(57)【要約】  本発明は、単一分子量ホモポリマー、特に単一分子量ポリサルコシンを含む、リガンド−薬物−複合体（ＬＤＣ）に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（ＸＶ）を有するリガンド−薬物−複合体化合物（ＬＤＣ）：
【化１】
2021500412.tif 000075
式中、Ｌは、（ＨＰＳＭＷ）が（Ｘ−Ｄ）に対して直交の向きにあることを可能にする直交コネクタであり；
ＨＰＳＭＷは、式（Ｉ）を有する単一分子量ホモポリマーの、前記直交コネクタＬへの共有結合から生じ、
【化２】
2021500412.tif 000076
（式中、Ｒ１とＲ２とは異なり、且つ
Ｒ１及びＲ２の一方はＨ又は不活性基であり、Ｒ１及びＲ２の他方は官能化反応性基であり、当該基は、前記不活性基が反応しない反応条件において、結合可能な基と共有結合するために反応性であり、
Ｚ１及びＺ２は、同一に又は別々に、任意のスペーサであり、且つ
ｎは１以上であり、且つｋは２以上である）；
Ｄは、細胞傷害性薬物であり；
Ｘは、Ｄを放出するための任意の切断可能な部分であり；
Ｚは、任意のスペーサであり；且つ
ａは１以上であり、ｂは１以上であり、且つｍは１以上である。
【請求項２】
前記単一分子量ホモポリマーがポリサルコシンである、請求項１に記載のＬＤＣ化合物。
【請求項３】
ＨＰＳＭＷは、式（ＩＩ）を有する単一分子量ホモポリマーの、前記直交コネクタＬへの共有結合から生じる、請求項１又は２に記載のＬＤＣ化合物：
【化３】
2021500412.tif 000077
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｚ１及びＺ２は、請求項１において規定された通りであり、且つ
ｋは、２〜１００、好ましくは２〜５０である。
【請求項４】
Ｒ１又はＲ２が官能化反応性基であり、以下の群から選択される、請求項１から３のいずれか１項に記載のＬＤＣ化合物：
−  カルボン酸基、
−  アミノ基ＮＲＲ''
（ここで、Ｒ及びＲ''は、独立して、Ｈと、Ｏ、Ｎ及びＳの中から選択される少なくとも１つのヘテロ原子によって随意的に割り込まれた（Ｃ１−Ｃ６）アルキルと、から選択される）、
−  水酸基、
−  ハロゲン原子、
−  ヒドラジン（−ＮＨ２−ＮＨ２）基、
−  ニトロ基、
−  ヒドロキシルアミン基、
−  アジド基、
−  （Ｃ２−Ｃ６）アルキニル基、
−  （Ｃ２−Ｃ６）アルケニル基、
−  チオール基、
−  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ペルフルオロエステル、ニトロフェニルエステル、アザ−ベンゾトリアゾール及びベンゾトリアゾール活性化エステル、アシル尿素等の活性化エステル基、
−  ボロン酸−Ｂ（ＯＲ''''）２基
（ここで、Ｒ''''は、水素原子又はＣ１−Ｃ６アルキル基である）、
−  マレイミド、ハロマレイミド、ハロアセチル、ピリジルジスルフィド等のチオール反応性基、
−  メシレート基、
−  トシレート基、
−  トリフレート基、
−  アルデヒド基、
−  イソシアネート基又はイソチオシアネート基、
−  クロロスルホニル基、
−  アクリレート基。
【請求項５】
前記リガンドは、ポリペプチド、タンパク質、抗体及び抗体断片から成る群から選択される、請求項１から４のいずれか１項に記載のＬＤＣ化合物。
【請求項６】
Ｄは、生物活性分子、抗癌剤等の治療用分子、造影剤及びフルオロフォアから成る群から選択される、請求項１から５のいずれか１項に記載のＬＤＣ化合物。
【請求項７】
Ｌは、１つ以上の天然又は非天然のアミノ酸である、請求項１から６のいずれかに記載のＬＤＣ化合物。
【請求項８】
Ｌは、グルタミン酸、リジン及びグリシンから選択される、請求項１から７のいずれかに記載のＬＤＣ化合物。
【請求項９】
Ｘは、
−  １つ以上の天然又は非天然のアミノ酸、
−  酸素グリコシド結合を介して自壊性基に結合した糖部分、
−  ジスルフィドリンカー、及び
−  リソソーム中で加水分解可能な、酸に不安定なリンカー
から選択される、請求項１から８のいずれかに記載のＬＤＣ化合物。
【請求項１０】
Ｘは、
−  １つ以上の天然又は非天然のアミノ酸、及び
−  酸素グリコシド結合を介して自壊性基に結合した糖部分
から選択される、請求項１から９のいずれかに記載のＬＤＣ化合物。
【請求項１１】
Ｚは、アルキレン、ヘテロアルキレン；アルコキシ；ポリエーテル；１つ以上の天然又は非天然のアミノ酸；Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ；Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ；アリーレン；及びそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１から１０のいずれかに記載のＬＤＣ化合物。
【請求項１２】
Ｚは、式（ＸＶＩＩ）、式（ＸＶＩＩＩ）、式（ＸＩＸ）、式（ＸＸ）、式（ＸＸＩ）又は式（ＸＸＩＩ）である、請求項１から１１のいずれかに記載のＬＤＣ化合物：
【化４】
2021500412.tif 000078
式中、波形結合は結合点を表し、且つ
Ｒ６は、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ６基のいずれかは１つ以上の＝Ｏで随意的に置換される。
【請求項１３】
式（ＸＶＩ）を有する中間体化合物：
【化５】
2021500412.tif 000079
式中、Ｌは、直交コネクタであり；
ＨＰＳＭＷは、式（Ｉ）を有する単一分子量ホモポリマーの、前記直交コネクタＬへの共有結合から生じ、
【化６】
2021500412.tif 000080
（式中、Ｒ１とＲ２とは異なり、且つ
Ｒ１及びＲ２の一方はＨ又は不活性基であり、Ｒ１及びＲ２の他方は官能化反応性基であり、当該基は、前記不活性基が反応しない反応条件において、結合可能な基と共有結合するために反応性であり、
Ｚ１及びＺ２は、同一に又は別々に、任意のスペーサであり、且つ
ｎは１以上であり、且つｋは２以上である）；
Ｄは、細胞傷害性薬物であり；
Ｘは、Ｄを放出するための任意の切断可能な部分であり；
Ｚは、任意のスペーサであり；且つ
ａは１以上であり、且つｂは０又は１以上である。
【請求項１４】
前記単一分子量ホモポリマーは、ポリサルコシンである、請求項１３に記載の中間体化合物。
【請求項１５】
薬剤として使用するための、請求項１から１２のいずれか１項に記載のＬＤＣ。
【請求項１６】
式（ＸＸＩＩＩ）を有する化合物：
【化７】
2021500412.tif 000081
式中、Ｒ６は、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−ＮＨ−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−ＮＨ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−ＮＨ−、−アリーレン−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−ＮＨ−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−ＮＨ−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−ＮＨ−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−Ｓ−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−Ｓ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−）−Ｓ−、−アリーレン−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−Ｓ−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｓ−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｓ−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒ６基のいずれかは、−Ｘ、−Ｒ’、−Ｏ−、−ＯＲ’、＝Ｏ、−ＳＲ’、−Ｓ−、−ＮＲ’２、−ＮＲ’３＋、＝ＮＲ’、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ’、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ’）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ’）２、−ＰＯ３−、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’２、及びＣ（＝ＮＲ’）ＮＲ’２から選択された１つ以上の置換基で随意的に置換され（ここで、各Ｘは、独立してハロゲン：−Ｆ、−ＣＩ、−Ｂｒ、又は−Ｉであり、且つ各Ｒ’は、独立して−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ６−Ｃ２０アリール、又は−Ｃ３−Ｃ１４複素環である）；
Ｚは、任意のスペーサであり；
Ｌは、直交コネクタであり；
Ｘは、Ｄを放出するための任意の切断可能な部分であり；
Ｄは、細胞傷害性薬物であり；
ａは１以上であり、且つｂは０又は１以上であり；且つ
ＨＰＳＭＷは、式（Ｉ）を有する単一分子量ホモポリマーの、前記直交コネクタＬへの共有結合から生じる：
【化８】
2021500412.tif 000082
（式中、Ｒ１とＲ２とは異なり、且つ
Ｒ１及びＲ２の一方はＨ又は不活性基であり、Ｒ１及びＲ２の他方は官能化反応性基であり、当該基は、前記不活性基が反応しない反応条件において、結合可能な基と共有結合するために反応性であり、
Ｚ１及びＺ２は、同一に又は別々に、任意のスペーサであり、且つ
ｎは１以上であり、且つｋは２以上である）。
【請求項１７】
前記単一分子量ホモポリマーは、ポリサルコシンである、請求項１６に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、単一分子量ホモポリマー、そのようなホモポリマーを調製するための方法、及び特に複合体技術におけるその使用に関する。
【０００２】
本発明はまた、単一分子量ホモポリマー、特に単一分子量ポリサルコシンを含む、リガンド−薬物−複合体（ＬＤＣ：Ligand-Drug-Conjugate）に関する。
【０００３】
リガンド−薬物−複合体（ＬＤＣ）は、少なくとも１つのリガンドユニットを含み、当該リガンドユニットは、合成リンカーを介して少なくとも１つの治療分子、診断分子又は標識分子（以下、薬物又はＤと呼ぶ）に共有結合的に連結されている、ポリペプチド又はタンパク質である。この合成リンカーは、リガンドユニットと薬物ユニットとを連結するための１つ又は数個の二価アームを含み得、これはスペーサ、コネクタ及び切断可能な部分から選択され得る。前記リンカーはまた、貯蔵安定性、血漿安定性又は薬物動態特性等のＬＤＣ性能を向上させることができる任意の一価部分を有してもよい。タンパク質又はポリペプチドは通常、ターゲティングユニットであるが、固有の治療学的特性を有し得る。複合体のリガンドユニットが抗体又は抗体断片であり、細胞傷害性薬物又は化学療法薬物と関連する場合、用語「抗体−薬物−複合体（ＡＤＣ）」が一般に使用される。
【０００４】
ＡＤＣ（antibody-drug-conjugate）の設計は、多数の多様な因子：（ｉ）リガンド上での結合に使用される合成リンカーの性質、数、全体的な疎水性及び位置；（ｉｉ）薬物の作用の性質及び機構；（ｉｉｉ）細胞内在化後及び細胞内輸送中の薬物放出に関与する構造要素；（ｉｖ）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）及び選択された抗原標的の特性；の考察を含む。最近の方法論は、利用可能なＡＤＣの欠点のいくつか、例えば、不均一な薬物積載量（異なる薬理学的特性を有するＡＤＣ亜種）、限られたｍＡｂ−リンカー安定性又は薬物−リンカー安定性、及び次善の薬物動態特性、に取り組んでいる（Beck et al. Nat. Rev. Drug. Disco., 2017, 16(5), 315-337）。
【０００５】
複合体を設計する際に考慮すべき別の重要な因子は、薬物比率（又はＡＤＣについての薬物−抗体−比率（ＤＡＲ：drug-antibody-ratio））であり、これは、抗体に結合された薬物ユニットの平均数である。最近の研究結果として、ＡＤＣ分野における実際の傾向は、低〜中程度のＤＡＲ（通常２〜４）を有する均質な複合体を生み出し、臨床にもたらすことである。それにもかかわらず、より最近になって、高積載したＡＤＣの欠点（凝集体を形成し、従って複合体製剤を複雑にする、好ましくない薬物動態特性及び傾向）を克服することを目的とする、新しいリンカー−薬物技術が出現した。そのような技術は、有効性が改善され、薬物動態特性が改善され、治療学的指数が改善された次世代ＡＤＣを臨床にもたらす可能性を有し、低い標的発現、遅い内在化又は非効率的な細胞内プロセシングを有する腫瘍を標的とすることができる。薬物動態特性及び製剤安定性を犠牲にすることなく、そのような高いペイロード積載量を達成するために、細胞傷害性ペイロードの見かけの疎水性をマスクすることを目的とする新しいリンカー−薬物設計アプローチを開発することが必要である。
【０００６】
ＷＯ２０１４／０９３３９４Ａ１では、高い薬物積載量及び標的抗原への強い結合を示すタンパク質−ポリマー−薬物複合体が報告されている。この複合体は、生分解性で生体適合性のポリ−［１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシルメチルホルマル］高分子エンティティを含み、これは、良好な薬物動態特性を有する、ｍＡｂ当たり約１２〜２５個の細胞傷害性分子の複合体を可能にする。このアプローチの主な欠点は、（ｉ）リンカーの多分散性、（ｉｉ）高分子アーム当たりの細胞傷害性分子の不均一な数、及び（ｉｉｉ）ｍＡｂ当たりのグラフトされた高分子アームの不均一な数、から生じる、最終複合体の極端な多分散性である。
【０００７】
ＷＯ２０１５／０５７６９９Ａ２及びＷＯ２０１６／０５９３７７Ａ１では、リンカー設計に直交のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含めることによって、８〜３６個の薬物積載ＡＤＣの製剤化が報告されている。ＰＥＧは、その親水性、生体適合性及び高い水和殻のために、小さい薬物、タンパク質、生体複合体及びナノ粒子の親水性、安定性及び循環時間を改善することが周知である。しかし、ＰＥＧは、いくつかの健康な個体によって発現される抗ＰＥＧ抗体が原因で、非生分解性、過敏症に至る起こり得る補体活性化及び不明瞭な薬物動態等の欠点を免れない。
【０００８】
（ｉ）好ましい薬物動態特性及び安定性を維持しつつ高い薬物積載量、（ｉｉ）薬物−リンカーレベル（化学的に単分散の薬物−リンカー）及び複合体レベル（均質に積載された複合体）での、複合体の完全な均質性、並びに（ｉｉｉ）疎水性のマスキング部分として作用する生分解性の親水性ホモポリマーに基づく、を組み合わせるリガンド−薬物−複合体が必要とされている。
【０００９】
ポリサルコシン（ポリ−Ｎ−メチルグリシン又はＰＳＡＲ）は、ＰＥＧの代替物であり得、そして改善された特性を有する新規のタンパク質複合体を設計するために使用され得る。ＰＳＡＲは、高親水性で、生分解性で、非免疫原性で、水溶性の高分子であり、薬物のためのいくつかの輸送システム又は診断において使用されている。今まで、ＰＳＡＲは、サルコシンＮ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）又はサルコシンＮ−チオカルボキシ無水物（ＮＴＡ）の縮合性の開環重合反応を介して入手されるので、多分散形態としてのみ利用可能である。許容できる分散性（多分散性指数＞１を有する、分子量のガウス分布）で比較的明確に規定されているが、一定の長さ（唯一且つ特有の分子量）を有し、従って絶対的な均質性を有している、より短いホモポリマー化合物の使用を必要とする特定の適用分野では、これらの多分散ＰＳＡＲは使用することができない。
【００１０】
巨大分子修飾のために離散した単分散ＰＳＡＲを使用することは、絶対的な化学的均質性を有する複合体を開発するための必要条件である。そのような均質な複合体は、全く同じ薬理学的特性（薬物動態及び効能）を共有するという利点を有し、特性を決定することがより容易であり、製造プロセスの再現性のより大きな制御を可能にし、そしてバイオ複合体についてのますます厳しい規制上の要件の要求を満たす。
【００１１】
本発明によれば、段階的な樹脂上サブモノマーアプローチを用いて、規定された鎖長を有する離散した単分散ＰＳＡＲホモポリマーが得られた。この方法は安価であり、容易に拡張することができ、許容できる収率及び優れたモノマー純度を有する最終生成物を与える。これらの単分散ＰＳＡＲホモポリマーは、改善された薬物積載能、薬物動態及び治療効果を有するリガンド−薬物−複合体（ＬＤＣ）を提供するために、タンパク質結合技術において使用された。
【００１２】
従って、本発明は、複合体技術、特にＬＤＣにおいて使用される前記要件を満たす単一分子量単官能性ホモポリマーを提供する。
【００１３】
このホモポリマーは、以下の式（Ｉ）を有している：
【００１４】
【化１】
2021500412.tif 000002
式中、Ｒ１とＲ２とは異なり、
Ｒ１及びＲ２の一方はＨ又は不活性基であり、Ｒ１及びＲ２の他方が官能化反応性基であり、前記基は、前記不活性基が反応しない反応条件において、結合可能な基と共有結合するために反応性であり、
Ｚ１及びＺ２は、同一に又は別々に、任意のスペーサであり、
ｎは１以上であり、ｋは２以上である。
【００１５】
本発明を詳細に説明する前に、本明細書で使用される用語の定義を以下に示す。
【００１６】
〔定義〕
本発明によれば、反応物、生成物、モノマー、ホモポリマー、ユニット等の任意の化合物は、酸付加塩と、塩基付加塩と、金属塩と、アンモニウム及びアルキル化アンモニウム塩とを含む、塩の形態であってもよい。そのような塩は、当業者に周知である。本発明のホモポリマーの意図された使用を考慮すると、それらは、好ましくは薬学的に受容可能な塩の形態である。
【００１７】
単一分子量ホモポリマーは、同じ性質であるがサイズ分布及び平均分子量を中心とした分子量分布を有するホモポリマーの混合物とは対照的に、唯一且つ特有の分子量を有するホモポリマーをいう。単一分子量ホモポリマーは、原子の絶対数を有する１つの絶対的な分子式で定義付けられ得る。
【００１８】
ワンポット重合プロセスによって伝統的に得られ且つＰＤＩ＞１を有する多分散ホモポリマーとは対照的に、単一分子量ホモポリマーはまた、１に等しい多分散指数（ＰＤＩ：polydispersity index）を有する「単分散」と呼ばれ得る。用語「単分散」は生成物の製造手順を正確には反映しないという事実にもかかわらず、唯一且つ絶対的な分子量、分子式及び分子構造を有するホモポリマーを規定している、用語「単分散」及び「離散した」の両方が交換可能であることが、本明細書において概して認められる。
【００１９】
不活性基又はキャッピング基は、ホモポリマーの一方の末端を終端させる任意の化学的非反応性基をいい、前記基は、所定の反応条件においてホモポリマーの他方の末端を終端させる官能化反応性基と比較したときに、非反応性である。結果として生じるホモポリマーは、見方によれば、この不活性基によって末端キャップされており、具体的にはＬＤＣ技術において使用される場合に、共有結合されることを目的としていない。一実施形態において、前記基は、ホモポリマーの一方の末端への共有結合後に不活性化されるだけでもよい。
【００２０】
不活性基の非網羅的なリストは、アシル基、特にアセチル基、アミド基、アルキル基、特にＣ１−２０アルキル基、アルキルエーテル基、アルキルエステル基、アルキルオルトエステル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アリールエステル基、三級アミン基、水酸基、アルデヒド基を含む。前記不活性基はまた、官能化反応性基を規定する基の同じリストから選択されてもよい（以下の官能化反応性基の定義を参照されたい）。
【００２１】
官能化反応性基は、結合可能な基と共有結合するために反応性である任意の化学部分をいい、所定の反応条件において不活性基と比較したときに反応性である。特に、それは、以下の基に結合し得る：カルボン酸；一級アミン；二級アミン；三級アミン；ヒドロキシル；ハロゲン；Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ペルフルオロエステル、ニトロフェニルエステル、アザ−ベンゾトリアゾール及びベンゾトリアゾール活性化エステル、アシル尿素等の活性化エステル；アルキニル；アルケニル；アジド；イソシアネート；イソチオシアネート；アルデヒド；マレイミド、ハロマレイミド、ハロアセチル、ピリジルジスルフィド等のチオール反応性部分；チオール；アクリレート；メシレート；トシレート；トリフラート、ヒドロキシルアミン；クロロスルホニル；ボロン酸−Ｂ（ＯＲ’）２誘導体（ここで、Ｒ’は水素又はアルキル基である）。
【００２２】
官能化反応性基の非網羅的なリストは、以下を含んでいる：カルボン酸；一級アミン；二級アミン；三級アミン；ヒドロキシル；ハロゲン；Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ペルフルオロエステル、ニトロフェニルエステル、アザ−ベンゾトリアゾール及びベンゾトリアゾール活性化エステル、アシル尿素等の活性化エステル；アルキニル；アルケニル；アジド；イソシアネート；イソチオシアネート；アルデヒド；マレイミド、ハロマレイミド、ハロアセチル、ピリジルジスルフィド等のチオール反応性部分；チオール；アクリレート；メシレート；トシレート；トリフラート、ヒドロキシルアミン；クロロスルホニル；ボロン酸−Ｂ（ＯＲ’）２誘導体（ここで、Ｒ’は水素又はアルキル基である）。
【００２３】
不活性基及び官能化反応性基についての用語「不活性」及び「官能化反応性」は、それぞれ、相互依存性であることに言及すべきである。これは、式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）のいずれか１つに規定される本発明のホモポリマーの所定の反応条件において、不活性基は反応せず、官能化反応性基は反応物と共有結合するように反応することを意味する。従って、式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）のいずれか１つのホモポリマー中の前記不活性基及び前記官能化反応性基は異なるが、それらは基の同じリストから全体的に選択されてもよい。
【００２４】
本発明による官能化反応性基又は不活性基における用語「基」は、所定の反応条件において、それぞれ、反応物と共有結合することができるか又は不活性である以外のいかなる機能も示さない基として理解されるべきである。
【００２５】
アルキルは、単独で又はアルキルエーテル若しくはアルキルエステルの一部として使用され、例えば、１〜２０個の炭素原子、好ましくは１〜１２個、より好ましくは１〜６個、特に１〜４個を有する、飽和の直鎖又は分枝の炭化水素基をいう。
【００２６】
アルケニル及びアルキニルは、２〜２０個の炭素原子、好ましくは２〜１２個、より好ましくは２〜６個、特に２〜４個を有する、少なくとも部分的に不飽和の直鎖又は分枝の炭化水素基をいう。
【００２７】
アリールは、単独で又はアリールエステルの一部として使用され、例えば、６〜１４個の環炭素原子、好ましくは６〜１０個、特に６個を含む、１個以上の環を有する芳香族基をいう。
【００２８】
アルキレンは、単独で又はアルキレングリコールの一部として使用され、例えば、１〜２０個の炭素原子、好ましくは１〜１２個、より好ましくは１〜６個、特に１〜４個を有する、二価の飽和の直鎖又は分枝の炭化水素基をいう。
【００２９】
アリーレンは、上で規定した二価のアリール基をいう。
【００３０】
ヘテロアルキルは、１〜２０個又は１〜１０個の炭素原子と、Ｏ、Ｎ、Ｓｉ及びＳから成る群から選択された１〜１０個、好ましくは１〜３個のヘテロ原子とから成る直鎖又は分枝の炭化水素鎖をいい、ここで、窒素及び硫黄原子は随意的に酸化されてもよく、窒素ヘテロ原子は随意的に四級化されてもよい。ヘテロ原子Ｏ、Ｎ及びＳは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置に、又はアルキル基が前記分子の残りの部分に結合する位置に、配置されてもよい。
【００３１】
ヘテロアルキレンは、上で規定した二価のヘテロアルキルをいう。ヘテロアルキレン基について、ヘテロ原子はまた、鎖の末端のいずれか又は両方を占め得る。
【００３２】
Ｃ３−Ｃ８炭素環は、３員、４員、５員、６員、７員又は８員の一価の、置換又は非置換の、飽和又は不飽和の非芳香族の単環式又は二環式の炭素環をいう。
【００３３】
Ｃ３−Ｃ８カルボシクロは、上で規定した二価のＣ３−Ｃ８炭素環をいう。
【００３４】
Ｃ３−Ｃ８複素環とは、３〜８個の炭素原子（環員とも呼ばれる）と、Ｎ、Ｏ、Ｐ又はＳから独立して選択された１〜４個のヘテロ原子環員とを有する、一価の置換又は非置換の芳香族又は非芳香族の単環式又は二環式の環系をいう。前記複素環における１つ以上のＮ、Ｃ又はＳ原子は、酸化され得る。ヘテロ原子を含む前記環は、芳香族又は非芳香族であり得る。特に明記しない限り、前記複素環は、安定な構造を生じる任意のヘテロ原子又は炭素原子でそのペンダント基に結合している。
【００３５】
Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロとは、上で規定した二価のＣ３−Ｃ８複素環をいう。
【００３６】
