(57)【要約】  本開示は、養子細胞療法を促進する組成物および方法を提供する。本開示は、ＮＦｋＢ活性の特異的活性化因子と組み合わせて、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および合成免疫受容体（ＳＩＲ）等を含むポリヌクレオチド、ベクター、系、および細胞を提供し、それ故に、細胞増殖、発現、および減少したアポトーシスが改善され、それにより、養子細胞療法における細胞持続性が改善される。【選択図】図２
2021500861.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体および（ｉｉ）ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を選択的に活性化する少なくとも１つの天然に存在しない薬剤を発現する免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項２】
前記少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体が、少なくとも１つの抗原結合ドメインおよび少なくとも１つの膜貫通ドメインを含む、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項３】
前記少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体が、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができる、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項４】
前記少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または組換えＴＣＲである、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項５】
前記少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体の前記少なくとも１つの抗原結合ドメインが、ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＭＰＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）または（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；急性白血病またはリンパ腫に発現するが、造血前駆細胞には発現しないグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血癌に発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ−ｌｌＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＴｅｓｔｉｓｉｎまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）；段階特異的胚抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ（ＦＲａまたはＦＲ１）；葉酸受容体ベータ（ＦＲｂ）；受容体チロシン−タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１（細胞表面結合型）（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニットベータ型９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐｌ００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）およびＡｂｅｌｓｏｎマウス白血病ウイルス癌遺伝子相同体１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラ��Ｃ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨ糖セラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（染色体１２ｐに位置）（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバーｌＡ（ＸＡＧＥｌ）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビン；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴ  Ａ−１またはガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来相同体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ相同体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  ｌＢ  １（ＣＹＰｌＢ  １）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはインプリント部位の調節因子の同胞）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳｌ）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓ユビキタス１（ＲＵ１）；腎臓ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒト乳頭腫ウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ヒト乳頭腫ウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲｌ）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファ���リーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ−ＭＹＣエピトープタグ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１  ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）；フコシル−ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１−ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ−ＩＧＬｌ１、ＴＣＲガンマ−デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、Ｔｎ  ａｇ、Ｔｉｍ１−／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ−ＣＳＦＲ−アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、Ｌｅｗｓ  Ａｇ、ＴＣＲ−ベータ１鎖、ＴＣＲ−ベータ２鎖、ＴＣＲ−ガンマ鎖、ＴＣＲ−デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲまたはＧＲ）、ＣＣＲ４、ＧＤ３、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、ＫＳＨＶ  Ｋ８．１、ＫＳＨＶ−ｇＨ、Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニリルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、デスモグレイン３に対する自己抗体（Ｄｓｇ３）、デスモグレイン１に対する自己抗体（Ｄｓｇ１）、ＨＬＡ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｇ、ＩｇＥ、ＣＤ９９、Ｒａｓ  Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤ１８Ａ２またはＣＬＤＮ１８Ａ．２）、Ｐ−糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、Ｌｉｖ１、ネクチン−４、クリプト、ｇｐＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原からなる群から選択される抗原に結合する、請求項２に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項６】
ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤が、ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＮＥＭＯ突然変異体、ＮＥＭＯ融合タンパク質、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＲＩＰ、ＩＫＫα、ＩＫＫβ、Ｔｃｌ−１、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５、任意のＮＦ−κＢ活性化タンパク質またはタンパク質断片、ＮＦ−κＢ経路阻害剤の任意の阻害剤、ＮＦ−κＢを選択的に活性化することができる任意の遺伝子編集系、それらの任意の相同体またはバリアント、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項７】
ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤が、非ウイルス起源のものである、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項８】
ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤が、遺伝子編集系である、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項９】
ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤が、ＮＥＭＯ／ＩＫＫγのオリゴマー化を誘導する、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項１０】
ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤が、ＩＫＫ複合体の活性化を誘導する、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項１１】
ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの前記天然に存在しない薬剤が、ＡＫＴ経路を活性化しない、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項１２】
ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤が、構成的または誘導的様式で発現される、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項１３】
ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤が、過渡的に発現される、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項１４】
ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤が、安定的に発現される、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項１５】
ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤の活性が、前記細胞を化合物と接触させることによって翻訳後に制御される、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項１６】
ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤が、スイッチドメインの１つ以上のコピーを有する融合構築物として発現される、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項１７】
ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤の活性が、前記スイッチドメインの二量体化を誘導する化合物の治療有効量を投与することによって翻訳後レベルで制御される、請求項９に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項１８】
前記スイッチドメインが、ＦＫＢＰ１２ドメインの１つ以上のコピーを含む、請求項１６または１７に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項１９】
前記化合物が、ＡＰ２０１８７またはＲｉｍｉｄｕｃｉｄまたはそれらの相同体である、請求項１５に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項２０】
前記免疫細胞が、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＴＣＲ発現Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、組織常在性リンパ球、幹細胞、誘導多能性幹細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項２１】
前記免疫細胞が、機能的天然Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナル伝達複合体および／またはβ２マイクログロブリンを欠くように操作されている、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項２２】
前記少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体および／またはＮＦ−κＢシグナル伝達経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの薬剤が、内在性ＴＣＲ遺伝子にクローン化され、それにより、前記少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体および／またはＮＦ−κＢシグナル伝達経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの薬剤の発現が、前記ＴＣＲ遺伝子の内在性調節要素／プロモーターの制御下に置かれるようになる、請求項１および２１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項２３】
がん、感染性疾患、免疫疾患、およびアレルギー性疾患の群から選択される疾患の予防および治療のために使用される、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項２４】
少なくとも１つのポリヌクレオチドが、前記少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体およびＮＦ−κＢシグナル伝達経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤をコードし、単一のプロモーターから発現される、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項２５】
前記少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体およびＮＦ−κＢシグナル伝達経路を選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドが、２つ以上の別個のプロモーターを使用して発現される、請求項１に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項２６】
前記少なくとも１つのポリヌクレオチドが、ＮＦ−κＢを選択的に活性化することができる前記天然に存在しない薬剤をコードする第２の核酸配列とは別個の前記少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体をコードする第１の核酸コード配列を含み、それにより、前記第１の核酸コード配列および前記第２の核酸コード配列の発現時に、天然に存在しない免疫受容体とＮＦ−κＢを選択的に活性化することができる天然に存在しない薬剤とが物理的または化学的に連結されないようになる、請求項２４または２５に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項２７】
前記少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体および／またはＮＦ−κＢを選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤をコードするポリヌクレオチド（複数可）が、内在性ＴＣＲ遺伝子にクローン化され、それにより、前記少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体および／またはＮＦ−κＢを選択的に活性化することができる前記少なくとも１つの天然に存在しない薬剤が、前記ＴＣＲ遺伝子の内在性調節要素／プロモーターの制御下に置かれるようになる、請求項２４または２５に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項２８】
前記ＴＣＲ遺伝子の１つ以上の定常鎖が、機能的に再発現される、請求項２１または２７に記載の免疫細胞またはその免疫細胞集団。
【請求項２９】
少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体をコードする少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドであって、
（ａ）内在性タンパク質の一部または全ての膜貫通および／または細胞質ドメインならびに任意選択的に細胞外ドメインをコードする第１の核酸ドメインであって、前記内在性タンパク質がリンパ球の表面に発現され、前記リンパ球の活性化および／または増殖を誘発する、第１の核酸ドメインと、
（ｂ）任意選択的に、ポリヌクレオチドａリンカーと、
（ｃ）前記第１の核酸ドメインに作動可能に連結された第２の核酸ドメインであって、１つ以上の非天然ＴＣＲ抗原結合ドメインをコードする、第２の核酸ドメインと、
（ｄ）共刺激ドメインをコードする任意選択的な第３の核酸ドメインと、
（ｅ）アクセサリーモジュールをコードする任意選択的な追加の核酸ドメインと、を含む、少なくとも１つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項３０】
少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドであって、
ａ）天然に存在しない免疫受容体をコードする第１の核酸と、
ｂ）選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むアクセサリーモジュールをコードする第２の核酸と、を含む、少なくとも１つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項３１】
前記第１の核酸および前記第２の核酸が、切断可能なペプチドリンカーをコードするオリゴヌクレオチドリンカーによって分離されている、請求項３０に記載の少なくとも１つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項３２】
前記第１の核酸および前記第２の核酸が別個のベクターから発現されるように２つの組換えポリヌクレオチドを含む、請求項３０に記載の少なくとも１つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項３３】
前記選択的ＮＦ−κＢ活性化因子が、天然に存在しない選択的ＮＦ−κＢ活性化因子である、請求項３０に記載の少なくとも１つの組換えポリヌクレオチド。
【請求項３４】
前記天然に存在しない免疫受容体が、ＣＡＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰ、ｃＴＣＲ、ＳＩＲ、および組換えＴＣＲからなる群から選択される、請求項３０に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチド。
【請求項３５】
前記天然に存在しない免疫受容体が、（ｉ）細胞外抗原特異的ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉｉ）免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む任意選択的な細胞内シグナル伝達ドメインを含み、（ｉｉｉ）が、前記天然に存在しない免疫受容体のＣ末端に位置する、請求項３０に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチド。
【請求項３６】
前記第１の核酸配列および前記第２の核酸配列の発現時に、前記天然に存在しない免疫受容体と前記選択的ＮＦ−κＢ活性化因子ポリペプチドとが物理的または化学的に連結されない、請求項３０に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチド。
【請求項３７】
前記細胞外抗原特異的ドメインが、ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＭＰＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）または（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；急性白血病またはリンパ腫に発現するが、造血前駆細胞には発現しないグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血癌に発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ−ｌｌＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＴｅｓｔｉｓｉｎまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）；段階特異的胚抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ（ＦＲａまたはＦＲ１）；葉酸受容体ベータ（ＦＲｂ）；受容体チロシン−タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１（細胞表面結合型）（ＭＵＣ１）；ＡＦＰ／ＭＨＣ複合体；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニットベータ型９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐｌ００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）およびＡｂｅｌｓｏｎマウス白血病ウイルス癌遺伝子相同体１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）��染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨ糖セラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；ＷＴ１／ＭＨＣ  Ｉ複合体；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＭＨＣ  Ｉ複合体、癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（染色体１２ｐに位置）（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバーｌＡ（ＸＡＧＥｌ）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビン；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴ  Ａ−１またはガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来相同体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ相同体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  ｌＢ  １（ＣＹＰｌＢ  １）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはインプリント部位の調節因子の同胞）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳｌ）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓ユビキタス１（ＲＵ１）；腎臓ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒト乳頭腫ウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ＨＰＶ  Ｅ６／ＭＨＣ  Ｉ複合体；ヒト乳頭腫ウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；ＨＰＶ  Ｅ７／ＭＨＣ  Ｉ複合体；ＡＦＰ／ＭＨＣ  Ｉ複合体；Ｒａｓ／ＭＨＣ  Ｉ複合体；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲｌ）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ−ＭＹＣエピトープタグ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１  ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）；フコシル−ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１−ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ−ＩＧＬｌ１、ＴＣＲガンマ−デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、Ｔｎ  ａｇ、Ｔｉｍ１−／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ−ＣＳＦＲ−アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、Ｌｅｗｓ  Ａｇ、ＴＣＲ−ベータ１鎖、ＴＣＲ−ベータ２鎖、ＴＣＲ−ガンマ鎖、ＴＣＲ−デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲまたはＧＲ）、ＣＣＲ４、ＧＤ３、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、ＫＳＨＶ  Ｋ８．１、ＫＳＨＶ−ｇＨ、Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニリルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、デスモグレイン３に対する自己抗体（Ｄｓｇ３）、デスモグレイン１に対する自己抗体（Ｄｓｇ１）、ＨＬＡ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｇ、ＩｇＥ、ＣＤ９９、Ｒａｓ  Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤ１８Ａ２またはＣＬＤＮ１８Ａ．２）、Ｐ−糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、Ｌｉｖ１、ネクチン−４、クリプト、ｇｐＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原のうちのいずれか１つ以上に結合する、請求項３５に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチド。
【請求項３８】
前記選択的ＮＦ−κＢ活性化因子が、ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３、ＮＥＭＯ突然変異体、ＮＥＭＯ融合タンパク質、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＲＩＰ、ＦＫＢＰｘ２−ＲＩＰ−ＩＤ、ＩＫＫ１、ＦＫＢＰｘ２−ＩＫＫａ、ＩＫＫ２、ＦＫＢＰｘ２−ＩＫＫ２、Ｔｃｌ−１、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５、任意のＮＦ−κＢ活性化タンパク質またはタンパク質断片、ＮＦ−κＢ経路阻害剤の任意の阻害剤、ＮＦ−κＢを選択的に活性化することができる遺伝子編集系、ＮＦ−κＢを選択的に活性化するＲＮＡ干渉系、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項３０に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチド。
【請求項３９】
前記選択的ＮＦ−κＢ活性化因子が、ＦＫＢＰドメインの１つ以上のコピーを有する融合構築物として発現される、請求項３７に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチド。
【請求項４０】
前記細胞外抗原特異的ドメインが、
−所定の標的抗原に特異的な抗体またはその断片の重鎖（ｖＨ）の可変領域、
−所定の標的抗原に特異的な抗体またはその断片の軽鎖（ｖＬ）の可変領域、
−所定の標的抗原に特異的な一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）またはその断片、
−所定の標的抗原に特異的な抗体断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、ａ（Ｆａｂ’）２）、
−所定の標的抗原に特異的な単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）断片、
−所定の標的抗原に特異的なラクダ類ｖＨＨドメイン、
−所定の標的抗原に特異的な非免疫グロブリン抗原結合足場、
−所定の標的抗原に特異的な受容体またはその断片、
−所定の標的抗原に特異的なリガンドまたはその断片、
−１つ以上の所定の標的抗原に特異的な二重特異性抗体、二重特異性抗体断片、二重特異性ｓｃＦＶ、二重特異性ｖＨＨ、二重特異性ＳＤＡＢ、二重特異性非免疫グロブリン抗原結合足場、二重特異性受容体、または二重特異性リガンド、および
−自己抗原またはその断片からなる群から選択される、請求項３５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４１】
請求項３０〜４０のいずれか一項に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、少なくとも１つのベクター。
【請求項４２】
前記ベクターが、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＡＡＶベクター、レトロウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンベクター、およびＰｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンベクターからなる群から選択される、請求項４１に記載の少なくとも１つのベクター。
【請求項４３】
請求項３０〜４０のいずれかに記載の少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドを含む、免疫エフェクター細胞または幹細胞。
【請求項４４】
請求項４１に記載の少なくとも１つのベクターを含む、免疫エフェクター細胞または幹細胞。
【請求項４５】
請求項４２に記載の少なくとも１つのベクターを含む、免疫エフェクター細胞または幹細胞。
【請求項４６】
請求項４１に記載の少なくとも１つのベクターを含む、抗原提示細胞。
【請求項４７】
前記免疫エフェクター細胞が、免疫エフェクター細胞を生み出すことができる、ヒトＴ細胞、ヒトＮＫＴ細胞もしくは合成Ｔ細胞、ＮＫ細胞、または幹細胞であり、任意選択的に、前記Ｔ細胞が、ジアグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）および／またはＩｋａｒｏｓ欠損性および／またはＢｒｄ４欠損性である、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞または幹細胞。
【請求項４８】
（ｉ）発現している免疫細胞の寿命を延長させ、（ｉｉ）免疫細胞の増殖を刺激し、（ｉｉｉ）免疫細胞によるサイトカイン産生を刺激し、（ｉｖ）免疫細胞による抗原提示を増強し、（ｖ）免疫細胞をアポトーシスから保護するための方法であって、前記免疫細胞を、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子またはＮＦ−κＢ特異的刺激ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドでトランスフェクトまたは形質転換することを含む、方法。
【請求項４９】
前記選択的ＮＦ−κＢ活性化因子またはＮＦ−κＢ特異的刺激ポリペプチドが、ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＮＥＭＯ突然変異体、ＮＥＭＯ融合タンパク質、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＲＩＰ、ＩＫＫα、ＩＫＫβ、Ｔｃｌ−１、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５、任意のＮＦ−κＢ活性化タンパク質またはタンパク質断片、ＮＦ−κＢ経路阻害剤の任意の阻害剤、それらの任意の相同体またはバリアント、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記選択的ＮＦ−κＢ活性化因子またはＮＦ−κＢ特異的刺激ポリペプチドが、構成的または誘導的様式で発現される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記選択的ＮＦ−κＢ活性化因子またはＮＦ−κＢ特異的刺激ポリペプチドが、前記Ｔ細胞を化合物と接触させることによって翻訳後に制御される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記選択的ＮＦ−κＢ活性化因子またはＮＦ−κＢ特異的刺激ポリペプチドが、ＦＫＢＰドメインの１つ以上のコピーを有する融合構築物として発現される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記選択的ＮＦ−κＢ活性化因子またはＮＦ−κＢ特異的刺激ポリペプチドの活性が、前記ＦＫＢＰドメインの二量体化を誘導する化合物の治療有効量を投与することによって翻訳後レベルで制御される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記化合物が、ＡＰ２０１８７またはＲｉｍｉｄｕｃｉｄである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
天然に存在しない免疫受容体を発現する免疫エフェクター細胞を作製する方法であって、請求項４１に記載の少なくとも１つのベクターまたは請求項２９に記載の少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドを、天然に存在しない免疫受容体が発現されるような条件下で、免疫エフェクター細胞または免疫エフェクター細胞を生み出すことができる造血幹細胞もしくは前駆細胞に導入することを含み、前記免疫エフェクター細胞が、ＮＦｋＢ特異的刺激ポリペプチドを欠くＣＡＲ−Ｔ細胞と比較して、（ｉ）延長された寿命、（ｉｉ）改善されたＴ細胞増殖、および／または（ｉｉｉ）減少したアポトーシスを含む、方法。
【請求項５６】
ａ）免疫エフェクター細胞の集団を提供することと、
ｂ）前記集団から調節性Ｔ細胞を除去し、それにより、調節性Ｔ細胞枯渇集団を提供することと、をさらに含み、
ステップａ）およびステップｂ）が、前記ＣＡＲおよび／または前記ＮＦｋＢ特異的刺激ポリペプチドをコードする前記ベクターまたは前記組換えポリヌクレオチドを前記集団に導入する前に行われる、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記調節性Ｔ細胞が、抗ＣＤ２５抗体または抗ＧＩＴＲ抗体を使用して前記細胞集団から除去される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
ａ）免疫エフェクター細胞の集団を提供することと、
ｂ）前記集団からＰ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐまたはＰｇｐ；ＭＤＲ１、ＡＢＣＢ１、ＣＤ２４３）陽性細胞を富化し、それにより、Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐまたはＰｇｐ；ＭＤＲ１、ＡＢＣＢ１、ＣＤ２４３）富化細胞集団を提供することと、をさらに含み、
ステップａ）およびステップｂ）が、前記ＣＡＲおよび／または前記ＮＦｋＢ特異的刺激ポリペプチドをコードする前記ベクターまたは前記組換えポリヌクレオチドを導入する前または導入した後に行われる、請求項５５に記載の方法。
【請求項５９】
前記Ｐ−糖タンパク質陽性細胞が、
ｉ）Ｐ−糖タンパク質特異的抗体のうちの１つまたはそのカクテルを使用した免疫選択、
ｉｉ）Ｐ−糖タンパク質がポンプとして活性である条件下での、Ｐ−糖タンパク質の基質である蛍光色素、テトラメチルローダミンメチルエステル（ＴＭＲＭ）、アドリアマイシン、およびアクチノマイシン−Ｄ）のうちの１つ以上での染色、および前記色素でわずかに染色される細胞の富化、
ｉｉｉ）Ｐ−糖タンパク質の基質である光毒性化合物、例えば、ＴＨ９４０２、２−（４，５−ジブロモ−６−アミノ−３−イミノ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−安息香酸メチルエステル塩酸塩、２−（４，５−ジブロモ−６−アミノ−３−イミノ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−安息香酸エチルエステル塩酸塩、２−（４，５−ジブロモ−６−アミノ−３−イミノ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−安息香酸オクチルエステル塩酸塩、２−（４，５−ジブロモ−６−アミノ−３−イミノ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−安息香酸ｎ−ブチルエステル塩酸塩、２−（６−エチルアミノ−３−エチルイミノ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−安息香酸ｎ−ブチルエステル塩酸塩、またはそれらの誘導体もしくはそれらの組み合わせのうちのいずれか１つ以上に耐性を示す細胞の選択、および
ｉｖ）Ｐ−糖タンパク質の基質である細胞毒性化合物、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール、パクリタキセル、ミトキサントロン、エトポシド、アドリアマイシン、ダウノルビシン、およびアクチノマイシン−Ｄに耐性を示す細胞の選択からなる群から選択される方法のうちのいずれか１つ以上を使用して富化される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
ＲＮＡ操作細胞の集団を生成する方法であって、インビトロ転写ＲＮＡ（複数可）または合成ＲＮＡ（複数可）を細胞または細胞集団に導入することを含み、前記ＲＮＡ（複数可）が、組換えポリヌクレオチドまたは請求項３０に記載のポリヌクレオチドを含む、方法。
【請求項６１】
対象に抗疾患免疫を提供する方法であって、前記対象に、請求項４３〜４７のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞または免疫エフェクター細胞を生み出すことができる幹細胞の有効量を投与することを含み、前記細胞が、免疫エフェクター細胞を生み出すことができる、自己Ｔ細胞もしくは同種Ｔ細胞、または自己ＮＫＴ細胞もしくは同種ＮＫＴ細胞、または自己もしくは同種造血幹細胞、または自己もしくは同種ｉＰＳＣである、方法。
【請求項６２】
前記同種Ｔ細胞または前記同種ＮＫＴ細胞または造血幹細胞またはｉＰＳＣが、機能的ＴＣＲまたは機能的ＨＬＡの発現を欠くか、またはその低発現を有する、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
天然に存在しない免疫受容体および選択的ＮＦｋＢ活性化因子を含む免疫エフェクター細胞または免疫エフェクター細胞を生成することができる幹細胞を含む組成物であって、前記天然に存在しない免疫受容体が、疾患関連抗原関連に結合する抗原結合ドメインを含み、前記疾患関連抗原が、ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ−１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）または（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ  ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；急性白血病またはリンパ腫に発現するが、造血前駆細胞には発現しないグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血癌に発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ−ｌｌＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＴｅｓｔｉｓｉｎまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）；段階特異的胚抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ；受容体チロシン−タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１（細胞表面結合型）（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニットベータ型９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐｌ００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）およびＡｂｅｌｓｏｎマウス白血病ウイルス癌遺伝子相同体１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシル  ＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８���；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨ糖セラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（染色体１２ｐに位置）（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバーｌＡ（ＸＡＧＥｌ）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビンｇ；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴ  Ａ−１またはガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来相同体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ相同体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  ｌＢ  １（ＣＹＰｌＢ  １）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはインプリント部位の調節因子の同胞）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳｌ）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓ユビキタス１（ＲＵ１）；腎臓ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒト乳頭腫ウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ヒト乳頭腫ウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲｌ）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ−ＭＹＣエピトープタグ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１  ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）フコシル−ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１−ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ−ＩＧＬｌ１、ＡＬＫ  ＴＣＲガンマ−デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、ＣＳＰＧ４−ＨＭＷ−ＭＡＡ、Ｔｉｍ１−／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ−ＣＳＦＲ−アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、ＶＥＧＦＲ２／ＫＤＲ、Ｌｅｗｓ  Ａｇ、ＴＣＲ−ベータ１鎖、ＴＣＲ−ベータ２鎖、ＴＣＲ−ガンマ鎖、ＴＣＲ−デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、絨毛性ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲ）、ＣＣＲ４、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニリルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、ＫＳＨＶ−Ｋ８．１タンパク質、ＫＳＨＶ−ｇＨタンパク質、デスモグレイン３に対する自己抗体（Ｄｓｇ３）、デスモグレイン１に対する自己抗体（Ｄｓｇ１）、ＨＬＡ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｇ、ＩＧＥ、ＣＤ９９、ＲＡＳ  Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤ１８Ａ２  ＯＲ  ＣＬＤＮ１８Ａ．２））、Ｐ−糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、ＬＩＶ１、ネクチン−４、クリプト、ＧＰＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原からなる群から選択される、組成物。
【請求項６４】
対象における疾患関連抗原の発現に関連する疾患を治療または予防する方法であって、前記対象に、天然に存在しない免疫受容体および選択的ＮＦｋＢ活性化因子を含む免疫エフェクター細胞の有効量を投与することであって、前記天然に存在しない免疫受容体が、疾患関連抗原関連に結合する抗原結合ドメインを含み、前記疾患関連抗原が、ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ−１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）または（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；急性白血病またはリンパ腫に発現するが、造血前駆細胞には発現しないグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血癌に発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ−ｌｌＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＴｅｓｔｉｓｉｎまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）；段階特異的胚抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ；受容体チロシン−タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１（細胞表面結合型）（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニットベータ型９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐｌ００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）およびＡｂｅｌｓｏｎマウス白血病ウイルス癌遺伝子相同体１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２��；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨ糖セラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（染色体１２ｐに位置）（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバーｌＡ（ＸＡＧＥｌ）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビンｇ；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴ  Ａ−１またはガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来相同体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ相同体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  ｌＢ  １（ＣＹＰｌＢ  １）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはインプリント部位の調節因子の同胞）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳｌ）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓ユビキタス１（ＲＵ１）；腎臓ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒト乳頭腫ウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ヒト乳頭腫ウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連���疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲｌ）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ−ＭＹＣエピトープタグ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１  ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）フコシル−ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１−ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ−ＩＧＬｌ１、ＡＬＫ  ＴＣＲガンマ−デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、ＣＳＰＧ４−ＨＭＷ−ＭＡＡ、Ｔｉｍ１−／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ−ＣＳＦＲ−アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、ＶＥＧＦＲ２／ＫＤＲ、Ｌｅｗｓ  Ａｇ、ＴＣＲ−ベータ１鎖、ＴＣＲ−ベータ２鎖、ＴＣＲ−ガンマ鎖、ＴＣＲ−デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、絨毛性ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲ）、ＣＣＲ４、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニリルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、ＫＳＨＶ−Ｋ８．１タンパク質、ＫＳＨＶ−ｇＨ  タンパク質、デスモグレイン３に対する自己抗体（Ｄｓｇ３）、デスモグレイン１に対する自己抗体（Ｄｓｇ１）、ＨＬＡ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｇ、ＩＧＥ、ＣＤ９９、ＲＡＳ  Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤ１８Ａ２  ＯＲ  ＣＬＤＮ１８Ａ．２））、Ｐ−糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、ＬＩＶ１、ネクチン−４、クリプト、ＧＰＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原からなる群から選択される、投与することを含み、
それにより、前記対象を治療するか、または前記対象における疾患を予防する、方法。
【請求項６５】
前記疾患関連抗原の発現に関連する前記疾患が、前記疾患関連抗原の発現に関連する、増殖性疾患、前がん状態、がん、および非がん関連適応症からなる群から選択される、請求項６３または６４に記載の使用または方法。
【請求項６６】
前記がんが、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞または大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成および骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質細胞性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、または前白血病のうちの１つ以上から選択される血液学的癌である、請求項６５に記載の使用または方法。
【請求項６７】
前記がんが、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部または頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児期固形腫瘍、膀胱癌、腎臓または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、メルケル細胞癌、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発癌、前記癌の組み合わせ、および前記癌の転移病巣からなる群から選択される、請求項６５に記載の使用または方法。
【請求項６８】
前記疾患が、ＨＩＶ１、ＨＩＶ２、ＨＴＬＶ１、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ＢＫウイルス、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス８インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、鳥インフルエンザウイルス、ＭＥＲＳおよびＳＡＲＳコロナウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、ライノウイルス、エンテロウイルス、デングウイルス、ウエストナイルウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、ラッサ熱ウイルス、ジカウイルス、ＲＳＶ、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ライノウイルス、水痘ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型および２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ＨＩＶ−１、ＨＴＬＶ１、肝炎ウイルス、エンテロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ニパおよびリフトバレー熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルスを含むが、これらに限定されないウイルスによる感染に関連するか、またはｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、非定型マイコバクテリア種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、トキソプラズマ症、リケッチア、ノカルジア、アスペルギルス、ケカビ、またはカンジダによる感染に関連する、請求項６５に記載の使用または方法。
【請求項６９】
前記疾患が、真性糖尿病、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、尋常性天疱瘡、強直性脊椎炎、橋本甲状腺炎、ＳＬＥ、サルコイドーシス、強皮症、混合結合組織病、移植片対宿主病、またはアルツハイマー病を含むが、これらに限定されない免疫疾患または変性疾患である、請求項６５に記載の使用または方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条の下で、２０１７年９月２７日に出願された米国仮出願第６２／５６４，２４９号に対する優先権を主張するものであり、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
がん、感染症、アレルギー性障害、変性障害、および免疫障害の養子細胞療法のための新規の共刺激モジュールおよび新規のキメラ抗原受容体が本明細書に提供される。
【０００３】
配列表の参照による組み込み
ＩＢＭ−ＰＣのＭＳ−Ｗｉｎｄｏｗｓオペレーティングシステムで機械的にフォーマットされた、２０１８年９月２７日に作成され、６０，３４７，２６０バイトのデータを有する「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」というファイル名の配列表が本出願に添付されている。本配列表は、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００４】
養子Ｔ細胞免疫療法は、がん治療法の最前線に位置している。Ｔ細胞は、腫瘍関連抗原を認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の遺伝子を発現するように操作され得る。ＣＡＲは、操作された免疫受容体であり、腫瘍細胞を選択的に死滅させるようにＴ細胞に再指向することができる。がん免疫療法におけるそれらの使用の一般前提は、腫瘍標的Ｔ細胞を迅速に生成することであり、能動免疫化の障壁および漸進的動態を迂回し、それにより、「生きた薬物」の役割を果たす。ＨＬＡ−ペプチド複合体を結合する生理学的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）とは異なり、ＣＡＲは、ペプチドプロセシングまたはＨＬＡ発現の認識を必要としない分子を結合する。したがって、ＣＡＲは、ＴＣＲとは対照的に、患者のハプロタイプに一致しなければならない任意のＨＬＡバックグラウンドの抗原を認識する。さらに、ＣＡＲは、ＴＣＲ媒介免疫からの腫瘍回避に寄与する２つの機構である下方調節されたＨＬＡ発現またはプロテアソームによる抗原プロセシングを有する腫瘍細胞を標的とすることができる。ＣＡＲの広範な適用性の別の特徴は、タンパク質のみならず炭水化物および糖脂質構造にも結合するそれらの能力であり、これらも同様に、潜在的標的の範囲を拡大する。
【発明の概要】
【０００５】
本開示は、（ｉ）少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体および（ｉｉ）ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を選択的に活性化する少なくとも１つの天然に存在しない薬剤を発現する免疫細胞またはその免疫細胞集団を提供する。一実施形態では、少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体は、少なくとも１つの抗原結合ドメインおよび少なくとも１つの膜貫通ドメインを含む。別のまたはさらなる実施形態では、少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体は、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができる。別のまたはさらなる実施形態では、少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または組換えＴＣＲである。別のまたはさらなる実施形態では、少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体の少なくとも１つの抗原結合ドメインは、ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＭＰＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）または（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；急性白血病またはリンパ腫に発現するが、造血前駆細胞には発現しないグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血癌に発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ−ｌｌＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＴｅｓｔｉｓｉｎまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）；段階特異的胚抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ（ＦＲａまたはＦＲ１）；葉酸受容体ベータ（ＦＲｂ）；受容体チロシン−タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１（細胞表面結合型）（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニットベータ型９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐｌ００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）およびＡｂｅｌｓｏｎマウス白血病ウイルス癌遺伝子相同体１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨ糖セラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（染色体１２ｐに位置）（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバーｌＡ（ＸＡＧＥｌ）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビン；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴ  Ａ−１またはガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来相同体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ相同体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  ｌＢ  １（ＣＹＰｌＢ  １）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはインプリント部位の調節因子の同胞）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ��ＴＥＳｌ）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓ユビキタス１（ＲＵ１）；腎臓ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒト乳頭腫ウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ヒト乳頭腫ウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲｌ）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ−ＭＹＣエピトープタグ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１  ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）；フコシル−ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１−ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ−ＩＧＬｌ１、ＴＣＲガンマ−デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、Ｔｎ  ａｇ、Ｔｉｍ１−／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ−ＣＳＦＲ−アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、Ｌｅｗｓ  Ａｇ、ＴＣＲ−ベータ１鎖、ＴＣＲ−ベータ２鎖、ＴＣＲ−ガンマ鎖、ＴＣＲ−デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲまたはＧＲ）、ＣＣＲ４、ＧＤ３、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、ＫＳＨＶ  Ｋ８．１、ＫＳＨＶ−ｇＨ、Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニリルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、デスモグレイン３に対する自己抗体（Ｄｓｇ３）、デスモグレイン１に対する自己抗体（Ｄｓｇ１）、ＨＬＡ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｇ、ＩｇＥ、ＣＤ９９、Ｒａｓ  Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤ１８Ａ２またはＣＬＤＮ１８Ａ．２）、Ｐ−糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、Ｌｉｖ１、ネクチン−４、クリプト、ｇｐＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原からなる群から選択される抗原に結合する。別のまたはさらなる実施形態では、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤は、ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３、���１３−ｏｐｔ、ＮＥＭＯ突然変異体、ＮＥＭＯ融合タンパク質、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＲＩＰ、ＩＫＫα、ＩＫＫβ、Ｔｃｌ−１、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５、任意のＮＦ−κＢ活性化タンパク質またはタンパク質断片、ＮＦ−κＢ経路阻害剤の任意の阻害剤、ＮＦ−κＢを選択的に活性化することができる任意の遺伝子編集系、それらの任意の相同体またはバリアント、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。別のまたはさらなる実施形態では、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤は、非ウイルス起源のものである。別のまたはさらなる実施形態では、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤は、遺伝子編集系である。別のまたはさらなる実施形態では、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤は、ＮＥＭＯ／ＩＫＫγのオリゴマー化を誘導する。別のまたはさらなる実施形態では、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤は、ＩＫＫ複合体の活性化を誘導する。別のまたはさらなる実施形態では、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤は、ＡＫＴ経路を活性化しない。別のまたはさらなる実施形態では、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤は、構成的または誘導的様式で発現される。別のまたはさらなる実施形態では、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤は、過渡的に発現される。別のまたはさらなる実施形態では、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤は、安定的に発現される。別のまたはさらなる実施形態では、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤の活性は、細胞を化合物と接触させることによって翻訳後に制御される。別のまたはさらなる実施形態では、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤は、スイッチドメインの１つ以上のコピーを有する融合構築物として発現される。別のまたはさらなる実施形態では、ＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化す
ることができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤の活性は、スイッチドメインの二量体化を誘導する化合物の治療有効量を投与することによって翻訳後レベルで制御される。別のまたはさらなる実施形態では、スイッチドメインは、ＦＫＢＰ１２ドメインの１つ以上のコピーを含む。別のまたはさらなる実施形態では、化合物は、ＡＰ２０１８７またはＲｉｍｉｄｕｃｉｄまたはそれらの相同体である。別のまたはさらなる実施形態では、免疫細胞は、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＴＣＲ発現Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、組織常在性リンパ球、幹細胞、誘導多能性幹細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。別のまたはさらなる実施形態では、免疫細胞は、機能的天然Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナル伝達複合体および／またはβ２マイクログロブリンを欠くように操作されている。別のまたはさらなる実施形態では、少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体および／またはＮＦ−κＢシグナル伝達経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの薬剤は、内在性ＴＣＲ遺伝子にクローン化され、それにより、少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体および／またはＮＦ−κＢシグナル伝達経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの薬剤の発現が、ＴＣＲ遺伝子の内在性調節要素／プロモーターの制御下に置かれるようになる。本開示は、がん、感染性疾患、免疫疾患、およびアレルギー性疾患の群から選択される疾患の予防および治療のために使用される本明細書に記載の免疫細胞または免疫細胞集団の使用も提供する。別のまたはさらなる実施形態では、少なくとも１つのポリヌクレオチドは、少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体およびＮＦ−κＢシグナル伝達経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤をコードし、単一のプロモーターから発現される。別のまたはさらなる実施形態では、少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体およびＮＦ−κＢシグナル伝達経路を選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドは、２つ以上の別個のプロモーターを使用して発現される。別のまたはさらなる実施形態では、少なくとも１つのポリヌクレオチドは、ＮＦ−κＢを選択的に活性化することができる天然に存在しない薬剤をコードする第２の核酸配列とは別個の少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体をコードする第１の核酸コード配列を含み、それにより、第１の核酸コード配列および第２の核酸コード配列の発現時に、天然に存在しない免疫受容体およびＮＦ−κＢを選択的に活性化することができる天然に存在しない薬剤が物理的または化学的に結合しないようになる。別のまたはさらなる実施形態では、少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体および／またはＮＦ−κＢを選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤をコードするポリヌクレオチドは、内在性ＴＣＲ遺伝子にクローン化され、それにより、少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体および／またはＮＦ−κＢを選択的に活性化することができる少なくとも１つの天然に存在しない薬剤が、ＴＣＲ遺伝子の内在性調節要素／プロモーターの制御下に置かれるようになる。別のまたはさらなる実施形態では、ＴＣＲ遺伝子の１つ以上の定常鎖は、機能的に再発現される。
【０００６】
本開示は、少なくとも１つの天然に存在しない免疫受容体をコードする少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドであって、（ａ）内在性タンパク質の一部または全ての膜貫通および／または細胞質ドメインならびに任意選択的に細胞外ドメインをコードする第１の核酸ドメインであって、内在性タンパク質がリンパ球の表面に発現され、リンパ球の活性化および／または増殖を誘発する、第１の核酸ドメインと、（ｂ）任意選択的にポリヌクレオチドａリンカーと、（ｃ）第１の核酸ドメインに作動可能に連結された第２の核酸ドメインであって、１つ以上の非天然ＴＣＲ抗原結合ドメインをコードする、第２の核酸ドメインと、（ｄ）共刺激ドメインをコードする任意選択的な第３の核酸ドメインと、（ｅ）アクセサリーモジュールをコードする任意選択的な追加の核酸ドメインとを含む、少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドも提供する。
【０００７】
本開示は、天然に存在しない免疫受容体をコードする第１の核酸と、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むアクセサリーモジュールをコードする第２の核酸とを含む、少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドも提供する。一実施形態では、第１の核酸および第２の核酸は、切断可能なペプチドリンカーをコードするオリゴヌクレオチドリンカーによって分離されている。別の実施形態では、少なくとも１つは、第１の核酸および第２の核酸が別個のベクターから発現されるように２つの組換えポリヌクレオチドを含む。別のまたはさらなる実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、天然に存在しない選択的ＮＦ−κＢ活性化因子である。別のまたはさらなる実施形態では、天然に存在しない免疫受容体は、ＣＡＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰ、ｃＴＣＲ、ＳＩＲ、および組換えＴＣＲからなる群から選択される。別のまたはさらなる実施形態では、天然に存在しない免疫受容体は、（ｉ）細胞外抗原特異的ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉｉ）免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む任意選択的な細胞内シグナル伝達ドメインを含み、（ｉｉｉ）は、天然に存在しない免疫受容体のＣ末端に位置する。別のまたはさらなる実施形態では、第１の核酸配列および第２の核酸配列の発現時に、天然に存在しない免疫受容体および選択的ＮＦ−κＢ活性化因子ポリペプチドは、物理的または化学的に結合しない。別のまたはさらなる実施形態では、細胞外抗原特異的ドメインは、ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＭＰＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）または（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；急性白血病またはリンパ腫に発現するが、造血前駆細胞には発現しないグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血癌に発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ−ｌｌＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＴｅｓｔｉｓｉｎまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）；段階特異的胚抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ（ＦＲａまたはＦＲ１）；葉酸受容体ベータ（ＦＲｂ）；受容体チロシン−タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１（細胞表面結合型）（ＭＵＣ１）；ＡＦＰ／ＭＨＣ複合体；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニットベータ型９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐｌ００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）およびＡｂｅｌｓｏｎマウス白血病ウイルス癌遺伝子相同体１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨ糖セラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；ＷＴ１／ＭＨＣ  Ｉ複合体；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＭＨＣ  Ｉ複合体、癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（染色体１２ｐに位置）（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバーｌＡ（ＸＡＧＥｌ）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビン；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴ  Ａ−１またはガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺���子）；Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来相同体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ相同体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  ｌＢ  １（ＣＹＰｌＢ  １）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはインプリント部位の調節因子の同胞）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳｌ）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓ユビキタス１（ＲＵ１）；腎臓ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒト乳頭腫ウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ＨＰＶ  Ｅ６／ＭＨＣ  Ｉ複合体；ヒト乳頭腫ウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；ＨＰＶ  Ｅ７／ＭＨＣ  Ｉ複合体；ＡＦＰ／ＭＨＣ  Ｉ複合体；Ｒａｓ／ＭＨＣ  Ｉ複合体；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲｌ）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ−ＭＹＣエピトープタグ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１  ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）；フコシル−ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１−ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ−ＩＧＬｌ１、ＴＣＲガンマ−デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、Ｔｎ  ａｇ、Ｔｉｍ１−／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ−ＣＳＦＲ−アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、Ｌｅｗｓ  Ａｇ、ＴＣＲ−ベータ１鎖、ＴＣＲ−ベータ２鎖、ＴＣＲ−ガンマ鎖、ＴＣＲ−デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲまたはＧＲ）、ＣＣＲ４、ＧＤ３、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、ＫＳＨＶ  Ｋ８．１、ＫＳＨＶ−ｇＨ、Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニリルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、デスモグレイン３に対する自己抗体（Ｄｓｇ３）、デスモグレイン１に対する自己抗体（Ｄｓｇ１）、ＨＬＡ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｇ、ＩｇＥ、ＣＤ９９、Ｒａｓ  Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤ１８Ａ２またはＣＬＤＮ１８Ａ．２）、Ｐ−糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、Ｌｉｖ１、ネクチン−４、クリプト、ｇｐＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原のうちのいずれか１つ以上に結合する。別のまたはさらなる実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３、ＮＥＭＯ突然変異体、ＮＥＭＯ融合タンパク質、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＲＩＰ、ＦＫＢＰｘ２−ＲＩＰ−ＩＤ、ＩＫＫ１、ＦＫＢＰｘ２−ＩＫＫａ、ＩＫＫ２、ＦＫＢＰｘ２−ＩＫＫ２、Ｔｃｌ−１、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５、任意のＮＦ−κＢ活性化タンパク質またはタンパク質断片、ＮＦ−κＢ経路阻害剤の任意の阻害剤、ＮＦ−κＢを選択的に活性化することができる遺伝子編集系、ＮＦ−κＢを選択的に活性化するＲＮＡ干渉系、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。別のまたはさらなる実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＦＫＢＰドメインの１つ以上のコピーを有する融合構築物として発現される。別のまたはさらなる実施形態では、細胞外抗原特異的ドメインは、所定の標的抗原に特異的な抗体またはその断片の重鎖（ｖＨ）の可変領域；所定の標的抗原に特異的な抗体またはその断片の軽鎖（ｖＬ）の可変領域；所定の標的抗原に特異的な一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）またはその断片；所定の標的抗原に特異的な抗体断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、ａ（Ｆａｂ’）２）；所定の標的抗原に特異的な単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）断片；所定の標的抗原に特異的なラクダ類ｖＨＨドメイン；所定の標的抗原に特異的な非免疫グロブリン抗原結合足場；所定の標的抗原に特異的な受容体またはその断片；所定の標的抗原に特異的なリガンドまたはその断片；１つ以上の所定の標的抗原に特異的な二重特異性抗体、二重特異性抗体断片、二重特異性ｓｃＦＶ、二重特異性ｖＨＨ、二重特異性ＳＤＡＢ、二重特異性非
免疫グロブリン抗原結合足場、二重特異性受容体、または二重特異性リガンド；および自己抗原またはその断片からなる群から選択される。
【０００８】
本開示は、本明細書の上に記載の前述のポリヌクレオチド構築物のうちのいずれかの少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む少なくとも１つのベクターも提供する。一実施形態では、ベクターは、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＡＡＶベクター、レトロウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンベクター、およびＰｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンベクターからなる群から選択される。
