(57)【要約】本開示は、抗ＡＬＫ７抗体などのＡＬＫ７結合タンパク質、ならびに組成物およびＡＬＫ７結合タンパク質を製造するための方法を提供する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７活性を阻害またはアンタゴナイズする。さらに、本開示は、過体重、肥満、糖尿病、過体重、肥満、２型糖尿病、およびそれらに関連した状態、代謝疾患、ならびにＡＬＫ７を標的とすることにより治療、予防、または改善することができる他の疾患もしくは状態を診断および治療するための組成物および方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＬＫ７タンパク質の少なくとも１つの一次エピトープに特異的に結合するアクチビン受容体様キナーゼ７（ＡＬＫ７）結合タンパク質であって、前記少なくとも１つの一次エピトープが配列番号３１０、３１３、および３１７から選択されるエピトープと本質的に同じである、前記ＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項２】
ＡＬＫ７タンパク質の少なくとも１つのコンフォメーションエピトープにさらに特異的に結合し、前記少なくとも１つのコンフォメーションエピトープが配列番号３１１、３１２、３１４、３１５、３１６、３１８、および３１９から選択されるエピトープと本質的に同じである、請求項１に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項３】
前記少なくとも１つの一次またはコンフォメーションエピトープが、配列番号３１０〜３１９と同一の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多いアミノ酸残基を共有する、請求項１または２に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項４】
ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、前記各ＣＤＲが、
（ａ）（ｉ）配列番号１０５のＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１１０のＶＬ配列、
（ｂ）（ｉ）配列番号１１７のＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１２４のＶＬ配列、
（ｃ）（ｉ）配列番号１２８のＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１３５のＶＬ配列、
（ｄ）（ｉ）配列番号１４０のＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１４８のＶＬ配列、
（ｅ）（ｉ）配列番号９１のＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号９８のＶＬ配列、
（ｆ）（ｉ）配列番号４のＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１３のＶＬ配列、
（ｇ）（ｉ）配列番号１５２のＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号９８のＶＬ配列、
（ｈ）（ｉ）配列番号１５９のＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１１０のＶＬ配列、
（ｉ）（ｉ）配列番号１６５のＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１７１のＶＬ配列、
（ｊ）（ｉ）配列番号２２のＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号３１のＶＬ配列、
（ｋ）（ｉ）配列番号４０のＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号４９のＶＬ配列、および
（ｌ）（ｉ）配列番号５８のＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号６７のＶＬ配列、
から選択される、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）のペアに由来するものであり、
前記タンパク質がＡＬＫ７に結合する、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項５】
ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、前記ＣＤＲのセットが、
（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１０２のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１０４のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１１５のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２３のアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１２５のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１４５のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１４６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１４７のアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号８８のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号８９のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、
（ｆ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号４２のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号４３のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９３のアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１５６のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１５７のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１０４のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を含むか、
（ｈ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１６３のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１６４のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１６８のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１６９のアミノ酸配列を含むか、
（ｉ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、
（ｊ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、
（ｋ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｌ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を含む
ＣＤＲの参照セットから合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１０個よりも少ない、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、
前記タンパク質がＡＬＫ７に結合する、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項６】
（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１０２のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１０４のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１１５のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２３のアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１２５のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１４５のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１４６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１４７のアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号８８のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号８９のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、
（ｈ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１５６のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１５７のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１０４のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を含むか、
（ｈ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１６３のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１６４のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１６７のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１６８のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１６９のアミノ酸配列を含むか、
（ｉ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、
（ｊ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、
（ｋ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または
（ｌ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、
（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を含む
ＣＤＲのセットを含み、
前記タンパク質がＡＬＫ７に結合する、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項７】
（ａ）（ｉ）配列番号１０５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１１０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、
（ｂ）（ｉ）配列番号１１７と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１２４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、
（ｃ）（ｉ）配列番号１２８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１３５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、
（ｄ）（ｉ）配列番号１４０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１４８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、
（ｅ）（ｉ）配列番号９１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、
（ｉｉ）配列番号９８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、
（ｆ）（ｉ）配列番号１５２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、
（ｉｉ）配列番号９８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、
（ｇ）（ｉ）配列番号１５９と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１１０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、
（ｈ）（ｉ）配列番号１６５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１７１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、
（ｉ）（ｉ）配列番号４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１３と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、
（ｊ）（ｉ）配列番号２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、
（ｉｉ）配列番号３１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、
（ｋ）（ｉ）配列番号４０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、
（ｉｉ）配列番号４９と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、および
（ｌ）（ｉ）配列番号５８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、
（ｉｉ）配列番号６７と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ
から選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、
前記タンパク質がＡＬＫ７に結合する、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項８】
前記ＶＨとＶＬのペアが、
（ａ）配列番号１０５のＶＨ配列と配列番号１１０のＶＬ配列、
（ｂ）配列番号１１７のＶＨ配列と配列番号１２４のＶＬ配列、
（ｃ）配列番号１２８のＶＨ配列と配列番号１３５のＶＬ配列、
（ｄ）配列番号１４０のＶＨ配列と配列番号１４８のＶＬ配列、
（ｅ）配列番号９１のＶＨ配列と配列番号９８のＶＬ配列、
（ｆ）配列番号１５２のＶＨ配列と配列番号９８のＶＬ配列、
（ｇ）配列番号１５９のＶＨ配列と配列番号１１０のＶＬ配列、
（ｈ）配列番号１６５のＶＨ配列と配列番号１７１のＶＬ配列、
（ｉ）配列番号４のＶＨ配列と配列番号１３のＶＬ配列、
（ｊ）配列番号２２のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列、
（ｋ）配列番号４０のＶＨ配列と配列番号４９のＶＬ配列、および
（ｌ）配列番号５８のＶＨ配列と配列番号６７のＶＬ配列
から選択され、
前記タンパク質がＡＬＫ７に結合する、請求項７に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項９】
（ａ）（ｉ）配列番号１０５の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１１０の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、
（ｂ）（ｉ）配列番号１１７の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１２４の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、
（ｃ）（ｉ）配列番号１２８の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１３５の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、
（ｄ）（ｉ）配列番号１４０の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１４８の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、
（ｅ）（ｉ）配列番号９１の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号９８の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、
（ｆ）（ｉ）配列番号１５２の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号９８の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、
（ｇ）（ｉ）配列番号１５９の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１１０の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、
（ｈ）（ｉ）配列番号１６５の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１７１の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、
（ｉ）（ｉ）配列番号４の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号１３の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、
（ｊ）（ｉ）配列番号２２の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号３１の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、
（ｉ）（ｉ）配列番号４０の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号４９の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、および
（ｌ）（ｉ）配列番号５８の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、
（ｉｉ）配列番号６７の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列
から選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、
前記タンパク質がＡＬＫ７に結合する、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項１０】
（ａ）（ｉ）配列番号１９０または３２０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＨＣと、
（ｉｉ）配列番号１９１または３２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＬＣ、および
（ｂ）（ｉ）配列番号１９２または３２４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＨＣと、
（ｉｉ）配列番号１９３または３２６と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＬＣ、
から選択されるＨＣとＬＣのペアを含み、
前記タンパク質がＡＬＫ７に結合する、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項１１】
（ａ）（ｉ）配列番号１９４または３２８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＨＣと、
（ｉｉ）配列番号１９１または３２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＬＣ、および
（ｂ）（ｉ）配列番号１９５または３３０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＨＣと、
（ｉｉ）配列番号１９３または３２６と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＬＣ、
から選択されるＨＣとＬＣのペアを含み、
前記タンパク質がＡＬＫ７に結合する、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項１２】
（ａ）（ｉ）配列番号１９６または３３２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＨＣと、
（ｉｉ）配列番号１９１または３２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＬＣ、および
（ｂ）（ｉ）配列番号１９７または３３４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＨＣと、
（ｉｉ）配列番号１９３または３２６と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＬＣ、
から選択されるＨＣとＬＣのペアを含み、
前記タンパク質がＡＬＫ７に結合する、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項１３】
ＡＬＫ７上の重複エピトープに結合し、前記重複エピトープが、配列番号３１０〜３１９に記載されるエピトープと少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多い同じアミノ酸残基を共有する、ＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項１４】
先行請求項のいずれかに記載の前記ＡＬＫ７結合タンパク質と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する、ＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項１５】
ｉ）請求項５または６のＣＤＲ配列とは異なる少なくとも１つのＣＤＲ配列、
ｉｉ）請求項４または請求項７〜９の可変配列とは異なる少なくとも１つの可変領域配列、および／または
ｉｉｉ）請求項１０の配列とは異なる少なくとも１つの配列
を含み、
好ましくは、配列番号１９０、３２０、１９２、または３２４の定常領域に少なくとも１つの置換、欠失、および／または挿入をさらに含む、請求項１３または１４に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項１６】
ＡＬＫ７活性をアンタゴナイズすることが可能な、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項１７】
脂肪細胞内の脂肪分解を増加させることが可能な、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項１８】
白色または褐色脂肪細胞内の脂肪分解を増加させることが可能な、請求項１７に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項１９】
脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害をアンタゴナイズすることが可能な、請求項１３〜１８のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項２０】
白色または褐色脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害をアンタゴナイズすることが可能な、請求項１３〜１８のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項２１】
脂肪細胞内の脂肪分解を、少なくとも５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％増加させることが可能な、請求項１７〜１８のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項２２】
脂肪分解が、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる脂肪分解アッセイで測定される、請求項１７〜１８のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項２３】
前記脂肪分解アッセイが、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる、請求項１７〜２２のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項２４】
（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および前記１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、
（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、
（ｃ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）とＡＬＫ７に対する結合について競合すること、
（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、
（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、
（ｆ）（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定した場合に）１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤでＡＬＫ７に結合すること、および
（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、
から選択される少なくとも１つの特性を有する、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項２５】
脂肪細胞内のグリセロール産生を増加させる、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項２６】
ＡＬＫ７に特異的に結合する抗体である、先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項２７】
ＬＡＬＡまたはＬＡＬＡ−ＰＧ変異をその重鎖定常領域内にさらに含む、請求項２６に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項２８】
前記抗体が、モノクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである、請求項２６または２７に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項２９】
前記ＡＬＫ７結合抗体フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子である、請求項２８に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項３０】
前記抗体が、
（ａ）ヒトＩｇＡ定常ドメイン、
（ｂ）ヒトＩｇＤ定常ドメイン、
（ｃ）ヒトＩｇＥ定常ドメイン、
（ｄ）ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、
（ｅ）ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、
（ｆ）ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、
（ｇ）ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、および
（ｈ）ヒトＩｇＭ定常ドメイン
から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項３１】
前記抗体が、
（ａ）ヒトＩｇκ定常ドメイン、および
（ｂ）ヒトＩｇλ定常ドメイン
から選択される軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項３２】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインおよびヒトκ軽鎖定常ドメインをさらに含む、請求項２６〜３１のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項３３】
前記抗体が、その重鎖定常ドメインに変異、置換、または改変をさらに含む、請求項２６〜３２のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項３４】
先行請求項のいずれかに記載のＡＬＫ７結合タンパク質をコードする、核酸分子または核酸分子のセット。
【請求項３５】
ｃＤＮＡである、請求項３４に記載の核酸分子または核酸分子のセット。
【請求項３６】
請求項３４または３５に記載の核酸分子または核酸分子のセットのフラグメントである、ハイブリダイゼーションプローブ、ＰＣＲプライマー、またはシークエンシングプライマーとして使用するのに充分なポリヌクレオチドもしくはｃＤＮＡ分子、またはその相補体。
【請求項３７】
前記核酸分子が調節配列と機能的に連結されている、請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の核酸分子またはｃＤＮＡ分子。
【請求項３８】
請求項３４〜３７のいずれか１項に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項３９】
請求項３４〜３７のいずれか１項に記載の核酸分子、または請求項３８に記載の前記ベクターを含む宿主細胞。
【請求項４０】
前記宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項３９に記載の宿主細胞。
【請求項４１】
前記宿主細胞が、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項３９に記載の宿主細胞。
【請求項４２】
請求項１〜３３のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質を製造する方法であって、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の宿主細胞を、前記ＡＬＫ７結合タンパク質を産生するのに適当な条件下で培養することを含む、前記方法。
【請求項４３】
宿主細胞から分泌されたＡＬＫ７結合タンパク質を単離することをさらに含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
請求項４２または４３に記載の方法を用いて製造されたＡＬＫ７結合タンパク質。
【請求項４５】
請求項１〜３３のいずれか１項に記載ＡＬＫ７結合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項４６】
薬剤として使用するための請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
ＡＬＫ７の発現またはＡＬＫ７シグナル伝達に関連した疾患または状態を治療および／または改善するための、請求項４６に記載の医薬組成物の使用。
【請求項４８】
前記疾患または状態が、肥満（例えば、腹部または内臓肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリック症候群および他の代謝疾患または状態；例えば、低ＨＤＬレベル、高ＬＤＬレベル、高脂血症、高トリグリセリド血症または脂質異常症などの脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド減少；炎症（例えば、肝臓の炎症および／または脂肪組織の炎症）、脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、高ＬＤＬレベルおよび高コレステロール血症）；冠状動脈性心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化症を含む心疾患などの心血管疾患；動脈硬化症および高血圧症；シンドロームＸ；血管再狭窄；神経障害；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸不全、腎疾患（ 例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値の上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚の濃い染み）；およびがん（例えば、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在化骨髄腫、または髄外性骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、胃癌、子宮癌または結腸癌）；および／または、上記の疾患または状態の１つ以上、または過剰な体脂肪に関連した他の疾患／状態から選択される要素である、請求項４７に記載の使用。
【請求項４９】
前記ＡＬＫ７結合タンパク質が、標識基またはエフェクター基をさらに含む、請求項４５または４６に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記エフェクター基が、放射性同位体、放射性核種、毒素、治療剤および化学療法剤から選択される、請求項４９に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
対象におけるＡＬＫ７発現、またはＡＬＫ７介在性シグナル伝達の増加に関連した疾患または状態を治療および／または改善するための方法であって、かかる治療および／または改善を要する対象に、有効量の、請求項１〜３３のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質を含む組成物、または請求項４５、４６、４９、または５０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項５２】
前記疾患または状態が、肥満（ 例えば、腹部肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリック症候群および他の代謝疾患または状態；例えば、低ＨＤＬレベル、高ＬＤＬレベル、高脂血症、高トリグリセリド血症または脂質異常症などの脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド減少；炎症（例えば、肝臓の炎症および／または脂肪組織の炎症）、脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、高ＬＤＬレベルおよび高コレステロール血症）；冠状動脈性心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化症を含む心疾患などの心血管疾患；動脈硬化症および高血圧症；シンドロームＸ；血管再狭窄；神経障害；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸不全、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値の上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚の濃い染み）；およびがん（例えば、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在化骨髄腫、または髄外性骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、胃癌、子宮癌または結腸癌）；および／または、上記の疾患または状態の１つ以上、または過剰な体脂肪に関連した他の疾患／状態から選択される要素である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記ＡＬＫ７結合タンパク質または医薬組成物が、単独または併用療法として投与される、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項５４】
有効量の、請求項１〜３３のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質、または請求項４５、４６、４９、または５０に記載の医薬組成物を投与することを含む、対象のＡＬＫ７活性を低下させる方法。
【請求項５５】
プラダー・ウィリ症候群を治療および／または改善するための方法であって、かかる治療および／または改善を要する対象に、有効量の、請求項１〜３３のいずれか１項に記載のＡＬＫ７結合タンパク質を含む組成物、または請求項４５、４６、４９、または５０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年１０月２５日に出願された米国仮特許出願第６２／５７７，０３８号に基づく優先権を主張するものであり、その全容を参照により本明細書に援用するものである。
【０００２】
電子的に提出される配列表の参照
本出願と共にＡＳＣＩＩテキストファイルＡＰＨ−００６２５＿ＳＬ（サイズ：２２７，５０１バイト、作成日：２０１８年１０月２４日）の形で提出される、電子的に提出される配列表の内容はその全体を参照により本明細書に援用するものである。
【背景技術】
【０００３】
過体重および肥満は、米国および世界中の多くの国々で蔓延しており、すべての年齢、人種および民族間で男女の区別なく増加している。過体重および肥満は、日常生活の活動および生活様式を妨げる他の疾患または状態とも関連している。肥満は、２型糖尿病、炎症、ならびに心血管疾患、肺疾患、脂肪肝疾患、神経疾患、および肝疾患、および腎疾患などの他の疾患および状態の重要な危険因子としても認識されている。
【０００４】
２型糖尿病はやはり同様に蔓延している慢性進行性疾患である。ＩＩ型糖尿病の確立された治療法は存在していないが、この疾患の不可避な転帰を遅延または緩和しようとする多くの認識されている治療法が存在している。２型糖尿病は、初期には食事および運動の調節により、特に肥満患者では減量によって治療される。臨床像を改善する体重減少量はわずかな場合もあり（例えば、４．４〜１１ポンド）、これは脂肪組織活動のあまり理解されていない側面、例えば化学シグナル伝達（特に腹部臓器内およびその周辺の内臓脂肪組織中の）によるものと考えられる。
【０００５】
上記を鑑み、過体重、肥満および２型糖尿病の蔓延を制御し、これらを治療するための新たな治療法が求められている。本開示の目的は、ＡＬＫ７結合タンパク質、ならびに過体重、肥満、２型糖尿病、およびそれらに関連する状態、ＡＬＫ７を標的とすることにより治療、予防、または改善することが可能な代謝性疾患および他の疾患もしくは状態の診断および治療、予防および／または改善におけるＡＬＫ７結合タンパク質の使用を提供することにある。
【発明の概要】
【０００６】
本開示は、ＡＬＫ７結合タンパク質およびＡＬＫ７結合タンパク質の使用方法を提供する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、１つ以上の同族ＡＬＫ７リガンドおよび／または１つ以上の同族ＡｃｔＲＩ受容体へのＡＬＫ７の結合を阻害または遮断することが可能である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７、ならびにＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）およびＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、またはＮｏｄａｌの多量体化を阻害または遮断することが可能である。本開示はまた、ＡＬＫ７発現および／またはＡＬＫ７介在性シグナル伝達の増加に関連する疾患または状態を診断、または治療、予防および／または改善するためのＡＬＫ７結合タンパク質の使用方法も提供するものである。かかる疾患または状態としては、これらに限定されるものではないが、過体重、肥満（例えば、腹部肥満）；インスリン抵抗性；メタボリック症候群および他の代謝疾患または状態；例えば、低ＨＤＬレベル、高ＬＤＬレベル、高脂血症、高トリグリセリド血症または脂質異常症などの脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド減少；炎症（例えば、肝臓の炎症および／または脂肪組織の炎症）、脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、高ＬＤＬレベルおよび高コレステロール血症）；冠状動脈性心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、疾患性線維素溶解、アテローム性動脈硬化症を含む心疾患などの心血管疾患；動脈硬化症および高血圧症；シンドロームＸ；血管再狭窄；神経障害；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸不全、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値の上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚の濃い染み）；およびがん（例えば、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在化骨髄腫、または髄外性骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、胃癌、子宮癌または結腸癌）；ならびに、上記の疾患または状態の１つ以上、または過剰な体重（例えば、ボディマス指数（ＢＭＩ）≧２５ｋｇ／ｍ２）もしくは過剰な体脂肪に関連した他の疾患／状態が挙げられる。本開示は、これに限定されるものではないが、抗体などのアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質を使用して体重を減少させる（例えば、体重減少を促進する）ための方法、および体重増加を減少させる（例えば、体重増加を防止する）ための方法も提供する。
【０００７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合する。さらなる実施形態では、提供されるＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７に特異的に結合し、以下から選択される少なくとも１つの特性を有する。すなわち、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合についてＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢと競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７に結合するＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。
【０００８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に記載されるＡＬＫ７タンパク質の少なくとも１つの一次エピトープに特異的に結合する。例えば、少なくとも１つの一次エピトープは、配列番号３１０、３１３、および３１７から選択されるエピトープと同じ、または本質的に同じであってよい。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に記載されるＡＬＫ７タンパク質の少なくとも１つの二次またはコンフォメーションエピトープに特異的に結合する。例えば、少なくとも１つのコンフォメーションエピトープは、配列番号３１１、３１２、３１４、３１５、３１６、３１８、および３１９から選択されるエピトープと同じ、または本質的に同じであってよい。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に記載されるＡＬＫ７タンパク質の少なくとも１つの一次エピトープおよび少なくとも１つの二次またはコンフォメーションエピトープに特異的に結合する。
【００１１】
「本質的に同じ」なる用語は、例えば、配列番号３１０〜３１９に反映されるものなどの本明細書に記載されるエピトープと少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多い同じアミノ酸残基を有する主要および／またはコンフォメーションエピトープのことを指す。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７上の少なくとも１つの重複エピトープに特異的に結合し、少なくとも１つの重複エピトープは、例えば、配列番号３１０〜３１９に反映されるものなどの本明細書に記載される主要またはコンフォメーションエピトープと重複する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７上の重複エピトープに特異的に結合し、重複エピトープは、配列番号３１０〜３１９に記載されるエピトープと少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多い同じアミノ酸残基を共有する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に記載されるものと本質的に同じかまたは重複する少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する。特定の実施形態では、少なくとも１つの本質的に同じかまたは重複するエピトープは、ＡＬＫ７結合タンパク質とＡＬＫ７に対する結合について交差遮断および／または競合する。
【００１４】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）のセット：重鎖可変領域（ＶＨ）−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、軽鎖可変領域（ＶＬ）−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３を含み、各ＣＤＲは、表１Ａに開示される重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）のペア中に存在する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）配列番号４のＶＨ配列と配列番号１３のＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列、（ｃ）配列番号４０のＶＨ配列と配列番号４９のＶＬ配列、および（ｄ）配列番号５８のＶＨ配列と配列番号６７のＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペア中に存在するＣＤＲのセットを含む。
【００１５】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）のセット：重鎖可変領域（ＶＨ）−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、軽鎖可変領域（ＶＬ）−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３を含み、各ＣＤＲは、表１Ｂまたは表３に開示される重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）のペア中に存在する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）配列番号１５２のＶＨ配列と配列番号９８のＶＬ配列、（ｂ）配列番号１５９のＶＨ配列と配列番号１１０のＶＬ配列、および（ｃ）配列番号１６５のＶＨ配列と配列番号１７１のＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペア中に存在するＣＤＲのセットを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）配列番号９１のＶＨ配列と配列番号９８のＶＬ配列、（ｂ）配列番号１０５のＶＨ配列と配列番号１１０のＶＬ配列、（ｃ）配列番号１１７のＶＨ配列と配列番号１２４のＶＬ配列、（ｄ）配列番号１２８のＶＨ配列と配列番号１３５のＶＬ配列、（ｅ）配列番号１４０のＶＨ配列と配列番号１４８のＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペア中に存在するＣＤＲのセットを含む。
【００１６】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７に特異的に結合し、以下のＣＤＲのセット：ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３を含み、ただし、ＣＤＲのセットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を有するか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を有するか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を有するか、または（ｄ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同じであるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、もしくは１０個未満の、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有し、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００１７】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は特異的にＡＬＫ７に結合し、以下のＣＤＲのセット：ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３を含み、ただし、ＣＤＲのセットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号８８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号８９のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を有するか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１０２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１０３のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１０４のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を有するか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１１４のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１１５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１１６のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１２１のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１２２のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２３のアミノ酸配列を有するか、（ｄ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１２５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１２６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１２７のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１３２のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１３３のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１３４のアミノ酸配列を有するか、または（ｅ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１３８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１３９のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１４５のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１４６のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同じであるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、もしくは１０個未満の、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有し、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を有するか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を有するか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を有するか、または（ｄ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲのセットを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００１９】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は特異的にＡＬＫ７に結合し、（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号８８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号８９のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を有するか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１０２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１０３のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１０４のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を有するか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１１４のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１１５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１１６のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１２１のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１２２のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２３のアミノ酸配列を有するか、（ｄ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１２５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１２６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１２７のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１３２のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１３３のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１３４のアミノ酸配列を有するか、または（ｅ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１３８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１３９のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１４５のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１４６のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲのセットを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）（ｉ）配列番号４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１３と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｂ）（ｉ）配列番号２２、または１３２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号３１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｃ）（ｉ）配列番号４０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号４９と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、および（ｄ）（ｉ）配列番号５８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号６７と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬから選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００２１】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）（ｉ）配列番号９１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号９８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｂ）（ｉ）配列番号１０５、または１３２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１１０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｃ）（ｉ）配列番号１１７と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１２４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｄ）（ｉ）配列番号１２８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１３５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、および（ｅ）（ｉ）配列番号１４０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１４８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬから選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００２２】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号４０または５８のＶＨ配列と、配列番号４９または６７のＶＬ配列とを含むＶＨとＶＬを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号４０のＶＨ配列と、配列番号４９のＶＬ配列とを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる他の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号５８のＶＨ配列と、配列番号６７のＶＬ配列とを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００２３】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号４のＶＨ配列と、配列番号１３のＶＬ配列とを含むＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００２４】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号２２のＶＨ配列と、配列番号３１のＶＬ配列とを含むＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００２５】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号４０のＶＨ配列と、配列番号４９のＶＬ配列とを含むＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００２６】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号５８のＶＨ配列と、配列番号６７のＶＬ配列とを含むＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００２７】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号９１のＶＨ配列と、配列番号９８のＶＬ配列とを含むＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００２８】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１０５のＶＨ配列と、配列番号１１０のＶＬ配列とを含むＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００２９】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１１７のＶＨ配列と、配列番号１２４のＶＬ配列とを含むＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００３０】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２８のＶＨ配列と、配列番号１３５のＶＬ配列とを含むＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００３１】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１４０のＶＨ配列と、配列番号１４８のＶＬ配列とを含むＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００３２】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）（ｉ）配列番号４から選択される参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１３の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、（ｂ）（ｉ）配列番号２２の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号３１の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、（ｃ）（ｉ）配列番号４０の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号４９の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、および（ｄ）（ｉ）配列番号５８の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号６７の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００３３】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）（ｉ）配列番号９１から選択される参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号９８の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、（ｂ）（ｉ）配列番号１０５の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１１０の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、（ｃ）（ｉ）配列番号１１７の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１２４の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、（ｄ）（ｉ）配列番号１２８の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１３５の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、および（ｅ）（ｉ）配列番号１４０の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１４８の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００３４】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に記載される主要またはコンフォメーションエピトープと同じもしくは本質的に同じまたは重複エピトープであるが、本明細書に記載される記載される対応する配列からの少なくとも１つの異なるＣＤＲ配列、フレームワーク配列、可変領域配列、定常領域配列、および／または重鎖／軽鎖配列を含むエピトープに特異的に結合する。例えば、ＡＬＫ７結合タンパク質は、その重鎖定常領域に少なくとも１つの変異、置換、欠失、または改変、例えば、抗体の毒性および／または宿主免疫原性を低下させ、および／または抗体安定性／半減期を増大させるような変異、置換、欠失、または改変を含むことができる。
【００３５】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、
（ａ）（ｉ）配列番号１９０または３２０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＨＣと
（ｉｉ）配列番号１９１または３２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＬＣ、および
（ｂ）（ｉ）配列番号１９２または３２４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＨＣと
（ｉｉ）配列番号１９３または３２６と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＬＣ、から選択される重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）のペアを含み、
タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００３６】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、その重鎖定常領域にＬＡＬＡ変異を含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、
（ａ）（ｉ）配列番号１９４または３２８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＨＣと
（ｉｉ）配列番号１９１または３２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＬＣ、および
（ｂ）（ｉ）配列番号１９５または３３０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＨＣと
（ｉｉ）配列番号１９３または３２６と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＬＣ、から選択されるＨＣとＬＣのペアを含み、
タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００３７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、その重鎖定常領域にＬＡＬＡ−ＰＧ変異を含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、
（ａ）（ｉ）配列番号１９６または３３２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＨＣと
（ｉｉ）配列番号１９１または３２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＬＣ、および
（ｂ）（ｉ）配列番号１９７または３３４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＨＣと
（ｉｉ）配列番号１９３または３２６と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＬＣ、から選択されるＨＣとＬＣのペアを含み、
タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【００３８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合する抗体である。さらなる実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、および一本鎖抗体分子（例えば、ＢｉＴＥ）から選択される抗体フラグメントである。