さらに、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキレン、アリーレン、ヘテロアルキル、ヘテロアルキレン、Ｃ３−Ｃ８炭素環、Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ、Ｃ３−Ｃ８複素環、Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロという用語は、−Ｘ、−Ｒ’、−Ｏ−、−ＯＲ’、＝Ｏ、−ＳＲ’、−Ｓ−、−ＮＲ’２、−ＮＲ’３、＝ＮＲ’、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ’、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ’）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ’）２、−ＰＯ３−、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’２、及びＣ（＝ＮＲ’）ＮＲ’２から選択された置換基のうちの１つ以上で、随意的に置換された基をいい、ここで、各Ｘは独立してハロゲン：−Ｆ、−ＣＩ、−Ｂｒ、又は−Ｉであり、各Ｒ’は独立して−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ６−Ｃ２０アリール、又は−Ｃ３−Ｃ１４複素環である。
【００３７】
アシル基は、−ＣＯ−アルキルをいい、アルキルは上で規定されている。
【００３８】
単官能性ホモポリマーは、単一タイプのモノマー（例えば、ポリサルコシンのためのＮ−メチルグリシンモノマー）を含み、当該単一タイプのモノマーは、上で規定した官能化反応性基を有している１つの末端と、Ｈ又は上で規定した不活性基を有しているもう１つの末端とを有している。
【００３９】
固相ペプチド合成のための担体（ＳＰＰＳ：Support for solid-phase peptide synthesis）は、周知のプロセスであるＳＰＰＳにおいて通常使用される担体をいい、ＳＰＰＳにおいては、担体に固定されたペプチド、不溶性ポリマーは、脱保護−洗浄−カップリング−洗浄の繰返しサイクルを介して、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸又はＢｏｃ保護アミノ酸の連続的な付加によって組み立てられる。それぞれのアミノ酸付加は、（ｉ）Ｎα−保護基の切断、（ｉｉ）洗浄ステップ、（ｉｉｉ）カップリング試薬及び非求核性塩基を用いる、フルロエニルメトキシカルボニル−（Ｆｍｏｃ）保護アミノ酸又はｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−（Ｂｏｃ）保護アミノ酸のカップリング、（ｉｖ）洗浄ステップ、のサイクルと呼ばれる。伸長鎖は前記担体に結合しているので、余剰の試薬及び可溶性の副生成物は、単純な濾過によって除去することができる。ヒンダードＦｍｏｃ保護Ｎ−メチル化アミノ酸又はヒンダードＢｏｃ保護Ｎ−メチル化アミノ酸との反復カップリング反応は困難であり、しばしば次善であるため、この技術では、低い粗純度、困難な精製及び低い収率が予想される。前記担体の例は、Ｗａｎｇ樹脂、Ｒｉｎｋアミド樹脂、トリチル−及び２−クロロトリチル樹脂、ＰＡＭ樹脂、ＰＡＬ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂、ＭＢＨＡ樹脂、ＨＭＰＢ樹脂、ＨＭＢＡ樹脂であり、これらは市販されており、これらにはペプチドが直接的又は間接的に結合される。
【００４０】
直交コネクタという用語は、分枝したリンカーユニット構成要素をいい、当該分枝したリンカーユニット構成要素は、リガンドをホモポリマーユニットと薬物ユニットとに結合させ、その結果、ホモポリマーユニットは、薬物ユニットに対して（直列配置とは対照的に）並列配置になる。直交コネクタは、リガンド−薬物−複合体の成分、すなわちリガンド、ホモポリマー及び薬物ユニットのための連結部位を有する足場である。用語「並列」は、リガンド−薬物−複合体（ＬＤＣ）の２つの構成要素の分枝を示すために使用されるが、前記２つの構成要素が必ず空間において極めて接近している、又はそれらの間に同じ距離を有することを示すためには使用されない。
【００４１】
薬物ユニットに対して並列の（すなわち、分岐した）向きにあるホモポリマー（例えば、ポリサルコシン）ユニットを有するＬＤＣの例示的な図式提示は、以下の通りである：
【００４２】
【化２】
2021500412.tif 000003
式中、（Ｌ）は直交コネクタユニットであり、ｗは１以上、典型的には１〜５、好ましくは１〜４、より好ましくは１〜３、さらには１〜２である。この直交構造は、直線構造と混同されるべきではない。薬物ユニットに対して直列の（すなわち、直線の）向きにあるホモポリマー（例えば、ポリサルコシン）ユニットを有するＬＤＣの例示的な図式提示は、以下の通りである：
【００４３】
【化３】
2021500412.tif 000004
直交コネクタの非網羅的なリストは、天然又は非天然のアミノ酸、例えば、リジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、セリン、チロシン、システイン、セレノシステイン、グリシン、ホモアラニン；アミノアルコール；アミノアルデヒド；ポリアミン、又はそれらの任意の組み合わせを含む。彼の知識から、当業者は、期待されるＬＤＣ化合物に適切な直交コネクタを選択することができる。有利には、Ｌは１つ以上の天然又は非天然のアミノ酸である。一実施形態において、Ｌは、グルタミン酸、リジン及びグリシンから選択される。
【００４４】
スペーサは、以下のようなリガンド−薬物−複合体の２つの成分と共有結合する二価の直線アームである：
−  リガンドユニット及び直交コネクタユニット、
−  直交コネクタユニット及びホモポリマーユニット、
−  直交コネクタ及び切断可能な部分、
−  切断可能な部分及び薬物、又は
−  直交コネクタ及び薬剤。
【００４５】
例えば、スペーサは、二価の直線状アルキレン基、好ましくは（ＣＨ２）４である。
【００４６】
スペーサユニットの非網羅的なリストは、アルキレン、ヘテロアルキレン（Ｓｉ、Ｎ、Ｏ及びＳから選択された少なくとも１つのヘテロ原子によって割り込まれたアルキレン）；アルコキシ；ポリアルキレングリコール及び典型的にはポリエチレングリコール等のポリエーテル；グリシン、アラニン、プロリン、バリン、Ｎ−メチルグリシン等の１つ以上の天然又は非天然のアミノ酸；Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ；Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ；アリーレン、及びそれらの任意の組み合わせを含む。スペーサは、切断可能な部分と薬物ユニットとの間、又は直交コネクタと薬物ユニットとの間に存在するとき、１つ以上の薬物ユニットに連結され得る。例えば、スペーサは、１〜４個の薬物ユニット、好ましくは１〜２個の薬物ユニットに連結され得る。一実施形態において、切断可能な部分と薬物ユニットとの間のスペーサは、（４−アミノ−１，３−フェニレン）ジメタノールである。
【００４７】
一実施形態において、スペーサユニットは、式（ＸＶＩＩ）、式（ＸＶＩＩＩ）、式（ＸＩＸ）、式（ＸＸ）、式（ＸＸＩ）又は式（ＸＸＩＩ）のものである：
【００４８】
【化４】
2021500412.tif 000005
波形結合は結合点を表し、Ｒ６は、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−ＮＨ−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−ＮＨ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−ＮＨ−、−アリーレン−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−ＮＨ−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−ＮＨ−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−ＮＨ−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−Ｓ−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−Ｓ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−）−Ｓ−、−アリーレン−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−Ｓ−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｓ−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｓ−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である。
【００４９】
Ｒ６基のいずれかは、−Ｘ、−Ｒ’、−Ｏ−、−ＯＲ’、＝Ｏ、−ＳＲ’、−Ｓ−、−ＮＲ’２、−ＮＲ’３＋、＝ＮＲ’、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ’、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ’）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ’）２、−ＰＯ３−、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’２、及びＣ（＝ＮＲ’）ＮＲ’２から選ばれる１つ以上の置換基によって随意的に置換され、ここで、各Ｘは独立してハロゲン：−Ｆ、−ＣＩ、−Ｂｒ、又は−Ｉであり；各Ｒ’は独立して−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ６−Ｃ２０アリール、又は−Ｃ３−Ｃ１４複素環である。
【００５０】
有利には、スペーサユニットは、式（ＸＶＩＩ）、式（ＸＶＩＩＩ）、式（ＸＩＸ）、式（ＸＸ）、式（ＸＸＩ）又は式（ＸＸＩＩ）のものである：
【００５１】
【化５】
2021500412.tif 000006
波形結合は結合点を表し、Ｒ６は、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である。
【００５２】
Ｒ６基のいずれかは、１つ以上の＝Ｏで随意的に置換される。
【００５３】
リガンドは、ＬＤＣ（例えば、抗体薬物複合体）技術において通常使用されるような任意の巨大分子（ポリペプチド、タンパク質、ペプチド、典型的には抗体）、又は葉酸若しくはアプタマーのような小分子をいい、バイオ複合体技術を使用して、本研究の合成リンカー又は薬物リンカーと共有結合されてもよい（Greg T. Hermanson, Bioconjugate Techniques, 3rd Edition, 2013, Academic Pressを参照）。リガンドは、伝統的に、その標的指向化能力のために選択される化合物である。リガンドの非網羅的なリストは、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、完全長抗体及びその抗原結合断片、インターフェロン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、ビタミン、トランスフェリン、又は任意の他の細胞結合分子若しくは物質を含む。複合体を調製するために使用されるリガンドの主な分類は抗体である。本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、改変モノクローナル抗体及び改変ポリクローナル抗体、単一特異性抗体、二重特異性抗体等の多特異性抗体、抗体断片、並びに抗体模倣物（Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）、Ａｆｆｉｌｉｎ（登録商標）、Ａｆｆｉｍｅｒ（登録商標）、Ｎａｎｏｆｉｔｉｎ（登録商標）、Ｃｅｌｌ  Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  Ａｌｐｈａｂｏｄｙ（登録商標）、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標）、Ａｖｉｍｅｒ（登録商標）、Ｆｙｎｏｍｅｒ（登録商標）、Ｍｏｎｏｂｏｄｉｅｓ又はｎａｎｏＣＬＡＭＰ（登録商標））。抗体の例は、トラスツズマブである。タンパク質の例は、ヒト血清アルブミンである。
【００５４】
本明細書中で言及される場合、用語「抗体」は、全抗体及び任意の抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）、又はその単鎖を含む。
【００５５】
天然に生じる「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書中ではＶＨと略される）と重鎖定常領域とから構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書中ではＶＬと略される）と軽鎖定常領域とから構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬで構成される。ＶＨ及びＶＬ領域はさらに、フレームワーク領域（ＦＲ）と名付けられたより保存された領域が点在している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と名付けられた超可変領域に細分化されることができる。各ＶＨ及びＶＬは、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配列された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の構成要素（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介してもよい。
【００５６】
抗体の用語「抗原結合部分」（又は、単に「抗原部分」）は、本明細書中で使用される場合、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の完全長又は１つ以上の断片をいう。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって実施され得ることが示されている。抗体の用語「抗原結合部分」に包含される結合断片の例は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインから成る一価の断片である、Ｆａｂ断片；ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片である、Ｆ（ａｂ）２断片；ＶＨ及びＣＨ１ドメインから成るＦｄ断片；抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインから成るＦｖ断片；ＶＨドメインから成るｄＡｂ断片（Ward et al., 1989 Nature 341:544-546）；及び単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、又はそのような抗原結合部分を含む任意の融合タンパク質を含む。
【００５７】
さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、それらは、一本鎖タンパク質として作製されることを可能にする合成リンカーによって、組換え方法を使用して連結され得、当該一本鎖タンパク質において、ＶＬ及びＶＨ領域が対になって一価の分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知である；例えば、Bird et al., 1988 Science 242:423−426；及びHuston et al., 1988 Proc Natl Acad. Sci. 85:5879-5883を参照のこと）を形成する。そのような一本鎖抗体もまた、抗体の用語「抗原結合部分」に包含されることが意図される。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来の技術を使用して得られ、そして断片は、完全な抗体であるのと同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。
【００５８】
特定の実施形態において、ＬＤＣのリガンドは、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体である。
【００５９】
用語「ヒト抗体」は、本明細書中で使用される場合、フレームワーク領域及びＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことが意図される。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域もまた、そのようなヒト配列、例えばヒト生殖系列配列、又はヒト生殖系列配列の変異体版、又はヒトフレームワーク配列分析（例えば、Ｋｎａｐｐｉｋら（2000. J Mol Biol 296, 57−86）に記載）に由来するコンセンサスフレームワーク配列を含む抗体に由来する。
【００６０】
ヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのランダム若しくは部位特異的な突然変異によって、又はｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞突然変異によって、導入された突然変異）を含んでいてもよい。しかしながら、用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、マウス等の別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植された抗体を含むことを意図しない。
【００６１】
用語「ヒトモノクローナル抗体」は、フレームワーク領域及びＣＤＲ領域の両方がヒト配列に由来する可変領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体をいう。
【００６２】
本明細書中で使用される場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によって提供される抗体クラス（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４等のＩｇＧ）をいう。
【００６３】
語句「抗原を認識する抗体」及び語句「抗原に特異的な抗体」は、用語「抗原に特異的に結合する抗体」と、本明細書において、言い換え可能に使用される。
【００６４】
切断可能な基（Ｘ）（「放出可能なアセンブリユニット」とも呼ばれる）は、薬物ユニットをリガンド−薬物−複合体の残りの部分に連結する。切断可能な基の機能は、リガンドが標的とする部位で薬物を放出することである。このユニットは、従って、例えば酵素処理又はジスルフィド除去機構による薬物ユニット放出のための、切断可能な結合を形成することができる。酵素処理のための認識部位は通常、ジペプチド切断部位（例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、又はＰｈｅ−Ｌｙｓ）、又は糖切断部位（例えば、グルクロニド切断部位）である。例えば、切断可能な基は、グルクロニド基である。この技術は当業者に周知であり、そして彼の知識から、彼はＬＤＣ（例えば、ＡＤＣ）化合物の薬物に適切な切断可能な基を選択することができる。例えば、切断可能な基は、ジスルフィド交換によって切断可能なジスルフィド含有リンカー、酸性ｐＨで切断可能な酸に不安定なリンカー、及び加水分解酵素（例えば、ペプチダーゼ、エステラーゼ、及びグルクロニダーゼ）によって切断可能なリンカーを含む。切断可能な基は、以下から選択された形態であり得る：
−  １つ以上の天然又は非天然のアミノ酸、例えば、２〜１２個のアミノ酸を含む切断可能なペプチド、
−  酸素グリコシド結合を介して自壊性基に連結した糖部分、
−  ジスルフィドリンカー、及び
−  リソソーム中で加水分解可能な、酸に不安定なリンカー。
【００６５】
有利には、切断可能な基は、以下から選択された形態であり得る：
−  １つ以上の天然又は非天然のアミノ酸、例えば、２〜１２個のアミノ酸を含む切断可能なペプチド、及び
−  酸素グリコシド結合を介して自壊性基に連結した糖部分。
【００６６】
糖部分が使用されるとき、自壊性基は、切断可能な基の一部であると考えられる。「自壊性基」は、三官能性の化学部分であり、当該三官能性の化学部分は、３つの離間した化学部分、すなわち糖部分（グリコシド結合を介して）、薬物Ｄ（スペーサＺを介して直接的又は間接的に）、及び直交コネクタＬ（スペーサＺを介して直接的又は間接的に）を一緒に共有結合的に連結することができる。グリコシド結合は、薬物の放出をもたらす自壊反応配列を開始するために標的部位で切断され得るものであり得る。
【００６７】
ジスルフィドリンカーが使用されるとき、切断は、ジスルフィドの２つの硫黄原子の間で起こる。種々のジスルフィドリンカーが当技術分野で公知であり、本開示における使用に適合させることができ、例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート）、ＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジル−オキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）、及びＳＰＰ（Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート）を使用して形成され得るものを含む。例えば、米国特許第４，８８０，９３５号を参照されたい。
【００６８】
いくつかの実施形態において、切断可能なユニットは、ｐＨ感応性であり、例えば、リソソーム中で加水分解可能な酸に不安定なリンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シス−アコニットアミド（cis-aconitic amide）、オルトエステル、アセタール、又はケタール基）を含み得るものが使用され得る（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号；第５，８２４，８０５号；第５，６２２，９２９号を参照のこと）。そのようなリンカーは、中性のｐＨ条件（例えば、血液中のｐＨ条件）の下で比較的安定であるが、ｐＨ５．５又は５．０（リソソームの凡そのｐＨ）では不安定である。
【００６９】
リガンド薬物複合体（ＬＤＣ）は、上で規定したようなリガンド及び薬物に結合し、上で規定したような任意の平均値（mean）を含み、本明細書の実施例において説明される、任意の複合体を指す。リガンドが抗体であるとき、本開示の好ましい実施形態である抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を指してもよい。
【００７０】
結合可能な基は、官能化反応性基と反応して共有結合を形成することができる基をいう。結合可能な基は、従って、所定の反応条件において官能化反応性基と反応する反応性基を含む。具体的には、結合可能な基は、以下の基のうちの１つを含むことができる：カルボン酸；一級アミン；二級アミン；三級アミン；ヒドロキシル；ハロゲン；Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ペルフルオロエステル、ニトロフェニルエステル、アザ−ベンゾトリアゾール及びベンゾトリアゾール活性化エステル、アシル尿素等の活性化エステル；アルキニル；アルケニル；アジド；イソシアネート；イソチオシアネート；アルデヒド；マレイミド、ハロマレイミド、ハロアセチル、ピリジルジスルフィド等のチオール反応性部分；チオール；アクリレート；メシレート；トシレート；トリフラート、ヒドロキシルアミン；クロロスルホニル；ボロン酸−Ｂ（ＯＲ’）２誘導体（ここで、Ｒ’は水素又はアルキル基である）。
【００７１】
薬物は、任意の種類の薬物又は化合物、例えば、細胞傷害性、細胞増殖抑制性、免疫抑制性、抗炎症性若しくは抗感染性の化合物をいう。細胞傷害性化合物のうち、カリケアマイシン；ウンシアラマイシン；アウリスタチン（ＭＭＡＥとして公知のモノメチルアウリスタチンＥ等）；チューブリシン類似体；メイタンシン；クリプトフィジン；ベンゾジアゼピン二量体（ＰＤＢ’ｓとして公知の、ピロール［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを含む）；インドリノベンゾジアゼピン疑似二量体（ＩＧＮｓ）；デュオカルマイシン；アンスラサイクリン（ドキソルビシン又はＰＮＵ１５９６８２等）；カンプトテシン類似体（ＳＮ３８又はエキサテカンとして公知の７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン等）；Ｂｃｌ２及びＢｃｌ−ｘｌ阻害剤；タイランスタチン；アマトキシン（α−アマニチンを含む）；キネシン紡錘体タンパク質（ＫＳＰ）阻害剤；ビノレルビン；サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）阻害剤；ブレオマイシン；ダクチノマイシン又は放射性核種及びそれらの錯化剤（ＤＯＴＡ／１７７Ｌｕ等）を挙げることができる。抗炎症薬のうち、デキサメタゾン又はフルチカゾン等のコルチコステロイドを挙げることができる。抗感染症薬のうち、リファンピシン又はバンコマイシン等の抗生物質を挙げることができる。
【００７２】
次に、本発明をより詳細に説明する。それはポリサルコシンホモポリマーの単一分子量に関してより具体的に記載されるが、その範囲は、前記式（Ｉ）内に包含される任意の単一分子量に及ぶことが認められるべきである。さらに、本発明の利益は、ＬＤＣ技術において具体的に証明される。もちろん、その利点は、そのような技術に限定されず、単一分子量の、生体適合性の、生分解性のホモポリマーが必要とされるあらゆる領域において、同様の又はより良好な性能を示すことができる。
【００７３】
従って、本発明は、より詳細には、式（ＩＩ）を有するサルコシンの単一分子量ホモポリマーに関する：
【００７４】
【化６】
2021500412.tif 000007
（式中、Ｒ１とＲ２とは異なり、
Ｒ１及びＲ２の一方はＨ又は不活性基であり、Ｒ１及びＲ２の他方は官能化反応性基であり、当該基は、前記不活性基が反応しない反応条件において、結合可能な基と共有結合するために反応性であり、
