(57)【要約】  抗TIM-3抗体及びその抗原結合断片について記載される。これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を含む組成物、及び、これらの抗体を産生し、疾患、例えば、がん、炎症性疾患、自己免疫疾患、代謝性疾患、及び/又は感染性疾患を治療又は予防するためにこれらの抗体を使用する方法も記載される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
(1)それぞれ、配列番号43、44、169、106、107、及び170;
(2)それぞれ、配列番号55、56、57、118、119、及び120;
(3)それぞれ、配列番号58、59、60、121、122、及び123;
(4)それぞれ、配列番号61、62、63、124、125、及び126;
(5)それぞれ、配列番号64、65、66、127、128、及び129;
(6)それぞれ、配列番号67、68、69、130、131、及び132;
(7)それぞれ、配列番号70、71、72、133、134、及び135;
(8)それぞれ、配列番号73、74、75、136、137、及び138;
(9)それぞれ、配列番号76、77、78、139、140、及び141;
(10)それぞれ、配列番号79、80、81、142、143、及び144;
(11)それぞれ、配列番号82、83、84、145、146、及び147;
(12)それぞれ、配列番号85、86、87、148、149、及び150;
(13)それぞれ、配列番号88、89、90、151、152、及び153;
(14)それぞれ、配列番号91、92、93、154、155、及び156;
(15)それぞれ、配列番号94、95、96、157、158、及び159;
(16)それぞれ、配列番号97、98、99、160、161、及び162;
(17)それぞれ、配列番号100、101、102、163、164、及び165;又は
(18)それぞれ、配列番号103、104、105、166、167、及び168;
のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含み、TIM-3、好ましくはヒトTIM-3に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２】
配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、若しくは41と少なくとも95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、若しくは42と少なくとも95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項1に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項３】
a.  配列番号1のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号2のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
b.  配列番号3のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号4のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
c.  配列番号5のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号6のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
d.  配列番号7のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号8のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
e.  配列番号9のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号10のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
f.  配列番号11のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号12のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
g.  配列番号13のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号14のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
h.  配列番号15のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号16のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
i.  配列番号17のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号18のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
j.  配列番号19のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号20のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
k.  配列番号21のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号22のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
l.  配列番号23のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号24のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
m.  配列番号25のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号26のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
n.  配列番号27のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号28のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
o.  配列番号29のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号30のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
p.  配列番号31のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号32のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
q.  配列番号33のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号34のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
r.  配列番号35のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号36のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
s.  配列番号37のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号38のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
t.  配列番号39のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号40のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;又は
u.  配列番号41のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号42のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、請求項1又は2に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項４】
キメラである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項５】
ヒトの又はヒト化されたものである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項６】
a.  配列番号171のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号175のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
b.  配列番号172のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号175のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
c.  配列番号173のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号176のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;又は
d.  配列番号174のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号176のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、請求項5に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項７】
TIM-3のホスファチジルセリン(PtdSer)への結合、TIM-3のガレクチン-9(Gal-9)への結合、TIM-3の癌胎児抗原細胞接着分子1(CEACAM1)への結合、及び/又はTIM-3の高移動度群タンパク質B1(HMGB1)への結合を阻止することが可能な、請求項1〜6のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項８】
請求項1〜7のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片をコードする単離された核酸。
【請求項９】
請求項8に記載の単離された核酸を含むベクター。
【請求項１０】
請求項9に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１１】
請求項1〜7のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
それを必要とする対象において、TIM-3のホスファチジルセリン(PtdSer)への結合を阻止する方法であって、請求項11に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１３】
それを必要とする対象において、TIM-3のガレクチン-9(Gal-9)への結合を阻止する方法であって、請求項11に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１４】
それを必要とする対象において、TIM-3の癌胎児抗原細胞接着分子1(CEACAM1)への結合を阻止する方法であって、請求項11に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１５】
それを必要とする対象において、TIM-3の高移動度群タンパク質B1(HMGB1)への結合を阻止する方法であって、請求項11に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１６】
それを必要とする対象において、がんを処置する方法であって、請求項11に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１７】
それを必要とする対象において、感染性疾患を処置する方法であって、請求項11に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１８】
それを必要とする対象において、炎症性疾患を処置する方法であって、請求項11に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１９】
それを必要とする対象において、自己免疫疾患を処置する方法であって、請求項11に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２０】
それを必要とする対象において、代謝性疾患を処置する方法であって、請求項11に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２１】
請求項1〜7のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片を生産する方法であって、モノクローナル抗体又は抗原結合断片を産生する条件下で、モノクローナル抗体又は抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を培養するステップ、及び細胞又は培養物から抗体又は抗原結合断片を回収するステップを含む、方法。
【請求項２２】
請求項1〜7のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片を含む医薬組成物を生産する方法であって、モノクローナル抗体又は抗原結合断片を、薬学的に許容される担体と配合して、医薬組成物を得るステップを含む、方法。
【請求項２３】
対象のTIM-3のレベルを決定する方法であって、(a)対象から試料を得るステップ、(b)試料を本発明の抗体又はその抗原結合断片と接触させるステップ、及び(c)対象のTIM-3のレベルを決定するステップを含む、方法。
【請求項２４】
試料が、組織試料である、請求項23に記載の方法。
【請求項２５】
組織試料が、がん組織試料である、請求項24に記載の方法。
【請求項２６】
試料が、血液試料である、請求項23に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
この出願は、2017年7月28日に出願された米国仮出願第62/538,277号に対する優先権を主張する。その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
この発明は、モノクローナル抗TIM-3抗体、該抗体をコードする核酸及び発現ベクター、該ベクターを含有する組換え細胞、並びに該抗体を含む組成物に関する。該抗体を作製する方法、並びにがん、炎症性疾患、自己免疫疾患、感染性疾患、代謝性疾患(例えば、肥満、インスリン抵抗性、及び糖尿病)、及び/又は関連する合併症を含む疾患を処置するために抗体を使用する方法も提供される。
【０００３】
電子的に提出した配列表への言及
この出願は、ファイル名が「689204.3WO Sequence Listing」、作成日が2018年7月25日の、78kbのサイズを有するASCIIフォーマットの配列表として、EFS-Webにより電子的に提出される配列表を含む。EFS-Webにより提出される配列表は本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００４】
T細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有分子3(TIM-3)は、樹状細胞(DC)、マクロファージ及びNK細胞、並びにリンパ球細胞のサブセット、例えば、T細胞を含む、骨髄細胞上で発現される受容体である。TIM-3について報告されているリガンドとして、ガレクチン-9(Gal-9)、ホスファチジルセリン(PtdSer)、及び高移動度群(high mobility group)タンパク質B1(HMGB1)が挙げられる。Gal-9及びPtdSerのライゲーションは、TIM-3の免疫グロブリン可変ドメイン(IgV)によって媒介される。IgVのグリコシル化は、Gal-9結合には必要とされるが、PtdSer結合には必要ではない。これらのリガンドと相互作用することによって、TIM-3は、自然免疫と適応免疫の両方をモジュレートする。HMGB1は、肥満における脂肪組織の慢性炎症においても重要な役割を果たし、このことは、TIM-3の機能が、炎症に関連する代謝変化に関与し得ることを示唆する。
【０００５】
骨髄細胞の表面では、TIM-3の高発現によって、マクロファージ及びDCに由来するサイトカインの産生が阻害される。この阻害は、T細胞からの刺激によって、及び同様に、モノクローナル抗体を阻止することによって覆し得る。腫瘍では、がん保護性及びがん促進性のM2マクロファージは、高レベルのTIM-3発現を伴うが、一方、がんと闘うM1マクロファージは、低レベルのTIM-3発現を伴う。モノクローナル抗体によってTIM-3を阻止することによって、M2が、がんを貪食するM1マクロファージに変換され得るか否かは、まだ実証されていない。
【０００６】
T細胞表面で、TIM-3は、リガンドGal-9と相互作用することによって適応免疫をモジュレートする。TIM-3は、CD4+ヘルパー(Th1及びTh17)T細胞、調節性(Treg)T細胞、及びCD8+細胞傷害性1(Tc1)T細胞で発現される。TIM-3のGal-9への常在ライゲーションによって、Th1細胞のアポトーシスが誘導され、免疫応答及び持続期間が下方調節される。TIM-3の表面での発現、又はおそらくはその機能は、シス(cis)及びトランス(trans)の両方でのCEACAM1への結合に依存する。注目すべきことに、TIM-3は、通常、免疫を抑制するPD-1を発現するCD8+T細胞上に見られる。TIM-3とPD-1は、腫瘍内T細胞の機能不全を導くコサプレッサーであることが提唱されている。このことにより、TIM-3アンタゴニスト抗体は、単独で並びにPD-1/PDL-1及び/又は他のがん免疫療法と組み合わせて、潜在的に優れた治療薬となる。
【０００７】
免疫細胞をモジュレートすることに加えて、TIM-3は、急性骨髄性白血病(AML)の白血病幹細胞(LSC)においても高度に発現される。LSCでは、TIM-3及びGal-9は、自己分泌刺激ループを形成し、がん性LSCの自己再生経路及び白血病の進行を駆動する。興味深いことに、TIM-3は、造血幹細胞(HSC)の表面には存在せず、これは、ブロッキング性/枯渇誘導性/細胞傷害性治療用TIM-3抗体を使用して、AML及び他の骨髄性白血病障害を処置する機会を提供する。
【０００８】
TIM-3は、自然免疫細胞と適応免疫細胞の両方の活性をモジュレートする。TIM-3阻止モノクローナル抗体は、がん細胞を排除する特有の機構を介して免疫システムを解放する可能性を有する。
【発明の概要】
【０００９】
一般的な一態様では、本発明は、TIM-3に結合する単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【００１０】
