(57)【要約】本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍を治療する方法を提供する。また、腫瘍を有する対象におけるＦａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定する方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の腫瘍の治療における使用のための、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターであって、少なくとも１回のプライミング用量の前記ベクターを投与した後に前記対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得、前記対象が前記プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示した後に前記対象に治療有効量の前記ベクターが投与される、前記ベクター。
【請求項２】
それを必要とする対象の腫瘍の治療における使用のための、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターであって、前記対象に少なくとも１回のプライミング用量の前記ベクター及び治療有効量の前記ベクターが投与され、前記プライミング用量の投与後に前記対象に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの変化がある、前記ベクター。
【請求項３】
それを必要とする対象の腫瘍の治療における使用のための、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターであって、
（ａ）前記対象に少なくとも１回のプライミング用量の前記ベクターが投与され；
（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、前記対象に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの変化があり；かつ
（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある前記対象に、治療有効量の前記ベクターが投与される、
前記ベクター。
【請求項４】
それを必要とする対象の腫瘍の治療における使用のための、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターであって、
（ａ）前記対象に少なくとも１回のプライミング用量の前記ベクターが投与され；
（ｂ）前記プライミング用量の投与後に、前記対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルが測定され；
（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、前記対象に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの変化があり；かつ
（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある前記対象に、治療有効量の前記ベクターが投与される、
前記ベクター。
【請求項５】
Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーの同定における使用のための、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターであって、腫瘍を有する対象に少なくとも１回のプライミング用量の前記ベクターが投与され、かつ、前記対象が、前記プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す、前記ベクター。
【請求項６】
Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーの同定における使用のための、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターであって、腫瘍を有する対象に少なくとも１回のプライミング用量の前記ベクター及び治療有効量の前記ベクターが投与され、かつ、前記対象が、前記プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す、前記ベクター。
【請求項７】
Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターであって、
（ａ）対象に少なくとも１回のプライミング用量のベクターが投与され；
（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、前記対象に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの変化があり；かつ
（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある前記対象に、治療有効量の前記ベクターが投与される、
前記ベクター。
【請求項８】
前記少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーが、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用のためのベクター。
【請求項９】
血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの前記変化が、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの増加である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用のためのベクター。
【請求項１０】
前記プライミング用量の投与後に前記レベルの増加を示す前記血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーが、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１７α、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを含む、請求項９に記載の使用のためのベクター。
【請求項１１】
血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの前記変化が、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの減少である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用のためのベクター。
【請求項１２】
前記レベルの減少を示す前記血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーが、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのマーカーを含む、請求項１１に記載の使用のためのベクター。
【請求項１３】
配列番号１９に示すヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のためのベクター。
【請求項１４】
Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）アクセッション番号１３０２１２０１を有する単離されたウイルスである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のためのベクター。
【請求項１５】
前記対象に１種類以上の化学療法剤の有効量がさらに投与される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用のためのベクター。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
本開示の背景
血管新生は、数種類の病的状態によく見られる重要な特徴である。このような病的状態には、血管新生により病状を改善できる疾患（虚血性心疾患など）と、病的状態の一部に過剰な血管新生があり、それを排除する必要のある疾患がある。後者の疾患には、糖尿病（糖尿病性網膜症）、心血管疾患（アテローム性動脈硬化症）、慢性炎症（関節リウマチ）、及びがんが含まれる。血管新生は腫瘍で発生し、腫瘍の成長、浸潤、及び転移を可能にする。１９７１年、フォークマンは、腫瘍の成長と転移が血管新生に依存しており、それゆえ血管新生の阻害が腫瘍成長を阻止する戦略となり得ることを提唱した。
【０００２】
転写因子から増殖因子まで、血管新生に関与する分子は数種類ある。低酸素症は、新生血管形成に至る重要な環境因子であり、血管新生促進因子である数種類のサイトカインの放出を誘発する。そのような因子には、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）及びその受容体、アンジオポエチンファミリーのメンバー、塩基性線維芽細胞増殖因子、及びエンドセリン−１（ＥＴ−１）がある。こうした因子は、内皮細胞の活性化、増殖、及び遊走による血管新生の誘発に関与している。
【０００３】
血管新生の内因性阻害薬の組換え形態が、がん治療について試験された。この組換え阻害薬の長期送達には潜在的な薬物動態学上、生物工学上、及び経済学上の欠点があり、科学者は他の手法を開発することになった。
【０００４】
抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体ベバシズマブの開発は、化学療法を補完する治療モダリティとしての抗血管新生手法の有効性を立証した。第２世代の多標的チロシンキナーゼ阻害薬を含む数種類の小分子阻害薬も、がんの抗血管新生剤として期待されている。
【０００５】
しかしながら、組換え阻害薬、抗体、及び小分子の長期送達には潜在的な薬物動態学上及び経済学上の欠点があるほか、単剤療法として用いた場合に出現する活性に限界があることから、科学者は抗血管新生遺伝子治療を評価するに至った。遺伝子治療は、遺伝性ヒト疾患と後天性ヒト疾患を治療するための新たなモダリティである。しかしながら、発現期間、免疫応答の誘導、ベクターの細胞毒性、及び組織特異性を含め、遺伝子治療の成功を阻む多くの障害がある。がん遺伝子治療の一般戦略として、腫瘍誘導性の遺伝子治療、または全身遺伝子治療の２つが提唱された。遺伝子治療製品の全身治療によるがん細胞またはその環境への標的化の成果が乏しいことによって、大半の治療が腫瘍自体に行われることになった。
【発明の概要】
【０００６】
本開示の概要
本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍を治療する方法であって、プライミング用量の投与後に対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示した後に、少なくとも１つの治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法に関する。本開示はさらに、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法に関する。本開示はまた、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法も提供する。本開示はさらに、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）プライミング用量の投与後に、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルを測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０００７】
本開示はさらに、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、当該対象がプライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定する方法を提供する。別の態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法を提供する。別の態様では、本開示は、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を同定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定する方法を提供する。
【０００８】
本開示のいくつかの態様では、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーは、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの増加である。いくつかの態様では、プライミング用量の投与後にレベルの増加を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ΜΙΡ−１β、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１７α、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを含む。特定の態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７α、ＭＩＰ−１α、及びＩＬ−１Ｒａを含む。
【０００９】
いくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの減少である。いくつかの態様では、レベルの減少を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのマーカーを含む。
【００１０】
本開示のいくつかの態様では、プライミング用量は治療有効量と同一である。他の態様では、プライミング用量は治療有効量よりも少ない。他の態様では、プライミング用量は治療有効量よりも大きい。いくつかの態様では、プライミング用量は複数回投与される。
【００１１】
いくつかの態様では、Ｆａｓキメラ遺伝子を含むベクターは、Ｆａｓポリペプチドの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインに融合されたＴＮＦ受容体１（ＴＮＦＲ１）ポリペプチドの細胞外ドメインを含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ＴＮＦＲ１の細胞外ドメインは、配列番号４と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＴＮＦＲ１の細胞外ドメインはＴＮＦ−αに対する結合能を有する。いくつかの態様では、Ｆａｓポリペプチドの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは、配列番号８と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるアミノ酸配列を含み、Ｆａｓポリペプチドの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは、Ｆａｓ媒介アポトーシスの誘導能を有する。本開示のいくつかの態様では、Ｆａｓキメラ遺伝子は、配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である第１のヌクレオチド配列、及び、配列番号７と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一である第２のヌクレオチド配列を含む。
【００１２】
いくつかの態様では、ベクターの内皮細胞特異的プロモーターは、ＰＰＥ−１プロモーターを含む。いくつかの態様では、内皮細胞特異的プロモーターは、シス作用性調節要素をさらに含む。いくつかの態様では、シス作用性調節要素は、配列番号１５または配列番号１６と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、シス作用性調節要素は配列番号１１または配列番号１２を含む。いくつかの態様では、シス作用性調節要素はさらに配列番号１３または配列番号１４を含む。
【００１３】
本開示のいくつかの態様では、内皮細胞特異的プロモーターはＰＰＥ−１−３Ｘプロモーターである。いくつかの態様では、ＰＰＥ−１−３Ｘプロモーターは、配列番号１８と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、ＰＰＥ−１−３Ｘプロモーターは内皮細胞内でのＦａｓキメラ遺伝子発現の誘導能を有する。本開示のいくつかの態様では、ベクターはアデノウイルスのＥ１領域を含まない。
【００１４】
本開示のいくつかの実施形態では、プライミング用量のベクターは、約１×１０１５未満、約１×１０１４未満、約５×１０１３未満、約４×１０１３未満、約３×１０１３未満、約２×１０１３未満、約１×１０１３未満、約９×１０１２未満、約８×１０１２未満、約７×１０１２未満、約６×１０１２未満、約５×１０１２未満、約４×１０１２未満、約３×１０１２未満、約２×１０１２未満、約１×１０１２未満、約９×１０１１未満、約８×１０１１未満、約７×１０１１未満、約６×１０１１未満、約５×１０１１未満、約４×１０１１未満、約３×１０１１未満、約２×１０１１未満、約１×１０１１未満、約９×１０１０未満、約８×１０１０、約７×１０１０未満、約６×１０１０未満、約５×１０１０未満、約４×１０１０未満、約３×１０１０未満、約２×１０１０未満、または約１×１０１０未満のウイルス粒子の量で投与される。
【００１５】
本開示のいくつかの実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０１５、少なくとも約１×１０１４、少なくとも約５×１０１３、少なくとも約４×１０１３、少なくとも約３×１０１３、少なくとも約２×１０１３、少なくとも約１×１０１３、少なくとも約９×１０１２、少なくとも約８×１０１２、少なくとも約７×１０１２、少なくとも約６×１０１２、少なくとも約５×１０１２、少なくとも約４×１０１２、少なくとも約３×１０１２、少なくとも約２×１０１２、少なくとも約１×１０１２、少なくとも約９×１０１１、少なくとも約８×１０１１、少なくとも約７×１０１１、少なくとも約６×１０１１、少なくとも約５×１０１１、少なくとも約４×１０１１、少なくとも約３×１０１１、少なくとも約２×１０１１、少なくとも約１×１０１１、少なくとも約９×１０１０、少なくとも約８×１０１０、少なくとも約７×１０１０、少なくとも約６×１０１０、少なくとも約５×１０１０、少なくとも約４×１０１０、少なくとも約３×１０１０、少なくとも約２×１０１０、または少なくとも約１×１０１０のウイルス粒子の量で投与される。
【００１６】
本開示のいくつかの態様では、治療有効量のベクターは反復投与される。治療有効量のベクターは、毎日、約２日に１回、約３日に１回、約４日に１回、約５日に１回、約６日に１回、約７日に１回、約２週間に１回、約３週間に１回、約４週間に１回、約５週間に１回、約６週間に１回、約７週間に１回、約２か月に１回、または約６か月に１回反復投与することができる。
【００１７】
本開示のいくつかの態様では、治療有効量のベクターの投与により、対象の腫瘍内の血管新生が減少する。いくつかの態様では、腫瘍は固形腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍は転移性腫瘍である。
【００１８】
本開示のいくつかの態様では、ベクターはアデノウイルスベクターである。一態様では、アデノウイルスベクターはアデノウイルス血清型５である。いくつかの態様では、ベクターは、配列番号１９を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの態様では、ベクターは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）アクセッション番号１３０２１２０１を有する単離されたウイルスである。
【００１９】
本開示のいくつかの態様では、ベクターの内皮細胞特異的プロモーターは、低酸素応答要素を含む。
【００２０】
一実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０１１のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０１２のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０１３のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０１４のウイルス粒子の量で投与される。
【００２１】
一実施形態では、ベクターの治療有効量は、少なくとも約１×１０１１のウイルス粒子である。別の実施形態では、ベクターの治療有効量は、少なくとも約１×１０１２のウイルス粒子である。別の実施形態では、ベクターの治療有効量は、少なくとも約１×１０１３のウイルス粒子である。別の実施形態では、ベクターの治療有効量は、少なくとも約１×１０１４のウイルス粒子である。
【００２２】
一実施形態では、方法は、有効量のＶＥＧＦアンタゴニストを対象に投与することをさらに含む。いくつかの態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、ベクターの投与前、投与と同時、または投与後に投与される。一実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ＶＧＸ−１００、ｒ８４、アフリベルセプト、ＩＭＣ−１８Ｆ１、ＩＭＣ−１Ｃ１１、及びラムシルマブからなる群から選択される。特定の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストはベバシズマブである。
【００２３】
本開示の別の実施形態では、ベバシズマブは、約１５ｍｇ／ｋｇ以下、約１４ｍｇ／ｋｇ以下、約１３ｍｇ／ｋｇ以下、約１２ｍｇ／ｋｇ以下、約１１ｍｇ／ｋｇ以下、約１０ｍｇ／ｋｇ以下、約９ｍｇ／ｋｇ以下、約８ｍｇ／ｋｇ以下、約７ｍｇ／ｋｇ以下、約６ｍｇ／ｋｇ以下、約５ｍｇ／ｋｇ以下、約４ｍｇ／ｋｇ以下、約３ｍｇ／ｋｇ以下、約２ｍｇ／ｋｇ以下、または約１ｍｇ／ｋｇ以下の有効量で投与される。いくつかの実施形態では、ベバシズマブは反復投与される。いくつかの実施形態では、ベバシズマブは、約７日に１回、約２週間に１回、約３週間に１回、約４週間に１回、約２か月に１回、約３か月に１回、約４か月に１回、約５か月に１回、または約６か月に１回反復投与される。
【００２４】
本開示の別の実施形態では、プライミング用量及び治療有効量のベクターは、３×１０１２〜１×１０１３ウイルス粒子の有効量で投与され、ベバシズマブは５ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇの有効量で投与される。
【００２５】
いくつかの実施形態では、プライミング用量のベクターは反復投与される。さらなる態様では、治療有効量のベクターは反復投与される。プライミング用量及び治療有効量のベクターは、毎日、約２日に１回、約３日に１回、約４日に１回、約５日に１回、約６日に１回、約７日に１回、約２週間に１回、約３週間に１回、約４週間に１回、約５週間に１回、約６週間に１回、約７週間に１回、約２か月に１回、または約６か月に１回反復投与することができる。ある特定の実施形態では、ベバシズマブは反復投与される。本開示の別の実施形態では、ベバシズマブは、約７日に１回、約２週間に１回、約３週間に１回、約４週間に１回、約２か月に１回、約３か月に１回、約４か月に１回、約５か月に１回、または約６か月に１回反復投与される。
【００２６】
別の実施形態では、プライミング用量の投与後に、対象は発熱を示す。
【００２７】
いくつかの実施形態では、方法は、１種類以上の化学療法剤の有効量を対象に投与することをさらに含む。いくつかの態様では、１種類以上の化学療法剤は、ベクターの投与前、投与と同時、または投与後に投与される。いくつかの実施形態では、１種類以上の化学療法剤は、アルトレタミン、ラルトリトレキセド、トポテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、リポソームドキソルビシン、ゲムシタビン、シクロホスファミド、ビノレルビン、イホスファミド、エトポシド、アルトレタミン、カペシタビン、イリノテカン、メルファラン、ペメトレキセド、ベバシズマブ、及びアルブミン結合パクリタキセルからなる群から選択される。特定の態様では、化学療法剤はパクリタキセルである。
【００２８】
本開示の他の実施形態では、パクリタキセルは、少なくとも約１０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約２０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約３０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約４０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約５０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約６０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約７０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約８０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約９０ｍｇ／ｍ２、または少なくとも約１００ｍｇ／ｍ２の有効量で投与される。いくつかの態様では、パクリタキセルの有効量は、約１０ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２、約２０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２、約３０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２、約４０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２、約５０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２、約６０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２、または約７０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２である。特定の態様では、パクリタキセルの有効量は約８０ｍｇ／ｍ２である。
【００２９】
いくつかの実施形態では、パクリタキセルは反復投与される。いくつかの実施形態では、パクリタキセルは、毎日、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、７日毎、８日毎、９日毎、または１０日毎に反復投与される。
【００３０】
本開示の他の実施形態では、プライミング用量及び治療有効量のベクターは、３×１０１２〜１×１０１３ウイルス粒子の有効量で投与され、パクリタキセルは７０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２の有効量で投与される。
【００３１】
いくつかの態様では、治療有効量のベクターは反復投与される。治療有効量のベクターは、毎日、約２日に１回、約３日に１回、約４日に１回、約５日に１回、約６日に１回、約７日に１回、約２週間に１回、約３週間に１回、約４週間に１回、約５週間に１回、約６週間に１回、約７週間に１回、約２か月に１回、または約６か月に１回反復投与することができる。ある特定の実施形態では、パクリタキセルは反復投与される。本開示の別の実施形態では、パクリタキセルは、毎日、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、７日毎、８日毎、９日毎、または１０日毎に反復投与される。
【００３２】
別の実施形態では、プライミング用量の投与後に、対象は発熱を示す。
【００３３】
本開示はさらに、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に発熱体温を示し得る対象の腫瘍を治療する方法であって、プライミング用量の投与後に対象が発熱体温を示した後に、治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法を提供する。本開示はまた、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に発熱体温を有する対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法も提供する。本開示はまた、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、発熱体温を有すると対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において発熱体温を有する対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。本開示はまた、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）プライミング用量の投与後に、対象の体温を測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、発熱体温を有すると対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において発熱体温を有する対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【００３４】
本開示はまた、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、プライミング用量の投与後に当該対象が発熱体温を示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法を提供する。本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に発熱体温を示す対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法を提供する。本開示はまた、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、発熱体温を有すると対象を同定すること；及び（ｃ）（ｂ）において発熱体温を有する対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法を提供する。
【００３５】
いくつかの態様では、本方法に使用されるプライミング用量は治療有効量と同一である。いくつかの態様では、本方法に使用されるプライミング用量は治療有効量よりも少ない。いくつかの態様では、本方法に使用されるプライミング用量は治療有効量よりも多い。いくつかの態様では、本方法に使用されるプライミング用量は複数回投与される。
【００３６】
実施形態
１．内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍を治療する方法であって、前記プライミング用量の投与後に前記対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示した後に、治療有効量の前記ベクターを前記対象に投与することを含む、前記方法。
２．それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を前記対象に投与すること、及び、前記プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある前記対象に、治療有効量の前記ベクターを投与することを含む、前記方法。
３．それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を前記対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると前記対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある前記対象に、治療有効量の前記ベクターを投与することを含む、前記方法。
４．それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を前記対象に投与すること；（ｂ）前記プライミング用量の投与後に、前記対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルを測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると前記対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある前記対象に、治療有効量の前記ベクターを投与することを含む、前記方法。
５．内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、前記対象が前記プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法。
６．内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与すること、及び、前記プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す前記対象に、治療有効量の前記ベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法。
７．（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると前記対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある前記対象に、治療有効量の前記ベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法。
８．前記少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーが、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態１〜７のいずれかの方法。
９．血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの前記変化が、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの増加である、実施形態１〜７のいずれかの方法。
１０．前記プライミング用量の投与後に前記レベルの増加を示す前記血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーが、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１７α、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを含む、実施形態９の方法。
１１．前記血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーが、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７α、ＭＩＰ−１α、及びＩＬ−１Ｒａを含む、実施形態９または１０の方法。
１２．血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの前記変化が、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの減少である、実施形態１〜７のいずれかの方法。
