(57)【要約】【課題】タキサン粒子の局所投与による膀胱癌の治療に関する。【解決手段】ドセタキセル粒子などのタキサン粒子を含む組成物の局所投与により膀胱癌を治療するための、または膀胱癌の再発を阻害するための方法が、本明細書で開示される。投与方法には、腫瘍内注射、外科的腫瘍切除部位への直接注射、および膀胱内注入が含まれる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における膀胱癌を治療するかまたは膀胱癌の再発を阻害する方法であって、タキサン粒子を含む第１の組成物の有効量を１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除部位に直接注射することを含み、前記注射が、前記対象の１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に行われ、前記タキサン粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、それにより前記膀胱癌を治療するか、または前記膀胱癌の前記再発を阻害する、方法。
【請求項２】
前記方法が、前記第１の組成物の注射後に、タキサン溶液または０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有するタキサン粒子を含む第２の組成物の有効量を前記対象の前記膀胱へ膀胱内注入することによる、第１の（初期）注入をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記方法が、前記第１の（初期）注入後にさらに１〜１４回、前記第２の組成物の有効量を前記対象の前記膀胱へ膀胱内注入により注入することをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記注入が、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月などの定期的な間隔で区切られる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記第１の組成物の前記タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有し、前記第２の組成物がタキサン粒子を含み、前記第２の組成物の前記タキサン粒子が０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記タキサン粒子が、前記タキサンの少なくとも９５％を構成する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記第１の組成物の前記タキサン粒子がドセタキセル粒子であり、前記第２の組成物がタキサン粒子を含み、前記第２の組成物の前記タキサン粒子がドセタキセル粒子である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ2／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ3〜０．１５ｇ／ｃｍ3のかさ密度（非タップ）を有する、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記第２の組成物がタキサン溶液を含み、前記タキサン溶液がドセタキセル溶液である、請求項２または３に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１の組成物および／または前記第２の組成物が、アルブミンを除外する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の組成物が液体担体をさらに含み、前記第１の組成物が前記液体担体中に分散された前記タキサン粒子の懸濁液を含み、前記第２の組成物がタキサン粒子を含み、前記第２の組成物が液体担体をさらに含み、前記第２の組成物が前記液体担体中に分散された前記タキサン粒子の懸濁液を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記液体担体が、水性担体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記水性担体が、生理食塩水溶液を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記水性担体が、界面活性剤および／またはエタノールを含む、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記水性担体が界面活性剤を含み、前記界面活性剤がポリソルベートである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ポリソルベートが、ポリソルベート８０であり、前記ポリソルベート８０が、約０．０１％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖの濃度で前記液体担体中に存在する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
水性担体がエタノールを含み、前記エタノールが約０．１％ｗ／ｖ〜約８％ｗ／ｖの濃度で存在する、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記第１の組成物が希釈剤をさらに含み、前記液体担体および前記希釈剤が混合物を形成し、前記第１の組成物が、前記液体担体／希釈剤混合物中に分散された前記タキサン粒子の懸濁液であり、前記第２の組成物がタキサン粒子を含み、前記第２の組成物が希釈剤をさらに含み、前記液体担体および前記希釈剤が混合物を形成し、前記第２の組成物が、前記液体担体／希釈剤混合物中に分散された前記タキサン粒子の懸濁液である、請求項１２〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記希釈剤が、生理食塩水溶液である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記第１の組成物中の前記ドセタキセル粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４ｍｇ／ｍＬである、請求項７〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記第２の組成物がドセタキセル粒子を含み、前記第２の組成物中の前記ドセタキセル粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬである、請求項７〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記第２の組成物の注入体積が、約２５ｍＬである、請求項２〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記膀胱癌が、筋層非浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）または筋層浸潤性膀胱癌（ＭＩＢＣ）である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記膀胱癌が、前記１つ以上の腫瘍の前記外科的切除後に前記対象において少なくとも３ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間、再発しない、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
１つ以上の膀胱腫瘍を外科的に切除された対象における膀胱癌の再発を阻害するための方法であって、
（ａ）１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に、タキサン粒子を含む第１の組成物の有効量を切除部位（複数可）に直接注射することであって、タキサン粒子が０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、注射することと、
（ｂ）第１の組成物の注射後に、タキサン溶液または０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有するタキサン粒子を含む第２の組成物の有効量を前記対象の膀胱へ膀胱内注入することによる、第１の（初期）注入と、
（ｃ）前記第１の（初期）注入後にさらに１〜１４回、前記第２の組成物の有効量を前記対象の前記膀胱へ膀胱内注入により注入することと、を含み、
前記膀胱癌は、前記１つ以上の腫瘍の前記外科的切除後に前記対象において少なくとも３ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間、再発せず、それにより、前記膀胱癌の前記再発を阻害する、方法。
【請求項２７】
前記注入が、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月などの定期的な間隔で区切られる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記第１の組成物の前記タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有し、前記第２の組成物がタキサン粒子を含み、前記第２の組成物の前記タキサン粒子が０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有する、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記タキサン粒子が、前記タキサンの少なくとも９５％を構成する、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記第１の組成物の前記タキサン粒子がドセタキセル粒子であり、前記第２の組成物がタキサン粒子を含み、前記第２の組成物の前記タキサン粒子がドセタキセル粒子である、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ドセタキセル粒子が、前記ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ2／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ3〜０．１５ｇ／ｃｍ3のかさ密度（非タップ）を有する、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記第２の組成物がタキサン溶液を含み、前記タキサン溶液がドセタキセル溶液である、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項３４】
前記第１の組成物および／または前記第２の組成物が、アルブミンを除外する、請求項２６〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記第１の組成物が液体担体をさらに含み、前記第１の組成物が、前記液体担体中に分散された前記タキサン粒子の懸濁液を含み、前記第２の組成物がタキサン粒子を含み、前記第２の組成物が液体担体をさらに含み、前記第２の組成物が、前記液体担体中に分散された前記タキサン粒子の懸濁液を含む、請求項２６〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記液体担体が、水性担体である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記水性担体が、生理食塩水溶液を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３８】
前記水性担体が、界面活性剤および／またはエタノールを含む、請求項３６または３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記水性担体が界面活性剤を含み、前記界面活性剤がポリソルベートである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ポリソルベートが、ポリソルベート８０であり、前記ポリソルベート８０が、約０．０１％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖの濃度で前記液体担体中に存在する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記水性担体がエタノールを含み、前記エタノールが約０．１％ｗ／ｖ〜約８％ｗ／ｖの濃度で存在する、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記第１の組成物が希釈剤をさらに含み、前記担体および前記希釈剤が混合物を形成し、前記第１の組成物が前記担体／希釈剤混合物中に分散された前記タキサン粒子の懸濁液であり、前記第２の組成物がタキサン粒子を含み、前記第２の組成物が希釈剤をさらに含み、前記液体担体および前記希釈剤が混合物を形成し、前記第２の組成物が前記液体担体／希釈剤混合物中に分散された前記タキサン粒子の懸濁液である、請求項３５〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記希釈剤が、生理食塩水溶液である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記第１の組成物中の前記ドセタキセル粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４ｍｇ／ｍＬである、請求項３０〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記第２の組成物がドセタキセル粒子を含み、前記第２の組成物中の前記ドセタキセル粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬである、請求項３０〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記第２の組成物の注入体積が、約２５ｍＬである、請求項２６〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記膀胱癌が、前記１つ以上の膀胱腫瘍の前記外科的切除前の、筋層非浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）または筋層浸潤性膀胱癌（ＭＩＢＣ）である、請求項２６〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記方法が、前記切除部位周辺の前記切除部位縁部の外側の領域に前記第１の組成物を直接注射することをさらに含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１８年１月５日に提出された米国仮特許出願第６２／６１４０６４号、２０１８年１２月１３日に提出された第６２／７７９３１７号、２０１８年５月３１日に提出された第６２／６７８４７０号、２０１８年１０月３日に提出された第６２／７４０４８９号、２０１８年１２月１３日に提出された第６２／７７９３２７号、２０１８年１０月３日に提出された第６２／７４０５０１号、および２０１８年１２月１３日に提出された第６２／７７９３２０号の優先権を主張し、これらはそれぞれ全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、概して、膀胱癌の治療に関する。
【背景技術】
【０００３】
膀胱癌は泌尿器系で最も一般的な癌であり、米国のすべての新規癌の約５％を占めている。膀胱癌は米国で６番目に多い癌であり、その疾患により２０１７年に予測される新規患者数は推定７９，０３０人で、６，８７０人が死亡している。膀胱癌のほとんどの患者（約７５％）は、筋層非浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）として分類される、粘膜または粘膜下組織に限局する疾患と診断される。ＮＭＩＢＣはさらに、低リスク、中リスク、または高リスクに階層化される。高リスクのＮＭＩＢＣ患者のほとんどは、経尿道的膀胱腫瘍切除術（ＴＵＲＢＴ）とその後の膀胱内化学療法を用いて治療される。膀胱内使用のために現在ＦＤＡによって承認されている３つの治療法、カルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）、バルルビシン、およびチオテパは不完全である。多くの患者は治療に応答しないか、持続的な応答を達成しないか、および／または深刻な治療関連の毒性に遭遇する。場合によっては、膀胱癌はしばしばこれらの手術の後に、より高悪性度の腫瘍として何度も再発するため、部分的または根治的膀胱切除を含むさらなる治療および手術が必要となる。膀胱癌の治療のための化学療法剤の静脈内（ＩＶ）投与は、末梢神経障害や体重減少などの全身毒性を引き起こす可能性がある。
【０００４】
筋層浸潤性膀胱癌（ＭＩＢＣ）は、積極的な局所および全身療法にもかかわらず、再発率が高く、全体的な予後が不良である。何十年もの間、根治的膀胱切除術は、筋浸潤性膀胱癌の治療の主力であった。優れた局所制御を提供しているにもかかわらず、手術だけでは最適な生存率が得られない。さらに、根治的膀胱切除術は、かなりの罹患率と死亡率、ならびに注目すべき長期的な合併症と生活の質への悪影響に関連している。
【発明の概要】
【０００５】
本開示は、膀胱癌の治療に関する当該技術分野における前述の制限および欠陥に対する解決策を提供する。本明細書に開示されるのは、膀胱癌を治療するための、ならびに外科的腫瘍切除後の膀胱癌の再発を阻害するための組成物および方法である。
【０００６】
一態様では、本明細書では、対象における膀胱癌を治療するかまたは膀胱癌の再発を阻害する方法であって、タキサン粒子を含む第１の組成物の有効量を１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除部位に直接注射することを含み、注射が、対象の１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に行われ、タキサン粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、それにより膀胱癌を治療するか、または膀胱癌の再発を阻害する方法が開示される。いくつかの実施形態では、方法はさらに、第１の組成物の注射後に、タキサン溶液または０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有するタキサン粒子を含む第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入することによる、第１の（初期）注入を含む。いくつかの実施形態では、方法はさらに、第１の（初期）注入後にさらに１〜１４回、第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入により注入することを含む。いくつかの実施形態では、注入は、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月などの定期的な間隔で区切られる。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、ドセタキセル粒子である。いくつかの実施形態では、ドセタキセル粒子は、少なくとも１８ｍ2／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する。いくつかの実施形態では、ドセタキセルの粒子は、０．０５ｇ／ｃｍ3〜０．１５ｇ／ｃｍ3のかさ密度（非タップ）を有する。いくつかの実施形態では、タキサン溶液はドセタキセル溶液である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に対象において少なくとも３ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間、再発しない。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、中リスクまたは高リスクの膀胱癌である。
【０００７】
別の態様では、本明細書に開示されているのは、１つ以上の膀胱腫瘍を外科的に切除された対象における膀胱癌の再発を阻害するための方法であって、（ａ）１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に、タキサン粒子を含む第１の組成物の有効量を切除部位（複数可）に直接注射することであって、タキサン粒子が０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、注射することと、（ｂ）第１の組成物の注射後に、タキサン溶液または０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有するタキサン粒子を含む第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入することによる、第１の（初期）注入と、（ｃ）第１の（初期）注入後にさらに１〜１４回、第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入により注入することと、を含み、膀胱癌は、１つ以上の腫瘍の外科的切除後に対象において少なくとも３ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間、再発せず、それにより、膀胱癌の再発を阻害する、方法である。いくつかの実施形態では、注入は、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月などの定期的な間隔で区切られる。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、ドセタキセル粒子である。いくつかの実施形態では、ドセタキセル粒子は、少なくとも１８ｍ2／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する。いくつかの実施形態では、ドセタキセルの粒子は、０．０５ｇ／ｃｍ3〜０．１５ｇ／ｃｍ3のかさ密度（非タップ）を有する。いくつかの実施形態では、タキサン溶液はドセタキセル溶液である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除前の、中間リスクまたは高リスクの膀胱癌であった。
【０００８】
本明細書で開示される別の態様は、対象における膀胱癌を治療する方法であり、この方法は、（ａ）腫瘍内注射を介して対象の膀胱腫瘍にタキサン粒子を含む組成物の有効量の第１の投与（第１のサイクル）を投与することであって、ここで、タキサン粒子は０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、投与することと、（ｂ）任意選択的に、（ａ）の第１の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第２の投与（第２のサイクル）を投与することと、（ｃ）任意選択的に、（ｂ）の第２の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第３の投与（第３のサイクル）を投与することと、それにより、膀胱癌を治療することと、を含む。いくつかの実施形態では、方法は、組成物の１回以上の追加投与を、各投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、定期的な間隔は、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月である。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、ドセタキセル粒子である。いくつかの実施形態では、ドセタキセル粒子は、少なくとも１８ｍ2／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する。いくつかの実施形態では、ドセタキセルの粒子は、０．０５ｇ／ｃｍ3〜０．１５ｇ／ｃｍ3のかさ密度（非タップ）を有する。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、低リスクの膀胱癌である。他の実施形態では、膀胱癌は、中リスクまたは高リスクの膀胱癌である。
【０００９】
さらに別の態様では、タキサン粒子を含む組成物の殺腫瘍用量を、膀胱癌を有する対象の膀胱腫瘍に投与する方法が開示され、この方法は、（ａ）腫瘍内注射を介して対象の膀胱腫瘍へタキサン粒子を含む組成物の有効量の第１の投与（第１のサイクル）を投与することであって、ここで、タキサン粒子は０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、投与することと、（ｂ）（ａ）の第１の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第２の投与（第２のサイクル）を投与することと、（ｃ）任意選択的に、（ｂ）の第２の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第３の投与（第３のサイクル）を投与することであって、ここで、膀胱腫瘍が除去される、投与することと、を含む。いくつかの実施形態では、定期的な間隔は、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月である。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、ドセタキセル粒子である。いくつかの実施形態では、ドセタキセル粒子は、少なくとも１８ｍ2／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する。いくつかの実施形態では、ドセタキセルの粒子は、０．０５ｇ／ｃｍ3〜０．１５ｇ／ｃｍ3のかさ密度（非タップ）を有する。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、低リスクの膀胱癌である。他の実施形態では、膀胱癌は、中リスクまたは高リスクの膀胱癌である。
【００１０】
別の態様は、本開示の方法がまた、腫瘍の治療に十分なレベルで腫瘍部位内および／または腫瘍部位の周囲に殺腫瘍性細胞の産生および殺腫瘍性細胞の浸潤をもたらす、対象の内因性免疫系を刺激するのに十分な持続的な時間にわたって、組成物の投与後にタキサン粒子の膀胱腫瘍への曝露を可能とすることである。いくつかの実施形態では、内因性免疫系の刺激が細胞性（細胞媒介性）免疫応答を生じる。他の実施形態では、内因性免疫系の刺激が体液性免疫応答を生じる。いくつかの実施形態では、転移が低減または排除される。いくつかの実施形態では、殺腫瘍性細胞は、樹状細胞、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、リンパ球、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、曝露時間は少なくとも４週間である。いくつかの実施形態では、持続的な曝露時間は、少なくとも１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、３２４、または３３６時間である。様々なさらなる実施形態では、持続的な曝露時間は、少なくとも３、４、５、６、７、または８週間である。
【００１１】
また、本明細書では、以下の実施形態１〜９４を開示する。
実施形態１．対象における膀胱癌を治療するかまたは膀胱癌の再発を阻害する方法であって、タキサン粒子を含む第１の組成物の有効量を１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除部位に直接注射することを含み、注射が、対象の１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に行われ、タキサン粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、それにより膀胱癌を治療するか、または膀胱癌の再発を阻害することを含む、方法。
実施形態２．方法がさらに、第１の組成物の注射後に、タキサン溶液または０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有するタキサン粒子を含む第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入することによる、第１の（初期）注入を含む、実施形態１に記載の方法。
実施形態３．方法がさらに、第１の（初期）注入後にさらに１〜１４回、第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入により注入することを含む、実施形態２に記載の方法。
実施形態４．注入が、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月などの定期的な間隔で区切られる、実施形態３に記載の方法。
実施形態５．第１の組成物のタキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有し、第２の組成物がタキサン粒子を含み、第２の組成物のタキサン粒子が０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有する、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６．タキサン粒子が、タキサンの少なくとも９５％を構成する、実施形態１〜５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７．第１の組成物のタキサン粒子がドセタキセル粒子であり、第２の組成物がタキサン粒子を含み、第２の組成物のタキサン粒子がドセタキセル粒子である、実施形態１〜６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８．ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態７に記載の方法。
実施形態９．ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態７または８に記載の方法。
実施形態１０．第２の組成物がタキサン溶液を含み、タキサン溶液がドセタキセル溶液である、実施形態２または３に記載の方法。
