記載の方法。
２６６．抗原結合性断片が、配列番号４９のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号５０のアミノ酸配列を有する軽鎖；または配列番号５１のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号５２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目２６２から２６５のいずれかに記載の方法。
２６７．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１４９のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１５０のヌクレオチド配列；または重鎖をコードする、配列番号１５１のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１５２のヌクレオチド配列を含む、項目２６６に記載の医薬組成物。
２６８．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目２６２から２６６のいずれかに記載の方法。
２６９．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目２６２から２６８のいずれかに記載の方法。
２７０．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目２６２から２６９のいずれかに記載の方法。
２７１．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目２６２から２７０のいずれかに記載の方法。
２７２．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９である、項目２６３から２７１のいずれかに記載の方法。
２７３．前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、前記ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒト肝細胞または筋肉細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目２６３から２７２のいずれかに記載の方法。
２７４．それを必要とするヒト対象におけるＰＮＨまたはａＨＵＳを処置する方法であって、前記ヒト対象の循環に、ヒト肝細胞により産生される、治療有効量の、抗Ｃ５タンパク質ｍＡｂもしくは抗Ｃ５ａタンパク質ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片を送達するステップを含む方法。
２７５．それを必要とするヒト対象におけるＰＮＨまたはａＨＵＳを処置する方法であって、
ｍＡｂまたはその抗原結合性断片のＨｕＰＴＭ形態を放出するデポが形成されるように、前記対象の肝臓に、ヒト肝細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗Ｃ５タンパク質ｍＡｂもしくは抗Ｃ５ａタンパク質ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む、治療有効量の、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与するステップ
を含む方法。
２７６．抗Ｃ５タンパク質ｍＡｂもしくは抗Ｃ５ａタンパク質ｍＡｂ、または抗原結合性断片が、エクリズマブである、項目２７４から２７５に記載の方法。
２７７．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖである、項目２７４から２７６のいずれかに記載の方法。
２７８．抗原結合性断片が、配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目２７４から２７７のいずれかに記載の方法。
２７９．トランス遺伝子が、重鎖をコードする、配列番号１４３のヌクレオチド配列、および軽鎖をコードする、配列番号１４４のヌクレオチド配列を含む、項目２７８に記載の方法。
２８０．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、高グリコシル化突然変異体である、項目２７４から２７９のいずれかに記載の方法。
２８１．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、アルファ２，６−シアル化グリカンを含有する、項目２７４から２８０のいずれかに記載の方法。
２８２．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、グリコシル化されているが、検出可能なＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しない、項目２７４から２８１のいずれかに記載の方法。
２８３．ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、チロシン硫酸化を含有する、項目２７４から２８２のいずれかに記載の方法。
２８４．組換え発現ベクターが、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９である、項目２７５から２８３のいずれかに記載の方法。
２８５．前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、前記ＨｕＰＴＭ形態の産生が、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、培養中のヒト肝細胞または筋肉細胞に形質導入し、前記ｍＡｂまたはその抗原結合性断片を発現させることにより確認される、項目２７５から２８４のいずれかに記載の方法。
製造法
２８６．組換えＡＡＶを作製する方法であって、
（ａ）（ｉ）ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれたシス発現カセットを含み、シス発現カセットが、ヒト細胞内の、トランス遺伝子の発現を制御する発現制御エレメントに作動可能に連結された、治療用抗体をコードするトランス遺伝子を含む人工ゲノムと；
（ｉｉ）ＡＡＶ  ＩＴＲを欠くトランス発現カセットであり、培養中の宿主細胞内の、ＡＡＶ  ｒｅｐタンパク質およびＡＡＶカプシドタンパク質の発現を駆動する発現制御エレメントに作動可能に連結され、ｒｅｐタンパク質およびｃａｐタンパク質をトランスにおいて供給する、ＡＡＶ  ｒｅｐタンパク質およびＡＡＶカプシドタンパク質をコードするトランス発現カセットと；
（ｉｉｉ）ＡＡＶカプシドタンパク質による、人工ゲノムの複製およびパッケージングを可能とするのに十分な、アデノウイルスのヘルパー機能と
を含有する宿主細胞を培養するステップ；ならびに 
（ｂ）細胞培養物に由来する人工ゲノムを、カプシドで包む組換えＡＡＶを回収するステップ
を含む方法。
２８７．トランス遺伝子が、アデュカヌマブ、クレネズマブ、ガンテネルマブ、ＢＡＮ２４０１、ａＴＡＵ、エレヌマブ、エプチネズマブ、フレマネズマブ、またはガルカネズマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
２８８．ＡＡＶカプシドタンパク質が、ＡＡＶ９カプシドタンパク質またはＡＡＶｒｈ１０カプシドタンパク質である、項目２８６または２８７に記載の方法。
２８９．トランス遺伝子が、イキセキズマブ、セクキヌマブ、またはウステキヌマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
２９０．トランス遺伝子が、ナタリズマブまたはベドリズマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
２９１．トランス遺伝子が、デュピルマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
２９２．トランス遺伝子が、メポリズマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
２９３．トランス遺伝子が、アリロクマブ、エボロクマブ、エビナクマブまたはＥ０６の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
２９４．トランス遺伝子が、デノスマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
２９５．トランス遺伝子が、ニボルマブまたはペムブロリズマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
２９６．トランス遺伝子が、ベリムマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
２９７．トランス遺伝子が、ラニビズマブ、ベバシズマブ、またはランパリズマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
２９８．トランス遺伝子が、アンデカリキシマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
２９９．トランス遺伝子が、ラナデルマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
３００．トランス遺伝子が、アダリムマブまたはインフリキシマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
３０１．トランス遺伝子が、エクリズマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ｍＡｂまたは抗原結合性断片をコードする、項目２８６に記載の方法。
３０２．ＡＡＶカプシドタンパク質が、ＡＡＶ８カプシドタンパク質またはＡＡＶ９カプシドタンパク質である、項目２８６または２８９から３０１のいずれかに記載の方法。
【００１６】
４．図面の簡単な説明
特許または出願のファイルは、有色で作製された、少なくとも１つの図面を含有する。有色の図面を伴う、この特許または特許出願公開のコピーは、申請し、必要な費用を支払えば、特許庁により交付される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】発現エレメントにより制御され、ＡＡＶ  ＩＴＲにより挟まれる、治療用ｍＡｂのＦａｂ領域の重鎖および軽鎖をコードする発現カセットを含有する、ｒＡＡＶベクターゲノム構築物の概略を示す図である。
【図２−１】ＣＮＳ標的に対する治療用抗体のＦａｂ領域のためのトランス遺伝子構築物のアミノ酸配列：抗Ａβである、アデュカヌマブＦａｂ（図２Ａ）；抗Ａβである、クレネズマブＦａｂ（図２Ｂ）；抗Ａβである、ガンテネルマブＦａｂ（図２Ｃ）、抗タウタンパク質である、ａＴＡＵ  Ｆａｂ（図２Ｄ）、および抗ＣＧＲＰＲである、エレヌマブＦａｂ（図２Ｅ）、および抗Ａβである、ＢＡＮ２４０１（図２Ｆ）を示す図である。グリコシル化部位は、太字体である。グルタミングリコシル化部位は、緑色で強調され；アスパラギニル（Ｎ）グリコシル化部位は、マゼンダで強調され；非コンセンサスアスパラギニル（Ｎ）グリコシル化部位は、青色で強調され；チロシン−Ｏ−硫酸化部位（斜字体）は、黄色で強調される。重鎖ヒンジ領域は、グレーで強調される。
【図２−２】図２−１の続きである。
【図２−３】図２−１の続きである。
【図２−４】図２−１の続きである。
【図２−５】図２−１の続きである。
【図２−６】図２−１の続きである。
【図３−１】インターロイキンに対する治療用抗体のＦａｂ領域のためのトランス遺伝子構築物のアミノ酸配列：抗ＩＬ４Ｒである、デュピルマブ（図３Ａ）；抗ＩＬ−１７である、イキセキズマブ（図３Ｂ）；セクキヌマブ（図３Ｃ）；抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３である、ウステキヌマブ（図３Ｄ）；および抗ＩＬ５である、メポリズマブ（図３Ｅ）を示す図である。グリコシル化部位は、太字体である。グルタミングリコシル化部位は、緑色で強調され；非コンセンサスアスパラギニル（Ｎ）グリコシル化部位は、青色で強調され；チロシン−Ｏ−硫酸化部位（斜字体）は、黄色で強調される。重鎖ヒンジ領域は、グレーで強調される。
【図３−２】図３−１の続きである。
【図３−３】図３−１の続きである。
【図３−４】図３−１の続きである。
【図４】インテグリンに対する治療用抗体のＦａｂ領域のためのトランス遺伝子構築物のアミノ酸配列：ベドリズマブ（図４Ａ）およびナタリズマブ（図４Ｂ）を示す図である。グリコシル化部位は、太字体である。グルタミングリコシル化部位は、緑色で強調され；非コンセンサスアスパラギニル（Ｎ）グリコシル化部位は、青色で強調され；チロシン−Ｏ−硫酸化部位（斜字体）は、黄色で強調される。重鎖ヒンジ領域は、グレーで強調される。
【図５−１】ＰＣＳＫ９に対する治療用抗体のＦａｂ領域のためのトランス遺伝子構築物のアミノ酸配列：アリロクマブ（図５Ａ）；エボロクマブ（図５Ｂ）；ＡＮＧＰＴＬ３：エビナクマブ（図５Ｃ）、ＯｘＰＬに対する治療用抗体のＦａｂ領域のためのトランス遺伝子構築物のアミノ酸配列：Ｅ０６−ｓｃＦｖを示す図である。グリコシル化部位は、太字体である。グルタミングリコシル化部位は、緑色で強調され；非コンセンサスアスパラギニル（Ｎ）グリコシル化部位は、青色で強調され；チロシン−Ｏ−硫酸化部位（斜字体）は、黄色で強調される。ヒンジ領域は、グレーで強調される。
【図５−２】図５−１の続きである。
【図６】ＲＡＮＫＬに対する治療用抗体である、デノスマブのＦａｂ領域のためのトランス遺伝子構築物のアミノ酸配列を示す図である。グリコシル化部位は、太字体である。グルタミングリコシル化部位は、緑色で強調され；非コンセンサスアスパラギニル（Ｎ）グリコシル化部位は、青色で強調され；チロシン−Ｏ−硫酸化部位（斜字体）は、黄色で強調される。ヒンジ領域は、グレーで強調される。
【図７】ＰＤ−１遮断剤である治療用抗体のＦａｂ領域のためのトランス遺伝子構築物のアミノ酸配列：ニボルマブ（図７Ａ）およびペムブロリズマブ（図７Ｂ）を示す図である。グリコシル化部位は、太字体である。グルタミングリコシル化部位は、緑色で強調され；非コンセンサスアスパラギニル（Ｎ）グリコシル化部位は、青色で強調され；チロシン−Ｏ−硫酸化部位（斜字体）は、黄色で強調される。ヒンジ領域は、グレーで強調される。
【図８−１】生物学的因子を指向する治療用抗体のＦａｂ領域のためのトランス遺伝子構築物のアミノ酸配列：抗ＶＥＧＦである、ラニビズマブ（図８Ａ）、ベバシズマブ（図８Ｂ）、およびブロルシズマブ（図８Ｄ）；抗ｆＤである、ランパリズマブ（図８Ｃ）；抗ＢＬｙＳである、ベリムマブ（図８Ｅ）；抗ヒトＣ５補体タンパク質である、エクリズマブ（図８Ｆ）；抗ＭＭＰ９である、アンデカリキシマブ（図８Ｇ）；ならびに抗カリクレインである、ラナデルマブ（図８Ｈ）を示す図である。グリコシル化部位は、太字体である。グルタミングリコシル化部位は、緑色で強調され；非コンセンサスアスパラギニル（Ｎ）グリコシル化部位は、青色で強調され；チロシン−Ｏ−硫酸化部位（斜字体）は、黄色で強調される。ヒンジ領域は、グレーで強調される。
【図８−２】図８−１の続きである。
【図８−３】図８−１の続きである。
【図８−４】図８−１の続きである。
【図８−５】図８−１の続きである。
【図９−１】ＴＮＦ−アルファを指向する治療用抗体のＦａｂ領域のためのトランス遺伝子構築物のアミノ酸配列：アダリムマブ（図９Ａ）およびインフリキシマブ（図９Ｂ）を示す図である。グリコシル化部位は、太字体である。グルタミングリコシル化部位は、緑色で強調され；非コンセンサスアスパラギニル（Ｎ）グリコシル化部位は、青色で強調され；チロシン−Ｏ−硫酸化部位（斜字体）は、黄色で強調される。ヒンジ領域は、グレーで強調される。
【図９−２】図９−１の続きである。
【図１０】全長ｍＡｂまたは抗原結合性ドメインのＨｕＧｌｙＦａｂ領域に接合させうるグリカンを示す図である（Bondt et al., 2014, Mol & Cell Proteomics 13.1: 3029-3039から転載）。
【図１１−１】本明細書で開示される治療用抗体の、重鎖Ｆａｂ部分（図１１Ａ）（それぞれ、出現の順に、配列番号２８３〜２９９、５９、３００〜３０２、３１３、３０３、３９、および３０４〜３１０）および軽鎖Ｆａｂ部分（図１１Ｂ）（それぞれ、出現の順に、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、６０、５８、３６、５４、３１１、３１４、３１２、３８、２３４、４２、４４、４８、２４７、および２３５）のアミノ酸配列のアミノ酸配列アライメントを示す図である。Ｆａｂ領域の高グリコシル化変異体を作製するのに置換されうる位置は、緑色で強調される。ヒト細胞による、Ｆａｂ領域の高グリコシル化を結果としてもたらすはずの、４カ所の置換（重鎖内の１カ所および軽鎖内の３カ所）を、アミノ酸残基位置の上方に注記する（Ｆａｂドメイン上に、さらなるグリコシル化部位を含有するための、ｍＡｂまたは抗原結合性断片の操作については、例えば、全長抗体のＦａｂドメイン上で高グリコシル化させた抗体の誘導体の記載についての、Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112を参照されたい）。
【図１１−２】図１１−１の続きである。
【図１１−３】図１１−１の続きである。
【図１１−４】図１１−１の続きである。
【図１１−５】図１１−１の続きである。
【図１１−６】図１１−１の続きである。
【図１２−１】ＡＡＶカプシド１〜９についての、Ｃｌｕｓｔａｌによる多重配列アライメントを示す図である。アミノ酸置換（下方行に太字で示される）は、他のアライメントされたＡＡＶカプシドの対応する位置から、アミノ酸残基を「動員すること」により、ＡＡＶ９カプシドおよびＡＡＶ８カプシドに施すことができる。赤色で示された配列＝超可変領域である。ＡＡＶカプシドのアミノ酸配列は、以下の通りに割り当てられた配列番号である：ＡＡＶ１は、配列番号７１であり；ＡＡＶ２は、配列番号７２であり；ＡＡＶ３−３は、配列番号７３であり；ＡＡＶ４−４は、配列番号７４であり；ＡＡＶ５は、配列番号７５であり；ＡＡＶ６は、配列番号７６であり；ＡＡＶ７は、配列番号７７であり；ＡＡＶ８は、配列番号７８であり；ＡＡＶ９は、配列番号７９であり；ｈｕ３１は、配列番号８１であり；ｈｕ３２は、配列番号８２である。
【図１２−２】図１２−１の続きである。
【図１２−３】図１２−１の続きである。
【図１２−４】図１２−１の続きである。
【図１２−５】図１２−１の続きである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
５．発明の詳細な説明
完全ヒト翻訳後修飾（ＨｕＰＴＭ）治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、または治療用ｍＡｂのＨｕＰＴＭ抗原結合性断片（例えば、治療用ｍＡｂの完全ヒトグリコシル化Ｆａｂ（ＨｕＧｌｙＦａｂ））を、治療用ｍＡｂによる処置の適応がある疾患または状態と診断された患者（ヒト対象）に送達するための、組成物および方法について記載する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、治療用ｍＡｂまたはその抗原結合性断片（またはいずれかの高グリコシル化誘導体）をコードする、ウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、治療用ｍＡｂによる処置の適応がある状態と診断された患者（ヒト対象）に投与して、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは治療用ｍＡｂの抗原結合性断片、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を、ｍＡｂまたはその抗原結合性断片が、その治療効果を及ぼす標的組織に持続的に供給する恒久的デポを、患者の組織内または臓器内に創出することにより達せられると有利でありうる。
【００１９】
トランス遺伝子によりコードされる、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ抗原結合性断片は、
・アミロイドベータ（ＡβまたはＡベータ）ペプチド、タウタンパク質、およびＣＧＲＰ受容体を含む、神経系標的；
・ＩＬ４Ｒ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ−５、およびＩＬ１２／ＩＬ２３を含む、インターロイキンまたはインターロイキン受容体；
・インテグリンアルファ４を含むインテグリン；
・ＰＣＳＫ９、ＡＮＧＰＴＬ３、またはＯｘＰＬなどの酸化リン脂質；
・ＲＡＮＫＬ；
・ＰＤ−１、またはＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２；
・ＢＬｙＳ（Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）としてもまた公知の、Ｂリンパ球刺激因子）；
・ＶＥＧＦ、ｆＤ、およびマトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ９）を含む眼標的；
・ＴＮＦ−アルファ；ならびに
・Ｃ５補体タンパク質およびＣ５ａ補体タンパク質、ならびに血漿カリクレインを含む、ヒト補体タンパク質などの血漿タンパク質標的；
に結合する、全長治療用抗体またはその抗原結合性断片、あるいはＦａｂドメイン上に、さらなるグリコシル化部位を含有するように操作された、ｍＡｂまたは抗原結合性断片（例えば、全長抗体のＦａｂドメイン上で高グリコシル化させた抗体の誘導体についてのその記載については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112を参照されたい）その抗原結合性断片を含みうるがこれらに限定されない。前出の抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を、後出の表４に提示し、その抗原結合性断片の重鎖および軽鎖をコードする、コドン最適化されたヌクレオチド配列を、表５に提示する。
【００２０】
トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターは、非複製型組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含む。ｒＡＡＶは、多くの理由で、特に、魅力的なベクターである：ｒＡＡＶは、非複製型細胞に形質導入することができ、したがって、トランス遺伝子を、ＣＮＳなど、細胞分裂が、低レベルで生じる組織に送達するのに使用することができ；ｒＡＡＶは、選択された特異的臓器を優先的にターゲティングするように修飾することができ；所望される組織特異性を得、かつ／または一部のＡＡＶに対する、既存の患者抗体による中和を回避するために選ぶべきカプシド血清型が数百に及ぶ。このようなｒＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ１０、またはＡＡＶｒｈ２０のうちの１つまたは複数に由来するカプシド構成要素を含む、ＡＡＶベースのベクターを含むがこれらに限定されない。好ましい実施形態では、本明細書で提示されるＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ１０、またはＡＡＶｒｈ２０の血清型のうちの１つまたは複数に由来するカプシドを含む。
【００２１】
しかし、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、または「ネイキッドＤＮＡ」構築物と称する、非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに限定されない、他のウイルスベクターも使用することができる。トランス遺伝子の発現は、構成的発現制御エレメントまたは組織特異的発現制御エレメントにより制御することができる。
【００２２】
重鎖および軽鎖の両方を発現させるように、遺伝子治療構築物をデザインする。より具体的に、重鎖と軽鎖とを、ほぼ等量で発現させるべきである、言い換えれば、重鎖と軽鎖とを、重鎖の、軽鎖に対する、約１：１の比で発現させる。重鎖および軽鎖のコード配列は、個別の重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドを発現させるように、重鎖および軽鎖を、切断型リンカーまたはＩＲＥＳで隔てられた、単一の構築物内で操作することができる。ある特定の実施形態では、コード配列は、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖをコードする。
【００２３】
ある特定の実施形態では、本明細書で開示される核酸（例えば、ポリヌクレオチド）および核酸配列は、例えば、当業者に公知の、任意のコドン最適化法を介してコドン最適化されうる（例えば、Quax et al., 2015, Mol Cell 59:149-161による総説を参照されたい）。治療用抗体の、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの、コドン最適化されたヌクレオチド配列を、表５に開示する。各重鎖および各軽鎖は、リーダーが、適正な翻訳後プロセシングおよび分泌を確保することを必要とする（Ｎ末端鎖だけが、リーダー配列を必要とする、ｓｃＦｖとして発現させるのでない限りにおいて）。本明細書では、治療用抗体の重鎖および軽鎖を、ヒト細胞内で発現させるのに有用なリーダー配列を開示する。例示的な組換え発現構築物を、図１に示す。
【００２４】
ＨｕＰＴＭｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（ＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖを含む）の作製は、遺伝子治療を介して：例えば、治療用ｍＡｂの、全長もしくはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ、またはｓｃＦｖなど、他の抗原結合性断片をコードする、ウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、このｍＡｂの適応がある疾患と診断された患者（ヒト対象）に投与して、対象において、対象の形質導入細胞により産生される、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達せられる疾患の処置のための「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。ＨｕＰＴＭｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  ＦａｂまたはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖのためのｃＤＮＡ構築物は、形質導入されたヒト細胞による、適正な共プロセシングおよび翻訳後プロセシング（グリコシル化およびタンパク質の硫酸化）を確保するシグナルペプチドを含むべきである。
【００２５】
ヒト対象への投与に適する医薬組成物は、生理学的に適合性の水性緩衝液、界面活性剤、および任意選択の賦形剤を含む製剤緩衝液中の、組換えベクターの懸濁液を含む。このような製剤緩衝液は、多糖、界面活性剤、ポリマー、または油のうちの１つまたは複数を含みうる。
【００２６】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、全長もしくはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ、またはこれらの他の抗原結合性断片をヒト細胞株内で組換えＤＮＡ技術により作製し、糖タンパク質を患者に投与することができる。このような組換え糖タンパク質産生のために使用されうるヒト細胞株は、少数を挙げれば、ヒト胎児腎２９３細胞（ＨＥＫ２９３）、線維肉腫ＨＴ−１０８０、ＨＫＢ−１１、ＣＡＰ、ＨｕＨ−７、および網膜細胞株であるＰＥＲ．Ｃ６またはＲＰＥを含むがこれらに限定されない（例えば、組換え産生ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ産物またはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖ産物、例えば、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ糖タンパク質のために使用されうるヒト細胞株の総説については、参照によりその全体において組み込まれる、Dumont et al., 2015, Crit. Rev. Biotechnol. 36(6):1110-1122を参照されたい）。完全なグリコシル化、とりわけ、シアル化、およびチロシン硫酸化を確保するために、α−２，６−シアリルトランスフェラーゼ（またはα−２，３−シアリルトランスフェラーゼおよびα−２，６−シアリルトランスフェラーゼの両方）、ならびに／またはヒト細胞内のチロシン−Ｏ−硫酸化の一因となる、ＴＰＳＴ−１およびＴＰＳＴ−２酵素を共発現させるように、宿主細胞を操作することにより、産生に使用される細胞株を増強することができる。
【００２７】
遺伝子治療手法またはタンパク質治療手法において作製される、あらゆる分子を、完全にグリコシル化および硫酸化することは、不可欠ではない。それよりも、作製される糖タンパク質の集団は、有効性を裏付けるのに十分な、グリコシル化（２，６−シアル化を含む）および硫酸化を有するべきである。本発明の、遺伝子治療による処置の目標は、疾患の進行を緩徐化または停止させることである。
【００２８】
本発明の方法は、全長もしくはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ、またはその抗原結合性断片の送達を伴い、患者への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、組合せ療法を包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。このような、さらなる処置は、治療用ｍＡｂによる連携療法を含みうるがこれらに限定されない。
【００２９】
また、ウイルスベクター、特に、ＡＡＶベースのウイルスベクターを製造する方法も提供される。具体的な実施形態では、組換えＡＡＶを作製する方法であって、ＡＡＶ  ＩＴＲに挟まれたシス発現カセットを含み、シス発現カセットが、ヒト細胞内の、トランス遺伝子の発現を制御する発現制御エレメントに作動可能に連結された、治療用抗体をコードするトランス遺伝子を含む人工ゲノムと；ＡＡＶ  ＩＴＲを欠くトランス発現カセットであり、培養中の宿主細胞内の、ＡＡＶ  ｒｅｐタンパク質およびＡＡＶカプシドタンパク質の発現を駆動する発現制御エレメントに作動可能に連結された、ＡＡＶ  ｒｅｐタンパク質およびＡＡＶカプシドタンパク質をコードし、ｒｅｐタンパク質およびｃａｐタンパク質を、トランスにおいて供給トランス発現カセットと；ＡＡＶカプシドタンパク質による、人工ゲノムの複製およびパッケージングを可能とするのに十分な、アデノウイルスのヘルパー機能とを含有する宿主細胞を培養するステップ；ならびに細胞培養物に由来する人工ゲノムを、カプシドで包む組換えＡＡＶを回収するステップを含む方法が提供される。
【００３０】
５．１  構築物
本明細書では、ＨｕＰＴＭｍＡｂまたはその抗原結合性断片、特に、ＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＰＴＭｍＡｂの抗原結合性断片の高グリコシル化誘導体をコードする、ウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物が提示される。本明細書で提示されるウイルスベクターおよび他のＤＮＡ発現構築物は、トランス遺伝子を、標的細胞に送達するのに適する、任意の方法を含む。トランス遺伝子を送達する手段は、ウイルスベクター、リポソーム、他の脂質含有複合体、他の高分子複合体、合成修飾ｍＲＮＡ、非修飾ｍＲＮＡ、低分子、非生物学的活性の分子（例えば、金粒子）、重合化した分子（例えば、デンドリマー）、ネイキッドＤＮＡ、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、またはエピソームを含む。一部の実施形態では、ベクターは、ターゲティングベクター、例えば、網膜色素上皮細胞、ＣＮＳ細胞、筋細胞、または肝細胞にターゲティングされたベクターである。
【００３１】
一部の態様では、本開示は、ＨｕＰＴＭｍＡｂもしくはＨｕＧｌｙＦａｂ、またはこれらの他の抗原結合性断片を、本明細書で記載されるトランス遺伝子としてコードするヌクレオチド配列であって、トランス遺伝子を発現させるためにターゲティングされる組織内の発現のために選択されるプロモーターであり、例えば、ＣＢ７プロモーター（図１を参照されたい）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、ＧＦＡＰプロモーター（グリア線維性酸性タンパク質）、ＭＢＰプロモーター（ミエリン塩基性タンパク質）、ＭＭＴプロモーター、ＥＦ−１アルファプロモーター、ＵＢ６プロモーター、ニワトリベータ−アクチンプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＲＰＥ６５プロモーター、およびオプシンプロモーター、ＴＢＧ（サイロキシン結合性グロブリン）プロモーター、ＡＰＯＡ２プロモーター、ＳＥＲＰＩＮＡ１（ｈＡＡＴ）プロモーター、もしくはｍＩＲ１２２プロモーターなどの肝臓特異的プロモーター、またはヒトデスミンプロモーターもしくはＰｉｔｘ３プロモーターなどの筋肉特異的プロモーター、低酸素状態誘導性プロモーターもしくはラパマイシン誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターであるがこれらに限定されないプロモーターに作動的に連結されたヌクレオチド配列を含む、使用のための核酸を提示する。
【００３２】
本明細書のある特定の実施形態では、１つまたは複数の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）を含む、組換えベクターが提示される。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡとＲＮＡとの組合せを含みうる。ある特定の実施形態では、ＤＮＡは、プロモーター配列、目的の遺伝子の配列（トランス遺伝子、例えば、ＨｕＰＴＭｍＡｂもしくはＨｕＧｌｙＦａｂ、または他の抗原結合性断片の重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列）、非翻訳領域、および終結配列からなる群から選択される配列のうちの１つまたは複数を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、目的の遺伝子に作動可能に連結されたプロモーターを含む。
【００３３】
ある特定の実施形態では、本明細書で開示される核酸（例えば、ポリヌクレオチド）および核酸配列は、例えば、当業者に公知の、任意のコドン最適化法を介してコドン最適化されうる（例えば、Quax et al., 2015, Mol Cell 59:149-161による総説を参照されたい）。本明細書では、表５における、ＨｕＧｌｙＦａｂの重鎖および軽鎖について、ヒト細胞内の発現にコドン最適化されたヌクレオチド配列が提示される。
【００３４】
具体的な実施形態では、本明細書で記載される構築物は、以下の構成要素：（１）発現カセットを挟む、ＡＡＶ２  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）；（２）ａ）１つまたは複数の制御エレメント、ｂ）ニワトリβ−アクチンイントロン、およびｃ）ウサギβ−グロビンポリＡシグナル；ならびに（３）等量の、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの発現を確保する、自己切断型フューリン（Ｆ）／Ｆ２Ａリンカーにより隔てられた、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片の重鎖および軽鎖をコードする核酸配列を含む。例示的な構築物を、図１に示す。
【００３５】
５．１．１  ｍＲＮＡベクター
ある特定の実施形態では、ＤＮＡベクターに対する代替物として、本明細書で提示されるベクターは、目的の遺伝子（例えば、トランス遺伝子、例えば、ＨｕＰＴＭｍＡｂもしくはＨｕＧｌｙＦａｂ、またはこれらの他の抗原結合性断片）をコードする修飾ｍＲＮＡである。トランス遺伝子を、網膜色素上皮細胞に送達するための修飾ｍＲＮＡおよび非修飾ｍＲＮＡの合成は、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Hansson et al., J. Biol. Chem., 2015, 290(9):5661-5672において教示されている。本明細書のある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭｍＡｂもしくはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ、またはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖをコードする修飾ｍＲＮＡが提示される。
【００３６】
５．１．２  ウイルスベクター
ウイルスベクターは、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０）、レンチウイルス、ヘルパー依存性アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、日本型ヘマグルチニンウイルス（ＨＶＪ）、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、およびレトロウイルスのベクターを含む。レトロウイルスベクターは、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）ベースのベクターおよびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ベースのベクターを含む。アルファウイルスベクターは、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）およびシンドビスウイルス（ＳＩＮ）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、組換えウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、それらが、ヒトにおいて複製欠損性となるように変更される。ある特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ハイブリッドベクター、例えば、「ヘルプレス」アデノウイルスベクターに導入されたＡＡＶベクターである。本明細書のある特定の実施形態では、第１のウイルスに由来するウイルスカプシドと、第２のウイルスに由来するウイルスエンベロープタンパク質とを含むウイルスベクターが提示される。具体的な実施形態では、第２のウイルスは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）である。より具体的な実施形態では、エンベロープタンパク質は、ＶＳＶ−Ｇタンパク質である。
【００３７】
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、ＨＩＶベースのウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提示される、ＨＩＶベースのベクターは、少なくとも２つのポリヌクレオチドを含み、この場合、ｇａｇ遺伝子およびｐｏｌ遺伝子は、ＨＩＶゲノムに由来し、ｅｎｖ遺伝子は、別のウイルスに由来する。
【００３８】
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、単純ヘルペスウイルスベースのウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提示される、単純ヘルペスウイルスベースのベクターは、それらが、１つまたは複数の前初期（ＩＥ）遺伝子を含まず、非細胞傷害性となるように改変される。
【００３９】
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、ＭＬＶベースのウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提示される、ＭＬＶベースのベクターは、ウイルス遺伝子の代わりに、最大で８ｋｂの異種ＤＮＡを含む。
【００４０】
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、レンチウイルスベースのウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるレンチウイルスベクターは、ヒトレンチウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるレンチウイルスベクターは、非ヒトレンチウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるレンチウイルスベクターは、レンチウイルスカプシドにパッケージングされる。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるレンチウイルスベクターは、以下のエレメント：ＬＴＲ（ｌｏｎｇ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）、プライマー結合性部位、ポリプリントラクト、ａｔｔ部位、およびカプシド形成部位のうちの１つまたは複数を含む。
【００４１】
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、アルファウイルスベースのウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるアルファウイルスベクターは、組換えの複製欠損アルファウイルスである。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるアルファウイルスベクター内のアルファウイルスレプリコンは、それらのビリオン表面上に、機能的な異種リガンドを提示することにより、特異的細胞型にターゲティングされる。
【００４２】
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、ＡＡＶベースのウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提示される、ＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ  ｒｅｐ遺伝子（複製に必要とされる）、および／またはＡＡＶ  ｃａｐ遺伝子（カプシドタンパク質の合成に必要とされる）（ｒｅｐタンパク質およびｃａｐタンパク質は、パッケージング細胞により、トランスにおいてもたらされうる）をコードしない。複数のＡＡＶ血清型が同定されている。ある特定の実施形態では、本明細書で提示される、ＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶの、１つまたは複数の血清型に由来する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示される、ＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、またはＡＡＶｒｈ１０のうちの１つまたは複数に由来するカプシド構成要素を含む。好ましい実施形態では、本明細書で提示される、ＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、またはＡＡＶｒｈ１０の血清型のうちの１つまたは複数に由来する構成要素を含む。カプシドタンパク質が、変異体のＡＡＶ８カプシドタンパク質（配列番号７８）、ＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号７９）、またはＡＡＶｒｈ１０カプシドタンパク質（配列番号８０）であり、より特定すると、天然カプシドの生物学的機能を保持しながら、ＡＡＶ８カプシドタンパク質（配列番号７８）、ＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号７９）、またはＡＡＶｒｈ１０カプシドタンパク質（配列番号８０）のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％同一である、ウイルスベクターが提供される。ある特定の実施形態では、コードされるＡＡＶカプシドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０カ所のアミノ酸置換を伴う、配列番号７８、７９、または８０の配列を有し、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡＡＶｒｈ１０カプシドの生物学的機能を保持する。図１２は、ＳＵＢＳ表示された行中の比較に基づきアライメントされた配列内の、ある特定の位置において置換されうる、潜在的なアミノ酸を伴う、異なるＡＡＶ血清型のカプシドタンパク質のアミノ酸配列の比較アライメントを提示する。したがって、具体的な実施形態では、ＡＡＶベクターは、図１２のＳＵＢＳ行中で同定される、天然のＡＡＶカプシド配列内の、この位置において存在しない、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０カ所のアミノ酸置換を有する、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡＡＶｒｈ１０のカプシド変異体を含む。ＡＡＶｒｈ１０のための配列を、表４に提示する。
【００４３】
ある特定の実施形態では、本明細書で記載される組成物および方法において使用されるＡＡＶは、参照によりその全体において組み込まれる、Zinn et al., 2015, Cell Rep. 12(6): 1056-1068において記載されている、Ａｎｃ８０またはＡｎｃ８０Ｌ６５である。ある特定の実施形態では、本明細書で記載される方法において使用されるＡＡＶは、以下のアミノ酸挿入：それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１９３，９５６号明細書；同第９，４５８，５１７号明細書；および同第９，５８７，２８２号明細書；ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号明細書において記載されている、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６２）またはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６３）のうちの１つを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で記載される方法において使用されるＡＡＶは、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１９３，９５６号明細書；同第９，４５８，５１７号明細書；および同第９，５８７，２８２号明細書、米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号明細書、および国際公開第ＷＯ２０１８／０７５７９８号パンフレットにおいて記載されている、ＡＡＶ．７ｍ８（変異体を含む）である。ある特定の実施形態では、本明細書で記載される方法において使用されるＡＡＶは、ＡＡＶ−ＰＨＰ．Ｂなど、米国特許第９，５８５，９７１号明細書において開示されている、任意のＡＡＶである。ある特定の実施形態では、本明細書で記載される組成物および方法において使用されるＡＡＶは、これらのベクターについて、参照により本明細書に組み込まれる、Charbel Issa et al., 2013, PLoS One 8(4): e60361において記載されている、ＡＡＶ８カプシド、および血清型ｃｙ５、ｒｈ２０、またはｒｈ３９のカプシドに由来する、ハイブリッドカプシド配列を有する、ＡＡＶ２／Ｒｅｃ２ベクターまたはＡＡＶ２／Ｒｅｃ３ベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で記載される方法において使用されるＡＡＶは、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、以下の特許および特許出願：米国特許第７，９０６，１１１号明細書；同第８，５２４，４４６号明細書；同第８，９９９，６７８号明細書；同第８，６２８，９６６号明細書；同第８，９２７，５１４号明細書；同第８，７３４，８０９号明細書；米国特許第９，２８４，３５７号明細書；同第９，４０９，９５３号明細書；同第９，１６９，２９９号明細書；同第９，１９３，９５６号明細書；同第９，４５８，５１７号明細書；および同第９，５８７，２８２号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０３７４８０３号明細書；同第２０１５／０１２６５８８号明細書；同第２０１７／００６７９０８号明細書；同第２０１３／０２２４８３６号明細書；同第２０１６／０２１５０２４号明細書；同第２０１７／００５１２５７号明細書；ならびに国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７９９号明細書；同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５号明細書のうちのいずれかにおいて開示されているＡＡＶである。
【００４４】
ＡＡＶ８ベースのウイルスベクター、ＡＡＶ９ベースのウイルスベクター、およびＡＡＶｒｈ１０ベースのウイルスベクターは、本明細書で記載される方法のうちの、ある特定の方法においてにおいて使用される。ＡＡＶベースのウイルスベクターのヌクレオチド配列、ならびに組換えＡＡＶおよびＡＡＶカプシドを作る方法は、例えば、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第７，２８２，１９９号明細書、米国特許第７，７９０，４４９号明細書、米国特許第８，３１８，４８０号明細書、米国特許第８，９６２，３３２号明細書、および国際特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６号明細書において教示されている。本明細書の一態様では、トランス遺伝子（例えば、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ）をコードする、ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡＡＶｒｈ１０）ベースのウイルスベクターが提示される。ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、およびＡＡＶｒｈ１０を含むＡＡＶカプシドのアミノ酸配列を、図１２および表４に提示する。
【００４５】
ある特定の実施形態では、前出の一本鎖ＡＡＶ（ｓｓＡＡＶ）を使用することができる。ある特定の実施形態では、自己相補性ベクター、例えば、ｓｃＡＡＶを使用することができる（例えば、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Wu, 2007, Human Gene Therapy, 18(2):171-82、McCarty et al, 2001, Gene Therapy, Vol 8, Number 16, Pages 1248-1254；ならびに米国特許第６，５９６，５３５号明細書；同第７，１２５，７１７号明細書；および同第７，４５６，６８３号明細書を参照されたい）。
【００４６】
ある特定の実施形態では、本明細書で記載される方法において使用されるウイルスベクターは、アデノウイルスベースのウイルスベクターである。組換えアデノウイルスベクターを使用して、ＨｕＰＴＭｍＡｂもしくはＨｕＧｌｙＦａｂ、または抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を導入することができる。組換えアデノウイルスは、Ｅ１を欠失させ、Ｅ３を欠失させるかまたは欠失させず、発現カセットを、いずれかの欠失させた領域に挿入した、第１世代のベクターでありうる。組換えアデノウイルスは、Ｅ２領域およびＥ４領域の、完全または部分的な欠失を含有する、第２世代のベクターでありうる。ヘルパー依存性アデノウイルスは、アデノウイルスＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）およびパッケージングシグナル（ｐｈｉ）だけを保持する。トランス遺伝子は、ゲノムを、約３６ｋｂの野生型サイズに近似するように保つ、封入配列を有するか、または伴わずに、パッケージングシグナルと、３’ＩＴＲとの間に挿入される。アデノウイルスベクターを作製するための、例示的なプロトコールは、参照によりその全体において組み込まれる、Alba et al., 2005, “Gutless adenovirus:  last generation adenovirus for gene therapy,” Gene Therapy 12:S18-S27において見出すことができる。
【００４７】
ある特定の実施形態では、本明細書で記載される方法において使用されるウイルスベクターは、レンチウイルスベースのウイルスベクターである。組換えレンチウイルスベクターを使用して、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を導入することができる。４つのプラスミド：Ｇａｇ／ｐｏｌ配列を含有するプラスミド、Ｒｅｖ配列を含有するプラスミド、エンベロープタンパク質を含有するプラスミド（すなわち、ＶＳＶ−Ｇ）、およびパッケージングエレメントおよび抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片遺伝子を伴うシスプラスミドを使用して、構築物を作る。
【００４８】
レンチウイルスベクターを作製するために、細胞（すなわち、ＨＥＫ２９３ベースの細胞）に、４つのプラスミドを共トランスフェクトするが、ここで、ポリエチレンイミンまたはリン酸カルシウムを、とりわけ、トランスフェクション剤として使用することができる。次いで、レンチウイルスを、上清中に採取する（レンチウイルスは、活性であるのに、細胞から出芽する必要があるので、細胞を採取する必要はない／採取すべきではない）。上清を濾過し（０．４５μｍ）、次いで、塩化マグネシウムおよびベンゾナーゼを添加する。さらなる下流の工程は、広範に変動しうるが、ＴＦＦおよびカラムクロマトグラフィーを使用する工程が、最もＧＭＰ適合性の工程である。他の工程は、カラムクロマトグラフィーを伴う／伴わない、超遠心分離を使用する。レンチウイルスベクターを作製するための、例示的なプロトコールは、それらのいずれもが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Lesch et al., 2011, “Production and purification of lentiviral vector generated in 293T suspension cells with baculoviral vectors,” Gene Therapy 18:531-538；およびAusubel et al., 2012, “Production of CGMP-Grade Lentiviral Vectors,” Bioprocess Int. 10(2):32-43において見出すことができる。
【００４９】
具体的な実施形態では、本明細書で記載される方法における使用のためのベクターは、ベクターが、関与性の細胞に導入されたら、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの抗原結合性断片またはＨｕＧｌｙＦａｂの、グリコシル化変異体および／またはチロシン硫酸化変異体が、細胞により発現させられるように、ＨｕＧｌｙＦａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの抗原結合性断片をコードするベクターである。
【００５０】
５．１．３  遺伝子発現のプロモーターおよび修飾因子
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるベクターは、遺伝子の送達または遺伝子の発現をモジュレートする構成要素（例えば、「発現制御エレメント」）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるベクターは、遺伝子の発現をモジュレートする構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるベクターは、細胞への結合またはターゲティングに影響を及ぼす構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるベクターは、取込みの後における、ポリヌクレオチド（例えば、トランス遺伝子）の、細胞内局在化に影響を及ぼす構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるベクターは、例えば、ポリヌクレオチドを取り込んだ細胞を検出または選択するのに、検出用マーカーまたは選択用マーカーとして使用されうる構成要素を含む。
【００５１】
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、トランス遺伝子の発現を制御する、１つまたは複数のプロモーターを含む。ある特定の実施形態では、プロモーターは、構成的プロモーターである。ある特定の実施形態では、プロモーターは、ＣＢ７プロモーターである（参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Dinculescu et al., 2005, Hum Gene Ther 16: 649-663を参照されたい）。一部の実施形態では、ＣＢ７プロモーターは、ベクターにより駆動されるトランス遺伝子の発現を増強する、他の発現制御エレメントを含む。ある特定の実施形態では、他の発現制御エレメントは、ニワトリβ−アクチンイントロンおよび／またはウサギβ−グロビンポリＡシグナルを含む。ある特定の実施形態では、プロモーターは、ＴＡＴＡボックスを含む。ある特定の実施形態では、プロモーターは、１つまたは複数のエレメントを含む。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のプロモーターエレメントを、互いと比べて、反転することもでき、移動させることもできる。ある特定の実施形態では、プロモーターのエレメントを、協調的に機能するように配置する。ある特定の実施形態では、プロモーターのエレメントを、独立的に機能するように配置する。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、ヒトＣＭＶ前初期遺伝子プロモーター、ＳＶ４０早期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳ）ＬＴＲ（ｌｏｎｇ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）、およびラットインスリンプロモーターからなる群から選択される、１つまたは複数のプロモーターを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるベクターは、ＡＡＶ、ＭＬＶ、ＭＭＴＶ、ＳＶ４０、ＲＳＶ、ＨＩＶ−１、およびＨＩＶ−２のＬＴＲからなる群から選択される、１つまたは複数のＬＴＲ（ｌｏｎｇ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）プロモーターを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるベクターは、１つまたは複数の組織特異的プロモーター（例えば、網膜色素上皮細胞特異的プロモーター、ＣＮＳ特異的プロモーター、肝臓特異的プロモーター、または筋肉特異的プロモーター）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、ＲＰＥ６５プロモーターまたはオプシンプロモーター（網膜細胞特異的プロモーター／ＣＮＳ特異的プロモーター）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、ＴＢＧ（サイロキシン結合性グロブリン）プロモーター、ＡＰＯＡ２プロモーター、ＳＥＲＰＩＮＡ１（ｈＡＡＴ）プロモーター、もしくはＭＩＲ１２２プロモーターなど、肝細胞特異的プロモーターを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、ヒトデスミンプロモーターなどの筋肉特異的プロモーター（Jonuschies et al., 2014, Curr. Gene Ther. 14:276-288）、またはＰｉｔｘ３プロモーター（Coulon et al., 2007, JBC 282:33192）を含む。他の実施形態では、ウイルスベクターは、ＶＭＤ２プロモーターを含む。
【００５２】
ある特定の実施形態では、プロモーターは、誘導的プロモーターである。ある特定の実施形態では、プロモーターは、低酸素状態誘導性プロモーターである。ある特定の実施形態では、プロモーターは、低酸素状態誘導性因子（ＨＩＦ）結合性部位を含む。ある特定の実施形態では、プロモーターは、ＨＩＦ−１α結合性部位を含む。ある特定の実施形態では、プロモーターは、ＨＩＦ−２α結合性部位を含む。ある特定の実施形態では、ＨＩＦ結合性部位は、ＲＣＧＴＧモチーフを含む。ＨＩＦ結合性部位の位置および配列に関する詳細については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Schodel, et al., Blood, 2011, 117(23):e207-e217を参照されたい。ある特定の実施形態では、プロモーターは、ＨＩＦ転写因子以外の低酸素状態誘導性転写因子に対する結合性部位を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、低酸素状態において、優先的に翻訳される、１つまたは複数のＩＲＥＳ部位を含む。低酸素状態誘導性遺伝子の発現およびこれに関与する因子に関する教示については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Kenneth and Rocha, Biochem J., 2008, 414:19-29を参照されたい。具体的な実施形態では、低酸素状態誘導性プロモーターは、ヒトＮ−ＷＡＳＰプロモーター（例えば、Ｎ−ＷＡＳＰプロモーターの教示について、参照により組み込まれるSalvi, 2017, Biochemistry and Biophysics Reports 9:13-21を参照されたい）であるか、またはヒトＥｐｏの低酸素状態誘導性プロモーター（Ｅｐｏ低酸素状態誘導性プロモーターの開示について、参照により組み込まれる、Tsuchiya et al., 1993, J. Biochem. 113:395-400を参照されたい）である。他の実施形態では、プロモーターは、薬物誘導性プロモーター、例えば、ラパマイシンまたはこの類似体の投与により誘導されるプロモーターである。例えば、薬物誘導性プロモーターの開示について、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１８３１７号、同第ＷＯ９６／２０９５１号、同第ＷＯ９６／４１８６５号、同第ＷＯ９９／１０５０８号、同第ＷＯ９９／１０５１０号、同第ＷＯ９９／３６５５３号、および同第ＷＯ９９／４１２５８号、ならびに米国特許第７，０６７，５２６号明細書における、ラパマイシン誘導性プロモーターについての開示を参照されたい。
【００５３】
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、プロモーター以外の、１つまたは複数の調節性エレメントを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、エンハンサーを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、リプレッサーを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、イントロンまたはキメライントロンを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、ポリアデニル化配列を含む。
【００５４】
５．１．４  シグナルペプチド
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるベクターは、タンパク質の送達をモジュレートする構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、１つまたは複数のシグナルペプチドを含む。本明細書では、シグナルペプチドはまた、「リーダー配列」または「リーダーペプチド」とも称する。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、トランス遺伝子産物が、細胞内の、適正なパッケージング（例えば、グリコシル化）を達成することを可能とする。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、トランス遺伝子産物が、細胞内の、適正な局在化を達成することを可能とする。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、トランス遺伝子産物が、細胞からの分泌を達成することを可能とする。
【００５５】