【００３９】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸２０〜１１３間でＡＬＫ７に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸２０〜１１３間でＡＬＫ７に特異的に結合し、１つ以上のＡＬＫリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌ）がＡＬＫ７と結合することを阻害する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸２０〜１１３間でＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）配列番号８５の２１位のＧｌｕ、（ｂ）配列番号８５の２２位のＬｅｕ、（ｃ）配列番号８５の２３位のＳｅｒ、（ｄ）配列番号８５の２４位のＰｒｏ、（ｅ）配列番号８５の２５位のＧｌｙ、（ｆ）配列番号８５の２６位のＬｅｕ、（ｇ）配列番号８５の２７位のＬｙｓ、（ｈ）配列番号８５の２８位のＣｙｓ、（ｉ）配列番号８５の２９位のＶａｌ、（ｊ）配列番号８５の３０位のＣｙｓ、（ｋ）配列番号８５の３１位のＬｅｕ、（ｌ）配列番号８５の３２位のＬｅｕ、（ｍ）配列番号８５の３３位のＣｙｓ、（ｎ）配列番号８５の３４位のＡｓｐ、（ｏ）配列番号８５の３５位のＳｅｒ、（ｐ）配列番号８５の３６位のＳｅｒ、（ｑ）配列番号８５の３７位のＡｓｎ、（ｒ）配列番号８５の３８位のＰｈｅ、（ｓ）配列番号８５の３９位のＴｈｒ、（ｔ）配列番号８５の４０位のＣｙｓ、（ｕ）配列番号８５の４１位のＧｌｎ、（ｖ）配列番号８５の４２位のＴｈｒ、（ｗ）配列番号８５の４３位のＧｌｕ、（ｘ）配列番号８５の４４位のＧｌｙ、（ｙ）配列番号８５の４５位のＡｌａ、（ｚ）配列番号８５の４６位のＣｙｓ、（ａａ）配列番号８５の４７位のＴｒｐ、（ａｂ）配列番号８５の４８位のＡｌａ、（ａｃ）配列番号８５の４９位のＳｅｒ、（ａｄ）配列番号８５の５０位のＶａｌ、（ａｅ）配列番号８５の５１位のＭｅｔ、（ａｆ）配列番号８５の５２位のＬｅｕ、（ａｇ）配列番号８５の５３位のＴｈｒ、（ａｈ）配列番号８５の５４位のＡｓｎ、（ａｉ）配列番号８５の５５位のＧｌｙ、（ａｊ）配列番号８５の５６位のＬｙｓ、（ａｋ）配列番号８５の５７位のＧｌｕ、（ａｌ）配列番号８５の５８位のＧｌｎ、（ａｍ）配列番号８５の５９位のＶａｌ、（ａｎ）配列番号８５の６０位のＩｌｅ、（ａｏ）配列番号８５の６１位のＬｙｓ、（ａｐ）配列番号８５の６２位のＳｅｒ、（ａｑ）配列番号８５の６３位のＣｙｓ、（ａｒ）配列番号８５の６４位のＶａｌ、（ａｓ）配列番号８５の６５位のＳｅｒ、（ａｔ）配列番号８５の６６位のＬｅｕ、（ａｕ）配列番号８５の６７位のＰｒｏ、（ａｖ）配列番号８５の６８位のＧｌｕ、（ａｗ）配列番号８５の６９位のＬｅｕ、（ａｘ）配列番号８５の７０位のＡｓｎ、（ａｙ）配列番号８５の７１位のＡｌａ、（ａｚ）配列番号８５の７２位のＧｌｎ、（ｂａ）配列番号８５の７３位のＶａｌ、（ｂｂ）配列番号８５の７４位のＰｈｅ、（ｂｃ）配列番号８５の７５位のＣｙｓ、（ｂｄ）配列番号８５の７６位のＨｉｓ、（ｂｅ）配列番号８５の７７位のＳｅｒ、（ｂｆ）配列番号８５の７８位のＳｅｒ、（ｂｇ）配列番号８５の７９位のＡｓｎ、（ｂｈ）配列番号８５の８０位のＡｓｎ、（ｂｉ）配列番号８５の８１位のＶａｌ、（ｂｊ）配列番号８５の８２位のＴｈｒ、（ｂｋ）配列番号８５の８３位のＬｙｓ、（ｂｌ）配列番号８５の８４位のＴｈｒ、（ｂｍ）配列番号８５の８５位のＧｌｕ、（ｂｎ）配列番号８５の８６位のＣｙｓ、（ｂｏ）配列番号８５の８７位のＣｙｓ、（ｂｐ）配列番号８５の８８位のＰｈｅ、（ｂｑ）配列番号８５の８９位のＴｈｒ、（ｂｒ）配列番号８５の９０位のＡｓｐ、（ｂｓ）配列番号８５の９１位のＰｈｅ、（ｂｔ）配列番号８５の９２位のＣｙｓ、（ｂｕ）配列番号８５の９３位のＡｓｎ、（ｂｖ）配列番号８５の９４位のＡｓｎ、（ｂｗ）配列番号８５の９５位のＩｌｅ、（ｂｘ）配列番号８５の９６位のＴｈｒ、（ｂｙ）配列番号８５の９７位のＬｅｕ、（ｂｚ）配列番号８５の９８位のＨｉｓ、（ｃａ）配列番号８５の９９位のＬｅｕ、（ｃｂ）配列番号８５の１００位のＰｒｏ、（ｃｃ）配列番号８５の１０１位のＴｈｒ、（ｃｄ）配列番号８５の１０２位のＡｌａ、（ｃｅ）配列番号８５の１０３位のＳｅｒ、（ｃｆ）配列番号８５の１０４位のＰｒｏ、（ｃｇ）配列番号８５の１０５位のＡｓｎ、（ｃｈ）配列番号８５の１０６位のＡｌａ、（ｃｉ）配列番号８５の１０７位のＰｒｏ、（ｃｊ）配列番号８５の１０８位のＬｙｓ、（ｃｋ）配列番号８５の１０９位のＬｅｕ、（ｃｌ）配列番号８５の１１０位のＧｌｙ、（ｃｍ）配列番号８５の１１１位のＰｒｏ、（ｃｎ）配列番号８５の１１２位のＭｅｔ、および（ｃｏ）配列番号８５の１１３位のＧｌｕから選択される１つ以上のアミノ酸と接触する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸２０〜１１３間でＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）配列番号８５の２１位のＧｌｕ、（ｂ）配列番号８５の２２位のＬｅｕ、（ｃ）配列番号８５の２３位のＳｅｒ、（ｄ）配列番号８５の２４位のＰｒｏ、（ｅ）配列番号８５の２５位のＧｌｙ、（ｆ）配列番号８５の２６位のＬｅｕ、（ｇ）配列番号８５の２７位のＬｙｓ、（ｈ）配列番号８５の２８位のＣｙｓ、（ｉ）配列番号８５の２９位のＶａｌ、（ｊ）配列番号８５の３０位のＣｙｓ、（ｋ）配列番号８５の３１位のＬｅｕ、（ｌ）配列番号８５の３２位のＬｅｕ、（ｍ）配列番号８５の３３位のＣｙｓ、（ｎ）配列番号８５の３４位のＡｓｐ、（ｏ）配列番号８５の３５位のＳｅｒ、（ｐ）配列番号８５の３６位のＳｅｒ、（ｑ）配列番号８５の３７位のＡｓｎ、（ｒ）配列番号８５の３８位のＰｈｅ、（ｓ）配列番号８５の３９位のＴｈｒ、（ｔ）配列番号８５の４０位のＣｙｓ、（ｕ）配列番号８５の４１位のＧｌｎ、（ｖ）配列番号８５の４２位のＴｈｒ、（ｗ）配列番号８５の４３位のＧｌｕ、（ｘ）配列番号８５の４４位のＧｌｙ、（ｙ）配列番号８５の４５位のＡｌａ、（ｚ）配列番号８５の４６位のＣｙｓ、（ａａ）配列番号８５の４７位のＴｒｐ、（ａｂ）配列番号８５の４８位のＡｌａ、（ａｃ）配列番号８５の４９位のＳｅｒ、（ａｄ）配列番号８５の５０位のＶａｌ、（ａｅ）配列番号８５の５１位のＭｅｔ、（ａｆ）配列番号８５の５２位のＬｅｕ、（ａｇ）配列番号８５の５３位のＴｈｒ、（ａｈ）配列番号８５の５４位のＡｓｎ、（ａｉ）配列番号８５の５５位のＧｌｙ、（ａｊ）配列番号８５の５６位のＬｙｓ、（ａｋ）配列番号８５の５７位のＧｌｕ、（ａｌ）配列番号８５の５８位のＧｌｎ、（ａｍ）配列番号８５の５９位のＶａｌ、（ａｎ）配列番号８５の６０位のＩｌｅ、（ａｏ）配列番号８５の６１位のＬｙｓ、（ａｐ）配列番号８５の６２位のＳｅｒ、（ａｑ）配列番号８５の６３位のＣｙｓ、（ａｒ）配列番号８５の６４位のＶａｌ、（ａｓ）配列番号８５の６５位のＳｅｒ、（ａｔ）配列番号８５の６６位のＬｅｕ、（ａｕ）配列番号８５の６７位のＰｒｏ、（ａｖ）配列番号８５の６８位のＧｌｕ、（ａｗ）配列番号８５の６９位のＬｅｕ、（ａｘ）配列番号８５の７０位のＡｓｎ、（ａｙ）配列番号８５の７１位のＡｌａ、（ａｚ）配列番号８５の７２位のＧｌｎ、（ｂａ）配列番号８５の７３位のＶａｌ、（ｂｂ）配列番号８５の７４位のＰｈｅ、（ｂｃ）配列番号８５の７５位のＣｙｓ、（ｂｄ）配列番号８５の７６位のＨｉｓ、（ｂｅ）配列番号８５の７７位のＳｅｒ、（ｂｆ）配列番号８５の７８位のＳｅｒ、（ｂｇ）配列番号８５の７９位のＡｓｎ、（ｂｈ）配列番号８５の８０位のＡｓｎ、（ｂｉ）配列番号８５の８１位のＶａｌ、（ｂｊ）配列番号８５の８２位のＴｈｒ、（ｂｋ）配列番号８５の８３位のＬｙｓ、（ｂｌ）配列番号８５の８４位のＴｈｒ、（ｂｍ）配列番号８５の８５位のＧｌｕ、（ｂｎ）配列番号８５の８６位のＣｙｓ、（ｂｏ）配列番号８５の８７位のＣｙｓ、（ｂｐ）配列番号８５の８８位のＰｈｅ、（ｂｑ）配列番号８５の８９位のＴｈｒ、（ｂｒ）配列番号８５の９０位のＡｓｐ、（ｂｓ）配列番号８５の９１位のＰｈｅ、（ｂｔ）配列番号８５の９２位のＣｙｓ、（ｂｕ）配列番号８５の９３位のＡｓｎ、（ｂｖ）配列番号８５の９４位のＡｓｎ、（ｂｗ）配列番号８５の９５位のＩｌｅ、（ｂｘ）配列番号８５の９６位のＴｈｒ、（ｂｙ）配列番号８５の９７位のＬｅｕ、（ｂｚ）配列番号８５の９８位のＨｉｓ、（ｃａ）配列番号８５の９９位のＬｅｕ、（ｃｂ）配列番号８５の１００位のＰｒｏ、（ｃｃ）配列番号８５の１０１位のＴｈｒ、（ｃｄ）配列番号８５の１０２位のＡｌａ、（ｃｅ）配列番号８５の１０３位のＳｅｒ、（ｃｆ）配列番号８５の１０４位のＰｒｏ、（ｃｇ）配列番号８５の１０５位のＡｓｎ、（ｃｈ）配列番号８５の１０６位のＡｌａ、（ｃｉ）配列番号８５の１０７位のＰｒｏ、（ｃｊ）配列番号８５の１０８位のＬｙｓ、（ｃｋ）配列番号８５の１０９位のＬｅｕ、（ｃｌ）配列番号８５の１１０位のＧｌｙ、（ｃｍ）配列番号８５の１１１位のＰｒｏ、（ｃｎ）配列番号８５の１１２位のＭｅｔ、および（ｃｏ）配列番号８５の１１３位のＧｌｕから選択される１つ以上のアミノ酸と接触し、１つ以上のＡＬＫ７リガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌ）がＡＬＫ７と結合することを阻害する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸２０〜１１３間でＡＬＫ７に特異的に結合し、脂肪分解（例えば、白色脂肪細胞および／または褐色脂肪細胞の脂肪分解）を増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸２０〜１１３間でＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）配列番号８５の２１位のＧｌｕ、（ｂ）配列番号８５の２２位のＬｅｕ、（ｃ）配列番号８５の２３位のＳｅｒ、（ｄ）配列番号８５の２４位のＰｒｏ、（ｅ）配列番号８５の２５位のＧｌｙ、（ｆ）配列番号８５の２６位のＬｅｕ、（ｇ）配列番号８５の２７位のＬｙｓ、（ｈ）配列番号８５の２８位のＣｙｓ、（ｉ）配列番号８５の２９位のＶａｌ、（ｊ）配列番号８５の３０位のＣｙｓ、（ｋ）配列番号８５の３１位のＬｅｕ、（ｌ）配列番号８５の３２位のＬｅｕ、（ｍ）配列番号８５の３３位のＣｙｓ、（ｎ）配列番号８５の３４位のＡｓｐ、（ｏ）配列番号８５の３５位のＳｅｒ、（ｐ）配列番号８５の３６位のＳｅｒ、（ｑ）配列番号８５の３７位のＡｓｎ、（ｒ）配列番号８５の３８位のＰｈｅ、（ｓ）配列番号８５の３９位のＴｈｒ、（ｔ）配列番号８５の４０位のＣｙｓ、（ｕ）配列番号８５の４１位のＧｌｎ、（ｖ）配列番号８５の４２位のＴｈｒ、（ｗ）配列番号８５の４３位のＧｌｕ、（ｘ）配列番号８５の４４位のＧｌｙ、（ｙ）配列番号８５の４５位のＡｌａ、（ｚ）配列番号８５の４６位のＣｙｓ、（ａａ）配列番号８５の４７位のＴｒｐ、（ａｂ）配列番号８５の４８位のＡｌａ、（ａｃ）配列番号８５の４９位のＳｅｒ、（ａｄ）配列番号８５の５０位のＶａｌ、（ａｅ）配列番号８５の５１位のＭｅｔ、（ａｆ）配列番号８５の５２位のＬｅｕ、（ａｇ）配列番号８５の５３位のＴｈｒ、（ａｈ）配列番号８５の５４位のＡｓｎ、（ａｉ）配列番号８５の５５位のＧｌｙ、（ａｊ）配列番号８５の５６位のＬｙｓ、（ａｋ）配列番号８５の５７位のＧｌｕ、（ａｌ）配列番号８５の５８位のＧｌｎ、（ａｍ）配列番号８５の５９位のＶａｌ、（ａｎ）配列番号８５の６０位のＩｌｅ、（ａｏ）配列番号８５の６１位のＬｙｓ、（ａｐ）配列番号８５の６２位のＳｅｒ、（ａｑ）配列番号８５の６３位のＣｙｓ、（ａｒ）配列番号８５の６４位のＶａｌ、（ａｓ）配列番号８５の６５位のＳｅｒ、（ａｔ）配列番号８５の６６位のＬｅｕ、（ａｕ）配列番号８５の６７位のＰｒｏ、（ａｖ）配列番号８５の６８位のＧｌｕ、（ａｗ）配列番号８５の６９位のＬｅｕ、（ａｘ）配列番号８５の７０位のＡｓｎ、（ａｙ）配列番号８５の７１位のＡｌａ、（ａｚ）配列番号８５の７２位のＧｌｎ、（ｂａ）配列番号８５の７３位のＶａｌ、（ｂｂ）配列番号８５の７４位のＰｈｅ、（ｂｃ）配列番号８５の７５位のＣｙｓ、
（ｂｄ）配列番号８５の７６位のＨｉｓ、（ｂｅ）配列番号８５の７７位のＳｅｒ、（ｂｆ）配列番号８５の７８位のＳｅｒ、（ｂｇ）配列番号８５の７９位のＡｓｎ、（ｂｈ）配列番号８５の８０位のＡｓｎ、（ｂｉ）配列番号８５の８１位のＶａｌ、（ｂｊ）配列番号８５の８２位のＴｈｒ、（ｂｋ）配列番号８５の８３位のＬｙｓ、（ｂｌ）配列番号８５の８４位のＴｈｒ、（ｂｍ）配列番号８５の８５位のＧｌｕ、（ｂｎ）配列番号８５の８６位のＣｙｓ、（ｂｏ）配列番号８５の８７位のＣｙｓ、（ｂｐ）配列番号８５の８８位のＰｈｅ、（ｂｑ）配列番号８５の８９位のＴｈｒ、（ｂｒ）配列番号８５の９０位のＡｓｐ、（ｂｓ）配列番号８５の９１位のＰｈｅ、（ｂｔ）配列番号８５の９２位のＣｙｓ、（ｂｕ）配列番号８５の９３位のＡｓｎ、（ｂｖ）配列番号８５の９４位のＡｓｎ、（ｂｗ）配列番号８５の９５位のＩｌｅ、（ｂｘ）配列番号８５の９６位のＴｈｒ、（ｂｙ）配列番号８５の９７位のＬｅｕ、（ｂｚ）配列番号８５の９８位のＨｉｓ、（ｃａ）配列番号８５の９９位のＬｅｕ、（ｃｂ）配列番号８５の１００位のＰｒｏ、（ｃｃ）配列番号８５の１０１位のＴｈｒ、（ｃｄ）配列番号８５の１０２位のＡｌａ、（ｃｅ）配列番号８５の１０３位のＳｅｒ、（ｃｆ）配列番号８５の１０４位のＰｒｏ、（ｃｇ）配列番号８５の１０５位のＡｓｎ、（ｃｈ）配列番号８５の１０６位のＡｌａ、（ｃｉ）配列番号８５の１０７位のＰｒｏ、（ｃｊ）配列番号８５の１０８位のＬｙｓ、（ｃｋ）配列番号８５の１０９位のＬｅｕ、（ｃｌ）配列番号８５の１１０位のＧｌｙ、（ｃｍ）配列番号８５の１１１位のＰｒｏ、（ｃｎ）配列番号８５の１１２位のＭｅｔ、および（ｃｏ）配列番号８５の１１３位のＧｌｕから選択される１つ以上のアミノ酸と接触し、脂肪分解（例えば、白色脂肪細胞および／または褐色脂肪細胞の脂肪分解）を増加させる。
【００４０】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸２８〜９２間でＡＬＫ７に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸２８〜９２間でＡＬＫ７に特異的に結合し、１つ以上のＡＬＫ７リガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌ）がＡＬＫ７に結合することを阻害する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸２８〜９２間でＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）配列番号８５の２８位のＣｙｓ、（ｂ）配列番号８５の２９位のＶａｌ、（ｃ）配列番号８５の３０位のＣｙｓ、（ｄ）配列番号８５の３１位のＬｅｕ、（ｅ）配列番号８５の３２位のＬｅｕ、（ｆ）配列番号８５の３３位のＣｙｓ、（ｇ）配列番号８５の３４位のＡｓｐ、（ｈ）配列番号８５の３５位のＳｅｒ、（ｉ）配列番号８５の３６位のＳｅｒ、（ｊ）配列番号８５の３７位のＡｓｎ、（ｋ）配列番号８５の３８位のＰｈｅ、（ｌ）配列番号８５の３９位のＴｈｒ、（ｍ）配列番号８５の４０位のＣｙｓ、（ｎ）配列番号８５の４１位のＧｌｎ、（ｏ）配列番号８５の４２位のＴｈｒ、（ｐ）配列番号８５の４３位のＧｌｕ、（ｑ）配列番号８５の４４位のＧｌｙ、（ｒ）配列番号８５の４５位のＡｌａ、（ｓ）配列番号８５の４６位のＣｙｓ、（ｔ）配列番号８５の４７位のＴｒｐ、（ｕ）配列番号８５の４８位のＡｌａ、（ｖ）配列番号８５の４９位のＳｅｒ、（ｗ）配列番号８５の５０位のＶａｌ、（ｘ）配列番号８５の５１位のＭｅｔ、（ｙ）配列番号８５の５２位のＬｅｕ、（ｚ）配列番号８５の５３位のＴｈｒ、（ａａ）配列番号８５の５４位のＡｓｎ、（ａｂ）配列番号８５の５５位のＧｌｙ、（ａｃ）配列番号８５の５６位のＬｙｓ、（ａｄ）配列番号８５の５７位のＧｌｕ、（ａｅ）配列番号８５の５８位のＧｌｎ、（ａｆ）配列番号８５の５９位のＶａｌ、（ａｇ）配列番号８５の６０位のＩｌｅ、（ａｈ）配列番号８５の６１位のＬｙｓ、（ａｉ）配列番号８５の６２位のＳｅｒ、（ａｊ）配列番号８５の６３位のＣｙｓ、（ａｋ）配列番号８５の６４位のＶａｌ、（ａｌ）配列番号８５の６５位のＳｅｒ、（ａｍ）配列番号８５の６６位のＬｅｕ、（ａｎ）配列番号８５の６７位のＰｒｏ、（ａｏ）配列番号８５の６８位のＧｌｕ、（ａｐ）配列番号８５の６９位のＬｅｕ、（ａｑ）配列番号８５の７０位のＡｓｎ、（ａｒ）配列番号８５の７１位のＡｌａ、（ａｓ）配列番号８５の７２位のＧｌｎ、（ａｔ）配列番号８５の７３位のＶａｌ、（ａｕ）配列番号８５の７４位のＰｈｅ、（ａｖ）配列番号８５の７５位のＣｙｓ、（ａｗ）配列番号８５の７６位のＨｉｓ、（ａｘ）配列番号８５の７７位のＳｅｒ、（ａｙ）配列番号８５の７８位のＳｅｒ、（ａｚ）配列番号８５の７９位のＡｓｎ、（ｂａ）配列番号８５の８０位のＡｓｎ、（ｂｂ）配列番号８５の８１位のＶａｌ、（ｂｃ）配列番号８５の８２位のＴｈｒ、（ｂｄ）配列番号８５の８３位のＬｙｓ、（ｂｅ）配列番号８５の８４位のＴｈｒ、（ｂｆ）配列番号８５の８５位のＧｌｕ、（ｂｇ）配列番号８５の８６位のＣｙｓ、（ｂｈ）配列番号８５の８７位のＣｙｓ、（ｂｉ）配列番号８５の８８位のＰｈｅ、（ｂｊ）配列番号８５の８９位のＴｈｒ、（ｂｋ）配列番号８５の９０位のＡｓｐ、（ｂｌ）配列番号８５の９１位のＰｈｅ、および（ｂｍ）配列番号８５の９２位のＣｙｓから選択される１つ以上のアミノ酸と接触する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸２８〜９２間でＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）配列番号８５の２８位のＣｙｓ、（ｂ）配列番号８５の２９位のＶａｌ、（ｃ）配列番号８５の３０位のＣｙｓ、（ｄ）配列番号８５の３１位のＬｅｕ、（ｅ）配列番号８５の３２位のＬｅｕ、（ｆ）配列番号８５の３３位のＣｙｓ、（ｇ）配列番号８５の３４位のＡｓｐ、（ｈ）配列番号８５の３５位のＳｅｒ、（ｉ）配列番号８５の３６位のＳｅｒ、（ｊ）配列番号８５の３７位のＡｓｎ、（ｋ）配列番号８５の３８位のＰｈｅ、（ｌ）配列番号８５の３９位のＴｈｒ、（ｍ）配列番号８５の４０位のＣｙｓ、（ｎ）配列番号８５の４１位のＧｌｎ、（ｏ）配列番号８５の４２位のＴｈｒ、（ｐ）配列番号８５の４３位のＧｌｕ、（ｑ）配列番号８５の４４位のＧｌｙ、（ｒ）配列番号８５の４５位のＡｌａ、（ｓ）配列番号８５の４６位のＣｙｓ、（ｔ）配列番号８５の４７位のＴｒｐ、（ｕ）配列番号８５の４８位のＡｌａ、（ｖ）配列番号８５の４９位のＳｅｒ、（ｗ）配列番号８５の５０位のＶａｌ、（ｘ）配列番号８５の５１位のＭｅｔ、（ｙ）配列番号８５の５２位のＬｅｕ、（ｚ）配列番号８５の５３位のＴｈｒ、（ａａ）配列番号８５の５４位のＡｓｎ、（ａｂ）配列番号８５の５５位のＧｌｙ、（ａｃ）配列番号８５の５６位のＬｙｓ、（ａｄ）配列番号８５の５７位のＧｌｕ、（ａｅ）配列番号８５の５８位のＧｌｎ、（ａｆ）配列番号８５の５９位のＶａｌ、（ａｇ）配列番号８５の６０位のＩｌｅ、（ａｈ）配列番号８５の６１位のＬｙｓ、（ａｉ）配列番号８５の６２位のＳｅｒ、（ａｊ）配列番号８５の６３位のＣｙｓ、（ａｋ）配列番号８５の６４位のＶａｌ、（ａｌ）配列番号８５の６５位のＳｅｒ、（ａｍ）配列番号８５の６６位のＬｅｕ、（ａｎ）配列番号８５の６７位のＰｒｏ、（ａｏ）配列番号８５の６８位のＧｌｕ、（ａｐ）配列番号８５の６９位のＬｅｕ、（ａｑ）配列番号８５の７０位のＡｓｎ、（ａｒ）配列番号８５の７１位のＡｌａ、（ａｓ）配列番号８５の７２位のＧｌｎ、（ａｔ）配列番号８５の７３位のＶａｌ、（ａｕ）配列番号８５の７４位のＰｈｅ、（ａｖ）配列番号８５の７５位のＣｙｓ、（ａｗ）配列番号８５の７６位のＨｉｓ、（ａｘ）配列番号８５の７７位のＳｅｒ、（ａｙ）配列番号８５の７８位のＳｅｒ、（ａｚ）配列番号８５の７９位のＡｓｎ、（ｂａ）配列番号８５の８０位のＡｓｎ、（ｂｂ）配列番号８５の８１位のＶａｌ、（ｂｃ）配列番号８５の８２位のＴｈｒ、（ｂｄ）配列番号８５の８３位のＬｙｓ、（ｂｅ）配列番号８５の８４位のＴｈｒ、（ｂｆ）配列番号８５の８５位のＧｌｕ、（ｂｇ）配列番号８５の８６位のＣｙｓ、（ｂｈ）配列番号８５の８７位のＣｙｓ、（ｂｉ）配列番号８５の８８位のＰｈｅ、（ｂｊ）配列番号８５の８９位のＴｈｒ、（ｂｋ）配列番号８５の９０位のＡｓｐ、（ｂｌ）配列番号８５の９１位のＰｈｅ、および（ｂｍ）配列番号８５の９２位のＣｙｓから選択される１つ以上のアミノ酸と接触し、１つ以上のＡＬＫ７リガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌ）がＡＬＫ７に結合することを阻害する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸２８〜９２間でＡＬＫ７に特異的に結合し、脂肪分解（例えば、白色脂肪細胞および／または褐色脂肪細胞の脂肪分解）を増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸２８〜９２間でＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）配列番号８５の２８位のＣｙｓ、（ｂ）配列番号８５の２９位のＶａｌ、（ｃ）配列番号８５の３０位のＣｙｓ、（ｄ）配列番号８５の３１位のＬｅｕ、（ｅ）配列番号８５の３２位のＬｅｕ、（ｆ）配列番号８５の３３位のＣｙｓ、（ｇ）配列番号８５の３４位のＡｓｐ、（ｈ）配列番号８５の３５位のＳｅｒ、（ｉ）配列番号８５の３６位のＳｅｒ、（ｊ）配列番号８５の３７位のＡｓｎ、（ｋ）配列番号８５の３８位のＰｈｅ、（ｌ）配列番号８５の３９位のＴｈｒ、（ｍ）配列番号８５の４０位のＣｙｓ、（ｎ）配列番号８５の４１位のＧｌｎ、（ｏ）配列番号８５の４２位のＴｈｒ、（ｐ）配列番号８５の４３位のＧｌｕ、（ｑ）配列番号８５の４４位のＧｌｙ、（ｒ）配列番号８５の４５位のＡｌａ、（ｓ）配列番号８５の４６位のＣｙｓ、（ｔ）配列番号８５の４７位のＴｒｐ、（ｕ）配列番号８５の４８位のＡｌａ、（ｖ）配列番号８５の４９位のＳｅｒ、（ｗ）配列番号８５の５０位のＶａｌ、（ｘ）配列番号８５の５１位のＭｅｔ、（ｙ）配列番号８５の５２位のＬｅｕ、（ｚ）配列番号８５の５３位のＴｈｒ、（ａａ）配列番号８５の５４位のＡｓｎ、（ａｂ）配列番号８５の５５位のＧｌｙ、（ａｃ）配列番号８５の５６位のＬｙｓ、（ａｄ）配列番号８５の５７位のＧｌｕ、（ａｅ）配列番号８５の５８位のＧｌｎ、（ａｆ）配列番号８５の５９位のＶａｌ、（ａｇ）配列番号８５の６０位のＩｌｅ、（ａｈ）配列番号８５の６１位のＬｙｓ、（ａｉ）配列番号８５の６２位のＳｅｒ、（ａｊ）配列番号８５の６３位のＣｙｓ、（ａｋ）配列番号８５の６４位のＶａｌ、（ａｌ）配列番号８５の６５位のＳｅｒ、（ａｍ）配列番号８５の６６位のＬｅｕ、（ａｎ）配列番号８５の６７位のＰｒｏ、（ａｏ）配列番号８５の６８位のＧｌｕ、（ａｐ）配列番号８５の６９位のＬｅｕ、（ａｑ）配列番号８５の７０位のＡｓｎ、（ａｒ）配列番号８５の７１位のＡｌａ、（ａｓ）配列番号８５の７２位のＧｌｎ、（ａｔ）配列番号８５の７３位のＶａｌ、（ａｕ）配列番号８５の７４位のＰｈｅ、（ａｖ）配列番号８５の７５位のＣｙｓ、（ａｗ）配列番号８５の７６位のＨｉｓ、（ａｘ）配列番号８５の７７位のＳｅｒ、（ａｙ）配列番号８５の７８位のＳｅｒ、（ａｚ）配列番号８５の７９位のＡｓｎ、（ｂａ）配列番号８５の８０位のＡｓｎ、（ｂｂ）配列番号８５の８１位のＶａｌ、（ｂｃ）配列番号８５の８２位のＴｈｒ、（ｂｄ）配列番号８５の８３位のＬｙｓ、（ｂｅ）配列番号８５の８４位のＴｈｒ、（ｂｆ）配列番号８５の８５位のＧｌｕ、（ｂｇ）配列番号８５の８６位のＣｙｓ、（ｂｈ）配列番号８５の８７位のＣｙｓ、（ｂｉ）配列番号８５の８８位のＰｈｅ、（ｂｊ）配列番号８５の８９位のＴｈｒ、（ｂｋ）配列番号８５の９０位のＡｓｐ、（ｂｌ）配列番号８５の９１位のＰｈｅ、および（ｂｍ）配列番号８５の９２位のＣｙｓから選択される１つ以上のアミノ酸と接触し、脂肪分解（例えば、白色脂肪細胞および／または褐色脂肪細胞の脂肪分解）を増加させる。
【００４１】
ＡＬＫ７結合タンパク質をコードする核酸、および核酸のセットも提供される。核酸および核酸のセットを含むベクターおよびベクターのセット、ならびにこれらの核酸およびベクターで形質転換された宿主細胞がさらに提供される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などのハイブリドーマまたは哺乳動物宿主細胞である。ＡＬＫ７結合タンパク質を産生する哺乳動物宿主細胞およびハイブリドーマを含む宿主細胞も提供される。
【００４２】
ＡＬＫ７結合タンパク質を作製するための方法も提供される。いくつかの実施形態では、方法は、ＡＬＫ７結合タンパク質を発現可能な宿主細胞を、タンパク質を発現させ、必要に応じて発現されたＡＬＫ７結合タンパク質を単離するのに適した条件下で培養することを含む。本明細書に開示される、またはさもなければ当該技術分野では周知の方法を用いて調製および／または単離されたＡＬＫ７結合タンパク質も提供される。
【００４３】
ＡＬＫ７結合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物がさらに提供される。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＬＫ７の発現またはＡＬＫ７介在性シグナル伝達の増加に関連した、またはＡＬＫ７シグナル伝達の減少により治療および／または改善することができる対象の状態を治療および／または改善するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、対象におけるＡＬＫ７介在性シグナル伝達を減少させる。
【００４４】
提供される方法を用いて治療および／または改善することができる対象の状態としては、これらに限定されるものではないが、肥満（例えば、腹部肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリック症候群および他の代謝疾患または状態；例えば、低ＨＤＬレベル、高ＬＤＬレベル、高脂血症、高トリグリセリド血症または脂質異常症などの脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド減少；炎症（例えば、肝臓の炎症および／または脂肪組織の炎症）、脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、高ＬＤＬレベルおよび高コレステロール血症）；冠状動脈性心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、病的線維素溶解、アテローム性動脈硬化症を含む心疾患などの心血管疾患；動脈硬化症および高血圧症；シンドロームＸ；血管再狭窄；神経障害；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸不全、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値の上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚の濃い染み）；およびがん（例えば、骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在化骨髄腫、または髄外性骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、胃癌、子宮癌および／または結腸癌）；ならびに、上記の疾患または状態の１つ以上、または過体重（例えば、ＢＭＩ≧２５ｋｇ／ｍ２）もしくは過剰な体脂肪に関連した他の疾患／状態が挙げられる。
【００４５】
いくつかの実施形態では、開示される方法は、有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体などのアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を含む医薬組成物を、医薬組成物の投与を要する対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は単独で投与される。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は併用療法として投与される。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はケア治療／療法の標準に対する併用療法として投与される。
【００４６】
ＡＬＫ７活性を遮断または低下させる方法（例えば、リガンド結合および／またはシグナル伝達）も提供される。いくつかの実施形態では、方法は、ＡＬＫ７結合タンパク質と、ＡＬＫ７を発現する細胞（例えば、分化した白色または褐色脂肪細胞）とを接触させることを含む。いくつかの例では、方法は、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７結合タンパク質とＡＬＫ７を発現する細胞とを接触させることを含む。いくつかの実施形態では、方法は、インビボで行われる。他の実施形態では、方法は、インビトロで行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７活性の遮断または低下はＡＬＫ７のリン酸化である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７活性の遮断または低下はＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化である。いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるＡＬＫ７活性を遮断または低下させる方法であって、有効量のＡＬＫ７結合タンパク質を、ＡＬＫ７活性の遮断または低下を要する対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００４７】
ＡＬＫ７の発現および／またはＡＬＫ７シグナル伝達に関連した病的状態における、またはＡＬＫ７リガンドの活性を低下または阻害することによって治療および／または改善することができる病的状態におけるＡＬＫ７活性を遮断または低下する方法も提供される。いくつかの例では、方法は、ＡＬＫ７またはＡＬＫ７リガンドの発現が増加している対象にＡＬＫ７結合タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、病的状態は、肥満、糖尿病、代謝性疾患、脂質異常症、循環器疾患、２型糖尿病、炎症、または肺疾患、脂肪肝疾患、神経疾患、および肝疾患、または腎疾患である。
【００４８】
別の態様において、本開示は、過体重の対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体などのアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を投与することを含む、過体重、または過体重であることに関連する状態を治療もしくは改善する方法を提供する。特定の実施形態では、治療または改善される状態は、肥満である。他の実施形態では、治療または改善される状態は、脂質異常症、高脂血症、高コレステロール血症、低ＨＤＬ血清レベル、高ＬＤＬ血清レベル（例えば、ＬＤＬ−Ｃ≧１００ｍｇ／ｄＬ、≧１３０ｍｇ／ｄＬ、≧１６０ｍｇ／ｄＬ）、および高トリグリセリド血症（例えば、ＴＧ≧１５０ｍｇ／ｄＬ、≧１６０ｍｇ／ｄＬ、≧１７０ｍｇ／ｄＬ）から選択される要素である。さらなる他の実施形態では、治療または改善される状態は高血圧である。さらなる実施形態では、治療または改善される状態は糖尿病である。特定のかかる実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどのＡＬＫ７アンタゴニストである。特定のかかる実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。特定の他の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる他の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａ、表１Ｂ、または表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は表１Ａ、表１Ｂ、または表３に開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。
【００４９】
別の態様において、本開示は、肥満の対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体などのアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を投与することを含む、肥満、または肥満に関連する状態を治療もしくは改善する方法を提供する。特定のかかる実施形態において、治療または改善される状態は、高血圧症、脂質異常症（例えば、高い総コレステロールまたはトリグリセリドの高いレベル）、２型糖尿病、冠状動脈性心疾患、脳卒中、胆嚢疾患、変形性関節症、睡眠障害、呼吸障害、がん（例えば、骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、胃癌、子宮癌、および／または大腸癌）、肥満関連胆嚢疾患、肥満関連炎症、肥満誘発性睡眠時無呼吸症、脂肪症（脂肪肝）、グルカゴノーマ、動脈硬化症または心不全である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、高血圧症、脂質異常症（例えば、高い総コレステロールまたはトリグリセリドの高いレベル）、２型糖尿病、冠状動脈性心疾患、脳卒中、胆嚢疾患、変形性関節症、睡眠障害、呼吸障害、がん（例えば、骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、胃癌、子宮癌、または大腸癌）、肥満関連胆嚢疾患、肥満関連炎症、肥満誘発性睡眠時無呼吸症、脂肪症、グルカゴノーマ、動脈硬化症または心不全を発症するリスクを有する。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどのＡＬＫ７アンタゴニストである。特定のかかる実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａ、表１Ｂ、または表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａ、表１Ｂ、または表３に開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。
【００５０】
別の態様において、本開示は、糖尿病の対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体などのアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を投与することを含む、２型糖尿病、または２型糖尿病に関連する状態を治療もしくは改善する方法を提供する。関連する実施形態では、本開示は、目の状態（例えば、緑内障、白内障、および網膜症）、心血管疾患（例えば、高血圧症、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、および脳卒中）、高血糖症、末梢神経障害、および腎疾患（例えば、腎症）などの２型糖尿病に関連する状態を治療または改善する方法を提供する。特定の実施形態では、対象は、目の状態（例えば、緑内障、白内障、および網膜症）、心血管疾患（例えば、高血圧症、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、疾患性線維素溶解、および脳卒中）、高血糖症、末梢神経障害、または腎疾患（例えば、腎症）などの２型糖尿病、または２型糖尿病に関連する状態を発症するリスクを有する。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどのＡＬＫ７アンタゴニストである。特定のかかる実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。他の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａ、表１Ｂ、または表３に開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。
【００５１】
別の態様において、本開示は、代謝性疾患もしくは障害、または代謝性疾患もしくは障害に関連する状態の治療または改善を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体などのアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を投与することを含む、代謝性疾患もしくは障害、または代謝性疾患もしくは障害に関連する状態を治療または改善する方法を提供する。特定のかかる実施形態では、治療または改善される状態は、脂質、リポタンパク質またはアポリポタンパク質代謝の変化である。他のかかる実施形態では、実施形態、代謝状態は、高血漿トリグリセリドレベル、高血圧、脂質異常症、高空腹時血糖、低いＨＤＬコレステロールレベルである。さらなる他の実施形態では、治療または改善される状態は、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、または内皮機能不全である。さらに他の実施形態では、治療または改善される状態は、慢性炎症である。さらなる実施形態では、治療または改善される状態は、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、脂肪肝および／またはＮＡＳＨ）である。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどのＡＬＫ７アンタゴニストである。特定のかかる実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。
【００５２】
さらなる別の態様において、本開示は、インスリン抵抗性、またはインスリン抵抗性に関連する状態の治療もしくは改善を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体などのアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を投与することを含む、インスリン抵抗性、またはインスリン抵抗性に関連する状態を治療もしくは改善する方法を提供する。特定のかかる実施形態では、治療または改善される状態は、耐糖能異常または高血糖症と関連する。他のかかる実施形態では、治療または改善される状態は、高血圧症またはアテローム性動脈硬化症と関連する。さらなる他の実施形態では、治療または改善される状態は、脂質異常症、高脂血症、高コレステロール血症、低ＨＤＬ血清レベル、高ＬＤＬ血清レベル（例えば、ＬＤＬ−Ｃ≧１００ｍｇ／ｄＬ、≧１３０ｍｇ／ｄＬ、≧１６０ｍｇ／ｄＬ）、および高トリグリセリド血症（例えば、ＴＧ≧１５０ｍｇ／ｄＬ、≧１６０ｍｇ／ｄＬ、≧１７０ｍｇ／ｄＬ）から選択される要素である。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどのＡＬＫ７アンタゴニストである。特定のかかる実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。他の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。
【００５３】
さらなる別の態様において、本開示は、目、神経系、腎臓、肺、および／または肝臓の疾患もしくは障害、または関連する状態の治療もしくは改善を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体などのアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を投与することを含む、目、神経系、腎臓、肺、および／または肝臓の疾患もしくは障害、または関連する状態を治療もしくは改善する方法を提供する。特定のかかる実施形態では、治療または改善される状態は、炎症である。他のかかる実施形態では、治療または改善される状態は、腎症（例えば、糖尿病性腎症）、腎動脈の動脈硬化、または腎不全である。さらに他の実施形態では、治療または改善される状態は、慢性炎症である。さらなる他の実施形態では、治療または改善される状態は、脂肪組織の炎症である。さらなる実施形態では、治療または改善される状態は、肝臓の炎症である。いっそうさらなる実施形態では、治療または改善される状態は、ＮＡＦＬＤ（例えば、脂肪肝および／またはＮＡＳＨ）である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、腎臓、肺、または肝臓の疾患または障害を発症するリスクを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、腎症を発症するリスクを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、腎症を発症するリスクを有する。特定の実施形態では、対象は、慢性炎症を発症するリスクを有する。他の実施形態では、対象は、脂肪組織の炎症を発症するリスクを有する。さらに他の実施形態では、対象は、肝臓の炎症を発症するリスクを有する。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどのＡＬＫ７アンタゴニストである。特定のかかる実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。
【００５４】
別の態様において、本開示は、心血管疾患もしくは障害、または心血管疾患もしくは障害に関連する状態の治療または改善を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体などのアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を投与することを含む、心血管疾患もしくは障害、または心血管疾患もしくは障害に関連する状態を治療または改善する方法を提供する。特定のかかる実施形態では、治療または改善される状態は、冠動脈性心疾患、うっ血性心不全、血管再狭窄、脳卒中、末梢血管疾患、微小血管疾患、疾患性線維素溶解、または動脈硬化症である。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、冠動脈性心疾患、うっ血性心不全、血管再狭窄、脳卒中、末梢血管疾患、微小血管疾患、または動脈硬化症を発症するリスクを有する。特定の実施形態では、治療または改善される状態は、高血圧（例えば、安静状態での血圧が１３０／８０ｍｍＨｇ超）である。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、高血圧を発症するリスクを有する。他の実施形態では、治療または改善される状態は、アテローム性動脈硬化症である。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、アテローム性動脈硬化症を発症するリスクを有する。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどのＡＬＫ７アンタゴニストである。特定のかかる実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂに開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂに開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを含む。関連する実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表３に開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１Ａ】ｍＡｂ  Ｊ０２、ｍＡｂ  Ｇ０５、およびｍＡｂ  Ｃ０３に対するヒトＡＬＫ７上のエピトープを示し、ｍＡｂ  Ｊ０２、ｍＡｂ  Ｇ０５、およびｍＡｂ  Ｃ０３に対するヒトＡＬＫ７上の一次エピトープを示す（配列番号２０８）。
【図１Ｂ】ｍＡｂ  Ｊ０２、ｍＡｂ  Ｇ０５、およびｍＡｂ  Ｃ０３に対するヒトＡＬＫ７上のエピトープを示し、ｍＡｂ  Ｊ０２、ｍＡｂ  Ｇ０５、およびｍＡｂ  Ｃ０３に対するヒトＡＬＫ７上の二次エピトープを示す（配列番号２０８）。
【図１Ｃ】ｍＡｂ  Ｊ０２、ｍＡｂ  Ｇ０５、およびｍＡｂ  Ｃ０３に対するヒトＡＬＫ７上のエピトープを示し、上記３つの例示的な抗体に対するすべての一次および二次エピトープをまとめて示す（配列番号２０８）。
【図２】ＡＬＫ７上のエピトープへの結合の３−Ｄ構造モデル化に使用するためのＡＬＫ７（配列番号３３７）、ＡＬＫ６（配列番号３３８）、ＡＬＫ５（配列番号３３９）、ＡＬＫ３（配列番号３４０）、およびＡＬＫ１（配列番号３４１）の残基４〜８４の一次配列の比較を示す。
【図３Ａ】ＡＬＫ６、ＡＬＫ５、ＡＬＫ３、およびＡＬＫ１の利用可能な構造データに基づくヒトＡＬＫ７細胞外ドメインの構造モデルを示す。残基４〜８４（Ａ）または４〜９２（ＢおよびＣ）を表す構造が、例示的な抗体ｍＡｂ  Ｊ０２、ｍＡｂ  Ｇ０５、およびｍＡｂ  Ｃ０３に対する一次および二次エピトープを示している。
【図３Ｂ】ＡＬＫ６、ＡＬＫ５、ＡＬＫ３、およびＡＬＫ１の利用可能な構造データに基づくヒトＡＬＫ７細胞外ドメインの構造モデルを示す。残基４〜８４（Ａ）または４〜９２（ＢおよびＣ）を表す構造が、例示的な抗体ｍＡｂ  Ｊ０２、ｍＡｂ  Ｇ０５、およびｍＡｂ  Ｃ０３に対する一次および二次エピトープを示している。
【図３Ｃ】ＡＬＫ６、ＡＬＫ５、ＡＬＫ３、およびＡＬＫ１の利用可能な構造データに基づくヒトＡＬＫ７細胞外ドメインの構造モデルを示す。残基４〜８４（Ａ）または４〜９２（ＢおよびＣ）を表す構造が、例示的な抗体ｍＡｂ  Ｊ０２、ｍＡｂ  Ｇ０５、およびｍＡｂ  Ｃ０３に対する一次および二次エピトープを示している。
【図４】ＴＢＳおよびＡＬＫ７  ｍＡｂで処置した高脂肪食（ＨＦＤ）マウスにおける脂肪量の変化を示す。脂肪量の変化は、ＡＬＫ７抗体またはＴＢＳ処置前のベースラインに対するものである。各ＡＬＫ７  ｍＡｂ（すなわち、Ｊ０２、Ｋ０２、Ｇ０５、Ｃ０３、およびＬ０２）による処置は、ＨＦＤマウスの脂肪量を有意に減少させた。＊は、ＨＦＤ＋ＴＢＳに対してｐ＞０．００１を示す。
【図５】ＴＢＳおよびＡＬＫ７  ｍＡｂで処置した高脂肪食（ＨＦＤ）マウスにおける除脂肪体重の変化を示す。除脂肪体重の変化は、ＡＬＫ７抗体またはＴＢＳ処置前のベースラインに対するものである。各ＡＬＫ７  ｍＡｂ(すなわち、Ｊ０２、Ｋ０２、Ｇ０５、Ｃ０３、およびＬ０２）による処置は、ＨＦＤマウスの除脂肪量を変化させなかった。
【図６】高脂肪食（ＨＦＤ）を与えたマウスに対する標準固形飼料（ＳＤ）を与えたマウスのベースライン体重の比較を示す。
【図７】標準固形飼料（ＳＤ）または高脂肪食（ＨＦＤ）を与え、対照（ＴＢＳ）または異なる用量のＡＬＫ７抗体で処置したマウスの毎日の体重の比較を示す。
【図８】標準固形飼料（ＳＤ）または高脂肪食（ＨＦＤ）を与え、対照（ＴＢＳ）または異なる用量のＡＬＫ７抗体で処置したマウス間のベースライン体重に対する毎日の体重変化の比の比較を示す。
【図９】異なる時点における、標準固形飼料（ＳＤ）または高脂肪食（ＨＦＤ）を与え、対照（ＴＢＳ）または異なる用量のＡＬＫ７抗体で処置したマウス間の体重に対する脂肪量の比の比較を示す。
【図１０】異なる時点における、標準固形飼料（ＳＤ）または高脂肪食（ＨＦＤ）を与え、対照（ＴＢＳ）または異なる用量のＡＬＫ７抗体で処置したマウス間の体重に対する除脂肪量の比の比較を示す。
【図１１】異なる時点における、標準固形飼料（ＳＤ）または高脂肪食（ＨＦＤ）を与え、対照（ＴＢＳ）または異なる用量のＡＬＫ７抗体で処置したマウス間の脂肪重量または除脂肪重量の比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
本開示は、単離されたおよび／または組換えＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７に特異的に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に記載される少なくとも１つのＡＬＫ７エピトープに結合する。特定の実施形態では、そのようなＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、二重特異性抗体）は、本明細書に記載される少なくとも１つのエピトープと、本明細書に記載されるか、または既知の、または本明細書に記載の方法および／または当該技術分野では一般的な知識を用いて発見可能な少なくとも１つの別のエピトープとに結合する。かかるＡＬＫ７結合タンパク質には、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体（例えば、表１Ａ、１Ｂ、および３などの表および実施例に記載される抗体）、およびそれらの抗原結合フラグメントが含まれ得る。あるいは、かかるＡＬＫ７結合タンパク質には、本明細書には開示されていないが、本明細書に記載される少なくとも１つのＡＬＫ７エピトープに結合する抗ＡＬＫ７抗体が含まれ得る。例えば、かかるＡＬＫ７結合タンパク質には、本明細書に開示される抗体とは異なる少なくとも１つのＣＤＲ、フレームワーク、ＣＤＲ／フレームワークの組み合わせ、可変、定常、可変／定常の組み合わせの配列を含む抗ＡＬＫ７抗体が含まれ得る。したがって、本発明のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）には、本明細書に記載されるような少なくとも１つのＡＬＫ７エピトープに結合するＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）が含まれる。かかるタンパク質は、本明細書に記載されるものとまったく同じ主要および／または二次／コンフォメーションエピトープと相互作用するか、または、本明細書に記載される少なくとも１つのエピトープと重複する（例えば、本質的に同じ）異なる主要および／または二次／コンフォメーションエピトープと相互作用することができる。したがって、本発明は、特定のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、本明細書に記載される抗ＡＬＫ７抗体）と、ＡＬＫ７への結合について競合するか、またはその結合を遮断するＡＬＫ７結合タンパク質も提供する。かかるＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７への特定のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、本明細書に記載される抗ＡＬＫ７抗体）の結合を減少させるか、そのような結合に影響を及ぼさないか、または、他の例では、そのようなＡＬＫ７結合タンパク質の結合を向上することができる。いくつかの実施形態では、そのような結合は、ＡＬＫ７への特定のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、本明細書に記載される抗ＡＬＫ７抗体）の結合を防止または阻害する。他の実施形態では、そのような結合は、ＡＬＫ７への特定のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、本明細書に記載される抗ＡＬＫ７抗体）の結合を促進または亢進する。特定の実施形態では、本発明のＡＬＫ７タンパク質は表１Ａ、表１Ｂ、または表３に記載される抗ＡＬＫ７抗体（すなわち、Ｇ０４、Ｃ０２、Ｄ０４、Ｈ０３、Ｊ０１、Ｋ０１、Ｃ０１、Ｊ０２、Ｋ０２、Ｇ０５、Ｃ０３、およびＣ０２）、またはこれらの抗原結合フラグメントを除外する。
【００５７】
ＡＬＫ７結合タンパク質をコードする核酸、そのような核酸を含むベクターおよび宿主細胞、ならびにＡＬＫ７結合タンパク質の製造および使用方法も提供される。提供されるＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７の発現および／またはシグナル伝達の増加に関連する疾患および状態の診断、治療、および／または改善における用途を有する。かかる用途としては、これらに限定されるものではないが、肥満（例えば、腹部肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリック症候群および他の代謝疾患または状態；例えば、低ＨＤＬレベル、高ＬＤＬレベル、高脂血症、高トリグリセリド血症または脂質異常症などの脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド減少；炎症（例えば、肝臓の炎症および／または脂肪組織の炎症）、脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、高ＬＤＬレベルおよび高コレステロール血症）；冠状動脈性心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化症を含む心疾患などの心血管疾患；動脈硬化症および高血圧症；シンドロームＸ；血管再狭窄；神経障害；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸不全、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値の上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚の濃い染み）；およびがん（例えば、骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在化骨髄腫、または髄外性骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、胃癌、子宮癌および／または結腸癌）；ならびに、上記の疾患または状態の１つ以上、または過体重（例えば、２５ｋｇ／ｍ２のＢＭＩ）もしくは過剰な体脂肪に関連した他の疾患／状態の予防、および／または改善が挙げられる。
【００５８】
定義
別段の定義がなされない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有するものとする。例えば、ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ−Ｓｈｏｗ，２ｎｄ  ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  Ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓは、当業者に、本開示に使用される用語の多くについて一般的な辞書を与えるものである。本明細書において示される見出しは、明細書全体を参照することにより得ることができるさまざまな実施形態を限定するものではない。また、以下に定義される用語は、明細書の全容を参照することにより、より完全に定義される。
【００５９】
「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」なる用語には、用語が用いられる文脈によってそうでない旨が明確に示されない限り、複数の指示対象が含まれる。用語「ａ」（または「ａｎ」）、ならびに用語「１つ以上の」、および「少なくとも１つの」は、本開示では互換可能に用いられ得る。さらに、本明細書で使用するところの「および／または」とは、他方を伴うかまたは伴わない、２つ以上の特定の特性または要素のそれぞれの具体的な開示として理解されるべきである。したがって、本明細書において「Ａおよび／またはＢ」といった語句で用いられる「および／または」なる用語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（のみ）、および「Ｂ」（のみ）を含むものとする。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」といった語句で使用される「および／または」なる用語は、以下の実施形態、すなわち、Ａ、Ｂ、およびＣ、Ａ、Ｂ、またはＣ、ＡまたはＣ、ＡまたはＢ、ＢまたはＣ、ＡおよびＣ、ＡおよびＢ、ＢおよびＣ、Ａ（のみ）、Ｂ（のみ）、ならびにＣ（のみ）のそれぞれを包含するものとする。
【００６０】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」なる用語は、含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）、すなわち、１つ以上の特性または要素の存在を許容するという意味で一般的に用いる。実施形態が、「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」なる文言によって記述される場合は常に、さもなければ「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」および／または「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」によって記述される類似の実施形態も提供される。
【００６１】
本明細書および特許請求の範囲の全体を通じて数値に関連して用いられる「約」および「およそ」なる用語は、当業者にはよく知られる許容可能な精度の間隔を示す。一般にそのような精度の間隔は、±１０％である。あるいは、特に生体系において、「約」および「およそ」なる用語は、与えられた値の一桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内の値も意味し得る。
【００６２】
数値範囲は、その範囲を規定する数を含むものとする。
【００６３】
ＡＬＫ７結合タンパク質とは、ＡＬＫ７に特異的に結合する、好ましくはＡＬＫ７の細胞外ドメインに結合するタンパク質を指す。
【００６４】
「ＡＬＫ７」および「ＡＬＫ７受容体」なる用語は互換可能に使用され、ＡＬＫ７のことを指す（ＡＣＶＲＬＫ７、アクチビンＡ受容体、タイプＩＣ、ＡＣＶＲ−１Ｃ，アクチビン受容体様キナーゼ７、および文献中のＥＣ ２．７．１１とも呼ばれる）。ヒトＡＬＫ７の参照配列は、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１１０４５０１．１で提供されている。提供されるＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸配列に対応するヒトＡＬＫ７の細胞外ドメインに結合する。ラットＡＬＫ７の参照配列は、ＮＣＢＩ参照配列Ｐ７０５３９で提供されている。いくつかの実施形態では、提供されるＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８６のアミノ酸配列に対応するラットＡＬＫ７の細胞外ドメインに結合する。
【００６５】
ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、中和抗体）との関連で使用される場合、「競合する（ｃｏｍｐｅｔｅ）」または「競合する（ｃｏｍｐｅｔｅｓ）」なる用語は、試験下の抗原結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメント）が、共通の抗原（例えば、ＡＬＫ７の細胞外ドメインまたはそのフラグメント）に対する参照抗原結合タンパク質（例えば、リガンド、または参照抗体）の特異的結合を阻止または阻害するようなアッセイによって測定される抗原結合タンパク質間の競合を意味する。例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）（例えば、Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７−８２ （１９９０）  ａｎｄ  Ｍｏｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７−１５（１９８８））、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：５４６−５５２（１９９０）およびＫｉｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−３６１９（１９８６）を参照）、およびサンドウィッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ９２：２４２−２５３（１９８３）を参照）などの多くの種類の競合的結合アッセイを使用することができる。一般的に、これらのアッセイでは、標識されていない試験抗原結合タンパク質および標識された参照抗原結合タンパク質のいずれかを保持する固体表面または細胞に結合した精製抗原の使用を伴う。
【００６６】
競合阻害は、試験抗原結合タンパク質の存在下で固体表面または細胞に結合する標識の量を決定することにより測定することができる。通常、試験抗原結合タンパク質は過剰量で存在する。競合アッセイにより特定される抗原結合タンパク質（競合する抗原結合タンパク質）には、参照ＡＬＫ７結合タンパク質と同じエピトープに結合するＡＬＫ７結合タンパク質、および参照ＡＬＫ７結合タンパク質が結合するエピトープに立体障害が生じるうえで充分に近い隣接エピトープに結合するＡＬＫ７結合タンパク質が含まれる。通常、競合するＡＬＫ７結合タンパク質が過剰量で存在する場合、参照ＡＬＫ７結合タンパク質のＡＬＫ７への特異的結合を少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％または７５％阻害する。いくつかの例において、競合する抗原結合タンパク質は、参照ＡＬＫ７結合タンパク質の特異的結合を少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％阻害する。
【００６７】
ＡＬＫ７タンパク質との関連で使用される場合、「エピトープ」なる用語は、本開示のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗体）に結合することが可能なＡＬＫ７（例えば、ヒトＡＬＫ７またはマウスＡＬＫ７）タンパク質決定因子を指す。エピトープは、アミノ酸または糖側鎖などの化学的に活性な分子の表面基から通常なり、通常、特定の３次元構造特性、および特定の電荷特性を有する。コンフォメーションエピトープと非コンフォメーションエピトープとは、前者への結合は変性溶媒の存在下で失われるが、後者では失われないという点で区別される。ＡＬＫ７結合タンパク質が結合するＡＬＫ７エピトープは、当該技術分野では周知の方法を用いて容易に決定することができる。
【００６８】
「線状エピトープ」または「一次エピトープ」なる用語は、ＡＬＫ７タンパク質の一次アミノ酸配列（連続した）に沿って直線的に生じるＡＬＫ７タンパク質と本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）との間のすべての相互作用点を含むエピトープのことを指す。抗原上の所望のエピトープが決定されると、例えば、本明細書に記載される当該技術分野では周知の方法を用いてそのエピトープに対する抗体を生成することが可能である。あるいは、発見プロセスの間に、抗体またはそのフラグメントの生成および特性評価によって所望のエピトープに関する情報を明らかにすることもできる。次いでこの情報から、同じエピトープに結合する抗体を競合的にスクリーニングすることが可能である。これを行うためのアプローチの１つに、互いに競合的に結合する抗体（例えば、抗原としてのＡＬＫ７タンパク質への結合について競合する抗体）をみつけるための交差競合実験を行うことがある。抗体の交差競合に基づいて抗体を「ビニング」するためのハイスループットプロセスが国際特許出願第ＷＯ２００３／４８７３号に記載されている。
【００６９】
「コンフォメーションエピトープ」または「構造エピトープ」なる用語は、ＡＬＫ７タンパク質の不連続なアミノ酸残基が、ＡＬＫ７結合タンパク質との相互作用点を含む３次元形状に集まったエピトープを意味する。コンフォメーションエピトープでは、相互作用点は、少なくとも１個のアミノ酸残基（不連続的な）によって互いから分離されたアミノ酸残基にわたって生じる（すなわち、接触点は、ＡＬＫ７の細胞外ドメインなど、ＡＬＫ７タンパク質の異なる別々の領域に生じる）。あくまで説明の目的で、コンフォメーションエピトープは、ＡＬＫ７の別々の異なる領域上に連続的な接触点（例えば、ＡＬＫ７の細胞外ドメインなどのＡＬＫ７の１つの領域内の少なくとも２個のアミノ酸との連続した接触点）を含んでもよい。
【００７０】
一般的に、特定の標的抗原に対して特異的な抗体は、タンパク質および／またはマクロ分子の複雑な混合物中の標的抗原上のエピトープを選択的に認識する。
【００７１】
エピトープを含む特定のポリペプチド（例えば、ＡＬＫ７タンパク質）の領域は、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野では周知のものなど、任意の数のエピトープマッピング法を用いて特定することができる。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６（Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙを参照。例えば、線状エピトープは、例えば、タンパク質分子の各部分に対応した多数のペプチドを固体支持体上に同時に合成し、ペプチドが支持体に付着している状態でこれらのペプチドを抗体と反応させることによって決定することができる。かかる方法は当該技術分野では周知のものであり、例えば、米国特許第４，７０８，８７１号；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８４）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：７８−１８２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５に記載されている。同様に、コンフォメーションエピトープは、例えば、水素／重水素交換、Ｘ線結晶分析、および２次元核磁気共鳴などにより、アミノ酸の空間的コンフォメーションを決定することにより容易に特定される。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，（前述）を参照。タンパク質の抗原性領域は、例えば、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐから販売されるＯｍｉｇａバージョン１．０ソフトウェアプログラムを用いて計算されるものなど、標準的な抗原性およびハイドロパシープロットを用いて特定することもできる。このコンピュータプログラムは、Ｈｏｐｐ／Ｗｏｏｄｓ法（Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：３８２４−３８２８）を抗原性プロファイルを決定するために、また、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ法（Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２）をヒドロパシープロットを決定するために用いている。
【００７２】
本明細書で使用するところの「パラトープ」なる用語は、ＡＬＫ７タンパク質上のエピトープへの結合を決定する結合領域の一般的構造を指す。この構造は、結合領域がエピトープに結合するか否か、およびその結合の仕方に影響する。「パラトープ」なる用語は、ＡＬＫ７タンパク質上の抗原決定基に対する抗体またはそのフラグメントの結合を生じさせる、抗体またはその抗原結合フラグメントの抗原性部位のことを指す場合がある。パラトープは、抗体のイディオトープ、およびエピトープに結合する相補性決定領域（ＣＤＲ）領域のことも指す。
【００７３】
線状エピトープマッピングまたは不連続エピトープマッピングのいずれかを用いて、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質によって認識されるＡＬＫ７上のエピトープをマッピングすることができる（例えば、モノクローナル抗体）。重複する合成ペプチドのライブラリーを用いて線状エピトープをマッピングする概念は、例えば、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）ＰＮＡＳ  ８１：３９９８−４００２にみることができる。この技術は、特定のヒドロゲル配合物で被覆した固体支持体上に直鎖状ペプチドのライブラリーを直接合成することを含み、これは、生体分子の操作を可能とし、大きな試料セットのプロファイリングを行うために容易に再現することができる。線状模倣体のライブラリーを作製するには、免疫原（または標的タンパク質）の正確なアミノ酸配列を、重複するフラグメントにインシリコで分割し、次いで、固体支持体上で合成する（「ミニカード」）。そのような免疫原（または標的タンパク質）に対する抗体の結合は、自動化されたＥＬＩＳＡ型のリードアウトを用いて定量することができる。正しいコンフォメーション中に正しいアミノ酸配列を含むコンストラクトが抗体ともっともよく結合する。
【００７４】
不連続エピトープを模倣するには、Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｎ  Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ（ＣＬＩＰＳ（商標））（足場上で化学的に連結されるペプチド）技術によって定義された３Ｄ構造中にペプチドを固定する。この技術は、ＣＬＩＰＳ足場上の臭素基とシステインコンストラクトのチオール側鎖との間の反応を利用して、天然のタンパク質配列を広範な構造のＣＬＩＰＳコンストラクトに変換するものである。ＣＬＩＰＳ（商標）技術は、ペプチドライブラリーを単一、２重、または３重ループ構造、ならびにシート状および螺旋状フォールドの形にするために現在、普通に用いられており、これにより、コンフォメーション結合部位および不連続結合部位を模倣することが可能である。
【００７５】
二次構造模倣体は、熱力学的に好ましいペプチドのコンフォメーションの選択を可能とするＣＬＩＰＳ足場の使用によって安定化させることができる。コンビナトリアルスクリーニングは、標的タンパク質を最大で１０，０００種類の重複するペプチドコンストラクトのライブラリーに変換することで開始される。正しいコンフォメーションの不連続エピトープの両方の部分を表すコンストラクトは、高い親和性で抗体と結合する。不完全なエピトープを提示するコンストラクトが抗体と低い親和性で結合し得るのに対して、エピトープを含まないコンストラクトはまったく結合しない。
【００７６】
本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７（例えば、ヒトＡＬＫ７）上の少なくとも１つのエピトープに結合することができる。いくつかの実施形態では、かかるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、ＡＬＫ７上の少なくとも１つの線状エピトープに結合する。他の実施形態では、かかるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、ＡＬＫ７上の少なくとも１つの不連続またはコンフォメーションエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、かかるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、ＡＬＫ７上の少なくとも１つの線状エピトープおよび少なくとも１つの不連続またはコンフォメーションエピトープに結合する。かかる線状、不連続またはコンフォメーションエピトープは、ＡＬＫ７の異なるドメインまたはモチーフに位置することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質が結合する少なくとも１つのエピトープは、ＡＬＫ７の細胞外ドメインに位置する。他の実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質が結合する少なくとも１つのエピトープは、ＡＬＫ７の細胞外ドメインの外側に位置する。さらに他の実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質が結合する少なくとも１つのエピトープは、ＡＬＫ７の細胞外ドメインの内側または外側の境界に位置する。
【００７７】
本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質が結合する例示的なエピトープは、ペプチドライブラリースクリーニングによって解明され、本明細書において、例えば実施例などで開示する。実施例において解明されたペプチドストレッチは、ＡＬＫ７の線状、不連続またはコンフォメーションエピトープの重要な部分を表す（ただし、おそらくは１つの部分のみであるが）。本明細書に記載される特定のＡＬＫ７結合タンパク質は、実施例に開示されるペプチドストレッチで表されるＡＬＫ７上のエピトープに結合する。当業者には、当該技術分野における通常の知識と組み合わせることで、実施例に開示されるペプチドストレッチ配列を有するエピトープ構造が理解されるであろう。当業者には、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質の、記載されるエピトープを介したＡＬＫ７への結合は、当該技術分野における一般的な知識によって理解される、高、中、および／または低ストリンジェンシー条件下で生じ得る点も容易に理解されるであろう。
【００７８】
本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質の、記載されるエピトープを介したＡＬＫ７への結合は、ＡＬＫ７の構造および／または機能を変化させる場合もさせない場合もある。例えば、かかる結合は、ＡＬＫ７の生物学的活性、および／または少なくとも１つの他のＡＬＫ７結合タンパク質と相互作用するＡＬＫ７の能力を低下または消失させることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質の、記載されるエピトープの少なくとも１つを介したＡＬＫ７への結合は、ＡＬＫ７と少なくとも１つのＡＬＫ７リガンドとの相互作用を減少または消失させる。他の実施形態では、かかる結合は、ＡＬＫ７と少なくとも１つのＡＬＫ７リガンドとの相互作用に大きく影響しない。さらに他の実施形態では、かかる結合は、ＡＬＫ７と少なくとも１つのＡＬＫ７リガンドとの相互作用を有意に増大または改善する。さらに、かかる結合は、ＡＬＫ７の安定性および／または半減期を改善するか、またはＡＬＫ７の安定性および／または半減期を低下させることができる（例えば、ＡＬＫ７の分解および／または除去の阻害または促進することにより）。