Ｚ１及びＺ２は、同一に又は別々に、任意のスペーサであり、
ｋは２以上である）。
【００７５】
式（Ｉ）のホモポリマー、特に式（ＩＩ）のホモポリマーのさらなる特徴は、単独又は任意の組み合わせで、以下に与えられる。
【００７６】
ｋは少なくとも２である整数であり、好ましくは最大でも１００であり、より好ましくは最大でも５０であり、具体的には２〜３０、より具体的には２〜２４、６〜２４、又は１２〜２４である。
【００７７】
式（Ｉ）又は式（ＩＩ）のいずれかにおいて、前記官能化反応性基Ｒ１又はＲ２は、以下の群から選択されてもよい：
−  カルボン酸基、
−  アミノ基ＮＲＲ''
（ここで、Ｒ及びＲ''は、独立して、Ｈと、Ｏ、Ｎ及びＳの中から選択される少なくとも１つのヘテロ原子によって随意的に割り込まれた（Ｃ１−Ｃ６）アルキルとから選択される）、
−  水酸基、
−  ハロゲン原子、
−  ヒドラジン（−ＮＨ２−ＮＨ２）基、
−  ニトロ基、
−  ヒドロキシルアミン基、
−  アジド基、
−  （Ｃ２−Ｃ６）アルキニル基、
−  （Ｃ２−Ｃ６）アルケニル基、
−  チオール基、
−  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ペルフルオロエステル、ニトロフェニルエステル、アザ−ベンゾトリアゾール及びベンゾトリアゾール活性化エステル、アシル尿素等の活性化エステル基、
−  ボロン酸−Ｂ（ＯＲ''''）２基
（ここで、Ｒ''''は、水素原子又はＣ１−Ｃ６アルキル基である）、
−  マレイミド、ハロマレイミド、ハロアセチル、ピリジルジスルフィド等のチオール反応性基、
−  メシレート基、
−  トシレート基、
−  トリフレート基、
−  アルデヒド基、
−  イソシアネート基又はイソチオシアネート基、
−  クロロスルホニル基、
−  アクリレート基。
【００７８】
上述したように、スペーサＺは任意であり、Ｚ１及びＺ２の両方が存在してもよく、Ｚ１及びＺ２の一方のみが存在してもよく、それらはまた存在しなくてもよい。この後者の場合において、及び本発明のホモポリマーがサルコシンのホモポリマーであるとき、それは式（ＩＩＩ）を有する：
【００７９】
【化７】
2021500412.tif 000008
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びｋは、上で規定した通りである）。
【００８０】
式（Ｉ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）において、Ｒ１はＨ又は不活性基であり、Ｒ２は官能化反応性基であってもよく、或いはＲ１は官能化反応性基であり、Ｒ２はＨ又は不活性基であってもよい。
【００８１】
好ましい実施形態によれば、官能化反応性基Ｒ１又はＲ２は二級アミンであり、不活性基Ｒ１又はＲ２は、未反応のままで最終的なＬＤＣ構造上に結合されないままのカルボン酸である。
【００８２】
好ましい実施形態において、式（Ｉ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）において、Ｒ１はＯＨ及びＮＨ２から選択され、
Ｒ１がＯＨのとき、Ｒ２はＣＯＣＨ３であり、
Ｒ１がＮＨ２のとき、Ｒ２はＣＯ−Ｇ−ＣＯＯＨであり、Ｇは、ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＯＣＨ２、ＣＨ２ＳＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２又はＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２である。
【００８３】
本発明はまた、式（Ｉ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）のいずれかの単一分子量ホモポリマーを調製するための方法に関連する。一般に、各Ｎ−メチルグリシンモノマーは、２つのサブモノマー、すなわちハロ酢酸及びメチルアミン、から固相担体上に組み立てられる。各モノマー付加は、（ｉ）ハロ酢酸及びカルボジイミドを用いた樹脂結合二級アミンのアシル化、又は他の適切なカルボン酸塩活性化方法によるアシル化、（ｉｉ）洗浄ステップ、（ｉｉｉ）メチルアミンを用いた樹脂結合ハロゲンの求核置換、（ｉｖ）洗浄ステップ、のサイクルと呼ばれる。
【００８４】
以下のステップを含む、本発明による方法：
ａ）式（ＩＶ）
【００８５】
【化８】
2021500412.tif 000009
（式中、Ｒ３はペプチド合成固相担体であり、ｍは１以上であり且つｋ未満である）
の化合物を、式（Ｖ）
【００８６】
【化９】
2021500412.tif 000010
（式中、Ｈａｌはハロゲンである）
の酸と反応させて、式（ＶＩ）
【００８７】
【化１０】
2021500412.tif 000011
（式中、Ｒ３、ｍ及びＨａｌは、上で規定した通りである）
の化合物を得ること、
ｂ）前記式（ＶＩ）の化合物をメチルアミンと反応させて、式（ＶＩＩ）
【００８８】
【化１１】
2021500412.tif 000012
（式中、Ｒ３及びｍは、上で規定した通りである）
の化合物を得ること、
ｃ）式（ＶＩＩＩ）
【００８９】
【化１２】
2021500412.tif 000013
（式中、Ｒ３は上で規定され、ｋは上で規定した通りである）
の化合物が得られるまで、ステップａ）及びステップｂ）を繰り返すこと、
ｄ）前記化合物（ＶＩＩＩ）を反応させて、式（ＩＸ）
【００９０】
【化１３】
2021500412.tif 000014
（式中、Ｒ２は不活性基であり、Ｒ３は上で規定され、ｋは上で規定した通りである）
の化合物を得ること、
ｅ）上で規定した式（ＩＩＩ）の単一分子量ホモポリマーを得るための開裂反応。
【００９１】
この方法の実施形態によれば、ステップａ）において、式（ＩＶ）（式中、Ｒ３はペプチド合成固相担体であり、ｍは３である）の化合物を反応させることを含み、前記化合物は、Ｆｍｏｃ−固相ペプチド合成方法によって得られる。それらは当業者に周知であり、彼の知識から、彼は任意の適切なカップリング試薬、例えばＮ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）、を選択することができる。
【００９２】
本発明の方法の代替的な実施形態において、単一分子量ホモポリマーを調製することは、以下のステップを含む：
ａ）式（Ｘ）
【００９３】
【化１４】
2021500412.tif 000015
（式中、Ｒ３はペプチド合成固相であり、ｍは１以上であり、且つｋ未満である）
の化合物を、式（Ｖ）
【００９４】
【化１５】
2021500412.tif 000016
（式中、Ｈａｌはハロゲンである）
の酸と反応させて、式（ＸＩ）
【００９５】
【化１６】
2021500412.tif 000017
（式中、Ｒ３、ｍ及びＨａｌは、上で規定した通りである）
の化合物を得ること、
ｂ）前記式（ＸＩ）の化合物をメチルアミンと反応させて、式（ＸＩＩ）
【００９６】
【化１７】
2021500412.tif 000018
（式中、Ｒ３及びｍは、上で規定した通りである）
の化合物を得ること、
ｃ）式（ＸＩＩＩ）
【００９７】
【化１８】
2021500412.tif 000019
（式中、Ｒ３及びｋは、上で規定した通りである）
の化合物が得られるまで、ステップａ）及びステップｂ）を繰り返すこと、
ｄ）式（ＸＩＶ）
【００９８】
【化１９】
2021500412.tif 000020
（式中、ｋは上で規定した通りである）
の化合物を得るための開裂反応、
ｅ）前記化合物（ＸＩＶ）を、コハク酸無水物、グルタル酸無水物、アジピン酸無水物、ジグリコール酸無水物、チオジグリコール酸無水物、３−メチルグルタル酸無水物、３−３−ジメチルグルタル酸無水物又は４−メチルモルホリン−２，６−ジオンの少なくとも１つと反応させて、上で規定したような式（ＩＩＩ）の単一分子量ホモポリマーを得る。
【００９９】
前述のように、本発明のホモポリマーは、この技術に限定されることなく、ＬＤＣ技術に有用である。
【０１００】
従って、本発明はまた、以下の式（ＸＶ）を有するリガンド−薬物−複合体化合物（ＬＤＣ）に関する：
【０１０１】
【化２０】
2021500412.tif 000021
（式中、Ｌは、（ＨＰＳＭＷ）が（Ｘ−Ｄ）に対して直交の向きにあることを可能にする直交コネクタであり、
ＨＰＳＭＷは、前述のような本発明の単一分子量ホモポリマーの、前記直交コネクタＬへの共有結合から生じ、
Ｄは薬物であり、特に、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）又はＳＮ３８等の細胞傷害性薬物であり、
Ｘは、Ｄを放出するための任意の切断可能な部分であり、
Ｚは任意のスペーサであり、
ａは１以上であり、ｂは１以上であり、且つｍは１以上である）。
【０１０２】
単一分子量ホモポリマー、特に単一分子量ポリサルコシンは、薬物ユニットに対して並列の（すなわち、直交）向きに移植されたとき、並列に移植された単一分子量ホモポリマーを含まないリガンド−薬物−複合体と比較して、複合体の効率的な疎水性マスキング特性、減少した見かけの疎水性、より良好な薬物動態特性、及び改善されたｉｎ  ｖｉｖｏ活性をもたらす。
【０１０３】
代替的な実施形態において、Ｄは、生物活性分子、抗癌剤等の治療用分子、造影剤、及びフルオロフォアから成る群から選択される。
【０１０４】
本発明の代替実施形態によれば、
ａは整数であり、少なくとも１、好ましくは最大でも６、より好ましくは最大でも３、特に２、より特には１である、及び／又は、
ｂは整数であり、少なくとも１、好ましくは最大でも６、より好ましくは最大でも３、特に２、より特には１である、及び／又は、
ｍは整数であり、少なくとも１、好ましくは最大でも３０、より好ましくは最大でも１５、特に８、より特には４である。
【０１０５】
有利には、単一分子量ホモポリマーはポリサルコシンである。
【０１０６】
一実施形態において、Ｌとリガンドとの間、及び／又はＬとＨＰＳＭＷとの間及び／又はＬとＸとの間、及び／又はＸとＤとの間に、スペーサＺがある。
【０１０７】
典型的には、（Ｘ−Ｄ）又は（Ｄ）ユニットがホモポリマーユニットに対して（直列構成ではなく）並列構成になるように、直交コネクタは、１つ以上のリンカーユニット構成要素を介して、放出可能なアセンブリ−薬物ユニット（Ｘ−Ｄ）又は薬物ユニット（Ｄ）を接続する。
【０１０８】
本発明はまた、式（ＸＶＩ）を有する中間体化合物に関連する：
【０１０９】
【化２１】
2021500412.tif 000022
（式中、Ｌは、直交コネクタであり、
ＨＰＳＭＷは、本発明の単一分子量ホモポリマーの、前記直交コネクタＬへの共有結合から生じ、
Ｄは、細胞傷害性薬物であり、
Ｘは、Ｄを放出するための任意の切断可能な部分であり、
Ｚは任意のスペーサであり、当該スペーサはリガンドに結合することができ、
ａは１以上であり、且つｂは０又は１以上である）。
【０１１０】
本開示はまた、式（ＸＸＩＩＩ）を有する化合物に関する：
【０１１１】
【化２２】
2021500412.tif 000023
式中、Ｒ６は、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−ＮＨ−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−ＮＨ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−ＮＨ−、−アリーレン−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−ＮＨ−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−ＮＨ−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−ＮＨ−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０ヘテロアルキレン−Ｓ−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−Ｓ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−）−Ｓ−、−アリーレン−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−Ｓ−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｓ−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｓ−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、
Ｒ６基のいずれかは、−Ｘ、−Ｒ’、−Ｏ−、−ＯＲ’、＝Ｏ、−ＳＲ’、−Ｓ−、−ＮＲ’２、−ＮＲ’３＋、＝ＮＲ’、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ’、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ’）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ’）２、−ＰＯ３−、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’２、及びＣ（＝ＮＲ’）ＮＲ’２から選択される１つ以上の置換基で随意的に置換され、ここで、各Ｘは、独立してハロゲン（−Ｆ、−ＣＩ、−Ｂｒ、又は−Ｉ）であり、各Ｒ’は、独立して−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ６−Ｃ２０アリール、又は−Ｃ３−Ｃ１４複素環であり、
Ｚは、任意のスペーサであり、
Ｌは、直交コネクタであり、
Ｘは、Ｄを放出するための任意の切断可能な部分であり、
Ｄは、細胞傷害性薬物であり、
ａは１以上であり、ｂは０又は１以上であり；
ＨＰＳＭＷは、本発明の単一分子量ホモポリマーの、上で規定したような前記直交コネクタＬへの共有結合から生じる。
【０１１２】
好ましい実施形態によれば、ＨＰＳＭＷは、本発明のポリサルコシンホモポリマーの、前記直交コネクタＬへの共有結合から生じる。この場合、式（ＸＶ）、式（ＸＶＩ）及び式（ＸＸＩＩＩ）において、ＨＰＳＭＷは以下を表す：
【０１１３】
【化２３】
2021500412.tif 000024
（式中、波形結合は、存在する場合には、Ｌ又はスペーサＺへの結合点を表し、
ｋは２以上であり、好ましくは、ｋは２〜５０であり、
Ｒ４はキャッピング基を表す）。
【０１１４】
有利には、Ｒ４が−Ｒ’、−Ｏ−、−ＯＲ’、−ＳＲ’、−Ｓ−、−ＮＲ’２、−ＮＲ’３＋、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ’、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ’）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ’）２、−ＰＯ３−、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’２、又はＣ（＝ＮＲ’）ＮＲ’２を表し、ここで、各Ｘは独立してハロゲン：−Ｆ、−ＣＩ、−Ｂｒ、又は−Ｉであり、各Ｒ’は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ６−Ｃ２０アリール、又は−Ｃ３−Ｃ１４複素環である。典型的には、Ｒ４は、−ＯＲ’、−ＮＲ’２、又は−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’である。
【０１１５】
一実施形態において、本開示はまた、以下の式（ＸＶ）を有するリガンド−薬物−複合体化合物（ＬＤＣ）に関する：
【０１１６】
【化２４】
2021500412.tif 000025
式中、リガンドは抗体であり、
Ｌは、ＨＰＳＭＷが（Ｘ−Ｄ）に対して直交の向きにあることを可能にする直交コネクタであり、天然又は非天然のアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、ポリアミン、及びそれらの組み合わせから選択され、
ＨＰＳＭＷは、以下を表し、
【０１１７】
【化２５】
2021500412.tif 000026
（式中、波形結合は、存在する場合には、Ｌ又はスペーサＺへの結合点を表し、
ｋは２以上であり、好ましくは、ｋは２〜５０であり、
Ｒ４はキャッピング基を表す）、
Ｄは、薬物であり、特に、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）又はＳＮ３８等の細胞傷害性薬物であり、
Ｘは、Ｄを放出するための任意の切断可能な部分であり、
・  １つ以上の天然又は非天然のアミノ酸、例えば、２〜１２個のアミノ酸を含む、切断可能なペプチド、
・  酸素グリコシド結合を介して自壊性基に結合した糖部分、
・  ジスルフィドリンカー、及び
・  リソソーム中で加水分解可能な、酸に不安定なリンカー
から選択された形態であり、
Ｚは任意のスペーサであり、ＬとＸとの間、及び／又はＸとＤとの間、及び／又はＬとＨＰＳＭＷとの間、に存在することができ、アルキレン、ヘテロアルキレン；アルコキシ；ポリエーテル；１つ以上の天然又は非天然のアミノ酸；Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ；Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ；アリーレン、及びそれらの任意の組み合わせ、から選択され、
ａは１以上であり、ｂは１以上であり、且つｍは１以上である。
【０１１８】
本発明はまた、本発明の少なくとも１つのＬＤＣ化合物及び薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物に関する。
【０１１９】
本開示はまた、薬剤として使用するための、前述のようなＬＤＣ化合物に関する。
【０１２０】
式（ＸＸＩＩＩ）の化合物は、マレイミド部分が、ｉｎ  ｖｉｖｏで、血清アルブミンのようなタンパク質と反応し得て、次いでリガンドとなるので、リガンドなしでそのまま使用することができる。従って、本開示はまた、薬剤として使用するための、前述のような式（ＸＸＩＩＩ）の化合物に関する。
【０１２１】
〔図面の簡単な説明〕
図１は、実施例１２による疎水性相互作用クロマトグラムを表す。
【０１２２】
図２は、実施例１３による疎水性相互作用クロマトグラムを表す。
【０１２３】
図３は、実施例１４によるマウスにおける薬物動態特性を表す。
【０１２４】
図４Ａは、実施例１５による腫瘍体積を時間の関数で表す。図４Ｂは、実施例１５によるマウスの生存率を表す。
【０１２５】
図５は、実施例１６によるマウスにおける薬物動態特性を表す。
【０１２６】
図６は、実施例１７による腫瘍体積を時間の関数で表す。
【０１２７】
〔実施例〕
（材料及び全般的な方法）
全ての溶媒及び試薬は、市販の供給元（Sigma-Aldrich, Alfa Aesar, Fluorochem, Thermo Fisher, Carbosynth）から入手し、特に断らない限り、さらに精製することなく使用した。無水ＤＭＦ及びＤＣＭは、Sigma-Aldrichから購入した。Ｆｍｏｃ−アミノ酸、２−クロロトリチル及びＲｉｎｋアミド樹脂は、Novabiochemから購入した。モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）及び７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＳＮ３８）は、DCChemicalsから購入した。ＰＮＵ１５９６８２は、Kerui Biotechnology Co.Ltd.から購入し、エキサテカンメシレートは、Angene Chemicalから購入した。ヒトアルブミン（ｃａｔ＃  Ａ３７８２）は、Sigma-Aldrichから購入した。抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ２２抗体は、Euromedexから購入した。トラスツズマブ（Herceptin（登録商標））はRocheから購入した。２０μｍポリエチレンフリット（Sigma-Aldrich）を備えた空のＳＰＥプラスチックチューブ中で、樹脂上での合成を行った。Ｔｉｔｒａｍａｘ  １０１プラットフォームシェーカー（Heidolph）を撹拌に用いた。特に断らない限り、全ての化学反応は、不活性アルゴン雰囲気下、室温で行った。
【０１２８】
液体核磁気共鳴スペクトルを、較正のために残留溶媒ピークを使用して、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｆｏｕｒｉｅｒ  ３００ＨＤ分光計で記録した。質量分析は、University Claude Bernard Lyon 1のＵＭＲ５２４６  ＣＮＲＳ研究所のCentre Commun de Spectrometrie de Masse（ＣＣＳＭ）によって行われた。
【０１２９】
順相フラッシュクロマトグラフィーは、Teledyne Isco CombiFlash（登録商標）Companion（登録商標）装置又はTeledyne Isco CombiFlash（登録商標）Rf200装置上で、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ（球状ＨＰ  ５０μｍ）又はＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＺＩＰ（登録商標）（５０μｍ）シリカカートリッジのいずれかを用いて行った。逆相クロマトグラフィーは、Biotage（登録商標）SNAP Ultra C18（２５μｍ）カートリッジ又はInterchim PuriFlash RP-AQ（３０μｍ）カートリッジを用いて行った。化学反応及び化合物の特徴付けは、それぞれ、プレコートされた４０〜６３μｍシリカゲル（Macherey-Nagel）、ＨＰＬＣ−ＵＶ（Agilent 1050）又はＵＨＰＬＣ−ＵＶ／ＭＳ（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｉｍｐａｃｔ  ＩＩ（商標）Ｑ−ＴｏＦ質量分析計を備えたＴｈｅｒｍｏ  ＵｌｔｉＭａｔｅ  ３０００  ＵＨＰＬＣシステム、又はＢｒｕｋｅｒ  ＭｉｃｒＯＴＯＦ−ＱＩＩ質量分析計を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２６０  ＨＰＬＣシステム）を用いた薄層クロマトグラフィーによってモニターし、分析した。
【０１３０】
ＨＰＬＣ法１：ＤＡＤ検出を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １０５０。移動相Ａは水であり、移動相Ｂはアセトニトリルであった。カラムは、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ａｑ  ４．６×１５０ｍｍ  ５μｍ（室温）であった。勾配は２０分で５％Ｂ〜９５％Ｂであり、続いて９５％Ｂで５分間保持した。流速は１．５ｍＬ／分であった。ＵＶ検出を２１４ｎｍでモニターした。
【０１３１】
ＨＰＬＣ方法２：ＤＡＤ検出を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １０５０。移動相Ａは水であり、移動相Ｂはアセトニトリルであった。カラムは、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ａｑ  ４．６×１５０ｍｍ  ５μｍ（室温）であった。勾配は３０分で０％Ｂ〜５０％Ｂであり、続いて５０％Ｂで５分間保持した。流速は１．０ｍＬ／分であった。ＵＶ検出を２１４ｎｍでモニターした。
【０１３２】
ＨＰＬＣ法３：ＨＰＬＣ法１と同じであるが、移動相Ａ中に０．１％のＴＦＡを含有する。
【０１３３】
ＨＰＬＣ法４：ＨＰＬＣ法２と同じであるが、移動相Ａ中に０．１％のＴＦＡを含有する。
【０１３４】
ＵＨＰＬＣ方法５：Ｔｈｅｒｍｏ  ＵｌｔｉＭａｔｅ  ３０００  ＵＨＰＬＣシステム＋Ｂｒｕｋｅｒ  ｉｍｐａｃｔ  ＩＩ（商標）Ｑ−ＴｏＦ質量分析計。移動相Ａは水＋０．１％ギ酸であり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．１％ギ酸であった。カラムは、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＰＬＲＰ−Ｓ  １０００Å  ２．１×１５０ｍｍ  ８μｍ（８０℃）であった。勾配は２５分で１０％Ｂ〜５０％Ｂであった。流速は０．４ｍＬ／分であった。ＵＶ検出を２８０ｎｍでモニターした。Ｑ−ＴｏＦ質量分析計を、ｍ／ｚ範囲５００〜３５００（ＥＳＩ＋）で使用した。Ｂｒｕｋｅｒ  Ｃｏｍｐａｓｓ（登録商標）ソフトウェアに含まれるＭａｘＥｎｔアルゴリズムを用いてデータをデコンボリュートした。
【０１３５】
ＨＰＬＣ方法６：ＤＡＤ検出を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １０５０。移動相Ａは水＋５ｍＭギ酸アンモニウムであり、移動相Ｂはアセトニトリルであった。カラムは、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  １２０ＥＣ−Ｃ１８  ３．０×５０ｍｍ  ２．７μｍ（室温）であった。勾配は１０分間で５％Ｂ〜９０％Ｂであり、続いて９０％Ｂで２分間保持した。流速は０．８ｍＬ／分であった。ＵＶ検出を２１４ｎｍでモニターした。
【０１３６】
以下の実施例１〜４は、本発明の単一分子量ポリサルコシンの合成を例示し、この合成は、種々の固相合成方法を含む本発明の一部である。
【０１３７】
実施例１：ポリサルコシン化合物の合成（樹脂上合成法１）
反応スキームを以下に記載する。
【０１３８】
【数１】
2021500412.tif 000027
【０１３９】
１．１）全般的な方法
２０μｍポリエチレンフリット（Sigma-Aldrich）を備えた空のＳＰＥプラスチックチューブ中で樹脂上合成を行った。Ｔｉｔｒａｍａｘ  １０１プラットフォームシェーカー（Heidolph）を撹拌に用いた。報告された全ての合成収率は、０．６３ｍｍｏｌ／ｇ（製造業者によって示された標識の程度）の最初の理論上の樹脂ローディングに基づく。特に明記しない限り、全ての反応は室温で行った。