遺伝子治療の文脈で、または細胞培養物中で、タンパク質を産生するためのシグナル配列を選択する、２つの一般的な手法が存在する。１つの手法は、発現させるタンパク質と同種のタンパク質に由来するシグナルペプチドを使用することである。例えば、ヒト抗体のシグナルペプチドを使用して、ＣＨＯ細胞内または他の細胞内で、ＩｇＧを発現させることができる。別の手法は、発現のために使用される、特定の宿主細胞について最適化されたシグナルペプチドを同定することである。シグナルペプチドは、異なるタンパク質の間で交換することもでき、なおまたは異なる生物のタンパク質の間で交換することもできるが、通例、この細胞型の、最も夥多な分泌タンパク質のシグナル配列が、タンパク質発現のために使用される。例えば、血漿中で最も夥多なタンパク質である、ヒトアルブミンのシグナルペプチドは、ＣＨＯ細胞内のタンパク質の産生収率を、実質的に増大させることが見出された。しかし、ある特定のシグナルペプチドは、発現させたタンパク質から切断された後において、機能を、「ターゲティング後機能」として保持し、活性を及ぼしうる。したがって、具体的な実施形態では、シグナルペプチドは、発現のために使用される細胞により分泌されて、ターゲティング後機能を回避する、最も夥多なタンパク質のシグナルペプチドから選択される。好ましい実施形態では、シグナル配列を、重鎖配列および軽鎖配列の両方と融合させる。好ましい配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）（図２〜９を参照されたい）である。代替的に、眼（ＣＮＳを含む）、筋肉、または肝臓における、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの発現に適切なシグナル配列を、それぞれ、下記の表１、２、および３に提示する。
【００５６】
【表１】
2021501196.tif 000003
【００５７】
【表２】
2021501196.tif 000004
【００５８】
【表３−１】
2021501196.tif 000005
【００５９】
【表３−２】
2021501196.tif 000006
【００６０】
５．１．５  ポリシストロニックのメッセージ：ＩＲＥＳおよびＦ２ＡリンカーならびにｓｃＦｖ構築物
内部リボソーム侵入部位：単一の構築物は、形質導入された細胞により、個別の重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドを発現させるように、切断型リンカーまたはＩＲＥＳで隔てられた、重鎖および軽鎖の両方をコードするよう操作することができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、ポリシストロニックの（例えば、バイシストロニックの）メッセージをもたらす。例えば、ウイルス構築物は、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）エレメントにより隔てられた、重鎖および軽鎖をコードしうる（バイシストロニックのベクターを創出するための、ＩＲＥＳエレメントの使用の例については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Gurtu et al., 1996, Biochem. Biophys. Res. Comm. 229(1):295-8を参照されたい）。ＩＲＥＳエレメントは、リボソーム走査モデルを迂回し、内部部位において、翻訳を開始する。ＡＡＶ内のＩＲＥＳの使用については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Furling et al., 2001, Gene Ther 8(11): 854-73において記載されている。ある特定の実施形態では、バイシストロニックのメッセージは、その中のポリヌクレオチドのサイズに対して制約のあるウイルスベクター内に含有される。ある特定の実施形態では、バイシストロニックのメッセージは、ＡＡＶウイルスベースのベクター（例えば、ＡＡＶ８ベースのベクター、ＡＡＶ９ベースのベクター、またはＡＡＶｒｈ１０ベースのベクター）内に含有される。
【００６１】
フューリン−Ｆ２Ａリンカー：他の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、自己切断型フューリン／Ｆ２Ａ（Ｆ／Ｆ２Ａ）リンカーなどの切断型リンカーにより隔てられた、重鎖および軽鎖（各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Fang et al., 2005, Nature Biotechnology 23: 584-590；およびFang, 2007, Mol Ther 15: 1153-9）をコードする。例えば、フューリン−Ｆ２Ａリンカーを、発現カセットに組み込んで、重鎖コード配列と、軽鎖コード配列とを隔てる結果として、構造：
リーダー−重鎖−フューリン部位−Ｆ２Ａ部位−リーダー−軽鎖−ポリＡ
を伴う構築物もたらすことができる。アミノ酸配列ＬＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２１０）を伴うＦ２Ａ部位は、自己プロセシング型である結果として、最終的なＧアミノ酸残基とＰアミノ酸残基との「切断」をもたらす。使用されうる、さらなるリンカーは、
Ｔ２Ａ：（ＧＳＧ）ＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号２１１）；
Ｐ２Ａ：（ＧＳＧ）ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号２１２）；
Ｅ２Ａ：（ＧＳＧ）ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２１３）；
Ｆ２Ａ：（ＧＳＧ）ＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２１４）
を含むがこれらに限定されない。
【００６２】
リボソームが、オープンリーディングフレーム内のＦ２Ａ配列に遭遇すると、ペプチド結合が省かれる結果として、翻訳の終結、または下流の配列（軽鎖）の翻訳の継続がもたらされる。この自己プロセシング配列は、重鎖のＣ末端において、さらなるアミノ酸の連なりを結果としてもたらす。しかし、次いで、このような、さらなるアミノ酸は、宿主細胞のフューリンにより、Ｆ２Ａ部位の直前に位置し、かつ、重鎖配列の後に位置する、フューリン部位において切断され、カルボキシペプチダーゼにより、さらに切断される。結果としてもたらされる重鎖は、Ｃ末端に含まれる、１つ、２つ、３つ、もしくはこれを越えるさらなるアミノ酸を有する場合もあり、使用されるフューリンリンカーの配列、およびリンカーを、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて切断するカルボキシペプチダーゼに応じて、このようなさらなるアミノ酸を有さない場合もある（例えば、Fang et al., 17 April 2005, Nature Biotechnol. Advance Online Publication; Fang et al., 2007, Molecular Therapy 15(6):1153-1159；Luke, 2012, Innovations in Biotechnology, Ch. 8, 161-186を参照されたい）。使用されうるフューリンリンカーは、４つの塩基性アミノ酸の連鎖、例えば、ＲＫＲＲ（配列番号２１５）、ＲＲＲＲ（配列番号２１６）、ＲＲＫＲ（配列番号２１７）、またはＲＫＫＲ（配列番号２１８）を含む。このリンカーが、カルボキシペプチダーゼにより切断されると、０、１つ、２つ、３つ、または４つのさらなるアミノ酸、例えば、Ｒ、ＲＲ、ＲＫ、ＲＫＲ、ＲＲＲ、ＲＲＫ、ＲＫＫ、ＲＫＲＲ（配列番号２１５）、ＲＲＲＲ（配列番号２１６）、ＲＲＫＲ（配列番号２１７）、またはＲＫＫＲ（配列番号２１８）が、重鎖のＣ末端上に、なおも残存しうるように、さらなるアミノ酸が、なおも残存しうる。ある特定の実施形態では、１つのリンカーが、カルボキシペプチダーゼにより切断され、さらなるアミノ酸は残存しない。ある特定の実施形態では、本明細書で記載される方法における使用のための構築物により産生される、抗体、例えば、抗原結合性断片の集団のうちの、０．５％〜１％、１％〜２％、５％、１０％、１５％、または２０％は、切断の後、重鎖のＣ末端上に残存する、１つ、２つ、３つ、または４つのアミノ酸を有する。ある特定の実施形態では、フューリンリンカーは、重鎖のＣ末端上の、さらなるアミノ酸が、Ｒ、ＲＸ、ＲＸＫ、ＲＸＲ、ＲＸＫＲ、またはＲＸＲＲ［配列中、Ｘは、任意のアミノ酸、例えば、アラニン（Ａ）である］であるように、配列Ｒ−Ｘ−Ｋ／Ｒ−Ｒを有する。ある特定の実施形態では、さらなるアミノ酸は、重鎖のＣ末端上に残存しない場合がある。
【００６３】
可撓性のペプチドリンカー：一部の実施形態では、単一の構築物は、ｓｃＦｖをコードするものなど、可撓性ペプチドリンカーにより隔てられた、重鎖および軽鎖（好ましくは、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメイン）の両方をコードするように操作することができる。可撓性ペプチドリンカーは、隣接する重鎖ドメインと、軽鎖ドメインとが、互いに対して、自由に動くように、グリシンおよびセリンのような可撓性残基から構成することができる。構築物は、重鎖可変ドメインが、ｓｃＦｖのＮ末端にあり、これに続き、リンカーがあり、次いで、軽鎖可変ドメインがあるように配置することができる。代替的に、構築物は、軽鎖可変ドメインが、ｓｃＦｖのＮ末端にあり、これに続き、リンカーがあり、次いで、重鎖可変ドメインがあるように配置することができる。すなわち、構成要素は、ＮＨ２−ＶＬ−リンカー−ＶＨ−ＣＯＯＨまたはＮＨ２−ＶＨ−リンカー−ＶＬ−ＣＯＯＨとして配置することができる。
【００６４】
ある特定の実施形態では、本明細書で記載される発現カセットは、その中のポリヌクレオチドのサイズに対して制約のあるウイルスベクター内に含有される。ある特定の実施形態では、発現カセットは、ＡＡＶウイルスベースのベクター内に含有される。ある特定のベクターのサイズの制約に起因して、ベクターは、治療用抗体の完全重鎖および完全軽鎖のコード配列を収容できる場合もあり、収容できない場合もあるが、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片またはｓｃＦｖの重鎖および軽鎖など、抗原結合性断片の重鎖および軽鎖のコード配列は収容しうる。特に、本明細書で記載されるＡＡＶベクターは、約４．７キロベースのトランス遺伝子を収容しうる。ＣＢ７プロモーター、ニワトリβ−アクチンイントロン、ウサギβ−グロビンポリＡシグナル、およびＩＴＲを含有する、図１の構築物などの構築物では、コードされる治療用抗体は、約７５２アミノ酸でありうる。小型の発現エレメントで置換すれば、全長治療用抗体など、大型のタンパク質産物の発現を可能とするであろう。
【００６５】
５．１．６  非翻訳領域
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、１つまたは複数の非翻訳領域（ＵＴＲ）、例えば、３’ＵＴＲおよび／または５’ＵＴＲを含む。ある特定の実施形態では、ＵＴＲを、所望されるタンパク質発現のレベルについて最適化する。ある特定の実施形態では、ＵＴＲを、トランス遺伝子のｍＲＮＡ半減期について最適化する。ある特定の実施形態では、ＵＴＲを、トランス遺伝子のｍＲＮＡの安定性について最適化する。ある特定の実施形態では、ＵＴＲを、トランス遺伝子のｍＲＮＡの二次構造について最適化する。
【００６６】
５．１．７  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、１つまたは複数のＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）配列を含む。ＩＴＲ配列は、組換え遺伝子発現カセットを、ウイルスベクターのビリオンにパッケージングするために使用することができる。ある特定の実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ８またはＡＡＶ２に由来する（例えば、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Yan et al., 2005, J. Virol., 79(1):364-379；米国特許第７，２８２，１９９号明細書、米国特許第７，７９０，４４９号明細書、米国特許第８，３１８，４８０号明細書、米国特許第８，９６２，３３２号明細書、および国際特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６号明細書を参照されたい）。
【００６７】
ある特定の実施形態では、自己相補性ベクター、例えば、ｓｃＡＡＶを作製するのに使用される、修飾ＩＴＲを使用することができる（例えば、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Wu, 2007, Human Gene Therapy, 18(2):171-82、McCarty et al, 2001, Gene Therapy, Vol 8, Number 16, Pages 1248-1254；ならびに米国特許第６，５９６，５３５号明細書；同第７，１２５，７１７号明細書；および同第７，４５６，６８３号明細書を参照されたい）。
【００６８】
５．１．８  トランス遺伝子
トランス遺伝子は、本明細書で開示される治療用抗体に基づく、全長抗体またはその抗原結合性断片、好ましくは、Ｆａｂ断片（ＨｕＧｌｙＦａｂ）またはＦ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖとしてのＨｕＰＴＭ  ｍＡｂをコードする。具体的な実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片、特に、ＨｕＧｌｙＦａｂを、Ｆａｂドメイン上に、さらなるグリコシル化部位を含有するように操作する（例えば、Ｆａｂドメイン上の高グリコシル化部位についてのその記載については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112を参照されたい）。図１１は、本明細書で開示される治療用抗体のＦａｂ重鎖およびＦａｂ軽鎖のアライメントを提示し、アスパラギン、または、一部の場合には、セリンにより置換される結果として、高グリコシル化をもたらしうる残基を、緑色で強調する。
【００６９】
ある特定の実施形態では、トランス遺伝子は、重鎖および軽鎖のコード配列により、全長抗体またはその抗原結合性断片をコードする。全長抗体を使用する場合、修飾ｍＡｂをコードする構築物を使用することができる。例えば、全てのヒトＩｇＧサブクラスの重鎖遺伝子内に保存されるＣ末端リシン（−Ｋ）は、一般に、血清中を循環する抗体には存在しない（Ｃ末端リシンは、循環中で切断される結果として、循環ＩｇＧの異種集団をもたらす）（van den Bremer et al., 2015, mAbs 7:672-680）。全長ｍＡｂのためのベクター化構築物内では、Ｆｃ末端のＣ末端リシン（−Ｋ）、またはグリシン−リシン（−ＧＫ）をコードするＤＮＡを欠失させて、ｉｎ  ｓｉｔｕにおいて、均一性の大きな抗体産物を作製することができる（参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Hu et al., 2017 Biotechnol. Prog. 33: 786-794を参照されたい）。
【００７０】
代替的に、抗原結合性断片を使用すると有利である。図２Ａ〜２Ｆ、３Ａ〜３Ｅ、４Ａ〜４Ｂ、５Ａ〜５Ｄ、６、７Ａ、７Ｂ、８Ａ〜８Ｈ、および９Ａ〜９Ｂは、治療用抗体のＦａｂ断片およびｓｃＦｖの、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を提示する（治療用抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を提示する表４もまた参照されたい）。トランス遺伝子は、重鎖配列および軽鎖配列をコードするヌクレオチド配列であって、本明細書でさらに記載される、適切なアイソタイプについて、重鎖のＦａｂ部分＋重鎖の定常ドメイン部分と、軽鎖とをコードするヌクレオチド配列を使用するヌクレオチド配列を含みうる。ヒト細胞内の発現にコドン最適化されたヌクレオチド配列であって、本明細書で開示される治療用抗体の重鎖および軽鎖のＦａｂ断片部分をコードするヌクレオチド配列を、表５に提示する。トランス遺伝子は、図２Ａ〜２Ｆ、３Ａ〜３Ｅ、４Ａ〜４Ｂ、５Ａ〜５Ｃ、６、７Ａ、７Ｂ、８Ａ〜８Ｈ、および９Ａ〜９Ｂに提示される配列をコードするヌクレオチド配列を使用するが、鎖間ジスルフィド結合を形成する、重鎖上のヒンジ領域の部分（すなわち、配列ＣＰＰＣＰＡ（配列番号２１９）を含有する部分）を含まないＦａｂ断片をコードしうる。Ｃ末端における、ヒンジ領域のＣＰＰＣＰ（配列番号２２０）配列を含有しない、重鎖可変ドメイン配列が、鎖内ジスルフィド結合を形成せず、したがって、対応する軽鎖可変ドメイン配列と共に、Ｆａｂ断片を形成するのに対し、配列ＣＰＰＣＰ（配列番号２２０）を含有する、Ｃ末端におけるヒンジ領域の部分を伴う重鎖可変ドメイン配列は、鎖内ジスルフィド結合を形成し、したがって、Ｆａｂ２断片を形成する。例えば、一部の実施形態では、トランス遺伝子は、例えば、図８Ｄにおけるブロルシズマブ、および図５ＤにおけるＥ０６について描示される通り、間の可撓性リンカーにより接続された、軽鎖可変ドメインと、重鎖可変ドメイン（この場合、重鎖可変ドメインは、ｓｃＦｖのＮ末端にある場合もあり、Ｃ末端にある場合もある）とを含む、ｓｃＦｖをコードしうる。代替的に、他の実施形態では、トランス遺伝子は、重鎖配列のＣ末端に含まれうる、ヒンジ領域の多様な領域について描示する、図２Ａ〜２Ｆ、３Ａ〜３Ｅ、４Ａ〜４Ｂ、５Ａ〜５Ｃ、６、７Ａ、７Ｂ、８Ａ〜８Ｃ、８Ｅ〜８Ｈ、および９Ａ〜９Ｂにおいて描示される、ヒンジ領域の、少なくとも、配列ＣＰＰＣＡ（配列番号２２１）を含む、軽鎖配列および重鎖配列をコードするヌクレオチド配列を含むＦ（ａｂ’）２断片をコードしうる。既存の抗ヒンジ抗体（ＡＨＡ）は、免疫原性を引き起こし、有効性を低減する可能性がある。したがって、ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１アイソタイプでは、Ｄ２２１によるＣ末端、または突然変異Ｔ２２５ＬによるＣ末端、またはＬ２４２によるＣ末端は、ＡＨＡへの結合を低減しうる（例えば、Brezski, 2008, J Immunol 181: 3183-92；およびKim, 2016, 8: 1536-1547を参照されたい）。ＩｇＧ２では、ＩｇＧ２のヒンジ領域は、内因性ＡＨＡを発生させるのに必要とされる、酵素による切断を受けやすくないので、ＡＨＡの危険性は小さい（例えば、Brezski, 2011, MAbs 3: 558-567を参照されたい）。
【００７１】
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、以下のエレメントを、以下：ａ）構成的プロモーター配列または誘導的（例えば、低酸素状態誘導性またはリファマイシン誘導性）プロモーター配列、およびｂ）トランス遺伝子（例えば、ＨｕＧｌｙＦａｂ）をコードする配列の順序で含む。ある特定の実施形態では、トランス遺伝子をコードする配列は、ＩＲＥＳエレメントにより隔てられた、複数のＯＲＦを含む。ある特定の実施形態では、ＯＲＦは、ＨｕＧｌｙＦａｂの重鎖ドメインおよび軽鎖ドメインをコードする。ある特定の実施形態では、トランス遺伝子をコードする配列は、Ｆ／Ｆ２Ａ配列により隔てられた、１つのＯＲＦ内の、複数のサブユニットを含む。ある特定の実施形態では、トランス遺伝子を含む配列は、Ｆ／Ｆ２Ａ配列により隔てられた、ＨｕＧｌｙＦａｂの重鎖ドメインおよび軽鎖ドメインをコードする。ある特定の実施形態では、トランス遺伝子を含む配列は、可撓性ペプチドリンカーにより隔てられた、ＨｕＧｌｙＦａｂの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインをコードする。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、以下のエレメントを、以下：ａ）構成的プロモーター配列または誘導的プロモーター配列、およびｂ）トランス遺伝子（例えば、ＨｕＧｌｙＦａｂ）をコードする配列の順序で含み、この場合、トランス遺伝子は、ＩＲＥＳエレメントにより隔てられた、シグナルペプチド、軽鎖Ｆａｂ部分、および重鎖Ｆａｂ部分をコードするヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、以下のエレメントを、以下：ａ）構成的プロモーター配列または低酸素状態誘導性プロモーター配列、およびｂ）トランス遺伝子をコードする配列であって、切断型Ｆ／Ｆ２Ａ配列または可撓性ペプチドリンカーにより隔てられた、シグナルペプチド、軽鎖配列、および重鎖配列を含む配列の順序で含む。
【００７２】
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、以下のエレメントを、以下：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）構成的プロモーター配列または誘導的プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）トランス遺伝子をコードする配列（例えば、ＨｕＧｌｙＦａｂ）、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、およびｍ）第２のＩＴＲ配列の順序で含む。
【００７３】
ある特定の実施形態では、本明細書で提示されるウイルスベクターは、以下のエレメントを、以下：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）構成的プロモーター配列または誘導的プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）トランス遺伝子をコードする配列（例えば、ＨｕＧｌｙＦａｂ）、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、およびｍ）第２のＩＴＲ配列の順序で含み、この場合、トランス遺伝子は、シグナルペプチドを含み、トランス遺伝子は、切断型Ｆ／Ｆ２Ａ配列により隔てられた、軽鎖配列および重鎖配列をコードする。
【００７４】
５．１．９  ベクターの製造および試験
本明細書で提示されるウイルスベクターは、宿主細胞を使用して製造することができる。本明細書で提示されるウイルスベクターは、哺乳動物の宿主細胞、例えば、Ａ５４９細胞、ＷＥＨＩ細胞、１０Ｔ１／２細胞、ＢＨＫ細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＣＯＳ１細胞、ＣＯＳ７細胞、ＢＳＣ１細胞、ＢＳＣ４０細胞、ＢＭＴ１０細胞、ＶＥＲＯ細胞、Ｗ１３８細胞、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、Ｓａｏｓ細胞、Ｃ２Ｃ１２細胞、Ｌ細胞、ＨＴ１０８０細胞、ＨｅｐＧ２細胞、初代線維芽細胞、肝細胞、および筋芽細胞を使用して製造することができる。本明細書で提示されるウイルスベクターは、ヒト、サル、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスターに由来する宿主細胞を使用して製造することができる。
【００７５】
宿主細胞を、トランス遺伝子をコードする配列、および関連するエレメント（すなわち、ベクターゲノム）、ならびに宿主細胞内でウイルスを産生する手段、例えば、複製遺伝子およびカプシド遺伝子（例えば、ＡＡＶのｒｅｐ遺伝子およびｃａｐ遺伝子）により安定に形質転換する。ＡＡＶ８カプシドを伴う組換えＡＡＶベクターを作製する方法については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第７，２８２，１９９号明細書の、「発明の詳細な説明」のＩＶ節を参照されたい。前記ベクターのゲノムコピー力価は、例えば、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）解析により決定することができる。ビリオンは、例えば、ＣｓＣｌ２沈降により回収することができる。
【００７６】
代替的に、昆虫細胞内のバキュロウイルス発現系を使用して、ＡＡＶベクターを作製することができる。総説については、製造法については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Aponte-Ubillus et al., 2018, Appl. Microbiol. Biotechnol. 102:1045-1054を参照されたい。
【００７７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、例えば、細胞培養物アッセイを使用して、本明細書で記載されるベクターからの、トランス遺伝子の発現を測定し、したがって、例えば、ベクターの有効性を指し示すことができる。例えば、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株（Ｌｏｎｚａ）、ヒト胎児網膜細胞または網膜色素上皮細胞に由来する細胞株、例えば、網膜色素上皮細胞株である、ｈＴＥＲＴ  ＲＰＥ−１（ＡＴＣＣ（登録商標）から入手可能である）を使用して、トランス遺伝子の発現を評価することができる。発現させたら、発現産物の特徴であって、ＨｕＧｌｙＦａｂと関連する、グリコシル化およびチロシン硫酸化パターンの決定を含む特徴を決定することができる。グリコシル化パターンおよびこれを決定する方法については、５．２．１節において論じ、チロシン硫酸化パターンおよびこれを決定する方法については、５．２．２節において論じる。加えて、細胞により発現させたＨｕＧｌｙＦａｂのグリコシル化／硫酸化から生じる利益は、当技術分野で公知のアッセイ、例えば、５．２．１および５．２．２節において記載されている方法を使用して決定することができる。
【００７８】
５．１．１０  組成物
ヒト対象への投与に適する医薬組成物は、生理学的に適合性の水性緩衝液、界面活性剤、および任意選択の賦形剤を含む製剤緩衝液中の、組換えベクターの懸濁液を含む。このような製剤緩衝液は、多糖、界面活性剤、ポリマー、または油のうちの１つまたは複数を含みうる。
【００７９】
５．２  Ｎ−グリコシル化、チロシン硫酸化、およびＯ−グリコシル化
本明細書で開示される、ＨｕＧｌｙＦａｂおよびＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖのアミノ酸配列（一次配列）は、各々、Ｎ−グリコシル化またはチロシン硫酸化が生じる、少なくとも１つの部位を含む（治療用抗体のＦａｂ断片のアミノ酸配列内の、グリコシル化および／または硫酸化の位置については、図２Ａ〜２Ｆ、３Ａ〜３Ｅ、４Ａ〜４Ｂ、５Ａ〜５Ｄ、６、７Ａ〜７Ｂ、８Ａ〜８Ｈ、および９Ａ〜９Ｂを参照されたい）。
【００８０】
５．２．１  Ｎ−グリコシル化
逆グリコシル化部位
カノニカルのＮ−グリコシル化配列は、Ａｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒ（またはＴｈｒ）［配列中、Ｘは、Ｐｒｏを除く、任意のアミノ酸でありうる］であることが、当技術分野で公知である。しかし、近年、逆コンセンサスモチーフである、Ｓｅｒ（またはＴｈｒ）−Ｘ−Ａｓｎ［配列中、Ｘは、Ｐｒｏを除く、任意のアミノ酸でありうる］の文脈では、ヒト抗体のアスパラギン（Ａｓｎ）残基を、グリコシル化することができることが裏付けられている。Valliere-Douglass et al., 2009, J. Biol. Chem. 284:32493-32506；およびValliere-Douglass et al., 2010, J. Biol. Chem. 285:16012-16022を参照されたい。本明細書で開示される通り、本明細書で開示される、ある特定のＨｕＧｌｙＦａｂおよびＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖは、このような逆コンセンサス配列を含む。
【００８１】
非コンセンサスグリコシル化部位
逆Ｎ−グリコシル化部位に加えて、近年、非コンセンサスモチーフである、Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒの文脈では、ヒト抗体のグルタミン（Ｇｌｎ）残基は、グリコシル化することができることが裏付けられている。Valliere-Douglass et al., 2010, J. Biol. Chem. 285:16012-16022を参照されたい。驚くべきことに、本明細書で開示される、ＨｕＧｌｙＦａｂ断片のうちのある特定のものは、このような非コンセンサス配列を含む。加えて、Ｏ−グリコシル化は、酵素による、セリン残基またはトレオニン残基への、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンの付加を含む。抗体のヒンジ領域内に存在するアミノ酸残基は、Ｏ−グリコシル化されうることが裏付けられている。ここでも、大腸菌（E. coli）は、天然では、ヒトＯ−グリコシル化において使用される機構と同等の機構を含有しないため（代わりに、大腸菌（E. coli）内のＯ−グリコシル化は、細菌が、特異的Ｏ−グリコシル化機構を含有するように修飾される場合に限られることが裏付けられている。例えば、Farid-Moayer et al., 2007, J. Bacteriol. 189:8088-8098を参照されたい）、Ｏ−グリコシル化の可能性は、本明細書で提示される治療用抗体に、例えば、大腸菌（E. coli）内で産生される抗原結合性断片と比較して、別の利点を付与する。
【００８２】
操作Ｎ−グリコシル化部位
ある特定の実施形態では、ＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＴＰＭ  ｓｃＦｖをコードする核酸を、通常、ＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖと関連するより（例えば、その非修飾状態にあるＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖと関連する、Ｎ−グリコシル化部位の数と比べて）、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、又は１０以上のＮ−グリコシル化部位（カノニカルのＮ−グリコシル化コンセンサス配列、逆Ｎ−グリコシル化部位、および非コンセンサスＮ−グリコシル化部位を含む）を含むように修飾する。具体的な実施形態では、グリコシル化部位の導入は、前記導入が、抗原結合性断片の、その抗原への結合に影響を及ぼさない限りにおいて、抗原結合性断片の、一次構造内の任意の位置における、Ｎ−グリコシル化部位（カノニカルのＮ−グリコシル化コンセンサス配列、逆Ｎ−グリコシル化部位、および非コンセンサスＮ−グリコシル化部位を含む）の挿入により達せられる。グリコシル化部位の導入は、例えば、新たなアミノ酸を、抗原結合性断片、または抗原結合性断片が由来する抗体の一次構造に付加する（すなわち、グリコシル化部位を、完全に、または部分的に付加する）ことにより達することもでき、Ｎ−グリコシル化部位を作出するために、抗原結合性断片内、または抗原結合性断片が由来する抗体内の、既存のアミノ酸を突然変異させる（すなわち、アミノ酸を、抗原結合性断片／抗体に付加せず、抗原結合性断片／抗体の、選択されたアミノ酸を、Ｎ−グリコシル化部位を形成するように突然変異させる）ことにより達することもできる。当業者は、当技術分野で公知の手法、例えば、タンパク質をコードする核酸配列の修飾を含む組換え法を使用して、タンパク質のアミノ酸配列を、たやすく修飾しうることを認識するであろう。
【００８３】
具体的な実施形態では、ＨｕＧｌｙＭａｂまたは抗原結合性断片を、網膜細胞、ＣＮＳ細胞、肝細胞、または筋細胞など、哺乳動物の細胞内で発現させた場合に、それが、高グリコシル化されうるように修飾する。参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Courtois et al., 2016, mAbs 8:99-112を参照されたい。
【００８４】
ＨｕＰＴＭ抗原結合性断片のＮ−グリコシル化
低分子薬と異なり、生物学的薬剤は、通例、異なる有効性、薬物動態、および／または安全性のプロファイルを有しうる、異なる修飾または形態を伴う、多くの変異体の混合物を含む。遺伝子治療手法またはタンパク質治療手法において作製される、あらゆる分子を、完全グリコシル化および硫酸化することは、不可欠ではない。それよりも、作製される糖タンパク質の集団は、有効性を裏付けるのに十分な、グリコシル化（２，６−シアル化を含む）および硫酸化を有するものとされる。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、例えば、疾患もしくは異常な状態の進行を緩徐化もしくは停止させるか、または疾患もしくは異常な状態と関連する、１つもしくは複数の症状の重症度を軽減することでありうる。
【００８５】
ＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖを、ヒト細胞内で発現させる場合、抗原結合性断片のＮ−グリコシル化部位を、多様な異なるグリカンによりグリコシル化することができる。当技術分野では、抗原結合性断片のＮ−グリカンが、特徴付けられている。例えば、Bondt et al., 2014, Mol. & Cell. Proteomics 13.11:3029-3039（その、Ｆａｂに会合させたＮ−グリカンの開示については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる；また、図１０も参照されたい）は、Ｆａｂと会合させたグリカンを特徴付け、抗体のＦａｂと、Ｆｃ部分とが、Ｆａｂグリカンのガラクトシル化、シアル化、および分岐（例えば、分岐型ＧｌｃＮＡｃを伴う）が高度であり、Ｆｃグリカンに関しては、フコシル化が低度である、顕著に異なるグリコシル化パターンを含むことを裏付ける。Ｂｏｎｄｔと同様に、Huang et al., 2006, Anal. Biochem. 349:197-207（その、Ｆａｂに会合させたＮ−グリカンの開示については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる）は、Ｆａｂの大半のグリカンが、シアル化されていることを見出した。しかし、Ｈｕａｎｇにより検討された抗体のＦａｂ（マウス細胞をバックグラウンドとして作製された）内では、同定されたシアル残基は、Ｎ−アセチルノイラミン酸（主要なヒトシアル酸である、「Ｎｅｕ５Ａｃ」）ではなく、Ｎ−グリコシルノイラミン酸（「Ｎｅｕ５Ｇｃ」または「ＮｅｕＧｃ」）（ヒトに天然ではない）であった。加えて、Song et al., 2014, Anal. Chem. 86:5661-5666（その、Ｆａｂに会合させたＮ−グリカンの開示については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる）は、市販の抗体と会合させた、Ｎ−グリカンのライブラリーについて記載する。
【００８６】
ＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖを、ヒト細胞内で発現させる場合、原核宿主細胞（例えば、大腸菌（E. coli））内、または真核宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞）内の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける産生に対する必要が回避されることは、重要である。それよりも、本明細書で記載される方法の結果として、ＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖのＮ−グリコシル化部位は、ヒトの処置に関与性であり、かつ、有益なグリカンで装飾すると有利である。例えば、ＣＨＯ細胞は、（１）２，６シアリルトランスフェラーゼを発現させず、したがって、Ｎ−グリコシル化時に、２，６シアル酸を付加できず；（２）Ｎｅｕ５Ａｃではなく、シアル酸としてのＮｅｕ５Ｇｃを付加することが可能であり；（３）大半の個体において存在する、抗α−Ｇａｌ抗体と反応し、高濃度の場合、アナフィラキシーを誘発しうる免疫原性グリカンである、α−Ｇａｌ抗原もまた産生し；かつ、（４）大腸菌（E. coli）は、天然では、Ｎ−グリコシル化に必要とされる構成要素を含有しないため、このような利点は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、または大腸菌（E. coli）を、抗体／抗原結合性断片の産生において活用する場合には、達成されない。
【００８７】
当技術分野では、抗原結合性断片を含む抗体のグリコシル化パターンを決定するためのアッセイが公知である。例えば、ヒドラジン分解を使用して、グリカンを解析することができる。まず、ヒドラジンを伴うインキュベーションにより、多糖を、それらを会合させたタンパク質から放出する（Ｌｕｄｇｅｒ  Ｌｉｂｅｒａｔｅ  Ｈｙｄｒａｚｉｎｏｌｙｓｉｓ  Ｇｌｙｃａｎ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｋｉｔ、Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ、ＵＫを使用することができる）。求核剤であるヒドラジンは、多糖と、キャリアタンパク質とのグリコシド結合を攻撃し、接合させたグリカンの放出を可能とする。この処置時に、Ｎ−アセチル基は失われるので、再Ｎ−アセチル化により再構成しなければならない。グリカンはまた、清浄に、かつ、ヒドラジンより少ない副反応を伴って切断する、ＰＮＧａｓｅ  ＦおよびＥｎｄｏ  Ｈなど、グリコシダーゼまたはエンドグリコシダーゼなどの酵素を使用しても放出することができる。遊離グリカンを、炭素カラム上で精製し、その後、還元末端において、フルオロフォアである、２−アミノベンズアミドにより標識することができる。標識された多糖は、Royle et al, Anal Biochem 2002, 304(1):70-90によるＨＰＬＣプロトコールに従い、ＧｌｙｃｏＳｅｐ−Ｎカラム（ＧＬ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で分離することができる。結果として得られる蛍光クロマトグラムは、多糖の長さおよび反復単位数を指し示す。構造情報は、個々のピークを収集し、その後、ＭＳ／ＭＳ解析を実施することにより集めることができる。これにより、反復単位の単糖組成および配列を確認し、加えて、多糖組成の均一性においても同定することができる。低分子量または高分子量の特異的ピークを、ＭＡＬＤＩ−ＭＳ／ＭＳにより解析し、結果を使用して、グリカン配列を確認する。クロマトグラム内の各ピークは、ある特定の数の、その反復単位および断片、例えば、糖基からなる、ポリマー、例えば、グリカンに対応する。したがって、クロマトグラムは、ポリマー、例えば、グリカンの長さの分布の測定を可能とする。溶離時間が、ポリマー長の指標であるのに対し、蛍光強度は、それぞれのポリマー、例えば、グリカンのモル存在度と相関する。抗原結合性断片と会合したグリカンを評価するための他の方法は、Bondt et al., 2014, Mol. & Cell. Proteomics 13.11:3029-3039、Huang et al., 2006, Anal. Biochem. 349:197-207、および／またはSong et al., 2014, Anal. Chem. 86:5661-5666により記載されている方法を含む。
【００８８】
抗体（抗原結合性断片を含む）と関連する、グリカンパターンの均一性または不均一性は、グリカンの長さまたはサイズ、およびグリカンがグリコシル化部位にわたり存在する数のいずれにも関連するので、当技術分野で公知の方法、例えば、グリカンの長さまたはサイズおよび流体力学的半径を測定する方法を使用して評価することができる。サイズ除外ＨＰＬＣ、順相ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ、およびアニオン交換ＨＰＬＣなどのＨＰＬＣ、ならびにキャピラリー電気泳動は、流体力学的半径の測定を可能とする。タンパク質中のグリコシル化部位の数が大きいほど、グリコシル化部位が少ないキャリアと比較して、流体力学的半径の変動が大きくなる。しかし、単一のグリカン鎖を解析する場合、長さがよりよく制御されるために、それらはより均一でありうる。グリカン長は、ヒドラジン分解、ＳＤＳ  ＰＡＧＥ、およびキャピラリーゲル電気泳動により測定することができる。加えて、均一性はまた、ある特定のグリコシル化部位の使用パターンが、広い／狭い範囲にわたり変化することも意味しうる。これらの因子は、糖ペプチドＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより測定することができる。
【００８９】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片はまた、検出可能なＮｅｕＧｃおよび／またはα−Ｇａｌも含有しない。本明細書では、「検出可能なＮｅｕＧｃ」または「検出可能なα−Ｇａｌ」または「ＮｅｕＧｃまたはα−Ｇａｌを含有しないか、またはこれらを有さない」とは、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片が、当技術分野で公知の、標準的なアッセイ法により検出可能な、ＮｅｕＧｃ部分またはα−Ｇａｌ部分を含有しないことを意味する。例えば、ＮｅｕＧｃは、ＮｅｕＧｃを検出する方法について、参照により本明細書に組み込まれる、Hara et al., 1989, “Highly Sensitive Determination of N-Acetyl-and N-Glycolylneuraminic Acids in Human Serum and Urine and Rat Serum by Reversed-Phase Liquid Chromatography with Fluorescence Detection.” J. Chromatogr., B: Biomed. 377, 111-119に従い、ＨＰＬＣにより検出することができる。代替的に、ＮｅｕＧｃは、質量分析により検出することができる。α−Ｇａｌは、ＥＬＩＳＡ（例えば、Galili et al., 1998, “A sensitive assay for measuring α-Gal epitope expression on cells by a monoclonal anti-Gal antibody.” Transplantation. 65(8):1129-32を参照されたい）を使用して検出することもでき、質量分析（例えば、Ayoub et al., 2013, “Correct primary structure assessment and extensive glyco-profiling of cetuximab by a combination of intact, middle-up, middle-down and bottom-up ESI and MALDI mass spectrometry techniques.” Landes Bioscience. 5(5):699-710を参照されたい）により検出することもできる。Platts-Mills et al., 2015, “Anaphylaxis to the Carbohydrate Side-Chain Alpha-gal” Immunol Allergy Clin North Am. 35(2): 247-260において引用されている参考文献もまた、参照されたい。
【００９０】
Ｎ−グリコシル化の利益
Ｎ−グリコシル化は、本明細書で記載されるＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖに対して、多数の利益を付与する。大腸菌（E. coli）は、天然では、Ｎ−グリコシル化に必要とされる構成要素を有さないため、このような利益は、大腸菌（E. coli）内の、抗原結合性断片の産生によっては、達成されない。さらに、ＣＨＯ細胞は、ある特定のグリカン（例えば、２，６シアル酸および分岐型ＧｌｃＮＡｃ）の付加に必要とされる構成要素を欠き、ＣＨＯ細胞株またはマウス細胞株は、主要なヒトシアル酸である、Ｎ−アセチルノイラミン酸（「Ｎｅｕ５Ａｃ」）ではなく、ヒトに天然ではない（かつ、潜在的に、免疫原性である）、Ｎ−Ｎ−グリコシルノイラミン酸（「Ｎｅｕ５Ｇｃ」または「ＮｅｕＧｃ」）を付加するため、一部の利益は、例えば、ＣＨＯ細胞（またはＮＳ０細胞などのマウス細胞）内の、抗体の産生によっては、達成されない。例えば、各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Dumont et al., 2015, Crit. Rev. Biotechnol. 36(6):1110-1122；Huang et al., 2006, Anal. Biochem. 349:197-207（ＮｅｕＧｃは、ＳＰ２／０およびＮＳ０など、マウス細胞株内の、主要なシアル酸である）；およびSong et al., 2014, Anal. Chem. 86:5661-5666を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は、大半の個体において存在する、抗α−Ｇａｌ抗体と反応し、高濃度の場合、アナフィラキシーを誘発しうる免疫原性グリカンである、α−Ｇａｌ抗原もまた産生する。例えば、Bosques, 2010, Nat. Biotech. 28:1153-1156を参照されたい。本明細書で記載されるＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖのヒトグリコシル化パターンは、トランス遺伝子産物の免疫原性を低減し、有効性を改善するべきである。
【００９１】
非カノニカルのグリコシル化部位は、通例、抗体集団の低レベルのグリコシル化（例えば、１〜５％）を結果としてもたらすが、機能的利益は著明でありうる（例えば、van de Bovenkamp et al., 2016, J. Immunol. 196:1435-1441を参照されたい）。例えば、Ｆａｂのグリコシル化は、抗体の安定性、半減期、および結合性特徴に影響を及ぼしうる。Ｆａｂのグリコシル化の、抗体の、その標的へのアフィニティーに対する効果を決定するために、当業者に公知である、任意の技法を使用することができる。例えば、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、または表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用することができる。Ｆａｂのグリコシル化の、抗体の半減期に対する効果を決定するために、当業者に公知である、任意の技法を使用することができる。例えば、放射性標識された抗体を投与した対象における、血液中または臓器内の、放射能のレベルを測定することによる。Ｆａｂのグリコシル化の、抗体の安定性、例えば、凝集またはタンパク質のアンフォールディングのレベルに対する効果を決定するために、当業者に公知である、任意の技法を使用することができる。例えば、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、例えば、サイズ除外高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）、キャピラリー電気泳動、質量分析、または濁度測定を使用することができる。
【００９２】
本明細書で記載される方法で使用される、ＨｕＧｌｙＦａｂ上またはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖ上のシアル酸の存在は、ＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖのクリアランス速度に影響を及ぼしうる。したがって、ＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖのシアル酸パターンを使用して、クリアランス速度を最適化した治療剤を作出することができる。当技術分野では、抗原結合性断片のクリアランス速度を評価する方法が公知である。例えば、Huang et al., 2006, Anal. Biochem. 349:197-207を参照されたい。
【００９３】
別の具体的な実施形態では、Ｎ−グリコシル化により付与される利益は、凝集の低減である。Ｎ−グリコシル化により占有された部位は、凝集しやすいアミノ酸残基を遮蔽する結果として、凝集の低減をもたらしうる。このようなＮ−グリコシル化部位は、本明細書で使用される抗原結合性断片に対して天然の場合もあり、本明細書で使用される抗原結合性断片に操作される場合もあるが、発現させた場合、例えば、ヒト細胞内で発現させた場合に、凝集しにくいＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖを結果としてもたらす。当技術分野では、抗体の凝集を評価する方法が公知である。例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Courtois et al., 2016, mAbs 8:99-112を参照されたい。
【００９４】
別の具体的な実施形態では、Ｎ−グリコシル化により付与される利益は、免疫原性の低減である。このようなＮ−グリコシル化部位は、本明細書で使用される抗原結合性断片に対して天然の場合もあり、本明細書で使用される抗原結合性断片に操作される場合もあるが、発現させた場合、例えば、ヒト網膜細胞、ヒトＣＮＳ細胞、ヒト肝細胞内、またはヒト筋細胞内で発現させた場合に、免疫原性となりにくいＨｕＧｌｙＦａｂまたはＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖを結果としてもたらす。
【００９５】
別の具体的な実施形態では、Ｎ−グリコシル化により付与される利益は、タンパク質の安定性である。タンパク質のＮ−グリコシル化は、それらに、安定性を付与することが周知であり、当技術分野では、Ｎ−グリコシル化から生じる、タンパク質の安定性を評価する方法が公知である。例えば、Sola and Griebenow, 2009, J Pharm Sci., 98(4): 1223-1245を参照されたい。
【００９６】
別の具体的な実施形態では、Ｎ−グリコシル化により付与される利益は、結合アフィニティーの変更である。当技術分野では、抗体の可変ドメイン内の、Ｎ−グリコシル化部位の存在が、抗体の、その抗原に対するアフィニティーを増大させうることが公知である。例えば、Bovenkamp et al., 2016, J. Immunol. 196:1435-1441を参照されたい。当技術分野では、抗体結合アフィニティーを測定するためのアッセイが公知である。例えば、Wright et al., 1991, EMBO J. 10:2717-2723；およびLeibiger et al., 1999, Biochem. J. 338:529-538を参照されたい。
【００９７】
５．２．２  チロシン硫酸化
チロシン硫酸化は、Ｙから、＋５〜−５内の位置に、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）を伴う、チロシン（Ｙ）残基において生じるが、この場合、Ｙから−１の位置は、中性または酸性の帯電アミノ酸であり、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を消失させる、アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）、またはヒスチジン（Ｈ）ではない。驚くべきことに、本明細書で記載される、ＨｕＧｌｙＦａｂおよびＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖは、チロシン硫酸化部位（図２Ａ〜２Ｆ、３Ａ〜３Ｅ、４Ａ−４Ｂ、５Ａ〜５Ｄ、６、７Ａ〜７Ｂ、８Ａ〜８Ｈ、および９Ａ〜９Ｂを参照されたい）を含む。
【００９８】
チロシンが硫酸化された抗原結合性断片は、天然では、チロシン硫酸化に必要とされる酵素を有さない大腸菌（E. coli）内では産生されえないことが重要である。さらに、ＣＨＯ細胞は、チロシン硫酸化を欠く（ＣＨＯ細胞は、分泌性細胞ではなく、翻訳後のチロシン硫酸化能が限定されている）。例えば、Mikkelsen & Ezban, 1991, Biochemistry 30: 1533-1537を参照されたい。本明細書で提示される方法は、分泌性であり、チロシン硫酸化能を有するヒト細胞内の、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの発現を要求するので有利である。
【００９９】
チロシン硫酸化は、いくつかの理由で有利である。例えば、標的に対する、治療用抗体の抗原結合性断片のチロシン硫酸化は、抗原に対するアビディティーおよび活性を、劇的に増大させることが示されている。例えば、Loos et al., 2015, PNAS 112: 12675-12680；およびChoe et al., 2003, Cell 114: 161-170を参照されたい。当技術分野では、チロシン硫酸化を検出するためのアッセイが公知である。例えば、Yang et al., 2015, Molecules 20:2138-2164を参照されたい。
【０１００】
５．２．３  Ｏ−グリコシル化
Ｏ−グリコシル化は、酵素による、セリン残基またはトレオニン残基への、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンの付加を含む。抗体のヒンジ領域内に存在するアミノ酸残基は、Ｏ−グリコシル化されうることが裏付けられている。ある特定の実施形態では、ＨｕＧｌｙＦａｂは、それらのヒンジ領域の全部または一部を含み、したがって、ヒト細胞内で発現させると、Ｏ−グリコシル化されうる。ここでも、大腸菌（E. coli）は、天然では、ヒトＯ−グリコシル化において使用される機構と同等の機構を含有しないため（代わりに、大腸菌（E. coli）内のＯ−グリコシル化は、細菌が、特異的Ｏ−グリコシル化機構を含有するように修飾される場合に限られることが裏付けられている。例えば、Farid-Moayer et al., 2007, J. Bacteriol. 189:8088-8098を参照されたい）、Ｏ−グリコシル化の可能性は、本明細書で提示されるＨｕＧｌｙＦａｂに、例えば、大腸菌（E. coli）内で産生される抗原結合性断片と比較して、別の利点を付与する。Ｏ−グリコシル化ＨｕＧｌｙＦａｂは、グリカンを保有することにより、Ｎ−グリコシル化ＨｕＧｌｙＦａｂと、有利な特徴を共有する（上記で論じた通り）。
【０１０１】
５．３  ベクター化治療用抗体
５．３．１  アルツハイマー病のための、抗ＡベータＨｕＰＴＭによる構築物および製剤
アミロイド前駆体タンパク質に由来する、アミロイドベータ（ＡβまたはＡベータ）ペプチドに結合し、アルツハイマー病（ＡＤ）などの処置において利益を有しうる、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、アデュカヌマブ、クレネズマブ、ガンテネルマブ、またはＢＡＮ２４０１、または前出のうちの１つの抗原結合性断片である。これらの抗体のＦａｂ断片のアミノ酸配列を、図２Ａ〜２Ｃおよび２Ｆに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、Ａβ結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、ＡＤと診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有する患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０１０２】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、Ａβに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、アデュカヌマブ、クレネズマブ、ガンテネルマブ、もしくはＢＡＮ２４０１、またはこれらの変異体など、Ａβに結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗Ａβ抗原結合性断片もコードしうる（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112を参照されたい）。
【０１０３】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、アデュカヌマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号１および２のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図２Ａを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現にコドン最適化することが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１０１のヌクレオチド配列（アデュカヌマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１０２のヌクレオチド配列（アデュカヌマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒトＣＮＳ細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）、または前出の表１において見出される配列のうちの１つのアミノ酸配列を有しうる。
【０１０４】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗Ａβ抗原結合性ドメインは、配列番号１の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２２）の全部または一部を含有し、具体的には、図２Ａに明示された、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号１の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表４に明示された、ヒンジ領域をコードする配列（配列番号１０１）によりコードされうる。
【０１０５】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、Ａβの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ａβの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、Ａβの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図２Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、Ａβの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図２Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０１０６】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｔ１１９Ｎ（重鎖）、Ｑ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９５Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号１および２の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化アデュカヌマブＦａｂをコードする。
【０１０７】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図２Ａの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのアデュカヌマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗Ａβ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのアデュカヌマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、クレネズマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号３および４のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図２Ｂを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１０３のヌクレオチド配列（クレネズマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１０４のヌクレオチド配列（クレネズマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒトＣＮＳ細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）、または表１において見出されるシグナル配列のアミノ酸配列を有しうる。
【０１０９】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗Ａβ抗原結合性ドメインは、配列番号３の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のチロシン（Ｙ）の後で始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、図２Ｂに明示された、アミノ酸配列ＧＰＰＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２９）、またはＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２３０）の全部または一部を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号３の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列（配列番号１０３）によりコードされうる。
【０１１０】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、Ａβの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ａβの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号３に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、Ａβの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図２Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、Ａβの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図２Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０１１１】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｔ１０７Ｎ（重鎖）、Ｑ１６５ＮもしくはＱ１６５Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ２００Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号３および４の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化クレネズマブＦａｂをコードする。
【０１１２】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図２Ｂの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのクレネズマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗Ａβ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのクレネズマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１１３】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ガンテネルマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号５および６のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図２Ｃを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１０５のヌクレオチド配列（ガンテネルマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１０６のヌクレオチド配列（ガンテネルマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒトＣＮＳ細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）、または表１において見出されるシグナル配列のアミノ酸配列を有しうる。
【０１１４】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗Ａβ抗原結合性ドメインは、配列番号５の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）において始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２２）の全部または一部を含有し、具体的には、図２Ｃに明示された、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号５の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列（配列番号１０５）によりコードされうる。