【００７９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質の、記載されるエピトープを介したＡＬＫ７への結合は、ＡＬＫ７と別のＡＬＫ７結合タンパク質との結合を減少または阻害する。例えば、１つのかかるＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７への結合について別の抗ＡＬＫ７抗体（例えば、市販の抗ＡＬＫ７抗体）と競合し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質の、記載されるエピトープを介したＡＬＫ７への結合は、別の抗ＡＬＫ７抗体（例えば、別の市販のまたは既知の抗ＡＬＫ７抗体）へのＡＬＫ７の結合を防止する。他の実施形態では、かかる結合は、別の抗ＡＬＫ７抗体への結合（例えば、別の市販のまたは既知の抗ＡＬＫ７抗体のＡＬＫ７への結合）を妨げない。
【００８０】
本開示は、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体またはそのフラグメント）が結合するＡＬＫ７上の多くの一次およびコンフォメーションエピトープに関する。本開示は、連続した、および／または不連続のアミノ酸残基を含むＡＬＫ７上の少なくとも１つの一次エピトープおよび／または少なくとも１つのコンフォメーションエピトープを認識するＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体またはその抗原結合フラグメント）にも関する。特定の実施形態では、かかる連続した、および／または不連続のアミノ酸残基は、ＡＬＫ７の細胞外ドメイン内に位置する。特定の実施形態では、かかる一次またはコンフォメーションエピトープは、本明細書に記載される一次またはコンフォメーションエピトープ（例えば、実施例の）、または本明細書に記載される一次またはコンフォメーションエピトープ（例えば、実施例の）と重複する（例えば、本質的に同じ）異なるエピトープを含む。
【００８１】
一態様では、本開示は、ＡＬＫ７内の多数の異なる一次およびコンフォメーションエピトープの特定に関する。ＡＬＫ７の細胞外ドメイン（残基４〜８４）の主要部分の３次元構造は、関連するＡＬＫタンパク質の既知の構造によりモデル化されている。本開示はまた、図１および図３に示されるように、複数の抗ＡＬＫ７抗体と相互作用する複数の一次およびコンフォメーションエピトープがＡＬＫ７の細胞外ドメイン内に存在することを最初に示すものである。
【００８２】
本明細書の開示は、異なるクラスの抗ＡＬＫ７抗体またはそのフラグメントが結合する多数の異なる一次およびコンフォメーションエピトープがＡＬＫ７の細胞外ドメイン内に存在することを示す。抗ＡＬＫ７抗体（例えば、ｍＡｂ  Ｃ０３）のような本明細書に記載される第１のクラスのＡＬＫ７結合タンパク質は、６９ＤＦＣＮＮＩＴＬＨＬＰ７９（配列番号３１７）のような一次エピトープと、単独で、または１ＬＳＰＧＬＫＣＶＣＬＬ１１（配列番号３１８）および／または５１ＱＶＦＣＨＳＳＮＮ５９（配列番号３１９）のような少なくとも別の一次エピトープまたは１つのコンフォメーションエピトープと一緒に結合し、抗ＡＬＫ７抗体（例えば、ｍＡｂ  Ｊ０２）のような本明細書に記載される第２のクラスのＡＬＫ７結合タンパク質は、４５ＬＰＥＬＮＡＱＶＦＣＨＳＳＮＮＶＴＫ６２（配列番号３１０）のような第２の一次エピトープと、単独で、または２６ＷＡＳＶＭＬＴＮＧＫＥＱ３７（配列番号３１１）および／または７８ＬＰＴＡＳＰＮＡＰＫ８７（配列番号３１２）のような少なくとも別の一次エピトープまたは１つのコンフォメーションエピトープとの組み合わせで結合し、第３のクラスの抗体は、４２ＶＳＬＰＥＬＮＡＱＶＦＣＨＳＳＮＮＶＴＫ６３（配列番号３１３）のような第３の一次エピトープと、単独で、または６ＫＣＶＣＬＬＣＤＳＳ１５（配列番号３１４）、２３ＧＡＣＷＡＳＶＭＬＴ３２（配列番号３１５）、および／または７１ＣＮＮＩＴＬＨＬＰＴ８０（配列番号３１６）のような少なくとも別の一次エピトープまたは１つのコンフォメーションエピトープとの組み合わせで結合する。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３のコンフォメーションエピトープは重複せず、第１、第２、および第３のクラスの抗体は、ＡＬＫ７タンパク質の異なる領域に結合する。特定の実施形態では、第１と第２のコンフォメーションエピトープは重複せず、第１と第２のクラスの抗体は、ＡＬＫ７タンパク質の異なる領域に結合する。特定の実施形態では、第１と第３のコンフォメーションエピトープは重複せず、第１と第３のクラスの抗体は、ＡＬＫ７タンパク質の異なる領域に結合する。特定の実施形態では、第２と第３のコンフォメーションエピトープは重複せず、第２と第３のクラスの抗体は、ＡＬＫ７タンパク質の異なる領域に結合する。
【００８３】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７タンパク質上の第１、第２、および第３のコンフォメーションエピトープは、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多いアミノ酸残基で互いに重複し、第１、第２、および第３のクラスの抗体は、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多い重複するアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、第１と第２のコンフォメーションエピトープは、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多いアミノ酸残基で互いに重複し、第１と第２のクラスの抗体は、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多い重複するアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、第１と第３のコンフォメーションエピトープは、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多いアミノ酸残基で互いに重複し、第１と第３のクラスの抗体は、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多い重複するアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、第２と第３のコンフォメーションエピトープは、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多いアミノ酸残基で互いに重複し、第２と第３のクラスの抗体は、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多い重複するアミノ酸残基に結合する。
【００８４】
他の実施形態では、３つのクラスの抗体は、本明細書に記載される重複するエピトープに結合することができる。かかる重複するエピトープは、記載される一次および／またはコンフォメーションエピトープと本質的に同じであるか、または記載されるエピトープと多かれ少なかれ異なっていてよい。重複するエピトープと本明細書に記載されるエピトープとの間のかかる本質的な同一性は、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、またはそれよりも多いアミノ酸残基の重複を含み得る。
【００８５】
いくつかの実施形態では、本発明の３つのクラスの抗体は、ＡＬＫ７タンパク質への結合について実施例に記載される参照抗ＡＬＫ７抗体（例えば、表１Ａ、１Ｂ、および３）と競合する。いくつかの実施形態では、本発明の３つのクラスの抗体は、実施例に記載される参照抗ＡＬＫ７抗体（例えば、表１Ａ、１Ｂ、および３）のＡＬＫ７タンパク質への結合を異なる程度で阻害する。例えば、３つのクラスの抗体は、本明細書に記載の参照抗ＡＬＫ７抗体によるＡＬＫ７への特異的結合を、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上阻害することができる。
【００８６】
本明細書に開示される抗ＡＬＫ７結合抗体およびそのＡＬＫ７結合フラグメント、変異体、または誘導体などの抗原結合タンパク質は、例えば、それらが認識するかまたは特異的に結合する標的ポリペプチドなどの抗原のエピトープ（複数可）または部分（複数可）に関して記述または特定することができる。例えば、本明細書に開示されるＡＬＫ７結合タンパク質の抗原結合ドメインと特異的に相互作用するＡＬＫ７の部分は、「エピトープ」である。エピトープは、連続的なアミノ酸またはタンパク質の３次フォールディングによって隣接した不連続なアミノ酸から形成され得る。連続的なアミノ酸から形成されたエピトープが、変性溶媒に曝露される際に一般的に保持されるのに対して、３次フォールディングによって形成されたエピトープは一般的に変性溶媒で処理すると失われる。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニル基などの化学的に活性な分子の表面基を有してよく、特定の３次元構造特性、および／または特定の電荷特性を有してよい。エピトープは、通常、少なくとも３、４、５、６、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５個のアミノ酸を固有の空間的コンフォメーションで含む。エピトープは、当該技術分野における周知の方法を用いて常法で決定することができる。
【００８７】
「阻害する」、「遮断する」、「低下させる」、「減少させる」、「抑制する」、「アンタゴナイズする」、および「中和する」なる用語は、互換可能に使用され、活性の完全な遮断を含む、活性（例えば、ＡＬＫ７リガンドの結合および／またはＡＬＫ７のシグナル伝達）のあらゆる統計的に有意な減少を指す。例えば、「阻害」、「抑制」または「アンタゴナイズ」は、対照と比較した場合の活性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％の低下を指し得る。
【００８８】
いくつかの実施形態では、「減少させる」、「阻害する」、または「アンタゴナイズする」なる用語は、ＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩＡ／Ｂを発現する細胞を、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌなどのＡＬＫ７リガンドと接触させることにより誘導される１つ以上のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を、ＡＬＫ７結合タンパク質が接触しない場合の細胞におけるＳｍａｄのリン酸化の程度に対して統計的に有意に（例えば、０．０５以下のｐ値で）減少させる、抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントなどのＡＬＫ７結合タンパク質の能力のことを指し得る。ＡＬＫ７を発現する細胞は、天然に存在する細胞もしくは細胞株であってよく、またはＡＬＫ７をコードする核酸を宿主細胞に導入することによって組換えにより作製することができる。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメント）は、例えばウェスタンブロッティングに続いて、本明細書に記載されるかもしくは当該技術分野では周知の方法を用いた抗ホスホチロシン抗体によるプロービングまたはＥＬＩＳＡ（例えば、Ｐ−Ｓｍａｄ  ＥＬＩＳＡ）またはＳｍａｄ依存レポーター遺伝子アッセイを行うことにより測定した場合に、１つ以上のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のＡＬＫ７リガンド介在性リン酸化を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、または約１００％アンタゴナイズする（減少させる）。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞における脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害をアンタゴナイズする（減少させる）。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストであり、脂肪分解アッセイで測定した場合に、白色脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害を、５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％アンタゴナイズする。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解アッセイで測定した場合に、白色脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害を、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、または約１００％低下もしくは減少させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。
【００８９】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストであり、脂肪分解アッセイで測定した場合に、白色および／または褐色脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害を、５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％アンタゴナイズする。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解アッセイで測定した場合に、白色および／または褐色脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害を、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、または約１００％低下もしくは減少させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。
【００９０】
「増大させる」、「促進する」、および「アゴニスト」なる用語は、互換可能に使用され、活性（例えば、ＡＬＫ７リガンドの結合および／またはＡＬＫ７のシグナル伝達）のあらゆる統計的に有意な増加を指す。例えば、「増加させる」または「促進する」は、対照と比較した場合の活性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％の増加を指し得る。
【００９１】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は細胞内の脂肪分解を増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解アッセイで測定した場合に、細胞内の脂肪分解を、少なくとも５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞内の脂肪分解を増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解アッセイで測定した場合に、脂肪細胞内の脂肪分解を、少なくとも５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％増加させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、白色脂肪細胞または褐色脂肪細胞内の脂肪分解を増加させる。
【００９２】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、白色脂肪細胞内の脂肪分解を増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解アッセイで測定した場合に、白色脂肪細胞内の脂肪分解を、少なくとも５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％増加させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイはＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。
【００９３】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、褐色脂肪細胞内の脂肪分解を増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解アッセイで測定した場合に、褐色脂肪細胞内の脂肪分解を、少なくとも５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％増加させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイはＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。
【００９４】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、白色および褐色脂肪細胞内の脂肪分解を増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解アッセイで測定した場合に、白色および褐色脂肪細胞内の脂肪分解を、少なくとも５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％増加させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。
【００９５】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で行われる脂肪分解アッセイで標準的な方法および条件を用いて測定した場合（例えば、本明細書の実施例に記載されるように）に、白色脂肪細胞内の脂肪分解を、少なくとも５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％増加させる。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解阻害アッセイで標準的な方法および条件を用いて測定した場合に、白色脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害を、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、または約１００％低下もしくは減少させる。特定のかかる実施形態では、脂肪分解アッセイは、アクチビンＢの存在下で行われる（５０ｎｇ／ｍｌ）（例えば、本明細書の実施例に記載されるように）。
【００９６】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で行われる脂肪分解アッセイで標準的な方法および条件を用いて測定した場合（例えば、本明細書の実施例に記載される）に、白色および／または褐色脂肪細胞内の脂肪分解を、少なくとも５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％増加させる。いっそうさらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解阻害アッセイで標準的な方法および条件を用いて測定した場合に、白色脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害を、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、または約１００％低下もしくは減少させる。特定のかかる実施形態では、脂肪分解アッセイは、アクチビンＢの存在下で行われる（５０ｎｇ／ｍｌ）（例えば、本明細書の実施例に記載されるように）。
【００９７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞内のグリセロール産生を増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解アッセイで測定した場合に、脂肪細胞内のグリセロール産生を、少なくとも５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％増加させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、白色脂肪細胞または褐色脂肪細胞内のグリセロール産生を増加させる。
【００９８】
「抗体」および「免疫グロブリン」なる用語は、互換可能に本明細書で使用され、全（完全長）抗体およびその抗原結合フラグメントまたは一本鎖を含む。通常の抗体は、ジスルフィド結合により相互連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖を含む。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略称する）と重鎖定常領域とからなる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の３つのドメインで構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略称する）と軽鎖定常領域とからなる。軽鎖定常領域は１個のドメインＣＬで構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＷ）と呼ばれるより保存された領域が間に介在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに分けることができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へとＦＷ１、ＣＤＲ１、ＦＷ２、ＣＤＲ２、ＦＷ３、ＣＤＲ３、およびＦＷ４の順序で配列された３つのＣＤＲと４つのＦＷとから構成されている。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含んでいる。抗体の定常領域は、免疫系のさまざまな細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）をはじめとする、宿主の組織または因子に対するイムノグロブリンの結合に介在し得る。例示的な抗体としては、通常の抗体、ｓｃＦｖ、およびこれらの組み合わせが含まれ、例えば、ｓｃＦｖは、通常の抗体の重鎖および／または軽鎖のＮまたはＣ末端に共有結合されるか（例えば、ペプチド結合を介して、または化学リンカーを介して）、または通常の抗体の重鎖および／または軽鎖内に介在する。
【００９９】
「抗体」および「免疫グロブリン」なる用語は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメントなど）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）誘導体および変異体、二重特異性抗体などの多重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、ならびに、抗体が所望の結合活性を示す限り、抗原認識部位を含む他の任意の改変免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの免疫グロブリンの５つの主要なクラスのいずれか、またはそれぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれるそれらの重鎖定常ドメインの性質に基づいた免疫グロブリンのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）であってよい。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なる周知のサブユニット構造および３次元構造を有する。抗体は、裸であってもよく、または毒素、放射性同位体などの他の分子と結合させることもできる。「ＩｇＧ」なる用語は、認識される免疫グロブリンγの遺伝子によって実質的にコードされた抗体のクラスに属するポリペプチドを指す。ヒトでは、このクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む。マウスでは、このクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、およびＩｇＧ３を含む。
【０１００】
「ＡＬＫ７抗体」、「ＡＬＫ７に結合する抗体」、または「抗ＡＬＫ７抗体」なる用語は、充分な親和性でＡＬＫ７に結合可能であることにより、ＡＬＫ７を標的とする治療剤または診断試薬としてそれぞれ有用である抗体のことを指す。
【０１０１】
ＡＬＫ７タンパク質との関連で使用される場合、「特異的に結合する」とは、抗体のような結合タンパク質が、無関連の対照タンパク質に結合する場合よりも高い親和性でＡＬＫ７（例えば、ヒトＡＬＫ７、好ましくはＡＬＫ７の細胞外ドメイン）に結合する能力のことを一般的に意味する。いくつかの実施形態では、対照タンパク質は、ニワトリ卵白リゾチームである。好ましくは、結合タンパク質は、対照タンパク質に対する親和性よりも少なくとも１００倍、５００倍、または１０００倍高い親和性でＡＬＫ７に結合する。好ましくは、結合タンパク質は、当該技術分野では周知の結合アッセイを用いて測定した場合に、ヒトＡＬＫ７に対する結合親和性が、１×１０−７Ｍ以下、または１×１０−８Ｍ以下である。いくつかの実施形態では、結合親和性は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）（例えば、被検質としてＡＬＫ７、およびリガンドとしてＡＬＫ７結合タンパク質を使用、またはその逆）を用いて測定される。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、無関係な非ＡＬＫ７タンパク質へのＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）の結合の度合いは、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）（例えば、被検質として組換えＡＬＫ７、およびリガンドとしてＡＬＫ７結合タンパク質を使用、またはその逆）、カイネティック排除アッセイ（ＫＩＮＥＸＡ（登録商標））、または当該技術分野では周知の他の結合アッセイにより測定した場合に、ＡＬＫ７へのＡＬＫ７結合タンパク質の結合の約１０％未満である。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、解離定数（ＫＤ）が、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下である完全長抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。
【０１０３】
「抗原結合抗体フラグメント」（例えば、「ＡＬＫ７結合抗体フラグメント」）なる用語は、インタクトな抗体の抗原結合可変領域（例えば、ＣＤＲ３）の全体または部分を含むフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントにより行われ得ることが知られている。抗体フラグメントの例としては、これらに限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント、線状抗体、一本鎖抗体、ならびに１つ以上の抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示は、抗体フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子であるようなＡＬＫ７結合抗体フラグメントを提供する。
【０１０４】
Ｆｃ領域は、最初の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域を含むポリペプチドを含む。したがって、Ｆｃとは、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメインと、これらのドメインのＮ末端側にある柔軟なヒンジを指す。ＩｇＡおよびＩｇＭでは、ＦｃはＪ鎖を含むことができる。ＩｇＧでは、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣγ２およびＣγ３と、Ｃγ１とＣγ２との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は通常、そのカルボキシル末端に残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むものとして定義され、ここで、番号付けは、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））に記載されるＥＵインデックスに従う。ＦＣは、この領域単独、または全抗体、抗体フラグメント、もしくはＦｃ融合タンパク質との関連でこの領域を指す場合がある。これに限定されるものではないが、ＥＵインデックスにより番号付けした場合の２７０位、２７２位、３１２位、３１５位、３５６位、および３５８位を含む、多くの異なるＦｃの位置で多型が観察されていることから、示される配列と従来技術の配列との間にはわずかな相違が存在し得る。
【０１０５】
「モノクローナル抗体」とは、単一の抗原性決定基またはエピトープの高度に特異的な認識および結合に関与する均質な抗体集団のことを指す。これは、通常は異なる抗原性決定基に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル抗体」なる用語は、インタクトな、および完全長のモノクローナル抗体の両方、ならびに抗体フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）変異体、および抗体部分を含む融合タンパク質、ならびに抗原認識部位を含む他の任意の改変された免疫グロブリン分子を包含する。モノクローナル抗体は、これらに限定されるものではないが、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、およびトランスジェニック動物を含む任意の数の方法で作製することができる。
【０１０６】
「キメラ抗体」なる用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２種以上の種に由来するものである抗体を指す。一般的に、軽鎖および重鎖の両方の可変領域は、所望の抗原特異性、親和性、および／または能力を有する１つの哺乳動物種（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体の可変領域に対応するのに対して、定常領域は別の種（通常はヒト）に由来する抗体の配列と相同であることで、その種に免疫応答を誘発することが回避される。
【０１０７】
「ヒト化抗体」なる用語は、より少ない数の、好ましくは最小の非ヒト（例えば、マウス）配列を含むように操作された非ヒト（例えば、マウス）免疫グロブリンＡに由来する抗体を指す。一般的に、ヒト化抗体は、ＣＤＲからの残基が、所望の抗原結合特異性、親和性、および／または能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスター）のＣＤＲからの残基に置き換えられたヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６（１９８８））。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖのフレームワーク領域（ＦＷ）残基は、所望の抗原結合特異性、親和性、および／または能力を有する非ヒト種からの抗体内の対応する残基に置き換えられる。ヒト化抗体は、Ｆｖフレームワーク領域内および／または置換された非ヒト残基内のさらなる残基の置換によって抗体の特異性、親和性、および／または能力を改良および最適化するようにさらに改変することができる。一般にヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域のすべてまたはほぼすべてのものを含むが、ＦＲ領域のすべてまたはほぼすべてがヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列のものであるような、少なくとも１つ、一般的には２つまたは３つの可変ドメインのほぼすべてを含む。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部、一般的にはヒト免疫グロブリンのものをさらに含んでもよい。ヒト化抗体を作製するために用いられる方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号、および同第５，６３９，６４１号に記載されている。
【０１０８】
「ヒト抗体」なる用語は、ヒトにより産生される抗体、または当該技術分野では周知の任意の方法を用いて作製された、ヒトにより産生される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。「ヒト抗体」なる用語には、インタクトな（完全長）抗体、そのフラグメント、および／またはマウス軽鎖とヒト重鎖のポリペプチドからなる抗体のように、少なくとも１つのヒト重鎖および／または軽鎖のポリペプチドを含む抗体が含まれる。
【０１０９】
「アンタゴニスト」、「遮断」、または「中和」結合タンパク質とは、ＡＬＫ７などのそれが結合する抗原の活性を阻害または低下させるものである。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７、ならびにＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの多量体化を低下または阻害する。特定の実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７の活性を実質的にまたは完全に阻害する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７活性は、１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％低下させられる。特定の実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、完全長抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの抗ＡＬＫ７抗体である。さらなる実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、ＡＬＫ７の活性を少なくとも１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％阻害または低下させる。
【０１１０】
「結合親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性の相互作用を総和した強度のことを一般的に指す。特に断らない限り、「結合親和性」とは、結合ペア（例えば、抗体と抗原）の要素間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的に解離定数（ＫＤ）により表すことができる。親和性は、本明細書に記載されるものを含む当該技術分野では周知の一般的な方法により測定することができ、本開示の目的に利用することができる。
【０１１１】
「効力」は、所定の強度の効果を生じるのに必要な化合物の量で表される、化合物の薬理活性の尺度である。効力は、規定の生物学的作用を得るのに必要な化合物の量を指し、必要とされる用量が少ないほどより薬剤の効力は強い。効力は通常、特に断らない限り、ＩＣ５０値としてｎＭ単位で表される。ＩＣ５０は、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）の阻害濃度の中央値である。機能アッセイにおいて、ＩＣ５０は、生物学的応答をその最大値の５０％減少させる濃度である。リガンド−受容体結合試験において、ＩＣ５０は、リガンド−受容体の結合を最大の特異的結合レベルの５０％減少させる濃度である。ＩＣ５０は、当該技術分野では周知の任意の数の手段により計算することができる。参照抗ＡＬＫ７抗体または他のＡＬＫ７結合タンパク質と比較した場合の本明細書で提供される抗体または他の結合タンパク質の効力の改善倍率は、少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１１０倍、１２０倍、１３０倍、１４０倍、１５０倍、１６０倍、１７０倍、または少なくとも１８０倍であり得る。
【０１１２】
「抗体依存性細胞傷害作用」（Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）または「ＡＤＣＣ」とは、分泌されたＩｇが特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合することで、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が、抗原を保持する標的細胞に特異的に結合し、その後、標的細胞を細胞毒素で殺傷する、細胞傷害性の１つの形態を指す。標的細胞の表面を狙った特異的な高親和性ＩｇＧ抗体は、細胞傷害性細胞を「武装」し、かかる殺傷作用にとって絶対的に必要なものである。標的細胞の溶解は、細胞外溶解であり、細胞と細胞の直接的接触を必要とし、補体は関与しない。抗体以外にも、ＡＬＫ７を保持する標的細胞に特異的に結合する能力を有する、Ｆｃ領域を含む他のタンパク質、特にＦｃ融合タンパク質は、細胞媒介性細胞傷害作用を行うことが可能であると考えられる。簡潔にするため、Ｆｃ融合タンパク質の活性から生じる細胞媒介性細胞傷害作用を本明細書ではＡＤＣＣ活性とも呼ぶ。
【０１１３】
「単離」されたＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７結合フラグメント、その変異体、および誘導体を含むＡＬＫ７抗体）、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、自然界には見出されない形態のタンパク質（例えば、抗体）、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物には、それらが自然界でみられる形態ではなくなる程度にまで精製されたものが含まれる。いくつかの実施形態では、単離されたタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は実質的に純粋である。単離されたタンパク質および単離された核酸は、それらが自然の環境中、あるいは調製が組換えＤＮＡ技術によりインビトロまたはインビボで行われる場合にそれらが調製される環境（例えば、細胞培養物）中で一緒に見出される他のポリペプチドまたは核酸のようなそれらが自然界で関連している物質を含まないかまたは実質的に含まない。タンパク質および核酸は、希釈剤または賦形剤と配合することができるが、なお、実用的な目的では単離状態である。例えば、タンパク質は、イムノアッセイで使用されるマイクロタイタープレートをコーティングする目的で用いられる場合、ゼラチンもしくは他の担体と通常は混合され、または診断もしくは治療に用いられる場合には薬学的に許容される担体もしくは希釈剤と混合される。
【０１１４】
「対象」、「個体」、「動物」、「患者」および「哺乳動物」なる用語は、診断、予後、または治療が望まれる任意の対象、特に哺乳動物の対象を指す。哺乳動物の対象としては、これらに限定されるものではないが、特定の治療のレシピエントとなる、ヒト、非ヒト霊長類、家畜動物、農場動物、齧歯類などが挙げられる。
【０１１５】
「医薬組成物」なる用語は、有効成分の生物学的活性を有効とするような形態であり、組成物が投与される対象にとって許容されない毒性を示す濃度のさらなる成分を含まない製剤のことを指す。かかる組成物は無菌状態とすることができる。
【０１１６】
本明細書に開示されるポリペプチド、例えば、抗体を含む抗原結合タンパク質の「有効量」は、具体的に述べた目的を実施するうえで充分な量である。「有効量」は、記載した目的に関連して、経験的および常法により決定することができる。「治療有効量」なる用語は、対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）の疾患または状態を「治療」するうえで効果的なポリペプチド、例えば、抗体を含む抗原結合タンパク質、または他の薬剤の量を指し、疾患または状態を有する対象に何らかの改善または利益をもたらす量を指す。したがって、「治療有効」量とは、ＡＬＫ７介在性疾患または状態の少なくとも１つの臨床症状の何らかの軽減、緩和、および／または減少をもたらす量である。本開示の方法によって治療することが可能な疾患または状態に関連する臨床症状は、周知のものである。さらに、治療効果は、対象に何らかの利益がもたらされるものであれば、完全または治癒的である必要はない。いくつかの実施形態では、「治療的に有効な」なる用語は、ＡＬＫ７活性を低下させることが必要な対象においてＡＬＫ７活性を低下させることが可能な治療剤の量を指す。実際の投与量ならびに投与の速度および時間変化は、治療対象の性質および重症度によって決まる。例えば投与量の決定といった治療の処方は、一般的な医療従事者および他の医師の責任の範囲内である。抗体およびその抗原結合フラグメントの適当な用量は、一般的に知られている（Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４７：６５９−６６４（１９９１）；Ｂａｇｓｈａｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔ．Ｉｍｍｕｎ．ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．４：９１５−９２２（１９９１）を参照）。
【０１１７】
ＡＬＫ７介在性疾患または状態を有する対象において特定の結果を得るうえでの「充分量」または「充分な量」とは、場合により治療効果（すなわち、治療有効量の投与による）である、所望の効果を生じるうえで効果的な治療剤（例えば、本明細書に開示される、抗体を含む抗原結合タンパク質）の量を指す。いくつかの実施形態では、かかる特定の結果は、ＡＬＫ７活性の低下が必要とされる対象におけるＡＬＫ７活性の低下である。
【０１１８】
「標識」なる用語は、抗ＡＬＫ７抗体などの部分に直接的または間接的に結合されることで「標識された」部分を形成する検出可能な化合物または組成物のことを指す。標識は、それ自体で検出可能であってもよく（例えば、放射性同位体標識または蛍光標識）、または酵素標識の場合では、検出可能な基質化合物または組成物の化学変化を触媒してもよい。
【０１１９】
「治療する」もしくは「治療」、「治療するための」、または「改善する」および「改善するための」などの用語は、（ａ）診断された病的状態または疾患を治癒、遅延、その症状を軽減、および／またはその進行を停止させる治療的措置、ならびに（ｂ）標的とする疾患または状態の発症を予防および／または遅延させる予防的または防止的措置の両方を指す。したがって、治療を要する対象には、既にこれらの疾患または状態を有する者、これらの疾患または状態を発症するリスクのある者、および、これらの疾患または状態を予防しようとする者が含まれる。特定の実施形態では、対象が、疾患または状態に関連した症状の完全、部分的、または一過性の改善もしくは消失を示す場合に本明細書で提供される方法に従って効果的に「治療される」。いくつかの実施形態では、本開示は、肥満（例えば、腹部肥満）；インスリン抵抗性；メタボリック症候群および他の代謝疾患または状態；例えば、低ＨＤＬレベル、高ＬＤＬレベル、高脂血症、高トリグリセリド血症または脂質異常症などの脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド減少；炎症（例えば、肝臓の炎症および／または脂肪組織の炎症）、脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、高ＬＤＬレベルおよび高コレステロール血症）；冠状動脈性心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化症を含む心疾患などの心血管疾患；動脈硬化症および高血圧症；シンドロームＸ；血管再狭窄；神経障害；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸不全、腎疾患（ 例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値の上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚の濃い染み）；およびがん（例えば、骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在化骨髄腫、または髄外性骨髄腫）、または卵巣癌（例えば、上皮性卵巣癌）、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、胃癌、子宮癌、または結腸癌）；ならびに、上記の疾患または状態の１つ以上、または過体重（例えば、２５ｋｇ／ｍ２のＢＭＩ）もしくは過剰な体脂肪に関連した他の疾患／状態から選択される疾患、障害、または状態を治療するための方法を提供する。
【０１２０】
本明細書で使用するところの「〜と併用される」または「併用療法」とは、追加的療法（例えば、第２、第３、第４、といった）が体内で依然有効であるような（例えば、複数の化合物が対象内で同時に有効であり、これにはこれらの化合物の相乗作用が含まれ得る）任意の形態の投与のことを指す。有効性は、血液中、血清中、または血漿中の薬剤の測定可能な濃度と相関しない場合もある。例えば、異なる治療化合物を、同じ製剤中または別々の製剤中で、同時にまたは順次に、異なるスケジュールで投与することができる。したがって、かかる治療を受ける対象は、異なる療法の複合的な効果から利益を得ることができる。本明細書で提供される１つ以上のＡＬＫ７結合タンパク質を、１つ以上の他のさらなる薬剤および／または補助的療法と同時に、その前、またはその後で投与することができる。一般的に、各治療剤は、その特定の薬剤について定められた用量および／またはタイムスケジュールで投与される。あるレジメンで用いられる特定の組み合わせは、本開示のアンタゴニストと療法および／または所望の転帰との適合性を考慮する。
【０１２１】
本開示の方法および技術は、特に示さない限り、公知の従来の方法に従って、本開示の全体を通じて引用および検討されるさまざまな一般的およびより具体的な参考文献に記載されるようにして一般的に実施される。例えば、いずれも参照により本明細書に援用するところの、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２００１）およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２），およびＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９９０）を参照されたい。
【０１２２】
「がん」、「腫瘍」、「がん性」および「悪性」なる用語は、調節されない細胞増殖によって一般的に特徴付けられる、哺乳動物における生理的状態を指す、またはこれを述べる。がんの例としては、これらに限定されるものではないが、腺癌、リンパ腫、芽腫、黒色腫、肉腫、および白血病を含むがんが挙げられる。かかるがんのより具体的な例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、消化器癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、膵癌、神経膠芽腫、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝細胞癌およびヘパトーマなどの肝癌、膀胱癌、乳癌（ホルモン媒介乳癌を含む）（例えば、Ｉｎｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９４：１０５７−１０６５（２００６）参照）、結腸癌、直腸結腸癌、子宮内膜癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、唾液腺癌、腎細胞癌およびウィルムス腫瘍などの腎癌、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、精巣癌、食道癌、さまざまな種類の頭頸部癌、および粘液性卵巣癌などの粘液起源の癌、胆管癌（肝臓）および腎乳頭癌が挙げられる。特定の実施形態では、がんは、乳癌、子宮内膜、または子宮癌である。他の実施形態では、がんは、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在化骨髄腫、および髄外性骨髄腫）、または子宮内膜癌、胃癌、肝癌、直腸癌、腎癌または膵癌である。
【０１２３】
「ポリヌクレオチド」および「核酸」なる用語は互換的に使用され、単数の核酸および複数の核酸を包含することが意図され、単離された核酸分子またはコンストラクト、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）のことを指す。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、従来のホスホジエステル結合または従来みられなかった結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）に見られるようなアミド結合）を含む。「核酸」なる用語は、ポリヌクレオチド中に存在する、例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはＲＮＡフラグメントなどの任意の１つ以上の核酸セグメントを指す。核酸またはポリヌクレオチドに適用される場合、「単離された」なる用語は、その天然の環境から取り出された核酸分子、ＤＮＡまたはＲＮＡを意味する。例えば、ベクターに含まれる抗原結合タンパク質をコードする組換えポリヌクレオチドは、本開示の目的では、単離されたとみなされる。単離されたポリヌクレオチドのさらなる例には、異種宿主細胞内で維持されるかまたは溶液中の他のポリヌクレオチドから（部分的にまたは実質的に）精製された組換えポリヌクレオチドが含まれる。単離されたＲＮＡ分子には、本開示のポリヌクレオチドのインビボまたはインビトロＲＮＡ転写産物が含まれる。本発明に基づく単離されたポリヌクレオチドまたは核酸にはさらに、合成により生成されたそのような分子が含まれる。さらに、ポリヌクレオチドまたは核酸は、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、または転写終結シグナルなどの調節エレメントを含むことができる。
【０１２４】
「ベクター」なる用語は、送達することが可能であり、いくつかの実施形態では、宿主細胞内で１つ以上の対象とする遺伝子（複数可）または配列（複数可）を発現することが可能なコンストラクトを意味する。ベクターの例としては、これらに限定されるものではないが、ウイルスベクター、裸のＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性凝集剤と会合させたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに封入されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、およびプロデューサー細胞などの特定の真核細胞が挙げられる。
【０１２５】
「宿主細胞」なる用語は、組換え核酸を保有するか、または保有することが可能な細胞または細胞の集団を指す。宿主細胞は、原核細胞（例えば、大腸菌）または真核細胞であってよい。宿主細胞は、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、またはシゾサッカロマイセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）などの酵母を含む真菌細胞であってよい。宿主細胞は、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ−９）、または哺乳動物細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｆ、ＣＨＯ、ＣＯＳ−７、ＮＩＨ−３Ｔ３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）、およびハイブリドーマ）などの各種の動物細胞のいずれでもよい。さらなる実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ−Ｋ、ＣＨＯ−０、ＣＨＯ−Ｌｅｃ１０、ＣＨＯ−Ｌｅｃ１３、ＣＨＯ−Ｌｅｃ１、ＣＨＯ  Ｐｒｏ−５、およびＣＨＯｄｈｆｒ−から選択されるＣＨＯ細胞である。詳細な実施形態では、宿主細胞はハイブリドーマである。
【０１２６】
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」なる用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを呼称するうえで本明細書で互換的に使用される。ポリマーは、直鎖状であっても分岐状であってもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されていてもよい。これらの用語は、自然に修飾された、または、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分との結合など、他の任意の操作もしくは改変などの介入により修飾されたアミノ酸ポリマーも包含される。かかる定義には、例えば、アミノ酸の１つ以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸など）、および当該技術分野では周知の他の修飾を有するポリペプチドも含まれる。いくつかの実施形態では、提供されるＡＬＫ７結合タンパク質は抗体に基づくものであるため、ＡＬＫ７結合タンパク質は、単鎖または会合した複数の鎖として存在し得るものと理解される。
【０１２７】
「組換え」ポリペプチド、タンパク質または抗体は、組換えＤＮＡ技術によって作製されたポリペプチド、タンパク質または抗体を指す。宿主細胞中で発現される組換えによって作製されたポリペプチド、タンパク質、および抗体は、任意の適当な方法によって分離、分画化、または部分的もしくは実質的に精製された天然または組換えポリペプチドと同様、本開示の目的では単離されているものとみなされる。
【０１２８】
本開示には、ポリペプチドのフラグメント、変異体、または誘導体、およびそれらの任意の組み合わせも含まれる。「フラグメント」なる用語は、ポリペプチドおよびタンパク質を指す場合、参照ポリペプチドまたはタンパク質の性質の少なくとも一部を保持する任意のポリペプチドまたはタンパク質を含む。ポリペプチドのフラグメントとしては、タンパク質分解フラグメント、および欠失フラグメントが挙げられる。
【０１２９】
「変異体」なる用語は、少なくとも１つのアミノ酸の改変によって親抗体またはポリペプチド配列のものと異なっている抗体またはポリペプチド配列を指す。抗体またはポリペプチドの変異体にはフラグメントが含まれ、アミノ酸の置換、欠失、または挿入によって変化したアミノ酸配列を有する抗体またはポリペプチドも含まれる。変異体は天然または非天然に生じるものであってよい。非天然に生じる変異体は、任意の適当な突然変異誘発技術を用いて作製することができる。変異体ポリペプチドは、保存的または非保存的なアミノ酸の置換、欠失または付加を有することができる。
【０１３０】
抗体またはポリペプチドに対して用いられる「誘導体」なる用語は、天然の抗体またはポリペプチドにはみられないさらなる特性を示すように変化させられた抗体またはポリペプチドを指す。「誘導体」抗体の１つの例としては、第２のポリペプチドもしくは別の分子（例えば、ＰＥＧ、発色団またはフルオロフォアのようなポリマー）または原子（例えば、放射性同位体）との融合体または複合体がある。
【０１３１】
「アミノ酸置換」なるは、親配列中に存在するアミノ酸残基を別のアミノ酸残基で置換することを指す。アミノ酸は、例えば、化学的ペプチド合成により、または周知の組換え方法によって親配列中で置換することができる。従って、「位置Ｘにおける置換」と言う場合、または「位置Ｘにおける置換」は、位置Ｘに存在するアミノ酸残基の別のアミノ酸残基による置換のことを指す。いくつかの実施形態では、置換パターンは、ＡＸＹ（ただし、Ａは位置Ｘに天然に存在するアミノ酸残基に対応する一文字コードであり、Ｙは置換アミノ酸残基である）という表示に従って記述することができる。いくつかの実施形態では、置換パターンは、ＸＹ（ただし、Ｙは、位置Ｘに天然に存在するアミノ酸残基を置換するアミノ酸残基に対応する一文字コードである）という表示に従って記述することができる。
【０１３２】
「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。塩基性側鎖（例えば、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）、酸性側鎖（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、非荷電極性側鎖（例えば、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ）、非極性側鎖（例えば、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ）、β分枝側鎖（例えば、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ）、および芳香族側鎖（例えば、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ）を含む、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーがこれまでに定義されている。ポリペプチド中のアミノ酸残基が同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置換される場合、その置換は保存的であるとみなされる。あるいは、一連のアミノ酸残基を、側鎖ファミリーのメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に似た一連のアミノ酸残基で保存的に置換することもできる。
【０１３３】
非保存的置換としては、（ａ）正に帯電した側鎖を有する残基（例えば、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓ）が、負に帯電した残基（例えば、ＧｌｕまたはＡｓｐ）で、もしくはそれにより置換される置換、（ｂ）親水性残基（例えば、ＳｅｒまたはＴｈｒ）が、疎水性残基（例えば、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、またはＶａｌ）で、もしくはそれにより置換される置換、（ｃ）ＣｙｓまたはＰｒｏが、他の任意の残基で、もしくはそれにより置換される置換、または（ｄ）嵩高い疎水性または芳香族側鎖を有する残基（例えば、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、またはＴｒｐ）がより小さい側鎖を有する残基（例えば、ＡｌａまたはＳｅｒ）または側鎖を有さない残基（例えば、Ｇｌｙ）で、もしくはそれにより置換される置換が挙げられる。
【０１３４】
他の置換も容易に特定することができる。例えば、アミノ酸アラニンでは、置換は、Ｄ−Ａｌａ、Ｇｌｙ、β−Ａｌａ、Ｌ−ＣｙｓおよびＤ−Ｃｙｓのいずれか１つから行われる。リシンでは、置換はＤ−Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、ホモ−Ａｒｇ、Ｍｅｔ、Ｄ−Ｍｅｔ、オルニチン、またはＤ−オルニチンのいずれか１つであってよい。一般的に、単離されたポリペプチドの性質の変化を誘発することが予想され得る機能的に重要な領域内の置換は、（ａ）極性残基（例えば、ＳｅｒまたはＴｈｒ）が疎水性残基（例えば、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、またはＡｌａ）で（もしくはそれにより）置換される置換、（ｂ）Ｃｙｓ残基が他の任意の残基で（もしくはそれにより）置換される置換、（ｃ）正に帯電した側鎖を有する残基（例えば、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓ）が負に帯電した側鎖を有する残基（例えば、ＧｌｕまたはＡｓｐ）で（もしくはそれにより）置換される置換、または（ｄ）嵩高い側鎖を有する残基（例えば、Ｐｈｅ）がそのような側鎖を有さない残基（例えば、Ｇｌｙ）で（もしくはそれにより）置換される置換である。上記の非保存的置換の１つがタンパク質の機能的性質を変化させ得る確率は、タンパク質の機能的に重要な領域に対する置換の位置にも相関している。すなわち、いくつかの非保存的置換は生物学的性質にそれによる影響をほとんどまたはまったく及ぼさない。
【０１３５】
「アミノ酸の挿入」なる用語は、親配列中に存在する２個のアミノ酸残基の間に新たなアミノ酸残基を導入することを指す。アミノ酸残基は、例えば、化学的ペプチド合成によって、または当該技術分野では周知の組換え法により親配列に挿入することができる。したがって、語句「Ｘ位とＹ位との間への挿入」または「Ｋａｂａｔ位置ＸとＹとの間への挿入」（ＸおよびＹはアミノ酸残基の位置に対応する）（例えば、２３９位と２４０位との間へのシステインアミノ酸残基の挿入）とは、Ｘ位とＹ位との間へのアミノ酸残基の挿入を指し、また、アミノ酸残基をコードするコドンの、位置ＸおよびＹにおいてアミノ酸残基をコードするコドン間での核酸配列内への挿入を指す。
【０１３６】
２個のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の「配列同一率（％）」または「同一率（％）」なる用語は、比較ウインドウにわたって各配列によって共有される同一の一致位置の数を指し、２個の配列の最適なアラインメントを得るために導入する必要のある付加または欠失（すなわちギャップ）を考慮したものである。一致位置は、同一のヌクレオチドまたはアミノ酸が、標的配列と参照配列の両方に示される任意の位置である。標的配列内に示されるギャップは、ヌクレオチドまたはアミノ酸ではないため、カウントされない。同様に、標的配列のヌクレオチドまたはアミノ酸はカウントされるが、参照配列のヌクレオチドまたはアミノ酸はカウントされないため、参照配列内に示されるギャップはカウントされない。配列同一性の比率（％）は、同一のアミノ酸残基または核酸塩基が両方の配列に存在する位置の数を求めて一致位置の数を得て、一致位置の数を比較ウインドウ内の位置の総数で割り、その結果を１００倍して配列同一性の比率（％）を得ることによって計算される。配列同士の比較および２個の配列間の配列同一率（％）の決定は、容易に入手可能なソフトウェアプログラムを使用して行うことができる。適当なソフトウェアプログラムは、さまざまな販売元から入手可能であり、タンパク質およびヌクレオチド配列の両方のアライメント用のものがある。配列同一率（％）を決定するための適当なプログラムの１つに、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴパッケージプログラムの一部であるｂｌ２ｓｅｑがある。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して、２個の配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮが核酸配列を比較するために使用されるのに対して、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。他の適当なプログラムとしては、例えば、バイオインフォマティクスプログラムパッケージＥＭＢＯＳＳの一部であり、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）よりｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａでやはり入手可能なＮｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒがある。
【０１３７】
ＣＤＲまたはＣＤＲのセットを保持するための構造は一般的に、再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされる天然に存在するＶＨおよびＶＬ抗体可変ドメインのＣＤＲおよびＣＤＲのセットに対応する位置にＣＤＲまたはＣＤＲのセットが配置された、抗体の重鎖もしくは軽鎖配列またはその相当部分のものである。免疫グロブリン可変ドメインおよびそのＣＤＲの構造および位置は、プログラムならびに本明細書に参照によりその全容を援用するところのＫａｂａｔ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｕ．Ｓ．ＤＨＨＳ．１９８７、およびインターネット上で入手可能なツール（例えば、ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／  ａｂｙｓｉｓ／ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿  ｉｎｐｕｔ／ｋｅｙ＿  ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ／ｋｅｙ  ＿ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ．  ｈｔｍｌ；およびｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕにて））を参照することにより規定どおりに決定することができるＣｈｏｔｈｉａ、Ｃｈｏｔｈｉａ＋、およびＫａｂａｔなどの既知の可変ドメイン残基の番号付けシステムを使用して当業者により容易に決定することができる。
【０１３８】
ＣＤＲは、例えば、フィブロネクチン、シトクロムＢ、アルブミン（例えば、ＡＬＢＵｄＡｂ（Ｄｏｍａｎｔｉｓ／ＧＳＫ）およびＡＬＢ−Ｋｕｎｉｔｚ（Ｄｙａｘ））、３〜６のアミノ酸の非構造化リピート配列（例えば、ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ（登録商標）技術およびＸＴＥＮ（登録商標）技術）、ならびにエラスチン様リピートドメインを含む配列（例えば、本明細書に参照によりその全容を援用するところの米国特許出願第６１／４４２，１０６号を参照）などの他の足場により保持させることもできる。
【０１３９】
本明細書に実質的に記載されるようなＣＤＲのアミノ酸配列は、ヒト可変ドメインまたはその相当部分内にＣＤＲとして保持させることもできる。本明細書に実質的に記載されるようなＨＣＤＲ３配列は、本開示の実施形態を表し、これらの配列のそれぞれをヒト重鎖可変ドメインまたはその相当部分にＨＣＤＲ３として保持させることができる。
【０１４０】
本開示で用いられる可変ドメインは、任意の生殖系列または再編成されたヒト可変ドメインから得ることができるか、または既知のヒト可変ドメインのコンセンサス配列に基づいた合成可変ドメインとすることができる。ＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲ３）は、組換えＤＮＡ技術を使用してＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）を欠いた可変ドメインのレパートリーに導入することができる。
【０１４１】
例えば、Ｍａｒｋｓら（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３  （１９９２）、本明細書に参照によりその全容を援用する）は、可変ドメイン領域の５’末端またはその隣接部に対するコンセンサスプライマーを、ヒトＶＨ遺伝子の３番目のフレームワーク領域に対するコンセンサスプライマーと組み合わせて用いることでＣＤＲ３を欠いたＶＨ可変ドメインのレパートリーを得る、抗体可変ドメインのレパートリーを作製する方法を提供している。Ｍａｒｋｓらはさらに、このレパートリーを特定の抗体のＣＤＲ３と組み合わせる方法を記載している。類似の技術を使用し、本開示のＣＤＲ３由来配列を、ＣＤＲ３を欠いたＶＨまたはＶＬドメインのレパートリーとシャッフルし、シャッフルされた完全なＶＨまたはＶＬドメインを同族のＶＬまたはＶＨドメインと組み合わせて抗原結合タンパク質を得ることができる。次いで、適当な抗原結合タンパク質を選択することができるように、このレパートリーを、国際出願公開第ＷＯ９２／０１０４７号またはＫａｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓをはじめとする、それに続く多くの文献のいずれかに記載のファージディスプレイシステムなどの適当な宿主系でディスプレイさせることができる。レパートリーは、１０４種類よりも多い個別のメンバー（例えば、１０６〜１０８、または１０１０種類のメンバー）で構成されるものとすることができる。他の適当な宿主系としては、酵母ディスプレイ、細菌ディスプレイ、Ｔ７ディスプレイ、およびリボソームディスプレイが挙げられる。リボソームディスプレイの概説は、いずれも本明細書に参照によりその全容を援用するところのＬｏｗｅ  ｅｔ   ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５１７−５２７（２００４）および国際出願公開第ＷＯ９２／０１０４７号を参照されたい。類似のシャッフリングまたはコンビナトリアル技術はまた、Ｓｔｅｍｍｅｒ（本明細書に参照によりその全容を援用するＮａｔｕｒｅ  ３７０：３８９−３９１（１９９４））によっても開示されており、この文献は、β−ラクタマーゼ遺伝子に関連した方法について記載しているが、この手法を抗体の生成に用いることができると述べている。
【０１４２】
ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、参照分子のＡＬＫ７への結合をある程度遮断するような程度でＡＬＫ７に結合する場合にＡＬＫ７との結合について参照分子と「競合する」と言われる。ＡＬＫ７への結合について競合し、従ってＡＬＫ７への互いの結合を妨げるか、遮断するか、または「交差遮断」するタンパク質の能力は、例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）をはじめとする、当該技術分野では周知の任意の標準的競合結合アッセイにより、またはＳｃａｔｃｈａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０−６７２（１９４９）により記載される方法に従って測定することができる。ＡＬＫ７結合タンパク質は、例えば、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％、ＡＬＫ７への参照分子の結合を競合的に阻害すると言うことができる。いくつかの実施形態によれば、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７への参照分子の結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％、競合的に阻害する。他の実施形態によれば、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７への参照分子の結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％、競合的に阻害する。
【０１４３】
ＡＬＫ７結合タンパク質
ＡＬＫ７に特異的に結合するタンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体である。さらなる実施形態では、抗体は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体である。
【０１４４】
本明細書で使用するところの「ＡＬＫ７」なる用語は、任意の種に由来するアクチビン受容体様キナーゼ７タンパク質のファミリー、およびかかるＡＬＫ７タンパク質から突然変異誘発または他の改変によって誘導される変異体のことを指す。本明細書においてＡＬＫ７と言う場合、現在同定されている形態のうちのいずれか１つのことを言うものと理解される。ＡＬＫ７ファミリーのメンバーは、一般的に、システインリッチ領域を含むリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および予測されるセリン／トレオニンキナーゼ活性を有する細胞質ドメインから構成される、膜貫通タンパク質である。ヒトＡＬＫ７にはさまざまな天然に存在するアイソフォームが存在する。カノニカルなヒトＡＬＫ７アイソフォーム１前駆体タンパク質の配列（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿６６０３０２．２）を以下に示す。
【０１４５】
2021500895.tif 000002
シグナルペプチドは１重下線で示され、細胞外ドメインは太字で示される。
【０１４６】
カノニカルなラットＡＬＫ７前駆体タンパク質の配列（ＮＣＢＩ参照配列Ｐ７０５３９．１）を以下に示す。
【０１４７】
2021500895.tif 000003