実施形態１１．第１の組成物および／または第２の組成物が、アルブミンを除外する、実施形態１〜１０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１２．第１の組成物が液体担体をさらに含み、第１の組成物が、液体担体中に分散されたタキサン粒子の懸濁液を含み、第２の組成物がタキサン粒子を含み、第２の組成物が液体担体をさらに含み、第２の組成物が、液体担体中に分散されたタキサン粒子の懸濁液を含む、実施形態１〜１１のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１３．液体担体が、水性担体である、実施形態１２に記載の方法。
実施形態１４．水性担体が、生理食塩水溶液を含む、実施形態１３に記載の方法。
実施形態１５．水性担体が、界面活性剤および／またはエタノールを含む、実施形態１３または１４に記載の方法。
実施形態１６．水性担体が界面活性剤を含み、界面活性剤がポリソルベートである、実施形態１５に記載の方法。
実施形態１７．ポリソルベートが、ポリソルベート８０であり、ポリソルベート８０が、約０．０１％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖの濃度で液体担体中に存在する、実施形態１６に記載の方法。
実施形態１８．水性担体がエタノールを含み、エタノールが約０．１％ｗ／ｖ〜約８％ｗ／ｖの濃度で存在する、実施形態１５〜１７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９．第１の組成物が希釈剤をさらに含み、液体担体および希釈剤が混合物を形成し、第１の組成物が、液体担体／希釈剤混合物中に分散されたタキサン粒子の懸濁液であり、第２の組成物がタキサン粒子を含み、第２の組成物が希釈剤をさらに含み、液体担体および希釈剤が混合物を形成し、第２の組成物が、液体担体／希釈剤混合物中に分散されたタキサン粒子の懸濁液である、実施形態１２〜１８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２０．希釈剤が、生理食塩水溶液である、実施形態１９に記載の方法。
実施形態２１．第１の組成物中のドセタキセル粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４ｍｇ／ｍＬである、実施形態７〜２０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２２．第２の組成物がドセタキセル粒子を含み、第２の組成物中のドセタキセル粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬである、実施形態７〜２０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２３．第２の組成物の注入体積が、約２５ｍＬである、実施形態２〜２２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２４．膀胱癌が、筋層非浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）または筋層浸潤性膀胱癌（ＭＩＢＣ）である、実施形態１〜２３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２５．膀胱癌が、１つ以上の腫瘍の外科的切除後に対象において少なくとも３ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間、再発しない、実施形態１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
実施形態２６．１つ以上の膀胱腫瘍を外科的に切除された対象における膀胱癌の再発を阻害するための方法であって、
（ａ）１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に、タキサン粒子を含む第１の組成物の有効量を切除部位（複数可）に直接注射することであって、タキサン粒子が０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、注射することと、
（ｂ）第１の組成物の注射後に、タキサン溶液または０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有するタキサン粒子を含む第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入することによる、第１の（初期）注入と、
（ｃ）第１の（初期）注入後にさらに１〜１４回、第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入により注入することと、を含み、
膀胱癌は、１つ以上の腫瘍の外科的切除後に対象において少なくとも３ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間、再発せず、それにより、膀胱癌の再発を阻害する、方法。
実施形態２７．注入が、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月などの定期的な間隔で区切られる、実施形態２６に記載の方法。
実施形態２８．第１の組成物のタキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有し、第２の組成物がタキサン粒子を含み、第２の組成物のタキサン粒子が０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有する、実施形態２６または２７に記載の方法。
実施形態２９．タキサン粒子が、タキサンの少なくとも９５％を構成する、実施形態２６〜２８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３０．第１の組成物のタキサン粒子がドセタキセル粒子であり、第２の組成物がタキサン粒子を含み、第２の組成物のタキサン粒子がドセタキセル粒子である、実施形態２６〜２９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３１．ドセタキセル粒子が、ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態３０に記載の方法。
実施形態３２．ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態３０または３１に記載の方法。
実施形態３３．第２の組成物がタキサン溶液を含み、タキサン溶液がドセタキセル溶液である、実施形態２６または２７に記載の方法。
実施形態３４．第１の組成物および／または第２の組成物が、アルブミンを除外する、実施形態２６〜３３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３５．第１の組成物が液体担体をさらに含み、第１の組成物が、液体担体中に分散されたタキサン粒子の懸濁液を含み、第２の組成物がタキサン粒子を含み、第２の組成物が液体担体をさらに含み、第２の組成物が、液体担体中に分散されたタキサン粒子の懸濁液を含む、実施形態２６〜３４のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３６．液体担体が、水性担体である、実施形態３５に記載の方法。
実施形態３７．水性担体が、生理食塩水溶液を含む、実施形態２６に記載の方法。
実施形態３８．水性担体が、界面活性剤および／またはエタノールを含む、実施形態３６または３７に記載の方法。
実施形態３９．水性担体が界面活性剤を含み、界面活性剤がポリソルベートである、実施形態３８に記載の方法。
実施形態４０．ポリソルベートが、ポリソルベート８０であり、ポリソルベート８０が、約０．０１％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖの濃度で液体担体中に存在する、実施形態３９に記載の方法。
実施形態４１．水性担体がエタノールを含み、エタノールが約０．１％ｗ／ｖ〜約８％ｗ／ｖの濃度で存在する、実施形態３８〜４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４２．第１の組成物が希釈剤をさらに含み、担体および希釈剤が混合物を形成し、第１の組成物が担体／希釈剤混合物中に分散されたタキサン粒子の懸濁液であり、第２の組成物がタキサン粒子を含み、第２の組成物が希釈剤をさらに含み、液体担体および希釈剤が混合物を形成し、第２の組成物が液体担体／希釈剤混合物中に分散されたタキサン粒子の懸濁液である、実施形態３５〜４１のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４３．希釈剤が、生理食塩水溶液である、実施形態４２に記載の方法。
実施形態４４．第１の組成物中のドセタキセル粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４ｍｇ／ｍＬである、実施形態３０〜４３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４５．第２の組成物がドセタキセル粒子を含み、第２の組成物中のドセタキセル粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬである、実施形態３０〜４４のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４６．第２の組成物の注入体積が、約２５ｍＬである、実施形態２６〜４５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４７．膀胱癌が、１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除前の、筋層非浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）または筋層浸潤性膀胱癌（ＭＩＢＣ）である、実施形態２６〜４６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４８．対象において膀胱癌を治療する方法であって、
（ａ）腫瘍内注射を介して対象の膀胱腫瘍へタキサン粒子を含む組成物の有効量の第１の投与（第１のサイクル）を投与することであって、ここで、タキサン粒子は０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、投与することと、
（ｂ）（ａ）の第１の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第２の投与（第２のサイクル）を投与することと、
（ｃ）任意選択的に、（ｂ）の第２の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第３の投与（第３のサイクル）を投与することと、
それにより、膀胱癌を治療することと、を含む、方法。
実施形態４９．組成物の１回以上の追加投与を、各投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に投与することをさらに含む、実施形態４８に記載の方法。
実施形態５０．定期的間隔が、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月である、実施形態４８または４９に記載の方法。
実施形態５１．タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有する、実施形態４８〜５０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５２．タキサン粒子が、タキサンの少なくとも９５％を構成する、実施形態４８〜５１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５３．タキサン粒子が、ドセタキセル粒子である、実施形態４８〜５２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５４．ドセタキセル粒子が、ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態５３に記載の方法。
実施形態５５．ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態５３または５４に記載の方法。
実施形態５６．組成物および／またはタキサン粒子が、アルブミンを除外する、実施形態４８〜５５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５７．組成物が液体担体をさらに含み、組成物が、液体担体中に分散されたタキサン粒子の懸濁液を含む、実施形態４８〜５６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５８．液体担体が、水性担体である、実施形態５７に記載の方法。
実施形態５９．水性担体が、生理食塩水溶液を含む、実施形態５８に記載の方法。
実施形態６０．水性担体が、界面活性剤および／またはエタノールを含む、実施形態５８または５９に記載の方法。
実施形態６１．水性担体が界面活性剤を含み、界面活性剤がポリソルベートである、実施形態６０に記載の方法。
実施形態６２．ポリソルベートが、ポリソルベート８０であり、ポリソルベート８０が、約０．０１％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖの濃度で液体担体中に存在する、実施形態６１に記載の方法。
実施形態６３．水性担体がエタノールを含み、エタノールが約０．１％ｗ／ｖ〜約８％ｗ／ｖの濃度で存在する、実施形態６０〜６２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６４．組成物が希釈剤をさらに含み、担体および希釈剤が混合物を形成し、組成物が担体／希釈剤混合物中に分散したタキサン粒子の懸濁液である、実施形態５７〜６３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６５．希釈剤が、生理食塩水溶液である、実施形態６４に記載の方法。
実施形態６６．組成物中のドセタキセル粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬである、実施形態５３〜６５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６７．膀胱癌が低リスクの膀胱癌である、実施形態４８〜６６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６８．膀胱癌が中リスクまたは高リスクの膀胱癌である、実施形態４８〜６６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６９．タキサン粒子を含む組成物の殺腫瘍用量を、膀胱癌を有する対象の膀胱腫瘍に投与する方法であって、
（ａ）腫瘍内注射を介して対象の膀胱腫瘍へタキサン粒子を含む組成物の有効量の第１の投与（第１のサイクル）を投与することであって、ここで、タキサン粒子は０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、投与することと、
（ｂ）（ａ）の第１の投与後の定期的な間隔内で腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第２の投与（第２のサイクル）を投与することと、
（ｃ）任意選択的に、（ｂ）の第２の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第３の投与（第３のサイクル）を投与することであって、
ここで、膀胱腫瘍が除去される、投与することと、を含む、方法。
実施形態７０．定期的間隔が、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月である、任意の実施形態６９に記載の方法。
実施形態７１．タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロン、または０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有する、実施形態６９または７０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７２．タキサン粒子が、タキサンの少なくとも９５％を構成する、実施形態６９〜７１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７３．タキサン粒子が、ドセタキセル粒子である、実施形態６９〜７２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７４．ドセタキセル粒子が、ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態７３に記載の方法。
実施形態７５．ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態７３または７４に記載の方法。
実施形態７６．組成物および／またはタキサン粒子が、アルブミンを除外する、実施形態６９〜７５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７７．組成物が液体担体をさらに含み、組成物が、液体担体中に分散されたタキサン粒子の懸濁液を含む、実施形態６９〜７６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７８．液体担体が、水性担体である、実施形態７７に記載の方法。
実施形態７９．水性担体が、生理食塩水溶液を含む、実施形態７８に記載の方法。
実施形態８０．水性担体が、界面活性剤および／またはエタノールを含む、実施形態７８または７９に記載の方法。
実施形態８１．水性担体が界面活性剤を含み、界面活性剤がポリソルベートである、実施形態８０に記載の方法。
実施形態８２．ポリソルベートが、ポリソルベート８０であり、ポリソルベート８０が、約０．０１％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖの濃度で液体担体中に存在する、実施形態８１に記載の方法。
実施形態８３．水性担体がエタノールを含み、エタノールが約０．１％ｗ／ｖ〜約８％ｗ／ｖの濃度で存在する、実施形態８０〜８２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８４．組成物が希釈剤をさらに含み、担体および希釈剤が混合物を形成し、組成物が担体／希釈剤混合物中に分散したタキサン粒子の懸濁液である、実施形態７７〜８３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８５．希釈剤が、生理食塩水溶液である、実施形態８４に記載の方法。
実施形態８６．組成物中のドセタキセル粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬである、実施形態７３〜８５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８７．膀胱癌が低リスクの膀胱癌である、実施形態６９〜８６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８８．膀胱癌が中リスクまたは高リスクの膀胱癌である、実施形態６９〜８６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８９．タキサン粒子を組成物の投与後に腫瘍部位に在留させて、腫瘍の治療に十分なレベルで腫瘍部位内および／または腫瘍部位の周囲に殺腫瘍性細胞の産生および殺腫瘍性細胞の浸潤をもたらす、対象の内因性免疫系を刺激するのに十分な持続的な時間にわたって、組成物の投与後に腫瘍をタキサン粒子に曝露させる、実施形態４８〜８８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９０．内因性免疫系の刺激が細胞性免疫応答を生じる、実施形態８９に記載の方法。
実施形態９１．内因性免疫系の刺激が体液性免疫応答を生じる、実施形態８９に記載の方法。
実施形態９２．前記持続的な時間が、少なくとも４週間である、実施形態８９〜９１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９３．殺腫瘍性細胞が、樹状細胞、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、リンパ球、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはそれらの組み合わせを含む、実施形態８９〜９２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９４．方法が、切除部位周辺の切除部位縁部の外側の領域に第１の組成物を直接注射することをさらに含む、実施形態１〜４７のいずれか１つに記載の方法。
【００１２】
本明細書で考察される任意の実施形態が、本開示の任意の方法または組成物に関して実行され得、逆もまた同様であることが企図される。さらに、本開示の組成物が本開示の方法を達成するために使用され得る。
【００１３】
本開示の実施形態の説明は、網羅的であることも、本開示を、開示された正確な形態に限定することも意図していない。本開示の特定の実施形態および実施例は、例示目的で本明細書に記載されているが、当業者が認識するように、本開示の範囲内で様々な同等の修正が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ウサギ膀胱壁への色素の直接注射の研究のための９つの注射部位の投与計画である。
【図２】ウサギ膀胱壁の第１ノ注射部位へ第１ノ色素注射をした後の写真である。
【図３】ウサギ膀胱壁の第９ノ注射部位へ第９ノ色素注射をした後の写真である。
【図４】ヒト膀胱癌（ＵＭ−ＵＣ−３）マウス異種移植片モデルにおける腫瘍移植後１７日目（治療１日目）〜６１日目の平均腫瘍体積のグラフである。矢印は、投与サイクル日数を示している。
【図５】ヒト膀胱癌（ＵＭ−ＵＣ−３）マウス異種移植片モデルにおける、ビヒクルＩＴ投与（３サイクル）についての、腫瘍移植後１７日目（治療１日目）〜６１日目の各動物の腫瘍体積のグラフである。
【図６】ヒト膀胱癌（ＵＭ−ＵＣ−３）マウス異種移植片モデルにおける、ドセタキセルＩＶ投与（３サイクル）についての、腫瘍移植後１７日目（治療１日目）〜６１日目の各動物の腫瘍体積のグラフである。
【図７】ヒト膀胱癌（ＵＭ−ＵＣ−３）マウス異種移植片モデルにおける、ナノ粒子ドセタキセル（ｎＤｏｃｅ）ＩＴ投与（１サイクル）についての、腫瘍移植後１７日目（治療１日目）〜６１日目の各動物の腫瘍体積のグラフである。
【図８】ヒト膀胱癌（ＵＭ−ＵＣ−３）マウス異種移植片モデルにおける、ｎＤｏｃｅＩＴ投与（２サイクル）についての、腫瘍移植後１７日目（治療１日目）〜６１日目の各動物の腫瘍体積のグラフである。
【図９】ヒト膀胱癌（ＵＭ−ＵＣ−３）マウス異種移植片モデルにおける、ｎＤｏｃｅ  ＩＴ投与（３サイクル）についての、腫瘍移植後１７日目（治療１日目）〜６１日目の各動物の腫瘍体積のグラフである。
【図１０】ヒト膀胱癌（ＵＭ−ＵＣ−３）マウス異種移植片モデルにおける、治療１日目対研究終了時の、動物あたりの腫瘍体積の散布図である。
【図１１】ヒト膀胱癌（ＵＭ−ＵＣ−３）マウス異種移植片モデルにおける腫瘍移植後１７日目（治療１日目）〜６１日目の平均動物体重のグラフである。
【図１２】膀胱癌異種移植片研究からの各投与群についての、６１日目における平均腫瘍体積のグラフである。
【図１３】膀胱癌異種移植片研究からの腫瘍移植後２７日目、４０日目、および６１日目の各投与群からの動物の写真である。
【図１４】膀胱癌異種移植片研究からのｎＤｏｃｅ１サイクル、２サイクル、および３サイクルについての、腫瘍組織内のドセタキセルの濃度のグラフである。
【図１５】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＴビヒクル対照Ｈ＆Ｅの顕微鏡写真である。倍率２．５２×。
【図１６】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＴビヒクル対照Ｈ＆Ｅの顕微鏡写真である。倍率６．３×。
【図１７】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＴビヒクル対照Ｈ＆Ｅの顕微鏡写真である。倍率２５．２×。
【図１８】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＶドセタキセル３サイクルＨ＆Ｅの顕微鏡写真である。倍率２．５２×。
【図１９】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＶドセタキセル３サイクルＨ＆Ｅの顕微鏡写真である。倍率６．３×。
【図２０】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＶドセタキセル３サイクルＨ＆Ｅの顕微鏡写真である。倍率２５．２×。
【図２１】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＴ  ｎＤｏｃｅ  ２サイクルＨ＆Ｅの顕微鏡写真である。倍率２．５２×。
【図２２】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＴ  ｎＤｏｃｅ  ２サイクルＨ＆Ｅの顕微鏡写真である。倍率６．３×。
【図２３】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＴ  ｎＤｏｃｅ  ３サイクルＨ＆Ｅの顕微鏡写真である。倍率２．５２×。
【図２４】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＴ  ｎＤｏｃｅ  ３サイクルＨ＆Ｅの顕微鏡写真である。倍率２．５２×。
【図２５】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＴ  ｎＤｏｃｅ  ３サイクルＨ＆Ｅの顕微鏡写真である。倍率２５．２×。
【図２６】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＴビヒクル対照３サイクルＦ４／８０染色の顕微鏡写真である。倍率２．５２×。
【図２７】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＶドセタキセル３サイクルＦ４／８０染色の顕微鏡写真である。倍率２．５２×。
【図２８】膀胱癌異種移植片組織スライド−ＩＴ  ｎＤｏｃｅ  ３サイクルＦ４／８０染色の顕微鏡写真である。倍率２．５２×。
【図２９】膀胱癌異種移植片組織スライドの対照症例の様々な顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ染色およびＣＤ６８染色。
【図３０】膀胱癌異種移植片組織スライドのＩＴ  ｎＤｏｃｅ症例の様々な顕微鏡写真である。１行目：１サイクルのｎＤｏｃｅ（１×）。２行目：２サイクルのｎＤｏｃｅ治療（２ｘ）。３行目：２サイクルのｎＤｏｃｅ治療（２×）。４行目：３サイクルのｎＤｏｃｅ治療（３ｘ）。
【図３１】様々なパクリタキセル製剤からの、パクリタキセル（ブタ膀胱膜を横切って経時的に送達されたパクリタキセル活性薬物の用量）の流れのグラフである。
【図３２】様々なパクリタキセル製剤からの、パクリタキセル（ブタ腸膜を横切って経時的に送達されたパクリタキセル活性薬物の用量）の流れのグラフである。
【図３３】様々なドセタキセル製剤からの、ドセタキセル（ブタ膀胱膜を横切って経時的に送達されたドセタキセル活性薬物の用量）の流れのグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本明細書に開示されるのは、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有するタキサン粒子の組成物の局所投与により達成される、膀胱癌を治療するための、ならびに外科的腫瘍切除後の膀胱癌の再発を阻害するための組成物および方法である。タキサン粒子は、任意の他の物質に結合またはカプセル化されていない固体粒子である。組成物の局所投与は、腫瘍内注射または腫瘍切除部位への直接注射などの直接注射、および／または膀胱内注入を含む。
【００１６】
一態様では、本明細書では、対象における膀胱癌を治療するかまたは膀胱癌の再発を阻害する方法であって、タキサン粒子を含む第１の組成物の有効量を１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除部位に直接注射することを含み、注射が、対象の１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に行われ、タキサン粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、それにより膀胱癌を治療するか、または膀胱癌の再発を阻害する方法が開示される。いくつかの実施形態では、方法はさらに、第１の（初期）注入後にさらに１〜１４回、第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入により注入することを含む。いくつかの実施形態では、注入は、約１週間、または約２週間、または約３週間、または約１ヶ月、または約２ヶ月、または約３ヶ月などの定期的な間隔で区切られる。
【００１７】
別の態様では、本明細書に開示されているのは、１つ以上の膀胱腫瘍を外科的に切除された対象における膀胱癌の再発を阻害するための方法であって、（ａ）１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に、タキサン粒子を含む第１の組成物の有効量を切除部位（複数可）に直接注射することであって、タキサン粒子が０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、注射することと、（ｂ）第１の組成物の注射後に、タキサン溶液または０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有するタキサン粒子を含む第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入することによる、第１の（初期）注入と、（ｃ）第１の（初期）注入後にさらに１〜１４回、第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入により注入することと、を含み、膀胱癌は、１つ以上の腫瘍の外科的切除後に対象において少なくとも３ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間、再発せず、それにより、膀胱癌の再発を阻害する、方法である。いくつかの実施形態では、注入は、約１週間、または約２週間、または約３週間、または約１ヶ月、または約２ヶ月、または約３ヶ月などの定期的な間隔で区切られる。