１３．前記レベルの減少を示す前記血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーが、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのマーカーを含む、実施形態１２の方法。
１４．前記プライミング用量が前記治療有効量と同一である、実施形態１〜１３のいずれかの方法。
１５．前記プライミング用量が前記治療有効量よりも少ない、実施形態１〜１３のいずれかの方法。
１６．前記プライミング用量が前記治療有効量よりも多い、実施形態１〜１３のいずれかの方法。
１７．前記プライミング用量が複数回投与される、実施形態１〜１６のいずれかの方法。
１８．前記Ｆａｓキメラ遺伝子が、Ｆａｓポリペプチドの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインに融合されたＴＮＦ受容体１（ＴＮＦＲ１）ポリペプチドの細胞外ドメインを含むポリペプチドをコードする、実施形態１〜１７のいずれかの方法。
１９．前記ＴＮＦＲ１の前記細胞外ドメインが、配列番号４と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＴＮＦＲ１の前記細胞外ドメインがＴＮＦ−αに対する結合能を有する、実施形態１８の方法。
２０．前記Ｆａｓポリペプチドの前記膜貫通ドメイン及び前記細胞内ドメインが、配列番号８と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記Ｆａｓポリペプチドの前記膜貫通ドメイン及び前記細胞内ドメインがＦａｓ媒介アポトーシスの誘導能を有する、実施形態１９の方法。
２１．前記Ｆａｓキメラ遺伝子が、配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である第１のヌクレオチド配列、及び、配列番号７と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一である第２のヌクレオチド配列を含む、実施形態１〜２０のいずれかの方法。
２２．前記内皮細胞特異的プロモーターがＰＰＥ−１プロモーターを含む、実施形態１〜２１のいずれかの方法。
２３．前記内皮細胞特異的プロモーターがシス作用性調節要素をさらに含む、実施形態１〜２２のいずれかの方法。
２４．前記シス作用性調節要素が、配列番号１５または配列番号１６と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む、実施形態２３の方法。
２５．前記シス作用性調節要素が配列番号１１または配列番号１２を含む、実施形態２４の方法。
２６．前記シス作用性調節要素が配列番号１３または配列番号１４をさらに含む、実施形態２５の方法。
２７．前記内皮細胞特異的プロモーターがＰＰＥ−１−３Ｘプロモーターである、実施形態１〜２６のいずれかの方法。
２８．前記ＰＰＥ−１−３Ｘプロモーターが、配列番号１８と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、前記ＰＰＥ−１−３Ｘプロモーターが内皮細胞内での前記Ｆａｓキメラ遺伝子発現の誘導能を有する、実施形態２７の方法。
２９．前記ベクターがアデノウイルスのＥ１領域を含まない、実施形態１〜２８のいずれかの方法。
３０．前記プライミング用量の前記ベクターが、約１×１０１５未満、約１×１０１４未満、約５×１０１３未満、約４×１０１３未満、約３×１０１３未満、約２×１０１３未満、約１×１０１３未満、約９×１０１２未満、約８×１０１２未満、約７×１０１２未満、約６×１０１２未満、約５×１０１２未満、約４×１０１２未満、約３×１０１２未満、約２×１０１２未満、約１×１０１２未満、約９×１０１１未満、約８×１０１１未満、約７×１０１１未満、約６×１０１１未満、約５×１０１１未満、約４×１０１１未満、約３×１０１１未満、約２×１０１１未満、約１×１０１１未満、約９×１０１０未満、約８×１０１０未満、約７×１０１０未満、約６×１０１０未満、約５×１０１０未満、約４×１０１０未満、約３×１０１０未満、約２×１０１０、または約１×１０１０未満のウイルス粒子の量で投与される、実施形態１〜２９のいずれかの方法。
３１．前記治療有効量の前記ベクターが、少なくとも約１×１０１５、少なくとも約１×１０１４、少なくとも約５×１０１３、少なくとも約４×１０１３、少なくとも約３×１０１３、少なくとも約２×１０１３、少なくとも約１×１０１３、少なくとも約９×１０１２、少なくとも約８×１０１２、少なくとも約７×１０１２、少なくとも約６×１０１２、少なくとも約５×１０１２、少なくとも約４×１０１２、少なくとも約３×１０１２、少なくとも約２×１０１２、少なくとも約１×１０１２、少なくとも約９×１０１１、少なくとも約８×１０１１、少なくとも約７×１０１１、少なくとも約６×１０１１、少なくとも約５×１０１１、少なくとも約４×１０１１、少なくとも約３×１０１１、少なくとも約２×１０１１、少なくとも約１×１０１１、少なくとも約９×１０１０、少なくとも約８×１０１０、少なくとも約７×１０１０、少なくとも約６×１０１０、少なくとも約５×１０１０、少なくとも約４×１０１０、少なくとも約３×１０１０、少なくとも約２×１０１０、または少なくとも約１×１０１０のウイルス粒子の量で投与される、実施形態１〜２９のいずれかの方法。
３２．前記治療有効量の前記ベクターを反復投与する、実施形態１〜３１のいずれかの方法。
３３．前記治療有効量の前記ベクターが、毎日、約２日に１回、約３日に１回、約４日に１回、約５日に１回、約６日に１回、約７日に１回、約２週間に１回、約３週間に１回、約４週間に１回、約５週間に１回、約６週間に１回、約７週間に１回、約２か月に１回、または約６か月に１回反復投与される、実施形態１〜３２のいずれかの方法。
３４．前記治療有効量の前記ベクターの投与により、前記対象の腫瘍内の血管新生が減少する、実施形態１〜３３のいずれかの方法。
３５．前記腫瘍が固形腫瘍である、実施形態１〜３４のいずれかの方法。
３６．前記腫瘍が転移性腫瘍である、実施形態１〜３５のいずれかの方法。
３７．前記ベクターがアデノウイルスベクターである、実施形態１〜３６のいずれかの方法。
３８．前記アデノウイルスベクターがアデノウイルス血清型５である、実施形態３７の方法。
３９．前記ベクターが、配列番号１９を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、実施形態１〜３８のいずれかの方法。
４０．前記ベクターが、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）アクセッション番号１３０２１２０１を有する単離されたウイルスである、実施形態１〜３９のいずれかの方法。
４１．前記プロモーターが低酸素応答要素を含む、実施形態１〜４０のいずれかの方法。
４２．前記ベクターの前記治療有効量が、約１×１０１１、約１×１０１２、約１×１０１３、または約１×１０１４ウイルス粒子である、実施形態１〜４１のいずれかの方法。
４３．有効量のＶＥＧＦアンタゴニストを前記対象に投与することをさらに含む、実施形態１〜４２のいずれかの方法。
４４．前記ＶＥＧＦアンタゴニストが、前記プライミング用量の前記ベクターの投与前、投与と同時、または投与後に投与される、実施形態４３の方法。
４５．前記ＶＥＧＦアンタゴニストが、前記治療有効量の前記ベクターの投与前、投与と同時、または投与後に投与される、実施形態４４の方法。
４６．前記ＶＥＧＦアンタゴニストが、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ＶＧＸ−１００、ｒ８４、アフリベルセプト、ＩＭＣ−１８Ｆ１、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ラムシルマブ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態４４〜４５のいずれかの方法。
４７．前記ＶＥＧＦアンタゴニストがベバシズマブである、実施形態４３〜４６のいずれかの方法。
４８．前記ベバシズマブが反復投与される、実施形態４７の方法。
４９．前記ベバシズマブが、約７日に１回、約２週間に１回、約３週間に１回、約４週間に１回、約２か月に１回、約３か月に１回、約４か月に１回、約５か月に１回、または約６か月に１回反復投与される、実施形態４８の方法。
５０．前記治療有効量の前記ベクターを２か月毎に投与し、かつベバシズマブを２週間毎に投与する、実施形態４７〜４９のいずれかの方法。
５１．１種類以上の化学療法剤の有効量を前記対象に投与することをさらに含む、実施形態１〜５０のいずれかの方法。
５２．前記１種類以上の化学療法剤が、前記プライミング用量の前記ベクターの投与前、投与と同時、または投与後に投与される、実施形態５１の方法。
５３．前記１種類以上の化学療法剤が、前記治療有効量の前記ベクターの投与前、投与と同時、または投与後に投与される、実施形態５２の方法。
５４．前記１種類以上の化学療法剤が、アルトレタミン、ラルトリトレキセド、トポテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、リポソームドキソルビシン、ゲムシタビン、シクロホスファミド、ビノレルビン、イホスファミド、エトポシド、アルトレタミン、カペシタビン、イリノテカン、メルファラン、ペメトレキセド、ベバシズマブ、及びアルブミン結合パクリタキセルからなる群から選択される、実施形態５１〜５３のいずれかの方法。
５５．前記化学療法剤がパクリタキセルである、実施形態５１〜５４のいずれかの方法。
５６．前記パクリタキセルが反復投与される、実施形態５５の方法。
５７．前記パクリタキセルが、毎日、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、７日毎、８日毎、９日毎、または１０日毎に反復投与される、実施形態５６の方法。
５８．前記治療有効量の前記ベクターを２か月毎に投与し、かつパクリタキセルを毎週投与する、実施形態５５〜５７のいずれかの方法。
５９．前記対象が発熱を示す、実施形態１〜５８のいずれかの方法。
６０．前記プライミング用量の投与後に前記対象が発熱を示す、実施形態５９の方法。
６１．内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に発熱体温を示し得る対象の腫瘍を治療する方法であって、前記プライミング用量の投与後に前記対象が発熱体温を示した後に、治療有効量の前記ベクターを前記対象に投与することを含む、前記方法。
６２．それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を前記対象に投与すること、及び、前記プライミング用量の投与後に発熱体温を有する前記対象に、治療有効量の前記ベクターを投与することを含む、前記方法。
６３．それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を前記対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、発熱体温を有すると前記対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において発熱体温を有する前記対象に、治療有効量の前記ベクターを投与することを含む、前記方法。
６４．それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を前記対象に投与すること；（ｂ）前記プライミング用量の投与後に、前記対象の体温を測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、発熱体温を有すると前記対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において発熱体温を有する前記対象に、治療有効量の前記ベクターを投与することを含む、前記方法。
６５．内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、前記プライミング用量の投与後に前記対象が発熱体温を示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法。
６６．内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与すること、及び、前記プライミング用量の投与後に発熱体温を示す前記対象に、治療有効量の前記ベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法。
６７．（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、発熱体温を有すると前記対象を同定すること；及び（ｃ）（ｂ）において発熱体温を有する前記対象に、治療有効量の前記ベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法。
６８．前記プライミング用量が前記治療有効量と同一である、実施形態６１〜６７のいずれかの方法。
６９．前記プライミング用量が前記治療有効量よりも少ない、実施形態６１〜６７のいずれかの方法。
７０．前記プライミング用量が前記治療有効量よりも多い、実施形態６１〜６７のいずれかの方法。
７１．前記プライミング用量が複数回投与される、実施形態６１〜６７のいずれかの方法。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】単剤療法としてまたはベバシズマブ（ＢＥＶ）との併用療法の一環として、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦＡＳキメラ遺伝子を含むアデノウイルス（例えばＶＢ−１１１）のレジメンを受けた患者の試験デザイン例の概略図を示す。
【図２】図２Ａ〜２Ｃは、患者の腫瘍成長を示す。図２Ａは、単剤療法フェーズの患者（ｎ＝２４）の治療から増悪まで（ＴＴｈＰ）を示している。図２Ｂは、ベバシズマブ併用フェーズの患者（ｎ＝２４）の治療から増悪まで（ＴＴｈＰ）を示している。図２Ｃは、限定曝露（ＬＥ）フェーズ（ｎ＝２２）の患者の腫瘍成長を示している。
【図３】図３Ａ〜３Ｄは、治療コホートの生存曲線を示す。図３Ａは、限定曝露（ＬＥ）治療用量群の患者及び治療から増悪まで（ＴＴｈＰ）治療用量群の患者の無増悪生存期間（ＰＦＳ）の中央値を示している。図３Ｂは、ＬＥ治療用量群及びＴＴｈＰ治療用量群の全生存期間を示している。図３Ｃは、アバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）単剤療法を受けた患者の過去の全生存期間と比較した、ＴＴｈＰ治療用量群の全生存期間を示している。図３Ｄは、ＶＢ−１１１に対する発熱反応を示さなかった患者と比較した、ＶＢ−１１１に対する発熱反応を示している患者の全生存曲線を示している。
【図４】図４Ａ及び４Ｂは、ＶＢ−１１１の投与後の対象の血液中のＶＢ−１１１ウイルスＤＮＡレベルを示す。図４Ａは、最初の４回の投与において、投与間で基礎レベル（１×１０１３ｖＤＮＡコピー／μｇＤＮＡ）を維持している患者のウイルスＤＮＡレベルを示している。図４Ｂは、ＶＢ−１１１の投与間でゼロに低下する対象のウイルスＤＮＡレベルを示している。
【図５】継続治療群と限定治療群両方の対象の全生存期間（ＯＳ）対２７種類のサイトカインの相関プロットを示す。
【図６】継続治療群と限定治療群の両方を含むデータセットの相関プロットマトリックスを示す。
【図７】継続治療群と限定治療群両方の全生存期間（ＯＳ）を示す。
【図８】図８Ａは、限定治療群の対象の全生存期間（ＯＳ）対２７種類のサイトカインの相関プロットを示す。図８Ｂは、限定治療群の相関プロットマトリックスを示す。
【図９】図９Ａは、継続治療群の対象の全生存期間（ＯＳ）対２７種類のサイトカインの相関プロットを示す。図９Ｂは、継続治療群の相関プロットマトリックスを示す。
【図１０】継続治療群と限定治療群両方の対象の全相関データの概要を示す。
【図１１】限定治療群の対象の相関データの概要を示す。
【図１２】継続治療群の対象の相関データの概要を示す。
【図１３】データセット全体（両方の治療群）についての患者指数レベル及び全生存日数による予測回帰線（Ｃｏｘ回帰）を示す。
【図１４】限定治療群の対象のデータセットについての患者指数レベル及び全生存日数による予測回帰線（Ｃｏｘ回帰）を示す。
【図１５】継続治療群の対象のデータセットについての患者指数レベル及び全生存日数による予測回帰線（Ｃｏｘ回帰）を示す。
【図１６】図１６Ａ及び１６Ｂは、Ｌｕｍｉｎｅｘマウスサイトカインプロファイリングアッセイのマイクロウェルプレートの区画を示す。図１６Ａは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８を刺激に使用するサイトカインアッセイの区画を示している。図１６Ｂは、ＬＰＳを刺激に使用するサイトカインアッセイの区画を示している。
【図１７】図１７Ａ〜１７Ｇは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８と共培養したマウス脾臓細胞及びミクログリア細胞からのサイトカインのレベルを示す。以下のサイトカインを測定した：ＩＬ−１（図１７Ａ）；ＩＰ−１０（図１７Ｂ）；ＭＣＰ−１（図１７Ｃ）；ＭＩＰ−２（図１７Ｄ）；ＭＩＧ（図１７Ｅ）；ＲＡＮＴＥＳ（図１７Ｆ）；及びＭＩＰ−１β（図１７Ｇ）。
【図１８】図１８Ａ〜１８Ｎは、ＬＰＳと共培養したマウス脾臓細胞及びミクログリア細胞からのサイトカインのレベルを示す。以下のサイトカインを測定した：Ｇ−ＣＳＦ（図１８Ａ）；ＩＦＮ−γ（図１８Ｂ）；ＩＬ−１α（図１８Ｃ）；ＩＬ−１β（図１８Ｄ）；ＩＬ−６（図１８Ｅ）；ＩＬ−１０（図１８Ｆ）；ＩＬ−１２（図１８Ｇ）；ＩＬ−１３（図１８Ｈ）；ＭＩＰ−１α（図１８Ｉ）；ＭＩＰ−１β（図１８Ｊ）；ＲＡＮＴＥＳ（図１８Ｋ）；ＩＬ−９（図１８Ｌ）；ＩＬ−１５（図１８Ｍ）；及びＭ−ＣＳＦ（図１８Ｎ）。
【図１９】図１９Ａ〜１９Ｅは、抗ＣＤ２／抗ＣＤ２８と共培養したマウス脾臓細胞及び腫瘍浸潤Ｔ細胞からのサイトカインのレベルを示す。以下のサイトカインを測定した：ＩＬ−４（図１９Ａ）；ＩＬ−３（図１９Ｂ）；ＩＬ−５（図１９Ｃ）；ＩＬ−１０（図１９Ｄ）；及びＩＬ−１３（図１９Ｅ）。
【図２０】図２０Ａは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激した場合の脾細胞とミクログリア細胞の共培養物（「Ｓ＋Ｍ」）または脾細胞と腫瘍浸潤Ｔ細胞の共培養物（「Ｓ＋Ｔ」）で測定されたＩＬ−２レベルの比較を示す。図２０Ｂは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激した場合の脾細胞とミクログリア細胞の共培養物（「Ｓ＋Ｍ」）または脾細胞と腫瘍浸潤Ｔ細胞の共培養物（「Ｓ＋Ｔ」）で測定されたＴＮＦαレベルの比較を示す。
【図２１】図２１Ａは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激した場合の脾細胞の培養物（「Ｓ」）、脾細胞とミクログリア細胞の共培養物（「Ｓ＋Ｔ」）、及び脾細胞と腫瘍浸潤Ｔ細胞の共培養物（「Ｓ＋Ｔ」）で測定されたＶＥＧＦレベルの比較を示す。図２１Ｂは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激した場合の脾細胞の培養物（「Ｓ」）、脾細胞とミクログリア細胞の共培養物（「Ｓ＋Ｔ」）、及び脾細胞と腫瘍浸潤Ｔ細胞の共培養物（「Ｓ＋Ｔ」）で測定されたＬＩＦレベルの比較を示す。
【図２２】ＬＰＳで刺激した場合の脾細胞の培養物（「Ｓ」）、脾細胞とミクログリア細胞の共培養物（「Ｓ＋Ｔ」）、及び脾細胞と腫瘍浸潤Ｔ細胞の共培養物（「Ｓ＋Ｔ」）で測定されたＬＩＦレベルの比較を示す。
【図２３】図２３Ａ〜２３Ｅは、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃまたは対照で処置した動物におけるサイトカインの相関プロットを示す。図２３Ａは、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物の相関プロットを示している。これは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激した脾細胞とミクログリアの共培養物におけるサイトカインプロファイルを測定したものである。図２３Ｂは、対照動物の相関プロットを示している。これは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激した脾細胞とミクログリアの共培養物におけるサイトカインプロファイルを測定したものである。図２３Ｃは、両方の処置群の相関プロットを示している。これは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激した脾細胞とミクログリアの共培養物におけるサイトカインプロファイルを測定したものである。図２３Ｄは、３つの集団群の相関を別の方法で実証したものを示している。図２３Ｅは、実験からの最も顕著なサイトカインを表す、図２３Ａ〜２３Ｄに示したデータの概要を示している。
【図２４】図２４Ａ〜２４Ｃは、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃまたは対照で処置した動物におけるサイトカインの相関プロットを示す。図２４Ａは、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物の相関プロットを示している。これは、ＬＰＳで刺激した脾細胞とミクログリアの共培養物におけるサイトカインプロファイルを測定したものである。図２４Ｂは、対照動物の相関プロットを示している。これは、ＬＰＳで刺激した脾細胞とミクログリアの共培養物におけるサイトカインプロファイルを測定したものである。図２４Ｃは、両方の処置群の相関プロットを示している。これは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激した脾細胞とミクログリアの共培養物におけるサイトカインプロファイルを測定したものである。図２４Ｄは、プロファイルの変化が最大であったサイトカインを示している。
【図２５】図２５Ａ〜２５Ｂは、全生存期間と発熱を示す対象との相関関係を示す。図２５Ａは、プライミング用量のベクターの後に発熱を示す対象（「あり」）を、プライミング用量のベクターの後に発熱を示さなかった対象（「なし」）と比較した全生存期間（ＯＳ）を示している。図２５Ｂは、任意の用量のベクターの後に発熱を示す対象（「あり」）を、任意の用量のベクターの後に発熱を示さなかった対象（「なし」）と比較した全生存期間（ＯＳ）を示している。
【図２６】各治療群（継続または限定）内で、全生存期間（ＯＳ）と任意の用量で発熱を示す対象との間の相関関係を示す。
【図２７】図２７Ａ〜２７Ｃは、全生存期間と発熱に関連するサイトカインとの相関関係を示す。以下のサイトカインを測定した：ＩＬ−１α（図２７Ａ）；ＩＬ−１β（図２７Ｂ）；及びＩＬ−６（図２７Ｃ）。
【図２８】図２８Ａ〜２８Ｆは、全生存期間と発熱に関連するサイトカインとの追加の相関関係を示す。以下のサイトカインを測定した：ＩＬ−８（図２８Ａ）；ＴＮＦα（図２８Ｂ）；ＭＩＰ−１α（図２８Ｃ）；ＭＩＰ−１β（図２８Ｄ）；ＩＦＮ−γ（図２８Ｅ）；及びＩＦＮ−α（図２８Ｆ）。
【図２９】ベバシズマブ単剤療法で治療したｒＧＢＭ患者に関する８例の試験のメタ分析から集計したカプランマイヤー曲線を示す。
【図３０】ＶＢ−１１１試験のＴＴｈＰコホートからのデータと比較した８例のベバシズマブ単剤療法試験（単一コホートとしてプール）のメタ分析から集計したカプランマイヤー曲線を示す。
【図３１】ＶＢ−１１１試験のＴＴｈＰコホートからのデータと比較した７例のベバシズマブ単剤療法試験（単一コホートとしてプール）のメタ分析から集計したカプランマイヤー曲線を示す。
【図３２】図３２Ａ〜３２Ｃは、２か月毎のＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ及び毎週のパクリタキセルで治療した患者からの患者腫瘍生検の免疫組織化学染色を示す。図３２Ａは、治療開始前のベースラインＨＥ染色（左）とＣＤ８＋染色（右）を示している。図３２Ｂは、治療開始１か月後のＨＥ染色（左）とＣＤ８＋染色（右）を示している。図３２Ｃは、治療開始４．５か月後のＨＥ染色（左）とＣＤ８＋染色（右）を示している。
【図３３】図３３Ａ〜３３Ｈは、２か月毎のＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ及び毎週のパクリタキセルで治療した患者２名（患者１及び患者２）からの患者腫瘍生検の免疫組織化学染色を示す。図３３Ａ及び３３Ｂは、（それぞれ）治療後の患者１のＣＤ８染色及びＨＥ染色を示している。図３３Ｃ及び３３Ｄは、（それぞれ）治療後の患者２のＣＤ８染色及びＨＥ染色を示している。図３３Ｅ及び３３Ｆは、（それぞれ）治療前の患者１のＣＤ８染色及びＨＥ染色を示している。図３３Ｇ及び３３Ｈは、（それぞれ）治療前の患者２のＣＤ８染色及びＨＥ染色を示している。円及び矢印は、アポトーシス腫瘍細胞の領域を示している。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本開示の詳細な説明
Ｉ．定義
特に定義しない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語はすべて、本開示が属する技術分野の当業者に共通して理解されているものと同じ意味を有する。矛盾が生じる場合には、定義を含む本明細書が優先される。特に文脈上の必要がない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含む。本明細書で言及する刊行物、特許、及びその他の参考文献は、個別の刊行物または特許出願がそれぞれ具体的かつ個別に参照により本明細書に組み込まれた場合と同様に、目的を問わず参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００３９】
本明細書の記載と同様または同等の方法及び材料を本開示の実施または試験に用いることができるが、好適な方法及び材料を後述する。材料、方法、及び実施例は単なる例示であり、限定的であることを意図しない。本開示の他の特長及び利点は、詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかであろう。
【００４０】
本開示をさらに定義するために、以下の用語及び定義を規定する。
【００４１】
用語「約」は、本明細書で概算、おおよそ、ほぼ、またはその範囲内を意味して使用される。用語「約」が数値範囲と組み合わせて使用される場合、示された数値の上下に範囲を広げることにより数値範囲が変化する。概して用語「約」は、指定した値の上下の数値が上下（大小）１０パーセントの変動差で変化する際に本明細書で使用される。
【００４２】
本明細書で使用される場合、「抗体」とは、無傷の免疫グロブリン、その抗原結合断片、または抗原結合分子を意味する。本開示の抗体は、任意のアイソタイプもしくはクラス（例えば、Ｍ、Ｄ、Ｇ、Ｅ、及びＡ）または任意のサブクラス（例えば、Ｇ１〜４、Ａ１〜２）のものであり得、カッパ（κ）またはラムダ（λ）軽鎖のいずれかを有し得る。
【００４３】
本明細書で使用される場合、用語「有効量」は、必要な投与量及び期間で、望ましい結果を得るのに有効な量を指す。望ましい結果とは、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでの新生血管形成または血管新生の低減または阻害であり得る。有効量によって新生血管形成または血管新生が完全に排除される必要はない。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「プライミング用量」とは、治療に対する対象の反応性を評価する前に対象に投与される薬剤の用量を指す。治療に対する対象の反応性は、ＭＲＩスキャン、ＣＴスキャン、体温の測定、血管新生または発熱に関する血漿バイオマーカーもしくは細胞表面バイオマーカーの測定、及びそれらの組み合わせによって評価することができる。治療に対する対象の反応性の評価後、同じ薬剤の追加単回用量または追加複数回用量を投与してもよい。追加単回用量または追加複数回用量は、その薬剤の治療有効量である。プライミング用量は、治療有効量よりも少ない投与量、治療有効量と同一の投与量、または治療有効量よりも多い投与量であり得る。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」とは、治療に対する対象の反応性の評価後に対象に投与される薬剤の用量を指す。治療に対する対象の反応性は、ＭＲＩスキャン、ＣＴスキャン、体温の測定、発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの測定、及びそれらの組み合わせによって評価することができる。治療有効量は、必要な投与量及び期間で、望ましい治療結果を得るのに有効な量を指す。望ましい治療結果は、例えば、症状の軽減、放射線イメージングにおける腫瘍サイズの退縮または安定化、生存期間の延長、運動性の改善などであり得る。治療結果は「治癒」である必要はない。いくつかの実施形態では、治療有効量とは、腫瘍の発生を予防するのに必要とされる量または投与量である。他の態様では、治療有効量とは、腫瘍サイズの縮小に必要とされる量または投与量である。他の態様では、治療有効量とは、腫瘍の再発を予防するのに必要とされる量または投与量である。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「予防有効量」とは、必要な投与量及び期間で、望ましい予防的結果を得るのに有効な量を指す。いくつかの実施形態では、予防用量は疾患の前または初期段階で対象に使用されるため、予防有効量は治療有効量よりも少なくなる。
【００４７】
本明細書で使用される場合、語句「腫瘍を治療すること」とは、腫瘍の成長の阻害、腫瘍サイズの縮小、腫瘍の再発の防止、及びそれらの組み合わせを指す。
【００４８】
用語「ポリヌクレオチド」または「ヌクレオチド」は、単一の核酸のみならず複数の核酸を包含することを意図し、単離された核酸分子または構築物、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、従来型ホスホジエステル結合または非従来型結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）に見られるようなアミド結合）を含む。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、または「核酸」は同義に使用でき、非翻訳５´配列及び３´配列、コード配列を含めた全長ｃＤＮＡ配列、ならびに核酸配列の断片、エピトープ、ドメイン、及び変異体のヌクレオチド配列を含む。ポリヌクレオチドは任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドで構成されてよく、それは非修飾ＲＮＡもしくはＤＮＡであっても、または修飾ＲＮＡもしくはＤＮＡであってもよい。例えば、ポリヌクレオチドは、一本鎖及び二本鎖のＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖のＲＮＡ、ならびに一本鎖領域と二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、すなわち一本鎖もしくはより典型的には二本鎖であるかまたは一本鎖領域と二本鎖領域の混合物であり得るＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子から構成され得る。加えて、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲＮＡとＤＮＡの両方を含む三本鎖領域から構成されてもよい。ポリヌクレオチドはまた、安定化またはその他の理由で、１つ以上の修飾塩基または修飾されたＤＮＡもしくはＲＮＡ骨格も含み得る。「修飾」塩基には、例えばトリチル化塩基、及びイノシンなどの特殊な塩基が含まれる。ＤＮＡ及びＲＮＡにさまざまな修飾を加えることができ、それゆえ「ポリヌクレオチド」は、化学修飾、酵素修飾、または代謝修飾された形態を包含する。
【００５０】
本明細書で使用される場合、「発熱体温」、「熱」、「熱症状」、及び「発熱」は同義に使用することができ、対象の正常体温と考えられるものよりも高い体温を包含することを意図する。ヒトでは、正常体温は概ね約３７℃（約９８．６°Ｆ）と考えられるが、この温度は、温度が測定される時刻、温度測定の経路（例えば口腔測定または直腸測定）、及び対象間のばらつきなどの要因に応じて異なる可能性がある。一部の対象、例えばヒト女性対象では、正常体温は約３７℃（約９８．６°Ｆ）より高い可能性がある。他の対象、例えばヒト男性対象では、正常体温は約３７℃（約９８．６°Ｆ）より低い可能性がある。ヒトでの発熱体温は、約３７℃（約９８．６°Ｆ）超、約３７．２℃（約９９°Ｆ）超、約３７．５℃（約９９．５°Ｆ）超、約３７．８℃（約１００°Ｆ）超、約３８．０℃（約１００．５°Ｆ）超、約３８．３℃（約１００．９°Ｆ）、約３８．５℃（約１０１．３°Ｆ）超、約３８．７℃（約１０１．７°Ｆ）超、約３８．９℃（約１０２°Ｆ）超、約３９℃（約１０２．２°Ｆ）超、約３９．２℃（約１０２．６°Ｆ）超、約３９．４℃（約１０２．９°Ｆ）超、約３９．６℃（約１０３．３°Ｆ）超、約３９．８℃（約１０３．６°Ｆ）、または約４０℃（約１０４°Ｆ）超の温度を含み得る。
【００５１】
本開示において、ポリペプチドは、ペプチド結合または修飾ペプチド結合によって互いに連結されたアミノ酸、すなわちペプチド等価体から構成されてよく、２０種類の遺伝子コードアミノ酸以外のアミノ酸（例えば非天然アミノ酸）を含み得る。本開示のポリペプチドは、翻訳後プロセシングなどの自然な過程によって修飾されても、または当技術分野で周知の化学修飾技術によって修飾されてもよい。このような修飾は、基礎的な教科書及び詳細な専攻論文、ならびに膨大な研究文献で十分に説明されている。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、及びアミノ末端またはカルボキシル末端を含め、ポリペプチドのどの位置に出現してもよい。同種類の修飾が、所与のポリペプチドの数部位に同程度または異なる程度で存在し得るものと理解される。また、所与のポリペプチドに多種類の修飾が含まれていてもよい。ポリペプチドは、例えばユビキチン化の結果として分岐していてよく、分岐の有無にかかわらず環状であってよい。環状、分岐、及び分岐環状ポリペプチドは、翻訳後の自然な過程から生じても、または合成法によって作製されてもよい。修飾には、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合性架橋の形成、システインの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ＰＥＧ化、タンパク質分解処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、トランスファーＲＮＡを介在するタンパク質へのアミノ酸の付加（アルギニル化など）、及びユビキチン化が含まれる。（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９３）；Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｖａｌｅｎｔ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｇｓ．１−１２（１９８３）；Ｓｅｉｆｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  １８２：６２６−６４６（１９９０）；Ｒａｔｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ６６３：４８−６２（１９９２）を参照）。
【００５２】