【０１１５】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号６に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、Ａβの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ａβの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号６に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号５に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、Ａβの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図２Ｃにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、Ａβの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図２Ｃにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０１１６】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１２１Ｎ（重鎖）、Ｑ１６１ＮもしくはＱ１６１Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９６Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号５および６の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ガンテネルマブＦａｂをコードする。
【０１１７】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図２Ｃの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのガンテネルマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗Ａβ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのガンテネルマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１１８】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ＢＡＮ２４０１の、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号５７および５８のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図２Ｆを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１５７のヌクレオチド配列（ＢＡＮ２４０１の重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１５８のヌクレオチド配列（ＢＡＮ２４０１の軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒトＣＮＳ細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）、または前出の表１において見出される配列のうちの１つのアミノ酸配列を有しうる。
【０１１９】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗Ａβ抗原結合性ドメインは、配列番号５７の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後で始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２２）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２３９）の全部または一部を含有し、具体的には、図２Ｆに明示された、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号５７の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表４に明示された、ヒンジ領域をコードする配列（配列番号１５７）によりコードされうる。
【０１２０】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５８に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、Ａβの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５７に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ａβの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５８に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号５７に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、Ａβの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図２Ｆにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、Ａβの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図２Ｆにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｔ１１９Ｎ（重鎖）、Ｑ１６５ＮもしくはＱ１６５Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ２００Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号５７および５８の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ＢＡＮ２４０１  Ｆａｂをコードする。
【０１２２】
ある特定の実施形態では、抗Ａβ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図２Ｆの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのＢＡＮ２４０１ＣＤＲであって、当技術分野で、抗Ａβ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのＢＡＮ２４０１ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１２３】
遺伝子治療法
抗Ａβ抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、ＡＤについて処置する方法が提供される。抗体は、アデュカヌマブ、クレネズマブ、ガンテネルマブ、またはＢＡＮ２４０１であることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある特定の実施形態では、患者は、前駆期ＡＤ、すなわち、早期ＡＤなおまたはプレＡＤと関連する、軽度認知機能障害と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．１節において記載し、図２Ａ〜２Ｃに示す。このようなベクターは、ヒトＣＮＳ細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ２０、ＡＡＶｒｈ３９、またはＡＡＶｃｙ５のカプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、脳脊髄液（ＣＳＦ）に導入することにより、組換えベクターが、ＣＮＳに侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．１節を参照されたい。
【０１２４】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗Ａβ療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、ＡＤと診断されているか、またはこれと関連する、１つもしくは複数の症状を有し、抗Ａβ抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗Ａβ抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、アデュカヌマブ、クレネズマブ、ガンテネルマブ、またはＢＡＮ２４０１により、既に処置されており、アデュカヌマブ、クレネズマブ、ガンテネルマブ、またはＢＡＮ２４０１のうちの１つまたは複数に対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗Ａβ抗体または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、ヒト細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０１２５】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、ＡＤと診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有するヒト対象（患者）に、髄腔内投与すること、特に、嚢内投与もしくは腰部投与、または静脈内投与して、形質導入されたＣＮＳ細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、ＣＮＳ内に創出することにより達せられる、ＡＤの処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０１２６】
抗Ａβ  ＨｕＰＴＭｍＡｂまたは抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  ＦａｂのためのｃＤＮＡ構築物は、形質導入されたＣＮＳ細胞による、適正な共プロセシングおよび翻訳後プロセシング（グリコシル化およびタンパク質の硫酸化）を確保するシグナルペプチドを含むべきである。例えば、シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうる。
【０１２７】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを、ヒト細胞株内で、組換えＤＮＡ技術により作製し、ＡＤと診断されるか、またはＡＤのための治療が適切であると考えられる患者に投与することができる。
【０１２８】
具体的な実施形態では、抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図２Ａに明示された、アデュカヌマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、青色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号１）のアミノ酸位置Ｎ１６６、または軽鎖（配列番号２）のＮ１５８および／もしくはＮ２１０のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、アデュカヌマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号１）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号２）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分（例えば、当技術分野で公知のアッセイにより検出されるＮｅｕＧｃ部分、例えば、後出の５．２節で記載されるＮｅｕＧｃ部分）を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分（例えば、当技術分野で公知のアッセイにより検出されるアルファ−Ｇａｌ部分、例えば、後出の５．２節で記載されるアルファ−Ｇａｌ部分）を含有しない。
【０１２９】
具体的な実施形態では、抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図２Ｂに明示された、クレネズマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、青色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号３）のアミノ酸位置Ｎ５２、Ｑ１０４、Ｎ１５４、および／もしくはＮ１９６、または軽鎖（配列番号４）のＱ１０５、Ｎ１６３、および／もしくはＮ２１５のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、クレネズマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号３）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号４）のＹ９１および／もしくはＹ９２において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０１３０】
具体的な実施形態では、抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図２Ｃに明示された、ガンテネルマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（アスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、マゼンダで強調し、非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、青色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号５）のアミノ酸位置Ｎ５２、Ｎ７７、Ｑ１１８、および／もしくはＮ１６８、または軽鎖（配列番号６）のＱ１０１、Ｎ１５９、および／もしくはＮ２１１のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ガンテネルマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号５）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号６）のＹ８７および／もしくはＹ８８において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０１３１】
具体的な実施形態では、抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図２Ｆに明示された、ＢＡＮ２４０１の重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、青色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号５７）のアミノ酸位置Ｑ１１６および／もしくはＮ１６６、または軽鎖（配列番号５８）のＮ１６３および／もしくはＮ２１５のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ＢＡＮ２４０１の重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号５７）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号５８）のＹ９１において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、２，６シアル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化、２，６シアル化、および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、特定の認知機能障害であるＡＤの進行を緩徐化または停止させることである。有効性は、プラーク形成の低減および／もしくは認知機能の改善、または認知機能の減退の軽減を測定することによりモニタリングすることができる。
【０１３３】
本明細書で提示される方法は、抗Ａβ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、ＣＮＳへの、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、ＡＤに利用可能な処置は、少数を挙げれば、ＡＲＩＣＥＰＴ（登録商標）（ドネペジル）、ＲＡＺＡＤＹＮＥ（登録商標）（ガランタミン）、ＮＡＭＥＮＤＡ（登録商標）（リバスチグミン）、およびＮＡＭＺＡＲＩＣ（登録商標）（ドネペジルおよびメマンチン）、ならびにアデュカヌマブ、クレネズマブ、ガンテネルマブ、もしくはＢＡＮ２４０１を含むがこれらに限定されない抗Ａβ剤、またはａＴＡＵなどの抗タウ剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０１３４】
５．３．２．アルツハイマー病などのタウオパチー、慢性外傷性脳症、進行性核上性麻痺、または前頭側頭型認知症のための、抗タウＨｕＰＴＭによる構築物および製剤
単量体タウ、オリゴマータウ、非リン酸化タウ、およびリン酸化タウなどのタウタンパク質（タウ）に結合し、アルツハイマー病（ＡＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、ピック複合、原発性年齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＤ）、および他のタウオパチーの処置において利益を有しうる、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、図２Ｄに提示されるＦａｂ断片を有する抗体（本明細書では、「ａＴＡＵ」と称する）、またはその抗原結合性断片である。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、タウ結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、ＡＤ、ＣＴＥ、ＰＳＰ、ＦＤ、もしくは他のタウオパチーと診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有する患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０１３５】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、タウに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、ａＴＡＵ、またはこれらの変異体など、タウに結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗タウ抗原結合性断片もコードしうる（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112を参照されたい）。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、抗タウ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ａＴＡＵの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号５３および５４のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図２Ｄを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１５３のヌクレオチド配列（ａＴＡＵの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１５４のヌクレオチド配列（ａＴＡＵの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒトＣＮＳ細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）、または前出の表１において見出される配列のうちの１つのアミノ酸配列を有しうる。
【０１３７】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗タウ抗原結合性ドメインは、配列番号５３の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後で始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、図２Ｄに明示された、アミノ酸配列ＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号２３１）を含有し、具体的には、ＧＰＰＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２９）、またはＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２３０）の全部または一部を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号５３の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表４に明示された、ヒンジ領域をコードする配列（配列番号１５３）によりコードされうる。
【０１３８】
ある特定の実施形態では、抗タウ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５４に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、タウの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗タウ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５３に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、タウの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗タウ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５４に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号５３に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、タウの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図２Ｄにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、タウの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図２Ｄにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０１３９】
ある特定の実施形態では、抗タウ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｔ１１０Ｎ（重鎖）、Ｑ１６４ＮもしくはＱ１６４Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９９Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号５３および５４の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ａＴＡＵ  Ｆａｂをコードする。
【０１４０】
ある特定の実施形態では、抗タウ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図２Ｄの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのａＴＡＵ  ＣＤＲであって、当技術分野で、抗タウ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのａＴＡＵ  ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１４１】
遺伝子治療法
抗タウ抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、ＡＤ、ＣＴＥ、ＰＳＰ、ＦＤ、または他のタウオパチーについて処置する方法が提供される。抗体は、ａＴＡＵであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある特定の実施形態では、患者は、前駆期ＡＤ、すなわち、早期ＡＤなおまたはプレＡＤと関連する、軽度認知機能障害と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．１節において記載し、図２Ｄに示す。このようなベクターは、ヒトＣＮＳ細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ２０、ＡＡＶｒｈ３９、またはＡＡＶｃｙ５のカプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、脳脊髄液（ＣＳＦ）に導入することにより、組換えベクターが、ＣＮＳに侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．１節を参照されたい。
【０１４２】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗タウ療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、ＡＤ、ＰＳＰ、またはＦＤと診断されているか、またはこれと関連する、１つもしくは複数の症状を有し、抗タウ抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗タウ抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、ａＴＡＵにより、既に処置されており、１つもしくは複数のａＴＡＵに対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗タウ抗体または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、ヒト細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０１４３】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗タウＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗タウＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗タウＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、ＡＤ、ＰＳＰ、もしくはＦＤと診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有するヒト対象（患者）に、髄腔内投与すること、特に、嚢内投与もしくは腰部投与、または静脈内投与して、形質導入されたＣＮＳ細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、ＣＮＳ内に創出することにより達せられる、ＡＤ、ＰＳＰ、またはＦＤの処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０１４４】
抗タウＨｕＰＴＭｍＡｂまたは抗タウＨｕＰＴＭ  ＦａｂのためのｃＤＮＡ構築物は、形質導入されたＣＮＳ細胞による、適正な共プロセシングおよび翻訳後プロセシング（グリコシル化およびタンパク質の硫酸化）を確保するシグナルペプチドを含むべきである。例えば、シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうる。
【０１４５】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、抗タウＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗タウＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを、ヒト細胞株内で、組換えＤＮＡ技術により作製し、ＡＤ、ＰＳＰ、もしくはＦＤと診断されるか、またはＡＤ、ＰＳＰ、もしくはＦＤのための治療が適切であると考えられる患者に投与することができる。
【０１４６】
具体的な実施形態では、抗タウＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図２Ｄに明示された、ａＴＡＵの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、青色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号５３）のアミノ酸位置Ｎ５７および／もしくはＱ１０７および／もしくはＮ１５７および／もしくはＮ１９９、または軽鎖（配列番号５４）のＮ７８および／もしくはＱ１０４および／もしくはＮ１６２および／もしくはＮ２１４のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ａＴＡＵの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号５３）のＹ９６および／もしくはＹ９７および／もしくはＹ１０４、ならびに／または軽鎖（配列番号５４）のＹ９０および／もしくはＹ９１において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗タウＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分（例えば、当技術分野で公知のアッセイにより検出されるＮｅｕＧｃ部分、例えば、後出の５．２節で記載されるＮｅｕＧｃ部分）を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分（例えば、当技術分野で公知のアッセイにより検出されるアルファ−Ｇａｌ部分、例えば、後出の５．２節で記載されるアルファ−Ｇａｌ部分）を含有しない。
【０１４７】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、２，６シアル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化、２，６シアル化、および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、ＡＤ、ＰＳＰ、またはＦＤ、特に、認知機能障害、粗大運動能力障害もしくは微細運動能力障害、または視覚機能障害の進行を緩徐化または停止させることである。有効性は、プラーク形成の低減および／または認知機能の改善を、運動能力もしくは視覚により、または認知機能、運動能力、もしくは視覚の減退の軽減により測定することによりモニタリングすることができる。
【０１４８】
本明細書で提示される方法は、抗タウＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、ＣＮＳへの、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、ＡＤ、ＰＳＰ、またはＦＤに利用可能な処置は、少数を挙げれば、ＡＲＩＣＥＰＴ（登録商標）（ドネペジル）、ＲＡＺＡＤＹＮＥ（登録商標）（ガランタミン）、ＮＡＭＥＮＤＡ（登録商標）（リバスチグミン）、およびＮＡＭＺＡＲＩＣ（登録商標）（ドネペジルおよびメマンチン）、ならびにａＴＡＵを含むがこれらに限定されない抗タウ剤、ならびにアデュカヌマブ、クレネズマブ、およびガンテネルマブなどであるがこれらに限定されない抗Ａβ剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０１４９】
５．３．３．偏頭痛および群発性頭痛のための、抗ＣＧＲＰＲ  ＨｕＰＴＭによる構築物および製剤
カルシトニン遺伝子関連ペプチド受容体（ＣＧＲＰＲ）に結合し、偏頭痛および群発頭痛（頭痛障害と総称される）の処置において利益を有しうる、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、エレヌマブ、エプチネズマブ、フレマネズマブ、ガルカネズマブ、または前出のうちの１つの抗原結合性断片である。エレヌマブのＦａｂ断片のためのアミノ酸配列を、図２Ｅに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、ＣＧＲＰＲ結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、偏頭痛および群発頭痛と診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有する患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０１５０】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、ＣＧＲＰＲに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、または本明細書における詳細に従い、エレヌマブ、エプチネズマブ、フレマネズマブ、ガルカネズマブ、またはこれらの変異体など、ＣＧＲＰＲに結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗ＣＧＲＰＲ抗原結合性断片もコードしうる（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112を参照されたい）。
【０１５１】
ある特定の実施形態では、抗ＣＧＲＰＲ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、エレヌマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号５５および５６のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図２Ｅを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１５５のヌクレオチド配列（エレヌマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１５６のヌクレオチド配列（エレヌマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒトＣＮＳ細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）、または前出の表１において見出される配列のうちの１つのアミノ酸配列を有しうる。
【０１５２】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗ＣＧＲＰＲ抗原結合性ドメインは、配列番号５５の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＧ（配列番号２３２）の全部または一部を含有し、具体的には、図２Ｅに明示された、ＣＰＰＣＰＡ（配列番号２１９）、またはＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧ（配列番号２３３）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号５５の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表４に明示された、ヒンジ領域をコードする配列（配列番号１５５）によりコードされうる。
【０１５３】
ある特定の実施形態では、抗ＣＧＲＰＲ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５６に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＣＧＲＰＲの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＣＧＲＰＲ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５５に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＣＧＲＰＲの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＣＧＲＰＲ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５６に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号５５に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＣＧＲＰＲの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図２Ｅにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、タウの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図２Ｅにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０１５４】
ある特定の実施形態では、抗ＣＧＲＰＲ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｔ１２５Ｎ（重鎖）および／またはＱ１９８Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号５５および５６の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化エレヌマブＦａｂをコードする。
【０１５５】
ある特定の実施形態では、抗ＣＧＲＰＲ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図２Ｅの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのエレヌマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗タウ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのエレヌマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１５６】
遺伝子治療法
抗ＣＧＲＰＲ抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、偏頭痛および群発頭痛について処置する方法が提供される。抗体は、エレヌマブ、エプチネズマブ、フレマネズマブ、またはガルカネズマブであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある特定の実施形態では、患者は、挿間性偏頭痛または慢性偏頭痛と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。ある特定の実施形態では、患者は、挿間性群発頭痛または慢性群発頭痛と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．１節において記載し、図２Ｅに示す。このようなベクターは、ヒトＣＮＳ細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ２０、ＡＡＶｒｈ３９、またはＡＡＶｃｙ５のカプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、脳脊髄液（ＣＳＦ）に導入することにより、組換えベクターが、ＣＮＳに侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．１節を参照されたい。
【０１５７】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗ＣＧＲＰＲ療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、偏頭痛または群発頭痛と診断されているか、またはこれと関連する、１つもしくは複数の症状を有し、抗ＣＧＲＰＲ抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗ＣＧＲＰＲ抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、エレヌマブ、エプチネズマブ、フレマネズマブ、またはガルカネズマブにより、既に処置されており、エレヌマブ、エプチネズマブ、フレマネズマブ、およびガルカネズマブのうちの１つまたは複数に対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗ＣＧＲＰＲ抗体または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、ヒト細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０１５８】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗ＣＧＲＰＲ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＣＧＲＰＲ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗ＣＧＲＰＲ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、偏頭痛もしくは群発頭痛と診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有するヒト対象（患者）に、髄腔内投与すること、特に、嚢内投与もしくは腰部投与、または静脈内投与して、形質導入されたＣＮＳ細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、ＣＮＳ内に創出することにより達せられる、偏頭痛または群発頭痛の処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０１５９】
抗ＣＧＲＰＲ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＣＧＲＰＲ  ＨｕＰＴＭ  ＦａｂのためのｃＤＮＡ構築物は、形質導入されたＣＮＳ細胞による、適正な共プロセシングおよび翻訳後プロセシング（グリコシル化およびタンパク質の硫酸化）を確保するシグナルペプチドを含むべきである。例えば、シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうる。
【０１６０】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、抗ＣＧＲＰＲ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＣＧＲＰＲ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを、ヒト細胞株内で、組換えＤＮＡ技術により作製し、偏頭痛もしくは群発頭痛と診断されるか、または偏頭痛もしくは群発頭痛のための治療が適切であると考えられる患者に投与することができる。
【０１６１】
具体的な実施形態では、抗ＣＧＲＰＲ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図２Ｅに明示された、エレヌマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、青色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号５５）のアミノ酸位置Ｎ７７および／もしくはＱ１２２および／もしくはＮ１７２および／もしくはＮ２０５および／もしくはＮ２１４、または軽鎖（配列番号５６）のＮ２８および／もしくはＮ１７４のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、エレヌマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号５５）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号５６）のＹ８７および／もしくはＹ８８において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＣＧＲＰＲ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分（例えば、当技術分野で公知のアッセイにより検出されるＮｅｕＧｃ部分、例えば、後出の５．２節で記載されるＮｅｕＧｃ部分）を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分（例えば、当技術分野で公知のアッセイにより検出されるアルファ−Ｇａｌ部分、例えば、後出の５．２節で記載されるアルファ−Ｇａｌ部分）を含有しない。
【０１６２】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、２，６シアル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化、２，６シアル化、および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、偏頭痛、群発頭痛、またはこれらと関連する症状であって、悪心、光過敏性、音過敏性、目の充血、眼瞼浮腫、額および顔面の発汗、催涙（流涙）、異常な瞳孔径の縮小（縮瞳）、鼻づまり、鼻水（鼻漏）、および眼瞼の下垂（眼瞼下垂症）を含む症状のうちの１つもしくは複数の強度または頻度を防止または低減することである。有効性は、偏頭痛もしくは群発頭痛の強度もしくは頻度の低減、または規定の時間にわたり使用された、急性偏頭痛特異的投薬量の低減を測定することによりモニタリングすることができる。
【０１６３】
本明細書で提示される方法は、抗ＣＧＲＰＲ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、ＣＮＳへの、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、群発頭痛または偏頭痛に利用可能な処置は、少数を挙げれば、トリプタン、エルゴタミン誘導体、およびＮＳＡＩＤ、ならびにエレヌマブ、エプチネズマブ、フレマネズマブ、およびガルカネズマブを含むがこれらに限定されない、抗ＣＧＲＰＲ剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０１６４】
５．３．４  自己免疫障害のための、抗インターロイキンＨｕＰＴＭおよび抗インターロイキン受容体ＨｕＰＴＭによる構築物および製剤
インターロイキン（ＩＬ）またはインターロイキン受容体（ＩＬＲ）（例えば、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１２／ＩＬ２３、またはＩＬ−５）に結合し、抗ＩＬまたは抗ＩＬＲに由来し、アトピー性皮膚炎、乾癬（例えば、尋常性乾癬、膿胞性乾癬、および乾癬性紅斑症）、関節炎（例えば、乾癬性関節炎および強直性脊椎炎）、クローン病、または喘息（本明細書の後出では、「対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）」と総称される）など、１つまたは複数の自己免疫関連障害の処置の適応がある、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、デュピルマブ、イキセキズマブ、セクキヌマブ、ウステキヌマブ、もしくはメポリズマブ、または前出のうちの１つの抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。これらの抗体のＦａｂ断片のアミノ酸配列を、図３Ａ〜３Ｅのそれぞれに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、ＩＬ／ＩＬＲ結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、アトピー性皮膚炎、乾癬（例えば、尋常性乾癬）、関節炎（例えば、乾癬性関節炎および強直性脊椎炎）、クローン病、もしくは喘息と診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有する患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０１６５】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、ＩＬ／ＩＬＲに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、デュピルマブ、イキセキズマブ、セクキヌマブ、ウステキヌマブ、メポリズマブ、またはこれらの変異体など、ＩＬ／ＩＬＲに結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗ＩＬ／ＩＬＲ抗原結合性断片もコードしうる（例えば、Courtois et al.を参照されたい）。
【０１６６】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、デュピルマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号７および８のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図３Ａを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１０７のヌクレオチド配列（デュピルマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１０８のヌクレオチド配列（デュピルマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０１６７】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗インテグリン抗原結合性ドメインは、配列番号７の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のチロシン（Ｙ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号２３１）の全部または一部を含有し、具体的には、図３Ａに明示された、ＧＰＰＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２９）、またはＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２３０）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号７の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０１６８】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号８に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＩＬ４Ｒの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号７に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＩＬ４Ｒの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号８に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号７に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＩＬ４Ｒの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図３Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＩＬ４Ｒの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図３Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０１６９】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｔ１２０Ｎ（重鎖）、Ｑ１６５ＮもしくはＱ１６５Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ２００Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号７および８の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化デュピルマブＦａｂをコードする。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図３Ａの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのデュピルマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＩＬ４Ｒ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのデュピルマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１７１】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、イキセキズマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号９および１０のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図３Ｂを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１０９のヌクレオチド配列（イキセキズマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１１０のヌクレオチド配列（イキセキズマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０１７２】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗インテグリン抗原結合性ドメインは、配列番号９の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のチロシン（Ｙ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号２３１）の全部または一部を含有し、具体的には、図３Ｂに明示された、ＧＰＰＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２９）、またはＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２３０）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号９の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０１７３】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１０に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＩＬ１７Ａの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号９に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＩＬ１７Ａの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１０に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号９に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＩＬ１７Ａの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図３Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＩＬ１７Ａの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図３Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０１７４】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１４Ｎ（重鎖）、Ｑ１６５ＮもしくはＱ１６５Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ２００Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号９および１０の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化イキセキズマブＦａｂをコードする。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図３Ｂの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのイキセキズマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＩＬ１７Ａ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのイキセキズマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１７６】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、セクキヌマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号１１および１２のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図３Ｃを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１１１のヌクレオチド配列（セクキヌマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１１２のヌクレオチド配列（セクキヌマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０１７７】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗インテグリン抗原結合性ドメインは、配列番号１１の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）の全部または一部を含有し、具体的には、図３Ｃに明示された、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号１１の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０１７８】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１２に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＩＬ１７Ａの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１１に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＩＬ１７Ａの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１２に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１１に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＩＬ１７Ａの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図３Ｃにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＩＬ１７Ａの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図３Ｃにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０１７９】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１２２Ｎ（重鎖）、Ｑ１６１ＮもしくはＱ１６１Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９６Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号１１および１２の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化セクキヌマブＦａｂをコードする。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図３Ｃの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのセクキヌマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＩＬ／ＩＬＲ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのセクキヌマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１８１】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ウステキヌマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号１３および１４のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図３Ｄを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１１３のヌクレオチド配列（ウステキヌマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１１４のヌクレオチド配列（ウステキヌマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０１８２】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗インテグリン抗原結合性ドメインは、配列番号１３の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）の全部または一部を含有し、具体的には、図３Ｄに明示された、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号１３の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０１８３】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１４に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＩＬ／ＩＬＲの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１３に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＩＬ１２／ＩＬ２３の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１４に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１３に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＩＬ１２／ＩＬ２３の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図３Ｄにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＩＬ１２／ＩＬ２３の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図３Ｄにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１４Ｎ（重鎖）、Ｑ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９５Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号１３および１４の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ウステキヌマブＦａｂをコードする。