【０１４０】
１．２）樹脂ローディング
典型的には、５００ｍｇのＮｏｖａＧＥＬ（商標）Ｒｉｎｋアミドビーズ（０．６３ｍｍｏｌ／ｇ、Novabiochem）を５ｍＬのＤＭＦ中で１５分間膨潤させた。最初のモノマーは、１０当量ブロモ酢酸と１３当量のジイソプロピルカルボジイミド（Sigma-Aldrich）を５ｍＬのＤＭＦ中において室温で６０分間反応させて加えた後、ＤＭＦで十分に洗浄した（５回５ｍＬ）。ブロモアセチル化された樹脂を、シェーカープラットフォーム上で、４０％（ｗｔ）メチルアミン水溶液（Sigma-Aldrich）５ｍＬと共に３０分間インキュベートし、続いてＤＭＦ（５回５ｍＬ）及びＤＣＭ（５回５ｍＬ）で十分に洗浄した。得られた樹脂は、伸長の準備ができていた。
【０１４１】
１．３）ポリサルコシン化合物の伸長
所望の長さが得られるまで、ブロモアセチル化工程とアミン置換段階工程とを交互に行うことにより、ポリサルコシンオリゴマーの伸長を行った。ブロモアセチル化工程は、５ｍＬのＤＭＦ中に１０当量のブロモ酢酸及び１３当量のジイソプロピルカルボジイミドを加えることによって行った。混合物を３０分間撹拌し、排水し、ＤＭＦ（４回５ｍＬ）で洗浄した。アミン置換工程のために、４０％（重量）メチルアミン（Sigma-Aldrich）水溶液５ｍＬを加え、容器を３０分間振盪し、排出し、ＤＭＦ（４回５ｍＬ）及びＤＣＭ（４回５ｍＬ）で洗浄した。
【０１４２】
１．４）樹脂からの切断
ポリサルコシンオリゴマーの切断は、５ｍＬのＴＦＡ／トリイソプロピルシラン（９５：５）溶液を用いて、室温において撹拌下で行った。樹脂を濾過し、得られた溶液を減圧下で蒸発させて、油状透明物質を得た。
【０１４３】
この段階で、ＰＳＡＲｎ−Ｎ（ＣＨ３）Ｈを精製のために水中に溶解するか（下記参照）、又は最終的な官能基化に関与させた。
【０１４４】
１．５）最終的な官能基化
ＰＳＡＲｎ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ化合物を得るために、オリゴマーのＮ端末を、無水アセトニトリル中の、２．５当量の無水コハク酸及び１０当量のＤＩＰＥＡを用いて官能化した。混合物を室温で１時間撹拌し、揮発性物質を減圧下で除去した。
【０１４５】
１．６）精製
ＰＳＡＲ化合物を、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ（登録商標）ＲＰ−ＡＱ（３０μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．０５％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡであった。勾配は０〜３０％Ｂの範囲であった。
【０１４６】
１．７）単一分子量ポリサルコシン化合物
以下の表１に、得られたＰＳＡＲ化合物を列挙する。
【０１４７】
【表１】
2021500412.tif 000028
実施例２：ポリサルコシン化合物の合成（樹脂上合成法２）
反応スキームを以下に記載する。
【０１４８】
【数２】
2021500412.tif 000029
【０１４９】
２．１）全般的な方法
２０μｍポリエチレンフリット（Sigma-Aldrich）を備えた空のＳＰＥプラスチックチューブ中で樹脂上合成を行った。Ｔｉｔｒａｍａｘ  １０１プラットフォームシェーカー（Heidolph）を撹拌に使用した。報告された全ての合成収率は、１．１ｍｍｏｌ／ｇ（製造業者によって示される標識の程度）の最初の樹脂ローディングに基づく。特に明記しない限り、全ての反応は室温で行った。
【０１５０】
２．２）Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−Ｓａｒ−ＯＨの合成
【０１５１】
【数３】
2021500412.tif 000030
【０１５２】
２．２．１）Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−Ｓａｒ−ＯｔＢｕの合成
Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ（２０００ｍｇ／６．４２ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２４４３ｍｇ／６．４２ｍｍｏｌ）を丸底フラスコ中の無水ＤＭＦ２８ｍＬに溶解した。ＤＩＰＥＡ（２４９１ｍｇ／１９．２７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３分間撹拌した。次いで、塩酸サルコシンtert−ブチルエステル（１１６７ｍｇ／６．４２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で９０分間撹拌した。揮発性物質を真空下で除去し、残渣を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させて、固形の粗生成物を得た。粗生成物をＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ８０：２０（ｖ／ｖ）に溶解し、白色不溶性物質を濾過により除去した。濾液をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、勾配６０：４０〜２０：８０）により精製して、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−Ｓａｒ−ＯｔＢｕ（２３１０ｍｇ／８２％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３９．２２２７；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３９．２２３４；Ｅｒｒｏｒ＝−１．５ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法１保持時間＝１３．３分。１００％ＥｔＯＡｃで溶出したＴＬＣ：Ｒｆ＝０．８。
【０１５３】
２．２．２）tert−ブチルエステル除去
Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−Ｓａｒ−ＯｔＢｕ（２３１０ｍｇ／５．２７ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＤＣＭに溶解し、８．５ｍＬのＴＦＡをゆっくりと加えた。水溶液を、完全なtert−ブチルエステル脱保護がＨＰＬＣによって観察されるまで（約２時間）、室温で撹拌した。次いで、揮発性物質を真空下で除去し、残渣をジエチルエーテルと共に粉砕して、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−Ｓａｒ−ＯＨ（１６９０ｍｇ／８４％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、１００℃）δ（ｐｐｍ）２．８４（ｓ、３Ｈ）、２．９３（ｓ、３Ｈ）、４．０１（ｓ、２Ｈ）、４．０５（ｓ、２Ｈ）、４．２５（ｔ、Ｊ＝４．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．３４（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．３３（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．４１（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．６３（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．８５（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）。ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８３．１６０１；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８３．１６０２；Ｅｒｒｏｒ＝０．０ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法１保持時間＝６．２分。ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ８５：１５（ｖ／ｖ）で溶出したＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６５。
【０１５４】
２．３）樹脂ローディング
典型的には、１０００ｍｇの２−クロロトリチルクロライド樹脂ビーズ（１００〜２００メッシュ、１％ＤＶＢ、１．１ｍｍｏｌ／ｇ、Novabiochem）を１０ｍＬのＤＣＭ中で１０分間膨潤させた。予め乾燥ＤＣＭ１０ｍ中に溶解したＦｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ（１．２当量）を樹脂上に加えた。ＤＩＰＥＡ（５当量）を加え、反応容器を室温で２時間撹拌した。排出後、樹脂をＤＣＭ（３回）、ＤＭＦ（２回）、ＤＣＭ（３回）、及びＭｅＯＨ（２回）で洗浄した。樹脂を高真空下で一晩乾燥させた。置換レベルを、樹脂の重量増加及び／又はＦｍｏｃ切断試験（３０１ｎｍでの吸光度測定）から評価し、準定量的（通常、０．９５〜１．１ｍｍｏｌ／ｇ）であることが見出された。樹脂はさらに使用するまで−２０℃で保存した。
【０１５５】
２．４）Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−Ｓａｒ−ＯＨカップリング法
樹脂をＤＭＦ中、２０％ピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）で、室温で１５分間、２回処理した。次いで、樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。樹脂にＤＭＦ中、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−Ｓａｒ−ＯＨ（３当量）、ＨＡＴＵ（２．８５当量）、及びＤＩＰＥＡ（６当量）の溶液を加えた（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）。反応容器を２時間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（５回）及びＤＣＭ（５回）で十分に洗浄した。樹脂を真空下で乾燥させ、さらに使用するまで−２０℃で保存した。
【０１５６】
２．５）ポリサルコシン化合物の伸長
樹脂をＤＭＦ中、２０％ピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）で、室温で１５分間、２回処理した。次いで、樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。
【０１５７】
所望の長さが得られるまで、ブロモアセチル化工程とアミン置換工程とを交互に行うことにより、ポリサルコシンオリゴマーの伸長を行った。ブロモアセチル化工程は、１０当量のブロモ酢酸及び１３当量のジイソプロピルカルボジイミドをＤＭＦ（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）中に添加することによって行った。混合物を３０分間撹拌し、排出し、ＤＭＦで洗浄した（４回）。アミン置換工程のために、４０％（重量）メチルアミン水溶液を加え（樹脂１００ｍｇ当たり１．５ｍＬ）、容器を３０分間振盪し、排出し、ＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。
【０１５８】
２．６）最終的なアセチル化
所望のオリゴマーの長さが得られたときに、無水酢酸／ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦ（１：２：３ｖ／ｖ）から成るキャッピング溶液を用いてＮ端末をアセチル化した（容器を３０分間振盪した）。溶液を排出し、新しいキャッピング溶液で反応を１回繰り返した。樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。
【０１５９】
２．７）樹脂切断
樹脂からのポリサルコシンオリゴマーの切断は、ＨＦＩＰ／ＤＣＭ（２０：８０ｖ／ｖ）溶液を用いて３０分間撹拌下で行った。樹脂を濾過し、揮発性物質を減圧下で除去して、固体の粗生成物を得た。
【０１６０】
２．８）精製
ＰＳＡＲ化合物を、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ（登録商標）ＲＰ−ＡＱ（３０μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．１％ＴＦＡであった。
【０１６１】
２．９）単一分子量ポリサルコシン化合物
以下の表２に、得られたＰＳＡＲ化合物を列挙する。
【０１６２】
【表２】
2021500412.tif 000031
実施例３：１つ又はいくつかのアジド官能化直交コネクタを有するポリサルコシン化合物の合成（樹脂上合成法３）
反応スキームを以下に記載する。
【０１６３】
【数４】
2021500412.tif 000032
【０１６４】
３．１）全般的な方法
２０μｍポリエチレンフリット（Sigma-Aldrich）を備えた空のＳＰＥプラスチックチューブ中で樹脂上合成を行った。Ｔｉｔｒａｍａｘ  １０１プラットフォームシェーカー（Heidolph）を撹拌に使用した。報告された全ての合成収率は、１．１ｍｍｏｌ／ｇ（製造業者によって示される標識の程度）の最初の樹脂ローディングに基づく。特に明記しない限り、全ての反応は室温で行った。出発物質を前記実施例２に記載したようにして得た。
【０１６５】
３．２）工程（１）
ＤＭＦ中の３Ｍの２−アジドエタン−１−アミン溶液を加え（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）、容器を４５分間振盪し、排出し、ＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。
【０１６６】
３．３）工程（２）
樹脂に、ＤＭＦ中、市販の２−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］酢酸（５当量）、ＣＯＭＵ（４．９当量）、及びＤＩＰＥＡ（４．９当量）の溶液を加えた（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）。反応容器を９０分間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（３回）及びＤＣＭ（３回）で洗浄した。
【０１６７】
３．４）工程（３）
樹脂からの目的の化合物の切断を、ＤＣＭ（ｖ／ｖ）溶液中の１％ＴＦＡを用いて、撹拌下で５分間行った（２回繰り返した）。樹脂を濾過し、揮発性物質を減圧下で除去して固体粗生成物を得て、これを前記実施例２に記載のプロトコルを用いて精製した。
【０１６８】
３．５）工程（４）
ブロモアセチル化工程は、１０当量のブロモ酢酸及び１３当量のジイソプロピルカルボジイミドをＤＭＦ（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）中に加えることによって行った。混合物を３０分間撹拌し、排出し、ＤＭＦで洗浄した（４回）。アミン置換工程のために、３０％（ｗｔ）アンモニア水溶液を添加し（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）、容器を３０分間振盪し、排出し、ＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。この段階で、化合物を樹脂から切断し（工程（３）に記載のように）、前記実施例２に記載のプロトコルを用いて精製した。
【０１６９】
３．６）工程（５）
最終的なブロモアセチル化工程は、ＤＭＦ中、１０当量のブロモ酢酸及び１３当量のジイソプロピルカルボジイミドを加えることによって行った（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）。混合物を３０分間撹拌し、排出し、ＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。この段階で、化合物を樹脂から切断し（工程（３）に記載のように）、前記実施例２に記載のプロトコルを用いて精製した。
【０１７０】
３．７）工程（６）
ブロモアセチル化工程は、１０当量のブロモ酢酸及び１３当量のジイソプロピルカルボジイミドをＤＭＦ（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）中に加えることによって行った。混合物を３０分間撹拌し、排出し、ＤＭＦで洗浄した（４回）。アミン置換工程のために、４０％（重量）メチルアミン水溶液を加え（樹脂１００ｍｇ当たり１．５ｍＬ）、容器を３０分間振盪し、排出し、ＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。
【０１７１】
３．８）工程（７）
ブロモアセチル化工程は、ＤＭＦ中、１０当量のブロモ酢酸及び１３当量のジイソプロピルカルボジイミドを加えることによって行った（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）。混合物を３０分間撹拌し、排出し、ＤＭＦで洗浄した（４回）。アミン置換工程のために、ＤＭＦ中、３Ｍの２−アジドエタン−１−アミン溶液を加え（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）、容器を４５分間振盪し、排出し、ＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。
【０１７２】
３．９）工程（８）
樹脂に、ＤＭＦ中、市販の２−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］酢酸（５当量）、ＣＯＭＵ（４．９当量）、及びＤＩＰＥＡ（４．９当量）の溶液を加えた（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）。反応容器を９０分間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（３回）及びＤＣＭ（３回）で洗浄した。この段階で、化合物を樹脂から切断し（工程（３）に記載のように）、前記実施例２に記載のプロトコルを用いて精製した。
【０１７３】
３．１０）単一分子量ポリサルコシン化合物
以下の表３に、得られたＰＳＡＲ化合物を列挙する。
【０１７４】
【表３】
2021500412.tif 000033
実施例４：末端非直交アジド官能化コネクタを有するポリサルコシン化合物の合成（樹脂上合成方法４）
反応スキームを以下に記載する。
【０１７５】
【数５】
2021500412.tif 000034
【０１７６】
４．１）全般的な方法
２０μｍポリエチレンフリット（Sigma-Aldrich）を備えた空のＳＰＥプラスチックチューブ中で樹脂上合成を行った。Ｔｉｔｒａｍａｘ  １０１プラットフォームシェーカー（Heidolph）を撹拌に使用した。報告された全ての合成収率は、０．４７ｍｍｏｌ／ｇ（製造業者によって示された標識の程度）の最初の理論樹脂ローディングに基づく。特に明記しない限り、全ての反応は室温で行った。
【０１７７】
４．２）樹脂ローディング
典型的には、５００ｍｇのＲａｍａｇｅ  ＣｈｅｍＭａｔｒｉｘ（登録商標）ビーズ（０．４７ｍｍｏｌ／ｇ、Sigma-Aldrich）を５ｍＬのＤＣＭ中で１５分間膨潤させた。樹脂をＤＭＦ中、２０％ピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）で、室温で１５分間２回処理した。次いで、樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。樹脂に、ＤＭＦ中、Ｆｍｏｃ−Ｌ−γ−アジドホモアラニンＯＨ（３当量）、ＨＡＴＵ（２．９当量）、及びＤＩＰＥＡ（６当量）の溶液を加えた（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍｌ）。反応容器を１．５時間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（５回）及びＤＣＭ（５回）で十分に洗浄した。未反応部位を、無水酢酸／ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦ（１：２：３ｖ／ｖ）から成るキャッピング溶液を用いてアセチル化した（容器を３０分間振盪した）。溶液を排出し、樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。樹脂をＤＭＦ中、２０％ピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）で、室温で１５分間２回処理した。次いで、樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。
【０１７８】
４．３）Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−Ｓａｒ−ＯＨカップリング法
樹脂にＤＭＦ中、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−Ｓａｒ−ＯＨ（４当量）、ＨＡＴＵ（３．９当量）、及びＤＩＰＥＡ（８当量）の溶液を加えた（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍｌ）。反応容器を２時間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で十分に洗浄した。樹脂をＤＭＦ中、２０％ピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）で、室温で１５分間２回処理した。次いで、樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。
【０１７９】
４．４）ポリサルコシン化合物の伸長
所望の長さが得られるまで、ブロモアセチル化工程とアミン置換工程とを交互に行うことにより、ポリサルコシンオリゴマーの伸長を行った。ブロモアセチル化工程は、ＤＭＦ中、１０当量のブロモ酢酸及び１３当量のジイソプロピルカルボジイミドを加えることによって行った（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）。混合物を３０分間撹拌し、排出し、ＤＭＦで洗浄した（４回）。アミン置換工程のために、水溶液中４０％（重量）メチルアミンを添加し（樹脂１００ｍｇ当たり１．５ｍＬ）、容器を３０分間振盪し、排出し、ＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。
【０１８０】
４．５）工程（６）
樹脂に、ＤＭＦ中、市販の２−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］酢酸（５当量）、ＣＯＭＵ（４．９当量）及びＤＩＰＥＡ（４．９当量）の溶液を加えた（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）。反応容器を９０分間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（３回）及びＤＣＭ（３回）で洗浄した。
【０１８１】
４．５）樹脂からの切断及び精製
樹脂からのオリゴマーの切断は、５ｍＬのＴＦＡ／ＤＣＭ（５０：５０）溶液を用いて、室温、撹拌下で３０分間行った。この工程を１回繰り返し、プールした濾液を減圧下で蒸発させて固体粗生成物を得て、これを前記実施例２に記載したように精製した。
【０１８２】
４．６）単一分子量ポリサルコシン化合物
以下の表４に、得られたＰＳＡＲ化合物を列挙する。
【０１８３】
【表４】
2021500412.tif 000035
実施例５：アジド官能化直交コネクタを有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）化合物の合成（樹脂上合成方法５）
反応スキームを以下に記載する。
【０１８４】
【数６】
2021500412.tif 000036
【０１８５】
５．１）全般的な方法
２０μｍポリエチレンフリット（Sigma-Aldrich）を備えた空のＳＰＥプラスチックチューブ中で樹脂上合成を行った。Ｔｉｔｒａｍａｘ  １０１プラットフォームシェーカー（Heidolph）を撹拌に用いた。報告された全ての合成収率は、１．１ｍｍｏｌ／ｇ（製造業者によって示される標識の程度）の最初の樹脂ローディングに基づく。特に明記しない限り、全ての反応は室温で行った。
【０１８６】
５．２）樹脂ローディング
典型的には、２００ｍｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂ビーズ（１００〜２００メッシュ、１％ＤＶＢ、１．１ｍｍｏｌ／ｇ、Novabiochem）を４ｍＬのＤＣＭ中で１０分間膨潤させた。Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ１２−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ（ＰｕｒｅＰＥＧ（商標）、１．２当量）を、あらかじめ２ｍＬの乾燥ＤＣＭに予め溶解して、樹脂に加えた。ＤＩＰＥＡ（３当量）を加え、反応容器を室温で１時間撹拌した。３００μＬのＭｅＯＨを加え、未反応樹脂をクエンチした。１０分間振盪した後、溶液を排出し、樹脂をＤＭＦ（３回）及びＤＣＭ（３回）で洗浄した。樹脂を高真空下で乾燥させた。
【０１８７】
５．２）工程（１）