「断片」、「変異体」、「誘導体」、及び「類似体」という用語は、本開示の任意のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指す場合、少なくともいくつかの活性、すなわちポリペプチドまたはポリヌクレオチドの何らかの自然機能として機能する力を保持する任意のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを包含する。例えば、腫瘍壊死因子受容体１（ＴＮＦＲ１）の「断片」、「変異体」、「誘導体」、及び「類似体」は、天然の全長ＴＮＦＲ１のいくつかの活性、例えばＴＮＦＲ１リガンド、すなわちＴＮＦ−アルファまたはリンホトキシンへの結合能を有する。別の例では、ＦＡＳポリペプチドの「断片」、「変異体」、「誘導体」、及び「類似体」は、天然の全長ＦＡＳポリペプチドのいくつかの活性、例えばアポトーシス誘導能を有する。他の例では、内皮細胞特異的プロモーターの「断片」、「変異体」、「誘導体」、及び「類似体」は、プロモーターに機能的に連結された遺伝子の内皮細胞特異的発現を誘導することができる。ＴＮＦＲ１、ＦＡＳポリペプチド、及び内皮細胞特異的プロモーターの種々の断片、変異体、類似体、または誘導体の追加の非限定的な例は以下に記載されている。
【００５３】
本開示において、「ポリペプチド断片」または「タンパク質断片」とは、ポリペプチドの短いアミノ酸配列を指す。タンパク質またはポリペプチド断片は、「独立」していても、断片が領域の一部を形成する大きなポリペプチド内に含まれていてもよい。本開示のポリペプチド断片の代表例として、例えば、約５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸、約７０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸、約９０個のアミノ酸、または約１００個のアミノ酸を含む断片が挙げられる。
【００５４】
「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似する側鎖を有するアミノ酸残基で置換されているものである。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当技術分野で定義されており、これには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電の極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。したがって、ポリペプチド内のアミノ酸が同じ側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸で置換されている場合、その置換は保存的であるとみなされる。別の実施形態では、アミノ酸の鎖が、側鎖ファミリーメンバーの順序及び／または組成が異なる構造的に類似した鎖で保存的に置換されていてもよい。
【００５５】
２つのポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列間の「配列同一性パーセント」という用語は、２つの配列を最適にアライメントするために導入される必要がある付加または欠失（すなわちギャップ）を考慮して、比較域にわたって配列が共有する完全に一致した位置の数を指す。一致した位置とは、標的配列と参照配列の両方に同一のヌクレオチドまたはアミノ酸が存在する任意の位置である。ギャップはヌクレオチドでもアミノ酸でもないため、標的配列に存在するギャップはカウントされない。同様に、参照配列のヌクレオチドまたはアミノ酸ではなく、標的配列のヌクレオチドまたはアミノ酸がカウントされるため、参照配列に存在するギャップはカウントされない。
【００５６】
配列同一性のパーセントは、両方の配列に同一のアミノ酸残基または核酸塩基が出現する位置の数を判定して、一致した位置の数を得て、一致した位置の数を比較域内の総位置数で除算し、その結果に１００を乗じ、配列同一性のパーセントを得ることにより算出される。配列の比較及び２つの配列間の配列同一性パーセントの決定は、オンラインでの使用及びダウンロードのいずれでも容易に使用可能なソフトウェアを使用して達成することができる。好適なソフトウェアプログラムは様々な供給元から入手可能であり、タンパク質配列とヌクレオチド配列の両方のアライメントに対して使用可能である。配列同一性パーセントを決定する好適なプログラムの一つは、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎのＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴプログラムスイートの一部であるｂｌ２ｓｅｑである。ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰいずれかのアルゴリズムを用いて、２つの配列間の比較を実施する。ＢＬＡＳＴＮは核酸配列の比較に使用され、対してＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列の比較に使用される。他の好適なプログラムは、例えば、ＥＭＢＯＳＳバイオインフォマティクスプログラムスイートの一部である、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒであり、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａのＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）からも入手可能である。
【００５７】
ポリヌクレオチドまたはポリペプチド参照配列とともに整列する単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域が、それぞれ固有の配列同一性パーセントを有してもよい。留意点として、配列同一性パーセント値は小数第１位に四捨五入される。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は８０．１に切り下げられ、対して８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は８０．２に切り上げられる。長さの値は常に整数であることにも留意する。
【００５８】
当業者であれば、配列同一性パーセントの算出のための配列アライメントの生成は、一次配列データによってのみ導出される２つの配列間比較に限定されないものと理解されるであろう。配列アライメントは、複数の配列アライメントから導出することができる。複数の配列アライメントを生成する好適なプログラムの一つは、ｗｗｗ．ｃｌｕｓｔａｌ．ｏｒｇから入手可能なＣｌｕｓｔａｌＷ２である。別の好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｄｒｉｖｅ５．ｃｏｍ／ｍｕｓｃｌｅ／から入手可能なＭＵＳＣＬＥである。あるいは、ＣｌｕｓｔａｌＷ２及びＭＵＳＣＬＥは、例えばＥＢＩから入手可能である。
【００５９】
配列アライメントは、構造データ（例えば、結晶学的タンパク質構造）、機能データ（例えば、変異の場所）、または系統発生学的データなど、異質の供給源からのデータと配列データを統合することによって生成できることも理解されるであろう。異質のデータを統合して複数の配列アライメントを生成する好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手可能な、あるいは例えばＥＢＩから入手可能なＴ−Ｃｏｆｆｅｅである。配列同一性パーセントの算出に使用される最終的なアライメントを自動でまたは手動で取りまとめできることも理解されるであろう。
【００６０】
本明細書で使用される場合、「連結される」、「融合される」、「融合」、「キメラの」、及び「キメラ」という用語は同義に使用される。これらの用語は、化学的コンジュゲーションまたは組換え手段を含むどのような手段であれ、２つ以上の要素または成分を共に連結することを指す。「インフレーム融合」とは、元のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の正しいリーディングフレームを維持して、２つ以上のＯＲＦを連結して、連続する長いＯＲＦを形成することを指す。したがって、組換え融合タンパク質またはキメラタンパク質は、元のＯＲＦによってコードされるポリペプチドに対応する２つ以上のセグメントを含有する単一のタンパク質である（これらのセグメントは通常、天然ではそのように連結されていない）。リーディングフレームはこのように融合セグメント全体にわたって連続を成すが、これらのセグメントが、例えばインフレームのリンカー配列によって物理的または空間的に分離されていてもよい。
【００６１】
「異種」及び「異種部分」という用語は、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、または他の部分が、それが比較される要素のものとは異なった要素に由来することを意味する。例えば、異種ポリペプチドは合成であっても、または異なる種、１つの個体の異なる細胞型、または異なった個体の同じ細胞型もしくは異なる細胞型に由来してもよい。一態様では、異種部分は、融合ポリペプチドまたはタンパク質を産生するように別のポリペプチドに融合されたポリペプチドであり得る。別の態様では、異種部分は、ポリペプチドまたはタンパク質にコンジュゲートされたＰＥＧなどの非ポリペプチドであり得る。
【００６２】
ポリペプチドの文脈において、「線状配列」または「配列」とは、ポリペプチドの一次構造において配列内の互いに隣接する残基が連続しているポリペプチド内の、アミノ末端からカルボキシル末端方向へのアミノ酸の順序である。
【００６３】
本明細書で使用される場合、用語「発現」とは、遺伝子が生化学物質、例えばＲＮＡまたはポリペプチドを産生する過程を指す。この過程には、遺伝子ノックダウンならびに一過性発現及び安定発現の両方を含むがそれらに限定されない、細胞内での遺伝子の機能的存在の何らかの顕在化を包含する。それには、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、または他の任意のＲＮＡ産物への遺伝子の転写、及びそのようなｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳が含まれるが、それに限定されるわけではない。望ましい最終産物が生化学物質である場合、発現には、その生化学物質及び任意の前駆体の生成が含まれる。
【００６４】
本明細書で使用される場合、用語「相補性決定領域」（ＣＤＲ）とは、抗原への結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。抗体のＣＤＲ領域は、抗体の重鎖及び軽鎖両方の超可変領域内に存在する。全長抗体は、重鎖可変ドメインに３つのＣＤＲ領域と軽鎖可変ドメインに３つのＣＤＲ領域を含む。
【００６５】
本明細書で使用される場合、用語「反復投与される」とは、規定された一定間隔での反復した治療薬の投与を指す。各投与間の時間間隔は反復投与の期間中に変更してもよく、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１年、またはそれ以上の長さであり得る。
【００６６】
本明細書で使用される場合、用語「併用療法」とは、疾患または病態を治療するための２種類以上の治療モダリティの実施を指す。本開示の一態様では、併用療法とは、それを必要とする対象または対象集団へのベクター及びＶＥＧＦアンタゴニストの投与を指す。いくつかの実施形態では、併用療法は、ベクターを投与する前にＶＥＧＦアンタゴニストを投与することを含む。別の実施形態では、併用療法は、ベクターの投与と同時にＶＥＧＦアンタゴニストを投与することを含む。別の実施形態では、併用療法は、ベクターを投与した後にＶＥＧＦアンタゴニストを投与することを含む。
【００６７】
ＩＩ．ＦＡＳキメラ遺伝子と内皮細胞特異的プロモーターとを含む核酸構築物
本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に発熱体温を示し得る対象の腫瘍を治療する方法であって、プライミング用量の投与後に対象が発熱体温を示した後に、治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法に関する。本開示において、ＦＡＳキメラタンパク質（または遺伝子産物）をコードする遺伝子は内皮細胞特異的プロモーターに連結されており、内皮細胞でのＦＡＳキメラ遺伝子産物の発現を誘導することができる。そのような細胞毒性遺伝子産物の発現は、過度の新生血管形成または血管増殖が望ましくない状況、例えば腫瘍において有用である。
【００６８】
本開示はまた、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、プライミング用量の投与後に当該対象が発熱体温を示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法も提供する。
【００６９】
Ａ．ＦＡＳキメラ
本開示の核酸構築物によって発現するＦＡＳキメラタンパク質は、ポリペプチドのそれぞれが異なるタンパク質に由来する少なくとも２種類の「デスレセプター」ポリペプチドを含む。ＦＡＳキメラタンパク質の第１のポリペプチドは、腫瘍壊死因子受容体１（ＴＮＦＲ１）のリガンド結合ドメインを含む。ＦＡＳキメラタンパク質の第２のポリペプチドは、ＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインを含む。
【００７０】
ＴＮＦＲ１のリガンド結合ドメインは、ＴＮＦＲ１リガンドに結合するどのドメインであってもよい。一実施形態では、ＴＮＦＲ１リガンドはＴＮＦ−αである。別の実施形態では、ＴＮＦＲ１リガンドはリンホトキシン−αである。ＴＮＦＲ１のリガンド結合ドメインは、ＴＮＦＲ１の細胞外ドメインであっても、その任意の断片、変異体、誘導体、または類似体であってもよい。ＴＮＦＲ１リガンド結合ドメインの非限定的な例は以下に記載されている。
【００７１】
本開示に有用なＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインは、細胞死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）を形成することによりアポトーシスを誘導する任意のＦＡＳドメインを含む。一実施形態では、ＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインは、細胞内ドメイン、膜貫通ドメイン、またはその両方を含む。ＦＡＳポリペプチドエフェクタードメインの非限定的な例は以下に記載されている。
【００７２】
ＴＮＦＲ１とＦＡＳポリペプチドは、ペプチド結合またはリンカーによって連結することができる。ＴＮＦＲ１リガンド結合ドメインをＦＡＳエフェクタードメインと連結するリンカーは、ポリペプチドリンカーであっても非ペプチドリンカーであってもよい。例えば、ＦＡＳキメラタンパク質のリンカーは、１つ以上のグリシン、セリン、ロイシン、またはそれらの任意の組み合わせを含んでもよい。一実施形態では、本開示に有用なリンカーはＳｅｒ−Ｌｅｕを含む。別の実施形態では、本開示に有用なリンカーは、（ＧＧＧＳ）ｎ（Ｄｅｎｉｓｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：３５０３５−３５０４３（２００２））（配列番号２７）を含み、ここで、ｎは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０以上であり得る。
【００７３】
１．腫瘍壊死因子受容体１
全長ヒトＴＮＦＲ１ポリペプチドは４５５アミノ酸長であり、ＴＮＦ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体Ｉ型（ＴＮＦＲＩ）、ＴＮＦＲ−Ｉ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＡＲ、ｐ５５、Ｐ６０、またはＣＤ１２０ａとしても知られる。天然ヒトＴＮＦＲ１ポリペプチドは、ＴＮＦ−αまたはホモ三量体リンホトキシン−αに結合することが知られている。ＴＮＦ−αが細胞外ドメインに結合するとＴＮＦＲ１はホモ三量体化し、それにより腫瘍壊死因子受容体１型関連デスドメインタンパク質（ＴＲＡＤＤ）のデスドメインと特異的に相互作用する。ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦＳ）、受容体相互作用セリン／トレオニンプロテインキナーゼ１（ＲＩＰＫ１）、及びＦａｓ関連デスドメインタンパク質（ＦＡＤＤ）などの種々のＴＲＡＤＤ相互作用タンパク質が、ＴＲＡＤＤとの連係により複合体に動員される。複合体は、アポトーシス及びＮＦ−カッパ−Ｂシグナル伝達という少なくとも２つの異なるシグナル伝達カスケードを活性化する。
【００７４】
ヒトＴＮＦＲ１ポリペプチド配列として報告されている４５５ａａのポリペプチド配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースの識別番号がＰ１９４３８−１である。このヒトＴＮＦＲ１ポリペプチド配列は、本明細書でアイソフォームＡ及び配列番号２と称される。配列番号１は、配列番号２をコードするヌクレオチド配列である。１０８ａａのポリペプチド配列はヒトＴＮＦＲ１ポリペプチド配列のアイソフォームとして報告されたものであり、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースの識別番号がＰ１９４３８−２である。１０８ａａのポリペプチドは、アイソフォームＡ（配列番号２）のアミノ酸１〜１０８に対応し、本明細書でアイソフォームＢと称する。２３２ａａを有するヒトＴＮＦＲ１ポリペプチドの別の変異体は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースの識別番号Ｐ１９４３８−３として報告された。２３２ａａのポリペプチドは、アイソフォームＡ（配列番号２）のアミノ酸１〜２３２に対応し、本明細書でアイソフォームＣと称する。ヒトＴＮＦＲ１の追加の天然変異体として、Ｈ５１Ｑ、Ｃ５９Ｒ、Ｃ５９Ｓ、Ｃ６２Ｇ、Ｃ６２Ｙ、Ｐ７５Ｌ、Ｔ７９Ｍ、Ｃ８１Ｆ、Ｃ９９Ｓ、Ｓ１１５Ｇ、Ｃ１１７Ｒ、Ｃ１１７Ｙ、Ｒ１２１Ｐ、Ｒ１２１Ｑ、Ｐ３０５Ｔ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の変異を含むアイソフォームＡ、Ｂ、及びＣのＴＮＦＲ１ポリペプチドが挙げられるが、それに限定されるわけではない。他の公知のＴＮＦＲ１変異体として、Ｌ１３ＬＩＬＰＱ、Ｋ２５５Ｅ、Ｓ２８６Ｇ、Ｒ３９４Ｌ、４１２：Ｍｉｓｓｉｎｇ、ＧＰＡＡ４４３−４４６ＡＰＰ、またはそれらの任意の組み合わせを含むアイソフォームＡ、Ｂ、及びＣのＴＮＦＲ１ポリペプチドが挙げられる。
【００７５】
表１は、ヒト野生型ＴＮＦＲ１アミノ酸配列、及び野生型ＴＮＦＲ１をコードするヌクレオチド配列を示す。
【００７６】
（表１）ＴＮＦＲ１配列
2021500355.tif 000002
2021500355.tif 000003
【００７７】
マウスＴＮＦＲ１ポリペプチド配列とその変異体も報告する。４５４ａａのマウスＴＮＦＲ１ポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースの識別番号がＰ２５１１８である。他の動物の公知のＴＮＦＲ１ポリペプチドとして、ラット（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースのＰ２２９３４）、ウシ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースのＯ１９１３１）、ブタ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースのＰ５０５５５）、またはウマ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースのＤ１ＭＨ７１）が挙げられるが、それに限定されるわけではない。
【００７８】
全長ＴＮＦＲ１は、（１）ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１Ａ、膜形態（すなわち、全長ＴＮＦＲ１に対応するアミノ酸２２〜４５５）及び（２）ＴＮＦ結合タンパク質１（ＴＢＰＩ）（すなわち、全長ＴＮＦＲ１に対応するアミノ酸４１〜２９１）という２つの鎖に切断することができる。全長ヒトＴＮＦＲ１ポリペプチドは、シグナル配列（配列番号２のアミノ酸１〜２１）、細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸２２〜２１１）、膜貫通ドメイン（配列番号２のアミノ酸２１２〜２３４）、及び細胞質ドメイン（配列番号２のアミノ酸２３５〜４５５）からなる。ＴＮＦＲ１細胞外ドメインは、ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ１（配列番号２に対応するアミノ酸４３〜８２）、ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ２（配列番号２に対応するアミノ酸８３〜１２５）、ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ３（配列番号２に対応するアミノ酸１２６〜１６６）、及びＴＮＦＲ−Ｃｙｓ４（配列番号２に対応するアミノ酸１６７〜１９６）という４つのシステインリピート領域を含む。
【００７９】
当業者は理解しているであろうが、上記のドメインの開始残基及び終了残基は、使用するコンピューターモデリングプログラム、またはドメインの判定に使用される方法に応じて異なる可能性がある。したがって、ＴＮＦＲ１の種々の機能的ドメインは、上記で定義されたものとは異なる可能性がある。
【００８０】
一実施形態では、ＦＡＳキメラタンパク質に有用なＴＮＦＲ１のリガンド結合ドメインは、ＴＮＦＲ１の細胞外ドメイン、またはその任意の断片、変異体、誘導体、もしくは類似体を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなり、ＴＮＦＲ１の細胞外ドメイン、またはその任意の断片、変異体、誘導体、もしくは類似体はＴＮＦ−αに結合する。別の実施形態では、ＴＮＦＲ１のリガンド結合ドメインは、ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ１；ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ２；ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ３；ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ４；ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ１とＴＮＦＲ−Ｃｙｓ２；ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ１とＴＮＦＲ−Ｃｙｓ３；ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ１とＴＮＦＲ−Ｃｙｓ４；ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ２とＴＮＦＲ−Ｃｙｓ３；ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ２とＴＮＦＲ−Ｃｙｓ４；ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ３とＴＮＦＲ−Ｃｙｓ４；ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ１、ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ２、及びＴＮＦＲ−Ｃｙｓ３；ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ１、ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ２、及びＴＮＦＲ−Ｃｙｓ４；ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ２、ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ３、及びＴＮＦＲ−Ｃｙｓ４；またはＴＮＦＲ−Ｃｙｓ１、ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ２、ＴＮＦＲ−Ｃｙｓ３、及びＴＮＦＲ−Ｃｙｓ４を含む。他の実施形態では、ＦＡＳキメラタンパク質のＴＮＦＲ１リガンド結合ドメインは、ＴＮＦ結合タンパク質Ｉを含む。さらに他の実施形態では、ＦＡＳキメラタンパク質のＴＮＦＲ１リガンド結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸２２〜１９０、アミノ酸２２〜１９１、アミノ酸２２〜１９２、アミノ酸２２〜１９３、アミノ酸２２〜１９４、アミノ酸２２〜１９５、アミノ酸２２〜１９６、アミノ酸２２〜１９７、アミノ酸２２〜１９８、アミノ酸２２〜１９９、アミノ酸２２〜２００、アミノ酸２２〜２０１、アミノ酸２２〜２０２、アミノ酸２２〜２０３、アミノ酸２２〜２０４、アミノ酸２２〜２０５、アミノ酸２２〜２０６、アミノ酸２２〜２０７、アミノ酸２２〜２０８、アミノ酸２２〜２０９、アミノ酸２２〜２１０、またはアミノ酸２２〜２１１と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなり、当該リガンド結合ドメインは、ＴＮＦＲ１リガンド、例えばＴＮＦ−αに結合する。
【００８１】
他の実施形態では、ＴＮＦＲ１のリガンド結合ドメインはシグナルペプチドをさらに含む。好適なシグナルペプチドの一例は、ＴＮＦＲ１のシグナルペプチド、例えば配列番号２のアミノ酸１〜２１である。さらに他の実施形態では、ＦＡＳキメラ遺伝子産物のリガンド結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸１〜１９０、アミノ酸１〜１９１、アミノ酸１〜１９２、アミノ酸１〜１９３、アミノ酸１〜１９４、アミノ酸１〜１９５、アミノ酸１〜１９６、アミノ酸１〜１９７、アミノ酸１〜１９８、アミノ酸１〜１９９、アミノ酸１〜２００、アミノ酸１〜２０１、アミノ酸１〜２０２、アミノ酸１〜２０３、アミノ酸１〜２０４、アミノ酸１〜２０５、アミノ酸１〜２０６、アミノ酸１〜２０７、アミノ酸１〜２０８、アミノ酸１〜２０９、アミノ酸１〜２１０、またはアミノ酸１〜２１１と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなり、当該リガンド結合ドメインは、ＴＮＦＲ１リガンド、例えばＴＮＦ−αに結合する。具体的な実施形態では、ＦＡＳキメラタンパク質のＴＮＦＲ１リガンド結合ドメインは、配列番号４と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなり、当該リガンド結合ドメインは、ＴＮＦＲ１リガンド、例えばＴＮＦ−αに結合する。
【００８２】
さらに他の実施形態では、ＴＮＦＲ１のリガンド結合ドメインは、配列番号３と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。
【００８３】
なおも他の実施形態では、ＦＡＳキメラタンパク質のＴＮＦＲ１リガンド結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸２２〜１０８（ＴＮＦＲ１アイソフォームＢ）、配列番号２のアミノ酸２２〜２３２（ＴＮＦＲ１アイソフォームＣ）、または配列番号２のアミノ酸４４〜２９１（ＴＢＰ１）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなり、当該リガンド結合ドメインは、ＴＮＦＲ１リガンド、例えばＴＮＦ−αに結合する。
【００８４】
２．ＦＡＳポリペプチド
全長ヒトＦＡＳポリペプチドは３３５アミノ酸長であり、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー６、Ａｐｏ−１抗原、アポトーシス媒介表面抗原ＦＡＳ、ＦＡＳＬＧ受容体、またはＣＤ９５としても知られる。天然のＦＡＳポリペプチドはＴＮＦＳＦ６／ＦＡＳＬＧに対する受容体である。ＦＡＳポリペプチドがＦＡＳリガンド（ＦａｓＬ）に結合すると、ＦＡＳとＦａｓＬの相互作用により、ＦＡＤＤ、カスパーゼ−８、及びカスパーゼ−１０を含む細胞死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）が形成される。一部の細胞型（Ｉ型）では、処理されたカスパーゼ−８がカスパーゼファミリーの他のメンバーを直接活性化し、細胞のアポトーシスの実行を誘発する。他の細胞型（ＩＩ型）では、ミトコンドリアからのアポトーシス促進因子の放出を増加させ、カスパーゼ−８の活性化を増幅させるというスパイラルに入るフィードバックループをＦＡＳ−ＤＩＳＣが開始する。ＦＡＳ介在型アポトーシスは、末梢性寛容の誘導、抗原刺激による成熟細胞の自死、またはその両方に役割を果たすことができる。
【００８５】
ヒトＦＡＳポリペプチド配列として報告されている３３５ａａのポリペプチド配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースの識別番号がＰ２５４４５−１である。このヒトＦＡＳポリペプチド配列は、本明細書で配列番号６と称される。配列番号５は、配列番号６をコードするヌクレオチド配列である。ＦＡＳポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、ＡＰＴ１、ＦＡＳ１、またはＴＮＦＲＳＦ６としても知られる。全長ＦＡＳポリペプチドは、シグナルペプチド（配列番号６に対応するアミノ酸１〜２５）、細胞外ドメイン（配列番号６に対応するアミノ酸２６〜１７３）、膜貫通ドメイン（配列番号６に対応するアミノ酸１７４〜１９０）、及び細胞内（または細胞質）ドメイン（配列番号６に対応するアミノ酸１９１〜３３５）を含む。細胞内ドメインは、デスドメイン（例えば、配列番号６に対応するアミノ酸２３０〜３１４）を含む。
【００８６】
当業者は理解しているであろうが、上記のドメインの開始残基及び終了残基は、使用するコンピューターモデリングプログラム、またはドメインの判定に使用される方法に応じて異なる可能性がある。したがって、ＦＡＳの種々の機能的ドメインは、上記で定義されたものとは異なる可能性がある。表２は、野生型ヒトＦＡＳアミノ酸配列、及びＦＡＳタンパク質をコードするヌクレオチド配列を示す。
【００８７】
（表２）ＦＡＳ配列
2021500355.tif 000004
2021500355.tif 000005
【００８８】
マウスＦＡＳポリペプチド配列とその変異体も報告されている。３２７ａａのマウスＦＡＳポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースの識別番号がＰ２５４４６である。他の動物の公知のＦＡＳポリペプチドとして、オナガザル（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースのＱ９ＢＤＮ４）、アカゲザル（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースのＱ９ＢＤＰ２）、ラット（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースのＱ６３１９９）、またはウシ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースのＰ５１８６７）が挙げられるが、それに限定されるわけではない。
【００８９】
ＦＡＳポリペプチドの配列変異に基づいて、当業者はＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインにおける配列変異を同定することができる。例えば、ＦＡＳエフェクタードメインの天然変異体には、Ｃ１７８Ｒ、Ｌ１８０Ｆ、Ｐ１８３Ｌ、Ｉ１８４Ｖ、Ｔ１９８Ｉ、Ｙ２３２Ｃ、Ｔ２４１Ｋ、Ｔ２４１Ｐ、Ｖ２４９Ｌ、Ｒ２５０Ｐ、Ｒ２５０Ｑ、Ｇ２５３Ｄ、Ｇ２５３Ｓ、Ｎ２５５Ｄ、Ａ２５７Ｄ、Ｉ２５９Ｒ、Ｄ２６０Ｇ、Ｄ２６０Ｖ、Ｄ２６０Ｙ、Ｉ２６２Ｓ、Ｎ２６４Ｋ、Ｔ２７０Ｉ、Ｔ２７０Ｋ、Ｅ２７２Ｇ、Ｅ２７２Ｋ、Ｌ２７８Ｆ、Ｋ２９９Ｎ、Ｔ３０５Ｉ、Ｉ３１０Ｓ、またはそれらの任意の組み合わせのうち１つ以上の置換または変異が含まれ得る。
【００９０】
一実施形態では、本開示に有用なＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインは、ＦＡＳポリペプチドのデスドメインを含む。別の実施形態では、ＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインは、配列番号６のアミノ酸２３０〜３１４と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。他の実施形態では、ＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインは、ＦＡＳポリペプチドの細胞内ドメインを含む。さらに他の実施形態では、ＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインは、配列番号６のアミノ酸１８５〜３３５、アミノ酸１８６〜３３５、アミノ酸１８７〜３３５、アミノ酸１８８〜３３５、アミノ酸１８９〜３３５、アミノ酸１９０〜３３５、アミノ酸１９１〜３３５、アミノ酸１９２〜３３５、アミノ酸１９３〜３３５、アミノ酸１９４〜３３５、アミノ酸１９５〜３３５、アミノ酸１９６〜３３５、アミノ酸１９７〜３３５、アミノ酸１９８〜３３５、またはアミノ酸１９９〜３３５と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００９１】
なおも他の実施形態では、ＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインはさらに、ＦＡＳポリペプチドの膜貫通ドメインを含む。さらに他の実施形態では、ＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインは、配列番号６のアミノ酸１７４〜３３５と少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインは、ＦＡＳ細胞外ドメインのＣ末端部分に由来する約１０個、約９個、約８個、約７個、約６個、約５個、約４個、約３個、約２個、または約１個のアミノ酸をさらに含む。ある特定の実施形態では、ＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインは、配列番号６のアミノ酸１７９〜３３５、アミノ酸１７８〜３３５、アミノ酸１７７〜３３５、アミノ酸１７６〜３３５、アミノ酸１７５〜３３５、アミノ酸１７４〜３３５、アミノ酸１７３〜３３５、アミノ酸１７２〜３３５、アミノ酸１７１〜３３５、アミノ酸１７０〜３３５、アミノ酸１６９〜３３５、アミノ酸１６８〜３３５、アミノ酸１６７〜３３５、アミノ酸１６６〜３３５、アミノ酸１６５〜３３５、アミノ酸１６４〜３３５、またはアミノ酸１６３〜３３５と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるアミノ酸配列を含み、当該エフェクタードメインは、細胞死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）を形成するか、カスパーゼ８を活性化するか、またはアポトーシスを誘発する。
【００９２】
いくつかの実施形態では、ＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインは、配列番号８と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなり、当該エフェクタードメインは、細胞死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）を形成するか、カスパーゼ８を活性化するか、またはアポトーシスを誘発する。