【０１８５】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図３Ｄの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのウステキヌマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのウステキヌマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１８６】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ−５抗原結合性断片のトランス遺伝子は、メポリズマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号１５および１６のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図３Ｅを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１１５のヌクレオチド配列（メポリズマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１１６のヌクレオチド配列（メポリズマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０１８７】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗インテグリン抗原結合性ドメインは、配列番号１５の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）の全部または一部を含有し、具体的には、図３Ｅに明示された、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号１５の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０１８８】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ−５抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１６に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＩＬ−５の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ−５抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１５に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＩＬ−５の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ−５抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１６に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１５に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＩＬ−５の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図３Ｅにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＩＬ−５の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図３Ｅにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０１８９】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ−５抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｔ１１４Ｎ（重鎖）、Ｑ１６６ＮもしくはＱ１６６Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ２０１Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号１５および１６の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化メポリズマブＦａｂをコードする。
【０１９０】
ある特定の実施形態では、抗ＩＬ−５抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図３Ｅの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのメポリズマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＩＬ−５抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのメポリズマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１９１】
遺伝子治療法
抗ＩＬ／ＩＬＲ抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）のうちの１つまたは複数について処置する方法が提供される。抗体は、デュピルマブ、イキセキズマブ、セクキヌマブ、ウステキヌマブ、またはメポリズマブであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある実施形態では、患者は、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）のうちの１つまたは複数と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．２節において記載する。このようなベクターは、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図３Ａ〜３Ｅに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、血流に（または、代替的な実施形態では、肝動脈などを介して、肝血流に）導入することにより、組換えベクターが、肝組織または筋組織に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．２節を参照されたい。
【０１９２】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗ＩＬ／ＩＬＲ療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）のうちの１つまたは複数と診断されているか、またはこれと関連する、１つもしくは複数の症状を有し、抗ＩＬ／ＩＬＲ抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗ＩＬ／ＩＬＲ 抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、デュピルマブ、イキセキズマブ、セクキヌマブ、ウステキヌマブ、またはメポリズマブにより、既に処置されており、デュピルマブ、イキセキズマブ、セクキヌマブ、ウステキヌマブ、またはメポリズマブに対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗ＩＬ／ＩＬＲ抗体または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、ヒト細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０１９３】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗ＩＬ／ＩＬＲ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＩＬ／ＩＬＲ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗ＩＬ／ＩＬＲ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）のうちの１つもしくは複数と診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有するヒト対象（患者）に、皮下投与、筋内投与、または静脈内投与して、形質導入された肝細胞または筋細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、肝組織内または筋組織内に創出することにより達せられる、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）のうちの１つまたは複数の処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０１９４】
抗ＩＬ／ＩＬＲ  ＨｕＰＴＭｍＡｂまたは抗ＩＬ／ＩＬＲ  ＨｕＰＴＭ  ＦａｂのためのｃＤＮＡ構築物は、形質導入された肝細胞または筋細胞による、適正な共プロセシングおよび翻訳後プロセシング（グリコシル化およびタンパク質の硫酸化）を確保するシグナルペプチドを含むべきである。例えば、シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０１９５】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、抗ＩＬ／ＩＬＲ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＩＬ／ＩＬＲ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを、ヒト細胞株内で、組換えＤＮＡ技術により作製し、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）のうちの１つもしくは複数と診断されるか、または対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）のうちの１つもしくは複数のための治療が適切であると考えられる患者に投与することができる。
【０１９６】
具体的な実施形態では、抗ＩＬ４Ｒ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図３Ａに明示された、デュピルマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号７）のアミノ酸位置Ｎ７７、Ｎ１６７、および／もしくはＱ１１７、または軽鎖（配列番号８）のＱ１０５、Ｎ１６３、および／もしくはＮ２１５のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、デュピルマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号７）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号８）のＹ９１および／もしくはＹ９２において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＩＬ４Ｒ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０１９７】
具体的な実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図３Ｂに明示された、イキセキズマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号９）のアミノ酸位置Ｑ１１１、Ｎ１６１、および／もしくはＮ２０３、または軽鎖（配列番号１０）のＱ１０５、Ｎ１６３、および／もしくはＮ２１５のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、イキセキズマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号９）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号１０）のＹ９１および／もしくはＹ９２において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なα−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０１９８】
具体的な実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図３Ｃに明示された、セクキヌマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号１１）のアミノ酸位置Ｎ１６９、または軽鎖（配列番号１２）のＱ１０１、Ｎ１５９、および／もしくはＮ２１１のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、セクキヌマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号１１）のＹ９４および／もしくはＹ９５および／もしくはＹ１０７および／もしくはＹ１０８、ならびに／または軽鎖（配列番号１２）のＹ８７および／もしくはＹ８８において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＩＬ１７Ａ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なα−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０１９９】
具体的な実施形態では、抗ＩＬ１２／ＩＬ２３  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図３Ｄに明示された、ウステキヌマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号１３）のアミノ酸位置Ｑ１１１および／もしくはＮ１６１、または軽鎖（配列番号１４）のＱ１００、Ｎ１５８、および／もしくはＮ２１０のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ウステキヌマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、軽鎖（配列番号１４）のＹ８６および／またはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＩＬ１２／ＩＬ２３  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なα−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０２００】
具体的な実施形態では、抗ＩＬ−５  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図３Ｅに明示された、メポリズマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号１５）のアミノ酸位置Ｎ７６および／もしくはＮ１６１、または軽鎖（配列番号１６）のＮ２２、Ｎ３４、Ｎ１６４、および／もしくはＮ２１６のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、メポリズマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号１５）のＹ９３および／もしくはＹ９４、ならびに／または軽鎖（配列番号１６）のＹ９２および／もしくはＹ９３において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＩＬ−５  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０２０１】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、２，６−シアル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）の進行を緩徐化または停止させることである。
【０２０２】
有効性は、例えば、皮膚、結腸、または関節など、身体の罹患組織内または罹患領域内の症状または炎症の程度を評定することによりモニタリングすることができる。例えば、ＣＤに関して、有効性は、処置の経過にわたり、クローン病活動指数［ＣＤＡＩ］を評価することによりモニタリングすることができる（例えば、Best WR et al. (1976) Gastroenterology 70(3):439-44, “Development of a Crohn’s disease activity index. National Cooperative Crohn’s Disease Study.”を参照されたい）。乾癬およびアトピー性皮膚炎に関して、有効性は、処置の経過にわたり、罹患皮膚または患者の生活の質の変化を評価することによりモニタリングすることができる。１つまたは複数の標準化された評価を使用して、変化を評価することができる（例えば、ＰＡＳＩ（Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  Ａｒｅａ  ａｎｄ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）、ＬＳ−ＰＧＡ（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ  Ｇｌｏｂａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ，ｌａｔｔｉｃｅ  ｓｙｓｔｅｍ）、ＮＰＦ−ＰＳ（ＮＰＦ  Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  Ｓｃｏｒｅ）、ＳＦ−３６（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  Ｓｕｒｖｅｙ  Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６）、Ｅｕｒｏ  ＱｏＬ、ＤＬＱＩ（Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｌｉｆｅ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）、およびＳｋｉｎｄｅｘを含む、標準化された評価について記載する、Feldman & Krueger, (2005) Ann. Rheum. Dis. 64(Suppl II):ii65-ii68: “Psoriasis assessment tools in clinical trials”を参照されたい；ＥＡＳＩ（Ｅｃｚｅｍａ  Ａｒｅａ  ａｎｄ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）およびＳＣＯＲＡＤ（Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｓｃｏｒｉｎｇ  ｏｆ  Ａｔｏｐｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ  Ｉｎｄｅｘ）を含む、標準化された評価について記載する、Schram et al. (2012) Allergy; 67: 99-106: “EASI, (objective) SCORAD and POEM for atopic eczema: responsiveness and minimal clinically important difference”を参照されたい）。関節炎に関して、有効性は、患者の関節の機能のレベル、または患者の関節への構造的損傷の程度、疾患の活動性のうちの１つまたは複数を評価することによりモニタリングすることができる（例えば、強直性脊椎炎のための、標準化された評価について記載する、Zockling & Braun (2005) Clin. Exp. Rheumatol 23 (Suppl. 39) S133-S141: “Assessment of ankylosing spondylitis”を参照されたい；また、乾癬性関節炎のための、標準化された評価について記載する、Coates et al. (2011) J. Rheumatol. 38(7):1496-1501: “Development of a disease severity and responder index for psoriatic arthritis (PsA)-report of the OMERACT 10 PsA special interest group”も参照されたい）。
【０２０３】
本明細書で提示される方法は、抗ＩＬ／ＩＬＲ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、肝臓または筋肉への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）に利用可能な処置は、乾癬のための光線療法、アミノサリチル酸、免疫調節剤（例えば、アザチオプリン（ＡＺＡ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、メトトレキサート（ＭＴＸ））、経口用もしくは局所用のコルチコステロイド（例えば、プレドニゾンまたはブデソニド）、局所用カルシニューリン阻害剤、喘息のための吸入用コルチコステロイド、および／またはクローン病のための抗生剤、ならびにデュピルマブ、イキセキズマブ、セクキヌマブ、ウステキヌマブ、またはメポリズマブを含むがこれらに限定されない、抗ＩＬ／ＩＬＲ剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０２０４】
５．３．５  ＩＢＤまたは多発性硬化症のための、抗インテグリンＨｕＰＴＭによる構築物および製剤
インテグリン（例えば、α４インテグリンまたはα４β７インテグリン）に結合し、抗α４インテグリンまたは抗α４β７インテグリンに由来し、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）またはクローン病（ＣＤ）などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、および多発性硬化症（ＭＳ）の処置の適応がある、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、ベドリズマブ、ナタリズマブ、または前出のうちの１つの抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。ベドリズマブおよびナタリズマブのＦａｂ断片のアミノ酸配列を、図４Ａおよび４Ｂのそれぞれに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、インテグリン結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、ＩＢＤもしくはＭＳと診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有する患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０２０５】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、インテグリンに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、ベドリズマブ、ナタリズマブ、またはこれらの変異体など、インテグリンに結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗インテグリン抗原結合性断片もコードしうる（例えば、Courtois et al.を参照されたい）。
【０２０６】
ある特定の実施形態では、抗インテグリン抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ベドリズマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号１７および１８のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図４Ａを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１１７のヌクレオチド配列（ベドリズマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１１８のヌクレオチド配列（ベドリズマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０２０７】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗インテグリン抗原結合性ドメインは、配列番号１７の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＡＧＡ（配列番号２３６）の全部または一部を含有し、具体的には、図４Ａに明示された、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＡＧＡＰＳＶＦＬ（配列番号２３７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＡＧＡＰＳＶＦＬ（配列番号２３８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号１１７の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０２０８】
ある特定の実施形態では、抗インテグリン抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１８に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、インテグリンの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗インテグリン抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１７に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、インテグリンの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗インテグリン抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１８に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１７に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、インテグリンの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図４Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、インテグリンの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図４Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０２０９】
ある特定の実施形態では、抗インテグリン抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１６Ｎ（重鎖）、Ｑ１６５ＮもしくはＱ１６５Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ２００Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号１７および１８の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ベドリズマブＦａｂをコードする。
【０２１０】
ある特定の実施形態では、抗インテグリン抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図４Ａの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのベドリズマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗インテグリン抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのベドリズマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０２１１】
ある特定の実施形態では、抗インテグリン抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ナタリズマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号１９および２０のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図４Ｂを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１１９のヌクレオチド配列（ナタリズマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１２０のヌクレオチド配列（ナタリズマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。代替的に、特に、ＭＳの処置のために、重鎖および軽鎖は、ヒトＣＮＳ細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列、例えば、表１に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つを有する。
【０２１２】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗インテグリン抗原結合性ドメインは、配列番号１９の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号２３１）の全部または一部を含有し、具体的には、図４Ｂに明示された、ＧＰＰＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２９）、またはＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２３０）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号１１９の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、抗インテグリン抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２０に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、インテグリンの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗インテグリン抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号１９に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、インテグリンの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗インテグリン抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２０に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１９に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、インテグリンの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図４Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、インテグリンの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図４Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０２１４】
ある特定の実施形態では、抗インテグリン抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１８Ｎ（重鎖）、Ｑ１５９ＮもしくはＱ１５９Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９４Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号１９および２０の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ナタリズマブＦａｂをコードする。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、抗インテグリン抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図４Ｂの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのナタリズマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗インテグリン抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのナタリズマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０２１６】
具体的な実施形態では、ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）、ＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）、またはＡＡＶｒｈ１０カプシド（配列番号８０）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗インテグリンｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムとを含むＡＡＶベクターが提供される。
【０２１７】
遺伝子治療法
抗インテグリン抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、ＩＢＤまたはＭＳについて処置する方法が提供される。抗体は、ベドリズマブまたはナタリズマブであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある実施形態では、患者は、ＵＣもしくはＣＤなどのＩＢＤ、またはＭＳと診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。特定の実施形態では、ＩＢＤは、中等度〜重度の活動性でありうる。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．１および５．４．２節において記載する。一部の実施形態では、このようなベクターは、ヒト肝細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図４Ａおよび４Ｂに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、血流に導入することにより、組換えベクターが、肝組織または筋組織に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．２を参照されたい。他の実施形態では、このようなベクターは、ヒトＣＮＳ細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ２０、ＡＡＶｒｈ３９、またはＡＡＶｃｙ５のカプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図４Ｂに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、脳脊髄液（ＣＳＦ）に導入することにより、組換えベクターが、ＣＮＳに侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．１節を参照されたい。
【０２１８】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗インテグリン療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、ＩＢＤ、ＭＳと診断されているか、またはこれと関連する、１つもしくは複数の症状を有し、抗インテグリン抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗インテグリン抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、ベドリズマブおよび／またはナタリズマブにより、既に処置されており、ベドリズマブまたはナタリズマブに対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗インテグリン抗体または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０２１９】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗インテグリンＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗インテグリンＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗インテグリンＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、ＩＢＤもしくはＭＳと診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有するヒト対象（患者）に、皮下投与、筋内投与、または静脈内投与して、形質導入された肝細胞、筋細胞、またはＣＮＳ細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、肝組織内、筋組織内、またはＣＮＳ組織内に創出することにより達せられる、ＩＢＤまたはＭＳの処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０２２０】
抗インテグリンＨｕＰＴＭｍＡｂまたは抗インテグリンＨｕＰＴＭ  ＦａｂのためのｃＤＮＡ構築物は、形質導入された肝細胞または筋細胞による、適正な共プロセシングおよび翻訳後プロセシング（グリコシル化およびタンパク質の硫酸化）を確保するシグナルペプチドを含むべきである。例えば、シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうる。代替的に、一部の実施形態では、シグナル配列は、ＣＮＳ細胞、単球、または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表１、２、または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０２２１】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、抗インテグリンＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗インテグリンＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを、ヒト細胞株内で、組換えＤＮＡ技術により作製し、ＩＢＤもしくはＭＳと診断されるか、またはＩＢＤもしくはＭＳのための治療が適切であると考えられる患者に投与することができる。
【０２２２】
具体的な実施形態では、抗インテグリンＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図４Ａに明示された、ベドリズマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号１７）のアミノ酸位置Ｑ１１３および／もしくはＮ１６３、または軽鎖（配列番号１８）のＱ１０５および／もしくはＮ１６３および／もしくはＮ２１５のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ベドリズマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号１７）のＹ９４、Ｙ９５、および／もしくはＹ１０６、ならびに／または軽鎖（配列番号１８）のＹ９１および／もしくはＹ９２において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗インテグリンＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０２２３】
具体的な実施形態では、抗インテグリンＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図４Ｂに明示された、ナタリズマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号１９）のアミノ酸位置Ｑ１１５、Ｎ１６５、および／もしくはＮ２０７、または軽鎖（配列番号２０）のＱ９９、Ｎ１５７、および／もしくはＮ２０９のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ナタリズマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号１９）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号２０）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗インテグリンＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０２２４】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、グリコシル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、ＩＢＤまたはＭＳの進行を緩徐化または停止させること、特に、患者の疼痛および不快感の軽減、ならびに／または、ＭＳの場合、運動能の改善である。有効性は、罹患組織内の症状または炎症の程度を評定することによりモニタリングすることができる。例えば、ＵＣに関して、有効性は、処置の経過にわたり、Ｍａｙｏスコアおよび内視鏡サブスコアを評価することによりモニタリングすることができる（例えば、Lobaton et al. (2015) J. Crohns Colitis. 2015 Oct;9(10):846-52, “The Modified Mayo Endoscopic Score (MMES): A New Index for the Assessment of Extension and Severity of Endoscopic Activity in Ulcerative Colitis Patients.”を参照されたい）。ＣＤに関して、有効性は、処置の経過にわたり、クローン病活動指数［ＣＤＡＩ］を評価することによりモニタリングすることができる（例えば、Best WR et al. (1976) Gastroenterology, Mar;70(3):439-44, “Development of a Crohn’s disease activity index. National Cooperative Crohn’s Disease Study.”を参照されたい）。例えば、ＭＳに関して、有効性は、再発頻度（例えば、年間再発率）、身体障害度（例えば、Ｋｕｒｔｚｋｅ総合障害度スケール（ＥＤＳＳ）を評定すること）、およびＭＲＩ（例えば、磁気共鳴イメージングを介する、Ｔ１重み付けガドリニウム（Ｇｄ）増強病変およびＴ２高強度病変の査定）を使用する脳走査を含む生物学的マーカーを評価することによりモニタリングすることができる。
【０２２５】
本明細書で提示される方法は、抗インテグリンＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、ＣＮＳ、肝臓、または筋肉への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、ＩＢＤに利用可能な処置は、アミノサリチル酸、コルチコステロイド、および免疫調節剤（例えば、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、および／またはメトトレキサート）、ならびにベドリズマブまたはナタリズマブを含むがこれらに限定されない、抗インテグリン剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、ＭＳに利用可能な処置は、インターフェロンベータ、インターフェロンベータ１ａ、グラチラマー酢酸塩、シクロホスファミド、コルチコステロイド、免疫調節剤（例えば、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、および／またはメトトレキサート）、およびミトキサントロン、ならびにナタリズマブを含むがこれらに限定されない、抗インテグリン剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０２２６】
５．３．６  抗ＰＣＳＫ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよび抗ＡＮＧＰＴＬ３  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ
ＰＣＳＫ９（ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ／ｋｅｘｉｎ  ｔｙｐｅ  ９）に結合し、抗ＰＣＳＫ９または抗アンギオポエチン様３（ＡＮＧＰＴＬ３）に由来し、ヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｅＦＨ）、ホモ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、もしくはアテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＣＤ）の処置、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、トリグリセリド（ＴＧ）、および／もしくは総コレステロール（ＴＣ）レベルの低下、および／またはアテローム性動脈硬化性プラーク形成の低減または緩徐化の適応がある、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、アリロクマブ、エボロクマブ、エビナクマブ、または前出のうちの１つの抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。アリロクマブ、エボロクマブ、およびエビナクマブのＦａｂ断片のアミノ酸配列を、図５Ａ〜５Ｃのそれぞれに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、ＰＣＳＫ９結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＡＮＧＰＴＬ３結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、ＨｅＦＨ、ＨｏＦＨ、もしくはＡＣＤ；ＬＤＬ−Ｃ、ＴＧ、および／もしくはＴＣの異常な高レベル；またはアテローム性動脈硬化性プラークの異常と診断されるか、あるいは１つまたは複数のこの症状を有する患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０２２７】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、ＰＣＳＫ９またはＡＮＧＰＴＬ３に結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、アリロクマブ、エボロクマブ、エビナクマブ、またはこれらの変異体など、ＰＣＳＫ９またはＡＮＧＰＴＬ３に結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗ＰＣＳＫ９または抗ＡＮＧＰＴＬ３抗原結合性断片もコードしうる（例えば、Courtois et al.を参照されたい）。
【０２２８】
ある特定の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、アリロクマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号２１および２２のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図５Ａを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１２１のヌクレオチド配列（アリロクマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１２２のヌクレオチド配列（アリロクマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０２２９】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性ドメインは、配列番号２１の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２２）の全部または一部を含有し、具体的には、図５Ａに明示された、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号２１の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０２３０】
ある特定の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２２に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＰＣＳＫ９の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２１に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＰＣＳＫ９の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２２に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号２１に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＰＣＳＫ９の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図５Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＰＣＳＫ９の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図５Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０２３１】
ある特定の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１３Ｎ（重鎖）、Ｑ１６６ＮもしくはＱ１６６Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ２０１Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号２１および２２の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化アリロクマブＦａｂをコードする。
【０２３２】
ある特定の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図５Ａの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのアリロクマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＰＣＳＫ９抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのアリロクマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０２３３】
ある特定の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、エボロクマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号２３および２４のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図５Ｂを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１２３のヌクレオチド配列（エボロクマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１２４のヌクレオチド配列（エボロクマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０２３４】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性ドメインは、配列番号２３の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のグルタミン酸（Ｅ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２２）の全部または一部を含有し、具体的には、図５Ｂに明示された、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号２３の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０２３５】
ある特定の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２４に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＰＣＳＫ９の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２３に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＰＣＳＫ９の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２４に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号２３に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＰＣＳＫ９の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図５Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＰＣＳＫ９の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図５Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０２３６】
ある特定の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｔ１１０Ｎ（重鎖）および／またはＱ１９７Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号２３および２４の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化エボロクマブＦａｂをコードする。
【０２３７】
ある特定の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図５Ｂの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのエボロクマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＰＣＳＫ９抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのエボロクマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０２３８】
ある特定の実施形態では、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗原結合性断片のトランス遺伝子は、エビナクマブの、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメイン（配列番号２５および２６のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図５Ｃを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。これらを、重鎖Ｃ１定常ドメインおよび／または軽鎖定常ドメインに融合させて、Ｆａｂ断片を形成することができる。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号２５のヌクレオチド配列（エビナクマブの重鎖可変ドメインをコードする）および配列番号２６のヌクレオチド配列（エビナクマブの軽鎖可変ドメインをコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０２３９】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗原結合性ドメインは、配列番号２５の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）の全部または一部を含有し、具体的には、図５Ｃに明示された、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号２５の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０２４０】
ある特定の実施形態では、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２６に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＡＮＧＰＴＬ３の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２５に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＡＮＧＰＴＬ３の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２６に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号２５に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図５Ｃにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図５Ｃにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０２４１】
ある特定の実施形態では、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｍ１２１Ｎ（重鎖）、Ｑ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９５Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号２５および２６の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化エビナクマブＦａｂをコードする。
【０２４２】
ある特定の実施形態では、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図５Ｃの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのエビナクマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのエビナクマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０２４３】
遺伝子治療法
抗ＰＣＳＫ９または抗ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、ＨｅＦＨ、ＨｏＦＨ、またはＡＤＣについて処置する方法が提供される。抗体は、アリロクマブ、エボロクマブ、またはエビナクマブであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある実施形態では、患者は、ＨｅＦＨ、ＨｏＦＨ、もしくはＡＤＣと診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．２節において記載する。このようなベクターは、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図５Ａ〜５Ｃに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、血流に導入することにより、組換えベクターが、肝組織または筋組織に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．２節を参照されたい。
【０２４４】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗ＰＣＳＫ９療法または抗ＡＮＧＰＴＬ３療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、ＨｅＦＨ、ＨｏＦＨ、もしくはＡＤＣと診断されているか、またはこれと関連する、１つもしくは複数の症状を有し、抗ＰＣＳＫ９抗体もしくは抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗ＰＣＳＫ９抗体もしくは抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、アリロクマブ、エボロクマブ、またはエビナクマブにより、既に処置されており、アリロクマブ、エボロクマブ、またはエビナクマブに対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗ＰＣＳＫ９抗体もしくは抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０２４５】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗ＰＣＳＫ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂもしくは抗ＰＣＳＫ９  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ、または抗ＡＮＧＰＴＬ３  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂもしくは抗ＡＮＧＰＴＬ３  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗ＰＣＳＫ９  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂもしくは抗ＡＮＧＰＴＬ３  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、ＨｅＦＨ、ＨｏＦＨ、もしくはＡＤＣと診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有するヒト対象（患者）に、皮下投与、筋内投与、または静脈内投与して、形質導入された肝細胞または筋細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、肝組織内または筋組織内に創出することにより達せられる、ＨｅＦＨ、ＨｏＦＨ、またはＡＤＣの処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすはずである。
【０２４６】
具体的な実施形態では、抗ＰＣＳＫ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図５Ａに明示された、アリロクマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号２１）のアミノ酸位置Ｎ３０、Ｎ５９、および／もしくはＮ１６０、または軽鎖（配列番号２２）のＮ２２、Ｎ３５、Ｑ１０６、Ｎ１６４、および／もしくはＮ２１６のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、アリロクマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号２１）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号２２）のＹ９２および／もしくはＹ９３において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０２４７】