【０００９】
本開示は、本明細書の上に記載の少なくとも１つの組換えポリヌクレオチド構築物またはベクターを含む免疫エフェクター細胞または幹細胞も提供する。一実施形態では、免疫細胞は、抗原提示細胞である。別のまたはさらなる実施形態では、免疫エフェクター細胞は、免疫エフェクター細胞を生み出すことができる、ヒトＴ細胞、ヒトＮＫＴ細胞もしくは合成Ｔ細胞、ＮＫ細胞、または幹細胞であり、任意選択的に、Ｔ細胞は、ジアグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）および／またはＩｋａｒｏｓ欠損性および／またはＢｒｄ４欠損性である。
【００１０】
本開示は、（ｉ）発現している免疫細胞の寿命を延長させ、（ｉｉ）免疫細胞の増殖を刺激し、（ｉｉｉ）免疫細胞によるサイトカイン産生を刺激し、（ｉｖ）免疫細胞による抗原提示を増強し、（ｖ）免疫細胞をアポトーシスから保護するための方法であって、免疫細胞を、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子またはＮＦ−κＢ特異的刺激ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドでトランスフェクトまたは形質転換することを含む、方法も提供する。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子またはＮＦ−κＢ特異的刺激ポリペプチドは、ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＮＥＭＯ突然変異体、ＮＥＭＯ融合タンパク質、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＲＩＰ、ＩＫＫα、ＩＫＫβ、Ｔｃｌ−１、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５、任意のＮＦ−κＢ活性化タンパク質またはタンパク質断片、ＮＦ−κＢ経路阻害剤の任意の阻害剤、それらの任意の相同体またはバリアント、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。別のまたはさらなる実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子またはＮＦ−κＢ特異的刺激ポリペプチドは、構成的または誘導的様式で発現される。別のまたはさらなる実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子またはＮＦ−κＢ特異的刺激ポリペプチドは、Ｔ細胞を化合物と接触させることによって翻訳後に制御される。別のまたはさらなる実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子またはＮＦ−κＢ特異的刺激ポリペプチドは、ＦＫＢＰドメインの１つ以上のコピーを有する融合構築物として発現される。別のまたはさらなる実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子またはＮＦ−κＢ特異的刺激ポリペプチドの活性は、ＦＫＢＰドメインの二量体化を誘導する化合物の治療有効量を投与することによって翻訳後レベルで制御される。別のまたはさらなる実施形態では、化合物は、ＡＰ２０１８７またはＲｉｍｉｄｕｃｉｄである。
【００１１】
本開示は、天然に存在しない免疫受容体を発現する免疫エフェクター細胞を作製する方法であって、本開示の少なくとも１つのベクターまたは少なくとも１つの組換えポリヌクレオチド構築物を、天然に存在しない免疫受容体が発現されるような条件下で、免疫エフェクター細胞または免疫エフェクター細胞を生み出すことができる造血幹細胞もしくは前駆細胞に導入することを含み、免疫エフェクター細胞が、ＮＦｋＢ特異的刺激ポリペプチドを欠くＣＡＲ−Ｔ細胞と比較して、（ｉ）延長された寿命、（ｉｉ）改善されたＴ細胞増殖、および／または（ｉｉｉ）減少したアポトーシスを含む、方法も提供する。別のまたはさらなる実施形態では、本方法は、免疫エフェクター細胞の集団を提供することと、その集団から調節性Ｔ細胞を除去し、それにより、調節性Ｔ細胞枯渇集団を提供することとをさらに含み、これらのステップは、ＣＡＲおよび／またはＮＦｋＢ特異的刺激ポリペプチドをコードするベクターまたは組換えポリヌクレオチドをその集団に導入する前に行われる。別のまたはさらなる実施形態では、調節性Ｔ細胞は、抗ＣＤ２５抗体または抗ＧＩＴＲ抗体を使用して細胞集団から除去される。別のまたはさらなる実施形態では、本方法は、ａ）免疫エフェクター細胞の集団を提供することと、ｂ）その集団からＰ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐまたはＰｇｐ；ＭＤＲ１、ＡＢＣＢ１、ＣＤ２４３）陽性細胞を富化し、それにより、Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐまたはＰｇｐ；ＭＤＲ１、ＡＢＣＢ１、ＣＤ２４３）富化細胞集団を提供することとをさらに含み、ステップａ）およびステップｂ）は、ＣＡＲおよび／またはＮＦｋＢ特異的刺激ポリペプチドをコードするベクターまたは組換えポリヌクレオチドを導入する前または導入した後に行われる。別のまたはさらなる実施形態では、Ｐ−糖タンパク質陽性細胞は、ｉ）Ｐ−糖タンパク質特異的抗体のうちの１つまたはそのカクテルを使用した免疫選択、ｉｉ）Ｐ−糖タンパク質がポンプとして活性である条件下での、Ｐ−糖タンパク質の基質である蛍光色素、テトラメチルローダミンメチルエステル（ＴＭＲＭ）、アドリアマイシン、およびアクチノマイシン−Ｄ）のうちの１つ以上での染色、およびその色素でわずかに染色される細胞の富化、ｉｉｉ）Ｐ−糖タンパク質の基質である光毒性化合物、例えば、ＴＨ９４０２、２−（４，５−ジブロモ−６−アミノ−３−イミノ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−安息香酸メチルエステル塩酸塩、２−（４，５−ジブロモ−６−アミノ−３−イミノ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−安息香酸エチルエステル塩酸塩、２−（４，５−ジブロモ−６−アミノ−３−イミノ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−安息香酸オクチルエステル塩酸塩、２−（４，５−ジブロモ−６−アミノ−３−イミノ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−安息香酸ｎ−ブチルエステル塩酸塩、２−（６−エチルアミノ−３−エチルイミノ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−安息香酸ｎ−ブチルエステル塩酸塩、またはそれらの誘導体もしくはそれらの組み合わせのうちのいずれか１つ以上に耐性を示す細胞の選択、およびｉｖ）Ｐ−糖タンパク質の基質である細胞毒性化合物、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール、パクリタキセル、ミトキサントロン、エトポシド、アドリアマイシン、ダウノルビシン、およびアクチノマイシン−Ｄに耐性を示す細胞の選択からなる群から選択される方法のうちのいずれか１つ以上を使用して富化される。
【００１２】
本開示は、ＲＮＡ操作細胞の集団を生成する方法であって、インビトロ転写ＲＮＡ（複数可）または合成ＲＮＡ（複数可）を細胞または細胞集団に導入することを含み、ＲＮＡ（複数可）が、本開示の組換えポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含む、方法も提供する。
【００１３】
本開示は、対象に抗疾患免疫を提供する方法であって、対象に、本開示の免疫エフェクター細胞または免疫エフェクター細胞を生み出すことができる幹細胞の有効量を投与することを含み、その細胞が、免疫エフェクター細胞を生み出すことができる、自己Ｔ細胞もしくは同種Ｔ細胞、または自己ＮＫＴ細胞もしくは同種ＮＫＴ細胞、または自己もしくは同種造血幹細胞、または自己もしくは同種ｉＰＳＣである、方法も提供する。別のまたはさらなる実施形態では、同種Ｔ細胞または同種ＮＫＴ細胞または造血幹細胞またはｉＰＳＣは、機能的ＴＣＲまたは機能的ＨＬＡの発現を欠くか、またはその低発現を有する。
【００１４】
本開示は、天然に存在しない免疫受容体および選択的ＮＦｋＢ活性化因子を含む免疫エフェクター細胞または免疫エフェクター細胞を生成することができる幹細胞を含む組成物であって、天然に存在しない免疫受容体が、疾患関連抗原関連に結合する抗原結合ドメインを含み、その疾患関連抗原が、ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ−１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）または（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；急性白血病またはリンパ腫に発現するが、造血前駆細胞には発現しないグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血癌に発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ−ｌｌＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＴｅｓｔｉｓｉｎまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）；段階特異的胚抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ；受容体チロシン−タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１（細胞表面結合型）（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニットベータ型９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐｌ００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）およびＡｂｅｌｓｏｎマウス白血病ウイルス癌遺伝子相同体１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２��８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨ糖セラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（染色体１２ｐに位置）（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバーｌＡ（ＸＡＧＥｌ）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビンｇ；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴ  Ａ−１またはガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来相同体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ相同体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  ｌＢ  １（ＣＹＰｌＢ  １）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはインプリント部位の調節因子の同胞）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳｌ）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓ユビキタス１（ＲＵ１）；腎臓ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒト乳頭腫ウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ヒト乳頭腫ウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲｌ）；���ｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ−ＭＹＣエピトープタグ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１  ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）フコシル−ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１−ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ−ＩＧＬｌ１、ＡＬＫ  ＴＣＲガンマ−デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、ＣＳＰＧ４−ＨＭＷ−ＭＡＡ、Ｔｉｍ１−／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ−ＣＳＦＲ−アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、ＶＥＧＦＲ２／ＫＤＲ、Ｌｅｗｓ  Ａｇ、ＴＣＲ−ベータ１鎖、ＴＣＲ−ベータ２鎖、ＴＣＲ−ガンマ鎖、ＴＣＲ−デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、絨毛性ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲ）、ＣＣＲ４、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニリルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、ＫＳＨＶ−Ｋ８．１タンパク質、ＫＳＨＶ−ｇＨ  タンパク質、デスモグレイン３に対する自己抗体（Ｄｓｇ３）、デスモグレイン１に対する自己抗体（Ｄｓｇ１）、ＨＬＡ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｇ、ＩＧＥ、ＣＤ９９、ＲＡＳ  Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤ１８Ａ２  ＯＲ  ＣＬＤＮ１８Ａ．２））、Ｐ−糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、ＬＩＶ１、ＮＥＣＴＩＮ−４、クリプト、ＧＰＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原からなる群から選択される、組成物も提供する。
【００１５】
本開示は、対象における疾患関連抗原の発現に関連する疾患を治療または予防する方法であって、対象に、天然に存在しない免疫受容体および選択的ＮＦｋＢ活性化因子を含む免疫エフェクター細胞の有効量を投与することであって、天然に存在しない免疫受容体が、疾患関連抗原関連に結合する抗原結合ドメインを含み、疾患関連抗原が、ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ−１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）または（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；急性白血病またはリンパ腫に発現するが、造血前駆細胞には発現しないグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血癌に発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ−ｌｌＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＴｅｓｔｉｓｉｎまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）；段階特異的胚抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ；受容体チロシン−タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１（細胞表面結合型）（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニットベータ型９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐｌ００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）およびＡｂｅｌｓｏｎマウス白血病ウイルス癌遺伝子相同体１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）��腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨ糖セラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（染色体１２ｐに位置）（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバーｌＡ（ＸＡＧＥｌ）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビンｇ；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴ  Ａ−１またはガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来相同体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ相同体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  ｌＢ  １（ＣＹＰｌＢ  １）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはインプリント部位の調節因子の同胞）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳｌ）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓ユビキタス１（ＲＵ１）；腎臓ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒト乳頭腫ウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ヒト乳頭腫ウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免���グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲｌ）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ−ＭＹＣエピトープタグ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１  ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）フコシル−ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１−ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ−ＩＧＬｌ１、ＡＬＫ  ＴＣＲガンマ−デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、ＣＳＰＧ４−ＨＭＷ−ＭＡＡ、Ｔｉｍ１−／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ−ＣＳＦＲ−アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、ＶＥＧＦＲ２／ＫＤＲ、Ｌｅｗｓ  Ａｇ、ＴＣＲ−ベータ１鎖、ＴＣＲ−ベータ２鎖、ＴＣＲ−ガンマ鎖、ＴＣＲ−デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、絨毛性ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲ）、ＣＣＲ４、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニリルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、ＫＳＨＶ−Ｋ８．１タンパク質、ＫＳＨＶ−ｇＨ  タンパク質、デスモグレイン３に対する自己抗体（Ｄｓｇ３）、デスモグレイン１に対する自己抗体（Ｄｓｇ１）、ＨＬＡ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｇ、ＩＧＥ、ＣＤ９９、ＲＡＳ  Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤ１８Ａ２  ＯＲ  ＣＬＤＮ１８Ａ．２））、Ｐ−糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、ＬＩＶ１、ＮＥＣＴＩＮ−４、クリプト、ＧＰＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原からなる群から選択される、投与することを含み、それにより、対象を治療するか、または対象における疾患を予防する、方法も提供する。別のまたはさらなる実施形態では、疾患関連抗原の発現に関連する疾患は、疾患関連抗原の発現に関連する、増殖性疾患、前癌状態、がん、および非がん関連適応症からなる群から選択される。別のまたはさらなる実施形態では、がんは、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞または大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成および骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質細胞性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、または前白血病のうちの１つ以上から選択される血液学的癌である。別のまたはさらなる実施形態では、がんは、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部または頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児期固形腫瘍、膀胱癌、腎臓または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、メルケル細胞癌、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発癌、これらのがんの組み合わせ、およびこれらのがんの転移病巣からなる群から選択される。別のまたはさらなる実施形態では、疾患は、ＨＩＶ１、ＨＩＶ２、ＨＴＬＶ１、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ＢＫウイルス、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス８インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、鳥インフルエンザウイルス、ＭＥＲＳおよびＳＡＲＳコロナウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、ライノウイルス、エンテロウイルス、デングウイルス、ウエストナイルウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、ラッサ熱ウイルス、ジカウイルス、ＲＳＶ、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ライノウイルス、水痘ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型および２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ＨＩＶ−１、ＨＴＬＶ１、肝炎ウイルス、エンテロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ニパおよびリフトバレー熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルスを含むが、これらに限定されないウイルスによる感染に関連するか
、またはｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、非定型マイコバクテリア種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、トキソプラズマ症、リケッチア、ノカルジア、アスペルギルス、ケカビ、またはカンジダによる感染に関連する。別のまたはさらなる実施形態では、疾患は、真性糖尿病、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、尋常性天疱瘡、強直性脊椎炎、橋本甲状腺炎、ＳＬＥ、サルコイドーシス、強皮症、混合結合組織病、移植片対宿主病、またはアルツハイマー病を含むが、これらに限定されない免疫疾患または変性疾患である。
【００１６】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、添付の図面および以下の発明を実施するための形態に記載されている。本発明の他の特徴、目的、および利点は、発明を実施するための形態および図面、ならびに特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】現代の抗体、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、ＣＡＲ、ならびに次世代ＣＡＲおよびＳＩＲの模式図を示す。
【図２】第二世代ＣＡＲの生物学的活性および構造を、ＣＤ２８または４１ＢＢを欠くが、ＮＦ−κＢ刺激分子（ＮＥＭＯおよび／またはＫ１３、またはそれらの突然変異体）を発現するＣＡＲを示す本開示の実施形態と比較した模式図を示す。
【図３】ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ突然変異体およびｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異体によるＮＦ−κＢの強い活性化、ならびにｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ｉ突然変異体およびｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ｇ突然変異体による弱い活性化を示す。
【図４】ＭＰＬを標的とし、かつ１６１−ｓｃＦｖ標的ドメインを使用する二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーの活性を示す。ＨＥＬ−ｐＬｅｎｔｉ−ｈＧｌｕｃおよびＴ細胞を、以下の上清、培地のみおよびｐＬｅｎｔｉ−１６１−ＳｔｒｅｐｔａｇＩＩ−ＣＤ３−Ｍｙｃ−Ｈｉｓ−Ｐ０２（０４２５１７−Ｐ０２−ＳＣ）と４℃で２時間別個にプレインキュベートした。インキュベートした後、細胞を、１：１または５：１のＥ：Ｔ比で、Ｕ底９６ウェルプレート内３７℃で４時間共培養した。１ウェル当たり５０μＬの細胞＋上清を三連で３８４ウェルプレートに移した。ｈＧＬｕｃアッセイを、１５ｕＬのＣＴＺアッセイ緩衝液（１：１００）を使用して行った。
【図５Ａ−５Ｃ】ＴＲＡＣ遺伝子座を標的化するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介ＴＦＰ遺伝子およびＴＲＡＣ発現をレスキューするための戦略を示す。Ａの上：ＴＲＡＣ遺伝子座であり、ＴＲＡＣの第１のエクソンの５′末端を灰色で示し、ＴＲＡＣ  ｇＲＮＡを青色で示し、対応するＰＡＭ配列を赤色で示している。２つの青色の矢印は、予測されるＣａｓ９二本鎖切断を示す。下：ＴＲＡＣ遺伝子座へのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９標的組み込み。標的構築物（ＡＡＶ）は、スプライスアクセプター（ＳＡ）を含み、Ｆ２Ａコード配列、ＴＦＰ遺伝子、およびポリＡ配列が続き、ＴＲＡＣ遺伝子座と相同の配列（ＬＨＡおよびＲＨＡ、左および右ホモロジーアーム）と隣接している。組み込まれると、内在性ＴＣＲαプロモーターがＴＦＰ発現を駆動する一方で、ＴＲＡＣ遺伝子座は破壊される。Ｂ）標的構築物は、ＴＦＰを発現し、ＴＲＡＣ（ＴＣＲα定常鎖）を、２Ａ配列を介して共発現する。Ｃ）標的構築物は、ＴＦＰを発現し、ＴＣＲαプロモーターがＴＦＰの発現ならびにＴＣＲα可変領域（ＴＲＡＶ）を欠いているＴＲＡＣの発現を駆動するようにＲＨＡに存在する第１のエクソンとインフレームのシグナルペプチドを、２Ａ配列を介して共発現する。ＴＲＡＪ：ＴＣＲα連結領域、２Ａ：自己切断型２Ａ配列、ｐＡ：ＳＶ４０／β−グロビンポリＡ配列。
【図６Ａ−６Ｅ】Ａｂ−ＴＣＲをＴＲＡＣ遺伝子座に指向するための標的カセットの様々な構築物設計を示す。
【図７Ａ−７Ｆ】ｃＴＣＲ（ＳＩＲ）をＴＲＡＣ遺伝子座に指向するための標的カセットの様々な構築物設計を示す。
【図８Ａ−８Ｄ】ｃＴＣＲ（ＳＩＲ）およびＴＣＲをＴＲＡＣ遺伝子座に指向するための標的カセットの様々な構築物設計を示す。
【図９Ａ−９Ｄ】一本鎖ｃＴＣＲ（ＳＩＲ）をＴＲＡＣ遺伝子座に指向するための標的カセットの様々な構築物設計を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
初期の第一世代ＣＡＲは、ｓｃＦｖ（一本鎖断片可変）に基づく抗原結合ドメインの、ＣＤ３−ζ鎖またはＦｃ受容体γ鎖に由来する細胞質シグナル伝達ドメインに連結された不活性ＣＤ８膜貫通ドメインへの融合により構築された（図１）。
【００１９】
ＣＤ３−ζ鎖凝集は、Ｔ細胞の溶解活性を可能にするのに十分であるが、それらは、インターロイキン−２（ＩＬ−２）を含むサイトカインのロバスト応答を誘発することができず、抗原に繰り返し曝露した場合にＴ細胞の拡大を支援することができなかった。最適な活性化および増殖のために、Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体結合およびシグナル伝達の両方、ならびに標的とされた腫瘍細胞または抗原提示細胞のいずれかによって発現された同族リガンド（すなわち、ＣＤ８０／８６、４−１ＢＢＬ、ＯＸ−４０Ｌ）に結合するＴ細胞上の共刺激受容体（すなわち、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ−４０）を介した共刺激シグナル伝達を必要とする。Ｔ細胞共刺激の欠如を打開するために、第一世代ＣＡＲは、Ｔ細胞共刺激受容体の細胞質シグナル伝達ドメインを組み込むことによってさらに修飾された。これらの第二世代ＣＡＲは、修飾されたＴ細胞のシグナル伝達の強度および持続性を増強し、優れた抗腫瘍活性につながった。第二世代ＣＡＲ構築物に存在する共刺激ドメインを介したシグナル伝達により、ＮＦ−κＢ、ＡＫＴ、およびＥＲＫ等のいくつかのシグナル伝達経路の活性化がもたらされる。具体的には、ＡＫＴ活性化は、Ｔ細胞活性化を促進するが、末端分化、疲弊、および持続性の欠如をもたらすことも示されている。
【００２０】
図２は、各々に関連する生物学的活性を示す、第一世代ＣＡＲの次の上述の第二世代ＣＡＲおよび特異的ＮＦ−κＢ刺激分子の模式図を示す。
【００２１】
現在の臨床使用におけるＣＡＲ構築物は、それらがいくつかの異なるタンパク質の融合を表すため、設計が人工的である。具体的には、第二世代ＣＡＲ構築物への共刺激ドメインの包含により、その受容体を介した非生理学的シグナル伝達がもたらされ、これは、次いで、それらの毒性に寄与し得る。いくつかのＣＡＲは、持続性抗原非依存性シグナル伝達を示し、これは、無制限の細胞活性化につながり、最終的には、アポトーシス、同族抗原とは無関係の過度のサイトカイン放出、および免疫学的疲弊をもたらす。共刺激ドメイン（例えば、４１ＢＢおよびＣＤ２８ドメイン）を介した持続性シグナル伝達がＴ細胞生存を妨げることが示されている。したがって、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）等の過度の毒性の危険性を伴うことなくＣＡＲ修飾Ｔ細胞の長期持続性を達成するためにＣＡＲ設計を改善する必要がある。
【００２２】
従来の第二世代ＣＡＲ設計上の制限のうちのいくつかを打開するために、Ａｂ−ＴＣＲ（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０７０６０８  Ａ１）、ＴＣＲ受容体融合タンパク質またはＴＦＰ（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／１８７３４９  Ａ１）、合成免疫受容体（ＳＩＲ）（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１８／１０２７９５  Ａ１を参照のこと）、三官能性Ｔ細胞抗原カップラー（Ｔｒｉ−ＴＡＣ）（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／１１７２２９  Ａ１を参照のこと）を含む、集合的に次世代ＣＡＲと称されるいくつかの代替の設計について説明されている。これらの代替のＣＡＲ設計は、一般に、共刺激ドメインを欠く。
【００２３】
ＡＫＴ活性化および持続性シグナル伝達の制限を打開するために、本開示は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、ＮＥＭＯ−突然変異体（例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ）、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、またはＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅの使用を実証し、共刺激機能を提供する。多数のシグナル伝達経路を活性化する４１ＢＢ−およびＣＤ２８由来の共刺激ドメイン（図１における第二および第三世代ＣＡＲを参照のこと）とは対照的に、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、またはＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ等は、Ｉ−カッパＢキナーゼ（ＩＫＫ）複合体を活性化することによってＮＦ−κＢ経路を選択的に活性化する。本開示は、代替の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）の設計についてさらに記載し、この設計では、共刺激が天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）と共発現される選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むアクセサリーモジュールによって提供される。しかしながら、共刺激ドメインが成熟ＣＡＲポリペプチドの成分である第二世代ＣＡＲ構築物とは対照的に、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むアクセサリーモジュールは、必ずしも成熟免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）ポリペプチドの不可欠な部分ではない。かかる設計は、持続性シグナル伝達、過度のサイトカイン産生、ならびに共刺激ドメインを介した凝集および非生理学的シグナル伝達によって引き起こされるＴ細胞の早期疲弊といった問題を打開するため、有利である。本開示は、スイッチドメインと融合した、例えば、ＦＫＢＰ１２ｖ３６ドメインのタンデムコピーと融合したＮＦ−κＢ活性化因子を発現させることによってその活性を調節するための方法をさらに提供する。
【００２４】
本開示は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６−Ｓ１８０ＥおよびＫ１３−ｏｐｔ等のＴ細胞における発現が、老化を経ることなく培養下で長期間増殖するそれらの能力を高めることを実証し、それにより、単一経路（すなわち、ＮＦ−κＢ）の活性化がＴ細胞の老化を遅らせるのに十分であることを初めて実証する。例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７ＡまたはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５を共発現するが、いずれの共刺激ドメインも欠くＣＤ１９−ＣＡＲ構築物は、４１ＢＢ共刺激ドメインを含む第二世代ＣＡＲ構築物と比較して優れたインビボ有効性を示す。本開示は、ＮＦ−κＢの選択的活性化が、Ｔ細胞の増殖を促進し、老化を遅らせ、かつＣＡＲ−Ｔ細胞療法を含む養子細胞療法のためにＴ細胞の性能を改善するのに十分であることをさらに実証する。したがって、本開示は、免疫細胞におけるＮＦ−κＢ経路の選択的または優先的（すなわち、ＡＫＴ活性化なし）活性化により、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−ＴもしくはＴＣＲ−ＴもしくはＳＩＲ−Ｔ細胞、および／または天然に存在しない免疫受容体を発現する免疫細胞の生存、増殖、サイトカイン分泌を増強し、その疲弊および老化を遅らせ、そのインビボ拡大、持続性、および抗腫瘍活性を改善するための組成物および方法を提供する。さらに、本開示は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７ＡまたはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５等が、内在性ＴＣＲ（例えば、腫瘍浸潤リンパ球）、外因性ＴＣＲ、ＳＩＲ等を発現するＴ細胞を含む養子細胞療法のためのいずれのＴ細胞でも使用され得るため、それらの使用がＣＡＲ−Ｔ細胞での使用に限定されないことを実証する。
【００２５】
本開示は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、またはＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ等が、免疫細胞、例えば、抗原提示細胞、例えば、樹状細胞によるサイトカイン分泌および抗原提示を促進することによってワクチンの性能を改善するために使用され得ることをさらに実証する。例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、またはＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅを発現する骨髄由来の樹状細胞（ＤＣ）は、対照ＤＣと比較して優れたサイトカイン産生、抗原提示、および免疫応答（例えば、抗腫瘍応答または抗感染薬応答）を示す。
【００２６】
本開示は、ヒト起源のものであり、それ故に、免疫原性が低い選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ活性化因子をさらに提供する。
【００２７】
本開示は、サイトゾルに発現され得る選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ活性化因子をさらに提供する。本開示は、ＮＦ−κＢを活性化する能力のため、構成的に活性であり、刺激、例えば、リガンドでの治療を必要としない選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ活性化因子をさらに提供する。
【００２８】
本開示は、養子細胞療法での適用のための、従来のＣＡＲ（例えば、４１ＢＢ共刺激ドメインを含む第二世代ＣＡＲ）、ならびに次世代ＣＡＲ、例えば、ＳＩＲ、ｚＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、およびＴＦＰの生成に使用され得るいくつかの抗原結合ドメインをさらに提供する。いくつかの実施形態では、これらの抗原結合ドメインは、血液学的悪性腫瘍および固形腫瘍の両方に発現される抗体および標的抗原に由来する。これらの抗原結合ドメインのｖＬ、ｖＨ、およびｓｃＦｖ断片の配列番号は、表６Ａ〜Ｃに示される。軽鎖（ｖＬ）および重鎖（ｖＨ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列番号は、表６Ａ〜Ｂに示される。４１ＢＢ共刺激ドメインを含む例示的な第二世代ＣＡＲおよびこれらの抗原結合ドメインに基づく次世代ＣＡＲ（例えば、ｚＣＡＲ−Ｋ１３、ｚＣＡＲ−ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、およびＴＦＰ）の核酸およびアミノ酸の配列番号は、表１０〜１４に提供される。これらの抗原結合ドメインを含むＣＡＲは、多様なインビトロおよびインビボ特性、例えば、標的抗原に対する結合親和性、サイトカイン分泌、増殖、細胞毒性、疲弊、および長期持続性を示す。したがって、これらの標的抗原を含む天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲを使用して、多様な免疫応答を引き起こすことができる。本開示の抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現するポリヌクレオチド、ポリペプチド、発現構築物、組換え操作された細胞、ならびにかかるポリペプチド、ポリヌクレオチド、および細胞を作製および使用する方法は、当該技術分野で既知の方法、ならびに参照により全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２４８４３、ＷＯ２０１４／１６００３０  Ａ２、ＷＯ２０１６／１８７３４９  Ａ１、ＷＯ２０１７／０７０６０８  Ａ１、およびＷＯ２０１８／１０２７９５  Ａ１に記載の方法に記載されている。これらの抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する免疫細胞は、当該技術分野で既知の方法、ならびに参照により全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１７／０７０６０８  Ａ１、ＷＯ２０１６／１８７３４９  Ａ１、ＷＯ２０１８／１０２７９５  Ａ１、ＷＯ２０１５／１１７２２９  Ａ１に記載の方法を使用して、がん、感染性障害、および免疫障害の養子細胞療法のために生成および使用され得る。
【００２９】
本開示は、既製の養子細胞療法の目的のために、ＴＣＲおよびＣＡＲ、例えば、次世代ＣＡＲ（例えば、ＴＦＰ、ＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ｃＴＣＲ）を発現する同種Ｔ細胞を生成するための新規の方法をさらに提供する。
【００３０】
本開示は、ＴＣＲおよびＣＡＲ、例えば、次世代ＣＡＲ（例えば、ＴＦＰ、ＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、およびｃＴＣＲを発現する自己および同種Ｔ細胞を使用する併用療法の新規の方法をさらに提供する。本開示は、ＴＦＰを発現する細胞に、定常鎖ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、またはＴＣＲδを共発現させることによって、天然ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲγ鎖、またはＴＣＲδ鎖の発現を欠くＴ細胞におけるＣＤ３ε鎖、ＣＤ３γ鎖、およびＣＤδ鎖に基づくＴＦＰの発現および／または活性を回復させる方法を提供する。本開示は、ＴＦＰを発現する細胞に、定常鎖ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、またはＴＣＲδの全長または断片をコードするＳＩＲまたはＡｂ−ＴＣＲのいずれかを共発現させることによって、天然ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲγ鎖、またはＴＣＲδ鎖の発現を欠くＴ細胞におけるＣＤ３ε鎖、ＣＤ３γ鎖、およびＣＤδ鎖に基づくＴＦＰの発現および／または活性を回復させる方法をさらに提供する。本開示は、同種および既製の療法の目的のために、ＣＤ３ε鎖、ＣＤ３γ鎖、およびＣＤδ鎖に基づくＴＦＰが、天然ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲγ鎖、またはＴＣＲδ鎖を欠くＴ細胞において、定常鎖ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、またはＴＣＲδ定常鎖をコードするＳＩＲまたはＡｂ−ＴＣＲと組み合わせられ得ることを提供する。
【００３１】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「ある細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」への言及は、複数のかかる細胞を含み、「そのポリヌクレオチド（ｔｈｅ  ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）」への言及は、１つ以上のポリヌクレオチドへの言及を含むといった具合である。
【００３２】
また、「または」の使用は、別途明記されない限り、「および／または」を意味する。同様に、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は同義であり、限定するようには意図されていない。
【００３３】
様々な実施形態の記述が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を使用する場合、当業者であれば、いくつかの特定の例では、実施形態が、「から本質的になる」または「からなる」という言葉を使用してその代わりに記述され得ると理解するであろうことをさらに理解されたい。
【００３４】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２２ｎｄ  ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １５，２０１２）、Ｈｏｒｎｙａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｎａｎｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（２００８）、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｓａｉｎｓｂｕｒｙ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３ｒｄ  ｅｄ．，ｒｅｖｉｓｅｄ  ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ  ２００６）、Ｓｍｉｔｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ７ｔｈ  ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ  ２０１３）、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  ＤＮＡ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３ｒｄ  ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ−Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２８，２０１２）、およびＧｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ４ｔｈ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ  ２０１２）は、当業者に本出願で使用される用語の多くに対する一般的な指針を提供する。抗体の調製法に関する参考文献については、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ＮＹ，２０１３）、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｌｉｎｅｓ  ｂｙ  ｃｅｌｌ  ｆｕｓｉｏｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９７６  Ｊｕｌ，６（７）：５１１−９、Ｑｕｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｉｃｋ，Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，米国特許第５，５８５，０８９号（１９９６  Ｄｅｃ）、およびＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ｎａｔｕｒｅ  １９８８  Ｍａｒ  ２４，３３２（６１６２）：３２３−７を参照されたい。本明細書に提供される全ての表題および副題は、単に読み易くするためのものであり、本発明を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書に記載の方法および材料と同様または同等の方法および材料が本発明の実践または試験で使用され得るが、好適な方法および材料は以下に記載される。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。矛盾が生じた場合、定義を含む本明細書が優先されるものとする。加えて、材料、方法、および具体的な例は、例証のためのみであり、限定するようには意図されていない。
【００３５】
本明細書における全ての刊行物は、個々の刊行物または特許出願が各々参照により組み込まれると明確かつ個別に示される場合と同じ程度に、参照により組み込まれる。引用されるいずれの参考文献も、それらの参考文献に提供される情報のうちのいずれかが先行技術であるか、または現在特許請求されている本発明に関連することも、具体的または黙示的に参照されるいずれの刊行物も先行技術であることも認めるものではない。
【００３６】
「約」という用語は、測定可能な値、例えば、量、時間的持続時間等を指す場合、規定値から±２０％、またはある場合には±１０％、またはある場合には±５％、またはある場合には±１％、またはある場合には±０．１％の変動を包含するよう意図されており、したがって、変動は、開示される方法の実行または本明細書における組成物の記載に適切である。さらに、任意の値または範囲（例えば、２０未満または同様の専門用語）は、かかる値間またはかかる値までの任意の整数を明示的に含む。したがって、例えば、「１〜５つの突然変異」は、１、２、３、４、および／または５つの突然変異を明示的に含む。
【００３７】
「Ａｂ−ＴＣＲ」または「ＡｂＴＣＲ」という用語は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０７０６０８  Ａ１に記載の次世代ＣＡＲプラットフォームを指す。ある実施形態では、Ａｂ−ＴＣＲは、少なくとも１つのＴＣＲシグナル伝達モジュールを動員することができるＴＣＲモジュールに融合した標的抗原に特異的に結合する抗体部分を含む。Ａｂ−ＴＣＲの構築に使用され得る例示的なＴＣＲモジュールは、配列番号９５９〜９６４（表６Ｄ）および参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０７０６０８  Ａ１に提供される。ＴＣＲモジュールＴＣＲｂ−ＩＡＨ−６ＭＤでは、ヒトＴＣＲｂ鎖（配列番号１５０５３）に見られる３つのアミノ酸残基（Ｆ１３３、Ｅ１３６、およびＱ１３９）（表４、５、および６Ｄを参照のこと）は、それぞれ、マウスＴＣＲｂ鎖に見られる残基イソロイシン、アラニン、およびヒスチジンに突然変異して、このモジュールの発現を増強するようになる。同様に、ＴＣＲモジュールＩｇＧ１−ＣＨ１−ＴＣＲａ−ＳＤＶＰ−６ＭＤでは、ヒトＴＣＲａ鎖（配列番号１５０４１）に見られる４つのアミノ酸残基（Ｐ９１、Ｅ９２、Ｓ９３、Ｓ９４）は、マウスＴＣＲａ鎖に見られる残基Ｓ、Ｄ、Ｖ、Ｐに突然変異して、このモジュールの発現を増強するようになる（表３および表６Ｄを参照のこと）。ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをコードするアクセサリーモジュールを共発現する例示的なＡｂ−ＴＣＲは、配列番号３１２４〜３５２３提供される（表１４）。しかしながら、このＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをコードするアクセサリーモジュールは、任意である。本開示に記載の抗原結合ドメイン（すなわち、ｖＬおよびｖＨ断片、リガンド、および受容体等）を有するＡｂ−ＴＣＲは、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａなしで構築され得る。したがって、このアクセサリーモジュールは、上流フーリン−ＳＧＳＧ−Ｆ２Ａ配列とともに、Ａｂ−ＴＣＲから欠失し得る。あるいは、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをコードするアクセサリーモジュールは、他のタンパク質、例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ５５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、またはＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、およびＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＦＫＢＰｘ２−ＮＥＭＯ、ＮＥＭＯ−Ｌ６００−ＦＫＢＰｘ２等をコードするアクセサリーモジュールに置き換えられ得る。さらに、Ａｂ−ＴＣＲに存在するＴＣＲモジュールは、ＷＯ２０１７／０７０６０８  Ａ１に記載の他のＴＣＲモジュールに置換される。例えば、配列番号３１２４〜３３２３によって表されるＡｂ−ＴＣＲは、それぞれ、ＴＣＲモジュールＩｇＣＬ−ＴＣＲｂ−ｗｔ２−ｏｐｔ−６ＭＤ（配列番号９６１）およびＩｇＧ１−ＣＨ１−ＴＣＲａ−ｗｔ２−ｏｐｔ−６ＭＤ（配列番号９６４）に置換され得る、ＴＣＲモジュールＩｇＣＬ−ＴＣＲｂ−ＩＡＨ−６ＭＤ（配列番号９６０）およびＩｇＧ１−ＣＨ１−ＴＣＲａ−ＳＤＶＰ−６ＭＤ（配列番号９６３）を含む。ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをコードするアクセサリーモジュールを共発現し、かつＴＣＲモジュールＩｇＣＬ−ＴＣＲｇ−６ＭＤ（配列番号９５９）およびＩｇＧ１−ＣＨ１−ＴＣＲｄ−６ＭＤ（配列番号９６２）を含む例示的なＡｂ−ＴＣＲは、配列番号３３２４〜３５２３に提供される。これらの構築物における抗原結合ドメインの順序は、表１４に示される構築物の順序と同じであり、それ故に、特定の抗原を標的とし、かつ特異的抗原結合ドメインを含むＩｇＣＬ−ＴＣＲｇ−６ＭＤ（配列番号９５９）およびＩｇＧ１−ＣＨ１−ＴＣＲｄ−６ＭＤ（配列番号９６２）に基づくＡｂ−ＴＣＲは、表１４を参照することによって特定され得る。
【００３８】
「アクセサリーモジュール」という用語は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＴＣＲ−Ｔ細胞）に発現して、免疫細胞の活性を低減、調節、または修飾する、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（またはＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ）、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−デルタ−Ｖ２４９−Ｋ５５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ（またはＩＫＫ２−ＳＳ／ＥＥ）、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ（またはＩＫＫ１−ＳＳ／ＥＥ）、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＴＣＬ−１ａ、ＭＴＣＰ−１、ＣＭＶ−１４１、４１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３、ＭＣ１５９、ｃＦＬＩＰ−Ｌ／ＭＲＩＴα、ｃＦＬＩＰ−ｐ２２、ＨＴＬＶ１  Ｔａｘ、ＨＴＬＶ２  Ｔａｘ、ＨＴＬＶ２  Ｔａｘ−ＲＳ突然変異体、ＦＫＢＰｘ２−Ｋ１３、ＦＫＢＰｘ２−ＨＴＬＶ２−Ｔａｘ、ＦＫＢＰｘ２−ＨＴＬＶ２−Ｔａｘ−ＲＳ、ＩＬ６Ｒ−３０４−ｖＨＨ−Ａｌｂ８−ｖＨＨ、ＩＬ１２ｆ、ＰＤ１−４Ｈ１  ｓｃＦＶ、ＰＤ１−５Ｃ４  ｓｃＦＶ、ＰＤ１−４Ｈ１−Ａｌｂ８−ｖＨＨ、ＰＤ１−５Ｃ４−Ａｌｂ８−ｖＨＨ、ＣＴＬＡ４−イピリムマブ−ｓｃＦｖ、ＣＴＬＡ４−イピリムマブ−Ａｌｂ８−ｖＨＨ、ＩＬ６−１９Ａ−ｓｃＦＶ、ＩＬ６−１９Ａ−ｓｃＦＶ−Ａｌｂ８−ｖＨＨ、ｓＨＶＥＭ、ｓＨＶＥＭ−Ａｌｂ８−ｖＨＨ、ｈＴＥＲＴ、Ｆｘ０６、Ｂｒｄ４を標的とするｓｈＲＮＡ、ＩｇＳＰ−［ｈＴＲＡＣ−ｏｐｔ２］、ＩｇＳＰ−［ｈＴＲＢＣ−ｏｐｔ２］、およびそれらの組み合わせのうちのいずれか１つ以上を指す。いくつかの実施形態では、アクセサリーモジュールは、ＣＡＲまたはＴＣＲ等の免疫受容体と共発現して、ＣＡＲまたはＴＣＲまたはＣＡＲ発現細胞またはＴＣＲ発現細胞の発現または活性を増加、低減、調節、または修飾する。アクセサリーモジュールは、単一のベクターを使用して、または２つ以上の異なるベクターを使用して、ＣＡＲまたはＴＣＲと共発現され得る。さらなる実施形態では、アクセサリーモジュールは、ＦＫＢＰｘ２−ＮＥＭＯ等のＦＫＢＰ（ＦＫ５０６結合タンパク質）融合タンパク質を含み、その活性は、二量体化因子分子の投与によって制御され得る。いくつかの実施形態では、アクセサリーモジュールは、抗原提示細胞、例えば、樹状細胞に発現される。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「親和性」は、結合強度の尺度を説明するよう意図されている。親和性は、ある場合には、結合剤とその標的との間（例えば、抗体と抗原（結合ドメインに特異的なエピトープを含む）との間）の立体化学的適合の近似性、それらの間の接触面積のサイズ、および荷電基および疎水基の分布に依存する。親和性は、一般に、結合剤がその標的に結合する「能力」を指す。「親和性」を測定するための多数の方法が当該技術分野に存在する。例えば、親和性を計算するための結合実験の使用を含む、抗体の抗原に対する親和性を計算するための方法が、当該技術分野で既知である。結合親和性は、当該技術分野で既知の様々な技法、例えば、表面プラズモン共鳴、生体層干渉法、二重偏波干渉法、静的光散乱、動的光散乱、等温滴定熱量測定、ＥＬＩＳＡ、分析超遠心、およびフローサイトメトリーを使用して決定され得る。結合親和性を決定するための例示的な方法は、表面プラズモン共鳴を用いる。表面プラズモン共鳴は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによって、リアルタイム生体特異的相互作用の分析を可能にする光学現象である。本明細書で使用される場合、「特異的結合」という用語は、少なくとも１０−６Ｍの結合親和性での抗体と抗原との間の接触を意味する。ある特定の態様では、抗体は、少なくとも約１０−７Ｍ、好ましくは、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、または１０−１２Ｍの親和性で結合する。
【００４０】
本明細書で使用される「ＡＫＴ経路」または「ＰＩ３Ｋ−ＡＫＴ経路」は、細胞外シグナルに応答して生存および成長を促進するシグナル伝達経路である。関与する主要なタンパク質は、ＰＩ３Ｋ（ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ）およびＡｋｔ（タンパク質キナーゼＢ）である。
【００４１】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原に特異的に結合するタンパク質、または免疫グロブリン分子に由来するポリペプチド配列を指す。抗体は、モノクローナルもしくはポリクローナル、複数鎖もしくは一本鎖、またはインタクトな免疫グロブリンであり得、天然源または組換え源に由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。抗体は、「ヒト化」、「キメラ」、または非ヒトであり得る。
【００４２】
「抗体断片」という用語は、抗原のエピトープと（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）特異的に相互作用する能力を保持する抗体少なくとも一部分を指す。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’ｈ、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＨおよびＣＨｌドメインからなるＦｄ断片、直鎖状抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、例えば、ｖＬまたはｖＨのいずれか、ラクダ類ｖＨＨドメイン、抗体断片から形成された多重特異性抗体、例えば、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、ならびに抗体の単離されたＣＤＲまたは他のエピトープ結合断片が挙げられるが、これらに限定されない。抗原結合断片は、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、およびビス−ｓｃＦｖに組み込まれる場合もある（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６，２００５を参照のこと）。抗原結合断片は、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）等のポリペプチドに基づいて足場にグラフトされる場合もある（フィブロネクチンポリペプチドミニホディについて記載している米国特許第６，７０３，１９９号を参照のこと）。
【００４３】
「抗体重鎖」という用語は、天然に存在する立体構造で抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖の大きい方を指し、通常、その抗体が属するクラスを決定する。
【００４４】
「抗体軽鎖」という用語は、天然に存在する立体構造で抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖の小さい方を指す。カッパ（κ）軽鎖およびラムダ（λ）軽鎖とは、２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
【００４５】
「抗がん剤」とは、異常な細胞分裂および成長を抑制するか、新生細胞の移動を抑制するか、侵襲性を抑制するか、またはがんの増殖および転移を予防する薬剤を指す。この用語には、化学療法剤、生物学的薬剤（例えば、細胞毒性遺伝子を送達するｓｉＲＮＡ、ウイルスベクター、例えば、操作されたＭＬＶ、アデノウイルス、ヘルペスウイルス）、抗体等が含まれる。
【００４６】
「抗がん効果」という用語は、腫瘍体積の減少、がん細胞数の減少、転移数の減少、平均寿命の延長、がん細胞増殖の低減、がん細胞生存の低減、または癌性状態に関連する様々な生理学的症状の改善を含むが、これらに限定されない、様々な手段によって現れ得る生物学的効果を指す。「抗がん効果」は、最初の段階でのがんの発症の予防におけるＣＡＲの能力によっても現れ得る。
【００４７】
「抗原」または「Ａｇ」という用語は、免疫応答を引き起こす分子を指す。この免疫応答は、抗体産生もしくは特定の免疫学的にコンピテントな細胞の活性化のいずれか、またはそれらの両方を伴い得る。当業者であれば、実質的に全てのタンパク質またはペプチドを含むいずれの巨大分子も抗原としての機能を果たすことができることを理解するであろう。さらに、抗原は、組換えまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者であれば、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分ヌクレオチド配列を含むいずれのＤＮＡも、それ故に、「抗原」という用語が本明細書で使用される場合に「抗原」をコードすることを理解するであろう。さらに、当業者であれば、抗原が遺伝子の全長ヌクレオチド配列のみによってコードされる必要がないことを理解するであろう。本開示は、１つより多くの遺伝子の部分ヌクレオチド配列の使用、およびこれらのヌクレオチド配列が所望の免疫応答を誘発するポリペプチドをコードするように様々な組み合わせで配置されることを含むが、これらに限定されない。さらに、当業者であれば、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要が全くないことを理解するであろう。抗原が、生物学的試料から生成されるか、それから合成されるか、またはそれに由来し得るか、またはポリペプチド以外の巨大分子であり得ることは容易に明らかである。かかる生物学的試料には、他の生物学的成分を有する組織試料、腫瘍試料、細胞、または体液が含まれ得るが、これらに限定されない。
【００４８】
標的抗原の非限定的な例としては、ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＭＰＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）または（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；急性白血病またはリンパ腫に発現するが、造血前駆細胞には発現しないグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血癌に発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ−ｌｌＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＴｅｓｔｉｓｉｎまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）；段階特異的胚抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ（ＦＲａまたはＦＲ１）；葉酸受容体ベータ（ＦＲｂ）；受容体チロシン−タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１（細胞表面結合型）（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニットベータ型９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐｌ００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）およびＡｂｅｌｓｏｎマウス白血病ウイルス癌遺伝子相同体１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリー��ィングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨ糖セラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（染色体１２ｐに位置）（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバーｌＡ（ＸＡＧＥｌ）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビン；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴ  Ａ−１またはガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来相同体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ相同体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  ｌＢ  １（ＣＹＰｌＢ  １）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはインプリント部位の調節因子の同胞）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳｌ）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓ユビキタス１（ＲＵ１）；腎臓ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒト乳頭腫ウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ヒト乳頭腫ウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲｌ）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメイン���ァミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ−ＭＹＣエピトープタグ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１  ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）；フコシル−ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１−ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ−ＩＧＬｌ１、ＴＣＲガンマ−デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、Ｔｎ  ａｇ、Ｔｉｍ１−／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ−ＣＳＦＲ−アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、Ｌｅｗｓ  Ａｇ、ＴＣＲ−ベータ１鎖、ＴＣＲ−ベータ２鎖、ＴＣＲ−ガンマ鎖、ＴＣＲ−デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲまたはＧＲ）、ＣＣＲ４、ＧＤ３、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、ＫＳＨＶ  Ｋ８．１、ＫＳＨＶ−ｇＨ、Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニリルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、デスモグレイン３に対する自己抗体（Ｄｓｇ３）、デスモグレイン１に対する自己抗体（Ｄｓｇ１）、ＨＬＡ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｇ、ＩｇＥ、ＣＤ９９、Ｒａｓ  Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤ１８Ａ２またはＣＬＤＮ１８Ａ．２）、Ｐ−糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、Ｌｉｖ１、ネクチン−４、クリプト、ｇｐＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原が挙げられる。
【００４９】
「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」という用語は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）と複合体形成した外来抗原をその表面に呈する免疫系細胞、例えば、アクセサリー細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞等）を指す。Ｔ細胞は、それらのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を使用してこれらの複合体を認識し得る。ＡＰＣは抗原をプロセシングし、それらをＴ細胞に提示する。
【００５０】
「抗感染効果」という用語は、例えば、感染病原体の力価の減少、感染病原体のコロニー計数の減少、感染性状態に関連する様々な生理学的症状の改善を含むが、これらに限定されない、様々な手段によって現れ得る生物学的効果を指す。「抗感染効果」は、最初の段階での感染の発症の予防におけるペプチド、ポリヌクレオチド、細胞、および抗体の能力によっても現れ得る。
【００５１】
「抗腫瘍効果」または「抗がん効果」という用語は、例えば、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、腫瘍細胞増殖の低減、または腫瘍細胞生存の低減を含むが、これらに限定されない、様々な手段によって現れ得る生物学的効果を指す。
【００５２】
「抗原結合ドメイン」または「抗原結合モジュール」または「抗原結合セグメント」または「抗原特異的ドメイン（ＡＳＤ）」とは、一次、二次、または三次配列、翻訳後修飾、および／または電荷のため、高度の特異性で抗原に結合するポリペプチドまたはペプチドを指す。抗原結合ドメインは、異なる源、例えば、抗体（全長重鎖、Ｆａｂ断片、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、二価一本鎖抗体、もしくはダイアボディ）、非免疫グロブリン結合タンパク質、リガンド、または受容体に由来し得る。しかしながら、各々本発明の様々な実施形態で使用され得る、連結されたサイトカイン（サイトカイン受容体を持つ細胞の認識につながる）、アフィボディ、天然に存在する受容体由来のリガンド結合ドメイン、受容体に対する可溶性タンパク質／ペプチドリガンド（例えば、腫瘍細胞上の）、ペプチド、および免疫応答を引き起こすためのワクチン等の多数の代替物が存在する。いくつかの実施形態では、当業者であれば理解するであろうように、高親和性で所与の抗原に結合するほぼいずれの分子もＡＳＤとして使用され得る。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはその一部分を含む。例示的な実施形態では、ｓｃＦＶを含む抗原結合ドメインをコードする核酸は、本明細書の配列番号６４２〜９０２および表６Ｃに記載される。例示的な実施形態では、ｓｃＦＶを含む抗原結合ドメインをコードするアミノ酸は、本明細書の表６Ｃの配列番号４５５５〜４８１５に記載される。
【００５３】
「会合定数（Ｋａ）」という用語は、受容体とリガンドとの会合の平衡定数と定義される。
【００５４】
「自己抗体」とは、自己抗原に特異的なＢ細胞によって産生される抗体を指す。
【００５５】
「自己抗原」という用語は、自己抗体の産生等の自己免疫応答の産生を刺激する内在性抗原を指す。自己抗原（ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ）は、自己免疫疾患の発症をもたらし得る細胞媒介または抗体媒介免疫応答の標的である自己抗原（ｓｅｌｆ−ａｎｔｉｇｅｎ）または正常組織由来の抗原も含む。自己抗原の例としては、デスモグレイン１、デスモグレイン３、およびそれらの断片が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５６】
「結合力」とは、結合剤とその標的との間の相互作用の強度（例えば、抗体とその抗原標的との間、受容体とその同族物との間等の相互作用の強度）を指す。結合力は、弱い場合も強い場合もある。親和性を計算するための結合実験の使用を含む、抗体の抗原に対する親和性を計算するための方法が、当該技術分野で既知である。機能的アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）における抗体活性は、抗体親和性の反映でもある。抗体および親和性は、機能的アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）を使用して、表現型的に特徴付けられ、比較され得る。
【００５７】
本明細書で使用される場合、「骨格」という用語は、ＣＡＲ（表１）と表２に記載のアクセサリーモジュールとの特定の組み合わせを指す。例示的な実施形態では、様々な骨格を含むＣＡＲとアクセサリーモジュールとの特定の組み合わせが表２に記載される。一実施形態では、ＣＡＲおよびアクセサリーモジュールは、単一の核酸分子によってコードされる。別の実施形態では、ＣＡＲは、第１の核酸分子によってコードされ、アクセサリーモジュールは、第２の核酸分子によってコードされる。いくつかの実施形態では、アクセサリーモジュールは、アクセサリーモジュール内の成分の数に応じて、１つより多くの核酸分子によってコードされる。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「有益な結果」には、疾患状態の重症度の軽減または緩和、疾患状態の悪化の阻止、疾患状態の治癒、疾患状態の発症の阻止、患者が疾患状態を発症する可能性の低下、および患者の寿命または平均寿命の延長が含まれ得るが、決してこれらに限定されない。非限定的な例として、「有益な結果」または「所望の結果」は、１つ以上の症状の緩和、欠陥の程度の減退、がんの進行の安定した（すなわち、悪化していない）状態、転移または侵襲性の遅延または緩徐化、およびがんに関連する症状の改善または緩和であり得る。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「結合ドメイン」または「抗体分子」という用語は、非特異的ドメインよりも高い親和性で標的に結合することができる少なくとも１つのドメイン、例えば、免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質、例えば、免疫グロブリン鎖またはその断片、リガンドドメインまたはその断片（場合によって）を指す。この用語は、抗体および抗体断片、またはリガンドおよびリガンド断片を包含する。別の実施形態では、抗体分子は、多重特異性抗体分子であり、例えば、これは、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、その複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列の第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、その複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列の第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。別の実施形態では、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つの抗原に対する特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列および第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列を特徴とする。二重特異性分子は、第１の抗原結合ドメインがＴ細胞に発現する抗原（例えば、ＣＤ３ε）に結合し、第２の抗原結合ドメインが病原細胞または疾患関連細胞（例えば、がん細胞）に発現する抗原に結合する、二重特異性Ｔ細胞結合抗体であり得る。二重特異性抗体は、それらの第２の抗原結合ドメインによって認識される標的抗原を発現する細胞に対するＴ細胞媒介細胞毒性を誘導するために使用され得る。本開示に記載の抗原結合ドメインを使用して、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーを構築することができる。本開示に記載の抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含む例示的な二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーの核酸配列は、配列番号３５４５〜３８３０（表１３）に提示される。対応するアミノ酸配列は、配列番号７４５８〜７７２１に提示される。
【００６０】
「同じエピトープに結合する」とは、例示される抗体、ｓｃＦｖ、または他の抗原結合ドメインと同じエピトープを有する、標的抗原に結合する抗体、ｓｃＦｖ、または他の抗原結合ドメインの能力を意味する。一例として、例示される抗体、ｓｃＦｖ、または他の結合剤および他の抗体のエピトープは、標準のエピトープマッピング技法を使用して決定され得る。当該技術分野で周知のエピトープマッピング技法には、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６（Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙが含まれる。例えば、直鎖状エピトープは、例えば、多数のペプチド（これらのペプチドはタンパク質分子の一部分に相当する）を固体支持体上で同時に合成し、それらのペプチドを依然としてその支持体に結合させながらそれらのペプチドを抗体と反応させることによって決定され得る。かかる技法は、当該技術分野で既知であり、例えば、米国特許第４，７０８，８７１号、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８：３９９８−４００２、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：７８−１８２、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８６）Ｍｏｌ．ｌｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５に記載されている。ＣＡＲの抗原結合ドメインによって結合されたエピトープは、エピトープビニングアッセイによっても決定され得る。エピトープビニングは、標的タンパク質に対するモノクローナル抗体を特徴付けた後にそのライブラリを選別するために使用される競合的免疫アッセイである。抗体が抗原のエピトープへの互いの結合を遮断するかを確認するために、同様の標的に対する抗体がそのライブラリ内の全ての他の抗体に対して対様式で試験される。各抗体がそのライブラリ内の他の抗体の全てに対して作成されたプロファイルを有した後、競合的遮断プロファイルが、そのライブラリ内の他の抗体に対して各抗体に作成される。密接に関連するビニングプロファイルは、これらの抗体が同じまたは密接に関連するエピトープを有し、一緒に「ビニング」される。同様に、立体構造エピトープは、アミノ酸の空間立体構造を決定することによって、例えば、水素／重水素交換、Ｘ線結晶学、および二次元核磁気共鳴等によって容易に特定される。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（上記参照）を参照されたい。タンパク質の抗原性領域は、標準の抗原性およびヒドロパシープロット、例えば、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐから入手可能なＯｍｉｇａバージョン１．０ソフトウェアプログラムを使用して計算されたもの等を使用することによって特定される場合もある。このコンピュータプログラムは、抗原性プロファイルを決定するためのＨｏｐｐ／Ｗｏｏｄｓ法（Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ，（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：３８２４−３８２８）、およびヒドロパシープロットのためのＫｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ技法（Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ，（１９８２）���．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．１５７：１  ０５−１３２）を用いる。標的（例えば、ＣＤ１９）に対する選択されたモノクローナル抗体が特有のエピトープに結合するかを決定するために、各抗体が市販の試薬（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）を使用してビオチン化され得る。非標識モノクローナル抗体およびビオチン化モノクローナル抗体を使用した競合研究が、ＣＤ１９−細胞外ドメインコーティングＥＬＩＳＡプレートを使用して行われ得る。ビオチン化ｍＡｂ結合が、ストレプトアビジン−アルカリ性ホスファターゼプローブを用いて検出され得る。ｓｃＦｖおよび本出願のＣＡＲによって結合されたヒトＣＤ２０抗原の例示的なエピトープは、配列番号１５１４９〜１５１５４に提供される。ｓｃＦｖおよび本出願のＣＡＲによって結合されたヒトＢＣＭＡの例示的なエピトープは、配列番号１５１５５〜１５１５９に提供される。ｓｃＦｖおよび本出願のＣＡＲによって結合されたヒトＭＰＬ抗原の例示的なエピトープは、配列番号１５１６０に提供される。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「その生物学的等価物」という用語は、参照タンパク質、抗体もしくはその断片、ポリペプチド、または核酸について言及する場合、「その等価物」と同義であるよう意図されており、所望の構造または機能性を依然として維持しながら最小の相同性を有するものを意図している。別途本明細書に明確に列挙されない限り、上記のうちのいずれもそれらの等価物を含むことが企図される。例えば、等価物は、参照タンパク質、ポリペプチド、抗体もしくはその断片、または核酸と少なくとも約７０％の相同性もしくは同一性、または少なくとも８０％の相同性もしくは同一性、またはあるいは少なくとも約８５％、またはあるいは少なくとも約９０％、またはあるいは少なくとも約９５％、またはあるいは少なくとも９８％の相同性もしくは同一性を意図し、それと実質的に同等の生物学的活性を呈する。あるいは、ポリヌクレオチドについて言及する場合、その等価物は、ストリンジェントな条件下で参照ポリヌクレオチドまたはその相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドである。あるいは、ポリペプチドまたはタンパク質について言及する場合、その等価物は、ストリンジェントな条件下で参照ポリペプチドまたはタンパク質をコードするポリヌクレオチドまたはその相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドから発現されたポリペプチドまたはタンパク質である。
【００６２】
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見られる非隣接抗原結合部位を意味するよう意図されている。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｉ．Ｃｈｅｒｎ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．１９６：９０１−９１７（１９８７）、およびＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．２５  ２６２：７３２−７４５（１９９６）によって説明されており、これらの定義は、互いに比較したときにアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体またはそのグラフト抗体もしくはバリアントのＣＤＲを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義および使用される用語の範囲内にあるよう意図されている。本明細書で使用される場合、抗体の異なるＣＤＲは、それらの異なる定義の組み合わせによっても定義され得る。例えば、ｖＨＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔに基づいて定義され得、ＶＨＣＤＲ２は、Ｃｈｏｔｈｉａに基づいて定義され得る。上記の参考文献の各々によって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基は、以下の通りである。
ＣＤＲ定義
2021500861.tif 000003
（残基番号は、それらの特定された参照に相当する）。
【００６３】