樹脂をＤＭＦ中、２０％ピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）で、室温で１５分間２回処理した。次いで、樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。ブロモアセチル化工程は、ＤＭＦ中、１０当量のブロモ酢酸及び１３当量のジイソプロピルカルボジイミドを加えることによって行った（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）。混合物を３０分間撹拌し、排出し、ＤＭＦで洗浄した（４回）。アミン置換工程のために、ＤＭＦ中、３Ｍの２−アジドエタン−１−アミンの溶液を加え（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）、容器を４５分間振盪し、排出し、ＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄した。
【０１８８】
５．３）ステップ（２）
２−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］酢酸カップリング法及び樹脂からの切断を前記実施例３に記載したように行い、化合物の精製を前記実施例２に記載したように行った。
【０１８９】
５．４）単一分子量ＰＥＧ化合物
以下の表５に、得られたＰＥＧ化合物を列挙する。
【０１９０】
【表５】
2021500412.tif 000037
実施例６：ＭＭＡＥ、ＳＮ３８、エキサテカン及びＰＮＵ１５９６８２ベースの中間体化合物の合成
６．１）化合物アルキン−グルクロニド−ＭＭＡＥの合成
【０１９１】
【数７】
2021500412.tif 000038
【０１９２】
出発物質１１０．８ｍｇ（０．０８７ｍｍｏｌ）（Renoux et al., Chem. Sci., 2017, 8(5), 3427-3433に記載されるように合成）を０℃でＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した。ＬｉＯＨ一水和物（３６．７ｍｇ／０．８７ｍｍｏｌ）を水（１ｍＬ）に溶解し、反応容器にゆっくりと加えた。０℃で７０分間撹拌した後、混合物を酢酸（６８．２ｍｇ／１．１４ｍｍｏｌ）で中和し、減圧下で濃縮した。得られた物質を水／ＭｅＯＨ／ＤＭＦ水溶液（１：１：１ｖ／ｖ）に溶解し、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．０５％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡであった。勾配は１０〜６０％Ｂの範囲であった。
【０１９３】
化合物アルキン−グルクロニド−ＭＭＡＥ（２つのジアステレオ異性体の混合物）を白色固体として得た（９５ｍｇ／９６％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１２７．５７５８；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１２７．５７５７；Ｅｒｒｏｒ＝０．１ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝１０．３分。
【０１９４】
６．２）化合物アルキンｒ−グルクロニド−ｂ（ＭＭＡＥ）２の合成
【０１９５】
【数８】
2021500412.tif 000039
【０１９６】
６．２．１）化合物アルキン−グルクロニド−（ＰＮＰ）２の合成
１６５ｍｇ（０．２４０ｍｍｏｌ）の出発物質（Renoux et al., Chem. Sci., 2017, 8(5), 3427-3433）、６４．２ｍｇ（０．４１９ｍｍｏｌ）の市販の４−アミノ−３−（ヒドロキシメチル）フェニルメタノール及び４０．７ｍｇ（０．３００ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを無水ＤＭＦに溶解した。５０℃で３時間撹拌した後、揮発性物質を蒸発させ、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、勾配４０：６０〜０：１００）によって精製して、中間体ジオール化合物を黄色の泡状物質として得た。
【０１９７】
無水ピリジン（４モル当量）を、無水ＤＣＭ中クロロギ酸４−ニトロフェニル（４モル当量）の冷却溶液（０℃）に滴下した。混合物を０℃で１５分間撹拌した。ＤＣＭ中の先の中間体ジオール化合物（１モル当量）の水溶液を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応をＮａＣｌの飽和溶液でクエンチし、ＤＣＭで３回抽出した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて固体粗生成物を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、勾配６０：４０〜３０：７０）で精製して、化合物アルキン−グルクロニド−（ＰＮＰ）２（５２ｍｇ／２１％、２工程で）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）２．０４（ｓ、３Ｈ）、２．０６（ｓ、３Ｈ）、２．１１（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、３Ｈ）、２．７１−２．９２（ｍ、２Ｈ）、３．７２（ｓ、３Ｈ）、４．１１（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．２２（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．１８−５．４１（ｍ、８Ｈ）、５．８７（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．３１−７．４１（ｍ、５Ｈ）、７．４５−７．５５（ｍ、２Ｈ）、７．５６−７．７１（ｍ、２Ｈ）、７．８３（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．８９（ｓ、１Ｈ）、８．２１−８．３２（ｍ、４Ｈ）。ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１０５５．１９２５；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１０５５．１９５５；Ｅｒｒｏｒ＝−２．９ｐｐｍ。
【０１９８】
６．２．２）化合物アルキン−グルクロニド−（ＭＭＡＥ）２の合成
５２ｍｇ（０．０５０ｍｍｏｌ）の先の化合物アルキン−グルクロニド−（ＰＮＰ）２、１３．７ｍｇ（０．１００ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔ及び７４．１ｍｇ（０．１０３ｍｍｏｌ）のモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を、無水ＤＭＦ／ピリジンの８：２（ｖ／ｖ）の混合物１ｍＬに溶解した。反応物を室温で２４時間撹拌し、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。粗生成物残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配９７：３〜９０：１０）により精製して、７７ｍｇ（７０％）の中間体化合物を得て、これを広範な特徴付けなしに脱保護工程に直接関与させた。この化合物７７ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）を０℃でＭｅＯＨ（７ｍＬ）に溶解した。ＬｉＯＨ一水和物（１４．７ｍｇ／０．３５０ｍｍｏｌ）を水（０．７ｍＬ）に溶解し、反応容器にゆっくりと加えた。０℃で６０分間撹拌した後、混合物を酢酸（２７．４ｍｇ／０．４５７ｍｍｏｌ）で中和し、減圧下で濃縮した。得られた物質を水／ＭｅＯＨ／ＤＭＦ溶液（１：１：１ｖ／ｖ）に溶解し、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．０５％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡであった。
【０１９９】
化合物アルキン−グルクロニド−（ＭＭＡＥ）２（２つのジアステレオ異性体の混合物）を白色固体として得た（４０ｍｇ／５６％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１０２５．５６２３；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１０２５．５５９９；Ｅｒｒｏｒ＝２．４ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝１３．０分。
【０２００】
６．３）化合物アルキン−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの合成
【０２０１】
【数９】
2021500412.tif 000040
【０２０２】
５８ｍｇ（０．０５２ｍｍｏｌ）の出発物質（Tang et al., Org. Biomol. Chem., 2016, 14(40), 9501-9518に記載されるように合成される）及び１５ｍｇ（０．０７７ｍｍｏｌ）の４−ペンチン酸スクシンイミジルエステルを３ｍＬの無水ＤＣＭに溶解した。１６．７ｍｇ（０．１２９ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを添加し、反応物を室温で、アルゴン雰囲気下で１６時間撹拌した。次いで、揮発性物質を減圧下で除去し、得られた物質をＤＭＦ溶液に溶解し、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．１％ＴＦＡであった。勾配は２５〜７０％Ｂの範囲であった。
【０２０３】
化合物アルキン−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを白色固体として得た（２１ｍｇ／３４％）。ＥＳＩ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１２２５．７。ＨＰＬＣ法３保持時間＝９．０分。
【０２０４】
６．４）化合物アルキン−ＳＮ３８の合成
【０２０５】
【数１０】
2021500412.tif 000041
【０２０６】
１５６ｍｇ（０．３０８ｍｍｏｌ）の出発物質ＴＢＤＭＳ−ＳＮ３８（Moon et al., JMed. Chem., 2008, 51(21), 6916-6926に記載されるように合成）、１１３ｍｇ（０．９２４ｍｍｏｌ）の４−（ジメチルアミノ）ピリジン、及び７５ｍｇ（０．３６９ｍｍｏｌ）のクロロギ酸４−ニトロフェニルを８ｍＬの無水ＤＣＭに溶解した。溶液を室温で９０分間撹拌し、水中５％酢酸で希釈し、ＤＣＭで３回抽出した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて黄色固形物を得て、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。
【０２０７】
この黄色固体１７５ｍｇ（０．２６１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ４ｍＬに溶解し、プロパルギルアミン４３ｍｇ（０．７８２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。反応物をアルゴン雰囲気下、室温で１６時間撹拌した。揮発性物質を真空下で除去し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、勾配４０：６０〜０：１００）により精製して、化合物アルキン−ＳＮ３８（７１ｍｇ／５６％）を明黄色固体として得た。ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７４．１６６０；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７４．１６６４；Ｅｒｒｏｒ＝−０．９ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝９．７分。１００％ＥｔＯＡｃで溶出したＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１５。
【０２０８】
６．５）化合物アルキングルクロニド−ＳＮ３８の合成
【０２０９】
【数１１】
2021500412.tif 000042
【０２１０】
５０ｍｇ（０．０７４ｍｍｏｌ）の出発物質ＴＢＤＭＳ−ＳＮ３８−ＯＰＮＰ（先のセクション６．４に記載されるように合成）及び５ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを反応容器中で秤量した。予め無水ＤＭＦ／ピリジンの８：２（ｖ／ｖ）の混合物１ｍＬに溶解したtert−ブチル（２−（（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）アミノ）エチル）（メチル）カルバメート（ＷＯ２０１１／１３３０３９に記載のように合成）５８．５（０．２２３ｍｍｏｌ）を反応容器に加えた。反応物を室温で１６時間撹拌し、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。粗生成物残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配９８：２〜９０：１０）により精製して、４８ｍｇ（９５％）の中間体化合物（黄色固体）を得て、これを脱保護工程に直接使用した。ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６８１．３１３０；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６８１．３１１３；Ｅｒｒｏｒ＝２．５ｐｐｍ。
【０２１１】
４８ｍｇ（０．０７１ｍｍｏｌ）のこの化合物を２ｍＬのＤＣＭに溶解し、５００μＬのＴＦＡを加えた。溶液を室温で９０分間撹拌し、揮発性物質を減圧下で除去した。粗生成物残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配９４：６〜８０：２０）により精製して、３９．８ｍｇ（９６％）の化合物ＳＮ３８−メチルアミンを黄色固体として得た。ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］＋＝５８１．２６０６；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］＋＝５８１．２６０１；Ｅｒｒｏｒ＝０．８ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝７．７分。
【０２１２】
４８ｍｇ（０．０６９ｍｍｏｌ）の出発物質（Renoux et al., Chem. Sci., 2017, 8(5), 3427-3433に記載されるように合成）、３９．８ｍｇ（０．０６９ｍｍｏｌ）の先の化合物ＳＮ３８−メチルアミン及び９．３ｍｇ（０．０６９ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを、１．５ｍＬの無水ＤＭＦ／ピリジンの８：２（ｖ／ｖ）の混合物に溶解した。反応物を室温で１６時間撹拌し、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。粗生成物残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配９８：２〜９５：５）によって精製して、５７ｍｇ（７４％）の中間体化合物（黄色固体）を得て、これを脱保護工程に直接使用した。ＥＳＩ＋［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１３０．４。
【０２１３】
この化合物５７ｍｇ（０．０５０ｍｍｏｌ）を０℃でＭｅＯＨ（６ｍＬ）に溶解した。ＬｉＯＨ一水和物（２１．２ｍｇ／０．５０４ｍｍｏｌ）を水（０．６ｍＬ）に溶解し、反応容器にゆっくりと加えた。０℃で７０分間撹拌した後、混合物を酢酸（３９．４ｍｇ／０．６５６ｍｍｏｌ）で中和し、減圧下で濃縮した。得られた物質を水／ＭｅＯＨ／ＤＭＦ溶液（１：１：１ｖ／ｖ）に溶解し、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．０５％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡであった。勾配は１０〜６０％Ｂの範囲であった。
【０２１４】
化合物アルキン−グルクロニド−ＳＮ３８を黄色固体として得た（２０．５ｍｇ／４２％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９９０．３２５１；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９９０．３２１０；Ｅｒｒｏｒ＝４．１ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝８．２分。
【０２１５】
６．６）化合物アルキン−グルクロニド−エキサテカンの合成
【０２１６】
【数１２】
2021500412.tif 000043
【０２１７】
１３２．１ｍｇ（０．１９２ｍｍｏｌ）の出発物質（Renoux et al., Chem. Sci., 2017, 8(5), 3427-3433に記載されるように合成）、１０２ｍｇ（０．１９２ｍｍｏｌ）のエキサテカンメシレート及び２６ｍｇ（０．１９２ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを、無水ＤＭＦ／ピリジンの８：２（ｖ／ｖ）の混合物１ｍＬに溶解した。反応物を室温で１６時間撹拌し、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。粗生成物残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配９８：２〜９０：１０）により精製して、１６５ｍｇ（８７％）の中間体化合物（黄色固体）を得て、これを脱保護工程に直接使用した。ＥＳＩ＋［Ｍ＋Ｈ］＋＝９８５．３。
【０２１８】
この化合物１６５ｍｇ（０．１６８ｍｍｏｌ）を０℃でＭｅＯＨ／ＴＨＦ  １：１ｖ／ｖ（１６ｍＬ）に溶解した。ＬｉＯＨ一水和物（７０．３ｍｇ／１．６７５ｍｍｏｌ）を水（１．６ｍＬ）に溶解し、反応容器にゆっくりと加えた。０℃で７０分間撹拌した後、混合物を酢酸（１３１ｍｇ／２．１８ｍｍｏｌ）で中和し、減圧下で濃縮した。得られた物質を水／ＭｅＯＨ／ＤＭＦ溶液（１：１：１ｖ／ｖ）に溶解し、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．０５％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡであった。勾配は１０〜５０％Ｂの範囲であった。
【０２１９】
化合物アルキン−グルクロニド−エキサテカンを黄色固体として得た（９８ｍｇ／６９％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］＋＝８４５．２３１２；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］＋＝８４５．２３６０；Ｅｒｒｏｒ＝−４．８ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝８．０分。
【０２２０】
６．７）化合物アルキン−ＰＮＵ１５９６８２の合成
【０２２１】
【数１３】
2021500412.tif 000044
【０２２２】
６．７．１）Ｎ−（２−（（２−アミノエチル）アミノ）−２−オキソエチル）プロピオールアミドの合成
７６２ｍｇ（４．５４ｍｍｏｌ）のグリシンtert−ブチルエステル塩酸塩、３１８．３ｍｇ（４．５４ｍｍｏｌ）のプロピオール酸、及び６１．４ｍｇ（０．４５４ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを５ｍＬの無水ＤＭＦに溶解した。１１０３ｍｇ（１０．９ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを加え、溶液を氷上（０℃）で撹拌した。８７１ｍｇ（４．５４ｍｍｏｌ）のＥＤＣ塩酸塩を無水ＤＭＦ１２ｍＬで懸濁し、反応容器に加えた。混合物を暗所で、室温で１６時間撹拌した。次いで、揮発性物質を減圧下で除去した。ＮＨ４Ｃｌの飽和溶液を加え、ＤＣＭで３回抽出した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ勾配８０：２０〜５０：５０）によって精製して、２５５ｍｇ（３１％）のtert−ブチルプロピオロイルグリシネートを透明な油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８４．０；石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（４０：６０ｖ／ｖ）で溶出し、ＫＭｎＯ４で染色した：Ｒｆ＝０．７５。
【０２２３】
２５５ｍｇ（１．３９ｍｍｏｌ）のtert−ブチルプロピオロイルグリシネートを５ｍＬのＤＣＭ／ＴＦＡ（１：１ｖ／ｖ）溶液に溶解した。脱保護反応はＴＬＣ分析によって評価されるように、室温で１時間撹拌した後に完了した。揮発性物質を減圧下で除去して、油状残渣として１８８ｍｇ（１０５％）のプロピオロイルグリシンを得て、これを精製せずに次の工程に使用した。
【０２２４】
１７８ｍｇ（１．４０ｍｍｏｌ）のプロピオロイルグリシン及び５０４．８ｍｇ（１．３３ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵを３ｍＬの無水ＤＭＦに溶解した。１８０．６ｍｇ（１．４０ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを加え、反応物を室温で５分間撹拌した。次いで、先に無水ＤＭＦ１ｍに溶解した２９１ｍｇ（１．８２ｍｍｏｌ）のＮ−Ｂｏｃ−エチレンジアミンを加え、反応混合物を暗所で、室温で３０分間撹拌した。次いで、揮発性物質を減圧下で除去した。ＮＨ４Ｃｌの飽和溶液を加え、ＤＣＭで３回抽出した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ勾配２０：８０〜０：１００）によって精製して、２０４ｍｇ（５４％）のtert−ブチル（２−（２−プロピオールアミドアセトアミド）エチル）カルバメートをわずかに黄色の油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２７０．１、１００％ＥｔＯＡｃで溶出し、ＫＭｎＯ４で染色したＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３５。
【０２２５】
２０４ｍｇ（０．７５８ｍｍｏｌ）のtert−ブチル（２−（２−プロピオールアミドアセトアミド）エチル）カルバメートを５ｍＬのＤＣＭ／ＴＦＡ（７：３ｖ／ｖ）溶液に溶解した。脱保護反応はＴＬＣ分析によって評価されるように、室温で４５分間撹拌した後に完了した。揮発性物質を高真空下で一晩除去して、１９６ｍｇ（９２％）のＮ−（２−（（２−アミノエチル）アミノ）−２−オキソエチル）プロピオールアミドＴＦＡ塩をわずかに黄色の濃いワックスとして得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）２．８４（ｑ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．２９（ｑ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．７２（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．２０（ｓ、１Ｈ）、７．７８（ｂｒ．ｓ、３Ｈ）、８．１２（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．９４（ｔ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ＋）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１７０．０。
【０２２６】
６．７．２）アルキン−ＰＮＵ１５９６８２の合成
２５ｍｇ（０．０４０ｍｍｏｌ）のＰＮＵ１５９６９２カルボン酸誘導体（ＷＯ／２０１６／０４０８２５に記載されるように合成された紫色固体、前記化学構造を参照のこと）及び１５．１ｍｇ（０．０４０ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵを、丸底フラスコ中の１ｍＬの無水ＤＭＦに溶解した。１０．２ｍｇ（０．０８０ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを加え、混合物を室温で２分間撹拌した。１３．４ｍｇ（０．０４７ｍｍｏｌ）のＮ−（２−（（２−アミノエチル）アミノ）−２−オキソエチル）プロピオールアミドＴＦＡ塩（予め５００μＬの無水ＤＭＦに溶解した）を加え、反応混合物を室温で５分間撹拌した。高真空下で揮発性物質を除去し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、勾配９９：１〜９０：１０）によって精製して、１４．７ｍｇ（４９％）のアルキン−ＰＮＵ１５９６８２を赤色固体として得た。ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７７９．２７７０；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７７９．２７５８；Ｅｒｒｏｒ＝１．５ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法６保持時間＝５．４分。
【０２２７】
実施例７：直交部分としてグルタミン酸を用いたポリサルコシンベースの薬物複合体リンカーの合成
反応スキームを以下に記載する。
【０２２８】
【数１４】
2021500412.tif 000045
【０２２９】
７．１）エチレンジアミンの樹脂ローディング