具体的な実施形態では、抗ＰＣＳＫ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図５Ｂに明示された、エボロクマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号２３）のアミノ酸位置Ｑ１０７および／もしくはＮ１５７および／もしくはＮ１９０および／もしくはＮ１９９、または軽鎖（配列番号２４）のＮ７１および／もしくはＮ１７３のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、エボロクマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号２３）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号２４）のＹ８８および／もしくはＹ８９において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０２４８】
具体的な実施形態では、抗ＡＮＧＰＴＬ３  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図５Ｃに明示された、エビナクマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号２５）のアミノ酸位置Ｎ７７、Ｑ１１８、および／もしくはＮ１６８、または軽鎖（配列番号２６）のＱ１００、Ｎ１５８、および／もしくはＮ２１０のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、エビナクマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号２５）のＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号２６）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０２４９】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、グリコシル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、ＨｅＦＨ、ＨｏＦＨ、もしくはＡＤＣの進行を緩徐化もしくは停止させ、かつ／または低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）レベルを低下させることである。有効性は、ＬＤＬ−Ｃレベルをモニタリングすることによりモニタリングすることができる。例えば、有効性は、ベースラインからの、ＬＤＬ−Ｃの平均値変化パーセントを評価することによりモニタリングすることができる。
【０２５０】
本明細書で提示される方法は、抗ＰＣＳＫ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂもしくは抗ＡＮＧＰＴＬ３  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片の、肝臓または筋肉への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、ＨｅＦＨ、ＨｏＦＨ、またはＡＣＤに利用可能な処置は、食餌、スタチン、エゼチミブ、およびＬＤＬアフェレーシス、ならびにアリロクマブ、エボロクマブ、またはエビナクマブを含むがこれらに限定されない、抗ＰＣＳＫ９剤または抗ＡＮＧＰＴＬ３剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０２５１】
５．３．７  抗ＯｘＰＬ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ
酸化リン脂質（ＯｘＰＬ）に結合し、アテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＣＤ）を含む心血管疾患、アテローム性動脈硬化性プラーク形成、非ＨＤＬコレステロールおよびＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、または高コレステロール血症の処置および／または低減および／または緩徐化の適応がある、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、Ｅ０６−ｓｃＦｖまたはその抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。Ｅ０６−ｓｃＦｖのアミノ酸配列を、図５Ｄに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、ＯｘＰＬ結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、心血管疾患、ＡＣＤ、高コレステロール血症、非ＨＤＬコレステロールおよび／もしくはＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、ならびに／またはアテローム性動脈硬化性プラークの異常と診断されるか、あるいは１つまたは複数のこの症状を有する患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０２５２】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、ＯｘＰＬに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、Ｅ０６−ｓｃＦｖまたはこの変異体など、ＯｘＰＬに結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗ＯｘＰＬ抗原結合性断片もコードしうる（例えば、Courtois et al.を参照されたい）。
【０２５３】
ある特定の実施形態では、抗ＯｘＰＬ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、Ｅ０６−ｓｃＦｖの、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメイン（配列番号５９および６０のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図５Ｄを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。Ｅ０６−ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖ分子であり、したがって、可撓性リンカーにより接続された、抗ＯｘＰＬ  ｍＡｂの、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含有する。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１５９のヌクレオチド配列（Ｅ０６−ｓｃＦｖの重鎖可変ドメインをコードする）および配列番号１６０のヌクレオチド配列（Ｅ０６−ｓｃＦｖの軽鎖可変ドメインをコードする）を含みうる。Ｅ０６は、ｓｃＦｖであり、このように、ｓｃＦｖは、軽鎖と重鎖との間にリンカーを伴う、１つのタンパク質鎖として発現させられる。ｓｃＦｖは、ヒト細胞、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ）など）内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるリーダー配列を有する。重鎖および軽鎖が、個別のタンパク質として発現させられる、他の実施形態では、これらのいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０２５４】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、軽鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、可撓性ペプチドリンカーを含みうる。可撓性ペプチドリンカー配列は、グリシン（Ｇ）またはセリン（Ｓ）などの可撓性残基を含みうる。一部の実施形態では、可撓性ペプチドリンカーは、１０〜３０残基、またはＧ、Ｓ、もしくはＧおよびＳの両方を含みうる。ＥおよびＫなどの帯電残基を使用し、散在させて、可溶性を増強することができる。可撓性ペプチドリンカー配列は、（ＧＧＧＧＳ）ｎ［配列中、ｎは、１、２、３、４、５、または６でありうる］（配列番号２４３）のアミノ酸配列を有しうる。この場合、シグナル配列を、場合に応じて、重鎖可変ドメイン配列または軽鎖可変ドメイン配列である、ｓｃＦｖのＮ末端に融合させる。
【０２５５】
ある特定の実施形態では、抗ＯｘＰＬ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号６０に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＯｘＰＬの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＯｘＰＬ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５９に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＯｘＰＬの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＯｘＰＬ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号６０に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号５９に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＯｘＰＬの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図５Ｄにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＯｘＰＬの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図５Ｄにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０２５６】
ある特定の実施形態では、抗ＯｘＰＬ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、任意選択で、突然変異Ｔ１１８Ｎ（重鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）を伴う、それぞれ、配列番号５９および６０の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化Ｅ０６−ｓｃＦｖ  Ｆａｂをコードする。
【０２５７】
ある特定の実施形態では、抗ＯｘＰＬ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図５Ｄの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのＥ０６−ｓｃＦｖ  ＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＯｘＰＬ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのＥ０６−ｓｃＦｖ  ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０２５８】
遺伝子治療法
抗ＯｘＰＬ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、心血管疾患、ＡＣＤ、高コレステロール血症、非ＨＤＬコレステロールおよび／もしくはＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、ならびに／またはアテローム性動脈硬化性プラークの異常について処置する方法が提供される。抗体は、Ｅ０６−ｓｃＦｖであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある実施形態では、患者は、心血管疾患、ＡＣＤ、高コレステロール血症、非ＨＤＬコレステロールおよび／もしくはＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、ならびに／またはアテローム性動脈硬化性プラークの異常と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．２節において記載する。このようなベクターは、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図５Ｄに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、血流に導入することにより、組換えベクターが、肝組織または筋組織に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．２節を参照されたい。
【０２５９】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗ＯｘＰＬ療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、心血管疾患、ＡＣＤ、高コレステロール血症、非ＨＤＬコレステロールおよび／もしくはＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、ならびに／またはアテローム性動脈硬化性プラークの異常と診断されているか、あるいはこれと関連する、１つまたは複数の症状を有し、抗ＯｘＰＬ抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗ＯｘＰＬ抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、Ｅ０６−ｓｃＦｖまたはＥ０６により、既に処置されており、Ｅ０６−ｓｃＦｖまたはＥ０６に対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗ＯｘＰＬ抗体または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０２６０】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗ＯｘＰＬ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＯｘＰＬ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗ＯｘＰＬ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、心血管疾患、ＡＣＤ、高コレステロール血症、非ＨＤＬコレステロールおよび／もしくはＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、ならびに／またはアテローム性動脈硬化性プラークの異常と診断されるか、あるいは１つまたは複数のこれらの症状を有するヒト対象（患者）に、皮下投与、筋内投与、または静脈内投与して、形質導入された肝細胞または筋細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、肝組織内または筋組織内に創出することにより達せられる、心血管疾患、ＡＣＤ、高コレステロール血症、非ＨＤＬコレステロールおよび／もしくはＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、ならびに／またはアテローム性動脈硬化性プラークの異常の処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０２６１】
具体的な実施形態では、抗ＯｘＰＬ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図５Ｄに明示された、Ｅ０６−ｓｃＦｖの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号５９）のアミノ酸位置Ｎ５３のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、Ｅ０６−ｓｃＦｖの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｓｃＦｖまたはこの他の抗原結合性断片は、重鎖（配列番号５９）のＹ５８および／もしくはＹ６２および／もしくはＹ９６および／もしくはＹ９７、ならびに／または軽鎖（配列番号６０）のＹ４２において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＯｘＰＬ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０２６２】
ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖによるＨｕＰＴＭ  ｍＡｂもしくはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、グリコシル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、心血管疾患、ＡＣＤ、高コレステロール血症、非ＨＤＬコレステロールおよび／もしくはＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、ならびに／またはアテローム性動脈硬化性プラークの異常の進行を処置し、これらを緩徐化させ、かつ／またはこれらを停止させることである。有効性は、ＬＤＬレベル、炎症マーカー、または大動脈弁領域内の変化、ピークおよび平均値の心弁圧較差、ならびに／もしくは最大大動脈血流量についてモニタリングすることなど、大動脈弁狭窄症の程度の変化についてモニタリングすることによりモニタリングすることができる。例えば、有効性は、ベースラインからの、ＬＤＬの平均値変化パーセントを評価することによりモニタリングすることができる。
【０２６３】
本明細書で提示される方法は、抗ＯｘＰＬ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、肝臓または筋肉への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、心血管疾患、ＡＣＤ、高コレステロール血症、非ＨＤＬコレステロールおよび／もしくはＬＤＬの異常な高レベル、大動脈弁狭窄症、肝管狭窄症、ならびに／またはアテローム性動脈硬化性プラークの異常に利用可能な処置は、食餌、スタチン、エゼチミブ、およびＬＤＬアフェレーシス、ならびにＥ０６−ｓｃＦｖを含むがこれらに限定されない、抗ＯｘＰＬ剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０２６４】
５．３．８．骨粗鬆症のための、抗ＲＡＮＫＬ  ＨｕＰＴＭによる構築物および製剤
ＲＡＮＫＬ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａ−Ｂ  ｌｉｇａｎｄ）に結合し、デノスマブ（図６）などの抗ＲＡＮＫＬ抗体に由来し、骨粗鬆症または異常な骨量減少もしくは骨衰弱の処置（例えば、骨の巨細胞性腫瘍の処置）、処置誘導性骨量減少の処置、乳がん患者および前立腺がん患者における骨量減少の緩徐化（または骨量を増大させること）、骨転移に起因する骨格関連事象の阻止、または骨吸収および骨回転の減殺の適応がある、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、デノスマブまたはその抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。この抗体のＦａｂ断片のアミノ酸配列を、図６に提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、ＲＡＮＫＬ結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、骨粗鬆症を伴うと診断されるか、または骨量の減少を患う患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０２６５】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、ＲＡＮＫＬに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、デノスマブまたはこの変異体など、ＲＡＮＫＬに結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗ＲＡＮＫＬ抗原結合性断片もコードしうる（例えば、Courtois et al.を参照されたい）。
【０２６６】
ある特定の実施形態では、抗ＲＡＮＫＬ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、デノスマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号２７および２８のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図６を参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１２７のヌクレオチド配列（デノスマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１２８のヌクレオチド配列（デノスマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０２６７】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗ＲＡＮＫＬ抗原結合性ドメインは、配列番号２７の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２２）の全部または一部を含有し、具体的には、図６に明示された、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号２７の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０２６８】
ある特定の実施形態では、抗ＲＡＮＫＬ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２８に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＲＡＮＫＬの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＲＡＮＫＬ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２７に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＲＡＮＫＬの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＲＡＮＫＬ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２８に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号２７に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＲＡＮＫＬの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図６において下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＲＡＮＫＬの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図６において下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０２６９】
ある特定の実施形態では、抗ＲＡＮＫＬ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１７Ｎ（重鎖）、Ｑ１６１ＮもしくはＱ１６１Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９６Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号２７および２８の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化デノスマブＦａｂをコードする。
【０２７０】
ある特定の実施形態では、抗ＲＡＮＫＬ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図６の重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのデノスマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＲＡＮＫＬ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのデノスマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０２７１】
遺伝子治療法
抗ＲＡＮＫＬ抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、骨粗鬆症または異常な骨量減少（例えば、乳がん患者もしくは前立腺がん患者における、または骨転移に起因する）について処置する方法が提供される。抗体は、デノスマブであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある実施形態では、患者は、骨粗鬆症または異常な骨量減少と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．２節において記載する。このようなベクターは、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図６に示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、血流に導入することにより、組換えベクターが、肝組織または筋組織に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．２節を参照されたい。
【０２７２】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗ＲＡＮＫＬ療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、骨粗鬆症もしくは異常な骨量減少と診断されているか、またはこれと関連する、１つもしくは複数の症状を有し、抗ＲＡＮＫＬ抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗ＲＡＮＫＬ抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、デノスマブにより、既に処置されており、デノスマブに対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗ＲＡＮＫＬ抗体または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０２７３】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗ＲＡＮＫＬ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＲＡＮＫＬ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗ＲＡＮＫＬ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、骨粗鬆症もしくは骨量の減少と診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有するヒト対象（患者）に、静脈内投与して、形質導入された肝細胞または筋細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、肝組織内または筋組織内に創出することにより達せられる、骨粗鬆症または骨量の減少の処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０２７４】
抗ＲＡＮＫＬ  ＨｕＰＴＭｍＡｂまたは抗ＲＡＮＫＬ  ＨｕＰＴＭ  ＦａｂのためのｃＤＮＡ構築物は、形質導入された肝細胞または筋細胞による、適正な共プロセシングおよび翻訳後プロセシング（グリコシル化およびタンパク質の硫酸化）を確保するシグナルペプチドを含むべきである。例えば、シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０２７５】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、抗ＲＡＮＫＬ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＲＡＮＫＬ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを、ヒト細胞株内で、組換えＤＮＡ技術により作製し、骨粗鬆症もしくは骨量の減少と診断されるか、または骨粗鬆症もしくは骨量の減少のための治療が適切であると考えられる患者に投与することができる。
【０２７６】
具体的な実施形態では、抗ＲＡＮＫＬ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図６に明示された、デノスマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号２７）のアミノ酸位置Ｎ７７および／もしくはＮ１６４および／もしくはＱ１１４、または軽鎖（配列番号２８）のＮ１５９および／もしくはＮ２１１および／もしくはＱ１０１のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、デノスマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号２７）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号２８）のＹ８８において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＲＡＮＫＬ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０２７７】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、グリコシル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、骨粗鬆症または骨量の減少の進行を緩徐化または停止させることである。有効性は、骨組織事象もしくは骨格事象、または骨格事象の欠如を査定することによりモニタリングすることができる。例えば、骨粗鬆症に関して、有効性は、骨ミネラル含量の評価、脊椎骨折についてのＸ線写真の評価、または臨床における骨折の確認のための、診断用イメージングによりモニタリングすることができる。
【０２７８】
本明細書で提示される方法は、抗ＲＡＮＫＬ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、肝臓または筋肉への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、骨粗鬆症または骨量の減少に利用可能な処置は、がんと診断された患者における、ビスホスホネート（例えば、ゾレドロン酸）、副甲状腺ホルモン（例えば、テリパラチド［ＰＴＨ１−３４］および／または全長ＰＴＨ１−８４）、カルシウム、ビタミンＤ、および化学療法、低温療法、または放射線療法、ならびにデノスマブを含むがこれらに限定されない、抗ＲＡＮＫＬ剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０２７９】
５．３．９  がんおよびリンパ腫のための、ＰＤ遮断剤ＨｕＰＴＭによる構築物および製剤
プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、またはプログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）に結合し、ＰＤ−１遮断剤（例えば、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、または抗ＰＤ−Ｌ２）に由来し、切除不能／転移性黒色腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫）、および癌腫（例えば、腎細胞癌、扁平上皮癌、および非小細胞肺癌）の処置の適応がある、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、または前出のうちの１つの抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。ニボルマブおよびペムブロリズマブのＦａｂ断片のアミノ酸配列を、図７Ａおよび７Ｂのそれぞれに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、黒色腫、癌腫、またはリンパ腫と診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有する患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０２８０】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２に結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、またはこれらの変異体など、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２に結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、または抗ＰＤ−Ｌ２抗原結合性断片もコードしうる（例えば、Courtois et al.を参照されたい）。
【０２８１】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ニボルマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号２９および３０のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図７Ａを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１２９のヌクレオチド配列（ニボルマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１３０のヌクレオチド配列（ニボルマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０２８２】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗インテグリン抗原結合性ドメインは、配列番号２９の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のチロシン（Ｙ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧ（配列番号２４０）の全部または一部を含有し、具体的には、図７Ａに明示された、ＧＰＰＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２９）、またはＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬ（配列番号２４１）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号２９の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０２８３】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３０に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＰＤ−１の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号２９に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＰＤ−１の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３０に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号２９に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＰＤ−１の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図７Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＰＤ−１の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図７Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０２８４】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１０８Ｎ（重鎖）、Ｑ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９５Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号２９および３０の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ニボルマブＦａｂをコードする。
【０２８５】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図７Ａの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのニボルマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのニボルマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０２８６】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ペムブロリズマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号３１および３２のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図７Ｂを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１３１のヌクレオチド配列（ペムブロリズマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１３２のヌクレオチド配列（ペムブロリズマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０２８７】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗インテグリン抗原結合性ドメインは、配列番号３１の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のチロシン（Ｙ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧ（配列番号２４０）の全部または一部を含有し、具体的には、図７Ｂに明示された、ＧＰＰＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２９）、またはＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬ（配列番号２４１）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号３１の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０２８８】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３２に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＰＤ−１の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３１に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＰＤ−１の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３２に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号３１に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＰＤ−１の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図７Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＰＤ−１の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図７Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０２８９】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｔ１１５Ｎ（重鎖）、Ｑ１６４ＮもしくはＱ１６４Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９９Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号３１および３２の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ペムブロリズマブＦａｂをコードする。
【０２９０】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図７Ｂの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのペムブロリズマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのペムブロリズマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０２９１】
遺伝子治療法
抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、および抗ＰＤ−Ｌ２抗体のうちの１つもしくは複数、またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、黒色腫、癌腫、またはリンパ腫について処置する方法が提供される。特に、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、および抗ＰＤ−Ｌ２抗体のうちの１つもしくは複数、またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、転移性黒色腫、リンパ腫、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮癌、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、胃がん、腎細胞癌、ミスマッチ修復欠損転移性結腸がん、または肝細胞癌を処置するための方法が提供される。抗体は、ニボルマブおよびペムブロリズマブであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある実施形態では、患者は、黒色腫、癌腫、もしくはリンパ腫と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．２節において記載する。このようなベクターは、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図７Ａおよび７Ｂに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、血流に導入することにより、組換えベクターが、肝組織または筋組織に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．２節を参照されたい。
【０２９２】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗ＰＤ−１療法、抗ＰＤ−Ｌ１療法、または抗ＰＤ−Ｌ２療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、黒色腫、癌腫、もしくはリンパ腫と診断されているか、またはこれと関連する、１つもしくは複数の症状を有し、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、もしくは抗ＰＤ−Ｌ２抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、もしくは抗ＰＤ−Ｌ２抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、ニボルマブまたはペムブロリズマブにより、既に処置されており、ニボルマブまたはペムブロリズマブに対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、もしくは抗ＰＤ−Ｌ２抗体、または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０２９３】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗ＰＤ−１  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、および／もしくは抗ＰＤ−Ｌ２  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、または抗ＰＤ−１  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ、および／もしくは抗ＰＤ−Ｌ２  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗ＰＤ−１  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ、および／もしくは抗ＰＤ−Ｌ２  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、黒色腫、癌腫、リンパ腫、もしくは他のがんと診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有するヒト対象（患者）に、皮下投与、筋内投与、または静脈内投与して、形質導入された肝細胞または筋細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、肝組織内または筋組織内に創出することにより達せられる、黒色腫、癌腫、またはリンパ腫の処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０２９４】
ＨｕＰＴＭｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  ＦａｂのためのｃＤＮＡ構築物は、形質導入された肝細胞または筋細胞による、適正な共プロセシングおよび翻訳後プロセシング（グリコシル化およびタンパク質の硫酸化）を確保するシグナルペプチドを含むべきである。例えば、シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０２９５】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、抗ＰＤ−１  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、もしくは抗ＰＤ−Ｌ２  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、または抗ＰＤ−１  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ、もしくは抗ＰＤ−Ｌ２  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを、ヒト細胞株内で、組換えＤＮＡ技術により作製し、転移性黒色腫、リンパ腫、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮癌、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、胃がん、腎細胞癌、ミスマッチ修復欠損転移性結腸がん、もしくは肝細胞癌と診断されるか、または転移性黒色腫、リンパ腫、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮癌、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、胃がん、腎細胞癌、ミスマッチ修復欠損転移性結腸がん、もしくは肝細胞癌のための治療が適切であると考えられる患者に投与することができる。
【０２９６】
具体的な実施形態では、抗ＰＤ−１  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図７Ａに明示された、ニボルマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号２９）のアミノ酸位置Ｎ７７、Ｑ１０５、および／もしくはＮ１５５、または軽鎖（配列番号３０）のＮ９３、Ｑ１００、Ｎ１５８、および／もしくはＮ２１０のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ニボルマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号２９）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号３０）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＰＤ−１  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０２９７】
具体的な実施形態では、抗ＰＤ−１  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図７Ｂに明示された、ペムブロリズマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号３１）のアミノ酸位置Ｑ１１２、Ｎ１６２、および／もしくはＮ２０４、または軽鎖（配列番号３２）のＮ１６２および／もしくはＮ２１４のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ペムブロリズマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号３１）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号３２）のＹ９０および／もしくはＹ９１において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＰＤ−１  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０２９８】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、グリコシル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、転移性黒色腫、リンパ腫、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮癌、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、胃がん、腎細胞癌、ミスマッチ修復欠損転移性結腸がん、または肝細胞癌の進行を緩徐化または停止させることである。有効性は、全生存、無進行生存、進行までの時間、処置失敗までの時間、無事象生存、次回処置までの時間、客観的奏効率、または奏効の持続期間を含む、１つまたは複数の腫瘍学評価項目によりモニタリングすることができる（例えば、U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research, Center for Biologics Evaluation and Research. Guidance for industry: clinical trial endpoints for the approval of cancer drugs and biologics. https://www.fda.gov/downloads/Drugs/Guidances/ucm071590.pdf. Published May 2007. Accessed October 13, 2017; Oncology Endpoints in a Changing Landscape. Manag. Care. 2016; 1(suppl):1-12を参照されたい）。
【０２９９】
本明細書で提示される方法は、１つまたは複数の抗ＰＤ−１  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、および抗ＰＤ−Ｌ２  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片の、肝臓または筋肉への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、転移性黒色腫、リンパ腫、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮癌、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、胃がん、腎細胞癌、ミスマッチ修復欠損転移性結腸がん、または肝細胞癌に利用可能な処置は、化学療法（例えば、シスプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、カルボプラチン、および／またはパクリタキセル）、放射線療法、低温療法、低分子ターゲティング療法、他の抗体、およびワクチン療法、ならびにニボルマブおよびペムブロリズマブを含むがこれらに限定されない、抗ＰＤ−１剤、抗ＰＤ−Ｌ１剤、および抗ＰＤ−Ｌ２剤のうちの１つまたは複数を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０３００】
５．３．１０  眼障害のための、抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭまたは抗ｆＤ  ＨｕＰＴＭによる構築物および製剤
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）または補体（例えば、因子Ｄ（ｆＤ））に結合し、抗ＶＥＧＦまたは抗補体（例えば、抗ｆＤ）のそれぞれに由来し、糖尿病網膜症、近視性脈絡膜新生血管（ｍＣＮＶ）、黄斑変性（例えば、新生血管型（湿性）加齢黄斑変性（ＡＭＤ））、黄斑浮腫（例えば、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）後の黄斑浮腫または糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ））を含む、１つまたは複数の網膜障害の処置；血管新生の抑制；または、抗ＶＥＧＦに由来するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの場合、上皮性卵巣がん、卵管がん、腹膜がん、子宮頸がん、転移性結腸直腸がん、転移性ＨＥＲ２陰性乳がん、転移性腎細胞癌、神経膠芽腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）を含む、１種類または複数種類のがんの処置の適応がある、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、ラニビズマブ、ベバシズマブ、ランパリズマブ、ブロルシズマブ、または前出のうちの１つの抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。ラニビズマブ、ベバシズマブ、およびランパリズマブのＦａｂ断片、ならびにブロルシズマブのｓｃＦｖのアミノ酸配列を、図８Ａ〜８Ｄのそれぞれに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、ＶＥＧＦ結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは因子Ｄ結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはｓｃＦｖを含む、その抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、網膜障害（例えば、糖尿病網膜症、ｍＣＮＶ、黄斑変性、または黄斑浮腫）、またはがん（例えば、上皮卵巣がん、卵管がん、腹膜がん、子宮頸がん、転移性結腸直腸がん、転移性ＨＥＲ２陰性乳がん、転移性腎細胞癌、神経膠芽腫、またはＮＳＣＬＣ）と診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有する患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０３０１】
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、ＶＥＧＦまたはｆＤに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、ラニビズマブ、ベバシズマブ、ランパリズマブ、ブロルシズマブ、またはこれらの変異体など、ＶＥＧＦまたはｆＤに結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗ＶＥＧＦまたは抗ｆＤ抗原結合性断片もコードしうる（例えば、Courtois et al.を参照されたい）。
【０３０２】
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ラニビズマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号３３および３４のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図８Ａを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１３３のヌクレオチド配列（ラニビズマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１３４のヌクレオチド配列（ラニビズマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、網膜を形成する、１つまたは複数の細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、網膜を形成する、１つまたは複数の細胞により分泌されるタンパク質に対応する、表１に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、後出の表２および３に列挙されたシグナル配列など、筋細胞内または肝細胞内の発現に適切でありうる。
【０３０３】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性ドメインは、配列番号３３の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２２）の全部または一部を含有し、具体的には、図８Ａに明示された、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号３３の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０３０４】
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３４に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＶＥＧＦの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３３に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＶＥＧＦの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３４に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号３３に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＶＥＧＦの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＶＥＧＦの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０３０５】
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１８Ｎ（重鎖）、Ｑ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９５Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号３３および３４の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ラニビズマブＦａｂをコードする。
【０３０６】
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図８Ａの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのラニビズマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのラニビズマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３０７】
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ベバシズマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号３５および３６のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図８Ｂを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１３５のヌクレオチド配列（ベバシズマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１３６のヌクレオチド配列（ベバシズマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、１つまたは複数の網膜細胞型または肝細胞型内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、網膜細胞型または肝細胞型のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表１または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０３０８】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗インテグリン抗原結合性ドメインは、配列番号３５の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２２）の全部または一部を含有し、具体的には、図８Ｂに明示された、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号３５の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０３０９】
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３６に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＶＥＧＦの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３５に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＶＥＧＦの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３６に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号３５に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＶＥＧＦの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＶＥＧＦの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０３１０】
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１８Ｎ（重鎖）、および／またはＱ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９５Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号３５および３６の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ベバシズマブＦａｂをコードする。