(1)それぞれ、配列番号43、44、169、106、107、及び170;
(2)それぞれ、配列番号55、56、57、118、119、及び120;
(3)それぞれ、配列番号58、59、60、121、122、及び123;
(4)それぞれ、配列番号61、62、63、124、125、及び126;
(5)それぞれ、配列番号64、65、66、127、128、及び129;
(6)それぞれ、配列番号67、68、69、130、131、及び132;
(7)それぞれ、配列番号70、71、72、133、134、及び135;
(8)それぞれ、配列番号73、74、75、136、137、及び138;
(9)それぞれ、配列番号76、77、78、139、140、及び141;
(10)それぞれ、配列番号79、80、81、142、143、及び144;
(11)それぞれ、配列番号82、83、84、145、146、及び147;
(12)それぞれ、配列番号85、86、87、148、149、及び150;
(13)それぞれ、配列番号88、89、90、151、152、及び153;
(14)それぞれ、配列番号91、92、93、154、155、及び156;
(15)それぞれ、配列番号94、95、96、157、158、及び159;
(16)それぞれ、配列番号97、98、99、160、161、及び162;
(17)それぞれ、配列番号100、101、102、163、164、及び165;又は
(18)それぞれ、配列番号103、104、105、166、167、及び168;
のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含み、TIM-3、好ましくはヒトTIM-3に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片が提供される。配列番号169は、アミノ酸配列ARDX1X2DYで表され、ここで、X1は、A、T、及びLからなる群から選択されるアミノ酸であり、X2は、M及びEから選択されるアミノ酸である。配列番号170は、アミノ酸SQX1X2HVPX3Tで表され、ここで、X1は、N、T、及びSからなる群から選択されるアミノ酸であり、X2は、T及びIから選択されるアミノ酸であり、X3は、W及びYから選択されるアミノ酸である。
【００１１】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、若しくは41と少なくとも95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域又は配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、若しくは42と少なくとも95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００１２】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片は:
(a)配列番号1のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号2のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(b)配列番号3のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号4のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(c)配列番号5のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号6のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(d)配列番号7のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号8のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(e)配列番号9のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号10のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(f)配列番号11のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号12のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(g)配列番号13のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号14のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(h)配列番号15のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号16のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(i)配列番号17のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号18のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(j)配列番号19のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号20のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(k)配列番号21のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号22のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(l)配列番号23のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号24のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(m)配列番号25のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号26のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(n)配列番号27のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号28のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(o)配列番号29のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号30のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(p)配列番号31のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号32のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(q)配列番号33のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号34のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(r)配列番号35のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号36のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(s)配列番号37のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号38のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(t)配列番号39のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号40のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;又は
(u)配列番号41のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号42のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む。
【００１３】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、キメラである。
【００１４】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ヒトのものであるか又はヒト化されたものである。
【００１５】
ある特定の実施形態では、ヒト化されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は:
(a)配列番号171のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号175のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(b)配列番号172のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号175のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(c)配列番号173のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号176のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;又は
(d)配列番号174のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号176のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む。
【００１６】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、TIM-3のホスファチジルセリン(PtdSer)への結合、TIM-3のガレクチン-9(Gal-9)への結合、TIM-3の癌胎児抗原細胞接着分子1(CEACAM1)への結合、及び/又はTIM-3の高移動度群タンパク質B1(HMGB1)への結合を阻止することが可能である。
【００１７】
本明細書に開示されている本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする単離された核酸も提供される。
【００１８】
本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする単離された核酸を含むベクターも提供される。
【００１９】
本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする単離された核酸を含むベクターを含む宿主細胞も提供される。
【００２０】
ある特定の実施形態では、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【００２１】
それを必要とする対象において、TIM-3のホスファチジルセリン(PtdSer)への結合、TIM-3のガレクチン-9(Gal-9)への結合、TIM-3の癌胎児抗原細胞接着分子1(CEACAM1)への結合、及び/又はTIM-3の高移動度群タンパク質B1(HMGB1)への結合を阻止する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法も提供される。
【００２２】
それを必要とする対象において、がんを処置する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法も提供される。がんは、任意の液状がん(liquid cancer)又は固形がんであってもよく、例えば、以下に限定されないが、肺がん、胃がん、結腸がん、肝細胞癌、腎細胞癌、膀胱尿路上皮癌、転移性黒色腫、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、頭頚部がん、膵臓がん、神経膠腫、神経膠芽腫、及び他の固形腫瘍、並びに非ホジキンリンパ腫(NHL)、急性リンパ性白血病(ALL)、慢性リンパ性白血病(CLL)、慢性骨髄性白血病(CML)、多発性骨髄腫(MM)、急性骨髄性白血病(AML)、及び他の液状腫瘍から選択され得る。
【００２３】
それを必要とする対象において、感染性疾患を処置する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法も提供される。
【００２４】
それを必要とする対象において、炎症性疾患を処置する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法も提供される。
【００２５】
それを必要とする対象において、自己免疫疾患を処置する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法も提供される。
【００２６】
それを必要とする対象において、代謝性疾患を処置する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法も提供される。
【００２７】
本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生産する方法であって、モノクローナル抗体又は抗原結合断片を産生する条件下で、モノクローナル抗体又は抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を培養するステップ、及び細胞又は培養物から抗体又は抗原結合断片を回収するステップを含む方法も提供される。
【００２８】
本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を生産する方法であって、モノクローナル抗体又は抗原結合断片を薬学的に許容される担体と配合して、医薬組成物を得るステップを含む方法も提供される。
【００２９】
対象のTIM-3のレベルを決定する方法も提供される。この方法は、(a)対象から試料を得るステップ;(b)試料を本発明の抗体又はその抗原結合断片と接触させるステップ;及び(c)対象のTIM-3のレベルを決定するステップを含む。ある特定の実施形態では、試料は、組織試料又は血液試料である。組織試料は、例えば、がん組織試料であってもよい。血液試料は、例えば、がん細胞を含んでもよい。
【００３０】
前述の概要、及び本出願の好ましい実施形態についての以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読まれるとより理解されるであろう。しかしながら、本出願は、図面に示されるまさにその実施形態に限定されないことが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１−１】図1は、PtdSerへのヒトTIM-3の結合の、抗TIM-3モノクローナル抗体(mAb)による阻害について示す。ELISAプレートをPtdSer又はPtdCholでコーティングし、洗浄し、様々な濃度の精製抗体とTIM3(ECD)-huFcの予め平衡化した混合物と共にインキュベートした。プレートを洗浄し、次いで、HRPを結合させた抗huFc二次抗体と共に、次いで、HRP基質と共にインキュベートすることによってシグナルを検出した。PtdSerへのTIM-3の結合を100%シグナルとして使用し、PtdCholへのTIM-3の結合をゼロ(バックグラウンド)として使用し、所与のmAbによる阻害のパーセントを計算した。図1Aは、抗TIM-3抗体20-L10-A、16-K5-A、15-L23-A、及び2-K2-Aによる、PtdSerへのヒトTIM-3の結合の阻害についてのグラフを示す。図1Bは、抗TIM-3抗体12-G18-A、5-C11-A、及び19-A14-Aによる、PtdSerへのヒトTIM-3の結合の阻害についてのグラフを示す。図1Cは、抗TIM-3抗体10-M21-A、18-N1-A、及び16-L3-Aによる、PtdSerへのヒトTIM-3の結合の阻害についてのグラフを示す。図1Dは、抗TIM-3抗体12-M11-A、5-K4-A、及び16-J5-Aによる、PtdSerへのヒトTIM-3の結合の阻害についてのグラフを示す。図1Eは、抗TIM-3抗体7-P15-A、8-F3-A、10-O15-A、及び18-O22-Aによる、PtdSerへのヒトTIM-3の結合の阻害についてのグラフを示す。図1Fは、抗TIM-3抗体6-I13-A、6-H6-A、及び7-N2-Aによる、PtdSerへのヒトTIM-3の結合の阻害についてのグラフを示す。
【図１−２】図1-1の続きである。
【図１−３】図1-2の続きである。
【図２】図2は、抗TIM-3 mAbのFACS結合分析を示す。ヒトTIM-3(「HuTIM-3細胞」と表示した)又は親HEK293細胞(「CTL細胞」と表示した)で一過性トランスフェクトしたHEK293細胞への精製された抗TIM-3 mAbの結合を3つの異なる濃度でFACSによって試験した。検出のために、抗マウス二次抗体(Ab) AlexaFluor488を使用した。
【図３】図3A及び3Bは、ELISAアッセイでプレートに固定した組換えヒトTIM-3(ECD)-6Hisへの、キメラ及びヒト化バージョンのmAb 16-K5-Aの結合の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
様々な刊行物、文献及び特許が背景技術及び本明細書の全体を通して引用又は記載され、これらの参照文献のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれている文書、作用、材料、デバイス、物品などについての議論は、本発明に関する背景を提供することを目的とする。このような議論は、これらの事項のいずれか又はすべてが、開示されるか又は特許請求される任意の発明に関して先行技術の一部を形成することを認めるものではない。
【００３３】
別途定義されていない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、この発明が関与する技術分野の当業者に通常理解されるものと同じ意味を有する。そうでなければ、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書に示す意味を有する。
【００３４】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「a」、「an」、及び「the」は、別途この文脈で明確に示されていない限り、複数の対象を含む。
【００３５】
別途記載されていない限り、任意の数値、例えば、本明細書に記載の濃度又は濃度範囲は、すべての例で、用語「約」で修飾されているものと理解されるべきである。よって、数値は、通常は、記載された値の±10%を含む。例えば、1mg/mLの濃度は、0.9mg/mL〜1.1mg/mLを含む。同様に、1%〜10%(w/v)の濃度範囲は、0.9%(w/v)から11%(w/v)までを含む。本明細書で使用する場合、数値範囲の使用は、文脈が別途明確に示していない限り、そのような範囲内の整数及びその値の分数を含む、可能性のあるすべての下位範囲、その範囲内のすべての個々の数値を明確に含む。