本開示のＣＡＲの抗原結合ドメインを構成し得る異なるｖＬセグメントおよびｖＨセグメントのＣＤＲの配列番号は、それぞれ、配列番号１３２０４〜１４１２１および配列番号１４１２２〜１５０３９（表６Ａ、Ｂ）、および参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に提供される。
【００６４】
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュール（Ｆａｂ様またはＦｖ様抗原結合モジュール等）への言及は、抗原結合モジュールが、（ａ）他の分子に対する結合親和性の少なくとも約１０倍（例えば、約１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、７５０、１０００倍、もしくはそれ以上）の親和性で、または（ｂ）他の分子への結合に対するＫｄの約１／１０倍以下（例えば、１／１０、１／２０、１／３０、１／４０、１／５０、１１７５、１／１００、１／２００、１／３００、１／４００、１／５００、１／７５０、１／１０００倍、もしくはそれ未満）のＫｄで、標的抗原に結合することを意味する。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析、または放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＡ）等の当該技術分野で既知の方法によって決定され得る。Ｋｄは、例えばＢｉａｃｏｒｅ機器を利用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ、または例えばＳａｐｉｄｙｎｅ機器を利用する結合平衡除外アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）等の当該技術分野で既知の方法によって決定され得る。
【００６５】
「がん」および「癌性」とは、典型的には未調節細胞成長を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指すか、またはそれを説明する。がんの例としては、Ｂ細胞リンパ腫（ホジキンリンパ腫および／または非ホジキンリンパ腫）、Ｔ細胞リンパ腫、骨髄腫、骨髄異形成症候群、皮膚癌、脳腫瘍、乳癌、結腸癌、直腸癌、食道癌、肛門癌、原発部位不明のがん、内分泌癌、精巣癌、肺癌、肝細胞癌、胃癌、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路癌、生殖器癌、甲状腺癌、腎臓癌、癌腫、黒色腫、頭頸部癌、脳癌（例えば、多形性膠芽腫）、前立腺癌（アンドロゲン依存性前立腺癌およびアンドロゲン非依存性前立腺癌を含むが、これらに限定されない）、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。他のがんおよび細胞増殖障害は、当該技術分野で容易に認識されるであろう。「腫瘍」および「がん」という用語は、本明細書で同義に使用され、例えば、これらの両方の用語は、固体および液体、例えば、びまん性または循環性の腫瘍を包含する。本明細書で使用される場合、「がん」または「腫瘍」という用語は、前悪性がんおよび腫瘍、ならびに悪性がんおよび腫瘍を含む。「がん」という用語は、組織病理学的タイプまたは侵襲性ステージにかかわらず、全てのタイプの癌性成長もしくは発癌性過程、転移性組織もしくは悪性形質転換細胞、組織、または臓器を含むよう意図されている。例示的な固形腫瘍には、様々な臓器系の悪性腫瘍、例えば、腺癌、肉腫、および癌腫、例えば、乳房、肝臓、肺、脳、リンパ、胃腸（例えば、結腸）、尿生殖路（例えば、腎細胞、尿路上皮細胞）、前立腺、および咽頭を侵すものが含まれる。腺癌には、大半の結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸癌、および食道癌等のがんが含まれる。一実施形態では、がんは、黒色腫、例えば、末期黒色腫である。前述のがんの転移病巣は、本開示の方法および組成物を使用して治療または予防される場合もある。治療または予防され得る他のがんの例としては、膵臓癌、骨癌、皮膚癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、頭部または頸部癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性または急性白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ球性白血病を含む）、小児期固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発癌（アスベストによって誘発されるものを含む）、およびそれらのがんの組み合わせが挙げられる。転移性がん、例えば、ＰＤ−Ｌ１を発現する転移性がん（Ｉｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１３３−１４４）の治療は、本明細書に記載の抗体分子を使用して達成され得る。成長が抑制され得る例示的ながんには、典型的には免疫療法に応答するがんが含まれる。加えて、再発性または難治性悪性腫瘍は、本明細��に記載の分子を使用して治療され得る。
【００６６】
「化学療法剤」とは、がんの化学療法に使用されることで知られている化合物である。化学療法剤の非限定的な例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミド；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ；エチレンイミンおよびメチラメラミン、例えば、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチロロメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトセシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィジン（特に、クリプトフィジン１およびクリプトフィジン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノブエンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソ尿素、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマ１ＩおよびカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照のこと）；ジネマイシン、例えば、ジネマイシンＡ；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート；エスペラマイシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；抗代謝物、例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤、例えば、フォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デホファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルホルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、タキソール（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）パクリタキセルのクレモフォール不含アルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌ．）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、およびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ；ビノレルビン；ノバトロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ−１１）（５−ＦＵおよびロイコボリンでのイリノテカンの治療レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン、例えば、オキサリプラチン治療レジメ��（ＦＯＬＦＯＸ）；ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）；細胞増殖を低減するＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）））、およびＶＥＧＦ−Ａ阻害剤；ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、もしくは誘導体、またはそれらの組み合わせが挙げられ得る。
【００６７】
「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」とは、養子細胞移入と呼ばれる技法を使用したがん療法としての使用に企図された人工的（天然に存在しない）免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）受容体である。ＣＡＲは、人工的Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、またはキメラ免疫受容体としても既知である。この複合体の抗原結合、シグナル伝達、および刺激機能は、遺伝子組換え法によって一般にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と称される単一のポリペプチド鎖に操作されている。例えば、Ｅｓｈｈａｒ（米国特許第７，７４１，４６５号）、Ｅｓｈｈａｒ（米国特許出願公開第２０１２／００９３８４２号）を参照されたい。ＣＡＲは、ＣＡＲが結合する特異的抗原に応答してＴ細胞活性化および増殖を刺激するように特異的に構築されている。一般に、ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞に発現されると、免疫エフェクター細胞に、標的細胞、典型的には、がん細胞に対する特異性、および細胞内シグナル生成を提供する一組のポリペプチド、最も単純な実施形態では、典型的には２つのポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに刺激分子および／または共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書で「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）を含む。いくつかの態様では、この一組のポリペプチドは、互いに隣接している。一態様では、刺激分子は、ゼータ鎖Ｔ細胞受容体複合体に関連するゼータ鎖である。一態様では、細胞質シグナル伝達ドメインは、以下で定義される少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインをさらに含む。一実施形態では、共刺激分子は、本明細書に記載の共刺激分子、例えば、４−ｌＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、および／またはＣＤ２８から選択される。一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ末端）に任意選択的なリーダー配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端にリーダー配列をさらに含み、このリーダー配列は、細胞プロセシングおよびＣＡＲの細胞膜への局在化中に、抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から任意選択的に切断される。様々な実施形態では、ＣＡＲは、抗原特異的ドメイン（ＡＳＤ）、ヒンジ領域（ＨＲ）、膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）、任意選択的な共刺激ドメイン（ＣＳＤ）、および細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＳＤ）を含む組換えポリペプチドである。任意選択的な共刺激ドメインは、一般に、第一世代ＣＡＲ構築物には不在である。本開示に記載の異なる抗原結合ドメイン（例えば、ｖＬおよびｖＨ断片、ｖＨＨ、リガンド、ならびに受容体等）を含み、かつＮＥＭＯ−Ｋ２７７ＡおよびＰＡＣをコードするアクセサリーモジュールを共発現するいくつかの例示的な第一世代ＣＡＲの標的抗原、抗原結合ドメイン名、および核酸配列は、配列番号１５９４〜１８９９（表１２）に提示される。これらのＣＡＲ構築物は、ヒトＣＤ８シグナルペプチド、ＣＤ８ヒンジおよび膜貫通領域、ならびにヒトＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを有する。これらの構築物は、抗原結合ドメインとＣＤ８ヒンジ領域との間にＭＹＣ���ンカーも任意選択的に有する。本開示に記載の異なる抗原結合ドメイン（例えば、ｖＬおよびｖＨ断片、ｖＨＨ、リガンド、ならびに受容体等）を含み、かつｖＦＬＩＰ  Ｋ１３およびＰＡＣをコードするアクセサリーモジュールを共発現するいくつかの例示的な第一世代ＣＡＲの核酸配列は、配列番号１０１６−１３１７（表１３）に提示される。本開示に記載の異なる抗原結合ドメイン（例えば、ｖＬおよびｖＨ断片、ｖＨＨ、リガンド、ならびに受容体等）を含み、かつ４１ＢＢ共刺激ドメインを組み込むいくつかの例示的な第二世代ＣＡＲの核酸配列は、配列番号１３１８−１５９３（表１３）に提示される。これらのＣＡＲ構築物は、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとフーリン−ＳＧＳＧ−Ｔ２Ａ配列によってＣＡＲカセットから分離されたピューロマイシン耐性遺伝子（ＰＡＣ）をコードするアクセサリーモジュールとの間にＭＹＣリンカーも有する。ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、およびＰＡＣをコードするアクセサリーモジュールは、上記の第一および第二世代ＣＡＲにおいて任意選択的である。したがって、本開示に記載の抗原結合ドメイン（すなわち、ｖＬおよびｖＨ断片、ｖＨＨ、リガンド、ならびに受容体等）を含むＣＡＲは、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、および／またはＰＡＣなしで構築されていてもよい。したがって、これらのアクセサリーモジュールは、上流切断リンカー配列（例えば、Ｆ２Ａ、Ｐ２Ａ、またはＴ２Ａ）とともに、配列番号１０１６〜１８９９によって表されるＣＡＲから欠失し得る。あるいは、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、および／またはＰＡＣをコードするアクセサリーモジュールは、他のタンパク質、例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ５５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、またはＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、およびＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＦＫＢＰｘ２−ＮＥＭＯ、ＮＥＭＯ−Ｌ６００−ＦＫＢＰｘ２、ＴＣＬ−１Ａ、ＭＴＣＰ−１、およびＣＭＶ−１４１等をコードするアクセサリーモジュールに置き換えられ得る。本明細書で使用される場合、「ＣＡＲ」または「ＣＡＲｓ」という用語は、抗原特異性を、細胞、例えば、抗体−ＴＣＲキメラ分子またはＡｂ−ＴＣＲまたはＡｂ−ＴＣＲ（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０７０６０８  Ａ１）、ＴＣＲ受容体融合タンパク質またはＴＦＰ（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／１８７３４９  Ａ１）、合成免疫受容体（ＳＩＲ）（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１８／１０２７９５  Ａ１を参照のこと）、三官能性Ｔ細胞抗原カップラー（Ｔｒｉ−ＴＡＣ）（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／１１７２２９  Ａ１を参照のこと）に付与するためのより新たなアプローチも包含む。本開示に記載されており、かつＣＤ３ε鎖、ＣＤ３δ鎖、ＣＤ３γ鎖、およびＣＤ３ζ鎖に基づく異なる抗原結合ドメイン（例えば、ｖＬおよびｖＨ断片、ｖＨＨ、リガンド、ならびに受容体等）を含み、かつ任意選択的なアクセサリーモジュールＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａを共発現するいくつかの例示的なＴＦＰの核酸配列は、それぞれ、配���番号１９００〜２２０５、２２０６〜２５１１、２５１２〜２８１７、２８１８〜３１２３（表１３）に提示される。異なるＣＡＲアーキテクチャおよびＢｉＴＥ構築物に含まれる抗原結合ドメインの順序は、表１３に列記されるは、表１２に提示されるｚＣＡＲ−Ｋ２７７Ａアーキテクチャ上の構築物の順序と同じである。したがって、所与のアーキテクチャ（例えば、ｚＣＡＲ−Ｋ１３）に属し、かつ特異的抗原結合ドメインを含むＣＡＲのアミノ酸および核酸配列番号は、表１２および表１３の試験によって決定され得る。したがって、表１２は、ｚＣＡＲ−ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａアーキテクチャ上にあり、かつｈｕＦＭＣ６３−１１−（ｖＬ−ｖＨ）抗原結合ドメインを含むＣＡＲが、表１２の第２の構築物であり、それぞれ、核酸およびアミノ酸配列番号１５９５および５５０８によって表されることを示す。ｚＣＡＲ−Ｋ１３アーキテクチャ上の対応するＣＡＲの核酸およびアミノ酸配列番号は、このアーキテクチャ上の第２の構築物が、それぞれ、核酸およびアミノ酸配列番号１０１７および４９３０を有することを示す表１３の試験によって決定され得る。同様のアプローチを使用して、異なるアーキテクチャおよびＢｉＴＥに属する他のＣＡＲ構築物の核酸およびアミノ酸配列番号を決定することができる。表１０は、異なる骨格に属し、かつＨＩＶ１−Ｎ４９Ｐ６  ｖＬおよびｖＨ抗原結合ドメインに基づくＨＩＶ−１エンベロープ糖タンパク質を標的とするいくつかの例示的なＣＡＲの核酸およびアミノ酸配列番号を提供する。表１１は、表１０に示される骨格に属するが、異なる抗原結合ドメインを含むいくつかの例示的なＣＡＲの核酸およびアミノ酸配列番号を提供する。したがって、表１１に示される抗原結合ドメインを含む特定の骨格上のＣＡＲの核酸およびアミノ酸配列番号は、表１０におけるその順位を最初に決定することによって決定され得る。したがって、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３骨格を有する第一世代ＣＡＲは、表１０のリストにおける第３のＣＡＲであり、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３を共発現し、かつＨＩＶ１−Ｎ４９Ｐ７抗原結合ドメインを含む第一世代ＣＡＲの核酸配列番号が配列番号８７４０であると表１１から容易に決定され得る（すなわち、８７３８から始まるシリーズの第３の構築物）。同様のアプローチを使用して、このＣＡＲ構築物のアミノ酸配列番号が配列番号１１４３８であると決定される。ＣＡＲが設計においてモジュラーであるため、異なる抗原結合ドメインまたはアクセサリーモジュールを含むＣＡＲ／ＢｉＴＥの核酸およびアミノ酸配列は、異なるモジュールならびに本開示に開示される例示的なＣＡＲおよびＢｉＴＥ構築物の配列を使用して、当業者によって容易に決定され得る。典型的には、キメラ抗原受容体を発現するように操作されたＴ細胞を指す「ＣＡＲ−Ｔ細胞」が使用される。したがって、かかるＣＡＲを持つＴリンパ球は、一般に、ＣＡＲ−Ｔリンパ球と称される。ＣＡＲは、造血幹細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、ＮＫ細胞、およびマクロファージ等のＴ細胞以外の細胞に発現される場合もある。
【００６８】
「コドン最適化」または「種のコドンバイアスの制御」とは、特定の宿主細胞の好ましいコドン使用を指す。当業者に理解されるであろうように、特定の宿主におけるその発現を増強するようにコード配列を修飾することが有利であり得る。遺伝暗号は６４個の可能なコドンで重複しているが、大半の生物は、典型的には、これらのコドンのサブセットを使用する。ある種において最も頻繁に利用されるコドンは、最適コドンと呼ばれ、めったに利用されないコドンは、稀なコドンまたは使用頻度の低いコドンに分類される。
【００６９】
特定の原核または真核宿主に好まれるコドンを含む最適化コード配列（Ｍｕｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１７：４７７−５０８も参照のこと）は、例えば、非最適化配列から産生された転写物と比較してより長い半減期等の望ましい特性を有する組換えＲＮＡ転写物の翻訳速度を上昇させるか、またはそれを産生するように調製され得る。翻訳終止コドンは、宿主選好を反映するように修飾される場合もある。当業者であれば、遺伝暗号の縮重性質のため、ヌクレオチド配列が異なる様々なＤＮＡ化合物を使用して、本開示の所与のポリペプチドをコードすることができることを認識するであろう。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「共発現」とは、２つ以上のポリヌクレオチドまたは遺伝子の発現を指す。遺伝子は、例えば、単一のポリペプチド鎖として単一のタンパク質またはキメラタンパク質をコードする核酸であり得る。本明細書に記載のＣＡＲまたはＴＣＲは、単一のポリヌクレオチド鎖によってコードされ、単一のポリペプチド鎖として発現され得、これは、その後、各々はっきりと異なる機能単位を表す異なるポリペプチドに切断される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたはＴＣＲが２つ以上の機能的ポリペプチド単位からなる場合、異なる機能単位は、１つ以上のポリヌクレオチド鎖を使用して共発現される。一実施形態では、共刺激は、ＣＡＲまたはＴＣＲと共発現されるが、ＣＡＲまたはＴＣＲポリペプチドの不可欠な部分ではないアクセサリーモジュールによって提供される。ＣＡＲもしくはＴＣＲ発現細胞または任意の細胞に共刺激を提供するが、ＣＡＲまたはＴＣＲポリペプチドの不可欠な部分ではないアクセサリーモジュールは、ＣＡＲ非依存的共刺激モジュールまたはＣＩＣＭと称される。別の実施形態では、異なるポリヌクレオチド鎖は、切断可能なリンカー（例えば、Ｔ２Ａ、Ｆ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ等）をコードする核酸配列によって連結される（表６Ｄ）。別の実施形態では、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（ＳＧＳＧ）モチーフ（配列番号４８４４）も、切断の効率を増強するために、切断可能なリンカー配列の上流に付加される。ＣＡＲまたはＴＣＲの異なる単位をコードするポリヌクレオチドは、ＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）配列によって連結され得る。あるいは、ＣＡＲまたはＴＣＲの異なる機能単位は、リンカーによって連結されないが、代わりに、例えば、２つの異なるベクターによってコードされる２つの異なるポリヌクレオチドによってコードされる。例示的な切断可能なリンカーおよびフーリン切断部位の核酸およびアミノ酸配列は、表６Ｄに提供される。
【００７１】
「保存的置換」または「保存的配列修飾」とは、コードされたタンパク質の結合特性または機能に著しく影響を及ぼさないまたはそれを改変しないアミノ酸修飾を指す。例えば、「保存的配列修飾」とは、本開示のＣＡＲ構築物の結合特性または機能に著しく影響を及ぼさないまたはそれを改変しないアミノ酸修飾（例えば、定常鎖、抗体、抗体断片、または非免疫グロブリン結合ドメインの保存的変化）を指す。かかる保存的修飾には、アミノ酸置換、付加、および欠失が含まれる。修飾は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発等の当該技術分野で既知の標準の技法によって導入され得る。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されたものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐状側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。したがって、本開示のＣＡＲ内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリー由来の他のアミノ酸残基で置換され得、改変されたＣＡＲは、本明細書に記載の結合アッセイおよび／または機能的アッセイを使用して試験され得る。
【００７２】
「Ｔ細胞受容体−アルファの定常領域」または「Ｔ細胞受容体−アルファの定常鎖」または「ＴＣＲα」または「Ｃα」という用語は、非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、類人猿等由来の配列番号１５０４１または等価残基（すなわち、相同体）として提供されるタンパク質と定義される。本開示は、ＳＩＲおよびＡｂ−ＴＣＲの構築に使用され得るＴＣＲαポリペプチドにある特定の突然変異も提供する（表３および表６Ｄ）。例えば、増加した発現および減少した誤対合を示すＣαにおける突然変異部位は、配列番号１５０４１の９１位、９２位、９３位、および９４位に位置する。ＣαにＴｈｒ  ４８  Ｃｙｓ（Ｔ４８Ｃ）突然変異を有し、かつＣβ１鎖またはＣβ２鎖にＳｅｒ−５７−Ｃｙｓ（Ｓ５７Ｃ）突然変異を有するＴＣＲポリペプチド（本明細書の他の箇所でより完全に記載される）により、２つのＴＣＲ定常鎖（αおよびβ）間に追加のジスルフィド結合がもたらされる。これは、次いで、免疫細胞における内在性ＴＣＲ鎖との減少した誤対合および増強された機能性をもたらす。同様に、Ｃα（配列番号１５０４８）にＳｅｒ  ６１  Ａｒｇ（Ｓ６１Ｒ）突然変異およびＣβ１鎖またはＣβ２鎖にＡｒｇ  ７９  Ｇｌｙ（Ｒ７９Ｇ）突然変異を有するＣＡＲ（本明細書の他の箇所でより完全に記載される）により、内在性ＴＣＲ鎖との減少した誤対合および増強された機能性がもたらされ、これは、対合の「ノブアンドホール」設計のためである。本開示は、ＳＩＲおよびＡｂ−ＴＣＲの構築に使用され得る以下の表３による突然変異のうちの１つ以上または全てを有するＣαポリペプチドを提供する。
【表１】
2021500861.tif 000004
【００７３】
ヒトゲノムは、２つの高度に相同性のＴＣＲベータ定常鎖、ＴＣＲベータ１（ＴＣＲβ１またはＴＣＲｂ１またはｃβ１）およびＴＣＲベータ２（ＴＣＲβ２またはＴＣＲｂ２またはｃβ２）をコードする。本開示のＣＡＲは、これらの２つの鎖のいずれかを含み得る。同様に、他の哺乳類種のＴＣＲベータ１鎖またはＴＣＲベータ２鎖のいずれかが本開示の方法に使用され得る。
【００７４】
「Ｔ細胞受容体−ベータ１定常鎖」または「Ｔ細胞受容体−ベータ１の定常領域」（ＴＣＲ−ベータ１またはＴＣＲβ１またはＴＣＲｂ１またはｈＴＣＲ−ベータ１またはＣβ１）という用語は、非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、類人猿等由来の配列番号１５０５１または等価残基（すなわち、相同体）として提供されるタンパク質と定義される。
【００７５】
「Ｔ細胞受容体−ベータ２の定常鎖」または「Ｔ細胞受容体−ベータ２の定常領域」（ＴＣＲ−ベータ２またはＴＣＲβ２またはＴＣＲｂ２またはＣβ２）という用語は、非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、類人猿等由来の配列番号１５０５２または等価残基（すなわち、相同体）として提供されるタンパク質と定義される。
【００７６】
「Ｔ細胞受容体−ベータの定常鎖」または「Ｔ細胞受容体−ベータの定常領域」（ＴＣＲ−ベータまたはＴＣＲβまたはＴＣＲｂまたはＣβ）という用語は、非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、類人猿等由来の配列番号１５０５１−１５０５３または等価残基（すなわち、相同体）として提供されるタンパク質と定義される。
【００７７】
Ｃβ２（配列番号１５０５２）およびＣβ１（配列番号１５０５１）の両方のタンパク質配列が既知である（表６Ｄ）。Ｃβ２配列とβ１配列との間の相違は、当該技術分野で典型的な通常の技能を使用して、これらの配列を整列させることによって容易に特定される。本開示は、ＳＩＲおよびＡｂ−ＴＣＲの構築に使用され得るＴＣＲβにある特定の突然変異も提供する。例えば、増加した発現および内在性ＴＣＲα鎖との減少した誤対合を示すＣβにおける突然変異部位が本明細書に提供される。Ｃβ１およびＣβ２におけるこれらの突然変異部位は、配列番号１５０５１および１５０５２の１８位、２２位、５７位、７９位、１３３位、１３６位、および１３９位に位置し、以下の表４および表５に要約される。Ｃβ１およびＣβ２における突然変異部位は、それらの位置で同一である。２つの配列間の唯一の相違点は、１３６位の突然変異である。この位置で、グルタミン酸（Ｅ）がＣβ２に存在する一方で、バリンはＣβ１に存在する。
【表２】
2021500861.tif 000005
【００７８】
「ＴＣＲ−ガンマの定常鎖」または「ＴＣＲ−ガンマの定常領域」（ＴＣＲ−ガンマまたはＴＣＲγまたはＴＣＲｇまたはＴＣＲ−ガンマ１またはＴＣＲγ１またはＴＣＲｇ１またはＣγ）という用語は、非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、類人猿等由来の配列番号１５０６８または等価残基（すなわち、相同体）として提供されるタンパク質と定義される。
【００７９】
「ＴＣＲ−デルタの定常鎖」または「ＴＣＲ−デルタの定常領域」（ＴＣＲ−デルタまたはＴＣＲδまたはＴＣＲｄまたはＣδ）という用語は、非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、類人猿等由来の配列番号１５０６９または等価残基（すなわち、相同体）として提供されるタンパク質と定義される。
【００８０】
タンパク質が互いに同一性または相同性を有し、同様または同一の機能を保持し得ることが認識されるであろう。本開示は、生物学的活性を保持しながら、本明細書に記載の配列のうちのいずれかに８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９８．５％、９９％、または９９．９％の同一性を有するＴＣＲ定常領域を含む。
【００８１】
したがって、本開示は、（ａ）配列番号１５０４１と少なくとも９８％同一であり、６１位、９１位、９２位、９３位、および／または９４位に１つ以上の突然変異を有し得るアミノ酸配列、（ｂ）配列番号１５０５１と少なくとも９８％同一であり、１８位、２２位、５７位、７９位、１３３位、１３６位、および／または１３９位に１つ以上の突然変異を有し得るアミノ酸配列、（ｃ）配列番号１５０５２と少なくとも９８％同一であり、１８位、２２位、５７位、７９位、１３３位、１３６位、および／または１３９位に１つ以上の突然変異を有し得るアミノ酸配列、（ｄ）配列番号１５０６８と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列、および（ｅ）配列番号１５０６９と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列からなる群から選択される配列を有するＴ細胞受容体定常鎖を提供する。（ａ）〜（ｅ）のうちのいずれかのＴ細胞受容体定常鎖は、それが同一性または相同性を有する野生型Ｔ細胞受容体定常鎖の少なくとも１つの生物学的活性を保持する。
【００８２】
「構成的に活性な」という用語は、刺激を必要とすることなくシグナル伝達活性を有する分子、例えば、タンパク質を指す。例示的な構成的に活性なタンパク質は、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７ＡおよびｖＦＬＩＰ  Ｋ１３であり、これらは、さらなる刺激を必要とすることなく好適な細胞に発現されるとＮＦ−κＢシグナル伝達を活性化することができる。
【００８３】
「共刺激分子」または「共刺激受容体」という用語は、共刺激リガンドに特異的に結合し、それにより、増殖等であるが、これに限定されない、Ｔ細胞による共刺激応答を媒介するＴ細胞上の同族結合パートナーを指す。共刺激細胞外分子は、効率的な免疫応答に寄与する抗原受容体またはそれらのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子には、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡおよびＴｏｌｌリガンド受容体、ならびにＯＸ４０、Ｄａｐ１０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ８、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、Ｌｃｋ、ＴＮＦＲ−Ｉ、ＴＮＦＲ−ＩＩ、Ｆａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、および４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）が含まれるが、これらに限定されない。かかる共刺激分子のさらなる例としては、ＣＤ８、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌｌｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤｌＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰ０−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが挙げられる。共刺激受容体は、細胞、他のＴ細胞、例えば、ＮＫ細胞またはマクロファージに発現される。
【００８４】
「共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン」または「共刺激ドメイン（ＣＳＤ）」とは、共刺激受容体の細胞内部分であり得る。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリー：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、および活性化ＮＫ細胞受容体で表され得る。かかる分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＡＭ−１、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ２８７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンド等が挙げられる。細胞内シグナル伝達ドメインは、その分子が由来する、その分子の全細胞内部分、または全天然細胞内シグナル伝達ドメイン、またはその機能的断片もしくは誘導体を含み得る。本開示のＣＡＲは、１つ以上の共刺激ドメインを含み得る。
【００８５】
「ｃＴＣＲ」という用語は、抗原結合ドメインに連結される野生型ＴＣＲ核酸コード配列および対応する野生型ＴＣＲタンパク質を指す。ｃＴＣＲは、いくつかの実施形態で使用され、参照対照である。例えば、ＣＤ１９結合ドメインを有するｃＴＣＲおよびＣＤ１９−ＣＡＲ（突然変異体ＴＣＲ鎖およびＣＤ１９結合ドメインを含む）は、標的抗原と異なる発現および／または異なる結合親和性を有するであろう。
【００８６】
「サイトゾル」または「細胞質」という用語は、細胞の細胞質にその成熟形態で位置する薬剤、例えば、タンパク質を指す。サイトゾルタンパク質は、核内に移動することができるが、膜貫通タンパク質ではなく、細胞外で分泌されない。例示的なサイトゾルタンパク質は、ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３である。
【００８７】
「変性障害」という用語は、通常の身体の衰えによるか、運動または食習慣等の生活様式の選択によるかにかかわらず、経時的に次第に悪化するであろう組織または臓器に影響を及ぼす変性細胞変化に基づく連続過程の結果である疾患を指す。例示的な変性疾患としては、アルツハイマー病、シャルコー・マリー・ツース病、クロイツフェルト・ヤコブ病、フリードライヒ失調症、真性糖尿病（ＩＩ型）、およびアテローム性動脈硬化症が挙げられる。
【００８８】
本明細書で使用される「に由来する」という用語は、第１の分子と第２の分子との間の関係を示す。これは、概して、第１の分子と第２の分子との間の構造的類似性を指し、第２の分子に由来する第１の分子に対する過程または源の限定を暗示するものでも含むものでもない。例えば、抗体分子に由来する抗原結合ドメインの場合、抗原結合ドメインは、それが必要な機能、すなわち、抗原に結合する能力を有するように、十分な抗体構造を保持する。これは、その抗体を産生する特定の過程に対する制限を暗示するものでも含むものでもなく、例えば、これは、抗原結合ドメインを提供するために、抗体配列から開始し、抗原結合ドメインに到達するように望ましくない配列を欠失させるか、または突然変異を課さなければならないことを意味しない。
【００８９】
本明細書で使用される「二量体化分子」という用語は、第１のスイッチドメインの第２のスイッチドメインとの会合を促進する分子を指す。実施形態では、二量体化分子は、対象に天然に存在しないか、または著しい二量体化をもたらすであろう濃度で存在しない。実施形態では、二量体化分子は、小分子、例えば、ラパマイシンまたはラパログ、例えば、ＲＡＤ００１、Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ、またはＡＰ２０１８７である。Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ（ＡＰ１９０３）は、ホモ二量体化活性を有する脂質透過性タクロリムス類似体である。Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄは、単一の酸置換（Ｐｈｅ３６Ｖａｌ）を含むヒトタンパク質の類似体ＦＫＢＰ１２（Ｆｖ）をホモ二量体化する。Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄは、天然に存在しない免疫受容体のＦｖ含有薬物結合ドメインをホモ二量体化するために使用され、細胞療法中に下流シグナル伝達活性化をもたらす。Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄは、約０．０１〜１ｍｇ／ｋｇであり得、細胞培養下で約０．１ｎＭのＥＣ５０を有する。ＡＰ２０１８７は、約２〜１０ｍｇ／ｋｇ／日で、単回投与または複数回投与で投与され得る。
【００９０】
「標的抗原の発現に関連する疾患」または「本明細書に記載の疾患関連抗原」という語句には、本明細書に記載の標的抗原の発現に関連する疾患または本明細書に記載の標的抗原を発現する細胞に関連する状態、例えば、増殖性疾患、例えば、がんもしくは悪性腫瘍もしくは前癌状態、例えば、骨髄異形成、骨髄異形成症候群、もしくは前白血病、または本明細書に記載の標的抗原を発現する細胞に関連する非癌関連適応症が含まれるが、これらに限定されない。一態様では、本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連するがんは、血液癌である。一態様では、本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連するがんは、固形がんである。本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連するさらなる疾患には、本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連する非定型および／もしくは非古典的がん、悪性腫瘍、前癌状態、または増殖性疾患が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載の標的抗原の発現に関連する非がん関連適応症には、例えば、自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギーおよび喘息）、ならびに移植が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、標的抗原発現細胞は、標的抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、または任意の時点で発現される。別の実施形態では、標的抗原発現細胞は、標的抗原タンパク質（例えば、野生型または突然変異体）を産生し、標的抗原タンパク質は、正常なレベルまたは低下したレベルで存在し得る。別の実施形態では、標的抗原発現細胞は、ある時点で検出可能なレベルの標的抗原タンパク質を産生し、その後、実質的に検出不能な標的抗原タンパク質を産生した。
【００９１】
本明細書で使用される「遺伝子修飾された細胞によって標的とされる疾患」は、治療的に有益な結果をもたらすために遺伝子修飾された細胞が罹患細胞を標的とするか健常細胞を標的とするかにかかわらず、本発明の遺伝子修飾された細胞によるいずれかの様式で任意の疾患に関与する任意の細胞の標的を包含する。遺伝子修飾された細胞には、遺伝子修飾されたＴ細胞、ＮＫ細胞、造血幹細胞、多能性胚幹細胞、または胚幹細胞が含まれるが、これらに限定されない。遺伝子修飾された細胞は、従来のＣＡＲおよび本発明のアクセサリーモジュールを有する従来のＣＡＲを含む新規の骨格を発現し、これらのＣＡＲは、標的細胞の表面に発現される抗原のうちのいずれかを標的とし得る。標的とされ得る抗原の例としては、Ｂ細胞に発現する抗原；癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、胚細胞腫瘍、および芽細胞腫に発現する抗原；様々な免疫細胞に発現する抗原；ならびに様々な血液疾患、自己免疫疾患、および／または炎症性疾患に関連する細胞に発現する抗原が挙げられるが、これらに限定されない。標的とされ得る他の抗原は当業者には明らかであり、その代替実施形態に関連して本発明のＣＡＲによって標的とされ得る。
【００９２】
「解離定数（Ｋｄ）」という用語は、受容体−リガンド相互作用の解離の平衡定数と定義される。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「多様な組の天然に存在しない免疫受容体」または「多様な組のＳＩＲ」または「多様な組のＣＡＲ」とは、同じ結合ドメインが多様な組のＴ細胞受容体定常鎖または「骨格」に連結された複数の天然に存在しない免疫受容体を指し、結合ドメインおよび異なるＴ細胞定常鎖または骨格を含む各構築物は、標的抗原に多様な範囲の結合および／または様々な発現レベルを提供する。例えば、定常ドメインの突然変異組成（例えば、突然変異体ＴＣＲａ＋ＴＣＲｂ）に応じて、結合ドメインのその標的に対する結合親和性は変化する。いくつかの実施形態では、本開示のＳＩＲ（一本鎖またはヘテロ二量体）は、同じ結合ドメインを有する野生型ＴＣＲ（例えば、ｃＴＣＲ）を超える結合親和性を含む。一実施形態では、ＳＩＲは、ｃＴＣＲよりも高い（少なくとも１．２５倍〜約１０，０００倍（およびそれらの間のいずれの数）の）発現レベルを有し、ＳＩＲおよびｃＴＣＲは、ＴＣＲドメインにおける突然変異のみが異なる。別の実施形態では、ＳＩＲは、同じ抗原への結合ドメインを有するｃＴＣＲよりも少なくとも１．５倍〜約１０，０００倍高い標的に対する結合親和性を有する。さらに別の実施形態では、ＳＩＲは、同じ抗原に対してｃＴＣＲよりも高いが、同じ結合ドメインを有するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）よりも低い結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲ発現エフェクター細胞の標的抗原への結合は、対応するｃＴＣＲ発現エフェクター細胞の結合よりも少なくとも１．２５倍高いが、対応するｃＴＣＲよりも１００，０００倍未満高い。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、約１０−４Ｍ〜１０−８Ｍの解離定数（ＫＤ、その結合親和性を反映するもの）を有する。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、上に列挙される抗原のうちの１つ以上に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、約１０−４Ｍ〜１０−８Ｍ、例えば、約１０−５Ｍ〜１０−７Ｍ、例えば、約１０−５Ｍ〜１０−６Ｍの標的抗原に対するＫＤを有する。一実施形態では、抗原結合ドメインの結合親和性は、参照抗体よりも少なくとも５倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、または１，０００倍低い。一実施形態では、コードされた抗原結合ドメインは、参照抗体よりも少なくとも５倍低い結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、参照抗体は、抗原結合ドメインが由来する抗体である。例えば、本開示は、ＴＣＲ鎖における核酸配列コドン最適化および／または突然変異に基づいて設計およびスクリーニングされて、結合ドメインおよびＴＣＲドメインの対合もしくは発現および／またはそれらの間のリンカーの使用を促進し得る特定の抗原標的に対するＳＩＲの多様な集団を企図する。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、免疫応答を誘発することができる抗原の一部分、または抗体もしくは抗体断片に結合する抗原の一部分であると定義される。エピトープは、タンパク質配列または部分配列であり得る。
【００９５】
「発現ベクター」という用語は、発現されるヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、発現のための他のエレメントは、宿主細胞によってまたはインビトロ発現系に供給され得る。発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、ネイキッドプラスミドまたはリポソーム内に含有されるプラスミド）、およびウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）を含む、当該技術分野で既知のもの全てが含まれる。
【００９６】
「機能的部分」という用語は、ＣＡＲに関して使用される場合、ＣＡＲの任意の部分または断片を指し、この部分または断片は、その一部であるＣＡＲ（親ＣＡＲ）の生物学的活性を保持する。機能的部分は、例えば、親ＣＡＲと同様の程度、同じ程度、またはそれを超える程度に、標的細胞を認識するか、または疾患を検出、治療、または予防する能力を保持するＣＡＲの一部を包含する。親ＣＡＲに関して、機能的部分は、例えば、親ＣＡＲの約１０％、２５％、３０％、５０％、６８％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上を含み得る。
【００９７】
本明細書で使用される「遺伝子修飾された細胞」、「再指向された細胞」、「遺伝子操作された細胞」または「修飾された細胞」とは、本開示のＣＡＲを発現する細胞を指す。いくつかの実施形態では、遺伝子修飾された細胞は、ＣＡＲをコードするベクターを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子修飾された細胞は、同じベクター内のＣＡＲおよび１つ以上のアクセサリー分子をコードするベクターを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子修飾された細胞は、ＣＡＲをコードする第１のベクターおよびアクセサリー分子をコードする第２のベクターを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子修飾された細胞は、ＣＡＲをコードする第１のベクターおよび１つより多くのアクセサリー分子をコードする第２のベクターを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子修飾された細胞は、ＣＡＲをコードする第１のベクターおよび第１のアクセサリー分子をコードする第２のベクターおよび第２のアクセサリー分子をコードする第３のベクターを含む。
【００９８】
本明細書で使用される「ヒンジ領域（ＨＲ）」とは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間にある親水性領域を指す。ヒンジ領域には、抗体またはその断片もしくは誘導体のＦｃ断片、抗体またはその断片もしくは誘導体のヒンジ領域、抗体のＣＨ２領域、抗体のＣＨ３領域、人工的スペーサー配列、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。ヒンジ領域の例としては、ＣＤ８ａヒンジ、および例えばＧｌｙ３と同程度に小さくあり得るポリペプチドから作製された人工的スペーサー、またはＩｇＧ（ヒトＩｇＧ４等）のＣＨ１およびＣＨ３ドメインが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、（ｉ）ＩｇＧ４のヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域、（ｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ領域およびＣＨ２領域、（ｉｖ）ＣＤ８ａのヒンジ領域、（ｖ）ＩｇＧ１のヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域、（ｖｉ）ＩｇＧ１のヒンジ領域または（ｖｉ）ＩｇＧ１のヒンジ領域およびＣＨ２領域のうちのいずれか１つ以上である。他のヒンジ領域は当業者には明らかであり、本開示の代替実施形態に関連して使用され得る。
【００９９】
「免疫障害」という用語は、免疫系の機能不全を特徴とする疾患を指す。自己免疫疾患は、正常な身体部分に異常な免疫応答に起因する状態である。自己免疫疾患には少なくとも８０種がある。
【０１００】
本明細書で使用される「免疫細胞」とは、抗原提示細胞、Ｂ細胞、好塩基球、細胞毒性Ｔ細胞、樹状細胞、好酸球、顆粒球、ヘルパーＴ細胞、白血球、リンパ球、マクロファー、マスト細胞、メモリー細胞、単球、ナチュラルキラー細胞、好中球、食細胞、プラズマ細胞、およびＴ細胞を含むが、これらに限定されない哺乳類免疫系の細胞を指す。
【０１０１】
本明細書で使用される「免疫エフェクター細胞」という用語は、免疫応答、例えば、免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例としては、Ｔ細胞、例えば、アルファ／ベータＴ細胞およびガンマ／デルタＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、マスト細胞、ならびに骨髄球由来の食細胞が挙げられる。
【０１０２】
「免疫エフェクター機能」または「免疫エフェクター応答」、「エフェクター機能」とは、分化細胞の特殊化機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む、細胞溶解活性またはヘルパー活性であり得る。例えば、免疫エフェクター機能または応答は、標的細胞の死滅または成長もしくは増殖の阻害を促進するＴ細胞またはＮＫ細胞の特性を指す。Ｔ細胞の場合、一次刺激および共刺激が、免疫エフェクター機能または応答の例である。抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）の場合、抗原提示およびサイトカイン分泌がエフェクター機能の例である。
【０１０３】
本明細書で使用される「免疫応答」とは、先天性免疫、体液性免疫、細胞性免疫、免疫、炎症性応答、後天性（適応的）免疫、自己免疫、および／または過剰活性免疫を含むが、これらに限定されない免疫を指す。
【０１０４】
本明細書で使用される「細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＳＤ）」または「細胞質ドメイン」という用語は、分子の細胞内シグナル伝達部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。免疫エフェクター機能の例としては、サイトカインの分泌を含む、細胞溶解活性およびヘルパー活性が挙げられる。エフェクター機能シグナルを伝達するドメインの例としては、Ｔ細胞受容体複合体のｚ鎖またはその相同体のうちのいずれか（例えば、ｈ鎖、ＦｃｅＲ１ｇおよびｂ鎖、ＭＢ１（Ｉｇａ）鎖、Ｂ２９（Ｉｇｂ）鎖等）、ヒトＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ３ポリペプチド（Ｄ、ｄ、およびｅ）、ｓｙｋファミリーチロシンキナーゼ（Ｓｙｋ、ＺＡＰ  ７０等）、ｓｒｃファミリーチロシンキナーゼ（Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｌｙｎ等）、ならびにＴ細胞形質導入に関与する他の分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ５、およびＣＤ２８が挙げられるが、これらに限定されない。他の細胞内シグナル伝達ドメインは当業者には明らかであり、本開示の代替実施形態に関連して使用され得る。
【０１０５】
別の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例示的な一次細胞内シグナル伝達ドメインとしては、一次刺激または抗原依存性刺激に関与する分子に由来するものが挙げられる。別の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的な共刺激細胞内シグナル伝達ドメインとしては、共刺激シグナルまたは抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが挙げられる。例えば、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ｚの細胞質配列を含み得、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８または４１ＢＢ等の共受容体または共刺激分子由来の細胞質配列を含み得る。
【０１０６】
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして既知のシグナル伝達モチーフを含み得る。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＣＤ３ゼータ、一般的なＦｅＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｅガンマＲＩＩａ、ＦｅＲベータ（ＦｅイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰｌＯ、およびＤＡＰ１２に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０７】
本明細書で使用される「単離された」という用語は、他の物質を実質的に含まない分子または生物学的薬剤または細胞物質を指す。一態様では、「単離された」という用語は、核酸、例えば、それぞれ、天然源に存在する他のＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはタンパク質もしくはポリペプチド、または細胞もしくは細胞小器官、または組織もしくは器官とは別個の、ＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはタンパク質もしくはポリペプチド（例えば、抗体もしくはその誘導体）、または細胞もしくは細胞小器官、または組織もしくは器官を指す。「単離された」という用語は、細胞物質、ウイルス物質、もしくは培養培地（組換えＤＮＡ技法によって産生された場合）、または化学的前駆体もしくは他の化学物質（化学的に合成された場合）を実質的に含まない核酸またはペプチドも指す。さらに、「単離された核酸」は、断片として天然に存在せず、かつ天然状態で見られないであろう核酸断片を含むよう意図されている。「単離された」という用語は、他の細胞タンパク質から単離されたポリペプチドを指すためにも本明細書で使用され、精製されたポリペプチドおよび組換えポリペプチドの両方を包含するよう意図されている。「単離された」という用語は、他の細胞または組織から単離された細胞または組織を指すためにも本明細書で使用され、培養された細胞または組織および操作された細胞または組織の両方を包含するよう意図されている。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、「リンカー」という用語（別名、「リンカードメイン」または「リンカー領域」）は、それぞれ、本明細書に開示されるＣＡＲポリヌクレオチドまたはポリペプチドの２つ以上のドメインまたは領域を一緒に連結するオリゴまたはポリペプチド（またはポリペプチドをコードするオリゴ）を指す。リンカーは、１〜５００アミノ酸長または３〜１５００ヌクレオチド長であり得る。いくつかの実施形態では、「リンカー」は、切断可能または切断不能である。別途特定されない限り、本明細書で使用される「リンカー」という用語は、切断不能なリンカーを意味する。この切断不能なリンカーは、互いに対する隣接するタンパク質ドメインの運動の自由度を可能にする可動性残基で構成され得る。かかる残基の非限定的な例としては、グリシンおよびセリンが挙げられる。いくつかの実施形態では、リンカーは、非可動性残基を含み得る。切断可能なリンカーの例としては、２Ａリンカー（例えば、Ｔ２Ａ）、２Ａ様リンカー、またはそれらの機能的等価物、およびそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、リンカーには、ピコルナウイルス２Ａ様リンカー、ブタテッショウウイルス（Ｐ２Ａ）のＣＨＹＳＥＬ配列、ゾセアアシグナウイルス（Ｔ２Ａ）のＣＨＹＳＥＬ配列、またはそれらの組み合わせ、バリアント、および機能的等価物が含まれる。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、２Ａグリシンと２Ｂプロリンとの間の切断をもたらすモチーフを含み得る（例えば、Ｔ２Ａ配列、配列番号４８３９および４８４０、Ｃ末端Ｇｌｙ−Ｐｒｏを参照のこと）。いくつかの例示的な切断可能なリンカーの核配列は、配列番号９２５〜配列番号９３０に提供され、いくつかの例示的なリンカーのアミノ酸配列は、配列番号４８３８〜配列番号４８４３に提供される。本明細書で使用され得る他の切断可能なリンカーは、当業者によって容易に理解される。
【０１０９】
ある実施形態では、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（ＳＧＳＧ）モチーフ（配列番号９３１−３２）も、切断の効率を増強するために、切断可能なリンカー配列の上流に付加される。切断可能なリンカーの潜在的な欠点は、Ｎ末端タンパク質の終端に残存する小さい２Ａタグがタンパク質機能に影響を及ぼし得るか、またはタンパク質の抗原性に寄与し得る可能性である。この制限を打開するために、いくつかの実施形態では、フーリン切断部位（ＲＡＫＲ）（配列番号９３３〜９３５）がＳＧＳＧモチーフの上流に付加されて、翻訳後の残留２Ａペプチドの切断を容易にする。
【０１１０】
本明細書で使用される「可動性ポリペプチドリンカー」という用語は、ポリペプチド鎖を一緒に（例えば、可変重鎖領域と可変軽鎖領域を一緒に）連結するための、単独でまたは組み合わせて使用されるグリシン残基および／またはセリン残基等のアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。一実施形態では、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎ、（配列番号４１９１〜４１９２）を含み、ここで、ｎは、１以上の正の整数である。例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５、ｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９、およびｎ＝１０である。一実施形態では、可動性ポリペプチドリンカーには、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４または（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号４１９３または４１９４）が含まれるが、これらに限定されない。参照により本明細書に組み込まれるＷ０２０１２／１３８４７５に記載のリンカーも本開示の範囲に含まれる。
【０１１１】
「レンチウイルス」という用語は、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅファミリーの属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞に感染することができるという点でレトロウイルスの中で特有であり、これらは、かなりの量の遺伝情報を宿主細胞のＤＮＡに送達することができ、それ故に、遺伝子送達ベクターの最も効率的な方法のうちの１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ、およびＦＩＶは全て、レンチウイルスの例である。
【０１１２】
「レンチウイルスベクター」という用語は、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９）に提供される特に自己不活性化レンチウイルスベクターを含むレンチウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。臨床で使用され得るレンチウイルスベクターの他の例としては、例えば、Ｏｘｆｏｒｄ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子送達技術およびＬｅｎｔｉｇｅｎのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクター系等が挙げられるが、これらに限定されない。非臨床型のレンチウイルスベクターも入手可能であり、当業者に既知であろう。レンチウイルスベクターの他の例は、ｐＬＥＮＴＩ−ＥＦ１α（配列番号３８３７）、ｐＬＥＮＴＩ−ＥＦ１α−ＤＷＰＲＥ（配列番号３８３８）、ｐＣＣＬｃ−ＭＮＤＵ３−ＷＰＲＥ（配列番号７７７９）、およびｐＣＣＬｃ−ＭＮＤＵ３−Ｅｃｏ−Ｎｈｅ−Ｓａｌ−ＷＰＲＥ（配列番号７７８０）である。ｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ−ＤＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ配列の欠失によってｐＬＥＮＴＩ−ＥＦ１αベクターから得られたものである。内部Ｓａｃ  ＩＩ断片は、ＥＦ１アルファ（ＥＦ１ａ）−Ｄ−ＳＡＣＩＩ−プロモーター（配列番号３８４２）を生成するためにＥＦ１αプロモーターから欠失させたものである。例示的な実施形態では、ＣＡＲ、ＣＡＲおよびアクセサリーモジュール（複数可）、またはアクセサリーモジュール（複数可）をコードする核酸断片は、当該技術分野で既知の方法を使用してｐＬＥＮＴＩ−ＥＦ１αおよびｐＣＣＬｃ−ＭＮＤＵ３−Ｅｃｏ−Ｎｈｅ−Ｓａｌ−ＷＰＲＥベクターに存在するＮｈｅ  Ｉ部位とＳａｌ  Ｉ部位との間にクローン化され得る。
【０１１３】
本明細書で使用される「哺乳動物」とは、ヒトおよび非ヒト霊長類、例えば、チンパンジーおよび他の類人猿およびサル種；家畜、例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、およびウマ；家畜哺乳動物、例えば、イヌおよびネコ；齧歯類を含む実験動物、例えば、マウス、ラット、およびテンジクネズミ等を含むが、これらに限定されない、哺乳類クラスの任意のメンバーを指す。この用語は、特定の年齢または性別を意味しない。したがって、成人および新生児対象、ならびに胎児は、男性（雄）であるか女性（雌）であるかにかかわらず、この用語の範囲に含まれるよう意図されている。
【０１１４】
本明細書で使用される「ネイキッドＤＮＡ」とは、発現に適切な配向で好適な発現ベクター内にクローン化されたＣＡＲをコードするＤＮＡを指す。使用され得るウイルスベクターには、ＳＩＮレンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、泡沫状ウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ハイブリッドベクター、および／またはプラスミドトランスポゾン（例えば、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン系）もしくはインテグラーゼベースのベクター系が含まれるが、これらに限定されない。本発明の代替実施形態に関連して使用され得る他のベクターは、当業者に明らかであろう。
【０１１５】
本明細書で使用される「天然」または「天然に存在する」または「内在性」とは、細胞に天然に存在するか、または細胞に自然に発現する遺伝子、タンパク質、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ等）、またはそれらの断片を指す。したがって、Ｔ細胞の天然または内在性ＴＣＲα鎖ポリペプチドは、ＴＣＲα定常鎖に連結された可変ドメイン（Ｖα）からなる。天然または内在性ＴＣＲα鎖前駆体ポリペプチドは、成熟ポリペプチドから切断されたアミノ末端シグナルペプチドからなるものでもある。
【０１１６】
ＮＦ−カッパ−Ｂ必須モジュレーター（ＮＥＭＯ）とは、ＮＦ−κＢ活性化に必要なＩκＢキナーゼ複合体の足場タンパク質成分を指す。ＮＦ−κＢは、炎症、細胞増殖、およびアポトーシスを制御する転写因子である。
【０１１７】
「ＮＦ−κＢ経路」または「ＮＦ−κＢシグナル伝達経路」とは、ＮＦ−κＢサブユニットの核転座およびＮＦ−κＢサブユニット応答性遺伝子の転写活性化をもたらすシグナル伝達経路を指す。ＮＦ−κＢは、炎症および免疫応答に関与するいくつかの遺伝子の発現の調節に関与する転写因子のファミリーを指す。現在に至るまでにこのファミリーの５つの既知のメンバーが特徴付けられており、ｃ−Ｒｅｌ、ＮＦ−κＢ１（ｐ５０およびその前駆体ｐ１０５）、ＮＦ−κＢ２（ｐ５２およびその前駆体ｐ１０５）、ｐ６５（ＲｅｌＡ）、ならびにＲｅｌＢを含む。ＮＦ−κＢの多くの二量体形態が説明されているが、古典的なＮＦ−κＢ複合体は、ｐ６５／ＲｅｌＡおよびｐ５０サブユニットのヘテロ二量体であり、ＩκＢ（これらのうちで最も一般的なものはＩκＢαである）と呼ばれる阻害タンパク質のファミリーに関連して大半の細胞に見られる。古典的なＮＦ−κＢ経路では、ＴＮＦαおよびＩＬ−１等のサイトカインのメンバーによる刺激により、マルチサブユニットＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）複合体の活性化がもたらされ、これは、２つの触媒サブユニットＩＫＫ１／ＩＫＫαおよびＩＫＫ２／ＩＫＫβ、ならびに調節サブユニットＮＥＭＯ／ＩＫＫγを含む。活性化されたＩＫＫ複合体は、ＩκＢタンパク質の誘導的リン酸化およびそれらのその後の分解をもたらし、それにより、ＮＦ−κＢをそれらの阻害影響から解放する。解放されると、ＮＦ−κＢは、核に自由に移動し、同族結合部位を有する特異的遺伝子のプロモーターに結合する。核内でのＮＦ−κＢ二量体の転写活性は、それらのリン酸化によってさらに修飾される。ｐ１００／ＮＦ−κＢ２のｐ５２サブユニットへのプロテアソーム媒介プロセシングを伴うＮＦ−κＢ活性化の代替（または非標準）経路、が説明されている。
【０１１８】
「ＮＦ−κＢ刺激分子」または「ＮＦ−κＢ刺激因子」または「ＮＦ−κＢ活性化因子」とは、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路の活性またはＮＦ−κＢシグナル伝達経路の下流標的遺伝子の活性／発現を促進するアクセサリー分子のサブセットを指す。いくつかの実施形態では、ＮＦ−κＢ活性化因子は、天然に存在しないＮＦ−κＢ活性化剤である。例示的な天然に存在しないＮＦ−κＢ活性化剤は、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａである。一実施形態では、ＮＦ−κＢ刺激分子またはＮＦ−κＢ刺激因子は、選択的ＮＦ−κＢ刺激因子または選択的ＮＦ−κＢ活性化因子である。本明細書に記載の「選択的ＮＦ−κＢ活性化因子」または「選択的ＮＦ−κＢ刺激因子」とは、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を選択的に活性化し、他のシグナル伝達経路を活性化しないか、または最小限にしか活性化しない薬剤を指す。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を活性化し、ＡＫＴシグナル伝達経路、ＰＩ３Ｋシグナル伝達経路、ＪＮＫシグナル伝達経路、ｐ３８キナーゼシグナル伝達経路、ＥＲＫシグナル伝達経路、ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路、およびインターフェロンシグナル伝達経路の群から選択されるシグナル伝達経路のうちの１つ以上を活性化しないか、または最小限にしか活性化しない。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を活性化し、ＡＫＴシグナル伝達経路を活性化しないか、または最小限にしか活性化しない。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を活性化し、ＡＫＴシグナル伝達経路を活性化しないか、または最小限にしか活性化しない。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を活性化し、ＰＩ３Ｋシグナル伝達経路を活性化しないか、または最小限にしか活性化しない。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を活性化し、ＥＲＫシグナル伝達経路を活性化しないか、または最小限にしか活性化しない。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を活性化し、ＪＮＫシグナル伝達経路を活性化しないか、または最小限にしか活性化しない。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を活性化し、ｐ３８キナーゼシグナル伝達経路を活性化しないか、または最小限にしか活性化しない。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を活性化し、ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路を活性化しないか、または最小限にしか活性化しない。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を活性化し、インターフェロンシグナル伝達経路を活性化しないか、または最小限にしか活性化しない。リン酸化ＩκＢα、リン酸化ｐ６５／ＲｅｌＡ、全ＩκＢαの測定、ｐ６５核転座、ＮＦ−κＢ応答性遺伝子の上方調節、電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）、およびＮＦ−κＢベースのレポーターアッセイ等を含むが、これらに限定されない、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路の活性化を測定するためのいくつかの方法が当該技術分野で既知である。これらのアッセイを本開示の方法で単独でまたは���み合わせて使用して、ＮＦ−κＢ経路の選択的活性化因子特定することができる。異なる経路に属する異なるキナーゼおよび下流基質のリン酸化の測定、下流転写因子の核転座、下流応答性遺伝子の上方調節、電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）、およびルシフェラーゼベースのレポーターアッセイ等を含むが、これらに限定されない、シグナル伝達経路（例えば、ＡＫＴシグナル伝達経路、ＰＩ３Ｋシグナル伝達経路、ＪＮＫシグナル伝達経路、ｐ３８キナーゼシグナル伝達経路、ＥＲＫシグナル伝達経路、ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路、およびインターフェロンシグナル伝達経路）の活性化を測定するためのいくつかの方法が当該技術分野で既知である。これらのアッセイを本開示の方法で単独でまたは組み合わせて使用して、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路の選択的活性化因子を選択することができる。選択的ＮＦ−κＢ刺激因子は、４１ＢＢ等の他のアクセサリー分子と比較してＮＦ−κＢを特異的に活性化する。選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ刺激分子は、以下の効果のうちの１つ以上を有する：（ｉ）Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＴＣＲ−Ｔ細胞の寿命を延長させる、（ｉｉ）Ｔ細胞増殖を刺激する、（ｉｉｉ）Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞をアポトーシスから保護する、（ｉｖ）Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＴＣＲ−Ｔ細胞の老化を遅延させる、（ｖ）Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＴＣＲ−Ｔ細胞の疲弊を遅延させる、（ｖｉ）Ｔ細胞の末端分化を遅延させる、（ｖｉｉ）Ｔ細胞によるＩＬ２等のサイトカインの産生を促進する、（ｖｉｉｉ）ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＴＣＲ−Ｔ細胞を含むＴ細胞のインビボ拡大を促進する、（ｉｘ）ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＴＣＲ−Ｔ細胞を含むＴ細胞のインビボ持続性を促進する、（ｘ）ＣＡＲ−ＴおよびＴＣＲ−Ｔ細胞を含むＴ細胞のインビボ活性（例えば、抗腫瘍活性）を改善する。選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ刺激分子は、抗原提示細胞、例えば、樹状細胞等のＴ細胞以外の細胞に発現し得る。選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ刺激分子を使用して、抗原提示細胞によってもたらされる抗原提示、サイトカイン産生、および免疫応答を増強することができる。選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ刺激分子は、ウイルスまたは非ウイルス（例えば、ヒト）起源のものであり得る。選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ刺激分子は、細胞に過渡的または安定的に発現し得る。選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ刺激分子は、細胞に構成的または誘導的様式で発現し得る。選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ刺激分子は、スイッチドメイン、例えば、ＦＫＢＰ１２ｖ３６ドメインのタンデムコピーと融合した細胞に発現し得る。ＮＦ−κＢ刺激分子を含む例示的なスイッチドメインは、配列番号９７３〜９７７、１００６〜１００９、７７６３〜７７６７、および７７８１〜７７８２（表７）に提供される。選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ刺激分子は、ＣＡＲ／ＴＣＲのコード配列を含むベクターから発現し得るか、または異なるベクターに存在し得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ／ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む���クターは、（ｉ）Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＴＣＲ−Ｔ細胞の寿命を延長させる、（ｉｉ）Ｔ細胞増殖を刺激する、（ｉｉｉ）Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞をアポトーシスから保護する、（ｉｖ）Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＴＣＲ−Ｔ細胞の老化を遅延させる、（ｖ）Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＴＣＲ−Ｔ細胞の疲弊を遅延させる、（ｖｉ）Ｔ細胞の末端分化を遅延させる、（ｖｉｉ）Ｔ細胞によるＩＬ２等のサイトカインの産生を促進する、（ｖｉｉｉ）ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＴＣＲ−Ｔ細胞を含むＴ細胞のインビボ拡大を促進する、（ｉｘ）ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＴＣＲ−Ｔ細胞を含むＴ細胞のインビボ持続性を促進する、および／または（ｘ）ＣＡＲ−ＴおよびＴＣＲ−Ｔ細胞を含むＴ細胞のインビボ活性（例えば、抗腫瘍活性）を改善するＮＦ−κＢ刺激分子または選択的ＮＦ−κＢ活性化因子であるウイルスおよび細胞シグナル伝達タンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＮＦ−κＢ刺激分子のコード配列は、切断可能なリンカーをコードするオリゴヌクレオチドによってＣＡＲ骨格コード配列に連結される。例示的な実施形態では、かかるＮＦ−κＢ刺激分子には、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス由来のｖＦＬＩＰ−Ｋ１３、コドン最適化Ｋ１３（Ｋ１３−ｏｐｔ）、ＮＥＭＯ突然変異体（（例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ｌ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ等）、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＴＣＬ−１Ａ、ＭＴＣＰ−１、ＩＫＫα、およびＩＫＫβ（表７）が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターは、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３をさらにコードする。別の実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターは、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをさらにコードする。いくつかの実施形態では、ＮＦ−κＢ刺激分子は、本明細書に記載のＣＡＲをコードするベクターとははっきりと異なるベクターによってコードされる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターを含むエフェクター細胞は、ＮＦ−κＢ刺激分子をコードするベクターも含む。いくつかの実施形態では、ＮＦ−κＢ刺激分子は、対応する内在性タンパク質をコードするゲノム遺伝子座を修飾することによってコードされる。例えば、ｈＮＥＭＯ遺伝子の１つ以上のコピーは、相同組換えによって修飾されて、それをＫ２７７Ａ突然変異体形態に突然変異させることができる。内在性ヒトＮＥＭＯ遺伝子にＫ２７７Ａ突然変異をもたらすために使用され得る例示的な標的構築物は、配列番号７７７１によって提示される。内在性ヒトＮＥＭＯ遺伝子にＫ２７７Ａ−デルタ−Ｖ２４９−Ｋ２５５突然変異をもたらすために使用され得る例示的な標的構築物は、配列番号７７７２によって提示される。これらの標的構築物は、当該技術分野で既知の技法を使用して、ＮＥＭＯを標的とする遺伝子編集系、例えば、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９またはＴＡＬＯＮとともにヒトＴ細胞に導入され得る。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  Ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９の例示的なＮＥＭＯ  ｇＲＮＡ標���配列は、配列番号７７５９〜７７６２に提供される。一実施形態では、ＣＡＲおよびＮＦ−κＢ刺激分子は、単一のポリヌクレオチドによってコードされる。別の実施形態では、ＣＡＲは、第１の核酸分子によってコードされ、ＮＦ−κＢ刺激分子は、第２の核酸分子によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＮＦ−κＢ刺激分子は、ＮＦ−κＢ刺激分子の数に応じて、１つより多くの核酸分子によってコードされる。本開示のある特定の部分では、「ＣＡＲ／ＮＦκＢ」という略語は、例えば、本開示のＣＡＲおよびＮＦ−κＢ刺激分子（例えば、ＮＦ−κＢ特異的刺激分子）の両方を発現する細胞を示すために使用される。例えば、「ＣＡＲ／ＮＦκＢ発現Ｔ細胞」という用語は、例えば、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス由来のｖＦＬＩＰ−Ｋ１３、コドン最適化Ｋ１３（Ｋ１３−ｏｐｔ）、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ５５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＴＣＬ−１Ａ、ＭＴＣＰ−１、ＩＫＫ１／ＩＫＫα、およびＩＫＫ２／ＩＫＫβ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるＮＦ−κＢ特異的刺激分子も発現する、任意の数の可能な異なる抗原結合ドメインを有するＣＡＲ−Ｔ細胞を指す。ＮＦ−κＢ刺激分子は、ＣＡＲの細胞質ドメインに直接連結され得るか、または独立して細胞に発現し得る。ＮＦ−κＢ刺激分子は、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路の発現および／またはその阻害剤の活性を遮断する分子であり得る。例えば、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路の発現および／またはその阻害剤の活性を遮断するＮＦ−κＢ刺激分子は、遺伝的（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｇＲＮＡ、ＴＡＬＯＮ、または亜鉛フィンガーヌクレアーゼ）、化学的、または生物学的Ａ２０阻害剤である。他の実施形態は、ＮＦ−κＢ刺激分子としてＮＥＭＯ融合構築物を含む（例えば、ｈＮＥＭＯ−ＦＫＢＰｘ２、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ６００等）。
【０１１９】
本明細書で使用される場合、「天然に存在しない薬剤」または「非天然」または「外因性」とは、細胞に天然に発現しない薬剤を指す。換言すれば、天然に存在しない薬剤は、細胞に発現されるように「操作される」。天然に存在しない薬剤は、天然に存在する薬剤のクローン化バージョンであり得る。例示的な天然に存在しない薬剤としては、ＣＡＲ、ＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰ、組換えＴＣＲ、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３、およびＫ１３−ｏｐｔが挙げられる。天然に存在しない薬剤は、レンチウイルスまたはレトロウイルス媒介遺伝子導入等の当該技術分野で既知の遺伝子導入技法を使用して細胞に発現され得る。天然に存在しない薬剤は、外因性プロモーター（例えば、ＥＦ１αプロモーター）または内在性プロモーター（例えば、ＴＣＲαプロモーター）を使用して免疫細胞に発現され得る。内在性遺伝子（例えば、ＩＫＫ１、ＩＫＫ２、ＩＫＫγ／ＮＥＭＯ）がクローン化され、細胞に異所的に発現されると、これは、天然に存在しない薬剤の別の例を表す。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、「天然に存在しない免疫受容体」または「外因性免疫受容体」とは、免疫細胞に天然に発現しない免疫受容体を指す。換言すれば、天然に存在しない免疫受容体は、免疫細胞に発現されるように「操作される」。天然に存在しない免疫受容体は、天然に存在する免疫受容体のクローン化バージョンであり得る。あるいは、天然に存在しない免疫受容体は、組換え分子生物学技法を使用して産生されるキメラ受容体であり得る。例示的な天然に存在しない免疫受容体としては、ＣＡＲ、ＳＩＲ、Ａｂ−ＴＣＲ、ＴＦＰ、および組換えＴＣＲが挙げられる。天然に存在しない免疫受容体は、レンチウイルスまたはレトロウイルス媒介遺伝子導入等の当該技術分野で既知の遺伝子導入技法を使用して免疫細胞に導入され得る。天然に存在しない免疫受容体は、外因性プロモーター（例えば、ＥＦ１αプロモーター）または内在性プロモーター（例えば、ＴＣＲαプロモーター）を使用して免疫細胞に発現され得る。
【０１２１】
本明細書で使用される場合、「天然に存在しないＴＣＲ抗原結合ドメイン」または「外因性ＴＣＲ抗原結合ドメイン」とは、自然界に存在するＴＣＲに対してキメラであり天然に存在しないＴＣＲ定常領域に作動可能に連結された結合ドメインを指す。換言すれば、天然に存在しないＴＣＲ抗原結合ドメインは、組換え分子生物学技法を使用してＴＣＲに作動可能に連結されるように「操作され」、さらに、抗原結合ドメインは、自然界で見られるＴＣＲとははっきりと異なる分子から得られるか、またはそれに由来する。自然界のＴＣＲとははっきりと異なる抗原結合ドメインには、抗体ｖＨおよびｖＬ断片、ヒト化抗体断片、キメラ抗体断片、受容体リガンド等が含まれる。
【０１２２】
本明細書で使用される場合、「非ウイルス起源」とは、ウイルスによって完全にまたは部分的にコードされていないか、またはウイルスでコードされたタンパク質と８０％超（例えば、８５％超、９０％超、９５％超、または９９％超）の配列相同性を有する１０個より多くのアミノ酸（例えば、１５個より多くのアミノ酸、２０個より多くのアミノ酸、２５個より多くのアミノ酸、または５０個より多くのアミノ酸）の任意のドメインまたは領域を有する薬剤（例えば、タンパク質）を指す。ある実施形態では、非ウイルス起源の薬剤は、ヒト起源のものである。ある実施形態では、非ウイルス起源の薬剤は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子である。選択的ＮＦ−κＢ活性化因子である例示的な非ウイルス起源の薬剤は、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（配列番号４８９２）である。
【０１２３】
「作動可能に連結された」または「機能的に連結された」という用語は、各成分が機能的になるような第１の成分と第２の成分との間の機能的連結または会合を指す。例えば、「作動可能に連結された」には、異種核酸配列の発現をもたらす調節配列と異種核酸配列との間の会合が含まれる。例えば、第１の核酸配列は、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的な関係に置かれた場合に、第２の核酸配列に作動可能に連結される。作動可能に連結された２つのポリペプチドとの関連で、第１のポリペプチドは、それがいずれの連結とも無関係であろう様式で機能し、第２のポリペプチドは、それがそれらの２つの間の連結を欠くであろうように機能する。
【０１２４】
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列との関連で「パーセント同一性」とは、同じである２つ以上の配列を指す。２つの配列は、これらの２つの配列が、最大一致について比較ウィンドウまたは指定された領域にわたって比較して整列させたときに、以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して、または手動アライメントおよび目視検査によって測定される、同じであるアミノ酸残基またはヌクレオチドの特定されたパーセンテージ（例えば、特定された領域にわたって、または特定されていない場合、全配列にわたって、６０％の同一性、任意選択的に、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％，８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性）を有する場合、「実質的に同一」である。任意選択的に、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド長（または１０アミノ酸長）である領域、またはより好ましくは、１００〜５００または１０００またはそれ以上のヌクレオチド長（または２０、５０、２００、またはそれ以上のアミノ酸長）である領域にわたって存在する。