【０３１１】
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図８Ｂの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのベバシズマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのベバシズマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１２】
ある特定の実施形態では、抗ｆＤ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ランパリズマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号３７および３８のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図８Ｃを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１３７のヌクレオチド配列（ランパリズマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１３８のヌクレオチド配列（ランパリズマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、網膜を形成する、１つまたは複数のヒト細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、網膜を形成する細胞により分泌されるタンパク質に対応する、表１に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０３１３】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗インテグリン抗原結合性ドメインは、配列番号３７の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）の全部または一部を含有し、具体的には、図８Ｃに明示された、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号３７の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０３１４】
ある特定の実施形態では、抗ｆＤ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３８に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ｆＤの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ｆＤ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３７に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ｆＤの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ｆＤ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３８に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号３７に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ｆＤの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｃにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ｆＤの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｃにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０３１５】
ある特定の実施形態では、抗ｆＤ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１０Ｎ（重鎖）、Ｑ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９５Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号３７および３８の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ランパリズマブＦａｂをコードする。
【０３１６】
ある特定の実施形態では、抗ｆＤ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図８Ｃの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのランパリズマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ｆＤ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのランパリズマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１７】
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ブロルシズマブの、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメイン（配列番号３９および４０のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図８Ｄを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ブロルシズマブは、ｓｃＦｖ分子であり、したがって、可撓性リンカーにより接続された、抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂの、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含有する。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１３９のヌクレオチド配列（ブロルシズマブの重鎖可変ドメイン部分をコードする）および配列番号１４２のヌクレオチド配列（ブロルシズマブの軽鎖可変ドメイン部分をコードする）を含みうる。重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを、個別のタンパク質として発現させる場合、重鎖配列および軽鎖配列の各々は、ヒト細胞内、特に、網膜を形成する、１つまたは複数の細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、網膜を形成する、１つまたは複数の細胞により分泌されるタンパク質に対応する、表１に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０３１８】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、軽鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、可撓性ペプチドリンカーを含みうる。可撓性ペプチドリンカー配列は、グリシン（Ｇ）またはセリン（Ｓ）などの可撓性残基を含みうる。一部の実施形態では、可撓性ペプチドリンカーは、１０〜３０残基、またはＧ、Ｓ、もしくはＧおよびＳの両方を含みうる。ＥおよびＫなどの帯電残基を使用し、散在させて、可溶性を増強することができる。可撓性ペプチドリンカー配列は、（ＧＧＧＧＳ）ｎ［配列中、ｎは、１、２、３、４、５、または６でありうる］（配列番号２４３）のアミノ酸配列を有しうる。この場合、シグナル配列を、場合に応じて、重鎖可変ドメイン配列または軽鎖可変ドメイン配列である、ｓｃＦｖのＮ末端と融合させる。
【０３１９】
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４０に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＶＥＧＦの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号３９に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＶＥＧＦの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４０に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号３９に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＶＥＧＦの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｄにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＶＥＧＦの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｄにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０３２０】
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１５Ｎ（重鎖）（図１１Ａ（重鎖）を参照されたい）を伴う、それぞれ、配列番号３９および４０の単鎖を含む、高グリコシル化ブロルシズマブｓｃＦｖをコードする。
【０３２１】
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図８Ｄの単鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのブロルシズマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのブロルシズマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３２２】
遺伝子治療法
抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、１つまたは複数の網膜障害（糖尿病網膜症、ｍＣＮＶ、黄斑変性、または黄斑浮腫など）、またはがん（上皮卵巣がん、卵管がん、腹膜がん、子宮頸がん、転移性結腸直腸がん、転移性ＨＥＲ２陰性乳がん、転移性腎細胞癌、神経膠芽腫、またはＮＳＣＬＣなど）について処置する方法が提供される。抗体またはこのＦａｂ断片は、ラニビズマブ、ベバシズマブ、またはブロルシズマブでありうる。ある実施形態では、患者は、多様な網膜障害、または上記で列挙されたがんのうちの１つまたは複数と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。
【０３２３】
また、抗ｆＤ抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、１つまたは複数の網膜障害（糖尿病網膜症、ｍＣＮＶ、黄斑変性、または黄斑浮腫など）について処置する方法も提供される。抗体は、ランパリズマブであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある実施形態では、患者は、上記で列挙された多様な網膜障害のうちの１つまたは複数と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。
【０３２４】
トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．３節において記載する。このようなベクターは、ヒト網膜型細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。代替的に、ＡＡＶ．７ｍ８カプシドを保有するベクターを、眼適応に使用することができる。図８Ａ〜８Ｄに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、眼に導入することにより、組換えベクターが、網膜に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．３節を参照されたい。例えば、がんを処置するための、肝臓への送達で、トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．２節において記載する。このようなベクターは、ヒト肝細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図８Ａ〜８Ｃに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、血流に導入することにより、組換えベクターが、肝臓に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．２節を参照されたい。
【０３２５】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗ＶＥＧＦまたは抗ｆＤ療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、１つもしくは複数の網膜障害、または１種類もしくは複数種類のがんと診断されているか、あるいはこれと関連する、１つまたは複数の症状を有し、抗ＶＥＧＦ抗体もしくは抗ｆＤ抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくは抗ｆＤ抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、ラニビズマブ、ベバシズマブ、ランパリズマブ、またはブロルシズマブにより、既に処置されており、ラニビズマブ、ベバシズマブ、ランパリズマブ、またはブロルシズマブに対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗ＶＥＧＦまたは抗ｆＤ抗体または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０３２６】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂもしくは抗ｆＤ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、または抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂもしくは抗ｆＤ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂもしくは抗ｆＤ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、１つもしくは複数の網膜障害と診断されるか、または１つもしくは複数のこれらの症状を有するヒト対象（患者）に、網膜下投与、硝子体内投与、または脈絡膜上投与するか、あるいは抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、がんと診断されたヒト対象（患者）に、皮下投与、筋内投与、または静脈内投与して、形質導入された網膜細胞または肝細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、網膜内または肝臓内に創出することにより達せられる、１つまたは複数の網膜障害またはがんの処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０３２７】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂもしくは抗ｆＤ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、または抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂもしくは抗ｆＤ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを、ヒト細胞株内で、組換えＤＮＡ技術により作製し、網膜障害もしくはがんと診断され、網膜障害もしくはがんのための治療が適切であると考えられる患者に投与することができる。
【０３２８】
具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図８Ａに明示された、ラニビズマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号３３）のアミノ酸位置Ｑ１１５および／もしくはＮ１６５、または軽鎖（配列番号３４）のＱ１００、Ｎ１５８、および／もしくはＮ２１０のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ラニビズマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号３３）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号３４）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０３２９】
具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図８Ｂに明示された、ベバシズマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号３５）のアミノ酸位置Ｑ１１５および／もしくはＮ１６５、または軽鎖（配列番号３６）のＱ１００、Ｎ１５８、および／もしくはＮ２１０のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ベバシズマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号３５）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号３６）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０３３０】
具体的な実施形態では、抗ｆＤ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図８Ｃに明示された、ランパリズマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号３７）のアミノ酸位置Ｑ１０７および／もしくはＮ１５７、または軽鎖（配列番号３８）のＱ１００および／もしくはＮ１５８および／もしくはＮ２１０のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ランパリズマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号３７）のＹ６０および／もしくはＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号３８）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ｆＤ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０３３１】
具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図８Ｄに明示された、ブロルシズマブの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号３９）のアミノ酸位置Ｎ７７および／もしくはＱ１１２、または軽鎖（配列番号４０）のＮ９７および／もしくはＱ１０３のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ブロルシズマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号３９）のＹ３２および／もしくはＹ３３および／もしくはＹ３４および／もしくはＹ５９および／もしくはＹ６０および／もしくはＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号４０）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０３３２】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、グリコシル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、網膜障害もしくはある種のがんの進行を緩徐化もしくは停止させ、かつ／または血管新生を抑制することである。網膜障害の場合、有効性は、視力をモニタリングすることによりモニタリングすることができる。例えば、有効性は、ベースラインからの視力の変化を評価することによりモニタリングすることができる。がんの場合、有効性は、全生存、無進行生存、進行までの時間、処置失敗までの時間、無事象生存、次回処置までの時間、客観的奏効率、または奏効の持続期間を含む、１つまたは複数の腫瘍学評価項目を評価することによりモニタリングすることができる（例えば、U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research, Center for Biologics Evaluation and Research. Guidance for industry: clinical trial endpoints for the approval of cancer drugs and biologics. https://www.fda.gov/downloads/Drugs/Guidances/ucm071590.pdf. Published May 2007. Accessed October 13, 2017; Oncology Endpoints in a Changing Landscape. Manag. Care. 2016; 1(suppl):1-12を参照されたい）。
【０３３３】
本明細書で提示される方法は、抗ＶＥＧＦ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂもしくは抗ｆＤ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片の、網膜または肝臓への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、糖尿病網膜症、ｍＣＮＶ、黄斑変性、または黄斑浮腫に利用可能な処置は、ベルテポルフィンを伴う、レーザー光凝固療法、レーザー光力学療法、アフリベルセプト、および／または硝子体内ステロイド、ならびにラニビズマブ、ベバシズマブ、ランパリズマブ、またはブロルシズマブを含むがこれらに限定されない、抗ＶＥＧＦまたは抗ｆＤ剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、上皮卵巣がん、卵管がん、腹膜がん、子宮頸がん、転移性結腸直腸がん、転移性ＨＥＲ２陰性乳がん、転移性腎細胞癌、神経膠芽腫、またはＮＳＣＬＣに利用可能な処置は、化学療法（例えば、シスプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、５−フルオロウラシル、カルボプラチン、イリノテカン、インターフェロンアルファ、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドキソルビシンのＰＥＧ化リポソーム製剤、および／またはトポテカン）、化学療法保護薬（例えば、ロイコボリン）、放射線療法、低温療法、低分子ターゲティング療法、他の抗体、アフリベルセプト、および／またはワクチン療法、ならびにラニビズマブまたはベバシズマブを含むがこれらに限定されない、抗ＶＥＧＦを伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０３３４】
５．３．１１．全身性エリテマトーデスのための、抗ＢＬｙＳ  ＨｕＰＴＭによる構築物および製剤
Ｂリンパ球刺激因子（ＢＬｙＳ）に結合し、ベリムマブ（図８Ｅ）などの抗ＢＬｙＳ抗体に由来し、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の処置、ならびに自己反応性Ｂ細胞および免疫グロブリン産生性形質細胞のレベルの低減の適応がある、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、ベリムマブまたはその抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。この抗体のＦａｂ断片のアミノ酸配列を、図８Ｅに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、ＢＬｙＳ結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、ＳＬＥと診断された患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０３３５】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、ＢＬｙＳに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、ベリムマブまたはこの変異体など、ＢＬｙＳに結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗ＢＬｙＳ抗原結合性断片もコードしうる（例えば、Courtois et al.を参照されたい）。
【０３３６】
ある特定の実施形態では、抗ＢＬｙＳ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ベリムマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号４１および４２のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図８Ｅを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１４１のヌクレオチド配列（ベリムマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１４２のヌクレオチド配列（ベリムマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０３３７】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗ＢＬｙＳ抗原結合性ドメインは、配列番号４１の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２２）の全部または一部を含有し、具体的には、図８Ｅに明示された、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号４１の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０３３８】
ある特定の実施形態では、抗ＢＬｙＳ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４２に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＢＬｙＳの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＢＬｙＳ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４１に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＢＬｙＳの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＢＬｙＳ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４２に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号４１に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＢＬｙＳの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｅにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＢＬｙＳの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｅにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０３３９】
ある特定の実施形態では、抗ＢＬｙＳ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｍ１１８Ｎ（重鎖）および／またはＱ１９６Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号４１および４２の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ベリムマブＦａｂをコードする。
【０３４０】
ある特定の実施形態では、抗ＢＬｙＳ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図８Ｅの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのベリムマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＢＬｙＳ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのベリムマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３４１】
遺伝子治療法
抗ＢＬｙＳ抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、ＳＬＥについて処置する方法が提供される。抗体は、ベリムマブであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある実施形態では、患者は、ＳＬＥと診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．２節において記載する。このようなベクターは、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図８Ｅに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、血流に導入することにより、組換えベクターが、肝組織または筋組織に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．２節を参照されたい。
【０３４２】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗ＢＬｙＳ療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、ＳＬＥと診断されているか、またはこれと関連する、１つもしくは複数の症状を有し、抗ＢＬｙＳ抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗ＢＬｙＳ抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、ベリムマブにより、既に処置されており、ベリムマブに対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗ＢＬｙＳ抗体または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０３４３】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗ＢＬｙＳ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＢＬｙＳ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗ＢＬｙＳ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、ＳＬＥと診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有するヒト対象（患者）に、静脈内投与して、形質導入された肝細胞または筋細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、肝組織内または筋組織内に創出することにより達せられる、ＳＬＥの処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０３４４】
抗ＢＬｙＳ  ＨｕＰＴＭｍＡｂまたは抗ＢＬｙＳ  ＨｕＰＴＭ  ＦａｂのためのｃＤＮＡ構築物は、形質導入された肝細胞または筋細胞による、適正な共プロセシングおよび翻訳後プロセシング（グリコシル化およびタンパク質の硫酸化）を確保するシグナルペプチドを含むべきである。例えば、シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０３４５】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、抗ＢＬｙＳ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＢＬｙＳ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを、ヒト細胞株内で、組換えＤＮＡ技術により作製し、ＳＬＥと診断されるか、またはＳＬＥのための治療が適切であると考えられる患者に投与することができる。
【０３４６】
具体的な実施形態では、抗ＢＬｙＳ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図８Ｅに明示された、ベリムマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号４１）のアミノ酸位置Ｎ３０および／もしくはＮ６３および／もしくはＮ１６５、または軽鎖（配列番号４２）のＮ６８および／もしくはＮ９５のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ベリムマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号４１）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号４２）のＹ８５および／もしくはＹ８６において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＢＬｙＳ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０３４７】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、グリコシル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、ＳＬＥの進行を緩徐化もしくは停止させるか、患者の疼痛もしくは不快感のレベルを軽減するか、または自己反応性Ｂ細胞および免疫グロブリン産生形質細胞のレベルを低減することである。有効性は、例えば、皮膚、関節、腎臓、肺、血液細胞、心臓、および脳など、身体の罹患組織内または罹患領域内の、機能、症状、または炎症の程度を評定することによりモニタリングすることができる。例えば、有効性は、発作、精神病、器質性脳症候群、視覚障害、他の神経学的問題、禿頭、皮膚発赤、筋力低下、関節炎、血管炎症、粘膜潰瘍、深呼吸と共に悪化し、胸膜炎および／または心膜炎の症状、ならびに発熱を伴う胸痛を含む、１つまたは複数の症状の、存在、程度、または進行速度をモニタリングすることによりモニタリングすることができる。ＳＥＬＥＮＡ−ＳＬＥＤＡＩ（Ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  Ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ  ｉｎ  Ｌｕｐｕｓ  Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）；ＢＩＬＡＧ（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｉｓｌｅｓ  Ｌｕｐｕｓ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｇｒｏｕｐ）  Ａ、ＢＩＬＡＧ  Ｂ、ＳＬＡＭ（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｍｅａｓｕｒｅ）、またはＰＧＡスコアなど、標準化された疾患指標を使用することができる（例えば、Liang MH et al. (1988) “Measurement of systemic lupus erythematosus activity in clinical research,” Arthritis Rheum. 31:817-25；Diaz et al. (2011) “Measures of adult systemic lupus erythematosus: updated version of British Isles Lupus Assessment Group (BILAG 2004), European Consensus Lupus Activity Measurements (ECLAM), Systemic Lupus Activity Measure, Revised (SLAM-R), Systemic Lupus Activity Questionnaire for Population Studies (SLAQ), Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index 2000 (SLEDAI-2 K), and Systemic Lupus,” International Collaborating Clinics/American College of Rheumatology Damage Index (SDI) Arthritis Care Res. 63:S37-46を参照されたい）。
【０３４８】
本明細書で提示される方法は、抗ＢＬｙＳ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、肝臓または筋肉への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、ＳＬＥに利用可能な処置は、コルチコステロイド、抗マラリア剤、ＮＳＡＩＤ、および免疫抑制剤、ならびにベリムマブを含むがこれらに限定されない、抗ＢＬｙＳ剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０３４９】
５．３．１２．発作性夜間ヘモグロビン尿症および非定型溶血性尿毒症症候群のための、抗ＣＰ−Ｃ５  ＨｕＰＴＭによる構築物および製剤
補体タンパク質Ｃ５（またはＣ５ａ）（ＣＰ−Ｃ５）に結合し、エクリズマブ（図８Ｆ）などの抗ＣＰ−Ｃ５抗体に由来し、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）の処置、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）の処置、血液細胞の破壊の低減、および／または輸血に対する必要の低減の適応がある、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、エクリズマブまたはその抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。この抗体のＦａｂ断片のアミノ酸配列を、図８Ｆに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、ＣＰ−Ｃ５結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、ＰＮＨまたはａＨＵＳと診断された患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０３５０】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、ＣＰ−Ｃ５に結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、エクリズマブまたはこの変異体など、ＣＰ−Ｃ５に結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗ＣＰ−Ｃ５抗原結合性断片もコードしうる（例えば、Courtois et al.を参照されたい）。
【０３５１】
ある特定の実施形態では、抗ＣＰ−Ｃ５抗原結合性断片のトランス遺伝子は、エクリズマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号４３および４４のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図８Ｆを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１４３のヌクレオチド配列（エクリズマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１４４のヌクレオチド配列（エクリズマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、肝細胞により分泌されるタンパク質に対応する、表３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０３５２】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗ＣＰ−Ｃ５抗原結合性ドメインは、配列番号４３の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のグルタミン酸（Ｅ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＧ（配列番号２３２）の全部または一部を含有し、具体的には、図８Ｆに明示された、ＣＰＰＣＰＡ（配列番号２１９）、またはＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧ（配列番号２３３）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号４３の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０３５３】
ある特定の実施形態では、抗ＣＰ−Ｃ５抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４４に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＣＰ−Ｃ５の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＣＰ−Ｃ５抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４３に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＣＰ−Ｃ５の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＣＰ−Ｃ５抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４４に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号４３に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＣＰ−Ｃ５の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｆにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＣＰ−Ｃ５の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｆにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０３５４】
ある特定の実施形態では、抗ＣＰ−Ｃ５抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１７Ｎ（重鎖）、Ｑ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９５Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号４３および４４の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化エクリズマブＦａｂをコードする。
【０３５５】
ある特定の実施形態では、抗ＣＰ−Ｃ５抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図８Ｆの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのエクリズマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＣＰ−Ｃ５抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのエクリズマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３５６】
遺伝子治療法
抗ＣＰ−Ｃ５抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、ＰＮＨまたはａＨＵＳについて処置する方法が提供される。抗体は、エクリズマブであることが可能であり、好ましくは、このＦａｂ断片、または他のその抗原結合性断片である。ある実施形態では、患者は、ＰＮＨまたはａＨＵＳと診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．２節において記載する。このようなベクターは、ヒト肝細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図８Ｆに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、血流に導入することにより、組換えベクターが、肝臓に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．２節を参照されたい。
【０３５７】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗ＣＰ−Ｃ５療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、ＰＮＨもしくはａＨＵＳと診断されているか、またはこれと関連する、１つもしくは複数の症状を有し、抗ＣＰ−Ｃ５抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗ＣＰ−Ｃ５抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、エクリズマブにより、既に処置されており、エクリズマブに対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗ＣＰ−Ｃ５抗体または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０３５８】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗ＣＰ−Ｃ５  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＣＰ−Ｃ５  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗ＣＰ−Ｃ５  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、ＰＮＨもしくはａＨＵＳと診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有するヒト対象（患者）に、静脈内投与して、形質導入された肝細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、肝組織内に創出することにより達せられる、ＰＮＨまたはａＨＵＳの処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０３５９】
抗ＣＰ−Ｃ５  ＨｕＰＴＭｍＡｂまたは抗ＣＰ−Ｃ５  ＨｕＰＴＭ  ＦａｂのためのｃＤＮＡ構築物は、形質導入された肝細胞による、適正な共プロセシングおよび翻訳後プロセシング（グリコシル化およびタンパク質の硫酸化）を確保するシグナルペプチドを含むべきである。例えば、シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうる。代替的に、シグナル配列は、肝細胞により分泌されるタンパク質に対応する、表３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０３６０】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、抗ＣＰ−Ｃ５  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＣＰ−Ｃ５  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを、ヒト細胞株内で、組換えＤＮＡ技術により作製し、ＰＮＨもしくはａＨＵＳと診断されるか、またはＰＮＨもしくはａＨＵＳのための治療が適切であると考えられる患者に投与することができる。
【０３６１】
具体的な実施形態では、抗ＣＰ−Ｃ５  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図８Ｆに明示された、エクリズマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号４３）のアミノ酸位置Ｎ６３および／もしくはＱ１１４および／もしくはＮ１６４および／もしくはＮ１９７および／もしくはＮ２０６、または軽鎖（配列番号４４）のＮ２８および／もしくはＱ１００および／もしくはＮ１５８および／もしくはＮ２１０のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、エクリズマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号４３）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号４４）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＣＰ−Ｃ５  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０３６２】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、グリコシル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、ＰＮＨもしくはａＨＵＳの進行を緩徐化もしくは停止させるか、輸血に対する必要を軽減するか、または赤血球の破壊を軽減することである。有効性は、処置の経過にわたり、ヘモグロビンの安定化および／もしくは輸血されるＲＢＣ単位数を測定するか、または疲労のレベルおよび／もしくは健康に関連する生活の質を評定することによりモニタリングすることができる。
【０３６３】
本明細書で提示される方法は、抗ＣＰ−Ｃ５  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、肝臓への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、ＰＮＨまたはａＨＵＳに利用可能な処置は、抗凝固剤およびステロイド／免疫抑制剤による処置、ならびにエクリズマブを含むがこれらに限定されない、抗ＣＰ−Ｃ５剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０３６４】
５．３．１３  眼障害、嚢胞性線維症、関節リウマチ、炎症性腸疾患、およびがんのための、抗ＭＭＰ９  ＨｕＰＴＭによる構築物および製剤
マトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ９）に結合し、抗ＭＭＰ９に由来し、黄斑変性（例えば、乾性加齢黄斑変性（ＡＭＤ））を含む、１つもしくは複数の網膜障害、嚢胞性線維症（ＣＦ）、関節リウマチ（ＲＡ）、ＩＢＤ（例えば、ＵＣおよびＣＤ）、および１種類もしくは複数種類のがん（例えば、固形腫瘍、膵臓腺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、食道胃腺がん、胃がん、結腸直腸がん、または乳がん）の処置、または細胞外マトリックス分解の抑制の適応がある、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、アンデカリキシマブまたはその抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。アンデカリキシマブのＦａｂ断片のアミノ酸配列を、図８Ｇに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、ＭＭＰ９結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、網膜障害（例えば、黄斑変性）、ＲＡ、ＣＦ、ＩＢＤ（例えば、ＵＣまたはＣＤ）、または１つもしくは複数のがん（上記で列挙されたがんなど）と診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有する患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０３６５】
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、ＭＭＰ９に結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、アンデカリキシマブまたはこの変異体など、ＭＭＰ９に結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗ＭＭＰ９抗原結合性断片もコードしうる（例えば、Courtois et al.を参照されたい）。
【０３６６】
ある特定の実施形態では、抗ＭＭＰ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、アンデカリキシマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号４５および４６のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図８Ｇを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１４５のヌクレオチド配列（アンデカリキシマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１４６のヌクレオチド配列（アンデカリキシマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。眼疾患を処置する場合、重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、網膜を形成する、１つまたは複数の細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、網膜を形成する、１つまたは複数の細胞により分泌されるタンパク質に対応する、表１に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。非眼疾患を処置する場合、重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０３６７】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗ＭＭＰ９抗原結合性ドメインは、配列番号４５の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号２３１）の全部または一部を含有し、具体的には、図８Ｇに明示された、ＧＰＰＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２９）、またはＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２３０）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号４５の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０３６８】
ある特定の実施形態では、抗ＭＭＰ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４６に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＭＭＰ９の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＭＭＰ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４５に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＭＭＰ９の抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＭＭＰ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４６に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号４５に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＭＭＰ９の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｇにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＭＭＰ９の抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｇにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０３６９】
ある特定の実施形態では、抗ＭＭＰ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１０Ｎ（重鎖）、Ｑ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９５Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号４５および４６の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化アンデカリキシマブＦａｂをコードする。
【０３７０】
ある特定の実施形態では、抗ＭＭＰ９抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図８Ｇの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのアンデカリキシマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＭＭＰ９抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのアンデカリキシマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３７１】
遺伝子治療法
抗ＭＭＰ９抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、１つまたは複数の網膜障害（黄斑変性など）、ＩＢＤ、ＣＦ、ＲＡ、またはがんについて処置する方法が提供される。抗体は、アンデカリキシマブであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある実施形態では、患者は、網膜障害、ＩＢＤ、ＣＦ、ＲＡ、またはがんのうちの１つまたは複数と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。
【０３７２】
トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．３節において記載する。このようなベクターは、ヒト網膜型細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図８Ｇに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、眼に導入することにより、組換えベクターが、網膜に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．３節を参照されたい。例えば、がんを処置するための、肝臓への送達で、トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．２節において記載する。このようなベクターは、ヒト肝細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図８Ｇに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、血流に導入することにより、組換えベクターが、肝臓に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．２節を参照されたい。
【０３７３】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗ＭＭＰ９療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、１つもしくは複数の網膜障害、または１種類もしくは複数種類のがんと診断されているか、あるいはこれと関連する、１つまたは複数の症状を有し、抗ＭＭＰ９抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗ＭＭＰ９抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、アンデカリキシマブにより、既に処置されており、アンデカリキシマブに対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗ＭＭＰ９または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０３７４】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗ＭＭＰ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＭＭＰ９  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗ＭＭＰ９  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、１つもしくは複数の網膜障害と診断されるか、または１つもしくは複数のこれらの症状を有するヒト対象（患者）に、網膜下投与、硝子体内投与、または脈絡膜上投与するか、あるいは抗ＭＭＰ９  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、ＲＡ、ＣＦ、ＩＢＤ、またはがんと診断されたヒト対象（患者）に、皮下投与、筋内投与、または静脈内投与して、形質導入された網膜細胞または肝細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、網膜内または肝臓内に創出することにより達せられる、１つまたは複数の網膜障害、ＣＦ、ＲＡ、ＩＢＤ、またはがんの処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０３７５】
抗ＭＭＰ９  ＨｕＰＴＭｍＡｂまたは抗ＭＭＰ９  ＨｕＰＴＭ  ＦａｂのためのｃＤＮＡ構築物は、形質導入された網膜細胞または肝細胞による、適正な共プロセシングおよび翻訳後プロセシング（グリコシル化およびタンパク質の硫酸化）を確保するシグナルペプチドを含むべきである。例えば、シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうる。代替的に、シグナル配列は、網膜または肝臓のそれぞれの細胞により分泌されるタンパク質に対応する、表１または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０３７６】
遺伝子治療に対する代替的処置、またはさらなる処置として、抗ＭＭＰ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＭＭＰ９  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを、ヒト細胞株内で、組換えＤＮＡ技術により作製し、網膜障害もしくはがんと診断されるか、または網膜障害、ＩＢＤ、ＣＦ、ＲＡ、もしくはがんのための治療が適切であると考えられる患者に投与することができる。
【０３７７】