【００１８】
本明細書で開示される別の態様は、対象において膀胱癌を治療する方法であり、この方法は、（ａ）腫瘍内注射を介して対象の膀胱腫瘍にタキサン粒子を含む組成物の有効量の第１の投与（第１のサイクル）を投与することであって、ここで、タキサン粒子は０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、投与することと、（ｂ）任意選択的に、（ａ）の第１の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第２の投与（第２のサイクル）を投与することと、（ｃ）任意選択的に、（ｂ）の第２の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第３の投与（第３のサイクル）を投与することと、それにより、膀胱癌を治療することと、を含む。いくつかの実施形態では、方法は、組成物の１回以上の追加投与を、各投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、定期的な間隔は、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月である。
【００１９】
さらに別の態様では、本明細書では、タキサン粒子を含む組成物の殺腫瘍用量を、膀胱癌を有する対象の膀胱腫瘍に投与する方法が開示され、この方法は、（ａ）腫瘍内注射を介して対象の膀胱腫瘍へタキサン粒子を含む組成物の有効量の第１の投与（第１のサイクル）を投与することであって、ここで、タキサン粒子は０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、投与することと、（ｂ）（ａ）の第１の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第２の投与（第２のサイクル）を投与することと、（ｃ）任意選択的に、（ｂ）の第２の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第３の投与（第３のサイクル）を投与することであって、ここで、膀胱腫瘍が除去される、投与することと、を含む。いくつかの実施形態では、定期的な間隔は、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月である。
【００２０】
理論に拘束されないが、タキサン粒子（パクリタキセル粒子またはドセタキセル粒子を含むがこれらに限定されない）を含む組成物が局所投与される、すなわち、膀胱腫瘍に直接注入される（腫瘍内注入）、および／または外科的に切除された膀胱腫瘍の切除部位に直接注入される、および／または膀胱内注入により膀胱に注入されると、タキサン粒子は、タキサンの溶液またはアルブミンでコーティングされたタキサン粒子よりも長い時間堆積し続けるため、タキサンが粒子からゆっくりと放出されるデポー効果を作り出し、その結果、周囲の組織がタキサンに長時間局所的に曝露されるということが仮定される。また、タキサン粒子の物理的特性により、粒子は、膀胱内注入により膀胱に注入されると、膀胱の内層に付着し、膀胱の内層の折り目に埋め込まれ、タキサンの溶液またはアルブミンでコーティングされたタキサン粒子よりも滞留時間が長くなり、効果が向上するということが仮定される。タキサン溶液の静脈内（ＩＶ）投与に勝るタキサン粒子の局所投与の利点は、ＩＶ投与で見られるような重篤な全身毒性の回避である。
【００２１】
本明細書に開示される方法の別の利点は、組成物の腫瘍内投与後の持続的な時間にわたるタキサン粒子の膀胱癌腫瘍への曝露が、内因性免疫系を刺激して、（１）樹状細胞、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、リンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの殺腫瘍性細胞の産生をもたらす、および（２）これらの殺腫瘍性細胞の腫瘍部位内および／または周囲への浸潤により腫瘍破壊を誘発するのに十分であることである。いくつかの実施形態では、持続的な曝露時間は、少なくとも４週間である。いくつかの実施形態では、持続的な曝露時間は、少なくとも１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、３２４、または３３６時間である。様々なさらなる実施形態では、持続的な曝露時間は、少なくとも３、４、５、６、７、または８週間である。いかなる特定の機構にも限定されないが、そのような効果は、例えば、リンパ球が腫瘍に対するそれらの先天性免疫応答ならびに適応免疫応答の両方を活性化するのに十分な時間を提供することを含み得る。いかなる特定の機構にも限定されないが、膀胱腫瘍へのタキサン粒子の腫瘍内への投与による局所腫瘍細胞死滅は、樹状細胞に付着した腫瘍細胞抗原を放出する。活性化された樹状細胞は、次いで、患者の血管系全体を循環するＴ細胞および他の殺腫瘍細胞に腫瘍特異的抗原を提示し、かつ患者全体にわたる癌の破壊を可能にする腫瘍を含有する組織に侵入し得る。したがって、本明細書で開示される方法は、直接的な局所療法、ならびに間接的な免疫系媒介局所および全身癌細胞死滅を可能とする。例えば、本明細書に開示される方法は、免疫応答を刺激するためのアジュバントとして作用するタキサン分子を提供する。タキサンの局所濃度は、４日間よりも長く、または少なくとも１４日間、または少なくとも４週間、上昇したままであり、これは、局所腫瘍細胞の死滅のために、ならびに全身に広範囲に広がり得る癌の死滅に適した免疫応答の刺激のために、腫瘍細胞がタキサンに曝露されるのに十分な時間を提供する。タキサン粒子の局所投与による免疫系のこの刺激は、患者の循環血液中に付随する高レベルのタキサンを産生することなく生じる。したがって、粒子タキサンの局所投与は、リンパ球などの白血球数の低減を伴う骨髄の造血を低減しない。骨髄抑制は、高濃度の循環タキサンによるＩＶ投与時のタキサンの一般的な副作用である。したがって、タキサン粒子を腫瘍内に投与することは、内因性免疫系を刺激することにおけるその効果を考えると、事実上腫瘍ワクチンである。
【００２２】
いくつかの実施形態では、内因性免疫系の刺激が細胞性（細胞媒介性）免疫応答を生じる。他の実施形態では、内因性免疫系の刺激が体液性免疫応答を生じる。いくつかの実施形態では、腫瘍は、三次リンパ構造の産生および腫瘍浸潤の結果として治療される。いくつかの実施形態では、転移が低減または排除される。
【００２３】
膀胱腫瘍を有する対象の内因性免疫系を刺激して、三次リンパ構造（ＴＬＳ）を産生するための方法も本明細書に開示される。膀胱腫瘍を有する対象において三次リンパ構造を産生する方法が開示され、この方法は、タキサン粒子を含む組成物を対象の腫瘍に腫瘍内投与することを含み、タキサン粒子は、組成物の投与後に、腫瘍部位に在留され、腫瘍部位内および／または腫瘍部位の周囲に三次リンパ構造の産生、および三次リンパ構造の浸潤をもたらす、対象の内因性免疫系を刺激するのに十分な持続的な時間にわたって、腫瘍をタキサン粒子に曝露させる。内因性免疫系の刺激は、細胞性（細胞介在性）免疫応答または体液性免疫応答を生じさせることができる。いくつかの実施形態では、転移が低減または排除される。持続的な曝露時間は、少なくとも１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、３２４、もしくは３３６時間にすることができ、または少なくとも３、４、５、６、７、もしくは８週間にすることができる。
【００２４】
本発明者らは、驚くべきことに、本明細書に開示される腫瘍内注射法が内因性免疫系を刺激し、腫瘍部位内およびその周囲に浸潤して腫瘍破壊を誘発する三次リンパ構造の産生をもたらすことを見出した。二次リンパ器官は、胚形成中に遺伝的に予めプログラムされたプロセスの一部として発達し、主に適応免疫応答を開始し、稀な抗原特異的ナイーブリンパ球と局所組織から排出する抗原提示細胞との間の相互作用の場所を提供する働きをする。二次リンパ組織の器官形成は、三次リンパ構造（ＴＬＳ）の新たなリンパ新生中、成人期に繰り返され、癌を含む様々な病的状態を患う炎症組織に形成され得る。気管支関連リンパ組織などの粘膜関連リンパ組織の臓器形成は、１つのそのような例である。ＴＬＳという用語は、リンパ球の単純なクラスターから、二次リンパ器官に非常によく似た高度化、分離構造まで、異なる組織の構造を指し得る。リンパ節とＴＬＳとの間の顕著な違いは、リンパ節が被包型である場合、ＴＬＳは、臓器または組織内に閉じ込められた免疫細胞および間質細胞の集合を表すことである。
【００２５】
本明細書で使用される場合、膀胱癌に関する用語「腫瘍」は、膀胱の中または上で見出される細胞の異常増殖の悪性腫瘤を意味する。膀胱腫瘍は通常、膀胱の内層（膀胱の尿路上皮または移行上皮）に形成されるが、腫瘍は、膀胱壁の外側から別の癌の転移として形成されることがある。膀胱癌の腫瘍は、膀胱の内壁に限局する場合とそうでない場合がある。腫瘍は、膀胱壁浸潤の状態、臨床病期、病理学的病期、および／または危険因子を含むがこれらに限定されない様々な方法によってさらに分類することができる。例えば、膀胱癌は、腫瘍が膀胱壁にどれだけ浸潤しているかによって、「筋層非浸潤性膀胱癌」（ＮＭＩＢＣ）または筋層浸潤性膀胱癌（ＭＩＢＣ）に分類できる。米国癌合同委員会（ＡＪＣＣ）の「ＴＮＭ」病期分類システムを使用すると、ＮＭＩＢＣには次のものが含まれる：１）内層（膀胱の尿路上皮または移行上皮）に限局され、非浸潤性乳頭癌（Ｔａ）および扁平上皮内癌腫もしくはＣＩＳ（Ｔｉｓ）を含む腫瘍、および２）粘膜下組織（上皮下結合組織）に浸潤しているが、筋層には侵入していない、Ｔ１を含む腫瘍。ＭＩＢＣはより侵襲性が高く、筋層に侵入し（Ｔ２）、筋層を通過してそれを取り囲む脂肪組織層に達し（Ｔ３）、膀胱壁を越えて広がる（Ｔ４）腫瘍を含む。
【００２６】
膀胱癌は、０およびローマ数字のＩ〜ＩＶを使用して、腫瘍の臨床病期によって分類できる。ステージ０は最も初期のステージであり、ステージＩＶは最も進んだステージである。以下は、アメリカ癌協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｏｒｇ／ｃａｎｃｅｒ／ｂｌａｄｄｅｒ−ｃａｎｃｅｒ／ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ−ｄｉａｇｎｏｓｉｓ−ｓｔａｇｉｎｇ／ｓｔａｇｉｎｇ．ｈｔｍｌ）によって公開された定義である。
ステージ０ａ（Ｔａ、Ｎ０、Ｍ０）：癌は非浸潤性乳頭癌腫（Ｔａ）である。それは膀胱の中空の中心に向かって成長しているが、膀胱壁の結合組織または筋肉には成長していない。それは、近くのリンパ節（Ｎ０）や遠隔部位（Ｍ０）には広がっていない。
ステージ０（Ｔｉｓ、Ｎ０、Ｍ０）：癌は、非浸潤性の扁平上皮癌（Ｔｉｓ）であり、非浸潤性扁平上皮内癌（ＣＩＳ）としても知られている。癌は、膀胱の内層のみで成長している。それは膀胱の中空部分に向かって成長しておらず、膀胱壁の結合組織または筋肉にも侵入していない。それは、近くのリンパ節（Ｎ０）や遠隔部位（Ｍ０）には広がっていない。
ステージＩ（Ｔ１、Ｎ０、Ｍ０）：癌は、膀胱の内層の下の結合組織の層まで成長しているが、膀胱壁の筋層には達していない（Ｔ１）。癌は、近くのリンパ節（Ｎ０）や遠隔部位（Ｍ０）には広がっていない。
ステージＩＩ（Ｔ２ａまたはＴ２ｂ、Ｎ０、Ｍ０）：癌は膀胱壁の厚い筋層中に成長しているが、膀胱を取り囲む脂肪組織の層に到達するために完全には筋肉を通過していない（Ｔ２）。癌は、近くのリンパ節（Ｎ０）や遠隔部位（Ｍ０）には広がっていない。
ステージＩＩＩ（Ｔ３ａ、Ｔ３ｂ、またはＴ４ａ、Ｎ０、Ｍ０）：癌は、膀胱を取り囲む脂肪組織の層中に成長している（Ｔ３ａまたはＴ３ｂ）。それは、前立腺、子宮、または膣中に広がっている可能性があるが、骨盤または腹壁中に成長していない（Ｔ４ａ）。癌は、近くのリンパ節（Ｎ０）や遠隔部位（Ｍ０）には広がっていない。
ステージＩＶ：次のいずれかが適用される：Ｔ４ｂ、Ｎ０、Ｍ０：癌は、膀胱壁を通って骨盤または腹壁中に成長している（Ｔ４ｂ）。癌は、近くのリンパ節（Ｎ０）や遠隔部位（Ｍ０）には広がっていない。またはＴ、Ｎ１〜Ｎ３、Ｍ０のいずれか：癌は、近くのリンパ節に広がっているが（Ｎ１〜Ｎ３）、遠隔部位には広がっていない（Ｍ０）。または任意のＴ、任意のＮ、Ｍ１：癌は、遠隔リンパ節または骨、肝臓、肺などの部位に広がっている（Ｍ１）。
【００２７】
膀胱癌は、以下のとおり、Ｍｉｌｌａｎ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚら、２０００によりリスクレベルの群に分類されている：
低リスク：グレード１ステージＴａ疾患または単一のグレード１ステージＴ１腫瘍；
中リスク：複数のグレード１ステージＴ１腫瘍、グレード２ステージＴａ疾患、または単一のグレード２ステージＴ１腫瘍；および
高リスク：複数のグレード２ステージＴ１腫瘍、グレード３ステージＴａおよびＴ１疾患、または上皮内癌（ＣＩＳまたはＴｉｓ）に関連する任意のステージの疾患。
【００２８】
低リスク膀胱癌は、ステージ０、Ｔａ−孤立性または原発性の低悪性度腫瘍を含み得る。中リスクの膀胱癌は、以下も含み得る：ステージ０、Ｔａ−原発性低悪性腫瘍が２つ以下、および／または再発が１年未満、ならびに腫瘍が直径３ｃｍを超えるか、および／または再発が１年未満である。高リスク膀胱癌には、Ｔ１、高悪性度、ＣＩＳ腫瘍も含まれる。
【００２９】
本明細書に記載される組成物および方法は、上記の膀胱癌のカテゴリーおよび分類のいずれかを治療するために使用することができる。
【００３０】
本明細書で使用する場合、膀胱癌に関して「治療する」、「治療」、「治療された」、または「治療する」という用語は、以下の１つまたは複数を達成することを意味する：（ａ）腫瘍サイズを低減すること、（ｂ）腫瘍の成長を低減すること、（ｃ）転移の発生および／または拡大を低減または制限すること、（ｄ）ＩＶ化学療法の１つ以上の副作用の発生を低減または制限すること、（ｅ）腫瘍を排除すること、（ｆ）腫瘍の再発を少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、または少なくとも１２ヶ月間、阻害、予防、または低減すること。ＩＶ化学療法の副作用には、貧血、好中球減少症、血小板減少症、神経毒性、食欲減退、便秘、下痢、脱毛、疲労、吐き気／嘔吐、および疼痛を含むが、これらに限定されない。
【００３１】
本明細書で使用する場合、「腫瘍内注射」という用語は、懸濁液などの組成物の一部またはすべてが膀胱腫瘤に直接注射されることを意味し、単一投与で、腫瘍の１つ以上の注射部位に１回以上の注射を含むことができる。当業者によって理解されるように、そのような直接注射は、例えば、組成物またはその懸濁液の量が多すぎて、すべてを固形腫瘤に直接注射できない場合などの、固形腫瘍の辺縁（「腫瘍周囲」）、および／または周囲の膀胱壁組織中への組成物の一部分の注射を含んでもよい。一実施形態では、組成物またはその懸濁液は、その全体が膀胱腫瘤に注射される。別の実施形態では、単一投与における組成物または懸濁液は、膀胱腫瘤、膀胱腫瘤の辺縁、および／または膀胱腫瘤を囲む膀胱壁組織に部分的に注射される。
【００３２】
本明細書で使用する場合、「懸濁液」という用語は、タキサン粒子が連続担体または連続担体／希釈剤混合物内で分散（懸濁）されている懸濁剤形組成物を意味する。タキサン子は、担体または担体／希釈剤混合物中に完全に分散、部分的に分散、および部分的に溶解することができるが、完全に溶解することはできない。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「対象」または「患者」という用語は、脊椎動物を意味する。いくつかの実施形態では、脊椎動物は、哺乳動物であり得る。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトを含む霊長類であり得る。
【００３４】
本明細書で使用される場合、「膀胱」という用語は、泌尿器膀胱を意味する。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「室温」（ＲＴ）という用語は、１５〜３０℃または２０〜２５℃を意味する。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）」または「界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｅ  ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）」という用語は、水の表面張力を低下させる能力、または２つの非混和性物質間の界面張力を低減する能力を示す化合物または材料または物質を意味する。
【００３７】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈からそうでないことが明確に示されない限り、複数の指示対象を含む。本明細書で使用される場合、「および」は、特に明記しない限り、「または」と互換的に使用される。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「約」または「およそ」という用語は、列挙された測定単位の＋／−５パーセント（５％）を意味する。
【００３９】
本出願について、１桁以上の小数位を有する数値は、標準的な丸めガイドラインを使用して、小数第１位で四捨五入して整数にされ得、すなわち、丸められる数値が５、６、７、８、または９である場合は切り上げられ、丸められる数値が０、１、２、３、または４の場合は切り捨てられ得る。例えば、３．７は、４に丸められ得る。
【００４０】
文脈上明白に他の意味に解すべき場合を除き、本明細書および特許請求の範囲全体を通して、「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「備えること（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの語は、排他的または網羅的な意味とは対照的に包括的または非限定的（ｏｐｅｎ−ｅｎｄｅｄ）な意味で、つまり、「〜が挙げられるが、これらに限定されない）」の意味で解釈されるものとする。単数または複数を使用する語は、それぞれ、複数、単数も含む。さらに、「ｈｅｒｅｉｎ（本明細書において）」、「ａｂｏｖｅ（上に）」、および「ｂｅｌｏｗ（以下に）」といった語、ならびに類似の意味の語は、本出願において使用されるときには、全体としての本出願を指すものであり、本出願のいずれの特定の個所も指すものではない。組成物およびそれらの使用方法は、本明細書全体を通して開示される成分またはステップのうちのいずれかを「含む」、「から本質的になる」、または「からなる」ことができる。「から本質的になる」という語句に関して、本開示の方法の基本的かつ新規な特性は、タキサン粒子の組成物を膀胱腫瘍に、または外科的切除手順後の膀胱腫瘍切除部位に局所投与することによって膀胱癌を治療する、および／または膀胱癌の再発を阻害するそれらの能力である。
【００４１】
タキサン粒子
タキサンは一般に、室温で１０ｍｇ／ｍＬ以下の水への溶解度を有する難水溶性化合物である。タキサンは、抗腫瘍薬および化学療法薬として広く使用されている。本明細書で使用される場合、「タキサン」という用語には、パクリタキセル（Ｉ）、ドセタキセル（ＩＩ）、カバジタキセル（ＩＩＩ）、および任意の他のタキサンもしくはタキサン誘導体が含まれ、その非限定的な例は、タキソールＢ（セファロマニン）、タキソールＣ、タキソールＤ、タキソールＥ、タキソールＦ、タキソールＧ、タキサジエン、バッカチンＩＩＩ、１０−デアセチルバッカチン、タクスキニンＡ、ブレビホリオール、およびタクススピンＤであり、また、タキサンの薬学的に許容される塩も含まれる。
【化１】
2021509663.tif 000002
【化２】
2021509663.tif 000003
【化３】
2021509663.tif 000004
【００４２】
パクリタキセルおよびドセタキセル医薬品有効成分（ＡＰＩ）は、Ｐｈｙｔｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＬＬＣ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａから市販されている。ドセタキセルＡＰＩは、無水の無溶媒ベースで計算されたドセタキセルを９０％以上、または９５％以上、または９７．５％以上含有する。パクリタキセルＡＰＩは、無水の無溶媒ベースで計算されたパクリタキセルを９０％以上、または９５％以上、または９７％以上含有する。いくつかの実施形態では、パクリタキセルＡＰＩおよびドセタキセルＡＰＩは、ＵＳＰおよび／またはＥＰグレードである。パクリタキセルＡＰＩは、半合成化学プロセスから、または植物細胞の発酵または抽出などの天然源から調製され得る。パクリタキセルはまた、商標名ＴＡＸＯＬ（登録商標）によって呼ばれることもあるが、ＴＡＸＯＬ（登録商標）が、静脈内注入前に好適な非経口液で希釈することを目的とした、ポリオキシエチル化ヒマシ油およびエタノール中のパクリタキセルの溶液の商標名であるため、これは誤称である。タキサンＡＰＩは、タキサン粒子を作製するために使用され得る。タキサン粒子は固体粒子である。タキサン粒子は、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、もしくはカバジタキセル粒子、またはタキサンの薬学的に許容される塩の粒子を含む他のタキサン誘導体の粒子であり得る。
【００４３】
タキサン粒子は、直径が約０．１ミクロン〜約５ミクロン（約１００ｎｍ〜約５０００ｎｍ）の平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、直径が約０．１ミクロン〜約１．５ミクロン（約１００ｎｍ〜約１５００ｎｍ）の平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、直径が約０．１ミクロン〜１ミクロン未満（約１００ｎｍ〜１０００ｎｍ未満）の平均粒径（数）を有する。好ましい実施形態では、タキサン粒子は、固体の、コーティングされていない（「ニート」または「裸の」）個々の粒子である。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、いかなる物質にも結合していない。いくつかの実施形態では、タキサン粒子の表面にはいかなる物質も吸収または吸着されていない。いくつかの実施形態では、タキサンまたはタキサン粒子は、いかなる物質内にもカプセル化、含有、封入、または埋め込みされていない。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、いかなる物質でもコーティングされていない。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、タキサンを含有するマイクロエマルション、ナノエマルション、ミクロスフェア、またはリポソームではない。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、モノマー、ポリマー（もしくは生体適合性ポリマー）、タンパク質、界面活性剤、またはアルブミンに結合、それらの中にカプセル化、またはそれらでコーティングされていない。いくつかの実施形態では、モノマー、ポリマー（もしくは生体適合性ポリマー）、タンパク質、界面活性剤、またはアルブミンは、タキサン粒子の表面に吸収または吸着されていない。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、アルブミンを除外する。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子であり、アルブミンを除外する。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、結晶形態である。他の実施形態では、タキサン粒子は、非晶質形態、または結晶形態と非晶質形態の両方の組み合わせである。いくつかの実施形態では、本開示のタキサン粒子は、タキサンの調製中に典型的に見られる微量の不純物および副生成物を含有する。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のタキサンを含み、タキサン粒子が、実質的に純粋なタキサンからなるか、または本質的になることを意味する。
【００４４】
タキサン粒子（パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、またはカバジタキセル粒子を含む）は、０．１ミクロン〜５ミクロン、０．１ミクロン〜２ミクロン、０．１ミクロン〜１．５ミクロン、０．１ミクロン〜１．２ミクロン、０．１ミクロン〜１ミクロン、または０．１ミクロン〜１ミクロン未満、または０．１ミクロン〜０．９ミクロン、０．１ミクロン〜０．８ミクロン、０．１〜０．７ミクロン、０．２ミクロン〜５ミクロン、０．２ミクロン〜２ミクロン、０．２ミクロン〜１．５ミクロン、０．２ミクロン〜１．２ミクロン、０．２ミクロン〜１ミクロン、または０．２ミクロン〜１ミクロン未満、または０．２ミクロン〜０．９ミクロン、０．２ミクロン〜０．８ミクロン、０．２ミクロン〜０．７ミクロン、０．３ミクロン〜５ミクロン、０．３ミクロン〜２ミクロン、０．３ミクロン〜１．５ミクロン、０．３ミクロン〜１．２ミクロン、０．３ミクロン〜１ミクロン、または０．３ミクロン〜１ミクロン未満、または０．３ミクロン〜０．９ミクロン、０．３ミクロン〜０．８ミクロン、０．３ミクロン〜０．７ミクロン、０．４ミクロン〜５ミクロン、０．４ミクロン〜２ミクロン、０．４ミクロン〜１．５ミクロン、０．４ミクロン〜１．２ミクロン、０．４ミクロン〜１ミクロン、または０．４ミクロン〜１ミクロン未満、または０．４ミクロン〜０．９ミクロン、０．４ミクロン〜０．８ミクロン、０．４ミクロン〜０．７ミクロン、０．５ミクロン〜５ミクロン、０．５ミクロン〜２ミクロン、０．５ミクロン〜１．５ミクロン、０．５ミクロン〜１．２ミクロン、０．５ミクロン〜１ミクロン、または０．５ミクロン〜１ミクロン未満、または０．５ミクロン〜０．９ミクロン、０．５ミクロン〜０．８ミクロン、０．５ミクロン〜０．７ミクロン、０．６ミクロン〜５ミクロン、０．６ミクロン〜２ミクロン、０．６ミクロン〜１．５ミクロン、０．６ミクロン〜１．２ミクロン、０．６ミクロン〜１ミクロン、または０．６ミクロン〜１ミクロン未満、または０．６ミクロン〜０．９ミクロン、０．６ミクロン〜０．８ミクロン、０．６ミクロン〜０．７ミクロンの平均粒径（数）を有することができる。
【００４５】
タキサン粒子の粒径は、粒径アナライザー計器によって決定され得、測定値は、数分布（数）に基づく平均直径として表される。好適な粒径アナライザー計器は、フォトゾーンまたは単一粒子光学検知法（ＳＰＯＳ）とも呼ばれる光遮蔽の分析技法を用いるものである。好適な光遮蔽粒径アナライザー計器は、Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｐｏｒｔ  Ｒｉｃｈｅｙ，Ｆｌｏｒｉｄａから入手可能なＡＣＣＵＳＩＺＥＲ  ７８０  ＳＩＳなどのＡＣＣＵＳＩＺＥＲである。別の好適な粒径アナライザー計器は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＳＡＬＤ−７１０１などのレーザー回折を用いるものである。
【００４６】
タキサン粒子は、当技術分野において既知の様々な粒径低減方法および装置を使用して製造され得る。そのような方法には、湿式または乾式粉砕、微粉化、崩壊、および微粉砕などの従来の粒径低減方法が含まれるが、これらに限定されない。他の方法には、超臨界二酸化炭素などの「圧縮抗溶媒を用いた沈殿」（ＰＣＡ）が含まれる。様々な実施形態では、タキサン粒子は、米国特許第ＵＳ５８７４０２９号、同第ＵＳ５８３３８９１号、同第ＵＳ６１１３７９５号、同第７ＵＳ７４４９２３号、同第ＵＳ８７７８１８１号、同第ＵＳ９２３３３４８号、同第ＵＳ９，８１４，６８５号；米国公開第ＵＳ２０１５／０３７５１５３号、第ＵＳ２０１６／０３７４９５３号；ならびに国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／１９７０９１号、第ＷＯ２０１６／１９７１００号、および第ＷＯ２０１６／１９７１０１号で開示されるようなＰＣＡ方法によって作製され、これらは全て、参照により本明細書に組み込まれる。
【００４７】
超臨界二酸化炭素を使用したＰＣＡ粒径低減方法では、十分に特徴付けられた粒径分布内で０．１〜５ミクロンほど小さいコーティングされていないタキサン粒子を生成するために、超臨界二酸化炭素（抗溶媒）および溶媒、例えば、アセトンまたはエタノールが用いられる。二酸化炭素および溶媒が処理中に除去され（最大０．５％の残留溶媒が残る場合がある）、タキサン粒子を粉末として残す。安定性研究は、パクリタキセル粒子粉末が、室温で最大５９ヶ月、促進条件下（４０℃／７５％相対湿度）で最大６ヶ月保管した場合、バイアル投与形態で安定していることを示す。
【００４８】
様々な超臨界二酸化炭素粒径低減方法によって生成されたタキサン粒子は、物理的衝撃または研削、例えば、湿式または乾式粉砕（ｍｉｌｌｉｎｇ）、微粉化、崩壊、粉砕（ｃｏｍｍｉｎｕｔｉｎｇ）、微小流動化、または微粉砕を使用した従来の粒径低減方法によって生成されたタキサン粒子と比較して、独自の物理的特性を有することができる。参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９２３３３４８号で開示されるように、そのような独自の特性は、０．０５ｇ／ｃｍ3〜０．１５ｇ／ｃｍ3のかさ密度（非タップ）、および少なくとも１８ｍ2／ｇの比表面積（ＳＳＡ）のタキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）粒子を含み、これらは、米国特許第９８１４６８５号に記載され、かつ以下に記載される超臨界二酸化炭素粒径低減方法によって生成される。このかさ密度範囲は一般に、従来の手段によって生成されたタキサン粒子のかさ密度よりも低く、ＳＳＡは一般に、従来の手段によって生成されたタキサン粒子のＳＳＡよりも高い。これらの独自の特性により、従来の手段によって生成されたタキサンと比較して、水／メタノール媒体中の溶解速度が大幅に高まる。本明細書で使用される場合、「比表面積」（ＳＳＡ）は、次の方法によるブルナウアー−エメット−テラー（「ＢＥＴ」）等温線によって測定されるタキサン質量単位当たりのタキサン粒子の総表面積である：２００〜３００ｍｇの既知の質量の検体が３０ｍＬ試料管に添加される。次いで、装填された管は、Ｐｏｒｏｕｓ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｉｎｃ．ＳＯＲＰＴＯＭＥＴＥＲ（登録商標）、モデルＢＥＴ−２０２Ａに載置される。次いで、自動試験が、ＢＥＴＷＩＮ（登録商標）ソフトウェアパッケージを使用して行われ、各試料の表面積が続いて計算される。当業者によって理解されるように、「タキサン粒子」は、凝集タキサン粒子および非凝集タキサン粒子の両方を含むことができ、ＳＳＡがグラム単位で決定されるため、組成物中のより大きな凝集タキサン粒子およびより小さな非凝集タキサン粒子の両方が考慮される。凝集タキサン粒子は、より小さい粒子の凝集によって形成される個々のタキサン粒子として本明細書で定義され、これらは、一緒に融合してより大きい個々のタキサン粒子を形成し、これらの全てがタキサン粒子の処理中に生じる。ＢＥＴ比表面積試験手順は、米国薬局方および欧州薬局方の両方に含まれる公定法である。かさ密度の測定は、室温でのタッピングなしでタキサン粒子をメスシリンダーに注ぎ、質量および体積を測定し、かさ密度を計算することによって行われ得る。