【００９３】
他の実施形態では、ＦＡＳポリペプチドのエフェクタードメインは、配列番号７と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。
【００９４】
一実施形態では、本開示のＦＡＳキメラ遺伝子産物は、配列番号１０と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなり、当該ＦＡＳキメラ遺伝子産物はアポトーシスを誘発する。別の実施形態では、ＦＡＳキメラ遺伝子産物は、配列番号９と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるヌクレオチド配列によってコードされ、当該ＦＡＳキメラ遺伝子産物はアポトーシスを誘発する。
【００９５】
Ｂ．内皮細胞特異的プロモーター
ＦＡＳキメラ遺伝子を含む核酸構築物は、機能的に連結されたＦＡＳキメラ遺伝子の発現を調節するのに有用な１つ以上の発現制御要素をさらに含む。発現制御要素として、プロモーター、分泌シグナル、及びその他の調節要素が挙げられるが、それに限定されるわけではない。
【００９６】
本開示に有用な核酸構築物は、内皮細胞でのＦＡＳキメラタンパク質の発現を誘導する内皮細胞特異的プロモーターを用い、それにより内皮細胞のアポトーシスを誘発する。
【００９７】
本開示の目的では、内皮細胞特異的プロモーターは、１つ以上のシス調節要素を含み、シス調節要素を含まないプロモーターと比較してプロモーターの内皮細胞特異性を改善することができる。一例では、シス調節要素はエンハンサーを含む。別の態様では、シス調節要素は低酸素応答要素を含む。他の例では、シス調節要素はエンハンサーと低酸素応答要素の両方を含む。
【００９８】
一実施形態では、本開示に有用なシス調節要素は、配列番号１１または配列番号１２（配列番号１１の相補配列）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、当該シス調節要素は、シス調節要素を含まないプロモーターと比較してプロモーターの内皮細胞特異性を改善する。シス調節要素はさらに、配列番号１３または配列番号１４（配列番号１３の相補配列）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である追加のヌクレオチド配列を含んでもよい。
【００９９】
別の実施形態では、本開示のためのシス調節要素は、配列番号１３または配列番号１４（配列番号１３の相補配列）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、当該シス調節要素は、シス調節要素を含まないプロモーターと比較してプロモーターの内皮細胞特異性を改善する。シス調節要素はさらに、配列番号１１または配列番号１２（配列番号１１の相補配列）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である追加のヌクレオチド配列を含んでもよい。
【０１００】
他の実施形態では、本開示のためのシス調節要素は、配列番号１５または配列番号１６（配列番号１５の相補配列）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、当該シス調節要素は、シス調節要素を含まないプロモーターと比較してプロモーターの内皮細胞特異性を改善する。さらに他の実施形態では、核酸構築物のシス調節要素は、配列番号７またはその任意の断片、変異体、誘導体、もしくは類似体を含み、その断片、変異体、誘導体、または類似体は、シス調節要素を含まないプロモーターと比較してプロモーターの内皮細胞特異性を改善する。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、本開示のためのシス調節要素は、配列番号２２または配列番号２３と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、当該シス調節要素は、シス調節要素を含まないプロモーターと比較してプロモーターの内皮細胞特異性を改善する。さらに他の実施形態では、核酸構築物のシス調節要素は、配列番号２２もしくは配列番号２３、またはその任意の断片、変異体、誘導体、もしくは類似体を含み、その断片、変異体、誘導体、または類似体は、シス調節要素を含まないプロモーターと比較してプロモーターの内皮細胞特異性を改善する。
【０１０２】
他の実施形態では、本開示のためのシス調節要素は、配列番号２４または配列番号２５と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一であるヌクレオチド配列を含み、当該シス調節要素は、シス調節要素を含まないプロモーターと比較してプロモーターの内皮細胞特異性を改善する。さらに他の実施形態では、核酸構築物のシス調節要素は、配列番号２４もしくは配列番号２５、またはその任意の断片、変異体、誘導体、もしくは類似体を含み、その断片、変異体、誘導体、または類似体は、シス調節要素を含まないプロモーターと比較してプロモーターの内皮細胞特異性を改善する。
【０１０３】
表３は、本開示に有用な種々のシス調節要素配列を示す。
【０１０４】
（表３）内皮細胞特異的なシス調節要素及びプロモーター
2021500355.tif 000006
2021500355.tif 000007
【０１０５】
本開示のためのシス調節要素は、プロモーターの上流または下流のプロモーターに連結されていても、プロモーター内の２つのヌクレオチド間に挿入されていてもよい。本開示のための内皮細胞特異的プロモーターには、当技術分野で公知の任意のプロモーターを用いることができる。例えば、本開示に用いることができる好適なプロモーターとして、内皮特異的プロモーター：プレプロエンドセリン−１（ＰＰＥ−１プロモーター）（２０１０年１１月１１日公開のＵＳ２０１０／０２８２６３４及び２０１１年７月１４日公開のＷＯ２０１１／０８３４６４）；ＰＰＥ−１−３Ｘプロモーター（米国特許第７，５７９，３２７号、米国特許第８，０７１，７４０号、ＵＳ８，０３９，２６１、ＵＳ２０１０／０２８２６３４、ＵＳ２００７／０２８６８４５、ＷＯ２０１１／０８３４６４、及びＷＯ２０１１／０８３４６６）；ＴＩＥ−１（Ｓ７９３４７、Ｓ７９３４６）及びＴＩＥ−２（Ｕ５３６０３）プロモーター［Ｓａｔｏ  ＴＮ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９３  Ｏｃｔ  １５；９０（２０）：９３５５−８］、エンドグリンプロモーター［Ｙ１１６５３；Ｒｉｕｓ  Ｃ，Ｂｌｏｏｄ  １９９８  Ｄｅｃ  １５；９２（１２）：４６７７−９０］、フォン・ヴィレブランド因子［ＡＦ１５２４１７；Ｃｏｌｌｉｎｓ  ＣＪ  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９８７  Ｊｕｌ；８４（１３）：４３９３−７］、ＫＤＲ／ｆｌｋ−１プロモーター［Ｘ８９７７７，Ｘ８９７７６；Ｒｏｎｉｃｋｅ  Ｖ，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ  １９９６  Ａｕｇ；７９（２）：２７７−８５］、ＦＬＴ−１プロモーター［Ｄ６４０１６  ＡＪ２２４８６３；Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ  Ｋ，：Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９５  Ｎｏｖ  １７；２７０（４６）：２７９４８−５３］、Ｅｇｒ−１プロモーター［ＡＪ２４５９２６；Ｓｕｋｈａｔｍｅ  ＶＰ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｒｅｓ  １９８７  Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；１（４）：３４３−５５］、Ｅ−セレクチンプロモーター［Ｙ１２４６２；Ｃｏｌｌｉｎｓ  ＴＪ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９１  Ｆｅｂ  ５；２６６（４）：２４６６−７３］、内皮接着分子プロモーター：ＩＣＡＭ−１［Ｘ８４７３７；Ｈｏｒｌｅｙ  ＫＪ  ＥＭＢＯ  Ｊ  １９８９  Ｏｃｔ；８（１０）：２８８９−９６］、ＶＣＡＭ−１［Ｍ９２４３１；Ｉａｄｅｍａｒｃｏ  ＭＦ，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９２  Ａｕｇ  １５；２６７（２３）：１６３２３−９］、ＰＥＣＡＭ−１［ＡＪ３１３３３０  Ｘ９６８４９；ＣＤ３１，Ｎｅｗｍａｎ  ＰＪ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９０  Ｍａｒ  ９；２４７（４９４７）：１２１９−２２］、血管平滑筋特異的要素：ＣＡｒＧボックスＸ５３１５４及び大動脈カルボキシペプチダーゼ様タンパク質（ＡＣＬＰ）プロモーター［ＡＦ３３２５９６；Ｌａｙｎｅ  ＭＤ，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００２；９０：７２８−７３６］、ならびにＡｏｒｔｉｃ  Ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｇｅｎｅ−１［Ｙｅｎ−Ｈｓｕ  Ｃｈｅｎ  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，Ｖｏｌ．２７６，Ｉｓｓｕｅ  ５０，４７６５８−４７６６３，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １４，２００１］が挙げられ、それらのすべてはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０６】
一実施形態では、内皮細胞特異的要素に連結されたプロモーターは、配列番号１７のヌクレオチド配列を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％含み、この要素に連結されたプロモーターは、当該プロモーターに機能的に連結された遺伝子に対して内皮細胞特異性を誘導する。別の実施形態では、内皮細胞特異的要素に連結されたプロモーターは、野生型ＰＰＥ−１プロモーターの断片、変異体、誘導体、または類似体を含み、その上記断片、変異体、誘導体、または類似体は、プロモーターに機能的に連結された遺伝子に対して内皮細胞特異性を誘導する。一例では、内皮細胞特異的要素を、配列番号１７に対応するヌクレオチド残基４４２と４４９の間に挿入することができる。
【０１０７】
さらなる実施形態では、内皮細胞特異的プロモーターは低酸素応答要素を含む。低酸素応答要素（ＨＲＥ）は、エンドセリン−１プロモーターのアンチセンス鎖に位置する。この要素は、低酸素による（ヒト、ラット、及びマウス遺伝子の）エンドセリン−１プロモーターの正の調節に必要とされる低酸素誘導因子−１結合部位である。低酸素は、エリスロポエチン（Ｅｐｏ）、ＶＥＧＦ、及び種々の糖分解酵素を含めたいくつかの遺伝子の発現を誘導する強力なシグナルである。低酸素条件に応答するすべての遺伝子においてコア配列（８塩基対）は保存され、隣接領域は他の遺伝子と異なる。ＥＴ−Ｉ低酸素応答要素は、ＧＡＴ  Ａ−２とＡＰ−１結合部位の間に位置する。一例では、低酸素応答要素は、配列番号２６、その断片、変異体、誘導体、または類似体を含む。
【０１０８】
他の実施形態では、本開示に有用な内皮細胞特異的プロモーターは、配列番号１８のヌクレオチド配列を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなり、シス調節要素に連結されたプロモーターは、当該プロモーターに機能的に連結された遺伝子に対して内皮細胞特異性を誘導する。別の実施形態では、内皮細胞特異的プロモーターは、配列番号１８の断片、変異体、誘導体、または類似体を含み、その上記断片、変異体、誘導体、または類似体は、プロモーターに機能的に連結された遺伝子に対して内皮細胞特異性を誘導する。
【０１０９】
内皮細胞特異的プロモーターの追加の変形例は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１１／０８３４６４、ＷＯ２０１１／０８３４６６、及びＷＯ２０１２／０５２４２３で参照することができる。
【０１１０】
本開示は、配列番号１７のヌクレオチド配列を含む新規なプロモーター配列も提供する。一例では、このプロモーターは内皮細胞特異的シス調節要素をさらに含む。一例では、内皮細胞特異的シス調節要素は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、またはその任意の断片、誘導体、変異体、もしくは類似体を含み、その断片、誘導体、変異体、または類似体は、シス調節要素を含まないプロモーターと比較してプロモーターの内皮細胞特異性を改善する。別の例では、プロモーターは、配列番号１８のヌクレオチド配列を含む。本開示は、新規なプロモーター及び異種ヌクレオチド配列を含む核酸構築物を含む。一実施形態では、異種核酸配列は、本明細書に記載のＦＡＳキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。別の実施形態では、異種ヌクレオチド配列はアデノウイルス配列を含む。
【０１１１】
Ｃ．ベクター
本開示はまた、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦＡＳキメラ遺伝子を含む核酸構築物を含むベクターも提供する。本開示の目的には、数々のベクター系を用いることができる。例えば、本開示の本態様の実施に用いることができる様々なウイルス遺伝子送達系として、アデノウイルスベクター、アルファウイルスベクター、エンテロウイルスベクター、ペスチウイルスベクター、レンチウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、エプスタイン・バールウイルスベクター、パポーバウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、及び単純ヘルペスウイルスベクターが挙げられるが、それに限定されるわけではない。
【０１１２】
別の実施形態では、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦＡＳキメラ遺伝子を含むベクターはアデノウイルスである。例えば、アデノウイルスは、ヒトアデノウイルス種Ａ（血清型１２、１８、及び３１）、Ｂ（血清型３、７、１１、１４、１６、２１、３４、３５、５０、及び５５）、Ｃ（血清型１、２、５、６、及び５７）、Ｄ（８、９、１０、１３、１５、１７、１９、２０、２２〜３０、３２、３３、３６〜３９、４２〜４９、５１、５３、５４、及び５６）、Ｅ（血清型４）、Ｆ（血清型４０及び４１）、またはＧ（血清型５２）のうちいずれか１種類以上であってよい。特定の実施形態では、本開示のためのアデノウイルスは、ヒトアデノウイルス血清型５である。いくつかの実施形態では、遺伝子治療に有用なアデノウイルスは、Ｅ１領域及びＥ３領域を含んでいない組換え非増殖型アデノウイルスである。ある特定の実施形態では、本発明のためのアデノウイルスは、Ｅ３領域を含んでいないがＥ１領域は含む制限増殖型アデノウイルスである。
【０１１３】
一実施形態では、ベクターは、配列番号１９を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。別の実施形態では、アデノウイルスベクターは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）アクセッション番号１３０２１２０１を有する単離されたウイルスである。
【０１１４】
Ｄ．生物学的寄託
生物学的寄託は、ブダペスト条約に準じてかつ米国特許法施行規則１．８０８条に準じて、Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｇｅｎｃｙ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ，Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｇｅｎｃｙ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｏｒｔｏｎ  Ｄｏｗｎ，Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，ＳＰ４  ０ＪＧ，ＵＫに設置されたＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）で行われた。寄託された材料の試料は、特許が付与された時点で公的に使用可能となる。寄託された実施形態は、本開示の単なる例示であると意図されるため、本明細書に記載されかつ主張される開示は、寄託された系統の範囲によって限定されるべきではない。
2021500355.tif 000008
【０１１５】
ＩＩＩ．ＶＥＧＦアンタゴニスト
血管内皮細胞増殖因子であるＶＥＧＦは、内皮細胞特異的マイトジェンであり、血管新生誘導物質である。ＶＥＧＦという用語には、ＶＥＧＦ遺伝子ファミリーのメンバー：ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、及びＶＥＧＦ−Ｄを包含する。ＶＥＧＦ−ＡはＶＥＧＦ遺伝子ファミリーのプロトタイプメンバーであると考えられている。選択的エキソンスプライシングにより、ＶＥＧＦ−Ａには４種類の異なるアイソフォーム：ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９、及びＶＥＧＦ２０６が存在する。シグナル配列の切断後、４種類のＶＥＧＦ−Ａアイソフォームのアミノ酸長はそれぞれ１２１、１６５、１８９、２０６である。
【０１１６】
発現するとＶＥＧＦは細胞外へ分泌され、そこでＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）の細胞外領域に結合する。２つの主要なＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ−１またはＶＥＧＦＲ−２があり、いずれも受容体チロシンキナーゼである。第３のＶＥＧＦＲであるＶＥＧＦＲ−３は、ＶＥＧＦ−ＣとＶＥＧＦ−Ｄにのみ結合する関連受容体チロシンキナーゼである。ＶＥＧＦに結合すると、ＶＥＧＦＲは、内皮細胞増殖及び血管新生をもたらす下流事象をシグナル伝達する。ＶＥＧＦ−Ｃ及びＶＥＧＦ−Ｄは、リンパ管新生を調節することが知られている。
【０１１７】
ＶＥＧＦ遺伝子は、低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）の配列との相同性が高いヌクレオチド配列を含む。このＨＩＦ−１様配列は、低酸素条件下でＶＥＧＦ遺伝子発現の誘導を可能にする。そのため、腫瘍の微小環境内などの低酸素条件下でＶＥＧＦ遺伝子の発現を誘導する。腫瘍床内で高レベルのＶＥＧＦが産生されることでＶＥＧＦＲのシグナル伝達と、それによる内皮細胞増殖及び血管新生が増加する。腫瘍内で新たな血管が形成されると、増殖しつつある腫瘍に血液と酸素が供給される。
【０１１８】
血管新生ならびに腫瘍の成長及び発達におけるＶＥＧＦの顕著な役割のため、可能性のあるがん治療薬としてＶＥＧＦアンタゴニストが試験されている。ＶＥＧＦアンタゴニストは、ＶＥＧＦに直接結合し、ＶＥＧＦＲとの相互作用を遮断することにより、ＶＥＧＦ活性を妨げることができる。それによりＶＥＧＦＲからのシグナル伝達と下流事象が抑制され、その結果として血管新生の減少が生じる。一実施形態では、本開示に有用なＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ結合分子である。別の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ結合分子は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、単鎖抗体、またはキメラ抗体である。別の実施形態では、治療のための抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ結合分子は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む。
【０１１９】
ＶＥＧＦ活性を低減または阻害することができる別の種類のＶＥＧＦアンタゴニストは、ＶＥＧＦＲに結合し、それによりＶＥＧＦＲとＶＥＧＦとの相互作用を遮断する分子である。この受容体／リガンド結合の妨害により、ＶＥＧＦＲシグナル伝達が妨げられ、血管新生及び内皮細胞増殖が減少する。一実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは抗ＶＥＧＦＲ抗体またはＶＥＧＦＲ結合分子である。別の実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ抗体またはＶＥＧＦＲ結合分子は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、単鎖抗体、またはキメラ抗体である。別の実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ抗体またはＶＥＧＦＲ結合分子は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む。
【０１２０】
ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲに結合するＶＥＧＦアンタゴニストは、受容体／リガンド相互作用、ＶＥＧＦＲシグナル伝達、ならびに内皮細胞増殖及び血管新生などの下流シグナル伝達事象を阻止するという点で類似する作用機序によりＶＥＧＦ活性を阻害することができる。したがって、一実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、ベバシズマブ（米国特許第７，１６９，９０１号、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、ラニビズマブ（米国特許第７，２９７，３３４号、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、ＶＧＸ−１００（米国特許第７，４２３，１２５号、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、ｒ８４（米国特許第８，０３４，９０５号、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、アフリベルセプト（米国特許第５，９５２，１９９号、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、ＩＭＣ−１８Ｆ１（米国特許第７，９７２，５９６号、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、ＩＭＣ−１Ｃ１１（ＰＣＴ／ＵＳ２０００／０２１８０、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、及びラムシルマブ（米国特許第７，４９８，４１４号、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）からなる群から選択される。ＶＥＧＦ結合分子には、他の形態の抗体由来分子、例えば、ＶＥＧＦ結合抗体の少なくとも１つのＣＤＲを含むモノボディ、ダイアボディ、ミニボディ、または任意のキメラタンパク質、例えばベバシズマブが含まれる。
【０１２１】
一実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ結合分子は、ＶＨＣＤＲ１（配列番号２８）、ＶＨＣＤＲ２（配列番号２９）、ＶＨＣＤＲ３（配列番号３０）、ＶＬＣＤＲ１（配列番号３１）、ＶＬＣＤＲ２（配列番号３２）、ＶＬＣＤＲ３（配列番号３３）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む。表４を参照のこと。
【０１２２】
（表４）相補性決定領域のアミノ酸配列
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【０１２３】
別の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ結合分子は、ベバシズマブの重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１（配列番号２８）、ＣＤＲ２（配列番号２９）、またはＣＤＲ３（配列番号３０）を含む。例えば、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ結合分子は、ＶＨのＣＤＲ１及びＣＲＤ２、ＶＨのＣＤＲ１及びＣＤＲ３、ＶＨのＣＤＲ２及びＣＤＲ３、またはＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３を含む。他の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ結合分子は、ベバシズマブの軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１（配列番号３１）、ＣＤＲ２（配列番号３２）、またはＣＤＲ３（配列番号３３）を含む。例えば、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ結合分子は、ＶＬのＣＤＲ１及びＣＲＤ２、ＶＬのＣＤＲ１及びＣＤＲ３、ＶＬのＣＤＲ２及びＣＤＲ３、またはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ結合分子はベバシズマブのＶＨを含む。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ結合分子はベバシズマブのＶＬを含む。
【０１２４】
本開示の別の態様では、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ結合分子は、ＶＨＣＤＲ１（配列番号２８）、ＶＨＣＤＲ２（配列番号２９）、ＶＨＣＤＲ３（配列番号３０）、ＶＬＣＤＲ１（配列番号３１）、ＶＬＣＤＲ２（配列番号３２）、及びＶＬＣＤＲ３（配列番号３３）を含む。
【０１２５】
ＩＶ．ＦＡＳキメラタンパク質を発現するアデノウイルスとＶＥＧＦアンタゴニストとを用いる治療方法
本開示の一実施形態は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍を治療する方法であって、プライミング用量の投与後に当該対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示した後に、治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法を提供する。一態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０１２６】
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）プライミング用量の投与後に、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルを測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０１２７】
本開示のいくつかの態様では、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの変化は、ベクターの少なくとも１回のプライミング投与後に測定される。一態様では、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの変化は、少なくとも１回のプライミング用量のベクターの投与後、約１時間未満、約２時間未満、約３時間未満、約４時間未満、約５時間未満、約６時間未満、約７時間未満、約８時間未満、約９時間未満、約１２時間未満、約１６時間未満、約２０時間未満、約２４時間未満、約４８時間未満、約７２時間未満、約９６時間未満、約１２０時間未満、及び約１４８時間未満に測定される。
【０１２８】
一態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、少なくとも１回のプライミング用量のベクターを受けた後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がない対象と比較して、少なくとも１回のプライミング用量のベクターを受けた後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象の疾患無増悪期間の中央値を延長する、方法を提供する。いくつかの態様では、少なくとも１回のプライミング用量のベクターを受けた後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象の疾患無増悪期間の中央値は、少なくとも約３０日、少なくとも約６０日、少なくとも約９０日、少なくとも約１２０日、少なくとも約１５０日、少なくとも約１８０日、少なくとも約２１０日、少なくとも約２４０日、少なくとも約２７０日、少なくとも約３００日、少なくとも約３３０日、少なくとも約３６０日、少なくとも約３９０日、少なくとも約４２０日、少なくとも約４５０日、少なくとも約４８０日、少なくとも約５１０日、及び少なくとも約５４０日であり得る。
【０１２９】
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、少なくとも１回のプライミング用量のベクターを受けた後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がない対象と比較して、少なくとも１回のプライミング用量のベクターを受けた後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象の死亡までの期間の中央値を延長する、方法を提供する。いくつかの態様では、少なくとも１回のプライミング用量のベクターを受けた後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象の死亡までの期間の中央値は、少なくとも約１５０日、少なくとも約１８０日、少なくとも約２１０日、少なくとも約２４０日、少なくとも約２７０日、少なくとも約３００日、少なくとも約３３０日、少なくとも約３６０日、少なくとも約３９０日、少なくとも約４２０日、少なくとも約４５０日、少なくとも約４８０日、少なくとも約５１０日、少なくとも約５４０日、少なくとも約５７０日、少なくとも約６００日、少なくとも約６３０日、少なくとも約６６０日、少なくとも約６９０日、少なくとも約７２０日、少なくとも約７５０日、及び少なくとも約７８０日であり得る。
【０１３０】
本開示のいくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１３１】
いくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの増加である。いくつかの態様では、プライミング用量の投与後にレベルの増加を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１α、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１７α、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを含む。特定の態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７α、ＭＩＰ−１α、及びＩＬ−１Ｒａを含む。
【０１３２】
本開示のいくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの減少である。いくつかの態様では、レベルの減少を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのマーカーを含む。
【０１３３】
別の態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍の血管新生を阻害または低減する方法であって、プライミング用量の投与後に対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示した後に、治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法を包含する。一態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍の血管新生を阻害または低減する方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍の血管新生を阻害または低減する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）プライミング用量の投与後に、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルを測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０１３４】
本開示のいくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１３５】
いくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの増加である。いくつかの態様では、プライミング用量の投与後にレベルの増加を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１α、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１７α、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを含む。特定の態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７α、ＭＩＰ−１α、及びＩＬ−１Ｒａを含む。
【０１３６】
本開示のいくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの減少である。いくつかの態様では、レベルの減少を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのマーカーを含む。
【０１３７】
他の態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、当該対象がプライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法を提供する。一態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法を提供する。別の態様では、本開示は、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を同定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法を提供する。
【０１３８】