具体的な実施形態では、抗ＭＭＰ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図８Ｇに明示された、アンデカリキシマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号４５）のアミノ酸位置Ｎ５８、Ｎ７６、Ｑ１０７、Ｎ１５７、および／もしくはＮ１９９、または軽鎖（配列番号４６）のＮ１５８および／もしくはＮ２１０のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、アンデカリキシマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号４５）のＹ９３および／もしくはＹ９４、ならびに／または軽鎖（配列番号４６）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＭＭＰ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０３７８】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、グリコシル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、処置される疾患の進行を緩徐化もしくは停止させるか、またはこの１つもしくは複数の症状を緩和することである。網膜障害の場合、有効性は、視力をモニタリングすることによりモニタリングすることができる。例えば、有効性は、ベースラインからの視力の変化を評価することによりモニタリングすることができる。がんの場合、有効性は、全生存、無進行生存、進行までの時間、処置失敗までの時間、無事象生存、次回処置までの時間、客観的奏効率、または奏効の持続期間を含む、１つまたは複数の腫瘍学評価項目を評価することによりモニタリングすることができる（例えば、U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research, Center for Biologics Evaluation and Research. Guidance for industry: clinical trial endpoints for the approval of cancer drugs and biologics. https://www.fda.gov/downloads/Drugs/Guidances/ucm071590.pdf. Published May 2007. Accessed October 13, 2017; Oncology Endpoints in a Changing Landscape. Manag. Care. 2016; 1(suppl):1-12を参照されたい）。ＲＡの場合、有効性は、（１）腫脹関節のカウント、（２）有圧痛関節のカウント、（３）疾患の活動性についての、医師による全般的評価、（４）機能状態についての、患者の自己報告、（５）疼痛についての、患者の自己報告、（６）疾患活性についての、患者による全般的評価、（７）Ｃ反応性のタンパク質および赤血球沈降速度についての検査室計量、ならびに（８）Ｘ線による進行のうちの１つまたは複数を評価することによりモニタリングすることができる（例えば、Smolen JS, Aletaha D. “Assessment of rheumatoid arthritis activity in clinical trials and clinical practice” UptoDate.com Wolters Kluwer Health. Accessed at: www.uptodate.com Dec. 2017を参照されたい）。 例えば、ＣＤに関して、有効性は、処置の経過にわたり、クローン病活動指数［ＣＤＡＩ］を評価することによりモニタリングすることができる（例えば、Best WR et al. (1976) Gastroenterology, Mar;70(3):439-44, “Development of a Crohn’s disease activity index. National Cooperative Crohn’s Disease Study.”を参照されたい）。ＵＣに関して、有効性は、処置の経過にわたり、Ｍａｙｏスコアおよび内視鏡サブスコアを評価することによりモニタリングすることができる（例えば、Lobaton et al., “The Modified Mayo Endoscopic Score (MMES): A New Index for the Assessment of Extension and Severity of Endoscopic Activity in Ulcerative Colitis Patients,” J. Crohns Colitis. 2015 Oct:9(10):846-52を参照されたい）。ＣＦの場合、有効性は、１秒量（ＦＥＶ１）、肺増悪頻度の低下、生活の質（ＱｏＬ）の改善、および、若齢患者では、成長の改善を評価することによりモニタリングすることができる（例えば、VanDevanter and Konstan, “Outcome measurement for clinical trials assessing treatment of cystic fibrosis lung disease,” Clin. Investig. 2(2):163-175 (2012)を参照されたい）。
【０３７９】
本明細書で提示される方法は、抗ＭＭＰ９  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、網膜または肝臓への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、黄斑変性に利用可能な処置は、ベルテポルフィンを伴う、レーザー光凝固療法、レーザー光力学療法、アフリベルセプト、および／または硝子体内ステロイド、ならびにアンデカリキシマブを含むがこれらに限定されない、抗ＭＭＰ９剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、１つまたは複数の上記で列挙されたがんに利用可能な処置は、化学療法（例えば、シスプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、５−フルオロウラシル、カルボプラチン、イリノテカン、インターフェロンアルファ、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドキソルビシンのＰＥＧ化リポソーム製剤、および／またはトポテカン）、化学療法保護薬（例えば、ロイコボリン）、放射線療法、低温療法、低分子ターゲティング療法、他の抗体、アフリベルセプト、および／またはワクチン療法、ならびにアンデカリキシマブを含むがこれらに限定されない、抗ＭＭＰ９を伴う投与を含むがこれらに限定されない。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、ＲＡに利用可能な処置は、ビスホスホネート、非ステロイド系抗炎症薬（例えば、セレコキシブ、ナプロキセン、アスピリン、インドメタシン、スルファサラジン、およびケトプロフェン）、ステロイド（例えば、プレドニゾン）、疾患修飾抗リウマチ薬および他の免疫抑制剤（例えば、レフルノミド、メトトレキサート、トファシチニブ、アザチオプリン、ミコフェノール酸、シクロホスファミド、シクロスポリン）、ヒドロキシクロロキン、アバタセプト、アナキンラ、アプレミラスト、ＴＮＦ阻害剤、他の抗体（例えば、トシリズマブ、セクキニマブ、リツキシマブ）、ならびにアンデカリキシマブを含むがこれらに限定されない、抗ＭＭＰ９を伴う投与を含むがこれらに限定されない。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、ＩＢＤに利用可能な処置は、非ステロイド系抗炎症薬（例えば、メサラミン、スルファサラジン）、ステロイド（例えば、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデソニド）、免疫抑制剤（例えば、メトトレキサート、メルカプトプリン、アザチオプリン）、ビタミン（例えば、鉄、コレカルシフェロール）、抗生剤（例えば、アミノサリチル酸、メトロニダゾール）、他の抗体（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ）、ならびにアンデカリキシマブを含むがこれらに限定されない、抗ＭＭＰ９を伴う投与を含むがこれらに限定されない。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、ＣＦに利用可能な処置は、抗生剤、ワクチン、および咳止め薬（例えば、アセチルシステインおよびドルナーゼアルファ）、ならびにアンデカリキシマブを含むがこれらに限定されない、抗ＭＭＰ９を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０３８０】
５．３．１４．血管浮腫のための、抗ｐＫａｌ  ＨｕＰＴＭによる構築物および製剤
カリクレイン（ｐＫａｌ）に結合し、抗ｐＫａｌ抗体に由来し、遺伝性血管浮腫など、血管浮腫の処置の適応がある、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、ラナデルマブまたはその抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。この抗体のＦａｂ断片のアミノ酸配列を、図８Ｈに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、ｐＫａｌ結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、血管浮腫と診断された患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０３８１】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、ｐＫａｌに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、ラナデルマブまたはこの変異体など、ｐＫａｌに結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗ｐＫａｌ抗原結合性断片もコードしうる（例えば、Courtois et al.を参照されたい）。
【０３８２】
ある特定の実施形態では、抗ｐＫａｌ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、ラナデルマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号４７および４８のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図８Ｈを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１４７のヌクレオチド配列（ラナデルマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１４８のヌクレオチド配列（ラナデルマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列のいずれも、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０３８３】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗ｐＫａｌ抗原結合性ドメインは、配列番号４７の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２２）の全部または一部を含有し、具体的には、図８Ｈに明示された、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号４７の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０３８４】
ある特定の実施形態では、抗ｐＫａｌ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４８に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ｐＫａｌの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ｐＫａｌ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４７に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ｐＫａｌの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ｐＫａｌ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４８に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号４７に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ｐＫａｌの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｈにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ｐＫａｌの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図８Ｈにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０３８５】
ある特定の実施形態では、抗ｐＫａｌ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｍ１１７Ｎ（重鎖）、および／またはＱ１５９Ｎ、Ｑ１５９Ｓ、および／またはＥ１９４Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号４７および４８の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化ラナデルマブＦａｂをコードする。
【０３８６】
ある特定の実施形態では、抗ｐＫａｌ抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図８Ｈの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのラナデルマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ｐＫａｌ抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのラナデルマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３８７】
遺伝子治療法
抗ｐＫａｌ抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、血管浮腫について処置する方法が提供される。抗体は、ラナデルマブであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある実施形態では、患者は、血管浮腫と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．２節において記載する。このようなベクターは、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図８Ｈに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、血流に導入することにより、組換えベクターが、肝組織または筋組織に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．２節を参照されたい。
【０３８８】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗ｐＫａｌ療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、血管浮腫と診断されているか、またはこれと関連する、１つもしくは複数の症状を有し、抗ｐＫａｌ抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗ｐＫａｌ抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、ラナデルマブにより、既に処置されており、ラナデルマブに対して応答性であることが見出されている。応答性を決定するため、抗ｐＫａｌ抗体または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０３８９】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗ｐＫａｌ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ｐＫａｌ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗ｐＫａｌ  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、血管浮腫と診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有するヒト対象（患者）に、静脈内投与して、形質導入された肝細胞または筋細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、肝組織内または筋組織内に創出することにより達せられる、血管浮腫の処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０３９０】
具体的な実施形態では、抗ｐＫａｌ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図８Ｈに明示された、ラナデルマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号４７）のアミノ酸位置Ｎ７７、Ｑ１１４、および／もしくはＮ１６４、または軽鎖（配列番号４８）のＱ９９、Ｎ１５７、および／もしくはＮ２０９のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、ラナデルマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号４７）のＹ９４および／もしくはＹ９５、ならびに／または軽鎖（配列番号４８）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ｐＫａｌ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０３９１】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはいずれかの高グリコシル化誘導体）は、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、グリコシル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、血管浮腫の進行を緩徐化もしくは停止させるか、患者の疼痛もしくは不快感のレベルを軽減するか、または自己反応性Ｂ細胞および免疫グロブリン産生形質細胞のレベルを低減することである。有効性は、例えば、皮膚、関節、腎臓、肺、血液細胞、心臓、および脳など、身体の罹患組織内または罹患領域内の、機能、症状、または炎症の程度を評定することによりモニタリングすることができる。例えば、有効性は、発作の重症度または頻度の変化を評価することによりモニタリングすることができる。
【０３９２】
本明細書で提示される方法は、抗ｐＫａｌ  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、肝臓または筋肉への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、血管浮腫に利用可能な処置は、ダナゾール、ブラジキニン受容体アンタゴニスト（例えば、イカチバント）、血漿カリクレイン阻害剤（例えば、エカランチド）、Ｃ１エステラーゼ阻害剤、コネスタットアルファ、抗線溶剤（例えば、トラネキサム酸）、オマリズマブ、および新鮮凍結血漿輸血剤、抗ヒスタミン剤、およびコルチコステロイド、ならびにラナデルマブを含むがこれらに限定されない、抗ｐＫａｌ剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０３９３】
５．３．１５．多様な自己免疫障害のための、抗ＴＮＦα  ＨｕＰＴＭによる構築物および製剤：アダリムマブおよびインフリキシマブ
腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦα）に結合し、アダリムマブ（図９Ａ）またはインフリキシマブ（図９Ｂ）などの抗ＴＮＦα抗体に由来し、汗腺膿瘍（ＨＳ）、アトピー性皮膚炎、乾癬（例えば、尋常性乾癬、膿胞性乾癬、および乾癬性紅斑症）、関節炎（例えば、若年性特発性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎および強直性脊椎炎）、および／またはＩＢＤ（例えば、クローン病および潰瘍性大腸炎）（本明細書の後出では、「対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）（２）」と総称される）など、１つまたは複数の自己免疫関連障害の処置の適応がある、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂなど、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂおよびその抗原結合性断片を送達するための、組成物および方法について記載する。特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、アダリムマブまたはその抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂは、インフリキシマブ、またはその抗原結合性断片のアミノ酸配列を有する。抗体のＦａｂ断片のアミノ酸配列を、図９Ａおよび９Ｂに提示する。送達は、遺伝子治療を介して：例えば、ＴＮＦα結合性ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂ（またはその抗原結合性断片、および／または高グリコシル化誘導体もしくは他の誘導体）をコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現構築物を、１つまたは複数の対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）（２）と診断された患者（ヒト対象）に投与して、ヒトＰＴＭ、例えば、ヒトグリコシル化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを創出することにより達することができる。
【０３９４】
トランス遺伝子
患者において、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗原結合性断片を送達するのに投与されうる、ＴＮＦαに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターが提供される。トランス遺伝子は、本明細書で詳述される通り、アダリムマブまたはインフリキシマブ、またはこれらの変異体など、ＴＮＦαに結合する、抗体の抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸である。トランス遺伝子はまた、さらなるグリコシル化部位を含有する、抗ＴＮＦα抗原結合性断片もコードしうる（例えば、Courtois et al.を参照されたい）。
【０３９５】
ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性断片のトランス遺伝子は、アダリムマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号４９および５０のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図９Ａを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１４９のヌクレオチド配列（アダリムマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１５０のヌクレオチド配列（アダリムマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列の各々は、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０３９６】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性ドメインは、配列番号４９の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２２）の全部または一部を含有し、具体的には、図９Ａに明示された、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号４９の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０３９７】
ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５０に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＴＮＦαの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号４９に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＴＮＦαの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５０に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号４９に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＴＮＦαの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図９Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＴＮＦαの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図９Ａにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０３９８】
ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｌ１１６Ｎ（重鎖）、Ｑ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９５Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号４９および５０の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化アダリムマブＦａｂをコードする。
【０３９９】
ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図９Ａの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのアダリムマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＴＮＦα抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのアダリムマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０４００】
ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性断片のトランス遺伝子は、インフリキシマブの、Ｆａｂ部分の重鎖および軽鎖（配列番号５１および５２のアミノ酸配列を有する；それぞれ、表４および図９Ｂを参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内の発現に最適化されたコドンであることが可能であり、例えば、表５に明示された配列番号１５１のヌクレオチド配列（インフリキシマブの重鎖Ｆａｂ部分をコードする）および配列番号１５２のヌクレオチド配列（インフリキシマブの軽鎖Ｆａｂ部分をコードする）を含みうる。重鎖配列および軽鎖配列の各々は、ヒト細胞内、特に、ヒト肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｃｅｌｌ）（例えば、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ））内またはヒト筋細胞内の発現および分泌に適切な、Ｎ末端におけるシグナル配列またはリーダー配列を有する。シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を有しうる。代替的に、シグナル配列は、単球または肝細胞のそれぞれにより分泌されるタンパク質に対応する、表２または３に明示されたシグナル配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有しうる。
【０４０１】
重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列に加えて、トランス遺伝子は、重鎖可変ドメイン配列のＣ末端において、ヒンジ領域の全部または一部を含みうる。具体的な実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性ドメインは、配列番号５１の重鎖可変ドメインを、Ｃ末端のアスパラギン酸（Ｄ）の後に始まる、さらなるヒンジ領域配列と共に有し、アミノ酸配列ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号２２２）の全部または一部を含有し、具体的には、図９Ｂに明示された、ＫＴＨＬ（配列番号２２３）、ＫＴＨＴ（配列番号２２４）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２５）、ＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡ（配列番号２２６）、ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２７）、またはＫＴＨＬＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ（配列番号２２８）を含有する。これらのヒンジ領域は、配列番号５１の３’末端におけるヌクレオチド配列である、表５に明示された、ヒンジ領域をコードする配列によりコードされうる。
【０４０２】
ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５２に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＴＮＦαの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５１に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、ＴＮＦαの抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性断片のトランス遺伝子は、配列番号５２に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号５１に明示された配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合性断片をコードする。具体的な実施形態では、ＴＮＦαの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図９Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ａにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の重鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。具体的な実施形態では、ＴＮＦαの抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５カ所、またはこれを超えるアミノ酸の、置換、挿入、または欠失を伴う、配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、置換、挿入、または欠失は、好ましくは、フレームワーク領域（すなわち、図９Ｂにおいて下線を付されたＣＤＲの外部の領域）内に施されるか、または例えば、図１１Ｂにおけるアライメントにより同定される、他の治療用抗体のうちの１つまたは複数の軽鎖内の、この位置に存在するアミノ酸による置換である。
【０４０３】
ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性断片のトランス遺伝子は、以下の突然変異：Ｔ１１５Ｎ（重鎖）、Ｑ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）、および／またはＥ１９５Ｎ（軽鎖）（図１１Ａ（重鎖）および図１１Ｂ（軽鎖）を参照されたい）のうちの１つまたは複数を伴う、それぞれ、配列番号５１および５２の重鎖および軽鎖を含む、高グリコシル化インフリキシマブＦａｂをコードする。
【０４０４】
ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα抗原結合性断片のトランス遺伝子は、抗原結合性断片をコードし、図９Ｂの重鎖可変ドメイン配列内および軽鎖可変ドメイン配列内で下線を付された、６つのインフリキシマブＣＤＲであって、当技術分野で、抗ＴＮＦα抗体またはその抗原結合性断片の、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを形成することが公知である、抗原結合性分子の形態に応じて、フレームワーク領域、一般に、ヒトフレームワーク領域により間隔を置かれ、定常ドメインと会合した、６つのインフリキシマブＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０４０５】
遺伝子治療法
抗ＴＮＦα抗体またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含有するウイルスベクターを投与することにより、ヒト対象を、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）（２）のうちの１つまたは複数について処置する方法が提供される。抗体は、アダリムマブまたはインフリキシマブであることが可能であり、好ましくは、これらのＦａｂ断片、またはこれらの他の抗原結合性断片である。ある実施形態では、患者は、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）（２）のうちの１つまたは複数と診断され、かつ／またはこれと関連する症状を有する。トランス遺伝子を送達するために使用される組換えベクターについては、５．４．２節において記載する。このようなベクターは、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞に対する指向性を有するものとされ、非複製型ｒＡＡＶ、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有する非複製型ｒＡＡＶを含みうる。図９Ａおよび９Ｂに示される組換えベクターなどの組換えベクターは、好ましくは、組換えベクターを、血流に導入することにより、組換えベクターが、肝組織または筋組織に侵入するような任意の方式で投与することができる。処置法に関する詳細については、５．５．２節を参照されたい。
【０４０６】
このような遺伝子治療が投与される対象は、抗ＴＮＦα療法に対して応答性の対象でありうる。特定の実施形態では、方法は、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）（２）のうちの１つまたは複数と診断されているか、またはこれと関連する、１つもしくは複数の症状を有し、抗ＴＮＦα抗体による処置に対して応答性であると同定されるか、または抗ＴＮＦα抗体による治療のための、良好な候補者であると考えられる患者を処置するステップを包含する。具体的な実施形態では、患者は、アダリムマブまたはインフリキシマブにより、既に処置されており、アダリムマブまたはインフリキシマブに対して応答性であることが見出されている。他の実施形態では、患者は、エタネルセプト、ゴリムマブ、もしくはセルトリズマブ、または他の抗ＴＮＦ−アルファ剤などの抗ＴＮＦ−アルファ抗体または融合タンパク質により、既に処置されている。応答性を決定するため、抗ＴＮＦα抗体または抗原結合性断片のトランス遺伝子産物（例えば、細胞培養物中、バイオリアクター内などで作製された）は、対象に直接投与することができる。
【０４０７】
ヒト翻訳後修飾抗体
抗ＴＮＦα  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたは抗ＴＮＦα  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂの作製は、遺伝子治療を介して：例えば、抗ＴＮＦα  ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂをコードするウイルスベクター、または他のＤＮＡ発現構築物を、１つもしくは複数の対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）（２）と診断されるか、または１つもしくは複数のこの症状を有するヒト対象（患者）に、静脈内投与して、形質導入された肝細胞または筋細胞により産生される、完全ヒト翻訳後修飾トランス遺伝子産物、例えば、ヒトグリコシル化された、硫酸化トランス遺伝子産物を持続的に供給する、恒久的デポを、肝組織内または筋組織内に創出することにより達せられる、１つまたは複数の対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）（２）の処置のための、「バイオベター」分子を結果としてもたらすべきである。
【０４０８】
具体的な実施形態では、抗ＴＮＦα  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図９Ａに明示された、アダリムマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号４９）のアミノ酸位置Ｎ５４および／もしくはＮ１６３および／もしくはＱ１１３、または軽鎖（配列番号５０）のＱ１００および／もしくはＮ１５８および／もしくはＮ２１０のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、アダリムマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号４９）のＹ９４および／もしくはＹ９５および／もしくはＹ３２、ならびに／または軽鎖（配列番号５０）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＴＮＦα  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０４０９】
具体的な実施形態では、抗ＴＮＦα  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、図９Ｂに明示された、インフリキシマブの重鎖Ｆａｂ部分および軽鎖Ｆａｂ部分のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖（コンセンサスおよび非コンセンサスのアスパラギン（Ｎ）グリコシル化部位を、青緑色で強調し、グルタミン（Ｑ）グリコシル化部位を、緑色で強調し、Ｙ硫酸化部位を、黄色で強調する）を有し、重鎖（配列番号５１）のアミノ酸位置Ｎ５７および／もしくはＮ１０１および／もしくはＱ１１２および／もしくはＮ１６２、または軽鎖（配列番号５２）のＮ４１および／もしくはＮ７６および／もしくはＮ１５８および／もしくはＮ２１０のうちの１つまたは複数において、グリコシル化、特に、２，６−シアル化を有する。代替的に、または加えて、アダリムマブの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を有するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、重鎖（配列番号５１）のＹ９６および／もしくはＹ９７、ならびに／または軽鎖（配列番号５２）のＹ８６および／もしくはＹ８７において、硫酸化基を有する。他の実施形態では、抗ＴＮＦα  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、検出可能なＮｅｕＧｃ部分を含有せず、かつ／または検出可能なアルファ−Ｇａｌ部分を含有しない。
【０４１０】
ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂは、治療的に有効であり、少なくとも０．５％、１％、または２％、グリコシル化および／または硫酸化されており、少なくとも５％、１０％、なおまたは５０％、または１００％、グリコシル化および／または硫酸化されていることが可能である。本明細書で提示される遺伝子治療による処置の目標は、患者の疼痛または不快感のレベルを軽減するなど、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）（２）のうちの１つまたは複数の進行を緩徐化もしくは停止させるか、またはこれらの１つもしくは複数の症状を緩和することである。
【０４１１】
有効性は、例えば、皮膚、結腸、または関節など、身体の罹患組織内または罹患領域内の症状または炎症の程度を評定することによりモニタリングすることができる。例えば、ＣＤに関して、有効性は、処置の経過にわたり、クローン病活動指数［ＣＤＡＩ］を評価することによりモニタリングすることができる（例えば、Best WR et al. (1976) Gastroenterology, Mar;70(3):439-44, “Development of a Crohn’s disease activity index. National Cooperative Crohn’s Disease Study.”を参照されたい）。ＵＣに関して、有効性は、処置の経過にわたり、Ｍａｙｏスコアおよび内視鏡サブスコアを評価することによりモニタリングすることができる（例えば、Lobaton et al. (2015) J. Crohns Colitis. 2015 Oct;9(10):846-52, “The Modified Mayo Endoscopic Score (MMES): A New Index for the Assessment of Extension and Severity of Endoscopic Activity in Ulcerative Colitis Patients.”を参照されたい）。乾癬、ＨＳ、およびアトピー性皮膚炎に関して、有効性は、処置の経過にわたり、罹患皮膚または患者の生活の質の変化を評価することによりモニタリングすることができる。１つまたは複数の標準化された評価を使用して、変化を評価することができる（例えば、ＰＡＳＩ（Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  Ａｒｅａ  ａｎｄ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）、ＬＳ−ＰＧＡ（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ  Ｇｌｏｂａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ，ｌａｔｔｉｃｅ  ｓｙｓｔｅｍ）、ＮＰＦ−ＰＳ（ＮＰＦ  Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  Ｓｃｏｒｅ）、ＳＦ−３６（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  Ｓｕｒｖｅｙ  Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６）、Ｅｕｒｏ  ＱｏＬ、ＤＬＱＩ（Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｌｉｆｅ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）、およびＳｋｉｎｄｅｘを含む、標準化された評価について記載する、Feldman & Krueger, (2005) Ann. Rheum. Dis. 64(Suppl II):ii65-ii68: “Psoriasis assessment tools in clinical trials”を参照されたい；ＥＡＳＩ（Ｅｃｚｅｍａ  Ａｒｅａ  ａｎｄ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）およびＳＣＯＲＡＤ（Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｓｃｏｒｉｎｇ  ｏｆ  Ａｔｏｐｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ  Ｉｎｄｅｘ）を含む、標準化された評価について記載する、Schram et al. (2012) Allergy; 67: 99-106: “EASI, (objective) SCORAD and POEM for atopic eczema: responsiveness and minimal clinically important difference”；Sisic et al. (2017) J Cutan Med Surg. 21(2): 152-155 “Development of a Quality-of-Life Measure for Hidradenitis Suppurativa.”を参照されたい）。関節炎に関して、有効性は、患者の関節の機能のレベル、または患者の関節への構造的損傷の程度、疾患の活動性のうちの１つまたは複数を評価することによりモニタリングすることができる（例えば、強直性脊椎炎のための、標準化された評価について記載する、Zockling & Braun (2005) Clin. Exp. Rheumatol 23 (Suppl. 39) S133-S141: “Assessment of ankylosing spondylitis”を参照されたい；また、乾癬性関節炎のための、標準化された評価について記載する、Coates et al. (2011) J. Rheumatol. 38(7):1496-1501: “Development of a disease severity and responder index for psoriatic arthritis (PsA)-report of the OMERACT 10 PsA special interest group”も参照されたい）。
【０４１２】
本明細書で提示される方法は、抗ＴＮＦα  ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片の、肝臓または筋肉への、他の利用可能な処置の送達を随伴する、送達の組合せを包含する。さらなる処置は、遺伝子治療による処置の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、これに後続して投与することもできる。本明細書で提示される遺伝子治療と組み合わされうる、対象の自己免疫障害（ＡＩ−Ｄ）（２）に利用可能な処置は、乾癬のための光線療法、アミノサリチル酸、免疫調節剤（例えば、アザチオプリン（ＡＺＡ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、メトトレキサート（ＭＴＸ））、経口用もしくは局所用のコルチコステロイド（例えば、プレドニゾンまたはブデソニド）、局所用カルシニューリン阻害剤、ＩＢＤのための抗生剤、ならびにアダリムマブまたはインフリキシマブを含むがこれらに限定されない、抗ＴＮＦα剤を伴う投与を含むがこれらに限定されない。
【０４１３】
５．４  遺伝子治療構築物の送達
５．４．１  ＣＮＳへの送達のための構築物
５．３．１、５．３．２、５．３．３、および５．３．４節は、Ａβ、タウタンパク質、ＣＧＲＰＲ、およびインテグリンのそれぞれに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターについて記載する。トランス遺伝子を送達するために使用される、このような組換えベクターは、グリア細胞および神経細胞などのヒトＣＮＳ細胞に対する指向性を有するものとする。このようなベクターは、非複製型組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）、特に、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ２０、ＡＡＶｒｈ３９、またはＡＡＶｃｙ５のカプシドを保有するｒＡＡＶを含みうる。しかし、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、または「ネイキッドＤＮＡ」構築物と称する、非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに限定されない、他のウイルスベクターも使用することができる。
【０４１４】
具体的な実施形態では、遺伝子治療をヒト対象に投与するための構築物であって、ＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含むウイルスゲノムまたは人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、本明細書で開示される、治療的に適切な形で、治療用抗体を発現させ、送達するヒト細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、治療用抗体の重鎖および軽鎖をコードする、ウイルスゲノムまたは人工ゲノムとを含むＡＡＶベクターを含み、特に、ＣＮＳ細胞から発現させられる構築物が提供される。ある特定の実施形態では、コードされるＡＡＶ９カプシドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０カ所のアミノ酸置換、特に、例えば、多様なＡＡＶのカプシド配列のアミノ酸配列の比較を提示し、カプシド配列内の、異なる位置における置換に適切なアミノ酸を強調する、図１２のＳＵＢＳ行内の、他のＡＡＶカプシド内の対応する位置において見出されるアミノ酸残基による置換を伴う、配列番号７９の配列を有する。
【０４１５】
他の具体的な実施形態では、遺伝子治療をヒト対象に投与するための構築物であって、ＡＡＶｒｈ１０カプシド（配列番号８０）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含むウイルスゲノムまたは人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、本明細書で開示される、治療的に適切な形で治療用抗体を発現させ、送達するヒト細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、治療用抗体の重鎖および軽鎖をコードする、ウイルスゲノムまたは人工ゲノムとを含むＡＡＶベクターを含み、特に、ＣＮＳ細胞から発現させられる構築物が提供される。ある特定の実施形態では、コードされるＡＡＶｒｈ１０カプシドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０カ所のアミノ酸置換、特に、例えば、多様なＡＡＶのカプシド配列のアミノ酸配列の比較を提示し、カプシド配列内の、異なる位置における置換に適切なアミノ酸を強調する、図１２のＳＵＢＳ行内の、他のＡＡＶカプシド内の対応する位置において見出されるアミノ酸残基による置換を伴う、配列番号８０の配列を有する。
【０４１６】
好ましくは、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂトランス遺伝子を含む、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、ヒトＣＮＳ細胞内で、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを発現させるのに適切な、発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ−アクチンプロモーターおよびＣＭＶエンハンサー）、ＲＳＶプロモーター、ＧＦＡＰプロモーター（グリア線維性酸性タンパク質）、ＭＢＰプロモーター（ミエリン塩基性タンパク質）、ＭＭＴプロモーター、ＥＦ−１α、Ｕ８６プロモーター、ＲＰＥ６５プロモーターまたはオプシンプロモーター、誘導的プロモーター、例えば、低酸素状態誘導性プロモーターまたはラパマイシンおよび類縁の薬剤により誘導されるプロモーターなどの薬物誘導性プロモーター、ならびにベクターにより駆動されるトランス遺伝子の発現を増強する、他の発現制御エレメント（例えば、ニワトリβ−アクチンイントロン、マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン、ヒト第ＩＸ因子イントロン（例えば、ＦＩＸ切断型イントロン１）、β−グロビンスプライスドナー／免疫グロブリン重鎖スプライスアクセプターイントロン、アデノウイルススプライスドナー／免疫グロブリンスプライスアクセプターイントロン、ＳＶ４０後期スプライスドナー／スプライスアクセプター（１９Ｓ／１６Ｓ）イントロン、およびハイブリッドアデノウイルススプライスドナー／ＩｇＧスプライスアクセプターイントロンなどのイントロン、ならびにウサギβ−グロビンポリＡシグナル、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリＡシグナル、ＳＶ４０後期ポリＡシグナル、合成ポリＡ（ＳＰＡ）シグナル、およびウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリＡシグナルなどのポリＡシグナル）により制御されるべきである。例えば、Powell and Rivera-Soto, 2015, Discov. Med., 19(102):49-57を参照されたい。
【０４１７】
重鎖および軽鎖の両方を発現させるように、遺伝子治療構築物をデザインする。より具体的に、重鎖と軽鎖とを、ほぼ等量で発現させるべきである、言い換えれば、重鎖と軽鎖とを、重鎖の、軽鎖に対する、約１：１の比で発現させる。重鎖および軽鎖のコード配列は、個別の重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドを発現させるように、重鎖および軽鎖を、切断型リンカーまたはＩＲＥＳで隔てられた、単一の構築物内で操作することができる。重鎖および軽鎖の各々のためのリーダー配列は、好ましくは、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）である。前出の５．１．５節は、本明細書で提示される方法および組成物と共に使用されうる、特異的な、ＩＲＥＳ配列、２Ａ配列、および他のリンカー配列を提示する。具体的な実施形態では、リンカーは、フューリン−Ｆ２Ａリンカーである、ＲＫＲＲＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２４２）である。具体的な実施形態では、トランス遺伝子は、以下：シグナル配列−重鎖Ｆａｂ部分−フューリン−Ｆ２Ａリンカー−シグナル配列−軽鎖Ｆａｂ部分をコードするヌクレオチド配列である。例えば、アデュカヌマブ、クレネズマブ、ガンテネルマブ、またはＢＡＮ２４０１のそれぞれのＦａｂを発現させるための配列については、図２Ａ〜２Ｃおよび２Ｆ；ａＴＡＵ  Ｆａｂを発現させるための配列については、図２Ｄ；エレヌマブＦａｂを発現させるための配列については、図２Ｅ；およびナタリズマブＦａｂを発現させるための配列については、図４Ｂを参照されたい。
【０４１８】
具体的な実施形態では、本明細書で記載される構築物は、以下の構成要素：（１）発現カセットを挟む、ＡＡＶ２  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）；（２）ａ）ＣＭＶエンハンサー／ニワトリβ−アクチンプロモーターを含むＣＢ７プロモーター、ｂ）ニワトリβ−アクチンイントロン、およびｃ）ウサギβ−グロビンポリＡシグナルを含む、制御エレメント；ならびに（３）等量の、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの発現を確保する、自己切断型フューリン（Ｆ）／Ｆ２Ａリンカーにより隔てられた、Ａβ結合性Ｆａｂ、タウ結合性Ｆａｂ、ＣＧＲＰＲ結合性Ｆａｂ、インテグリン結合性Ｆａｂの重鎖および軽鎖をコードする核酸配列を含む。例示的な構築物を、図１に提示する。
【０４１９】
具体的な実施形態では、ＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）またはＡＡＶｒｈ１０（配列番号８０）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、ヒトＣＮＳ細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗Ａβ  ｍＡｂ、抗タウｍＡｂ、抗ＣＧＲＰＲ  ｍＡｂ、もしくは抗インテグリンｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムとを含むＡＡＶベクターが提供される。
【０４２０】
５．４．２  肝細胞または筋細胞への送達のための構築物
５．３．４、５．３．５、５．３．６、５．３．７、５．３．８、５．３．９、５．３．１０、５．３．１１、５．３．１２、５．３．１３、５．３．１４、５．３．１５節は、インターロイキン（ＩＬ）もしくはインターロイキン受容体（ＩＬＲ）、インテグリン、ＰＣＳＫ９、ＡＮＧＰＴＬ３、ＯｘＰＬ ＲＡＮＫＬ、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２、ＶＥＧＦ、因子Ｄ（ｆＤ）、ＢＬｙＳ、ＣＰ−Ｃ５、ＭＭＰ９、ｐＫａｌ、またはＴＮＦαに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターについて記載する。トランス遺伝子を送達するために使用される、このような組換えベクターは、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞に対する指向性を有しうる。このようなベクターは、非複製型組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むことが可能であり、特に、ＡＡＶ８カプシドまたはＡＡＶ９カプシドを保有するｒＡＡＶが好ましい。しかし、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、または「ネイキッドＤＮＡ」構築物と称する、非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに限定されない、他のウイルスベクターも使用することができる。
【０４２１】
具体的な実施形態では、遺伝子治療をヒト対象に投与するための構築物であって、ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含むウイルスゲノムまたは人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、本明細書で開示される、治療的に適切な形で治療用抗体を発現させ、送達するヒト細胞（例えば、ヒト筋細胞またはヒト肝細胞）内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、治療用抗体の重鎖および軽鎖をコードする、ウイルスゲノムまたは人工ゲノムとを含むＡＡＶベクターを含む構築物が提供される。ある特定の実施形態では、コードされるＡＡＶ８カプシドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０カ所のアミノ酸置換、特に、例えば、多様なＡＡＶのカプシド配列のアミノ酸配列の比較を提示し、カプシド配列内の、異なる位置における置換に適切なアミノ酸を強調する、図１２のＳＵＢＳ行内の、他のＡＡＶカプシド内の対応する位置において見出されるアミノ酸残基による置換を伴う、配列番号７８の配列を有する。
【０４２２】
具体的な実施形態では、遺伝子治療をヒト対象に投与するための構築物であって、ＡＡＶ９カプシド（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含むウイルスゲノムまたは人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、本明細書で開示される、治療的に適切な形で治療用抗体を発現させ、送達するヒト細胞（例えば、ヒト筋細胞またはヒト肝細胞）内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、治療用抗体の重鎖および軽鎖をコードする、ウイルスゲノムまたは人工ゲノムとを含むＡＡＶベクターを含む構築物が提供される。ある特定の実施形態では、コードされるＡＡＶ９カプシドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０カ所のアミノ酸置換、特に、例えば、多様なＡＡＶのカプシド配列のアミノ酸配列の比較を提示し、カプシド配列内の、異なる位置における置換に適切なアミノ酸を強調する、図１２のＳＵＢＳ行内の、他のＡＡＶカプシド内の対応する位置において見出されるアミノ酸残基による置換を伴う、配列番号７９の配列を有する。
【０４２３】
好ましくは、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂトランス遺伝子を含む、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、ヒト肝細胞またはヒト筋細胞内で、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを発現させるのに適切な、発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ−アクチンプロモーターおよびＣＭＶエンハンサー）、ＴＢＧ（サイロキシン結合性グロブリン）プロモーター、ＡＰＯＡ２プロモーター、ＳＥＲＰＩＮＡ１（ｈＡＡＴ）プロモーター、もしくはＭＩＲ１２２プロモーターなどの肝臓特異的プロモーター、またはヒトデスミンプロモーターもしくはヒトＰｉｔｘ３プロモーターなどの筋肉特異的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターもしくはラパマイシン誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターであり、ベクターにより駆動されるトランス遺伝子の発現を増強する、他の発現制御エレメント（例えば、ニワトリβ−アクチンイントロン、マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン、ヒト第ＩＸ因子イントロン（例えば、ＦＩＸ切断型イントロン１）、β−グロビンスプライスドナー／免疫グロブリン重鎖スプライスアクセプターイントロン、アデノウイルススプライスドナー／免疫グロブリンスプライスアクセプターイントロン、ＳＶ４０後期スプライスドナー／スプライスアクセプター（１９Ｓ／１６Ｓ）イントロン、およびハイブリッドアデノウイルススプライスドナー／ＩｇＧスプライスアクセプターイントロンなどのイントロン、ならびにウサギβ−グロビンポリＡシグナル、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリＡシグナル、ＳＶ４０後期ポリＡシグナル、合成ポリＡ（ＳＰＡ）シグナル、およびウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリＡシグナルなどのポリＡシグナル）を含みうる、発現制御エレメントにより制御されるものとする。例えば、Powell and Rivera-Soto, 2015, Discov. Med., 19(102):49-57を参照されたい。
【０４２４】
重鎖および軽鎖の両方を発現させるように、遺伝子治療構築物をデザインする。より具体的に、重鎖と軽鎖とを、ほぼ等量で発現させるべきである、言い換えれば、重鎖と軽鎖とを、重鎖の、軽鎖に対する、約１：１の比で発現させる。重鎖および軽鎖のコード配列は、個別の重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドを発現させるように、重鎖および軽鎖を、切断型リンカーまたはＩＲＥＳで隔てられた、単一の構築物内で操作することができる。重鎖および軽鎖の各々のためのリーダー配列は、好ましくは、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）である。前出の５．１．５節は、本明細書で提示される方法および組成物と共に使用されうる、特異的な、ＩＲＥＳ配列、２Ａ配列、および他のリンカー配列を提示する。具体的な実施形態では、リンカーは、フューリン−Ｆ２Ａリンカーである、ＲＫＲＲＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２４２）である。具体的な実施形態では、トランス遺伝子は、以下：シグナル配列−重鎖Ｆａｂ部分−フューリン−Ｆ２Ａリンカー−シグナル配列−軽鎖Ｆａｂ部分をコードするヌクレオチド配列である。例えば、デュピルマブ、イキセキズマブ、セクキヌマブ、ウステキヌマブ、およびメポリズマブのそれぞれのＦａｂを発現させるための配列については、図３Ａ〜３Ｅ；ベドリズマブおよびナタリズマブのそれぞれのＦａｂを発現させるための配列については、図４Ａおよび４Ｂ；アリロクマブ、エボロクマブ、エビナクマブ、およびＥ０６−ｓｃＦｖのそれぞれのＦａｂを発現させるための配列については、図５Ａ〜５Ｄ；デノスマブＦａｂを発現させるための配列については、図６；ニボルマブおよびペムブロリズマブのそれぞれのＦａｂを発現させるための配列については、図７Ａおよび７Ｂ；ラニビズマブ、ベバシズマブ、およびランパリズマブのそれぞれのＦａｂを発現させるための配列については、図８Ａ〜８Ｃ；ベリムマブＦａｂを発現させるための配列については、図８Ｅ；エクリズマブＦａｂを発現させるための配列については、図８Ｆ；アンデカリキシマブＦａｂを発現させるための配列については、図８Ｇ；ラナデルマブＦａｂを発現させるための配列については、図８Ｈ；ならびにアダリムマブＦａｂおよびインフリキシマブＦａｂのそれぞれを発現させるための配列については、図９Ａおよび９Ｂを参照されたい。