【００３６】
別途示されていない限り、一連の要素に先行する用語「少なくとも」は、その連続したあらゆる要素を指すものと理解されるべきである。当業者であれば、単なる慣用の実験を使用して、本明細書に記載の本発明の具体的実施形態の多くの均等物を認識するか、又は確認することができるであろう。このような均等物は、本発明に包含されることが意図される。
【００３７】
本明細書で使用する場合、用語「含む(comprises)」、「含むこと(comprising)」、「含む(includes)」、「含むこと(including)」、「有する(has)」、「有すること(having)」、「含有する(contains)」若しくは「含有すること(containing)」、又はその任意の他の変形は、記載された整数又は整数の群の包含を意味するが、任意の他の整数又は整数の群の除外を意味するものではなく、非排他的又はオープンエンドであることを意図するものである。例えば、要素の列挙を含む組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置は、これらの要素のみに必ずしも限定されるものではなく、明示的に列挙されていないか又はこのような組成物、混合物、プロセス、方法、物品、若しくは装置に固有の他の要素を含み得る。さらに、明示的にその逆が述べられていない限り、「又は(or)」は、包括的な又はを指し、排他的な又はを指すものではない。例えば、条件A又はBは、以下のうちのいずれか1つを満たす:Aが真であり(又は存在し)Bが偽である(又は存在しない)；Aが偽であり(又は存在しない)Bが真である(又は存在する)；及びAとBの両方が真である(又は存在する)。
【００３８】
本明細書で使用する場合、複数の記載された要素間の接続的用語「及び/又は」は、個々の選択肢及び組み合わせた選択肢の両方を包含するものと理解される。例えば、2つの要素が「及び/又は」により接続される場合、第1の選択肢は、第2の要素なしでの第1の要素の適用性を指す。第2の選択肢は、第1の要素なしでの第2の要素の適用性を指す。第3の選択肢は、第1及び第2の要素の一緒の適用性を指す。これらの選択肢のいずれか1つは、その意味の範囲内にあると理解され、したがって、本明細書で使用される用語「及び/又は」の要件を満たす。この選択肢の1つ以上の同時適用も、この意味に含まれると理解され、したがって、用語「及び/又は」の要件を満たす。
【００３９】
本明細書で使用する場合、本明細書及び特許請求の範囲の全体を通して使用される用語「からなる(consists of)」、又はその変形、例えば、「からなる(consist of)」若しくは「からなる(consisting of)」は、任意の記載された整数又は整数の群の包含を示すが、さらなる整数又は整数の群を特定の方法、構造、又は組成物に追加することはできない。
【００４０】
本明細書で使用する場合、本明細書及び特許請求の範囲の全体を通して使用される、用語「から本質的になる(consists essentially of)」、又はその変形、例えば、「から本質的になる(consist essentially of)」若しくは「から本質的になる(consisting essentially of)」は、任意の記載された整数又は整数の群の包含、及び特定の方法、構造又は組成物の基本的な又は新規な特性を実質的に変えない任意の記載された整数又は整数の群の任意選択の包含を示す。M.P.E.P.§2111.03を参照のこと。
【００４１】
本明細書で使用する場合、「対象」は、任意の動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。用語「哺乳動物」は、本明細書で使用する場合、任意の哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、これらに限定されないが、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒトなど、より好ましくはヒトが挙げられる。
【００４２】
用語「右」、「左」、「下」、及び「上」は、言及される図面の方向を示す。
【００４３】
好ましい発明の構成要素の寸法又は特徴に言及する場合に本明細書で使用する用語「約(about)」、「およそ(approximately)」、「全般的に(generally)」、「実質的に(substantially)」などの用語は、記載された寸法/特徴が、厳密な境界又はパラメータではなく、当業者に理解されるように、機能的に同じか又は同様のそれらの軽微な変化を除外するものではないことも理解されるべきである。少なくとも、数値パラメータを含むこのような言及は、当技術分野で許容される数学的及び工業的原理(例えば、丸め誤差、測定誤差又は他の系統誤差、製作公差など)を使用した場合に少なくとも最下位桁を変化させないばらつきを含む。
【００４４】
2つ以上の核酸又はポリペプチド配列(例えば、抗TIM-3抗体、TIM-3ポリペプチド、及びそれらをコードするポリヌクレオチド)の文脈における、用語「同一の」又は「同一性」パーセントは、以下の配列比較アルゴリズムのうちの1つを使用するか又は目視検査によって測定して最大一致となるように比較及びアライメントされた場合に、同じであるか、又は同じであるアミノ酸残基若しくはヌクレオチドを特定のパーセンテージで有する、2つ以上の配列又は部分配列を指す。
【００４５】
配列比較では、通常は、1つの配列が、試験配列が比較される参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列及び参照配列がコンピュータに入力され、必要に応じて部分配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。次いで、配列比較アルゴリズムによって、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列と比較した試験配列に関する配列同一性パーセントが計算される。
【００４６】
比較のために最適な配列アラインメントは、例えば、Smith及びWaterman、Adv. Appl. Math. 2:482(1981)のローカルホモロジーアルゴリズムによって、Needleman及びWunsch、J. Mol. Biol. 48:443(1970)のホモロジーアラインメントアルゴリズムによって、Pearson及びLipman、Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444(1988)の類似性検索法によって、これらのアルゴリズム(Wisconsin Genetics Software Package、Genetics Computer Group、575 Science Dr., Madison、WIのGAP、BESTFIT、FASTA、及びTFASTA)のコンピュータ上での実行によって、又は目視検査(全般的に、Current Protocols in Molecular Biology、F.M. Ausubelら編、Current Protocols、Greene Publishing Associates, Inc.とJohn Wiley & Sons, Inc.の合弁事業、(1995補遺)(Ausubel)を参照のこと)によって行うことができる。
【００４７】
配列同一性パーセント及び配列類似性を決定するのに好適なアルゴリズム例は、Altschulら(1990)J. Mol. Biol. 215:403〜410頁及びAltschulら(1997)Nucleic Acids Res. 25:3389〜3402頁にそれぞれ記載される、BLAST及びBLAST2.0アルゴリズムである。BLAST分析を実施するためのソフトウェアは、米国立生物工学情報センター(National Center for Biotechnology Information)を通じて公的に利用可能である。このアルゴリズムはまず、データベース配列中の同じ長さのワードと整列させた場合、ある正の値の閾値スコアTと一致するか又はそれを満たすかのいずれかである、クエリー配列中の長さWの短いワードを特定することによって、高スコア配列対(HSP)を特定することを伴う。Tは、隣接ワードスコア閾値と呼ばれる(Altschulら、上掲)。これらの初期隣接ワードヒットは、それらを含有するより長いHSPを見出すための検索を開始するためのシードとして作用する。次いで、このワードヒットは、累積アラインメントスコアが増加し得る限り、各配列に沿って両方向に伸長される。
【００４８】
累積スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメータM(一致する残基の対に関するリワードスコア;常に0より大きい)及びN(ミスマッチの残基に関するペナルティスコア;常に0より小さい)を使用して計算される。アミノ酸配列については、スコアリングマトリックスを使用して、累積スコアを計算する。累積アラインメントスコアがその最大達成値から量X下降するか;累積スコアが1つ以上の負のスコアリングの残基アラインメントの蓄積のために、0以下になるか;又はいずれかの配列の末端に達するかした場合、それぞれの方向でのワードヒットの伸長が停止される。BLASTアルゴリズムパラメータW、T及びXは、アラインメントの感度及び速度を決定する。BLASTNプログラム(ヌクレオチド配列について)は、ワード長(W)を11、期待値(E)を10、M=5、N=-4、及び両鎖の比較をデフォルトとして使用する。アミノ酸配列については、BLASTPプログラムは、ワード長(W)を3、期待値(E)を10、及びBLOSUM62スコアリングマトリックス(Henikoff及びHenikoff、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915頁(1989)を参照のこと)をデフォルトとして使用する。
【００４９】
配列同一性パーセントを計算することに加えて、BLASTアルゴリズムはまた、2つの配列間の類似性の統計分析も実施する(例えば、Karlin及びAltschul、Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 90:5873〜5787頁(1993)を参照のこと)。BLASTアルゴリズムによって提供される類似性の1つの尺度は、2つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然に生じる確率の指標を提供する最小和確率(P(N))である。例えば、試験核酸と参照核酸との比較における最小和確率が約0.1未満、より好ましくは約0.01未満、最も好ましくは約0.001未満である場合、その核酸は参照配列と類似すると考えられる。
【００５０】
2つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同一であることのさらなる指標は、第1の核酸によってコードされるポリペプチドが、以下に記載されるように、第2の核酸によってコードされるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であることである。よって、ポリペプチドは、典型的には、例えば、2つのペプチドが保存的置換によってのみ異なる場合に、第2のポリペプチドと実質的に同一である。2つの核酸配列が実質的に同一であることの別の指標は、2つの分子が、ストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。
【００５１】
抗体
本発明は、全般的に、単離された抗TIM-3抗体、これらの抗体をコードする核酸及び発現ベクター、このベクターを含有する組換え細胞、並びにこれらの抗体を含む組成物に関する。これらの抗体を作製する方法、並びにがん、炎症性疾患、自己免疫疾患、代謝性疾患、及び/又は感染性疾患を含む疾患を処置するためにこれらの抗体を使用する方法も提供される。本発明の抗体は、以下に限定されないが、TIM-3への高親和性結合、TIM-3への高い特異性、TIM-3のホスファチジルセリン(PtdSer)への結合を阻止する能力、TIM-3のガレクチン-9への結合を阻止する能力、TIM-3の癌胎児抗原細胞接着分子1(CEACAM1)への結合を阻止する能力、TIM-3の高移動度群タンパク質B1(HMGB1)への結合を阻止する能力、以下に限定されないがIL-2及びIFN-γなどのサイトカインの産生を刺激する能力、並びに単独又は他の抗がん治療と組み合わせて投与した場合の動物モデル及び対象における腫瘍成長を阻害する能力を含む、1つ以上の望ましい機能的特性を有する。
【００５２】
全般的態様では、本発明は、TIM-3に結合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【００５３】
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、広義の意味で使用され、免疫グロブリン又は抗体分子を含み、モノクローナル若しくはポリクローナルである、ヒトの、ヒト化された、複合体の及びキメラの抗体及び抗体断片を含む。一般的に、抗体は、特定の抗原への結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖である。抗体構造は周知である。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインアミノ酸配列に応じて5つの主要なクラス(すなわち、IgA、IgD、IgE、IgG及びIgM)に割り当てることができる。IgA及びIgGは、アイソタイプIgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3及びIgG4にさらに細分類される。したがって、本発明の抗体は、5つの主要なクラス又は対応するサブクラスのいずれかのものであり得る。好ましくは、本発明の抗体は、IgG1、IgG2、IgG3又はIgG4である。脊椎動物種の抗体軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、2つの明確に異なるタイプ、すなわち、カッパ及びラムダのうちの一方に割り当てることができる。したがって、本発明の抗体は、カッパ又はラムダ軽鎖定常ドメインを含有し得る、特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、ラット又はヒト抗体由来の重鎖及び/又は軽鎖定常領域を含む。重鎖及び軽鎖定常ドメインに加えて、抗体は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域から構成される抗原結合領域を含み、その軽鎖可変領域及び重鎖可変領域のそれぞれが3つのドメイン(すなわち、相補性決定領域1〜3;CDR1、CDR2、及びCDR3)を含む。軽鎖可変領域のドメインは、代わりに、LCDR1、LCDR2、及びLCRD3と称され、重鎖可変領域のドメインは、代わりに、HCDR1、HCRD2、及びHCDR3と称される。
【００５４】
本明細書で使用する場合、用語「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す(例えば、TIM-3に特異的に結合する単離された抗体は、TIM-3に結合しない抗体を実質的に含まない)。さらに、単離された抗体は、他の細胞材料及び/又は化学物質を実質的に含まない。
【００５５】
本明細書で使用する場合、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団に含む個々の抗体は、わずかな量で存在し得る天然に存在する可能性のある突然変異を除いて、同一である。本発明のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ技法、単一リンパ球遺伝子クローニング技法によって、又は組換えDNA法によって、作製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、ヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウス又はラットから得られるB細胞を含むハイブリドーマによって産生させることができる。
【００５６】
本明細書で使用する場合、用語「抗原結合断片」は、例えば、ダイアボディ、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv断片、ジスルフィド安定化Fv断片(dsFv)、(dsFv)2、二重特異的dsFv(dsFv-dsFv')、ジスルフィド安定化ダイアボディ(dsダイアボディ)、単鎖抗体分子(scFv)、単一ドメイン抗体(sdab)、scFv二量体(二価のダイアボディ)、1つ以上のCDRを含む抗体の一部から形成された多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片などの、抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体又は親抗体断片が結合するのと同じ抗原に結合することが可能である。特定の実施形態によれば、抗原結合断片は、軽鎖可変領域、軽鎖定常領域、及び重鎖のFdセグメントを含む。他の特定の実施形態によれば、抗原結合断片は、Fab及びF(ab')を含む。
【００５７】
本明細書で使用する場合、用語「単鎖抗体」は、約15〜約20アミノ酸の短いペプチドによって連結した重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、この分野の従来の単鎖抗体を指す。本明細書で使用する場合、用語「単一ドメイン抗体」は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むか又は重鎖可変領域のみを含む、この分野の従来の単一ドメイン抗体を指す。
【００５８】
本明細書で使用する場合、用語「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体又は当技術分野で公知の任意の技法を使用して作製されるヒトによって産生される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。ヒト抗体のこの定義は、インタクトな若しくは完全長の抗体、その断片、並びに/又は少なくとも1つのヒト重鎖及び/若しくは軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。
【００５９】
本明細書で使用する場合、用語「ヒト化抗体」は、抗体の抗原結合特性は保持されるが、ヒトの身体におけるその抗原性は低下するように、ヒト抗体のものに対する配列相同性を増加させるよう改変されている、非ヒト抗体を指す。
【００６０】
本明細書で使用する場合、用語「キメラ抗体」は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が2つ以上の生物種に由来する抗体を指す。軽鎖と重鎖の両方の可変領域が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する哺乳動物のうちの1種(例えば、マウス、ラット、ウサギなど)に由来する抗体の可変領域に対応する場合が多く、一方、定常領域は、その種における免疫応答の誘発を回避するために、哺乳動物の別の種(通常、ヒト)に由来する抗体の配列に対応する。
【００６１】