５００ｍｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂ビーズ（１００〜２００メッシュ、１％ＤＶＢ、１．１ｍｍｏｌ／ｇ、０．５５ｍｍｏｌスケール、Novabiochem）を５ｍＬのＤＣＭ中で１０分間膨潤させ、５当量（２．７５ｍｍｏｌ、１６５．３ｍｇ）のエチレンジアミン（Sigma-Aldrich）を加え、混合物を室温で４時間振盪し、続いてＤＣＭで十分に洗浄した（５回５ｍＬ）。樹脂上の未反応部位を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１ｖ／ｖ）溶液を用いてキャップした（２０分間処理）。樹脂をＤＣＭ（５回５ｍＬ）及びＭｅＯＨ（５回５ｍＬ）で十分に洗浄し、真空下で乾燥させ、さらに使用するまで−２０℃で保存した。
【０２３０】
７．２）Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＡｌｌ）−ＯＨカップリング
脱保護されたＮ末端（１当量）を含有する樹脂に、ＤＭＦ中、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＡｌｌ）−ＯＨ（３当量）、ＨＡＴＵ（２．８５当量）、及びＤＩＰＥＡ（６当量）の溶液を加えた（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）。反応容器を２時間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（５回３ｍＬ）及びＤＣＭ（５回３ｍＬ）で十分に洗浄した。反応の完全性は、陰性Ｋａｉｓｅｒテストによって確認した。樹脂を真空下で乾燥させ、さらに使用するまで−２０℃で保存した。
【０２３１】
７．３）アロック保護基除去
樹脂をＤＣＭに懸濁し（樹脂１００ｍｇ当たり４ｍＬ）、混合物を、フリットディスクの下から導入したアルゴン流によって穏やかに撹拌した。フェニルシラン（２０当量）を加え、撹拌を５分間続けた後、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．２５当量）を加えた。アルゴン流下、室温での混合物の撹拌を、光からの保護下、３０分間続けた後、溶液を排出した。フェニルシラン及びＰｄ（ＰＰｈ３）４での処理を１回繰り返し、樹脂をＤＣＭ（５回５ｍＬ）、ＤＭＦ（５回５ｍＬ）、及びＭｅＯＨ（５回５ｍＬ）で十分に洗浄した。樹脂を真空下で乾燥させ、さらに使用するまで−２０℃で保存した。樹脂ローディングを評価し（Ｆｍｏｃ切断テスト、３０１ｎｍでの吸光度測定）、通常０．７０〜０．８０ｍｍｏｌ／ｇであった。
【０２３２】
７．４）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（ＮＨ２−グルクロニド−ＭＭＡＥ）結合法
脱保護されたカルボン酸基（１当量）を含有する樹脂に、ＤＭＦ中、ＨＡＴＵ（４当量）及びＤＩＰＥＡ（４．２当量）の溶液を添加した。反応容器を２５分間撹拌し、排出し、樹脂をＤＭＦで洗浄した（４回５ｍＬ）。次いで、樹脂にＤＭＦ中、１．５当量の化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（「ＮＨ２−グルクロニド−ＭＭＡＥ」；Jeffrey SC et al., Bioconjug. Chem., 2006, 17(3), 831-840に記載されているように合成した）及びＤＩＰＥＡ（３．２当量）を加えた。反応容器を３時間撹拌し、排出し、ＤＭＦ（５回３ｍＬ）及びＤＣＭ（５回３ｍＬ）で洗浄した。樹脂を真空下で乾燥させ、さらに使用するまで−２０℃で保存した。
【０２３３】
７．５）Ｆｍｏｃ脱保護法
Ｆｍｏｃ保護されたアミノ酸を含有する樹脂を、ＤＭＦ中、２０％ピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）で、室温で２回１５分間処理した。次いで、樹脂をＤＭＦ（５回５ｍＬ）及びＤＣＭ（５回５ｍＬ）で洗浄した。樹脂を真空下で乾燥させ、さらに使用するまで−２０℃で保存した。
【０２３４】
７．６）ポリサルコシンカップリング法
脱保護された第一級アミン基（１当量）を含む樹脂に、ＤＭＦ中、ポリサルコシン−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ（２．２当量）、ＨＡＴＵ（２当量）、及びＤＩＰＥＡ（６当量）の溶液を加えた。反応容器を２．５時間撹拌し、排出し、樹脂をＤＭＦ（３回５ｍＬ）及びＤＣＭ（３回５ｍＬ）で洗浄した。樹脂を真空下で乾燥させ、さらに使用するまで−２０℃で保存した。
【０２３５】
７．７）樹脂からの切断
ＤＣＭ溶液中の２０％（ｖ／ｖ）ＨＦＩＰ（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）を用いて、撹拌下、室温で、２−クロロトリチル樹脂からの最終的な切断を行った。反応時間は６０分であった。樹脂を濾過し、得られた溶液をアルゴンガス流下で蒸発させた。最終的な残渣を高真空下で乾燥させ、以下の工程でそのまま使用した。
【０２３６】
７．８）３−（マレイミド）プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルカップリング法
無水ＤＭＦに溶解した残渣に、３−（マレイミド）プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（８当量）を加えた。ＤＩＰＥＡ（１０当量）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。反応混合物を水／ＴＦＡ（９９．５：０．５ｖ／ｖ）でクエンチし、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．０５％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡであった。勾配は１０〜６０％Ｂの範囲であった。
【０２３７】
化合物ＭＡＬ−Ｇｌｕ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＳＡＲ６は透明な油として得られた（５．８ｍｇ／最初の樹脂ローディングに基づく収率は１４％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９８９．５０６４；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋９８９．５０２３；Ｅｒｒｏｒ＝４．２ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法１保持時間＝６．７分。
【０２３８】
化合物ＭＡＬ−Ｇｌｕ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＳＡＲ１２は透明な油として得られた（４．６ｍｇ／最初の樹脂ローディングに基づく収率２０％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１２０２．６１７８；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋１２０２．６１７８；Ｅｒｒｏｒ＝０．０ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法１保持時間＝６．９分。
【０２３９】
化合物ＭＡＬ−Ｇｌｕ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＳＡＲ１８は透明な油として得られた（２．４ｍｇ／最初の樹脂ローディングに基づく収率は１４％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１４１５．７２９１；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋１４１５．７２８２；Ｅｒｒｏｒ＝０．７ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法１保持時間＝６．８分。
【０２４０】
実施例８：直交部分としてリジンを用いたポリサルコシンベースの薬物複合体リンカーの合成
反応スキームを以下に記載する。
【０２４１】
【数１５】
2021500412.tif 000046
【０２４２】
８．１）Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＮＨ２の合成
【０２４３】
【化２６】
2021500412.tif 000047
化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（「ＮＨ２−グルクロニド−ＭＭＡＥ」；Jeffrey SC et al., Bioconjug. Chem., 2006, 17(3), 831-840に記載されているように合成した）（６９．９ｍｇ／０．０６２ｍｍｏｌ）及びＦｍｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＳｕ（３５ｍｇ／０．０６２ｍｍｏｌ）を１．２ｍＬの無水ＤＭＦに溶解した。ＤＩＰＥＡ（２４．０ｍｇ／０．１８６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２０時間撹拌した。揮発性物質を真空下で除去した。わずかに黄色の粗生成物を含むフラスコを氷浴（０℃）上に置き、７ｍＬのＤＣＭ／ＴＦＡ（７：３ｖ／ｖ）溶液をゆっくりと加えた。全Ｂｏｃ脱保護がＨＰＬＣによって観察されるまで（約２時間）、溶液を氷上で撹拌した。次いで、揮発性物質を減圧下で除去し、残渣を３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上での精製のためにＤＭＦ中に溶解した。移動相Ａは水＋０．０５％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡであった。勾配は１０〜６０％Ｂで、化合物Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＮＨ２は白色固体（５９ｍｇ／６５％）として得られた。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４８０．７８６２；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４８０．７８９０；Ｅｒｒｏｒ＝−１．９ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法１保持時間＝１０．５分。
【０２４４】
８．２）Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲｎの合成
【０２４５】
【化２７】
2021500412.tif 000048
化合物ＰＳＡＲｎ−ＣＯＯＨ（２当量；実施例２に記載されるように得て、無水ＤＭＦ中の０．１５Ｍストック溶液として予め溶解した）を、バイアル中のＨＡＴＵ（１．８当量）に加えた。ＤＩＰＥＡ（５当量）を加え、混合物を室温で３分間撹拌した。次いで、化合物Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＮＨ２（１当量；無水ＤＭＦ中に０．０５Ｍストック液として予め溶解した）を加えた。室温で１時間撹拌し、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジに注入して精製した。移動相Ａは水＋０．０５％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡであった。勾配は１０〜６０％Ｂの範囲であった。
【０２４６】
化合物Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ６を白色固体として得た（９．８ｍｇ／３８％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９７５．０１３３；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９７５．００８８；Ｅｒｒｏｒ＝４．６ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法１保持時間＝７．５分。
【０２４７】
化合物Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２を白色固体として得た（３．６ｍｇ／２８％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１１８８．１２４７；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１１８８．１２３３；Ｅｒｒｏｒ＝１．１ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法１保持時間＝７．６分。
【０２４８】
８．３）６−（マレイミド）ヘキサン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルカップリング法
前工程からの化合物Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲｎを、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンで、室温で５分間処理した。揮発性物質を高真空下で除去し、乾燥残渣を無水ＤＭＦに溶解した。次いで、６−（マレイミド）ヘキサン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（８当量）及びＤＩＰＥＡ（１０当量）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。水／ＴＦＡ（９９．５：０．５ｖ／ｖ）でクエンチし、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．０５％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡであった。１０分間のアイソクラティック保持（５％Ｂ）後、目的の化合物を４０％Ｂでアイソクラティックに溶出した。
【０２４９】
【化２８】
2021500412.tif 000049
化合物ＭＡＬ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ６を透明な油として得た（５．０ｍｇ／５２％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９６０．５１６３；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９６０．５１６７；Ｅｒｒｏｒ＝−０．５ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法１保持時間＝７．１分。
【０２５０】
化合物ＭＡＬ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２を透明な油として得た（１．８ｍｇ／５１％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１１７３．６２７６；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋１１７３．６２２９；Ｅｒｒｏｒ＝４．０ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法１保持時間＝７．０分。
【０２５１】
実施例９：直交部分としてグリシンを用いたポリアルコシンベース又はポリエチレングリコールベースの薬物複合体リンカーの合成
９．１）化合物ブロモアセトアミド−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−）グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲｎ
【０２５２】
【数１６】
2021500412.tif 000050
【０２５３】
アルキン−グルクロニド−ＭＭＡＥ（１当量；実施例６に記載のようにして得た）、ＰＳＡＲｎ−Ｎ３−ブロモアセトアミド（１．１当量；実施例３に記載のようにして得た）、及びテトラキス（アセトニトリル）銅（Ｉ）ヘキサフルオロホスフェート（３当量）を反応容器中で合わせた。ＤＣＭ／アセトニトリル１：１（ｖ／ｖ）溶液を加えて、１２μｍｏｌ／ｍＬの最終的なアルキン−グルクロニド−ＭＭＡＥ濃度に到達させた。反応物を暗所でアルゴン下、室温で１６〜２０時間撹拌した。揮発性物質の減圧下での除去後、残渣をＤＭＦに溶解し、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．１％ＴＦＡであった。勾配は１０〜５０％Ｂの範囲であった。
【０２５４】
化合物ブロモアセトアミド−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２を白色固体として得た（８．５ｍｇ／５１％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１１５１．０１７９；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１１５１．０１８８；Ｅｒｒｏｒ＝−０．８ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝８．５分。
【０２５５】
９．２）化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲｎ
【０２５６】
【数１７】
2021500412.tif 000051
【０２５７】
アルキン−グルクロニド−ＭＭＡＥ（実施例６に記載されるように得た）及びＰＳＡＲｎ−Ｎ３−フェニル−ＭＡＬ（実施例３に記載されるように得た）を、反応溶媒としてＤＣＭを用いて、セクション９．１に上述したように反応させ、精製した。
【０２５８】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ６を白色固体として得た（３．３ｍｇ／２０％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９５５．９５６６；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９５５．９５３３；Ｅｒｒｏｒ＝３．４ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝９．２分。
【０２５９】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２を白色固体として得た（９．０ｍｇ／３３％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１１６９．０６７９；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１１６９．０６２１；Ｅｒｒｏｒ＝４．９ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝８．７分。
【０２６０】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１８を白色固体として得た（１１．５ｍｇ／４０％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１３８２．１７９２；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１３８２．１８０３；Ｅｒｒｏｒ＝−０．７ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝８．６分。
【０２６１】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ２４を白色固体として得た（１５ｍｇ／４４％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋４Ｎａ］４＋＝８２０．１３０９；Ｅｘｐ［Ｍ＋４Ｎａ］４＋＝８２０．１３２４；Ｅｒｒｏｒ＝−１．８ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝８．４分。
【０２６２】
９．３）化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＥＧｎ
【０２６３】
【数１８】
2021500412.tif 000052
【０２６４】
アルキン−グルクロニド−ＭＭＡＥ（実施例６に記載のように得た）及びＰＥＧｎ−Ｎ３−フェニル−ＭＡＬ（実施例５に記載のように得た）を、反応溶媒としてＮＭＰ／ＤＣＭ２：１（ｖ／ｖ）を用いて、セクション９．１に上述したように反応させ、精製した。
【０２６５】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＥＧ１２を、わずかに黄色の油として得た（１０．４ｍｇ／４５％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１０４２．５２１１；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１０４２．５２１８；Ｅｒｒｏｒ＝−０．７ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝８．０分。
【０２６６】
９．４）化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲｎ
【０２６７】
【数１９】
2021500412.tif 000053
【０２６８】
アルキン−グルクロニド−ＭＭＡＥ（３当量；実施例６に記載のように得た）、ＰＳＡＲｎ−Ｎ３−Ｎ３−フェニル−ＭＡＬ（１当量；実施例３に記載のように得た）、及びテトラキス（アセトニトリル）銅（Ｉ）ヘキサフルオロホスフェート（５当量）を反応容器中で合わせた。ＤＣＭを加え、反応物を暗所でアルゴン下、室温で１６〜２０時間撹拌した。揮発性物質の減圧下での除去後、残渣をＤＭＦに溶解し、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．１％ＴＦＡであった。勾配は１０〜５０％Ｂの範囲であった。
【０２６９】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１８を白色固体として得た（１０．１ｍｇ／４４％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋４Ｈ］４＋＝１０２２．５０８２；Ｅｘｐ［Ｍ＋４Ｈ］４＋＝１０２２．５０９３；Ｅｒｒｏｒ＝−１．０ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝９．５分。
【０２７０】
９．５）化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ［トリアゾール−グルクロニド（ＭＭＡＥ）２］−ＰＳＡＲｎ
【０２７１】
【数２０】
2021500412.tif 000054
【０２７２】
アルキン−グルクロニド−（ＭＭＡＥ）２（実施例６に記載されるように得た）及びＰＳＡＲｎ−Ｎ３−フェニル−ＭＡＬ（実施例３に記載されるように得た）を、反応溶媒としてＤＣＭを用いて、セクション９．１に上述したように反応させ、精製した。
【０２７３】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ［トリアゾール−グルクロニド（ＭＭＡＥ）２］−ＰＳＡＲ２４を白色固体として得た（１２．５ｍｇ／３９％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１３７１．３７６７；Ｅｘｐ［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１３７１．３８１８；Ｅｒｒｏｒ＝−３．８ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝１０．０分。
【０２７４】
９．６）化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ［トリアゾール−ガラクトシド（ＭＭＡＥ）２］−ＰＳＡＲｎ
【０２７５】
【数２１】
2021500412.tif 000055
【０２７６】
アルキン−ガラクトシド−（ＭＭＡＥ）２（Alsarraf et al., Chem. Commun., 2015, 51(87), 15792-15795に記載されているように合成した）及びＰＳＡＲｎ−Ｎ３−フェニル−ＭＡＬ（実施例３に記載されるように得た）を、反応溶媒としてＤＣＭを用いて、セクション９．１に記載されているように反応させ、精製した。
【０２７７】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ［トリアゾール−ガラクトシド（ＭＭＡＥ）２］−ＰＳＡＲ２４を白色固体として得た（６．５ｍｇ／５５％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋４Ｈ］４＋＝１０２２．７８９５；Ｅｘｐ［Ｍ＋４Ｈ］４＋＝１０２２．７９０３；Ｅｒｒｏｒ＝０．８ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝９．２分。
【０２７８】
９．７）化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲｎ
【０２７９】
【数２２】
2021500412.tif 000056
【０２８０】
アルキン−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（実施例６に記載されるように得た）及びＰＳＡＲｎ−Ｎ３−フェニル−ＭＡＬ（実施例３に記載されるように得た）は、セクション９．１で上述したように反応溶媒としてＮＭＰを用いて反応させ、精製した。
【０２８１】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２を白色固体として得た（４．５ｍｇ／１２％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１２０７．１４９４；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１２０７．１５３５；Ｅｒｒｏｒ＝−３．５ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝８．６分。