【０１２５】
配列比較のために、一般に、１つの配列が参照配列の役割を果たし、試験配列がこの参照配列と比較される。配列比較アルゴリズムを使用して、試験配列および参照配列がコンピュータに入力され、必要に応じて部分配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。デフォルトプログラムパラメータが使用され得るか、または代替のパラメータが指定され得る。その後、配列比較アルゴリズムが、プログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列のパーセント配列同一性を計算する。比較のための配列アライメント法は、当該技術分野で周知である。比較のための最適な配列アライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．４８：４４３の相同性アライメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４の類似性検索法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ））、または手動アライメントおよび目視検査（例えば、Ｂｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙを参照のこと）によって行われ得る。
【０１２６】
パーセント配列同一性および配列類似性を決定するために使用され得るアルゴリズムの２つの例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムおよびＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムであり、これらは、それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２、およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．２１５：４０３−４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを介して公的に入手可能である。
【０１２７】
２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ，（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１−１７）のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０重み残基表、ギャップ長ペナルティ１２、およびギャップペナルティ４を使用して決定することもできる。加えて、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍから入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．４８：４４４−４５３）アルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｏｍ  ６２行列またはＰ  ＡＭ２５０行列のいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重み、および１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用して決定され得る。
【０１２８】
「ポリヌクレオチド」、「核酸」、または「組換え核酸」という用語は、ヌクレオチドのポリマー、例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を指し、適切な場合、リボ核酸（ＲＮＡ）も指す。
【０１２９】
本明細書で同義に使用される「タンパク質」または「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合と呼ばれる化学結合によって一緒に連結されたアミノ酸と呼ばれる化学的構成要素の１つ以上の鎖を含む。
【０１３０】
「レトロウイルスベクター」という用語は、レトロウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。レトロウイルスベクターの例としては、ＭＳＣＶｎｅｏ、ＭＳＣＶ−ｐａｃ（またはＭＳＣＶ−ｐｕｒｏ）、ＭＳＣＶ−ｈｙｇｒｏ（ＡｄｄｇｅｎｅまたはＣｌｏｎｔｅｃｈから入手可能）が挙げられる。
【０１３１】
「Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン」または「Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンベクター」という用語は、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。
【０１３２】
「一本鎖可変領域」または「ｓｃＦｖ」という用語は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片および重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片を含む融合タンパク質を指し、軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、例えば、合成リンカー、例えば、短い可動性ポリペプチドリンカーを介して隣接して連結されており、一本鎖ポリペプチドとして発現されることができ、ｓｃＦｖは、それが由来するインタクトな抗体の特異性を保持する。特定されない限り、本明細書で使用される場合、ｓｃＦｖは、例えば、ポリペプチドのＮ末端およびＣ末端に対して、ｖＬ可変領域およびｖＨ可変領域をいずれかの順序で有し得、ｓｃＦｖは、ｖＬ−リンカー−ｖＨを含み得るか、またはｖＨ−リンカー−ｖＬを含み得る。本発明では、ｓｃＦｖは、ｖＬ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−リンカー−ｖＨとも称される。あるいは、ｓｃＦｖは、（ｖＬ＋ｖＨ）または（ｖＨ＋ｖＬ）とも称される。
【０１３３】
「シグナル伝達ドメイン」という用語は、細胞内に情報を伝達して、第２のメッセンジャーを生成することによって、またはかかるメッセンジャーに応答することによってエフェクターとして機能することによって定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するタンパク質の機能的領域を指す。
【０１３４】
「合成免疫受容体」またはあるいは「ＳＩＲ」という用語は、エフェクター細胞に発現されると、細胞に、標的細胞、典型的にはがん細胞に対する特異性と、細胞内シグナル発生とを提供する一組のポリペプチド、いくつかの実施形態では、典型的には２つの組のポリペプチドを指す。ＳＩＲは、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１８／１０２７９５  Ａ１に記載の次世代ＣＡＲプラットフォームを表す。典型的な実施形態では、ＳＩＲは、本明細書に記載の抗原に結合する１つ以上の抗原結合ドメイン（例えば、抗体もしくは抗体断片、リガンド、または受容体）を含み、任意選択的なリンカーを介して１つ以上のＴ細胞受容体定常鎖または領域に連結される。いくつかの実施形態では、この一組のポリペプチドは、互いに隣接している。いくつかの実施形態では、ＳＩＲは、２つ以上の組の２つ以上のポリペプチドを含む。各組のＳＩＲのポリペプチドは、互い（機能的ポリペプチド単位１）に隣接しているが、他方の組のポリペプチド（機能的ポリペプチド単位２）とは隣接していない。いくつかの態様では、ＳＩＲのＴ細胞受容体定常鎖（または領域）は、ヒトＴ細胞受容体−アルファ（ＴＣＲ−アルファまたはＴＣＲαまたはＴＣＲａまたはｈＴＣＲ−アルファまたはｈＴＣＲαまたはｈＴＣＲａまたはＣα）、ヒトＴ細胞受容体−ベータ１（ＴＣＲ−ベータ１またはＴＣＲβ１またはＴＣＲｂ１またはｈＴＣＲ−ベータ１またはｈＴＣＲβ１またはｈＴＣＲｂ１またはＣβ１）、ヒトＴ細胞受容体−ベータ２（ＴＣＲ−ベータ２またはＴＣＲβ２またはＴＣＲｂ２またはｈＴＣＲ−ベータ２またはｈＴＣＲβ２またはｈＴＣＲｂ２またはＣβ２、ＴＣＲ−ベータ、ＴＣＲβまたはＴＣＲｂまたはＣβとも指定される）、ヒトプレＴ細胞受容体アルファ（（プレＴＣＲ−アルファまたはプレＴＣＲαまたはプレＴＣＲａまたはプレＣα）、ヒトＴ細胞受容体−ガンマ（ＴＣＲ−ガンマまたはＴＣＲγまたはＴＣＲｇまたはｈＴＣＲ−ガンマまたはｈＴＣＲγまたはｈＴＣＲｇまたはｈＴＣＲγ１またはｈＴＣＲガンマ１、またはＣγ）、またはヒトＴ細胞受容体−デルタ（ＴＣＲ−デルタまたはＴＣＲｄまたはＴＣＲδまたはｈＴＣＲ−デルタまたはｈＴＣＲｄまたはｈＴＣＲδまたはＣδ）の定常鎖から選択される。いくつかの実施形態では、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖は、それらの野生型ヌクレオチド配列によってコードされ、他の態様では、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖は、野生型ではないヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖は、それらのコドン最適化配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖は、野生型ポリペプチド配列をコードし、他の実施形態では、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖は、１つ以上の突然変異を持つポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖は、１つ以上の突然変異を持つそれらのコドン最適化配列によってコードされる。本明細書に記載のもの等の特異的腫瘍マーカー「Ｘ」を標的とする抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖまたはｖＨＨ）を含むＳＩＲは、Ｘ−ＳＩＲまたはＸＳＩＲとも称される。例えば、ＣＤ１９を標的とする抗原結合ドメインを含むＳＩＲは、ＣＤ１９−ＳＩＲまたはＣＤ１９ＳＩＲと称される。ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖／ドメインは、ＳＩＲが最終的に使用されるであろう同じ種に由来し得る。例えば、ヒトに使用する場合、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖がヒトＴＣＲ定常鎖に由来するか、またはそれから成ることが有益であり得る。しかしながら、ある場合には、ＴＣＲ定常鎖が、ＳＩＲが最終的に使用されるであろう同じ種に由来するが、ＴＣＲ定常鎖の発現を増強するアミノ酸置換を持つように修飾されることが有益である。例えば、ヒトに使用する場合、ＳＩＲのＴＣＲ定常鎖がヒトＴＣＲ定常鎖に由来するか、またはそれから成るが、そこである特定のアミノ酸がマウスＴＣＲ定常鎖由来の対応するアミノ酸に置き換えられることが有益であり得る。かかるマウス化ＴＣＲ定常鎖は、ＳＩＲの増加した発現を提供する。ＳＩＲまたはその機能的部分は、アミノ末端もしくはカルボキシ末端に、または両方の末端に追加のアミノ酸を含み得、この追加のアミノ酸は、ＳＩＲを構成するＴＣＲまたは抗原結合ドメインのアミノ酸配列には見られない。望ましくは、この追加のアミノ酸は、ＳＩＲまたは機能的部分の生物学的機能、例えば、標的細胞の認識、がんの検出、がんの治療または予防等を妨害しない。より望ましくは、この追加のアミノ酸は、親ＳＩＲの生物学的活性と比較して、生物学的活性を増強する。例示的なＳＩＲの核酸およびアミノ酸配列は、配列番号３８７８〜３８７９および表１０〜１１に提供される。
【０１３５】
「刺激」という用語は、刺激分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）のその同族リガンド（または標的抗原）への結合によって誘導され、それにより、ＴＣＲ／ＣＤ３を介したシグナル伝達等であるが、これに限定されないシグナル伝達事象を媒介する一次応答を指す。刺激は、ある特定の分子の改変された発現を媒介し得る。
【０１３６】
「刺激分子」という用語は、免疫細胞シグナル伝達経路の少なくともいくつかの態様について免疫細胞の活性化を刺激的に調節する細胞質シグナル伝達配列（複数可）を提供する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞）によって発現される分子を指す。一態様では、シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体のペプチドを装填したＭＨＣ分子への結合によって開始され、増殖、活性化、分化等を含むが、これらに限定されないＴ細胞応答の媒介をもたらす一次シグナルである。刺激的に作用する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも称される）は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして既知のシグナル伝達モチーフを含み得る。ＩＴＡＭを含む細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＣＤ３ゼータ、一般的なＦｅＲガンマ（ＦＣＥＲＩＧ）、ＦｅガンマＲＩＩａ、ＦｅＲベータ（ＦｅイプシロンＲｉｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰＩＯ、およびＤＡＰ１２に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３７】
「対象」という用語は、免疫応答が誘発され得る生きた生物（例えば、いずれの家畜哺乳動物またはヒト）を含むよう意図されている。
【０１３８】
本明細書で使用される「スイッチドメイン」または「二量体化ドメイン」とは、典型的には、二量体化分子の存在下で別のスイッチドメインと会合するポリペプチドベースの実体を指す。この会合により、第１のスイッチドメインに連結された、例えば、融合した第１の実体と、第２のスイッチドメインに連結された、例えば、融合した第２の実体との機能的カップリングがもたらされる。第１のスイッチドメインおよび第２のスイッチドメインは、集合的に二量体化スイッチと称される。実施形態では、第１のスイッチドメインおよび第２のスイッチドメインは、互いに同じであり、例えば、それらは、同じ一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、集合的にホモ二量体化スイッチと称される。実施形態では、このスイッチは、細胞内にある。実施形態では、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えば、ＦＫＢＰ（ＦＫ５０６結合タンパク質）であり、二量体化分子は、小分子、例えば、ＡＰ２０１８７である。
【０１３９】
「Ｔ細胞」および「Ｔリンパ球」という用語は同義であり、本明細書で同義に使用される。例としては、ナイーブＴ細胞（「リンパ球前駆体」）、中心メモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、幹メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、ｉＰＳＣ由来のＴ細胞、合成Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４０】
「ＴＣＲ関連シグナル伝達モジュール」という用語は、ＴＣＲ−ＣＤ３複合体の一部である細胞質免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有する分子を指す。ＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールには、ＣＤγε、ＣＤδε、およびＣＤ３ζζが含まれる。
【０１４１】
本明細書で使用される「治療薬」とは、例えば、疾患を治療する、抑制する、予防する、その影響を軽減する、その重症度を低下させる、その発症の可能性を低減する、その進行を緩徐化する、および／または治癒するために使用される薬剤を指す。治療薬によって標的とされる疾患には、感染性疾患、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、胚細胞腫瘍、芽細胞腫、様々な免疫細胞に発現する抗原、ならびに様々な血液疾患および／または炎症性疾患に関連する細胞に発現する抗原が含まれるが、これらに限定されない。
【０１４２】
本明細書で使用される「治療制御体（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｃｏｎｔｒｏｌ）」とは、ＣＡＲ発現細胞の活性を制御するために使用される要素を指す。いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ発現細胞の活性を制御するための治療制御体は、切断型上皮成長因子受容体（ｔＥＧＦＲ）、切断型上皮成長因子受容体ｖｉｉｉ（ｔＥＧＦＲｖｉｉｉ）、切断型ＣＤ３０（ｔＣＤ３０）、切断型ＢＣＭＡ（ｔＢＣＭＡ）、切断型ＣＤ１９（ｔＣＤ１９）、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ニトロレダクターゼ、キサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、ヒトカスパーゼ８、ヒトカスパーゼ９、誘導的カスパーゼ９、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、リナマラーゼ／リナマリン／グルコースオキシダーゼ、デオキシリボヌクレオシドキナーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）／インドール−３−酢酸（ＩＡＡ）、ガンマ−グルタミルシステインシンテターゼ、ＣＤ２０／アルファＣＤ２０、ＣＤ３４／チミジンキナーゼキメラ、ｄｏｘ−依存性カスパーゼ−２、突然変異体チミジンキナーゼ（ＨＳＶ−ＴＫＳＲ３９）、ＡＰ１９０３／Ｆａｓ系、キメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）、選択マーカー、およびそれらの組み合わせのうちのいずれか１つ以上を含む。
【０１４３】
「治療効果」という用語は、例えば、腫瘍体積の減少、がん細胞数の減少、転移数の減少、平均寿命の延長、がん細胞増殖の低減、がん細胞生存の低減、感染病原体の力価の減少、感染病原体のコロニー計数の減少、疾患状態に関連する様々な生理学的症状の改善を含むが、これらに限定されない、様々な手段によって現れ得る生物学的効果を指す。「治療効果」は、最初の段階での疾患の発症の予防または疾患の再発の予防におけるペプチド、ポリヌクレオチド、細胞、および抗体の能力によっても現れ得る。
【０１４４】
本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、疾患または障害の少なくとも１つ以上の症状を軽減するための本明細書に開示される１つ以上のペプチド、またはその突然変異体、バリアント、類似体、もしくは誘導体を含む薬学的組成物の量を指し、所望の効果を提供するのに十分な薬理学的組成物の量に関連する。本明細書で使用される「治療有効量」という語句は、いずれの医学的治療にも適用される合理的なリスク対効果比での障害を治療するのに十分な組成物の量を意味する。
【０１４５】
症状の治療的または予防的に有意な軽減は、対照もしくは未処理対象または本明細書に記載のオリゴペプチドの投与前の対象の状態と比較して、例えば、測定されたパラメータの少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１２５％、少なくとも約１５０％、またはそれ以上である。測定されたパラメータまたは測定可能なパラメータには、疾患の臨床的に検出可能なマーカー、例えば、生物学的マーカーの上昇または低下したレベル、ならびに糖尿病の臨床的に許容される規模の症状またはマーカーに関連したパラメータが含まれる。しかしながら、本明細書に開示される組成物および製剤の１日当たりの総使用量が正しい医学的判断の範囲内で主治医によって決定されるであろうことが理解されよう。必要とされる正確な量は、対象の治療される疾患の種類、性別、年齢、および体重等の要因に応じて変化するであろう。
【０１４６】
「ＴＣＲ受容体融合タンパク質またはＴＦＰ」という用語は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／１８７３４９  Ａ１に記載の次世代ＣＡＲプラットフォームを指す。ある実施形態では、ＴＦＰは、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、またはＴＣＲβ等のＴＣＲ鎖に融合した標的抗原に特異的に結合する抗体部分を含む。ＴＦＰの構築に使用され得る例示的なＴＣＲ鎖は、配列番号９４４〜９４５、９４８、９４９〜９５０、および９５８によって表され、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０７０６０８  Ａ１に提供されている。ＣＤ３ε鎖を組み込むＴＦＰは、ＣＤ３ε  ＴＦＰと称される。ＣＤ３γ鎖を組み込むＴＦＰは、ＣＤ３γ  ＴＦＰと称される。ＣＤ３δ鎖を組み込むＴＦＰは、ＣＤ３δ  ＴＦＰと称される。ＣＤ３ε鎖、ＣＤ３γ鎖、またはＣＤ３δ鎖を組み込むＴＦＰは、集合的にＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰと称される。本開示に記載の異なる抗原結合ドメイン（例えば、ｖＬおよびｖＨ断片、リガンド、受容体等）を組み込み、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをコードするアクセサリーモジュールを共発現する例示的なＴＦＰは、配列番号１９００〜３１２３（表１３）に提供される。これらのＴＦＰの配列番号、抗原結合ドメイン、および標的抗原は、これらのＴＦＰ構築物が、表１２に示されるＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａを共発現する第一世代ＣＡＲ構築物と同一の抗原結合ドメインを有し、同一の順序で番号付けされているため、表１２を参照することによって決定され得る。しかしながら、このＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをコードするアクセサリーモジュールは、任意である。本開示に記載の抗原結合ドメイン（すなわち、ｖＬおよびｖＨ断片、リガンド、および受容体等）を有するＴＦＰは、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａなしで構築され得る。したがって、このアクセサリーモジュールは、上流フーリン−ＳＧＳＧ−Ｆ２Ａ配列とともに、配列番号１９００〜３１２３によって表されるＴＦＰから欠失し得る。あるいは、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａをコードするアクセサリーモジュールは、他のシグナル伝達タンパク質、例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ５５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、またはＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ならびにＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＦＫＢＰｘ２−ＮＥＭＯ、ＮＥＭＯ−Ｌ６００−ＦＫＢＰｘ２、およびＣＭＶ−１４１等をコードするアクセサリーモジュールに置き換えられ得る。
【０１４７】
「導入ベクター」という用語は、単離された核酸を含み、その単離された核酸を細胞の内部に送達するために使用され得る物質の組成物を指す。直鎖状ポリヌクレオチド、イオン性または両親媒性化合物と会合したポリヌクレオチド、プラスミド、およびウイルスを含むが、これらに限定されない多数のベクターが当該技術分野で既知である。したがって、「導入ベクター」という用語は、自律的に複製するプラスミドまたはウイルスを含む。この用語は、例えば、ポリリジン化合物およびリポソーム等の核酸の細胞への導入を容易にする非プラスミドおよび非ウイルス化合物をさらに含むとも解釈されるべきである。ウイルス導入ベクターの例としては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４８】
本明細書で使用される「膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）」とは、形質膜を横断するＣＡＲの領域を指す。本発明のＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜貫通タンパク質（例えば、Ｉ型膜貫通タンパク質）、人工的疎水性配列、またはそれらの組み合わせの膜貫通領域である。他の膜貫通ドメインは当業者には明らかであり、本発明の代替実施形態に関連して使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の骨格のうちのいずれかを含むＴＭＤをコードするＣＡＲは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、またはゼータ鎖、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤｌ  ｌａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒ  ａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、および／またはＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを含む。
【０１４９】
本明細書で使用される場合、「三官能性Ｔ細胞抗原カップラーまたはＴｒｉ−ＴＡＣ」とは、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／１１７２２９  Ａ１に記載の次世代ＣＡＲプラットフォームを指す。異なる抗原を標的とするＴｒｉ−ＴＡＣは、当該技術分野で既知の技法を使用して、本開示に記載の抗原結合ドメイン（例えば、ｖＬおよびｖＨ断片、ｓｃＦｖ、ｖＨＨ、リガンド、ならびに受容体等）を使用して構築され得る。さらに、本開示に記載の異なるアクセサリーモジュール（例えば、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ等）は、Ｔｒｉ−ＴＡＣを発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞に発現され得る。
【０１５０】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」、「治療すること」、または「改善」という用語は、治療的治療を指し、疾患または障害を逆転させる、緩和する、改善する、抑制する、それに関連する状態の進行または重症度を緩徐化または停止させることが目的である。「治療すること」という用語は、状態、疾患、または障害、例えば、がんの少なくとも１つの有害作用または症状を軽減または緩和することを含む。治療は、一般に、１つ以上の症状または臨床的マーカーが軽減／低減された場合に「有効」である。あるいは、治療は、疾患の進行が軽減または停止された場合に「有効」である。すなわち、「治療」は、症状またはマーカーの改善のみならず、治療の不在下で予想されるであろう症状の進行または悪化の停止または少なくとも緩徐化も含む。有益または所望の臨床結果には、検出可能であるか検出不能であるかにかかわらず、１つ以上の症状の緩和、疾患の程度の減退、疾患の安定した（すなわち、悪化していない）状態、疾患進行の遅延または緩徐化、疾患状態の改善または緩和、および寛解（部分的であるか全体であるかにかかわらず）が含まれるが、これらに限定されない。疾患の「治療」という用語は、疾患の症状または副作用の緩和を提供することも含む（姑息的治療を含む）。いくつかの実施形態では、がんの治療は、腫瘍体積の減少、がん細胞数の減少、がん転移の抑制、平均寿命の延長、がん細胞増殖の低減、がん細胞生存の低減、または癌性状態に関連する様々な生理学的症状の改善を含む。
【０１５１】
本明細書で使用される「腫瘍」とは、悪性であるか良性であるかにかかわらず全ての新生細胞成長および増殖、ならびに全ての前癌性および癌性細胞および組織を指す。
【０１５２】
本明細書で使用される「ベクター」、「クローニングベクター」、および「発現ベクター」とは、ポリヌクレオチド配列（例えば、外来遺伝子）が宿主細胞に導入されて、それにより、宿主を形質転換し、導入された配列の発現（例えば、転写および翻訳）を促進するようになり得るビヒクルを指す。ベクターには、プラスミド、ファージ、ウイルス等が含まれる。
【０１５３】
「ゼータ」またはあるいは「ゼータ鎖」、「ＣＤ３−ゼータ」または「ＴＣＲ−ゼータ」という用語は、ＧｅｎＢａｎ  Ａｃｅとして提供されるタンパク質と定義される。非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、類人猿等由来のＢＡＧ３６６６４．１または等価残基、および「ゼータ刺激ドメイン」またはあるいは「ＣＤ３−ゼータ刺激ドメイン」または「ＴＣＲ−ゼータ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分なゼータ鎖の細胞質ドメイン由来のアミノ酸残基またはその機能的誘導体と定義される。一態様では、ゼータの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｅの残基５２〜１６４を含む。非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、類人猿等由来のＢＡＧ３６６６４．１または等価残基は、その機能的オルソログである。一態様では、「ゼータ刺激ドメイン」または「ＣＤ３−ゼータ刺激ドメイン」は、配列番号４８５３として提供される配列である（表６Ｄ）。
【０１５４】
ＣＡＲの結合ドメインは、所望のエピトープに結合するように選択される。例えば、ＣＡＲによって認識されるエピトープは、ＣＡＲを含むｓｃＦｖによって認識されるエピトープからも決定され得る。例えば、ＭＰＬを標的とするＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（配列番号１５０９および配列番号５４２２）の抗原特異的ドメインが、ｓｃＦｖ  ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）（配列番号８０８および配列番号４７２１）から成るため、ＣＡＲがｓｃＦｖおよびｓｃＦｖが由来する親抗体と同じエピトープを標的とするであろうことが予想される。ｓｃＦｖ  ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）（配列番号８０８および配列番号４７２１）によって認識されるエピトープは、配列番号１５１６０に提供される。本開示のＣＡＲおよび骨格の構築に使用されるいくつかのｓｃＦｖおよび／またはそれらの親抗体によって認識されるエピトープは、当該技術分野で既知である。あるいは、ＣＡＲ（骨格の一部として存在するＣＡＲを含む）によって標的とされるエピトープは、その標的抗原の一連の突然変異体を生成し、ＣＡＲ発現細胞に結合するそれらの突然変異体の能力を試験することによって決定され得る。一例として、ＭＰＬを標的とするＣＡＲ  ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣによって認識されるエピトープは、ＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−Ｎｌｕｃ−ＡｃＶ５融合構築物（ＤＮＡ配列番号１０１５およびＰＲＴ配列番号４９２８）の突然変異体のパネルを生成することによって決定され得る。突然変異体構築物は、好適な細胞株（例えば、２９３ＦＴ細胞）にトランスフェクトされ、融合タンパク質を含む上清が収集され、ＮＬｕｃ活性についてアッセイされて、異なる突然変異体ＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−Ｎｌｕｃ−ＡｃＶ５融合タンパク質が上清中に分泌されていることを確実にするであろう。その後、融合タンパク質は、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ  ＣＡＲ構築物を発現する細胞（例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞またはＴ細胞）に結合するそれらの能力について試験されるであろう。ＣＡＲ発現細胞に結合することができない突然変異体は、ＭＰＬ特異的ＣＡＲによって標的とされるエピトープを含む候補である。特定のＣＡＲによって認識されるエピトープを決定するための代替アプローチには、異なる試験抗体を用いた機能的競合アッセイが含まれ得る。例えば、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ  ＣＡＲを発現するＴ細胞は、異なる試験ＭＰＬ抗体の増加濃度の不在下および存在下でＭＰＬを発現する細胞株（例えば、ＨＥＬ細胞）と共培養され得る。試験ＭＰＬ抗体によって認識されるエピトープがＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ  ＣＡＲによって認識されるエピトープと重複する場合、この試験抗体が、用量依存的様式で、ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−１６１−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ  ＣＡＲを発現するＴ細胞によって誘導される標的細胞死滅およびサイトカイン産生を阻止することが予想されるであろう。試験抗体と同じ��イソタイプの非特異的抗体は、対照として含まれ、ＣＡＲを発現するＴ細胞によって誘導される標的細胞死滅およびサイトカイン産生に影響を及ぼさないことが予想されるであろう。同様に、特異的ＣＡＲがＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ細胞に発現され得、標的細胞株との共培養時にＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ細胞によるＥＧＦＰ誘導を阻止する試験抗体の能力を使用して、試験抗体によって認識されるエピトープがそのＣＡＲによって認識されるエピトープと重複するかを決定することができる。
【０１５５】
天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲと、アクセサリーモジュール（ＮＦ−κＢ刺激分子および選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含む）とを含む組成物、およびがんを含む疾患を治療するためのその組成物の使用法も本明細書に提供される。本明細書に記載されるように、従来のＣＡＲ（表１）および表２に記載のアクセサリーモジュールの特定の組み合わせが提供される。
【０１５６】
表１：従来のＣＡＲアーキテクチャ第一世代の従来のＣＡＲ（従来のＣＡＲ  Ｉ）は、細胞内シグナル伝達（ＩＳＤ）ドメイン（例えば、ＣＤ３ｚ）を有し、共刺激ドメインを有しない。ＴＣＲ融合タンパク質（ＴＦＰ）は、従来のＣＡＲ  １の別の例である。第二世代の従来のＣＡＲ（従来のＣＡＲ  ２またはＣＡＲ  ＩＩ）は、１つの共刺激ドメイン（例えば、４１ＢＢまたはＣＤ２８）および細胞内シグナル伝達（ＩＳＤ）ドメイン（例えば、ＣＤ３ｚ）を有する。第三世代の従来のＣＡＲ（従来のＣＡＲ  ３またはＣＡＲ  ＩＩＩ）は、２つの共刺激ドメイン（例えば、４１ＢＢおよびＣＤ２８）および細胞内シグナル伝達（ＩＳＤ）ドメイン（例えば、ＣＤ３ｚ）を有する。Ａｂ−ＴＣＲは、二本鎖受容体であり、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５８３０５に記載されている。ｃＴＣＲは、１つ以上のＴＣＲ定常鎖に融合しており、かつＴ細胞シグナル伝達の活性化をもたらす、ｖＬおよびｖＨ断片に由来する抗原結合ドメインからなる一本鎖、一本半鎖（ｏｎｅ−ａｎｄ−ｈａｌｆ）、または二本鎖受容体である。合成免疫受容体は、次世代ＣＡＲであり、ＵＳ６２／４２９，５９７およびＷＯ２０１８／１０２７９５  Ａ１に記載されている。
【表３】
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【表４−１】
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【表４−２】
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【表５−１】
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【表５−２】
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【表５−３】
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【表５−４】
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【表５−５】
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【表５−６】
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【表５−７】
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【表５−８】
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【表５−９】
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【表５−１０】
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【表５−１１】
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【表５−１２】
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【表５−１３】
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【表６−１】
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【表６−２】
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【表６−３】
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【表６−４】
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【表６−５】
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【表６−６】
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【表６−７】
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【表６−８】
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【表６−９】
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【表６−１０】
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【表６−１１】
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【表６−１２】
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【表７−１】
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【表７−２】
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【表７−３】
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【表７−４】
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【表７−５】
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【表７−６】
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【表７−７】
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【表７−８】
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【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【表１１−１】
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【表１１−２】
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【表１１−３】
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【表１１−４】
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【表１２−１】
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【表１２−２】
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【表１２−３】
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【表１２−４】
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【０１５７】
略語、１ｓｔ  Ｇｅｎ  ＣＡＲ：第一世代ＣＡＲ、２ｎｄ  Ｇｅｎ  ＣＡＲ：第二世代ＣＡＲ、ＤＣ  ＳＩＲ：二本鎖ＳＩＲ、ＯＨＣ  ＳＩＲ：一本半鎖ＳＩＲ。
【０１５８】
上記の表１０の例示的な構築物中のアクセサリーモジュールは任意選択的であり、欠失していても他のアクセサリーモジュールに置き換えられてもよい。
【表１３−１】
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【表１３−２】
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【表１４−１】
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【表１４−２】
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【表１４−３】
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【表１４−４】
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【表１４−５】
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【表１４−６】
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【表１４−７】
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【表１４−８】
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【表１４−９】
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【表１４−１０】
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【表１４−１１】
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【表１４−１２】
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【表１４−１３】
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【表１４−１４】
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【表１４−１５】
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【表１４−１６】
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【表１４−１７】
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【表１５】
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【表１６−１】
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【表１６−２】
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【表１６−３】
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【表１６−４】
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【表１６−５】
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【表１６−６】
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【表１６−７】
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【表１６−８】
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【表１６−９】
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【表１６−１０】
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【表１６−１１】
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【表１６−１２】
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【表１６−１３】
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【表１６−１４】
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【表１６−１５】
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【表１６−１６】
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【表１６−１７】
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【表１６−１８】
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【表１６−１９】
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【０１５９】
いくつかの実施形態では、本組成物は、従来のＣＡＲ１〜６（表１）をコードする核酸を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表６Ａ〜Ｃまたは参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載の１つ以上の特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、本組成物は、骨格１〜７２（表２）のうちのいずれか１つ以上をコードする核酸を含み、コードされたＣＡＲの抗原特異的ドメインは、表６Ａ〜ＣまたはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載の１つ以上の特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、本組成物は、骨格−１をコードする核酸を含み、骨格−１におけるＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表６Ａ〜ＣまたはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載の１つ以上のがん特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、本組成物は、骨格−１をコードする核酸を含み、骨格−２におけるＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表６Ａ〜ＣまたはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載の１つ以上のがん特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、本組成物は、骨格−１をコードする核酸を含み、骨格−３７におけるＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表６Ａ〜ＣまたはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載の１つ以上のがん特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、本組成物は、骨格−１をコードする核酸を含み、骨格−３８におけるＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表６Ａ〜ＣまたはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載の１つ以上のがん特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、本組成物は、骨格−１をコードする核酸を含み、骨格−４９におけるＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表６Ａ〜ＣまたはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載の１つ以上のがん特異的抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、本組成物は、骨格−１をコードする核酸を含み、骨格−５０におけるＣＡＲの抗原特異的ドメインは、本明細書の表６Ａ〜ＣまたはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載の１つ以上のがん特異的抗原を標的とする。
【０１６０】
様々な実施形態では、本明細書に記載の骨格の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）の成分をコードする単離された核酸分子は、１、２、３つ、またはそれ以上の抗原特異的ドメインをコードする。例えば、本明細書に記載のがん関連抗原に特異的に結合する１つ以上のＡＳＤが使用され得る。ＡＳＤの配列は、ＣＡＲの１つ以上の鎖の残りをコードする核酸配列と隣接しており、それと同じリーディングフレーム内にある。
【０１６１】
一実施形態では、ＶＨドメインが単独で抗原特異性を付与するのに十分である場合（「単一ドメイン抗体」）、抗原特異的領域は各々、ＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメイン、ならびにＣＨ２およびＣＨ３（Ｆｃ）Ｉｇドメインを有する全長ＩｇＧ重鎖（標的抗原に特異的）を含む。全長ＩｇＧ重鎖は、適切な膜貫通ドメインを介して共刺激ドメインおよび任意選択的な細胞内シグナル伝達ドメインに連結され得る。ＶＨドメインおよびＶＬドメインの両方が完全に活性な抗原特異的標的領域を生成するのに必要である場合、ＶＨを含む天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）も全長ラムダ軽鎖（ＩｇＬ）もいずれも細胞に導入されて、活性な抗原特異的標的領域を生成する。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、コードされた天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）の分子の抗原特異的ドメインは、抗体、抗体断片、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ａ（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ｖＨもしくはｖＬドメイン、またはラクダ類ｖＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）の抗原結合ドメインは、由来するｓｃＦｖのマウス配列と比較してヒト化されているｓｃＦｖ抗体断片である。
【０１６３】
ある場合には、ｓｃＦｖは、当該技術分野で既知の方法に従って調製され得る（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３）。ＳｃＦｖ分子は、可動性ポリペプチドリンカーを使用してＶＨ領域とＶＬ領域を一緒に連結することによって産生され得る。ｓｃＦｖ分子は、最適化された長さおよび／またはアミノ酸組成（例えば、折り畳みを最適化するため等）を有するリンカー（例えば、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー）を含む。ｓｃＦｖは、そのＶＬ領域とＶＨ領域との間に少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０個、またはそれ以上のアミノ酸残基のリンカーを含み得る。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、アミノ酸グリシンおよびセリンを含む。別の実施形態では、リンカー配列は、グリシンおよびセリン反復セットを含む。リンカーの長さの変化により、活性が保持または増強され得、活性研究において優れた有効性をもたらす。いくつかの実施形態では、抗原特異的ｓｃＦｖ抗体断片は、由来するＩｇＧ抗体と同じまたは同等の親和性で同じ抗原に結合するという点で機能的である。他の実施形態では、抗体断片は、それが由来する抗体と比較してより低い抗原に対する結合親和性を有するが、本明細書に記載の生物学的応答を提供するという点で機能的である。一実施形態では、ＣＡＲ分子は、１０−４Ｍ〜１０−８Ｍ、１０−５Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−６Ｍ、または１０−８Ｍの標的抗原に対する結合親和性ＫＤを有する抗体断片を含む。
【０１６４】
一実施形態では、抗原特異的ドメインは、本明細書に列記される抗体またはｓｃＦｖの１つ、２つ、または３つ全ての重鎖（ｈｃ）ＣＤＲ、ｈｃＣＤＲ１、ｈｃＣＤＲ２、およびｈｃＣＤＲ３（表６Ｂ、配列番号１４１２２〜１５０３９）、および／または本明細書に列記される抗体またはｓｃＦｖの１つ、２つ、または３つ全ての軽鎖（ｌｃ）ＣＤＲ、ｌｃＣＤＲ１、ｌｃＣＤＲ２、およびｌｃＣＤＲ３（表６Ａ、配列番号１３２０４〜１４１２１）を含む（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６も参照のこと）。いくつかの実施形態では、ＡＳＤは、特異的ｓｃＦｖに属する３つ全ての軽鎖ＣＤＲを含むＶＬ（またはｖＬ）断片（表６Ａ、配列番号１３２０４〜１４１２１）、または特異的ｓｃＦｖに属する３つ全ての重鎖ＣＤＲを含むＶＨ（またはｖＨ）断片（表６Ｂ、配列番号１４１２２〜１５０３９）を含む（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６も参照のこと）。表６Ｃは、異なるｓｃＦｖの名称、標的抗原、および配列番号を提供し、そのｖＬ断片およびｖＬ断片ならびにＣＤＲが表６Ａおよび表６Ｂに列記される。ｖＬ断片およびｖＨ断片ならびに対応するｓｃＦｖを本開示の様々な実施形態で使用して、本明細書に記載のＣＡＲを構築することができる。
【０１６５】
別の実施形態では、抗原特異的ドメインは、ヒト化抗体または抗体断片を含む。いくつかの態様では、非ヒト抗体は、ヒト化されており、その抗体の特定の配列または領域が、ヒトにおいて天然に産生される抗体またはその断片との類似性を高めるように修飾されている。一態様では、抗原結合ドメインは、ヒト化されている。ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフティング、ベニアリングまたはリサーフェシング、および鎖シャッフリングを含むが、これらに限定されない当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生され得る。
【０１６６】
さらなる実施形態では、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは各々、二価（ｄｉｖａｌｅｎｔ）（または二価（ｂｉｖａｌｅｎｔ））一本鎖可変断片（ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ）を含み得る。例えば、ｄｉ−ｓｃＦＶを含むＣＡＲでは、各抗原に特異的な２つのｓｃＦｖは、２つのＶＨ領域および２つのＶＬ領域を有する単一のペプチド鎖を産生することによって一緒に連結され、タンデムｓｃＦｖをもたらす。（Ｘｉｏｎｇ，Ｃｈｅｎｇ−Ｙｉ；Ｎａｔａｒａｊａｎ，Ａ；Ｓｈｉ，ＸＢ；Ｄｅｎａｒｄｏ，ＧＬ；Ｄｅｎａｒｄｏ，ＳＪ（２００６）．“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｎｔｉ−ＭＵＣ−１  ｍｕｌｔｉｍｅｒ：ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｄｉ−ｓｃＦｖ  ｕｎｐａｉｒｅｄ  ｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｎ  ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ”．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  １９（８）：３５９−３６７、Ｋｕｆｅｒ，Ｐｅｔｅｒ；Ｌｕｔｔｅｒｂｕｓｅ，Ｒａｌｆ；Ｂａｅｕｅｒｌｅ，Ｐａｔｒｉｃｋ  Ａ．（２００４）．“Ａ  ｒｅｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２２（５）：２３８−２４４）。少なくとも２つの抗原特異的標的領域を含むＣＡＲは、２つの抗原の各々に特異的な２つのｓｃＦｖを発現するであろう。結果として生じたＡＳＤは、ヒンジ領域および膜貫通ドメインを介して共刺激ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインに連結される。あるいは、２つの抗原特異的標的領域を含む天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲは、２つの抗原または同じ抗原の２つのエピトープの各々に特異的な２つのｖＨＨを発現するであろう。２つの抗原を標的とする例示的なＣＡＲは、配列番号１３０７および１３１０によって表される。
【０１６７】
別の実施形態では、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲのＡＳＤは各々、ダイアボディを含む。ダイアボディでは、ｓｃＦｖは、２つの可変領域が一緒に折り畳むには短すぎるリンカーペプチドを用いて作製され、ｓｃＦｖを二量体化させる。さらに短いリンカー（１つまたは２つのアミノ酸）は、三量体、いわゆるトリアボディまたはトリボディの形成をもたらす。テトラボディも使用され得る。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲのＡＳＤは、本明細書に記載のＶＨＨ断片（ナノボディ）を含む（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６を参照のこと）。いくつかの実施形態では、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲのＡＳＤは、本明細書に記載のアフィボディを含む（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６を参照のこと）。
【０１６９】
別の実施形態では、抗原特異的結合ドメインは、標的細胞に発現される同族のリガンドを含む。
【０１７０】
一実施形態では、標的抗原に対する天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、この抗原を標的とするｖＨＨ断片の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６を参照のこと）。
【０１７１】
一実施形態では、標的抗原に対する天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、この抗原を標的とする非免疫グロブリン足場の抗原結合部分である（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６を参照のこと）。
【０１７２】
一実施形態では、標的抗原に対する天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、この標的抗原に結合することで知られている受容体の抗原結合部分である（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６を参照のこと）。
【０１７３】
別の態様では、抗原結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）、またはその断片、例えば、一本鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）である。かかるＴＣＲを作製するための方法は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ  ＲＡ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ７：１３６９−１３７７（２０００）、Ｚｈａｎｇ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １１：４８７−４９６（２００４）、Ａｇｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１９（４）：３６５−７４（２０１２）（これらの参考文献は、全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。例えば、リンカー（例えば、可動性ペプチド）によって連結されたＴ細胞クローン由来のＶα遺伝子およびνβ遺伝子を含むｓｃＴＣＲが操作され得る。このアプローチは、細胞内にあるがん関連標的に非常に有用であるが、かかる抗原の断片（ペプチド）は、ＭＨＣによってがん細胞の表面に提示される。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、抗原特異的ドメインは、標的抗原に特異的なＴ細胞受容体またはＴ細胞受容体の断片であり、この断片は、標的抗原に対する特異性を保持する。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＭＨＣ提示ペプチドに結合する。通常、内在性タンパク質に由来するペプチドは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子のポケットを満たし、ＣＤ８＋Ｔリンパ球上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）によって認識される。ＭＨＣクラスＩ複合体は、全ての有核細胞によって構成的に発現される。がんにおいて、ウイルス特異的および／または腫瘍特異的ペプチド／ＭＨＣ複合体は、免疫療法のための細胞表面標的の特有のクラスを表す。ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−Ａ１またはＨＬＡ−Ａ２との関連でウイルス抗原または腫瘍抗原に由来するペプチドを標的とするＴＣＲ様抗体について説明されている（例えば、Ｓａｓｔｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒａｌ．２０１１  ８５（５）：１９３５−１９４２、Ｓｅｒｇｅｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１１１７（１６）：４２６２−４２７２、Ｖｅｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｌｍｍｕｎｏｌ２０１０  １８４（４）：２１５６−２１６５、Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ２００１８（２１）：１６０１−１６０８、Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１３  ５（１７６）：１７６ｒａ３３、Ｔａｓｓｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２０１２  １９（２）：８４−１００を参照のこと）。例えば、ＴＣＲ様抗体は、ヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリ等のライブラリをスクリーニングすることによって特定され得る。ＨＬＡ−Ａ２と関連してＷＴ１を標的とするＴＣＲ様抗体に基づく例示的なＣＡＲは、配列番号１２６６〜配列番号１２６８によって表される。本発明では、ＣＡＲは、いくつかのＨＬＡ−Ａ２制限細胞内ペプチドに対するＴＣＲ様抗体に由来する抗原結合ドメインを使用して生成された。ペプチドの標的タンパク質抗原、ペプチド断片、および配列は、表８に示される。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、単独でまたは本明細書に記載のアクセサリーモジュールと発現された場合、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲによって標的とされ得る疾患に特異的な抗原には、ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＭＰＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）または（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；急性白血病またはリンパ腫に発現するが、造血前駆細胞には発現しないグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血癌に発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ−ｌｌＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＴｅｓｔｉｓｉｎまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）；段階特異的胚抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ（ＦＲａまたはＦＲ１）；葉酸受容体ベータ（ＦＲｂ）；受容体チロシン−タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１（細胞表面結合型）（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニットベータ型９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐｌ００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）およびＡｂｅｌｓｏｎマウス白血病ウイルス癌遺伝子相同体１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；ク��ーディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨ糖セラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（染色体１２ｐに位置）（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバーｌＡ（ＸＡＧＥｌ）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビン；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴ  Ａ−１またはガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来相同体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ相同体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  ｌＢ  １（ＣＹＰｌＢ  １）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはインプリント部位の調節因子の同胞）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳｌ）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓ユビキタス１（ＲＵ１）；腎臓ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒト乳頭腫ウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ヒト乳頭腫ウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲｌ）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；���血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ−ＭＹＣエピトープタグ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１  ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）；フコシル−ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１−ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ−ＩＧＬｌ１、ＴＣＲガンマ−デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、Ｔｎ  ａｇ、Ｔｉｍ１−／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ−ＣＳＦＲ−アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、Ｌｅｗｓ  Ａｇ、ＴＣＲ−ベータ１鎖、ＴＣＲ−ベータ２鎖、ＴＣＲ−ガンマ鎖、ＴＣＲ−デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲまたはＧＲ）、ＣＣＲ４、ＧＤ３、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、ＫＳＨＶ  Ｋ８．１、ＫＳＨＶ−ｇＨ、Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニリルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、デスモグレイン３に対する自己抗体（Ｄｓｇ３）、デスモグレイン１に対する自己抗体（Ｄｓｇ１）、ＨＬＡ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｇ、ＩｇＥ、ＣＤ９９、Ｒａｓ  Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤ１８Ａ２またはＣＬＤＮ１８Ａ．２）、Ｐ−糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、Ｌｉｖ１、ネクチン−４、クリプト、ｇｐＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原、またはそれらの組み合わせのうちのいずれか１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、単独でまたは本明細書に記載のアクセサリーモジュールと発現された場合、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲによって標的とされ得る疾患に特異的な抗原には、４−１ＢＢ、５Ｔ４、腺癌抗原、アルファ−フェトプロテイン、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ−１２５、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＣＲ４、ＣＤ１５２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤ２２１、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４４  ｖ６、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＥＡ、ＣＮＴＯ８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３、ＦＡＰ、フィブロネクチン細胞外ドメイン−Ｂ、葉酸受容体１、ＧＤ２、ＧＤ３ガングリオシド、糖タンパク質７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ヒト散乱因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧ１、Ｌ１−ＣＡＭ、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ３、ＬＡＭＰ１、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  α、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺癌細胞、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ＴＡＧ−７２、テネイシンＣ、ＴＧＦベータ２、ＴＧＦ−β、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、またはそれらの組み合わせのうちのいずれか１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。がんに特異的な他の抗原は当業者には明らかであり、本開示の代替実施形態に関連して使用され得る。
【０１７８】
ＣＡＲは、単独でまたは本明細書に記載のアクセサリーモジュールと使用される場合、疾患支持抗原（例えば、本明細書に記載の疾患支持抗原）に結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体または抗体断片）を含み得る。いくつかの実施形態では、疾患支持抗原は、病原細胞の生存および増殖を支持する細胞に存在する抗原である。いくつかの実施形態では、疾患支持抗原は、間質細胞または骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）に存在する抗原である。間質細胞は、成長因子およびサイトカインを分泌して、微環境下で細胞増殖を促進することができる。ＭＤＳＣ細胞は、Ｔ細胞増殖および活性化を阻止することができる。理論によって束縛されることを望むことなく、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、疾患支持細胞を破壊し、それにより、病原細胞の成長または生存を間接的に阻止する。
【０１７９】
ある特定の実施形態では、間質細胞抗原は、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、およびテネイシンのうちの１つ以上から選択される。ある実施形態では、ＦＡＰ特異的抗体は、シブロツヅマブであるか、それと結合について競合するか、またはそれと同じＣＤＲを有する。実施形態では、ＭＤＳＣ抗原は、ＣＤ３３、ＣＤｌｌｂ、Ｃ１４、ＣＤ１５、およびＣＤ６６ｂのうちの１つ以上から選択される。したがって、いくつかの実施形態では、疾患支持抗原は、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）またはテネイシン、ＣＤ３３、ＣＤｌｌｂ、Ｃ１４、ＣＤ１５、およびＣＤ６６ｂのうちの１つ以上から選択される。
【０１８０】
別の実施形態では、本開示は、本開示の天然に存在しない免疫受容体（例えば、本開示のＣＡＲのうちのいずれかと異なる標的への結合について交差競合する能力を有するＣＡＲ）のうちのいずれかとして、表６Ａ〜Ｃに記載の異なる標的上の同じエピトープに結合する天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲを提供する。いくつかの実施形態では、これらの天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、抗体のｖＬ断片、ｖＨ断片、またはｓｃＦｖ断片に由来し得る。いくつかの実施形態では、本開示の天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照抗体は、配列番号４５５５〜４８１５、１１１６５〜１１４０１、１５０７０〜１５１３２（表６Ｃ）に示される配列を有する本明細書の表６Ｃに記載のｓｃＦｖ、またはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載のｓｃＦｖである。例示的な実施形態では、配列番号４５５５によって表される参照ｓｃＦｖ  ＦＭＣ６３（ｖＬ−ｖＨ）を交差競合研究で使用して、本開示のＦＭＣ６３ベースの従来のＣＡＲおよび骨格によって認識される標的エピトープを決定することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の本開示の天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｖＨＨ断片は、配列番号４４７４〜４５１４に示される配列を有するｖＨＨ断片である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の本開示の天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究のための交差競合研究用の参照非免疫グロブリン抗原結合足場は、配列番号４５１５〜４５１９に示される配列を有する非免疫グロブリン抗原結合足場である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の本開示のＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照リガンドは、配列番号４５４４〜４５５４の配列を有するリガンドである。いくつかの実施形態では、異なる標的に対する交差競合研究用の参照ＣＡＲは、配列番号が表１０〜１４に示されるＣＡＲである。
【０１８１】
別の実施形態では、本開示のＭＰＬ標的ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照抗体は、特許出願第ＵＳ２０１２／０２６９８１４  Ａ１号に記載の抗体ｍＡｂ−１．６、ｍＡｂ−１．１１１、ｍＡｂ−１．７５、ｍＡｂ−１．７８、ｍＡｂ−１．１６９、およびｍＡｂ−１．３６である。
【０１８２】
別の実施形態では、本開示のＭＰＬ標的ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、表６Ｃの配列番号４７２０〜４７２７に示される配列を有するｓｃＦｖ、またはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載のｓｃＦｖである。
【０１８３】
別の実施形態では、本開示のＭＰＬ標的ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照リガンドは、配列番号４５４４〜４５４５に列記される配列を有するＴＰＯリガンドおよびｍＴＰＯリガンドである。
【０１８４】
別の実施形態では、本開示のＭＰＬ標的ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、配列番号５１２０〜５１２６に示される配列を有するＣＡＲである。
【０１８５】
好ましい実施形態では、本開示のＭＰＬ標的ＣＡＲは、配列番号１５１６０に示される配列に対応するエピトープに結合する。
【０１８６】
一実施形態では、本発明のＣＤ１９標的ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、配列番号４５５５〜４５６８および表６Ｃに示される配列を有するｓｃＦｖ、またはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載のｓｃＦｖである。別の実施形態では、本発明のＣＤ１９標的ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、配列番号４９２９〜４９４３に示される配列を有するＣＡＲである。
【０１８７】
一実施形態では、本発明のＣＤ２０標的ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、ＣＤ２０を標的とし、かつ表６Ｃに列記される配列番号を有するｓｃＦｖ、またはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載のｓｃＦｖである。別の実施形態では、本発明のＣＤ２０標的ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、ＣＤ２０を標的とし、かつ表１２に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０１８８】
好ましい実施形態では、本開示のＣＤ２０標的ＣＡＲは、配列番号１５１４９〜１５１５４に示される配列のうちの１つ以上に対応するエピトープに結合する。
【０１８９】
一実施形態では、本発明のＢＣＭＡ標的ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、ＣＤ２０を標的とし、かつ表６Ｃに列記される配列番号を有するｓｃＦｖ、またはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載のｓｃＦｖである。別の実施形態では、本発明のＢＣＭＡ標的ＣＡＲによって認識される標的エピトープを決定するための交差競合研究用の参照ＣＡＲは、ＢＣＭＡを標的とし、かつ表１２に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０１９０】
好ましい実施形態では、本開示のＢＣＭＡ標的ＣＡＲは、配列番号１５１５５〜１５１５９に示される配列のうちの１つ以上に対応するエピトープに結合する。
【０１９１】
一実施形態では、本発明のＤＬＬ３標的ＣＡＲに対する交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、ＤＬＬ３を標的とし、かつ表６Ｃに列記される配列番号を有するｓｃＦｖ、またはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載のｓｃＦｖである。別の実施形態では、本発明のＤＬＬ３標的ＣＡＲに対する交差競合研究用の参照ＣＡＲは、ＤＬＬ３を標的とし、かつ表１２に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０１９２】
一実施形態では、本発明のＬＡＭＰ１標的ＣＡＲに対する交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、ＬＡＭＰ１を標的とし、かつ表６Ｃに列記される配列番号を有するｓｃＦｖ、またはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載のｓｃＦｖである。別の実施形態では、本発明のＬＡＭＰ１標的ＣＡＲに対する交差競合研究用の参照ＣＡＲは、ＬＡＭＰ１を標的とし、かつ表１２に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０１９３】
一実施形態では、本発明のＴＲＯＰ２標的ＣＡＲに対する交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、ＴＲＯＰ２を標的とし、かつ表６Ｃに列記される配列番号を有するｓｃＦｖ、またはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載のｓｃＦｖである。別の実施形態では、本発明のＴＲＯＰ２標的ＣＡＲに対する交差競合研究用の参照ＣＡＲは、ＴＲＯＰ２を標的とし、かつ表１２に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０１９４】
一実施形態では、本発明のＰＴＫ７標的ＣＡＲに対する交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、ＰＴＫ７を標的とし、かつ表６Ｃに列記される配列番号を有するｓｃＦｖ、またはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載のｓｃＦｖである。別の実施形態では、本発明のＰＴＫ７標的ＣＡＲに対する交差競合研究用の参照ＣＡＲは、ＰＴＫ７を標的とし、かつ表１２に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０１９５】
一実施形態では、本発明のＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ７０、ＣＤ１３８、ＣＳ１、ＩＬ１３Ｒａ２、葉酸受容体α、葉酸受容体β、ＴＣＲＢ１、ＴＣＲＢ２、ＴＣＲγδ、ＣＤ３０、メソテリン、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、およびＨＩＶ１標的ＣＡＲに対する交差競合研究用の参照ｓｃＦｖは、これらの抗原を標的とし、かつ表６Ｃに列記される配列番号を有するｓｃＦｖ、またはＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６４３７９の表５〜６に記載のｓｃＦｖである。別の実施形態では、本発明のＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ７０、ＣＤ１３８、ＣＳ１、ＩＬ１３Ｒａ２、葉酸受容体α、葉酸受容体β、ＴＣＲＢ１、ＴＣＲＢ２、ＴＣＲγδ、ＣＤ３０、メソテリン、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、およびＨＩＶ１標的ＣＡＲに対する交差競合研究用の参照ＣＡＲは、これらの抗原を標的とし、かつ表１２に列記される配列番号を有するＣＡＲである。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、抗原特異的ドメインと膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域またはリンカー領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、抗体、またはその機能的等価物、断片、もしくは誘導体のヒトＣＤ８αまたはＦｃ断片、ヒトＣＤ８αまたは抗体、またはその機能的等価物、断片、もしくは誘導体のヒンジ領域、抗体のＣＨ２領域、抗体のＣＨ３領域、人工的スペーサー配列、およびそれらの組み合わせのうちのいずれか１つ以上を含む。例示的な実施形態では、ヒンジ領域は、（ｉ）ＩｇＧ４のヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域、（ｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ領域およびＣＨ２領域、（ｉｖ）ＣＤ８αのヒンジ領域、（ｖ）ＩｇＧ１のヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域、（ｖｉ）ＩｇＧ１のヒンジ領域、（ｖｉ）ＩｇＧ１のヒンジ領域およびＣＨ２領域、または（ｖｉｉ）それらの組み合わせのうちのいずれか１つ以上を含む。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲの２つ以上の機能的ドメインは、１つ以上のリンカーによって分離されている。リンカーは、本開示の天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲのドメイン／領域のうちのいずれかを一緒に連結する、約１〜１００アミノ酸長のオリゴペプチドまたはポリペプチド領域である。いくつかの実施形態では、リンカーは、例えば、５〜１２アミノ酸長、５〜１５アミノ酸長、または５〜２０アミノ酸長であり得る。リンカーは、隣接するタンパク質ドメインが互いに対して自由に動くことができるように、グリシンおよびセリン等の可動性残基で構成され得る。より長いリンカー、例えば、１００アミノ酸長を超えるものが本開示の代替実施形態に関連して使用され得、例えば、２つの隣接するドメインが互いに立体的に妨害しないことを確実にするように選択され得る。