他の態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、プライミング用量の投与後に当該対象が発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーを示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法を提供する。一態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーを示す対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法を提供する。別の態様では、本開示は、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーを示すと対象を同定すること；及び（ｃ）（ｂ）において発熱体温を有する対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定するための方法を提供する。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーは、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１４０】
いくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの増加である。いくつかの態様では、プライミング用量の投与後にレベルの増加を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１α、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１７α、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを含む。特定の態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７α、ＭＩＰ−１α、及びＩＬ−１Ｒａを含む。
【０１４１】
本開示のいくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの減少である。いくつかの態様では、レベルの減少を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのマーカーを含む。
【０１４２】
一実施形態では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍において内皮細胞のアポトーシスを誘発する方法であって、プライミング用量の投与後に対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの変化に示した後に、治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法に関する。一態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍において内皮細胞のアポトーシスを誘発する方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍において内皮細胞のアポトーシスを誘発する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍において内皮細胞のアポトーシスを誘発する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）プライミング用量の投与後に、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルを測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍サイズを縮小させる方法であって、プライミング用量の投与後に対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示した後に、治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法を提供する。一態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍サイズを縮小させる方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍のサイズを縮小させる方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍のサイズを縮小させる方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）プライミング用量の投与後に、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルを測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０１４４】
ある特定の実施形態では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍に付随する疾患または病態を治療する方法であって、プライミング用量の投与後に対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示した後に、治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法を包含する。一態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍に付随する疾患または病態を治療する方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍に付随する疾患または病態を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍に付随する疾患または病態を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）プライミング用量の投与後に、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルを測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、当該対象がプライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療の候補を同定するための方法を提供する。一態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療の候補を同定するための方法を提供する。別の態様では、本開示は、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を同定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療の候補を同定するための方法を提供する。
【０１４６】
他の実施形態では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、プライミング用量の投与後に、当該対象が発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーを示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療の候補を同定するための方法を包含する。一態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーを示す対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療の候補を同定するための方法を提供する。別の態様では、本開示は、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーを有すると対象を同定すること；及び（ｃ）（ｂ）において発熱体温を有する対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療の候補を同定するための方法を提供する。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーは、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１４８】
いくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの増加である。いくつかの態様では、プライミング用量の投与後にレベルの増加を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ΜΙΡ−１α、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１７α、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを含む。特定の態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７α、ＭＩＰ−１α、及びＩＬ−１Ｒａを含む。
【０１４９】
本開示のいくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの減少である。いくつかの態様では、レベルの減少を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのマーカーを含む。
【０１５０】
特定の実施形態では、対象の腫瘍の成長またはサイズは、ＭＲＩにより測定される。別の実施形態では、腫瘍の成長またはサイズは、ＣＴスキャンにより測定される。他の実施形態では、対象の腫瘍は、ベクターによる治療中に生じた再発性腫瘍である。さらに他の実施形態では、対象の腫瘍は、ベクターによる治療中に生じた転移性腫瘍である。
【０１５１】
一態様では、本開示の方法は、有効量のＶＥＧＦアンタゴニストの投与をさらに含む。ある特定の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ＶＧＸ−１００、ｒ８４、アフリベルセプト、ＩＭＣ−１８Ｆ１、ＩＭＣ−１Ｃ１１、及びラムシルマブからなる群から選択される。特定の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストはベバシズマブである。
【０１５２】
用語「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」とは、ＦＡＳキメラタンパク質を発現するベクターに対する反応性が増加または改善されているかまたは期待される任意の対象、特に哺乳動物対象を意味する。いくつかの態様では、用語「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」とは、ＦＡＳキメラタンパク質を発現するベクターとＶＥＧＦアンタゴニストを含む併用レジメンに対する反応性が増加または改善されているかまたは期待される任意の対象、特に哺乳動物対象を意味する。一実施形態では、対象はヒトである。別の実施形態では、対象はがん患者である。別の実施形態では、対象は女性対象である。別の実施形態では、対象は男性対象である。
【０１５３】
本明細書で使用される場合、語句「対象または対象集団」は、対象または対象集団が、Ｆａｓキメラ遺伝子治療、またはＦａｓキメラ遺伝子治療とＶＥＧＦアンタゴニストを含む併用療法の一候補または複数の候補として同定されたことを表す。対象または対象集団は、ベクターもしくはＶＥＧＦアンタゴニストの投与前、またはベクターもしくはＶＥＧＦアンタゴニストの投与後に、Ｆａｓキメラ遺伝子治療または併用療法の一候補または複数の候補として同定することができる。
【０１５４】
ある特定の実施形態では、ベクター治療または併用療法の候補の同定は、腫瘍血管新生の様々な特徴、例えば、腫瘍サイズの縮小、腫瘍成長の阻害、血管新生の減少、新生血管形成の減少、または血管新生の任意の公知の特徴を測定することを含む。他の実施形態では、ベクター治療または併用療法の候補の同定は、血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの測定を含む。いくつかの実施形態では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーは、血管新生または発熱に関連している。ある特定の実施形態では、バイオマーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、プロテインＣ、インターロイキン（ＩＬ）−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、単球走化性タンパク質−１、ＩＣＡＭ−１、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ、及びＥ−セレクチンからなる群から選択される。他の態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーは、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１５５】
ある特定の態様では、対象または対象集団が候補として同定されれば、ベクターの投与前、ベクターの投与と同時、またはベクターの投与後にＶＥＧＦアンタゴニストが投与される。他の態様では、対象または対象集団が候補として同定された後、ＶＥＧＦアンタゴニストよりも少なくとも１日前、少なくとも２日前、少なくとも３日前、少なくとも４日前、少なくとも５日前、少なくとも６日前、少なくとも７日前、少なくとも９日前、少なくとも１０日前、少なくとも２週間前、少なくとも３週間前、少なくとも４週間前、少なくとも１か月前、少なくとも２か月前、またはそれ以上前にベクターが投与される。
【０１５６】
本開示の一実施形態では、本開示は、がんに関連する疾患または障害を安定化させる方法を包含する。いくつかの実施形態では、本開示は、転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）、進行性非扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、転移性腎細胞癌（ｍＲＣＣ）、多形膠芽腫（ＧＢＭ）、ミューラー管癌、卵巣癌、腹膜癌、卵管癌、または子宮体部漿液性腺癌（ｕｔｅｒｉｎｅ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｓｅｒｏｕｓｓｐｅｃｔ）と関連する疾患または障害を安定化する方法を包含する。本開示は、悪性腹膜液、例えば腹水の量を減少させる、対象の痛みを緩和する、対象の生存期間を延長する、またはそれらの任意の組み合わせである。ベクターとＶＥＧＦアンタゴニストの組み合わせにより軽減、阻害、または治療できる腫瘍は、固形腫瘍、原発腫瘍、または転移性腫瘍であってよい。用語「転移性」または「転移」とは、別の部分または器官に二次腫瘍病変を確立可能である腫瘍細胞を指す。
【０１５７】
「固形腫瘍」には、肉腫、黒色腫、癌腫、またはその他の固形腫瘍癌が含まれるが、それに限定されるわけではない。「肉腫」とは、胚性結合組織のような物質で構成され、一般に筋原線維物質または均質物質に埋め込まれた充填細胞で構成される腫瘍を指す。肉腫には、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アバーネシー肉腫、脂肪性肉腫、脂肪肉腫、胞状軟部肉腫、エナメル上皮肉腫、ブドウ状肉腫、緑色肉腫、絨毛癌、胎芽性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、ジェンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉腫肉腫、傍骨性肉腫、細網肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢胞性肉腫、滑膜肉腫、または毛細血管拡張性肉腫が含まれるが、それに限定されるわけではない。
【０１５８】
用語「黒色腫」とは、皮膚及び他の器官の色素細胞系に起因する腫瘍を指す。黒色腫として、例えば肢端黒子型黒色腫、無色素性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング・パッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、転移性黒色腫、結節型黒色腫、爪下黒色腫、または表在拡大型黒色腫が挙げられる。
【０１５９】
用語「癌腫」とは、周辺組織に浸潤して転移を引き起こす傾向がある上皮細胞から形成される悪性の新たな増殖を指す。例示的な癌腫として、例えば腺房癌、小葉癌、腺嚢癌腫、腺様嚢胞癌、腺腫様癌、副腎皮質の癌腫、肺胞癌、肺胞上皮癌、基底細胞癌（ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、類基底細胞癌、基底扁平上皮細胞癌、細気管支肺胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、大脳様癌、胆管細胞癌、絨毛膜癌、粘液癌、面疱癌、体癌、篩状癌、鎧状癌、皮膚癌、円柱上皮癌、円柱細胞癌、腺管癌、硬性癌、胎児性癌、脳様癌、類表皮癌、腺様上皮癌、外方発育癌、潰瘍癌、線維性癌、膠様癌（ｇｅｌａｔｉｎｉｆｏｒｍ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、膠様癌（ｇｅｌａｔｉｎｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｇｉａｎｔ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｇｉｇａｎｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母体癌、血様癌、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌、硝子様癌、副腎様癌、小児胎児性癌、上皮内癌、表皮内癌、上皮内癌、クロムペッヘル（Ｋｒｏｍｐｅｃｈｅｒ）癌、クルチツキー細胞癌、大細胞癌、レンズ状癌（ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、レンズ状癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｅ）、脂肪性癌、リンパ上皮癌、髄様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｅｄｕｌｌａｒｅ）、髄様癌（ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、黒色癌、軟性癌、粘液性癌、粘液腺癌、粘液細胞癌、粘液性類表皮癌、粘液癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｕｃｏｓｕｍ）、粘液癌（ｍｕｃｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液腫様癌、上咽頭癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、類骨癌、乳頭状癌、門脈周囲癌、前浸潤癌、有棘細胞癌、髄質様癌、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫様癌、シュナイダー癌、スキルス癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、ソラノイド癌、球状細胞癌、紡錘細胞癌、海綿様癌、扁平上皮癌、扁平上皮細胞癌、ストリング癌、毛細血管拡張性癌、毛細血管拡張症様癌、移行上皮癌、結節癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、結節癌（ｔｕｂｅｒｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、疣状癌、または絨毛癌が挙げられる。
【０１６０】
阻害または治療できるその他のがんとして、例えば白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、乳癌、卵巣癌、肺癌、横紋筋肉腫、原発性血小板増加症、原発性マクログロブリン血症、小細胞肺腫瘍、原発性脳腫瘍、胃癌、結腸癌、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド、膀胱癌、前悪性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、甲状腺乳頭癌、神経芽細胞腫、神経内分泌癌、食道癌、腎尿路生殖器癌、悪性高カルシウム血症、子宮頸癌、子宮内膜癌、副腎皮質癌、前立腺癌、ミューラー管癌、卵巣癌、腹膜癌、卵管癌、または子宮体部漿液性癌が挙げられる。
【０１６１】
他の実施形態では、対象は最大３ライン、最大２ライン、または最大１ラインの先行化学療法歴がある。さらに他の実施形態では、対象は、再発癌に対して３ラインを超える前化学療法歴がない。
【０１６２】
本開示の一部として投与される１回または複数回のプライミング用量及び１回または複数回の治療有効量のベクターは、ウイルス粒子（ＶＰ）において測定することができる。一実施形態では、プライミング用量は治療有効量と同一である。別の実施形態では、プライミング用量は治療有効量よりも少ない。別の実施形態では、プライミング用量は治療有効量よりも多い。一態様では、プライミング用量は複数回投与される。別の態様では、プライミング用量は反復投与される。一態様では、治療有効量は複数回投与される。別の態様では、治療有効量は反復投与される。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、プライミング用量のベクターは、約１×１０１５未満、約１×１０１４未満、約５×１０１３未満、約４×１０１３未満、約３×１０１３未満、約２×１０１３未満、約１×１０１３未満、約９×１０１２未満、約８×１０１２未満、約７×１０１２未満、約６×１０１２未満、約５×１０１２未満、約４×１０１２未満、約３×１０１２未満、約２×１０１２未満、約１×１０１２未満、約９×１０１１未満、約８×１０１１未満、約７×１０１１未満、約６×１０１１未満、約５×１０１１未満、約４×１０１１未満、約３×１０１１未満、約２×１０１１未満、約１×１０１１未満、約９×１０１０未満、約８×１０１０未満、約７×１０１０未満、約６×１０１０未満、約５×１０１０未満、約４×１０１０未満、約３×１０１０未満、約２×１０１０、または約１×１０１０未満のウイルス粒子の量で投与される。
【０１６４】
他の実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０１５、少なくとも約１×１０１４、少なくとも約５×１０１３、少なくとも約４×１０１３、少なくとも約３×１０１３、少なくとも約２×１０１３、少なくとも約１×１０１３、少なくとも約９×１０１２、少なくとも約８×１０１２、少なくとも約７×１０１２、少なくとも約６×１０１２、少なくとも約５×１０１２、少なくとも約４×１０１２、少なくとも約３×１０１２、少なくとも約２×１０１２、少なくとも約１×１０１２、少なくとも約９×１０１１、少なくとも約８×１０１１、少なくとも約７×１０１１、少なくとも約６×１０１１、少なくとも約５×１０１１、少なくとも約４×１０１１、少なくとも約３×１０１１、少なくとも約２×１０１１、少なくとも約１×１０１１、少なくとも約９×１０１０、少なくとも約８×１０１０、少なくとも約７×１０１０、少なくとも約６×１０１０、少なくとも約５×１０１０、少なくとも約４×１０１０、少なくとも約３×１０１０、少なくとも約２×１０１０、または少なくとも約１×１０１０のウイルス粒子の量で投与される。
【０１６５】
一実施形態では、ベバシズマブとの併用療法における少なくとも１回のプライミング用量及び少なくとも１回の治療有効量のベクターは、ベバシズマブを使用しない治療（例えばベクターのみを使用した単剤療法）に使用される少なくとも１回のプライミング用量及び少なくとも１回の治療有効量よりも少ない。例えば、ベバシズマブとの併用療法におけるベクターの治療有効量には、限定されるわけではないが、約１×１０１３以下、約９×１０１２以下、約８×１０１２以下、約７×１０１２以下、約６×１０１２以下、約５×１０１２以下、約４×１０１２以下、約３×１０１２以下、約２×１０１２以下、約１×１０１２以下、約９×１０１１以下、約８×１０１１以下、約７×１０１１以下、約６×１０１１以下、約５×１０１１以下、約４×１０１１以下、約３×１０１１以下、約２×１０１１以下、約１×１０１１以下、約９×１０１０以下、約８×１０１０以下、約７×１０１０以下、約６×１０１０以下、約５×１０１０以下、約４×１０１０以下、約３×１０１０以下、約２×１０１０以下、または約１×１０１０以下のウイルス粒子を包含する。またベバシズマブとの併用療法におけるベクターのプライミング用量には、限定されるわけではないが、約１×１０１３以下、約９×１０１２以下、約８×１０１２以下、約７×１０１２以下、約６×１０１２以下、約５×１０１２以下、約４×１０１２以下、約３×１０１２以下、約２×１０１２以下、約１×１０１２以下、約９×１０１１以下、約８×１０１１以下、約７×１０１１以下、約６×１０１１以下、約５×１０１１以下、約４×１０１１以下、約３×１０１１以下、約２×１０１１以下、約１×１０１１以下、約９×１０１０以下、約８×１０１０以下、約７×１０１０以下、約６×１０１０以下、約５×１０１０以下、約４×１０１０以下、約３×１０１０以下、約２×１０１０以下、または約１×１０１０以下のウイルス粒子を包含する。
【０１６６】
一実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０１１のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０１２のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０１３のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０１４のウイルス粒子の量で投与される。他の実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０７、少なくとも約１×１０８、少なくとも約１×１０９、少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約５×１０１０のウイルス粒子の量で投与される。
【０１６７】
別の実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０１１のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０１２のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０１３のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０１４のウイルス粒子の量で投与される。他の実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０７、少なくとも約１×１０８、少なくとも約１×１０９、少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約５×１０１０のウイルス粒子の量で投与される。
【０１６８】
ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えばベバシズマブ）の用量は、ｍｇ／ｋｇ体重で測定することができる。一態様では、ベクターとの併用療法におけるベバシズマブの用量は、ベクターを使用しない場合（例えばベバシズマブのみを使用する療法）のベバシズマブの用量よりも少ない。ベバシズマブの有効量の非限定的な例として、約１５ｍｇ／ｋｇ以下、約１４ｍｇ／ｋｇ以下、約１３ｍｇ／ｋｇ以下、約１２ｍｇ／ｋｇ以下、約１１ｍｇ／ｋｇ以下、約１０ｍｇ／ｋｇ以下、約９ｍｇ／ｋｇ以下、約８ｍｇ／ｋｇ以下、約７ｍｇ／ｋｇ以下、約６ｍｇ／ｋｇ以下、約５ｍｇ／ｋｇ以下、約４ｍｇ／ｋｇ以下、約３ｍｇ／ｋｇ以下、約２ｍｇ／ｋｇ以下、または約１ｍｇ／ｋｇ以下が挙げられる。
【０１６９】
具体的な実施形態では、プライミング用量のベクターは、３×１０１２〜１×１０１３ＶＰの量で投与され、治療有効量のベクターは３×１０１２〜１×１０１３ＶＰの量で投与され、かつベバシズマブは５ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇの有効量で投与される。
【０１７０】
本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、少なくとも１回のプライミング用量のベクター、少なくとも１回の治療有効量のベクター、及びＶＥＧＦアンタゴニストを投与することを含む、方法を提供する。ベクター及びＶＥＧＦアンタゴニストの投与に使用されるレジメンは、ベクター及びベバシズマブの反復投与を含む。一実施形態では、ベクターは、毎日、約２日に１回、約３日に１回、約４日に１回、約５日に１回、約６日に１回、約７日に１回、約２週間に１回、約３週間に１回、約４週間に１回、約５週間に１回、約６週間に１回、約７週間に１回、約２か月に１回、または約６か月に１回反復投与される。別の実施形態では、ベバシズマブは、約７日に１回、約２週間に１回、約３週間に１回、約４週間に１回、約２か月に１回、約３か月に１回、約４か月に１回、約５か月に１回、または約６か月に１回反復投与される。特定の実施形態では、ベクターを２か月毎に投与し、かつベバシズマブを２週間毎に投与する。
【０１７１】
Ｖ．タキサン
タキサンは、タクスス（Ｔａｘｕｓ）属の植物（イチイ）によって産生されるジテルペンであり、化学療法剤として広く使用されている。タキサンは人工的に合成することもできる。タキサンは微小管機能に作用し、有糸分裂を阻害する。タキサン剤として、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））が挙げられるが、それに限定されるわけではない。
【０１７２】
一態様では、タキサンを異種部分に融合または結合することができる。そのような異種部分は、タキサン製剤の溶解性を改善するか、タキサンの毒性を低下させることができる。例えばタキサンはアルブミンに融合または結合することができ、アルブミン結合パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）、別称ｎａｂ−パクリタキセル）は、パクリタキセルがアルブミンナノ粒子に結合された代替製剤である。
【０１７３】
パクリタキセル産生に対する合成手法によりドセタキセルの開発に至った。ドセタキセルは、パクリタキセルと類似する一連の臨床使用があり、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）の名称で販売されている。
【０１７４】
別の態様では、本発明に有用なタキサンとして、ヘーゼル植物の殻及び葉にあるパクリタキセル、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ、バッカチンＩＩＩ、パクリタキセルＣ、及び７−エピパクリタキセルが挙げられるが、それに限定されるわけではない。
【０１７５】
ＩＶ．ＦＡＳキメラタンパク質を発現するアデノウイルスと１種類以上の化学療法剤とを用いる治療方法
本開示の一実施形態は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍を治療する方法であって、プライミング用量の投与後に対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示した後に、治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法を提供する。一態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０１７６】
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）プライミング用量の投与後に、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルを測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０１７７】
本開示のいくつかの態様では、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの変化は、ベクターの少なくとも１回のプライミング投与後に測定される。一態様では、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの変化は、少なくとも１回のプライミング用量のベクターの投与後、約１時間未満、約２時間未満、約３時間未満、約４時間未満、約５時間未満、約６時間未満、約７時間未満、約８時間未満、約９時間未満、約１２時間未満、約１６時間未満、約２０時間未満、約２４時間未満、約４８時間未満、約７２時間未満、約９６時間未満、約１２０時間未満、または約１４８時間未満に測定される。
【０１７８】
一態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、少なくとも１回のプライミング用量のベクターを受けた後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がない対象と比較して、少なくとも１回のプライミング用量のベクターを受けた後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象の疾患無増悪期間の中央値を延長する、方法を提供する。いくつかの態様では、少なくとも１回のプライミング用量のベクターを受けた後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象の疾患無増悪期間の中央値は、少なくとも約３０日、少なくとも約６０日、少なくとも約９０日、少なくとも約１２０日、少なくとも約１５０日、少なくとも約１８０日、少なくとも約２１０日、少なくとも約２４０日、少なくとも約２７０日、少なくとも約３００日、少なくとも約３３０日、少なくとも約３６０日、少なくとも約３９０日、少なくとも約４２０日、少なくとも約４５０日、少なくとも約４８０日、少なくとも約５１０日、または少なくとも約５４０日であり得る。
【０１７９】
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、少なくとも１回のプライミング用量のベクターを受けた後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がない対象と比較して、少なくとも１回のプライミング用量のベクターを受けた後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象の死亡までの期間の中央値を延長する、方法を提供する。いくつかの態様では、少なくとも１回のプライミング用量のベクターを受けた後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象の死亡までの期間の中央値は、少なくとも約１５０日、少なくとも約１８０日、少なくとも約２１０日、少なくとも約２４０日、少なくとも約２７０日、少なくとも約３００日、少なくとも約３３０日、少なくとも約３６０日、少なくとも約３９０日、少なくとも約４２０日、少なくとも約４５０日、少なくとも約４８０日、少なくとも約５１０日、少なくとも約５４０日、少なくとも約５７０日、少なくとも約６００日、少なくとも約６３０日、少なくとも約６６０日、少なくとも約６９０日、少なくとも約７２０日、少なくとも約７５０日、または少なくとも約７８０日であり得る。
【０１８０】
本開示のいくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１８１】
いくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの増加である。いくつかの態様では、プライミング用量の投与後にレベルの増加を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１α、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１７α、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを含む。特定の態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７α、ＭＩＰ−１α、及びＩＬ−１Ｒａを含む。