シグナルペプチドは１重下線で示され、細胞外ドメインは太字で示される。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＴＧＦβ受容体ファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡＬＫ７結合タンパク質の親和性よりも少なくとも１００倍、５００倍、または１０００倍高い親和性でＡＬＫ７に結合する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７に結合し、１μΜ未満、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、１０ｐＭ未満、１ｐＭ未満、または０．１ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ヒトＡＬＫ７に対して、１μＭ以下かつ０．１ｐＭ以上、１００μＭ以下かつ０．１ｐＭ以上、または１００μＭ以下かつ１ｐＭ以上の範囲内のＫＤを有する。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析を用いて、参照ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）によるＡＬＫ７タンパク質への結合と競合する／結合を遮断するＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）の能力を測定することができる。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）装置（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００）が製造者の推奨に従って操作されるさらなる実施形態では、ＡＬＫ７−Ｆｃ融合タンパク質を、ＡＬＫ７をコーティングした表面を生成するために予め結合させた抗ｎｉＦｃ  ＩｇＧによりＣＭ５  ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップ上に捕捉する。一般的には、２００〜８００共鳴単位のＡＬＫ７−Ｆｃ（二量体）がチップに結合される（容易に測定可能な結合レベルを与えるが、使用される試験試薬の濃度によって容易に飽和可能な量）。
【０１５０】
互いに競合／遮断する能力を評価するための２種類のＡＬＫ７結合タンパク質（Ａ＊およびＢ＊と呼ぶ）を、適当なバッファー中で１：１の結合部位のモル比で混合して試験混合物を調製する。結合部位ベースで濃度を計算する場合、ＡＬＫ７結合タンパク質の分子量は、ＡＬＫ７結合タンパク質の総分子量を、そのＡＬＫ７結合タンパク質上のＡＬＫ７結合部位の数で割ったものと仮定される。試験混合物中のそれぞれのＡＬＫ７結合タンパク質（すなわち、Ａ＊およびＢ＊）の濃度は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップ上に捕捉されたＡＬＫ７−Ｆｃ分子上のそのＡＬＫ７結合タンパク質に対する結合部位を速やかに飽和するように充分に高くする必要がある。混合物中のＡ＊およびＢ＊ＡＬＫ７結合タンパク質は（結合ベースで）同じモル濃度であり、その濃度は通常、１．００〜１．５μＭである（結合部位ベースで）。ＡＬＫ７結合タンパク質Ａ＊単独およびＡＬＫ７結合タンパク質Ｂ＊単独を含む別々の溶液も調製する。これらの溶液中のＡＬＫ７結合タンパク質Ａ＊およびＡＬＫ７結合タンパク質Ｂ＊は、試験混合物と同じバッファー中で同じ濃度としなければならない。試験混合物をＡＬＫ７−ＦｃをコーティングしたＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップ上に通過させて結合の合計量を記録する。次いで、チップに結合したＡＬＫ７−Ｆｃにダメージを与えないように、結合した各ＡＬＫ７結合タンパク質が除去されるようにチップを処理する。通常、これは、チップを３０ｍＭ  ＨＣｌで６０秒間処理することによって行われる。次いで、ＡＬＫ７結合タンパク質Ａ＊単独の溶液をＡＬＫ７−Ｆｃをコーティングした表面上に通過させ、結合の量を記録する。チップに結合したＡＬＫ７−Ｆｃにダメージを与えないように、結合した抗体が除去されるようにチップを再び処理する。次いで、ＡＬＫ７結合タンパク質Ｂ＊単独の溶液をＡＬＫ７−Ｆｃをコーティングした表面上に通過させ、結合の量を記録する。ＡＬＫ７結合タンパク質Ａ＊およびＡＬＫ７結合タンパク質Ｂ＊の混合物の最大の理論上の結合量を次に計算するが、これはＡＬＫ７表面を単独で通過させた場合のそれぞれのＡＬＫ７結合タンパク質の結合量の合計である。混合物の実際に記録された結合量がこの理論上の最大値よりも小さければ、２つのＡＬＫ７結合タンパク質は互いに競合／遮断していることになる。したがって、一般的に、遮断ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）遮断アッセイにおいてＡＬＫ７に結合するものであり、アッセイにおいて第２のＡＬＫ７結合タンパク質の存在下で、記録される結合量が、２つのＡＬＫ７結合タンパク質を組み合わせた場合の最大理論結合量（上記で定義したもの）の８０％〜０．１％（例えば、８０％未満〜４％）、詳細には最大理論結合量の７５％〜０．１％（例えば、７５％〜４％）、より詳細には最大理論結合量の７０％〜０．１％（例えば、７０％〜４％）であるようなものである。
【０１５１】
上記に述べたＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイは、抗ＡＬＫ７抗体などの２つのＡＬＫ７結合タンパク質が、ＡＬＫ７への結合について互いに競合／遮断するかどうかを判定するために用いられる例示的なアッセイである。まれに、特定のＡＬＫ７結合タンパク質は、抗Ｆｃ  ＩｇＧを介してＣＭ５  ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップに結合されたＡＬＫ７−Ｆｃに結合しない場合がある（これは、ＡＬＫ７上の関連する結合部位がＦｃに対するＡＬＫ７の結合によってマスクまたは破壊される場合に生じ得る）。そのような場合、遮断は例えば、ＡＬＫ７のタグ付加された形態、例えば、Ｃ末端にＨｉｓタグを付加したＡＬＫ７を使用して判定することができる。この特定のフォーマットでは、抗Ｈｉｓ抗体がＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップに結合された後、Ｈｉｓタグ付加ＡＬＫ７をチップの表面上に通過させ、抗Ｈｉｓ抗体によって捕捉させる。それぞれのチップ再生サイクル後に、新しいＨｉｓタグ付加ＡＬＫ７を抗Ｈｉｓ抗体でコーティングした表面上に再びロードする点以外は、基本的に上記に述べたようにして交差遮断分析を行う。さらに、各種の他の既知のタグとタグ結合タンパク質との組み合わせをこうしたブロッキング分析に使用することができる（例えば、ＨＡタグと抗ＨＡ抗体、ＦＬＡＧタグと抗ＦＬＡＧ抗体、ビオチンタグとストレプトアビジン）。以下に、ＡＬＫ７結合タンパク質が、ＡＬＫ７への参照ＡＬＫ７結合タンパク質の結合を遮断するかどうか、または遮断することが可能であるかどうかを判定するためのＥＬＩＳＡアッセイを一般的に記載する。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡを用いて、参照ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７リガンド）とＡＬＫ７への結合について競合するＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）の能力を測定する。かかるアッセイの一般的原理は、参照ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）をＥＬＩＳＡプレートのウェル上にコーティングすることである。過剰量の第２の潜在的に遮断性を有する試験ＡＬＫ７結合タンパク質を溶液に加える（すなわち、ＥＬＩＳＡプレートに結合されていない）。次いで、限定されたＡＬＫ７の量（または代替的にＡＬＫ７−Ｆｃ）を各ウェルに加える。コーティングされた参照ＡＬＫ７結合タンパク質と溶液中の試験ＡＬＫ７結合タンパク質とは、限定された数のＡＬＫ７（またはＡＬＫ７−Ｆｃ）分子の結合について競合する。プレートを洗浄して、コーティングされた参照ＡＬＫ７結合タンパク質が結合していないＡＬＫ７を除去し、試験溶液相ＡＬＫ７結合タンパク質および試験溶液相ＡＬＫ７結合タンパク質とＡＬＫ７との間に形成された任意の複合体も除去する。次いで、結合したＡＬＫ７の量を適当なＡＬＫ７検出試薬を用いて測定する。コーティングされた参照ＡＬＫ７結合タンパク質のＡＬＫ７への結合を遮断することが可能な溶液中の試験ＡＬＫ７結合タンパク質は、コーティングされた参照ＡＬＫ７結合タンパク質が結合できるＡＬＫ７分子の数を、コーティングされた参照ＡＬＫ７結合タンパク質が第２の溶液相試験ＡＬＫ７結合タンパク質の非存在下で結合できるＡＬＫ７分子の数に対して減少させることができるであろう。アッセイのバックグラウンドシグナルは、コーティングされた参照ＡＬＫ７結合タンパク質、溶液相の試験ＡＬＫ７結合タンパク質、ＡＬＫ７バッファーのみ（すなわち、ＡＬＫ７なし）、およびＡＬＫ７検出試薬を含むウェルで得られるシグナルとして定義される。アッセイの陽性対照シグナルは、コーティングされた参照ＡＬＫ７結合タンパク質、溶液相の試験ＡＬＫ７結合タンパク質バッファーのみ（すなわち、溶液相の試験ＡＬＫ７結合タンパク質なし）、ＡＬＫ７、およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）検出試薬を含むウェルで得られるシグナルとして定義される。ＥＬＩＳＡアッセイは、陽性対照シグナルがバックグラウンドシグナルの少なくとも３倍となるような方法で行う。方法論的アーティファクト用の対照として、交差ブロッキングアッセイを今述べたようなフォーマットで行い、さらに逆転させて、試験ＡＬＫ７結合タンパク質をコーティングされる抗体として、参照ＡＬＫ７結合タンパク質を溶液相抗体として用いて行うことができる。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＴＧＦβ受容体ファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡＬＫ７結合タンパク質の親和性よりも少なくとも１００倍、５００倍、または１０００倍高い親和性でＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＴＧＦβ受容体ファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡＬＫ７結合タンパク質の親和性よりも少なくとも１００倍、５００倍、または１０００倍高い親和性でＡＬＫ７に結合する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７に結合し、１μΜ未満、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、１０ｐＭ未満、１ｐＭ未満、または０．１ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ヒトＡＬＫ７に対して、１μＭ以下かつ０．１ｐＭ以上、１００μＭ以下かつ０．１ｐＭ以上、または１００μＭ以下かつ１ｐＭ以上の範囲内のＫＤを有する。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、細胞ベースの脂肪分解阻害アッセイを用いて、哺乳動物の白色脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害を低下（阻害）するＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体）の能力を測定する。いくつかの実施形態では、脂肪分解阻害アッセイは、ＡＬＫ７活性を低下させるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）の能力を測定するために成熟白色脂肪細胞（例えば、ヒト、マウス、またはラット）を用いて行われる。脂肪分解アッセイを行うためのキット、試薬および方法は市販されており、当該技術分野では周知のものである。詳細な実施形態では、脂肪分解阻害アッセイは本明細書の実施例に示されるようにして行われる。他の実施形態では、アッセイは、市販の脂肪分解アッセイキット（例えば、ＢｉｏＡｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＥｎｚｙＣｈｒｏｍ（商標）Ａｄｉｐｏｌｙｓｉｓ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ，カタログ番号ＥＡＰＬ−２００；Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ１８５４３３；Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，カタログ番号ＬＩＰ−１−ＮＣＬ１；ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ，カタログ番号Ｋ５７７−１００；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，カタログ番号ＭＡＫ２１１；およびＡｄｉｐｏＬｙｚｅ（商標）Ｌｉｐｏｌｙｓｉｓ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ，Ｌｏｎｚａ、カタログ番号１９３３３９）で提供される指示および試薬に従って行われる。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストであり、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で行われる脂肪分解阻害アッセイで標準的な方法および条件を用いて測定した（例えば、本明細書の実施例に記載されるように）場合に、成熟白色脂肪細胞内の脂肪分解を、５％〜１００％、１０％９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６５％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％増加させる。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で行われる脂肪分解阻害アッセイで標準的な方法および条件を用いて測定した（例えば、本明細書の実施例に記載されるように）場合に、成熟白色脂肪細胞内の脂肪分解を、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％、または約１００％増加させる。
【０１５６】
ＡＬＫ７シグナル伝達に依存する薬力学的パラメータをＡＬＫ７結合タンパク質のインビボ試験のエンドポイントとして測定することで、ＡＬＫ７を中和して治療効果を与えることが可能な結合タンパク質を特定することができる。ＡＬＫ７中和結合剤は、溶媒で処理した動物と比較してかかる薬力学的パラメータに統計的に有意な変化を生じることが可能なものとして定義される。かかるインビボ試験は、任意の適当な哺乳動物（例えば、マウス、ラット、またはサルで行うことができる。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合する抗体である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、完全長の抗ＡＬＫ７抗体である。さらなる実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、またはそれらのＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、ＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７抗体は、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合されたＦｖ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃＦｖ−Ｆｃまたはｂｉｓ−ｓｃＦｖである。
【０１５９】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨおよびＶＬを含む抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、重鎖定常領域またはそのフラグメントをさらに含む。いくつかの態様において、抗体は、（ａ）ヒトＩｇＡ定常領域、またはそのフラグメント、（ｂ）ヒトＩｇＤ定常領域、またはそのフラグメント、（ｃ）ヒトＩｇＥ定常ドメイン、またはそのフラグメント、（ｄ）ヒトＩｇＧ１定常領域、またはそのフラグメント、（ｅ）ヒトＩｇＧ２定常領域、またはそのフラグメント、（ｆ）ヒトＩｇＧ３定常領域、またはそのフラグメント、（ｇ）ヒトＩｇＧ４定常領域、またはそのフラグメント、および（ｈ）ヒトＩｇＭ定常領域、またはそのフラグメントから選択される重鎖免疫グロブリン定常領域を含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、重鎖定常領域またはそのフラグメント、例えば、ヒトＩｇＧ定常領域またはそのフラグメントを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、改変されたエフェクター機能および／または半減期を有するかまたはそれを有するように変異させられた重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。
【０１６０】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、エフェクター機能を低下させる変異を有するＩｇＧ１重鎖定常領域を含む抗体である（例えば、いずれも本明細書に参照によりその全容を援用するところの、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６６：２５７１−２５７５（２００１）；Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  １０５：２０１６７−２０１７２（２００８）；Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３４：２２０４−２２１０（２００７）；Ｂｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：４０３−４１１（１９９３）；Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３（１９９４）；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００：１６−２６（２０００）；Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６８：５６３−５７１（１９９９）；Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９２：１１９８０−１１９８４（１９９５）；Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５−１９３３（２０００）；ＷＯ９７／１１９７１，およびＷＯ０７／１０６５８５；米国特許出願公開第２００７／０１４８１６７Ａ１号；ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０９：１１８５−１１９２  （２００７）；Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ． Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：６８５−６９１（２００９）；およびＫｕｍａｇａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４７：１４８９−１４９７（２００７）を参照）。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、重鎖定常領域またはそのフラグメントは、野生型ＩｇＧ定常ドメインに対して１つ以上のアミノ酸置換を含み、改変されたＩｇＧは、野生型ＩｇＧの定常ドメインを有するＩｇＧの半減期と比較して低下したＡＤＣＣを有する。ＡＤＣＣを低下させる提供される抗体に含まれるＦｃ配列を操作する改変の例としては、位置の番号付けがＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従うものとして、ＩｇＧ１のＫ３２６Ｗ、Ｅ３３３Ｓ；ＩｇＧ２のＥ３３３Ｓ；ＩｇＧ１のＮ２９７Ａ；ＩｇＧ１のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ２のＶ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ；ＩｇＧ４のＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ；ＩｇＧ４のＳ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ；ＩｇＧ２のＥＵ配列１１８〜２６０；ＩｇＧ４のＥＵ配列２６１〜４４７；ＩｇＧ２のＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ；ＩｇＧ１のＣ２２０Ｓ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ；ＩｇＧ１のＣ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ；およびＩｇＧ１のＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓに対応する１つ以上の改変が含まれる。
【０１６２】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、低下したＣＤＣ活性を有するかまたは有するように変異させられた重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＣＤＣ活性を低下させる突然変異を含有するＩｇＧ１重鎖定常領域を含む抗体である（例えば、いずれも本明細書に参照によりその全容を援用するところの、ＷＯ９７／１１９７１およびＷＯ０７／１０６５８５；米国出願第２００７／０１４８１６７Ａ１号；ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０９：１１８５−１１９２（２００７）；Ｈａｙｄｅｎ−Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  １５：２７３９−２７４６（２００９）；Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  １０３：４００５−４０１０（２００６）；Ｂｒｕｃｋｈｅｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ  １１：５０９−５１７（２００９）；Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ． Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２０：６８５−６９１（２００９）；およびＳａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  １０５：２０１６７−２０１７２（２００８）を参照）。ＣＤＣを低下させる抗ＡＬＫ７抗体に含まれるＦｃ配列を操作する改変の例としては、ＩｇＧ１のＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ；ＩｇＧ２のＥＵ配列１１８−２６０；ＩｇＧ４のＥＵ配列２６１−４４７；ＩｇＧ２のＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ；ＩｇＧ１のＣ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ１のＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ；およびＩｇＧ１のＣ２２６Ｓ、Ｐ２３０Ｓに対応する１つ以上の改変が挙げられる。
【０１６３】
さらなる実施形態では、重鎖定常領域またはそのフラグメントは、野生型ＩｇＧ定常ドメインに対して１つ以上のアミノ酸置換を含み、改変されたＩｇＧは、野生型ＩｇＧの定常ドメインを有するＩｇＧの半減期と比較して増加した半減期を有する。例えば、ＩｇＧ定常ドメインは、アミノ酸位置の番号付けがＫａｂａｔに記載されるＥＵインデックスに従うものとして、２５１〜２５７位、２８５〜２９０位、３０８〜３１４位、３８５〜３８９位、および４２８〜４３６位のアミノ酸残基の１つ以上のアミノ酸置換を含むことができる。特定の実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインは、Ｋａｂａｔ位置２５２のアミノ酸のＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、もしくはＴｈｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置２５４のアミノ酸のＴｈｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置２５６のアミノ酸のＳｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、もしくはＴｈｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置２５７のアミノ酸のＬｅｕによる置換、Ｋａｂａｔ位置３０９のアミノ酸のＰｒｏによる置換、Ｋａｂａｔ位置３１１のアミノ酸のＳｅｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置４２８のアミノ酸のＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、もしくはＳｅｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置４３３のアミノ酸のＡｒｇ、Ｓｅｒ、Ｉｓｏ、Ｐｒｏ、もしくはＧｌｎによる置換、またはＫａｂａｔ位置４３４のアミノ酸のＴｒｐ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、もしくはＴｙｒによる置換のうちの１つ以上を含むことができる。より詳細には、ＩｇＧ定常ドメインは、Ｋａｂａｔ位置２５２のアミノ酸のＴｙｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置２５４のアミノ酸のＴｈｒによる置換、およびＫａｂａｔ位置２５６のアミノ酸のＧｌｕによる置換を含む、野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインに対するアミノ酸置換を含むことができる。
【０１６４】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、軽鎖免疫グロブリン定常領域を含む抗体である。さらなる実施形態では、抗体は、ヒトＩｇκ定常領域またはヒトＩｇλ定常領域を含む。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、各ＣＤＲは、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペア中に存在する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＣＤＲのセットを含み、各ＣＤＲは、（ａ）配列番号４のＶＨ配列と配列番号１３のＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列、（ｃ）配列番号４０のＶＨ配列と配列番号４９のＶＬ配列、および（ｄ）配列番号５８のＶＨ配列と配列番号６７のＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペア中に存在し、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、各ＣＤＲは、表１Ｂに開示されるＶＨとＶＬのペア中に存在する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＣＤＲのセットを含み、各ＣＤＲは、（ａ）配列番号１５２のＶＨ配列と配列番号９８のＶＬ配列、（ｂ）配列番号１５９のＶＨ配列と配列番号１１０のＶＬ配列、および（ｃ）配列番号１６５のＶＨ配列と配列番号１７１のＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペア中に存在し、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、各ＣＤＲは、表３に開示されるＶＨとＶＬのペア中に存在する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＣＤＲのセットを含み、各ＣＤＲは、（ａ）配列番号９１のＶＨ配列と配列番号９８のＶＬ配列、（ｂ）配列番号１０５のＶＨ配列と配列番号１１０のＶＬ配列、（ｃ）配列番号１１７のＶＨ配列と配列番号１２４のＶＬ配列、（ｄ）配列番号１２８のＶＨ配列と配列番号１３５のＶＬ配列、および（ｄ）配列番号１４０のＶＨ配列と配列番号１４８のＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペア中に存在し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３、または（ｂ）ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、本明細書に開示されるＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、表１Ａに開示されるＶＨまたはＶＬ配列中のＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有する。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３、または（ｂ）ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、本明細書に開示されるＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＣＤＲのセットを含み、ＣＤＲのセットは、表１Ｂに開示されるＶＨまたはＶＬ配列中のＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有する。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、本明細書に開示されるＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、表３に開示されるＶＨとＶＬ配列ペア中のＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有する。
【０１７１】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を有するか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を有するか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を有するか、または（ｄ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７お���びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１７２】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を有する、（ｂ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１５６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１５７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１８４のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を有する、および（ｃ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１６３のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１６４のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１６７のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１６８のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発��する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１７３】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号８８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号８９のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を有するか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１０２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１０３のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１０４のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を有するか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１１４のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１１５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１１６のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１２１のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１２２のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２３のアミノ酸配列を有するか、（ｄ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１２５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１２６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１２７のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１３２のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１３３のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１３４のアミノ酸配列を有するか、または（ｅ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１３８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１３９のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１４５のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１４６のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬ��７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１７４】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を有するか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を有するか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を有するか、または（ｄ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【０１７５】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を有する、（ｂ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１５６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１５７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１０４のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を有する、および（ｃ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１６３のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１１６４のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１６８のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１６９のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【０１７６】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号８８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号８９のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を有するか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１０２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１０３のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１０４のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を有するか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１１４のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１１５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１１６のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１２１のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１２２のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２３のアミノ酸配列を有するか、（ｄ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１２５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１２６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１２７のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１３２のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１３３のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１３４のアミノ酸配列を有するか、または（ｅ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１３８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１３９のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１４５のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１４６のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１４７のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットから合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１０個よりも少ない、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＣＤＲのセットを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、およびアクチビンＢを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合についてＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１���ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットから合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１０個よりも少ない、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＣＤＲのセットを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、およびアクチビンＢを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、Ｇ���Ｆ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットから合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１０個よりも少ない、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＣＤＲのセットを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５��〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットから合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１０個よりも少ない、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＣＤＲのセットを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５��〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号８８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号８９のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットから合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１０個よりも少ない、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＣＤＲのセットを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、およびアクチビンＢを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合についてＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、Ｇ���Ｆ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１０２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１０３のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１０４のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットから合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１０個よりも少ない、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＣＤＲのセットを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、およびアクチビンＢを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、���ＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１１４のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１１５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１１６のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１２１のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１２２のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットから合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１０個よりも少ない、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＣＤＲのセットを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて��肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１２５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１２６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１２７のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１３２のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１３３のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットから合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１０個よりも少ない、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＣＤＲのセットを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて��肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１３８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１３９のアミノ酸配列を有し、（ｉｖ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１４５のアミノ酸配列を有し、（ｖ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１４６のアミノ酸配列を有し、かつ（ｖｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットから合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１０個よりも少ない、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＣＤＲのセットを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて��肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３９または５７のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７���よびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％��または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１��％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１８９】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％��８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１９０】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％��８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号８８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号８９のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号８８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号８９のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１��％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１０２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１０３のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１０４のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１０２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１０３のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１０４のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜��００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１９３】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１１４のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１１５のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１１４のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１１５のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１１６のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１０��％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１９４】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１２５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１２６のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１２５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１２６のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１２７のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１０��％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１９５】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１３８のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、およびＶＨ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１３７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１３８のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１３９のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１０��％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２００】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０９のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１２１のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１２２のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１２１のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１２２のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１２３のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１３２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１３３のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１３２のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１３３のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１３４のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、このＣＤＲのセットは、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１４５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１４６のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲの参照セットと同一であるか、または合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個よりも少ない、ＣＤＲの参照セットからのアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、およびＶＬ−ＣＤＲ３のＣＤＲのセットを含み、（ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１４５のアミノ酸配列を有し、（ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１４６のアミノ酸配列を有し、および（ｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１４７のアミノ酸配列を有し、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるＶＨ−ＣＤＲ３またはＶＬ−ＣＤＲ３配列を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨ−ＣＤＲ３またはＶＬ−ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるＶＨ−ＣＤＲ３およびＶＬ−ＣＤＲ３配列を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨ−ＣＤＲ３およびＶＬ−ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂに開示されるＶＨ−ＣＤＲ３またはＶＬ−ＣＤＲ３配列を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂに開示されるＶＨ−ＣＤＲ３およびＶＬ−ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表３に開示されるＶＨ−ＣＤＲ３またはＶＬ−ＣＤＲ３配列を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表３に開示されるＶＨ−ＣＤＲ３およびＶＬ−ＣＤＲ３配列を含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３および配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３および配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３および配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、Ｇ��Ｆ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３および配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、Ｇ��Ｆ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２１０】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１および配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号３または２１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。
【０２１１】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２および配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、および配列番号３または２１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含む。
【０２１２】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１および配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号３９または５７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。
【０２１３】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２および配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、および配列番号３９または５７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含む。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３および配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３および配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号１０２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは��ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１１６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１１６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３および配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１１６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号１１４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３および配列番号１２６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号１２６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号１２５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３および配列番号１３８または１６３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号１または１３７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では��脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３および配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２２０】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１および配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。
【０２２１】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２および配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、および配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を有する。
【０２２２】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１０２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１０２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１および配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１０２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号１０４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。
【０２２３】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２および配列番号１０２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号１０２のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、および配列番号１０４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を有する。
【０２２４】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１１４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１１４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１および配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１１４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号１１６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。
【０２２５】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２および配列番号１１４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号１１４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、および配列番号１１６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を有する。
【０２２６】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１２５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１２５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１および配列番号１２６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１２５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号１２６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号１２７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。
【０２２７】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１２６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２および配列番号１２５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２６のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号１２５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、および配列番号１２７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を有する。
【０２２８】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１および配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、および配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。
【０２２９】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ１、および配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＣＤＲ３を有する。