【０１９８】
本明細書に記載されるように、本明細書に記載のＣＡＲは、膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型膜貫通タンパク質のうちのいずれかを含む、膜貫通ドメインを有するいずれかのタンパク質由来の膜貫通配列を含み得る。本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、人工的疎水性配列も含み得る。本明細書に記載のＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜貫通ドメインが二量体化しないように選択され得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、またはゼータ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤｌ  ｌａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒ  ａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、および／またはＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを有する本明細書に記載の骨格のうちのいずれかを含む。
【０１９９】
膜貫通ドメインは、膜貫通領域に対して膜貫通領域（例えば、１つ以上のアミノ酸が細胞外に伸長し、かつ／または１つ以上のアミノ酸が細胞内に伸長する）のいずれかの末端に１つ以上の追加のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、最大１５個のアミノ酸）を含み得る。一態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの他のドメインのうちの１つと隣接している。一実施形態では、膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメイン、共刺激ドメイン、またはヒンジドメインが由来する同じタンパク質由来であり得る。別の態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの任意の他のドメインが由来する同じタンパク質に由来しない。
【０２００】
様々な実施形態では、本明細書に記載の骨格の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）成分をコードする単離された核酸分子は、０、１、２、３個、またはそれ以上の細胞内シグナル伝達ドメインをコードする。
【０２０１】
本明細書に記載されるように、本明細書に記載の天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲは、任意選択的に、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。このドメインは、細胞質であり得、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞にその特殊化された機能を果たすように指示し得る。細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、Ｔ細胞受容体のζ鎖またはその相同体のうちのいずれか（例えば、η鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＦｃεＲ１γ、およびβ鎖、ＭＢ１（Ｉｇα）鎖、Ｂ２９（Ｉｇβ）鎖等）、ＣＤ３ポリペプチド（Δ、δ、およびε）、ｓｙｋファミリーチロシンキナーゼ（Ｓｙｋ、ＺＡＰ  ７０等）、ｓｒｃファミリーチロシンキナーゼ（Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｌｙｎ等）、ならびにＴ細胞形質導入に関与する他の分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ５、およびＣＤ２８が挙げられるが、これらに限定されない。具体的には、細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３ゼータ鎖、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃεＲＩ、Ｆｃ受容体の細胞質尾部、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有する細胞質受容体、またはそれらの組み合わせであり得る。追加の細胞内シグナル伝達ドメインは当業者には明らかであり、本発明の代替実施形態に関連して使用され得る。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３ゼータ鎖、ＦｃｇＲＩＩＩ、ＦｃｅＲＩ、Ｆｃ受容体の細胞質尾部、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有する細胞質受容体、およびそれらの組み合わせのうちの１つ以上のシグナル伝達ドメインを含む。
【０２０２】
様々な実施形態では、本明細書に記載の骨格の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）成分をコードする単離された核酸分子は、０、１、２、３個、またはそれ以上の共刺激ドメインをコードする。例示的な実施形態では、共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、Ｄａｐ１０、ＣＤ２７、ＣＤ２、ＣＤ５、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、Ｌｃｋ、ＴＮＦＲ−Ｉ、ＴＮＦＲ−ＩＩ、Ｆａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ４０およびそれらの組み合わせのうちのいずれか１つ以上由来のシグナル伝達ドメインを含む。本開示の天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲの様々な成分は、本明細書の上および他の箇所に提供される。この場合もやはり、本開示が、例えば、リンカーの「ヒンジ」を介して膜貫通ドメインに結合し、次いで、これが１つ以上の刺激ドメインおよび任意選択的に１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインに連結される抗原特異的結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＡＲを提供することを認識されたい。
【０２０３】
本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６（表１）または骨格１〜７２のうちのいずれか１つ以上（表２）をコードする１つ以上の核酸分子によってコードされる１つ以上のポリペプチドが本明細書に提供される。
【０２０４】
従来のＣＡＲ  １〜６をコードする１つ以上の核酸分子によってコードされた１つ以上のポリペプチドも本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、がん細胞等の標的細胞上の１、２、３つ、またはそれ以上の抗原に特異的である。本明細書に記載されるように、ＣＡＲの各成分は、ＣＡＲの他の各成分と隣接しており、同じリーディングフレーム内にある。いくつかの実施形態では、ＣＡＲを含む骨格は、１つより多くの抗原特異的ドメインを含み、これらの抗原特異的ドメインは各々、同じＣＡＲにおける他の抗原特異的ドメインと隣接しており、同じリーディングフレーム内にある。
【０２０５】
本明細書に記載の従来のＣＡＲ  ＩとＮＦ−κＢ刺激分子（例えば、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ７５３（２５１）、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ６００（２００）、ＦＫＢＰｘ２−ＲＩＰ−ＩＤ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＴＣＬ−１Ａ、またはそれらのバリアント）をコードするアクセサリーモジュールとを含む骨格１〜１０をコードする１つ以上の核酸分子によってコードされる１つ以上のポリペプチドも本明細書に提供される。骨格１〜１０におけるアクセサリーモジュールは、異なるＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、Ｋ１３−ｏｐｔ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−デルタ−Ｖ２４９−Ｋ２５５、またはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ｌ等）を含む異なる分子をコードする他のアクセサリーモジュールに置き換えられ得る。従来のＣＡＲ  ＩとＩｇＳＰ−［ｈＴＲＡＣ−ｏｐｔ２］およびＩｇＳＰ−［ｈＴＲＢＣ−ｏｐｔ２］をコードするアクセサリーモジュールとを含む骨格１１〜１２をコードする１つ以上の核酸分子によってコードされる１つ以上のポリペプチドも本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲを含む骨格１〜１２の抗原特異的ドメインは、がん細胞等の標的細胞上の１、２、３つ、またはそれ以上の抗原に特異的である。本明細書に記載されるように、ＣＡＲの各成分は、ＣＡＲを含む骨格１〜１２の他の各成分と隣接しており、同じリーディングフレーム内にある。いくつかの実施形態では、ＣＡＲを含む骨格１−１２は、１つより多くの抗原特異的ドメインを含み、これらの抗原特異的ドメインは各々、同じＣＡＲにおける他の抗原特異的ドメインと隣接しており、同じリーディングフレーム内にある。
【０２０６】
本明細書に記載の従来のＣＡＲ  ＩＩとＮＦ−κＢ刺激分子（例えば、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ７５３（２５１）、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ６００（２００）、ＦＫＢＰｘ２−ＲＩＰ−ＩＤ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＴＣＬ−１Ａ、またはそれらのバリアント）をコードするアクセサリーモジュールとを含む骨格１３〜２２をコードする１つ以上の核酸分子によってコードされる１つ以上のポリペプチドも本明細書に提供される。骨格１３〜２２におけるアクセサリーモジュールは、異なるＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、Ｋ１３−ｏｐｔ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−デルタ−Ｖ２４９−Ｋ２５５、またはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ｌ等）を含む異なる分子をコードする他のアクセサリーモジュールに置き換えられ得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲを含む骨格１３〜２２の抗原特異的ドメインは、がん細胞等の標的細胞上の１、２、３つ、またはそれ以上の抗原に特異的である。本明細書に記載されるように、ＣＡＲの各成分は、ＣＡＲを含む骨格１３〜２４の他の各成分と隣接しており、同じリーディングフレーム内にある。いくつかの実施形態では、ＣＡＲを含む骨格１３〜２４は、１つより多くの抗原特異的ドメインを含み、これらの抗原特異的ドメインは各々、同じＣＡＲにおける他の抗原特異的ドメインと隣接しており、同じリーディングフレーム内にある。
【０２０７】
本明細書に記載のＡｂ−ＴＣＲとＮＦ−κＢ刺激分子（例えば、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ７５３（２５１）、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ６００（２００）、ＦＫＢＰｘ２−ＲＩＰ−ＩＤ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＴＣＬ−１Ａ、またはそれらのバリアント）をコードするアクセサリーモジュールとを含む骨格３７〜４６をコードする１つ以上の核酸分子によってコードされる１つ以上のポリペプチドも本明細書に提供される。骨格３７〜４６におけるアクセサリーモジュールは、異なるＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、Ｋ１３−ｏｐｔ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−デルタ−Ｖ２４９−Ｋ２５５、またはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ｌ等）を含む異なる分子をコードする他のアクセサリーモジュールに置き換えられ得る。
【０２０８】
本明細書に記載の二本鎖ｃＴＣＲ／ＳＩＲとＮＦ−κＢ刺激分子（例えば、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ７５３（２５１）、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ６００（２００）、ＦＫＢＰｘ２−ＲＩＰ−ＩＤ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＴＣＬ−１Ａ、またはそれらのバリアント）をコードするアクセサリーモジュールとを含む骨格４９〜５８をコードする１つ以上の核酸分子によってコードされる１つ以上のポリペプチドも本明細書に提供される。骨格４９〜５８におけるアクセサリーモジュールは、異なるＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、Ｋ１３−ｏｐｔ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−デルタ−Ｖ２４９−Ｋ２５５、またはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ｌ等）を含む異なる分子をコードする他のアクセサリーモジュールに置き換えられ得る。
【０２０９】
本明細書に記載の一本半鎖（ＯＨＣ）ｃＴＣＲ／ＳＩＲとＮＦ−κＢ刺激分子（例えば、ｖＦＬＩＰ−Ｋ１３、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ７５３（２５１）、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ６００（２００）、ＦＫＢＰｘ２−ＲＩＰ−ＩＤ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＭｙＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＴＣＬ−１Ａ、またはそれらのバリアント）をコードするアクセサリーモジュールとを含む骨格６１〜７０をコードする１つ以上の核酸分子によってコードされる１つ以上のポリペプチドも本明細書に提供される。骨格６１〜７０におけるアクセサリーモジュールは、異なる選択的ＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、Ｋ１３−ｏｐｔ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−デルタ−Ｖ２４９−Ｋ２５５またはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ｌ等）を含む異なる分子をコードする他のアクセサリーモジュールに置き換えられ得る。
【０２１０】
様々な実施形態では、本明細書に記載の骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドは、１、２、３つ、またはそれ以上のＮＦ−κＢ刺激分子（例えば、Ｋ１３−ｖＦＬＩＰ、Ｋ１３ｏｐｔ、ＮＥＭＯ、ＮＥＭＯ  Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ｌ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、もしくはマウスＮＥＭＯ  Ｋ２７０Ａ、またはそれらのバリアント）を含む。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、トロンボポエチン受容体であるＭＰＬに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ１９に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２０に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２２に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２３に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ３０に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ３２に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣ��Ｒをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ３３に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ１２３に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ１３８に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２００Ｒに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ２７６に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ３２４に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＢＣＭＡに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＳ１に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−���、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＡＬＫ１に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＲＯＲ１に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤＨ６に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤＨ１６に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤＨ１７に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤＨ１９に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＥＧＦＲｖｉｉｉに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ド��インは、Ｈｅｒ２に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｈｅｒ３に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、メソテリンに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、葉酸受容体アルファに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、葉酸受容体ベータに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＬＬ−１に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等
）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＬＥＣ５Ａに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＮＹ−ＥＳＯ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＷＴ１／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＷＴ１／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＨＰＶ１６−Ｅ７／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ｇｐ１００／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これ���のＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ｈＴＥＲＴ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＭＡＲＴ１／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＰＲ１／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＨＩＶ１−ｇａｇ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＨＩＶ１−エンベロープｇｐ１２０に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＤＬＬ３に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＰＴＫ７に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細��に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＴＲＯＰ２に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＬＡＭＰ１に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｔｉｍ１に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＴＣＲガンマ−デルタに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＴＣＲベータ１定常鎖に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＴＣＲベータ２定常鎖に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＧＣＣに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸���子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｂ７Ｈ４に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＬＨＲに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＴＳＨＲに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｔｎ−Ｍｕｃ１に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＴＳＬＰＲに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、組織因子に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７
、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＳＳＥＡ−４に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−３２、または骨格−３３等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＳＬｅａに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｍｕｃ１／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｍｕｃ１６に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＮＹＢＲ−１に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＩＬ１３Ｒａ２に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＩＬ１１Ｒａに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｌ１ＣＡＭに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来の���ＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＥｐＣＡＭ１に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ｇｐＮＭＢに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＧＲＰ７８に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＧＰＣ３に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＧＲＰＣ５Ｄに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＧＦＲａ４に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＦＩＴＣに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ７９ｂに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｌｙｍ１に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、Ｌｙｍ２に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜４の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＬＤ１８Ａ２に特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜４の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、白血病細胞に発現したＣＤ４３エピトープに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜４の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＣＤ１７９ａに特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の従来のＣＡＲ  １〜６の一部または骨格（骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１等）の一部であるＣＡＲをコードする核酸分子によってコードされたポリペプチドが本明細書に提供され、これらのＣＡＲの抗原特異的ドメインは、抗体のＦｃ部分（すなわち、Ｉｇ  Ｆｃ）に特異的である。Ｉｇ  Ｆｃに特異的な抗原特異的ドメインを有する例示的なＣＡＲは、配列番号１６２９によって表され、抗原特異的ドメインとしてＣＤ１６−Ｖ１５８の細胞外ドメインを含む。前述のうちのいずれかでは、ＣＡＲ構築物をコードする核酸分子は、ＮＦ−κＢ活性化因子コード配列をさらに含むか、またはあるいは、ＮＦ−κＢ活性化因子コード配列は、第２の核酸分子上に存在し得る。
【０２１２】
本明細書に記載の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）および／または選択的ＮＦ−κＢ活性化因子コード配列の所望の成分をコードする核酸配列は、当該技術分野で既知の組換え方法を使用して、例えば、標準の技法を使用して、核酸分子を発現する細胞由来のライブラリをスクリーニングすること、核酸分子を含むことで知られているベクターから核酸分子を得ること、または細胞およびその細胞を含む組織から直接単離すること等によって得られ得る。あるいは、目的とする核酸は、クローン化されるのではなく、合成的に産生され得る。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）および／またはアクセサリー分子（例えば、ＮＦ−κＢ活性化因子配列）をコードする核酸分子は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写物として提供される。別の実施形態では、本明細書に記載の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）および／またはアクセサリー分子（例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子コード配列）をコードする核酸分子は、ＤＮＡ構築物として提供される。
【０２１４】
クローン化法および発現法は当業者には明らかであり、各々の内容が本明細書に記載されているかのように参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１５／１４２６７５、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ、Ｊｕｎｅ  ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９．１０：７０４−７１６、ＷＯ０１／９６５８４、ＷＯ０１／２９０５８、米国特許第６，３２６，１９３号に記載のものであり得る。ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための物理的方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション等は、当該技術分野で周知であり、当業者には明らかであろう。例示的な実施形態では、かかる方法は、各々の内容が本明細書に記載されているかのように参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ）、米国特許第５，３５０，６７４号、および同第５，５８５，３６２号に記載されている。別の実施形態では、ＣＡＲベクターは、各々の内容が本明細書に記載されているかのように参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、特許出願第ＷＯ２０１３／０５９３４３  Ａ１号（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６０６４６）およびＤｉｎｇ  Ｘ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１，００３９（２０１７）に記載されるように、マイクロ流体デバイスを使用して細胞膜に過渡動揺を引き起こすことによって、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に形質導入される。
【０２１５】
本開示は、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲをコードする核酸分子を含む組換え核酸構築物を提供し、この核酸分子は、１つ以上の抗原結合ドメインをコードする核酸配列を含み、抗原結合ドメインの各々をコードするヌクレオチド配列は、（ｉ）任意選択的なヒンジ／リンカー、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉｉ）任意選択的な細胞内ドメイン、または（ａ）Ｔ細胞受容体定常鎖をコードする核酸配列と隣接しており、同じリーディングフレーム内にある。ＳＩＲの構築に使用され得る例示的なＴ細胞受容体定常鎖としては、ＴＣＲα、ＴＣＲβ１、ＴＣＲβ２、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、プレＴＣＲαの定常鎖、ならびにそれらのバリアントおよび突然変異体が挙げられるが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、ＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子）コード配列は、同じ組換え核酸構築物上にあるが、発現時には、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲに連結されておらず、むしろ、切断されている（例えば、ペプチド切断可能なリンカーを介して）か、またはポリヌクレオチドにおけるそれ自体の発現カセットの一部である。
【０２１６】
本開示は、本明細書に記載の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）およびアクセサリーモジュールをコードする核酸配列（複数可）を含むベクター（複数可）も提供する。いくつかの実施形態では、アクセサリーモジュールは、ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子をコードする。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、天然に存在しないＮＦ−κＢ活性化因子である。一実施形態では、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）およびアクセサリーモジュール（例えば、ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュール）は、単一のベクターによってコードされる。別の実施形態では、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）およびアクセサリーモジュール（例えば、ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュール）は、１つより多くのベクターによってコードされる。さらに別の実施形態では、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）およびアクセサリーモジュール（例えば、ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュール）は各々、別個のベクターまたは別個の核酸によってコードされる。一実施形態では、２つの機能的ポリペプチド単位（例えば、ＣＡＲおよびアクセサリーモジュール）は、単一のベクターまたは単一の核酸によってコードされる。一実施形態では、ベクター（複数可）は、ＤＮＡベクター（複数可）、ＲＮＡベクター（複数可）、プラスミド（複数可）、レンチウイルスベクター（複数可）、アデノウイルスベクター（複数可）、レトロウイルスベクター（複数可）、バキュロウイルスベクター（複数可）、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンベクター（複数可）、またはＰｉｇｇｙＢａｃｋトランスポゾン（複数可）から選択される。一実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターである。別の実施形態では、ベクターは、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンベクターである。例示的なベクターの核酸配列は、配列番号３８４０〜３８４１に提供される。ベクターであるｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１α（配列番号３８４０）とｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１α−ＤＷＰＲＥ（配列番号３８４１）は、ｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１α−ＤＷＰＲＥがＷＰＲＥ領域を欠くという事実だけが異なる空レンチウイルスベクターである。ｐＣＣＬ３−ＭＮＤＵ３−ＷＰＲＥベクターの核酸配列は、配列番号７７７９に提供される。本開示の天然に存在しない免疫受容体コード配列は、これらのベクターのＮｈｅ  Ｉ部位とＳａｌ  Ｉ部位との間にクローン化され得る。
【０２１７】
レトロウイルスベクターは、例えば、ガンマレトロウイルスベクターでもあり得る。ガンマレトロウイルスベクターは、例えば、プロモーター、パッケージングシグナル（ψ）、プライマー結合部位（ＰＢＳ）、１つ以上の（例えば、２つの）長い末端反復（ＬＴＲ）、および目的とする導入遺伝子、例えば、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲをコードする遺伝子を含み得る。ガンマレトロウイルスベクターは、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖ等のウイルス構造遺伝子を欠き得る。例示的なガンマレトロウイルスベクターとしては、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、脾臓フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）、および骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）、ならびにそれらに由来するベクターが挙げられ得る。他のガンマレトロウイルスベクターは、例えば、Ｔｏｂｉａｓ  Ｍａｅｔｚｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｇａｍｍａｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”  Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０１１  Ｊｕｎ；３（６）：６７７−７１３に記載されている。別の実施形態では、本開示の所望の天然に存在しない免疫受容体をコードする核酸を含むベクターは、アデノウイルスベクター（Ａ５／３５）である。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、本開示のベクターは、プロモーターをさらに含み得る。プロモーターの非限定的な例としては、例えば、ＭＮＤＵ３プロモーター、ＣＭＶ  ＩＥ遺伝子プロモーター、ＥＦ−ｌαプロモーター、ユビキチンＣプロモーター、コアプロモーター、またはホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターが挙げられる。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ−１プロモーターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、ポリ（Ａ）尾部を含む。いくつかの実施形態では、ベクターは、３’ＵＴＲを含む。
【０２１９】
本開示は、細胞に直接トランスフェクトされ得るＲＮＡ構築物も含む。トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡを生成するための方法は、特別に設計されたプライマーを用いた鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）、続いて、３’および５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）（例えば、本明細書に記載の３’および／または５’ＵＴＲ）、５’キャップ（例えば、本明細書に記載の５’キャップ）および／または内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）（例えば、本明細書に記載のＩＲＥＳ）、発現される核酸、ならびにポリＡ尾部、典型的には５０〜２０００塩基長（配列番号３８５５）を含む構築物を産生するためのポリＡ付加を含む。そのように産生されたＲＮＡは、異なる種類の細胞を効率的にトランスフェクトすることができる。一実施形態では、鋳型は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子の配列を含む。一実施形態では、ＲＮＡ  ＣＡＲ−ＮＦκＢベクターは、電気穿孔によって、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に形質導入される。別の実施形態では、ＲＮＡ  ＣＡＲベクターおよび／またはＮＦ−κＢ活性化因子ベクターは、マイクロ流体デバイスを使用して細胞膜に過渡動揺を引き起こすことによって、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に形質導入される。異なる鎖（または機能的ポリペプチド単位）も、１つまたは１つより多くのベクター、異なるベクターまたは技法の組み合わせを使用して細胞に導入され得る。別の実施形態では、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲが、レトロウイルスベクターを使用して導入され得る一方で、ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールは、レンチウイルスベクターを使用して導入される。別の態様では、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲが、レンチウイルスベクターを使用して導入される一方で、アクセサリーモジュール（例えば、ＮＦ−κＢ活性化因子）は、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンを使用して導入される。さらに別の態様では、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲが、レンチウイルスベクターを使用して導入される一方で、アクセサリーモジュール（例えば、ＮＦ−κＢ活性化因子）は、ＲＮＡトランスフェクションを使用して導入される。さらに別の態様では、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲが、当該技術分野で既知の遺伝子標的技法を使用して内在性ＴＣＲ鎖遺伝子座における遺伝子組換えによって細胞中に産生される一方で、アクセサリーモジュールは、レンチウイルスまたはレトロウイルスベクターを使用して導入される。
【０２２０】
ＲＮＡは、いくつかの異なる方法、例えば、電気穿孔（Ａｍａｘａ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ−ＩＩ（Ａｍａｘａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ））、（ＥＣＭ  ８３０（ＢＴＸ）（Ｈａｒｖａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）もしくはＧｅｎｅ  Ｐｕｌｓｅｒ  ＩＩ（ＢｉｏＲａｄ，Ｄｅｎｖｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、Ｍｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｔ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むが、これらに限定されない商業的に利用可能な方法、リポフェクション、ポリマーカプセル化、ペプチド媒介トランスフェクション、もしくは「遺伝子銃」等の微粒子銃送達系（例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１２（８）：８６１−７０（２００１）を参照のこと）を使用した、またはマイクロ流体デバイスを使用して細胞膜に過渡動揺を引き起こすことによる（例えば、特許出願第ＷＯ２０１３／０５９３４３  Ａ１号およびＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６０６４６を参照のこと）カチオン性リポソーム媒介トランスフェクションのうちのいずれかを使用して標的細胞に導入され得る。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、非ウイルス法は、トランスポゾン（別名、転位因子）の使用を含む。いくつかの実施形態では、トランスポゾンは、ゲノム内のある位置に自己挿入することができる一片のＤＮＡ、例えば、自己複製してそのコピーをゲノムに挿入することができる一片のＤＮＡ、またはより長い核酸からスプライスされてゲノム内の別の位置に挿入され得る一片のＤＮＡである。例えば、トランスポゾンは、転位のために遺伝子を隣接する逆方向反復で構成されたＤＮＡ配列を含む。
【０２２２】
トランスポゾンを使用した核酸送達の例示的な方法は、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン系（ＳＢＴＳ）およびｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）トランスポゾン系を含む。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．２０．Ｒ１（２０１１）：Ｒ１４−２０、Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５（２００８）：２９６１−２９７１、Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６（２００８）：５８０−５８９、Ｇｒａｂｕｎｄｚｉｊａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８（２０１０）：１２００−１２０９、Ｋｅｂｒｉａｅｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１２２．２１（２０１３）：１６６、Ｗｉｌｌｉａｍｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １６．９（２００８）：１５１５−１６、Ｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２．１２（２００７）：３１５３−６５、およびＤｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ．１２２．３（２００５）：４７３−８３を参照されたい。
【０２２３】
ＳＢＴＳは、２つの成分、１）導入遺伝子を含むトランスポゾンおよび２）トランスポザーゼ酵素源を含む。トランスポザーゼは、トランスポゾンを担体プラスミド（または他のドナーＤＮＡ）から宿主細胞染色体／ゲノム等の標的ＤＮＡに転位することができる。例えば、トランスポザーゼは、担体プラスミド／ドナーＤＮＡに結合し、トランスポゾン（導入遺伝子（複数可）を含む）をプラスミドから切断し、それを宿主細胞のゲノムに挿入する。例えば、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ（上記参照）を参照されたい。
【０２２４】
例示的なトランスポゾンとしては、ｐＴ２ベースのトランスポゾンが挙げられる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｒａｂｕｎｄｚｉｊａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．４１．３（２０１３）：１８２９−４７、およびＳｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６８．８（２００８）：２９６１−２９７１を参照されたい。例示的なトランスポザーゼとしては、Ｔｃ１／マリナー型トランスポザーゼ、例えば、ＳＢ１０トランスポザーゼまたはＳＢ１１トランスポザーゼ（例えば、サイトメガロウイルスプロモーターから発現され得る高活性トランスポザーゼ）が挙げられる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｋｅｂｒｉａｅｉ  ｅｔ  ａｌ．、およびＧｒａｂｕｎｄｚｉｊａ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。
【０２２５】
ＳＢＴＳの使用により、導入遺伝子、例えば、本明細書に記載のＣＡＲおよび／またはＮＦ−κＢ活性化因子をコードする核酸の効率的な組み込みおよび発現が可能になる。例えば、ＳＢＴＳ等のトランスポゾン系を使用して、本明細書に記載のＣＡＲおよび／またはＮＦ−κＢ活性化因子を安定的に発現する細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫＴ細胞または幹細胞またはｉＰＳＣまたは合成Ｔ細胞を生成する方法が本明細書に提供される。
【０２２６】
本明細書に記載の方法によれば、いくつかの実施形態では、ＳＢＴＳ成分を含む１つ以上の核酸、例えば、プラスミドは、細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫＴ細胞または幹細胞またはｉＰＳＣまたは合成Ｔ細胞）に送達される。例えば、核酸（複数可）は、標準の核酸（例えば、プラスミドＤＮＡ）送達法、例えば、本明細書に記載の方法、例えば、電気穿孔、トランスフェクション、またはリポフェクションによって送達される。いくつかの実施形態では、核酸は、導入遺伝子、例えば、本明細書に記載の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）および／またはＮＦ−κＢ活性化因子をコードする核酸を含むトランスポゾンを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、導入遺伝子（例えば、本明細書に記載の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）および／またはＮＦ−κＢ活性化因子をコードする核酸）を含むトランスポゾン、ならびにトランスポザーゼ酵素をコードする核酸配列を含む。他の実施形態では、例えば、第１のプラスミドが導入遺伝子を含むトランスポゾンを含み、第２のプラスミドがトランスポザーゼ酵素をコードする核酸配列を含む、２つの核酸を有する系、例えば、二重プラスミド系が提供される。例えば、第１の核酸および第２の核酸は、宿主細胞に共送達される。
【０２２７】
本明細書の上および他の箇所に記載されるように、本開示は、本開示の免疫受容体（例えば、ＣＡＲ、内在性ＴＣＲ、または組換えＴＣＲ）の、ＮＦ−κＢ刺激分子（例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、天然に存在しないＮＦ−κＢ活性化剤、例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ）との共発現により、生存、拡大、増殖、活性化、持続性、サイトカイン産生、およびインビボ活性等の免疫細胞の機能が改善されることを実証する。いくつかの実施形態では、免疫受容体は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲまたは組換えＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、免疫受容体は、天然に存在する免疫受容体（例えば、天然ＴＣＲ）である。一実施形態では、ＮＦ−κＢ刺激分子は、第一世代、第二世代、第三世代ＣＡＲ、ＴＦＰ、ＡｂＴＣＲ、またはＳＩＲと共発現される。上述のように、ＮＦ−κＢ刺激分子は、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＳＩＲ骨格に連結され得るが、好ましくは連結されない。さらに、ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ２８または４１ＢＢドメインを含まず、任意選択的にＣＤ３ドメインを含む。
【０２２８】
一実施形態では、本開示は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の発現により、生存、拡大、増殖、活性化、持続性、サイトカイン産生およびインビボ活性等の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、樹状細胞、ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＴＣＲ−Ｔ細胞等）の機能が改善されることを実証する。本明細書に記載の選択的ＮＦ−κＢ活性化因子とは、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を選択的に活性化し、他のシグナル伝達経路を活性化しないか、または最小限にしか活性化しない薬剤を指す。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を活性化し、ＡＫＴシグナル伝達経路、ＰＩ３Ｋシグナル伝達経路、ＪＮＫシグナル伝達経路、ｐ３８キナーゼシグナル伝達経路、ＥＲＫシグナル伝達経路、ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路、およびインターフェロンシグナル伝達経路の群から選択されるシグナル伝達経路のうちの１つ以上を活性化しないか、または最小限にしか活性化しない。ＮＦ−κＢ、ＡＫＴ、ＰＩ３Ｋ、ＪＮＫ、ｐ３８キナーゼ、ＥＲＫ、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ、およびインターフェロンシグナル伝達経路の活性化を測定するためのいくつかの方法が当該技術分野で既知である。これらのアッセイを本開示の方法で単独でまたは組み合わせて使用して、ＮＦ−κＢ経路の選択的活性化因子特定することができる。
【０２２９】
一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＮＦ−κＢ  ｐ６５（Ｓｅｒ５３６）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＡＫＴ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＮＦ−κＢ  ｐ６５（Ｓｅｒ５３６）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＳＡＰＫ／ＪＮＫ（Ｔｈｒ１８３／Ｔｙｒ１８５）抗体（例えば、クローンＧ９、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＪＮＫ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＮＦ−κＢ  ｐ６５（Ｓｅｒ５３６）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ３８  ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）抗体（例えば、クローンＤ３Ｆ９、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ｐ３８キナーゼ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＮＦ−κＢ  ｐ６５（Ｓｅｒ５３６）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｔａｔ１（Ｔｙｒ７０１）抗体（例えば、クローンＤ４Ａ７、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＳＴＡＴ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＮＦ−κＢ  ｐ６５（Ｓｅｒ５３６）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌ���ｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｔａｔ２（Ｔｙｒ６９０）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＳＴＡＴ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＮＦ−κＢ  ｐ６５（Ｓｅｒ５３６）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｔａｔ３（Ｔｙｒ７０５）抗体（例えば、クローンＤ３Ａ７、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＳＴＡＴ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＮＦ−κＢ  ｐ６５（Ｓｅｒ５３６）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｔａｔ５（Ｔｙｒ６９４）抗体（例えば、クローンＤ４７Ｅ７、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＳＴＡＴ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＮＦ−κＢ  ｐ６５（Ｓｅｒ５３６）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ４４／４２  ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）（例えば、クローンＤ１３．１４．４Ｅ、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＥＲＫ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。
【０２３０】
一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２）抗体（例えば、１４Ｄ４、Ｃｌｏｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）サブユニットによって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＡＫＴ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２）抗体（例えば、１４Ｄ４、Ｃｌｏｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＳＡＰＫ／ＪＮＫ（Ｔｈｒ１８３／Ｔｙｒ１８５）抗体（例えば、クローンＧ９；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＪＮＫ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２）抗体（例えば、１４Ｄ４、Ｃｌｏｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ３８  ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）抗体（例えば、クローンＤ３Ｆ９、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ｐ３８キナーゼ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２）抗体（例えば、１４Ｄ４、Ｃｌｏｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｔａｔ１（Ｔｙｒ７０１）抗体（例えば、クローンＤ４Ａ７、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＳＴＡＴ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたと��に、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２）抗体（例えば、１４Ｄ４、Ｃｌｏｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｔａｔ２（Ｔｙｒ６９０）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＳＴＡＴ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２）抗体（例えば、１４Ｄ４、Ｃｌｏｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｔａｔ３（Ｔｙｒ７０５）抗体（例えば、クローンＤ３Ａ７、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＳＴＡＴ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２）抗体（例えば、１４Ｄ４、Ｃｌｏｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｔａｔ５（Ｔｙｒ６９４）抗体（例えば、クローンＤ４７Ｅ７、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＳＴＡＴ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、対照ヒトＴ細胞と比較して、試験ヒトＴ細胞に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２）抗体（例えば、１４Ｄ４、Ｃｌｏｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）によって測定される、ＮＦ−κＢ活性の２０％超（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％超）の増加を誘導するが、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ４４／４２  ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）（例えば、クローンＤ１３．１４．４Ｅ、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用して測定される、ＥＲＫ経路の活性の２０％未満の増加しか誘導しない。
【０２３１】
ＮＦ−κＢ、ＡＫＴ、ＪＮＫ、ｐ３８、ＥＲＫ、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ、およびインターフェロンシグナル伝達経路の活性化を測定する代替方法が当該技術分野で既知であり、これらを使用して、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路の選択的活性化因子を特定することができる。例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｆｏｓ、ＪｕｎＤ、ＡＴＦ２、ＳＴＡＴ３、ＮＦＡＴ１ｃ、ＥＬＫ−１、ＣＲＥＢ、ＩＲＦ３、またはＩＲＦ７  ＤＮＡ結合活性の増加と比較して、標的細胞（例えば、Ｔ細胞または２９３ＦＴ細胞）に曝露されるか、またはそれに発現されたときに、ＮＦ−κＢ  ＤＮＡ結合活性のより高い増加を誘導する。異なるシグナル伝達経路に属する異なる転写因子のＤＮＡ結合活性を測定するためのキットが市販されており（例えば、ＴｒａｎｓＡＭ（登録商標）転写因子アッセイ；Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆ）、これらを使用して、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路の選択的活性化因子を特定することができる。
【０２３２】
ある実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＣＤ２８と比較して、ＩκＢαおよびＡＫＴの両方がヒトＴ細胞に発現されたときに、またはこれらの両方を介したシグナル伝達が同等の条件下でヒトＴ細胞において活性化されたときに、ＩκＢαリン酸化の増加のＡＫＴリン酸化の増加に対する比率のより高い増加を誘導する。ある実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、４１ＢＢと比較して、ＩκＢαおよびＡＫＴの両方が同等の条件下でヒトＴ細胞に発現されたときに、またはこれらの両方を介したシグナル伝達が同等の条件下でヒトＴ細胞において活性化されたときに、ＩκＢαリン酸化の増加のＡＫＴリン酸化の増加に対する比率のより高い倍増を誘導する。ある実施形態では、共刺激ドメインを欠く第一世代ＣＡＲと共発現されたときに、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＣＤ２８共刺激ドメインを含む第二世代ＣＡＲと比較して、ＩκＢαおよびＡＫＴの両方が同等の条件下でヒトＴ細胞に発現され、かつ標的抗原を含む細胞に曝露されたときに、ＩκＢαリン酸化の増加のＡＫＴリン酸化の増加に対する比率のより高い増加を誘導する。ある実施形態では、共刺激ドメインを欠く第一世代ＣＡＲ（例えば、配列番号１０１６によって表されるＣＡＲ）と共発現されたときに、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、４１ＢＢ共刺激ドメインを含む第二世代ＣＡＲ（例えば、配列番号１３１８によって表されるＣＡＲ）と比較して、ＩκＢαおよびＡＫＴの両方が同等の条件下でヒトＴ細胞に発現され、かつ標的抗原を含む細胞（例えば、ＲＡＪＩ）に曝露されたときに、ＩκＢαリン酸化の増加のＡＫＴリン酸化の増加に対する比率のより高い増加を誘導する。例えば、Ｋ１３を共発現するＣＤ１９指向性第一世代ＣＡＲ（ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ、配列番号１０１６）を発現するＴ細胞は、４１ＢＢ共刺激ドメインを有するＣＤ１９指向性第二世代ＣＡＲ（ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ、配列番号１３１８）を発現するＴ細胞と比較して、両方のＣＡＲ−Ｔ細胞がＲＡＪＩ細胞に１：５のＥ：Ｔ比で１〜２４時間曝露されたときに、ＩκＢαリン酸化のＡＫＴリン酸化に対する比率のより高い増加を示す。ＩκＢαおよびＡＫＴのリン酸化は、それらのリン酸化形態に特異的な抗体を使用した当該技術分野で既知の方法（例えば、免疫ブロット法またはフローサイトメトリー）を使用することによって計算される。ＩκＢαリン酸化の増加は、ＣＡＲの発現を欠く対照Ｔ細胞におけるＩκＢαリン酸化を、ＲＡＪＩ細胞への曝露後のＣＡＲ−Ｔ細胞におけるＩκＢαリン酸化から差し引くことによって計算される。ＡＫＴリン酸化の増加は、ＣＡＲの発現を欠く対照Ｔ細胞におけるＡＫＴリン酸化を、ＲＡＪＩ細胞への曝露後のＣＡＲ−Ｔ細胞におけるＡＫＴリン酸化から差し引くことによって計算される。ＩκＢαリン酸化の増加のＡＫＴリン酸化の増加に対する比率は、ＩκＢαリン酸化の増加をＡＫＴリン酸化の増加で割ることによって計算される。
【０２３３】
ある実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＣＤ２８と比較して、ｐ６５／ＲｅｌＡおよびＡＫＴの両方がヒトＴ細胞に発現されたときに、またはこれらの両方を介したシグナル伝達が同等の条件下でヒトＴ細胞において活性化されたときに、ｐ６５／ＲｅｌＡリン酸化の増加のＡＫＴリン酸化の増加に対する比率のより高い増加を誘導する。ある実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、４１ＢＢと比較して、ｐ６５／ＲｅｌＡおよびＡＫＴの両方が同等の条件下でヒトＴ細胞に発現されたときに、またはこれらの両方を介したシグナル伝達が同等の条件下でヒトＴ細胞において活性化されたときに、ｐ６５／ＲｅｌＡリン酸化の増加のＡＫＴリン酸化の増加に対する比率のより高い倍増を誘導する。ある実施形態では、共刺激ドメインを欠く第一世代ＣＡＲと共発現されたときに、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ＣＤ２８共刺激ドメインを含む第二世代ＣＡＲと比較して、ｐ６５／ＲｅｌＡおよびＡＫＴの両方が同等の条件下でヒトＴ細胞に発現され、かつ標的抗原を含む細胞に曝露されたときに、ｐ６５／ＲｅｌＡリン酸化の増加のＡＫＴリン酸化の増加に対する比率のより高い増加を誘導する。ある実施形態では、共刺激ドメインを欠く第一世代ＣＡＲ（例えば、配列番号１０１６によって表されるＣＡＲ）と共発現されたときに、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、４１ＢＢ共刺激ドメインを含む第二世代ＣＡＲ（例えば、配列番号１３１８によって表されるＣＡＲ）と比較して、ｐ６５／ＲｅｌＡおよびＡＫＴの両方が同等の条件下でヒトＴ細胞に発現され、かつ標的抗原を含む細胞（例えば、ＲＡＪＩ）に曝露されたときに、ｐ６５／ＲｅｌＡリン酸化の増加のＡＫＴリン酸化の増加に対する比率のより高い増加を誘導する。例えば、Ｋ１３を共発現するＣＤ１９指向性第一世代ＣＡＲ（ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−Ｋ１３−Ｆｌａｇ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ、配列番号１０１６）を発現するＴ細胞は、４１ＢＢ共刺激ドメインを有するＣＤ１９指向性第二世代ＣＡＲ（ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ＢＢｚ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ、配列番号１３１８）を発現するＴ細胞と比較して、両方のＣＡＲ−Ｔ細胞がＲＡＪＩ細胞に１：５のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）で１〜２４時間（例えば、１時間、２時間、４時間、１２時間、または２４時間）曝露されたときに、ｐ６５／ＲｅｌＡリン酸化のＡＫＴリン酸化に対する比率のより高い増加を示す。ｐ６５／ＲｅｌＡおよびＡＫＴのリン酸化は、それらのリン酸化形態に特異的な抗体を使用した当該技術分野で既知の方法（例えば、免疫ブロット法またはフローサイトメトリー）を使用することによって計算される。ｐ６５／ＲｅｌＡリン酸化の増加は、ＣＡＲの発現を欠く対照Ｔ細胞におけるｐ６５／ＲｅｌＡリン酸化を、両方のＲＡＪＩ細胞への曝露後のＣＡＲ−Ｔ細胞におけるｐ６５／ＲｅｌＡリン酸化から差し引くことによって計算される。ＡＫＴリン酸化の増加は、ＣＡＲの発現を欠く対照Ｔ細胞におけるＡＫＴリン酸化を、両方のＲＡＪＩ細胞への曝露のＣＡＲ−Ｔ細胞におけるＡＫＴリン酸化から差し引くことによって計算される。ｐ６５／ＲｅｌＡリン酸化の増加のＡＫＴリン酸化の増加に���する比率は、ｐ６５／ＲｅｌＡリン酸化の増加をＡＫＴリン酸化の増加で割ることによって計算される。
【０２３４】
ある実施形態では、共刺激ドメインを欠く第一世代ＣＡＲ（例えば、配列番号１０１６によって表されるＣＡＲ）と共発現されたときに、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、４１ＢＢ共刺激ドメインを含む第二世代ＣＡＲ（例えば、配列番号１３１８によって表されるＣＡＲ）と比較して、ＩκＢαリンおよびＪＮＫ、ＥＲＫ、またはｐ３８キナーゼの両方がヒトＴ細胞に同等の条件下で発現され、かつ標的抗原を含む細胞（例えば、ＲＡＪＩ）に適切な期間（例えば、１〜２４時間）曝露されたときに、ＩκＢαリン酸化の増加の、ＪＮＫ、ＥＲＫ、またはｐ３８キナーゼリン酸化の増加に対する比率のより高い増加を誘導する。ある実施形態では、共刺激ドメインを欠く第一世代ＣＡＲ（例えば、配列番号１０１６によって表されるＣＡＲ）と共発現されたときに、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、４１ＢＢ共刺激ドメインを含む第二世代ＣＡＲ（例えば、配列番号１３１８によって表されるＣＡＲ）と比較して、ｐ６５／ＲｅｌＡおよびＪＮＫ、ＥＲＫ、またはｐ３８キナーゼの両方がヒトＴ細胞に同等の条件下で発現され、かつ標的抗原を含む細胞（例えば、ＲＡＪＩ）に適切な期間（例えば、１〜−２４時間）曝露されたときに、ｐ６５／ＲｅｌＡリン酸化の増加の、ＪＮＫ、ＥＲＫ、またはｐ３８キナーゼリン酸化の増加に対する比率のより高い増加を誘導する。
【０２３５】
一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ活性化因子は、天然に存在しない薬剤であり、細胞に外因的に発現される。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ウイルス起源のものであり、すなわち、これは、ウイルスによってコードされるか、またはウイルスによってコードされたタンパク質に由来するか、または１つ以上のウイルスタンパク質と８０％超（例えば、８５％、９０％、９５％、または９９％超）の同一性を有する１０個より多くのアミノ酸残基（例えば、１５個より多くのアミノ酸残基、２０個より多くのアミノ酸残基、３０個より多くのアミノ酸残基、または５０個より多くのアミノ酸残基）のドメインを有する。ウイルス起源の例示的な選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスに由来するｖＦＬＩＰ  Ｋ１３（配列番号）である。別の実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、哺乳類または細胞起源のものである。哺乳類起源の例示的な選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異体、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５突然変異体、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ突然変異体、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、およびＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅである。別の実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ヒト起源のものであり、すなわち、これは、１つ以上のヒトタンパク質と８０％超（例えば、８５％、９０％、９５％、または９９％超）の同一性を有する１０個より多くのアミノ酸残基（例えば、１５個より多くのアミノ酸残基、２０個より多くのアミノ酸残基、３０個より多くのアミノ酸残基、または５０個より多くのアミノ酸残基）のドメインを有する。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、２つ以上の融合タンパク質（例えば、ＦＫＢＰｘ２−ＮＥＭＯ）で構成されている。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の２つ以上の融合パートナーは各々、ヒトタンパク質に由来するか、またはヒトタンパク質と８０％超の同一性を有する。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子が野生型核酸配列によってコードされる一方で、他の実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、コドン最適化核酸配列または突然変異体配列によってコードされる。例示的な実施形態では、ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３は、ヒトコドン最適化核酸配列、例えば、Ｋ１３−ｏｐｔ（配列番号７７６８）によってコードされる。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、免疫細胞が単一の選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を発現する一方で、他の実施形態では、免疫細胞発現は、１つより多くの選択的ＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７ＡおよびＫ１３−ｏｐｔまたはＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１ＥおよびＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ）を発現する。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、構成的様式で免疫細胞に発現される。他の実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、誘導的様式で免疫細胞に発現される。例示的な実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の誘導的発現は、誘導性プロモーターの使用によって達成され得る。誘導性プロモーターの例としては、メタロチオネイン誘導性プロモーター、グルココルチコイド誘導性プロモーター、プロゲステロン誘導性プロモーター、およびテトラサイクリン誘導性プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。ＲｈｅｏＳｗｉｔｃｈ（登録商標）系は、タンパク質の発現を制御するための別の転写調節因子プラットフォームに相当する。
【０２３９】
タンパク質の活性を制御するための方法は当該技術分野で既知であり、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を含むＮＦ−κＢ活性化因子の活性を制御するために使用され得る。例示的な実施形態では、これは、二量体化ドメインまたはスイッチドメインに融合したＮＥＭＯまたはＮＥＭＯ突然変異体のＴ細胞またはＮＫ細胞等の標的細胞における発現を伴う。例示的な実施形態では、スイッチドメインは、ＦＫＢＰ１２ドメインまたはＦＫＢＰ１２ｖ３６ドメインの１つ以上のコピーを含む。いくつかの実施形態では、スイッチドメインがＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、ＮＥＭＯ）のカルボキシ末端に結合している一方で、他の実施形態では、スイッチドメインは、ＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、ＮＥＭＯ）のアミノ末端に結合している。かかる融合タンパク質を発現する標的細胞の好適な二量体化因子（例えば、Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）への曝露により、ＮＥＭＯのオリゴマー化がもたらされ、次いで、ＮＦ−κＢ活性化につながる。代替実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の活性は、説明されているように（Ｍａｔｔａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８２，３４，２００７）、それらを突然変異したエストロゲン受容体のリガンド結合ドメインに融合させることによっても制御され得る。突然変異したエストロゲン受容体は、生理学的リガンドエストロゲンに結合しないが、ｂｉｎｄｓ  ｗｉｔｈ  非常に高い親和性で合成リガンド４−ＯＨＴ（４−ヒドロキシタモキシフェン）に結合し、４−ＯＨＴ依存性様式で融合パートナー（例えば、ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３またはＮＥＭＯ）の活性を調節する。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、当該技術分野で既知の遺伝子編集技法を使用して、そのゲノムコピーの改変によって免疫細胞に発現される。例示的な実施形態では、遺伝子編集系（例えば、ＴＡＬＯＮ、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ、またはＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９）は、ヒトＮＥＭＯの一方または両方の対立遺伝子をヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異体形態に変換するために使用される。別の例示的な実施形態では、遺伝子編集系は、ヒトＮＥＭＯの一方または両方の対立遺伝子をヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−デルタ−Ｖ２４９−Ｋ２５５突然変異体形態に変換するために使用される。Ｋ２７７ＡおよびＫ２７７Ａ−デルタ−Ｖ２４９−Ｋ２５５突然変異を誘導するために使用され得るヒトＮＥＭＯ遺伝子標的構築物の配列は、それぞれ、配列番号７７７１および７７７２に提供される。これらの配列は、好適なベクター（例えば、組み込み欠損レンチウイルスベクター、ＡＡＶベクター、またはアデノウイルスベクター）にクローン化され得る。相補的標的配列を含むＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９  ｇＲＮＡが生成され得るヒトＮＥＭＯのゲノム標的配列の例は、配列番号７７５９〜７７６２に提供される。ｇＲＮＡ配列は、ｐＸ３３０−Ｕ６−キメラ＿ＢＢ−ＣＢｈ−ｈＳｐＣａｓ９ベクター（Ａｄｄｇｅｎｅ）にクローン化される。あるいは、ｇＲＮＡ配列は、Ａｄｄｇｅｎｅによって提供される指示に従ってＡｄｄｇｅｎｅから入手可能なｐＬｅｎｔｉ−ＣＲＩＳＰＲ−ｖ２ベクター（プラスミド番号５２９６１）にクローン化され得る。ＮＥＭＯ標的構築物およびｇＲＮＡをコードする構築物のＴ細胞への導入は、本質的に以前に説明されているように（Ｋｎｉｐｐｉｎｇ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ＆  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｖｏｌ  ４，２０１７）行われる。
【０２４１】
本明細書に記載の前述の実施形態のうちのいずれかの別のまたはさらなる実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ５５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、またはＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ）をコードするアクセサリーモジュールを発現する免疫エフェクター細胞は、アクセサリーモジュールを欠く対応する免疫エフェクター細胞と比較して、同様の条件下で比較されたときに、標的抗原発現細胞に対する改善されたインビトロ活性（例えば、標的抗原誘導性ＩＬ２産生、増殖、拡大、および末端分化の遅延、老化の遅延等）を示す。免疫エフェクター細胞におけるＮＦ−κＢ活性化は、リン酸化ＩκＢα、リン酸化ｐ６５、全ＩκＢαの測定、ｐ６５核転座、ＮＦ−κＢ応答性遺伝子の上方調節、電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）、およびＮＦ−κＢベースのレポーターアッセイ等を含むが、これらに限定されない、当該技術分野で既知の技法を使用することによって測定される。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化は、ＡＫＴ経路の活性化の倍増に対する免疫エフェクター細胞におけるＮＦ−κＢの活性化の倍増を測定することによって決定される。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、Ｋ１３−ｏｐｔ（ヒトコドン最適化  Ｋ１３）またはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ）をコードするアクセサリーモジュールを発現する免疫エフェクター細胞は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、Ｋ１３−ｏｐｔまたはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ）をコードするアクセサリーモジュールの発現を欠く対応する免疫エフェクター細胞と比較して、これらの両方が同様の実験条件下で試験されたときに、標的抗原発現細胞に対するより高いインビトロ活性（例えば、標的抗原誘導性ＩＬ２産生、増殖、拡大、ならびに末端分化の遅延、および老化の遅延）を示す。例示的な実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、Ｋ１３−ｏｐｔ（ヒトコドン最適化  Ｋ１３）またはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ）をコードするアクセサリーモジュールを発現するＣＤ１９−ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、Ｋ１３−ｏｐｔまたはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ）をコードするアクセサリーモジュールを発現しない対応するＣＤ１９−ＣＡＲ発現エフェクター細胞と比較して、これらの両方が同様の実験条件下で試験されたときに、Ｎａｌｍ６細胞に対するより高いインビトロ活性（例えば、標的抗原誘導性ＩＬ２産生、増殖、拡大、ならびに末端分化の遅延、および老化の遅延）を示す。いくつかの実施形態では、標的抗原発現細胞（すなわち、標的細胞）に対する選択的ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールを発現する免疫エフェクター細胞のインビトロ活性（例えば、標的抗原誘導性ＩＬ２産生、増殖、拡大、ならびに末端分化の遅延、および老化の遅延）は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールを発現しない対応する免疫エフェクター細胞のインビトロ活性よりも少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、または１００％高い。いくつかの実施形態では、標的抗原発現細胞（すなわち、標的細胞）に対する選択的ＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ）を発現する免疫エフェクター細胞のインビトロ活性（例えば、標的抗原誘導性ＩＬ２産生、増殖、拡大、ならびに末端分化の遅延、および老化の遅延）は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の発現を欠く対応する免疫エフェクター細胞のインビトロ活性よりも少なくとも１．２５倍、１．５倍、２倍、５倍、または１０倍高い。ある実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を発現する免疫エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞）は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の発現を欠く対照免疫エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞）と比較して、標的抗原発現細胞（例えば、Ｎａｌｍ−６細胞）に曝露されたときに、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、または１００％高いＩＬ２を産生する。ある実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を発現する免疫エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞）は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の発現を欠く対照免疫エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）と比較して、標的抗原発現細胞（例えば、Ｎａｌｍ−６細胞）に曝露されたときに、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、または１００％高い増殖を示す。ある実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を発現する免疫エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞）は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の発現を欠く対照免疫エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）と比較して、標的抗原発現細胞（例えば、Ｎａｌｍ−６細胞）に曝露されたときに、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、または１００％低い疲弊マーカーを示す。ある実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を発現する免疫エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞）は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の発現を欠く対照免疫エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）と比較して、標的抗原発現細胞（例えば、Ｎａｌｍ−６細胞）に曝露されたときに、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、または１００％低い末端分化マーカーを示す。ある実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子を発現する免疫エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞）は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の発現を欠く対照免疫エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）と比較して、標的抗原発現細胞（例えば、Ｎａｌｍ−６細胞）に３〜４週間にわたって連続して曝露されたときに、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、または１００％高い細胞毒性を示す。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールを発現する免疫エフェクター細胞は、免疫エフェクター細胞を生み出すことができる、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８  Ｔ細胞、ＣＤ４  Ｔ細胞、ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＴＩＬ、ＴＲＥＧ細胞、ＮＫＴ細胞）、ＮＫ細胞（例えば、ＣＡＲ−ＮＫ細胞）、マクロファージ（例えば、ＣＡＲ発現マクロファージ）、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）、幹細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、または幹細胞である。