【０１８２】
本開示のいくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの減少である。いくつかの態様では、レベルの減少を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのマーカーを含む。
【０１８３】
別の態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍の血管新生を阻害または低減する方法であって、プライミング用量の投与後に対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの変化に示した後に、治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法を包含する。一態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍の血管新生を阻害または低減する方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍の血管新生を阻害または低減する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）プライミング用量の投与後に、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルを測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０１８４】
本開示のいくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１８５】
いくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの増加である。いくつかの態様では、プライミング用量の投与後にレベルの増加を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１α、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１７α、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを含む。特定の態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７α、ＭＩＰ−１α、及びＩＬ−１Ｒａを含む。
【０１８６】
本開示のいくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの減少である。いくつかの態様では、レベルの減少を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのマーカーを含む。
【０１８７】
他の態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、当該対象がプライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定する方法を提供する。一態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定する方法を提供する。別の態様では、本開示は、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を同定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定する方法を提供する。
【０１８８】
他の態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、プライミング用量の投与後に当該対象が発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーを示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定する方法を提供する。一態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーを示す対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定する方法を提供する。別の態様では、本開示は、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーを示すと対象を同定すること；及び（ｃ）（ｂ）において発熱体温を有する対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定する方法を提供する。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーは、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１９０】
いくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの増加である。いくつかの態様では、プライミング用量の投与後にレベルの増加を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１α、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１７α、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを含む。特定の態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７α、ＭＩＰ−１α、及びＩＬ−１Ｒａを含む。
【０１９１】
本開示のいくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの減少である。いくつかの態様では、レベルの減少を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのマーカーを含む。
【０１９２】
一実施形態では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍において内皮細胞のアポトーシスを誘発する方法であって、プライミング用量の投与後に対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示した後に、治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法に関する。一態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍において内皮細胞のアポトーシスを誘発する方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること、及びプライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍において内皮細胞のアポトーシスを誘発する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍において内皮細胞のアポトーシスを誘発する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）プライミング用量の投与後に、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルを測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０１９３】
ある特定の実施形態では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍サイズを縮小させる方法であって、プライミング用量の投与後に対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示した後に、治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法を提供する。一態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍サイズを縮小させる方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍のサイズを縮小させる方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍のサイズを縮小させる方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）プライミング用量の投与後に、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルを測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０１９４】
ある特定の実施形態では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を投与した後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍に付随する疾患または病態を治療する方法であって、プライミング用量の投与後に対象が少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示した後に、治療有効量のベクターを対象に投与することを含む、方法を包含する。一態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍に付随する疾患または病態を治療する方法であって、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍に付随する疾患または病態を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍に付随する疾患または病態を治療する方法であって、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）プライミング用量の投与後に、対象の少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの血清レベルを測定すること；（ｃ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を判定すること；及び（ｄ）（ｃ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、方法を提供する。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、当該対象がプライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療の候補を同定する方法を包含する。一態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示す対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療の候補を同定する方法を提供する。別の態様では、本開示は、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化があると対象を同定すること；及び（ｃ）（ｂ）において少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化がある対象に治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療の候補を同定する方法を提供する。
【０１９６】
他の実施形態では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与することを含み、プライミング用量の投与後に当該対象が発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーを示す、Ｆａｓキメラ遺伝子治療の候補を同定する方法を包含する。一態様では、本開示は、内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を、腫瘍を有する対象に投与すること、及び、プライミング用量の投与後に発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーを示す対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療の候補を同定する方法を提供する。別の態様では、本開示は、（ａ）内皮細胞特異的プロモーターに機能的に連結されたＦａｓキメラ遺伝子を含むベクターの少なくとも１回のプライミング用量を対象に投与すること；（ｂ）（ａ）におけるプライミング用量の投与の結果、発熱に関する血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーを有すると対象を同定すること；及び（ｃ）（ｂ）において発熱体温を有する対象に、治療有効量のベクターを投与することを含む、Ｆａｓキメラ遺伝子治療の候補を同定する方法を提供する。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーは、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１９８】
いくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの増加である。いくつかの態様では、プライミング用量の投与後にレベルの増加を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１α、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１７α、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを含む。特定の態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７α、ＭＩＰ−１α、及びＩＬ−１Ｒａを含む。
【０１９９】
本開示のいくつかの態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーの変化は、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーのレベルの減少である。いくつかの態様では、レベルの減少を示す血漿バイオマーカーまたは細胞表面マーカーは、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのマーカーを含む。
【０２００】
特定の実施形態では、対象の腫瘍の成長またはサイズは、ＭＲＩにより測定される。別の実施形態では、腫瘍の成長またはサイズは、ＣＴスキャンにより測定される。他の実施形態では、対象の腫瘍は、ベクターによる治療中に生じた再発性腫瘍である。さらに他の実施形態では、対象の腫瘍は、ベクターによる治療中に生じた転移性腫瘍である。
【０２０１】
一態様では、本開示の方法は、１種類以上の化学療法剤の有効量の投与をさらに含む。本開示の方法を使用して投与することができる１種類以上の化学療法剤として、アシビシン；アクラルビシン；アコダゾール塩酸塩；アクロニン；アドリアマイシン；アドゼレシン；アルデスロイキン；アリムタ；アルトレタミン；アンボマイシン；酢酸アメタントロン；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；ビサントレン塩酸塩；メシル酸ビスナフィド；ベバシズマブ；ビゼレシン；ブレオマイシンサルフェート；ブレキナルナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；カルビシン塩酸塩；カルゼレシン；セデフィンゴール；クロラムブシル；シロレマイシン；シスプラチン；クラドリビン；メシル酸クリスナトール；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；ダウノルビシン塩酸塩；デシタビン；デキソルマプラチン；デザグアニン；メシル酸デザグアニン；ジアジコン；ドセタキセル；ドキソルビシン；ドキソルビシン塩酸塩；ドロロキシフェン；ドロロキシフェンシトラート；ドロモスタノロンプロピオナート；デュアゾマイシン；エダトレキサート；塩酸エフロルニチン；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロマート；エピプロピジン；エピルビシン塩酸塩；エルブロゾール；エソルビシン塩酸塩；エストラムスチン；リン酸エストラムスチンナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；リン酸エトポシド；エトプリン；塩酸ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；フルダラビンホスフェート；フルオロウラシル；フルロシタビン；ホスキドン；ホストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；ゲムシタビン塩酸塩；ヒドロキシ尿素；イダルビシン塩酸塩；イホスファミド；イルモホシン；インターフェロンアルファ−２ａ；インターフェロンアルファ−２ｂ；インターフェロンアルファ−ｎ１；インターフェロンアルファ−ｎ３；インターフェロンベータ−Ｉａ；インターフェロンガンマ−Ｉｂ；イプロプラチン；塩酸イリノテカン；ランレオチドアセテート；レトロゾール；ロイプロリドアセテート；リアロゾール塩酸塩；ロメトレキソールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン塩酸塩；マソプロコール；メイタンシン；塩酸メクロレタミン；酢酸メゲストロール；酢酸メレンゲストロール；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；ミトクロミン；ミトギリン；ミトマルシン；マイトマイシン；ミトスペル；ミトタン；ミトキサントロン塩酸塩；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オキシスラン；パゾチニブ；パクリタキセル；ペガスパルガーゼ；ペリオマイシン；ペンタムスチン；ペプロマイシンサルフェート；ペルホスファミド；ピポブロマン；ピポスルファン；ピロキサントロン塩酸塩；プリカマイシン；プルメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；プロカルバジン塩酸塩；ピューロマイシン；ピューロマイシン塩酸塩；ピラゾフリン；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴール；サフィンゴール塩酸塩；セムスチン；シムトラゼン；ソラフィニブ；スパルフォセートナトリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウム塩酸塩；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スロフェヌール；スニチニブ；タリスマイシン；タキソール；テコガランナトリウム；テガフール；テロキサントロン塩酸塩；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフイリン；チラパザミン；トポテカン塩酸塩；トレミフェンシトラート；酢酸トレストロン；リン酸トリシリビン；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン；ツブロゾール塩酸塩；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィン；ビンブラスチンサルフェート；ビンクリスチンサルフェート；ビンデシン；ビンデシンサルフェート；ビネピジンサルフェート；ビングリシナートスルファート；硫酸ビンロイロシン；ビノレルビンタータラート；ビンロシジンサルフェート；ビンゾリジンサルフェート；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；またはゾルビシン塩酸塩が挙げられるが、それに限定されるわけではない。追加の抗悪性腫瘍薬として、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  ”Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”，Ｅｉｇｈｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｉｎｃの第５２章Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ（Ｐａｕｌ  Ｃａｌａｂｒｅｓｉ  ａｎｄ  Ｂｒｕｃｅ  Ａ．Ｃｈａｂｎｅｒ）及びその序論１２０２−１２６３に開示されているものが挙げられる。
【０２０２】
本開示のいくつかの態様では、１種類以上の化学療法剤は、アルトレタミン、ラルトリトレキセド、トポテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、リポソームドキソルビシン、ゲムシタビン、シクロホスファミド、ビノレルビン、イホスファミド、エトポシド、アルトレタミン、カペシタビン、イリノテカン、メルファラン、ペメトレキセド、ベバシズマブ、及びアルブミン結合パクリタキセルからなる群から選択される。特定の態様では、化学療法剤はパクリタキセルである。
【０２０３】
ある特定の実施形態では、ベクター治療または併用療法の候補の同定は、腫瘍血管新生の様々な特徴、例えば、腫瘍サイズの縮小、腫瘍成長の阻害、血管新生の減少、新生血管形成の減少、または血管新生の任意の公知の特徴を測定することを含む。他の実施形態では、ベクター治療または併用療法の候補の同定は、血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの測定を含む。いくつかの実施形態では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーは、血管新生または発熱に関連している。ある特定の実施形態では、バイオマーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、プロテインＣ、インターロイキン（ＩＬ）−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、単球走化性タンパク質−１、ＩＣＡＭ−１、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ、及びＥ−セレクチンからなる群から選択される。他の態様では、血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーは、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７α、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３５、ＬＩＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＴＧＦ−β１、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１Ｒａ、エオタキシン、ＣＡ−１２５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０２０４】
ある特定の態様では、対象または対象集団が候補として同定されれば、ベクターの投与前、ベクターの投与と同時、またはベクターの投与後に１種類以上の化学療法剤が投与される。他の態様では、対象または対象集団が候補として同定された後、１種類以上の化学療法剤よりも少なくとも１日前、少なくとも２日前、少なくとも３日前、少なくとも４日前、少なくとも５日前、少なくとも６日前、少なくとも７日前、少なくとも９日前、少なくとも１０日前、少なくとも２週間前、少なくとも３週間前、少なくとも４週間前、少なくとも１か月前、少なくとも２か月前、またはそれ以上前にベクターが投与される。
【０２０５】
本開示の一実施形態では、本開示は、がんに関連する疾患または障害を安定化させる方法を包含する。いくつかの実施形態では、本開示は、転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）、進行性非扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、転移性腎細胞癌（ｍＲＣＣ）、多形膠芽腫（ＧＢＭ）、ミューラー管癌、卵巣癌、腹膜癌、卵管癌、または子宮体部漿液性腺癌と関連する疾患または障害を安定化する方法を包含する。本開示は、悪性腹膜液、例えば腹水の量を減少させる、対象の痛みを緩和する、対象の生存期間を延長する、またはそれらの任意の組み合わせである。ベクターと１種類以上の化学療法剤の組み合わせにより軽減、阻害、または治療できる腫瘍は、固形腫瘍、原発腫瘍、または転移性腫瘍であってよい。用語「転移性」または「転移」とは、別の部分または器官に二次腫瘍病変を確立可能である腫瘍細胞を指す。
【０２０６】
「固形腫瘍」には、肉腫、黒色腫、癌腫、またはその他の固形腫瘍癌が含まれるが、それに限定されるわけではない。「肉腫」とは、胚性結合組織のような物質で構成され、一般に筋原線維物質または均質物質に埋め込まれた充填細胞で構成される腫瘍を指す。肉腫には、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アバーネシー肉腫、脂肪性肉腫、脂肪肉腫、胞状軟部肉腫、エナメル上皮肉腫、ブドウ状肉腫、緑色肉腫、絨毛癌、胎芽性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、ジェンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉腫肉腫、傍骨性肉腫、細網肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢胞性肉腫、滑膜肉腫、または毛細血管拡張性肉腫が含まれるが、それに限定されるわけではない。
【０２０７】
用語「黒色腫」とは、皮膚及び他の器官の色素細胞系に起因する腫瘍を指す。黒色腫として、例えば肢端黒子型黒色腫、無色素性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング・パッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、転移性黒色腫、結節型黒色腫、爪下黒色腫、または表在拡大型黒色腫が挙げられる。
【０２０８】
用語「癌腫」とは、周辺組織に浸潤して転移を引き起こす傾向がある上皮細胞から形成される悪性の新たな増殖を指す。例示的な癌腫として、例えば腺房癌、小葉癌、腺嚢癌腫、腺様嚢胞癌、腺腫様癌、副腎皮質の癌腫、肺胞癌、肺胞上皮癌、基底細胞癌（ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、類基底細胞癌、基底扁平上皮細胞癌、細気管支肺胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、大脳様癌、胆管細胞癌、絨毛膜癌、粘液癌、面疱癌、体癌、篩状癌、鎧状癌、皮膚癌、円柱上皮癌、円柱細胞癌、腺管癌、硬性癌、胎児性癌、脳様癌、類表皮癌、腺様上皮癌、外方発育癌、潰瘍癌、線維性癌、膠様癌（ｇｅｌａｔｉｎｉｆｏｒｍ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、膠様癌（ｇｅｌａｔｉｎｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｇｉａｎｔ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｇｉｇａｎｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母体癌、血様癌、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌、硝子様癌、副腎様癌、小児胎児性癌、上皮内癌、表皮内癌、上皮内癌、クロムペッヘル癌、クルチツキー細胞癌、大細胞癌、レンズ状癌（ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、レンズ状癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｅ）、脂肪性癌、リンパ上皮癌、髄様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｅｄｕｌｌａｒｅ）、髄様癌（ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、黒色癌、軟性癌、粘液性癌、粘液腺癌、粘液細胞癌、粘液性類表皮癌、粘液癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｕｃｏｓｕｍ）、粘液癌（ｍｕｃｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液腫様癌、上咽頭癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、類骨癌、乳頭状癌、門脈周囲癌、前浸潤癌、有棘細胞癌、髄質様癌、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫様癌、シュナイダー癌、スキルス癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、ソラノイド癌、球状細胞癌、紡錘細胞癌、海綿様癌、扁平上皮癌、扁平上皮細胞癌、ストリング癌、毛細血管拡張性癌、毛細血管拡張症様癌、移行上皮癌、結節癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、結節癌（ｔｕｂｅｒｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、疣状癌、または絨毛癌が挙げられる。
【０２０９】
阻害または治療できるその他のがんとして、例えば白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、乳癌、卵巣癌、肺癌、横紋筋肉腫、原発性血小板増加症、原発性マクログロブリン血症、小細胞肺腫瘍、原発性脳腫瘍、胃癌、結腸癌、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド、膀胱癌、前悪性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、甲状腺乳頭癌、神経芽細胞腫、神経内分泌癌、食道癌、腎尿路生殖器癌、悪性高カルシウム血症、子宮頸癌、子宮内膜癌、副腎皮質癌、前立腺癌、ミューラー管癌、卵巣癌、腹膜癌、卵管癌、または子宮体部漿液性癌が挙げられる。
【０２１０】
他の実施形態では、対象は最大３ライン、最大２ライン、または最大１ラインの先行化学療法歴がある。いくつかの態様では、当該ラインの先行化学療法は、プラチナ系化学療法（例えばシスプラチン、オキサリプラチン、またはカルボプラチン）である。さらに他の実施形態では、対象は、再発癌に対して３ラインを超える前化学療法歴がない。
【０２１１】
本開示の一部として投与される１回または複数回のプライミング用量及び１回または複数回の治療有効量のベクターは、ウイルス粒子（ＶＰ）において測定することができる。一実施形態では、プライミング用量は治療有効量と同一である。別の実施形態では、プライミング用量は治療有効量よりも少ない。別の実施形態では、プライミング用量は治療有効量よりも多い。一態様では、プライミング用量は複数回投与される。別の態様では、プライミング用量は反復投与される。一態様では、治療有効量は複数回投与される。別の態様では、治療有効量は反復投与される。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、プライミング用量のベクターは、約１×１０１５未満、約１×１０１４未満、約５×１０１３未満、約４×１０１３未満、約３×１０１３未満、約２×１０１３未満、約１×１０１３未満、約９×１０１２未満、約８×１０１２未満、約７×１０１２未満、約６×１０１２未満、約５×１０１２未満、約４×１０１２未満、約３×１０１２未満、約２×１０１２未満、約１×１０１２未満、約９×１０１１未満、約８×１０１１未満、約７×１０１１未満、約６×１０１１未満、約５×１０１１未満、約４×１０１１未満、約３×１０１１未満、約２×１０１１未満、約１×１０１１未満、約９×１０１０未満、約８×１０１０未満、約７×１０１０未満、約６×１０１０未満、約５×１０１０未満、約４×１０１０未満、約３×１０１０未満、約２×１０１０、または約１×１０１０未満のウイルス粒子の量で投与される。
【０２１３】
他の実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０１５、少なくとも約１×１０１４、少なくとも約５×１０１３、少なくとも約４×１０１３、少なくとも約３×１０１３、少なくとも約２×１０１３、少なくとも約１×１０１３、少なくとも約９×１０１２、少なくとも約８×１０１２、少なくとも約７×１０１２、少なくとも約６×１０１２、少なくとも約５×１０１２、少なくとも約４×１０１２、少なくとも約３×１０１２、少なくとも約２×１０１２、少なくとも約１×１０１２、少なくとも約９×１０１１、少なくとも約８×１０１１、少なくとも約７×１０１１、少なくとも約６×１０１１、少なくとも約５×１０１１、少なくとも約４×１０１１、少なくとも約３×１０１１、少なくとも約２×１０１１、少なくとも約１×１０１１、少なくとも約９×１０１０、少なくとも約８×１０１０、少なくとも約７×１０１０、少なくとも約６×１０１０、少なくとも約５×１０１０、少なくとも約４×１０１０、少なくとも約３×１０１０、少なくとも約２×１０１０、または少なくとも約１×１０１０のウイルス粒子の量で投与される。
【０２１４】
一実施形態では、１種類以上の化学療法剤との併用療法における少なくとも１回のプライミング用量及び少なくとも１回の治療有効量のベクターは、１種類以上の化学療法剤を使用しない治療法（例えばベクターのみを使用した単剤療法）に使用される少なくとも１回のプライミング用量及び少なくとも１回の治療有効量よりも少ない。例えば、パクリタキセルとの併用療法におけるベクターの治療有効量には、限定されるわけではないが、約１×１０１３以下、約９×１０１２以下、約８×１０１２以下、約７×１０１２以下、約６×１０１２以下、約５×１０１２以下、約４×１０１２以下、約３×１０１２以下、約２×１０１２以下、約１×１０１２以下、約９×１０１１以下、約８×１０１１以下、約７×１０１１以下、約６×１０１１以下、約５×１０１１以下、約４×１０１１以下、約３×１０１１以下、約２×１０１１以下、約１×１０１１以下、約９×１０１０以下、約８×１０１０以下、約７×１０１０以下、約６×１０１０以下、約５×１０１０以下、約４×１０１０以下、約３×１０１０以下、約２×１０１０以下、または約１×１０１０以下のウイルス粒子を包含する。またパクリタキセルとの併用療法におけるベクターのプライミング用量には、限定されるわけではないが、約１×１０１３以下、約９×１０１２以下、約８×１０１２以下、約７×１０１２以下、約６×１０１２以下、約５×１０１２以下、約４×１０１２以下、約３×１０１２以下、約２×１０１２以下、約１×１０１２以下、約９×１０１１以下、約８×１０１１以下、約７×１０１１以下、約６×１０１１以下、約５×１０１１以下、約４×１０１１以下、約３×１０１１以下、約２×１０１１以下、約１×１０１１以下、約９×１０１０以下、約８×１０１０以下、約７×１０１０以下、約６×１０１０以下、約５×１０１０以下、約４×１０１０以下、約３×１０１０以下、約２×１０１０以下、または約１×１０１０以下のウイルス粒子を包含する。