【００４９】
米国特許第９８１４６８５号で開示されるように、研究は、室温において６０分間６００ＲＰＭで、５ｍｍボールサイズを使用したＤｅｃｏ−ＰＢＭ−Ｖ−０．４１ボールミルで、パクリタキセルを粉砕することによって生成されたパクリタキセル粒子について、１５．０ｍ2／ｇのＳＳＡおよび０．３１ｇ／ｃｍ3のかさ密度を示した。また、米国特許第９８１４６８５号に開示されているように、１ロットのパクリタキセル粒子は、次の方法を使用した超臨界二酸化炭素法によって生成された場合、３７．７ｍ2／ｇのＳＳＡおよび０．０８５ｇ／ｃｍ3のかさ密度を有した：６５ｍｇ／ｍＬのパクリタキセルの溶液をアセトン中で調製した。ＢＥＴＥ  ＭｉｃｒｏＷｈｉｒｌ（登録商標）噴霧ノズル（ＢＥＴＥ  Ｆｏｇ  Ｎｏｚｚｌｅ，Ｉｎｃ．）および音波プローブ（Ｑｓｏｎｉｃａ、型番Ｑ７００）を、約８ｍｍ離して結晶化チャンバ内に位置付けた。約１００ｎｍの穴を有するステンレス鋼メッシュフィルタを結晶化チャンバに取り付けて、沈殿したパクリタキセル粒子を収集した。超臨界二酸化炭素を製造装置の結晶化チャンバ内に配置し、約３８℃および２４ｋｇ／時間の流速で約１２００ｐｓｉにした。音波プローブを、２０ｋＨｚの周波数で６０％の総出力に調整した。パクリタキセルを含有するアセトン溶液を、約３６時間、４．５ｍＬ／分の流速でノズルを通して送り出した。上記の超臨界二酸化炭素法によって生成されたパクリタキセル粒子の追加のロットは、２２．２７ｍ2／ｇ、２３．９０ｍ2／ｇ、２６．１９ｍ2／ｇ、３０．０２ｍ2／ｇ、３１．１６ｍ2／ｇ、３１．７０ｍ2／ｇ、３２．５９ｍ2／ｇ、３３．８２ｍ2／ｇ、３５．９０ｍ2／ｇ、３８．２２ｍ2／ｇ、および３８．５２ｍ2／ｇのＳＳＡ値を有した。
【００５０】
米国公開第９８１４６８５号で開示されるように、研究は、室温において６０分間６００ＲＰＭで、５ｍｍボールサイズを使用したＤｅｃｏ−ＰＢＭ−Ｖ−０．４１ボールミルで、ドセタキセルを粉砕することによって生成されたドセタキセル粒子について、１５．２ｍ2／ｇのＳＳＡおよび０．４４ｇ／ｃｍ3のかさ密度を示した。また、米国特許第９８１４６８５号に開示されているように、ドセタキセル粒子は、次の方法を使用した超臨界二酸化炭素法によって生成された場合、４４．２ｍ2／ｇのＳＳＡおよび０．０７９ｇ／ｃｍ3のかさ密度を有した：７９．３２ｍｇ／ｍＬのドセタキセルの溶液をエタノール中で調製した。ノズルおよび音波プローブを、約９ｍｍ離して加圧可能なチャンバ内に位置付けた。約１００ｎｍの穴を有するステンレス鋼メッシュフィルタを加圧可能なチャンバに取り付けて、沈殿したドセタキセル粒子を収集した。超臨界二酸化炭素を製造装置の加圧可能なチャンバ内に配置し、約３８℃および６８ｓｌｐｍの流速で約１２００ｐｓｉにした。音波プローブを、２０ｋＨｚの周波数で６０％の総出力に調整した。ドセタキセルを含有するエタノール溶液を、約９５分間、２ｍＬ／分の流速でノズルを通して送り出した。次いで、沈殿したドセタキセル凝集粒子およびより小さいドセタキセル粒子を、混合物がステンレス鋼メッシュフィルタを通して送り出されるときに超臨界二酸化炭素から収集した。ドセタキセルの粒子を含むフィルタを開き、得られる生成物をフィルタから収集した。
【００５１】
米国特許第９８１４６８５号で開示されるように、溶解研究は、室温において６０分間６００ＲＰＭで、５ｍｍボールサイズを使用したＤｅｃｏ−ＰＢＭ−Ｖ−０．４１ボールミルを使用して、パクリタキセルおよびドセタキセルを粉砕することによって作製されたパクリタキセルおよびドセタキセル粒子と比較して、米国特許第９８１４６８５号に記載される超臨界二酸化炭素法によって作製されたパクリタキセルおよびドセタキセル粒子のメタノール／水媒体中の溶解速度の増加を示した。溶解速度の決定に使用される手順は、次のとおりである。パクリタキセルの場合、約５０ｍｇの材料を、約１時間バイアル内で材料およびビーズを混転させることによって、約１．５ｇの１ｍｍガラスビーズ上にコーティングした。ビーズをステンレス鋼メッシュ容器に移し、３７℃、ｐＨ７のメタノール／水５０／５０（ｖ／ｖ）媒体および７５ｒｐｍで動作するＵＳＰ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ  ＩＩ（Ｐａｄｄｌｅ）を含む溶解浴内に配置した。１０、２０、３０、６０、および９０分で、５ｍＬのアリコートを除去し、０．２２μｍフィルタを通して濾過し、２２７ｎｍにおいてＵＶ／ＶＩＳ分光光度計で分析した。試料の吸光度値を、溶解媒体中で調製した標準溶液の吸光度値と比較して、溶解した材料の量を決定した。ドセタキセルの場合、約５０ｍｇの材料を、３７℃、ｐＨ７のメタノール／水１５／８５（ｖ／ｖ）媒体および７５ｒｐｍで動作するＵＳＰ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ  ＩＩ（Ｐａｄｄｌｅ）を含む溶解浴内に直接配置した。５、１５、３０、６０、１２０、および２２５分で、５ｍＬのアリコートを除去し、０．２２μｍフィルタを通して濾過し、２３２ｎｍにおいてＵＶ／ＶＩＳ分光光度計で分析した。試料の吸光度値を、溶解媒体中で調製した標準溶液の吸光度値と比較して、溶解した材料の量を決定した。パクリタキセルの場合、溶解速度は、粉砕によって作製された粒子についての３０分で３２％溶解と対比して、超臨界二酸化炭素法によって作製された粒子については３０分で４７％溶解した。ドセタキセルの場合、溶解速度は、粉砕によって作製された粒子についての３０分で９％溶解と対比して、超臨界二酸化炭素法によって作製された粒子については３０分で２７％溶解した。
【００５２】
いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、または少なくとも３５ｍ2／ｇのＳＳＡを有する。一実施形態では、タキサン粒子は、約１０ｍ2／ｇ〜約５０ｍ2／ｇのＳＳＡを有する。いくつかの実施形態では、抗腫瘍粒子は、約０．０５０ｇ／ｃｍ3〜約０．２０ｇ／ｃｍ3のかさ密度を有する。
【００５３】
さらなる実施形態では、タキサン粒子は、以下のＳＳＡを有する。
（ａ）１６ｍ2／ｇ〜３１ｍ2／ｇ、もしくは３２ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、
（ｂ）１６ｍ2／ｇ〜３０ｍ2／ｇ、もしくは３２ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、
（ｃ）１６ｍ2／ｇ〜２９ｍ2／ｇ、もしくは３２ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、
（ｄ）１７ｍ2／ｇ〜３１ｍ2／ｇ、もしくは３２ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、
（ｅ）１７ｍ2／ｇ〜３０ｍ2／ｇ、もしくは３２ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、
（ｆ）１７ｍ2／ｇ〜２９ｍ2／ｇ、もしくは３２ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、
（ｇ）１６ｍ2／ｇ〜３１ｍ2／ｇ、もしくは３３ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、
（ｈ）１６ｍ2／ｇ〜３０ｍ2／ｇ、もしくは３３ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、
（ｉ）１６ｍ2／ｇ〜２９ｍ2／ｇ、もしくは３３ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、
（ｊ）１７ｍ2／ｇ〜３１ｍ2／ｇ、もしくは３３ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、
（ｋ）１７ｍ2／ｇ〜３０ｍ2／ｇ、もしくは３３ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、
（ｌ）１７ｍ2／ｇ〜２９ｍ2／ｇ、もしくは３３ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、
（ｍ）１６ｍ2／ｇ〜３１ｍ2／ｇ、もしくは≧３２ｍ2／ｇ、
（ｈ）１７ｍ2／ｇ〜３１ｍ2／ｇ、もしくは≧３２ｍ2／ｇ、
（ｉ）１６ｍ2／ｇ〜３０ｍ2／ｇ、もしくは≧３２ｍ2／ｇ、
（ｊ）１７ｍ2／ｇ〜３０ｍ2／ｇ、もしくは≧３２ｍ2／ｇ、
（ｋ）１６ｍ2／ｇ〜２９ｍ2／ｇ、もしくは≧３２ｍ2／ｇ、
（ｌ）１７ｍ2／ｇ〜２９ｍ2／ｇ、もしくは≧３２ｍ2／ｇ、
（ｍ）１６ｍ2／ｇ〜３１ｍ2／ｇ、もしくは≧３３ｍ2／ｇ、
（ｎ）１７ｍ2／ｇ〜３１ｍ2／ｇ、もしくは≧３３ｍ2／ｇ、
（ｏ）１６ｍ2／ｇ〜３０ｍ2／ｇ、もしくは≧３３ｍ2／ｇ、
（ｐ）１７ｍ2／ｇ〜３０ｍ2／ｇ、もしくは≧３３ｍ2／ｇ、
（ｑ）１６ｍ2／ｇ〜２９ｍ2／ｇ、もしくは≧３３ｍ2／ｇ、
（ｒ）１７ｍ2／ｇ〜２９ｍ2／ｇ、もしくは≧３３ｍ2／ｇ。
【００５４】
いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、非凝集の個々の粒子であり、非共有結合相互作用、ファンデルワールス力、親水性もしくは疎水性相互作用、静電相互作用、クーロン力、分散材料との相互作用、または官能基を介した相互作用などの相互作用力によって一緒に結合される複数のタキサン粒子のクラスターではない。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、より小さい粒子の凝集によって形成される個々のタキサン粒子であり、これらは、一緒に融合してより大きい個々のタキサン粒子を形成し、これらの全てがタキサン粒子の処理中に生じる。
【００５５】
いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子であり、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、または少なくとも３５ｍ2／ｇのＳＳＡを有する。他の実施形態では、パクリタキセル粒子は、１８ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または２０ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または２２ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または２５ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または２６ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または３０ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または３５ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または１８ｍ2／ｇ〜４５ｍ2／ｇ、または２０ｍ2／ｇ〜４５ｍ2／ｇ、または２２ｍ2／ｇ〜４５ｍ2／ｇ、または２５ｍ2／ｇ〜４５ｍ2／ｇ、または２６ｍ2／ｇ〜４５ｍ2／ｇ、または３０ｍ2／ｇ〜４５ｍ2／ｇ、または３５ｍ2／ｇ〜４５ｍ2／ｇ、または１８ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、または２０ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、または２２ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、または２５ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、または２６ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、または３０ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇ、または３５ｍ2／ｇ〜４０ｍ2／ｇのＳＳＡを有する。
【００５６】
いくつかの実施形態では、パクリタキセル粒子は、０．０５ｇ／ｃｍ3〜０．１５ｇ／ｃｍ3、または０．０５ｇ／ｃｍ3〜０．２０ｇ／ｃｍ3のかさ密度（非タップ）を有する。
【００５７】
いくつかの実施形態では、パクリタキセル粒子は、３７℃および７のｐＨにおいて、７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置で、５０％メタノール／５０％水（ｖ／ｖ）の溶液中に３０分以内で少なくとも４０％ｗ／ｗ溶解する溶解速度を有する。
【００５８】
いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、ドセタキセル粒子であり、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、または少なくとも４２ｍ2／ｇのＳＳＡを有する。他の実施形態では、ドセタキセル粒子は、１８ｍ2／ｇ〜６０ｍ2／ｇ、または２２ｍ2／ｇ〜６０ｍ2／ｇ、または２５ｍ2／ｇ〜６０ｍ2／ｇ、または３０ｍ2／ｇ〜６０ｍ2／ｇ、または４０ｍ2／ｇ〜６０ｍ2／ｇ、または１８ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または２２ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または２５ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または２６ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または３０ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または３５ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇ、または４０ｍ2／ｇ〜５０ｍ2／ｇのＳＳＡを有する。
【００５９】
いくつかの実施形態では、ドセタキセルの粒子は、０．０５ｇ／ｃｍ3〜０．１５ｇ／ｃｍ3のかさ密度（非タップ）を有する。
【００６０】
いくつかの実施形態では、ドセタキセル粒子は、３７℃および７のｐＨにおいて、７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置で、１５％メタノール／８５％水（ｖ／ｖ）の溶液中に３０分以内で少なくとも２０％ｗ／ｗ溶解する溶解速度を有する。
【００６１】
タキサン粒子は、ガラスまたはプラスチックバイアルなどの任意の適切な容器に詰めることができる。適切な容器の非限定的な例は、ブロモブチルゴム栓およびアルミニウムクリンプシールで閉じられたタイプ１、ＵＳＰ、透明ガラスバイアルである。タキサン粒子は、粒子が容器に入れられた後に、ガンマ線照射またはオートクレーブなどの当技術分野で既知の滅菌方法を使用して滅菌することができる。
【００６２】
組成物
本開示の組成物は、タキサン粒子を含み、組成物の直接注射により、例えば、腫瘍内注射または腫瘍切除部位への直接注射により、および／または組成物の膀胱内注入により、膀胱癌を治療するために、および／または外科的膀胱腫瘍切除手順後の膀胱癌の再発を阻害するために有用である。組成物は、担体をさらに含むことができる。担体は、水性担体などの液体（流体）担体であり得る。好適な水性担体の非限定的な例には、水、例えば、注射用滅菌水ＵＳＰ；生理食塩水溶液（０．９％塩化ナトリウム溶液）、例えば、注射用０．９％塩化ナトリウムＵＳＰ；デキストロース溶液、例えば、注射用５％デキストロースＵＳＰ；および注射用乳酸リンゲル液ＵＳＰが含まれる。非水性系液体担体および他の水性系液体担体が使用され得る。担体は、薬学的に許容される担体、すなわち、注射、または他の投与経路による対象への投与に適した担体であり得る。担体は、エマルションまたは流動性半固体などの他のタイプの液体であり得る。流動性半固体の非限定的な例には、ゲルおよび熱硬化性ゲルが含まれる。組成物は、懸濁液、すなわち、タキサン粒子が連続担体／および／または希釈剤内に分散（懸濁）している懸濁液剤形組成物であり得る。タキサン粒子は、担体中に完全に分散、部分的に分散、および部分的に溶解することができるが、完全に溶解することはできない。いくつかの実施形態では、組成物は、連続担体内に分散したタキサン粒子の懸濁液である。好ましい実施形態では、担体は、薬学的に許容される担体である。好ましい実施形態では、組成物は、滅菌である。様々な実施形態では、組成物は、タキサン粒子および液体担体を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなり、組成物は、液体担体内に分散したタキサン粒子の懸濁液である。いくつかの実施形態では、組成物は、タキサン粒子および担体から本質的になるか、またはそれらからなり、担体は、水性担体であり、組成物は、懸濁液である。
【００６３】
タキサン粒子および担体の組成物は、そのまま投与され得る。任意選択的に、タキサン粒子および担体の組成物は、所望の濃度（用量）のタキサン粒子を達成するために、組成物を希釈するための好適な希釈剤をさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、担体は、希釈剤として機能することができ、別の言い方をすれば、組成物中の担体の量は、組成物中の所望の濃度のタキサン粒子を提供し、さらなる希釈は必要ではない。好適な希釈剤は、水性流体などの流体であり得る。好適な水性希釈剤の非限定的な例には、水、例えば、注射用滅菌水ＵＳＰ；生理食塩水溶液（０．９％塩化ナトリウム溶液）、例えば、注射用０．９％塩化ナトリウムＵＳＰ；デキストロース溶液、例えば、注射用５％デキストロースＵＳＰ；および注射用乳酸リンゲル液ＵＳＰが含まれる。注射による投与に適した他の液体および水性系希釈剤が使用され得、任意に塩、緩衝剤、および／または他の賦形剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、希釈剤は、滅菌である。組成物は、所望の濃度投与量のタキサン粒子を提供する比率において希釈剤で希釈され得る。例えば、希釈剤に対する組成物の体積比は、１：１〜１：１００ｖ／ｖの範囲または他の適切な比率であり得る。いくつかの実施形態では、組成物は、タキサン粒子、担体、および希釈剤を含み、担体および希釈剤は、混合物を形成し、組成物は、担体／希釈剤混合物中に分散したタキサン粒子の懸濁液である。いくつかの実施形態では、担体／希釈剤混合物は、連続相であり、タキサン粒子は、分散相である。
【００６４】
組成物、担体、および／または希釈剤は、機能性成分、例えば、緩衝剤、塩、浸透圧剤、界面活性剤、粘度調整剤、レオロジー変性剤、懸濁化剤、アルカリ化剤または酸性化剤などのｐＨ調整剤、張度調整剤、防腐剤、塩化ベンザルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムなどの四級アンモニウム化合物を含む抗菌剤、粘滑剤、酸化防止剤、消泡剤、エタノールなどのアルコール、キレート剤、ならびに／または着色剤を含ことができる。例えば、組成物は、タキサン粒子、ならびに水、塩、界面活性剤、および任意に緩衝液を含む担体を含むことができる。一実施形態では、担体は、水性担体であり、界面活性剤を含み、界面活性剤の濃度は、ｗ／ｗまたはｗ／ｖ基準で１％以下である。他の実施形態において、界面活性剤は、０．５％未満、０．２５％未満、０．１％未満、または約０．１％である。他の実施形態では、水性担体は、界面活性剤ＧＥＬＵＣＩＲＥ（登録商標）（モノ−、ジ−、およびトリグリセリドならびにポリエチレングリコールのモノ−およびジエステルから構成されるポリエチレングリコールグリセリド）および／またはＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）（ポリエトキシ化ヒマシ油）を除外する。いくつかの実施形態では、組成物または担体は、ポリマー、タンパク質（アルブミンなど）、ポリエトキシ化ヒマシ油、ならびに／またはモノ−、ジ−、およびトリグリセリドおよびポリエチレングリコールのモノ−およびジエステルから構成されるポリエチレングリコールグリセリドを除外する。
【００６５】
組成物、担体、および／または希釈剤は、１つ以上の界面活性剤を含むことができる。好適な界面活性剤には、限定ではなく例として、ポリソルベート、ラウリル硫酸塩、アセチル化モノグリセリド、ジアセチル化モノグリセリド、およびポロキサマー４０７などのポロキサマーが含まれる。ポリソルベートは、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルであり、これは、ソルビトールおよびその無水物の一連の部分脂肪酸エステルであり、ソルビトールおよびその無水物のモル毎に約２０、５、または４モルのエチレンオキシドと共重合している。ポリソルベートの非限定的な例は、ポリソルベート２０、ポリソルベート２１、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６１、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８１、ポリソルベート８５、およびポリソルベート１２０である。約２０モルのエチレンオキシドを含有するポリソルベートは、親水性非イオン性界面活性剤である。約２０モルのエチレンオキシドを含有するポリソルベートの例には、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８５、およびポリソルベート１２０が含まれる。ポリソルベートは、商標名ＴＷＥＥＮ（商標）でＣｒｏｄａから市販されている。ポリソルベートの番号指定は、ＴＷＥＥＮの番号指定に対応し、例えば、ポリソルベート２０は、ＴＷＥＥＮ  ２０であり、ポリソルベート４０は、ＴＷＥＥＮ  ４０であり、ポリソルベート６０は、ＴＷＥＥＮ  ６０であり、ポリソルベート８０は、ＴＷＥＥＮ  ８０などである。ＵＳＰ／ＮＦグレードのポリソルベートには、ポリソルベート２０  ＮＦ、ポリソルベート４０  ＮＦ、ポリソルベート６０  ＮＦ、およびポリソルベート８０  ＮＦが含まれる。ポリソルベートは、ＰｈＥｕｒグレード（欧州薬局方）、ＢＰグレード、およびＪＰグレードでも入手可能である。「ポリソルベート」という用語は、一般的名称である。ポリソルベート２０の化学名は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノラウレートである。ポリソルベート４０の化学名は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノパルミテートである。ポリソルベート６０の化学名は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノステアレートである。ポリソルベート８０の化学名は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレエートである。いくつかの実施形態では、組成物、担体、および／または希釈剤は、ポリソルベートの混合物を含むことができる。いくつかの実施形態では、組成物、担体、および／または希釈剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８５、および／またはポリソルベート１２０を含む。いくつかの実施形態では、組成物、担体、および／または希釈剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、および／またはポリソルベート８０を含む。一実施形態では、組成物、担体、および／または希釈剤は、ポリソルベート８０を含む。
【００６６】
いくつかの実施形態では、組成物、担体、および／または希釈剤は、エタノールなどのアルコールを含むことができる。エタノールは、アルコールＵＳＰや脱水アルコール（２００プルーフ）ＵＳＰなどのＵＳＰグレードであり得る。いくつかの実施形態では、組成物は、タキサン粒子、担体、および任意に希釈剤を含み、担体および／または希釈剤は、水、エタノール、およびポリソルベートを含む。いくつかの実施形態では、エタノールは、組成物、担体、および／または希釈剤中に、約０．１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、または約０．１％ｗ／ｖ〜約８％ｗ／ｖ、または約２％〜約８％ｗ／ｖ、または約５％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、または約８％ｗ／ｖの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、エタノールは、約０．１ｗ／ｖ〜約４％ｗ／ｖ、または約２％ｗ／ｖ〜約４％ｗ／ｖ、または約３．２％ｗ／ｖの濃度で組成物中に存在する。一実施形態では、組成物は、懸濁液であり、ポリソルベートは、ポリソルベート８０である。他の実施形態では、ポリソルベートまたはポリソルベート８０は、約０．０１％ｗ／ｖ〜約１．５％ｗ／ｖの濃度で組成物、担体、および／または希釈剤中に存在する。驚くべきことに、本発明者らは、列挙した非常に少量のポリソルベート８０が、タキサン粒子と水性担体（生理食塩水溶液など）の界面における表面張力を低減することを発見した。これらの実施形態は、典型的には、組成物の使用時が近づくと製剤化される。いくつかの実施形態では、粒子は、ポリソルベートまたはポリソルベート８０でコーティングされてもよい。他の実施形態では、粒子は、ポリソルベートまたはポリソルベート８０でコーティングされていない。様々な他の実施形態では、ポリソルベートまたはポリソルベート８０は、組成物、担体、および／または希釈剤中に、約０．０１％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖ、約０．０１％ｗ／ｖ〜約０．５％ｗ／ｖ、約０．０１％ｗ／ｖ〜約０．４％ｗ／ｖ、約０．０１％ｗ／ｖ〜約０．３５％ｗ／ｖ、約０．０１％ｗ／ｖ〜約０．３％ｗ／ｖ、約０．０１％ｗ／ｖ〜約０．２５％ｗ／ｖ、約０．０１％ｗ／ｖ〜約０．２％ｗ／ｖ、約０．０１％ｗ／ｖ〜約０．１５％ｗ／ｖ、約０．０１％ｗ／ｖ〜約０．１％ｗ／ｖ、０．０２％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖ、約０．０２％ｗ／ｖ〜約０．５％ｗ／ｖ、約０．０２％ｗ／ｖ〜約０．４％ｗ／ｖ、約０．０２％ｗ／ｖ〜約０．３５％ｗ／ｖ、約０．０２％ｗ／ｖ〜約０．３％ｗ／ｖ、約０．０２％ｗ／ｖ〜約０．２５％ｗ／ｖ、約０．０２％ｗ／ｖ〜約０．２％ｗ／ｖ、約０．０２％ｗ／ｖ〜約０．１５％ｗ／ｖ、約０．０２％ｗ／ｖ〜約０．１％ｗ／ｖ、約０．０５％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖ、約０．０５％ｗ／ｖ〜約０．５％ｗ／ｖ、約０．０５％ｗ／ｖ〜約０．４％ｗ／ｖ、約０．０５％ｗ／ｖ〜約０．３５％ｗ／ｖ、約０．０５％ｗ／ｖ〜約０．３％ｗ／ｖ、約０．０５％ｗ／ｖ〜約０．２５％ｗ／ｖ、約０．０５％ｗ／ｖ〜約０．２％ｗ／ｖ、約０．０５％ｗ／ｖ〜約０．１５％ｗ／ｖ、約０．０５％ｗ／ｖ〜約０．１％ｗ／ｖ、約０．１％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖ、約０．１％ｗ／ｖ〜約０．５％ｗ／ｖ、約０．１％ｗ／ｖ〜約０．４％ｗ／ｖ、約０．１％ｗ／ｖ〜約０．３５％ｗ／ｖ、約０．１％ｗ／ｖ〜約０．３％ｗ／ｖ、約０．１％ｗ／ｖ〜約０．２５％ｗ／ｖ、約０．１％ｗ／ｖ〜約０．２％ｗ／ｖ、約０．１％ｗ／ｖ〜約０．１５％ｗ／ｖ、約０．２％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖ、約０．２％ｗ／ｖ〜約０．５％ｗ／ｖ、約０．２％ｗ／ｖ〜約０．４％ｗ／ｖ、約０．２％ｗ／ｖ〜約０．３５％ｗ／ｖ、約０．２％ｗ／ｖ〜約０．３％ｗ／ｖ、約０．２％ｗ／ｖ〜約０．２５％ｗ／ｖ、約０．３％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖ、約０．３％ｗ／ｖ〜約０．５％ｗ／ｖ、約０．３％ｗ／ｖ〜約０．４％ｗ／ｖ、または約０．３％ｗ／ｖ〜約０．３５％ｗ／ｖ；または約０．０１％、約０．０５％、約０．１％ｗ／ｖ、約０．１５％ｗ／ｖ、約０．１６％ｗ／ｖ、約０．２％ｗ／ｖ、約０．２５％ｗ／ｖ、約０．３％ｗ／ｖ、約０．３５％ｗ／ｖ、約０．４％ｗ／ｖ、約０．４５％ｗ／ｖ、約０．５％ｗ／ｖ、または約１％ｗ／ｖの濃度で存在する。
【００６７】
組成物、担体、および／または希釈剤は、１つ以上の張度調整剤を含むことができる。好適な張度調整剤には、限定ではなく例として、１つ以上の無機塩、電解質、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、ナトリウム、硫酸カリウム、重炭酸ナトリウムおよびカリウム、ならびにアルカリ土類金属塩、例えば、アルカリ土類金属無機塩、例えば、カルシウム塩、およびマグネシウム塩、マンニトール、デキストロース、グリセリン、プロピレングリコール、ならびにそれらの混合物が含まれる。
【００６８】
組成物、担体、および／または希釈剤は、１つ以上の緩衝剤を含むことができる。好適な緩衝剤には、限定ではなく例として、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス−（ヒドロキシメチル）メタン、および炭酸水素ナトリウム、ならびに当業者に既知のその他が含まれる。腫瘍内または膀胱内使用に望ましい範囲にｐＨを調整するために、緩衝液が一般に使用される。
【００６９】