本明細書で使用する場合、用語「多重特異性抗体」は、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む抗体を指し、この複数のうち第1の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第1のエピトープに対する結合特異性を有し、この複数のうち第2の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第2のエピトープに対する結合特異性を有する。一実施形態では、第1及び第2のエピトープは、同じ抗原上、例えば、同じタンパク質(又は多量体タンパク質の同じサブユニット)上にある。一実施形態では、第1及び第2のエピトープは、重複しているか又は実質的に重複している。一実施形態では、第1及び第2のエピトープは、重複していないか又は実質的に重複していない。一実施形態では、第1及び第2のエピトープは、異なる抗原上、例えば、異なるタンパク質(又は多量体タンパク質の異なるサブユニット)上にある。一実施形態では、多重特異性抗体は、第3、第4、又は第5の免疫グロブリン可変ドメインを含む。一実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体、又は四重特異性抗体分子である。
【００６２】
本明細書で使用する場合、用語「二重特異性抗体」は、たった2つのエピトープ又は2つの抗原に結合する多重特異性抗体を指す。二重特異性抗体は、第1のエピトープに対する結合特異性を有する第1の免疫グロブリン可変ドメイン配列と、第2のエピトープに対する結合特異性を有する第2の免疫グロブリン可変ドメイン配列とによって特徴付けられる。一実施形態では、第1及び第2のエピトープは、同じ抗原上、例えば、同じタンパク質(又は多量体タンパク質の同じサブユニット)上にある。一実施形態では、第1及び第2のエピトープは、重複しているか又は実質的に重複している。一実施形態では、第1及び第2のエピトープは、異なる抗原上、例えば、異なるタンパク質(又は多量体タンパク質の異なるサブユニット)上にある。一実施形態では、二重特異性抗体は、第1のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、第2のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列とを含む。一実施形態では、二重特異性抗体は、第1のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体、又はその断片、及び第2のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体、又はその断片を含む。一実施形態では、二重特異性抗体は、第1のエピトープに対する結合特異性を有するscFv、又はその断片、及び第2のエピトープに対する結合特異性を有するscFv、又はその断片を含む。一実施形態では、第1のエピトープは、TIM-3上に位置し、第2のエピトープは、PD-1、PD-L1、LAG-3、CTLA-4、EGFR、HER-2、CD19、CD20、CD33、DLL-3、CD73、アペリン、CD3、CD47、TIP-1、CLDN18.2、FOLR1及び/又は他の腫瘍関連免疫サプレッサー若しくは表面抗原上に位置する。
【００６３】
本明細書で使用する場合、用語「TIM-3」は、樹状細胞(DC)、マクロファージ及びナチュラルキラー(NK)細胞、並びにリンパ球細胞のサブセット、例えば、T細胞を含む、骨髄細胞上に発現される受容体である、T細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有分子3タンパク質を指す。TIM-3は、アポトーシス小体又は細胞の食作用に対する主要なシグナルである、ホスファチジルセリン(PtdSer)に結合することが可能である。PtdSerとTIM-3の結合が特定の抗体で阻止される場合、アポトーシス小体は除去されず、免疫学的異常、例えば、自己抗体の生成を誘導し得る(Ocana-Guzmanら、「TIM-3 regulates distinct functions in macrophages」、Frontiers in Immunology  第7巻、Art. 229(2016)にて総論)。TIM-3は、単球及びマクロファージにおけるサイトカインの産生及び放出を調節することができる(Ocana-Guzmanら、同上にて総論)。用語「ヒトTIM-3」は、ヒトを起源とするTIM-3を指す。ヒトTIM-3の例示的アミノ酸配列は、GenBankアクセッション番号Q8TDQ0.3又はGenBankアクセッション番号NP_116171.3(配列番号177)に示される。
【００６４】
本明細書で使用する場合、「TIM-3に特異的に結合する」抗体は、1×10-7M以下、好ましくは1×10-8M以下、より好ましくは5×10-9M以下、1×10-9M以下、5×10-10M以下、又は1×10-10M以下のKDで、TIM-3、好ましくはヒトTIM-3に結合する抗体を指す。用語「KD」は、解離定数を指し、Kaに対するKdの比率(すなわち、Kd/Ka)から得られ、モル濃度(M)として表される。抗体に対するKD値は、本開示に鑑みて、当技術分野における方法を使用して決定することができる。例えば、抗体のKDは、表面プラズモン共鳴を使用して、例えば、バイオセンサーシステム、例えば、Biacore(登録商標)システムを使用して、又はバイオレイヤー干渉法、例えば、Octet RED96システムを使用して、決定することができる。
【００６５】
抗体のKD値が小さいほど、抗体が標的抗原に結合する親和性は高くなる。
【００６６】
特定の態様によれば、本発明は:
(1)それぞれ、配列番号43、44、169、106、107、及び170;
(2)それぞれ、配列番号55、56、57、118、119、及び120;
(3)それぞれ、配列番号58、59、60、121、122、及び123;
(4)それぞれ、配列番号61、62、63、124、125、及び126;
(5)それぞれ、配列番号64、65、66、127、128、及び129;
(6)それぞれ、配列番号67、68、69、130、131、及び132;
(7)それぞれ、配列番号70、71、72、133、134、及び135;
(8)それぞれ、配列番号73、74、75、136、137、及び138;
(9)それぞれ、配列番号76、77、78、139、140、及び141;
(10)それぞれ、配列番号79、80、81、142、143、及び144;
(11)それぞれ、配列番号82、83、84、145、146、及び147;
(12)それぞれ、配列番号85、86、87、148、149、及び150;
(13)それぞれ、配列番号88、89、90、151、152、及び153;
(14)それぞれ、配列番号91、92、93、154、155、及び156;
(15)それぞれ、配列番号94、95、96、157、158、及び159;
(16)それぞれ、配列番号97、98、99、160、161、及び162;
(17)それぞれ、配列番号100、101、102、163、164、及び165;又は
(18)それぞれ、配列番号103、104、105、166、167、及び168;
のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含み、TIM-3、好ましくはヒトTIM-3に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【００６７】
配列番号169は、アミノ酸配列ARDX1X2DYで表され、ここで、X1は、A、T、及びLからなる群から選択されるアミノ酸であり、X2は、M及びEから選択されるアミノ酸である。
【００６８】
配列番号170は、アミノ酸配列SQX1X2HVPX3Tで表され、ここで、X1は、N、T、及びSからなる群から選択されるアミノ酸であり、X2は、T及びIから選択されるアミノ酸であり、X3は、W及びYから選択されるアミノ酸である。
【００６９】
別の特定の態様によれば、本発明は、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、若しくは41のうちの1つと少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、若しくは42のうちの1つと少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。好ましい一実施形態によれば、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、又は41と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、又は42と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００７０】
別の特定の態様によれば、本発明は、
a.  配列番号1のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号2のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
b.  配列番号3のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号4のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
c.  配列番号5のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号6のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
d.  配列番号7のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号8のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
e.  配列番号9のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号10のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
f.  配列番号11のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号12のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
g.  配列番号13のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号14のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
h.  配列番号15のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号16のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
i.  配列番号17のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号18のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
j.  配列番号19のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号20のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
k.  配列番号21のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号22のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
l.  配列番号23のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号24のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
m.  配列番号25のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号26のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
n.  配列番号27のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号28のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
o.  配列番号29のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号30のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
p.  配列番号31のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号32のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
q.  配列番号33のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号34のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
r.  配列番号35のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号36のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
s.  配列番号37のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号38のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
t.  配列番号39のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号40のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;又は
u.  配列番号41のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号42のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【００７１】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号43、44、45、106、107、及び108のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号1と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号2と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号1のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号2のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００７２】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号46、47、48、109、110、及び111のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号3と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号4と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号3のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号4のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００７３】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号49、50、51、112、113、及び114のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号5と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号6と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号5のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号6のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００７４】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号52、53、54、115、116、及び117のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号7と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号8と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号7のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号8のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００７５】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号55、56、57、118、119、及び120のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号9と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号10と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号9のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号10のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００７６】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号58、59、60、121、122、及び123のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号11と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号12と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号11のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号12のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００７７】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号61、62、63、124、125、及び126のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