【０２１５】
一実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０１１のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０１２のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０１３のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０１４のウイルス粒子の量で投与される。他の実施形態では、プライミング用量のベクターは、少なくとも約１×１０７、少なくとも約１×１０８、少なくとも約１×１０９、少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約５×１０１０のウイルス粒子の量で投与される。
【０２１６】
別の実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０１１のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０１２のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０１３のウイルス粒子の量で投与される。別の実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０１４のウイルス粒子の量で投与される。他の実施形態では、治療有効量のベクターは、少なくとも約１×１０７、少なくとも約１×１０８、少なくとも約１×１０９、少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約５×１０１０のウイルス粒子の量で投与される。
【０２１７】
パクリタキセルの用量は、体表面積の平方メートルあたりのｍｇで測定することができる（ｍｇ／ｍ２）。一態様では、ベクターとの併用療法におけるパクリタキセルの用量は、ベクターを使用しない場合（例えばパクリタキセルのみを使用する療法）のパクリタキセルの用量よりも少ない。パクリタキセルの有効量の非限定的な例として、少なくとも約１０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約２０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約３０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約４０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約５０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約６０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約７０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約８０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約９０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約１００ｍｇ／ｍ２、少なくとも約１１０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約１３０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約１７０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約１８０ｍｇ／ｍ２、少なくとも約１９０ｍｇ／ｍ２、または少なくとも約２００ｍｇ／ｍ２が挙げられる。一態様では、パクリタキセルの有効量は約１７５ｍｇ／ｍ２である。別の態様では、パクリタキセルの有効量は約１３５ｍｇ／ｍ２である。
【０２１８】
いくつかの態様では、パクリタキセルの有効量は、約１０ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２、約２０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２、約３０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２、約４０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２、約５０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２、約６０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２、または約７０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２である。特定の態様では、パクリタキセルの有効量は約８０ｍｇ／ｍ２である。
【０２１９】
いくつかの態様では、パクリタキセルは、少なくとも１０分間、少なくとも２０分間、少なくとも３０分間、少なくとも４０分間、少なくとも５０分間、少なくとも６０分間、少なくとも７０分間、少なくとも８０分間、少なくとも９０分間、少なくとも１００分間、少なくとも１１０分間、少なくとも１２０分間、少なくとも１５０分間、少なくとも１８０分間、少なくとも２１０分間、少なくとも２４０分間、少なくとも２７０分間、または少なくとも３００分間注入される。いくつかの態様では、パクリタキセルは、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、少なくとも１０時間、または少なくとも１２時間注入される。いくつかの態様では、パクリタキセルは少なくとも２４時間注入される。一態様では、パクリタキセルは少なくとも１時間注入される。別の態様では、パクリタキセルは少なくとも３時間注入される。パクリタキセルの注入方法には、当技術分野で公知の任意の方法を使用することができる。例えば、０．２２ミクロンを上回らない微細孔膜を備えたインラインフィルターを通して、３時間にわたってパクリタキセルを投与することができる。
【０２２０】
具体的な実施形態では、プライミング用量のベクターは、３×１０１２〜１×１０１３ＶＰの量で投与され、治療有効量のベクターは３×１０１２〜１×１０１３ＶＰの量で投与され、かつパクリタキセルは７０ｍｇ／ｍ２〜９０ｍｇ／ｍ２の有効量で投与される。
【０２２１】
本開示のいくつかの態様では、プライミング用量のベクターを投与する前に、１種類以上の追加薬を対象に前投与する。いくつかの態様では、治療用量のベクターを投与する前に、１種類以上の追加薬を対象に前投与する。いくつかの態様では、パクリタキセルを投与する前に、１種類以上の薬剤を対象に前投与する。いくつかの態様では、１種類以上の追加薬はコルチコステロイド（例えばデキサメタゾン）である。いくつかの態様では、１種類以上の追加薬はジフェンヒドラミンである。いくつかの態様では、１種類以上の追加薬はＨ２アンタゴニスト（例えば、シメチジンまたはラニチジン）である。いくつかの態様では、１種類以上の追加薬は、コルチコステロイド（デキサメタゾンなど）、ジフェンヒドラミン、及びＨ２アンタゴニスト（シメチジンまたはラニチジンなど）を含む。
【０２２２】
本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法であって、少なくとも１回のプライミング用量のベクター、少なくとも１回の治療有効量のベクター、及び１種類以上の化学療法剤を投与することを含む、方法を提供する。ベクター及び１種類以上の化学療法剤の投与に使用されるレジメンは、ベクター及び１種類以上の化学療法剤の反復投与を含む。一実施形態では、ベクターは、毎日、約２日に１回、約３日に１回、約４日に１回、約５日に１回、約６日に１回、約７日に１回、約２週間に１回、約３週間に１回、約４週間に１回、約５週間に１回、約６週間に１回、約７週間に１回、約２か月に１回、または約６か月に１回反復投与される。別の実施形態では、１種類以上の化学療法剤は、毎日、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、７日毎、８日毎、９日毎、または１０日毎に反復投与される。いくつかの態様では、１種類以上の化学療法剤は、約７日に１回、約２週間に１回、約３週間に１回、約４週間に１回、約２か月に１回、約３か月に１回、約４か月に１回、約５か月に１回、または約６か月に１回投与される。特定の実施形態では、ベクターを２か月毎に投与し、かつパクリタキセルを毎週投与する。
【０２２３】
Ｖ．医薬組成物
本開示では、本開示の方法に使用されるＦＡＳキメラタンパク質を発現するベクターを含む医薬組成物も提供する。医薬組成物は、ヒトを含む哺乳動物への投与用に製剤化することができる。本開示の方法に使用される医薬組成物は薬学的に許容される担体を含んでおり、これには、例えば、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、ホスファートなどの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩など、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール、及び羊毛脂が含まれる。一実施形態では、組成物は、生理食塩水を添加することにより製剤化される。
【０２２４】
本開示の組成物は、任意の好適な方法によって、例えば非経口的に（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病巣内、及び頭蓋内への注射または注入技術を含む）、脳室内に、経口的に、吸入スプレーによって、局所的に、直腸内に、経鼻的に、頬側に、経膣的に、または埋込式リザーバーを介して投与することができる。既述されているように、核酸構築物を含む組成物は、内皮細胞においてＦＡＳキメラ遺伝子を発現させ、それによって内皮細胞のアポトーシスを誘発する。したがって、組成物は、腫瘍内皮細胞の新生血管形成及び／または血管新生を阻害することにより、腫瘍のサイズまたはその転移を阻害する、低減する、または減少させることができる。同様に、核酸構築物と併用されるＶＥＧＦアンタゴニストは、ＶＥＧＦ活性の直接的な阻害により新生血管形成及び／または血管新生を阻害する。したがって、一実施形態では、併用療法は全身にまたは局所に送達される。核酸構築物、アデノウイルス、またはアデノウイルスの同種集団を含有する医薬製剤は、全身送達または局所送達のために、針、カニューレ、または外科用器具などの機械装置を用いることができる。
【０２２５】
本開示の方法に使用される組成物の滅菌注射形態は、水性または油性の懸濁液であってよい。この懸濁液は、好適な分散剤または湿潤剤及び懸濁化剤を使用して、当技術分野の公知の技術に従って製剤化することができる。滅菌注射用調製物はまた、例えば１，３−ブタンジオール懸濁液のような、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液であってもよい。中でも、使用可能な許容されるビヒクル及び溶媒は、水、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液であり得る。加えて、従来から滅菌不揮発性油が溶媒または懸濁媒として使用されている。この目的では、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含め、任意の無刺激の不揮発性油を使用することができる。オレイン酸などの脂肪酸及びそのグリセリド誘導体は、オリーブ油またはヒマシ油、特にそれらのポリオキシエチル化型などの薬学的に許容される天然の油と同様、注射液の調製に有用である。このような油性溶液または懸濁液はまた、カルボキシメチルセルロースなどの長鎖アルコール希釈剤もしくは分散剤、または乳濁液及び懸濁液を含めた薬学的に許容される剤形の製剤化に一般に使用される同様の分散剤を含有してもよい。Ｔｗｅｅｎ、Ｓｐａｎなどの一般に使用される他の界面活性剤、及び薬学的に許容される固体剤形、液体剤形、または他の剤形の製造に一般に使用される他の乳化剤または生物学的利用能増強剤も製剤化の目的に使用することができる。
【０２２６】
非経口製剤は、単回ボーラス用量、注入または負荷ボーラス用量、それに続く維持用量であり得る。これらの組成物は、特定の固定間隔または可変間隔で、例えば１日１回、または「必要に応じて」投与することができる。
【０２２７】
本開示の方法に使用されるある特定の医薬組成物は、例えばカプセル、錠剤、水性懸濁液、または溶液を含めた許容される剤形で経口投与することができる。ある特定の医薬組成物はまた、経鼻エアロゾルまたは吸入によって投与してもよい。そのような組成物は、ベンジルアルコールもしくは他の好適な防腐剤、生物学的利用能を増強する吸収促進剤、及び／または他の従来的な可溶化剤もしくは分散剤を用いて、生理食塩水の溶液として調製してもよい。
【０２２８】
有効量の化学療法剤は当技術分野で使用可能である。一態様では、例えば、ベバシズマブの有効量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約５ｍｇ／ｋｇであり得る。
【実施例】
【０２２９】
実施例１
ウイルスベクターの構築及びクローニング
アデノウイルス５型のゲノムの大部分を含み、かつ組換えが可能なようにアダプタープラスミドに対する部分的相同性を有する骨格を用いてベクターを構築した。
【０２３０】
Ｅ１初期転写単位を骨格プラスミドから除去し、さらにｐＷＥ２５及びＡｍｐ耐性選択マーカー部位を除去することによって改変した。
【０２３１】
アダプタープラスミドは、Ａｄ５、ＣＭＶプロモーター、ＭＣＳ、及びＳＶ４０ポリＡの配列を含有する。このアダプタープラスミドを、ＣＭＶプロモーターを欠失させるように改変し、ＰＰＥ−１プロモーター及びＦａｓ−ｃ断片を制限消化によって挿入した。改変ＰＰＥ−１プロモーター（ＰＰＥ−１−３Ｘ、配列番号１８）及びＦａｓキメラ導入遺伝子（Ｆａｓ−ｃ、配列番号９）をアデノウイルスベクターの構築に用いた。ＰＰＥ−１−（３Ｘ）−Ｆａｓ−ｃ要素（２１１５ｂｐ）を、ＰＰＥ−１−（３Ｘ）−ｌｕｃ要素から構築した。この要素は、１．４ｋｂのマウスプレプロエンドセリンＰＰＥ−１−（３Ｘ）プロモーター、ルシフェラーゼ遺伝子、ＳＶ４０ポリＡ部位、及びＨａｒａｔｓ  ｅｔ  ａｌ（Ｈａｒａｔｓ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，ＪＣＩ，１９９５）によって使用されたｐＥＬ８プラスミド（８８４８ｂｐ）を起源とするマウスＥＴ−１遺伝子の第１イントロンを含有する。ＰＰＥ−３−Ｌｕｃカセットを、ＢａｍＨＩ制限酵素を使用してｐＥＬ８プラスミドから抽出した。ルシフェラーゼ遺伝子をＦａｓ−ｃ遺伝子［ヒトＴＮＦ−Ｒ１（腫瘍壊死因子受容体１、配列番号４）の細胞外及び膜内ドメイン、ならびにＦａｓ（ｐ５５）細胞内ドメイン（配列番号８）（Ｂｏｌｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ，ＪＢＣ，１９９５）から構成される］によって置換し、ＰＰＥ−１−３ｘ−Ｆａｓ−ｃカセットを得た。
【０２３２】
ＰＰＥ−１（３ｘ）−Ｆａｓ−ｃプラスミド−このカセットをさらに制限消化により骨格プラスミドに導入し、ＰＰＥ−１（３ｘ）−Ｆａｓ−ｃプラスミドを得た。
【０２３３】
アダプター−ＰＰＥ−１（３ｘ）−Ｆａｓ−ｃプラスミド−ＰＰＥ−１−３ｘ−Ｆａｓ−ｃ要素を、第一世代構築物ＰＰＥ−１−３ｘ−Ｆａｓ−ｃプラスミドから抽出し、５´末端と３´末端にそれぞれＳｎａＢ１及びＥｃｏＲ１制限部位を導入する指定のＰＣＲプライマーを用いて増幅した。これらの部位を用いて、ＳｎａＢ１及びＥｃｏＲ１で消化されたアダプタープラスミドにＰＰＥ−Ｆａｓ−ｃ断片をクローニングし、宿主細胞（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６細胞）のトランスフェクションに用いられるアダプター−ＰＰＥ−１−３ｘ−Ｆａｓ−ｃを得た。
【０２３４】
実施例２
血管新生内皮細胞特異的デスレセプターと抗腫瘍特異的免疫誘導の二重機構を有するＶＢ−１１１による、再発性膠芽腫の遺伝子治療の第２相試験
目的：この第１／２相試験の目的は、再発性ＧＢＭ（ｒＧＢＭ）患者での単回用量及び複数回用量のＶＢ−１１１（１×１０１２、３×１０１２、及び１×１０１３ウイルス粒子）の安全性、忍容性、及び有効性、ＶＢ−１１１の分布、ならびにアデノウイルスベクターに対する抗体レベルを評価することであった。また本試験を拡張し、ｒＧＢＭ患者における複数回用量のＶＢ−１１１（３×１０１２または１×１０１３ＶＰ）とベバシズマブとの併用治療の安全性、忍容性、及び有効性を評価した。有効性の主要エンドポイントは全生存期間（ＯＳ）であった。
【０２３５】
方法
試験デザイン：本試験は、米国の３施設及びイスラエルの１施設（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ，ＴＸ；Ｄａｎａ  Ｆａｒｂｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ；Ｄｕｋｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ；及びＴｅｌ  Ａｖｉｖ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｔｅｌ  Ａｖｉｖ，Ｉｓｒａｅｌ；ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ、識別番号ＮＣＴ０１２６０５０６）で実施された、ＶＢ−１１１の前向き非盲検用量漸増第１／２相試験であった。本試験は、あらゆる試験関連手順の実施前に全患者からの書面によるインフォームドコンセントを得ることを含め、ヘルシンキ宣言及び適正臨床試験の実施に関する医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）ガイドラインを遵守して実施された。試験プロトコールと患者資料は、関連する規制機関と施設独自の倫理委員会によって承認された。
【０２３６】
患者の選択：本試験に適格な患者は、多形膠芽腫の組織学的な確定診断を受けた１８歳以上の患者である。患者の要件は、神経腫瘍学における応答評価（ＲＡＮＯ）基準１６に従って測定可能な疾患、及びテモゾロミドと放射線による標準治療処置後の疾患の増悪または再発を有することであり、切除不能な腫瘍を含め、腫瘍サイズを問わず許容する。用量漸増の試験段階では、腫瘍の重大な腫瘤効果が画像で認められる場合（５ｍｍ未満の移動またはヘルニアの形跡で規定）、対象を除外した。全コホートに関して、先行して抗血管新生療法または定位放射線療法を受けた患者は除外した。その他の重要な適格基準には、カルノフスキーパフォーマンスステータスが少なくとも７０％であることと、血液学的機能、腎機能、及び肝機能が適正であることが含まれていた。除外基準には、近時の活動性心血管疾患、近時の手術歴、増殖性網膜症、肝疾患、調査薬の使用（４週間以内）、または制御不能な併存疾患が含まれていた。
【０２３７】
実施される治療、及び用量漸増スキーム：ＶＢ−１１１は現行の適正製造基準施設で製造した。バイアルを注入用の正常生理食塩水で希釈し、１回のＩＶ注入として投与した。開始用量は１×１０１２ＶＰであり、これは先の第１相試験で決定された最大評価安全用量１×１０１３ＶＰよりも２用量低いレベルに相当する。
【０２３８】
予定用量レベル３×１０１２ＶＰ及び１×１０１３ＶＰへの用量漸増は、標準的な３＋３デザインに従った。１名の患者に用量制限毒性（ＤＬＴ；治療関連グレード３の毒性と規定）が発現した場合、そのコホートを患者６名に拡張した。拡張したコホートの患者３名のうちＤＬＴの発現が０名である場合、次の用量レベルへの漸増を続行した。最大予定用量の１×１０１３ＶＰまでにＤＬＴが見られた患者が３３％未満である最大用量で最大耐量（ＭＴＤ）を規定した。毒性は、米国立がん研究所の有害事象共通用語規準（バージョン４．０）に従って等級付けした。
【０２３９】
投与コホート：治療量以下（ＳｕｂＴ）コホートには、用量漸増（ＤＥ）にて１×１０１３ＶＰ未満の用量を投与された患者が含まれる。患者間の用量漸増を許容したため、ＳｕｂＴコホートの患者に後で１×１０１３ＶＰのＶＢ１１１を投与する機会を与えた。
【０２４０】
限定曝露（ＬＥ）コホートには、５６日間隔、最大予定用量（１×１０１３ＶＰ）で複数回ＶＢ−１１１の投与を受けた患者が含まれる。
【０２４１】
ＬＥ−ＤＥコホートには、少なくとも１回の１×１０１３ＶＰの投与を受けた全患者が含まれる（ベバシズマブなし）。このコホートは安全性についてのみ評価した。
【０２４２】
プロトコールを修正して、治療から増悪まで（ＴＴｈＰ）のコホートを追加し、増悪まで５６日毎にＶＢ−１１１（１×１０１３ＶＰ）を患者に与え（ＴＴｈＰコホート、単剤療法フェーズ）、さらに増悪以降も、これらの患者に２週間毎のサルベージベバシズマブ（１０ｍｇ／ｋｇのＩＶ）と組み合わせて５６日毎にＶＢ−１１１（１×１０１３ＶＰ）を与えた（ＴＴｈＰコホート、併用フェーズ）（図１）。
【０２４３】
併用薬：試験薬投与後の発熱を回避するため、投与前にアセトアミノフェン（１ｇ）を与え、それ以降も投与後の７２時間は必要に応じて患者に与えた。試験薬の血管破壊作用と脳浮腫の可能性が懸念されるため、１４日間の最初のＶＢ−１１１注入期間、及び３日間のその後の注入期間にデキサメタゾン（４ｍｇを経口で１日２回）を全患者に与えた。
【０２４４】
生体内分布分析：定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）法を実施して、ヒト全血試料及び尿試料のアデノウイルスベクターＶＢ−１１１を検出した。Ｑｉａｇｅｎ  ＤＮｅａｓｙ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＭＤ）を使用してＤＮＡの分離を実施した。次に、この溶出液５マイクロリットルのアデノウイルスヘキソン遺伝子の有無を、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ７９００ＨＴ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して、検証済みｑＰＣＲアッセイにより分析した。３番目の複製物にＶＢ−１１１  ＤＮＡを１００コピー添加して、３連で各試料を分析し、何らかのＰＣＲ阻害物質が試料に存在するかどうかを判定した。最後に、各複製物から得られた平均コピー数を、ＤＮＡのマイクログラムあたりのコピー数に変換した。
【０２４５】
反応評価：２サイクル終了毎に実施する磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャンで患者を追跡した。現地の研究者がＲＡＮＯ基準を用いて反応と疾患の増悪を評価し、反応の中央判定を事後に実施した（ＢＩＯＣＬＩＮＩＣＡ（登録商標），Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）。
【０２４６】
統計解析
第ＩＩ相試験のサブグループ間の比較：連続変数の場合にはクラスカル・ワリス検定を、カテゴリ変数の場合にはフィッシャーの正確検定を使用して、３群（ＳｕｂＴ、ＬＥ、及びＴＴｈｐ）間で人口統計学的変数及び関連する臨床的特徴を記載して比較した。
【０２４７】
全生存期間（日数単位の死亡までの期間）は各群個々について及び各群全部をひっくるめてカプランマイヤー曲線を使用して評価した。ログランク検定を使用して、群間の生存率の差を試験した。
【０２４８】
治療の開始後６か月時点の増悪及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）を全群について検査した。これはＲＡＮＯ評価に基づくものであった。（ｉ）臨床現場を起源とし、神経腫瘍学者によってレビューされたデータ、及び（ｉｉ）外部供給業者（Ｂｉｏｃｌｉｎｉｃａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ）から得て神経腫瘍学者によってレビューされたデータという２組の増悪データを分析した。
【０２４９】
ＴＴｈｐ患者の場合、高用量単剤療法後の増悪及びＶＢ−１１１＋ベバシズマブ併用療法後の増悪という２つの増悪エンドポイントを規定した。これらのエンドポイントの無増悪期間は、第１の症例では単剤療法の開始から、第２の症例では併用療法の開始から測定した。ＴＴｈｐ群の患者１名に増悪は見られず、４４か月の追跡期間を通して単剤療法を継続した。この患者は増悪結果に含まれていない。ログランク検定を使用して、群間のＰＦＳの差を試験した。
【０２５０】
経時的な対数腫瘍測定値の勾配を各患者について算出し、ウィルコクソンの順位和検定を使用して治療群間で勾配を比較した。
【０２５１】
ＴＴｈｐコホートと歴史的コホートとの比較：歴史的対照群は、ベバシズマブで治療したｒＧＢＭ患者を含めた治験及び症例集積のメタ分析に基づいて設定した。
【０２５２】
ＶＢ−１１１の第１／２相単群試験の歴史的対照群を構築するために、２名の研究者が、「ｒＧＢＭ」、「再発性膠芽腫」、「ベバシズマブ」、及び「アバスチン」というキーワードを用いてＭｅｄｌｉｎｅの検索を実施し、ベバシズマブ単剤療法で治療したｒＧＢＭ患者の任意の治験または症例集積の文献を特定した。以下の規定の選択基準に基づいたメタ分析で、文献をレビューし、適格性に関する合意を得た。
●前向きデザインか、後向きデザインか
●２００５年以降に稿本として公開
●ベバシズマブ群に以下の患者が少なくとも２０名含まれている
○１８歳以上の成人
○ｒＧＢＭと診断（初回またはその後の再発）
○先行ベバシズマブを除く、任意の先行レジメンによる治療
○任意の用量のベバシズマブ単剤療法による治療（注：複数の治療群を用いた試験の場合、ベバシズマブ群のデータが分離されていてもよい）
●個々の患者の詳細な生存転帰が報告されている（表形式またはカプランマイヤー曲線として）
【０２５３】
適格な各文献について次のデータを抽出した。
●引用
●治療患者数（合計及びベバシズマブ群）
●個別の及びサマリの患者データ：
○再発回数
○年齢（中央値、平均）
○性別
○先行治療（薬物／放射線／手術などの数と種類）
○先行放射線治療からの経過期間
○再発時の手術、完全切除率
○初回切除：完全、部分的、または生検
○診断から再発までの期間
○ＭＧＭＴメチル化状態、ＥＧＦＲ−Ｖ３、ＩＤＨ−１、及びその他の遺伝的状態
○カルノフスキーパフォーマンスステータス
○投与したベバシズマブ用量
○ベースライン時の最大拡張腫瘍の直径
○コルチコステロイドの使用
○試験後の治療
●ＰＦＳ及びＯＳの中央値
【０２５４】
生存データは、個々の患者データの表またはカプランマイヤー曲線から抽出した。後者の場合、グラフを数値データに変換するプログラムであるＤｉｇｉｔｉｚｅｌｔ（Ｂｏｒｍａｎｎ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用してデータを抽出した。
【０２５５】
検索結果から、メタ分析の対象として適格であった８つの文献を得た。これには、ベバシズマブ単剤療法で治療されたｒＧＢＭ患者６９４名が含まれていた：Ｆｒｉｅｄｍａｎ  ＨＳ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ａｌｏｎｅ  ａｎｄ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  ｉｎ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ，”  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２７：４７３３−４７４０（２００９）；Ｄｕｅｒｉｎｃｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐａｔｉｅｎｔ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｂｅｌｇｉａｎ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｎｅｅｄ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｏｎ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｆｏｒ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ，”  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ，２６２：７４２−７５１（２０１５）；Ｔａａｌ  Ｗ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｉｎｇｌｅ−ａｇｅｎｔ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｏｒ  ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ａ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｐｌｕｓ  ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ（ＢＥＬＯＢ  ｔｒｉａｌ）：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｐｈａｓｅ  ２  ｔｒｉａｌ，”  Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ  １５：９４３−９５３（２０１４）；Ｋｒｅｉｓｌ  ＴＮ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ−ａｇｅｎｔ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｐｌｕｓ  ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  ａｔ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ，”  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２７：７４０−７４５（２００９）；Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ  ＭＣ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  ＳＫ，“Ｓａｌｖａｇｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  ｓｉｎｇｌｅ  ａｇｅｎｔ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｆｏｒ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ，”  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ  ９６：２５９−２６９（２０１０）；Ｆｉｅｌｄ  ＫＭ  ｅｔ  ａｌ，“Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｈａｓｅ  ２  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ  ａｎｄ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｉｎ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ，”  Ｎｅｕｒｏ  Ｏｎｃｏｌ  １７：１５０４−１５１３（２０１５）；Ｎａｇａｎｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ−ａｇｅｎｔ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｉｎ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｇｌｉｏｍａ，”  Ｊｐｎ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ４２：８８７−８９５（２０１２）；及びＣｈｅｎ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｕｔｃｏｍｅｓ  ｗｉｔｈ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｎｏｎ−ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｍｅｎｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｆｒｏｍ  ＵＳ  ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ  ｐｒａｃｔｉｃｅｓ，”  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ  １２２：５９５−６０５（２０１５）。これらの試験を以下の表５に示す。
【０２５６】
（表５）ベバシズマブ単剤療法により治療されたｒＧＢＭ患者のメタ分析に関する試験
2021500355.tif 000010
略語：ＥＣＯＧ、Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ；ＫＰＳ、カルノフスキーパフォーマンスステータス；Ｎ、治療された患者数；ＮＡ＝該当なし；ＲＣＴ、ランダム化比較試験；ＴＴｈＰ、治療から増悪まで。
【０２５７】
全試験にわたるデータをプールして歴史的対照群を形成し、ログランク検定を使用して生存率をＶＢ−１１１試験のＴＴｈｐコホートと比較した。８試験それぞれに対する数値データからカプランマイヤー曲線を再構築し、個々の試験については図２９に、プールされたベバシズマブコホート（ＶＢ−１１１試験のＴＴｈｐコホートとプロット）については図３０に示した。ログランクカイ二乗統計は、自由度１で４．７４であった（Ｐ＝０．０２９４）。Ｃｏｘ回帰モデルから、プールしたベバシズマブコホートと比較したＶＢ−１１１群の推定ハザード比は０．６２（９５％ＣＩ、０．４０〜０．９６）であった。
【０２５８】
異質性分析によれば、歴史的対照群の最大規模の試験（Ｄｕｅｒｉｎｃｋ  ｅｔ  ａｌ  ２０１５）は、他の試験よりもはるかに低い生存率であることが示されたが、これは提示されたデータの種類（臨床研究試験ではなく治療プログラムの報告）に起因する可能性があり、よく指摘される通り、臨床研究試験の参加患者が、一般的に予後が良好であるためである。実際、８試験すべてのＣｏｘ回帰は、結果の有意な異質性が確認されており、自由度７のＷａｌｄカイ二乗は２６．９６である（ｐ＝０．０００３）。この異質性の大部分は、Ｄｕｅｒｉｎｃｋの試験結果と、Ｆｒｉｅｄｍａｎ及びＮａｇａｎｅの試験結果との差によって説明された。
【０２５９】
感度分析では、プールしたベバシズマブコホートからＤｕｅｒｉｎｃｋの試験を除外し、ＴＴｈｐコホートとの比較を繰り返して、ＶＢ−１１１  ＴＴｈｐコホートとプールしたベバシズマブコホートとの間に確認された有意な生存率の差が、Ｄｕｅｒｉｎｃｋの試験の除外に対して頑強であるかどうかを判定した（図３１）。ログランクカイ二乗統計は、自由度１で４．２９に減少したが、引き続き統計的に有意であった（Ｐ＝０．０３８２）。Ｃｏｘ回帰モデルから、プールしたベバシズマブコホートと比較したＶＢ−１１１ＴＴｈＰコホートの推定ハザード比は変化なく、０．６２のままであったが、そのＣＩはわずかに広がった（９５％ＣＩ、０．３９〜０．９８）。
【０２６０】
結果