組成物、担体、および／または希釈剤は、１つ以上の粘滑剤を含むことができる。粘滑剤は、腹膜およびその中の臓器を覆う膜などの粘膜の上に滑らかな薄膜を形成する薬剤である。粘滑剤は、軽度の痛みおよび炎症を和らげる場合があり、粘膜保護剤と呼ばれることもある。好適な粘滑剤には、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびメチルセルロースなど、約０．２〜約２．５％の範囲のセルロース誘導体；約０．０１％のゼラチン；グリセリン、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００、およびプロピレングリコールなどの約０．０５〜約１％も含む、約０．０５〜約１％のポリオール；約０．１〜約４％のポリビニルアルコール；約０．１〜約２％のポビドン、ならびに本明細書に記載の別の高分子粘滑剤と共に使用される場合、約０．１％のデキストラン７０が含まれる。
【００７０】
組成物、担体、および／または希釈剤は、ｐＨを調整するために１つ以上のアルカリ化剤を含むことができる。本明細書で使用される場合、「アルカリ化剤」という用語は、アルカリ性媒体を提供するために使用される化合物を意味するよう意図される。そのような化合物には、限定ではなく例として、アンモニア溶液、炭酸アンモニウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、および水酸化ナトリウム、ならびに当業者に既知のその他が含まれる。
【００７１】
組成物、担体、および／または希釈剤は、ｐＨを調整するために１つ以上の酸性化剤を含むことができる。本明細書で使用される場合、「酸性化剤」という用語は、酸性媒体を提供するために使用される化合物を意味するよう意図している。そのような化合物には、限定ではなく例として、酢酸、アミノ酸、クエン酸、硝酸、フマル酸、および他のアルファヒドロキシ酸、塩酸、アスコルビン酸、および硝酸、ならびに当業者に既知のその他が含まれる。
【００７２】
組成物、担体、および／または希釈剤は、１つ以上の消泡剤を含むことができる。本明細書で使用される場合、「消泡剤」という用語は、充填組成物の表面に形成される発泡を防止するか、またはその量を低減する化合物（複数可）を意味するよう意図される。好適な消泡剤には、限定ではなく例として、ジメチコン、ＳＩＭＥＴＨＩＣＯＮＥ、オクトキシノール、および当業者に既知のその他が含まれる。
【００７３】
組成物、担体、および／または希釈剤は、懸濁液の粘度を増加または減少させる１つ以上の粘度調整剤を含むことができる。好適な粘度調整剤には、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マンニトール、ポリビニルピロリドン、カルボマーなどの架橋アクリル酸ポリマー、および当業者に既知のその他が含まれる。組成物、担体、および／または希釈剤は、組成物の流動特性を変更して、それが注射針またはチューブなどのデバイスを通して適切に流動することができるようにするレオロジー変性剤をさらに含むことができる。粘度調整剤およびレオロジー変性剤の非限定的な例は、“Ｒｈｅｏｌｏｇｙ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ−Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｕｓｅ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”Ｂｒａｕｎ，Ｗｉｌｌｉａｍ  Ａｎｄｒｅｗ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０００で見ることができる。
【００７４】
組成物中のタキサン粒子の濃度は、組成物の直接注射および／または膀胱内注入による膀胱癌の治療に有効な量であり得る。一実施形態では、組成物中のタキサン粒子の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬである。様々なさらなる実施形態では、組成物中のタキサン粒子の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約０．５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ〜約８ｍｇ／ｍＬ、もしくは約４ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６１、６５、７０、７５、もしくは１００ｍｇ／ｍＬ、または約０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６１、６５、７０、７５、もしくは１００ｍｇ／ｍＬである。タキサン粒子は、投与される唯一の治療薬であってもよく、または他の治療薬と共に投与されてもよい。
【００７５】
様々な実施形態では、組成物は、ドセタキセル粒子、担体、および希釈剤を含み、組成物（担体および希釈剤を含む）中のドセタキセル粒子の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ〜約８ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ〜約４ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ、または約２ｍｇ／ｍＬ、または約３ｍｇ／ｍＬ、または約４ｍｇ／ｍＬ、または約５ｍｇ／ｍＬ、または約６ｍｇ／ｍＬ、または約７ｍｇ／ｍＬ、または約８ｍｇ／ｍＬである。さらなる実施形態では、担体は、生理食塩水溶液などの食塩水溶液であり得る水性担体であり、希釈剤は、生理食塩水溶液などの食塩水溶液であり得る水性希釈剤である。さらなる実施形態では、水性担体は、ポリソルベート８０などのポリソルベート、および／またはエタノールを含む。
【００７６】
膀胱内注入に有用なタキサン溶液は、パクリタキセル溶液またはドセタキセル溶液を含み、タキサンが完全に溶解している組成物である。例えば、適切なドセタキセル溶液は、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）であり、これは、５０％ｖ／ｖのポリソルベート８０および５０％ｖ／ｖの脱水アルコールの溶液中に溶解した２０ｍｇ／ｍＬのドセタキセルの市販製剤である。タキサン溶液、例えば、ドセタキセル溶液は、上記のような適切な希釈剤で、膀胱内注入のための望ましい用量濃度、例えば、０．１ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬに希釈することができる。
【００７７】
キット
本開示はまた、以下を含むキットを提供する：
（ａ）０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有するタキサン粒子を含む、それらから本質的になる、またはそれらからなる第１のバイアル；
（ｂ）薬学的に許容される担体を含む第２のバイアル；および
（ｃ）第１バイアルと第２バイアルの内容物を組み合わせて、懸濁液を形成し、場合により懸濁液を希釈剤で希釈することにより、膀胱内注入のために、または直接注射のために、例えば、腫瘍内注射または腫瘍切除部への注射のために有用な懸濁液へとタキサン粒子を再構成するための、指示。
【００７８】
いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、ドセタキセル粒子である。第１のバイアル中のドセタキセル粒子は、粉末形態であり得る。第１のバイアル中のドセタキセル粒子の量は、粒子を懸濁液に再構成した後の所望の用量レベルに適切な任意の量であり得る。一実施形態では、第１のバイアル中のドセタキセル粒子の量は１００ｍｇである。第１のバイアル中のドセタキセル粒子は、第１のバイアル中の唯一の成分であり得る。いくつかの実施形態では、ドセタキセル粒子は、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する。他の実施形態では、ドセタキセル粒子は、０．４ミクロン〜１．２ミクロンの平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態では、ドセタキセルの粒子は、少なくとも１８ｍ2／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有し、および／または０．０５ｇ／ｃｍ3〜０．１５ｇ／ｃｍ3のかさ密度（非タップ）を有する。薬学的に許容される担体は、生理食塩水溶液などの水性担体であり得る。担体は、ポリソルベートなどの界面活性剤をさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート８０である。他の実施形態では、ポリソルベートまたはポリソルベート８０は、約０．０１％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖの濃度である。いくつかの実施形態では、第２のバイアル中の担体中のポリソルベート８０の量は、約１％ｗ／ｖである。いくつかの実施形態では、担体はエタノールなどのアルコールをさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、第２のバイアル中の担体中のエタノールの量は、約８％ｗ／ｖである。キットは、タキサン粒子および担体溶液の複数のバイアルを含むことができ、注入に利用できる大量の再構成された懸濁液が可能となる。キットは、生理食塩水溶液などの希釈剤をさらに含むことができる。希釈剤の量を調整して、所望の用量濃度および容量を提供することができる。ドセタキセル粒子と、ポリソルベートおよびエタノールを含有する担体との懸濁液を希釈剤で希釈すると、ドセタキセル粒子の過剰な溶解が防止される。
【００７９】
キットには任意の適切なバイアルを使用できる。適切なバイアルの非限定的な例は、ブロモブチルゴム栓およびアルミニウムクリンプシールで閉じられたタイプ１、ＵＳＰ、透明ガラスバイアルである。バイアルの容量は、タキサン粒子の量、担体の容量、および最終的に再構成された懸濁液の容量によって異なり得る。バイアルおよびそれらの内容物は、ガンマ線照射またはオートクレーブなどの当技術分野で知られている滅菌方法を使用して滅菌することができる。いくつかの実施形態では、バイアルの内容物は滅菌である。キットは、単回投与または複数回投与用に構成され得る。
【００８０】
直接注射または膀胱内注入のいずれかのためのキットからドセタキセル懸濁液組成物を調製するための非限定的な例示的な手順は、以下の通りである：
バイアル１の内容物：１００ｍｇのドセタキセル粒子
バイアル２の内容物：生理食塩水溶液に溶解した１％ｗ／ｖのポリソルベート８０と８％ｗ／ｖのエタノールを含有する担体
希釈剤：生理食塩水溶液。
１．適切なゲージの針を備えたシリンジを使用して、１００ｍｇのドセタキセル粒子を含有する第１のバイアルに、第２のバイアルから１ｍＬの担体を添加する。
２．第１のバイアルを反転させて手で激しく振盪して、バイアルの内部および栓に接着している全ての粒子が湿潤していることを確認する。
３．振盪後すぐに、適切なゲージの針を備えたシリンジを使用して、第１のバイアルに適切な容量の希釈剤を添加し、懸濁液を所望の用量濃度レベルと容量に希釈し、バイアルをさらに１分間手で振盪する。大きい目に見える塊がないか懸濁液を定期的に検査する。存在する場合、懸濁液が適切に分散するまで手で混合し続ける。
５．混合した後、懸濁液を少なくとも５分間そのまま放置しておき、封入された空気および泡を低減する。
懸濁液は室温で貯蔵することができ、再構成後２４時間以内に投与される必要がある。
【００８１】
本開示の組成物、懸濁液、およびキットは、タキサン粒子の任意の実施形態、担体および希釈剤の任意の実施形態、ポリソルベートまたはポリソルベート８０濃度の任意の実施形態、ならびにエタノール濃度の任意の実施形態を含む、本明細書で記載の任意の実施形態または実施形態の組み合わせを含むことができる。組成物、懸濁液、およびキットは、ポリマー、タンパク質（アルブミンなど）、ポリエトキシ化ヒマシ油、ならびに／またはモノ−、ジ−、およびトリグリセリドおよびポリエチレングリコールのモノ−およびジエステルから構成されるポリエチレングリコールグリセリドを除外することができる。組成物およびキットは、所与のタキサン粒子に適切な他の成分をさらに含み得る。
【００８２】
投与／治療の方法
上記に記載および開示されたタキサン粒子を含む組成物は、腫瘍内注射または腫瘍切除部位への注射などの直接注射を含む組成物の局所投与により、および／または膀胱内注入により、膀胱癌の治療のため、および腫瘍切除後の膀胱癌再発の阻害のための方法において使用することができる。
【００８３】
膀胱腫瘍の経尿道的切除（ＴＵＲＢＴ）を含むがこれらに限定されない外科的切除手順は、対象の膀胱壁から膀胱癌腫瘍を除去するために使用される。外科的腫瘍切除には、腫瘍の切除と、必要に応じて膀胱部分切除が含まれる。ＴＵＲＢＴの手順では、一般に、尿道から膀胱に膀胱鏡を挿入し、そこからツール（通常はワイヤーループ）を使用して腫瘍を外科的に除去する。ＴＵＲＢＴ手順には、１段階および２段階の切除が含まれる。外科的切除手順は当技術分野で知られており、さまざまなツールおよび技法が切除に使用され、その非限定的な例には、ワイヤーループ、レーザー、および高周波療法（高エネルギー電気）が含まれる。しかしながら、膀胱癌は、外科的腫瘍切除処置の後に再発することが多い。
【００８４】
腫瘍切除後にタキサン粒子を含む組成物を切除部位に直接注射することによる投与は、膀胱癌のさらなる治療として使用でき、膀胱癌の再発を阻害するのに役立ち得る。腫瘍切除部位とは、目に見える腫瘍の塊と縁部（腫瘍の境界にある正常な組織）が外科的に切除された領域であり、視覚的に識別できる。切除部位への組成物の直接注射は、切除手順の直後に（例えば、対象がまだ麻酔の影響下にある間の２時間未満）投与することができ、またはより後の時間に投与することができる。切除部位に組成物を投与する方法は、単一投与中に切除部位への１回以上の直接注射を含む。非限定的な例として、１回の投与で、切除縁部の外側の最大５ｍｍを含む、切除部位全体にわたってグリッド状のパターンで約１ｃｍ間隔で距離をあけた８回の注射を行って、組成物で切除部位を完全にカバーすることができ、そこで、これらの注射の各々は、合計約４ｍＬの組成物に対して各々約０．５ｍＬであり得る。いくつかの実施形態では、注射組成物の総量は、１〜５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注射組成物の総量は、３〜５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注射組成物の総量は、４ｍＬである。切除された膀胱壁への注射には、調節可能な先端長の膀胱鏡検査針を使用できる。針の先端は、膀胱のドーム領域での注射の場合は２ｍｍ、膀胱の側面領域での注射の場合は３〜４ｍｍに調節できる。針の先端の直接の可視化は、手順の間に膀胱鏡を使用することによって支援することができる。７０°の角度の斜め方向の膀胱鏡ビューを使用できる。注射は、切除部位の一部である切除された腫瘍辺縁領域に行うことができる。注射は、必要に応じて、切除部位に含まれない周囲の膀胱壁組織の領域をカバーするために、切除部位周辺の切除部位縁部の外側に行うこともできる。様々な実施形態では、周囲の膀胱壁組織は、切除部位縁部の辺縁の外側の最大２ｍｍ、または最大５ｍｍ、または最大１０ｍｍ、または最大１５ｍｍ、または最大２０ｍｍである。いくつかの実施形態では、周囲の膀胱壁組織は、切除部位縁部の辺縁の外側１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０ｍｍである。注射は尿道を通して実施することができる。注射は、外科的切除手順で切除された腫瘍の数に対応する１つ以上の切除部位に投与することができる。
【００８５】
一実施形態は、対象における膀胱癌を治療するかまたは膀胱癌の再発を阻害する方法であって、タキサン粒子を含む組成物の有効量を１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除部位に直接注射することを含み、注射が、対象の１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に行われ、タキサン粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、それにより膀胱癌を治療するか、または膀胱癌の再発を阻害する方法である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、中リスクまたは高リスクの膀胱癌である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、ＮＭＩＢＣである。他の実施形態では、膀胱癌は、ＭＩＢＣである。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に対象において少なくとも３ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間、再発しない。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、ドセタキセル粒子である。いくつかの実施形態では、組成物中のドセタキセル粒子の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４ｍｇ／ｍＬである。
【００８６】
タキサン粒子を含む組成物の膀胱内注入は、膀胱癌の治療に使用できる本開示の別の方法である。ドセタキセル粒子懸濁液の膀胱内注入により、膀胱内に薬剤の貯蔵所が確立され、時間の経過とともに膀胱内にドセタキセルが持続的に放出される。膀胱内注入手順は当技術分野で知られている。膀胱内注入の場合、組成物（担体および任意の希釈剤を含む）は、膀胱内注入に十分な投与量を供給するのに適した量でなければならず、すなわち、投与量は、組成物に対して膀胱組織を曝露させるのに十分となる。一般に、組成物（担体および任意の希釈剤を含む）の容量は１００ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、組成物の容量は、約１０ｍＬ〜約１００ｍＬ、または約２０ｍＬ〜約８０ｍＬ、または約２５ｍＬ〜約７５ｍＬ、または約１０ｍＬ〜約５０ｍＬ、または約１５ｍＬ〜約４５ｍＬ、または約２０ｍＬ〜約４０ｍＬ、または約２５ｍＬ〜約３５ｍＬ、または約２０ｍＬ〜約３０ｍＬ、または約２５ｍＬである。膀胱内注入の滞留時間は、一般的に３０分から２時間であり得る。タキサン粒子を含む組成物の膀胱内注入を投与して、膀胱腫瘍、特に外科的腫瘍切除を伴うまたは伴わない低リスク膀胱腫瘍を治療することができる。タキサン粒子を含む組成物の膀胱内注入はまた、外科的腫瘍切除手順後に、または外科的腫瘍切除手順に加えて、タキサン粒子を含む組成物の切除部位への直接注入後に、膀胱癌の再発の抑制を阻害するために使用され得る。外科的腫瘍切除術の間、腫瘍からの癌細胞が腫瘍から放出され、膀胱内の別の場所に移植される。膀胱内注入により、これらの癌細胞が膀胱壁に埋め込まれる前にそれらを洗い流したり、腫瘤に成長する機会を得る前に細胞を殺傷することができる。タキサン粒子の物理的特性により、粒子は、膀胱内注入により膀胱に注入されると、膀胱の内層に付着し、膀胱の内層の折り目に埋め込まれ、滞留時間が長くなり、タキサンが粒子からゆっくりと放出されるデポー効果を作り出す。タキサン粒子を含む組成物の膀胱内注入は、最初に特定の期間内に（例えば、約１２時間、約１日、約１週間、または約１ヶ月の期間を含むがこれらに限定されない）、外科的腫瘍切除手順の後、または外科的腫瘍切除手順に続いてタキサン粒子を含む組成物の切除部位への直接注入の後のいずれかに、行うことができる。初期注入の後に、組成物の１回以上の注入を実施することができる。その後の注入は定期的な間隔で区切ることができる。非限定的な例として、定期的な間隔は、約１日、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月とすることができる。非限定的な一例では、初期注入から２週間後に５回の引き続きの注入を毎週投与でき、さらに、５回目の引き続きの注入から３ヶ月後にさらに３回の引き続きの注入を毎週投与でき、８回目の注入から３ヶ月後にさらに３回のその後の注入を毎週投与でき、その後１１回目の注入から３ヶ月後にさらに３回その後の注入を毎週投与でき、初期注入後、合計１４回のその後の注入が投与される。カテーテルおよび針などのデバイスを使用して、組成物を膀胱に投与することができる。フォーリーカテーテルとＩｎｊｅＴＡＫ（登録商標）針のドセタキセル粒子懸濁液との化学的適合性および適合性を示す研究が行われた。
【００８７】
一実施形態は、対象における膀胱癌を治療するかまたは膀胱癌の再発を阻害する方法であって、タキサン粒子を含む第１の組成物の有効量を１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除部位に直接注射することを含み、注射が、対象の１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に行われ、タキサン粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、それにより膀胱癌を治療するか、または膀胱癌の再発を阻害する方法である。いくつかの実施形態では、注射は、外科的切除処置後２時間以内に行われる。いくつかの実施形態では、方法はさらに、第１の組成物の注射後に、タキサン溶液または０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有するタキサン粒子を含む第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入することによる、第１の（初期）注入を含む。いくつかの実施形態では、第１の（初期）注入は、注射後２時間以内に行われる。いくつかの実施形態では、方法はさらに、第１の（初期）注入後にさらに１〜１４回、有効量の第２の組成物を対象の膀胱へ膀胱内注入により注入することを含む。いくつかの実施形態では、外科的切除部位が治癒した後に追加の注入が開始される。いくつかの実施形態では、注入は、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月などの定期的な間隔で区切られる。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、中リスクまたは高リスクの膀胱癌である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に対象において少なくとも３ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間、再発しない。いくつかの実施形態では、第１および第２の組成物中のタキサン粒子は、ドセタキセル粒子である。いくつかの実施形態では、第１および第２の組成物中のタキサン粒子は、パクリタキセル粒子である。いくつかの実施形態では、第１の組成物中のタキサン粒子はドセタキセル粒子であり、第２の組成物中のタキサン粒子はパクリタキセル粒子である。いくつかの実施形態では、第１の組成物中のタキサン粒子はパクリタキセル粒子であり、第２の組成物中のタキサン粒子はドセタキセル粒子である。いくつかの実施形態では、第１の組成物中のタキサン粒子はドセタキセル粒子であり、第２の組成物中のタキサン溶液はドセタキセル溶液である。いくつかの実施形態では、第１の組成物中のタキサン粒子はドセタキセル粒子であり、第２の組成物中のタキサン溶液はパクリタキセル溶液である。いくつかの実施形態では、第１の組成物中のタキサン粒子はパクリタキセル粒子であり、第２の組成物中のタキサン溶液はドセタキセル溶液である。いくつかの実施形態では、第１の組成物中のタキサン粒子はパクリタキセル粒子であり、第２の組成物中のタキサン溶液はパクリタキセル溶液である。いくつかの実施形態では、第１の組成物中のドセタキセル粒子の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、第２の組成物中のドセタキセル粒子の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、タキサン溶液はドセタキセル溶液である。いくつかの実施形態では、膀胱癌はＮＭＩＢＣである。他の実施形態では、膀胱癌はＭＩＢＣである。
【００８８】
一実施形態は、１つ以上の膀胱腫瘍を外科的に切除された対象における膀胱癌の再発を阻害するための方法であって、（ａ）１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除後に、タキサン粒子を含む第１の組成物の有効量を切除部位（複数可）に直接注射することであって、タキサン粒子が０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、注射することと、（ｂ）第１の組成物の注射後に、タキサン溶液または０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有するタキサン粒子を含む第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入することによる、第１の（初期）注入と、（ｃ）第１の（初期）注入後にさらに１〜１４回、第２の組成物の有効量を対象の膀胱へ膀胱内注入により注入することと、を含み、膀胱癌は、１つ以上の腫瘍の外科的切除後に対象において少なくとも３ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間、再発せず、それにより、膀胱癌の再発を阻害する、方法である。いくつかの実施形態では、注入は、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または約３ヶ月などの定期的な間隔で区切られる。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、１つ以上の膀胱腫瘍の外科的切除前の、中間リスクまたは高リスクの膀胱癌であった。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、ドセタキセル粒子である。いくつかの実施形態では、第１の組成物中のドセタキセル粒子の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、第２の組成物中のドセタキセル粒子の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、タキサン溶液はドセタキセル溶液である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、ＮＭＩＢＣである。他の実施形態では、膀胱癌は、ＭＩＢＣである。
【００８９】
膀胱癌の治療に有用な本開示の別の方法は、１、２、３、またはそれ以上の投与サイクルのためのタキサン粒子の組成物の腫瘍内注射である。固形腫瘍へのタキサン粒子の腫瘍内注射は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１７／１７６６２８号に開示されている。しかしながら、ドセタキセル粒子を含む組成物をマウス異種移植片モデルの膀胱癌腫瘍に２回または３回の投与サイクルで腫瘍内注射すると殺腫瘍性であることが現在示されている。本明細書で使用される場合、用語「腫瘍内注射」とは、懸濁液などの組成物の一部または全てが腫瘤に直接注射されることを意味する。当業者によって理解されるように、そのような直接注射は、例えば、組成物またはその懸濁液の量が多すぎて、すべてを固形腫瘤に直接注射できない場合などの、固形腫瘍の辺縁（「腫瘍周囲」）、および／または腫瘍を取り囲む膀胱壁組織中への組成物の一部分の注射を含んでもよい。一実施形態では、組成物またはその懸濁液は、その全体が膀胱腫瘤に注射される。本明細書で使用する場合、膀胱腫瘍へのタキサン粒子を含む組成物の腫瘍内注射による投与に関する用語「サイクル」は、腫瘍内注射による組成物の単一投与を意味する。２回以上の投与サイクルは、定期的な間隔で区切ることができる。非限定的な例として、定期的な間隔は、約１日、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、または四半期とすることができる。注射は尿道を通して実施することができる。タキサン粒子を含む組成物の膀胱内注入はまた、腫瘍内注射の２回以上の投与サイクルの間または後に実施することができる。
【００９０】
一実施形態は、対象において膀胱癌を治療する方法であり、この方法は、（ａ）腫瘍内注射を介して対象の膀胱腫瘍にタキサン粒子を含む組成物の有効量の第１の投与（第１のサイクル）を投与することであって、ここで、タキサン粒子は０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、投与することと、（ｂ）（ａ）の第１の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第２の投与（第２のサイクル）を投与することと、（ｃ）任意選択的に、（ｂ）の第２の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第３の投与（第３のサイクル）を投与することであって、ここで、膀胱癌が排除される、投与することと、それにより、膀胱癌を治療することと、を含む。いくつかの実施形態では、方法は、組成物の１回以上の追加投与を、各投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、定期的な間隔は、約１週間である。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、ドセタキセル粒子である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、低リスクの膀胱癌である。他の実施形態では、膀胱癌は、中リスクまたは高リスクの膀胱癌である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、ＮＭＩＢＣである。他の実施形態では、膀胱癌は、ＭＩＢＣである。
【００９１】