号13と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号14と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号13のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号14のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００７８】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号64、65、66、127、128、及び129のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号15と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号16と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号15のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号16のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００７９】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号67、68、69、130、131、及び132のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号17と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号18と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号17のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号18のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００８０】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号70、71、72、133、134、及び135のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号19と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号20と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号19のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号20のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００８１】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号73、74、75、136、137、及び138のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号21と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号22と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号21のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号22のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００８２】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号76、77、78、139、140、及び141のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号23と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号24と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号23のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号24のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００８３】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号79、80、81、142、143、及び144のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号25と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号26と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号25のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号26のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００８４】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号82、83、84、145、146、及び147のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号27と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号28と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号27のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号28のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００８５】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号85、86、87、148、149、及び150のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号29と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号30と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号29のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号30のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００８６】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号88、89、90、151、152、及び153のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号31と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号32と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号31のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号32のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００８７】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号91、92、93、154、155、及び156のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号33と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号34と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号33のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号34のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００８８】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号94、95、96、157、158、及び159のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号35と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号36と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号35のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号36のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００８９】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号97、98、99、160、161、及び162のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号37と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号38と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号37のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号38のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００９０】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号100、101、102、163、164、及び165のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号39と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号40と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号39のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号40のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００９１】
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号103、104、105、166、167、及び168のポリペプチド配列を有するHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号41と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号42と少なくとも85%、好ましくは90%、より好ましくは95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号41のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号42のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００９２】
別の特定の態様によれば、本発明は、キメラである、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【００９３】
別の特定の態様によれば、本発明は、ヒトの又はヒト化された、本発明の単離されたヒト化モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【００９４】
別の特定の態様によれば、本発明は:
(a)配列番号171のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号175のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(b)配列番号172のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号175のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(c)配列番号173のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号176のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;又は
(d)配列番号174のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号176のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【００９５】
別の特定の態様によれば、本発明は、TIM-3のホスファチジルセリン(PtdSer)への結合、TIM-3のガレクチン-9(Gal-9)への結合、TIM-3の癌胎児抗原細胞接着分子1(CEACAM1)への結合、及び/又はTIM-3の高移動度群タンパク質B1(HMGB1)への結合を阻止することが可能な、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【００９６】
別の一般的態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離された核酸に関する。タンパク質のコード配列を、タンパク質のアミノ酸配列を変化させることなく、変化させる(例えば、置換、欠失、挿入など)ことができることは当業者によって認識されるであろう。したがって、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸配列は、タンパク質のアミノ酸配列を変化させることなく変更され得ることは、当業者によって理解されるであろう。
【００９７】
別の一般的態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする単離された核酸を含むベクターに関する。本開示を鑑みて、当業者に公知の任意のベクター、例えば、プラスミド、コスミド、ファージベクター又はウイルスベクターを使用することができる。一部の実施形態では、ベクターは、組換え発現ベクター、例えば、プラスミドである。ベクターは、発現ベクターの従来の機能を確立するための任意の要素、例えば、プロモーター、リボソーム結合エレメント、ターミネーター、エンハンサー、選択マーカー、及び複製起点を含むことができる。プロモーターは、構成性、誘導性又は抑制性プロモーターであってもよい。核酸を細胞に送達することが可能な多くの発現ベクターが、当技術分野で公知であり、本明細書において、細胞における抗体又はその抗原結合断片の生産に使用することができる。本発明の実施形態によれば、従来のクローニング技法又は人工遺伝子合成を使用して組換え発現ベクターを生成することができる。
【００９８】
別の一般的態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする単離された核酸を含む宿主細胞に関する。本開示に鑑みて、当業者に公知の任意の宿主細胞を、本発明の抗体又はその抗原結合断片の組換え発現に使用することができる。一部の実施形態では、宿主細胞は、大腸菌(E. coli)TG1若しくはBL21細胞(例えば、scFv又はFab抗体の発現用)、CHO-DG44若しくはCHO-K1細胞又はHEK293細胞(例えば、完全長IgG抗体の発現用)である。特定の実施形態によれば、従来の方法、例えば、化学的トランスフェクション、熱ショック、又はエレクトロポレーションによって、組換え発現ベクターは宿主細胞に形質転換され、組換え核酸が有効に発現されるように組換え発現ベクターが宿主細胞のゲノムに安定して組み込まれる。
【００９９】
別の一般的態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生産する方法であって、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を産生する条件下で、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を培養するステップ、及び細胞又は細胞培養物から(例えば、上清から)、抗体又はその抗原結合断片を回収するステップを含む方法に関する。当技術分野で公知であり、本明細書に記載される従来の技法に従って、発現された抗体又はその抗原結合断片を細胞から採取し、精製することができる。
【０１００】
医薬組成物
別の一般的態様では、本発明は、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。用語「医薬組成物」は、本明細書で使用する場合、本発明の抗体を、薬学的に許容される担体と一緒に含む生産物を意味する。本発明の抗体及びこれらを含む組成物は、本明細書で言及した治療適用のための医薬の製造においても有用である。
【０１０１】
本明細書で使用する場合、用語「担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、相溶剤、油、脂質、ベシクルを含む脂質、マイクロスフェア、リポソーム封入、又は医薬製剤において使用するための当技術分野で周知の他の材料を指す。担体、賦形剤又は希釈剤の特徴は、特定の適用のための投与経路に依存することが理解されよう。本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容される担体」は、本発明による組成物の有効性又は本発明による組成物の生物学的活性を妨げない非毒性材料を指す。特定の実施形態によれば、本開示に鑑みて、抗体医薬組成物において使用するのに好適な任意の薬学的に許容される担体を、本発明において使用することができる。
【０１０２】
薬学的に活性な成分の薬学的に許容される担体との製剤化は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy(例えば、第21版(2005)、その後の任意の版)にあるように、当技術分野で公知である。追加の成分の非限定例として、緩衝剤、希釈剤、溶媒、張性調節剤、防腐剤、安定剤、及びキレート剤が挙げられる。1つ以上の薬学的に許容される担体を、本発明の医薬組成物の製剤化において使用することができる。
【０１０３】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は、液体製剤である。液体製剤の好ましい例は、水性製剤、すなわち、水を含む製剤である。液体製剤は、溶液、懸濁液、エマルション、マイクロエマルション、ゲルなどを含むことができる。水性製剤は、典型的には、少なくとも50%w/wの水、又は少なくとも60%、70%、75%、80%、85%、90%、又は少なくとも95%w/wの水を含む。