【０２４２】
本明細書に記載の前述の実施形態のうちのいずれかの別のまたはさらなる実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールを発現する免疫エフェクター細胞は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールを発現しない対照免疫エフェクター細胞と比較して、これらの両方が同様の条件下で試験されたときに、標的抗原発現細胞に対するより高いインビボ活性（例えば、インビボ拡大、インビボ持続性、腫瘍低減、ルシフェラーゼ発現腫瘍から得られた生物発光値の低下、または動物生存）を示す。免疫エフェクター細胞におけるＮＦ−κＢ活性化は、リン酸化ＩκＢα、全ＩκＢαの測定、ｐ６５核転座、Ｆ−κＢ応答性遺伝子の上方調節、電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）、およびＮＦ−κＢベースのレポーターアッセイ等を含むが、これらに限定されない、当該技術分野で既知の技法を使用することによって測定される。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化は、ＡＫＴ経路の活性化の倍増に対する免疫エフェクター細胞におけるＮＦ−κＢの活性化の倍増を測定することによって決定される。例えば、いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、Ｋ１３−ｏｐｔ（ヒトコドン最適化  Ｋ１３）またはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ）をコードするアクセサリーモジュールを発現するＣＤ１９−ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子（例えば、Ｋ１３−ｏｐｔ（ヒトコドン最適化Ｋ１３）またはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ）をコードするアクセサリーモジュールを欠く対応するＣＤ１９−ＣＡＲ発現エフェクター細胞と比較して、同様の実験条件下で試験されたときに、ＮＳＧマウス異種移植モデルにおけるＮａｌｍ６−ＦＬｕｃ細胞に対するより高いインビボ活性（例えば、インビボ拡大、インビボ持続性、腫瘍低減、ＦＬｕｃ発現腫瘍から得られた生物発光値の低下、または動物生存）を示す。いくつかの実施形態では、ＮＳＧマウス異種移植モデルにおける標的抗原発現細胞（例えば、Ｎａｌｍ−６）に対する選択的ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールを発現する免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞）のインビボ活性（例えば、インビボ拡大、インビボ持続性、腫瘍低減、ＦＬｕｃ発現腫瘍から得られた生物発光値の低下、または動物生存）は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールを欠く対応する免疫エフェクター細胞のインビボ活性よりも少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０％、または１００％高い。いくつかの実施形態では、ＮＳＧマウス異種移植モデルにおける標的抗原発現細胞（例えば、Ｎａｌｍ６）に対する選択的ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールをコードする免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ１９−ＣＡＲ−Ｔ細胞）のインビボ活性（例えば、インビボ拡大、インビボ持続性、腫瘍低減、ＦＬｕｃ発現腫瘍から得られた生物発光値の低下、または動物生存）は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールの発現を欠く対応する免疫エフェクター細胞のインビボ活性よりも少なくとも１．２５倍、１．５倍、２倍、５倍、または１０倍高い。いくつかの実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールを発現する免疫エフェクター細胞は、免疫エフェクター細胞を生み出すことができる、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８  Ｔ細胞、ＣＤ４  Ｔ細胞、ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＴＩＬ、ＴＲＥＧ細胞、ＮＫＴ細胞）、ＮＫ細胞（例えば、ＣＡＲ−ＮＫ細胞）、マクロファージ（例えば、ＣＡＲ発現マクロファージ）、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）、幹細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、または幹細胞である。
【０２４３】
本明細書に記載の前述の実施形態のうちのいずれかの別のまたはさらなる実施形態では、アクセサリーモジュール、例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ５５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、またはＭＹＤ８８−Ｌ２６５Ｐを発現する免疫エフェクター細胞は、アクセサリーモジュールを欠く対応する免疫エフェクター細胞と比較して、同様の条件下で比較されたときに、標的抗原発現細胞に対するより高いインビボ活性（例えば、インビボ拡大、インビボ持続性、腫瘍低減、ＦＬｕｃ発現腫瘍から得られた生物発光値の低下、または動物生存）を示す。例えば、いくつかの実施形態では、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ５５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、またはＭＹＤ８８−Ｌ２６５Ｐも共発現するＣＤ１９−ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ発現を欠く対応するＣＤ１９−ＣＡＲ発現エフェクター細胞と比較して、同様の実験条件下で試験されたときに、ＮＳＧマウス異種移植モデルにおけるＮａｌｍ６−ＦＬｕｃ細胞に対するより高いインビボ活性（例えば、インビボ拡大、インビボ持続性、腫瘍低減、ＦＬｕｃ発現腫瘍から得られた生物発光値の低下、または動物生存）を示す。いくつかの実施形態では、ＮＳＧマウス異種移植モデルにおける標的抗原発現細胞（すなわち、標的細胞）に対する本明細書に記載のアクセサリーモジュール（例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ５５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、またはＭＹＤ８８−Ｌ２６５Ｐ）を発現する免疫エフェクター細胞のインビボ活性（例えば、インビボ拡大、インビボ持続性、腫瘍低減、ＦＬｕｃ発現腫瘍から得られた生物発光値の低下、または動物生存）は、アクセサリーモジュールの発現を欠く対応する免疫エフェクター細胞のインビボ活性よりも少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０％、または１００％高い。いくつかの実施形態では、ＮＳＧマウス異種移植モデルにおける標的抗原発現細胞（すなわち、標的細胞）に対する本明細書に記載のアクセサリーモジュール（例えば、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ５５５、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、Ｋ１３−ｏｐｔ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、またはＭＹＤ８８−Ｌ２６５Ｐ）を発現する免疫エフェクター細胞のインビボ活性（例えば、インビボ拡大、インビボ持続性、腫瘍低減、ＦＬｕｃ発現腫瘍から得られた生物発光値の低下、または動物生存）は、アクセサリーモジュールの発現を欠く対応する免疫エフェクター細胞のインビボ活性よりも少なくとも１．２５倍、１．５倍、２倍、５倍、または１０倍高い。いくつかの実施形態では、アクセサリーモジュール発現エフェクター細胞は、免疫エフェクター細胞を生み出すことができる、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８  Ｔ細胞、ＣＤ４  Ｔ細胞、ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＴＩＬ、ＴＲＥＧ細胞、ＮＫＴ細胞）、ＮＫ細胞（例えば、ＣＡＲ−ＮＫ細胞）、マクロファージ（例えば、ＣＡＲ発現マクロファージ）、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、または幹細胞である。
【０２４４】
本開示は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の発現を使用して、樹状細胞を含む抗原提示細胞によってもたらされるサイトカイン分泌、抗原提示、および免疫応答を改善することができることをさらに提供する。本開示は、エクスビボまたはインビボでの抗原提示細胞における選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の発現によってがんワクチンを含むワクチンの有効性を改善する方法をさらに提供する。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子の使用により、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）によるサイトカイン産生（例えば、ＴＮＦα）が少なくとも１５％超増加する。
【０２４５】
本開示は、ＣＭＶ−１４１（配列番号７７７０）をコードするアクセサリーモジュールが、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＴＣＲ−Ｔ細胞に発現されて、それらの疲弊を遅延させ、それらの長期持続性を改善することができることをさらに提供する。ＣＭＶ−１４１は、誘導的または構成的様式で免疫エフェクター細胞に発現され得る。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現する細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫＴ細胞または幹細胞またはｉＰＳＣ細胞または合成Ｔ細胞は、ＳＢＴＳを使用した遺伝子挿入と、ヌクレアーゼ（例えば、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系、または操作メガヌクレアーゼ再操作ホーミングエンドヌクレアーゼ）を使用した遺伝子編集との組み合わせを使用することによって生成される。
【０２４７】
別の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞または幹細胞またはｉＰＳＣ細胞または合成Ｔ細胞に、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子をコードする核酸を含むベクターを導入（例えば、形質導入）することを含む、細胞（例えば、免疫エフェクター細胞またはその集団）を作製する方法を提供する。
【０２４８】
様々な実施形態では、本明細書に記載の非天然免疫受容体および／またはＮＦ−κＢ刺激分子での修飾のためのＴ細胞またはＮＫ細胞を含む細胞は、療法を所望する対象から得られ得る。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含むいくつかの源から得られ得る。Ｔ細胞は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子の発現前にインビトロで培養および拡大され得る組織常在性ガンマ−デルタＴ細胞であり得る。
【０２４９】
一実施形態では、本開示は、疾患関連抗原、例えば、本明細書に記載の腫瘍抗原に特異的に結合するように操作された抗原結合ドメイン（例えば、抗体または抗体断片、ＴＣＲまたはＴＣＲ断片）を含むいくつかのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。一実施形態では、本開示は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲまたは組換えＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供し、この操作された免疫エフェクター細胞は、治療特性を呈する。一実施形態では、本開示は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲまたは組換えＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供し、この操作された免疫エフェクター細胞は、抗がんまたは抗感染（例えば、抗ＨＩＶ−１）特性を呈する。いくつかの実施形態では、ＮＦ−κＢ刺激分子は、Ｔ細胞（例えば、腫瘍浸潤リンパ球またはＴＩＬ）にその内在性ＴＣＲとともに発現され得、この操作された免疫エフェクター細胞は、抗がんまたは抗感染（例えば、抗ＨＩＶ−１）特性を呈する。一実施形態では、細胞は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲまたは組換えＴＣＲ）およびＮＦ−κＢ刺激分子で形質転換され、天然に存在しない免疫受容体は、細胞表面に発現される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲまたは組換えＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子をコードするウイルスベクターで形質導入される。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。いくつかのかかる実施形態では、細胞は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲまたは組換えＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を安定的に発現し得る。別の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲまたは組換えＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子をコードする核酸、例えば、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡでトランスフェクトされる。いくつかのかかる実施形態では、細胞は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲまたは組換えＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を過渡的に発現し得る。いくつかの実施形態では、ＮＦ−κＢ刺激分子は、Ｔ細胞（例えば、腫瘍浸潤リンパ球またはＴＩＬ）にその内在性ＴＣＲとともに発現され得る。
【０２５０】
本開示は、免疫エフェクター細胞をがん細胞等の罹患細胞または疾患関連細胞に指向する１つ以上の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ／ＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を含むように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供する。これは、がん関連抗原に特異的な免疫受容体上の抗原結合ドメインを介して達成される。本開示のＣＡＲによって標的とされ得るがん関連抗原（腫瘍抗原）には、（１）がん細胞の表面に発現されるがん関連抗原、および（２）細胞内にあるがん関連抗原の２つのクラスが存在するが、かかる抗原の断片（ペプチド）は、ＭＨＣ（主要組織適合性複合体）によってがん細胞の表面に提示される。本開示は、内在性ＴＣＲを含み、かつ／または免疫エフェクター細胞をがん細胞等の罹患細胞または疾患関連細胞に指向する１つ以上のＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）も提供する。
【０２５１】
さらに、本開示は、ＮＦ−κＢ刺激分子も発現するＣＡＲ、ＴＣＲ、およびＣＡＲ／ＴＣＲ発現細胞、および薬剤におけるそれらの使用、または数ある疾患の中でもとりわけ、本明細書に記載の腫瘍抗原または疾患関連抗原を発現する細胞または組織を伴うがんまたはいずれかの悪性腫瘍または自己免疫疾患または感染性疾患または変性疾患またはアレルギー性疾患を治療するための方法を提供する。
【０２５２】
一実施形態では、本開示は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）および／またはＴＣＲ、およびＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供し、この操作された免疫エフェクター細胞は、抗腫瘍特性等の抗疾患特性を呈する。抗原のタイプの１つは、本明細書に記載のがん関連抗原（すなわち、腫瘍抗原）である。一態様では、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、部分的にヒト化された抗体断片を含む。一実施形態では、天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、部分的にヒト化されたｓｃＦｖを含む。したがって、本開示は、ヒト化抗原結合ドメインを含み、ＮＦ−κＢ刺激分子も発現する細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に操作された天然に存在しない免疫受容体、例えば、ＣＡＲ、および養子療法のためのそれらの使用法を提供する。
【０２５３】
一実施形態では、本開示は、ＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように操作された内在性免疫受容体（例えば、ＴＣＲ）を含む免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供し、この操作された免疫エフェクター細胞は、抗腫瘍特性または抗ＨＩＶ−１特性等の抗疾患特性を呈する。
【０２５４】
本明細書に記載のポリヌクレオチドおよび／または天然に存在しない免疫受容体を含む遺伝子操作された細胞が本明細書にさらに提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）である。いくつかの実施形態では、細胞は、ナイーブＴ細胞、中心メモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、胚幹細胞、または多能性幹細胞である。ＮＦ−κＢ刺激分子と組み合わせて本開示の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）を含み得、かつそれを発現し得る遺伝子操作された細胞には、治療的に関連する子孫を生み出すことができる、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、ナイーブＴ細胞（ＴＮ）、メモリーＴ細胞（例えば、中心メモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ））、ナチュラルキラー細胞、造血幹細胞、および／または多能性胚／誘導性幹細胞が含まれるが、これらに限定されない。ある実施形態では、遺伝子操作された細胞は、自己細胞である。ある実施形態では、遺伝子操作された細胞は、同種細胞である。一例として、本発明の個々のＴ細胞は、ＣＤ４＋／ＣＤ８−、ＣＤ４−／ＣＤ８＋、ＣＤ４−／ＣＤ８−、またはＣＤ４＋／ＣＤ８＋であり得る。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋／ＣＤ８−細胞およびＣＤ４−／ＣＤ８＋細胞の混合集団、または単一クローンの集団であり得る。本発明のＣＤ４＋Ｔ細胞は、標的抗原を発現する細胞（例えば、ＣＤ２０＋および／またはＣＤ１９＋腫瘍細胞）とインビトロで共培養されると、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、および他のＴ細胞エフェクターサイトカインを産生し得る。本発明のＣＤ８＋Ｔ細胞は、標的細胞とインビトロで共培養されると、抗原特異的標的細胞を溶解し得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ナイーブ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＤ６２Ｌ＋中心メモリー細胞、ＣＤ６２Ｌ−エフェクターメモリー細胞、またはそれらの組み合わせのうちのいずれか１つ以上であり得る（Ｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ｖｉｒｕｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９  ２１（２）２２４−２３２）。遺伝子修飾された細胞は、細胞を本開示の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子をコードするＤＮＡで安定的にトランスフェクトすることによって産生され得る。単一の組み込まれた再編成されていないベクターの存在ならびに天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子の発現を示すトランスフェクトされた細胞は、エクスビボで拡大され得る。一実施形態では、エクスビボ拡大のために選択された細胞は、ＣＤ８＋であり、抗原特異的標的細胞を特異的に認識および溶解する能力を示す。
【０２５５】
適切な条件下での抗原によるＴ細胞の刺激により、細胞の増殖（拡大）および／またはＩＬ−２の産生がもたらされる。本開示の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を含む細胞の数は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）の抗原特異的標的領域への１つ以上の抗原の結合に応答して拡大するであろう。本開示は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）を発現する細胞を作製および拡大する方法も提供する。この方法は、細胞を、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現するベクター（複数可）でトランスフェクトまたは形質導入することと、細胞を、受容体に対する標的抗原、組換え標的抗原、または抗体を発現する細胞で刺激して、細胞を増殖させて、Ｔ細胞を作製および拡大することとを含む。ある実施形態では、細胞は、治療的に関連する子孫を生み出すことができる、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、または多能性胚／誘導性幹細胞のうちのいずれか１つ以上であり得る。ある実施形態では、ＮＦ−κＢ刺激分子は、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）を導入することなく、細胞（例えば、免疫細胞を生み出すことができる、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、または幹細胞）に発現され得る。
【０２５６】
本明細書に記載の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を含むＴ細胞およびＮＫ細胞等の免疫エフェクター細胞は、一般に、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号、同第６，８６７，０４１号、および米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載の方法を使用して活性化および拡大され得る。
【０２５７】
一実施形態では、遺伝子操作された細胞は、従来のＣＡＲ  １〜６、または本明細書に記載の骨格、例えば、骨格−１、骨格−２、骨格−１３、骨格−１４、骨格−３７、骨格−３８、骨格−４９、骨格−５０、骨格−６０、または骨格−６１の一部である従来のＣＡＲ  １〜６、およびＮＦ−κＢ刺激分子をコードする核酸分子を含み、ＣＡＲの抗原特異的ドメインは、ＭＰＬ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＢＣＭＡ、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＬＬ１、ＴＣＲ−ベータ１定常鎖、ＴＣＲ−ベータ２定常鎖、ＴＣＲガンマ／デルタ、メソテリン、ＩＬ１３Ｒａ２、ＡＬＫ、ＰＴＫ７、ＤＬＬ３、ＴＲＯＰ２、Ｔｉｍ１、ＬＡＭＰ１、ＣＳ１、Ｌｙｍ１、Ｌｙｍ２、ＴＳＨＲ、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＭＨＣクラス１複合体、ＷＴ１／ＭＨＣクラスＩ複合体、Ｒａｓ／ＭＨＣクラスＩ複合体、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体、ＨＰＶ−Ｅ６／ＭＨＣクラスＩ複合体、ＨＰＶ−Ｅ７／ＭＨＣクラスＩ複合体、ＣＤ１７９ａ、ＣＬＤ１８Ａ２、ＣＤ４３エピトープ、またはＨＩＶ１エンベロープタンパク質ｇｐ１２０に特異的である。
【０２５８】
一実施形態では、細胞は、Ｔ細胞であり、Ｔ細胞は、内在性Ｔ細胞受容体鎖のうちの１つ以上を欠損している。本開示による機能的ＴＣＲの発現を安定的に欠くＴ細胞は、内在性Ｔ細胞受容体鎖を標的とする亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９、およびｓｈＲＮＡの使用等の様々なアプローチを使用して産生され得る。ｓｈＲＮＡに関する非限定的な例示的な方法は、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１２／０３２１６６７Ａ１に記載されている。ＴＣＲのα鎖およびβ鎖の定常領域を標的とするＺＦＮを使用した内在性ＴＣＲ発現の排除に関する別の非限定的な例示的な方法は、Ｔｏｒｉｋａｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｌｏｏｄ，１１９（２４），Ｊｕｎｅ，１４  ２０１２）に記載されている。
【０２５９】
機能的内在性ＴＣＲを欠くＴ細胞は、例えば、それがいずれの機能的内在性ＴＣＲもその表面に発現しないように操作され得るか、それが機能的内在性ＴＣＲを含む１つ以上のサブユニット（例えば、内在性ＴＣＲα、ＴＣＲβ１、ＴＣＲβ２、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、またはプレＴＣＲαの定常鎖）を発現しないように操作され得るか、またはそれが非常に少数の機能的内在性ＴＣＲしかその表面に産生しないように操作され得る。あるいは、Ｔ細胞は、例えば、ＴＣＲのサブユニットのうちの１つ以上の突然変異型または切断型の発現によって、実質的に障害された内在性ＴＣＲを発現し得る。「実質的に障害されたＴＣＲ」という用語は、このＴＣＲが宿主に有害な免疫反応を誘発しないであろうことを意味する。なおさらに代替の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子は、Ｔ細胞ゲノムにおけるＴＣＲ遺伝子座にクローン化され得、それ故に、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子は、内在性Ｔ細胞発現系の制御下に置かれるであろう。
【０２６０】
本開示は、第一世代または第二世代ＣＡＲ構築物での状態とは対照的に、ＣＤ３ε鎖、ＣＤ３γ鎖、およびＣＤ３δ鎖に基づくＴＦＰ（ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰと指定される）が、機能的内在性または天然ＴＣＲα鎖ポリペプチドを欠くか、または障害された機能的内在性または天然ＴＣＲα鎖ポリペプチドを表面に有するαβ  Ｔ細胞に発現されたときに、不良な発現および活性を有することを実証する。例えば、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰは、内在性ＴＲＡＣゲノム遺伝子座がＴＦＰ発現カセットによって破壊されたαβ  Ｔ細胞において発現および活性（例えば、Ｔ細胞活性化、増殖、サイトカイン産生、および細胞毒性等）障害を有することが観察される。本開示は、天然全長ＴＣＲα鎖ポリペプチドの発現が低減または排除されたＴ細胞にＴＣＲα定常鎖（ＴＲＡＣ鎖）ポリペプチドまたはその断片を再発現することによってこの問題への解決策を提供する。ある実施形態では、再発現されたＴＣＲα定常鎖ポリペプチドまたはＴＣＲα定常鎖断片により、天然ＴＣＲα定常鎖の発現が障害されるか、低減されるか、または排除されるαβ  Ｔ細胞における機能的ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ−ＴＣＲ−ＣＤ３シグナル伝達複合体の再構成が可能になる。ある実施形態では、再発現されたＴＣＲα定常鎖またはＴＣＲα定常鎖断片により、天然ＴＣＲα定常鎖の発現が障害されるか、低減されるか、または排除されるＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ発現αβ  Ｔ細胞の標的抗原誘導性サイトカイン（例えば、ＩＬ２、ＴＮＦα、ＩＦＮγ）産生、増殖、および／または細胞毒性活性を１５％超（例えば、２０％超、５０％超、７５％超、または１００％超等）改善する。ある実施形態では、再発現されたＴＣＲα定常鎖またはＴＣＲα定常鎖断片により、天然ＴＣＲα定常鎖の発現が障害されるか、低減されるか、または排除されるαβ  Ｔ細胞におけるＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの増強された発現が可能になる。ある実施形態では、再発現されたＴＣＲα定常鎖またはＴＣＲα定常鎖断片により、天然ＴＣＲα定常鎖の発現が障害されるか、低減されるか、または排除されるαβ  Ｔ細胞におけるＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの発現の１５％超（例えば、２０％超、５０％超、７５％超、または１００％超等）の増加が可能になる。例示的な実施形態では、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの発現およびシグナル伝達活性は、かかるＴ細胞に外因性ＴＣＲα定常鎖（ＴＲＡＣ鎖）（例えば、配列番号１０１０）をコードする核酸構築物を導入することによって、天然ＴＣＲα鎖の発現が低減または排除されるαβ  Ｔ細胞において回復し得る。好ましい実施形態では、外因性ＴＲＡＣ鎖をコードするヌクレオチド配列がコドン最適化され、そのヌクレオチド配列内の内在性または天然ＴＣＲα定常鎖とは異なる。代替実施形態では、外因性ＴＲＡＣ鎖をコードするヌクレオチド配列がコドン最適化され、ヒトＴＣＲα定常鎖の発現を増強することで知られている１つ以上のアミノ酸置換を有する（表３を参照のこと）。例示的な実施形態では、内在性ＴＣＲα遺伝子の発現が下方調節または排除されたαβ  Ｔ細胞におけるＴＦＰ−ＴＣＲ−ＣＤ３複合体の再発現および／または活性を可能にするために使用され得る外因性ＴＲＡＣ鎖は、配列番号３８８６〜３８９４に示される配列を有するか、または配列番号３８８６〜３８９４に示される配列によってコードされたポリペプチドと８０％超の相同性を有するポリペプチドをコードする配列を有する。その細胞表面発現を可能にするために、外因性ＴＣＲα定常鎖（ＴＲＡＣ）をコードするヌクレオチド配列は、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列に操作的に連結される。ある実施形態では、追加の天然に存在しない配列（例えば、リンカーまたは抗原結合ドメイン）は、ＴＣＲ−ＣＤ３シグナル伝達複合体および／またはＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの他の成分を動員する能力を妨害しない限り、ＴＲＡＣ鎖をコードする配列に任意選択的に付加され得る。ある実施形態では、外因性ＴＣＲα定常鎖ポリペプチドは、発現されるＴ細胞に存在する天然Ｖα配列（すなわち、抗原結合ドメイン）に操作的に連結されない。ある実施形態では、外因性ＴＣＲα定常鎖ポリペプチドの発現は、αβ  Ｔ細胞がその天然抗原認識特異性および／または親和性を取り戻すこと、例えば、内在性ＴＣＲα鎖を有するＴ細胞によって認識されたＭＨＣ−ペプチド抗原複合体を認識することを可能にしない。例示的な実施形態では、外因性ＴＣＲα定常鎖をコードするアクセサリーモジュールは、αβ  Ｔ細胞に、適切な方法（例えば、レンチウイルス媒介遺伝子導入）を使用して単独で発現され得る（配列番号１０１０）か、または単一のベクター（例えば、レンチウイルスベクター）を使用してＴＦＰ発現カセットと共発現され得るかのいずれかである。２つ以上の遺伝子またはＲＮＡの送達および発現の代替方法は当該技術分野で既知であり、本開示に記載されており、本発明の代替実施形態で使用され得る。ＴＣＲα定常鎖を、ＭＰＬを標的とするＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ構築物と共発現する例示的な構築物のヌクレオチド配列は、配列番号３５３８、３５４０、および３５４２に示される。例示的な構築物ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−Ｈｕ−１６１−２−（ｖＬ−ｖＨ）−ＣＤ３ｅ−ＥＣＤＴＭＣＰ−ｏｐｔ２−Ｆ−Ｐ２Ａ−ＩｇＳＰ−［ＴＲＡＣ−ｏｐｔ２］（配列番号３５３８）において、第１のカセットは、ＣＤ８シグナルペプチドを含むＣＤ３ε−ＴＦＰをコードし、続いて、ヒトＭＰＬタンパク質を標的とするヒト化ｓｃＦＶ、ならびにＣＤ３εの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびサイトゾルドメインをコードする。このＴＦＰをコードするカセットの後に、インフレームで、フーリン−ＳＧＳＧ−Ｐ２Ａをコードするリンカーおよびシグナルペプチド（ＩｇＳＰ）をコードするカセットおよびＴＲＡＣをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列が続く。例示的な実施形態では、全カセットがレンチウイルスベクターを使用して内在性ＴＣＲα鎖を欠くαβ  Ｔ細胞に発現され得る。
【０２６１】
代替実施形態では、ＴＣＲα定常鎖ポリペプチドの発現は、内在性ＴＣＲα定常鎖遺伝子を使用することによって、機能的内在性または天然ＴＣＲα鎖ポリペプチドを欠くか、または障害された機能的内在性または天然ＴＣＲα鎖ポリペプチドを表面に有するαβ  Ｔ細胞において回復し得る。例示的な実施形態では、ＴＣＲα定常鎖ポリペプチドの発現は、当該技術分野で既知の遺伝子編集技法を使用してシグナルペプチドをコードする核酸配列を内在性ＴＣＲα定常鎖遺伝子の少なくとも１つのコピーにインフレームで機能的に連結することによって、機能的内在性または天然ＴＣＲα鎖ポリペプチドを欠くか、または障害された機能的内在性または天然ＴＣＲα鎖ポリペプチドを表面に有するαβ  Ｔ細胞において回復し得る。例示的な実施形態では、シグナルペプチドをコードする核酸配列は、ＴＣＲα定常鎖ポリペプチドのＴ細胞表面における発現を可能にするように、内在性ＴＣＲα定常鎖遺伝子のうちの少なくとも１つの第１のエクソンにインフレームで操作的に連結される。ある実施形態では、シグナルペプチドおよびＴＣＲα定常鎖遺伝子をコードする発現カセットは、内在性ＴＣＲαプロモーターの転写調節制御下にある。ある実施形態では、シグナルペプチドおよびＴＣＲα定常鎖遺伝子をコードする発現カセットは、内在性ＴＣＲα遺伝子の３’非翻訳配列および調節制御を共有する。代替実施形態では、シグナルペプチドおよびＴＣＲα定常鎖遺伝子をコードする発現カセットは、外因性プロモーター（例えば、ＥＦ１αまたはＣＭＶプロモーター）下にある。
【０２６２】
例示的な実施形態では、ＴＣＲα定常鎖ポリペプチドの発現は、ＴＦＰカセットの後に、インフレームで、２Ａ切断可能なリンカー、シグナルペプチド（例えば、ＣＤ８シグナルペプチドまたはＩｇＨシグナルペプチド）、およびＴＣＲα定常鎖（ＴＲＡＣ）の第１のエクソンが続く（図５Ｃ）ように標的カセットを設計することによって、内在性または天然ＴＣＲα鎖遺伝子がＴＦＰをコードするカセットの標的組み込みによって破壊されたαβ  Ｔ細胞において回復し得る。例示的なかかる標的構築物は、配列番号３８６０によって表される。この実施形態では、ＴＣＲα定常鎖は、細胞表面発現が標的カセットに存在するシグナルペプチドによって促進される内在性ＴＣＲα定常鎖（ＴＲＡＣ）遺伝子から発現される。この実施形態では、ＴＣＲα定常鎖は、ＴＣＲα遺伝子プロモーターおよびＴＣＲα  ３’非翻訳領域の調節制御下で発現される。例示的な代替標的構築物は、配列番号３８５９によって表され、ＴＦＰをコードするカセットの標的組み込みによって内在性ＴＣＲα鎖を破壊すると同時に、シグナルペプチド、続いて、コドン最適化ＴＣＲα定常鎖ｃＤＮＡおよびポリＡ配列をコードする発現カセット（図５Ｂ）からのＴＣＲα定常鎖の再発現を同時に可能にする本開示の代替実施形態で使用され得る。
【０２６３】
本開示は、第一世代または第二世代ＣＡＲ構築物での状態とは対照的に、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰは、機能的内在性または天然ＴＣＲβ１およびＴＣＲβ２鎖ポリペプチドを欠くか、または障害された機能的内在性または天然ＴＣＲβ１およびＴＣＲβ２鎖ポリペプチドを表面に有するαβ  Ｔ細胞（すなわち、ＴＣＲα鎖およびＴＣＲβ鎖を発現するＴ細胞）に発現されたときに、それらの活性を失うことも実証する。例えば、本開示は、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰが内在性ＴＣＲβ１およびＴＣＲβ２ゲノム遺伝子座が破壊されたαβ  Ｔ細胞において発現および活性（例えば、Ｔ細胞活性化、増殖、サイトカイン産生、および細胞毒性等）障害を有することを提供する。本開示は、天然全長ＴＣＲβ１およびＴＣＲβ２鎖ポリペプチドの発現が低減または排除されたＴ細胞にＴＣＲβ１もしくはＴＣＲβ２定常鎖ポリペプチドまたはその断片を再発現することによってこの問題への解決策を提供する。ある実施形態では、再発現されたＴＣＲβ１／β２定常鎖ポリペプチドまたはＴＣＲβ１／β２定常鎖断片により、天然ＴＣＲβ１および／またはβ２定常鎖の発現が障害されるか、低減されるか、または排除されるＴ細胞、例えば、αβ  Ｔ細胞における機能的ＴＦＰ−ＴＣＲ−ＣＤ３シグナル伝達複合体の再構成が可能になる。ある実施形態では、再発現されたＴＣＲβ１／β２定常鎖またはＴＣＲβ１／β２定常鎖断片により、天然ＴＣＲβ１および／またはβ２定常鎖の発現が障害されるか、低減されるか、または排除されるＴＦＰ発現αβ  Ｔ細胞の標的抗原誘導性サイトカイン（例えば、ＩＬ２、ＴＮＦα、ＩＦＮγ）産生、増殖、および／または細胞毒性活性が１５％超（例えば、２０％超、５０％超、７５％超、または１００％超等）改善する。ある実施形態では、再発現されたＴＣＲβ１／β２定常鎖またはＴＣＲβ１／β２定常鎖断片により、天然ＴＣＲβ１および／またはＴＣＲβ２定常鎖の発現が障害されるか、低減されるか、または排除されるαβ  Ｔ細胞におけるＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの増強された発現が可能になる。ある実施形態では、再発現されたＴＣＲβ１／β２定常鎖またはＴＣＲβ１／β２定常鎖断片により、天然ＴＣＲβ１および／またはＴＣＲβ２定常鎖の発現が障害されるか、低減されるか、または排除されるαβ  Ｔ細胞におけるＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの発現の１５％超（例えば、２０％超、５０％超、７５％超、または１００％超等）の増加が可能になる。例示的な実施形態では、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの発現およびシグナル伝達活性は、かかるＴ細胞に外因性ＴＣＲβ１／β２定常鎖（ＴＲＢＣ鎖）（例えば、配列番号１０１１）をコードする核酸構築物に導入することによって天然ＴＣＲβ１および／またはＴＣＲβ２鎖の発現が低減または排除されるＴ細胞において回復し得る。好ましい実施形態では、外因性ＴＣＲβ１／β２定常鎖をコードするヌクレオチド配列がコドン最適化され、そのヌクレオチド配列内の内在性または天然ＴＣＲβ１およびＴＣＲβ２定常鎖とは異なる。代替実施形態では、外因性ＴＣＲβ１／β２定常鎖をコードするヌクレオチド配列がコドン最適化され、ヒトＴＣＲβ１／β２定常鎖の発現を増強することで知られている１つ以上のアミノ酸置換を有する（表４ａ、表４ｂを参照のこと���。例示的な実施形態では、内在性ＴＣＲβ１およびβ２鎖の発現が下方調節または排除されたＴ細胞におけるＴＦＰ−ＴＣＲ−ＣＤ３複合体の再発現および／または活性を可能にするために使用され得る外因性ＴＣＲβ１／β２鎖は、配列番号３８９５〜３９００に示される配列を有するか、または配列番号３８９５〜３９００に示される配列によってコードされたポリペプチドと８０％超の相同性を有するポリペプチドをコードする配列を有する。その細胞表面発現を可能にするために、外因性ＴＣＲβ１／β２定常鎖（ＴＲＢＣ）をコードするヌクレオチド配列は、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列に操作的に連結される。ある実施形態では、追加の天然に存在しない配列（例えば、リンカーまたは抗原結合ドメイン）は、ＴＣＲ−ＣＤ３シグナル伝達複合体および／またはＴＦＰの他の成分を動員する能力を妨害しない限り、ＴＣＲβ１／β２定常鎖（ＴＲＢＣ）をコードする配列に任意選択的に付加され得る。ある実施形態では、外因性ＴＣＲβ１／β２定常鎖ポリペプチドは、発現されるＴ細胞に存在する天然Ｖβ配列（すなわち、抗原結合ドメイン）に操作的に連結されない。ある実施形態では、外因性ＴＣＲβ１／β２定常鎖ポリペプチドの発現は、Ｔ細胞がその天然抗原認識特異性および／または親和性を取り戻すこと、例えば、内在性ＴＣＲβ１／β２鎖を有するＴ細胞によって認識されたＭＨＣ−ペプチド抗原複合体を認識することを可能にしない。例示的な実施形態では、外因性ＴＣＲβ１／β２定常鎖をコードするアクセサリーモジュールは、Ｔ細胞に、適切な方法（例えば、レンチウイルス媒介遺伝子導入）を使用して単独で（例えば、配列番号１０１１）発現され得るか、または単一のベクター（例えば、レンチウイルスベクター）を使用してＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ発現カセットと共発現され得るかのいずれかである。２つ以上の遺伝子またはＲＮＡの送達および発現の代替方法は当該技術分野で既知であり、本開示に記載されており、本開示の代替実施形態で使用され得る。ＴＣＲβ定常鎖を、ＭＰＬを標的とするＴＦＰ構築物と共発現する例示的な構築物のヌクレオチド配列を、配列番号３５３７、３５３９、および３５４１に示す。例示的な構築物ＣＤ８ＳＰ−ＭＰＬ−Ｈｕ−１６１−２−（ｖＬ−ｖＨ）−ＣＤ３ｅ−ＥＣＤＴＭＣＰ−ｏｐｔ２−Ｆ−Ｐ２Ａ−ＩｇＳＰ−［ＴＲＢＣ−ｏｐｔ２］（配列番号３５３７）において、第１のカセットは、ＣＤ８シグナルペプチドを含むＴＦＰをコードし、続いて、ヒトＭＰＬタンパク質を標的とするヒト化ｓｃＦＶ、ならびにＣＤ３εの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびサイトゾルドメインをコードする。このＴＦＰをコードするカセットの後に、インフレームで、フーリン−ＳＧＳＧ−Ｐ２Ａをコードするリンカーおよびシグナルペプチド（ＩｇＳＰ）をコードするカセットおよびＴＣＲβ定常鎖（ＴＲＢＣ）をコードするコドン最適化ヌクレオチド配列が続く。例示的な実施形態では、全カセットがレンチウイルスベクターを使用して内在性ＴＣＲβ鎖を欠くＴ細胞に発現され得る。
【０２６４】
代替実施形態では、ＴＣＲβ１またはβ２定常鎖ポリペプチドの発現は、内在性ＴＣＲβ１またはβ２定常鎖遺伝子を使用することによって、機能的内在性または天然ＴＣＲα鎖ポリペプチドを欠くか、または障害された機能的内在性または天然ＴＣＲα鎖ポリペプチドを表面に有するαβ  Ｔ細胞において回復し得る。例示的な実施形態では、ＴＣＲβ１／β２定常鎖ポリペプチドおよび共発現されたＴＦＰの発現は、当該技術分野で既知の遺伝子編集技法を使用してシグナルペプチドをコードする核酸配列を内在性ＴＣＲβ１またはＴＣＲβ２定常鎖遺伝子の少なくとも１つのコピーにンフレームで操作的に連結することによって、機能的内在性または天然ＴＣＲβ鎖ポリペプチドを欠くか、または障害された機能的内在性または天然ＴＣＲβ鎖ポリペプチドを表面に有するαβ  Ｔ細胞において回復し得る。例示的な実施形態では、シグナルペプチドをコードする核酸配列は、ＴＣＲβ１／β２定常鎖ポリペプチドおよび共発現されたＴＦＰのＴ細胞表面における発現を可能にするように、内在性ＴＣＲβ１またはＴＣＲβ２定常鎖遺伝子のうちの少なくとも１つの第１のエクソンにインフレームで操作的に連結される。ある実施形態では、シグナルペプチドおよびＴＣＲβ１／β２定常鎖をコードする発現カセットは、内在性ＴＣＲβ１／β２  プロモーターの転写調節制御下にある。ある実施形態では、シグナルペプチドおよびＴＣＲβ１／β２定常鎖をコードする発現カセットは、内在性ＴＣＲβ１／β２遺伝子の３’非翻訳配列および調節制御下にある。代替実施形態では、シグナルペプチドおよびＴＣＲβ１／β２定常鎖をコードする発現カセットは、外因性プロモーター（例えば、ＥＦ１αまたはＣＭＶプロモーター）下にある。
【０２６５】
例示的な実施形態では、ＴＣＲβ１／β２定常鎖ポリペプチドの発現は、ＴＦＰカセットの後に、インフレームで、２Ａ切断可能なリンカー、シグナルペプチド（例えば、ＣＤ８シグナルペプチドまたはＩｇＨシグナルペプチド）、およびＴＣＲβ１／β２定常鎖（ＴＲＢＣ）の第１のエクソンが続くように標的カセットを設計することによって、内在性または天然ＴＣＲβ１およびＴＣＲβ２鎖遺伝子がＴＦＰをコードするカセットの標的組み込みによって破壊されたαβ  Ｔ細胞において回復し得る。
【０２６６】
ＣＡＲカセットのＴＲＡＣ遺伝子座への指向により、およそ９５％のＴ細胞がＴＣＲ陰性になることが観察されている。かかるＴＣＲ陰性Ｔ細胞は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を引き起こす可能性が低いため、同種環境下で使用され得る。しかしながら、ＴＲＡＣ遺伝子座がＴＦＰカセットによって標的とされたＴ細胞におけるＴＲＡＣ鎖の再発現が、Ｖβ領域を含む全長ＴＣＲβ鎖の発現につながる可能性がある。かかるＴ細胞は、Ｖα領域によって提供されるＭＨＣ認識を欠くが、ＴＣＲβ鎖を介してＭＨＣ複合体によって提示されるアロ抗原を認識することができる可能性があり、それ故に、ＧＶＨＤを引き起こす可能性がある。本開示の代替実施形態では、ＴＣＲα鎖およびＴＣＲβ１鎖またはβ２鎖の両方が、内在性ＴＣＲα鎖ならびにＴＣＲβ１鎖およびＴＣＲβ２鎖の発現が下方調節または排除されたＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ発現αβ  Ｔ細胞に再発現される。
【０２６７】
上記の例では、外因性ＴＲＡＣまたはＴＲＢＣは、ＴＦＰ発現構築物と共発現されて、内在性ＴＣＲα鎖および／またはＴＣＲβ鎖の発現が、例えば、それらのゲノム遺伝子座とすることによって下方調節または排除されたα／β  Ｔ細胞におけるＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの発現および／または活性を回復させる。本発明の代替実施形態では、外因性ＴＣＲα定常鎖および／またはＴＣＲβ１／β２定常鎖の発現は、キメラ抗原受容体、キメラＴ細胞受容体（ｃＴＣＲ）、ＡｂＴＣＲ、または合成免疫受容体を発現する野生型α／β  Ｔ細胞またはα／β  Ｔ細胞を含む任意のα／β  Ｔ細胞におけるＴＣＲ／ＣＤ３複合体発現を回復させるために使用される。最後に、同様のアプローチを使用して、内在性ＴＣＲγ鎖および／またはＴＣＲδ鎖の発現が下方調節または排除されたγ／δ  Ｔ細胞におけるＣＡＲ／ＴＦＰおよび／またはＴＣＲ／ＣＤ３発現を回復させることができる。内在性ＴＣＲγ鎖および／またはＴＣＲδ鎖の発現が下方調節または排除されたγ／δ  Ｔ細胞に発現され得るＴＣＲγ（ＴＲＧＣ）およびＴＣＲδ（ＴＲＤＣ）の例示的な定常鎖は、配列番号３９１２および３９１３によって表される。
【０２６８】
本開示は、障害された天然ＴＣＲα／β／γまたはδ鎖を有するか、または天然ＴＣＲα／β／γまたはδ鎖の発現を欠くＴ細胞におけるＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの発現および活性が、ＴＣＲα／β／γまたはδの定常鎖の断片またはバリアントを再発現することによって回復し得ることも提供する。天然ＴＣＲα／β／γまたはδ鎖を欠く細胞におけるＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの発現を回復させるために使用され得るＴＣＲα／β／γおよびδの定常鎖の断片／バリアントは、配列番号１５１４１〜１５１４４に提供される（表６Ｄ）。ＩｇＨシグナルペプチドを有するこれらの鎖をコードする発現カセットは、配列番号１５１４５〜１５１４８に列記される（表７）。
【０２６９】
本開示は、障害されたＴＣＲα／β／γまたはδ鎖を有するか、または天然ＴＣＲα／β／γまたはδ鎖の発現を欠くＴ細胞におけるＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの発現および活性が、欠損しているＴＣＲα／β／γまたはδ定常鎖を含むＳＩＲまたはＡｂ−ＴＣＲの共発現によって回復し得ることをさらに提供する。したがって、障害された天然ＴＣＲα鎖を有するか、または天然ＴＣＲα鎖の発現を欠くαβ  Ｔ細胞において、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの発現および活性は、ＴＣＲα定常鎖を含むＳＩＲの発現によってレスキューされ得る。例示的な実施形態では、障害された天然ＴＣＲα鎖を有するか、または天然ＴＣＲα鎖の発現を欠くαβ  Ｔ細胞において、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ（例えば、配列番号８７０８〜８７１４によってコードされたＴＦＰ）の発現および活性は、ＴＣＲα定常鎖を含むＳＩＲ（例えば、配列番号９６６８、９６６９、または９６８４等によって表されるＳＩＲ）の発現によってレスキューされ得る。別の例示的な実施形態では、障害された天然ＴＣＲα鎖を有するか、または天然ＴＣＲα鎖の発現を欠くαβ  Ｔ細胞において、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ（例えば、配列番号８７０８〜８７１４によってコードされたＴＦＰ）の発現および活性は、ＴＣＲα定常鎖の一部分を含むＡｂ−ＴＣＲ（例えば、配列番号９６７７または９６７８等によって表されるＡｂ−ＴＣＲ）の発現によってレスキューされ得る。本開示は、２つのＣＡＲを含む同種Ｔ細胞での併用療法のために、ＣＤ３α／γ／δ  ＴＦＰが、好ましくは、同種Ｔ細胞における発現が低減されるか、または欠損しているＴＣＲ定常鎖またはＴＣＲ定常鎖断片を組み込むＳＩＲおよび／またはＡｂ−ＴＣＲと組み合わせられることを提供する。
【０２７０】
本開示は、障害された天然ＴＣＲβ鎖を有するか、または天然ＴＣＲβ鎖の発現を欠くαβ  Ｔ細胞において、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの発現および活性が、ＴＣＲβ定常鎖を含むＳＩＲの発現によってレスキューされ得ることをさらに提供する。例示的な実施形態では、障害された天然ＴＣＲβ１／β２鎖を有するか、または天然ＴＣＲβ１／β２鎖の発現を欠くαβ  Ｔ細胞において、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ（例えば、配列番号８７０８〜８７１４によってコードされたＴＦＰ）の発現および活性は、ＴＣＲβ定常鎖を含むＳＩＲ（例えば、配列番号９６６８、９６６９、または９６８４等によって表されるＳＩＲ）の発現によってレスキューされ得る。別の例示的な実施形態では、障害された天然ＴＣＲα鎖を有するか、または天然ＴＣＲα鎖の発現を欠くαβ  Ｔ細胞において、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ（例えば、配列番号８７０８〜８７１４によってコードされたＴＦＰ）の発現および活性は、ＴＣＲβ定常鎖の一部分を含むＡｂ−ＴＣＲ（例えば、配列番号９６７７または９６７８等によって表されるＡｂ−ＴＣＲ）の発現によってレスキューされ得る。
【０２７１】
本開示は、障害された天然ＴＣＲγ鎖を有するか、または天然ＴＣＲγ鎖の発現を欠くγδ  Ｔ細胞において、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの発現および活性が、ＴＣＲγ定常鎖を含むＳＩＲの発現によってレスキューされ得ることをさらに提供する。例示的な実施形態では、障害された天然ＴＣＲγ鎖を有するか、または天然ＴＣＲγ鎖の発現を欠くγδ  Ｔ細胞において、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ（例えば、配列番号８７０８〜８７１４によってコードされたＴＦＰ）の発現および活性は、ＴＣＲγ定常鎖を含むＳＩＲ（例えば、配列番号９６８９によって表されるＳＩＲ）の発現によってレスキューされ得る。別の例示的な実施形態では、障害された天然ＴＣＲγ鎖を有するか、または天然ＴＣＲγ鎖の発現を欠くγδ  Ｔ細胞において、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ（例えば、配列番号８７０８〜８７１４によってコードされたＴＦＰ）の発現および活性は、ＴＣＲγ定常鎖の一部分を含むＡｂ−ＴＣＲ（例えば、配列番号９６７６によって表されるＡｂ−ＴＣＲ）の発現によってレスキューされ得る。
【０２７２】
本開示は、障害された天然ＴＣＲδ鎖を有するか、または天然ＴＣＲδ鎖の発現を欠くγδ  Ｔ細胞において、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰの発現および活性が、ＴＣＲδ定常鎖を含むＳＩＲの発現によってレスキューされ得ることをさらに提供する。例示的な実施形態では、障害された天然ＴＣＲδ鎖を有するか、または天然ＴＣＲδ鎖の発現を欠くγδ  Ｔ細胞において、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ（例えば、配列番号８７０８〜８７１４によってコードされたＴＦＰ）の発現および活性は、ＴＣＲδ定常鎖を含むＳＩＲ（例えば、配列番号９６８９によって表されるＳＩＲ）の発現によってレスキューされ得る。別の例示的な実施形態では、障害された天然ＴＣＲδ鎖を有するか、または天然ＴＣＲδ鎖の発現を欠くγδ  Ｔ細胞において、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰ（例えば、配列番号８７０８〜８７１４によってコードされたＴＦＰ）の発現および活性は、ＴＣＲδ定常鎖の一部分を含むＡｂ−ＴＣＲ（例えば、配列番号９６７６によって表されるＡｂ−ＴＣＲ）の発現によってレスキューされ得る。
【０２７３】
本開示は、次世代ＣＡＲ（例えば、ＳＩＲおよびＡｂＴＣＲ）、ｃＴＣＲ、およびＴＣＲが内在性ＴＣＲ遺伝子によって提供される生理学的調節機構下で発現されることを可能にする方法および構築物も提供する。本開示は、次世代ＣＡＲ（例えば、ＳＩＲおよびＡｂＴＣＲ）、ｃＴＣＲ、およびＴＣＲが内在性ＴＣＲ遺伝子によって提供されるプロモーターおよび３’非翻訳調節機構下で発現されることを可能にする方法および構築物も提供する。一実施形態では、本開示は、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲをコードする発現カセットが内在性ＴＣＲα、ＴＣＲβ１／β２、ＴＣＲγ、またはＴＣＲδ遺伝子座を標的とするような方法を提供する。ある実施形態では、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲは、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲのＴＣＲα定常鎖が内在性天然ＴＣＲα定常鎖遺伝子から完全にまたは部分的に発現されるように、内在性ＴＣＲα遺伝子座（ＴＲＡＣ）を標的とする。ある実施形態では、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲは、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲのＴＣＲα定常鎖が内在性ＴＣＲα定常鎖遺伝子のエクソンのうちの少なくとも１つによって完全にまたは部分的にコードされるように、内在性ＴＣＲα遺伝子座（ＴＲＡＣ）を標的とする。ある実施形態では、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲは、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲのＴＣＲα定常鎖が天然／内在性ＴＣＲα定常鎖遺伝子の３’非翻訳領域およびポリアデニル化配列を完全にまたは部分的に共有するように、内在性ＴＣＲα遺伝子座（ＴＲＡＣ）を標的とする。
【０２７４】
ある実施形態では、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲは、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲのＴＣＲβ定常鎖が内在性天然ＴＣＲβ１またはＴＣＲβ２定常鎖遺伝子から完全にまたは部分的に発現されるように、内在性ＴＣＲβ遺伝子座（ＴＲＢＣ）を標的とする。ある実施形態では、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲは、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲのＴＣＲβ定常鎖が内在性ＴＣＲβ定常鎖遺伝子のエクソンのうちの少なくとも１つによって完全にまたは部分的にコードされるように、内在性ＴＣＲβ１／β２遺伝子座（ＴＲＢＣ）を標的とする。ある実施形態では、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲは、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲのＴＣＲβ定常鎖が天然／内在性ＴＣＲβ定常鎖遺伝子の３’非翻訳領域およびポリアデニル化配列を完全にまたは部分的に共有するように、内在性ＴＣＲβ１／β２遺伝子座（ＴＲＢＣ）を標的とする。
【０２７５】
ある実施形態では、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲは、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲのＴＣＲγ定常鎖が内在性天然ＴＣＲγ定常鎖遺伝子から完全にまたは部分的に発現されるように、内在性ＴＣＲγ遺伝子座（ＴＲＧＣ）を標的とする。ある実施形態では、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲは、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲのＴＣＲγ定常鎖が内在性ＴＣＲγ定常鎖遺伝子のエクソンのうちの少なくとも１つによって完全にまたは部分的にコードされるように、内在性ＴＣＲγ遺伝子座（ＴＲＧＣ）を標的とする。ある実施形態では、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲは、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲのＴＣＲγ定常鎖が天然／内在性ＴＣＲγ定常鎖遺伝子の３’非翻訳領域およびポリアデニル化配列を完全にまたは部分的に共有するように、内在性ＴＣＲγ遺伝子座（ＴＲＧＣ）を標的とする。
【０２７６】
ある実施形態では、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲは、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲのＴＣＲδ定常鎖が内在性天然ＴＣＲδ定常鎖遺伝子から完全にまたは部分的に発現されるように、内在性ＴＣＲδ遺伝子座（ＴＲＤＣ）を標的とする。ある実施形態では、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲは、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲのＴＣＲδ定常鎖が内在性ＴＣＲδ定常鎖遺伝子のエクソンのうちの少なくとも１つによって完全にまたは部分的にコードされるように、内在性ＴＣＲδ遺伝子座（ＴＲＧＣ）を標的とする。ある実施形態では、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲは、ＳＩＲ／ｃＴＣＲ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲのＴＣＲδ定常鎖が天然／内在性ＴＣＲδ定常鎖遺伝子の３’非翻訳領域およびポリアデニル化配列を完全にまたは部分的に共有するように、内在性ＴＣＲδ遺伝子座（ＴＲＤＣ）を標的とする。
【０２７７】
Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）または幹細胞は、対象から得られ得る。「対象」という用語は、免疫応答が誘発され得る生きた生物（例えば、哺乳動物）を含むよう意図されている。対象の例としては、ヒト、サル、チンパンジー、イヌ、ネコ、マウス、ラット、およびそれらのトランスジェニック種が挙げられる。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含むいくつかの源から得られ得る。Ｔ細胞は、ＣＡＲ／ＴＣＲおよび／またはＮＦ−κＢ刺激分子の発現前にインビトロで培養および拡大され得る組織常在性ガンマ−デルタＴ細胞であり得る。
【０２７８】
本開示のある特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離等の当業者に既知のいくつかの技法を使用して対象から収集された血液単位から得られ得る。好ましい一態様では、個体の循環血液由来の細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス産物は、通常、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含むリンパ球を含む。一態様では、アフェレーシスによって収集された細胞が洗浄されて血漿画分が除去され、任意選択的に、その後の処理ステップのために細胞を適切な緩衝液または培地に置くことができる。一実施形態では、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。代替の実施形態では、洗浄溶液はカルシウムを欠くか、マグネシウムを欠き得るか、または全てではないが多くの二価カチオンを欠き得る。
【０２７９】
カルシウムの不在下での初期活性化ステップにより、活性化の拡大がもたらされ得る。当業者であれば容易に理解するであろうように、洗浄ステップは、当業者に既知の方法によって、例えば、製造業者の指示に従って半自動「貫流」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１細胞処理装置、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）を使用することによって達成され得る。洗浄後、細胞は、様々な生体適合性緩衝液、例えば、Ｃａ不含、Ｍｇ不含ＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、または緩衝液を含むか含まない他の生理食塩水溶液等中に再懸濁され得る。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない成分が除去され、細胞が培養培地中に直接再懸濁され得る。
【０２８０】
本出願の方法が、５％以下、例えば、２％のヒトＡＢ血清を含む培養培地条件を利用し、既知の培養培地条件および組成物、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  Ｘｅｎｏ−ｆｒｅｅ  ＣＴＳ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｅｒｕｍ  Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ＆  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１５）４，ｅ３１；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｉ．２０１４．３１に記載のものを用いることができることが認識される。
【０２８１】
一態様では、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による向流遠心水簸または遠心分離によって単球を枯渇させることによって、末梢血リンパ球から単離される。
【０２８２】
一実施形態では、本開示は、疾患の治療または予防を必要とする対象に、Ｘ−ＣＡＲまたはＸ−ＴＣＲおよびＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）または免疫エフェクター細胞を生み出すことができる幹細胞を提供することによって、疾患を治療または予防する方法を提供し、ここで、Ｘは、本明細書に記載の疾患関連抗原を表し、病原細胞または疾患関連細胞がそのＸ抗原を発現する。表９は、異なる抗原およびこれらの抗原を標的とするＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を使用して予防、抑制、または治療され得る例示的な疾患のリストを提供する。
【０２８３】
別の実施形態では、本開示は、がん、感染症、自己免疫疾患、またはアレルギー性疾患の治療または予防を必要とする対象に、本開示の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）または免疫エフェクター細胞を生み出すことができる幹細胞を提供することによって、がん、感染症、自己免疫疾患、またはアレルギー性疾患を治療または予防する方法を提供する。一実施形態では、ＮＦ−κＢ刺激分子は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子である。一実施形態では、ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、非ウイルスＮＦ−κＢ活性化因子である。一実施形態では、ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、膜貫通タンパク質ではなく、サイトゾルに発現されるか、またはサイトゾルに優先的に存在する。一実施形態では、ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、構成的に活性である。一実施形態では、ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、構成的に活性ではない。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、誘導剤（例えば、二量体化因子）の投与によって活性化される。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、またはその誘導体である。ＣＡＲ／ＮＦ−κＢ刺激分子発現免疫エフェクター細胞は、患者に投与される。一態様では、疾患関連細胞は、がん細胞、感染細胞（例えば、ＨＩＶ−１感染細胞）、またはプラズマ細胞もしくはＢ細胞もしくはＴ細胞である。
【０２８４】
別の実施形態では、本開示は、がん、感染症、自己免疫疾患、またはアレルギー性疾患の治療または予防を必要とする対象に、天然に存在する免疫受容体（例えば、天然ＴＣＲ）およびＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）または免疫エフェクター細胞を生み出すことができる幹細胞を提供することによって、がん、感染症、自己免疫疾患、またはアレルギー性疾患を治療または予防する方法を提供する。一実施形態では、ＮＦ−κＢ刺激分子は、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子である。一実施形態では、ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、非ウイルスＮＦ−κＢ活性化因子である。一実施形態では、ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、膜貫通タンパク質ではなく、サイトゾルに発現されるか、またはサイトゾルに優先的に存在する。一実施形態では、ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、構成的に活性である。一実施形態では、ＮＦ−κＢ活性化因子、例えば、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、構成的に活性ではない。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、誘導剤（例えば、二量体化因子）の投与によって活性化される。一実施形態では、選択的ＮＦ−κＢ活性化因子は、ｖＦＬＩＰ  Ｋ１３、ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、またはその誘導体である。天然ＴＣＲおよびＮＦ−κＢ刺激分子発現免疫エフェクター細胞は、患者に投与される。一態様では、疾患関連細胞は、がん細胞、感染細胞（例えば、ＨＩＶ−１感染細胞）、またはプラズマ細胞もしくはＢ細胞もしくはＴ細胞である。
【０２８５】
別の実施形態では、本開示は、がん、感染症、自己免疫疾患、またはアレルギー性疾患の治療または予防を必要とする対象に、天然に存在する（例えば、天然ＴＣＲ）または本開示の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／または組換えＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）または免疫エフェクター細胞を生み出すことができる幹細胞を提供することによって、がん、感染症、自己免疫疾患、またはアレルギー性疾患を治療または予防する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＴまたはＴＣＲ−Ｔ細胞の活性は、水溶性ダサチニブ塩を使用して制御され得る。
【０２８６】
別の態様では、対象を治療する方法、例えば、対象における過剰増殖性障害または状態（例えば、がん）、例えば、固形腫瘍、軟部組織腫瘍、血液癌、または転移病巣を軽減または改善する方法が提供される。
【０２８７】
さらに別の実施形態では、本開示は、対象における疾患を治療する方法に関する。この方法は、対象における疾患が治療されるように、対象に、天然に存在するおよび／または本開示の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／または組換えＴＣＲ）および／または本開示のＮＦ−κＢ刺激分子を発現する細胞を投与することを含む。一態様では、この方法は、対象における疾患が治療されるように、対象に、内在性（または天然）ＴＣＲおよび本開示のＮＦ−κＢ刺激分子を発現する細胞を投与することを含む。一態様では、本明細書に記載の疾患関連抗原の発現に関連する疾患は、感染性疾患である。一態様では、感染性疾患は、ＨＩＶ１、ＨＩＶ２、ＨＴＬＶ１、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ＢＫウイルス、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス８、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルスパラインフルエンザウイルス、鳥インフルエンザウイルス、ＭＥＲＳおよびＳＡＲＳコロナウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、ライノウイルス、エンテロウイルス、デングウイルス、ウエストナイルウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、ラッサ熱ウイルス、ジカウイルス、ＲＳＶ、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ライノウイルス、水痘ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型および２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ＨＩＶ−１、ＨＴＬＶ１、肝炎ウイルス、エンテロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ニパおよびリフトバレー熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、非定型マイコバクテリア種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、トキソプラズマ症、リケッチア、ノカルジア、アスペルギルス、ケカビ、またはカンジダによる感染に関連する疾患である。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）は、ＨＩＶ抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ抗原は、ＨＩＶ−１抗原である。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ抗原は、ＨＩＶエンベロープタンパク質またはその一部分である。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ抗原は、ｇｐｌ２０またはその一部分である。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ抗原は、ｇｐｌ２０上のＣＤ４結合部位である。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ抗原は、ｇｐｌ２０上のＣＤ４誘導性結合部位である。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ抗原は、ｇｐｌ２０上のＮ−グリカンである。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ抗原は、ｇｐｌ２０のＶ２である。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ抗原は、ｇｐ４１上の膜近位領域である。
【０２８９】
本開示は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＴ細胞を生み出す幹細胞）が本開示のＣＡＲまたはＴＣＲおよび／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように遺伝子修飾され、ＣＡＲ発現Ｔ細胞または幹細胞がそれを必要とするレシピエントに注入される、ある種の細胞療法を含む。本開示は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＴ細胞を生み出す幹細胞）がＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように遺伝子修飾され、かかる細胞がそれを必要とするレシピエントに注入される、ある種の細胞療法も含む。注入された細胞は、レシピエントにおける疾患関連細胞（例えば、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞）を死滅させることができる。抗体療法とは異なり、ＮＦ−κＢ活性化因子で修飾された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、幹細胞）は、インビボで複製することができ、長期持続性をもたらし、持続的な腫瘍制御につながり得る。様々な態様では、患者に投与されるＮＦ−κＢ活性化因子で修飾された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＴ細胞を生み出すことができる幹細胞）、またはそれらの子孫は、患者へのＴ細胞または幹細胞の投与後、少なくとも４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年、または５年間にわたって患者に存続する。
【０２９０】
本開示は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を生み出すことができる幹細胞（例えば、造血幹細胞またはリンパ幹細胞または胚幹細胞、または誘導多能性幹細胞）が本開示の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように修飾され、それを必要とするレシピエントに投与される、ある種の細胞療法も含む。投与された幹細胞は、レシピエントへの移植後に免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を生み出し、この細胞（すなわち、免疫エフェクター細胞）は、レシピエントにおける疾患関連細胞を死滅させることができる。したがって、様々な態様では、ＣＡＲ／ＮＦκＢ−活性化因子発現幹細胞の投与後に患者に産生される免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、患者へのＴ細胞または幹細胞の投与後、少なくとも１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年、５年、１０年、または２０年間にわたって患者に存続する。本開示は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を生み出すことができる幹細胞が本開示の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように修飾され、インビトロで分化して、それを必要とするレシピエントに注入される免疫エフェクター細胞を生成する、ある種の細胞療法も含む。レシピエントに注入された後、注入された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、レシピエントにおける疾患関連細胞を死滅させることができる。したがって、様々な態様では、患者に投与される免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年、５年、１０年、または２０年間にわたって患者に存続する。
【０２９１】
本開示は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＴ細胞を生み出す幹細胞）が同じ細胞における２つ以上の異なる抗原を標的とするＣＡＲを発現するように遺伝子修飾され、かかるＴ細胞または幹細胞がそれを必要とするレシピエントに注入される、ある種の細胞療法を含む。ある実施形態では、ＣＡＲのうちの少なくとも１つが、造血細胞に発現される抗原を標的とする。ある実施形態では、ＣＡＲのうちの少なくとも１つが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＣＤ１３８、Ｌｙｍ１、Ｌｙｍ２、ＣＤ３３、およびＣＤ１２３の群から選択される抗原を標的とする。ある実施形態では、ＣＡＲのうちの少なくとも１つが、造血細胞に発現される抗原を標的とし、少なくとも１つの他のＣＡＲが、固形腫瘍に発現される抗原を標的とする。ある実施形態では、ＣＡＲのうちの少なくとも１つが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＣＤ１３８、Ｌｙｍ１、Ｌｙｍ２、ＣＤ３３、またはＣＤ１２３の群から選択される抗原を標的とし、少なくとも１つの他のＣＡＲが、メソテリン、Ｈｅｒ２、葉酸受容体１、ＲＯＲ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＡＦＰ、ＷＴ１、Ｒａｓ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＤＬＬ３、ＣＤ７０、およびＰＴＫ７の群から選択される抗原を標的とする。ある実施形態では、ＣＡＲのうちの少なくとも１つが、ＳＩＲである。ある実施形態では、ＣＡＲのうちの少なくとも１つが、Ａｂ−ＴＣＲである。ある実施形態では、ＣＡＲのうちの少なくとも１つが、ＳＩＲであり、他のＣＡＲが、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰである。ある実施形態では、ＣＡＲのうちの少なくとも１つが、Ａｂ−ＴＣＲであり、他のＣＡＲが、ＣＤ３ε／γ／δ  ＴＦＰである。ある実施形態では、細胞は、天然ＴＣＲ鎖のうちの少なくとも１つの発現障害を有する。本開示は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＴ細胞を生み出す幹細胞）が２つの異なる抗原を標的とするＣＡＲおよびＮＦ−κＢ刺激分子を発現するように遺伝子修飾され、かかる細胞がそれを必要とするレシピエントに注入される、ある種の細胞療法も含む。実施形態では、これらの細胞が自己である一方で、他の実施形態では、これらの細胞は、同種である。注入された細胞は、レシピエントにおける疾患関連細胞（例えば、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞）を死滅させることができる。
【０２９２】
エクスビボ免疫化に関して、ｉ）細胞の拡大、ｉｉ）本開示の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子をコードする核酸の細胞への導入、またはｉｉｉ）細胞の凍結保存のうちの少なくとも１つが、哺乳動物への細胞の投与前にインビトロで生じる。
【０２９３】
エクスビボ手順が当該技術分野で周知であり、以下でより完全に論じられる。簡潔には、細胞が哺乳動物（例えば、ヒト）から単離され、本開示の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／または本明細書に開示されるＮＦ−κＢ刺激分子を発現する１つ以上のベクターで遺伝子修飾（すなわち、インビトロで形質導入またはトランスフェクト）される。天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）およびＮＦ−κＢ活性化因子で修飾された細胞が哺乳類レシピエントに投与されて、治療利益を提供し得る。哺乳類レシピエントは、ヒトであり得、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）およびＮＦ−κＢ活性化因子で修飾された細胞は、レシピエントに対して自己であり得る。あるいは、これらの細胞は、レシピエントに対して同種、同系、または異種であり得る。
【０２９４】
造血幹細胞および前駆細胞のエクスビボ拡大が、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，１９９，９４２号に記載されており、本発明の細胞に適用され得る。他の好適な方法が当該技術分野で既知であり、それ故に、本発明は、細胞のエクスビボ拡大のいずれの特定の方法にも限定されない。簡潔には、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）のエクスビボ培養および拡大は、（１）ＣＤ３４＋造血幹細胞および前駆細胞を哺乳動物由来の末梢血採取物または骨髄外植片から収集することと、（２）かかる細胞をエクスビボで拡大することとを含む。米国特許第５，１９９，９４２号に記載の細胞成長因子に加えて、ｆｌｔ３−Ｌ、ＩＬ−ｌ、ＩＬ−３、およびｃ−ｋｉｔリガンド等の他の因子が、細胞の培養および拡大に使用され得る。
【０２９５】