一実施形態は、タキサン粒子を含む組成物の殺腫瘍用量を、膀胱癌を有する対象の膀胱腫瘍に投与する方法が開示され、この方法は、（ａ）腫瘍内注射を介して対象の膀胱腫瘍へタキサン粒子を含む組成物の有効量の第１の投与（第１のサイクル）を投与することであって、ここで、タキサン粒子は０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、投与することと、（ｂ）（ａ）の第１の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第２の投与（第２のサイクル）を投与することと、（ｃ）任意選択的に、（ｂ）の第２の投与後の定期的な間隔内で、腫瘍内注射を介して膀胱腫瘍に組成物の有効量の第３の投与（第３のサイクル）を投与することであって、ここで、膀胱腫瘍が除去される、投与することと、を含む。いくつかの実施形態では、定期的な間隔は、約１週間である。いくつかの実施形態では、タキサン粒子は、ドセタキセル粒子である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、低リスクの膀胱癌である。他の実施形態では、膀胱癌は、中リスクまたは高リスクの膀胱癌である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、ＮＭＩＢＣである。他の実施形態では、膀胱癌は、ＭＩＢＣである。
【実施例】
【００９２】
本開示は、特定の実施例によってさらに詳細に説明される。以下の実施例は、例示のみを目的として提供され、いかなる方法でも本開示を限定することを意図するものではない。当業者は、本質的に同じ結果をもたらすように変更または修正され得る様々な重要ではないパラメーターを容易に認識するであろう。
【００９３】
実施例１．パクリタキセル粒子およびドセタキセル粒子の製造
材料および方法
未加工のパクリタキセルおよびドセタキセルは、Ｐｈｙｔｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ、Ｃａｎａｄａ）からそれぞれロット番号ＦＰ２−１５００４およびＤＴ７−１４０２５で購入した。どちらも未加工の形態で特徴付けられた。両方の薬剤の粉砕は、Ｄｅｃｏ−ＰＢＭ−Ｖ−０．４１ミル（Ｄｅｃｏ）を使用して行われた。両方の化合物についての粉砕条件は次のとおりである：
ボールサイズ＝５ｍｍ
ＲＰＭ＝６００
処理時間＝６０分
室温。
【００９４】
パクリタキセル粒子の調製
６５ｍｇ／ｍＬのパクリタキセルの溶液をアセトン中で調製した。ＢＥＴＥ  ＭｉｃｒｏＷｈｉｒｌ（登録商標）噴霧ノズル（ＢＥＴＥ  Ｆｏｇ  Ｎｏｚｚｌｅ，Ｉｎｃ）および音波プローブ（Ｑｓｏｎｉｃａ、型番Ｑ７００）を、約８ｍｍ離して結晶化チャンバ内に位置付けた。約１００ｎｍの穴を有するステンレス鋼メッシュフィルタを結晶化チャンバに取り付けて、沈殿したパクリタキセルナノ粒子を収集した。超臨界二酸化炭素を製造装置の結晶化チャンバ内に配置し、約３８℃および２４ｋｇ／時間の流速で約１２００ｐｓｉにした。音波プローブを、２０ｋＨｚの周波数で６０％の総出力に調整した。パクリタキセルを含有するアセトン溶液を、約３６時間、４．５ｍＬ／分の流速でノズルを通して送り出した。産生したパクリタキセルナノ粒子は、平均数加重平均サイズは０．８１μｍを有し、３回の個別の分析での平均標準偏差は０．７４μｍであった。
【００９５】
ドセタキセル粒子の調製
７９．３２ｍｇ／ｍＬのドセタキセルの溶液をエタノール中で調製した。ノズルおよび音波プローブを、約９ｍｍ離して加圧可能なチャンバ内に位置付けた。約１００ｎｍの穴を有するステンレス鋼メッシュフィルタを加圧可能なチャンバに取り付けて、沈殿したドセタキセルナノ粒子を収集した。超臨界二酸化炭素を製造装置の加圧可能なチャンバ内に配置し、約３８℃および６８ｓｌｐｍの流速で約１２００ｐｓｉにした。音波プローブを、２０ｋＨｚの周波数で６０％の総出力に調整した。ドセタキセルを含有するエタノール溶液を、約９５分間、２ｍＬ／分の流速でノズルを通して送り出した。次いで、沈殿したドセタキセル凝集粒子およびより小さいドセタキセル粒子を、混合物がステンレス鋼メッシュフィルタを通して送り出されるときに超臨界二酸化炭素から収集した。ドセタキセルのナノ粒子を含むフィルタを開き、得られる生成物をフィルタから収集した。
【００９６】
産生したドセタキセル粒子は、平均数加重平均サイズは０．８２μｍを有し、３回の個別のエタノール分析での平均標準偏差は０．６６μｍであった。
【００９７】
粒径分析
粒径は、光遮蔽法とレーザー回折法の両方により分析した。粒子サイジングシステムＡｃｃｕＳｉｚｅｒ  ７８０  ＳＩＳシステムが光遮蔽法に使用され、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＳＡＬＤ−７１０１がレーザー回折法に使用された。パクリタキセルナノ粒子は、分散剤として水中の０．１０％（ｗ／ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を使用して分析した。ドセタキセルナノ粒子は、分散剤としてＩｓｏｐａｒ  Ｇを使用して分析された。
【００９８】
パクリタキセル懸濁液は、約４ｍｇのパクリタキセル粒子を含有するガラスバイアルに約７ｍＬの濾過された分散剤を加えることによって調製された。バイアルを約１０秒間ボルテックスした後、超音波槽で約１分間超音波処理した。試料がすでに懸濁している場合は、パクリタキセル懸濁液対０．１％ＳＤＳ溶液の１：１溶液を作成し、１０秒間ボルテックスし、超音波槽で１分間超音波処理した。
【００９９】
ドセタキセル懸濁液は、約４ｍｇのドセタキセル粒子を含有するプラスチックバイアルに約７ｍＬの濾過された分散剤を加えることによって調製された。バイアルを約１０秒間ボルテックスした後、超音波浴で約２分間超音波処理した。この懸濁液をレーザー回折分析に使用した。未使用の懸濁液を１２５ｍＬの粒子不含プラスチックボトルに注ぎ、次いで、濾過した分散剤で約１００ｍＬまで満たした。懸濁液を約１０秒間ボルテックスした後、超音波槽で約２分間超音波処理した。この希釈された懸濁液を光遮蔽分析に使用した。
【０１００】
ＡｃｃｕＳｉｚｅｒ  ７８０  ＳＩＳで粒子を分析する前に、まずバックグラウンド試験を行った。蠕動ポンプを使用して、リザーバーから０．２２μｍのＭｉｌｌｉｐｏｒｅフィルタを通してボトルにポンプで注入することにより、新しい粒子不含プラスチックボトルにブランク懸濁液を充填した。粒子／ｍＬカウントが１００粒子／ｍＬ未満であることを確認するために、バックグラウンド分析が実行された。溶液の濃度に応じて、５〜１００μＬの少量のパクリタキセル懸濁液を、バックグラウンド試験の適所にあるプラスチックボトルにピペットで入れ、約１００ｍＬの分散剤で満たし、分析を開始した。カウントを監視し、パクリタキセル溶液を追加して、分析全体で６０００〜８０００粒子カウント／ｍＬに到達および／または維持した。分析が完了すると、バックグラウンドデータが除去され、４カウント未満の任意の測定が除去された。
【０１０１】
バッチセルを使用してＳＡＬＤ−７１０１の粒子を分析するために、手動測定を選択して分析を開始した。屈折率は１．５〜１．７とした。バッチセルは、エッチングされたラインを通過した直後に濾過された分散剤で満たされた。ブランク測定が実行された。少量のＡＰＩ（パクリタキセルまたはドセタキセル）懸濁液をピペットで注入し、０．１５〜０．２吸光単位の許容吸光度を達成するために必要に応じて、１００μＬもの低い溶液の濃度に応じて、一般に＜１ｍＬをバッチセルに注入する。測定が実行され、最高の信頼度を伴う結果のグラフが選択された。バックグラウンドは自動的に考慮された。
【０１０２】
ＢＥＴ分析
２００〜３００ｍｇの検体の既知の質量を３０ｍＬの試料管に添加した。次いで、装填された管は、Ｐｏｒｏｕｓ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｉｎｃ．ＳＯＲＰＴＯＭＥＴＥＲ（登録商標）、モデルＢＥＴ−２０２Ａに載置された。次いで、自動試験が、ＢＥＴＷＩＮ（登録商標）ソフトウェアパッケージを使用して行われ、各試料の表面積が続いて計算された。
【０１０３】
かさ密度分析物
パクリタキセルまたはドセタキセル粒子調製物を、室温でプラスチック計量漏斗を介して、１０ｍＬの風袋を除いたシリンダーに加えた。薬物の質量をほぼ０．１ｍｇまで測定し、容量をほぼ０．１ｍＬまで決定し、密度を計算した。
【０１０４】
溶出試験
パクリタキセル
約５０ｍｇの材料（すなわち、未加工パクリタキセル、粉砕パクリタキセル、またはパクリタキセル粒子）を、約１時間バイアル内で材料およびビーズを混転させることによって、約１．５ｇの１ｍｍガラスビーズ上にコーティングした。ビーズをステンレス鋼メッシュ容器に移し、３７℃、ｐＨ７のメタノール／水５０／５０（ｖ／ｖ）媒体および７５ｒｐｍで動作するＵＳＰ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ  ＩＩ（Ｐａｄｄｌｅ）を含む溶解浴内に配置した。１０、２０、３０、６０、および９０分で、５ｍＬのアリコートを除去し、０．２２μｍフィルタを通して濾過し、２２７ｎｍにおいてＵ（Ｖ／Ｖ）分光光度計で分析した。試料の吸光度値を、溶解媒体中で調製した標準溶液の吸光度値と比較して、溶解した材料の量を決定した。
【０１０５】
ドセタキセル
約５０ｍｇの材料（すなわち、未加工ドセタキセル、粉砕ドセタキセル、またはドセタキセル粒子）を、３７℃、ｐＨ７のメタノール／水１５／８５（ｖ／ｖ）媒体および７５ｒｐｍで動作するＵＳＰ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ  ＩＩ（Ｐａｄｄｌｅ）を含む溶解浴内に直接配置した。５、１５、３０、６０、１２０、および２２５分で、５ｍＬのアリコートを除去し、０．２２μｍフィルタを通して濾過し、２３２ｎｍにおいてＵＶ／ＶＩＳ分光光度計で分析した。試料の吸光度値を、溶解媒体中で調製した標準溶液の吸光度値と比較して、溶解した材料の量を決定した。
【０１０６】
結果
上記のプロトコルとそのバリエーション（すなわち、修正ノズル、フィルタ、音波エネルギー源、流量など）を使用して生成された粒子のＢＥＴ表面積は、２２〜３９ｍ2／ｇの範囲であった。比較すると、未加工パクリタキセルのＢＥＴ表面積は７．２５ｍ2／ｇと測定され、一方で、米国特許第５８３３８９１号および第５８７４０２９号の方法に従って製造されたパクリタキセル粒子は１１．３〜１５．５８ｍ2／ｇの範囲であった。本開示の方法を使用して生成される例示的な粒径は、表１に示されている。
【表１】
2021509663.tif 000005
【０１０７】
本開示の方法によって生成された生薬物、粉砕薬物粒子、および薬物粒子についてのかさ密度、ＳＳＡ、および溶解速度（上記のように実施）に関する比較研究を、以下の表２および表３に提供する。パクリタキセルおよびドセタキセル材料の完全な溶解時間経過を、それぞれ表４および表５に示す。
【表２】
2021509663.tif 000006
【表３】
2021509663.tif 000007
【表４】
2021509663.tif 000008
【表５】
2021509663.tif 000009
【０１０８】
実施例２．ウサギ膀胱壁への色素の直接注入のパイロット評価研究
研究は、ウサギの膀胱壁へのビヒクル製剤中の青色組織色素の直接注射（壁内注射）を評価するために行われた。膀胱壁への注射は、ｎＤｏｃｅ（この実施例で使用された、本明細書で開示されているナノ粒子ドセタキセル、平均粒径（数）１．０７８ミクロン、ＳＳＡ  ３７．２ｍ2／ｇ、およびかさ密度（非タップ）０．０７２３ｇ／ｃｍ3を伴う約９９％ドセタキセル）懸濁液のヒトにおける意図された投与経路である。ウサギは膀胱壁の筋肉構造と膀胱のサイズが類似しているため、研究に適した種である。製剤ビヒクルは、滅菌生理食塩水溶液（注射用０．９％塩化ナトリウム、ＵＳＰ）中で調製された０．４％ｗ／ｗポリソルベート８０  ＮＦ、３．２％ｗ／ｗエタノール（２００プルーフ）を含有していた。視覚化に十分な量の１０ｍｇ／ｍＬのＥｖａｎｓ  Ｂｌｕｅ組織色素をビヒクルに添加した。
【０１０９】
１日目に、麻酔導入後、動物を背臥位にし、滅菌手術の準備をした。正中線切開後、泌尿器膀胱にアクセスし、２５または２７ゲージの針を使用して、エバンスブルーの組織色素を含有するビヒクルを膀胱壁に注射した。泌尿器膀胱に入らないように注意した。注射のために針を斜めに上向きに挿入し、次いで、膀胱壁から針を取り除く前に、斜め下向きの位置まで回転させた。各動物は、図１に示される投与計画に従って、注射部位あたり１００μＬの投与量で９回の注射を受けた。注入は約７ｍｍ間隔で行われた。各注射後、写真が得られた。試験終了時（８日目）に、動物を安楽死させた。皮膚は腹側正中切開から反転され、肉眼的所見はすべて同定され、生前所見と相関していた。膀胱を（外部および内部で）検査して、投与手順の忍容性が良好かどうかを判断した。
【０１１０】
１匹の動物の第１ノ注射後および第９ノ注射後に得られた写真をそれぞれ図２および図３に示す。写真からわかるように、青色色素は、注射部位に囲まれた領域全体を囲むように拡散し、試験部位全体の集密的な到達範囲を提供した。注射手順では、予期しない悪影響は発生しなかった。
【０１１１】
実施例３．ラットにおけるｎＤｏｃｅの単一投与小胞内範囲に見出される毒性および毒性動態研究
ＣＤ（登録商標）［Ｃｒｌ：ＣＤ（登録商標）（ＳＤ）］雌ラットの膀胱に単一小胞内投与した後の、試験物質ｎＤｏｃｅ（この実施例で使用された、本明細書に開示されているナノ粒子ドセタキセル、平均粒径（数）１．０７８ミクロン、ＳＳＡ  ３７．２ｍ2／ｇ、およびかさ密度（非タップ）０．０７２３ｇ／ｃｍ3を伴う約９９％ドセタキセル）の毒性および毒物動態学を評価および特徴付けるために、および最大耐用量（ＭＴＤ）を推定するために、非ＧＬＰ研究が実施された。小胞内経路は、ヒトにおけるｎＤｏｃｅ懸濁液の意図された投与経路である。ラットは、さまざまな種類の化学物質の毒性を評価するために使用される通常のげっ歯類モデルであり、大規模な履歴データベースが存在している。雄のラットと比較して尿道カテーテル法が容易であることを考慮して、雌のラットをこの研究のために選択した。動物は、７２時間または１４日間の投与後回復期間の間、維持された。以下の表６および表７に示すように、ラットを研究に割り当てた。
【表６】
2021509663.tif 000010
【表７】
2021509663.tif 000011
【０１１２】
ｎＤｏｃｅ（ナノ粒子ドセタキセル）懸濁液は、適切な量のｎＤｏｃｅ（ナノ粒子ドセタキセル）粉末を滅菌再構成溶液［生理食塩水溶液（注射用ＵＳＰの０．９％塩化ナトリウム）中の１％ｗ／ｗのポリソルベート８０  ＮＦ、８％ｗ／ｗのエタノール２００プルーフ（脱水アルコール非変性ＵＳＰ）］および生理食塩水溶液（注射用ＵＳＰの０．９％塩化ナトリウム）と混合することにより調製して、１．６、５、１５、および４０ｍｇ／ｍＬの名目上のドセタキセル粒子濃度を得る。ｎＤｏｃｅ粉末の平均粒径（数）は、１．０ミクロンであった。ビヒクル対照は、適切な量の生理食塩水溶液（注射用ＵＳＰの０．９％塩化ナトリウム）を適切な量の滅菌再構成溶液（上記を参照）に添加することにより調製され、ビヒクル対照中、０．４％ｗ／ｗのポリソルベート８０および３．２％ｗ／ｗのエタノールの最終濃度を得た。
【０１１３】
ｎＤｏｃｅ懸濁液は、１日目に１回、小胞内注入を介して膀胱に２ｍＬ／ｋｇの総投与量で投与された。用量レベルは、０（対照）、３．２、１０、３０、および８０ｍｇ／ｋｇであった。注入前に、動物に麻酔をかけ、ラットの膀胱カテーテルを尿道を介して膀胱内に進めた。カテーテルが膀胱に入ると、膀胱の内容物が排出されて、膀胱から尿がなくなった。ｎＤｏｃｅ懸濁液またはビヒクル対照は、ボーラス注射としてカテーテルを通して膀胱内に注入され、膀胱内に２時間保持された。投与後２時間で、膀胱の内容物がカテーテルを通して収集された。
【０１１４】
毒性の評価は、死亡率、臨床観察、体重、摂餌量、ならびに選択した組織の臨床的および解剖学的病理学に基づいた。評価された次のパラメーター：死亡率、臨床観察、体重、摂餌量、または尿検査において、ｎＤｏｃｅ関連の所見は存在しなかった。最小〜軽度の慢性活動性炎症が、５群の３匹のラットのうち２匹の膀胱（８０ｍｇ／ｋｇ）に７２時間の終了間隔で認められた。しかし、重症度は軽度であり、可逆性であり、回復間隔期間の最後（１５日目）には観察されなかった。したがって、観察された影響の重症度が最小限であり、回復期間の終わりまで持続しなかったことを考慮すると、８０ｍｇ／ｋｇがＭＴＤと考えられる。
【０１１５】
実施例４．ヒト膀胱癌（ＵＭ−ＵＣ−３）マウス異種移植片研究
免疫不全（Ｈｓｄ：Ａｔｈｙｍｉｃ  Ｎｕｄｅ−Ｆｏｘｎ１ｎｕヌード）マウスにおける皮下（ＳＣ）ＵＭ−ＵＣ−３膀胱癌細胞株（ＡＴＣＣ−ＣＲＬ−１７４９）腫瘍の成長に対する、ｎＤｏｃｅ（本明細書で開示されるナノ粒子ドセタキセル、本実施例で使用される１．０７８ミクロンの平均粒径（数）、３７．２ｍ２／ｇのＳＳＡ、および０．０７２３ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する約９９％のドセタキセル）懸濁液の１、２、および３回の毎週の腫瘍内注射（ＩＴ）投与（投与サイクル）の効果を評価するために、研究を行った。ビヒクルの腫瘍内注射投与およびドセタキセル溶液の静脈内（ＩＶ）投与も、対照群として研究に組み込んだ。
【０１１６】
腫瘍を、右脇腹に１×１０7個の細胞（１００μＬ体積）で移植した（マトリゲル：ＢＤ３５６２３４を含むＰＢＳ  １：１）。腫瘍体積をキャリパーで決定した。式：Ｖ＝ｒ長さ＊ｒ幅＊ｒ高さ）＊π＊４／３。動物の体重を週２回測定した。腫瘍体積を、腫瘍移植後３〜４日毎に（合計で約２０回の測定）および安楽死の日に決定した。腫瘍の写真画像を、移植後２、３、および４週間において、かつ安楽死の日に得た。いったん腫瘍が３，０００ｍｍ3のサイズ、または重大な腫瘍の潰瘍化の点まで達すると、動物を安楽死させた。安楽死の時点で、腫瘍を分離し、半分にした。腫瘍の半分は、ＬＮ２中で急速凍結され、−８０℃で保存され、その後に分析される。腫瘍のもう半分をホルマリンで固定した。２つのＨ＆Ｅ染色スライド／腫瘍を調製した（最大４個の腫瘍／群を処置した）。
【０１１７】
腫瘍移植後１８日目に、平均腫瘍サイズは、５０〜３２５ｍｍ3であり、動物を等しい平均腫瘍サイズの５つの群に分類し、以下の表８に示されるように処置した。
【表８】
2021509663.tif 000012
【０１１８】
ＩＴ投与（ビヒクル／ｎＤｏｃｅ）のために、注射（２７Ｇ、１／２インチ針を使用）を、腫瘍内の３つの部位で投与して（４０ｍｇ／ｍＬのｎＤｏｃｅ原液および２５ｇのマウス＝６３μＬに基づいて計算した総注射体積。３つの注射部位に均一に分割）、腫瘍全体にわたる試験製剤の分布を最大化した。第２の処置（第２のサイクル）を第１の処置（第１のサイクル）の７日後に行い、第３の処置（第３のサイクル）を第１の処置の１４日後に行った。ドセタキセル溶液ＩＶを、尾静脈を介して投与した。
【０１１９】
試験製剤を次のように調製した。
ビヒクル（対照）：生理食塩水（注射用０．９％塩化ナトリウム）再構成溶液中１％ポリソルベート８０／８％エタノール１ｍＬを、１．５ｍＬの生理食塩水（０．９％注射用塩化ナトリウム、ＵＳＰ）で希釈した。ビヒクル中、ポリソルベート８０の最終濃度は、０．４％であり、エタノールの最終濃度は、３．２％であった。
ｎＤｏｃｅ懸濁液：生理食塩水（注射用０．９％塩化ナトリウム）再構成溶液中１％ポリソルベート８０／８％エタノール１ｍＬを、ｎＤｏｃｅ粒子粉末のバイアル（１００ｍｇ／６０ｃｃのバイアル）に添加した。ｎＤｏｃｅ粒子粉末の平均粒径（数）は、１．０ミクロンであった。バイアルを反転させて１分間手で激しく振盪した。振盪直後、１．５ｍＬの生理食塩水溶液（０．９％注射用塩化ナトリウムＵＳＰ）をバイアルに添加し、バイアルをさらに１分間手で振盪して、４０ｍｇ／ｍＬの懸濁液を作製した。懸濁液を少なくとも５分間そのままにさせて、封入された空気および泡を低減した。
ドセタキセル溶液：５０％エタノール／５０％ポリソルベート８０中で２０ｍｇ／ｍＬのドセタキセル原液を調製した。生理食塩水溶液（０．９％注射用塩化ナトリウム）を原液に添加して、最終の３ｍｇ／ｍＬドセタキセル溶液を作製した。ボルテックスして混合した。
【０１２０】
腫瘍体積を、研究継続期間（６１日間）、週２回決定した。この研究の結果は、図４、図５、図６、図７、図８、図９、図１０、図１１、図１２、および図１３に示される。図４に見られるように、ｎＤｏｃｅ  ＩＴ  ２サイクルおよびｎＤｏｃｅ  ＩＴ  ３サイクルの投与量の場合、腫瘍体積が減少し、腫瘍を効果的に排除した。腫瘍体積は、ｎＤｏｃｅ  ＩＴ  １サイクルおよびドセタキセルＩＶ  ３サイクルの投与量の場合、最初に減少したが、その後増加した。これらの観察結果は、図５、図６、図７、図８、図９、図１２、および図１３にも反映されている。
【０１２１】
図１０の散布図は、処置の１日目対研究終了時（屠殺の日）の動物当たりの腫瘍体積を示す。図１０から分かるように、本質的に、全ての腫瘍が効果的に排除されたため、研究終了時の所与の動物における腫瘍の体積は、ｎＤｏｃｅＩＴ  ２サイクルおよびｎＤｏｃｅＩＴ  ３サイクルで処置した動物の場合、同じ動物の初期の腫瘍サイズに依存しなかった。しかしながら、ドセタキセルＩＶ  ３サイクルで処置した動物の場合、研究終了時の腫瘍の体積は一般に、所与の動物の初期腫瘍体積に依存し、すなわち、初期腫瘍体積が大きいほど、研究終了時の腫瘍体積はより大きかった。ドセタキセルＩＶ  ３サイクルによる処置は、小さい腫瘍の処置においてある程度効果的であったが、大きい腫瘍の処置ではあまり効果的ではなかった。初期腫瘍サイズに関わらず、２サイクルまたは３サイクルのｎＤｏｃｅ  ＩＴ（腫瘍内）の投与は、腫瘍を効果的に治療した。
【０１２２】
図１１から分かるように、ドセタキセルＩＶ  ３サイクルで処置した動物の初期の動物体重減少は一般に、ｎＤｏｃｅ  ＩＴ  １サイクル、ｎＤｏｃｅ  ＩＴ  ２サイクル、およびｎＤｏｃｅ  ＩＴ  ３サイクルで治療した動物よりも大きかった。体重は最終的に、全ての処置においてある程度回復した。これは、初期食欲喪失の副作用が、ｎＤｏｃｅ  ＩＴ投与よりもドセタキセルＩＶ投与で大きいことを示唆し得る。また、ドセタキセルＩＶ  ３サイクルで処置した動物が、ｎＤｏｃｅ  ＩＴ  ３サイクルで処置した動物よりも末梢神経障害の大きい兆候を有したことが観察され、末梢神経障害の兆候は、ｎＤｏｃｅ  ＩＴ  １サイクルまたは２サイクルで処置した動物では観察されなかった。
【０１２３】
死亡または安楽死の日に、腫瘍組織試料を採取し、ドセタキセル分析、組織学、および免疫組織化学（ＩＨＣ）観察のためにＬＮ２中で凍結させた。ＩＶドセタキセル対照群では、１つの腫瘍のみ（測定した７つのうち）が、アッセイの定量限界（１ｎｇ／ｇ）を超えるドセタキセルレベルを有した。ドセタキセルの測定可能なレベルは、ＩＴ  ｎＤｏｃｅ群からの全ての腫瘍で見られ、ｎＤｏｃｅ３サイクル群は、腫瘍内に残っているドセタキセルの最高濃度を有する傾向があった（図１４を参照）。組織学スライド、Ｈ＆Ｅ染色の顕微鏡写真が、図１５〜２５に示される。Ｆ４／８０抗体染色で染色したＩＨＣスライドの顕微鏡写真が、図２６、図２７、および図２８に示される。
【０１２４】
追加のＨ＆Ｅおよび免疫組織化学的（ＩＨＣ）評価を、ホルマリン固定組織に行い、図２９および３０に示す。
【０１２５】
図１５〜２５の顕微鏡写真の組織学的概要
一般的な観察結果：
対照：増殖細胞を有し、単核免疫細胞浸潤がほとんどまたはまったくなく、時折マクロファージが見られる、広範なレベルの生存腫瘍。
【０１２６】
ドセタキセル溶液：ある程度の腫瘍壊死を伴う、ある程度のマクロファージおよび時折のリンパ球応答応を有する、多くの生存しているように見える腫瘍塊。
【０１２７】
ｎＤｏｃｅ  ２サイクル：単離された腫瘍細胞がいくつか残り、皮膚損傷の小さい領域、瘢痕／線維症が見られ、マクロファージおよび単核細胞を含む免疫細胞浸潤物。
【０１２８】
ｎＤｏｃｅ  ３サイクル：単離された腫瘍細胞がいくつか残り、皮膚損傷の小さい領域、瘢痕／線維症が見られ、マクロファージおよび単核細胞を含む免疫細胞浸潤物。
【０１２９】
広範囲の単核細胞浸潤が、ｎＤｏｃｅの腫瘍内注射を受けた動物の皮下空間の腫瘍移植部位において観察された。サイクル数が増えると、腫瘍応答が増加するが、おそらくヌードマウスの脇腹に注射するための小さい空間および浅い領域により、ある程度の皮膚損傷がある（例えば、腫瘍上できつく引っ張られている皮膚に対してすぐの腫瘍）。使用されるモデルがＴ細胞を欠損しているため、リンパ系細胞は、Ｂ細胞またはＮＫ細胞である可能性が高い。Ｂ細胞は、細胞傷害の生成に寄与する（抗体は、Ｆｃ受容体を発現させる細胞に結合し、これらの細胞の死滅能力を高める。ＮＫ細胞は、腫瘍細胞の死滅に重要である自然リンパ系細胞である。腫瘍のある患者では、ＮＫ細胞活性が低減され、腫瘍の成長を可能にする。Ｔ細胞に加えて、ＮＫ細胞は、それらの活性を高めるためのいくつかのチェックポイント阻害剤の標的である。提供された全ての組織学的試料において、マクロファージが腫瘍内に存在していたが、その数は、大幅に増加するようには見えなかった。
【０１３０】
トリガーシグナルまたは阻害シグナルのいずれかを送達することが可能な幅広い表面受容体を使用することによって、ＮＫ細胞は、それらの環境内の細胞を監視して、細胞が異常（腫瘍またはウイルス感染）であり、細胞毒性によって排除される必要があるかどうかを確認することができる。ＮＫ細胞の細胞毒性および走化性は、腫瘍細胞およびそれらの副産物を含む多くの病理学的プロセスによって変更され得る。ある特定のシグナルに応じて、それらの機能は、強化または増強される。異なるＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を使用して、いくつかの病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に応答して、ＮＫ細胞は、サイトカイン産生および／または細胞溶解活性を高めることができる。ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、およびＩＦＮ  α／βを含むサイトカインも、ＮＫ細胞の活性を変更することができる。ＮＫ細胞は、異なる腫瘍細胞標的を死滅させることが可能な細胞溶解性エフェクターのみである単純な細胞ではなく、むしろ、それらは、多様な環境状況でそれらの活性を細かく調整することができる異種の集団を表す。
【０１３１】
腫瘍負荷は、ｎＤｏｃｅで処置した動物の異種移植片注射部位において大幅に低減され、腫瘍内注射は、静脈内ドセタキセルよりも効果的である。したがって、ｎＤｏｃｅの形態のドセタキセルの局所投与は、付加的な効力を提供する。これは、長期にわたる化学療法へのより長い曝露および腫瘍部位への活発な細胞浸潤の両方による可能性が高い。この後者の応答は、用量密度（実際の用量および投与頻度）に依存しているように見えた。解剖学的に、マクロファージは、腫瘍の縁に多数存在し、腫瘍内でより深く移動する間質全体にわたって頻度が減少する。
【０１３２】
図２６、図２７、および図２８の免疫組織化学の概要
図２６：広いシート状の生存腫瘍細胞であり、単核免疫細胞はない（茶色の染色なし）。
【０１３３】
図２７：膨大な数の生存腫瘍細胞の中で、腫瘍細胞破壊は非常に少なく、散在性単核免疫細胞はほとんどない。
【０１３４】
図２８：実質上、腫瘍細胞が残っておらず、膨大な数の単核免疫細胞が明確なパターン（おそらく大部分はマクロファージ）に組織化されている。
【０１３５】
さらなるＨ＆Ｅおよび免疫組織化学的（ＩＨＣ）評価（図２９および図３０を参照されたい）
Ｈ＆ＥおよびＩＨＣ染色の前に腫瘍組織を固定した。膀胱組織切片を脱パラフィンし、標準的なＨ＆ＥおよびＩＨＣ染色により処理した。治療群あたり少なくとも４つの腫瘍が処理された。
【０１３６】
観察結果：図２９の対照症例：
上段：Ｈ＆Ｅ染色切片（Ａ〜Ｃ）：（Ａ）近接に密集した大きな多形性腫瘍細胞のシートで構成される膀胱癌腫。（Ｂ）顕著な核小体（実線矢印）および有糸分裂像の著しい増加（破線矢印）を伴う大きな腫瘍細胞を示す高倍率像。（Ｃ）混合した変性腫瘍細胞（点線矢印）および画像の下部と上部に隣接する生存可能な癌腫（実線矢印）を伴う地理的な腫瘍細胞壊死の焦点を示す低倍率像。
下段：ＩＴビヒクル（Ｄ）およびＩＶドセタキセル（ＥとＦ）：（Ｄ）ＩＴビヒクルの場合（症例Ａ３）。Ｈ＆Ｅ染色切片は、画像の下半分に広範な壊死（破線矢印）と左上に生存可能な癌腫（実線矢印）を示す。（Ｅ）ＩＶドセタキセル（症例Ｂ１）。Ｈ＆Ｅ染色切片は、画像の右上部分に、対照およびＩＴビヒクルの場合における癌腫と類似しているように見える、生存可能な癌腫を示す（実線矢印）。腫瘍を囲むカプセルのない左下の非腫瘍性脂肪組織との境界がはっきりしていることに留意されたい（破線矢印）。脂肪はまばらな免疫細胞の浸潤を含んでいた。（Ｆ）ＩＶドセタキセル（症例Ｂ１）。ＣＤ６８染色は、画像の下半分の周囲の間質に浸潤する穏やかなマクロファージを強調している（破線の矢印）。生存可能な癌腫は、画像の上部にある（実線矢印）。
【０１３７】
観察：図３０。腫瘍内ｎＤｏｃｅ症例（すべての群からの典型的な画像は１サイクル、２サイクル、および３サイクルを含んだ）。
１行目：１サイクルのｎＤｏｃｅ（１×）（症例Ｃ４）。（Ａ）非生存壊死物質の均質な好酸球染色からなる広範囲の地理的腫瘍細胞壊死を示す低倍率Ｈ／Ｅ染色（破線矢印）。壊死は、画像の右上にあるマウスの被覆皮膚表面（２つの実線の矢印）から、左下隅にある限局性の生存可能な癌腫（単一の実線の矢印）に及ぶ。（Ｂ）左の生存可能な癌腫（実線矢印）と右の壊死（破線矢印）の高倍率像。（Ｃ）周囲の非腫瘍性脂肪組織における軽度のマクロファージ浸潤（実線矢印）を示すＣＤ６８免疫組織化学染色。
２行目：２サイクルのｎＤｏｃｅ治療（２ｘ）（症例Ｄ２）。（Ｄ）最大寸法が２ｍｍ（実線矢印）で測定された３次元リンパ構造（ＴＬＳ）を示す低倍率像。十分に境界付けされたＴＬＳの境界と、免疫細胞が浸潤している周囲の組織との境界に留意されたい。潰瘍を形成している被覆皮膚（破線の矢印）に留意されたい。（Ｅ）ＴＬＳのリンパ球の大部分がＢ細胞であることを確認する、ＴＬＳ全体で広範な染色を示すＣＤ４５Ｒ免疫染色（Ｂ細胞マーカー）。Ｂ細胞のリンパ濾胞（実線の矢印）と、毛包間の「Ｔ細胞」のゾーン（破線の矢印）を表す非染色焦点領域への構成に留意されたい。（Ｆ）同じＴＬＳの高倍率像。髄洞（破線の矢印）とリンパ濾胞の１つに形成される胚中心（実線の矢印）を含む肺門領域を持つＴＬＳの構成に留意されたい。
３行目：２サイクルのｎＤｏｃｅ治療（２ｘ）（症例Ｄ２）、継続。（Ｇ）胚中心の高倍率像。小さな成熟したリンパ球、中間サイズのセントロサイト、そして時折大きなセントロブラスト（実線矢印）の混合集団からなる胚中心の多形性リンパ球集団に留意されたい。これを小さな成熟リンパ球の隣接する均質な集団と比較されたい（破線の矢印）。（Ｇ）同じ症例、左側に潰瘍のある皮膚（破線の矢印）、および右側に壊死組織（実線の矢印）を伴う、別個の領域を示している。生存可能な癌腫は存在しない。（Ｈ）診断可能な生存可能な癌腫を伴わない均質な好酸球性無定形壊死材料を示す、壊死領域の高倍率像。
４行目：３サイクルのｎＤｏｃｅ治療（３ｘ）（症例Ｄ２）。（Ｊ）上部に潰瘍のある皮膚表面と下にある壊死（破線矢印）を示す、低倍率像。画像の右下部分にある隣接するＴＬＳに留意されたい（実線矢印）。（Ｊ）ＴＬＳのＢ細胞の密集した集団を示すＣＤ４５Ｒ免疫染色切片の低倍率像（実線矢印）。（Ｌ）診断可能な生存可能な癌腫細胞を伴わない無定形壊死材料を示す、皮膚潰瘍の下の壊死領域の高倍率像。