【０２８２】
９．８）化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＳＮ３８）−ＰＳＡＲｎ
【０２８３】
【数２３】
2021500412.tif 000057
【０２８４】
アルキン−ＳＮ３８（実施例６に記載されるように得た）及びＰＳＡＲｎ−Ｎ３−フェニル−ＭＡＬ（実施例３に記載されるように得た）を、反応溶媒としてＤＣＭ／ＤＭＦ２：１（ｖ／ｖ）を用いて、セクション９．１に記載されるように反応させ、精製した。
【０２８５】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＳＮ３８）−ＰＳＡＲ１８を明黄色固体として得た（４．０ｍｇ／２０％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｎａ］２＋＝１０７７．４５６２；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｎａ］２＋＝１０７７．４５８８；Ｅｒｒｏｒ＝−２．４ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝７．５分。
【０２８６】
９．９）化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＳＮ３８）−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＳＮ３８）−ＰＳＡＲｎ
【０２８７】
【数２４】
2021500412.tif 000058
【０２８８】
アルキン−ＳＮ３８（実施例６に記載されるように得た）及びＰＳＡＲｎ−Ｎ３−Ｎ３−フェニル−ＭＡＬ（実施例３に記載されるように得た）を、セクション９．４に上述したように反応させ、精製した。
【０２８９】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＳＮ３８）−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＳＮ３８）−ＰＳＡＲ１８を黄色固体として得た（５．１ｍｇ／４３％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｎａ］２＋＝１４１２．５８１２；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｎａ］２＋＝１４１２．５８５２；Ｅｒｒｏｒ＝−３．８ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝８．４分。
【０２９０】
９．１０）化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＳＮ３８）−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＳＮ３８）−ＰＳＡＲｎ
【０２９１】
【数２５】
2021500412.tif 000059
【０２９２】
アルキン−グルクロニド−ＳＮ３８（実施例６に記載されるように得た）及びＰＳＡＲｎ−Ｎ３−Ｎ３−フェニル−ＭＡＬ（実施例３に記載されるように得た）を、反応溶媒としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ８：２（ｖ／ｖ）を使用して、セクション９．４に上述したように反応させ、精製した。
【０２９３】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＳＮ３８）−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＳＮ３８）−ＰＳＡＲ１８を黄色固体として得た（７．０ｍｇ／３０％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１２７１．５０８０；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１２７１．５１０３；Ｅｒｒｏｒ＝−１．８ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝７．８分。
【０２９４】
９．１１）化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニド−エキサテカン）−ＰＳＡＲｎ
【０２９５】
【数２６】
2021500412.tif 000060
【０２９６】
アルキン−グルクロニド−エキサテカン（実施例６に記載されるように得た）及びＰＳＡＲｎ−Ｎ３−フェニル−ＭＡＬ（実施例３に記載されるように得た）を、反応溶媒としてＤＣＭを用いて、セクション９．１に上述したように反応させ、精製した。
【０２９７】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニド−エキサテカン）−ＰＳＡＲ１８を黄色固体として得た（１３．２ｍｇ／６４％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１２４１．００６９；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１２４１．００８８；Ｅｒｒｏｒ＝−１．１ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝７．１分。
【０２９８】
９．１２）化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＰＮＵ１５９６８２）−ＰＳＡＲｎ
【０２９９】
【数２７】
2021500412.tif 000061
【０３００】
アルキン−ＰＮＵ１５９６８２（実施例６に記載されるように得た）及びＰＳＡＲｎ−Ｎ３−フェニル−ＭＡＬ（実施例３に記載されるように得た）を、反応溶媒としてＤＣＭを用いて、逆相精製の間、移動相中の０．１％ＴＦＡ添加剤を０．１％ギ酸で置き換えて、セクション９．１に上述したように反応させ、精製した。
【０３０１】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＰＮＵ１５９６８２）−ＰＳＡＲ１２を赤色固体として得た（４．８ｍｇ／４０％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９９４．９１８５；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９９４．９１８４；Ｅｒｒｏｒ＝０．１ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法６保持時間＝５．０分。
【０３０２】
化合物ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＰＮＵ１５９６８２）−ＰＳＡＲ１８を赤色固体として得た（７．２ｍｇ／３３％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１２０８．０２９８；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１２０８．０２９５；Ｅｒｒｏｒ＝０．３ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法６保持時間＝４．９分。
【０３０３】
実施例１０：陰性対照薬物複合体リンカーＭＡＬ−グルクロニドＭＭＡＥ、ＭＡＬ−フェニル−トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ、及びＭＡＬ−フェニル−ＰＳＡＲｎ−トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥの合成
１０．１）化合物ＭＡＬ−グルクロニドＭＭＡＥの合成
【０３０４】
【数２８】
2021500412.tif 000062
【０３０５】
出発化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（「ＮＨ２−グルクロニド−ＭＭＡＥ」；Jeffrey SC et al., Bioconjug. Chem., 2006, 17(3), 831-840に記載されているように合成した）（６．２ｍｇ／５μｍｏｌ）及び３−（マレイミド）プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（１４．６ｍｇ／５５μｍｏｌ）を秤量して、２００μＬの無水ＤＭＦに溶解した。ＤＩＰＥＡ（８．５ｍｇ／６６μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。１．５ｍＬの水／ＴＦＡ（９９：１ｖ／ｖ）でクエンチし、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．０５％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡであった。勾配は１０〜７０％Ｂの範囲であった。
【０３０６】
表題の化合物ＭＡＬ−グルクロニドＭＭＡＥを白色固体として得た（４．１ｍｇ／５９％）。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２８１．６５０１；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２８１．６４８９；Ｅｒｒｏｒ＝０．９ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法１保持時間＝７．１分。
【０３０７】
１０．２）化合物ＭＡＬ−フェニル−トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥの合成
１０．２．１）ペルフルオロフェニル２−（４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル）アセテートの合成
【０３０８】
【化２９】
2021500412.tif 000063
市販の２−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］酢酸（２９９ｍｇ／１．２９ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２６７ｍｇ／１．２９ｍｍｏｌ）及びペンタフルオロフェノール（２３８ｍｇ／１．２９ｍｍｏｌ）を反応容器中の無水１，２−ジメトキシエタン１５ｍＬに溶解した。室温で２時間撹拌した後、不溶性物質を濾過により除去し、濾液をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、勾配８０：２０〜２０：８０）によって精製して、表題の化合物（４００ｍｇ／７８％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）４．０１（ｓ、２Ｈ）、６．８７（ｓ、２Ｈ）、７．４０（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．４７（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）。ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９８．０４４６；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９８．０４４８；Ｅｒｒｏｒ＝−０．４ｐｐｍ。
【０３０９】
１０．２．２）Ｎ−（２−アジドエチル）−２−（４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル）アセトアミドの合成
【０３１０】
【化３０】
2021500412.tif 000064
先の化合物ペルフルオロフェニル２−（４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル）アセテート（７８ｍｇ／０．２０ｍｍｏｌ）を、反応容器中の１ｍＬの無水ＤＣＭに溶解した。２−アジドエタン−１−アミン（３３．８ｍｇ／０．４０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。次いで、１Ｎ  ＨＣｌ溶液を加え、混合物をＤＣＭで３回抽出した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて固体粗生成物を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、勾配６０：４０〜０：１００）で精製して、表題の化合物（１８ｍｇ／３１％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３００．１；ＨＰＬＣ法１保持時間＝８．４分。１００％ＥｔＯＡｃで溶出したＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６５。
【０３１１】
１０．２．３）化合物ＭＡＬ−フェニル−トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥの合成
【０３１２】
【数２９】
2021500412.tif 000065
【０３１３】
実施例６からの化合物アルキン−グルクロニドＭＭＡＥ（１７ｍｇ／１５．１μｍｏｌ）、テトラキス（アセトニトリル）銅（Ｉ）ヘキサフルオロホスフェート（１１．２ｍｇ／３０μｍｏｌ）、及び前工程からのＮ−（２−アジドエチル）−２−（４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル）アセトアミド（６．３ｍｇ／２１μｍｏｌ）をＨＰＬＣバイアル中で合わせた。８００μＬの無水ＤＣＭ／アセトニトリル／ＮＭＰ１：１：１（ｖ／ｖ／ｖ）溶液を加え、反応物をアルゴン下、室温で１６時間撹拌した。揮発性物質の減圧下での除去後、残渣をＤＭＦに溶解し、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．１％ＴＦＡであった。勾配は１０〜６０％Ｂの範囲であった。
【０３１４】
表題の化合物ＭＡＬ−フェニル−トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥをオフホワイトの固体（１０．３ｍｇ／４８％）として得た。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝７１３．８４２５；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝７１３．８４１５；Ｅｒｒｏｒ＝１．３ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝１０．２分。
【０３１５】
１０．３）化合物ＭＡＬ−フェニル−ＰＳＡＲｎ−トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥの合成
【０３１６】
【数３０】
2021500412.tif 000066
【０３１７】
実施例６からの化合物アルキン−グルクロニドＭＭＡＥ（２０ｍｇ／１７．７μｍｏｌ）、テトラキス（アセトニトリル）銅（Ｉ）ヘキサフルオロホスフェート（１３．２ｍｇ／３５μｍｏｌ）、及び実施例４からのＮ３−ＰＳＡＲｎ−フェニル−ＭＡＬ（３４．３ｍｇ／２８μｍｏｌ）をＨＰＬＣバイアル中で合わせた。９００μＬのＮＭＰ／ＤＣＭ２：１（ｖ／ｖ）溶液を加え、反応物をアルゴン下、室温で１６時間撹拌した。揮発性物質の減圧下での除去後、残渣をＤＭＦに溶解し、３０ｇＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８（２５μｍ）カートリッジ上で精製した。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．１％ＴＦＡであった。勾配は１０〜６０％Ｂの範囲であった。
【０３１８】
白色固体（１６．０ｍｇ／３９％）として、表題の化合物ＭＡＬ−フェニル−ＰＳＡＲｎ−トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥを得た。ＬＣ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１１６８．５７５９；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１１６８．５７９２；Ｅｒｒｏｒ＝−２．８ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３保持時間＝６．８分。
【０３１９】
実施例１１：本発明のＬＤＣ化合物の調製
以下のＬＤＣ化合物を調製し、特徴付けした：
トラスツズマブ−Ｇｌｕ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＳＡＲ６
トラスツズマブ−Ｇｌｕ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＳＡＲ１２
トラスツズマブ−Ｇｌｕ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＳＡＲ１８
トラスツズマブ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ６
トラスツズマブ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２
トラスツズマブ−ＢＡＣ−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ６
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１８
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＳＮ３８）−ＰＳＡＲ１８
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニド−エキサテカン）−ＰＳＡＲ１８
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＰＮＵ１５９６８２）−ＰＳＡＲ１２
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＰＮＵ１５９６８２）−ＰＳＡＲ１８
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ２４
ＣＤ１９−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ２４
ＣＤ２２−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ２４
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１８
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ［トリアゾール−グルクロニド（ＭＭＡＥ）２］−ＰＳＡＲ２４
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ［トリアゾール−ガラクトシド（ＭＭＡＥ）２］−ＰＳＡＲ２４
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＳＮ３８）−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＳＮ３８）−ＰＳＡＲ１８
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＳＮ３８）−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＳＮ３８）−ＰＳＡＲ１８
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＥＧ１２
トラスツズマブ−グルクロニドＭＭＡＥ
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−ＰＳＡＲ１２−トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ
ヒトアルブミン−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ２４
それらの構造を以下の表６に記載する。
【０３２０】
【表６】
2021500412.tif 000067
2021500412.tif 000068
2021500412.tif 000069
2021500412.tif 000070
2021500412.tif 000071
2021500412.tif 000072
2021500412.tif 000073
2021500412.tif 000074
１１．１）複合体の調製
１１．１．１）抗体−薬物−複合体の調製
抗体の溶液（ＰＢＳ７．４＋１ｍＭ  ＥＤＴＡ中１０ｍｇ／ｍＬ）を、１４モル当量のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）で、３７℃で２時間処理した。マレイミドベースのカップリングについては、完全に還元された抗体を、Ａｍｉｃｏｎ  ３０Ｋ遠心フィルターデバイス（Merck Millipore）を用いた３ラウンドの希釈／遠心分離によって、リン酸カリウム１００ｍＭ  ｐＨ７．４＋１ｍＭ  ＥＤＴＡとバッファー交換した。１０〜１２当量の薬物リンカー（１２ｍＭ  ＤＭＳＯストック溶液から）を抗体に加えた（残留ＤＭＳＯ＜１０％ｖ／ｖ）。溶液を室温で３０分間インキュベートした。ブロモアセトアミドベースのカップリングについては、完全に還元された抗体をホウ酸バッファー５０ｍＭ  ｐＨ８．１＋１ｍＭ  ＥＤＴＡでバッファー交換し、１６モル当量の薬物−リンカーを用いて、暗所で、３７℃で２４時間コンジュゲーションを実行した。Ａｍｉｃｏｎ  ３０Ｋ遠心フィルターデバイスを用いた４ラウンドの希釈／遠心分離により、複合体をＰＢＳ７．４でバッファー交換／精製した。あるいは、ＰＤ  ＭｉｎｉＴｒａｐ  Ｇ−２５カラム（GE Healthcare）を用いて複合体をバッファー交換／精製し、滅菌濾過した（０．２０μｍＰＥＳフィルター）。自己加水分解性マレイミド（ＭＡＬ−フェニル）基を組み込んだ複合体を、ＰＢＳ７．４中、３７℃で４８時間、５ｍｇ／ｍＬでインキュベートして、スクシンイミジル部位の完全な加水分解を確実にした。最終的なタンパク質濃度を、Ｃｏｌｉｂｒｉマイクロボリューム分光計装置（Titertek Berthold）を用いて２８０ｎｍで分光光度的に評価した。
【０３２１】
１１．１．２）ヒトアルブミン−薬物−複合体の調製
ヒトアルブミンの溶液（リン酸カリウム１００ｍＭ  ｐＨ７．４＋１ｍＭ  ＥＤＴＡ中１０ｍｇ／ｍＬ）に、２モル当量の薬物−リンカー（１２ｍＭ  ＤＭＳＯストック水溶液から）を加えた。残留ＤＭＳＯは＜１０％（ｖ／ｖ）であった。溶液を室温で４時間インキュベートした。Ａｍｉｃｏｎ  ３０Ｋ遠心フィルターデバイスを用いた４ラウンドの希釈／遠心分離により、複合体をＰＢＳ７．４でバッファー交換／精製した。あるいは、ＰＤ  ＭｉｎｉＴｒａｐ  Ｇ−２５カラム（GE Healthcare）を用いて複合体をバッファー交換／精製し、滅菌濾過した（０．２０μｍＰＥＳフィルター）。複合体を、ＰＢＳ７．４中、３７℃で４８時間、５ｍｇ／ｍＬでインキュベートして、スクシンイミジル部位の完全な加水分解を確実にした。最終的なタンパク質濃度を、Ｃｏｌｉｂｒｉマイクロボリューム分光計デバイス（Titertek Berthold）を用いて２８０ｎｍで分光光度的に評価した。
【０３２２】
１１．２）複合体の特徴付け
得られた複合体を以下のように特徴付けた：
逆相液体クロマトグラフィー−質量分析（ＲＰＬＣ−ＭＳ）：
変性ＲＰＬＣ−ＱＴｏＦ分析を、上述したＵＨＰＬＣ法５を用いて行った。簡単に述べると、複合体を、水／アセトニトリル＋０．１％ギ酸（０．４ｍＬ／分）の移動相の勾配を用いて、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＰＬＲＰ−Ｓ  １０００Å  ２．１×１５０ｍｍ  ８μｍ（８０℃）で溶出し、５００〜３５００ｍ／ｚ範囲（ＥＳＩ＋）をスキャンするＢｒｕｋｅｒ  Ｉｍｐａｃｔ  ＩＩ（商標）Ｑ−ＴｏＦ質量分析計を用いて検出した。Ｂｒｕｋｅｒ  Ｃｏｍｐａｓｓ（登録商標）ソフトウェアに含まれるＭａｘＥｎｔアルゴリズムを用いてデータをデコンボリュートした。
【０３２３】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）：
ＳＥＣは、１５μＬ未満のカラム外容量を有するＡｇｉｌｅｎｔ１０５０ＨＰＬＣシステム（内径０．１２ｍｍのｐｅｅｋチューブの短い切片及びマイクロボリュームＵＶフローセルを備える）で行った。カラムは、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（登録商標）Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＢＥＨ  ＳＥＣ  ２００Å  ４．６×１５０ｍｍ  １．７μｍ（室温で維持）又はＡｇｉｌｅｎｔ  ＡｄｖａｎｃｅＢｉｏ  ＳＥＣ  ３００Å  ４．６×１５０ｍｍ  ２．７μｍ（室温で維持）であった。移動相は、１００ｍＭリン酸ナトリウム及び２００ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ６．８）であった。１０％アセトニトリル（ｖ／ｖ）を移動相に加えて、固定相との二次疎水性相互作用を最小限にし、細菌増殖を防止した。流速は０．３５ｍＬ／分であった。ＵＶ検出を２８０ｎｍでモニターした。
【０３２４】
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）：