【０２３０】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３および配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２３１】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３および配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１��ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２３２】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３および配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３、配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３および配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３、配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２、および配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２３４】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３および配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３、配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２、および配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１��ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２３５】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３および配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３、配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２、および配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ １つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは��ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２３６】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号１２３のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２３のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３および配列番号１２２のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２３のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３、配列番号１２２のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２、および配列番号１２１のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３および配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３、配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２、および配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１４７のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１４７のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３および配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１４７のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ３、配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ２、および配列番号１４５のアミノ酸配列を有するＶＬ−ＣＤＲ１を有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、��ＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２３９】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号７５、７８、８１、または８４のアミノ酸配列を有するＶＨ抗原結合ドメイン３（ＡＢＤ３）を含むＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３を含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３および配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＨ抗原結合ドメイン２（ＶＨ−ＡＢＤ２）を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３、配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ２、および配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＨ抗原結合ドメイン１（ＶＨ−ＡＢＤ１）を含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３を含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３および配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＨ抗原結合ドメイン２（ＶＨ−ＡＢＤ２）を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３、配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ２、および配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＨ抗原結合ドメイン１（ＶＨ−ＡＢＤ１）を含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３を含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３および配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＨ抗原結合ドメイン２（ＶＨ−ＡＢＤ２）を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３、配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ２、および配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＨ抗原結合ドメイン１（ＶＨ−ＡＢＤ１）を含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３を含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３および配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ抗原結合ドメイン２（ＶＨ−ＡＢＤ２）を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３、配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ２、および配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ抗原結合ドメイン１（ＶＨ−ＡＢＤ１）を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３を含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３および配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＨ抗原結合ドメイン２（ＶＨ−ＡＢＤ２）を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ３、配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＨ−ＡＢＤ２、および配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＨ抗原結合ドメイン１（ＶＨ−ＡＢＤ１）を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書で開示される参照ＶＨまたはＶＬと比較して、合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨまたはＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａまたは１Ｂに開示される参照ＶＨまたはＶＬと比較して、合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨまたはＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書で開示される参照ＶＨとＶＬのペアと比較して、合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨとＶＬのペアを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａまたは１Ｂに開示される参照ＶＨとＶＬのペアと比較して、合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨとＶＬのペアを含む。
【０２４１】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表３に開示される参照ＶＨまたはＶＬと比較して、合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨまたはＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表３に開示される参照ＶＨとＶＬのペアと比較して、合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨとＶＬのペアを含む。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）（ｉ）配列番号４から選択される参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１３の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、（ｂ）（ｉ）配列番号２２の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号３１の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、（ｃ）（ｉ）配列番号４０、１７０、または１７１の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号４９の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、および（ｄ）（ｉ）配列番号５８の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号６７の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アク��ビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）（ｉ）配列番号９１から選択される参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号９８の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、（ｂ）（ｉ）配列番号１０５の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１１０の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、（ｃ）（ｉ）配列番号１１７の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１２４の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、（ｄ）（ｉ）配列番号１２８の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１３５の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、および（ｅ）（ｉ）配列番号１４０の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１４８の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）（ｉ）配列番号１５２から選択される参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号９８の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、（ｂ）（ｉ）配列番号１５９の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１１０の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列、および（ｃ）（ｉ）配列番号１６５の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１７１の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃ��ｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２４５】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ配列が、配列番号４の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、ＶＬ配列が、配列番号１３の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨとＶＬのペアを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アク��ビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２４６】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ配列が、配列番号２２の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、ＶＬ配列が、配列番号３１の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨとＶＬのペアを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、ア��チビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２４７】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ配列が、配列番号４０の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、ＶＬ配列が、配列番号４９の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨとＶＬのペアを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２４８】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ配列が、配列番号５８の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、ＶＬ配列が、配列番号６７の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨとＶＬのペアを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、ア��チビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２４９】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ配列が、配列番号９１の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、ＶＬ配列が、配列番号９８の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨとＶＬのペアを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２５０】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ配列が、配列番号１０５の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、ＶＬ配列が、配列番号１１０の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨとＶＬのペアを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２５１】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ配列が、配列番号１１７の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、ＶＬ配列が、配列番号１２４の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨとＶＬのペアを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２５２】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ配列が、配列番号１２８の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、ＶＬ配列が、配列番号１３５の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨとＶＬのペアを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８��アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２５３】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＨ配列が、配列番号１４０の参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し、ＶＬ配列が、配列番号１４８の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨとＶＬのペアを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）配列番号４、（ｂ）配列番号２２、（ｃ）配列番号４０、および（ｄ）配列番号５８から選択される参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列を含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）配列番号９１、（ｂ）配列番号１０５、（ｃ）配列番号１１７、（ｄ）配列番号１２８、および（ｅ）配列番号１４０から選択される参照ＶＨ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＨ配列を含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンド��存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）配列番号１３、（ｂ）配列番号３１、（ｃ）配列番号４９、および（ｄ）配列番号６７の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列を含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）配列番号９８、（ｂ）配列番号１１０、（ｃ）配列番号１２４、（ｄ）配列番号１３５、および（ｅ）配列番号１４８の参照ＶＬ配列から合計で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個未満、または０個のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するＶＬ配列を含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書で開示される参照ＶＨまたはＶＬと少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨまたはＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示される参照ＶＨまたはＶＬと少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨまたはＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂに開示される参照ＶＨまたはＶＬと少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨまたはＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表３に開示される参照ＶＨまたはＶＬと少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨまたはＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書で開示される参照ＶＨまたはＶＬと少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨおよびＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示される参照ＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨおよびＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂに開示される参照ＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨおよびＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表３に開示される参照ＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨおよびＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例え��、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）配列番号４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性、（ｂ）配列番号２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性、（ｃ）配列番号４０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ、および（ｄ）配列番号５８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）配列番号９１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性、（ｂ）配列番号１０５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性、（ｃ）配列番号１１７と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性、（ｄ）配列番号１２８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ、および（ｅ）配列番号１４０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）配列番号１３と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性、（ｂ）配列番号３１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性、（ｃ）配列番号４９と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性、および（ｄ）配列番号６７と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）配列番号９８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性、（ｂ）配列番号１１０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性、（ｃ）配列番号１２４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性、（ｄ）配列番号１３５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性、および（ｅ）配列番号１４８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）（ｉ）配列番号４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１３と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｂ）（ｉ）配列番号２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号３１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｃ）（ｉ）配列番号４０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号４９と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、および（ｄ）（ｉ）配列番号５８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号６７と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬから選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）（ｉ）配列番号１５２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号９８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｂ）（ｉ）配列番号１５９と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１１０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、および（ｃ）（ｉ）配列番号１６５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１７１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬから選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、（ａ）（ｉ）配列番号９１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号９８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｂ）（ｉ）配列番号１０５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１１０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｃ）（ｉ）配列番号１１７と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１２４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｄ）（ｉ）配列番号１２８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１３５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、および（ｅ）（ｉ）配列番号１４０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１４８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬから選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩ��ＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２６６】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ、および配列番号１３と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号４のＶＨ、および配列番号１３のＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏ��ａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２６７】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ、および配列番号３１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号２２のＶＨ、および配列番号３１のＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および��ｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２６８】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号４０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ、および配列番号４９と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号４０のＶＨ、および配列番号４９のＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および��ｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２６９】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号５８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ、および配列番号６７と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号５８のＶＨ、および配列番号６７のＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２７０】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号９１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ、および配列番号９８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号９１のＶＨ、および配列番号９８のＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２７１】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号１０５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ、および配列番号１１０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号１０５のＶＨ、および配列番号１１０のＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ��およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２７２】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号１１７と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ、および配列番号１２４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号１１７のＶＨ、および配列番号１２４のＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２７３】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号１２８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ、および配列番号１３５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号１２８のＶＨ、および配列番号１３５のＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２７４】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号１４０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ、および配列番号１４８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号１４０のＶＨ、および配列番号１４８のＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ��およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２７５】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）配列番号４のＶＨ配列と配列番号１３のＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列、（ｃ）配列番号４０のＶＨ配列と配列番号４９のＶＬ配列、および（ｄ）配列番号５８のＶＨ配列と配列番号６７のＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、タンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩＡ／Ｂを発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの���施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２７６】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）配列番号９１のＶＨ配列と配列番号９８のＶＬ配列、（ｂ）配列番号１０５のＶＨ配列と配列番号１１０のＶＬ配列、（ｃ）配列番号１１７のＶＨ配列と配列番号１２４のＶＬ配列、（ｄ）配列番号１２８のＶＨ配列と配列番号１３５のＶＬ配列、および（ｅ）配列番号１４０のＶＨ配列と配列番号１４８のＶＬ配列から選択されるＶＨとＶＬのペアを含み、このタンパク質はＡＬＫ７に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、および／またはＮｏｄａｌの存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩＡ／Ｂを発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結��タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０２７７】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書で開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号４、２２、４０、または５８のＶＨを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号１３、３１，４９、または６７のＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号４、２２、４０、または５８のＶＨ、および配列番号１３、３１，４９、または６７のＶＬを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書で開示されるＡＬＫ７結合タンパク質と同じエピトープに結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ａに開示されるＡＬＫ７結合タンパク質と同じエピトープに結合する。参照ＡＬＫ７結合タンパク質と同じＡＬＫ７のエピトープとの結合について競合する、および／または該同じＡＬＫ７のエピトープに結合するＡＬＫ７結合タンパク質の能力は、本明細書で開示されるかまたはさもなくば当該技術分野では周知の方法を用いて容易に決定することができる。
【０２７８】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂに開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号１５２、１５９、または１６６のＶＨを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号９８、１０、または１７１のＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号１５２、１５９、または１６６のＶＨ、および配列番号９８、１１０、または１７１のＶＬを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書で開示されるＡＬＫ７結合タンパク質と同じエピトープに結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂに開示されるＡＬＫ７結合タンパク質と同じエピトープに結合する。参照ＡＬＫ７結合タンパク質と同じＡＬＫ７のエピトープとの結合について競合する、および／または該同じＡＬＫ７のエピトープに結合するＡＬＫ７結合タンパク質の能力は、本明細書で開示されるかまたはさもなくば当該技術分野では周知の方法を用いて容易に決定することができる。
【０２７９】
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表３に開示されるＶＨとＶＬの配列ペアを含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号９１、１０５、１１７、１２８、または１４０のＶＨを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号９８、１１０、１２４，１３５、または１４８のＶＬを含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、配列番号９１、１０５、１１７、１２８、または１４０のＶＨ、および配列番号９８、１１０、１２４、１３５、または１４８のＶＬを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書で開示されるＡＬＫ７結合タンパク質と同じエピトープに結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、表３に開示されるＡＬＫ７結合タンパク質と同じエピトープに結合する。参照ＡＬＫ７結合タンパク質と同じＡＬＫ７のエピトープとの結合について競合する、および／または該同じＡＬＫ７のエピトープに結合するＡＬＫ７結合タンパク質の能力は、本明細書で開示されるかまたはさもなくば当該技術分野では周知の方法を用いて容易に決定することができる。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号４０のＶＨ配列、および配列番号４９のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号４０のＶＨ配列および配列番号４９のＶＬ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号４０のＶＨ配列および配列番号４９のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号５８のＶＨ配列、および配列番号６７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号５８のＶＨ配列および配列番号６７のＶＬ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号５８のＶＨ配列および配列番号６７のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体Ｊ０１のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１５２のＶＨ配列、および配列番号９８のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１５２のＶＨ配列および配列番号９８のＶＬ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１５２のＶＨ配列および配列番号９８のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体Ｊ０２のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号９１のＶＨ配列、および配列番号９８のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号９１のＶＨ配列および配列番号９８のＶＬ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号９１のＶＨ配列および配列番号９８のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体Ｋ０１のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１５９のＶＨ配列、および配列番号１１０のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１５９のＶＨ配列および配列番号１１０のＶＬ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１５９のＶＨ配列および配列番号１１０のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体Ｋ０２のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１０５のＶＨ配列、および配列番号１１０のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１０５のＶＨ配列および配列番号１１０のＶＬ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１０５のＶＨ配列および配列番号１１０のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体Ｇ０４のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号４のＶＨ配列、および配列番号１３のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号４のＶＨ配列および配列番号１３のＶＬ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号４のＶＨ配列および配列番号１３のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体Ｇ０５のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１１７のＶＨ配列、および配列番号１２４のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１１７のＶＨ配列および配列番号１２４のＶＬ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１１７のＶＨ配列および配列番号１２４のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体Ｃ０２のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号２２のＶＨ配列、および配列番号３１のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号２２のＶＨ配列および配列番号３１のＶＬ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号２２のＶＨ配列および配列番号３１のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体Ｃ０３のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２８のＶＨ配列、および配列番号１３５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２８のＶＨ配列および配列番号１３５のＶＬ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１２８のＶＨ配列および配列番号１３５のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体Ｌ０１のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１６５のＶＨ配列、および配列番号１７１のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１６５のＶＨ配列および配列番号１７１のＶＬ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１６５のＶＨ配列および配列番号１７１のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体Ｌ０２のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１４０のＶＨ配列、および配列番号１４８のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１４０のＶＨ配列および配列番号１４８のＶＬ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１４０のＶＨ配列および配列番号１４８のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９０または３２０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）、および／または配列番号１９１または３２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９０または３２０のＨＣ配列および配列番号１９１または３２２のＬＣ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９０または３２０のＨＣ配列および配列番号１９１または３２２のＬＣ配列を含む抗体と同じ少なくとも１つのＡＬＫ７のエピトープ、または本質的に同じ１つのＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０２９３】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｃ０３  ＨＣ：アミノ酸配列（ＶＨ  ＦＲ１：アミノ酸２０〜４４；ＶＨ  ＣＤＲ１：アミノ酸４５〜５３；ＶＨ  ＦＲ２：アミノ酸５４〜７０；ＶＨ  ＣＤＲ２：アミノ酸７１〜８６；ＶＨ  ＦＲ３：アミノ酸８７〜１１８；ＶＨ  ＣＤＲ３：アミノ酸１１９〜１３５；およびＶＨ  ＦＲ４：アミノ酸１３６〜１４６）
2021500895.tif 000004
注：シグナルペプチドは１重下線で示され、可変領域は太字で示される。
【０２９４】
ｍＡｂ  Ｃ０３  ＨＣの成熟ペプチド：アミノ酸配列
2021500895.tif 000005
【０２９５】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｃ０３  ＨＣ：コーディング核酸配列
2021500895.tif 000006
【０２９６】
ｍＡｂ  Ｃ０３  ＨＣの成熟ペプチド：コーディング核酸配列（５’末端のＡＴＧが開始コドンとして付加されている）
2021500895.tif 000007
【０２９７】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｃ０３  ＬＣ：アミノ酸配列（ＶＬ  ＦＲ１：アミノ酸２０〜４２；ＶＬ  ＣＤＲ１：アミノ酸４３〜５４；ＶＬ  ＦＲ２：アミノ酸５５〜６９；ＶＬ  ＣＤＲ２：アミノ酸７０〜７６；ＶＬ  ＦＲ３：アミノ酸７７〜１０８；ＶＬ  ＣＤＲ３：アミノ酸１０９〜１１７；およびＶＬ  ＦＲ４：アミノ酸１１８〜１２７）
2021500895.tif 000008
注：シグナルペプチドは１重下線で示され、可変領域は太字で示される。
【０２９８】
ｍＡｂ  Ｃ０３  ＬＣの成熟ペプチド：アミノ酸配列
2021500895.tif 000009
【０２９９】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｃ０３  ＬＣ：コーディング核酸配列
2021500895.tif 000010
【０３００】
ｍＡｂ  Ｃ０３  ＬＣの成熟ペプチド：コーディング核酸配列（５’末端のＡＴＧが開始コドンとして付加されている）
2021500895.tif 000011
【０３０１】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９２または３２４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）、および／または配列番号１９３または３２６と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９２または３２４のＨＣ配列および配列番号１９３または３２６のＬＣ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９２または３２４のＨＣ配列および配列番号１９３または３２６のＬＣ配列を含む抗体と同じ少なくとも１つのＡＬＫ７のエピトープ、または本質的に同じ１つのＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０３０２】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｇ０５  ＨＣ：アミノ酸配列（ＶＨ  ＦＲ１：アミノ酸２０〜４９；ＶＨ  ＣＤＲ１：アミノ酸５０〜５４；ＶＨ  ＦＲ２：アミノ酸５５〜６８；ＶＨ  ＣＤＲ２：アミノ酸６９〜８５；ＶＨ  ＦＲ３：アミノ酸８６〜１１７；ＶＨ  ＣＤＲ３：アミノ酸１１８〜１２９；およびＶＨ  ＦＲ４：アミノ酸１３０〜１３９）
2021500895.tif 000012
注：シグナルペプチドは１重下線で示され、可変領域は太字で示される。
【０３０３】
ｍＡｂ  Ｇ０５  ＨＣの成熟ペプチド：アミノ酸配列
2021500895.tif 000013
【０３０４】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｇ０５  ＨＣ：コーディング核酸配列
2021500895.tif 000014
【０３０５】
ｍＡｂ  Ｇ０５  ＨＣの成熟ペプチド：コーディング核酸配列（５’末端のＡＴＧが開始コドンとして付加されている）
2021500895.tif 000015
【０３０６】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＣ：アミノ酸配列（ＶＬ  ＦＲ１：アミノ酸２０〜４２；ＶＬ  ＣＤＲ１：アミノ酸４３〜５３；ＶＬ  ＦＲ２：アミノ酸５４〜６８；ＶＬ  ＣＤＲ２：アミノ酸６９〜７５；ＶＬ  ＦＲ３：アミノ酸７６〜１０７；ＶＬ  ＣＤＲ３：アミノ酸１０８〜１１６；およびＶＬ  ＦＲ４：アミノ酸１１７〜１２６）
2021500895.tif 000016
注：シグナルペプチドは１重下線で示され、可変領域は太字で示される。
【０３０７】
ｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＣの成熟ペプチド：アミノ酸配列
2021500895.tif 000017
【０３０８】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＣ：コーディング核酸配列
2021500895.tif 000018
【０３０９】
ｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＣの成熟ペプチド：コーディング核酸配列（５’末端のＡＴＧが開始コドンとして付加されている）
2021500895.tif 000019
【０３１０】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、少なくとも１つの変異、改変、および／または置換、例えば、ＦｃまたはＦａｂ領域内の変異を含む。かかる変異および／または置換は、例えば、ＡＬＫ７結合タンパク質の発現レベル、翻訳後修飾、安定性／半減期、および／または活性を増加または向上させることができる。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、例えば、宿主における、エフェクター活性および／または毒性を低下させ、および／または補体結合および固定を減少させ、Ｆｃ−ｇに依存した抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を低下させ、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を低下させ、および／またはバイオアベイラビリティーおよび／または安定性／半減期を改善する、少なくとも１つの変異、改変、および／または置換をそのＦｃ領域内に含む。
【０３１１】
ＡＤＣＣを低下させるＦｃ配列を操作する改変の例（そのうちの１つ以上が提供される抗体に含まれ得る）としては、位置の番号付けがＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従うものとして、ＩｇＧ１のＫ３２６Ｗ、Ｅ３３３Ｓ；ＩｇＧ２のＥ３３３Ｓ；ＩｇＧ１のＮ２９７Ａ；ＩｇＧ１のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ２のＶ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ；ＩｇＧ４のＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ；ＩｇＧ４のＳ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ；ＩｇＧ２のＥＵ配列１１８〜２６０；ＩｇＧ４のＥＵ配列２６１〜４４７；ＩｇＧ２のＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ；ＩｇＧ１のＣ２２０Ｓ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ；ＩｇＧ１のＣ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ；およびＩｇＧ１のＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓに対応する改変が含まれる。
【０３１２】
ＣＤＣ活性を低下させるＦｃ配列を操作する改変の例（そのうちの１つ以上が提供される抗体に含まれ得る）としては、例えば、以下に記載される１つ以上の改変が挙げられる。すなわち、ＷＯ９７／１１９７１およびＷＯ０７／１０６５８５；米国出願公開第２００７／０１４８１６７Ａ１号；ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０９：１１８５−１１９２（２００７）；Ｈａｙｄｅｎ−Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  １５：２７３９−２７４６（２００９）；Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  １０３：４００５−４０１０（２００６）；Ｂｒｕｃｋｈｅｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ  １１：５０９−５１７（２００９）；Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ.２０：６８５−６９１（２００９）；およびＳａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  １０５：２０１６７−２０１７２ （２００８）、なお、これらをいずれも本明細書に参照によりその全容を援用する。特定のそのような改変としては、ＩｇＧ１のＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ；ＩｇＧ２のＥＵ配列１１８の２６０；ＩｇＧ４のＥＵ配列２６１の４４７；ＩｇＧ２のＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ；ＩｇＧ１のＣ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ１のＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ；およびＩｇＧ１のＣ２２６Ｓ、Ｐ２３０Ｓに対応する改変が含まれる。
【０３１３】
半減期を改善するＦｃ配列を操作する改変の例（そのうちの１つ以上が提供される抗体に含まれ得る）としては、アミノ酸位置の番号付けがＫａｂａｔに記載されるＥＵインデックスに従うものとして、２５１〜２５７位、２８５〜２９０位、３０８〜３１４位、３８５〜３８９位、および４２８〜４３６位のアミノ酸残基の置換が含まれる。特定の実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインは、Ｋａｂａｔ位置２５２のアミノ酸のＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、もしくはＴｈｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置２５４のアミノ酸のＴｈｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置２５６のアミノ酸のＳｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、もしくはＴｈｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置２５７のアミノ酸のＬｅｕによる置換、Ｋａｂａｔ位置３０９のアミノ酸のＰｒｏによる置換、Ｋａｂａｔ位置３１１のアミノ酸のＳｅｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置４２８のアミノ酸のＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、もしくはＳｅｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置４３３のアミノ酸のＡｒｇ、Ｓｅｒ、Ｉｓｏ、Ｐｒｏ、もしくはＧｌｎによる置換、またはＫａｂａｔ位置４３４のアミノ酸のＴｒｐ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、もしくはＴｙｒによる置換のうちの１つ以上を含む。より詳細には、ＩｇＧ定常ドメインは、Ｋａｂａｔ位置２５２のアミノ酸のＴｙｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置２５４のアミノ酸のＴｈｒによる置換、およびＫａｂａｔ位置２５６のアミノ酸のＧｌｕによる置換を含む、野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインに対する１つ以上のアミノ酸置換を含むことができる。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ作用を低下させ、および／または半減期を改善するための少なくとも１つの変異、改変、および／または置換、例えば、本明細書に開示されるＦｃまたはＦａｂ領域内の変異を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質は、少なくとも２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、またはそれよりも多い置換、例えば、本明細書に開示されるＦｃまたはＦａｂ領域内の変異を含む。
【０３１５】
いくつかの特定の変異（複数可）、改変（複数可）、および／または置換（複数可）を、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質に、単独で、または上記に述べた少なくとも１つの変異、改変、および／または置換と組み合わせて導入することができる。例えば、抗体の細胞毒性を低下させるには、残基Ｎ２９７のＮ結合グリコシル化を、Ｎ２９７をアラニン、グリシン、またはアスパラギン酸で置換することによって除去することができる（Ｔａｏ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４３：２５９５−２６０１；Ｈｒｉｓｔｏｄｏｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ５４：１０５６−１０６８）。同様に、２９９位のセリン／トレオニン残基を改変することができる（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０５：２０１６７−２０１７２）。Ｎ２９７の変異を、Ｄ２６５Ａ変異とさらに組み合わせることができ（Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５７：４９６３−４９６９）、例えば、２つのよく用いられるアミノ酸変化のペアはＤＡＮＡ（Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ａ）またはＤＡＮＧ（Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ｇ）として示される。抗体のエフェクター機能を低下させる別の変異としては、Ｌ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ、Ｋａｂａｔ位置）などの抗体のヒンジ下部の残基の置換がある（Ｃｈａｐｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ８８：９０３６−９０４０）。これらの残基は、ＣＨ２ドメイン上のＦｃ−γ受容体結合部位の一部を形成しており、より高いまたはより低いエフェクター機能を有する抗体アイソタイプ間でのこれらの残基の交換によって、ＡＤＣＣにおけるこれらの残基の重要性が示されている。これらの部位でのアラニン置換はヒトおよびマウス抗体でＡＤＣＣを低下させるのに効果的であるが、これらの置換はＣＤＣ活性を低下させるにはそれほど効果的ではない。ＦｃのＣ１ｑ結合部位をマッピングするためのランダム突然変異誘発法によって同定された別の単一変異体Ｐ３２９Ａは、ＡＤＣＣ活性を保持しながら、ＣＤＣ活性を低下させるのに非常に有効である。Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９AＡ（ＬＡＬＡ−ＰＧ、Ｋａｂａｔ位置）置換の組み合わせは、ヒトＩｇＧ１抗体のエフェクター機能を効果的に消失させることが示されている。ＬＡＬＡ、ＬＡＬＡ−ＰＧ、および他の変異の詳細な考察については、その内容を本明細書に参照によりその全容を援用するところのＬｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９２：３９００−３９０８を参照されたい。本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に記載される少なくとも１つ、２つ、３つ、またはそれよりも多い変異を有することができる。
【０３１６】
特定の好ましい実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、重鎖のＦｃ領域内にＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ変異（ＬＡＬＡ、Ｋａｂａｔ位置）を含む（ＬＡＬＡ  ＨＣ）。他の好ましい実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、重鎖のＦｃ領域内にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇ変異（ＬＡＬＡ−ＰＧ、Ｋａｂａｔ位置）を含む。
【０３１７】
特定の好ましい実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質は、例えば、ｍＡｂ  Ｃ０３の重鎖にＬＡＬＡ変異を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９４または３２８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）、および／または配列番号１９１または３２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）を含む。関連する実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９４または３２８のＨＣ配列および配列番号１９１または３２２のＬＣ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９４または３２８のＨＣ配列および配列番号１９１または３２２のＬＣ配列を含む抗体が結合するＡＬＫ７エピトープと同じ、または本質的に同じである少なくとも１つのエピトープに結合する。下記に示すようにＬＡＬＡ変異は、配列番号１９４のＬ２６３およびＬ２６４に位置する。
【０３１８】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｃ０３  ＬＡＬＡ  ＨＣ：アミノ酸配列  変異は下線で示される。（ＶＨ  ＦＲ１：アミノ酸２０〜４４；ＶＨ  ＣＤＲ１：アミノ酸４５〜５３；ＶＨ  ＦＲ２：アミノ酸５４〜７０；ＶＨ  ＣＤＲ２：アミノ酸７１〜８６；ＶＨ  ＦＲ３：アミノ酸８７〜１１８；ＶＨ  ＣＤＲ３：アミノ酸１１９〜１３５；ＶＨ  ＦＲ４：アミノ酸１３６〜１４６、ＬＡＬＡ変異：アミノ酸２６３〜２６４）
2021500895.tif 000020
注：シグナルペプチドは１重下線で示され、可変領域は太字で示され、ＬＡＬＡ変異は２重下線で示される。
【０３１９】
ｍＡｂ  Ｃ０３  ＬＡＬＡ  ＨＣの成熟ペプチド：アミノ酸配列
2021500895.tif 000021
【０３２０】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｃ０３  ＬＡＬＡ  ＨＣ：コーディング核酸配列；ＬＡＬＡ変異は下線で示される。
2021500895.tif 000022
【０３２１】
ｍＡｂ  Ｃ０３  ＬＡＬＡ  ＨＣの成熟ペプチド：コーディング核酸配列（５’末端のＡＴＧが開始コドンとして付加されている）ＬＡＬＡ変異は下線で示される。
2021500895.tif 000023
【０３２２】
特定の好ましい実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質は、例えば、ｍＡｂ  Ｇ０５の重鎖にＬＡＬＡ変異を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９５または３３０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）、および／または配列番号１９３または３２６と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９５または３３０のＨＣ配列および配列番号１９３または３２６のＬＣ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９５または３３０のＨＣ配列および配列番号１９３または３２６のＬＣ配列を含む抗体が結合するＡＬＫ７抗体と同じ、または本質的に同じである少なくとも１つのエピトープに結合する。下記に示すようにＬＡＬＡ変異は、配列番号１９５のＬ２５７およびＬ２５８に位置する。
【０３２３】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＡＬＡ  ＨＣ：アミノ酸配列（ＶＨ  ＦＲ１：アミノ酸２０〜４９；ＶＨ  ＣＤＲ１：アミノ酸５０〜５４；ＶＨ  ＦＲ２：アミノ酸５５〜６８；ＶＨ  ＣＤＲ２：アミノ酸６９〜８５；ＶＨ  ＦＲ３：アミノ酸８６〜１１７；ＶＨ  ＣＤＲ３：アミノ酸１１８〜１２９；ＶＨ  ＦＲ４：アミノ酸１３０〜１３９、およびＬＡＬＡ変異：アミノ酸２５７〜２５８）
2021500895.tif 000024
注：シグナルペプチドは１重下線で示され、可変領域は太字で示され、ＬＡＬＡ変異は２重下線で示される。
【０３２４】
ｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＡＬＡ  ＨＣの成熟ペプチド：アミノ酸配列
2021500895.tif 000025
【０３２５】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＡＬＡ  ＨＣ：コーディング核酸配列（ＬＡＬＡ変異は下線で示される。）
2021500895.tif 000026
【０３２６】
ｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＡＬＡ ＨＣの成熟ペプチド：コーディング核酸配列（５’末端のＡＴＧが開始コドンとして付加されている）ＬＡＬＡ変異は下線で示される。
2021500895.tif 000027
【０３２７】
特定の好ましい実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質は、例えば、ｍＡｂ  Ｃ０３の重鎖にＬＡＬＡ−ＰＧ変異を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９６または３３２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）、および／または配列番号１９１または３２２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９６または３３２のＨＣ配列および配列番号１９１または３２２のＬＣ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９６または３３２のＨＣ配列および配列番号１９１または３２２のＬＣ配列を含む抗体が結合するＡＬＫ７エピトープと同じ、または本質的に同じである少なくとも１つのエピトープに結合する。下記に示すように、ＬＡＬＡ−ＰＧ変異は、配列番号１９６にＬ２６３Ａ、Ｌ２６４Ａ、およびＰ３５８Ｇ変異を含む。
【０３２８】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｃ０３  ＬＡＬＡ−ＰＧ  ＨＣ：アミノ酸配列（ＶＨ  ＦＲ１：アミノ酸２０〜４４；ＶＨ  ＣＤＲ１：アミノ酸４５〜５３；ＶＨ  ＦＲ２：アミノ酸５４〜７０；ＶＨ  ＣＤＲ２：アミノ酸７１〜８６；ＶＨ  ＦＲ３：アミノ酸８７〜１１８；ＶＨ  ＣＤＲ３：アミノ酸１１９〜１３５；ＶＨ  ＦＲ４：アミノ酸１３６〜１４６、ＬＡＬＡ−変異：アミノ酸２６３、２６４、および３５８）
2021500895.tif 000028
注：シグナルペプチドは１重下線で示され、可変領域は太字で示され、ＬＡＬＡ−ＰＧ変異は２重下線で示される。
【０３２９】
ｍＡｂ  Ｃ０３  ＬＡＬＡ−ＰＧ  ＨＣの成熟ペプチド：アミノ酸配列
2021500895.tif 000029
【０３３０】
シグナルペプチドを有する例示的なｍＡｂＣ０３  ＬＡＬＡ−ＰＧ  ＨＣ：コーディング核酸配列変異体１：変異は下線で示される。
2021500895.tif 000030
【０３３１】
ｍＡｂＣ０３  ＬＡＬＡ−ＰＧ  ＨＣの成熟ペプチド：コーディング核酸配列変異体１（５’末端のＡＴＧが開始コドンとして付加されている）変異は下線で示される。
2021500895.tif 000031
【０３３２】
特定の好ましい実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質は、例えば、ｍＡｂ  Ｇ０５の重鎖にＬＡＬＡ−ＰＧ変異を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９７または３３４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）、および／または配列番号１９３または３２６と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９７または３３４のＨＣ配列および配列番号１９３または３２６のＬＣ配列を含む抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、配列番号１９７または３３４のＨＣ配列および配列番号１９３または３２６のＬＣ配列を含む抗体が結合するＡＬＫ７エピトープと同じ、または本質的に同じである少なくとも１つのエピトープに結合する。下記に示すように、ＬＡＬＡ−ＰＧ変異は、配列番号１９７にＬ２５７Ａ、Ｌ２５８Ａ、およびＰ３５２Ｇ変異を含む。
【０３３３】
シグナルペプチドを有するｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＡＬＡ−ＰＧ  ＨＣ：アミノ酸配列（ＶＨ  ＦＲ１：アミノ酸２０〜４９；ＶＨ  ＣＤＲ１：アミノ酸５０〜５４；ＶＨ  ＦＲ２：アミノ酸５５〜６８；ＶＨ  ＣＤＲ２：アミノ酸６９〜８５；ＶＨ  ＦＲ３：アミノ酸８６〜１１７；ＶＨ  ＣＤＲ３：アミノ酸１１８〜１２９；ＶＨ  ＦＲ４：アミノ酸１３０〜１３９、およびＬＡＬＡ−ＰＧ変異：アミノ酸２５７〜２５８）
2021500895.tif 000032
注：シグナルペプチドは１重下線で示され、可変領域は太字で示され、ＬＡＬＡ−ＰＧ変異は２重下線で示される。
【０３３４】
ｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＡＬＡ−ＰＧ  ＨＣの成熟ペプチド：アミノ酸配列
2021500895.tif 000033
【０３３５】