【０１３８】
病理組織学：
未治療対照：剖検日、未治療対照動物の腫瘍体積を測定し、次いで、腫瘍部位の組織を解剖し、腫瘍の約半分をドセタキセル内容物のために処理し、半分を組織学的分析のために保存した。未治療対照腫瘍は、スライド上で最大１５ｍｍと測定され、密接に詰め込まれた腫瘍細胞のシートからなる、浸潤性癌腫の広範なびまん性増殖を含んだ（図２９−スライドＡ）。腫瘍細胞は大きく、小胞クロマチンを有する多形性核、および顕著な好酸球性核小体を伴った。腫瘍細胞は、適量の軽度に好酸球性な細胞質を有し、それらは、有糸分裂活性の増加を顕著に示した（１０の高倍率視野当たり１２２の有糸分裂［４００×ｈｐｆ］）（図２９−スライドＢ）。個別に壊死性およびアポトーシス性腫瘍細胞が腫瘍内に存在し、凝固性腫瘍細胞壊死の散在した領域もあり、全体として腫瘍領域の５〜１０％を占めていた。壊死中心は均質な好酸球性壊死破片からなり、これは混合した変性腫瘍細胞の領域を含んでいた（図２９−スライドＣ）。腫瘍内に有意なリンパ球浸潤物はなく、特に、腫瘍組織または周囲の非腫瘍性間質組織には、別個の小リンパ球の集合体または三次リンパ組織（ＴＬＳ）はなかった。周囲の間質は、斑状の穏やかな免疫細胞浸潤物を含んでいた。ＣＤ６８の免疫組織化学的染色（マクロファージのマーカー）は、腫瘍内および周囲の軽度のマクロファージ浸潤物を強調し、腫瘍壊死の病巣内の染色密度の増加は、細胞破片の増加を含む領域のマクロファージの増加濃度と一致した。
【０１３９】
未治療腫瘍内ビヒクル対照：剖検日、これらのＩＴビヒクル動物の腫瘍体積を測定し、次いで、腫瘍部位の組織を解剖し、腫瘍の約半分をドセタキセル内容物のために処理し、半分を組織学的分析のために保存した。２つの腫瘍内ビヒクル症例は、形態学的および免疫組織化学的レベルで同様の所見を示し、両方とも、上記した対照症例において見られるものと同一の形態学的および免疫組織化学的外観を有した。特に、両方の症例には、対照の症例で見られたものと同一の外観を持つ大きな癌腫細胞の広範なシートが含まれていた。生存可能な腫瘍は、これらの２つの症例のスライドでそれぞれ最大寸法１２ｍｍと２４ｍｍまで測定された。両方の症例は壊死の地理的領域も含み、これは腫瘍領域の５０％超を占める１つの症例（症例Ａ３）でかなり広範であった（図２９スライドＤ）。両方の症例では評価のために非常に限られた非腫瘍性組織があったが、存在する場合、これは穏やかな免疫細胞浸潤物を含んでいた。ＴＬＳは存在しなかった。
【０１４０】
静脈内ドセタキセル：剖検日、ＩＶドセタキセル動物の腫瘍体積を測定し、次いで、腫瘍部位の組織を解剖し、腫瘍の約半分をドセタキセル内容物のために処理し、半分を組織学的分析のために保存した。２つのＩＶドセタキセル症例は、形態学的および免疫組織化学的レベルで同様の所見を示し、両方とも、上記した対照症例および２つのＩＴビヒクル症例で見られるものと同様の形態学的および免疫組織化学的外観を有した。具体的には、両方の症例には、２つの症例においてそれぞれ腫瘍領域の１１〜５０％（症例Ｂ１）および５０〜９０％（症例Ｂ３）を占める、大きな生存可能な癌腫細胞のシートと地理的腫瘍細胞壊死の散在領域が含まれていた（下の表１２、図２９−スライドＥおよび図２９−スライドＦを参照されたい）。どちらの場合も、スライド上で最大寸法が１０ｍｍを超える腫瘤（１１ｍｍおよび１５ｍｍ）があった（以下の表９を参照）。周囲の間質組織は、穏やかな免疫細胞浸潤を含んでいた。ＴＬＳは存在しなかった。
【０１４１】
腫瘍内ｎＤｏｃｅ１サイクル：この群の３匹すべての動物には、対照、ＩＴビヒクル、およびＩＶドセタキセル群で見られるのと同様の多形性細胞で構成される残存癌腫が含まれていた。しかし、残存癌腫の量はこの群内で劇的に異なった。具体的には、３つの症例のうち２つ（症例Ｃ１およびＣ６）に、スライド上で最大寸法が１６ｍｍおよび１９ｍｍと測定された広範囲の残存する生存可能な癌腫が含まれていた。これらの２つの症例はまた、腫瘍領域の１１〜５０％を占める地理的壊死を有していた。これら２つの症例の１つ（症例Ｃ１）には、軽度の免疫細胞浸潤を伴う非腫瘍性組織が少量含まれていた。もう１つの症例には、周囲の免疫細胞浸潤を評価するための非腫瘍性組織の存在はなかった（症例Ｃ６）。対照的に、第３の症例（症例Ｃ４）は、腫瘍の５０〜９０％の壊死を示し、この場合、スライド上の最大断面寸法が２．５ｍｍと測定された、残存する生存可能な癌腫の小さな焦点のみが存在した（図３０−スライドＡおよび図３０スライドＢ）。これと同じ症例では、周囲の非腫瘍性間質は、軽度の免疫細胞浸潤物を含んでいた（図３０−スライドＣ）。さらに、より深い免疫組織化学染色切片では、隣接する非腫瘍性脂肪組織にＴＬＳが認められた。ＴＬＳの最大寸法は約１ｍｍと測定され、リンパ濾胞および門部領域への組織化を示す小さな成熟したリンパ球の密集した、十分に周囲を囲んだ集まりで構成されていた。ＣＤ４５Ｒの染色により、ＴＬＳのリンパ球の大部分がＢ細胞であり、これらがＴＬＳ内のＢ細胞の濾胞に組織化されたことが確認された。未治療腫瘍内ビヒクル対照と同じように、剖検日、これらの動物の腫瘍体積を測定し、次いで、腫瘍部位の組織を解剖し、腫瘍の約半分をドセタキセル内容物のために処理し、半分を組織学的分析のために保存した。
【０１４２】
腫瘍内ｎＤｏｃｅ  ２サイクル：この群の５匹の動物のうち４匹は、それらの腫瘍部位組織の全体が組織学的分析のために保存されていた。この群の５匹の動物のうち２匹（症例Ｄ２およびＤ８）には生存可能な癌腫が含まれておらず、これらの動物はまた広範囲の地理的腫瘍壊死を示した（腫瘍壊死の１００％；図３０−スライドＨおよび図３０−スライドＩ）。残りの３匹の動物のうち２匹（症例Ｄ４およびＤ６）にも、広範な壊死（腫瘍の９０％超）が存在し、どちらの症例にも、剥離した腫瘍細胞のまれな小さな集まりしか存在せず、その最大のものは各症例で最大０．１ｍｍと測定された。これらのまれな小さな剥離した腫瘍細胞クラスターの有意性は明確ではなく、それらの外観と組織の縁部および壊死の縁部に隣接する剥離した局在を考えると、切片化の人的効果は除外することができなかった。これら４つの症例のそれぞれで、単一のＴＬＳがあった。ＴＬＳのうち３つは１ｍｍ、１ｍｍ、２ｍｍと測定されたが、４つ目は０．１ｍｍと測定された（症例Ｄ８）。ＴＬＳは、非腫瘍性組織内に離散的に配置され、一般に、壊死性物質に近接して、または直接隣接していた（図３０−スライドＤ）。ＴＬＳは十分に周囲を囲まれていたが、それらは、繊維膜を欠失していた。ＴＬＳの内部トポロジーはさまざまな成熟度を示したが、より成熟した外観のＴＬＳには、二次リンパ器官に明確な類似点があり、これらのいくつかは、目に見える核小体のない均質な小さな成熟リンパ球から構成された末梢に配置されたリンパ濾胞に向かって延在する髄洞を持つ門部領域を有していた（図３０−スライドＦおよび図３０−スライドＧ）。濾胞間領域には、免疫芽細胞と一致するより大きなリンパ系細胞が時折存在する、同様に見える小さな成熟リンパ球も含まれていた。局所的に、いくつかのリンパ濾胞は、小さな成熟リンパ球、中型のセントロサイト、およびセントロブラストと一致するより大きな細胞を含む多形性リンパ集団から構成された胚中心を含んでいた（図３０−スライドＧ）。時折、可染体マクロファージ（ｔａｎｇｉｂｌｅ−ｂｏｄｙ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）も胚中心で認められた。ＣＤ４５Ｒのための免疫組織化学染色は、ＴＬＳのＢ細胞の強い染色を示した。具体的には、この結果は、胚中心を含むリンパ濾胞におけるＢ細胞を強調し、濾胞性リンパ系細胞（Ｔ細胞領域）で染色がないことを示した（図３０−スライドＥ）。この群の第５の症例（症例Ｄ９）は、最大寸法が８ｍｍと測定された生存可能な癌腫の残存巣を含み、腫瘍領域の５〜１０％の壊死も示した。この動物では、腫瘍部位組織の約５０％を組織学的分析のために保存し、５０％をドセタキセル含有量について分析した。ＣＤ６８の染色では、この群の５症例のうち１症例（症例Ｄ２）で中程度のマクロファージ浸潤が見られ、残りの４症例（症例Ｄ４、Ｄ６、Ｄ８およびＤ９）で軽度のマクロファージ浸潤が見られた。
【０１４３】
腫瘍内ｎＤｏｃｅ  ３サイクル：この群の３匹の動物（Ｅ１、Ｅ７、Ｅ９）のいずれもが残存する診断可能な生存可能な浸潤性癌腫結節を含まず、３症例すべてが広範囲の壊死を示した（図３０−スライドＬ）。この群のすべての３匹の動物は、それらの腫瘍部位組織の全体が組織学的分析のために保存されていた。これらの動物の２匹（Ｅ１とＥ７）には、皮膚潰瘍形成の大きな領域があり、その下には、周囲の非腫瘍性線維脂肪組織と筋肉組織に広がる壊死領域があった。これは、筋細胞の変性変化だけでなく、偽上皮腫性過形成の領域を含む周囲の表皮内層の再生変化に関連していた。同様に、壊死内および壊死に隣接して、線維芽細胞および内皮細胞を含む再生性のより大きな間質細胞が存在した。核が変性している壊死にはまれに混合した単一の大きな細胞もあった。これらのまれな細胞は壊死の過程にあるか、または完全に壊死したように見え、これらがまれに死にかけている腫瘍細胞を表す可能性があることを明確に除外することは困難であったが、切片の別の場所にある最終的な筋細胞が退化した核の特徴を示すように、これらはまた反応性／再生性の間質細胞または退化した筋細胞を表すこともできた。そのため、これらのまれな細胞の正確な意味は明確ではなかったが、それらは凝集性の小結節を形成せず、死につつあるか壊死性であるように見えた。これらの細胞をさらに評価するために、パンサイトケラチン（ＡＥ１／ＡＥ３）免疫染色を実施した。しかしながら、これはこれらのより大きな細胞のいくつかの標識の欠如を示した一方で、決定的な評価を一部の領域で困難にする過剰なバックグラウンド染色があった。さらに、この研究で実施されたパンサイトケラチンは全体的に信頼性がなく、対照症例では感度が欠失していた。そのため、現在のケラチン染色によるこれらの切片の決定的な評価は信頼できず、これは、現在保留中の別のケラチン免疫染色（ケラチン７）で染色されたスライドのレビューまで延期される。３つの症例はすべて、単一の、十分に形成されたＴＬＳも含んでおり、これらの３匹の動物において最大寸法は０．８ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍと測定された。この群のＴＬＳ（図３０−スライドＪおよび図３０−スライドＫ）は、上記のｎＤｏｃｅ  ２サイクル群で説明したものと同様の範囲の成熟およびＣＤ４５Ｒ染色パターンを示した。特に、ＴＬＳは十分に境界付けされており、壊死と潰瘍に近接して局在した。この群のＴＬＳは、ＣＤ４５Ｒを強く発現するＢ細胞で構成されたリンパ濾胞の内部組織を示し、これらのリンパ濾胞のいくつかは胚中心を含んでいた。ＣＤ６８染色により、３匹すべての動物で中程度のマクロファージ浸潤が明らかになった。
【０１４４】
以下の表９および１０は、スライド上でミリメートル単位で測定された、生存可能な癌腫の最大断面寸法を反映している。
【表９】
2021509663.tif 000013
【表１０】
2021509663.tif 000014
【０１４５】
表９は、６つの群の残存腫瘍のサイズの範囲を示している。表１０は、３つの非ｎＤｏｃｅ群（合計５匹の動物）と、３つのｎＤｏｃｅ群（合計１１匹の動物）における残存癌腫結節のサイズを直接比較するために、このデータを要約している。５匹の非ｎＤｏｃｅ動物はすべて、１０ｍｍを超えて測定された残存する生存可能な癌腫結節を有していた。対照的に、ＩＴ  ｎＤｏｃｅで治療した動物の半分足らず（５／１１）は、測定するためのスライド上の診断可能な残存する生存癌腫を有さなかった（完全退縮）。残存する生存可能な癌腫を有した、ＩＴ  ｎＤｏｃｅ群の残りの５匹の動物のうちの２匹では、これは、腫瘍が最大寸法で最大０．１ｍｍと測定されたまれな小さな腫瘍細胞の集まりで構成されていた。これらの症例における少量の腫瘍の有意性は、分離した局在と小さいサイズがまた切片化の人的効果の可能性を高めたため、明確ではなかった。第３の症例では、残存腫瘍は２．５ｍｍと測定され、残りの３つの症例では、スライド上の最大寸法が８ｍｍ、１６ｍｍ、１９ｍｍと測定された。
【０１４６】
残存浸潤癌腫がない症例の割合およびスライド上の残存生存癌腫結節のサイズに関する３つのＩＴ  ｎＤｏｃｅ群の比較が、表１１に示される。
【表１１】
2021509663.tif 000015
【０１４７】
ＩＴ  ｎＤｏｃｅのサイクル数が１サイクルから３サイクルに次第に増加すると、癌腫が残存しない症例の割合が増加した。具体的には、ＩＴ  ｎＤｏｃｅ  １サイクル群では、完全退縮を伴う症例が０％（０／３）であったが、これらの症例の１つはわずか２．５ｍｍと測定され、他の２つはスライド上で１６および１９ｍｍと測定された。対照的に、ｎＤｏｃｅを２サイクル投与した群では、症例の４０％（２／５）で完全に退縮した。ただし、残存する生存可能な癌腫を有したこの群の残りの３つの症例のうち、これは非常に最小限であり、人的効果を表す可能性のある最大０．１ｍｍと測定されたクラスターを伴った。最後に、３サイクルを投与された群は、動物の１００％（３／３）で完全退縮を有し、ＩＴ  ｎＤｏｃｅ  ３サイクル群の３つの症例のいずれかにおいて、測定するための残存する生存可能な癌腫を有さなかった。
【０１４８】
壊死を示す組織の割合が表１２に示される。
【表１２】
2021509663.tif 000016
【０１４９】
この研究の１６匹すべての動物は、地理的な腫瘍細胞壊死を含み、非ｎＤｏｃｅ治療の症例では、これには、５０〜９０％の腫瘍壊死を伴う２つの症例が含まれていた。しかしながら、全体として、腫瘍細胞壊死の程度は、非ｎＤｏｃｅ治療群よりもｎＤｏｃｅ治療群で有意に大きかった。具体的には、１１匹のｎＤｏｃｅ治療の動物のうち５匹が１００％の腫瘍細胞壊死（完全退縮）を示し、残りの６匹のうち２匹が９０％超の腫瘍細胞退縮を示した。対照的に、５匹の非ｎＤｏｃｅ治療動物のどれもが、９０％超の腫瘍細胞壊死を示さなかった。
【０１５０】
半定量的に等級付けした、Ｈ＆Ｅの評価およびＣＤ６８による免疫組織化学的染色に基づいた、周囲の非腫瘍性組織におけるマクロファージ浸潤物密度が、表１３に示される。
【表１３】
2021509663.tif 000017
【０１５１】
すべての動物における周囲の非腫瘍性組織におけるマクロファージ浸潤の強度は、顕著でなかった。しかし、非ｎＤｏｃｅ治療群をｎＤｏｃｅ治療群と比較した場合、非ｎＤｏｃｅ治療群には見られなかったが、後者には中程度のマクロファージ浸潤が認められた症例が含まれていることが認められた。＊ＩＴ  ｎＤｏｃｅで治療された１サイクル群の１つの症例には、評価のための周囲の非腫瘍性組織が含まれていなかった。
【０１５２】
少なくとも１つのＴＬＳを含有する各群の症例の数を表１４に示す。
【表１４】
2021509663.tif 000018
【０１５３】
非ｎＤｏｃｅ治療群の５例にはＴＬＳが含有されていなかった。ただし、ｎＤｏｃｅで治療された群の１１匹の動物のうちの８匹はＴＬＳを含み、これらの８症例の１つを除くすべては、ＴＬＳは最大寸法で少なくとも１ｍｍを測定した。特に重要なのは、ＴＬＳの有無が残存する癌腫の有無と密接に関連していたことである。具体的には、診断可能な残存する癌腫がないか（５症例）または２．５ｍｍ以下と測定された残存する癌腫（３症例）のいずれかを有したすべての症例もＴＬＳを含み、これらはＴＬＳを含む唯一の症例であった。対照的に、残りの症例はどれも、スライド上に少なくとも８ｍｍの癌腫が残存していたが、ＴＬＳを含んでいなかった。
【０１５４】
スライド上で測定された剖検体積対最大腫瘍サイズの比較を表１５に示す。
【表１５】
2021509663.tif 000019
【０１５５】
剖検時の腫瘍部位の体積をスライド上の最大癌腫の長さと比較すると、異なる治療群間でのスライド上の腫瘍長さに見られる傾向は、剖検腫瘍体積にも見られ、これは、スライド上の腫瘍測定値が、異なる動物における治療に対する異なる反応の代表的な評価であったことを支持している（表１５を参照されたい）。剖検でわずかな体積の腫瘍部位が記録され、顕微鏡検査で癌腫がまったくないか、ごくわずかな癌腫が観察された動物では、剖検で認められた少量の体積は、主にまたは完全に、壊死または線維性組織が原因であった可能性がありる。あるいは、剖検時に１〜２ｍｍのＴＬＳが腫瘍部位で検出された可能性もあり、その測定が記録された腫瘍部位の体積の一部に寄与している可能性がある。
【０１５６】
議論：
膀胱癌腫研究からの１６匹のマウスのサブセットの形態学的および免疫組織化学的特徴は、腫瘍内ｎＤｏｃｅの一般的な安全性と有効性を評価することを目的とした。１６匹の動物のこのサブセットは、１匹の未治療対照動物、腫瘍内ビヒクルを投与した２匹の動物、静脈内ドセタキセル（３サイクル）で治療した２匹の動物、および腫瘍内ｎＤｏｃｅで治療した１１匹の動物を含んだ。ｎＤｏｃｅ群は、投与サイクルの数に基づいて３つの群に分けられた：群１（１サイクル。３匹の動物）；群２（２サイクル。５匹の動物）；および群３（３サイクル。３匹の動物）。
【０１５７】
様々な群間で２つの主な特徴、腫瘍退縮の存在および程度、ならびに三次リンパ球凝集の存在が異なっていた。特に、腫瘍内ｎＤｏｃｅ群の大部分の動物では顕著な腫瘍退縮が存在したが、他の群のどの動物にも明白な腫瘍退縮は存在しなかった。この所見を反映して、有意な退縮を伴うｎＤｏｃｅ群のすべての動物にＴＬＳが含まれていたが、一方で、明白な退縮を伴わずに腫瘍が持続する動物にはＴＬＳが含まれていなかった。
【０１５８】
この顕微鏡的レビューでは、スライド上の残存する生存可能な癌腫の最大寸法を使用して、異なる群の応答の程度を比較した。剖検時の対応する最大腫瘍長は比較に利用できなかった。ただし、剖検時の腫瘍体積は入手可能であった。剖検時の腫瘍体積をスライド上の最大腫瘍の長さと比較すると、異なる治療群間でのスライド上の腫瘍長さに見られる傾向は、剖検腫瘍体積にも見られ、これは、スライド上の腫瘍測定値が、異なる動物における治療に対する異なる反応を比較するために使用するための典型的な標準的尺度であったことを支持している（表１５）。非ｎＤｏｃｅ群では、５匹すべての動物に、スライド上で最大寸法が少なくとも１１ｍｍ（範囲：１１ｍｍ〜２４ｍｍ）と測定された広範囲の残存する生存可能な癌腫が含まれていた。対照的に、ＩＴ  ｎＤｏｃｅで治療した動物の半分足らず（５／１１）は、測定するためのスライド上の診断可能な残存する生存可能な癌腫を有さなかった（完全退縮）。残存する生存可能な癌腫を有した、ＩＴ  ｎＤｏｃｅ群の残りの５匹の動物のうちの２匹では、これは、腫瘍が最大寸法で最大０．１ｍｍと測定されたまれな小さな腫瘍細胞の集まりで構成されていた。これらの症例の両方における少量の腫瘍の有意性は、これらの症例における偽陽性知見をもたらす、分離した局在と小さいサイズがまた切片化の人的効果の可能性を高めたため、明確ではなかった。第３の症例では、残存腫瘍は２．５ｍｍと測定され、残りの３つの症例では、スライド上の最大寸法が８ｍｍ、１６ｍｍ、１９ｍｍと測定された（表９および１０）。
【０１５９】
この研究の１６匹すべての動物には、腫瘍領域の少なくとも５％を占める地理的腫瘍細胞壊死の領域が含まれていた。ただし、両方の群にあるすべての症例をまとめると、腫瘍細胞の壊死の程度は、非ｎＤｏｃｅ群よりもｎＤｏｃｅ群の方が有意に大きかった。具体的には、１１匹のｎＤｏｃｅ動物のうち５匹が１００％の腫瘍細胞壊死（完全退縮）を示し、残りの６匹のうち２匹が９０％超の腫瘍細胞退縮を示した。対照的に、５匹の非ｎＤｏｃｅ動物のどれもが、９０％超の腫瘍細胞壊死を示さなかった。具体的には、非ｎＤｏｃｅ群では、５つの症例のうち３つが５０％未満の壊死を示したのに対し、非ｎＤｏｃｅ症例の５つのうち２つは５０〜９０％の腫瘍壊死を示した（表１２）。
【０１６０】
３つのｎＤｏｃｅ群（１サイクル、２サイクル、３サイクル）をともに比較すると、ＩＴ  ｎＤｏｃｅのサイクル数が１サイクルから３サイクルに徐々に増加することが、残存する癌腫を有さなかった症例の割合における増加と関連したことが認められた。具体的には、ＩＴ  ｎＤｏｃｅ  １サイクル群では、完全退縮を伴う症例が０％（０／３）であったが、これらの症例の１つでは、スライド上で残存する生存可能な癌腫の結節はわずか２．５ｍｍと測定され、一方で、他の２症例では、スライド上で１６および１９ｍｍと測定された残存する生存可能な癌腫があった。対照的に、２サイクルを投与した群は、５例中２例（４０％）で完全な退縮があった。さらに、生存可能な癌腫が残存していたこの群の残りの３つの症例のうち２つでは、残存する癌腫のサイズは非常に小さく、クラスターの最大寸法は最大０．１ｍｍと測定された。これらの２匹の動物における小さなクラスターの末梢および分離した局在を考えると、これらはおそらくこれらの２匹の動物で偽陽性をもたらす切片化の人的効果を表している可能性があり、その場合、実際の完全退縮率は、２サイクルを与えられた群において４／５（８０％）となる。２サイクル群の最後の動物には、８ｍｍと測定された残存する癌腫があった。最後に、ｎＤｏｃｅの３サイクルを投与された群は、動物の１００％（３／３）で完全退縮を有し、ＩＴ  ｎＤｏｃｅ  ３サイクル群の３つの症例のいずれかにおいて、測定するために利用可能な、残存する生存可能な癌腫を有さなかった（表１１）。
【０１６１】
この研究でのもう１つの印象的な発見は、治療に対して有意な反応を示したすべてのｎＤｏｃｅ動物における三次リンパ球構造（ＴＬＳ）の存在であった。具体的には、ＴＬＳは８匹の動物で見つかり、これらはすべてｎＤｏｃｅ群に属していた。ＴＬＳを含むこれらの８匹の動物には、生存可能な癌腫が残っていない５匹の動物、最大０．１ｍｍと測定されたまれな剥離した癌腫のクラスターを有する２匹の動物、および２．５ｍｍと測定された残存する癌腫巣を有する動物が含まれていた。残りのすべての動物には、少なくとも８ｍｍと測定された残存する癌腫結節があり、任意のＴＬＳは有さなかった。この発見は、ＴＬＳの存在と治療に対する有意な腫瘍反応との間に非常に強い相関があることを実証した。さらに、ＴＬＳはＩＴ  ｎＤｏｃｅを受けた動物でのみ見られ、その群内では、３サイクルのｎＤｏｃｅを与えられた３匹すべての動物を含む１１匹の動物のうち８匹にＴＬＳが存在した。
【０１６２】
この研究のＴＬＳは、サイズが０．１〜２ｍｍの範囲であった。ただし、８つのＴＬＳのうち７つは最大寸法が少なくとも１ｍｍで、２つは最大２ｍｍと測定された。これらのサイズを考えると、これらのほとんどの動物におけるＴＬＳは、染色されたスライドの肉眼検査で個別の小結節として容易に評価され、これらはインビボ状態で触知できた可能性がある。ＴＬＳのすべては十分に境界付けされていたが、それらは、十分に形成された繊維膜を欠失していた。それらは、成熟のさまざまな段階を示し、最も成熟したＴＬＳは、ＣＤ４５Ｒで強く標識された成熟Ｂ細胞と介在する濾胞間「Ｔ細胞領域」および副鼻腔を伴う髄質領域で構成される、十分に形成された末梢リンパ濾胞を有していた。一部のＴＬＳは、胚中心を含むリンパ濾胞による活性化の証拠を示した。
【０１６３】
最後に、非腫瘍性組織に関連するマクロファージ浸潤があり、これは一般に治療に対する腫瘍の応答の程度と相関していた。特に、非ｎＤｏｃｅ群のすべての動物には軽度のマクロファージ浸潤があり、一方、ｎＤｏｃｅ群には軽度および中程度の免疫細胞浸潤の症例が含まれていた。中程度の免疫細胞浸潤を伴う４症例すべてで腫瘍が完全に退縮し、これには３サイクルのＩＴ  ｎＤｏｃｅを投与された群の３匹すべての動物が含まれた。
【０１６４】
結果：
結論として、膀胱癌腫コホートの１６匹のマウスのサブセットで行われたこの研究は、ＩＴ  ｎＤｏｃｅ治療と腫瘍退縮の間の強い関連性を明らかに示し、ＩＴ  ｎＤｏｃｅで治療された１１匹の動物のうち５匹は完全な腫瘍退縮を示し、この群のさらに３匹の動物は、０．１ｍｍ、０．１ｍｍ、２．５ｍｍと測定された最大範囲の最小残存腫瘍があった。さらに、ＩＴ  ｎＤｏｃｅのサイクルの増加（１サイクルから３サイクルへの移動）により、腫瘍退縮の程度が大きくなり、３サイクル群の３匹すべての動物が完全な腫瘍退縮を示した。さらに、有意な腫瘍反応を示したすべての８匹の動物で三次リンパ構造（ＴＬＳ）が見られたが、有意な腫瘍応答を示さなかった動物のいずれにもＴＬＳは見られなかった。これらの発見は、ＩＴ  ｎＤｏｃｅを与えられた動物において、腫瘍に対する局所薬物効果と宿主動物の免疫系との間に有意な相互作用があり、腫瘍に隣接する強力な局所ＴＬＳの形成をもたらし、それが次に、有意な腫瘍退縮にさらに寄与する適応免疫および体液性免疫の急速なフィードバックループをセットアップすることを示唆している。
【０１６５】
実施例５．インビトロ放出試験研究。自然膜を横切るパクリタキセルおよびドセタキセル濃度平衡の比較測定
インビトロ放出試験研究は、天然の上皮膜を横切る様々な形態のパクリタキセルおよびドセタキセルの製剤の流れを比較的測定するために行われた。
【０１６６】
試験物質：
懸濁液６ｍｇ／ｍＬ中の、パクリタキセル粒子（この実施例で使用されたナノ粒子パクリタキセル粉末、平均粒径（数）０．８２７ミクロン、ＳＳＡ２７．９ｍｇ2／ｇ、かさ密度（非タップ）０．０８０５ｇ／ｃｍ3を伴う約９８％のパクリタキセル）。
懸濁液１０ｍｇ／ｍＬ中の、ドセタキセル粒子（この実施例で使用されているナノ粒子ドセタキセル粉末、平均粒径（数）０．９１５ミクロン、ＳＳＡ３３．４ｍｇ2／ｇ、かさ密度（非タップ）０．０６７５ｇ／ｃｍ3を伴う約９９．５％のドセタキセル）。
６ｍｇ／ｍＬに希釈されたＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）。
６ｍｇ／ｍＬに希釈された注射用パクリタキセル溶液。
１０ｍｇ／ｍＬに希釈した注射用ドセタキセル溶液。
【０１６７】
上皮膜基質：ブタの膀胱およびブタの腸が供給された。膀胱および腸を受け取ったら、膜を使用するまで−２０℃で保存した。使用する前に、膜を冷凍庫から取り出し、周囲温度で完全に解凍させた。
【０１６８】
装置：
フランツ型拡散セル（ＦＤＣ）：３．３ｍｌのレセプター容量と０．５５ｃｍ２のレセプター液曝露表面積を持つ６４個の拡散セル。
攪拌型ドライブロックヒーター：Ｒｅａｃｔｉ−Ｔｈｅｒｍ＃１８８２３攪拌型ドライブロックヒーターを使用して、研究全体を通して一定の攪拌を行いながら、レセプター液を３２±０．５℃に維持した。
Ｇ１６１２０ＭＳ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２６０  ＨＰＬＣユニット、ＩＤ＃：ＴＭ−ＥＱ−０６９。
【０１６９】
レセプター液：レセプター液は、ｐＨ４の６０ｖｏｌ％／４０ｖｏｌ％のメタノール／水と０．０１重量％のＮａＮ3（保存剤として追加）で構成された。レセプター液中のパクリタキセルおよびドセタキセルの溶解度は、研究全体を通して沈下条件を維持するのに十分であると決定された。レセプター液を混合および脱気した後、それを真空下でＺａｐＣａｐ  ＣＲ０．２μｍ膜を通して濾過した。そのように濾過されたレセプター液を真空下でさらに２０分間撹拌した。
【０１７０】
実験手順：
１．レセプターウェルは、ピペットを使用して脱気されたレセプター液で満たされた。
２．直径６ｍｍ×３ｍｍのテフロンコーティングされた磁気攪拌棒を各レセプターウェルに導入した。
３．解凍されて洗浄された膀胱または腸の小片が検査され、目に見える表面の損傷がない均一な厚さの領域のみが使用された。
４．皮膚用はさみを使用して、膀胱と腸の小片を約２ｃｍｘ２ｃｍの正方形に切り分けた。正方形のサイズは、基質の形状と寸法に応じて必要に応じて調整されたが、すべてのＦＤＣ間でサイズがほぼ均一になるように選択された。
５．基質片は、各反転ドナー区画の中心に置かれた。
６．次に、ドナーとレセプターウェル区画をピンチクランプで位置合わせしてからクランプし、基質片がドナーとレセプターの両方のウェルの中心に置かれたことを確認した。
７．必要に応じて、さらなるレセプター液を追加した。レセプターウェル内の気泡は、もしあれば、試料ポートに沿って空気が脱気されるようにＦＤＣアセンブリを傾けることによって取り除かれた。レセプターウェルは、約３．３ｍｌのレセプター液で満たされた。
８．組み立てられたＦＤＣは、３２℃に予熱された撹拌型ドライブロックヒーターに配置された。レセプター液は、磁気攪拌棒を介して連続的に攪拌された。
９．２０分後、各ＦＤＣ中の膜の表面を調べた。膜が濡れているように見えたり、損傷の兆候が見られた場合、セルは廃棄された。
【０１７１】
試験品の適用手順：膜完全性試験が完了し、セルが適切に分類された後、試験品の試料が基質の表面に適用された。１回投与レジメンをこの研究に使用した。すべての製剤について、１００μｌの製剤をドナー細胞に導入した。その後、ドナー細胞は、実験の残りの時間キャッピングされた。パクリタキセル粒子懸濁液、注射用パクリタキセル溶液、およびＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）の場合、有効なパクリタキセル薬物の量は、１０９１μｇ／ｃｍ2の用量に相関する０．６重量％に相当した。ドセタキセル粒子懸濁液、注射用ドセタキセルの場合、有効なドセタキセル薬物の量は、１８１８μｇ／ｃｍ2の用量に相関する１．０重量％に相当した。「ブランク」の非投与ＦＤＣセルも、バックグラウンドシグナルノイズを試験するために設定された。これらの「ブランク」セルから測定されたバックグラウンドノイズは無視できるものであった。
【０１７２】
レセプター液のサンプリング：段階的なハミルトン型インジェクターシリンジを使用して、３００μｌのアリコートが、１、３、８、２４、および４７時間のそれぞれで各ＦＤＣのサンプリングポートから抽出された。新鮮なレセプター液を各レセプターウェルに追加して、抽出された液体の容量を置き換えた。抽出された各アリコートを９６ウェルマイクロタイタープレートのウェルに導入した。ＭＳ分析の前に、試料を４〜８℃の冷蔵庫で保存した。採取後５日以内に試料を分析した。
【０１７３】
試料の分析：レセプターウェルから抽出された試料は、次いで、ＭＳ法を使用して分析された。有効成分の濃度を測定し、それぞれの症例で報告した。ＭＳ試験が完了した後、試料はＣｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを使用して分析された。パクリタキセルまたはドセタキセルのピークのＡＵＣを記録し、較正標準のＡＵＣ値と既知の濃度値から作成された較正曲線を使用して、μｇ／ｍＬ値に変換した。これらのμｇ／ｍＬ値は、研究結果Ｅｘｃｅｌワークブックにインポートされた。次に、これらの濃度にレセプター容量（３．３ｍＬ）を掛け、レセプター液に曝露された皮膚の表面積（０．５５ｃｍ2）で割ると、最終的な累積量がμｇ／ｃｍ2で得られる。レセプター液の時点が１時間を超える場合、このμｇ／ｃｍ2値は、試料容量を新しい緩衝液で置き換えることによって引き起こされる希釈を補うために除去された試料アリコート量に対して修正された。例として、３時間目の第２の時点では、希釈係数（３００μｌアリコート／３．３ｍｌ受容体容量または１／１１）に、１時間の時点で計算されたμｇ／ｃｍ2値を掛け、続いて、その結果を、３時間のＡＵＣ値を使用して計算されるμｇ／ｃｍ2濃度に足す。