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）をＡｇｉｌｅｎｔ  １０５０  ＨＰＬＣシステムで行った。カラムは、Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫ−ＧＥＬ  ＢＵＴＹＬ−ＮＰＲ  ４．６×３５ｍｍ  ２．５μｍ（２５℃）であった。移動相Ａは、１．５Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４＋２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ７．０であった。移動相Ｂは、２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ７．０＋１５％イソプロパノール（ｖ／ｖ）であった。線形勾配は１０分で０％Ｂ〜１００％Ｂであり、続いて１００％Ｂで３分間保持した。流速は０．７５ｍＬ／分であった。ＵＶ検出を２２０及び２８０ｎｍでモニターした。
【０３２５】
１１．３）複合体の特徴付けの概要
複合体は、それらの変性ＲＰＬＣクロマトグラム（ＤＡＲ８複合体）上に１つのＬＣ−１ｄ（１つの薬物リンカーが付着した軽鎖）及び１つのＨＣ−３ｄ（３つの薬物−リンカーが付着した重鎖）吸光度ピークを示した。重鎖の質量分析については、主要なグリコフォームが報告された（トラスツズマブについてのＧ０Ｆ）。複合体は、それらのＨＩＣクロマトグラム上に単一の吸光度ピークを示した。
【０３２６】
トラスツズマブ−Ｇｌｕ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＳＡＲ６（ＤＡＲ８）：
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５４１６；Ｏｂｓ：２５４１７／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５６５２９；Ｏｂｓ：５６５２８
モノマー純度：９７．２％
ＨＩＣ保持時間：８．８分
トラスツズマブ−Ｇｌｕ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＳＡＲ１２（ＤＡＲ８）：
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５８４４；Ｏｂｓ：２５８４４／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５７８０５；Ｏｂｓ：５７８０５
モノマー純度：９９．０％
ＨＩＣ保持時間：８．８分
トラスツズマブ−Ｇｌｕ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＳＡＲ１８（ＤＡＲ８）：
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２６２７０；Ｏｂｓ：２６２７０／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５９０８６；Ｏｂｓ：５９０８６
モノマー純度：９６．５％
ＨＩＣ保持時間：８．８分
トラスツズマブ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ６（ＤＡＲ８）：
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５３６０；Ｏｂｓ：２５３６０／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５６３５２；Ｏｂｓ：５６３５３
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：７．６分
トラスツズマブ−Ｌｙｓ（グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２（ＤＡＲ８）：
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５７８６；Ｏｂｓ：２５７８６／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５７６３４；Ｏｂｓ：５７６３２
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：７．５分
トラスツズマブ−ＢＡＣ−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２（ＤＡＲ８）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５６６１；Ｏｂｓ：２５６６２／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５７２６４；Ｏｂｓ：５７２６２
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：７．０分（ＤＡＲ８複合体）。このＡＤＣはＨＩＣクロマトグラムで観察されたように、〜２０％のＤＡＲ６；〜２０％のＤＡＲ７、及び〜６０％のＤＡＲ８複合体を含有する不均質な混合物である。
【０３２７】
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ６（ＤＡＲ８）（＝ＡＤＣ−ＰＳＡＲ６）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５３６８；Ｏｂｓ：２５３６８／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５６３８２；Ｏｂｓ：５６３８０
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：７．５分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２（ＤＡＲ８）（＝ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１２）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５７９４；Ｏｂｓ：２５７９４／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５７６６０；Ｏｂｓ：５７６６０
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：７．１分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１２（ＤＡＲ８）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５８７１；Ｏｂｓ：２５８７０／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５７８８９；Ｏｂｓ：５７８８８
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：９．２分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１８（ＤＡＲ８）（＝ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１８）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２６２２１；Ｏｂｓ：２６２２１／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５８９３９；Ｏｂｓ：５８９３９
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：６．８分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＳＮ３８）−ＰＳＡＲ１８（ＤＡＲ８）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５５６７；Ｏｂｓ：２５５６７／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５６９７９；Ｏｂｓ：５６９７７
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：５．１分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニド−エキサテカン）−ＰＳＡＲ１８（ＤＡＲ８）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５９３８；Ｏｂｓ：２５９３７／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５８０９２；Ｏｂｓ：５８０８９
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：５．７分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＰＮＵ１５９６８２）−ＰＳＡＲ１２（ＤＡＲ８）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５４４６；Ｏｂｓ：２５４４６／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５６６１４；Ｏｂｓ：５６６１２
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：５．２分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＰＮＵ１５９６８２）−ＰＳＡＲ１８（ＤＡＲ８）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５８７２；Ｏｂｓ：２５８７２／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５７８９４；Ｏｂｓ：５７８９２
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：５．１分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ２４（ＤＡＲ８）（＝ＡＤＣ−ＰＳＡＲ２４）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２６６４７；Ｏｂｓ：２６６７４／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：６０２１８；Ｏｂｓ：６０２１８
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：６．７分
ＣＤ１９−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ２４（ＤＡＲ８）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２７３４７；Ｏｂｓ：２７３４７／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：６０１３７；Ｏｂｓ：６０１３２
モノマー純度：９２．６％
ＨＩＣ保持時間：６．８分
ＣＤ２２−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ２４（ＤＡＲ８）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２７３４１；Ｏｂｓ：２７３４１／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：６０３１４；Ｏｂｓ：６０３１１
モノマー純度：９７．４％
ＨＩＣ保持時間：６．８分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ１８（ＤＡＲ１６）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２７５４４；Ｏｂｓ：２７５４５／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：６２９１０；Ｏｂｓ：６２９０７
モノマー純度：９８．５％
ＨＩＣ保持時間：８．７分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ［トリアゾール−グルクロニド（ＭＭＡＥ）２］−ＰＳＡＲ２４（ＤＡＲ１６）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２７５６９；Ｏｂｓ：２７５７０／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：６２９８５；Ｏｂｓ：６２９８３
モノマー純度：９８．２％
ＨＩＣ保持時間：９．９分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ［トリアゾール−ガラクトシド（ＭＭＡＥ）２］−ＰＳＡＲ２４（ＤＡＲ１６）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２７５５５；Ｏｂｓ：２７５５４／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：６２９４３；Ｏｂｓ：６２９４０
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：１０．２分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＳＮ３８）−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−ＳＮ３８）−ＰＳＡＲ１８（ＤＡＲ１６）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２６２３７；Ｏｂｓ：２６２３７／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５８９８９；Ｏｂｓ：５８９８７
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：６．６分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＳＮ３８）−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＳＮ３８）−ＰＳＡＲ１８（ＤＡＲ１６）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２７２７０；Ｏｂｓ：２７２７０／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：６２０８６；Ｏｂｓ：６２０８７
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：５．７分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＥＧ１２（ＤＡＲ８）（＝ＡＤＣ−ＰＥＧ１２）
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５５４１；Ｏｂｓ：２５５４１／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５６９０１；Ｏｂｓ：５６９００
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：７．４分
トラスツズマブ−グルクロニドＭＭＡＥ（ＤＡＲ８）：
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２４７２１；Ｏｂｓ：２４７２０／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５４４３９；Ｏｂｓ：５４４３８
モノマー純度：９５．２％
ＨＩＣ保持時間：９．２分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ（ＤＡＲ８）（＝ＡＤＣ−ＰＳＡＲ０）：
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２４８８４；Ｏｂｓ：２４８８４／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５４９２６；Ｏｂｓ：５４９２６
モノマー純度：９８．５％
ＨＩＣ保持時間：８．４分
トラスツズマブ−ＭＡＬ−フェニル−ＰＳＡＲ１２−トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ（ＤＡＲ８）（＝ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１２Ｌ）：
デコンボリュートされたＬＣ−１ｄ  Ｃａｌｃ：２５７９３；Ｏｂｓ：２５７９３／デコンボリュートされたＨＣ−３ｄ  Ｃａｌｃ：５７６５７；Ｏｂｓ：５７６５７
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：８．５分
ヒトアルブミン−ＭＡＬ−フェニル−Ｎｇｌｙ（トリアゾール−グルクロニドＭＭＡＥ）−ＰＳＡＲ２４（ＤＡＲ１）：
デコンボリュートされたＣａｌｃ：６９７６５；Ｏｂｓ：６９６４５
モノマー純度：９０．８％
ＨＩＣ保持時間：３．９分
トラスツズマブ：
デコンボリュートされたＬＣ  Ｏｂｓ：２３４３９／デコンボリュートされたＨＣ  Ｏｂｓ：５０５９５
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：４．７分
抗ＣＤ１９抗体：
デコンボリュートされたＬＣ  Ｏｂｓ：２４１３９／デコンボリュートされたＨＣ  Ｏｂｓ：５０５１７
モノマー純度：９３．２％
ＨＩＣ保持時間：４．７分
抗ＣＤ２２抗体：
デコンボリュートされたＬＣ  Ｏｂｓ：２４１３３／デコンボリュートされたＨＣ  Ｏｂｓ：５０６９２
モノマー純度：９９＋％
ＨＩＣ保持時間：４．８分
ヒトアルブミン：
デコンボリュートされたＯｂｓ：６６５５６
モノマー純度：９２．４％
ＨＩＣ保持時間：２．５分。
【０３２８】
実施例１２：非ポリサルコシンベースの抗体−薬物−複合体（ＡＤＣ−ＰＳＡＲ０）、直交配置を有するポリサルコシンベースの抗体−薬物−複合体（ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１２）、及び線形配置を有するポリサルコシンベースの抗体−薬物−複合体（ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１２Ｌ）の疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）特性
バルク溶媒への結合されたペイロードの相対露出及びトラスツズマブベースのＤＡＲ８  ＡＤＣの見かけの疎水性を、実施例１１に記載の方法に従って、Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫ−ＧＥＬ  ＢＵＴＹＬ−ＮＰＲカラム上の疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって評価した。その結果を図１に示す。ポリサルコシンは、薬物ユニットとの関係で並列の（すなわち直交の）向きにグラフトすると、効率的な疎水性マスキング特性が得られ、複合体（ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１２）の見かけの疎水性が低下する。しかしながら、ポリサルコシンが直線状の（すなわち、連続の）配置にある場合、複合体の見かけの疎水性の減少は観察されない（ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１２Ｌ）。
【０３２９】
実施例１３：ポリサルコシン及びポリエチレングリコールベースの抗体−薬物−複合体の疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）特性
バルク溶媒への結合されたペイロードの相対露出及びトラスツズマブベースのＤＡＲ８  ＡＤＣの見かけの疎水性を、実施例１１に記載の方法に従って、Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫ−ＧＥＬ  ＢＵＴＹＬ−ＮＰＲカラム上の疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって評価した。結果を図２に示す。等しい長さ（ｎ＝１２モノマー単位）で、ポリサルコシンは、ポリエチレングリコール（より低い保持時間）よりも良好な疎水性マスキング特性を与える。
【０３３０】
実施例１４：３ｍｇ／ｋｇ容量の非ポリサルコシンベースの抗体−薬物−複合体（ＡＤＣ−ＰＳＡＲ０）及びポリサルコシンベースの抗体−薬物−複合体（ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１２）の単回静脈内投与後のマウスにおける薬物動態特性（時間総抗体濃度）
雄のＳＣＩＤマウス（４〜６週齢）にＡＤＣを３ｍｇ／ｋｇで尾静脈（各投与群５匹、無作為に割り当て）を介して注射した。血液を、種々の時点で後眼窩出血を介してクエン酸チューブに採取し、血漿に処理した。ヒトＩｇＧ  ＥＬＩＳＡキット（Stemcell（商標）Technologies）を用いて、製造者のプロトコルに従って全ＡＤＣ濃度を評価した。トラスツズマブの標準曲線を定量に用いた。薬物動態パラメーター（クリアランス及びＡＵＣ）は、ＰＫ機能を組み込んだＭｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｅｘｃｅｌ（登録商標）ソフトウェア（Usansky et al., Department of Pharmacokinetics and Drug Metabolism, Allergan, Irvine, USAによって開発されたアドイン）を用いた非コンパートメント解析によって計算した。結果を図３に示す。ポリサルコシンを含むＡＤＣは、ポリサルコシンを含まないＡＤＣと比較した場合、好ましい薬物動態を示す。
【０３３１】
実施例１５：３ｍｇ／ｋｇの非ポリサルコシンベースのＡＤＣ（ＡＤＣ−ＰＳＡＲ０）及びポリサルコシンベースのＡＤＣ（ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１２）を１回静脈内投与したＢＴ−４７４乳癌異種移植片モデルにおける腫瘍体積（ｍｍ３）及び生存曲線
ＢＴ−４７４乳癌細胞を雌のＳＣＩＤマウス（４週齢）に皮下移植した。前記実施例１４からのＡＤＣは腫瘍が約１５０ｍｍ３まで増殖したとき、３ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内に１回投与した（２０日目、１群当たり５匹の動物、群間の最初の腫瘍体積の差を最小限にするように割り当てた）。結果を図４Ａ及び４Ｂに示す。腫瘍体積をカリパス装置により３〜５日毎に測定し、式（Ｌ×Ｗ２）／２を用いて計算した。腫瘍体積が１０００ｍｍ３を超えた場合、マウスを屠殺した。ポリサルコシンを含むＡＤＣは、ポリサルコシンを含まないＡＤＣと比較した場合、インビボ活性が改善されている。処置したマウスにおいて有意な体重変化は観察されなかった。
【０３３２】
実施例１６：３ｍｇ／ｋｇ用量のポリサルコシンベースの抗体−薬物−複合体（ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１２）及びポリ（エチレングリコール）ベースの抗体−薬物−複合体（ＡＤＣ−ＰＥＧ１２）の単回静脈内投与後のマウスにおける薬物動態特性（時間に対する全抗体濃度）
実験は、雄のＣＤ−１マウス（４〜６週齢）において、実施例１４に記載の手順に従って行った。結果を図５に示す。ポリサルコシンを含むＡＤＣは、ポリ（エチレングリコール）を含むＡＤＣと比較した場合、薬物動態パラメータが改善されている。
【０３３３】
実施例１７：直交の向きで異なるＰＳＡＲ長さを有する２．５ｍｇ／ｋｇのポリサルコシンベースの抗体−薬物複合体（ＡＤＣ−ＰＳＡＲ６、ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１２、ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１８、ＡＤＣ−ＰＳＡＲ２４）；直交ポリ（エチレングリコール）ベースの抗体−薬物複合体（ＡＤＣ−ＰＥＧ１２）及び直線状のポリサルコシンベースの抗体−薬物複合体（ＡＤＣ−ＰＳＡＲ１２Ｌ）を１回静脈内投与した、ＢＴ−４７４乳癌異種移植片モデルにおける腫瘍体積（ｍｍ３）
実験は、実施例１５に記載したように行った。ＢＴ−４７４乳癌細胞を雌のＳＣＩＤマウス（４週齢）に皮下移植した。腫瘍が約１５０ｍｍ３まで増殖したとき、ＡＤＣを２．５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内に１回投与した（１３日目、１群当たり６匹の動物、群間の最初の腫瘍体積の差を最小限にするように割り当てた）。結果を図６に示す。処置したマウスにおいて有意な体重変化は観察されなかった。
【図面の簡単な説明】
【０３３４】
【図１】図１は、実施例１２による疎水性相互作用クロマトグラムを表す。
【図２】図２は、実施例１３による疎水性相互作用クロマトグラムを表す。
【図３】図３は、実施例１４によるマウスにおける薬物動態特性を表す。
【図４Ａ】図４Ａは、実施例１５による腫瘍体積を時間の関数で表す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、実施例１５によるマウスの生存率を表す。
【図５】図５は、実施例１６によるマウスにおける薬物動態特性を表す。
【図６】図６は、実施例１７による腫瘍体積を時間の関数で表す。
【図１】
2021500412.tif 000083
【図２】
2021500412.tif 000084
【図３】
2021500412.tif 000085
【図４Ａ】
2021500412.tif 000086
【図４Ｂ】
2021500412.tif 000087
【図５】
2021500412.tif 000088
【図６】
2021500412.tif 000089
【国際調査報告】
2021500412.tif 000090
2021500412.tif 000091