シグナルペプチドを有する例示的なｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＡＬＡ−ＰＧ  ＨＣ：コーディング核酸配列変異体１：変異は下線で示される。
2021500895.tif 000034
【０３３６】
例示的なｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＡＬＡ−ＰＧ  ＨＣの成熟ペプチド：コーディング核酸配列変異体１（５’末端のＡＴＧが開始コドンとして付加されている）変異は下線で示される。
2021500895.tif 000035
【０３３７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、マウス抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、多重特異性抗体、またはこれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、ｄｓＦｖ抗体フラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、またはｓｃ（Ｆｖ）２フラグメントである。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＡＬＫ７リガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、またはＮｏｄａｌ）の活性を遮断する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏ）の活性を遮断する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＡＬＫ７リガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、またはＮｏｄａｌ）の活性に関連した脂肪生成を減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７に特異的に結合し、過体重、肥満、または代謝性疾患に関連した１つ以上の疾患または状態を治療または改善する。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、ＩＩ形糖尿病である。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、高血圧である。いくつかの実施形態では、代謝性疾患は、脂質異常症、インスリン抵抗性、高インスリン血症、または高血糖症である。
【０３３９】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、ＡＬＫ７介在性Ｓｍａｄシグナル伝達を減少させる。別の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解アッセイで測定した場合に、白色および／または褐色脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害を、５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％アンタゴナイズする。別の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解アッセイで測定した場合に、白色および／または褐色脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害を、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、または約１００％低下もしくは減少させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７に結合し、過体重、肥満、インスリン抵抗性、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、高血圧、炎症、および／またはＮＡＦＬＤ（例えば、脂肪肝および／またはＮＡＳＨ）に関連した１つ以上の状態を阻害または減少させる。
【０３４０】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、ＡＬＫ７介在性Ｓｍａｄシグナル伝達を減少させる。別の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で行われる脂肪分解阻害アッセイで標準的な方法および条件を用いて測定した（例えば、本明細書の実施例に記載されるように）場合に、白色脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害を、５％〜１００％、１０％〜９５％、１０〜９０％、１０〜８５％、１０〜８０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜７５％、１０〜７０％、１０〜６０％、１０〜５５％、１０〜５０％、または１０〜４５％阻害する。別の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で行われる脂肪分解阻害アッセイで標準的な方法および条件を用いて測定した（例えば、本明細書の実施例に記載されるように）場合に、白色脂肪細胞内の脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害を、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％、または約１００％低下もしくは減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７に結合し、過体重、肥満、インスリン抵抗性、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、高血圧、炎症、および／またはＮＡＦＬＤ（例えば、脂肪肝および／またはＮＡＳＨ）に関連した１つ以上の状態を阻害または減少させる。
【０３４１】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）によるＡＬＫ７活性の遮断は、高血圧、がん、および神経障害、網膜症、ならびに心血管疾患、肺疾患および腎疾患などの過体重、インスリン抵抗性、肥満または糖尿病に関連した１つ以上の状態を阻害または減少させる。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７の遮断は、代謝性疾患に関連する１つ以上の条件を阻害または減少させる。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、またはＮｏｄａｌによるＡＬＫ７への結合を阻害または減少させる。別の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、Ｓｍａｄ依存経路による脂肪分解の阻害を阻害または減少させる。
【０３４２】
上記に述べたように、いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７に結合するＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含む抗ＡＬＫ７抗体(例えば、完全長ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメント、ならびにそれらの変異体および誘導体）は、本明細書に記載される配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有することができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７に結合するＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列（複数可）は、本明細書に記載される配列に対して８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個のアミノ酸付加、置換（例えば、保存的置換）または欠失を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７に結合するＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列は、本明細書に記載される配列に対して１個、２個、３個、４個、５個、またはそれよりも多いアミノ酸付加、置換（例えば、保存的置換）または欠失を含む。ＶＨ領域またはＶＬ領域と一定の類似率（％）を有するかまたは１つ以上の置換、欠失および／または挿入（例えば、保存的置換）を有するＶＨおよびＶＬ領域を含む抗ＡＬＫ７抗体は、本明細書に記載されるＶＨおよび／またはＶＬ領域をコードする核酸分子の突然変異誘発（例えば、部位特異的またはＰＣＲ介在型突然変異誘発）に続いて、ＡＬＫ７への結合について、コードされた改変抗体の試験を行い、場合により、本明細書に記載される機能性アッセイまたは維持された機能について試験するように常法により改変することができる当該技術分野では周知のアッセイを用いて維持された機能について試験を行うことによって得ることができる。
【０３４３】
ｈＡＬＫ７またはｍｕｒＡＬＫ７に対する抗ＡＬＫ７抗体（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメント、ならびにそれらの変異体および誘導体）などのＡＬＫ７結合タンパク質のアフィニティーまたはアビディティーは、例えば、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、または動態（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）またはＫＩＮＥＸＡ（登録商標）分析）などの当該技術分野では周知の任意の適当な方法を用いて実験的に測定することができる。直接的結合アッセイおよび競合結合アッセイフォーマットを容易に用いることができる（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”  Ｉｎ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８４）；Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９２）；および本明細書に記載される方法を参照）。特定の抗体抗原相互作用の測定される親和性は、異なる条件（例えば、塩濃度、ｐＨ、温度）で測定される場合に異なり得る。したがって、アフィニティーおよび他のＡＬＫ７結合パラメータ(例えば、ＫＤまたはＫｄ、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ）の測定は、ＡＬＫ７結合タンパク質およびＡＬＫ７の標準化溶液で行われ、測定は、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野では周知の標準化された条件および方法を用いて行われる。
【０３４４】
本開示はさらに、本明細書に記載されるような抗ＡＬＫ７抗体などのＡＬＫ７結合タンパク質を提供し、ＡＬＫ７結合タンパク質は異種物質と複合体化される。特定の実施形態では、異種物質は、抗微生物剤、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、脂質、生物応答改変剤、薬剤、リンフォカイン、異種抗体または抗体フラグメント、検出可能な標識、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。異種複合体ＡＬＫ７結合タンパク質については、本明細書の他の箇所で考察する。
【０３４５】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体ではない。標的タンパク質に高い親和性で結合する非抗体ポリペプチドを同定および作製するためのさまざまな方法が当該技術分野で知られている（例えば、いずれも本明細書に参照によりその全容を援用するところのＳｋｅｒｒａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１８：２９５−３０４（２００７）；Ｈｏｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １５：１４−２７（２００６）；Ｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：６５３−６５８ （２００６）；Ｎｙｇｒｅｎ，ＦＥＢＳ  Ｊ．２７５：２６６８−２６７６（２００８）；およびＳｋｅｒｒａ，ＦＥＢＳ  Ｊ．２７５：２６７７−２６８３（２００８）を参照）。いくつかの実施形態では、ファージディスプレイライブラリーを用いてＡＬＫ７結合タンパク質を同定／作製することができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＶＡＳＰポリペプチド、トリ膵臓ポリペプチド（ａＰＰ）、テトラネクチン（ＣＴＬＤ３に基づく）、アフィリン（γＢ−クリスタリン／ユビキチンに基づく）、ノッティン、ＳＨ３ドメイン、ＰＤＺドメイン、テンダミスタット、トランスフェリン、アンキリンコンセンサスリピートドメイン（例えば、ＤＡＲＰｉｎ）、リポカインタンパク質フォールド（例えば、アンチカリンおよびデュオカリン）、タンパク質エピトープ模倣体（ＰＥＭ）、マキシボディ／アビマー、ドメイン抗体、フィブロネクチンドメイン（例えば、１０Ｆｎ３、例えば、いずれも本明細書に参照によりその全容を援用する米国特許公開第２００３／０１７０７５３号および同第２００９０１５５２７５号を参照）、プロテインＡのドメイン（例えば、アフィボディ）、およびチオレドキシンから選択されるタイプに基づくタンパク質足場を含む。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で提供される抗ＡＬＫ７抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合するＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、完全長の抗ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの抗ＡＬＫ７抗体）を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質と同じＡＬＫ７のエピトープに結合するＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。例えば、配列番号４のＶＨ配列および配列番号１３のＶＬ配列、配列番号２２のＶＨ配列および配列番号３１のＶＬ配列、配列番号４０のＶＨ配列および配列番号４９のＶＬ配列、または配列番号５８のＶＨ配列および配列番号６７のＶＬ配列を含む抗体などの参照結合タンパク質のＡＬＫ７への結合を阻害する試験ＡＬＫ７結合タンパク質の能力は、試験ＡＬＫ７結合タンパク質がＡＬＫ７に対する結合について参照抗体と競合し得ることを示す。かかるＡＬＫ７結合タンパク質は、非限定的な理論によれば、ＡＬＫ７結合タンパク質が競合するＡＬＫ７参照抗体と同じ、または関連した（例えば、構造的に似た、または空間的に近接した）ＡＬＫ７上のエピトープに結合することができる。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、それぞれ、配列番号４のＶＨ配列および配列番号１３のＶＬ配列、配列番号２２のＶＨ配列および配列番号３１のＶＬ配列、配列番号４０のＶＨ配列および配列番号４９のＶＬ配列、または配列番号５８のＶＨ配列および配列番号６７のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７上のエピトープに結合する。
【０３４７】
同様に、例えば、配列番号９１のＶＨ配列および配列番号９８のＶＬ配列、配列番号１０５のＶＨ配列および配列番号１１０のＶＬ配列、配列番号１１７のＶＨ配列および配列番号１２４のＶＬ配列、配列番号１２８のＶＨ配列および配列番号１３５のＶＬ配列、または配列番号１４０のＶＨ配列および配列番号１４８のＶＬ配列を含む抗体などの参照結合タンパク質のＡＬＫ７への結合を阻害する試験ＡＬＫ７結合タンパク質の能力は、試験ＡＬＫ７結合タンパク質がＡＬＫ７に対する結合について参照抗体と競合し得ることを示す。かかるＡＬＫ７結合タンパク質は、非限定的な理論によれば、ＡＬＫ７結合タンパク質が競合するＡＬＫ７参照抗体と同じ、または関連した（例えば、構造的に似た、または空間的に近接した）ＡＬＫ７上のエピトープに結合することができる。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、それぞれ、配列番号９１のＶＨ配列および配列番号９８のＶＬ配列、配列番号１０５のＶＨ配列および配列番号１１０のＶＬ配列、配列番号１１７のＶＨ配列および配列番号１２４のＶＬ配列、配列番号１２８のＶＨ配列および配列番号１３５のＶＬ配列、または配列番号１４０のＶＨ配列および配列番号１４８のＶＬ配列を含む抗体と同じＡＬＫ７上のエピトープに結合する。
【０３４８】
一般的に、ＡＬＫ７などの１型ＴＧＦβ受容体ファミリーメンバーは、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢ）によってリン酸化され、Ｓｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を介してシグナル伝達することが知られている。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、ＡＬＫ７およびＩＩ型受容体を発現する細胞（例えば、脂肪細胞）における１つ以上のＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）によるＡＬＫ７のリン酸化を減少させることができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、ＡＬＫ７およびＩＩ型受容体を発現する細胞（例えば、脂肪細胞）におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のＡＬＫ７介在性リン酸化を減少させることができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７受容体発現細胞は、マウスのものである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７受容体発現細胞は、ヒトのものである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７受容体発現細胞は、脂肪細胞である。
【０３４９】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％ 〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７に結合するＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対��る結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７に結合するＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７に結合するＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質(例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、細胞ベースのアッセイを用いて測定した場合にＳｍａｄのリン酸化を減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、細胞ベースのアッセイを用いて測定した場合に５００ｐＭ未満、３５０ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、７５ｐＭ未満、６０ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、４０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または５ｐＭ未満のＩＣ５０でＡＬＫ７介在性リン酸化を減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７に結合するＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。
【０３５３】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定した場合に）１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤでＡＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７に結合するＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７に結合するＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントである。
【０３５５】
上記に記載の構造的および／または機能的特性の少なくとも１つを有することで、本開示に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７の特定のアミノ酸に特異的に結合する。例えば、かかるＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７の、抗原決定基としても知られる少なくとも１つのエピトープに結合することができる。エピトープは、抗体（または他の結合タンパク質）が結合する抗原の特定の部分であるが、エピトープは通常は非自己タンパク質である。エピトープに結合する抗体の部分はパラトープと呼ばれる。エピトープはその構造およびパラトープとの相互作用に基づいて、コンフォメーションエピトープと線状エピトープとに分けることができる。コンフォメーションエピトープは、抗原のアミノ酸配列の不連続な部分で構成されている。これらのエピトープは、抗原の３−Ｄ表面構造および形状または３次構造に基づいてパラトープと相互作用する。線状エピトープは、その一次構造に基づいてパラトープと相互作用する。線状エピトープは、抗原からのアミノ酸の連続した配列により形成される。エピトープは、タンパク質マイクロアレイ、ＥＬＩＳＰＯＴまたはＥＬＩＳＡ法を用いるか、あるいはハイスループット突然変異誘発を用いてマッピングすることができる。
【０３５６】
ＡＬＫ７結合タンパク質の調製
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７の細胞外ドメインに結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、完全長の抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの抗ＡＬＫ７抗体、ならびにそれらの変異体および誘導体である。
【０３５７】
ＡＬＫ７結合タンパク質は、公知の技術を用いて容易に調製することができる。モノクローナル抗ＡＬＫ７抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７（１９７５）により記載されるものなどのハイブリドーマ法をはじめとする、当該技術分野では周知の方法を用いて調製することができる。ハイブリドーマ法を用いて、上記に述べたようにしてマウス、ハムスター、または他の適当な宿主動物を免疫することで、免疫化抗原に特異的に結合する抗体のリンパ球による産生を誘発する。また、インビトロでリンパ球を免疫してもよい。免疫後、リンパ球を単離し、次いで適当な骨髄腫細胞株と融合させることでハイブリドーマ細胞を形成し、これを未融合のリンパ球および骨髄腫細胞から選択して分離することができる。これにより、免疫沈降法、イムノブロッティング、またはインビトロ結合アッセイ（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）など）によって測定される、ｈＡＬＫ７などのＡＬＫ７を特異的に狙ったモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを、常法を用いたインビトロ培養（例えば、Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６を参照）または動物の体内で腹水腫瘍としてインビボで増殖させることができる。その後、モノクローナル抗体を、上記でポリクローナル抗体について記載したように培地または腹水から精製することができる。
【０３５８】
提供されるモノクローナル抗体はまた、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるような組換えＤＮＡ法を用いて作製することもでき、モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドを、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅するオリゴヌクレオチドプライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲなどによって成熟Ｂ細胞またはハイブリドーマ細胞から単離し、それらの配列を既知の方法を用いて決定する。次に、単離した、重鎖および軽鎖をコードするポリヌクレオチドを適当な発現ベクターにクローニングする。これらの発現ベクターを例えば大腸菌、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｐｅｒ．Ｃ６細胞、または骨髄腫細胞（例えば、ＮＳ０細胞）などの通常は免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞にトランスフェクトすると宿主細胞によってモノクローナル抗体が産生される。組換え抗ＡＬＫ７モノクローナル抗体は、周知の方法を用いて所望の種類のＣＤＲを発現するファージディスプレイライブラリーから容易に単離することもできる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４  （１９９０）；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８  （１９９１）；およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）を参照）。
【０３５９】
抗ＡＬＫ７抗体は、必要に応じて、ＡＬＫ７抗原に対する高い親和性および他の好ましい生物学的性質を示すようにヒト化、表面再構成、および操作することができる。例えば、ＡＬＫ７に対する高い親和性などの所望の抗体特性を与えるように、ヒト化（またはヒト）抗ＡＬＫ７抗体を、一般的に利用可能な３次元免疫グロブリンモデリングならびにフレームワーク（ＦＷ）残基、コンセンサス配列、および生殖系配列を選択するための既知の手法を用いて容易に設計および調製することができる。
【０３６０】
親和性成熟法およびチェーンシャッフリング法は、当該技術分野では周知のものであり、高い親和性を有する抗ＡＬＫ７抗体ならびに本明細書に開示されるＡＬＫ７結合タンパク質の誘導体および変異体を作製するために用いることができる。（例えば、本明細書に参照によりその全容を援用するところのＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）を参照）。高い親和性を有する抗ＡＬＫ７抗体ならびに本明細書に開示されるＡＬＫ７結合タンパク質の誘導体および変異体を作製するためのさらなる方法は、１つ以上の選択されたＶＨおよび／またはＶＬ遺伝子のランダム突然変異導入を用いて可変ドメイン全体内に変異を生じることにより、本開示のＣＤＲ由来配列を含む新規なＶＨまたはＶＬ領域を作製することである。エラープローンＰＣＲを用いるそのような技法は、Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８９：３５７６−３５８０（１９９２））により記載されている。いくつかの実施形態では、１個または２個のアミノ酸置換を、ＶＨ  ＣＤＲおよび／またはＶＬ  ＣＤＲのセット内で行う。抗ＡＬＫ７抗体をコードするＶＨまたはＶＬ遺伝子のＣＤＲ領域への直接的な突然変異導入を用いたさらなる方法が本明細書に開示されている。かかる方法の例は、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４））およびＳｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：５５１−５６７ （１９９６））に開示されている。
【０３６１】
本開示の抗ＡＬＫ７抗体のヒト化、表面再構成、または操作は、これらに限定されるものではないが、本明細書に参照によりその全容を援用するところのＪｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３  （１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４（１９８８）），Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７），Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）、米国特許第５，６３９，６４１号、同第５，７２３，３２３号、同第５，９７６，８６２号、同第５，８２４，５１４号、同第５，８１７，４８３号、同第５，８１４，４７６号、同第５，７６３，１９２号、同第５，７２３，３２３号、同第５，７６６，８８６号、同第５，７１４，３５２号、同第６，２０４，０２３号、同第６，１８０，３７０号、同第５，６９３，７６２号、同第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，２２５，５３９号、同第４，８１６，５６７号、同第７，５５７，１８９号、同第７，５３８，１９５号、および同第７，３４２，１１０号；国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６２８０号、同第ＰＣＴ／ＵＳ９６／１８９７８号、同第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０９６３０号、同第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５９３９号、同第ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１２３４号、同第ＰＣＴ／ＧＢ８９／０１３３４号、同第ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４号、同第ＰＣＴ／ＧＢ９２／ ０１７５５；国際出願公開第ＷＯ９０／１４４４３号、同第ＷＯ９０／１４４２４号、同第ＷＯ９０／１４４３０号；ならびに欧州特許公開第ＥＰ２２９２４６号に記載されるものを含む、任意の周知の方法を用いて行うことができる。同様に、所望の特性を示す抗ＡＬＫ７抗体を容易に選択するための既知のアッセイが利用可能である（例えば、本明細書に記載されるＡＬＫ７への結合親和性を測定するためのアッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ベースのヒトＡＬＫ７結合タンパク質競合結合アッセイなどの交差ブロッキングアッセイ）。
【０３６２】
非ヒトまたはヒト抗体を、操作、ヒト化または表面再構成するための方法はまた、使用可能であり、当該技術分野では周知のものである。ヒト化、表面再構成または同様に操作された抗体は、例えば、これらに限定されるものではないが、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類または他の哺乳動物などのヒト以外の源に由来する１つ以上のアミノ酸残基を有することができる。これらの非ヒトアミノ酸残基は、既知のヒト配列の「インポートされた」可変、定常、または他のドメインに通常由来する「インポート」残基としばしば呼ばれる残基で置換される。当該技術分野では周知であるように、かかるインポートされた配列を用いることで、免疫原性を低下させるか、または、結合性、アフィニティー、結合速度、解離速度、アビディティー、特異性、半減期、もしくは他の任意の適当な特性を低下、増大、または改変することができる。好ましくは、非ヒトまたはヒトＣＤＲ配列の一部またはすべてが維持される一方で、可変領域および定常領域の非ヒト配列をヒトまたは他のアミノ酸で置換することができる。
【０３６３】
完全長の抗ＡＬＫ７抗体などのＡＬＫ７結合タンパク質をコードする核酸（複数可）を、組換えＤＮＡ技術を用いた多くの異なる方法でさらに改変することで別の抗体を作製することができる。いくつかの実施形態では、例えば、マウスモノクローナル抗体の軽鎖および重鎖の定常ドメインをコードする核酸（複数可）を、（ａ）キメラ抗体を作製するために例えばヒト抗体のコーディング領域で、または（ｂ）融合抗体を作製するために免疫グロブリンをコードしない核酸（複数可）で置換することができる。いくつかの実施形態では、定常領域は、モノクローナル抗体の所望の抗体フラグメントを作製するために短縮または除去される。可変領域コーディング配列の部位特異的または高密度変異導入を用いて、モノクローナル抗体の特異性、親和性などを最適化することができる。
【０３６４】
抗ＡＬＫ７ヒト抗体は、当該技術分野では周知の多くの方法のいずれによっても直接的に調製することができる（例えば、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６−９５（１９９１）；および米国特許第５，７５０，３７３号を参照）。同様に、ヒト抗ＡＬＫ７抗体は、インビトロで免疫した不死化ヒトＢリンパ球から容易に得るか、またはＡＬＫ７に対する抗体を産生する免疫された個体から単離することができる。
【０３６５】
ヒト抗ＡＬＫ７抗体は、ヒト抗体を発現するファージライブラリーから選択することもでき、これについては、例えばＶａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：３０９−３１４（１９９６），Ｓｈｅｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９５：６１５７−６１６２（１９９８），Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１），およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１（１９９１）に記載されている。抗体ファージライブラリーを作製およびスクリーニングするための方法は、米国特許第５，９６９，１０８号、同第６，１７２，１９７号、同第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号、同第６，５４４，７３１号、同第６，５５５，３１３号、同第６，５８２，９１５号、同第６，５９３，０８１号、同第６，３００，０６４号、同第６，６５３，０６８；６，７０６，４８４号、および同７，２６４，９６３号、ならびにＲｏｔｈｅｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７６（４）：１１８２−１２００  （２００８）にも記載されている（いずれも本明細書に参照によりその全容を援用する）。
【０３６６】
ヒト抗ＡＬＫ７抗体は、免疫されると内因性の免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体を産生することが可能なヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウスで作製することもできる。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、および同第５，６６１，０１６号に記載されている。
【０３６７】
ヒト抗ＡＬＫ７抗体は、例えば、いずれも本明細書に参照によりその全容を援用する、例えば、ＷＯ０１２／００９５６８、ＷＯ０９／０３６３７９、ＷＯ１０／１０５２５６、ＷＯ０３／０７４６７９および米国特許出願公開第ＵＳ２００２／０１７７１７０号に開示されるような、酵母に基づいた抗体提示ライブラリーから選択および／または単離することもできる。かかるライブラリーは、ヒト免疫前レパートリーによってもたらされる多様性を反映するようにインシリコで設計される。
【０３６８】
あるいは、抗ＡＬＫ７抗体は、酵母に提示される抗体ライブラリーから選択することも可能である（例えば、Ｂｌａｉｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ３４２（２）：２１１−２１８（２００４）；Ｂｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５（６）：５５３−５５７（１９９７）；Ｋｕｒｏｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．３３（１）：１−９（２０１１）．Ｒｅｖｉｅｗ；Ｌａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０１（１）：１０２−１５（２０１２）；Ｏｒｃｕｔｔ  Ｋ．Ｄ．ａｎｄ  Ｗｉｔｔｒｕｐ  Ｋ．Ｄ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｙｅａｓｔ  ｄｉｓｐｌａｙ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ（２０１０），２０７−２３３；Ｒａｋｅｓｔｒａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２４（６）：５２５−３０（２０１１）；および米国特許第６，４２３，５３８号、および同第６，６９６，２５１、および同第６，６９９，６５８号参照）。
【０３６９】
抗原結合抗体フラグメントを作製するためのさまざま方法が知られている。従来より、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解的消化によって得られている（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈ．２４：１０７−１１７（１９９３）；およびＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）を参照）。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合抗体フラグメントは、組み換えにより作製される。Ｆａｂ、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ抗体フラグメントは、いずれも大腸菌または他の宿主細胞で発現させ、それらから分泌させることができるため、これらのフラグメントを大量に製造することが可能である。かかるＡＬＫ７結合抗体フラグメントは、上記で述べた抗体ファージライブラリーからさらに単離することもできる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合抗体フラグメントは、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されるような線状抗体である。抗原結合抗体フラグメントを作製するための他の方法は、当該技術分野では周知のものである。
【０３７０】
既知の方法を、ＡＬＫ７を結合する一本鎖抗体の作製に容易に適応することができる（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照）。さらに、既知の方法をＦａｂ発現ライブラリーの構築に規定どおりに適応する（例えば、Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１（１９８９）を参照）ことにより、ＡＬＫ７に対する所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメントを迅速かつ効果的な同定が可能である。ＡＬＫ７結合抗体フラグメントは、これらに限定されるものではないが、（ａ）抗体のペプシン消化によって生成されるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｂ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することにより生成されるＦａｂフラグメント、（ｃ）抗ＡＬＫ７抗体のパパインおよび還元剤による処理によって生成されるＦａｂフラグメント、ならびに（ｄ）Ｆｖフラグメントを含む当該技術分野では周知の方法によって作製することができる。
【０３７１】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）を血清中半減期を増加させるように改変することができる。これは、例えば、ＡＬＫ７結合タンパク質の適当な領域の変異によりＡＬＫ７結合タンパク質にサルベージ受容体結合エピトープを組み込むことにより、またはサルベージ受容体エピトープをペプチドタグに組み込み、次いでこのペプチドタグをＡＬＫ７結合タンパク質の両端に融合するかもしくはその中間に融合する（例えば、ＤＮＡまたはペプチド合成により）ことによって行うことができる。ＡＬＫ７結合タンパク質の血清中半減期を延ばすための他の方法（例えば、ＰＥＧなどの異種分子との複合体化）は、当該技術分野では周知のものである。
【０３７２】
ヘテロ複合体ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、完全長の抗ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメント、ならびにそれらの変異体および誘導体）も、本開示の範囲内に含まれる。ヘテロ複合体ＡＬＫ７結合タンパク質は、共有結合された２個のタンパク質で構成される。ヘテロ複合体ＡＬＫ７結合タンパク質は、架橋剤を用いるものなど、合成タンパク質化学では既知の方法を用いてインビトロで調製することができることが企図される。例えば、ジスルフィド交換反応を用いるかまたはチオエーテル結合を形成することにより、免疫毒素を構築することができる。この目的に適した試薬の例としては、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデートが挙げられる。
【０３７３】
ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体のＡＬＫ７との結合をもたらす任意の種類の可変領域を含むことができる。そのような可変領域は、体液性応答を誘発してＡＬＫ７抗原に対する免疫グロブリンを生成するように誘導することができる任意の哺乳動物を含むかまたはかかる哺乳動物に由来するものであってよい。抗ＡＬＫ７抗体の可変領域は、例えば、ヒト、マウス、非ヒト霊長類霊長類（例えば、カニクイザル、マカクザルなど）またはルピナス（ｌｕｐｉｎｅ）由来のものとすることができる。いくつかの実施形態では、改変された抗ＡＬＫ７抗体の可変領域および定常領域は両方ともヒトのものである。他の実施形態では、適合性抗体(通常、非ヒト源に由来する)の可変領域を、分子の結合特性を改善するかまたは免疫原性を弱めるように操作するかまたは特別に調整することができる。この点に関し、本開示に基づいて有用な可変領域は、親和性成熟、突然変異誘発法、チェーンシャッフリング法および／または本明細書に記載されるかまたは当該技術分野では周知の他の方法を用いてインポートされるアミノ酸配列を含めることでヒト化するかまたは他の形で改変することができる。
【０３７４】
特定の実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体の重鎖および軽鎖の両方の可変ドメインは、１つ以上のＣＤＲの少なくとも部分的な置換により、および／または、部分的なフレームワーク領域置換と配列変化によって改変される。ＣＤＲは、フレームワーク領域が由来する抗体と同じクラス、またはさらにはサブクラスの抗体に由来するものとしてもよいが、ＣＤＲを異なるクラスの抗体に、特定の実施形態では、異なる種からの抗体に由来するものとすることも考えられる。１つの可変ドメインの抗原結合能力を別の可変ドメインに移行させるには、すべてのＣＤＲをドナーの可変領域に由来する完全なＣＤＲに置き換える必要はない。むしろ、抗原結合部位の活性を維持するうえで必要な残基だけを移行するだけでよい。免疫原性を低下させた機能性抗体を常法によって得ることは充分に当業者の能力の範囲内であろう。例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、および同第５，６９３，７６２号を参照されたい。
【０３７５】
可変領域への変更にもかかわらず、当業者であれば、本開示の改変抗ＡＬＫ７抗体は、天然または改変されていない定常領域を有する概ね同じ免疫原性を有する抗体と比較した場合に、低いＡＤＣＣまたは増加した血清半減期などの所望の生化学的特性を与えるように１つ以上の定常領域ドメインの少なくとも一部が欠失されるかまたは他の形で改変された抗体を含むであろうことは認識されよう。いくつかの実施形態では、改変抗ＡＬＫ７抗体の定常領域は、ヒト定常領域を含む。定常領域に対する改変は、１つ以上のドメイン内の１つ以上のアミノ酸の付加、欠失または置換を含み得る。本明細書に開示される改変抗ＡＬＫ７抗体は、３個の重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）および／または軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）の１つ以上に変更または改変を有することができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のドメインが部分的または完全に欠失された定常領域を有する改変抗ＡＬＫ７抗体が想到される。いくつかの実施形態では、改変抗ＡＬＫ７抗体は、ＣＨ２ドメイン全体が除去されたドメイン欠失コンストラクトまたは変異体を含む（ΔＣＨ２コンストラクト）。いくつかの実施形態では、除去された定常領域ドメインは、欠失した定常領域によって通常与えられる分子の柔軟性の一部を与える短いアミノ酸スペーサー（例えば、残基１０個）に置き換えることができる。
【０３７６】
定常領域は、いくつかのエフェクター機能を媒介しているものと一般的に理解されている。例えば、補体のＣ１成分の抗体との結合は、補体系を活性化する。補体の活性化は、細胞病原体のオプソニン化および溶解に重要である。補体の活性化は炎症反応も刺激し、自己免疫の超感受性にも関与し得る。さらに、抗体はＦｃ領域を介して細胞に結合し、抗体Ｆｃ領域上のＦｃ受容体部位が細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合する。ＩｇＧ（γ受容体）、ＩｇＥ（ｅｔａ受容体）、ＩｇＡ（α受容体）、およびＩｇＭ（μ受容体）をはじめとする、異なるクラスの抗体に対して特異性を有する多くのＦｃ受容体が存在している。細胞表面上のＦｃ受容体への抗体の結合は、抗体でコーティングされた粒子の貪食および破壊、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体でコーティングされた標的細胞の溶解（抗体依存性細胞傷害、またはＡＤＣＣと呼ばれる）、炎症メディエーターの放出、免疫グロブリン産生の胎盤移行および調節をはじめとする多くの重要かつ多様な生物学的反応を誘発する。
【０３７７】
特定の実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、変化したエフェクター機能を有し、これが投与された抗ＡＬＫ７抗体の生物学的プロファイルに影響する。例えば、定常領域ドメインの欠失または不活性化（点突然変異または他の手段による）は、循環する改変抗体のＦｃ受容体の結合を減少させることができる。他の場合では、定常領域の改変は補体の結合を緩和することにより、複合体化された細胞毒素の血清半減期および非特異的結合を減少させることができる。定常領域のさらに他の改変を用いてジスルフィド結合またはオリゴ糖部分を欠失させることで、抗原特異性または抗体柔軟性が高められることで局在化を促進することができる。同様に、本開示による定常領域の改変は、当業者には周知の生化学的または分子工学方法を用いて容易に行うことができる。
【０３７８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質は、１つの以上のエフェクター機能を有さないＡＬＫ７抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性をいっさい有さない。特定の実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、Ｆｃ受容体および／または補体因子に結合しない。特定の実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、エフェクター機能を有さない。ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性ならびにＦｃ受容体および／または補体因子の結合を低下または消失させるＦｃ配列の操作による改変の例は、これらを試験するためのアッセイおよび手順と同様、本明細書に記載されるかまたはさもなくば当該技術分野では周知のものである。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、それぞれの改変抗体のヒンジ領域にＣＨ３ドメインを直接融合するように操作される。他のコンストラクトでは、ヒンジ領域と改変されたＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインとの間にペプチドスペーサーが挿入される。例えば、ＣＨ２ドメインが欠失され、残りのＣＨ３ドメイン（改変されるかまたは改変されていない）が５〜２０個のアミノ酸スペーサーによってヒンジ領域に接合された適合性のコンストラクトを発現させることができる。こうしたスペーサーを加えることで、例えば、定常ドメインの調節エレメントを自由な状態でアクセス可能に維持するか、またはヒンジ領域を柔軟な状態に保つことができる。アミノ酸スペーサーは、場合により免疫原性を有することが示されており、コンストラクトに対して望ましくない免疫応答を誘発する場合がある。したがって、特定の実施形態では、コンストラクトに加えられるいずれのスペーサーも比較的に非免疫原性のものとするか、またはまとめて欠失させることで改変された抗ＡＬＫ７抗体の所望の生化学的性質を維持することができる。
【０３８０】
さらなる実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、定常領域内の数個または１個のアミノ酸の部分的欠失または置換によって改変される。例えば、ＣＨ２ドメインの選択された領域における１個のアミノ酸の変異は、Ｆｃ結合を大きく減少させるうえで充分であり得る。同様に、エフェクター機能（例えば、補体Ｃ１Ｑの結合）を制御する１つ以上の定常領域ドメインを完全または部分的に欠失させることができる。定常領域のそのような部分的欠失は、抗ＡＬＫ７抗体の選択された特性（例えば、血清半減期）を改善しつつ、対応する定常領域ドメインに関連する他の望ましい機能は完全な状態に維持することができる。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体の定常領域は、得られるコンストラクトのプロファイルを高める１つ以上のアミノ酸の変異または置換によって改変される。この点に関し、保存された結合部位によって与えられる活性（例えば、Ｆｃ結合）を妨げる一方で、改変された抗ＡＬＫ７抗体の形態および免疫原性プロファイルは実質的に維持することが可能である。本開示はまた、エフェクター機能を減少もしくは増加させる、または１つ以上の細胞毒素、標識もしくは炭水化物部分の結合部位を与える、といった所望の特性を高めるために定常領域に１つ以上のアミノ酸の付加を有する抗ＡＬＫ７抗体も提供する。かかる実施形態では、選択された定常領域ドメインに由来する特定の配列を挿入または複製することが望ましい場合がある。
【０３８１】
本開示はまた、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質に対する変異体であるＡＬＫ７結合タンパク質も提供する（例えば、マウス、キメラ、ヒト化およびヒトＡＬＫ７結合タンパク質）。特定の実施形態では、変異体ＡＬＫ７結合タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０３８２】
抗ＡＬＫ７抗体のような提供されるＡＬＫ７結合タンパク質は、溶解度、生物学的半減期、バイオアベイラビリティーなどを向上させるために当該技術分野では周知のさらなる化学部分を含むように、あるいは、ＡＬＫ７結合タンパク質の安定性、配合および／または治療特性を改善させるように誘導体化することができる。そのような部分の非網羅的な概要は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（２０００）にみることができる。
【０３８３】
ＡＬＫ７結合タンパク質をコードする核酸およびその発現
ＡＬＫ７結合タンパク質をコードする核酸分子および核酸分子の組み合わせも提供される。いくつかの実施形態では、核酸分子は、完全長の抗ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの抗ＡＬＫ７抗体をコードする。さらなる実施形態では、本開示は、本明細書で提供される完全長の抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントの変異体または誘導体をコードする核酸分子を提供する。
【０３８４】
本明細書で開示される核酸分子は、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であってよい。ＤＮＡは、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および合成ＤＮＡを含み、二本鎖または一本鎖であってよく、一本鎖である場合にはコーディング鎖または非コーディング（アンチセンス）鎖であってよい。特定の実施形態では、核酸分子は単離されている。さらなる実施形態では、核酸分子は実質的に純粋である。いくつかの実施形態では、核酸はｃＤＮＡであるか、またはｃＤＮＡから誘導される。いくつかの実施形態では、核酸は組換え技術によって作製される。
【０３８５】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、宿主細胞内またはインビトロでコーディング配列の発現を制御する調節配列に機能的に連結されたＡＬＫ７結合タンパク質コーディング配列を含む。特定の実施形態では、コーディング配列はｃＤＮＡである。本開示はまた、宿主細胞内またはインビトロでコーディング配列の発現を制御する調節配列に機能的に連結されたＡＬＫ７結合タンパク質コーディング配列を含む核酸分子を含むベクターにも関する。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、同じリーディングフレーム内で異種ポリヌクレオチド配列と融合された成熟ＡＬＫ７結合タンパク質のコーディング配列を含む。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチド配列は、核酸分子（複数可）をコードするＡＬＫ７結合タンパク質で形質転換された宿主細胞から発現されたタンパク質の分泌を促すリーダーペプチド配列をコードする。リーダー配列を含むタンパク質はプレタンパク質と呼ばれ、リーダー配列が宿主細胞によって切断されることでＡＬＫ７結合タンパク質の成熟型を形成することができる。宿主細胞内での組換えタンパク質の分泌を促進するそのようなリーダー配列およびそれらの使用は当該技術分野では周知のものである。さらなる実施形態では、異種ポリヌクレオチド配列は、例えば精製を容易とし、組み換えによって発現されたＡＬＫ７結合タンパク質のタンパク質安定性および／または治療特性もしくは診断特性を加えるかもしくは改善するように機能することができるさらなる５’末端アミノ酸残基をコードする。
【０３８７】
いくつかの実施形態において、本開示は、ハイブリダイゼーションプローブ、ＰＣＲプライマーまたはシークエンシングプライマーとしてとして使用するのに充分な、ｃＤＮＡフラグメントをコードするＡＬＫ７結合タンパク質などの単離された核酸を提供する。
【０３８８】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される少なくとも１つの特性を有するＡＬＫ７結合タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、コードされるＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、コードされるＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７を発現する脂肪細胞内の脂肪分解を増加させる。いくつかの実施形態では、コードされるＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、コードされるＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。いくつかの実施形態では、コードされるＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７と結合するＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、コードされるＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書で開示される抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、コードされるＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるＶＨとＶＬのペアを有するＡＬＫ７結合抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。さらなる実施形態では、コードされるＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書で開示される抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。さらなる実施形態では、核酸分子は、ＡＬＫ７に特異的に結合し、ＶＨおよびＶＬを含むＡＬＫ７結合タンパク質をコードする。
【０３８９】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質をコードする核酸および核酸のセットを含むベクターおよびベクターのセットを提供する。これらの核酸、核酸のセット、ベクター、およびベクターのセットによって形質転換された宿主細胞、ならびにＡＬＫ７結合タンパク質を作製および使用する方法が提供される。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、本開示は、上記で与えられた核酸分子もしくは核酸分子の組み合わせまたはベクターを含む宿主細胞を提供し、宿主細胞はいくつかの例では、ＡＬＫ７に特異的に結合するＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの抗ＡＬＫ７抗体）を発現することができる。さらなる実施形態では、本開示は、上記で与えられた核酸分子もしくは核酸分子の組み合わせまたはベクターによって形質転換された宿主細胞を提供し、宿主細胞はいくつかの例では、ＡＬＫ７に特異的に結合するＡＬＫ７結合タンパク質を発現することができる。かかる宿主細胞を、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質を作製する方法で用いることができ、方法は、（ａ）宿主細胞を培養することと、（ｂ）宿主細胞から発現されたＡＬＫ７結合タンパク質を単離することと、を含む。
【０３９１】
本開示はまた、ＡＬＫ７結合タンパク質を作製するための方法であって、ＡＬＫ７結合タンパク質を発現することが可能な宿主細胞（例えば、ハイブリドーマまたは形質転換された哺乳動物宿主細胞）を適当な条件下で培養することを含む、方法を提供し、場合により、宿主細胞から分泌されたＡＬＫ７結合タンパク質を単離する方法を提供する。さらに、本開示は、開示される方法を用いて単離されたＡＬＫ７結合タンパク質を提供する。
【０３９２】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、例えば、コードされたポリペプチドの精製を可能とするマーカー配列に対して同じリーディングフレーム内で融合された成熟ＡＬＫ７結合タンパク質（複数可）（例えば、完全長抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどのＡＬＫ７抗体）のコーディング配列（複数可）を含む。例えば、マーカー配列は、細菌宿主の場合ではマーカーに融合された成熟ポリペプチドの精製を可能とするようにｐＱＥ−９ベクターによって与えられるヘキサヒスチジンタグ（配列番号３３６）とすることができ、または哺乳動物宿主（例えば、ＣＯＳ−７細胞）が使用される場合にはインフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するヘマグルチニン（ＨＡ）タグとすることができる。
【０３９３】
抗ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどのＡＬＫ７結合タンパク質をコードする核酸変異体も提供される。核酸変異体は、コーディング領域、非コーディング領域、またはその両方に改変を含むことができる。いくつかの実施形態では、核酸変異体は、サイレント置換、付加、または欠失を生じるが、コードされるポリペプチドの性質または活性を変化させない改変を含む。いくつかの実施形態では、核酸変異体は、遺伝コードの縮重に起因するサイレント置換によって作製される。核酸変異体は、例えば、特定の宿主に対してコドン発現を最適化するため（大腸菌などの細菌宿主に好まれるものとなるようにヒトｍＲＮＡのコドンを変化させる）など、さまざまな理由で作製することができる。本明細書に記載される核酸を含むベクターおよび細胞も提供される。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、完全長抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの抗ＡＬＫ７抗体）をコードする核酸配列は、オリゴヌクレオチド合成装置を用いた化学合成によって構築される。そのようなオリゴヌクレオチドは、所望のポリペプチドのアミノ酸配列および宿主細胞の好みに基づいたコドン最適化に基づいて設計することができる。標準的な方法を規定どおりに適用してＡＬＫ７結合タンパク質をコードした単離ポリヌクレオチド配列を合成することができる。
【０３９５】
ＡＬＫ７結合タンパク質をコードする核酸配列は、アセンブルされた後（合成、部位特異的突然変異誘発、または他の方法により）、所望の宿主内でのＡＬＫ７結合タンパク質の発現に適当な調節配列に規定どおりに機能的に連結することができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質をコードする核酸配列（複数可）を１つ以上の発現ベクターに挿入し、所望の宿主内でのタンパク質の発現に適当な調節配列（複数可）に機能的に連結する。トランスフェクトされたコーディング配列の宿主内での高い発現レベルを得るには、コーディング配列を、選択された発現宿主内で機能する転写および翻訳発現調節配列に機能的に連結するかまたは関連付けることができる。
【０３９６】
特定の実施形態では、組換え発現ベクターを用いて、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどのＡＬＫ７結合タンパク質をコードしたＤＮＡを増幅および発現させる。組換え発現ベクターは、哺乳動物、微生物、ウイルス、または昆虫の遺伝子に由来する適当な転写または翻訳調節エレメントに機能的に連結されたＡＬＫ７結合タンパク質のポリペプチド鎖をコードする、合成またはｃＤＮＡ由来のＤＮＡフラグメントを有する複製可能なＤＮＡコンストラクトである。転写ユニットは一般的に、以下に詳細に記載するような（１）遺伝子発現において調節的役割を有する遺伝子エレメント（複数可）（例えば、転写プロモーターまたはエンハンサー）、（２）ｍＲＮＡに転写され、タンパク質に翻訳される構造的配列またはコーディング配列、ならびに（３）適当な転写および翻訳開始および終止配列のアセンブリを含む。そのような調節エレメントは、転写を制御するオペレーター配列を含むことができる。通常は複製起点によって与えられる、宿主内で複製する能力、および形質転換体の認識を容易とする選択遺伝子をさらに組み込むことができる。ＤＮＡの各領域は、それらが互いに機能的に関連している場合に機能的に連結されている。例えば、シグナルペプチド（分泌リーダー）のＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与する前駆体として発現される場合にポリペプチドのＤＮＡと機能的に連結されており、プロモーターは、コーディング配列の転写を制御する場合にコーディング配列と機能的に連結されており、あるいは、リボソーム結合部位は、翻訳が行われるように配置される場合にコーディング配列と機能的に連結される。酵母発現系での使用を意図した構造的エレメントには、宿主細胞によって翻訳されたタンパク質の細胞外分泌を可能とするリーダー配列が含まれる。あるいは、組換えタンパク質がリーダーまたは輸送配列なしで発現される場合、タンパク質はＮ末端のメチオニン残基を含んでもよい。この残基は、必要に応じて、発現された組換えタンパク質から後で切断されることによって最終的なタンパク質を与えることができる。特定の実施形態では、本開示は、上記で、または本明細書の他の箇所で記載される核酸またはベクターを含み、１つ以上の担体、希釈剤、賦形剤、または他の添加剤を必要に応じてさらに含む、組成物、例えば、医薬組成物を提供する。
【０３９７】
本明細書で開示される核酸分子またはｃＤＮＡ分子および／またはベクターによって形質転換された宿主細胞も提供される。本開示はまた、調節配列に機能的に連結され、必要に応じてベクターに挿入された開示される核酸分子（複数可）で形質転換された宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞である。さらなる実施形態では、哺乳動物宿主細胞は、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。他の実施形態では、宿主細胞はハイブリドーマである。
【０３９８】
さらなる実施形態では、本開示は、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの抗ＡＬＫ７抗体、ならびにそれらの変異体および誘導体）を製造する方法であって、本明細書に開示される形質転換された宿主細胞またはハイブリドーマを、ＡＬＫ７結合タンパク質を産生するのに適した条件下で培養することを含む方法を提供する。本開示は、必要に応じて、宿主細胞から分泌されたＡＬＫ７結合タンパク質を単離することを提供する。本開示はまた、必要に応じて、この方法を用いて製造されたＡＬＫ７結合タンパク質、ならびにＡＬＫ７結合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も提供する。
【０３９９】
発現調節配列および発現ベクターの選択は、宿主の選択に依存する。広範な発現宿主／ベクターの組み合わせを使用することができる。真核生物宿主において有用な発現ベクターとしては、例えば、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス、アデノウイルスおよびサイトメガロウイルス由来の発現調節配列を含むベクターが挙げられる。細菌宿主において有用な発現ベクターとしては、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９およびそれらの誘導体を含む大腸菌由来のプラスミドなどの既知の細菌プラスミド、ならびにＭ１３および繊維状一本鎖ＤＮＡファージなどの幅広い宿主を有するプラスミドが挙げられる。
【０４００】
ＡＬＫ７結合タンパク質の発現に適した宿主細胞には、適当なプロモーターの制御下の原核生物、酵母、昆虫またはより高等な真核細胞が含まれる。原核生物には、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、大腸菌または桿菌が含まれる。より高等な真核細胞としては、下記に述べるような哺乳動物由来の確立された細胞株が挙げられる。無細胞翻訳系を用いることもできる。抗体産生を含む、タンパク質産生の方法に関するさらなる情報は、例えば、いずれも本明細書に参照によりその全容を援用するところの米国特許出願公開２００８／０１８７９５４号、米国特許第６，４１３，７４６および同第６，６６０，５０１号、および国際出願公開第ＷＯ０４／００９８２３号にみることができる。
【０４０１】
さまざまな哺乳動物または昆虫細胞培養系もまた、組換えＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの抗ＡＬＫ７抗体、ならびにそれらの変異体および誘導体体）を発現させるために効果的に用いることができる。組換えＡＬＫ７結合タンパク質は一般的に適正に折り畳まれ、適当に修飾されており、完全に機能的であることから、哺乳動物細胞内で発現させることができる。適当な哺乳動物宿主細胞株の例としては、ＨＥＫ−２９３およびＨＥＫ−２９３Ｔ、Ｇｌｕｚｍａｎ（Ｃｅｌｌ  ２３：１７５（１９８１））によって記載されるサル腎細胞のＣＯＳ−７株、ならびに、例えば、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨｅＬａ、およびＢＨＫ細胞株を含む他の細胞株が上げられる。哺乳動物発現ベクターは、複製起点、発現させようとする遺伝子に連結された適当なプロモーターおよびエンハンサー、および他の５’または３’末端側に隣接する非転写配列などの非転写エレメント、ならびに、必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナーおよびアクセプター部位、および転写終結配列などの５’または３’末端側の非翻訳配列を有することができる。昆虫細胞内で異種タンパク質を産生させるためのバキュロウイルス系がＬｕｃｋｏｗ  ａｎｄ  Ｓｕｍｍｅｒｓ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：４７（１９８８）により概説されている。
【０４０２】
形質転換された宿主細胞またはハイブリドーマにより産生されるＡＬＫ７結合タンパク質は、任意の適当な方法に従って精製することができる。かかる標準的な方法は、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、およびサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、またはタンパク質精製のための他の任意の標準的方法が挙げられる。ヘキサヒスチジン（配列番号３３６）、マルトース結合ドメイン、インフルエンザコート配列、およびグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼなどの親和性タグをタンパク質に結合させることにより、適当な親和性カラムに通すことで容易に精製を行うことができる。ＡＬＫ７結合タンパク質は、タンパク質分解、核磁気共鳴およびＸ線結晶解析などの方法を用いて物理的な特性評価を行うこともできる。
【０４０３】
例えば、組換えＡＬＫ７結合タンパク質を培地中に分泌する系から得た上清を、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過装置などの市販のタンパク質濃縮フィルターを用いて最初に濃縮することができる。濃縮工程後、濃縮物を適切な精製マトリックスに適用することができる。また、例えば、ペンダントジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基を有するマトリックスまたは基質などの陰イオン交換樹脂を用いることもできる。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、またはタンパク質の精製に通常用いられる他の種類のものであってよい。また、陽イオン交換工程を用いてもよい。適当な陽イオン交換体としては、スルホプロピルまたはカルボキシメチル基を有するさまざまな不溶性マトリックスが挙げられる。最後に、例えば、ペンダントメチルまたは他の脂肪族基を有するシリカゲルなどの疎水性ＲＰ―ＨＰＬＣ媒体を用いる１つ以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＬＰＣ）工程を用いて、ＡＬＫ７結合タンパク質をさらに精製することができる。上記の精製工程の一部またはすべてを、さまざまな組み合わせで常法により用いて均質な組換えＡＬＫ７結合タンパク質を得ることができる。
【０４０４】
細菌培養物中に産生された組換えＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの抗ＡＬＫ７抗体、ならびにそれらの変異体および誘導体）は、例えば、最初に細胞ペレットから抽出した後、１回以上の濃縮、塩析、水性イオン交換またはサイズ排除クロマトグラフィー工程によって単離できる。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて最終精製工程を行うことができる。組換えタンパク質の発現に用いた微生物細胞は、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破砕または細胞溶解剤の使用を含む任意の従来法によって破砕することができる。