一般に、本明細書に記載されるように活性化および拡大された細胞は、免疫不全の個体に発症する疾患の治療および予防に利用され得る。ある特定の態様では、本開示の細胞は、本明細書に記載の疾患関連抗原の発現に関連する疾患、障害、および状態を発症する危険性のある患者の治療に使用される。したがって、本開示は、本明細書に記載の疾患関連抗原の発現に関連する疾患、障害、および状態を治療または予防するための方法であって、それを必要とする対象に、ＣＡＲ／ＴＣＲ／ＮＦ−κＢ刺激分子で修飾された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）または本開示の免疫エフェクター細胞を生成することができる幹細胞の治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【０２９６】
一態様では、本開示のＣＡＲ／ＴＣＲ／ＮＦ−κＢ刺激分子発現細胞を使用して、がんもしくは悪性腫瘍等の増殖性疾患、または骨髄異形成、骨髄異形成症候群、もしくは前白血病等の前癌状態を治療することができる。さらに、本明細書に記載のがん関連抗原の発現に関連する疾患には、例えば、本明細書に記載のがん関連抗原を発現する非定型および／もしくは非古典的がん、悪性腫瘍、前癌状態、または増殖性疾患が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載の疾患関連抗原の発現に関連する非癌性関連適応症には、例えば、自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギーおよび喘息）、感染性状態（例えば、ＨＩＶ１、ＣＭＶ、ＥＢＶ、インフルエンザ）、ならびに移植が含まれるが、これらに限定されない。
【０２９７】
本開示のＣＡＲ／ＴＣＲ／ＮＦ−κＢ刺激分子で修飾された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、単独で、または薬学的組成物として、希釈剤および／または他の成分、例えば、ＩＬ−２もしくは他のサイトカインまたは細胞集団と組み合わせてのいずれかで投与され得る。
【０２９８】
血液癌または血液癌状態は、血液、骨髄、およびリンパ系を侵す白血病、リンパ腫、および悪性リンパ増殖性状態等のがんの種類である。
【０２９９】
白血病は、急性白血病および慢性白血病に分類される。急性白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）にさらに分類され得る。慢性白血病は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）および慢性リンパ白血病（ＣＬＬ）を含む。他の関連状態には、骨髄血液細胞の産生不良（または異形成）およびＡＭＬへの形質転換の危険性によってまとめられる多様な血液学的状態の群である骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、以前の「前白血病」）が含まれる。
【０３００】
リンパ腫は、リンパ球から生じる血液細胞腫瘍の群である。例示的なリンパ腫としては、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫が挙げられる。
【０３０１】
本開示は、がんを治療および予防するための組成物および方法を提供する。一態様では、がんは、血液学的癌であるか、または血液学的癌を含むが、これに限定されない血液癌は、白血病またはリンパ腫である。一態様では、本開示のＣＡＲ／ＴＣＲ／ＮＦκＢ発現細胞を使用して、例えば、急性白血病（例えば、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を含むが、これらに限定されない）、１つ以上の慢性白血病（例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含むが、これらに限定されない）、さらなる血液学的癌または血液学的状態（例えば、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞または大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成および骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質細胞性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、および骨髄血液細胞の産生不良（または異形成）等によってまとめられる多様な血液学的状態の群である「前白血病」を含むが、これらに限定されない）等であるが、これらに限定されない、がんおよび悪性腫瘍を治療することができる。さらに、本明細書に記載のがん関連抗原の発現に関連する疾患には、例えば、本明細書に記載のがん関連抗原を発現する非定型および／もしくは非古典的がん、悪性腫瘍、前癌状態、または増殖性疾患が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０２】
本開示は、対象に、各々が天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を含む細胞、例えば、免疫エフェクター細胞、またはその集団の有効量を、任意選択的に免疫細胞の有効性および／または安全性を高める薬剤と組み合わせて投与する方法を提供する。様々な実施形態では、免疫細胞の有効性および／または安全性を高める薬剤は、（ｉ）タンパク質ホスファターゼ阻害剤、（ｉｉ）キナーゼ阻害剤、（ｉｉｉ）サイトカイン、（ｉｖ）免疫抑制分子阻害剤、（ｖ）ＴＲＥＧ細胞のレベルまたは活性を低下させる薬剤、（ｖｉ）ＣＡＲ／ＮＦ−κＢ刺激分子で修飾された細胞の増殖および／または持続性を高める薬剤、（ｖｉｉ）ケモカイン、（ｖｉｉｉ）ＣＡＲ／ＴＣＲの発現を増加させる薬剤、（ｉｘ）ＣＡＲの発現または活性の調節を可能にする薬剤、（ｘ）修飾された細胞の生存および／または持続性の制御を可能にする薬剤、（ｘｉ）修飾された細胞の副作用を制御する薬剤、（ｘｉｉ）Ｂｒｄ４阻害剤、（ｘｉｉｉ）治療薬（例えば、ｓＨＶＥＭ）または予防薬を疾患部位に送達する薬剤、（ｘｉｖ）ＣＡＲが指向される標的抗原の発現を増加させる薬剤、（ｘｖ）アデノシンＡ２ａ受容体アンタゴニスト、および（ｘｖｉ）（ｉ）〜（ｘｖ）の任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、治療または予防される疾患は、血液学的癌である。さらなる実施形態では、血液学的癌は、白血病である。急性白血病の非限定的な例としては、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、１つ以上の慢性白血病（慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含むが、これらに限定されない）、さらなる血液学的癌または血液学的状態（Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞または大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成および骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質細胞性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、および骨髄血液細胞の産生不良（または異形成）によってまとめられる多様な血液学的状態の群である「前白血病」を含むが、これらに限定されない）が挙げられ、本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連する疾患には、本明細書に記載の腫瘍抗原を発現する非定型および／もしくは非古典的がん、悪性腫瘍、前癌状態、または増殖性疾患、およびそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。別の実施形態では、本明細書に記載の腫瘍抗原に関連する疾患は、固形腫瘍である。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、疾患に関連する腫瘍抗原は、ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ−１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−ｌ）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）または（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；急性白血病またはリンパ腫に発現するが、造血前駆細胞には発現しないグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血癌に発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ−ｌｌＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＴｅｓｔｉｓｉｎまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ−ベータ）；段階特異的胚抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ；受容体チロシン−タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１（細胞表面結合型）（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニットベータ型９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐｌ００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）およびＡｂｅｌｓｏｎマウス白血病ウイルス癌遺伝子相同体１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ−４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ−１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（��ＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨ糖セラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（染色体１２ｐに位置）（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバーｌＡ（ＸＡＧＥｌ）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビンｇ；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴ  Ａ−１またはガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来相同体（ＭＹＣＮ）；Ｒａｓ相同体ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  ｌＢ  １（ＣＹＰｌＢ  １）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはインプリント部位の調節因子の同胞）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳｌ）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓ユビキタス１（ＲＵ１）；腎臓ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒト乳頭腫ウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ヒト乳頭腫ウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲｌ）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバ���Ａ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ−ＭＹＣエピトープタグ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１  ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）フコシル−ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１−ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬ１１Ｒａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ−ＩＧＬｌ１、ＡＬＫ  ＴＣＲガンマ−デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、ＣＳＰＧ４−ＨＭＷ−ＭＡＡ、Ｔｉｍ１−／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ−ＣＳＦＲ−アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、ＶＥＧＦＲ２／ＫＤＲ、Ｌｅｗｓ  Ａｇ、ＴＣＲ−ベータ１鎖、ＴＣＲ−ベータ２鎖、ＴＣＲ−ガンマ鎖、ＴＣＲ−デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、絨毛性ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲ）、ＣＣＲ４、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニリルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、ＫＳＨＶ−Ｋ８．１タンパク質、ＫＳＨＶ−ｇＨ  タンパク質、デスモグレイン３に対する自己抗体（Ｄｓｇ３）、デスモグレイン１に対する自己抗体（Ｄｓｇ１）、ＨＬＡ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｇ、ＩＧＥ、ＣＤ９９、ＲＡＳ  Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤ１８Ａ２  ＯＲ  ＣＬＤＮ１８Ａ．２））、Ｐ−糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、ＬＩＶ１、ネクチン−４、クリプト、ＧＰＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原から選択される。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、治療される疾患は、ＨＩＶ１、ＨＩＶ２、ＨＴＬＶ１、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ＢＫウイルス、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス８インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、鳥インフルエンザウイルス、ＭＥＲＳおよびＳＡＲＳコロナウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、ライノウイルス、エンテロウイルス、デングウイルス、ウエストナイルウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、ラッサ熱ウイルス、ジカウイルス、ＲＳＶ、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ライノウイルス、水痘ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型および２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ＨＩＶ−１、ＨＴＬＶ１、肝炎ウイルス、エンテロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ニパおよびリフトバレー熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、非定型マイコバクテリア種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、トキソプラズマ症、リケッチア、ノカルジア、アスペルギルス、ケカビ、またはカンジダによる感染を含むが、これらに限定されない感染性疾患である。かかる疾患において、疾患に関連する標的抗原は、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＩＶ１−ｇａｇ、ＨＴＬＶ１−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、およびＧＡＤから選択される。
【０３０６】
本開示の方法および組成物によって治療または予防される疾患は、免疫疾患または変性疾患、例えば、真性糖尿病、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、尋常性天疱瘡、強直性脊椎炎、橋本甲状腺炎、ＳＬＥ、サルコイドーシス、強皮症、混合結合組織病、移植片対宿主病、またはアルツハイマー病であり得る。かかる実施形態では、疾患に関連する標的抗原は、自己抗体である。
【０３０７】
標的抗原の発現に関連する疾患のさらなる非限定的な例としては、以下のがんまたは関連状態：結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部または頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児期固形腫瘍、膀胱癌、腎臓または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発癌、これらのがんの組み合わせ、およびこれらのがんの転移病巣のうちのいずれか１つが挙げられる。
【０３０８】
本明細書に記載の方法または使用のある特定の実施形態では、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子分子を含むＣＡＲ／ＴＣＲ発現細胞は、免疫エフェクター細胞の有効性を高める薬剤、例えば、タンパク質ホスファターゼ阻害剤、キナーゼ阻害剤、サイトカイン、ケモカイン、ｓｃＦＶ断片、二重特異性抗体、免疫抑制分子阻害剤、細胞シグナル伝達タンパク質、ウイルスシグナル伝達タンパク質、またはＴＲＥＧ細胞のレベルまたは活性を低下させる薬剤のうちの１つ以上と組み合わせて投与される。タンパク質ホスファターゼ阻害剤の非限定的な例としては、ＳＨＰ−１阻害剤および／またはＳＨＰ−２阻害剤が挙げられる。キナーゼ阻害剤の非限定的な例としては、ＣＤＫ４阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤（例えば、パルボシクリブ）、ＢＴＫ阻害剤（例えば、イブルチニブまたはＲＮ−４８６）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシンまたはエベロリムス（ＲＡＤ００１））、ＭＮＫ阻害剤、または二重Ｐ１３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤が挙げられる。一実施形態では、ＢＴＫ阻害剤は、インターロイキン−２−誘導性キナーゼ（ＩＴＫ）のキナーゼ活性を低下させることも阻害することもない。Ａ２ａ受容体アンタゴニストの非限定的な例としては、Ｖｉｐａｄｅｎａｎｔが挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫抑制分子を阻害する薬剤は、抑制分子の発現を阻害する、抗体または抗体断片、阻害性核酸、クラスター化された規則的に間隔を空けた短い回文反復（ＣＲＩＳＰＲ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、または亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）のうちの１つ以上であり得る。本明細書に記載の方法または使用の他の実施形態では、ＴＲＥＧ細胞のレベルまたは活性を低下させる薬剤は、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇、またはそれらの組み合わせから選択される。本明細書に記載の方法または使用のある特定の実施形態では、免疫抑制分子は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦＲベータ、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３、およびＣＥＡＣＡＭ−５からなる群から選択される。他の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、もしくはＩＬ−２１、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。他の実施形態では、ＣＡＲ／ＴＣＲおよび／またはＮＦ−κＢ刺激分子、ならびに第２のもの、例えば、本明細書に開示される併用療法のうちのいずれか（例えば、免疫エフェクター細胞の有効性を高める薬剤）を含む免疫エフェクター細胞は、実質的に同時にまたは順次投与される。一実施形態では、サイトカインは、対象に、ＣＡＲ／ＴＣＲおよび／またはＮＦ−κＢ刺激分子を含む細胞または細胞集団と同時に投与される（例えば、同じ日に投与される）か、またはその投与後間もなく投与される（例えば、投与の１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に投与される）。他の実施形態では、サイトカインは、対象に、細胞または細胞集団の投与から長期間後に（例えば、少なくとも２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、またはそれ以上の期間後に）投与されるか、または対象の細胞への応答の評価後に投与される。
【０３０９】
他の実施形態では、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現する細胞は、ＣＡＲ／ＴＣＲおよび／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現する細胞の投与に関連する１つ以上の副作用を改善する薬剤と組み合わせて投与される。ＣＡＲ／ＴＣＲおよび／またはＮＦ−κＢ刺激分子）発現細胞に関連する副作用は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、血球貪食性リンパ組織球増多症（ＨＬＨ）、または神経学的合併症から選択され得る。かかる薬剤の例としては、ステロイド（例えば、プレドニゾン、デキサメタゾン）、ＩＬ６Ｒアンタゴニスト（例えば、トシリズマブ）、ＩＬ１Ｒアンタゴニスト（例えば、アナキンラ）、ｓｒｃキナーゼ阻害剤（例えば、ダサチニブまたは水溶性ダサチニブ塩）、キナーゼ阻害剤（例えば、イブルチニブ）、カルシニューリン阻害剤（例えば、タクロリムスまたはシクロスポリンＡ）、または化学療法薬（例えば、シクロホスファミド、メトトレキサート、またはビンクリスチン）が挙げられる。
【０３１０】
一実施形態では、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現する細胞は、免疫増強低用量のｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせて投与される。理論によって束縛されることを望むことなく、免疫増強低用量（例えば、免疫系を完全に抑制しないが、免疫機能を改善するには十分である用量）での治療が、ＰＤ−１陽性Ｔ細胞の減少またはＰＤ−１陰性細胞の増加を伴うと考えられている。ＰＤ−１陽性Ｔ細胞は、ＰＤ−１リガンド、例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２を発現する細胞との結合によって疲弊し得るが、ＰＤ−１陰性Ｔ細胞は疲弊し得ない。
【０３１１】
本開示の薬学的組成物は、本明細書に記載の天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子発現細胞、例えば、複数のＣＡＲ／ＴＣＲおよび／またはＮＦ−κＢ刺激分子発現細胞を、１つ以上の薬学的または生理学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含み得る。かかる組成物は、緩衝液（例えば、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水等）、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロース、またはデキストラン、マンニトール）、タンパク質、ポリペプチドまたはアミノ酸（例えば、グリシン）、抗酸化剤、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン）、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、および防腐剤を含み得る。本開示の組成物は、静脈内投与用に製剤化され得る。本組成物は、二次活性薬剤（例えば、抗がん剤、抗ウイルス剤、または抗生物質剤）をさらに含み得る。
【０３１２】
本開示の薬学的組成物は、治療（または予防）される疾患に適切な様式で投与され得る。投与量および投与頻度は、患者の状態、ならびに患者の疾患の種類および重症度等の要因によって決定されるであろう。「免疫学的有効量」、「抗腫瘍有効量」、「腫瘍抑制有効量」、または「治療量」もしくは「抗感染」が示されるとき、投与される本開示の組成物の量は、場合によって、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、および患者（対象）の状態の個体差を考慮して、医師によって決定され得る。概して、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を含む薬学的組成物が１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、ある場合には１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重（これらの範囲内の全ての整数値を含む）の投薬量で投与され得ると述べられ得る。Ｔ細胞組成物もこれらの投薬量で複数回投与され得る。これらの細胞は、免疫療法で一般に知られている注入技法を使用することによって投与され得る（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照のこと）。
【０３１３】
ある特定の態様では、対象に活性化された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与し、その後、再採血し（またはアフェレーシスを行い）、本開示によるそれ由来の免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を活性化し、患者にこれらの活性化および拡大された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を再注入することが所望され得る。このプロセスは、数週間毎に複数回行われ得る。ある特定の態様では、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採血から活性化され得る。ある特定の態様では、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、または１００ｃｃの採血から活性化される。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、対象は、白血球がエクスビボで収集されるか、富化されるか、または枯渇して、目的とする細胞、例えば、Ｔ細胞を選択および／または単離する白血球除去療法を受け得る。これらのＴ細胞単離物は、当該技術分野で既知の方法によって拡大され、本開示の１つ以上の構築物が導入され得るように処理および／または形質転換され、それにより、ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールを共発現する本開示のＣＡＲ−ＴまたはＴＣＲ−Ｔ細胞を作製することができる。その後、それを必要とする対象は、高用量化学療法での標準の治療を受け、その後に末梢血幹細胞移植が続く。ある特定の態様では、移植後または移植と同時に、対象は、ＮＦ−κＢ活性化因子をコードするアクセサリーモジュールを任意選択的に共発現する本開示の拡大されたＣＡＲ−Ｔ細胞またはＴＣＲ−Ｔ細胞の注入を受ける。さらなる態様では、拡大された細胞は、手術前または手術後に投与される。
【０３１５】
本開示を実施するためにキットも提供される。例えば、対象におけるがんを治療するためのキット、または本明細書に開示される天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現する細胞を作製するためのキット。本キットは、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子をコードする少なくとも１つの核酸分子またはベクターを、その核酸を免疫エフェクター細胞に導入するための方法とともに含み得る。本キットは、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子をコードする核酸を含むウイルス、ならびにウイルス形質導入を増強するためのポリブレン等の化学物質を含み得る。本キットは、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）を発現するＴ細胞を単離するための成分を含み得る。あるいは、本キットは、天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）または幹細胞を含み得る。開示される天然に存在しない免疫受容体（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ）および／またはＮＦ−κＢ刺激分子のうちの２つ以上が本キットに含まれ得る。本キットは、容器および容器上のラベルまたは容器に関連する添付文書を含み得る。
【０３１６】
好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の様々な材料から形成され得る。容器は、典型的には、核酸分子、ウイルス、ベクター、Ｔ細胞等のうちの１つ以上を含む組成物を保持する。いくつかの実施形態では、容器は、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであり得る）。ラベルまたは添付文書は、組成物が特定の状態を治療するために使用されることを示す。ラベルまたは添付文書は、典型的には、例えば、腫瘍を治療もしくは予防する方法またはＣＡＲ−Ｔ細胞を作製する方法における開示される成分の使用に関する指示をさらに含むであろう。添付文書は、典型的には、治療用製品の市販のパッケージに習慣的に含まれる、適応症、使用法、投薬量、投与、禁忌、および／またはかかる治療用製品の使用に関する警告についての情報を含む指示を含む。教材は、電子的形態（コンピュータディスケットまたはコンパクトディスク等）で書かれ得るか、または視覚的なもの（ビデオファイル等）であり得る。本キットは、本キットが設計された特定の用途を促進するための追加の成分も含み得る。したがって、例えば、本キットは、Ｔ細胞上でのまたはＴ細胞におけるＣＡＲおよび／またはＮＦ−κＢ刺激分子の発現を測定するための手段、またはＣＡＲおよび／またはＮＦ−κＢ刺激分子を発現するＴ細胞の数またはパーセンテージを決定する手段、または細胞の機能性を決定する手段をさらに含み得る。本キットは、特定の方法の実施に日常的に使用される緩衝液および他の試薬をさらに含み得る。かかるキットおよび適切な内容物は、当業者に周知である。
【０３１７】
本開示は、以下の実験実施例を参照することによってさらに説明される。これらの実施例は、例証目的のためのみに提供され、別途特定されない限り、限定するようには意図されていない。したがって、本開示は、決して以下の実施例に限定されると解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書に提供される教示の結果として明らかになるありとあらゆる変形例を包含すると解釈されるべきである。
【実施例】
【０３１８】
異なる細胞表面および細胞内抗原を標的とする異なる構築物の細胞毒性を測定するためにルシフェラーゼ（例えば、ＧＬｕｃまたはＮＬｕｃ）を発現するように操作された細胞株を表Ａに提供する。この実験に使用した細胞株、細胞株上の標的抗原、およびそれらの成長培地を以下の表Ａに示す。細胞を３７℃／５％ＣＯ２の加湿インキュベーター内で培養した。細胞株をＡＴＣＣ、ＮＩＨ  ＡＩＤＳ試薬プログラムから入手するか、または実験室で入手可能であった。
【表１７−１】
2021500861.tif 000092
【表１７−２】
2021500861.tif 000093
【０３１９】
ＮＦＡＴ依存性ＥＧＦＰ（またはＧＦＰ）レポーター遺伝子で操作されたＪｕｒｋａｔ細胞株（クローンＥ６−１）は、Ｄｒ．Ａｒｔｈｕｒ  Ｗｅｉｓｓ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）から寄贈されたものであり、ＣＡＲシグナル伝達の研究のために説明されている（（Ｗｕ，ＣＹ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３５０：２９３−３０２，２０１５）。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、１０％ＦＢＳ、ペニシリン、およびストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ−１６４０培地中で維持した。
【０３２０】
ＭＰＬに対するキメラ抗原受容体をコードするレンチウイルスベクターの生成
ｐＬＥＮＴＩ−Ｂｌａｓｔベクターは、ＬａｃＺ遺伝子の除去によってｐＬｅｎｔｉ６ｖ５ｇｗ＿ｌａｃｚベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）から得られたものである。ｐＬｅｎｔｉ−ＭＰ２は、Ｐａｎｔｅｌｉｓ  Ｔｓｏｕｌｆａｓ（Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド番号３６０９７）から寄贈されたものであり、これを使用して、標準の分子生物学技法を使用してＣＭＶプロモーターをヒトＥＦ１αプロモーターに置き換えることによって、ｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａまたはｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１α［配列番号３８３７］レンチウイルスベクターを生成した。ｐＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ−ＤＷＰＲＥ［配列番号３８３８］は、ＷＰＲＥ配列の欠失によってｐＬＥＮＴＩ−ＥＦ１αベクターから得られたものである。内部Ｓａｃ  ＩＩ断片をＥＦ１αプロモーターから欠失させて、ＥＦ１アルファ（ＥＦ１ａ）−Ｄ−ＳＡＣＩＩ−プロモーター（配列番号３８４２）を生成した。ｐｓＰＡＸ２ベクターは、Ｄｉｄｉｅｒ  Ｔｒｏｎｏ（Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド番号１２２６０）から寄贈されたものである。ｐＬＰ／ＶＳＶＧエンベローププラスミドおよび２９３ＦＴ細胞をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）から入手した。レトロウイルス導入ベクターＭＳＣＶｎｅｏ、ＭＳＣＶｈｙｇｒｏ、およびＭＳＣＶｐａｃ、ならびにパッケージングベクターｐＫＡＴを、Ｄｒ．Ｒｏｂｅｒｔ  Ｉｌｌａｒｉａの実験室から入手した。ｐｈＲＧＴＫ  Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ  プラスミドは、Ｐｒｏｍｅｇａのものであった。
【０３２１】
ＢＢｚ、ＣＤ２８ｚ、およびｚ−Ｋ１３骨格を有するベクターを含むキメラ抗原受容体の生成、ＧＧＳ−ＮＬｕｃ融合タンパク質の生成および使用、ならびにＭａｔａｄｏｒアッセイを使用して細胞毒性を測定するためのルシフェラーゼ（例えば、ＧＬｕｃ）レポーター細胞株の生成および使用が記載されている（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２４８４３、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２５６０２、およびＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０５２３４４）。
【０３２２】
レンチウイルスおよびレトロウイルスベクター
レンチウイルスを、本質的に以前に説明されているように（Ｍａｔｔａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ．２（２）：２０６−１０．２００３）、２９３ＦＴ細胞におけるリン酸カルシウムベースのトランスフェクションによって生成した。２９３ＦＴ細胞を、１０％ＦＣＳ、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、０．１ｍＭ  ＭＥＭ非必須アミノ酸、および１ｍＭ  ＭＥＭピルビン酸ナトリウムを有するＤＭＥＭ（本明細書によってＤＭＥＭ−１０と称される）中で成長させた。レンチウイルスを生成するために、トランスフェクション当日におよそ８０％コンフルエントになるように、２９３ＦＴ細胞を１０ｃｍの組織培養プレート内の抗生物質なしの１０ｍＬのＤＭＥＭ−１０培地中にプレーティングした。翌日、これらの細胞を、異なる遺伝子をコードする１０μｇのレンチウイルス発現プラスミド、７．５μｇのＰＳＰＡＸ２プラスミド、および２μｇのＰＬＰ／ＶＳＶＧプラスミドを使用して、リン酸カルシウムトランスフェクション法によってトランスフェクトした。トランスフェクションのおよそ１５〜１６時間後、９ｍＬの培地を除去し、５ｍＬの新鮮な培地と交換した。トランスフェクションのおよそ４８時間後、５ｍＬの上清を収集し（第１の収集）、５ｍＬの新鮮な培地と交換した。トランスフェクションのおよそ７２時間後、全ての培地を収集した（第２の収集、通常約６ｍＬ）。収集した上清をプールし、１０００ｒｐｍで１分間遠心分離して、いずれの細胞残屑も非付着性細胞も除去した。無細胞上清を、０．４５μｍのシリンジフィルターを通して濾過した。ある場合には、上清を４℃で２時間にわたる１８５００ｒｐｍでの超遠心分離によってさらに濃縮した。ウイルスペレットをＸＶＩＶＯ培地中の初期体積の１０分の１の体積中に再懸濁した。ウイルスを新鮮なうちに使用して標的細胞を感染させるか、または−８０℃で一定分量を凍結保存した。
【０３２３】
Ｔ細胞およびＰＢＭＣの感染
バフィーコート細胞をＢｌｏｏｄ  Ｂａｎｋ  ａｔ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ｏｆ  Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓの健常な匿名成人ドナーから入手し、それらを使用して末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心分離によって単離した。ＰＢＭＣをそのままの状態で使用するか、またはそれを使用して、Ｔ細胞を製造業者の指示に従ってＣＤ３電磁マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して単離した。ＰＢＭＣまたは単離されたＴ細胞を、１０ｎｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、および１００ＩＵの組換えヒト−ＩＬ２で置き換えたＸＶＩＶＯ培地（Ｌｏｎｚａ）中に再懸濁した。細胞を３７℃／５％ＣＯ２の加湿インキュベーター内で培養した。細胞をレンチウイルスベクターに感染させる前に上記の培地中で１日間活性化した。概して、初代細胞（例えば、Ｔ細胞）を、午前中に、スピン感染（１８００ｒｐｍ、３７℃で９０分間）を使用して８μｇ／ｍＬのＰｏｌｙｂｒｅｎｅ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｈ９２６８）の存在下でＸＶＩＶＯ培地中に再懸濁された３００μＬの濃縮ウイルスに感染させた。培地を夕方に交換し、感染をさらに２日間続けて、合計３回感染させた。３回目の感染後、細胞をペレット化し、１０ｎｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、および１００ＩＵの組換えヒト−ＩＬ２を含有し、かつ（必要に応じて）それぞれの抗生物質を補充した新鮮なＸＶＩＶＯ培地中に再懸濁し、別途指示されない限り、選択のために細胞培養フラスコ内に置いた。薬物選択を使用しなかった場合、細胞を上記の培地中で１０〜１５日間培養し、薬物選択を使用した場合、２０〜３０日間培養した。細胞を、ＥＧＦＰを発現するレンチウイルスに感染させた場合、これらの細胞を薬物選択なしで拡大させるか、または流動選別して、ＥＧＦＰ発現細胞を富化した。がん細胞株の感染のために、およそ５００，０００個の細胞を、総体積３ｍＬのＰｏｌｙｂｒｅｎｅ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｈ９２６８）中２ｍＬの未濃縮ウイルス上清に感染させた。翌朝、細胞をペレット化し、それぞれの抗生物質を有する培地中に再懸濁し、選択のために細胞培養フラスコ内に置いた。
【０３２４】
２９３ＦＴ細胞を、１０μｇのレトロウイルス構築物、４μｇのｐＫＡＴ、および２μｇのＶＳＶＧプラスミドを使用して、１０ｍＬのＤＭＥＭ−１０培地中の１０ｃｍの組織培養プレート内で概ねトランスフェクトしたことを除いて、レンチウイルスベクター産生について上に記載される手順と本質的に同様の手順をレトロウイルスベクターの生成に使用した。ウイルス収集および標的細胞感染を、レンチウイルスベクターについて本質的に上に記載されるように行った。
【０３２５】
抗体および薬物
ブリナツモマブをＡｍｇｅｎから入手した。ジギトニンをＳｉｇｍａから購入し（カタログ番号Ｄ１４１）、１００ｍｇ／ｍＬの原液をＤＭＳＯ中で作製した。１ｍｇ／ｍＬの希釈原液をＰＢＳ中で作製した。細胞溶解に使用したジギトニンの最終濃度は、別途指示されない限り、３０μｇ／ｍＬであった。
【０３２６】
ＥＬＩＳＡ
ヒトＩＬ２、ＩＦＮγ、ＩＬ６、およびＴＮＦαを、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）およびＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから市販されているＥＬＩＳＡキットを使用し、かつ製造業者の推奨に従って、特異的標的細胞株と２４〜９６時間共培養したＣＡＲ発現Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰエフェクター細胞またはＴ細胞の細胞培養上清中で測定した。
【０３２７】
ＣＡＲの発現を検出するためのＦＡＣＳ分析
マウス抗ヒトｃ−Ｍｙｃ  ＡＰＣコンジュゲートモノクローナル抗体（カタログ番号ＩＣ３６９６Ａ）は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）製のものであった。ビオチン化タンパク質ＬをＧｅｎｅＳｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）から購入し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で１ｍｇ／ｍＬで再構成し、４℃で保管した。ストレプトアビジン−ＡＰＣ（ＳＡ１００５）をＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。
【０３２８】
Ｍｙｃ染色を使用してＣＡＲを検出するために、１×１０６細胞を採取し、４％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）洗浄緩衝液を含有する３ｍＬの氷冷１×ＰＢＳで３回洗浄した。洗浄後、細胞を、１０μＬのＡＰＣコンジュゲートＭｙｃ抗体を含有する０．１ｍＬの氷冷洗浄緩衝液中に再懸濁し、暗所で１時間インキュベートし、その後、氷冷洗浄緩衝液で２回洗浄した。
【０３２９】
タンパク質Ｌ染色を使用してＣＡＲを検出するために、１×１０６細胞を採取し、４％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）洗浄緩衝液を含有する３ｍＬの氷冷１×ＰＢＳで３回洗浄した。洗浄後、細胞を、１μｇのタンパク質Ｌを含有する０．１ｍＬの氷冷洗浄緩衝液中に４℃で１時間再懸濁した。細胞を氷冷洗浄緩衝液で３回洗浄し、その後、０．１ｍＬの洗浄緩衝液中１０μＬのＡＰＣコンジュゲートストレプトアビジンと３０分間インキュベートし（暗所で）、その後、氷冷洗浄緩衝液で２回洗浄した。ＦＡＣＳを、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製のＦＡＣＳＶｅｒｓｅ分析器を使用して行った。
【０３３０】
細胞死アッセイ
細胞死を測定するために、Ｇｌｕｃ、ＮＬｕｃ、および他のルシフェラーゼの異所性サイトゾル発現に基づく新規のアッセイを、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０５２３４４“Ａ  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ”に記載されるように利用した。この方法は、健常な細胞内に優先的に保持されるが、死細胞および瀕死細胞から放出されるか、または活性が死細胞および瀕死細胞において優先的に測定され得るかのいずれかの様式での標的細胞におけるレポーターの発現を含む。このアッセイに好ましいレポーターは、１）Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓ等のカイアシ類由来のルシフェラーゼの非分泌形態、２）ＮａｎｏＬｕｃ等の深海エビ由来の操作されたルシフェラーゼレポーターである。いくつかのかかる例示的なレポーターベクターの配列を、配列番号３８４５〜配列番号３８５１に提供する。上記のベクターを使用してレトロウイルスおよびレンチウイルスを生成し、次いで、これらを使用して、適切な抗生物質での選択後にＧＬｕｃ、ＮＬｕｃ、またはＴｕｒｂｏＬｕｃを安定的に発現するいくつかの標的細胞株のポリクローナル集団を生成した。別途指示されない限り、異なるルシフェラーゼを安定的に発現する標的細胞を培地中の３８４ウェルプレート内に三連でプレーティングし、標的細胞を成長させるために使用した。懸濁液中で成長する標的細胞を２〜３×１０４／ウェルの濃度で概ねプレーティングし、付着性単層として成長する標的細胞を１〜２×１０４／ウェルの濃度でプレーティングした。別途指示されない限り、標的細胞を遺伝子修飾されたＴ細胞（すなわち、ＣＡＲを発現するもの）と１：１〜１０：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で４時間〜９６時間共培養した。標的細胞が付着細胞（例えば、ＨｅＬａ細胞）として成長する場合、それらをウェルの底部に一晩付着させた後にＴ細胞を添加した。標的細胞の溶解のＴ細胞媒介誘導を、以下に記載されるように天然セレンテラジン（Ｎａｎａｏｌｉｇｈｔ）を含有する０．５×ＣＴＺアッセイ緩衝液を直接注入することによってＢｉｏＴｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙプレートリーダーによって測定されるルシフェラーゼ活性の増加によってアッセイした。
【０３３１】
ＣＴＺアッセイ
天然セレンテラジンの１００倍原液（ＣＴＺ、Ｎａｎｏｌｉｇｈｔ、カタログ番号３０３）を、ＣＴＺの経時的な酸化を避けるために１ｍｇの凍結乾燥ＣＴＺ粉末を３０μＬの６Ｎ  ＨＣｌを補充した１．１ｍＬの１００％メタノール中に溶解することによって作製した。ＣＴＺアッセイ緩衝液を作製するために、ＣＴＺの１００倍原液をＰＢＳ中で０．５倍濃度に希釈した。別途指示されない限り、総体積１５μＬのＣＴＺアッセイ緩衝液（上で調製されたもの）を、体積およそ５０〜６０μＬの培地中のルシフェラーゼの非分泌型を発現する細胞を含有する３８４ウェル白色プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、３８４ウェル白色プレートカタログ番号７８１０７５）の各ウェルに添加し、ＢｉｏＴｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙＨ４プレートリーダーを使用してプレートを発光について読み取った。９６ウェルプレートの場合、細胞を２００μＬの培地中にプレーティングし、およそ５０μＬの０．５倍ＣＴＺアッセイ緩衝液を添加した。別途指示されない限り、０．５倍ＣＴＺアッセイ緩衝液を、ＧＬｕｃ、ＴｕｒｂｏＬｕｃ１６、およびＭＬｕｃ７の活性をアッセイするために使用した。ＣＴＺアッセイ緩衝液（０．１２５倍濃度に希釈したもの）もいくつかの実験でＮＬｕｃ活性を測定するために使用した。概して、別途指示されない限り、添加した０．５倍ＣＴＺアッセイ緩衝液の体積は、細胞を含有するウェル中の液体の体積のおよそ４分の１であったが、このアッセイは、０．５倍ＣＴＺアッセイ緩衝液を、細胞を１：１の体積比で含有する培地に添加したときにも機能した。培地のみ（Ｍｅｄ）を含有するウェルおよび標的細胞をいずれのＣＡＲ構築物（Ｔ−ＵＩ）にも感染しなかったＴ細胞とインキュベートしたウェルにおけるＧｌｕｃ活性を、必要に応じて対照として使用した。
【０３３２】
標的細胞上での抗原の発現を検出し、ＣＡＲおよびＢｉＴｅの構築に使用される様々な抗原結合部分の抗原結合活性を決定するためのアッセイ
標的細胞上での抗原の発現を、抗原特異的抗体での免疫染色または参照により全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２５６０２に記載の高感度抗原検出アッセイと組み合わせた生物情報学アプローチによって決定した。このアッセイは、ＧＬｕｃまたはＮＬｕｃレポーター断片の、抗体の抗原結合ドメイン、ｓｃＦｖ、ｖＨＨ、もしくは任意の他の抗原結合断片、または任意の受容体およびリガンドへのの融合を含む。結果として生じた融合タンパク質を、試験抗原を発現する標的細胞とインキュベートし、融合タンパク質の結合を、セレンテラジンまたはルシフェラーゼレポーターの他の好適な基質の添加によって決定する。
【０３３３】
ＣＡＲ  Ｔ細胞の多様なプールの生成
上記のアッセイを使用して、本発明のＣＡＲの構築に使用される異なる抗原結合モジュール（例えば、ｓｃＦｖ、ｖＨＨ、受容体、リガンド）をスクリーニングし、特異的結合活性を示すことが認められた抗原結合モジュールをＣＡＲの構築のために選択した。さらに、ｓｃＦＶ断片のうちのいくつかも、文献または我々の実験室におけるそれらの既知の活性に基づいて選択した。
【０３３４】
異なるＣＡＲまたはＣＡＲのサブセットが、病原細胞および疾患関連細胞の有病率およびそれらにおける標的抗原の発現レベル、疾患負荷、ならびに疾患の進行速度を含むが、これらに限定されない様々な要因に応じて異なる疾患状態に最適に適合されることが可能である。異なるＣＡＲは、それらの有効性および毒性プロファイルならびに患者の状態に応じて異なる患者における単一の疾患状態にさえも最適に適合され得る。本開示は、多様な養子免疫応答の生成の著しい技術的および論理的な困難への解決策を提供する。
【０３３５】
正常ＴＣＲ多様性が遺伝子再編成によってもたらされる。胸腺における厳密な陽性および陰性選択プロセスは、低い親和性範囲内で自己ペプチド／ＭＨＣの認識に制限されるαβ  ＴＣＲを発現するＴ細胞のみが周辺に生息することができることを確実にする。したがって、胸腺環境は、自己制限的であるが、自己反応性ではないαβ  Ｔ細胞のプールの生成を可能にする。
【０３３６】
異なる抗原結合ドメインからのＣＡＲ−Ｔ細胞の多様なプールの生成は、複数の抗原結合ドメインの生成および試験の技術的および経済的困難によって制限される。より重要なことには、抗原結合ドメイン（例えば、抗体のｖＬ断片およびｖＨ断片）が各々他の抗原に結合し、かつ標的外の毒性を引き起こす可能性があるため、複数の抗原結合ドメインのみに基づくＣＡＲの多様なプールは、毒性の危険性の増加を有する可能性がある。したがって、かかるプールの潜在的な多様性は、標的外の毒性の低減に制限されなければならない。本出願は、単一または少数の抗原結合ドメインをＴＣＲ鎖、シグナル伝達ドメイン、および骨格の異なるバリアントに結合させることによって単一または少数の抗原結合ドメインからＣＡＲの多様なプールを生成することによってこの問題を打開する。ＣＡＲプールの多様性は、異なるリンカーの使用によってさらに増加する。このプールを発現するＴ細胞の多様性は、本開示に記載の異なるアクセサリーモジュールの使用によってさらに増加し得る。
【０３３７】
この多様なＣＡＲプールを使用して、その抗原を発現する病原細胞または疾患関連細胞に対する多様な免疫応答を提供することができる。あるいは、この多様なＣＡＲプールは、当該技術分野で既知の技法を使用して任意選択的にＤＮＡバーコード化され、その後、これを使用して、最適な生物学的および臨床的特性を有するＣＡＲの単一群または下位群を選択することができる。これらの特性には、インビトロ生物学的アッセイにおける性能（例えば、細胞毒性、サイトカイン分泌、結合親和性、細胞表面発現、標的外効果、Ｔ細胞増殖、疲弊マーカーの発現、および末端分化等）、インビボアッセイにおける性能（例えば、生存、腫瘍低減、Ｔ細胞持続性、Ｔ細胞拡大等）、ならびに臨床経験（例えば、疾患寛解、再発率、毒性等）が含まれ得るが、これらに限定されない。本開示のＣＡＲを単独でまたは他のＣＡＲならびに当該技術分野で既知の他の天然および合成免疫受容体と組み合わせて、それらの標的抗原を発現する細胞によって引き起こされるか、またはそれに関連する様々な疾患状態を予防および治療するための免疫エフェクター細胞の多様なプールを生成することができる。
【０３３８】
所望の特性を有するＣＡＲを選択するためのインビトロおよびインビボ選択の使用。ＣＤ１９を標的とするＣＡＲ（配列番号１５９４〜１６０８、１０１６〜１０２６、１９００〜１９１０）のプールを、ＴＲＡＣ  ｇＲＮＡおよび当該技術分野で既知の技法を使用して、Ｔ細胞におけるＴＲＡＣ遺伝子座に標的させる。標的ベクターは、ＣＡＲ挿入の終止コドンの下流に位置するＤＮＡバーコードも有する。Ｔ細胞を、末梢血から得ることができる。代替実施形態では、Ｔ細胞を、当該技術分野で既知の技法を使用してｉＰＳＣまたは造血幹細胞の単一のクローンから得る。ＣＡＲプールを発現するＴ細胞をＲＡＪＩ細胞とインビトロで１〜２１日間共培養する。標的細胞と培養する前にＣＡＲ−Ｔ細胞プールの一定分量を収集し、共培養後の様々な日に収集する。試料を次世代シーケンシングに供して、標的細胞への曝露後の異なるＣＡＲの相対頻度を決定する。生物情報学分析を使用して、標的細胞との共培養後のより良好な増殖応答に関連するＣＡＲを決定する。本質的に同様のアプローチを使用して、腫瘍チャレンジに屈する動物と比較して、Ｔ細胞増にインビボでより高い殖能を付与する、および／またはインビボで長期存続する、および／または生存動物における出発Ｔ細胞集団でのそれらの頻度に正規化した場合により高い頻度で存在するＣＡＲを決定する。本開示の代替実施形態では、本質的に同様のアプローチをヒト臨床試料に使用して、より良好な長期生存、より低いサイトカイン放出症候群罹患率、より低い神経毒性、および／またはより高い長期持続性を含むが、これらに限定されない異なる特性および／または結果に関連するＣＡＲを特定する。その後、かかるＣＡＲを単独でまたは様々な組み合わせでのいずれかで使用して、異なる疾患状態および異なる患者の治療の多様な特性を有する、同じまたは異なる抗原結合ドメインを標的とするＣＡＲを含む異なるＣＡＲサブプールを生み出すことができる。他の実施可能形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞をそれらの標的細胞株に曝露し、その後、フローサイトメトリーによって決定される細胞内ＩＦＮγの程度に基づいて異なる組に選別する。低ＩＦＮγ集団対高ＩＦＮγ集団における異なるＣＡＲの頻度を次世代シーケンシングによって決定し、対照ＣＡＲ−Ｔ細胞集団、すなわち、標的細胞株に曝露されていないか、またはＣＡＲの標的を発現しない細胞株に曝露されるＣＡＲ−Ｔ細胞におけるそれらの頻度に正規化する。この分析から、異なるＩＦＮγ産生レベルに関連するＣＡＲを決定することができる。同様のアプローチを使用して、より低い疲弊マーカーの発現、より低い末端分化マーカーの発現、および／またはより高い細胞毒性マーカーの発現を含むが、これらに限定されない所望の特性または特質のうちのいずれかまたはそれらの組み合わせを有するＣＡＲをスクリーニングおよび選択することができる。
【０３３９】
共刺激を提供するためのＮＥＭＯ−突然変異体の使用
マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ（配列番号９９２）は、ＮＦ−κＢを構成的に活性化することで知られている。Ｔ細胞に共刺激を提供するこの突然変異体の能力を実証するために、ＣＤ３陽性Ｔ細胞を、１０ｎｇ／ｍＬの可溶性抗ＣＤ３、１０ｎｇ／ｍＬの可溶性抗ＣＤ２８、および１００ＩＵの組換えヒト−ＩＬ２で置き換えたＸＶＩＶＯ培地（Ｌｏｎｚａ）中で培養した。細胞を３７℃／５％ＣＯ２の加湿インキュベーター内で培養し、１日後、ＥＧＦＰを発現するレンチウイルスベクター（ｐＬＥＮＴＩ−ＥＧＦＰ−Ｂｌａｓｔｉｃｉｄｉｎ）、およびマウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ突然変異体（ｐＬＥＮＴＩ−ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ−ＦＬＡＧ−ブラストサイジンおよびｐＬＥＮＴＩ−ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ−ＨＡ−ブラストサイジン）またはマウスＮＥＭＯ−ｗｔ（ｐＬＥＮＴＩ−ｍＮＥＭＯ−ＦＬＡＧ−ブラストサイジン）を発現するレンチウイルスベクターに感染させた。ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０ＡおよびｍＮＥＭＯ−ｗｔの配列を、それぞれ、配列番号９９２および９９１に提供する。感染のおよそ１日後、細胞をブラストサイジンで選択し、細胞の数を定期的に計算した。マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ突然変異体（ｐＬＥＮＴＩ−ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ−ＦＬＡＧ−ブラストサイジンおよびｐＬＥＮＴＩ−ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ−ＨＡ−ブラストサイジン）をコードするレンチウイルスに感染したＴ細胞は、ＥＧＦＰまたはマウスＮＥＭＯ−ｗｔ（ｐＬＥＮＴＩ−ｍＮＥＭＯ−ＦＬＡＧ−ブラストサイジン）をコードするレンチウイルスに感染したＴ細胞と比較して、より活発に増殖することが示された。
【０３４０】
ヒトＮＥＭＯは、もはやマウスＮＥＭＯではなく、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、配列番号９７９）突然変異体は、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ（ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ）突然変異体に相当するｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異体がＮＦ−κＢも活性化するかを試験するために、この突然変異体をコードする発現ベクター（ｐＣＤＮＡ３）を生成した。加えて、アミノ酸残基２７７のＬｙｓ（Ｋ）を異なるアミノ酸残基（例えば、Ｋ２７７Ｑ、Ｋ２７７Ｔ、Ｋ２７７Ｉ、Ｋ２７７Ｎ、Ｋ２７７Ｓ、Ｋ２７７Ｍ、Ｋ２７７Ｇ、Ｋ２７７Ｒ）に置き換えたｈＮＥＭＯのいくつかの他の突然変異体をコードする発現構築物を生成した。異なる構築物をＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物およびＲＳＶ−ＬａｃＺ（正規化対照）レポーター構築物とともに２９３ＦＴ細胞にトランスフェクトし、前述のアッセイを使用してＮＦ−κＢを活性化するそれらの能力について試験した。図３は、ｍＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ突然変異体およびｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異体によるＮＦ−κＢの強い活性化、ならびにｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ｉ突然変異体およびｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ｇ突然変異体による弱い活性化を示す。同様の実験において、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ｌ突然変異体およびｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５突然変異体も、２９３ＦＴ細胞にトランスフェクトしたときにＮＦ−κＢ活性化を示した。ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５突然変異体は、ヒトＮＥＭＯのアミノ酸残基Ｖ２４９〜Ｋ２５５を欠き、Ｋ２７７Ａ突然変異も有する。これらの結果は、ＮＥＭＯの構成的活性突然変異体がマウスＮＥＭＯのＫ２７０残基およびヒトＮＥＭＯのＫ２７７残基を突然変異させることによって迅速に生成および特定され得ることを示唆する。同様のアプローチを使用して、ＮＦ−κＢを活性化する能力を有する他のＮＥＭＯ残基に突然変異体を生成することができる。
【０３４１】
ＦＭＣ６３ベースのＣＤ１９  ＣＡＲ。Ｎ末端ＦＫＢＰｘ２二量体化因子ドメインと融合した全長ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７ＡまたはｈＮＥＭＯ−Ｌ７５３突然変異体（アミノ酸１〜２５１をコードする）と共発現するＣＡＲ構築物を生成した。構築物をＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物およびＲＳＶ−ＬａｃＺレポーター構築物とともに２９３ＦＴ細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションのおよそ８時間後、細胞を未処理のまま放置したか、またはＡＰ２０１８７（１００ｎＭ）で処理した。およそ７２時間後、細胞溶解物を調製し、前述のようにＮＦ−κＢルシフェラーゼおよびＬａｃＺ活性について分析した。ＮＦ−κＢ−Ｌｕｃ活性をＬａｃＺ活性に正規化して、トランスフェクション効率の差を制御した。結果は、ＡＰ２０１８７での処理により、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異体（配列番号１００６）およびＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ７５３（配列番号１００７）突然変異体の両方を共発現する構築物をコードするＣＡＲでトランスフェクトした２９３ＦＴ細胞におけるＮＦ−κＢ活性の増加がもたらされたことを示した。これらの結果は、二量体化因子ドメインと融合した全長ＮＥＭＯまたはその欠失突然変異体の共発現、その後、二量体化因子の付加によってＣＡＲまたはＴＣＲまたはキメラＴＣＲ構築物においてＮＦ−κＢを誘導的様式で活性化する能力を実証する。
【０３４２】
Ｊ−Ｎ−Ｇ細胞を、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７ＡまたはＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ７５３を共発現するＣＤ１９指向性ＦＭＣ６３ベースの第一世代ＣＡＲに感染させる。細胞をＡＰ２０１８７化合物の存在下および不在下でＲＡＪＩ標的細胞と共培養し、これらの細胞がＥＧＦＰ発現を誘導することが示され、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７ＡまたはＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ７５３がＣＡＲとその活性を妨害することなく共発現され得ることを示す。
【０３４３】
ＮＥＭＯに加えて、いくつかの他の細胞タンパク質がＮＦ−κＢを構成的に活性化することで知られており、これらの細胞タンパク質を本発明の代替実施形態で使用して、養子細胞療法の目的のためにＴ細胞に共刺激を提供することができる。例示的なタンパク質としては、ＴＣＬ−１Ａ（配列番号１００５）、ならびに構成的活性突然変異体ＩＫＫα／ＩＫＫ１（ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、配列番号１００４）、ＩＫＫβ／ＩＫＫ２（ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、配列番号１００２）、およびＭＹＤ８８−Ｌ２６５Ｐ（配列番号１０００）が挙げられる。ある実施形態実施形態では、これらのタンパク質は、二量体化因子ドメインなしで発現して、養子細胞療法の目的のためにＴ細胞に構成的共刺激を提供する。これらのタンパク質を、任意のベクター（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、ＡＡＶ、もしくはＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンベクター）、または当該技術分野で既知の非ベクター（ＤＮＡまたはＲＮＡトランスフェクション）遺伝子送達方法を使用してＴ細胞に発現させることができる。あるいは、これらのタンパク質を、当該技術分野で既知の遺伝子改変技法（例えば、Ｃａｓ９、Ｔａｌｏｎ、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ）を使用してそれらのゲノムコピーを改変することによって発現させることができる。例示的な実施形態では、ｈＮＥＭＯの１つ以上のゲノムコピーを、当該技術分野で既知の技法を使用したＴ細胞における相同組換えを使用してｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａに突然変異させる。
【０３４４】
これらの共刺激タンパク質の発現を、Ｔｅｔ誘導性プロモーターまたはＲｈｅｏＧｅｎｅ系等の当該技術分野で既知の誘導性プロモーターを使用してそれらを発現させることによって制御することができる。ある実施形態では、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異体およびｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５をｐＳＬＩＫ−Ｔｅｔ−Ｏｎベクターにクローン化し（Ｇｏｐａｌａｋｒｉｓｈｎａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；１９（１８），２０１３）、結果として生じたウイルスをＴ細胞の感染のために使用する。Ｔ細胞のドキシサイクリンでの処理がｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７ＡおよびｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５発現ならびにＮＦ−κＢ活性誘導することが示される。ＮＦ−κＢ活性を、ＡｌｅｘａＦｌｏｕｒコンジュゲートＰｈｏｓｐｈｏ−ＩκＢα抗体およびフローサイトメトリーによって測定する。
【０３４５】
本発明の代替実施形態では、他のＮＦ−κＢ活性化タンパク質またはそれらのシグナル伝達ドメイン（例えば、ＩＫＫ１、ＩＫＫ２、ＲＩＰ等）を、二量体化因子ドメインとの融合として発現させて、Ｔ細胞に共刺激を誘導的様式で提供する。本発明のこれらの構成的または誘導的ＮＦ−κＢ活性化タンパク質が他の免疫細胞（ＮＦ−κＢ活性化がそれらの機能を増強することで知られている細胞、例えば、ＮＫ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞等）に共刺激を提供することができるため、これらの使用は、Ｔ細胞に共刺激を提供することに限定されない。ＮＦ−κＢがアポトーシスから保護し、かつ細胞生存を促進することで知られているため、これらの構成的および誘導的ＮＦ−κＢ活性化タンパク質を細胞操作に使用して、生物学的製品の製造に使用される細胞の生存を増強することもできる。例示的な実施形態では、ハイブリドーマ細胞を、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５（配列番号７７６９）、Ｋ１３、ＩＫＫα／ＩＫＫ１（ＩＫＫ１−ＳＳ／ＥＥ、配列番号１００４）、ＩＫＫβ／ＩＫＫ２（ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、配列番号１００２）、またはＭＹＤ８８−Ｌ２６５Ｐ（配列番号１０００）を構成的に発現するように操作して、それらの増殖および高細胞密度で成長する能力を増強する。
【０３４６】
Ｔ細胞養子細胞療法のためのＮＦ−κＢ活性化因子
バフィーコート細胞をＢｌｏｏｄ  Ｂａｎｋの健常な匿名成人ドナーから入手し、それらを使用して末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心分離によって単離する。Ｔ細胞を、ＣＤ３マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して単離し、ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓおよび５０ＩＵ／ｍＬの組換えＩＬ２を補充したＸＶＩＶＯ１５培地中で培養する。あるいは、Ｔ細胞を、１０ｎｇ／ｍＬのＣＤ３抗体、１０ｎｇ／ｍＬのＣＤ２８抗体、および１００ＩＵの組換えヒト−ＩＬ２で置き換えたＸＶＩＶＯ培地（Ｌｏｎｚａ）中に再懸濁する。
【０３４７】
翌日、Ｔ細胞を、ｐＣＣＬ３−ＭＮＤ３骨格におけるＣＤ１９標的ＣＡＲ（次世代ＣＡＲを含む）をコードするレンチウイルスベクターに感染させる。ＣＡＲの核酸配列を、配列番号１０１６〜１０２９、１３１８〜１３３１、１５９４〜１６０４、１９００〜１９１３、２２０６〜２２１９、２５１２〜２５２５、２８１８〜２８３１、３１２４〜３１２７、３３２４〜３３２７に示す。加えて、Ｔ細胞を、上記の構築物に相当するが、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａモジュールを欠くＣＡＲ構築物に感染させる。各感染について、１８００万個のＴ細胞を、６ウェルプレート内での３２℃で９０分間の２８００ｒｐｍでのスピン感染によって、５００μＬの異なるＣＡＲ構築物をコードする濃縮ウイルスおよび８μｇ／ｍＬのポリブレンに感染させる。プレートを３７℃で６時間インキュベートする。細胞を収集し、遠心分離してウイルスおよびポリブレンを除去し、新鮮な培養培地中に再懸濁し、３７℃で一晩培養する。
【０３４８】
翌日、スピン感染を繰り返し、細胞を、ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ、５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ２、および５％ＦＢＳを補充したＸＶＩＶＯ１５培地を有するＴ−７５細胞培養フラスコに移す。
【０３４９】
拡大の４日後、ＣＡＲ−Ｔ細胞を、タンパク質Ｌ染色、ＣＤ１９結合、サイトカイン産生（ＩＬ２、ＩＦＮγ、ＴＮＦａ）、および細胞毒性（Ｍａｔａｄｏｒアッセイ）を使用してＣＡＲ発現について確認する。
【０３５０】
拡大の１０日後、ＣＡＲ／ＳＩＲ−Ｔ細胞をインビボ実験に使用する。この目的のために、ＮＳＧマウスに１０６Ｎａｌｍ−６−Ｌｕｃ細胞を尾静脈注射によって注射する。２日後、３×１０６ＣＡＲ／ＳＩＲ−Ｔ細胞を注射する。マウスをＤ−ルシフェリンの投与後に生物発光画像化法によって毎週画像化し、生存について追跡する。
【０３５１】
第一世代ＣＡＲをｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（配列番号１５９４−１６０４）とともに発現するＴ細胞が、ＢＢｚ共刺激ドメインを有する第二世代ＣＡＲ（配列番号１５９４〜１６０４）を発現するＴ細胞と比較して、ＲＡＪＩ細胞に曝露したときに、ＥＬＩＳＡによって測定される優れたＩＬ２産生を示すことに留意されたい。加えて、第一世代ＣＡＲをｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（配列番号１５９４−１６０４）とともに発現するＴ細胞は、ＢＢｚ共刺激ドメインを有する第二世代ＣＡＲ（配列番号１５９４〜１６０４）を発現するＴ細胞と比較して、ＲＡＪＩ細胞と３週間にわたって共培養したときに、細胞増殖、サイトカイン（ＩＬ２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα）産生、疲弊マーカーの発現（例えば、ＰＤ１）、および細胞毒性（Ｍａｔａｄｏｒ細胞毒性アッセイ）によって測定されるより低い疲弊兆候を示す。最後に、第一世代ＣＡＲをｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（配列番号１５９４〜１６０４）とともに発現するＴ細胞は、ＮＡＬＭ−６−Ｌｕｃ細胞を異種移植したＮＳＧマウスに投与したときに、インビボでのＴ細胞拡大および持続性、腫瘍成長の低減、ならびに改善された生存によって決定される優れたインビボ活性を示す。第一世代ＣＡＲをｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（骨格２、配列番号１５９４〜１６０４）とともに発現するＴ細胞は、概して、第一世代ＣＡＲを発現し、かつｖＦＬＩＰ  Ｋ１３（すなわち、骨格１、配列番号１０１６〜１０２９）を共発現するＴ細胞と比較して、ＲＡＪＩ細胞に曝露したときに、サイトカイン（例えば、ＩＬ２、ＩＦＮγ、およびＴＮＦα）のより弱い産生を示す。
【０３５２】
ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａを発現する配列番号１９００〜１９１３、２２０６〜２２１９、２５１２〜２５２５、２８１８〜２８３１、３１２４〜３１２７、３３２４〜３３２７に対応するＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞は、同様であるが、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａモジュールを欠く構築物を発現するＴ細胞と比較して、優れたインビトロおよびインビボ活性を示す。ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａモジュールの共発現がＣＤ２０を標的とするＳＩＲ（配列番号９６８３）を発現するＴ細胞のインビトロおよびインビボ性能を改善することも示される。これらの結果は、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａアクセサリーモジュールの共発現が、第一世代ＣＡＲ構築物のみならず、ＴＦＰ、Ａｂ−ＴＣＲ、およびＳＩＲのインビトロ活性（例えば、増殖、サイトカイン産生、疲弊の遅延）およびインビボ活性（例えば、改善されたＴ細胞の拡大および抗腫瘍活性）も増強することを実証する。
【０３５３】
同じ骨格を有するが、異なる抗原結合ドメインを有する異なる構築物間の相違にも留意されたい。したがって、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（すなわち、骨格２）を共発現する第一世代ＣＡＲ構築物のうち、４Ｇ７（例えば、配列番号１５９９）、ｈｕＢｌｙ３（例えば、配列番号１６０４）、およびｈｕＳＪ２５Ｃ１（例えば、配列番号１６０５）ｓｃＦＶに由来する抗原結合ドメインを有する構築物は、ＦＭＣ６３（例えば、配列番号１５９４）、ｈｕ−ＦＭＣ６３−１１（例えば、配列番号１５９５）、ｈｕＦＭＣ６３−１１−Ｎ２０３Ｑ（例えば、配列番号１５９６）、Ｂｕ１２（例えば、配列番号１５９７）、ＣＤ１９−ＭＯＲ００２８（例えば、配列番号１６０２）、およびＣＤ１９−ｈｕ−ｍＲＯＯ５（例えば、配列番号１６０７）に基づくｓｃＦｖに由来する抗原結合ドメインを有する構築物と比較して、概ね弱い。同様の傾向が、ＣＡＲの抗原結合ドメインの性質に基づく他の骨格でのＣＡＲのインビトロおよびインビボ活性で観察される。
【０３５４】
前述の実験では、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａモジュールを単一のベクターを使用してＴ細胞にＣＡＲモジュールと共発現させる。２つの別個のレンチウイルスベクターを使用して２つのモジュールを発現させる実験を繰り返す。ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａモジュールを欠く例示的なＣＤ２０  ＣＡＲをコードする核酸構築物の配列番号は、配列番号９６６８に提示される。Ｔ細胞を２つのレンチウイルスベクターに５の感染多重度で共感染させ、２つのベクターの比率（すなわち、ＣＡＲ：ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ）は、１：１〜１：１０である。Ｔ細胞を拡大させ、インビトロおよびインビボアッセイにおいて試験する。ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７ＡのＣＡＲ構築物との共発現が、ＩＬ２産生、細胞増殖、疲弊の欠如、インビボ拡大、および抗腫瘍活性についてのアッセイによって決定される、ＣＡＲ−Ｔ細胞のインビトロおよびインビボ性能を改善することが示される。
【０３５５】
代替実施形態では、当該技術分野で既知の遺伝子編集技法（例えば、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９、ＴＡＬＯＮ、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ等）を使用した相同組換えを使用して、Ｔ細胞における内在性ヒトＮＥＭＯ遺伝子の一方または両方でのＫ２７７Ａ突然変異を誘導する。その後、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異を有する結果として生じたＴ細胞を、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲ構築物およびＮＹ−ＥＳＯ−１を標的とするＴＣＲ構築物の発現を含む養子細胞療法に使用する。ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異を有するＴ細胞が、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異を欠く対照Ｔ細胞と比較して、増強された増殖、サイトカイン産生、拡大、インビボでの長期持続性、および抗腫瘍活性を示すことが示される。
【０３５６】
ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａアクセサリーモジュールを、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（配列番号１００６）、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ７５３（２５１）（配列番号１００７）、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ６００（２００）（配列番号１００８）、ＩＫＫ２−デルタ−ＳＣＤ−ＦＫＢＰｖ３６ｘ２（配列番号７７８２）、ＩＫＫ１−デルタ−ＳＣＤ−ＦＫＢＰｖ３６ｘ２（配列番号７７８１）、およびＦＫＢＰｘ２−ＲＩＰ−ＩＤ（配列番号１００９）をコードするアクセサリーモジュールに置き換えたＣＡＲ構築物を使用することによって、前段落に記載の実験を繰り返す。ＣＡＲおよびこれらのアクセサリーモジュールを発現するＴ細胞を、二量体化因子ＡＰ２０１８７（１００ｎＭ）の不在下および存在下でのインビトロアッセイを使用して試験する。ＡＰ２０１８７の付加により、標的抗原（すなわち、ＣＤ１９）を発現するＲＡＪＩ細胞に曝露したときに、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（配列番号１００６）、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ７５３（２５１）（配列番号１００７）、ＩＫＫ２−デルタ−ＳＣＤ−ＦＫＢＰｖ３６ｘ２（配列番号７７８２）、ＩＫＫ１−デルタ−ＳＣＤ−ＦＫＢＰｖ３６ｘ２（配列番号７７８１）、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ６００（２００）（配列番号１００８）、およびＦＫＢＰｘ２−ＲＩＰ−ＩＤ（配列番号１００９）モジュールを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞による増殖およびサイトカイン産生が誘導されることが示される。インビボ実験では、ＮＳＧマウス（１群当たりｎ＝１２）に２００万個のＲＡＪＩ−Ｌｕｃ細胞を尾静脈注射によって異種移植し、３日後、ＣＤ１９−ＣＡＲを発現し、かつＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（配列番号１００６）、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ７５３（２５１）（配列番号１００７）、ＦＫＢＰｘ２−ｈＮＥＭＯ−Ｌ６００（２００）（配列番号１００８）、およびＦＫＢＰｘ２−ＲＩＰ−ＩＤ（配列番号１００９）モジュールを共発現するＴ細胞を５００万個投与する。各群のマウスの半数（ｎ＝６）に、以前に説明されているように（Ｃｈｉｎｎｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９；１８２：２７３８−２７４４）、４０μｇのＡＰ２０１８７を腹腔内注射によって１０日間毎日投与する。ＡＰ２０１８７投与により、ＣＡＲ−Ｔ細胞の拡大が促進されることが示される。代替実施形態では、この実験を、両方のＦＫＢＰドメインが脂質透過性二量体化リガンドＲｉｍｉｄｕｃｉｄに高親和性で結合するＦＫＢＰ１２Ｖ３６突然変異を有する構築物を使用して繰り返す。融合タンパク質の二量体化は、Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄの投与によってもたらされる。インビトロ実験の場合、Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄを１０〜１００ｎＭの最終濃度で使用する。ＮＳＧマウスにおけるインビボ研究の場合、Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄを５ｍｇ／ｋｇで腹腔内（ｉ．ｐ）注射により毎週投与する。
【０３５７】
ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａアクセサリーモジュールを、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＭＹＤ８８−Ｌ２６５Ｐ、ＴＣＬ−１Ａ、およびＭＴＣＰ−１をコードするアクセサリーモジュールに置き換えた構築物を使用することによって、前段落に記載の実験を繰り返す。ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ＤｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ、ＩＫＫ１−Ｓ１７６Ｅ−Ｓ１８０Ｅ、ＭＹＤ８８−Ｌ２６５Ｐアクセサリーモジュールを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞が、これらのアクセサリーモジュールを欠くＣＡＲ−Ｔ細胞と比較して、増加したサイトカイン産生、増殖、インビボ拡大、および抗腫瘍活性を示すことが示される。ＴＣＬ−１ＡおよびＭＴＣＰ−１アクセサリーモジュールを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞が増加した増殖応答を有することが示される。
【０３５８】
ワクチン接種におけるヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅの使用
ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅを発現するレンチウイルスベクターを生成する。ニワトリオボアルブミンアミノ酸残基２４２〜３５３およびＲｏｗｅ  ＨＭ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１３，２，２００６に記載されるバリアント鎖における主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩのＣ末端（Ｉｉ−ＯＶＡ）を発現するレンチウイルスベクターも生成する。最後に、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、またはＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅをコードするカセットを、Ｉｉ−ＯＶＡをコードするカセットと共発現するレンチウイルスベクターを生成し、これらの２つのカセットは、２Ａ切断配列によって分離されている。
【０３５９】
ＤＣの形質導入およびフローサイトメトリー。マウス骨髄由来の樹状細胞（ＤＣ）を前述のように調製する。記載されるように（Ｒｏｗｅ  ＨＭ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１３，２，２００６）、４日目に未熟ＤＣに２０のＭＯＩでレンチウイルスベクターを形質導入し、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含有する新鮮な培地（５０ｎｇ／ｍＬ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ製）を４日毎に供給する。形質導入後５日目に、ＤＣを採取し、洗浄し、Ｆｃ受容体を遮断した後、以下のビオチンコンジュゲート抗体：抗ＣＤ１１ｃ、抗ＣＤ８６、および抗Ｉ−Ａｂ（ＭＨＣクラスＩＩ）（全てＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）、抗ＣＤ４０（Ｓｅｒｏｔｅｃ製）、ならびに抗ＣＤ８０、抗ＩＣＡＭ−１、および抗Ｋｂ（ＭＨＣクラスＩ）（全てｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製）で成熟マーカーについて表面染色する。ハムスターアイソタイプ対照抗体（ビオチンコンジュゲート）をＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから購入する。その後、抗体をストレプトアビジンＲＰＥ  Ｃｙ−５  ２ｏ試薬（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ）で標識した後、フローサイトメトリーを行う。リポ多糖類（ＬＰＳ）（５０ｎｇ／ｍＬ）（Ｓｉｇｍａ）を形質導入していないＤＣに添加し、成熟の陽性対照として一晩放置する。ザイモサンＡ（１０μｇ／ｍＬ）処理物（３７℃で３０分間）をＥＲＫ活性化の対照として使用する。
【０３６０】
ＥＬＩＳＡ。培養上清を５×１０５細胞／ウェル（１．５ｍＬ中）でプレーティングした  ＤＣから採取する。ＩＬ−１２ｐ７０および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）を、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製のキットを製造業者のガイドラインに従って使用して、サンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって検出する。
【０３６１】
ＤＣのリンパ節からの精製。Ｃ５７／ＢＬ６マウス（Ｈａｒｌａｎ）の尾の付け根に１×１０８感染単位（ｉ．ｕ．）のレンチベクターを皮下（ｓ．ｃ．）注射する。６日後、リンパ節（傍大動脈および鼠径部）を採取し（各群のマウス由来の細胞をプールした）、コラゲナーゼＣＬＳ−４（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ）とインキュベートし、潰して、単細胞懸濁液を得る。Ｆｃ受容体を遮断した後、ＭＡＣＳビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用してＣＤ１１ｃ陽性細胞を選択する。