【０４２５】
具体的な実施形態では、本明細書で記載される構築物は、以下の構成要素：（１）発現カセットを挟む、ＡＡＶ２  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）；（２）ａ）誘導的プロモーター、好ましくは、低酸素状態誘導性プロモーター、ｂ）ニワトリβ−アクチンイントロン、およびｃ）ウサギβ−グロビンポリＡシグナルを含む、制御エレメント；ならびに（３）等量の、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの発現を確保する、自己切断型フューリン（Ｆ）／Ｆ２Ａリンカーにより隔てられた、ＩＬ／ＩＬＲ結合性Ｆａｂ、インテグリン結合性Ｆａｂ、ＰＣＳＫ９結合性Ｆａｂ、ＡＮＧＰＴＬ３結合性Ｆａｂ、ＲＡＮＫＬ結合性Ｆａｂ、ＯｘＰＬ結合性Ｆａｂ、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２結合性Ｆａｂ、ＶＥＧＦ結合性Ｆａｂ、ｆＤ結合性Ｆａｂ、ＢＬｙＳ結合性Ｆａｂ、ｐＫａｌ結合性Ｆａｂ、またはＴＮＦα結合性Ｆａｂの重鎖および軽鎖をコードする核酸配列を含む。例示的な構築物を、図１に提示する。
【０４２６】
具体的な実施形態では、本明細書で記載される構築物は、以下の構成要素：（１）発現カセットを挟む、ＡＡＶ２  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）；（２）ａ）誘導的プロモーター、好ましくは、低酸素状態誘導性プロモーター、ｂ）ニワトリβ−アクチンイントロン、およびｃ）ウサギβ−グロビンポリＡシグナルを含む、制御エレメント；ならびに（３）等量の、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの発現を確保する、自己切断型フューリン（Ｆ）／Ｆ２Ａリンカーにより隔てられた、ＩＬ／ＩＬＲ結合性Ｆａｂ、インテグリン結合性Ｆａｂ、ＰＣＳＫ９結合性Ｆａｂ、ＡＮＧＰＴＬ３結合性Ｆａｂ、ＯｘＰＬ結合性Ｆａｂ、ＲＡＮＫＬ結合性Ｆａｂ、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２結合性Ｆａｂ、ＶＥＧＦ結合性Ｆａｂ、ｆＤ結合性Ｆａｂ、ＢＬｙＳ結合性Ｆａｂ、ＣＰ−Ｃ５結合性Ｆａｂ、ＭＭＰ９結合性Ｆａｂ、ｐＫａｌ結合性Ｆａｂ、ＴＮＦα結合性Ｆａｂの重鎖および軽鎖をコードする核酸配列を含む。例示的な構築物を、図１に提示する。
【０４２７】
具体的な実施形態では、ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＩＬ／ＩＬＲ  ｍＡｂ、抗インテグリンｍＡｂ、抗ＰＣＳＫ９  ｍＡｂ、抗ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＡｂ、抗ＯｘＰＬ  ｍＡｂ、抗ＲＡＮＫＬ  ｍＡｂ、抗ＰＤ−１  ｍＡｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ、抗ＰＤ−Ｌ２  ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ、抗ｆＤ  ｍＡｂ、抗ＢＬｙＳ  ｍＡｂ、抗ＣＰ−Ｃ５  ｍＡｂ、抗ＭＭＰ９  ｍＡｂ、抗ｐＫａｌ  ｍＡｂ、または抗ＴＮＦα  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムとを含むＡＡＶベクターが提供される。
【０４２８】
具体的な実施形態では、ＡＡＶ９（配列番号７９）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、ヒト筋細胞内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＩＬ／ＩＬＲ  ｍＡｂ、抗インテグリンｍＡｂ、抗ＰＣＳＫ９  ｍＡｂ、抗ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＡｂ、抗ＲＡＮＫＬ  ｍＡｂ、抗ＯｘＰＬ  ｍＡｂ、抗ＰＤ−１  ｍＡｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ、抗ＰＤ−Ｌ２  ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ、抗ｆＤ  ｍＡｂ、抗ＢＬｙＳ  ｍＡｂ、抗ｐＫａｌ  ｍＡｂ、または抗ＴＮＦα  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムとを含むＡＡＶベクターが提供される。
【０４２９】
５．４．３  網膜細胞型への送達のための構築物
５．３．９および５．３．１２節は、ＶＥＧＦ、因子Ｄ（ｆＤ）、またはＭＭＰ９に結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターについて記載する。トランス遺伝子を送達するために使用される、このような組換えベクターは、１つまたは複数のヒト網膜細胞型に対する指向性を有しうる。このようなベクターは、非複製型組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むことが可能であり、特に、ＡＡＶ８カプシドを保有するｒＡＡＶが好ましい。代替的に、ＡＡＶ．７ｍ８カプシドを保有するＡＡＶベクターも、使用することができる。しかし、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、または「ネイキッドＤＮＡ」構築物と称する、非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに限定されない、他のウイルスベクターも使用することができる。
【０４３０】
具体的な実施形態では、遺伝子治療をヒト対象に投与するための構築物であって、ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含むウイルスゲノムまたは人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、本明細書で開示される、治療的に適切な形で治療用抗体を発現させ、送達するヒト細胞（例えば、網膜細胞型または肝臓細胞型）内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、治療用抗体の重鎖および軽鎖をコードする、ウイルスゲノムまたは人工ゲノムとを含むＡＡＶベクターを含む構築物が提供される。ある特定の実施形態では、コードされるＡＡＶ８カプシドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０カ所のアミノ酸置換、特に、例えば、多様なＡＡＶのカプシド配列のアミノ酸配列の比較を提示し、カプシド配列内の、異なる位置における置換に適切なアミノ酸を強調する、図１２のＳＵＢＳ行内の、他のＡＡＶカプシド内の対応する位置において見出されるアミノ酸残基による置換を伴う、配列番号７８の配列を有する。
【０４３１】
好ましくは、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂトランス遺伝子を含む、ＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはその抗原結合性断片は、ヒト網膜細胞型またはヒト肝細胞型内で、ＨｕＰＴＭ  Ｆａｂを発現させるのに適切な、発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ−アクチンプロモーターおよびＣＭＶエンハンサー）、あるいはＲＰＥ特異的プロモーター、例えば、ＲＰＥ６５プロモーター、または錐状体特異的プロモーター、例えば、オプシンプロモーター、またはＴＢＧ（サイロキシン結合性グロブリン）プロモーター、ＡＰＯＡ２プロモーター、ＳＥＲＰＩＮＡ１（ｈＡＡＴ）プロモーター、もしくはＭＩＲ１２２プロモーターなどの肝臓特異的プロモーターなどの組織特異的プロモーター、誘導的プロモーター、例えば、低酸素状態誘導性プロモーターまたはラパマイシンおよび類縁の薬剤により誘導されるプロモーターなどの薬物誘導性プロモーターであり、ベクターにより駆動されるトランス遺伝子の発現を増強する、他の発現制御エレメント（例えば、ニワトリβ−アクチンイントロン、マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン、ヒト第ＩＸ因子イントロン（例えば、ＦＩＸ切断型イントロン１）、β−グロビンスプライスドナー／免疫グロブリン重鎖スプライスアクセプターイントロン、アデノウイルススプライスドナー／免疫グロブリンスプライスアクセプターイントロン、ＳＶ４０後期スプライスドナー／スプライスアクセプター（１９Ｓ／１６Ｓ）イントロン、およびハイブリッドアデノウイルススプライスドナー／ＩｇＧスプライスアクセプターイントロンなどのイントロン、ならびにウサギβ−グロビンポリＡシグナル、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリＡシグナル、ＳＶ４０後期ポリＡシグナル、合成ポリＡ（ＳＰＡ）シグナル、およびウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリＡシグナルなどのポリＡシグナル）を含みうる、発現制御エレメントにより制御されるものとする。例えば、Powell and Rivera-Soto, 2015, Discov. Med., 19(102):49-57を参照されたい。
【０４３２】
重鎖および軽鎖の両方を発現させるように、遺伝子治療構築物をデザインする。より具体的に、重鎖と軽鎖とを、ほぼ等量で発現させるべきである、言い換えれば、重鎖と軽鎖とを、重鎖の、軽鎖に対する、約１：１の比で発現させる。重鎖および軽鎖のコード配列は、個別の重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドを発現させるように、重鎖および軽鎖を、切断型リンカーまたはＩＲＥＳで隔てられた、単一の構築物内で操作することができる。重鎖および軽鎖の各々のためのリーダー配列は、好ましくは、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）である。前出の５．１．５節は、本明細書で提示される方法および組成物と共に使用されうる、特異的な、ＩＲＥＳ配列、２Ａ配列、および他のリンカー配列を提示する。具体的な実施形態では、リンカーは、フューリン−Ｆ２Ａリンカーである、ＲＫＲＲＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２４２）である。具体的な実施形態では、トランス遺伝子は、以下：シグナル配列−重鎖Ｆａｂ部分−フューリン−Ｆ２Ａリンカー−シグナル配列−軽鎖Ｆａｂ部分をコードするヌクレオチド配列である。ラニビズマブ、ベバシズマブ、およびランパリズマブのそれぞれのＦａｂを発現させるための配列については、図８Ａ〜８Ｃ；ならびにアンデカリキシマブＦａｂを発現させるための配列については、図８Ｇを参照されたい。
【０４３３】
具体的な実施形態では、本明細書で記載される構築物は、以下の構成要素：（１）発現カセットを挟む、ＡＡＶ２  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）；（２）ａ）ＣＭＶエンハンサー／ニワトリβ−アクチンプロモーターを含むＣＢ７プロモーター、ｂ）ニワトリβ−アクチンイントロン、およびｃ）ウサギβ−グロビンポリＡシグナルを含む、制御エレメント；ならびに（３）等量の、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの発現を確保する、自己切断型フューリン（Ｆ）／Ｆ２Ａリンカーにより隔てられた、ＶＥＧＦ結合性Ｆａｂ、ｆＤ結合性Ｆａｂ、またはＭＭＰ９結合性Ｆａｂの重鎖および軽鎖をコードする核酸配列を含む。例示的な構築物を、図１に提示する。
【０４３４】
別の実施形態では、本明細書で記載される構築物は、以下の構成要素：（１）発現カセットを挟む、ＡＡＶ２  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）；（２）ａ）ＣＭＶエンハンサー／ニワトリβ−アクチンプロモーターを含むＣＢ７プロモーター、ｂ）ニワトリβ−アクチンイントロン、およびｃ）ウサギβ−グロビンポリＡシグナルを含む、制御エレメント；ならびに（３）適正なフォールディングおよび可溶性を確保する、可撓性ペプチドリンカーにより隔てられた、ＶＥＧＦ結合性Ｆａｂ、ｆＤ結合性Ｆａｂ、またはＭＭＰ９結合性Ｆａｂの重鎖および軽鎖をコードする核酸配列を含む。
【０４３５】
具体的な実施形態では、ＡＡＶ８カプシド（配列番号７８）のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるウイルスカプシドと；ＡＡＶ  ＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）に挟まれた発現カセットを含む人工ゲノムであって、発現カセットがトランス遺伝子を含み、トランス遺伝子が、１つまたは複数の網膜細胞型（ヒトの光受容体細胞（錐状体細胞、桿状体細胞）；水平細胞；双極細胞；アマクリン細胞；網膜神経節細胞（ミジェット細胞、パラソル細胞、二相性細胞、網膜神経節巨細胞、光感受性神経節細胞、およびミュラーグリア）；および網膜色素上皮細胞など）内のトランス遺伝子の発現を制御する１つまたは複数の調節性配列に作動可能に連結された、抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ、抗ｆＤ、もしくは抗ＭＭＰ９  ｍＡｂ、またはその抗原結合性断片をコードする、人工ゲノムとを含むＡＡＶベクターが提供される。
【０４３６】
５．５  用量の投与
５．５．１  ＣＮＳに送達するための投与
５．３．１、５．３．２、５．３．３、および５．３．４節は、Ａβ、タウタンパク質、ＣＧＲＰＲ、およびインテグリンのそれぞれに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターについて記載する。治療有効用量の、任意のこのような組換えベクターを、好ましくは、組換えベクターを、脳脊髄液（ＣＳＦ）に導入することにより、組換えベクターが、ＣＮＳに侵入するような任意の方式で投与するものとする。具体的な実施形態では、ベクターを、髄腔内投与するか、具体的には、嚢内（大槽などに）投与するか、または、代替的に、腰部送達により投与する。代替的に、組換えベクターは、静脈内投与することができる。特に、組換えＡＡＶ９ベクターは、血液脳関門を越えることが示されており、このため、抗Ａβ抗体、抗タウ抗体、抗ＣＧＲＰＲ抗体、または抗インテグリン抗体のトランス遺伝子産物を、ＣＮＳに送達するのに有用でありうる。具体的に、ｓｃＡＡＶ９は、静脈内投与に、特に、有用でありうる。嚢内投与を含む髄腔内投与もしくは腰部投与、または静脈内投与は、ＣＮＳの細胞内の、可溶性トランス遺伝子産物の発現を結果としてもたらすべきである。トランス遺伝子産物の発現（例えば、コードされる抗Ａβ抗体、抗タウ抗体、抗ＣＧＲＰＲ抗体、または抗インテグリン抗体）は、ＣＮＳ内のトランス遺伝子産物の送達および維持を結果としてもたらす。トランス遺伝子産物は、持続的に産生されるため、低濃度の維持が有効でありうる。トランス遺伝子産物の濃度は、ＣＳＦの患者試料中で測定することができる。
【０４３７】
髄腔内投与、嚢内投与、腰部投与、または静脈内投与に適する医薬組成物は、抗Ａβ抗体、抗タウ抗体、抗ＣＧＲＰＲ抗体、もしくは抗インテグリン抗体、またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む組換えベクターの、生理学的に適合性の水性緩衝液を含む製剤緩衝液中の懸濁液を含む。製剤緩衝液は、多糖、界面活性剤、ポリマー、または油のうちの１つまたは複数を含みうる。
【０４３８】
５．５．２  肝組織または筋組織に送達するための投与
５．３．４、５．３．５、５．３．６、５．３．７、５．３．８、５．３．９、５．３．１０、５．３．１１、５．３．１２、５．３．１３、および５．３．１４節は、インターロイキン（ＩＬ）もしくはインターロイキン受容体（ＩＬＲ）、インテグリン、ＰＣＳＫ９、ＡＮＧＰＴＬ３、ＲＡＮＫＬ、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２、ＶＥＧＦ、因子Ｄ（ｆＤ）、ＢＬｙＳ、ＣＰ−Ｃ５、ＭＭＰ９、ｐＫａｌ、またはＴＮＦαに結合するＨｕＰＴＭ  ｍＡｂまたはＨｕＰＴＭ  Ｆａｂ（またはＨｕＰＴＭ  ｍＡｂの、他の抗原結合性断片）をコードするトランス遺伝子を含有する組換えベクターについて記載する。治療有効用量の、任意のこのような組換えベクターを、好ましくは、組換えベクターを、血流に導入することにより、組換えベクターが、肝臓または筋肉（例えば、骨格筋）に侵入するような任意の方式で投与するものとする。代替的に、ベクターは、肝血流を介して、例えば、肝上静脈を介して、または肝動脈を介して、肝臓に直接投与することができる。具体的な実施形態では、ベクターを、皮下、筋内、または静脈内投与する。筋内投与、皮下投与、静脈内投与、または肝内投与は、肝臓または筋肉の細胞内の可溶性トランス遺伝子産物の発現を結果としてもたらすべきである。代替的に、ベクターは、肝血流を介して、例えば、肝上静脈を介して、または肝動脈を介して、肝臓に直接投与することができる。トランス遺伝子産物の発現（例えば、コードされた抗ＩＬ／ＩＬＲ、抗インテグリン、抗ＰＣＳＫ９、抗ＡＮＧＰＴＬ３、抗ＲＡＮＫＬ、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−Ｌ２、抗ＶＥＧＦ、抗ｆＤ、抗ＢＬｙＳ、抗ＣＰ−Ｃ５、抗ＭＭＰ９、抗ｐＫａｌ、または抗ＴＮＦα抗体）は、肝臓内または筋肉内の、トランス遺伝子産物の送達および維持を結果としてもたらす。
【０４３９】
トランス遺伝子産物の濃度は、患者の血清試料中で測定することができる。具体的な実施形態では、抗ＩＬ／ＩＬＲ抗体のトランス遺伝子産物の濃度を、使用されるｍＡｂに応じて、５〜３０μｇ／ｍｌ、５〜５０μｇ／ｍｌ、または５〜８０μｇ／ｍｌ、または５〜１００μｇ／ｍｌ、または５〜２００μｇ／ｍｌのＣｍｉｎなど、少なくとも２μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量が所望される。例えば、約６０〜９０μｇ／ｍｌのデュピルマブ（隔週投与と同等）、または１７０〜２００μｇ／ｍｌのデュピルマブ（毎週投与と同等）、または約２μｇ／ｍｌ〜１２μｇ／ｍｌのイキセキズマブ、または約１３μｇ／ｍｌ〜５０μｇ／ｍｌのセクキヌマブのＣｍｉｎを達成する用量が所望される。
【０４４０】
具体的な実施形態では、抗ＴＮＦα抗体のトランス遺伝子産物の濃度を、少なくとも０．５μｇ／ｍＬ、または少なくとも１μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ（例えば、１〜１０μｇ／ｍｌ、３〜３０μｇ／ｍｌ、もしくは５〜１５μｇ／ｍＬ、または５〜３０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ）に維持する用量が所望される。
【０４４１】
具体的な実施形態では、抗インテグリン抗体のトランス遺伝子産物の濃度を、少なくとも１０μｇ／ｍｌ（例えば、１０〜６０μｇ／ｍｌのＣｍｉｎ）のＣｍｉｎに維持する用量が所望される。
【０４４２】
具体的な実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体または抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のトランス遺伝子産物の濃度を、１０〜８０μｇ／ｍｌのＣｍｉｎなど、少なくとも１０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量が所望される。
【０４４３】
具体的な実施形態では、抗ＲＡＮＫＬ抗体のトランス遺伝子産物の濃度を、少なくとも１０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ（例えば、１０〜５０μｇ／ｍｌまたは１５〜３０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ）に維持する用量が所望される。
【０４４４】
具体的な実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、または抗ＰＤ−Ｌ２抗体のトランス遺伝子産物の濃度を、１０〜１００μｇ／ｍｌまたは１００〜３００μｇ／ｍｌまたは３００〜６００μｇ／ｍｌのＣｍｉｎが所望されるなど、少なくとも１０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量が所望される。
【０４４５】
具体的な実施形態では、抗ＢＬｙＳ抗体のトランス遺伝子産物の濃度を、少なくとも７０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ（例えば、７０〜１５０μｇ／ｍｌまたは１００〜２００μｇ／ｍＬまたは２００〜３５０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ）に維持する用量が所望される。
【０４４６】
具体的な実施形態では、抗ｐＫａｌ抗体のトランス遺伝子産物の濃度を、少なくとも７０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ（例えば、７０〜１５０μｇ／ｍｌまたは１００〜２００μｇ／ｍＬまたは２００〜３５０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ）に維持する用量が所望される。
【０４４７】
トランス遺伝子産物の発現（例えば、コードされる抗ＶＥＧＦ抗体）は、肝臓内のトランス遺伝子産物の送達および維持を結果としてもたらす。一部の実施形態では、ＶＥＧＦのトランス遺伝子産物の濃度を、９０μｇ／ｍＬ〜２００μｇ／ｍＬのＣｍｉｎなど、少なくとも９０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量が所望される。具体的な実施形態では、抗ＣＰ−Ｃ５抗体のトランス遺伝子産物の濃度を、少なくとも３０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ、例えば、３０〜３００μｇ／ｍｌまたは１００〜２００μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量が所望される。
【０４４８】
しかし、いずれの場合にも、トランス遺伝子産物は、持続的に産生されるため、低濃度の維持が有効でありうる。それにもかかわらず、トランス遺伝子産物は、持続的に産生されるため、低濃度の維持が有効でありうる。トランス遺伝子産物の濃度は、患者の血清試料中で測定することができる。
【０４４９】
静脈内投与、筋内投与、皮下投与、または肝内投与に適する医薬組成物は、抗ＩＬ／ＩＬＲ抗体、抗インテグリン抗体、抗ＰＣＳＫ９抗体、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、抗ＲＡＮＫＬ抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ｆＤ抗体、抗ＢＬｙＳ抗体、抗ＣＰ−Ｃ５抗体、抗ＭＭＰ９抗体、抗ｐＫａｌ抗体、もしくは抗ＴＮＦα抗体、またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む組換えベクターの、生理学的に適合性の水性緩衝液を含む製剤緩衝液中の懸濁液を含む。製剤緩衝液は、多糖、界面活性剤、ポリマー、または油のうちの１つまたは複数を含みうる。
【０４５０】
５．５．３  網膜型細胞に送達するための投与
治療有効用量の組換えベクターを、好ましくは、組換えベクターを、眼に直接導入することにより、組換えベクターが、網膜に侵入するような任意の方式で投与するものとする。具体的な実施形態では、ベクターを、網膜下（対象を局所麻酔下に置く、部分的硝子体切除術を伴う、熟練の網膜外科医により実施される手術手順、および遺伝子治療の、網膜への注射；例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Campochiaro et al., 2016, Hum Gen Ther Sep 26 epub:doi: 10.1089/hum.2016.117を参照されたい）、またはマイクロインジェクションもしくはマイクロカニュレーションなどにより、硝子体内もしくは脈絡膜上（例えば、各々が、参照によりその全体において組み込まれる、Patel et al., 2012, Invest Ophth & Vis Sci 53:4433-4441；Patel et al., 2011, Pharm Res 28:166-176; Olsen, 2006, Am J Ophth 142:777-787を参照されたい）投与する。網膜下投与、硝子体内投与、または脈絡膜上投与は、以下の網膜細胞型：ヒトの光受容体細胞（錐状体細胞、桿状体細胞）；水平細胞；双極細胞；アマクリン細胞；網膜神経節細胞（ミジェット細胞、パラソル細胞、二相性細胞、網膜神経節巨細胞、光感受性神経節細胞、およびミュラーグリア）；および網膜色素上皮細胞のうちの１つまたは複数における、可溶性トランス遺伝子産物の発現を結果としてもたらすべきである。トランス遺伝子産物の発現（例えば、コードされる抗ＶＥＧＦ、抗ｆＤ、抗ＭＭＰ９抗体）は、網膜内のトランス遺伝子産物の送達および維持を結果としてもたらす。
【０４５１】
トランス遺伝子産物の濃度は、処置された眼の、硝子体液および／または前房による患者試料中で測定することができる。具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ、抗ｆＤのトランス遺伝子産物の濃度を、３カ月間にわたり、硝子体液中で、少なくとも０．３３μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ、または房水中（眼の前房内）で、０．１１μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量が所望され；その後、１．７０〜６．６０μｇ／ｍＬの範囲の、トランス遺伝子産物の硝子体液中Ｃｍｉｎ濃度、および／または０．５６７〜２．２０μｇ／ｍＬの範囲の房水中Ｃｍｉｎ濃度を維持される。しかし、トランス遺伝子産物は、持続的に産生されるため、低濃度の維持が有効でありうる。代替的に、硝子体液濃度は、患者のトランス遺伝子産物の血清濃度（トランス遺伝子産物への、全身曝露の、硝子体内曝露に対する比は、約１：９０，０００である）を測定することにより、推定および／またはモニタリングすることができる（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Xu L, et al., 2013, Invest. Opthal. Vis. Sci. 54: 1616-1624の、１６２１頁および１６２３頁の表５において報告されている、ラニビズマブの硝子体液濃度および血清濃度を参照されたい）。しかし、トランス遺伝子産物は、持続的に産生されるため、低濃度の維持が有効でありうる。
【０４５２】
投与に適する医薬組成物は、抗ＶＥＧＦ、抗ｆＤ、もしくは抗ＭＭＰ９抗体、またはその抗原結合性断片をコードするトランス遺伝子を含む組換えベクターの、生理学的に適合性の水性緩衝液を含む製剤緩衝液中の懸濁液を含む。製剤緩衝液は、多糖、界面活性剤、ポリマー、または油のうちの１つまたは複数を含みうる。
【実施例】
【０４５３】
６．実施例
[実施例１]
６．１  アデュカヌマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
アデュカヌマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１および２である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、アデュカヌマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒトＣＮＳ細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１０１および１０２のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、シグナルペプチド、特に、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）をコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図２Ａを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４５４】
[実施例２]
６．２  クレネズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
クレネズマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３および４である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、クレネズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒトＣＮＳ細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１０３および１０４のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、シグナルペプチド、特に、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）をコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図２Ｂを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４５５】
[実施例３]
６．３  ガンテネルマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ガンテネルマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号５および６である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ガンテネルマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒトＣＮＳ細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１０５および１０６のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、シグナルペプチド、特に、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）をコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図２Ｃを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４５６】
[実施例４]
６．４  デュピルマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
デュピルマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号７および８である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、デュピルマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１０７および１０８のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図３Ａを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４５７】
[実施例５]
６．５  イキセキズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
イキセキズマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号９および１０である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、イキセキズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト筋細胞内またはヒト肝細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１０９および１１０のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図３Ｂを参照されたい。任意選択で、ベクターは、加えて、低酸素状態誘導性プロモーターを含む。
【０４５８】
[実施例６]
６．６  セクキヌマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
セクキヌマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１１および１２である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、セクキヌマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１１１および１１２のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、表２または３のそれぞれに列挙された群から選択されるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図３Ｃを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４５９】
[実施例７]
６．７  ウステキヌマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ウステキヌマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１３および１４である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ウステキヌマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１１３および１１４のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図３Ｄを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４６０】
[実施例８]
６．８  メポリズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
メポリズマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５および１６である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、メポリズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト筋細胞内またはヒト肝細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１１５および１１６のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図３Ｅを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４６１】
[実施例９]
６．９  ベドリズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ベドリズマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１７および１８である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ベドリズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１１７および１１８のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図４Ａを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４６２】
[実施例１０]
６．１０  ナタリズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ナタリズマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１９および２０である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ナタリズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１１９および１２０のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図４Ｂを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４６３】
[実施例１１]
６．１１  アリロクマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
アリロクマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号２１および２２である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、アリロクマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１２１および１２２のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図５Ａを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４６４】
[実施例１２]
６．１２  エボロクマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
エボロクマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号２３および２４である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、エボロクマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１２３および１２４のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図５Ｂを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４６５】
[実施例１３]
６．１３  エビナクマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
エビナクマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号２５および２６である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、エビナクマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１２５および１２６のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図５Ｃを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４６６】
[実施例１４]
６．１４  デノスマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
デノスマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号２７および２８である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、デノスマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１２７および１２８のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図６を参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４６７】
[実施例１５]
６．１５  ニボルマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ニボルマブの重鎖配列および軽鎖配列（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号２９および３０である）のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ニボルマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１２９および１３０のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図７Ａを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４６８】
[実施例１６]
６．１６  ペムブロリズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ペムブロリズマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３１および３２である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ペムブロリズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１３１および１３２のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図７Ｂを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４６９】
[実施例１７]
６．１７  ラニビズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ラニビズマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３３および３４である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ラニビズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト網膜細胞内またはヒト肝細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１３３および１３４のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表１による、網膜特異的シグナル配列、もしくは表３による、肝臓特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図８Ａを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４７０】
[実施例１８]
６．１８  ベバシズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ベバシズマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３５および３６である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ベバシズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト網膜細胞内またはヒト肝細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１３５および１３６のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表１による、網膜特異的シグナル配列、もしくは表３による、肝臓特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図８Ｂを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４７１】
[実施例１９]
６．１９  ランパリズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ランパリズマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３７および３８である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ランパリズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト網膜細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１３７および１３８のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表１による、網膜特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図８Ｃを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４７２】
[実施例２０]
６．２０  ブロルシズマブｓｃＦｖのｃＤＮＡベースのベクター
ブロルシズマブの重鎖配列および軽鎖配列の可変ドメイン（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３９および４０である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ブロルシズマブｓｃＦｖのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖の可変ドメインをコードするヌクレオチド配列は、ヒト網膜細胞内またはヒト肝細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１３９および１４０のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表１による、網膜特異的シグナル配列、もしくは表３による、肝臓特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、可撓性ペプチドリンカーにより隔てる。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図８Ｄを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４７３】
[実施例２１]
６．２１  ベリムマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ベリムマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号４１および４２である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ベリムマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１４１および１４２のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表３による、肝臓特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図８Ｅを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４７４】
[実施例２２]
６．２２  エクリズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
エクリズマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号４３および４４である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、エクリズマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１４３および１４４のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表３による、肝臓特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図８Ｆを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーターを含む。
【０４７５】
[実施例２３]
６．２３  アンデカリキシマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
アンデカリキシマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号４５および４６である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、アンデカリキシマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１４５および１４６のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表３による、肝臓特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図８Ｇを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４７６】
[実施例２４]
６．２４  ラナデルマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ラナデルマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号４７および４８である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ラナデルマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１４７および１４８のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表３による、肝臓特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図８Ｈを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４７７】
[実施例２５]
６．２５  アダリムマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
アダリムマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号４９および５０である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、アダリムマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１４９および１５０のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２もしくは３による、肝臓もしくは筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図９Ａを参照されたい。ベクターは、加えて、低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４７８】
[実施例２６]
６．２６  インフリキシマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
インフリキシマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号５１および５２である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、インフリキシマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１５１および１５２のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表３による、肝臓特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図９Ｂを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーターを含む。
【０４７９】
[実施例２７]
６．２７  ａＴＡＵＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ａＴＡＵの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号５３および５４である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ａＴＡＵＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒトＣＮＳ細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１５３および１５４のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、シグナルペプチド、特に、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）をコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図２Ｄを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４８０】
[実施例２８]
６．２８  エレヌマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
エレヌマブの重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号５５および５６である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、エレヌマブＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒトＣＮＳ細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１５５および１５６のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、シグナルペプチド、特に、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）をコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図２Ｅを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４８１】
[実施例２９]
６．２９  ＢＡＮ２４０１  ＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
ＢＡＮ２４０１の重鎖配列および軽鎖配列のＦａｂ部分（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号５７および５８である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、ＢＡＮ２４０１  ＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖および軽鎖のＦａｂ部分をコードするヌクレオチド配列は、ヒトＣＮＳ細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１５７および１５８のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、シグナルペプチド、特に、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）をコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａ切断部位により隔てて、バイシストロニックのベクターを創出する。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図２Ｆを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４８２】
[実施例３０]
６．３０  Ｅ０６−ｓｃＦｖ  ＦａｂのｃＤＮＡベースのベクター
Ｅ０６−ｓｃＦｖの重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列（アミノ酸配列は、それぞれ、配列番号５９および６０である）をコードするヌクレオチド配列を含むトランス遺伝子を含む、Ｅ０６−ｓｃＦｖ  ＦａｂのｃＤＮＡベースのベクターを構築する。重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列は、ヒト肝細胞内またはヒト筋細胞内の発現にコドン最適化されており、それぞれ、配列番号１５９および１６０のヌクレオチド配列でありうる。トランス遺伝子はまた、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６１）でありうるか、または表２による、肝臓特異的シグナル配列、もしくは表３による、筋肉特異的シグナル配列であるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、可撓性ペプチドリンカーにより隔てる。トランス遺伝子産物のアミノ酸配列については、図５Ｄを参照されたい。ベクターは、加えて、ＣＢ７プロモーターなどの構成的プロモーター、または低酸素状態誘導性プロモーターなどの誘導的プロモーターを含む。
【０４８３】
【表４−１】
2021501196.tif 000007
【０４８４】
【表４−２】
2021501196.tif 000008
【０４８５】
【表４−３】
2021501196.tif 000009
【０４８６】
【表４−４】
2021501196.tif 000010
【０４８７】
【表４−５】
2021501196.tif 000011
【０４８８】
【表４−６】
2021501196.tif 000012
【０４８９】
【表４−７】
2021501196.tif 000013
【０４９０】
【表４−８】
2021501196.tif 000014
【０４９１】
【表４−９】
2021501196.tif 000015
【０４９２】
【表５−１】
2021501196.tif 000016
【０４９３】
【表５−２】
2021501196.tif 000017
【０４９４】
【表５−３】
2021501196.tif 000018
【０４９５】
【表５−４】
2021501196.tif 000019
【０４９６】
【表５−５】
2021501196.tif 000020
【０４９７】
【表５−６】
2021501196.tif 000021
【０４９８】
【表５−７】
2021501196.tif 000022
【０４９９】
【表５−８】
2021501196.tif 000023
【０５００】
【表５−９】
2021501196.tif 000024
【０５０１】
【表５−１０】
2021501196.tif 000025
【０５０２】
【表５−１１】
2021501196.tif 000026
【０５０３】
【表５−１２】
2021501196.tif 000027
【０５０４】
【表５−１３】
2021501196.tif 000028
【０５０５】
【表５−１４】
2021501196.tif 000029
【０５０６】
【表５−１５】
2021501196.tif 000030
【０５０７】
【表５−１６】
2021501196.tif 000031
【０５０８】
【表５−１７】
2021501196.tif 000032
【０５０９】
【表５−１８】
2021501196.tif 000033
【０５１０】
【表５−１９】
2021501196.tif 000034
【０５１１】
【表５−２０】
2021501196.tif 000035
【０５１２】
【表５−２１】
2021501196.tif 000036
【０５１３】
【表５−２２】
2021501196.tif 000037
【０５１４】
【表５−２３】
2021501196.tif 000038
【０５１５】
【表５−２４】
2021501196.tif 000039
【０５１６】
均等物
本発明は、その具体的実施形態を参照しながら、詳細に記載されるが、機能的に同等である変化形も、本発明の範囲内にあることが理解されるであろう。実際、当業者には、本明細書で示され、記載される改変に加えて、前出の記載および付属の図面からも、本発明の多様な改変が明らかとなるであろう。このような改変は、付属の特許請求の範囲内に収まることを意図する。常法の実験のみを使用して、本明細書で記載される、本発明の具体的実施形態に対する多くの均等物を認識するか、またはこれを確認することが可能であろう。このような均等物は、以下の特許請求の範囲により包含されることが意図される。
【０５１７】
本明細書で言及される、全ての刊行物、特許、および特許出願は、各個別の刊行物、特許、または特許出願が、それらの全体において、参照により本明細書に組み込まれることが、具体的に、かつ、個別に指し示された場合と同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
2021501196.tif 000040
【図２−１】
2021501196.tif 000041
【図２−２】
2021501196.tif 000042
【図２−３】
2021501196.tif 000043
【図２−４】
2021501196.tif 000044
【図２−５】
2021501196.tif 000045
【図２−６】
2021501196.tif 000046
【図３−１】
2021501196.tif 000047
【図３−２】
2021501196.tif 000048
【図３−３】
2021501196.tif 000049
【図３−４】
2021501196.tif 000050
【図４】
2021501196.tif 000051
【図５−１】
2021501196.tif 000052
【図５−２】
2021501196.tif 000053
【図６】
2021501196.tif 000054
【図７】
2021501196.tif 000055
【図８−１】
2021501196.tif 000056
【図８−２】
2021501196.tif 000057
【図８−３】
2021501196.tif 000058
【図８−４】
2021501196.tif 000059
【図８−５】
2021501196.tif 000060
【図９−１】
2021501196.tif 000061
【図９−２】
2021501196.tif 000062
【図１０】
2021501196.tif 000063
【図１１−１】
2021501196.tif 000064
【図１１−２】
2021501196.tif 000065
【図１１−３】
2021501196.tif 000066
【図１１−４】
2021501196.tif 000067
【図１１−５】
2021501196.tif 000068
【図１１−６】
2021501196.tif 000069
【図１２−１】
2021501196.tif 000070
【図１２−２】
2021501196.tif 000071
【図１２−３】
2021501196.tif 000072
【図１２−４】
2021501196.tif 000073
【図１２−５】
2021501196.tif 000074
【配列表】
2021501196000001.app
【国際調査報告】
2021501196.tif 000075
2021501196.tif 000076
2021501196.tif 000077
2021501196.tif 000078
2021501196.tif 000079
2021501196.tif 000080
2021501196.tif 000081
2021501196.tif 000082
2021501196.tif 000083
2021501196.tif 000084
2021501196.tif 000085