【０１０４】
一実施形態では、医薬組成物は、例えば、注射デバイス(例えば、シリンジ又は輸液ポンプ)を介して注射することができる注射剤として製剤化することができる。注射は、例えば、皮下、筋肉内、腹腔内、硝子体内、又は静脈内に送達することができる。
【０１０５】
別の実施形態では、医薬組成物は、固体製剤、例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥組成物であり、これはそのまま使用してもよく、又は、医師若しくは患者が使用前に溶媒、及び/若しくは希釈剤を添加して使用してもよい。固体剤形としては、錠剤、例えば、圧縮錠剤、及び/又はコーティングされた錠剤、並びにカプセル(例えば、ハード又はソフトゼラチンカプセル)を挙げることができる。医薬組成物はまた、例えば、サッシェ、糖衣錠、粉末、顆粒、トローチ剤、又は再構築用の粉末の形態であってもよい。
【０１０６】
剤形は、即時放出(この場合、水溶性又は分散性担体を含み得る)であってもよく、又は、遅延放出、持続放出、若しくは修正放出(これらの場合は、胃腸管又は皮下における剤形の溶解速度を調節する非水溶性ポリマーを含み得る)であってもよい。
【０１０７】
他の実施形態では、医薬組成物は、鼻腔内、頬内、又は舌下送達され得る。
【０１０８】
水性製剤のpHは、pH3〜pH10の間であり得る。本発明の一実施形態では、製剤のpHは、約7.0〜約9.5である。本発明の別の実施形態では、製剤のpHは、約3.0〜約7.0である。
【０１０９】
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は、緩衝剤を含む。緩衝剤の非限定例として、アルギニン、アスパラギン酸、ビシン、クエン酸塩、リン酸水素二ナトリウム、フマル酸、グリシン、グリシルグリシン、ヒスチジン、リシン、マレイン酸、リンゴ酸、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、コハク酸塩、酒石酸、トリシン、及びトリス(ヒドロキシメチル)-アミノメタン、並びにこれらの混合物が挙げられる。緩衝剤は、個々に又は全体で、約0.01mg/ml〜約50mg/ml、例えば、約0.1mg/ml〜約20mg/mlの濃度で存在してもよい。これらの具体的な緩衝剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【０１１０】
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は、防腐剤を含む。防腐剤の非限定例として、塩化ベンゼトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、ブロノポール、ブチル4-ヒドロキシベンゾエート、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロヘキシジン、クロルフェネシン、o-クレゾール、m-クレゾール、p-クレゾール、エチル4-ヒドロキシベンゾエート、イミド尿素、メチル4-ヒドロキシベンゾエート、フェノール、2-フェノキシエタノール、2-フェニルエタノール、プロピル4-ヒドロキシベンゾエート、デヒドロ酢酸ナトリウム、チメロサール、及びこれらの混合物が挙げられる。防腐剤は、個々に又は全体で、約0.01mg/ml〜約50mg/ml、例えば、約0.1mg/ml〜約20mg/mlの濃度で存在してもよい。これらの具体的な防腐剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【０１１１】
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は、等張剤を含む。本実施形態の非限定例として、塩(例えば、塩化ナトリウム)、アミノ酸(例えば、グリシン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、及びトレオニン)、アルジトール(例えば、グリセロール、1,2-プロパンジオールプロピレングリコール)、1,3-プロパンジオール、及び1,3-ブタンジオール)、ポリエチレングリコール(例えば、PEG400)、及びこれらの混合物が挙げられる。等張剤の別の例としては、糖が挙げられる。糖の非限定例は、単糖類、二糖類、若しくは多糖類、又は水溶性グルカンであってもよく、例えば、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、ショ糖、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、アルファ及びベータ-HPCD、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウムが挙げられる。等張剤の別の例は糖アルコールであり、用語「糖アルコール」は、少なくとも1つの-OH基を有するC(4〜8)炭化水素として定義される。糖アルコールの非限定例として、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール、及びアラビトールが挙げられる。等張剤は、個々に又は全体で、約0.01mg/ml〜約50mg/ml、例えば、約0.1mg/ml〜約20mg/mlの濃度で存在してもよい。これらの具体的な等張剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【０１１２】
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は、キレート剤を含む。キレート剤の非限定例として、クエン酸、アスパラギン酸、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)の塩、及びこれらの混合物が挙げられる。キレート剤は、個々に又は全体で、約0.01mg/ml〜約50mg/ml、例えば、約0.1mg/ml〜約20mg/mlの濃度で存在してもよい。これらの具体的なキレート剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【０１１３】
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は、安定剤を含む。安定剤の非限定例として、1つ以上の凝集阻害剤、1つ以上の酸化阻害剤、1つ以上の界面活性剤、及び/又は1つ以上のプロテアーゼ阻害剤が挙げられる。
【０１１４】
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は、安定剤を含み、前記安定剤は、カルボキシ/ヒドロキシセルロース及びその誘導体(例えば、HPC、HPC-SL、HPC-L及びHPMC)、シクロデキストリン、2-メチルチオエタノール、ポリエチレングリコール(例えば、PEG3350)、ポリビニルアルコール(PVA)、ポリビニルピロリドン、塩(例えば、塩化ナトリウム)、硫黄含有物質、例えば、モノチオグリセロール)、又はチオグリコール酸である。安定剤は、個々に又は全体で、約0.01mg/ml〜約50mg/ml、例えば、約0.1mg/ml〜約20mg/mlの濃度で存在してもよい。これらの具体的な安定剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【０１１５】
本発明のさらなる実施形態では、医薬組成物は、1つ以上の界面活性剤、好ましくは界面活性剤、少なくとも1つの界面活性剤、又は2つの異なる界面活性剤を含む。用語「界面活性剤」は、水溶性(親水性)部分と、脂溶性(親油性)部分とから構成される任意の分子又はイオンを指す。界面活性剤は、例えば、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、及び/又は双極性イオン界面活性剤からなる群から選択することができる。界面活性剤は、個々に又は全体で、約0.1mg/ml〜約20mg/mlの濃度で存在してもよい。これらの具体的な界面活性剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【０１１６】
本発明のさらなる実施形態では、医薬組成物は、1つ以上のプロテアーゼ阻害剤、例えば、EDTA、及び/又は塩酸(HCl)ベンズアミジンなどを含む。プロテアーゼ阻害剤は、個々に又は全体で、約0.1mg/ml〜約20mg/mmlの濃度で存在してもよい。これらの具体的なプロテアーゼ阻害剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【０１１７】
別の一般的態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を生産する方法であって、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を薬学的に許容される担体と配合して、医薬組成物を得るステップを含む方法に関する。
【０１１８】
使用方法
別の一般的態様では、本発明は、TIM-3のホスファチジルセリン(PtdSer)への結合を阻止する方法、TIM-3のガレクチン-9への結合を阻止する方法、TIM-3の癌胎児抗原細胞接着分子1(CEACAM1)への結合を阻止する方法、又はTIM-3の高移動度群タンパク質B1(HMGB1)への結合を阻止する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法に関する。
【０１１９】
TIM-3に結合する抗体及びその抗原結合断片の機能的活性は、当技術分野で公知の方法及び本明細書に記載される方法によって特徴付けることができる。TIM-3に結合する抗体及びその抗原結合断片を特徴付けるための方法として、以下に限定されないが、Biacore、ELISA、及びOctetRed分析を含む親和性及び特異性アッセイ; PtdSer、ガレクチン-9、CEACAM1、及び/又はHMGB1へのTIM-3の結合の阻止を検出するための受容体リガンド結合アッセイが挙げられ、ここで、抗TIM-3 mAbによるPtdSer-TIM-3相互作用の阻害の機能的効果を、TIM-3発現マクロファージがアポトーシスを受けている細胞(それによって、PtdSerを発現している)と共にインキュベートされる細胞ベースの食作用アッセイにおいて検出することができ、PtdSer-TIM-3相互作用のmAbによる阻止によって食作用の増強が導かれる。抗TIM-3 mAbによるGal-9-TIM-3相互作用の阻害の機能的効果は、IFN-γ分泌及び細胞の死滅がAML細胞上のGal-9の、NK細胞上のTIM-3への結合のmAbによる阻止の結果として誘導される細胞ベースのアッセイにおいて、検出することができる。抗TIM-3 mAbによるHMGB1-TIM-3相互作用の阻害の機能的効果は、TIM-3発現細胞がB-DNAと共にインキュベートされる細胞ベースのアッセイにおいて検出することができ、HMGB1-TIM-3相互作用のmAbによる阻止によってINF-β1産生の増加が導かれる。抗TIM-3 mAbの機能的活性は、異なるドナーに由来する樹状細胞及びCD4+細胞が、mAbの存在下で混合され、サイトカイン分泌の刺激が測定されるMixed Lymphocyte Reaction(MLR)アッセイにおいて評価することもできる。特定の実施形態によれば、TIM-3に結合する抗体及びその抗原結合断片を特徴付けるための方法として、以下に記載されるものが挙げられる。
【０１２０】
別の一般的態様では、本発明は、それを必要とする対象において、がんを処置する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法に関する。がんは、例えば、以下に限定されないが、肺がん、胃がん、結腸がん、肝細胞癌、腎細胞癌、膀胱尿路上皮癌、転移性黒色腫、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、頭頚部がん、膵臓がん、神経膠腫、神経膠芽腫、及び他の固形腫瘍、並びに非ホジキンリンパ腫(NHL)、急性リンパ性白血病(ALL)、慢性リンパ性白血病(CLL)、慢性骨髄性白血病(CML)、多発性骨髄腫(MM)、急性骨髄性白血病(AML)、及び他の液状腫瘍から選択され得る。
【０１２１】
別の一般的態様では、本発明は、それを必要とする対象において、感染性疾患を処置する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法に関する。
【０１２２】
別の一般的態様では、本発明は、それを必要とする対象において、炎症性疾患を処置する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法に関する。
【０１２３】
別の一般的態様では、本方法は、それを必要とする対象において、自己免疫疾患を処置する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法に関する。
【０１２４】
別の一般的態様では、本発明は、それを必要とする対象において、代謝性疾患を処置する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法に関する。
【０１２５】
本発明の実施形態によれば、医薬組成物は、治療有効量の抗TIM-3抗体又はその抗原結合断片を含む。本明細書で使用する場合、用語「治療有効量」は、対象において、所望の生物学的又は医学的応答を誘発する、有効成分又は構成成分の量を指す。治療有効量は、記載された目的に関連して、経験的且つ慣用方法で決定することができる。
【０１２６】
抗TIM-3抗体又はその抗原結合断片に関連して本明細書で使用する場合、治療有効量は、それを必要とする対象において、免疫応答をモジュレートする抗TIM-3抗体又はその抗原結合断片の量を意味する。また、抗TIM-3抗体又はその抗原結合断片に関連して本明細書で使用する場合、治療有効量は、疾患、障害、若しくは状態の処置をもたらし、疾患、障害、若しくは状態を予防するか若しくはその進行を遅延させるか、又は疾患、障害、若しくは状態に伴う症状を低減するか若しくは完全に緩和する、抗TIM-3抗体又はその抗原結合断片の量を意味する。
【０１２７】
特定の実施形態によれば、処置される疾患、障害又は状態は、がん、好ましくは肺がん、胃がん、結腸がん、肝細胞癌、腎細胞癌、膀胱尿路上皮癌、転移性黒色腫、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、頭頚部がん、膵臓がん、神経膠腫、神経膠芽腫、及び他の固形腫瘍、並びに非ホジキンリンパ腫(NHL)、急性リンパ性白血病(ALL)、慢性リンパ性白血病(CLL)、慢性骨髄性白血病(CML)、多発性骨髄腫(MM)、急性骨髄性白血病(AML)、及び他の液状腫瘍からなる群から選択されるがんである。他の特定の実施形態によれば、処置される疾患、障害又は状態は、感染性疾患、炎症性疾患、免疫疾患、自己免疫疾患、及び/又は代謝性疾患である。
【０１２８】
特定の実施形態によれば、治療有効量は、以下の効果のうちの1つ、2つ、3つ、4つ、又はそれを超えるものを達成するのに十分な治療の量を指す:(i)処置される疾患、障害若しくは状態、又はそれに伴う症状の重症度を低減又は改善すること、(ii)処置される疾患、障害若しくは状態、又はそれに伴う症状の期間を短縮すること、(iii)処置される疾患、障害若しくは状態、又はそれに伴う症状の進行を予防すること、(iv)処置される疾患、障害若しくは状態、又はそれに伴う症状の退縮を生じること、(v)処置される疾患、障害若しくは状態、又はそれに伴う症状の進展又は発症を予防すること、(vi)処置される疾患、障害若しくは状態、又はそれに伴う症状の再発を予防すること、(vii)処置される疾患、障害、若しくは状態、又はそれに伴う症状を有する対象の入院を減少させること、(viii)処置される疾患、障害若しくは状態、又はそれに伴う症状を有する対象の入院期間を短縮させること、(ix)処置される疾患、障害若しくは状態、又はそれに伴う症状を有する対象の生存率を高めること、(xi)対象における、処置される疾患、障害若しくは状態、又はそれに伴う症状を阻害若しくは低減すること、並びに/あるいは(xii)別の治療の予防的又は治療効果を強化又は改善すること。
【０１２９】
治療有効量又は治療有効投与量は、様々な因子、例えば、処置される疾患、障害又は状態、投与の手段、標的部位、対象の生理学的状態(例えば、年齢、体重、健康を含む)、対象がヒトであるか又は動物であるか、投与される他の医薬、及び処置が予防的であるか又は治療的であるかに応じて変動し得る。処置投与量は、安全性及び有効性を最適化するよう最適に用量設定される。
【０１３０】
特定の実施形態によれば、本明細書に記載の組成物は、対象への意図した投与経路に好適となるように製剤化される。例えば、本明細書に記載の組成物は、静脈内、皮下、又は筋肉内投与に好適となるよう製剤化することができる。
【０１３１】
本明細書で使用する場合、用語「処置する(treat)」、「処置すること(treating)」、及び「処置(treatment)」はいずれも、がん、感染性疾患、障害若しくは状態、免疫疾患、障害若しくは状態、自己免疫疾患、障害若しくは状態、炎症性疾患、障害若しくは状態、及び/又は代謝性疾患、障害若しくは状態に関連した少なくとも1つの測定可能な物理的パラメータの改善又は好転を指すことを意図し、これは対象において必ずしも認識されるとは限らないが、対象において認識可能な場合もある。用語「処置する(treat)」、「処置すること(treating)」、及び「処置(treatment)」はまた、疾患、障害、又は状態の退縮を生じること、その進行を予防すること、又は少なくともその進行を遅らせることを指してもよい。特定の実施形態では、「処置する(treat)」、「処置すること(treating)」、及び「処置(treatment)」は、疾患、障害、又は状態に伴う1つ以上の症状の緩和、進展若しくは発症の予防、又はその期間の短縮を指す。特定の実施形態では、「処置する(treat)」、「処置すること(treating)」、及び「処置(treatment)」は、疾患、障害、又は状態の再発の予防を指す。特定の実施形態では、「処置する(treat)」、「処置すること(treating)」、及び「処置(treatment)」は、疾患、障害、又は状態を有する対象の生存率の向上を指す。特定の実施形態では、「処置する(treat)」、「処置すること(treating)」、及び「処置(treatment)」は、対象における疾患、障害、又は状態の消失を指す。
【０１３２】
特定の実施形態によれば、がん、感染性疾患、障害若しくは状態、免疫疾患、障害若しくは状態、自己免疫疾患、障害若しくは状態、代謝性疾患、障害若しくは状態、及び/又は炎症性疾患、障害若しくは状態の処置において使用される組成物は、別の処置と組み合わせて使用することができる。がんの処置では、組成物は、以下に限定されないが、化学療法、抗CD20 mAb、抗CTLA-4抗体、抗LAG-3 mAb、抗EGFR mAb、抗HER-2 mAb、抗CD19 mAb、抗CD33 mAb、抗CD73 mAb、抗CD47 mAb、抗DLL-3 mAb、抗アペリン mAb、抗TIP-1 mAb、抗CLDN18.2 mAb、抗FOLR1 mAb、抗PD-L1抗体、抗PD-1抗体、PD-1/PD-L1療法、他のがん免疫薬(immuno-oncology drug)、抗血管新生薬、放射線療法、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)、標的療法、又は他の抗がん薬を含む別の処置と組み合わせて使用され得る。
【０１３３】