【０４０５】
完全長抗体および抗原結合抗体フラグメントなどの標的結合タンパク質を精製するための当該技術分野では周知の方法としては、例えば、いずれも本明細書に参照によりその全容を援用するところの米国出願公開第２００８／０３１２４２５号、同第２００８／０１７７０４８号、および同第２００９／０１８７００５号に記載されるものも挙げられる。
【０４０６】
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体ではない。標的タンパク質に高い親和性で結合する非抗体ポリペプチドを同定および作製するためのさまざまな方法が知られている。（例えば、いずれも本明細書に参照によりその全容を援用するところのＳｋｅｒｒａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：２９５−３０４（２００７）；Ｈｏｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １５：１４−２７（２００６）；Ｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：６５３−６５８（２００６）；Ｎｙｇｒｅｎ，ＦＥＢＳ  Ｊ．２７５：２６６８−２６７６（２００８）；およびＳｋｅｒｒａ，ＦＥＢＳ  Ｊ．２７５：２６７７−２６８３（２００８）を参照）。特定の実施形態では、ファージディスプレイ技術を用いてＡＬＫ７結合タンパク質を同定／作製する。特定の実施形態では、ポリペプチドは、プロテインＡ、リポカリン、フィブロネクチンドメイン（例えば、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３））、アンキリンコンセンサスリピートドメイン、およびチオレドキシンから選択されたタイプのタンパク質骨格を含む。
【０４０７】
使用方法および医薬組成物
提供されるＡＬＫ７結合タンパク質（抗体、免疫複合体、およびポリペプチドを含む）は、これらに限定されるものではないが、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）によりさまざまな疾患および状態を診断する方法ならびに治療および／または改善する方法をはじめとするさまざまな用途で有用である。ＡＬＫ７シグナル伝達、ＡＬＫ７発現の変化に関連した、および／またはＡＬＫ７シグナル伝達の低下により改善することができる疾患または状態を有する対象を治療するためのＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合する完全長抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの抗ＡＬＫ７抗体、ならびにそれらの変異体および誘導体）の使用方法が提供される。さらなる実施形態では、本開示は、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、薬剤として使用するための、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。本開示は、ＡＬＫ７シグナル伝達、ＡＬＫ７発現の変化に関連した、および／またはＡＬＫ７シグナル伝達の低下により改善することができる疾患または状態を治療および／または改善するための本明細書で開示される医薬組成物の使用も提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物を使用して治療される疾患または状態は、肥満（例えば、腹部肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリック症候群および他の代謝疾患または状態；例えば、低ＨＤＬレベル、高ＬＤＬレベル、高脂血症、高トリグリセリド血症または脂質異常症などの脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド減少；炎症（例えば、肝臓の炎症および／または脂肪組織の炎症）、脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、高ＬＤＬレベルおよび高コレステロール血症）；冠状動脈性心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化症を含む心疾患などの心血管疾患；動脈硬化症および高血圧症；シンドロームＸ；血管再狭窄；神経障害；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸不全、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値の上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚の濃い染み）；または骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在化骨髄腫、および髄外性骨髄腫）、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、および結腸癌などのがん；または上記の疾患もしくは状態の１つ以上に関連した別の疾患／状態である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物を使用して治療される疾患または状態は、過体重（例えば、ＢＭＩ≧２５ｋｇ／ｍ２）、または過剰な体脂肪に関連する。
【０４０８】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体）および薬学的に許容される担体を含み、ＡＬＫ７結合タンパク質は標識基またはエフェクター基をさらに含む。「標識」とは、スクリーニングにおける検出を可能とするように結合された１つ以上の元素、同位体、または化学化合物を指す。標識は大きく分けて、（ａ）同位体標識（放射性または重同位体であってよい）、（ｂ）小分子標識（蛍光色素および比色色素、または他の標識方法を可能とするビオチンなどの分子を含み得る）、および（ｃ）免疫標識（抗体によって認識される融合パートナーとして組み込まれたエピトープであってよい）の３つの部類に分けられる。「標識基」とは、任意の検出可能な標識を指す。いくつかの実施形態では、標識基は、潜在的な立体障害を低減するためにスペーサー（例えば、ペプチドスペーサー）を介してＡＬＫ７結合タンパク質に結合される。標識は、化合物の任意の位置に組み込むことができ、タンパク質を発現させる間にインビトロまたはインビボで組み込むことができる。タンパク質を標識するためのさまざまな方法が当該技術分野では周知であり、提供される方法を実施する際に使用することができる。さらなる実施形態では、標識基は、同位体標識、磁気標識、酸化還元活性部分、光学色素、ビオチン化基、および二次レポーターによって認識されるポリペプチドエピトープから選択される。いくつかの実施形態では、標識基は、蛍光タンパク質、例えば、緑色蛍光タンパク質またはその誘導体（例えば、増強ＧＦＰ、青色蛍光タンパク質またはその誘導体（例えば、ＥＢＦＰ（増強青色蛍光タンパク質）、ＥＢＦＰ２、アズライト、ｍＫａｌａｍａ１、シアン蛍光タンパク質またはその誘導体（例えば、ＥＣＦＰ（増強シアン蛍光タンパク質）、セルリアン、ＣｙＰｅｔ）、黄色蛍光タンパク質またはその誘導体（例えば、ＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、ＹＰｅｔ）である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドエピトープは、ビオチンシグナルペプチド、ヒスチジンペプチド（ｈｉｓ）、ヘマグルチニン（ＨＡ）、Ｆｌａｇ、金結合ペプチドから選択される要素である。さらなる実施形態では、エフェクター基は、放射性同位体、放射性ヌクレオチド、毒素、治療剤および化学療法剤から選択される。
【０４０９】
本開示のＡＬＫ７結合タンパク質は、インビトロおよびインビボでの診断および治療での使用における用途を有する。例えば、ＡＬＫ７結合タンパク質は、さまざまな疾患または状態を治療、予防もしくは診断するために例えば、インビトロまたはインビボの培養細胞に、または対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ヒト抗体、マウス抗体、またはヒト化抗体である。
【０４１０】
また、ＡＬＫ７活性を遮断する方法も提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、ＡＬＫ７をアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質と接触させることを含む。さらなる実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体である。いくつかの例では、方法は、インビボで行われる。他の実施形態では、方法は、インビトロで行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７活性の遮断は、（ａ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）の存在下でＡＬＫ７およびＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞の表面上でのＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドを含む複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７に対する結合について１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３および／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦβリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、および／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７およびＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現する細胞内のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２および／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定される）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏおよび／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、および１つ以上のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含む複合体の形成を減少させること、から選択される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストである（例えば、中和抗ＡＬＫ７抗体）。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を用いた脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、上記の特性のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
【０４１１】
特定の実施形態では、本開示は、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体）を、ＡＬＫ７シグナル伝達、ＡＬＫ７発現の変化に関連した、および／またはＡＬＫ７シグナル伝達の低下により改善することができる疾患または状態を有するか、またはかかる疾患または状態を発症するリスクを有する対象に投与することを含む、疾患または状態の治療、予防／および／または改善を提供する。別の実施形態では、治療は、対象から単離した組織または細胞へのＡＬＫ７結合タンパク質の投与を含み、対象は、ＡＬＫ７発現またはＡＬＫ７シグナル伝達に関連した疾患または状態を有するか、またはかかる疾患または状態を発症するリスクを有する。
【０４１２】
本開示は、ＡＬＫ７結合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。対象におけるＡＬＫ７介在性活性に関連した状態を治療および／または改善するための方法であって、状態の治療および／または改善を要する対象に、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質を含む有効量の医薬組成物を投与することを含む、方法も提供される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は単独で投与される。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は併用療法として投与される。対象におけるＡＬＫ７活性を低下させる方法であって、有効量のＡＬＫ７結合タンパク質を、ＡＬＫ７活性の低下を要する対象に投与することを含む、方法も提供される。
【０４１３】
本明細書で提供されるように、有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）は、体重を減少させ（例えば、体重減少を促進する）、体重増加を減少させ（例えば、体重増加を予防する）、および／または肥満を治療するために投与することができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与される抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与される抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与される抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与される抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。特定の場合では、対象は２型糖尿病を有する。
【０４１４】
特定の実施形態では、本開示は、体重を減少させる方法であって、体重減少を望むかまたは体重減少を要する対象に、有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は過体重（例えば、前肥満）である。いくつかの実施形態では、対象は、２５ｋｇ／ｍ２以上のボディマス指数（ＢＭＩ）を有する。さらなる実施形態では、対象は、２５ｋｇ／ｍ２〜２９．９ｋｇ／ｍ２、３０ｋｇ／ｍ２〜３９．９ｍｋｇ／ｍ２、２５ｋｇ／ｍ２〜３９．９ｋｇ／ｍ２、または２５ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２または３０ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２）のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は病的肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、４０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する。さらなる実施形態では、対象は、４０ｋｇ／ｍ２〜４５ｋｇ／ｍ２、または４０ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は、中心性肥満（例えば、腹部脂肪および／または内臓脂肪を含む腹部の脂肪過多）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、０．８５以上のウェスト／ヒップ外周比（ＷＨＲ）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、周辺性肥満（例えば、臀部の脂肪過多）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、２型糖尿病を有する。ＡＬＫ７結合タンパク質は単独で、または併用療法として投与される。いくつかの実施形態では、投与は、食習慣および／または運動の補助である。
【０４１５】
特定の実施形態では、本開示は、体重増加を減少させる方法であって、体重増加の減少を望むかまたは体重増加の減少を要する対象に、有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は過体重（例えば、前肥満）である。いくつかの実施形態では、対象は、２５ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する。さらなる実施形態では、対象は、２５ｋｇ／ｍ２〜２９．９ｋｇ／ｍ２、３０ｋｇ／ｍ２〜３９．９ｍｋｇ／ｍ２、２５ｋｇ／ｍ２〜３９．９ｋｇ／ｍ２、または２５ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２または３０ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２）のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は病的肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、４０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する。さらなる実施形態では、対象は、４０ｋｇ／ｍ２〜４５ｋｇ／ｍ２、または４０ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は、２型糖尿病を有する。
【０４１６】
過剰な体重に関連した疾患または状態を治療または予防する方法であって、治療または予防を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法も提供される。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、肥満である。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、インスリン抵抗性である。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、脂質異常症、高脂血症（総コレステロール値が２４０ｍｇ／ｄＬ超）、高コレステロール血症（例えば、総コレステロール値が２００ｍｇ／ｄＬ超、２２０ｍｇ／ｄＬ超、２４０ｍｇ／ｄＬ超、２５０ｍｇ／ｄＬ超、または２７５ｍｇ／ｄＬ超）、低ＨＤＬ血清レベル（例えば、４０ｍｇ／ｄＬ未満、４５ｍｇ／ｄＬ未満、または５０ｍｇ／ｄＬ未満）、高ＬＤＬ血清レベル（例えば、１００ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、または１９０ｍｇ／ｄＬ以上）、および高トリグリセリド血症（例えば、空腹時ＴＧレベルが１５０ｍｇ／ｄＬ以上、１７５ｍｇ／ｄＬ以上、２００ｍｇ／ｄＬ以上、３００ｍｇ／ｄＬ以上、４００ｍｇ／ｄＬ以上、または４９９ｍｇ／ｄＬ以上）から選択される要素である。特定の場合では、投与は、食習慣および／または運動の補助である。
【０４１７】
別の実施形態では、本開示は、過体重である対象において体重を減少させる方法を提供する。本方法は、過体重の対象に、有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は、２５ｋｇ／ｍ２以上のボディマス指数（ＢＭＩ）を有する。さらなる実施形態では、対象は、２５ｋｇ／ｍ２〜２９．９ｋｇ／ｍ２、３０ｋｇ／ｍ２〜３９．９ｍｋｇ／ｍ２、２５ｋｇ／ｍ２〜３９．９ｋｇ／ｍ２、または２５ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２、または２７〜４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２または３０ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２）のＢＭＩを有する。ＡＬＫ７結合タンパク質は単独で、または併用療法として投与される。いくつかの実施形態では、投与は、食習慣および／または運動の補助である。
【０４１８】
特定の実施形態では、本開示は、肥満の対象において体重を減少させる方法を提供する。本方法は、対象に、有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は、３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２または３０ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は、４０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は、中心性肥満（例えば、腹部脂肪および／または内臓脂肪を含む腹部の脂肪過多）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、０．８５以上のウェスト／ヒップ外周比（ＷＨＲ）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、周辺性肥満（例えば、臀部の脂肪過多）を有する。ＡＬＫ７結合タンパク質は単独で、または併用療法として投与される。いくつかの実施形態では、投与は、食習慣および／または運動の補助である。
【０４１９】
別の実施形態では、本開示は、肥満、または肥満に関連する疾患もしくは状態を治療および／または改善する方法であって、肥満の対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は、３０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する。さらなる実施形態では、対象は、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２または３０ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は病的肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、４０ｋｇ／ｍ２以上のボディＢＭＩを有する。さらなる実施形態では、対象は、４０ｋｇ／ｍ２〜４５ｋｇ／ｍ２、または４０ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は、２型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、対象は、３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２）のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は、中心性肥満（例えば、腹部脂肪および／または内臓脂肪を含む腹部の脂肪過多）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、０．８５以上のウェスト／ヒップ外周比（ＷＨＲ）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、周辺性肥満（例えば、臀部の脂肪過多）を有する。ＡＬＫ７結合タンパク質は単独で、または併用療法として投与される。いくつかの実施形態では、投与は、食習慣および／または運動の補助である。
【０４２０】
肥満に関連した疾患または状態を治療または予防する方法であって、治療または予防を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法も提供される。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、脂質異常症、高脂血症（総コレステロール値が２４０ｍｇ／ｄＬ超）、高コレステロール血症（例えば、総コレステロール値が２００ｍｇ／ｄＬ超、２２０ｍｇ／ｄＬ超、２４０ｍｇ／ｄＬ超、２５０ｍｇ／ｄＬ超、または２７５ｍｇ／ｄＬ超）、低ＨＤＬ血清レベル（例えば、４０ｍｇ／ｄＬ未満、４５ｍｇ／ｄＬ未満、または５０ｍｇ／ｄＬ未満）、高ＬＤＬ血清レベル（例えば、１００ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、または１９０ｍｇ／ｄＬ以上）、および高トリグリセリド血症（例えば、空腹時ＴＧレベルが１５０ｍｇ／ｄＬ以上、１７５ｍｇ／ｄＬ以上、２００ｍｇ／ｄＬ以上、３００ｍｇ／ｄＬ以上、４００ｍｇ／ｄＬ以上、または４９９ｍｇ／ｄＬ以上）から選択される要素である。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、心血管疾患である。さらなる実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、高血圧症（高血圧）、心筋梗塞、脳卒中、末梢動脈疾患、血圧調節障害、動脈硬化症、うっ血性心不全、アテローム性動脈硬化症、冠動脈心疾患、または微小血管疾患である。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、炎症である。別の実施形態において、治療または予防される疾患または状態は、網膜症、腸疾患、潰瘍性大腸炎、および喘息、炎症（例えば、肝臓の炎症および／または脂肪組織の炎症）からなる群から選択される要素である。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、肝疾患である。特定の実施形態では、治療または予防される肝臓の疾患または状態は、ＮＡＦＬＤである。特定の実施形態では、肝疾患は脂肪肝である。特定の実施形態では、肝疾患は、ＮＡＳＨである。別の実施形態において、治療または予防される疾患または状態は、脂肪性肝炎、脂肪症、線維症、および／または肝硬変の群から選択される要素である。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、白内障、黄斑変性症、閉塞性睡眠時無呼吸、静脈炎、痛風、骨関節炎、胆嚢疾患、腎疾患、肺疾患（例えば、喘息、低換気症候群、または呼吸不全）、および／またはがん（例えば、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、および／または結腸癌、および／またはがん転移（例えば、リンパ転移、血流転移、および／または腫瘍の増殖および浸潤）から選択される要素である。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、感染症である。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、治癒が遅い創傷または治癒しない創傷である。特定の場合では、投与は、食習慣および／または運動の補助である。
【０４２１】
特定の実施形態では、本開示は、肝脂肪を減少させる方法であって、肝脂肪の減少を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は過体重（例えば、前肥満）である。いくつかの実施形態では、対象は、２５ｋｇ／ｍ２以上のボディマス指数（ＢＭＩ）を有する。さらなる実施形態では、対象は、２５ｋｇ／ｍ２〜２９．９ｋｇ／ｍ２、３０ｋｇ／ｍ２〜３９．９ｍｋｇ／ｍ２、２５ｋｇ／ｍ２〜３９．９ｋｇ／ｍ２、または２５ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２または３０ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２）のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は病的肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、４０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する。さらなる実施形態では、対象は、４０ｋｇ／ｍ２〜４５ｋｇ／ｍ２、または４０ｋｇ／ｍ２〜５０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は、中心性肥満（例えば、腹部脂肪および／または内臓脂肪を含む腹部の脂肪過多）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、０．８５以上のウェスト／ヒップ外周比（ＷＨＲ）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、周辺性肥満（例えば、臀部の脂肪過多）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、２型糖尿病を有する。ＡＬＫ７結合タンパク質は単独で、または併用療法として投与される。いくつかの実施形態では、投与は、食習慣および／または運動の補助である。
【０４２２】
別の実施形態では、本開示は、２型糖尿病または糖尿病に関連した疾患もしくは状態を治療、改善、および／または予防する方法であって、２型糖尿病を有するかまたは２型糖尿病を発症するリスクを有する対象に、有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は、３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２）のボディマス指数ＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、対象は、中心性肥満（例えば、腹部脂肪および／または内臓脂肪を含む腹部の脂肪過多）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、０．８５以上のＷＨＲを有する。いくつかの実施形態では、対象は、周辺性肥満（例えば、臀部の脂肪過多）を有する。ＡＬＫ７結合タンパク質は単独で、または併用療法として投与される。いくつかの実施形態では、投与は、食習慣および／または運動の補助である。
【０４２３】
糖尿病に関連した疾患または状態を治療、改善または予防する方法であって、糖尿病を有する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法も提供される。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、脂質異常症、高脂血症（総コレステロール値が２４０ｍｇ／ｄＬ超）、高コレステロール血症（例えば、総コレステロール値が２００ｍｇ／ｄＬ超、２２０ｍｇ／ｄＬ超、２４０ｍｇ／ｄＬ超、２５０ｍｇ／ｄＬ超、または２７５ｍｇ／ｄＬ超）、低ＨＤＬ血清レベル（例えば、４０ｍｇ／ｄＬ未満、４５ｍｇ／ｄＬ未満、または５０ｍｇ／ｄＬ未満）、高ＬＤＬ血清レベル（例えば、１００ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、または１９０ｍｇ／ｄＬ以上）、および高トリグリセリド血症（例えば、空腹時ＴＧレベルが１５０ｍｇ／ｄＬ以上、１７５ｍｇ／ｄＬ以上、２００ｍｇ／ｄＬ以上、３００ｍｇ／ｄＬ以上、４００ｍｇ／ｄＬ以上、または４９９ｍｇ／ｄＬ以上）から選択される要素である。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、心血管疾患である。さらなる実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、高血圧症（高血圧）、心筋梗塞、脳卒中、末梢動脈疾患、血圧調節障害、または動脈硬化症である。特定の実施形態では、治療または予防する疾患または状態は、炎症（例えば、全身性炎症、肝臓の炎症、および脂肪組織の炎症）である。別の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、アテローム性動脈硬化症、網膜症、腸疾患、潰瘍性大腸炎、喘息、肝臓の炎症、および／または脂肪組織の炎症の群から選択される要素である。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、肝疾患である。別の実施形態において、治療または予防される疾患または状態は、脂肪肝疾患、脂肪性肝炎、脂肪症、および／または肝硬変の群から選択される要素である。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、白内障、黄斑変性症、閉塞性睡眠時無呼吸、静脈炎、痛風、骨関節炎、胆嚢疾患、高コレステロール、肺疾患（例えば、喘息、および／または低換気症候群）、神経障害、網膜症、血管障害、細小血管障害、腎障害、腎不全、および／またはがん（例えば、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、および／または結腸癌）、ならびにがん転移（例えば、リンパ転移、血流転移、および／または腫瘍の増殖および浸潤）から選択される要素である。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、感染症または治癒しない創傷である。特定の場合では、投与は、食習慣および／または運動の補助である。
【０４２４】
本開示はまた、対象の血中脂質プロファイルを改善するための方法であって、かかる治療を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト（中和）抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法も提供する。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＤＬコレステロールのレベルを低下させるか、またはＨＤＬコレステロールのレベルを増加させるための方法を提供する。特定の実施形態では、対象は脂質異常症である。別の実施形態では、対象は、高い血清脂質（例えば、コレステロール（高コレステロール血症）および／またはトリグリセリド（例えば、高トリグリセリド血症）を有する。特定の実施形態では、対象は、１００ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、または１６０ｍｇ／ｄＬ以上のＬＤＬ−Ｃを有する。特定の実施形態では、対象は、１５０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、１７０ｍｇ／ｄＬ以上のＴＧを有する。特定の実施形態では、対象は、高い血漿インスリンレベルを有する（高インスリン血症、例えば、２０μｇ／ｍｌ超の空腹時インスリンレベルが１００を上回る場合がある）。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＩ型糖尿病を有する。
【０４２５】
特定の実施形態によれば、本開示は、代謝疾患もしくは障害または代謝疾患もしくは障害に関連した状態を治療または予防する方法であって、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を治療または予防を要する対象に投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、治療される代謝疾患、障害、または状態は、高血糖症（例えば、空腹状態で、または経口グルコース負荷試験時のグルコース投与後に１３０ｍｇ／ｄＬ超）である。特定の実施形態では、治療される代謝疾患、障害、または状態は、脂質代謝疾患、障害、または状態である。特定の実施形態では、治療される代謝疾患、障害、または状態は、脂質異常症である。さらなる実施形態では、脂質代謝疾患、障害、または状態は、低ＨＤＬレベル、高ＬＤＬレベル、高トリグリセリドレベル、高脂血症、およびリポタンパク質異常から選択される要素である。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、２００ｍｇ／ｄＬ超、２２０ｍｇ／ｄＬ超、２４０ｍｇ／ｄＬ超、２５０ｍｇ／ｄＬ超、または２７５ｍｇ／ｄＬ超の総コレステロール値を有する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、４０ｍｇ／ｄＬ未満、４５ｍｇ／ｄＬ未満、または５０ｍｇ／ｄＬ未満のＨＤＬの血清レベルを有する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、１００ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ、または１９０ｍｇ／ｄＬ以上のＬＤＬの血清レベルを有する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、１５０ｍｇ／ｄＬ以上、１７５ｍｇ／ｄＬ以上、２００ｍｇ／ｄＬ以上、３００ｍｇ／ｄＬ以上、４００ｍｇ／ｄＬ以上、または４９９ｍｇ／ｄＬ以上の空腹時ＴＧレベルを有する。特定の実施形態では、治療される代謝疾患、障害、または状態は、グルコース代謝疾患、障害、または状態である。さらなる実施形態では、グルコース代謝疾患、障害、または状態は、グルコース不耐性、インスリン抵抗性、耐糖能異常（ＩＧＴ）、空腹時血糖異常から選択される要素である。特定の実施形態では、治療される代謝疾患、障害、または状態は、高尿酸値、ＮＡＦＬＤ、脂肪肝、ＮＡＳＨ、および多嚢胞性卵巣症候群から選択される要素である。いくつかの実施形態では、治療される対象は、高インスリン血症である。特定の実施形態では、治療される対象は、肥満である（例えば、対象は内臓または腹部肥満を有する）。別の実施形態では、治療される対象は、ＩＩ型糖尿病を有する。
【０４２６】
メタボリックシンドロームは、心臓病のリスクを高める障害群を含む状態である。メタボリックシンドロームの主要な要素は、過剰体重、心血管のパラメータ（高血圧、脂質異常症、血中のトリグリセリドの高レベルおよび／またはＨＤＬの低レベル）、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、および／またはインスリン抵抗性である。これらの要素のいくつかを有する対象（すなわちメタボリックシンドローム）は、各要素が危険因子であるものの、心臓病に罹りやすい。本開示はまた、メタボリックシンドロームの上記の要素のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれ以上を治療または予防するための方法であって、治療を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法も提供する。
【０４２７】
本開示はまた、対象のプラダー・ウィリ症候群、またはプラダー・ウィリ症候群に関連した状態を治療、予防、または改善するための組成物および方法であって、かかる治療を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法も提供する。プラダー・ウィリ症候群（別名ラブハート・ウィリ症候群、プラダー症候群、プラダー・ラブハート・ウィリ・ファンコーニ症候群）は、身体の多くの部分を侵す複雑な遺伝的状態である。乳児期では、この状態は弱い筋緊張（緊張低下）、摂食困難、成長障害、および発達の遅れによって特徴付けられる。小児期より、罹患者は強い食欲を生じ、慢性的な過食（過食症）および肥満につながる。プラダー・ウィリ症候群の患者の一部、特に肥満の者は、２型糖尿病（糖尿病の最も一般的なもの）も発症する。プラダー・ウィリ症候群の患者は通常、軽度から中度の知的障害および学習障害を有する。感情の爆発、頑固さ、および皮膚を摘まむなどの強迫行動をはじめとする問題行動が一般的である。睡眠異常が発生する場合もある。この状態のさらなる特徴には、狭い額、アーモンド形の目および三角の口などの独特の顔の特徴、低身長、ならびに小さな手足が挙げられる。プラダー・ウィリ症候群の患者の一部には、異常に白い肌および明るい色の毛髪を有する者もいる。罹患男性および罹患女性のいずれも未発達の生殖器を有する。思春期は遅延するかまたは不完全であり、最も影響が深刻な患者では子供をもつことはできない（不妊症）。その他の関連する症状は、乳児期の筋緊張低下から、眼球協調の欠如、生まれつきアーモンド形の目、強い吸引反射（低い筋緊張による）、弱い鳴き声、起床が困難である、薄い上唇を有するなどの小児期前期の問題行動および乳児期の症状にわたる。成人期の症状としては、例えば、不妊、性腺機能低下、まばらな陰毛、肥満、低緊張（筋緊張低下）、学習障害／ボーダーラインの知的機能、糖尿病を発症しやすい、極度の柔軟性などが挙げられる。現在、疾患は臨床的所見だけでなく遺伝子検査（父系のＰＷＳ／ＡＳ領域の欠失について）によっても診断されている。
【０４２８】
プラダー・ウィリ症候群は一般的に、父系１５番染色体のセグメントの欠失（約７０％の患者）、または母系１５番染色体の２つのコピーを有する（母性片親性ダイソミー；約２５％の患者）ことによって引き起こされる。まれに、プラダー・ウィリ症候群は、転座と呼ばれる染色体再編成により、または父系１５番染色体上の遺伝子を異常にオフする（不活性化する）突然変異または他の欠陥によって引き起こされる場合もある。領域１５ｑ１１−１３（いわゆる、ＰＷＳ／ＡＳ領域）内のプラダー・ウィリ症候群の原因となる１５番染色体上のセグメントは、少なくとも、ＳＮＲＰＮ（ｓｍａｌｌ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ Ｎ）およびネクジン（ＮＤＮ）を含む遺伝子を、ＳＮＯＲＤ６４、ＳＮＯＲＤ１０７、ＳＮＯＲＤ１０８、ならびにＳＮＯＲＤ１０９の２個のコピー、ＳＮＯＲＤ１１６（ＨＢＩＩ−８５）の２９個のコピー、およびＳＮＯＲＤ１１５（ＨＢＩＩ−５２）の４８個のコピーのような小核小体ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）のクラスターとともに含む。母系染色体上の同じ領域の欠失は、アンジェルマン症候群（ＡＳ）を引き起こす。ＰＷＳおよびＡＳは、ヒトにおけるインプリンティング疾患の最初の報告例を表している。
【０４２９】
プラダー・ウィリ症候群には治療法は存在していない。しかしながら、いくつかの治療が、病態の症状を軽減する目的で行われている。対象は乳児期の間に、筋力を向上させるために成長ホルモン（ＧＨ）療法（例えば、ＧＨの毎日注射）のような治療を行う必要がある。音声療法および作業療法も適応される。重度の肥満に起因する閉塞性睡眠時無呼吸のために気道陽圧装置がしばしば必要とされる。症例によっては外科的処置が用いられる。癇癪を軽減し、強迫性を向上させるうえでセロトニンアゴニストが最も高い効果を有することが示されている。
【０４３０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＬＫ７結合タンパク質は、プラダー・ウィリ症候群またはプラダー・ウィリ症候群に関連する状態を治療、予防、または改善するために使用される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントのようなアンタゴニスト抗ＡＬＫ７タンパク質、例えば、本明細書で開示されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントである。
【０４３１】
心血管疾患または状態を治療、予防、または改善する方法であって、かかる治療、予防、または改善を要する対象にＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法もさらに提供される。特定の実施形態では、治療、予防、または改善される心血管疾患または状態は、アテローム性動脈硬化症である。特定の実施形態では、治療、予防、または改善される心血管疾患または状態は、高血圧（例えば、安静状態での血圧が１３０／８０ｍｍＨｇ超、または１４０／９０ｍｍＨｇ超）である。特定の実施形態では、心血管疾患または症状は、末梢血管疾患、細小血管または微小血管合併症、脳卒中、および／または網膜症である。特定の実施形態では、心血管疾患は、アテローム性動脈硬化症（冠状動脈性心疾患）である。
【０４３２】
特定の実施形態では、本開示は、炎症性疾患または状態を治療および／または改善する方法であって、かかる治療および／または改善を要する対象にＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、炎症性疾患または状態は、慢性炎症である。別の実施形態では、炎症性疾患または状態は、脂肪組織の炎症である。別の実施形態では、疾患または状態は、肝臓の炎症である。特定の実施形態では、疾患または状態は、ＮＡＦＬＤである。さらなる実施形態では、疾患または状態は、脂肪肝である。さらなる実施形態では、疾患または状態は、脂肪症（例えば、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ））である。
【０４３３】
本開示はまた、血糖コントロールを改善するための方法であって、治療を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法も提供する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、１３０超、１３５超、１４０超、１４５超、または１５０ｍｇ／ｄＬ超の空腹時血糖値を有する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、食後２時間後に、１８０超、１８５超、１９０超、１９５超、または２００ｍｇ／ｄＬ超の食後血糖値を有する。特定の場合では、投与は、食習慣および／または運動の補助である。投与は、体重を減少させるかまたは肥満を治療することもできる。特定の例では、対象は、２型糖尿病を有する。特定の例では、対象は、２７〜４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の例では、対象は、３０〜３９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する。特定の例では、対象は、少なくとも４０のＢＭＩを有する。特定の例では、対象は、過体重である。特定の例では、対象は肥満である。血糖コントロールの改善は、混合食餌試験などの当該技術分野では周知の技術を用いて評価することができる。
【０４３４】
本開示はまた、対象の高血糖症、または高血糖症に関連した状態を治療、予防、または改善するための組成物および方法であって、かかる治療を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法も提供する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、１３０超、１３５超、１４０超、１４５超、または１５０ｍｇ／ｄＬ超の空腹時血糖値を有する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、食後２時間後に、１８０超、１８５超、１９０超、１９５超、または２００ｍｇ／ｄＬ超の食後血糖値を有する。特定の実施形態では、治療、予防、または改善の結果は、治療前の対象の血清レベルと比較した場合のグルコースの血清レベルの低下、トリグリセリドの血清レベルの低下、インスリンの血清レベルの低下、および／または非エステル化脂肪酸の血清レベルの低下から選択される要素である。特定の実施形態では、治療、予防または改善の結果は、治療前の対象の体温と比較した場合の約０．４℃〜１℃の体温の上昇である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与はまた、対象の体重を減少させる。
【０４３５】
別の実施形態では、本開示は、対象の血漿インスリンレベルを低下させる方法であって、かかる治療を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、１３０超、１３５超、１４０超、１４５超、または１５０ｍｇ／ｄＬ超の空腹時血糖値を有する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、食後２時間後に、１８０超、１８５超、１９０超、１９５超、または２００ｍｇ／ｄＬ超の食後血糖値を有する。特定の実施形態では、対象は、過体重である。特定の実施形態では、対象は肥満である。別の実施形態では、対象は、ＩＩ型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０４３６】
本開示はまた、対象の高血糖症、または高血糖症に関連した状態を治療、予防、または改善するための組成物および方法であって、かかる治療を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法も提供する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、１３０超、１３５超、１４０超、１４５超、または１５０ｍｇ／ｄＬ超の空腹時血糖値を有する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、食後２時間後に、１８０超、１８５超、１９０超、１９５超、または２００ｍｇ／ｄＬ超の食後血糖値を有する。特定の実施形態では、治療、予防、または改善の結果は、治療前の対象の血清レベルと比較した場合のグルコースの血清レベルの低下、トリグリセリドの血清レベルの低下、インスリンの血清レベルの低下、および／または非エステル化脂肪酸の血清レベルの低下から選択される要素である。特定の実施形態では、治療、予防または改善の結果は、治療前の対象の体温と比較した場合の約０．４℃〜１℃の体温の上昇である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与はまた、対象の体重を減少させる。
【０４３７】
別の実施形態では、本開示は、対象の血漿インスリンレベルを低下させる方法であって、かかる治療を要する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、１３０超、１３５超、１４０超、１４５超、または１５０ｍｇ／ｄＬ超の空腹時血糖値を有する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、食後２時間に、１８０超、１８５超、１９０超、１９５超、または２００ｍｇ／ｄＬ超の食後血糖値を有する。特定の実施形態では、対象は、過体重である。特定の実施形態では、対象は肥満である。別の実施形態では、対象は、ＩＩ型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０４３８】
別の実施形態では、本開示は、対象の肝疾患を治療、予防、または改善する方法であって、肝疾患を有する対象に有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、対象は肝臓の炎症を有する。特定の実施形態では、対象はＮＡＦＬＤを有する。一実施形態では、対象は脂肪肝を有する。別の実施形態では、対象は、ＮＡＳＨを有する。特定の実施形態では、治療、予防または改善される肝疾患は、線維症、瘢痕化、肝硬変または肝不全である。別の実施形態では、治療、予防、または改善される肝疾患は、肝癌である。特定の実施形態では、対象は、過体重である。別の実施形態では、対象は肥満である。別の実施形態では、対象は、ＩＩ型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、本明細書に開示されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
【０４３９】
さらなる実施形態では、本開示は、がんまたはがんに関連する状態を治療および／または改善する方法であって、かかる治療および／または改善を要する対象にＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメント）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、対象は、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在化骨髄腫、または髄外性骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、胃癌、子宮癌、または結腸癌から選択されるがんを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、リンパ転移、血流転移、腫瘍増殖、または腫瘍浸潤を治療または予防するために投与される。
【０４４０】
特定の実施形態では、本開示は、がんを治療する方法であって、ＡＬＫ７を発現しているがん細胞、腫瘍関連間質細胞、または内皮細胞を、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）と接触させることを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、がん細胞は、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在化骨髄腫、または髄外性骨髄腫）、卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、胃癌、子宮癌、および／または結腸癌細胞である。いくつかの実施形態では、接触される細胞は、がん系統である。いくつかの実施形態では、癌細胞は、インビボで接触させられる。
【０４４１】
特定の実施形態では、本開示は、脂肪分解を増加させる方法であって、白色脂肪細胞または脂肪組織を、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）と接触させることを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は、脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪細胞における脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質は脂肪分解アッセイにおける脂肪分解を５％〜１００％、１０％〜８０％、または１０％〜６０％増加させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、およびＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、本明細書で提供される抗体を含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、白色脂肪細胞または脂肪組織はインビトロで接触させられる。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織はインビボで接触させられる。特定の実施形態では、本方法は、インビボ、例えば哺乳動物の対象（例えば動物モデル）で行われる。さらなる実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、本方法は、グリセロール産生の増加をもたらす。さらなる実施形態では、本方法は、脂肪細胞培養中でグリセロールおよび／または遊離脂肪酸の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、本方法は、脂肪細胞または組織のトリグリセリド（ＴＧ）含量の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、本方法は、対象の血漿ＴＧレベルの減少をもたらす。
【０４４２】
別の実施形態では、本開示は、脂肪細胞または組織におけるアドレナリン作動性受容体β（ＡＤＲＢ）によるシグナル伝達を増加させる方法を提供する。本方法は、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織を、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）とＡＤＲＢシグナル伝達を増加させるのに充分な量で接触させることを含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、本明細書で提供される抗体を含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織はインビトロで接触させられる。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織はインビボで接触させられる。特定の実施形態では、本方法は、インビボ、例えば哺乳動物の対象（例えば動物モデル）で行われる。さらなる実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、本方法は、グリセロール産生の増加をもたらす。さらなる実施形態では、本方法は、脂肪細胞培養中でグリセロールおよび／または遊離脂肪酸の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、本方法は、脂肪細胞または組織中のＴＧ含量の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、本方法は、対象の血漿ＴＧレベルの減少をもたらす。いくつかの実施形態では、本方法は、栄養過負荷時の脂肪細胞または脂肪組織におけるＡＤＲＢシグナル伝達の増加をもたらす。
【０４４３】
別の実施形態では、本開示は、脂肪細胞または脂肪組織（例えば、分化した白色脂肪細胞）におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）によるシグナル伝達を減少させる方法を提供する。本方法は、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織を、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）とＰＰＡＲγ活性を減少させるのに有効な量で接触させることを含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、本明細書で提供される抗体を含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織はインビトロで接触させられる。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織はインビボで接触させられる。特定の実施形態では、本方法は、インビボ、例えば哺乳動物の対象（例えば動物モデル）で行われる。さらなる実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、本方法は、グリセロール産生の増加をもたらす。さらなる実施形態では、本方法は、脂肪細胞培養中でグリセロールおよび／または遊離脂肪酸の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、本方法は、脂肪細胞または組織中のＴＧ含量の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、本方法は、対象の血漿ＴＧレベルの減少をもたらす。
【０４４４】
別の実施形態では、本開示は、脂肪細胞または脂肪組織（例えば、分化した白色脂肪細胞）におけるインスリン抵抗性を減少させる方法を提供する。本方法は、脂肪細胞または脂肪組織を、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）とインスリン抵抗性を減少させるのに有効な量で接触させることを含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、本明細書で提供される抗体を含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織はインビトロで接触させられる。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織はインビボで接触させられる。特定の実施形態では、本方法は、インビボ、例えば哺乳動物の対象（例えば動物モデル）で行われる。さらなる実施形態では、対象は、ヒトである。
【０４４５】
別の実施形態では、本開示は、脂肪細胞または組織の代謝速度を増加させる方法を提供する。本方法は、脂肪細胞または脂肪組織を、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）と脂肪細胞または組織の代謝率を増加させるのに有効な量で接触させることを含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、本明細書で提供される抗体を含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ａに開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と、ＡＬＫ７に対する結合について交差遮断または競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１Ｂまたは表３に開示されるＶＨとＶＬのペアを有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織はインビトロで接触させられる。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織はインビボで接触させられる。特定の実施形態では、本方法は、インビボ、例えば哺乳動物の対象（例えば動物モデル）で行われる。さらなる実施形態では、対象は、ヒトである。
【０４４６】
本開示は、肥満（例えば、腹部または内臓肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリック症候群および他の代謝疾患または状態；例えば、低ＨＤＬレベル、高ＬＤＬレベル、高脂血症、高トリグリセリド血症または脂質異常症などの脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド減少；炎症（例えば、肝臓の炎症および／または脂肪組織の炎症）、脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、高ＬＤＬレベルおよび／または高コレステロール血症）；冠状動脈性心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化症を含む心疾患などの心血管疾患；動脈硬化症および／または高血圧症；シンドロームＸ；血管再狭窄；神経障害；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸不全、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値の上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚の濃い染み）；および／またはがん（例えば、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在化骨髄腫、または髄外性骨髄腫）、卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、胃癌、子宮癌、または結腸癌）；および／または、上記の疾患または状態の１つ以上、および／または過体重（例えば、２５ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩ）もしくは過剰な体脂肪に関連した他の疾患／状態から選択される疾患、障害、または状態などの、ＡＬＫ７介在性疾患および／または状態を有するかまたはかかる疾患および／または状態を発症するリスクを有する対象に、治療有効量のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合抗体フラグメント）を単独で、または１つ以上のさらなる療法（例えば、１つ以上のさらなる治療剤）と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
【０４４７】
また、臨床試験方法の一環として（例えば、所定の治療レジメンの有効性を判定するため）血液または組織中のタンパク質レベル（例えば、ＡＬＫ７のレベル）の診断モニタリングのための本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質の使用も提供される。例えば、検出は、ＡＬＫ７結合タンパク質を検出可能な物質と結合させることによって容易に行うことができる。検出可能な物質の例としては、各種の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、および／または放射性物質が挙げられる。適当な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ、適当な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ、適当な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられ、発光物質の例としては、ルミノールが挙げられ、生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンが挙げられ、適当な放射性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、または３Ｈが挙げられる。
【０４４８】
医薬組成物および投与方法
ＡＬＫ７結合タンパク質を調製する方法、およびＡＬＫ７結合タンパク質の投与を要する対象に投与する方法は、当業者には周知のものであるか、または当業者によって容易に決定されるものである。ＡＬＫ７結合タンパク質の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入による、または局所とすることができる。非経口なる用語には、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、眼内、皮下、直腸内、または膣内投与が含まれる。これらすべての投与形態は明らかに本開示の範囲内にあると考えられるが、投与形態の別の例として、注射液、特に、静脈内または動脈内注射または点滴用の溶液がある。通常、適当な医薬組成物は、緩衝液（例えば、酢酸塩、リン酸塩またはクエン酸緩衝液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、場合により、安定化剤（例えば、ヒトアルブミン）などを含むことができる。本明細書の教示に適合する他の方法では、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質は、臓器および／または線維症もしくは腫瘍の部位に直接送達することができ、それによって治療剤への疾患組織の曝露を増大させる。特定の実施形態では、投与は、例えば吸入または鼻腔内投与により、気道に対して直接行われる。
【０４４９】
本明細書で述べるように、ＡＬＫ７結合タンパク質は、例えば、肥満、糖尿病、代謝性疾患、脂質異常症、心血管疾患、２型糖尿病、炎症、または心血管疾患、肺疾患、脂肪肝疾患、神経疾患、および肝疾患、または腎疾患、およびおよび／がんなどのＡＬＫ７介在性疾患および状態のインビボ治療における薬学的な有効量で投与することができる。この点に関し、開示されるＡＬＫ７結合タンパク質は、活性剤の投与を促進し、その安定性を高めるように製剤化することができる点は認識されよう。本開示に基づく医薬組成物は、生理食塩水、非毒性緩衝液、防腐剤などの薬学的に許容される、非毒性の無菌担体を含むことができる。本出願の目的では、複合体化されているかまたは複合体化されていない、ＡＬＫ７結合タンパク質の薬学的な有効量とは、ＡＬＫ７への効果的な結合を得るうえで、また、例えば、疾患もしくは状態の症状を改善するか、または物質もしくは細胞を検出する、といった利益を得るうえで充分な量を意味する。本明細書に開示される治療方法での使用に適した製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．）１６ｔｈ  ｅｄ．（１９８０）に記載されている。
【０４５０】
本明細書で提供される特定の医薬組成物は、例えば、カプセル剤、錠剤、水性懸濁液または水溶液を含む、許容される剤形で経口投与することができる。特定の医薬組成物はまた、鼻腔エアロゾルまたは吸入によって投与することもできる。かかる組成物は、ベンジルアルコールもしくは他の適当な防腐剤、バイオアベイラビリティーを高めるための吸収促進剤、フッ化炭素、および/または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を使用して、生理食塩水中の溶液として調製することができる。
【０４５１】
担体材料と組み合わせて単回剤形を与えることができるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合する抗体）の量は、治療される対象、および特定の投与様式に応じて異なる。組成物は、単回用量、複数回用量として、または注入液として確立された期間にわたって投与することができる。投与レジメンは、最適な所望の反応（例えば、治療的または予防的反応）が得られるように調整することもできる。
【０４５２】
本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質は、治療効果を生じるだけの充分な量で、上記に述べた治療方法に従って、ヒトまたは他の対象に投与することができる。本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質は、周知の方法に従ってＡＬＫ７結合タンパク質を従来の薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わせることにより調製された従来の剤形でかかるヒトまたは他の動物に投与することができる。薬学的に許容される担体または希釈剤の形態および特性は、それらが組み合わされる有効成分の量、投与経路および他の周知の変量によって決定することができる。１つ以上の異なるＡＬＫ７結合タンパク質を含むカクテルを使用することもできる。
【０４５３】
肥満、糖尿病、代謝性疾患、脂質異常症、心血管疾患、２型糖尿病、炎症、または心血管疾患、肺疾患、脂肪肝疾患、神経疾患、および肝疾患、または腎疾患および／またはがんなどのＡＬＫ７介在性疾患または状態を治療するためのＡＬＫ７結合組成物の治療有効用量は、投与の手段、標的部位、対象の生理学的状態、対象がヒトであるか動物であるか、投与される他の薬剤、および治療が予防的であるか治療的であるか、をはじめとする多くの異なる因子に応じて異なる。通常、対象はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物を治療することもできる。当業者に公知の通常の方法を用いて治療用量を滴定することにより安全性および有効性を最適化することができる。
【０４５４】
ＡＬＫ７結合タンパク質の投与による特定の疾患または状態の症状を改善するとは、ＡＬＫ７結合タンパク質の投与に起因または関連し得る永久的であるか一時的であるか、持続性または一過性なものであるかによらない、あらゆる軽減を指す。
【０４５５】
本開示はまた、肥満、糖尿病、代謝性疾患、脂質異常症、心血管疾患、２型糖尿病、炎症、または心血管疾患、肺疾患、脂肪肝疾患、神経疾患、および肝疾患、または腎疾患および／またはがんを例えば、治療、予防、または改善するための薬剤の製造における抗ＡＬＫ７抗体などのＡＬＫ７結合タンパク質の使用も提供する。
【０４５６】
併用療法
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの抗ＡＬＫ７抗体、またはそれらの変異体もしくは誘導体）は、１つ以上の他の療法と併せて投与される。かかる療法には、さらなる治療剤だけでなく、他の医学的介入も含まれる。本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質と併せて投与することが可能な例示的な治療剤としては、これらに限定されるものではないが、抗ＳＤＩ線維化剤、コルチコステロイド、抗炎症剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗薬、利尿薬、抗糖尿病薬、免疫抑制剤、化学療法剤、代謝拮抗剤、および／または免疫調節剤が挙げられる。さまざまな実施形態において、ＡＬＫ７結合タンパク質は、外科的切除／除去手術の前、その間、および／またはその後で対象に投与される。
【０４５７】
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの抗ＡＬＫ７抗体、またはそれらの変異体もしくは誘導体）は、１つ以上の（ａ）ビグアニド（例えば、ブホルミン、メトホルミン、フェンホルミン）、（ｂ）インスリン、（ｃ）ソマトスタチン、（ｄ）α−グルコシダーゼ阻害剤（例えば、ボグリボース、ミグリトール、アカルボース）、（ｅ）ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、例えば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、サクサグリプチン（例えば、米国特許第６，６９９，８７１Ｂ１号に開示される）（ｆ）ＬＸＲ調節剤、（ｇ）インスリン分泌促進物質（ 例えば、アセトヘキサミド、カルブタミド、クロルプロパミド、グリボルヌリド、グリクラジド、グリメピリド、グリピジド、グリキドン、グリソキセピド、グリブリド、グリヘキサミド、グリピナミド、フェンブタミド、トラザミド、トルブタミド、トルシクラミド、ナテグリニドおよび／またはレパグリニド）、（ｋ）ＣＢ１阻害剤、例えばリモナバント、トラナバント、および国際出願公開第ＷＯ０３／０７７８４７Ａ２号および同第ＷＯ０５／０００８０９Ａ１号に開示される化合物、または（ｉ）シブトラミン、トピラメート、オルリスタット、キネクサ、メバスタチン、シンバスタチン、エゼチミブ、アトルバスタチン、ナルトレキソン、ブプロピオン、フェンテルミン、ヒドロクロロチアジド、またはロサルタンと併せて投与される。