ｒＧＢＭ患者６２名を３つの連続コホート：ＳｕｂＴ（ｎ＝１９）、ＬＥ（ｎ＝１９）、及びＴＴｈＰ（ｎ＝２４）に登録した。３名の患者は最初にＳｕｂＴコホートの低用量で開始し、プロトコールに従って１×１０１３ＶＰへの患者間用量漸増を実施した。その結果、安全性評価のためのＬＥ−ＤＥコホートには２２名（１９＋３）の患者が含まれている。データカットオフ日時点で、３名の患者が生存しており（全員ＴＴｈＰコホート中）、２名が追跡不能となり、３名が同意を撤回し、５３名が死亡した（図１）。患者特徴を表６に示す。
【０２６１】
（表６）ベースライン患者特徴
2021500355.tif 000011
2021500355.tif 000012
ａクラスカル・ワリス検定
ｂフィッシャーの正確検定
ｃ不明なカテゴリを検定から除外
【０２６２】
年齢はコホート間で類似していた；大半の患者が併用療法による治療を以前に経験しており、大半が試験登録時に単一病変を有していた。ＴＴｈｐコホートは、２回目またはそれ以降の再発下にある患者の割合が多く、１ラインを超える前治療歴があり、カルノフスキーパフォーマンスステータスが９０未満であることが示すように、疾患の進行が進んでいた。腫瘍体積も、ＴＴｈＰコホートではベースライン体積が３２ｃｃを上回る患者が、ＳｕｂＴ群及びＬＥ−ＤＥ群の１５％及び１９％と比較して３８％であった。残念ながら、患者の６０％に関してＭＧＭＴステータスは不明であった。
【０２６３】
患者は最大１３用量のＶＢ−１１１を受けた。投与回数の中央値（平均）は、ＬＥコホート及びＴＴｈＰコホートにおいてそれぞれ１（２．２）及び４（４．７）であった。
【０２６４】
生体内分布：患者は、ＶＢ−１１１注入直後の血液中に、ゲノムＤＮＡのマイクログラムあたり約１０７ゲノムコピーのアデノウイルスＤＮＡという均一なピークを有し、反復投与によるピークレベルの減衰はなかった。全患者で注入後数時間以内に、ある程度のウイルスＤＮＡレベルのクリアランスがあり、半減期は６時間で、反復投与による注入後４日目までに少なくとも３ｌｏｇ以上の減少があった。この全血中のウイルスＤＮＡの排出は、血液中にウイルスの蓄積がないことを示し、隔月投与の安全性を裏付けている。最初の数回の投与においてのみ投与間で基礎レベルを維持した患者もいれば、最初の投与から投与間でレベルがゼロに低下した患者もいた。ＶＢ−１１１の反復投与による２種類のパターンの用量レベルの例を図４Ａ及び４Ｂに示す。
【０２６５】
安全性及び忍容性：ＤＬＴの観察なく最大予定用量レベル（１×１０１３ＶＰ）まで漸増が進行した場合、ＳｕｂＴコホートではＭＴＤに到達しなかった。報告された毒性の詳細を表７に示す。
【０２６６】
（表７）有害事象
2021500355.tif 000013
【０２６７】
患者の約半数は、注入後数時間から発熱及び／またはインフルエンザ様症状を発症した。このような事象は概して自己制限的であり、グレード１〜２の事象であり、解熱治療に反応した。グレード３以上の、治療に起因する有害事象（ＡＥ）の割合は、３つのコホートで１２％〜４１％の範囲であり、予想される通り、大部分が中枢神経系に関連していた（すなわち神経学的及び精神医学的、最大２９％）。ＤＶＴ（ｎ＝１）及び高血圧（ｎ＝２）を含む、血管のグレード３の事象は３例発生した（すべてＴＴｈＰコホート）。患者２名（８．３％）は、毒性のため試験治療を中止した。
【０２６８】
反応及び腫瘍成長率：ＳｕｂＴコホートでは、顕著な抗腫瘍活性は観察されず、研究者及び中央判定による最良効果または安定疾患（ＳＤ）は、それぞれ患者１６名のうち１１名（６９％）及び患者１６名のうち９名（５６％）であった。ＬＥコホートでは、研究者と中央判定の両方で患者１９名のうち１名（５％）に確定部分奏効（ＰＲ）が認められ、研究者と中央判定の両方でそれぞれ患者９名（４８％）と患者１２名（６３％）が安定疾患であった。ＳｕｂＴまたはＬＥコホートのいずれにおいても、完全奏功（ＣＲ）は認められなかった。ＶＢ−１１１による単剤療法期間のＴＴｈＰコホートでは、研究者及び中央判定によってそれぞれ以下の反応が認められた：両方の種類の判定で患者１９名のうち１名（５％）が確定ＣＲ；それぞれ患者１９名のうち１名（５％）及び患者１９名のうち０名（０％）がＰＲ；かつそれぞれ患者１９名のうち１０名（５３％）及び患者１９名のうち１１名（５９％）がＳＤであった。併用療法期間のＴＴｈＰコホートでは、研究者及び中央判定によってそれぞれ以下の反応が認められた：両方の種類の判定で患者１９名のうち０名（０％）が確定ＣＲ、両方の種類の判定で患者１９名のうち２名（１０％）がＰＲ；かつそれぞれ患者１９名のうち１０名（５３％）及び患者１９名のうち９名（４８％）がＳＤであった。
【０２６９】
スパイダー図は、ＶＢ−１１１単剤療法期の間、ＬＥコホートとＴＴｈＰコホートで同様の急速な腫瘍成長を示し、局所部位データによる３０日あたりの中央値パーセント増加（ＭＰＩ）は１４．８対１４．１（ｐ＝０．９８）であった（図２ａ及び図２ｃ）。ＴＴｈＰコホートでは、先行するＶＢ−１１１単剤療法期と比較して、最初の増悪後に成長が減衰した（ＭＰＩ：０．６対１４．１、ｐ＝０．００３２）（図２ａ及び２ｂ）。ＬＥコホートとＴＴｈＰコホートの両方で見られた反応には、ＰＲ６名を含み、そのうち２名はほぼＣＲ（９８％の縮小）を達成し、ＣＲ１名は３年以上にわたって持続した。同様の減衰が、中央の実験室の腫瘍測定で見られた。ＴＴｈＰコホートでは腫瘍退縮の頻度が高く、最初の１００日間でベースラインの体積未満に減少した腫瘍患者の割合は、ＬＥコホート対ＴＴｈＰコホートでそれぞれ患者の１３％対６１％であった（ｐ＝０．００２；マクネマー検定）。
【０２７０】
生存期間：研究者評価によるＰＦＳ中央値は、ＳｕｂＴ、ＬＥ、及びＴＴｈＰ単剤療法コホートで、それぞれ５５日、５６日、及び６１日であった（ｐ＝非有意［ＮＳ］）。ＴＴｈＰ併用コホートのＰＦＳ中央値（併用療法の開始から疾患増悪まで）は８３日（対するＬＥコホートでは５６日、ハザード比［ＨＲ］０．４６［９５％信頼区間（ＣＩ）０．２３〜０．９１］；ｐ＝０．０１［ログランク］；図３ａ）。中央判定は、ＳｕｂＴ、ＬＥ、及びＴＴｈＰ単剤療法コホートで、それぞれ５５日、６０日、及び６１日という類似したＰＦＳ中央値を示した（ｐ＝ＮＳ）。
【０２７１】
全生存期間は、ＳｕｂＴ（ｎ＝１６）、ＬＥ（ｎ＝１９）、及びＴＴｈＰ（ｎ＝２４）コホートで、それぞれ３８週間（２６６日）、３２週間（２２３日）、及び５９週間（４１４日）であった。ＴＴｈＰコホートのＯＳは、ＬＥコホートよりも有意に高かった（ＨＲ、０．５１［９５％ＣＩ、０．２６〜０．９９］；ｐ＝０．０４３［ログランク］；図３ｂ）。
【０２７２】
歴史的対照群は、ベバシズマブ単剤療法で治療したｒＧＢＭ患者６９４名を含む８つの文献のメタ分析に基づいて実施された。歴史的群のＯＳ中央値は３２週間であり、ＴＴｈＰコホートでのＯＳよりも有意に低かった（ＨＲ、０．６２［９５％ＣＩ、０．４０〜０．９６］；ｐ＝０．０２９［ログランク］；図３ｃ）。１２か月のＯＳ率は、ＶＢ−１１１のＴＴｈＰコホート対プールしたメタ分析で、それぞれ５７％対２４％であった（ｐ＝０．００２）。Ｄｕｅｒｉｎｃｋ  ｅｔ  ａｌ  ２０１５の試験を歴史的コホートから除外した後も、ＯＳ中央値は３７週間であり、ＴＴｈｐコホートのＯＳよりもまだ有意に低く（ｐ＝０．０３８［ログランク］）、１２か月のＯＳ率は３０％で、ＴＴｈｐコホートのそれよりもまだ有意に低かった（ｐ＝０．００５）。
【０２７３】
注入後の発熱反応の発症は患者の４５％で起こり、生存期間の改善と相関し（全コホート；図３ｄ）、ＯＳが２３５日対４４８日であった（ｐ＜０．００１）。ＳｕｂＴ（ＯＳ２２９対５６１、ｐ＝０．０２７）コホート及びＬＥ−ＤＥ（ＯＳ１９４対３７１、ｐ＜０．００１）コホートもそれに該当したが、ＴＴｈＰコホート（ＯＳ３２１対４４８、ｐ＝ＮＳ）は該当しなかった。
【０２７４】
５９週間というＴＴｈＰ群のＯＳ中央値は、ＬＥコホート生存期間（３２週間）、使用可能なすべての歴史的対照、及びプールしたメタ分析における８試験からのＯＳ複合中央値（３２週間）よりも統計的有意に良好であった。重要な点として、ＴＴｈＰコホートで１年超生存する患者の割合（５７％）は、１名を除く全患者が死に至るか最低１５か月であったプールしたメタ分析（２４％）の２倍を上回った。ＯＳでの有益性はＰＦＳシグナルよりも大きく、中程度ながらも統計的有意に達しており、個々の患者の腫瘍成長データは腫瘍成長の有意な減衰を示唆している。
【０２７５】
ＶＢ−１１１は、単剤としても、ベバシズマブとの併用でも極めて十分な忍容性があった。１７％というＴＴｈＰコホートでのグレード３以上の治療関連ＡＥ率は、単群試験と比較して良好であり、ロムスチンまたはイリノテカンとのベバシズマブの併用について報告されているものよりも有意に低い。グレードを問わず、ＶＢ−１１１に関連する最も一般的なＡＥの一つは、典型的には注入の数時間後に発生し、翌日までに解消する発熱反応であり、ＬＥコホートでは患者の５０％及びＴＴｈＰコホートでは５８％に発生した。発熱反応の発症は、生存期間の改善と高い相関性があった。
【０２７６】
本試験の結果は、５６日毎のＶＢ−１１１の投与が、ベバシズマブと共に投与された場合にｒＧＢＭにおける生存期間を改善し、かつ良好な安全性プロファイルを伴うことを示している。
【０２７７】
実施例３
Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ療法は抗腫瘍免疫療法反応を誘発する
背景：Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃは、いくつかのがん適応症の第２相臨床試験において、ベバシズマブに追加するとｒＧＢＭにおいて全生存期間（ＯＳ）がほぼ２倍になることを含め、良好な毒性プロファイルと有効性を示した。実施例２に示すように、ＯＳの増加は、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃに対する発熱反応を経験している対象においてより顕著である。本実施例は、少なくとも１回のプライミング用量のＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃの投与後、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーに変化を示し得る対象の腫瘍を治療する方法、ならびにＦａｓキメラ遺伝子治療に対するレスポンダーを同定する方法を開示する。
【０２７８】
方法：（ｉ）ｌｕｍｉｎｅｘ系アレイを使用して、ベースライン時及びＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ注入から６時間後のｒＧＢＭ患者由来の血清をサイトカインプロファイリングにかけた。（ｉｉ）Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで治療した卵巣癌患者及び対照プラチナ耐性卵巣癌患者からの病理学的検体のＣＤ８Ｔ細胞を染色した。（ｉｉｉ）正所性Ｕ２５１腫瘍を有するマウスをＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃまたは対照で処置した。選別した腫瘍ミクログリア及びＴ細胞を脾細胞と共培養し、ＬＰＳまたは抗ＣＤ３／ＣＤ２８で活性化した。上清をサイトカインプロファイリングにかけた。（ｉｖ）動物モデルに抗ＰＤ−Ｌ１とＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃの併用治療を実施した。
【０２７９】
結果：（ｉ）ｒＧＢＭ患者において、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ注入から６時間後のいくつかのサイトカインのレベルはＯＳと相関性があった。（ｉｉ）免疫組織化学では、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで治療した卵巣癌患者の腫瘍浸潤ＣＤ８Ｔ細胞は、対照検体と比較して大幅な増加を示した。（ｉｉｉ）Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置したＵ２５１モデル由来の腫瘍ミクログリア及びＴ細胞を脾細胞と共培養し、ＬＰＳまたは抗ＣＤ３／ＣＤ２８で活性化すると、ミクログリアとの共培養でのみ、種々のサイトカイン及びケモカインの有意な増加が観察された。逆に、抗ＣＤ３／ＣＤ２８活性化脾細胞と腫瘍Ｔ細胞の共培養では、抗炎症性サイトカインの減少が観察された。これらの結果は、腫瘍ミクログリアが、細胞傷害性Ｔ細胞応答を促進するプロファイルをもつサイトカイン放出に関与していることを示唆している。（ｉｖ）ルイス肺癌及び黒色腫で実施した動物試験では、単回用量のＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃと抗ＰＤ−Ｌ１の併用で、腫瘍体積の縮小及びＣＤ８細胞の増加が見られた。
【０２８０】
結論：これらのデータは、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃの前述の抗血管新生機構に加えて、ウイルス性免疫腫瘍剤として作用するＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃの免疫活性化の役割を示している。
【０２８１】
実施例４
Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ治療、サイトカイン測定、及び全生存期間についてのデータセット分析
上記のＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ臨床データセット由来の血清試料のＬｕｍｉｎｅｘアッセイを使用して分析を実施した。２７種類のサイトカインと全生存期間（ＯＳ）の関係を評価した。治療群を「継続」または「限定」に分類した。継続治療群では、ＶＢ−１１１による治療を受けた対象に、増悪時にも疾患状態を問わずベバシズマブと併用してＶＢ−１１１による治療を継続した。限定治療群では、単剤療法としてＶＢ−１１１を対象に与え、疾患の増悪時には標準治療であるベバシズマブに切り替えた。
【０２８２】
データ処理及び変換。完全なデータセットを作成するため、Ｌｕｍｉｎｅｘサイトカインアッセイ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）による２つのプレートの実行結果を集約した。サイトカインレベルのデータに加えて、「ＯＳ」、「群」、「１回目の投与時の発熱」、「任意の投与時の発熱」などの変数を追加した。
【０２８３】
データの品質を検証した後、検出可能なレベルを下回った値を、０から検出可能なレベルの中央値に置き換えた。
【０２８４】
２つの時点（Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ注入の０時間後及び６時間後）で各サイトカインを分析したため、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ治療後６時間のサイトカインレベルの動的変化を表すサイトカインレベルの増分を使用した。
【０２８５】
統計分析は、Ｍａｔｌａｂ及びＲプログラミング言語によって実施した。
【０２８６】
探索的データ分析。最初に、薬物投与の６時間後のＯＳと２７種類のサイトカインレベルの変化との関係を調べるために、相関プロットを作成した（図５）。ピアソン相関係数に基づき、ＯＳと、ＩＬ−１Ｒａ（＋０．４６）、ＴＮＦα（＋０．４４）、及びエオタキシン（＋０．４）のようなサイトカインとの間に最も強い相関が確認された。ＯＳと追加のサイトカインＩＦＮγ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＰ−１０、及びＧ−ＣＳＦとの関係も評価した。有意性検定（有意水準＞０．０５）により、８種類のサイトカイン（ＩＬ−１Ｒａ、ＴＮＦα、エオタキシン、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＰ−１０、及びＧ−ＣＳＦ）すべてにＯＳとの統計的有意な相関があることが判明した（図６）。
【０２８７】
生存率が２つの治療群間で有意に異なるという事実を考慮して（図７）、治療群に応じたＯＳとサイトカインとの相関を評価した（図８〜９）。限定群のＯＳは、２群を合計した場合と比較して、８種類のサイトカインと最も強い相関があると判明した。限定群のＯＳは、サイトカインＩＬ−１５及びＩＬ−４の増加と相関し（図８Ａ）、その相関は有意である（図８Ｂ）ことも判明した。継続群のＯＳは、調査した２７種類のいずれのサイトカインの変化とも有意な相関を示さなかった（図９Ａ、９Ｂ）。
【０２８８】
Ｃｏｘ比例ハザード分析。Ｃｏｘ回帰分析を使用した。Ｃｏｘ回帰はロジスティック回帰のうちの一種類であり、事象発生時、この場合は死亡を探索する。全体、継続、限定という３つの異なる群で上述のサイトカインに対してＣｏｘ回帰を実施し、それぞれの間に何らかの変動があったかどうかを確認した。この回帰により、患者の指数からＯＳを決定する際に従うべき推定線を得る。すべてのサイトカインに回帰を実施するとともに、上位のサイトカインを用いて多変量回帰を実施し、本来有するであろうものとは異なる係数を各サイトカインに割り当てている良好な予測を取得した。Ｃｏｘ回帰を使用する場合にはベースライン式が必要であるが、簡素化のため平均を使用した。図１０（全体の試料）、図１１（限定治療群の試料）、及び図１２（継続治療群の試料）はそれぞれ３つの値：Ｃｏｘ回帰でサイトカインに割り当てられる係数、係数の標準誤差、及び平均指示誤差を示している。図１３、図１４、及び図１５はそれぞれ、誤差の概念を得るために実値に対してプロットした推定線を示している。
【０２８９】
結論。生物統計学的分析からの観察に基づくと、４種類のサイトカインのレベルの変化は、患者のＯＳと最大の相関関係を示した。ＩＬ−１Ｒａ及びＴＮＦαは、Ｔ検定においてＯＳと相関し、ＴＮＦα、ＩＬ−１７ａ、及びＭＩＰ−１αはＣｏｘ回帰のすべてのデータセットにおいて相関した。Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ後にあまり変化しないが、ＯＳとの相関を維持する他のサイトカインレベルも有益である可能性がある。
【０２９０】
実施例５
本実施例では、正所性Ｕ２５１腫瘍を有するマウスをＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃまたは対照で処置した。選別した腫瘍ミクログリア及びＴ細胞を脾細胞と共培養し、ＬＰＳまたは抗ＣＤ３／ＣＤ２８で活性化した。培養上清をサイトカインプロファイリングにかけた。
【０２９１】
方法：正所性Ｕ２５１腫瘍を有するマウスに１×１０１１ウイルス粒子のＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃを静脈内注射して処置した。処置の６時間後、動物を屠殺し、腫瘍と脾臓を摘出した。Ａｃｃｕｍａｘ細胞解離溶液を使用して、腫瘍由来細胞及び脾細胞をそれぞれの組織から採取した。
【０２９２】
腫瘍から抽出した細胞を、ＦｃＲブロッキング緩衝液と１５分間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後、試料を以下の抗体と２０分間インキュベートした：生細胞用Ｚｏｍｂｉｅ−ＮＩＲ；非腫瘍細胞用のＡＰＣ（アロフィコシアニン）標識ＣＤ４５；ミクログリア用のＰｅｒＣＰ（ペリジニン−クロロフィルタンパク質）標識ＣＤ１１ｂ；総Ｔ細胞用のＢＶ４２１（Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ  ４２１）標識ＣＤ３。
【０２９３】
標識細胞を計数し、９６ウェルプレートの３重ウェルに播種した（ウェルあたりの培地２００マイクロリットル）。脾臓細胞を、ウェルあたり２．８×１０４細胞の密度で播種した。ミクログリア細胞を、ウェルあたり１×１０５細胞の密度で播種した。Ｔ細胞を、ウェルあたり２．４×１０４細胞の密度で播種した。細胞を抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８と２４時間（図１６Ａ）、または１００μｇ／ｍｌのＬＰＳと７２時間（図１６Ｂ）共インキュベートした。インキュベーション後、培養上清を回収し、分析まで−２０℃で保存した。
【０２９４】
Ｌｕｍｉｎｅｘサイトカインアッセイ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；サイトカイン３２種類、マウス）を使用して３重ウェルでサイトカインをプロファイリングした。
【０２９５】
結果：Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置したＵ２５１モデル由来の腫瘍ミクログリア及びＴ細胞を脾細胞と共培養し、ＬＰＳまたは抗ＣＤ３／ＣＤ２８で活性化すると、ミクログリアとの共培養でのみ、種々のサイトカイン及びケモカインの有意な増加が観察された。例えば、図１７Ａ〜１７Ｇはそれぞれ、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物由来の試料において、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８と共培養された脾臓及びミクログリア細胞からの上清に存在するＩＬ−６、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、及びＭＩＰ−１βのレベルが対照と比較して増加したことを示す。図１８Ａ〜１８Ｎはそれぞれ、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物由来の試料において、ＬＰＳと共培養された脾臓及びミクログリア細胞からの上清に存在するＧ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２（ｐ７０）、ＩＬ−１３、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−９、ＩＬ−１５、及びＭ−ＣＳＦのレベルが対照と比較して増加したことを示す。
【０２９６】
逆に、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８活性化脾細胞と腫瘍Ｔ細胞の共培養では、抗炎症性サイトカインの減少が観察された。例えば、図１９Ａ〜１９Ｅはそれぞれ、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物由来の試料において、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８と共培養された脾臓及びＴ細胞からの上清中のＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、及びＩＬ−１３のレベルが対照と比較して減少したことを示す。
【０２９７】
これらの結果は、腫瘍ミクログリアが、細胞傷害性Ｔ細胞応答を促進するサイトカインプロファイルをもつサイトカイン放出の主要因子であることを示している。
【０２９８】
脾細胞をミクログリアとインキュベートした場合には検出されたサイトカインがいくつかあったが、脾細胞をＴ細胞とインキュベートした場合には検出されないサイトカインもあれば、その逆のサイトカインもあった。例えば、図２０Ａは、脾細胞をミクログリア（Ｓ＋Ｍ）とインキュベートした場合、処置試料及び対照試料の両方で低レベルのＩＬ−２が検出されたことを示している。しかしながら、脾細胞をＴ細胞（Ｓ＋Ｔ）とインキュベートした場合、対照試料ではＩＬ−２のレベルの増加が検出され、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物由来の試料ではＩＬ−２のレベルの減少が検出された。図２０Ａを参照のこと。図２０Ｂは、脾細胞をミクログリア（Ｓ＋Ｍ）とインキュベートした場合、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物由来の試料で、対照と比較してＴＮＦαのレベルの増加が検出されたことを示す。しかしながら、脾細胞を腫瘍浸潤Ｔ細胞（Ｓ＋Ｔ）とインキュベートした場合、処置試料及び対照試料の両方でＴＮＦαのレベルの減少が検出された。図２０Ｂを参照のこと。
【０２９９】
ＶＥＧＦ及び白血病阻害因子（ＬＩＦ）のレベルも評価した。例えば、ＶＥＧＦとＬＩＦのレベルは、脾細胞のみ培養（Ｓ）、ミクログリアと脾細胞の共培養（Ｓ＋Ｍ）、及び腫瘍浸潤Ｔ細胞と脾細胞の共培養（Ｓ＋Ｔ）の上清から測定した。結果を図２１Ａ及び図２１Ｂに示す。図２１Ａは、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ処置した動物からの脾細胞が、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激すると、対照試料と比較してレベルの増加したＶＥＧＦを産生したことを示している。ミクログリアまたは腫瘍浸潤Ｔ細胞と共培養した脾細胞でのＶＥＧＦ産生は、処置試料と対照試料で類似していた。図２１Ａを参照のこと。図２１Ｂは、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物からの脾細胞が、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８とインキュベーションすると、対照試料と比較してレベルの増加したＬＩＦを産生したことを示している。Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物の試料では、脾細胞を腫瘍浸潤Ｔ細胞とインキュベートするとＬＩＦレベルは減少した。図２１Ｂを参照のこと。
【０３００】
ＬＰＳを刺激に使用して同様の実験を実施した。図２２は、脾細胞をミクログリアと共培養した場合（Ｓ＋Ｍ）、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物の試料ではＬＩＦレベルが増加したが、脾細胞を腫瘍Ｔ細胞と共培養した場合（Ｓ＋Ｔ）は有意ではなかったことを示している。
【０３０１】
実施例６
実施例５のサイトカインプロファイル分析を実施した後、ミクログリアと共培養した脾細胞と、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激された脾細胞との有意なサイトカイン変化の相関を判定した。結果を図２３Ａ〜２３Ｅに示す。図２３Ａ〜２３Ｃは、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物（図２３Ａ）、対照動物（図２３Ｂ）、及びＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物及び対照動物の両方（図２３Ｃ）に対する各アッセイの上清で測定された２７種類のサイトカイン／ケモカインのレベルを示している。赤または青の強度は相関のレベルを示し、濃色は強い相関を示す。図２３Ｄは、図２３Ｃと同様の融合データを別の方法でプロットしたものを示す。サイトカインは３群に分類した。対照と比較して有意な変化を示したサイトカインを１つの集団に集約している。本実験から最も有意なサイトカインは、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−２、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１β、及びＩＰ−１０であると判明した（図２３Ｅを参照）。
【０３０２】
同様の相関試験を実施して、ミクログリアと共培養した脾細胞と、ＬＰＳで刺激された脾細胞との有意なサイトカイン変化の相関を判定した。結果を図２４Ａ〜２４Ｄに示す。図２４Ａ〜２４Ｃは、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物（図２４Ａ）、対照動物（図２４Ｂ）、及びＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで処置した動物及び対照動物の両方（図２４Ｃ）に対する各アッセイの上清で測定された２７種類のサイトカイン／ケモカインのレベルを示している。本実験で最も顕著に変化したサイトカインは、ＭＩＰ−１β、ＭＩＰ−１α、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−１０、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１２（ｐ７０）、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、及びＭ−ＣＳＦであると判定された（図２４Ｄを参照）。
【０３０３】
実施例７
全生存期間（ＯＳ）、少なくとも１つの血漿バイオマーカーまたは細胞表面バイオマーカーの変化、及び発熱の発症の相関関係を評価した。実施例４の上記のＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ臨床データセット由来の試料を使用して分析を実施した。
【０３０４】
最初に、ＯＳと発熱を示す対象（プライミング用量のベクターの後または任意の用量のベクターの後）との間の相関関係を評価した。図２５Ａは、プライミング用量のベクターの後に発熱を示す対象は、プライミング用量後に発熱を示さなかった対象と比較してＯＳが増加したことを示している。図２５Ｂは、任意の用量のベクターの後に発熱を示す対象は、任意の用量のベクターの後に発熱を示さなかった対象と比較してＯＳが増加したことを示している。
【０３０５】
第２に、ＯＳと、ベクターの任意の用量で発熱を示す対象との間の相関関係を、治療群：継続治療群または限定治療群ごとに評価した。図２６は、継続治療群と限定治療群の両方で任意の用量のベクターの後に発熱を示す対象は、任意の用量のベクターの後に発熱を示さなかった対象と比較してＯＳが増加したことを示している。
【０３０６】
第３に、発熱及びＯＳと関連するサイトカイン間の相関を評価した。９種類のサイトカイン：ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦα、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＩＦＮ−α、及びＩＦＮ−γを分析した。図２７Ａ〜２７Ｃは、（それぞれ）ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、及びＩＬ−６の結果を示す。ＩＬ−１αレベルの差は、期間と熱の発症の両方に関して有意であった（図２７Ａ）。ＩＬ−６レベルの差は、期間に関してのみ有意であった（図２７Ｃ）。図２８Ａ〜２８Ｆは、（それぞれ）ＩＬ−８、ＴＮＦα、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＩＦＮ−γ、及びＩＦＮ−αの結果を示す。ＩＬ−８レベルの差は、期間に関してのみ有意であった（図２８Ａ）。ＴＮＦαレベルの差は、期間と熱の発症に関して有意であった（図２８Ｂ）。ＭＩＰ−１αレベルの差は、期間と熱の発症に関して有意であった（図２８Ｃ）。ＭＩＰ−１βレベルの差は、期間と熱の発症に関して有意であった（図２８Ｄ）。ＩＦＮ−γレベルの差は、期間と熱の発症に関して有意であった（図２８Ｅ）。
【０３０７】
実施例８
目的。毎週のパクリタキセルを併用したＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃによる治療は、第２相試験で、再発性プラチナ耐性卵巣癌患者の全生存期間を延長することを示している。投与後の発熱反応は生存期間の改善と関連しており、ＶＢ−１１１の作用機序が免疫系の一役を担うことを裏付けた。本実施例では、患者の腫瘍生検データを評価して、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃの腫瘍内免疫活性をさらに特性決定した。
【０３０８】
方法：毎週のパクリタキセルと併用して２か月毎に静脈内１×１０１３ＶＰのＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃで治療した再発性プラチナ耐性卵巣癌の患者３名から治療後の生検を採取した。１名は試験ＮＣＴ０３３９８６５５の患者（図３２）であり、２名は試験ＮＣＴ０１７１１９７０の患者（図３３）であった。治療前の検体と１２名の非治療対照の結果を比較した。ＣＤ８＋及びＣＤ４＋腫瘍内Ｔ細胞についてＨＥ及び免疫組織化学（ＩＨＣ）を実施した。
【０３０９】
結果：Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃによる治療前に採取した検体は、腫瘍内にＴ細胞浸潤を全く示さないか、または最小限示した（図３２Ａ及び図３３Ｅ〜３３Ｈ）。Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ治療の１か月後の転移性病変はＣＤ８＋Ｔ細胞（最大７４個のＣＤ８＋細胞／ＨＰＦ）及びＣＤ４＋Ｔ細胞による腫瘍浸潤を示した（図３２Ｂ）。免疫組織化学染色は、アポトーシス腫瘍細胞の領域（図３３Ｂ、３３Ｄ（赤丸））、及び対照（図３３Ｅ〜３３Ｈ）と比較したＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ治療患者の腫瘍浸潤ＣＤ８リンパ球の増加（図３３Ａ、３３Ｃ）を示す。
【０３１０】
最初の薬物投与の４．５か月後（３回投与後）に、肝臓病変は、生存腫瘍のない壊死組織及び線維組織、リンパ球凝集体、ＣＤ８の強度染色（１５７個のＣＤ８＋細胞／ＨＰＦ）、ＣＤ４の強度染色、及びマクロファージ染色を示した（図３２Ｃ）。
【０３１１】
治療前（ベースライン）、及びパクリタキセルと併用したＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃによる治療の３か月後にＣＡ−１２５レベルも測定した。本実施例では、ベースラインでのＣＡ−１２５レベルは１０５６Ｕ／ｍｌであった（図３４Ａ、３４Ｂ）。８週間毎のＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ及び毎週のパクリタキセルによる治療の３か月後、ＣＡ−１２５レベルは１８Ｕ／ｍＬであった（図３４Ｃ、３４Ｄ）。
【０３１２】
結論：Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ治療後の病理学的所見は、ＣＤ８＋Ｔ細胞による腫瘍浸潤として現れる免疫療法効果の誘導、及び腫瘍壊死の証拠を示唆している。腫瘍浸潤リンパ球の存在は、卵巣癌の重要な予後因子であり、Ａｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃ第ＩＩ相試験で見られる有効な生存転帰の一因であり得る。パクリタキセル及びプラセボと比較した、毎週のパクリタキセルとＡｄ５−ＰＰＥ−１−３Ｘ−Ｆａｓ−ｃとの併用の有効性及び安全性を評価するピボタル第ＩＩＩ相試験が現在進行中である。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【図１８−３】
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【図１８−４】
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【図１９−１】
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【図１９−２】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２３Ｄ】
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【図２３Ｅ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２４Ｄ】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８−１】
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【図２８−２】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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