本明細書で使用する場合、対象への2つ以上の治療の施行の文脈における、用語「組み合わせて」は、2つ以上の治療の使用を指す。用語「組み合わせて」の使用は、治療が対象に施行される順序を限定するものではない。例えば、第1の治療(例えば、本明細書に記載の組成物)を、対象への第2の治療の施行前に(例えば、5分、15分、30分、45分、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間、16時間、24時間、48時間、72時間、96時間、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、8週間、又は12週間前に)、施行と同時に、又は施行後に(例えば、5分、15分、30分、45分、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間、16時間、24時間、48時間、72時間、96時間、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、8週間、又は12週間後に)施行することができる。
【０１３４】
別の一般的態様では、本発明は、対象のTIM-3のレベルを決定する方法であって、(a)対象から試料を得るステップ、(b)試料を本発明の抗体又はその抗原結合断片と接触させるステップ、及び(c)対象のTIM-3のレベルを決定するステップを含む方法に関する。ある特定の実施形態では、試料は、組織試料又は血液試料である。組織試料は、例えば、がん組織試料であってもよい。血液試料は、例えば、がん細胞を含んでもよい。
【０１３５】
本明細書で使用する場合、「試料」は、対象から単離された生体試料を指し、以下に限定されないが、全血、血清、血漿、血液細胞、内皮細胞、組織生検(例えば、がん組織、肝組織など)、リンパ液、腹水液、間質液、骨髄、脳脊髄液、唾液、粘液、痰、汗、尿、又は任意の他の分泌物、排せつ物、又は他の体液を挙げることができる。「血液試料」は、全血又は血液細胞、血清、及び血漿を含むその任意の画分を指す。「血液試料」は、例えば、がん細胞を含み得る。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、対象のTIM-3のレベルは、以下に限定されないが、ウエスタンブロットアッセイ、ELISAアッセイ、FACSアッセイ、及び/又は免疫組織化学(IHC)から選択されるアッセイを利用して決定することができる。相対的なタンパク質レベルは、ウエスタンブロット分析、FACSアッセイ、及び免疫組織化学(IHC)を利用することによって決定することができ、絶対的なタンパク質レベルは、ELISAアッセイを利用して決定することができる。TIM-3の相対的レベルを決定する場合、TIM-3のレベルは、少なくとも2つの試料間、例えば、同じ対象由来の異なる時点における試料間、同じ対象の異なる組織由来の試料間、及び/又は異なる対象由来の試料間で決定することができる。あるいは、TIM-3の絶対的レベルを、例えばELISAアッセイによって決定する場合、試料中のTIM-3の絶対的レベルは、試料を試験する前に、ELISAアッセイについての標準を作成することによって決定することができる。当業者であれば、本発明の抗体又はその抗原結合断片を利用して、対象由来の試料中のTIM-3のレベルを決定するために、どの分析技法を利用するかを理解するであろう。
【０１３７】
対象由来の試料中のTIM-3のレベルを決定する方法を利用することによって、疾患における異常な(上昇した、低減した、又は不十分な)TIM-3のレベルの診断を導き、適切な治療上の決定をすることができる。このような疾患は、以下に限定されないが、がん、好ましくは肺がん、胃がん、結腸がん、肝細胞癌、腎細胞癌、膀胱尿路上皮癌、転移性黒色腫、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、頭頚部がん、膵臓がん、神経膠腫、神経膠芽腫、及び他の固形腫瘍、並びに非ホジキンリンパ腫(NHL)、急性リンパ性白血病(ALL)、慢性リンパ性白血病(CLL)、慢性骨髄性白血病(CML)、多発性骨髄腫(MM)、急性骨髄性白血病(AML)、及び他の液状腫瘍からなる群から選択されるがん、炎症性疾患、感染性疾患、代謝性疾患、免疫疾患、及び/又は自己免疫疾患から選択され得る。
【０１３８】
実施形態
本発明は、以下の非限定的実施形態も提供する。
【０１３９】
実施形態1は、
(1)それぞれ、配列番号43、44、169、106、107、及び170;
(2)それぞれ、配列番号55、56、57、118、119、及び120;
(3)それぞれ、配列番号58、59、60、121、122、及び123;
(4)それぞれ、配列番号61、62、63、124、125、及び126;
(5)それぞれ、配列番号64、65、66、127、128、及び129;
(6)それぞれ、配列番号67、68、69、130、131、及び132;
(7)それぞれ、配列番号70、71、72、133、134、及び135;
(8)それぞれ、配列番号73、74、75、136、137、及び138;
(9)それぞれ、配列番号76、77、78、139、140、及び141;
(10)それぞれ、配列番号79、80、81、142、143、及び144;
(11)それぞれ、配列番号82、83、84、145、146、及び147;
(12)それぞれ、配列番号85、86、87、148、149、及び150;
(13)それぞれ、配列番号88、89、90、151、152、及び153;
(14)それぞれ、配列番号91、92、93、154、155、及び156;
(15)それぞれ、配列番号94、95、96、157、158、及び159;
(16)それぞれ、配列番号97、98、99、160、161、及び162;
(17)それぞれ、配列番号100、101、102、163、164、及び165;又は
(18)それぞれ、配列番号103、104、105、166、167、及び168;
のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含み、TIM-3、好ましくはヒトTIM-3に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【０１４０】
実施形態2は、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、若しくは41と少なくとも95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、若しくは42と少なくとも95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態1の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片である。
【０１４１】
実施形態3は、
(a)配列番号1のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号2のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(b)配列番号3のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号4のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(c)配列番号5のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号6のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(d)配列番号7のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号8のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(e)配列番号9のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号10のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(f)配列番号11のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号12のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(g)配列番号13のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号14のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(h)配列番号15のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号16のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(i)配列番号17のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号18のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(j)配列番号19のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号20のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(k)配列番号21のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号22のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(l)配列番号23のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号24のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(m)配列番号25のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号26のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(n)配列番号27のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号28のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(o)配列番号29のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号30のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(p)配列番号31のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号32のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(q)配列番号33のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号34のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(r)配列番号35のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号36のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(s)配列番号37のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号38のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(t)配列番号39のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号40のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;又は
(u)配列番号41のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号42のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、実施形態1又は2の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片である。
【０１４２】
実施形態4は、キメラである、実施形態1〜3のいずれかの単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片である。
【０１４３】
実施形態5は、ヒトの又はヒト化されたものである、実施形態1〜4のいずれかの単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片である。
【０１４４】
実施形態6は:
(a)配列番号171のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号175のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(b)配列番号172のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号175のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
(c)配列番号173のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号176のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;又は
(d)配列番号174のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号176のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、実施形態5の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片である。
【０１４５】
実施形態7は、TIM-3のホスファチジルセリン(PtdSer)への結合、TIM-3のガレクチン-9(Gal-9)への結合、TIM-3の癌胎児抗原細胞接着分子1(CEACAM1)への結合、及び/又はTIM-3の高移動度群タンパク質B1(HMGB1)への結合を阻止することが可能な、実施形態1〜6のいずれかの単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片である。
【０１４６】
実施形態8は、実施形態1〜7のいずれかのモノクローナル抗体又は抗原結合断片をコードする、単離された核酸である。
【０１４７】
実施形態9は、実施形態8の単離された核酸を含むベクターである。
【０１４８】
実施形態10は、実施形態9のベクターを含む宿主細胞である。
【０１４９】
実施形態11は、実施形態1〜7のいずれかの単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
【０１５０】
実施形態12は、それを必要とする対象において、TIM-3のホスファチジルセリン(PtdSer)への結合を阻止する方法であって、実施形態11の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法である。
【０１５１】
実施形態13は、それを必要とする対象において、TIM-3のガレクチン-9(Gal-9)への結合を阻止する方法であって、実施形態11の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法である。
【０１５２】
実施形態14は、それを必要とする対象において、TIM-3の癌胎児抗原細胞接着分子1(CEACAM1)への結合を阻止する方法であって、実施形態11の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法である。
【０１５３】
実施形態15は、それを必要とする対象において、TIM-3の高移動度群タンパク質B1(HMGB1)への結合を阻止する方法であって、実施形態11の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法である。
【０１５４】
実施形態16は、それを必要とする対象において、がんを処置する方法であって、実施形態11の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法である。
【０１５５】
実施形態17は、それを必要とする対象において、感染性疾患を処置する方法であって、実施形態11の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法である。
【０１５６】
実施形態18は、それを必要とする対象において、炎症性疾患を処置する方法であって、実施形態11の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法である。
【０１５７】
実施形態19は、それを必要とする対象において、自己免疫疾患を処置する方法であって、実施形態11の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法である。
【０１５８】
実施形態20は、それを必要とする対象において、代謝性疾患を処置する方法であって、実施形態11の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法である。
【０１５９】
実施形態21は、実施形態1〜7のいずれかのモノクローナル抗体又は抗原結合断片を生産する方法であって、モノクローナル抗体又は抗原結合断片を産生する条件下で、モノクローナル抗体又は抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を培養するステップ、及び細胞又は培養物から抗体又は抗原結合断片を回収するステップを含む、方法である。
【０１６０】
実施形態22は、実施形態1〜7のいずれかのモノクローナル抗体又は抗原結合断片を含む医薬組成物を生産する方法であって、モノクローナル抗体又は抗原結合断片を薬学的に許容される担体と配合して、医薬組成物を得るステップを含む、方法である。
【０１６１】
実施形態23は、対象のTIM-3のレベルを決定する方法であって、(a)対象から試料を得るステップ、(b)試料を本発明の抗体又はその抗原結合断片と接触させるステップ、及び(c)対象のTIM-3のレベルを決定するステップを含む、方法である。
【０１６２】
実施形態24は、試料が、組織試料である、実施形態23の方法である。
【０１６３】
実施形態25は、組織試料が、がん組織試料である、実施形態24の方法である。
【０１６４】
実施形態26は、試料が、血液試料である、実施形態23の方法である。
【実施例】
【０１６５】
[実施例1]
抗TIM-3モノクローナル抗体の特定