【０３６２】
五量体染色。１試料当たり１００万個の脾細胞を１０μＬのフィコエリトリンコンジュゲートＳＩＩＮＦＥＫＬ／Ｋｂ五量体または四量体（Ｐｒｏｉｍｍｕｎｅ）と室温で１２分間インキュベートする。その後、細胞を洗浄し、ビオチンコンジュゲート抗ＣＤ８（Ｓｅｒｏｔｅｃ）と氷上で１５分間インキュベートした後、洗浄し、ストレプトアビジン−アロフィコシアニン（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と１５分間インキュベートする。試料を洗浄し、Ｃｅｌｌ−Ｑｕｅｓｔソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＢＤ  ＬＳＲ機上に得る。
【０３６３】
細胞内サイトカイン染色。脾細胞をＯＶＡ２５７−２６４ペプチドありまたはなしで一晩インキュベートする。モネンシン溶液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、最終濃度２μＭ）を添加し、３時間放置した後、細胞をＣＤ８について表面染色する。その後、細胞を固定し、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製のＣｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍキットを使用して透過化する。その後、アロフィコシアニンコンジュゲート抗ガンマインターフェロン（抗ＩＦＮ−γ）抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を添加し、３０分間放置した後、細胞を洗浄し、試料をＢＤ  ＬＳＲ機にかける。
【０３６４】
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ。酵素結合免疫スポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）プレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に、精製された抗ＩＦＮ−γ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を４℃で一晩コーティングする。クラスＩ  ＯＶＡ２５７−２６４ペプチド（Ｐｒｏｉｍｍｕｎｅ）ありまたはなしで、全脾細胞を三連で連続希釈して、エクスビボＥＬＩＳＰＯＴアッセイを行う。プレートを一晩培養し、製造業者の指示に従って成長させる。ＡＩＤ  ＥＬＩＳＰＯＴ計数器およびソフトウェアを使用してスポットを計数する。
【０３６５】
腫瘍療法。ＥＧ７．ＯＶＡ腫瘍細胞を、０．４ｍｇ／ｍＬのＧ４１８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有するＲＰＭＩ中で成長させる。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２×１０６腫瘍細胞をｓ．ｃ．注射してフラスコに入れ、その後、ワクチン接種する。これらのマウスを、１５ｍｍ超の直径に達した腫瘍を有した時点で屠殺する。
【０３６６】
マウスＢＭ由来の樹状細胞（ＤＣ）を、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅをコードするレンチベクターに単独でまたはＩｉ−ＯＶＡと組み合わせてのいずれかで感染させる。ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅの発現により、細胞質ｐ６５のレベルがより高い未処理または対照ベクターＤＣではなく、ＬＰＳ処理ＤＣにおけるレベルと同様のレベルでＤＣの核におけるｐ６５（ＲｅｌＡ）の核転座がもたらされることが示される。増加した核ＮＦ−κＢ結合活性もヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅで形質導入されたＤＣにおいて検出されるが、核ＡＰ１結合活性によって決定されるＭＡＰＫ経路の活性化に影響を及ぼさない。
【０３６７】
ＢＭ由来のＤＣを、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅで形質導入した後、形質導入細胞または非形質導入細胞上の成熟マーカーを分析する。ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＩＣＡＭ−１、およびＣＤ８０は、対照ベクター群における形質導入ＤＣと比較して、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅを発現するＤＣにおいて上方調節される。さらに、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅで形質導入されたＤＣが、それらの上方調節されたＣＤ８６を培養下で数週間保持することが示される。ＩＬ−１２ｐ７０およびＴＮＦ−αの分泌が、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅで形質導入されたＤＣ培養下で上方調節されることが認められる。
【０３６８】
レンチベクターをｓ．ｃ．注射した後、形質導入されたＤＣが流入領域リンパ節内で検出される。同様のパーセンテージのリンパ節ＤＣ（ＣＤ１１ｃ＋／ＭＨＣクラスＩＩ＋）を、対照またはヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅベクターのいずれかをｓ．ｃ．注射した後に形質導入する。しかしながら、対照ベクターを注入した動物と比較して、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅを注入した動物におけるＤＣにおいてＣＤ８６が上方調節される。
【０３６９】
ｓ．ｃ．ワクチン接種後にマウスにおけるＯｖａ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導する、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−２Ａ−Ｉｉ−ＯＶＡ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５−２Ａ−Ｉｉ−ＯＶＡ、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ−２Ａ−Ｉｉ−ＯＶＡ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ−２Ａ−Ｉｉ−ＯＶＡ、およびＩｉ−ＯＶＡをコードするベクターの能力を試験する。５×１０５ｉ．ｕ．のベクター用量を使用する。ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−２Ａ−Ｉｉ−ＯＶＡ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５−２Ａ−Ｉｉ−ＯＶＡ、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ−２Ａ−Ｉｉ−ＯＶＡ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ−２Ａ−Ｉｉ−ＯＶＡをワクチン接種したマウスは、細胞内蛍光活性化細胞選別またはＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定される、ＳＩＩＮＦＥＫＬ／Ｋｂ五量体陽性ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＩＦＮ−γ分泌ＣＤ８＋Ｔ細胞を示す。
【０３７０】
マウスに致死量のＥＧ７．ＯＶＡ腫瘍細胞を接種した後に、形質導入ＤＣまたはヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅベクターのいずれかを直接ワクチン接種する。全てのマウスが腫瘍を発症することが示される。形質導入ＤＣ注射またはレンチベクター直接注射のいずれか後、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ群における腫瘍のないマウスの数は、対照群における数よりも高い。ＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−２Ａ−Ｉｉ−ＯＶＡ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５−２Ａ−Ｉｉ−ＯＶＡ、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ−２Ａ−Ｉｉ−ＯＶＡ、ＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅ−２Ａ−Ｉｉ−ＯＶＡベクターの有効性を、Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｉ発現オボアルブミンを使用して寄生虫保護モデル（Ｐｏｌｌｅｙ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７４：７７３−７７６，２０１６）において試験する。
【０３７１】
ワクチン接種におけるヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅの使用
単一白血球除去療法において収集した抗原提示細胞に、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ、ヒトＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−ｄｅｌｔａＶ２４９−Ｋ２５５、マウスＮＥＭＯ−Ｋ２７０Ａ、およびＩＫＫ２−Ｓ１７７Ｅ−Ｓ１８１Ｅをコードするアデノウイルスベクターを形質導入し、その後、ヒト前立腺特異的膜抗原の細胞外ドメインを含むタンパク質ＰＡ００１とインキュベートする。１以下の前化学療法レジメン後の進行性ｍＣＲＰＣを有する男性を登録して、２〜４週間毎に皮内投与した結果として生じたワクチンの３つの用量（４×１０６、１２．５×１０６、および２５×１０６細胞）を評価する。用量制限毒性はない。免疫上方調節、ならびに抗腫瘍活性が、ＰＳＡ減少で観察される。
【０３７２】
１６１抗体に由来するｓｃＦｖ断片に基づくヒト化ＭＰＬ  ＣＡＲの構築および試験
マウスモノクローナル抗体１６１は、ヒトＭＰＬ（トロンボポエチン受容体ＴＰＯ−Ｒ）を標的とする。ＭＰＬを標的とするが、免疫原性が低下したＣＡＲを生成するために、マウス１６１抗体の抗原結合ドメインを含むｓｃＦＶ断片の配列をヒト化した。ｈｕ−１６１−２と指定されるヒト化１６１ｓｃＦｖ断片（配列番号８９１）を、４１ＢＢ共刺激ドメインおよびＣＤ３ｚ活性化ドメインを含む第二世代ＣＡＲ骨格（配列番号１５８２）においてクローン化した。Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ（Ｊ−Ｎ−Ｇ）細胞に、ヒト化ＭＰＬ−ｈｕ−１６１−２  ＣＡＲ構築物をコードするレンチウイルスを安定的に形質導入した。その後、親ＪｕｒｋａｔおよびＣＡＲ発現ＪｕｒｋａｔをＨＥＬ細胞と共培養し、４時間後にＥＧＦＰ発現の誘導をＦＡＣＳ分析によって監視した。ＭＰＬ−ｈｕ−１６１−２  ＣＡＲ構築物を発現するＪｕｒｋａｔ細胞のＨＥＬ細胞との共培養により、ＨＥＬ細胞に曝露されなかった細胞と比較して増加したＥＧＦＰ発現がもたらされ、標的抗原を認識し、かつシグナル伝達を活性化するヒト化ＭＰＬ−ｈｕ−１６１−２  ＣＡＲ構築物の能力を示す。この実験を、ｈｕ−１６１−２  ｓｃＦＶを組み込み、かつｖＦＬＩＰ  Ｋ１３（配列番号１２８６）またはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異体（配列番号１８７８）のいずれかを共発現する第一世代ＣＡＲで繰り返したときに、本質的に同様の結果が得られる。
【０３７３】
１７５および１１１抗体に由来するｓｃＦｖ断片に基づくヒト化ＭＰＬ  ＣＡＲの構築および試験
マウスモノクローナル１７５および１１１は、ヒトＭＰＬにも結合する。したがって、これらの抗体の抗原結合ドメインを含むｓｃＦＶ断片の配列をヒト化し、これを使用して、対応する第二世代ＣＡＲ（ＣＡＲ  ＩＩ）構築物（配列番号１５８３および１５８４）、ならびにｖＦＬＩＰ  Ｋ１３（配列番号１２８７、１２８８）およびｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（配列番号１８９６および１８９７）を共発現する骨格１および骨格２を作製する。この実験を前実施例にあるように繰り返す。ＭＰＬ−ｈｕ−１７５−２およびｈｕ−１１１−２  ＣＡＲ構築物を発現するＪｕｒｋａｔ細胞のＨＥＬ細胞との共培養により、ＨＥＬ細胞に曝露されなかった細胞と比較して増加したＥＧＦＰ発現がもたらされ、標的抗原を認識し、かつシグナル伝達を活性化するヒト化ＭＰＬ−ｈｕ−１７５−２およびｈｕ−１１１−２  ＣＡＲ構築物の能力を示す。
【０３７４】
ＣＤ７０を標的とするＣＡＲの構築および試験
ＣＤ７０を標的とするいくつかの構築物を構築する（配列番号９７８１〜１００８６、および７７８３〜７７８９）。これらの構築物をＪ−Ｎ−Ｇ細胞およびＴ細胞に発現させ、インビトロおよびインビボアッセイを使用してＣＤ７０発現標的細胞株ＲＡＪＩおよびＴＨＰ−１に対するＴ細胞活性化および細胞毒性について試験する。
【０３７５】
ＣＤ７０、ＰＴＫ７、カッパ軽鎖、Ｃｌａｕｄｉｎ１８Ａ２、Ｒａｓ／ＨＬＡ−Ａ２複合体、ＮＹ−ＥＳＯ／ＨＬＡ−Ａ２複合体、Ｓｔｒｅｐｔａｇ、および白血病細胞に発現したＣＤ４３エピトープを標的とするＣＡＲの構築および試験
第二世代骨格（例えば、従来のＣＡＲ  ＩＩ）またはｖＦＬＩＰ  Ｋ１３またはｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａのいずれかを共発現する骨格１および骨格２のいずれかに、ＰＴＫ７、カッパ軽鎖、Ｃｌａｕｄｉｎ１８Ａ２、Ｒａｓ／ＨＬＡ−Ａ２複合体、ＮＹ−ＥＳＯ／ＨＬＡ−Ａ２複合体、Ｓｔｒｅｐｔａｇ、および白血病細胞に発現したＣＤ４３エピトープを標的とするＣＡＲ構築物を生成する。この実験を前実施例にあるように繰り返す。異なるＣＡＲ構築物を発現するＪｕｒｋａｔ細胞のそれらのそれぞれの標的細胞との共培養により、標的細胞に曝露されなかった細胞と比較して増加したＥＧＦＰ発現がもたらされた。同様に、異なるＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞のＧＬｕｃを発現するそれらのそれぞれの標的細胞との共培養により、ＧＬｕｃ活性の増加によって測定される細胞死の増加がもたらされた。
【０３７６】
ＭＰＬを標的とするＴＦＰ
ＭＰＬを標的とするいくつかのＴＦＰベースのＣＡＲを抗原結合ドメインとしてｈｕ−１６１−２  ｓｃＦＶに基づいて構築する。これらのＴＦＰ  ＣＡＲ構築物の配列を、配列番号３５２６〜３５３３に示す。Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ（Ｊ−Ｎ−Ｇ）細胞に、ＭＰＬを標的とするＴＦＰ  ＣＡＲをコードするレンチウイルスを形質導入し、ピューロマイシンで選択する。ＭＰＬを標的とするＴＦＰ  ＣＡＲを発現するＪ−Ｎ−Ｇ細胞が、ＨＥＬ．９２．１．７（ＨＥＬ）細胞との４時間の共培養時にＥＧＦＰ発現を誘導することが示される。ＭＰＬを標的とするＴＦＰ  ＣＡＲを初代Ｔ細胞にも発現させ、４時間の共培養時にＨＥＬ−ＧＬｕｃ細胞の溶解を誘導するそれらの能力について試験する。１７５、１１１、ｈｕ−１７５−２、およびｈｕ−１１１−２  ｓｃＦｖ（配列番号１０４７６〜１０４８３）に基づくＭＰＬ  ＴＦＰ  ＣＡＲ構築物を、ｈｕ−１６１−２に基づくＴＦＰ  ＣＡＲについて上述されるＪ−Ｎ−Ｇ細胞および初代Ｔ細胞を使用して同様に構築し、試験する。Ｊ
【０３７７】
他の抗原を標的とするＴＦＰ
次に、いくつかの異なる抗原を標的とするＴＦＰ  ＣＡＲを構築する。共刺激を提供するために、これらの構築物は、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａも共発現する。これらの構築物をＪ−Ｎ−Ｇ細胞および初代Ｔ細胞に発現させ、上述のアッセイを使用して、それらの標的抗原を発現する細胞を認識するそれらの能力について試験する。Ｊ−Ｎ−Ｇ細胞を発現するＴＦＰ  ＣＡＲが、それらの同族抗原を発現する標的細胞との共培養時にＥＧＦＰ発現を誘導することが示される。上述のＧＬｕｃベースの細胞毒性アッセイを使用して、異なる抗原を標的とするこれらのＴＦＰ  ＣＡＲを発現するＴ細胞が、対応する抗原を発現する標的細胞の細胞毒性を誘導することが示される。表Ａは、このアッセイで使用する異なる標的抗原を発現する標的細胞株を示す。異なる標的抗原を発現する追加の細胞株は当該技術分野で既知であるか、または当該技術分野で既知の技法によって所望の抗原を発現するように遺伝子操作することができる。上記の実施例では、ＴＦＰ構築物は、共刺激を提供するためのｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異体を共発現するアクセサリーモジュールを含む。代替実施形態では、共刺激を提供するためのアクセサリーモジュールを欠くか、またはｖＦＬＩＰ  Ｋ１３等の他のタンパク質の共発現によって共刺激を提供するアクセサリーモジュールを含むかのいずれかのＴＦＰ構築物も構築する。この実験を、同様の結果を有するＪ−Ｎ−Ｇ細胞および初代Ｔ細胞におけるＴＦＰ構築物の発現によって上述のように繰り返す。
【０３７８】
ＭＰＬを標的とするＡｂ−ＴＣＲ
ＭＰＬを標的とするいくつかのＡｂ−ＴＣＲを抗原結合ドメインとしてマウス１６１  ｓｃＦＶに基づいて構築する。ＴＣＲαおよびＴＣＲβベースのＡｂ−ＴＣＲの発現を改善するために、特異的突然変異をそれらのＴＣＲ受容体モジュールに導入する。ＴＣＲγ／ＴＣＲｄ、野生型ＴＣＲα／ＴＣＲβ（ｗｔ−ｏｐ２とラベル付けされる）、および突然変異体ＴＣＲα／ＴＣＲβ（ＳＤＶＰ−ＩＡＨとラベル付けされる）を含むＡｂ−ＴＣＲ構築物の配列を、配列番号９５９〜９６４に示す。Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＥＧＦＰ（Ｊ−Ｎ−Ｇ）細胞に、ＭＰＬを標的とするＡｂ−ＴＣＲ（配列番号２０９１、２３９７、２７０３）をコードするレンチウイルスを形質導入し、ピューロマイシンで選択する。ＭＰＬを標的とするＡｂ−ＴＣＲを発現するＪ−Ｎ−Ｇ細胞が、ＨＥＬ細胞との４時間の共培養時にＥＧＦＰ発現を誘導することが示され、ＭＰＬを認識し、かつシグナル伝達を活性化するＭＰＬを標的とするＡｂ−ＴＣＲの能力を示す。ＭＰＬを標的とするＡｂ−ＴＣＲを初代Ｔ細胞にも発現させ、４時間の共培養時にＨＥＬ−ＧＬｕｃ細胞の溶解を誘導するそれらの能力について試験する。ＭＰＬ  Ａｂ−ＴＣＲを発現するＴ細胞が、ＧＬｕｃ活性の増加によって測定される、ＨＥＬ−ＧＬｕｃ細胞の溶解を誘導することが示される。マウス１７５および１１１  ｓｃＦｖ（配列番号１０４９２〜１０４９３）に基づくＭＰＬ  Ａｂ−ＴＣＲ構築物を、１６１に基づくＡｂ−ＴＣＲについて上述されるＪ−Ｎ−Ｇ細胞および初代Ｔ細胞を使用して同様に構築し、試験する。
【０３７９】
他の抗原を標的とするＡｂ−ＴＣＲ
次に、いくつかの異なる抗原を標的とするＡｂ−ＴＣＲを構築する。共刺激を提供するために、これらの構築物は、ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａも共発現する。これらの構築物をＪ−Ｎ−Ｇ細胞および初代Ｔ細胞に発現させ、上述のアッセイを使用してそれらの標的抗原を発現する細胞を認識するそれらの能力について試験する。Ｊ−Ｎ−Ｇ細胞を発現するＡｂ−ＴＣＲが、それらの同族抗原を発現する標的細胞との共培養時にＥＧＦＰ発現を誘導することが示される。上述のＧＬｕｃベースの細胞毒性アッセイを使用して、異なる抗原を標的するこれらのＡｂ−ＴＣＲを発現するＴ細胞が、対応する抗原を発現する標的細胞の細胞毒性を誘導することが示される。表Ａは、このアッセイで使用する異なる標的抗原を発現する標的細胞株を示す。異なる標的抗原を発現する追加の細胞株は当該技術分野で既知であるか、または当該技術分野で既知の技法によって所望の抗原を発現するように遺伝子操作することができる。上記の実施例では、Ａｂ−ＴＣＲ構築物は、共刺激を提供するためのｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ突然変異体を共発現するアクセサリーモジュールを含む。代替実施形態では、共刺激を提供するためのアクセサリーモジュールを欠くか、またはｖＦＬＩＰ  Ｋ１３等の他のタンパク質の共発現によって共刺激を提供するアクセサリーモジュールを含むかのいずれかのＡｂ−ＴＣＲ構築物も構築する。この実験を、同様の結果を有するＪ−Ｎ−Ｇ細胞および初代Ｔ細胞におけるＡｂ−ＴＣＲ構築物の発現によって上述のように繰り返す。
【０３８０】
ＨＩＶ−１に感染した標的細胞に応答した形質導入ＣＤ８＋Ｔリンパ球のＣＡＲ媒介増殖のフローサイトメトリー
ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質を標的とするいくつかのＣＡＲを生成し、配列番号８７０４〜９３４９によって表す。以下のアッセイを使用して、それらのインビトロでの抗ＨＩＶ１活性を試験する。これらの活性構築物を、ＨＩＶ１およびＡＩＤＳを有する患者の治療のために単独で組み合わせで使用する。
【０３８１】
プロセシング関連トランスポーター（ＴＡＰ）の欠失のためＭＨＣクラスＩ低であり（Ｓａｌｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９８６）ＥＭＢＯ  Ｊ  ５：９４３−９４９）、かつＨＩＶ−１特異的ＣＡＲに好適な標的細胞であることが以前に示されている（Ｓｅｖｅｒｉｎｏ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ３０６：３７１−３７５）ＨＩＶ−１に感染したＴ２細胞は、標的細胞の役割を果たす。これらを、ｖｐｒ遺伝子座におけるマウスＣＤ２４（ｍＣＤ２４）遺伝子を有する過度のＨＩＶ−１  ＮＬ４−３ベースのレポーターウイルスに感染させて（Ａｌｉ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １１０：１３７−１４２）、以前に説明されているように（Ｂｅｎｎｅｔｔ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８１：４９７３−４９８０、Ｙａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７０：５７９９−５８０６、およびＹａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７１：３１２０−３１２８）、感染の３日または４日後までに９０％超の感染細胞を得る。これらを、セシウム照射器内で使用直前に１０，０００ラドで照射し、健常なドナー由来の末梢血単核細胞を３，０００ラドで照射する（フィーダーＰＢＭＣ）。ＨＩＶ１−ＣＡＲを形質導入した初代ＣＤ８＋Ｔリンパ球を、製造業者（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）の指示に従ってＣｅｌｌＴｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔで標識し、洗浄する。４８ウェルプレートのウェル内に、５×１０５個の標識した形質導入細胞を５×１０５個の照射した感染Ｔ２細胞および２×１０６個の照射したフィーダーＰＢＭＣに添加し、１ｍＬのＲ１０−５０中で５日間培養し、培地を３日後に取り替える。その後、ヒトＣＤ８（ＰｅｒＣＰ−抗ヒトＣＤ８、カタログ番号３０１３０、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で共染色してフローサイトメトリー（ＬＳＲ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  ＩＩ  ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を行い、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）を使用して増殖の分析を行う。ＨＩＶ１−ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞が、ＨＩＶ−１に感染したＴ２細胞に曝露されたときに増殖することが示される。
【０３８２】
ウイルス抑制アッセイ
ＨＩＶ−１の複製を抑制するＨＩＶ１−ＣＡＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔリンパ球ならびにその拡大および富化されたクローンの能力を、以前に説明されているように（Ｙａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９９７）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９４：１１４７８−１１４８３、およびＹａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７１：３１２０−３１２８）試験する。９４ＵＳ＿３３９３  ＩＮ（カタログ番号１１２５０）、９０ＪＪＳ８７３（カタログ番号１１２５１）、９６ＴＨ＿ＮＰ１５３８（カタログ番号１１２５２）、００ＴＺ＿Ａ２４６（カタログ番号１１２５６）等の試験するＨＩＶ−１系統を、ＮＩＨ  ＡＩＤＳ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｒｅａｇｅｎｔから入手する。簡潔には、ヒトＣＣＲ５を形質導入したＴｌ細胞を１細胞当たり感染多重度０．１の組織培養感染用量で感染させ、９６ウェルプレート内で、２００μＬのＲｌ  ０−５０中それぞれ５×１０４細胞：１．２５×１０４細胞の比率で、ＨＩＶ１  ＣＡＲ形質導入細胞と共培養するか、または対照としていずれのエフェクター細胞とも共培養しない。エフェクター細胞が９０％超形質導入したことが確認される。各条件を三連で行い、ｐ２４定量的ＥＬＩＳＡ（ＸｐｒｅｓｓＢｉｏ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）を使用してウイルス複製を監視する。ＨＩＶ１  ＣＡＲ細胞への曝露が、ｐ２４  ＥＬＩＳＡによって測定されるＨＩＶ１の抑制をもたらすことが示される。
【０３８３】
ＨＩＶ１−ＣＡＲを発現するエフェクター細胞を、感染ＣＤ４＋細胞に対する抗ウイルス活性についても試験する。Ｔ２−ＣＣＲ５細胞を、初代Ｒ５向性単離物を含むＨＩＶ−１系統のパネルに感染させ、ＨＩＶ１−ＣＡＲ形質導入エフェクター細胞の不在下または存在下で培養する。ウイルス複製を、培養７日目〜１０日目のｐ２４抗原の測定によって評価する。複製の抑制を、エフェクター細胞との培養なしとエフェクター細胞との培養ありとの間のｐ２４の論理単位の差として計算し、その後、これをエフェクター細胞なしでの全複製に対する比率として正規化する。
【０３８４】
ＨＩＶ−１に感染した標的細胞のＣＡＲ媒介死滅のためのクロム放出死滅アッセイ
上述のようにＨＩＶ−１系統ＮＬ４−３に感染させたＴ２−ＧＬｕｃ細胞を、Ｍａｔａｄｏｒアッセイにおいて、または以前に説明されているように（Ｂｅｎｎｅｔｔ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８１：４９７３−４９８０、Ｙａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７０：５７９９−５８０６、およびＢｅｎｎｅｔｔ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ａｉｄｓ  ２４：２６１９−２６２８）標準の５１Ｃｒ放出アッセイを使用して、ＨＩＶ１−ＣＡＲ形質導入初代ＣＤ８＋Ｔリンパ球の標的細胞として使用する。簡潔には、感染Ｔ２細胞および対照非感染Ｔ２細胞を５１Ｃｒで１時間標識し、９６ウェルＵ底プレート内で様々な細胞比でエフェクターＣＤ８＋Ｔリンパ球ありまたはなしで４時間インキュベートする。その後、上清を採取し、細胞外５１Ｃｒを９６ウェルプレート内でのｍｉｃｒｏ２０４シンチレーション計数によって測定する。自発的放出をエフェクター細胞なしの標的細胞で測定し、最大放出を２．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で溶解した標的細胞で測定する。特異的溶解を、（実験的放出クロム−自発的放出）÷（最大放出−自発的放出）として計算する。
【０３８５】
ＭＰＬを標的とする二重特異性抗体
二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）および二重親和性再標的（ＤＡＲＴ）等の二重特異性抗体を使用して、Ｔ細胞を特定の抗原を発現する標的細胞に再標的させることができる。
【０３８６】
１６１  ｓｃＦＶに基づくＭＰＬを標的とする二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーを抗原結合ドメインとして構築する。この二重特異性構築物の配列を、配列番号３７３６に示す。この二重特異性構築物は、ＧＧＧＳＧ−Ｓｔｒｅｐｔａｇｘ２−Ｔａｇリンカー（配列番号２８７）を含むが、代替リンカー（例えば、ＳＧＧＧＳ）を使用することもできる。
【０３８７】
二重特異性構築物を２９３ＦＴ細胞中にトランスフェクトし、融合タンパク質を含有する上清を４８〜９６時間後に収集した。ＭＰＬ−１６１二重特異性融合タンパク質の存在下でＴ細胞と培養したＨＥＬ−ＧＬｕｃ細胞が、二重特異性融合タンパク質のみまたはＴ細胞のみと培養した細胞と比較して、ＧＬｕｃアッセイによって決定される細胞溶解を経ることが示された。
【０３８８】
次に、１７５、１１１、ｈｕ−１６１−２、ｈｕ−１７５−２、およびｈｕ−１１１  ｓｃＦｖに基づく構築物をコードする二重特異性抗体を構築し、ＨＥＬ−ＧＬｕｃ細胞毒性アッセイにおいて活性を有することが認められる。最後に、ＰＴＫ７、ＤＬＬ３、ＴＲＯＰ２、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ１７９ｂ、ＣＤ２３、ＬＡＭＰ１、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１７、ＣＤ３２、ＣＤＨ１９、ＨＩＶ１−ｇｐ１２０エンベロープ糖タンパク質等を含むいくつかの他の抗原を標的とする二重特異性抗体を同様に構築し、それらの同族抗原を発現する標的細胞株と共培養したときに活性を有することが認められる。
【０３８９】
図４．ＭＰＬを標的とし、かつ１６１−ｓｃＦｖ標的ドメインを使用する二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーの活性。ＨＥＬ−ｐＬｅｎｔｉ−ｈＧｌｕｃおよびＴ細胞を、以下の上清、培地のみおよびｐＬｅｎｔｉ−１６１−ＳｔｒｅｐｔａｇＩＩ−ＣＤ３−Ｍｙｃ−Ｈｉｓ−Ｐ０２（０４２５１７−Ｐ０２−ＳＣ）と４℃で２時間別個にプレインキュベートした。インキュベートした後、細胞を、１：１または５：１のＥ：Ｔ比で、Ｕ底９６ウェルプレート内３７℃で４時間共培養した。１ウェル当たり５０μＬの細胞＋上清を三連で３８４ウェルプレートに移した。ｈＧＬｕｃアッセイを、１５ｕＬのＣＴＺアッセイ緩衝液（１：１００）を使用して行った。
【０３９０】
ＴＣＲαおよびＴＣＲβ発現を欠くＪｕｒｋａｔ細胞におけるＴＦＰの発現および活性。
Ｊｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−ＧＦＰ（Ｊ−Ｎ−Ｇ）細胞（Ｔ細胞リンパ腫）を、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ１／β２定常鎖を標的とするｇＲＮＡを発現し、かつＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  Ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９を共発現するレンチウイルスベクターに感染させる。ＴＣＲα鎖の例示的なｇＲＮＡ標的配列を、配列番号７７５４および７７５５に提供する。ＴＣＲβ１／β２鎖の例示的なｇＲＮＡ標的配列を、配列番号７７５６〜７７５８に提供する。代替の実施形態では、Ｋｎｉｐｐｉｎｇ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｖｏｌ  ４，２０１７に記載されるようにｇＲＮＡおよびＴＡＬＯＮを使用して、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ１／β２定常鎖遺伝子座を標的とする。ＴＣＲαまたはＴＣＲβ１／β２鎖の発現を欠くＪ−Ｎ−Ｇ細胞を、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体に対して指向された抗体を使用して、細胞選別によって精製する。ＥＦ１αプロモーター下でヒトＭＰＬに対して指向されたＴＦＰを発現する（配列番号２１８４、２４９０、２７９６）レンチウイルスベクターを使用して、親Ｊ−Ｎ−Ｇ細胞（対照）およびＴＣＲαまたはＴＣＲβ１／β２鎖の発現を欠くものを感染させる。細胞におけるＴＦＰの発現を、タンパク質Ｌ染色での免疫染色およびＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５融合タンパク質（配列番号４９２３）での染色によって決定する。Ｊ−Ｎ−Ｇ親細胞が、細胞表面に頑強なＴＦＰ発現を示す一方で、ＴＣＲαまたはＴＣＲβ１／β２鎖を欠くＪ−Ｎ−Ｇ細胞は、ＴＦＰ発現不良またはＴＦＰ発現なしを示す。Ｊ−Ｎ−Ｇ細胞の異なる集団をＨＥＬ．９２．１．７標的細胞に２４時間曝露し、ＮＦＡＴ−プロモーター駆動ＧＦＰ発現およびＩＬ２産生の増加について試験する。ＭＰＬ特異的ＴＦＰを発現するＪ−Ｎ−Ｇ親細胞は、ＨＥＬ．９２．１．７細胞との共培養時にＧＦＰ蛍光およびＩＬ２分泌の著しい増加を示す。対照的に、ＴＣＲαまたはＴＣＲβ１／β２鎖の不在下でＭＰＬ特異的ＴＦＰを発現するＪ−Ｎ−Ｇ細胞は、弱いＧＦＰ誘導およびＩＬ２分泌またはＧＦＰ誘導およびＩＬ２分泌なしを示す。この実験を、ＣＤ１９（配列番号１９１３、２２１９、２５２５）、ＣＤ２０（配列番号１９４５、２２５１、２５５７）、およびＣＤ２２（配列番号１９５０、２２５６、２５６２）を標的とするＴＦＰの発現時に、かつＲＡＪＩおよびＮａｌｍ６標的細胞との共培養時に、Ｊ−Ｎ−Ｇ親細胞およびＴＣＲα欠損またはＴＣＲβ１／β２欠損細胞で繰り返したときに、本質的に同様の結果が得られる。
【０３９１】
次に、ＥＦ１αプロモーター下でコドン最適化ＴＣＲα定常鎖（ＩｇＳＰ−［ｈＴＲＡＣ−ｏｐｔ２］、配列番号１０１０）またはＴＣＲβ定常鎖（ＩｇＳＰ−［ｈＴＲＢＣ−ｏｐｔ２］、配列番号１０１１）を発現するレンチウイルスベクターを使用して、異なるＪ−Ｎ−Ｇ細胞集団を感染させる。ＴＣＲα鎖がｇＲＮＡ媒介遺伝子ノックアウトによって破壊されたＭＰＬ特異的ＴＦＰを発現するＪ−Ｎ−Ｇ細胞におけるＴＣＲα定常鎖の発現により、ＨＥＬ．９２．１．７標的細胞との共培養時に、細胞表面でのＴＦＰの発現、ならびにＧＦＰ発現およびＩＬ２分泌の誘導の増加がもたらされる。同様に、ＴＣＲβ１／β２鎖がｇＲＮＡ媒介遺伝子ノックアウトによって破壊されたＭＰＬ特異的ＴＦＰを発現するＪ−Ｎ−Ｇ細胞におけるＴＣＲβ定常鎖の発現により、ＨＥＬ．９２．１．７標的細胞との共培養時に、細胞表面でのＴＦＰの発現、ならびにＧＦＰ発現およびＩＬ２分泌の誘導の増加がもたらされる。
【０３９２】
ＴＣＲαおよびＴＣＲβ発現を欠くＪｕｒｋａｔ細胞におけるＡｂ−ＴＣＲおよびｃＴＣＲ／ＳＩＲの発現および活性
ＣＤ１９を標的とするＴＦＰの代わりにヒトＣＤ１９を標的とするＡｂ−ＴＣＲおよびＳＩＲをコードする発現カセットを使用することを除いて、上記の実験を繰り返す。ＣＤ１９を標的とするＡｂ−ＴＣＲを、配列番号３１２４によって表す。ＣＤ１９を標的とするｃＴＣＲ／ＳＩＲを、配列番号３８７８〜３８８０によって表す。ＴＣＲαまたはＴＣＲβ１／β２発現を欠くＪ−Ｎ−Ｇ細胞におけるＡｂ−ＴＣＲ、ｃＴＣＲ、およびＳＩＲの発現により、親Ｊ−Ｎ−Ｇ細胞におけるそれらの発現と比較して増加した発現および活性がもたらされることが示される。
【０３９３】
本開示のＣＡＲ、ＴＦＰ、およびＡｂ−ＴＣＲを発現する同種および既製のＴ細胞
同種または既製のＣＡＲ−Ｔ細胞を、ＴＡＬＯＮ、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９、または他のヌクレアーゼを使用して内在性ＴＣＲαおよび／またはＴＣＲβ鎖の発現を低減または排除することによって生成する。
【０３９４】
ＭＰＬ特異的ＴＦＰカセット（配列番号３５２７、３５２９、３５３１）を、ＴＲＡＣ  ゲノム遺伝子座を標的とし、かつＴＲＡＣゲノム配列に由来する右および左ホモロジーアームを含むように設計された標的構築物にクローン化する。ポリアデニル化配列をＴＦＰの終止コドンの下流に挿入する。標的構築物および標的戦略の概略図を図５Ａに示す。標的構築物の配列を、配列番号３８５８、７７７３、および７７７６に提供する。これらの標的構築物を、組み込み欠損レンチウイルスベクター（ＩＤＬＶ）およびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターにクローン化する。構築物を、当該技術分野で既知の技法に記載のＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９（図５Ａ）を使用し、かつＴＲＡＣ  ｇＲＮＡ配列（配列番号７７５１）：５′Ｃ＊Ａ＊Ｇ＊ＧＧＵＵＣＵＧＧＡＵＡＵＣＵＧＵＧＵＵＵＵＡＧＡＧＣＵＡＧＡＡＡＵＡＧＣＡＡＧＵＵＡＡＡＡＵＡＡＧＧＣＵＡＧＵＣＣＧＵＵＡＵＣＡＡＣＵＵＧＡＡＡＡＡＧＵＧＧＣＡＣＣＧＡＧＵＣＧＧＵＧＣＵ＊  Ｕ＊  Ｕ＊  Ｕ−３′を使用して、精製されたヒトＴ細胞におけるＴＲＡＣ遺伝子座に指向させる。アスタリスク（＊）は、２′−Ｏ−メチル３′ホスホロチオエートを表す。ＩＤＬＶおよびＡＡＶを使用して標的構築物をＴＲＡＣ遺伝子座に送達するための例示的な技法が、それぞれ、Ｋｎｉｐｐｉｎｇ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｖｏｌ  ４，２０１７およびＥｙｑｕｅｍ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔｕｒｅ，５４３（７６４３）：１１３−１１７，２０１７に記載されている。並行して、従来のアプローチを使用して、精製されたヒトＴ細胞に対応するＴＦＰ構築物（配列番号２１８４、２４９０、２７９６）をコードするレンチウイルスベクターをＥＦ１αプロモーター下で形質導入して、異なるＴＦＰを発現する細胞を生成する。Ｔ細胞におけるＴＣＲαβおよびＴＦＰの発現を、それぞれ、ＴＣＲ／ＣＤ３抗体およびタンパク質Ｌ染色での免疫染色によって決定する。Ｔ細胞におけるＴＦＰの発現も、ＭＰＬ−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５融合タンパク質（配列番号４９２３）での染色によって試験する。Ｔ細胞の異なる集団をＨＥＬ．９２．１．７−ＧＬｕｃ標的細胞に曝露し、インビトロおよびインビボアッセイを使用して、細胞活性化、増殖、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ２）、標的細胞溶解、老化、疲弊、インビボ拡大、インビボ持続性、およびインビボ抗腫瘍活性を比較する。ＴＦＰは、レンチウイルスベクターを使用してそれらを発現させたときと比較して、それらの発現をＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたときに、Ｔ細胞表面での発現障害、およびＴ細胞における活性低下または活性なし（例えば、Ｔ細胞活性化、増殖、サイトカイン産生、および細胞毒性等）を示す。次に、ＴＣＲα定常鎖（ＴＲＡＣ鎖）の発現を使用して、ＴＦＰ発現ならびにシグナル伝達および活性を、内在性ＴＲＡＣゲノム遺伝子座がＴＦＰ発現カセットによって破壊されたＴ細胞において回復させることができるかを試験する。この目的のために、ＴＦＰを、アミノ末端シグナルペプチド（ＩｇＳＰ）を有するＴＣＲα定常鎖をコードするアクセサリーモジュールと共発現する標的構��物を構築する（図５Ｂ）。このアクセサリーモジュールを、フーリン−ＳＧＳＧ−Ｐ２ＡリンカーによってＴＦＰコード配列から分離する。ＴＣＲα定常鎖を、ＭＰＬを標的とするＴＦＰ構築物と共発現する例示的な標的構築物のヌクレオチド配列を、配列番号３８５９、７７７４、および７７７７）に示す。これらの構築物におけるＴＣＲα定常鎖のヌクレオチド配列をコドン最適化し、そのヌクレオチド配列内の内在性ＴＣＲα定常鎖とは異なる。代替実施形態では、ＴＲＡＣ鎖をコドン最適化し、ヒトＴＣＲα定常鎖の発現を増強することで知られているアミノ酸置換を有する。内在性ＴＣＲα遺伝子の発現が標的とすることによって下方調節または排除されたＴ細胞におけるＴＣＲ／ＣＤ３複合体の再発現を可能にするために使用され得る例示的な外因性ＴＲＡＣ鎖のヌクレオチド配列を、配列番号３８８６〜３８９４に示す。外因性ＴＲＡＣは、Ｔ細胞に単独で発現し得る（配列番号１０１０）か、または単一のベクターを使用してＴＦＰ発現カセットと共発現し得る。
【０３９５】
ＭＰＬ特異的ＴＦＰ構築物（配列番号３８５８、７７７３、および７７７６）およびＴＦＰ−ＴＲＡＣ構築物（配列番号３８５９、７７７４、および７７７７）をＩＤＬＶおよびＡＡＶベクターにクローン化し、本質的に以前に説明されているようにＴＲＡＣ遺伝子座に指向させる。
【０３９６】
これらの構築物を発現する細胞をＨＥＬ．９２．１．７−ＧＬｕｃ標的細胞に曝露し、上述の機能的アッセイにおいて試験する。ＴＦＰ−ＴＲＡＣ構築物をＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたＴ細胞は、ＴＦＰ構築物のみ（すなわち、外因性ＴＲＡＣ鎖との共発現なし）をＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたＴ細胞と比較して、細胞表面にＴＦＰのより良好な発現を示す。加えて、ＴＦＰ−ＴＲＡＣ構築物をＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたＴ細胞は、ＴＦＰ構築物のみ（すなわち、外因性ＴＲＡＣ鎖との共発現なし）をＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたＴ細胞と比較して、より高い増殖、活性化、サイトカイン（例えば、ＩＬ２およびＴＮＦα）産生、細胞毒性、インビボ拡大、標的細胞に対するインビボ抗腫瘍活性を示す。
【０３９７】
ＴＦＰの発現および活性は、ＴＦＰカセットの後に、インフレームで、２Ａ切断可能なリンカー、シグナルペプチド（例えば、ＣＤ８シグナルペプチドまたはＩｇＨシグナルペプチド）、およびＴＣＲα鎖（ＴＲＡＣ）の第１のエクソンが続くように標的カセットを設計することによって、内在性ＴＲＡＣ遺伝子座が破壊されたＴ細胞においても回復する（図５Ｃ）。例示的な標的構築物のヌクレオチド配列を、配列番号３８６０、７７７５、および７７７８に示す。この実施形態では、ＴＲＡＣタンパク質を、細胞表面発現が標的カセットに提供されるシグナルペプチドによって促進される内在性ＴＲＡＣ鎖によって産生する。
【０３９８】
天然ＴＣＲα鎖の発現を欠くが、ＴＦＰ細胞表面発現および活性がＴＣＲα定常鎖の発現によってレスキューされるＴＦＰ−ＴＲＡＣ発現Ｔ細胞の同種反応性を、同種ドナーに由来する照射Ｔ細胞を使用した混合リンパ球培養反応を使用して試験する。天然ＴＣＲαの発現を欠くＴＦＰ−ＴＲＡＣ発現Ｔ細胞は、レンチウイルスベクターを使用してＴＦＰを発現させたＴ細胞と比較して、増殖応答によって測定される著しく低減した同種反応性または同種反応性なしを示す。移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を誘発する天然ＴＣＲαの発現を欠くＴＦＰ−ＴＲＡＣ発現ヒトＴ細胞の能力を、免疫不全ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ）に１動物当たり５億個のＴＦＰ−ＴＲＡＣ発現ＴＣＲα欠損Ｔ細胞を投与することによって試験する。動物を９０日間にわたって観察する。ＴＦＰ−ＴＲＡＣカセットをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたヒトＴ細胞が、免疫不全ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ）に注入したときに著しく軽減された移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）またはＧＶＨＤなしを示す一方で、レンチウイルスベクターを使用してＴＦＰを発現させたＴ細胞を投与した動物にはＧＶＨＤが観察される。移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を誘発するＴＦＰ−ＴＲＡＣ発現ＴＣＲα欠損ヒトＴ細胞の能力を、リンパ球枯渇化学療法を受けた同種ヒトレシピエントに１キログラム当たり１億個の細胞を投与することによっても試験する。ＴＦＰ−ＴＲＡＣカセットをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させた同種Ｔ細胞は、同種レシピエントに投与したときに移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の著しく低下した罹患率および重症度を示す。
【０３９９】
この実験を、ＴＦＰをＴＲＢＣ遺伝子座に指向させたＴ細胞で繰り返したときに、本質的に同様の結果が得られる。ＴＲＢＣを標的とするｇＲＮＡの標的配列を、配列番号７７５６〜７７５８に示す。これらのｇＲＮＡを、当該技術分野で既知の方法を使用して、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｃ  Ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９と組み合わせて使用する。ＴＦＰ発現カセットのＴＲＢＣゲノム遺伝子座への指向が、ＭＰＬ特異的ＴＦＰの活性障害をもたらすことが示される。しかしながら、ＴＦＰの活性は、外因性ＴＣＲβ定常鎖（ＴＲＢＣ）の共発現によって回復する。ＴＣＲ／ＣＤ３複合体シグナル伝達機能を回復させるために使用され得る例示的な外因性ＴＲＢＣ鎖のヌクレオチド配列を、配列番号３８９９〜３９１０に示す。外因性ＴＲＢＣは、Ｔ細胞に単独で発現し得る（配列番号１０１１）か、または単一のベクター由来のＴＦＰ発現カセットと共発現し得る。ＴＲＢＣ鎖を、ＭＰＬを標的とするＴＦＰ構築物と共発現する例示的な構築物のヌクレオチド配列を、配列番号３５３７、３５３９、および３５４１に示す。これらのＴＦＰ発現構築物を、当該技術分野で既知の技法を使用して、好適なＴＲＢＣ標的ベクターにクローン化することができる。代替実施形態では、ＴＲＢＣの発現は、ＴＦＰカセットの後に、インフレームで、２Ａ切断可能なリンカー、シグナルペプチド（例えば、ＣＤ８シグナルペプチドまたはＩｇＨシグナルペプチド）、およびＴＣＲβ鎖（ＴＲＢＣ）の第１のエクソンが続くように標的カセットを設計することによって、内在性ＴＲＢＣ遺伝子座が破壊されたＴ細胞において回復し得る。
【０４００】
Ａｂ−ＴＣＲ構築物のＴＲＡＣ遺伝子座への指向
ＦＭＣ６３  ｓｃＦｖに基づくＣＤ１９を標的とする２つのＡｂ−ＴＣＲ構築物を、ＥＦ１αプロモーターによって駆動されるレンチウイルスベクター（配列番号３８３７）に生成する。これらの構築物ＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−ｖＬ−［ＩｇＣＬ−ＴＣＲｂ−ＩＡＨ−６ＭＤ］−Ｆ−Ｐ２Ａ−ＳＰ−ＦＭＣ６３−ｖＨ−［ＩｇＧ１−ＣＨ１−ＴＣＲａ−ＳＤＶＰ−６ＭＤ］およびＣＤ８ＳＰ−ＦＭＣ６３−ｖＬ−［ＩｇＣＬ−ＴＣＲｇ−６ＭＤ］−Ｆ−Ｐ２Ａ−ＳＰ−ＦＭＣ６３−ｖＨ−［ＩｇＧ１−ＣＨ１−ＴＣＲｄ−６ＭＤ］のヌクレオチド配列を、配列番号３１２４および３３２４のＡｂ−ＴＣＲ成分をコードするヌクレオチド配列によって表す。初代ヒトＴ細胞を対応するレンチウイルス上清に感染させ、ＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５上清（配列番号１０１４）を使用してＡｂ−ＴＣＲ細胞表面発現についてアッセイし、ＲＡＪＩ−ＧＬｕｃ細胞に対する細胞毒性についてアッセイする。Ａｂ−ＴＣＲを発現するＴ細胞は、中程度の発現および活性を示す。Ａｂ−ＴＣＲの発現を、配列番号３８６１〜３８６４によって表される遺伝子標的構築物（図６を参照のこと）を使用して本質的にＥｙｑｕｅｍ  Ｊ  ｅｔ  ａｌによって説明されているように（Ｎａｔｕｒｅ，５４３（７６４３）：１１３−１１７，２０１７）ＴＲＡＣ遺伝子座に指向させる。標的構築物は、スプライスアクセプター（ＳＡ）を含み、Ｆ２Ａコード配列、Ａｂ−ＴＣＲカセットが続き、ＴＲＡＣ遺伝子座と相同の配列（ＬＨＡおよびＲＨＡ、左および右ホモロジーアーム）と隣接している。カセットＡおよびＢ（配列番号３８６１〜３８６２）では、Ａｂ−ＴＣＲ発現カセットをコードするヌクレオチド配列の後に、終止コドン、ポリＡ配列、ＴＲＡＣのエクソン１、およびＴＲＡＣ遺伝子座と相同の配列（ＲＨＡ：右ホモロジーアーム）が続く。カセットＣでは、Ａｂ−ＴＣＲ発現カセットをコードするヌクレオチド配列の後に、終止コドン、ＴＲＡＣのエクソン１、およびＴＲＡＣ遺伝子座と相同の配列（ＲＨＡ：右ホモロジーアーム）が続くが、転写物が３’末端にＴＲＡＣ遺伝子およびそのポリアデニル化配列を持つようにポリＡ配列を含まない。カセットＤでは、Ａｂ−ＴＣＲカセットは、自身のＴＣＲαモジュールを欠き、ＴＲＡＣの第１のエクソンの３’側半分にインフレームで融合したＩｇＧ１−ＣＨ１領域にまでしか伸長しない。したがって、この構築物では、ＴＣＲαモジュールは、エクソン１の一部、ならびにエクソン２およびエクソン３の全部を含むゲノムＴＲＡＣ遺伝子座によってコードされる。カセットＥは、標的構築物のＲＨＡがＴＲＡＣの発現を増強することができる突然変異（ＳＤＶＰ）を持つことを除いて、カセットＤに類似している。Ａｂ−ＴＣＲカセットをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたＴ細胞は、レンチウイルスベクターを使用して発現させたＡｂ−ＴＣＲカセットと比較して、インビボおよびインビトロアッセイを使用して決定される導入遺伝子の均一な生理学的発現ならびに長期持続性および活性を示す。Ａｂ−ＴＣＲ発現Ｔ細胞を、ＰＥ−タンパク質Ｌでの染色、その後、流動選別によって精製する。Ａｂ−ＴＣＲ発現Ｔ細胞の同種反応性を、同種ドナーに由来する���射Ｔ細胞を使用した混合リンパ球培養条件を使用して試験する。Ａｂ−ＴＣＲをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたＴ細胞は、レンチウイルスベクターを使用してＡｂ−ＴＣＲを発現させたＴ細胞と比較して、増殖応答によって測定される著しく低減した同種反応性または同種反応性なしを示す。移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を誘発するＡｂ−ＴＣＲ発現ヒトＴ細胞の能力を、免疫不全ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ）に１動物当たり５００万個のＡｂ−ＴＣＲ発現Ｔ細胞を投与することによって試験する。動物を９０日間にわたって観察する。Ａｂ−ＴＣＲカセットをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたヒトＴ細胞が、免疫不全ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ）に注入したときに著しく軽減された移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）またはＧＶＨＤなしを示す一方で、レンチウイルスベクターを使用してＡｂ−ＴＣＲを発現させたＴ細胞を投与した動物にはＧＶＨＤが観察される。移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を誘発するＡｂ−ＴＣＲ発現ヒトＴ細胞の能力を、同種ヒトレシピエントにＡｂ−ＴＣＲ発現Ｔ細胞（１キログラム当たり１００万個の細胞）を投与することによっても試験する。Ａｂ−ＴＣＲカセットをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させた同種Ｔ細胞は、同種レシピエントに投与したときに移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の著しく低下した罹患率および重症度を示す。発現カセットをＴＲＢＣ遺伝子座に指向させることによってＡｂ−ＴＣＲを発現させたＴ細胞を使用して、本質的に同様の結果が得られる。
【０４０１】
キメラＴＣＲまたは合成免疫受容体（ＳＩＲ）構築物のＴＲＡＣ遺伝子座への指向
ＦＭＣ６３  ｓｃＦｖに基づくＣＤ１９を標的とする３つのｃＴＣＲ（またはＳＩＲ）構築物を、ＥＦ１αプロモーターによって駆動されるレンチウイルスベクター（配列番号３８３７）に生成する。これらの構築物のヌクレオチド配列を、それぞれ、配列番号３８７８、３８７９、および３８８０によって表す。これらは全て、同じｖＬ領域およびｖＨ領域を有する。配列番号３８８０がＴＣＲαおよびＴＣＲβ定常鎖の野生型ヌクレオチド配列を有する一方で、配列番号３８７８および３８７９は、コドン最適化配列を有する。配列番号３８７８は、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ定常鎖の発現および塩基対合を増強するためのいくつかのアミノ酸置換をさらに有する。初代ヒトＴ細胞を対応するレンチウイルス上清に感染させ、ＦＬＡＧ−ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳＧ−ＮＬｕｃ−ＡｃＶ５上清（配列番号１０１４）を使用してＳＩＲの細胞表面発現についてアッセイし、ＲＡＪＩ−ＧＬｕｃ細胞に対する細胞毒性についてアッセイする。配列番号３８８０を有するｃＴＣＲ／ＳＩＲ構築物が良好に発現することも標的細胞溶解を誘導することも認められない。ｃＴＣＲ／ＳＩＲも、配列番号３８６５〜３８６８、および３８７３によって表される例示的な遺伝子標的構築物（図７を参照のこと）を使用して本質的にＥｙｑｕｅｍ  Ｊ  ｅｔ  ａｌによって説明されているように（Ｎａｔｕｒｅ，５４３（７６４３）：１１３−１１７，２０１７）ＴＲＡＣ遺伝子座に指向させる。標的構築物は、スプライスアクセプター（ＳＡ）を含み、Ｆ２Ａコード配列、Ａｂ−ＴＣＲカセットが続き、ＴＲＡＣ遺伝子座と相同の配列（ＬＨＡおよびＲＨＡ、左および右ホモロジーアーム）と隣接している。カセットＡおよびＢ（配列番号３８６５、３８６６、および３８７３）では、ＳＩＲ発現カセットをコードするヌクレオチド配列の後に、終止コドン、ポリＡ配列、ＴＲＡＣのエクソン１、およびＴＲＡＣ遺伝子座と相同の配列（ＲＨＡ：右ホモロジーアーム）が続く。カセットＥでは、ＳＩＲ発現カセットをコードするヌクレオチド配列の後に、終止コドン、ＴＲＡＣのエクソン１、およびＴＲＡＣ遺伝子座と相同の配列（ＲＨＡ：右ホモロジーアーム）が続くが、転写物が３’末端にＴＲＡＣ遺伝子およびそのポリアデニル化配列を持つように介在ポリＡ配列を含まない。カセットＤでは、ＳＩＲカセットは、自身のＴＣＲαモジュールを欠き、標的構築物に存在するＴＲＡＣの第１のエクソンにインフレームで融合したＦＭＣ６３−ｖＨ領域にまでしか伸長しない。したがって、この構築物では、ＴＣＲαモジュールは、エクソン  １の一部、ならびにエクソン２およびエクソン３の全部を含むゲノムＴＲＡＣ遺伝子座によってコードされる。カセットＦは、標的構築物のＲＨＡがＴＲＡＣの発現を増強することができるＴＲＡＣのエクソン１および２に突然変異（ＣＳＤＶＰ）を持つことを除いて、カセットＥに類似している。ｃＴＣＲ／ＳＩＲカセットをＴＲＡＣ遺伝子座（配列番号３８７３）に指向させたＴ細胞は、レンチウイルスベクターを使用して発現させたｃＴＣＲ／ＳＩＲカセットと比較して、インビボおよびインビトロアッセイを使用して決定される導入遺伝子の均一な生理学的発現ならびに長期持続性および活性を示す。他のｃＴＣＲ（配列番号３８６５〜３８６８）も、ＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたときに、均一な発現および活性を示す。ｃＴＣＲおよびＳＩＲ発現Ｔ細胞を、ＦＩＴＣコンジュゲートＣＤ３抗体およびＰＥ−タンパク質Ｌでの染色、その後、流動選別によって精製する。ｃＴＣＲおよびＳＩＲ発現Ｔ細胞の同種反応性を、同種ドナーに由来する照射Ｔ細胞を使用した混合リンパ球培養条件を使用して試験する。ｃＴＣＲ／ＳＩＲをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたＴ細胞は、レンチウイルスベクターを使用してｃＴＣＲ／ＳＩＲを発現させたＴ細胞と比較して、増殖応答によって測定される著しく低減した同種反応性または同種反応性なしを示す。移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を誘発するｃＴＣＲ／ＳＩＲ発現ヒトＴ細胞の能力を、免疫不全ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ）に１動物当たり５００万個のｃＴＣＲ／ＳＩＲ発現Ｔ細胞を投与することによって試験する。動物を９０日間にわたって観察する。ｃＴＣＲ／ＳＩＲカセットをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたヒトＴ細胞が、免疫不全ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ）に注入したときに著しく軽減された移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）またはＧＶＨＤなしを示す一方で、レンチウイルスベクターを使用してｃＴＣＲ／ＳＩＲを発現させたＴ細胞を投与した動物にはＧＶＨＤが観察される。移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を誘発するｃＴＣＲおよびＳＩＲ発現ヒトＴ細胞の能力を、リンパ球枯渇化学療法を受けた同種ヒトレシピエントにｃＴＣＲ／ＳＩＲ発現Ｔ細胞（１キログラム当たり１００万個の細胞）を投与することによっても試験する。ｃＴＣＲ／ＳＩＲカセットをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させた同種Ｔ細胞は、同種レシピエントに投与したときに移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の著しく低下した罹患率および重症度を示す。発現カセットをＴＲＢＣ遺伝子座に指向させることによってｃＴＣＲおよびＳＩＲを発現させたＴ細胞を使用して、本質的に同様の結果が得られる。
【０４０２】
ＴＣＲまたはｃＴＣＲ／ＳＩＲ構築物のＴＲＡＣ遺伝子座への指向
ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＨＬＡ−Ａ２複合体を標的とするＴＣＲ構築物およびｃＴＣＲ（またはＳＩＲ）構築物をレンチウイルスベクター（配列番号３８３７）に生成し、ＴＣＲ  ＮＹＥＳＯ−１Ｇ４およびＴＣＲ模倣抗体  ＮＹＥＳＯ−３５−１５に基づく。これらの構築物のヌクレオチド配列を、それぞれ、配列番号３８８３および３８８２によって表す。これらの２つの構築物を、配列番号３８７４〜３８７７によって表される標的構築物を使用してＴＲＡＣ遺伝子座にも標的させる。標的構築物の設計を図８に示す。ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲまたはｃＴＣＲをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたＴ細胞は、導入遺伝子の均一な発現、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＨＬＡ−Ａ２複合体を発現する標的細胞の良好な認識を示し、インビボアッセイを使用したレンチウイルス媒介遺伝子導入を使用して上記の構築物を発現させたＴ細胞と同等に良好にまたはそれよりも良好に機能する。ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲまたはｃＴＣＲをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたヒトＴ細胞は、レンチウイルス媒介遺伝子導入を使用してＮＹ−ＥＳＯ−１またはｃＴＣＲを発現させたＴ細胞と比較して、混合リンパ球反応における低減された同種反応性およびＮＳＧマウス異種移植モデルにおける軽減されたＧＶＨＤも示す。
【０４０３】
一本鎖ｃＴＣＲ／ＳＩＲ構築物のＴＲＡＣ遺伝子座への指向
ＦＭＣ６３−ｓｃＦｖがコドン最適化ＴＣＲａ定常鎖またはコドン最適化およびマウス化ＴＣＲａ  定常鎖（配列番号３８８１）に結合した一本鎖ｃＴＣＲ／ＳＩＲを、レンチウイルスベクターを使用してＴ細胞に発現させ、不良な発現および活性を示す。同じ構築物を、図９に示され、かつ配列番号３８６９〜３８７２によって表される標的構築物を使用してＴＲＡＣ遺伝子座に指向させる。一本鎖ｃＴＣＲ／ＳＩＲをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたＴ細胞は、以前に説明されているアッセイを使用してアッセイしたときにｃＴＣＲの均一な発現および活性を示す。加えて、一本鎖ｃＴＣＲ／ＳＩＲをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させたＴ細胞は、レンチウイルス媒介遺伝子導入を使用してＮＹ−ＥＳＯ−１またはｃＴＣＲを発現させたＴ細胞と比較して、ＭＬＲを使用して同種反応性の低下した罹患率およびＮＳＧマウス異種移植モデルを使用してＧＶＨＤの低下した罹患率を示す。
【０４０４】
上記の実施例では、ＣＡＲ／ＴＦＰ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲ／ｃＴＣＲをＴＲＡＣ遺伝子座に指向させる。本質的に同様の手順が、当該技術分野で既知の技法を使用してＣＡＲ／ＴＦＰ／Ａｂ−ＴＣＲ／ＴＣＲ／ｃＴＣＲまたはアクセサリーモジュールをＴＣＢＣ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、およびＣＤ３ζ遺伝子座に指向させるために使用され得る。
【０４０５】
より短いＥＦ１αプロモーターがＴ細胞において強いプロモーター活性を保持し、養子細胞療法に好適である。
養子細胞療法用途における強いウイルスプロモーターの使用は、下流癌遺伝子の活性化およびがん発症の危険性を有する。したがって、ヒト伸長因子１α（ＥＦ１α）プロモーターが強い発現を提供し、ヒト起源であるため、養子細胞療法用途において頻繁に使用されている。しかしながら、ＥＦ１αプロモーターの制限は、その比較的大きいサイズにある。小型ＥＦ１αプロモーターについて説明されているが、ＥＦ１αプロモーターと比較してはるかに弱い。ＥＦ１αプロモーター強度を保ちながらＥＦ１αプロモーターの内部欠失がその長さの短縮を可能にするかを決定するために、ＳａｃＩＩ断片をＥＦ１αプロモーターから欠失させた。結果として生じたＥＦ１α−Ｄ−ＳａｃＩＩプロモーターのヌクレオチド配列を、配列番号３８４２に提示する。ＣＤ１９指向性ＦＭＣ６３−ＢＢｚ  ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターを、野生型ＥＦ１αプロモーター（配列番号３８４０）またはＥＦ１α−Ｄ−ＳａｃＩＩプロモーター（配列番号３８３９）を有するベクターに構築した。これらのベクターは、２Ａリンカーを介してＥＧＦＰおよびブラストサイジン耐性遺伝子を共発現した。レンチウイルスを２９３ＦＴ細胞に生成し、これを使用してＪ−Ｎ−Ｇ細胞に感染させた。感染細胞をブラストサイジンで選択し、その後、ＣＤ１９陽性ＲＡＪＩ細胞との共培養時にＥＧＦＰ発現を誘導するそれらの能力について試験した。ＥＧＦＰ発現のほぼ同等の誘導が、いずれかのレンチウイルス構築物を形質導入したＪ−Ｎ−Ｇ細胞で観察された。加えて、ＣＤ１９−ＥＣＤ−ＧＧＳ−ＮＬｕｃ融合タンパク質への結合によって決定されるＦＭＣ６３−ＢＢｚ  ＣＡＲのほぼ同等の発現が、いずれかの構築物を形質導入したＪ−Ｎ−Ｇ細胞の表面で観察された。これらの結果は、ＥＦ１α−Ｄ−ＳａｃＩＩプロモーターを養子細胞療法用途に使用することができることを示す。これらの結果は、ＥＦ１α−Ｄ−ＳａｃＩＩプロモーターが野生型ＥＦ１αプロモーターよりもサイレンシング傾向が低く、これを長期導入遺伝子発現に使用することができることをさらに示す。
【０４０６】
養子細胞療法中に観察されるサイトカイン放出症候群および神経学的合併症を制御するための水溶性ダサチニブ塩の使用
ダサチニブは、水難溶性薬物であり、商業用ダサチニブは、一水和物であり、２４℃で８μｇ／ｍＬの溶解度を有すると報告されている。ＣＲＳおよび神経学的合併症を有する患者は、経口形態のダサチニブを服用するのが困難であり、水溶性形態のダサチニブが望ましい。水溶性ダサチニブ塩がＷＯ２０１５１０７５４５  Ａ１に記載されている。メタンスルホン酸ダサチニブ一水和物の可溶性塩を含む注射可能な組成物を、ＷＯ２０１５１０７５４５  Ａ１の方法に従って調製し、これを使用して、ＣＡＲ−Ｔ細胞およびブリナツモマブの投与に関連するＣＲＳおよび神経学的合併症を有する患者を治療することができる。メタンスルホン酸ダサチニブ一水和物の用量を滴定して、有効な血漿濃度を達成することができる。例示的な実施形態では、ダサチニブの血漿濃度を、１０ｎＭ、２０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、または３００ｎＭよりも高く保つ。別の例示的な実施形態では、ダサチニブの血漿濃度を、５ｎｇ／ｍＬ、１５ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、または７５ｎｇ／ｍＬよりも高く保つ。最後に、正常生理食塩水中に溶解したメタンスルホン酸ダサチニブ一水和物を使用して、ＣＡＲ−Ｔ細胞およびブリナツモマブ由来の神経学的合併症を有する患者に髄腔内投与することができる。例示的な実施形態では、メタンスルホン酸ダサチニブ髄腔内用量を調整して、１０ｎＭ、２０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、または３００ｎＭよりも高いＣＳＦ濃度を達成する。例示的な実施形態では、メタンスルホン酸ダサチニブの髄腔内用量を調整して、５ｎｇ／ｍＬ、１５ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、または７５ｎｇ／ｍＬよりも高いよりも高いＣＳＦ濃度を達成する。
【０４０７】
複数の抗原を標的とする従来のＣＡＲおよび骨格１〜７２を発現する自己Ｔ細胞の養子細胞療法のための使用
感染性疾患（例えば、ＨＩＶ１、ＥＢＢ、ＣＭＶ、ＨＴＬＶ１等）、変性疾患（例えば、アルツハイマー病）、アレルギー性疾患（例えば、慢性特発性蕁麻疹様）、および多発性癌を含む多くの異なる疾患を有する患者を、異なる病原抗原または疾患関連抗原を標的とするＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ（骨格２）を共発現する養子導入自己ＣＡＲ−Ｔ細胞での免疫療法のＩＲＢに認可された第１相臨床試験に登録する。異なる疾患に対するＣＡＲを、病原細胞または疾患関連細胞におけるそれらの標的抗原の既知の発現に基づいて選択する。可能な場合、病原細胞または疾患関連細胞におけるＣＡＲ標的の発現を、ＣＡＲの抗原結合ドメインが可動性リンカーを介してＮＬｕｃタンパク質の非分泌形態に融合している抗原結合ドメイン−ＧＧＳ−ＮＬｕｃ融合タンパク質への結合によって確認する。あるいは、市販の抗体を使用した免疫組織化学またはフローサイトメトリーを使用して、病原細胞または疾患関連細胞におけるＣＡＲの標的抗原の発現を確認する。白血球除去療法を使用してＴ細胞を対象から収集し、適切なレンチウイルスベクターを形質導入し、閉鎖系でＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを使用してエクスビボで拡大させる。結果として生じた細胞産物が品質管理試験（滅菌および腫瘍特異的細胞毒性試験を含む）を受けた後、これらを凍結保存する。ＣＡＲ−Ｔ細胞産物を前実施例に記載されるように対象に投与する。その後、医師の判断で臨床的および実験室相関追跡研究を行うことができる。本質的に同様のアプローチを使用して、本開示に記載の他の骨格におけるＣＡＲを試験する。
【０４０８】
複数の抗原を標的とする従来のＣＡＲおよび骨格１〜７２を発現する同種Ｔ細胞の養子細胞療法のための使用
感染性疾患（例えば、ＨＩＶ１、ＥＢＢ、ＣＭＶ、ＨＴＬＶ１等）、変性疾患（例えば、アルツハイマー病）、アレルギー性疾患（例えば、慢性特発性蕁麻疹様）、および多発性癌を含む多くの異なる疾患を有する患者を、異なる病原または疾患関連抗原を標的とする養子導入同種ＣＡＲ−Ｔ細胞での免疫療法のＩＲＢに認可された第１相臨床試験に登録する。異なる疾患に対するＣＡＲを、病原細胞または疾患関連細胞におけるそれらの標的抗原の既知の発現に基づいて選択する。可能な場合、病原細胞または疾患関連細胞におけるＣＡＲ標的の発現を、ＣＡＲの抗原結合ドメインが可動性リンカーを介してＮＬｕｃタンパク質の非分泌形態に融合している抗原結合ドメイン−ＧＧＳ−ＮＬｕｃ融合タンパク質への結合によって確認する。あるいは、市販の抗体を使用した免疫組織化学またはフローサイトメトリーを使用して、病原細胞または疾患関連細胞におけるＣＡＲの標的抗原の発現を確認する。Ｔ細胞を、白血球除去療法を使用して健常なドナーから収集する。ＣＡＲ発現カセット（配列番号１９００〜配列番号２２０５）を標的ベクターにクローン化し、本質的に（Ｅｙｑｕｅｍ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ、５４３（７６４３）：１１３−１１７）によって説明されているように、ＣＡＲモジュールをＴ細胞におけるＴＲＡＣ遺伝子座に指向させる。表面でのＣＤ３発現を欠くＴ細胞を免疫磁気精製によって選択し、その後、閉鎖系でＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを使用してエクスビボで拡大させる。結果として生じた細胞産物が品質管理試験（滅菌および腫瘍特異的細胞毒性試験を含む）を受けた後、これらを凍結保存する。ＣＡＲ−Ｔ細胞産物を前実施例に記載されるように対象に投与する。その後、医師の判断で臨床的および実験室相関追跡研究を行うことができる。本質的に同様のアプローチを使用して、本開示に記載のＶαドメインを欠くＴＣＲα定常鎖（ＴＲＡＣ）を共発現するＣＡＲを含む、他の骨格におけるＣＡＲを試験する。
【０４０９】
ＣＡＲ−Ｔ細胞の肝動脈内注入
静脈内注入に加えて、本発明に記載の従来のＣＡＲおよび骨格１〜７２を発現するＴ細胞を、動脈内注入して、疾患に関与する局部または臓器に高濃度のＣＡＲ−Ｔ細胞を提供することができる。以下の実施例では、葉酸受容体アルファ（ＦＲ１）を発現する胃腸癌由来の肝転移を有する患者の場合、このアプローチを使用する。本質的に同様のアプローチを使用して、他の腫瘍抗原を標的とする従来のＣＡＲおよび骨格１〜７２を発現するＴ細胞を動脈内注入することができる。
【０４１０】
マッピング血管造影をベースライン時に右総大腿動脈アプローチにより行う。他の潜在的な肝外灌流源に加えて、胃十二指腸動脈および右胃動脈をマイクロコイルで塞栓する。同じ動脈アクセス手順を、構築物ＣＤ８ＳＰ−ＦＲ１−ｈｕＭｏｖ１９−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（配列番号１７２７）を発現するＴ細胞を投与するために行う。Ｔ細胞を０日目に患者から収集し、構築物ＣＤ８ＳＰ−ＦＲ１−ｈｕＭｏｖ１９−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣをコードするレンチウイルスに感染させ、前実施例に記載されるように拡大させる。ＣＡＲ−Ｔ細胞を、用量漸増様式で、１４日目（１０７個のＣＡＲ−Ｔ細胞）、２８日目（１０８個のＣＡＲ−Ｔ細胞）、および４４日目（１０９個のＣＡＲ−Ｔ細胞）に投与する。ＣＡＲ−Ｔ細胞を、２ｃｃ／秒未満の速度で６０ｃｃシリンジにより手動で注射する。総注入体積は、およそ１００ｃｃである。較正コントラスト比での血管造影を第１の５０ｃｃ注入後およびＣＡＲ−Ｔ注入の終了時に行い、動脈流が保たれていることを確認する。可能な場合、注入物を適切な肝動脈に送達する。ある特定の患者は、右肝動脈または左肝動脈のいずれかが適切な肝動脈から生じない異常な肝動脈内解剖学的形態を有し得る。かかる場合、ＣＡＲ−Ｔ細胞の用量を肺葉体積計算に基づいて分割する。かかる場合、分割用量を右肝動脈および左肝動脈に別個に送達して、両肝葉への比例したＣＡＲ−Ｔ送達を確実にする。
【０４１１】
ＣＡＲ−Ｔ細胞の腹腔内投与
ＣＡＲ−Ｔ細胞を、本質的にＫｏｎｅｒｕ  Ｍ  ｅｔ  ａｌに記載されるように（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；２０１５；１３：１０２）、腹腔内投与することもできる。以下の実施例では、葉酸受容体アルファ（ＦＲ１）を発現する卵巣癌を伴う腹膜病変を有する患者にこのアプローチを使用する。本質的に同様のアプローチを使用して、本開示に記載の他の腫瘍抗原を標的とするＣＡＲ−Ｔ細胞を腹腔内注入することができる。
【０４１２】
スクリーニングインフォームドコンセントを、再発性高悪性度卵巣癌を有する患者に提示して、患者の癌をＦＲ１の発現について試験する。ＦＲ１の発現を免疫組織化学によって確認した後、患者の末梢血から白血球除去療法産物を得る。過度の血小板および赤血球混入物を白血球除去療法産物から除去し、この産物を凍結させる。この研究の治療段階で、白血球除去療法産物を解凍し、洗浄する。その後、ＣＤ３＋Ｔ細胞を、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを使用した磁気分離によって解凍した白血球除去療法産物から単離する。活性化したＴ細胞にＣＤ８ＳＰ−ＦＲ１−ｈｕＭｏｖ１９−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ構築物をレンチウイルス形質導入し、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ拡大プロトコルを使用してさらに拡大させる。
【０４１３】
保存（パラフィン包埋）または新たに生検した腫瘍の免疫組織化学（ＩＨＣ）分析によって確認されるＦＲ１抗原を発現することを示す再発性高悪性度卵巣癌、原発性腹膜癌、または卵管癌を有する患者が、この研究に適格である可能性がある。
【０４１４】
第１相用量漸増投薬をこの試験に使用する。３〜６名の患者のコホートに漸増用量の修飾されたＴ細胞を注入して、最大耐量（ＭＴＤ）を確立する。４つの計画用量レベル：３×１０５、１×１０６、３×１０６、および１×１０７ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇがある。コホートＩおよびコホートＩＩを３×１０５ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇで治療するが、コホートＩＩの患者にはリンパ球枯渇シクロホスファミドも投与する。コホートＩＩ〜Ｖには、シクロホスファミドでの前治療後に漸増用量の修飾されたＴ細胞を投与する。リンパ球枯渇シクロホスファミドを最初のＴ細胞注入の２〜４日前に７５０ｍｇ／ｍ２用量で投与する。標準の３＋３用量漸増スキーマに従う。
【０４１５】
ＩＰカテーテルを設置した後にＴ細胞を注入する。患者を入院病棟に入れた後に第１のＣＡＲ  Ｔ細胞注入を行い、第２のＣＡＲ  Ｔ細胞注入の少なくとも３日間は入院を続ける。治療される患者の第１のコホート、および各々のその後のコホートにおける治療される第１の患者を集中治療室（ＩＣＵ）に入れ、その後の患者を内科的腫瘍学入院患者サービスに入れてもよい（治療医師の臨床上の判断に従う）。
【０４１６】
患者は、ＣＡＲ修飾Ｔ細胞での治療を開始する２〜４日前に、単回投与によるリンパ球枯渇シクロホスファミド（７５０ｍｇ／ｍ２  ＩＶ）化学療法を受ける。形質導入Ｔ細胞を、注入前に、数、純度、生存能力、および滅菌について品質試験する。全ての患者に遺伝子修飾されたＴ細胞用量の５０％を静脈内投与する。患者を毒性について注意深く監視する。１〜３日後、残りのＴ細胞用量をＩＰ注入で投与する。少なくとも３名の患者を用量レベル１で治療し、各用量レベル内に１ヶ月当たり２名より多くの患者が発生することはない。前コホートにおける治療された全ての患者を最初のＴ細胞注入日から最低４週間観察した後、次のコホートへの漸増を行う。治療前および治療後に血液試料を全ての患者から得て、遺伝子修飾されたＴ細胞の毒性、治療効果、および生存を評価する。
【０４１７】
腫瘍内注射のためのＣＡＲ−Ｔ細胞の使用
ＣＡＲ−Ｔ細胞を、本質的にＢｒｏｗｎ  ＣＥ，ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１５  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １５；２１（１８）：４０６２−４０７２に記載されるように、腫瘍内投与することもできる。以下の実施例では、ＩＬ１３Ｒａ２を発現する再発性膠芽細胞腫（ＧＢＭ）を有する患者の場合、このアプローチを使用する。本質的に同様のアプローチを使用して、従来のＣＡＲを発現するＴ細胞または他の腫瘍抗原を標的とするアクセサリーモジュール（骨格１〜７２）を発現する従来のＣＡＲを腫瘍内注射することができる。
【０４１８】
パイロット安全性および実現可能性研究を行って、再発性ＧＢＭにおけるＣＤ８ＳＰ−ＩＬ１３Ｒａ２−Ｈｕ１０８−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（配列番号１７６９）を発現するＴ細胞を試験する。全ての参加患者は、書面によるインフォームドコンセントを提出するよう義務付けられている。臨床プロトコルは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄに認可されたものであり、この臨床プロトコルをＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎの下で行われ、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖに登録する。適格な患者には、腫瘍が心室／ＣＳＦ経路との伝達を示さず、かつ切除術に適している再発性または難治性単巣性テント上グレードＩＩＩまたはＩＶ神経膠腫を有する成人（１８〜７０歳）が含まれる。この試験への参加は、ＩＬ１３Ｒα２（またはＩＬ１３Ｒａ２）腫瘍抗原状態とは無関係である。患者を高悪性度神経膠腫（ＷＨＯグレードＩＩＩまたはＩＶ）の初期診断後に登録し、この時点で、白血球除去療法を受けて、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を収集する。前述の実施例に記載されるように対応するレンチウイルスベクターに感染させた後に、これらの細胞を使用して、ピューロマイシン耐性遺伝子（ＰＡＣ）を含む構築物ＣＤ８ＳＰ−ＩＬ１３Ｒａ２−Ｈｕ１０８−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣを発現させるようにＴ細胞を操作する。あるいは、ＣＡＲ−Ｔ細胞を、レトロウイルスベクター感染後に、またはＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンを使用して、またはＩＶＴ  ｍＲＮＡのトランスフェクションによって生成することができる。その後、放出試験後の治療用ＣＡＲ−Ｔ細胞を凍結保存し、後で使用するために保管する。第１の腫瘍再発時に、研究参加者は腫瘍切除術を受け、加えてＲｉｃｋｈａｍリザーバー／カテーテルも設置する。同時に、治療用ＣＡＲ−Ｔ細胞を解凍し、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズベースの急速拡大プロトコルを使用してインビトロで再拡大させる。手術からの回復後およびベースラインＭＲ画像法後、ＣＡＲ−Ｔ細胞を、本質的に説明されているように（Ｂｒｏｗｎ  ＣＥ，ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１５  ２１（１８）：４０６２−４０７２）、留置カテーテルを介して切除空洞に直接投与する。細胞を、２１ゲージの翼状針を使用してＲｉｃｋｈａｍリザーバーに手動で注入して、２ｍＬ体積を５〜１０分間にわたって送達し、その後、２ｍＬの防腐剤を含まない正常生理食塩水で５分間にわたって洗い流す。プロトコル治療計画は、１２回のＣＡＲ  Ｔ細胞用量の毎週治療サイクルから成る５週間期間にわたる頭蓋内投与を目標とする患者内用量漸増スケジュールを指定する。サイクル１、２、４、および５の期間中、Ｔ細胞注入をサイクル週の１、３、および５日目に行い、３週目が休止サイクルである。安全のために、サイクル１では、１注入当たり１０７、５×１０７、および１０８細胞のＣＡＲ  Ｔ細胞用量を、それぞれ、１、３、および５日目に投与する患者内用量漸増戦略を使用し、そ��後、１０８細胞の９回の追加のＣＡＲ  Ｔ細胞注入を４週間にわたって行う。応答を評価するための画像化を、３週目の休止サイクル中および５週目以降に行う。毒性監視および有害事象報告について、ＮＣＩ  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａバージョン２．０（ｈｔｔｐｓ：／／ｃｔｅｐ．ｉｆｏ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｌ）に提供されるガイドラインに従う。
【０４１９】
移植前の骨髄または末梢血幹細胞調製物のエクスビボパージのためのＣＡＲ−Ｔ細胞の使用
ＣＡＲ  Ｔ細胞を使用して、幹細胞移植前にがん細胞の骨髄または末梢血幹細胞調製物をパージすることができる。以下の実施例では、ＣＤ８ＳＰ−ＣＳ１−ＨｕＬｕｃ６４−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ（配列番号１６９９）を発現するＴ細胞を使用して、自己幹細胞（または骨髄）移植前に多発性骨髄腫を有する患者から得た骨髄または末梢血幹細胞をパージする。
【０４２０】
患者は白血球除去療法を受けて、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を収集する。Ｔ細胞を、ＣＤ３ビーズを使用して精製する。前述の実施例に記載されるように対応するレンチウイルスベクターに感染させた後に、これらの細胞を使用して、ＣＤ８ＳＰ−ＣＳ１−ＨｕＬｕｃ６４−（ｖＬ−ｖＨ）−Ｍｙｃ−ｚ−Ｐ２Ａ−ｈＮＥＭＯ−Ｋ２７７Ａ−Ｔ２Ａ−ＰＡＣ  ＣＡＲを発現させるようにＴ細胞を操作する。その後、放出試験後の治療用ＣＡＲ−Ｔ細胞を凍結保存し、後で使用するために保管するか、または新鮮な状態で使用する。骨髄細胞および末梢血前駆細胞産物を、標準の手順に従って多発性骨髄腫を有する患者から収集する。末梢血幹細胞の動員のために、患者に、シクロホスファミド（３ｇｍ／ｍ２）を投与し、その後、Ｇ−ＣＳＦ（１０μｇ／ｋｇ）をシクロホスファミド投与の２４時間後から開始してフェレーシスが完了するまで毎日皮下投与する。末梢血ＣＤ３４＋−細胞計数が１５細胞／μＬになった時点で、末梢血幹細胞を収集する。収集目標は、処理後に最低２．０回の１０６  ＣＤ３４＋細胞／ｋｇに達するまで１日３つの血液量を処理することである。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ製のＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）Ｓｙｓｔｅｍを使用し、製造業者の推奨に従って、骨髄および末梢血幹細胞産物から赤血球を任意選択的に枯渇させ、かつ／またはＣＤ３４発現細胞を富化する。これらの産物を新鮮な状態で、または凍結保存した状態で使用して、エクスビボパージする。パージのために、骨髄または末梢血幹細胞産物を、１００ＩＵの組換えヒト−ＩＬ２で置き換えたＸＶＩＶＯ培地（Ｌｏｎｚａ）内で、解凍したＣＡＲ−Ｔ細胞と５：１〜３０：１の範囲のエフェクター：標的比で４〜２４時間共培養する。細胞を３７℃／５％ＣＯ２の加湿インキュベーター内で培養する。共培養期間の終了時、細胞の一定分量を採取して、滅菌および品質検査（ＣＦＵ−ＧＭの測定ならびにＣＤ３４およびＣＤ１３８陽性細胞のフローサイトメトリーを含む）を行う。残りの試料を、以前に骨髄破壊的化学療法（例えば、２回の分割用量７０ｍｇ／ｍ２、総用量１４０ｍｇ／ｍ２の高用量メルファラン）を受けた患者に静脈内投与する。
【０４２１】
二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーの使用
二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーによってコードされたタンパク質を、表１３に列記される配列番号を有する構築物を使用してＨｅｌａ細胞に発現させる。標準のタンパク質精製技法を使用して、タンパク質を、金属親和性タグまたはＳｔｒｅｐＴａｇ  ＩＩカラムを使用して精製する。精製したタンパク質を第１相臨床試験において試験する。当該技術分野で既知の異なるアッセイを使用して、患者を二重特異性抗体の標的抗原の発現に基づいて選択する。二重特異性抗体を２４時間注入によって投与する。毒性監視および有害事象報告について、ＮＣＩ  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０（ｈｔｔｐ［ｓ：／／］ｃｔｅｐ．ｉｆｏ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｌ）に提供されるガイドラインに従う。
【０４２２】
ＣＡＲ組み合わせの使用
中皮腫および膠芽細胞腫を有する患者に、メソテリン（中皮腫に発現）、ＩＬ１３Ｒａ２（膠芽細胞腫に発現）、および造血マーカー（ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＢＣＭＡ）を標的とするＣＡＲの組み合わせをコードするレンチウイルスに感染させたＴ細胞を投与する。Ｔ細胞は、野生型ＴＣＲ鎖のものであるか、またはＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９アプローチによってノックアウトされたＴＣＲα鎖を有するかのいずれかである。メソテリンを標的とするＣＡＲ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、またはＢＣＭＡを標的とするＣＡＲの野生型ＴＣＲ鎖との同じＴ細胞における共発現により、メソテリンのみの発現と比較して、インビボでのＴ細胞拡大の増加がもたらされることが観察される。膠芽細胞腫を標的とするＣＡＲでも本質的に同様の結果が得られる。しかしながら、ＴＣＲ鎖が欠損したＴ細胞において、ＴＦＰベースのＣＤ２０（配列番号９６６０）を標的とするＣＡＲの共発現が、インビボ拡大を誘導することができない一方で、ＳＩＲ（配列番号９６６８）またはＡｂ−ＴＣＲ（配列番号９６７６）ベースのＣＡＲの共発現は、Ｔ細胞拡大を誘導することができる。
【表１８】
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【０４２３】
上述の様々な方法および技法は、本出願を行うためのいくつかの方法を提供する。言うまでもなく、記載される全ての目的または利点が必ずしも本明細書に記載のいずれかの特定の実施形態に従って達成され得るわけではないことを理解されたい。したがって、例えば、当業者であれば、それらの方法が、必ずしも本明細書で教示または提案される他の目的または利点を達成することなく、本明細書で教示される１つの利点または一群の利点を達成または最適化する様式で行われ得ることを認識する。様々な代替案について本明細書で言及されている。いくつかの好ましい実施形態が、１つの、別の、またはいくつかの特徴を具体的に包含する一方で、他の実施形態は、１つ、別の、またはいくつかの特徴を具体的に除外し、さらに他の実施形態は、１つ、別の、またはいくつかの有利な特徴の包含によって特定の特徴を軽減することを理解されたい。
【０４２４】
さらに、当業者であれば、異なる実施形態からの様々な特徴の適用性を認識する。同様に、当業者であれば、上述の様々な要素、特徴、およびステップ、ならびに各々のかかる要素、特徴、またはステップの他の既知の等価物を様々な組み合わせで用いて、本明細書に記載の原理による方法を行うことができる。様々な要素、特徴、およびステップのうち、多様な実施形態では、いくつかは具体的に包含され、他のものは具体的に除外される。
【０４２５】
本開示を例証するために、いくつかの実施形態が上述されている。以下の特許請求の範囲は、出願人が自身の発明とみなすものをさらに記載する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ−５Ｃ】
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【図６Ａ−６Ｅ】
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【図７Ａ−７Ｆ】
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【図８Ａ−８Ｄ】
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【図９Ａ−９Ｄ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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