【０１７４】
結果：結果を図３１、図３２、および図３３に示す。
【０１７５】
図３１は、様々なパクリタキセル製剤からの、パクリタキセル（ブタ膀胱膜を横切って経時的に送達されたパクリタキセル活性薬物の用量）の流れのグラフである。
【０１７６】
図３２は、様々なパクリタキセル製剤からの、パクリタキセル（ブタ腸膜を横切って経時的に送達されたパクリタキセル活性薬物の用量）の流れのグラフである。注：投与量を超える流れ量は、レセプター液の蒸発に起因していた。
【０１７７】
図３３は、様々なドセタキセル製剤からの、ドセタキセル（ブタ膀胱膜を横切って経時的に送達されたドセタキセル活性薬物の用量）の流れのグラフである。注：４８時間の時点は、レセプター液試料の蒸発の問題を原因として、破棄された。
【０１７８】
図から分かるように、パクリタキセル粒子およびドセタキセル粒子の懸濁液は、膜を通して送達された最小量の活性薬物によって示されるように、膜を横切る最低の流れを有した。これらの結果は、パクリタキセル粒子が、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）またはパクリタキセル溶液よりも長期間にわたって、上皮膜の片側に保持されることを示している。また、ドセタキセル粒子は、ドセタキセル溶液よりも長期間にわたって、上皮膜の片側に保持される。これは、上皮性嚢胞に注射された場合にパクリタキセル粒子懸濁液は、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）またはパクリタキセル溶液よりも長期間にわたって嚢胞内に多く存在すること、上皮性嚢胞に注射された場合にドセタキセル粒子懸濁液は、ドセタキセル溶液よりも長期間にわたって嚢胞内に存在することを示唆している。
【０１７９】
実施例６．尿路上皮癌腫を有する対象における腫瘍切除部位への注射および膀胱内注入におけるドセタキセル粒子懸濁液の安全性と忍容性を評価する第１／２相試験
この第１／２相試験には、筋層非浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）および筋層浸潤性膀胱癌（ＭＩＢＣ）を有する対象が含まれる。本明細書に開示されるように、ｎＤｏｃｅは、本実施例で使用される、平均粒径（数）が０．１ミクロン〜５ミクロン、ＳＳＡが少なくとも１８ｍ2／ｇ、およびかさ密度（非タップ）が０．０５ｇ／ｃｍ3〜０．１５ｇ／ｃｍ3の、少なくとも９５％のドセタキセルのドセタキセル粒子の水性懸濁液である。
【０１８０】
目的：この研究の主な目的は、外科的切除後に膀胱壁腫瘍切除部位に直接注射された、および膀胱内に注入されたｎＤｏｃｅの安全性と忍容性を評価することである。二次的な目的は、（ａ）膀胱内注入の存在下で膀胱壁腫瘍切除部位に直接注射した場合のｎＤｏｃｅの薬物動態（ＰＫ）を特徴付けること、（ｂ）ｎＤｏｃｅ濃度（０．７５、１．５、２．５、または３．７５ｍｇ／ｍＬを注射で投与、２．０または３．０ｍｇ／ｍＬを膀胱内注入で投与）のいずれかが予備的な有効性の兆候を示すかどうかを判断すること、である。
【０１８１】
研究の説明：この非盲検の第１／２相研究では、高リスクのＮＭＩＢＣまたはＭＩＢＣの病理学的または細胞学的診断を受けた対象が登録される。対象は、群１（ＮＭＩＢＣ）と群２（ＭＩＢＣ）の２つの治療群に階層化される。治験薬は、膀胱壁腫瘍切除部位への直接注射と膀胱内注入により投与される。訪問２で、すべての対象は、ＴＵＲＢＴの直後に膀胱壁の指標の腫瘍切除部位にｎＤｏｃｅが注射され、その後、初期のｎＤｏｃｅ膀胱内注入（直接注射から２時間以内）が行われる。
【０１８２】
群１（ＮＭＩＢＣ）：回復期間の後、群１の対象は、３ヶ月の導入期間に進む。対象は、訪問２後の第４週間目（１ヶ月目）に回復（ＴＵＲＢＴ切除部位の治癒）について評価され、その時点で、調査担当者は、対象の症状、病状（利用可能な場合）、肉眼的血尿、または尿検査の所見を評価する。調査担当者が対象が第４週間目で回復していないと判断した場合、少なくとも２週間ごとに、対象が回復して膀胱内ｎＤｏｃｅを投与できるようになるまで、評価を繰り返す。
【０１８３】
３ヶ月の導入期間は、６回の毎週のｎＤｏｃｅ膀胱内注入と、それに続く６週間の休息から構成される。導入期間後、再発のないことが確認された後、対象者は３回の毎週のｎＤｏｃｅ膀胱内注入と、それに続く９週間の休息から構成される、３ヶ月の維持期間に進む。対象は、治療終了の研究訪問のために第６ヶ月目に戻ってくる。血漿試料は、訪問２（ｎＤｏｃｅ注射前、および注射の１、２、４、６、および２４時間後）、訪問３（ｎＤｏｃｅ膀胱内注入前、および膀胱内注入の１、２、４、６、および２４時間後）、ｎＤｏｃｅ膀胱内注入前の訪問４〜１１、ならびにｎＤｏｃｅのＰＫを特徴付けるための治療終了時に、収集される。
【０１８４】
対象は、訪問９、治療終了時、または調査担当者の裁量で任意の時点で、膀胱鏡検査および尿細胞診により腫瘍再発について評価される。生検は、陽性または疑わしい細胞診または膀胱鏡検査所見について、調査担当者の裁量で随時実施される。さらに、安全性と治療に対する腫瘍反応のために、治験薬を最後に投与した後の３０日間、対象を追跡する。任意の切除、嚢胞切除術、または生検標本について、施設による病理学および免疫組織化学レポートが収集され、これらには、膀胱切除、研究の任意の時点で実施される生検、または嚢胞切除術の早期採取組織もしくは結節試料が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８５】
群２（ＭＩＢＣ）：訪問２の終わりに、群２（ＭＩＢＣ）の対象は、施設の標準治療（ＳＯＣ）の治療に進み、訪問２の３０日（＋／−５日）後に治療終了の研究訪問のために戻ってくる。血漿試料は、訪問２（ｎＤｏｃｅ注射前、注射の１、２、４、６、および２４時間後）、ならびに研究終了時の訪問時に、ｎＤｏｃｅのＰＫを特徴付けるために収集される。
【０１８６】
群１および２：研究は、群１および２のｎＤｏｃｅ濃度（０．７５、１．５、２．５、または３．７５ｍｇ／ｍＬ）の直接注射についての用量漸増フェーズと用量確認フェーズで構成される。直接注射の用量漸増フェーズでは、対象は最低濃度で始まる３人の対象の連続したコホートに登録される。データ安全監視委員会（ＤＳＭＢ）によるコホートデータのレビューに続き、ＰＫデータを除いて、ＤＳＭＢは以下のことを決定する：（ａ）次の用量レベルコホートに段階的に拡大するかどうか（ＤＬＴ（用量制限毒性）なし）；（ｂ）現在のコホートにさらに３人の対象を追加するかどうか（１つのＤＬＴ）；（ｃ）まだ第１のコホートの場合は、研究を中止するかどうか（２つ以上のＤＬＴ）；（ｄ）より高いコホートの場合は、以前の（より低い）用量のコホートに戻り、３人の対象まで拡大するかどうか（複数のＤＬＴ）。さらなる評価に最も適切であると決定された用量は、許容可能な安全性および忍容性プロファイル（ＤＳＭＢによって決定されるような）を備えた最高用量として定義され、その直接注射用量レベルで合計１２名までの追加の対象を登録する。
【０１８７】
この研究では、ｎＤｏｃｅ濃度（２．０および３．０ｍｇ／ｍＬ）の膀胱内注入の場合、群１および２の用量も段階的に拡大する。膀胱内注入の用量漸増フェーズでは、群１および群２内の第１の３人の対象は、訪問２の注入の場合、２．０ｍｇ／ｍＬの最低濃度で登録される。用量の忍容性が良好である場合、第１の３人の対象は、３．０ｍｇ／ｍＬの導入および維持膀胱内注入を受け、将来のコホートはすべて３．０ｍｇ／ｍＬの膀胱内注入を受ける。
【０１８８】
主要エンドポイント：腫瘍エンドポイントは、ＡＥ、臨床検査評価の変化、身体検査の所見、およびバイタルサインによって実証されるような安全性および忍容性である。
【０１８９】
二次エンドポイント：二次エンドポイントは、膀胱内注入の存在下で注射後の全身循環におけるドセタキセルの濃度（ＰＫ分析により決定されるような）；および腫瘍の再発である。
【０１９０】
治験薬：治験薬は、臨床用品キットで供給される。各キットには、ｎＤｏｃｅ粒子のバイアル１つと滅菌再構成溶液のバイアル１つが含まれる。ｎＤｏｃｅ粉末バイアルには、白色粉末のように見える、１００ｍｇ／バイアルの滅菌ナノ粒子ドセタキセル粒子が含まれる。滅菌再構成溶液は、生理食塩水溶液（注射用０．９％の塩化ナトリウム、ＵＳＰ）中に１％のポリソルベート８０、ＮＦおよび８％のエタノール、ＵＳＰを含有する。使用の準備ができると、ｎＤｏｃｅ粒子は滅菌再構成溶液中に懸濁される。
【０１９１】
治験薬の調製：直接注射：適切な量の再構成溶液をｎＤｏｃｅ粉末バイアルに追加して、懸濁液中の薬物を注射に必要なコホート割り当て用量（３．０、６．０、１０．０または１５．０ｍｇ）に再構成する。薬物が再構成されると、最大注射容量の４．０ｍＬを少し超えた懸濁液がバイアルからシリンジに取り出される。膀胱内注入：適切な量の再構成溶液をｎＤｏｃｅ粉末バイアルに追加して、懸濁液中の薬物を２．０ｍｇ／ｍＬまたは３．０ｍｇ／ｍＬに再構成する。薬剤が再構成されたら、適切な容量の懸濁液をバイアルから取り出し、注入のために生理食塩水バッグ（注射用の０．９％塩化ナトリウム、ＵＳＰ）に移す。
【０１９２】
投与および管理：
群１および２：直接注射：対象は、ＴＵＲＢＴの直後の訪問２で、割り当てられたｎＤｏｃｅ注射量を腫瘍切除部位の基部に受ける。指標の腫瘍切除部位は、複数の切除が行われた場合の最大切除部位（８．１ｃｍ2を超えてはならない）として定義される。複数の切除が行われる場合、指標の腫瘍切除部位のみがｎＤｏｃｅ注射を受ける。切除された膀胱壁への注射には、調節可能な先端長の膀胱鏡検査針を使用する。針の先端は、膀胱のドーム領域での注射の場合は２ｍｍ、膀胱の側面領域での注射の場合は３〜４ｍｍに調節する（製造元の推奨に従って）。ｎＤｏｃｅの総量４．０ｍＬを０．５ｍＬ増加量で、約１ｃｍ間隔で注射し、切除縁部の外側最大５ｍｍまでを含む、最大８回まで指標の腫瘍切除部位に注射する。注射は接線方向のアプローチ（切除部位を覆うグリッド状のパターン）で行われるため、膀胱鏡による直接的な視覚化の下で針の先端を見ることができる。７０°の角度の膀胱鏡ビューを使用してもよい。投与される総用量は、３．０ｍｇ（０．７５ｍｇ／ｍＬ）、６．０ｍｇ（１．５ｍｇ／ｍＬ）、１０．０ｍｇ（２．５ｍｇ／ｍＬ）、または１５．０ｍｇ（３．７５ｍｇ／ｍＬ）の割り当てられたコホート用量を超えない。
【０１９３】
群１および２：訪問２の膀胱内注入：初期の膀胱内注入は、ｎＤｏｃｅ直接注射の直後（２時間以内）に行われる。ｎＤｏｃｅは膀胱内に最大３０分間（＋／−５分間）膀胱内注入される。投与される総用量は、最終濃度２．０ｍｇ／ｍＬの場合、２５ｍＬの生理食塩水中で５０ｍｇの、または最終濃度３．０ｍｇ／ｍＬの場合、２５ｍＬの生理食塩水中で７５ｍｇの割り当てられたコホート用量を超えない。対象は仰向けの配置とする。局所麻酔ゲルは、カテーテル留置のために許可される。尿道カテーテルは、滅菌技術を使用して膀胱に挿入される。等張食塩水または滅菌水は、この研究で許可される唯一の膨張媒体である。膀胱内注入後、膀胱壁への治験薬の均一なコーティングを確実にするために、対象は１５分ごとに位置を変えるよう求められる。訪問２では、３０分の滞留時間の終わりに、注入物はカテーテルによって適切な容器に排出される。カテーテルが取り外され、排出された液体とカテーテルは廃棄される。
【０１９４】
群１のみ：導入および維持の膀胱内注入：訪問３〜８の導入：ｎＤｏｃｅは、週に１回、６週間、最大１２０分間（＋／−１０分）膀胱内に注入される。訪問９〜１１の維持：ｎＤｏｃｅは、週に１回、３週間、最大１２０分間（＋／−１０分）膀胱内に注入される。
【０１９５】
投与開始および用量漸増スケジュール：
直接注射：表１６に示されるように、研究は１および２のｎＤｏｃｅ濃度（０．７５、１．５、２．５、または３．７５ｍｇ／ｍＬ）の直接注射についての用量漸増フェーズと用量確認フェーズで構成される。
【表１６】
2021509663.tif 000020
直接注射の用量漸増中、コホートは最低用量（３．０ｍｇ）から順番に開始して登録される。コホートは群１と２について別々に登録される。各コホートには、群１の３人の対象および群２の３人の対象が最低限計画されている。各群の次のコホートへの段階的拡大は、他の群とは無関係に、データのレビューに従って進める。すべてのＤＬＴを含み、ＰＫを除く、各コホートの対象からのすべての臨床データは、３人の対象すべてが訪問３を完了するとレビューおよび評価され、受け取った用量が安全かつ忍容性があると考えられるかどうかが判断され、用量の段階的拡大が可能かどうかを決定する。初期のレビューで、コホート１（３．０ｍｇ）が安全である（ＤＬＴなし）と判断された場合、次の用量レベルであるコホート２（６．０ｍｇ）への段階的拡大を行う。コホート１で１以上のＤＬＴが生じた場合、コホート１にさらに３人の対象が追加される。さらなる３人の対象で１以上のＤＬＴが生じた場合、試験は中止される。さらなる３人の対象でさらなるＤＬＴが生じない場合、研究は次の用量レベルであるコホート２（６．０ｍｇ）に段階的拡大を行う。コホート２（６．０ｍｇ）では３人の対象が投与される。コホート２が安全である（ＤＬＴなし）と判断された場合、次の用量レベルであるコホート３（１０．０ｍｇ）への段階的拡大を行う。コホート２で１以上のＤＬＴが生じた場合、コホート２にさらに３人の対象が追加される。さらなる３人のコホート２対象で１以上のＤＬＴが生じた場合、研究は以前の（より低い）用量のコホート１（３．０ｍｇ）に戻り、用量の確認に進む。さらなる３人の対象でさらなるＤＬＴが生じない場合、研究は次の用量レベルであるコホート３（１０．０ｍｇ）に段階的拡大を行う。コホート３（１０．０ｍｇ）では３人の対象が投与される。コホート３が安全である（ＤＬＴなし）と判断された場合、次の用量レベルであるコホート４（１５．０ｍｇ）への段階的拡大を行う。コホート３で１以上のＤＬＴが生じた場合、コホート３にさらに３人の対象が追加される。さらなる３人のコホート３対象で１以上のＤＬＴが生じた場合、研究は以前の（より低い）用量のコホート２（６．０ｍｇ）に戻り、用量の確認に進む。さらなる４人の対象でさらなるＤＬＴが生じない場合、研究は次の用量レベルであるコホート３（１５．０ｍｇ）に段階的拡大を行う。コホート４（１５．０ｍｇ）では３人の対象が投与される。コホート４が安全である（ＤＬＴなし）と判断された場合、コホート４（１５．０ｍｇ）での用量の確認が行われる。コホート４で１以上のＤＬＴが生じた場合、コホート４にさらに３人の対象が追加される。さらなる４人のコホート３対象で１以上のＤＬＴが生じた場合、研究は以前の（より低い）用量のコホート３（１０．０ｍｇ）に戻り、用量の確認に進む。さらなる３人の対象でさらなるＤＬＴが生じない場合、試験は、用量確認において、コホート４（１５．０ｍｇ）での登録を完了する。さらなる評価に最も適した用量は、許容可能な安全性および忍容性プロファイルを備えた最高用量である。６人の対象のコホートで１人以下の対象が、または３人の対象のコホートでは０人の対象が、最高用量で、ＤＬＴを経験する場合、そのコホートは用量確認フェーズに入れられる。６人の対象のコホートで１人以上の対象がＤＬＴを経験した場合、以前の用量が用量確認フェーズに入れられる。さらなる評価に適切であると思われる用量が決定されると、その用量レベルで投与された合計１２人までの対象を提供するために、さらなる対象が登録される。
【０１９６】
膀胱内注入：：この研究では、ｎＤｏｃｅ濃度（２．０および３．０ｍｇ／ｍＬ）の膀胱内注入の場合、群１および２の用量も段階的に拡大する。膀胱内注入の用量漸増フェーズでは、群１および群２内の第１の３人の対象は、訪問２の注入の場合、２．０ｍｇ／ｍＬの最低濃度で登録される。各群の３．０ｍｇ／ｍＬへの段階的拡大は、他の群とは無関係に、データのレビューに従って進める。２．０ｍｇ／ｍＬのコホート１の対象がいずれもＤＬＴを経験しない場合、膀胱内用量は、以下に説明するように、その群の３．０ｍｇ／ｍＬに段階的拡大される。コホート１の２人以上の対象が２．０ｍｇ／ｍＬでＤＬＴを経験した場合、試験は中止される。コホート１の３人の対象のうちの１人が２．０ｍｇ／ｍＬでＤＬＴを経験した場合、さらなる３人の対象が２．０ｍｇ／ｍＬのコホート１に登録される。２．０ｍｇ／ｍＬのさらなる３人の対象で、ＤＬＴを経験した対象がいない場合、用量は下記のように２．０ｍｇ／ｍＬのままである。２．０ｍｇ／ｍＬのさらなる３人の対象で、もう１人の対象がＤＬＴを経験した場合、試験は中止される。群１：このセクションで記載されるすべてのＤＬＴを含み、ＰＫを除く、コホート１の対象からのすべての臨床データは、コホート１の３人の対象すべてが訪問３を完了するとレビューおよび評価され、２．０ｍｇ／ｍＬが安全かつ忍容性があると考えられるかどうかが判断され、用量の段階的拡大が可能かどうかを決定する。上記のように２．０ｍｇ／ｍＬの忍容性が良好な場合、コホート１はその後のすべての導入および維持注入の訪問で３．０ｍｇ／ｍＬを投与され、群１の将来の対象はすべての膀胱内注入について３．０ｍｇ／ｍＬを投与される。群２：このセクションで記載されるすべてのＤＬＴを含み、ＰＫを除く、コホート１の対象からのすべての臨床データは、コホート１の３人の対象すべてが治療終了時の訪問を完了するとレビューおよび評価され、２．０ｍｇ／ｍＬが安全かつ忍容性があると考えられるかどうかが判断され、用量の段階的拡大が可能かどうかを決定する。２．０ｍｇ／ｍＬが２．０ｍｇ／ｍＬで十分に耐用性があると判断された場合、群１の将来の対象は、すべての膀胱内注入について３．０ｍｇ／ｍＬを投与される。
【０１９７】
用量制限毒性（ＤＬＴ）の定義：ＡＥ（有害事象）および安全に関する一般的な研究データ（臨床検査結果、バイタルサイン、身体検査所見）のレビューには、段階的拡大をしないための規則がある。ｎＤｏｃｅに関連している、またはおそらく関連していると考えられるいずれかのＡＥは、ＤＬＴである可能性がある。さらに、ＤＬＴには次のものが含まれる。１）入院または外科的介入を必要とする手技関連の事象と、医療的介入を必要とする手技関連の事象；２）治験薬に関連している可能性があるすべてのグレード３〜４のＡＥは、以下：ａ）最適の制吐または下痢止め予防薬を受けていない患者において４８時間未満続くグレード３の悪心またはグレード３〜４の嘔吐および下痢；ｂ）５日未満のグレード３の疲労感；ｃ）臨床的に重要ではなく、４８時間以内に正常（介入の有無にかかわらず）に戻るグレード３の臨床検査異常、を除いてＤＬＴと考えられる；３）臨床的に有意な出血を伴うグレード３の血小板減少症；４）さらなる治療ができないか、少なくとも３週間持続する、グレード２の毒性；および５）生命を脅かすすべての事象（事象が手技または治験薬自体に関連していないという明確な代替的説明がない限り）。
【０１９８】
用量調整／修正／遅延：群１：導入または維持中の任意の時点で、グレード２の血小板減少症、貧血、好中球減少症、血尿（肉眼的血尿）、または感染が解決するまでの検査室で確認された尿路感染症の事象において、膀胱内注入は毎週の増分で差し控えられる。血尿および異常なＣＢＣ値は最大でグレード１に解決する必要がある。群２：研究では、各対象の１つの単一ｎＤｏｃｅ膀胱内注入を評価する。したがって、用量の調整や変更はない。
【０１９９】
治療期間：訪問２で、ｎＤｏｃｅを指標の腫瘍切除部位に直接注射し、その後、単一の膀胱内注入を行う。群１：最大６回の導入ｎＤｏｃｅ膀胱内注入と最大３回の維持ｎＤｏｃｅ膀胱内注入が投与される。個々の対象の参加は最大３３週間続くと推定される。群２：個々の対象の参加は最大７４日間続くと推定される。
【０２００】
他のアッセイまたは手順：ｎＤｏｃｅのＰＫを特徴付けるために血漿試料を収集する。群１：血漿試料は、訪問２（ｎＤｏｃｅ注射前、および注射の１、２、４、６、および２４時間後）、訪問３（ｎＤｏｃｅ膀胱内注入前、および膀胱内注入の１、２、４、６、および２４時間後）、ｎＤｏｃｅ膀胱内注入前の訪問４〜１１、ならびに治療終了時に、収集される。許容されるウィンドウは、第１の４時間の収集で１０分、６時間後で２０分、２４時間後で３０分である。群２：血漿試料は、訪問２（ｎＤｏｃｅ注射前、注射の１、２、４、６、および２４時間後）、ならびに治療終了時の訪問時に、収集される。許容されるウィンドウは、第１の４時間の収集で１０分、６時間後で２０分、２４時間後で３０分である。
【０２０１】
研究スケジュール：
スクリーニング（訪問１）：群１および２がスクリーニング訪問（訪問１）を完了する。ｎＤｏｃｅ注射の試験に同意する前に実施される評価、訪問、およびその他のアッセイが実施され、本試験の一部とは見なされない。以下の手順と評価は、スクリーニング期間中、ｎＤｏｃｅ訪問２の注射前１４日以内に、調査担当者が完了し、文書化し、レビューする必要がある：研究スケジュール、手順および対象のプロトコル必要条件に関する包括的な議論を含む、文書化されたインフォームドコンセント；以前の医療記録と人口統計のレビューを含む、完全な病歴；尿路上皮癌腫の診断（生検および／または画像診断）のレビューおよび文書化；外科的、化学療法および免疫学的記録を含む以前の治療のレビューおよび文書化；すべての付随する処方薬および非処方薬のレビューおよび文書化；包括的な身体検査；ＥＣＯＧ（Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ）パフォーマンスステータス；バイタルサイン（血圧、心拍数、脈拍、および体温）、体重、身長；臨床検査評価のための試料収集および処理。
【０２０２】
膀胱腫瘍の経尿道的切除術（訪問２）：群１および２は訪問２を完了する：病歴の確認（ｎＤｏｃｅ注射の前に発生したＡＥは病歴と見なされる）；包括的な身体検査（訪問２の１４日以前に完了しなかった場合）；ＥＣＯＧパフォーマンスステータスの評価；ＴＵＲＢＴ−ＴＵＲＢＴ後の非膀胱穿孔の確認は、対象の研究記録に文書化し、提出する必要があり、経尿道切除表面積（＜８ｃｍ2）が記録される。対象者が適格でないか、または膀胱穿孔が確認された場合、対象は、ｎＤｏｃｅ注射に進まず、スクリーニング不適格と見なされる。ｎＤｏｃｅ注射の継続が確認された場合、膀胱切除組織試料が収集され、組織学的評価のために処理される。包含および除外基準の最終レビューと適格性の決定は、ｎＤｏｃｅ注射の前に行われる。
【０２０３】
ｎＤｏｃｅ治療−注射および膀胱内注入（訪問２が続く）：群１と２は訪問２を完了する：ベースラインＰＫ試料は、ｎＤｏｃｅ注射の前に採取され、ＴＵＲＢＴ手順の前に収集される；ｎＤｏｃｅ注射の前にバイタルサインが監視され、収集される；ｎＤｏｃｅは切除された膀胱腫瘍中に注入される−第１の注射の開始時間と最後の注射の停止時間が記録される；ｎＤｏｃｅ注射後にバイタルサインが監視され、収集される；ｎＤｏｃｅは膀胱内に膀胱内注入される−注入の開始時間と排尿終了時の時間が記録される；ｎＤｏｃｅ膀胱内注入液の後に（カテーテルは取り除かれ、注入液は排出される）、バイタルサインが監視され、収集される；ＡＥの収集（ｎＤｏｃｅ注射後）は、治療に伴う有害事象（ＴＥＡＥ）として個別に文書化され、直接注射投与時またはその後に開始日時が記録される；併用薬の収集；ＰＫ試料は、ｎＤｏｃｅ注射停止時間の１、２、４、６、および２４時間後に採取される；対象には、次の研究訪問まで、ＡＥと併用薬を記録するための日記が提供される。
【０２０４】
導入期間（訪問３〜８）：群１の対象のみが導入期間（訪問３〜８）を完了する。群１の対象は、訪問２後の第４週間目（１ヶ月目）に回復（ＴＵＲＢＴ切除部位の治癒）について評価され、その時点で、調査担当者は、対象の症状、病状（利用可能な場合）、肉眼的血尿、または尿検査の所見を評価する。調査担当者が対象が第４週間目で回復していないと判断した場合、少なくとも２週間ごとに、対象が回復して膀胱内ｎＤｏｃｅを投与できるようになるまで、評価を繰り返す。３ヶ月の導入期間は、６回の毎週のｎＤｏｃｅ膀胱内注入治療と、それに続く６週間の休息から構成される。以下の手順が実行される：バイタルサイン；指示された健康診断；臨床検査評価のための試料収集と処理；非臨床的に重要なＣＢＣおよび尿検査は、感染またはＤＬＴを除外するために、各膀胱内注入の前に確認される；ＰＫ試料が採取される；訪問３のみ：ＰＫ試料は、ｎＤｏｃｅ注入の開始前、およびｎＤｏｃｅ注入開始時刻の１、２、４、６、および２４時間後に採取される；訪問４〜８：ＰＫ試料は、ｎＤｏｃｅ注入前に採取される；ｎＤｏｃｅの膀胱内注入が行われる；ＡＥレビュー；併用薬のレビュー。研究中の任意の時点で、調査担当者は、細胞診、膀胱鏡検査、または生検（陽性または疑わしい細胞診または膀胱鏡所見の場合）を行うことができる。必要に応じて、生検試料が組織学的および免疫組織化学的評価のために収集される。対象の日記は、適切に記入されていることを確認するためにレビューされる。対象は、矛盾点、欠落している項目および誤りに関して質問される。矛盾点がある場合は、委任されたスタッフが対象の原文書に文書化する。注入の排出時間を記録し、有害事象と併用薬を記録するために毎日書き留めることができるように、対象に新しい日記が提供される。
【０２０５】
維持期間（訪問９〜１１）：群１の対象のみが維持期間（訪問９〜１１）を完了する。訪問９は、対象が３ヶ月の導入期間の最終日を完了した後に行われる。生検が指示される場合、組織病理学の結果が得られるまで、ｎＤｏｃｅによる維持療法は差し控えられる。ｎＤｏｃｅによる維持療法の開始は、最大３週間遅れる場合がある。この研究の目的のために、疾患の進行は、疾患の持続、再発、および／または進行として定義される。訪問９では、再発または進行のエビデンスがない対象は、最初の３週間に週１回投与される３回のｎＤｏｃｅ膀胱内注入からなる３ヶ月の維持期間に進む。以下の手順は、訪問９〜１１で実施される：指示された健康診断が実施されてもよい−訪問９のみ；ＥＣＯＧ−訪問９のみ；バイタルサイン；臨床検査評価のための試料収集と処理）；非臨床的に重要なＣＢＣおよび尿検査は、感染またはＤＬＴを除外するために、各膀胱内注入の前に確認される；訪問９、１０、１１での膀胱内ｎＤｏｃｅ注入；臨床検査評価のための試料収集と処理（セクション７．２．１）−訪問９のみ；ＰＫ試料はｎＤｏｃｅ注入前に採取される；膀胱鏡検査、尿細胞診−訪問９のみ；生検−陽性または疑わしい細胞診または膀胱鏡検査の所見に対して行われ、該当する場合、生検試料が組織学的および免疫組織化学的評価のために収集される；ＡＥレビュー；併用薬のレビュー。対象の日記は、適切に記入されていることを確認するためにレビューされる。対象は、矛盾点、欠落している項目および誤りに関して質問される。矛盾点がある場合は、委任されたスタッフが対象の原文書に記載される。注入の排出時間を記録し、有害事象と併用薬を記録するために毎日書き留めることができるように、対象に新しい日記が提供される。
【０２０６】
治療終了：治療終了の訪問は、対象がいずれかのまたはすべての研究治療を完了した後に行われる。治療終了の訪問は、群１については６ヶ月目に、群２については訪問２の３０日後に予定される。すべての診断（生検、スキャン、または施設で必要な診断テストを含むが、これらに限定されない）レポートは、研究中の任意の時点で研究目的で収集され、治療手順の最後の一部として提出される。追加の画像化が実行される場合がある。すべての得られた画像および／またはレポートは、対象者の記録のために収集される。訪問時には、以下の手順が実行される：指示された身体検査；ＥＣＯＧ；バイタルサイン；１２誘導ＥＣＧ；臨床検査試料収集；ＰＫ試料収集（１つの試料収集のみ）；膀胱鏡検査および尿細胞診；生検−陽性または疑わしい細胞診または膀胱鏡検査の所見に対して行われ、該当する場合、生検試料が組織学的および免疫組織化学的評価のために収集される；ＡＥ収集；併用薬。対象の日記は、適切に記入されていることを確認するためにレビューされる。対象は、矛盾点、欠落している項目および誤りに関して質問される。矛盾点がある場合は、対象の原文書に記載される。
【０２０７】
イベントスケジュールの要約は、以下の票１７、表１８および表１９に示される。
【表１７】
2021509663.tif 000021
【表１８】
2021509663.tif 000022
【表１９】
2021509663.tif 000023
【表２０】
2021509663.tif 000024
【０２０８】
この研究の結果は、対象における膀胱癌の治療または膀胱癌の再発の阻害のための治療方法であって、タキサン粒子を含む第１の組成物の有効量を膀胱腫瘍の外科的切除部位に（膀胱腫瘍の外科的な切除後に）直接注射することと、続いて、タキサン粒子を含む第２の組成物の有効量を対象の膀胱に膀胱内注入することと、を含む方法の有効性を実証している。
【図１】
2021509663.tif 000025
【図２】
2021509663.tif 000026
【図３】
2021509663.tif 000027
【図４】
2021509663.tif 000028
【図５】
2021509663.tif 000029
【図６】
2021509663.tif 000030
【図７】
2021509663.tif 000031
【図８】
2021509663.tif 000032
【図９】
2021509663.tif 000033
【図１０】
2021509663.tif 000034
【図１１】
2021509663.tif 000035
【図１２】
2021509663.tif 000036
【図１３】
2021509663.tif 000037
【図１４】
2021509663.tif 000038
【図１５】
2021509663.tif 000039
【図１６】
2021509663.tif 000040
【図１７】
2021509663.tif 000041
【図１８】
2021509663.tif 000042
【図１９】
2021509663.tif 000043
【図２０】
2021509663.tif 000044
【図２１】
2021509663.tif 000045
【図２２】
2021509663.tif 000046
【図２３】
2021509663.tif 000047
【図２４】
2021509663.tif 000048
【図２５】
2021509663.tif 000049
【図２６】
2021509663.tif 000050
【図２７】
2021509663.tif 000051
【図２８】
2021509663.tif 000052
【図２９】
2021509663.tif 000053
【図３０】
2021509663.tif 000054
【図３１】
2021509663.tif 000055
【図３２】
2021509663.tif 000056
【図３３】
2021509663.tif 000057
【国際調査報告】
2021509663.tif 000058
2021509663.tif 000059
2021509663.tif 000060