Fcでタグ付けしたヒト及びカニクイザルのTIM-3細胞外ドメイン(ECD)タンパク質及びアジュバントでマウスを免疫化した。血漿力価を酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)によって決定した。安楽死させた後、脾臓及びリンパ節を回収し、ハイブリドーマを作製した。ハイブリドーマを384ウェル組織培養プレート中で増殖させ、個々のウェルに由来する上清をELISAによってスクリーニングし、ヒト及びカニクイザルのTIM-3 ECDタンパク質に対する陽性結合物質を特定した。陽性の上清はまた、ホスファチジルセリンのTIM-3組換えタンパク質への結合、及びホスファチジルセリンの天然TIM-3タンパク質への結合の、阻止について、TIM-3発現HEK293細胞に対するFACS分析によってスクリーニングした。陽性のクローンを単離し、シークエンシングした。
【０１６６】
抗TIM-3モノクローナル抗体について重鎖及び軽鎖可変領域の配列を表1及び2に提供し、抗TIM-3モノクローナル抗体についてCDR領域の配列を表3及び4に提供する。抗TIM-3モノクローナル抗体についてのCDR領域は、IMGT法を利用して決定した。
【０１６７】
【表１】
2021500916.tif 000002
2021500916.tif 000003
【０１６８】
【表２】
2021500916.tif 000004
2021500916.tif 000005
【０１６９】
【表３】
2021500916.tif 000006
【０１７０】
【表４】
2021500916.tif 000007
【０１７１】
[実施例2]
ELISAを用いたTIM-3及びPtdSer結合アッセイ
TIM-3のホスファチジルセリン(PtdSer)との相互作用に対する抗TIM-3抗体の効果を決定するために、384ウェルELISAプレートを、室温で、PtdSer又はホスファチジルコリン(PtdChol)でコーティングした。ウェルを、0.1%のTween-20を補充したPBSで洗浄し、次いで、2%のウシ血清アルブミン(BSA)を補充したPBSを使用してブロッキングした。プレートを洗浄し、次いで、CaCl2を補充したブロッキング緩衝液中、精製抗体(0、0.03、0.08、0.25、0.74、2.22、6.67、又は20μg/mLのmAb)、及びTIM3(ECD)-huFc、すなわちヒトTIM-3の細胞外ドメイン(ECD)及びヒトFc(huFc)を含有する融合タンパク質、の予め平衡化した混合物と共にインキュベートした。プレートを洗浄し、次いで、HRPを結合させた抗huFc二次抗体と共にインキュベートした。プレートを洗浄し、HRP基質と共にインキュベートし、POLARstar Omega Microplate(BMG LABTECH)を使用して読み取りを行った。アッセイは三連で実施した。TIM-3のPtdSerへの結合のシグナルを100%シグナルと定義し、TIM-3のPtdCholへの結合のシグナルをゼロ(バックグラウンド)と定義してアッセイウィンドウを設定した。ELISAアッセイによって実証された、抗TIM-3モノクローナル抗体(mAb)によるヒトTIM-3のPtdSerへの結合の阻害の結果を図1A〜1Fに示す。
【０１７２】
[実施例3]
精製抗体のFACS結合分析
ヒトTIM-3発現プラスミドを作製し、HEK293細胞へと一過性トランスフェクトした。およそ48時間後、細胞を384ウェルV底プレートに移した。細胞を氷冷したFACS緩衝液(1%のBSAを補充したPBS)で洗浄し、4℃で45分間穏やかに撹拌しながら、精製mAbと共にインキュベートした。細胞をFACS緩衝液で洗浄し、抗マウス二次抗体(Ab) AlexaFluor488と共にインキュベートした。細胞を洗浄し、FACSによって分析した。抗TIM-3 mAbのFACS結合アッセイの結果を図2に提供する。
【０１７３】
[実施例4]
解離定数(KD)分析
25℃で、OCTET Red96において、結合実験を実施した。抗体を、Anti-Mouse Fc(AMC)バイオセンサーにロードした。ロードしたセンサーを抗原の連続希釈液中に浸した。動力学定数を一価(1:1)のモデルを使用して計算した。アッセイ緩衝液は、0.1%のBSA、500mMのNaCl、0.02%のTween-20を補充したPBS(pH7.2)であった。抗体抗原結合に関する解離定数を、抗TIM-3モノクローナル抗体について決定し、以下の表5に示す。
【０１７４】
【表５】
2021500916.tif 000008
【０１７５】
[実施例5]
抗TIM-3 mAbのヒト化
マウス抗TIM-3 mAb 16-K5-Aをヒト化して、ヒト患者に使用した場合の免疫原性の可能性を低減させた。重鎖及び軽鎖(VH及びVL)の可変領域の配列を、Protein Data Bank(PDB)データベースのヒト抗体配列と比較し、SWISS-モデリングを適用することによって相同性モデルを構築した。マウスのmAbの重鎖と軽鎖の両方のCDRを、抗原結合に必要であると思われる正しい構造を維持する可能性が最も高いヒトフレームワークへと移植した。必要な場合は、ヒト残基からマウス残基への復帰突然変異を設計した。ヒト化VH及びVL領域の配列を表6に示す。ヒト化VH及びVL領域をそれぞれヒトIgG4重鎖及びカッパ軽鎖の定常領域と融合させた。mAb配列に対応する構築物を、293E細胞における一過性トランスフェクションのために使用した。得られた抗体をプロテインAアフィニティーカラムによって精製した。
【０１７６】
【表６】
2021500916.tif 000009
【０１７７】
[実施例6]
キメラ及びヒト化抗TIM-3 mAbについてのELISA結合分析
カーボネートコーティング緩衝液中の組換えヒトTIM-3(ECD)-6Hisを、4℃で、終夜、ELISAプレート上にコーティングした。抗TIM-3 mAbのキメラ及びヒト化バージョン(H1L1、H2L1、H5L5及びH7L5)を、洗浄後に異なる濃度でプレートに添加し、室温で1時間インキュベートした。プレートを洗浄し、セイヨウワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートした抗ヒトIgG(hIgG-HRP)(ThermoFisher Scientific、カタログ番号31410)を添加することによって抗体結合を検出し、60分間インキュベートした。洗浄後、ELISAを、One-step Detection Solution(ThermoFisher Scientific、カタログ番号34028)を使用して発色させ、450nmでの吸光度として測定した。結果を図3A及び3Bに示す。
【０１７８】
上記の実施形態に対し、その広義の発明概念から逸脱することなく、変更がなされ得ることは当業者であれば認識するであろう。したがって、この発明は、開示された特定の実施形態に限定されず、本明細書によって定義した本発明の趣旨及び範囲内の改変を包含することを意図するものとして理解される。
【図１−１】
2021500916.tif 000010
【図１−２】
2021500916.tif 000011
【図１−３】
2021500916.tif 000012
【図２】
2021500916.tif 000013
【図３】
2021500916.tif 000014
【配列表】
2021500916000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年3月31日(2020.3.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(1)それぞれ、配列番号43、44、169、106、107、及び170;
(2)それぞれ、配列番号55、56、57、118、119、及び120;
(3)それぞれ、配列番号58、59、60、121、122、及び123;
(4)それぞれ、配列番号61、62、63、124、125、及び126;
(5)それぞれ、配列番号64、65、66、127、128、及び129;
(6)それぞれ、配列番号67、68、69、130、131、及び132;
(7)それぞれ、配列番号70、71、72、133、134、及び135;
(8)それぞれ、配列番号73、74、75、136、137、及び138;
(9)それぞれ、配列番号76、77、78、139、140、及び141;
(10)それぞれ、配列番号79、80、81、142、143、及び144;
(11)それぞれ、配列番号82、83、84、145、146、及び147;
(12)それぞれ、配列番号85、86、87、148、149、及び150;
(13)それぞれ、配列番号88、89、90、151、152、及び153;
(14)それぞれ、配列番号91、92、93、154、155、及び156;
(15)それぞれ、配列番号94、95、96、157、158、及び159;
(16)それぞれ、配列番号97、98、99、160、161、及び162;
(17)それぞれ、配列番号100、101、102、163、164、及び165;又は
(18)それぞれ、配列番号103、104、105、166、167、及び168;
のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含み、TIM-3、好ましくはヒトTIM-3に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２】
配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、171、172、173、若しくは174と少なくとも95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、175、若しくは176と少なくとも95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項1に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項３】
a.  配列番号1のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号2のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
b.  配列番号3のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号4のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
c.  配列番号5のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号6のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
d.  配列番号7のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号8のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
e.  配列番号9のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号10のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
f.  配列番号11のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号12のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
g.  配列番号13のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号14のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
h.  配列番号15のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号16のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
i.  配列番号17のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号18のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
j.  配列番号19のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号20のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
k.  配列番号21のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号22のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
l.  配列番号23のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号24のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
m.  配列番号25のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号26のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
n.  配列番号27のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号28のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
o.  配列番号29のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号30のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
p.  配列番号31のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号32のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
q.  配列番号33のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号34のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
r.  配列番号35のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号36のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
s.  配列番号37のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号38のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
t.  配列番号39のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号40のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
u.  配列番号41のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号42のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
v.  配列番号171のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号175のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
w.  配列番号172のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号175のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
x.  配列番号173のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号176のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;又は
y.  配列番号174のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号176のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、請求項1又は2に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項４】
キメラである、及び／又はヒトの又はヒト化されたものである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項５】
TIM-3のホスファチジルセリン(PtdSer)への結合を阻止することが可能な、請求項1〜4のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項６】
請求項1〜5のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片を含む、二重特異性抗体。
【請求項７】
請求項1〜5のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片をコードする単離された核酸。
【請求項８】
請求項7に記載の単離された核酸を含むベクター。
【請求項９】
請求項8に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１０】
請求項1〜5のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
それを必要とする対象において、TIM-3のホスファチジルセリン(PtdSer)への結合を阻止するため、並びに／又は、がん、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、及び代謝性疾患からなる群から選択される疾患又は状態を処置するための、請求項10に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
請求項1〜5のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片を生産する方法であって、モノクローナル抗体又は抗原結合断片を産生する条件下で、モノクローナル抗体又は抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を培養するステップ、及び細胞又は培養物から抗体又は抗原結合断片を回収するステップを含む、方法。
【請求項１３】
請求項1〜5のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片を含む医薬組成物を生産する方法であって、モノクローナル抗体又は抗原結合断片を、薬学的に許容される担体と配合して、医薬組成物を得るステップを含む、方法。
【請求項１４】
対象のTIM-3のレベルを決定する方法であって、(a)対象由来の試料を請求項1〜5のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と接触させるステップ、及び(b)対象のTIM-3のレベルを決定するステップを含む、方法。
【請求項１５】
試料が、組織試料又は血液試料であり、組織試料はがん組織試料であってよい、請求項14に記載の方法。
【国際調査報告】
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