【０４５８】
診断
本開示はまた、ＡＬＫ７介在性疾患および状態（例えば、肥満（例えば、腹部または内臓肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリック症候群および／または他の代謝疾患または状態；例えば、低ＨＤＬレベル、高ＬＤＬレベル、高脂血症、高トリグリセリド血症または脂質異常症などの脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド減少；炎症（例えば、肝臓の炎症および／または脂肪組織の炎症）、脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、高ＬＤＬレベルおよび／または高コレステロール血症）；冠状動脈性心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化症を含む心疾患などの心血管疾患；動脈硬化症および／または高血圧症；シンドロームＸ；血管再狭窄；神経障害；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸不全、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値の上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚の濃い染み）；および／またはがん（例えば、骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、局在化骨髄腫、または髄外性骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎癌、膵癌、胃癌、子宮癌および結腸癌）；および／または、上記の疾患または状態の１つ以上、または過剰な体脂肪に関連した他の疾患／状態）の診断において有用な診断方法であって、個体から得た組織または体液中のＡＬＫ７タンパク質の発現レベルを測定することと、測定された発現レベルと正常組織または体液中の標準的なＡＬＫ７発現レベルと比較することと、を含み、標準と比較したＡＬＫ７発現レベルの増加が、本明細書で提供される完全長の抗ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメントなどの本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質によって治療可能な疾患を示す、診断方法も提供する。
【０４５９】
抗ＡＬＫ７抗体（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメント、ならびにそれらの変異体および誘導体）などのＡＬＫ７結合タンパク質を、当該技術分野では周知の古典的な免疫組織学的方法を用いて生物学的試料中のＡＬＫ７レベルをアッセイするために用いることができる（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８５）；Ｊａｌｋａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−３０９６（１９８７）を参照）。ＡＬＫ７タンパク質の発現を検出するために有用な他の抗体ベースの方法としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのイムノアッセイ、免疫沈降法、またはウエスタンブロットが挙げられる。
【０４６０】
「ＡＬＫ７タンパク質の発現レベルをアッセイする」とは、第１の生物学的試料中のＡＬＫ７タンパク質のレベルを直接的（例えば、絶対タンパク質レベルを測定または推定することにより）または相対的に（例えば、第２の生物学的試料中の疾患に関連したポリペプチドレベルと比較することにより）、定性的または定量的に測定または推定することを意味する。第１の生物学的試料中のＡＬＫ７タンパク質発現レベルを測定または推定し、疾患を有さない個体から得られた第２の生物学的試料から得られるかまたは疾患を有さない個体の集団から得られたレベルを平均化することによって決定される標準ＡＬＫ７タンパク質レベルと比較することができる。当該技術分野で理解されるように、いったん「標準」ＡＬＫ７タンパク質レベルが分かれば、これを比較を行うための標準として繰り返し使用することができる。
【０４６１】
「生物学的試料」とは個体、細胞株、組織培養物、またはＡＬＫ７を発現している可能性のある他の細胞源から得られる任意の生物学的試料を意味する。哺乳動物から組織生検および体液を得るための方法は、当該技術分野では周知のものである。
【０４６２】
ＡＬＫ７結合タンパク質を含むキット
本開示は、適当なパッケージング内のＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体およびＡＬＫ７結合抗体フラグメント、ならびにそれらの変異体および誘導体などの、ＡＬＫ７に特異的に結合する抗体）および資料を含み、本明細書に記載される方法を実施するために使用することができるキットをさらに提供する。資料は、以下の情報、すなわち、使用説明書、臨床研究の検討内容、副作用の一覧、科学文献の参照、添付文書、臨床試験の結果、および／またはこれらの要約などのいずれかを含むことができる。資料は、組成物の活性および／または効果を示すか、または確立することができ、および／または用量、投与法、副作用、薬物相互作用または医療従事者にとって有用な他の情報を記載することができる。かかる情報は、例えば、インビボモデルを含む実験動物を用いた研究、および／またはヒトの臨床試験に基づく研究などのさまざまな研究の結果に基づいたものとすることができる。キットはさらに、別の療法（例えば、別の薬剤）および／または他の療法（例えば、他の薬剤）に関する情報を提供する役割を果たす、上記にのべたもののような資料をさらに含んでもよい。
【０４６３】
特定の実施形態では、キットは、少なくとも１つの精製されたＡＬＫ７結合タンパク質を１つ以上の容器中に含む。いくつかの実施形態では、キットは、すべての対照、アッセイを行うための指示書、および／または分析および結果の表示を行うためのあらゆる必要なソフトウェアをはじめとする、検出アッセイを行ううえで必要および／または充分な要素のすべてを含む。
【０４６４】
イムノアッセイ
ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合する抗体、およびＡＬＫ７に特異的に結合する抗体のＡＣＴＲＩＩＡ／Ｂ結合フラグメント、ならびにそれらの変異体、または誘導体）は、当該技術分野では周知の任意の方法によって免疫特異的な結合についてアッセイすることができる。使用可能なイムノアッセイとしては、これらに限定されるものではないが、例えばウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ（ＲＥＡ）、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光イムノアッセイ、またはプロテインＡイムノアッセイなどの方法を用いた競合アッセイまたは非競合アッセイシステムが挙げられる。かかるアッセイは常法であり、当該技術分野では周知のものである（例えば、本明細書に参照によりその全容を援用するところのＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ，（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ）Ｖｏｌ．１を参照）。
【０４６５】
本明細書で提供されるＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、ＡＬＫ７に特異的に結合する抗体、およびＡＬＫ７に特異的に結合する抗体のＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）結合フラグメント、ならびにそれらの変異体、または誘導体）は、免疫蛍光法、免疫電子顕微鏡法または非免疫学的アッセイにおけるように組織学的に用いることで、ＡＬＫ７またはその保存された変異体もしくはペプチドフラグメントのインサイチュー検出を行うことができる。インサイチュー検出は、当該技術分野では周知の方法に従って行うことができる。当業者であれば、通常の実験を用いることによってそれぞれの決定を行ううえで有効かつ最適なアッセイ条件を決定することができるであろう。ＡＬＫ７結合タンパク質の結合特性を決定するのに適した方法は、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野では周知のものである。このような動態分析用に設計された機器およびソフトウェアが市販されている（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（登録商標）ソフトウェア、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）ソフトウェア、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）。
【０４６６】
特に断らない限り、本開示の実施に当たっては、当業者の技能の範囲内である、細胞生物学、細胞培養法、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ法、および免疫学の従来の技術を用いている。
【０４６７】
以下の実施例は、例示のために示すものであって、限定のために示すものではない。
【実施例】
【０４６８】
＊＊＊
具体的な実施形態の上記の説明は本開示の一般的な性質を余すところなく示しているため、他者は、当業者の技能の範囲内の知識を適用することで、過度の実験を行うことなく、本開示の一般的概念から逸脱せずに、かかる具体的な実施形態を容易に改変し、および／またはさまざまな用途に適合させることができる。したがって、そのような適合および改変は、本明細書に示される教示および助言に基づき、開示される実施形態の均等物の意味および範囲内のものとする。本明細書における語句または用語は、説明を目的としたものであって、限定を目的とするものではなく、本明細書における語句または用語は本明細書の教示および助言を考慮することで当業者によって理解されるものであることを理解されたい。
【０４６９】
本開示の幅および範囲は、上記の例示的な実施形態のいずれによっても限定されるべきでなく、下記の特許請求の範囲およびそれらの均等物のみに従って定義されるべきものである。
【０４７０】
本出願に引用されるすべての刊行物、特許、特許出願、および／または他の文書は、恰もそれぞれの個別の刊行物、特許、特許出願、および／または他の文書があらゆる目的で参照によって個別に援用されていることが示されているものと同様にして、あらゆる目的でそれらの全容を参照により援用するものである。
【０４７１】
実施例１．ＡＬＫ７結合抗体の選択、特性評価、および産生
複数ラウンドの選択手順を用いて下記に詳述する高い親和性でＡＬＫ７に結合するヒトＩｇＧ抗体を選択した。
【０４７２】
材料および方法
ヒトＡＬＫ７−Ｆｃ含有タンパク質を、ＰｉｅｒｃｅからのＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔを使用してビオチン化した。ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２κ−ＦＩＴＣ （ＬＣ−ＦＩＴＣ）、Ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ−ＰＥ（ＥＡ−ＰＥ）、およびストレプトアビジン−６３３（ＳＡ−６３３）を、それぞれ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、ＳｉｇｍａおよびＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓより得た。ストレプトアビジンマイクロビーズおよびＭＡＣＳ  ＬＣ分離カラムをＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃより購入した。
【０４７３】
各実験は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００／Ｔ２００バイオセンサー（Ｂｉａｃｏｒｅ／ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を２５℃および３７℃で用いて行った。ＡＬＫ７抗体をカスタムメイドのＦＡＢチップ上に捕捉した。ＡＬＫ７−Ｆｃ含有タンパク質の濃度系列を、５０μｌ／ｍｌの流速でフローセルに注入した。反応速度定数を得るため、補正したデータをＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて１：１の相互作用モデルにフィッティングした。平衡結合定数ＫＤを結合速度定数の比ｋｄ／ｋａにより決定した。
【０４７４】
それぞれ約１０９の多様性を有する８つのナイーブヒト合成酵母のライブラリーを従来記載されているようにして増殖させた（例えば、ＷＯ０９／０３６３７９、ＷＯ１０／１０５２５６、ＷＯ１２／００９５６８を参照）。選択の最初の２ラウンドでは、記載されるように、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＭＡＣシステムを用いた磁気ビーズ分取法を行った（例えば、Ｓｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ  ２８６（１−２）：１４１−１５３（２００４））を参照）。簡単に述べると、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリー)を、ＦＡＣＳ洗浄バッファー（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）／０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））中、室温で１５分間、３ｍｌの１０ｎＭビオチン化ＡＬＫ７−Ｆｃ含有タンパク質とインキュベートした。５０ｍｌの氷冷した洗浄バッファーで１回洗浄した後、細胞ペレットを４０ｍＬの洗浄バッファー中に再懸濁し、ストレプトアビジンマイクロビーズ（５００μｌ）を酵母に加え、４℃で１５分間インキュベートした。次いで、酵母をペレット化し、５ｍＬの洗浄バッファー中に再懸濁し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＬＳカラムにロードした。５ｍＬをロードした後、カラムを３ｍｌのＦＡＣＳ洗浄バッファーで３回洗浄した。次いで、カラムを磁場から取り出し、酵母を増殖培地５ｍＬで溶出してから一晩増殖させた。フローサイトメトリーを用いて分取の次のラウンドを行った。約１×１０８個の酵母をペレット化し、洗浄バッファーで３回洗浄し、平衡条件下、室温で減少する濃度のビオチン化ＡＬＫ７−Ｆｃ含有タンパク質（１００〜１ｎＭ）とインキュベートした。次いで、酵母を２回洗浄し、ＬＣ−ＦＩＴＣ（１：１００に希釈）およびＳＡ−６３３（１：５００に希釈）またはＥＡ−ＰＥ（１：５０に希釈）二次試薬のいずれかにより、４°Ｃで１５分間染色した。氷冷した洗浄バッファーで２回洗浄した後、細胞ペレットを０．４ｍＬの洗浄バッファー中に再懸濁し、ストレーナーでキャップした分取チューブに移した。ＦＡＣＳ  ＡＲＩＡソーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて分取を行い、分取ゲートをバックグラウンドコントロールに対して特異的なバインダーを選択するように割り当てた。ＣＨＯ細胞から得た可溶性膜タンパク質を用いた続く選択のラウンドを用いて非特異的な試薬バインダーの数を減らし（例えば、ＷＯ１４／１７９３６３およびＸｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２６（１０）：６６３−６７０（２０１３）参照）、ＡＬＫ７−Ｆｃ含有タンパク質を用いてＡＬＫ７に対して向上した親和性を有するバインダーを特定した。分取の最後のラウンドの後、酵母をプレーティングし、特性評価を行い、親和性成熟させるクローンの候補とするために個々のコロニーを選んだ。
【０４７５】
抗体の産生および精製
さらなる特徴評価を行ううえで充分な量の選択された抗体を産生させるため、酵母クローンを飽和状態まで増殖させ、次いで振盪しながら３０℃で４８時間誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット化し、上清を回収して精製を行った。プロテインＡカラムを用いてＩｇＧを精製し、酢酸（ｐＨ２．０）で溶出した。パパイン消化によってＦａｂフラグメントを生成し、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）で精製した。
【０４７６】
ＦｏｒｔｅＢｉｏによるＫ Ｄ測定
選択された抗体のＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を概ね従来記載されているようにして行った（例えば、Ｅｓｔｅｐ ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｂｓ，５（２）：２７０−２７８（２０１３）を参照）。簡単に述べると、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定は、ＩｇＧをＡＨＱセンサーにオンラインでロードすることにより行った。各センサーをアッセイバッファー中、オフラインで３０分間平衡化し、その後、オンラインで６０秒間監視してベースラインを確立した。ＩｇＧをロードしたセンサーを５分間、１００ｎＭの抗原に暴露し、その後、５分間アッセイバッファーに移して解離速度測定を行った。１：１結合モデルを用いて動態を分析した。
【０４７７】
Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ３８４エピトープビニング／リガンドブロッキング
標準的なサンドイッチフォーマットの交差ブロッキングアッセイを用いて選択された抗体のエピトープビニング／リガンドブロッキングを行った。コントロール抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサーにロードし、センサー上の占有されていないＦｃ結合部位を無関係なヒトＩｇＧ１抗体でブロッキングした。次いで、各センサーを１００ｎＭの標的抗原、続いて第２の抗標的抗原またはリガンドに曝露した。ＦｏｒｔｅＢｉｏのＤａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ７．０を使用してデータを処理した。抗原結合後の第２の抗体またはリガンドによるさらなる結合は占有されていないエピトープを示し(非競合物質)、そのような結合がない場合はエピトープがブロックされたこと（競合物質またはリガンドのブロッキング）を示す。
【０４７８】
サイズ排除クロマトグラフィー
ＴＳＫｇｅｌ  ＳｕｐｅｒＳＷ  ｍＡｂ  ＨＴＰカラム（２２８５５）を、６分／ランのサイクルタイムを用い、０．４ｍＬ／分で酵母により産生されたｍＡｂの高速ＳＥＣ分析に使用した。２００ｍＭのリン酸ナトリウムおよび２５０ｍＭの塩化ナトリウムを移動相として使用した。
【０４７９】
動的走査蛍光光度法
１０μｌの２０ｘＳｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅを２０μＬの０．２〜１ｍｇ／ｍＬのｍＡｂまたはＦａｂ溶液に加えた。ＲＴ−ＰＣＲ装置（ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６  ＲＴ  ＰＣＲ）を使用して、各温度で２分間の平衡化を行いながら０．５℃刻みに４０℃〜９５℃まで試料プレートの温度を上昇させた。生データのマイナスの一次導関数を用いてＴｍを抽出した。
【０４８０】
実施例２．ＡＬＫ７結合抗体の特性評価
前述の例に従って生成された例示的なＡＬＫ７結合タンパク質を、配列、ＳＰＲ、および細胞を用いた脂肪分解阻害アッセイ分析によりさらに特性評価した。
【０４８１】
実施例１に記載の方法に従って生成された例示的なＡＬＫ７結合抗体の配列を、表１Ａおよび表１Ｂに示す（例示的なＣＤＲ配列は下線で示される）。
【０４８２】
【表１Ａ】
2021500895.tif 000036
2021500895.tif 000037
2021500895.tif 000038
2021500895.tif 000039
【０４８３】
【表１Ｂ】
2021500895.tif 000040
2021500895.tif 000041
2021500895.tif 000042
【０４８４】
ＳＰＲ（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）ベースの分析）および細胞ベースの脂肪分解阻害アッセイを用いて、表１Ａ、表１Ｂ、または表３に記載されるＡＬＫ７結合タンパク質の例示的なセットのより完全な特性評価を行った。
【０４８５】
表面プラズモン共鳴分析−
各実験は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００／Ｔ２００バイオセンサー（Ｂｉａｃｏｒｅ／ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を２５℃および３７℃で用いて行った。ＡＬＫ７抗体をカスタムメイドのＦＡＢチップ上に捕捉した。ＡＬＫ７−Ｆｃ含有タンパク質の濃度系列を、５０μｌ／ｍｌの流速でフローセルに注入した。反応速度定数を得るため、補正したデータをＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて１：１の相互作用モデルにフィッティングした。平衡結合定数ＫＤを結合速度定数の比ｋｄ／ｋａにより決定した。
【０４８６】
脂肪分解阻害アッセイ
脂肪分解は、細胞内でのトリグリセリドのグリセロールと遊離脂肪酸への加水分解である。グリセロールと遊離脂肪酸は、その後、血流または培地中に放出される。脂肪分解は基本的にすべての細胞で起きるが白色および褐色脂肪細胞に最も多く見られる。３Ｔ３−Ｌ１細胞（ＡＴＣＣにより供給される；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＬ−１７３（商標））を、１０％ウシ血清（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ：１６１７０−０６０）を含んだダルベッコ改変イーグル培地（ＡＴＣＣ：ＡＴＣＣ（登録商標）３０−２００２（商標））中でコンフルエンスに達するまで増殖させた。分化を誘導するため、２日後に、コンフルエンスに達した後の培地を、１０％ウシ胎児血清（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ：１００８２１４７）、デキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ、Ｄ８８９３）、ＩＢＭＸ（Ｓｉｇｍａ、Ｉ７０１８）、およびインスリン（Ｓｉｇｍａ、Ｉ０５１６）を含んだ新鮮なダルベッコ改変イーグル培地（ＡＴＣＣ：ＡＴＣＣ（登録商標）３０−２００２（商標））に２週間、置き換えた。顕微鏡により測定される細胞への脂質液滴の蓄積を用いて、成熟脂肪細胞への完全な分化を確認した。脂肪細胞を、溶媒（ＰＢＳ）、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）で一晩処理するか、またはアクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）およびＡＬＫ７抗体（５ μｇ／ｍｌ）で同時処理した。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、脂肪分解アッセイバッファーとインキュベートした（Ａｂｃａｍ社により供給されるａｂ１８５４３３）。脂肪分解アッセイバッファーを３時間後に回収し、グリセロール濃度を製造業者の指示に従って測定した（Ａｂｃａｍ：ａｂ１８５４３３）。
【０４８７】
ＳＰＲの結果を表２Ａおよび２Ｂに示し、例示的なＡＬＫ７結合タンパク質についての細胞ベースの脂肪分解阻害アッセイの結果を表２Ａに示す。
【０４８８】
例示的なＡＬＫ７結合タンパク質についてのＳＰＲおよび細胞ベースの脂肪分解阻害アッセイの結果を表３に示す。
【０４８９】
【表２】
2021500895.tif 000043
【０４９０】
ＡＬＫ７シグナル伝達は脂肪分解を抑制し、その結果、脂肪細胞および脂肪組織における脂肪蓄積につながるものと考えられている。脂肪分解のＡＬＫ７介在性阻害を妨げる抗体Ｈ０３、Ｄ０４、Ｃ０２、およびＧ０４の能力を細胞ベースの脂肪分解阻害アッセイで評価した。抗体Ｈ０３、Ｄ０４、Ｃ０２、およびＧ０４は、それぞれ、脂肪分解活性を９１．８％、１０９．２％、５５．８％、４５．８％増加させた。したがって、これらのデータは、ＡＬＫ７抗体を用いて脂肪分解のＡＬＫ７介在性抑制をアンタゴナイズし、それにより、脂肪細胞内での脂肪酸の分解を増加させることができることを示している。以上を総合すると、これらのデータは、ＡＬＫ７抗体を、例えば、肥満、糖尿病、インスリン抵抗性、メタボリックシンドローム、脂肪肝疾患および他の代謝疾患または状態を含む、細胞、特に脂肪細胞（ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ）（脂肪細胞（ａｄｉｐｏｓｅ  ｃｅｌｌｓ））における低い脂肪分解活性および／または過剰な脂肪酸の蓄積に関連するさまざまな障害または状態の治療に使用することができることを示す。
【０４９１】
ヒトＡＬＫ７（配列番号８５）およびラットＡＬＫ７（配列番号８６）の細胞外ドメインは、９７％の配列同一性を共有する。抗体Ｈ０３、Ｇ０４の結合。Ｃ０２およびＤ０４のヒトＡＬＫ７およびラットＡＬＫ７への結合が、ＳＰＲを用いて測定されている。抗体Ｈ０３、Ｄ０４、Ｋ０１、およびＬ０１は、ヒトＡＬＫ７およびラットＡＬＫ７の両方に結合する。Ｆ０３およびＣ０２はヒトＡＬＫ７のみに結合した。Ｊ０１はラットＡＬＫ７のみに結合した。
【０４９２】
実施例３．ＡＬＫ７抗体の結合最適化
ナイーブクローンの結合最適化を、軽鎖の多様化、ＣＤＲＨおよび／ＣＤＲＨ２の多様化、ならびにＶＨおよびＶＬの順次の変異誘発を行うこと、の３つの成熟化の戦略を用いて行った。
【０４９３】
軽鎖の多様化：重鎖プラスミドはナイーブ出力を抽出し（上述）、１×１０６の多様性を有する軽鎖ライブラリーに形質転換した。各ラウンドでは、１０ｎＭもしくは１ｎＭのビオチン化ＡＬＫ７−Ｆｃ抗原を使用して、１ラウンドのＭＡＣＳ分取および２ラウンドのＦＡＣＳ分取を行って上記に述べたようにして選択を行った。
【０４９４】
ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２の選択：軽鎖の多様化手順から選択されたクローンから得られたＣＤＲＨ３を、１×１０８の多様性を有するＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２変異体を含む既成のライブラリーと組み合わせ、上記に述べたようにして、ＡＬＫ７を使用して選択を行った。ビオチン化抗原−抗体酵母複合体を非ビオチン化抗原と異なる時間にわたってインキュベートすることによって親和性圧力を適用させることによって最も高い親和性の抗体を選択した。
【０４９５】
ＶＨｍｕｔ／ＶＫｍｕｔ選択：ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２選択手順から得られたクローンに、重鎖および／または軽鎖のエラープローンＰＣＲベースの突然変異誘発によるさらなる親和性成熟のラウンドを行った。選択は、すべての選択ラウンドでＦＡＣＳ分取をさらに用いた点以外は、抗原としてＡＬＫ７を使用して上記実施例２に記載されるものと概ね同様にして行った。抗原濃度を低下させ、非標識（ｃｏｌｄ）抗原との競合時間を増加させて最適親和性に向かう圧力をさらにかけた。
【０４９６】
例示的な最適化ＡＬＫ７抗体の配列を表３に示す。
【０４９７】
【表３】
2021500895.tif 000044
2021500895.tif 000045
2021500895.tif 000046
2021500895.tif 000047
2021500895.tif 000048
【０４９８】
ＳＰＲ（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）ベースの分析）を用いて表３に記載の親和性成熟ＡＬＫ７抗体のより完全な特性評価を行った。
【０４９９】
表面プラズモン共鳴分析−
各実験は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００／Ｔ２００バイオセンサー（Ｂｉａｃｏｒｅ／ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を２５℃および３７℃で用いて行った。ＡＬＫ７抗体をカスタムメイドのＦＡＢチップ上に捕捉した。ＡＬＫ７−Ｆｃ含有タンパク質の濃度系列を、５０μｌ／ｍｌの流速でフローセルに注入した。反応速度定数を得るため、補正したデータをＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて１：１の相互作用モデルにフィッティングした。平衡結合定数ＫＤを結合速度定数の比ｋｄ／ｋａにより決定した。
【０５００】
上記と同様にして行ったＳＰＲの結果を表４に示す。
【０５０１】
【表４】
2021500895.tif 000049
【０５０２】
実施例４．抗ＡＬＫ７抗体の変異体
この実施例では、上記の実施例で検討した抗ＡＬＫ７抗体と同じエピトープ（複数可）においてＡＬＫ７に特異的に結合する第２世代の抗ＡＬＫ７モノクローナル抗体を作製するための例示的なプロセスを説明する。これらの第２世代抗体は、重鎖（例えば、Ｆｃドメイン）の定常領域に、抗体の毒性および／または免疫原性を低減させ、および／または宿主内における抗体安定性／半減期を向上させる変異を含む。
【０５０３】
ｍＡｂ  Ｃ０３またはｍＡｂ  Ｇ０５の配列に基づく例示的な第２世代の抗体を作製するため、Ｐｅｒｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７），Ｇｅｎｅ  １８７：９−１８に基づいてヒトＩｇＧ重鎖および軽鎖を発現させるためのベクターを構築した。いずれのベクターもＩｇＧ分泌リーダーを用いている。このヒト重鎖ベクターは、５’末端にＶＨをクローニングするための固有の制限部位（ＢｓｓＨＩＩ）を含み、３’末端にＶＨをクローニングするための、すべてのＶＨサブグループ間で保存されたＢｓｔＥＩＩ部位を含む隣接したＶＨリンカーが組み込まれている。したがって、ｍＡｂ  Ｃ０３またはｍＡｂ  Ｇ０５抗体のＶＨ（それぞれ配列番号１２９または１１８）が、ＢｓｓＨＩＩおよびＢｓｔＥＩＩで消化し、消化されたｐＡＩＤ４ヒトＩｇＧ１重鎖ベクターに別々に挿入し（５’ＢｓｓＨＩＩと３’ＢｓｔＥＩＩ）、ＤＮＡ合成を行うことによって作製された。ｍＡｂ  Ｃ０３またはｍＡｂ  Ｇ０５抗体のＶＬ配列（それぞれ配列番号１３６または１２５）を挿入したヒトκ軽鎖を別々に設計し、合成した（イントロンを含まず）。完成したコンストラクトに確認のためのシーケンシングを行い、ＣＨＯ細胞に同時トランスフェクトした。ＣＨＯの馴化培地を、抗体のサイズを確認するためにウエスタンブロットによって分析し、抗体濃度を測定するためにヒトＦｃドメインについてＥＬＩＳＡにより分析した。ＣＨＯ細胞の馴化培地からの抗体タンパク質の精製は、プロテインＡクロマトグラフィー（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ（登録商標），Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、透析法、ウイルス濾過、およびバッファー交換によって行った。
【０５０４】
ヒト重鎖ベクターの変異体には、エフェクター機能を低下させるためにＣＨ２ドメインに変異Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ、Ｋａｂａｔ位置）を含むものがある。ヒトＩｇＧ重鎖のＶＨ領域の下流の固有の内部ＡｇｅＩ制限部位を利用して、５’末端側のＡｇｅＩから３’末端側の終止コドンまでの領域を、重複ＰＣＲのストラテジーおよび変異を組み込んだプライマーを用いて作製した。終止コドンに続くＢａｍＨＩ制限部位を有するＰＣＲ反応用の３’プライマーも設計し、プラスミド内のクローニング部位として使用した。この産物を消化したｐＡＩＤ４ヒトＩｇＧ１重鎖ベクターに挿入した（５’末端側のＡｇｅＩと３’末端側のＢａｍＨＩ）。ｍＡｂ  Ｃ０３またはｍＡｂ  Ｇ０５のＶＨを上記に述べたようにしてこの重鎖変異体に挿入した。得られたｍＡｂ  Ｃ０３  ＬＡＬＡ抗体は、配列番号１９４または３２８の重鎖配列と、配列番号１９１または３２２の軽鎖配列を有するものである。上記で説明したようにＬＡＬＡ変異は、配列番号１９４のＬ２６３およびＬ２６４に位置する。得られたｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＡＬＡ抗体は、配列番号１９５または３３０の重鎖配列と、配列番号１９３または３２６の軽鎖配列を有するものである。上記で説明したようにＬＡＬＡ変異は、配列番号１９５のＬ２５７およびＬ２５８に位置する。
【０５０５】
同様に、ＬＡＬＡ−ＰＧ変異体を、ｍＡｂ  Ｃ０３またはｍＡｂ  Ｇ０５の重鎖配列にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ−ＰＧ、Ｋａｂａｔ位置）変異を導入することによって調製することができる。得られたｍＡｂ  Ｃ０３  ＬＡＬＡ−ＰＧ抗体は、配列番号１９６または３３２の重鎖配列と、配列番号１９１または３２２の軽鎖配列を有するものである。上記で説明したようにＬＡＬＡ−ＰＧ変異は、配列番号１９６にＬ２６３Ａ、Ｌ２６４Ａ、およびＰ３５８Ｇ変異を含む。得られたｍＡｂ  Ｇ０５  ＬＡＬＡ−ＰＧ抗体は、配列番号１９７または３３４の重鎖配列と、配列番号１９３または３２６の軽鎖配列を有するものである。上記で説明したようにＬＡＬＡ−ＰＧ変異は、配列番号１９７にＬ２５７Ａ、Ｌ２５８Ａ、およびＰ３５２Ｇ変異を含む。
【０５０６】
実施例５．ＡＬＫ７  ｍＡｂのエピトープマッピング
ＡＬＫ７の直鎖状エピトープおよび不連続エピトープの両方を、表３に記載される例示的な抗ＡＬＫ７結合タンパク質、ｍＡｂＣ０３、Ｇ０５、およびＪ０２についてマッピングした。ジスルフィド架橋模倣体のコンビナトリアルライブラリーを含む完全な不連続エピトープマッピングアプローチをＰｅｐｓｃａｎ  Ｐｒｅｓｔｏ  ＢＶによるＣＬＩＰＳ（商標）技術を用いて行った。（Ｌｅｌｙｓｔａｄ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）。
【０５０７】
実験方法
ペプチドライブラリーの標的ＡＬＫ７配列
ヒトＡＬＫ７の細胞外ドメインを、エピトープマッピングのための一般的なペプチドライブラリーの例として用いた。そのような細胞外ドメインのアミノ酸配列を以下に示す。
【０５０８】
1 LSPGLKCVCL LCDSSNFTCQ TEGACWASVM LTNGKEQVIK SCVSLPELNA 50
51 QVFCHSSNNV TKTECCFTDF CNNITLHLPT ASPNAPKLGP ME 92（配列番号２０８）
ジスルフィド架橋に関する知見がない場合、上記配列中のＣｙｓ残基のすべての可能な組み合わせを模倣した。
【０５０９】
ペプチドの合成
例示的なヒトＡＬＫ７細胞外ドメインのエピトープを再構成するため、ペプチドベースのエピトープ模倣体のライブラリーを固相Ｆｍｏｃ合成法を用いて合成した。アミノ官能化ポリプロピレン支持体を、独自の親水性ポリマー配合物によりグラフトした後、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）をＮヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とともに使用してｔ−ブチルオキシカルボニル−ヘキサメチレンジアミン（ＢｏｃＨＭＤＡ）と反応させ、その後、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いてＢｏｃ基を切断することにより得た。標準的なＦｍｏｃペプチド合成法を用い、カスタム改変したＪＡＮＵＳ（登録商標）リキッドハンドリングステーション（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）によってアミノ官能化固体支持体上でペプチドを合成した。
【０５１０】
Ｐｅｐｓｃａｎが所有する足場上に化学結合させたペプチド（Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｎ  Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ）（ＣＬＩＰＳ）技術を用いて構造的模倣体の合成を行った。ＣＬＩＰＳ技術は、構造ペプチドを、単一ループ、２重ループ、３重ループ、シート状フォールド、螺旋状フォールド、およびそれらの組み合わせとすることを可能とするものである。ＣＬＩＰＳテンプレートをシステイン残基に結合させる。ペプチド内の複数のシステインの側鎖を１個または２個のＣＬＩＰＳテンプレートに結合させる。例えば、Ｐ２  ＣＬＩＰＳ（２，６−ビス（ブロモメチル）ピリジン）の０．５ｍＭ溶液を重炭酸アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．８）／アセトニトリル（１：３（ｖ／ｖ））に溶解する。この溶液をペプチドアレイの上に添加する。ＣＬＩＰＳテンプレートは、ペプチドアレイ（３μＬのウェルを有する４５５ウェルのプレート）の固相に結合したペプチド中に存在する２個のシステインの側鎖に結合する。このペプチドアレイを溶液で完全に覆われた状態で溶液中で３０〜６０分間穏やかに振盪した。最後に、このペプチドアレイを過剰量のＨ２Ｏでよく洗浄し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中に１％ＳＤＳ／０．１％β−メルカプトエタノールを含む破壊緩衝液中７０℃で３０分間超音波処理した後、Ｈ２Ｏ中でさらに４５分間超音波処理した。３個のシステインを使用した点以外は同様の方法で、ペプチドを支持したＴ３  ＣＬＩＰＳを作製した。
【０５１１】
ＥＬＩＳＡスクリーニング
合成されたペプチドのそれぞれに対する抗体の結合をｐｅｐｓｃａｎに基づくＥＬＩＳＡで試験した。各ペプチドアレイを一次抗体溶液インキュベートした（４℃で一晩）。洗浄後、これらのペプチドアレイを抗体ペルオキシダーゼ複合体（例えば、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（カタログ番号６１７５−０５，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｎ，ＡＬ）のウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＨＲＰ複合体）の１／１０００希釈液と、２５℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質として２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）および２０μｌ／ｍＬの３％Ｈ２Ｏ２を添加した。１時間後、発色を測定した。発色は、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラおよび画像処理システムを用いて定量した。
【０５１２】
データ処理
ＣＣＤカメラから得られる値は、標準的な９６ウェルプレートＥＬＩＳＡ−リーダーと同様の０〜３０００ｍＡＵの範囲である。その結果を定量化し、Ｐｅｐｌａｂデータベースに保存する。ウェルが偽陽性の値につながる気泡を含むことがあるため、各カードをマニュアルで検査し、気泡によって生じた値はすべてスコアを０とする。
【０５１３】
合成の品質管理
合成されたペプチドの品質を検証するため、陽性および陰性対照ペプチドの別々のセットを並行して合成した。これらを市販の抗体３Ｃ９および５７．９でスクリーニングした（Ｐｏｓｔｈｕｍｕｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４：３３０４−３３０９参照）。
【０５１４】
参考文献
Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．２０：２８３−２９９；
Ｌａｎｇｅｄｉｊｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４１７：１４９−１５５．
【０５１５】
データの分析および解釈
箱ひげ図分析
箱ひげ図は、Ｊｏｈｎ  Ｔｕｋｅｙによって１９７０年代に発明された、データ群を表示することを可能とする探索ツールである。箱ひげ図は、与えられたデータセットのデータ分布の第一印象を与える。各箱ひげ図は、データセットの極値（最大値および最小値）、上位および下位四分位点、中央値、外れ値を表示する（ｆｌｏｗｉｎｇｄａｔａ．ｃｏｍのＷｏｒｌｄ  Ｗｉｄｅ  Ｗｅｂサイトからの箱ひげ図を参照）。この箱ひげ図の主な用途は、ベースラインレベルを見つけ、すべてのｗデータの品質評価に対する信号雑音比を推定することにある。
【０５１６】
線形強度プロファイル
線形強度プロファイルは、所定の試料について記録された強度プロファイルのグラフ表示を示す。多くの場合、異なるペプチドセットで記録された強度プロファイルの重ね合わせを１つのグラフにプロットすることで、異なる種類のエピトープ模倣体に対する所定の抗体の反応の直接的な比較が可能となる。
【０５１７】
ヒートマップ分析
ヒートマップは、２次元マップ内の変数が取る値が色で表現された、データのグラフ表示である。ヒートマップは、ペプチドのセット（複数可）の試料（複数可）について記録されたＥＬＩＳＡ強度を表現または比較するため、および／または所定の試料について不連続なペプチドライブラリーで記録されたデータを視覚化するために使用することができる。
【０５１８】
１．単純な強度プロファイルのヒートマップ分析
反応の大きさ（例えば、重複ペプチドのライブラリーで記録されたポリクローナル試料からの）が色コード化され、キーがプロットに含まれる。反応は、ヒストグラムまたはヒートマップの２つの補完的な方法で表示される。単一の試料ではヒストグラムが容易に理解されるが、多数の試料からの反応の比較は、各試料が列（または行）としてプロットされ、各ペプチドが行（または列）としてプロットされたヒートマップで分析するとより容易である。
【０５１９】
２．不連続なペプチドライブラリーを再構築するヒートマップマトリックス
ヒートマップは、２次元マップ内の変数が取る値が色で表現された、データのグラフ表示である。２重ループのＣＬＩＰＳペプチドでは、このような２次元マップを、第１および第２のループの独立した配列から導出することができる。例えば、１６個のＣＬＩＰＳペプチドの配列は効果的に、ループ１内の４個の固有のサブ配列と、ループ２内の４個の固有のサブ配列の順列である。したがって、観察されたＥＬＩＳＡデータは、各Ｘ座標が第１のループの配列に対応し、各Ｙ座標が第２のループの配列に対応した４×４のマトリックスとしてプロットすることができる。ＣＬＩＰＳペプチドについて観察されたＥＬＩＳＡ値は、そのペプチドが有する特定のループ１／ループ２の配列を含む行と列の交点における四角形内に見出すことができる。
【０５２０】
さらに視覚化を容易にするため、ＥＬＩＳＡ値を連続的な勾配からの色で置き換えることができる。例示的な場合では、極めて低い値が緑で示され、極めて高い値が赤で示され、平均値が黒で示される。
【０５２１】
ペプチドの設計
ペプチドの異なるセットを以下の設計に従って合成した。いくつかのミニカード上のペプチドの実際の順序をランダム化した。すべての実験データセットが最適な結果を与えたわけではなかった。最適な結果を与えたもののみを本実施例で検討する。
【０５２２】
セット１のペプチド（模倣タイプ：直鎖、ラベル：ＬＩＮ）は、オフセットが１残基である、ヒトＡＬＫ７細胞外ドメインに由来するアミノ酸１５個の長さの直鎖状ペプチドを含む。セット１の最初の１０個の配列を以下に示す。
LSPGLKCVCLLCDSS   （配列番号209)
SPGLKCVCLLCDSSN   （配列番号210)
PGLKCVCLLCDSSNF   （配列番号211)
GLKCVCLLCDSSNFT   （配列番号212)
LKCVCLLCDSSNFTC   （配列番号213)
KCVCLLCDSSNFTCQ   （配列番号214)
CVCLLCDSSNFTCQT   （配列番号215)
VCLLCDSSNFTCQTE   （配列番号216)
CLLCDSSNFTCQTEG   （配列番号217)および
LLCDSSNFTCQTEGA   （配列番号218)
【０５２３】
セット２（模倣タイプ：直鎖、ラベル：ＡＡ）は、セット１のペプチドを含むが、１０位および１１位の残基がアラニンによって置換されている。天然のアラニンがいずれかの位置にある場合、グリシンで置換した。セット２の最初の１０個の配列を以下に示す。
SNNVTKTECAATDFC   （配列番号219)
AQVFCHSSNAATKTE   （配列番号220)
TLHLPTASPAGPKLG   （配列番号221)
MLTNGKEQVAASCVS   （配列番号222)
LKCVCLLCDAANFTC   （配列番号223)
WASVMLTNGAAQVIK   （配列番号224)
LLCDSSNFTAATEGA   （配列番号225)
TEGACWASVAATNGK   （配列番号226)
EQVIKSCVSAAELNA   （配列番号227)および
CDSSNFTCQAAGACW   （配列番号228)
【０５２４】
セット３（模倣タイプ：直鎖、ラベル：ＬＩＮ．２）は、セット１のペプチドを含むが、システイン残基がＣｙｓ−アセトアミドメチル（ａｃｍ、「Ｘ」で示される）によって置換されている。セット３の最初の１０個の配列を以下に示す。
SXVSLPELNAQVFXH   （配列番号229)
SSNFTXQTEGAXWAS   （配列番号230)
DSSNFTXQTEGAXWA   （配列番号231)
ELNAQVFXHSSNNVT   （配列番号232)
KTEXXFTDFXNNITL   （配列番号233)
HSSNNVTKTEXXFTD   （配列番号234)
SLPELNAQVFXHSSN   （配列番号235)
TEXXFTDFXNNITLH   （配列番号236)
AXWASVMLTNGKEQV   （配列番号237)および
AQVFXHSSNNVTKTE   （配列番号238)、ただし、X=Cys-アセトアミドメチルである（ACM）。
【０５２５】
セット４（模倣タイプ：単一ループ、ｍＰ２；ラベル：ＬＯＯＰ１７）は、アミノ酸１７個の長さの単一ループペプチドを含む。２〜１６位は、オフセットが１残基である、ヒトＡｌｋ７の標的配列に由来する１５マーのペプチドを含む。１位および１７位のシステインを、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳを使用してループ模倣体を作製するために使用した。天然のシステインはＣｙｓ−ａｃｍ（ａｃｍ、上記と同様「Ｘ」で示す）で置換した。セット４の最初の１０個の配列を以下に示す。
CLSPGLKXVXLLXDSSC   （配列番号239)
CSPGLKXVXLLXDSSNC   （配列番号240)
CPGLKXVXLLXDSSNFC   （配列番号241)
CGLKXVXLLXDSSNFTC   （配列番号242)
CLKXVXLLXDSSNFTXC   （配列番号243)
CKXVXLLXDSSNFTXQC   （配列番号244)
CXVXLLXDSSNFTXQTC   （配列番号245)
CVXLLXDSSNFTXQTEC   （配列番号246)
CXLLXDSSNFTXQTEGC   （配列番号247)および
CLLXDSSNFTXQTEGAC  (配列番号248)、ただし、X=Cys-アセトアミドメチル(acm)である。
【０５２６】
セット５（模倣タイプ：単一ループ、ｍＰ２、ラベル：ＬＯＯＰ２０）は、アミノ酸２０個の長さの単一ループペプチドを含む。２〜１９位は、オフセットが１残基である、ヒトＡｌｋ７の標的配列に由来する１８マーのペプチドを含む。１位および２０位のシステインを、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳを使用してループ模倣体を作製するために使用した。天然のシステインはＣｙｓ−ａｃｍ（ａｃｍ、上記と同様「Ｘ」で示す）で置換した。セット５の最初の１０個の配列を以下に示す。
CLSPGLKXVXLLXDSSNFTC   （配列番号249)
CSPGLKXVXLLXDSSNFTXC   （配列番号250)
CPGLKXVXLLXDSSNFTXQC   （配列番号251)
CGLKXVXLLXDSSNFTXQTC   （配列番号252)
CLKXVXLLXDSSNFTXQTEC   （配列番号253)
CKXVXLLXDSSNFTXQTEGC   （配列番号254)
CXVXLLXDSSNFTXQTEGAC   （配列番号255)
CVXLLXDSSNFTXQTEGAXC   （配列番号256)
CXLLXDSSNFTXQTEGAXWC   （配列番号257)および
CLLXDSSNFTXQTEGAXWAC  (配列番号258)、ただし、X=Cys-アセトアミドメチル(acm)である。
【０５２７】
セット６（模倣タイプ：α螺旋、ｍＰ２鎖、ラベル：ＨＥＬ）は、オフセットが１残基である、ヒトＡｌｋ７の標的配列に由来するアミノ酸２２個の長さのα螺旋状模倣体を含む。ｍＰ２  ＣＬＩＰＳを使用してα螺旋のターンを誘導するために１位および５位の残基をシステインで置換した。天然のシステインはＣｙｓ−ａｃｍ（ａｃｍ、上記と同様「Ｘ」で示す）で置換した。セット６の最初の１０個の配列を以下に示す。
CTKTCXXFTDFXNNITLHLPTA   （配列番号259)
CXWACVMLTNGKEQVIKSXVSL  （配列番号260)
CQVFCHSSNNVTKTEXXFTDFX   （配列番号261)
CLSPCLKXVXLLXDSSNFTXQT   （配列番号262)
CNAQCFXHSSNNVTKTEXXFTD   （配列番号263)
CSVMCTNGKEQVIKSXVSLPEL   （配列番号264)
CXFTCFXNNITLHLPTASPNAP   （配列番号265)
CVMLCNGKEQVIKSXVSLPELN   （配列番号266)
CEQVCKSXVSLPELNAQVFXHS   （配列番号267)および
CTNGCEQVIKSXVSLPELNAQV   （配列番号268)、ただし、X=Cys-アセトアミドメチル(acm)である。
【０５２８】
セット７（模倣タイプ：βターン、ｍＰ２、ラベル：ＢＥＴ）は、オフセットが１残基である、ヒトＡｌｋ７の標的配列に由来するアミノ酸２２個の長さのβターン状模倣体を含む。βターンの核を形成するために１１位および１２位の残基を「ＰＧ」モチーフに置き換えた。ｍＰ２  ＣＬＩＰＳを用いて１位と２２位のシステイン残基を連結した。天然のシステインはＣｙｓ−ａｃｍ（ａｃｍ、上記と同様「Ｘ」で示す）で置換した。セット７の最初の１０個の配列を以下に示す。
CLSPGLKXVXPGXDSSNFTXQC   （配列番号269)
CSPGLKXVXLPGDSSNFTXQTC   （配列番号270)
CPGLKXVXLLPGSSNFTXQTEC   （配列番号271)
CGLKXVXLLXPGSNFTXQTEGC   （配列番号272)
CLKXVXLLXDPGNFTXQTEGAC   （配列番号273)
CKXVXLLXDSPGFTXQTEGAXC   （配列番号274)
CXVXLLXDSSPGTXQTEGAXWC   （配列番号275)
CVXLLXDSSNPGXQTEGAXWAC   （配列番号276)
CXLLXDSSNFPGQTEGAXWASC   （配列番号277)および
CLLXDSSNFTPGTEGAXWASVC  (配列番号278)、ただし、X=Cys-アセトアミドメチル(acm)である。
【０５２９】
セット８（模倣タイプ：ジスルフィド架橋、ラベル：ＣＹＳ．２５）は、ヒトＡｌｋ７の標的配列に由来するアミノ酸２５個の長さのペプチドを含む。各２５マーは、ジスルフィド結合を形成する２個のシステイン残基を含む。他のシステインはＣｙｓ−ａｃｍ（ａｃｍ、上記と同様「Ｘ」で示す）で置換した。セット８の最初の１０個の配列を以下に示す。
LSPGLKCVCLLXDSSNFTXQTEGAX   （配列番号279)
SPGLKCVCLLXDSSNFTXQTEGAXW   （配列番号280)
PGLKCVCLLXDSSNFTXQTEGAXWA   （配列番号281)
GLKCVCLLXDSSNFTXQTEGAXWAS   （配列番号282)
LKCVCLLXDSSNFTXQTEGAXWASV   （配列番号283)
KCVCLLXDSSNFTXQTEGAXWASVM   （配列番号284)
CVCLLXDSSNFTXQTEGAXWASVML   （配列番号285)
LSPGLKCVXLLCDSSNFTXQTEGAX   （配列番号286)
SPGLKCVXLLCDSSNFTXQTEGAXW   （配列番号287)および
PGLKCVXLLCDSSNFTXQTEGAXWA  （配列番号288)、ただし、X=Cys-アセトアミドメチル(acm)である。
【０５３０】
セット９（模倣タイプ：ジスルフィド架橋、ラベル：ＣＹＳ．２７）は、アミノ酸２７個の長さのペプチドを含む。１〜１１位および１７〜２７位には、「ＧＧＳＧＧ」（配列番号２８９）リンカーにより連結された、ヒトＡｌｋ７の標的配列に由来する１１マーのペプチドがある。これらの１１マーはどちらも、ジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含む。他のシステインはＣｙｓ−ａｃｍ（ａｃｍ、上記と同様「Ｘ」で示す）で置換した。セット９の最初の１０個の配列を以下に示す。
LSPGLKCVXLLGGSGGNGKEQVIKSCV   （配列番号290)
PGLKCVXLLXGGSGGNGKEQVIKSCV   （配列番号291)
LKCVXLLXDSSGGSGGNGKEQVIKSCV   （配列番号292)
CVXLLXDSSNFGGSGGNGKEQVIKSCV   （配列番号293)
LSPGLKCVXLLGGSGGKEQVIKSCVSL   （配列番号294)
PGLKCVXLLXDGGSGGKEQVIKSCVSL   （配列番号295)
LKCVXLLXDSSGGSGGKEQVIKSCVSL   （配列番号296)
CVXLLXDSSNFGGSGGKEQVIKSCVSL   （配列番号297)
LSPGLKCVXLLGGSGGQVIKSCVSLPE   （配列番号298)および
PGLKCVXLLXDGGSGGQVIKSCVSLPE  (配列番号299)、ただし、X=Cys-アセトアミドメチル(acm)である。
【０５３１】
セット１０（模倣タイプ：不連続エピトープ模倣体、Ｔ３  ＣＬＩＰＳ、ラベル：ＭＡＴ（ＭＡＴ２７＋ＭＡＴ３３））は、アミノ酸２７個（ＭＡＴ２７）またはアミノ酸３３個（ＭＡＴ３３）の長さのコンビナトリアルペプチドを含む。２〜１６位および１８〜３２位のＭＡＴ３３の場合、標的配列に由来する１５マーのペプチドである。システイン残基は、１位、１７位および３３位にあり、Ｔ３  ＣＬＩＰＳによって接合されて不連続なエピトープ模倣体を形成する。２〜１３位および１５〜２６位のＭＡＴ２７の場合、標的配列に由来する１２マーのペプチドである。システイン残基は、１位、１４位および２７位にあり、Ｔ３  ＣＬＩＰＳによって接合されて不連続なエピトープ模倣体を形成する。ＭＡＴ２７およびＭＡＴ３３では、天然のシステインをＣｙｓ−ａｃｍ（ａｃｍ、上記と同様「Ｘ」で示す）で置換した。セット１０の最初の１０個の配列を以下に示す。
CLXDSSNFTXQTEGAXCTDFXNNITLHLPTASC   （配列番号300)
CTEGAXWASVMLTNGKCNGKEQVIKSXVSLPEC   （配列番号301)
CTKTEXXFTDFXNNITCNGKEQVIKSXVSLPEC   （配列番号302)
CNFTXQTEGAXWASVMCPGLKXVXLLXDSSNFC   （配列番号303)
CXFTDFXNNITLHCNNVTKTEXXFTDC   （配列番号304)
CLHLPTASPNAPKCEQVIKSXVSLPEC   （配列番号305)
CLPTASPNAPKLGCASPNAPKLGPMEC   （配列番号306)
CLSPGLKXVXLLXCXNNITLHLPTASC   （配列番号307)
CTEXXFTDFXNNITLHCXNNITLHLPTASPNAC   （配列番号308)および
CXNNITLHLPTASPNACGAXWASVMLTNGKEQC   配列番号309)、
ただし、X=Cys-アセトアミドメチル(acm)である。
【０５３２】
スクリーニングの詳細
抗体の結合は、ＥＬＩＳＡバッファー中の抗体の濃度ならびに競合タンパク質の量および性質を含む因子の組み合わせによって決まる。また、プレコート条件（実験試料とのインキュベーションの前のペプチドアレイの特定の処理）が結合に影響する。例示的なｍＡｂ  Ｊ０２では、希釈液は、試料バッファーおよびプレコンディショニングバッファーとして２５％Ｐｅｐｓｃａｎ  ＢｕｆｆｅｒおよびＰｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ（有意量）を含む１μｇ／ｍＬの抗体を含む。例示的なｍＡｂ  Ｇ０５では、希釈液は、試料バッファーおよびプレコンディショニングバッファーとして１０％Ｐｅｐｓｃａｎ  ＢｕｆｆｅｒおよびＰｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ（有意量）を含む１μｇ／ｍＬの抗体を含む。例示的なｍＡｂ  Ｃ０３では、希釈液は、試料バッファーおよびプレコンディショニングバッファーとしての１％有意量として０．１％Ｐｅｐｓｃａｎ  ＢｕｆｆｅｒおよびＰｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ（有意量）を含む５μｇ／ｍＬの抗体を含む。
【０５３３】
スクリーニングの結果
抗体ｍＡｂ  Ｊ０２を、高ストリンジェンシー条件下で試験したところ、コンフォメーションエピトープ模倣体との結合を生じた。直鎖状ペプチドとの結合は検出されなかった。抗体は、コア配列４５ＬＰＥＬＮＡＱＶＦＣＨＳＳＮＮＶＴＫ６２（配列番号３１０）を有する単一ループ模倣体およびα螺旋状エピトープ模倣体に結合した。
【０５３４】
不連続エピトープ模倣体で記録された結合プロファイルの分析により、ペプチドストレッチ２６ＷＡＳＶＭＬＴＮＧＫＥＱ３７（配列番号３１１）および７８ＬＰＴＡＳＰＮＡＰＫ８７（配列番号３１２）も、４５ＬＰＥＬＮＡＱＶＦＣＨＳＳＮＮＶＴＫ６２（配列番号３１０）内の領域と組み合わされた場合のみであるが、ｍＡｂ  Ｊ０２によってやはり認識されることが示唆された。
【０５３５】
抗体ｍＡｂ  Ｇ０５を、中度ストリンジェンシー条件下で試験したところ、コンフォメーションエピトープ模倣体と弱く結合した。直鎖状ペプチドとの結合は検出されなかった。抗体は、コア配列４３ＶＳＬＰＥＬＮＡＱＶＦＣＨＳＳＮＮＶＴＫ６２（配列番号３１３）を有する単一ループ模倣体およびα螺旋状エピトープ模倣体に極めて弱く結合した。
【０５３６】
不連続エピトープ模倣体で記録された結合プロファイルの分析により、ペプチドストレッチ６ＫＣＶＣＬＬＣＤＳＳ１５（配列番号３１４）、２３ＧＡＣＷＡＳＶＭＬＴ３２（配列番号３１５）、および７１ＣＮＮＩＴＬＨＬＰＴ８０（配列番号３１６）も、４３ＶＳＬＰＥＬＮＡＱＶＦＣＨＳＳＮＮＶＴＫ６２（配列番号３１３）内の領域と組み合わされた場合のみであるが、抗体Ｇ０５によってやはり認識されることが示唆された。
【０５３７】
抗体ｍＡｂ  Ｃ０３を高度および中度ストリンジェンシー条件下で試験したところ、アレイ上に存在するいずれのペプチドとも結合しなかった。そこで、抗体を低ストリンジェンシー条件下で再試験したところ、アレイ上に存在するすべてのセットからのペプチドに組織的に結合した。注目すべき点として、記録された強度プロファイルは、おそらくは低量の競合するタンパク質に起因する上昇したバックグラウンドを示した。
【０５３８】
抗体Ｃ０３は、部分エピトープであり得るコア配列６９ＤＦＣＮＮＩＴＬＨＬＰ７９（配列番号３１７）を有する線状エピトープ模倣体および単純なコンフォメーションエピトープ模倣体に同様によく結合した。
【０５３９】
不連続なジスルフィド架橋エピトープ模倣体で記録された結合プロファイルの分析により、ペプチドストレッチ１ＬＳＰＧＬＫＣＶＣＬＬ１１（配列番号３１８）および５１ＱＶＦＣＨＳＳＮＮ５９（配列番号３１９）は、６９ＤＦＣＮＮＩＴＬＨＬＰ７９（配列番号３１７）を共通して含む模倣体による結合を増強し得ることを示唆した。
【０５４０】
結論
３種類のモノクローナル抗体を線形およびさまざまなコンフォメーションエピトープ模倣体を含むＰｅｐｓｃａｎペプチドアレイを使用して試験することで、結果によってエピトープ候補を示唆することが可能となった。
【０５４１】
ＰＥＰＳＣＡＮデータは、３つすべての抗体が、ヒトＡＬＫ７の一次構造では隣接していない３つ以上のペプチドストレッチからなるコンフォメーションエピトープを認識することを示している。しかしながら、単一のピークを有する強度プロファイルが単純なコンフォメーションまたは線状エピトープ模倣体のいずれかで記録されたことから、３つすべての抗体についてコアエピトープ領域を導出することが可能であった。
【０５４２】
注目に値する点として、ｍＡｂ  Ｊ０２およびｍＡｂ  Ｇ０５のいずれも、直鎖状ペプチドにはいっさい反応性を示さなかったが、ＣＬＩＰＳを用いたエピトープ模倣体との検出可能な結合は認められた。この観察結果は、構造的要素の存在がｍＡｂ  Ｊ０２およびｍＡｂ  Ｇ０５の結合に重要であることを示すものである。
【０５４３】
不連続エピトープ模倣体で記録されたデータの分析結果は、さらなるペプチドストレッチがすべての抗体で結合を増強することを示している。現在の知見の概要を表５に示す。
【０５４４】
【表５】
2021500895.tif 000050
【０５４５】
抗体ｍＡｂ  Ｊ０２およびｍＡｂ  Ｇ０５について特定されたコアエピトープ領域は、大部分が重複している。それにもかかわらず、それらの不連続エピトープの全体的な組成は異なっている。これに対して、ｍＡｂ  Ｃ０３について特定されたコアエピトープは、ｍＡｂ  Ｊ０２およびｍＡｂ  Ｇ０５のコアエピトープと異なるが、ｍＡｂ  Ｇ０５の部分エピトープと一部重複している。
【０５４６】
３Ｄ構造モデルでのエピトープマッピング
上記に述べたように、抗ＡＬＫ７抗体に対するＡＬＫ７上のエピトープは、少なくとも一次エピトープおよび二次エピトープを含む。図１に示すように、一次エピトープは、少なくとも、ｍＡｂ  Ｊ０２に対する４５ＬＰＥＬＮＡＱＶＦＣＨＳＳＮＮＶＴＫ６２（配列番号３１０）、ｍＡｂ  Ｇ０５に対する４２ＶＳＬＰＥＬＮＡＱＶＦＣＨＳＳＮＮＶＴＫ６３（配列番号３１３）、およびｍＡｂ  Ｃ０３に対する６９ＤＦＣＮＮＩＴＬＨＬＰ７９（配列番号３１７）を含む（図１Ａ）。ヒトＡＬＫ７の二次エピトープは、少なくとも、ｍＡｂ  Ｊ０２に対する２６ＷＡＳＶＭＬＴＮＧＫＥＱ３７（配列番号３１１）および７８ＬＰＴＡＳＰＮＡＰＫ８７（配列番号３１２）、ｍＡｂ  Ｇ０５に対する６ＫＣＶＣＬＬＣＤＳＳ１５（配列番号３１４）、２３ＧＡＣＷＡＳＶＭＬＴ３２（配列番号３１５）、および７１ＣＮＮＩＴＬＨＬＰＴ８０（配列番号３１６）、ならびにｍＡｂ  Ｃ０３に対する１ＬＳＰＧＬＫＣＶＣＬＬ１１（配列番号３１８）および５１ＱＶＦＣＨＳＳＮＮ５９（配列番号３１９）を含む（図１Ｂ）。これらのエピトープの中で、それぞれの試験したｍＡｂについて主として認識される領域は一次エピトープである。二次エピトープの少なくとも１つは、対応するｍＡｂによってさらに認識され得る。
【０５４７】
Ａｌｋ７の相同性に基づく構造モデルを、４種類のアクチビンＩ型受容体の既知の結晶構造（すなわち、ＡＬＫ１（ＰＤＢ  ＩＤ：４ＦＡＯ）、ＡＬＫ３（ＰＤＢ  ＩＤ：２ＧＯＯ）、ＡＬＫ５（ＰＤＢ  ＩＤ：２ＰＪＹ）、およびＡＬＫ６（ＰＤＢ  ＩＤ：３ＥＶＳ））から導出した複合テンプレートに基づいて作成した。テンプレート構造はＡＬＫ７の残基４〜８４についてのみ存在するため、これらの残基のみをモデル化した（モデル化のためのこれらのＡＬＫタンパク質間の一次配列の比較は、図２を参照）。最終的な３Ｄモデルをさらに最適化し、エネルギー最小化した（図３）。ヒトＡＬＫ７の残基８５〜９２は、これらの残基についてはＡＬＫ１／３／５／６の報告されている構造に基づくテンプレート構造が存在しないため、構造化しなかった（図３Ｂ）。上記に述べたように、抗体ｍＡｂ  Ｊ０２およびｍＡｂ  Ｇ０５について特定された一次エピトープ領域は、大部分が重複している（図３Ａおよび３Ｂ）。それにもかかわらず、それらの不連続エピトープの全体的な組成は異なっている（図３Ｃ）。これに対して、ｍＡｂ  Ｃ０３について特定された一次エピトープは、ｍＡｂ  Ｊ０２およびｍＡｂ  Ｇ０５の一次エピトープと異なる（図３Ａ）が、ｍＡｂ  Ｇ０５の部分エピトープと一部重複している（図３Ｂ）。
【０５４８】
実施例６．肥満マウスにおける脂肪症および除脂肪体重に対するＡＬＫ７抗体の効果
本出願人らは、食餌誘導性肥満のマウスモデルにおいて、いくつかのヒトモノクローナルＡＬＫ７抗体（ＡＬＫ７  ｍＡｂ）の脂肪および除脂肪組織量に対する効果を調べた。
【０５４９】
雄マウス（各群ｎ＝８）を、ＮＭＲを用いて脂肪および除脂肪筋肉量のベースラインで評価した。次いで、マウスを以下の異なる処置群に分けた。すなわち、１）標準固形飼料（ＳＤ）を与え、ＴＢＳ溶媒で週２回皮下処置したマウス、２）高脂肪食（ＨＦＤ）を与え、ＴＢＳ溶媒で週２回皮下処置したマウス、３）１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７  ｍＡｂ  Ｊ０２で週２回皮下処置したＨＦＤマウス、４）１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７  ｍＡｂ  Ｋ０２で週２回皮下処置したＨＦＤマウス、５）１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７  ｍＡｂ  Ｇ０５で週２回皮下処置したＨＦＤマウス、６）１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７  ｍＡｂ  Ｃ０３で週２回皮下処置したＨＦＤマウス、および、７）１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７  ｍＡｂ  Ｌ０２で週２回皮下処置したＨＦＤマウス。３週間後、マウスに再び全身ＮＭＲスキャンを行って脂肪および除脂肪組織量を評価し、これらの測定値を脂肪および除脂肪筋肉量のベースライン量と比較した。
【０５５０】
ＴＢＳで処置したＨＦＤマウスは、ＴＢＳで処置したＳＤマウスと比較して有意に高い脂肪組織の量を示した（図４）。平均して、各ＡＬＫ７  ｍＡｂによる処置は、ＴＢＳ処置したＨＦＤマウスと比較してＨＦＤマウスで脂肪組織の蓄積を有意に減少させた（およそ−３０％の減少）（図４）。これに対して、すべてのマウスがベースラインからの筋肉量の増加を示したが、処置群間で有意差は認められなかった（図５）。
【０５５１】
以上をまとめると、これらのデータは、ＡＬＫ７  ｍＡｂを用いて脂肪レベルをインビボで低減することができることを実証するものである。したがって、これらのデータは、ＡＬＫ７抗体が、特に肥満患者において、望ましくない高い脂肪レベルに関連したさまざまな障害および合併症を治療するうえで有用となり得ることを示すものである。さらに、これらのデータは、除脂肪体重を同時に増加させることなく脂肪の減少を実現することが可能であることを示し、ＡＬＫ７抗体が、筋肉量を増加させることなく、体脂肪量を減少させることが望ましい患者を治療するうえで特に有用となり得ることを示すものである。
【０５５２】
実施例７．確立された肥満を有するマウスに対するＡＬＫ７抗体の効果
本実施例では、確立された肥満を有するマウスにおける体重、脂肪および除脂肪組織量分布に対するヒトモノクローナルＡＬＫ７抗体（ＡＬＫ７  ｍＡｂ）の治療可能性の研究について述べる。ＡＬＫ７抗体の可能性を試験するため、マウス（Ｃ５７ＢＬ／６系）を体重に基づいて無作為化し、各マウスの体重が実験ベースラインで約３５グラムに達するまで高脂肪食（ＨＦＤ）を与えた。対照マウス（ｎ＝５）には標準固形飼料（ＳＤ）を与えた。次いでマウス（各群ｎ＝５〜９）を以下の異なる処置群に分けた。すなわち、１）ＴＢＳ溶媒で週２回皮下処置したＳＤマウス（すなわち、ＳＤを与えたマウス）、２）ＴＢＳ溶媒で週２回皮下処置したＨＦＤマウス（すなわち、ＨＦＤを与えたマウス）、３）１ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７  ｍＡｂ  Ｃ０３で週２回皮下処置したＨＦＤマウス、４）３ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７  ｍＡｂ  Ｃ０３で週２回皮下処置したＨＦＤマウス、および５）１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７  ｍＡｂ  Ｃ０３で週２回皮下処置したＨＦＤマウス。ＴＢＳまたはＡＬＫ７  ｍＡｂ  Ｃ０３による各処置は６週間にわたって実施した。マウスに全身ＮＭＲスキャンを行ってベースライン、３週目、および６週目の時点の脂肪および除脂肪組織量の量を評価した。実験期間にわたり、週２回計量天秤を用いて体重を記録した。
【０５５３】
実験のベースラインで、ＨＦＤを与えたすべてのマウスは、ＳＤを与えたマウスと比較して２６．２パーセントの体重の平均増加を示した（Ｐ＜０．００１）（図６）。６週間ＨＦＤを継続し、ＴＢＳで処置したマウスはベースライン値と比較してさらに体重が増加した（平均で約２２％、Ｐ＜０．００１）（図７および図８）。これに対して、ＨＦＤ＋ＡＬＫ７抗体（１、３または１０ｍｇ／ｋｇ）処置群では、この６週間の期間中にそれぞれのベースライン体重と比較して体重の有意な増加を示さなかった（図７および図８）。平均して、ＡＬＫ７  ｍＡｂ（１、３または１０ｍｇ／ｋｇ）で処置したＨＦＤマウスは、ＴＢＳで処置したマウスと比較して、６週間の実験期間の最後にそれぞれ、−６％（Ｐ＜０．０５）、−７％（Ｐ＜０．００１）および−９％（Ｐ＜０．００１）の有意に低い体重増加を示した（図８）。
【０５５４】
体重増加と一致して、すべての処置群（ＴＢＳまたはＡＬＫ７  ｍＡｂ）のベースラインのすべてのＨＦＤマウスは、ＴＢＳで処置したＳＤマウスと比較して増加した脂肪量（図９）およびそれに比例して減少した除脂肪量（図１０）を示し（ＮＭＲで測定した）、実験開始時の肥満を示した。６週にわたってＨＦＤを継続し、ＴＢＳで処置したマウスは、ベースラインと比較して、３週目および６週目の両方の時点でＮＭＲで測定した場合に、脂肪量のさらなる増加（図９）および除脂肪量の減少（図１０）を示した。ＨＦＤ＋ＡＬＫ７抗体（１、３または１０ｍｇ／ｋｇ）処置群は、ベースライン値と比較して、３週目および６週目の両方の時点で有意に低い脂肪量（図９）を示したが、除脂肪量に有意な差は認められなかった（図１０）。
【０５５５】
実験終了前の６週目の時点では、ＴＢＳで処置したＨＦＤマウスは、ＴＢＳで処置したＳＤマウスと比較して平均で約１５４．５％の脂肪量の増加を示した（Ｐ＜０．００１）が、除脂肪量の増加はわずかであった（約１５．９％、Ｐ＜０．０１）（図１１）。ＨＦＤ＋ＡＬＫ７抗体処置群（１、３または１０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ）は、ＴＢＳで処置したＨＦＤマウスと比較して、それぞれ、−２９．４％（Ｐ＜０．００１）、−３５．９％（Ｐ＜０．００１）および−２９．３％（Ｐ＜０．００１）と脂肪量の有意な減少を示したが、除脂肪量の有意な変化は認められなかった（図１１）。しかしながら、ＡＬＫ７  ｍＡｂ処置群（１、３または１０ｍｇ／ｋｇ）のいずれにおいても、ＴＢＳ＋ＨＦＤマウスと比較して除脂肪量に有意差は認められなかった（図１１）。
【０５５６】
以上をまとめると、これらのデータは、ＡＬＫ７  ｍＡｂを用いて脂肪レベルをインビボで低減することができることを実証するものである。したがって、これらのデータは、ＡＬＫ７抗体が、特に肥満患者において、望ましくない高い脂肪レベルに関連したさまざまな障害および合併症を治療するうえで有用となり得ることを示すものである。さらに、これらのデータは、除脂肪体重を同時に増加させることなく脂肪の減少を実現することが可能であることを示し、ＡＬＫ７抗体が、筋肉量を増加させることなく、体脂肪量を減少させることが望ましい患者を治療するうえで特に有用となり得ることを示すものである。
【図１Ａ】
2021500895.tif 000051
【図１Ｂ】
2021500895.tif 000052
【図１Ｃ】
2021500895.tif 000053
【図２】
2021500895.tif 000054
【図３Ａ】
2021500895.tif 000055
【図３Ｂ】
2021500895.tif 000056
【図３Ｃ】
2021500895.tif 000057
【図４】
2021500895.tif 000058
【図５】
2021500895.tif 000059
【図６】
2021500895.tif 000060
【図７】
2021500895.tif 000061
【図８】
2021500895.tif 000062
【図９】
2021500895.tif 000063
【図１０】
2021500895.tif 000064
【図１１】
2021500895.tif 000065
【配列表】
2021500895000001.app
【国際調査報告】
2021500895.tif 000066
2021500895.tif 000067
2021500895.tif 000068